KR20180037728A - 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 유효 성분으로 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 항산화효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선, 보습 효과가 있어 각종 기능성 화장료를 제공할 수 있다.

Description

석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION CONTAINING THE MIXED EXTRACT OF POMEGRANATE, ROSA CENTIFOLIA FLOWER, CARTHAMUS TINCTORIUS AND ROSA RUGOSA}
본 발명은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.
좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.
그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.
노화에는 이러한 자유라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.
그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.
한국공개특허 제2016-0087113호는 메리골드 꽃, 동백꽃, 살구꽃, 오이풀꽃, 작약, 장미, 진달래, 해당화 등의 다양한 꽃을 포함하는 화장품에 관하여 개시한다. 한국공개특허 제2011-0001538호는 일당귀꽃, 박태기꽃, 목련꽃, 아카시아꽃 등의 다양한 꽃을 포함하는 항산화 및 미백 활성을 갖는 화장료 조성물에 관하여 개시한다.
이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화를 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여 MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 생합성 효과, 항산화 효과, 보습 효과를 측정한 결과, 그 효능이 매우 우수하므로 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.
본 발명의 목적은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 항산화 효과, 보습 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 목적은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 효능을 극대화하기 위해 초임계, 초음파를 제조하고 정제과정을 거쳐 효능 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 이용하는 화장 방법을 제공하는데 있다.
본 발명은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선용이다.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 항산화용이다.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 보습용이다.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선용이다.
바람직하게는, 상기 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유된다.
바람직하게는, 상기 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법으로 추출된다.
본 발명에 따른 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과(실험예 1), 콜라겐 합성 증진 효과(실험예 2), 항산화효과 (실험예 3) 및 보습 효과(실험예 4)를 갖는다.
또한, 본 발명에 따르면, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 효능을 극대화하기 위해 초음파추출 또는 초임계추출을 통해 MMP-1 생성억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과 등을 더욱 증진시켜준다.
본 발명의 화장료 조성물은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함한다.
석류는 고대 솔로몬왕 시대부터 음료수와 빙과를 만드는데 널리 이용되어 왔고 석류의 꽃과 덜 익은 열매의 껍질은 붉은색 염료의 원료로 사용되어 왔다. 꽃은 붉은색, 노란색, 흰색 등 여러 색으로 피고 익으면 탐스러운 열매가 둥근 모양으로 열린다. 식물성 에스트로겐이 다량 함유되어 있어 여성의 과일로 불린다.
서양장미꽃은 달콤하고 환상적인 향기를 내뿜는 장미꽃으로서, 희랍과 로마시대의 의사들은 이를 강장제로 사용하였다. 또한 중국에서는 한방의학적 측면에서 장미에는 화혈, 행혈 이기의 작용이 있는 것으로 알려져 있고 미용에 탁월하여 목욕 후 장미가루를 몸에 마사지 하여 피부를 가꾸는 미용재료로 이용해 왔다.
홍화는 잇꽃이라고도 하며, 예로부터 한의학에서 이를 통경제로 어혈을 푸는 약으로 널리 사용하였으며, 부인병, 통경, 복통에 사용되었다.
해당화는 우리나라 각처의 바닷가 모래땅과 산기슭에서 나는 낙엽관목으로 향이 많이 나기 때문에 바람 부는 곳을 향하면 장미향보다 더 은은한 향이 나 사랑 받는 식물이다. 꽃잎은 음식을 만들 때와 피로회복에 사용하였으며 열매는 비타민 C가 풍부하게 함유된 천연 항산화제의 역할을 하고 뿌리는 간보호의 역할과 어린 순은 나물로 식용하는 등 다양한 쓰임을 갖는다.
본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화를 동일한 양으로 혼합하거나 상이한 양으로 혼합하여 추출할 수 있다.
본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다.
본 발명에서 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.
한편, 본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.
또한, 본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다.　예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효 산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.
또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.
본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.
초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출 효율을 증가시킨다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출 용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이　0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.
이러한 다양한 기능을 가진 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 콜라겐 합성 증진 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 항산화 효과, 피부 주름 개선 효과, 보습 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 항산화 효과 및 보습효과를 얻을 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.　 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
제조예 1: 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 제조
세절하여 음건한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화를 1:1:1:1의 중량비 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 43g을 수득하였다.
제조예 2 및 3:　 초임계 유체 추출물 및 초음파 추출물 제조
세절하여 음건한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화를 1:1:1:1의 중량비 1kg을 통상적인 초임계 추출법(약 60℃의 온도에서 약 300 기압의 압력 하에 초임계 상태에서 공용매로서 에탄올을 이용하여 추출함)으로 추출하여 초임계 추출물을 얻었다(제조예 2). 또한, 세절하여 음건한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화를 1:1:1:1의 중량비 1kg을 초음파(슈퍼소닉 초음파기기를 이용하여 25KHz의 강도로 30℃에서 약 2시간 동안 추출)를 이용한 추출을 통해　초음파 추출물을 얻었다(제조예 3). 단, 제조예 3의 경우에는 공용매로 에탄올을 사용하였다.
비교제조예 1: 석류 추출물 제조
세절하여 음건한 석류 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.
비교제조예 2: 서양장미꽃 추출물 제조
세절하여 음건한 서양장미꽃 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.
비교제조예 3: 홍화 추출물 제조
세절하여 음건한 홍화 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.
비교제조예 4: 해당화 추출물 제조
세절하여 음건한 해당화 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.
실험예 1. 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의　 MMP -1 생성 억제 효과
실험예 1은 제조예 1, 2, 3에서 수득한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물과 비교제조예 1 내지 4의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정하였다.
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 내지 3의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 및 비교제조예 1 내지 4의 추출물을 각각 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.
배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
Figure pat00001
시료명 처리 농도 MMP-1 생성 억제율(%)
제조예1 제조예2 제조예3 비교제조예1 비교제조예2 비교제조예3 비교제조예4
추출물 10ppm 22.79 24.17 23.82 9.5 7.2 5.2 6.8
100ppm 45.74 54.81 53.14 18.2 16.3 17.5 14.6
1000ppm 87.12 89.19 88.51 42.3 38.2 35.6 32.5
TGF-β (200nM) 76.8
상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1의 생성을 억제(MMP-1 활성 억제)시키는 것을 확인할 수 있었다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(200nM)와 본원발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 농도(100ppm) 차이를 감안해도, 여러 종류의 물질이 혼합된 추출물 수준에서 상기와 같은 정도의 MMP-1 억제율을 나타낸 것은 본원발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 보여준다.
실험예 2. 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과
인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다.　상기 제조예 1 내지 3에 의해 제조된 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 및 비교제조예 1 내지 4를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.　배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다.　콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
Figure pat00002
시료명 처리 농도 콜라겐 생합성율(%)
제조예1 제조예2 제조예3 비교제조예1 비교제조예2 비교제조예3 비교제조예4
추출물 5ppm 21.0 24.9 23.8 11.5 8.6 10.2 6.5
10ppm 43.4 44.5 42.5 20.1 15.2 18.2 13.8
20ppm 154.4 163.5 165.1 38.5 35.4 36.5 30.4
TGF-β (200nM) 163.5
표 2에 따르면, 본 발명의 제조예 1, 2, 3에 의해 제조된 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 콜라겐 생합성율이 농도의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 제조예 2에 의해 제조된 추출물이 효과가 제조예 1 및 3 추출물보다 효과가 더 좋은 것을 확인하였다.
실험예 3: 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 분석
실험예 3은 제조예 1 내지 3에서 수득한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질(혼합 추출물)에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율(%)을 측정한다. 사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.
측정방법으로서,
① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ml에 시료 용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.
② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.
③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.
④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.
⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 수학식 3에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 3과 같다.
Figure pat00003
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도
시료명 SC50 (%)
제조예 1 0.021
제조예 2 0.015
제조예 3 0.023
DPPH 자유라디칼을 50% 소거하는데 필요한 시료의 농도인 SC50을 확인한 결과 제조예 1 내지 3은 항산화 효과를 보였다.
　 제형예 1: 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조
석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 포함하는 화장료로서, 제조예 1 내지 3의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 포함하는 화장료(제형예 1 내지 3)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 석류 추출물(비교제조예 1), 서양장미꽃 추출물물(비교제조예 2), 홍화 추출물물(비교제조예 3) 및 해당화 추출물(비교제조예 4)을 각각 포함하는 비교제형예 1 내지 4를 제조하였며, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 5)을 하기 표 4의 조성과 같이 제조하였다.
구분 성분 제형예 1 제형예 2 제형예 3 비교
제형예 1		 비교
제형예 2		 비교
제형예 3		 비교
제형예 4		 비교
제형예 5
A 제조예 1 5.0 - - - - - - -
　 제조예 2 - 5.0 - - - - - -
　 제조예 3 - - 5.0 - - - - -
비교제조예 1 - - - 5.0 - - - -
비교제조예 2 - - - - 5.0 - - -
비교제조예 3 - - - - 5.0 - -
비교제조예 4 - - - - - 5.0 -
　 글리세린 - - - - - - - 5.0
　 1,3-부틸렌글리콜 - - - - - - - 5.0
　 EDTA-2Na 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
　 정제수 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100 to 100
B 세토스테아릴알코올 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
　 글리세릴스테아레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
　 마이크로크리스탈린 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
　 스쿠알란 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
　 유동파라핀 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
　 트리옥타노인 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
　 폴리솔베이트 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
　 솔비탄스테아레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
　 토코페릴아세테이트 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
　 사이클로메치콘 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
　 BHT 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
C 향, 방부제 적량 적량 적량 적량 적량 적량 적량 적량
실험예 4: 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물의 보습 효과
상기 제형예 1, 2, 3의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹 (A, B, C, D, E, F, G 및 H )으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 제형예 1 내지 3의 화장료 조성물을, D 그룹에는 석류 추출물만 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), E그룹에는 서양장미꽃 추출물만 포함하는 화장료 조성물(비교제형예2), F 그룹에는 홍화 추출물만 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 3), G 그룹에는 해당화 추출물만 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 4), H 그룹에는 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 모두 포함하지 않고 글리세린, 1,3-부틸렌글라이콜의 보습제만 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 5)을 각각 1일 2회씩 2주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 1주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다.　실험 결과는 하기 표 5에 나타내었다.
구분 사용 전 사용 2주 후 사용 4주 후
제형예 1 21.4 35.6 45.7
제형예 2 23.1 37.7 48.9
제형예 3 24.1 38.5 47.7
비교제형예 1 23.7 27.7 30.5
비교제형예 2 23.8 29.4 35.9
비교제형예 3 23.5 27.4 29.9
비교제형예 4 22.5 25.6 27.5
비교제형예 5 21.6 28.3 30.1
상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 5) 및 석류 추출물, 서양장미꽃 추출물, 홍화 추출물 및 해당화 추출물을 각각 함유한 화장료(비교제형예 1 내지 4)와 비교하여도 본 발명의 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물 함유한 화장료(제형예 1 내지 3)의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.
실험예 5: 피부 탄력 개선 효과 측정
실험예 5은 제조예 1 내지 3에서 수득한 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 포함하는 제형예 및 비교제형예에 따른 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 알아보기 위하여, 30~40대의 탄력이 감소한 여성 70명을 대상으로 측정하였다.　10명씩 7개 그룹으로 나눈 뒤, 1 그룹에는 제형예 1을, 2 그룹에는 제형예 2를, 3 그룹에는 제형예 3을, 4 그룹에는 비교제형예 1을, 5 그룹에는 비교제형예 2를, 6 그룹에는 비교제형예 3을, 그리고 7그룹에는 비교제형예 4를 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 12주 후 피부 탄력을 측정하였다. 얼굴 부위의 탄력을 cutometer SEM575 (MPA 580, Courage+Khazaka GmbH, Germany)를 이용하여 측정하였으며, 피부 탄력을 나타내는 R2(biological elasticity)를 도포 전과 도포 후를 측정한 뒤 개선도(%)로 평가하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타내었으며, 결과는 각 군에 대한 개선도의 평균치이다.
실험제품 피부 탄력 개선도(%)
제형예 1 23.5
제형예 2 28.1
제형예 3 26.8
비교제형예 1 13.2
비교제형예 2 12.2
비교제형예 3 11.2
비교제형예 4 12.3
상기 표 6에 나타난 바와 같이, 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물이 함유된 제형예 1 내지 3은 비교제형예 1 내지 4에 비하여 피부 탄력이 매우 향상됨을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

  1. 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선용인, 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화용인, 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 보습용인, 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선용인, 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 석류, 서양장미꽃, 홍화 및 해당화의 혼합 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법으로 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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