KR20180016088A - Meduim for culturing condiophores formable bacillus - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법; 상기 방법을 통해 제조된 분생포자 배양용 배지; 및 이를 이용한 분생포자 형성균 배양방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a culture medium for culturing conidiospore-forming bacteria; A culture medium for conidiospores prepared by the above method; And a method for culturing a conidia-forming microorganism using the same.
분생포자(conidium)는 진균류가 만드는 무성포자의 일종으로, 분생포자는 분생자병(conidiophore)이 형성된 다음 그 위에 여러 개의 마디가 있는 둥근 플라스크 모양의 파이어라이드를 만들고 마디의 끝부분에 1개씩 지그재그 모양으로 발달하여 포도송이와 유사한 형태를 지닌다.Conidium is a kind of silent spore produced by fungi, and conidophore is formed by the fungus. Then, a round flask-like firefly with several nodes is formed on the conidium, and one zigzag It is shaped like a grape cluster.
분생포자 형성균으로는 대표적으로 트리코더마 속(Trichoderma sp.), 허슈텔라 속(Hirsutella sp.), 아스페르길루스 속(Aspergillus sp.), 아스키소니아 속(Aschersonia sp.), 패실로마이세스 속(Paecilomyces sp.), 버티실리움 속(Verticillium sp.), 브베리아 속(Beauveria sp.), 노무라에라 속(Nomuraea sp.) 또는 메타르히지움 속(Metarrhizium sp.) 의 균류가 있다.With conidia forming bacteria is typically in Trichoderma (Trichoderma sp .), the genus Hirsutella sp.), Aspergillus genus (Aspergillus sp.), Sonia in ASCII (Aschersonia sp.), L indeed My process in (Paecilomyces sp .), Verticillium sp ., Beauveria sp . sp .), Nomuraea sp .) or fungi of the genus Metarrhizium sp .
분생포자 형성균은 원예, 식품 및 해충 방제제 등으로서의 유용한 용도가 다수 알려져 있는데, 대표적으로 백강균은 곤충류에 병을 일으켜 곤충이 사멸하게 하는 곤충성 병원균 중 하나로써 곤충 방역 생물 농약으로 각광받고 있다. Conidia sp. Forming bacteria are known to be useful for horticulture, food, and pest control agents. Typically, it is one of the insecticidal pathogens causing insects to cause disease, resulting in insect pest control.
분생포자 형성균이 분생포자를 형성하기 위해서는 통기성 좋은 배지의 선택이 매우 중요한데, 현재 많이 쓰이고 있는 분생포자 형성용 배지로는 버미큘라이트나 펄라이트 등과 같은 다공질의 광물질과 곡물을 기반으로 한 곡물 배지가 있다. 광물질을 다공질화시키기 위한 방법으로 고온으로 가열하는 방법이 보편적이고, 유기물을 다공질화시키기 위한 방법으로는 고온으로 가열한 다음 압력 주었다가 급격히 상온과 상압으로 변화시켜서 팽창시키는 방법이 있다.In order for the conidia to form conidia, it is very important to select a medium with good permeability. Currently, there are porous media such as vermiculite and pearlite, and cereal-based cereal-based media such as vermiculite and pearlite. As a method for making a mineral porous, a method of heating at a high temperature is a common method. As a method for making an organic material porous, there is a method of heating it to a high temperature and then expanding it by rapidly changing it to normal temperature and normal pressure.
분생포자 형성균 배양용 배지와 관련하여, 배양 배지에 귤피를 1~3% 첨가한 배양 배지를 이용하여 동충하초균을 배양하는 방법에 관한 기술(한국공개특허 제2010-0012923호), 두부 제조시 발생되는 폐비지를 이용하여 백강균을 배양하는 방법에 관한 기술(한국공개특허 제2006-0040021호), 폐한약재를 대체배지로 이용하여 백강균을 배양하는 방법에 관한 기술(한국공개특허 제2012-0076725호)이 개발되어 있다.With regard to the culture medium for conidia-forming bacteria, the technology for cultivating the Chinese cabbage (Korean Patent Publication No. 2010-0012923) using a culture medium in which 1 to 3% of citrus peel is added to the culture medium (Korean Patent Publication No. 2010-0012923) (Korean Unexamined Patent Application Publication No. 2006-0040021), a technique for cultivating Bacillus subtilis by using the herbal medicines as an alternative medium (Korean Patent Publication No. 2012-0076725 ) Has been developed.
그러나 이들 기술은 배양체의 겉면에만 균사가 피게 되어 균체량이 낮아지는 문제, 분생 포자가 형성되기에는 공극이 너무 거칠어 양질의 분생포자가 형성되지 않는 문제, 균주의 분생포자 발생 속도도 느리다는 문제, 또는 가격이 높은 곡물을 다량 사용하게 되므로 제조 단가가 높아지는 문제가 제기되어 왔다.However, these techniques are problematic in that the amount of mycelium is reduced due to mycelial growth only on the outer surface of the culture, the problem is that pores are too coarse to form conidium spores, There has been a problem that the manufacturing cost is increased because a large amount of high-priced grain is used.
이 때문에 분생포자 형성균의 유용한 가치에도 불구하고 본격적인 상품화가 지연되고 있고, 위와 같은 문제점을 해결할 수 있는 분생포자 형성균 배양용 배지의 개발이 절실한 실정이다.For this reason, despite the useful value of conidia spore-forming bacteria, full commercialization has been delayed, and development of a culture medium for conidia-forming culture that can solve the above problems is urgently required.
따라서 본 발명의 목적은 분생포자 형성균 배양의 최적 조건을 제공할 수 있는 신규 형태의 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel method for producing a culture medium for conidia-forming bacteria capable of providing optimal conditions for conidia-forming culture.
본 발명의 다른 목적은 상기 제조방법으로 제조된 분생포자 형성균 배양용 배지를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a culture medium for culturing a conidia-forming microorganism produced by the above production method.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 분생포자 형성균 배양용 배지를 이용한 분생포자 형성균의 배양방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a method for culturing conidia-forming bacteria using the medium for culturing the conidia-forming bacteria.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서,In order to achieve the above-mentioned object of the present invention,
본 발명은 목질재료 및 곡물재료를 포함하는 배지 원료를 준비하는 단계; 및The present invention relates to a method for preparing a medium feedstock comprising the steps of: preparing a medium feedstock comprising a woody material and a cereal material; And
배지 원료를 사상균으로 처리하는 단계를 포함하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법을 제공한다.And a step of treating the medium of the culture medium with filamentous bacteria.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사상균은 담자균일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the filamentous fungus may be a bacillus.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사상균으로 처리하는 단계는 배지 원료에 느타리 버섯, 새송이 버섯, 팽이 버섯 및 표고 버섯으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 버섯을 배양하는 단계일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the step of treating with the filamentous fungi may be a step of culturing at least one mushroom selected from the group consisting of Oyster mushroom, Mushroom mushroom, Mushroom mushroom and Shiitake mushroom.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 목질재료는 톱밥, 면실피, 면실박, 대패, 콘콥, 볏짚, 왕겨 및 펄프로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, The woody material may be at least one selected from the group consisting of sawdust, cottonseed, cottonseed, planter, conch, straw, rice hull and pulp.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곡물재료는 미강, 밀기울, 옥분, 건비지 및 대두피로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the grain material may be at least one selected from the group consisting of rice bran, wheat bran, rice bran, dried bran, and soybean bran.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 분생포자 형성균 배양용 배지는 수분 함량이 40 내지 70중량%일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the culture medium for conidia-forming microorganism culture may have a water content of 40 to 70% by weight.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 분생포자 형성균이 트리코더마 속(Trichoderma sp .), 허슈텔라 속(Hirsutella sp.), 아스페르길루스 속(Aspergillus sp.), 아스키소니아속(Aschersonia sp.), 패실로마이세스 속(Paecilomyces sp.), 버티실리움속(Verticillium sp.), 브베리아 속(Beauveria sp.), 노무라에라 속(Nomuraea sp.) 또는 메타르히지움 속(Metarrhizium sp.)의 균류일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the conidiospore is selected from the group consisting of Trichoderma sp . , Hirsutella sp . sp.), Aspergillus genus (Aspergillus sp .), genus Aschersonia sp .), the genus Paecilomyces sp .), genus Verticillium sp ., Beauveria sp .), Nomuraea sp . or Metarrhizium sp ., for example.
또한, 본 발명은 방법에 따라 제조된 분생포자 형성균 배양용 배지를 제공한다.In addition, the present invention provides a medium for culture of conidia-forming bacteria prepared according to the method.
또한, 본 발명은 상기 분생포자 형성균 배양용 배지를 준비하는 단계; b) 상기 배지에 분생포자 형성균을 접종하는 단계; 및 c) 상기 분생포자 형성균을 배양하는 단계를 포함하는 분생포자 형성균의 배양방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for culturing a conidia-forming microorganism; b) inoculating conidia forming bacteria into said medium; And c) culturing the conidium spore-forming microorganism.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 b) 단계는 분생포자 형성균을 배지 전체를 기준으로 5 내지 30중량%의 비율로 접종할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the b) may be inoculated with the conidiospore-forming bacteria at a ratio of 5 to 30% by weight based on the entire culture medium.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 c) 단계는 1 내지 50℃의 온도에서 3-30일 동안 배양할 수 있다.In one embodiment of the present invention, step c) may be carried out at a temperature of 1 to 50 DEG C for 3 to 30 days.
본 발명에 따른 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법은 배지 원료에 사상균으로 처리하는 단계를 통해 사상균이 난분해성 섬유소를 분해시켜 배지 원료의 통기성을 현저히 향상시키고, 사상균 처리 후 배지 내에 다량의 단백질로 구성된 사상균의 균사체가 남아 있게 되므로 이들이 추가의 영양성분으로 기능할 수 있게 된다. 따라서 상기와 같은 방법으로 제조된 본 발명의 분생포자 형성균 배양용 배지는 공극, 수분, 영양분, 산도 특성이 분생포자 형성균이 성장할 수 있는 최적 배양조건을 가지는바, 양질의 분생포자 형성균을 단시간 내에 대량 배양할 수 있는 장점을 가진다.The method for producing a culture medium for culturing a conidia-forming microorganism according to the present invention is a method for culturing a culture medium for conidia-forming microorganism culture according to the present invention, which comprises treating the culture medium with filamentous fungi to degrade fungus-resistant fibrinous cells to remarkably improve air permeability of the culture medium, The mycelium of filamentous fungi is left, so that they can function as additional nutrients. Therefore, the culture medium for conidia-forming bacteria of the present invention produced by the above-mentioned method has optimum culture conditions for pore, moisture, nutrients and acidity to grow conidiospore-forming bacteria, It has an advantage that it can be mass-cultured in a short time.
도 1은 배지원료에 사상균을 접종하는 과정을 개략적으로 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따라 느타리 버섯을 배양한 배지에 분생포자 형성균을 접종한 사진이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따라 새송이 버섯을 배양한 배지에 분생포자 형성균을 접종한 사진이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따라 표고 버섯을 배양한 배지에 분생포자 형성균을 접종한 사진이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따라 느타리 버섯을 배양한 배지에 분생포자 형성균을 접종한 후 분생포자 형성이 완료된 사진이다.
도 6a는 2015년 9월 천안 광덕산 채집한 양봉벌을 나타낸 것이며, 6b는 상기 양봉벌에서 분리한 아스페르길루스 노미우스(Aspergillus nomius) 균주를 현미경으로 50배 확대 촬영한 사진이다.
도 7a는 2016년 포항시 흥해읍 야산 채집 솔수하늘소의 다리를 현미경으로 100배 확대 촬영한 사진이며, 7b는 상기 솔수하늘소에서 분리한 메타르히지움 아니소플리애(Metarrhizium anisopliae) 균주를 나타낸 것이다.
도 8a는 포항시에서 채집한 진딧물을 현미경으로 50배 확대 촬영한 사진이며, 8b는 상기 진딧물로부터 분리한 브베리아 바시아나(Beauveria bassiana) 균주를 50배 확대 촬영한 사진이다.
도 9는 백강균 분생포자를 현미경으로 확대 촬영한 사진이다(9a: 50배, 9b: 100배, 9c: 600배).
도 10은 진딧물에 백강균 감염 후 시간 경과에 따른 형태 변화를 현미경으로 50배 확대 촬영한 사진이다(10a: 백강균 감염 전, 10b: 백강균 감염 직후, 10c: 백강균 감염 초기, 10d: 백강균 감염 중기, 10e: 백강균 감염 후기 건조전, 10f: 백강균 감염 후기 건조 상태).Fig. 1 schematically shows the process of inoculating filamentous fungi into media.
FIG. 2 is a photograph of a conidia-forming bacterium inoculated on a medium cultured on a mushroom according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 is a photograph of a conidia-forming bacterium inoculated on a culture medium of a mushroom according to an embodiment of the present invention.
FIG. 4 is a photograph of a conidia-forming bacterium inoculated on a medium in which shiitake was cultivated according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 is a photograph showing completion of conidium formation by inoculating conidia forming bacteria into a medium cultivated with Pleurotus ostreatus according to an embodiment of the present invention.
6a shows a beekeeping bee collected from Cheonan Gwangduksan in September 2015 and 6b shows a beekeeping bee collected from Aspergillus nomius ) strain by a microscope.
Fig. 7a is a photograph of a 100x magnification photograph of a leg of a midsummer picking horn of the Hokkaido area of Pohang City, Pohang in 2016, and Fig. 7b is a photograph showing a strain of Metarrhizium anisopliae isolated from the above-mentioned marshland.
FIG. 8A is a photograph of aphid collected in Pohang City under magnification of 50 times magnified by a microscope, and 8b is a photograph of Beauveria bassiana ) strain 50 times.
9 is a photograph (9a: 50-fold, 9b: 100-fold, 9c: 600-fold) photographed with a microscope.
FIG. 10 is a photograph of a 50-fold magnification photograph of aphid by a microscope after a period of time after infection with aphids by a microscope (10a: before infection with platelets, 10b: immediately after infection with platelets, 10c: early infection with platelets, 10d: : Before and after drying in late stage of infection with Paekcheongjong, 10f: dry late stage of late infection with Paekcheunggi).
본 발명은 목질재료 및 곡물재료를 포함하는 배지 원료를 준비하는 단계; 및 배지 원료를 사상균으로 처리하는 단계를 포함하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention relates to a method for preparing a medium feedstock comprising the steps of: preparing a medium feedstock comprising a woody material and a cereal material; And a step of treating the culture medium with filamentous fungi.
본 명세서에서 언급하는 ‘목질재료’는 나무나 식물에서 얻어지는 식물성 물질(Ligno-cellulosic materials)을 의미한다.As used herein, 'woody material' refers to ligno-cellulosic materials obtained from trees or plants.
상기 목질재료의 종류로는 톱밥, 면실피, 면실박, 대패, 콘콥, 볏짚, 왕겨 및 펄프 등을 예시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Examples of the woody material include, but are not limited to sawdust, cottonseed, cottonseed, planter, conch, straw, rice hull and pulp.
본 명세서에서 언급하는 ‘곡물재료’는 식물로부터 얻을 수 있고 사람의 식량이 되는 물질로서 곡물을 기반으로 하는 물질을 의미한다.As used herein, the term " grain material " refers to a grain-based material as a material that can be obtained from a plant and becomes a human food.
상기 곡물재료의 종류로는 미강, 밀기울, 옥분, 건비지 및 대두피 등을 예시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Examples of the type of the grain material include, but are not limited to, rice bran, wheat bran, rice bran, soybean curd, and scalp.
본 명세서에서 언급하는 ‘사상균’은 곰팡이, 버섯, 효모와 같은 호기성 종속영양미생물의 총칭으로 균사체(mycelium: 복수 mycelia)를 형성하며, 포자(spore)를 형성하여 번식하고 균사가 실모양으로 되어 있으며 진균 또는 곰팡이라고도 한다.As used herein, 'filamentous fungus' is a generic term for aerobic heterotrophic microorganisms such as fungi, mushroom, and yeast. It forms mycelium (plural mycelia), forms spores by propagation, Also known as fungi or mold.
상기 사상균의 종류로는 담자균을 예시할 수 있으며, 더욱 구체적으로는 느타리 버섯, 송이 버섯, 새송이 버섯, 표고 버섯, 팽이 버섯, 목이 버섯 등과 같은 스스로 양분을 만들지 못하여 기생하는 생물을 예시할 수 있다.Examples of the fungus include bacillus, and more specifically, parasitic organisms such as oyster mushroom, matsutake mushroom, mushroom mushroom, shiitake mushroom, top mushroom, and throat mushroom can not be produced by themselves.
본 명세서에서 언급하는 ‘분생포자 형성균’은 분생포자(진균류가 만드는 무성포자의 일종)를 형성할 수 있는 균류를 의미한다.As used herein, the term "conidia" means fungi capable of forming conidia (a species of aseptic spore produced by fungi).
상기 분생포자 형성균은 대표적으로 트리코더마 속(Trichoderma sp .), 허슈텔라 속(Hirsutella sp .), 아스페르길루스 속(Aspergillus sp .), 아스키소니아 속(Aschersonia sp .), 패실로마이세스 속(Paecilomyces sp .), 버티실리움 속(Verticillium sp .), 브베리아 속(Beauveria sp .), 노무라에라 속(Nomuraea sp .) 또는 메타르히지움 속(Metarrhizium sp .)을 예시할 수 있다.The conidiospore forming bacteria are typically Trichoderma sp . ), The genus Hirsutella sp . ), The genus Aspergillus sp . ), The genus Aschersonia sp . ), Paecilomyces sp . , Verticillium spp . sp . , Beauveria sp . ), In Nomura Era (Nomuraea sp.) Or methoxy tareuhi erase in (Metarrhizium sp . ) Can be exemplified.
본 명세서에서 언급하는 ‘분생포자 형성균 배양용 배지’는 상기와 같은 분생포자 형성균을 효과적으로 배양할 수 있는 배지를 의미한다.As used herein, the term " medium for culturing conidia spore-forming bacteria " means a medium capable of effectively culturing the conidia-forming bacteria as described above.
본 발명의 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법을 단계별로 설명하면 다음과 같다.The production method of the culture medium for conidia-forming bacteria of the present invention will be described step by step.
1단계: Stage 1: 목질재료Woody material 및 곡물재료를 포함하는 배지 원료를 준비하는 단계 And preparing a medium raw material containing the grain material
우선, 목질재료 및 곡물재료를 포함하는 배지 원료를 준비한다.First, a medium raw material containing a woody material and a grain material is prepared.
상기 목질재료로 톱밥, 면실피, 면실박, 대패, 콘콥, 볏짚, 왕겨 및 펄프로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.The woody material may be at least one selected from the group consisting of sawdust, cottonseed, cottonseed, planter, corncob, rice straw, rice hull and pulp.
상기 곡물재료로 미강, 밀기울, 옥분, 건비지 및 대두피로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니고, 분생포자 형성균의 배양에 필요한 영양분을 함유하고 있는 것이라면 특별한 제한 없이 이용될 수 있다.The grain material may be at least one selected from the group consisting of rice bran, wheat bran, corn, dried bean curd, and soybean curd, but is not limited thereto and may be used without any particular limitation as long as it contains nutrients necessary for culturing the conidia- .
상기 곡물재료와 목질재료는 5:30~95:70의 부피비로 배합될 수 있다.The grain material and woody material may be blended in a volume ratio of 5:30 to 95:70.
2단계: 배지 원료를 Step 2: 사상균으로As a fungus 처리하는 단계 Processing step
다음, 목질화된 배지 원료를 사상균으로 처리한다.Next, the lignocellulous medium is treated with filamentous bacteria.
일반적으로 곡물재료나 목질재료들은 섬유소가 분해되기까지 통기성이 불량하다. 그러나 본 발명에서와 같이 배지 원료를 사상균으로 처리하는 단계를 거치게 되면 사상균이 난분해성 섬유소인 셀룰로오스, 헤미셀룰로스, 리그닌 등을 분해시켜 배지 원료의 통기성을 현저히 향상시킬 수 있다. 이는 사상균의 처리에 의해 셀룰로오스, 헤미셀룰로스, 리그닌 등의 결합이 끊어지고 배지 원료의 세포벽 사이로 호스와 같은 형태의 통기가 형성되기 때문이다.Generally, grain or woody materials are poorly ventilated until the fiber is degraded. However, when the culture medium is treated with filamentous fungi as in the present invention, the fungi can decompose cellulose, hemicellulose, lignin and the like, which are poorly decomposable fibrils, to significantly improve the air permeability of the culture medium. This is because the binding of cellulose, hemicellulose, lignin and the like is cut off by the treatment of the filamentous fungus and a hose-like ventilation is formed between the cell walls of the medium raw material.
또한, 배지 원료를 사상균으로 처리하고 나면 배지 내에 다량의 단백질로 구성된 사상균의 균사체가 남아 있게 되므로 이들이 추가의 영양성분으로 기능할 수 있게 되는 장점을 갖는다.Further, when the medium of the medium is treated with filamentous fungi, the mycelium of filamentous fungi composed of a large amount of proteins remains in the medium, so that they have an advantage that they can function as additional nutrients.
상기 사상균의 종류로는 특별히 제한되는 것은 아니지만, 담자균류가 가장 효율적이다. 이는 담자균류에 의한 리그닌 분해율이 가장 우수한 것이다. 또한, 갈색부후균보다는 백색부후균이 리그닌 분해력이 왕성하여 더 효율적이다. 사상균으로 느타리 버섯, 새송이 버섯, 팽이 버섯 및 표고 버섯이 등이 이용될 수 있다.The type of the fungi is not particularly limited, but the fungi are most effective. This is the most excellent decomposition rate of lignin by basidiomycetes. In addition, the white rot fungus is more efficient than the brown rot fungus because of its strong lignin decomposition ability. Mushroom, mushroom, mushroom, and shiitake can be used as fungi.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 사상균으로 처리하는 단계는 배지 원료에 느타리 버섯, 새송이 버섯, 팽이 버섯 및 표고 버섯으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 버섯을 배양하는 단계일 수 있다. 각종 버섯을 배양시킨 후의 버섯 폐배지가 가진 공극, 수분, 영양분, 산도 특성은 분생포자 형성균의 최적 배양조건과 매우 유사하기 때문에, 별도의 복잡한 가공 과정을 추가하지 않고도 그 자체로서 우수한 분생포자 형성균 배양용 배지로 사용될 수 있어 유리하다. 또한, 축산 농가에서 버려지거나 방치되고 있는 폐배지를 재활용할 수 있으므로 친환경적이면서도 분생포자 형성균 제조 단가를 현저히 낮출 수 있다.In one embodiment of the present invention, the step of treating with the filamentous fungi may be a step of culturing at least one mushroom selected from the group consisting of oyster mushroom, fresh mushroom, top mushroom and shiitake mushroom. The pore, moisture, nutrients, and acidity characteristics of the mushroom waste medium after cultivation of various mushrooms are very similar to the optimal cultivation conditions of the conidia forming bacteria. Therefore, it is possible to form excellent conidial spores It can be used as a culture medium for bacterial culture. In addition, since waste media that are left or left in livestock farms can be recycled, they can be eco-friendly and significantly reduce the manufacturing cost of conidiogenous bacteria.
한편, 제조된 분생포자 형성균 배양용 배지에 곡물 재료가 지나치게 적게 포함되는 경우 분생포자 형성균 배양에 있어서 영양성분의 부족으로 분생포자 형성이 빈약하거나 배양이 늦어질 수 있으므로, 곡물재료가 추가로 첨가하는 것이 가능하다. 이 때, 구체적인 첨가량은 버섯 폐배지 각각이 가지는 특성에 따라 조절되는 것이 바람직하다. 다만, 곡물 재료가 지나치게 많이 포함될 경우 배지 점도가 증가되어 산소 용해도가 감소되는데 점액질은 산소 투과율을 감소시켜 균사 생육을 저해하게 되거나 버섯 폐배지의 장점인 다량의 공극 형성이나 높은 수분 함량 보유에 따른 본 발명의 효과가 충분히 발현되지 않을 수 있으니 유의하여야 한다.On the other hand, when the prepared culture medium for conidia-forming microorganism culture contains too little grain material, congenital spore formation may be poor or the culture may be delayed due to lack of nutritional components in the conidia-forming microorganism culture, Can be added. At this time, the specific addition amount is preferably adjusted according to the characteristics of each of the mushroom waste media. However, when the amount of cereal material is too much, the viscosity of the medium is increased to decrease the oxygen solubility. The mucilage may decrease the oxygen permeability to inhibit mycelial growth, or may cause the formation of a large amount of pores or a high moisture content It should be noted that the effect of the invention may not be fully manifested.
상기와 같은 단계를 거친 분생포자 형성균 배양용 배지는 추가적으로 배지의 수분 함량이 40 내지 70중량%가 되도록 조정할 수 있다.The culture medium for culturing the conidia spore-forming bacteria which has undergone the above steps may further be adjusted so that the moisture content of the medium is 40 to 70% by weight.
본 발명은 또한, 상기 방법에 따라 제조된 분생포자 형성균 배양용 배지를 제공한다.The present invention also provides a culture medium for culturing a conidia-forming microorganism produced according to the above method.
본 발명의 분생포자 형성균 배양용 배지는 공극, 수분, 영양분, 산도 특성이 분생포자 형성균이 성장할 수 있는 최적 배양조건을 가지는바, 양질의 분생포자 형성균을 단시간 내에 대량 배양할 수 있는 장점을 가진다.The culture medium for culturing the conidia-forming microorganism of the present invention has the optimum culture conditions for pore, moisture, nutrient and acidity to grow conidiospore-forming bacteria, and thus it is possible to cultivate a high quality conidia-forming microorganism in a short time .
본 발명은 또한, a) 상기 분생포자 형성균 배양용 배지를 준비하는 단계; b) 상기 배지에 분생포자 형성균을 접종하는 단계; 및 c) 상기 분생포자 형성균을 배양하는 단계를 포함하는 분생포자 형성균의 배양방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing a microorganism, comprising the steps of: a) preparing a culture medium for culturing the conidia-forming microorganism; b) inoculating conidia forming bacteria into said medium; And c) culturing the conidium spore-forming microorganism.
상기 b) 단계에서, 분생포자 형성균은 분생포자 형성균 배양용 배지 전체를 기준으로 5중량% 내지 30중량%씩 접종하는 것이 바람직하다. 배지의 사용량이 지나치게 많은 경우 분생포자 형성이 원활하지 않을 수 있고, 지나치게 적은 경우 배양 면적 대비 균류 배양율이 비효율적인 문제가 있을 수 있다.In step b), the conidiospore-forming microorganism is preferably inoculated in an amount of 5 to 30% by weight based on the entire culture medium for conidia-forming microorganism culture. If the amount of the medium used is too large, conidial spores may not be formed smoothly. If the amount is too small, there may be a problem that the culture rate of the fungus to the cultured area is inefficient.
상기 c) 단계에서, 배양 온도는 1 내지 50℃가 바람직하고, 배양 기간은 3일 내지 30일이 바람직하다. 상기 배양 기간은 종래 기술에 따른 배양 기간에 비해 상당히 단축된 것으로 본 발명에 따른 분생포자 형성균 배양용 배지를 이용할 경우 배양 기간이 30일 이내로 짧은 경우라 하더라도 양질의 분생포자가 대량 형성된다. 또한, 본 발명에 따른 분생포자 형성균 배양용 배지를 이용할 경우 종래 배지 대비 분생포자 발생 정도가 10-100배 이상으로 증대되는 효과를 보인다.In the step c), the incubation temperature is preferably 1 to 50 캜, and the incubation period is preferably 3 to 30 days. The culture period is considerably shortened compared to the culture period according to the prior art. When the culture medium for culturing the conidia of the present invention is used, even if the culture period is as short as 30 days, a large amount of fine particle cells is formed. In addition, when the culture medium for culturing the conidia spore-forming bacteria according to the present invention is used, the degree of conidiospore generation compared to the conventional culture medium is increased to 10-100 times or more.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are for further illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
<< 실시예Example 1> 1>
분생포자 Conidia 형성균Forming fungus 배양용 배지의 제조 Preparation of Culture Medium
하기 표 1과 같은 다양한 조성의 배지 원료에 사상균을 접종한 다음 22~25℃의 온도에서 느타리 버섯 30일, 새송이 버섯 45일, 표고버섯 120일, 팽이버섯 50일 동안 배양 처리한 다음, 자실체를 제거하고, 남은 배지를 수거하여 본 발명에 따른 분생포자 형성균 배양용 배지로 준비하였다.After inoculating filamentous fungi into media materials having various compositions as shown in the following Table 1, they were cultured for 30 days at a temperature of 22 to 25 ° C for a period of 30 days, for a period of 45 days, for a period of 45 days, for a period of 120 days, and for a period of 50 days. And the remaining medium was collected and prepared as a medium for culture of conidia-forming bacteria according to the present invention.
배지 원료에 사상균을 접종하는 과정을 아래에서 자세히 기재하였다.The process of inoculating filamentous fungi into the media is described in detail below.
먼저, 종균은 살균된 액체배지에 접종 후 배양하는 과정을 거쳐 준비하였다. 이때, 액체배지는 밀가루 3g 및 설탕 20g에 물 1L에 첨가하여 풀을 쑤어 전분을 알파화시키고 멸균 처리하여 침전이 없도록 제조한 것을 사용하였다.First, seeds were prepared by inoculation and cultivation in a sterilized liquid medium. At this time, 3 g of wheat flour and 20 g of sugar were added to 1 L of water, and the paste was soaked in starch to be alpha and sterilized to prevent precipitation.
이후, 배지원료에 사상균을 접종하기 위하여, 배지원료는 수분이 55%가 되도록 조정한 후 입병(PP병)하고 121℃에서 90분 동안 살균과정을 거친 후 14℃에서 냉각한 다음, 상기 준비된 종균을 접종(접종량 30cc 표준접종/1100cc PP병)하였다. after, In order to inoculate filamentous fungi into the culture medium, the culture medium was adjusted to have a moisture content of 55%, followed by admission (PP bottle), sterilization at 121 ° C for 90 minutes, cooling at 14 ° C, (Inoculation volume of 30cc standard inoculation / 1100cc PP bottle).
도 1에서 배지원료에 사상균을 접종하는 과정을 개략적으로 나타내었다.FIG. 1 schematically shows a process of inoculating filamentous fungi into a culture medium.
<< 실험예Experimental Example 1> 1>
분생포자 Conidia 형성균의Formative 배양 culture
상기 비교예 1-3 및 실시예 1-8에 따른 배양용 배지에 다양한 분생포자 형성균을 접종한 다음, 분생포자 형성능력을 비교하였다. 모든 조건은 121℃에서 90분간 멸균처리 후 액상의 종균을 20cc 무균 접종하여 약 30일 후 관찰하여 포자수를 미생물카운터(Automatic Colony Counting System, 제작사명/모델명 IUL / Flesh mat)를 이용하여 산정하였다. 각각의 배지는 수분 55%로 조정하였으며 밀알은 스팀처리하여 수분이 45% 이내로 조정하여 관찰하였다. 한편, 각각이 실험데이터는 5반복 평균으로 계산하여 기록하였다.The culturing media according to Comparative Examples 1-3 and 1-8 were inoculated with various conidia forming bacteria, and then their conidia formation ability was compared. All conditions were sterilized at 121 ° C for 90 minutes, 20cc aseptic inoculum was inoculated after 20 days of inoculation, and the number of spores was estimated by using a microorganism counter (Automatic Colony Counting System, manufactured by IUL / Flesh mat). Each medium was adjusted to 55% moisture and the wheat was steamed to adjust the moisture to within 45%. On the other hand, each experimental data was calculated and recorded as 5 repetition averages.
분생포자 형성균으로는 트리코더마 하르지아늄(trichoderma harzianum), 허슈텔라 엔토모필라(Hirsutella entomophila), 아스페르길루스 노미우스( Aspergillus nomius), 아스키소니아 알레이로디스(Aschersonia aleyrodis), 패실로마이세스 테누이프스(Paecilomyces tenuipes), 버티실리움 레카니(Verticillium lecanii), 브레비아 바시아나(Beauveria bassiana), 노무라에라 릴레이(Nomuraea rileyi), 메타르히지움 아니소플리애(Metarrhizium anisopliae)를 사용하였다.The conidia forming bacteria include trichoderma harzionium harzianum ), Hirsutella entomophila ), Aspergillus Nomi mouse (Aspergillus nomius), which display the ASCII Sonia Alessio (Aschersonia aleyrodis), L indeed my sister, Te Seth peuseu (Paecilomyces tenuipes ), Verticillium lecanii , Beauveria bassiana), Nomura Era relay (Nomuraea rileyi), Tome tareuhi Clear No small kids Plymouth (Metarrhizium anisopliae ) was used.
이때, 상기 트리코더마 하르지아늄(trichoderma harzianum)은 2014년 3월충남 예산 버섯사랑 농장 김기환 내에 오염원 중 분리하여 수득하였으며; 허슈텔라 엔토모필라(Hirsutella entomophila)는 2009년 9월 천안 광덕산 지장리 채집하였으며; 아스페르길루스 노미우스(Aspergillus nomius)는 2015년 9월 천안 광덕산 양봉벌에서 분리하여 수득하였으며; 아스키소니아 알레이로디스(Aschersonia aleyrodis)는 2015년 5월 수원시 화서동 아파트 단지 온실가루이에서 수득하였으며; 패실로마이세스 테누이프스(Paecilomyces tenuipes)는 2008년 공주시 유구에서 매뚜기 채집을 통해 분리 수득하였으며; 버티실리움 레카니(Verticillium lecanii)는 2012년 수원 농촌진흥천 서호공원 온실가루이 분리하여 수득하였으며; 브레비아 바시아나(Beauveria bassiana)는 2009년 천안 광덕산 매뚜기에서 수득하고 돌연변이 유기원인 EMS 0.3% 6시간 침지처리에 의하여 변이된 개체중 포자형성능력이 우수한 개체를 분리선발한 균주이며; 노무라에라 릴레이(Nomuraea rileyi)는 2011년 충남 홍성 장곡 누애에서 분리하여 수득하였으며; 메타르히지움 아니소플리애(Metarrhizium anisopliae)는 2016년 포항시 흥해읍 야산 채집 솔수하늘소에서 분리하여 수득하였다.At this time, the trichoderma harijium harzianum ) was isolated in March 2014 from a pollutant source in Kim Ki-hwan, a mushroom-loving farm in Chungnam; Hirsutella entomophila ) were collected in September 2009 in Cheonan, Gwangdeoksan; Aspergillus nomius was isolated in September 2015 from the Bee Bee Pollin of Cheonan; Aschersonia aleyrodis ) was obtained in May 2015 from a greenhouse in Suwon, Hwasa-dong apartment complex; Paecilomyces tenuipes was isolated in 2008 from locusts collected in Gongju, Korea; Verticillium lecanii was obtained in 2012 by separating the greenhouse powder from Chungho West Lake Park in Suwon Rural Village; Beauveria bassiana is a strain obtained from a locus in Cheonan, Gwangdeok, Cheonan in 2009, and isolates selected by mutation organism EMS 0.3% for 6 hours immersed in a mutant organism having superior spore formation ability; Nomura Era relay (Nomuraea rileyi) was obtained by separation from Chungcheongnam Hongsung janggok nuae 2011; Metarrhizium anisopliae was isolated in 2016 from the Hokkaido-Yusan-euphyeon-gun, Pohang city.
<1-1> <1-1> 사상균으로As a fungus 느타리 버섯을Oyster mushrooms 처리한 경우 If processed
상기 실시예 1을 통해 준비된 사상균으로 느타리 버섯을 처리한 배지에 다양한 분생포자 형성균 각각을 접종한 후 분생포자 형성균의 발생 정도를 측정하였다. The incidence of conidiospore-forming bacteria was measured after inoculation of various conidia-forming bacteria in the medium treated with oyster mushroom prepared in Example 1 above.
그 결과 상기 표 2에서 나타낸 바와 같이, 사상균으로 처리한 배지를 사용하여 분생포자 형성균을 배양한 모든 군에서 사상균 처리 단계를 거치지 않은 배지를 사용한 비교예 1-3의 경우보다 현저하게 증가된 분생포자 형성 능력을 보였다.As a result, as shown in Table 2, in all the groups cultured with the conidia-forming bacteria using the medium treated with the filamentous fungus, the significantly increased incidence Showed spore formation ability.
<1-2> <1-2> 사상균으로As a fungus 새송이Safflower 버섯을 처리한 경우 When mushrooms are processed
상기 실시예 1을 통해 준비된 사상균으로 새송이 버섯을 처리한 배지에 다양한 분생포자 형성균 각각을 접종한 후 분생포자 형성균의 발생 정도를 측정하였다.The incidence of conidiospore-forming bacteria was measured after inoculation of various conidia-forming bacteria in the medium treated with the filamentous fungus prepared in Example 1 above.
그 결과 상기 표 3에서 나타낸 바와 같이, 사상균으로 처리한 배지를 사용하여 분생포자 형성균을 배양한 모든 군에서 사상균 처리 단계를 거치지 않은 배지를 사용한 비교예 1-3의 경우보다 현저하게 증가된 분생포자 형성 능력을 보였다.As a result, as shown in Table 3, in all the groups cultured with conidia-forming bacteria using the medium treated with filamentous fungi, the significantly increased incidences Showed spore formation ability.
<1-3> <1-3> 사상균으로As a fungus 표고 버섯을Shiitake mushrooms 처리한 경우 If processed
상기 실시예 1을 통해 준비된 사상균으로 표고 버섯을 처리한 배지에 다양한 분생포자 형성균 각각을 접종한 후 분생포자 형성균의 발생 정도를 측정하였다.The incidence of conidiospore-forming bacteria was measured after inoculation of various conidia-forming bacteria in the medium treated with mushroom as the filamentous fungus prepared in Example 1 above.
그 결과 상기 표 4에서 나타낸 바와 같이, 사상균으로 처리한 배지를 사용하여 분생포자 형성균을 배양한 모든 군에서 사상균 처리 단계를 거치지 않은 배지를 사용한 비교예 1-3의 경우보다 현저하게 증가된 분생포자 형성 능력을 보였다.As a result, as shown in Table 4, in all the groups cultured with the conidiospore-forming bacteria using the medium treated with the filamentous fungus, the significantly increased incidence Showed spore formation ability.
<1-4> <1-4> 사상균으로As a fungus 팽이 버섯을Top mushrooms 처리한 경우 If processed
상기 실시예 1을 통해 준비된 사상균으로 팽이 버섯을 처리한 배지에 다양한 분생포자 형성균 각각을 접종한 후 분생포자 형성균의 발생 정도를 측정하였다.The incidence of conidia forming bacteria was measured after inoculation of various conidia-forming bacteria in the medium treated with the filamentous fungus prepared in Example 1 above.
그 결과 상기 표 5에서 나타낸 바와 같이, 사상균으로 처리한 배지를 사용하여 분생포자 형성균을 배양한 모든 군에서 사상균 처리 단계를 거치지 않은 배지를 사용한 비교예 1-3의 경우보다 현저하게 증가된 분생포자 형성 능력을 보였다.As a result, as shown in Table 5, in all the groups cultured with the conidia-forming bacteria using the medium treated with the filamentous fungus, the significantly increased incidences Showed spore formation ability.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.
Claims (11)
배지 원료를 사상균으로 처리하는 단계를 포함하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.Preparing a medium feedstock comprising a woody material and a cereal material; And
And a step of treating the culture medium with filamentous fungi.
상기 사상균은 담자균인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the filamentous fungus is a bacillus subtilis.
상기 사상균으로 처리하는 단계는 배지 원료에 느타리 버섯, 새송이 버섯, 팽이 버섯 및 표고 버섯으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 버섯을 배양하는 단계인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the step of treating with the filamentous fungi is a step of culturing at least one mushroom selected from the group consisting of Oyster mushroom, Mushroom mushroom, Mushroom mushroom, and Shiitake mushroom in a culture medium.
상기 목질재료는 톱밥, 면실피, 면실박, 대패, 콘콥, 볏짚, 왕겨 및 펄프로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the woody material is at least one selected from the group consisting of sawdust, cottonseed, cottonseed, planter, corncob, rice straw, rice hull and pulp.
상기 곡물재료는 미강, 밀기울, 옥분, 건비지 및 대두피로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the cereal material is at least one selected from the group consisting of rice bran, wheat bran, corn, soybean curd and soybean curd.
상기 분생포자 형성균 배양용 배지의 수분 함량이 40 내지 70중량%인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
Wherein the water content of the culture medium for conidia-forming microorganism culture is 40 to 70% by weight.
상기 분생포자 형성균이 트리코더마 속(Trichoderma sp.), 허슈텔라 속(Hirsutella sp.), 아스페르길루스 속(Aspergillus sp.), 아스키소니아속(Aschersonia sp.), 패실로마이세스 속(Paecilomyces sp.), 버티실리움속(Verticillium sp.), 브베리아 속(Beauveria sp.), 노무라에라 속(Nomuraea sp.) 또는 메타르히지움 속(Metarrhizium sp.)의 균류인 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균 배양용 배지의 제조방법.The method according to claim 1,
The conidiospore-forming microorganism is Trichoderma sp.), heosyu telra in (Hirsutella sp.), Aspergillus genus (Aspergillus sp.), Sonia in ASCII (Aschersonia sp.), L indeed My process in (Paecilomyces sp .), Verticillium sp ., Beauveria sp . sp .), Nomuraea sp .) or Metarrhizium sp .). < / RTI >
b) 상기 배지에 분생포자 형성균을 접종하는 단계; 및
c) 상기 분생포자 형성균을 배양하는 단계를 포함하는, 분생포자 형성균의 배양방법.a) preparing the medium of claim 8;
b) inoculating conidia forming bacteria into said medium; And
c) culturing the conidia-forming bacteria.
상기 b) 단계는 분생포자 형성균을 배지 전체를 기준으로 5 내지 30중량%의 비율로 접종하는 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균의 배양방법.10. The method of claim 9,
Wherein the step b) comprises inoculating the conidia-forming bacteria at a ratio of 5 to 30% by weight based on the whole culture medium.
상기 c) 단계는 1 내지 50℃의 온도에서 3-30일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는 분생포자 형성균의 배양방법.10. The method of claim 9,
Wherein the step c) is carried out at a temperature of 1 to 50 DEG C for 3 to 30 days.
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