KR20180014419A - Biomarkers for diagnosing rheumatoid arthritis - Google Patents

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KR20180014419A
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Abstract

The present invention relates to a biomarker for diagnosing rheumatoid arthritis, evaluating the activity of rheumatoid arthritis and/or prognosis prediction of the severity of rheumatoid arthritis, and use thereof. A composition for diagnosing rheumatoid arthritis includes a medicine that measures the level of expression of one or more proteins.

Description

류마티스 관절염 진단용 바이오마커{Biomarkers for diagnosing rheumatoid arthritis}{Biomarkers for diagnosing rheumatoid arthritis}

본 발명은 류마티스 관절염 진단용 바이오마커에 관한 것이다. The present invention relates to a biomarker for diagnosis of rheumatoid arthritis.

류마티스 관절염(RA: Rheumatoid Arthritis)은 관절 주위를 둘러싸고 있는 활막이라는 조직의 염증 때문에 일어나는 질환으로 우리나라 전체 인구 중 대략 1%가 환자군으로 추정되고 있는 대표적인 만성질환이다.Rheumatoid arthritis (RA) is a disease caused by the inflammation of the synovium that surrounds the joints. It is a typical chronic disease in which about 1% of the total population in Korea is estimated to be a patient.

류마티스 관절염의 진단은 일차적으로 임상 증상에 의존하고 있으나 이미 관절의 파괴가 상당히 진행된 후 진단이 내려지게 되는 한계가 있으며, 류마티스 관절염의 혈청학적 표지자로서 류마티스 유사인자(Rheumatoid factor, RF)가 국제적 진단 기준인 미국류마티스학회(American College of Rheumatology, ACR)의 진단기준에 포함되어 있기는 하나, RF는 류마티스 관절염 환자의 20%에서 병의 진행과정 내내 음성을 보여 민감도에 문제가 있으며, 다른 류마티스성 질환이나 만성 염증, 악성종양, 심지어 일부 건강한 노인에게도 나타나 특이도가 낮다는 단점이 있다.Although the diagnosis of rheumatoid arthritis is primarily dependent on clinical symptoms, there is a limit to the extent that the diagnosis is made after the destruction of the joint has progressed considerably. Rheumatoid factor (RF), as a serologic marker of rheumatoid arthritis, Although included in the diagnostic criteria of the American College of Rheumatology (ACR), RF is found in 20% of patients with rheumatoid arthritis and has a sensitivity to disease throughout the course of the disease, and other rheumatic diseases Chronic inflammation, malignant tumors, and even some healthy elderly people.

또한, 류마티스 관절염의 치료 방법으로는 관절의 손상을 최소화하고, 기능 손실을 방지하며 통증을 줄이기 위하여 일반적으로 진통소염제를 다양한 항류마티스제제와 병합 투여하는 약물치료 방법이 사용되고 있고, 최근에는 생물학적 치료제가 개발되어 항류마티스 약제와 함께 병용 치료로 이용되고 있으며, 질병의 중증도가 심각한 경우에는 수술요법이 시행되고 있다. 그러나 이와 같은 치료 방법은 상당히 뛰어난 효과에도 불구하고 관절 변형이 지속될 수 있고 약제 부작용으로 적절한 치료가 어려운 경우도 있으며, 신약 개발 비용에 따른 약가 상승으로 많은 비용이 드는 단점이 있기 때문에, 류마티스 관절염의 발병, 예후 및 중증도를 적절히 진단 및 예측할 수 있는 방법들의 개발이 시급한 실정이다.In addition, as a method of treating rheumatoid arthritis, a drug treatment method is generally used in which an analgesic anti-inflammatory agent is combined with various antirheumatic agents in order to minimize joint damage, prevent loss of function, and reduce pain. In recent years, Has been developed and is being used in combination therapy with antirheumatic agents. In cases where the severity of the disease is serious, surgical treatment is being performed. However, even though such a therapeutic method has a remarkable effect, the joint transformation can be continued, and in some cases, appropriate treatment is difficult due to the side effect of the drug, and since the drug cost is increased due to the development cost of the new drug, , Prognosis and severity of the disease.

특히, 혈액으로부터 검출된 류마티스 관절염 진단 마커들은 상당수 보고된 바 있으나, 본 발명는 소변 시료에서 검출할 수 있는 류마티스 관절염 진단 마커라는 점에 그 특징이 있다.In particular, many of the diagnostic markers for rheumatoid arthritis detected from blood have been reported, but the present invention is characterized in that it is a rheumatoid arthritis diagnostic marker that can be detected in a urine sample.

혈액에서 검출될 수 있는 단백질은 5만 여종으로 알려져 있으며, 이 수많은 단백질 중 대부분은 신장에서 필터링되어 소변 내에서는 거의 검출되지 않기 때문에, 혈액 내에서 검출되는 단백질이라고 해서 모두 소변에서 검출되는 것은 아니다. 또한, 혈액 시료를 사용하는 경우에는 침습적 검사로 시료를 얻어야 하기 때문에, 환자에게 고통을 유발하며, 많은 시간이 소요되는 문제가 있다.Proteins that can be detected in blood are known to be about 50,000. Most of these proteins are filtered in the kidney and rarely detected in the urine, so proteins detected in the blood are not detected in the urine. In addition, in the case of using a blood sample, it is necessary to obtain a sample by an invasive test, which causes pain to the patient and takes a lot of time.

특히, 류마티스 관절염 활성도 평가 검사의 경우에는 류마티스 관절염 발병 후 수년, 수십년간 길게는 평생 동안 정기적으로 시료를 채취하여 검사를 진행하여야 하기 때문에 소변 시료만으로도 활성도를 평가할 수 방법을 제공하는 본원발명은 기존 검사 방법에 비해 환자의 고통과 불편함을 없앤 것으로 매우 획기적이다.Particularly, in the case of the evaluation test of rheumatoid arthritis activity, it is necessary to collect the samples regularly for a long period of several years or several years after the onset of rheumatoid arthritis periodically, so that the present invention, which provides a method of evaluating the activity by the urine sample alone, It is a breakthrough in that the patient's suffering and inconvenience are eliminated compared with the method.

국내특허등록 제0937144호(2010. 1. 8)Domestic patent registration No. 0937144 (January 8, 2010)

본 발명의 목적은 소변 시료 내에 존재하는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a method for the production of one or more proteins selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin- And an agent for measuring the level of expression of the compound of the present invention.

또한, 본 발명의 목적은 상기 조성물을 포함하는 류마티스 관절염 진단용 키트 및 단백질 칩을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a kit for the diagnosis of rheumatoid arthritis and a protein chip comprising the composition.

또한, 본 발명의 목적은 류마티스 관절염 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 환자의 소변 시료로부터 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법을 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide a method for detecting one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 from a urine sample of a patient to provide information necessary for diagnosis of rheumatoid arthritis will be.

또한, 본 발명의 목적은 소변 시료 내에 존재하는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 조성물을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a composition for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, which comprises an agent for measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 present in a urine sample .

또한, 본 발명의 목적은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 키트 또는 단백질 칩을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a kit or a protein chip for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, which comprises the above composition.

또한, 본 발명의 목적은 소변 시료로부터 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염 활성도를 평가하기 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide information for evaluating rheumatoid arthritis activity, comprising measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 from a urine sample To provide a method to do so.

또한, 본 발명의 목적은 소변 시료 내에 존재하는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 조성물을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a composition for predicting the severity of prognosis of rheumatoid arthritis, comprising an agent for measuring the level of expression of at least one protein selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 present in a urine sample .

또한, 본 발명의 목적은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 키트를 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a kit for predicting the severity of rheumatoid arthritis, which comprises the above composition.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 소변 시료 내에 존재하는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 조성물에 관한 것이다.In one aspect of the present invention, the present invention provides a method for measuring the level of expression of at least one protein selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 present in a urine sample. To a diagnostic composition for rheumatoid arthritis.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 키트에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a diagnostic kit for rheumatoid arthritis comprising the composition.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 류마티스 관절염 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 환자의 소변 시료로부터 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법에 관한 것이다.In another aspect, the present invention provides a method for detecting one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2, and IL-8 from urine samples of a patient to provide information necessary for diagnosis of rheumatoid arthritis .

또 하나의 양태로서, 본 발명은 소변 시료 내에 존재하는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention provides a method for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, comprising the step of measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 present in a urine sample ≪ / RTI >

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 키트에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a kit for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, which comprises the above composition.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 단백질 칩에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a protein chip for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, which comprises the above composition.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 소변 시료로부터 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염 활성도를 평가하기 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.In another aspect, the present invention provides a method for evaluating rheumatoid arthritis activity, comprising the step of measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 from a urine sample And a method for providing the same.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 소변 시료 내에 존재하는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 조성물에 관한 것이다. 하나의 구현예로, 본 발명은 (i) 소변 내 IL-6 및 혈청 내 CRP 발현 수준을 측정하는 제제, (ii) 소변 내 CCL-2 및 소변 내 IL-8 발현 수준을 측정하는 제제, 또는 (iii) 소변 내 IL-6 및 소변 내 IL-8의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 조성물을 포함한다.In another aspect, the present invention provides a method for the treatment and / or prophylaxis of rheumatoid arthritis, comprising the step of determining the level of expression of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL- To a composition for prediction. In one embodiment, the present invention relates to a method for the determination of urinary IL-6 and serum CRP expression level, comprising (i) an agent for measuring urinary IL-6 and serum CRP expression level, (ii) an agent for measuring urinary CCL- (iii) an agent for measuring the level of expression of IL-6 in urine and IL-8 in urine.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 키트에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a kit for predicting the severity of rheumatoid arthritis, comprising the composition.

본 발명은 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 이용하여, 류마티스 관절염을 진단함으로써 조기 치료가 가능하도록 한다. 또한, 본 발명은 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 제제를 이용하여, 류마티스 관절염의 활성도를 측정하고, 중증도 예후 예측에 폭넓게 활용할 수 있으므로 환자의 상태에 맞춘 적합한 치료를 행할 수 있도록 한다.The present invention enables early treatment by diagnosing rheumatoid arthritis using an agent that measures the expression level of at least one protein selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8. The present invention also provides a method for measuring the activity of rheumatoid arthritis using the agent for measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8, Therefore, appropriate treatment according to the patient's condition should be made.

도 1은 정상인과 류마티스 관절염 환자들의 소변 내 사이토카인 수준을 비교한 것이다.
도 2는 류마티스 관절염 환자에서 측정된 임상 변수들과 소변 내 사이토카인 수준의 관련성을 나타낸 것이다.
도 3은 DAS28 점수가 3.2점 미만인 낮은 질병활성(Low Disease Activity, 경증), 3.2점 이상 5.1 점 미만인 중간 질병활성(Moderate Disease Activity, 중증도), 그리고 5.1점 이상인 높은 질병활성(High Disease Activity, 중증)으로 정의된 류마티스 관절염 질병 활성도에서 소변 내 IL-6, CCL-2 및 IL-8 수준을 비교한 것이다.
도 4는 높은 질병 활성도를 검정하기 위한 ROC curve를 나타낸 것이다[a: 소변 IL-6과 혈청 CRP와의 질환활성도 예측 비교, b: 소변 CCL2와 혈청 CRP와의 질환활성도 예측 비교, c: 소변 IL-8과 혈청 CRP와의 질환활성도 예측 비교].
도 5는 방사선학적 진행의 예측 확률도를 나타낸 것이다.
도 6은 중증도를 검정하기 위한 ROC curve를 나타낸 것이다[a: IL-6, ESR, 그리고 CRP와의 3년 뒤 골 파괴 예측 비교, b: CCL2, ESR, 그리고 CRP와의 3년 뒤 골 파괴 예측 비교, c: IL-8, ESR, 그리고 CRP와의 3년 뒤 골 파괴 예측 비교].Figure 1 compares urinary cytokine levels in normal and rheumatoid arthritis patients.
Figure 2 shows the relationship between the clinical parameters measured in patients with rheumatoid arthritis and levels of urinary cytokines.
FIG. 3 is a graph showing the results of a comparison between a low Disease Activity (mild), a DAS28 score of less than 3.2, a Moderate Disease Activity (severity) of 3.2 or more and a score of 5.1 or less, and a High Disease Activity ) And urinary IL-6, CCL-2 and IL-8 levels in rheumatoid arthritis disease activity.
Fig. 4 shows the ROC curve for confirming high disease activity. [A: Comparison of disease activity between urine IL-6 and serum CRP, b: Comparison of urinary CCL2 and serum CRP disease activity, c: Urine IL-8 And serum CRP].
Figure 5 And the predicted probability of radiological progression.
Figure 6 shows the ROC curve for assessing severity [a: comparison of bone destruction predictions with IL-6, ESR, and CRP three years later, b: comparison of bone destruction predictions with CCL2, ESR, and CRP three years later, c: Comparison of bone destruction predictions with IL-8, ESR, and CRP three years later].

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명에서 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 류마티스 관절염의 발병 여부를 확인하거나, 나아가 질환의 진행 여부 또는 심화 여부를 확인하는 것을 의미할 수 있다.As used herein, the term "diagnosis" means identifying the presence or characteristic of a pathological condition. For the purpose of the present invention, the diagnosis may refer to the identification of the onset of rheumatoid arthritis, and further, whether the disease is progressing or intensifying.

본 발명에서 용어, "진단용 마커, 진단하기 위한 마커 또는 진단 마커(diagnosis marker)"란 류마티스 관절염을 류마티스 관절염이 아닌 상태와 구분(예를 들어, 정상과 구분하거나, 또는 골관절염 등 다른 관절염과 구분)하여 진단할 수 있는 물질로, 류마티스 관절염이 아닌 개체의 시료에 비하여 류마티스 관절염을 가진 개체의 시료에서 증가 또는 감소를 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질 또는 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자들을 포함한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 진단 마커는, 류마티스 관절염 환자의 시료에서 특이적으로 증가된 발현을 나타내는 IL-6, CCL-2 및 IL-8을 말한다.In the present invention, the term "diagnostic marker, marker for diagnosis or diagnosis marker" means distinguishing rheumatoid arthritis from non-rheumatoid arthritic condition (for example, distinguishing it from normal or distinguishing it from other arthritis such as osteoarthritis) (Eg, mRNA), lipid, glycolipid, glycoprotein or sugar (eg, mRNA) that show an increase or decrease in a sample of an individual having rheumatoid arthritis as compared to a sample of an individual that is not a rheumatoid arthritis Monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, etc.), and the like. For purposes of the present invention, the diagnostic markers of the present invention refer to IL-6, CCL-2 and IL-8 that exhibit specifically increased expression in a sample of rheumatoid arthritis patients.

보다 구체적으로, 본 발명은 류마티스 관절염의 진단 마커로서 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 제공한다.More specifically, the present invention provides one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 as diagnostic markers of rheumatoid arthritis.

본 발명에서, "류마티스 관절염의 활성도" 또는 "류마티스 관절염의 질병 활성도"란, 류마티스 관절염 환자의 전반적인 염증 정도, 또는 류마티스 관절염의 진행 정도를 의미하며, 치료에 대한 반응 또는 관해 여부를 평가하는데 유용하게 사용될 수 있다.In the present invention, "activity of rheumatoid arthritis" or "disease activity of rheumatoid arthritis" means an overall degree of inflammation in rheumatoid arthritis patients or progression of rheumatoid arthritis and is useful for evaluating the response or remission Can be used.

또한, 본 발명에서, "류마티스 관절염 활성도의 평가"란 류마티스 관절염 환자의 전반적인 염증 정도, 또는 류마티스 관절염의 진행 정도를 평가하는 것을 말하고, 나아가 이를 토대로 하여 현재 실시하고 있는 치료가 환자에게 효과를 나타내는지 판단하는 것, 최적의 치료 요법(약물 요법 또는 수술 등)을 선택하는 것, 그리고 치료에 대한 반응성 및 완화 여부를 예측하는 것을 포함하는 개념이다.In the present invention, "evaluation of rheumatoid arthritis activity" refers to an evaluation of the degree of inflammation or the degree of progression of rheumatoid arthritis in patients with rheumatoid arthritis, and furthermore, The choice of the most appropriate therapy (drug therapy or surgery), and the prediction of responsiveness and relaxation to treatment.

종래 임상에서 류마티스 관절염의 활성도를 측정하는 대표적인 방법인 DAS(Disease Activity Score) 또는 이것의 변형된 형태인 DAS28(Disease Activity Score 28)은 점수 계산 방식의 지수 평가 방법으로, 염증 표지자 검사나 방사선 소견 같은 일부 객관적 요소와 함께 환자 및 의사가 평가하는 주관적인 요소들을 함께 평가한다.DAS (Disease Activity Score), which is a representative method for measuring the activity of rheumatoid arthritis in the past, or DAS28 (Disease Activity Score 28), which is a modified form thereof, is an index evaluation method of score calculation method. Together with some objective factors, evaluate the subjective factors that patients and doctors evaluate.

DAS28은 환자의 28개 관절 중 압통을 느끼는 관절 수, 부종을 보이는 관절 수, 적혈구 침강속도, 환자의 전신적 평가로 구성된 종합 지수로서, 28개의 관절에는 양쪽 어깨 관절, 팔꿈치 및 손목 관절, 중수지 관절, 근수지 관절, 무릎 관절 등을 포함한다.DAS28 is a composite index consisting of 28 joints with tenderness, edema, edema, erythrocyte sedimentation rate, and systemic evaluation of the patient. The 28 joints have both shoulder joints, elbow and wrist joints, , Muscular joints, knee joints, and the like.

DAS28로 조사된 류마티스 관절염 질병 활성도는 0점에서 최대 9.4점까지 계산될 수 있으며, 일반적으로 DAS28 점수가 2.6 미만이면 질병 활성이 거의 없는 상태(Remission, 관해), 2.6점 이상 3.2점 미만이면 낮은 질병활성(Low Disease Activity, 경증), 3.2점 이상 5.1 점 미만이면 중간 질병활성(Moderate Disease Activity, 중증도), 그리고 5.1점 이상이면 높은 질병활성(High Disease Activity, 중증)으로 정의하고 있다. 그러나, 상기 배경기술에서 언급한 바와 같이, DAS28에 의한 종래의 질병 활성도 평가 방법은 침습적이어서, 환자에게 고통을 유발하고 많은 시간이 필요한 문제가 있다.The DAS28-irradiated rheumatoid arthritis disease activity can be calculated from 0 to a maximum of 9.4 points. In general, if the DAS28 score is less than 2.6, there is little disease activity (remission). If the score is 2.6 or more, Moderate Disease Activity (severity) is defined as less than 5.1 points, and High Disease Activity (severity) is defined as greater than 5.1 points. However, as mentioned in the background section above, the conventional method of assessing disease activity by DAS28 is invasive, causing pain to the patient and requiring a lot of time.

본 발명은 기존의 DAS28과 같은 류마티스 관절염 활성도 평가에 의하지 않고도 비침습적으로 환자의 현재 질병활성도를 확인할 수 있고, 이를 토대로 환자에 최적의 치료 요법을 선택하고 해당 치료에 적절한 치료 반응이 보이는지를 판단할 수 있는 객관적인 질병 활성도 표지자를 제공함을 특징으로 한다.The present invention can identify the current disease activity of the patient non-invasively without evaluating the activity of rheumatoid arthritis as in the case of the existing DAS28, and based on this, it is possible to select the optimal treatment regimen for the patient, Lt; RTI ID = 0.0 > a < / RTI > disease activity marker.

보다 구체적으로, 본 발명은 류마티스 관절염의 질병 활성도 표지자로서 마커로서 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 제공한다. 본 발명에서 상기 단백질들은 류마티스 관절염의 질병 상태를 반영하는 지표로, 류마티스 관절염 비활성군보다 활성군에서 높은 농도를 보이며, 현재 임상에서 질병 활성도 평가에 사용되는 DAS28과 같은 종래의 질병 활성도 평가 수단들과 강한 양의 상관관계를 나타낼 뿐만 아니라, DAS28 평가 시 중요한 염증활성 표지자로 사용되는 CRP와 유의적인 상관관계를 나타낸다.More specifically, the present invention provides one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2, and IL-8 as markers as disease activity markers of rheumatoid arthritis. In the present invention, the above proteins reflect the disease state of rheumatoid arthritis. The proteins show a higher concentration in the active group than in the rheumatoid arthritis inactive group and are used in conventional disease activity evaluation methods such as DAS28 But also a significant correlation with the CRP used as a marker of inflammatory activity in DAS28 evaluation.

따라서, 마커로서 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8은 비침습적인 바이오마커로서, 그 자체로 환자의 염증활성 반응을 평가하고 치료 반응을 예측하는데 유용하게 사용될 수 있다. 뿐만 아니라, 혈청 CRP, 혈청 ESR과 같은 염증활성 표지자가 류마티스 관절염 환자의 임상 양상과 상이한 결과를 보일 때 치료반응을 판단하기 위한 보조적인 표지자로서도 활용할 수 있다. 특히, 혈청 CRP 평가와 결합하여 사용할 경우 보다 나은 활성의 바이오마커로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.Thus, as markers, IL-6, CCL-2 and / or IL-8 are non-invasive biomarkers that can be usefully used to assess the inflammatory response of a patient and predict therapeutic response. In addition, inflammatory markers such as serum CRP and serum ESR may be used as an adjunct marker to judge the therapeutic response when the results are different from those of patients with rheumatoid arthritis. In particular, when used in combination with serum CRP assay, it is expected to be used as a biomarker of better activity.

본 발명에서 용어, "류마티스 관절염의 중증도 예후 예측"이란 류마티스 관절염 환자의 전반적인 염증 정도, 골 파괴 정도, 또는 류마티스 관절염의 진행 정도를 평가하였을 때 높은 질병활성으로 인해 골 파괴가 진행될 가능성 또는 관절 변형이 초래될 가능성과 관련된다. 종래 임상에서 류마티스 관절염의 질병 중증도를 측정하는 대표적인 방법인 DAS(Disease Activity Score) 또는 이것의 변형된 형태인 DAS28(Disease Activity Score 28) 은 점수 계산 방식의 지수 평가 방법으로, 염증 표지자 검사나 방사선 소견 같은 일부 객관적 요소와 함께 환자 및 의사가 평가하는 주관적인 요소들을 함께 평가한다. DAS28은 환자의 28개 관절 중 압통을 느끼는 관절 수, 부종을 보이는 관절 수, 적혈구 침강속도, 환자의 전신적 평가로 구성된 종합 지수로서, 28개의 관절에는 양쪽 어깨 관절, 팔꿈치 및 손목 관절, 중수지 관절, 근수지 관절, 무릎 관절 등을 포함한다.The term "prognosis of the severity of rheumatoid arthritis" in the present invention means that the overall degree of inflammation, degree of bone destruction, or degree of progression of rheumatoid arthritis in patients with rheumatoid arthritis is evaluated, It is related to the possibility of being caused. DAS (Disease Activity Score), which is a representative method for measuring disease severity in rheumatoid arthritis in the past, or DAS28 (Disease Activity Score 28), which is a modified form thereof, is an index evaluation method of score calculation method. Together with some objective factors such as patient and physician evaluations. DAS28 is a composite index consisting of 28 joints with tenderness, edema, edema, erythrocyte sedimentation rate, and systemic evaluation of the patient. The 28 joints have both shoulder joints, elbow and wrist joints, , Muscular joints, knee joints, and the like.

DAS28로 조사된 류마티스 관절염 질병 활성도는 0점에서 최대 9.4점까지 계산될 수 있으며, 일반적으로 DAS28 점수가 2.6 미만이면 질병 활성이 거의 없는 상태(Remission, 관해), 2.6점 이상 3.2점 미만이면 낮은 질병활성(Low Disease Activity, 경증), 3.2점 이상 5.1 점 미만이면 중간 질병활성(Moderate Disease Activity, 중증도), 그리고 5.1점 이상이면 높은 질병활성(High Disease Activity, 중증)으로 정의하고 있다. The DAS28-irradiated rheumatoid arthritis disease activity can be calculated from 0 to a maximum of 9.4 points. In general, if the DAS28 score is less than 2.6, there is little disease activity (remission). If the score is 2.6 or more, Moderate Disease Activity (severity) is defined as less than 5.1 points, and High Disease Activity (severity) is defined as greater than 5.1 points.

본 발명은 비침습적인 방법으로 환자의 향후 질병 중증도를 손쉽게 예측할 수 있어, 추가 필요한 치료 방법의 사용 여부를 결정함으로써 류마티스 관절염 발병 후의 질병의 지연, 완화 및/또는 완치를 위한 정보로 활용할 수 있다.The present invention can easily predict the future disease severity of patients in a noninvasive manner and can be used as information for delaying, alleviating and / or curing diseases after the onset of rheumatoid arthritis by determining whether to use additional necessary treatment methods.

본 발명에서는 류마티스 관절염 환자의 중증도 예후 예측 마커로서 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 제공한다. 본 발명에서 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8은 류마티스 관절염의 질병 상태를 예측할 수 있는 지표로, 환자의 소변 시료 내 상기 마커, 보다 바람직하게는 IL-6 및 CCL-2, CCL-2 및 IL-8, 또는 IL-6 및 IL-8의 농도가 증가할 경우 류마티스 관절염의 골 파괴 위험도가 증가할 것으로 예측할 수 있다. 또한, 상기 마커는 기존의 잘 알려져 있는 골 파괴 예측 위험 요인인 C-반응성 단백질(CRP; C-reactive protein)와 유사한 정도의 검정력을 나타내었다. The present invention provides at least one protein selected from the group consisting of IL-6, CCL-2, and IL-8 as a prognosis prediction marker for severity of rheumatoid arthritis patients. In the present invention, IL-6, CCL-2 and / or IL-8 are indicators for predicting the disease state of rheumatoid arthritis. The marker, more preferably IL-6 and CCL- 2 and IL-8, or IL-6 and IL-8, the risk of bone destruction of rheumatoid arthritis may be increased. In addition, the markers showed a similar power to that of the known well-known bone destruction prediction CRP (C-reactive protein).

본 발명에서, "IL-6"란, 인터루킨-6(interleukin 6)의 약어이다. 인터루킨-6은 B 세포의 항체생산세포로의 최종 분화를 유도하는 B세포자극인자2(BSF-2)로 분리한 분자량이 210,000인 당단백질이다. 또한, T림프구, B림프구, 대식세포, 섬유아세포 등 여러 세포에서 생산되는 시토카인으로, 인터페론β2(IFN-β2)와 동일 분자이다. 면역응답, 조혈계와 신경계 세포의 증식 및 분화, 급성 반응 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. IL-6의 아미노산 서열은 공지된 유전자 데이터베이스에서 그 서열 정보를 확인할 수 있다. 예를 들어, 인간 IL-6 단백질의 아미노산 서열은 NCBI Genbank 등록번호 AAD13886.1에서 확인할 수 있고, 이를 서열번호 1에 기재하였다.In the present invention, "IL-6" is an abbreviation of interleukin-6. Interleukin-6 is a glycoprotein with a molecular weight of 210,000 isolated by B cell stimulating factor 2 (BSF-2), which induces terminal differentiation of B cells into antibody producing cells. It is also a cytokine produced by various cells such as T lymphocytes, B lymphocytes, macrophages, and fibroblasts, and is the same molecule as interferon β 2 (IFN-β 2 ). Immune responses, proliferation and differentiation of hematopoietic and neuronal cells, and acute response. The amino acid sequence of IL-6 can be found in a known gene database. For example, the amino acid sequence of the human IL-6 protein can be found in NCBI Genbank Accession No. AAD13886.1, which is set forth in SEQ ID NO: 1.

[서열번호 1][SEQ ID NO: 1]

1 mnsfstsafg pvafslglll vlpaafpapv ppgedskdva aphrqpltss eridkqiryi1 mnsfstsafg pvafslglll vlpaafpapv ppgedskdva aphrqpltss eridkqiryi

61 ldgisalrke tcnksnmces skealaennl nlpkmaekdg cfqsgfneet clvkiitgll61 ldgisalrke tcnksnmces skealaennl nlpkmaekdg cfqsgfneet clvkiitgll

121 efevyleylq nrfesseeqa ravqmstkvl iqflqkkakn ldaittpdpt tnaslltklq121 efevyleylq nrfesseeqa ravqmstkvl iqflqkkakn ldaittpdpt tnaslltklq

181 aqnqwlqdmt thlilrsfke flqsslralr qm181 aqnqwlqdmt thlilrsfke flqsslralr qm

본 발명에서, "CCL-2"는 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 2의 약어로, MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이라고도 불린다. CC 케모카인 군에 속하며, 주로 단핵세포, 대식세포, 수지상세포에서 분비되고, 단핵세포, 기억관련 T세포, 수지상 세포들을 감염된 부위나 염증이 일어난 부위로 유입시키는 역할을 하는 단백질이다. 분자량은 13kDa으로 알려져 있으며, metalloproteinase MMP12에 의해 절단될 경우 활성화된다. CCL-2의 아미노산 서열은 공지된 유전자 데이터베이스에서 그 서열 정보를 확인할 수 있다. 예를 들어, 인간 CCL-2 단백질의 아미노산 서열은 NCBI Genbank 등록번호 AAB20651.1에서 확인할 수 있다. CCL-2 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 2에 기재하였다.In the present invention, "CCL-2" is abbreviation of chemokine (C-C motif) ligand 2 and is also referred to as MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1). CC belongs to the family of chemokines, mainly secreted by mononuclear cells, macrophages, dendritic cells, and is a protein that plays a role in introducing mononuclear cells, memory-related T cells and dendritic cells into infected areas or inflammation sites. The molecular weight is known as 13 kDa and is activated when cleaved by metalloproteinase MMP12. The amino acid sequence of CCL-2 can be found in a known gene database. For example, the amino acid sequence of human CCL-2 protein can be found in NCBI Genbank Accession No. AAB20651.1. The amino acid sequence of the CCL-2 protein is shown in SEQ ID NO: 2.

[서열번호 2][SEQ ID NO: 2]

1 mkvsaallcl lliaatfipq glaqpdaina pvtccynftn rkisvqrlas yrritsskcp1 mkvsaallcl lliaatfipq glaqpdaina pvtccynftn rkisvqrlas yrritsskcp

61 keavifktiv akeicadpkq kwvqdsmdhl dkqtqtpkt       61 keavifktiv akeicadpkq kwvqdsmdhl dkqtqtpkt

본 발명에서, "IL-8"이란, 인터루킨-8(interleukin 8)의 약어이다. 인터루킨-8은 CXC 리간드8이라고도 불리며 케모카인의 일종이다. 주로 대식세포와 상피세포, 기도평활근세포, 내피세포 등에서 분비된다. IL-8의 주된 역할은 감염된 곳으로 중성구를 유입시키는 화학주성이며, 혈관 신생, TLR(toll-like receptor)을 통한 선천 면역에도 관여한다 IL-8의 아미노산 서열은 공지된 유전자 데이터베이스에서 그 서열 정보를 확인할 수 있다. 예를 들어, 인간 IL-8 단백질의 아미노산 서열은 NCBI Genbank 등록번호 AAH13615.1에서 확인할 수 있고, 이를 서열번호 3에 기재하였다.In the present invention, "IL-8" is an abbreviation of interleukin-8. Interleukin-8, also called CXC ligand 8, is a type of chemokine. It is mainly secreted by macrophages, epithelial cells, airway smooth muscle cells, endothelial cells and the like. The major role of IL-8 is chemotaxis, which triggers neutrophils into infected sites. It also participates in innate immunity via angiogenesis and TLR (toll-like receptor). The amino acid sequence of IL-8 is known from the sequence database . For example, the amino acid sequence of the human IL-8 protein can be found in NCBI Genbank Accession No. AAH13615.1, which is set forth in SEQ ID NO: 3.

[서열번호 3][SEQ ID NO: 3]

1 mtsklavall aaflisaalc egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph1 mtsklavall aaflisaalc egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph

61 canteiivkl sdgrelcldp kenwvqrvve kflkraens       61 canteiivkl sdgrelcldp kenwvqrvve kflkraens

본 발명의 구체적인 실시예에서는, RA 환자와 정상인의 소변 시료로부터 특이적으로 발현 차이를 나타내는 단백질을 선별하였고, IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8의 단백질 양이 정상인 보다 RA 환자에서 두드러지게 높게 나타나는 것을 확인하였다(도 1). 이 단백질들은 프로테옴 프로파일의 변화가 일정하기 때문에 류마티스 관절염 진단을 위한 소변 단백질 바이오마커라고 입증되었다.In a specific example of the present invention, proteins expressing specific expression differences from urine samples of RA patients and normal persons were selected and the amount of protein of IL-6, CCL-2 and / or IL-8 was determined in RA patients (Fig. 1). These proteins have proven to be a biomarker of urine protein for the diagnosis of rheumatoid arthritis because of a constant change in the proteome profile.

본 발명의 구체적인 실시예에서는, 높은 류마티스 관절염 활성을 갖는 RA 환자((DAS28≥5.1) 들에서 기존의 잘 알려진 혈청 지표와 비교해 보기 위해 ROC 분석을 진행한 결과, 혈청 CRP의 AUC(area under curve)는 0.669 (95% confidence interval; CI [0.614-0.765])였고, 소변 내 IL-6의 AUC는 0.657 [0.572-0.742], CCL-2의 AUC는 0.642 [0.551-0.734], IL-8의 AUC는 0.546 [0.457-0.636]으로 CRP와 비교하여 열등하지 않음을 보여주었다(도 4).In a specific example of the present invention, ROC analysis was conducted to compare with known well-known serum markers in RA patients (DAS28? 5.1) with high rheumatoid arthritis activity, and the area under curve (AUC) , The AUC of urinary IL-6 was 0.657 [0.572-0.742], the AUC of CCL-2 was 0.642 [0.551-0.734], the AUC of IL-8 was 0.669 (95% confidence interval; CI [0.614-0.765] Was 0.546 [0.457-0.636], which was not inferior to CRP (Fig. 4).

본 발명의 구체적인 실시예에서는, 3년 뒤 골 파괴 정도를 예측할 수 있는 검정력을 혈청 ESR 및 혈청 CRP와 비교해 보기 위해 ROC 분석을 진행한 결과, 혈청 ESR의 AUC는 0.741 [0.647-0.835]이었고, CRP의 AUC는 0.740 [0.657-0.824]이었다. 소변 내 IL-6의 AUC는 0.696 [0.590-0.801]로서 혈청 ESR 및 혈청 CRP와 비교하여 대등한 수준임을 보여주었다(도 6).In a specific example of the present invention, the ROC analysis was performed to compare the power of ESR and serum CRP to predict the degree of bone destruction three years later. As a result, the AUC of serum ESR was 0.741 [0.647-0.835] Was 0.740 [0.657-0.824]. The AUC of urinary IL-6 was 0.696 [0.590-0.801], which was comparable to that of serum ESR and serum CRP (Fig. 6).

이상의 결과는 소변 내 마커 측정만으로도 침습적인 혈액 채취 없이도 류마티스 관절염의 진단, 활성도 및 질환 중증도 평가가 가능하다는 것을 보여준다.These results indicate that the diagnosis, activity and severity of rheumatoid arthritis can be evaluated without invasive blood sampling only by measuring the marker in the urine.

나아가, (i) 소변 내 IL-6 및 혈청 내 CRP의 조합, (ii) 소변 내 IL-6 및 소변 내 CCL-2의 조합, (iii) 소변 내 CCL-2 및 소변 내 IL-8의 조합, 또는 (iv) 소변 내 IL-6 및 소변 내 IL-8의 조합 등 각 단백질의 상호 조합에 의한 바이오마커로서의 가능성이 입증되었다.Furthermore, a combination of (i) a combination of urinary IL-6 and serum CRP, (ii) a combination of urinary IL-6 and urinary CCL-2, (iii) a combination of urinary CCL-2 and urine IL- , Or (iv) a combination of urinary IL-6 and urine IL-8, as a biomarker by mutual combination of proteins.

따라서, 상기 마커 단백질들은 류마티스 관절염 진단, 활성도 평가 또는 중증도 예후 예측을 위한 비침습적인 바이오마커로 사용될 수 있고, 이들 단백질의 상호 조합은 보다 나은 진단의 바이오마커로 활용될 수 있음이 확인되었다.Therefore, it has been confirmed that the marker proteins can be used as non-invasive biomarkers for the diagnosis of rheumatoid arthritis, evaluation of activity, or prediction of the prognosis of severity, and mutual combinations of these proteins can be used as biomarkers for better diagnosis.

바람직한 일 예로, 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8에 특이적인 항체일 수 있다.In a preferred embodiment, the agent that measures the level of expression of the protein may be an antibody specific for IL-6, CCL-2 and / or IL-8.

본 발명에서, "항체"란 항원성 부위에 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 상기 마커 단백질인 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8에 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 단클론항체, 다클론항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다.In the present invention, "antibody" means a protein molecule specific for an antigenic site. For the purpose of the present invention, the antibody refers to an antibody that specifically binds to the marker proteins IL-6, CCL-2 and / or IL-8, and includes all monoclonal antibodies, polyclonal antibodies and recombinant antibodies.

단클론항체는 당해 분야에 널리 공지된 하이브리도마 방법(Kohler 및 Milstein(1976)European journal og Immunology 6:511-519), 또는 파지 항체 라이브러리(Clarkson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol.,222:58, 1-597, 1991)기술을 이용하여 제조될 수 있다.Monoclonal antibodies can be generated using hybridoma methods well known in the art (Kohler and Milstein (1976) European journal og Immunology 6: 511-519), or phage antibody libraries (Clarkson et al, Nature, 352: 624-628, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 58, 1-597, 1991).

다클론항체는 상기한 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다.Polyclonal antibodies can be produced by methods well known in the art for injecting the above protein antigens into animals and obtaining blood from animals to obtain sera containing antibodies. Such polyclonal antibodies can be prepared from any animal species host, such as goats, rabbits, sheep, monkeys, horses, pigs, cows, dogs, and the like.

또한, 본 발명의 항체에는 키메라 항체, 인간화 항체, 인간항체 등의 특수항체도 포함된다.The antibody of the present invention also includes a special antibody such as a chimeric antibody, a humanized antibody, and a human antibody.

나아가, 본 발명에 사용되는 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며 Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등을 예시할 수 있다.Further, the antibodies used in the present invention include functional fragments of antibody molecules as well as complete forms having two full-length light chains and two full-length heavy chains. A functional fragment of an antibody molecule refers to a fragment having at least an antigen-binding function, and examples thereof include Fab, F (ab ') 2, F (ab') 2 and Fv.

이러한 항체를 이용하여 시료 내 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8의 발현 수준을 측정하기 위한 방법으로는, 시료에 상기 항체를 처리하여 항원-항체 복합체의 생성 정도를 확인할 수 있는 방법이라면 제한 없이 사용할 수 있다.As a method for measuring the expression level of IL-6, CCL-2 and / or IL-8 in a sample using such an antibody, there is a method in which a sample is treated with the antibody to determine the degree of production of an antigen- You can use it without limitation.

상기 "항원-항체 복합체"란 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8 단백질과 이에 특이적인 항체의 결합물을 의미하고, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다.Refers to a combination of an IL-6, CCL-2 and / or IL-8 protein and an antibody specific thereto, and the amount of the antigen-antibody complex formed is determined by a signal of a detection label And can be measured quantitatively.

예를 들어, 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip) 등을 예시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.For example, Western blotting, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), immunoprecipitation assay, Complement Fixation Assay, Fluorecence Activated Cell Sorter (FACS) (protein chips), and the like, but the present invention is not limited thereto.

본 발명의 키트는 환자 시료 내 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제뿐만 아니라, 발현 수준 분석에 적합한 한 종류 이상의 조성물, 용액 또는 장치를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 키트는 항체의 면역학적 검출을 위하여 기질, 적당한 완충용액, 검출 라벨로 표지된 2차 항체, 및 발색 기질 등을 포함할 수 있다.The kit of the present invention may comprise one or more compositions, solutions or devices suitable for the analysis of expression levels as well as agents capable of measuring the level of expression of IL-6, CCL-2 and / or IL-8 in a patient sample have. For example, the kit may comprise a substrate, a suitable buffer solution, a secondary antibody labeled with a detection label, and a chromogenic substrate for immunological detection of the antibody.

구체적인 일례로, 상기 류마티스 관절염의 진단, 활성도 평가 또는 중증도 예후 예측용 키트는 ELISA 키트, 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 구현하기 위하여, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트일 수 있다.For example, the kit for diagnosis, activity assessment or severity prognosis prediction of rheumatoid arthritis includes essential elements necessary for performing ELISA to implement various ELISA methods such as ELISA kit, sandwich ELISA, and the like. .

ELISA 키트는 상기 단백질들에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론항체, 다클론항체 또는 재조합 항체일 수 있다. 또한, ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromopores), 효소 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.ELISA kits include antibodies specific for these proteins. Antibodies can be monoclonal, polyclonal or recombinant antibodies, with high specificity and affinity for IL-6, CCL-2 and / or IL-8 proteins and little cross-reactivity to other proteins. In addition, ELISA kits can contain antibodies specific for the control protein. Other ELISA kits may include reagents capable of detecting bound antibodies, such as labeled secondary antibodies, chromopores, enzymes and other substrates capable of binding to the substrate or antibody.

이 외에도, 상기 키트는 웨스턴 블랏, 면역침전분석법, 보체 고정 분석법, 유세포분석, 또는 단백질 칩 등을 구현하기 위한 키트일 수 있으며, 각 분석 방법에 적합한 부가적인 구성을 추가로 포함할 수 있다. 이 분석 방법들을 통하여, 항원-항체 복합체 형성량을 비교함으로써 류마티스 관절염을 진단할 수 있으며, 이에 맞추어 환자를 적절히 치료할 수 있다.In addition, the kit may be a kit for implementing Western blots, immunoprecipitation assays, complement fixation assays, flow cytometry, or protein chips, and may further include additional structures suitable for each assay method. Through these analytical methods, it is possible to diagnose rheumatoid arthritis by comparing the amount of antigen-antibody complex formed, and accordingly the patient can be appropriately treated.

또 하나의 양태로서, 본 발명의 키트는 단백질 칩의 형태로 제공될 수 있다. In another embodiment, the kit of the present invention may be provided in the form of a protein chip.

단백질 칩은 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8 단백질에 대한 하나 이상의 항체가 정해진 위치에 배열되어 고밀도로 고정화되어있는 것이다. 단백질 칩을 이용하여 분석하는 방법은, 검체 시료에서 단백질을 분리하고, 분리한 단백질을 단백질 칩과 혼성화시켜서 항원-항체 복합체를 형성시키고, 이를 판독하여 단백질의 발현 정도를 확인하여 류마티스 관절염을 진단하거나, 활성도를 평가하거나 중증도를 예후 예측할 수 있다.The protein chip is one in which at least one antibody against IL-6, CCL-2 and / or IL-8 protein is arranged at a predetermined position and immobilized at a high density. A method of analyzing using a protein chip is as follows. A protein is separated from a sample, and the separated protein is hybridized with a protein chip to form an antigen-antibody complex. The protein is then analyzed to determine the expression level of the protein to diagnose rheumatoid arthritis , Activity can be assessed or prognosis of severity can be predicted.

상기 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다.The amount of the antigen-antibody complex formed is quantitatively measurable through the size of the signal of the detection label.

상기 검출 라벨은 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사선 동위원소로 이루어진 그룹 중에서 선택할 수 있으며, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.The detection label may be selected from the group consisting of an enzyme, a minerals, a ligand, a luminescent material, a microparticle, a redox molecule, and a radioactive isotope, but is not necessarily limited thereto.

본 발명에서 용어, "검체 시료"란 마커 단백질인 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8의 발현 수준이 차이나는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 림프액, 뇌척수액, 세포간액 또는 소변과 같은 시료 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 보다 바람직한 양태로, 상기 검체 시료는 소변시료일 수 있다.The term "specimen sample" in the present invention refers to a sample, cell, whole blood, plasma, serum, blood, saliva, sputum, lymphatic fluid, or the like, in which the expression levels of marker proteins IL-6, CCL- Cerebrospinal fluid, interstitial fluid, urine, and the like. In a more preferred embodiment, the specimen sample may be a urine specimen.

검체 시료에서 단백질을 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며, 단백질 수준은 앞서 언급한 다양한 항원-항체 복합체 측정 방법으로 측정할 수 있다.The process of separating the protein from the sample can be carried out using a known process. The protein level can be measured by the above-mentioned various methods of measuring antigen-antibody complexes.

보다 바람직한 양태로, 본 발명은 상기 단백질의 발현 수준을 측정은 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8에 특이적인 항체를 이용하여 수행될 수 있다.In a more preferred embodiment, the present invention can be carried out using an antibody specific for IL-6, CCL-2 and / or IL-8 to determine the level of expression of said protein.

더욱 바람직한 양태로, 상기 항체는 IL-6, CCL-2 및/또는 IL-8에 특이적인 단클론항체 또는 다클론항체일 수 있으나, 나아가 항원결합활성을 보유하는 항체의 기능적 단편일 수 있다.In a more preferred embodiment, the antibody may be a monoclonal or polyclonal antibody specific for IL-6, CCL-2 and / or IL-8, but may further be a functional fragment of an antibody having antigen binding activity.

본 발명에서는 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 항체를 이용하여 측정함으로써, 신속하고 정확하게 류마티스 관절염을 진단하거나, 활성도를 평가하거나, 중증도를 예후 예측할 수 있다.In the present invention, the level of expression of at least one protein selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8 is measured using an antibody to quickly and accurately diagnose rheumatoid arthritis, evaluate its activity, Can be predicted.

이하, 본 발명에 따르는 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 제시된 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the scope of the present invention is not limited by the following examples.

실시예Example 1:  One: 류마티스Rheumatism 관절염 환자군과 대조군에서 소변 내 사이토카인 농도 비교  Urinary cytokine levels in arthritis patients and controls

류마티스 관절염 환자 205명과 건강 대조군 62명의 채취한 소변에서, 대표적인 염증성 사이토카인인 IL-6, CCL-2, IL-8 농도를 측정해 보았다. 이들 사이토카인은 염증성 질환에서 혈청 내 농도가 올라가 있다고 알려져 있으나 류마티스 관절염 환자들의 소변에서도 증가되어 있는지는 알려져 있지 않다. 이 세 가지 사이토카인을 혈청 creatinine으로 보정한 뒤에 두 군 간의 농도 차이가 있는지를 비교하여 보았다. IL-6, CCL-2 and IL-8 levels were measured in 205 urine samples from rheumatoid arthritis patients and 62 healthy control patients. These cytokines are known to be elevated in serum levels in inflammatory diseases, but they are not known to be elevated in the urine of patients with rheumatoid arthritis. After adjusting these three cytokines with serum creatinine, we compared the difference in the concentration between the two groups.

도 1에서 보듯이, IL-6 (RA vs control: 0.06 [0.03-0.133] vs 0.03 [0.01-0.07], P<0.001), CCL-2 (RA vs control: 1.47 [0.58-2.51] vs 1.01 [0.54-1.77], P=0.033), IL-8 (RA vs control: 0.09 [0.03-0.19] vs 0.06 [0.01-0.14], P=0.026), 모두 류마티스 관절염 환자에서 유의하게 증가되어 있었다. As shown in FIG. 1, IL-6 (RA vs control: 0.06 [0.03-0.133] vs. 0.03 [0.01-0.07], P <0.001), CCL-2 (RA vs control: 1.47 [0.58-2.51] (P = 0.033), and IL-8 (RA vs control: 0.09 [0.03-0.19] vs 0.06 [0.01-0.14], P = 0.026) were significantly increased in patients with rheumatoid arthritis.

실시예 2: 류마티스 관절염 환자군의 소변 내 사이토카인 농도와 염증성 지표들 및 질환 활성도와의 관련성 조사 Example 2: Investigation of urinary cytokine concentration, inflammatory indexes and disease activity in patients with rheumatoid arthritis

다음으로, 측정된 이 세가지 사이토카인, IL-6, IL-8, CCL-2의 소변 내 농도가 류마티스 관절염 환자 205명의 염증성 지표들과 관련되어 있는지 조사하였다. Next, we investigated whether the urine concentrations of the three cytokines, IL-6, IL-8, and CCL-2 measured were associated with inflammatory markers in 205 patients with rheumatoid arthritis.

첫째로 대표적인 혈청 내 염증 반영 지표인 ESR(erythrocyte sedimentation rate), CRP(C-reactive protein), 알부민(Alb), 헤모글로빈(Hb), WBC(white blood cell)과, 류마티스 관절염 활성도 지표인 DAS28(disease activity 28), 그리고 류마티스 관절염 중증도 지표인 골 파괴 점수(Sharp van der Heijde score; SvdH)와 상호관련성을 조사하였다. 또 동시에 각각의 소변 내 사이토카인이 혈청 IL-6, IL-8, CCL-2와도 상관관계를 보이는 지 함께 조사하였다. 도 2에서 보듯이, 소변 내 IL-6은 혈청 CRP, DAS28, SvdH score, Alb, WBC, 혈청 IL-6과 유의한 상관관계를 보였고, 소변 내 IL-8은 혈청 ESR, CRP, DAS28, Alb, Hb과, 소변 내 CCL-2는 혈청 ESR, CRP, DAS28, Alb, Hb와 유의한 관계를 보였다. 이상의 결과는 소변 내 IL-6, IL-8, CCL-2 세 사이토카인이 혈청 내 염증 정도를 유의하게 반영해 줄 수 있음을 시사한다. First, the representative serum reflux indicators such as erythrocyte sedimentation rate (ESR), C-reactive protein (CRP), albumin, hemoglobin (Hb), white blood cell (WBC), and DAS28 activity 28), and the degree of rheumatoid arthritis severity index (Sharp van der Heijde score; SvdH). At the same time, we also examined whether each urine cytokine correlated with serum IL-6, IL-8, and CCL-2. As shown in FIG. 2, urinary IL-6 was significantly correlated with serum CRP, DAS28, SvdH score, Alb, WBC, and serum IL-6, while urinary IL-8 was significantly correlated with serum ESR, CRP, DAS28, Alb , Hb and urinary CCL-2 were significantly correlated with serum ESR, CRP, DAS28, Alb, and Hb. These results suggest that urinary IL-6, IL-8, and CCL-2 cytokines may significantly reflect serum inflammation.

질환 활성도와의 관련성을 조금 더 살펴보기 위해 류마티스 관절염 환자들을 질환 활성도에 따라 low (DAS28<3.2), moderate (3.2≤DAS28<5.1), high (DAS28≥5.1)로 나누어 각각의 군에서 혈청 creatinine으로 보정한 소변 내 사이토카인 농도들을 비교하였다. IL-6 농도는 low, moderate, high disease activity 군에서 각각 0.10±0.04, 0.11±0.02, 0.37±0.12 (mean±SEM)이었고, low versus high disease activity 군에서는 P=0.029, moderate versus high disease activity 군에서는 P=0.013으로 유의한 차이를 보였다 (도 3의 A). CCL-2 농도는 low, moderate, high disease activity 군에서 각각 1.78±0.39, 1.71±0.25, 5.69±2.19 (mean±SEM)이었고, moderate versus high disease activity 군에서만 P=0.040으로 유의한 차이를 보였다 (도 3의 B). IL-8 농도는 low, moderate, high disease activity 군에서 각각 0.24±0.16, 0.37±0.12, 1.06±0.65 (mean±SEM)이었고, low versus high disease activity 군에서만 P=0.041로 유의한 차이를 보였다 (도 3의 C). In order to investigate the relationship between disease activity and serum creatinine level in patients with rheumatoid arthritis, we divided the patients into low (DAS28 <3.2), moderate (3.2≤DAS28 <5.1) and high (DAS28≥5.1) Corrected urine cytokine concentrations were compared. IL-6 levels were 0.10 ± 0.04, 0.11 ± 0.02 and 0.37 ± 0.12 (mean ± SEM) in the low, moderate and high disease activity groups, respectively. P = 0.029 and moderate versus high disease activity (P = 0.013), indicating a significant difference (FIG. 3A). CCL-2 levels were 1.78 ± 0.39, 1.71 ± 0.25, and 5.69 ± 2.19 (mean ± SEM) in the low, moderate and high disease activity groups, respectively, and P = 0.040 in the moderate versus high disease activity groups 3B). IL-8 levels were 0.24 ± 0.16, 0.37 ± 0.12, and 1.06 ± 0.65 (mean ± SEM) in the low, moderate and high disease activity groups, respectively, and P = 0.041 in the low versus high disease activity group 3C).

심한 질환 활성도를 보이는 환자군(DAS28≥5.1)들을 진단해 낼 수 있는 검정력을 기존의 잘 알려진 혈청 지표와 비교해 보기 위해 ROC 분석을 하였다. 현재 혈청 염증성 지표로 가장 널리 사용되는 것은 ESR과 CRP이다. 본 실험에서는 CRP와만 비교를 하였는데, 이는 본 환자군 대상으로 질환 활성도 평가 시 사용된 지표 DAS28은 ESR을 사용하여 계산되었기 때문에 ESR은 제외시켰다. 혈청 CRP의 AUC(area under curve)는 0.669 (95% confidence interval; CI [0.614-0.765]) 이었고, 소변 내 IL-6의 AUC는 0.657 [0.572-0.742], CCL-2의 AUC는 0.642 [0.551-0.734], IL-8의 AUC는 0.546 [0.457-0.636]으로 CRP와 비교하여 열등하지 않음을 보여주었다 (도 4). ROC analysis was performed to compare the power of diagnosing patients with severe disease activity (DAS28 ≥5.1) to those of well-known serum markers. Currently, ESR and CRP are the most widely used serum inflammatory indexes. In this study, only the CRP was compared with the ESR because the index DAS28 used in the evaluation of disease activity was calculated using ESR. The AUC of the urine IL-6 was 0.657 [0.572-0.742] and the AUC of the CCL-2 was 0.642 [0.551]. The area under the curve of serum CRP was 0.669 (95% confidence interval; CI [0.614-0.765] -0.734] and the AUC of IL-8 was 0.546 [0.457-0.636], which was not inferior to CRP (Fig. 4).

실시예 3: 소변 내 사이토카인 농도의 류마티스 관절염 중증도(골 파괴 정도) 예측 분석 Example 3: Prediction of rheumatoid arthritis severity (degree of bone destruction) of urine cytokine concentration

류마티스 관절염의 중증도 평가를 위해 환자들의 소변 내 농도에 따른 3년 뒤 골 파괴 정도 점수를 분석하였다. 골 파괴 정도는 Sharp van der Heijde (SvdH) 방법을 이용하여 양손과 양발 X-ray에서 계산하였다. 기존의 알려져 있는 중증도 지표들을 포함하여 소변 내 사이토카인들의 농도에 따른 골 파괴 발생 predicted probability plot을 각각 산출하였다. 소변 내 IL-6 농도, 혈청 ESR 및 혈청 CRP 농도가 증가할수록, ACPA(anti-cyclic citrullinated peptide antibody) positivity를 보일 때 골 파괴 발생 predicted probability가 증가하였다 (도 5). To assess the severity of rheumatoid arthritis, the degree of bone destruction was analyzed three years later according to the urinary concentration of the patients. The degree of bone destruction was calculated on both hands and on both hands using Sharp van der Heijde (SvdH) method. The predicted probability plots of bone destruction according to urine cytokine concentrations were calculated, including known severity indices. As the urinary IL-6 concentration, serum ESR and serum CRP levels increased, the predicted probability of bone destruction increased when the ACPA (anti-cyclic citrullinated peptide antibody) positivity was observed (FIG. 5).

어떠한 위험 인자들이 3년 뒤 골 파괴 정도를 독립적으로 예측할 수 있는지 조사하기 위하여, 소변 내 사이토카인들과, 다변량 분석결과 유의한 변수 및 기존의 골 파괴 위험인자를 알려진 변수들-나이, 질병 이환 기간, CRP-, 그리고 소변 내 사이토카인 농도에 영향을 줄 수 있는 glomerular filtration rate를 보정하여 다변량 분석을 시행하였다. 다변량 분석 결과, 소변 내 IL-6의 1-quarter 증가 시 골파괴 위험이 3.97배, ESR 1mm/hr 증가 시 골 파괴 위험은 1.03배, ACPA 양성 소견을 보일 때 골 파괴 위험이 5.87배 증가함을 확인할 수 있었다 (표 1). To investigate the risk factors independently predictive of bone destruction three years later, the variables of urinary cytokines, multivariate analysis, and known bone destruction risk factors were compared with age, , CRP-, and glomerular filtration rate, which may affect urine cytokine concentrations. Multivariate analysis showed a 1.97-fold increase in urinary IL-6, a 3.97-fold increased risk of osteolysis, a 1.03-fold increased risk of osteoporosis, and a 5.87-fold increase in osteoporotic risk when ACPA- (Table 1).

또한, 3년 뒤 골 파괴 정도를 예측할 수 있는 검정력을 ESR 및 CRP와 비교해 보기 위해 ROC 분석을 하였다. 혈청 ESR의 AUC는 0.741 [0.647-0.835]이었고, 혈청 CRP의 AUC는 0.740 [0.657-0.824]이었다. 소변 내 IL-6의 AUC는 0.696 [0.590-0.801]로서 ESR 및 CRP와 비교하여 대등한 수준임을 보여주었다 (도 6). In addition, ROC analysis was performed to compare the power of ESR and CRP to predict the degree of bone destruction three years later. The AUC of serum ESR was 0.741 [0.647-0.835] and the AUC of serum CRP was 0.740 [0.657-0.824]. The AUC of urinary IL-6 was 0.696 [0.590-0.801], which was comparable to that of ESR and CRP (Fig. 6).

이상의 결과는 소변 내 마커 측정만으로도 침습적인 혈액 채취 없이도 류마티스 관절염의 활성도 및 질환 중증도 평가가 가능하다는 것을 보여준다. These results show that the measurement of urine marker alone can evaluate the activity and disease severity of rheumatoid arthritis without invasive blood sampling.

방사선 진행을 예측하는 다변량 로지스틱 회귀 분석Multivariate logistic regression analysis to predict radiation progression VariablesVariables Odds ratioOdds ratio EstimateEstimate P-valueP-value Urianry IL-6, per 1 quarter increaseUrianry IL-6, per 1 quarter increase 3.973.97 1.3791.379 0.0160.016 ESR, per 1 unit increaseESR, per 1 unit increase 1.031.03 0.0310.031 0.0010.001 ACPA, positivity ACPA, positivity 5.875.87 1.771.77 0.0420.042

로지스틱 회귀는 방사선 진행의 존재에 대해 조정된 기본 모델 교차비(Odds ratio)를 획득하는데 사용하고, 이 모델은 연령, 질병 기간, C-반응성 단백질 및 사구체 여과율에 대해 조정된다.Logistic regression is used to obtain an adjusted baseline model odds ratio for the presence of radiation progression, which is adjusted for age, disease duration, C-reactive protein and glomerular filtration rate.

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상기 표 2는 뇨 IL-6과 혈청 CRP level에 따라 각각 3군으로 나눴을 때 both low 군은 IL-6와 CRP level이 동시에 모두 낮은 1군을 의미하고, both high 는 동시에 모두 높은 3군을 의미하며, high CRP 군은 CRP만 높은 3군, high IL-6군은 IL-6만 높은 3군을 의미한다. 나머지 군은 both mid 군에 속한다. Both high 군은 both low 인 군에 비해 골 파괴 위험이 4.6배 증가했으며, 항CCP 항체 양성 군에서는 5.0배, ESR이 상승되어 있는 군에서는 6.7배 위험이 증가했음을 확인하였다. In Table 2, when both groups were divided into three groups according to urinary IL-6 and serum CRP levels, IL-6 and CRP levels were both lower in both low and high groups, High CRP group means 3 group with high CRP only and high IL-6 group means 3 high IL-6 group. The other group belongs to both mid group. Both high and low groups showed a 4.6-fold increased risk of osteoporotic fracture, a 5.0-fold increase in anti-CCP antibody and a 6.7-fold increase in ESR.

이는 하기 표 3에서 보는 바와 같이, 각각의 마커들을 3군으로 나눈 후, 하나의 마커만을 이용해 골 파괴 위험을 측정했을 때, IL-6의 경우 2.9배, CRP의 경우 2.8배 보다 더 증가된 위험도를 보이고 있어 IL-6과 CRP 조합이 유용한 마커가 될 수 있음을 보여준다. As shown in Table 3, when the risk of bone destruction was measured using only one marker after dividing each marker into three groups, the risk increased by 2.9 times for IL-6 and 2.8 times for CRP And the combination of IL-6 and CRP can be a useful marker.

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또한, 소변 내 단백질들의 조합이 3년 뒤 골 파괴 정도를 각각의 경우 보다 조합했을 때 더 잘 예측할 수 있는지 조사하기 위해 combination modeling을 시행하였다. 이를 위해 환자들을 각각의 소변 내 단백질 농도 중간 값(median value)에 따라 두 군으로 나누었고, 각 두 개의 단백질로 조합한 3가지 경우(IL6+CCL2, IL6+IL8, IL8+CCL2)를 조사하였다. Combination modeling was also performed to investigate whether the combination of proteins in the urine could be better predicted when the degree of bone destruction was combined in each case three years later. For this purpose, patients were divided into two groups according to the median value of protein concentration in urine. Three groups (IL6 + CCL2, IL6 + IL8, IL8 + CCL2)

예를 들어 IL-6과 IL-8의 경우, 두 단백질이 모두 낮은 군, 모두 높은 군, IL-6만 높은 군, IL-8만 높은 군, 위의 4가지 경우에 모두 해당하지 않는 군으로 5군으로 나눠서, 두 가지 단백질 모두 낮은 군을 참고치로 했을 때, 모두 높은 군의 골파괴 위험도를 조사하였다. For example, in the case of IL-6 and IL-8, both proteins are low, all high, high IL-6 only, high IL-8 only, When divided into 5 groups, both groups were examined for the risk of bone destruction in all groups.

그 결과, IL-6과 IL-8의 경우, 두 단백질의 농도가 모두 낮은 군에 비해 둘 다 높은 군이 골 파괴 위험이 3.1배 증가하였고, IL-6과 CCL2의 경우는 두 가지 단백질 농도가 낮은 군에 비해 모두 높을 때 6.2배, IL-8과 CCL2의 경우 모두 낮은 군에 비해 모두 높은 군이 6.1 배 골 파괴 위험이 증가함을 확인하였음 (표 4).As a result, IL-6 and IL-8 increased the risk of osteoporosis by 3.1 times in both groups, whereas IL-6 and CCL2 showed two protein concentrations 6.2-fold higher than that of the low-level group, and 6.1-fold higher risk of osteolysis than that of the low-level group in both IL-8 and CCL2 4).

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<110> THE CATHOLIC UNIVERSITY OF KOREA INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Biomarkers for diagnosing rheumatoid arthritis <130> P17U11C0736 <150> KR 10-2016-0097185 <151> 2016-07-29 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 212 <212> PRT <213> human IL-6 <400> 1 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro 20 25 30 Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln Pro Leu Thr 35 40 45 Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu Asp Gly Ile 50 55 60 Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met Cys Glu Ser 65 70 75 80 Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro Lys Met Ala 85 90 95 Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu 100 105 110 Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr 115 120 125 Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln 130 135 140 Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn 145 150 155 160 Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu 165 170 175 Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His 180 185 190 Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala 195 200 205 Leu Arg Gln Met 210 <210> 2 <211> 99 <212> PRT <213> human CCL-2 <400> 2 Met Lys Val Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Ala Thr 1 5 10 15 Phe Ile Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val 20 25 30 Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu 35 40 45 Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val 50 55 60 Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln 65 70 75 80 Lys Trp Val Gln Asp Ser Met Asp His Leu Asp Lys Gln Thr Gln Thr 85 90 95 Pro Lys Thr <210> 3 <211> 99 <212> PRT <213> human IL-8 <400> 3 Met Thr Ser Lys Leu Ala Val Ala Leu Leu Ala Ala Phe Leu Ile Ser 1 5 10 15 Ala Ala Leu Cys Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu 20 25 30 Arg Cys Gln Cys Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe 35 40 45 Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr 50 55 60 Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu Leu Cys Leu Asp Pro 65 70 75 80 Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala 85 90 95 Glu Asn Ser <110> THE CATHOLIC UNIVERSITY OF KOREA INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Biomarkers for diagnosing rheumatoid arthritis <130> P17U11C0736 <150> KR 10-2016-0097185 <151> 2016-07-29 <160> 3 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 212 <212> PRT <213> human IL-6 <400> 1 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu   1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro              20 25 30 Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln Pro Leu Thr          35 40 45 Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu Asp Gly Ile      50 55 60 Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met Cys Glu Ser  65 70 75 80 Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro Lys Met Ala                  85 90 95 Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu             100 105 110 Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr         115 120 125 Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln     130 135 140 Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn 145 150 155 160 Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu                 165 170 175 Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His             180 185 190 Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala         195 200 205 Leu Arg Gln Met     210 <210> 2 <211> 99 <212> PRT <213> human CCL-2 <400> 2 Met Lys Val Ser Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ile Ala Ala Thr   1 5 10 15 Phe Ile Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val              20 25 30 Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu          35 40 45 Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val      50 55 60 Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln  65 70 75 80 Lys Trp Val Gln Asp Ser Met Asp His Leu Asp Lys Gln Thr Gln Thr                  85 90 95 Pro Lys Thr             <210> 3 <211> 99 <212> PRT <213> human IL-8 <400> 3 Met Thr Ser Lys Leu Ala Val Ala Leu Ala Ala Phe Leu Ile Ser   1 5 10 15 Ala Ala Leu Cys Glu Gly Ala Val Leu Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu              20 25 30 Arg Cys Gln Cys Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro Phe His Pro Lys Phe          35 40 45 Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro His Cys Ala Asn Thr      50 55 60 Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu Leu Cys Leu Asp Pro  65 70 75 80 Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys Phe Leu Lys Arg Ala                  85 90 95 Glu Asn Ser            

Claims (28)

소변 시료 내 존재하는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 조성물.
The level of expression of at least one protein selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin-8 (IL-8) A diagnostic composition for the treatment of rheumatoid arthritis.
제 1 항에 있어서,
상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 특이적인 항체인 조성물.
The method according to claim 1,
The agent for measuring the expression level of the protein may be at least one selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin- &Lt; / RTI &gt;
제 2 항에 있어서,
상기 항체는 단클론항체 또는 다클론항체인 조성물.
3. The method of claim 2,
Wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
제 1 항에 있어서,
소변 내 존재하는 IL-6 및 혈청 내 존재하는 CRP의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 것인 조성물.
The method according to claim 1,
A composition that measures the level of expression of CRP present in serum and IL-6 present in the urine.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 키트.
A kit for the diagnosis of rheumatoid arthritis, comprising the composition of any one of claims 1 to 4.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 진단용 단백질 칩.
A diagnostic protein chip for the treatment of rheumatoid arthritis, comprising the composition of any one of claims 1 to 4.
류마티스 관절염 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,
환자의 소변 시료로부터 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법.
To provide the information needed to diagnose rheumatoid arthritis,
A method for detecting one or more proteins selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin-8 (IL-8) from a urine sample of a patient.
제 7 항에 있어서,
상기 단백질의 검출은 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 특이적인 항체를 이용하여 수행되는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
The detection of the protein may be carried out using an antibody specific to at least one selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin-8 Lt; / RTI &gt;
제 8 항에 있어서,
상기 항체는 단클론항체 또는 다클론항체인 방법.
9. The method of claim 8,
Wherein said antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
제 7 항에 있어서,
상기 단백질의 검출은 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포 분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip)을 이용하여 수행되는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
The protein may be detected by Western blotting, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), immunoprecipitation assay, complement fixation assay, Fluorecence Activated Cell Sorter (FACS) Wherein the method is performed using a protein chip.
제 7 항에 있어서,
소변으로부터 IL-6을 검출하고, 혈청으로부터 CRP을 검출하는 것인 방법.
8. The method of claim 7,
Detecting IL-6 from the urine, and detecting CRP from the serum.
소변 시료 내 존재하는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 조성물.
A composition for measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin-8 (IL-8) present in a urine sample Wherein the composition is for the evaluation of the activity of rheumatoid arthritis.
제 12 항에 있어서,
상기 단백질의 농도를 측정하는 제제는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 특이적인 항체인 조성물.
13. The method of claim 12,
The agent for measuring the concentration of the protein is selected from the group consisting of IL-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2), and interleukin-8 Lt; / RTI &gt;
제 13 항에 있어서,
상기 항체는 단클론항체 또는 다클론항체인 조성물.
14. The method of claim 13,
Wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
제 12 항에 있어서,
소변 내 존재하는 IL-6 및 혈청 내 존재하는 CRP의 농도를 측정하는 제제를 포함하는 것인 조성물.
13. The method of claim 12,
A composition that measures the concentration of IL-6 present in the urine and the concentration of CRP present in the serum.
제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 키트.
15. A kit for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, comprising the composition of any one of claims 12 to 15.
제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 활성도 평가용 단백질 칩.
15. A protein chip for evaluating the activity of rheumatoid arthritis, comprising the composition of any one of claims 12 to 15.
소변 시료로부터 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 류마티스 관절염 활성도를 평가하기 위한 정보를 제공하는 방법.
And measuring the concentration of one or more proteins selected from the group consisting of IL-6, CCL-2, and IL-8 from the urine sample.
제 18 항에 있어서,
상기 단백질의 농도 측정은 IL-6, CCL-2 및 IL-8로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 특이적인 항체를 이용하여 수행되는 것인 방법.
19. The method of claim 18,
Wherein the measurement of the concentration of the protein is performed using an antibody specific to at least one selected from the group consisting of IL-6, CCL-2 and IL-8.
제 19 항에 있어서,
상기 항체는 단클론항체 또는 다클론항체인 방법.
20. The method of claim 19,
Wherein said antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
제 18 항에 있어서,
상기 단백질의 농도 측정은 웨스턴 블랏(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbentassay), 면역침전분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포 분석(Fluorecence Activated Cell Sorter, FACS), 또는 단백질 칩(protein chip)을 이용하여 수행되는 것인 방법.
19. The method of claim 18,
The concentration of the protein can be measured by Western blotting, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), immunoprecipitation assay, complement fixation assay, Fluorecence Activated Cell Sorter (FACS) Wherein the method is performed using a protein chip.
제 18 항에 있어서,
소변 내 존재하는 IL-6 및 혈정 내 존재하는 CRP의 농도를 측정하는 것인 방법.
19. The method of claim 18,
Wherein the concentration of the present IL-6 and CRP present in the urine is measured.
소변 시료 내 존재하는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 조성물.
The level of expression of at least one protein selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin-8 (IL-8) A composition for predicting the severity of the prognosis of rheumatoid arthritis.
제 23 항에 있어서,
상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 인터루킨-6(IL-6), CCL-2(Chemokine (C-C motif) ligand 2) 및 인터루킨-8(IL-8)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상에 특이적인 항체인 조성물.
24. The method of claim 23,
The agent for measuring the expression level of the protein may be at least one selected from the group consisting of interleukin-6 (IL-6), CCL-2 (Chemokine (CC motif) ligand 2) and interleukin- &Lt; / RTI &gt;
제 24 항에 있어서,
상기 항체는 단클론항체 또는 다클론항체인 조성물.
25. The method of claim 24,
Wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
제 23 항에 있어서,
(i) 소변 내 IL-6 및 혈청 내 CRP 발현 수준을 측정하는 제제, (ii) 소변 내 CCL-2 및 소변 내 IL-8 발현 수준을 측정하는 제제, 또는 (iii) 소변 내 IL-6 및 소변 내 IL-8의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 조성물.
24. The method of claim 23,
(i) an agent for measuring urinary IL-6 and serum CRP expression level, (ii) an agent for measuring urinary CCL-2 and urinary IL-8 expression level, or (iii) urine IL-6 and A composition comprising an agent that measures the level of expression of IL-8 in urine.
제 23 항에 있어서,
소변 내 IL-6 및 혈청 내 CRP 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 조성물.
24. The method of claim 23,
A composition for measuring urinary IL-6 and serum CRP expression levels.
제 23 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 류마티스 관절염의 중증도 예후 예측용 키트.27. A kit for predicting the severity of a rheumatoid arthritis, comprising the composition of any one of claims 23 to 27.
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