KR20180013473A - 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 카제이 dk128 균주 및 이를 이용한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법 - Google Patents
프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 카제이 dk128 균주 및 이를 이용한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 카제이 DK128 균주 및 이를 이용한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에서는 내산성, 내담즙성, 유단백질 분해능, β-글루코시다제 분비능 및 β-갈락토시다제 분비능이 우수한 프로바이오틱(probiotic) 활성을 가지는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주를 분리하였다. 또한, 상기 락토바실러스 카제이 DK128 균주를 이용하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유는 면역 증진효과가 있는 점을 제시하고 있어, 본 발명은 관련 산업에 매우 유용한 정보를 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 카제이 DK128 균주 및 이를 이용한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법에 관한 것이다.
천년초(Opuntia Ficus indica)는 우리나라의 토종 식물인 일명, 손바닥 선인장을 말하는데, 아메리카 대륙이 원산지이다. 한반도에서 자생하는 선인장, 즉 백련초 선인장과 천년초 선인장은 오펀티아(Opuntia) 속에 속하는데, 천년초 선인장의 장점은 재배가 무척 쉬우며, 둥글넓적한 줄기 하나를 땅에 꽂아두면 저절로 자라고, 심을 때 유기질 비료를 적당히 주면 화학비료나 농약이 필요 없다. 이러한 천년초 선인장은 한 포기에서 한 해에 수확할 수 있는 줄기가 15장 남짓 되며 열매도 7~8개 수확 가능하다. 그러나 아직 수요가 많지 않은 게 단점은 있지만 줄기는 가시와 껍질을 제거하면 음식에 다양하게 쓸 수 있다. 이러한, 천년초 선인장은 현재까지 임상실험 결과에 따르면 항산화, 항미백, 항비만, 항염, 치매 억제, 뇌 혈관계, 당뇨 및 기타 성인병, 알콜 대사 등의 탁월한 효과가 있는 성분을 함유하고 있다. 특히 플라보노이드는 노화방지 및 아토피예방 효과가 연구논문으로 발표되었으며, 풍부한 천연 비타민C는 멜라닌 색소억제 기능으로 미백효과, 다양한 유, 무기질은 피부에 영양을 공급한다고 알려져 있다. 천년초는 이를 뒷받침할 수 있는 단백질, 탄수화물, 회분, 지방, 칼슘, 마그네슘, 철, 크롬, 플라보노이드, 페놀화합물 등 신체에 필요한 18가지 필수 아미노산을 함유하고, 항산화 실험결과, 총 페놀 함량이 감초, 천궁, 어성초에 비해 높게 나타났으며, EDA(Electron donating ability)에서도 감초, 천, 어성초보다 높게 나타났다. 플라보노이드 함량을 비교한 결과, 토종 천년초 선인장(5%), 율무(0.19%), 표고(0.21%), 칡뿌리(2.21%)로 높게 나타나 있으며, 비타민C는 열매에 163.8mg%와 줄기에 71.2mg% 함유되어 있으며, 오렌지의 13배 많은 비타민을 함유하고 있어 선인장의 약성에 대해서는 이미 많이 알려져 있다. 식용으로 많은 영양분과 플라보노이드가 함유되어 있다는 것을 강조할 필요가 있을 것이다. 그러나, 천년초는 많은 영양 성분과 플라보노이드를 함유하여 그 수요는 증가하고 있지만 점성이 강한 성질을 지니고 있어 건조 분말상태에서도 수분과 만나면 끈적이고 부풀어 오르는 성질이 있어 상품으로 개발하는데 많은 문제점이 있다.
이에 본 발명에서는 천년초를 첨가한 원유 또는 탈지분유를 본 발명에서 분리한 유산균으로 발효시켜 보다 유용한 효과를 지닌 천년초 발효유의 제조 방법을 제공하고자 하며, 본 발명을 통해 제조된 천년초 발효유가 가축 사료로 매우 효과적인 점을 제공하고자 한다.
한편, 한국공개특허 제2016-0034009호에서는 '천년초를 이용한 액상발효산물을 제조하는 방법'이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2016-0066260호에서는 '천연 발효 식초의 제조방법과 이 방법에 의하여 제조된 천연 발효 식초'가 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이, 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 카제이 DK128 균주 및 이를 이용한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법에 대해서는 밝혀진 바가 전혀 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 전통식품 유래의 유산균을 대상으로 내산성, 내담즙성, 유단백질 분해능, β-글루코시다제 분비능 및 β-갈락토시다제 분비능이 우수한 프로바이오틱(probiotic) 활성을 갖는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주를 분리하였고, 상기 균주를 천년초가 첨가된 원유 또는 탈지분유에 접종하여 발효한 결과, 항산화능, 항균활성 및 면역력이 증가된 천년초 발효유의 제조가 가능한 것을 확인하였다. 또한, 상기 기능성 천년초 발효유를 가축에 급여한 결과, 특히 면역력이 증진되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 프로바이오틱(probiotic) 활성을 갖는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 천년초가 첨가된 원유 또는 탈지분유에 접종하여 발효하는 단계를 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 동물 면역증강용 천년초 발효유를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 천년초 발효유를 유효성분으로 함유하는 동물 면역증강용 사료첨가제 조성물을 제공한다.
본 발명에서는 내산성, 내담즙성, 유단백질 분해능, β-글루코시다제 분비능 및 β-갈락토시다제 분비능이 우수한 프로바이오틱(probiotic) 활성을 가지는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주를 분리하였다. 또한, 상기 락토바실러스 카제이 DK128 균주를 이용하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유는 면역 증진효과가 있는 점을 제시하고 있어, 본 발명은 관련 산업에 매우 유용한 정보를 제공할 수 있다.
도 1은 에스쿨린 아가 테스트를 통해 본 발명에서 분리한 유산균들의 β-글루코시다제 활성을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명에서 분리한 유산균들의 β-갈락토시다제 활성을 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 총 플라보노이드 함량 변화를 분석한 결과이다.
도 4는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 총 폴리페놀 함량 변화를 분석한 결과이다.
도 5는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 항산화활성 변화를 분석한 결과이다.
도 6은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전(A)·후(B)의 성분 변화를 분석한 결과이다.
도 7은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 총 폴레페놀 함량 변화를 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 8은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 DPPH 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 9는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 FRAP 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 10은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 ABTS 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 11은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 생균수 변화를 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 2는 본 발명에서 분리한 유산균들의 β-갈락토시다제 활성을 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 총 플라보노이드 함량 변화를 분석한 결과이다.
도 4는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 총 폴리페놀 함량 변화를 분석한 결과이다.
도 5는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전·후의 항산화활성 변화를 분석한 결과이다.
도 6은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 발효 전(A)·후(B)의 성분 변화를 분석한 결과이다.
도 7은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 총 폴레페놀 함량 변화를 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 8은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 DPPH 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 9는 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 FRAP 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 10은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 항산화능을 ABTS 소거능으로 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
도 11은 본 발명에서 분리한 락토바실러스 카제이 DK128을 첨가하여 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유에서 천년초 함유량에 따른 생균수 변화를 분석한 결과이다. 0%: 무첨가, 0.1%: 천년초 분말 0.1%(w/v) 첨가, 0.2%: 천년초 분말 0.2%(w/v) 첨가, 0.3%: 천년초 분말 0.3%(w/v) 첨가.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 프로바이오틱(probiotic) 활성을 갖는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주를 제공한다.
본 발명의 상기 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주는 내산성, 내담즙산성, 유단백질 분해능, β-글루코시다제 분비능 및 β-갈락토시다제 분비능이 우수한 균주로, 프로바이오틱 활성을 가지는 균주로 전통식품으로부터 분리 동정되었다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유 제조용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 기능성은 항산화능, 항균활성 및 면역력이 증가된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명에서는 상기 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주로 천년초를 첨가한 원유 또는 탈지분유를 발효시켜 제조한 동물 면역증강용 천년초 발효유의 생리활성을 탐색하기 위하여, 항산화능, 항균활성 및 면역능 실험을 수행한 결과, 본 발명의 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주로 발효시킨 천년초 발효유가 본 발명의 균주로 발효시키지 않은 천년초 원유 또는 탈지분유보다 항산화능, 항균활성 및 면역능이 현저히 우수한 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유 제조용 조성물은 천년초 발효유의 항산화능, 항균활성 및 면역능을 현저히 상승시키므로, 동물 면역증강용 천년초 발효유의 개발에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주 또는 락토바실러스 카제이 DK128 균주의 배양액에는 락토바실러스 카제이 DK128 균주가 생산하는 다양한 물질들이 포함되어 있어 동물 면역증강용 천년초 발효유 제조용 조성물에 유효성분으로 포함되었을 때, 상기 유산균주를 포함한 조성물과 동일한 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 유효 성분 외에 통상적인 약학적 담체 및 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이러한 조성물은 통상적인 프로바이오틱 조성물 제조방법에 따라 열건조 또는 동결-건조하여 생균제 형태로 제조하여 이용할 수 있다. 본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대해, 유효성분이 락토바실러스 카제이 DK128 균주를 105 내지 1012 cfu/g, 바람직하게는 107 내지 1011 cfu/g의 함량으로 포함할 수 있고, 유효성분이 락토바실러스 카제이 DK128 균주의 배양액인 경우 이를 각각 106 내지 1012 ㎖/g, 바람직하게는 107 내지 1011 ㎖/g의 함량으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 천년초가 첨가된 원유 또는 탈지분유에 접종하여 발효하는 단계를 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 동물 면역증강용 천년초 발효유를 제공한다.
본 발명에서, 상기 균주의 접종 및 발효는 당업계에 통상적으로 이용되는 방법에 따라 배양할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 천년초 발효유를 유효성분으로 함유하는 동물 면역증강용 사료첨가제 조성물을 제공한다.
상기 균주에 대해서는 전술한 바와 같으며, 면역 증진을 목적으로 사료첨가제 조성물로 첨가할 수 있다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다.
본 발명의 사료첨가제 조성물은 사료에 첨가될 수 있으며, "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 동물 면역증강용
천년초
발효유 제조를 위한
발효균주
선발
1-1. 동물 면역증강용 천년초 발효유 생산능력 우수 유산균 선발
한국 전통식품 유래 유산균 60 종을 분리ㆍ동정 후 기초 생리활성을 검증하고, 1차 선발된 하기 표 1에 기재된 36개 유산균에 대한 HCl을 이용한 내산성 실험, 담즙염(bile salt)을 이용한 담즙산 내성 실험, 단백질 분해활력 및 β-갈락토시다제 활성, 에스쿨린 아가 테스트(Esculin agar test) 실험을 실시하여 유산균 8종을 선발하였다.
| Sample name | Species | Sample name | Species |
| DK109 | Lactobacillus plantarum | DK119 | Lactobacillus plantarum |
| DK121 | Lactobacillus paracasei | DK128 | Lactobacillus casei |
| DK201 | Lactobacillus plantarum | DK202 | Lactobacillus plantarum |
| DK203 | Lactobacillus plantarum | DK204 | Lactobacillus plantarum |
| DK205 | Lactobacillus brevis | DK206 | Lactobacillus plantarum |
| DK207 | Lactobacillus casei | DK208 | Lactobacillus plantarum |
| DK209 | Lactobacillus plantarum | DK210 | Lactobacillus plantarum |
| DK211 | Lactobacillus casei | DK212 | Lactobacillus casei |
| DK213 | Lactobacillus plantarum | DK214 | Lactobacillus plantarum |
| DK215 | Lactobacillus paracasei | DK303 | Lactobacillus plantarum |
| DK304 | Lactobacillus pentosus | DK305 | Leuconostoc citreum |
| DK306 | Weisella cibaria | DK307 | Weisella cibaria |
| DK308 | Weisella cibaria | DK309 | Weisella cibaria |
| DK310 | Lactobacillus sakei | DK311 | Lactobacillus sakei |
| DK312 | Lactobacillus sakei | DK313 | Lactobacillus sakei |
| DK314 | Weissella confusa | DK315 | Lactobacillus sakei |
| DK316 | Lactobacillus sakei | DK317 | Weisella cibaria |
| DK318 | Weisella cibaria |
1-2. 한국전통식품 유래 유산균 생리활성 확인 및 2차 선발
1-2-1. 한국전통식품 유래 유산균의 내산성
분리ㆍ동정한 유산균의 내산성을 측정하기 위해 pH 2.0로 조절된 MRS broth에서 2시간 및 24시간 배양 후에 DK101, DK102, DK104, DK107, DK109, DK119, DK121, DK128, DK207, DK211, DK212, DK215, DK301, DK303인 총 14종의 유산균 생존력이 배양 0시간과 비슷한 수준을 유지하여 내산성이 높은 것으로 나타났다.
1-2-2. 한국전통식품 유래 유산균의 담즙산 내성
유산균의 담즙산 내성을 측정하기 위해 1.0% oxgall을 첨가한 MTS broth에서 37℃에서 2시간 배양 후 생존력을 확인하였다. 유산균의 담즙산 내성은 DK128, DK207, DK211 및 DK212를 포함한 총 32종이 DK 균주가 107(CFU/mL) 이상의 생존력을 나타내는 것을 확인하였다.
1-2-3. 한국전통식품 유래 유산균의 에스쿨린 아가 테스트(Esculin agar test)를 통한 β-글루코시다제 활력
선발된 유산균의 당 이용능력의 지표로 활용되는 β-글루코시다제 활성을 확인하기 위해 도 1과 같이 에스쿨린 아가 테스트를 Agar well diffusion 방법을 응용하여 실험하였다. 그 실험 결과 에스쿨린 아가 플레이트에서 주입한 균 주위의 생성된 환으로 DK109, DK119, DK121, DK128, DK207, DK211, DK212 및 DK215의 β-글루코시다제 활력을 확인할 수 있었으며(도 1), 다른 균주들은 β-글루코시다제 활력이 없거나 매우 미미하였다. 따라서 위 DK 균주들을 제외한 나머지 균주들은 당 이용능력이 미미한 것으로 판단되며, 천년초 발효능이 낮을 것으로 예상되었다.
1-2-4. 한국전통식품 유래 유산균의 유단백질 분해 활력
선발유산균의 유단백질 분해능을 측정하기 위해 Well diffusion 방법을 응용하여 실험하였다. 탈지유 한천 배지 상에서 주입한 균 주위의 생성된 환을 보고 선발된 유산균의 유단백질 분해능에 대한 활성을 확인하였다.
확인 결과 DK119, DK121 및 DK128의 유단백질 분해능이 우수한 것으로 확인되었으며 DK109은 배양 72시간부터 환이 확인되었고, 그 밖의 DK 균주들을 제외한 나머지 균주들의 유단백질 분해능은 다른 선발균주에 비해 낮은 것으로 확인되었다.
1-2-5. 한국전통식품 유래 유산균의 β-갈락토시다제 활성
선발유산균의 β-갈락토시다제 활성을 측정하기 위해 MRS broth에서 배양한 후 ONPG (Sigma, USA) 용액을 이용하여 β-갈락토시다제 활성을 확인한 결과, DK128, DK207, DK211 및 DK212은 100 unit/mL 이상의 우수한 활성을 보였으며, 위 DK 균주들을 제외한 나머지 균주들의 β-갈락토시다제 활성은 다른 선발균주에 비해 낮은 것으로 확인되었다(도 2).
1-3. 한국 전통식품 유래 유산균의 2차 선발
1차 선발 유산균 36종 중 기초생리활성 및 β-글루코시다제 활력이 우수하여 천연물(천년초)의 발효능이 우수할 것으로 예상되는 DK109, DK119, DK121, DK128, DK207, DK211, DK212, DK215 유산균인 총 8종을 2차 선발하였다.
실시예
2. 선발 유산균의 최적 배양 배지 개발 및 최적 조건 설정
생화학적 특성 및 기능성, 동물 면역증강용 천년초 발효유에 대한 적용성 실험을 통하여 선발된 유산균 DK128, DK207, DK211 및 DK212을 DK 균주에 최적화된 자체 개발 JMO 배지에 적용하여 생장력을 확인하였다.
JMO 배지 50 mL에 37℃에서 24시간 배양한 각각의 균주(DK128, DK207, DK211 및 DK212)를 1 mL씩 접종 후, 0 h, 24시간에 샘플링하여 십진희석하여 MRS 아가 배지로 총 균수를 측정하였다. 그 결과 배양 종료 후, DK128는 3.85×109 CFU/mL, DK207은 3.90×109 CFU/mL, DK211은 2.89×109 CFU/mL, DK212는 2.85×109 CFU/mL를 나타내었다. 상기 4 균주 모두 109 CFU/mL 이상으로 JMO 배지에서 생장력과 활성 모두 적합한 것으로 확인하였다.
실시예
3.
천년초
발효 전·후
항산화능
변화 비교분석
천년초(생초) 수확 후 가시를 제거한 뒤 10~20mm 수준으로 분쇄한 뒤 동결건조기를 이용하여 동결건조 후 산업용 믹서기를 이용하여 분쇄하여 천년초 분말을 준비하였다. 천년초 발효유의 제조방법에 대해서는 하기 실시예 6에 기재한 바와 같다.
천년초 발효 전·후 총 플라보노이드 함량 변화를 측정하였다. 천년초 발효 전·후 샘플을 메탄올, 10% AlCl3, 1M 포타슘 아세테이트, 증류수를 넣고 상온에서 30분 동안 반응시킨 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 415nm로 설정하여 총 플라보노이드 함량을 측정하였다. 그 결과, 총 플라보노이드 함량은 다음과 같이 천년초 첨가 발효유에서 대조군(천년초 미첨가 발효유)에 비해 높은 결과를 보였으며, 특히 본 발명에서 분리한 프로바이오틱 활성이 가장 우수한 DK128를 이용하여 발효시킨 천년초 발효 샘플이 대조군은 물론 발효전 샘플보다 높은 플라보노이드 함량을 보였다(도 3).
또한, 천년초 발효 전·후 총 폴리페놀 함량 변화를 측정하였다. 천년초 발효 전후 샘플에 0.2M N-Folin 시약을 첨가 후 상온에서 30분 반응시킨 시료에 10% Na2CO3를 넣어 상온에서 1시간 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 700nm으로 설정하여 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 그 결과, 발효전 대조군과 천년초 함유 발효전 샘플을 비교하였을 때 천년초를 함유한 발효전 샘플의 총 폴리페놀 함량의 차이는 보이지 않았으나, 특히 DK128, DK207, DK211 및 DK212을 각각 이용하여 천년초를 함유한 발효 후 제조의 경우 발효전의 샘플보다 총 폴리페놀 함량이 증가하였다(도 4).
또한, 천년초 발효 전·후 항산화능 변화를 측정하였다. 천년초 발효 전후 샘플에 DPPH 시약을 넣어 37℃에서 30분 반응시킨 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 510nm로 설정하여 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 천년초 발효전 샘플과 발효전 대조군의 항산화 활성은 큰 차이가 보이지 않았으나 특히 DK128, DK207, DK211 및 DK212을 각각 이용한 천년초 발효 후의 DPPH 값은 대조군 및 발효전 샘플보다 증가하는 경향을 보였다(도 5).
결론적으로, 발효 후 천년초의 TPC, TFC 및 항산화능의 경향을 보았을 때 항산화활성을 나타내는 주성분인 플라보노이드와 페놀성 성분들이 증가해 항산화능이 우수해지는 것으로 판단되었다.
실시예
4.
천년초
발효 전·후 성분 변화 비교분석
천년초 발효 전·후 성분변화를 측정하였다. 발효 대조군과 천년초 발효 전·후 샘플의 HPLC 크로마토그램을 비교하였다. 지표성분은 isorhamnetin-3-O-β-galactosyl-4’-O-β-glucoside (1)와 isorhamnetin-3-O-β-glucosyl-4’-O-β-glucoside (2)를 사용하였으며, 각각 13.7분과 14.5분에 피크가 나타났다.
천년초 발효 전·후 주 당류는 글루코스이며 발효 후 글루코스의 양이 발효 전의 글루코스 양보다 줄어드는 것을 확인하였다(도 6). 이는 발효과정 중 DK128 균주가 글루코스를 이용하여 증식하며 천년초를 발효시킨 것으로 분석되었다.
실시예
5.
천년초
발효 전·후 항균력 변화 비교분석
천년초 발효 전·후의 항균력을 비교하기 위해 4종의 병원성 미생물을 대상으로 비교실험을 진행하였다. 병원성 미생물은 KCTC에 등록된 대장균(E. coli KCTC 1682), 포도상구균(S. aureus KCTC 3881), 엔테로코커스 패칼리스(E. faecalis KCTC 2011) 및 바실러스 세레우스(B. cereus KCTC 3624)로 KCTC로부터 분양받아 실험에 사용하였다. 분양받은 균주들을 TSB 배지에 1%(v/v) 수준으로 접종하여 35℃에서 24h 배양 후 TSA 고체 배지에 발효 전·후 샘플의 상등액을 취해 페이퍼 웰(10mm)에 200㎕ 접종하여 저해환의 크기로 샘플의 항균력을 비교하였다. 아래 표 2에 나타난 바와 같이, DK128을 이용하여 발효시킨 천년초를 함유한 샘플의 항균력이 대조군에 비해 우수하게 나타났으며, 발효 전보다 발효 후가 바실러스 세레우스 및 포도상구균에 대한 항균력이 우수한 것으로 나타났다.
| Sample | E. faecalis KCTC 2011 |
B. cereus KCTC 3624 |
S. aureus KCTC 3881 |
E. coli KCTC 1682 |
| 발효전 대조군 | + | ++ | + | NE |
| 발효전 천년초 | ++ | ++ | + | + |
| 발효후 천년초 | ++ | +++ | ++ | + |
상기 결과는 발효 전·후 천년초의 병원성 균에 대한 항균력을 비교하여 페이퍼 웰(10mm)으로부터 저해환의 크기(1~2mm : +, 2~4mm : ++, 4~8mm +++)에 따라 나타내었으며, NE는 항균력에 대한 효과가 없음을 의미한다.
실시예
6. 동물 면역증강용
천년초
발효유(유산균) 제품 생산
6-1. 동물 면역증강용 천년초 발효유 최적 조건 확립
6-1-1. 동물 면역증강용 천년초 발효유 원재료 설정
선바이오(주)에서 가시를 제거한 천년초(생초)를 공급받아 10~20mm 크기로 절개 후 페트리디쉬에 담아 단국대학교 산학협력단 공동기기실의 동결건조기(OPERON, OPR-FDV-7012)를 1AH, 12A, 10Hz로 설정하여 -70℃로 24h 동결건조 후 산업용 믹서기에 갈아 실링 후 -24℃ 냉동고에서 샘플을 보관하며 사용하였다. 동물 면역증강용 천년초 발효유 제조를 위한 탈지분유는 Skim milk Preparation(SMP8515, Schils Food, B.V. Holland)의 사료용 탈지분유를 공급받아 실험에 사용하였으며, 유산균의 증식을 위한 함수결정포도당은 'DEAHAN'사의 제품을 사용하였다.
6-1-2. 동물 면역증강용 천년초 발효유 배합비 설정
천년초 발효유에 분쇄 천년초 0.4% 이상 첨가시 발효 중 천년초 내 muco 다당으로 인한 curd 생성 전 응집현상으로 인하여 발효가 이루어지지 않았다. 따라서 분쇄 천년초를 0.1, 0.2, 0.3% 첨가하여 제조한 발효유의 그 기능성 및 효과를 검증하였다. 또한 0.2% 이하의 분쇄 천년초를 함유한 발효유에서는 생균수 유지능이 0.3%에 비해 저하되며 그 효과가 미비하여 최종 배합비는 다음 표 3과 같이 설정하였다. 이때 락토바실러스 카제이 DK128 균주는 1×106 내지 1×107cfu/ml가 되도록 접종하였다.
| 원재료 | 탈지분유 | 함수결정포도당 | 분쇄천년초 | 정제수 |
| 함량(중량%) | 15 | 3 | 0.3 | 81.2 |
6-1-3. 동물 면역증강용 천년초 발효유 총 폴리페놀 함량 및 항산화능 분석
동물 면역증강용 천년초 발효유의 총 폴리페놀 함량을 분석하였다(도 7). 전처리된 천년초 발효유 샘플에 0.2M N-Folin 시약을 첨가 후 상온에서 30분 반응시킨 시료에 10% Na2CO3를 넣어 상온에서 1h 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 700nm으로 설정하여 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 천년초 함량이 증가함에 따라 유의적으로 총 폴리페놀 함량이 증가하는 경향을 보였다.
6-1-4. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 함량별 항산화능(DPPH) 분석
전처리된 천년초 발효유 샘플에 0.02mM DPPH 용액을 첨가한 후 상온에서 30min 반응시킨 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 517nm으로 설정하여 DPPH 소거능(%)을 측정하였다. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 천년초 함량이 증가함에 따라 유의적으로 DPPH 소거능(%)이 증가하는 경향을 보였다(도 8).
6-1-5. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 함량별 항산화능(FRAP) 분석
전처리된 천년초발효유 샘플에 FRAP 용액과 암실에서 30min 반응 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 593nm으로 설정하여 FRAP 소거능(%)을 측정하여 Troloc concentrate의 대비값으로 나타내었다. 동물 면역증강용 천년초발효유의 천년초 함량에 따른 유의적 차이는 보이지 않았으나, 천년초를 첨가하지 않은 대조군에 비해 유의적으로 높은 항산화능을 나타내었다(도 9).
6-1-6. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 함량별 항산화능(ABTS) 분석
전처리된 천년초 발효유 샘플에 ABTS stock solution을 첨가 후 상온에서 6min 반응시킨 후 UV/VIS 스펙트로포토미터의 흡광도를 734nm으로 설정하여 ABTS 소거능(%)을 측정하여 Troloc concentrate의 대비값으로 나타내었다. 동물 면역증강용 천년초 발효유의 ABTS 소거능은 천년초 함량이 증가함에 따라 증가하는 경향을 보였다(도 10).
6-1-7. 동물 면역증강용 천년초 발효유 함량에 따른 저장기간 중 생균수 변화
제조된 동물 면역증강용 천년초 발효유의 저장기간 중 생균수 변화를 56일 동안 7일 간격으로 측정한 결과 분쇄 천년초가 0.3% 함유된 발효유에서 타 배합비의 발효유보다 생균수가 10^1 이상 차이나는 것을 확인하였다. 이는 유통 중 제품의 변질 및 추후 2차년도에 제품개발 할 예정인 생균제에 있어 그 제품의 유통기한 및 안정성에 크게 기여할 것으로 분석되었다(도 11).
실시예
7. 동물 면역증강용 천년초 발효유 시제품
자돈
사양급여실험
천년초 발효유의 동물면역증강 효과를 확인하기 위해 천안연암대학(한동운 교수)에 위탁하였고, 실험기간은 2016년 4월 1일부터 2016년 6월 30일까지 수행하였다. 발효천년초를 양돈사료에 첨가하여 이유자돈과 육성 전기 돼지의 생산성을 평가하고 돼지의 설사 및 호흡기 질병 발생을 측정하여 면역증강 효과를 측정하고 돈분뇨의 악취 감소에 의한 돈사내 환경개선 효과를 규명하고자 실시하였다.
7-1. 시험동물 및 실험설계
평균체중 7.22 ± 0.04 kg인 삼원 교잡종([Yorkshire × Landrace]× Duroc) 육성돈 240두를 공시하여, 이유후(4주), 육성전기(4주)로 총 8주 동안 사양실험을 수행하였다. 총 3처리 4 반복으로 돈방 당 20두씩 체중에 따라 각 처리구에 난괴법(RCBD; Randomized Complete Block Design)으로 배치하였다. 처리구는 1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여로 하여 표 4와 같이 배치하였다.
| Item | No. of replication | No. of Pigs | Total |
| Con* | 4 | 20 | 80 |
| T1* | 4 | 20 | 80 |
| T2* | 4 | 20 | 80 |
| Total | 240 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
7-2. 사양관리
Con은 대조구로 기존의 사료를 급여하고 T1은 대조구 사료에 피그루트 1% 첨가사료를 급이하고 T2는 천년초 발효유 1% 첨가사료를 급이하였다. 사료는 자동급이기, 물은 자동급수기에 의해 자유 채식시켰으며, 기타 사양관리는 풍일농장 돈사 표준 사양관리법에 준하였다.
7-3. 조사항목 및 방법
실험개시부터 매주 1회 체중 및 사료섭취량을 측정하였고 일당증체량(ADG), 일당 사료섭취량(ADFI) 및 사료 효율(G:F ratio)을 계산하여 이유자돈에서의 천년초 발효유의 증체효과와 사료효율을 측정하였다. 사료섭취량은 매 측정시마다 총 급여량과 잔량을 측정하여 계산하였으며, 일당증체량은 돈형기(이동식 돼지체중 전용저울)를 이용하여 측정하였다. 사료요구율은 시험기간 중의 사료섭취량을 증체량으로 나누어 계산하였다. 모든 실험군에 대하여 주 2회 오전 10-11시에 임상증상을 관찰하여 설사 발생 상황과 호흡기 증상 발생 여부를 관찰하여 소화기 증상 및 호흡기 증상 발생 빈도를 측정하였다. 분내 유해물질 측정은 오전 10-11시에 임상 증상을 관찰하면서 주 1회 처리구당 10두씩 임의 선발된 돼지의 분변을 채취하여 100g을 채취한 후 플라스틱 용기에 분주하여 Gastec (Model GV-100, GASTEC, Japan)을 사용하여 발생하는 암모니아 농도와 황화수소 농도를 측정하였다.
7-4. 돼지의 혈액 화학치 및 IFN-r와 TNF-a, IL-6 측정
발효유가 돼지의 면역형성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 24-25일령의 이유자돈 300두를 실험에 공시하고 격주간격으로 처리구당 20두씩 임의 선발하여 EDTA 튜브에 혈액을 채취한 후 원심분리하였다. 각 처리구당 20두를 임의 선발하여 이유자돈의 혈액을 채취하여 혈장에서 혈액 화학치를 측정하였고 원심분리한 혈청을 대상으로 혈중 IFN-r와 TNF-a, IL-6 함량을 측정은 실험전과 실험 4주와 8주에 각 3회 실시하여 혈중 농도를 측정하였다(IDDEX사의 ELISA kit).
7-5. 생산성
사양실험 전 기간을 기준으로 일당증체량, 일당사료섭취량에 있어서 처리구간에 유의적인 차이가 나타나지 않았으나, 일당증체량에서 천년초 발효유 처리군에서 523.2g으로 대조군과 발효유처리구에 비해 높은 증체량을 나타냈다. 사료효율에 있어서는 천년초 발효유 처리구인 T2가 가장 높게 나타났고 대조군과 피그루트 처리구가 천년초 요구르트 처리구보다 비교적 낮게 나타났다(P<0.05). 결과적으로 이유후기와 육성전기에 발효유의 급여가 돼지의 증체에 효과가 있고 천년초 발효유가 함유된 자돈 사료를 급여한 돼지가 다른 처리구에 비해 높은 성장능력을 보였으나 일당 사료섭취량에서는 천년초 발효유 처리구에서 대조구에 비해 더 낮은 섭취량을 보여 사료 효율이 높게 나타나는 경향을 보여주었다. 실험종료시의 체중 측정결과에서도 발효유와 천년초 처리구에서 대조구에 비해 체중이 증가하였다(표 5).
| Con* | T1 | T2 | SE** | |
| 일당증체량 (g) | 465.7 | 487.9 | 523.2 | 29.00 |
| 일당사료섭취량 (g) | 1321.5 | 1301.3 | 1284.5 | 18.53 |
| 사료효율 | 0.35 | 0.37 | 0.41 | 0.08 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
**Pooled standard error
일당증체량에서는 대조군이 4주차와 5주차에 증체량이 현저하게 낮았으나 6주부터 회복하는 경향을 보였고 이는 4-5주 사이에 소화기 및 호흡기 증상의 발현과 관련이 있는 것으로 판단되며 발효유 처리군과 천년초 발효유 처리군에서는 꾸준한 일당 증체량을 보여 이유후기와 육성전기에 돼지의 질병 방어효과를 보이는 것으로 분석되었다. 발효유와 천년초 발효유 첨가 급여가 돼지 생산성에 미치는 영향은 사료 섭취량에서는 대조구에서 가장 높은 결과를 보여주고 있지만 모든 처리구간의 유의차는 나타나지 않았다. 사료 효율에서는 천년초 발효유 처리군과 발효유 처리군에서 대조군에 비해 높게 나타나는 구간이 많았고, 특히, 천년초 발효유 처리군에서 대조군에 비해 육성단계 초기인 6주차에 대조구에 비해 낮게 나타났지만 대부분의 실험 기간동안 대조군과 발효유 처리군에 비해 일관되게 높게 나타났다.
7-6. 자돈의 질병 발생 방어 효과
이유자돈에 대한 설사와 호흡기 증상 발현율을 비교한 결과는 표 6 및 표 7에 나타내었다. 이유자돈 사료에 발효유와 천년초 발효유의 첨가가 이유자돈의 설사 발생 빈도에 미치는 영향은 표 6에 나타난 바와 같이 천년초 발효유 첨가구에서 설사 발생 빈도가 가장 낮게 나타났으며, 발효유 처리구에서 그 다음으로 낮은 수치를 보였다(P=0.05). 이는 사양 실험에서 천년초 발효유 첨가구(T2)의 성장 능력이 가장 높다는 것을 보여주었다. 그러나 발효유 첨가구에서는 사양 성적에 비견되는 일관된 결과가 나타나지는 않았다. 또한 표 7에서 보는 바와 같이 호흡기 증상의 발현율은 소화기 증상의 예방효과에 비하여 낮게 나타났다. 천년초와 발효유 처리구 모두에서 대조구에 비해서는 호흡기 증상의 발현율이 낮게 나타났으나 천년초 발효유의 급여만으로 호흡기 질병을 차단하지는 못하는 것으로 나타났다.
| Item | No. of pigs | No. of Pigs with diarrhea on weeks | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | ||
| Con* | 80 | 9 | 7 | 8 | 5 | 4 | 2 | 3 | 3 |
| T1* | 80 | 9 | 4 | 2 | 1 | 2 | 1 | 1 | 2 |
| T2* | 80 | 10 | 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 0 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
| Item | No. of pigs | No. of Pigs with respiratory disease on weeks | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | ||
| Con* | 80 | 8 | 7 | 5 | 4 | 7 | 6 | 5 | 6 |
| T1* | 80 | 7 | 4 | 5 | 4 | 6 | 5 | 4 | 5 |
| T2* | 80 | 8 | 5 | 4 | 3 | 4 | 3 | 3 | 3 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
7-7. 천년초 요구르트가 분변내 유해가스 발생에 미치는 영향
시험돈에 천년초와 발효유를 첨가한 사료를 8주간 급여하면서 4주 간격으로 2회 분변을 채취하여 돈분의 유해가스 발생량을 조사한 결과는 표 8에서 보는 바와 같다. 먼저 암모니아 (NH3) 발생량은 발효유 처리구와 천년초 발효유 처리구인 T1과 T2 처리구에서 각각 11.2ppm 및 9.6ppm으로 대조구에 비하여 유의성 있게 낮게 나타나(p<0.05) 발효유가 돼지의 분변내 유해가스 억제에도 효과가 있음을 보여주었다.
| Item | Con * | T1 | T2 | 평균값 | 표준편차 |
| Ammonia (ppm) | 16.3 | 13.6 | 11.2 | 13.70 | 0.82 |
| 17.6 | 11.2 | 9.6 | 12.80 | 0.68 | |
| Hydrogen sulfide (ppm) |
9.6 | 7.8 | 6.7 | 8.03 | 0.52 |
| 10.3 | 8.1 | 5.8 | 8.07 | 0.47 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
한편, 황화수소 (H2S) 가스는 T1 및 T2 처리구가 각각 8.1ppm 및 5.8ppm으로 대조구에 비해 천년초 발효유 처리구인 T2가 황화수소 발생량을 효과적으로 줄일 수 있는 것으로 나타났다. 이상과 같이 돼지의 분변내 유해가스 분석 결과 천년초 발효유의 경구투여는 돼지의 분뇨 중 암모니아와 황화수소를 감소시켜 양돈장의 유해가스 발생 억제에 효과적인 것으로 평가되었다. 유제품을 통한 식이조절이 비만관리 및 예방에 도움이 될 가능성이 있으며, 건강을 증진시키는 질을 예방 및 치료 물질의 성분으로 사용될 것으로 여겨진다. 따라서 우유와 유제품이 기능성 식품 및 이 식품의 성분으로 활용할 수 있도록 적극적인 지속적인 연구가 진행되어야 할 것이다.
7-7. 천년초 요구르트가 면역반응에 미치는 영향
천년초가 발효유를 통해 흡수되었을 때 돼지의 면역반응에 미치는 영향을 알아보기 위하여 실험사료 급여 후 2주 후 혈액을 채취하여 TNF-a를 비롯해 INF-γ, IL-6 등의 염증 매게 물질을 측정하여 돼지에서 염증 발생을 효과적으로 억제할 수 있는 지를 확인하였다(표 9). 혈액에서 TNF-a를 비롯해 INF-γ, IL-6 물질을 측정한 결과 천년초 발효유를 처리한 군에서 높은 항산화 활성과 및 염증 매개 물질의 생성을 억제하는 우수한 항염증 효과가 있는 것으로 확인되었다. 기존의 연구에서 생균제, 효소제, 효모 및 항생제를 이유자돈부터 비육시까지 급여하여 증체량과 사료효율성이 개선되고 생균제의 성장촉진제로서의 가능성이 입증된 바 있다. 천년초를 함유한 복합생균제를 비육돈에 급여시 체중 증가 및 사료효율 향상뿐만 아니라 NH3 및 H2S 가스의 발생을 감소시킴으로써 사육환경 개선효과가 나타났다.
| Cytokine | Con* | T1 | T2 | SE** |
| IL-6 (pg/ml) | 37.8 | 42.5 | 44.2 | 0.21 |
| TNF-α (pg/ml) | 93.7 | 74.3 | 51.7 | 0.24 |
| INF-γ (pg/ml) | 87.2 | 76.4 | 65.7 | 0.17 |
1) Con: 대조구 2) T1 : 피그루트 1% 첨가사료 급여 3) T2 : 천년초 발효유 1% 첨가사료 급여
**Pooled standard error
7-8. 동물 사양실험 결과 요약
본 실험은 돼지의 사료에 발효유와 천년초 첨가 발효유의 첨가가 자돈의 생산성과 질병방어효과 및 분뇨의 암모니아와 황화수소 발생에 미치는 영향을 측정하기 위하여 실시하였다. 실험은 대조구(C), 대조구 사료에 피그루트 0.1%를 첨가한 구(T1), 천연초 발효유 0.1%를 첨가한 구(T2) 등 3개 처리구를 두고, 처리당 4반복, 반복당 20두씩 총 240두의 이유자돈을 공시하여 실시하였다. 실험 결과 증체량과 사료 섭취량은 천년초 발효유 처리구에서 대조구에 비해 유의하게 (P<0.05) 높았고, 발효유 처리구의 증체량은 대조구(C)에 비하여 약간의 개선효과가 있었으나 통계적인 유의차는 인정되지 않았다. 사료 요구율은 모든 처리구간에 유의차가 나타나지 않았다. 발효유 처리구의 질병 발생여부를 관찰한 결과 천년초 발효유 첨가구에서 설사 발생 빈도가 가장 낮게 나타났으며, 발효유 처리구에서 그 다음으로 낮은 수치를 보였다(P=0.05). 암모니아 가스 발생량은 발효유와 천년초 발효유 처리구 모두에서 대조구에 비해 낮게 나타나 발효유가 암모니아 가스 발생률을 줄일 수 있음을 보여주었다.
결론적으로 복합 효소제와 생균제의 첨가는 이유자돈의 생산성을 개선시키며 암모니아 가스 발생을 억제시키는 경향이 있었다. 이상의 결과 본 천년초 발효유가 소화효소를 분비하는 정상적인 소화기관 미생물의 기능을 유지시켜 사료의 영양소 이용가치를 향상시켜 주고 이유자돈과 육성돈의 증체량과 사료 효율을 증대시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한 천년초 발효유의 지속적인 섭취는 일반 발효유에 비하여 항산화 및 항염증 효과를 발휘하여 이유자돈과 육성돈의 설사와 호흡기 질병의 발생율을 더욱 낮추고 분변과 뇨에 함유된 암모니아 및 황화수소 가스의 발생량을 감소시켜 돼지의 사육환경 개선에도 효과를 보여 양돈장 주변의 환경오염 문제 해결에도 기여할 것으로 판단된다.
Claims (7)
- 프로바이오틱(probiotic) 활성을 갖는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) DK128 균주.
- 제1항에 있어서, 상기 균주는 내산성, 내담즙성, 유단백질 분해능, β-글루코시다제 분비능 및 β-갈락토시다제 분비능을 가지는 것을 특징으로 하는 균주.
- 제1항 또는 제2항의 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유 제조용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 기능성은 항산화능, 항균활성 및 면역력이 증가된 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항 또는 제2항의 균주, 이의 배양액, 상기 배양액의 농축액 또는 그의 건조물을 천년초가 첨가된 원유 또는 탈지분유에 접종하여 발효하는 단계를 포함하는 동물 면역증강용 천년초 발효유의 제조방법.
- 제5항의 방법에 의해 제조된 동물 면역증강용 천년초 발효유.
- 제6항의 천년초 발효유를 유효성분으로 함유하는 동물 면역증강용 사료첨가제 조성물.
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| CN110408577A (zh) * | 2019-09-06 | 2019-11-05 | 西南大学 | 一株控制蔬菜细菌性软腐病的干酪乳杆菌及其应用 |
| KR102501957B1 (ko) * | 2022-05-24 | 2023-02-23 | 주식회사 한국인삼공사 | 인삼으로부터 유래한 신규 락토바실러스 카제이 균주 및 이의 용도 |
| KR20230040252A (ko) * | 2021-09-15 | 2023-03-22 | 일동바이오사이언스(주) | 단백질 분해능을 가지는 락토바실러스 카제이 idcc 3451을 포함하는 식품 조성물 및 건강기능식품 |
-
2016
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