KR20170139439A - Inhibitor of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and the method of inhibiting SIRT1 expression using the same - Google Patents

Inhibitor of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and the method of inhibiting SIRT1 expression using the same Download PDF

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KR20170139439A KR1020170034709A KR20170034709A KR20170139439A KR 20170139439 A KR20170139439 A KR 20170139439A KR 1020170034709 A KR1020170034709 A KR 1020170034709A KR 20170034709 A KR20170034709 A KR 20170034709A KR 20170139439 A KR20170139439 A KR 20170139439A
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홍승필
송지홍
정민영
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단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK), which inhibits the expression of SIRT1 in in vitro-cultured keratinocytes derived from the human skin, and thus can be actively used in researches for carrying out basic human skin research. The composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte comprises at least one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA, and shRNA complementarily binding to mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

Description

각질형성세포에서의 SIRT1 발현 억제제 및 이를 이용한 SIRT1 발현억제 방법 {Inhibitor of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and the method of inhibiting SIRT1 expression using the same}[0001] The present invention relates to an inhibitor of SIRT1 expression in keratinocytes and a method of inhibiting expression of SIRT1 using the same. [0002] Inhibitors of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and the method of inhibiting SIRT1 expression using the same [

본 발명은 인간 각질형성세포에서 SIRT1 발현을 억제할 수 있는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition capable of inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes.

유전자 수준에서 단백질의 발현을 조절하기 위한 방법으로는 지금까지 상동 재조합기술을 이용하여 목적하는 유전자의 기능을 없애는 넉아웃 시스템(knock out system)이 사용되어 왔으나 이를 위해서는 시간이 오래 걸리고 과정이 복잡하다는 단점이 있다.As a method for controlling the expression of a protein at a gene level, a knock out system has been used, which uses a homologous recombination technique to eliminate the function of a desired gene. However, it takes a long time and a complicated process There are disadvantages.

최근에 유전자 수준에서 단백질의 발현을 조절하기 위한 방법으로 RNA간섭 (RNA interference, RNAi) 현상을 이용한 방법이 연구되고 있다. 일반적으로 siRNA 로 명명되는 작은 RNA 조각은 약 20 뉴클레오티드 크기의 작은 RNA조각으로 상보적인 서열을 갖는 mRNA에 특이적으로 결합하여 단백질 발현을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 이중-가닥 RNA를 선충에게 주입했을 때 상보적인 세포 내부의 mRNA와 서열특이적으로 결합해 유전자 침묵(gene silencing)을 유도하는 기능을 확인했고, 이를 계기로 이런 현상을 RNA 간섭이라고 부른다. siRNA에 의해 그에 상보적인 염기서열을 갖는 mRNA 분해가 유발되는지 혹은 번역억제가 유도되는지 여부는 해당하는 21-25 뉴클레오티드 RNA와 mRNA 간의 상보성 정도에 따라 결정되는 것으로 알려졌는데, 100% 상보적인 경우는 mRNA 분해를, 약 80-90% 상보적인 경우는 번역 억제를 일으키는 것으로 파악되고 있다. 이러한 siRNA는 진핵세포에서 빠르고 효율적인 발현 억제를 가능하게 함으로써, 효율적인 RNAi기술을 개발하는 데에도 중요한 기반지식을 제공하는 것으로 알려졌다.Recently, methods using RNA interference (RNAi) phenomenon as a method for controlling the expression of a protein at a gene level have been studied. In general, a small RNA fragment, termed siRNA, has been found to bind specifically to mRNA having a complementary sequence with a small RNA fragment of about 20 nucleotides in size and to inhibit protein expression. When double-stranded RNA was injected into a nematode, it was found to function by inducing gene silencing by sequence-specific binding to mRNA in complementary cells. This phenomenon is called RNA interference. Whether mRNA degradation with a complementary base sequence is induced by siRNA or whether translation inhibition is induced is known to be determined by the degree of complementarity between the corresponding 21-25 nucleotide RNA and mRNA. In the case of 100% complement, mRNA Degradation, and about 80-90% complement, translational inhibition. These siRNAs have been shown to provide rapid and efficient suppression of expression in eukaryotic cells, thus providing an important basis for developing efficient RNAi technology.

그러나 이 방법은 유전자의 형질 발현을 100% 억제할 수 있는 것은 아니며 생성되는 mRNA 또는 단백질의 양이 풍부하거나 매우 안정한 단백질을 코딩하는 유전자를 목적으로 할 때에는 그 효과가 미미할 수도 있을 뿐만 아니라, mRNA와 상보적인 염기서열을 갖는 모든 뉴클레오티드가 RNA 간섭 효과를 발휘하는 것이라고 말할 수는 없다. 즉 siRNA를 제조하려면 먼저 다운 레귤레이션(down regulation)을 유도하려는 유전자 염기서열에서 siRNA에 상보적인 약 19-21 뉴클레오타이드의 목표 서열을 결정해야 하며, 또한 이론적으로 예상되는 siRNA가 반드시 목표로 하는 mRNA의 능력을 효과적으로 억제시키지 않는 것으로 밝혀졌다. 그러므로 한 유전자 당 다수의 목표 부위를 선정하여 siRNA를 제조하고 이것을 세포나 동물모델을 이용하여 직접적으로 효과를 확인하는 과정이 필요하다.However, this method can not inhibit the expression of a gene by 100%. When the gene coding for a protein having a rich or highly stable mRNA or protein content is intended, the effect may be insignificant. It can not be said that all nucleotides having a complementary base sequence exert an RNA interference effect. In order to produce siRNA, it is first necessary to determine a target sequence of about 19 to 21 nucleotides complementary to the siRNA in the gene sequence to induce down regulation, and theoretically expected siRNA must be capable of the target mRNA Of the total amount of the composition. Therefore, it is necessary to prepare siRNAs by selecting a number of target sites per gene, and to directly examine the effects of these siRNAs using cell or animal models.

본 발명의 목적은, 인간 각질형성세포에서 SIRT1 발현을 억제할 수 있는 조성물 및 이를 이용한 SIRT1 발현 억제 방법을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a composition capable of inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes and a method for inhibiting SIRT1 expression using the same.

그러나, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 해당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the problems to be solved by the present invention are not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

일실시예에 따르면, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는, 인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물이 제공된다.According to one embodiment, at least one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA and shRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK) is provided.

상기 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 siRNA는, 서열번호 2 및 서열번호 3로 기재되는 염기서열을 포함할 수 있다. The siRNA complementarily binding to mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene may include the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3.

상기 siRNA는 SIRT1의 발현을 24 내지 72시간 동안 억제할 수 있다.The siRNA can inhibit the expression of SIRT1 for 24 to 72 hours.

상기 siRNA는 10 내지 30 nM 로 포함될 수 있다. The siRNA may be included at 10 to 30 nM.

일실시예에 따르면, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는 조성물을 세포에 처리하는 단계를 포함하는, 인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법이 제공된다. According to one embodiment, at least one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA and shRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 A method of inhibiting the expression of SIRT1 in human keratinocytes (pHEK), comprising the step of treating the cells with a composition comprising:

상기 SIRT1 (sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 siRNA는, 서열번호 2 및 서열번호 3로 기재되는 염기서열을 포함할 수 있다. The siRNA complementarily binding to mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene may include the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3.

상기 siRNA는 SIRT1의 발현을 24 내지 72시간 동안 억제할 수 있다.The siRNA can inhibit the expression of SIRT1 for 24 to 72 hours.

상기 siRNA는 10 내지 30 nM 로 포함될 수 있다.The siRNA may be included at 10 to 30 nM.

본 발명의 SIRT1 발현 억제 조성물은, 인간 각질형성세포에서의 SIRT1 발현을 억제할 수 있으므로, 인간 피부로부터 유래한 체외 배양 각질형성세포에서 SIRT1의 발현을 억제하여 인체 피부 기초 연구를 수행하는 연구에 적극적으로 활용될 수 있으며, 또한 인간 피부에 적용될 수 있는 신규 약물 또는 소재의 작용기전 또는 부작용 등을 보다 정확하게 밝히는 연구에도 폭넓게 이용될 수 있다.The SIRT1 expression-inhibiting composition of the present invention is capable of inhibiting the expression of SIRT1 in human keratinocyte, and thus can inhibit the expression of SIRT1 in in vitro cultured keratinocytes derived from human skin, And can also be widely used in studies that more accurately reveal the action mechanism or side effects of new drugs or materials that can be applied to human skin.

도 1은, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물 농도에 따른 SIRT1 발현 억제를 나타낸 사진이다.
도 2는, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물의 SIRT1 발현 억제 작용시간을 나타낸 사진이다.
도 3은, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물 처리에 따른 세포 내 지질량의 변화를 나타낸 사진이다.
도 4는, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물 처리에 따른 지질 합성효소의 발현 변화를 나타낸 그래프이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a photograph showing inhibition of SIRT1 expression according to the concentration of SIRT1 expression inhibiting composition according to one embodiment. FIG.
2 is a photograph showing the SIRT1 expression inhibiting action time of the SIRT1 expression inhibiting composition according to one embodiment.
FIG. 3 is a photograph showing changes in intracellular lipid according to the SIRT1 expression inhibiting composition treatment according to one embodiment. FIG.
FIG. 4 is a graph showing changes in the expression of lipid synthase following treatment with SIRT1 expression inhibiting composition according to an embodiment.

이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 각 도면에 제시된 동일한 참조 부호는 동일한 부재를 나타낸다.In the following, embodiments will be described in detail with reference to the accompanying drawings. Like reference symbols in the drawings denote like elements.

아래 설명하는 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있다. 아래 설명하는 실시예들은 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 이들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.Various modifications may be made to the embodiments described below. It is to be understood that the embodiments described below are not intended to limit the embodiments, but include all modifications, equivalents, and alternatives to them.

실시예에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 실시예를 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.The terms used in the examples are used only to illustrate specific embodiments and are not intended to limit the embodiments. The singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In this specification, the terms "comprises" or "having" and the like refer to the presence of stated features, integers, steps, operations, elements, components, or combinations thereof, But do not preclude the presence or addition of one or more other features, integers, steps, operations, elements, components, or combinations thereof.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this embodiment belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries are to be interpreted as having a meaning consistent with the contextual meaning of the related art and are to be interpreted as either ideal or overly formal in the sense of the present application Do not.

또한, 첨부 도면을 참조하여 설명함에 있어, 도면 부호에 관계없이 동일한 구성 요소는 동일한 참조 부호를 부여하고 이에 대한 중복되는 설명은 생략하기로 한다. 실시예를 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 실시예의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.In the following description of the present invention with reference to the accompanying drawings, the same components are denoted by the same reference numerals regardless of the reference numerals, and redundant explanations thereof will be omitted. In the following description of the embodiments, a detailed description of related arts will be omitted if it is determined that the gist of the embodiments may be unnecessarily blurred.

시르투인 단백질 (sirtuin protein, SIRT)은 스트레스나 영양 상태에 반응하여 개체의 생명을 조절할 수 있는 NAD-의존 탈아세틸효소(NAD-dependant deacetylase)이다. 포유동물의 세포에서 SIRTs 1 에서 7까지 7종류의 유사체가 확인이 되었고 그 중 비교적 진화 과정에서도 그 기능이 잘 유지되어 단세포 생물이나 꼬마선충을 이용한 연구를 통해 기능과 특성에 대해서 많은 사실이 밝혀져 있는 SIRT1이 가장 핵심적인 인자로 알려져 있다. 이 단백질이 활성화되면 생명이 길어지는 장수효과가 나타나기 때문에 다양한 분야의 항노화 연구에 표적 물질로 연구되고 있다. 특히, SIRT1의 작용제로 알려진 레스베라트롤 (resveratrol)은 피부 항노화 소재로 알려져 있다. Sirtuin protein (SIRT) is a NAD-dependent deacetylase that can regulate the life of an individual in response to stress or nutritional status. Seven kinds of analogues from SIRTs 1 to 7 were identified in mammalian cells. Among them, their functions were maintained well during the evolutionary process, and studies on single-celled organisms or small nematodes revealed many facts about their functions and characteristics SIRT1 is the most important factor. The activation of this protein has long been studied as a target for anti-aging studies in various fields because of its long longevity. In particular, resveratrol, known as the agonist of SIRT1, is known as a skin aging agent.

또한, SIRT1은 피부 각질형성세포에서 지질 합성에 관여하는 것으로 본 발명에 따른 SIRT1 발현 억제제를 처리하는 경우 각질형성세포의 세포질에서 지질함량이 감소하고(실시예 3 참조), 각질형성 세포에서 지질 합성에 필요한 효소가 억제(실시예 4 참조)됨을 확인할 수 있었다.In addition, SIRT1 is involved in lipid synthesis in dermal keratinocytes. When the SIRT1 expression inhibitor according to the present invention is treated, the lipid content in the cytoplasm of keratinocytes decreases (see Example 3) (See Example 4). ≪ tb > < TABLE >

따라서, SIRT1 유전자 발현을 knockdown 할 수 있는 효과적인 저해제를 개발하여 각질형성세포에서의 SIRT1 유전자의 발현을 조절한다면, 각질형성세포에서의 SIRT1 기능을 정밀하게 연구할 수 있을 것이다. Therefore, if we develop an effective inhibitor to knockdown the expression of SIRT1 gene and control the expression of SIRT1 gene in keratinocyte, we will be able to study SIRT1 function in keratinocyte precisely.

본 발명은, 인체 유래 일차 표피각질형성세포(primary human epidermal keratinocyte, pHEK)에서 SIRT1 유전자의 발현을 저해할 수 있는 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition capable of inhibiting the expression of the SIRT1 gene in human primary epidermal keratinocytes (pHEK).

일실시예에 따르면, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는, 인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물이 제공된다.According to one embodiment, at least one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA and shRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK) is provided.

본 발명에서 사용되는 용어, "siRNA"는 특정 mRNA의 절단(cleavage)을 통하여 RNAi(RNA interference) 현상을 유도할 수 있는 짧은 이중사슬 RNA를 의미한다. 표적 유전자의 mRNA와 상동인 서열을 가지는 센스 RNA 가닥과 이와 상보적인 서열을 가지는 안티센스 RNA 가닥으로 구성된다.　siRNA는 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있기 때문에 효율적인 유전자 넉다운 방법으로서 또는 유전자 치료의 방법으로 제공될 수 있다.As used herein, the term "siRNA" means a short double-stranded RNA capable of inducing RNAi (RNA interference) through cleavage of a specific mRNA. A sense RNA strand having a sequence homologous to the mRNA of the target gene, and an antisense RNA strand having a complementary sequence. Since siRNA can inhibit expression of a target gene, it can be provided as an efficient gene knockdown method or as a method of gene therapy.

siRNA는 RNA끼리 짝을 이루는 이중사슬 RNA 부분이 완전히 쌍을 이루는 것에 한정되지 않고 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(일방의 사슬에 대응하는 염기가 없음) 등에 의하여 쌍을 이루지 않는 부분이 포함될 수 있다. 전체 길이는 10 내지 100 염기, 바람직하게는 15 내지 80 염기, 더욱 바람직하게는 20 내지 70염기이다.　siRNA 말단 구조는 표적 유전자의 발현을 RNAi 효과에 의해 억제할 수 있는 것이면 평활(blunt) 말단 또는 점착(cohesive) 말단 모두 가능하다. 점착 말단 구조는 3' 말단 돌출한 구조와 5' 말단 쪽이 돌출한 구조 모두 가능하다. 돌출하는 염기 수는 한정되지 않는다. 또한 siRNA는 표적 유전자의 발현 억제 효과를 유지할 수 있는 범위에서 예를 들어, 한쪽 말단의 돌출 부분에 저분자 RNA(예를 들어, tRNA, rRNA, 바이러스 RNA와 같은 천연의 RNA 분자 또는 인공의 RNA 분자)를 포함할 수 있다. siRNA 말단 구조는 양측 모두 절단 구조를 가질 필요는 없고, 이중 사슬 RNA 일반의 말단 부위가 링커 RNA에 의하여 접속된 스텝 루프형 구조일 수도 있다.The siRNA is not limited to a complete pair of double-stranded RNA portions that are paired with each other, but is paired by a mismatch (the corresponding base is not complementary), a bulge (no base corresponding to one chain) May be included. The total length is 10 to 100 bases, preferably 15 to 80 bases, more preferably 20 to 70 bases. The siRNA terminal structure is capable of blunt or cohesive termini as long as it can inhibit the expression of the target gene by the RNAi effect. The adhesive end structure can be a structure having a 3 'end protruding structure and a 5' end protruding structure. The number of protruding bases is not limited. The siRNA may be a small RNA (for example, a natural RNA molecule such as a tRNA, a rRNA, or a viral RNA, or an artificial RNA molecule) at a protruding portion at one end within a range that can maintain the effect of suppressing the expression of a target gene, . ≪ / RTI > The siRNA end structure does not need to have a truncation structure on both sides, and may be a step-loop structure in which the terminal region of the double-stranded RNA is connected by linker RNA.

본 발명에서 사용되는 siRNA는 그 자체로 폴리뉴클레오타이드 페어링을 갖는 완전한 형태, 즉 시험관에서 siRNA를 직접 합성한 두 형질전환 과정을 거쳐 세포 안으로 도입되는 형태이거나, 생체 내에 투여된 후 이러한 형태를 갖도록 하나의 단일쇄 올리고뉴클레오타이드 단편과 이의 역방향(reverse) 상보물이 스페이서에 의해 분리된 단일쇄 폴리뉴클레오타이드로부터 유도될 수 있는 형태, 예를 들어 siRNA가 세포 안에서 발현되도록 제조된 siRNA 발현 벡터 또는 PCR-유도된 siRNA 발현 카세트를 형질전환 또는 감염(infection) 과정을 거쳐 세포 안으로 도입되는 형태일 수 있다.　 siRNA를 제조하고 세포 또는 동물로 도입하는 방법의 결정은 목적 및 표적 유전자 산물의 세포 생물학적 기능에 따라 달라질 수 있다.　The siRNA used in the present invention may be a complete form having polynucleotide pairing itself, that is, a form in which siRNA is directly synthesized in a test tube and introduced into a cell through two transformation processes, Single chain oligonucleotide fragments and their reverse-phase trefoil can be derived from single-stranded polynucleotides separated by a spacer, for example, a form of siRNA expression vector or PCR-derived siRNA prepared so that the siRNA is expressed in a cell The expression cassette may be introduced into the cell through a transformation or infection process. The determination of how to prepare siRNAs and introduce them into cells or animals may depend on the objective and the cellular biological function of the target gene product.

본 발명에서 사용되는 용어, "shRNA" 는 siRNA의 고가의 생합성 비용, 낮은 세포 형질감염 효율로 인한 RNA 간섭 효과의 단시간 유지 등의 단점을 극복하기 위한 것으로 RNA 중합효소 Ⅲ의 프로모터로부터 아데노 바이러스, 렌티 바이러스 및 플라스미드 발현 벡터 시스템을 이용하여 이를 세포 내로 도입하여 발현시킬 수 있으며, 이러한 shRNA는 세포 내에 존재하는 siRNA 프로세싱 효소(Dicer or Rnase Ⅲ)에 의해 정확한 구조를 갖는 siRNA로 전환되어 목적 유전자의 사일런싱을 유도함이 널리 알려져 있다. As used herein, the term "shRNA" is intended to overcome the disadvantages of high cost biosynthetic cost of siRNA, short term maintenance of RNA interference effect due to low cell transfection efficiency, The siRNA can be expressed by introducing it into a cell using a virus and plasmid expression vector system. The shRNA is converted into an siRNA having a correct structure by the siRNA processing enzyme (Dicer or Rnase Ⅲ) Is widely known.

본 발명에서 사용되는 용어, "안티센스 핵산"이란 특정 mRNA 의 서열에 상보적인 핵산 서열을 함유하고 있는 DNA 또는 RNA 또는 이들의 유도체를 의미하고, mRNA 내의 상보적인 서열에 결합하여 mRNA의 단백질로의 번역을 저해하는 특징이 있다.　 본 발명의 안티센스 서열은 SIRT1의 mRNA에 상보적이고 이의 mRNA에 결합할 수 있는 DNA 또는 RNA 서열을 의미하고, SIRT1 mRNA의 번역, 세포질 내로의 전위(translocation), 성숙(maturation) 또는 다른 모든 전체적인 생물학적 기능에 대한 필수적인 활성을 저해할 수 있다. 안티센스 핵산의 길이는 6 내지 100 염기이고, 바람직하게는 8 내지 60 염기이고, 보다 바람직하게는 10 내지 40 염기이다.As used herein, the term "antisense nucleic acid" means DNA or RNA or a derivative thereof containing a nucleic acid sequence complementary to the sequence of a specific mRNA, and refers to a complementary sequence in mRNA, . ≪ / RTI > The antisense sequence of the present invention refers to a DNA or RNA sequence that is complementary to mRNA of SIRT1 and capable of binding to its mRNA and can be used for translation of SIRT1 mRNA, translocation into the cytoplasm, maturation or any other overall biological function Lt; RTI ID = 0.0 > activity. ≪ / RTI > The length of the antisense nucleic acid is 6 to 100 bases, preferably 8 to 60 bases, more preferably 10 to 40 bases.

안티센스 RNA의 경우 통상의 방법으로 시험관에서 합성되어 생체 내로 투여하거나, 생체 내에서 안티센스 RNA가 합성되도록 할 수 있다. 시험관에서 안티센스 RNA를 합성하는 한 예는 RNA 폴리머라제Ⅰ를 이용하는 것이다. 생체 내에서 안티센스 RNA가 합성되도록 하는 한가지 예는 인식부위(MCS)의 기원이 반대 방향에 있는 벡터를 사용하여 안티센스 RNA가 전사되도록 하는 것이다. 이런 안티센스 RNA는 서열 내에 번역 중지 코돈이 존재하도록 하여 펩타이드 서열로 번역되지 않도록 하는 것이 바람직하다.In the case of antisense RNA, it can be synthesized in vitro in a conventional manner and administered in vivo, or the antisense RNA can be synthesized in vivo. One example of the synthesis of antisense RNA in vitro is the use of RNA polymerase I. One example of allowing antisense RNA to be synthesized in vivo is to allow the antisense RNA to be transcribed using a vector in which the origin of the recognition site (MCS) is in the opposite direction. Such antisense RNAs are preferably made such that translation stop codons are present in the sequence so that they are not translated into the peptide sequence.

일측에 따르면, 상기 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 siRNA는, 서열번호 2 및 서열번호 3로 기재되는 염기서열을 포함할 수 있다. According to one aspect, the siRNA that complementarily binds to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene may include the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3.

일측에 따르면, 상기 siRNA는 SIRT1의 발현을 24 내지 72시간 동안 억제할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 siRNA는 SIRT1의 발현을 48 내지 72시간 동안 억제할 수 있다(실시예 2 참조).According to one aspect, the siRNA can inhibit the expression of SIRT1 for 24 to 72 hours. More preferably, the siRNA can inhibit the expression of SIRT1 for 48 to 72 hours (see Example 2).

일실시예에 따르면, 서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는 조성물을 세포에 처리하는 단계를 포함하는, 인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법이 제공된다. According to one embodiment, at least one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA and shRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 A method of inhibiting the expression of SIRT1 in human keratinocytes (pHEK), comprising the step of treating the cells with a composition comprising:

이하 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 목적으로 기술된 것으로서, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. The following examples are provided for the purpose of illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<실시예 1: SIRT1의 Knockdown>&Lt; Example 1: Knockdown of SIRT1 >

Genbank에 등록되어있는 Homo sapiens sirtuin 1 (SIRT1)의 염기서열 (aceession No. NM_012238)을 주형으로 하여, siRNA 센스가닥와 안티센스가닥을 제조하였다. (siRNA의 제조는 (주)제놀루션(Genolution, Seoul, Korea)에 제작의뢰 하였다.)An siRNA sense strand and an antisense strand were prepared using the nucleotide sequence of Homo sapiens sirtuin 1 (SIRT1) (aceession No. NM_012238) registered in Genbank as a template. (Preparation of siRNA was commissioned by Genology, Seoul, Korea)

Sense: 5' AAGUGCCUCAGAUAUUAAUUAUU 3'Sense: 5 'AAGUGCCUCAGAUAUUAAUUAUU 3'

Antisense: 5' UAAUUAAUAUCUGAGGCACUUUU 3' Antisense: 5 'UAAUUAAUAUCUGAGGCACUUUU 3'

음성 대조군(negative control)으로는, 다음과 같은 핵산을 제조하였다.As a negative control, the following nucleic acids were prepared.

Sense: 5' CCUCGUGCCGUUCCAUCAGGUAGUU 3'Sense: 5 'CCUCGUGCCGUUCCAUCAGGUAGUU 3'

Antisense: 5' CUACCUGAUGGAACGGCACGAGGUU 3'Antisense: 5 'CUACCUGAUGGAACGGCACGAGGUU 3'

상기 siRNA는 RNase 및 DNase free-water (sigma, USA, Cat.No. W4502)와 혼합하여 20 uM 농도의 stock으로 제조하였다. 하루 전에 인간 유래 각질형성세포 (primary keratinocyte)를 6 웰 배양 플레이트에 1.5×105cells/ml 로 seeding한 후, 37 ℃, 5% CO2 인큐베이터에서 오버나이트 인큐베이션 하여 각질형성세포 플레이트를 준비하였다. 상기 20 uM의 siRNA stock을 이용하여 최종 농도가 각각 5 nM, 10 nM, 15 nM, 20 nM가 되도록 상기 세포 배양 플레이트에 처리하였으며, lipofectamin (Invitrogen, USA, Cat.No. 11668019)을 처치하고 6시간 동안 37 ℃, 5% CO2 인큐베이터에서 트랜스펙션을 하였다. 6시간 후 배지를 교체하고, 다시 24시간의 인큐베이션 후, 세포를 수거하여 SIRT1 항체(Abcam, USA, Cat.No. ab32441)을 이용하여 웨스턴블롯을 수행하여 SIRT1 단백질의 knockdown 여부를 확인하였다. The siRNA was mixed with RNase and DNase free-water (Sigma, USA, Cat. No. W4502) to prepare 20 uM stocks. Human keratinocytes were seeded at a density of 1.5 × 10 5 cells / ml on a 6-well culture plate and incubated overnight at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator to prepare keratinocyte cell plates. The cell culture plate was treated with the 20 uM siRNA stock to final concentrations of 5 nM, 10 nM, 15 nM and 20 nM, respectively. Lipofectamine (Invitrogen, USA, Cat. No. 11668019) 0.0 &gt; 37 C &lt; / RTI &gt; in a 5% CO 2 incubator. After 6 hours, the medium was replaced, and after 24 hours of incubation, the cells were harvested and subjected to Western blotting using SIRT1 antibody (Abcam, USA, Cat. No. ab32441) to confirm the knockdown of SIRT1 protein.

도 1은, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물의 농도에 따른 SIRT1 발현 억제를 나타낸 사진이다. 1 is a photograph showing inhibition of SIRT1 expression according to the concentration of the SIRT1 expression inhibiting composition according to one embodiment.

도 1을 참고하면, siRNA의 농도가 20 nM 일 때 SIRT1이 유의하게 knockdown 되는 것을 확인하였다. Referring to FIG. 1, SIRT1 was significantly knocked down when siRNA concentration was 20 nM.

<실시예 2: knockdown의 지속시간 확인>&Lt; Example 2: Determination of duration of knockdown >

실시예 1에서 제조된 siRNA를 이용하여 SIRT1 유전자에 대한 작용 시간을 확인하기 위해서 24, 48 및 72시간 경과에 따른 SIRT1 단백질의 발현 여부를 확인하였다. 실시예 1에서와 동일한 방법으로, 하루 전에 인간 유래 각질형성세포 (primary keratinocyte)를 6 웰 배양 플레이트에 1.5×105cells/ml 로 seeding한 후, 37 ℃, 5% CO2 인큐베이터에서 오버나이트 인큐베이션 하여 각질형성세포 플레이트를 준비하였다. 20 nM의 siRNA를 상기 세포 배양 플레이트에 처리하여 트랜스펙션을 하였으며, 각각 24, 48또는 72시간 동안 37 ℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 각각의 세포를 수거하여 SIRT1 항체(Abcam, USA, Cat.No. ab32441)을 이용하여 웨스턴블롯을 수행하여 SIRT1 단백질의 knockdown 여부를 확인하였다.Using the siRNA prepared in Example 1, the expression of SIRT1 protein was confirmed at 24, 48 and 72 hours in order to confirm the action time of the SIRT1 gene. Human keratinocytes were seeded at a density of 1.5 × 10 5 cells / ml on a 6-well culture plate one day before incubation in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. in the same manner as in Example 1. Overnight incubation To prepare a keratinocyte cell plate. 20 nM of siRNA were transfected into the cell culture plates and incubated in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 24, 48, or 72 hours, respectively. Each of the cells was harvested and subjected to Western blotting using SIRT1 antibody (Abcam, USA, Cat. No. ab32441) to confirm the knockdown of SIRT1 protein.

도 2는, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물의 SIRT1 발현 억제 작용시간을 나타낸 사진이다.2 is a photograph showing the SIRT1 expression inhibiting action time of the SIRT1 expression inhibiting composition according to one embodiment.

도 2를 참고하면, 본 발명의 SIRT1 발현 억제 조성물 (siRNA)의 knockdown 효과가 48시간 후까지 지속되며 72시간 후에는 knockdown 효과가 소멸되는 것을 확인하였다.Referring to FIG. 2, it was confirmed that the knockdown effect of the SIRT1 expression-inhibiting composition (siRNA) of the present invention lasted up to 48 hours and the knockdown effect disappeared after 72 hours.

<실시예 3: SIRT1 처리에 따른 세포 내 지질량>&Lt; Example 3: Intracellular lipid amount by SIRT1 treatment >

실시예1에서 제조된 siRNA를 이용하여 SIRT1 발현억제 처리에 따른 각질형성세포 내 지질량 변화를 확인하기 위해서 Nile red 형광염색법을 시행하였다. 실시예 1에서와 유사한 방법으로, 하루 전에 인간 유래 각질형성세포 (primary keratinocyte)를 글라스 커버슬립(glass coverslip)을 넣은 24 웰 배양 플레이트에 1.5×105cells/ml 로 seeding한 후, 37 , 5% CO2 인큐베이터에서 오버나이트 인큐베이션 하여 각질형성세포 플레이트를 준비하였다. 그 후, 20 nM의 siRNA와 lipofectamin을 상기 세포 배양 플레이트에 처리하여 트랜스펙션을 하고 6시간 후, 배지를 교체하고 24시간 동안 인큐베이션 하여 nile red 형광염색을 하였다. Nile red 형광염색을 위하여1 ml의 nile red dye (1-5㎍/ml in glycerol, nile red dye, 9-diethylamino-5H-benzo[a]phenoxazine-5-one (sigma, USA, Cat.No. N3013))를 실온에서 5분간 처리하고, 형광현미경(Olympus Corp., Tokyo, Japan)으로 관찰 및 촬영하였다.Nile red fluorescence staining was performed to confirm the changes in keratinocyte lipid in accordance with SIRT1 expression inhibition treatment using the siRNA prepared in Example 1. Human keratinocytes were seeded at a density of 1.5 x 10 5 cells / ml on a 24-well culture plate containing a glass coverslip and incubated at 37, 5, overnight incubation at% CO 2 incubator and were prepared keratinocytes plate. Then, 20 nM of siRNA and lipofectamine were treated with the cell culture plate for transfection, and after 6 hours, the medium was replaced and incubated for 24 hours to perform nile red fluorescence staining. For nile red fluorescent staining, 1 ml of nile red dye (1-5 μg / ml in glycerol, nile red dye, 9-diethylamino-5H-benzo [a] phenoxazine-5-one (Sigma, USA, Cat. N3013) was treated at room temperature for 5 minutes and observed and photographed with a fluorescence microscope (Olympus Corp., Tokyo, Japan).

도 3은, 일 실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물 처리에 따른 세포 내 지질량의 변화를 나타낸 사진이다.FIG. 3 is a photograph showing changes in intracellular lipid according to the SIRT1 expression inhibiting composition treatment according to one embodiment. FIG.

도 3을 참고하면, 본 발명의 SIRT1 발현 억제 조성물을 처리한 세포에서 붉은 형광이 유의하게 감소되어, 세포 내 지질량이 감소된 것을 확인하였다.3, red fluorescence was significantly decreased in the cells treated with the SIRT1 expression inhibiting composition of the present invention, and it was confirmed that the intracellular lipid amount was decreased.

<실시예 4: SIRT1 처리에 따른 지질합성 효소 발현량>&Lt; Example 4: Amount of expression of lipid-synthesizing enzyme by SIRT1 treatment >

실시예 1에서 제조된 siRNA를 이용하여 SIRT1 억제제가 각질형성세포 지질합성 능력에 미치는 영향을 확인하고자 realtime RT-PCR을 이용하여 콜레스테롤 합성의 주요 효소인 HMG CoA reductase, 세라마이드 합성의 주요 효소인 serine-palmitoyl transferase의 mRNA 발현 정도를 분석하였다. 실시예 1에서와 동일한 방법으로, 하루 전에 인간 유래 각질형성세포(primary keratinocyte)를 6 웰 배양 플레이트에 1.5×105cells/ml 로 seeding한 후, 37 , 5% CO2 인큐베이터에서 오버나이트 인큐베이션 하여 각질형성세포 플레이트를 준비하였다. 그 후, 20 nM의 siRNA와 lipofectamin을 상기 세포 배양 플레이트에 처리하여 트랜스펙션을 하고 6시간 후 배지를 교체하고, 37 , 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 인큐베이션한 후, realtime RT-PCR 분석을 시행하였다. Realtime RT-PCR을 간략히 설명하면, siRNA를 처치 후 24시간 인큐베이션 한 세포를 각 튜브에 모으고, RNA extraction kit (세포, 조직 및 효모로부터 RNA를 신속하게 정제할 수 있는 키트로, 50개의 RNeasy 미니 스핀 컬럼, 1.5ml 및 2ml의 콜렉션 튜브, RNase-free 시약 및 버퍼를 포함한다. Qiagen, Germany, Cat.No. 74104) 를 이용하여 total RNA를 추출한 후 정량하여1ug의 total RNA를 Reverse Transcription kit (50 x 20 ㎕ 반응에 사용되는 것으로, 100㎕ 7x gDNA Wipeout Buffer, 50㎕ Quantiscript Reverse Transcriptase, 200㎕ 5x Quantiscript RT Buffer, 50㎕ RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water를 포함하며, gDNA Wipeout Buffer는 gDNA의 오염을 제거한다. Qiagen, Germany, Cat.No. 205311)를 이용하여 reverse transcription 하고, QuantiFast realtime PCR kit (기존 realtime PCR에 비해 PCR의 성능은 유지하고 처리 시간은 최대 60%까지 단축시킨 것으로, 버퍼에 첨가된Q-Bond가 denaturation, annealing, 및 extension 과정을 단축시킨다. Qiagen, Germany, Cat.No. 204054)를 이용하여 realtime PCR을 진행하였다. Realtime RT-PCR에 이용된 각 지질 합성 효소의 primer는 다음과 같다. 인간 HMG CoA reductase (NM_000859): forward (ACG GTG GGT GGT GGG ACC AA), reverse (TCC TGC TGC CAA TGC TGC CA); 인간 serine-palmitoyl transferase (NM_001281303.1): forward (AGT GGG TTC TGG TGG AGA TG), reverse (TTT GGG ACA GGA GGA ACA AG)In order to examine the effect of the SIRT1 inhibitor on the keratinocyte lipid synthesis ability using the siRNA prepared in Example 1, real-time RT-PCR was performed to determine the activity of HMG CoA reductase, the main enzyme of cholesterol synthesis, mRNA expression of palmitoyl transferase was analyzed. Human keratinocytes were seeded at a density of 1.5 × 10 5 cells / ml on a 6-well culture plate one day prior to incubation in a 37% 5% CO 2 incubator in the same manner as in Example 1 A keratinocyte cell plate was prepared. Then, 20 nM of siRNA and lipofectamine were transfected into the cell culture plates, and after 6 hours, the medium was replaced, incubated for 24 hours in a 37, 5% CO 2 incubator, and then subjected to realtime RT-PCR analysis . Real time RT-PCR is briefly described. Cells incubated for 24 hrs after siRNA treatment are collected in each tube, and RNA extraction kit (50 RNeasy minispin with a kit for rapid purification of RNA from cells, tissues and yeast) Total RNA was extracted using Qiagen, Germany, Cat. No. 74104, and quantified, and 1 ug of total RNA was purified using reverse transcription kit (50 μg / ml) x 20 μl reaction containing 100 μl 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 μl Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 μl 5x Quantiscript RT Buffer, 50 μl RT Primer Mix and 1.9 ml RNase-Free Water. The gDNA Wipeout Buffer contains gDNA Reverse transcription using Qiagen, Germany, Cat. No. 205311) and QuantiFast realtime PCR kit (preserving the performance of the PCR and shortening the processing time by up to 60% compared to the real-time PCR, Add to buffer Real-time PCR was performed using Qiagen, Germany, Cat. No. 204054, which shortens the denaturation, annealing, and extension steps of the Q-Bond. The primers of each lipid-synthesizing enzyme used in Realtime RT-PCR are as follows. Human HMG CoA reductase (NM_000859): forward (ACG GTG GGT GGT GGG ACC AA), reverse (TCC TGC TGC CAA TGC TGCCA); Human serine-palmitoyl transferase (NM_001281303.1): forward (AGT GGG TTC TGG TGG AGA TG), reverse (TTT GGG ACA GGA GGA ACA AG)

도 4는, 일실시예에 따른 SIRT1 발현 억제 조성물 처리에 따른 지질 합성효소의 발현 변화를 나타낸 그래프이다.FIG. 4 is a graph showing changes in the expression of lipid synthase following treatment with SIRT1 expression inhibiting composition according to an embodiment.

도 4를 참고하면, 본 발명의 SIRT1 발현 억제제 처리에 따라 콜레스테롤 합성의 핵심 효소인 HMG-CoA reductase와 세라마이드 합성의 핵심효소인 Serine-Palmitoyl transferase가 대조군에 비해서 유의하게 감소되었음을 확인하였다. (Control: 무처치 대조군, siRNA neg: siRNA를 처리한 대조군, SIRT1 KD: SIRT1 발현 억제제를 처리한 군) Referring to FIG. 4, it was confirmed that HMG-CoA reductase, which is a key enzyme of cholesterol synthesis, and Serine-Palmitoyl transferase, a key enzyme for ceramide synthesis, were significantly reduced by treatment with SIRT1 expression inhibitor of the present invention. (Control: untreated control group, siRNA neg: control group treated with siRNA, SIRT1 KD: group treated with SIRT1 expression inhibitor)

이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기의 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 및/또는 설명된 구성요소들이 설명된 방법과 다른 형태로 결합 또는 조합되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments. For example, if the techniques described are performed in a different order than the described methods, and / or if the described components are combined or combined in other ways than the described methods, or are replaced or substituted by other components or equivalents Appropriate results can be achieved.

그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 특허청구범위의 범위에 속한다.Therefore, other implementations, other embodiments, and equivalents to the claims are also within the scope of the following claims.

<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, DANKOOK UNIVERSITY <120> Inhibitor of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and the method of inhibiting SIRT1 expression using the same <130> APC-2016-0216 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens sirtuin 1 <400> 1 aagtgcctca gatattaatt a 21 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense siRNA <400> 2 aagugccuca gauauuaauu auu 23 <210> 3 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense siRNA <400> 3 uaauuaauau cugaggcacu uuu 23 <110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, DANKOOK UNIVERSITY <120> Inhibitor of SIRT1 expression in human primary keratinocyte and          the method of inhibiting SIRT1 expression using the same <130> APC-2016-0216 <160> 3 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens sirtuin 1 <400> 1 aagtgcctca gatattaatt a 21 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense siRNA <400> 2 aagugccuca gauauuaauu auu 23 <210> 3 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antisense siRNA <400> 3 uaauuaauau cugaggcacu uuu 23

Claims (8)

서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물.
An antisense nucleotide complementary to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, siRNA and shRNA.
A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK).
제1항에 있어서,
상기 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 siRNA는, 서열번호 2 및 서열번호 3로 기재되는 염기서열을 포함하는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the siRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3,
A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK).
제2항에 있어서,
상기 siRNA는 SIRT1의 발현을 24 내지 72시간 동안 억제하는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물.
3. The method of claim 2,
Wherein said siRNA inhibits the expression of SIRTl for 24 to 72 hours.
A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK).
제2항에 있어서,
상기 siRNA는 10 내지 30 nM 로 포함되는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제용 조성물.
3. The method of claim 2,
Wherein the siRNA is comprised between 10 and 30 nM.
A composition for inhibiting SIRT1 expression of human keratinocyte (pHEK).
서열번호 1의 염기서열로 구성되는 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 안티센스 뉴클레오티드(antisense nucleotide), siRNA 및 shRNA로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는 조성물을 세포에 처리하는 단계를 포함하는,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법.
A composition comprising at least any one selected from the group consisting of antisense nucleotides, siRNA and shRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, &Lt; / RTI &gt;
Methods for inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes (pHEK).
제5항에 있어서,
상기 SIRT1(sirtruin-1) 유전자의 mRNA에 상보적으로 결합하는 siRNA는, 서열번호 2 및 서열번호 3로 기재되는 염기서열을 포함하는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법.
6. The method of claim 5,
Wherein the siRNA complementarily binding to the mRNA of the SIRT1 (sirtruin-1) gene comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3,
Methods for inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes (pHEK).
제6항에 있어서,
상기 siRNA는 상기 세포 내 SIRT1의 발현을 24 내지 72시간 동안 억제하는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법.
The method according to claim 6,
Wherein said siRNA inhibits the expression of said intracellular SIRT1 for 24 to 72 hours.
Methods for inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes (pHEK).
제6항에 있어서,
상기 siRNA는 10 내지 30 nM의 농도로 세포에 처리되는 것인,
인간 각질형성세포(pHEK)의 SIRT1 발현 억제 방법.The method according to claim 6,
Wherein the siRNA is treated to a cell at a concentration of 10 to 30 nM.
Methods for inhibiting SIRT1 expression in human keratinocytes (pHEK).
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