KR20170072215A

KR20170072215A - Biomarkers and methods of prediction

Info

Publication number: KR20170072215A
Application number: KR1020177010754A
Authority: KR
Inventors: 토마스 디에테를; 에릭 제이 니에서; 로제마리 킨취-엥겔; 호르스트 클리마; 파비안 모델; 가브리엘라 버클라; 빈첸트 롤니
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2014-10-22
Filing date: 2015-10-20
Publication date: 2017-06-26
Also published as: CA2962835A1; HK1251877A1; RU2017117497A3; JP2017533428A; MX2017005021A; SG11201703065RA; US20170322225A1; WO2016062709A1; RU2017117497A; IL251204A0; EP3210026A1; AU2015335016A1; BR112017008065A2; CN107912057A

Abstract

본 발명은 급성 관상동맥 증후군을 겪은 환자에서 후속 심혈관 사건(예를 들어, 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색, 허혈성 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 입원, 심정지)에 대한 위험을 식별하기 위한 생물마커 및 방법(NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 수준을 검출하는 단계를 포함함)이다.The present invention relates to a method for identifying a risk for subsequent cardiovascular events in a patient suffering from acute coronary syndromes (e.g., cardiovascular disease-causing death, non-fatal myocardial infarction, ischemic stroke, unstable angina pectoris, And methods (including detecting levels of NT-proBNP, homocysteine and CRP).

Description

생물마커 및 예측 방법{BIOMARKERS AND METHODS OF PREDICTION}{BIOMARKERS AND METHODS OF PREDICTION}

본 발명은 관상동맥 심장 질환(CHD)에 이어서, 특히 급성 관상동맥 증후군(ACS)에 이어서, 보다 특히 최근의 ACS에 이어서 심혈관 사건, 예를 들어 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색, 허혈성 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 반복적인 입원, 관상동맥 혈관재생술 또는 심정지를 겪을 위험이 증가하기 쉬운 집단의 식별에 관한 것이다.The present invention relates to a method of treating coronary heart disease (CHD) followed by acute coronary syndrome (ACS), more particularly followed by recent ACS followed by cardiovascular events such as cardiovascular disease-induced death, non-fatal myocardial infarction, ischemic stroke , Repetitive hospitalization due to unstable angina, coronary angioplasty, or identification of populations susceptible to increased risk of cardiac arrest.

이들 심혈관 위험 인자의 공격적인 약물학적 치료를 통해 저밀도 지단백질(LDL) 콜레스테롤, 혈압, 및 혈당의 표적을 달성함에도 불구하고, 급성 관상동맥 증후군을 겪은 환자는 관상동맥 심장병으로 인한 사망, 치명적이지 않은 심근경색, 허혈성 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 반복적인 입원 또는 심정지와 같은 2차 심혈관 사건으로 고통 받을 위험이 여전히 높다. 심혈관 위험 인자의 최적의 치료에도 불구하고 여전한 위험을 "상주 심혈관 위험"이라 칭한다. 스타틴 대 비스타틴을 비교하는 14개의 무작위 시험에서의 심혈관 질환(CVD)을 갖는 거의 29,000명의 환자를 포함하는 메타-분석에서, 치료된 환자의 21.2 퍼센트는 5년의 추적조사 기간 동안 주요 심혈관 사건을 경험하였다(문헌[Cholesterol Treatment Trialists' (CTT) Collaborators. Efficacy and safety of cholesterol-lowering treatment: prospective meta-analysis of data from 90056 patients in 14 randomized trials of statins. The Lancet 2005; 366: 1267-1278]). 미국에서만 매년 퇴원 환자 중 114만 명이 1차 또는 2차 ACS 진단을 받고 있으며, 상주 위험의 진단 및 치료를 모두 포함하여 ACS-후 가료를 개선시키고자 하는 충족되지 않은 높은 의학적 요구가 존재한다(문헌[Heart Disease and Stroke Statistics - 2014 Update: A report from the American Heart Association. Circulation 2014; 129: e28-e292.). Despite achieving low-density lipoprotein (LDL) cholesterol, blood pressure, and blood glucose targets through aggressive pharmacologic treatment of these cardiovascular risk factors, patients suffering from acute coronary syndrome suffer from coronary heart disease death, nonfatal myocardial infarction , Ischemic stroke, recurrent hospitalization due to unstable angina, or secondary cardiovascular events such as cardiac arrest. Despite optimal treatment of cardiovascular risk factors, the remaining risk is referred to as "resident cardiovascular risk. &Quot; In a meta-analysis involving nearly 29,000 patients with cardiovascular disease (CVD) in 14 randomized trials comparing statin versus vistatin, 21.2 percent of patients treated had major cardiovascular events during a 5 year follow-up period (Cholesterol Treatment Trialists' (CTT) Collaborators. Efficacy and safety of cholesterol-lowering treatment: prospective meta-analysis of data from 90056 patients in 14 randomized trials of statins. The Lancet 2005; 366: 1267-1278) . In the United States alone, 1.14 million outpatients are diagnosed with primary or secondary ACS each year and there is an unmet medical need to improve post-ACS care, including diagnosis and treatment of resident risk [Heart Disease and Stroke Statistics - 2014 Update: A report from the American Heart Association. Circulation 2014; 129: e28-e292.).

상주 위험이 높은 환자의 식별은 추후 진단 및 치료학적 중재뿐만 아니라 임상적인 환자 모니터링 방문의 타이밍 및 양을 개별적으로 맞추는 것이 필수적이다. 공개된 위험 점수, 예를 들어 HEART, TIMI 또는 GRACE가 병원 입원 승인시 ACS 환자에서 급성 상황의 적용을 위해 개발되었다. 이들 점수는 각각 6-개월 사망 위험(GRACE), 24시간 내지 6주 이내의 2차 심혈관 사건에 대한 위험(HEART, TIMI)에 관한 정보를 제공한다(GRACE: 문헌[Fox, KAA, et al. BMJ 2006; 333: 1091-1094]; HEART: 문헌[Backus, BE, et al. Int J Cardio 2013; 168: 2153-2158]; TIMI: 문헌[Wiviott, SD, et al. J Am Coll Cardiol 2006; 47: 1553-1558]). 그러나, 이러한 점수는 최근에 ACS를 겪은, 2차 심혈관 사건의 예방을 위해 최적 치료하에 있는 안정한 환자들에서 개별적인 상주 위험을 예측하도록 설계된 것이 아니었으며 따라서 상기 환자 집단에 적용하기에는 쓸모가 없다. 위험 계층화에 임상적으로 적용 가능한 도구의 결여로 인해, 국가 및 국제 지침은 아세틸살리실산(ASA), 스타틴류, 베타-차단제, 및 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제/안지오텐신 수용체 차단제(적용 가능한 경우)에 의한 ACS 후 환자에서의 심혈관 위험 인자의 공격적인 치료를 권장한다. 임상적인 모니터링의 빈도 및 타이밍에 관한 지침은 존재하지 않는다. 더욱이, 근원적인 질병 진행의 조기 검출이 결과에 대한 후속의 이로운 효과와 함께 보다 이른 치료를 허용할 것이지만, 각각의 스트레스 시험 과정, 침습적인 진단 과정, 예를 들어 관상동맥 혈관조영술의 빈도 및 타이밍은 명확하지 않다.Identification of patients with high risk of residence is necessary to tailor the timing and amount of clinical patient monitoring visits as well as further diagnostic and therapeutic interventions. An open risk score, for example HEART, TIMI or GRACE, was developed for the application of an acute situation in ACS patients at hospital admission approval. These scores provide information on the 6-month death risk (GRACE) and the risk of secondary cardiovascular events (HEART, TIMI) within 24 hours to 6 weeks (GRACE: Fox, KAA, et al. BMJ 2006; 333: 1091-1094; HEART: Backus, BE, et al. Int J Cardio 2013; 168: 2153-2158]; TIMI: Wiviott, SD, et al. J Am Coll Cardiol 2006; 47: 1553-1558). However, these scores were not designed to predict individual resident risks in stable patients under optimal treatment for the prevention of secondary cardiovascular events, which have recently undergone ACS, and are therefore not useful for such patient populations. Due to the lack of clinically applicable tools for risk stratification, national and international guidelines recommend that acetylsalicylic acid (ASA), statins, beta-blockers, and angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors / angiotensin receptor blockers We recommend aggressive treatment of cardiovascular risk factors in patients after ACS. There are no guidelines on the frequency and timing of clinical monitoring. Moreover, although early detection of the underlying disease progression will allow earlier treatment with subsequent beneficial effects on outcome, each stress testing procedure, invasive diagnostic procedure, for example the frequency and timing of coronary angiography It is not clear.

따라서, 급성 관상동맥 증후군 후 2차 심혈관 사건에 대해서 고 위험 환자를 식별할 수 있게 하는, 사용이 용이한 임상 도구에 대한 충족되지 않은 높은 의학적 요구가 존재한다.Therefore, there is a high unmet medical need for an easy-to-use clinical tool that can identify high-risk patients for secondary cardiovascular events after acute coronary syndromes.

본 명세는 안정 관상동맥 심장병(CHD), 특히 문서로 기록된 최근의 급성 관상동맥 증후군(ACS), 보다 특히 포스트 급성 관상동맥 증후군(ACS), 가장 특히 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공한다.This specification describes subjects with stable coronary heart disease (CHD), particularly the documented recent acute coronary syndrome (ACS), more particularly post-acute coronary syndrome (ACS), most particularly recent ACS, cardiovascular events , Especially those with increased risk of other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events.

본 명세는 피실험자를, 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 보다 특히 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공한다.This specification provides a method for identifying a subject as having an increased risk of experiencing a cardiovascular event, particularly following a recent acute coronary syndrome following acute coronary syndrome.

본 명세는 피실험자를, 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 보다 특히 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 또 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공한다.This specification provides a method for identifying a subject as an increased risk of experiencing another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event, following the acute coronary syndrome, more particularly the recent acute coronary syndrome.

본 발명의 하나의 태양은 안정 관상동맥 심장병(CHD), 특히 문서로 기록된 최근의 급성 관상동맥 증후군(ACS), 보다 특히 포스트 급성 관상동맥 증후군(ACS), 가장 특히 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공하며, 상기 방법은One aspect of the present invention is the use of a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the treatment of stable coronary heart disease (CHD), particularly acute coronary syndrome (ACS) documented recently, more particularly post-acute coronary syndrome (ACS) As an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events,

a) 피실험자의 시료 중에서 프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단(NT-proBNP), 호모시스테인 및 C-반응성 단백질(CRP)의 양을 검출하는 단계;a) detecting the amount of the N-terminal (NT-proBNP), homocysteine and C-reactive protein (CRP) of the pro-hormone brain sodium diuretic peptide in the sample of the subject;

b) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량과 비교하는 단계; 및b) comparing the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP to reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And

c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계c) when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP, the subject is treated with an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, &Lt; / RTI >

를 포함한다..

본 발명의 두 번째 태양은 안정 관상동맥 심장병(CHD), 특히 문서로 기록된 최근의 급성 관상동맥 증후군(ACS), 보다 특히 포스트 급성 관상동맥 증후군(ACS), 가장 특히 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공하며, 상기 방법은A second aspect of the present invention is a method for the treatment of patients with stable coronary heart disease (CHD), particularly documented acute coronary syndrome (ACS), more particularly post-acute coronary syndrome (ACS) As an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events,

로 이루어진다..

본 발명의 다른 태양은 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공하며, 상기 방법은Another aspect of the present invention provides a method of identifying a subject suffering from recent ACS as having an increased risk of a second cardiovascular event,

c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계c) identifying the subject as having an increased risk of a second cardiovascular event if the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP

를 포함한다..

로 이루어진다..

본 발명의 다른 태양은 피실험자를, 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 보다 특히 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공하며, 상기 방법은Another aspect of the invention is a method for identifying a subject as an increased risk of experiencing cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, particularly secondary cardiovascular events, following acute coronary syndromes, more particularly following recent acute coronary syndromes , The method comprising:

를 포함한다..

로 이루어진다..

본 발명의 다른 태양은 피실험자를, 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법을 제공하며, 상기 방법은Another aspect of the present invention provides a method of identifying a subject as having an increased risk of suffering a second cardiovascular event following a recent acute coronary syndrome,

를 포함한다..

로 이루어진다..

몇몇 실시태양에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법을 제공하며, 여기에서 상기 심혈관 사건은 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색(MI), 허혈성 기원의 치명적이지 않은 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 입원, 관상동맥 혈관재생술 및 심정지 중에서 선택된다.In some embodiments, the invention provides a method as described herein wherein said cardiovascular event is selected from the group consisting of cardiovascular disease-induced death, non-fatal myocardial infarction (MI), non-fatal stroke of ischemic origin, unstable angina Hospitalization, coronary angioplasty and cardiac arrest.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 검출은 시험관내에서 상기 시료를 검출제들의 조합(각각의 검출제는 생물마커들 중 하나에 특이적인 결합 친화성을 갖는다)과 접촉시킴을 포함한다.In some embodiments of this aspect, the detection comprises contacting the sample in vitro with a combination of detection agents, each detection agent having a binding affinity specific to one of the biomarkers.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 작용제는 항체 또는 그의 단편이다.In some embodiments of the foregoing aspects, the agent is an antibody or a fragment thereof.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 시료는 혈액, 혈장, 혈청 또는 뇨이며, 보다 특히 혈액, 혈장 또는 혈청, 가장 특히 혈액으로부터의 것이다.In some embodiments of the foregoing aspects, the sample is blood, plasma, serum or urine, more particularly from blood, plasma or serum, most particularly from blood.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 피실험자는 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 그들 각각의 참조량의 중간값보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된, 특히 낮은(3.6% 미만) 또는 높은(7.7% 초과), 보다 특히 높은(7.7% 초과) 것으로서 식별된다.In some embodiments of the above aspects, the subject is exposed to a cardiovascular event, particularly other cardiovascular events, more particularly a second cardiovascular event, particularly when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the median of their respective reference amounts (Less than 3.6%) or higher (greater than 7.7%), and particularly higher (greater than 7.7%).

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 피실험자는 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 그들 각각의 참조량의 제4 사분위수 범위에 있는 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된다.In some embodiments of the above aspects, the subject is exposed to a cardiovascular event, particularly other cardiovascular events, more particularly, to a cardiovascular event, especially when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is in the fourth quartile range of their respective reference amounts, The risk of car-cardiovascular events is identified as increased.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 방법은 상기 피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 심혈관 질환을 치료하는 요법을 권장하는 단계를 추가로 포함한다.In some embodiments of the above aspects, the method further comprises the step of recommending therapy for treating cardiovascular disease when the subject is identified as having an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events .

상기 태양의 보다 특정한 실시태양에서, 상기 방법은 상기 피실험자가 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 심혈관 질환을 치료하는 요법을 권장하는 단계를 추가로 포함한다.In a more particular embodiment of this aspect, the method further comprises the step of recommending therapy for treating cardiovascular disease when said subject is identified as having an increased risk of a second cardiovascular event.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 방법은 상기 피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 상기 피실험자에게 심혈관 질환을 치료하는 약제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.In some embodiments of the above aspects, the method further comprises administering to the subject a medicament for treating a cardiovascular event if the subject is identified as having an increased risk of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, particularly a second cardiovascular event .

상기 태양의 보다 특정한 실시태양에서, 상기 방법은 상기 피실험자가 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 상기 피실험자에게 심혈관 질환을 치료하는 약제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.In a more particular embodiment of this aspect, the method further comprises administering to the subject a medicament for treating a cardiovascular disease if the subject is identified as having an increased risk of a second cardiovascular event.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 요법은 조사 중인 신규 약물 요법을 포함한다.In some embodiments of the foregoing aspects, the therapy comprises a new drug therapy under investigation.

또 다른 실시태양에서, 본 출원은 a) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP에 특이적으로 결합하는 검출제들의 조합을 포함하는 분석 유닛(상기 분석 유닛은 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합하다); b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛(상기 컴퓨터-실행 알고리즘은 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험 증가의 진단을 제공한다)을 포함하는, 상술한 바와 같은 방법을 수행하기에 적합한 장치를 개시한다.In another embodiment, the present application provides a kit comprising: a) an analytical unit comprising a combination of NT-proBNP, homocysteine and detectors that specifically bind to CRP, the assay unit comprising a sample from a subject in vitro, Suitable for contact); b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for said database, said computer-implemented algorithm being adapted to: measure the amount of biomarkers in a sample from said subject when executed by said computing device, The amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP was compared with the corresponding amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP and the amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP measured in the measuring step were compared with corresponding NT-proBNP, homocysteine and CRP Which provides a diagnosis of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly a diagnosis of increased risk of secondary cardiovascular events, when the reference amount is greater than the reference amount.

또 다른 실시태양에서, 본 출원은 a) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP에 특이적으로 결합하는 검출제들의 조합을 포함하는 분석 유닛(상기 분석 유닛은 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합하다); b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛(상기 컴퓨터-실행 알고리즘은 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험 증가의 진단을 제공한다)으로 이루어지는, 상술한 바와 같은 방법을 수행하기에 적합한 장치를 개시한다.In another embodiment, the present application provides a kit comprising: a) an analytical unit comprising a combination of NT-proBNP, homocysteine and detectors that specifically bind to CRP, the assay unit comprising a sample from a subject in vitro, Suitable for contact); b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for said database, said computer-implemented algorithm being adapted to: measure the amount of biomarkers in a sample from said subject when executed by said computing device, The amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP was compared with the corresponding amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP and the amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP measured in the measuring step were compared with corresponding NT-proBNP, homocysteine and CRP Which provides a diagnosis of a cardiovascular event, in particular a different cardiovascular event, more particularly a diagnosis of an increased risk of a second cardiovascular event, when the reference amount is greater than the reference amount.

본 명세서에 정의된 바와 같은 상기 장치의 특정한 실시태양에서, 상기 데이터베이스는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량을 추가로 포함한다.In a particular embodiment of the device as defined herein, the database further comprises a reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP.

또 다른 실시태양에서, 본 출원은 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 검출제 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 방법을 수행하기에 적합한 키트를 개시한다.In another embodiment, the present application discloses a kit suitable for carrying out the method, including a detection agent for NT-proBNP, homocysteine and CRP, and instructions for performing the method as described herein.

특정한 실시태양에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 키트는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP에 대한 검출제들의 조합을 추가로 포함한다.In certain embodiments, the kit as described herein further comprises a combination of detectors for NT-proBNP, homocysteine, and CRP.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 검출은 시험관내에서 상기 시료를 검출제들의 조합과 접촉시킴을 포함하며, 각각의 검출제는 생물마커들 중 하나에 특이적인 결합 친화성을 갖는다. 몇몇 실시태양에서, 상기 작용제는 항체 또는 그의 단편이다. 상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 시료는 혈청 또는 혈액 시료이다.In some embodiments of this aspect, the detection comprises contacting the sample with a combination of detecting agents in vitro, wherein each detecting agent has a binding affinity specific to one of the biomarkers. In some embodiments, the agent is an antibody or a fragment thereof. In some embodiments of the foregoing aspects, the sample is a serum or blood sample.

상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 피실험자는 상기 시료 중의 생물마커의 양이 참조량의 중간값보다 많은 경우, 질병 진행의 위험이 증가된 것으로서 식별된다. 상기 태양의 몇몇 실시태양에서, 상기 피실험자는 상기 시료 중의 생물마커의 양이 상기 참조량의 제4 사분위수 범위내에 있는 경우, 질병 진행의 위험이 증가된 것으로서 식별된다. In some embodiments of the above aspects, the subject is identified as having an increased risk of disease progression if the amount of biomarker in the sample is greater than the median value of the reference amount. In some embodiments of the above aspects, the subject is identified as having an increased risk of disease progression if the amount of biomarker in the sample is within the fourth quartile of the reference amount.

본 발명의 또 다른 태양은 a) 생물마커에 특이적으로 결합하는 검출제들의 조합을 포함하는 분석 유닛(상기 분석 유닛은 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합하다); b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛(상기 컴퓨터-실행 알고리즘은 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 생물마커의 양을 생물마커 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 생물마커의 양이 상기 생물마커 참조량보다 많은 경우 질병 진행의 위험 증가의 진단을 제공한다)을 포함하는 선행 실시태양들 중 어느 한 실시태양의 방법을 수행하기에 적합한 장치를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 데이터베이스는 생물마커 참조량을 추가로 포함한다.Another aspect of the present invention is a kit comprising: a) an analysis unit comprising a combination of detection agents that specifically bind to a biomarker, the assay unit being suitable for contacting a sample from a subject with the detection agent in vitro; b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for said database, said computer-implemented algorithm being adapted to: measure the amount of biomarkers in a sample from said subject when executed by said computing device, And provides a diagnosis of an increased risk of disease progression when the amount of biomarker measured in the measurement step is greater than the amount of the biomarker reference amount) Lt; RTI ID = 0.0 > embodiment < / RTI > In one embodiment, the database further comprises a biomarker reference amount.

본 발명의 또 다른 태양은 a) 생물마커에 특이적으로 결합하는 검출제들의 조합를 포함하는 분석 유닛(상기 분석 유닛은 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합하다); b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛(상기 컴퓨터-실행 알고리즘은 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 생물마커의 양을 생물마커 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 생물마커의 양이 상기 생물마커 참조량보다 많은 경우, 질병 진행의 위험 증가의 진단을 제공한다)으로 이루어지는 선행 실시태양들 중 어느 한 실시태양의 방법을 수행하기에 적합한 장치를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 데이터베이스는 생물마커 참조량을 추가로 포함한다.Another aspect of the present invention is a kit comprising: a) an assay unit comprising a combination of detectors that specifically bind to a biomarker, the assay unit being suitable for contacting a sample from a subject with the detection agent in vitro; b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for said database, said computer-implemented algorithm being adapted to: measure the amount of biomarkers in a sample from said subject when executed by said computing device, And provides a diagnosis of an increased risk of disease progression when the amount of biomarker measured in the measurement step is greater than the amount of the biomarker reference amount) Lt; RTI ID = 0.0 > embodiment < / RTI > In one embodiment, the database further comprises a biomarker reference amount.

본 발명의 또 다른 태양은 상기 생물마커에 대한 검출제 및 선행 실시태양들 중 어느 한 실시태양의 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 방법을 수행하기에 적합한 키트를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 키트는 상기 생물마커에 대한 검출제들의 조합을 추가로 포함한다.Another aspect of the present invention provides a kit suitable for carrying out the method, comprising a detector for the biomarker and instructions for performing the method of any one of the preceding embodiments. In one embodiment, the kit further comprises a combination of detection agents for the biomarker.

"프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단" 또는 "NT-proBNP"란 용어는 서열번호 1에 의해 예시된 아미노-말단 proBNP를 지칭한다(스위스 프롯 수탁 번호NP_002512.1, 유전자 ID NCBI 4879), WO 02/089657, WO 02/083913, EP 0 648 228. "NT-proBNP"는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 그의 변이체, 상동체 및 동형을 포함한다. 상기와 같은 변이체, 상동체 및 동형은 특정한 NT-proBNP와 적어도 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 성질들을 갖는다. 예를 들어, 상기 변이체, 상동체 및 동형은, 이들이 본 명세서에 지칭된 동일한 특정한 분석들에 의해, 예를 들어 상기 NT-proBNP 폴리펩타이드를 특이적으로 인식하는 다클론 또는 단클론 항체를 사용하는 ELISA 분석에 의해 검출 가능한 경우, 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 성질을 공유한다. 예시적인 분석들을 첨부되는 실시예에 기재한다. 상기에 지칭된 변이체는 대립유전자 변이체 또는 임의의 다른 종 특이적인 상동체, 파라로그 또는 오쏘로그일 수 있다. 더욱이, 본 명세서에 언급된 변이체는, 상기 특정한 NT-proBNP 폴리펩타이드 또는 상기 언급한 유형의 변이체의 단편이 상기에 지칭된 바와 같은 필수적인 면역학적 및 생물학적 성질을 갖는 한, 상기 단편을 포함한다. 상기와 같은 단편은, 예를 들어 상기 NT-proBNP 폴리펩타이드의 분해 산물일 수 있다. 인산화 또는 미리스틸화와 같은 번역후 변형으로 인해 상이한 변이체들이 또한 포함된다.Terminus "or" NT-proBNP "refers to the amino-terminal proBNP exemplified by SEQ ID NO: 1 (Switzerland Plot Accession No. NP_002512.1, Gene ID NCBI 4879) , WO 02/089657, WO 02/083913, EP 0 648 228. "NT-proBNP" includes proteins having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, as well as variants, homologs and isomorphs thereof. Such variants, homologs and isomorphs have at least the same essential biological and immunological properties as the specific NT-proBNP. For example, the variants, homologues and isomorphs can be identified by the same specific assays referred to herein, for example, ELISA using polyclonal or monoclonal antibodies that specifically recognize the NT-proBNP polypeptide When detectable by analysis, they share the same essential biological and immunological properties. Exemplary analyzes are described in the appended examples. The variants referred to above may be allelic variants or any other species-specific homologues, paralogs or orthologs. Furthermore, variants referred to herein include such fragments so long as the particular NT-proBNP polypeptide or fragments of variants of the above-mentioned type have essential immunological and biological properties as referred to above. Such a fragment may be, for example, a degradation product of the NT-proBNP polypeptide. Different variants are also included due to post-translational modifications such as phosphorylation or myristylation.

"호모시스테인"이란 용어는 식이 단백질로부터 메티오닌의 대사에 의해 세포 내에서 생성된다. 세포내 농도는 혈장내로의 수출에 의해 유지되며, 상기 호모시스테인은 상기 혈장에서 빠르게 산화되고 3가지 형태(표 1) 중 하나로서 순환하게 된다. 임상 실험에서 가장 빈번하게 측정되는 매개변수는 상기 3가지 형태 모두를 합한 합이며, 이를 "총 호모시스테인"이라 칭한다. 본 발명에 따라 "총 호모시스테인" 및 "호모시스테인"은 호환 가능한 것으로 이해해야 한다. 실제로 본 발명에 따라 측정되는 호모시스테인 수준은 표 1에 따른 총 호모시스테인 수준이다.The term "homocysteine " is produced intracellularly by metabolism of methionine from a dietary protein. Intracellular concentrations are maintained by export into plasma, which homocysteine is rapidly oxidized in the plasma and circulates as one of three forms (Table 1). The most frequently measured parameter in clinical trials is the sum of all three forms, called "total homocysteine ". According to the present invention, "total homocysteine" and "homocysteine" are to be understood as compatible. Indeed, the level of homocysteine measured according to the present invention is the total homocysteine level according to Table 1.

"C-반응성 단백질" 또는 "CRP"란 용어는 제1 염색체상에서 발견되는 환상 오량체성 단백질을 지칭한다(서열번호 2(스위스 프롯 수탁 번호 NP_000558)에 의해 예시된다). 본 발명에 따라, CRP의 농도를 측정하는데 고-감도 CRP(hs-CRP)를 사용할 것이 권장된다. 상기 hs-CRP 시험은 레이저 비탁분석법을 사용하여 낮은 수준의 CRP를 측정한다. 상기와 같은 방법을 사용하는 이점은 속도 및 높은 감도이다.The term "C-reactive protein" or "CRP" refers to a cyclic metamorphic protein found on the first chromosome (exemplified by SEQ ID NO: 2 (Swiss Accession No. NP - 000558)). In accordance with the present invention, it is recommended to use high-sensitivity CRP (hs-CRP) to measure the concentration of CRP. The hs-CRP assay measures low levels of CRP using laser bead assay. Advantages of using such methods are speed and high sensitivity.

본 명세서에 사용되는 "심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된"이란 용어는 본 명세의 방법에 의해 분석되는 피실험자가 심혈관 사건을 겪을 위험이 낮은(즉, 상승되지 않은) 집단의 피실험자 군, 또는 현저하게 위험이 상승된 피실험자 군, 고위험 군으로 할당됨을 의미한다. 본 명세에 따라 지칭되는 "위험이 증가된"은 소정의 예측 창내에서 심혈관 사건을 겪을 위험이, 피실험자 집단에서 질병 진행에 대한 평균 위험에 관하여 상기 피실험자에서 현저하게 상승됨을 의미한다.As used herein, the term " increased risk of experiencing a cardiovascular event "means that a subject being analyzed by the method of the present specification is in a group of subjects at low risk of experiencing a cardiovascular event (i.e., not elevated) This means that the risk is assigned to the group of elevated subjects and the group of high risk. The term "increased risk", referred to herein, means that the risk of experiencing a cardiovascular event in a given prediction window is significantly elevated in the subject relative to the average risk for disease progression in the subject population.

"앱타머"란 용어는 목적하는 생물 활성, 특히 상응하는 표적 분자에의 결합을 나타내는 RNA, DNA 및 RNA/DNA 분자 또는 펩타이드 분자를 포함한 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다.The term " aptamers " refers to oligonucleotides containing RNA, DNA and RNA / DNA molecules or peptide molecules that exhibit the desired biological activity, particularly binding to the corresponding target molecule.

"시료"란 용어는 체액의 시료, 분리된 세포의 시료 또는 조직 또는 기관으로부터의 시료를 지칭한다. 체액 시료는 주지된 기법에 의해 수득될 수 있으며, 혈액, 혈장, 혈청, 뇨, 림프액, 객담, 복수, 기관지 세척액 또는 임의의 다른 체 분비물 또는 그의 유도체의 시료를 포함한다. 조직 또는 기관 시료는, 예를 들어 생검에 의해 임의의 조직 또는 기관으로부터 수득될 수 있다. 분리된 세포를 분리 기법, 예를 들어 원심분리 또는 세포 분류에 의해 체액 또는 조직 또는 기관으로부터 수득할 수 있다. 예를 들어, 세포, 조직 또는 기관 시료를 상기 생물마커를 발현하거나 생성시키는 상기 세포, 조직 또는 기관으로부터 수득할 수 있다. 상기 시료는, 예를 들어 동결되고, 신선하고, 고정되고(예를 들어, 포르말린 고정되고), 원심분리되고/되거나 매몰(예를 들어, 파라핀 매몰)될 수 있다. 물론, 상기 세포 시료에, 상기 시료 중 마커의 양을 평가하기에 앞서, 다양한 주지된 수집-후 조제 및 보관 기법(예를 들어, 핵산 및/또는 단백질 추출, 고정, 보관, 동결, 한외여과, 농축, 증발, 원심분리 등)을 가할 수 있다. 마찬가지로, 생검에 또한 수집-후 조제 및 보관 기법, 예를 들어 고정을 가할 수 있다. 특히, 상기 시료는 혈액, 혈장, 혈청 또는 뇨, 보다 특히 혈액, 혈장 또는 혈청의 시료로부터의 체액 시료를 지칭한다.The term "sample" refers to a sample of body fluids, a sample of isolated cells or a sample from a tissue or organ. Fluid samples can be obtained by well known techniques and include samples of blood, plasma, serum, urine, lymph, sputum, ascites, bronchial washing fluid or any other body secretions or derivatives thereof. A tissue or organ sample can be obtained from any tissue or organ, for example by biopsy. Isolated cells can be obtained from body fluids or tissues or organs by separation techniques, e. G. By centrifugation or cell sorting. For example, a cell, tissue or organ sample can be obtained from the cell, tissue or organ that expresses or produces the biomarker. The sample may be frozen, fresh, fixed (e.g., formalin fixed), centrifuged and / or buried (e.g., paraffin buried), for example. Of course, the cell sample may be subjected to various known collection-post preparation and storage techniques (e.g., nucleic acid and / or protein extraction, fixation, storage, freezing, ultrafiltration, Concentration, evaporation, centrifugation, etc.) may be added. Similarly, biopsies may also be subjected to post-collection preparation and storage techniques, such as fixation. In particular, the sample refers to blood, plasma, serum or urine, more particularly a body fluid sample from a sample of blood, plasma or serum.

본 명세서에 사용되는 "진단하는" 또는 "식별하는" 또는 "평가하는"이란 용어는 "상주 심혈관 위험" 또는 또 다른 심혈관 사건을 겪을 위험이, 심혈관 사건, 보다 특히 최근의 심혈관 사건 후 피실험자에서 증가되는지 아닌지를 예측함을 의미한다. 당해 분야의 숙련가들에 의해 이해되는 바와 같이, 상기와 같은 예측은 대개 상기 피실험자의 100%를 정확하게 진단하고자 하는 것은 아니다. 그러나, 상기 용어는, 상기 질병 진행에 대한 위험이 증가하는지 또는 아닌지를 예측하는 것이 상기 피실험자(예를 들어, 코호트 연구에서 코호트)의 통계학적으로 의미있는 부분에 대해서는 정확할 것을 요한다. 일부가 통계학적 유의수준인지의 여부를 다양한 주지된 통계학적 평가 도구, 예를 들어 신뢰도 구간의 측정, p-값 측정, 스튜던츠 t-검정, 만-휘트니 검정 등을 사용하여 당해 분야의 숙련가에 의해 순조롭게 판정할 수 있다. 상세한 내용은 문헌[Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983]에서 발견된다. 신뢰도 구간의 예는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%이다. 상기 p-값은 0.1, 0.05, 0.01, 0.005 또는 0.0001을 포함한다.As used herein, the term " diagnosing "or" identifying "or " evaluating" means that a risk of undergoing "resident cardiovascular risk" or another cardiovascular event is increased in subjects after a cardiovascular event, Or whether or not it is possible. As will be appreciated by those skilled in the art, such predictions are generally not intended to accurately diagnose 100% of the subjects. However, the term requires that it be accurate for the statistically significant portion of the subject (e.g. cohort in the cohort study) to predict whether the risk for the disease progression is increased or not. Whether a portion is statistically significant can be assessed using a variety of well-known statistical assessment tools such as, for example, measures of confidence intervals, p-value measurements, Student's t-test, Bay-Whitney test, It can be determined smoothly. Details are found in Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. An example of a confidence interval is at least 90%, at least 95%, at least 97%, at least 98% or at least 99%. The p-value includes 0.1, 0.05, 0.01, 0.005, or 0.0001.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 "진단/평가를 제공하는"이란 어구는 환자에서 "상주 심혈관 위험" 또는 또 다른 심혈관 사건을 겪을 위험을 진단/평가하기 위해서 상기 환자의 시료 중 생물마커(들)의 수준 또는 존재와 관련하여 생성되는 정보 또는 데이터를 사용함을 지칭한다. 상기 정보 또는 데이터는 임의의 형태, 서면, 구두 또는 전자 형태로 존재할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 생성된 정보 또는 데이터를 사용함은 연통, 제공, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 배급 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시태양에서, 연통, 제공, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 배급 또는 이들의 조합을 계산 장치, 분석기 유닛 또는 이들의 조합에 의해 수행한다. 일부 추가의 실시태양에서, 연통, 제공, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 배급 또는 이들의 조합을 실험 또는 의학 전문가에 의해 수행한다. 일부 실시태양에서, 상기 정보 또는 데이터는 상기 생물마커 수준의 참조 수준에의 비교를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 정보 또는 데이터는 상기 생물마커가 상기 시료 중에 존재하거나 부재함을 가리킴을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 정보 또는 데이터는 환자가 "상주 심혈관 위험" 또는 또 다른 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로 진단/평가됨을 가리킴을 포함한다.As used herein, the phrase "providing a diagnosis / assessment" refers to the use of a biomarker (s) in a patient's sample to diagnose / assess the risk of experiencing "resident cardiovascular risk &Quot; refers to the use of information or data generated in connection with a level or presence. The information or data may be in any form, written, oral or electronic form. In some embodiments, the use of the generated information or data includes communication, provision, reporting, storage, transmission, delivery, provision, transmission, distribution, or a combination thereof. In some embodiments, communication, provision, reporting, storage, transmission, delivery, delivery, delivery, or combination thereof is performed by a computing device, an analyzer unit, or a combination thereof. In some additional embodiments, communication, provision, reporting, storage, transmission, delivery, provision, transmission, distribution, or a combination thereof is performed by an experimental or medical professional. In some embodiments, the information or data includes a comparison to the reference level of the biomarker level. In some embodiments, the information or data includes indicating that the biomarker is present or absent in the sample. In some embodiments, the information or data includes indicating that the patient is diagnosed / evaluated as having an increased risk of experiencing "resident cardiovascular risk" or another cardiovascular event.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 생물마커 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양을 "검출하는"이란 용어는 상기 양 또는 농도를, 예를 들어 반-정량적으로 또는 정량적으로 측정함을 지칭한다. 측정을 직접적으로 또는 간접적으로, 보다 특히 직접적으로 수행할 수 있다. 직접 측정은 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드 자체로부터 획득된 신호에 근거한 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양 또는 농도 및 상기 시료 중에 존재하는 펩타이드 분자의 수와 직접 상관있는 강도를 측정함에 관한 것이다. 상기와 같은 신호(때때로 본 명세서에서 강도 신호라 칭함)를, 예를 들어 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 특정한 물리적 또는 화학적 성질의 강도 값을 측정함으로써 획득할 수 있다. 간접 측정은 2차 성분(즉, 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드 자체가 아닌 성분) 또는 생물학적 판독 시스템, 예를 들어 측정 가능한 세포 반응, 리간드, 표지, 또는 효소 반응 생성물로부터 획득된 신호를 측정함을 포함한다.The term "detecting " the amount of a biomarker peptide or polypeptide as used herein refers to measuring the amount or concentration, for example, semi-quantitatively or quantitatively. Measurements can be performed directly or indirectly, more particularly directly. The direct measurement relates to measuring the amount or concentration of the peptide or polypeptide based on the signal obtained from the peptide or polypeptide itself and the intensity directly correlated with the number of peptide molecules present in the sample. Such a signal (sometimes referred to herein as a strength signal) may be obtained, for example, by measuring the intensity value of a particular physical or chemical property of the peptide or polypeptide. Indirect measurement involves measuring the signal obtained from a secondary component (i.e., a component that is not the peptide or polypeptide itself) or a biological reading system, such as a measurable cell reaction, ligand, label, or enzyme reaction product .

본 명세서에 사용되는 "피실험자"란 용어는 동물, 예를 들어 포유동물(예를 들어, 인간)에 관한 것이다. 본 명세에 따른 피실험자는 본 명세서의 어딘가에 기재된 심혈관 질환, 안정 심혈관 질환 또는 급성 관상동맥 증후군을 앓고 있을 것이다.The term "subject" as used herein refers to an animal, such as a mammal (e.g., a human). Subjects according to this specification will suffer from cardiovascular disease, stable cardiovascular disease or acute coronary syndrome as described elsewhere herein.

본 명세서에 사용되는 "심혈관 사건"은 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색(MI), 허혈 기원의 치명적이지 않은 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 입원 및 관상동맥 혈관재생술을 지칭한다.As used herein, "cardiovascular event" refers to cardiovascular disease-induced death, non-fatal myocardial infarction (MI), non-fatal stroke of ischemic origin, admission due to unstable angina, and coronary angioplasty.

본 명세서에 사용되는 "비교하는"이란 용어는 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커의 수준을 본 명세의 달리 어딘가에 명시된 생물마커의 참조 수준과 비교함을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 비교는 상응하는 매개변수 또는 값의 비교를 지칭하는 것으로, 예를 들어 절대량은 절대 참조량과 비교되는 반면 농도는 참조 농도와 비교되거나, 시료 중 생물마커로부터 획득된 강도 신호는 참조 시료로부터 획득된 동일한 유형의 강도 신호와 비교되는 것으로 이해해야 한다. 상기 비교를 수동으로 또는 컴퓨터 지원으로 수행할 수 있다. 따라서, 상기 비교를 계산 장치(예를 들어, 본 명세서에 개시된 시스템)에 의해 수행할 수 있다. 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커의 측정되거나 검출된 수준 및 참조 수준의 값을, 예를 들어 서로 비교할 수 있으며, 상기 비교를 상기 비교 연산을 실행하는 컴퓨터 프로그램에 의해 자동적으로 수행할 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 목적하는 평가를 적합한 출력 포맷으로 제공할 것이다. 컴퓨터 지원된 비교를 위해서, 상기 측정량의 값을 컴퓨터 프로그램에 의해 데이터베이스에 저장된 적합한 참조에 상응하는 값에 비교할 수 있다. 상기 컴퓨터 프로그램은 상기 비교 결과를 추가로 평가할 수 있다. 즉, 상기 목적하는 평가를 적합한 출력 포맷으로 자동적으로 제공할 수 있다. 컴퓨터 지원된 비교를 위해서, 상기 측정량의 값을 컴퓨터 프로그램에 의해 데이터베이스에 저장된 적합한 참조에 상응하는 값에 비교할 수 있다. 상기 컴퓨터 프로그램은 상기 비교 결과를 추가로 평가할 수 있다. 즉, 상기 목적하는 평가를 적합한 출력 포맷으로 자동적으로 제공할 수 있다.As used herein, the term " comparing " refers to comparing the level of a biomarker in a sample from an individual or patient to a reference level of a biomarker specified elsewhere in this specification. As used herein, a comparison refers to a comparison of corresponding parameters or values, e.g., an absolute amount is compared to an absolute reference amount, while a concentration is compared to a reference concentration, or a strength obtained from a biomarker in a sample It should be understood that the signal is compared with the same type of intensity signal obtained from the reference sample. The comparison may be performed manually or with computer support. Thus, the comparison may be performed by a computing device (e.g., the system described herein). The measured or detected level and the value of the reference level of the biological marker in the sample from an individual or patient can be compared to each other, for example, and the comparison can be performed automatically by a computer program that performs the comparison operation. The computer program that performs the evaluation will provide the desired evaluation in a suitable output format. For computer-supported comparisons, the value of the measurand can be compared by a computer program to a value corresponding to a suitable reference stored in the database. The computer program may further evaluate the comparison result. That is, the desired evaluation can be automatically provided in a suitable output format. For computer-supported comparisons, the value of the measurand can be compared by a computer program to a value corresponding to a suitable reference stored in the database. The computer program may further evaluate the comparison result. That is, the desired evaluation can be automatically provided in a suitable output format.

본 명세서에 사용되는 "참조량"이란 용어는 심혈관 질환을 앓고 있는 피실험자가 심혈관 사건의 위험이 증가하는 지의 여부를 평가할 수 있게 하는 양을 지칭한다. 상기 참조는, 예를 들어 어떠한 심혈관 사건도 앓지 않은 일반 모집단으로부터의 피실험자의 풀로부터 유래할 수 있다. 더욱이, 상기 참조량은 한계량 또는 한계 범위를 한정할 수 있으며, 이에 의해 상기 참조 유형에 따라 상기 한계에 대한 측정량의 변화는 질병 진행의 증가된 위험 또는 통상적인 위험을 암시한다. 한편으로, 필수적으로 동일한 양이, 적합한 참조량이 사용되는 경우, 질병 진행의 증가된 위험 또는 통상적인 위험을 또한 암시할 수 있다. 개별 피실험자에 적용 가능한 참조량은 연령, 성별 또는 부분모집단과 같은 다양한 생리학적 매개변수뿐만 아니라 본 명세서에서 지칭된 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 측정에 사용되는 수단에 따라 변할 수 있다. 적합한 참조량을 시험 시료과 함께, 즉 동시에 또는 후속적으로 분석하고자 하는 참조 시료로부터 측정할 수 있다.The term "reference amount ", as used herein, refers to an amount that allows a subject suffering from cardiovascular disease to evaluate whether the risk of a cardiovascular event is increased. The reference may be, for example, from a pool of subjects from a general population without any cardiovascular events. Moreover, the reference quantity may define a limit or a range of limits, whereby a change in the quantity of the measurand to the limit, depending on the reference type, implies an increased risk or a usual risk of disease progression. On the one hand, essentially the same amount can also imply an increased risk or a general risk of disease progression if suitable reference amounts are used. The amount of reference applicable to an individual subject can vary depending on various physiological parameters such as age, sex, or subpopulation as well as the means used to measure the polypeptide or peptide referred to herein. A suitable reference amount can be determined from a reference sample to be analyzed together with the test sample, i.e., simultaneously or subsequently.

"결합제"란 용어는 상응하는 표적 생물마커 분자에 특이적으로 결합하는 결합 부분을 포함하는 분자를 지칭한다. "결합제"의 예는 핵산 탐침, 핵산 프라이머, DNA 분자, RNA 분자, 앱타머, 항체, 항체 단편, 펩타이드, 펩타이드 핵산(PNA) 또는 화학적 화합물이다.The term "binder" refers to a molecule comprising a binding moiety that specifically binds to a corresponding target biomarker molecule. Examples of "binding agents" are nucleic acid probes, nucleic acid primers, DNA molecules, RNA molecules, aptamers, antibodies, antibody fragments, peptides, peptide nucleic acids (PNAs) or chemical compounds.

"탐침" 또는 "핵산 탐침"이란 용어는, 표적 핵산 분자(예를 들어, 게놈 표적 핵산 분자)와 하이브리드화할 수 있고, 상기 표적에 하이브리드화하는 경우 직접 또는 간접적으로 검출될 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 따라서, 탐침은 표적 핵산 분자의 검출, 및 일부 예에서 정량분석을 허용한다. 특정한 예에서, 탐침은 상기 표적 핵산 분자로부터 유래된 결합 영역을 포함하고, 따라서, 상기 표적 핵산 분자의 적어도 일부에 특이적으로 하이브리드화할 수 있는 다수의 핵산 분자를 포함한다. 탐침은 "표지된 핵산 탐침"으로서 지칭될 수 있으며, 이는 상기 탐침이 검출 가능한 부분 또는 "표지"에 직접 또는 간접적으로 커플링됨(이는 상기 탐침을 검출 가능하게 만든다)을 암시한다.The term "probe" or "nucleic acid probe" refers to a nucleic acid molecule that can hybridize to a target nucleic acid molecule (eg, a genomic target nucleic acid molecule) and that can be directly or indirectly detected when hybridizing to the target do. Thus, the probe allows the detection of target nucleic acid molecules, and in some instances, quantitative analysis. In a particular example, the probe comprises a plurality of nucleic acid molecules that comprise a binding region derived from the target nucleic acid molecule and are thus capable of specifically hybridizing to at least a portion of the target nucleic acid molecule. A probe may be referred to as a " labeled nucleic acid probe ", which implies that the probe is directly or indirectly coupled to a detectable moiety or "marker " (which makes the probe detectable).

"프라이머" 또는 "핵산 프라이머"란 용어는 표적 서열과의 하이브리드화에 의해 관심 시료 중에 잠재적으로 존재하는 표적 분자에 결합하고, 그 후에 상기 표적에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 중합을 촉진하는, 일반적으로 유리 3'-OH 기를 갖는 짧은 단일 가닥 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다.The term "primer" or "nucleic acid primer" refers to a nucleic acid that hybridizes to a target molecule that is potentially present in the sample of interest by hybridization with the target sequence, and which generally promotes polymerization of the polynucleotide complementary to the target Quot; refers to short single-stranded polynucleotides having a 3 ' -OH group.

"특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"이란 용어는 결합 쌍 분자들이, 이들이 다른 분자들에 그다지 결합하지 않는 조건하에서 서로에 대해 결합을 나타내는 결합 반응을 지칭한다.The term "specific binding" or "specifically binding" refers to a binding reaction in which binding pair molecules exhibit binding to each other under conditions where they do not bind very much to other molecules.

"특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"이란 용어는 결합제로서 단백질 또는 펩타이드를 지칭하는 경우, 결합제가 상응하는 표적 분자에 적어도 10^-7 M의 친화성으로 결합하는 결합 반응을 지칭한다. "특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"이란 용어는 표적 분자에 대한, 바람직하게는 적어도 10^-8 M 또는 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10^-9 M의 친화성을 지칭한다. "특이적인" 또는 "특이적으로"란 용어는 시료 중에 존재하는 다른 분자들이 상기 표적 분자에 특이적인 결합제에 그다지 결합하지 않음을 가리키는데 사용된다. 바람직하게, 상기 표적 분자 외의 분자에 대한 결합 수준은 상기 표적 분자에 대한 친화성의 단지 10% 이하, 보다 바람직하게는 단지 5% 이하인 결합 친화성을 생성시킨다.The term "specific binding" or "specifically binding" refers to a binding reaction in which a binding agent binds to a corresponding target molecule with an affinity of at least 10 ^-7 M, when referring to a protein or peptide as a binding agent. The term "specific binding" or "specifically binding" refers to an affinity for a target molecule, preferably at least 10 ^-8 M or even more preferably at least 10 ^-9 M. The term "specific" or "specifically" is used to indicate that other molecules present in the sample do not bind much to the binding agent specific to the target molecule. Preferably, the level of binding to the molecule other than the target molecule produces a binding affinity that is only 10% or less, more preferably only 5% or less of the affinity for the target molecule.

"특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"이란 용어는 결합제로서 핵산을 지칭하는 경우, 결합제 또는 탐침이 관심 표적 서열에 정확하게 또는 실질적으로 상보적인 하이브리드화 영역을 함유하는 하이브리드화 반응을 지칭한다. 충분히 엄격한 하이브리드화 조건하에서 상기 결합제 또는 탐침을 사용하여 수행된 하이브리드화 분석은 상기 특정한 표적 서열의 선택적 검출을 가능하게 한다. 상기 하이브리드화 영역은 바람직하게는 길이가 약 10 내지 약 35 뉴클레오타이드, 보다 바람직하게는 약 15 내지 약 35 뉴클레오타이드이다. 상기 하이브리드화 안정성에 영향을 미치는, 당해 분야에 주지된 변형된 염기 또는 염기 유사체의 사용은 필적하는 안정성으로 보다 짧거나 보다 긴 탐침의 사용을 가능하게 할 수 있다. 결합제 또는 탐침은 전적으로 하이브리드화 영역으로 이루어지거나 상기 탐침의 검출 또는 고정화를 허용하지만 상기 하이브리드화 영역의 하이브리드화 특성은 그다지 변경시키지 않는 추가적인 특징을 함유할 수 있다.The term "specific binding" or "specifically binding " refers to a hybridization reaction in which a binding agent or probe, when referring to a nucleic acid as a binding agent, contains a hybridization region that is precisely or substantially complementary to the target sequence of interest . Hybridization assays performed using the binding agent or probe under sufficiently stringent hybridization conditions allow selective detection of the particular target sequence. The hybridization region is preferably about 10 to about 35 nucleotides in length, more preferably about 15 to about 35 nucleotides in length. Use of modified base or base analogs known in the art to affect the hybridization stability may enable the use of shorter or longer probes with comparable stability. The binder or probe may comprise additional features that are entirely made up of the hybridization region or allow detection or immobilization of the probe, but do not significantly alter the hybridization properties of the hybridization region.

"특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"이란 용어는 결합제로서 핵산 앱타머를 지칭하는 경우, 핵산 앱타머가 낮은 nM 내지 pM 범위의 친화성으로 상응하는 표적 분자에 결합하는 결합 반응을 지칭한다.The term "specific binding" or "specifically binding " refers to a binding reaction in which a nucleic acid aptamer binds to a corresponding target molecule with affinity in the low nM to pM range when referring to a nucleic acid aptamer as a binding agent .

본 명세서에서 "항체"란 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며 다양한 항체 구조물, 예를 들어 비제한적으로 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체), 및 항체 단편이 목적하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 상기 항체 단편을 포함한다.As used herein, the term "antibody" is used in its broadest sense and includes various antibody constructs such as but not limited to monoclonal, polyclonal, multispecific (e.g., bispecific) Lt; / RTI > antigen-binding activity.

본 명세서에 사용되는, "최근"이란 용어는 과거 6개월 동안, 보다 특히 3개월내에 발생한 사건을 지칭한다. 예를 들어, 본 발명에 따른 "최근"의 경우, 최근의 사건은 과거 3개월 동안 발생한 사건이다.As used herein, the term "recent" refers to an event that occurred during the past six months, more particularly within three months. For example, in the case of "recent" according to the present invention, a recent event is an event that occurred during the past three months.

본 명세서에 사용되는 "양"이란 용어는 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 절대량, 상기 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 상대적인 양 또는 농도뿐만 아니라 상기와 상관 있는 임의의 값 또는 매개변수를 포함하거나 이로부터 유도될 수 있다. 상기와 같은 값 또는 매개변수는 직접적인 측정에 의해 상기 펩타이드로부터 획득된 모든 특정한 물리적 또는 화학적 성질로부터의 강도 신호 값, 예를 들어 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼에서 강도 값을 포함한다. 더욱이, 본 명세 어딘가에 명시된 간접 측정에 의해 획득된 모든 값 또는 매개변수, 예를 들어 상기 펩타이드에 반응하여 생물학적 판독 시스템으로부터 측정된 반응 수준 또는 특이적으로 결합된 리간드로부터 획득된 강도 신호가 포함된다. 상기 언급한 양 또는 매개변수와 상관 있는 값들을 또한 모든 표준적인 수학적 연산에 의해 획득할 수 있는 것으로 생각된다.As used herein, the term "amount " includes or is derived from the absolute amount of the polypeptide or peptide, the relative amount or concentration of the polypeptide or peptide, as well as any value or parameter related thereto. Such values or parameters include intensity values from all specific physical or chemical properties obtained from the peptide by direct measurement, for example intensity values in the mass spectrum or NMR spectrum. Moreover, all values or parameters obtained by indirect measurements specified elsewhere in the specification, for example, the level of response measured from the biological reading system in response to the peptide, or the intensity signal obtained from the specifically bound ligand. It is contemplated that values associated with the amounts or parameters mentioned above may also be obtained by all standard mathematical operations.

본 명세서에 사용되는 "장치"란 용어는 본 명세의 방법에 따라 진단을 허용하도록 서로에 대해 작동적으로 연결된 상기 언급한 유닛들을 포함하는 시스템에 관한 것이다. 상기 분석 유닛에 사용될 수 있는 예시적인 검출제는 본 명세서 어딘가에 개시되어 있다. 상기 분석 유닛은 상기 검출제를, 양을 측정하고자 하는 생물마커를 포함하는 시료과 접촉하게 되어 있는 고체 지지체상에 고정화된 형태로 포함할 수 있다. 더욱이, 상기 분석 유닛은 또한 상기 생물마커에 특이적으로 결합된 검출제의 양을 측정하는 검출기를 포함할 수 있다. 상기 측정된 양을 상기 평가 유닛으로 전송할 수 있다. 상기 평가 유닛은 상기 측정량과 적합한 참조간의 비교를 수행하기 위한 실행 연산과 함께, 데이터 처리 요소, 예를 들어 컴퓨터를 포함한다.The term "device ", as used herein, refers to a system comprising the above-mentioned units operatively connected to each other to permit diagnosis in accordance with the methods of this specification. Exemplary detectors that may be used in the assay unit are disclosed elsewhere herein. The analyzing unit may include the detecting agent in an immobilized form on a solid support which is in contact with a sample containing a biomarker to be measured. Furthermore, the analysis unit may also comprise a detector for measuring the amount of detection agent specifically bound to the biomarker. And send the measured amount to the evaluation unit. The evaluation unit comprises a data processing element, for example a computer, together with an execution operation for performing a comparison between the measured quantity and a suitable reference.

본 명세서에 사용되는 "키트"란 용어는 별도로 또는 단일 용기내에 제공될 수 있는 상기 언급한 성분들의 수집품을 지칭한다. 상기 용기는 또한 본 명세의 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함한다. 상기 설명서는 매뉴얼의 형태로 존재하거나, 본 명세의 방법에서 지칭된 비교를 수행할 수 있고 컴퓨터 또는 데이터 처리 장치상에서 상응하게 실행시 진단을 확립시킬 수 있는 컴퓨터 프로그램 코드에 의해 제공될 수 있다. 상기 컴퓨터 프로그램 코드는 데이터 저장 매체 또는 장치, 예를 들어 광학적 저장 매체(예를 들어, 콤팩트 디스크)상에 또는 컴퓨터 또는 데이터 처리 장치상에 직접 제공될 수 있다.The term "kit" as used herein refers to a collection of the above-mentioned ingredients that may be provided separately or in a single container. The container also includes instructions for performing the method of the present specification. The description may be provided in the form of a manual, or may be provided by computer program code that is capable of performing the comparisons referred to in the methods of this specification and establishing a corresponding run-time diagnosis on the computer or data processing apparatus. The computer program code may be provided on a data storage medium or device, e.g., an optical storage medium (e.g., a compact disc) or directly on a computer or data processing apparatus.

임상적인 위험 예측 모델은 개인 환자에 대한 부작용의 위험을 예측하는 다수의 변수들을 포함한다. 연령, 맥박수(PBM), LDL 콜레스테롤 수준, 동맥 고혈압, 당뇨병, 말초 혈관 질환, 울혈성 심부전, 선행 급성 관상동맥 증후군, 선행 혈관재생술, 선행 뇌졸중, 관상동맥 심장병, 이뇨제에 의한 치료가 급성 관상동맥 증후군에 대한 강한 위험 인자들이다. 본 명세서에 기재된 생물마커 접근법은 심혈관 사건의 병인에 관련된 다양한 경로들을 반영하며 2차 심혈관 사건의 예측을 제공한다. 상기 접근법의 용도 및 실행을 사용하여 신규의 치료가 가장 이로울 수 있는 CHD의 부분, 특히 급성 관상동맥 증후군 집단을 식별할 수 있다. 본 명세서에 기재된 생물마커 및 방법의 임상적 용도는, 상이한 치료가 필요할 수 있는 환자를 식별하고 진행의 위험이 가장 낮은 환자에서 추가적인 치료 선택권을 피하는데 유용하다. 더욱 또한, 본 발명은 위험 집단의 보다 양호한 진단에 이로울 수 있다. 본 명세의 실시태양은 또한 진단 장치 및 상기 언급한 방법을 수행하기 위한 키트를 포함한다.The clinical risk prediction model includes a number of variables that predict the risk of side effects to individual patients. The treatment of acute coronary syndromes with age, heart rate (PBM), LDL cholesterol level, arterial hypertension, diabetes, peripheral vascular disease, congestive heart failure, prior acute coronary syndrome, prior angioplasty, prior stroke, coronary heart disease, Are strong risk factors for. The biomarker approach described herein reflects the various pathways involved in the pathogenesis of cardiovascular events and provides predictions of secondary cardiovascular events. Using the use and practice of this approach, one can identify the portion of CHD in which new therapies are most beneficial, particularly the acute coronary syndrome population. Clinical use of the biomarkers and methods described herein is useful for identifying patients who may require different treatments and avoiding additional treatment options in patients at the lowest risk of progression. Furthermore, the present invention may benefit from a better diagnosis of a risk group. Embodiments of the present disclosure also include a diagnostic device and a kit for performing the above-mentioned method.

본 명세의 하나의 태양은 급성 관상동맥 증후군 또는 최근의 심혈관 사건을 앓고 있는 피실험자가 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가되는지의 여부를 진단하기 위한 방법에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 상기 방법은 피실험자의 시료 중에서 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 생물마커의 양을 검출하고 상기 양을 참조와 비교함을 포함한다. 특히, 상기 방법은 피실험자의 시료 중에서 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 생물마커의 양을 검출하고 상기 양을 참조와 비교하는 것으로 이루어진다. 상기 피실험자는 상기 시료 중 생물마커의 양이 각 생물마커의 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별된다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 참조량은 CRP의 경우 1.51 ㎎/L, 호모시스테인의 경우 12.16 μmol/L, NT-proBNP의 경우 263 pg/㎖이다.One aspect of the disclosure relates to a method for diagnosing whether a subject suffering from acute coronary syndrome or a recent cardiovascular event is at increased risk of experiencing a cardiovascular event. In one embodiment, the method comprises detecting the amount of NT-proBNP, homocysteine, and CRP biomarker in a subject's sample and comparing the amount with a reference. In particular, the method consists in detecting the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP biomarkers in a sample of a subject and comparing the amount with a reference. The subject is identified as having an increased risk of suffering a cardiovascular event if the amount of biomarker in the sample is greater than the reference amount of each biomarker. In a more specific embodiment, the reference amount is 1.51 mg / L for CRP, 12.16 μmol / L for homocysteine, and 263 pg / mL for NT-proBNP.

본 명세의 또 다른 태양은 포스트 급성 관상동맥 증후군을 앓고 있는 피실험자가 심혈관 질환, 특히 급성 관상동맥 증후군의 치료 과정 동안 심혈관 사건의 위험이 증가되는 지의 여부를 모니터하는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 상기 방법은 피실험자의 시료 중에서 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 생물마커의 양을 검출하고 상기 양을 참조와 비교함을 포함한다. 특히, 상기 방법은 피실험자의 시료 중에서 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 생물마커의 양을 검출하고 상기 양을 참조와 비교하는 것으로 이루어진다. 상기 피실험자는 상기 시료 중 생물마커의 양이 상기 생물마커의 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별된다. 하나의 실시태양에서, 상기 참조는 심혈관 질환, 특히 급성 관상동맥 증후군을 앓고 있지 않는 피실험자의 시료로부터 유래된다. 또 다른 실시태양에서, 상기 참조는 심혈관 질환, 특히 급성 관상동맥 증후군에 대해 새로운 추가적인 치료를 시작하기 전에 상기 피실험자로부터 취한 시료 또는 상기 새로운 추가적인 치료 과정 동안의 시점에서 상기 피실험자로부터 취한 시료이다. 상기 치료는 상기 방법의 결과를 토대로 변형될 수 있다. 예를 들어, 상기 피실험자가 상기 참조에 비해 생물마커의 양의 감소를 나타내는 경우, 상기 치료를 계속할 수 있다. 환언하면, 상기 피실험자가 상기 참조에 비해 생물마커의 양의 증가를 나타내는 경우, 상기 치료를 대체 치료로 대체시킬 수 있다.Another aspect of the disclosure is directed to a method of monitoring whether a subject suffering from post-acute coronary syndrome is at increased risk of cardiovascular events during the course of treatment of cardiovascular disease, particularly acute coronary syndrome. In one embodiment, the method comprises detecting the amount of NT-proBNP, homocysteine, and CRP biomarker in a subject's sample and comparing the amount with a reference. In particular, the method consists in detecting the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP biomarkers in a sample of a subject and comparing the amount with a reference. The subject is identified as having an increased risk of experiencing a cardiovascular event if the amount of the biomarker in the sample is greater than the reference amount of the biomarker. In one embodiment, the reference is from a sample of a subject who is not suffering from a cardiovascular disease, particularly an acute coronary syndrome. In another embodiment, the reference is a sample taken from the subject prior to commencing new additional treatment for cardiovascular disease, particularly acute coronary syndrome or a sample taken from the subject at the time of the new additional course of treatment. The treatment may be modified based on the results of the method. For example, if the subject exhibits a decrease in the amount of a biomarker relative to the reference, the treatment can continue. In other words, if the subject exhibits an increase in the amount of a biomarker relative to the reference, the treatment may be replaced by an alternative treatment.

본 발명의 또 다른 태양은 상기에 제공된 방법들을 수행하기에 적합한 장치에 관한 것이며 이는 본 명세서에 제공된다. 상기 장치의 예시적인 실시태양은 a) 본 발명의 생물마커에 특이적으로 결합하는 검출제를 포함하는 분석 유닛(상기 분석 유닛은 시험관내에서 피실험자로부터의 시료의 일부를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합하다); b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛(상기 컴퓨터-실행 알고리즘은 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 생물마커의 양을 생물마커 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 생물마커의 양이 상기 생물마커 참조량보다 많은 경우, 질병 진행의 위험 증가의 진단을 제공한다)을 포함한다. 일부 실시태양에 따라, 상기 데이터베이스는 생물마커 참조량을 추가로 포함한다.Another aspect of the present invention relates to an apparatus suitable for carrying out the methods provided above and is provided herein. Exemplary embodiments of the apparatus include a) an analysis unit comprising a detection agent that specifically binds to a biomarker of the invention, wherein the analysis unit is capable of contacting a portion of a sample from a subject in vitro with the detection agent Suitable); b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for said database, said computer-implemented algorithm being adapted to: measure the amount of biomarkers in a sample from said subject when executed by said computing device, Comparing the amount of the biomarker with the reference amount of the biomarker and providing a diagnosis of an increased risk of progression of the disease when the amount of the biomarker measured in the measurement step is greater than the reference amount of the biomarker. According to some embodiments, the database further includes a biomarker reference amount.

본 발명의 또 다른 태양은 상기 생물마커에 대한 검출제뿐만 아니라 상기 개시된 본 명세의 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함하는, 상기 방법을 수행하기에 적합한 키트를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 키트는 급성 관상동맥 증후군, 특히 최근의 심혈관 사건을 앓고 있는 피실험자가 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가되는 지를 진단하기 위한 것이다.Yet another aspect of the present invention provides a kit suitable for carrying out the method, comprising a detector for the biomarker as well as instructions for performing the methods of the present disclosure as described above. In one embodiment, the kit is for diagnosing whether an acute coronary syndrome, particularly a subject suffering from a recent cardiovascular event, is at increased risk of suffering other cardiovascular events, particularly secondary cardiovascular events.

하나의 실시태양에서, 상기 시험 시료에서 측정된 3가지 생물마커의 양이 상기 생물마커의 참조량에 비해 증가된 것은 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 피실험자를 가리킨다.In one embodiment, the increase in the amount of the three bio-markers measured in the test sample relative to the reference amount of the biomarker indicates that the subject is at increased risk of suffering other cardiovascular events, particularly secondary cardiovascular events.

하나의 실시태양에서, 상기 시험 시료 중에서 측정된 임상 생물마커를 포함한 모든 생물마커 마커들의 양이 상기 생물마커의 참조량에 비해 증가된 것은 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 피실험자를 가리킨다.In one embodiment, the increase in the amount of all biomarker markers, including the clinical biomarker measured in the test sample relative to the reference amount of the biomarker, is associated with an increased risk of experiencing other cardiovascular events, particularly secondary cardiovascular events It refers to the subject.

하나의 실시태양에서, 상기 피실험자는 상기 시험 시료 중에서 측정된 생물마커의 양이 상기 참조량보다 많은 경우, 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별된다. 하나의 실시태양에서, 상기 참조량은 심혈관 질환, 특히 급성 관상동맥 증후군을 앓지 않는 피실험자의 코호트로부터 유래된 중간량이다.In one embodiment, the subject is identified as having an increased risk of experiencing other cardiovascular events, particularly secondary cardiovascular events, if the amount of biomarker measured in the test sample is greater than the reference amount. In one embodiment, the reference amount is a median amount derived from a cohort of subjects suffering from cardiovascular disease, particularly acute coronary syndrome.

생물마커의Biomarker 검출 방법 Detection method

단백질 또는 핵산을 포함한 생물마커를 당해 분야에 일반적으로 공지된 방법들을 사용하여 검출할 수 있다. 검출 방법은 일반적으로 시료 중 생물마커의 수준을 정량분석하거나(정량분석법), 생물마커가 시료 중에 존재하는지의 여부를 측정하는(정성분석법) 방법들을 포함한다. 하기의 방법들 중 어느 것이 생물마커의 정성분석적 및/또는 정량분석적 검출에 적합한지는 숙련가에게 일반적으로 공지되어 있다. 시료을 편의상, 예를 들어 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA), 방사성 면역분석(RIA), 형광-기재 면역분석과 같은 웨스턴 및 면역분석을 사용하여 단백질에 대해서 뿐만 아니라, 노던, 도트-블럿, 폴리머라제 쇄 반응(PCR) 분석, 배열 하이브리드화, RNase 보호 분석을 사용하거나 DNA SNP 칩 미세배열(DNA 미세배열 스냅샷을 포함하여 상업적으로 입수할 수 있다)을 사용하여 관심 유전자 생물마커로부터 mRNA 또는 DNA에 대해서 분석할 수 있다. 생물마커를 검출하는데 추가로 적합한 방법은 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 특이적인 물리적 또는 화학적 성질, 예를 들어 그의 정확한 분자량 또는 NMR 스펙트럼을 측정함을 포함한다. 상기 방법은, 예를 들어 바이오센서, 면역분석에 커플링된 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치, 예를 들어 질량-분광계, NMR-분석기, 또는 크로마토그래피 장치를 포함한다. 더욱이, 방법들은 미세플레이트 ELISA-기반 방법, 완전히-자동화된 또는 로봇식 면역분석(예를 들어, Elecsys(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다), CBA(효소적 코발트 결합 분석, 로슈-히타치(Roche-Hitachi)(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다), 및 라텍스 응집반응 분석(로슈-히타치(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다)을 포함한다.Biomarkers, including proteins or nucleic acids, can be detected using methods generally known in the art. The detection method generally includes a method of quantitatively analyzing the level of a biomarker in a sample (quantitative analysis method) or a method of determining whether a biomarker is present in a sample (qualitative analysis method). It is generally known to the skilled artisan which of the following methods is suitable for qualitative and / or quantitative detection of a biomarker. Siryoeul for convenience, for example, enzyme-linked immune absorption analysis (ELISA), a radioactive immunoassay (RIA), fluorescence-based, as well as for protein using the Western and immunoassays, such as immunoassay, Northern, dot-blot, MRNA from a gene of interest biomarkers using polymerase chain reaction (PCR) analysis, array hybridization, RNase protection analysis, or using DNA SNP chip microarrays (commercially available including DNA microarray snapshots) DNA can be analyzed. A further suitable method for detecting a biomarker comprises measuring the physical or chemical properties specific to said peptide or polypeptide, for example its exact molecular weight or NMR spectrum. The method includes, for example, a biosensor, an optical device coupled to an immunoassay, a biochip, an analytical device such as a mass-spectrometer, an NMR-analyzer, or a chromatographic device. Moreover, the methods may be used in a microplate ELISA-based method, a fully automated or robotic immunoassay (for example, available on Elecsys ™ analyzers), CBA (enzymatic cobalt binding assay, Roche- Available on a Hitachi (R) analyzer), and latex agglutination assay (available on a Roche-Hitachi (trademark) analyzer).

생물마커 단백질의 검출을 위해서 상기와 같은 분석 포맷을 사용하는 광범위한 면역분석 기법들을 이용할 수 있다. 예를 들어, 미국특허 제 4,016,043 호, 미국특허 제 4,424,279 호 및 미국특허 제 4,018,653 호를 참조하시오. 이들 기법은 비-경쟁적인 유형의 단일 부위 및 2-부위 모두 또는 "샌드위치" 분석뿐만 아니라 전통적인 경쟁 결합 분석을 포함한다. 이들 분석은 또한 표지된 항체의 표적 생물마커에의 직접적인 결합을 포함한다.For the detection of biomarker proteins, a wide variety of immunoassay techniques using the same assay format can be used. See, for example, U.S. Patent No. 4,016,043, U.S. Patent No. 4,424,279, and U.S. Patent No. 4,018,653. These techniques include both traditional and non-competitive types of single site and two-site or "sandwich" analysis as well as traditional competitive binding analyzes. These assays also involve direct binding of the labeled antibody to the target biomarker.

샌드위치 분석이 가장 유용하고 통상적으로 사용되는 면역분석 중 하나이다.Sandwich analysis is one of the most useful and commonly used immunoassays.

전기화학발광 현상을 측정하는 방법이 주지되어 있다. 상기와 같은 방법은, 산화에 의해 바닥 상태로 붕괴되어 전기화학발광을 방출하는 여기된 상태를 성취하는 특수 금속 착체의 능력을 이용한다. 재고찰을 위해 문헌[Richter, M.M., Chem. Rev. 104(2004) 3003-3036]을 참조하시오.Methods of measuring electrochemiluminescence phenomena are well known. Such a method utilizes the ability of a special metal complex to achieve an excited state that is collapsed to the ground state by oxidation to release the electrochemiluminescence. For review, see Richter, M. M., Chem. Rev. 104 (2004) 3003-3036.

생물마커를 또한 자기 공명 분광학(NMR 분광학), 기체 크로마토그래피-질량 분광분석법(GC-MS), 액체-크로마토그래피-질량 분광분석법(LC-MS), 고 및 초-HPLC HPCL, 예를 들어 역상 HPLC, 예를 들어 이중 UV-파장 검출과의 이온-페어링 HPLC, 레이저-유도된 형광 검출과의 모세관 전기영동, 음이온 교환 크로마토그래피 및 형광 검출, 박층 크로마토그래피를 포함한 일반적으로 공지된 방법들에 의해 검출할 수 있다.Biomarkers can also be detected by magnetic resonance spectroscopy (NMR spectroscopy), gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), liquid-chromatography-mass spectrometry (LC-MS), high- and ultra- HPLC, ion-pairing HPLC with, for example, double UV-wavelength detection, capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection, anion exchange chromatography and fluorescence detection, thin layer chromatography Can be detected.

본 명세에 따라, 생물마커 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양의 검출을 시료 중 펩타이드의 양을 측정하는 모든 공지된 수단에 의해 성취할 수 있다. 상기와 같은 수단의 예는 다양한 샌드위치, 경쟁 또는 다른 분석 포맷으로 표지된 분자를 사용할 수 있는 면역분석 장치 및 방법을 포함한다. 이들 분석은 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 존재 또는 부재를 가리키는 신호를 발생시킬 것이다. 더욱이, 상기 신호 강도는 시료 중에 존재하는 폴리펩타이드의 양과 직접적으로 또는 간접적으로(예를 들어, 반-비례) 상관 있을 수 있다. 추가의 적합한 방법은 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 특이적인 물리 또는 화학적 성질, 예를 들어 그의 정확한 분자량 또는 NMR 스펙트럼을 측정함을 포함한다. 상기 방법은 바이오센서, 면역분석에 커플링된 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치, 예를 들어 질량-분광계, NMR-분석기, 또는 크로마토그래피 장치를 포함할 수 있다. 더욱이, 방법들은 미세플레이트 ELISA-기반 방법, 완전히-자동화된 또는 로봇식 면역분석(예를 들어, Elecsys(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다), CBA(효소적 코발트 결합 분석, 로슈-히타치(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다), 및 라텍스 응집반응 분석(로슈-히타치(상표) 분석기상에서 입수할 수 있다)을 포함한다.In accordance with the present specification, detection of the amount of biomarker peptide or polypeptide can be accomplished by any known means of measuring the amount of peptide in the sample. Examples of such means include immunoassay devices and methods that can use molecules labeled with various sandwiches, competition or other analytical formats. These assays will generate a signal indicating the presence or absence of the peptide or polypeptide. Furthermore, the signal strength may be directly or indirectly (e.g., anti-proportional) to the amount of polypeptide present in the sample. A further suitable method comprises measuring physical or chemical properties specific to said peptide or polypeptide, for example its exact molecular weight or NMR spectrum. The method may include a biosensor, an optical device coupled to an immunoassay, a biochip, an analytical device such as a mass-spectrometer, an NMR-analyzer, or a chromatographic device. Moreover, the methods may be used in a microplate ELISA-based method, a fully automated or robotic immunoassay (e.g., available on Elecsys ™ analyzers), CBA (enzymatic cobalt binding assay, Roche-Hitachi ) Analyzer), and latex agglutination reaction analysis (available on a Roche-Hitachi (trademark) analyzer).

본 명세에 따라, 생물마커 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양의 측정은 (a) 세포 반응(그의 강도는 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양을 가리킨다)을 이끌어낼 수 있는 세포를 적합한 기간 동안 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드와 접촉시키는 단계, (b) 상기 세포 반응을 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 세포 반응을 측정하기 위해서, 상기 시료 또는 가공된 시료를 세포 배양물에 가하고 내부 또는 외부 세포 반응을 측정한다. 상기 세포 반응은 리포터 유전자의 측정 가능한 발현 또는 물질, 예를 들어 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 소분자의 분비를 포함할 수 있다. 상기 발현 또는 물질은 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양과 상관 있는 강도 신호를 생성시킬 것이다.According to the present specification, the measurement of the amount of a biomarker peptide or polypeptide comprises the steps of: (a) culturing cells capable of eliciting a cellular response (the intensity of which refers to the amount of the peptide or polypeptide) to the peptide or polypeptide , And (b) measuring the cell response. To measure the cell response, the sample or the processed sample is added to the cell culture and the internal or external cell response is measured. The cellular response may comprise measurable expression of a reporter gene or secretion of a substance, e.g., a peptide, polypeptide or small molecule. The expression or substance will produce a strength signal correlated with the amount of the peptide or polypeptide.

또한, 생물마커 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양의 검출은 상기 시료 중 펩타이드 또는 폴리펩타이드로부터 획득될 수 있는 특정한 강도 신호를 측정하는 단계를 포함한다. 상술한 바와 같이, 상기와 같은 신호는 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 특이적인 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼에서 관찰되는 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 특이적인 m/z 변수에서 관찰된 신호 강도일 수 있다.Further, the detection of the amount of the biomarker peptide or polypeptide comprises measuring a specific intensity signal that can be obtained from the peptide or polypeptide in the sample. As described above, the signal may be a signal intensity observed in an m / z variable specific to the peptide or polypeptide observed in a mass spectrum or an NMR spectrum specific to the peptide or polypeptide.

생물마커 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양의 검출은 (a) 상기 펩타이드를 특정한 리간드와 접촉시키는 단계, (b) (임의로) 결합되지 않은 리간드를 제거하는 단계, (c) 상기 결합된 리간드의 양을 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 결합된 리간드는 강도 신호를 생성시킬 것이다. 본 명세에 따른 결합은 공유 및 비-공유 결합을 모두 포함한다. 본 명세에 따른 리간드는 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합하는 임의의 화합물, 예를 들어 펩타이드, 폴리펩타이드, 핵산, 또는 소분자일 수 있다. 예시적인 리간드는 항체, 핵산, 펩타이드 또는 폴리펩타이드, 예를 들어 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 수용체 또는 결합 상대 및 상기 펩타이드에 대한 결합 도메인을 포함하는 그의 단편, 및 앱타머, 예를 들어 핵산 또는 펩타이드 앱타머를 포함한다. 상기와 같은 리간드의 제조 방법은 당해 분야에 주지되어 있다. 예를 들어, 적합한 항체 또는 앱타머의 식별 및 생성은 또한 상업적인 공급자에 의해 제공된다. 당해 분야의 숙련가는 보다 높은 친화성 또는 특이성을 갖는 상기와 같은 리간드의 유도체를 개발하는 방법에 친숙하다. 예를 들어, 랜덤 돌연변이를 상기 핵산, 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 도입시킬 수 있다. 이어서, 이들 유도체를 당해 분야에 공지된 선별 과정, 예를 들어 파지 디스플레이에 따라 결합에 대해 시험할 수 있다. 본 명세서에서 언급되는 항체는 다클론 및 단클론 항체 모두뿐만 아니라, 항원 또는 합텐에 결합할 수 있는 그의 단편, 예를 들어 Fv, Fab 및 F(ab)₂ 단편을 포함한다.Detection of the amount of a biomarker peptide or polypeptide can be performed by (a) contacting the peptide with a specific ligand, (b) optionally removing the unbound ligand, (c) measuring the amount of the bound ligand . The bound ligand will generate an intensity signal. Binding according to this specification includes both shared and non-shared binding. A ligand according to the present disclosure may be any compound that binds to the peptide or polypeptide described herein, for example, a peptide, polypeptide, nucleic acid, or small molecule. Exemplary ligands include, but are not limited to, antibodies, nucleic acids, peptides or polypeptides, e. G. Receptors or binding partners for the peptides or polypeptides and fragments thereof comprising the binding domain for the peptides, and aptamers such as nucleic acids or peptides Includes app tamer. Methods for preparing such ligands are well known in the art. For example, the identification and generation of a suitable antibody or aptamer is also provided by a commercial supplier. Those skilled in the art are familiar with methods for developing derivatives of such ligands with higher affinity or specificity. For example, a random mutation can be introduced into the nucleic acid, peptide or polypeptide. These derivatives can then be tested for binding according to screening procedures known in the art, for example phage display. Antibodies referred to herein include both polyclonal and monoclonal antibodies, as well as fragments thereof capable of binding to an antigen or hapten, such as Fv, Fab and F (ab) ₂ fragments.

본 명세는 또한 단쇄 항체 및 인간화된 하이브리드 항체를 포함하며, 여기에서 목적하는 항원-특이성을 나타내는 비-인간 공여자 항체의 아미노산 서열은 인간 수용자 항체의 서열과 결합된다. 상기 공여자 서열은 대개 적어도 상기 공여자의 항원-결합 아미노산 잔기를 포함할 것이나, 상기 공여자 항체의 다른 구조상 및/또는 기능상 관련된 아미노산 잔기를 또한 포함할 수 있다. 상기와 같은 하이브리드를 당해 분야에 주지된 다수의 방법들에 의해 제조할 수 있다. 상기 리간드 또는 작용제는 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합한다. 본 명세에 따른 특이적인 결합은 상기 리간드 또는 작용제가, 분석하려는 시료 중에 존재하는 또 다른 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 물질에 실질적으로 결합하지("교차-반응하지") 않아야 함을 의미한다. 상기 특이적으로 결합된 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 임의의 다른 관련된 펩타이드 또는 폴리펩타이드보다 적어도 3배 더, 및 일부 실시태양에서 적어도 10배 더 또는 심지어 적어도 50배 더 높은 친화성으로 결합해야 한다. 비-특이적인 결합은, 상기 결합이, 예를 들어 웨스턴 블럿상의 그의 크기에 따라, 또는 시료 중 그의 상대적으로 더 높은 풍부성에 의해 여전히 식별되고 확실하게 측정될 수 있다면, 허용될 수 있다. 상기 리간드의 결합은 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 상기 방법은 반-정량적 또는 정량적일 수 있다. 적합한 방법은 하기에 기재된다.The specification also includes single chain antibodies and humanized hybrid antibodies, wherein the amino acid sequence of a non-human donor antibody exhibiting the desired antigen-specificity is associated with a sequence of human acceptor antibody. The donor sequence will usually comprise at least the antigen-binding amino acid residue of the donor, but may also comprise other structural and / or functionally related amino acid residues of the donor antibody. Such hybrids can be prepared by a number of methods well known in the art. The ligand or agent specifically binds to the peptide or polypeptide. Specific binding according to this specification means that the ligand or agent must not substantially bind ("cross-react") to another peptide, polypeptide or substance present in the sample to be analyzed. The specifically bound peptide or polypeptide must bind at least 3 times more, and in some embodiments at least 10 times or even at least 50 times greater affinity than any other related peptide or polypeptide. Non-specific binding can be tolerated if the binding can still be identified and reliably measured, for example, by its size on a western blot, or by its relatively higher abundance in the sample. The binding of the ligand can be measured by any method known in the art. The method may be semi-quantitative or quantitative. Suitable methods are described below.

첫 번째로, 리간드의 결합을, 예를 들어 NMR 또는 표면 플라스몬 공명에 의해 직접적으로 측정할 수 있다. 두 번째로, 상기 리간드가 또한 관심 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 효소 활성의 기질로서 작용하는 경우, 효소적 반응 생성물을 측정할 수 있다(예를 들어, 프로테아제의 양을, 예를 들어 웨스턴 블럿 상의 절단된 기질의 양을 측정함으로써 측정할 수 있다). 한편으로, 상기 리간드는 효소 성질 자체를 나타낼 수 있으며, 각각 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 의해 결합된 "리간드/펩타이드 또는 폴리펩타이드" 복합체 또는 리간드를 강도 신호의 생성에 의해 검출을 허용하는 적합한 기질과 접촉시킬 수 있다. 효소적 반응 생성물의 측정을 위해서, 상기 기질의 양을 포화시킬 수 있다. 상기 기질을 상기 반응에 앞서 검출 가능한 표지로 또한 표지할 수 있다. 예를 들어, 상기 시료를 적합한 기간 동안 상기 기질과 접촉시킨다. 적합한 기간은 검출 가능한, 및 일부 실시태양에서 측정 가능한 양의 생성물을 생성시키는데 필요한 시간을 지칭한다. 상기 생성물의 양을 측정하는 대신에, 주어진(예를 들어, 검출 가능한) 양의 생성물의 출현에 필요한 시간을 측정할 수 있다. 세 번째로, 상기 리간드를 리간드의 검출 및 측정을 허용하는 표지에 공유 또는 비-공유 커플링시킬 수 있다. 표지화는 직접적인 또는 간접적인 방법에 의해 수행될 수 있다. 직접적인 표지화는 상기 리간드에 대한 상기 표지의 직접적인(공유 또는 비-공유) 커플링을 수반한다. 간접적인 표지화는 2차 리간드의 1차 리간드에의 결합(공유 또는 비-공유)을 수반한다. 상기 2차 리간드는 상기 1차 리간드에 특이적으로 결합해야 한다. 상기 2차 리간드를 적합한 표지 및/또는 상기 2차 리간드에 결합하는 3차 리간드의 표적(수용체)과 커플링시킬 수 있다. 상기 2차, 3차 또는 훨씬 더 고차 리간드의 사용을 또한 상기 신호를 증가시키는데 사용한다. 적합한 2차 및 보다 고차의 다른 리간드는 항체, 2차 항체, 및 주지된 스트렙트아비딘-비오틴 시스템(벡터 레보라토리즈 인코포레이티드(Vector Laboratories, Inc.))을 포함할 수 있다.First, the binding of the ligand can be measured directly, for example by NMR or surface plasmon resonance. Second, if the ligand also serves as a substrate for the enzyme activity of the peptide or polypeptide of interest, the enzymatic reaction product can be determined (e.g., by measuring the amount of protease, for example, Can be measured by measuring the amount of substrate). On the one hand, the ligand may represent the enzyme property itself and may be contacted with a suitable " ligand / peptide or polypeptide "complex or ligand conjugated by the peptide or polypeptide, respectively, . For the measurement of the enzymatic reaction product, the amount of the substrate can be saturated. The substrate can also be labeled with a detectable label prior to the reaction. For example, the sample is contacted with the substrate for a suitable period of time. Suitable terms refer to the time necessary to produce a detectable, and measurable amount of product in some embodiments. Instead of measuring the amount of the product, the time required for the appearance of a given (e.g., detectable) amount of product can be determined. Third, the ligand can be covalently or non-covalently coupled to a label that allows detection and measurement of the ligand. The labeling can be performed by a direct or indirect method. Direct labeling involves direct (covalent or non-covalent) coupling of the label to the ligand. Indirect labeling involves binding (sharing or non-sharing) of the second ligand to the first ligand. The secondary ligand should specifically bind to the primary ligand. The secondary ligand can be coupled to a suitable label and / or to a target (receptor) of a tertiary ligand that binds to the secondary ligand. The use of the secondary, tertiary or even higher order ligands is also used to increase the signal. Suitable secondary and higher order other ligands can include antibodies, secondary antibodies, and the well-known streptavidin-biotin system (Vector Laboratories, Inc.).

상기 리간드 또는 기질을 또한 당해 분야에 공지된 바와 같은 하나 이상의 태그로 "태깅(tagging)"할 수 있다. 이때 상기와 같은 태그는 보다 고차 리간드에 대한 표적일 수 있다. 적합한 태그는 비오틴, 디곡시제닌, His-태그, 글루타치온-S-트랜스퍼라제, FLAG, GFP, myc-태그, A형 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA), 말토스 결합 단백질 등을 포함한다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 경우에, 상기 태그는 N-말단 및/또는 C-말단에 있을 수 있다. 적합한 표지는 적합한 검출 방법에 의해 검출 가능한 임의의 표지이다. 전형적인 표지는 금 입자, 라텍스 비드, 아크리단 에스터, 루미놀, 루테늄, 효소 활성 표지, 방사성 표지, 자기 표지(예를 들어, "자기 비드", 상자성 및 초상자성 표지 포함), 및 형광 표지를 포함한다. 효소 활성 표지는, 예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 루시페라제 및 이들의 유도체를 포함한다. 검출에 적합한 기질은 디아미노-벤지딘(DAB), 3,3'-5,5'-테트라메틸벤지딘, NBT-BCIP(4-니트로 블루 테트라졸륨 클로라이드 및 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트, 로슈 다이아그노스틱스로부터의 기성품 모액으로서 입수할 수 있다), CDP-Star(상표)(애머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences)), ECF(상표)(애머샴 바이오사이언시즈)를 포함한다. 적합한 효소-기질 조합은 형광 또는 화학발광성의 착색된 반응 생성물을 생성시킬 수 있으며, 이를 당해 분야에 공지된 방법에 따라(예를 들어, 감광성 필름 또는 적합한 카메라 시스템을 사용하여) 측정할 수 있다. 상기 효소 반응의 측정에 관하여, 상기 제공된 기준을 유사하게 적용한다. 전형적인 형광 표지는 형광 단백질(예를 들어, GFP 및 그의 유도체), Cy3, Cy5, 텍사스 레드, 플루오레세인 및 알렉사 염료(예를 들어, 알렉사 568)를 포함한다. 추가의 형광 표지를, 예를 들어 몰레큘러 프로브스(Molecular Probes)(미국 오리건주 소재)로부터 입수할 수 있다. 또한 형광 표지로서 양자점의 사용이 고려된다. 전형적인 방사성 표지는 ³⁵S, ¹²⁵I, ³²P, ³³P 등을 포함한다. 방사성 표지를 공지되고 적합한 임의의 방법, 예를 들어 감광성 필름 또는 인광 영상 장치에 의해 검출할 수 있다. 본 명세에 따른 적합한 측정 방법은 또한 침전(특히 면역침전), 전기화학발광(전기-생성된 화학발광), RIA(방사성면역분석), ELISA(효소-결합된 면역흡수 분석), 샌드위치 효소 면역 시험, 전기화학발광 샌드위치 면역분석(ECLIA), 해리-증대된 란타나이드 플루오로 면역 분석(DELFIA), 섬광 근접 분석(SPA), 비탁법, 혼탁법, 라텍스-증대된 비탁법 또는 혼탁법, 또는 고상 면역 시험을 포함한다. 당해 분야에 공지된 추가적인 방법들(예를 들어, 젤 전기영동, 2D 젤 전기영동, SDS 폴리아크릴아미드 젤 전기영동(SDS-PAGE), 웨스턴 블럿팅 및 질량 분광분석법)을 단독으로 또는 상술한 바와 같은 표지화 또는 다른 검출 방법과 함께 사용할 수 있다.The ligand or substrate may also be "tagged" with one or more tags as is known in the art. Where such tags may be targets for higher order ligands. Suitable tags include biotin, digoxigenin, His-tag, glutathione-S-transferase, FLAG, GFP, myc-tag, influenza virus hemagglutinin type A (HA), maltose binding protein and the like. In the case of peptides or polypeptides, the tag may be at the N-terminus and / or the C-terminus. A suitable label is any label detectable by a suitable detection method. Typical labels include gold particles, latex beads, acridan esters, luminol, ruthenium, enzymatic activity labels, radioactive labels, magnetic labels (including "magnetic beads", paramagnetic and superparamagnetic labels) do. Enzyme activity labels include, for example, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, beta-galactosidase, luciferase and derivatives thereof. Substrates suitable for detection include, but are not limited to, diamino-benzidine (DAB), 3,3'-5,5'-tetramethylbenzidine, NBT-BCIP (4-nitroblotetrazolium chloride and 5- (Commercially available as a ready-made stock solution from Roche Diagnostics), CDP-Star (Amersham Biosciences), ECF (trademark) (Amersham Biosciences) . Suitable enzyme-substrate combinations can produce fluorescent or chemiluminescent colored reaction products, which can be measured according to methods known in the art (e.g., using a photosensitive film or suitable camera system). Regarding the measurement of the enzyme reaction, the provided criteria are applied similarly. Typical fluorescent labels include fluorescent proteins (e.g., GFP and derivatives thereof), Cy3, Cy5, Texas red, fluorescein and Alexa dyes (e.g., Alexa 568). Additional fluorescent labels may be obtained, for example, from Molecular Probes (Oregon, USA). The use of quantum dots as fluorescent labels is also considered. Typical radioactive labels include ³⁵ S, ¹²⁵ I, ³² P, ³³ P, and the like. The radioactive label can be detected by any known and suitable method, for example a photosensitive film or a phosphorescent imaging device. Appropriate measurement methods according to the present specification can also be used to determine the extent of precipitation (especially immunoprecipitation), electrochemiluminescence (electro-chemiluminescence), RIA (radioimmunoassay), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), sandwich enzyme immunoassay , Electrochemiluminescent sandwich immunoassay (ECLIA), dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay (DELFIA), scintillation proximity assay (SPA), turbidimetry, turbidimetry, latex-enhanced turbidimetry or turbidimetry, Includes immune tests. Additional methods known in the art (e.g., gel electrophoresis, 2D gel electrophoresis, SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), Western blotting and mass spectrometry) Can be used with the same labeling or other detection methods.

본 명세의 실시태양들에 따라, 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양을 하기와 같이 검출할 수 있다: (a) 상기 명시된 바와 같은 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 리간드를 포함하는 고체 지지체를 상기 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 포함하는 시료와 접촉시키고, (b) 상기 지지체에 결합된 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 양을 측정한다. 상기 리간드를 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 및 앱타머로 이루어지는 군 중에서 선택할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 리간드는 고체 지지체상에 고정화된 형태로 존재한다. 고체 지지체의 제조 방법은 당해 분야에 주지되어 있으며, 특히 상업적으로 입수할 수 있는 컬럼 물질, 폴리스타이렌 비드, 라텍스 비드, 자기 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 나이트로셀룰로스 스트립, 멤브레인, 시드, 듀라사이트, 반응 트레이의 웰 및 벽, 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 상기 리간드 또는 작용제를 다수의 상이한 담체들에 결합시킬 수 있다. 주지된 담체의 예는 유리, 폴리스타이렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로스, 천연 및 변형된 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스 및 마그네타이트를 포함한다. 상기 담체의 성질은 본 명세의 목적을 위해 용해성이거나 불용성일 수 있다. 상기 리간드의 고정/고정화에 적합한 방법은 주지되어 있으며, 비제한적으로 이온, 소수성, 공유적 상호작용 등을 포함한다. 또한 본 명세에 따른 배열로서 "현탁 배열"을 사용하는 것이 고려된다(문헌[Nolan 2003, Trends Biotechnol. 20(1):9-12]). 상기와 같은 현탁 배열에서, 담체, 예를 들어 미세비드 또는 미소구가 현탁액 중에 존재한다. 상기 배열은, 가능하게는 표지된, 상이한 리간드를 운반하는 상이한 미세비드 또는 미소구로 이루어진다. 상기와 같은 배열, 예를 들어 고상 화학 및 광-불안정성 보호기를 기본으로 하는 배열의 생성 방법은 일반적으로 공지되어 있다(미국특허 제 5,744,305 호).According to embodiments of the present disclosure, the amount of peptide or polypeptide can be detected as follows: (a) contacting a solid support comprising a peptide or polypeptide ligand as specified above with the peptide or polypeptide (B) measuring the amount of the peptide or polypeptide bound to the support. The ligand can be selected from the group consisting of nucleic acids, peptides, polypeptides, antibodies and aptamers. In some embodiments, the ligand is in an immobilized form on a solid support. Methods of making solid supports are well known in the art and include, among others, commercially available column materials, polystyrene beads, latex beads, magnetic beads, colloidal metal particles, glass and / or silicon chips and surfaces, Membranes, seeds, dulcites, wells and walls of reaction trays, plastic tubes, and the like. The ligand or agent can be bound to a number of different carriers. Examples of well-known carriers include glass, polystyrene, polyvinyl chloride, polypropylene, polyethylene, polycarbonate, dextran, nylon, amylose, natural and modified celluloses, polyacrylamides, agaroses and magnetite. The nature of the carrier may be either soluble or insoluble for the purposes of this specification. Suitable methods for immobilizing / immobilizing the ligand are well known and include, but are not limited to, ionic, hydrophobic, covalent interactions, and the like. It is also contemplated to use a "suspension arrangement" as an arrangement according to the present specification (Nolan 2003, Trends Biotechnol. 20 (1): 9-12). In such a suspension arrangement, a carrier, for example a microbead or microsphere, is present in the suspension. The arrangement consists of different fine beads or microspheres, possibly carrying different ligands, labeled. Methods for producing such arrangements, such as those based on solid state chemistry and photo-labile protecting groups, are generally known (U.S. Patent No. 5,744,305).

참조량:Reference volume:

참조량을 표준 통계학적 방법을 적용함으로써 주어진 생물마커에 대한 평균 값을 기준으로 피실험자(즉, CHD를 갖는 것으로 공지된 피실험자)의 코호트에 대해 계산할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 참조를 다변량 비례 위험(콕스) 회귀 분석(문헌[Cox DR. Regression models and life tables. J R Stat Soc (B). 1972; 34(series B):187-220])을 사용하여 CHD를 앓고 있는 피실험자들의 코호트에서 측정한다. 상기 유형의 분석에 유용한 기법 및 분석들은 실시예 및 상기 문헌 중의 참조 도면에 기재되어 있다.The reference amount can be calculated for the cohort of the subject (i. E., A subject known to have CHD) based on the mean value for a given biomarker by applying a standard statistical method. In one embodiment, the reference is subjected to a multivariate proportional hazard (Cox) regression analysis (Cox DR. Regression models and life tables. JR Stat Soc (B). 1972; 34 (series B): 187-220) Using a cohort of subjects suffering from CHD. Techniques and analyzes useful for this type of analysis are described in the Examples and in the reference figures in the literature.

표 2는 실시예 1에 따라 획득된 데이터를 근거로 계산된 평균 및 중간값을 제공한다.Table 2 provides the calculated mean and median values based on the data obtained according to Example 1. < tb > < TABLE >

생물마커 hsCRP, 호모시스테인, NT-proBNP: 평균, 중간값, 사분범위(IQR), 단위;Biomarkers hsCRP, homocysteine, NT-proBNP: mean, median, quartile (IQR), units; 생물마커Biomarker 위약Placebo 단위unit 평균 +/- SDAverage +/- SD 중간 [IQR]Medium [IQR] NN hsCRPhsCRP 3.64 +/- 8.683.64 +/- 8.68 1.51 [0.81-3.61]1.51 [0.81-3.61] 75017501 ㎎/lMg / l 호모시스테인Homocysteine 13.33 +/- 5.6113.33 +/- 5.61 12.16 [9.99-14.98]12.16 [9.99-14.98] 20622062 μmol/lμmol / l NT-proBNPNT-proBNP 573 +/- 1329573 +/- 1329 263 [122-595]263 [122-595] 20722072 pg/㎖pg / ml 환자들의 코호트에서 측정된 생물마커에 대한 중간값들을 또한 참조 수준의 확립을 위한 기준으로서 사용할 수 있다.Median values for biomarkers measured in patient cohorts can also be used as a reference for establishing reference levels.

몇몇 실시태양에서, 본 명세서의 "참조 수준"이란 용어는 소정의 수준을 지칭한다. 이와 관련하여 "수준"은 절대량, 상대량 또는 농도뿐만 아니라 이들과 상관 있거나 이들로부터 유도될 수 있는 임의의 값 또는 매개변수를 포함한다. 숙련가가 인식하는 바와 같이, 상기 참조 수준은 미리 측정되며, 예를 들어 특이성 및/또는 감도에 관하여 통상적인 요건을 충족하도록 설정된다. 상기 요건은, 예를 들어 규제기관마다 변할 수 있다. 상기 요건은, 예를 들어 분석 감도 또는 특이성이 각각 일정한 수준, 예를 들어 각각 80%, 90%, 95% 또는 98%로 설정되어야 하는 것일 수 있다. 상기 요건은 또한 양성 또는 음성 예측값에 대해서 한정될 수도 있다. 그럼에도 불구하고, 본 발명에 제공된 교시를 근거로, 숙련가는 항상 상기 요건을 총족시키는 참조 수준에 도달할 수 있을 것이다. 하나의 실시태양에서, 상기 참조 수준을 건강한 개인으로부터의 참조 시료 중에서 측정한다. 상기 참조 수준은 하나의 실시태양에서 환자가 속하는 질병 존재로부터의 참조 시료 중에서 미리 측정되었다. 몇몇 실시태양에서, 상기 참조 수준을, 예를 들어 조사되는 질병 존재 중의 값들의 전체 분포의 25% 내지 75%의 임의의 비율로 설정할 수 있다. 다른 실시태양에서, 상기 참조 수준을, 예를 들어 조사되는 질병 존재로부터의 참조 시료 중의 값들의 전체 분포로부터 측정된 바와 같은 중간값, 삼분위수 또는 사분위수로 설정할 수 있다. 특히, 상기 참조 수준은 CRP의 경우 1.51 ㎎/L, 호모시스테인의 경우 12.16 μmol/L, NT-proBNP의 경우 263 pg/㎖이다.In some embodiments, the term "reference level" herein refers to a predetermined level. In this regard, "level" includes absolute values, relative amounts, or concentrations, as well as any value or parameter that can be correlated with or derived from them. As will be appreciated by the skilled artisan, the reference level is pre-determined and set to meet typical requirements, e.g., with respect to specificity and / or sensitivity. The above requirements may vary, for example, from regulatory agency to regulatory agency. The requirement may be, for example, that the analytical sensitivity or specificity should be set to a certain level, for example 80%, 90%, 95% or 98%, respectively. The requirement may also be defined for positive or negative predictive values. Nevertheless, based on the teachings provided in the present invention, the skilled artisan will always be able to reach a reference level that meets the above requirements. In one embodiment, the reference level is measured in a reference sample from a healthy individual. The reference level was pre-determined in a reference sample from a disease presence in which the patient belongs in one embodiment. In some embodiments, the reference level can be set at any rate, for example, 25% to 75% of the total distribution of values in the disease presence being examined. In another embodiment, the reference level can be set to a median, a ternary or quartile, as measured, for example, from the overall distribution of values in the reference sample from the disease being examined. In particular, the reference level is 1.51 mg / L for CRP, 12.16 μmol / L for homocysteine, and 263 pg / ml for NT-proBNP.

하나의 실시태양에서, 상기 참조 수준을 조사된 질병 존재 중의 값들의 전체 분포로부터 측정된 중간값으로 설정한다. 상기 참조 수준은 다양한 생리학적 매개변수들, 예를 들어 연령, 성별 또는 부분 모집단뿐만 아니라 본 명세서에서 지칭되는 생물마커 Y의 측정에 사용되는 평균에 따라 변할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 참조 시료는 본 발명의 방법이 수행되는 개인 또는 환자로부터의 시료와 필수적으로 동일한 유형의 세포, 조직, 기관 또는 체액 공급원으로부터 유래된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 혈액을 개인 중 생물마커 Y의 수준을 측정하기 위한 시료로서 사용하는 경우, 상기 참조 수준을 또한 혈액 또는 그의 일부에서 측정한다.In one embodiment, the reference level is set to a median measured from the overall distribution of values in the examined disease presence. The reference level may vary depending on a variety of physiological parameters, such as the age, gender or subpopulation as well as the mean used in the measurement of the biomarker Y referred to herein. In one embodiment, the reference sample is derived from a cell, tissue, organ or body fluid source of essentially the same type as the individual or sample from which the method of the present invention is performed. For example, when blood is used as a sample for measuring the level of a biomarker Y in an individual according to the present invention, the reference level is also measured in blood or a portion thereof.

몇몇 실시태양에서, "바로 그 참조 수준"이란 용어는 참조 수준과 필수적으로 동일한 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커의 수준 또는 상기 참조 수준과 1% 이하, 2% 이하, 3% 이하, 4% 이하, 5% 이하까지 상이한 수준을 지칭한다.In some embodiments, the term "immediate reference level" refers to a level of a biomarker in a sample from an individual or patient that is essentially the same as the reference level, or less than 1%, 2%, 3% Or less, and up to 5%.

몇몇 실시태양에서, "참조 수준 초과"란 용어는 참조 수준 위의 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커의 수준, 또는 참조 수준에 비해, 본 명세서에 기재된 방법에 의해 측정된 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 이상의 전체적인 증가를 지칭한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 "증가"란 용어는 상기 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커 수준의 증가를 지칭하며, 여기에서 상기 증가는, 예를 들어 참조 시료로부터 미리 측정된 참조 수준에 비해 적어도 약 1.5-, 1.75-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 15-, 20-, 25-, 30-, 40-, 50-, 60-, 70-, 75-, 80-, 90-, 또는 100-배 더 높다.In some embodiments, the term "exceeded reference level" refers to the level of a biomarker in a sample from an individual or patient over a reference level, or a 5%, 10% Refers to an overall increase of at least 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% In some embodiments, the term "increase" refers to an increase in the level of a biomarker in a sample from the individual or patient, wherein the increase is at least about 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 15-, 20-, 25-, 30-, 40-, 50-, , 60-, 70-, 75-, 80-, 90-, or 100-fold higher.

몇몇 실시태양에서, 본 명세서에서 "감소" 또는 "이하"란 용어는 참조 수준 이하의 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커의 수준, 또는 참조 수준에 비해, 본 명세서에 기재된 방법에 의해 측정된 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 전체적인 감소를 지칭한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 용어는 상기 개인 또는 환자로부터의 시료 중의 생물마커 수준의 감소를 지칭하며, 여기에서 상기 감소된 수준은, 예를 들어 참조 시료로부터 미리 측정된 참조 수준의 기껏해야 약 0.9-, 0.8-, 0.7-, 0.6-, 0.5-, 0.4-, 0.3-, 0.2-, 0.1-, 0.05- 또는 0.01-배 또는 그 이하이다.In some embodiments, the term "reduced" or "below, " as used herein, refers to the level of a biomarker in a sample from an individual or patient below the reference level, %, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% Refers to overall reduction. In some embodiments, the term refers to a decrease in the level of a biomarker in a sample from the individual or patient, wherein the reduced level is, for example, at least about 0.9- , 0.8-, 0.7-, 0.6-, 0.5-, 0.4-, 0.3-, 0.2-, 0.1-, 0.05- or 0.01- fold or less.

다른 실시태양에서, 본 발명은 표 3에 나타낸 바와 같이 2차 예방 시험의 시료 크기의 감소를 허용할 수 있다.In another embodiment, the invention may allow a reduction in the sample size of the secondary prevention test, as shown in Table 3.

2차 예방 시험의 시료 크기 감소Decrease sample size of secondary prevention study 상대적인 시료 크기 감소
위약 평가Relative sample size reduction
Placebo evaluation dalO상에서 절대 시료 크기 감소(농축하의 시료 크기/농축 부재하의 시료 크기)
위약 평가Absolute sample size reduction on dalO (sample size under concentration / sample size under concentration)
Placebo evaluation 최소 생물마커
(3 마커)Minimal biomarker
(3 markers) 45.70%45.70% 7254 (8618/15872)7254 (8618/15872) 프레이밍햄(Framingham)Framingham 27.90%27.90% 4431 (11441/15872)4431 (11441/15872) 레이놀즈(Reynolds)Reynolds 24.40%24.40% 3866 (12006/15872)3866 (12006/15872)

하기의 실시예는 단지 본 발명의 실시를 예시하고자 할 뿐이며 제한으로서 제공되지 않는다.The following examples are intended to illustrate the practice of the invention only and are not to be construed as limiting.

실시예Example 1 One

Dal-OUTCOMES 시험(NC20971)은 최근에 급성 관상동맥 증후군(ACS)으로 입원한 환자에서 CETP 억제제 달세트라핍의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 이중 맹검, 무작위, 위약-대조용, 병행 군, 다기관, III기 연구였다. 중간 분석시에 상기 연구는 2개의 치료 부문: 위약(7933명 환자) 및 달세트라핍(매일 600 ㎎; 7938명 환자)에 걸쳐 분배된, 15871명의 무작위 환자를 포함하였다. 상기 연구는 위약 부문에 비해 달세트라핍 부문에서 1차 효능 종점에서 사건 발생률의 감소에 대한 증거를 나타내지 않았다. 상기 dal-OUTCOMES 연구의 상세한 내용을 문헌[G. Schwartz et al., N. Engl. J. Med.367;22, 2012]에서 찾을 수 있다.The Dal-OUTCOMES trial (NC20971) is a double-blind, randomized, placebo-controlled, concurrent, multicenter, and multivariate study designed to assess the safety and efficacy of the CETP inhibitor dalcitabine in patients admitted with acute coronary syndrome (ACS) III study. At the time of the interim analysis, the study included 15871 randomized patients divided into 2 treatment groups: placebo (7933 patients) and monthly cirapip (600 mg daily; 7938 patients). The study did not show evidence of a decrease in incident incidence at the primary efficacy endpoint in the lunar cortex region relative to placebo. The details of the dal-OUTCOMES study can be found in G. Schwartz et al., N. Engl. J. Med.367; 22, 2012].

시료 수집Sample collection

밤새 금식 후에, 혈액을 SST 튜브에 수집하고, 5회 서서히 뒤집어 혼합한 다음 30분 동안 시료를 응고되게 하였다. 이어서, 수집 1시간 이내에 1500 내지 2000 g(약 4000 내지 5000 rpm)에서 15분 동안 원심분리시켰다. 혈청을 플레인 캡 전달 튜브내로 옮기고 즉시 동결시켰다.After overnight fasting, the blood was collected in SST tubes, mixed 5 times with gentle inversion, and allowed to solidify for 30 minutes. Then, it was centrifuged at 1500 to 2000 g (about 4000 to 5000 rpm) for 15 minutes within one hour of collection. Serum was transferred into a plain cap delivery tube and immediately frozen.

환자 시료를, 환자의 후속 심혈관 사건을 겪을 가능성의 증가의 지정을 돕는 다수 생물마커의 유용성을 평가하기 위해 분석하였다.Patient samples were analyzed to assess the utility of multiple biomarkers to aid in the designation of an increased likelihood of suffering a subsequent cardiovascular event in the patient.

각 환자로부터 수득한 시료를 각 생물마커의 수준을 측정하기 위해 면역분석에 의해 분석하였다. 면역분석을 Elecsys(등록상표) proBNP 플랫폼(Elecsys 20.10 면역분석기)을 사용하여 샌드위치 분석 포맷으로 또는 NT-proBNP에 대해 실행하였다.The samples obtained from each patient were analyzed by immunoassay to determine the level of each biomarker. Immunoassays were performed in sandwich assay format or on NT-proBNP using the Elecsys (TM) proBNP platform (Elecsys 20.10 immunoassay).

각 생물마커에 대해 사용된 분석들은 하기와 같다:The assays used for each biomarker are:

NT-proBNP - 로슈 면역분석(Elecsys(등록상표))NT-proBNP - Roche immunoassay (Elecsys (R))

고감도 CRP - 로슈 임상 화학 분석; COBAS(등록상표) 상에서 고도로 민감한 심장 C-반응성 단백질(라텍스)High sensitivity CRP - Roche clinical chemistry analysis; Highly sensitive cardiac C-reactive protein (latex) on COBAS (R)

호모시스테인 - 로슈 임상 화학 분석 COBAS(등록상표) 상에서 로슈 호모시스테인 효소 분석.Homocysteine-Roche Clinical Chemical Analysis Roche homocysteine enzyme analysis on COBAS (registered trademark).

호모시스테인의 농도, "총 호모시스테인"을 제조사의 프로토콜에 따라 상업적인 분석 키트를 사용하여 혈청 시료에서 측정하였다.The concentration of homocysteine, "total homocysteine" was measured in serum samples using a commercial assay kit according to the manufacturer's protocol.

CRP(고감도 CRP)의 농도를 제조사의 프로토콜에 따라 상업적인 효소-결합된 면역흡수 분석 키트를 사용하여 혈청 시료에서 중복 측정하였다. 혈장 시료를 X배 희석하였다. 정량분석의 하한을 측정하고 X ng/㎖로 설정하였다.Concentrations of CRP (High Sensitivity CRP) were measured in duplicate in serum samples using a commercial enzyme-linked immunoabsorption assay kit according to the manufacturer's protocol. Plasma samples were diluted X-fold. The lower limit of quantitative analysis was measured and set to X ng / ml.

NP-proBNP(카탈로그 번호 04842464190, 로슈 다이아그노스틱스, 독일 만하임 소재)를 제조사의 설명에 따라 상업적인 CE 인증 시험 키트를 사용하여 혈청에서 측정하였다.NP-proBNP (Cat. No. 04842464190, Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) was measured in serum using a commercial CE certification test kit according to the manufacturer's instructions.

하기의 특징들이 평가되었다:The following features were evaluated:

동적 농도 범위; 정량분석의 하한 및 상한; 기질 효과; 정밀도; 정확성; 안정성; 선택성 및 특이성; 희석 평행; 및 간섭제.Dynamic concentration range; Lower and upper limits of quantitative analysis; Substrate effect; Precision; accuracy; stability; Selectivity and specificity; Dilution parallelism; And an interference agent.

시료 크기Sample Size

생물마커 측정을 시간 및 비용이 효율적일 수 있도록 환자들의 선택된 부분집합상에서 수행하였다. 입수 가능한 기준선 혈청 시료를 갖는 환자의 단지 약 7%만이 사건을 겪는 것을 고려하면, 코호트내 환자 대조군(Nested Case-Control)(NCC) 디자인을 적용함으로써 거의 완전한 검증력을 유지하면서 분석된 시료의 수를 대단히 감소시키는 것이 가능하였다. 상기 NCC 디자인은 1차 복합 종점(PCE) 사건 또는 심혈관(CV) 질환 원인 사망 및 입수 가능한 혈청 시료를 갖는 환자들을 모두 포함하였다. 각각의 상기 선택된 사건에 대해서 각각의 사건 시에 하나의 사건을 겪을 위험이 여전한 대조용 환자와 합치하는 환자를 무작위로 선택한다. 상기 1차 분석 모집단의 경우 대조용 대 사건의 4:1 합치가 수행되었다.Biomarker measurements were performed on selected subsets of patients to be time- and cost-effective. Considering that only about 7% of patients with available baseline serum samples are experiencing the event, applying the Nested Case-Control (NCC) design allows the number of samples analyzed It was possible to greatly reduce it. The NCC design included both patients with primary end-of-care (PCE) events or cardiovascular (CV) disease deaths and patients with available serum samples. For each of the selected events, randomly chooses the patient to coincide with the control patient who is still at risk of experiencing one event at each event. In the case of the first analysis population, a 4: 1 congruence of control vs. event was performed.

시료 크기 계산은 양분되는 설명 변수를 갖는 단변량 비례 위험 회귀에서 득점 검증과 동등한 로그-순위 검정에 근거하였다. 분석은 전체 ITT 모집단을 포함하지 않고 상기 선택된 NCC 디자인에 의해 선택된 부분집합을 포함하였기 때문에, 검증력이 상기 전체 모집단에 비해 감소하였다. 상기 4:1 합치에서 사례 검증력은 완전한 ITT 모집단에 대한 검증력의 약 80%였다. 모든 보고된 검증력 숫자를 상기 NCC 디자인으로 인한 상대적인 검증력 감소에 의해 보정하였다.Sample size calculations were based on a log-rank test equivalent to score validation in a univariate proportional hazards regression with two explanatory variables. Since the analysis did not include the entire ITT population and included a subset selected by the selected NCC design, the verification power was reduced compared to the total population. In this 4: 1 congruence, the case validation power was about 80% of the verification power for the complete ITT population. All reported verified power numbers were corrected by the relative verification power reduction due to the NCC design.

상기 위약 군에서, 476명에서 PCR 사건이 관찰되었다. 상기 선택된 4:1 합치의 경우 상기는 25%의 위험 감소를 검출하는 70% 검증력을 제공하였고 19%의 위험 감소를 검출하는 50% 검증력을 제공하였다. 숫자는 5%의 양측 I형 오류를 지칭한다.In the placebo group, PCR events were observed in 476 patients. In the case of the selected 4: 1 congruency, it provided 70% verification power to detect a 25% risk reduction and 50% verification power to detect a 19% risk reduction. The number refers to both side I-type errors of 5%.

통계학적 분석Statistical analysis

분석 모집단Analysis Population

결과는 3기 임상 시험 NC20971의 제2 중간 분석에 근거하였다. 중간 분석시에 상기 연구는 2개의 치료 부문: 위약(7934명 환자) 및 달세트라핍(매일 600 ㎎; 7938명 환자)에 걸쳐 분배된, 15872명의 무작위 환자를 포함하였다. 상기 연구는 위약 부문에 비해 달세트라핍 부문에서 1차 효능 종점에서 사건 발생률의 감소에 대한 어떠한 증거도 나타내지 않았다.The results were based on the second interim analysis of phase 3 clinical trial NC20971. At the time of the interim analysis, the study included 15872 randomized patients divided into 2 treatment groups: placebo (7934 patients) and lunar crisis (600 mg daily; 7938 patients). The study did not show any evidence of a decrease in incident incidence at the primary efficacy endpoint in the lunar cortex than in the placebo sector.

연구자 주도 모집단(Researcher-led population ( ITTITT ))

연구의 분석력에 영향을 미치는 사기성 데이터를 갖는 것으로서 확인되었거나 환자들을 치료하고자 하는 어떠한 의도도 없이 조사자에 의해 잘못 무작위 분류된 환자들을 제외하고, 무작위 분류된 모든 환자들을 연구자 주도 모집단에 포함시켰다.All randomized patients were included in the researcher-led population, with the exception of patients who were identified as having fraudulent data affecting the analytical power of the study or who were incorrectly randomized by the investigator without any intention to treat the patients.

상기 ITT 모집단은 15871명의 환자를 포함하였다(1135명은 PCE 사건을 겪었고 1101명은 DMS 사건(CHD 사망, 치명적이지 않은 MI 또는 뇌졸중 사건)을 겪었다). 모든 추가로 선택된 분석 모집단들은 상기 ITT 모집단에 근거하였다.The ITT population included 15871 patients (1135 underwent a PCE event and 1101 underwent a DMS event (CHD death, non-fatal MI or stroke). All further selected analysis populations were based on the ITT population.

자동 분석 모집단Automatic analysis population

PCE 사건 또는 CV 사망 및 입수 가능한 기준선 혈청 시료 및 상응하는 대조군을 갖는 ITT 모집단으로부터의 모든 환자를 상기 4:1 코호트내 환자 대조군 합치에 의해 선택하였다. 환자-대조군 합치를 대체와 함께 무작위 시료화에 의해 수행하였기 때문에 시료들이 상이한 위험 설정들에 대해서 1회 초과하여 선택되는 듯하다. 따라서, 일부 환자 시료는 분석 데이터 세트 중에 수회 나열되나 단지 1회만 측정된다.PCE event or CV death and all patients from the ITT population with baseline serum samples available and corresponding controls were selected by the patient control in the 4: 1 cohort. It appears that the samples were selected more than once for different risk settings because patient-control congruence was performed by random sampling with replacement. Thus, some patient samples are listed multiple times in the analytical data set, but only once.

상기 2개의 분석 종점에 상응하게 본 발명자들은 2개의 상이한 모집단을 한정하였다:Corresponding to the two analytical endpoints we have defined two different populations:

· 자동 분석 PCE 모집단 - 모든 측정된 PCE 사건 및 합치하는 대조군을 함유한다.· Automatic analysis PCE population - contains all measured PCE events and matching controls.

· 자동 분석 DMS 모집단 - 모든 측정된 DMS 사건 및 합치하는 대조군을 함유한다.· Automatic analysis DMS population - contains all measured DMS events and matching controls.

기준선 혈청 시료를 961 PCE 및 851 DMS 사건으로부터 입수할 수 있었다. 자동 분석에 사용된 4:1 합치에 의해 상기 자동 분석 PCE 모집단에서 총 4805명의 환자(중복 없이 4112명) 및 상기 자동 분석 DMS 모집단에서 4255명의 환자(중복 없이 3712명)가 도출되었다. 상기 자동 분석 PCE 모집단이 1차 분석 모집단이었다.Baseline serum samples were available from 961 PCE and 851 DMS cases. A total of 4805 patients (4112 without duplication) and 4255 patients (3712 without duplication) in the automated analysis DMS population were derived from the automated analysis PCE population by 4: 1 conformation used for automated analysis. The automated analysis PCE population was the first analysis population.

생물마커Biomarker 데이터의 전처리 Data preprocessing

절삭Cutting 값의 처리 Processing Values

생물마커 측정을 파일 포맷 명세서(FFS) 서류에 명시된 포맷으로 제공하였다. 데이터 파일은 실제 시료 측정 및 측정 단위(예를 들어, ng/㎖)에 대한 정보를 함유하였다. 상기 측정 범위 아래의 값을 "<Y"로서 기록하였다(이때, Y는 하한이다). 상기 측정 범위 위의 값을 ">X"로서 기록하였다(이때, X는 상한이다). Biomarker measurements were provided in the format specified in the File Format Specification (FFS) document. The data file contained information on actual sample measurements and measurement units (e.g., ng / ml). The value below the measurement range was recorded as "<Y" (where Y is the lower limit). The value above the measurement range was recorded as "> X" (where X is the upper limit).

상기 측정 데이터를 하기와 같이 전처리하였다:The measurement data were pre-treated as follows:

1. "<Y" 기입을 Y/2로 대체하였다1. Replace "<Y" entry with Y / 2

2. ">X" 기입을 X로 대체하였다.2. Replace the "> X" entry with X.

70% 초과의 절삭 값을 갖는 생물마커는 상기 분석에서 제외하였다.Biomarkers with cuts greater than 70% were excluded from the analysis.

결측치의 처리Treatment of missing values

20% 초과의 결측치를 갖는 생물마커를 상기 분석으로부터 제외하였다. 회귀 분석을 위해서 나머지 결측치를 데이터 행렬 중의 각 생물마커의 중간값으로 대체하였다.Biomarkers with greater than 20% missing values were excluded from the analysis. For the regression analysis, the remaining missing values were replaced by the median values of each biomarker in the data matrix.

변환 및 변화 계산Conversion and change calculation

모든 생물마커 측정을 log2 변환시켰다. 농도 변화의 분석을 위해서 기준선과 3개월째 방문간의 상대적인 log2 변화를 log2(V3/BL)로서 계산하였다.All biomarker measurements were log2 transformed. For the analysis of the concentration change, the relative log2 change between baseline and visit at 3 months was calculated as log2 (V3 / BL).

특징 감소Feature reduction

상기 연구에서 평가된 생물마커의 세트는 동일한 분석물을 평가하였거나 다른 분석물(예를 들어, LDL-c 및 sdLDL)의 부-성분들을 평가하는 다수의 분석들을 함유하였다. 이들 생물마커 쌍 중 다수는 매우 높은 상관성을 나타내고, 이는 통계적 검증력을 감소시키며 예측 모델의 평가 및 특징 선택에 문제를 일으킬 수도 있을 것으로 예상되었다.The set of biomarkers evaluated in the study included a number of assays that evaluated the same analyte or sub-components of other assays (e.g., LDL-c and sdLDL). Many of these pairs of biomarkers exhibit very high correlation, which may reduce statistical validity and cause problems in the evaluation and characterization of predictive models.

유사성 척도로서 스피어맨 상관 계수를 사용하여 계층적 군집화에 의해 생물마커 후보의 매우 상관된 군을 식별하였다. 매우 상관된 단백질의 군집이 식별되었으면, 상기 군집을 1차 분석을 위한 하나의 단일 변수로 감소시켰다. 감소는, 상기 군집의 하나의 전형적인 생물마커를, 선호(예를 들어, 분석학적 분석 수행능 또는 생물학적 추론)를 근거로 또는 모든 다른 군집 구성원까지의 최소 거리를 근거로 선택함으로써 성취되었다.A highly correlated group of biomarker candidates was identified by hierarchical clustering using Spearman correlation coefficients as a similarity measure. If a cluster of highly correlated proteins were identified, the population was reduced to one single variable for the first analysis. The reduction was achieved by selecting one typical biomarker of the population based on a preference (e.g., analytical performance capability or biological reasoning) or a minimum distance to all other population members.

생물마커Biomarker 및 처리 군 동등성의 분석 And treatment group equivalence

인구통계학Demography

요약 통계를 하기의 인구통계학 및 기준선 특징: 성별, 연령, 인종, 민족성, 지리적인 지역, 체중, 신장 및 체질량 지수(BMI)에 대해서 완전한 연구 ITT, 자동 분석 PCE, 및 수동 분석 PCE 모집단 내의 2개의 처리 군 모두에 대해서 나타낸다.Demographics and baseline characteristics of the summary: Complete study of sex, age, race, ethnicity, geographical area, weight, height and body mass index (BMI) ITT, automated analysis PCE, and manual analysis Two Treatment group.

기준선 질병 특징Baseline disease features

요약 통계를 하기의 기준선 질병 특징: 고혈압, 당뇨병, 대사 증후군, 선행 MI/UA 및 지리학적 기원에 대해서 완전한 연구 ITT, 자동 분석 PCE, 및 수동 분석 PCE 모집단 내의 2개의 처리 군 모두에 대해서 나타낸다.Summary statistics for baseline disease features: Complete study of hypertension, diabetes mellitus, metabolic syndrome, preceding MI / UA, and geographic origin. ITT, automated analysis PCE, and manual analysis.

결측Missing 데이터 data

회귀 분석을 위해서 연속적인 기준선 특징의 결측치 및 생물마커 값을 데이터 행렬 중의 각각의 변수의 중간값으로 대체하였다. 범주적 기준선 변수들의 경우 가장 빈번한 범주가 대체되었다.For regression analysis, we replaced the missing values of consecutive baseline features and biomarker values with the median of each variable in the data matrix. In the case of categorical baseline variables, the most frequent category was replaced.

종점 결측치 대체는, 모든 사용된 통계학적 방법들이 검열된 데이터를 처리할 수 있으므로 필요하지 않았다.The endpoint missing value replacement was not necessary because all the used statistical methods could process the censored data.

예측 정확성의 척도A measure of predictive accuracy

절대 척도Absolute scale

본 발명자들은 장래 심혈관 사건의 위험을 예측하기 위한 모델의 정확성을 평가하기 위해서 하기 모델 적합성의 척도를 사용하였다.We used the following model fit measures to assess the accuracy of the model to predict the risk of future cardiovascular events.

일치 지수Coincident index

일치 지수 C를 하기와 같이 정의하였다:The coincidence index C was defined as:

C = Pr[Z_i>Z_j│D_i = 1,t_i<t_j]C = Pr [Z _i > Z _{j |} D _i = 1, t _i <t _j ]

상기에서, Z_i는 예측 모델 위험 점수이고, t_i는 생존 시간이고, D_i는 i번째 환자에 대한 사건의 관찰에 대한 지시 변수이다(문헌[Pencina, M. J. (2008)., Statistics in Medicine, 27(2), pp. 157-172], 문헌[Chambless, L. E. et al. (2011). Statistics in Medicine , 30(1), pp. 22-38]).In the above, Z _i is the predictive model risk score, t _i is the survival time, and D _i is the indicator variable for observation of events for the ith patient (Pencina, MJ (2008)., Statistics in Medicine , 27 (2), pp. 157-172, Chambless, LE et al. (2011). Statistics in & Lt ; / RTI > Medicine , 30 (1), pp. 22-38).

상기 C 지수는 모델 예측 및 관찰된 결과가 일치하는 모든 환자 쌍의 비율에 대한 비-모수 평가자이다.The C index is a non-parametric estimator of the proportion of all patient pairs for which the model predictions and the observed results are consistent.

시간 의존적인 Time-dependent AUCAUC

사건 데이터에 대한 시간의 분석에서, 감도, 특이성 및 ROC 곡선하 면적(AUC)의 고전적인 진단 척도는 시간의 함수가 된다. 주어진 시점에서 사건을 겪을 위험이 있는 환자들의 주어진 세트에 대해서, 상기 척도는 주어진 위험 점수 또는 생물마커 및 컷오프 값을 근거로 긴급한 사례와 근일 대조군간의 식별을 정량분석한다.In the analysis of time for event data, the classic diagnostic measure of sensitivity, specificity and area under the ROC curve (AUC) is a function of time. For a given set of patients at risk of experiencing an event at a given time point, the scale quantifies the discrimination between the urgent case and the nearest control group based on a given risk score or biomarker and cutoff value.

상기 시간 의존적인 AUC를 하기와 같이 정의하였다:The time-dependent AUC was defined as:

AUC(t) = Pr[Z_i>Z_j│D_i = 1, t_i=t, t_i<t_j]AUC (t) = Pr [Z _i > Z _{j |} D _i = 1, t _i = t, t _i <t _j ]

상기에서, Z_i는 예측 모델 위험 점수이고, t는 관심 시점이고, t_i는 생존 시간이고, D_i는 i번째 환자에 대한 사건의 관찰에 대한 지시 변수이다(문헌[Saha-Chaudhuri, P. et al.(2012). Non-parametric estimation of a time-dependent predictive accuracy curve. Biostatistics.]). AUC(t)는 모델 예측 및 관찰된 결과가 한정된 관심 시간틀내에서 일치하는 환자 쌍의 비율에 대한 비모수 평가자이다.In the above, Z _i is the predictive model risk score, t is the time of interest, t _i is the survival time, and D _i is the indicator variable for observation of events for the i th patient (Saha-Chaudhuri, P. et al. (2012). Non -parametric estimation of a time-dependent predictive accuracy curve. Biostatistics.]). AUC (t) is a nonparametric estimator of the proportion of patient pairs matched within the time window of interest for which the model predictions and observed results are limited.

모델 비교를 위한 상대적인 척도Relative measure for model comparison

본 발명자들은 예측 정확성에 관하여 2개 모델의 비교를 위해 하기 척도를 사용하였다:The present inventors used the following scale for comparison of the two models with respect to prediction accuracy:

일치 지수의 차이Difference in coincident index

2개 모델의 C 지수간의 차이는 모델 예측 정확성의 개선을 위한 비모수 척도이다.The difference between the C indexes of the two models is a nonparametric measure to improve the accuracy of the model predictions.

시간 의존적인 Time-dependent AUCAUC 값의 차이 Difference in value

2개 모델의 ACU(t)간의 차이는 주어진 시점에서 모델 예측 정확성의 개선을 위한 비모수 척도이다.The difference between the ACU (t) of the two models is a nonparametric measure for improving the accuracy of the model prediction at a given point in time.

편차값Deviation value

편차값은 우도 비에 근거한 2개의 내재적 모수 모델의 적합성을 비교한다. 편차값을 하기와 같이 정의하였다:The deviation values compare the suitability of the two inherent parameter models based on the likelihood ratio. The deviation values were defined as follows:

상기에서, y는 관찰된 데이터이고,

및

는 각각 기준선 및 전체 모델의 평가된 모수들이다. 상기 편차값은 직접적으로 모델 우도에 근거하기 때문에, 상기 값은 모델 적합에 사용되는 최적화 기준에 직접 관련된다. 상기 값은 모델 보정에 의존하고 어떠한 임상적 해석도 갖지 않는다는 단점이 있다.In the above, y is the observed data,

And

Are the estimated parameters of the baseline and the overall model, respectively. Since the deviation value is directly based on model likelihood, the value is directly related to the optimization criterion used for model fit. This value has the disadvantage that it relies on model correction and does not have any clinical interpretation.

예후적Prognostic 생물마커Biomarker 발견 discovery

상기 예후적 생물마커 발견의 목적은 환자에 대한 위험 예측을 현저하게 개선시키는 생물마커 세트의 식별이었다. 식별된 생물마커는 충분히 확립된 위험 마커(예를 들어, HDL, LDL) 및 다른 예후 인자(예를 들어, 당뇨병 또는 흡연)에 대한 추가적인 정보를 더해야 한다.The purpose of this prognostic biomarker discovery was to identify sets of biomarkers that significantly improved risk prediction for patients. The identified biomarkers should be supplemented with additional information about well-established risk markers (eg, HDL, LDL) and other prognostic factors (eg, diabetes or smoking).

1차 분석Primary analysis

1차 분석을 1차 복합 종점상에서 수행하였다. 상기 분석 데이터 세트는 PCE 위험 세트에 대해 선택된 모든 환자들을 함유하였다. 상기 1차 분석은 위험 세트에 의해 계층화되지 않았다; 각각의 선택된 환자는 상기 분석에 단지 1회 참가하였다. 계층화된 분석을 본 명세서에 기재된 바와 같은 1차 분석의 잠재적인 치우침을 점검하기 위해서 감도 분석으로서 최종 선택 모델에 대해 수행하였다.The primary analysis was performed on the primary composite endpoint. The analysis data set contained all patients selected for the PCE risk set. The primary analysis was not layered by the risk set; Each selected patient participated only once in the analysis. The layered analysis was performed on the final selection model as a sensitivity analysis to check for potential bias in the primary analysis as described herein.

상기 분석에 대한 잠재적인 설명 변수는 표 8 및 9에 나열된 실험 및 자동 분석 생물마커의 기준선 농도 및 인구통계학적 변수뿐만 아니라 기준선에서의 건강 상태 및 임상 기록과 관련된 임상 변수였다.Potential descriptive variables for this analysis were the baseline concentrations and demographic variables of the experimental and automated analysis biomarkers listed in Tables 8 and 9, as well as clinical parameters related to baseline health status and clinical records.

상기 1차 분석을 본 명세서에 정의된 바와 같은 자동 분석 PCE 모집단의 위약 군 상에서 수행하였다. 상기 분석 모집단은 치유 치료 시나리오의 표준을 나타내기 위해서 상기 위약 군으로 제한되었다.The primary analysis was performed on a placebo group of automated analysis PCE populations as defined herein. The analysis population was restricted to the placebo group to indicate the standard of healing treatment scenarios.

상기 1차 분석은 최적의 예후 모델의 선택 및 상기 선택된 모델의 위험 예측 수행성능의 측정을 포함하였다. 이를 상기 위약 군에 대한 내재적 교차-확인 분석에 의해 수행하였다(최적 모델 복잡성의 측정을 위한 내부 교차-확인, 위험 예측 수행성능의 측정을 위한 외부 교차-확인). 또한, 본 발명자들은 상기 치료 군에 대한 모델의 위험 예측 수행성능을 측정하였다. 달세트라핍의 완전한 무효력을 가정하는 경우, 상기는 독립적인 환자 코호트에 대한 위험 예측 수행성능 평가를 제공할 것이다.The primary analysis included selection of the optimal prognostic model and measurement of the performance of the selected model in performing the predictive risk. This was done by an implicit cross-validation analysis for the placebo group (internal cross-validation for measuring optimal model complexity, external cross-validation for measuring performance of risk prediction performance). We also measured the risk prediction performance of the model for the treatment group. Assuming the complete ineffectiveness of the moon caterpillar, this will provide a risk prediction performance assessment for an independent patient cohort.

모델 선택Select model

사건까지의 시간을 계층화되지 않은 콕스 비례 위험 모델로 모델화하였다. 변수 선택을 콕스 회귀에 대한 경로 순환적 좌표 하강 방법(문헌[Simon, N. et al. (2011). Journal of Statistical Software, 39(5), pp. 1-13])을 사용하여, LASSO 방법(문헌[Tibshirani, R. et al. (1996). J. Royal . Statist . Soc B., 1, pp. 267-288])에 의해 수행하였다.Time to event was modeled as a non-stratified Cox proportional hazard model. Variable selection is performed by a path cyclic descent method for Cox regression (Simon, N. et al. (2011). Journal of Statistical Software , 39 (5), pp. 1-13]) using, it was carried out by the LASSO method (literature [Tibshirani, R. et al. ( 1996). J. Royal. Statist. Soc B., 1, pp. 267-288]).

새로운 생물마커에 의해 전달된 추가적인 정보의 값을 평가하기 위해서 2개의 모델을 선택할 필요가 있었다. 첫 번째 모델은 모든 비-생물마커 변수 및 충분히 확립된 CV 위험 생물마커 중에서 선택되었다. 두 번째 모델은 상기 첫 번째 모델에 기반하였으나 새로운 생물마커 후보들로 연장되었다. 상기 첫 번째 모델을 "참조 모델"이라 칭하고 상기 두 번째 모델을 "생물마커 모델"이라 칭하였다. 상기 참조 모델을 먼저 생성시키고 상기 참조 모델에 기반하여 상기 생물마커 모델을 형성시켰다. 상기 생물마커 모델은 상기 참조 모델에 의해 선택된 모든 변수를 포함하였다.It was necessary to select two models to evaluate the value of the additional information delivered by the new biomarker. The first model was selected from all non-biomarker parameters and well-established CV risk biomarkers. The second model was based on the first model but extended to new biomarker candidates. The first model is referred to as a "reference model " and the second model is referred to as a " biomarker model ". The reference model was first generated and the biomarker model was formed based on the reference model. The biomarker model included all variables selected by the reference model.

X₁, ..., X_n은 모든 비-생물마커 및 확립된 CV 위험 생물마커 변수를 나타내며 Z₁, ..., Z_m은 모든 새로운 생물마커 변수를 나타낸다. A는 LASSO에 의해 선택된 모든 비-생물마커 및 확립된 CV 위험 생물마커 변수의 크기 k의 지수 세트를 나타낸다. 따라서, A를 하기와 같이 정의하였고:X ₁ , ..., X _n represent all non-biomarkers and established CV risk biomarker variables, and Z ₁ , ..., Z _m represent all new biomarker variables. A represents an exponential set of size k of all non-biomarkers and established CV risk biomarker variables selected by LASSO. Thus, A was defined as:

A = {i│X_i는 예후 모델에 대해 선택된다},A = { _{i |} X _i is chosen for the prognostic model},

따라서, X_A1, ..., X_Ak는 모든 선택된 비-생물마커 및 확립된 CV 위험 생물마커 변수였다.Thus, X _A1 , ..., X _Ak were all selected non-biomarkers and established CV risk biomarker variables.

이때, 상기 참조 모델은 하기와 같다:At this time, the reference model is as follows:

Y = X_A1 + ... + X_Ak.Y = X _A1 + ... + X _Ak .

이어서, 상기 참조 모델에 기반하여 상기 LASSO 과정을 두 번째 단계에서 상기 모델에 포함시키기 위한 추가적인 변수인 새로운 생물마커 후보 Z₁, ..., Z_m 중에서 선택할 수 있었다. B는 상기 참조 모델 외에 LASSO에 의해 선택된 모든 새로운 생물마커 후보 변수의 크기 p의 지수 세트를 나타낸다:Then, based on the reference model, the LASSO procedure can be selected from the new biomarker candidates Z ₁ , ..., Z _{m, which} are additional variables for inclusion in the model in the second step. B represents an exponential set of size p of all new biomarker candidate variables selected by LASSO in addition to the reference model:

B = {i│Z_i는 예후 모델에 포함된 예후적 생물마커이다}.B = { _{i |} Z _i is the prognostic biomarker included in the prognosis model}.

이때, X_A1, ..., X_Ak 및 Z_B1, ..., Z_Bp의 합은 상기 예후적 생물마커 모델을 구성한다:At this time, the sum of X _A1 , ..., X _Ak and Z _B1 , ..., Z _Bp constitutes the prognostic biomarker model:

Y = X_A1+ ... + X_Ak + Z_B1 + ... + Z _Bp.Y = X _A1 + ... + X _Ak + _ZB1 + ... + Z _Bp .

상기 LASSO 과정에서, 상기 모델의 복잡성(선택된 특징들의 수)은 벌칙 모수 람다에 의해 조절된다. 큰 람다(고 벌칙)는 소수의 변수를 포함시키고 작은 람다(저 벌칙)는 보다 많은 변수를 포함시켰다. 최적의 람다 선택을 위해서, 10배 교차-확인을 사용하였다. 이는 상기 데이터 세트를 10개(균등한 크기)의 부분(9개는 학습에 사용되었고 10번째는 검증에 사용되었다)으로 분할하였음을 의미한다. 이어서, 상기 학습/검증 세트 할당을 달리 바꿔 배열하였으며, 따라서 상기 10개 부분은 각각 상기 학습 세트에 9회 속하고 검증 세트에 1회 속한다. 각각의 검증 세트상에서 각각의 람다에 대한 결과가 예측되었으며 이를 실제 결과와 비교하였다. 모델 예측의 질을 c-지수에 의해 각각의 람다에 대해 평가하고 저장하였다. 상기 기재된 k-배 교차-확인 과정을 무작위로 정렬된 시료 세트상에서 5회 반복하였다. 각각의 람다에 대한 예측의 질을 상기 교차-확인 결과의 중간값에 의해 요약하였다(10*5 = 검증 세트상의 50 c-지수). 최대의 상응하는 중간값을 갖는 람다를 선택하였으며 이를 λ_opt라 칭하였다. 상기 "최소 손실" λ_opt는 종종 덜 복잡한 모델에 대한 유의수준이거나 임상적으로 의미있는 개선을 나타내지 않는 복잡한 모델을 도출해내기 때문에, 추가적인 보정 단계를 포함시켰다. 본 발명자들은 c-지수의 유의수준의 개선을 λ_opt에서 관찰된 교차-확인 c-지수의 하나의 표준 편차로서 정의하였다. 본 발명자들은 c-지수의 임상적으로 의미있는 개선을 0.0025(증가된 일치를 나타내는 환자 쌍의 0.25%에 상응한다)의 델타로서 정의하였다. 상기 숫자는 HDL(ΔC=0.013-0.023) 또는 흡연(ΔC=0.006-0.024)과 같은 확립된 위험 인자들의 공개된 c-지수로부터 유도되었다(문헌[Chambless, L. E. et al. (2011). Statistics in Medicine, 30(1), pp. 22-38]).In the LASSO process, the complexity of the model (the number of selected features) is adjusted by the penalty parameter lambda. The large lambda (high penalty) contains a small number of variables and the small lambda (low penalty) contains more variables. For optimal lambda selection, 10x cross-validation was used. This means that the data set is divided into 10 parts (equal size) (9 used for learning and 10 used for verification). Then, the learning / verification set assignments are alternately arranged, so that each of the 10 parts belongs to the learning set 9 times and belongs once to the verification set. The results for each lambda on each verification set were predicted and compared with the actual results. The quality of the model predictions was evaluated and stored for each lambda by the c-index. The k-fold cross-validation procedure described above was repeated 5 times on a randomly aligned sample set. The quality of the prediction for each lambda was summarized by the median of the cross-validation results (10 * 5 = 50 c-exponent on the verification set). The lambda with the largest corresponding median value was chosen and called λ _opt . Since the "minimum loss" [lambda] _opt often yields a complex model that does not represent a significant level or clinically meaningful improvement for a less complex model, an additional correction step was included. We defined an improvement in significance level of the c-index as one standard deviation of the cross-validation c-index observed in? _Opt . We defined the clinically significant improvement of the c-index as a delta of 0.0025 (corresponding to 0.25% of the patient pairs exhibiting increased agreement). The figure was derived from the published c- index of the established risk factors, such as HDL (ΔC = 0.013-0.023) or smoking (ΔC = 0.006-0.024) (literature [Chambless, LE et al. ( 2011). Statistics in Medicine, 30 (1), pp. 22-38).

상기 선택된 람다는 하기와 같았다:The selected lambda was as follows:

λ_sel = max(λ | 중간값(c-지수[λ]) >= 중간값(c-지수 [λ_opt]) - max(sd(c-지수 [λ_opt]), 0.0025))λ _sel = max (λ | intermediate value (c-index (c-index [? _opt ]), max (sd (c-index [? _opt ]), 0.0025)

이는 본 발명자들이 상기 수행성능(c-지수의 중간값)이 더 크거나 동등한 최대 람다(최소 모델)를 상기 λ_opt 모델의 수행성능 - 그의 표준 편차로서 간주하였음을 의미한다. 상기 표준 편차가 0.0025 미만인 경우 0.0025를 공제하였다. 상기 표준 편차 sd(c - 지수 [λ_opt])를 상기 교차-확인 실행으로부터 추정하였다.This means that the present inventors regarded the maximum lambda (minimum model) that is greater or equal to the performance (the median of the c-index) as the standard deviation of the performance of the λ _opt model - its standard deviation. If the standard deviation is less than 0.0025, 0.0025 is deducted. The standard deviation sd (c - exponent [? _Opt ]) was estimated from the cross-validation run.

최종 모델을 람다 λ_sel와 함께 LASSO를 사용하여 선택하였다. 최종 모델의 회귀 계수를 벌칙 없는 콕스 회귀에 의해 추정하였다.The final model was selected using LASSO with lambda [lambda] _sel . The regression coefficient of the final model was estimated by Cox regression without penalty.

먼저 상기 참조 모델을 상기 기재된 LASSO 과정에 따라 형성시켰다. 이어서, 상기 생물마커 모델을 동일한 LASSO 과정을 사용하여 형성시켜 추가적인 생물마커를 더하였다. 두 번째 LASSO 단계에서 유일한 차이는, 상기 참조 모델에서 선택된 변수들의 모든 계수가 벌칙이 없으며, 따라서 상기 계수가 상기 람다를 무시하는 모델에 항상 포함된다는 것이다.First, the reference model was formed according to the LASSO procedure described above. The biomarker model was then formed using the same LASSO procedure to add additional biomarkers. The only difference in the second LASSO step is that all coefficients of the variables selected in the reference model are non-punitive, and thus the coefficients are always included in the model ignoring the lambda.

이어서, 상기 2개 모델을 환자 반응을 예측하는 그들의 능력에 대해서 비교하였다.The two models were then compared for their ability to predict patient response.

일반화 수행성능Generalization performance

모델 선택을 상기 모델의 평가와 동일한 데이터 세트상에서 수행하였기 때문에 모델 적합성에 관한 2개 모델의 비교는 보다 복잡한 모델을 선호할 것이다. 따라서, 외부 교차-확인 단계가 필요하였다.Because model selection was performed on the same data set as the evaluation of the model, a comparison of the two models on model fit would favor a more complex model. Therefore, an external cross-validation step was required.

이는 상기 데이터가 상술한 "내부" 교차-확인 단계에 들어가기 전에 데이터를 외부 검증과 학습 세트로 분할하였음을 의미한다. 상기 학습 세트는 사례의 80%를 포함하였다. 상기 학습 세트에 포함된 사례는 무작위로 선택되었다(몬테 카를로 교차-확인). 상기 검증 세트는 모든 선택되지 않은 사례들을 포함하였다. 이어서, "모델 선택"에 기재된 접근법을 외부 학습 세트에 적용시켰다. 그 결과, 본 발명자들은 2개의 모델, 참조 모델 및 생물마커 모델을 수용하였다. 이들 2개 모델에 기반하여 상기 반응 변수에 대한 예측을 상기 검증 세트 및 각 모델에 대해 계산된 c-지수상에서 수행하였다. 상기 참조 모델과 생물마커 모델간의 예측 질의 차이를 c-지수의 절대 차이에 의해 평가하였다.This means that the data has been partitioned into external verification and learning sets before entering the "internal" cross-validation step described above. The learning set included 80% of the cases. The cases included in the learning set were randomly selected (Monte Carlo cross-validation). The verification set included all unselected cases. Then, the approach described in "Model Selection" was applied to the external learning set. As a result, the present inventors accepted two models, a reference model and a biomarker model. Based on these two models, a prediction for the response variable was performed on the validation set and the calculated c-exponent for each model. The difference in the prediction quality between the reference model and the bio-marker model was evaluated by the absolute difference of the c-index.

c-지수_Diff = c-지수_Biom - c-지수_Ref.c-Index _Diff = c-Index _Biom -c-Index _Ref .

외부 교차-확인 단계를 적어도 100회 반복하였다.The external cross-validation step was repeated at least 100 times.

모든 교차-확인 실행으로부터의 c-지수_Diff의 중간값은 새로운 생물마커의 포함에 의해 개선된 모델 수행성능에 대한 치우치지 않은 척도이다. 평균 모델 적합성 개선에 대한 신뢰도 구간을 상기 교차-확인 결과의 90% 시료 분위수로부터 추정한다. 상기 식별된 생물마커 패널의 사용은, 상기 계산된 교차-확인 신뢰도 구간의 하계가 0 이상인 경우 위험 평가의 유의수준의 개선을 생성시킨다.The median value of the c-exponential _Diff from all cross-validation runs is an unbiased measure of improved model performance performance by inclusion of new biomarkers. The confidence interval for the average model fit improvement is estimated from the 90% sample quotient of the cross-check results. The use of the identified biomarker panel results in an improvement in the significance level of the risk assessment when the summer of the calculated cross-validation confidence interval is greater than or equal to zero.

절대 위험의 계산을 위한 모델:Model for calculation of absolute risk:

상기 콕스 모델의 일반적인 형태는 h(t) = h0(t) * exp(b1 * X1 + b2 * X2 + ...)이며, 여기에서 b는 HR 값의 자연 로그와 같다. 본 발명자들의 모델에서 X1은 연령과 같고, X2는 맥박수와 같고, X3은 LDL과 같고, ...이다.The general form of the Cox model is h (t) = h0 (t) * exp (b1 * X1 + b2 * X2 + ...), where b is the natural logarithm of the HR value. In our model, X1 equals age, X2 equals pulse rate, X3 equals LDL, ....

연령의 HR은 1.004이고, 자연 로그는 0.004이며, 이를 표 4, 1열, 계수 컬럼에서 찾을 수 있다. 맥박수의 HR은 1.016이고, 자연 로그는 0.016이다(표 4, 2열, 계수 컬럼을 참조하시오).The HR of age is 1.004 and the natural logarithm is 0.004, which can be found in Table 4, column 1, and coefficient column. HR of the heart rate is 1.016, and the natural logarithm is 0.016 (see Table 4, column 2, coefficient column).

h0(t), 기준선 위험 비(기준선 HR)는 상기 위험 모델에 포함된 변수들로부터의 정보를 함유하지 않는 시간-의존적인 함수이다.h0 (t), baseline risk ratio (baseline HR) is a time-dependent function that does not contain information from the variables included in the risk model.

다변량 예후 모델(최소 Multivariate prognostic model (minimum 생물마커Biomarker 모델)의 요약 Model) 통계학. 분석statistics. analysis 모집단은 자동 분석 Population is automatically analyzed 모집단이다. It is a population. 관찰 수: 2080^2(489 사건 포함) C 지수: 0.7081.Number of observations: 2080 ^ 2 (including 489 cases) C index: 0.7081. 계수Coefficient exp(계수)exp (coefficient) se(coed)se (coed) z z Pr(>
│z│)Pr (>
│z│) 연령 age 0.0040.004 1.0041.004 0.0050.005 0.6890.689 0.4910.491 맥박수Pulse rate 0.0160.016 1.0161.016 0.0040.004 3.5813.581 0.0000.000 LDL 콜레스테롤LDL cholesterol 0.2850.285 1.3301.330 0.0990.099 2.8862.886 0.0040.004 당뇨병 = "예"Diabetes = "Yes" 0.1020.102 1.1071.107 0.1010.101 1.0001,000 0.3170.317 말초 혈관 질환 = 예Peripheral Vascular Disease = Yes 0.3610.361 1.4351.435 0.1260.126 2.8652.865 0.0040.004 울혈성 심부전 = 예Congestive heart failure = Yes 0.0280.028 1.0281.028 0.1130.113 0.2440.244 0.8070.807 선행 혈관재생술 = 예Pre-existing vascular regeneration = Yes 0.3280.328 1.3881.388 0.1360.136 2.4192.419 0.0160.016 지수 사건 전 관상동맥 심장병 = 예Index Pre-event Coronary heart disease = Yes 0.3170.317 1.3741.374 0.1870.187 1.6991.699 0.0890.089 선행 ACS = YESPreceding ACS = YES 0.2820.282 1.3261.326 0.1720.172 1.6421.642 0.1010.101 이뇨제 치료 = 예Diuretic therapy = Yes 0.2840.284 1.3291.329 0.1060.106 2.6692.669 0.0080.008 고감도 CRPHigh sensitivity CRP 0.0550.055 1.0561.056 0.0290.029 1.8581.858 0.0630.063 호모시스테인Homocysteine 0.2300.230 1.2591.259 0.0960.096 2.3892.389 0.0170.017 NT-proBNPNT-proBNP 0.1680.168 1.1831.183 0.0300.030 5.6815.681 0.0000.000

상기 예후 모델을 표 5에 예시한다.The prognostic model is illustrated in Table 5.

생물마커는 상기 모델에 연속 변수로서 기입된다. HR은 로그 단계당 제공되며, 이 경우 베이스 2이다. 호모시스테인(HR 1.259)의 경우에 이는 위험이 호모시스테인 수준의 배가당 각 로그 단계당 25.9%까지 증가함을 의미한다. NT-proBNB에 대한 각각의 수는 로그 단계(배가)당 18.3%이고 hsCRP의 경우 로그 단계(배가)당 5.6%이다.Biomarkers are written to the model as continuous variables. HR is provided per log phase, in this case Base 2. In the case of homocysteine (HR 1.259), this means that the risk increases by 25.9% per log phase per doubling of homocysteine levels. Each number for NT-proBNB is 18.3% per log phase (doubling) and 5.6% per log phase (doubling) for hsCRP.

이를 연령, 맥박수 및 LDL에 적용하는 반면, 당뇨병(HR1.107), 말초 혈관 질환(HR 1.435), 울혈성 심부전(HR 1.028), 선행 ACS(HR 1.326), 선행 혈관재생술(HR 1.388), 지수 사건 전 관상동맥 질환(HR 1.374) 및 이뇨제 치료(HR 1.329)의 존재는 위험을 10.7%, 43.5%, 2.8%, 32.6%, 38.8%, 37.4%, 및 32.9%까지 증가시킨다.(HR 1.107), peripheral vascular disease (HR 1.435), congestive heart failure (HR 1.028), prior ACS (HR 1.326), prior angioplasty (HR 1.388), index The presence of pre-event coronary artery disease (HR 1.374) and diuretic therapy (HR 1.329) increases risk by 10.7%, 43.5%, 2.8%, 32.6%, 38.8%, 37.4%, and 32.9%.

예후 모델Prognostic model 위험 인자Risk factor 최소 at least 생물마커Biomarker 모델 Model
HR (95% CI)HR (95% CI) 연령 - 세Age - three 1.004 (0.993 - 1.014)1.004 (0.993 - 1.014) 맥박수 - BPMPulse rate - BPM 1.016 (1.007 - 1.025)1.016 (1.007 - 1.025) LDL - log₂ ng/㎖LDL-log ₂ ng / ml 1.330 (1.096 - 1.615)1.330 (1.096 - 1.615) 당뇨병diabetes 1.107 (0.907 - 1.350)1.107 (0.907 - 1.350) 말초 혈관질환Peripheral vascular disease 1.435 (1.121 - 1.837)1.435 (1.121 - 1.837) 울혈성 심부전
(CHF 부류 I 또는 부류 II)Congestive heart failure
(CHF class I or class II) 1.028 (0.823 - 1.284)1.028 (0.823 - 1.284) 선행 급성 관상동맥 증후군 (MI 또는 불안정 협심증)Pre-existing acute coronary syndrome (MI or unstable angina) 1.326 (0.947 - 1.856)1.326 (0.947 - 1.856) 선행 혈관재생술 (PCI, CABG), 선행 뇌졸중 또는 TIAPreoperative angioplasty (PCI, CABG), prior stroke or TIA 1.388 (1.064 - 1.811)1.388 (1.064 - 1.811) IE 전 관상동맥 심장병IE pre-coronary heart disease 1.374 (0.952 1.981)1.374 (0.952, 1981) 이뇨제 치료Diuretic therapy 1.329 (1.078 - 1.637)1.329 (1.078 - 1.637) CRPCRP 1.056 (0.997 - 1.119)1.056 (0.997 - 1.119) 호모시스테인Homocysteine 1.259 (1.042 - 1.521)1.259 (1.042 - 1.521) ProBNPIIProBNPII 1.183 (1.116 - 1.254)1.183 (1.116-1.254)

예후 모델 수행성능Prognostic model performance 예후 모델Prognostic model 위약 (재치환)Placebo (replacement)
위약Placebo
(교차-확인)(Cross-check) C-지수C-index 로이스톤 DLois Tone D C-지수C-index 로이스톤 DLois Tone D 프레이밍햄Framingham 0.616
(0.593-0.638)0.616
(0.593-0.638) 1.91
(1.69-2.16)1.91
(1.69-2.16) -- -- 레이놀즈Reynolds 0.609
(0.587-0.631)0.609
(0.587-0.631) 1.88
(1.66-2.13)1.88
(1.66-2.13) -- -- 최소 생물마커
(3 마커: 호모시스테인, CRP, NT-proBNP)Minimal biomarker
(3 markers: homocysteine, CRP, NT-proBNP) 0.708
(0.682-0.734)0.708
(0.682-0.734) 3.53
(3.03-4.10)3.53
(3.03-4.10) 0.6970.697 3.263.26

상술한 방법에 따른 상기 기재된 모델의 교차-확인 결과The cross-validation result of the described model according to the method described above

확립된 대 신규 모델의 수행성능Performance of established versus new models C-지수C-index Δ C-지수 대 프레이밍햄Δ C-exponent versus framing ham 로이스톤 DLois Tone D NRI 대 프레이밍햄NRI vs. Framingham 프레이밍햄Framingham 0.6160.616 -------- 1.911.91 -------- 레이놀즈Reynolds 0.6090.609 - 0.007- 0.007 1.881.88 + 0.011+ 0.011 최소 생물마커Minimal biomarker 0.7080.708 + 0.092+ 0.092 3.533.53 + 0.337+ 0.337 로이스톤 D = 다변량 점수 중간값 컷오프에 대한 위험비의 어림
NRI = 순 재분류 향상값Lois tone D = Multivariate score Intermediate value Estimated risk ratio for cutoff
NRI = net reclassification enhancement value

예후 모델 비교Prognostic Model Comparison 예후 모델Prognostic model 부문sector 사건 범주Event category 위험 범주 (2년째에)Risk category (at year 2) NRINRI 대 참조 모델 (2년째에) Large Reference Model (2nd year) ≤3.6%&Lt; 3.6-7.7%3.6-7.7% >7.7%> 7.7% 프레이밍햄Framingham 위약Placebo 대조군Control group 20%
(166/824)20%
(166/824) 43%
(355/824)43%
(355/824) 37%
(303/824)37%
(303/824) -0.260-0.260 사례case 13%
(59/455)13%
(59/455) 34%
(153/455)34%
(153/455) 53%
(243/455)53%
(243/455) 레이놀즈Reynolds 위약Placebo 대조군Control group 16% (135/824)16% (135/824) 33%
(275/824)33%
(275/824) 43%
(353/824)43%
(353/824) -0.249-0.249 사례case 14%
(65/455)14%
(65/455) 28%
(129/455)28%
(129/455) 57% (261/455)57% (261/455) 최소 at least 생물마커Biomarker
(3 (3 마커Marker : 호모시스테인,: Homocysteine,
proBNPproBNP , CRP), CRP) 위약Placebo 대조군Control group 46%
(380/824)46%
(380/824) 32%
(267/824)32%
(267/824) 21%
(177/824)21%
(177/824) 0.0770.077 사례case 16%
(73/455)16%
(73/455) 30%
(135/455)30%
(135/455) 54%
(247/455)54%
(247/455)

[도식 1] 예후 모델 비교(MBS는 3 마커 모델: 호모시스테인, proBNP, CRP이다)[Scheme 1] Comparison of prognostic models (MBS is a 3-marker model: homocysteine, proBNP, CRP)

자동 Automatic 분석상에서On the analysis 측정된 Measured 생물마커. 확립된Biological markers. Established CVCV 위험 danger 마커Marker .. 번호number 마커Marker 공급자producer 0101 HDL-CHDL-C 로슈Roche 0202 LDL-CLDL-C 로슈Roche 0303 트라이글리세라이드Triglyceride 로슈Roche

자동 분석상에서 측정된 생물마커. 잠재적인 새로운 CV 위험 마커.Biomarkers measured on automated analysis. Potential new CV risk markers. 번호number 마커Marker 공급자producer 0101 시스타틴 CCystatin C 로슈Roche 0202 요산Uric acid 로슈Roche 0303 호모시스테인Homocysteine 다이아자임(Diazyme)Diazyme 0404 hsCRPhsCRP 로슈Roche 0505 총 콜레스테롤Total cholesterol 로슈Roche 0606 Apo-A1Apo-A1 로슈Roche 0707 ApoBApoB 로슈Roche 0808 Lp(a)Lp (a) 덴카(Denka)Denka 0909 PON-1 활성PON-1 activity 로슈 (R&D)Roche (R & D) 1010 나머지 입자Remaining particles 쿄와(Kyowa)Kyowa 1111 HDL-C3HDL-C3 쿄와Kyowa 1212 sdLDLsdLDL 덴카Denka 1313 HDL-C3HDL-C3 덴카Denka 1414 아디포넥틴Adiponectin 덴카Denka 1515 ApoA-IIApoA-II 카미야(Kamiya)Kamiya 1616 ApoC-IIIApoC-III 카미야Kamiya 1717 GDF-15GDF-15 로슈 (R&D)Roche (R & D) 1818 hsTnThsTnT 로슈Roche 1919 NTproBNP NTproBNP 로슈Roche 2020 IL-6IL-6 로슈Roche 2121 C-펩타이드C-peptide 로슈Roche 2222 인슐린insulin 로슈Roche

SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-la Roche AG <120> Biomarkers and Methods of Prediction <130> case 32368 <140> PCT/EP2015/074242 <141> 2015-10-20 <150> EP 14189840.3 <151> 2014-10-22 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asp Pro Gln Thr Ala Pro Ser Arg Ala Leu Leu Leu Leu Leu Phe 1 5 10 15 Leu His Leu Ala Phe Leu Gly Gly Arg Ser His Pro Leu Gly Ser Pro 20 25 30 Gly Ser Ala Ser Asp Leu Glu Thr Ser Gly Leu Gln Glu Gln Arg Asn 35 40 45 His Leu Gln Gly Lys Leu Ser Glu Leu Gln Val Glu Gln Thr Ser Leu 50 55 60 Glu Pro Leu Gln Glu Ser Pro Arg Pro Thr Gly Val Trp Lys Ser Arg 65 70 75 80 Glu Val Ala Thr Glu Gly Ile Arg Gly His Arg Lys Met Val Leu Tyr 85 90 95 Thr Leu Arg Ala Pro Arg Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys 100 105 110 Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ile Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys 115 120 125 Lys Val Leu Arg Arg His 130 <210> 2 <211> 224 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Lys Leu Leu Cys Phe Leu Val Leu Thr Ser Leu Ser His Ala 1 5 10 15 Phe Gly Gln Thr Asp Met Ser Arg Lys Ala Phe Val Phe Pro Lys Glu 20 25 30 Ser Asp Thr Ser Tyr Val Ser Leu Lys Ala Pro Leu Thr Lys Pro Leu 35 40 45 Lys Ala Phe Thr Val Cys Leu His Phe Tyr Thr Glu Leu Ser Ser Thr 50 55 60 Arg Gly Tyr Ser Ile Phe Ser Tyr Ala Thr Lys Arg Gln Asp Asn Glu 65 70 75 80 Ile Leu Ile Phe Trp Ser Lys Asp Ile Gly Tyr Ser Phe Thr Val Gly 85 90 95 Gly Ser Glu Ile Leu Phe Glu Val Pro Glu Val Thr Val Ala Pro Val 100 105 110 His Ile Cys Thr Ser Trp Glu Ser Ala Ser Gly Ile Val Glu Phe Trp 115 120 125 Val Asp Gly Lys Pro Arg Val Arg Lys Ser Leu Lys Lys Gly Tyr Thr 130 135 140 Val Gly Ala Glu Ala Ser Ile Ile Leu Gly Gln Glu Gln Asp Ser Phe 145 150 155 160 Gly Gly Asn Phe Glu Gly Ser Gln Ser Leu Val Gly Asp Ile Gly Asn 165 170 175 Val Asn Met Trp Asp Phe Val Leu Ser Pro Asp Glu Ile Asn Thr Ile 180 185 190 Tyr Leu Gly Gly Pro Phe Ser Pro Asn Val Leu Asn Trp Arg Ala Leu 195 200 205 Lys Tyr Glu Val Gln Gly Glu Val Phe Thr Lys Pro Gln Leu Trp Pro 210 215 220 SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-la Roche AG <120> Biomarkers and Methods of Prediction <130> case 32368 <140> PCT / EP2015 / 074242 <141> 2015-10-20 &Lt; 150 > EP 14189840.3 <151> 2014-10-22 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Asp Pro Gln Thr Ala Pro Ser Arg Ala Leu Leu Leu Leu Lehe Phe 1 5 10 15 Leu His Leu Ala Phe Leu Gly Gly Arg Ser His Pro Leu Gly Ser Pro 20 25 30 Gly Ser Ala Ser Asp Leu Glu Thr Ser Gly Leu Gln Glu Gln Arg Asn 35 40 45 His Leu Gln Gly Lys Leu Ser Glu Leu Gln Val Glu Gln Thr Ser Leu 50 55 60 Glu Pro Leu Gln Glu Ser Pro Arg Pro Thr Gly Val Trp Lys Ser Arg 65 70 75 80 Glu Val Ala Thr Glu Gly Ile Arg Gly His Arg Lys Met Val Leu Tyr 85 90 95 Thr Leu Arg Ala Pro Arg Ser Pro Lys Met Val Gln Gly Ser Gly Cys 100 105 110 Phe Gly Arg Lys Met Asp Arg Ser Ser Ser Ser Gly Leu Gly Cys 115 120 125 Lys Val Leu Arg Arg His 130 <210> 2 <211> 224 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Lys Leu Leu Cys Phe Leu Val Leu Thr Ser Leu Ser His Ala 1 5 10 15 Phe Gly Gln Thr Asp Met Ser Arg Lys Ala Phe Val Phe Pro Lys Glu 20 25 30 Ser Asp Thr Ser Tyr Val Ser Leu Lys Ala Pro Leu Thr Lys Pro Leu 35 40 45 Lys Ala Phe Thr Val Cys Leu His Phe Tyr Thr Glu Leu Ser Ser Thr 50 55 60 Arg Gly Tyr Ser Ile Phe Ser Tyr Ala Thr Lys Arg Gln Asp Asn Glu 65 70 75 80 Ile Leu Ile Phe Trp Ser Lys Asp Ile Gly Tyr Ser Phe Thr Val Gly 85 90 95 Gly Ser Glu Ile Leu Phe Glu Val Pro Glu Val Thr Val Ala Pro Val 100 105 110 His Ile Cys Thr Ser Trp Glu Ser Ala Ser Gly Ile Val Glu Phe Trp 115 120 125 Val Asp Gly Lys Pro Arg Val Val Lys Ser Leu Lys Lys Gly Tyr Thr 130 135 140 Val Gly Ala Glu Ala Ser Ile Ile Leu Gly Gln Glu Gln Asp Ser Phe 145 150 155 160 Gly Gly Asn Phe Gly Gly Ser Gln Ser Leu Val Gly Asp Ile Gly Asn 165 170 175 Val Asn Met Trp Asp Phe Val Leu Ser Pro Asp Glu Ile Asn Thr Ile 180 185 190 Tyr Leu Gly Gly Pro Phe Ser Pro Asn Val Leu Asn Trp Arg Ala Leu 195 200 205 Lys Tyr Glu Val Gln Gly Glu Val Phe Thr Lys Pro Gln Leu Trp Pro 210 215 220

Claims

안정 관상동맥 심장 질환(CHD), 특히 문서로 기록된 최근의 급성 관상동맥 증후군(ACS), 보다 특히 포스트 급성 관상동맥 증후군(ACS), 가장 특히 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법으로서,
a) 피실험자의 시료 중에서 프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단(NT-proBNP), 호모시스테인 및 C-반응성 단백질(CRP)의 양을 검출하는 단계;
b) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량과 비교하는 단계; 및
c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계
를 포함하는 방법.Subjects with stable coronary heart disease (CHD), particularly documented recent acute coronary syndrome (ACS), more particularly post-acute coronary syndrome (ACS), most particularly recent ACS, As a method of identifying another cardiovascular event, more particularly an increased risk of a second cardiovascular event,
a) detecting the amount of the N-terminal (NT-proBNP), homocysteine and C-reactive protein (CRP) of the pro-hormone brain sodium diuretic peptide in the sample of the subject;
b) comparing the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP to reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
c) when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP, the subject is treated with an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, &Lt; / RTI >
&Lt; / RTI >

제 1 항에 있어서,
심혈관 사건이 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색(MI), 허혈성 기원의 치명적이지 않은 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 입원, 관상동맥 혈관재생술 및 심정지 중에서 선택되는 방법.The method according to claim 1,
Wherein the cardiovascular event is selected from cardiovascular disease-related death, non-fatal myocardial infarction (MI), non-fatal stroke of ischemic origin, hospitalization due to unstable angina, coronary angioplasty and cardiac arrest.

제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
검출이 시험관내에서 시료를 검출제의 조합과 접촉시킴을 포함하고, 각각의 검출제가 생물마커 중 하나에 특이적인 결합 친화성을 갖는 방법.The method according to claim 2 or 3,
Wherein the detection comprises contacting the sample with a combination of detectors in vitro, wherein each detector agent has a binding affinity specific to one of the biomarkers.

제 3 항에 있어서,
검출제가 항체 또는 그의 단편인 방법.The method of claim 3,
Wherein the detection agent is an antibody or a fragment thereof.

제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
시료가 혈청 또는 혈액 시료인 방법.5. The method according to any one of claims 1 to 4,
Wherein the sample is a serum or blood sample.

제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 중간값보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법.6. The method according to any one of claims 1 to 5,
A method for identifying a subject as an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly a second cardiovascular event, when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than a median of the respective reference amounts.

제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 중간값보다 적은 경우, 후속 심혈관 사건의 위험이 낮은 것으로서 식별하는 방법.6. The method according to any one of claims 1 to 5,
The subject is identified as having a lower risk of a subsequent cardiovascular event if the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is less than the median of the respective reference amounts.

제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 제4 사분위수 범위에 있는 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법.7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Subjects were identified as having an increased risk of cardiovascular events, especially other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events, when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample were in the fourth quartile of the respective reference amounts How to.

제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 심혈관 질환을 치료하는 요법을 권장하는 단계를 추가로 포함하는 방법.7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Wherein the subject further includes a step of recommending therapy to treat a cardiovascular event, if the subject is identified as having an increased risk of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event.

제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 상기 피실험자에게 심혈관 질환을 치료하는 약제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Wherein the subject further comprises administering to the subject a medicament for treating a cardiovascular event if the subject is identified as having an increased risk of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event.

제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
요법이 조사 중인 신규 약물 요법을 포함하는 방법.11. The method according to claim 9 or 10,
A method wherein the therapy involves a new drug therapy under investigation.

a) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP에 특이적으로 결합하는 검출제의 조합을 포함하는 분석 유닛으로서, 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합한 분석 유닛; 및
b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛으로서, 상기 컴퓨터-실행 알고리즘이 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험 증가의 진단을 제공하는 평가 유닛
을 포함하는, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기에 적합한 장치.a) an assay unit comprising a combination of NT-proBNP, homocysteine and a detective that specifically binds to CRP, said assay unit comprising: an assay unit adapted to contact a sample from a subject with said detective in vitro; And
and b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for the database, the computer-implemented algorithm comprising: a computer-implemented algorithm for measuring the amount of biomarkers in a sample from the subject when the computer- Comparing the measured amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP to the corresponding reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP and comparing the amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP measured in the measuring step with corresponding NT-proBNP, homocysteine and CRP levels In cases where the CRP is greater than the reference amount, an evaluation unit that provides a diagnosis of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event,
10. Apparatus suitable for carrying out the method according to any of the claims 1 to 10,

제 11 항에 있어서,
데이터베이스가 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량을 추가로 포함하는 장치.12. The method of claim 11,
Wherein the database further comprises a reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP.

NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 검출제; 및
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기 위한 설명서
를 포함하는, 상기 방법을 수행하기에 적합한 키트.Detectors of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
Instructions for carrying out the method according to any one of claims 1 to 10
&Lt; / RTI > a kit suitable for carrying out the method.

제 14 항에 있어서,
NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 검출제의 조합을 추가로 포함하는 키트.15. The method of claim 14,
NT-proBNP, homocysteine, and a detectable agent of CRP.

피실험자를, 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 보다 특히 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법으로서,
a) 피실험자의 시료 중에서 프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단(NT-proBNP), 호모시스테인 및 C-반응성 단백질(CRP)의 양을 검출하는 단계;
b) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량과 비교하는 단계; 및
c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계
를 포함하는 방법.A method of identifying a subject as having an increased risk of suffering from a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, particularly a second cardiovascular event, following the acute coronary syndrome, more particularly the recent acute coronary syndrome,
a) detecting the amount of the N-terminal (NT-proBNP), homocysteine and C-reactive protein (CRP) of the pro-hormone brain sodium diuretic peptide in the sample of the subject;
b) comparing the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP to reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
c) when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP, the subject is treated with an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, &Lt; / RTI >
&Lt; / RTI >

안정 CHD, 특히 문서로 기록된 최근의 급성 관상동맥 증후군(ACS), 보다 특히 포스트 급성 관상동맥 증후군(ACS), 가장 특히 최근의 ACS를 앓고 있는 피실험자를, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법으로서,
a) 피실험자의 시료 중에서 프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단(NT-proBNP), 호모시스테인 및 C-반응성 단백질(CRP)의 양을 검출하는 단계;
b) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량과 비교하는 단계; 및
c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계
로 이루어지는 방법.Stable CHD, particularly documented recent acute coronary syndrome (ACS), more particularly post-acute coronary syndrome (ACS), most particularly recent ACS, is used to treat cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, As a method of identifying an increased risk of a second cardiovascular event,
a) detecting the amount of the N-terminal (NT-proBNP), homocysteine and C-reactive protein (CRP) of the pro-hormone brain sodium diuretic peptide in the sample of the subject;
b) comparing the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP to reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
c) when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP, the subject is treated with an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, &Lt; / RTI >
&Lt; / RTI >

제 17 항에 있어서,
심혈관 사건이 심혈관 질환 원인 사망, 치명적이지 않은 심근경색(MI), 허혈성 기원의 치명적이지 않은 뇌졸중, 불안정 협심증으로 인한 입원, 관상동맥 혈관재생술 및 심정지 중에서 선택되는 방법.18. The method of claim 17,
Wherein the cardiovascular event is selected from cardiovascular disease-related death, non-fatal myocardial infarction (MI), non-fatal stroke of ischemic origin, hospitalization due to unstable angina, coronary angioplasty and cardiac arrest.

제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
검출이 시험관내에서 시료를 검출제의 조합과 접촉시킴을 포함하고, 각각의 검출제가 생물마커 중 하나에 특이적인 결합 친화성을 갖는 방법.The method according to claim 17 or 18,
Wherein the detection comprises contacting the sample with a combination of detectors in vitro, wherein each detector agent has a binding affinity specific to one of the biomarkers.

제 19 항에 있어서,
검출제가 항체 또는 그의 단편인 방법.20. The method of claim 19,
Wherein the detection agent is an antibody or a fragment thereof.

제 17 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
시료가 혈청 또는 혈액 시료인 방법.21. The method according to any one of claims 17 to 20,
Wherein the sample is a serum or blood sample.

제 17 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 중간값보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법.22. The method according to any one of claims 17 to 21,
A method for identifying a subject as an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, more particularly a second cardiovascular event, when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than a median of the respective reference amounts.

제 17 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 중간값보다 적은 경우, 후속 심혈관 사건의 위험이 낮은 것으로서 식별하는 방법.22. The method according to any one of claims 17 to 21,
The subject is identified as having a lower risk of a subsequent cardiovascular event if the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is less than the median of the respective reference amounts.

제 17 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자를, 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 각각의 참조량의 제4 사분위수 범위에 있는 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법.23. The method according to any one of claims 17 to 22,
Subjects were identified as having an increased risk of cardiovascular events, especially other cardiovascular events, more particularly secondary cardiovascular events, when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample were in the fourth quartile of the respective reference amounts How to.

제 17 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 심혈관 질환을 치료하는 요법을 권장하는 단계를 추가로 포함하는 방법.23. The method according to any one of claims 17 to 22,
Wherein the subject further includes a step of recommending therapy to treat a cardiovascular event, if the subject is identified as having an increased risk of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event.

제 17 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
피실험자가 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별된 경우, 상기 피실험자에게 심혈관 질환을 치료하는 약제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.23. The method according to any one of claims 17 to 22,
Wherein the subject further comprises administering to the subject a medicament for treating a cardiovascular event if the subject is identified as having an increased risk of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event.

제 25 항 또는 제 26 항에 있어서,
요법이 조사 중인 신규 약물 요법을 포함하는 방법.27. The method of claim 25 or 26,
A method wherein the therapy involves a new drug therapy under investigation.

a) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP에 특이적으로 결합하는 검출제의 조합으로 이루어지는 분석 유닛으로서, 시험관내에서 피실험자로부터의 시료를 상기 검출제와 접촉시키기에 적합한 분석 유닛; 및
b) 데이터베이스 및 상기 데이터베이스에 대한 컴퓨터-실행 알고리즘을 갖는 계산 장치를 포함하는 평가 유닛으로서, 상기 컴퓨터-실행 알고리즘이 상기 계산 장치에 의해 실행될 때 상기 피실험자로부터의 시료 중의 생물마커의 양을 측정하고, 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량과 비교하고, 측정 단계에서 측정된 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 상응하는 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량보다 많은 경우, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험 증가의 진단을 제공하는 평가 유닛
을 포함하는, 제 17 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기에 적합한 장치.a) an assay unit consisting of a combination of NT-proBNP, homocysteine and a detective that specifically binds to CRP, said assay unit comprising: an assay unit adapted to contact a sample from a subject with said detector in vitro; And
and b) an evaluation unit comprising a database and a computing device having a computer-implemented algorithm for the database, the computer-implemented algorithm comprising: a computer-implemented algorithm for measuring the amount of biomarkers in a sample from the subject when the computer- Comparing the measured amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP to the corresponding reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP and comparing the amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP measured in the measuring step with corresponding NT-proBNP, homocysteine and CRP levels In cases where the CRP is greater than the reference amount, an evaluation unit that provides a diagnosis of a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, more particularly a second cardiovascular event,
26. Apparatus suitable for carrying out the method according to any one of claims 17 to 26,

제 28 항에 있어서,
데이터베이스가 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP 참조량을 추가로 포함하는 장치.29. The method of claim 28,
Wherein the database further comprises a reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP.

NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 검출제; 및
제 17 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하기 위한 설명서
를 포함하는, 상기 방법을 수행하기에 적합한 키트.Detectors of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
Instructions for carrying out the method according to any one of claims 17 to 27
&Lt; / RTI > a kit suitable for carrying out the method.

제 30 항에 있어서,
NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 검출제의 조합을 추가로 포함하는 키트.31. The method of claim 30,
NT-proBNP, homocysteine, and a detectable agent of CRP.

피실험자를, 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 보다 특히 최근의 급성 관상동맥 증후군에 이어서, 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 특히 2차 심혈관 사건을 겪을 위험이 증가된 것으로서 식별하는 방법으로서,
a) 피실험자의 시료 중에서 프로-호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩타이드의 N-말단(NT-proBNP), 호모시스테인 및 C-반응성 단백질(CRP)의 양을 검출하는 단계;
b) NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양을 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량과 비교하는 단계; 및
c) 상기 시료 중의 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 양이 NT-proBNP, 호모시스테인 및 CRP의 참조량보다 많은 경우, 상기 피실험자를 심혈관 사건, 특히 다른 심혈관 사건, 보다 특히 2차 심혈관 사건의 위험이 증가된 것으로서 식별하는 단계
로 이루어지는 방법.A method of identifying a subject as having an increased risk of suffering from a cardiovascular event, particularly another cardiovascular event, particularly a second cardiovascular event, following the acute coronary syndrome, more particularly the recent acute coronary syndrome,
a) detecting the amount of the N-terminal (NT-proBNP), homocysteine and C-reactive protein (CRP) of the pro-hormone brain sodium diuretic peptide in the sample of the subject;
b) comparing the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP to reference amounts of NT-proBNP, homocysteine and CRP; And
c) when the amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP in the sample is greater than the reference amount of NT-proBNP, homocysteine and CRP, the subject is treated with an increased risk of cardiovascular events, particularly other cardiovascular events, &Lt; / RTI >
&Lt; / RTI >

제 1 항 내지 제 11 항, 제 16 항 내지 제 27 항 및 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
참조량이 CRP의 경우 1.51 ㎎/L, 호모시스테인의 경우 12.16 μmol/L, 및 NT-proBNP의 경우 263 pg/㎖인 방법.32. The method according to any one of claims 1 to 11, 16 to 27 and 32,
The reference amount is 1.51 mg / L for CRP, 12.16 μmol / L for homocysteine, and 263 pg / ml for NT-proBNP.

본 명세서에서 앞서 기재한 발명.The invention as hereinbefore described.