KR20160131061A - 항-mcam 항체 및 관련된 사용 방법 - Google Patents

항-mcam 항체 및 관련된 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20160131061A
KR20160131061A KR1020167027673A KR20167027673A KR20160131061A KR 20160131061 A KR20160131061 A KR 20160131061A KR 1020167027673 A KR1020167027673 A KR 1020167027673A KR 20167027673 A KR20167027673 A KR 20167027673A KR 20160131061 A KR20160131061 A KR 20160131061A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
antibody
seq
leu
gly
Prior art date
Application number
KR1020167027673A
Other languages
English (en)
Inventor
유에 리우
패트릭 가리델
안드레아스 랑어
Original Assignee
프로테나 바이오사이언시즈 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=52823724&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20160131061(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 filed Critical 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드
Publication of KR20160131061A publication Critical patent/KR20160131061A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells

Abstract

본 발명은 라미닌 알파-4 쇄에 결합하는 인간 MCAM의 능력을 저해하는 항-MCAM 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 약제학적 조성물 및 약제학적 제형, 이러한 항체의 생성방법, 및 신경염증 질환, 자가면역 질환 또는 암의 치료를 위한 의약의 제조에서 그들의 용도를 제공한다.

Description

항-MCAM 항체 및 관련된 사용 방법{ANTI-MCAM ANTIBODIES AND ASSOCIATED METHODS OF USE}
관련 출원에 대한 상호참조
본 출원은 2014년 3월 12일자로 출원된 미국 가출원 특허 제61/952,116호, 2014년 3월 13일자로 출원된 미국 가출원 특허 제61/952,833호, 2014년 7월 11일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/023,724호, 및 2014년 10월 24일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/068,419호의 우선권을 주장하며, 앞서 언급한 출원의 각각은 본 명세서에 모든 목적을 위해 그들의 전문이 참고로 포함된다.
서열 목록, 표 또는 컴퓨터 프로그램 목록에 대한 언급
"항-MCAM 항체 및 관련된 사용 방법" 에 대해 2015년 3월 4일자에 생성된 파일명 458911SEQLIST.txt에 기재된 서열목록은 154 킬로바이트이다. 이 파일에 함유된 정보는 본 명세서에 참고로 포함된다.
TH17 세포(T 헬퍼 17 세포)로 칭해지는 CD4+ T 세포의 서브세트는 다수의 자가면역 질환, 특히 T 세포의 CNS 침윤을 수반하는 해당 신경염증성 병태, 예컨대 다발성 경화증 및 동물 모델, 실험적 자가면역 뇌수막염(EAE)의 병리에 연루되었다. TH17 세포는 IL-17 및 IL-22를 포함하는 다수의 선택적 사이토카인을 분비하는 것으로 보고되었다. TH17 세포는 조직의 특이적 동원(recruitment) 및 침윤을 겪는 것으로 보고되었다. MCAM은 TH17 세포 상에서 발현되고 리간드로서 라미닌 알파-4에 결합하는 것으로 보고되었다.
본 발명은 서열 161의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 중쇄 가변 영역(위치 32(카바트 넘버링(Kabat numbering))이 N, S 또는 Q일 수 있고 그리고 위치 33(카바트 넘버링)이 G 또는 A일 수 있는 것은 제외하고, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유됨) 및 서열번호 123의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 제공한다. 일부 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 90% 동일하고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 90% 동일하다. 일부 이러한 항체는 인간화된 항체이다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 98% 또는 99% 동일하다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지되, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95% 동일하다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95% 동일하고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 가진다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 가진다. 일부 이러한 항체에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 가진다. 일부 이러한 항체에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 171 또는 172의 아미노산 서열을 가지고/가지거나 경쇄 불변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 가진다.
본 발명은 아미노산 잔기 141을 포함하는 에피토프에서 인간 MCAM(서열번호 11)에 결합하는 항-MCAM 항체를 추가로 제공한다. 일부 항체에서, 에피토프는 아미노산 잔기 145를 포함한다. 일부 항체에서, 에피토프는 아미노산 잔기 141을 포함하는 인간 MCAM의 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 이러한 항체에서, 항체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 항체가 아니다:
(a) 서열번호 18에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 13에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 15;
(b) 서열번호 7에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 2에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 17;
(c) 서열번호 35에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 30에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1174.1.3;
(d) 서열번호 45에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 40에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1414.1.2;
(e) 서열번호 55에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 50에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1415.1.1;
(f) 서열번호 65에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 60에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1749.1.3;
(g) 서열번호 77에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 70에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 2120.4.19;
(h) 서열번호 89에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 84에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 2107.4.10;
(i) 실질적으로 단클론성 항체 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10로부터의 CDR을 포함하는 항체. 일부 이러한 항체에서, 항체는 단클론성이다. 일부 이러한 항체에서, 항체는 키메라, 인간화, 베니어(veneered), 또는 인간이다.
일부 이러한 항체에서, 항체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 항체가 아니다:
(a) 서열번호 18에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 13에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 15;
(b) 서열번호 7에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 2에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 17;
(c) 서열번호 35에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 30에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1174.1.3;
(d) 서열번호 45에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 40에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1414.1.2;
(e) 서열번호 55에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 50에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1415.1.1;
(f) 서열번호 65에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 60에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 1749.1.3;
(g) 서열번호 77에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 70, 71 또는 72에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 2120.4.19;
(h) 서열번호 89에 대응하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 82 또는 84에 대응하는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는 클론 2107.4.10;
(i) 실질적으로 단클론성 항체 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10으로부터의 CDR을 포함하는 항체. 일부 이러한 항체에서, 항체는 단클론성이다. 일부 이러한 항체에서, 항체는 키메라, 인간화, 베니어(veneered), 또는 인간이다.
본 발명은 임의의 상기 언급한 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 (a) 약 1㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖ 범위 내의 농도로 존재하는 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 약 10mM 내지 약 30mM 범위 내의 농도로 존재하는 완충제, 예컨대 히스티딘 완충제; (c) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 당 및/또는 폴리올, 예컨대 수크로스 또는 트레할로스; 및 (d) 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 존재하는 계면활성제, 예컨대 폴리솔베이트 20를 포함하는 약제학적 제형을 추가로 제공하되; 제형은 약 5.5 내지 약 7 범위 내의 pH를 특징으로 한다.
예시적인 약제학적 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항체(항체는 약 40㎎/㎖의 농도로 존재함); (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 수크로스; (d) 약 0.02%의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및 (e) 약 6.0의 pH를 포함한다.
다른 예시적인 약제학적 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항체(항체는 약 40㎎/㎖의 농도로 존재함); (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 트레할로스; (d) 약 0.02%의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및 (e) 약 6.5의 pH를 포함한다.
본 발명에 의해 제공되는 일부 제형은 증량제를 추가로 포함하고, 멸균이고/이거나 냉동 및 해동 시 안정하다. 일부 제형에서, 항체의 적어도 65%는 38 내지 42℃에서 적어도 30일 동안 저장 후에 및/또는 38 내지 42℃에서 적어도 3개월 동안 저장 후에 소수성 상호작용 크로마토그래피 상에서 단일 피크로서 나타난다. 일부 제형에서, 5중량% 이하는 38 내지 42℃에서 적어도 30일 동안 저장 후에 및/또는 38 내지 42℃에서 적어도 3개월 동안 저장 후 고성능 크기 배제 크로마토그래피 상에서 응집된 단백질이다.
본 발명에 의해 제공된 항체 제형은 동결건조된 제형의 형태일 수 있다. 예를 들어, 대표적인 동결건조된 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 히스티딘 완충제; (c) 수크로스 또는 트레할로스; 및 (d) 폴리솔베이트 20을 포함할 수 있다. 동결건조된 제형은 약 10㎎ 내지 약 40㎎의 항체 및 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 폴리솔베이트 20을 포함할 수 있다. 재구성 후에, 동결건조된 제형은 약 10mM 내지 약 30mM 히스티딘 완충제 및 약 200mM 내지 약 260mM의 수크로스 또는 트레할로스를 포함할 수 있다. 재구성 후에, 동결건조된 제형은 약 6 내지 약 7, 예컨대 pH 6.0 또는 6.5를 갖는 수용액을 수득한다.
재구성 후에, 예시적인 동결건조된 제형은 (a) 약 40㎎/㎖의 농도로 존재하는 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 수크로스; (d) 약 0.2g/ℓ의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및 (e) pH 약 6.0을 포함할 수 있다. 이러한 동결건조된 제형은 약 200㎎의 항체, 약 15.5㎎의 히스티딘, 약 376㎎ 수크로스, 및 약 1㎎ 폴리솔베이트 20을 포함할 수 있다.
재구성 후에, 다른 예시적인 동결건조된 제형은 (a) 약 40㎎/㎖의 농도로 존재하는 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 트레할로스 2수화물; (d) 약 0.2g/ℓ의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및 (e) pH 약 6.5를 포함할 수 있다. 이러한 동결건조된 제형은 약 200㎎의 항체, 약 15.5㎎의 히스티딘, 약 416㎎ 트레할로스 2수화물, 및 약 1㎎ 폴리솔베이트 20을 포함할 수 있다.
본 발명은 신체의 염증 부위 내로의 MCAM-발현 세포의 침윤을 특징으로 하는 염증성 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서 임의의 상기 언급한 항체의 용도를 추가로 제공한다. 이러한 염증성 장애는 CNS 내로의 MCAM-발현 세포의 침윤을 특징으로 하는 중추신경계(CNS) 염증성 장애일 수 있다.
본 발명은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알레르기성 접촉성 피부염, 건선, 건선성 관절염, 류마티스 관절염, 유육종증, 염증성 장 질환, 크론병 또는 암(예를 들어, 고형 또는 혈액학적 종양), 예컨대 흑색종의 치료를 위한 의약의 제조에서 임의의 상기 언급한 항체의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 염증 부위에 대한 MCAM-발현 세포의 침윤을 특징으로 하는 염증성 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 상기 방법은 치료가 필요한 포유류 대상체에게 유효량의 임의의 상기 언급한 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 방법에서, 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알레르기성 접촉성 피부염, 건선, 건선성 관절염, 류마티스 관절염, 유육종증, 염증성 장 질환, 크론병, 또는 암(예를 들어, 고형 또는 혈액학적 종양), 예컨대 흑색종이다. 일부 방법에서, MCAM-발현 세포는 TH17 세포이다. 일부 방법에서, 포유류 대상체는 인간이다. 일부 방법에서, 항체는 라미닌 α-4 쇄를 포함하는 단백질에 대한 MCAM의 결합을 저해한다. 일부 방법에서, 포유류 대상체는 인간이다. 일부 방법에서, MCAM-발현 세포는 TH17 세포이다.
본 발명은 항-MCAM 단클론성 항체에 결합하기 위한 에피토프를 포함하는 단리된 펩타이드를 추가로 제공하되, 펩타이드는 아미노산 잔기 141을 포함하는 인간 MCAM(서열번호 11)의 5 내지 50개의 인접한 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 이들 펩타이드에서, 펩타이드는 담체 폴리펩타이드에 연결된다. 일부 이들 펩타이드에서, 펩타이드는 애주번트와 조합된다.
본 발명은 하기 단계들을 포함하는, 라미닌 α-4 쇄에 대한 인간 MCAM의 결합을 저해하는 항체를 생성하는 방법을 추가로 제공한다:
(a) 대상체를 상기 기재한 펩타이드를 이용하여 면역화시키는 단계;
(b) 대상체로부터 B-세포를 단리시키는 단계로서, B-세포는 항체를 분비하는 단계;
(c) 라미닌 α-4 쇄에 대한 인간 MCAM의 결합을 저해하는 항체를 동정하기 위해 항체를 선별하는 단계. 일부 방법에서, 상기 방법은 하기 단계들을 추가로 포함한다:
(d) 배양물에서 불멸화 세포와 B 세포를 융합하여 단클론성 항체-생산 혼성 세포를 형성하는 단계;
(e) 혼성 세포를 배양시키는 단계; 및,
(f) 배양물로부터 단클론성 항체를 단리시키는 단계.
도 1은 중요한 클론의 동정을 도시한 도면. 평균 2120.4.19 결합값을 그의 평균 표면 발현값(회색 다이아몬드)의 함수로서 플롯팅하였다. 30% 미만의 단클론성 항체 반응성 및 50% 초과의 마우스 혈청 결합의 역치를 항체 결합에 대해서는 음성이지만 표면 발현에 대해서는 양성인 클론(검정색 다이아몬드)을 동정하도록 적용하였다.
도 2A 내지 도 2C. 도 2A는 리본 다이어그램에 의해 표시되는 인간 MCAM의 상동성 모델을 도시한 도면. 도 2B는 인간 MCAM의 위치 141(I141) 및 위치 145(P145)에서 관심 대상의 잔기를 나타내는 인간 BCAM, 인간 MCAM, 및 마우스 MCAM 서열의 부분적 정렬을 도시한 도면. 도 2C는 인간 MCAM의 I141 및 P145 잔기의 위치 및 노출을 도시하는 리본 다이어그램을 도시한 도면.
도 3A 및 도 3B. 도 3A는 다음에 대한 가변 중쇄 서열의 정렬을 도시한 도면: 래트 2120.4.19 항-MCAM 항체(2120.4.19.6_VH_토포_프로; 서열번호 114); 2120 VH1 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH1; 서열번호 115); 2120 VH2 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH2; 서열번호 116); 2120 VH3 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH3; 서열번호 117); 2120 VH4 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH4; 서열번호 118); 2120 VH5 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH5; 서열번호 119); 및 프레임워크 공여체로서 사용되는 중쇄 인간 가변 AF062133 IGHV2-26*01 서열(AF062133_VH; 서열번호 108). 카바트 넘버링이 사용되며, 가변 중쇄 가변 AF062133 IGHV2-26*01 프레임워크에 대해 래트 2120.4.19.6 항체로부터 접합된 초가변 영역(HVR)을 박스 표시한다. (i) CDR-H1의 박스 표시된 N/D 잔기의 돌연변이, 예를 들어, N32S(VH3); N32Q(VH4); 또는 G33A(VH5))와 조합된 S30T, I37V, L48I 및 K71R 돌연변이는 N 탈아마이드화 돌연변이체를 제공한다. 인간화된 항체 서열에서 볼드체의 아미노산 잔기는 래트 항체 서열에서 대응하는 잔기와 상이하다. CDR 접촉 또는 CDR 구조에 영향을 미칠 수 있는 정규 및 계면 아미노산 잔기의 위치는 별표로 표시한다. N-탈아미노화 부위 또는 N-글리코실화 부위의 존재 때문에 돌연변이가 집중되는 잔기를 괄호 박스에 나타낸다.
도 3B는 다음에 대한 가변 서열의 정렬을 나타낸다: 래트 2120.4.19.6 항-MCAM 항체(2120.4.19.6_VL_토포_프로; 서열번호 120); 2120 VL1 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL1 서열번호 121); 2120 VL2 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL2 서열번호 122); 2120 VL3 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL3 서열번호 123); 및 프레임워크 공여체로서 사용되는 경쇄 인간 가변 X84343 IGKV2-26*01 서열(X84343_VL 서열번호 124). 카바트 넘버링이 사용되며, 가변 경쇄 가변 X84343 IGKV2-26*01 프레임워크에 대해 래트 2120.4.19.6 항체로부터 접합된 초가변 영역(HVR)을 박스 표시한다. 인간화된 항체 서열에서 볼드체의 아미노산 잔기는 래트 항체 서열에서 대응하는 잔기와 상이하다. CDR 접촉 또는 CDR 구조에 영향을 미칠 수 있는 정규 및 계면 아미노산 잔기의 위치는 별표로 표시한다.
도 4A는 다음에 대한 성숙 중쇄 가변 영역의 서열을 나타낸다: 래트 2120.4.19 항-MCAM 항체(2120.4.19.6_VH_토포_프로; 서열번호 114); 2120 VH1.Q1E 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH1.Q1E; 서열번호 157); 2120 VH2.Q1E 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH2.Q1E; 서열번호 158); 2120 VH3.Q1E 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH3.Q1E; 서열번호 159); 2120 VH4.Q1E 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH4.Q1E; 서열번호 160); 2120 VH5.Q1E 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VH5.Q1E; 서열번호 161); 및 프레임워크 공여체로서 사용되는 중쇄 인간 가변 AF062133 IGHV2-26*01 서열(AF062133_VH; 서열번호 108). 카바트 넘버링이 사용되며, 가변 중쇄 가변 AF062133 IGHV2-26*01 프레임워크에 대해 래트 2120.4.19.6 항체로부터 접합된 초가변 영역(HVR)을 박스 표시한다. 위치 Q1E 치환은 박스로 나타낸다.
도 4B는 다음에 대한 가변 서열의 정렬을 나타낸다: 래트 2120.4.19.6 항-MCAM 항체(2120.4.19.6_VL_토포_프로; 서열번호 120); 2120 VL1 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL1 서열번호 121); 2120 VL2 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL2 서열번호 122); 2120 VL3 인간화된 항-MCAM 항체(h2120VL3 서열번호 123); 및 프레임워크 공여체로서 사용되는 경쇄 인간 가변 X84343 IGKV2-26*01 서열(X84343_VL 서열번호 124). 카바트 넘버링이 사용되며, 가변 경쇄 가변 X84343 IGKV2-26*01 프레임워크에 대해 래트 2120.4.19.6 항체로부터 접합된 초가변 영역(HVR)을 박스 표시한다.
서열번호 1은 항체 클론 17의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 2는 항체 클론 17의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 3은 항체 클론 17의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 4는 항체 클론 17의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 5는 항체 클론 17의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 6은 항체 클론 17의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 7은 항체 클론 17의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 8은 항체 클론 17의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 9는 항체 클론 17의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 10은 항체 클론 17의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 11은 인간 MCAM 수탁번호 CAA48332의 아미노산 서열이다.
서열번호 12는 항체 클론 15의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 13은 항체 클론 15의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 14는 항체 클론 15의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 15는 항체 클론 15의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 16은 항체 클론 15의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 17은 항체 클론 15의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 18은 항체 클론 15의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 19는 항체 클론 15의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 20은 항체 클론 15의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 21은 항체 클론 15의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 22는 인간 MCAM 도메인 1의 아미노산 서열(잔기 19 내지 129)이다.
서열번호 23은 인간 MCAM 도메인 2의 아미노산 서열(잔기 139 내지 242)이다.
서열번호 24는 인간 MCAM 도메인 3의 아미노산 서열(잔기 244 내지 321)이다.
서열번호 25는 인간 MCAM 도메인 4의 아미노산 서열(잔기 355 내지 424)이다.
서열번호 26은 인간 MCAM 도메인 5의 아미노산 서열(잔기 430 내지 510)이다.
서열번호 27은 인간 라미닌 411의 4-쇄 아이소폼의 아미노산 서열(수탁번호 NP001098676)이다.
서열번호 28은 인간 라미닌 411의 4-쇄 아이소폼의 아미노산 서열(수탁번호 CAA48332)이다.
서열번호 29는 항체 1174.1.3의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 30은 항체 1174.1.3의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 31은 항체 1174.1.3의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 32는 항체 1174.1.3의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 33는 항체 1174.1.3의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 34는 항체 1174.1.3의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 35는 항체 1174.1.3의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 36은 항체 1174.1.3의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 37은 항체 1174.1.3의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 38은 항체 1174.1.3의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 39는 항체 1414.1.2의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 40은 항체 1414.1.2의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 41은 항체 1414.1.2의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 42는 항체 1414.1.2의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 43은 항체 1414.1.2의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 44는 항체 1414.1.2의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 45는 항체 1414.1.2의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 46은 항체 1414.1.2의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 47은 항체 1414.1.2의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 48은 항체 1414.1.2의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 49는 항체 1415.1.1의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 50은 항체 1415.1.1의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 51은 항체 1415.1.1의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 52는 항체 1415.1.1의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 53은 항체 1415.1.1의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 54는 항체 1415.1.1의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 55는 항체 1415.1.1의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 56은 항체 1415.1.1의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 57은 항체 1415.1.1의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 58은 항체 1415.1.1의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 59는 항체 1749.1.3의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 60은 항체 1749.1.3의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 61은 항체 1749.1.3의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 62는 항체 1749.1.3의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 63은 항체 1749.1.3의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 64는 항체 1749.1.3의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 65는 항체 1749.1.3의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 66은 항체 1749.1.3의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 67은 항체 1749.1.3의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 68은 항체 1749.1.3의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 69는 항체 2120.4.19의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 70은 서열번호 69에 제시된 항체 2120.4.19의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 71은 항체 2120.4.19의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 72는 항체 2120.4.19의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 73은 항체 2120.4.19의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 74는 항체 2120.4.19의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 75는 항체 2120.4.19의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 76은 항체 2120.4.19의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 77은 항체 2120.4.19의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 78은 항체 2120.4.19의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 79는 항체 2120.4.19의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 80은 항체 2120.4.19의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 81은 항체 2107.4.10의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 82는 서열번호 81에 제시된 항체 2107.4.10의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 83은 항체 2107.4.10의 성숙 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 84는 서열번호 83에 제시된 항체 2107.4.10의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 85는 항체 2107.4.10의 CDRL1의 아미노산 서열이다.
서열번호 86은 항체 2107.4.10의 CDRL2의 아미노산 서열이다.
서열번호 87은 항체 2107.4.10의 CDRL3의 아미노산 서열이다.
서열번호 88은 항체 2107.4.10의 성숙 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 89는 항체 2107.4.10의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 90은 항체 2107.4.10의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 91은 항체 2107.4.10의 CDRH2의 아미노산 서열이다.
서열번호 92는 항체 2107.4.10의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 93은 항체 1749.1.3의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 94는 인간화된 항체 1749 버전 1의 성숙 중쇄 가변 영역(VH1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 95는 인간화된 항체 1749 버전 2의 성숙 중쇄 가변 영역(VH2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 96은 중쇄 가변 프레임워크 공여체 U96282_VH의 아미노산 서열이다.
서열번호 97은 항체 1749.1.3의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 98은 인간화된 항체 1749 버전 1 성숙 경쇄 가변 영역(VL1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 99는 인간화된 항체 1749 버전 2 성숙 경쇄 가변 영역(VL2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 100은 경쇄 가변 프레임워크 공여체 X02990_VL의 아미노산 서열이다.
서열번호 101은 항체 2107.4.10.18의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 102는 인간화된 항체 2107 버전 1의 성숙 중쇄 가변 영역(VH1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 103은 인간화된 항체 2107 버전 2의 성숙 중쇄 가변 영역(VH2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 104는 인간화된 항체 2107 버전 3의 성숙 중쇄 가변 영역(VH3)의 아미노산 서열이다.
서열번호 105는 인간화된 항체 2107 버전 4A의 성숙 중쇄 가변 영역(VH4A)의 아미노산 서열이다.
서열번호 106은 인간화된 항체 2107 버전 5A의 성숙 중쇄 가변 영역(VH5A)의 아미노산 서열이다.
서열번호 107은 인간화된 항체 2107 버전 6의 성숙 중쇄 가변 영역(VH6)의 아미노산 서열이다.
서열번호 108은 중쇄 가변 프레임워크 공여체 AF062133_VH의 아미노산 서열이다.
서열번호 109는 항체 2107.4.10.18의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 110은 인간화된 항체 2107 버전 1 성숙 경쇄 가변 영역(VL1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 111은 인간화된 항체 2107 버전 2 성숙 경쇄 가변 영역(VL2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 112는 인간화된 항체 2107 버전 3 성숙 경쇄 가변 영역(VL3)의 아미노산 서열이다.
서열번호 113은 경쇄 가변 프레임워크 공여체 U86803의 아미노산 서열이다.
서열번호 114는 항체 2120.4.19.6의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 115는 인간화된 항체 2120 버전 1의 성숙 중쇄 가변 영역(VH1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 116은 인간화된 항체 2120 버전 2의 성숙 중쇄 가변 영역(VH2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 117은 인간화된 항체 2120 버전 3의 성숙 중쇄 가변 영역(VH3)의 아미노산 서열이다.
서열번호 118은 인간화된 항체 2120 버전 4의 성숙 중쇄 가변 영역(VH4)의 아미노산 서열이다.
서열번호 119는 인간화된 항체 2120 버전 5의 성숙 중쇄 가변 영역(VH5)의 아미노산 서열이다.
서열번호 120은 항체 2120.4.19.6의 성숙 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 121은 인간화된 항체 2120 버전 1 성숙 경쇄 가변 영역(VL1)의 아미노산 서열이다.
서열번호 122는 인간화된 항체 2120 버전 2 성숙 경쇄 가변 영역(VL2)의 아미노산 서열이다.
서열번호 123은 인간화된 항체 2120 버전 3 성숙 경쇄 가변 영역(VL3)의 아미노산 서열이다.
서열번호 124는 경쇄 가변 프레임워크 공여체 X84343_VL의 아미노산 서열이다.
서열번호 125는 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 126은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 127은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 128은 인간화된 중쇄/경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 129는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 130은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 131은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 132는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 133은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 134는 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 135는 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 136은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 137은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 138은 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 139는 인간화된 항체 2120 버전 3(VH3)의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 140은 인간화된 항체 2120 버전 4(VH4)의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 141은 인간화된 항체 2120 버전 5(VH5)의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 142는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 143은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 144는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 145는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 146은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 147은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 148은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 149는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 150은 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 151은 인간화된 항체 2107 버전 1(VH1)의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 152는 인간화된 항체 2107 버전 4(VH4)의 CDRH1의 아미노산 서열이다.
서열번호 153은 인간화된 항체 2120 버전 1 내지 5(VH1 내지 VH5)의 CDRH3의 아미노산 서열이다.
서열번호 154는 인간화된 경쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 155는 인간화된 중쇄 프레임워크 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 156은 항체 2120.4.19.Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 157은 인간화된 항체 2120 버전 1 Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역(VH1.Q1E)의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 158은 인간화된 항체 2120 버전 2 Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역(VH2.Q1E)의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 159는 인간화된 항체 2120 버전 3 Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역(VH3.Q1E)의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 160은 인간화된 항체 2120 버전 4 Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역(VH4.Q1E)의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 161은 인간화된 항체 2120 버전 5 Q1E의 성숙 중쇄 가변 영역(VH5.Q1E)의 아미노산 서열이되, 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유된다.
서열번호 162는 성숙 중쇄 또는 성숙 경쇄 가변 영역에 융합될 수 있는 예시적 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 163은 서열번호 162의 핵산 서열에 의해 암호화된 예시적 신호 펩타이드의 아미노산 서열이다.
서열번호 164는 성숙 중쇄 또는 성숙 경쇄 가변 영역에 융합될 수 있는 예시적 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 165는 서열번호 164의 핵산 서열에 의해 암호화된 예시적 신호 펩타이드의 아미노산 서열이다.
서열번호 166은 성숙 중쇄 또는 성숙 경쇄 가변 영역에 융합될 수 있는 예시적 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열이다.
서열번호 167은 서열번호 166의 핵산 서열에 의해 암호화된 예시적 신호 펩타이드의 아미노산 서열이다.
서열번호 168은 N-말단에서 아르기닌을 지니는 인간화된 2120 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 169는 N-말단에서 아르기닌이 없는 인간화된 2120 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 170은 인간화된 2120 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 171은 BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 172는 BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열번호 173은 인간화된 항체 2120 버전 3의 성숙 경쇄 가변 영역(VL3 + 경쇄 불변 영역)의 아미노산 서열이다.
서열번호 174는 인간화된 항체 2120 버전 5의 성숙 중쇄 영역(VH5 + BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역)의 아미노산 서열이다.
서열번호 175는 인간화된 항체 2120 버전 5의 성숙 중쇄 영역(VH5 + BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역)의 아미노산 서열이다.
서열번호 176은 인간화된 항체 2120 버전 5 Q1E의 성숙 중쇄 영역(VH5.Q1E + BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역)의 아미노산 서열이다.
서열번호 177은 인간화된 항체 2120 버전 5 Q1E의 성숙 중쇄 영역(VH5.Q1E + BIP 버전 중쇄 G1m3 알로타이프 불변 영역)의 아미노산 서열이다.
서열번호 178은 인간화된 항체 2107 버전 4B의 성숙 중쇄 가변 영역(VH4B)의 아미노산 서열이다.
서열번호 179는 인간화된 항체 2107 버전 5B의 성숙 중쇄 가변 영역(VH5B)의 아미노산 서열이다.
정의
단클론성 항체는 전형적으로 단리된 형태로 제공된다. 이는 항체가 전형적으로 그의 생성 또는 정제로부터 생기는 적어도 50% w/w 순도의 단백질 및 다른 거대분자이지만, 단클론성 항체가 과량의 약제학적으로 허용가능한 담체(들) 또는 그의 사용을 용이하게 하는 것으로 의도된 다른 비히클과 조합된다는 것을 의미한다. 때때로 단클론성 항체는 생성 또는 정제로부터의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95 또는 99% w/w 순도의 단백질 및 다른 거대분자이다.
단클론성 항체의 그의 표적 항원에 대한 특이적 결합은 적어도 106, 107, 108, 109 또는 1010 M-1의 친화도를 의미한다. 특이적 결합은 규모가 검출가능하게 더 크며, 적어도 하나의 비관련 표적에 대해 생기는 비특이적 결합과 구별가능하다. 특이적 결합은 특정 작용기 또는 특정 공간적 적합성(예를 들어, 자물쇠와 열쇠 유형) 사이의 결합 형성 결과일 수 있는 반면, 비특이적 결합은 보통 반데르 발스힘의 결과이다. 그러나 특이적 결합은 단클론성 항체가 하나 및 단지 하나의 표적에 결합한다는 것을 반드시 암시하는 것은 아니다.
기본 항체 구조 단위는 서브유닛의 사량체이다. 각각의 사량체는 폴리펩타이드의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각각의 쌍은 하나의 "경"쇄(약 25kDa) 및 하나의 "중"쇄(약 50 내지 70kDa)를 가진다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 초래하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이 가변 영역은 처음에 절단가능한 신호 펩타이드에 발현가능하게 연결된다. 신호 펩타이드가 없는 가변 영역은 때때로 성숙 가변 영역으로서 지칭된다. 따라서, 예를 들어, 경쇄 성숙 가변 영역은 경쇄 신호 펩타이드가 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 각각의 쇄의 카복시-말단 부분은 주로 효과기 기능을 초래하는 불변 영역을 의미한다.
경쇄는 카파 또는 람다 중 하나로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로서 분류되고, 항체의 아이소타입을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로서 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 결합되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. (일반적으로, 전문이 모든 목적을 위해 참고로 포함되는 문헌[Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7] 참조).
각각의 경쇄/중쇄쌍의 성숙 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 무결함 항체는 2개의 결합 부위를 가진다. 이작용성 또는 이중특이성 항체를 제외하고, 2개의 결합 부위는 동일하다. 쇄는 모두 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 결합된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반적 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 쇄로부터의 CDR은 특이적 에피토프에 결합을 가능하게 하는 프레임워크에 의해 정렬된다. N-말단으로부터 C-말단까지, 경쇄와 중쇄는 둘 다 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 정렬은 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 and 1991), 또는 Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]의 카바트의 정의에 따른다. 카바트는 또한 널리 사용되는 넘버링 관습(카바트 넘버링)을 제공하며, 이때 상이한 중쇄 사이의 또는 상이한 경쇄 사이의 대응하는 잔기는 동일한 숫자가 부여된다(예를 들어, H83은 성숙 중쇄 가변 영역에서 카바트 넘버링에 의해 위치 83을 의미하고; 마찬가지로 위치 L36은 성숙 경쇄 가변 영역에서 카바트 넘버링에 의해 위치 36을 의미한다). 카바트 넘버링은 달리 명확하게 언급되지 않는 한, 항체의 가변 영역에서의 위치를 언급함에 있어서 전체적으로 사용된다.
용어 "항체"는 무결함 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 전형적으로, 단편은 별도의 중쇄, 경쇄 Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)c, 다이어바디, Dab, 나노바디 및 Fv를 포함하는 표적에 대한 특이적 결합으로부터 유래된 무결함 항체와 경쟁한다. 단편은 재조합 DNA 기법에 의해 또는 무결함 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 분리에 의해 생성될 수 있다.
용어 "항체"는 또한 이중특이성 항체, 및/또는 키메라 항체, 및/또는 인간화된 항체를 포함한다. 이중특이성 또는 이작용성 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 혼성체 항체이다(예를 들어, 문헌[Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-53 (1992)] 참조). 일부 이중특이성 항체에서, 2개의 상이한 중쇄/경쇄쌍은 인간화된 중쇄/경쇄쌍 및 상이한 에피토프에 특이적인 중쇄/경쇄쌍을 포함할 수 있다.
일부 이중특이성 항체에서, 하나의 중쇄 경쇄쌍은 이하에 추가로 개시한 바와 같은 인간화된 항체이며, 중쇄 경쇄쌍은 혈액 뇌 장벽 상에서 발현되는 수용기, 예컨대 인슐린 수용기, 인슐린-유사 성장 인자(IGF) 수용기, 렙틴 수용기, 또는 지방단백질 수용기, 또는 트랜스페린 수용기에 결합되는 항체로부터 유래된다(Friden et al., PNAS 88:4771-4775, 1991; Friden et al., Science 259:373-377, 1993). 이러한 이중특이성 항체는 수용기-매개 통과세포외배출에 의해 혈액 뇌 장벽을 가로질러 전달될 수 있다. 이중특이성 항체의 뇌 흡수는 이중 특이성 항체가 혈액 뇌 장벽 수용기에 대한 그의 친화도를 감소시키도록 공학처리함으로써 추가로 향상될 수 있다. 수용기에 대한 감소된 친화도는 뇌에서의 더 넓은 분포를 초래한다(예를 들어, 문헌[Atwal. et al. Sci . Trans. Med . 3, 84ra43, 2011; Yu et al. Sci . Trans. Med. 3, 84ra44, 2011] 참조).
예시적인 이중특이성 항체는 또한 (1) 이중-가변-도메인 항체(DVD-Ig)(여기서 각각의 경쇄 및 중쇄는 짧은 펩타이드 결합을 통해 직렬로 2개의 가변 도메인을 함유함)(Wu et al., Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-Ig™) Molecule, In: Antibody Engineering, Springer Berlin Heidelberg (2010)); (2) 각각의 표적 항원에 대해 2개의 결합 부위를 갖는 4가 이중특이성 항체를 초래하는 2개의 단일쇄 다이어바디의 융합인 탠댑(Tandab); (3) 다가 분자를 초래하는 다이어바디와 scFv의 조합인 플렉시바디(flexibody); (4) Fab에 적용될 때 상이한 Fab 단편에 연결된 2개의 동일한 Fab 단편으로 이루어진 3가 이중특이성 결합 단백질을 수득할 수 있는 단백질 키나제 A에서 "이량체화 및 도킹 도메인"에 기반한 소위 "독 앤 락(dock and lock)" 분자; (5) 예를 들어, 인간 Fc-영역의 말단 둘 다에 융합된 2개의 scFv를 포함하는 소위 스콜피온(Scorpion) 분자일 수 있다. 이중특이성 항체를 제조하는데 유용한 플랫폼의 예는 BiTE(마이크로메트(Micromet)), DART(마크로제닉스(MacroGenics)), Fcab 및 Mab2(F-스타(F-star)), Fc-공학처리 IgGl(젠코(Xencor)) 또는 듀오바디(DuoBody)(Fab 암(arm) 교환에 기반, 젠맙(Genmab))을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항체 상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 하나 이상의 단백질의 3차 폴딩에 의해 나란히 놓인 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 의한 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 입체구조에서 적어도 3, 및 더 보통으로는, 적어도 5 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 입체구조를 결정하기 위한 방법은, 예를 들어, x-선 결정학 및 2-차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)] 참조.
"길항제" 항체 또는 다른 결합제는 그것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 저해하는 것이다. 이러한 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 저해할 수 있다.
MCAM에 대해 용어 "생물학적 활성" 및 "생물학적으로 활성"은 그의 리간드에 특이적으로 결합하는 그의 능력(라미닌 α4 쇄, 예를 들어, 라미닌 411의 α4 쇄) 및/또는 MCAM-발현 세포, 예를 들어, TH17 세포의 CNS 내로의 침윤을 가능하게 하는 그의 능력을 지칭한다.
"저해하다"는 제제가 적어도 하나의 표적, 예를 들어 MCAM의 생물학적 활성을 감소시킨다는 것을 의미한다. 이러한 저해제는 적어도 약 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 95% 또는 적어도 100%만큼 적어도 하나의 표적의 활성을 저해한다.
"대상체"는 예방적 또는 치료적 치료 중 하나를 받는 인간 또는 다른 포유류 대상체를 포함한다.
보존적 또는 비보존적으로서 아미노산 치환을 분류하는 목적을 위해, 아미노산은 다음과 같이 그룹화된다: 그룹 I(소수성 측쇄): met, ala, val, leu, ile; 그룹 II(중성 친수성 측쇄): cys, ser, thr; 그룹 III(산성 측쇄): asp, glu; 그룹 IV(염기성 측쇄): asn, gln, his, lys, arg; 그룹 V(쇄 배향에 영향을 미치는 잔기): gly, pro; 및 그룹 VI(방향족 측쇄): trp, tyr, phe. 보존적 치환은 동일한 부류의 아미노산 간의 치환을 수반한다. 비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류의 구성원으로 교환하는 것을 구성한다.
서열 동일성 백분율은 카바트 넘버링 관습에 의해 최대로 정렬되는 항체 서열에 의해 결정된다. 정렬 후에, 대상 항체 영역(예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 전체 성숙 가변 영역)을 기준 항체의 동일 영역과 비교한다면, 대상과 기준 항체 영역 사이의 서열 동일성 백분율은 대상과 기준 항체 영역 둘 다에서 동일한 아미노산에 의해 점유되는 위치의 수를 계수화되지 않은 갭을 지니는 두 영역의 정렬된 위치의 총 수로 나누고 100을 곱하여서 백분율로 전환한다.
하나 이상의 인용된 구성요소를 "포함하는" 조성물 또는 방법은 구체적으로 인용되지 않은 다른 구성요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체를 포함하는 조성물은 단독으로 또는 다른 성분과 조합하여 함유할 수 있다.
값의 범위의 지정은 범위 내의 또는 범위를 정하는 모든 정수를 포함하고, 모든 하위 범위는 범위 내의 정수로 정해진다.
문맥으로부터 달리 명확하지 않다면, 용어 "약"은 표준 값의 측정 오차(SEM)의 표준 차이 내의 값을 포함한다.
통계학적 유의도는 p≤0.05를 의미한다.
상세한 설명
I. 일반
라미닌 411의 라미닌 α4 쇄에 대한 MCAM 결합을 저해하는 유용한 특성을 지니는 항체는 WO/2012/170071 및 PCT/US2013/058773에 개시되어 있다. 본 출원은 특히 (a) 2120.4.19 항체의 새로운 인간화된 형태를 제공하고, (b) 이 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하며, (c) 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공하고, (d) 개시된 항체의 새로운 제형을 제공한다.
용어 "2120.4.19", "m2120", "마우스 2120" 항체는 서열번호 114에 대응하는 성숙 가변 중쇄 및 서열번호 120에 대응하는 성숙 가변 경쇄를 갖는 설치류 유래 단클론성 항체를 지칭한다. "인간화된 2120" 또는 "hu2120"은 2120.4.19 클론의 인간화된 변이체를 지칭한다.
II. 표적 분자
천연 인간 야생형 MCAM(CD146 및 MUC18로서도 공지된 흑색종 세포부착분자)은 다음의 아미노산 서열을 갖는 646개의 아미노산의 단백질이다:
Figure pct00001
Figure pct00002
(수탁 번호 AAA20922.1(CAA48332)하의 젠뱅크 데이터베이스). MCAM은 세포 부착에 그리고 수반된 혈관 조직의 세포내 접합부에서 내피 단일층의 응집에 수반된 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하는 세포 표면 당단백질이다. 이는 또한 흑색종 및 전립선암을 포함하는 고형 종양과 같은 다수의 암의 종양 진행을 촉진시킨다. 이는 동형/혈우병성 방식으로 상호작용하는 것으로 공지되어 있고, 또한 다른 리간드에 결합할 수 있다. 인간 MCAM은 서열번호 22 내지 26로서 나타내는 5개의 면역글로불린 도메인(1: 아미노산 잔기 19 내지 129; 2: 아미노산 잔기 139 내지 242; 3: 아미노산 잔기 244 내지 321; 4: 아미노산 잔기 335 내지 424; 및 5: 아미노산 잔기 430 내지 510)을 포함한다.
문맥으로부터 달리 명확하지 않다면, MCAM 또는 그의 단편에 대한 언급은 상기 표시한 천연 인간 야생형 아미노산 서열 및 인간 대립유전자 변이체를 포함한다.
라미닌 α4는 대부분의 세포 및 기관에 대한 단백질 네트워크 기반인 (기저막의) 기저판에서 발현된 라미닌 분자에서 발견된 폴리펩타이드 쇄 중 하나를 지칭한다. 라미닌은 혈장막 분자를 통해 세포막에 결합하는 것으로 알려져 있으며, 세포 부착에 기여한다. 라미닌 α4 쇄는 전형적으로 라미닌 β-쇄 및 라미닌 γ-쇄와의 복합체를 형성한다. 라미닌 α4 쇄는 라미닌 411(라미닌 8 또는 α4β1γ1); 라미닌 421(라미닌 9 또는 α4β2γ1) 및 라미닌 423(라미닌 14 또는 α4β2γ3)을 포함하는 수많은 라미닌 분자에서 발견된다. 인간 라미닌 α4-쇄의 2개의 주된 아이소폼이 있다: 젠뱅크 수탁 번호 NP001098676 및 NP001098677(각각 서열번호 27 및 28). "라미닌 411"은 3개의 폴리펩타이드 서브유닛 또는 쇄(α4-쇄, β1-쇄 및 γ1-쇄)로 구성되는 삼량체 폴리펩타이드 복합체를 지칭한다.
MCAM에 대한 길항제는 IgG 불변 영역 다른 생물학적 결합 분자 및 소분자에 대한 항체, 수용기의 융합 단백질 또는 리간드를 포함한다. 항체는 단클론성 또는 다클론성일 수 있다. 항체는 비인간, 예컨대 마우스 또는 래트, 비인간 영장류일 수 있거나 또는 인간일 수 있다. 항체는 키메라, 베니어, 인간화, 영장류화 등일 수 있다.
MCAM 길항제는 MCAM (i) 그의 리간드인 라미닌 α4 쇄, 예를 들어, 라미닌 411의 α4 쇄에 특이적으로 결합하기 위한; 및/또는 (ii) MCAM-발현 세포, 예를 들어, TH17 세포가 대상체 조직 내로 침윤하거나 또는 이동하는 것을 용이하게 하기 위한 MCAM의 능력을 완전히 또는 부분적으로 저해하는 길항제를 지칭한다. MCAM 길항제는 MCAM에 대한 또는 그의 리간드 라미닌 알파 4에 대한 항체 또는 다른 길항제 결합을 포함한다.
III. 항체
A. 항체 2120.4.19 및 이의 키메라 , 베니어 및 인간화된 형태
인간화된 항체는 유전자 공학처리된 항체이며, 이때, 비인간 "공여체" 항체(즉, 2120.4.19)로부터의 CDR은 인간 "수용체(acceptor)" 항체 서열 내로 접합된다(예를 들어, 퀸(Queen)의 미국 특허 제5,530,101호 및 제5,585,089호; 윈터(Winter)의 미국 특허 제5,225,539호, 카터(Carter)의 미국 특허 제6,407,213호, 아다이르(Adair)의 미국 특허 제5,859,205호, 제6,881,557호, 푸트(Foote)의 미국 특허 제6,881,557호 참조). 수용체 항체 서열은, 예를 들어, 성숙 인간 항체 서열, 이러한 서열의 복합체, 인간 항체 서열의 공통 서열, 또는 생식계열 영역 서열일 수 있다. 인간 수용체 항체 서열은 선택적으로 인간 수용체 서열 가변 영역 프레임워크와 공여체 항체쇄의 대응하는 가변 영역 프레임워크 사이의 높은 정도의 서열 동일성(예를 들어, 65 내지 85% 동일성)을 제공하기 위해 다수의 공지된 인간 항체 서열 중에서 선택될 수 있다. 따라서, 인간화된 항체는 공여체 항체 및 가변 영역 프레임워크 서열 및 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면 인간 항체 서열로부터 완전히 또는 실질적으로 일부 또는 모든 CDR을 갖는 항체이다. 유사하게 인간화된 중쇄는 공여체 항체 중쇄, 및 중쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 중쇄 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면, 인간 중쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 적어도 1, 2 및 보통은 모두 3개의 CDR을 가진다. 유사하게 인간화된 경쇄는 공여체 항체 경쇄, 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 경쇄 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면, 인간 경쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 적어도 1, 2 및 보통은 모두 3개의 CDR을 가진다. 나노바디 및 dAb 이외에, 인간화된 항체는 인간화된 중쇄 및 인간화된 경쇄를 포함한다. 인간화된 항체에서 CDR은 대응하는 잔기(카바트에 의해 정의됨)의 적어도 85%, 90%, 95% 또는 100%가 각각의 CDR 간에 동일할 때, CDRH1가 2개까지의 치환을 가질 수 있고, CHDRH2가 위치 H60 내지 65에서 치환을 가질 수 있다는 것을 제외하고 비인간 항체에서의 대응하는 CDR로부터 유래된다. 카바트에 의해 정의되는 대응하는 잔기의 적어도 85%, 90%, 95% 또는 100%가 동일할 때, 항체쇄의 가변 영역 프레임워크 서열 또는 항체쇄의 불변 영역은 실질적으로 각각 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 인간 불변 영역으로부터 유래된다.
인간화된 항체가 종종 마우스 항체로부터의 모두 6개의 CDR(바람직하게는, 카바트에 의해 정의됨)을 혼입함에도 불구하고, 그들은 또한 마우스 항체로부터 유래된 모든 CDR 보다 적게(예를 들어, 적어도 3, 4 또는 5개의 CDR) 구성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos et al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002; Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura et al, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000]).
일부 항체에서, SDR로 칭해지는 CDR의 부분, 즉, 결합을 위해 필요한 CDR 잔기의 서브세트만이 인간화된 항체에서의 결합을 유지하는데 필요하다. 항원과 접촉되지 않고, SDR에 있지 않은 CDR 잔기는 분자 모델링에 의해 및/또는 경험적으로, 또는 문헌[Gonzales et al., Mol. Immunol. 41: 863, 2004]에 기재된 바와 같이 코티아 초가변 루프 외부에 놓인 카바트 CDR의 영역으로부터(Chothia, J. Mol. Biol. 196:901, 1987) 이전의 연구를 기반으로 동정될 수 있다(예를 들어, CDR H2에서 잔기 H60 내지 H65는 종종 필요하지 않음). 하나 이상의 공여체 CDR 잔기가 없거나 또는 전체 공여체 CDR이 생략된 위치에서 이러한 인간화된 항체에서, 위치를 점유하는 아미노산은 수용체 항체 서열에서 (카바트 넘버링에 의해) 대응하는 위치를 점유하는 아미노산일 수 있다. 포함되는 CDR에서 수용체의 공여체 아미노산으로의 이러한 치환 수는 경쟁적 고려사항의 균형을 반영한다. 이러한 치환은 인간화된 항체에서 마우스 아미노산 수의 감소 및 결과적으로 잠재적 면역원성의 감소에서 잠재적으로 유리하다. 그러나, 치환은 또한 친화도의 변화를 야기할 수 있으며, 친화도의 상당한 감소는 바람직하게는 회피된다. CDR 내의 치환을 위한 위치 및 치환하기 위한 아미노산은 또한 경험적으로 선택될 수 있다.
MCAM에 대한 2120.4.19 래트 항체는 PCT/US2013/058773에 개시되어 있으며, 서열번호 69 내지 80에 의해 본 명세서에 정의되어 있다. 2120.4.19 항체의 키메라, 베니어 및 인간화된 형태는 또한 '773 출원에 개시되어 있었다. 개시된 인간화된 형태는 본 명세서에서 서열번호 115 내지 119, 121 내지 123, 139 내지 141 및 153으로서 정의되어 있다. 이들 서열번호로 표시되는 인간화된 중쇄 및 인간화된 경쇄의 임의의 사전 돌연변이를 포함하는 개시된 형태는 본 발명의 일부 양상, 예컨대 약제학적 조성물 및 제형에서 사용될 수 있다.
본 출원은 중쇄 가변 영역의 위치 1(카바트 넘버링)에서 글루탐산으로 치환되는(즉, Q1E) 2120.4.19 항체의 추가적인 인간화된 형태를 제공한다. 중쇄 가변 영역에서 Q1E 치환은 항체의 결합 특징에 대해 실질적인 효과를 생성하는 것으로 예상되지 않지만, 항체 안정성을 개선시킬 수 있는 보존적 치환이다.
문맥으로부터 달리 명확하지 않다면, 다음의 설명은 PCT/US2013/058773에 개시된 인간화된 항체 및 본 명세서에 개시된 Q1E 변이체를 포함한다.
본 발명은 서열번호 78의 카바트 CDR1: GFSLTSNGVS; 서열번호 79의 카바트 CDR2: AISSGGTTYYNSAFKS; 및 서열번호 80의 카바트 CDR3: RYGYGWYFDF를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 제공한다. 일부 항체는 서열번호 73의 카바트 CDR1: KASQNIYNSLA; 서열번호 74의 카바트 CDR2: NANSLQT; 및 서열번호 75의 카바트 CDR3: QQFYSGYT를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 이러한 항체는 서열번호 78의 카바트 CDR1에서 N32Q 치환 또는 N32Q 치환을 포함하고, 일부는 서열번호 78의 카바트 CDR1에서 G33A 치환을 포함한다. 이들 치환은 항체 친화도 및 효능의 증가를 포함하는 개선된 특징을 제공하는 것으로 발견되었다.
본 발명은 또한 성숙 중쇄 가변 영역이 서열번호 161에 대해 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가지고, 성숙 경쇄 가변 영역이 서열번호 123에 대해 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 항-MCAM 항체를 제공한다. 일부 이러한 항체는 공여체 2120.4.19 항체의 CDR 영역에 대해 완전히 또는 실질적으로 동일한 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 동일하지 않다면, CDR을 바람직하게는 본 명세서에 정의된, 예컨대 앞 단락의 유형 및 위치에서 치환을 가진다. CDR 영역은 임의의 전통적인 정의(예를 들어, 코티아)에 의해 정의될 수 있지만, 바람직하게는 카바트에 의해 정의된다.
임의의 상기 정의한 항체는 인간화된 항체일 수 있다. 일부 인간화된 항체는, 위치 32(카바트 넘버링)가 N, S 또는 Q일 수 있고, 위치 33(카바트 넘버링)은 G 또는 A일 수 있다는 것을 제외하고, 서열번호 161의 3개의 카바트 CDR(서열번호 156의 CDR과 동일함)을 포함하는 성숙 중쇄 가변 영역 및 서열번호 123의 3개의 카바트 CDR(서열번호 120의 CDR과 동일함)을 포함하는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하되, 바람직하게는 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 90% 동일하고, 바람직하게는 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 90% 동일하다. 임의의 이러한 항체는 카바트 넘버링에 의해 위치 H1에서 Q 또는 E(즉, Q1E 치환)를 가질 수 있다.
성숙 중쇄 가변 영역에서 Q1E 치환을 갖는 본 명세서에 제공된 항체는 서열번호 156(즉, 2120.4.19.Q1E), 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 갖는 성숙 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 일부 이러한 항체는 서열번호 120, 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123에 표기된 아미노산 서열을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함한다. 성숙 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 임의의 가능한 순열로 조합될 수 있다. 예시적인 조합은 서열번호 161의 아미노산 서열을 갖는 성숙 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 123에 표기된 아미노산 서열을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체이다. Q1E 치환이 없는 이들 항체의 형태는, 예컨대 PCT/US2013/058773에 기재되어 있으며, 또한 약제학적 조성물 및 제형과 같은 본 발명의 일부 양상에서 사용될 수 있다.
본 발명은 중쇄 성숙 가변 영역이 임의의 서열번호 156(즉, 2120.4.19.Q1E), 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가지고, 경쇄가 임의의 서열번호 120, 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123에 대해 적어도 90%,95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 항체를 추가로 제공한다. 이러한 항체는 바람직하게는 인간화된다. 임의의 이러한 항체는 카바트 넘버링에 의해 위치 H1에서 Q 또는 E(즉, Q1E 치환)를 가질 수 있다.
서열번호에 개시된 변이체는 전형적으로 적은 수(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄 성숙 가변 영역 프레임워크, 또는 둘 다에서 전형적으로 1, 2, 3, 5 또는 10개 이하)의 치환, 결실 또는 삽입만큼 성숙 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열과 상이하다. 임의의 변화는 바람직하게는 보존적 치환이다.
B. 불변 영역의 선택
키메라, 베니어 또는 인간화된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 인간 불변 영역의 적어도 일부에 연결될 수 있다. 불변 영역의 선택은 항체-의존적 세포-매개 세포독성, 항체 의존적 세포 식세포작용 및/또는 상보체 의존적 세포독성이 요망되는지의 여부에 부분적으로 의존한다. 예를 들어, 인간 아이소토프 IgG1 및 IgG3은 상보체-의존적 세포독성을 가지며, 인간 아이소토프 IgG2 및 IgG4는 그렇지 않다. 인간 IgG1 및 IgG3은 또한 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개 효과기 기능을 유도한다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다.
경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카복시 말단에서 하나 또는 몇몇 아미노산, 예컨대 중쇄의 C-말단 라이신은 분자의 부분 또는 모두에서 상실 또는 유도체화될 수 있다. 치환은 상보체-매개 세포독성 또는 ADCC와 같은 효과기 기능을 감소 또는 증가시키기 위해(예를 들어, 윈터(Winter) 등의 미국 특허 제5,624,821호; Tso 등의 미국 특허 제5,834,597호; 및 문헌[Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006] 참조), 또는 인간에서의 반감기를 연장시키기 위해(예를 들어, 문헌[Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004]) 불변 영역에서 이루어질 수 있다. 예시적인 치환은 항체의 반감기를 증가시키기 위해 위치 250에서 Gln 및/또는 위치 428에서 Leu을 포함한다(EU 넘버링은 불변 영역에 대해 이 단락에서 사용된다). 임의의 또는 모든 위치 234, 235, 236 및/또는 237에서의 치환은 Fcγ 수용기, 특히 FcγRI 수용기에 대한 친화도를 감소시킨다(예를 들어, 미국 특허 제6,624,821호). 인간 IgG1의 위치 234, 235 및 237에서 알라닌 치환은 효과기 기능을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 항체는 효과기 기능을 감소시키기 위해 인간 IgG1의 위치 234, 235 및 237에서 알라닌 치환을 가진다. 선택적으로, 인간 IgG2에서 위치 234, 236 및/또는 237은 알라닌으로 치환되고 위치 235는 글루타민으로 치환된다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호). 일부 항체에서, 인간 IgG1의 EU 넘버링에 의해 위치 241, 264, 265, 270, 296, 297, 322, 329, 및 331 중 하나 이상의 돌연변이가 사용된다. 일부 항체에서, 인간 IgG1의 EU 넘버링에 의해 위치 318, 320 및 322 중 하나 이상의 돌연변이가 사용된다. 일부 항체에서, 위치 234 및/또는 235는 알라닌으로 치환되고/되거나 위치 329는 글리신으로 치환된다. 일부 항체에서, 위치 234 및 235는 서열번호 172에서와 같이 알라닌으로 치환된다. 일부 항체에서, 아이소타입은 인간 IgG2 또는 IgG4이다. 예시적인 인간 경쇄 카파 불변 영역은 서열번호 168의 아미노산 서열을 가진다. 경쇄 카파 불변 영역이 서열번호 169의 아미노산 서열을 갖는 경우에 서열번호 168의 N-말단 알기닌은 생략될 수 있다. 예시적인 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 서열번호 170의 아미노산 서열을 가진다(C-말단 라이신이 있거나 또는 없음). 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서, 별도의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv로서, 또는 단일쇄 항체로서 발현될 수 있으며, 이때 중쇄 및 경쇄 성숙 가변 도메인이 스페이서를 통해 연결된다.
인간 불변 영역은 상이한 개체 사이의 알로타이프 변이 및 아이소알로타이프 변이를 나타내며, 즉, 불변 영역은 하나 이상의 다형성 위치에서 상이한 개체에서 상이할 수 있다. 아이소알로타이프는 알로타이프와 상이하며, 즉, 아이소알로타이프를 인식하는 혈청은 하나 이상의 다른 아이소타입의 비다형성 영역에 결합한다. 따라서, 예를 들어, 다른 중쇄 불변 영역은 IgG1 G1m3 알로타이프이고, 서열번호 171의 아미노산 서열을 가진다. 다른 중쇄 불변 영역은 그것이 C-말단 라이신을 결여한다는 것을 제외하고 서열번호 171의 아미노산 서열을 가진다. 다른 중쇄 불변 영역은 서열번호 172의 아미노산 서열을 가진다. 또 다른 중쇄 불변 영역은 그것이 C-말단 라이신을 결여한다는 것을 제외하고 서열번호 172의 아미노산 서열을 가진다.
본 발명은 임의의 상기 불변 영역을 암호화하는 핵산을 추가로 제공한다. 선택적으로, 이러한 핵산은 추가로 신호 펩타이드를 암호화하며, 불변 영역에 연결된 신호 펩타이드에 의해 발현될 수 있다.
C. 재조합 항체의 발현
항체는 재조합 발현에 의해 생성될 수 있다. 항체를 암호화하는 핵산은 요망되는 세포 유형(예를 들어, CHO 또는 Sp2/0)에 대해 코돈 최적화될 수 있다. 재조합 핵산 작제물은 전형적으로 천연-관련된 또는 이종성 프로모터 영역을 포함하는 항체쇄의 암호 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함한다. 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터에서의 진핵 프로모터 시스템일 수 있다. 일단 벡터가 적절한 숙주 내에 혼입되었다면, 숙주는 뉴클레오타이드 서열의 고수준 발현, 및 교차 반응 항체의 수집 및 정제를 위한 적합한 조건 하에서 유지된다. 항체쇄를 암호화하는 벡터 또는 벡터들은 또한 항체쇄를 암호화하는 핵산의 복제수를 증폭시키기 위해 선택가능한 유전자, 예컨대 다이하이드로엽산 환원효소를 함유할 수 있다.
이콜라이는 항체, 특히 항체 단편을 발현시키는데 특히 유용한 원핵 숙주이다. 미생물, 예컨대 효모는 또한 발현에 유용하다. 사카로마이세스는 요망된다면 발현 제어 서열, 복제기점, 종결서열 등을 갖는 적합한 벡터를 지니는 효모 숙주의 예이다. 전형적인 프로모터는 3-포스포글리세레이트 키나제 및 기타 당분해효소를 포함한다. 유도성 숙주 프로모터는 특히 알코올탈수소효소, 아이소사이토크롬 C, 및 말토스 및 갈락토스 이용을 초래하는 효소로부터의 프로모터를 포함한다.
포유류 세포는 면역글로불린 또는 이의 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드 세그먼트를 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 문헌[Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)] 참조. 무결함 이종성 단백질을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주가 당업계에서 개발되었고, CHO 세포주, 다양한 COS 세포주, 헬라(HeLa) 세포, HEK293 세포, L 세포, 및 Sp2/0 및 NS0를 포함하는 비-항체-생성 골수종을 포함한다. 비인간 세포를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 이들 세포에 대한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제기점, 프로모터, 인핸서(Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)), 및 필수적 정보 처리 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 적합한 발현 제어 서열은 내인성 유전자, 사이토메갈로바이러스, SV40, 아데노바이러스, 소 파필로마바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다. 문헌[Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992)] 참조.
세포 배양물 내로 항체 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 벡터(들)를 도입하면, 세포 풀은 무혈청 배지에서 성장 생산성 및 생성물 품질에 대해 선별될 수 있다. 이어서, 상부-생성 세포 풀은 단클론성 계통을 생성하기 위해 FACS-기반 단일 세포 클로닝이 실시될 수 있다. 7.5g/ℓ 배양물 초과의 생성물 역가에 대응하는 50pg 또는 100pg/세포/일 초과의 구체적 생산성이 유리할 수 있다. 단일 세포 클론에 의해 생성되는 항체는 또한 탁도, 여과 특성, PAGE, IEF, UV 스캔, HP-SEC, 탄수화물-올리고당 맵핑, 질량분석법 및 결합 분석, 예컨대 ELISA 또는 바이어코어(Biacore)에 대해 시험될 수 있다. 이어서, 선택된 클론은 다수 바이알에 저장될 수 있고, 후속 사용을 위해 냉동저장될 수 있다.
일단 발현되면, 항체는 단백질 A 포획, 칼럼 크로마토그래피(예를 들어, 소수성 상호작용 또는 이온 교환), 바이러스 불활성화에 대한 낮은 pH 등을 포함하는 당업계의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(일반적으로 문헌[Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)] 참조).
코돈 최적화, 프로모터의 선택, 전사 구성요소 및 종결자, 무혈청 단일 세포 클로닝, 세포 뱅킹, 복제수의 증폭을 위한 선택마커의 사용, CHO 종결자, 무혈청 단일 세포 클로닝, 단백질 역가의 개선을 포함하는 항체의 상업적 생성을 위한 방법(예를 들어, 미국 특허 제5,786,464호, 미국 특허 제5,888,809호, 미국 특허 제6,063,598호, 미국 특허 제6,114,148호, 미국 특허 제7,569,339호, WO2004/050884, WO2005/019442, WO2008/012142, WO2008/012142, WO2008/107388 및 WO2009/027471 참조).
D. 핵산
본 발명은 추가로 상기 기재한 임의의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산을 제공한다. 전형적으로, 핵산은 또한 성숙 중쇄 및 경쇄에 융합되는 신호 펩타이드(예를 들어, 서열번호 162, 164 및 166에 의해 암호화될 수 있는 서열번호 163, 165 및 167의 아미노산 서열을 갖는 신호 펩타이드)를 암호화한다. 핵산 상의 암호 서열은 프로모터, 인핸서, 리보솜 결합 부위, 전사 종결 신호 등과 같은 암호 서열의 발현을 보장하기 위해 조절서열과 작동가능하게 연결될 수 있다. 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산은 단리된 형태로 생길 수 있거나 또는 하나 이상의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 핵산은, 예를 들어, 중복 올리고뉴클레오타이드의 고체 상태 합성 또는 PCR에 의해 합성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산은, 예를 들어, 발현 벡터 내에서 하나의 인접한 핵산으로서 결합될 수 있거나, 또는 분리될 수 있고, 예를 들어, 각각 그 자체의 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
E. 항체 결합을 위한 MCAM 에피토프의 특성규명 및 그에 결합하는 항체의 생성
1. 항체 결합을 위한 MCAM 에피토프
본 발명은 인간 MCAM 단백질 내에서 특이적 에피토프에 결합하는 단클론성 항체를 제공하며, 이의 일부는 2120.4.19(m2120)로 표기된 항체와 동일 또는 중복되는 에피토프에 결합한다.
MCAM의 잔기 39, 62, 133, 141, 159, 212, 220, 221, 223, 227, 238, 241 및/또는 392(서열번호 11)에서 돌연변이는 m2120의 특이적 결합을 파괴한다(예를 들어, 실시예로서 기재한 바와 같은 양성 대조군 야상형 MCAM에 비해 돌연변이체 MCAM에 대해 30% 미만의 결합). 잔기 145, 167, 175, 206, 207, 216 및 225에서 돌연변이는 m2120의 가장 큰 효과(감소)의 특이적 결합을 갖는 것으로 동정되었다. 상대적으로 소수의 잔기가 결합에 영향을 미치고 잔기는 전형적인 선형 에피토프(예를 들어, 3 내지 20개의 인접한 아미노산)보다 더 넓게 이격되기 때문에, 이들 결과는 m2120이 입체구조적 에피토프에 결합할 수 있거나 또는 대안적으로, 결합에 영향을 미치는 하나 이상의 잔기가 항체와 직접 접촉 없이 다른자리입체성으로 결합할 수 있다는 표시를 제공한다.
MCAM의 39, 62, 133, 141, 145, 159, 167, 175, 206, 207, 212, 216, 220, 221, 223, 225, 227, 238, 241 및 392 중 하나 이상을 포함하는 에피토프, 및 특히 잔기 141 및 145 중 하나 이상을 포함하는 에피토프에 대한 항체 결합은 m2120 내에서 유용한 저해 특성을 공유할 가능성이 있다. 따라서, MCAM의 하나 이상의 잔기 141 및 145 중 하나 이상 및 특히 잔기 141의 돌연변이유발에 의해 특이적 결합이 저해된 항체는 m2120에 대해 유사한 특성을 공유할 가능성이 있다. 일부 이러한 항체는 MCAM의 잔기 141 및/또는 145를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 에피토프에 결합한다. 에피토프는 구체화된 아미노산(141 및 145) 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 에피토프(예를 들어, 2-5, 3-5, 3-10, 3-15, 3-20, 5-10, 5-15, 5-20, 5-30, 5-40, 5-50, 5-60, 또는 5-70 인접한 아미노산)와 같이 선형일 수 있거나, 구체화된 아미노산 중 1 또는 둘 다를 포함하거나 또는 이루어진 입체구조일 수 있다.
2. 특이적 MCAM 에피토프를 결합하는 항체의 생성
일부 항체는 m2120 항체와 동일 또는 중복되는 에피토프에 결합한다. 인간 MCAM에 대해 다른 비인간 단클론성 항체, 예를 들어, 뮤린, 기닉픽, 영장류, 토끼 또는 래트의 생성은, 예를 들어, 목적으로 하는 에피토프("면역원")를 포함하는 인간 MCAM 또는 이의 인간 MCAM cDNA를 나타내는 인간 MCAM 또는 펩타이드 단편 또는 세포주를 이용하여 동물을 면역화시킴으로써(레트로바이러스에 의한 암호화 또는 유전자총에 의한 면역화), 그리고 선택적으로 m2120와 경쟁하여 MCAM에 대해 얻어진 항체를 선별함으로써, 달성될 수 있다(문헌[Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (CSHP NY, 1988)] 참조, 모든 목적을 위해 참고로 포함됨). 선택적으로, 면역원은 담체 분자에 컨쥬게이팅된다. 선택적으로, 면역원은 애주번트와 함께 투여된다. 몇몇 유형의 애주번트는 이하에 기재되는 바와 같이 사용될 수 있다. 완전 프로인트 애주번트, 이어서, 불완전 애주번트는 실험 동물의 면역화에 바람직하다. 토끼 또는 기닉픽은 전형적으로 다클론성 항체를 제조하는데 사용된다. 마우스는 전형적으로 단클론성 항체를 제조하는데 사용된다. 항체는 MCAM 내에서 목적으로 하는 에피토프에 대한 특이적 결합을 위해 선별된다.
본 발명은 상기 기재된 에피토프와 관련된 항체를 생성하기 위해 사용되는 MCAM의 펩타이드 단편을 제공한다. 이러한 펩타이드의 예는 길이로 2-5, 3-5, 3-10, 3-15, 3-20, 5-10, 5-15, 5-20, 5-30, 5-40, 5-50, 5-60 또는 5-70 인접한 아미노산인 펩타이드를 포함하고, MCAM의 아미노산 잔기 141 및 145 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 이들 펩타이드에서, 펩타이드는 아미노산 잔기 141와 145 둘 다를 포함한다.
면역원은 담체 분자, 전형적으로 담체 폴리펩타이드에 컨쥬게이팅될 수 있고, 따라서, 담체에 컨쥬게이팅된 단편에 대해 면역 반응을 유발할 수 있다. 단일 제제는 단일 담체에 연결될 수 있고, 제제의 다중 복제물은 담체의 결국 서로 연결되는 다중 복제물에 연결될 수 있으며, 제제의 다중 복제물은 담체의 단일 복제물에 연결될 수 있거나, 또는 제제의 단일 복제물은 담체의 다중 복제물, 또는 상이한 담체에 연결될 수 있다. 적합한 담체는 혈청 알부민, 키홀-림펫 헤모사이아닌(keyhole limpet hemocyanin), 면역글로불린 분자, 티로글루불린, 오발부민, 파상풍 톡소이드, 또는 다른 병원성 박테리아, 예컨대 디프테리아(예를 들어, CRM197), 이콜라이(E. coli) 콜레라, 또는 헬리코박터 파일로리(H. pylori) 또는 약독된 독소 유도체로부터의 톡소이드를 포함한다.
면역원은 종종 약제학적으로 허용가능한 애주번트와 함께 투여된다. 펩타이드가 단독으로 사용된다면 애주번트는 유도된 항체의 역가 및/또는 상황에 대해 유도된 항체의 결합 친화도를 증가시킨다. 다양한 애주번트는 면역 반응을 유발하기 위해 MCAM의 면역원 단편과 조합하여 사용되어 사용될 수 있다. 바람직한 애주번트는 반응의 정량적 형태에 영향을 미치는 면역원에서 입체구조적 변화를 야기하는 일 없이 면역원에 대해 고유한 반응을 증가시킨다. 예시적인 애주번트는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄, 3 De-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A(MPL(상표명))를 포함한다(영국 특허 제2220211호(몬태나주 해밀턴에 소재한 RIBI 이뮤노켐 리서치 인코포레이티드(RIBI ImmunoChem Research Inc.), 현재 코릭사사(Corixa)의 부분임). 스티뮬론(Stimulon)(상표명) QS-21은 남아메리카에서 발견된 퀼라야사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina) 나무의 껍질로부터 단리된 테르펜 글리코사이드 또는 사포닌이다(문헌[Kensil et al., in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995)]; 미국 특허 제5,057,540호), (매사추세츠주 프레이밍햄에 소재한 아퀼라 바이오파마슈티칼스(Aquila BioPharmaceuticals); 현재 뉴욕주 뉴욕에 소재한 안티제닉스 인코포레이티드(Antigenics, Inc.)). 다른 애주번트는 선택적으로 모노포스포릴 지질 A, 플루로닉 중합체, 및 사멸 마이코박테리아와 같은 면역 자극제와 조합한 수중유 에멀전(예컨대 스쿠알렌 또는 땅콩유)이다(문헌[Stoute et al., N. Engl . J. Med . 336, 86-91 (1997)] 참조). 다른 애주번트는 CpG이다(WO 98/40100). 애주번트는 활성제를 지니는 치료 조성물의 성분으로서 투여될 수 있거나 또는 치료제의 투여 전에, 동시에 또는 후에 별도로 투여될 수 있다.
3. 항체의 유형
항체는 단클론성 또는 다클론성일 수 있다. 항체는 비인간, 예컨대 마우스 또는 래트, 비인간 영장류일 수 있거나 또는 인간일 수 있다. 항체는 키메라, 베니어, 인간화, 영장류화 등일 수 있다.
단클론성 항체는 상기 기재된 방법 및 퀸의 미국 특허 제5,530,101호 및 제5,585,089호; 윈터의 미국 특허 제5,225,539호, 카터의 미국 특허 제6,407,213호, 아다이르의 미국 특허 제5,859,205호, 제6,881,557호, 푸트의 미국 특허 제6,881,557호에 기재된 방법을 이용하여 인간화된다. 수용체 항체 서열은, 예를 들어, 성숙 인간 항체 가변 영역 서열, 이러한 서열의 복합체, 인간 항체 가변 영역 서열의 공통 서열(예를 들어, 카바트의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 공통 서열, 1991, 상기 참조), 또는 생식계열 서열일 수 있다. 따라서, 인간화된 항체는 공여체 항체 및 가변 영역 프레임워크 서열 및 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면 인간 항체 서열로부터 완전히 또는 실질적으로 일부 또는 모든 CDR을 갖는 항체이다. 유사하게 인간화된 중쇄는 공여체 항체 중쇄, 및 중쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 중쇄 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면, 인간 중쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 적어도 1, 2 및 보통은 모두 3개의 CDR을 가진다. 유사하게 인간화된 경쇄는 공여체 항체 경쇄, 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 경쇄 불변 영역으로부터 완전히 또는 실질적으로, 존재한다면, 인간 경쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터 실질적으로 적어도 1, 2 및 보통은 모두 3개의 CDR을 가진다. 나노바디 및 dAb 이외에, 인간화된 항체는 인간화된 중쇄 및 인간화된 경쇄를 포함한다. 인간화된 항체에서 CDR은, 대응하는 잔기(카바트에 의해 정의된 바와 같음)의 적어도 85%, 90%, 95% 또는 100%가 각각의 CDR 간에 동일할 때 비인간 항체에서 대응하는 CDR로부터 실질적으로 유래된다. 카바트에 의해 정의되는 대응하는 잔기의 적어도 85, 90, 95 또는 100%가 동일할 때, 항체쇄의 가변 영역 프레임워크 서열 또는 항체쇄의 불변 영역은 실질적으로 각각 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 인간 불변 영역으로부터 유래된다.
인간화된 항체가 종종 마우스 항체로부터의 모두 6개의 CDR(바람직하게는, 카바트에 의해 정의됨)을 혼입함에도 불구하고, 그들은 또한 마우스 항체로부터 유래된 모든 CDR 보다 적게(예를 들어, 적어도 3, 4 또는 5개의) CDR로 구성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos et al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002; Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999; Tamura et al, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000]).
일부 항체에서, SDR로 칭해지는 CDR의 부분, 즉, 결합을 위해 필요한 CDR 잔기의 서브세트만이 인간화된 항체에서의 결합을 유지하는데 필요하다. 항원과 접촉되지 않고, SDR에 있지 않은 CDR 잔기는 분자 모델링에 의해 및/또는 경험적으로, 또는 문헌[Gonzales et al., Mol. Immunol. 41: 863, 2004]에 기재된 바와 같이 코티아 초가변 루프 외부에 높인 카바트 CDR의 영역으로부터(Chothia, J. Mol. Biol. 196:901, 1987) 이전의 연구를 기반으로 동정될 수 있다(예를 들어, CDR H2에서 잔기 H60 내지 H65는 종종 필요하지 않음). 하나 이상의 공여체 CDR 잔기가 없거나 또는 전체 공여체 CR이 생략된 위치에서 이러한 인간화된 항체에서, 위치를 점유하는 아미노산은 수용체 항체 서열에서 (카바트 넘버링에 의해) 대응하는 위치를 점유하는 아미노산일 수 있다. 포함되는 CDR에서 수용체의 공여체 아미노산으로의 이러한 치환 수는 경쟁적 고려사항의 균형을 반영한다. 이러한 치환은 인간화된 항체에서 마우스 아미노산 수의 감소 및 결과적으로 잠재적 면역원성의 감소에서 잠재적으로 유리하다. 그러나, 치환은 또한 친화도의 변화를 야기할 수 있으며, 친화도의 상당한 감소는 바람직하게는 회피된다. 치환하기 위한 CDR 및 아미노산 내의 치환을 위한 위치는 또한 경험적으로 선택될 수 있다.
인간 수용체 항체 서열은 선택적으로 인간 수용체 서열 가변 영역 프레임워크와 공여체 항체쇄의 대응하는 가변 영역 프레임워크 사이의 높은 정도의 서열 동일성(예를 들어, 65 내지 85% 동일성)을 제공하기 위해 다수의 공지된 인간 항체 서열 중에서 선택될 수 있다.
인간 가변 영역 프레임워크 잔기로부터의 특정 아미노산은 CDR 입체구조 및/또는 항원에 대한 결합에 대한 그들의 가능한 영향에 기반하여 치환을 위해 선택될 수 있다. 이러한 가능한 영향의 연구는 특정 위치에서 아미노산 특징의 시험, 또는 특정 아미노산의 치환 또는 돌연변이유발 효과의 경험적 관찰을 모델링하는 것에 의한다.
예를 들어, 아미노산이 뮤린 가변 영역 프레임워크 잔기 및 선택된 인간 가변 영역 프레임워크 잔기 사이에 차이가 있을 때, 인간 프레임워크 아미노산은 아미노산이 하기와 같은 것으로 합리적으로 예상될 때의 마우스 항체와 동등한 프레임워크 아미노산으로 치환될 수 있다:
(1) 항원에 비공유적으로 직접 결합됨,
(2) CDR 영역에 인접함,
(3) 다르게는 CDR 영역과 상호작용함(예를 들어, CDR 영역의 약 6Å 내임).
치환을 위한 다른 후보는 해당 위치에서 인간 면역글로불린에 대해 통상적이지 않은 수용체 인간 프레임워크 아미노산이다. 이들 아미노산은 마우스 공여체 항체의 동등한 위치로부터의 또는 더 전형적인 인간 면역글로불린의 동등한 위치로부터의 아미노산으로 치환될 수 있다. 치환을 위한 다른 후보는 해당 위치에서 인간 면역글로불린에 대해 통상적이지 않은 수용체 인간 프레임워크 아미노산이다.
본 발명은 추가로 상기 기재한 MCAM 에피토프에 특이적으로 결합하는 비인간 항체의 키메라 및 베니어 형태를 제공한다.
키메라 항체는 비-인간 항체(예를 들어, 마우스)의 경쇄 및 중쇄의 성숙 가변 영역이 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 조합되는 항체이다. 이러한 항체는 마우스 항체의 결합 특이성을 실질적으로 또는 완전히 유지하고, 약 3분의 2의 인간 서열이다.
베니어 항체는 CDR의 일부 및 보통은 모두 그리고 비-인간 항체의 비-인간 가변 영역 프레임워크 잔기의 일부를 보유하는 인간화된 항체의 유형이지만, B- 또는 T-세포 에피토프에 기여할 수 있는 다른 가변 영역 프레임워크 잔기, 예를 들어 노출된 잔기를 인간 항체 서열의 대응하는 위치로부터의 잔기로 대체한다(Padlan, Mol. Immunol. 28:489, 1991). 결과는 CDR이 비-인간 항체로부터 완전히 또는 실질적으로 유래되고, 비인간 항체의 가변 영역 프레임워크는 치환에 의해 더 인간 유사로 만들어지는 항체이다.
MCAM에 대한 인간 항체는 이하에 기재되는 다양한 기법에 의해 제공된다. 일부 인간 항체는 경쟁적 결합 실험에 의해, 상기 윈터의 파지 디스플레이 방법에 의해, 또 다르게는, 특정 마우스 항체와 동일한 에피토프 특이성, 예컨대 실시예에 기재된 마우스 단클론성 중 하나를 갖도록 선택된다. 인간 항체는 또한 표적 항원으로서 MCAM의 단편만을 이용함으로써, 및/또는 MCAM의 결실 돌연변이체의 수집에 대해 항체를 선별함으로써 특정 에피토프 특이성에 대해 선별될 수 있다.
인간 항체를 생성하는 방법은 문헌[Oestberg et al., Hybridoma 2:361-367 (1983)]; 오에스트버그(Oestberg)의 미국 특허 제4,634,664호; 및 이글맨(Engleman) 등의 미국 특허 제4,634,666호의 트리오마(trioma) 방법, 인간 면역글로불린 유전자를 포함하는 유전자이식 마우스의 사용(예를 들어, 롱버그(Lonberg) 등의 WO93/12227 (1993); 미국 특허 제5,877,397호, 미국 특허 제5,874,299호, 미국 특허 제5,814,318호, 미국 특허 제5,789,650호, 미국 특허 제5,770,429호, 미국 특허 제5,661,016호, 미국 특허 제5,633,425호, 미국 특허 제5,625,126호, 미국 특허 제5,569,825호, 미국 특허 제5,545,806호, 문헌[Nature 148, 1547-1553 (1994), Nature Biotechnology 14, 826 (1996), Kucherlapati, WO 91/10741 (1991)] 참조) 및 파지 디스플레이 방법(예를 들어, 도워(Dower) 등의 WO 91/17271 및 맥카페티(McCafferty) 등의 WO 92/01047, 미국 특허 제5,877,218호, 미국 특허 제5,871,907호, 미국 특허 제5,858,657호, 미국 특허 제5,837,242호, 미국 특허 제5,733,743호 및 미국 특허 제5,565,332호를 포함한다.
키메라, 인간화(베니어를 포함) 및 인간 항체는 전형적으로 상기 기재한 바와 같은 재조합 발현에 의해 생성된다.
본 발명은 비-항체 결합 분자를 추가로 제공한다. 비-항체 결합 분자는, 예를 들어, 리간드 결합 부위를 형성하는 4개의 초가변 루프를 지지하는 강성 베타-배럴을 특징으로 하는 단백질 구조인 리포칼린 스캐폴드에 기반한 안티칼린을 포함한다. 신규한 결합 특이성은 기능성 디스플레이 및 가이딩된 선택과 조합하여 루프 영역에서 표적화된 무작위 돌연변이유발에 의해 공학처리된다(Skerra (2008) FEBS J. 275: 2677-2683). 다른 적합한 스캐폴드는, 예를 들어, 인간 피브로넥틴 III의 열번째 세포밖 도메인에 기반한 애드넥틴(adnectin) 또는 모노바디(Koide and Koide (2007) Methods Mol. Biol. 352: 95-109); 스타필로코커스 단백질 A의 Z 도메인에 기반한 애피바디(Nygren et al. (2008) FEBS J. 275: 2668-2676)); 안키린 반복체 단백질에 기반한 DARPins(Stumpp et al. (2008) Drug. Discov. Today 13: 695-701); 인간 Fyn 단백질 키나제의 SH3 도메인에 기반한 피로머(Grabulovski et al. (2007) J. Biol. Chem. 282: 3196-3204); 설포로부스 아시도라리우스(Sulfolobus acidolarius)로부터의 Sac7d에 기반한 아피틴(Krehenbrink et al. (2008) J. Mol. Biol. 383: 1058-1068); 인간 y-B-크리스탈린에 기반한 아필린(Ebersbach et al. (2007) J. Mol. Biol. 372: 172-185); 막 수용체 단백질의 A 도메인에 기반한 아비머(Silverman et al. (2005) Biotechnol. 23: 1556-1561); 시스테인-풍부 노틴 펩타이드(Kolmar (2008) FEBS J. 275: 2684-2690); 및 공학처리된 쿠니츠형(Kunitz-type) 저해제(Nixon and Wood (2006) Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9: 261-268)를 포함할 수 있다. 검토를 위해, 문헌[Gebauer and Skerra (2009) Curr. Opin. Chem. Biol. 13: 245-255] 참조.
일부 이들 항체에서, 항체는 WO/2012/170071 및 PCT/US2013/058773에 기재된 항체, 특히 WO/2012/170071에서 클론 15(서열번호 12 내지 21로 정의됨) 및 클론 17(서열번호 1 내지 10으로 정의됨)로 표기된 항체 및 PCT/US2013/058773에 기재된 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1 및 1749.1.3으로 표기된 마우스 항-인간 MCAM 단클론성 클론, 및 2120.4.19 및 2107.4.10으로 표기된 래트 항-인간 MCAM 단클론성 항체 클론으로부터의 CDR(카바트, 코티아 또는 이들의 복합체에 의해 정의됨)을 완전히 또는 실질적으로 포함하는 항체 또는 항체들 중 임의의 하나가 아니다.
4. 활성에 대한 항체의 선별방법
본 명세서에 기재된 MCAM 항체의 저해 활성은 동일 또는 실질적으로 유사한 에피토프(예를 들어, m2120)에 결합하는 항체를 이용하는 경쟁적 결합 분석 및 MCAM 결합의 그의 리간드인 라미닌 411의 라미닌 α4 쇄를 이용하는 차단을 포함하는 다양한 방법에 의해 분석될 수 있다.
예를 들어, MCAM과 라미닌 411의 라미닌 α4 쇄 사이의 상호작용을 저해하는 MCAM 항체의 활성은 다음과 같이 선별될 수 있다. MCAM-발현 세포는 (a) 후보 항체의 존재 또는 부재 하에서, 라미닌 α4 쇄, 예를 들어, 라미닌 411의 α4 쇄를 포함하는 재조합 폴리펩타이드와 함께 인큐베이션하고; (b) 예를 들어, 형광현미경 검사 또는 유세포분석기에 의해 세포에 대한 라미닌 α4 결합 수준을 모니터링하며; 그리고 (c) 라미닌 α4 결합 수준이 후보 항체가 없을 때보다 존재할 때 더 낮다면 MCAM/라미닌 α4 상호작용의 저해제로서 상기 후보 항체를 동정한다. 대안의 선별 프로토콜은 후보 항체의 존재 및 부재 하에서 MCAM와 함께 인큐베이션될 수 있는 라미닌 α4 쇄를 발현시키는 세포 집단의 사용, 및 모니터링한 세포 집단에 대한 MCAM의 결합을 수반한다. 후보 항체의 존재 하에 세포 집단에 대한 MCAM의 결합이 후보 항체가 없을 때보다 더 낮다면, 후보 항체는 MCAM 길항제이다.
다른 모니터링 방법은 형광 활성화 세포 분류(FACS) 및 효소결합 면역흡착분석(ELISA)을 포함한다.
MCAM의 그의 리간드, 예를 들어, 라미닌 α4 쇄에 대한 결합을 저해하는 그들의 능력에 기반하여 동정된 MCAM 길항제는 MCAM-발현 세포의 침윤을 특징으로 하는 염증성 병태의 치료를 위한 후보이다.
MCAM 항체의 저해 활성이 또한 생체내에서 평가될 수 있다. MCAM 항체의 저해 활성을 평가하기 위한 방법의 예는 실험적 자가면역 뇌수막염(EAE) 모델에 의한다. EAE는 인간에서 다발성 경화증(MS)의 증상과 유사한 증상을 생성하는 실험 동물에서 발생된 질환이다. 예를 들어, 문헌[Bauer et al., Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 106: 1920-1925 (2009)] 참조. EAE는 일반적으로 다른 동물의 중추신경계로부터의 상이한 단백질, 예를 들어, 미엘린 염기성 단백질 및 전체 척수 또는 뇌조직의 추출물로, 또는 미엘린과 특이적으로 반응하는 T 세포로 동물에 주사함으로써 생성된다. EAE는 통상적으로 MS의 재발 또는 진행성 형태 과정에 따르도록 사용된다. EAE는 MS에 대한 치료제를 개발하고 MS의 특이적 질환 과정을 연구하는 적합한 동물 모델로서 작용하였다. 예를 들어, 문헌[Gold et al., Brain 129: 1953-1971 (2006)] 참조; 또한 문헌[Steinman et al., Ann. Neurol . 60: 12-21 (2006)] 참조.
TH17 분극화가 생체내에서 일어나는 EAE의 치료적 모델에서 질환 진행에 대한 MCAM 차단의 효과가 시험될 수 있다. 마우스는 EAE를 유도하기 위해 PLP 139-151 펩타이드에 의해 면역화된다. 질환 개시 후에, 마우스는 후보 항-MCAM 항체 또는 아이소타입 대조군 중 하나를 이용하여 복강내로, 그리고 그 이후에 매일 치료된다. 마우스는 매일 모니터링되며, 맹검방식으로 스코어링하고, 체중은 2 내지 3일마다 얻는다. 후보 MCAM 항체로 처리한 마우스에서 재발의 지연 및 증상 중증도의 상당한 감소는 성공적인 후보 항체를 나타낸다.
F. 컨쥬게이팅된 항체
MCAM에 특이적으로 결합하는 컨쥬게이팅된 항체는 파괴를 위해 암 또는 종양 세포 표적화에서 또는 자가면역 질환 또는 신경염증성 질환에 수반된 세포 표적화에서 유용할 수 있다. 이러한 항체는 또한 MCAM의 발현에 의해 적어도 부분적으로 매개된 임의의 질환을 표적화하는데 유용할 수 있다. 예를 들어, 이러한 항체는 다른 치료제, 다른 단백질, 다른 항체 및/또는 검출가능한 표지와 컨쥬게이팅될 수 있다. WO 03/057838; 미국 특허 제8,455,622호 참조. 이러한 치료제는 환자에서 원치않는 병태 또는 질환, 예컨대 자가면역질환, 신경염증 질환 또는 암을 치료, 하거나, 싸우거나, 좋아지게 하거나, 예방하거나 또는 개선시킬 수 있다. 치료제는 세포독성제, 세포증식억제제, 방사선치료제, 면역조절제 또는 항체의 활성을 용이하게 하거나 또는 향상시킬 수 있는 임의의 생물학적 활성제를 포함할 수 있다. 세포독성제는 세포에 대해 독성인 임의의 제제일 수 있다. 세포증식 억제제는 세포 증식을 저해하는 임의의 제제일 수 있다. 면역조절제는 면역학적 반응의 발생 또는 유지를 자극 또는 저해하는 임의의 제제일 수 있다. 방사선치료제는 방사선을 방출하는 임의의 분자 또는 화합물일 수 있다. 이러한 치료제가 MCAM-특이적 항체, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체와 결합된다면, 결합된 치료제는 다른 세포 이상으로 MCAM-발현 세포(예를 들어, 면역 세포, 예컨대 TH17-발현 세포, 또는 암세포, 예컨대 악성 멜라닌세포)에 대한 특이적 친화도를 가질 것이다. 결과적으로, 컨쥬게이팅된 항체의 투여는 다른 주위의 세포 및 조직에 대해 최소 효과를 지니고 MCAM-발현 세포를 직접적으로 표적화한다. 이는 그 자체로 투여되는 것이 너무 독성인 치료제에 대해 특히 유용하다. 추가로, 더 적은 양의 치료제가 사용될 수 있다.
항체는 면역독소로서 작용하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,194,594호 참조. 예를 들어, 식물로부터 유래된 세포 독소인 리신은 항체에 대해 이작용성 시약인 S-아세틸머캅토숙신 무수물 및 리신에 대해 숙신이미딜 3-(2-피리딜다이티오)프로피오네이트를 이용함으로써 항체에 결합될 수 있다. 문헌[Pietersz et al., Cancer Res. 48(16):4469-4476 (1998)] 참조. 결합은 리신의 B-쇄 결합 활성의 상실을 초래하는 반면, 리신의 A-쇄의 독성 가능성도 항체의 활성도 손상시키지 않는다. 유사하게, 리보솜 조립체의 저해제인 사포닌은 화학적으로 삽입된 설프하이드릴기 사이의 이황화 결합을 통해 결합될 수 있다. 문헌[Polito et al., Leukemia 18:1215-1222 (2004)] 참조.
방사성동위원소는 또한 항체, 예를 들어, 이트륨90(90Y), 인듐111(111In), 131I, 99mTc, 방사성 은-111, 방사성 은-199 및 비스무트213에 연결될 수 있다. 항체에 대한 방사성 동위원소의 결합은 전통적인 2기능성 킬레이트에 의해 수행될 수 있다. 방사성 은-11 및 방사성 은-199 결합을 위해, 황 기반 결합제가 사용될 수 있다. 문헌[Hazra et al., Cell Biophys. 24-25:1-7 (1994)] 참조. 은 방사성 동위원소의 결합은 아스코르브산을 이용하여 면역글로불린을 환원시키는 단계를 수반할 수 있다. 방사성 동위원소, 예컨대 111In 및 90Y에 대해, 이브리투모맙 티욱세탄은 사용될 수 있고, 111In-이브리투모맙 티욱세탄 및 90Y-이브리투모맙 티욱세탄을 각각 형성하기 위해 이러한 아이소토프와 반응할 것이다. 문헌[Witzig, Cancer Chemother. Pharmacol., 48 Suppl 1:S91-S95 (2001)] 참조.
다른 치료제가 또한 항체에 결합될 수 있다. 치료제는 보통 세포독성 또는 세포증식 억제성일 수 있다. 예를 들어, 항체는 독성 화학치료 약물, 예컨대 메이탄신, 겔다나마이신, 튜불린 저해제, 예컨대 아우리스타틴, 또는 마이너 그루브 결합제, 예컨대 칼케아마이신과 컨쥬게이션될 수 있다. 다른 대표적인 치료제는 자가면역질환, 신경염증성 질환 또는 암의 치료, 관리, 또는 개선 또는 자가면역 질환, 신경염증성 질환 또는 암의 증상에 유용한 것으로 알려진 제제를 포함한다. 이러한 치료제의 예는 본 명세서의 다른 곳에 개시된다.
항체는 또한 다른 단백질과 결합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 파이노머(Fynomer)와 결합될 수 있다. 파이노머는 인간 Fyn SH3 도메인으로부터 유래된 소결합 단백질(예를 들어, 7kDa)이다. 그러나, 그들은 안정하고 가용성일 수 있으며, 그들은 시스테인 잔기 및 이황화 결합을 결여할 수 있다. 파이노머는 항체와 동일한 친화도 및 특이성을 지니는 표적 분자에 결합하도록 공학처리될 수 있다. 그들은 항체에 기반한 다중 특이성 융합 단백질을 생성하는데 적합하다. 예를 들어, 파이노머는 상이한 구조를 지니는 이중- 및 삼중-특이성 파이놈Ab를 생성하기 위해 항체의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합될 수 있다. 파이노머는 FACS, 바이어코어 및 최적의 특성을 지니는 파이노머의 효율적인 선택을 허용하는 세포 기반 분석을 이용하는 선별 기법을 통해 파이노머 라이브러리를 이용하여 선택될 수 있다. 파이노머의 예는 문헌[Grabulovski et al., J. Biol . Chem . 282:3196-3204 (2007); Bertschinger et al., Protein Eng . Des. Sel . 20:57-68 (2007); Schlatter et al., MAbs . 4:497-508 (2011); Banner et al., Acta . Crystallogr . D. Biol . Crystallogr . 69(Pt6):1124-1137 (2013); 및 Brack et al., Mol . Cancer Ther. 13:2030-2039 (2014)]에 개시되어 있다.
본 명세서에 개시된 항체는 또한 하나 이상의 다른 항체에 결합되거나 또는 컨쥬게이팅될 수 있다(예를 들어, 항체 헤테로컨쥬게이트를 형성). 이러한 다른 항체는 MCAM 내에서 상이한 에피토프에 결합할 수 있거나 또는 상이한 표적 항원에 결합할 수 있다.
항체는 또한 검출가능한 표지에 결합할 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어, 자가면역 질환, 신경염증성 질환, 또는 암의 진단을 위해, 자가면역 질환, 신경염증성 질환, 또는 암의 진행의 모니터링을 위해, 및/또는 치료 효능을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 항체는 자가면역 질환, 신경염증성 질환, 또는 암에 걸렸거나 또는 여지가 있는 대상체에서, 또는 이러한 대상체로부터 얻은 적절한 생물학적 샘플에서 이러한 결정을 수생하는데 유용할 수 있다. 항체에 결합되거나 또는 연결될 수 있는 대표적인 검출가능한 표지는 다양한 효소, 예컨대 겨자무과산화효소, 알칼리 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스터라제; 보결분자단, 이러한 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴; 형광 물질, 예컨대 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오사이아네이트, 로다민, 다이클로로트라이아진일아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린; 발광 물질, 예컨대 루미놀; 생발광 물질, 예컨대 루시퍼라제, 루시페린 및 아에쿠오린; 방사성 물질, 예컨대 방사성 은-111, 방사성 은-199, 비스무트213, 요오드(131I, 125I, 123I, 121I,), 탄소(14C), 황(5S), 삼중수소(3H), 인듐(115In, 113In, 112In, 111In), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga, 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브데늄(99Mo), 제논(133Xe), 플루오린(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn 및 117Tin; 다양한 양전자 방사 단층 촬영을 이용하는 양전자 방출 금속; 비방사성 상자성 금속 이온; 및 특이적 방사성 동위원소에 방사성 표지 또는 컨쥬게이팅된 분자를 포함한다.
치료제, 다른 단백질, 다른 항체 및/또는 검출가능한 표지는 당업계에 공지된 기법을 이용하여 뮤린, 키메라, 베니어 또는 인간화된 항체에 중간체(예를 들어, 링커)를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 결합 또는 컨쥬게이팅될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985); 및 Thorpe et al., Immunol. Rev., 62:119-58 (1982)] 참조. 적합한 링커는, 예를 들어, 절단가능 및 비-절단가능 링커를 포함한다. 산성 또는 환원 조건 하에서 또는 특이적 프로테아제에 대한 노출 시 약물을 방출하는 상이한 링커가 사용될 수 있다. 마찬가지로, 산성 또는 환원 조건 하에서, 또는 특이적 프로테아제에 대한 노출 시, 결합된 치료제, 단백질, 항체 및/또는 검출가능한 표지를 방출하는 상이한 링커가 사용될 수 있다.
IV. 치료방법
본 명세서에 개시된 항체 또는 다른 길항제는 특히 자가면역 질환, 신경염증 질환 및 암의 일반적 집단에 대해 상승된 위험을 갖거나(예를 들어, DSM-IV-TR 또는 DSM-V의 기준과 같은 당업계에 인식된 기준을 충족시킴) 또는 상승된 위험에 있는 대상체의 예방을 치료 또는 달성하기 위해 사용될 수 있다. 상승된 위험은 질환과 관련된 하나 이상의 유전적 또는 생화학적 마커 또는 질환과 일치되지만 분명한 진단을 내리기에는 불충분한 하나이상의 증상의 존재로부터 평가될 수 있다. 상기 언급된 범주 또는 질환은 반드시 서로 상호 배타적이지 않으며; 예를 들어, 다발성 경화증은 신경염증 또는 자가면역으로서 분류될 수 있다. 본 방법에 의해 치료될 수 있는 일부 특이적인 예시적 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알레르기성 접촉성 피부염, 건선, 건선성 관절염, 류마티스 관절염, 유육종증, 염증성 장 질환, 크론병, 및 암, 특히, 고형 종양, 예컨대 흑색종을 포함한다. 방법의 실행이 메커니즘의 이해에 의존하지는 않지만, 일부 방법에서 항체 또는 다른 길항제는 T 세포(예를 들어, TH17 세포) 및 라미닌 α4 쇄(예를 들어, 내피 세포의 표면 상에서 발현된 라미닌 411의 α4 쇄) 상에서 발현된 MCAM의 상호작용을 저해함으로써 적어도 부분적으로 작용하는 것으로 믿어진다. 항체-약물 컨쥬게이트는 전형적으로 표적화된 세포 내에서의 흡수 후에 연결제의 세포독성 또는 세포증식억제 효과를 포함하는 추가적인 작용 메커니즘을 가질 수 있다. 항체-약물 컨쥬게이트는 또한 종양 관련 대식세포 독성을 유도할 수 있다.
신경염증 병태는 CNS 염증 및/또는 조직 손상을 특징으로 한다. 징후는 증가된 신경교세포 활성화, 증가된 전염증 사이토카인/케모카인 수준(예를 들어, TNFα, INFγ, IL-1β), 증가된 혈액뇌 장벽 투과성, 및/또는 증가된 면역 세포(예를 들어, 백혈구) CNS에 대한 동원/침습을 포함할 수 있다. 신경염증은 종종 면역계 세포의 만성 활성화(즉, 자가면역-관련 신경염증)와 관련되어 만성이지만, 대안적으로 또는 추가적으로 급성 에피소드일 수 있다.
다발성 경화증은 임의의 그의 적어도 4개의 하위유형에서의 치료를 잘 받아들이는 질환이다. 재발성 감퇴 MS(RR-MS)는 가장 흔한 MS 형태이고, 분명하게 정해진 악화/재발(급성 발작) 다음에 부분적 또는 완전한 회복을 특징으로 한다. 재발 기간 사이에 질환 진행은 없다. 초기에(진단시) RR-MS는 모든 새로 진단된 대상체의 약 85%를 나타낸다. 재발의 정의는 적어도 24시간 동안 존재하고, 발열 또는 사이에 일어나는 질병(예컨대 "독감" 또는 요로감염)과 관련되지 않은 새로운 증상 또는 징후를 필요로 하는데, 상승된 체온이 침묵 또는 오래된 병변을 드러낼 수 있기 때문이다.
1차 진행성(PP-MS)는 분명한 재발 없이 시작으로부터 계속된다. 정체기(안정 기간)가 있을 수 있다. 모든 MS 대상체의 10 내지 15%는 이 그룹에 있으며, 이는 더 나이든 개체에서 생기는 경향이 있다. 약 2:1로 암컷이 우세한 다른 형태와 달리, 이 그룹에서 암컷 대 수컷비는 동일하다. 또한 PP-MS는 더 소수의 뇌 MRI 변화 및 더 많은 척수병증/척수 관련 변화가 존재하는 경향이 있다.
2차 진행 형태(SP-MS)는 RR-MS로서 시작하고, 이후에 안정된 진행이 재발과 함께 또는 재발 없이 생긴다. 대략 50%의 재발성 감퇴 대상체는 2차 진행 형태로 진행한다.
개체의 약 5%에서 생기는 진행성 재발 형태(PR-MS)는 중첩 재발(회복이 있거나 또는 회복이 없음)에 의한 개시로부터 진행한다.
MS의 진단은 보통 병력, 신경학적 시험, 및 자기공명영상(MRI), 유발전위(EP) 및 척수액 분석을 포함하는 다양한 검사에 기반한다. MS의 최종 진단은 뇌, 척수 및 시신경을 포함하는 중추신경계(CNS)의 적어도 2개의 별개의 영역에서의 손상 증거 및 손상이 적어도 1개월 간격으로 일어난 증거 및 모든 다른 가능한 진단의 배제를 필요로 한다. 뿐만 아니라 당업계에 인식된 기준에 의해 MS가 진단된 대상체를 치료적으로 치료하여, 본 발명은 또한 건강한 개체의 일반적 집단에 비해 MS 진행의 증가된 위험에 그들을 위치시켜 MS의 적어도 하나의 징후 또는 증상을 갖는 개체를 예방적으로 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 방법은 MS로 진행될 수도 있고 진행되지 않을 수도 있는 MS-유사 증상(임상적 독립 증후군(CIS)으로서 지칭됨)의 한 번의 공격(또는 재발 또는 악화로 불림)이 있는 개체를 치료하기 위해 사용될 수 있다. MS가 발생할 위험에 있는 개체는 또한 방법들 중에서도, 그들의 혈청 중에서 단백질 KIR4.1에 대한 항체의 존재에 의해 동정될 수 있다.
신경염증 질환은 또한 파킨슨병을 포함한다. 파킨슨병의 증상은 떨림(예를 들어, 손, 팔, 다리, 턱 및 안면의 떨림); 팔 및 몸통의 강직 또는 경직; 운동완만증 또는 느린 이동; 자세 불안정 또는 손상된 균형 및 협응; 우울증 및 다른 감정적 변화; 연하, 저작 및 말하기의 곤란함; 비뇨기 문제 또는 변비; 피부 문제; 수면 장애를 포함한다. 파킨슨병은 이러한 증상 및/또는 뇌 스캔 및/또는 다른 질환을 판명하기 위한 다른 검사로부터 진단될 수 있다.
본 발명의 방법은 암 성장 또는 전이를 저해하기 위해 사용될 수 있다. 암은 전암성 병변을 포함하는 양성 또는 악성인, 조혈 악성종양 또는 고형 종양, 즉, 과도한 세포 성장 또는 증식으로부터 초래되는 세포 덩어리일 수 있다. 암은 양성, 악성 또는 전이성일 수 있다. 전이성 암은 그것이 처음에 신체의 다른 곳에서 시작하는 경우 해당 장소로부터 퍼진 암을 지칭한다. 전이성 암 세포에 의해 형성된 종양은 암세포가 신체의 다른 부분으로 퍼지는 과정을 지칭하기 위해 또한 사용되는 용어인 전이성 종양 또는 전이로 불린다. 일반적으로, 전이성 암은 본래의 또는 원발성 암과 동일한 명칭 및 동일한 유형의 암을 가진다. 암의 예는 고형 종양, 예컨대 흑색종, 암종, 아세포종 및 육종을 포함한다. 암은 또한 혈액학적 악성 종양, 예컨대 백혈병 또는 림프 악성종양, 예컨대 림프종을 포함한다. 이러한 암의 더 특별한 예는 편평세포암, 폐암, 복막암, 간세포암, 위장암을 포함하는 위암, 췌장암, 신경교종, 교아세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁암종, 침샘암, 콩팥 또는 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암종, 항문암, 음경암뿐만 아니라 두경부암을 포함한다.
자가면역 질환은 전신 자가면역 질환, 기관- 또는 조직-특이적 자가면역 질환, 및 자가면역유형 발현을 나타내는 질환을 포함한다. 이들 질환에서, 신체는 그 자신의 항원 중 하나에 대해 세포 및/또는 체액성 면역 반응이 발생하여 해당 항원의 파괴 및 잠재적으로 손상 및/또는 치명적인 결과를 야기한다. 존재한다면 세포 반응은 B-세포 또는 T-세포 또는 둘 다일 수 있다. 인터류킨(IL)-17 및 IL-22의 생성을 특징으로 하는 계통 T 헬퍼 세포인 TH17 세포는 인간에서 다발성 경화증 및 마우스에서 실험적 자가면역 뇌수막염(EAE)을 포함하는 병원성 자가면역 반응을 용이하게 하기 위해 조직에 유입되는 것으로 보고되었다. 예를 들어, 문헌[Cua et al., Nature 421: 744-748 (2003); Ivonov et al., Cell 126: 1121-1133 (2006)] 참조. TH17 세포는 조직에 대한 그리고 조직의 침윤에 대한 그들의 특이적 동원에 의해 염증 반응을 개시 또는 전파시킬 수 있다.
자가면역 질환의 예는 그레이브스병, 하시모토 갑상선염, 자가면역성다분비성증후군, 인슐린-의존 당뇨병(1형 당뇨병), 인슐린-내성 당뇨병(2형 당뇨병), 면역 매개 불임, 자가면역 애디슨병, 심상성천포창, 낙엽상천포창, 포진형 피부염, 자가면역 탈모, 백반증, 자가면역 용혈 빈혈, 특발성 혈소판감소성자반병, 자가면역 혈소판감소성 자반병, 악성빈혈, 중증근무력증, 길랑바레 증후군, 근강직 증후군, 급성 류마티스성 열, 교감성 안염, 굿파스 증후군, 자가면역 포도막염, 혈관성 염증, 베체트병, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 원발성 담즙성 간경변, 자가면역 간염, 자가면역 난소염, 섬유근육통, 다발근육염, 피부근염, 강직성 척추염, 타카야수 동맥염, 지방층염, 유천포창, 원인미상의 혈관염, anca 음성 혈관염, anca 양성 혈관염, 전신 홍반성 낭창, 건선성 관절염, 류마티스 관절염, 피부경화증, 전신 괴사성맥관염, 베게너 육아종증, CREST 증후군, 항인지질 증후군, 쇼그렌 증후군, 호산구성 위장염, 비전형 국소 피부염, 심근증, 감염후 증후군, 감염후 심근막심근염, 셀리악병, 다발성 경화증, 유육종증, 크론병 및 건선을 포함한다.
항체 또는 다른 길항제는 개시를 지연시키고/시키거나, 중증도를 감소시키고/시키거나 악화를 추가로 저해하고/저해하거나 치료 중인 질환(예를 들어, 암)의 적어도 하나의 징후 또는 증상을 개선시키는 투약량, 투여 경로 및 투여빈도를 의미하는 효과적인 요법으로 투여된다. 환자가 이미 장애로 고통받고 있다면, 요법은 치료적으로 유효한 요법으로서 지칭될 수 있다. 환자가 일반적 집단에 대해 장애의 상승된 위험에 있지만 아직 증상을 경험하지 않았다면, 요법은 예방적으로 유효한 요법으로서 지칭될 수 있다. 일부 예에서, 치료적 또는 예방적 효능은 동일 환자에서의 이력 제어 또는 과거 경험에 관해 개개 환자에서 관찰될 수 있다. 다른 예에서, 치료 또는 예방적 효능은 비처리 환자의 제어 집단에 비해 처리 환자의 집단에서의 전임상 또는 임상 시험에서 입증될 수 있다.
항체에 대한 예시적인 투약량은 고정된 투약량으로서 0.1-20 또는 0.5-5㎎/kg 체중(예를 들어, 0.5, 1, 2, 3, 4 또는 5㎎/kg) 또는 10-1500㎎이다. 투약량은 인자들 중에서도, 환자의 병태 및 치료 전 반응, 만약에 있다면, 장애가 급성 또는 만성인지의 여부에 의존한다.
투여는 비경구, 정맥내, 경구, 피하, 동맥내, 두개내, 척추강내, 국소, 비강내 또는 근육내일 수 있다. 일부 항체에 대해 그리고 일부 상황 하에서, 정맥내 또는 피하 투여에 의한 전신 순환으로의 투여가 바람직하다. 정맥내 투여는, 예를 들어, 기간, 예컨대 30 내지 90분에 걸쳐 주입에 의할 수 있다.
투여 빈도는 인자들 중에서, 순환에서의 항체의 반감기, 환자의 병태 및 투여 경로에 의존한다. 빈도는 환자 병태의 변화 또는 치료 중인 장애의 진행에 반응하여 매일, 매주, 매달, 분기별 또는 비정기적 간격일 수 있다. 정맥내 투여에 대한 예시적 빈도는, 다수 빈번한 용량이 또한 가능할 수 있지만, 치료의 지속 원인에 따라 매주 내지 분기별이다. 피하 투여에 대해, 예시적 투약 빈도는, 다수 빈번한 투약이 또한 가능하지만, 매일 내지 매달이다.
투여되는 투약량의 수는 장애가 급성 또는 만성인지의 여부 및 치료에 대한 장애의 반응에 의존한다. 급성 장애 또는 만성 장애의 급속한 악화에 대해, 1 내지 10회 용량이 종종 충분하다. 선택적으로 분할된 형태로 때때로 단일 볼루스 용량은 급성 장애 또는 만성 장애의 급성 악화에 충분하다. 치료는 급성 장애 또는 급성 악화의 재발에 대해 반복될 수 있다. 만성 장애에 대해, 항체는, 예를 들어, 적어도 1, 5 또는 10년 또는 환자의 수명 동안 매주, 40일, 매달, 분기별, 6개월마다 정기적 간격으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 다른 길항체에 의한 치료는 치료 중인 장애에 대해 효과적인 다른 치료와 병용될 수 있다. 병용 치료는 별도로 투여를 위해 제형화될 수 있다. 다발성 경화증의 치료를 위한 추가적인 치료제는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 테리플루노마이드, 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b, 글라티라머 아세테이트, 핀고리모드 및 미톡산트론 또는 콜티코스테로이드, 예컨대 프레드니손, 메틸프레드니솔론 또는 덱사메타손.
암에 대한 추가적인 치료제는 알킬화제, 예컨대 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 프로카바진 및 사이클로포스파마이드; 항대사물질, 예컨대 플루오로유라실, 플록수리딘, 플루다라빈, 겜시타빈, 메토트렉세이트 및 하이드록시유레아; 식물성 알칼로이드 및 항생제를 포함하는 천연 생성물, 예컨대 블레오마이신, 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 에토포사이드, 미토마이신, 미톡산트론, 빈블라스틴, 빈크리스틴 및 탁솔(Taxol)(파클리탁셀) 또는 관련된 화합물, 예컨대 탁소텔(Taxotere)(등록상표); 토포아이소머라제 1 저해제 이리노테칸; 테모졸로마이드 및 글리아델(Gliadel)(등록상표), 카무스틴; 및 타이로신 키나제의 저해제, 예컨대 글리벡(Gleevec)(등록상표), 수텐트(Sutent)(등록상표)(수니티닙 말레이트), 넥사바르(Nexavar)(등록상표)(소라페닙) 및 타르세바(Tarceva)(등록상표)(에를로티닙) 또는 이레사(Iressa)(등록상표) (게피티닙); 혈관형성 저해제; 및 HER2 항원에 대해 허셉틴(Herceptin)(등록상표)을 포함하는 단클론성 항체; VEGF에 대해 아바스틴(Avastin)(등록상표); 또는 상피 성장인자(EGF) 수용기에 대한 항체, 예컨대 에르비툭스(Erbitux)(등록상표)(세툭시맙) 및 벡티빅스(Vectibix)(등록상표)(파니투무맙)를 포함한다.
파킨슨병을 치료하기 위한 추가적인 제제는 레보도파, 벤자세라이드, 카르비도파, 도파민 효현제, 비-맥각 도파민 효현제, 카테콜-O-메틸("COMT") 저해제, 예를 들어, 엔타코폰 또는 톨코폰, 모노아민 옥시다제("MAO") 저해제, 예를 들어, 라사갈린, 아만타딘 또는 항콜린제를 포함한다
V. 제형
비경구 투여를 위한 약제학적 조성물은 바람직하게는 멸균 그리고 실질적으로 등장성이며, GMP 조건 하에서 제조된다. 약제학적 조성물은 단위 제형(즉, 단일 투여를 위한 투약량)으로 제공된다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 생리적 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 이용하여 제형화될 수 있다. 제형은 선택된 투여 경로에 의존한다. 주사를 위해, 항체는 (주사 부위에서의 불편함을 감소시키기 위해) 생리적으로 양립가능한 완충제, 예컨대 행크스 용액, 링거 용액 또는 생리 식염수 또는 아세트산염 완충제 중에서 제형화될 수 있다. 용액은 현탁제, 안정제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다. 대안적으로 항체는 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어, 멸균 무발열원수를 이용하는 구성을 위해 동결건조된 형태일 수 있다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 항체 또는 다른 길항제, 완충제, 하나 이상의 당 및/또는 폴리올 및 계면활성제를 포함하고, pH가 약 5.5 내지 약 7의 범위에 있는 제형을 제공한다. 제형은 액체 형태로 또는 동결건조 형태로 저장을 위해 제조될 수 있다. 동결건조된 형태로 저장될 때, 제형은 본 명세서에 기재된 농도 및 특성에 대해 액체(예를 들어, 멸균수)를 이용하여 재구성될 수 있다. 구체화된 성분 농도 및 pH의 제형을 생성하기 위해 물을 첨가함으로써 동결건조된 조성물이 재구성될 수 있는 것으로 언급될 때, 이는 동결건조된 제형이 단순히 물의 첨가에 의해(즉, 추가적인 양의 성분을 공급하거나 또는 pH를 변화시키기 위해 산 또는 염기를 첨가하는 일 없이) 재구성될 수 있다는 것을 의미한다. 사전동결건조된 제형의 농도 및 특성은 또한 동결건조된 제형이 제형의 사전 동결건조와 동일한 용적으로 재구성된다면 이하에 기재하는 것에 따를 수 있다. 용적이 상이하다면, 제형의 농도는 비례해서 조절되어야 한다. 예를 들어, 재구성된 용적이 사전동결건조 용적의 절반이라면, 사전동결건조 제형에서 성분의 농도는 재구성된 제형에서의 농도의 절반이어야 한다.
선택적으로, 항체는 이하에 기재하는 바와 같이 제형 중에서 재현탁되고, 사전동결건조물을 저장시키기 위해 일시적으로 냉동되며, 사전동결건조물과 동일한 농도로 물에 의해 재구성된다. 이러한 제형은 바람직하게는 냉동, 동결건조, 저장 및 재구성뿐만 아니라 비경구 투여에 적합한 것을 통해 항체를 안정화시켜야 한다. 예시적인 작업 흐름에서, 정제된 항체는 제형에서 약 40㎎/㎖로 재현탁되고, 백(bag) 안에서 -40℃로 냉동저장된다. 백은 3시간 동안 실온에서 해동되고, 내용물은 풀링된다. 제형은 0.2 마이크론 멸균 필터를 통해 멸균 여과된다. 바이알은 5.4㎖의 제형으로 채워지고, 동결건조된다. 동결건조된 바이알은 2 내지 8℃에서 저장된다. 동결건조된 바이알은 멸균수(예를 들어, 제형에 따라서 대략 5.0 내지 5.4㎖ 멸균수)를 첨가함으로써 재구성된다. 이어서, 5㎖의 재구성된 생성물은 환자에게 정맥내 주입을 위해 20 내지 100㎖의 정상 식염수, 젖산 링거 용액, 또는 5% 덱스트로스 용액 등을 함유하는 IV 백의 포트 내로 첨가된다.
일부 제형은 당/폴리올 성분과 동일할 수도 있고 동일하지 않을 수도 있는 증량제를 포함한다. 전형적으로, 제형은, 예를 들어, 0.2㎛ 또는 0.22㎛ 필터를 이용하는 멸균 여과에 의해 수행되는 바와 같이 멸균이다. 제형은 또한 일반적으로 냉동 및 해동시 이하에 추가로 정의하는 바와 같이 낮은 내지 검출가능하지 않은 수준의 단편화 및/또는 응집화에 의해 안정하다. 또 다른 제형은 약 40℃에서 적어도 3개월 동안 동결건조된 케이크의 재구성 후에 안정하다. 일부 제형에서, 약 5% 미만의 항체는 제형에서 응집물로서 존재한다.
일부 제형에서, 항체는 약 5㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖ 범위 내의 농도로 존재한다. 일부 제형에서, 항체는 약 5㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖ 범위 내의 농도로 존재한다. 일부 제형에서, 항체는 약 25㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖ 범위 내의 농도로 존재한다. 예를 들어, 항체는 약 35 내지 45㎎/㎖ 또는 약 40㎎/㎖의 농도로 존재할 수 있다. 항체는 약 50㎎/바이알 내지 약 500㎎/바이알 이상의 멸균 액체 제형으로 존재할 수 있다. 항체는 약 40㎎/바이알 내지 약 500㎎/바이알의 동결건조 제형으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 항체는 약 250 내지 350㎎/바이알 또는 약 200㎎/바이알의 멸균 액체 또는 동결건조 제형으로 존재할 수 있다.
제형은 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 포함할 수 있다. 일부 제형에서, 제형화된 항체는 (i) 위치 32(카바트 넘버링)가 N, S 또는 Q일 수 있고, 위치 33(카바트 넘버링)이 G 또는 A일 수 있다는 것을 제외하고 서열번호 161의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 중쇄 가변 영역으로서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 90% 동일한, 성숙 중쇄 가변 영역, 및 (ii) 서열번호 123의 3개의 카바트 CDR을 포함하고, 서열번호 123에 대해 적어도 90% 동일한 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체이다. 이러한 제형에서, 성숙 중쇄 가변 영역의 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유될 수 있다. 일부 제형에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122, 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 가진다. 예를 들어, 일부 제형에서, 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지며, 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 가진다.
다른 제형에서, 제형화된 항체는 본 명세서에 기재된 단리된 항-MCAM 항체이다. 이러한 제형에서, 단리된 항-MCAM 항체는 아미노산 잔기 141을 포함하는 에피토프에서 인간 MCAM (서열번호 11)에 결합한다.
완충제는, 예를 들어, 히스티딘, 숙시네이트 및 시트레이트 완충제의 적합한 pH를 달성하기 위해 개시된 제형에서 사용된다. 일부 제형은 약 5.5 내지 약 7, 예를 들어, pH 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 또는 7.0의 범위 내에서 pH를 가진다. 일부 제형은 pH가 약 5.5 내지 약 6.5이다. 일부 제형은 pH가 약 6.0이며, 다른 제형은 pH가 약 6.5이다. 일부 제형에서, 히스티딘 완충제는 약 10mM 내지 약 30mM의 범위 내의 농도에서, 예를 들어, 약 15 내지 25mM 또는 약 20mM의 농도에서 존재한다.
제형에 대한 적합한 당 및/또는 폴리올은 트레할로스 및 수크로스, 또는 이들의 조합물을 포함한다. 당/폴리올은 증량제, 동결보호제 및/또는 등장 조절제로서 작용한다. 예를 들어, 일부 제형은 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 트레할로스, 또는 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 수크로스를 포함한다. 일부 제형은 약 220mM의 농도로 존재하는 트레할로스를 포함한다. 다른 제형은 약 220mM의 농도로 존재하는 수크로스를 포함한다. 일부 이러한 제형은 약 250 내지 400, 300 내지 400 또는 300 내지 350mOsm/kg, 예를 들어, 287 또는 295mOsm/kg의 범위에서의 삼투압몰농도를 특징으로 한다.
제형은 표면에 대한 항체 응집 및 흡수를 감소시키기 위해 계면활성제를 함유할 수 있다. 적합한 계면활성제는 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20을 포함한다. 폴리솔베이트 20은 항체의 제형에서 생기는 응집 또는 탁도의 현저한 증가에 대해 보호한다. 폴리솔베이트 20은 약 0.01% 내지 약 0.05% 범위 내의 농도로 존재할 수 있다. 예를 들어, 농도는 0.005%, 0.01%, 0.015%, 0.02%, 0.025%, 0.03%, 0.035%, 0.04%, 0.045% 또는 0.05%일 수 있다. 대안적으로, 일부 제형에서, 폴리솔베이트 20은 약 0.05g/ℓ, 0.1g/ℓ, 0.15g/ℓ, 0.2g/ℓ, 0.25g/ℓ, 0.3g/ℓ, 0.35g/ℓ, 0.4g/ℓ, 0.45g/ℓ 또는 0.5g/ℓ 범위 내의 농도로 존재한다. 일부 제형은 0.2g/ℓ의 농도로 폴리솔베이트 20을 포함한다.
예시적인 제형(액체, 사전동결건조물 또는 동결건조 후 재구성)은 약 5.5 내지 약 7 범위 내의 pH를 특징으로 하며, (a) 약 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖ 범위 내의 농도로 본 명세서에 기재된 항체; (b) 약 10mM 내지 약 30mM 범위 내의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 트레할로스, 및 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 수크로스로부터 선택되는 하나 이상의 당 및 폴리올("당/폴리올"); 및 (d) 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20을 포함한다. 일 예에서, 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 약 20mM 농도로 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM 농도로 수크로스; (d) 약 0.02% 농도로 폴리솔베이트 20; 및 pH 약 6.0을 포함할 수 있다. 다른 예에서, 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항체; (b) 약 20mM 농도로 히스티딘 완충제; (c) 약 220mM 농도로 트레할로스; (d) 약 0.02%의 농도로 폴리솔베이트 20; 및 pH 약 6.5를 포함할 수 있다.
일부 동결건조된 제형은 (a) 본 명세서에 기재된 항체; (b) 히스티딘 완충제; (c) 트레할로스 또는 수크로스; 및 (d) 폴리솔베이트 20을 포함한다. 동결건조된 제형은 약 200㎎의 항체를 포함할 수 있다. 일부 동결건조된 제형은 멸균수를 이용하여 재구성될 수 있다. 일부 동결건조된 제형은 100 내지 300 또는 150 내지 250㎎ 항체, 10 내지 20 또는 14 내지 16㎎의 히스티딘, 300 내지 450 또는 350 내지 400㎎ 수크로스, 및 0.5 내지 1.5㎎ 또는 0.75 내지 1.25㎎ 폴리솔베이트 20을 포함한다. 다른 동결건조된 제형은 100 내지 300 또는 150 내지 250㎎ 항체, 10 내지 20 또는 14 내지 16㎎의 히스티딘, 360 내지 500 또는 400 내지 450㎎ 트레할로스 탈수화물, 및 0.5 내지 1.5㎎ 또는 0.75 내지 1.25㎎ 폴리솔베이트 20을 포함한다.
예시적인 동결건조된 제형은 200㎎의 항체, 15.5㎎의 히스티딘, 376㎎ 수크로스, 및 1㎎ 폴리솔베이트 20을 포함한다. 다른 예시적인 동결건조된 제형은 200㎎의 항체, 15.5㎎의 히스티딘, 416㎎ 트레할로스 2수화물, 및 1㎎ 폴리솔베이트 20을 포함한다. 일부 이러한 제형은 약 5㎖의 용적으로 재구성될 수 있다. 다른 동결건조된 제형은 임의의 이 단락에 개시된 바와 동일한 비율로 그러나 상이한 양으로 동일한 성분을 포함한다(예를 들어, 400㎎ 항체, 31㎎ 히스티딘, 752㎎ 수크로스 및 2㎎ 폴리솔베이트 20).
동결건조된 제형은 약 30 내지 50 또는 35 내지 45㎎/㎖, 예를 들어 내지 약 40㎎/㎖의 항체 농도; (b) 약 10 내지 30 또는 15 내지 25mM, 예를 들어 약 20mM 농도로 존재하는 히스티딘 완충제; (c) 약 160 내지 330 또는 200 내지 260mM, 예를 들어 약 220mM 농도로 존재하는 수크로스 또는 트레할로스; (d) 약 0.1 내지 0.3 또는 0.15 내지 0.25g/ℓ, 예를 들어 약 0.2g/ℓ 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및 (e) 약 5.5 내지 6.5, 예를 들어 약 6.0(수크로스가 존재한다면) 또는 6.5(트레할로스가 존재한다면)의 pH로 재구성될 수 있다.
액체 또는 재구성된 동결건조된 제형은 바람직하게는 실질적으로 등장성이고, 약 250 내지 350mOsm/kg 물의 삼투압을 나타낸다. 일부 제형은 삼투압몰농도가 270 내지 300mOsm/kg이다. 일부 제형은 삼투압몰농도가 약 287 또는 약 295mOsm/kg이다. 액체 또는 재구성된 동결건조된 제형은 또한 고장성 > 350mOsm/kg 물 또는 저장성 (<250mOsm/kg 물)일 수 있다.
기재된 임의의 제형은 본 명세서의 성분으로서 기재된 것 이외에 약제학적 부형제, 담체 등 없이 제조될 수 있다. 이러한 제형은 인용된 성분으로 이루어지거나, 또는 제형의 특성에 영향을 미치지 않는 상당하지 않은 양의 다른 성분이 존재한다면 인용된 성분으로 본질적으로 이루어지는 것으로 기재될 수 있다. 제형은 바람직하게는 인간에 투여를 위한 약물의 제조를 위해 FDA에 의해 승인된 또는 승인가능한 우수의약품 제조관리 제도(good manufacturing practice: GMP) 하에서 제조된다.
본 발명은 적어도 약 30일 동안, 적어도 약 3개월 이상 동안 38℃ 내지 42℃에서 안정성을 갖는(예를 들어, 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC)에 의해 평가되는 바와 같음) 항체 제형을 포함한다. 이러한 제형은 또한 적어도 약 1년 동안 20℃ 내지 24℃에서 안정성 및/또는 적어도 약 3년 동안 2℃ 내지 4℃에서 안정성을 가질 수 있다. 동결건조된 제형의 안정성은 동결건조된 상태에서 저장을 위해 평가된다. 시간 및 온도의 이들 구체화된 조합 중 하나 이상에서 인큐베이션 후에 그것이 낮은 내지 검출가능하지 않은 단편화 및/또는 낮은 내지 검출가능하지 않은 응집에 대한 이하의 정의를 충족한다면, 제형은 안정한 것으로 고려된다. 더 구체적으로, 개시된 제형은 낮은 내지 검출가능하지 않은 수준의 항체 응집 및/또는 단편화, 또는 초기 수준 초과로 단편화 및/또는 응집의 낮은 내지 검출가능하지 않은 증가(예를 들어, 약 5% 미만의 응집)를 나타낸다. 낮은 내지 검출가능하지 않은 수준의 단편화를 갖는 제형은, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 결정된 바와 같이 단일 피크에서, 또는 비분해 항체를 나타내고, 각각의 총 단백질의 5% 초과, 4% 초과, 3% 초과, 2% 초과, 1% 초과 또는 0.5% 초과를 갖는 다른 단일 피크를 함유하는 환원 모세관 겔 전기영동(Capillary Gel Electrophoresis: rCGE)에 의해 2개의 피크(각각의 항체 중쇄 및 항체 경쇄에 대응하는 것)에서 적어도 약 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 총 단백질을 함유한다. 낮은 내지 검출가능하지 않은 수준의 응집을 갖는 제형은 고성능 크기배제 크로마토그래피(HPSEC)에 의해 측정한 바와 같이 단백질 중량으로 약 15% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하, 약 4% 이하, 약 3% 이하, 약 2% 이하, 약 1% 이하 또는 약 0.5% 이하의 응집물을 함유한다. 예를 들어, 일부 제형에서, 약 5% 미만의 항체는 응집물로서 존재한다. 안정한 제형은 또한, 예를 들어, ELISA 및/또는 추가적인 기능성 분석에 의해 측정가능한 결합 친화도를 갖는, 즉, 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 초기 측정가능한 값인 생물학적 활성(들)의 상실을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다.
VI. 키트
본 발명은 MCAM 항체 또는 본 명세서에 개시된 다른 길항제 및 관련된 물질, 예컨대 사용을 위한 설명서(예를 들어, 포장 삽입물)를 포함하는 키트(예를 들어, 용기)를 추가로 제공한다. 사용을 위한 설명서는, 예를 들어, MCAM 길항제 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 제제의 투여를 위한 설명서를 함유할 수 있다. MCAM 길항제(들)의 용기는 단위 용량, 벌크 패키지(예를 들어, 다회용량 패키지) 또는 서브유닛 용량일 수 있다.
포장 삽입물은 이러한 치료 제품에 관한 적응증, 용법, 투약량, 투여, 농도, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 함유하는 치료 제품의 상업적 포장에 관습적으로 포함된 설명서를 지칭한다.
키트는 또한 약제학적으로 허용가능한 완충제, 예컨대 정균처리 주사용수(BWFI), 인삼염 완충 식염수, 링거용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 또한 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하는 상업적 그리고 사용자 견지로부터 바람직한 다른 물질을 포함할 수 있다.
상기 또는 이하에 인용된 모든 특허 출원, 웹사이트, 다른 간행물, 수탁번호 등은 각각의 개개 항목이 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시되는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그들의 전문이 참고로 포함된다. 서열의 상이한 버전이 상이한 시간에 수탁 번호와 관련된다면, 본 출원의 효과적인 출원일에 수탁 번호와 관련된 버전을 의미한다. 유효 출원일은 적용가능하다면 더 빠른 실제 출원일 또는 수탁번호에 관한 우선권 출원의 출원일을 의미한다. 마찬가지로, 상이한 버전의 간행물, 웹사이트 등이 상이한 시간에 공개된다면, 달리 표시되지 않는 한, 출원의 유효 출원일에 가장 최근에 공개된 버전을 의미한다. 본 발명의 임의의 특징, 단계, 구성요소, 실시형태 또는 양상은 달리 구체적으로 표시되지 않는 한 임의의 다른 것과 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명이 명확함 및 이해의 목적을 위해 예시 및 실시예에 의해 일부 상세하게 기재되었지만, 특정 변화 및 변형은 첨부된 청구범위의 범주 내에서 실행될 수 있다는 것이 명확할 것이다.
실시예
물질 및 방법
항체 생성/특성규명
뮤린 MCAM에 결합할 수 있는 항체의 생성을 위해, MCAM-Fc를 인간 IgG에 뮤린 MCAM의 세포외 도메인을 융합함으로써 생성하고, 표준 기법을 이용하여 CHO 세포에서 생성하였다. Lou/M 래트를 CFA 중의 100㎍의 MCAM-Fc 단백질(1:1 용적)으로 면역화시켰다. 래트를 불완전 프로인트 애주번트(IFA) 중의 MCAM-Fc 단백질(1:1 용적)을 이용하여 2주 간격으로 2회 부스팅하였다. 표준 프로토콜을 이용하여 면역화된 래트로부터 혼성세포를 생성하고 나서, 클론을 클론픽스(Clonepix)에 의해 선택하였다. CHO 세포를 전장 뮤린 MCAM 유전자로 형질감염시키고 나서, 네오마이신 및 표준 기법을 이용하는 표준 발현에 대해 선택하였다. 모 CHO 세포(MCAM 음성)를 표준 기법을 이용하여 카복시플루오레세인 숙신이미딜 에스터(CFSE)로 형광 표지하였고, 비표지 MCAM 형질감염 CHO 세포로 1:1 비로 혼합하였다. 혼성세포 상청액을 30분 동안 세포의 이런 혼합물과 함께 인큐베이션시키고 나서, 가능한 MCAM 특이적 항체의 결합을 유세포분석기에 의해 형광 표지된 항-래트 2차 항체(잭슨 이뮤노(Jackson Immuno))를 이용하여 검출하였다.
라미닌 α4 발현 세포주 WM2664에 대한 첨가 전에 MCAM 특이적 항체에 대해 양성으로 선별한 혼성세포로부터의 상청액을 형광 표지된 마우스 MCAM-Fc 단백질(5㎍/㎖)과 함께 30분 동안 사전인큐베이션시키고, 세포주에 대한 MCAM-Fc 단백질의 결합 중화를 유세포분석기에 의해 결정하였다.
인간 MCAM에 결합할 수 있는 래트 항체의 생성을 위해, hMCAM-Fc를 인간 IgG에 인간 MCAM의 세포외 도메인을 융합함으로써 생성하고, 표준 기법을 이용하여 CHO 세포에서 생성하였다. Lou/M 래트를 CFA 중의 250㎍의 hMCAM-Fc 단백질(1:1 용적)으로 면역화시켰다. 래트를 불완전 프로인트 애주번트(IFA) 중의 hMCAM-Fc 단백질(1:1 용적)을 이용하여 2주 간격으로 2회 부스팅하였다. 표준 프로토콜을 이용하여 면역화된 래트로부터 혼성세포를 생성하고 나서, 클론을 클론픽스(Clonepix)에 의해 선택하였다. CHO 세포를 전장 인간 MCAM 유전자로 형질감염시키고 나서, 네오마이신 및 표준 기법을 이용하는 표준 발현에 대해 선택하였다. 모 CHO 세포(MCAM 음성)를 표준 기법을 이용하여 카복시플루오레세인 숙신이미딜 에스터(CFSE)로 형광 표지하였고, 비표지 인간 MCAM 형질감염 CHO 세포로 1:1 비로 혼합하였다. 혼성세포 상청액을 30분 동안 세포의 이런 혼합물과 함께 인큐베이션시키고 나서, 가능한 인간 MCAM 특이적 항체의 결합을 유세포분석기에 의해 형광 표지된 항-래트 2차 항체(잭슨 이뮤노(Jackson Immuno))를 이용하여 검출하였다.
인간 MCAM에 결합할 수 있는 마우스 항체의 생성을 위해, hMCAM-Fc를 인간 IgG에 인간 MCAM의 세포외 도메인을 융합함으로써 생성하고, 표준 기법을 이용하여 CHO 세포에서 생성하였다. Balb/c 마우스를 CFA 중의 50㎍의 hMCAM-Fc 단백질(1:1 용적)으로 면역화시켰다. 마우스를 불완전 프로인트 애주번트(IFA) 중의 hMCAM-Fc 단백질(1:1 용적)을 이용하여 2주 간격으로 2회 부스팅하였다. 표준 프로토콜을 이용하여 면역화된 마우스로부터 혼성세포를 생성하고 나서, 클론을 클론픽스(Clonepix)에 의해 선택하였다. CHO 세포를 전장 인간 MCAM 유전자로 형질감염시키고 나서, 네오마이신 및 표준 기법을 이용하는 표준 발현에 대해 선택하였다. 모 CHO 세포(MCAM 음성)를 표준 기법을 이용하여 카복시플루오레세인 숙신이미딜 에스터(CFSE)로 형광 표지하였고, 비표지 인간 MCAM 형질감염 CHO 세포로 1:1 비로 혼합하였다. 혼성세포 상청액을 30분 동안 세포의 이런 혼합물과 함께 인큐베이션시키고 나서, 가능한 인간 MCAM 특이적 항체의 결합을 유세포분석기에 의해 형광 표지된 항-마우스 2차 항체(잭슨 이뮤노(Jackson Immuno))를 이용하여 검출하였다.
라미닌 α4 발현 세포주 WM2664에 대한 첨가 전에 인간 MCAM 특이적 항체에 대해 양성으로 선별한 혼성세포로부터의 상청액을 형광 표지된 hMCAM-Fc 단백질(5㎍/㎖)과 함께 30분 동안 사전인큐베이션시키고, 세포주에 대한 hMCAM-Fc 단백질의 결합 중화를 유세포분석기에 의해 결정하였다.
핵산 및 단백질 조작
CDR의 결정을 위해, 총 RNA를 RNAquous-4PCR 키트(앰비온(Ambion))를 이용하여 혼성 세포로부터 단리시키고, cDNA 합성을 위해 사용하였다. 첫번째 및 두번째 가닥 cDNA를 얻어진 dscDNA의 5'-말단에 결찰된 cDNA 어댑터를 이용하는 마라톤(Marathon) cDNA 증폭(클론테크(Clontech))로부터 변형된 방법을 이용하여 합성하였다. 역 특이적 프라이머를 중쇄와 경쇄 둘 다에 대해 특이적 항체 아이소타입 불변 영역 서열에 기반하여 설계하고 나서, Pfu 울트라 DNA 폴리머라제(스트라타겐(Stratagene))을 이용하여 VL과 VH 단편 둘 다의 PCR 증폭에서 어댑터 프라이머와 함께 사용하였다. 증폭된 PCR 산물을 pCR-Blunt-TOPO(인비트로젠(Invitrogen)) 내로 클로닝시키고 나서, 뉴클레오타이드 서열을 결정하였다. 동정된 클론의 서열을 VL 및 VH 서열 내의 동일성 백분율과 비교하였다.
상청액에서 IL-17 농도의 결정을 위해, ELISA를 상업적 키트(알앤디 시스템즈(R&D Systems))를 이용하여 수행하였다.
실시예 1. 항- MCAM 단클론성 항체의 생성
인간 MCAM 단백질에 관한 마우스 및 래트 단클론성 항체를 상기 물질 및 방법에 기재한 바와 같이 생성하였다. 단클론성 항체와 인간 MCAM 사이의 특이적 결합을 인간 MCAM을 이용하여 형질감염한 세포에 결합하는 단클론성 항체의 능력을 평가함으로써 확인하였다. 이에 관해, 비형질감염 세포를 카복시플루오레세인 숙신이미딜 에스터(CFSE)로 표지하고, 비표지 인간 MCAM 형질감염 세포와 혼합하였다. 따라서 비형질감염 세포는 분화될 수 없었다.
이들 기법을 이용하여, 823개의 독립적 마우스 융합 클론을 단리시켰고, 인간 MCAM에 결합할 수 있는 항체를 발현시키는 것으로 나타났다. 추가적으로, 152개의 독립적 래트 융합 클론을 단리시켰고, 인간 MCAM에 결합할 수 있는 항체를 발현시키는 것으로 나타났다.
다음에, 항-인간 MCAM 단클론성 항체를 이용하여 인간 MCAM의 그의 리간드에 대한 결합을 차단하는 그들의 능력을 시험하였다. 인간 MCAM-Fc 단백질(5㎍/㎖)을 아이소타입 대조군 항체, 또는 10㎍/㎖의 시험 단클론성 항체와 함께 PBS 중에서 30분 동안 사전인큐베이션시켰다. 혼합물을 건강한 척수 조직 절편에 첨가하고 나서, 후속적으로, 상기 물질 및 방법에 기재한 바와 같이 형광현미경 검사에 의해 특성규명하였다. 더 나아가, 인간 MCAM 유전자로 형질감염시킨 모 CHO 세포(CHOK1) 또는 CHO 세포를 37℃에서 45분 동안 CHO 배양배지(DMEM), 재조합 라미닌 411(10㎍/㎖) 또는 재조합 라미닌 511(즉, 라미닌 10(α5β1γ1))(10㎍/㎖)과 함께 사전인큐베이션시켰다. 세포를 세척하고 나서, 라미닌 411(라미닌 511은 아님)의 MCAM에 대한 특이적 결합을 유세포분석기에 의해 pan-라미닌 항체로 검출하였다. 라미닌 인큐베이션 전에, 항-MCAM 항체와 함께(20㎍/㎖에서) 인간 MCAM 형질감염 CHO 세포의 사전인큐베이션은 인간 MCAM의 라미닌 411에 대한 결합을 없앴다.
이 기법을 이용하여, 상기 기재한 823개의 독립적 마우스 융합 클론 중 87개 및 152개의 독립적 래트 융합 클론 중 26개가 인간 MCAM 단백질과 그의 리간드인 라미닌의 α-4 쇄 사이의 상호작용을 차단할 수 있는 항체를 발현시켰다는 것을 나타내었다.
실시예 2. 항- MCAM 단클론성 항체의 추가적인 특성규명
(i) 인간 MCAM에 결합할 수 있고, (ii) 인간 MCAM과 라미닌의 α-4 쇄 사이의 상호작용을 차단시킬 수 있는 것으로 상기 실시예 1에 기재한 87개의 독립적 마우스 융합 클론 및 26개의 독립적 래트 융합 클론을 다음과 같이 추가로 특성규명하였다. 처음에, 라미닌의 α-4 쇄에 대한 인간 MCAM의 결합을 차단하는 단클론성 항체의 능력에 대한 IC50 정량화를 다음과 같이 결정하였다. 인간 MCAM을 발현시키는 CHO 세포를 30분 동안 4℃에서 (다양한 농도에서) 항-인간 MCAM 항체와 함께 인큐베이션시켰다.　 이어서 비결합 항체를 세척하고 나서, 세포를 37℃에서 45분 동안 20㎍/㎖로 재조합 인간 라미닌 411과 함께 인큐베이션시켰다.　이어서, 비결합 라미닌을 세척하고 나서, 세포 표면에 결합된 라미닌을 형광 표지된 항-라미닌 항체로 검출하였다.　 세척 후에, 표면에 결합된 라미닌의 양을 유세포분석기에 의해 검출하고 나서, IC50을 평균 형광 강도에 기반하여 계산하였다.
상기 기재한 분석을 이용하여, 6개의 독립적 항-인간 MCAM 단클론성 항체 클론을 인간 MCAM에 대한 결합으로서 그리고 세포의 표면 상에서 발현시킨 인간 MCAM과 그의 결합 리간드인 인간 라미닌 411 사이의 상호작용을 차단하는 가장 큰 능력을 갖는 것으로 동정하였다. 이들 6개 항-MCAM 단클론성 항체 클론을 본 명세서에서 (i) 마우스 항-인간 MCAM 단클론성 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 및 1749.1.3, 및 (ii) 래트 항-인간 MCAM 단클론성 항체 클론 2120.4.19 및 2107.4.10으로서 지칭한다. 이들 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 및 핵산 서열, 및 그들의 초가변 영역을 서열번호 29 내지 92에서 제공한다. 더 구체적으로, 상기 분석에서, 단클론성 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10에 대한 IC50을 각각 0.469㎍/㎖, 0.431㎍/㎖, 0.307㎍/㎖, 0.545㎍/㎖, 0.888㎍/㎖ 및 0.290㎍/㎖가 되는 것으로 결정하였다. 게다가, 각각의 단클론성 항체의 특이적 결합 친화도를 결정하기 위해 수행한 실험은 각각이 고친화도로 인간 MCAM 단백질에 결합할 수 있다는 것을 입증하였다(데이터 미제시). 그러한, 각각의 이들 특이적 단클론성 항체는 인간 MCAM에 결합할 수 있고, 세포 발현된 인간 MCAM의 그의 α-4 라미닌 결합 리간드와의 상호작용을 저해할 수 있다. 대조적으로, 2개의 대조군 항체인 비-특이적 인간 IgG1 항체 및 ABX-MA1로서 지칭되는 앞서 기재한 완전 인간 항-MCAM 항체(예를 들어, 문헌[Mills et al., Cancer Res. 62:5106 (2002)], 및 미국 특허 제6,924,360호, 제7,067,131호 및 제7,090,844호 참조)는 둘 다 인간 MCAM과 그의 라미닌 411 상대 사이의 결합 상호작용을 차단할 수 없다. 그러한, 상기 동정한 6개의 특이적 단클론성 항체는 (i) 살아있는 세포의 표면 상에서 인간 MCAM에 대해 고친화도로 결합하고, (ii) 세포 발현된 인간 MCAM의 α-4 라미닌 폴리펩타이드쇄를 포함하는 라미닌 단백질과의 상호작용을 차단하는 신규한 능력을 소유한다.
실시예 3. 항- MCAM 단클론성 항체에 대한 도메인 결합 분석
포르테바이오(ForteBio) 분석을 단클론성 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10에 의해 인식 및 결합된 인간 MCAM 단백질 상의 항원 에피토프의 위치를 결정하는데 사용하였다. 다음의 프로토콜을 사용하였다: 바이오센서 표면에 대한 전장 MCAMhFc 단백질을 포함하는 다양한 MCAMhFc 도메인을 고정하기 위해 포르테바이오 항-인간 IgG Fc 바이오센서를 사용하였다. 이들 센서를 이들 도메인 또는 전장 단백질에 대한 결합의 검출을 위해 MCAM 특이적 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 또는 2107.4.10 항체 내로 담그었다. 블랙 96 웰 플레이트 내로 이들 샘플을 장입시킨 후에, 옥텟 레드(Octet Red)를 다음과 같이 프로그래밍하였다: 기준 #1에 대해 60초; 다양한 도메인을 장입하기 위해 180초; 기준 #2에 대해 60초; 도메인에 대한 항체의 결합을 위해 180초; 및 도메인으로부터 항체의 해리를 위해 240초.
사용한 시약 및 공급물 :
1. 5㎍/㎖에서 MCAMhFc 최종 농도
2. 5㎍/㎖에서 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10 클론
3. 역학 실험에 대해 포르테바이오 항-인간 IgG Fc 포획(AHC) 바이오센서, 카탈로그 번호 18-5060
4. 그레이너 바이오-원(Greiner Bio-one) 카탈로그 번호 655209로부터의 블록 96 웰 플레이트
5. 포르테바이오 옥텟 레드 기기
6. 새로운 조직 배양 배지, 20% FCS를 지니는 DMEM을 희석을 위한 완충제로서 사용하였다.
이들 분석으로부터의 결과는 다음과 같다.
단클론성 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1 및 1749.1.3은 모두 인간 MCAM 단백질의 아미노산 244 내지 321(서열번호 24)에 의해 특이적으로 정해진 인간 MCAM 단백질의 도메인 3 상에서 발견한 항원성 에피토프에 결합하는 것으로 나타났다. 이들 단클론성 항체는 인간 MCAM 도메인 1(즉, 아미노산 19 내지 129, 서열번호 22), 도메인 2(즉, 아미노산 139-242, 서열번호 23), 또는 도메인 1과 2의 조합(즉, 아미노산 19 내지 242)에 결합할 수 없다. 따라서, 단클론성 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1 및 1749.1.3은 인간 MCAM 단백질의 도메인 3 내에 위치된 신규한 항원성 에피토프를 나타낸다.
단클론성 항체 클론 2120.4.19 및 2107.4.10은 각각 인간 MCAM 도메인 1(즉, 아미노산 19 내지 129, 서열번호 22), 및 도메인 2(즉, 아미노산 139 내지 242, 서열번호 23)의 조합에 의해 나타내는 항원성 에피토프에 결합하는 것으로 나타났다. 이들 두 단클론성 항체 중 어떤 것도 인간 MCAM 도메인 1에 단독으로 결합되지 않았다. 따라서, 단클론성 항체 클론 2120.4.19 및 2107.4.10은 인간 MCAM 단백질 도메인 1과 2 둘 다의 존재에 의해 결정되는 신규한 항원성 에피토프를 나타낸다.
상기와 대조적으로, 앞서 기재한 완전한 인간 항-MCAM 항체 ABX-MA1은 상기 기재한 것과 상이한 항원성 에피토프, 즉, 인간 MCAM 도메인 1 단독 내에서 완전히 정해지고 포함되는 항원성 에피토프에 결합한다.
이들 결과를 고려하면, 각각의 단클론성 항체 클론 1174.1.3, 1414.1.2, 1415.1.1, 1749.1.3, 2120.4.19 및 2107.4.10은 (i) 인간 MCAM에 결합할 수 있고, (ii) 인간 MCAM과 단백질을 함유하는 α-4 라미닌 사이의 상호작용을 차단할 수 있는 반면, ABX-MA1 항체는 인간 MCAM에만 결합할 수 있지만, 인간 MCAM과 단백질을 함유하는 α-4 라미닌 사이의 상호작용을 차단할 수 없기 때문에, 이들 결과는 인간 MCAM 도메인 2, 인간 MCAM 도메인 3 및 이들의 조합이 α-4 라미닌 쇄와의 결합 상호작용에서 어떤 역할을 한다는 것을 입증한다. 이를 고려하여, 인간 MCAM 도메인 2, 인간 MCAM 도메인 3 및/또는 이들의 조합에 결합하는 항체는 인간 MCAM과 α-4 라미닌 사이의 상호작용을 차단할 수 있는 제제로서의 용도를 발견하며, 이에 의해 해당 상호작용으로부터 초래되는 본 명세서에 기재된 다양한 결과를 저해하는 용도를 발견하는 것은 분명하다. 대조적으로, 인간 MCAM 도메인 1에 의해서만 나타내는 항체(예컨대, 본 명세서에 기재된 ABX-MA1 항체)는 MCAM/α-4 라미닌 상호작용 및 그의 다양한 후속 생물학적 결과를 차단하는데 유용하지 않다.
실시예 4. 샷건 돌연변이유발 에피토프 맵핑
항-MCAM 항체 결합에 대한 관심대상의 다양한 아미노산 잔기를 진핵 세포 내에서 돌연변이된 표적 단백질의 거대 라이브러리의 발현 및 분석을 가능하게 하는 샷건 돌연변이유발 및 고속대량 세포 발현 기법을 이용하여 동정하였다. 인간 MCAM 단백질에서 모든 잔기를 기능 변화를 분석하기 위해 알라닌 또는 다른 구체화된 잔기로 개개로 돌연변이시켰다. 표준 포유류 세포주 내에서 단백질을 발현시켰다.
표 1은 샷건 돌연변이유발 라이브러리를 생성하기 위해 사용되는 시약 및 방법의 요약을 나타낸다.
Figure pct00003
전장 인간 MCAM을 성공적으로 코돈 최적화하고 나서, 합성하고, 포유류 고발현 벡터 내로 다시 클로닝하였다. 이어서, 이 모 작제물을 서열 확인하고 나서, 면역검출 방법에 의해 포유류 세포 발현에 대해 입증하였다.
면역형광에 의한 2120.4.19 항체 및 마우스 혈청 결합의 검출은 고속대량 샷건 돌연변이유발 형식에 대해 성공적으로 최적화되었다. 각각의 1차 항체의 연속 희석을 384-웰 형식에서 2차 항체의 단일 희석을 이용하여 시험하였다. 항체를 인간 MCAM을 발현시키는 293T 및 BHK 세포의 검출에 대해 시험하였다. 완전 돌연변이 라이브러리를 선별하기 위한 최적의 분석 조건을 선택하였다.
MCAM 돌연변이 라이브러리를 생성하고 나서, 545 클론(528/536 알라닌 돌연변이체 및 17/17 부위 지정 돌연변이체)으로 이루어진 서열을 확인하였고, 각각은 알라닌(알라닌 잔기는 세린으로 치환됨) 또는 구체화된 잔기에 대한 단일 잔기 치환을 보유하였다. 잔기 35, 66, 161, 261, 342, 380, 414 및 435는 라이브러리에서 표시하지 않는다. 돌연변이 라이브러리를 마우스 혈청에 대한 결합을 위해 면역검출에 의해 3회 중복하여 선별하였다. 이는 각각의 돌연변이체 클론에 대한 세포 표면 발현을 입증한다.
다중라운드 최적화를 수행하여 맵핑에 적합한 조건을 결정하였다. 다음의 변수를 평가하였다: 다중 라미닌 농도 및 항-라미닌 2차 항체 농도, 비특이적 결합, 다중 세포 유형 및 다중 세척 단계를 감소시키기 위한 다양한 차단 완충제.
돌연변이 라이브러리를 2120.4.19 항체에 대한 결합을 위해 면역검출에 의해 3회 중복하여 선별하였다. 결합 상실을 나타내는 점 돌연변이를 동정하기 위해 각각의 돌연변이체에 대한 반응성을 정량화하였다.
표면 발현에 영향을 미치는 일 없이 결합의 상실을 나타내는 돌연변이체를 동정하기 위해 각각의 돌연변이체 클론에 대해 단클론성 항체 및 혈청 반응성을 정량화하였다. 각각의 돌연변이체 클론의 혈청 결합 프로파일에 대한 단클론성 항체 결합 프로파일의 비교에 의해 각각의 항체에 대한 중요한 잔기를 동정하였다.
384-웰 형식 다음에 면역검출에서 야생형(WT) MCAM 또는 벡터 중 하나 단독으로 BHK 세포를 형질감염시켰다. 각각의 항체(4㎍/㎖로 시작)의 단계 희석을 WT 또는 벡터 단독에 대한 면역반응성에 대해 시험하였다(표 2). 각각의 점은 4개 복제물의 평균을 나타낸다.
Figure pct00004
2120.4.19 및 Ms 혈청의 면역검출 및 에피토프 맵핑을 위한 최적 선별 조건을 결정하였다. 이들 조건을 이용하여, 각각의 항체는 강한 신호, 신호 대 배경 값 및 복제물 사이의 낮은 변이성을 입증하였다. 이들 데이터는 이들 조건이 성공적인 고속대량 에피토프 맵핑에 적합하다는 것을 나타낸다. 2120.4.19 및 Ms 혈청의 1:800 희석에 대해 최종 선별 농도 0.25㎍/㎖를 사용하였다. 잭슨 이뮤노리서치로부터의 2차 항체를 2120.4.19 및 혈청 검출에 대해 1:400으로 사용하였다. 표 3은 고속대량 면역검출에 대해 최적화된 실험 매개변수를 나타낸다.
Figure pct00005
돌연변이 라이브러리를 표면 발현(마우스 혈청 결합) 및 단클론성 항체 결합에 대해 3회 중복해서 분석하였다. 각각의 원 데이터 점을 배경 차감하고 나서, 야생형 MCAM 반응성 값에 대해 정규화하였다. 결과를 도 1에 나타낸다. 2120.4.19에 대한 평균 단클론성 항체 결합값을 그의 평균 표면 발현값의 함수로서 플롯팅한다(도 1, 회색 다이아몬드). 30% 미만의 단클론성 항체 반응성 및 50% 초과의 마우스 혈청 결합의 역치를 단클론성 항체 결합에 대해서는 음성이지만 표면 발현에 대해서는 양성인 클론(도 1, 검정색 다이아몬드)을 동정하도록 적용하였다.
2120.4.19에 대한 중요한 잔기를 각각의 클론의 평균 단클론성 항체 반응성을 그의 전체 표면 발현에 비교하여 평가함으로써(평균 혈청 반응성) 동정하였다(표 4). 항체 결합에 수반된 잔기를 단클론성 항체 결합(<30% WT)에 대해서는 음성이지만 표면 발현(>50% WT)에 대해서는 양성인 것으로 동정하였다. 평균 반응성(및 표준 편차)을 각각의 중요한 잔기에 대해 나타낸다.
Figure pct00006
샷건 돌연변이유발 맵핑에 의해 동정한 중요한 아미노산은 2120.4.19 항체에 대한 결합 부위를 시사한다. 데이터는 2120.4.19가 입체구조적으로 복합체 에피토프를 결합하는 한편, 두 번째 Ig 도메인에 주로 결합한다는 것을 나타낸다.
중요한 잔기는 두 번째 및/또는 세 번째 Ig 도메인의 이황화 결합에 의해 기여되는 구조적 안정화에 주로 의존하는 것으로 나타난다. 2120.4.19에 대한 결합은 두 번째 Ig 도메인의 이황화 결합된 시스테인 161 및 223 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 중요한 잔기의 클러스터에 의해 지지된다.
실시예 5. 항체 및 라미닌 결합을 위한 확증적 MCAM 에피토프 맵핑
인간 MCAM에 대한 2120.4.19의 결합 부위를 동정하기 위해, 인간 MCAM Ig1 및 Ig2의 상동성 모델을 슈뢰딩거 마에스트로(Schrodinger Maestro)를 이용함으로써 인간 BCAM Ig1 및 Ig2 모델 상에서 구성하였다(도 2A). 구조 정보 및 샷건 돌연변이유발 정보에 기반한 20개의 점 돌연변이체를 설계하고 생성하였다. 이들 돌연변이체를 포유류 세포 상에서 나타내고, FACS를 사용하여 MCAM 돌연변이체에 대한 2120.4.19 및 라미닌 α-4의 결합을 시험하였다. 3개의 MCAM 단일 돌연변이체, 즉, I141A, D216A 및 Y318A은 라미닌 α-4 결합의 완전한 상실을 입증하였다. I141A는 2120.4.19 결합의 완전한 상실을 입증하였고, P145V는 2120.4.19 결합의 상당한 상실을 입증하였다.
추가로 데이터를 확인하기 위해, I141A, P145V, D216A 및 Y318A를 각각 발현시키는 안정한 세포주를 생성하였다. 포르테바이오 분석을 상기 기재한 바와 같은 정제 단백질을 이용하여 수행하였다. 대조군 ABX-MA1 항체는 야생형 MCAM 및 MCAM 돌연변이체에 결합되었다. 2120.4.19는 MCAM I141A 돌연변이체에 대한 상당한 결합을 입증하지 못하였다. 추가로, 2120.4.19는 MCAM P145V 및 D216A 돌연변이체 각각에 대해 크게 감소된 결합을 입증하였다. 또한, MCAM 돌연변이체 P145V에 대한 2120.4.19의 결합은 빠른 K off를 입증하였다.
실시예 6. 인간화된 항- MCAM 2120 항체의 생성
다양한 인간화된 항-MCAM 항체를 다음의 프로토콜에 따라 생성하였다. 첫째로, 가변 영역의 3차원 분자 모델을 JN 바이오센스 소유의 알고리즘을 이용하여 구성하였다. 둘째로, CDR 구조의 형성에 중요하거나 또는 항원에 대한 결합에 필수적인 프레임워크 아미노산 잔기를 분자 모델을 이용하여 동정하였다. 동시에, VH 및 VL 아미노산 서열 각각에 대해 높은 상동성을 지니는 cDNA-유래 인간 VH 및 VL 아미노산 서열을 선택하였다. 마지막으로, CDR 구조 또는 항원 결합에 중요한 프레임워크 아미노산 잔기와 함께 CDR 서열을 VH 및 VL로부터 대응하는 선택된 인간 프레임워크 서열 내로 접합시켰다.
도 3은 다양한 2120 중쇄 및 경쇄 서열의 정렬을 도시한다. 잔기 넘버링은 카바트 넘버링에 따른다. CDR 형성 및 항원 결합에 수반된 프레임워크(FR) 아미노산 잔기에 대한 상이한 돌연변이를 항체 형태에 따라서 동정하였다.
2120 항체의 예시적인 돌연변이를 도 3A에 도시하며(CDR-H1 내(S30T), CDR-H1과 CDR-H2 사이(I37V 및 L48I), 그리고 CDR-H2와 CDR-H3 사이(K71R)의 박스 표시한 잔기는 CDR 접촉에 영향을 미치고; CDR-H2(T68S) 다음의 추가적인 돌연변이와 조합한 S30T, I37V, L48I 및 K71R 돌연변이는 CDR 접촉에 영향을 미침); 도 3B(CDR-L1과 CDR-L2 사이(L46V 및 Y49F) 그리고 CDR-L2와 CDR-L3 사이(V58I)의 박스 표시한 잔기는 CDR 접촉에 영향을 미치고; CDR-L1과 CDR-L2 사이(L46V 및 Y49F)의 박스 표시한 잔기는 CDR 접촉에 영향을 미치며; CDR-L1 앞의 추가적인 돌연변이(T22N)와 조합한 L46V, Y49F 및 V58I 돌연변이는 항체/항원 상호작용에 영향을 미친다).
각각의 쇄의 몇몇 형태를 설계하였다(표준 대 공격적 또는 보존적). N-탈아마이드화 모티프(NG)를 함유한 해당 항체에 대해, 아스파라긴 또는 글리신에 대한 돌연변이를 표준 형태로 도입하였다. 다양한 인간화된 V 영역을 이종성 신호 서열을 이용하여 합성하고 나서, 인간 CK(VL) 또는 인간 IgG1(VH)을 함유하는 발현 벡터 내로 클로닝하였다.
중쇄 및 경쇄 플라스미드를 제조업자의 프로토콜에 따라 프리스타일(FreeStyle)(상표명) MAX 형질감염 시약(인비트로젠(Invitrogen))과 함께 293F 세포 내로 공동형질감염시켰다. 발현된 항체를 단백질 A PhyTip 칼럼(피넥서스(Phynexus))을 이용하여 정제하고 나서, OD280을 통해 정량화하였다.
인간화된 항체의 분명한 친화도를 다음의 프로토콜에 따라 경쟁적 ELISA에서 모 설치류 또는 키메라 항체에 비교하였다.
ELISA 플레이트를 재조합 hMCAM-His으로 코팅하고 나서, 비특이적 결합을 방지하기 위해 카제인 완충제로 차단시켰다. 바이오틴일화한 설치류 또는 키메라 항체를 비표지 경쟁자(인간화된 항체, 설치류 또는 키메라)의 3x 증가된 농도의 존재 또는 부재 하에서 포화 농도로 첨가하였다. 비결합 항체를 제거하기 위한 세척 후에, 바이오틴일화된 항체를 검출하기 위해 스트렙타비딘 HRP를 첨가하였다. TMB 기질을 이용하여 ELISA를 진행하였고, OD450을 측정하였다. 비표지 경쟁자의 IC50을 그래프패드 프리즘5 소프트웨어를 이용하여 결정하였다.
표 5는 인간화된 서열의 설계를 요약한다.
Figure pct00007
중쇄 및 경쇄 플라스미드를 제조업자의 프로토콜에 따라 프리스타일(FreeStyle)(상표명) MAX 형질감염 시약(인비트로젠(Invitrogen))과 함께 293F 세포 내로 공동형질감염시켰다. 발현된 항체를 단백질 A PhyTip 칼럼(피넥서스(Phynexus))을 이용하여 정제하고 나서, OD280을 통해 정량화하였다.
인간화된 항체의 분명한 친화도를 다음의 프로토콜에 따라 경쟁적 ELISA에서 모 설치류 또는 키메라 항체에 비교하였다.
ELISA 플레이트를 재조합 hMCAM-His으로 코팅하고 나서, 비특이적 결합을 방지하기 위해 카제인 완충제로 차단시켰다. 바이오틴일화한 설치류 또는 키메라 항체를 비표지 경쟁자(인간화된 항체, 설치류 또는 키메라)의 3x 증가된 농도의 존재 또는 부재 하에서 포화 농도로 첨가하였다. 비결합 항체를 제거하기 위한 세척 후에, 바이오틴일화된 항체를 검출하기 위해 스트렙타비딘 HRP를 첨가하였다. TMB 기질을 이용하여 ELISA를 진행하였고, OD450을 측정하였다. 비표지 경쟁자의 IC50을 그래프패드 프리즘5 소프트웨어를 이용하여 결정하였다.
친화도를 포르테바이오 옥텟 레드를 이용하여 측정하였다. 항-인간 Fc 센서를 사용하여 인간화된 항체를 포획하였고, 몇몇 농도의 hMCAMHis 분석물을 이용하여 1:1 적합 모델을 이용하여 친화도를 결정하였다.
항체의 효능을 다음의 프로토콜에 따라 라미닌/FACS 분석에서 측정하였다: 재조합 라미닌 411(바이오라미네이트(Biolaminate))를 다양한 농도의 인간화, 설치류 또는 키메라 항체의 존재 또는 부재 하에 CHO 세포를 발현시키는 hMCAM에 첨가하였다. 30 내지 45분에 대한 인큐베이션 후에, 세포를 세척하고 나서, 결합된 라미니을 검출하기 위해 AF650(노부스바이오(NovusBio))에 컨쥬게이팅한 항-라미닌을 첨가하였다. 라미닌 결합 신호를 측정하기 위해 세포를 유세포분석기 상에서 실행하였다.
표 6은 형질감염을 위해 사용한 작제물을 제공한다.
Figure pct00008
표 7은 구체적 형질감염 실험을 기재한다.
Figure pct00009
표 8은 포르테바이오 및 경쟁적 ELISA에 의해 측정한 바와 같은 설치류 모체뿐만 아니라 형질감염의 제1 라운드에 대한 발현 수준에 비교한 인간화된 항체의 상대적 친화도를 나타낸다.
Figure pct00010
표 9는 설치류 모체뿐만 아니라 형질감염의 두번째 라운드로부터의 발현수준에 비교하여 포르테바이오에 의한 친화도, 경쟁적 ELISA 및 기능적 차단 데이터(라미닌/FACS 분석)를 나타낸다.
Figure pct00011
전반적으로, 데이터는 다양한 2120 인간화된 항체가 포르테바이오에 의해 측정되는 바와 같이 친화도의 5x 초과의 감소를 가지며, 친화도 및 효능의 2x 미만의 감소를 갖는 VH5VL3(G-A N-탈아마이드화 돌연변이체 VH/보존적 VL)을 제외하고, 대부분은 경쟁적 ELISA 및 라미닌 차단 분석에 의해 측정되는 바와 같이 명확한 친화도 및 효능의 2 내지 3x 초과의 감소를 가진다는 것을 입증한다.
특정 후보 항체를 재발현시키고, 포르테바이오에 의한 그들의 친화도 및 그들의 IC50에 대해 시험하였다. 결과를 이하의 표 10에 제공한다.
Figure pct00012
실시예 7. 인간화된 2120 항체의 변형
상기 및 문헌[Liu et al. JBC. 286:11211-7, 2011]에 기재한 DNA 조작 방법을 이용하여, 2120.4.19 항체 성숙 중쇄 가변 영역의 래트 및 인간화된 형태의 변이체를 구성하였다. 위치 H1에서 글루타민의 글루탐산으로의 치환을 갖는 2120.4.19, h2120VH1, h2120VH2, h2120VH3, h2120VH4 및 h2120VH5의 변이체를 구성하였다(카바트 넘버링)(도 4A). 이들 변이체를 2120.4.19.Q1E, h2120VH1.Q1E, h2120VH2.Q1E, h2120VH3.Q1E, h2120VH4.Q1E 및 h2120VH5.Q1E로서 지칭하고, 서열번호 156 내지 161에서 나타낸다. 서열번호 157 내지 161에서 동정하는 인간화된 형태를 도 4A의 정렬에서 도시한다. 다양한 래트 및 인간화된 항체를 h2120VH1.Q1E+h2120VL1; h2120VH1.Q1E +h2120VL2; h2120VH1.Q1E +h2120VL3; h2120VH2.Q1E +h2120VL1; h2120VH2.Q1E +h2120VL2; h2120VH2.Q1E +h2120VL3; h2120VH3.Q1E +h2120VL1; h2120VH3.Q1E +h2120VL2; h2120VH3.Q1E +h2120VL3; h2120VH4.Q1E +h2120VL1; h2120VH4.Q1E +h2120VL2; h2120VH4.Q1E +h2120VL3; h2120VH5.Q1E +h2120VL1; h2120VH5.Q1E +h2120VL2; 및 h2120VH5.Q1E +h2120VL3을 포함하는 변형된 가변 중쇄를 이용하여 구성할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> PROTHENA BIOSCIENCES LIMITED <120> ANTI-MCAM ANTIBODIES AND ASSOCIATED METHODS OF USE <130> WO/2015/136470 <140> PCT/IB2015/051787 <141> 2015-03-12 <150> US 61/952,116 <151> 2014-03-12 <150> US 61/952,833 <151> 2014-03-13 <150> US 62/023,724 <151> 2014-07-11 <150> US 62/068,419 <151> 2014-10-24 <160> 179 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 428 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 atgagggtcc agattcagtt tctggggctc cttctgctct ggacatcagt tgtccagtgt 60 gatgtccaga tgacccagtc tccatcttat cttgctacgt ctcctggaga gagtgtttcc 120 atcagttgca aggcaagtaa aaacattgac acatacttag cctggtatca ggagaaacct 180 gggaaaacga ataagcttct tatctactct gggtcaactt tgcaatctgg aactccatcg 240 agattcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcacgctca ccatcagaaa cctggagtct 300 gaagattttg cagtctacta ctgtcaacag cataatgaat acccgctcac gttcggttct 360 gggaccaagc tggagatcaa acgggctgat gctgcaccaa ctgtatccat cttcccacca 420 tcctcgga 428 <210> 2 <211> 142 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Met Arg Val Gln Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Thr Ser 1 5 10 15 Val Val Gln Cys Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala 20 25 30 Thr Ser Pro Gly Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Lys Asn 35 40 45 Ile Asp Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Thr Pro Ser 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg 85 90 95 Asn Leu Glu Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn 100 105 110 Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Lys Ala Ser Lys Asn Ile Asp Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Ser Gly Ser Thr Leu 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 6 <211> 480 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 atggacacca ggctctgctt ggttttcctt gtccttttca taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg tggaggctta gtgcagcctg gaaggtccct gaaactctcc 120 tgtgcagcct caggattcac tttcagtaac tattacatgg cctgggtccg ccaggctcca 180 acgaagggtc tggagtgggt cgcatccatt agttttgagg gtaatagaaa tcactatgga 240 gactccgtga agggccgaat cactatctcc agagataatg caaaaagcac cctatacctg 300 caaatgacca gtctgaggcc tgaggacacg gcctattatt gtgcaagaca tcgggggtat 360 agtacgaatt tttatcacga cgttttggat gcctggggtc aaggagcttt agtcactgtc 420 tcctcagctg aaacaacagc cccatctgtc tatccactgg ctcctggaac tgctctcaaa 480 <210> 7 <211> 161 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 7 Met Asp Thr Arg Leu Cys Leu Val Phe Leu Val Leu Phe Ile Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asn Tyr Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Phe Glu Gly Asn Arg Asn His Tyr Gly 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Thr 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg His Arg Gly Tyr Ser Thr Asn Phe Tyr His Asp 115 120 125 Val Leu Asp Ala Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 130 135 140 Glu Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Thr Ala Leu 145 150 155 160 Lys <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr Met Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 Ser Ile Ser Phe Glu Gly Asn Arg Asn His Tyr Gly Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 <210> 10 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 His Arg Gly Tyr Ser Thr Asn Phe Tyr His Asp Val Leu Asp Ala Trp 1 5 10 15 Gly Gln Gly <210> 11 <211> 646 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Gly Leu Pro Arg Leu Val Cys Ala Phe Leu Leu Ala Ala Cys Cys 1 5 10 15 Cys Cys Pro Arg Val Ala Gly Val Pro Gly Glu Ala Glu Gln Pro Ala 20 25 30 Pro Glu Leu Val Glu Val Glu Val Gly Ser Thr Ala Leu Leu Lys Cys 35 40 45 Gly Leu Ser Gln Ser Gln Gly Asn Leu Ser His Val Asp Trp Phe Ser 50 55 60 Val His Lys Glu Lys Arg Thr Leu Ile Phe Arg Val Arg Gln Gly Gln 65 70 75 80 Gly Gln Ser Glu Pro Gly Glu Tyr Glu Gln Arg Leu Ser Leu Gln Asp 85 90 95 Arg Gly Ala Thr Leu Ala Leu Thr Gln Val Thr Pro Gln Asp Glu Arg 100 105 110 Ile Phe Leu Cys Gln Gly Lys Arg Pro Arg Ser Gln Glu Tyr Arg Ile 115 120 125 Gln Leu Arg Val Tyr Lys Ala Pro Glu Glu Pro Asn Ile Gln Val Asn 130 135 140 Pro Leu Gly Ile Pro Val Asn Ser Lys Glu Pro Glu Glu Val Ala Thr 145 150 155 160 Cys Val Gly Arg Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Gln Val Ile Trp Tyr Lys 165 170 175 Asn Gly Arg Pro Leu Lys Glu Glu Lys Asn Arg Val His Ile Gln Ser 180 185 190 Ser Gln Thr Val Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Gln Ser Ile Leu 195 200 205 Lys Ala Gln Leu Val Lys Glu Asp Lys Asp Ala Gln Phe Tyr Cys Glu 210 215 220 Leu Asn Tyr Arg Leu Pro Ser Gly Asn His Met Lys Glu Ser Arg Glu 225 230 235 240 Val Thr Val Pro Val Phe Tyr Pro Thr Glu Lys Val Trp Leu Glu Val 245 250 255 Glu Pro Val Gly Met Leu Lys Glu Gly Asp Arg Val Glu Ile Arg Cys 260 265 270 Leu Ala Asp Gly Asn Pro Pro Pro His Phe Ser Ile Ser Lys Gln Asn 275 280 285 Pro Ser Thr Arg Glu Ala Glu Glu Glu Thr Thr Asn Asp Asn Gly Val 290 295 300 Leu Val Leu Glu Pro Ala Arg Lys Glu His Ser Gly Arg Tyr Glu Cys 305 310 315 320 Gln Ala Trp Asn Leu Asp Thr Met Ile Ser Leu Leu Ser Glu Pro Gln 325 330 335 Glu Leu Leu Val Asn Tyr Val Ser Asp Val Arg Val Ser Pro Ala Ala 340 345 350 Pro Glu Arg Gln Glu Gly Ser Ser Leu Thr Leu Thr Cys Glu Ala Glu 355 360 365 Ser Ser Gln Asp Leu Glu Phe Gln Trp Leu Arg Glu Glu Thr Asp Gln 370 375 380 Val Leu Glu Arg Gly Pro Val Leu Gln Leu His Asp Leu Lys Arg Glu 385 390 395 400 Ala Gly Gly Gly Tyr Arg Cys Val Ala Ser Val Pro Ser Ile Pro Gly 405 410 415 Leu Asn Arg Thr Gln Leu Val Lys Leu Ala Ile Phe Gly Pro Pro Trp 420 425 430 Met Ala Phe Lys Glu Arg Lys Val Trp Val Lys Glu Asn Met Val Leu 435 440 445 Asn Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly His Pro Arg Pro Thr Ile Ser Trp 450 455 460 Asn Val Asn Gly Thr Ala Ser Glu Gln Asp Gln Asp Pro Gln Arg Val 465 470 475 480 Leu Ser Thr Leu Asn Val Leu Val Thr Pro Glu Leu Leu Glu Thr Gly 485 490 495 Val Glu Cys Thr Ala Ser Asn Asp Leu Gly Lys Asn Thr Ser Ile Leu 500 505 510 Phe Leu Glu Leu Val Asn Leu Thr Thr Leu Thr Pro Asp Ser Asn Thr 515 520 525 Thr Thr Gly Leu Ser Thr Ser Thr Ala Ser Pro His Thr Arg Ala Asn 530 535 540 Ser Thr Ser Thr Glu Arg Lys Leu Pro Glu Pro Glu Ser Arg Gly Val 545 550 555 560 Val Ile Val Ala Val Ile Val Cys Ile Leu Val Leu Ala Val Leu Gly 565 570 575 Ala Val Leu Tyr Phe Leu Tyr Lys Lys Gly Lys Leu Pro Cys Arg Arg 580 585 590 Ser Gly Lys Gln Glu Ile Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Thr Glu Leu 595 600 605 Val Val Glu Val Lys Ser Asp Lys Leu Pro Glu Glu Met Gly Leu Leu 610 615 620 Gln Gly Ser Ser Gly Asp Lys Arg Ala Pro Gly Asp Gln Gly Glu Lys 625 630 635 640 Tyr Ile Asp Leu Arg His 645 <210> 12 <211> 474 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 atggaatcac agacccaggt cctcatgtcc ctgctgctct ggatttctgg tacctgtggg 60 gacattgtga tgacccagtc tccatcctct ctggctgtgt cagctgggga gacggtctct 120 atacactgca agtccagtca gagtctttta tacagtggaa cccaaaagaa ctacttggcc 180 tggttccagc agaaaccagg acagtctcct aaactgctga tcttctgggc atctactagg 240 cagtctggtg tccctgatcg cttcataggc cgtggatctg ggacagactt cactctgacc 300 atcagcggtg tgcaggcaga agatctggca atttattact gtcaacaata ttatgatact 360 ctcacggaca cgtttggagc ggggaccaag ctggaactga aacgggctga tgctgcacca 420 actgtatcta tcttcccacc atccacggaa cagttagcaa ctggaggtgc ctca 474 <210> 13 <211> 158 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 13 Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Met Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Thr Cys Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Ala Gly Glu Thr Val Ser Ile His Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45 Leu Leu Tyr Ser Gly Thr Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln 50 55 60 Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Trp Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80 Gln Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr 100 105 110 Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Thr Leu Thr Asp Thr Phe Gly Ala Gly 115 120 125 Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile 130 135 140 Phe Pro Pro Ser Thr Glu Gln Leu Ala Thr Gly Gly Ala Ser 145 150 155 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gly Thr Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 Trp Ala Ser Thr Arg Gln Ser 1 5 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Gln Gln Tyr Tyr Asp Thr Leu Thr Asp Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 469 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 atggacatca ggctcagctt ggctttcctg gtccttttca taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcggctgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gaaagtccat gaaactctcc 120 tgtgtagcct cgggattcaa attcagtaac tattacatgt cctgggtccg ccaggctcca 180 gcgaagggtc tggagtgggt cgcatccatt agtgatggtg gtggtgacac tttctgtcga 240 gacttggtga agggccgatt cactatctcc agagataatg caaaaagtac cctttacctg 300 caaatggaca gtctgaggcc tgaggacacg gccacttatt actgtgcaag acggggagca 360 gctatggggg gtgttatgga tgcctggggt caaggaactt cagtcactgt ctcctcagct 420 gaaacaacag ccccatctgt ctatccactg gctcctggaa ctgctctca 469 <210> 18 <211> 156 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 18 Met Asp Ile Arg Leu Ser Leu Ala Phe Leu Val Leu Phe Ile Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Lys Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Lys Phe 35 40 45 Ser Asn Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Ala Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Ser Ile Ser Asp Gly Gly Gly Asp Thr Phe Cys Arg 65 70 75 80 Asp Leu Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Thr 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Ala Ala Met Gly Gly Val Met Asp Ala 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Glu Thr Thr Ala 130 135 140 Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Thr Ala Leu 145 150 155 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 Gly Phe Lys Phe Ser Asn Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 Ser Ile Ser Asp Gly Gly Gly Asp Thr Phe Cys Arg Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 21 Arg Gly Ala Ala Met Gly Gly Val Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly 1 5 10 15 <210> 22 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Pro Arg Val Ala Gly Val Pro Gly Glu Ala Glu Gln Pro Ala Pro Glu 1 5 10 15 Leu Val Glu Val Glu Val Gly Ser Thr Ala Leu Leu Lys Cys Gly Leu 20 25 30 Ser Gln Ser Gln Gly Asn Leu Ser His Val Asp Trp Phe Ser Val His 35 40 45 Lys Glu Lys Arg Thr Leu Ile Phe Arg Val Arg Gln Gly Gln Gly Gln 50 55 60 Ser Glu Pro Gly Glu Tyr Glu Gln Arg Leu Ser Leu Gln Asp Arg Gly 65 70 75 80 Ala Thr Leu Ala Leu Thr Gln Val Thr Pro Gln Asp Glu Arg Ile Phe 85 90 95 Leu Cys Gln Gly Lys Arg Pro Arg Ser Gln Glu Tyr Arg Ile Gln 100 105 110 <210> 23 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Pro Asn Ile Gln Val Asn Pro Leu Gly Ile Pro Val Asn Ser Lys Glu 1 5 10 15 Pro Glu Glu Val Ala Thr Cys Val Gly Arg Asn Gly Tyr Pro Ile Pro 20 25 30 Gln Val Ile Trp Tyr Lys Asn Gly Arg Pro Leu Lys Glu Glu Lys Asn 35 40 45 Arg Val His Ile Gln Ser Ser Gln Thr Val Glu Ser Ser Gly Leu Tyr 50 55 60 Thr Leu Gln Ser Ile Leu Lys Ala Gln Leu Val Lys Glu Asp Lys Asp 65 70 75 80 Ala Gln Phe Tyr Cys Glu Leu Asn Tyr Arg Leu Pro Ser Gly Asn His 85 90 95 Met Lys Glu Ser Arg Glu Val Thr 100 <210> 24 <211> 78 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Pro Val Phe Tyr Pro Thr Glu Lys Val Trp Leu Glu Val Glu Pro Val 1 5 10 15 Gly Met Leu Lys Glu Gly Asp Arg Val Glu Ile Arg Cys Leu Ala Asp 20 25 30 Gly Asn Pro Pro Pro His Phe Ser Ile Ser Lys Gln Asn Pro Ser Thr 35 40 45 Arg Glu Ala Glu Glu Glu Thr Thr Asn Asp Asn Gly Val Leu Val Leu 50 55 60 Glu Pro Ala Arg Lys Glu His Ser Gly Arg Tyr Glu Cys Gln 65 70 75 <210> 25 <211> 90 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Pro Gln Glu Leu Leu Val Asn Tyr Val Ser Asp Val Arg Val Ser Pro 1 5 10 15 Ala Ala Pro Glu Arg Gln Glu Gly Ser Ser Leu Thr Leu Thr Cys Glu 20 25 30 Ala Glu Ser Ser Gln Asp Leu Glu Phe Gln Trp Leu Arg Glu Glu Thr 35 40 45 Asp Gln Val Leu Glu Arg Gly Pro Val Leu Gln Leu His Asp Leu Lys 50 55 60 Arg Glu Ala Gly Gly Gly Tyr Arg Cys Val Ala Ser Val Pro Ser Ile 65 70 75 80 Pro Gly Leu Asn Arg Thr Gln Leu Val Lys 85 90 <210> 26 <211> 81 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Pro Pro Trp Met Ala Phe Lys Glu Arg Lys Val Trp Val Lys Glu Asn 1 5 10 15 Met Val Leu Asn Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly His Pro Arg Pro Thr 20 25 30 Ile Ser Trp Asn Val Asn Gly Thr Ala Ser Glu Gln Asp Gln Asp Pro 35 40 45 Gln Arg Val Leu Ser Thr Leu Asn Val Leu Val Thr Pro Glu Leu Leu 50 55 60 Glu Thr Gly Val Glu Cys Thr Ala Ser Asn Asp Leu Gly Lys Asn Thr 65 70 75 80 Ser <210> 27 <211> 1823 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Met Ala Leu Ser Ser Ala Trp Arg Ser Val Leu Pro Leu Trp Leu Leu 1 5 10 15 Trp Ser Ala Ala Cys Ser Arg Ala Ala Ser Gly Asp Asp Asn Ala Phe 20 25 30 Pro Phe Asp Ile Glu Gly Ser Ser Ala Val Gly Arg Gln Asp Pro Pro 35 40 45 Glu Thr Ser Glu Pro Arg Val Ala Leu Gly Arg Leu Pro Pro Ala Ala 50 55 60 Glu Lys Cys Asn Ala Gly Phe Phe His Thr Leu Ser Gly Glu Cys Val 65 70 75 80 Pro Cys Asp Cys Asn Gly Asn Ser Asn Glu Cys Leu Asp Gly Ser Gly 85 90 95 Tyr Cys Val His Cys Gln Arg Asn Thr Thr Gly Glu His Cys Glu Lys 100 105 110 Cys Leu Asp Gly Tyr Ile Gly Asp Ser Ile Arg Gly Ala Pro Gln Phe 115 120 125 Cys Gln Pro Cys Pro Cys Pro Leu Pro His Leu Ala Asn Phe Ala Glu 130 135 140 Ser Cys Tyr Arg Lys Asn Gly Ala Val Arg Cys Ile Cys Asn Glu Asn 145 150 155 160 Tyr Ala Gly Pro Asn Cys Glu Arg Cys Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asn 165 170 175 Pro Leu Leu Ile Gly Ser Thr Cys Lys Lys Cys Asp Cys Ser Gly Asn 180 185 190 Ser Asp Pro Asn Leu Ile Phe Glu Asp Cys Asp Glu Val Thr Gly Gln 195 200 205 Cys Arg Asn Cys Leu Arg Asn Thr Thr Gly Phe Lys Cys Glu Arg Cys 210 215 220 Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asp Ala Arg Ile Ala Lys Asn Cys Ala Val 225 230 235 240 Cys Asn Cys Gly Gly Gly Pro Cys Asp Ser Val Thr Gly Glu Cys Leu 245 250 255 Glu Glu Gly Phe Glu Pro Pro Thr Gly Met Asp Cys Pro Thr Ile Ser 260 265 270 Cys Asp Lys Cys Val Trp Asp Leu Thr Asp Asp Leu Arg Leu Ala Ala 275 280 285 Leu Ser Ile Glu Glu Gly Lys Ser Gly Val Leu Ser Val Ser Ser Gly 290 295 300 Ala Ala Ala His Arg His Val Asn Glu Ile Asn Ala Thr Ile Tyr Leu 305 310 315 320 Leu Lys Thr Lys Leu Ser Glu Arg Glu Asn Gln Tyr Ala Leu Arg Lys 325 330 335 Ile Gln Ile Asn Asn Ala Glu Asn Thr Met Lys Ser Leu Leu Ser Asp 340 345 350 Val Glu Glu Leu Val Glu Lys Glu Asn Gln Ala Ser Arg Lys Gly Gln 355 360 365 Leu Val Gln Lys Glu Ser Met Asp Thr Ile Asn His Ala Ser Gln Leu 370 375 380 Val Glu Gln Ala His Asp Met Arg Asp Lys Ile Gln Glu Ile Asn Asn 385 390 395 400 Lys Met Leu Tyr Tyr Gly Glu Glu His Glu Leu Ser Pro Lys Glu Ile 405 410 415 Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala Gln Lys Met Leu Glu Glu Ile Arg Ser 420 425 430 Arg Gln Pro Phe Phe Thr Gln Arg Glu Leu Val Asp Glu Glu Ala Asp 435 440 445 Glu Ala Tyr Glu Leu Leu Ser Gln Ala Glu Ser Trp Gln Arg Leu His 450 455 460 Asn Glu Thr Arg Thr Leu Phe Pro Val Val Leu Glu Gln Leu Asp Asp 465 470 475 480 Tyr Asn Ala Lys Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Leu Asp Gln Ala Leu 485 490 495 Asn Tyr Val Arg Asp Ala Glu Asp Met Asn Arg Ala Thr Ala Ala Arg 500 505 510 Gln Arg Asp His Glu Lys Gln Gln Glu Arg Val Arg Glu Gln Met Glu 515 520 525 Val Val Asn Met Ser Leu Ser Thr Ser Ala Asp Ser Leu Thr Thr Pro 530 535 540 Arg Leu Thr Leu Ser Glu Leu Asp Asp Ile Ile Lys Asn Ala Ser Gly 545 550 555 560 Ile Tyr Ala Glu Ile Asp Gly Ala Lys Ser Glu Leu Gln Val Lys Leu 565 570 575 Ser Asn Leu Ser Asn Leu Ser His Asp Leu Val Gln Glu Ala Ile Asp 580 585 590 His Ala Gln Asp Leu Gln Gln Glu Ala Asn Glu Leu Ser Arg Lys Leu 595 600 605 His Ser Ser Asp Met Asn Gly Leu Val Gln Lys Ala Leu Asp Ala Ser 610 615 620 Asn Val Tyr Glu Asn Ile Val Asn Tyr Val Ser Glu Ala Asn Glu Thr 625 630 635 640 Ala Glu Phe Ala Leu Asn Thr Thr Asp Arg Ile Tyr Asp Ala Val Ser 645 650 655 Gly Ile Asp Thr Gln Ile Ile Tyr His Lys Asp Glu Ser Glu Asn Leu 660 665 670 Leu Asn Gln Ala Arg Glu Leu Gln Ala Lys Ala Glu Ser Ser Ser Asp 675 680 685 Glu Ala Val Ala Asp Thr Ser Arg Arg Val Gly Gly Ala Leu Ala Arg 690 695 700 Lys Ser Ala Leu Lys Thr Arg Leu Ser Asp Ala Val Lys Gln Leu Gln 705 710 715 720 Ala Ala Glu Arg Gly Asp Ala Gln Gln Arg Leu Gly Gln Ser Arg Leu 725 730 735 Ile Thr Glu Glu Ala Asn Arg Thr Thr Met Glu Val Gln Gln Ala Thr 740 745 750 Ala Pro Met Ala Asn Asn Leu Thr Asn Trp Ser Gln Asn Leu Gln His 755 760 765 Phe Asp Ser Ser Ala Tyr Asn Thr Ala Val Asn Ser Ala Arg Asp Ala 770 775 780 Val Arg Asn Leu Thr Glu Val Val Pro Gln Leu Leu Asp Gln Leu Arg 785 790 795 800 Thr Val Glu Gln Lys Arg Pro Ala Ser Asn Val Ser Ala Ser Ile Gln 805 810 815 Arg Ile Arg Glu Leu Ile Ala Gln Thr Arg Ser Val Ala Ser Lys Ile 820 825 830 Gln Val Ser Met Met Phe Asp Gly Gln Ser Ala Val Glu Val His Ser 835 840 845 Arg Thr Ser Met Asp Asp Leu Lys Ala Phe Thr Ser Leu Ser Leu Tyr 850 855 860 Met Lys Pro Pro Val Lys Arg Pro Glu Leu Thr Glu Thr Ala Asp Gln 865 870 875 880 Phe Ile Leu Tyr Leu Gly Ser Lys Asn Ala Lys Lys Glu Tyr Met Gly 885 890 895 Leu Ala Ile Lys Asn Asp Asn Leu Val Tyr Val Tyr Asn Leu Gly Thr 900 905 910 Lys Asp Val Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys Pro Val Ser Ser Trp Pro 915 920 925 Ala Tyr Phe Ser Ile Val Lys Ile Glu Arg Val Gly Lys His Gly Lys 930 935 940 Val Phe Leu Thr Val Pro Ser Leu Ser Ser Thr Ala Glu Glu Lys Phe 945 950 955 960 Ile Lys Lys Gly Glu Phe Ser Gly Asp Asp Ser Leu Leu Asp Leu Asp 965 970 975 Pro Glu Asp Thr Val Phe Tyr Val Gly Gly Val Pro Ser Asn Phe Lys 980 985 990 Leu Pro Thr Ser Leu Asn Leu Pro Gly Phe Val Gly Cys Leu Glu Leu 995 1000 1005 Ala Thr Leu Asn Asn Asp Val Ile Ser Leu Tyr Asn Phe Lys His Ile 1010 1015 1020 Tyr Asn Met Asp Pro Ser Thr Ser Val Pro Cys Ala Arg Asp Lys Leu 1025 1030 1035 1040 Ala Phe Thr Gln Ser Arg Ala Ala Ser Tyr Phe Phe Asp Gly Ser Gly 1045 1050 1055 Tyr Ala Val Val Arg Asp Ile Thr Arg Arg Gly Lys Phe Gly Gln Val 1060 1065 1070 Thr Arg Phe Asp Ile Glu Val Arg Thr Pro Ala Asp Asn Gly Leu Ile 1075 1080 1085 Leu Leu Met Val Asn Gly Ser Met Phe Phe Arg Leu Glu Met Arg Asn 1090 1095 1100 Gly Tyr Leu His Val Phe Tyr Asp Phe Gly Phe Ser Gly Gly Pro Val 1105 1110 1115 1120 His Leu Glu Asp Thr Leu Lys Lys Ala Gln Ile Asn Asp Ala Lys Tyr 1125 1130 1135 His Glu Ile Ser Ile Ile Tyr His Asn Asp Lys Lys Met Ile Leu Val 1140 1145 1150 Val Asp Arg Arg His Val Lys Ser Met Asp Asn Glu Lys Met Lys Ile 1155 1160 1165 Pro Phe Thr Asp Ile Tyr Ile Gly Gly Ala Pro Pro Glu Ile Leu Gln 1170 1175 1180 Ser Arg Ala Leu Arg Ala His Leu Pro Leu Asp Ile Asn Phe Arg Gly 1185 1190 1195 1200 Cys Met Lys Gly Phe Gln Phe Gln Lys Lys Asp Phe Asn Leu Leu Glu 1205 1210 1215 Gln Thr Glu Thr Leu Gly Val Gly Tyr Gly Cys Pro Glu Asp Ser Leu 1220 1225 1230 Ile Ser Arg Arg Ala Tyr Phe Asn Gly Gln Ser Phe Ile Ala Ser Ile 1235 1240 1245 Gln Lys Ile Ser Phe Phe Asp Gly Phe Glu Gly Gly Phe Asn Phe Arg 1250 1255 1260 Thr Leu Gln Pro Asn Gly Leu Leu Phe Tyr Tyr Ala Ser Gly Ser Asp 1265 1270 1275 1280 Val Phe Ser Ile Ser Leu Asp Asn Gly Thr Val Ile Met Asp Val Lys 1285 1290 1295 Gly Ile Lys Val Gln Ser Val Asp Lys Gln Tyr Asn Asp Gly Leu Ser 1300 1305 1310 His Phe Val Ile Ser Ser Val Ser Pro Thr Arg Tyr Glu Leu Ile Val 1315 1320 1325 Asp Lys Ser Arg Val Gly Ser Lys Asn Pro Thr Lys Gly Lys Ile Glu 1330 1335 1340 Gln Thr Gln Ala Ser Glu Lys Lys Phe Tyr Phe Gly Gly Ser Pro Ile 1345 1350 1355 1360 Ser Ala Gln Tyr Ala Asn Phe Thr Gly Cys Ile Ser Asn Ala Tyr Phe 1365 1370 1375 Thr Arg Val Asp Arg Asp Val Glu Val Glu Asp Phe Gln Arg Tyr Thr 1380 1385 1390 Glu Lys Val His Thr Ser Leu Tyr Glu Cys Pro Ile Glu Ser Ser Pro 1395 1400 1405 Leu Phe Leu Leu His Lys Lys Gly Lys Asn Leu Ser Lys Pro Lys Ala 1410 1415 1420 Ser Gln Asn Lys Lys Gly Gly Lys Ser Lys Asp Ala Pro Ser Trp Asp 1425 1430 1435 1440 Pro Val Ala Leu Lys Leu Pro Glu Arg Asn Thr Pro Arg Asn Ser His 1445 1450 1455 Cys His Leu Ser Asn Ser Pro Arg Ala Ile Glu His Ala Tyr Gln Tyr 1460 1465 1470 Gly Gly Thr Ala Asn Ser Arg Gln Glu Phe Glu His Leu Lys Gly Asp 1475 1480 1485 Phe Gly Ala Lys Ser Gln Phe Ser Ile Arg Leu Arg Thr Arg Ser Ser 1490 1495 1500 His Gly Met Ile Phe Tyr Val Ser Asp Gln Glu Glu Asn Asp Phe Met 1505 1510 1515 1520 Thr Leu Phe Leu Ala His Gly Arg Leu Val Tyr Met Phe Asn Val Gly 1525 1530 1535 His Lys Lys Leu Lys Ile Arg Ser Gln Glu Lys Tyr Asn Asp Gly Leu 1540 1545 1550 Trp His Asp Val Ile Phe Ile Arg Glu Arg Ser Ser Gly Arg Leu Val 1555 1560 1565 Ile Asp Gly Leu Arg Val Leu Glu Glu Ser Leu Pro Pro Thr Glu Ala 1570 1575 1580 Thr Trp Lys Ile Lys Gly Pro Ile Tyr Leu Gly Gly Val Ala Pro Gly 1585 1590 1595 1600 Lys Ala Val Lys Asn Val Gln Ile Asn Ser Ile Tyr Ser Phe Ser Gly 1605 1610 1615 Cys Leu Ser Asn Leu Gln Leu Asn Gly Ala Ser Ile Thr Ser Ala Ser 1620 1625 1630 Gln Thr Phe Ser Val Thr Pro Cys Phe Glu Gly Pro Met Glu Thr Gly 1635 1640 1645 Thr Tyr Phe Ser Thr Glu Gly Gly Tyr Val Val Leu Asp Glu Ser Phe 1650 1655 1660 Asn Ile Gly Leu Lys Phe Glu Ile Ala Phe Glu Val Arg Pro Arg Ser 1665 1670 1675 1680 Ser Ser Gly Thr Leu Val His Gly His Ser Val Asn Gly Glu Tyr Leu 1685 1690 1695 Asn Val His Met Lys Asn Gly Gln Val Ile Val Lys Val Asn Asn Gly 1700 1705 1710 Ile Arg Asp Phe Ser Thr Ser Val Thr Pro Lys Gln Ser Leu Cys Asp 1715 1720 1725 Gly Arg Trp His Arg Ile Thr Val Ile Arg Asp Ser Asn Val Val Gln 1730 1735 1740 Leu Asp Val Asp Ser Glu Val Asn His Val Val Gly Pro Leu Asn Pro 1745 1750 1755 1760 Lys Pro Ile Asp His Arg Glu Pro Val Phe Val Gly Gly Val Pro Glu 1765 1770 1775 Ser Leu Leu Thr Pro Arg Leu Ala Pro Ser Lys Pro Phe Thr Gly Cys 1780 1785 1790 Ile Arg His Phe Val Ile Asp Gly His Pro Val Ser Phe Ser Lys Ala 1795 1800 1805 Ala Leu Val Ser Gly Ala Val Ser Ile Asn Ser Cys Pro Ala Ala 1810 1815 1820 <210> 28 <211> 1816 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Met Ala Leu Ser Ser Ala Trp Arg Ser Val Leu Pro Leu Trp Leu Leu 1 5 10 15 Trp Ser Ala Ala Cys Ser Arg Ala Ala Ser Gly Asp Asp Asn Ala Phe 20 25 30 Pro Phe Asp Ile Glu Gly Ser Ser Ala Val Gly Arg Gln Asp Pro Pro 35 40 45 Glu Thr Ser Glu Pro Arg Val Ala Leu Gly Arg Leu Pro Pro Ala Ala 50 55 60 Glu Lys Cys Asn Ala Gly Phe Phe His Thr Leu Ser Gly Glu Cys Val 65 70 75 80 Pro Cys Asp Cys Asn Gly Asn Ser Asn Glu Cys Leu Asp Gly Ser Gly 85 90 95 Tyr Cys Val His Cys Gln Arg Asn Thr Thr Gly Glu His Cys Glu Lys 100 105 110 Cys Leu Asp Gly Tyr Ile Gly Asp Ser Ile Arg Gly Ala Pro Gln Phe 115 120 125 Cys Gln Pro Cys Pro Cys Pro Leu Pro His Leu Ala Asn Phe Ala Glu 130 135 140 Ser Cys Tyr Arg Lys Asn Gly Ala Val Arg Cys Ile Cys Asn Glu Asn 145 150 155 160 Tyr Ala Gly Pro Asn Cys Glu Arg Cys Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asn 165 170 175 Pro Leu Leu Ile Gly Ser Thr Cys Lys Lys Cys Asp Cys Ser Gly Asn 180 185 190 Ser Asp Pro Asn Leu Ile Phe Glu Asp Cys Asp Glu Val Thr Gly Gln 195 200 205 Cys Arg Asn Cys Leu Arg Asn Thr Thr Gly Phe Lys Cys Glu Arg Cys 210 215 220 Ala Pro Gly Tyr Tyr Gly Asp Ala Arg Ile Ala Lys Asn Cys Ala Val 225 230 235 240 Cys Asn Cys Gly Gly Gly Pro Cys Asp Ser Val Thr Gly Glu Cys Leu 245 250 255 Glu Glu Gly Phe Glu Pro Pro Thr Gly Cys Asp Lys Cys Val Trp Asp 260 265 270 Leu Thr Asp Asp Leu Arg Leu Ala Ala Leu Ser Ile Glu Glu Gly Lys 275 280 285 Ser Gly Val Leu Ser Val Ser Ser Gly Ala Ala Ala His Arg His Val 290 295 300 Asn Glu Ile Asn Ala Thr Ile Tyr Leu Leu Lys Thr Lys Leu Ser Glu 305 310 315 320 Arg Glu Asn Gln Tyr Ala Leu Arg Lys Ile Gln Ile Asn Asn Ala Glu 325 330 335 Asn Thr Met Lys Ser Leu Leu Ser Asp Val Glu Glu Leu Val Glu Lys 340 345 350 Glu Asn Gln Ala Ser Arg Lys Gly Gln Leu Val Gln Lys Glu Ser Met 355 360 365 Asp Thr Ile Asn His Ala Ser Gln Leu Val Glu Gln Ala His Asp Met 370 375 380 Arg Asp Lys Ile Gln Glu Ile Asn Asn Lys Met Leu Tyr Tyr Gly Glu 385 390 395 400 Glu His Glu Leu Ser Pro Lys Glu Ile Ser Glu Lys Leu Val Leu Ala 405 410 415 Gln Lys Met Leu Glu Glu Ile Arg Ser Arg Gln Pro Phe Phe Thr Gln 420 425 430 Arg Glu Leu Val Asp Glu Glu Ala Asp Glu Ala Tyr Glu Leu Leu Ser 435 440 445 Gln Ala Glu Ser Trp Gln Arg Leu His Asn Glu Thr Arg Thr Leu Phe 450 455 460 Pro Val Val Leu Glu Gln Leu Asp Asp Tyr Asn Ala Lys Leu Ser Asp 465 470 475 480 Leu Gln Glu Ala Leu Asp Gln Ala Leu Asn Tyr Val Arg Asp Ala Glu 485 490 495 Asp Met Asn Arg Ala Thr Ala Ala Arg Gln Arg Asp His Glu Lys Gln 500 505 510 Gln Glu Arg Val Arg Glu Gln Met Glu Val Val Asn Met Ser Leu Ser 515 520 525 Thr Ser Ala Asp Ser Leu Thr Thr Pro Arg Leu Thr Leu Ser Glu Leu 530 535 540 Asp Asp Ile Ile Lys Asn Ala Ser Gly Ile Tyr Ala Glu Ile Asp Gly 545 550 555 560 Ala Lys Ser Glu Leu Gln Val Lys Leu Ser Asn Leu Ser Asn Leu Ser 565 570 575 His Asp Leu Val Gln Glu Ala Ile Asp His Ala Gln Asp Leu Gln Gln 580 585 590 Glu Ala Asn Glu Leu Ser Arg Lys Leu His Ser Ser Asp Met Asn Gly 595 600 605 Leu Val Gln Lys Ala Leu Asp Ala Ser Asn Val Tyr Glu Asn Ile Val 610 615 620 Asn Tyr Val Ser Glu Ala Asn Glu Thr Ala Glu Phe Ala Leu Asn Thr 625 630 635 640 Thr Asp Arg Ile Tyr Asp Ala Val Ser Gly Ile Asp Thr Gln Ile Ile 645 650 655 Tyr His Lys Asp Glu Ser Glu Asn Leu Leu Asn Gln Ala Arg Glu Leu 660 665 670 Gln Ala Lys Ala Glu Ser Ser Ser Asp Glu Ala Val Ala Asp Thr Ser 675 680 685 Arg Arg Val Gly Gly Ala Leu Ala Arg Lys Ser Ala Leu Lys Thr Arg 690 695 700 Leu Ser Asp Ala Val Lys Gln Leu Gln Ala Ala Glu Arg Gly Asp Ala 705 710 715 720 Gln Gln Arg Leu Gly Gln Ser Arg Leu Ile Thr Glu Glu Ala Asn Arg 725 730 735 Thr Thr Met Glu Val Gln Gln Ala Thr Ala Pro Met Ala Asn Asn Leu 740 745 750 Thr Asn Trp Ser Gln Asn Leu Gln His Phe Asp Ser Ser Ala Tyr Asn 755 760 765 Thr Ala Val Asn Ser Ala Arg Asp Ala Val Arg Asn Leu Thr Glu Val 770 775 780 Val Pro Gln Leu Leu Asp Gln Leu Arg Thr Val Glu Gln Lys Arg Pro 785 790 795 800 Ala Ser Asn Val Ser Ala Ser Ile Gln Arg Ile Arg Glu Leu Ile Ala 805 810 815 Gln Thr Arg Ser Val Ala Ser Lys Ile Gln Val Ser Met Met Phe Asp 820 825 830 Gly Gln Ser Ala Val Glu Val His Ser Arg Thr Ser Met Asp Asp Leu 835 840 845 Lys Ala Phe Thr Ser Leu Ser Leu Tyr Met Lys Pro Pro Val Lys Arg 850 855 860 Pro Glu Leu Thr Glu Thr Ala Asp Gln Phe Ile Leu Tyr Leu Gly Ser 865 870 875 880 Lys Asn Ala Lys Lys Glu Tyr Met Gly Leu Ala Ile Lys Asn Asp Asn 885 890 895 Leu Val Tyr Val Tyr Asn Leu Gly Thr Lys Asp Val Glu Ile Pro Leu 900 905 910 Asp Ser Lys Pro Val Ser Ser Trp Pro Ala Tyr Phe Ser Ile Val Lys 915 920 925 Ile Glu Arg Val Gly Lys His Gly Lys Val Phe Leu Thr Val Pro Ser 930 935 940 Leu Ser Ser Thr Ala Glu Glu Lys Phe Ile Lys Lys Gly Glu Phe Ser 945 950 955 960 Gly Asp Asp Ser Leu Leu Asp Leu Asp Pro Glu Asp Thr Val Phe Tyr 965 970 975 Val Gly Gly Val Pro Ser Asn Phe Lys Leu Pro Thr Ser Leu Asn Leu 980 985 990 Pro Gly Phe Val Gly Cys Leu Glu Leu Ala Thr Leu Asn Asn Asp Val 995 1000 1005 Ile Ser Leu Tyr Asn Phe Lys His Ile Tyr Asn Met Asp Pro Ser Thr 1010 1015 1020 Ser Val Pro Cys Ala Arg Asp Lys Leu Ala Phe Thr Gln Ser Arg Ala 1025 1030 1035 1040 Ala Ser Tyr Phe Phe Asp Gly Ser Gly Tyr Ala Val Val Arg Asp Ile 1045 1050 1055 Thr Arg Arg Gly Lys Phe Gly Gln Val Thr Arg Phe Asp Ile Glu Val 1060 1065 1070 Arg Thr Pro Ala Asp Asn Gly Leu Ile Leu Leu Met Val Asn Gly Ser 1075 1080 1085 Met Phe Phe Arg Leu Glu Met Arg Asn Gly Tyr Leu His Val Phe Tyr 1090 1095 1100 Asp Phe Gly Phe Ser Gly Gly Pro Val His Leu Glu Asp Thr Leu Lys 1105 1110 1115 1120 Lys Ala Gln Ile Asn Asp Ala Lys Tyr His Glu Ile Ser Ile Ile Tyr 1125 1130 1135 His Asn Asp Lys Lys Met Ile Leu Val Val Asp Arg Arg His Val Lys 1140 1145 1150 Ser Met Asp Asn Glu Lys Met Lys Ile Pro Phe Thr Asp Ile Tyr Ile 1155 1160 1165 Gly Gly Ala Pro Pro Glu Ile Leu Gln Ser Arg Ala Leu Arg Ala His 1170 1175 1180 Leu Pro Leu Asp Ile Asn Phe Arg Gly Cys Met Lys Gly Phe Gln Phe 1185 1190 1195 1200 Gln Lys Lys Asp Phe Asn Leu Leu Glu Gln Thr Glu Thr Leu Gly Val 1205 1210 1215 Gly Tyr Gly Cys Pro Glu Asp Ser Leu Ile Ser Arg Arg Ala Tyr Phe 1220 1225 1230 Asn Gly Gln Ser Phe Ile Ala Ser Ile Gln Lys Ile Ser Phe Phe Asp 1235 1240 1245 Gly Phe Glu Gly Gly Phe Asn Phe Arg Thr Leu Gln Pro Asn Gly Leu 1250 1255 1260 Leu Phe Tyr Tyr Ala Ser Gly Ser Asp Val Phe Ser Ile Ser Leu Asp 1265 1270 1275 1280 Asn Gly Thr Val Ile Met Asp Val Lys Gly Ile Lys Val Gln Ser Val 1285 1290 1295 Asp Lys Gln Tyr Asn Asp Gly Leu Ser His Phe Val Ile Ser Ser Val 1300 1305 1310 Ser Pro Thr Arg Tyr Glu Leu Ile Val Asp Lys Ser Arg Val Gly Ser 1315 1320 1325 Lys Asn Pro Thr Lys Gly Lys Ile Glu Gln Thr Gln Ala Ser Glu Lys 1330 1335 1340 Lys Phe Tyr Phe Gly Gly Ser Pro Ile Ser Ala Gln Tyr Ala Asn Phe 1345 1350 1355 1360 Thr Gly Cys Ile Ser Asn Ala Tyr Phe Thr Arg Val Asp Arg Asp Val 1365 1370 1375 Glu Val Glu Asp Phe Gln Arg Tyr Thr Glu Lys Val His Thr Ser Leu 1380 1385 1390 Tyr Glu Cys Pro Ile Glu Ser Ser Pro Leu Phe Leu Leu His Lys Lys 1395 1400 1405 Gly Lys Asn Leu Ser Lys Pro Lys Ala Ser Gln Asn Lys Lys Gly Gly 1410 1415 1420 Lys Ser Lys Asp Ala Pro Ser Trp Asp Pro Val Ala Leu Lys Leu Pro 1425 1430 1435 1440 Glu Arg Asn Thr Pro Arg Asn Ser His Cys His Leu Ser Asn Ser Pro 1445 1450 1455 Arg Ala Ile Glu His Ala Tyr Gln Tyr Gly Gly Thr Ala Asn Ser Arg 1460 1465 1470 Gln Glu Phe Glu His Leu Lys Gly Asp Phe Gly Ala Lys Ser Gln Phe 1475 1480 1485 Ser Ile Arg Leu Arg Thr Arg Ser Ser His Gly Met Ile Phe Tyr Val 1490 1495 1500 Ser Asp Gln Glu Glu Asn Asp Phe Met Thr Leu Phe Leu Ala His Gly 1505 1510 1515 1520 Arg Leu Val Tyr Met Phe Asn Val Gly His Lys Lys Leu Lys Ile Arg 1525 1530 1535 Ser Gln Glu Lys Tyr Asn Asp Gly Leu Trp His Asp Val Ile Phe Ile 1540 1545 1550 Arg Glu Arg Ser Ser Gly Arg Leu Val Ile Asp Gly Leu Arg Val Leu 1555 1560 1565 Glu Glu Ser Leu Pro Pro Thr Glu Ala Thr Trp Lys Ile Lys Gly Pro 1570 1575 1580 Ile Tyr Leu Gly Gly Val Ala Pro Gly Lys Ala Val Lys Asn Val Gln 1585 1590 1595 1600 Ile Asn Ser Ile Tyr Ser Phe Ser Gly Cys Leu Ser Asn Leu Gln Leu 1605 1610 1615 Asn Gly Ala Ser Ile Thr Ser Ala Ser Gln Thr Phe Ser Val Thr Pro 1620 1625 1630 Cys Phe Glu Gly Pro Met Glu Thr Gly Thr Tyr Phe Ser Thr Glu Gly 1635 1640 1645 Gly Tyr Val Val Leu Asp Glu Ser Phe Asn Ile Gly Leu Lys Phe Glu 1650 1655 1660 Ile Ala Phe Glu Val Arg Pro Arg Ser Ser Ser Gly Thr Leu Val His 1665 1670 1675 1680 Gly His Ser Val Asn Gly Glu Tyr Leu Asn Val His Met Lys Asn Gly 1685 1690 1695 Gln Val Ile Val Lys Val Asn Asn Gly Ile Arg Asp Phe Ser Thr Ser 1700 1705 1710 Val Thr Pro Lys Gln Ser Leu Cys Asp Gly Arg Trp His Arg Ile Thr 1715 1720 1725 Val Ile Arg Asp Ser Asn Val Val Gln Leu Asp Val Asp Ser Glu Val 1730 1735 1740 Asn His Val Val Gly Pro Leu Asn Pro Lys Pro Ile Asp His Arg Glu 1745 1750 1755 1760 Pro Val Phe Val Gly Gly Val Pro Glu Ser Leu Leu Thr Pro Arg Leu 1765 1770 1775 Ala Pro Ser Lys Pro Phe Thr Gly Cys Ile Arg His Phe Val Ile Asp 1780 1785 1790 Gly His Pro Val Ser Phe Ser Lys Ala Ala Leu Val Ser Gly Ala Val 1795 1800 1805 Ser Ile Asn Ser Cys Pro Ala Ala 1810 1815 <210> 29 <211> 334 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 29 gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60 atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gtactggtac 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcaac acagtaggga gcttccattc 300 acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaac 334 <210> 30 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 30 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 31 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met Tyr 1 5 10 15 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 32 Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 33 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr 1 5 <210> 34 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 34 cagattcagt tggtgcagtc tggacctgag ctgaagaagc ctggagagac agtcaagatc 60 tcctgcaagg cttctgggta taccttcaca aactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120 ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180 gctgatgact tcaagggacg gtttgccttg tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240 ttgcagatca acaacctcaa aaatgaggac atggctacat atttctgtgc aagatatagg 300 tataataaat acgagagggc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 35 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 35 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Leu Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Arg Tyr Asn Lys Tyr Glu Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 37 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 38 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 Tyr Arg Tyr Asn Lys Tyr Glu Arg Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 39 <211> 338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60 atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtagca cccgaaagaa cttcttggct 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttataatcgg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacg 338 <210> 40 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 40 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Ser Thr Arg Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Arg Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ser Thr Arg Lys Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ala <210> 42 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 42 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 Lys Gln Ser Tyr Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 44 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 gagatccagc tgcagcagac tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ttcattcact gactacatca tgctctgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggaaat attaatcctt actctggtag tagtggctac 180 aatctgaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcttccag cacagcctac 240 atgcagctca acagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagggaag 300 gactttgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351 <210> 45 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 45 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Thr Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ile Met Leu Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Ser Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Asp Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile Met Leu 1 5 10 <210> 47 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 Asn Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Ser Ser Gly Tyr Asn Leu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 Gly Lys Asp Phe Ala Met Asp 1 5 <210> 49 <211> 322 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcatgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacaact ttcctcggac gttcggtgga 300 ggcaccaagc tggaaatcaa ac 322 <210> 50 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 50 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Asn Phe Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 10 <210> 52 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 Gln Asn Gly His Asn Phe Pro Arg Thr 1 5 <210> 54 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgag cttgtgcagc ctggggctcc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta cattttcacc agctactgga tgaactgggt gaagcagagg 120 cctggacgag gcctcgagtg gattggaagg attgatcctt ccgatagtaa aattcactac 180 aatcaaaagt tcaaagacaa ggccacactg actgtagaca gatcctccag cacagcctac 240 atccaactcg gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attattgtgc aaaagagggg 300 ggtttacgac ggggggacta tgctatggac tactggggtc aaggaacctc agtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 55 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 55 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 Pro Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Lys Ile His Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Gly Gly Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 10 <210> 57 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 Arg Ile Asp Pro Ser Asp Ser Lys Ile His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 58 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 Glu Gly Gly Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 59 <211> 337 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 60 atgaactgca aatccagtcg gagtctgctc aacagtagaa tccgaaagaa ctacttggct 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttataatctg 300 ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaac 337 <210> 60 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 60 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Ile Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser Arg Ile Arg Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 63 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Leu Thr 1 5 <210> 64 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 gacgtgaagc tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatatca tgtcttgggt tcgtcagact 120 ccggagaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagtg gtggtagttc cacctactat 180 ccagacagtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240 ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtac aagagatgat 300 gattacgacg taaaggtatt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctctgca 360 <210> 65 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 65 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Asp Tyr Asp Val Lys Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Ser Tyr Ile Met Ser 1 5 <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 Asp Asp Asp Tyr Asp Val Lys Val Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 69 <211> 319 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 69 gatatccgga tgactcagtc tccttcactc ctgtctgcat ctgtggggga cagagtcact 60 ctcaactgca aagcaagtca gaatatttat aacagcttag cctggtatca gcaaaagctt 120 ggagaaggtc ccaaagtcct gatttttaat gcaaacagtt tgcaaacggg catcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcacactca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg ccacatattt ctgccagcag ttttatagcg ggtacacgtt tggagctggg 300 accaagctgg aactgaaac 319 <210> 70 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 70 Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Gly Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 71 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 71 Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Gly Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 72 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 72 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Gly Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 73 Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 74 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 74 Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 75 Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 1 5 <210> 76 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 76 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggt ctggtgcagc cctcacagac cctgtctctc 60 acctgcactg tctctggatt ctcattaacc agcaatggtg taagctgggt tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gattgcagca atatcatctg gtggaaccac atattataat 180 tcagcgttca aatcccgact gagcatcagc aggaacacct ccaagagcca agttctctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgaagacaca gccatgtact tctgtgccag acggtatggg 300 tacgggtggt actttgactt ctggggccca ggaaccatgg tcacagtctc ctca 354 <210> 77 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 77 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Leu Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 78 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 78 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn Gly Val Ser 1 5 10 <210> 79 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 79 Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys Ser 1 5 10 15 <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 80 Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 81 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 81 gacatccggg tgactcagtc tccttcactc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60 ctcaactgca aaggaagtca gaatatttat aagagcttag cctggtttcg gctaaagcgt 120 ggagaagctc ccaagctcct gatttatgat gcaaacagtt tgcaaacggg catcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcacactca ccatcaccag cctacagcct 240 gaagatgttg ccacatattt ctgccagcag tattatagcg gttacacgtt tggagctggg 300 accaagctgg aactgaaa 318 <210> 82 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 82 Asp Ile Arg Val Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Arg Leu Lys Arg Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 83 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 83 gacatccagg tgactcagtc tccttcactc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60 ctcaactgca aaggaagtca gaatatttat aagagcttag cctggtttcg gctaaagcgt 120 ggagaagctc ccaagctcct gatttatgat gcaaacagtt tgcaaacggg catcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcacactca ccatcaccag cctacagcct 240 gaagatgttg ccacatattt ctgccagcag tattatagcg gttacacgtt tggagctggg 300 accaagctgg aactgaaa 318 <210> 84 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 84 Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Arg Leu Lys Arg Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 85 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 85 Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser Leu Ala 1 5 10 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 86 Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 87 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 87 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 1 5 <210> 88 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 88 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggt ctggtgcagt cctcacagac cctgtctctc 60 acctgcactg tctctggatt ctcattaacc agtaatggtg taagctgggt tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gattgcagca atatcaagtg gtggaagcac atattataat 180 tcagcgttca aatcccgact gagcatcagc aggaacacct ccaagagcca agttctctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgaagacaca ggcatgtact tctgtgccag acatagaccg 300 ttctactttg attactgggg ccaaggagtc atggtcacag tctcctca 348 <210> 89 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 89 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Ser Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Leu Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 90 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 90 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn Gly Val Ser 1 5 10 <210> 91 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 91 Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys Ser 1 5 10 15 <210> 92 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 92 His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 93 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 93 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Asp Tyr Asp Val Lys Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 94 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 94 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Asp Tyr Asp Val Lys Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 95 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 95 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ile Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Asp Asp Tyr Asp Val Lys Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 96 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 96 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Ala Ile Phe Gly Val Val Ser His Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 97 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 97 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Ile Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 98 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 98 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Ile Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 99 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 99 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Arg Ile Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln 85 90 95 Ser Tyr Asn Leu Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 100 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 100 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asp Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 101 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 101 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Ser Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Pro Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Leu Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 102 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 103 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 104 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 104 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 105 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 105 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Ser 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Pro Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 106 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 106 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gln 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Pro Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 107 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 107 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 108 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 108 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala 20 25 30 Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Gly Glu Ser Ala Ser Asp Arg Tyr Cys Ser Gly Gly 100 105 110 Ser Cys Phe Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 115 120 125 Val Ser Ser 130 <210> 109 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 109 Asp Ile Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Arg Leu Lys Arg Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 110 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 110 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 111 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 111 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 112 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 112 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Gly Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 113 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 113 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Pro 85 90 95 Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 114 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 114 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Leu Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 115 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 115 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 116 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 116 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 117 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 117 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Ser 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 118 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 118 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gln 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 119 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 119 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 120 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 120 Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Gly Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Pro Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 121 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 121 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 122 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 123 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 123 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 124 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 124 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95 Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 125 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 125 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 126 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 126 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg 20 25 30 <210> 127 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 127 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 128 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 128 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala 1 5 10 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 129 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 130 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 130 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 131 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 132 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 132 Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 133 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 133 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser 20 25 <210> 134 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 134 Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile Ala 1 5 10 <210> 135 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 135 Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 136 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 136 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 137 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 137 Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 138 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 138 Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr 1 5 10 15 Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 139 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 139 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Ser Gly Val Ser 1 5 10 <210> 140 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 140 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gln Gly Val Ser 1 5 10 <210> 141 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 141 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn Ala Val Ser 1 5 10 <210> 142 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 142 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 143 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 143 Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 144 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 144 Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 145 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 145 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 146 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 146 Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 147 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 147 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys 20 <210> 148 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 148 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile Phe 1 5 10 15 <210> 149 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 149 Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 150 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 150 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 151 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 151 Ser Asn Gly Val Ser 1 5 <210> 152 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 152 Ser Ser Gly Val Ser 1 5 <210> 153 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 153 Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 154 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 154 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 155 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 155 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 156 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 156 Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asn Thr Ser Lys Ser Gln Val Leu Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 157 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 157 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 158 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 158 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 159 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 159 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Ser 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 160 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 160 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gln 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 161 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 161 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 162 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 162 atggagttcg gcctgtcctg gctgttcctg gtggccatcc tgaagggcgt gcagtgc 57 <210> 163 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 163 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys <210> 164 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 164 atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcag caacaggtgc ccactcc 57 <210> 165 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 165 Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Ala His Ser <210> 166 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 166 atggacatgc gcgtgcccgc ccagctgctg ggcctgctga tgctgtgggt gtccggctcc 60 tccggc 66 <210> 167 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 167 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp 1 5 10 15 Val Ser Gly Ser Ser Gly 20 <210> 168 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 168 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 169 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 169 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 170 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 170 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Val Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 171 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 171 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 172 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 172 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 173 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 173 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Asn Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Phe Asn Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 174 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 174 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 175 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 175 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 176 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 176 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 177 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthesized <400> 177 Glu Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Asn 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Arg Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 178 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 178 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Ser 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 179 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 179 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gln 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Phe Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg His Arg Pro Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115

Claims (77)

  1. (a) 위치 32(카바트 넘버링(Kabat numbering))가 N, S 또는 Q일 수 있고 그리고 위치 33(카바트 넘버링)이 G 또는 A일 수 있는 것은 제외하고, 위치 1(카바트 넘버링)이 E에 의해 점유된 서열 161의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 중쇄 가변 영역; 및
    (b) 서열번호 123의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 90% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 90% 동일한, 항체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95% 동일한, 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 98% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95% 동일한, 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 99% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95% 동일한, 항체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지되, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 95% 동일한, 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 98% 동일한, 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 99% 동일한, 항체.
  9. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 95% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는, 항체.
  10. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 98% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 98% 동일한, 항체.
  11. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 99% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 99% 동일한, 항체.
  12. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는, 항체.
  13. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는, 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화된 항체인, 항체.
  15. 아미노산 잔기 141을 포함하는 에피토프에서 인간 MCAM(서열번호 11)에 결합하는 단리된 항-MCAM 항체.
  16. 제15항에 있어서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 145를 포함하는, 단리된 항-MCAM 항체.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 에피토프는 아미노산 잔기 141을 포함하는 인간 MCAM의 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기를 포함하는, 단리된 항-MCAM 항체.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체 2120.4.19 또는 실질적으로 단클론성 항체 2120.4.19로부터의 CDR을 포함하는 항체가 아닌, 단리된 항-MCAM 항체.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성인, 단리된 항-MCAM 항체.
  20. 제15항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 키메라, 인간화, 베니어(veneered) 또는 인간인, 단리된 항-MCAM 항체.
  21. 제1항 내지 제20항, 제74항 및 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 항원-결합 단편인, 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체.
  22. 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체를 포함하는 약제학적 조성물.
  23. 약제학적 제형으로서,
    (a) 하기 (i) 및 (ii)를 포함하는 항체:
    (i) 위치 32(카바트(Kabat) 넘버링)가 N, S 또는 Q일 수 있고 그리고 위치 33(카바트 넘버링)이 G 또는 A일 수 있는 것을 제외한 서열 161의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 중쇄 가변 영역; 및
    (ii) 서열번호 123의 3개의 카바트 CDR을 포함하는 성숙 경쇄 가변 영역;
    (b) 약 10mM 내지 약 30mM 범위 내의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제;
    (c) 하기 (i) 및 (ii)로부터 선택되는 하나 이상의 당 및 폴리올("당/폴리올"):
    (i) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 수크로스;
    (ii) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 트레할로스;
    (d) 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20을 포함하되,
    상기 약제학적 제형은 약 5.5 내지 약 7 범위 내의 pH를 특징으로 하는, 약제학적 제형.
  24. 제23항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161에 대해 적어도 90% 동일하고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123에 대해 적어도 90% 동일한, 약제학적 제형.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역의 위치 1(카바트 넘버링)은 E에 의해 점유되는, 약제학적 제형.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 157, 서열번호 158, 서열번호 159, 서열번호 160 또는 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 121, 서열번호 122 또는 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는, 약제학적 제형.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는, 약제학적 제형.
  28. 약제학적 제형으로서,
    (a) 제15항 내지 제21항 중 어느 한 항의 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 약 10mM 내지 약 30mM 범위 내의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제;
    (c) 하기 (i) 및 (ii)로부터 선택되는 하나 이상의 당 및 폴리올("당/폴리올"):
    (i) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 수크로스;
    (ii) 약 200mM 내지 약 260mM 범위 내의 농도로 존재하는 트레할로스;
    (d) 약 0.005중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20을 포함하되,
    상기 약제학적 제형은 pH가 약 5.5 내지 약 7 범위 내인 것을 특징으로 하는, 약제학적 제형.
  29. 제28항에 있어서, 상기 단리된 항-MCAM 항체는 아미노산 잔기 141을 포함하는 에피토프에서 인간 MCAM(서열번호 11)에 결합하는, 약제학적 제형.
  30. 제23항 내지 제29항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체는 약 40㎎/㎖의 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
  31. 제23항 내지 제30항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히스티딘 완충제는 약 20mM의 농도로 존재하는, 약제학적 제형.
  32. 제23항 내지 제31항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당/폴리올은 약 220mM의 농도로 존재하는 수크로스인, 약제학적 제형.
  33. 제32항에 있어서, 상기 pH는 약 6.0인, 약제학적 제형.
  34. 제33항에 있어서, 약 295mOsm/kg의 삼투압몰농도를 특징으로 하는, 약제학적 제형.
  35. 제23항 내지 제31항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당/폴리올은 약 220mM의 농도로 존재하는 트레할로스인, 약제학적 제형.
  36. 제35항에 있어서, 상기 pH는 약 6.5인, 약제학적 제형.
  37. 제36항에 있어서, 약 287mOsm/kg의 삼투압몰농도를 특징으로 하는, 약제학적 제형.
  38. 제23항 내지 제37항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5% 미만의 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체가 상기 제형에서 응집물로서 존재하는, 약제학적 제형.
  39. 제23항 내지 제38항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 증량제를 더 포함하는, 약제학적 제형.
  40. 제23항 내지 제39항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 멸균인, 약제학적 제형.
  41. 제23항 내지 제40항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 냉동 및 해동 시 안정한, 약제학적 제형.
  42. 제23항 내지 제41항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질의 적어도 65%가 38 내지 42℃에서 적어도 30일 동안 저장 후에 및/또는 38 내지 42℃에서 적어도 3개월 동안 저장 후에 소수성 상호작용 크로마토그래피 상에서 단일 피크로서 나타나는, 약제학적 제형.
  43. 제23항 내지 제41항, 제76항 및 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 38 내지 42℃에서 적어도 30일 동안 저장 후에 및/또는 38 내지 42℃에서 적어도 3개월 동안 저장 후 고성능 크기배제 크로마토그래피 상에서 5중량% 이하의 응집된 단백질을 갖는, 약제학적 제형.
  44. 동결건조된 제형으로서,
    (a) 제15항 내지 제21항, 제23 내지 제27항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 히스티딘 완충제;
    (c) 수크로스 또는 트레할로스; 및
    (d) 폴리솔베이트 20을 포함하는, 동결건조된 제형.
  45. 제44항에 있어서, 물의 첨가 시, pH가 약 5.5 내지 약 6.5인 제형으로 재구성되는, 동결건조된 제형.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 약 10㎎ 내지 약 40㎎의 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체를 포함하는, 동결건조된 제형.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 재구성될 때 약 20mM의 양으로 존재하는 히스티딘 완충제를 포함하는, 동결건조된 제형.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 재구성될 때 약 220mM의 양으로 존재하는 수크로스를 포함하는, 동결건조된 제형.
  49. 제48항에 있어서, 상기 제형은 재구성될 때 pH가 약 6.0인, 동결건조된 제형.
  50. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 재구성될 때 약 220mM의 양으로 존재하는 트레할로스를 포함하는, 동결건조된 제형.
  51. 제50항에 있어서, 상기 제형은 재구성될 때 pH가 약 6.5인, 동결건조된 제형.
  52. 제44항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리솔베이트 20은 약 0.01중량% 내지 약 0.05중량% 범위 내의 양으로 존재하는, 동결건조된 제형.
  53. 제44항에 있어서, 하기를 포함하는 수용액에 물을 첨가함으로써 재구성될 수 있는, 동결건조된 제형:
    (a) 약 40㎎/㎖의 농도로 존재하는 상기 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제;
    (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 수크로스;
    (d) 약 0.02%의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및
    (e) pH 약 6.0.
  54. 제53항에 있어서, 하기를 포함하는 동결건조된 제형:
    (a) 200㎎의 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 15.5㎎의 히스티딘
    (c) 376㎎의 수크로스;
    (d) 1mg의 폴리솔베이트 20; 및
    (e) pH 약 6.0.
  55. 제44항에 있어서, 하기를 포함하는 수용액에 물을 첨가함으로써 재구성될 수 있는, 동결건조된 제형:
    (a) 약 40㎎/㎖의 농도로 존재하는 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 약 20mM의 농도로 존재하는 히스티딘 완충제;
    (c) 약 220mM의 농도로 존재하는 트레할로스;
    (d) 약 0.02%의 농도로 존재하는 폴리솔베이트 20; 및
    (e) pH 약 6.5.
  56. 제55항에 있어서, 하기를 포함하는 동결건조된 제형:
    (a) 200㎎의 상기 항체 또는 상기 단리된 항-MCAM 항체;
    (b) 15.5㎎의 히스티딘
    (c) 416㎎의 트레할로스 2수화물;
    (d) 1㎎의 폴리솔베이트 20; 및
    (e) pH 약 6.5.
  57. 포유류 대상체에서 염증성 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도로서, MCAM-발현 세포의 신체 내 염증 부위 내로의 침윤을 특징으로 하는, 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  58. 포유류 대상체에서 중추 신경계(CNS) 염증성 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도로서, MCAM-발현 세포의 CNS 내로의 침윤을 특징으로 하는, 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  59. 포유류 대상체에서 다발성 경화증의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  60. 포유류 대상체에서 건선의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  61. 포유류 대상체에서 흑색종과 같은 고형 종양의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  62. 포유류 대상체에서 유육종증의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  63. 포유류 대상체에서 건선성 관절염의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  64. 포유류 대상체에서 파킨슨병의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  65. 포유류 대상체에서 알레르기성 접촉성 피부염의 치료를 위한 의약의 제조에서 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체의 용도.
  66. MCAM-발현 세포의 염증 부위에 대한 침윤을 특징으로 하는 염증성 장애의 치료방법으로서, 치료가 필요한 포유류 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제21항, 제74항 또는 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 단리된 항-MCAM 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 치료방법.
  67. 제66항에 있어서, 상기 MCAM-발현 세포는 TH17 세포인, 치료방법.
  68. 제57항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유류 대상체는 인간인, 치료방법 또는 용도.
  69. 항-MCAM 단클론성 항체에 결합하기 위한 에피토프를 포함하는 단리된 펩타이드로서, 아미노산 잔기 141을 포함하는 인간 MCAM(서열번호 11)의 5 내지 50개의 인접한 아미노산 잔기를 포함하는, 단리된 펩타이드.
  70. 제69항에 있어서, 상기 펩타이드는 담체 폴리펩타이드에 결합되는, 단리된 펩타이드.
  71. 제69항 또는 제70항에 있어서, 상기 펩타이드는 애주번트와 조합되는, 단리된 펩타이드.
  72. 하기 단계들을 포함하는, 라미닌 α-4 쇄에 대한 인간 MCAM의 결합을 저해하는 항체를 생성하는 방법:
    (a) 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 정의한 바와 같은 펩타이드를 이용하여 대상체를 면역화시키는 단계;
    (b) 대상체로부터 B-세포를 단리시키는 단계로서, 상기 B-세포는 항체를 분비시키는 단계; 및
    (c) 라미닌 α-4 쇄에 대한 인간 MCAM의 결합을 저해하는 항체를 동정하기 위해 상기 항체를 선별하는 단계.
  73. 제72항에 있어서, 하기 단계들을 더 포함하는, 항체를 생성하는 방법:
    (d) 배양물에서 상기 B 세포를 불멸화 세포와 융합하여 단클론성 항체-생산 혼성 세포를 형성하는 단계;
    (e) 상기 혼성 세포를 배양시키는 단계; 및
    (f) 배양물로부터 단클론성 항체를 단리시키는 단계.
  74. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖되, 상기 항체는 서열번호 171의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체.
  75. 제1항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖되, 상기 항체는 서열번호 172의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체.
  76. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖되, 상기 항체는 서열번호 171의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 약제학적 제형.
  77. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 성숙 중쇄 가변 영역은 서열번호 161의 아미노산 서열을 가지고, 상기 성숙 경쇄 가변 영역은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖되, 상기 항체는 서열번호 172의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역 및 서열번호 168의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 약제학적 제형.
KR1020167027673A 2014-03-12 2015-03-12 항-mcam 항체 및 관련된 사용 방법 KR20160131061A (ko)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461952116P 2014-03-12 2014-03-12
US61/952,116 2014-03-12
US201461952833P 2014-03-13 2014-03-13
US61/952,833 2014-03-13
US201462023724P 2014-07-11 2014-07-11
US62/023,724 2014-07-11
US201462068419P 2014-10-24 2014-10-24
US62/068,419 2014-10-24
PCT/IB2015/051787 WO2015136470A1 (en) 2014-03-12 2015-03-12 Anti-mcam antibodies and associated methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160131061A true KR20160131061A (ko) 2016-11-15

Family

ID=52823724

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167027673A KR20160131061A (ko) 2014-03-12 2015-03-12 항-mcam 항체 및 관련된 사용 방법

Country Status (18)

Country Link
US (1) US20150259419A1 (ko)
EP (1) EP3116912A1 (ko)
JP (1) JP2017510567A (ko)
KR (1) KR20160131061A (ko)
CN (1) CN106132990A (ko)
AU (1) AU2015228454A1 (ko)
BR (1) BR112016020871A2 (ko)
CA (1) CA2942233A1 (ko)
CL (1) CL2016002257A1 (ko)
CU (1) CU20160133A7 (ko)
EA (1) EA201691836A1 (ko)
IL (1) IL247754A0 (ko)
MX (1) MX2016011731A (ko)
PE (1) PE20161210A1 (ko)
PH (1) PH12016501760A1 (ko)
SG (1) SG11201606274XA (ko)
TW (1) TW201623331A (ko)
WO (1) WO2015136470A1 (ko)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI595007B (zh) 2012-09-10 2017-08-11 Neotope Biosciences Ltd 抗ｍｃａｍ抗體及相關使用方法
CA2938933A1 (en) 2014-03-12 2015-09-17 Prothena Biosciences Limited Anti-laminin4 antibodies specific for lg4-5
PT3116911T (pt) 2014-03-12 2019-09-04 Prothena Biosciences Ltd Anticorpos anti-mcam e métodos de utilização associados
WO2017046776A2 (en) * 2015-09-16 2017-03-23 Prothena Biosciences Limited Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of giant cell arteritis, polymyalgia rheumatica or takayasu's arteritis
JP2018534930A (ja) * 2015-10-30 2018-11-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｄ因子抗体及びコンジュゲート
WO2017149513A1 (en) 2016-03-03 2017-09-08 Prothena Biosciences Limited Anti-mcam antibodies and associated methods of use
WO2017208210A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Prothena Biosciences Limited Anti-mcam antibodies and associated methods of use
CN110114078B (zh) 2016-12-28 2024-01-30 Jcr制药股份有限公司 冷冻干燥制剂
MX2021009851A (es) 2019-02-18 2021-09-10 Lilly Co Eli Formulacion de anticuerpos terapeuticos.
US11883432B2 (en) 2020-12-18 2024-01-30 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2024081820A1 (en) 2022-10-13 2024-04-18 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles targeting hematopoietic stem cells

Family Cites Families (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH652145A5 (de) 1982-01-22 1985-10-31 Sandoz Ag Verfahren zur in vitro-herstellung von hybridomen welche humane monoklonale antikoerper erzeugen.
US4634666A (en) 1984-01-06 1987-01-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Human-murine hybridoma fusion partner
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5194594A (en) 1990-09-07 1993-03-16 Techniclone, Inc. Modified antibodies
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5871907A (en) 1991-05-15 1999-02-16 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
CA2150262C (en) 1992-12-04 2008-07-08 Kaspar-Philipp Holliger Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
US5914349A (en) 1994-01-10 1999-06-22 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5786464C1 (en) 1994-09-19 2012-04-24 Gen Hospital Corp Overexpression of mammalian and viral proteins
DE19539493A1 (de) 1995-10-24 1997-04-30 Thomae Gmbh Dr K Starker homologer Promotor aus Hamster
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
WO1998040100A1 (en) 1997-03-10 1998-09-17 Ottawa Civic Loeb Research Institute USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE AS AN ADJUVANT
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
ATE490518T1 (de) 1999-02-05 2010-12-15 Samsung Electronics Co Ltd Verfahren und vorrichtung zum wiederauffinden von texturbildern
WO2004006955A1 (en) 2001-07-12 2004-01-22 Jefferson Foote Super humanized antibodies
JP4317010B2 (ja) * 2001-07-25 2009-08-19 ピーディーエル バイオファーマ，インコーポレイティド ＩｇＧ抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤
ES2289174T3 (es) 2001-12-28 2008-02-01 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos contra el antigeno muc-18.
JP2005516965A (ja) 2001-12-28 2005-06-09 アブジェニックス・インコーポレーテッド 抗ｍｕｃ１８抗体を使用する方法
ATE394121T1 (de) 2001-12-28 2008-05-15 Amgen Fremont Inc Verwendung von antikörpern gegen das muc18- antigen
WO2003068821A2 (en) * 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
EP1382615A1 (en) * 2002-07-15 2004-01-21 Xerion Pharmaceuticals AG MCAM inhibitors
ES2293096T3 (es) 2002-11-29 2008-03-16 BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH &amp; CO. KG Nuevos genes de la fosfotransferasa de neomicina y procedimiento para la seleccion de celulas recombinantes de produccion elevada.
DE10338531A1 (de) 2003-08-19 2005-04-07 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Reklonierung von Produktionszellen
KR101319848B1 (ko) * 2004-07-20 2013-10-18 심포젠 에이/에스 재조합 폴리클로날 단백질 또는 폴리클로날 세포주의구조적 특성화 방법
EP1820022B1 (en) 2004-11-10 2009-06-03 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Use of flow-cytometric analysis to optimize cell banking strategies for cho cells
US20080124760A1 (en) 2006-07-26 2008-05-29 Barbara Enenkel Regulatory Nucleic Acid Elements
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
PT2126093E (pt) 2007-03-02 2012-12-03 Boehringer Ingelheim Pharma Melhoramento da produção de proteínas
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
TW201124427A (en) * 2009-10-15 2011-07-16 Abbott Lab IL-1 binding proteins
AR079944A1 (es) * 2010-01-20 2012-02-29 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpo neutralizante de la actividad de un anticoagulante
US8974782B2 (en) * 2011-02-07 2015-03-10 Glaxo Group Limited Treatment of stroke comprising anti-MAG antibodies
EP2718327A1 (en) * 2011-06-06 2014-04-16 Neotope Biosciences Limited Mcam antagonists and methods of treatment
WO2013083497A1 (en) * 2011-12-06 2013-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
TWI595007B (zh) * 2012-09-10 2017-08-11 Neotope Biosciences Ltd 抗ｍｃａｍ抗體及相關使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
CL2016002257A1 (es) 2017-06-02
PH12016501760A1 (en) 2016-11-07
JP2017510567A (ja) 2017-04-13
SG11201606274XA (en) 2016-08-30
CN106132990A (zh) 2016-11-16
BR112016020871A2 (pt) 2018-01-23
CU20160133A7 (es) 2017-02-02
MX2016011731A (es) 2017-05-01
US20150259419A1 (en) 2015-09-17
IL247754A0 (en) 2016-11-30
WO2015136470A1 (en) 2015-09-17
PE20161210A1 (es) 2016-12-02
EP3116912A1 (en) 2017-01-18
AU2015228454A1 (en) 2016-08-11
EA201691836A1 (ru) 2016-12-30
CA2942233A1 (en) 2015-09-17
TW201623331A (zh) 2016-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7266670B2 (ja) ＳＩＲＰα結合タンパク質及びその使用方法
JP6728053B2 (ja) 抗ｍｃａｍ抗体及び関連する使用方法
KR20160131061A (ko) 항-mcam 항체 및 관련된 사용 방법
JP7196076B2 (ja) がんの処置のための抗ｔｎｆ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２及び抗カドヘリン１７結合性二重特異的分子
AU2018366650A1 (en) Single-domain antibodies and variants thereof against PD-L1
KR20230053602A (ko) 항-ror1 항체 및 관련된 이중특이적 결합 단백질
US11851460B2 (en) PD1 binding agents
CN114728065A (zh) 针对cd3和bcma的抗体和自其制备的双特异性结合蛋白
JP2018530540A (ja) 巨細胞動脈炎、リウマチ性多発筋痛症又は高安動脈炎の処置又は予防のための抗ｍｃａｍ抗体の使用
US20170101470A1 (en) Use of Anti-MCAM Antibodies for Treatment or Prophylaxis of Giant Cell Arteritis, Polymyalgia Rheumatica or Takayasus Arteritis
WO2017046774A2 (en) Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of giant cell arteritis, polymyalgia rheumatica or takayasu&#39;s arteritis
KR20200063153A (ko) Cd137을 표적화하는 항체 및 이의 사용 방법
TW201922786A (zh) 對免疫球蛋白樣轉錄本3(ilt3)具特異性之抗體及其用途
US20170129954A1 (en) Use of Anti-MCAM Antibodies for Treatment or Prophylaxis of Giant Cell Arteritis, Polymyalgia Rheumatica or Takayasus Arteritis
KR20160131082A (ko) Lg1-3에 특이적인 항-라미닌4 항체
CN116249717A (zh) 识别分拣蛋白的抗体
JP2021501583A (ja) 抗体および使用方法
WO2017153953A1 (en) Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases
WO2010065496A1 (en) Anti-ferroportin 1 monoclonal antibodies and uses thereof
CN114761042A (zh) Il-38特异性抗体
EP3636320A1 (en) Antibodies targeting cd137 and methods of use thereof
WO2023040940A1 (zh) Pvrig/tigit结合蛋白联合免疫检查点抑制剂用于治疗癌症
TW202317644A (zh) 一種含抗ｐｖｒｉｇ／ｔｉｇｉｔ雙特異性抗體的醫藥組成物
WO2017153955A1 (en) Use of anti-mcam antibodies for treatment or prophylaxis of granulomatous lung diseases