KR20160129526A - Composition for preventing a biofilm formation comprising glycyrrhetinic acid - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 글리시레틴산을 포함하는 바이오필름 형성 억제에 우수한 성능을 발휘하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition exhibiting excellent performance in inhibiting the formation of a biofilm including glycyrrhetinic acid.
바이오필름(Biofilm)이란, 미생물이 감염되거나 부착된 부분에서 나타나는 것으로서, 폴리머 기질로 감싸이며 미생물에 의하여 형성된 미생물 복합체를 이루는 막으로 생물막 또는 균막이라고도 불린다. 미생물의 경우 다양한 환경에 적응하여 살아가기 위하여 바이오필름이라는 미생물 군집체를 만드는데, 이러한 바이오필름이 미생물의 생존에 중요한 이유는 미생물에게 보호막의 역할을 해줄 뿐만 아니라, 서로 다른 균체들이 만나서 대사(metabolism)를 공유하기도 하고, 유전자 치환(gene transfer)을 통하여 유익한 성질들을 획득하기도 하기 때문이다. 즉, 바이오필름은 각종 균들의 집합체임과 동시에, 균 집단의 보호막 기능을 하기 때문에, 균으로 인한 각종 질병의 직/간접적인 원인이 된다. Biofilm refers to a microbial complex formed by microorganisms surrounded by a polymer substrate, which is called a biofilm or a membrane. In the case of microorganisms, biofilms are used to grow in various environments. Biofilms are important for the survival of microorganisms because they play a protective role for microorganisms, , And gain useful properties through gene transfer. In other words, biofilm is an aggregate of various microbes and also functions as a protective barrier of a microbial population, which is a direct / indirect cause of various diseases caused by bacteria.
바이오필름의 형성은 먼저 부유 상태의 미생물이 가역적으로 표면에 부착하여 시작되는데, 미소 콜로니(군락)을 형성하고 이것이 서서히 성장하며, 세포주위로 분비되는 세포외 다당류(Extracelluar polysaccharide, EPS) 중 비수용성 다당류는 미생물의 부착을 보다 용이하게 하며, 비가역적이고 불용성인 바이오필름을 형성할 수 있게 한다. 대부분의 세균은 EPS 합성능력을 가지고 있고, 생성된 EPS는 세포 외 또는 환경 중으로 배출되어 바이오필름의 구조 유지나 기능 발현에 매우 중요한 역할을 한다.The formation of biofilm begins by reversibly adhering microorganisms in the suspended state to the surface, forming microcolonies, which grow slowly and which are released from the extracellular polysaccharide (EPS) secreted onto the cell line. Facilitates the attachment of microorganisms and enables the formation of irreversible and insoluble biofilms. Most bacteria have EPS synthesis ability, and EPS produced is excreted extracellularly or environmentally, and plays a very important role in maintaining the structure and function of biofilm.
특히, 구강 질환은 바이오필름 형성으로 인한 질병 가운데 하나이며, 이는 크게 충치와 그 외 구강질환으로 나눌 수 있다. 충치는 감염성 세균에 의해 일어나는 대표적인 감염성 질환 중의 하나로, 치아에 형성되는 세균막인 플라그에서 자라는 세균의 작용에 의해 차츰 치아가 탈회되는 병이다. 일반적으로 세균이 당을 분해하여 산을 분비하고, 이 산에 의해 치아표면의 에나멜질에 탈회가 일어나 충치가 된다. 그 밖에, 치은염, 치주염 등도 역시 세균감염에 의한 질병이며, 구강내 세균막이 중요한 역할을 한다. In particular, oral disease is one of the diseases caused by biofilm formation, which can be largely divided into tooth decay and other oral diseases. Tooth decay is one of the most common infectious diseases caused by infectious bacteria. It is a disease in which the teeth are gradually demineralized by the action of bacteria that grow on the plaque, a bacterial membrane formed in the teeth. Generally, bacteria break down the saccharide to secrete acid, and the acid causes decarboxylation of the enamel on the surface of the tooth, resulting in tooth decay. In addition, gingivitis and periodontitis are also diseases caused by bacterial infection, and the oral bacteria membrane plays an important role.
구강 내에는 약 1000여종의 세균이 존재한다고 알려져 있으나, 일반적으로 가장 중요한 초기 충치유발세균은 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp)으로 알려져 있다. 이 중, 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans, S. mutans)가 치아표면에 부착하면서 충치발생의 원인이 되는 세균막 형성이 시작되는데, 일반적으로 스트렙토코쿠스 뮤탄스가 초기 세균막 형성에 가장 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. It is known that about 1000 kinds of bacteria are present in the oral cavity, but the most important early tooth decay bacteria are generally known as Streptococcus spp. Among them, the streptococcus mutans (Streptococcus mutans, S. Mutans) that there is and attached to the surface of the teeth begins to form segyunmak that cause tooth decay occurs, in general, that the most important role in the streptococcus myutan Suga initial segyunmak formed .
기존의 치아우식증, 치은염, 치주염, 구취 등과 같은 구강질환을 예방 또는 개선하는 방법으로는 항균제 등이 주로 사용되어 왔다. 그러나 이는 구강 병원균 뿐만 아니라, 구강내 유익한 균까지 모두 제거하여 구강내 면역력을 약화시킨다. 또한, 항균제는 구강 병원균의 유전적 변이에 의한 내성을 증가시켜, 구강 병원균으로 인해 야기되는 구강질환을 예방 또는 개선하는 방법으로 사용하기에는 한계가 있다.Antimicrobial agents have been mainly used to prevent or improve oral diseases such as dental caries, gingivitis, periodontitis, and bad breath. However, this reduces not only oral pathogens but also beneficial bacteria in the mouth to weaken the oral immune system. In addition, antimicrobial agents increase resistance to genetic mutations of oral pathogens, and thus have limitations in preventing or improving oral diseases caused by oral pathogens.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는, 구강내 정상적인 세균의 생태계를 파괴하지 않으면서, 유해 세균에 의해 바이오필름이 형성되는 것을 막기 위한 바이오필름 형성 억제용 구강 조성물을 제공하고자 하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide an oral composition for inhibiting the formation of a biofilm by preventing harmful bacteria from forming a biofilm, without destroying a normal bacterial ecosystem in the oral cavity.
본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는, 이러한 바이오필름 형성 억제용 구강 조성물을 이용하여 구강질환 개선용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for improving oral diseases using the oral composition for inhibiting biofilm formation.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 글리시레틴산(Glycyrrhetinic acid)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름(biofilm) 형성 억제용 구강 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides an oral composition for inhibiting biofilm formation, which comprises glycyrrhetinic acid as an active ingredient.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 글리시레틴산은 상기 조성물 전체 함량에 대하여 0.0002 내지 2 중량%로 함유될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the glycyrrhetinic acid may be contained in an amount of 0.0002 to 2% by weight based on the whole composition.
또한, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 바이오필름 형성 억제용 구강 조성물은 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans), 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 프레보텔라 니그레센스(Prevotella nigrescens), 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum), 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium) 및 바실러스(Bacillus) 등을 포함하는 군에서 선택되는 하나 이상의 균의 바이오필름의 형성을 억제할 수 있으며, 바람직하게는 스트렙토코쿠스 뮤탄스에 의한 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다.Also, according to a preferred embodiment of the present invention, the oral composition for inhibiting biofilm formation comprises Streptococcus mutans (Streptococcus mutans), Porphyro Monas Jinji Balis (Porphyromonas gingivalis), Prebellar Nigresense (Prevotella nigrescens), Fusobacterium nuclideum (Fusobacterium nucleatum), Serratia marcensense (Serratia marcescens), Methyl bacterium (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas),Zanthomonas (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium) And Bacillus (Bacillus) And the like, and it is possible to inhibit the formation of a biofilm by Streptococcus mutans, preferably.
또한, 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 글리시레틴산은 구강내 미생물의 바이오필름 형성의 초기 단계에서 중요한 역할을 하는 스트렙토코쿠스 뮤탄스의 세균막 생성 및 구강내 표면 부착을 효과적으로 억제시킨다.Also, according to a preferred embodiment of the present invention, the glycyrrhetinic acid effectively inhibits the production of bacterial membranes and adhesion of the oral cavity surface of Streptococcus mutans, which plays an important role in the early stage of biofilm formation of microorganisms in the oral cavity.
또한, 본 발명의 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 바이오필름 형성 억제용 조성물은 생물체 유래의 조직 또는 기관, 치과용품의 표면, 주방용품의 표면, 욕실용품의 표면, 또는 배관 또는 세탁기 세탁조 등에 형성된 바이오필름의 형성 억제 또는 물 때 제거 등에도 사용될 수 있다.The composition for inhibiting biofilm formation comprising glycyrrhetinic acid as an active ingredient of the present invention can be used as a biofilm formation inhibitor in a biological tissue-derived tissue or organ, a surface of a dental appliance, a surface of a kitchenware, The formation of the formed biofilm can be inhibited or the water can be removed.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따르면, 본 발명은 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 구강 건강용 조성물, 치은염 예방 또는 치료용 조성물, 시린이 예방 또는 치료용 조성물, 구취 제거용 조성물, 또는 충치 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.According to another embodiment of the present invention, there is provided an oral care composition comprising glycyrrhetinic acid as an active ingredient, a composition for preventing or treating gingivitis, a composition for preventing or treating rhinorrhea, Or a composition for prevention or treatment of tooth decay.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따르면, 본 발명은 글리시레틴산을 생물체 또는 비생물체의 표면에 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름 형성 억제 방법, 바람직하게는 글리시레틴산을 구강 내에 처리하여 스트렙토코쿠스 뮤탄스에 의한 바이오필름의 형성을 억제하는 방법을 제공한다.
According to another embodiment of the present invention, there is provided a method for inhibiting biofilm formation, which comprises treating glycyrrhetinic acid on the surface of an organism or an organism, preferably glycyrrhetinic acid The present invention also provides a method for inhibiting the formation of biofilm by Streptococcus mutans by treating it in the oral cavity.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 기재된 구성은 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail. The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may appropriately define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention. Therefore, the embodiments described in the present specification and the constitutions described in the drawings are merely the most preferred embodiments, and not all of the technical ideas of the present invention are described. Therefore, various equivalents which can be substituted at the time of the present application It should be understood that variations can be made.
본 발명은 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름(biofilm) 생성 억제용 구강 조성물을 제공한다.The present invention provides an oral composition for inhibiting biofilm formation, which comprises glycyrrhetinic acid as an active ingredient.
본 발명자들은 구강내 정상적인 세균의 생태계를 유지하면서, 세균막 형성의 초기 단계에 중요한 역할을 하는 스트렙토코쿠스 뮤탄스 균의 세균막 생성을 효과적으로 억제할 수 있는 천연 소재를 탐색하기 위해 예의 노력하였다. 본 발명자들은 글리시레틴산이 바이오필름이 부착 표면에 비가역적으로 흡착되는 것을 억제하고, 물로 씻는(wash-off) 방법을 통하여 바이오필름이 용이하게 제거하게 할 수 있으며, 특히 스트렙토코쿠스 뮤탄스 균에 의한 세균막 생성 및 치아 부착을 현저하게 억제하는 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다. 즉, 상기 글리시레틴산은 미생물의 표면 부착력을 저해함으로서 바이오필름의 형성을 억제할 수 있으며, 특히 스트렙토코쿠스 뮤탄스 균에 의한 구강내 세균막 생성 및 치아 부착을 효과적으로 억제할 수 있다.The present inventors have made efforts to search for natural materials capable of effectively inhibiting the production of bacterial membranes of Streptococcus mutans, which plays an important role in the early stage of bacterial membrane formation, while maintaining normal bacteriological ecosystems in the oral cavity. The present inventors have found that glycyrrhetinic acid can prevent the biofilm from being irreversibly adsorbed on the adhesion surface of the biofilm and can be easily removed through wash-off method. In particular, the biofilm of Streptococcus mutans bacteria And thus the present invention has been completed. That is, the glycyrrhetinic acid can inhibit the formation of biofilm by inhibiting the surface adhesion of microorganisms. In particular, it is possible to effectively inhibit the generation of bacterial membranes in oral cavity and adhesion of teeth by Streptococcus mutans bacteria.
본 발명에 있어서 글리시레틴산은 허브 감초로부터 수득된 글리시리직산의 가수분해로 수득된 베타-아밀린(beta-amyrin) 타입의 펜타사이클릭 트리터페노이드(pentacyclic triterpenoid)이며, 하기 화학식 1로 표시된다. 일반적으로, 글리시레틴산은 향료 및 알로에나 퀴닌과 같은 약물의 쓴맛을 차폐하는데 사용된다. 또한, 글리시레틴산은 위궤양의 치료에 효과적이며 또한 거담(기침 억제) 특성을 갖는다.In the present invention, glycyrrhetinic acid is a beta-amyrin type pentacyclic triterpenoid obtained by hydrolysis of glycyrrhizic acid obtained from herbal licorice, and is represented by the following formula (1) do. Generally, glycyrrhetinic acid is used to mask the bitter taste of drugs such as perfumes and aloe or quinine. In addition, glycyrrhetinic acid is effective in the treatment of gastric ulcer and also has gonadal (cough suppression) properties.
[화학식 1] [Chemical Formula 1]
상기 미생물 부착 표면은 미생물이 바이오필름을 형성하는 곳이면 어디든지 제한되지 아니하고, 미생물이 바이오필름을 형성할 수 있는 생물체 또는 비생물체의 표면이 모두 포함될 수 있다. 예를 들면, 생물체 유래의 조직, 기관 또는 금속 표면, 타일 표면 등의 치과용품, 주방용품, 욕실용품, 상하수도 배관, 세탁기 세탁조 등 지속적으로 물이 닿는 부위가 될 수 있고, 바람직하게 구강점막 또는 치아표면과 같은 구강내 표면이 될 수 있다. The microbial attachment surface is not limited to where the microorganism forms the biofilm, and may include the surface of an organism or an organism in which the microorganism can form a biofilm. For example, it may be a portion that continuously reaches water, such as a tissue, an organ or metal surface derived from an organism, a dental article such as a tile surface, a kitchen utensil, a bathroom article, a water supply and drainage pipe, a washing machine, It can be an oral surface such as a surface.
본 발명에 따른 바이오필름 생성 억제용 구강 조성물은 조성물 전체 함량에 대하여 글리시레틴산을 0.0002 내지 2 중량%, 바람직하게 0.001 내지 1 중량%를 함유할 수 있다. 글리시레틴산이 0.0002 중량% 미만일때는 바이오필름 생성 억제 효과가 미미하여, 경제적 투자 대비 효과를 얻을 수 없다는 문제점이 있으며, 2 중량% 초과일 때는 자극 및 외과적 상처를 일으킬 수 있다는 문제점이 있다.The oral composition for inhibiting biofilm formation according to the present invention may contain 0.0002 to 2% by weight, preferably 0.001 to 1% by weight, of glycyrrhetinic acid based on the whole composition. When the content of glycyrrhetinic acid is less than 0.0002% by weight, the effect of inhibiting biofilm formation is insignificant and the effect of economic investment can not be obtained. When the glycyrrhetinic acid content is more than 2% by weight, irritation and surgical scratches may occur.
본 발명에 따른 바이오필름 억제용 구강 조성물은 어떠한 미생물의 바이오필름인지에 대하여 제한되지 아니하나, 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans), 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 프레보텔라 니그레센스(Prevotella nigrescens), 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum), 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium), 또는 바실러스(Bacillus) 등이 바람직하며, 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)의 바이오필름이 보다 바람직하다.The oral composition for inhibition of biofilm according to the present invention is not limited as to what kind of microbial biofilm is, but it is preferable to use Strophotococcus mutans , Porphyromonas gingivalis , Prevotella nigrescens , Fusobacterium nucleatum , Serratia < RTI ID = 0.0 > marcescens), methyl tumefaciens (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas), Pseudomonas janto (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium), or Bacillus (Bacillus) And the like, and a biofilm of Streptococcus mutans is more preferable.
본 발명에 따른 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명에 따른 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 조성물은 구강 건강용 조성물로서 사용될 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명에 따른 구강 건강용 조성물은 프라그 생성의 주 원인인 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)균에 의한 바이오필름의 형성을 억제할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 조성물은 구내염 예방 또는 치료, 치은염 예방 또는 치료, 시린이의 예방 또는 치료, 구취 제거용, 또는 충치 예방 또는 치료의 용도로 사용될 수 있다.According to another aspect of the present invention, a composition comprising glycyrrhetinic acid as an active ingredient according to the present invention can be used as a composition for oral health. More specifically, the composition for oral care according to the present invention can inhibit the formation of a biofilm by Streptococcus mutans , which is a major cause of plaque production. The composition containing glycyrrhetinic acid according to the present invention as an active ingredient can be used for prevention or treatment of stomatitis, prevention or treatment of gingivitis, prevention or treatment of acne, removal of bad breath, or prevention or treatment of cavity .
본 발명에 따른 구강용 조성물은 통상적으로 구강용 조성물의 제조에 사용되는 성분들로, 습윤제, 연마제, 약효제, 감미제, 방부제, 결합제, 향료, 기포제, 또는 물 등을 더 포함할 수 있다.The composition for oral use according to the present invention is typically used for preparing oral compositions, and may further contain a wetting agent, an abrasive, a pharmaceutical agent, a sweetener, a preservative, a binder, a flavoring agent, a foaming agent, or water.
또한, 본 발명에 따른 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명에 따른 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 조성물은 물때 생성 억제용 조성물로 사용될 수도 있다. 물때는 치과용품, 주방용품, 욕실용품, 정수기, 상하수도 배관, 또는 세탁기의 세탁조 등 지속적으로 물이 닿는 부위에 생길 수 있으며, 이러한 물때는 세라티아 마르체센스(Serratia marcescens), 메틸박테리움(Methylobacterium), 슈도모나스(Psuedomonas), 잔토모나스(Xanthomonas), 코리네박테리움(Corynebacterium), 또는 바실러스(Bacillus) 등의 세균이 공기중에 떠다니다가 이물질이나 습기가 많은 곳에서 번식하여 바이오필름을 형성하여 생긴 결과로 생길 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 조성물은 이러한 균에 의한 바이오필름 형성을 억제하여 물때 생성을 방지할 수 있다. 본 발명에 따른 물 때 생성 억제용 조성물은 통상적으로 물때를 생성 방지용 조성물 제조에 사용될 수 있는 통상적인 물질들을 더 포함할 수 있다.According to another aspect of the present invention, a composition comprising glycyrrhetinic acid as an active ingredient according to the present invention may be used as a composition for inhibiting the formation of water. Scale dental supplies, kitchen supplies, bathroom supplies, which can result in water purifier, water and sewage pipes, or laundry tub constantly exposed to the water area of the washing machine, this scale is Serratia dry material sense (Serratia Reproduction in marcescens), methyl tumefaciens (Methylobacterium), Pseudomonas (Psuedomonas), janto Monastir (Xanthomonas), Corynebacterium (Corynebacterium), or Bacillus (Bacillus), such as a bacterial tteodanida the air debris or moisture in the area Which is a result of forming a biofilm. That is, the composition according to the present invention can inhibit biofilm formation due to such microbes, thereby preventing generation of water. The composition for inhibiting the formation of water according to the present invention may further comprise conventional materials which can be usually used for preparing a water-proofing composition.
또한, 본 발명은 글리시레틴산을 생물체 또는 비생물체의 표면에 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오필름 형성의 억제 방법, 바람직하게는 글리시레틴산을 구강 내에 처리하여 스트렙토코쿠스 뮤탄스에 의한 바이오필름의 형성을 억제하는 방법을 제공한다.The present invention also relates to a method for inhibiting biofilm formation, which comprises treating glycyrrhetinic acid on the surface of an organism or an organism. Preferably, glycyrrhetinic acid is treated in the oral cavity to produce streptococcus mu A method for inhibiting the formation of a biofilm by tans is provided.
본 발명에 따른 글리시레틴산을 유효성분으로 포함하는 바이오필름 형성 억제용 구강 조성물은 미생물에 의한 바이오필름 형성을 억제하며, 특히 바이오필름 형성의 초기 단계에 중요한 역할을 하는 스트렙토코쿠스 뮤탄스 균의 구강내 세균막 생성 및 치아 부착을 효과적으로 억제할 수 있다.The oral composition for inhibiting the formation of a biofilm comprising glycyrrhetinic acid according to the present invention as an active ingredient inhibits the formation of a biofilm by a microorganism and more particularly relates to a composition for inhibiting the formation of a biofilm of Streptococcus mutans It is possible to effectively inhibit the generation of a bacterial film in the oral cavity and tooth adhesion.
또한, 본 발명에 따른 바이오필름 형성 억제용 구강 조성물은 치아의 부식, 치석 형성, 입냄새 생성, 및 잇몸 질환 등의 구강 질환을 예방 또는 치료하여 구강 건강을 증진시킬 수 있다.In addition, the oral composition for inhibiting biofilm formation according to the present invention can improve oral health by preventing or treating oral diseases such as erosion of teeth, formation of calculus, generation of bad breath, and gum disease.
도 1은 글리시레틴산에 의한 스트렙토코쿠스 뮤탄스의 세균막 억제 효과를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 글리시레틴산에 의한 스트렙토코쿠스 뮤탄스의 치아 디스크 부착 억제 효과를 대조군과 비교하여 나타낸 사진이다.FIG. 1 is a graph showing the inhibitory effect of streptococcus mutans on glyceral acid by glycyrrhetinic acid in comparison with the control group.
Fig. 2 is a photograph showing the inhibitory effect of streptococcus mutans by glycyrrhetinic acid on tooth disc attachment compared with the control group. Fig.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following embodiments. Embodiments of the invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.
실험예Experimental Example 1: One: 글리시레틴산(Glycyrrhetinic acid)의Glycyrrhetinic acid 독성 실험 Toxicity experiment
스트렙토코쿠스 뮤탄스(S. mutans)에 독성이 없는 글리시레틴산의 농도를 정하기 위하여 독성 평가를 우선적으로 시행하였다. 브레인 하트 인퓨전(Brain Heart Infusion, BHI) 배지에 스트렙토코쿠스 뮤탄스를 접종하여 600nm에서 광학 밀도(optical density) 0.5가 될 때까지 배양하였다. 이후, 96 웰(well) 마이크로플레이트에 1×106 CFU/ml 농도로 접종시키고, 글리시레틴산을 농도별로 첨가하여 37℃에서 18시간 배양하였다.In order to determine the concentration of glycyrrhetinic acid which is not toxic to Streptococcus mutans , toxicity evaluation was given priority. Streptococcus mutans was inoculated on a Brain Heart Infusion (BHI) medium and cultured at 600 nm until an optical density of 0.5 was reached. Then, the cells were inoculated in a 96-well microplate at a concentration of 1 × 10 6 CFU / ml, and glycyrrhetinic acid was added at different concentrations and cultured at 37 ° C. for 18 hours.
독성 평가는 알라마 블루(alamarblue)를 이용하여 다음과 같이 수행하였다. 시료를 처리한 96 웰 마이크로플레이트에 20uL씩 첨가하여 37℃의 배양기에서 2시간 동안 배양 한 후 플레이트 리더(plate reader)(VICTOR, PerkinElmer)를 사용하여 형광도를 측정하였다. 이때 글리시레틴산의 독성 여부를 판단하기 위하여 각각 3회씩 실시하여 평균값을 구하였다. 균 생존율은 글리시레틴산이 함유되지 않은 BHI 배지인 대조군 대비 형광도의 비율을 평가하였다. 하기 표 1에 독성 평가 결과로, 글리시레틴산의 스트렙토코쿠스 뮤탄스에 대한 글리시레틴산의 농도별 균 생존율을 나타내었다.Toxicity evaluation was performed using alamarblue as follows. 20 uL was added to each well of a 96-well microtiter plate and incubated for 2 hours in a 37 ° C incubator. Fluorescence was measured using a plate reader (VICTOR, PerkinElmer). At this time, to determine the toxicity of glycyrrhetinic acid, three times each was carried out to obtain an average value. Bacterial viability was evaluated by the ratio of fluorescence to control, which is BHI medium containing no glycyrrhetinic acid. As a result of toxicity evaluation, the bacterial survival rate of streptococcus mutans of glycyrrhetinic acid according to glycyrrhetinic acid concentration was shown in Table 1 below.
실험예Experimental Example 2: 세균막 생성 억제 효과 2: Inhibitory effect on bacterial membrane formation
스트렙토코쿠스 뮤탄스에 글리시레틴산을 20ppm 처리한 후 세균막 생성억제효과를 측정하였다. 스트렙토코쿠스 뮤탄스를 96 웰 마이크로플레이트에 1×106 CFU/ml 농도로 접종시키고, 20ppm 글리시레틴산을 처리하여 37℃에서 18시간 배양하였다. 그리고 배지를 제거하고 인산완충식염수(Phosphate buffered saline, PBS)로 세척하여 부유균을 제거하였다. 생성된 세균막의 양은 알라마 블루를 이용하여 측정하였다. 세균막 생성율은 글리시레틴산을 함유하지 않은 BHI 배지인 대조군 대비 형광도의 비율로 평가하였다. 도 1에 글리시레틴산의 스트렙토코쿠스 뮤탄스에 대한 세균막 생성율 결과를 나타내었다.
Streptococcus mutans was treated with 20 ppm of glycyrrhetinic acid and the effect of inhibiting bacterial membrane formation was measured. Streptococcus mutans was inoculated into a 96-well microplate at a concentration of 1 × 10 6 CFU / ml, treated with 20 ppm glycyrrhetinic acid, and cultured at 37 ° C. for 18 hours. Then, the medium was removed and washed with phosphate buffered saline (PBS) to remove floating bacteria. The amount of the produced bacterial membrane was measured using Allama Blue. The bacterial membrane production rate was evaluated by the ratio of fluorescence to the control, which is a BHI medium containing no glycyrrhetinic acid. FIG. 1 shows the results of production of the bacterial membrane against streptococcus mutans of glycyrrhetinic acid.
실험예Experimental Example 3: 치아 부착 억제 효과 3: Effect of inhibiting tooth adhesion
치아 디스크인 수산화인회석 디스크(hydroxyapatite disc)에 스트렙토코쿠스 뮤탄스를 접종시키고, 20ppm 글리시레틴산을 처리하여 치아부착 억제효과를 측정하였다. 스트렙토코쿠스 뮤탄스를 수산화인회석 디스크가 든 24 웰 마이크로플레이트에 5×106 CFU/ml 농도로 접종시키고, 20ppm 글리시레틴산을 처리하여 37℃에서 18시간 배양하였다. 그리고 배지를 제거하고 인산완충식염수 (PBS)로 세척하여 부유균을 제거하였다. 그리고 수산화인회석 디스크에 형성된 세균막을 치면착색제 (RED-COTE, Butler)로 염색하여 측정하였다. 도 2에 글리시레틴산에 의한 수산화인회석 디스크에 스트렙토코쿠스 뮤탄스의 부착 억제효과를 나타내었다.
Streptococcus mutans was inoculated on a hydroxyapatite disc, which was a tooth disk, and 20ppm glycyrrhetinic acid was treated to measure tooth adhesion inhibition effect. Streptococcus mutans was inoculated into a 24-well microplate containing a hydroxyapatite disk at a concentration of 5 × 10 6 CFU / ml, treated with 20 ppm glycyrrhetinic acid, and cultured at 37 ° C. for 18 hours. The medium was removed and washed with phosphate-buffered saline (PBS) to remove floating bacteria. The bacterial membrane formed on the hydroxyapatite disk was stained with a coloring agent (RED-COTE, Butler). FIG. 2 shows the effect of inhibiting the adhesion of Streptococcus mutans to hydroxyapatite disks by glycyrrhetinic acid.
실험예Experimental Example 4: 4: 치은염증Gingival inflammation 형성 억제 효과 Formation inhibitory effect
치은염증 형성 억제정도를 비교하기 위하여, 우선 치약을 제조하기 위해 일반적으로 사용될 수 있는 카르복시메칠세룰로오스나트륨, 라우릴황산나트륨, 글리세린, 콜리이드성 이산화규소, 실리카류, 소디움코코일이세치온산나트륨, 도디신과 감미제, 방향제, 착색제 등을 사용하여 대조군 치약을 만들었고, 여기에 글리시레틴산이 0.01 중량% 함유된 실험군 치약을 제조하였다.In order to compare the degree of inhibition of gingival inflammation formation, it is preferable to firstly dissolve sodium carboxymethylcellulose sodium, sodium laurylsulfate, glycerin, colloidal silicon dioxide, silica, sodium cocoyl sodium catecholate , Dodine, a sweetener, a fragrance, a coloring agent and the like were used to prepare a control toothpaste, and an experimental toothpaste containing 0.01 wt% glycyrrhetinic acid was prepared.
실험 대상자는 치열이 고르고 결손 치아가 없는 치은염증 환자를 대상으로 연령별 30세부터 50세까지 10세 간격으로 성별에 따라 30명씩 정밀한 구강검진을 실시하여 120명의 실험대상군을 선별한 후, 60명씩 나누어 치은염증 치료효과에 대한 임상실험을 수행하였다.Subjects were divided into 10 groups from 30 to 50 years of age by gentle oral examinations. The subjects were divided into 120 experimental groups, and 60 subjects Clinical trials were carried out on the effect of the divided inflammation treatment.
실험 대상군을 실험군과 대조군으로 나누어 식후 2시간 경과 후 잠자기 전에 하루 3회 사용하도록 교육시키고 치면세마를 실시하였다. 초기 치은염지수를 점수화하고 각각의 치약 조성물을 사용하도록 하여 1주, 1개월, 3개월, 및 6개월 경과 후 구강검진을 실시하여 치은염지수를 검사하였다. 치은염지수의 측정방법은 페리오덴탈 프로브(periodontal probe)를 치은열구 내에 삽입하여 힘을 가하지 않은 상태로 각 치아주위를 연소하여 탐침하고 30초가 지난 뒤에 출혈된 상태를 측정하여 하기 표 2에 개시된 방법으로 점수를 기록하여 결과를 얻었다. 치은염증 억제 효과에 대한 평가 결과는 하기 표 3에 나타내었다.Subjects were divided into two groups: experimental group and control group. Initial gingival index was scored and each dentifrice composition was used. After 1 week, 1 month, 3 months, and 6 months, oral examination was performed to check gingival index. The method of measuring gingival index was performed by inserting a periodontal probe into the gingival fissure, burning the circumference of each tooth without applying any force, measuring the bleeding state after 30 seconds, The scores were recorded and the results were obtained. The evaluation results of gingival inflammation inhibitory effect are shown in Table 3 below.
실험예Experimental Example 5: 5: 시린이Cyrin 현상 억제 정도 비교 Comparison of degree of inhibition of development
시린이 억제정도를 비교하기 위하여, 우선 치약을 제조하기 위해 일반적으로 사용될 수 있는 카르복시메칠세룰로오스나트륨, 라우릴황산나트륨, 글리세린, 콜리이드성 이산화규소, 실리카류, 소디움코코일이세치온산나트륨, 도디신과 감미제, 방향제, 착색제 등을 사용하여 대조군 치약을 만들었고, 여기에 글리시레틴산이 0.01 중량% 함유된 실험군 치약을 제조하였다. In order to compare the degree of suppression of the syringes, there can be mentioned, first, carboxymethylcellulose sodium, sodium laurylsulfate, glycerin, colloidal silicon dioxide, silicas, sodium cocoyl sulfate, sodium cocoate, Control dentifrice was prepared using Dodicin, a sweetener, a fragrance, a coloring agent and the like, and an experimental dentifrice containing glycyrrhetinic acid in an amount of 0.01 wt% was prepared.
위에서 제조한 조성물들의 시린이 현상 억제 정도를 비교 측정하였다. 즉, 지각과민치아를 가진 사람으로 이 실험에 참여하기를 동의한 지원자 40명을 연구대상으로 하였으며, 총 연구대상 치아는 80개이다. 또한, 지원자 중 남자가 20명, 여자가 20명이었고, 연령은 20세 내지 50세였다. 연구 대상자들은 치약 내용물을 알지 못하도록 하였고, 총 시험기간은 2주로 하였다.The degree of suppression of the syringes of the compositions prepared above was compared and measured. In other words, the study subjects consisted of 40 volunteers who agreed to take part in this experiment. Among the applicants, 20 were male and 20 were female, and the ages ranged from 20 to 50 years. The study subjects were not informed about the contents of the toothpaste, and the total test period was 2 weeks.
온도자극을 가한 후 환자의 반응을 측정하는 방법으로 시험을 실시하였다. 시험을 실시하기 전에 미리 각 지원자의 지각과민치아의 과민부위를 체크하였고, 치아의 시린부위에 약 5℃의 차가운 물을 스포이드로 떨어뜨려 평점을 한 후 2주간 각각의 조성물을 1일 3회 사용하게 하고, 2주가 지나 다시 약 5℃의의 차가운 물을 스포이드로 떨어뜨려 평점을 하였다. 자극 후 환자의 반응 평점 기준은 다음과 같이 설정하였다. 0점: 아무런 불편감이 없음, 1점: 약간 불편하거나 시림, 3점: 아픔. 통계처리는 실험 실시 전과 2주 후의 자극 점수를 paired student-t test로 검정하였다. 시린이 억제 정도에 대한 실험 결과는 0주 및 2주 후의 온도자극에 대한 반응점수를 평가하여 하기 표 4에 나타내었다.After the temperature stimulation was applied, the test was performed by measuring the response of the patient. Prior to the test, the hypersensitive areas of the hypersensitive teeth of each volunteer were checked in advance, and cold water of about 5 ° C was dropped on the acupressure of the teeth and dropped on a syringe. After the evaluation, each composition was used three times a day for 2 weeks After 2 weeks, cold water of about 5 ° C was dropped into the eyedropper. The response criteria of the patients after stimulation were set as follows. 0 points: No discomfort, 1 point: Slightly uncomfortable or sore, 3 points: Pain. Statistical analysis was done by paired student-t test before and 2 weeks after the experiment. Experimental results on the degree of inhibition of sirein are shown in Table 4 below by evaluating the response score to temperature stimulation at 0 and 2 weeks.
실험예Experimental Example 6: 구취제거 효과 실험 6: Experiment of removing bad breath
구취제거 정도를 비교하기 위하여 우선 치약을 제조하기 위해 일반적으로 사용될 수 있는 카르복시메칠세룰로오스나트륨, 라우릴황산나트륨, 글리세린, 콜리이드성 이산화규소, 실리카류, 소디움코코일이세치온산나트륨, 도디신과 감미제, 방향제, 착색제 등을 사용하여 대조군 치약을 만들었고, 여기에 글리시레틴산이 0.01 중량% 함유된 실험군 치약을 제조하였다 In order to compare the degree of bad breath removal, it is preferable to firstly dissolve the sodium carboxymethylcellulose sodium, sodium laurylsulfate, glycerin, colloidal silicon dioxide, silica, sodium cocoyl sulfate, sodium dodecanoate, A control toothpaste was prepared using a sweetener, a fragrance, a coloring agent, etc., and an experimental toothpaste containing 0.01 wt% of glycyrrhetinic acid was prepared
치아우식증이 없는 남녀 50명을 선정하여 대상 음료에 대하여 교차 반복 실험(Cross-over test)을 실시하였다. 시판하는 마늘분을 물에 분산시켜 24시간 방치한 후 희석하여 할리미터(Halimeter) 측정값이 700 ppb 이상이 되도록 하여, 상기 희석액을 구취 유발원으로 사용하였다. 마늘분 희석액 15ml로 30초간 가글을 한 후 1분 뒤에 할리미터로 구취정도를 측정한 후, 대조군, 실험군 치약을 사용하여 30초~1분간 양치질하였다. 양치질을 하고 1분, 5분, 30분 경과 후 할리미터로 구취정도를 측정하여 구취억제의 지속여부를 측정하여 하기 표 5에 구취제거 효과를 평가한 결과를 나타내었다.Fifty men and women without dental caries were selected and cross-over test was performed for the beverage. The commercially available garlic powder was dispersed in water, allowed to stand for 24 hours, and diluted so that the measured value of the halimeter was 700 ppb or more. The diluted solution was used as a source of bad breath. After 30 minutes of gagging with 15 ml of garlic diluted solution, the degree of halitosis was measured with a half-meter after one minute, and then groomed for 30 seconds to 1 minute using a control group and an experimental group of toothpaste. After brushing, 1, 5, and 30 minutes later, the degree of halitosis was measured by a halimeter to measure the persistence of halitosis suppression, and the results of evaluating the halitosis elimination effect are shown in Table 5 below.
상기의 실험들로부터 글리시레틴산이 구강질환의 근본원인인 세균막 형성의 초기 단계에서 중요한 역할을 하는 스트렙토코쿠스 뮤탄스의 세균막 생성 및 표면 부착을 억제시킴으로써 충치, 잇몸질환 예방 또는 개선효과, 구취제거, 및 시린이 현상을 완화시켜 구강 건강을 효과적으로 유지하고 개선하는 천연소재로서 확실한 효과를 주는 것을 확인하였다.
From the above experiments, it was found that glycyrrhetinic acid inhibits bacterial membrane formation and surface adhesion of Streptococcus mutans, which plays an important role in the early stage of bacterial membrane formation, which is the root cause of oral diseases, , And silane to relieve the symptoms and to maintain and improve oral health effectively.
Claims (9)
A composition for preventing or treating tooth decay characterized by comprising glycyrrhetinic acid as an active ingredient.
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| KR20200137316A (en) * | 2019-05-29 | 2020-12-09 | 국민대학교산학협력단 | Composition for Inhibiting Biofilm Formation Comprising Glycyrrhizin and Glycyrrhetic Acid Having Synergistic Effect, and Composition for Preventing, Improving or Treating Dental Disease |
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