KR20160129322A - Pharmacy composition for treating or preventing of anti-aging, anti-cancer, and anti-inflammation, and material suppressing expression of matrix metalloproteinase-9 - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 항노화, 항암 및 항염증 치료 또는 예방용 약학 조성물 및 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation, and a substrate metalloproteinase MMP-9 expression inhibitor.
기질 금속 단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)는 아연-의존성 엔도펩티다아제 계열로서, 서로 다른 23 개 유형의 인간 MMP가 있다. 이들 단백질 분해효소는 공통적으로 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)의 구조 성분을 분해시킨다. MMP에 의한 ECM 단백질의 분해는 배아 발생, 창상 치유, 노화 등에 의하여 조직 재형성을 동반하는 다수의 정상적인 생리학적 변화 과정에서 관찰된다. 또한, MMP 활성이 비정상적으로 제어될 경우에 종양 침윤(invasion), 전이, 류마티스성 관절염, 골관절염, 심혈관 질환과 같은 병리학적 과정에도 관여한다. The matrix metalloproteinase (MMP) is a zinc-dependent endopeptidase family, with 23 different types of human MMPs. These proteolytic enzymes commonly degrade the structural components of the extracellular matrix (ECM). The degradation of ECM proteins by MMPs is observed in many normal physiological processes involving tissue remodeling, such as embryonic development, wound healing, and aging. In addition, abnormal control of MMP activity may also be involved in pathological processes such as tumor invasion, metastasis, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, and cardiovascular disease.
특히 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9은 기저막에서 IV형 콜라겐을 분해시킨다. 또한 MMP-9은 노화 과정에서의 역할이 잘 알려져 있다. 피부가 자외선에 노출되면 MMP-9의 발현이 증가하고, 콜라겐을 분해함으로써 피부 노화를 일으키며, MMP-9의 발현은 심장 노화의 마커로도 잘 알려져 있다. 또한, MMP-9 발현 증가는 종양 생성과 암 전이 과정은 물론이고, 염증을 수반하는 여러 질병의 발병에서도 중대한 역할을 한다. 이러한 MMP-9은 성장인자와 염증성 사이토킨에 의해 발현이 증가하는 양상으로 조절된다. 따라서 상기 MMP-9의 발현을 감소시키는 조절은 노화와 암 및 염증 질환을 예방 또는 치료하는데 효과적일 것으로 보고 있다. In particular, the substrate metalloproteinase MMP-9 degrades type IV collagen in the basement membrane. MMP-9 is also well known for its role in the aging process. When skin is exposed to ultraviolet light, MMP-9 expression increases, collagen degradation causes skin aging, and MMP-9 expression is also known as a marker of cardiac aging. In addition, increased expression of MMP-9 plays a crucial role in tumorigenesis and cancer metastasis as well as in the pathogenesis of many inflammatory diseases. Such MMP-9 is regulated by an increase in expression by growth factors and inflammatory cytokines. Therefore, the regulation of the expression of MMP-9 is expected to be effective in preventing or treating aging and cancer and inflammatory diseases.
한편, 플라보노이드는 식물 기원의 식품에서 매우 흔하게 발견되는 폴리페놀성 화합물이다. 이들은 항산화와 항발암성 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 플라보놀은 3-히드록시 플라본 주쇄를 가진 플라보노이드류이다. 특히 갈란진(또는 갈랑긴, Galangin)은 플라보노이드의 하나로서, 갈랑가 뿌리 속에 들어 있으며, 황색 바늘 모양 결정이면서 녹는점은 214-215 ℃이고, 염화철(Ⅲ)에서 자갈색이며, 수산화알칼리 또는 진한 황산에 황색을 나타내면서 용해되는데 형광을 내지는 않는다. 또한 캠퍼롤(Kaempferol)은 노란색 가루로 전형적인 C6-C3-C6의 구조를 가진 널리 퍼져 있는 중요한 플라보노이드 중의 하나이며, 지방과 DNA의 산화 위험을 막고 강한 항산화 작용을 하고, 혈액 안에서 혈소판을 만들고 LDL(low density lipoprotein)의 산화를 막아 동맥경화증을 예방하며, 암세포 형성을 방해하는 화학적 예방 작용제로서 활동한다. Flavonoids, on the other hand, are polyphenolic compounds that are very common in foods of plant origin. They are known to have antioxidant and anticarcinogenic effects. Flavonol is a flavonoid with a 3-hydroxyflavone backbone. In particular, Galangin (or Galangin) is one of the flavonoids, which is contained in the roots of Galangar, which has yellow needle-like crystals and melting point of 214-215 ° C., is ferrochromic in ferric chloride (Ⅲ) But it does not fluoresce. Kaempferol is one of the most prevalent and important flavonoids with a typical structure of C6-C3-C6 in yellow powder. It prevents the risk of oxidation of fat and DNA, has a strong antioxidant effect, produces platelets in the blood, low density lipoprotein) to prevent arteriosclerosis and to act as a chemical preventive agent to prevent cancer cell formation.
이렇게 상기 MMP-9의 발현 및 활성의 조절은 항노화, 항암 및 항염증 효과가 있으며, 플라보노이드 일종인 갈란진 또는 캠퍼롤은 항산화 및 항암 효과가 있는데, 이러한 MMP-9과 갈란진 또는 캠퍼롤과의 상관 관계에 관한 연구는 현재 전무한 실정이다. Thus, the expression and activity of MMP-9 are antagonistic, anticancer and anti-inflammatory, and galangin or camphorol, which is a type of flavonoid, has antioxidant and anti-cancer effects. There is no research on the correlation between the two.
본 발명과 관련된 선행기술문헌으로는 대한민국 등록특허 제10-0946789호(특허문헌 1)가 개시되어 있으며, 상기 특허문헌 1에는 양강 추출물인 갈란진을 함유하여 치매의 개선 및 치료 효과와 인지기억능 향상 효과를 가지는 물질에 대한 내용이 개시되어 있다.
Korean Patent No. 10-0946789 (Patent Document 1) has been disclosed as a prior art document related to the present invention.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 항노화, 항암 및 항염증에 효과적인 약학 조성물을 제공하는 것이 목적이다. 또한 발현 증가시 노화를 유도하고, 암을 발생시키거나 증식시키고, 염증성 질환에도 관여하는 기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9의 발현을 감소시키거나 억제하는 물질을 제공하는 것이 목적이다.
The present invention has been conceived to solve the above-mentioned problems, and an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition effective for anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation. It is also an object to provide a substance that induces senescence upon increased expression, induces or proliferates cancer, and reduces or inhibits the expression of MMP-9, a substrate metalloproteinase involved in inflammatory diseases.
위와 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명의 한 특징에 따른 약학 조성물은 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물이다.
In order to solve the above problems, the pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention may be used for the treatment or prevention of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammatory drugs, which include any one of galantamine or camphor roll as a flavonoid, Lt; / RTI >
본 발명의 또 다른 특징에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제는According to another aspect of the present invention, there is provided a substrate metalloproteinase MMP-9 expression inhibitor
플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제이며,A substrate metalloproteinase MMP-9 expression inhibitor comprising any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, or a mixture thereof,
상기 발현 억제제는 생체외(in vitro)에서 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제이다.
The expression inhibitor is an inhibitor of matrix metalloproteinase MMP-9 expression, which inhibits the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro.
본 발명의 또 다른 특징에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 방법은The method for inhibiting the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9 according to another aspect of the present invention comprises
1) 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 물질을 처리하여 생체외(in vitro)에서 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 단계;1) inhibiting the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro, by treating a substance comprising or consisting of any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, in vitro;
를 포함하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 방법이다.
Which inhibits the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9.
본 발명에 따른 항노화, 항암 및 항염증 치료 또는 예방용 약학 조성물은 노화의 예방, 종양 제거 및 예방이나 염증성 관련 질병을 치료하거나 예방하는 효과가 우수한 약학 조성물이다. 또한 본 발명의 또 다른 특징에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제는 발현 증가시 세포외 기질 재형성(ECM remodeling)을 통한 피부 및 심장 등 조직의 노화를 유발하고, 암을 발생시키거나 증식시키고, 염증성 질환에도 관여하는 기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9의 발현을 감소시키거나 억제시키는 물질이다. 또한 본 발명에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제는 갈란진 또는 캠퍼롤을 포함하는 것이므로, 항노화, 항암 및 항염증 효과가 있을 뿐만 아니라, 항산화 작용에도 효과적일 수 있다.
The pharmaceutical composition for the treatment or prevention of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation according to the present invention is a pharmaceutical composition having an excellent effect of preventing or treating aging, tumor removal and prevention, or inflammatory-related diseases. In addition, the inhibitor of matrix metalloproteinase MMP-9 according to another aspect of the present invention induces aging of tissues such as skin and heart through ECM remodeling at an increased expression, It is a substance that reduces or inhibits the expression of MMP-9, a substrate metalloproteinase that is proliferating and also involved in inflammatory diseases. In addition, since the inhibitor of substrate metalloproteinase MMP-9 according to the present invention contains galantamine or camphor roll, it can be effective not only for anti-aging, anti-cancer and anti-inflammatory effects, but also for antioxidative action.
도 1은 플라보노이드 물질들이 MMP-9의 발현 양상에 미치는 영향을 조사한 결과이다.
도 2는 갈란진과 캠퍼롤의 농도별 세포 독성에 미치는 영향을 조사한 결과이다.
도 3은 갈란진과 캠퍼롤이 MMP-9 유전자의 전사를 저해하는지 조사한 결과로서, 갈란진과 캠퍼롤을 세포에 처리한 경우 루시퍼라제의 활성으로 MMP-9 프로모터의 전사 활성을 조사한 결과이다.
도 4는 갈란진과 캠퍼롤이 MAPK 신호전달 경로를 조절하는지 여부를 조사한 결과이다.
도 5는 갈란진과 캠퍼롤이 NF-ΚB 신호전달경로를 조절하는지 여부를 조사한 결과이다. FIG. 1 shows the effect of flavonoid substances on the expression pattern of MMP-9.
FIG. 2 shows the results of investigating the cytotoxic effect on the concentration of gallantine and camphor roll.
FIG. 3 shows the result of investigating the transcriptional activity of the MMP-9 promoter by the activity of luciferase in the case where galantin and camphor roll were treated with cells as a result of investigating whether the galangin and camphor roll inhibited the transcription of the MMP-9 gene.
FIG. 4 shows the results of investigating whether the galangin and camphor roll regulate the MAPK signaling pathway.
FIG. 5 shows the results of investigating whether gallantin and camphor roll regulate the NF- [ kappa] B signaling pathway.
이에 본 발명자들은 기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9의 발현을 감소시키거나 억제하는 물질을 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 본 발명에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제를 발견하여 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the inventors of the present invention have made extensive efforts to develop a substance that reduces or inhibits the expression of MMP-9, a substrate metalloproteinase. As a result, they discovered an inhibitor of substrate metalloproteinase MMP-9 expression, .
구체적으로 본 발명에 따른 약학 조성물은 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하거나, 또는 약학적으로 허용 가능한 이들 각각의 염을 포함하는 항노화, 항암 및 항염증 치료 또는 예방용 약학 조성물이다. Specifically, the pharmaceutical composition according to the present invention comprises an anti-aging, anti-cancer and anti-inflammatory agent comprising each of these salts, which comprises any one of galantamine or camphor roll, which is a flavonoid, For the treatment or prevention of inflammation.
기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9은 발현이 증가하는 경우, 노화를 유발하고, 암을 유발하거나 암세포의 증식을 촉진하게 되며, 류마티스 관절염이나 골관절염과 같은 염증성 질환을 유발하거나 발전시키게 된다. 본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤, 또는 이들의 혼합물을 포함하여 상기 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하거나 감소시키게 된다. 결국, 이렇게 본 발명에 따른 약학 조성물은 기질 금속 단백질 MMP-9의 발현을 억제시키거나 감소시켜 항노화, 항암 및 항염증 효과를 달성할 수 있다. MMP-9, a substrate metalloproteinase, induces senescence, induces cancer, promotes the proliferation of cancer cells, and induces or develops inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and osteoarthritis when expression is increased. The pharmaceutical composition according to the present invention inhibits or reduces the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9, including galvanic or camphor rolls, or mixtures thereof, which are flavonoids. Thus, the pharmaceutical composition according to the present invention can inhibit or decrease the expression of the matrix metalloprotein MMP-9 to achieve anti-aging, anti-cancer and anti-inflammatory effects.
또한 상기 약학 조성물은 특별한 제한이 있는 것은 아니지만, 바람직하게는 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물에 대하여 약학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 일실시예로서 상기 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물의 용해도를 증가시키기 위한 것이라면 모두 이에 해당할 수 있고, 바람직한 일실시예에 산부가염이 해당 될 수도 있다. The pharmaceutical composition may also include, but is not limited to, pharmaceutically acceptable salts with respect to galantine, camphorol or a mixture thereof. As an example of the pharmaceutically acceptable salt, any of them may be used to increase the solubility of the galactan, camphorol, or a mixture thereof. In one preferred embodiment, the acid addition salt may be applicable.
한편, 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 인체에 독성이 낮고 모화합물의 생물학적 활성과 물리화학적 성질에 악영향을 주지 않아야 한다. 또한 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 제조에 사용될 수 있는 유리산은 무기산과 유기산으로 나눌 수 있다. 무기산은 염산, 황산, 질산, 인산, 과염소산, 브롬산 등이 사용될 수 있다. 유기산은 초산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 푸마린산, 말레산, 말론산, 프탈산, 숙신산, 젖산, 구연산, 시트르산, 글루콘산, 타타르산, 살리실산, 말산, 옥살산, 벤조산, 엠본산, 아스파르트산, 글루탐산 등이 사용될 수 있다. 유기염기부가염 제조에 사용될 수 있는 유기염기는 트리스(히드록시메틸)메틸아민, 디시클로헥실아민 등이다. 아미노산부가염기 제조에 사용될 수 있는 아미노산은 알라닌, 글라이신 등의 천연아미노산이다. 또한 본 발명에 따른 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물은 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라 모든 수화물 그리고 용매화물도 포함할 수 있다. 상기 수화물 또는 용매화물은 상기 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물을 메탄올, 에탄올, 아세톤, 1,4-디옥산과 같은 물과 섞일 수 있는 용매에 녹인 다음에 유리산 또는 유리염기를 가한 후에 결정화되거나 또는 재결정화될 수 있다. 그러한 경우, 용매화물(특히 수화물)이 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명의 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물로서 동결건조와 같은 방법으로 제조 가능한 다양한 양의 물 함유 화합물 이외에 수화물을 비롯한 화학 양론적 용매화물도 포함할 수 있다.On the other hand, the pharmaceutically acceptable salts should not be toxic to humans and adversely affect the biological activity and physicochemical properties of the parent compound. The free acids that can be used in the preparation of the pharmaceutically acceptable salts can also be divided into inorganic acids and organic acids. As the inorganic acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, perchloric acid, bromic acid and the like can be used. The organic acid may be selected from the group consisting of acetic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, fumaric acid, maleic acid, malonic acid, phthalic acid, succinic acid, lactic acid, citric acid, citric acid, gluconic acid, tartaric acid, Benzoic acid, embonic acid, aspartic acid, glutamic acid and the like can be used. Organic bases that can be used to prepare organic base addition salts include tris (hydroxymethyl) methylamine, dicyclohexylamine, and the like. Amino acids that can be used in the production of amino acid addition bases are natural amino acids such as alanine and glycine. Also, the galangin, camphorol or a mixture thereof according to the present invention may include not only pharmaceutically acceptable salts but also all hydrates and solvates. The hydrate or solvate may be obtained by dissolving the gallanzine, camphorol or a mixture thereof in a solvent that can be mixed with water such as methanol, ethanol, acetone, or 1,4-dioxane, adding a free acid or a free base, Or may be recrystallized. In such cases, solvates (especially hydrates) may be formed. Thus, in addition to the various amounts of water-containing compounds that can be prepared by methods such as lyophilization, such as the galangan, camphorol, or mixtures thereof of the present invention, stoichiometric solvates, including hydrates, may also be included.
또한, 상기 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물이거나, 또는 약학적으로 허용 가능한 이들의 염은, 특별한 제한이 있는 것은 아니지만 바람직하게는 전체 조성물 100 중량부에 대하여 1-80 중량부로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 20-60 중량부로 포함되는 것이 바람직하다. 상기 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물이거나, 또는 약학적으로 허용 가능한 이들의 염이 1 중량부 미만으로 포함되는 경우에는 본 발명에서 달성하려는 항노화, 항암 및 항염증 효과를 충분히 발현시키기 어려워 바람직하지 않으며, 상기 갈란진, 캠페롤 또는 이들의 혼합물이거나, 또는 약학적으로 허용 가능한 이들의 염이 80 중량부를 초과하는 경우에는 약학적인 응용 제품으로 제조하기 위한 나머지 물질들의 함량을 제한 할 수 있어 바람직하지 않다. The above-mentioned gallanz, camphorol, a mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is not particularly limited, but is preferably contained in an amount of 1-80 parts by weight based on 100 parts by weight of the total composition By weight, more preferably 20 to 60 parts by weight. In the case where gallanzine, camphorol, a mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is contained in an amount of less than 1 part by weight, it is difficult to sufficiently express the anti-aging, anti-cancer and anti- And the amount of the above-mentioned gallanzine, camphorol, or a mixture thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is more than 80 parts by weight, the content of the remaining substances for producing a pharmaceutical application product can be limited, I do not.
한편, 상기 항노화, 항암 및 항염증에 관한 치료 또는 예방용 약학 조성물의 투여 방법은 특별한 제한이 있는 것은 아니지만, 바람직하게는 동맥 또는 정맥 내로 투입하거나, 피하로, 직장으로, 비강으로, 임의의 다른 비경구로도 투입될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 동맥 또는 정맥 내로 투입하거나 경구 투여하거나 또는 근육 세포에 직접 투입하는 것이 바람직하다. On the other hand, the method of administering the pharmaceutical composition for the treatment or prevention of the anti-aging, anti-cancer and anti-inflammatory agent is not particularly limited, but is preferably administered intraarterially or intravenously, subcutaneously, rectally, nasally, It may be injected into other parenteral form, more preferably injected into the artery or vein, orally or directly into the muscle cell.
또한 상기 조성물로부터 선택되는 투여 수준은 화합물의 활성, 투여 경로, 치료되는 병태의 중증도 및 치료되는 환자의 병태 및 이전 병력에 따를 것이다. 그러나 원하는 치료 효과의 달성을 위해 요구되는 것보다 낮은 수준의 화합물의 용량에서 시작하여, 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 서서히 증가시키는 것은 당업계의 지식 내에 있으며, 바람직한 투여량은 나이, 성별, 체형, 체중에 따라 결정될 수 있다. 상기 조성물은 약제학상 허용 가능한 제약 제제로 제제화 되기 전에 추가로 가공될 수 있으며, 바람직하게는 더 작은 입자들로 분쇄 또는 연마될 수 있다. 또한 상기 조성물은 병태 및 치료되는 환자에 따라 달라질 것이지만, 이는 비-독창적으로 결정할 수 있다.Also, the dosage level selected from the composition will depend on the activity of the compound, the route of administration, the severity of the condition being treated, and the condition and previous history of the patient being treated. It is, however, within the knowledge of the art to gradually increase the dose until the desired effect is achieved, starting with the dose of the compound at a level lower than that required for achieving the desired therapeutic effect, , Body shape, and body weight. The composition may be further processed before being formulated into a pharmaceutically acceptable pharmaceutical formulation and may be preferably ground or ground into smaller particles. Also, the composition will vary depending on the condition and the patient being treated, but it can be determined non-ingeniously.
또한 본 발명에 따른 약학 조성물과 같이 기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9의 발현을 억제할 수 있음은 갈란진과 캠퍼롤로 인해 가능하게 된다. 상기 갈란진과 캠퍼롤은 플라보노이드의 일종으로서 원래 항산화 및 항암 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 본 발명은 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제 또는 감소시키는 효과가 있음을 확인한 것이다. 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 NF-KB 또는 AP-1의 활성화를 저해함으로써, PMA에 의해 유도되는 MMP-9의 발현을 저해하게 된다. 또한 상기 갈란진 또는 캠퍼롤의 혼합물을 포함하는 경우에는 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 단독으로 포함되는 경우에 비해 보다 월등한 상승 효과가 달성될 수 있어 바람직하며, 이렇게 혼합되어 사용되는 경우에는 단독으로 사용되는 경우에 비해 1.5-3 배 이상 상승된 효과를 달성할 수 있어 바람직하다. 또한 상기 갈란진 또는 캠퍼롤에 각각 다른 플라보노이드 물질을 혼합하는 경우에 비해 갈란진 및 캠퍼롤 혼합물인 것이 2-3 배 이상 상승된 효과를 달성할 수 있어 바람직하다.Also, it is possible to inhibit the expression of MMP-9, which is a substrate metalloproteinase, like the pharmaceutical composition according to the present invention due to the presence of galangin and camphor. It is known that gallan and camper roll are originally flavonoids and have original antioxidant and anticancer effects. However, the present invention has the effect of inhibiting or reducing the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 It is confirmed. By inhibiting the activation of the binary or camphor Rogaland roll NF- K B or AP-1, thereby inhibiting the expression of MMP-9 induced by PMA. Also, in the case of containing a mixture of the above-mentioned gallanzes or camper rolls, a superior synergistic effect can be achieved as compared with the case where the above-mentioned gallanzes or camphor rolls are contained alone. It is possible to achieve an effect of 1.5 to 3 times higher than that of the case where it is used. In addition, it is preferable that the mixture of the galantine and the camphor roll is increased by a factor of 2-3 or more, as compared with the case of mixing the different flavonoid materials in the galantamine or camper roll.
한편, 본 발명에 따른 약학 조성물의 항노화 효과로 인해 치료 또는 예방의 약리효과가 달성되는 질병은 피부 노화 또는 심장 노화가 이에 해당할 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 항암 효과로 인해 치료 또는 예방의 약리효과가 달성되는 질병은 갑상선암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 간암, 전립선암 및 췌장암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 암 관련 질병이 이에 해당할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 약학 조성물의 항염증 효과로 인해 치료 또는 예방의 약리효과가 달성되는 질병은 류마티스 관절염, 골관절염, 동맥경화, 천식, 및 궤양으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 염증성 질환이 이에 해당할 수 있다. On the other hand, the diseases in which the pharmacological effect of treatment or prevention is achieved due to the anti-aging effect of the pharmaceutical composition according to the present invention may be skin aging or cardiac aging. The disease for which the pharmacological effect of treatment or prevention is achieved due to the anticancer effect of the pharmaceutical composition according to the present invention is at least one kind of cancer associated with thyroid cancer, stomach cancer, colon cancer, lung cancer, breast cancer, liver cancer, prostate cancer and pancreatic cancer Illness can be the case. Also, the disease for which the pharmacological effect of treatment or prevention is achieved by the anti-inflammatory effect of the pharmaceutical composition according to the present invention is at least one inflammatory disease selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, osteoarthritis, arteriosclerosis, asthma, can do.
또한 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 0.1-100 μM로 포함되는 것이 세포 독성에 미치는 영향이 적어 바람직한데, 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 100 μM를 초과하게 되면 세포 독성이 커져 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물로 활용하기 어렵게 되어 바람직하지 않다. 또한 더욱 바람직하게는 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 0.1-30 μM로 포함되는 것이 세포 독성에 미치는 영향이 없어 바람직한데, 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 30 μM을 초과하기 이전까지는 세포 독성이 거의 나타나지 않아 더욱 바람직하다.
In addition, when the content of gallan or camper roll is in the range of 0.1-100 [mu] M, the effect on cytotoxicity is less, and when the content of gallan or camper roll is more than 100 [mu] M, cytotoxicity is increased and anti- It is difficult to utilize it as a pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis. More preferably, the content of gallanase or camphor roll is 0.1 to 30 μM because it has no effect on cytotoxicity, and cytotoxicity is hardly observed until galantin or camper roll exceeds 30 μM More preferable.
한편, 본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 정제, 캡슐제, 시럽제, 도포제 및 패치제에 첨가되어 사용될 수 있다.Meanwhile, the pharmaceutical composition according to the present invention can be used in addition to tablets, capsules, syrups, coatings and patches.
상기 정제는 제조방법에 있어서 특별한 제한이 있는 것은 아니며, 바람직한 일실시예로서 상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약학 조성물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분과 혼합한 후에, 정제수를 첨가하여 분말로 과립화하고, 상기 과립을 건조시킨 후에 스테아르산 마그네슘과 혼합하고 압착하여 제조되며, 이때, 정제의 바람직한 성분 및 함량은 본 발명에 따른 상기 약학 조성물 5.0 ㎎, 락토오스 BP 150.0 ㎎, 전분 BP 30.0 ㎎, 전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0 ㎎ 및 스테아르산 마그네슘 1.0 ㎎이다.The tablets are not particularly limited in terms of the production method, and as a preferable example, the pharmaceutical composition comprising any one of the above-mentioned gallan or camper rolls, or a mixture thereof, is sieved and lactose, starch and starch The granules are mixed with gelatinized corn starch and then added with purified water to granulate the powder. The granules are dried and then mixed with magnesium stearate and compressed. The preferred components and contents of the tablets are as follows: 5.0 mg of the pharmaceutical composition, 150.0 mg of lactose BP, 30.0 mg of starch BP, 15.0 mg of pregelatinized corn starch BP and 1.0 mg of magnesium stearate.
또한 캡슐제는 제조방법에 있어서 특별한 제한이 있는 것은 아니며, 바람직한 일실시예로서 상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약학 조성물을 체질한 다음 부형제와 혼합한 후에 젤라틴 캡슐에 충전하여 제조되는데, 이때, 캡슐제의 바람직한 성분 및 함량은 본 발명에 따른 상기 약학 조성물 5.0 ㎎, 전분 100.0 ㎎ 및 스테아르산마그네슘 BP 1.0 ㎎이다.In addition, there is no particular limitation in the preparation method of the capsules, and as a preferable example, the pharmaceutical composition comprising any one of the above-mentioned gallan or camper rolls or a mixture thereof is sieved and then mixed with the excipient The preferred components and contents of the capsules are 5.0 mg of the pharmaceutical composition according to the present invention, 100.0 mg of starch and 1.0 mg of magnesium stearate BP.
또한 시럽제는 제조방법에 있어서 특별한 제한이 있는 것은 아니며, 바람직한 일실시예로서 정제수 500 ㎖에 백당을 용해시키고, 별도의 용기에 카르복시메틸셀룰로오스나트륨을 정제수 400 ㎖에 용해시킨 후에, 상기 백당이 용해된 정제수와 메틸셀룰로오스나트륨이 용해된 정제수를 혼합하고, 메틸파라벤과 프로필파라벤을 첨가하여 용해시키고, 에탄올을 첨가한 후에 정제수를 전체 용액의 용량이 1,000 ㎖가 되도록 첨가하고, 여기에 상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나이거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 약학 조성물을 현탁시켜 제조되는데, 이때, 상기 시럽제의 바람직한 성분 및 함량은 본 발명에 따른 상기 약학 조성물 5.0 g, 백당 637.5 g, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨 2.0 g, 메틸파라벤 0.28 g, 프로필파라벤 0.12 g, 에탄올 20 ㎖, 정제수 잔량이다.
There is no particular limitation on the preparation method of the syrup agent. In one preferred embodiment, white sugar is dissolved in purified water (500 ml), carboxymethyl cellulose sodium is dissolved in 400 ml of purified water in a separate vessel, Purified water and purified water in which methyl cellulose sodium was dissolved were mixed and dissolved by adding methylparaben and propylparaben. After addition of ethanol, purified water was added so that the total volume of the solution became 1,000 ml, , Or a mixture thereof. The preferred ingredients and the content of the syrup are 5.0 g of the pharmaceutical composition according to the present invention, 637.5 g of white sugar, 2.0 g of carboxymethylcellulose sodium 2.0 g, 0.28 g of methylparaben, 0.12 g of propylparaben, 20 ml of ethanol, The.
본 발명의 또 다른 특징에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9(matrix metalloproteinase-9) 발현 억제제는 In accordance with another feature of the present invention, the inhibitor of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9)
플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제이며,A substrate metalloproteinase MMP-9 expression inhibitor comprising any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, or a mixture thereof,
상기 발현 억제제는 생체외(in vitro)에서 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제이다. The expression inhibitor is an inhibitor of matrix metalloproteinase MMP-9 expression, which inhibits the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro.
본 발명에 따른 상기 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제는 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤, 또는 이들의 혼합물을 포함하여 상기 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하거나 감소시키게 된다. 결국, 이렇게 본 발명에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제를 통해 MMP-9의 발현을 억제시키거나 감소시키게 되며, 이를 생체내(in vivo)에 적용하는 경우 항노화, 항암 및 항염증 효과를 달성할 수 있다. The inhibitor of the substrate metalloproteinase MMP-9 according to the present invention inhibits or reduces the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9, including flavonoids such as galactan or camphorol, or a mixture thereof. As a result, the expression of MMP-9 is inhibited or decreased by the inhibitor of substrate metalloproteinase MMP-9 according to the present invention, and when it is applied in vivo, anti-aging, anti-cancer and anti- Effect can be achieved.
이렇게 기질 금속 단백질 분해효소인 MMP-9의 발현을 억제할 수 있음은 갈란진과 캠퍼롤로 인해 가능하게 된다. 상기 갈란진과 캠퍼롤은 플라보노이드의 일종으로서 원래 항산화 및 항암 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 본 발명은 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제 또는 감소시키는 효과가 있음을 확인한 것이다. 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 NF-KB 또는 AP-1의 활성화를 저해함으로써, PMA에 의해 유도되는 MMP-9의 발현을 저해하게 된다. 또한 상기 갈란진 또는 캠퍼롤의 혼합물을 포함하는 경우에는 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 단독으로 포함되는 경우에 비해 보다 월등한 상승 효과가 달성될 수 있어 바람직하다. The ability to inhibit the expression of the substrate metalloproteinase, MMP-9, is made possible by the use of galantamine and camphor. It is known that gallan and camper roll are originally flavonoids and have original antioxidant and anticancer effects. However, the present invention has the effect of inhibiting or reducing the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 It is confirmed. The galangin or camphor roll inhibits the activation of NF-KB or AP-1, thereby inhibiting the expression of MMP-9 induced by PMA. Further, in the case of containing a mixture of the above-mentioned galangin or camphor roll, a superior synergistic effect can be achieved as compared with the case where the above-mentioned galangin or camphor roll is contained singly, which is preferable.
또한 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 0.1-100 μM로 포함되는 것이 세포 독성에 미치는 영향이 적어 바람직한데, 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 100 μM를 초과하게 되면 세포 독성이 커져 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제로 활용하기 어렵게 되어 바람직하지 않다. 또한 더욱 바람직하게는 상기 갈란진 또는 캠퍼롤은 0.1-30 μM로 포함되는 것이 세포 독성에 미치는 영향이 없어 바람직한데, 상기 갈란진 또는 캠퍼롤이 30 μM을 초과하기 이전까지는 세포 독성이 거의 나타나지 않아 더욱 바람직하다.
In addition, when the content of gallan or camper roll is less than 100 μM, the cytotoxicity of the galantin or camper roll is increased and the substrate metalloproteinase MMP- 9 expression inhibitor. More preferably, the content of gallanase or camphor roll is 0.1 to 30 μM because it has no effect on cytotoxicity, and cytotoxicity is hardly observed until galantin or camper roll exceeds 30 μM More preferable.
본 발명의 또 다른 특징에 따른 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 방법은The method for inhibiting the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9 according to another aspect of the present invention comprises
1) 플라보노이드인 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나를 포함하거나, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 물질을 처리하여 생체외(in vitro)에서 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 단계;1) inhibiting the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro, by treating a substance comprising or consisting of any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, in vitro;
를 포함하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 방법이다.
Which inhibits the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9.
이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings. The present invention may, however, be embodied in many different forms and should not be construed as limited to the embodiments set forth herein.
실시예Example
<화학물질><Chemicals>
3-히드록시플라본(순도 > 98.0%)은 Tokyo Chemical Industry(일본)로부터 얻었다. 갈란진(순도 ≥ 95.0 %), 캠퍼롤(순도 ≥ 90.0%), 피세틴(순도 ≥ 98.0 %), 케르세틴(quercetin, 순도 ≥ 98.0 %), 모린(morin, 순도 ≥ 85.0 %)과 미리세틴(myricetin, 순도 ≥ 96.0 %)은 Sigma-Aldrich(미국)로부터 얻었다. 고시페틴(gossypetin, 순도 ≥ 97.0 %)은 Timtec(미국)으로부터 얻었다. 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT)는 Sigma-Aldrich로부터 얻었다. PMA는 A.G. Scientific(미국)으로부터 얻었다. 항-MMP-9, 항-포스포-ERK1/2, 항-ERK, 항-포스포-JNK, 항-JNK, 항-포스포-p38 MAPK, 항-포스포-IκBα와 항-IκBα 항체들은 Cell Signaling Technology(미국)로부터 구입하였다. 항-p38 MAPK 항체는 Santa Cruz Biotechnology(미국)로부터 구입하였다. 항-GAPDH 항체는 AbClon(한국)으로부터 구입하였다. 서양고추냉이 과산화효소-결합 염소-항 마우스 또는 토끼 IgG 항체는 KOMA(한국)로부터 구입하였다.
3-Hydroxyflavone (purity > 98.0%) was obtained from Tokyo Chemical Industry (Japan). (Purity ≥85.0%), myrrhin (purity ≥ 95.0%), camper roll (purity ≥ 90.0%), picetine (purity ≥ 98.0%), quercetin myricetin, purity ≥ 96.0%) was obtained from Sigma-Aldrich (USA). Gossypetin (purity ≥ 97.0%) was obtained from Timtec (USA). 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) was obtained from Sigma-Aldrich. PMA was obtained from AG Scientific (USA). Anti-phospho-IκBα and anti-IκBα antibodies have been found to be useful in the treatment of cancer, including anti-MMP-9, anti-phospho-ERK1 / 2, anti-ERK, anti-phospho-JNK, anti- Cell Signaling Technology (USA). Anti-p38 MAPK antibody was purchased from Santa Cruz Biotechnology (USA). Anti-GAPDH antibody was purchased from AbClon (Korea). Western horseradish peroxidase-conjugated goat-anti mouse or rabbit IgG antibodies were purchased from KOMA (Korea).
<세포배양><Cell Culture>
5 % CO2를 함유한 37 ℃의 가습 배양기 안에서 10 % 우태아혈청(FBS), 100 U/ml 페니실린과 100 μg/ml 스트렙토마이신이 첨가된 둘베코 변형 이글 배지(DMEM, Thermo Scientific, 미국)에 인간 섬유육종 HT-1080 세포를 유지시켰다. 플라보놀을 세포에 첨가하였을 때, 이들은 디메틸설폭사이드(DMSO)에서 가용화되었다. 최종 농도 0.2 % 미만의 DMSO 함유 DMEM에서 세포를 배양하였다.
10% fetal bovine serum (FBS), two of the 100 U / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin was added Beko modified Eagle's medium (DMEM, Thermo Scientific, USA) in a 5% CO 2 humidified incubator at 37 ℃ containing Lt; RTI ID = 0.0 > HT-1080 < / RTI > When Flavonol was added to the cells, they were solubilized in dimethylsulfoxide (DMSO). Cells were cultured in DMEM containing less than 0.2% final concentration of DMSO.
<젤라틴 <Gelatin 자이모그래피Zymography (( zymographyzymography ) 분석법>) Method>
100 % 미만으로 밀집된(subconfluent) HT-1080 세포를 12-웰 플레이트에 도말하고 30 ng/ml PMA와 다양한 농도의 플라보놀을 가진 무혈청 배지와 함께 24 시간 배양하였다. 순화(conditioned) 배지를 0.1 % 젤라틴 함유 7.5 % SDS 겔을 이용하여 젤라틴 자이모그래피 분석(Lv et al., 2013, Nam et al., 2011) 처리하였다. 겔을 상온에서 1 시간 동안 리폴딩(refolding) 완충액(50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 2.5 % 트리톤 X-100)에서 배양하고 37 ℃에서 16 시간 동안 반응 완충액(50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 10 mM CaCl2)에서 배양하였다. 다음, 겔을 쿠마쉬 브릴리언트 블루(Coomassie brilliant blue) R-250으로 염색하였다.
Subconfluent HT-1080 cells were plated on 12-well plates and cultured for 24 h with serum-free medium with 30 ng / ml PMA and various concentrations of flavonol. The conditioned media was subjected to gelatin assays (Lv et al., 2013, Nam et al., 2011) using 7.5% SDS gels containing 0.1% gelatin. The gel was incubated in refolding buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 2.5% Triton X-100) for 1 hour at room temperature and incubated for 16 hours at 37 ° C in reaction buffer (50 mM Tris- HCl, pH 7.4, 10 mM CaCl2). The gel was then stained with Coomassie brilliant blue R-250.
<세포 증식 분석법><Cell proliferation assay>
100 % 미만으로 밀집된 HT-1080 세포를 96-웰 플레이트에 도말하고 10 % FBS와 다양한 농도의 갈란진과 캠퍼롤이 첨가된 배지에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 세포를 MTT 용액으로 처리하였고, DMSO로 가용화한 다음, 마이크로플레이트 리더를 이용하여 565 nm에서 흡광도를 측정하였다.
HT-1080 cells densely packed less than 100% were plated on 96-well plates and cultured in media supplemented with 10% FBS and various concentrations of galactan and camper roll for 24 hours. After incubation, cells were treated with MTT solution, solubilized with DMSO, and absorbance was measured at 565 nm using a microplate reader.
<이중-루시페라아제 리포터 분석법><Dual-luciferase reporter assay>
100 % 미만으로 밀집된 HT-1080 세포를 24-웰 플레이트에 도말하고 인간 야생형 MMP-9 프로모터를 함유하는 개똥벌레 루시페라아제 리포터 구조체 pGL3-M9Pwt(Hah and Lee, 2003)와 레닐라(Renilla) 루시페라아제 리포터 벡터 pRL-TK를 동시에 형질 주입(co-transfection)하였다. 제작사 권고사항에 따라 WelFect-EX와 형질 주입 시약(Welgene, 한국)을 이용하여 형질 주입하였다. 완전(complete) 배지에서 24 시간 배양 후, 상기 배지를 무혈청 배지로 대체한 다음, 세포를 30 ng/ml PMA와 30 μM 갈랑긴 또는 캠퍼롤로 24 시간 동안 처리하였다. 이중-루시페라아제 리포터 분석 장치(Promega, 미국)를 이용하여 세포 용해물의 루시페라아제 활성을 측정하였다.
HT-1080 cells densely packed to less than 100% were plated on a 24-well plate and the firefly luciferase reporter construct pGL3-M9Pwt (Hah and Lee, 2003) and the Renilla luciferase reporter vector containing the human wild-type MMP-9 promoter pRL-TK were simultaneously co-transfected. The transfection was performed using WelFect-EX and transfection reagent (Welgene, Korea) according to the manufacturer's recommendation. After 24 hours of culture in complete medium, the medium was replaced with serum-free medium and cells were treated with 30 ng / ml PMA and 30 μM Galangin or camper roll for 24 hours. The luciferase activity of cell lysates was measured using a dual-luciferase reporter assay (Promega, USA).
<< 웨스턴Western 블로팅법과Blowing method 면역 검출법( Immunodetection method immunodetectionimmunodetection )>)>
세포를 얼음 상에서 15 분 동안 RIPA 용해용 완충액[50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 % NP-40, 0.5 % 데옥시콜레이트, 0.1 % SDS, 1 mM NaF, 1 mM 소듐 오르토바나데이트, 단백질 분해효소 저해제 칵테일 세트 I(Calbiochem, 독일)]을 이용하여 용해시킨 후, 4 ℃에서 15 분 동안 13,000 x g으로 원심 분리하였다. 상청액을 100 mM β-메르캅토에탄올 함유 SDS 시료 완충액(50 mM 트리스-HCl, pH 6.8, 2 % SDS, 0.1 % 브로모페놀 블루, 10 % 글리세롤)에 재현탁하고 SDSPAGE에 의해 분리하였다. 단백질을 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 막에 블로팅하고 1차 및 2차 항체와 함께 배양하였다. Immobilon Western Chemiluminescent HRP Substrate(Millipore, 미국)와 LAS-3000(Fujifilm, 일본)을 이용하여 면역반응 신호를 검출하였다.
Cells were resuspended in RIPA dissolution buffer [50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS, 1 mM NaF, 1 mM sodium orthobarb Date, protease inhibitor cocktail set I (Calbiochem, Germany)] and centrifuged at 13,000 xg for 15 minutes at 4 ° C. The supernatant was resuspended in SDS sample buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 2% SDS, 0.1% Bromophenol Blue, 10% glycerol) containing 100 mM? -Mercaptoethanol and separated by SDS PAGE. Proteins were blotted onto nitrocellulose or PVDF membranes and incubated with primary and secondary antibodies. Immobilon signals were detected using Immobilon Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore, USA) and LAS-3000 (Fujifilm, Japan).
<통계분석><Statistical Analysis>
데이터는 적어도 3 회의 독립적인 실험의 평균 ± 표준편차로서 나타내었다. Student’s t-검정법을 이용하여 집단 평균을 비교하였다.
Data are presented as mean + standard deviation of at least three independent experiments. Student's t-test was used to compare group means.
실험예Experimental Example
<< 실험예Experimental Example 1: 일부 1: some 플라보놀은Flavonol MMPMMP -9의 분비를 감소시킴>-9 < / RTI > secretion &
본 발명들은 젤라틴 자이모그래피를 이용하여 HT-1080 세포에서 PMA에 의해 유도되는 MMP-9 발현에 대한 서로 다른 8종의 플라보놀(Hy: 3-히드록시플라본, Ga: 갈란진, Ka: 캠퍼롤, Fi: 피세틴, Qu: 케르세틴, Mo: 모린, My: 미리세틴, Go: 고시페틴)의 효과를 분석하였다. 기대한 바대로, 본 발명자들은 PMA 처리가 proMMP-9의 분비를 현저하게 증가시킨다는 것을 관찰할 수 있었다(도 1A). 각각의 플라보놀을 30 μM의 농도로 첨가하였을 때, PMA에 의해 유도되는 MMP-9 분비는 갈란진과 캠퍼롤에 의해 명백하게 감소하였고, 피세틴에 의해서는 완만하게 감소하였으며, 케르세틴에 의해서는 미약하게 감소하였다(도 1A). 갈란진, 캠퍼롤과 피세틴을 용량-의존적으로 처리하였더니 갈란진과 캠퍼롤이 피세틴보다 MMP-9 분비를 더 효율적으로 감소시킨다는 것이 밝혀졌다(도 1B). 또한 웨스턴 블로팅 분석을 통해 갈란진, 캠퍼롤과 피세틴은 PMA에 의해 유도되는 MMP-9 분비를 감소시킨다는 것을 입증하였다(도 1C).
The present invention is based on the finding that eight different flavonols (Hy: 3-hydroxyflavone, Ga: galactan, Ka: camphor) for the expression of MMP-9 induced by PMA in HT-1080 cells using gelatin- Roll, Fi: pisetin, Qu: quercetin, Mo: morin, My: myrcetin, Go: goethiphen). As expected, the inventors could observe that the PMA treatment significantly increased the secretion of proMMP-9 (FIG. 1A). When each flavonol was added at a concentration of 30 μM, the PMA-induced secretion of MMP-9 was markedly reduced by galantamine and camphorol, gently decreased by picetin, and weakly by quercetin (Fig. 1A). It was found that galantine, camperol and picetine were treated in a dose-dependent manner, so that galantine and camphor roll more effectively reduce MMP-9 secretion than picetine (Fig. 1B). Western blotting analysis also demonstrated that galantine, camperol and picetine reduced PMA-induced MMP-9 secretion (Fig. 1C).
<< 실험예Experimental Example 2: 2: 갈란진과Gallandin 캠퍼롤은The camper roll 30 μM 이하의 농도에서는 세포증식에 영향을 주지 않음> No effect on cell proliferation at concentrations below 30 μM>
갈란진과 캠퍼롤에 의해 유도되는 MMP-9 분비 감소가 이들의 세포독성에 기인하는 것인지 조사하기 위해서 본 발명자들은 MTT 분석법을 이용하여 갈란진과 캠퍼롤의 HT-1080 세포증식 효과를 분석하였다. 세포증식은 30 μM 갈란진과 캠퍼롤에 의해서는 영향을 받지 않았고 100 μM 갈란진(79.4 %)과 캠퍼롤(74.3 %)에 의해서 미약하게 저해될 뿐이었다(도 2). 이에 따라 30 μM 갈란진 또는 캠페롤은 세포 생존율에 영향을 주지 않았고 아래 실험을 위한 농도로서 선택하였다.
In order to investigate whether the decrease of MMP-9 secretion induced by gallantin and camphor roll is due to their cytotoxicity, we analyzed the proliferation effect of Galantzin and camphorol on HT-1080 cells using MTT assay. Cell proliferation was not affected by 30 μM galangin and camphor rolls and was only marginally inhibited by 100 μM galantine (79.4%) and camper roll (74.3%) (Figure 2). Thus, 30 μM of either galangin or camphor did not affect cell viability and were selected as concentrations for the following experiments.
<< 실험예Experimental Example 3: 3: 갈란진과Gallandin 캠퍼롤은The camper roll MMPMMP -9 유전자 전사를 저해함>-9 Inhibiting gene transcription>
갈란진과 캠퍼롤이 매개하는 MMP-9 분비 저해가 MMP-9 전사의 억제 때문인지 분석하기 위해서 본 발명자들은 MMP-9 프로모터 서열(pGL3-M9Pwt)에 결합된 루시페라아제 리포터 유전자로 일시적으로 형질 주입시킨 세포를 이용하여 프로모터 분석을 수행하였다. MMP-9 프로모터에 의해 주도된 루시페라아제 활성은 미처리 세포에 비해 PMA로 처리한 세포에서 22 배까지 증가하였다(도 3). 갈란진 또는 캠퍼롤(30 μM)을 세포에 첨가하였더니 대조군의 약 40 %까지 루시페라아제 활성이 감소하였다. 이 결과는 갈란진과 캠퍼롤이 PMA에 의해 유도되는 MMP-9 유전자의 전사 억제를 입증하는 것이다.
In order to analyze whether the inhibition of MMP-9 secretion mediated by galantamine and camphor roll is due to the inhibition of MMP-9 transcription, the present inventors examined whether cells transiently transfected with the luciferase reporter gene bound to the MMP-9 promoter sequence (pGL3-M9Pwt) To perform a promoter analysis. The luciferase activity driven by the MMP-9 promoter increased 22-fold in cells treated with PMA compared to untreated cells (Fig. 3). When galantine or camper roll (30 μM) was added to the cells, the luciferase activity decreased to about 40% of the control. These results demonstrate that galantine and camphor roll inhibit the transcription of the MMP-9 gene induced by PMA.
<< 실험예Experimental Example 4: 4: 갈란진과Gallandin 캠퍼롤은The camper roll NFNF -κB와 -KB and APAP -1 경로를 차단함으로써 By blocking the -1 path PMAPMA 에 의해 유도되는 Induced by MMPMMP -9 -9 발현을 못하게Prevent expression 함> However,
MMP-9 유전자 전사는 대개 미토겐-활성화 단백질 키나아제(MAPK)와 NF-κB 경로에 의해 활성화된다. 본 발명자들은 먼저 갈란진과 캠퍼롤이 MAPK 신호전달경로를 조절하는지 조사하였다. PMA에 의해 유도되는 MAPK의 활성화를 위한 최적의 시점을 결정하기 위해서 다양한 시간 간격 동안 HT-1080 세포를 PMA로 자극하였다. PMA는 30-60 분 후에 ERK와 JNK를 최대한 활성화하고 10-30 분 후에 p38 MAPK를 활성화하면서 MAPK의 인산화를 유도하였다(도 4A). 갈란진 또는 캠퍼롤과 함께 세포의 전-배양은 PMA에 의해 유도되는 ERK1/2와 p38 MAPK 인산화에 영향을 주지 않는바, 이는 MMP-9 분비를 유도하지 않는 고시페틴 처리와 유사하다. 그러나 갈란진과 캠퍼롤은 PMA에 의해 유도되는 JNK 인산화를 현저하게 감소시켰다(도 4B).MMP-9 gene transcription is usually activated by mitogen-activated protein kinase (MAPK) and the NF-κB pathway. The present inventors first investigated whether the galangin and camphor rolls regulate MAPK signaling pathways. HT-1080 cells were stimulated with PMA at various time intervals to determine the optimal time point for PMA-induced MAPK activation. PMA stimulated phosphorylation of MAPK while activating p38 MAPK 10-30 min after maximally activating ERK and JNK 30-60 min (Fig. 4A). Pre-incubation of cells with either galantine or camphor roll does not affect PMA-induced ERK1 / 2 and p38 MAPK phosphorylation, similar to gestoprotein treatment, which does not induce MMP-9 secretion. However, galantine and camphor roll significantly reduced PMA-induced JNK phosphorylation (Fig. 4B).
이러한 결과를 확인한 후, 본 발명자들은 갈란진과 캠퍼롤이 NF-κB 신호전달경로를 제어하는지 조사하였다. 기대한 바대로, PMA 처리는 HT-1080 세포에서 IκBα 인산화를 일시적으로 증가시키고 IκBα 농도를 감소시켰다(도 5A). 흥미롭게도 갈란진과 캠퍼롤은 IκBα 인산화를 현저하게 감소시켰고 이에 따라 IκBα 농도 증가가 수반되었다(도 5B). 종합하면, 이들 결과는 갈란진과 캠퍼롤이 NF-κB 활성화를 방해하고 정도는 덜 하지만 JNK 활성화를 저해하여 AP-1 활성화를 감소시킴으로써 PMA에 의해 유도되는 MMP-9 발현을 감소시킨다는 것을 시사하고 있다.
After confirming these results, the present inventors investigated whether the galangin and camphor roll controls the NF-κB signaling pathway. As expected, PMA treatment temporarily increased IκBα phosphorylation and decreased IκBα concentration in HT-1080 cells (FIG. 5A). Interestingly, gallantine and camphor rolls markedly decreased IκBα phosphorylation and consequently increased IκBα concentration (FIG. 5B). Taken together, these results suggest that galantine and camphorol interfere with NF-κB activation and, to a lesser extent, inhibit JNK activation, thereby reducing AP-1 activation and thereby reducing PMA-induced MMP-9 expression .
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments, but, on the contrary, is intended to cover various modifications and equivalent arrangements included within the spirit and scope of the appended claims. It is natural.
Claims (17)
A pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation, which comprises any one of these, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising any one of gallanzin or camphorol as a flavonoid.
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어나 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 NF-KB 또는 AP-1의 활성화를 저해함으로써, PMA에 의해 유도되는 MMP-9의 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
Characterized by inhibiting the expression of MMP-9 induced by PMA by inhibiting the activation of NF-KB or AP-1, or a mixture thereof, either of the galangan or the camphor roll, or an anti- And a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of inflammation.
상기 치료 또는 예방용 약학 조성물에 의해 항노화 효과가 달성되는 질환은 피부노화 또는 심장노화인 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
The pharmaceutical composition for the treatment or prevention of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation, wherein the disease in which the anti-aging effect is achieved by the pharmaceutical composition for treatment or prevention is skin aging or cardiac aging.
상기 치료 또는 예방용 약학 조성물에 의해 항암 효과가 달성되는 질환은 갑상선암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 간암, 전립선암 및 췌장암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
The disease in which the anticancer effect is achieved by the pharmaceutical composition for treatment or prevention is any one or more selected from the group consisting of thyroid cancer, stomach cancer, colon cancer, lung cancer, breast cancer, liver cancer, prostate cancer and pancreatic cancer. And a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of inflammation.
상기 치료 또는 예방용 약학 조성물에 의해 항염증 효과가 달성되는 질환은 류마티스 관절염, 골관절염, 동맥경화, 천식, 및 궤양으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
The disease in which the anti-inflammatory effect is achieved by the pharmaceutical composition for treatment or prevention is any one or more selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, osteoarthritis, arteriosclerosis, asthma, and ulcer. ≪ / RTI >
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 0.1-100 μM로 포함되는 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
The pharmaceutical composition for the treatment or prevention of the anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation, wherein the galangine or the camper roll, or a mixture thereof, is contained at 0.1-100 μM.
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 0.1-30 μM로 포함되는 것을 특징으로 하는 항노화, 항암 및 항염증의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis of anti-aging, anti-cancer and anti-inflammation, characterized in that it is contained in the range of 0.1 to 30 μM.
A tablet characterized by comprising a pharmaceutical composition according to claim 1.
A capsule preparation comprising the pharmaceutical composition according to claim 1.
A syrup formulation comprising a pharmaceutical composition according to claim 1.
A coating agent comprising a pharmaceutical composition according to claim 1.
A patch agent comprising the pharmaceutical composition according to claim 1.
상기 발현 억제제는 생체외(in vitro)에서 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제.
A substrate metalloproteinase MMP-9 expression inhibitor comprising any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, or a mixture thereof,
Wherein the expression inhibitor inhibits the expression of the matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro. The inhibitor of MMP-9 expression of the matrix metalloproteinase.
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어나 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 NF-KB 또는 AP-1의 활성화를 저해함으로써, PMA에 의해 유도되는 MMP-9의 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는 기질 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제.
14. The method of claim 13,
Characterized in that the said protease inhibits the expression of MMP-9 induced by PMA by inhibiting the activation of NF-KB or AP-1, or one or both of said galangin or camphor rolls, MMP-9 expression inhibitor.
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 0.1-100 μM로 포함되는 것을 특징으로 하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제.
14. The method of claim 13,
Wherein said galangin or camphor roll, or a mixture thereof, is contained in an amount of 0.1-100 [mu] M.
상기 갈란진 또는 캠퍼롤 중 어느 하나이거나, 또는 이들의 혼합물은 0.1-30 μM로 포함되는 것을 특징으로 하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9 발현 억제제.
14. The method of claim 13,
Wherein the galangin or camphor roll, or a mixture thereof, is contained in an amount of 0.1 to 30 [mu] M.
를 포함하는 기질 금속 단백질 분해효소 MMP-9의 발현을 억제하는 방법.
1) inhibiting the expression of matrix metalloproteinase MMP-9 in vitro, by treating a substance comprising or consisting of any one of gallanzine or camphorol, which is a flavonoid, in vitro;
≪ / RTI > comprising inhibiting the expression of the substrate metalloproteinase MMP-9.
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| KR1020150061266A KR101791226B1 (en) | 2015-04-30 | 2015-04-30 | composition comprising galangin or kaempferol for treating or preventing of anti-aging |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109453160A (en) * | 2018-11-27 | 2019-03-12 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | Application of the Kaempferol in osteoarthritis treatment drug |
| KR20200069616A (en) * | 2018-12-07 | 2020-06-17 | 제주대학교 산학협력단 | Anti-inflammatory composition comprising Prunus pendula for. ascendens (Makino) Ohwi |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| KR100946789B1 (en) | 2008-01-15 | 2010-03-11 | 강원대학교산학협력단 | Cognitive Enhancing Agent Comprising Alpinia officinarum Extract as an Active Ingredient |
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|---|---|---|---|---|
| WO2014095289A2 (en) * | 2012-12-20 | 2014-06-26 | Unilever Plc | Method of treating hair ageing |
-
2015
- 2015-04-30 KR KR1020150061266A patent/KR101791226B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (1)
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| KR101791226B1 (en) | 2017-10-27 |
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