KR20160114303A - Cosmetic composition containing fermentative extract of hippocampus coronatus as active ingredient - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 해마 발효 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising a hippocampus fermented extract as an active ingredient.
사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유 라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. A variety of physical and chemical changes occur in human skin during the aging process. The cause of this phenomenon is divided into intrinsic aging and photo-aging. Free radicals can be caused by activation of ultraviolet rays, stress, disease state, environmental factors, wounds, and aging. When such state is deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, And aging.
좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major components of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging.
특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.In particular, the oxidation of proteins can cause collagen (collagen), hyaluronic acid, elastin, proteoglycan, fibronectin, and the like that are severely hyperinflammatory reaction and skin elasticity If this gets worse, DNA mutations can lead to mutations, cancer, and immune deficiency.
그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. Therefore, it is necessary to protect the cell membrane by destroying the free radicals mediated by free radicals, ultraviolet rays, and inflammation that occur during the metabolism of the body, and to regenerate already damaged cells by active metabolism, Can quickly recover and maintain healthy skin.
노화에는 이러한 자유라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. Aging involves not only these free radicals, but also enzyme called matrix metalloproteinase (MMP), a collagenase. That is, synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen in vivo are appropriately controlled, but collagen synthesis is reduced as aging progresses, and expression of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades collagen, is promoted, And the wrinkles are formed. In addition, these degrading enzymes may be activated by ultraviolet irradiation.
그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.Therefore, there is a demand for development of a substance capable of modulating MMP expression induced in the cell or inhibiting its activity. Until now, the raw materials used as cosmetic materials mostly inhibited only the enzyme activity. Therefore, we tried to control the amount and activity of MMP expression induced by intracellular natural aging and photoaging.
한편, 색소 침착에 의한 피부 변화가 생긴다. 피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은, 부분 또는 전체적인 색소 침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강 상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소 침착이다.On the other hand, skin changes due to pigment deposition occur. The factors that determine skin color are basically the partial or total pigmentation such as stain, freckle and tanning due to ultraviolet exposure, and the distribution of acne and scars and keratin Blood circulation, stress, and health. The most important factor among these factors is pigmentation.
피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 이 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. Melanin, melanoid, carotene and hemoglobin are the most important factors affecting skin color. Among them, melanin is the most important factor affecting the biosynthesis of melanin.
멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대 흡수 파장이 없고 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성 산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조 내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.Melanin absorbs or scatters ultraviolet light and plays a major role in preventing damage to the skin from ultraviolet rays. It does not have a specific maximum absorption wavelength and absorbs light in all areas. In addition, it has excellent ability to remove reactive oxygen species, sometimes melanin itself generates active oxygen, and other substances are reduced or oxidized by catechol or quinone in the melanin structure, and melanin itself shows free radical properties Pray.
멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라닌 형성 세포의 멜라노좀에서 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화 과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색(eumelanin)의 중합체로 형성된다. The biosynthesis of melanin begins with the conversion of tyrosine, an amino acid, into melanosomes of melanocyte-forming melanosomes by tyrosinase and conversion to dihydroxy phenylalanine, followed by a series of oxidation processes to form pheomelanin, eumelanin.
이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 각질 세포의 식세포 작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 각질 세포의 핵 주변에 축적된다.This biosynthesis process is carried out in a special form of melanocyte in the brown intracellular organelle. The melanomas, including melanin granules, migrate from the nucleus to the tip of the dendritic process, and migrate into the cytoplasm by phagocytosis of keratinocytes. It accumulates around the nucleus.
멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 각질 세포로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포내 조절인자인 싸이토카인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다.The synthesis of melanin, the number of melanosomes, and the migration to keratinocytes in the periphery are partially affected by hormones and ultraviolet rays, and are primarily affected by genetics. In addition, it is known that interleukins, prostaglandins, histamines, and the like are involved in the expression of tyrosinase and cytokine, which is an intracellular regulator involved in the synthesis and transmission of melanin, and metal ions such as copper, zinc and iron.
이미 아스코르빈산 (일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논 (일본특개평-192062), 코직산 (일본특개소 56-7710), 알부틴 (일본특개평 4-93150) 및 일부의 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 낮으므로 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 그리고 상기한 물질들은 그 티로시나제 억제 효과가 입증되었으나 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. 따라서 생체 레벨과 유사한 흑색종 세포 배양에 의한 저해효과 평가가 요구되고 있는 실정이다. 또한, 하이드로퀴논은 발암성 물질로 규정되어 화장품에서는 그 사용이 금지 또는 제한되고 있다. 코직산과 아스코르빈산은 매우 불안정한 물질이다. 상기 성분들을 소량 함유한 화장료는 실온에서 수 주일동안 보관하면 갈변 현상이 발생한다.(Japanese Patent Laid-open No. 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid-Open No. 192062), kojic acid (Japanese Patent Laid-open No. 56-7710), arbutin Activity, and is used as a whitening cosmetic. However, since it is low in stability in cosmetic formulations, its use is restricted due to decomposition and coloring, generation of odor, efficacy at a living body level, unclear effect and safety problem. These substances have proved their tyrosinase inhibitory effect, but their effect is lower in experiments similar to actual living body level. Therefore, it is required to evaluate the inhibitory effect by the melanoma cell culture similar to the biological level. Hydroquinone is also defined as a carcinogenic substance and its use in cosmetics is prohibited or restricted. Kojic acid and ascorbic acid are very unstable substances. When a cosmetic containing a small amount of the above components is kept at room temperature for several weeks, browning occurs.
이러한 여러 가지 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다.In order to solve these various problems, recently, many cosmetics using natural products have been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. Natural materials are not only less harmful to the skin, but also have increased their value as a raw material for cosmetics due to the recent popularity of cosmetics using natural materials.
한국 공개특허 제10-2009-0043656호는 해마 추출물을 함유한 항산화용 조성물에 관한 것으로, 해마 추출물의 DPPH 라디칼, 히드록실 라디칼, 슈퍼옥사이드 라디칼 및 페록실 라디칼 제거 활성을 개시하고 있다.Korean Patent Laid-Open No. 10-2009-0043656 discloses an antioxidative composition containing a hippocampus extract and discloses DPPH radical, hydroxyl radical, superoxide radical and peroxyl radical removal activity of hippocampus extract.
이에, 본 발명자들은 해마 발효 추출물의 화장품으로의 응용 가능성을 확인하기 위해 해마 발효 추출물을 제조하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 멜라닌 생성억제효과, 항산화효과, 보습효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 피부 항노화 효과를 측정한 결과, 그 효능이 매우 우수하므로 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.Accordingly, the inventors of the present invention prepared a hippocampus fermented extract to confirm the possibility of application of the hippocampal fermentation extract as a cosmetic product, and found that the effect of inhibiting MMP-1 production, collagen biosynthesis, melanin production inhibition, antioxidant effect, , Skin elasticity improvement effect, and skin antiaging effect. As a result, it was found that the efficacy of cosmetics can be expected.
본 발명의 목적은 해마 발효 추출물을 함유하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 멜라닌 생성억제효과, 항산화 효과, 보습효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 피부 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition containing a hippocampus fermentation extract and exhibiting an effect of inhibiting MMP-1 production, collagen biosynthesis effect, melanin formation inhibitory effect, antioxidative effect, moisturizing effect, skin wrinkle improving effect, skin elasticity improving effect, Compositions.
본 발명의 다른 목적은 상기 해마 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 이용하는 화장 방법을 제공하는데 있다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic method using the cosmetic composition containing the hippocampus fermentation extract.
따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 해마 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 의해 달성된다. Accordingly, the object of the present invention is achieved by a cosmetic composition comprising an extract of fermented hippocampus as an active ingredient.
또한 바람직하게는, 상기 해마 발효 추출물은 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae ATCC 18824)로 발효시켜 얻은 것일 수 있다.Also preferably, the hippocampal fermentation extract is Saccharomyces cerevisiae cerevisiae ATCC 18824).
또한, 바람직하게는, 상기 유산균은 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물로 발효시켜 얻은 것일 수 있다.Preferably, the lactic acid bacteria may be obtained by fermentation with a microorganism selected from the group consisting of Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Leuconostock, Pediococcus, Lactococcus, and mixtures thereof.
또한, 바람직하게는, 상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물로 발효시켜 얻은 것일 수 있다.Preferably, the Bacillus subtilis is selected from the group consisting of Bacillus subtilis, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus polyfermenticus, Bacillus meencentericus, and mixtures thereof. Which is obtained by fermentation with a microorganism.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부주름 개선용인 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is for improving skin wrinkles.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용인 것을 특징으로 한다.Further, preferably, the cosmetic composition is characterized by being for skin whitening.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is characterized by being for antioxidation.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 보습용인 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is characterized in that it is for moisturizing.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선용인 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is for improving skin elasticity.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부노화방지용인 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is characterized in that it is for preventing skin aging.
또한, 바람직하게는, 상기 해마 발효 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.Preferably, the hippocampal fermentation extract is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 멜라닌 생성억제효과, 보습효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과, 항산화 효과, 피부 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.Preferably, the cosmetic composition is a cosmetic composition exhibiting an effect of inhibiting MMP-1 production, collagen biosynthesis effect, melanin formation inhibitory effect, moisturizing effect, skin wrinkle improving effect, skin elasticity improving effect, .
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.Preferably, the cosmetic composition is a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, cleansing oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray Lt; RTI ID = 0.0 > of: < / RTI >
본 발명에 따른 해마 발효 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과(실험예 1), 콜라겐 합성 증진 효과(실험예 2), 멜라닌 생성 억제 효과(실험예 3), 항산화효과(실험예 4), 보습 효과(실험예 5), 주름개선 효과(실험예 6) 및 피부 탄력 개선 효과(실험예 7)를 갖는다.The hippocampus fermentation extract according to the present invention was found to be effective in inhibiting MMP-1 production (Experimental Example 1), collagen synthesis enhancing effect (Experimental Example 2), melanin formation inhibitory effect (Experimental Example 3), antioxidative effect (Experimental Example 4) (Experimental Example 5), wrinkle improving effect (Experimental Example 6) and skin elasticity improving effect (Experimental Example 7).
본 발명의 화장료 조성물 중 유효 성분으로 사용되는 해마는 영문표기가 학명으로는 Hippocampus coronatus로 표기되고 있다. 해마는 실고기과에 속하는 경골어류로서 세계적으로 36종이 서식하는 것으로 알려져 있다. 몸길이 6∼10.5cm이다. 눈의 가시가 뚜렷하고 등지느러미의 기저(base:기관 또는 부속기관과 몸통과 연결되는 부위) 길이가 매우 짧은 것이 가장 큰 특징이다. 가늘고 긴 주둥이는 눈 뒤쪽의 머리 길이와 같고 머리가 다른 어류에 비하여 거의 직각으로 구부러져 있으며 몸은 많은 골판으로 구성되어 있다. 머리에는 관처럼 생긴 돌기가 뚜렷하게 튀어나와 있고 목에 해당되는 부분에 돌기 모양의 갈고리가 있다. 해안 가까이에 서식한다. 한국·일본 등 아열대 해역에 분포한다.The hippocampus used as an active ingredient in the cosmetic composition of the present invention is represented by Hippocampus coronatus . The hippocampus is a tibia fish belonging to the genus Meat and is known to live in 36 species worldwide. Body length is 6 ~ 10.5cm. The most prominent feature is that the thorns of the eyes are clear and the base of the dorsal fin (base: the part connected to the organ or the attachment organs and body) is very short. The elongated snout has the same length as the head of the back of the eye. The head is bent at almost right angles to other fishes and the body is composed of many corrugated plates. The head has a tube-like protrusion protruding clearly and a protruding hook in the neck. It lives near the coast. It is distributed in sub-tropical waters such as Korea and Japan.
본 발명의 해마는 깨끗이 세척하여 건조시킨 해마를 100 ~ 500 메쉬로 미세하게 분쇄한 것을 사용하며, 해마의 다양한 기관 또는 부분을 사용한다.The hippocampus of the present invention is a hippocampus obtained by finely grinding a hippocampus cleaned and dried to 100 to 500 mesh, and uses various organs or parts of the hippocampus.
본 발명에 있어서, 해마 발효 추출물은 해마 추출물을 발효하여 얻은 것을 의미한다. 해마 추출물은 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1 ~ 4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법, (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법, 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다.In the present invention, the hippocampus fermentation extract means fermented hippocampus extract. The hippopotamus extract may be prepared using conventional solvents under the conditions of ordinary temperature and pressure, but preferably is (a) water, anhydrous or lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms (e.g., methanol, ethanol, Propanol and butanol), a solvent selected from the group consisting of propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, (B) decompression by carbon dioxide, supercritical extraction by high temperature, or (c) extraction by ultrasonic extraction.
또한, 통상의 미생물 배양 배지에 상기 해마 추출물을 첨가한 것을 배양배지로 하고, 여기에 미생물을 접종하여 발효시켜 얻은 해마 발효 추출물을 사용한다.In addition, a hippocampus fermentation extract obtained by fermenting microbes by inoculation with a hippocampus extract added to an ordinary microorganism culture medium is used as a culture medium.
본 발명에 따른 해마 발효 추출물은 배양 배지에 해마 추출물을 1 ~ 30 중량%로 첨가하고, 여기에 발효 미생물을 100,000 ~ 10,000,000 cfu/L의 양으로 접종한 뒤 20 ~ 40℃, 바람직하게는 25 ~ 35℃에서 12 ~ 168시간, 바람직하게는 12 ~ 72시간 동안 배양하여 얻을 수 있다. The hippocampus fermented extract according to the present invention is prepared by adding 1 to 30% by weight of a hippocampus extract to a culture medium, inoculating the fermenting microorganism in an amount of 100,000 to 10,000,000 cfu / L, Followed by culturing at 35 占 폚 for 12 to 168 hours, preferably 12 to 72 hours.
발효에 사용되는 배양배지에서 해마 추출물의 양은 1 ~ 30 중량%를 첨가하여 사용할 수 있다. 해마 추출물이 1 중량% 미만이면 미생물에 의한 발효액의 양이 적어 효과가 나타나기 어렵고, 30 중량%를 초과하면 해마 추출물이 배지에 잘 녹지 않아 발효 효율이 떨어진다. The amount of hippocampal extract in the culture medium used for fermentation may be 1 to 30% by weight. If the amount of the horsetail extract is less than 1% by weight, the amount of the fermentation broth due to the microorganism is small and the effect is difficult to be exhibited. When the amount exceeds 30% by weight, the horsetail extract does not sufficiently dissolve in the medium,
또한, 본 발명에서 사용하는 발효 미생물로는 효모, 버섯균사체, 유산균류, 바실러스 속 균류로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 사카로마이세스(Saccharomyces)속을 사용하고, 더욱 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae ATCC 18824)를 사용한다.The fermentation microorganism used in the present invention may be one or more selected from the group consisting of yeast, mushroom mycelium, lactic acid bacteria, and Bacillus sp. Fungi, preferably Saccharomyces sp. More preferably, Saccharomyces cerevisiae ATCC 18824 is used.
본 발명에서 사용될 수 있는 유산균은 바람직하게는 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도 박테리움, 류코노스톡, 페디오 코커스, 락토 코커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 락토바실러스(Lactobacillus)이다. 락토바실러스 중에서도 본 발명의 안개나무를 발효시키는데 사용하기에 가장 바람직한 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)이다. The lactic acid bacteria that can be used in the present invention preferably include Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Leuconostock, Pediococcus, Lactococcus and mixtures thereof, most preferably Lactobacillus . Among lactobacilli, the most preferred lactic acid bacterium for use in fermenting the mist tree of the present invention is Lactobacillus plantarum.
또한 본 발명에서 사용될수 있는 바실러스균은 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)이다. Bacillus bacteria that can be used in the present invention preferably include Bacillus subtilis, Bacillus fumilis, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus polyfermenticus, Bacillus mesentericus, and mixtures thereof And most preferably Bacillus subtilis.
발효 배양 후, 배양액을 원심분리하여 상등액만을 분리하여 해마 발효 추출물을 얻는다. 이렇게 해서 얻어진 발효 추출물은 그대로 사용하거나, 또는 발효액을 건조하여 사용한다. 건조하여 사용 시에는 건조중량의 1 ~ 20배의 추출용매를 첨가하여 4 ~ 30℃에서 3 ~ 20일간 침적시켜 유효성분을 추출한다. 추출 용매에 의한 추출은 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 추출용매도 이용될 수 있다.After fermentation, the culture broth is centrifuged to separate only the supernatant to obtain a hippocampus fermented extract. The fermented extract thus obtained is used as it is, or the fermentation broth is dried and used. When the product is dried and used, an extraction solvent of 1 to 20 times the dry weight is added and the product is immersed at 4 to 30 ° C for 3 to 20 days to extract an active ingredient. Extraction with an extraction solvent may be carried out using any extraction solvent conventionally used in the art.
상기 추출물을 와트만(whatman)#10 여과지로 여과하고, 이 여과액을 0.25 um의 여과지를 이용하여 최종 여과한 뒤 60℃이하에서 감압농축 동결건조하여, 이 감압농축물 또는 동결건조물을 0.001 ~ 70 중량% 함유되도록 추출용매를 사용하여 발효 추출물을 최종 획득한다.The extract was filtered through Whatman # 10 filter paper, and the filtrate was finally filtered using 0.25 μm filter paper. The filtrate was concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 60 ° C or lower to obtain a filtrate, The fermentation extract is finally obtained using an extraction solvent such that it contains 70% by weight.
본 발명에 따르면, 상기 해마 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 해마 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다. According to the present invention, the hippocampus fermentation extract is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, more preferably, the hippocampus fermentation extract is contained in an amount of 0.01 to 10% by weight based on the total weight of the cosmetic composition . When the content of the extract is less than 0.0001% by weight, the effect of improving the skin is not exhibited. When the content of the extract is more than 30.0% by weight, the degree of improvement of the skin against the increase of the content is insignificant, It is not even.
따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 해마 발효 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 콜라겐 합성 증진 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 항산화 효과, 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 미백 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 보습효과, 피부노화방지 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.Therefore, the cosmetic composition of the present invention comprising the hippocampus fermentation extract having various functions can be effectively used as a cosmetic composition for preventing or treating skin diseases, which has excellent collagen synthesis promoting effect, MMP-1 production inhibiting effect, antioxidant effect, skin wrinkle improving effect, skin elasticity improving effect, A production-inhibiting effect, a moisturizing effect, and a skin aging-preventing effect.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.The ingredients contained in the cosmetic composition of the present invention may contain, as an active ingredient, the ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the above-mentioned effective ingredients, and may contain conventional ingredients such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, Supplements, and carriers.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art and can be used in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, , Oil, powdered foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be manufactured in the form of a soft lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether Alkylamido betaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.When the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, washed or rinsed with water. The surfactant-containing cleansing formulation may be a cleansing foam, a cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack. The surfactant-free cleansing formulation may be a cleansing cream, , Cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel, but is not limited thereto.
한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.On the other hand, the cosmetic process of the present invention refers to all cosmetic processes using the cosmetic composition of the present invention. That is, all methods known in the art using a cosmetic composition belong to the cosmetic method of the present invention.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention. The cosmetic composition according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and may be used in a number of times depending on the skin condition or taste of the user.
본 발명의 해마 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 보습효과, 피부 주름 개선 및 탄력 개선 효과를 얻을 수 있다.When the cosmetic composition containing the hippocampal fermentation extract of the present invention is used, it is possible to obtain an effect of inhibiting MMP-1 production, an effect of promoting collagen synthesis, an effect of inhibiting melanin formation, a moisturizing effect, .
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention .
제조예Manufacturing example 1 내지 2. 해마 발효 추출물 제조 1 to 2. Preparation of hippocampal fermentation extract
세척하여 음건한 해마를 분쇄한 뒤 70% (v/v) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 해마 추출물을 얻었다.The horses were washed and shredded, and then refluxed for 3 hours with 70% (v / v) aqueous ethanol solution for 5 hours. After cooling, the mixture was filtered through Whatman # 4 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 50 캜 or below and lyophilized to obtain a hippocampus extract.
효모용 미생물 배양배지는 YPD 배지(Difco, USA)를 사용하였고, 유산균용 배양배지는 Lactobacillus MRS Broth (DIFCO, USA)를 사용하였으며 여기에 각각 상기 해마 추출물을 10 중량% 첨가하여 제조하였다.YPD medium (Difco, USA) was used as a yeast culture medium, and Lactobacillus MRS broth (DIFCO, USA) was used as a culture medium for lactic acid bacteria.
상기 YPD 배지에 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae ATCC 18824)를 10,000,000 cfu로 접종한 후 30℃에서 72시간 동안 배양하였다.Three saccharide in my process to the YPD medium Levy jiae (Saccharomyces cerevisiae ATCC 18824) were inoculated at 10,000,000 cfu and cultured at 30 ° C for 72 hours.
배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 해마 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(v/v)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효 추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 해마 발효 추출물(제조예1)을 얻었다.After culturing, the culture broth was centrifuged to remove the bacteria to obtain a hippocampus fermented product. Ethanol was added to the final 70% (v / v), refluxed for 3 hours for 5 hours, Filtered through Whatman # 4 filter paper. The filtered fermented extract was filtered through a 0.25 μm filter paper, and the filtrate was concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 60 ° C or lower to obtain a hippocampus fermentation extract (Preparation Example 1).
또한, Lactobacillus MRS 배지에 해마 추출물을 10 중량% 첨가하여 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ATCC 10012)를 10,000,000 cfu로 접종한 후 37℃에서 72시간 동안 배양하였다. Lactobacillus plantarum ATCC 10012 was inoculated at 10,000,000 cfu and cultured at 37 ° C for 72 hours.
배양 후, 배양액을 원심분리하여 균을 제거하여 해마 발효물을 얻은 뒤 여기에 에탄올을 최종 70%(V/V)가 되도록 첨가한 뒤 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 발효 추출물을 다시 0.25 um 여과지로 여과한 후 이를 60℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 해마 발효 추출물(제조예 2)을 얻었다.
After culturing, the culture was centrifuged to remove the bacteria to obtain a hippocampus fermented product. Ethanol was added to the final 70% (V / V), refluxed for 3 hours for 5 hours, Filtered through Whatman # 4 filter paper. The filtered fermented extract was filtered through a 0.25 μm filter paper, and the filtrate was concentrated under reduced pressure at 60 ° C. or below and lyophilized to obtain a hippocampus fermentation extract (Preparation Example 2).
비교제조예Comparative Manufacturing Example 1. 해마 용매 추출물 1. Hippocampus solvent extract
해마 발효 추출물의 비교예로서 해마 추출물을 제조하였다. 해마 추출물은 세척하여 음건한 해마를 분쇄한 뒤, 70% (v/v) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.
As a comparative example of hippocampus fermentation extract, hippocampus extract was prepared. The hippopotamus extract was washed, shredded horsetail, and then refluxed for 3 hours with 70% (v / v) aqueous ethanol solution for 5 hours. After cooling, it was filtered with Whatman # 4 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 50 DEG C or lower.
실험예Experimental Example 1. 해마 발효 추출물의 1. Fermented sea horse extract MMPMMP -1 생성 억제 효과-1 production inhibitory effect
본 실험예 1은 제조예 1 내지 비교제조예 1에서 수득한 해마 발효 추출물이 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정하였다.In Experimental Example 1, the effect of inhibiting the production of collagenase, MMP-1, from the hippocampus fermentation extracts obtained in Preparation Examples 1 to 1 was measured.
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1내지 2의 해마 발효 추출물 또는 비교제조예 1에 의해 제조된 해마 추출물을을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 해마 발효 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.Human normal skin cells were inoculated into a 48-well microplate (Nunc, Denmark) at a concentration of 1 × 10 6 cells per well and cultured in DMEM medium (Sigma, USA) and 37 ° C Serum-free DMEM medium supplemented with the hippocampus fermentation extracts of Preparation Examples 1 and 2 or the hippocampus extract prepared according to Comparative Preparation Example 1 and the control group were added to serum-free DMEM medium containing no hippocampal fermentation extract Lt; / RTI > for 48 hours.
배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
After the incubation, the supernatant of each well was collected and the amount (ng / ml) of the newly synthesized MMP-1 was measured using an MMP-1 assay kit (Amersham, USA) The inhibition rate (%) was calculated and the results are shown in Table 1.
상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 해마 발효 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1의 생성을 억제(MMP-1 활성 억제)시키는 것을 확인할 수 있었다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(200nM)와 본원발명의 해마 발효 추출물의 농도(500ppm) 차이를 감안해도, 여러 종류의 물질이 혼합된 추출물 수준에서 상기와 같은 정도의 MMP-1 억제율을 나타낸 것은 본원발명의 해마 발효 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 보여준다.
As shown in the results of Table 1, it was confirmed that the hippocampal fermentation extract of the present invention inhibits MMP-1 production (inhibits MMP-1 activity) in a concentration-dependent manner. Considering the difference between the concentration of TGF-beta (200 nM), which is a substance having an inhibitory effect on MMP-1 production, and the concentration of hippocampus fermentation extract (500 ppm) of the present invention, , Indicating that the hippocampal fermentation extract of the present invention has an inhibitory effect on the production of MMP-1.
실험예Experimental Example 2. 해마 발효 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과 2. Enhancement of collagen synthesis in hippocampus fermented extract
인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1내지 2에 의해 제조된 해마 발효 추출물 또는 비교제조예 1에 의해 제조된 해마 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 해마 발효 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
Human normal epithelial cells, fibroblasts, were inoculated into 48-well microplates at a density of 1 x 10 6 cells per well and cultured in DMEM medium for 24 hours. The serum-free DMEM medium supplemented with the hippocampus fermentation extract prepared in Preparation Examples 1 and 2 or the hippocampus extract prepared in Comparative Preparation Example 1 and the control group were added for 48 hours in serum-free DMEM medium containing no hippocampal fermentation extract Lt; / RTI > After the incubation, the supernatant of each well was collected, and the amount of procollagen type I C-peptide (PICP) was measured using a collagen kit (Takara, Japan) and converted into ng / Respectively. Collagen biosynthesis increase rate (%) was calculated according to the following formula (2), and the results are shown in Table 2.
표 2에 따르면, 본 발명의 제조예 1 내지 2에 의해 제조된 해마 발효 추출물의 콜라겐 생합성율이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 제조예 1에 의해 제조된 발효 추출물의 효과가 비교 제조예 1 보다 효과가 더 좋은 것을 확인하였다.
According to Table 2, it was confirmed that the collagen biosynthesis rate of the hippocampus fermentation extract prepared in Production Examples 1 and 2 of the present invention increased in a concentration-dependent manner. In particular, it was confirmed that the effect of the fermentation extract prepared in Preparation Example 1 was better than that of Comparative Preparation Example 1. [
실험예Experimental Example 3: 해마 발효 추출물의 B16F1 멜라닌형성세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 3: Inhibitory effect of hyaline fermentation extract on melanin formation by B16F1 melanocyte-forming cells
본 실험예 3는 상기 제조예 1 내지 2에서 수득한 해마 발효 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다. 본 실험예 3에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다. Experimental Example 3 was conducted to examine the whitening effect of the horseradish fermentation extracts obtained in Production Examples 1 and 2 to determine the inhibitory effect on melanin formation on B16F1 melanocyte-forming cells. The B16F1 melanin-forming cell used in Experimental Example 3 is a cell strain derived from a mouse, and is a cell that secretes a melanin pigment called melanin.
이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다.During the artificial culture of these cells, samples were treated to compare the degree of reduction of melanin pigment. The B16F1 melanin-forming cells used in this experiment were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC).
B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 행하였다. Melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanin-forming cells was measured as follows.
B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 X 105 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 제조예 1 내지 비교 제조예 1을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율을 (%)은 하기 수학식 3에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 기재하였다. B16F1 melanocyte-forming cells were divided into 6-well plates at a concentration of 2 X 10 5 per well, treated with Preparation 1 to Comparative Preparation Example 1 at a concentration that did not induce toxicity after cells were adhered and cultured for 72 hours. After incubation for 72 hours, the cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was carried out with a slight modification of the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). Cell pellet was washed once with PBS, and 1 ml of homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1N NaOH (10% DMSO) was added to the cell filtrate to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm with a microplate reader. The inhibition rate (%) of melanin formation was measured. Melanin formation inhibition rate (%) of B16F1 melanin-forming cells was calculated by the following equation (3), and the results are shown in Table 3. [
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Amount of melanin in the well to which the sample was added
상기 표 3의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 제조예 1내지 2에 의해 제조된 정제된 해마 발효 추출물은 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하는 것을 알 수 있었다. 또한 제조예 1의 멜라닌 생성 저해효과는 비교제조예 1보다 우수함을 확인할 수 있었다.
As can be seen from the results of Table 3, the purified hippocampus fermentation extract prepared according to Production Examples 1 and 2 of the present invention significantly inhibited melanogenesis in B16F1 melanin-forming cells. It was also confirmed that the melanin formation inhibitory effect of Production Example 1 is superior to Comparative Production Example 1.
실험예Experimental Example 4 : 해마 발효 추출물의 항산화 효과 4: Antioxidative effect of horseradish fermented extract
제조예 1 내지 2에서 수득한 해마 발효 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율(%)을 측정한다. 사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다. The antioxidative effect (free radical scavenging ratio) was measured using the DPPH method in order to measure the antioxidative effect of the hippocampus fermentation extracts obtained in Production Examples 1 and 2. The DPPH method measures the antioxidative effect by reducing power using a free radical called DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl) free radical. The degree of reduction of the absorbance by reduction of DPPH by the test substance is compared with the absorbance of the blank test solution, and the free radical scavenging ratio (%) is measured at a wavelength of 560 nm. As a reagent used, 61.88 mg of a 0.1 mM solution of 2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW = 618.76) was dissolved in methanol to make 100 ml.
측정방법으로서 As a measuring method
① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ml에 시료 용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다. (1) Add 0.15 ml of the sample solution to 0.15 ml of 0.1 mM DPPH solution in a 96-well plate, stir rapidly, and start culturing at 25 ° C for 10 minutes.
② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. ② Measure the absorbance St at 560 nm thereafter.
③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다. (3) The blank of the sample solution is measured by the same procedure as that for measuring the absorbance St except that methanol is used instead of the 0.1 mM DPPH solution.
④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다. (4) The absorbance Bt is measured by operating in the same manner as in the measurement of the absorbance St except that distilled water is used instead of the sample solution.
⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. (5) Blank of the blank test is carried out in the same manner as in the measurement of the absorbance St except that methanol is used instead of the 0.1 mM DPPH solution and distilled water is used instead of the sample solution, and the absorbance Bo is measured.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 수학식 4에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 4와 같다.The results of the free radical scavenging ratio (%) were calculated by the equation (4), and the results are shown in Table 4 below.
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도St: absorbance at 514 nm after free radical scavenging of the sample solution
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도Bt: Absorbance at 514 nm after free radical scavenging of blank test solution
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도So: the absorbance at 514 nm before the reaction in the absence of free radicals in the sample solution
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도Bo: absorbance at 514 nm before the reaction in the absence of the free radical of the blank test solution
DPPH 자유라디칼을 50% 소거하는데 필요한 시료의 농도인 SC50을 확인한 결과 제조예 1 내지 2에서 항산화 효과를 보였으며 특히 비교 제조예1보다 우수한 효과를 보였다.
SC 50 , which is a concentration of the sample required to remove 50% of the DPPH free radical, was confirmed. As a result, the antioxidative effect was shown in Production Examples 1 and 2, and particularly, it was superior to Comparative Production Example 1.
제형예Formulation Example 1 :해마 발효 추출물을 함유하는 1: containing horseradish fermented extract 화장료Cosmetics 조성물의 제조 Preparation of composition
해마 발효 추출물을 포함하는 화장료는 제조예 1 내지 2의 해마 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 (제형예 1, 2)을 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 해마 발효 추출물 대신에 비교제조예 1의 해마추출물을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 해마발효 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 해마발효 추출물 대신에 주름개선 원료로서 아데노신을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 3), 해마 발효 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 4)을 하기 표 5에 나타내었다.The cosmetic compositions containing the hippocampus fermentation extract were prepared by preparing cosmetic compositions (Formulation Examples 1 and 2) containing the hippocampus fermentation extracts of Preparation Examples 1 and 2, and in order to compare the efficacy, the hippocampus extract of Comparative Preparation Example 1 (Comparative Formulation Example 1), a cosmetic composition containing glycerin and 1,3-butylene glycol as moisturizing agents (Comparative Formulation Example 2) instead of hippocampal fermentation extract, adenosine as a wrinkle improving raw material instead of hippocampal fermentation extract (Comparative Formulation Example 3), and cosmetic composition (Comparative Formulation Example 4) which do not contain the hippocampus fermentation extract or the moisturizing agent are shown in Table 5 below.
(제조예 1)Hippocampus fermented extract
(Production Example 1)
(제조예 2)Hippocampus fermented extract
(Production Example 2)
(비교제조예 1)Sea horse extract
(Comparative Production Example 1)
실험예Experimental Example 5: 해마 발효 추출물의 보습 효과 5: Moisturizing effect of horseradish fermentation extract
상기 제형예 1 내지 2의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹 (A, B, C ,D 및 E)으로 나눈 후, A그룹에는 제형예 1의 화장료 조성물을, B그룹에는 제형예 2의 화장료 조성물을, C그룹에는 비교제형예 1의 화장료 조성물을, D 그룹에는 비교제형예 2의 화장료 조성물을, E 비교제형예 4의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 6에 나타내었다.
The clinical moisturizing effects of the cosmetic compositions of Formulation Examples 1 and 2 were measured as follows. A total of 125 healthy adult men and women who felt skin dryness were divided into 5 groups (A, B, C, D and E) by randomly dividing them into 25 groups, and the cosmetic composition of Formulation Example 1 was classified into Group A , The cosmetic composition of Comparative Formulation Example 1, the cosmetic composition of Comparative Formulation Example 2, and the cosmetic composition of Comparative Composition E of Example E were applied to the facial composition of Formulation Example 2, . The moisturizing effect was evaluated by Corneometer CM 820 (Corage + Khazaka, Germany) for every 2 weeks and after the start of the test. The experimental results are shown in Table 6 below.
상기 표 6에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 2)와 비교하여도 본 발명의 해마 발효 추출물 함유한 화장료(제형예 1, 2)의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다. As shown in Table 6, it was confirmed that the moisturizing effect of the cosmetic compositions (Formulation Examples 1 and 2) containing the hippocampus fermentation extract of the present invention of the present invention was superior to the cosmetic compositions containing other moisturizing agents (Comparative Formulation Example 2) .
실험예Experimental Example 6. 해마 발효 추출물의 피부 주름 개선효과 6. Effect of hyaline fermentation extract on skin wrinkles
본 발명의 해마 발효 추출물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. Clinical trials were carried out on the effect of the cosmetic composition containing the hippocampus fermented extract of the present invention for improving the skin wrinkles. Clinical trials were conducted through actual use tests of each cosmetic product.
즉, 임상실험은 40-60세 여성 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹 (A, B, C ,D 및 E)으로 나눈 후, A그룹에는 제형예 1의 화장료 조성물을, B그룹에는 제형예 2의 화장료 조성물을, C 그룹에는 비교제형예 1의 화장료 조성물을, D그룹에는 비교제형예 2의 화장료 조성물을, D 비교제형예 3의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 8주 후의 주름 개선 효과를 육안으로 평가하여 주름 개선 정도를 확인하였다. 이 평가를 토대한 주름 개선 효과 결과는 하기의 표 7에 나타내었다. Namely, in a clinical experiment, 125 women aged 40 to 60 years were randomly divided into five groups (A, B, C, D and E) by 25 persons. The cosmetic composition of Formulation Example 1 was administered to Group A, The cosmetic composition of Example 2, the cosmetic composition of Comparative Formulation Example 1, the cosmetic composition of Comparative Formulation Example 2, and the cosmetic composition of Comparative Composition D 3 were applied to face C . The wrinkle improvement effect after 8 weeks was visually evaluated to confirm the wrinkle improvement degree. The results of the wrinkle-improving effect based on this evaluation are shown in Table 7 below.
실험 완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 3개월간 사용 후의 각 피검자의 주름 개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰 및 기기측정(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co.,Germany)을 통하여 평가하였으며, 실험 결과는 하기의 표 7에 나타낸 바와 같다.
The effect of improving wrinkles after the completion of the experiment was evaluated by visual examination and instrument measurement (cutometer SEM 575, C + K Electronic Co., Germany) of a skilled physician before and after 3 months of use. The experimental results are shown in Table 7 below.
상기 표 7의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 해마 발효 추출물을 함유한 제형예 1 내지 2의 화장료 조성물은 보습제를 함유하는 비교제형예 2에 비하여 약 2.7배 높은 주름개선 효과를 보여주었다. As can be seen from the results of Table 7, the cosmetic compositions of Formulation Examples 1 and 2 containing the hippocampus fermented extract of the present invention showed a wrinkle-improving effect about 2.7 times higher than Comparative Formulation Example 2 containing moisturizing agent.
또한, 해마 발효 추출물 대신 주름 개선 효과가 있는 것으로 알려진 아데노신을 함유하는 비교 제형예 3의 화장료와 유사한 결과가 나타나, 해마 발효 추출물이 우수한 주름 개선 효과를 나타냄을 알 수 있었다.
Similar results were obtained with the cosmetic preparation of Comparative Example 3 containing adenosine, which is known to have a wrinkle-reducing effect instead of the hippocampal fermentation extract, and the hippocampus fermentation extract showed excellent wrinkle-reducing effect.
실험예Experimental Example 7: 피부 탄력 개선 효과 측정 7: Measurement of skin elasticity improvement effect
본 실험예 7은 제조예 1 내지 2에서 수득한 해마 발효 추출물을 포함하는 제형예 1, 2 및 비교제형예에 따른 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 알아보기 위하여, 30~40대의 탄력이 감소한 여성 40명을 대상으로 측정하였다. 10명씩 A, B, C, D의 4그룹으로 나눈 뒤, A 그룹에는 제형예 1을, B그룹에는 제형예 2를, C그룹에는 비교 제형예 1을, D그룹에는 비교 제형예 4를 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 12주 후 피부 탄력을 측정하였다. 얼굴 부위의 탄력을 cutometer SEM575 (MPA 580, Courage+Khazaka GmbH, Germany)를 이용하여 측정하였으며, 피부 탄력을 나타내는 R2(biological elasticity)를 도포 전과 도포 후를 측정한 뒤 개선도(%)로 평가하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었으며, 결과는 각 군에 대한 개선도의 평균치이다.In Experimental Example 7, in order to examine the skin elasticity improving effect of the cosmetic compositions according to Formulation Examples 1 and 2 and Comparative Formulation Examples containing the hippocampus fermentation extract obtained in Production Examples 1 and 2, 40 patients were measured. 10 groups were divided into four groups of A, B, C and D, and then Formulation 1 was applied to Group A, Formulation Example 2 was applied to Group B, Comparative Formulation Example 1 was applied to Group C, For 12 weeks, twice a day, and then skin elasticity was measured after 12 weeks. The elasticity of the facial region was measured using a cutometer SEM575 (MPA 580, Courage + Khazaka GmbH, Germany), and the R2 (biological elasticity) indicating skin elasticity was measured before and after application . The results are shown in Table 8 below, and the results are the average of the degree of improvement for each group.
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 해마 발효 추출물이 함유된 제형예 1, 2 는 비교제형예 4에 비하여 피부 탄력이 매우 향상됨을 알 수 있었다.
As shown in Table 8, Formulation Examples 1 and 2 containing hippocampus fermentation extract showed significantly improved skin elasticity as compared with Comparative Formulation Example 4. [
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.
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