KR20160076126A

KR20160076126A - 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품

Info

Publication number: KR20160076126A
Application number: KR1020140185914A
Authority: KR
Inventors: 송창호
Original assignee: 주식회사 고운선형
Priority date: 2014-12-22
Filing date: 2014-12-22
Publication date: 2016-06-30

Abstract

본 발명은 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품에 관한 것이다. 보다 상세하게는 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백, 황기, 당귀, 작약, 박하, 적작약, 토복령, 녹용, 인삼 추출물, 전복 펩타이드를 포함하는 한약재를 추출하여 화장품 베이스와 배합하여 여드름 압출부위에 도포함으로써 염증발생의 효소인 COX-2(콕스-2)의 생성을 차단하여 염증세포의 활성화 및 피부 노화를 억제하고, Propionibacterium acnes을 포함하는 여드름 원인균에 대한 생육을 억제하고, Collagenase 저해 활성과 Peptide의 성분을 이용한 피부재생을 촉진하며, 단계별 각기 다른 한약재와 화장품 베이스를 배합하여 순서대로 도포함으로써 상이한 제형과 효능으로 인해 여드름 병변을 집중적으로 치료할 수 있도록 하고, 무방부제, 무향, 천연계면활성제를 함유하여 피부자극을 최소화할 수 있도록 하는 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품에 관한 것이다.

Description

단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품{omitted}

한의학적으로 여드름의 원인은 혈열(피가 탁함), 어혈(나쁜 피), 대장열(변비), 비습(살이 급격히 찌는 경우), 패열(피부에 발열), 습독, 충임맥 부족(자궁의 약함) 등의 병리학적 요인과 피지분비량의 증가 등의 호르몬 요인과 비타민 B2, 비타민 B6의 결핍이 원인이라고 밝혀지고 있다.

이러한 원인으로 발병된 여드름을 치료하기 위해 다양한 약제가 개발 중에 있다. 하지만, 여드름 병변에 효과적인 치료제로서 살리실산제, 항히스타민제, 호르몬제제 등이 주로 사용되고 있다. 살리실산은 면포성 여드름이나 감염되지 않은 여드름 치료에 사용되며, 트리클로산은 여드름 균이 세포벽에 부착하는 것을 막아주는 데 효과가 있다.

하지만, 상기 약물은 피부 작열감과 따가움을 유발시키는 물질로 피부 건조나 피부 박피 등을 유발하는 문제점이 있고, 임산부나 수유부는 의사 처방이 필요한 물질이다.

따라서 이러한 문제를 해결하기 위해서는 염증과 항균 작용이 우수하면서 피부자극이 적은 소재의 개발이 필요한 실정이다.

선행기술문헌 : KR 공개특허공보 제2013-0015339호(2013.2.14 공개)

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 특히 여드름 압출 후 염증을 완화시키고 여드름 균의 생육을 억제하며 여드름 병변을 집중적으로 치료하여 치료 효율을 극대화하는 데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위해 안출된 본 발명에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품은 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백 추출물을 포함하는 한약재와 화장품베이스를 교반하여 여드름 압출 후 염증의 발생을 억제하고 피부 청열을 제거하는 스킨 세럼, 황기, 당귀, 작약, 박하 추출물을 포함하는 한약재와 화장품 베이스를 교반하여 피부혈관을 확장하는 에센스, 및 적작약, 토복령, 녹용, 인삼 추출물, 전복 펩타이드를 포함하는 한약재와 실리콘 속에 수분입자를 함유하는 W/S (Water in Silicon) 제형의 유화타입의 화장품 베이스를 교반하여 피부 모공의 수축과 노화를 방지할 수 있도록 하는 크림을 포함할 수 있다.

또한, 스킨세럼, 에센스, 및 크림 순으로 도포 시, Propionibacterium acnes(프로피오니박테리움), Staphylococcus epidermidis(표피포도상 구균), Staphylococcus aureus(포도상구균), Candida albicans(칸디다 알비칸스) 중 적어도 어느 하나의 여드름 생성균의 증식을 억제할 수 있다.

본 발명에 의하면 여드름 압출 후 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백, 황기, 당귀, 작약, 박하, 적작약, 토복령, 녹용, 인삼 추출물, 전복 펩타이드를 포함하는 한약재를 추출하여 화장품 베이스와 배합함으로써 염증발생의 효소인 COX-2(콕스-2)의 생성을 차단하여 염증세포의 활성화를 억제하고, 항산화 활성을 통한 피부 노화를 억제하며, 여드름 원인균인 Propionibacterium acnes 등에 대한 생육을 억제하고, Collagenase 저해 활성과 Peptide의 성분을 이용한 피부재생을 촉진하는 데 그 효과가 있다.

또한, 본 발명에 의하면 단계별 각기 다른 한약재와 화장품 베이스를 배합하여 제조하여 순서대로 도포함으로써 상이한 제형과 효능으로 인해 여드름 병변을 집중적으로 치료할 수 있도록 하는 데 그 효과가 있다.

또한, 본 발명에 의하면 무방부제, 무향, 천연계면활성제를 함유함으로써 피부자극을 최소화할 수 있도록 하는 데 그 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품의 한약재 법제공정 개념도,
도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품의 한약재 추출물의 항균 활성상태를 분석한 그래프이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면들을 참조하여 상세히 설명한다. 우선 각 도면의 구성 요소들에 참조 부호를 부가함에 있어서, 동일한 구성 요소들에 대해서는 비록 다른 도면상에 표시되더라도 가능한 한 동일한 부호를 가지도록 하고 있음에 유의해야 한다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략한다. 또한, 이하에서 본 발명의 바람직한 실시예를 설명할 것이나, 본 발명의 기술적 사상은 이에 한정하거나 제한되지 않고 당업자에 의해 변형되어 다양하게 실시될 수 있음은 물론이다.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품의 한약재 법제공정 개념도이고, 도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품의 한약재 추출물의 항균 활성상태를 분석한 그래프이다.

도 1을 참조하면, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품은 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백, 황기, 당귀, 작약, 박하, 적작약, 토복령, 녹용, 인삼추출물, 전복펩타이드를 포함하는 한약재를 효소반응을 통해 발효한다. 발효 방식은 공기 중의 미생물을 이용하여 자연적으로 발효시킬 수 있으며, 발효의 최적 온도는 30~37℃가 바람직하다. 37℃를 초과하는 환경에서는 발효균이 변성되어 발효가 안되고, 30℃ 미만의 조건에서는 발효균은 잔존해있지만 발효균의 성장과 번식이 저하되어 발효 효율이 떨어진다.

미생물 발효가 완료되면, 원심분리를 통해 분리된 추출물을 한외여과기(Ultrafilteration,UF)를 통해 불순물을 투과시키고 여과물은 농축과정을 거쳐 유효성분으로 활용한다.

상기 추출물은 collagenase의 활성, 항산화, 항균활성, COX-2 효소의 선택적인 억제에 대한 효과가 있다.

이하에서는 한약 추출물의 성분분석을 측정하는 방법을 설명하고자 한다.

(1) 총 당량

한약 추출물의 전 당량 측정은 Phenol-sulfuric acid method를 사용한다. 시료 용액 0.2ml를 test tube에 넣고 5%(v/v) Phenol 용액 0.2ml를 첨가한 후, 황산 1.0ml를 반응액에 서서히 적하시킨 후 혼합하여 실온에 20분간 방치한 후 490nm에서 흡광도를 측정하며, 표준당으로는 D(+)-glucose (glucose 10mg+DW 20ml)를 사용하여 검량곡선을 작성한 후 비교하여 총 당량을 계산한다.

(2) 환원당 정량

한약 추출물의 환원당량을 측정하기 위해 DNS method를 사용한다. DNS solution은 1) 3,5-Dinitrosalicylic acid(DNS) 0.75 g/100 ml 2) NaOH 1.4 g/100 ml, 3) Potassium sodium tartrate tetrahydrate 21.62 g/100 ml, 4) Phenol 0.54 g/100 ml, 5) Na₂S₂O₅ 0.59 g/100 ml을 조제하여 사용하였으며, 540_nm 흡광도값을 측정한다.

(3) 단백질정량

단백질 정량은 Bradford method를 사용한다. Bradford Reagent은 0.1g briliant blue G-250 in 50ml Methanol(high purity) 100ml, 85% phosphoric acid 50ml 증류수에 녹인 후 filtering하여 냉장 보관 하며, 595nm에서 흡광도를 측정한다.

(4) 플라보노이드 화합물분석

총 플라보노이드 분석을 위하여 Flavonoid류와 AlCl₃+가 반응하여 생성 된 노랑색의 착체를 측정하는 방식인 Flavonoid-AlCl₃+ method를 사용한다. 보다 상세하게는 0.5ml 탕약(1mg/ml)에 0.5ml 2% AlCl₃(in EtOH)를 넣고 반응시켜 1시간 동안 실온에 방치한 후 420nm에서 흡광도를 측정하며, 표준물질로는 Rutin을 사용한다. 표준물질은 Ethanol 1ml에 Rutin 1mg을 넣고 용해시킨 후 희석하여 검량곡선을통해 총 플라보이드 화합물을 분석한다.

스킨 세럼은 피부 청열해독 및 항염증기능이 활성화된 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백 추출물을 포함하는 한약재를 선택하여 화장품 베이스를 교반하여 제조한다. 감초, 상백피, 황련, 황금, 황백을 포함하는 한약재 추출물은 청열해독, 항염증, 피부진정, 피부미백에 효과가 있으므로 여드름 압출 후 우선적으로 스킨세럼을 도포한다.

에센스는 황기, 당귀, 작약, 박하 추출물을 포함하는 한약재 추출물과 화장품 베이스를 교반하여 제조된다. 황기, 당귀, 작약, 박하 추출물은 항균, 보혈, 피부 보호, 혈관 확장의 효과가 있으므로 스킨세럼 후에 도포하는 것이 바람직하다.

크림은 적작약, 토복령, 녹용, 인삼, 전복 펩타이드를 포함하는 한약재 추출물과 실리콘 속에 수분입자를 함유하는 W/S (Water in Silicon) 제형의 유화타입의 화장품 베이스를 교반하여 제조된다. 항산화, 콜라게네이즈 억제, 피부 재생에 효과가 있으므로 에센스 후에 도포하는 것이 바람직하다.

상기 스킨세럼, 에센스, 크림은 방부제, 무향, 천연계면활성제를 함유함으로써 피부자극을 최소화할 수 있도록 한다.

이하에서는 상기 과정을 통해 획득한 한약 추출물의 생리활성을 분석한 결과를 설명하고자 한다.

-항균활성

항균활성은 Filter paper disc method를 사용하였으며, 사용된 균주로는 여드름과 관련된 Propionibacterium acnes(프로피오니박테리움), Staphylococcus epidermidis(표피포도상 구균), Staphylococcus aureus(포도상구균), Candida albicans(칸디다 알비칸스)를 사용한다. 시험균주를 37 로 TSB에서 mid-logarithmic phase까지 배양하고, 항균활성을 측정하고자 하는 시료들은 일정농도를 취하여 멸균된 증류수 (50 l)에 녹인 후, paper disk에 흡수시켜 건조한다. 배양한 균주는 원심분리 (10분, 2,000 g)한 후 0.1 M phosphate buffer (PBS, pH 6.7)로 3회 반복하여 세척한 후 배양한 균액 100 L (A _{570 nm} = 0.1)를 Trypticase Soy Agar (TSA)에 도말하고 준비한 paper disk를 배지 위에 일정간격으로 정치시켜 37 에서 18 시간동안 배양하여 항균활성을 측정한다.

항균 활성의 실험 결과를 통해 감초, 숙지황, 황금, 황련은 시험균주로 사용한 Staphylococcus epidermidis의 생장을 저해하고, 감초, 세신, 황금, 황련은 시험균주로 사용한 Staphylococcus aureus의 생장을 저해하며, 황금, 황련, 황백은 시험균주로 사용한 Candida albicans의 생장을 저해하는 것으로 나타났다.

- 항산화(DPPH method)

전자공여능(EDA: electron donating ability) 측정법으로 Blois의 방법을 변형하여 측정한다. DPPH radical 제거 효과는 추출물의 DPPH에 대한 전자공여효과로 시료의 환원력을 측정하는 방법에 의하여 측정한다. 시료 용액 10(control: 99.5% ethanol)에 0.1mM DPPH (in 99.5% ethanol) 용액을 190를 가하고, vortex mixer로 10초간 진탕하여 37에서 30분 동안 반응 시킨 후, Microplate Reader(Bio-Tek, USA)를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정한다. 음성대조군으로는 시료 대신 methanol를 10 첨가하여 반응시키고, 양성대조군으로는 L-ascorbic acid, caffeic acid를 사용하여 같은 방법으로 측정한다. 각 시료의 항산화작용은 대조군에 비하여 감소된 흡광도로부터 radical 제거율을 계산한다.

Sample O.D. : 시료를 가한 시험액의 흡광도

Control O.D. : 시료를 가하지 않은 시험액의 흡광도

- 항염증활성

항염증 활성 측정시험은 Nitric oxide 저해 활성 및 Western blot을 이용한 iNOS, COX-2 억제 활성을 측정한다. 보다 상세하게는 96 well plate의 2 well 에 10l heme, 10ul assay buffer(100mM Tris-HCl, pH 8.0) 그리고 10l solvent (inhibitor를 녹였던 용매)를 첨가한다. Background well에는 2 well 에 10l heme, 10ul assay buffer 그리고 10l의 solvent를 첨가하고, 100% initial activity 측정을 위해 2 well 에 10l heme, 10ul 효소(COX-2) 그리고 10l의 solvent를 첨가한다. Sample(inhibitor)의 COX 저해활성측정을 위해 2 well에 10l heme, 10l 효소 (COX-2) 그리고 10l의 sample을 첨가한다. Standard inhibitor로는 Indomethacin을 dimethyl sulfoxide 에 녹여 처리하였고, Sample은 100mM Tris-HCl (pH 8.0)에 녹여 농도별로 처리하며, 모든 well에 200l의 assay buffer를 첨가하여 실온에서 반응시킨 후, Luminometer(SpectraMax L, Molecular devices, USA)에 부착되어 있는 2개의 dispenser를 이용하여 하나의 dispenser로 모든 well에 10l의 chemiluminescent substrate를 첨가하고, 즉시 다른 하나의 dispenser를 이용하여 50l의 arachidonic acid를 첨가한 후 Relative Luminescent Units (RLU)를 Luminometer로 측정한다.

- 세포독성 측정(MTT assay)

시료를 농도별로 처리하고 세포배양 20시간이 지난 후, 5 mg/ml 의 MTT 시약을 이용하여 0.1 mg MTT/(200 ul) well 에 넣고 2시간 동안 배양하였다. 각 실험군당 well 수는 3으로 하고, 배양 후 상등액을 제거하고, 200 ul 의 PBS 로 세척한 후, 100 ul의 DMSO를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 formazan을 용해시킨 후, ELISA microplate reader(Model: MQX200R, BioTek, USA)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정한다. 세포 생존률은 control cell 에 대한 백분율로 표시한다 [i.e. viability (% of control) = 100/(absorbance of treated sample)/(absorbance of control)].

- NO 분비 억제 효능 측정

Raw 264.7 세포로부터 생성된 NO의 양을 LPS 처리 후, 20시간에 있어서 측정하며, 각 실험군당 well 수는 3으로 한다. 96 well plate에 세포 배양상등액 100 ul 와 Griess시약(1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid + 1% -naphthylamide in H₂O) 150 ul 를 혼합한 후, 5분 동안 반응시켜 ELISA microplate reader(Model: MQX200R, BioTek, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 검량선 작성을 위해 sodium nitrite(NaNO₂)를 표준품으로 사용하여 비교한다.

- 염증성 Cytokine 분석

항염증 효능을 비교하기 위해 추출물 농도별(1/500, 1/100, 1/50)로 희석하여 사용한다. 측정방법으로는 RAW 264.7 cell을 6well plate에 well당 1 x 10⁶ cell로 seeding하여 overnight 배양을 하였으며, serumnm free medium으로 세척한 후 30분간 배양한 후 탕약원액을 1/500, 1/100, 1/50로 희석하여 1시간 동안 배양한다. 그 후 LPS(1g/ml)를 처리하여 24시간 동안 배양하여 배양 상등액을 수집하여 TNF-, IL-1, IL-8 ELISA kit를 구입하여 Assay를 한다.

- 미백 측정

0.1M Na-phosphate buffer(pH 6.5) 183l 에 test sample 17l과 17l의 mushroom tyrosinase(2000 Unit/ml), substrate(tyrosine) 33l을 첨가하여 최종 반응액이 250l이 되도록 96-well microplate 에 넣는다. 이 반응액을 37에서 15분간 배양한 후, 신속하게 ice에서 5분 동안 방치하여 반응을 중단시킨 후, microplate reader (Bio-Tek, USA)를 이용하여 490nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며, Tyrosinase의 활성 저해율은 다음 식에 의해 계산한다.

Tyrosinase 활성저해율(%) = {100-(b-b')/a-a'}*100

a : 공시료액의 반응 후 흡광도

b : 시료액의 반응 후 흡광도

a', b' : tyrosinase 대신 완충액을 처리한 흡광도

- Collagenase 저해 활성 측정(주름관련 실험)

Collagenase 저해활성 측정은 50mM Tris-HCl buffer 50ul에 5ul collagenase (2 mg/ml) 과 희석된 시료 10 ul 용액을 37에서 10 min간 전 처리한 후, 중탕 가열한 6mg/ml의 gelatin이 포함된 기질용액 0.5ml(50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5)과 37에서 30min 간 반응시킨다. 효소 반응을 정지시키기 위해 10.0 %(w/v) trichloroacetic acid(TCA) 0.5 ml를 첨가한 후, ninhydrin 용액 0.5 ml을 혼합하여 100, 10 min간 끓이고, ice-water에서 냉각시킨다. 가수분해 되지 않은 단백질을 침전시키기 위해 50.0% 1-propanol을 가하여 15min간 방치한 후, 10,000 rpm에서 10 min간 원심분리하여 570 nm에서 측정한다. 저해율(%)은 저해제를 첨가한 것의 반응 전(A)과 반응 후(B)의 흡광도, 저해제를 첨가하지 않은 것의 반응 전(C)과 반응 후(D)의 흡광도로부터 다음과 같은 식으로 계산한다.

저해율(%) = {(D-C)-(B-A)/(D-C)}*100

이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정, 변경 및 치환이 가능할 것이다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예 및 첨부된 도면들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예 및 첨부된 도면에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

감초, 상백피, 황련, 황금, 황백 추출물을 포함하는 한약재와 화장품베이스를 교반하여 여드름 압출 후 염증의 발생을 억제하고 피부 청열을 제거하는 스킨 세럼,
황기, 당귀, 작약, 박하 추출물을 포함하는 한약재와 화장품 베이스를 교반하여 피부혈관을 확장하는 에센스, 및
적작약, 토복령, 녹용, 인삼 추출물, 전복 펩타이드를 포함하는 한약재와 실리콘 속에 수분입자를 함유하는 W/S (Water in Silicon) 제형의 유화타입의 화장품 베이스를 교반하여 피부 모공의 수축과 노화를 방지할 수 있도록 하는 크림
을 포함하는 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품.
제1항에 있어서,
스킨세럼, 에센스, 및 크림 순으로 도포 시, Propionibacterium acnes(프로피오니박테리움), Staphylococcus epidermidis(표피포도상 구균), Staphylococcus aureus(포도상구균), Candida albicans(칸디다 알비칸스) 중 적어도 어느 하나의 여드름 생성균의 증식을 억제하는 단계별 처방이 가능한 한방 여드름 화장품.