KR20160050173A

KR20160050173A - 신규 펩타이드 및 성장인자 콤플렉스를 함유한 상처 재생 및 피부 진정용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20160050173A
Application number: KR1020140147594A
Authority: KR
Inventors: 정대현; 김수정; 윤구영; 천지숙
Original assignee: 주식회사 바이오에프디엔씨; 주식회사 메디안스
Priority date: 2014-10-28
Filing date: 2014-10-28
Publication date: 2016-05-11
Also published as: KR101679310B1

Abstract

본 발명은 신규 펩타이드 및 성장인자 콤플렉스(복합물)를 함유한 상처 재생 및 피부 진정용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 상처 재생 및 피부 진정에 효능을 지닌 신규 펩타이드(prospin), 그리고 상기 펩타이드와 여러 성장인자를 함유한 성장인자 콤플렉스가 함유된 상처 재생 및 피부 진정 효과를 지닌 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 펩타이드 그리고 EGF, bFGF, SCF, PGF를 더 함유하는 복합물은 피부 진정능, 피부 상처 재생능을 가지고 있어, 특히 피부 레이저 시술 후 도포를 통해 피부를 보호, 재생하는데 탁월한 효과를 가지고 있다.

Description

신규 펩타이드 및 성장인자 콤플렉스를 함유한 상처 재생 및 피부 진정용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for skin regeneration and skin soothing comprising novel peptide and growth factor complex}

본 발명은 신규 펩타이드 및 성장인자 콤플렉스(복합물)를 함유한 상처 재생 및 피부 진정용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 상처 재생 및 피부 진정에 효능을 지닌 신규 펩타이드(prospin), 그리고 상기 펩타이드와 여러 성장인자를 함유한 성장인자 콤플렉스가 함유된 상처 재생 및 피부 진정 효과를 지닌 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 들어 피부에 대한 사람들의 관심이 증가함에 따라 깨끗한 피부를 만들기 위해 피부과에서 레이져 박피 시술을 통한 여드름 등과 같은 흉터를 치료하는 사례가 늘고 있다.

레이져 박피는 주로 여드름이나 수두로 인해 발생한 흉터와 주름살 치료에 많이 이용되는데, 치료 원리는 레이져 빛에 의해 피부에 정확하게 1도 화상만을 입혀 진피층에서 새로운 조직들이 많이 자라게 하는 방법이다. 레이저 박피에는 어븀 야그 레이저와 탄산가스 레이저가 사용된다. 탄산가스 레이저는 열 손상이 많아서 치료한 주변 조직에 많은 손상을 입힌다.

어븀야그 레이저는 열손상이 거의 없어서 치료 후에 홍반이나 색소침착 같은 부작용이 탄산가스 레이져에 비해 덜 생긴다. 하지만 반대로 열 손상이 어느 정도 있어야 흉터가 잘 차오른다는 것이 밝혀지면서 최근에는 어븀야그 레이저만으로 치료하기 보다는 탄산가스 레이저와 병합해서 사용한다. 한번의 시술로 만족스러운 결과를 얻지 못하는 경우에는 여러 차례 시도하지만, 시술 후의 과색소 침착증 등 부작용도 가지고 있다. 또한 열손상에 의한 피부 화상이 일어날 수 있기 때문에 레이져박피 후에는 열손상에 의해 약해진 피부를 진정시키고 빠르게 상처를 회복시키기 위하여 자극적이지 않으면서 상처재생 활성이 있는 화장수의 사용이 필요하다.

성장인자들을 이용한 피부 재생 촉진제에 관한 선행연구 (대한민국특허공개 1020130056838)가 있었으나, 본원발명에서의 신규 펩타이드, 이를 함유한 성장인자 콤플렉스가 상처 재생, 피부 진정에 활용된 사례는 전무하다.

특허문헌 1: 대한민국특허공개 102013005683

본 발명자들은 피부상처 재생 효능과 진정능이 있는 신규 펩타이드를 합성하고, 이러한 펩타이드 및 성장인자들을 함유한 성장인자 복합물(콤플렉스)이 피부 상처 재생 효능과 진정능이 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드와 EGF(epidermal growth factor), bFGF(basic fibroblast growth factor), SCF(stem cell factor) 또는 PGF (placenta growth factor)를 더 함유하는 피부 상처 재생용 조성물, 피부 진정용 조성물 또는 레이저 시술 부위 도포용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 진정용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 상처 재생용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 레이저 시술 부위 도포용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 펩타이드를 함유하는 피부 진정용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 펩타이드를 함유하는 피부 레이저 시술 부위 도포용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 펩타이드 뿐만 아니라, EGF(epidermal growth factor), bFGF(basic fibroblast growth factor), SCF(stem cell factor) 또는 PGF (placenta growth factor)를 더 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 펩타이드 그리고 EGF, bFGF, SCF, PGF를 더 함유하는 복합물은 피부 진정능, 피부 상처 재생능을 가지고 있어, 특히 피부 레이저 시술 후 도포를 통해 피부를 보호, 재생하는데 탁월한 효과를 가지고 있다.

도 1은 본 발명의 조성물의 세포 독성 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 조성물의 각질형성세포주 세포 증식능 시험결과를 나타낸 현미경 사진이다.
도 3은 본 발명의 조성물의 섬유아세포 증식능 실험결과이다.
도 4는 본 발명의 조성물의 UV에 대한 세포보호능 시험결과를 나타낸 것이다.

본 발명은 상처 재생 효능 및 피부 진정능이 있는 신규 펩타이드 및 EGF, bFGF, SCF, PGF의 성장인자를 함유한 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 신규 펩타이드는 프로스핀(prospin)이라고 명명하였으며, 구체적으로 서열번호 1의 아미노산 서열을 가진 헥사펩타이드이되, 펩타이드의 N 말단에 니코틴산이 결합된 펩타이드이다.

이러한 서열번호 1의 아미노산 서열은 건강한 피부 상태와 젊고 생기 있는 피부에 필수적인 비타민인 Vitamin B3 (Nicotinic acid, Niacin)과 각종 환경 오염 및 스트레스가 외인성 노화를 유발하는 신호전달수용체인 PAR2의 저해성 펩타이드로, 여기에 니코틴산을 결합시킨 새로운 개념의 진보된 항주름 및 항노화 개선용 펩타이드 신소재이다.

prospin의 아미노산 서열은 FSLLRY-NH2(페닐알라닌-세린-루신-루신-아르기닌-티로신-아마이드)로써 이를 고효율로 생산하기 위하여 고체상 합성 플랫폼을 기반으로 한 합성방법을 개발하였다. 펩타이드는 두 개 이상의 아미노산이 펩타이드 결합(peptide bond)이라는 화학결합 형태로 연결된 물질로 요즘은 대부분 Bruce Merrifield가 1963년도에 고안한 고체상 펩타이드 합성법(Solid-Phase Peptide Synthesis; SPPS)을 이용한다. 본 연구개발에서도 이러한 고체상 합성법을 기반으로 Prospin의 합성 플랫폼을 개발하였다. 이를 위해 불용성의 폴리스티렌 수지에 보호기를 가지고 있는 아미노산을 순서로 연속적으로 첨가하여 펩타이드 부분을 우선 합성한 후, 이를 합성지지체에서 분리하지 않고 직접 니코틴산(nicotinic acid)를 화학적으로 합성한 후, 결합되지 않은 니코틴산(nicotinic acid)를 반응체에서 제거하는 방법을 플랫폼으로 개발 완료하였다.

일 관점에서, 본 발명은 상기 신규펩타이드 및 성장인자 복합물(complex)를 함유한 상처 재생용, 피부 진정용 화장료 조성물에 관한 것이다.

이러한 성장인자로는 EGF, bFGF, SCF, PGF 등이 있다.

EGF(epidermal growth factor)은 상피세포성장인자로써 EGF 수용체에 의하여 세포신호전달이 이루어진다. EGF는 53개의 아미노산으로 이루어져 있으며, 3개의 이황화결합으로 이루어진 삼차구조의 단백질이다. EGF의 생물학적 메카니즘은 세포 증식, 분화, 생존에 관여한다고 알려져 있다.

이러한 EGF에 대한 cDNA 서열은 서열번호 2과 같으며, 단백질 서열은 서열번호 3와 같다.

서열번호 2: AATAGTGACTCTGAATGTCCCCTGTCCCACGATGGGTACTGCCTCCATGATGGTGTGTGCATGTATATTGAAGCATTGGACAAGTATGCATGCAACTGTGTTGTTGGCTACATCGGGGAGCGATGTCAGTACCGAGACCTGAAGTGGTGGGAACTGCGC,

서열번호 3: NSDSECPLSHDGYCLHDGVCMYIEALDKYACNCVVGYIGERCQYRDLKWWELR

bFGF(basic fibroblast growth factor)은 섬유아세포성장인자로써 섬유아세세포의 증식 및 분화를 촉진할뿐만 아니라, 혈관내피세포, 혈관평활근세포와 표피세포등의 증식 및 분화에도 작용하는 단백질이다. 따라서 bFGF는 세포에 손상이 일어날 경우 세포손상을 치유하기 위하여 필수적인 단백질로써 화상, 욕창, 피부상처등에서 뛰어난 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.

이러한 bFGF에 대한 cDNA 서열은 서열번호 4과 같으며, 단백질 서열은 서열번호 5와 같다

서열번호 4:

-cDNA : CCCGCCTTGCCCGAGGATGGCGGCAGCGGCGCCTTCCCGCCCGGCCACTTCAAGGACCCCAAGCGGCTGTACTGCAAAAACGGGGGCTTCTTCCTGCGCATCCACCCCGACGGCCGAGTTGACGGGGTCCGGGAGAAGAGCGACCCTCACATCAAGCTACAACTTCAAGCAGAAGAGAGAGGAGTTGTGTCTATCAAAGGAGTGTGTGCTAACCGTTACCTGGCTATGAAGGAAGATGGAAGATTACTGGCTTCTAAATGTGTTACGGATGAGTGTTTCTTTTTTGAACGATTGGAATCTAATAACTACAATACTTACCGGTCAAGGAAATACACCAGTTGGTATGTGGCACTGAAACGAACTGGGCAGTATAAACTTGGATCCAAAACAGGACCTGGGCAGAAAGCTATACTTTTTCTTCCAATGTCTGCTAAGAGCTGA

서열번호 5:

- 단백질 : PALPEDGGSGAFPPGHFKDPKRLYCKNGGFFLRIHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEERGVVSIKGVCANRYLAMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTYRSRKYTSWYVALKRTGQYKLGSKTGPGQKAILFLPMSAKS)

SCF(stem cell factor)은 kit-ligan, KL 혹은 steel factor로 알려진 성장인자로써 c-Kit 수용체 (CD117)과 결합하여 생리적 조절 작용을 나타내는 주요한 성장인자이다. SCF는 막에 결합된 형태와 수용성 단백질 형태로 모두 존재하며, 혈액형성, 정자형성 그리고 멜라닌 형성에 관여한다. SCF는 피부를 포함한 거의 모든 조직에 존재하는 줄기세포 (stem cell)을 활성화시키는 필수 요소로 피부에서는 노화를 방지하고 모발에서는 새로운 모낭의 형성을 촉진하는 것으로 알려져 있다.

이러한 SCF에 대한 cDNA 서열은 서열번호 6과 같으며, 단백질 서열은 서열번호 7와 같다

서열번호 6:

cDNA : ATGAAGAAGACACAAACTTGGATTCTCACTTGCATTTATCTTCAGCTGCTCCTATTTAATCCTCTCGTCAAAACTGAAGGGATCTGCAGGAATCGTGTGACTAATAATGTAAAAGACGTCACTAAATTGGTGGCAAATCTTCCAAAAGACTACATGATAACCCTCAAATATGTCCCCGGGATGGATGTTTTGCCAAGTCATTGTTGGATAAGCGAGATGGTAGTACAATTGTCAGACAGCTTGACTGATCTTCTGGACAAGTTTTCAAATATTTCTGAAGGCTTGAGTAATTATTCCATCATAGACAAACTTGTGAATATAGTGGATGACCTTGTGGAGTGCGTGAAAGAAAACTCATCTAAGGATCTAAAAAAATCATTCAAGAGCCCAGAACCCAGGCTCTTTACTCCTGAAGAATTCTTTAGAATTTTTAATAGATCCATTGATGCCTTCAAGGACTTTGTAGTGGCATCTGAAACTAGTGATTGTGTGGTTTCTTCAACATTAAGTCCTGAGAAAGGGAAGGCCAAAAATCCCCCTGGAGACTCCAGCCTACACTGGGCAGCCATGGCATTGCCAGCATTGTTTTCTCTTATAATTGGCTTTGCTTTTGGAGCCTTATACTGGAAGAAGAGACAGCCAAGTCTTACAAGGGCAGTTGAAAATATACAAATTAATGAAGAGGATAATGAGATAAGTATGTTGCAAGAGAAAGAGAGAGAGTTTCAAGAAGTGTAA

서열번호 7:

단백질 :

MKKTQTWILTCIYLQLLLFNPLVKTEGICRNRVTNNVKDVTKLVANLPKDYMITLKYVPGMDVLPSHCWISEMVVQLSDSLTDLLDKFSNISEGLSNYSIIDKLVNIVDDLVECVKENSSKDLKKSFKSPEPRLFTPEEFFRIFNRSIDAFKDFVVASETSDCVVSSTLSPEKGKAKNPPGDSSLHWAAMALPALFSLIIGFAFGALYWKKRQPSLTRAVENIQINEEDNEISMLQEKEREFQEV

PGF(placenta growth factor)는 VEGF family에 속하는 성장인자로써 배발생 단계에서 혈관의 신생과 성장을 조절하는 주요 성장인자이다. 임신 중 placental trophoblast에 의해 가장 왕성하게 생성되는 PGF는 흔히 말하는 태반 및 태반추출물의 생리기능을 가능하게 해주는 핵심물질이다.

이러한 PGF에 대한 cDNA 서열은 서열번호 8과 같으며, 단백질 서열은 서열번호 9와 같다

PGF

서열번호 8:

- cDNA :

ATGCCGGTCATGAGGCTGTTCCCTTGCTTCCTGCAGCTCCTGGCCGGGCTGGCGCTGCCTGCTGTGCCCCCCCAGCAGTGGGCCTTGTCTGCTGGGAACGGCTCGTCAGAGGTGGAAGTGGTACCCTTCCAGGAAGTGTGGGGCCGCAGCTACTGCCGGGCGCTGGAGAGGCTGGTGGACGTCGTGTCCGAGTACCCCAGCGAGGTGGAGCACATGTTCAGCCCATCCTGTGTCTCCCTGCTGCGCTGCACCGGCTGCTGCGGCGATGAGAATCTGCACTGTGTGCCGGTGGAGACGGCCAATGTCACCATGCAGCTCCTAAAGATCCGTTCTGGGGACCGGCCCTCCTACGTGGAGCTGACGTTCTCTCAGCACGTTCGCTGCGAATGCCGGCCTCTGCGGGAGAAGATGAAGCCGGAAAGGTGCGGCGATGCTGTTCCCCGGAGGTAA

서열번호 9:

- 단백질 서열 :

MPVMRLFPCFLQLLAGLALPAVPPQQWALSAGNGSSEVEVVPFQEVWGRSYCRALERLVDVVSEYPSEVEHMFSPSCVSLLRCTGCCGDENLHCVPVETANVTMQLLKIRSGDRPSYVELTFSQHVRCECRPLREKMKPERCGDAVPRR

상기 성장인자들은 인간의 유전자를 오리진으로 하여 미생물 발효시스템을 이용하여 생산한다. 각각의 성장인자의 유전자 염기서열을 합성하여 발현벡터에 삽입한 후 이를 E.coli에 주입하여 배양하고, 미생물이 O.D 값이 0.5~0.8정도 일 때, IPTG(Isopropyl -D-1-thiogalactopyranoside)를 이용하여 induction한다. 이를 37℃에서 4시간 추가 배양 후 미생물의 pellet을 수득하기 위하여 12,000rpm 원심분리하고, 수득된 pellet은 g당 20ml의 lysis buffer로 부드럽게 현탁 한 후 sonicator로 2시간 sonication하여 미생물의 세포막을 깨준 다음. 이후 다시 12,000rpm으로 원심분리하여 상등액을 취하고 상등액은 크로마토그래피를 통하여 해당하는 성장인자들을 정제한다 (정제 순도 95% 이상).

본 발명에 있어서, 상기 조성물 내에 펩타이드 및 성장인자들의 함량비는 특별히 제한되지 않으나, 예컨대, EGF:bFGF:SCF:PGF:펩타이드가 2~5:1~5:1~5:1~5:50~100일 수 있다. 다시말해, 펩타이드 100 중량부에 대하여 EGF:bFGF:SCF:PGF는 각각 2~5,2~5, 2~5, 및 2~5 중량부인 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 조성물은 상기 성장인자 복합물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서 화장료 조성물은 얼굴 뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 피부 외용제 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 조성물을 제조할 수 있다.

특히, 상기 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

이러한, 본 발명에 따른 조성물은 피부 진정, 피부 상처 치유, 항노화 등의 기능성 화장품의 형태를 포함한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

1.1 신규 펩타이드 합성

Prospin은 6개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드와 Nicotinic acid가 결합된 신물질이다. 펩타이드 서열은 FSLLRY로 PAR-2 signal을 inhibition 한다고 알려져 있는 서열이다. 이의 합성방법으로는 고체상합성법으로 합성하였으며 아미노산을 결합시키는 순서는 C-terminal에서 N-terminal 방향으로 합성을 한다. 구체적인 방법으로는 2-chlorotritylchloride resin(1.4mmole/g, 비드테크)을 710mg(1mM) 저울로 재어 DMF(N,N'-DiMethyl Formamide, DAE JUNG)로 충분히 반응하여 swelling 시켜준다. 그 후 F-moc으로 보호된 tyrosine(Y)을 레진 대비 5당량(5mM)으로 계산하여 HOBT(N-hydorxybenzotriazole, beadTech)와 DIC(N,N'-Diisoproyl carbodiimide, Alfa Aesar)로 30분간 활성화를 시켜준 후 이미 swelling되어 있는 resin과 3~4시간동안 반응시켜준다. 반응 후 Fmoc을 제거해 주기 위하여 20% Piperidine(Merk)을 처리하여 약 15분간 반응 시켜준다. 이후 그 다음 서열인 Argine(R)을 붙여주는데 위의 Tyrosine을 붙이는 방법처럼 반복하여 마지막 서열인 Nicotinic acid까지 결합시켜준다. 합성된 펩타이드는 Reverse Phase (RP)-HPLC with Bondapack C18 column으로 순도 95% 이상으로 정제한다.

1.2 성장인자 준비

본 연구에 사용된 성장인자 콤플렉스를 이용한 상처재생 및 피부진정용 화장품 조성물을 획득하기 위하여 EGF,bFGF,SCF,PGF의 성장인자들은 각 인간의 유전자를 오리진으로 하여 미생물 발효시스템을 이용하여 생산하였다. 각각의 오리진은 합성(바이오니아)하여 확보하였으며, 자세하게는 EGF(Epidermal Growth Factor)을 획득하기 위하여 인간의 유전정보인

cDNA (서열번호 2: AATAGTGACTCTGAATGTCCCCTGTCCCACGATGGGTACTGCCTCCATGATGGTGTGTGCATGTATATTGAAGCATTGGACAAGTATGCATGCAACTGTGTTGTTGGCTACATCGGGGAGCGATGTCAGTACCGAGACCTGAAGTGGTGGGAACTGCGC, Protein sequence : 서열번호 3: NSDSECPLSHDGYCLHDGVCMYIEALDKYACNCVVGYIGERCQYRDLKWWELR)를 PET41b+ 벡터에 클로닝하여 박테리아(BL21)에 삽입하여 발현하였다. 이때 사용한 제한효소는 NdeI(NEB, Cat#: R0111S)과 XhoI(NEB, Cat# : R0146S)을 사용하여 PET41b+(Novagen) 벡터에 클로닝 하였다. 인간의 유전자가 삽인된 벡터를 BL21(NEB, Cat# : C25271)에 트랜스포메이션을 시키기 위하여 42℃에서 30초간 반응시켰다. 이렇게 단백질 유전자가 삽입된 박테리아는 전배양을 거처 500ml 배양배지에 배양하여 O.D 0.6일 때 IPTG(Isopropyl b-D-1-thiogalactopyranoside, Sigma, Cat# : 16758-1G)을 0.5mM 처리하여 단백질의 발현을 유도하였다. IPTG로 발현을 유도한 후 3시간 37℃에서 추가 배양을 하였으며, 배양이 끝난 후 고속내장원심분리기(VS-24SMTi)을 이용하여 6,000rpm, 20분간 원심분리하여 미생물 pellet을 수득하였다. 이후 1g당 20ml의 lysisbuffer(5mM sodiumphosphate buffer)로 현탁 한후 sonication으로 세포막을 깨어 단백질을 solublelation 하였다. 이후 크로마토그래피를 통하여 해당 단백질을 순도 95% 이상으로 정제하여 사용하였다. 나머지 성장인자들도 같은 실험방법으로 정제 사용하였으며, 각각의 유전정보 및 단백질 정보는 아래와 같다.

bFGF

-cDNA : 서열번호 4: CCCGCCTTGCCCGAGGATGGCGGCAGCGGCGCCTTCCCGCCCGGCCACTTCAAGGACCCCAAGCGGCTGTACTGCAAAAACGGGGGCTTCTTCCTGCGCATCCACCCCGACGGCCGAGTTGACGGGGTCCGGGAGAAGAGCGACCCTCACATCAAGCTACAACTTCAAGCAGAAGAGAGAGGAGTTGTGTCTATCAAAGGAGTGTGTGCTAACCGTTACCTGGCTATGAAGGAAGATGGAAGATTACTGGCTTCTAAATGTGTTACGGATGAGTGTTTCTTTTTTGAACGATTGGAATCTAATAACTACAATACTTACCGGTCAAGGAAATACACCAGTTGGTATGTGGCACTGAAACGAACTGGGCAGTATAAACTTGGATCCAAAACAGGACCTGGGCAGAAAGCTATACTTTTTCTTCCAATGTCTGCTAAGAGCTGA

- protein seqence : 서열번호 5: PALPEDGGSGAFPPGHFKDPKRLYCKNGGFFLRIHPDGRVDGVREKSDPHIKLQLQAEERGVVSIKGVCANRYLAMKEDGRLLASKCVTDECFFFERLESNNYNTYRSRKYTSWYVALKRTGQYKLGSKTGPGQKAILFLPMSAKS)

SCF

cDNA : 서열번호 6: ATGAAGAAGACACAAACTTGGATTCTCACTTGCATTTATCTTCAGCTGCTCCTATTTAATCCTCTCGTCAAAACTGAAGGGATCTGCAGGAATCGTGTGACTAATAATGTAAAAGACGTCACTAAATTGGTGGCAAATCTTCCAAAAGACTACATGATAACCCTCAAATATGTCCCCGGGATGGATGTTTTGCCAAGTCATTGTTGGATAAGCGAGATGGTAGTACAATTGTCAGACAGCTTGACTGATCTTCTGGACAAGTTTTCAAATATTTCTGAAGGCTTGAGTAATTATTCCATCATAGACAAACTTGTGAATATAGTGGATGACCTTGTGGAGTGCGTGAAAGAAAACTCATCTAAGGATCTAAAAAAATCATTCAAGAGCCCAGAACCCAGGCTCTTTACTCCTGAAGAATTCTTTAGAATTTTTAATAGATCCATTGATGCCTTCAAGGACTTTGTAGTGGCATCTGAAACTAGTGATTGTGTGGTTTCTTCAACATTAAGTCCTGAGAAAGGGAAGGCCAAAAATCCCCCTGGAGACTCCAGCCTACACTGGGCAGCCATGGCATTGCCAGCATTGTTTTCTCTTATAATTGGCTTTGCTTTTGGAGCCTTATACTGGAAGAAGAGACAGCCAAGTCTTACAAGGGCAGTTGAAAATATACAAATTAATGAAGAGGATAATGAGATAAGTATGTTGCAAGAGAAAGAGAGAGAGTTTCAAGAAGTGTAA

protein sequence : 서열번호 7:

PGF

- cDNA : 서열번호 8:

- Protein sequence : 서열번호 9:

1.3 조성물 제조

상기 1.1에서 얻어진 펩타이드와 1.2에서 얻어진 성장인자를 정제수에 실온에서 아래 표 1에 기재된 함량비율로 혼합하여 조성물을 제조하였다.

원료	INCI 명	함유량 (%)
EGF(epidermal growth factor)	sh-oligopeptide-1	0.0002
bFGF(basic fibroblast growth factor)	sh-polypeptide-1	0.0001
SCF(Stem cell factor)	sh-polypeptide-4	0.0001
PGF(placenta growth factor)	sh-polypeptide-16	0.0001
Prospin	nicotinoyl hexapeptide-44	0.005

실험예 1: 세포독성시험

1.1 인간 각질형성 세포 배양

인간 각질형성 세포인 HaCaT 세포주는 본 연구를 위하여 37도, 5% CO₂ 배양기에서 배양되었다. 배양 용기의 85 ~ 90%의 면적만큼의 배양도를 보이면, trypsin 처리로 세포를 탈착시켜 계수 후, 5×10³cells/Cm²으로 계대 배양하였다. 세포의 배양에는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO, Cat. No., 26140-079, USA)과 100 U/ml penicillin 그리고 100 ug/ml streptomycin이 첨가된 Delbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO, Cat. No. 11995-065, USA)을 사용하였다. 계대 배양을 위하여 75 T-flask (NUNC, Cat. No. 156499, Danmark)가 사용되었으며, 세포 독성 시험을 위해서는 24 well plate (NUNC, Cat. No., 142475, Danmark)가 사용되었다.

1.2 세포 독성 시험

본 발명에 따른 조성물이 장기간 사용 시에도 피부자극 없이 개선 효과를 보일 수 있는 지를 확인하기 위하여, 인간 각질형성 세포에 대한 세포 독성 유무를 시험하였다. 인간 각질형성 세포를 24 well plate에 5×10³ cells/well 씩 동일하게 heamacytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ~ 30%만큼 배양되면, 본 조성물이 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50 ul 첨가하고 3시간 추가로 배양하였다. 그 후, 세포 배양액을 전부 버리고, 200 ul의 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)를 각 well 당 200ul 처리하여 교반한 후, 100 ul 씩을 96 well로 취하여 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 독성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

Well 당 초기 배양 5×10³ 세포들이 배양용기 표면적의 25 ~ 30% 만큼 배양된 시점에서 10% 까지의 피부재생 및 피부진정용 화장품 조성물을 첨가하여 대조군과 비교한 세포 독성은 도 1과 같았다. 10%까지 처리한 결과 무처리군에 비해서 150.58±6.98%의 증식 정도를 보였다. 또한 5%, 1% 처리 시 각각 125.4±2.74%, 116.28±3.01%, 그리고 105.11±8.05%로 무처리군에 비해 약간의 증식 효과를 보였다. 본 결과는 조성물을 장기간 사용하여도 세포독성에 의한 피부자극이 유발되지 않음과 동시에 인간각질형성세포의 증식을 유도하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2: 상처재생 시험

인간각질형성세포주를 6 well plate에 2×10⁵ cells/well 씩 동일하게 hemocytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 90 ~ 100%만큼 배양되면, 각 세포에 날카로운 도구를 활용하여 십자형의 상처을 유발한 후 FBS-free DMEM에 본 발명 조성물이 10% 함유된 배양배지로 교체하여 48시간 더 배양하였다. 그후 현미경을 통하여 대조군(무처리군)과의 상처 후 재생증가량을 비교한 결과, 현미경으로 확인한 결과, 인간각질형성세포주에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비하여 상처재생능이 현저하게 증가함을 확인 할 수 있었다 (도 2)

실험예 3: 섬유아세포 증식능 시험

상처재생을 위하여는 섬유아세포의 증식이 필수적이여야 한다. 섬유아세포는 히알루론산, 콜라겐, 엘라스틴등의 피부 교원질을 생산하는 세포로써 주름개선 및 탄력을 위해서는 섬유아세포의 증식 및 분화가 이루어져야 한다. 본 실험을 위하여 섬유아세포주를 6 well plate에 2×10⁴ cells/well 씩 동일하게 hemocytometer를 이용하여 계수한 후 분주하였다. 10% FBS를 함유하는 DMEM에서 24시간 배양하여 배양용기 표면적의 40 ~ 50%만큼 배양되면, FBS-free DMEM에 본 발명의 조성물이 10% 함유된 배양배지로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 세포 염색을 한 후 현미경을 통하여 대조군(무처리군)과의 섬유아세포 증가량을 비교한 결과, 10% 함유 조성물이 섬유아세포 증식능이 현저히 증가됨을 알 수 있었으며 (도 3B), 데이터화 한 결과 대조군과 대비하여 약 230% 정도 섬유아세포의 증식을 촉진하였음을 확인할 수 있었다 (도 3A).

실험예 4:피부자극 실험

본 연구에 사용된 피부재생 및 피부진정용 화장품 조성물의 피부자극 정도를 측정하기 위해 10명의 피험자들을 대상으로 patch test를 실시하였다. 본 조성물 및 대조군을 100ul 함유하는 patch를 피험자의 팔 안쪽 깨끗한 부위에 부착하고 48시간 후에 흐르는 물로 씻어 낸 후 30분 후의 자극 정도를 판정하였다. 음성대조군은 순수한 물을 사용하였으며, 양성대조군은 5%의 SLS(Sodium Laureth Sulfate)를 사용하였다.

피부 반응의 평가는 자극 수치를 5단계로 나누어 판정한 결과 본 조성물의 피부자극성은 음성대조군에서 0, 양성대조군에서 40, 본 조성물은 2.5로 피부자극성이 거의 존재하지 않음을 확인하였다.

구 분	자 극 수 치					피부자극 평균정도(%)	자극성판정
구 분	4	3	2	1	0	피부자극 평균정도(%)	자극성판정
음성대조군	0	0	0	0	10	0	1
양성대조군	0	1	5	3	1	40	4
조성물	0	0	0	1	9	2.5	1

실험예 5: UV 세포손상 보호능 시험 방법

인간각질형성세포주인 HaCaT에 UV-B로 세포손상을 유발한 후 상처재생 및 피부진정용 화장품 조성물 을 처리 하였을때 UV-B에 의해 유도된 세포 독성을 상처재생 및 피부진정용 화장품 조성물이 얼마나 회복시키고 진정시키는지에 대한 영향을 시험하였다. 구체적인 시험 방법으로는 인간 피부세포의 일종인 인간각질형성세포주인 HaCaT 세포를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% fetal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-antimycotic (GIBCO, Cat No. 15240-062)과 함께 75 Cm² flask에서 37℃, 5% CO₂의 조건으로 배양하였다. 이 세포가 80%이상 confluence 일 때 계대배양 하여 6well에 1×10⁴로 분주 한 후 세포배양 조건에서 confluence가 80%이상 도달 될 때 까지 배양 하였다. 배지를 버린후 UV-B등으로 50mJ로 UV를 조사하였다. 그 다음 실시예 1에서 제조한 조성물을 처리 후 48시간 추가 배양하였다. 이후 MTT 용액(6.6mg/ml, 3-(4,5-dimethyl thiazol-2yl)-2,5 diphenyl-2H-tetrazolium bromide액)을 각 well에 50ul씩 넣고 3시간 추가 배양하였다. 배양액을 제거한 다음 dimethylsulfoxide(DMSO, Amresco, 0231-500ML)를 200ul씩 넣고 10분간 흔들어 준 다음 100ul씩 96well에 취하여 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) reader로 540nm에서 흡광도를 측정한다. 세포 회복 및 진정 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

세포회복 및 진정성(%) = (시험군의 흡광도/대조군의 흡광도)x100

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 세포에 UV-B를 처리했을 때 처리하지 않은 대조군에 비하여 약 40%정도 세포 손상을 입었다. 여기에 실시예 1의 조성물을 1%, 5%, 10% 처리한 결과 대부분의 농도에서 UV에 의한 세포손상을 회복시켰으며, 특히 10% 처리군에서는 세포손상이 완전히 회복되었으며, UV를 손상시키지 않을 때 보다 약 20%정도 세포증식능을 보였다.

화장료 조성물의 제조

본 발명의 펩타이드 및 성장인자 복합물을 유효성분으로 함유하는 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.

제조예 2-1: 화장수

다음 처방에 따라 통상의 화장수 제조 방법에 따라 제조하였다.

원 료 명	중량 %(w/w)
글리세린	5.0
디프로필렌글리콜	3.0
히아루론산	0.5
폴리옥시에틸렌 경화피마자유	0.1
폴리에틸렌 올레일에틸	0.1
에탄올	5.0
방부제	0.15
항료	적량
착색료	적량
펩타이드 및 성장인자 복합물	2.0
정제수	to 100

제조예 2-2: 에센스

다음 처방에 따라 통상의 에센스 제조 방법에 따라 제조하였다.

원 료 명	중량 %(w/w)
세토스테아릴알코올	1.0
자기유화형모노스테아린산	1.0
밀납	0.5
스쿠알란	5.0
이소세틸옥타노에이트	3.0
디메틸실록산	0.3
모노스테아린산소르비탄	0.5
모노스테아린산폴리에틸렌글리콜	8.0
글리세린	4.0
프로필렌글리콜	0.2
카르복시폴리머	0.22
트리에탄올아민	0.25
방부제	적량
향료	적량
착색료	적량
펩타이드 및 성장인자 복합물	7.0
정제수	to 100

제조예 2-3: 로션

다음 처방에 따라 통상의 로션 제조 방법에 따라 제조하였다.

원료명	중량 %(w/w)
세토스테아릴알코올	0.8
자기유화형모노스테아린산	1.0
밀납	0.5
스테아린산	0.5
유동파라핀	7.0
스쿠알란	5.0
마카데미아오일	3.0
이소세틸옥타노에이트	2.0
디메틸실록산	0.3
모노스테아린산소르비탄	0.5
모노스테아린산폴리에틸렌글리콜	1.2
글리세린	4.0
프로필렌글리콜	4.0
베타인	4.0
카르복시폴리머	0.12
트리에탄올아민	0.15
방부제	0.25
향료	적량
착색료	적량
펩타이드 및 성장인자 복합물	5.0
정제수	to 100

제조예 2-4: 크림

다음 처방에 따라 통상의 크림 제조 방법에 따라 제조하였다.

원 료 명	중량 %(w/w)
세토스테아릴알코올	3.0
자기유화형모노스테아린산	1.5
친유형모노스테아린산	1.5
밀납	0.5
유동파라핀	8.0
스쿠알란	7.0
이소세틸옥타노에이트	4.0
정제호호바유	4.0
디메틸실록산	0.3
모노스테아린산소르비탄	1.0
모노스테아린산폴리에틸렌글리콜	1.2
글리세린	6.0
프로필렌글리콜	4.0
베타인	4.0
산탄검	0.06
트리에탄올아민	0.10
방부제	0.25
향료	적량
착색료	적량
펩타이드 및 성장인자 복합물	7.0
정제수	to 100

제조예 2-5: 젤

다음 처방에 따라 통상의 젤 제조 방법에 따라 제조하였다.

원료명	중량 %(w/w)
글리세린	4.0
프로필렌글리콜	4.0
에탄올	10
폴리옥시에틸렌경화피마자유	0.1
카르복시폴리머	0.30
트리에탄올아민	0.30
방부제	적량
향료	적량
착색료	적량
펩타이드 및 성장인자 복합물	1.0
정제수	to 100

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> BIO FDNC MEDIANS <120> Cosmetic composition for skin regeneration and skin soothing comprising novel peptide and growth factor complex <130> P-20141028 <160> 9 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Prospin peptide <400> 1 Phe Ser Leu Leu Arg Tyr 1 5 <210> 2 <211> 159 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cDNA of EGF <400> 2 aatagtgact ctgaatgtcc cctgtcccac gatgggtact gcctccatga tggtgtgtgc 60 atgtatattg aagcattgga caagtatgca tgcaactgtg ttgttggcta catcggggag 120 cgatgtcagt accgagacct gaagtggtgg gaactgcgc 159 <210> 3 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein of EGF <400> 3 Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His 1 5 10 15 Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Asn 20 25 30 Cys Val Val Gly Tyr Ile Gly Glu Arg Cys Gln Tyr Arg Asp Leu Lys 35 40 45 Trp Trp Glu Leu Arg 50 <210> 4 <211> 441 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cDNA of bFGF <400> 4 cccgccttgc ccgaggatgg cggcagcggc gccttcccgc ccggccactt caaggacccc 60 aagcggctgt actgcaaaaa cgggggcttc ttcctgcgca tccaccccga cggccgagtt 120 gacggggtcc gggagaagag cgaccctcac atcaagctac aacttcaagc agaagagaga 180 ggagttgtgt ctatcaaagg agtgtgtgct aaccgttacc tggctatgaa ggaagatgga 240 agattactgg cttctaaatg tgttacggat gagtgtttct tttttgaacg attggaatct 300 aataactaca atacttaccg gtcaaggaaa tacaccagtt ggtatgtggc actgaaacga 360 actgggcagt ataaacttgg atccaaaaca ggacctgggc agaaagctat actttttctt 420 ccaatgtctg ctaagagctg a 441 <210> 5 <211> 146 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein of bFGF <400> 5 Pro Ala Leu Pro Glu Asp Gly Gly Ser Gly Ala Phe Pro Pro Gly His 1 5 10 15 Phe Lys Asp Pro Lys Arg Leu Tyr Cys Lys Asn Gly Gly Phe Phe Leu 20 25 30 Arg Ile His Pro Asp Gly Arg Val Asp Gly Val Arg Glu Lys Ser Asp 35 40 45 Pro His Ile Lys Leu Gln Leu Gln Ala Glu Glu Arg Gly Val Val Ser 50 55 60 Ile Lys Gly Val Cys Ala Asn Arg Tyr Leu Ala Met Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Leu Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu 85 90 95 Arg Leu Glu Ser Asn Asn Tyr Asn Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr 100 105 110 Ser Trp Tyr Val Ala Leu Lys Arg Thr Gly Gln Tyr Lys Leu Gly Ser 115 120 125 Lys Thr Gly Pro Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Met Ser Ala 130 135 140 Lys Ser 145 <210> 6 <211> 738 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cDNA of SCF <400> 6 atgaagaaga cacaaacttg gattctcact tgcatttatc ttcagctgct cctatttaat 60 cctctcgtca aaactgaagg gatctgcagg aatcgtgtga ctaataatgt aaaagacgtc 120 actaaattgg tggcaaatct tccaaaagac tacatgataa ccctcaaata tgtccccggg 180 atggatgttt tgccaagtca ttgttggata agcgagatgg tagtacaatt gtcagacagc 240 ttgactgatc ttctggacaa gttttcaaat atttctgaag gcttgagtaa ttattccatc 300 atagacaaac ttgtgaatat agtggatgac cttgtggagt gcgtgaaaga aaactcatct 360 aaggatctaa aaaaatcatt caagagccca gaacccaggc tctttactcc tgaagaattc 420 tttagaattt ttaatagatc cattgatgcc ttcaaggact ttgtagtggc atctgaaact 480 agtgattgtg tggtttcttc aacattaagt cctgagaaag ggaaggccaa aaatccccct 540 ggagactcca gcctacactg ggcagccatg gcattgccag cattgttttc tcttataatt 600 ggctttgctt ttggagcctt atactggaag aagagacagc caagtcttac aagggcagtt 660 gaaaatatac aaattaatga agaggataat gagataagta tgttgcaaga gaaagagaga 720 gagtttcaag aagtgtaa 738 <210> 7 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein of SCF <400> 7 Met Lys Lys Thr Gln Thr Trp Ile Leu Thr Cys Ile Tyr Leu Gln Leu 1 5 10 15 Leu Leu Phe Asn Pro Leu Val Lys Thr Glu Gly Ile Cys Arg Asn Arg 20 25 30 Val Thr Asn Asn Val Lys Asp Val Thr Lys Leu Val Ala Asn Leu Pro 35 40 45 Lys Asp Tyr Met Ile Thr Leu Lys Tyr Val Pro Gly Met Asp Val Leu 50 55 60 Pro Ser His Cys Trp Ile Ser Glu Met Val Val Gln Leu Ser Asp Ser 65 70 75 80 Leu Thr Asp Leu Leu Asp Lys Phe Ser Asn Ile Ser Glu Gly Leu Ser 85 90 95 Asn Tyr Ser Ile Ile Asp Lys Leu Val Asn Ile Val Asp Asp Leu Val 100 105 110 Glu Cys Val Lys Glu Asn Ser Ser Lys Asp Leu Lys Lys Ser Phe Lys 115 120 125 Ser Pro Glu Pro Arg Leu Phe Thr Pro Glu Glu Phe Phe Arg Ile Phe 130 135 140 Asn Arg Ser Ile Asp Ala Phe Lys Asp Phe Val Val Ala Ser Glu Thr 145 150 155 160 Ser Asp Cys Val Val Ser Ser Thr Leu Ser Pro Glu Lys Gly Lys Ala 165 170 175 Lys Asn Pro Pro Gly Asp Ser Ser Leu His Trp Ala Ala Met Ala Leu 180 185 190 Pro Ala Leu Phe Ser Leu Ile Ile Gly Phe Ala Phe Gly Ala Leu Tyr 195 200 205 Trp Lys Lys Arg Gln Pro Ser Leu Thr Arg Ala Val Glu Asn Ile Gln 210 215 220 Ile Asn Glu Glu Asp Asn Glu Ile Ser Met Leu Gln Glu Lys Glu Arg 225 230 235 240 Glu Phe Gln Glu Val 245 <210> 8 <211> 450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> cDNA of PGF <400> 8 atgccggtca tgaggctgtt cccttgcttc ctgcagctcc tggccgggct ggcgctgcct 60 gctgtgcccc cccagcagtg ggccttgtct gctgggaacg gctcgtcaga ggtggaagtg 120 gtacccttcc aggaagtgtg gggccgcagc tactgccggg cgctggagag gctggtggac 180 gtcgtgtccg agtaccccag cgaggtggag cacatgttca gcccatcctg tgtctccctg 240 ctgcgctgca ccggctgctg cggcgatgag aatctgcact gtgtgccggt ggagacggcc 300 aatgtcacca tgcagctcct aaagatccgt tctggggacc ggccctccta cgtggagctg 360 acgttctctc agcacgttcg ctgcgaatgc cggcctctgc gggagaagat gaagccggaa 420 aggtgcggcg atgctgttcc ccggaggtaa 450 <210> 9 <211> 149 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein of PGF <400> 9 Met Pro Val Met Arg Leu Phe Pro Cys Phe Leu Gln Leu Leu Ala Gly 1 5 10 15 Leu Ala Leu Pro Ala Val Pro Pro Gln Gln Trp Ala Leu Ser Ala Gly 20 25 30 Asn Gly Ser Ser Glu Val Glu Val Val Pro Phe Gln Glu Val Trp Gly 35 40 45 Arg Ser Tyr Cys Arg Ala Leu Glu Arg Leu Val Asp Val Val Ser Glu 50 55 60 Tyr Pro Ser Glu Val Glu His Met Phe Ser Pro Ser Cys Val Ser Leu 65 70 75 80 Leu Arg Cys Thr Gly Cys Cys Gly Asp Glu Asn Leu His Cys Val Pro 85 90 95 Val Glu Thr Ala Asn Val Thr Met Gln Leu Leu Lys Ile Arg Ser Gly 100 105 110 Asp Arg Pro Ser Tyr Val Glu Leu Thr Phe Ser Gln His Val Arg Cys 115 120 125 Glu Cys Arg Pro Leu Arg Glu Lys Met Lys Pro Glu Arg Cys Gly Asp 130 135 140 Ala Val Pro Arg Arg 145

Claims

EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 진정용 화장료 조성물.
EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 상처 재생용 화장료 조성물.
EGF(Epidermal Growth Factor), bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor), SCF(Stem Cell Factor) 및 PGF(Placenta Growth Factor)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자와 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 함유하는 피부 레이저 시술 부위에 도포하기 위한 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 N 말단에 니코틴산이 결합된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.