KR20160029866A - Formulations for the oral administration of therapeutic agents and related methods - Google Patents

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KR20160029866A
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fatty acid
ampb
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amphotericin
polyethylene oxide
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키쇼르 엠. 와산
엘렌 케이. 와산
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더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아
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Abstract

본 발명은 암포테리신 B 및 다른 치료제의 경구용 제제에 관한 것으로, 상기 제제는 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르 및 하나 이상의 PEG 개질된 인지질 또는 지방산 에스테르를 포함한다. 상기 제제는 위액 내의 낮은 pH에서 치료제의 증강된 생물학적 이용가능성 및/또는 증가된 안정성을 제공한다.The present invention relates to oral preparations of amphotericin B and other therapeutic agents comprising one or more fatty acid glycerol esters and one or more PEG modified phospholipids or fatty acid esters. Such formulations provide enhanced bioavailability and / or increased stability of the therapeutic agent at low pH in gastric juices.

Description

치료제의 경구 투여를 위한 제제 및 관련 방법{Formulations for the oral administration of therapeutic agents and related methods}≪ Desc / Clms Page number 2 > Formulations for oral administration of therapeutic agents and related methods

본 발명은 암포테리신 B 및 다른 치료제의 경구용 제제에 관한 것으로, 상기 제제는 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르 및 하나 이상의 PEG 개질된 인지질 또는 지방산 에스테르를 포함한다. 상기 제제는 위액 내의 낮은 pH에서 치료제의 증강된 생물학적 이용가능성 및/또는 증가된 안정성을 제공한다.The present invention relates to oral preparations of amphotericin B and other therapeutic agents comprising one or more fatty acid glycerol esters and one or more PEG modified phospholipids or fatty acid esters. Such formulations provide enhanced bioavailability and / or increased stability of the therapeutic agent at low pH in gastric juices.

본 출원은 2007년 5월 25일자로 출원된 미국 가출원 60/940,307과, 2007년 10월 1일자로 출원된 미국 가출원 60/976,708과, 2008년 4월 1일자로 출원된 미국 가출원 61/041,478에 의한 우선권을 주장하며, 이들 각 출원은 전체가 참조로 본원에 특별히 도입한다.This application is a continuation-in-part of U.S. Provisional Application No. 60 / 940,307, filed May 25, 2007, U.S. Provisional Application No. 60 / 976,708, filed October 1, 2007, and U.S. Provisional Application No. 61 / 041,478, filed April 1, , Each of which is specifically incorporated herein by reference in its entirety.

매년 인도 아대륙에서만 500,000 이상의 사람이, 마크로파지에 침습하고 중요 기관들에 빠르게 침입하여 결국에는 내장 세망내피계의 심각한 감염에 이르게 하는 잠행성 기생충인 내장 리슈만편모충의 숙주가 되고 있다. 흑혈병으로 알려진 내장 리슈만편모충증은 집단 중 내지 약자와 어린 아이에게 가장 널리 퍼진다. 치료하지 않고 방치할 경우, 감염된 사람의 거의 모두가 사망에 이른다. 내장 리슈만편모충증은 62개국의 2억 명 이상에게 영향을 미치고 있다. 리슈만편모충에 대한 치료 병기는 5가의 안티몬 화합물을 매일 주입하는 것을 포함한, 적은 수의 제제의 비경구투여로 제한되어 있다. 비록 안티몬보다는 고가이지만, 암포테리신 B(Amp B)는 97%의 치유율을 가지며 내성이 보고된바 없다. 그러나, 약물 요법은 30-40일 이상의 정맥주사 투여를 포함하며, 주입과 관련된 부작용(열, 오한, 뼈의 통증, 혈전성 정맥염)을 동반한다. 치유능력의 달성에도 영향을 미칠 수 있는 용량 제한 독성은 신장 장애이다. 더욱이 엄청나게 비싼 가격과 어려운 약물 투여 경로로 인하여 환자들에 대한 암포테리신 B의 접근성이 떨어지고 있다.Each year, more than 500,000 people in the Indian subcontinent are host to the visceral parasites, which are parasitic parasites that invade the macrophages and rapidly invade critical institutions, eventually leading to serious infections of the intestinal endothelial system. Known as the black blood clot, the visceral leishmaniasis is the most prevalent among the group to the weak and the young. If left untreated, nearly all of the infected people will die. Internal leishmaniasis affects more than 200 million people in 62 countries. Therapeutic staging for lichen mannitol is limited to parenteral administration of small numbers of preparations, including daily injections of pentavalent antimony compounds. Amphotericin B (Amp B) has a 97% cure rate and no resistance has been reported, although it is more expensive than antimony. However, pharmacotherapy involves intravenous administration for 30-40 days or more and is accompanied by side effects associated with infusion (fever, chills, bone pain, thrombophlebitis). Capacity limiting toxicity, which can also affect the achievement of healing capacity, is kidney failure. In addition, amphotericin B is less accessible to patients due to the prohibitively expensive price and difficult drug delivery routes.

선진국에서는 칸디다증, 히스토플라스마증, 콕시디아증, 아스페르길루스증과 같은 파종성의 진균 감염이 증가추세이고, 암, 기관 이식 환자, 당뇨, 및 HIV/AIDS 환자에 영향을 미치고 있다. 이러한 환자들 중 침윤성 진균 감염증이 사망자의 약 30%에 책임이 있다. 많은 수의 새로운 항진균제의 개발에도 불구하고, 정맥투여되는 미셀 및 리포좀성 분산액으로서 제제화된 암포테리신 B는 전신성 진균염(Systemic Fungal Infections)의 치료에 가장 효과적인 제제 중 하나로 남아있다. 또한, 다양한 비경구 제제 접근법이 AmpB 를 위해 연구되어 왔다. 비록 효과적이기는 하나, 암포테리신 B의 이러한 비경구 제제의 제약은 투여와 관련된 안정성 문제이다(유치 카테터, 적혈구 용혈로 인한 환자 오한과 떨림, 용량 의존적 신장독성).In developed countries, disseminated fungal infections such as candidiasis, histoplasmosis, coccidiasis, and aspergillosis are on the rise and affect cancer, organ transplant patients, diabetes, and HIV / AIDS patients. Invasive fungal infections among these patients account for about 30% of the deaths. Despite the development of a large number of new antifungal agents, amphotericin B formulated as intravenously administered micelles and liposomal dispersions remains one of the most effective agents for the treatment of Systemic Fungal Infections. A variety of parenteral formulation approaches have also been studied for AmpB. Although effective, the restriction of this parenteral formulation of amphotericin B is a matter of administration related stability (host catheter, patient chills and tremors due to erythrocyte hemolysis, dose-dependent renal toxicity).

파종성 진균 감염의 치료에 중요하게 적용될 수 있는 효과적이고 안전한 암포테리신 B의 경구용 제제의 개발은 내장 리슈만편모충증 치료에의 접근을 극적으로 확장시킬 것이다. 그러나 AmpB의 생물학적 이용가능성은 저 수용성과 위액 내 낮은 pH에서의 불안정성으로 인해 매우 낮다. 이러한 제약은 경구용 제제가 바람직한 다른 다양한 치료제에도 역시 적용된다. The development of effective and safe oral formulations of amphotericin B, which may be important for the treatment of disseminated fungal infections, will dramatically expand the approach to the treatment of visceral leishmaniasis. However, the bioavailability of AmpB is very low due to low water solubility and instability at low pH in gastric juice. This restriction also applies to various other therapeutic agents for which oral preparations are desirable.

다른 많은 치료제뿐만 아니라 암포테리신 B도 향상된 생물학적 이용가능성 및/또는 위액 내 낮은 pH에서 관심 있는 치료제의 증가된 안정성을 제공하는 효과적이고 안전한 경구용 제제가 필요하다. 본 발명은 이러한 필요를 충족시키고 나아가 관련된 우월성을 제공한다.As well as many other therapeutic agents, amphotericin B also requires an effective and safe oral formulation that provides enhanced bioavailability and / or increased stability of the therapeutic agent of interest at low pH in gastric juices. The present invention meets this need and further provides an associated superiority.

본 발명은 치료제의 제제화를 위한 조성물, 상기 조성물에 기초한 치료제 제제, 상기 제제를 이용하여 치료제를 투여하는 방법, 및 상기 제제를 이용하여 몸의 이상 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.The present invention provides a composition for formulating a therapeutic agent, a therapeutic agent formulation based on the composition, a method for administering a therapeutic agent using the agent, and a method for treating a disorder or disease of the body using the agent.

하나의 양태로서, 본 발명은 In one embodiment,

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하는 암포테리신 B 제제를 제공한다.(c) an amphotericin B formulation comprising at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

하나의 구체예로서, 암포테리신 B는 제제 내에서 제제의 약 0.5 내지 약 10 mg/mL의 양으로 존재한다. 하나의 구체예로서, 암포테리신 B는 제제 내지 약 5 mg/mL로 존재한다. 또 하나의 구체예로서, 암포테리신 B는 제제 내지 약 7 g/mL로 존재한다.In one embodiment, the amphotericin B is present in the formulation in an amount of about 0.5 to about 10 mg / mL of the formulation. In one embodiment, amphotericin B is present at about 5 mg / mL of formulation. In yet another embodiment, amphotericin B is present at about 7 g / mL of formulation.

하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 모노글리세리드를 약 32 내지 약 52 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 디글리세리드를 약 30 내지 약 50 중량% 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 트리글리세리드를 약 5 내지 약 20 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 올레산 모노글리세리드, 디글리세리드, 및 트리글리세리드를 약 60 중량% 이상 포함한다.In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 32% to about 52% by weight fatty acid monoglyceride. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 30% to about 50% by weight fatty acid diglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 5% to about 20% by weight fatty acid triglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises oleic acid monoglycerides, diglycerides, and triglycerides in an amount of at least about 60% by weight.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염의 C8-C22 포화 지방산 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 350 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 550 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 750 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 1000 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 염, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 제제 내에서 제제의 부피에 기초하여 1 mM 내지 약 30 mM의 양으로 존재한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 암모늄염 또는 나트륨염이다. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises a C8-C22 saturated fatty acid ester of a phosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is selected from the group consisting of distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 350 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 550 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene Glycol 750 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 1000 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 salt, and mixtures thereof. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present in the formulation in an amount of from 1 mM to about 30 mM based on the volume of the formulation. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is an ammonium salt or a sodium salt.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C8-C22 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C12-C18 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 라우르산 에스테르, 팔미트산 에스테르, 스테아르산 에스테르, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 약 750 내지 약 2000의 평균 분자량을 가지는 폴리에틸렌 옥시드를 포함한다.In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C8-C22 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C12-C18 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is selected from the group consisting of lauric acid esters, palmitic acid esters, stearic acid esters, and mixtures thereof. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises polyethylene oxide having an average molecular weight of about 750 to about 2000.

하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 20:80 내지 약 80:20 v/v이다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 60:40 v/v이다.In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is from about 20:80 to about 80:20 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is about 60:40 v / v.

하나의 구체예로서, 상기 제제는 글리세롤을 약 10 중량% 미만의 양으로 더 포함한다.In one embodiment, the formulation further comprises glycerol in an amount less than about 10% by weight.

하나의 구체예로서, 상기 제제는 자가 유화 약물 전달계이다.In one embodiment, the formulation is a self emulsifying drug delivery system.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 암포테리신 B 제제를 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는, 암포테리신 B를 투여하는 방법을 제공한다. 하나의 구체예로서, 상기 제제는 경구로 투여된다. 또 하나의 구체예로서, 상기 제제는 국부적으로 투여된다.In another aspect, the invention provides a method of administering amphotericin B comprising administering an amphotericin B preparation to a subject in need thereof. In one embodiment, the formulation is administered orally. In yet another embodiment, the formulation is administered locally.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 본 발명의 암포테리신 B 제제의 치료학적으로 효과적인 양을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 암포테리신 B 투여에 의해 치료할 수 있는 감염성 질환의 치료 방법을 제공한다. 하나의 구체예로서, 상기 제제는 경구로 투여된다. 또 하나의 구체예로서, 상기 제제는 국부적으로 투여된다.In another aspect, the invention provides a method of treating an infectious disease that can be treated by administration of amphotericin B, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the amphotericin B preparation of the invention ≪ / RTI > In one embodiment, the formulation is administered orally. In yet another embodiment, the formulation is administered locally.

상기 제제에 의해 치료할 수 있는 질환은 진균 감염, 내장 리슈만편모충증, 피부 리슈만편모충, 샤가스병, 알츠하이머병, 또는 열성 호중구 감소증(febrile neutropenia)을 포함한다. 상기 제제에 의해 치료할 수 있는 진균 감염은 아스페르길루스균증(aspergillosis), 블라스토미스진균증(blastomycosis), 칸디다증(candidiasis), 콕시디오이데스진균증(coccidioidomycosis), 크립토콕커스증(cryptococcosis), 히스토플라스마증(histoplasmosis), 뮤코르진균증(mucormycosis), 파라콕시디오이데스진균증(paracoccidioidomycosis), 또는 스포로트릭스증(Sporotrichosis)을 포함한다.Diseases that can be treated by the agent include fungal infections, intestinal leishmaniasis, skin leishmaniasis, chagas, Alzheimer's disease, or febrile neutropenia. Fungal infections that can be treated by the agents include but are not limited to aspergillosis, blastomycosis, candidiasis, coccidioidomycosis, cryptococcosis, Histoplasmosis, mucormycosis, paracoccidioidomycosis, or Sporotrichosis. The term " anastrozole "

또 하나의 양태로서, 본 발명은 In another aspect,

(a) 치료제,(a) a therapeutic agent,

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하는, 치료제의 전달을 위한 제제를 제공한다.(c) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

하나의 구체예로서, 상기 치료제는 제제 내에서 제제의 약 0.1 mg/mL 내지 약 25 mg/mL의 양으로 존재한다.In one embodiment, the therapeutic agent is present in the formulation in an amount from about 0.1 mg / mL to about 25 mg / mL of the formulation.

특정의 구현예로서, 상기 치료제는 항암제, 항생제, 항바이러스 약물, 항진균제, 항-프리온제, 항-아메바제, 비스테로이드성 항염증 약물, 항-알러지제, 면역억제제, 관상동맥 약물, 진통제, 국부 마취제, 항불안제, 진정제, 수면제, 편두통약, 멀미약, 및 구토제로 이루어진 군으로부터 선택된다.In certain embodiments, the therapeutic agent is selected from the group consisting of an anti-cancer agent, an antibiotic, an antiviral drug, an antifungal agent, an anti-prion agent, an anti-amoebic agent, a non- steroidal antiinflammatory drug, A topical anesthetic, an anxiolytic, a sedative, a hypnotic, a migraine, a suspending agent, and a vomiting agent.

특정 구현예로서, 상기 치료제는 테트라사이클린, 독시사이클린, 옥시테트라사이클린, 클로람페니콜, 에리스로마이신, 아시클로버, 이독수리딘, 트로만타딘, 미코나졸, 케토코나졸, 플루코나졸, 이트라코나졸, 에코나졸, 그리세오풀빈, 암포테리신 B, 니스타틴, 메트로니다졸, 메트로니다졸 벤조에이트, 티니다졸, 인도메타신, 이부프로펜, 피록시캄, 디클로페낙, 디소듐 크로모글리케이트, 니트로글리세린, 아이소소비드 디니트레이트, 베라파밀, 니페디핀, 딜티아젬, 디곡신, 몰핀, 사이클로포린, 부프레놀핀, 리도케인, 디아제팜, 니프라제팜, 플루라제팜, 에스타졸람, 플루니트라제팜, 트리아졸람, 알프라졸람, 미다졸람, 테마제팜 로르메타제팜, 브로티졸람, 클로바잠, 클로나제팜, 로라제팜, 옥사제팜, 부시프론, 수마트립탄, 에르고타민 유도체, 시나리진, 항히스타민제, 온다세트론, 트로피세트론, 그라니세트론, 메토클로프라미드, 디술피람, 비타민 K, 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, SN38, 시스플라틴, 및 카보플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다.In certain embodiments, the therapeutic agent is selected from the group consisting of tetracycline, doxycetelin, oxytetracycline, chloramphenicol, erythromycin, acyclovir, euglydine, tromanchedane, myconazole, ketoconazole, fluconazole, itraconazole, econazole, griseofulvin, Neuropathic pain, neuropathic pain, neuropathic pain, neuropathic pain, neuropathic pain, neuropathic pain, neuropathy, neuropathy, neuropathy, neuropathy, The present invention relates to a pharmaceutical composition containing at least one compound selected from the group consisting of gem, digoxin, morphine, cyclophorin, buprenorphine, lidocain, diazepam, nifrazem, flurazem, esrazolam, flunitrazem, triazolam, alprazolam, midazolam, Thiazolam, clobazam, clonazepam, lorazepam, oxazepam, bushflon, sumatriptan, ergotamine derivatives, Cina And is selected from the group consisting of angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, angiotensin, .

하나의 구체예로서, 상기 제제는 제2의 치료제를 추가로 포함한다.In one embodiment, the formulation further comprises a second therapeutic agent.

하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 모노글리세리드를 약 32 내지 약 52 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 디글리세리드를 약 30 내지 약 50 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 트리글리세리드를 약 5 내지 약 20 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 올레산 모노글리세리드, 디글리세리드, 및 트리글리세리드를 약 60 중량% 이상 포함한다.In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 32% to about 52% by weight fatty acid monoglyceride. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 30% to about 50% by weight of fatty acid diglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 5% to about 20% by weight fatty acid triglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises oleic acid monoglycerides, diglycerides, and triglycerides in an amount of at least about 60% by weight.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염의 C8-C22 포화 지방산 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 350 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 550 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 750 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 1000 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 염, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 제제 내에서 제제의 부피에 기초하여 1 mM 내지 약 30 mM의 양으로 존재한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 암모늄염 또는 나트륨염이다. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises a C8-C22 saturated fatty acid ester of a phosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is selected from the group consisting of distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 350 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 550 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene Glycol 750 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 1000 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 salt, and mixtures thereof. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present in the formulation in an amount of from 1 mM to about 30 mM based on the volume of the formulation. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is an ammonium salt or a sodium salt.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C8-C22 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C12-C18 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 라우르산 에스테르, 팔미트산 에스테르, 스테아르산 에스테르, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 약 750 내지 약 2000의 평균 분자량을 가지는 폴리에틸렌 옥시드를 포함한다.In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C8-C22 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C12-C18 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is selected from the group consisting of lauric acid esters, palmitic acid esters, stearic acid esters, and mixtures thereof. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises polyethylene oxide having an average molecular weight of about 750 to about 2000.

하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 20:80 내지 약 80:20 v/v이다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 60:40 v/v이다.In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is from about 20:80 to about 80:20 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is about 60:40 v / v.

하나의 구체예로서, 상기 제제는 글리세롤을 약 10 중량% 미만의 양으로 더 포함한다.In one embodiment, the formulation further comprises glycerol in an amount less than about 10% by weight.

하나의 구체예로서, 상기 제제는 자가 유화 약물 전달계이다.In one embodiment, the formulation is a self emulsifying drug delivery system.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 치료제 제제를 이러한 제제를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는, 치료제를 투여하는 방법을 제공한다. 하나의 구체예로서, 상기 제제는 경구로 투여된다. 또 하나의 구체예로서, 상기 제제는 국부적으로 투여된다. In another aspect, the invention provides a method of administering a therapeutic agent, comprising administering the therapeutic agent to a subject in need of such agent. In one embodiment, the formulation is administered orally. In yet another embodiment, the formulation is administered locally.

또 하나의 양태로서, 본 발명은In another aspect,

(a) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(a) at least one fatty acid glycerol ester; And

(b) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하는, 치료제의 제제화를 위한 조성물을 제공한다.(b) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 모노글리세리드를 약 32 내지 약 52 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 디글리세리드를 약 30 내지 약 50 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 지방산 트리글리세리드를 약 5 내지 약 20 중량%로 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 올레산 모노글리세리드, 디글리세리드, 및 트리글리세리드를 약 60 중량% 이상 포함한다.In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 32% to about 52% by weight fatty acid monoglyceride. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 30% to about 50% by weight of fatty acid diglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 5% to about 20% by weight fatty acid triglycerides. In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises oleic acid monoglycerides, diglycerides, and triglycerides in an amount of at least about 60% by weight.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염의 C8-C22 포화 지방산 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 350 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 550 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 750 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 1000 염, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 염, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 제제 내에서 제제의 부피에 기초하여 1 mM 내지 약 30 mM의 양으로 존재한다. 하나의 구체예로서, 상기 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 암모늄염 또는 나트륨염이다. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises a C8-C22 saturated fatty acid ester of a phosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing phospholipid comprises distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is selected from the group consisting of distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 350 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 550 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene Glycol 750 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 1000 salt, distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 salt, and mixtures thereof. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present in the formulation in an amount of from 1 mM to about 30 mM based on the volume of the formulation. In one embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is an ammonium salt or a sodium salt.

하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C8-C22 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 C12-C18 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함한다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 라우르산 에스테르, 팔미트산 에스테르, 스테아르산 에스테르, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예로서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 약 750 내지 약 2000의 평균 분자량을 가지는 폴리에틸렌 옥시드를 포함한다.In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C8-C22 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C12-C18 saturated fatty acid. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is selected from the group consisting of lauric acid esters, palmitic acid esters, stearic acid esters, and mixtures thereof. In one embodiment, the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises polyethylene oxide having an average molecular weight of about 750 to about 2000.

*하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 20:80 내지 약 80:20 v/v이다. 하나의 구체예로서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율은 약 60:40 v/v이다.In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is from about 20: 80 to about 80: 20 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is about 60:40 v / v.

하나의 구체예로서, 상기 조성물은 글리세롤을 약 10 중량% 미만의 양으로 더 포함한다.In one embodiment, the composition further comprises glycerol in an amount less than about 10% by weight.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 치료제의 제제화를 위한 본 발명의 조성물과 함께 치료제를 조합하는 것을 포함하는, 치료제를 제제화하는 방법을 제공한다.In another aspect, the invention provides a method of formulating a therapeutic agent comprising combining a therapeutic agent with a composition of the invention for the formulation of a therapeutic agent.

본 발명은 치료제의 제제화를 위한 조성물을 제공한다. 이 조성물은 치료제, 특히 난용성인 치료제의 용해도를 높이는데 효과적이다. 이 조성물은 유리하게 치료제의 생물학적 이용가능성을 증강시킨다. 본 발명은 또한 치료제의 전달, 특히 치료제의 경구투여에 효과적인 조성물에 기초한 치료제 제제를 제공한다. 암포테리신 B 제제는 본원에서 대표적인 예로서 사용되나, 당업자는 그러한 제제가 다양한 치료제에 적용될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물에 기초한 암포테리신 B 제제를 제공한다. 이 암포테리신 B 제제는 증가된 암포테리신 B 농도를 가지는 제제를 제공하는 암포테리신 B를 효과적으로 가용화시키고, 동시에 향상된 암포테리신 B의 생물학적 이용가능성을 제공한다.The present invention provides a composition for the formulation of therapeutic agents. This composition is effective for increasing the solubility of a therapeutic agent, particularly a poorly therapeutic agent. This composition advantageously enhances the bioavailability of the therapeutic agent. The present invention also provides therapeutic agents based on compositions effective for the delivery of therapeutic agents, particularly for oral administration of therapeutic agents. Amphotericin B preparations are used herein as representative examples, but those skilled in the art will appreciate that such agents can be applied to a variety of therapeutic agents. Thus, in one aspect, the present invention provides an amphotericin B formulation based on said composition. This amphotericin B preparation effectively solubilizes amphotericin B, which provides a formulation with increased amphotericin B concentration, while at the same time providing improved bioavailability of amphotericin B.

암포테리신 B 제제Amphotericin B preparation

하나의 양태로서, 본 발명은 암포테리신 B 제제, 제제를 만드는 방법, 제제를 이용한 암포테리신 B의 투여 방법, 및 제제의 투여에 의해 암포테리신 B로 치료가능한 질병을 치료하는 방법을 제공한다. In one embodiment, the invention provides amphotericin B formulations, methods of making formulations, methods of administering amphotericin B using the formulations, and methods of treating diseases treatable with amphotericin B by the administration of formulations do.

암포테리신 B는 효과적인 항진균제이고 현재 대부분의 심각한 전신성 진균 감염증 치료에 선택되는 약품이다. 그 약품은 진균 세포막의 주 스테롤 성분인 에르고스테롤에 강하게 결합하고 세포막에 구멍을 형성하여 세포막의 붕괴, 세포 투과성 향상, 세포 용해를 야기한다. Amphotericin B is an effective antifungal agent and is currently the drug of choice for the treatment of most serious systemic fungal infections. The drug binds strongly to ergosterol, a major sterol component of the fungal cell membrane, and forms a hole in the cell membrane, causing cell membrane breakdown, cell permeability enhancement, and cell lysis.

암포테리신 B는 여러 가지 불리한 속성에 의하여 임상적인 투여에서 제한이 있다. 첫째, 암포테리신 B는 대부분의 포유류 세포막에 존재하는 스테롤인 콜레스테롤에 강한 결합력을 가지므로 숙주 세포를 붕괴시킬 수 있다. 이는 약품의 신장 독성에 이르게 한다. 둘째, 암포테리신 B는 낮은 가용성과 위의 산성 환경에서의 민감성으로 인해 위장관에 흡수되지 않는다. 이 문제를 극복하기 위해 암포테리신 B는 임의의 전신성 진균 감염의 치료를 위해 리포좀(AMBISOME®)이나 콜로이드 분산액(FUNGIZONE®, ABELCET®)으로서 비경구적으로 사용된다(Arikan and Rex, 2001. Lipid-based antifungal agents: current status. Curr . Pharm . Des. 5, 393-415).Amphotericin B has limitations in clinical administration due to its various adverse properties. First, amphotericin B has strong binding affinity to the cholesterol, the sterol present in most mammalian cell membranes, and can disrupt host cells. This leads to renal toxicity of the drug. Second, amphotericin B is not absorbed into the gastrointestinal tract due to its low solubility and sensitivity to acidic environment. To overcome this problem, amphotericin B is used parenterally as a liposome (AMBISOME®) or a colloidal dispersion (FUNGIZONE®, ABELCET®) for the treatment of any systemic fungal infection (Arikan and Rex, 2001. Lipid- based antifungal agents:.... current status Curr Pharm Des 5, 393-415).

그러나 정맥 주사 및 암포테리신 B의 주입은 심각한 단점이 있다. 첫째, 정맥 주사 및 암포테리신 B의 주입은 혈액 내 약품의 농도의 상당한 변동 및 신장 독성과 같은 부작용과 관련되어 있다(Muller et al., 2000, Nanosuspensions for the formulation of poorly soluble drugs-rationale for development and what we can expect for the future. In: Nielloud, F., Marti-Mestres, G. (Eds.), Pharmaceutical emulsions and suspensions. Plenum Press/Marcel Dekker, New York, pp. 383-408). 둘째, 고가인데다, 암포테리신 B 제제의 주사 및 주입은 유행국가(endemic country)의 투여에서 낮은 순응도 및 기술적 문제점이 존재한다.However, intravenous infusion and amphotericin B infusion have serious drawbacks. First, intravenous and infusion of amphotericin B have been associated with adverse effects such as significant changes in the concentration of drug in the blood and kidney toxicity (Muller et al., 2000). F., Marti-Mestres, G. (Eds.), Pharmaceutical emulsions and suspensions, Plenum Press / Marcel Dekker, New York, pp. 383-408). Second, injection and infusion of amphotericin B preparations are expensive, and there is low compliance and technical problems in the administration of endemic countries.

하나의 구체예로서, 본 발명은 경구로 투여될 수 있는 암포테리신 B 제제를 제공함으로써 이러한 단점을 극복한다. 본 발명의 경구용 암포테리신 B 제제는 환자의 순응도를 높이고, 약품의 약물 동력학을 증강시키며, 위장관에서의 암포테리신 B 흡수를 증가를 기대할 수 있다.In one embodiment, the present invention overcomes this disadvantage by providing an amphotericin B preparation that can be administered orally. The oral amphotericin B formulations of the invention can be expected to increase patient compliance, enhance drug pharmacokinetics, and increase amphotericin B uptake in the gastrointestinal tract.

암포테리신 B는 스트렙토마이시스 노도수스(Streptomyces nodosus M4575)으로부터 얻어지는 항진균성 폴리엔 항생제이다. 암포테리신 B는 화학적으로 [1R-(1R*,3S*,5R*,6R*,9R*,11R*,15S*,16R*,17R*,18S*,19E,21E,23E,25E,27E,29E,31E,33R*,35S*,36R*,37S,)]-33-[(3-아미노-3,6-디데옥시-β-D-만노피라노실) 옥시]1,3,5,6,9,11,17,37-옥타히드록시-15,16,18-트리메틸-13-옥소-14,39-디옥사비시클로-[33.3.1] 노나트리아콘타-19,21,23,25,27,29,31-헵타인-36-카르복시산를 가리킨다. 암포테리신 B의 화학적 구조는 도 1A에 나타나 있다. 결정형 암포테리신 B는 물에 불용성이다.Amphotericin B is a member of Streptomyces < RTI ID = 0.0 > nodosus M4575). < / RTI > Amphotericin B can be chemically synthesized from [1R- (1R *, 3S *, 5R *, 6R *, 9R *, 11R *, 15S *, 16R *, 17R *, 18S *, 19E, 21E, 23E, 25E, 27E (3-amino-3,6-dideoxy-β-D-mannopyranosyl) oxy] 1,3,5, 6,9,11,17,37-octahydroxy-15,16,18-trimethyl-13-oxo-14,39-dioxabicyclo- [33.3.1] nona triaconta-19,21,23 , 25,27,29,31-heptane-36-carboxylic acid. The chemical structure of amphotericin B is shown in Figure 1A. Crystalline amphotericin B is insoluble in water.

하나의 양태로서, 본 발명은 암포테리신 B 제제를 제공한다. 본 발명의 암포테리신 B 제제는 In one embodiment, the present invention provides an amphotericin B preparation. The amphotericin B preparation of the present invention

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함한다.(c) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

대표적인 제제에서, 암포테리신 B는 제제 내지 약 0.5 내지 약 10 mg/mL의 양으로 존재한다. 하나의 구체예에서, 암포테리신 B 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 제제 안에 약 5 mg/mL 존재한다. 하나의 구체예에서, 암포테리신 B 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 제제 안에 약 7 mg/mL 존재한다. In a representative formulation, amphotericin B is present in the formulation in an amount of about 0.5 to about 10 mg / mL. In one embodiment, amphotericin B or a pharmaceutically acceptable salt thereof is present at about 5 mg / mL in the formulation. In one embodiment, amphotericin B or a pharmaceutically acceptable salt thereof is present in the formulation at about 7 mg / mL.

암포테리신 B는 제제는 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르를 포함하며, 일반적으로 지방산 글리세롤 에스테르의 혼합물을 포함한다. 본 발명에서 사용된 용어 "지방산 글리세롤 에스테르"란, 글리세롤과 모노-, 디-, 트리-에스테르(즉, 글리세리드)를 포함하는 하나 이상의 지방산 사이에 형성된 에스테르를 말한다. 적합한 지방산은 8 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 포화 및 불포화 지방산(즉, C8-C22 지방산)을 포함한다. 특정 구체예에서, 적합한 지방산은 C12-C18 지방산을 포함한다.Amphotericin B formulations comprise one or more fatty acid glycerol esters, and generally comprise a mixture of fatty acid glycerol esters. As used herein, the term "fatty acid glycerol ester " refers to an ester formed between one or more fatty acids comprising glycerol and a mono-, di-, tri- ester (i.e., glyceride). Suitable fatty acids include saturated and unsaturated fatty acids having 8 to 22 carbon atoms (i.e., C8-C22 fatty acids). In certain embodiments, suitable fatty acids include C12-C18 fatty acids.

제제 내에서 유용한 지방산 글리세롤 에스테르는 상업적으로 이용가능한 원료를 제공받을 수 있다. 지방산 글리세롤 에스테르의 대표적인 원료는 보통 "글리세릴 올레산염" 또는 "글리세릴 모노올레산염"으로 통칭되는 PECEOL®(Gattefosse, Saint Priest Cedex, France)로서, 상업적으로 이용가능한 모노-, 디-, 트리-에스테르의 혼합물이다. PECEOL®가 제제의 지방산 글리세롤 에스테르의 원료로 사용되는 경우, 지방산 글리세롤 에스테르는 지방산 모노글리세리드 약 32 내지 약 52 중량%, 지방산 디글리세리드 약 30 내지 약 50 중량%, 지방산 트리글리세리드 약 5 내지 약 20 중량%로 포함한다. 지방산 글리세롤 에스테르는 약 60 중량% 이상 올레산 모노-, 디-, 및 트리글리세리드를 포함한다. 기타 지방산 글리세롤 에스테르는 팔미트산(C16)(약 12% 미만), 스테아릭산(C18)(약 6% 이하), 리놀레산(C18:2)(약 35% 이하), 리놀렌산(C18:3)(약 2% 이하), 아라키돈산(C20)(약 2% 이하), 및 에이코세노산(C20:1)(약 2% 이하)을 포함한다. PECEOL®은 또한 유리 글리세롤(일반적으로 약 1%)을 포함한다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르는 지방산 모노글리세리드 약 44 중량%, 지방산 디글리세리드 약 45 중량%, 및 지방산 트리글리세리드 약 9 중량%을 포함하고, 또한 지방산 글리세롤 에스테르는 약 78 중량%로 올레산(C18:1) 모노-, 디-, 및 트리글리세리드를 포함한다. 기타 지방산 글리세롤 에스테르는 팔미트산(C16)(약 4% 미만), 스테아릭산(C18)(약 2% 이하), 리놀레산(C18:2)(약 12% 이하), 리놀렌산(C18:3)(약 1% 이하),아라키돈산(C20)(약 1% 이하), 및 에이코세노산(C20:1)(약 1% 이하)을 포함한다.Useful fatty acid glycerol esters in the formulation may be provided with commercially available raw materials. Representative starting materials for fatty acid glycerol esters are commercially available mono-, di-, tri-, and tri-olefins as PECEOL® (Gattefosse, Saint Priest Cedex, France), commonly referred to as "glyceryl oleate" or "glyceryl monooleate" Ester. When PECEOL is used as a source of the fatty acid glycerol ester of the preparation, the fatty acid glycerol ester may be present in an amount of from about 32 to about 52 wt.% Fatty acid monoglyceride, from about 30 to about 50 wt.% Fatty acid diglyceride, from about 5 to about 20 wt.% Fatty acid triglyceride, . Fatty acid glycerol esters include oleic acid mono-, di-, and triglycerides, at least about 60% by weight. Other fatty acid glycerol esters are palmitic acid (C16) (less than about 12%), stearic acid (less than about 6%), linoleic acid (less than about 35%), linolenic acid About 2% or less), arachidonic acid (C20) (about 2% or less), and eicosanoic acid (C20: 1) (about 2% or less). PECEOL (R) also contains free glycerol (typically about 1%). In one embodiment, the fatty acid glycerol ester comprises about 44 weight percent fatty acid monoglyceride, about 45 weight percent fatty acid diglyceride, about 9 weight percent fatty acid triglyceride, and about 78 weight percent fatty acid glycerol ester, : 1) mono-, di-, and triglycerides. Other fatty acid glycerol esters are palmitic acid (C16) (less than about 4%), stearic acid (less than about 2%), linoleic acid (less than about 12%), linolenic acid About 1% or less), arachidonic acid (C20) (about 1% or less), and eicosanoic acid (C20: 1) (about 1% or less).

특정 구체예로서, 본 발명의 제제는 10 중량% 미만의 양으로 글리세롤을 포함할 수 있다.In certain embodiments, the formulation of the present invention may comprise glycerol in an amount less than 10% by weight.

암포테리신 B 제제: 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질(DSPE-PEGs)Amphotericin B formulation: Polyethylene oxide-containing phospholipids (DSPE-PEGs)

암포테리신 B 제제는 하나 이상의 폴리에톡실레이트 리피드를 포함한다. 구체적인 실시예에서, 폴리에톡실레이트 리피드는 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질, 또는 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질의 혼합물이다. 또 다른 구체예에서, 폴리에톡실레이트 리피드는 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르, 또는 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 혼합물이다.Amphotericin B preparations include one or more polyethoxylate lipids. In a specific embodiment, the polyethoxylate lipid is a mixture of a polyethylene oxide-containing phospholipid, or a polyethylene oxide-containing phospholipid. In another embodiment, the polyethoxylate lipid is a mixture of a polyethylene oxide-containing fatty acid ester, or a polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

따라서, 구체적인 실시예에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는Thus, in a specific embodiment, the amphotericin B preparation of the invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질을 포함한다.(c) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid.

본 발명에서 사용된 용어 "폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질"이란 일반적으로 카바메이트 또는 에스테르 결합을 통해 인지질과 공유결합을 하는 폴리에틸렌 옥시드 그룹(즉, 폴리에틸렌 글리콜 그룹)을 포함하는 인지질을 의미한다. 인지질은 글리세롤에서 유래하고 인산 에스테르 그룹 및 두 개의 지방산 에스테르 그룹을 포함할 수 있다. 적합한 지방산은 8 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 포화 및 불포화 지방산(즉, C8-C22 지방산)을 포함한다. 특정 구체예에서, 적합한 지방산은 포화된 C12-C18 지방산을 포함한다. 대표적인 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질은 포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염의 C8-C22 포화 지방산 에스테르를 포함한다. 특정 구체예에서, 적합한 지방산은 포화된 C12-C18 지방산을 포함한다. As used herein, the term "polyethylene oxide-containing phospholipid" means a phospholipid comprising a polyethylene oxide group (i.e., a polyethylene glycol group) that is covalently bonded to a phospholipid via a carbamate or ester bond. Phospholipids are derived from glycerol and can include phosphoric acid ester groups and two fatty acid ester groups. Suitable fatty acids include saturated and unsaturated fatty acids having 8 to 22 carbon atoms (i.e., C8-C22 fatty acids). In certain embodiments, suitable fatty acids include saturated C12-C18 fatty acids. Representative polyethylene oxide-containing phospholipids include C8-C22 saturated fatty acid esters of phosphatidylethanolamine polyethylene glycol salts. In certain embodiments, suitable fatty acids include saturated C12-C18 fatty acids.

폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질의 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 분자량은 제제로서 치료제(즉, 암포테리신 B)의 용해도를 최적화하기 위하여 다양화할 수 있다. 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 대표적인 평균 분자량은 약 200 내지 약5000(즉, PEG 200에서 PEG 5000)일 수 있다.The molecular weight of the polyethylene oxide group of the polyethylene oxide-containing phospholipid can be varied to optimize the solubility of the therapeutic agent (i. E., Amphotericin B) as a formulation. Typical average molecular weights of the polyethylene oxide groups may range from about 200 to about 5000 (i.e., PEG 200 to PEG 5000).

하나의 구체예에서, 폴리에틸렌-함유 인지질은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염이다. 대표적인 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 350 염(DSPE-PEG-350), 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 550 염(DSPE-PEG-550), 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 750 염(DSPE-PEG-750), 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 1000 염(DSPE-PEG-1000), 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 1500 염(DSPE-PEG-1500), 및 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 염(DSPE-PEG-2000)을 포함한다. 이들의 혼합물 역시 이용될 수 있다. 상기의 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염에서 숫자(즉, 350, 550, 750, 1000, 및 2000)는 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 평균 분자량을 가리킨다.In one embodiment, the polyethylene-containing phospholipid is distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. Representative distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salts include distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 350 salt (DSPE-PEG-350), distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 550 salt (DSPE-PEG-550), (DSPE-PEG-750), distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 1000 salt (DSPE-PEG-1000), distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 1500 salt (DSPE- DSPE-PEG-1500), and distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 salt (DSPE-PEG-2000). Mixtures of these may also be used. The numbers (i.e., 350, 550, 750, 1000, and 2000) in the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt indicate the average molecular weight of the polyethylene oxide group.

적합한 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 암모늄염과 나트륨염을 포함한다. Suitable distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salts include ammonium salts and sodium salts.

디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 (DSPE-PEG-2000) 암모늄염의 화학구조는 도 1B에 나타내었다. 도 1B에 의하면 폴리에틸렌-함유 인지질은 인산 에스테르 그룹과 두 개의 지방산 에스테르(스테아르산염) 그룹, 및 카바마이트 결합을 통해서 포스파티딜 에탄올아민의 아미노 그룹에 공유결합하는 폴리에틸렌 옥시드 그룹을 포함한다.The chemical structure of distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 (DSPE-PEG-2000) ammonium salt is shown in Figure 1B. According to FIG. 1B, the polyethylene-containing phospholipid comprises a phosphoric acid ester group and two fatty acid ester (stearate) groups, and a polyethylene oxide group covalently bonded to the amino group of phosphatidylethanolamine through a carbamate bond.

상기에서 언급한 바에 따라, 폴리에틸렌-함유 인지질은 치료제의 가용 능력을 높이기 위한 제제의 능력에 영향을 미친다. 일반적으로, 폴리에틸렌-함유 인지질의 양이 많을수록, 용해되기 어려운 치료제에 대한 제제의 가용화 능력이 높아진다. 폴리에틸렌-함유 인지질은 제제 내에서 제제 부피에 기초하여 약 1 mM 내지 약 30 mM 로 존재할 수 있다. 특정 구체예에서, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 제제 내에서 제제 부피에 기초하여 약 15 mM로 존재한다.As mentioned above, the polyethylene-containing phospholipids affect the ability of the formulation to increase the solubility of the therapeutic agent. Generally, the greater the amount of polyethylene-containing phospholipids, the higher the ability of the formulation to solubilize the therapeutic agent that is difficult to dissolve. The polyethylene-containing phospholipid may be present in the formulation at about 1 mM to about 30 mM based on the formulation volume. In certain embodiments, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present at about 15 mM based on the formulation volume in the formulation.

도 2 는 AmpB/PECEOL® 제제(폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하고 있지 않음)안의 암포테리신 B 농도와 5, 10, 및 15mM 농도에서 DSPE-PEG-2000를 포함하고 있는 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000)를 비교한 것이다. AmpB는 45℃에서 24시간 후에 원심분리된 샘플의 자외선 흡광도로 측정하였다. Figure 2 shows the effect of DSPE-PEG-2000 at 5, 10, and 15 mM concentrations on amphotericin B concentration in AmpB / PECEOL® preparations (not containing polyethylene oxide-containing phospholipids or polyethylene oxide-containing fatty acid esters) (AmpB / PECEOL (R) / DSPE-PEG-2000) of the present invention. AmpB was measured by ultraviolet absorbance of the centrifuged sample after 24 hours at 45 ° C.

구체적인 실시예에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는In a specific embodiment, the amphotericin B preparation of the invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 올레산 글리세롤 에스테르; 및 (b) oleic acid glycerol ester; And

(c) 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다.(c) distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt.

구체적인 실시예에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는 암포테리신 B, PECEOL®, 및 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 구체예에서, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 약 30 mM 까지 존재한다.In a specific embodiment, the amphotericin B formulations of the present invention comprise amphotericin B, PECEOL®, and distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salts. In embodiments, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present at up to about 30 mM.

폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질을 포함하는 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 제조 및 특성분석은 실시예 1에 기술하였다.Preparation and characterization of representative amphotericin B formulations of the present invention comprising polyethylene oxide-containing phospholipids are described in Example 1. [

폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질을 포함하는 암포테리신 B 제제는 부분적으로 용해되고 순수한 고체의 분산액을 제공하는 고체 입자로 존재하는 암포테리신 B를 포함한다. 수용성 배지 내 제제의 분산액은 약 50 nm 내지 약 5 μm 크기 내 범위에서 에멀전 액적을 가지는 나노-/마이크로 에멀전을 제공한다.Amphotericin B formulations comprising a polyethylene oxide-containing phospholipid include amphotericin B, which is present as solid particles that provide a dispersion of partially dissolved and pure solids. The dispersion of the formulation in the aqueous medium provides a nano- / microemulsion having an emulsion droplet in the range of about 50 nm to about 5 μm in size.

폴리에틸렌 글리콜 분자량은 37℃ 상에서 2시간 동안 혼합된 인공 장액(표 3) 내의 에멀전 액적에 명확한 영향을 미치지 못한다. 서브마이크론 평균 직경은 300-600 nm 범위의 매우 넓은 다분산성이 관찰되었다. 또한, 바이모달 입자 크기 분포 역시 생생되었는데, 서브마이크론 범위(150-300 nm)의 중심에 위치한 하위집단(약 20%)과 1-2 μm 범위의 다른 하위집단(80%)이다. PECEOL® 단독 내의 AmpB 또한 인공 장액 내에서 비슷한 크기의 액적과 분포를 형성하였다.The molecular weight of polyethylene glycol has no definite effect on the emulsion droplets in the artificial intestinal fluid (Table 3) mixed for 2 hours at 37 占 폚. The submicron average diameter was observed to be very broad in the range of 300-600 nm. In addition, bimodal particle size distributions also emerge, with subgroups (approximately 20%) located at the center of the submicron range (150-300 nm) and other subgroups (80%) ranging from 1-2 μm. PECEOL® alone AmpB also formed similar droplets and distributions within the artificial intestinal fluid.

경구 투여용 제제로서의 효능을 결정하기 위하여, 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성을 인공 장액 내에서 평가하였다. 도 3A 은 다양한 농도(0.5-15 μg/ml)에서 SGF(stimulated gastric fluid)에서 배양된 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(PECEOL®/DSPE-PEG)의 시간에 따른 UV 흡수 스펙트럼을 비교한 것이다. 배양시간 60분까지의 함수에서 어떤 농도에서도 피크 농도 및 비율의 변화가 없다. 도 3B는 AmpB 흡광도 대 농도의 표준 곡선을 그리기 위해 407 nm에서의 피크 높이를 이용하여 결합된 도 2A의 데이터의 표준곡선을 비교한 것이다. 다른 표준곡선은 다양한 DSPE-PEG분자량에서의 각 제제를 위해 준비되었다. 도 4는 37℃, 인공 위액 내에서 시간(10, 30, 및 120 분)의 함수에 따른 본 발명의 대표적인 제제(PECEOL®/DSPE-PEG 350, 550, 750, 및 2000) 내에서의 AmpB의 안정성과 AmpB/PECEOL® 제제 내에서의 AmpB의 안정성을 비교한 것이다. 데이터는 각각 세 번식 수행된 세 가지 독립된 실험의 mean±SD 로 나타내었다. 본 발명의 평가된 대표적인 제제 각각은 평가된 시간 동안 인공 장액 내에서의 안정성을 나타낸다.To determine its efficacy as a formulation for oral administration, the stability of representative amphotericin B formulations of the present invention was evaluated in artificial intestinal fluids. Figure 3A compares the UV absorption spectra over time for representative AmpB formulations (PECEOL® / DSPE-PEG) of the invention cultured in SGF (stimulated gastric fluid) at various concentrations (0.5-15 μg / ml). There is no change in the peak concentration and the ratio at any concentration in the function up to the incubation time of 60 minutes. Figure 3B compares the standard curves of the data of Figure 2A combined using a peak height at 407 nm to draw a standard curve of AmpB absorbance versus concentration. Other standard curves were prepared for each formulation at various DSPE-PEG molecular weights. Figure 4 shows the effect of AmpB in a representative formulation of the invention (PECEOL® / DSPE-PEG 350, 550, 750 and 2000) as a function of time (10, 30, and 120 min) Stability and the stability of AmpB in AmpB / PECEOL® preparations. Data were expressed as mean ± SD of three independent experiments, each of which was performed in triplicate. Each of the evaluated representative agents of the invention exhibits stability in the artificial intestinal fluid for an estimated time.

또한, 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성은 레시틴이 포함 및 불포함된 공복 상태의 인공 장액(FSSIF), 및 판크레아틴 효소가 포함된 인공 장액 내에서 평가하였다. 도　5A와 5B는 37℃, 레시틴이 포함 및 불포함된 공복 상태의 인공 장액(FSSIF) 내에서 시간(10, 30, 60 및 120 분)의 함수에 따른 본 발명의 대표적인 제제(PECEOL®/DSPE-PEG 350, 550, 750, 및 2000, 각각 PEG 350, 550, 750, 2000으로 지칭) 내의 암포테리신 B의 안정성과 AmpB/PECEOL® 제제 내에서의 AmpB의 안정성을 비교한 것이다. 데이터는 각각 세 번식 수행된 세 가지 독립된 실험의 mean±SD로 나타내었다. 본 발명의 평가된 대표적인 제제 각각은 평가된 시간 동안 인공 장액 내에서의 안정성을 나타낸다.In addition, the stability of representative amphotericin B formulations of the present invention was evaluated in artificial intestinal fluids containing fasting state artificial intestinal fluid (FSSIF) with and without lecithin, and pancreatin enzyme. Figures 5A and 5B show a representative formulation of the invention (PECEOL® / DSPE-1) according to a function of time (10, 30, 60 and 120 minutes) in an intestinal fluid (FSSIF) PEG 350, 550, 750, and 2000, respectively, PEG 350, 550, 750, 2000) and the stability of AmpB / PECEOL® The stability of AmpB in the formulation is compared. Data were expressed as mean ± SD of three independent experiments, each of which was performed in triplicate. Each of the evaluated representative agents of the invention exhibits stability in the artificial intestinal fluid for an estimated time.

위장액 내에서의 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성은 경구 투여용 제제에서의 안정성을 나타낸다.The stability of representative amphotericin B preparations of the invention in gastrointestinal fluids represents the stability in formulations for oral administration.

PECEOL® 내의 AmpB는 안정화되고 그의 용해도는 PEG 평균 분자량이 350에서 200 사이로 다양한 경우에 15 mM DSPE-PEG와 통합되어 50배 증가한다. 위와 장에서의 약물 안정성은 위장관 내의 약물 흡수도 향상을 위해 중요하다. AmpB는 낮은 pH에서 잘 녹으나 상대적으로 불안정하기로 잘 알려져 있으므로, 제제의 리피드 구성에 의해 제공되는 보호는 AmpB의 경구내 생물학적 이용가능성을 증가시키는데 중요할 수 있다. 또한 이전에 생체 내에서의 활성도뿐만 아니라 약물 안정성에도 영향을 보였던 리피드 운반체가 AmpB의 초응집 상태에 영향을 미치는 여부를 아는 것이 중요하다. 본원에서 설명된 리피드 운반체에서의 AmpB의 UV 스펙트럼 양상은 인공 위액 또는 장액 내의 배양 전 후의 단량체 AmpB와 일치한다(도 3A 참고). 주변 온도(21℃)에서 4주 이상 UV 스펙트럼 양상은 변화가 없었다(데이터 미기재). 그러나 희석하지 않은 제제(분석 용매 부재 상에서)에서 AmpB와 리피드 구성의 상호작용 또는 생체 내의 경구 흡수는 다를 수 있다. PECEOL® AmpB stabilizes and its solubility increases by 50-fold when combined with 15 mM DSPE-PEG when the PEG average molecular weight is varied from 350 to 200. Drug stability in stomach and intestines is important for improving drug absorption in the gastrointestinal tract. Since AmpB is well known to be soluble at low pH but relatively unstable, the protection afforded by the lipid composition of the preparation may be important in increasing the oral bioavailability of AmpB. It is also important to know whether lipid transporters, which have previously been shown to affect not only in vivo activity but also drug stability, affect the supercoagulability of AmpB. The UV spectrum pattern of AmpB in the lipid transporters described herein is consistent with the monomer AmpB before and after incubation in artificial gastric juice or intestinal fluid (see Figure 3A). There was no change in the UV spectrum pattern for more than 4 weeks at ambient temperature (21 ° C) (data not shown). However, the interaction of AmpB with the lipid composition or in vivo oral absorption may be different in non-diluted preparations (on the analytical medium).

인공 위액 내 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성은 2시간 이상 좋으며, 다양한 DSPE-PEG 또는 PECEOL®로만 제조된 제제 간에 놀라울 만큼 변이가 적다 (도 4-6). 모두 침전물 없이 반투명한 외관을 보였다. 담즙산염을 포함한 공복상태 인공장액에서는 안정성에서 좀 더 변화됨이 관찰되었다(도 5A 및 5B). 판크레아틴 내의 담즙산염, 레시틴, 및 포스포리파아제의 유화 성질은 제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있으므로 약물 안정성은 이들 구성을 포함하는 인공 장액 내에서 평가하였다. 레시틴은 인공 장액 내에 포함될 때 지질 혼합물에 통합될 가능성이 있고, 이는 리피드 부형제와 암포테리신 B와의 결합을 향상시거나 또는 이를 제외할 가능성이 있다. 그러나 레시틴의 존재는 2시간 경과시 붕괴 속도나 정도 또는 붕괴 순위의 순서에 중대한 차이가 없었다(도 5B). 정확하게는, DSPE-PEG 350를 포함한 제제는 더 긴 사슬의 PEG를 포함한 DSPE-PEG 보다 약품의 안정성이 덜하다. 레시틴이 부재인 경우, 서브마이크론 입자 크기 분석에서 DSPE-PEG 미셀들, 예컨대 DSPE-PEG350이 자가 결합을 하여 분리된 미셀 집단을 이루는 경우와 마찬가지로 50nm 이하의 집단은 잘 보이지 않았다. 또한, DSPE-PEG 또는 폴리에틸렌 글리콜 분자량의 존재로 인해서는 입자 크기에 대한 유의한 효과는 없었는데, 이는 유화 성질이 대부분 PECEOL® 성분에 의해 유도된 것임을 나타낸다. 그러나 모든 DSPE-PEG 제제에서 미셀의 작은 조각들이 인공 장액에서 리피드 부형제/약물 혼합물과 평형을 이루며 존재할 가능성을 배제할 수는 없으나, 그것이 주성분으로 보이지는 않는다. 그러므로 입자 크기 분포와의 직접적 관련성이 부족함에도 불구하고, 높은 분자량의 PECEOL®/DSPE-PEG 내의 AmpB의 향상된 안정성이 그들의 에멀전 액적 자체의 표면 속성과 관련되는 것이 가능하고, 그런 친수성 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 물 경계면으로 향하는 반면 PECEOL®/AmpB 부분은 기름상의 내부에 남아 있어서 AmpB를 격리시키고 보호한다. 따라서, PEG 분자량이 750 및 2000인 경우가 350 및 550인 경우와 비교하여 안정성을 증가시키는 경향이 있다. 이러한 AmpB 및 PECEOL®/DSPG-PEG의 상호작용은 응집된 AmpB 보다는 단량체 AmpB의 UV 스펙트럼 형태와 일치하는 결과를 가져온다.The stability of representative amphotericin B formulations of the invention in artificial gastric juice is better than 2 hours and is surprisingly less variable among formulations made with various DSPE-PEG or PECEOL® (FIGS. 4-6). All showed a translucent appearance without sediment. It was observed that stability was more variable in fasting artificial intestinal fluids including bile salts (FIGS. 5A and 5B). Since the emulsifying properties of bile salts, lecithin, and phospholipase in pancreatin can affect the stability of the preparation, drug stability was evaluated in artificial intestinal fluids containing these constituents. Lecithin is likely to be incorporated into the lipid mixture when incorporated into the intestinal fluid, which may enhance or exclude binding of the lipid excipient to amphotericin B. However, the presence of lecithin did not show a significant difference in the order of collapse rate or degree or collapse rank after 2 hours (Fig. 5B). Precisely, preparations containing DSPE-PEG 350 are less stable than DSPE-PEG containing longer chains of PEG. In the absence of lecithin, the sub-50 nm population was not seen as well as in the case of DSPE-PEG micelles such as DSPE-PEG 350 being self-assembled into a separated micelle population in submicron particle size analysis. In addition, there was no significant effect on particle size due to the presence of DSPE-PEG or polyethylene glycol molecular weights, indicating that most emulsification properties were induced by the PECEOL® component. However, it is not possible to exclude the possibility that small fractions of micelles in all DSPE-PEG formulations exist in equilibrium with the lipid excipient / drug mixture in the artificial intestinal fluids, but that does not appear to be the main component. It is therefore possible that the improved stability of AmpB in high molecular weight PECEOL® / DSPE-PEG is related to the surface properties of their emulsion droplets themselves, despite the lack of direct relevance to the particle size distribution, and such hydrophilic polyethylene glycol chains are water While the PECEOL® / AmpB moiety remains inside the oil, isolating and protecting AmpB. Therefore, there is a tendency to increase the stability as compared with the cases where the PEG molecular weights are 750 and 2000 at 350 and 550, respectively. This interaction of AmpB and PECEOL® / DSPG-PEG results in a coincidence with the UV spectrum form of the monomer AmpB rather than the aggregated AmpB.

암포테리신 B 제제: 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르Amphotericin B preparation: Polyethylene oxide-containing fatty acid ester

상기 언급한 바에 따라, 암포테리신 B 제제는, 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르, 및 일반적으로 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질의 혼합물 또는 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 혼합물과 같은 하나 이상의 폴리에톡실레이티드 리피드를 포함한다.As mentioned above, amphotericin B formulations are prepared by mixing a polyethylene oxide-containing phospholipid or one or more polyethylene oxide-containing fatty acid esters, and a mixture of polyethylene oxide-containing phospholipids or a mixture of polyethylene oxide- ≪ / RTI > and mixtures thereof.

따라서, 하나의 구체예로서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는Thus, in one embodiment, the amphotericin B preparation of the invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함한다.(c) at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

본 발명에서 사용된 용어 "폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르"란 에스테르 결합을 통해 지방산과 공유결합한 폴리에틸렌 옥시드 그룹(즉, 폴리에틸렌 글리콜 그룹)를 포함한 지방산 에스테르를 의미한다. 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 폴리에틸렌 글리콜의 모노- 및 디-지방산 에스테르를 포함한다. 적합한 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 8 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 포화 및 불포화 지방산(즉, C8-C22 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르)을 포함한 지방산으로부터 유도된다. 특정 구체예에서, 적합한 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 12 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 포화 및 불포화 지방산(즉, C12-C18 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르)을 포함한 지방산으로부터 유도된다. 대표적인 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 포화된 C8-C22 지방산 에스테르를 포함한다. 특정 구체예에서, 적합한 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 포화된 C12-C18 지방산 에스테르를 포함한다. As used herein, the term "polyethylene oxide-containing fatty acid ester" refers to a fatty acid ester comprising a polyethylene oxide group (i.e., a polyethylene glycol group) covalently bonded to a fatty acid via an ester bond. Polyethylene oxide-containing fatty acid esters include mono- and di-fatty acid esters of polyethylene glycol. Suitable polyethylene oxide-containing fatty acid esters are derived from fatty acids including saturated and unsaturated fatty acids having 8 to 22 carbon atoms (i.e., polyethylene oxide esters of C8-C22 fatty acids). In certain embodiments, suitable polyethylene oxide-containing fatty acid esters are derived from fatty acids including saturated and unsaturated fatty acids having 12 to 18 carbon atoms (i.e., polyethylene oxide esters of C12-C18 fatty acids). Representative polyethylene oxide-containing fatty acid esters include saturated C8-C22 fatty acid esters. In certain embodiments, suitable polyethyleneoxide-containing fatty acid esters include saturated C12-C18 fatty acid esters.

폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 분자량은 제제 안에서 치료제(즉, 암포테리신 B)의 용해도를 최적화하기 위해서 다양화될 수 있다. 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 대표적인 평균 분자량은 약 350 내지 약 2000이다. 하나의 구체예에서, 폴리에틸렌 옥시드 그룹의 평균 분자량은 약 1500이다.The molecular weight of the polyethylene oxide group of the polyethylene oxide-containing fatty acid ester can be varied to optimize the solubility of the therapeutic agent (i. E., Amphotericin B) within the formulation. Typical average molecular weights of the polyethylene oxide groups are from about 350 to about 2000. In one embodiment, the average molecular weight of the polyethylene oxide group is about 1500.

본 구체예에서, 암포테리신 B 제제는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르, 및 일반적으로 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 혼합물(폴리에틸렌 글리콜의 모노- 및 디-지방산 에스테르)을 포함한다.In this embodiment, the amphotericin B preparation comprises at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester and a mixture of polyethylene oxide-containing fatty acid esters (mono-and di-fatty acid esters of polyethylene glycol) in general.

제제 내에서 유용한 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 상업적으로 이용가능한 원료에 의해 제공될 수 있다. 대표적인 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르(모노- 및 디에스테르)는 GELUCIRE®(Gattefosse, Saint Priest Cedex, France)로서, 상업적으로 입수가능하다. 적합한 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 GELUCIRE® 44/14, GELUCIRE® 50/13, GELUCIRE® 53/10에 의해서 제공될 수 있다. 상기 숫자들은 각각 이들 물질들의 녹는점과 친수성/친유성 균형 (HLB) 을 의미한다.Polyethylene oxide-containing fatty acid esters useful in the formulations can be provided by commercially available raw materials. Representative polyethylene oxide-containing fatty acid esters (mono- and diesters) are commercially available as GELUCIRE® (Gattefosse, Saint Priest Cedex, France). Suitable polyethylene oxide-containing fatty acid esters are available from GELUCIRE 44/14, GELUCIRE® 50/13, GELUCIRE® 53/10. These numbers refer to the melting point and hydrophilic / lipophilic balance (HLB) of these materials, respectively.

GELUCIRE® 44/14, GELUCIRE® 50/13, 및 GELUCIRE® 53/10는 (a) 글리세롤(글리세리드)의 모노-, 디-, 및 트리에스테르 및 (b) 폴리에틸렌 글리콜(마크로골)의 모노-, 및 디에스테르의 혼합물이다. GELUCIRE 는 또한 유리 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 1500)을 포함할 수 있다. GELUCIRE® 44/14, GELUCIRE® 50/13, and GELUCIRE® 53/10 is a mixture of (a) mono-, di-, and triesters of glycerol (glyceride) and (b) mono- and diesters of polyethylene glycol (macrogol). GELUCIRE may also include free polyethylene glycol (e.g., PEG 1500).

라우르산(C12)은 GELUCIRE® 44/14 안의 글리세리드와 폴리에틸렌 글리콜 에스테르의 주된 지방산 구성요소이다. GELUCIRE® 44/14은 글리세릴 디라우레이트(글리세롤을 가진 라우르산 디에스테르)와 PEG 디라우레이트(폴리에틸렌 글리콜을 가진 라우르산 디에스테르)의 혼합물을 의미하고, 일반적으로 PEG-32 글리세릴 라우레이트(Gattefosse) 라우로일 마크로골-32 글리세리드 EP, 또는 라우로일 폴리옥시글리세리드 USP/NF로 알려져 있다. GELUCIRE® 44/14는 수소화된 야자씨 기름과 폴리에틸렌 글리콜(평균 분자량 1500)과의 반응에 의해 제조된다. GELUCIRE® 44/14는 약 20%의 모노-, 디-, 및 트리글리세리드와 약 72%의 폴리에틸렌 글리콜 1500의 모노-, 디-지방산 에스테르, 및 약 8%의 폴리에틸렌 글리콜 1500을 포함한다.Lauric acid (C12) is obtained from GELUCIRE® It is a major fatty acid component of glycerides and polyethylene glycol esters in 44/14. GELUCIRE® 44/14 means a mixture of glyceryl dilaurate (lauric acid diester with glycerol) and PEG dilaurate (lauric acid diester with polyethylene glycol), generally PEG-32 glyceryl laurate Gattefosse lauroyl macroalb-32 glyceride EP, or lauroyl polyoxy glyceride USP / NF. GELUCIRE® 44/14 is prepared by the reaction of hydrogenated coconut oil with polyethylene glycol (average molecular weight 1500). GELUCIRE® 44/14 comprises about 20% mono-, di-, and triglycerides, about 72% polyethylene glycol 1500 mono-, di-fatty acid esters, and about 8% polyethylene glycol 1500.

GELUCIRE® 44/14는 라우르산(C12) 에스테르(30에서 50%), 미리스트산(C14) 에스테르 (5에서 25%), 팔미트산(C16) 에스테르 (4에서 25%), 스테아르산 (C18) 에스테르 (5　내지 35%), 카프릴산(C8) 에스테르 (15% 미만), 및 카프르산(C10) 에스테르 (12% 미만)를 포함한다. 또한 GELUCIRE® 44/14는 유리 글리콜(일반적으로 1% 미만)을 포함할 수 있다. 대표적인 제제에서, GELUCIRE® 44/14 는 라우르산(C12) 에스테르(약 47%), 미리스트산(C14) 에스테르(약 18%), 팔미트산(C16) 에스테르(약 10%), 스테아르산 (C18) 에스테르(약 11%), 카프릴산(C8) 에스테르(약 8%), 및 카프르산(C10) 에스테르(약 12%)를 포함한다.GELUCIRE® 44/14 is a mixture of lauric acid (C12) ester (30 to 50%), myristic acid (C14) ester (5 to 25%), palmitic acid (C16) ester (4 to 25%), stearic acid ) Esters (5 to 35%), caprylic acid (C8) esters (less than 15%), and capric acid (C10) esters (less than 12%). GELUCIRE® 44/14 may contain free glycols (generally less than 1%). In a representative formulation, GELUCIRE® 44/14 is a mixture of lauric acid (C12) ester (about 47%), myristic acid (C14) ester (about 18%), palmitic acid (C16) ester (about 10%), stearic acid About 11%), caprylic acid (C8) esters (about 8%), and capric acid (C10) esters (about 12%).

팔미트산(C16)(40-50%)과 스테아르산(C18)(48-58%)은 GELUCIRE® 50/13 안에서 글리세리드 및 폴리에틸렌 글리콜 에스테르의 주된 지방산이다. GELUCIRE® 50/13는 PEG-32 글리세릴 팔미토스테아레이트(Gattefosse), 스테아로일 마크로골글리세리드 EP, 또는 스테아로일 폴리옥시글리세리드 USP/NF로 알려져 있다. GELUCIRE® 50/13는 팔미트산(C16) 에스테르 (40에서 50%), 스테아르산 (C18) 에스테르(48에서 58%)(스테아르산 및 팔미트산 에스테르는 약 90% 이상), 라우르산(C12) 에스테르(5% 이하), 미리스트산(C14) 에스테르(5% 미만), 카프릴산(C8) 에스테르(3% 미만), 및 카프르산(C10) 에스테르(3% 미만)를 포함한다. GELUCIRE® 50/13는 또한 유리 글리콜(일반적으로 1% 미만)을 포함할 수 있다. 대표적인 제제에서, GELUCIRE® 50/13는 팔미트산(C16) 에스테르(약 43%), 스테아르산 (C18) 에스테르( 54%)(스테아르산 및 팔미트산 에스테르는 약 97%), 라우르산(C12) 에스테르(1% 이하), 미리스트산(C14) 에스테르(약 1%), 카프릴산(C8) 에스테르(1% 이하), 및 카프르산(C10) 에스테르(1% 이하)를 포함한다.Palmitic acid (C16) (40-50%) and stearic acid (C18) (48-58%) are available from GELUCIRE® 0.0 > 50/13 < / RTI > of the glyceride and polyethylene glycol esters. GELUCIRE® 50/13 is known as PEG-32 glyceryl palmitostearate (Gattefosse), stearoyl macrogol glyceride EP, or stearoyl polyoxy glyceride USP / NF. GELUCIRE® 50/13 contains palmitic acid (C16) esters (40 to 50%), stearic acid (C18) esters (48 to 58%) (stearic acid and palmitic acid esters of about 90% ) Esters (less than 5%), myristic acid (C14) esters (less than 5%), caprylic acid (C8) esters (less than 3%), and capric acid (C10) . GELUCIRE® 50/13 may also contain free glycols (generally less than 1%). In a representative formulation, GELUCIRE® (C16) ester (about 43%), stearic acid (C18) ester (about 54%) (about 97% for stearic acid and palmitic acid ester), lauric acid (C12) ester (Up to 1%), myristic acid (C14) esters (about 1%), caprylic acid (C8) esters (up to 1%), and capric acid (C10) esters (up to 1%).

스테아르산 (C18)은 GELUCIRE® 50/13 안에서 글리세리드와 폴리에틸렌 글리콜 에스테르의 주된 지방산 구성요소이다. GELUCIRE® 50/13 은 PEG-32 글리세릴 스테아레이트로 알려져 있다 (Gattefosse).Stearic acid (C18) is available from GELUCIRE® 50/13 is the major fatty acid component of glyceride and polyethylene glycol esters. GELUCIRE® 50/13 is known as PEG-32 glyceryl stearate (Gattefosse).

하나의 구체예로서, 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르는 라우르산 에스테르, 팔미트산 에스테르, 또는 스테아르산 에스테르이다(즉, 폴리에틸렌 글리콜의 모노- 및 디-라우르산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜의 모노- 및 디-팔미트산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜의 모노- 및 디-스테아르산 에스테르). 이들 에스테르의 혼합물 역시 사용될 수 있다.In one embodiment, the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is a lauric acid ester, a palmitic acid ester, or a stearic acid ester (i.e., a mono-and di-lauric acid ester of polyethylene glycol, And di-palmitic acid esters, mono- and di-stearic acid esters of polyethylene glycol). Mixtures of these esters may also be used.

폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르를 포함하는 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 20:80 내지 약 80:20 v/v이다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 30:70이다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 40:60 v/v이다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 50:50 v/v이다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 60:40 v/v이다. 하나의 구체예에서, 지방산 글리세롤 에스테르의 폴리에틸렌-옥시드 함유 지방산 에스테르에 대한 비율은 약 70:30 v/v이다. In embodiments comprising a polyethylene-oxide containing fatty acid ester, the ratio of fatty acid glycerol ester to polyethylene-oxide containing fatty acid ester is from about 20: 80 to about 80: 20 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is about 30:70. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is about 40: 60 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is about 50:50 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is about 60: 40 v / v. In one embodiment, the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene-oxide containing fatty acid ester is about 70:30 v / v.

하나의 구체예로서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는In one embodiment, the amphotericin B preparation of the present invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 올레산 글리세롤 에스테르; 및(b) oleic acid glycerol ester; And

(c) 폴리에틸렌 글리콜의 라우르산 에스테르를 포함한다.(c) a lauric acid ester of polyethylene glycol.

또 다른 구체예로서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는In yet another embodiment, the amphotericin B preparation of the present invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 올레산 글리세롤 에스테르; 및(b) oleic acid glycerol ester; And

(c) 폴리에틸렌 글리콜의 팔미트 및 스테아르산 에스테르를 포함한다.(c) palmitates of polyethylene glycol and stearic acid esters.

추가의 구체예로서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는In a further embodiment, the amphotericin B preparation of the invention comprises

(a) 암포테리신 B;(a) amphotericin B;

(b) 올레산 글리세롤 에스테르; 및(b) oleic acid glycerol ester; And

(c) 폴리에틸렌 글리콜의 스테아르산 에스테르를 포함한다.(c) stearic acid esters of polyethylene glycol.

하나의 구체예로서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는 암포테리신 B, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 44/14를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는 암포테리신 B, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 50/13를 포함한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는 암포테리신 B, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 53/10를 포함한다. 이들 구체예에서, PECEOL® 과 GELUCIRE® 의 비율은 20:80 내지 80:20일 수 있다 (예컨대, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30 및 80:20).In one embodiment, the amphotericin B formulations of the invention include amphotericin B, PECEOL®, and GELUCIRE® 44/14. In another embodiment, the amphotericin B formulations of the invention comprise amphotericin B, PECEOL®, and GELUCIRE® 50/13. In a further embodiment, the amphotericin B formulations of the invention comprise amphotericin B, PECEOL®, and GELUCIRE® 53/10. In these embodiments, the ratio of PECEOL (R) and GELUCIRE (R) may be 20:80 to 80:20 (e.g., 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 80:20).

폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 에스테르를 포함하는 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 제조 및 특성분석은 실시예 1에 기술하였다.Preparation and characterization of representative amphotericin B formulations of the present invention comprising polyethylene oxide-containing phospholipid esters are described in Example 1.

폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하는 암포테리신 B 제제는 부분적으로 용해되고 순수한 고체 분산액을 제공하기 위한 고체 입자로서 존재한다. 수용성 배지 내 제제의 분산액은 나노-/마이크로에멀젼을 제공한다.Amphotericin B formulations containing polyethylene oxide-containing fatty acid esters are partially soluble and exist as solid particles to provide a pure solid dispersion. The dispersion of the formulation in the aqueous medium provides a nano- / microemulsion.

암포테리신 B의 예비 SEDDS 제제(실시예 1 참조)는 생리학적 염수 내에 분산되기까지 자가-유화 및 작은 액적 크기를 생성하였다. CAPTEX®355-기반의 제제의 분선 특성은 PECEOL®/GELUCIRE® 44/14 또는 50/13의 혼합물에 기초한 경우와 유사하며, 서브마이크론 또는 1μm 범위에서 에멀전 액적의 복합적 하위집단을 생성하였다(표 1 및 표 2 참조). 이러한 입자 크기는 흡수를 가장 촉진하기 위한 위장관 내 약물 분산에 적합할 수 있다. 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하는 대표적인 암포테리신 B 제제의 용해도는 도 10A-10C 에 나타내었다. 도 10A, 10B, 및 10C 는 PECEOL® : GELUCIRE®의 다양한 비율에서 (60:40; 50:50; 및 40:60 v/v) 2, 4, 및 24시간에 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14; AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 50/13; 및 AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 53/13) 내의 AmpB 농도 (mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB는 45℃에서 특정 시간 이후에 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였다). 도 11은 AmpB/PECEOL® 제제(PECEOL®로 지칭) 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50; 및 AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, 15mM DSPE-PEG-2000)의 시간(0, 1, 5, 7, 15, 21, 28, 36, 43, 49, 및 56일)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB는 43℃에서 특정 시간 이후에 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였다). AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50 제제는 21시간까지 가장 높은 안정성을 보였다.The preparative SEDDS formulation of amphotericin B (see Example 1) produced self-emulsification and small droplet size until dispersed in physiological saline. The sorption properties of CAPTEX®355-based formulations were similar to those based on mixtures of PECEOL® / GELUCIRE® 44/14 or 50/13 and produced a complex subpopulation of emulsion droplets in the submicron or 1 μm range (Table 1 And Table 2). This particle size may be suitable for drug dispersion in the gastrointestinal tract to best promote absorption. The solubility of representative amphotericin B formulations comprising polyethylene oxide-containing fatty acid esters is shown in Figures 10A-10C. Figures 10A, 10B, and 10C show representative AmpB formulations of the invention (AmpB) at 2, 4, and 24 hours at various ratios of PECEOL®: GELUCIRE® (60:40; 50:50; and 40:60 v / (Mg / mL) in AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14; AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 50/13; and AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 53/13) Lt; RTI ID = 0.0 > UV < / RTI > Figure 11 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL (R) formulation (referred to as PECEOL®) and exemplary AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50; and AmpB / PECEOL® / DSPE- AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to the time (0, 1, 5, 7, 15, 21, 28, 36, 43, 49 and 56 days) of DSPE-PEG- AmpB was measured by UV absorbance of the centrifuged sample after a specific time at 43 ° C. AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50 formulations showed the highest stability until 21 hours.

경우 투여되는 제제로서의 효능을 검정하기 위하여, 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성을 인공 장액에서 측정하였다.In order to test the efficacy as an administered agent, the stability of representative amphotericin B formulations of the present invention was measured in artificial intestinal fluids.

도 12는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50; 및 AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE-PEG-2000)의 인공 위액(SGF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 및 120분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB는 pH 1.2에서 30 mM NaCl, 37℃에서 특정 시간 이후에 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였다).Figure 12 shows the effect of the AmpB / PECEOL (R) formulation and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50; and AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE- AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to time (10, 30, 45, 60, 90 and 120 minutes) in the artificial gastric juice mM NaCl, at 37 < 0 > C after a certain period of time).

도 13은 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 식이 상태 인공장액(FeSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB는 FeSSIF에서 4시간 후 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였으며, FeSSIF는 염화칼륨(15.2 g/L), 나트륨 타우로라우레이트(15 mM), 달걀 포스파티딜콜린(3.75 mM), 및 pH 5.0으로 조정된 아세트산을 포함한다). 본 발명의 대표적인 제제는 2시간까지 일정한 AmpB 농도를 나타내었다. Figure 13 shows time (10, 30, 45, 60) times in the dietary state of artificial intestinal fluid (FeSSIF) of the AmpB / PECEOL (R) formulation and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) (AmpB was measured by UV absorbance of the centrifuged sample after 4 hours in FeSSIF, and FeSSIF was measured in terms of potassium chloride (NaCl) (15.2 g / L), sodium tauro laurate (15 mM), egg phosphatidylcholine (3.75 mM), and acetic acid adjusted to pH 5.0). The representative formulation of the present invention showed a constant AmpB concentration for up to 2 hours.

도 14는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 효소 포함 식이 상태 인공장액(FeSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB 는 FeSSIF에서 4시간 후 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였으며, FeSSIF는 염화칼륨(15.2 g/L), 나트륨 타우로라우레이트(7.5 mM), 달걀 포스파티딜콜린(2.0 mM), 글리세릴 모노올레산염(5.0 mM), 나트륨 올레산염(0.8 mM), 판크레아틴(1000　u　lipase/L), 및 pH 5.8로 조정된 아세트산을 포함한다). 본 발명의 대표적인 제제는 2시간까지 일정한 AmpB 농도를 나타내었다. Figure 14 shows time (10, 30, 45) times in the enzyme-containing dietary state of artificial intestinal fluid (FeSSIF) of AmpB / PECEOL® preparations and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) (AmpB was measured by UV absorbance of the centrifuged sample after 4 hours in FeSSIF, and FeSSIF (1, 2, 3, 4, (5.0 mM), sodium oleate (0.8 mM), pancreatin (1000 μl lipase), and sodium chloride / L), and acetic acid adjusted to pH 5.8. The representative formulation of the present invention showed a constant AmpB concentration for up to 2 hours.

도 15는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 공복 상태 인공장액(FaSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB는 FaSSIF에서 4시간 후 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의하여 측정하였으며, FaSSIF는 염화칼륨(7.7 g/L), 제2 인산칼륨(3.9 g/L), 나트륨 타우로라우레이트(3.0 mM), 달걀 포스파티딜콜린(0.75 mM), 및 pH 6.5로 조정된 아세트산을 포함한다). 본 발명의 대표적인 제제는 2시간까지 일정한 AmpB 농도를 나타내었다.Figure 15 shows time (10, 30, 45, 60) times in the fasted state artificial intestinal fluid (FaSSIF) of AmpB / PECEOL (R) preparations and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) (AmpB was measured by UV absorbance of the centrifuged sample after 4 hours in FaSSIF, and FaSSIF was measured in terms of potassium chloride (NaCl) (7.7 g / L), potassium phosphate (3.9 g / L), sodium tauro laurate (3.0 mM), egg phosphatidylcholine (0.75 mM) and acetic acid adjusted to pH 6.5. The representative formulation of the present invention showed a constant AmpB concentration for up to 2 hours.

평가된 각 본 발명의 대표적인 제제는 평가된 시간 동안 인공 체액 내에서 안정성을 나타내었다. 위장관 체액 내에서 대표적인 암포테리신 B 제제의 안정성은 이들의 경구 투여 제제의 안정성을 나타내는 것이다.Representative preparations of each invention evaluated exhibited stability in artificial body fluids for the estimated time. The stability of representative amphotericin B preparations in gastrointestinal fluids indicates the stability of these oral dosage forms.

자가-유화 약물 전달계Self-emulsifying drug delivery system

본 발명의 암포테리신 B 제제는 자가-유화 약물 전달계가 될 수 있다. 자가-유화 약물 전달계(SEDDS)는 기름, 계면활성제, 용매, 및 공용매/계면활성제의 균등 혼합물이다. SEDDS는 암포테리신 B와 같은 높은 지질친화성 약물 화합물의 경구 흡수를 향상시키기 위한 제제를 디자인할 때 사용될 수 있다. SEDDS 조성물이 소화관의 루멘 안으로 방출될 때, 조성물은 순수한 에멀젼을 형성하기 위해 분산되고, 약물은 결정상태로부터 소수성 약물의 흡수율을 빈번하게 제한하는 분해 단계를 피하기 위하여 소화관 내 용액 속에 남아있게 된다. SEDDS의 사용은 보통 생물학적 이용가능성 및/또는 소화관으로부터의 보다 일관된 일시적 흡수 프로파일을 향상시킨다. SEDDS 조성물에 대한 기재는 문헌[C. W. Pouton, Advanced Drug Delivery Reviews　25: 47-58 (1997)]에서 찾아볼 수 있다.The amphotericin B preparation of the present invention can be a self-emulsifying drug delivery system. Self-emulsifying drug delivery systems (SEDDS) are an even mixture of oil, surfactants, solvents, and co-solvents / surfactants. SEDDS can be used in designing agents to enhance the oral absorption of high lipid-affinity drug compounds such as amphotericin B. When the SEDDS composition is released into the lumen of the digestive tract, the composition is dispersed to form a pure emulsion and the drug remains in the solution in the digestive tract to avoid degradation steps that frequently limit the rate of absorption of the hydrophobic drug from the crystalline state. The use of SEDDS usually improves biological availability and / or a more consistent transient absorption profile from the digestive tract. A description of the SEDDS composition can be found in CW Pouton, Advanced Drug Delivery Reviews 25: 47-58 (1997).

본 발명의 암포테리신 B 제제는 부드러운 또는 단단한 젤라틴 캡슐 내에서 경구적으로 투여될 수 있고, 위장관액과의 섞임 때문에 수성의 희석액에서 상대적으로 안정한 oil-in-water(o/w)을 형성할 수 있다. SEDDS로부터의 약물 성분의 경구적 흡수의 효능은 많은 제제-관련 변수, 예컨대 제제의 성분, 에멀전의 극성, 액적의 크기 및 전위 등에 의존하며, 이들 모두는 자가-유화 능력을 결정하는데 필수적이다. 따라서, 매우 특정한 약제학적 부형제 조합만이 자가-유화 시스템을 효과적이게 할 수 있다.Amphotericin B formulations of the present invention can be administered orally in soft or hard gelatine capsules and form relatively stable oil-in-water (o / w) in an aqueous diluent due to mixing with the gastrointestinal tract . The efficacy of oral absorption of the drug component from SEDDS depends on many formulation-related parameters such as the components of the formulation, the polarity of the emulsion, the size and potential of the droplet, all of which are essential for determining the self-emulsifying ability. Thus, only a very specific combination of pharmaceutical excipients can make the self-emulsifying system effective.

암포테리신 B를 이용한 투여 및 치료 방법Administration and treatment with amphotericin B

정맥투여되는 AmpB의 투여는 혈장 및/또는 혈청 약물 농도의 모니터링에 의해 예측가능하지 않은, 약물-의존적 신장 독성에 의해 제한된다. 많은 연구들이 메탄올에 용해된 AmpB가 위장관으로부터 흡수가 거의 되지 않고 따라서 일반적으로 경구적으로는 투여될 수 없고 정맥투여되며, 이는 앞서 언급한 바와 같이 신경독성을 일으킨다고 보고하고 있다. 그러나, 현재까지 경구용 AmpB의 항진균 활성을 발달 및 평가한 연구에 대해서는 거의 보고된 바가 없다.Administration of intravenously administered AmpB is limited by drug-dependent renal toxicity, which is not predictable by monitoring plasma and / or serum drug concentrations. Many studies have shown that AmpB, dissolved in methanol, is less absorbable from the gastrointestinal tract and therefore generally can not be administered orally, and is administered intravenously, which causes neurotoxicity, as mentioned above. However, there have been few reports on the development and evaluation of antifungal activity of oral AmpB to date.

진균 감염을 치료하는, 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질을 포함하는 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 효능은 실시예 2에 기술하였다. 아스퍼질루스 퍼미가투스(Aspergillus fumigatus ) 또는 칸디다 알비칸스(andida albicans ) 를 치료하는 이들 제제의 효능을 동물 실험에서 증명하였다.The efficacy of representative amphotericin B formulations of the present invention, including polyethylene oxide-containing phospholipids, for treating fungal infections is described in Example 2. Aspergillus fumigatus spread Loose Fur (Aspergillus fumigatus) or Candida albicans (andida The efficacy of these agents for treating albicans has been demonstrated in animal studies.

폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질을 포함하는 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제를 이용한 아스퍼질루스 퍼미가투스 감염된 랫트의 치료는 비처치 대조군에 비하여 80% 까지 함께 첨가한 모든 기관에서의 총 진균의 CFU 농도를 유의하게 감소시켰으며(표 4), 혈장 크레아틴 수준은 유의한 변화가 없었다(표 5). ABELCET® 처치는 비처치 대조군에 비하여 88% 까지 함께 첨가한 모든 기관에서의 총 진균의 CFU 농도를 유의하게 감소시켰으며(표 4) 혈장 크레아틴 수준은 유의한 변화가 없었다(표 5).Treatment of aspergillus perfumitus-infected rats with representative amphotericin B formulations of the present invention comprising polyethylene oxide-containing phospholipids resulted in a significant reduction in CFU of all fungi in all organs added up to 80% (Table 4) and there was no significant change in plasma creatine levels (Table 5). ABELCET® treatment significantly reduced the total fungal CFU concentration in all organs added up to 88% compared to the non-treated control (Table 4) and there was no significant change in plasma creatine levels (Table 5).

칸디다 알비칸스(Candida albicans)의 결과는 아스퍼질루스 퍼미가투스(Aspergillus fumigatus)의 결과와 유사하다. 본 발명의 대표적인 AmpB 제제로 처리한 칸디다 알비칸스-감염된 랫트의 신장의 진균 분석은 대조군과 비교했을 때 총 진균 CFU 농도를 유의하게 감소시킴을 증명하였다. 도 7은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 신장에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다. 도 8은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 기관에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다. 감소하는 칸디다 알비칸스 농도에서의 대표적인 AmpB 제제의 효능은 ABELCET®에 견줄만 하다. 대표적인 AmpB 제제의 처치는 혈장 크레아틴 농도의 유의한 변화 없이 신장에서의 진균 CFU 농도를 유의하게 감소시켰다. 도 9는 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)(blank, 0 시간, 및 48시간)로 처리된 랫트에서의 혈장 크레아틴(mg/dl)을 비교한 것이다. 혈장 크레아틴 수준에 의해 측정된 신장 독성은 관찰되지 않았다. The results of Candida albicans are similar to those of Aspergillus fumigatus . Fungal analysis of the kidney of Candida albicans-infected rats treated with representative AmpB formulations of the present invention demonstrated a significant reduction in total fungal CFU concentration compared to the control group. Figure 7 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000) infected with Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the kidneys of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml). Figure 8 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000), Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the organs of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml). The efficacy of representative AmpB preparations at decreasing Candida albicans concentrations is comparable to ABELCET®. Treatment of a representative AmpB formulation significantly reduced fungal CFU concentration in the kidney without significant changes in plasma creatine concentration. FIG. 9 is a graph showing the effect of the present invention on AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000 and AmpB / DSPE-PEG-2000, which are infected with Candida albicans and treated with a control, AmpB / PECEOL® preparation (10 mg / kg) , 10 mg / kg), and plasma creatinine (mg / dl) in rats treated with intravenous ABELCET® (designated ABLC, 5 mg / ml) (blank, 0 h and 48 h) . No renal toxicity as measured by plasma creatine levels was observed.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 암포테리신 B를 투여함으로써 치료가능한 감염성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 본 발명의 암포테리신 B 제제의 치료학적으로 유효한 양이 이를 필요로 하는 개체에 투여된다. 하나의 구체예에서, 제제는 경구적으로 투여된다. 또 하나의 구체예에서, 제제는 국부적으로 투여된다.In another aspect, the present invention provides a method of treating an infectious disease treatable by administering amphotericin B. In this method, a therapeutically effective amount of the amphotericin B preparation of the present invention is administered to an individual in need thereof. In one embodiment, the agent is administered orally. In another embodiment, the agent is administered locally.

본원에 사용된 용어, "치료하는" 및 "치료" 는 증상의 심각성 및/또는 빈번함의 감소, 증상 및/또는 병인의 제거, 증상 및/또는 병인의 발생가능성의 감소, 및 손상의 향상 또는 개선을 의미한다. 따라서 본원에서 제공되는 활성제로 환자를 "치료하는" 것은 임상적 증상을 보이는 개체의 치료뿐 아니라 병에 걸리기 쉬운 개체에서 특정 컨디션, 질환 또는 질병을 예방하는 것을 포함한다. 본원에서 사용된 용어, "유효한 양"이란 치료학적으로 유효한 양 및 예방학적으로 유효한 양 모두를 포함할 수 있는 양을 말한다. 본원에서 사용된 용어, "치료학적으로 유효한 양" 은 바람직한 치료 결과를 달성하는데 효과적인 양을 말한다. 주어진 활성제의 치료학적으로 유효한 양은 치료대상 환자의 나이, 성별, 및 몸무게, 질병 또는 질환의 유형 및 심각성과 같은 인자들에 의해 변경될 수 있다.As used herein, the terms "treating" and "treatment" refer to a decrease in the severity and / or frequency of symptoms, a reduction in the likelihood of symptoms and / . Thus, "treating " a patient with the active agents provided herein includes the prevention of certain conditions, diseases, or diseases in susceptible individuals as well as treatment of individuals exhibiting clinical symptoms. As used herein, the term "effective amount" refers to an amount that can include both a therapeutically effective amount and a prophylactically effective amount. As used herein, the term "therapeutically effective amount" refers to an amount effective to achieve the desired therapeutic result. The therapeutically effective amount of a given active agent may be varied by factors such as the age, sex, and weight and type and severity of the disease or disorder of the subject being treated.

본 발명의 방법 및 제제에 의해 치료가능한 감염 질환은 진균 감염(아스페르길루스균증, 블라스토미스진균증, 칸디다, 콕시디오이데스진균증, 크립토콕커스증, 히스토플라스마증, 뮤코르진균증, 파라콕시디오이데스진균증, 및 스포로트릭스증), 내장 리슈만편모충증, 피부 리슈만편모충, 샤가스병, 및 열성 호중구 감소증을 포함한다. 암포테리신 B는 아밀로이드에 결합하고 섬유 제제를 예방하는 것이 보고되었다. 암포테리신 B는 알츠하이머병의 치료에 유용한 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 암포테리신 B 제제는 알츠하이머병의 치료에 사용될 수 있다.The infectious diseases treatable by the methods and formulations of the present invention include, but are not limited to, fungal infections (aspergillosis, blastomycosis, candida, coccydioid fungi, cryptococcosis, histoplasmosis, Coccidiosis fungus, and sporotrichosis), visceral leishmaniasis, skin leishmaniasis, chagas, and febrile neutropenia. It has been reported that amphotericin B binds to amyloid and prevents fiber preparation. Amphotericin B was found to be useful in the treatment of Alzheimer's disease. Accordingly, the amphotericin B preparation of the present invention can be used for the treatment of Alzheimer's disease.

요약하면, 하나의 양태로서, 본 발명은 경구적으로 투여되는 암포테리신 B 제제를 제공한다. 본 발명의 암포테리신 제제는 인공 위액 및 장액에서 우수한 약물 용해도, 약물 안정성을 제공하고, 암포테리신 B의 비경구 제제에서 알려진 용량-제한적 신장 독성 없이 유의한 항진균 활성을 가진다.In summary, in one aspect, the present invention provides amphotericin B formulations to be administered orally. The amphotericin agents of the present invention provide excellent drug solubility and drug stability in artificial gastric juices and intestinal fluids and have significant antifungal activity without dose-limiting renal toxicity known in parenteral formulations of amphotericin B.

치료제 제제Therapeutic agent formulation

또 하나의 양태로서, 본 발명은 치료제의 전달을 위한 제제, 상기 제제를 만드는 방법, 및 상기 제제를 사용하여 치료제를 투여하는 방법을 제공한다. In another aspect, the present invention provides an agent for delivering a therapeutic agent, a method for making the agent, and a method for administering the therapeutic agent using the agent.

하나의 양태로서, 본 발명은 치료제의 전달을 위한 제제를 제공한다. 치료제 제제는 In one aspect, the invention provides an agent for delivery of a therapeutic agent. The therapeutic agent is

(a) 치료제,(a) a therapeutic agent,

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(b) one or more fatty acid glycerol esters; And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르과 같은 하나 이상의 폴리에톡실레이트 리피드를 포함한다.(c) at least one polyethoxylate lipid such as at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

상기의 치료제 제제에서, 지방산 글리세롤 에스테르, 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질, 및 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 앞서 암포테리신 B 제제에서 설명한 바와 같다. 상기 치료제 제제 내의 이들 성분의 양은 역시 앞서 암포테리신 B 제제에서 설명한 바와 같다. 치료제는 제제 내에 약 0.1 mg/mL 내지 약 25 mg/mL의 양으로 존재할 수 있다. 특정 구체예에서, 제제는 추가로 약 10 중량% 미만의 양으로 글리세롤을 포함할 수 있다. In the above therapeutic agent preparation, the fatty acid glycerol ester, the polyethylene oxide-containing phospholipid, and the polyethylene oxide-containing fatty acid ester are as described in the amphotericin B preparation. The amounts of these components in the therapeutic agent formulation are also as previously described in the amphotericin B formulations. The therapeutic agent may be present in the formulation in an amount from about 0.1 mg / mL to about 25 mg / mL. In certain embodiments, the formulation may further comprise glycerol in an amount less than about 10% by weight.

본 발명의 치료 약물 제제는 난용성인 치료 약물의 용해도를 유리하게 높일 수 있다. 본 발명의 제제 및 방법에 의해 유리하게 제제화되고 전달될 수 있는 대표적인 치료제는 항암제, 항생제, 항바이러스 약물, 항진균제, 항-프리온제, 항-아메바제, 비스테로이드성 항염증 약물, 항-알러지제, 면역억제제, 관상동맥 약물, 진통제, 국부 마취제, 항불안제, 진정제, 수면제, 편두통약, 멀미약, 및 구토제를 포함한다.The therapeutic drug formulations of the present invention can advantageously increase the solubility of the poorly therapeutic drug. Representative therapeutic agents that can be advantageously formulated and delivered by the formulations and methods of the present invention include, but are not limited to, anti-cancer agents, antibiotics, antiviral drugs, antifungal agents, anti-prion agents, anti-amoebic agents, non- steroidal anti- , An immunosuppressant, a coronary drug, an analgesic, a local anesthetic, an anxiolytic, a sedative, a hypnotic, a migraine, a sickness, and a vomiting agent.

본 발명의 제제 및 방법에 의해 유리하게 제제화되고 전달될 수 있는 특정 치료제는 테트라사이클린, 독시사이클린, 옥시테트라사이클린, 클로람페니콜, 에리스로마이신, 아시클로버, 이독수리딘, 트로만타딘, 미코나졸, 케토코나졸, 플루코나졸, 이트라코나졸, 에코나졸, 그리세오풀빈, 암포테리신 B, 니스타틴, 메트로니다졸, 메트로니다졸 벤조에이트, 티니다졸, 인도메타신, 이부프로펜, 피록시캄, 디클로페낙, 디소듐 크로모글리케이트, 니트로글리세린, 아이소소비드 디니트레이트, 베라파밀, 니페디핀, 딜티아젬, 디곡신, 몰핀, 사이클로포린, 부프레놀핀, 리도케인, 디아제팜, 니프라제팜, 플루라제팜, 에스타졸람, 플루니트라제팜, 트리아졸람, 알프라졸람, 미다졸람, 테마제팜 로르메타제팜, 브로티졸람, 클로바잠, 클로나제팜, 로라제팜, 옥사제팜, 부시프론, 수마트립탄, 에르고타민 유도체, 시나리진, 항히스타민제, 온다세트론, 트로피세트론, 그라니세트론, 메토클로프라미드, 디술피람, 비타민 K, 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, SN38, 시스플라틴, 및 카보플라틴을 포함한다.Certain therapeutic agents that can be advantageously formulated and delivered by the formulations and methods of the invention include, but are not limited to, tetracycline, doxycycline, oxytetracycline, chloramphenicol, erythromycin, acyclovir, euglydine, tromanadidine, myconezole, ketoconazole, fluconazole, Itraconazole, econazole, griseofulvin, amphotericin B, nystatin, metronidazole, metronidazole benzoate, thinidazole, indomethacin, ibuprofen, piroxycam, diclofenac, disodium cromoglycate, nitroglycerin, But are not limited to, bead dinitrate, verapamil, nifedipine, diltiazem, digoxin, morphine, cyclophorin, buprenorphine, lidocaine, diazepam, niflazemal, flurazepam, esthazolam, flunitrazepam, triazolam, alprazolam , Midazolam, themegemaxololmetazepam, bromothiazolam, clobazam, clonazepam, lorazepam, oxazine , Bupropion, sumatriptan, ergotamine derivatives, cinarizine, antihistamine, ondacetron, tropisetron, ganisetron, methoclopramide, disulfiram, vitamin K, paclitaxel, docetaxel, camptothecin, SN38, cisplatin , And carboplatin.

특정 구체예로서, 본 발명의 치료제 제제는 제2의 치료제를 포함할 수 있다.In certain embodiments, the therapeutic agent of the present invention may comprise a second therapeutic agent.

상기 치료제 제제는 자가-유화 약물 전달계일 수 있다.The therapeutic agent may be a self-emulsifying drug delivery system.

하나의 구체예로서, 상기 치료제 제제는In one embodiment, the therapeutic agent formulation comprises

(a) 치료제;(a) a therapeutic agent;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르(예컨대, 올레산 글리세롤 에스테르); 및 (b) at least one fatty acid glycerol ester (e.g., oleic acid glycerol ester); And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질(예컨대, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염) 을 포함한다.(c) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid, such as distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt.

하나의 구체예로서, 본 발명의 치료제 제제는 치료제, PECEOL®, 및 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 본 구체예에서, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 약 30 mM까지의 양으로 존재한다.In one embodiment, the therapeutic agent formulation of the present invention comprises a therapeutic agent, PECEOL (R), and distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In this embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present in an amount of up to about 30 mM.

또 하나의 구체예로서, 상기 치료제 제제는 In another embodiment, the therapeutic agent formulation comprises

(a) 치료제;(a) a therapeutic agent;

(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르(예컨대, 올레산 글리세롤 에스테르); 및 (b) at least one fatty acid glycerol ester (e.g., oleic acid glycerol ester); And

(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르(예컨대, 폴리에틸렌 글리콜의 라우르, 팔미트 및/또는 스테아르산 에스테르)를 포함한다. (c) one or more polyethylene oxide-containing fatty acid esters (e.g., lauric, palmitic and / or stearic acid esters of polyethylene glycol).

하나의 구체예로서, 본 발명의 치료제 제제는 치료제, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 44/14를 포함한다. 또다른 구체예로서, 상기 제제는 치료제, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 50/13를 포함한다. 추가의 구체예에서, 상기 제제는 치료제, PECEOL®, 및 GELUCIRE® 53/10를 포함한다. 이들 구체예에서, PECEOL®과 GELUCIRE®의 비율은 20:80 내지 80:20일 수 있다 (예컨대, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30 및 80:20).In one embodiment, the therapeutic agents of the present invention include therapeutic agents, PECEOL®, and GELUCIRE® 44/14. In another embodiment, the formulation comprises a therapeutic agent, PECEOL®, and GELUCIRE® 50/13. In a further embodiment, the formulation comprises a therapeutic agent, PECEOL (R), and GELUCIRE (R) 53/10. In these embodiments, the ratio of PECEOL (R) and GELUCIRE (R) may be 20:80 to 80:20 (e.g., 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 80:20).

두 개의 대표적인 치료제, 에코나졸 및 도세탁셀의 제제화를 각각 실시예 3 및 실시예 4에 기술하였다.Formulations of two representative therapeutic agents, econazole and docetaxel, are described in Example 3 and Example 4, respectively.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 치료제를 투여하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 치료제의 치료학적으로 유효한 양은 상기에서 기술한 치료제 제제를 사용하여 투여된다. 하나의 구체예로서, 상기 제제는 경구적으로 투여된다. 또 다른 구체예로서, 상기 제제는 국부적으로 투여된다.In another aspect, the present invention provides a method of administering a therapeutic agent. In this method, a therapeutically effective amount of the therapeutic agent is administered using the therapeutic agent described above. In one embodiment, the formulation is administered orally. In another embodiment, the formulation is administered locally.

추가의 양태로서, 본 발명은 본 발명에 따라 제제화된 치료제에 의해 치료될 수 질환 및 컨디션을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법에서, 본 발명의 치료 약물 제제의 유효한 양이 이를 필요로 하는 개체에 투여된다. 컨디션 및 질환을 치료하는 방법은 본원에 기재된 치료제군 및 특정 치료제의 제제를 사용한다.In a further aspect, the invention provides a method of treating diseases and conditions which can be treated by a therapeutic agent formulated in accordance with the present invention. In this method, an effective amount of the therapeutic drug formulation of the present invention is administered to an individual in need thereof. Methods of treating conditions and diseases use the therapeutic agents set forth herein and formulations of certain therapeutic agents.

치료적 약물 담체Therapeutic drug carrier

추가의 양태로서, 본 발명은 치료제의 제제화를 위한 조성물, 상기 조성물을 만드는 방법, 및 상기 조성물을 사용하여 전달하기 위해 치료제를 제제화하는 방법을 제공한다.In a further aspect, the invention provides a composition for formulation of a therapeutic agent, a method of making the composition, and a method of formulating a therapeutic agent for delivery using the composition.

하나의 양태로서, 본 발명은 치료제 전달을 위한 제제화를 위한 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 In one aspect, the present invention provides a composition for formulation for therapeutic delivery. The composition

(a) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(a) at least one fatty acid glycerol ester; And

*(b) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르과 같은 하나 이상의 폴리에톡실레이트 리피드를 포함한다.(b) at least one polyethoxylate lipid such as at least one polyethylene oxide-containing phospholipid or at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester.

상기 조성물에서, 지방산 글리세롤 에스테르, 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질, 및 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르는 앞서 암포테리신 B 제제에서 설명한 바와 같다. 상기 조성물 내의 이들 성분의 양은 역시 앞서 암포테리신 B 제제에서 설명한 바와 같다. 특정 구체예에서, 조성물은 추가로 약 10 중량% 미만의 양으로 글리세롤을 포함할 수 있다. In the above composition, the fatty acid glycerol ester, the polyethylene oxide-containing phospholipid, and the polyethylene oxide-containing fatty acid ester are as described in the amphotericin B preparation. The amounts of these components in the compositions are also as described previously in the amphotericin B formulations. In certain embodiments, the composition may further comprise glycerol in an amount of less than about 10% by weight.

상기 조성물은 난용성인 치료 약물의 용해도를 유리하게 높일 수 있다. 치료제와 통합되어서, 상기 조성물은 자가-유화 약물 전달계로 제공될 수 있다.The composition can advantageously increase the solubility of the poorly therapeutic drug. Integrating with the therapeutic agent, the composition can be provided as a self-emulsifying drug delivery system.

하나의 구체예에서, 상기 조성물은In one embodiment, the composition comprises

(a) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및(a) at least one fatty acid glycerol ester; And

(b) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질(예컨대, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염) 을 포함한다.(b) at least one polyethylene oxide-containing phospholipid (e.g., distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt).

하나의 구체예로서, 본 발명의 치료제 제제는 치료제, PECEOL®, 및 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염을 포함한다. 본 구체예에서, 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 염은 약 30 mM까지의 양으로 존재한다.In one embodiment, the therapeutic agent formulation of the present invention comprises a therapeutic agent, PECEOL (R), and distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt. In this embodiment, the distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol salt is present in an amount of up to about 30 mM.

또 하나의 구체예로서, 상기 조성물은 In another embodiment, the composition comprises

(a) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르(예컨대, 올레산 글리세롤 에스테르); 및 (a) at least one fatty acid glycerol ester (e.g., oleic acid glycerol ester); And

(b) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르(예컨대, 폴리에틸렌 글리콜의 라우르, 팔미트 및/또는 스테아르산 에스테르)를 포함한다. (b) one or more polyethylene oxide-containing fatty acid esters (e.g., lauric, palmitic and / or stearic acid esters of polyethylene glycol).

하나의 구체예로서, 상기 조성물은 PECEOL®, 및 GELUCIRE® 44/14를 포함한다. 또다른 구체예로서, 상기 조성물은 PECEOL®, 및 GELUCIRE® 50/13를 포함한다. 추가의 구체예에서, 상기 조성물은 PECEOL®, 및 GELUCIRE® 53/10를 포함한다. 이들 구체예에서, PECEOL®과 GELUCIRE®의 비율은 20:80 내지 80:20일 수 있다(예컨대, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30 및 80:20).In one embodiment, the composition comprises PECEOL (R), and GELUCIRE (R) 44/14. In another embodiment, the composition comprises PECEOL®, and GELUCIRE® 50/13. In a further embodiment, the composition comprises PECEOL®, and GELUCIRE® 53/10. In these embodiments, the ratio of PECEOL (R) and GELUCIRE (R) may be 20:80 to 80:20 (e.g., 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 80:20).

또 하나의 양태로서, 본 발명은 치료제 제제를 만드는 방법을 제공한다. 본 방법의 하나의 구체예로서, 치료제는 상기에 기술한 조성물과 조합된다. 본 방법의 또 다른 구체예로서, 치료제는 조성물의 성분의 하나(예컨대, 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르)와 조합되어 제1 조합을 제공하며 이어서 제1 조합은 조성물의 다른 성분(예컨대, 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 인지질, 또는 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르)와 조합된다.In another aspect, the invention provides a method of making a therapeutic agent formulation. In one embodiment of the method, the therapeutic agent is combined with the composition described above. In another embodiment of the method, the therapeutic agent is combined with one of the components of the composition (e.g., one or more fatty acid glycerol esters) to provide a first combination, and the first combination is then applied to the other components of the composition A seed-containing phospholipid, or one or more polyethylene oxide-containing fatty acid esters).

본원에 기재한 본 발명의 제제 및 조성물은 기술된 성분들을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제제 및 조성물은 기술된 성분들 및 제제 및 조성물(즉, 인용된 성분들로 필수적으로 구성된 제제 및 조성물)의 특성에 영향을 주지 않는 기타의 추가 성분들을 포함한다.The formulations and compositions of the present invention described herein include the components described. In certain embodiments, formulations and compositions of the present invention comprise the described ingredients and other additional ingredients that do not affect the properties of the formulation and composition (i. E., Formulations and compositions essentially composed of the recited ingredients).

제제 및 조성물의 특성에 영향을 주지 않는 기타의 추가 성분들은 제제 또는 조성물의 치료적 프로파일 및 효능을 불리하게 변경 또는 영향을 주지 않는 추가적인 치료제, 기술된 치료제 성분을 가용화하는 제제 및 조성물의 능력을 불리하게 변경 또는 영향을 주지 않는 추가적인 성분, 및 기술된 치료제 성분의 생물학적 이용가능성을 증가시키는 제제 및 조성물의 능력을 불리하게 변경 또는 영향을 주지 않는 추가적인 성분을 포함한다. 또 다른 구체예로서, 본 발명의 제제 및 조성물은 오직 기술한 성분들만 포함한다(즉, 이루어져 있다).The formulation and other additional components that do not affect the properties of the composition may be used in combination with additional therapeutic agents that adversely alter or do not adversely affect the therapeutic profile and efficacy of the formulation or composition, And additional ingredients that do not adversely alter or affect the ability of the compositions and compositions to increase the bioavailability of the described therapeutic ingredients. In yet another embodiment, the formulations and compositions of the present invention comprise (i.e., consist of) only the ingredients described.

본 발명은 암포테리신 B 및 다른 치료제의 경구용 제제에 관한 것으로, 상기 제제는 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르 및 하나 이상의 PEG 개질된 인지질 또는 지방산 에스테르를 포함한다. 상기 제제는 위액 내의 낮은 pH에서 치료제의 증강된 생물학적 이용가능성 및/또는 증가된 안정성을 제공한다.The present invention relates to oral preparations of amphotericin B and other therapeutic agents comprising one or more fatty acid glycerol esters and one or more PEG modified phospholipids or fatty acid esters. Such formulations provide enhanced bioavailability and / or increased stability of the therapeutic agent at low pH in gastric juices.

앞서 말한 양태 및 본 발명에 수반되는 많은 이점은, 도면과 함께 결합하였을 때, 하기의 상세한 설명을 참조함으로써 더 잘 이해되고 보다 쉽게 이해될 것이다.
도 1A는 암포테리신 B(AmpB)의 화학적 구조를 나타낸다.
도 1B는 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민 폴리에틸렌 글리콜 2000 암모늄염(DSPE-PEG-2000)의 화학적 구조를 나타낸다.
도 2는 AmpB/PECEOL® 제제 안의 암포테리신 B 농도와 5, 10, 및 15 mM 농도에서 DSPE-PEG-2000를 포함하고 있는 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®DSPE-PEG-2000)를 비교한 것이다.
도 3A는 다양한 농도(0.5-15 μg/ml)에서 SGF(stimulated gastric fluid)에서 배양된 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(PECEOL®/DSPE-PEG)의 시간에 따른 UV 흡수 스펙트럼을 비교한 것이다.
도 3B는 AmpB 흡광도 vs. 농도의 표준 곡선을 그리기 위하여 407 nm에서 피크 높이를 사용하여 결합한 도 2A로부터의 표준 곡선을 비교한 것이다. DSPE-PEG 분자량이 변하는 지점에서 각 제제를 위한 서로 다른 표준 곡선이 작성되었다.
도 4는 37℃, 인공 위액 내에서 시간(10, 30, 및 120 분)의 함수에 따른 본 발명의 대표적인 제제(PECEOL®/DSPE-PEG 350, 550, 750, 및 2000) 내에서의 AmpB의 안정성과 AmpB/PECEOL® 제제 내에서의 AmpB의 안정성을 비교한 것이다.
도　5A와 5B는 37℃, 레시틴이 포함 및 불포함된 공복 상태의 인공 장액(FSSIF) 내에서 시간(10, 30, 60 및 120 분)의 함수에 따른 본 발명의 대표적인 제제(PECEOL®/DSPE-PEG 350, 550, 750, 및 2000, 각각 PEG 350, 550, 750, 2000으로 지칭) 내의 암포테리신 B의 안정성과 AmpB/PECEOL® 제제 내에서의 AmpB의 안정성을 비교한 것이다.
도 6은 시간의 함수(10, 30, 60, 및 120분)로서 판크레아틴 효소가 있는 SIF(simulated intestinal fluid) 내 37℃에서 AmpB/PECEOL® 내에서와 본 발명의 대표적인 제제(각각 PEG 350, 550, 750, 2000로 지칭된, PECEOL®/DSPE-PEG 350, 550, 750, 및 2000) 내에서의 AmpB의 안정성을 비교한 것이다.
도 7은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET® (ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 신장에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다.
도 8은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 기관에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다.
도 9는 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)(blank, 0 시간, 및 48시간)로 처리된 랫트에서의 혈장 크레아틴(mg/dl)을 비교한 것이다.
도 10A, 10B, 및 10C는 PECEOL®:GELUCIRE®의 다양한 비율(60:40; 50:50; 및 40:60 v/v)에서 2, 4, 및 24시간에 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14; AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 50/13; 및 AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 53/13) 내의 AmpB 농도(mg/mL)를 비교한 것이다.
도 11은 AmpB/PECEOL® 제제(PECEOL®로 지칭) 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50; 및 AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE-PEG-2000)의 시간(0, 1, 5, 7, 15, 21, 28, 36, 43, 49, 및 56일)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다.
도 12는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50; 및 AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE-PEG-2000)의 인공 위액(SGF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 및 120분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다.
도 13은 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 식이 상태 인공장액(FeSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다.
도 14는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 효소 포함 식이 상태 인공장액(FeSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다.
도 15는 AmpB/PECEOL® 제제 및 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/GELUCIRE® 44/14, 50/50)의 공복 상태 인공장액(FaSSIF) 내에서 시간(10, 30, 45, 60, 90, 120, 및 240분)에 따른 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다.
도 16은 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE-PEG-2000)의 실온 및 43℃에서 7일 후에 AmpB 농도(% 오리지날 농도, 5 mg/mL)를 비교한 것이다(AmpB 는 특정 시간 후에 원심분리된 샘플의 UV 흡광도에 의해 측정하였다.).The foregoing aspects and many of the attendant advantages of the present invention will become better understood and appreciated more readily by reference to the following detailed description when taken in conjunction with the drawings.
Figure 1A shows the chemical structure of amphotericin B (AmpB).
1B shows the chemical structure of distearoylphosphatidylethanolamine polyethylene glycol 2000 ammonium salt (DSPE-PEG-2000).
Figure 2 shows a representative AmpB preparation (AmpB / PECEOL ® DSPE-PEG-2000) of the present invention comprising DSPE-PEG-2000 at 5, 10 and 15 mM concentrations of amphotericin B in the AmpB / .
Figure 3A compares the UV absorption spectra over time for a representative AmpB formulation (PECEOL® / DSPE-PEG) of the invention cultured in SGF (stimulated gastric fluid) at various concentrations (0.5-15 μg / ml).
FIG. 3B shows the AmpB absorbance vs. absorbance. Lt; RTI ID = 0.0 > 2A < / RTI > using a peak height at 407 nm to draw a standard curve of concentration. Different standard curves for each formulation were made at the point where the DSPE-PEG molecular weight varied.
Figure 4 shows the effect of AmpB in a representative formulation of the invention (PECEOL® / DSPE-PEG 350, 550, 750 and 2000) as a function of time (10, 30, and 120 min) Stability and the stability of AmpB in AmpB / PECEOL® preparations.
Figures 5A and 5B show a representative formulation of the invention (PECEOL® / DSPE-1) according to a function of time (10, 30, 60 and 120 minutes) in an intestinal fluid (FSSIF) PEG 350, 550, 750, and 2000, respectively, PEG 350, 550, 750, 2000) and the stability of AmpB / PECEOL® The stability of AmpB in the formulation is compared.
Figure 6 shows the results of a representative formulation of the present invention (PEG 350, < RTI ID = 0.0 > PEG < / RTI > 350, DSPE-PEG 350, 550, 750, and 2000, referred to as PECEOL 550, 750, 2000).
Figure 7 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000) infected with Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the kidneys of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml).
Figure 8 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000), Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the organs of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml).
FIG. 9 is a graph showing the effect of the present invention on AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000 and AmpB / DSPE-PEG-2000, which are infected with Candida albicans and treated with a control, AmpB / PECEOL® preparation (10 mg / kg) , 10 mg / kg), and plasma creatinine (mg / dl) in rats treated with intravenous ABELCET® (designated ABLC, 5 mg / ml) (blank, 0 h and 48 h) .
Figures 10A, 10B, and 10C show representative AmpB formulations of the invention (AmpB) at 2, 4, and 24 hours at various ratios of PECEOL®: GELUCIRE® (60:40; 50:50; and 40:60 v / (Mg / mL) in AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14; AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 50/13; and AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 53/13).
Figure 11 is a graphical representation of the effect of the AmpB / PECEOL (R) formulation (referred to as PECEOL®) and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50; and AmpB / PECEOL® / DSPE- AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to time (0, 1, 5, 7, 15, 21, 28, 36, 43, 49 and 56 days) It is.
Figure 12 shows the effect of the AmpB / PECEOL (R) formulation and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50; and AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, 15 mM DSPE- AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to time (10, 30, 45, 60, 90, and 120 minutes) in artificial gastric juice (SGF)
Figure 13 shows time (10, 30, 45, 60) times in the dietary state of artificial intestinal fluid (FeSSIF) of the AmpB / PECEOL (R) formulation and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to the method of Example 1, 90, 120, and 240 min.
Figure 14 shows time (10, 30, 45) times in the enzyme-containing dietary state of artificial intestinal fluid (FeSSIF) of AmpB / PECEOL® preparations and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to the method of Example 1, 60, 90, 120, and 240 min.
Figure 15 shows time (10, 30, 45, 60) times in the fasted state artificial intestinal fluid (FaSSIF) of AmpB / PECEOL (R) preparations and representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, 50/50) AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) according to the method of Example 1, 90, 120, and 240 min.
Figure 16 shows the AmpB concentration (% original concentration, 5 mg / mL) after 7 days at room temperature and 43 < 0 > C of representative AmpB formulations of the invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG- 2000, 15 mM DSPE- (AmpB was measured by UV absorbance of the centrifuged sample after a certain time).

하기의 실시예는 발명을 설명하기 위한 목적으로 제공되는 것이며, 발명을 제한하는 것은 아니다.The following examples are provided for the purpose of illustrating the invention and are not intended to limit the invention.

재료material

하기의 재료는 하기의 실시예에 기술된 바와 같이 사용하였다.The following materials were used as described in the following examples.

암포테리신 B(Streptomyces sp.유래, Calbiochem, >86% 순도)는 EMD Biosciences (San Diego, CA)에서 구입하였고 추가의 정제 없이 사용하였다. 상업적으로 이용가능한 디옥시콜레이트 미셀 분산액(FUNGIZONE®)으로서의 암포테리신 B는 Vancouver General Hospital pharmacy에서 구입하였다. 인지질 및 폴리(에틸렌 글리콜)-리피드는 모두 Avanti Polar Lipids(Alabaster, AL)에서 얻었다. HPLC grade 용매는 Fluka로부터 얻었다. PECEOL®(글리세릴 올레산염), LABRASOL®(카프릴로카프로일 마크로골 글리세리드) 및 GELUCIRE® 44/14, GELUCIRE® 50/13, 및 GELUCIRE® 53/10는 Gattefosse Canada (Mississauga, Ontario)로부터 얻었다. CAPTEX 355® 및 CAPMUL®은 Abitech로부터 얻었다. 효소가 없는 인공 위액(SGF, Simulated gastric fluid) 30 mM NaCl로 구성되어 있으며, 1 N HCl로 pH 1.2로 적정하였다. 판크레아틴 효소가 있는 인공장액(SIFe, Simulated intestinal fluid with pancreatin enzymes)은 미국 약전의 방법(USP28)에 따르되 문헌[Vertzoni et al., Dissolution media simulating the intralumenal composition of the small intestine: physiological issues and practical aspects, J. Pharmacy and Pharm. 56(4):453-462 (2004)]에 의해 변경한 방법으로 제조하였고, 0.2 M NaOH, 6.8 g/L의 1가 염기 인산칼륨 및 10 g/L의 판크레아틴(Sigma)으로 구성되어 있으며, NaOH로 pH 7.5로 조정하였다. 공복 상태의 담즙산염 포함 인공 장액(FaSSIF, Fasted-state simulated intestinal fluid with bile salts)(Vertzoni et al.)은 3 mM 나트륨 타우로콜레이트(Sigma), 3.9 g/L 인산이수소나트륨, 6.2 g/L NaCl in water로 구성되어 있으며 0.75 mM 레시틴을 포함하거나 포함하지 않으며, NaOH 로 pH 6.5로 적정하였다. 물은 역삼투 시스템에 의해 정제하였고 사용하기 전에 여과하였다(0.2 μm). 모든 화합물을 Sigma Aldrich에서 연구용 규격(reagent-grade)으로 구입하였다.Amphotericin B ( from Streptomyces sp ., Calbiochem,> 86% purity) was purchased from EMD Biosciences (San Diego, Calif.) And used without further purification. Amphotericin B as a commercially available dioxycholate micellar dispersion (FUNGIZONE®) was purchased from Vancouver General Hospital pharmacy. Both phospholipids and poly (ethylene glycol) -lipids were obtained from Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL). HPLC grade solvents were obtained from Fluka. PECEOL® (glyceryl oleate), LABRASOL® (caprylocaproyl macrogol glyceride) and GELUCIRE® 44/14, GELUCIRE® 50/13, and GELUCIRE® 53/10 were obtained from Gattefosse Canada (Mississauga, Ontario). CAPTEX 355® and CAPMUL® were obtained from Abitech. (SGF, Simulated gastric fluid) 30 mM NaCl and titrated to pH 1.2 with 1 N HCl. Simulated intestinal fluid with pancreatin enzymes with pancreatic enzymes is in accordance with USP 28 (USP28) [Vertzoni et al., Dissolution media simulating the intraluminal composition of the small intestine: physiological issues and practical aspects , J. Pharmacy and Pharm. 56 (4): 453-462 (2004)) and consisted of 0.2 M NaOH, 6.8 g / L monovalent potassium phosphate and 10 g / L pancreatin (Sigma) , And adjusted to pH 7.5 with NaOH. (FaSSIF, Faston-state simulated intestinal fluid with bile salts) (Vertzoni et al.) Were diluted with 3 mM sodium taurocholate (Sigma), 3.9 g / L sodium dihydrogenphosphate, 6.2 g / L NaCl in water, with or without 0.75 mM lecithin, titrated to pH 6.5 with NaOH. Water was purified by reverse osmosis system and filtered (0.2 μm) before use. All compounds were purchased as reagent-grade from Sigma Aldrich.

실시예 1Example 1

대표적인 암포테리신 B 제제의 제조 및 특징분석Preparation and characterization of representative amphotericin B preparations

본 실시예에서는 본 발명의 대표적인 암포테리신 B 제제의 제조 및 특징 분석을 기술한다.This example describes the preparation and characterization of representative amphotericin B formulations of the present invention.

* 자가 유화 약물전달계(SEDDS)의 제조 * Manufacture of self emulsifying drug delivery system (SEDDS)

약물 파우더를 리피드와 섞고 빛으로부터 보호 아래 약하게 가열 및 교반(45℃, 1-2시간)함으로써 암포테리신 B(AmpB)를 SEDDS 리피드 운반체(lipid vehicle)와 혼합하였다. 10,000 x g에서 15분간 원심분리함으로써 모든 눈에 보이는 남아있는 미립자들을 제거하였다.Amphotericin B (AmpB) was mixed with the SEDDS lipid vehicle by mixing the drug powder with lipid and protecting it from light, heating and stirring (45 ° C, 1-2 hours) with mild heating. All remaining visible microparticles were removed by centrifugation at 10,000 x g for 15 minutes.

AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG 제제의 제조Preparation of AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG formulations

AmpB를 5 mg/mL에서 PECEOL®의 혼합물에 완전히 용해시키고, 95% 에탄올(1:3　v/v)과 15 mM 디스테아로일포스파티딜 에탄올아민(DSPE)-폴리(에틸렌 글리콜)n(PEG)(여기서, n은 평균 PEG 분자량, 350, 550, 750 또는 2000이다)를 첨가하였다. AmpB 농도는 각각 에탄올에서 3 mg/ml, PECEOL®에서 5 mg/mL로 하여 최초 혼합물 내에서 완전한 약물 용해도를 가지게 하였다. 용액은 빛으로부터 보호 아래 1시간 동안 40℃에서 교반하여 암포테리신 B와 지질을 용해하고, 회전 농축기에서 수 시간 동안 진공(65 mbar) 하에 40℃에서 용매 증발을 수행하였다. 에탄올은, 에탄올을 첨가하기 전에 즉시 측정된 암포테리신 B, PECEOL®, 및리피드를 포함하는 샘플의 원래 무게를 달성한 것으로 에탄올이 완전히 제거된 것으로 판단하였다. 미립자가 없는 반투명한 노란색 혼합물을 형성시켰다. 하기의 과정에서 AmpB 의 분해나 스펙트럼 형태의 변화는 관찰되지 않았다.AmpB was completely dissolved in a mixture of PECEOL (R) at 5 mg / mL and phosphatidylethanolamine (DSPE) -poly (ethylene glycol) n (PEG) in 95 mM ethanol (1: (Where n is the average PEG molecular weight, 350, 550, 750, or 2000). AmpB concentrations were 3 mg / ml in ethanol and 5 mg / mL in PECEOL®, respectively, to achieve complete drug solubility in the initial mixture. The solution was allowed to dissolve amphotericin B and lipid by stirring at 40 ° C for 1 hour under light protection, and solvent evaporation was carried out at 40 ° C under vacuum (65 mbar) for several hours in a rotary evaporator. Ethanol was determined to have completely removed ethanol by achieving the original weight of the sample containing amphotericin B, PECEOL (R), and lipid immediately measured before addition of ethanol. A translucent yellow mixture without particulates was formed. No degradation of AmpB or a change in spectral shape was observed in the following procedure.

암포테리신 B 안정성의 특성 분석Characterization of amphotericin B stability

약물 농도는 역상 HPLC/UV 또는 UV 분광광도계(λ= 407 nm)로 측정하였다. AmpB의 HPLC 분석을 위하여, 샘플을 DMSO 내 20% (v/v) 메탄올에서 희석하였고, 20 μL 을 30℃에서 Luna 5 μm(2.0 x 150 mm) C18 칼럼(Phenomenex)에 주입하였다. Waters 996 HPLC 시스템상의 gradient program을 이용하였을 때 이동상은 10 mM 아세트산나트륨 및 아세토니트릴이었으며, Waters photodiode array detector(λ= 408 nm)로 측정하였다. 이동 시간(run time)은 13분이었고, 유지시간(retention time)은 약 8.5 분이었다. 약물 안정화 동안 지질 운반체의 약한 가열에 따른 및 14일 동안의 보존(21℃)에 따른 분해 또는 초응집(superaggregation)에 대한 AmpB의 안정성은 λ= 250-500 nm에서 Thermoscan UV/가시광선 분광광도계를 사용한 UV 스펙트럼 변환 분석에 의해 평가하였다.The drug concentration was measured by reversed phase HPLC / UV or UV spectrophotometer (? = 407 nm). For HPLC analysis of AmpB, the sample was diluted in 20% (v / v) methanol in DMSO and 20 μL was injected at 30 ° C into the Luna 5 μm (2.0 x 150 mm) C18 column (Phenomenex). When using a gradient program on a Waters 996 HPLC system, the mobile phase was 10 mM sodium acetate and acetonitrile and measured with a Waters photodiode array detector (λ = 408 nm). The run time was 13 minutes and the retention time was about 8.5 minutes. The stability of AmpB for degradation or superaggregation with weak heating of the lipid carrier during drug stabilization and for 14 days of storage (21 ° C) was measured using a Thermoscan UV / visible light spectrophotometer at λ = 250-500 nm Lt; RTI ID = 0.0 > UV < / RTI >

용해도, 물리적 안정성, 및 자가-유화Solubility, physical stability, and self-emulsification

SEDDS(self-emulsifying drug delivery systems) 제제는 HPLC로 측정시 100-500 μg/mL 범위의 AmpB 용해도를 가지며, 이는 수용액(pH 7)에서의 매우 낮은 용해도와 견줄만하다.자가-유화 리피드 혼합물을 실험하기 위하여, 3 mg의 AmpB 파우더를 0.3 ml(10 mg/mL)의 다양한 리피드 조합과 섞은 후 혼합물을 37℃, 2시간 동안 1 mL 갈색 유리 바이알에서 교반하였다. 혼합 후에, 샘플은 15분 동안 10,000 x g 원심분리하여 남아있는 모든 약물 미립자들을 제거하였다. 이 과정은 리피드 성분을 침전시키지 않는다. 다음으로 샘플을 30분간 37℃로 강하게 혼합하면서 150 mM NaCl 내에서 1:1000(v/v) 희석액으로 분산시켰다. CAPTEX® 355-기반의 AmpB SEDDS 결과는 표 1에 요약하였다. PECEOL®/GELUCIRE®-기반의 AmpB SEDDS 결과는 표 2에 요약하였다.SEDDS (self-emulsifying drug delivery systems) have AmpB solubility in the range of 100-500 μg / mL as measured by HPLC, which is comparable to very low solubility in aqueous solution (pH 7). , 3 mg of AmpB powder was mixed with various lipid combinations of 0.3 ml (10 mg / mL), and the mixture was stirred at 37 캜 for 2 hours in a 1 mL brown glass vial. After mixing, the sample was centrifuged at 10,000 x g for 15 minutes to remove any remaining drug microparticles. This process does not precipitate lipid components. The sample was then dispersed with a 1: 1000 (v / v) dilution in 150 mM NaCl with vigorous mixing at 37 ° C for 30 minutes. CAPTEX® 355-based AmpB SEDDS results are summarized in Table 1. PECEOL® / GELUCIRE®-based AmpB SEDDS results are summarized in Table 2.

표 1: CAPTEX® 355-기반의 암포테리신 B SEDDS 예비 SEDDSTable 1: CAPTEX® 355-based Amphotericin B SEDDS Spare SEDDS

표 2: PECEOL®/GELUCIRE®-기반의 AmpB SEDDSTable 2: PECEOL® / GELUCIRE®-based AmpB SEDDS


성분(% v/v)
Component (% v / v) 유효 수력학적 직경(nm)
(다분산지수)Effective hydrodynamic diameter (nm)
(Polydispersity index) 하위집단Subgroup 직경 범위(nm)Diameter Range (nm) 상대적 비율Relative ratio CAPTEX®355CAPTEX®355 Tween
80Tween
80 CAPMUL®MCM CAPMUL®MCM NaH2PO4
(10mM, pH 4.0)NaH 2 PO 4
(10 mM, pH 4.0) 5050 1717 3131 22 186(0.232)186 (0.232) 49-69
196-27749-69
196-277 79
2179
21 5353 55 4040 22 237(0.278)237 (0.278) 24-44
111-242
614-133424-44
111-242
614-1334 73
12
1573
12
15 5858 1010 3030 22 216(0.258)216 (0.258) 44-64
154-255
541-89344-64
154-255
541-893 51
5
4451
5
44 6363 55 3030 22 223(284)223 (284) 62-89
168-241
413-64862-89
168-241
413-648 19
6
7519
6
75 7070 1010 1818 22 168(0.215)168 (0.215) 50-65
199-27350-65
199-273 82
1882
18 5050 1717 3131 22 179(0.24)179 (0.24) 55-71
214-29755-71
214-297 80
2080
20

입자의 정립은 혼합물이 30분간 37℃에서 150 mM NaCl 내에서 1:1000(v/v)로 분산된 후에 이루어졌다. 상대적인 비율은 입자 크기의 누적분포에 기초한 것이다.The particle sizing was carried out after the mixture was dispersed at 1: 1000 (v / v) in 150 mM NaCl at 37 DEG C for 30 minutes. The relative ratio is based on the cumulative distribution of particle size.

성분(% v/v)Component (% v / v) 유효 수력학적 직경(nm)
(다분산지수)Effective hydrodynamic diameter (nm)
(Polydispersity index) 하위집단(nm)Subgroup (nm) 상대적 비율Relative ratio PECEOL®PECEOL® GELUCIRE®
44/14GELUCIRE®
44/14 7070 3030 156(0.291)156 (0.291) 20-43
75-132
307-62120-43
75-132
307-621 55
16
2955
16
29 5050 5050 314(0.319)314 (0.319) 35-62
165-332
768-134535-62
165-332
768-1345 56
5
5956
5
59 3030 7070 252(0.294)252 (0.294) 28-50
135-241
568-116028-50
135-241
568-1160 63
7
3063
7
30 PECEOL®PECEOL® GELUCIRE®
50/13GELUCIRE®
50/13 7070 3030 158(0.279)158 (0.279) 30-47
94-168
336-59930-47
94-168
336-599 55
17
2855
17
28 5050 5050 192(0.301)192 (0.301) 19-22
71-145
396-70419-22
71-145
396-704 25
24
5125
24
51 3030 7070 396(0.265)396 (0.265) 50-99
228-527
1703-238250-99
228-527
1703-2382 25
63
1225
63
12

입자의 정립은 혼합물이 30분간 37℃에서 150 mM NaCl 내에서 1:1000(v/v)로 분산된 후에 이루어졌다. 상대적인 비율은 입자 크기의 누적분포에 기초한 것이다.The particle sizing was carried out after the mixture was dispersed at 1: 1000 (v / v) in 150 mM NaCl at 37 DEG C for 30 minutes. The relative ratio is based on the cumulative distribution of particle size.

표 1 및 표 2에 나타난 바와 같이, 유효 수력학적 직경은 CAPTEX® 355/CAPMUL®MCM/Tween 80(표 1)의 경우 평형상태에서 168-237 nm였고, PECEOL®/GELUCIRE® 44/14(표 2)의 경우 58-396 nm이었으나, 콩기름(soybean oil), PECEOL®/LABRASOL®, 또는 PECEOL®/GELUCIRE® 50/13의 경우에는 아니었다 (>1 μm, 데이터 미기재). 중요하게, 복합적 하위집단의 에멀전 액적 크기(droplet size)가 관찰되었다. CAPTEX®355-based SEDDS의 경우, 이들 하위집단은 미셀 크기와 일치하는 (예컨대, 20-50 nm) 직경을 포함하였고, 모든 집단이 서브마이크론 범위로 남아있었다(표 1). PECEOL®/GELUCIRE® 44/14의 경우, 20-50 nm, 1000-200 nm 범위(마이너 집단) 및 직경 1 μm에 근접한 범위를 포함하는 세 개의 하위집단이 관찰되었다. PECEOL®/GELUCIRE® 50/13의 경우, 가장 큰 직경의 하위집단에서 다소 더 큰 액적이 되는 경향을 보였지만, 세 개의 하위집단에서 PECEOL®/GELUCIRE® 44/14와 유사한 액적 크기 범위가 관찰되었고, 이는 PECEOL®/GELUCIRE® 50/13의 비율이 증가하면서 역시 증가하였다(표 2). 대표적인 단일 샘플들은 상기 표에 충분히 기재되어 있으며, 복제 샘플에서도 유효 직경 및 하위집단의 입자 크기 범위에 있어서 일관성을 보였음을 밝혀둔다. 주변 온도(21℃)에서 수일간 혼화성, 상 분리, 및 침전에 대하여 육안 관측을 실시하였다. 여러 개의 SEDDS 제제가 투명하고 균질한 상태로 남아있었다. 예를 들어, CAPTEX®-based SEDDS 제제는 모두 150 mM NaCl와 혼합된 후에 CAPTEX®, Tween 80, 및 인산나트륨의 모든 조합 비율에서 균질한 반투명한 혼합물을 생성하였다(표 1). 70/30 내지 30/70(v/v)의 PECEOL®과 GELUCIRE® 44/14의 조합은 순수한 에멀전을 생성한 반면, PECEOL®과 GELUCIRE® 50/13을 사용한 경우에는 GELUCIRE® 50/13의 높은 녹는점에서 일관되게(50℃) 21℃에서 24시간 동안 몇몇 부분적인 응고가 관찰되었다. As shown in Table 1 and Table 2, the effective hydrodynamic diameter was 168-237 nm at equilibrium for CAPTEX® 355 / CAPMUL®MCM / Tween 80 (Table 1), and PECEOL® / GELUCIRE® 44/14 2) was 58-396 nm, but not for soybean oil, PECEOL® / LABRASOL®, or PECEOL® / GELUCIRE® 50/13 (> 1 μm, data not shown). Significantly, the droplet size of the complex subgroup was observed. For CAPTEX®355-based SEDDS, these subgroups included diameters that corresponded to the micelle size (eg, 20-50 nm) and all groups remained in the submicron range (Table 1). For PECEOL® / GELUCIRE® 44/14, three subgroups were observed, including the range of 20-50 nm, the range of 1000-200 nm (minor group), and the range close to 1 μm in diameter. For PECEOL® / GELUCIRE® 50/13, droplet size ranges similar to PECEOL® / GELUCIRE® 44/14 were observed in the three subgroups, although the tendency was to be somewhat larger in the subgroup with the largest diameter, This also increased with an increase in the proportion of PECEOL® / GELUCIRE® 50/13 (Table 2). Representative single samples are fully described in the above table and are also shown to be consistent in the effective diameter and sub-population particle size range in replicate samples. Visual observations were made for compatibility, phase separation, and precipitation for several days at ambient temperature (21 ° C). Several SEDDS preparations remained clear and homogeneous. For example, all CAPTEX®-based SEDDS preparations were mixed with 150 mM NaCl followed by a homogenous translucent mixture in all combinations of CAPTEX®, Tween 80, and sodium phosphate (Table 1). The combination of PECEOL® and GELUCIRE® 44/14 from 70/30 to 30/70 (v / v) produced a pure emulsion, whereas PECEOL® and GELUCIRE® 50/13 produced a high level of GELUCIRE® 50/13 Some partial coagulation was observed at 21 ° C for 24 hours consistently at the melting point (50 ° C).

PECEOL ®/ DSPE -PEG 제제에서의 AmpB 용해도 및 공복 상태 인공 장액에서의 에멀전화 AmpB solubility and fasting state in PECEOL® / DSPE- PEG formulations Emulsification in artificial intestinal fluids

PEG의 평균 분자량이 350 내지 2000으로 다양한 경우에 있어서 PECEOL® 및 DSPE-PEGn의 조합은, 예비 SEDDS 제제와 비교했을 때 매우 큰 AmpB 용해도를 나타낸다. ≥10 mg/mL 농도에서, 24시간 동안 주변 온도(21℃)가 지속됨에 따라 AmpB의 침전이 발생한다. 0.5　mg/mL 37℃ SGF 내에서의 분산에 이어서 30분간의 교반에 따라, PECEOL®/DSPE-PEG2000 AmpB 제제는 300-500 nm의 입자 크기 및 눈에 보이는 미립자 없이 반투명한 에멀전을 생성하였다. 몇몇 경우에, 어떤 것은 직경 100 nm의 입자 및 나머지는 직경 수백 nm의 입자를 가진 서브마이크론 입자의 두 하위집단이 관찰되었다.When the average molecular weight of PEG is varied from 350 to 2000, the combination of PECEOL® and DSPE-PEGn exhibits a very high AmpB solubility compared to the preparative SEDDS formulation. At ≥ 10 mg / mL concentration, precipitation of AmpB occurs as the ambient temperature (21 ° C) continues for 24 hours. 0.5 mg / mL Following dispersion in SGF at 37 DEG C for 30 minutes followed by stirring for 30 minutes, the PECEOL® / DSPE-PEG 2000 AmpB preparation produced a translucent emulsion with a particle size of 300-500 nm and no visible particulate. In some cases, two sub-populations of submicron particles with some 100 nm diameter particles and the rest with several hundred nm diameter particles were observed.

인공 위액 및 장액에서의 AmpB 안정성AmpB stability in artificial gastric juice and intestinal fluid

PECEOL®/DSPE-PEG 제제(5 mg/mL) 내의 암포테리신 B를 3배 제조하고 인공 위액(SGF)에서 1:10(v/v) 희석액으로 배양하거나, 레시틴을 포함 및 불포함 또는 효소를 포함하도록 제조된 장액에서 37℃에서 강하게 교반하며 1:50(v/v) 희석액으로 배양하였다. 배양 시간은 0, 10, 30 또는 120분이었다. 매 시간마다, AmpB 농도는 샘플을 정화하기 위하여 95% 에탄올에서 완전하게 용해시켜 UV 분석에서 선형 범위가 되도록 샘플을 희석한 후에 흡광도(407 nm)를 세 번 측정하여 분광광도계에 의해 결정하였다. 수치는 330 nm에서 기준(baseline)이 되도록 표준화하였고 농도는 각 체액 타입(r2>0.99)에서 제조된 암포테리신 B 표준 곡선에 기초하여 계산하였다. 표준 곡선의 선형성과 PECEOL®/DSPE-PEG에서 제조된 표준 농도 범위는 인공 위액의 유형 또는 배양 시간에 영향을 받지 않았으나, DSPE-PEG의 다양한 분자량(350, 550, 750, 또는 2000)을 포함하는 각 제제에 대하여 분리된 3개의 표준 곡선을 제조하였다.Amphotericin B in PECEOL® / DSPE-PEG formulations (5 mg / mL) is prepared in triplicate and incubated with 1:10 (v / v) dilution in artificial gastric juice (SGF), or with or without lecithin Lt; RTI ID = 0.0 > (v / v) < / RTI > dilution. The incubation time was 0, 10, 30 or 120 minutes. At each time point, the AmpB concentration was determined by spectrophotometry by measuring the absorbance (407 nm) three times after diluting the sample to a linear range in the UV analysis, completely dissolving in 95% ethanol to purify the sample. The values were normalized to be baseline at 330 nm and concentrations were calculated based on the amphotericin B standard curve produced at each fluids type (r 2 > 0.99). The linearity of the standard curve and the standard concentration range produced by PECEOL® / DSPE-PEG were not affected by the type or incubation time of the artificial gastric juice, but the range of molecular weights (350, 550, 750, or 2000) Three separate standard curves were prepared for each formulation.

AmpB의 화학적 안정성 및 응집 상태 (모노머 vs. 자가의)는 담즙액 및 판크레아틴이 포함 및 불포함된 공복 상태의 인공 장액뿐만 아니라 USP 인공 장액에서도 평가하였다. 상기에 기재한 바와 같이, PECEOL® 단독 또는 PECEOL®/DSPE-PEG 제제(PEG 분자량 = 350, 550, 750, 또는 2000) 내의 AmpB 은 5 mg/mL에서 제조하였고 인공 위액에서 총 2시간 동안 배양하였다. 30분 간격으로, AmpB 농도 및 UV 스펙트럼을 측정하였다. AmpB는 UV 영역에서 5개의 주요 분광학적 피크를 나타냈다. 피크 4 및 5는 단량체 AmpB에서 가장 큰 진폭을 가진 반면, AmpB가 자가-관련되었을 때에는 좌방 이동(left shift)이 나타났다. 도 3A는 UV 분석의 선형 범위에서 CEOL®/DSPE-PEG 내의 AmpB의 전형적인 UV 스펨트럼을 나타내며, 단량체 AmpB의 우세함을 나타낸다. 이러한 패턴은 PEG 분자량이 350 내지 2000으로 다양한 경우에도 유지되었다(데이터 미기재). 도 3B에 나타난 바와 같이, 동일한 스펙트럼 패턴이 또한 SGF 내의 배양 후에도 관찰되었으며, 다양한 AmpB/PECEOL®/DSPE-PEGn 제조의 거의 동일한 표준 곡선을 유발하였다. Chemical stability and aggregation status (monomer vs. self) of AmpB was assessed in USP artificial intestinal fluid as well as in artificial intestinal fluids with and without bile fluid and pancreatin. As described above, AmpB in PECEOL® alone or in PECEOL® / DSPE-PEG formulations (PEG molecular weight = 350, 550, 750, or 2000) was prepared at 5 mg / mL and cultured in artificial gastric juice for a total of 2 hours . At 30 minute intervals, AmpB concentration and UV spectrum were measured. AmpB showed five major spectroscopic peaks in the UV region. Peaks 4 and 5 had the largest amplitude in the monomer AmpB, while left shifts when AmpB was self-associated. Figure 3A shows the typical UV spemtrum of AmpB in CEOL < > / DSPE-PEG in the linear range of UV analysis and shows the predominance of the monomer AmpB. This pattern was retained even when the PEG molecular weight varied from 350 to 2000 (data not shown). As shown in FIG. 3B, the same spectral pattern was also observed after incubation in SGF, resulting in nearly identical standard curves of various AmpB / PECEOL® / DSPE-PEGn preparations.

화학적 안정성에 관하여, DSPE-PEG 750 또는 2000과 비교했을 때 DSPE-PEG 350 또는 550으로 제조된 제제에서 다소 낮은 약물 안정성 경향을 보였다. AmpB 단독(예컨대, 순수한 파우더)은 이러한 매체에 용해되지 않아 시간 vs. 분해에서 증가된 용해의 교란 인자 때문에 유사한 농도에서 대조군으로 적절하게 사용할 수가 없다. 동일 방식으로 다르게 제조된 PECEOL® 단독 내의 AmpB는 제제 내에서 DSPE-PEG의 안정화 효과에 대한 음성 대조군으로서 포함하였다. AmpB/PECEOL®은 도 4에 나타난 바와 같이 DSPE-PEG 350 또는 2000을 포함하는 제제보다 SGF에서 다소 낮은 약물 안정성 경향을 보였다. 도 5는 레시틴 없이 담즙산염을 포함(도 5A)하거나 레시틴과 담즙산염을 포함(도 5B)하는 인공 장액 내의 AmpB 안정성이, 더 높은 PEG 분자량을 사용한 제제와 비교했을 때 PECEOL® 단독 내의 또는 PECEOL®/DSPE-PEG 350 내의 AmpB 보다 낮다는 것을 보여준다.With regard to chemical stability, there was a somewhat lower drug stability tendency in formulations made with DSPE-PEG 350 or 550 as compared to DSPE-PEG 750 or 2000. AmpB alone (e.g., pure powder) does not dissolve in these media, Due to the disturbance factor of increased dissolution in the degradation, it can not be suitably used as a control at similar concentrations. AmpB in PECEOL® alone, prepared differently in the same manner, was included as a negative control for the stabilizing effect of DSPE-PEG in the formulation. AmpB / PECEOL® showed a somewhat lower drug stability tendency in SGF than the formulation containing DSPE-PEG 350 or 2000 as shown in FIG. Figure 5 shows that AmpB stability in artificial intestinal fluids containing bile salts (Figure 5A) without lecithin or lecithin and bile acid salts (Figure 5B) is superior to PECEOL® alone or PECEOL® / DSPE-PEG 350. < / RTI >

도 6은 분해 효소를 포함하는 판크레아틴이 포함된 인공 장액 내의 AmpB의 안정성을 나타낸다. 이러한 데이터는 PECEOL® 단독 내의 350 또는 550과 비교하여 DSPE-PEG 750 또는 2000을 포함하는 제제의 안정성이 더 낫다는 것을 나타낸다. 그러나, PECEOL® 단독 내의 AmpB의 분해를 평가하는데 있어서, 인공 위액에서 AmpB/PECEOL®이 잘 혼합되지 않는 것이 관찰되었음을 아는 것이 중요하다; 이 제제는 부유하는 경향이 있다. 본원에 기술한 다양한 매체에서의 충분한 배양 시간 이후에 단량체 형태 vs. 응집된 AmpB의 전환과 관련된 변화, 예컨대 UV 스펙트럼에서의 특정 피크의 높이 비율의 차이점 또는 전체적인 패턴과 같은 변화는 관찰되지 않았다(데이터 미기재).6 shows the stability of AmpB in artificial intestinal fluid containing pancreatin containing a degrading enzyme. These data indicate that the stability of the formulation comprising DSPE-PEG 750 or 2000 is better compared to 350 or 550 in PECEOL® alone. However, in evaluating the degradation of AmpB in PECEOL® alone it is important to know that AmpB / PECEOL® is not well mixed in the artificial gastric juice; This formulation tends to float. After a sufficient incubation time in the various media described herein, Changes related to the conversion of the agglomerated AmpB, such as differences in height ratios of specific peaks in the UV spectrum, or changes such as the overall pattern, were not observed (data not shown).

입자 크기 분석Particle size analysis

동적광산란법(dynamic light scattering)(ZetaPALS instrument, Brookhaven Laboratories, New York, operating at 650 nm)에 의한 입자 크기 분석을 자가-유화 특성을 평가하기 위해 사용하였다. 에멀전 액적 크기는 37℃에서 30분간 배양한 후에 생리학적 염수(150 mM NaCl)에서 측정하였다. PECEOL®/DSPE-PEG AmpB 제제에서, 평균 직경을 예비 실험에서 매 10분마다 37℃에서 측정하였고 평균 직경이 1시간 후에 평형상태에 도달하여 안정하게 유지됨을 관찰하였다. 약물 안정성은 2시간 이후에 측정하였고, 따라서 2시간은 인공 장액 내에 배양된 샘플로부터 보고된 입자 크기 분석을 하는데 사용되는 타임 포인트였다. 2개의 데이터 분석 모드가 ZetaPALS(version 3.88)에서 이용가능하며, 이는 로그 정규분포 및 다중분포에 기초하여 가중치를 둔 평균 유효 수력학적 직경을 계산하여 둘 이상의 직경의 중심에 있는 하위집단을 확인할 수 있다. 양 수치는 누적 분포 분석(ZetaPALS software, version 3.88)에 기초하여 보고된 각 하위집단의 비율과 함께 양봉 분포 또는 다봉 분포를 검출하는 것으로 보고되었다. Particle size analysis by dynamic light scattering (ZetaPALS instrument, Brookhaven Laboratories, New York, operating at 650 nm) was used to evaluate the self-emulsifying properties. The emulsion droplet size was measured in physiological saline (150 mM NaCl) after incubation at 37 ° C for 30 minutes. In the PECEOL® / DSPE-PEG AmpB formulation, the average diameter was measured at 37 ° C every 10 minutes in the preliminary experiment, and the average diameter reached equilibrium after 1 hour and remained stable. Drug stability was measured after 2 hours and thus 2 hours was the time point used for the reported particle size analysis from samples incubated in artificial intestinal fluid. Two data analysis modes are available in ZetaPALS (version 3.88), which can be used to identify a subgroup at the center of two or more diameters by calculating the weighted mean effective hydraulic diameter based on log normal and multiple distributions . Positive figures have been reported to detect a bee or multi-tail distribution with a proportion of each sub-population reported based on cumulative distribution analysis (ZetaPALS software, version 3.88).

DSPE-PEG 분자량의 변화는 37℃에서 2시간 동안 혼합한 후에 인공 장액 내 에멀전 액적 크기에 뚜렷한 영향을 보이지 않았다(표 3). 서브마이크론 평균 직경은 대단히 넓은 분자량분포(polydispersity)에서 300-600 nm의 범위로 관찰되었다. 서브마이크론 범위(150-300 nm)의 중심에 위치한 작은 하위집단 및 1-2 μm 범위의 중심에 위치한 다른 하위집단과 함께, 바이모달 입자 크기 분포 역시 생성되었다. 이들 입자 크기 측정은 레시틴의 부재 하에 수행하였으며, 이는 불투명한 샘플의 혼합 조건 하에 매우 큰 에멀전 액적을 형성하였다. 그 결과는 도 3 에 나타내었다.Changes in the molecular weight of DSPE-PEG did not show a significant effect on the emulsion droplet size in the artificial intestinal fluid after mixing for 2 hours at 37 ° C (Table 3). The submicron average diameter was observed in the range of 300-600 nm with a very broad molecular weight distribution (polydispersity). A bimodal particle size distribution was also generated with a small subgroup located at the center of the submicron range (150-300 nm) and another subgroup located at the center of the 1-2 μm range. These particle size measurements were carried out in the absence of lecithin, which formed very large emulsion droplets under mixing conditions of opaque samples. The results are shown in Fig.

표 3: PECEOL®/DSPE-PEG 암포테리신 B 제제 입자 크기Table 3: PECEOL® / DSPE-PEG amphotericin B formulation Particle size

제제:
PECEOL®/DSPE-PEGn
nFormulation:
PECEOL® / DSPE-PEGn
n 유효 직경(nm)
로그정규분포Effective diameter (nm)
Log normal distribution 다분산지수Polydispersity index 하위집단(nm)Subgroup (nm) 상대적 비율Relative ratio 350350 370370 0.3440.344 129-186
888-1282129-186
888-1282 20
8020
80 550550 600600 0.4020.402 108-171
1206-1909108-171
1206-1909 20
8020
80 750750 596596 0.3950.395 134-210
1245-3400134-210
1245-3400 18
8218
82 20002000 533533 0.3920.392 119-200
1390-2330119-200
1390-2330 30
7030
70 PECEOL® 단독 내의 AmpB AmpB in PECEOL® alone 351351 0.3330.333 128-194
738-1120128-194
738-1120 20
8020
80

PECEOL®/DSPE-PEG 내의 AmpB의 동적광산란법에 의한 입자 크기는, PEG의 분자량이 350 내지 2000으로 다양한 범위에서, 0.5 mg AmpB/mL에서 2시간의 인공 공복 상태 장액(pH 6.8) 배양에 따라 측정하였다. 상대적 비율은 입자 크기의 누적 분포에 기초하였다.The particle size according to the dynamic light scattering method of AmpB in PECEOL® / DSPE-PEG was determined by varying the molecular weight of PEG from 350 to 2000 according to the culture of artificial fasting state liquid (pH 6.8) at 0.5 mg AmpB / mL for 2 hours Respectively. The relative proportions were based on cumulative distribution of particle size.

실시예 2Example 2

진균 감염의 치료에서의 대표적인 암포테리신 B 제제의 효능The efficacy of representative amphotericin B preparations in the treatment of fungal infections

아스퍼질루스 퍼미가투스 ( Aspergillus fumigatus ) 및 칸디다 알비칸 스(andida albicans) Aspergillus Fur fumigatus (Aspergillus fumigatus ) and Candida albicans ( andida albicans)

본 실시예에서는, 진균 감염의 치료에서 본 발명의 대표적인 앞포테리신 B의 효능을 기술한다. 아스퍼질루스 퍼미가투스(Aspergillus fumigatus) 또는 칸디다 알비칸스(andida albicans)에 감염된 랫트 치료에 있어 본 발명의 대표적인 암포테리신 B의 효능을 결정하기 위하여 동물 실험을 수행하였다.In this example, the efficacy of a representative anti-aflatoxin B of the present invention in the treatment of fungal infections is described. Aspergillus in rats treated infected fumigatus) or Candida albicans (andida albicans) were conducted animal experiments to determine the effectiveness of representative amphotericin B of the present invention.

1. 아스퍼질루스 퍼미가투스(2.7-3.3 x 107 colony forming units [CFU])를 경정맥에 투여하였다; 48시간 후에 수컷 알비노 Sprague-Dawley 랫트(350-400 g)에 모노글리세리드-DSPE/PEG2000-기초 AmpB(10 mg AmpB/kg; n=7)의 단일 위관영양을 연속 2일 동안 하루에 2회씩 투여하고 ABELCET®(5 mg AmpB/kg; n=4)의 단일 정맥투여 용량으로 투여하거나, 생리학적 염수(비처치 대조군; n=9)을 연속 2일 동안 하루에 1회씩 투여하였다. 랫트를 희생시켜 장기를 수집하였고(3일째), 다음을 수행하였다. 혈액은 접종(Blank) 전, 선량(0 시간) 및 혈장 크레아틴 분석을 위한 치료 후 48시간 후에 채취하였다. 수컷 알비노 Sprague-Dawley 랫트(350 내지 400 g)는 Charles River Laboratories (Wilmington, MA)에서 구입하였다. 랫트는 토끼에 사용되는 유사한 방법으로 정맥혈에 접근하기 위하여 포트(Access Technologies)와 카테터를 이용하여 외과적으로 이식하였다. 랫트는 동물 보호 시설에 12시간 명-암 주기로 보관하였고 온도와 습도를 조절하였다. 랫트는 실험기간 동안 물 및 표준 고형사료(Purina Rat Chow)에 접근이 자유롭도록 하였다. 봉쇄를 방지하기 위하여 생리식염수 및 헤파린과 함께 포트를 매일 제공하였다. 동물은 캐나다 동물관리협의회 및 브리티쉬 콜롬비아 대학에 의해 공표된 원칙에 따라 보살폈다.1. Aspergillus fumigatus (2.7-3.3 x 10 7 colony forming units [CFU]) was administered to the jugular vein; After 48 hours, single gavage of monoglyceride-DSPE / PEG2000-based AmpB (10 mg AmpB / kg; n = 7) in male albino Sprague-Dawley rats (350-400 g) , Or ABELCET® (5 mg AmpB / kg; n = 4), or physiological saline (non-treated control; n = 9) was administered once daily for two consecutive days. The organs were sacrificed (day 3) and the following were performed. Blood was collected before inoculation (Blank), dose (0 hour) and 48 hours after treatment for plasma creatine analysis. Male Albino Sprague-Dawley rats (350-400 g) were purchased from Charles River Laboratories (Wilmington, Mass.). Rats were surgically implanted using Access Technologies and a catheter to access venous blood in a similar manner as used for rabbits. The rats were housed in an animal care facility for 12 hours at a light-dark cycle, and temperature and humidity were controlled. The rats were allowed access to water and standard solid feed (Purina Rat Chow) during the experiment. Ports were provided daily with physiological saline and heparin to prevent containment. The animals were cared for according to the principles promulgated by the Canadian Animal Care Council and the University of British Columbia.

아스퍼질루스 퍼미가투스 접종원Aspergillus perigitis inoculum

아스퍼질루스 퍼미가투스는 파종성 아스페르길루스균증 환자 집단(BC Centre for Disease Control)에서 수집하였다. 배양은 37℃에서 48시간 동안 사브로드 덱스트로즈 한천(Sabouraud Dextrose agar)에서 배양하였다. 분생자는 발열물질이 없는 염수의 한천에 세척하여 분리하였다. 분생자는 유리 비드로 볼텍싱하여 현탁하였고, 분생자는 발열물질이 없는 염수에 희석하여 300 μl의 염수 내에서 2.7 내지 3.3 x 107의 분생자를 얻었다. 분생자는 혈구계수기(hemocytometer)를 사용하여 계수하였으며 100 μl의 분취량을 연속적으로 희석하고 분취량을 37℃, 48시간 동안 사브로드 덱스트로즈 한천에 접종하여 눈에 보이는 분생자의 개수 및 접종원의 순도를 결정하였다. 접종원에서 눈에 보이는 분생자의 평균 백분율은 62%±19였다. 포자 현탁액은 다른 유기체로 오염되지 않았다. 랫트는 아스페르길루스균증의 치료를 시작하기 48시간 전에 유치 포트(indwelling port)를 통해 300 μl 접종하였다. Aspergillus perigatus was collected from the BC Center for Disease Control. Cultures were incubated in Sabouraud Dextrose agar for 48 hours at 37 ° C. Conidia were separated by washing in agar of brine without pyrogen. The conidia were suspended by vortexing with glass beads and the conidia were diluted in saline without pyrogen to yield 2.7 to 3.3 x 10 7 conidiospores in 300 μl of saline. Conidia were counted using a hemocytometer and 100 μl aliquots were serially diluted and aliquots were inoculated into a sodbodextrose agar at 37 ° C for 48 hours to determine the number of visible conidia and the purity of the inoculum . The average percentage of concealers seen in the inoculum was 62% ± 19. Spore suspension was not contaminated with other organisms. The rats were inoculated with 300 μl via an indwelling port 48 hours prior to the start of treatment of Aspergillosis.

2. 칸디다 알비칸스(Candida albicans)(1-1.35 x 106 colony forming units [CFU])를 경정맥에 투여하였다; 48시간 후에 수컷 알비노 Sprague-Dawley 랫트(350-400 g)에 모노글리세리드-DSPE/PEG2000-based AmpB(10 mg AmpB/kg; n=7)의 단일 위관영양을 연속 2일 동안 하루에 2회씩 투여하고 ABELCET®(5 mg AmpB/kg; n=4)의 단일 정맥투여 용량으로 투여하거나, 생리학적 염수(비처치 대조군; n=9)을 연속 2일 동안 하루에 1회씩 투여하였다. 랫트를 희생시켜 장기를 수집하였고(3일째), 다음을 수행하였다. 혈액은 접종(Blank) 전, 선량(0 시간) 및 혈장 크레아틴 분석을 위한 치료 후 48시간 후에 채취하였다. 수컷 알비노 Sprague-Dawley 랫트 (350 내지 400 g)은 Charles River Laboratories (Wilmington, MA)에서 구입하였다. 랫트는 토끼에 사용되는 유사한 방법으로 정맥혈에 접근하기 위하여 포트(Access Technologies)와 카테터를 이용하여 외과적으로 이식하였다. 랫트는 동물 보호 시설에 12시간 명-암 주기로 보관하였고 온도와 습도를 조절하였다. 랫트는 실험기간 동안 물 및 표준 고형사료(Purina Rat Chow)에 접근이 자유롭도록 하였다. 봉쇄를 방지하기 위하여 생리식염수 및 헤파린과 함께 포트를 매일 제공하였다. 동물은 캐나다 동물관리협의회 및 브리티쉬 콜롬비아 대학에 의해 공표된 원칙에 따라 보살폈다.2. Candida albicans (1-1.35 x 10 6 colony forming units [CFU]) was administered to the jugular vein; After 48 hours, single gavage of monoglyceride-DSPE / PEG2000-based AmpB (10 mg AmpB / kg; n = 7) in male albino Sprague-Dawley rats (350-400 g) , Or ABELCET® (5 mg AmpB / kg; n = 4), or physiological saline (non-treated control; n = 9) was administered once daily for two consecutive days. The organs were sacrificed (day 3) and the following were performed. Blood was collected before inoculation (Blank), dose (0 hour) and 48 hours after treatment for plasma creatine analysis. Male Albino Sprague-Dawley rats (350-400 g) were purchased from Charles River Laboratories (Wilmington, Mass.). Rats were surgically implanted using Access Technologies and a catheter to access venous blood in a similar manner as used for rabbits. The rats were housed in an animal care facility for 12 hours at a light-dark cycle, and temperature and humidity were controlled. The rats were allowed access to water and standard solid feed (Purina Rat Chow) during the experiment. Ports were provided daily with physiological saline and heparin to prevent containment. The animals were cared for according to the principles promulgated by the Canadian Animal Care Council and the University of British Columbia.

칸디다 알비칸스 접종원Candida albicans inoculum

칸디다 알비칸스는 파종성 칸디다증 환자 집단(BC Centre for Disease Control)에서 수집하였다. 배양은 37℃에서 48시간 동안 사브로드 덱스트로즈 한천(Sabouraud Dextrose agar)에서 배양하였다. 분생자는 발열물질이 없는 염수의 한천에 세척하여 분리하였다. 분생자는 유리 비드로 볼텍싱하여 현탁하였고, 분생자는 발열물질이 없는 염수에 희석하여 300 μl의 염수 내에서 2.7 내지 3.3 x 107의 분생자를 얻었다. 분생자는 혈구계수기(hemocytometer)를 사용하여 계수하였으며 100 μl의 분취량을 연속적으로 희석하고 분취량을 37℃, 48시간 동안 사브로드 덱스트로즈 한천에 접종하여 눈에 보이는 분생자의 개수 및 접종원의 순도를 결정하였다. 접종원에서 눈에 보이는 분생자의 평균 백분율은 62%±19였다. 포자 현탁액은 다른 유기체로 오염되지 않았다. 랫트는 아스페르길루스균증의 치료를 시작하기 48시간 전에 유치 포트(indwelling port)를 통해 300 μl 접종하였다. Candida albicans was collected from a BC center for Disease Control. Cultures were incubated in Sabouraud Dextrose agar for 48 hours at 37 ° C. Conidia were separated by washing in agar of brine without pyrogen. The conidia were suspended by vortexing with glass beads and the conidia were diluted in saline without pyrogen to yield 2.7 to 3.3 x 10 7 conidiospores in 300 μl of saline. Conidia were counted using a hemocytometer and 100 μl aliquots were serially diluted and aliquots were inoculated into a sodbodextrose agar at 37 ° C for 48 hours to determine the number of visible conidia and the purity of the inoculum . The average percentage of concealers seen in the inoculum was 62% ± 19. Spore suspension was not contaminated with other organisms. The rats were inoculated with 300 μl via an indwelling port 48 hours prior to the start of treatment of Aspergillosis.

3. 동물 방법3. Animal methods

1 ml 전혈 샘플을 감염(Blank) 전, 선량(0 시간) 및 처치 후 48시간(48시간)에 소아 수집 튜브(3.6 mg K2 EDTA)에 채취하였다. 모든 전혈 샘플은 전위에 의해 혼합하고 혈장은 원심분리로 분리하였다(15분, 4℃에서 300 RPM). 혈장 샘플은 크레아틴 분석을 위하여 -20℃에서 보관하였다. 혈액 표본을 수집한 48시간 후에, 랫트에 EUTHANYL®를 정맥으로 과량 투여(1 ml)하여 안락사시켰다(펜토바르비탈 나트륨 240 mg/ml). 비장, 우신장, 간, 폐, 심장 및 뇌 조직 샘플을 수집하고, 무게를 재고, 멸균된 용기에 담았다. 생리식염수를 첨가하고, 표본 1 ml/g을 균질화하였다(Heidolph diax 900). 기관 균질현탁액의 분취액을 접종 때까지 실온에서 보관하였고, 남아있는 샘플을 HPLC 분석 때까지 -80℃에 두었다.A 1 ml whole blood sample was collected in a pediatric collection tube (3.6 mg K 2 EDTA) before the blank, at the dose (0 h) and at 48 h (48 h) after treatment. All whole blood samples were mixed by dislocation and the plasma separated by centrifugation (300 rpm at 15 min, 4 ° C). Plasma samples were stored at -20 ° C for creatinine analysis. Forty-eight hours after collecting blood samples, rats were euthanized by intravenous overdose (1 ml) of EUTHANYL® (pentobarbital sodium 240 mg / ml). Spleen, right kidney, liver, lung, heart and brain tissue samples were collected, weighed, and placed in sterile containers. Physiological saline was added and a sample of 1 ml / g was homogenized (Heidolph diax 900). An aliquot of the tracheal homogenate suspension was stored at room temperature until inoculation and the remaining samples were stored at -80 ° C until HPLC analysis.

항진균 활성의 표지자로서 기관 CFU(colony forming unit)를 이전의 공개된 문헌에 기초하여 선택하였다(K.M. Wasan et al., Assessing the antifungal activity and toxicity profile of Amphotericin B Lipid Complex (ABLC; ABELCET®) in combination with Caspofungin in experimental systemic aspergillosis, Journal of Pharm. Sci. 2004; 93(6):1382-1389). 100 μl 원액 기관 균질 현탁액의 분취액 및 1:10 희석액(멸균 염수 포함)을 2개의 사브로드 덱스트로즈 한천 위에 각각 평판 도말하였다. 37℃에서 배양 48시간 후, 아스퍼질루스 퍼미가투스 및 칸디다 알비칸스의 결과 콜로니를 계수하고 2개 플레이트를 평균하였다. 분석의 검출 한계는 0.1 x 102 CFU/ml 균질 현탁액이었다.The organ CFU (colony forming unit) as a marker of antifungal activity was selected based on previous published literature (KM Wasan et al., Assessing the antifungal activity and toxicity profile of Amphotericin B Lipid Complex (ABLC) with Caspofungin in experimental systemic aspergillosis, Journal of Pharm. Sci., 2004; 93 (6): 1382-1389). An aliquot and a 1:10 dilution (including sterile saline) of 100 μl stock solution of homogenate suspension were plated on two Sodbrod dextrose agars, respectively. After 48 hours of incubation at 37 ° C, the resulting colonies of Aspergillus fumigatus and Candida albicans were counted and the two plates were averaged. The detection limit of the assay was 0.1 x 10 2 CFU / ml homogenous suspension.

신장 독성은 이전의 보고에 따라 상업적으로 이용가능한 키트(Sigma Chemicals Co.)를 사용하여 혈장 내의 크레아틴 농도를 결정함으로써 간접적으로 측정하였다(K.M. Wasan et　al., Assessing the antifungal activity and toxicity profile of Amphotericin B Lipid Complex (ABLC; ABELCET®) in combination with Caspofungin in experimental systemic aspergillosis, Journal of Pharm. Sci. 2004; 93(6): 1382-1389). 기준점(baseline)은 블랭크 샘플 내의 크레아틴 농도를 측정함으로써 결정하였고, 0시간(pre-dose), 48시간 샘플에서 혈장 크레아틴 농도를 비교하였다. 본 실험의 목적을 위하여, 기준점과 비교하여 혈장 크레아틴 농도가 50% 이상 증가하는 것을 신장 독성의 징후로 판단하였다.Kidney toxicity was determined indirectly by determining the creatine concentration in plasma using a commercially available kit (Sigma Chemicals Co.) according to previous reports (KM Wasan et al., Assessing the antifungal activity and toxicity profile of Amphotericin B Lipid Complex (ABLC) in combination with Caspofungin in experimental systemic aspergillosis, Journal of Pharm. Sci., 2004; 93 (6): 1382-1389). The baseline was determined by measuring the creatine concentration in the blank sample, and the plasma creatinine concentration was compared at the 0 hour (pre-dose), 48 hour sample. For the purpose of this experiment, the increase in plasma creatine concentration by more than 50% compared with the reference point was judged as a sign of renal toxicity.

4. 통계적 분석4. Statistical analysis

치료를 위한 투여 전 및 투여 후에 기관에서의 CFU dml 수 및 혈장 크레아틴 농도를 분산 분석(INSTAT2; GraphPad Inc.)에 의하여 각 처치 그룹 간에 비교하였다. 한계(Critical difference)는 Tukey post hoc tests에 의해 평가하였다. 혈청 크레아틴 수치는 한계(Critical difference)를 결정하기 위하여 Tukey post hoc test와 ANOVA의 반복측정을 사용하여 처치 전부터 처치 48 시간 후까지를 비교하였다. 결과를 설명하는 기회의 확률이 5% 미만으로 감소하는 경우(p<0.05) 차이점이 중요하다고 판단하였다. 모든 데이터는 평균 ±평균의 표준오차로 표현하였다.The CFU dml count and plasma creatinine concentrations in the organs before and after treatment for treatment were compared between the different treatment groups by an analysis of variance (INSTAT2; GraphPad Inc.). Critical difference was assessed by Tukey post hoc tests. Serum creatine levels were measured before and after 48 hours of treatment using the Tukey post hoc test and repeated measures of ANOVA to determine the critical difference. When the probability of explaining the result was less than 5% ( p <0.05), it was considered that the difference was important. All data were expressed as mean ± standard error of mean.

아스퍼질루스 퍼미가투스로 감염된 랫트의 항진균 활성 및 신장 독성Antifungal activity and renal toxicity of rats infected with Aspergillus perigatus

PECEOL®/DSPE/PEG2000-based 경구 AmpB 처치는 비처치 대조군에 비하여 80% 까지 함께 첨가한 모든 기관에서의 총 진균의 CFU 농도를 유의하게 감소시켰으며(표 4) 혈장 크레아틴 수준은 유의한 변화가 없었다(표 5). ABELCET® 처치는 비처치 대조군에 비하여 88% 까지 함께 첨가한 모든 기관에서의 총 진균의 CFU 농도를 유의하게 감소시켰으며(표 4) 혈장 크레아틴 수준은 유의한 변화가 없었다(표 5).PECEOL® / DSPE / PEG2000-based oral AmpB treatment significantly reduced the total fungal CFU concentration in all organs added up to 80% compared to the untreated control (Table 4), and significant changes in plasma creatine levels (Table 5). ABELCET® treatment significantly reduced the total fungal CFU concentration in all organs added up to 88% compared to the non-treated control (Table 4) and there was no significant change in plasma creatine levels (Table 5).

표 4: 경구 위관영양의 생리식염수 (비처치군), PECEOL®에 통합된 암포테리신-DSPE-PEG200(10 mg/kg twice daily x 2 days) 또는 단일 경구투여 용량의 ABELCET®(ABLC; 5 mg/kg once daily x 2 days)로 처치된, 아스퍼질루스 퍼미가투스 감염된 수컷 Sprague Dawley 랫트의 진균 분석. 모든 랫트는 최초 처치 전에 아스퍼질루스 퍼미가투스의 2.9-3.45 x 107 Viable Colony Forming Units(CFU)/0.3 ml/rat로 감염시켰다.Table 4: Amphotericin-DSPE-PEG200 (10 mg / kg twice daily x 2 days) or a single oral dose of ABELCET® (ABLC; 0.0 &gt; mg / kg &lt; / RTI &gt; once daily x 2 days) of Aspergillus fumigatus infected male Sprague Dawley rats. All rats were infected with 2.9-3.45 x 10 7 Viable Colony Forming Units (CFU) / 0.3 ml / rat of Aspergillus fumigatus prior to the first treatment.

표 5: 감염 전(blank), 선량(O 시간) 및 처치 후 48시간(48시간)에서의 혈장 크레아틴 농도Table 5: Plasma creatinine concentrations at pre-infection (blank), dose (O time) and 48 hours (48 hours) after treatment

처치그룹Treatment Group 감염된 조직(균질화된 조직의 CFU/ml)Infected tissues (CFU / ml of homogenized tissue) 뇌brain 폐lungs 심장Heart 간liver 비장spleen 신장kidney 모든 기관 All institutions 비처치 대조군(n=9)Untreated controls (n = 9) 3538±
18103538 ±
1810 74±
3074 ±
30 101±
63101 ±
63 308±
114308 ±
114 1163±
7721163 ±
772 364±
119364 ±
119 5549±
24985549 ±
2498 ABLC 5(n=4)ABLC 5 (n = 4) 550±
445a 550 ±
445 a 10±
4a 10 ±
4 a 15±
3a 15 ±
3 a 18±
5a 18 ±
5 a 88±
44a 88 ±
44 a 10±
0a 10 ±
0 a 690±
419a 690 ±
419 a AmpB-DSPE-
PEG-2000(n=7)AmpB-DSPE-
PEG-2000 (n = 7) 736±
186a 736 ±
186 a 51±
1851 ±
18 20±
420 ±
4 180±
48180 ±
48 107±
32a 107 ±
32 a 44±
10a 44 ±
10 a 1139±
221a 1139 ±
221 a

a스튜던트의 T-Test를 사용한 p<0.05 vs. 비처치 대조군; 모든 데이터는 평균 ± SEM 으로 나타냈다. p using the Student's T-Test for a <0.05 vs. Non-treated controls; All data were expressed as mean ± SEM.

*참고: 이전의 연구들은 AmpB 단독으로는 본원에서 사용한 용량으로 측정가능한 축적을 가지지 않는다는 것을 보였었다. ABLC : 암포테리신 B 리피드 복합체.* Note: Previous studies have shown that AmpB alone does not have measurable accumulation in the doses used here. ABLC: Amphotericin B lipid complex.

크레아틴(mg/dl) 대조군(n=9)Creatine (mg / dl) control (n = 9) BlankBlank 00 4848 0.4
±0.10.4
± 0.1 0.5
±0.10.5
± 0.1 0.9
±0.20.9
± 0.2 AmpB/DSPE-PEG2000/PECEOL®10 mg/kg(경구) (n=7)AmpB / DSPE-PEG2000 / PECEOL 占 10 mg / kg (oral) (n = 7) 0.6
±0.20.6
± 0.2 0.6
±0.20.6
± 0.2 0.5
±0.10.5
± 0.1 ABLC 5 mg/kg-IV(n=4)ABLC 5 mg / kg-IV (n = 4) 0.3
±0.20.3
± 0.2 0.4
±0.10.4
± 0.1 0.5
±0.10.5
± 0.1

평균 ± SEM으로 나타나는 데이터Mean ± SEM data

칸디다 알비칸스(Candida albicans)의 결과는 아스퍼질루스 퍼미가투스(Aspergillus fumigatus)의 결과와 유사하다. 본 발명의 대표적인 AmpB 제제로 처리한 칸디다 알비칸스-감염된 랫트의 신장의 진균 분석은 대조군과 비교했을 때 총 진균 CFU 농도를 유의하게 감소시킴을 증명하였다. 도 7은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET® (ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 신장에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다. 도 8은 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)로 처리된 랫트의 기관에서의 칸디다 알비칸스 농도(CFU/ml)를 비교한 것이다. 감소하는 칸디다 알비칸스 농도에서의 대표적인 AmpB 제제의 효능은 ABELCET®에 견줄만 하다. 대표적인 AmpB 제제의 처치는 혈장 크레아틴 농도의 유의한 변화 없이 신장에서의 진균 CFU 농도를 유의하게 감소시킨다.The results of Candida albicans are similar to those of Aspergillus fumigatus . Fungal analysis of the kidney of Candida albicans-infected rats treated with representative AmpB formulations of the present invention demonstrated a significant reduction in total fungal CFU concentration compared to the control group. Figure 7 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000) infected with Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the kidneys of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml). Figure 8 is a graph showing the effect of the AmpB / PECEOL 占 preparation (10 mg / kg), the representative AmpB preparation of the present invention (AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000, AmpB / DSPE-PEG-2000), Candida albicans, , 10 mg / kg), and candida albicans concentration (CFU / ml) in the organs of rats treated with intravenously administered ABELCET® (ABLC, 5 mg / ml). The efficacy of representative AmpB preparations at decreasing Candida albicans concentrations is comparable to ABELCET®. Treatment of a typical AmpB formulation significantly reduces fungal CFU concentrations in the kidney without significant changes in plasma creatine concentration.

도 9는 칸디다 알비칸스로 감염되고 대조군, AmpB/PECEOL® 제제(10 mg/kg), 본 발명의 대표적인 AmpB 제제(AmpB/PECEOL®/DSPE-PEG-2000, AmpB/DSPE-PEG-2000으로 지칭, 10 mg/kg), 및 정맥 투여하는 ABELCET®(ABLC로 지칭, 5 mg/ml)(blank, 0시간, 및 48시간)로 처리된 랫트에서의 혈장 크레아틴(mg/dl)을 비교한 것이다. 혈장 크레아틴 수준에 의해 측정된 신장 독성은 관찰되지 않았다. FIG. 9 is a graph showing the effect of the present invention on AmpB / PECEOL® / DSPE-PEG-2000 and AmpB / DSPE-PEG-2000, which were infected with Candida albicans and treated with a control, AmpB / PECEOL® preparation (10 mg / kg) , 10 mg / kg), and plasma creatinine (mg / dl) in rats treated with intravenous ABELCET® (designated ABLC, 5 mg / ml) (blank, 0 h and 48 h) . No renal toxicity as measured by plasma creatine levels was observed.

실시예 3Example 3

대표적인 에코나졸 제제Representative econazole preparations

본 실시예에서는, 본 발명의 대표적인 에코나졸 제제의 제조 및 특성분석을 기술한다. 물에서 에코나졸의 용해도는 <1 mg/mL(19-66 OF)이며, 에탄올에서의 용해도는 ≤20 mg/mL이다.In this Example, the preparation and characterization of representative echinazoline preparations of the present invention is described. The solubility of econazole in water is <1 mg / mL (19-66 O F) and the solubility in ethanol is <20 mg / mL.

질산에코나졸 제제(10 및 15 mg 질산에코나졸/mL 제제)는 실시예 1에 기술한 암포테리신 B의 제조 방법과 유사한 방법으로 제조한다. 질산에코나졸(Sigma) 및 DSPE-PEG2000(15 mM) 파우더를 45℃ PECEOL®에 첨가하고 결과 혼합물을 진탕 배양기에서 45℃에서 2-4시간 동안 진탕하였다. 에탄올은 사용하지 않았다. 가용화되지 않은 재료들을 가시화하기 위하여 샘플들을 원심분리하였다. 다음으로, 혼합물을 시간에 따른 투명도로 평가하였다.The echinazoline nitrate preparation (10 and 15 mg echinacea nitrate / mL preparation) is prepared by a method similar to that of amphotericin B described in Example 1. Powder of nitric acid econazole (Sigma) and DSPE-PEG2000 (15 mM) was added to PECEOL® at 45 ° C and the resulting mixture was shaken at 45 ° C for 2-4 hours in a shaking incubator. No ethanol was used. Samples were centrifuged to visualize the non-solubilized materials. Next, the mixture was evaluated with transparency over time.

질산에코나졸 제제는 유화 성질을 평가하기 위하여 37℃에서 2시간 동안 인공 위액(1:100 v/v 희석액), 공복 상태 인공 장액, 판크레아틴이 포함 또는 불포함된 공복 상태 인공 장액(모두 1:500 v/v 희석액)에서 배양하였다. 에멀전 액적 크기는 동적광산란법(Zetasizer, Malvern Instruments)에 의하여 바로 평가하였다.The echinazoline nitrate preparation was evaluated for emulsification properties in the presence of artificial gastric juice (1: 100 v / v dilution), fasting artificial intestinal fluid, fasting state artificial intestinal fluids with or without pancreatin (all 1: 500 v / v dilution). The emulsion droplet size was directly evaluated by dynamic light scattering method (Zetasizer, Malvern Instruments).

제제는 시간에 따른 투명도로 평가하였다. 그 결과는 표 6에 요약하였다.The formulation was evaluated with transparency over time. The results are summarized in Table 6.

표 6: 에코나졸 제제의 시각적 외관Table 6: Visual appearance of econazole preparations

에코나졸 제제Econazole preparation 시각적 외관Visual appearance Day 0Day 0 24h24h 4 days4 days 5 days5 days 10 mg/mL10 mg / mL 투명Transparency 투명Transparency 투명Transparency 투명 >5 일Transparent> 5 days 15 mg/mL15 mg / mL 원심분리 후에 일부 덩어리 잔존Some lumps remain after centrifugation 덩어리 부분 있지만 여전히 투명Lump part but still transparent 실험하지 않음No experiment 실험하지 않음No experiment

에멀전 액적 크기 분석은 부피에 의해 피크 분석에 기초한 평균과 함께, 인공 위액 및 인공 장액(SGF, FaSSIF, FeSSIF, 및 FeSSIFe) 내의 에코나졸 제제(10 mg/mL)에 대하여 측정하였다. 표에서의 에멀전 액적 크기는 평균 및 피크 반-너비, 각 하위집단의 범위를 말한다. 그 결과는 표 8에 요약하였다.Emulsion droplet size analysis was performed on econazole formulation (10 mg / mL) in artificial gastric juice and artificial intestinal fluids (SGF, FaSSIF, FeSSIF, and FeSSIFe), with an average based on peak analysis by volume. The emulsion droplet size in the table refers to the mean and peak half-width, the range of each subgroup. The results are summarized in Table 8.

표 7: 에코나졸 제제의 에멀전 액적 크기Table 7: Size of emulsion droplets of econazole formulation

매체media 희석 배율Dilution factor 최소 크기(nm)Minimum Size (nm) 최대 크기(nm)Maximum Size (nm) 평균(nm)Average (nm) SGFSGF 100100 3030 291291 72±46(71%) 및
310±200(29%)72 ± 46 (71%) and
310 ± 200 (29%) FaSSIFFaSSIF 500500 5959 333333 123±65(44%) 및
342±138(56%)123 ± 65 (44%) and
342 ± 138 (56%) FeSSIFFeSSIF 500500 6666 15571557 386±182(10%);
726±143(5%) 및
2503±565(85%)386 + - 182 (10%);
726 ± 143 (5%) and
2503 + - 565 (85%) FeSSIFeFeSSIFe 500500 510510 >5000> 5000 650±150(75%)
>5 μm(25%)650 ± 150 (75%)
> 5 μm (25%)

SGF: 인공위액(simulated gastric fluid)SGF: simulated gastric fluid

FaSSIF: 공복 상태 인공장액(fasted-state simulated intestinal fluid)FaSSIF: fasted-state simulated intestinal fluid

FeSSIF: 식이 상태 인공위액(fed-state simulated intestinal fluid)FeSSIF: fed-state simulated intestinal fluid

FeSSIFe: 판크레아틴 효소를 포함한 식이 상태 인공위액(fed-state simulated intestinal fluid with pancreatic enzymes (Sigma))FeSSIFe: fed-state simulated intestinal fluid with pancreatic enzymes (Sigma)

인공 위액/장액의 조성물을 에코나졸 제제의 유화 연구에 사용하였다.The artificial gastric juice / serous composition was used for emulsifying studies of econazole preparations.

SGF (simulated gastric fluid):Simulated gastric fluid (SGF):

증류수: 1 LDistilled water: 1 L

염화나트륨: 30 mM(1740 mg/L)Sodium chloride: 30 mM (1740 mg / L)

염산: pH 1.2로 조정하는데 필요함Hydrochloric acid: necessary to adjust to pH 1.2

FaSSIF(fasted-state simulated intestinal fluid):FaSSIF (fasted-state simulated intestinal fluid):

제2 인산칼륨: 3.9 gPotassium secondary phosphate: 3.9 g

증류수: 1 LDistilled water: 1 L

나트륨 타우로콜레이트: 3 mM(1613.04 mg/L)Sodium taurocholate: 3 mM (1613.04 mg / L)

달걀 포스파티딜콜린: 0.75 mM(570.07 mg/L)Egg phosphatidylcholine: 0.75 mM (570.07 mg / L)

염화칼륨: 7.7 gPotassium chloride: 7.7 g

염산: pH 6.5로 조정하는데 필요함Hydrochloric acid: necessary to adjust to pH 6.5

FeSSIF(fed-state simulated intestinal fluid):FeSSIF (fed-state simulated intestinal fluid):

증류수: 1 LDistilled water: 1 L

아세트산: 8.65 g = 9.073 mlAcetic acid: 8.65 g = 9.073 ml

나트륨 타우로콜레이트: 15 mM(8065.2 mg/L)Sodium taurocholate: 15 mM (8065.2 mg / L)

*달걀 포스파티딜콜린: 3.75 mM(2850.34 mg/L)Egg phosphatidylcholine: 3.75 mM (2850.34 mg / L)

염화칼륨: 15.2 gPotassium chloride: 15.2 g

*염산 또는 수산화나트륨: pH 5.0로 조정하는데 필요함* Hydrochloric acid or sodium hydroxide: required to adjust to pH 5.0

판크레아틴 효소 포함 FeSSIF:Including pancreatic enzymes FeSSIF:

증류수: 1 LDistilled water: 1 L

나트륨 타우로콜레이트: 7.5 mM(4032.6 mg/L)Sodium taurocholate: 7.5 mM (4032.6 mg / L)

달걀 포스파티딜콜린: 2.0 mM(1520.18 mg/L)Egg phosphatidylcholine: 2.0 mM (1520.18 mg / L)

글리세릴 모노올레산염: 5.0 mM(1782.72 mg/L)Glyceryl monooleate: 5.0 mM (1782.72 mg / L)

나트륨 올레산염: 0.8 mM(241.96 mg/L)Sodium oleate: 0.8 mM (241.96 mg / L)

판크레아틴: 1000 u lipasePancreatin: 1000 u lipase

아세트산: 9.073 mlAcetic acid: 9.073 ml

염화칼륨: 15.2 gPotassium chloride: 15.2 g

염산 또는 수산화나트륨: pH 5.8로 조정하는데 필요함Hydrochloric acid or sodium hydroxide: required to adjust to pH 5.8

실시예 4Example 4

대표적인 도세탁셀 제제Representative docetaxel preparations

본 실시예에서는, 본 발명의 대표적인 도세탁셀 제제의 제조에 관하여 기술한다. 물에서 도세탁셀의 용해도는 10-25 μg/mL 이다. This example describes the preparation of representative docetaxel formulations of the present invention. The solubility of docetaxel in water is 10-25 μg / mL.

도세탁셀 제제(10 mg 도세탁셀/mL 제제)는 도세탁셀(Fluka) 파우더를 DSPE-PEG2000 파우더와 조합하고 조합된 파우더를 최종 의도한 부피의 100% 에탄올 내지 10% v/v로 담그어 제조하였다. 에탄올은 상기 파우더에 가용화되지 않는다. 젖은 파우더에 50℃로 미리 데워진 PECEOL®를 첨가하고, 볼텍스로 2분간 혼합하여 투명한 용액을 만들었다. 에탄올은 제거되지 않았다.The docetaxel formulation (10 mg docetaxel / mL formulation) was prepared by combining Fluka powder with DSPE-PEG 2000 powder and soaking the combined powder in 100% ethanol to 10% v / v of the final intended volume. Ethanol is not solubilized in the powder. PECEOL® preheated to 50 ° C was added to the wet powder and mixed with a vortex for 2 minutes to form a clear solution. No ethanol was removed.

에탄올은 용해도를 최대화하기 위하여 본 제제 내에 공용매(co-solvent)로서 도세탁셀과 함께 사용하였다. 도세탁셀은 극성 부위를 가지고 있지만 물에 거의 용해되지 않는다. Ethanol was used with docetaxel as a co-solvent in the formulation to maximize solubility. Docetaxel has polar regions but is almost insoluble in water.

제제는 시간에 따른 투명도로 평가하였다. 그 결과는 표 8에 요약하였다.The formulation was evaluated with transparency over time. The results are summarized in Table 8.

표 8: 도세탁셀 제제의 시각적 외관Table 8: Visual appearance of docetaxel preparation

도세탁셀
제제Doclex
Formulation 시각적 외관Visual appearance Day 0Day 0 24h24h 4 days4 days 5 days5 days 10 mg/mL
at 4 ℃10 mg / mL
at 4 ° C -- 4℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at 4 ° C but transparent when melted 4℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at 4 ° C but transparent when melted 4℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at 4 ° C but transparent when melted 10 mg/mL
at 21 ℃10 mg / mL
at 21 ° C 투명Transparency 투명Transparency 투명Transparency 투명Transparency 10 mg/mL
at -20℃10 mg / mL
at -20 ° C -- -20℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at -20 ° C but transparent when melted -20℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at -20 ° C but transparent when melted -20℃에서 고형화되나 간단히 녹을때 투명함Solid at -20 ° C but transparent when melted 10 mg/ml
at 50℃10 mg / ml
at 50 ℃ -- 투명Transparency 노란색 색조와 함께 투명*Transparent with yellow tint * 노란색 색조와 함께 투명*Transparent with yellow tint *

*본 시간 길이 동안 50℃에서 PECEOL® 단독으로 관찰된 색깔 변화와 일치한다.* Matches the color change observed at 50 ° C for PECEOL® alone during this time length.

본 발명의 도세탁셀 제제는 상기와 같은 조성을 포함하나, 에탄올은 포함하지 않는다. The formulation of docetaxel of the present invention includes the above composition but does not include ethanol.

예시적인 구체예를 예시 및 설명하였으나, 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변형이 이루어질 수 있음이 이해될 것이다.While illustrative embodiments have been illustrated and described, it will be understood that various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention.

Claims (14)

(a) 암포테리신 B;
(b) 하나 이상의 지방산 글리세롤 에스테르; 및
(c) 하나 이상의 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르를 포함하고,
상기 지방산 글리세롤 에스테르가 C8-C22 포화 지방산의 글리세롤 에스테르를 포함하고, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르가 C8-C22 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함하는 것인, 암포테리신 B 제제.(a) amphotericin B;
(b) one or more fatty acid glycerol esters; And
(c) at least one polyethylene oxide-containing fatty acid ester,
Wherein the fatty acid glycerol ester comprises a glycerol ester of a C8-C22 saturated fatty acid and the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of a C8-C22 saturated fatty acid. 제1항에 있어서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르가 올레산 모노글리세리드, 디글리세리드 및 트리글리세리드를 지방산 글리세롤 에스테르의 중량을 기준으로 60 중량% 이상 포함하는 것인 제제.The preparation according to claim 1, wherein the fatty acid glycerol ester comprises oleic acid monoglyceride, diglyceride and triglyceride in an amount of 60% by weight or more based on the weight of the fatty acid glycerol ester. 제1항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르가 750 내지 2000의 평균 분자량을 갖는 폴리에틸렌 옥시드를 포함하는 것인 제제.The formulation of claim 1, wherein said polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises polyethylene oxide having an average molecular weight of from 750 to 2000. 제1항에 있어서, 상기 제제가 자가-유화 약물 전달계인 것인 제제.The formulation of claim 1, wherein the formulation is a self-emulsifying drug delivery system. 제1항에 있어서, 상기 암포테리신 B가 제제의 0.5 내지 10 mg/mL의 양으로 존재하는 것인 제제.The formulation of claim 1, wherein the amphotericin B is present in an amount of 0.5 to 10 mg / mL of the formulation. 유효성분으로서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 암포테리신 B 제제를 포함하는, 감염성 질환을 치료하기 위한 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for treating an infectious disease comprising an amphotericin B preparation according to any one of claims 1 to 5 as an active ingredient. 제6항에 있어서, 상기 감염성 질환이 아스페르길루스균증(aspergillosis), 블라스토미스진균증(blastomycosis), 칸디다증(candidiasis), 콕시디오이데스진균증(coccidioidomycosis), 크립토콕커스증(cryptococcosis), 히스토플라스마증(histoplasmosis), 뮤코르진균증(mucormycosis), 파라콕시디오이데스진균증(paracoccidioidomycosis) 및 스포로트릭스증(Sporotrichosis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 진균 감염; 내장 리슈만편모충증; 피부 리슈만편모충증; 샤가스병; 또는 열성 호중구감소증(febrile neutropenia)인 것인 약학적 조성물.7. The method of claim 6, wherein said infectious disease is selected from the group consisting of aspergillosis, blastomycosis, candidiasis, coccidioidomycosis, cryptococcosis, Fungal infections selected from the group consisting of histoplasmosis, mucormycosis, paracoccidioidomycosis and Sporotrichosis; Visceral leishmaniasis; Skin leishmaniasis; Chagas bottle; Or febrile neutropenia. &Lt; RTI ID = 0.0 &gt; 제6항에 있어서, 경구 또는 국부적 사용을 위한 약학적 조성물.7. A pharmaceutical composition according to claim 6 for oral or topical use. 유효성분으로서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 암포테리신 B 제제를 포함하는, 알츠하이머병을 치료하기 위한 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for treating Alzheimer's disease, comprising an amphotericin B preparation according to any one of claims 1 to 5 as an active ingredient. 제9항에 있어서, 경구 또는 국부적 사용을 위한 약학적 조성물.10. A pharmaceutical composition according to claim 9 for oral or topical use. 제1항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르가 C12-C18 포화 지방산의 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함하는 것인 제제.The preparation according to claim 1, wherein the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester of C12-C18 saturated fatty acid. 제1항에 있어서, 상기 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르가 라우르산 에스테르, 팔미트산 에스테르, 스테아르산 에스테르 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리에틸렌 옥시드 에스테르를 포함하는 것인 제제. The formulation of claim 1, wherein the polyethylene oxide-containing fatty acid ester comprises a polyethylene oxide ester selected from the group consisting of lauric acid esters, palmitic acid esters, stearic acid esters, and mixtures thereof. 제1항에 있어서, 상기 지방산 글리세롤 에스테르와 폴리에틸렌 옥시드-함유 지방산 에스테르의 비율이 20:80 내지 80:20 v/v인 것인 제제.The preparation according to claim 1, wherein the ratio of the fatty acid glycerol ester to the polyethylene oxide-containing fatty acid ester is 20:80 to 80:20 v / v. 제1항에 있어서, 10 중량% 미만의 양으로 글리세롤을 추가로 포함하는 제제.The formulation of claim 1, further comprising glycerol in an amount less than 10% by weight.
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