KR20150106015A - 전복 발효물 또는 이의 추출물을 함유하는 항염 조성물 및 전복 발효물의 제조방법 - Google Patents

전복 발효물 또는 이의 추출물을 함유하는 항염 조성물 및 전복 발효물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물과 전복 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 전복을 버섯 균사체로 발효시킴으로써, 염증매개인자인 NO, TNF-α 및 IL-6 생성을 억제하고 iNOS 활성을 억제하는 효과가 있는 전복 발효물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 새로운 항염 조성물을 제공하는 효과가 있다.

Description

전복 발효물 또는 이의 추출물을 함유하는 항염 조성물 및 전복 발효물의 제조방법{ANTI-INFLAMMATORY COMPOSITION COMPRISING FERMENTED ABALONE OR EXTRACTS OF THE SAME AND MANUFACTURING METHOD OF FERMENTED ABALONE}
본 발명은 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물과 전복 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
염증은 여러 가지 원인에 의해서 발생하는 것으로 알려져 있으나, 최근 여러 연구에 의하면 유도성 일산화질소 합성 효소 (iNOS)에 의해 방출되는 다량의 일산화질소 (NO)가 염증을 유발하는 중요한 인자로 부각되고 있다 (Nadler E.P., et al., Semin. Pediatr. Surg.,vol 8, p 148∼154, 1999). 적절한 양의 일산화질소 방출은 병원체로부터 생체를 보호하지만 부적절하게 다량으로 방출된 일산화질소는 염증 및 염증과 관련된 질병을 유발한다고 알려져 있다 (Nadler E.P., et al., Semin. Pediatr. Surg., vol 8, p 148∼154, 1999).
일산화질소가 많이 생성되면 숙주세포를 죽이고 염증을 일으키는 부작용이 나타난다. 병원균의 사멸 후에도 계속해서 대식세포가 일산화질소를 과잉 생산하는 경우 패혈증 후 쇼크 또는 심한 염증 질환을 일으키며 자가 면역 질환을 발생시킨다. 따라서, 대식세포에 의한 일산화질소 생성은 원활하게 조절되어야 한다.
현재 염증 치료제로 부신피질 호르몬 성분을 이용한 덱사메타손, 코티손 등이 있다. 이들은 염증 치료제로서 작용을 하기는 하나, 독성이 강하며 부작용으로 부종과 같은 증상을 일으키기도 한다. 또한, 염증 원인에 대하여 선택적으로 작용하지 못하여 심한 면역억제를 유발하는 문제가 생기는 경우도 있다.
이에, 천연물을 소재로 새로운 항염 소재를 개발하여 부작용을 억제하는 방안이 다양하게 연구 중에 있고, 최근에는 전복을 이용한 가공식품 개발 및 기능성 소재 개발에 대한 연구가 이루어지고 있다. 한국 공개특허 제10-2010-0132245호(전복 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물), 한국 등록특허 제10-1217565호(전복 내장 추출물을 유효성분으로 하는 항암 증진 또는 암 전이 억제용 조성물) 등에 전복을 원료로 한 기능성 소재가 개시되어 있으나, 전복 발효물의 항염 효과에 대해서는 개시된 바가 없다.
본 발명의 목적은 전복을 버섯 균사체로 발효시키는 발효공정에 의해 제조된 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물의 새로운 용도를 제공함에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 전복을 버섯 균사체로 발효시킨 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물을 제공한다.
상기 버섯 균사체는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체 또는 동충하초 균사체인 것을 특징으로 한다.
상기 버섯 균사체는 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부에 해당하는 양을 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 한다.
상기 전복 발효물은 전복에 쌀을 첨가하고 버섯 균사체를 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 한다.
이때, 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부에 해당하는 양을 첨가하는 것을 특징으로 한다.
상기 전복 발효물 또는 추출물은 염증매개인자인 일산화질소(Nitric oxide, NO), 종양괴사인자-알파(Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 생성을 억제하고, 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthetase, iNOS) 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 (1) 전복과 쌀을 혼합하여 혼합물을 멸균시키는 단계; 및 (2) 상기 멸균시킨 혼합물에 버섯 균사체를 접종하여 발효시키는 단계;를 포함하는 전복 발효물의 제조방법을 제공한다.
상기 (1)단계에서 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부를 첨가하여 혼합하는 것을 특징으로 한다.
상기 (2)단계에서 버섯 균사체는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체 또는 동충하초 균사체인 것을 특징으로 한다.
상기 (2)단계에서 버섯 균사체는 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부를 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 한다.
상기 (2)단계에서 발효는 20 내지 40 ℃에서 이루어진 것을 특징으로 한다.
상기와 같은 본 발명에 따르면, 전복을 버섯 균사체를 이용하여 최적의 조건으로 발효시킴으로써, 염증매개인자인 NO, TNF-α 및 IL-6 생성을 억제하고 iNOS 활성을 억제하는 효과가 있는 전복 발효물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 함유하는 새로운 항염 조성물을 제공하는 효과가 있다.
또한, 본 발명에 따른 항염 조성물은 부작용 없이 생체 내 대식세포의 일산화질소(NO) 과량생성에서 기인되는 패혈증과 같은 염증 질환을 예방 또는 치료하는 효과가 있으며, 항염용 화장료, 피부 외용제 또는 건강기능식품에 다양하게 이용될 수 있다.
도 1은 세포 생존력 및 아질산염 농도를 나타내는 그래프로, RAW264.7 세포를 전복, 동충하초 및 동충하초 균사체로 발효시킨 전복의 추출물 (0.2 mg/mL)로 1 시간 동안 전처리하고 LPS (100 ng/mL)를 18 시간 동안 처리하여 (A) 세포 생존력을 MTT assay로 측정한 결과와 (B) NO 농도를 Griess assay로 측정한 결과 (###p< 0.001 compared to control, and ***p< 0.001 compared to LPS alone).
도 2는 HFCM-5 추출물의 LPS로 자극된 RAW264.7 세포의 아질산염 생성 및 iNOS 발현 억제 효과 (###p< 0.001 compared to control, and ***p< 0.001 compared to LPS alone).
도 3은 DCF-DA를 이용하여 측정한 LPS로 자극된 RAW264.7 세포내 ROS. (A) 대조군 (B) LPS, (C) LPS + HFCM-5 (0.05 mg/mL), (D) LPS + HFCM-5 (0.1 mg/mL), (E) LPS + HFCM-5 (0.2 mg/mL), (F) LPS + Dexamethasone (10 μM).
도 4는 LPS로 자극된 RAW264.7 세포에서 HFCM-5 추출물의 염증전 사이토카인 억제 효과. (A) IL-6, (B) TNF-α (###p< 0.001 compared to control, and ***p< 0.001 compared to LPS alone).
도 5는 LPS로 자극된 RAW264.7 세포에서 MyD88 의존성 신호전달과 관련된 단백질의 발현 양상.
도 6은 LPS로 자극된 RAW264.7 세포에서 TRIF 의존성 신호전달과 관련된 단백질의 발현 양상.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 전복을 버섯 균사체로 발효시킨 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물을 제공한다.
상기 버섯 균사체로는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 동충하초 균사체 등이 있으나, 버섯 균사체의 종류를 이에 한정하는 것은 아니다. 또한, 버섯 균사체는 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부에 해당하는 양을 접종하여 발효시킨 것이 바람직하며, 상기 범위를 벗어날 경우 원활한 발효공정이 일어나지 않고 시간적, 비용적인 면에서 효율성이 떨어지며 부패되는 문제가 발생하므로 상기 범위 내의 버섯 균사체를 접종하는 것이 중요하다.
상기 전복 발효물은 전복에 쌀을 첨가하고 버섯 균사체를 접종하여 발효시킨 것이 바람직하다. 이때, 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부에 해당하는 양을 첨가하는 것이 바람직하며, 첨가되는 곡류의 종류가 쌀에 한정되는 것은 아니다. 쌀을 첨가함으로써 발효 효율을 증진시키고 항염 활성을 촉진시키는 효과가 있다.
상기 전복 발효물 또는 추출물은 염증매개인자인 일산화질소(Nitric oxide, NO), 종양괴사인자-알파(Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 생성을 억제하고, 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthetase, iNOS) 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 (1) 전복과 쌀을 혼합하여 혼합물을 멸균시키는 단계; 및 (2) 상기 멸균시킨 혼합물에 버섯 균사체를 접종하여 발효시키는 단계;를 포함하는 전복 발효물의 제조방법을 제공한다.
상기 (1)단계에서 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부를 첨가하여 혼합하는 것이 바람직하다.
상기 (2)단계에서 버섯 균사체로는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체, 동충하초 균사체 등이 있고, 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부를 접종하여 발효시킨 것이 바람직하다.
상기 (2)단계에서 발효는 20 내지 40 ℃에서 이루어진 것이 바람직하다. 발효 온도가 너무 높거나 낮을 경우 원활한 발효공정이 일어나지 않고 시간적, 비용적인 면에서 효율성이 떨어지며 부패되거나 균사체가 활성화되지 않는 문제가 발생하므로, 버섯 균사체를 이용하여 전복을 발효시켜 항염 효과를 극대화하기 위해서는 상기 범위 내에서 발효시키는 것이 중요하다.
상기 (2)단계에서 발효공정을 통해 제조된 전복 발효물은 용매 추출법, 초임계 추출법 또는 초음파 추출법 등의 방법으로 추출될 수 있으며, 냉침추출, 열수추출, 환류냉각추출 또는 가열추출에 의해 추출된 것이 바람직하다. 용매 추출법은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 부틸아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 헥산을 포함하는 군에서 선택되는 1 이상의 추출용매를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 전복 발효 추출물은 전복 추출물 또는 동충하초 균사체 추출물에 비하여 높은 산화질소 억제 효과가 있으며, MyD88 의존성 신호전달에는 영향을 미치지 않으나 TRIF 의존성 신호전달인 IRF3과 STAT1의 인산화 반응을 감소시켜 TRIF 의존성 신호전달을 통한 항염 효과를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예.
전복 (Haliotis discus hannai)을 열수에서 10 내지 20 초간 데친 후 작은 조각 (0.5×0.5 cm)으로 잘게 썰고, 현미 (Oryza sativa)를 12 시간 동안 물에 침지시킨 후 물기를 제거하였다. 전복 무게의 0 중량%, 5 중량%의 현미가 각각 혼합된 전복을 멸균(121 ℃, 1 시간)시킨 후 동충하초 균사체를 전복 무게의 10 중량%로 접종하였다. 이후, 25 ℃에서 20 일 동안 배양하여 얻은 전복 발효물을 전복 발효물 무게의 10 배에 해당하는 증류수로 2 시간 동안 열수추출한 다음, 여과지 No.41을 이용하여 여과하고 증발시킨 후 감압 하에서 동결건조하여 전복 발효 추출물을 제조하였다.
실험예.
(1) 세포 배양
RAW264.7 세포를 Korean Cell Line Bank (Seoul, Korea)에서 구입하여 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신 및 10 % 소태아혈청 (FBS)이 보충된 DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서 5% CO2를 함유하는 습한 공기에서 37 ℃로 보관하였다.
(2) 세포 생존력 측정
세포 생존력은 MTT assay에 의해 측정되었다. MTT assay는 미토콘드리아 탈수소효소에 의해 노란색 테트라졸리움염 (MTT)이 보라색 포르마잔 결정으로 환원되는 원리에 기초한다. 세포를 48 웰 플레이트에 1×105 cells/well 밀도로 도말하고 20 시간 후 샘플을 18 시간 동안 처리한 후, MTT 용액을 각 웰에 첨가하여 세포를 4 시간 동안 배양하였다. 이후, 배지를 버리고 세포내 포르마잔 생성물을 10 분간 진탕하여 200 μL DMSO에 용해시켰다. 흡광도는 microplate reader (Tecan, Austria)를 이용하여 540 nm에서 측정하고, 세포 생존력은 대조군을 100 % 기준으로 비교하여 퍼센트로 나타내었다.
(3) 산화질소 (NO) 측정
RAW264.7 세포를 전복 발효 추출물과 함께 1 시간 동안 전처리한 후, LPS (100 ng/mL)로 18 시간 동안 자극하였다. 배양 상청액 100 μL를 상온에서 10 분간 Griess reagent (100 μL, 1 % sulfanilamaide, 0.1 % N-1-naphthyl ethylendiamine, 5 % phosphoric acid)와 혼합하고 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 아질산염 농도는 아질산나트륨 표준 곡선으로부터 계산되었다.
(4) 세포내 ROS 측정
RAW264.7 대식세포의 세포내 ROS는 비극성 2＇7＇-디클로르플루오레세인-디아세테이트 (DCF-DA) 염료를 이용하여 측정되었다. 세포를 다양한 농도의 HFCM-5 추출물로 1 시간 동안 전처리하고 18 시간 동안 LPS (100 ng/mL)에 노출시켰다. 이후, PBS로 세척한 후 세포를 37 ℃에서 30 분간 20 μM DCF-DA와 배양하고 상대적인 형광광도를 FACS Calibur (Becton Dickinson, USA)로 분석하였다.
(5) ELISA에 의한 염증 사이토카인 (pro-inflammatory cytokines) 분석
대식세포를 전복 추출물로 1 시간 동안 전처리하고 LPS (100 ng/mL)에 18 시간 동안 노출시켰다. ELISA kits (BD OptEIATM)를 이용하여 염증 사이토카인을 분석하였다.
(6) 웨스턴 블롯
세포 용해물 총 단백질 30 μg을 SDS-PAGE 겔 전기영동에 의해 분리하고 PVDF 멤브레인으로 이동시켰다. 상기 멤브레인을 blocking buffer (5 % fat-free dried milk가 함유된 TBS)로 2 시간 동안 상온에서 반응시켜 비특이적 항체 결합을 억제하고, 1 : 1000~5000으로 희석된 1차 항체와 4 ℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 이후, 면역 복합체를 1 : 2000~5000으로 희석된 호스라디시 페록시다제가 컨쥬게이션된 항체와 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 2차 항체 적용 이후 TBS-T로 3회 세척하고 enhanced-chemiluminescence (ECL) detection kit를 사용하여 발색시켜 Luminescent image analyzer (LAS-3000, Fujifilm, Tokyo, Japan)로 확인하였다.
(7) 통계 분석
데이터는 평균 ± 표준편차로 나타냈고, 통계학적 분석은 p<0.05 이하인 경우 유의성 있는 것으로 평가하였다.
실험결과.
(1) 전복 발효 추출물이 세포 생존력과 NO 생산에 미치는 영향
대식세포 RAW264.7를 이용하여 전복, 동충하초, 그리고 동충하초 균사체로 발효시킨 전복 (HFCM) 추출물의 항염 효능을 측정하였다.
도 1(A), 도 1(B)는 각 추출물의 세포독성과 측정된 아질산염 농도를 나타낸 그래프로, 0.2 mg/mL로 전복, 동충하초, HFCM-0 (0 % 현미 함유), 그리고 HFCM-5 (5% 현미 함유)를 전처리할 경우 NO 생산이 억제됨을 알 수 있다. HFCM-5 추출물의 경우 가장 높은 NO 억제 효능을 나타냈고, 이후 HFCM-5 추출물로 나머지 실험을 진행하였다.
(2) HFCM-5 추출물이 NO 생산 및 iNOS 발현에 미치는 영향
도 2는 HFCM-5 추출물이 농도 의존적으로 NO 생산 및 iNOS 발현을 감소시킴을 나타내며, HFCM-5 추출물은 iNOS 단백질 발현을 저해하여 NO 생성을 억제함을 알 수 있었다. 또한, HFCM-5 추출물이 LPS로 자극된 RAW264.7 세포에서 발현되는 것으로 알려진 COX-2의 발현에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(데이터 미도시). NO 생산 및 iNOS 발현이 억제되어도 COX-2 발현은 감소되지 않음은 이미 보고된 바 있다.
(3) HFCM-5 추출물의 ROS 생성 억제 효과
LPS로 유도된 세포내 ROS 생성에 대한 HFCM-5 추출물의 효과를 형광탐침 DCFH-DA를 이용하여 분석한 결과, 세포를 18 시간 동안 다양한 농도 (0.05, 0.1 및 0.2 mg/mL)로 처리하였을 때 세포내 ROS 생성이 유의적으로 감소되었다. 따라서, HFCM-5 추출물이 LPS로 유도된 세포내 ROS 생성을 억제시켜 항염 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 도 3은 LPS로 유도된 세포내 ROS 생성이 대조군에 비하여 27 %까지 증가되었으나 HFCM-5 추출물 처리에 의해 농도 의존적으로 ROS 생성이 감소됨을 나타낸다.
(4) HFCM-5 추출물의 염증전 사이토카인에 대한 효과
대식세포는 NO 생성과 종양괴사인자-α(TNF-α), 인터루킨-6(IL-6)과 같은 염증전 사이토카인 분비에 의한 염증 반응에서 매우 중요한 역할을 수행한다. HFCM-5 추출물의 TNF-α, IL-6 생성에 대한 효과는 세포 상등액으로부터 ELISA에 의해 측정되었다. 그 결과, 도 4에서 보는 바와 같이 HFCM-5 추출물의 전처리는 LPS로 유도된 TNF-α, IL-6 생성을 농도 의존적으로 억제하였다.
(5) 웨스턴 블롯 분석
도 5는 LPS로 자극된 RAW264.7 대식세포에서 세 종류의 mitogen-activated protein kinases (MAPKs)가 현저하게 증가함을 나타낸다. HFCM-5 추출물은 ERK, JNK 및 p38의 인산화반응에 영향을 미치지 않았으며, IkB-α 인산화반응을 크게 감소시켰다. 그러나, HFCM-5 추출물이 IkB-α의 인산화반응을 차단하지는 않았다. TRIF 의존성 신호 전달체계에서 IFN-β 분비를 통한 LPS 유도 STAT1 활성은 면역반응에서 IP-10, IRF-1 및 iNOS와 같은 유전자의 발현에 중요한 역할을 한다. 도 6은 LPS로 자극된 RAW264.7 대식세포에서 유도된 STAT1, IRF3의 인산화반응이 HFCM-5 추출물에 의해 억제됨을 나타낸다. 이는 HFCM-5 추출물이 ROS 생성을 감소시키고 TRIF 의존성 신호 전달을 억제하여 LPS로 야기되는 NO 생산을 저해시키는 효과가 있음을 의미한다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. 전복을 버섯 균사체로 발효시킨 전복 발효물 또는 상기 전복 발효물에서 추출한 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 버섯 균사체는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체 또는 동충하초 균사체인 것을 특징으로 하는 항염 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 버섯 균사체는 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부에 해당하는 양을 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 항염 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 전복 발효물은 전복에 쌀을 첨가하고 버섯 균사체를 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 항염 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부에 해당하는 양을 첨가하는 것을 특징으로 하는 항염 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 전복 발효물 또는 추출물은 염증매개인자인 일산화질소(Nitric oxide, NO), 종양괴사인자-알파(Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 생성을 억제하고, 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthetase, iNOS) 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 항염 조성물.
  7. (1) 전복과 쌀을 혼합하여 혼합물을 멸균시키는 단계; 및
    (2) 상기 멸균시킨 혼합물에 버섯 균사체를 접종하여 발효시키는 단계;를 포함하는 전복 발효물의 제조방법.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 (1)단계에서 쌀은 전복 100 중량부에 대하여 1 내지 10 중량부를 첨가하여 혼합하는 것을 특징으로 하는 전복 발효물의 제조방법.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 (2)단계에서 버섯 균사체는 노루궁뎅이버섯 균사체, 상황버섯 균사체, 영지버섯 균사체, 표고버섯 균사체 또는 동충하초 균사체인 것을 특징으로 하는 전복 발효물의 제조방법.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 (2)단계에서 버섯 균사체는 전복 100 중량부에 대하여 5 내지 15 중량부를 접종하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 전복 발효물의 제조방법.
  11. 제 7항에 있어서,
    상기 (2)단계에서 발효는 20 내지 40 ℃에서 이루어진 것을 특징으로 하는 전복 발효물의 제조방법.

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JP2021042147A (ja) * 2019-09-09 2021-03-18 株式会社ノエビア ミトコンドリア活性化剤
CN113966218A (zh) * 2019-03-21 2022-01-21 阿尔维特Lcs制药有限公司 用于预防和治疗癌症、炎症性或免疫介导的炎症性疾病的***素和药用蘑菇的固定剂量组合

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