KR20150097892A - 크레아티닌 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출수단 및 그 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 개인의 몸 상태 및 수분섭취량 등에 상관없이 정확한 인체내 활성산소를 검출할 수 있도록 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단 및 방법을 제공한다.본 발명은, 소변속에 함유된 말론디알데하이드를 검출하는 제1검출수단;그리고 소변속에 함유된 크레아틴을 검출하는 제2검출수단과; 상기 제1검출수단 및 제2검출수단에 의해 검출된 값을 비교 분석하여 인체내 활성산소의 양을 측정하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단을 제공하거나, 소변속에 함유된 말론디알데하이드의 양을 검출하는 제1단계와; 소변속에 함유된 크레아틴의 양을 검출하는 제2단계; 상기 제1단계와 제2단계에서 검출된 값을 비교분석하는 제3단계; 그리고 상기 제3단계에서 비교분석된 값으로 활성산소의 양을 판단하는 제4단계;로 이루어지는 검출 방법을 제공한다. 따라서 본 발명은 소변내에 함유된 크레아틴분석을 통하여 보정을 행함으로써 개인의 상태에 따른 말론디알데히드의 분석값의 정량적 변화를 보정함으로써 보다 정확한 활성산소 분석이 이루어지는 효과가 있다.

Description

크레아틴 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출수단 및 그 방법{Detection mean of oxygen free radical using a creatinine ratio in urinalysis and its method}

본 발명은 인체 내 유해한 요소인 활성산소 검출수단에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 소변을 검출지에 묻힘으로써 체내에 잔존하는 활성산소의 양을 정량적으로 검출해 냄으로써 보다 간편하고 신속하게 검사할 수 있도록 한 크레아틴 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출수단에 관한 것이다.

인간은 생존과 활동을 위한 충분한 에너지(ATP) 공급을 위해 탄수화물과 지방 대사에 의존하며, 이렇듯 인간은 세포 속에 산소를 공급하지 않으면 살아갈 수 없는데, 이러한 에너지 생산을 위한 인체내 산소대사의 과정에서는 부산물로서 유해 산소 또는 활성산소라고 부르는 프리 라디컬(Free radical) 이 생겨난다. 이러한 활성산소는 인체에 여러 가지 악 영향을 끼치며, 일 예를 들면 인체 조직내에 지질과산화물을 생성하는 것이다. 지질의 과산화는 세포막에서 지속적으로 일어나는 생리작용으로 불포화지질의 산화적 손상을 의미한다. 즉, 활성산소인 프리라디컬 등이 불포화지방산이 다량 함유된 세포막의 인지질을 산화시켜 세포막에 지질 과산화물이 생성된다. 즉, 활성산소의 증가는 지질의 과산화물의 생성을 증가시키며, 과도한 지질 과산화물은 뇌혈관 장애로 인한 뇌졸중, 심근경색, 알콜성 간염 등의 간장질환 등 각종 인체 질환을 일으킨다.

따라서 건강 예방의 지표로써 활성산소의 양을 정량적으로 체크하는 것은 상당히 중요한 의미를 가지며, 이를 측정하기 위한 많은 장치가 개발되었다. 최근에는 바이오센서의 개발로 인하여 보다 소형화, 정밀화 되어 가고 있는 추세이나 현재 사용중인 장치는 고가의 전자센서장치로 누구나 범용적으로 손쉽게 접근할 수 없는 문제점이 있다.

따라서 이러한 문제점을 해결하기 위하여 간단히 시험지를 이용한 활성산소 검출수단 및 방법을 본 출원인이 선행특허로써 출원한바 있다. 즉, 대한민국공개특허 10-2013-0088623호(인체내 활성산소 검출수단)에 따르면, 혈액속의 존재하는 유해한 활성산소는 반응성이 매우 뛰어나 직접적인 측정이 매우 어려워 간접적인 방식으로 활성산소에 의해 야기되는 지질의 과산화물의 양을 검출하여 활성산소의 표지자로로써 많이 사용한다. 통상 말론디알데하이드( Malondialdehyde (MDA))는 지질의 과산화 정도를 알 수 있는 측정 방법 중 하나로 혈액 조직에서 쉽게 검출하여 건강 영향 평가에 쓰이는 지표이며, 말론디알데하이드(Malondialdehyde (MDA))의 측정은 지질의 과산화 정도를 알 수 있고, 혈액, 소변에서 검출이 가능하여 이를 주로 이용하며, 소변을 묻혀 색의 발색변화만으로도 말론디알데하이드(MDA)의 정량적 검출이 가능하도록 함으로써 별도의 장비 및 전문인력이 불필요한 인체 내 활성산소 검출수단을 제공하는 장치 및 그 방법을 제시하였다.

그러나, 소변속의 말론디알데히드(MDA) 양에 따른 발색변화를 이용한 본 출원인의 선행특허는 단회성소변으로 측정하므로 매우 간단하기는 하나, 각 개인의 수분 섭취량 또는 몸 상태 등을 고려한 정확한 측정에는 다소 못 미치는 문제점이 있다.

대한민국공개특허 10-2014-0016055호 대한민국공개특허 10-2013-0088623호

따라서 본 발명은 종래의 이런 근본적인 문제점을 해결하기 위하여 개인의 몸 상태 및 수분섭취량 등에 상관없이 정확한 인체내 활성산소를 검출할 수 있도록 크레아틴을 이용하여 보정을 행하므로써 단회성 소변 검사시에서도 말론디알데하이드(MDA)와 크레아틴의 발색변화를 비교분석하여 인체내의 활성산소의 양의 정확한 검출이 가능하도록 한 인체 내 활성산소 검출수단 및 그 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 목적들은 아래의 기재로부터 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 목적을 가지는 본 발명은, 소변속에 함유된 말론디알데하이드를 검출하는 제1검출수단;그리고 소변속에 함유된 크레아틴을 검출하는 제2검출수단과; 상기 제1검출수단 및 제2검출수단에 의해 검출된 값을 비교 분석하여 인체내 활성산소의 양을 측정하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단을 제공하는데 그 기술적 특징이 있다.

그리고, 제1검출수단은 말론디알데하이드와 반응하여 발색변화를 일으키는 발색지시제가 묻힌 제1시험지이고, 제2검출수단은 크레아틴과 반응하여 발색변화를 일으키는 발색지시제가 묻힌 제2시험지이도록 한다. 상기 제1시험지는, 1,3-디메칠-2-티오바르비튜릭(1,3-Diethyl-2-Thiobarbituric Acid(TBA)), 베이직 퓨크진(Basic fuchsine), 파라로사닐린 하이드로클로라이드(Pararosaniline Hydrochlpride) 또는 글리신 중의 어느 하나를 발색지시제로 사용되고, 상기 제2시험지는,소변 속 크레아티닌과 피크린산염(picrate)이 결합하여 야노프스키(Janovski)결합물을 생성하는 원리를 이용한 Jaffe method에 의하거나, 또는 Cu²(금속)이온과 소변 속 Creatinine을 결합시켜 가성과산화수소를 분해하여 벤지딘(올소-톨루딘, 테트라메틸벤지딘, 1,6-디하이드로퍼록사이드)과 발색하는 발색지시제이도록 하여 ,상기 제1시험지와 제2시험지는 지지대 상면에 부착되어 지지대가 소변속에 침지되도록 한다.

한편, 본 발명은, 소변속에 함유된 말론디알데하이드의 양을 검출하는 제1단계와; 소변속에 함유된 크레아틴의 양을 검출하는 제2단계; 상기 제1단계와 제2단계에서 검출된 값을 비교분석하는 제3단계; 그리고 상기 제3단계에서 비교분석된 값으로 활성산소의 양을 판단하는 제4단계;로 이루어지는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출 방법을 제공하는 것을 다른 기술적 특징으로 한다.

바람직 하기로는, 상기 제1단계와 제2단계는, 발색에 의한 색변화값을 이용하고, 상기 제3단계는, 말론디아라데하이드/크레아틴의 비값(umol/L)/(mmol/L)의 단위로 나타내도록 한다. 상기 비값에 따라 0-0.23는 정상(Normal), 0.24 - 1는 낮음(Low), 1 - 3은 높음(High) 그리고 3이상은 매우높음( Very high)로 판단되도록 한다. 또는, 상기 제1단계는, 발색에 의한 색변화값을 4단계로 나타내고, 제2단계는 발색에 의한 색변화값을 5단계로 나타내고, 상기 단계구분에 의한 활성산호의 상태를 나타낸 표를 만들고, 각 검출된 색변화값을 기 준비된 칼라차트표와 비교하여 어느 단계에 속하는 가를 판단하고, 표에서 해당지점을 찾아서 활성산소의 상태를 파악하고, 상기 상태를 나타낸 표는, 가로축에 크레아틴 농도를 5단계로 나타내고 세로축은 말론디알데하이드 농도를 4단계로 나타내어 표3의 형태로 나타내도록 한다.

본 발명은 소변내에 함유된 크레아틴분석을 통하여 보정을 행함으로써 개인의 상태에 따른 말론디알데히드의 분석값의 정량적 변화를 보정함으로써 보다 정확한 활성산소 분석이 이루어지는 효과가 있다.

또한, 본 발명은 검사를 위한 특정시설이 필요하지 않으므로 언제 어디서든 간략히 검사할 수 있어 범용적인 사용이 가능한 다른 효과도 있다.

도 1은 크레아틴의 농도에 따른 시험지의 색변화를 나타낸 도로써,
(a)는 크레아틴이 피크린산염(picrate)이 결합하여 야노프스키(Janovski)결합물을 생성하는 원리를 이용한 자페방법(Jaffe method) 에 의한 색변화를 나타낸 도이고,
(b)는 Cu^{2 +}금속이온과 소변 속 Creatinine을 결합시켜 가성과산화수소를 분해하여 벤지딘(올소-톨루딘, 테트라메틸벤지딘, 1,6-디하이드로퍼록사이드)과 발색에 의한 색변화를 나타낸 도.
도 2는 본 발명에 의한 MDA와 크레아티닌의 발색지시제가 함유된 시험지를 구비된 지지대를 나타낸 도.
도 3은 본 발명에 의한 크레아틴의 농도별 색변화를 나타낸 그래프.
도 4는 본 발명에 의한 말론디알데하이드(MDA)의 농도별 색변화를 나타낸 그래프.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것으로서, 본 발명은 청구항의 기재에 의해 정의될 뿐이다. 한편, 본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며, 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명하기로 한다.

실시예1) 소변내 MDA 농도에 따른 상태

1) MDA 농도의 기준범위 설정

일반적인 소변속에 함유된 MDA 농도의 정상(Normal) 범위는 0-4umol/L 라고 학회 논문에 발표되었으며, 실제적으로 건강한 일반군 30명을 측정 해보면 0-4umol/L 범위에 있으며, 기존의 측정방법인 HPLC 및 TBARS를 이용하여 측정한 값과, 본 출원인의 선행특허에서 나타난 시험지측정값 모두 결과는 동일하게 나타남을 알 수있었다.

따라서 상기 논문 및 일반적으로 알려진 값을 기준으로 하여 MDA 농도는 정상(Normal), 낮음(Low), 높음(High), 매우높음(Very high) 총 4단계로 나누었다. 측정 농도 범위는 정상(Normal)(0-4umol/L), 낮음(Low)(5-9umol/L), 높음(High)(10-19umol/L), 매우높음(Very High)(20-30umol/L) 으로써 그 이유는 아래와 같다.

낮음(Low)(5-9umol/L)의 기준설정

일반군 30명에 대해 30일 동안 지속적으로 아침 첫뇨를 MDA 측정해 보면 측정 결과의 99%가 측정하는 전날 과음을 하였거나, 피곤이 쌓인 금요일, 과격한 운동후에 5-9umol/L 범위 결과가 나온다. 따라서 정상인의 건강한 사람인 경우 상황에 따라 5-9umol/L 단계가 나타기 때문에 이 농도 범위를 LOW 로 표기 하였다.

높음(High)(10-19umol/L), 매우높음(Very High)(20-30umol/L)의 기준설정

10명의 화상환자들 소변 MDA양을 20회이상 반복하여 측정 하였을 때 20-25umol/L 로 Very high 로 측정이 되었으며 이를 근거로 20-30umol/L 농도를 Very High 구간으로 정하였고, 그 중간 농도인 10-19umol/L 농도를 high 로 표기하였다.

2) 시험지의 발색변화 기준 설정

실제 시험지는 반정량으로 표시 되기 때문에 농도는 다음과 같이 표시하여 Color 를 정하였다. 저농도는 발색되는 저농도를 칼라 기준을 설정하였고 고농도는 중간농도를 기준으로 칼라를 설정하였다.

0-4umol/L ->정상(Normal) -> 1umol/L

5-9umol/L -> 낮음(Low) -> 5umol/L

10-19umol/L -> 높음(High) -> 10umol/L

20-30umol/L -> 매우높음(Very high) -> 25umol/L

3) 임상 테스트

실제 150명의 일반인을 대상으로 산화적 스트레스 지표인 MDA를 24시간 동안 수집한 소변으로 HPLC로 측정 하였을 때 35명(0-4umol/L), 51명(5-9umol/L), 45명(10-19umol/L), 19명(20-30umol/L) 이었다. 그러나 동시에 단회뇨를 측정 하였을때 (0-4umol/L) 로 나오는 35명중 30명은 이 범위안에 나왔으나 5명은 (5-9umol/L)범위에 나왔다. 또한 (5-9umol/L) 42명은 이 범위안에 나왔으나 4명은 (0-4umol/L) 5명은 (10-19umol/L) 로 나왔다. (10-19umol/L) 40명은 이 범위안에 나왔으나 3명은(5-9umol/L) 2명은 (20-30umol/L) 범위안에 나왔다. (20-30umol/L) 에서는 16명이 이 범위안에 나왔고 3명은 (10-19umol/L)범위안에 나왔다. 이 결과를 정리하면 아래표와 같다.

4) 테스트결과 정리

단회뇨에서 결과는 24시간 뇨에서 결과와 비교하였을 때 각 범위별로 85.7%, 82.3%, 88.8%, 84.2%이였다. 즉 11.2%-17.7%가 불일치한 결과가 나타난다.

이렇게 불일치한 이유는 뇨중의 MDA 배설속도가 물의 섭치나 고혈당증, 고혈압, 운동, 자세 등 여러 요인에 의해서 일시적으로 변할 수 있기 때문으로 해석된다. 따라서 이러한 각 개인적인 변화요인을 고려하여 단회뇨 측정값에서도 24시간 수집한 소변에서 나타난 값과 동일한 값을 나타내도록 하여야 한다.

실시예2)

1)보정요소인 크레아틴 도입

크레아티닌은 요소질소나 요산과 마찬가지로 체내에서 에너지로서 사용된 단백의 노폐물로서 근육 내에서 에너지로 사용된 후 크레아티닌이나 크레아티닌 인산으로 형성되어 혈중으로 유출되어 신장으로부터 요로 배설이 된다.

뇨량의 변화에 의한 MDA 농도의 영향은 사구체의 여과기능이 일정하면 크레아티닌 배설도 일정하므로 크레아틴에 대한 MDA 비를 구함으로써 소변량에 대한 부정확한 결과를 피할 수 있다. 정상적인 사구체에서 크리아틴의 농도는 10-300mg/dL(0.9 - 26.5mmol/L)이며, 이러한 크레아티닌의 측정농도와 MDA의 측정농도의 상관관계를 통하여 정량적인 비값을 분석하면 보다 정확한 결과치를 도출할 수 잇을 것이다.

2) MDA/크레아티닌(umol/mmol) 값의 분석

정상적인 사구체에서 크리아틴의 농도는 10-300mg/dL(0.9 - 26.5mmol/L)이며, 이러한 크레아티닌의 측정농도와 MDA의 측정농도의 상관관계를 살펴보았다.

본 출원인의 선행특허에서 MDA이 양은 발색지시제에 의한 색변화를 통한 육안관찰 및 광도계를 이용한 측정 어느 것이나 가능하므로 본 발명 역시 MDA와 크레아틴의 색변화 관찰 및 광도계를 통한 분석 양자 다 가능하도록 하는 것이 바람직하다.

이를 위해 MDA를 4단계로 나누고, 크레아틴은 5단계로 나누어서 색변화를 관찰하는 것이 용이함을 알 수 있었다. MDA의경우는 본 출원인의 선행특허에서 나타난 바와 같이, 시험지의 색변화를 칼라차트와 비교하여 육안관찰하거나, 광도계를 이용한 색변화값을 수치화하여 이용하면 족할 것이다. 그리고, 크레아틴의 경우 색변화 관찰을 위하여 5단계로 나누는 것이 비교적 육안관찰이 용이하다. 이러한 색변화는 기존 칼러챠트를 구비하여 이와 비교관찰하면 족할 것이며, 정확히 하기위해서는 광도계를 통한 색변화값을 분석하는 것도 족할 것이다. 상기와 같이 MDA는 4단계, 크레아틴은 5단계로 각각 나누어 아래 표3에서는 MDA/ 크레아틴 (umol/mmol)의 값을 나타내었다.

상기 표에서 크레아틴의 농도가 0.9(mmol/L)일 경우, ★ 표시는 샘플이 정확하게 비율로 판독하기에는 많이 희석되어 있다.

실험결과에 따르면, 정상(Normal) 의 경우는 크리아틴의 양에 따라 양성으로 판단이 되지 않는다. 따라서 그 범위에 포함이 되는 Normal 비(ratio) 는 0-0.23 umol/mmol으로 하는 것이 타당한 것으로 알 수 있었다.

그리고 처음 측정시 정상(Normal) 범위안에 측정 결과가 나타난 일반군 20명에 대해 2개월 동안 MDA와 크리아틴을 계속적으로 측정 한 결과 0-1umol/mmol 범위안에 포함이 되었으며, 과량의 알코올 섭취 후, 과잉운동, 불충분한 휴식 등에 의해 일시적으로 약간 높게 판독이 되고 시간이 지나면 다시 정상범위로 판독이 되었다. 이를 바탕으로 낮음(Low) 범위는 0.24-1 umol/mmol로 정하는 것이 타당하였다.

또한, 실제 임상에서 크리아틴이 <1.8 mmol/L 인 경우는 비정상적이며,희석( Dilute) 되어 있다고 한다. 따라서 크리아틴 <1.8 mmol/L 에서 MDA 양이 측정이 되면 매우 많은 양이 나오는 것으로 판단이 되며 MDA umol / Creatinine mmol 비율이 3<이상 판독이 되고, 이를 기준으로 매우높음( Very high) 로 범위를 정하였다. 따라서 그사이 농도는 1-3 umol/mmol 은 높음(High) 로 정하였다.

이상의 결과를 정리하면, MDA/ 크레아틴 (umol/mmol)비 값이 0-0.23 일 경우에는 정상(Normal), 0.24 - 1 일 경우에는 낮음(Low), 1 - 3 일 경우에는 높음( High), 3이상일 경우에는 매우높음( Very high)으로 나타낼 수 있다.

표2를 토대로 정리한 결과를 표3에 비값을 정상과 비정상으로 나타내었다.

상기와 같이 정상여부를 표시함에 따라 MDA의 색변화와 크레아틴의 색변화를 육안으로 관찰하고, 상기 표에 해당되는 범위를 찾으면 정상여부를 확인 할 수 있게 된다. 그리고, 이러한 기준값이 정확한지 실시예1)에서 나타난 150명의 24시간뇨를 생화학장비를 이용하여 크레아틴 농도를 측정하였고, 또한 단회뇨에서 크레아틴 농도를 측정하여 MDA/크레아티닌(umol/mmol) 비를 구하여 비교한 결과 아래 표4에 나타나 있다.

상기 표에서 나타나는 바와 같이, MDA/크레아티닌(umol/mmol) 비값을 통하여 정리할 경우,100%일치함을 알 수 있다.

따라서 일회성 뇨에서 크레아틴에 대한 MDA 비를 구하여 표시하는 것이 결과의 신뢰성이 높음을 알 수 있다.

실시예3) 검사시험지의 구성

지시제의 구성

MDA검출을 위한 수단은 본 출원인의 선행특허(대한민국공개특허 10-2013-0088623호)인 종래와 동일하므로 그대로 사용 한다.

크리아틴 검출을 위한 시약의 지시제 및 그 부착 방법

본 발명에서 사용한 크리아틴 시험지는 종래에 널리 알려진 방법을 그대로 사용하면 족할 것이며, 그 일 예로 2가지 원리를 이용한 시험지를 설명하기로 한다.

1) 소변 속 크레아티닌과 피크린산염(picrate)이 결합하여 야노프스키(Janovski)결합물을 생성하는 원리를 이용한 자페방법(Jaffe method) 으로 제작된 것을 이용한다. 이경우에는 크레아티닌의 양에 따라 적자색으로 발색이 된다. 도1의 (a)에 나타난 바와 같이, 자폐방법에 의해 제작된 시험지가 크레아틴의 농도에 따라 색변화를 나타내었으며, 도시된 바와 같이 색변화를 충분히 시각적으로 확인할 수 있으며, 이러한 색변화는 기 준비된 칼라차트와 비교하면, 크레아틴의 농도가 해당되는 구역을 확인할 수 있다.

2) Cu²(금속)이온과 소변 속 Creatinine을 결합시켜 가성과산화수소를 분해하여 벤지딘(올소-톨루딘, 테트라메틸벤지딘, 1,6-디하이드로퍼록사이드)과 발색하여 노랑색에서 초록색으로 발색이 되는 방법을 사용한다. 도1의 (b)에 표시된 바와 같이, 이 역시 색변화를 육안관찰이 가능함을 알 수 있다.

시험지 제작방법

이러한 크레아틴의 양에따라 색변화를 일으키는 시험지는 종래부터 널리 알려져 있는 일반적인 방법을 사용하면 족할 것이며, 간략히 설명하기로 한다.

크리아틴 검출 시험지 제조용액은 발색을 일으키는 주발색제와 반응이 되도록 조건을 만들어주는 완충용액 그리고 시험지를 안정화 시켜주는 시약으로 구성되어 있으며, 상기 준비된 용액에 와트만 시험지(Whatman paper) 등과 같은 용액이 쉽게 흡습될 수 있는 재질의 시험지를 침지시켜 피크린산염(picrate) ( 혹은 벤지딘(올소-톨루딘, 테트라메틸벤지딘, 1,6-디하이드로퍼록사이드)성분이 충분히 스며들게 한다. 즉, 1차용액에 침지시킨 후, 드라이 오븐 등과 같은 기구에서 약 50 내지 60℃ 정도에서 20 내지 30분 정도 건조시켜 최종 시험지를 제작하게 된다.

상기와 같은 방법으로 제작된 크레아틴 발색시험지는 MDA 발색시험지와 일정한 간격을 두고 형성되도록 하며, 그 모습이 도2에 나타나 있다. 도2에 도시된 바와 같이, 플라스틱지지대(1)의 일면에 MDA발색시험지(3)와 일정간격 떨어진 지점에 크레아틴발색시험지(4)를 위치시킨다. 이러한 시험지(3,4)는 양면테이프 또는 접착제 등의 접착매개제(2)를 이용하여 지지대(1)상면에 결합시키면 족할 것이다.

상기와 같이 검출수단을 만든 경우, 한손으로 플라스틱지지대(1)의 끝을 잡고 소변속에 MDA발색시험지(3)와 크레아틴발색시험지(4)가 디핑되게 한 다음, 색변화를 육안으로 관찰하고 기 준비된 칼라차트표와 비교함으로써 표3의 어느 구간에 해당되는지 판별함으로써 활성산소의 농도를 판별할 수 있게 된다.

실시예4) 광도계를 이용한 측정

육안으로 측정하는 방법에는 반정량으로 나타내기 때문에 그 결과가 한계가 있어 정확한 측정을 위해 광전반사법에 의한 광도계를 이용하여 측정하는 것이 바람직하다. 이러한 광도계는 현재 시중에 널이 나와 있으며, 본 출원인 역시 측정 전용기기(모델명: MDA R-505)를 개발하여 현재 이용중에 있다.

측정 방법은, 발광부(LED)에서 빛을 밝히면 시험지에서 반사되는 빛의 양을 센서에서 감지하여 반사체의 색을 분석하여 설정된 Parameter(기준값)와 비교하여 결과는 자동적으로 계산이 되어 비(Ratio)로 출력이 되고 그 비(ratio) 결과로 소변에 포함된 활성산소의 정상 여부를 판단할 수 있게 된다.

본 발명에서는 크레아틴은 5단계로 구분하고, MDA는 4단계로 구분하므로, 구분별 계산법을 간략히 설명하기로 한다.

크레아틴 구분별 색 변화량과 농도 변화량의 구변별 변환식을 통한 정량 계산

표5는 크레아틴의 농도에 따른 색 변화량표를 나타낸다.

상기 표를 바탕으로 아래의 식에 의거하여 도3에 그래프를 나타내었다.

표6은 말론디알데하이드(MDA)의 농도에 따른 색변화표를 나타낸다.

상기표를 바탕으로 아래의 식에 의거하여 도4의 그래프를 만들었다.

상기 표5와 표6을 바탕으로 수식과 도3과 도4에 나타난 그래프를 이용하여 실지 검출된 말론디알데하이드(MDA)와 크레아틴의 양을 정량적으로 표시할 수 있음은 물론이고, 자동계산되어 MDA/크레아틴의 비값을 계산하고, 그 값으로 활성산소의 정도를 확인할 수 있게 된다.

Claims (15)

1. 소변속에 함유된 말론디알데하이드를 검출하는 제1검출수단과
   소변속에 함유된 크레아틴을 검출하는 제2검출수단;그리고
   상기 제1검출수단 및 제2검출수단에 의해 검출된 값을 비교 분석하는 비교분석수단; 으로 이우러져 인체내 활성산소의 양을 측정하는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단.
2. 제1항에 있어서,
   제1검출수단은 말론디알데하이드와 반응하여 발색변화를 일으키는 발색지시제가 묻힌 제1시험지이고,
   제2검출수단은 크레아틴과 반응하여 발색변화를 일으키는 발색지시제가 묻힌 제2시험지이고,
   비교분석수단은 발색에 의해 나타나는 색변화를 비교하는 색변화표이거나, 색변화 값을 감지하는 광도계인 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단.
3. 제2항에 있어서, 상기 색변화표는 말론디알데하이드는 4단계의 색변화값을 나타내고, 크레아틴은 5단계의 색변화값을 나타내는 표3으로 나타내고, 각 검출된 값을 표와 비교하여 활성산소의 양을 측정하는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단.
4. 제2항에 있어서, 상기 광도계는 말론디알데하이드/크레아틴의 (umol/L)/(mmol/L)비값으로 나타내는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출 수단.
5. 제4항에 있어서, 상기 비값에 따라 0-0.23는 정상(Normal), 0.24 - 1는 낮음(Low), 1 - 3은 높음(High) 그리고 3이상은 매우높음( Very high)로 판단됨을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체 내활성산소 검출 수단.
6. 제2항 내지 제5항중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 제1시험지는, 1,3-디메칠-2-티오바르비튜릭(1,3-Diethyl-2-Thiobarbituric Acid(TBA)), 베이직 퓨크진(Basic fuchsine), 파라로사닐린 하이드로클로라이드(Pararosaniline Hydrochlpride) 또는 글리신 중의 어느 하나를 발색지시제로 사용됨을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출수단.
7. 제6항에 있어서, 상기 제2시험지는,소변 속 크레아티닌과 피크린산염(picrate)이 결합하여 야노프스키(Janovski)결합물을 생성하는 원리를 이용한 Jaffe method에 의하거나, 또는 Cu²(금속)이온과 소변 속 Creatinine을 결합시켜 가성과산화수소를 분해하여 벤지딘(올소-톨루딘, 테트라메틸벤지딘, 1,6-디하이드로퍼록사이드)과 발색하는 발색지시제 중 어느 하나임을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단.
8. 제7항에 있어서,
   상기 제1시험지와 제2시험지는 지지대 상면에 부착되어 지지대가 소변속에 침지되도록 하는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출수단.
9. 소변속에 함유된 말론디알데하이드의 양을 검출하는 제1단계와;
   소변속에 함유된 크레아틴의 양을 검출하는 제2단계;
   상기 제1단계와 제2단계에서 검출된 값을 비교분석하는 제3단계; 그리고
   상기 제3단계에서 비교분석된 값으로 활성산소의 양을 판단하는 제4단계;로 이루어지는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출 방법.
10. 제9항에 있어서, 상기 제1단계와 제2단계는,
    발색에 의한 색변화값을 이용하는 것을 특징으로 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 제3단계는,
    말론디알데하이드/크레아틴의 비값으로 나타내는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체 내 활성산소 검출 방법.
12. 제11항에 있어서, 상기 비값은 (umol/L)/(mmol/L)의 단위로 나타남을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출방법.
13. 제12항에 있어서, 상기 비값에 따라 0-0.23는 정상(Normal), 0.24 - 1는 낮음(Low), 1 - 3은 높음(High) 그리고 3이상은 매우높음( Very high)로 판단됨을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체 내활성산소 검출 수단.
14. 제 10항에 있어서, 상기 제1단계는, 발색에 의한 색변화값을 4단계로 나타내고,
    제2단계는 발색에 의한 색변화값을 5단계로 나타내고, 상기 단계구분에 의한 활성산호의 상태를 나타낸 표를 만들고,
    각 검출된 색변화값을 기 준비된 칼라차트표와 비교하여 어느 단계에 속하는 가를 판단하고, 표에서 해당지점을 찾아서 활성산소의 상태를 파악하는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출 방법.
15. 제14항에 있어서, 상기 상태를 나타낸 표는,
    가로축에 크레아틴 농도를 5단계로 나타내고 세로축은 말론디알데하이드 농도를 4단계로 나타내어 표3의 형태로 나타내는 것을 특징으로 하는 크레아틴 보정을 통한 인체내 활성산소 검출 방법.

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