KR20150004684A - Diagnostic kit of colorectal cancer using blood protein biomarkers and diagnostic method using them - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 대장직장암 진단용 키트에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 혈액 단백질 바이오마커를 이용한 대장직장암 진단용 키트 및 이를 이용한 대장직장암 진단 방법에 관한 것이다.More particularly, the present invention relates to a kit for diagnosing colorectal cancer using blood protein biomarkers and a method for diagnosing colorectal cancer using the same.
대장직장암은 대장이나 직장의 내부 표면 조직을 이루는 세포들에서 발생하는 암으로 대부분 샘암종 (adenocarcinoma)이다. 그 외 양성종양인 카르시노이드 종양 (carcinoid tumor), 위장관 간질성 종양 (gastrointestinal stromal tumor, GIST), 림프종 (lymphoma) 등이 간혹 발견되기도 한다. 이러한 대장직장암은 세계적으로 그 발병률이 증가하고 있으며 여성보다는 남성에게서 더 높은 발병률을 보이고 있는데 지역별로는 중앙 아프리카 보다는 호주 및 뉴질랜드의 발병률이 10% 이상 높다. Colorectal cancer is a cancer that occurs in the cells that make up the internal surface of the colon or rectum, most of which is adenocarcinoma. Other benign tumors such as carcinoid tumors, gastrointestinal stromal tumors (GIST), and lymphomas are occasionally found. The incidence of colorectal cancer is increasing globally, with a higher incidence in males than females, with rates of more than 10% higher in Australia and New Zealand than in central Africa.
대장암 발병의 직접적인 원인은 밝혀지지 않았으나 현재까지의 관련 연구를 종합하면 몇 가지 위험요소가 있다. 대장직장암 환자의 90% 이상이 50세 이상이었으며 확진 시 평균 연령은 72세이다. 50세 이상의 연령대 인구에서 폴립이 자주 발견되는데 이들 중 암으로 진행되는 경우가 많기도 하다. 가족 중 대장직장암 환자가 있는 사람의 경우 그렇지 않은 경우보다 높은 발병률을 보이며 특정 유전자의 돌연변이 역시 암의 원인이기도 하다. 특히 대장직장암 환자 2% 정도는 HNPCC 유전자의 변이가 있으며 평균 발병 연령보다 훨씬 빠르게 발병하기도 한다(44세). APC 유전자의 변이가 있는 경우도 대장직장암 발병이 상대적으로 젊은 나이(40세)에 발견되며 전체 대장직장암의 약 1%를 차지하고 있다. 이미 대장직장암으로 치료받았거나 난소암, 자궁암, 유방암 병력이 있는 여성의 경우도 대장직장암에 걸릴 위험도가 높은 것으로 나타났다. 크론병이 오래 지속되는 환자의 경우에서도 대장직장암 발병률이 높으며 동물성 지방이 많고 칼슘, 폴릭산과 섬유소가 적은 음식을 섭취하는 경우에도 그 위험도가 증가한다.The direct cause of colorectal cancer has not been identified, but there are some risks associated with the research to date. More than 90% of colorectal cancer patients were over 50 years old and the mean age at diagnosis was 72 years. Polyps are frequently found in people aged 50 years and older, often with cancer. People with colorectal cancer in the family have a higher incidence than others, and mutations in certain genes are also the cause of cancer. In particular, about 2% of colorectal cancer patients have mutations in the HNPCC gene and develop much faster than the average onset age (44 years). In the case of APC gene mutations, the incidence of colorectal cancer is found at a relatively young age (40 years) and accounts for about 1% of all colorectal cancer. Women who have already been treated with colorectal cancer or have a history of ovarian cancer, uterine cancer and breast cancer are also at increased risk for colorectal cancer. Even in patients with long-term Crohn's disease, the incidence of colorectal cancer is high, and the risk is increased even if there is a high intake of animal fats and calcium, polyunsaturated fatty acids and fibrinous foods.
대장직장암은 대부분 폴립(polyp)으로부터 시작되는데 폴립은 사람들이 노화되어가는 과정 중에 직장이나 대장의 내벽에 발생하게 된다. 선종폴립 (adenomatous polyp)은 대장과 직장에서 발견되는 대표적인 폴립인데 대장내시경으로 발견하여 제거하지 않으면 나중에 암으로 자랄 수 있는 작은 돌기이다. 대장과 직장의 폴립 중 10% 정도는 편평한 형태를 띄는데 이는 대장 내시경으로 발견하기 어려운 모습을 가지고 있으며 크기에 관계없이 향후 암으로 진행되는 가능성이 높은 폴립이다.Most colorectal cancer begins with polyp, which occurs in the rectum or intestine during the process of aging. Adenomatous polyp is a typical polyp found in the colon and rectum. It is a small protuberance that can grow into cancer if it is not found by colonoscopy. About 10% of the polyps in the colon and rectum are flat, which is difficult to detect by colonoscopy, and it is a polyp that is likely to progress to cancer regardless of size.
현재, 대장직장암을 진단하기 위한 다양한 방법들이 있다. 예컨대, 혈액 검사가 있으며, 이는 혈액으로부터 CEA (carcinoembryonic cancer antigen) 단백질의 수준을 검사 측정하는 진단법으로 대장직장암 환자는 정상인 (<2.5ng/ml)에 비하여 그 수치가 높은 것을 이용하여 대장직장암 여부를 판단하게 된다. 혈액을 이용하는 간편성은 좋으나 실제로 CEA의 혈액 내 수준은 흡연 정상인에게서도 높게 나타나며 (<5.0ng/ml) 감염증, 비만증, 염증성 장질환, 췌장염, 간경화증과 양성종양에서도 높게 나타나는 단점이 있다. 더 큰 문제점으로는 유방암, 폐암, 췌장암, 갑상샘암, 난소암의 경우에도 그 수준이 증가하여 대장직장암의 판단이 어렵다는 데 있다. 다음으로, 분변잠혈 반응검사 (Fecal occult blood test, FOBT)가 있다. 암조직이나 폴립에서 출혈이 있는 경우 변에 혈액이 포함되는데 이때 변에 혈액의 존재 여부를 세포염색과 현미경 등으로 검사하여 대장/직장 내의 출혈을 유추하게 되는데 암이나 폴립 외에서도 출혈이 있을 수 있음에 따라 그 혈액의 근원을 밝히는 별도의 검사가 병행되어야 한다. 다음으로, 대변 DNA 검사법이 있으며, 이는 대변에 포함된 세포를 분리하고 여기에서 DNA를 분리 분석하여 대장직장암과 관련이 있는 유전자 여부와 서열 변이를 검사하는 방법이다. 다음으로, S상 결장 검사법 (Sigmoidoscopy)이 있으며, 이는 직장과 대장의 하단 부위를 내시경으로 검사하는 방법으로 폴립을 제거할 수 있다. 다음으로, 대장 내시경 검사법 (Colonoscopy)이 있으며, 이는 직장과 대장 전체를 내시경으로 검사하는 방법으로 폴립을 제거할 수 있다. 다음으로, 이중 대조 대장 조영촬영법 (Double-contrast barium enema)이 있으며, 이는 바륨 용액으로 대장과 직장에 관장을 한 후 직장에 공기를 불어 넣고 다양한 각도의 x-ray 촬영을 하여 대장과 직장 내의 암이나 폴립을 조사하는 방법이다. 다음으로, 직장 내 초음파 검사법 (Endorectal ultrasound)이 있으며, 이는 직장에 초음파 탐침을 삽입한 후 초음파가 직장 내벽에 반사되는 형태를 컴퓨터로 분석하는 검사법이다.Currently, there are various methods for diagnosing colorectal cancer. For example, there is a blood test, which is a diagnostic method for measuring the level of carcinoembryonic cancer antigen (CEA) protein from blood. Using the higher value of colon cancer colorectal cancer patients than normal (<2.5 ng / ml) . Although blood glucose levels are good, the levels of CEA in blood are high in smokers (<5.0 ng / ml) and are also high in infectious diseases, obesity, inflammatory bowel disease, pancreatitis, liver cirrhosis and benign tumors. The more serious problems are breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer, thyroid cancer, and ovarian cancer. Next, there is the Fecal occult blood test (FOBT). If there is bleeding in cancer tissue or polyps, the blood is included in the stool. In this case, the presence of blood in the stool is examined by cytodiffusion and microscopy to suggest bleeding within the large intestine / rectum. A separate examination should be performed to identify the source of the blood. Next, there is a stool DNA test, which is a method of isolating the cells contained in the stool and isolating and analyzing the DNA to examine the presence of genes and sequence mutations associated with colorectal cancer. Next, there is a sigmoidoscopy, which can remove the polyps by examining the lower end of the rectum and colon by endoscopy. Next, there is a colonoscopy, which can remove the polyps by examining the rectum and the entire colon by endoscopy. Next, there is a double-contrast barium enema (barium enema), which is used to barium enema and enema the rectum and rectum, then air is blown into the rectum and x- Or polyps. Next, there is an endorectal ultrasound, which is a computerized analysis of the shape of the ultrasound reflected on the lining of the rectum after insertion of an ultrasound probe into the rectum.
하지만, 혈액이나 대변을 이용하여 진단하는 방법은 상대적으로 간편한 면은 있으나 그 정확도가 낮은 문제점이 있으며, 진단기기를 이용하는 진단방법은 불편하며 비용이 많이 드는 문제점이 있다. 또한, 기존의 유사한 혈액기반 검사법으로는 대변을 본 후 변기 내로 진단제가 들어 있는 소형 봉투를 투척하고 대변에 혈액이 있는 경우 봉투표면의 색깔이 변하는 것으로 혈액 유무를 판단하는 방법이 있는데 이는 그 신뢰도가 매우 낮은 문제가 있다. 또한 소량의 대변을 염색처리하여 현미경으로 혈구세포 존재 여부를 판단하는 방법도 있으나 이 역시 시료의 채취 부분에 따라 상이한 결과가 나올 수 있어 이 역시 신뢰도가 낮으며 혈구세포를 확인하여도 그 근원을 판단할 수 있는 별도의 검사를 추가로 하여야 하는 문제가 있다.However, the method of diagnosing using blood or feces is relatively simple, but its accuracy is low, and the diagnostic method using the diagnostic device is inconvenient and costly. In addition, a similar blood-based test method is a method of throwing a small bag containing a diagnostic agent into the toilet after seeing a stool, and determining the presence or absence of blood by changing the color of the envelope surface when there is blood in the stool. There is a very low problem. In addition, there is a method of judging the presence or absence of a hemocyte by a microscope by staining a small amount of stool. However, this result may also be different depending on the sampling part of the sample. Therefore, the reliability is also low. There is a problem that a separate inspection that can be performed is required.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 암의 중요한 지표 혹은 병인으로 작용하는 바이오마커인 VEGF 및 CEA를 이용하여 우수한 민감도와 특이도를 보이는 대장직장암 진단용 키트 및 이를 이용한 대장직장암 진단 방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made in order to solve the problems of the prior art as described above, and it is an object of the present invention to provide a kit for diagnosing colorectal cancer which shows superior sensitivity and specificity using VEGF and CEA, which are biomarkers, And a method for diagnosing colorectal cancer.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
본 발명은 VEGF 및 CEA 마커에 각각 특이적으로 결합하는 결합제를 포함하는 대장직장암 진단용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for diagnosing colorectal cancer comprising a binding agent that specifically binds to VEGF and CEA markers, respectively.
본 발명의 일 구현예로, 상기 결합제는 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the present invention, the binding agent is an antibody or an antigen-binding portion thereof.
본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 대장직장암 진단용 키트를 제공한다.The present invention provides a kit for the diagnosis of colorectal cancer comprising the composition as an active ingredient.
본 발명은The present invention
(a) 피검체로부터 분리된 시료를 VEGF 및 CEA 마커에 각각 특이적으로 결합하는 결합제로 처리하는 단계; 및(a) treating a sample separated from a subject with a binding agent that specifically binds VEGF and CEA markers, respectively; And
(b) 상기 시료에 존재하는 마커의 수준 또는 농도를 결정하는 단계를 포함하는 대장직장암 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.(b) determining the level or concentration of the marker present in the sample.
본 발명의 일 구현예로, 상기 결합제는 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the present invention, the binding agent is an antibody or an antigen-binding portion thereof.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 방법이 효소면역측정법(ELISA)인 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the method is characterized by an enzyme immunoassay (ELISA).
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 시료는 혈액, 혈장 또는 혈청인 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the sample is blood, plasma or serum.
본 발명의 대장직장암 진단용 키트는 암의 중요한 지표 혹은 병인으로 작용하는 바이오마커인 VEGF 및 CEA를 이용함으로써 소량의 혈액만으로도 상대적으로 우수한 민감도와 특이도를 나타내어 대장직장암의 정확한 진단이 가능한바, 간편성, 정확성 및 경제성의 효과가 있다. 따라서 단순한 혈액검사만으로도 간편하게 대장직장암 환자를 선별하거나 치료 효과를 평가하는 방법으로 활용할 수 있을 것으로 기대된다.The kit for colorectal cancer diagnosis of the present invention uses the biomarkers VEGF and CEA, which are important markers or pathogens of cancer, to show a relatively excellent sensitivity and specificity even with a small amount of blood, thereby enabling accurate diagnosis of colorectal cancer. Accuracy and economy. Therefore, it is expected that the simple blood test can easily be used as a method of selecting patients for colorectal cancer or evaluating the therapeutic effect.
도 1은 ELISA 분석을 통한 혈액(혈청) 샘플 내 CEA 수준을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 ELISA 분석을 통한 혈액(혈청) 샘플 내 VEGF 수준을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 대장암 환자를 대상으로 한 ROC 분석을 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 위암 환자를 대상으로 한 ROC 분석을 수행한 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of measuring CEA levels in blood (serum) samples through ELISA analysis.
Figure 2 shows the results of measuring VEGF levels in blood (serum) samples through ELISA analysis.
FIG. 3 shows the results of ROC analysis for patients with colorectal cancer.
FIG. 4 shows the results of ROC analysis for gastric cancer patients.
본 발명자들은 검사 대상자의 혈액에서 분리한 소량의 혈청을 이용하여 상대적으로 우수한 민감도와 특이도를 보이는 진단법을 개발하기 위해 연구 노력한 결과, 암의 중요한 지표 혹은 병인으로 작용하는 복수의 바이오마커인 VEGF 및 CEA을 이용한 진단법을 개발하였고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
The inventors of the present invention have made efforts to develop a diagnostic method showing relatively excellent sensitivity and specificity using a small amount of serum isolated from the blood of a test subject. As a result, it has been found that a plurality of biomarkers VEGF The inventors of the present invention have developed a diagnostic method using CEA.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 VEGF 및 CEA 마커에 각각 특이적으로 결합하는 결합제를 포함하는 대장직장암 진단용 조성물을 제공하며, 이때, 상기 마커에 특이적으로 결합하는 결합제는, 바람직하게는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.The present invention provides a composition for the diagnosis of colorectal cancer comprising a binding agent specifically binding to VEGF and CEA markers, wherein the binding agent specifically binding to the marker is preferably an antibody or an antigen binding portion thereof.
본 발명에서 용어 "VEGF"는 혈관내피성장인자(Vascular Endothelial Growth Factor)로, 혈관신생 (angiogenesis) 유도와 혈관의 투과도 (permeability)를 증가시키는 역할을 한다. VEGF는 성체에서의 혈관 생성(angiogenesis) 뿐만 아니라, 배아 발생에서의 혈관발달(vasculogenesis)을 조절하는 기능을 하며, 포유동물에서는 현재 다섯 종류의 VEGF들(VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, PLGF)이 밝혀져 있다. 이들은 VEGF 수용체(VEGFR) -1, -2, -3 라고 알려진 세 개의 수용체 타이로신 인산화 효소(RTK)와 헤파린 설페이트 프로테오클리칸(HSPGs: heparin sulphate proteoglycans), 뉴로필린(NRPs) 등의 보조 수용체들에 중복적으로 결합한다. VEGF 수용체는 많은 성장인자 수용체가 그러하듯이 세포이동, 생존, 증식 등을 유발하는데, 다른 RTK 등에는 없는 삼차원의 혈관을 형성할 수 있는 신호를 전달하거나 혈관투과성을 조절하는 기능을 가진다. 암세포가 증식 및 성장하기 위해서는 산소와 영양을 공급하는 새로운 혈관이 필요하게 된다. 새로운 혈관 형성에는 여러 인자들이 관여하지만 그 중에서 가장 중추적인 조절인자로서 역할을 하는 것이 혈관내피세포 성장인자(VEGF; vascular endothelial growth factor)로 알려져 있다.In the present invention, the term "VEGF" is a vascular endothelial growth factor and serves to induce angiogenesis and increase the permeability of blood vessels. VEGF functions to regulate vasculogenesis in embryogenesis as well as angiogenesis in the adult body. In mammals, there are currently five types of VEGF (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C , VEGF-D, and PLGF). These include three receptor tyrosine kinases (RTKs) known as the VEGF receptors (VEGFR) -1, -2, -3 and helper receptors such as heparin sulphate proteoglycans (HSPGs), neurofilin (NRPs) . VEGF receptors, like many growth factor receptors, induce cell migration, survival, and proliferation. They have the ability to transmit signals that can form three-dimensional blood vessels that are not present in other RTKs or to regulate vascular permeability. For cancer cells to proliferate and grow, new blood vessels are needed to supply oxygen and nutrition. Several factors play a role in the formation of new blood vessels, but it is known as the vascular endothelial growth factor (VEGF), which plays a central role as the most important regulator.
VEGF에 의한 내피세포 투과성 조절 메커니즘은 VEGF는 VEGFR-2를 경유하여, p120과 p100의 serine/threonine dephosphorylation을 유도함으로써 cadherin의 접착성을 변화시키고, 이를 통하여 혈관 투여도 및 세포의 이동성을 야기한다는 것이다. 하지만 이러한 실험 결과는 이전에 보고된 beta-catenin의 tyrosine phosphorylation에 의한 혈관 내피세포의 접착성 변형 유도 기작과는 실험 조건이 다르게 보고가 되었기 때문에 실제로 어떤 기작이 더욱 신빙성을 가지는 지는 좀 더 많은 실험을 필요로 하는 부분이다. 이러한 일련의 과정들은 adheren junction의 조밀함을 완화시켜 혈관의 투여도를 높이고, 또한 세포들의 이동을 야기하게 된다.The mechanism of VEGF-mediated endothelial cell permeability regulation is that VEGF induces serine / threonine dephosphorylation of p120 and p100 via VEGFR-2, thereby altering the adhesion of cadherin, resulting in vascularity and cell mobility . However, the results of these experiments have shown that the experimental conditions differed from the previously reported mechanism of inducing adherent deformation of vascular endothelial cells by tyrosine phosphorylation of beta-catenin. It is the part that needs. This sequence of processes alleviates the denseness of the adherence junction, thereby increasing blood vessel delivery and also causing cell migration.
VEGF의 처음 알려질 당시에 angiogenesis factor로써 알려지기 보다는 혈관의 permeability 조절인자 (VPF)로 알려졌었다. 이후에 암세포에서 VEGF를 경유한 암세포의 조절기작들은 많은 연구가 이루어졌으나 permeability와 연관하여 이루어진 연구들은 암과 직접적으로 관련한 실험에 비해 극히 미비한 실정이다. 하지만 VEGF가 permeability를 조절함으로써, 암세포의 angiogenesis 유도와 전이과정, 그리고 암세포의 이동을 좀 더 용이하도록 유도할 것이라고 주장되어져 오고 있다.VEGF was known to be an angiogenesis factor at the time of initial presentation, rather than known as the permeability factor (VPF) of blood vessels. Thereafter, a number of studies have been conducted on the regulation of cancer cells via VEGF in cancer cells, but the studies made in connection with permeability are inferior to those directly related to cancer. However, it has been suggested that VEGF regulates permeability to induce angiogenesis induction and metastasis of cancer cells and migration of cancer cells more easily.
본 발명에 용어 "CEA"는 암태아항원(Carcinoembryonic antigen)으로서, embryonic entodermal ephithelium에서 정상적으로 발견되는 당단백이다. CEA는 정상적으로 태생기의 장, 췌장, 간에서 생성되는 항원성 당단백으로 출생 후 소실되어 버리는 태아성 항원이다. 태아의 내배엽 조직이나 대장의 상피조직에 주로 존재한다. 대장암을 비롯하여 위암, 췌장암, 폐암, 유방암 등 여러 장기의 종양에서 폭 넓게 출현하는 범종양 표지자다. 종양세포뿐만 아니라 점액질을 생산하는 정상 상피에서도 생산된다. 면역 글로불린과 유사하며 생물학적으로는 암세포의 유착 및 이탈에 모두 관여하는 양극성을 보인다. 정상조직에서 나오는 CEA는 혈류나 림프조직에 접근하지 못하여 대개 분변으로 배출되게 되므로 혈중농도로는 잘 확인되지 않는다. 반면에 암세포의 경우는 혈류나 림프 침투를 하므로 CEA가 혈중에서 확인될 여지가 높다. 체내에서의 반감기는 간기능에 좌우되며 대개 2-10 일이다.The term "CEA" in the present invention is a carcinoembryonic antigen, a glycoprotein normally found in the embryonic entodermal ephithelium. CEA is an antigenic glycoprotein normally produced in the intestine, pancreas, and liver of the fetal stage and is a fetal antigen that is lost after birth. It is mainly present in the endodermal tissue of the fetus or epithelial tissue of the large intestine. It is a pan-tumor marker that appears widely in various organs including colon cancer, stomach cancer, pancreatic cancer, lung cancer, and breast cancer. It is produced not only in tumor cells but also in normal epithelium producing mucus. It is similar to immunoglobulin and biologically shows bipolarity that is involved both in adhesion and release of cancer cells. CEA from normal tissues can not be approached by blood concentration or lymphatic tissue because it is usually excreted in the feces. On the other hand, in the case of cancer cells, blood flow or lymph infiltration is likely to be confirmed in the blood of CEA. The half-life in the body depends on liver function and is usually 2-10 days.
CEA의 직장벽 내에 국한된 결직장암에 대한 민감도가 20-40% 정도에 불과한 것으로 되어 있다. 뚜렷한 진행암이라면 90% 이상에서 상승하는 것으로 되어는 있지만 조기암에서는 상승정도가 낮은 것을 감안해서 전체적으로 결직장암의 60-70% 정도에서 상승한다고 보면 된다. 뿐만 아니라 결직장암이 아니라도 췌장암, 유방암, 위암, 폐암에서도 그 혈중치가 올라가며 양성질환 중에서도 궤양성 대장염이나 췌장염, 간염, 위염에서도 올라갈 수 있고 담배를 많이 피워 생기는 만성 기관지염 환자의 경우에도 올라갈 수도 있는 것으로 보고되고 있다.The sensitivity of CEA to rectal cancer within the rectal wall is only 20-40%. Although it is seen that it progresses from 90% or more in the case of definite advanced cancer, it is considered that it increases from 60% to 70% of the total rectal cancer in consideration of the low degree of elevation in early cancer. In addition, even if it is not colorectal cancer, it can rise in pancreatic cancer, breast cancer, stomach cancer and lung cancer, and it can go up in ulcerative colitis, pancreatitis, hepatitis and gastritis among benign diseases and may also rise in case of chronic bronchitis Are reported.
CEA가 처음에 보고될 때에는 소화기암 중에서도 특히 결직장암의 80% 이상에서 양성반응을 보이는 결직장암에 특이한 항원이라고 하여 암의 표식자로서 결장암의 조기진단에 이용될 수 있을 것으로 기대되기도 하였으나 조기암 보다는 진행암에서 혈중치가 상승하는 경우가 대부분이어서 결직장암의 조기진단 수단으로서는 그 의미가 퇴색되게 되었다. CEA의 직장벽내에 국한된 결직장암에 대한 민감도가 20-40% 정도에 불과한 것으로 되어 있다. When CEA is first reported, it is expected to be used in the early diagnosis of colon cancer as a marker of cancer, especially in gastrointestinal cancer, especially in colorectal cancer, which is positive in more than 80% of colorectal cancer. Most of the cases of elevated serum levels in cancer have diminished its significance as an early diagnostic tool for colorectal cancer. The sensitivity of CEA to rectal cancer within the rectal wall is only 20-40%.
본 발명에서 용어 "진단"은 질병 발생 가능성을 예측하거나 질병 발생 위험도를 결정하거나 도출시키는데 사용되는 모든 유형의 분석을 포함한다.The term "diagnosis" in the present invention includes all types of analyzes used to predict the likelihood of disease outbreak or to determine or derive a disease outbreak risk.
본 발명에서 용어, "항체"란 당해 분야에서 공지된 용어로서 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 본 발명의 마커에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 본 발명의 항체의 형태는 특별히 제한되지 않으며 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 또는 항원 결합성을 갖는 것이면 그것의 일부도 본 발명의 항체에 포함되고 모든 면역 글로불린 항체가 포함된다. 나아가, 본 발명의 항체에는 인간화 항체 등의 특수항체도 포함된다. 본 발명에 사용되는 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태 뿐만 아니라 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며 Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다.The term "antibody" as used herein in the present invention means a specific protein molecule indicated for an antigenic site as a term known in the art. For the purpose of the present invention, an antibody refers to an antibody that specifically binds to the marker of the present invention, and the form of the antibody of the present invention is not particularly limited, and a polyclonal antibody, a monoclonal antibody, Part thereof is included in the antibody of the present invention and includes all the immunoglobulin antibodies. Furthermore, the antibodies of the present invention include special antibodies such as humanized antibodies. Antibodies used in the present invention include functional fragments of antibody molecules as well as complete forms having two full-length light chains and two full-length heavy chains. A functional fragment of an antibody molecule refers to a fragment having at least an antigen-binding function, and includes Fab, F (ab ') 2, F (ab') 2 and Fv.
상기 항체는 효소, 형광 물질, 방사선 물질 및 단백질 등과 같은 다양한 분자와 결합하여 변형될 수 있다. 변형된 항체는 화학적으로 항체를 변형하여 수득할 수 있다. 이러한 변형 방법은 당업계에서 통상적으로 사용된다. 또한, 상기 항체는 비인간 항체로부터 유래한 변형 부위(variable region)와 인간 항체로부터 유래한 불변 부위(constant region)가 결합된 키메라 항체(chimeric antibody)로 수득되거나, 또는 인간이 아닌 항체로부터 유도된 상보성 결정 부위를 포함하여 인간 항체로부터 유도된 구조 부위(frame work region, FR)와 불변부위가 결합된 인간화 항체(humanized antibody)로 수득될 수 있다. 이러한 항체는 당업계에 알려져 있는 방법을 이용하여 제조될 수 있다.The antibody may be modified by binding with various molecules such as enzymes, fluorescent substances, radioactive substances and proteins. Modified antibodies can be obtained by chemically modifying antibodies. Such modification methods are commonly used in the art. In addition, the antibody may be obtained as a chimeric antibody in which a variable region derived from a non-human antibody is bound to a constant region derived from a human antibody, or a complementary antibody derived from a non-human antibody And can be obtained as a humanized antibody in which the constant region is combined with a frame work region (FR) derived from a human antibody including a crystal region. Such antibodies can be prepared using methods known in the art.
이를 위한 분석 방법으로는 웨스턴블랏(western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크레로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complete fixation assay), FACS, 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Methods for this analysis include Western blotting, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay, radioimmunodiffusion, Ouchterlony immunodiffusion, Rocket immunoelectrophoresis, Immunoprecipitation assays, complete fixation assays, FACS, protein chips, and the like, but are not limited thereto.
본 발명의 일 실시예에 따르면, ELISA 방법에 의해 정상인과 환자의 혈액 샘플로부터 CEA 및 VEGF 수준을 측정한 결과, 정상인 혈청보다 대장암 환자군 혈청에서 CEA 및 VEGF 수준이 현저히 증가하는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).According to one embodiment of the present invention, CEA and VEGF levels were measured from a blood sample of a normal person and a patient by an ELISA method. As a result, it was confirmed that CEA and VEGF levels were significantly increased in the serum of patients with colorectal cancer See Example 2).
또한, 본 발명의 다른 실시예에 따르면, 대장암 환자의 ROC(receiver operating characteristic)를 분석한 결과, VEGF 및 CEA 단독으로 진단을 하는 것 보다 VEGF 및 CEA를 같이 분석하면 민감도와 특이도가 증가하는 것을 확인하였다(실시예 3 참조). According to another embodiment of the present invention, analyzing the receiver operating characteristic (ROC) of colorectal cancer patients, the sensitivity and specificity are increased when VEGF and CEA are analyzed together rather than by VEGF and CEA alone (See Example 3).
따라서, 암에서 중요한 병인으로 작용하는 VEGF 및 CEA를 이용한 암의 대표적인 인자들을 효과적으로 진단할 수 있었으며, 앞으로 암의 이상적인 진단 및 환자 치료의 경과 지표 테스트로 적용될 수 있을 것이다. Therefore, it is possible to effectively diagnose the typical factors of cancer using VEGF and CEA, which are important pathogens of cancer, and it can be applied to the ideal diagnosis of cancer and a progressive index test of patient treatment.
이에, 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 대장직장암 진단용 키트를 제공하다. 본 발명의 대장직장암 진단용 키트는 상기 조성물 외에 분석에 사용되는 적절한 시약 및 도구를 더 포함할 수 있으며, 이러한 시약 및 도구로는 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제 등이 포함된다. 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수도 있다.Accordingly, in another aspect, the present invention provides a kit for the diagnosis of colorectal cancer comprising the composition as an active ingredient. The kit for colorectal cancer diagnosis of the present invention may further include appropriate reagents and tools used for analysis in addition to the above composition. Examples of such reagents and tools include a suitable carrier, a label capable of generating a detectable signal, a solubilizer, . In addition, when the labeling substance is an enzyme, it may include a substrate capable of measuring the enzyme activity and a reaction terminator.
적합한 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 가용성 담체, 예를 들어 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS, 불용성 담체, 예를 들어 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로스 및 이들의 조합일 수 있다.Suitable carriers include, but are not limited to, soluble carriers, e. G., Physiologically acceptable buffers such as PBS, insoluble carriers such as polystyrene, polyethylene, polypropylene, Polyacrylonitrile, fluororesin, crosslinked dextran, polysaccharide, polymer such as magnetic fine particles plated with metal on latex, other paper, glass, metal, agarose, and combinations thereof.
상기 진단용 키트가 ELISA 키트인 경우, 바람직하게 마커 단백질에 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면 표지된 2차 항체, 발색단(chromopores), 효소(예:항체와 접합) 및 그의 기질을 포함할 수 있다. 또한, 정량 대조구 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수도 있다.When the diagnostic kit is an ELISA kit, a reagent capable of detecting an antibody bound to a marker protein, for example, a labeled secondary antibody, chromopores, an enzyme (e.g., an antibody conjugate) . It may also contain an antibody specific for the quantitative control protein.
또 하나의 양태로서, 본 발명은In another aspect,
(a) 피검체로부터 분리된 시료를 VEGF 및 CEA 마커에 각각 특이적으로 결합하는 결합제로 처리하는 단계; 및(a) treating a sample separated from a subject with a binding agent that specifically binds VEGF and CEA markers, respectively; And
(b) 상기 시료에 존재하는 마커의 수준 또는 농도를 결정하는 단계를 포함하는 대장직장암 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.(b) determining the level or concentration of the marker present in the sample.
본 발명에서 용어 "시료"란 개체의 암 조직에서 VEGF 및 CEA의 발현수준이 차이가 나는 전혈, 혈장, 혈액 등을 의미한다.The term "sample" in the present invention means whole blood, plasma, blood and the like in which the expression levels of VEGF and CEA are different in cancer tissue of an individual.
본 발명의 대장직장암의 진단을 위한 정보제공 방법은 상기 시료에 VEGF 및 CEA에 특이적인 항체를 처리한 후, 상기 시료 내에서 항체-항원 복합체를 형성하도록 하여 이들의 반응 수준을 비교할 수 있는데, 본 발명에서 항원-항체 반응 수준이란 시료 중의 상기 단백질 항원과 이를 인지하는 본 발명의 항체 또는 이의 항원결합부위와 결합된 양을 의미하며, 항원-항체 복합체의 양이다. 이러한 항원-항체의 반응수준은 당업계에서 통상적으로 사용되는 측정방법을 제한 없이 사용하여 비교 할 수 있다. In the method for providing information for the diagnosis of colorectal cancer of the present invention, it is possible to compare the level of the reaction by forming an antibody-antigen complex in the sample after treating the sample with an antibody specific for VEGF and CEA, In the present invention, the level of the antigen-antibody reaction refers to the amount of the protein antigen in the sample and the amount of the antibody or the antigen-binding site of the antibody of the present invention which recognizes the protein antigen in the sample and is the amount of the antigen-antibody complex. The level of the reaction of such an antigen-antibody can be compared by using measurement methods commonly used in the art without limitation.
이러한 항원-항체 반응수준 측정방법의 예로는 웨스턴 블럿(Western blot), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), FACS, 응집법 및 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니며, 바람직하게는 ELISA 방법을 이용할 수 있다.Examples of methods for measuring the level of the antigen-antibody reaction include Western blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion, Ouchterlony immunization But are not limited to, diffusion methods, rocket immunoelectrophoresis, tissue immuno staining, immunoprecipitation assays, complement fixation assays, FACS, agglutination and protein chips, Preferably, an ELISA method can be used.
ELISA는 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 표지된 항체를 이용하는 직접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체의 복합체에서 포획 항체를 인지하는 표지된 항체를 이용하는 간접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 2차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 포함한다. 예를 들어, 고체 지지체에 항체를 부착시키고 시료를 반응시킨 후 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 표지된 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키거나 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 항체에 대해 표지된 2차 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키는 샌드위치 ELISA 방법에 의해서 검출할 수 있다. 마커 단백질과 항체의 복합체 형성 정도를 확인하여, 대장직장암의 발병 유무를 진단할 수 있다.
ELISAs include direct ELISA using labeled antibodies that recognize the antigen attached to the solid support, indirect ELISA using labeled antibodies that recognize the capture antibody in a complex of antibodies recognizing the antigen attached to the solid support, A direct sandwich ELISA using another labeled antibody that recognizes an antigen in the complex of antibody and antigen, a method of reacting with another antibody recognizing an antigen in a complex of an antibody and an antigen attached to a solid support, Indirect sandwich ELISA using a secondary antibody, and various ELISA methods. For example, an antibody may be attached to a solid support, reacted with a sample, labeled with an antibody that recognizes an antigen of an antigen-antibody complex, and then labeled with an antibody that recognizes the antigen of the antigen-antibody complex The secondary antibody can be detected and detected by a sandwich ELISA method in which the secondary antibody is enzymatically developed. It is possible to diagnose the incidence of colorectal cancer by checking the degree of complex formation of the marker protein and the antibody.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.
[[ 실시예Example ]]
실시예Example 1. 혈액 샘플 수집 1. Blood sample collection
충남대학교병원 IRB 심사를 통과한 인체자원은행에서 공급받은 정상인과 암환자 혈청 및 Bio Serve 사에서 인증된 혈청을 구입하여 하기의 실험을 진행하였고, 보다 구체적으로는 정상 20명, 유방암 20명, 위암 20명, 대장암 20명, 갑상선암 20명, 관절염 20명, 난소암 10명, 건선 10명의 시료를 수집하였다.
The subjects were 20 normal, 20 breast, and gastric cancer patients. The subjects were 20 normal subjects, 20 breast cancer patients, and 20 healthy volunteers. 20 patients, 20 colon cancer patients, 20 thyroid cancer patients, 20 arthritis patients, 10 ovarian cancer patients and 10 psoriasis patients.
실시예Example 2. 2. ELISAELISA 분석을 통한 Through analysis CEACEA 및 And VEGFVEGF 수준 측정 Measure level
실시예 1을 통해 수집된 혈액 샘플을 하기와 같은 ELISA 분석을 통해 CEA 및 VEGF 수준을 측정하였다.
Blood samples collected through Example 1 were measured for CEA and VEGF levels by ELISA analysis as follows.
2-1. 항체 코팅2-1. Antibody coating
코팅버퍼(coating buffer 1L : Na2CO3[Sigma, S7795]) 1.59g, NaHCO3(Sigma, S8875) 2.93g, NaN3(Sigma, S2002) 0.2g dH2O(pH9.6보정 후)를 filter[0.2m])에 100ng/well 희석하여 96well 플레이트(NUNC, 439454)에 각 well에 100μl 첨가하여 4℃에서 12시간 반응시켰다(ex buffer 9.99ml+Ab(1mg/ml) 10μl). 반응이 끝나면 각 well의 내용물을 흡입해 내고 표준액(Sigma, P2688) 200μl 첨가하여 실온(15~25℃)에서 2시간 반응시킨 후, 플레이트를 흡습지(핸드타올)에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 습기를 완전히 제거하였다.
A: (Na 2 CO 3 [Sigma , S7795] coating buffer 1L) 1.59g, NaHCO 3 (Sigma, S8875) 2.93g, NaN 3 (Sigma, S2002) 0.2g dH 2 O (pH9.6 after correction)
2-2. 혈청 반응 및 2차 항체 반응2-2. Serum and secondary antibody responses
표준액 30μl와 혈청(혹은 혈장) 20μl 및 2차 항체(표준액을 사용하여 1/500로 희석) 50μl 첨가 후 30초 동안 프레임을 가볍게 흔들어 완전히 혼합한 후 37℃에서 60분간 반응시켰다 (표준액과 2차 항체 및 검체의 반응시간의 편차를 최소화하기 위하여 검사 시 표준액 및 검체를 10분 이내에 넣는다).
After adding 30 μl of the standard solution, 20 μl of the serum (or plasma) and 50 μl of the secondary antibody (diluted 1/500 with the standard solution), the frame was shaken gently for 30 seconds and the mixture was reacted at 37 ° C for 60 minutes In order to minimize the deviation of the reaction time of the antibody and the specimen, the standard solution and the specimen are put in within 10 minutes.
2-3. 혈청 및 2차 항체 제거 및 세척2-3. Removal and washing of serum and secondary antibody
각 well의 내용물을 흡입해 내고 세척액(Sigma, P3563)을 플레이트의 각 well에 300μl씩 분주하여 세척하며, 이를 3회 반복하여 세척하였다. 세척된 플레이트를 흡습지(핸드타올)에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 습기를 완전히 제거하였다.
The contents of each well were inhaled, and 300 μl of wash solution (Sigma, P3563) was dispensed into each well of the plate, washed, and washed three times. The washed plate was turned over to a humidifier (hand towel) and strongly scrubbed to remove any remaining moisture.
2-4. 2-4. StreptavidinStreptavidin HRPHRP 반응 reaction
표준액으로 희석하여 조제한 Streptavidin HRP용액(R&D, DY998)을 플레이트의 각 well에 100μl씩 분주하였다. 30초 동안 프레임을 가볍게 흔들어 완전히 혼합한 후 37℃에서 30분간 반응시켰다.
100 μl of Streptavidin HRP solution (R & D, DY998) diluted with the standard solution was dispensed into each well of the plate. The frame was gently shaken for 30 seconds, mixed thoroughly, and reacted at 37 ° C for 30 minutes.
2-5. 2-5. StreptavidinStreptavidin HRPHRP 반응액 제거 및 세척 Removing and Cleaning the Reaction Solution
각 well의 내용물을 흡입해 내고 세척액을 플레이트의 각 well에 300μl씩 분주하여 세척하며, 이를 3회 반복하여 세척하였다. 세척된 플레이트를 흡습지에 뒤집어 강하게 쳐서 남아있는 습기를 완전히 제거 하였다.
The contents of each well were inhaled, and 300 μl of the washing solution was dispensed into each well of the plate, which was then washed three times. The washed plate was inverted on a desiccant paper and strongly scrubbed to remove any residual moisture.
2-6. 2-6. 기질액Substrate solution 반응 및 반응 정지 Reaction and reaction stop
기질액(TMB, KPL 52-00-03)을 각 well에 100μl씩 넣고 프레임을 가볍게 처서 잘 혼합한 후, 실온(15~25℃)에서 30분 동안 반응시켰다. 이때, 상기 반응은 직사광선을 피하여 실시하였다. 반응정지액(Hydrogen peroxide solution, Sigma, 320501) 100μl 씩 각 well에 넣고 부드럽게 혼합하여 반응을 정지시켰다(이때 푸른색은 노란색으로 완전히 바뀌어야 한다).
100 μl of the substrate solution (TMB, KPL 52-00-03) was added to each well, and the frame was lightly mixed, well mixed, and allowed to react at room temperature (15 to 25 ° C) for 30 minutes. At this time, the reaction was carried out in direct sunlight. The reaction was stopped by adding 100 μl of a hydrogen peroxide solution (Sigma, 320501) to each well and gently mixing. The blue color should be completely changed to yellow.
2-7. 흡광도 측정2-7. Absorbance measurement
검체의 흡광도를 450nm에서 측정 하였다. 이중파장을 사용할 경우 참조 파장은 620nm로 측정하였고, 흡광도는 반응정지액을 넣은 후 10분 이내에 측정한다.
The absorbance of the specimen was measured at 450 nm. When the double wavelength is used, the reference wavelength is measured at 620 nm, and the absorbance is measured within 10 minutes after inserting the stop solution.
2-8. 결과 분석2-8. Results analysis
혈청 분석할 때 농도를 알고 있는 표준 단백질(Ag protein)을 standard로 사용하였으며, ELISA 측정값을 이용 Microsoft Office Excel 프로그램을 사용하여 혈청의 상대적인 농도를 계산하였다. 한편, 통계 분석은 MedCalc for windows version 10 분석 프로그램을 이용하여 분석하였다.
The standard protein (Ag protein) was used as a standard for serum analysis and the relative concentration of serum was calculated using the Microsoft Office Excel program using ELISA measurements. Statistical analysis was performed using MedCalc for windows version 10 analysis program.
① 혈청 내 CEA 수준① Serum levels of CEA
ELISA 분석을 통한 혈액(혈청) 샘플 내 CEA 수준을 측정한 결과는 도 1에 나타내었다.The results of measuring CEA levels in blood (serum) samples through ELISA analysis are shown in FIG.
도 1에 나타낸 바와 같이, 대장암, 위암 및 관절염의 경우에, 정상인 혈청보다 환자군 혈청에서 CEA 수준이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
As shown in Fig. 1, in the case of colorectal cancer, stomach cancer and arthritis, it was confirmed that the serum level of CEA was increased in the patient's serum than in the normal serum.
② 혈청 내 VEGF 수준 ② VEGF levels in the serum
ELISA 분석을 통한 혈액(혈청) 샘플 내 VEGF 수준을 측정한 결과는 도 2에 나타내었다.The results of measuring VEGF levels in blood (serum) samples through ELISA analysis are shown in FIG.
도 2에 나타낸 바와 같이, 대장암, 위암, 갑상선암 및 관절염의 경우에, 정상인 혈청보다 환자군 혈청에서 VEGF 수준이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
As shown in FIG. 2, in the case of colorectal cancer, stomach cancer, thyroid cancer and arthritis, it was confirmed that the serum level of VEGF was increased in the patient's serum than the normal serum.
실시예 3. 암 환자의 ROC(receiver operating characteristic) 분석Example 3. ROC (receiver operating characteristic) analysis of cancer patients
3-1. 대장암 환자의 ROC 분석3-1. ROC analysis of colorectal cancer patients
정상 56명, 환자 63명의 혈청을 이용하여 ROC 분석을 수행하였고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
ROC analysis was performed using 56 normal and 63 patients, and the results are shown in FIG.
추가적으로, 통계 분석을 통해 민감도(sensitivity) 및 특이도(specificity)를 산출하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.In addition, sensitivity and specificity were calculated by statistical analysis, and the results are shown in Table 1.
표 1에 나타낸 바와 같이, VEGF의 경우에는 민감도와 특이도가 각각 64.1% 및 69.1%였고, AUC는 0.702였고, CEA의 경우에는 민감도와 특이도가 각각 32.8% 및 94.5%였고, AUC는 0.625임을 확인할 수 있었다. 한편, Logistic의 경우에는 민감도와 특이도가 각각 67.2% 및 81.8%였고, AUC는 0.751임을 확인할 수 있었다.As shown in Table 1, the sensitivity and specificity of VEGF were 64.1% and 69.1%, and the AUC was 0.702. In the case of CEA, the sensitivity and specificity were 32.8% and 94.5%, respectively, and the AUC was 0.625 I could confirm. On the other hand, in the case of Logistic, the sensitivity and specificity were 67.2% and 81.8%, respectively, and the AUC was 0.751.
상기 결과로부터, 대장암 환자를 진단하고자 하는 경우, VEGF 및 CEA 단독으로 진단을 할 때 보다 VEGF 및 CEA를 같이 분석하면 민감도와 특이도가 증가하는 것을 알 수 있었다.
From the above results, it was found that sensitivity and specificity were increased when VEGF and CEA were analyzed in the same manner as VEGF and CEA alone when diagnosed with colorectal cancer.
3-2. 위암 환자의 3-2. Gastric cancer patients ROCROC 분석 analysis
정상 56명, 환자 38명의 환자의 혈청을 이용하여 ROC 분석을 수행하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.ROC analysis was performed using serum from 56 patients and 38 patients, and the results are shown in FIG.
추가적으로, 통계 분석을 통해 민감도(sensitivity) 및 특이도(specificity)를 산출하였고, 그 결과 VEGF의 경우 민감도와 특이도가 각각 56.4% 및 85.5%였고, AUC는 0.701임을 확인할 수 있었다.In addition, sensitivity and specificity were calculated through statistical analysis. As a result, the sensitivity and specificity of VEGF were 56.4% and 85.5%, respectively, and the AUC was 0.701.
상기 결과로부터, 위암 및 대장암(소화기에 관련 암) 진단 분석에는 VEGF 및 CEA 단독으로 진단을 할 때 보다 VEGF 및 CEA를 같이 분석하면 민감도와 특이도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the sensitivity and specificity of gastric cancer and colorectal cancer (cancer related to gastrointestinal cancer) were analyzed by VEGF and CEA analysis more than VEGF and CEA alone.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.
Claims (7)
(a) 피검체로부터 분리된 시료를 VEGF 및 CEA 마커에 각각 특이적으로 결합하는 결합제로 처리하는 단계; 및
(b) 상기 시료에 존재하는 마커의 수준 또는 농도를 결정하는 단계를 포함하는, 방법.As an information providing method for diagnosing colorectal cancer,
(a) treating a sample separated from a subject with a binding agent that specifically binds VEGF and CEA markers, respectively; And
(b) determining the level or concentration of the marker present in the sample.
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| KR1020130078015A KR20150004684A (en) | 2013-07-03 | 2013-07-03 | Diagnostic kit of colorectal cancer using blood protein biomarkers and diagnostic method using them |
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| KR1020130078015A KR20150004684A (en) | 2013-07-03 | 2013-07-03 | Diagnostic kit of colorectal cancer using blood protein biomarkers and diagnostic method using them |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190088403A (en) * | 2017-06-02 | 2019-07-26 | 이종균 | A method for evaluating immunity using information on the distribution of immune cells in peripheral blood of a colon cancer patient and a normal person, providing information on the onset of cancer, and a diagnostic kit using the method |
| CN113721021A (en) * | 2021-09-16 | 2021-11-30 | 郑州大学 | Application of PRKCZ autoantibody in auxiliary diagnosis of esophageal squamous cell carcinoma |
| WO2022173967A1 (en) * | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Edp Biotech Corporation | Kits and methods for detecting markers and determining the presence or risk of cancer |
-
2013
- 2013-07-03 KR KR1020130078015A patent/KR20150004684A/en not_active Application Discontinuation
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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