KR20140133739A - A method for preparation of extract mixture having antioxidant and antiaging activity from dendropanax morbifera, cornus fruit and lycium chinense, and cosmetic composition containing the extract - Google Patents

A method for preparation of extract mixture having antioxidant and antiaging activity from dendropanax morbifera, cornus fruit and lycium chinense, and cosmetic composition containing the extract Download PDF

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Abstract

The present invention relates to a method for preparing an antioxidant and antiaging extract of a mixture of Dendropanax morbifera, Cornus fruit, and Lycium chinense, and more specifically, to a method for extracting and preparing an antioxidant and antiaging extract at high efficiency from Dendropanax morbifera, Cornus fruit, and Lycium chinense through multi-stage supercritical extraction using supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent. The present invention can provide a method for preparing an antioxidant and antiaging extract with high purity from mixed raw materials of Dendropanax morbifera, Cornus fruit, and Lycium chinense through multi-stage supercritical extraction using supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent. The extract has excellent ability to remove free radicals, suppresses the skin cell damage due to ultraviolet light (photo-aging inhibition), and inhibits elastase as an elastin-degrading enzyme and MMP-1 as a collagen-degrading enzyme, and thus can be used as a cosmetic composition for reducing skin wrinkles and alleviating skin aging.

Description

항산화 및 항노화 활성을 갖는 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법 및 상기 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{A method for preparation of extract mixture having antioxidant and antiaging activity from dendropanax morbifera, cornus fruit and lycium chinense, and cosmetic composition containing the extract}FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for preparing a mixture of extracts of Hwangchu, Okusu, and Gugija having antioxidant and anti-aging activity and a cosmetic composition containing the extract as an active ingredient. chinense, and cosmetic composition containing the extract}

본 발명은 항산화 및 항노화 활성을 갖는 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 초임계 이산화탄소 및 보조용매를 이용한 다단계 초임계 추출을 통해 황칠나무, 산수유 및 구기자로부터 항산화 및 항노화 활성을 갖는 혼합 추출물을 고효율로 추출하여 제조하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for preparing a mixed extract of Hwangchu, Sanswort, and Gugija having antioxidant and anti-aging activity, and more particularly, to a method for preparing a mixture of Hwangchil, Antioxidant, and anti-aging activity by high-efficiency extraction.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 프리 라디칼(또는 활성 산소종)이 활성화될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 즉, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.In human skin, various physical and chemical changes occur in the aging process. The cause of this phenomenon is divided into intrinsic aging and photo-aging. Free radicals (or reactive oxygen species) can be activated by ultraviolet rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and aging. When such conditions are deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, To promote adult diseases and aging. That is, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging.

그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 프리 라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 프리 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.Therefore, it is necessary to protect the cell membrane by destroying free radicals mediated by free radicals, ultraviolet rays, and inflammation that occur during metabolism of the body, and to regenerate already damaged cells by active metabolism The skin can quickly recover and maintain healthy skin.

상기 프리 라디칼, 특히 활성 산소종에 대한 구체적인 내용은 아래와 같다.Details of the free radicals, particularly active oxygen species, are as follows.

인간의 생체 내에서, 필요한 에너지 공급을 위해 끊임없이 일어나는 생화학 반응을 통해 발생하는 활성 산소종은 자기 방어 기구인 생체 내 소거 메카니즘에 의해 대부분 제거된다. 그러나 활성 산소종이 정상적으로 소거되지 않아 산화적 스트레스가 생체 내에 가해지면, 이들 활성 산소종은 세포 구성 성분들인 지질, 단백질, 탄수화물과 DNA의 산화적 손상 및 효소활성을 변화시켜 뇌졸중, 파킨슨씨 병과 같은 뇌 질환뿐만 아니라 심장질환, 허혈, 동맥경화 등과 같은 성인병 및 암 등의 각종 질병을 일으키는 원인이 된다. 또한 활성 산소종은 생체조직을 손상시킬 뿐만 아니라 앞서 언급한 바와 같이 노화를 촉진시키는 것으로 알려져 있다. In living organisms, reactive oxygen species, which are generated through constant biochemical reactions for the necessary energy supply, are largely eliminated by the in vivo elimination mechanism which is a self-defense mechanism. However, when the oxidative stress is applied in the living body due to the fact that the active oxygen species are not normally erased, these reactive oxygen species change oxidative damage and enzyme activity of lipids, proteins, carbohydrates and DNA of cellular constituents such as stroke, It causes not only diseases but also diseases such as heart diseases, ischemia, arteriosclerosis and various diseases such as cancer. It is also known that reactive oxygen species not only damage biological tissues, but also promote aging as previously mentioned.

활성 산소종은 여러 신호전달 과정을 변경하여 유전자 발현, 세포흡착, 물질대사, 세포주기, 세포사멸에 영향을 주는 것으로 알려져 있으며, 활성 산소종이 유도하는 신호전달에는 mitogen-activated protein kinase (MAPK), nuclear factor-κB (NF-κB), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), p53, β-catenin/Wnt를 매개로 하는 신호전달이 알려져 있다. 최근, 활성 산소종에 의한 인체 내 손상을 보호하는 항산화, 항노화 물질에 대한 연구는 다양하게 이루어지고 있으며, 특히 식물에는 활성 산소종을 제거할 수 있는 항산화, 항노화 성분들이 다량 함유되어 있는 것으로 알려져 있으며, 과일, 야채, 차, 허브 등과 같은 식물로부터 얻어진 vitamin, 페놀화합물, 카로티노이드 등의 항산화, 항노화 물질에 대한 많은 연구가 보고되고 있다.Activated oxygen species are known to alter gene expression, cell adhesion, metabolism, cell cycle, and apoptosis by altering the signal transduction pathways. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) NF-κB (NF-κB), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K), p53, β-catenin / Wnt mediated signal transduction are known. Recently, studies on antioxidant and anti-aging substances that protect human body damage caused by active oxygen species have been carried out variously, and in particular, plants contain a large amount of antioxidant and anti-aging ingredients capable of removing active oxygen species Many studies have been reported on antioxidants and antioxidants such as vitamins, phenol compounds and carotenoids obtained from plants such as fruits, vegetables, tea, herbs and the like.

노화에는 상기와 같은 프리 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.In addition to free radicals as described above, enzymes such as matrix metalloproteinase (MMP), a collagenase, are also involved in aging. That is, synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen in vivo are appropriately controlled, but collagen synthesis is reduced as aging progresses, and expression of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades collagen, is promoted, And the wrinkles are formed. These degrading enzymes are also activated by ultraviolet irradiation.

그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.
Therefore, there is a demand for development of a substance capable of modulating MMP expression induced in the cell or inhibiting its activity.

산수유 나무(Cornus officianalis)는 층층나무과(Cornaceae)의 낙엽교목으로 주로 국내에서는 중부이남 지역에 분포한다. 산수유 나무의 열매인 산수유는 한의학에 있어서 맛이 시고 성질은 약간 따뜻하며 간경, 신경에 좋고, 이뇨작용, 혈압강하작용, 단백질의 소화를 돕는 작용, 항암 및 항균작용 등이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 보고된 산수유의 성분으로는 gallic acid, malic acid, tartaric acid, ursolic acid와 morronoside, loganin, sweroside와 같은 iridoid 배당체 등이 있으며, tannin류의 분리도 보고되었다. 산수유에 대한 연구로는 항산화, 항노화 연구, 항암물질 분리, 항균활성 분리, 영양성분 분석 등 다양한 기능성 관련 연구가 보고되고 있다. 단일성분에 관한 연구의 예시로서 loganin은 실험동물에서 활성 산소종을 감소시켜 산화적 스트레스를 완화시켜주며, 지질 합성 관련 분자의 발현을 억제하여 지질대사에도 작용하는 것으로 보고되고 있다. 또한 인지력 향상 기능도 가지는 것으로 알려져 있다. 최근 산수유에 대한 관심 증가로 산수유로부터 유효성분의 추출 방법 개발은 산업적으로 매우 중요하며, 유효성분의 존재 여부를 분석하는 것은 산업적 상품의 진위와 품질을 판정하는데 중요한 수단이 된다.Cornus ( Cornus) officianalis ) is a deciduous arboreous tree of Cornaceae , mainly distributed in the southern part of Korea. It is known that it is tasted in Oriental medicine and is slightly warm in nature, and it is known to have liver, nerve, diuretic effect, blood pressure lowering effect, function to help digestion of protein, anticancer and antimicrobial action. In addition, the reported sources of acidity were gallic acid, malic acid, tartaric acid, ursolic acid, and iridoid glycosides such as morronoside, loganin, and sweroside. Studies on acid fermentation have been reported in various functional studies such as antioxidation, anti-aging research, segregation of anticancer substances, isolation of antimicrobial activity, and nutritional analysis. As an example of a single component study, loganin has been reported to reduce oxidative stress by reducing reactive oxygen species in laboratory animals and to inhibit the expression of lipid synthesis-related molecules and to affect lipid metabolism. It is also known to have a cognitive enhancement function. Recently, the development of a method for extracting active ingredients from corn oil is very important in industry because of increasing interest in corn oil. Analyzing the presence of active ingredients is an important means for judging authenticity and quality of industrial products.

황칠나무(Dendropanax morbifera)는 두릅나무과 황칠나무속으로 동아시아, 말레이반도, 중앙 및 남아메리카 등에 약 75종이 분포되어 있으며 우리나라에는 1종이 분포되어 있다. 우리나라 황칠나무의 분포도를 보면 제주도, 전남 완도, 보길도, 대흑산도, 거문도, 전북 어청도, 경남일대 바닷가 등에서 자생하는 상록 활엽 교목으로 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다. Dendropanax morbifera ) is Araliaceae, and about 75 species are distributed in East Asia, Malay Peninsula, Central and South America, and one species is distributed in Korea. In the distribution chart of Korean wild wood, it is an evergreen broad-leaved arboreous tree native to Jeju Island, Jeonnam Wando, Bogildo, Daejukdo, Geomundo, Jeollabuk-do, Eocheongdo and Gyeongnam area. This is called 黄 漆.

황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장식구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 사용되었으며, 옛 문헌상에도 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있음을 확인할 수 있다. 황칠의 성분으로는 도료 성분인 비휘발 성분 66.7%, 방향성분 10.8%, 수분 8.1%, 고형분 14.4%로 구성되어 있고, 특히 정유분획으로 세스퀴테르펜(sesquiterpene)류의 β-쿠베벤(cubebene), β-셀리넨(selinene), δ-카디넨(cadinene)으로 이루어져 있다. 현재까지 황칠나무에 대하여 연구된 바로는 자연의 금색을 나타내는 공예품에 사용하는 도료의 원료와 황칠나무 잎 추출물 분획에서 항암, 항산화, 항노화, 간세포 재생, 당뇨치료 효과, 경조직 세포 재생 등과 방향 성분의 신경계에 대한 진정작용과 강장작용이 있으며, 황칠로부터 얻은 추출물에서 멜라닌을 생성하는 티로시아나제의 활성 억제 기능으로 미백효과에 도움을 준다고 알려져 있다.Hwangchil has been used as a rare paint for the golden color of the emperor's armor, helmet and other metal decoration since the Three Kingdoms period. The components of the whitish crush were composed of 66.7% of non-volatile component, 10.8% of directional component, 8.1% of water content and 14.4% of solid content. Especially, sesquiterpene cube- ,? -cellinene, and? -cadinene. So far, the researches on Hwangchujang have been carried out to investigate the effects of antioxidant, antioxidant, anti-aging, hepatocyte regeneration, diabetic treatment effect, hard tissue cell regeneration, It has been known that it has sedative and tonic action on the nervous system, and it helps the whitening effect by inhibiting the activity of tyrosyanase which produces melanin in the extract obtained from Huangchil.

구기자는 구기자나무(Lycium chinense Miller) 또는 영하구기(寧夏枸杞)(Lycium barbarum Linne)의 열매로서 예로부터 민간 치료제로 사용해 왔으며, 성상은 열매로서 한쪽이 뾰족한 방추상이며, 길이 6~20mm, 지름 3~10mm으로 외부는 적색 또는 어두운 적색이고 맨 끝은 작은 돌기 모양의 암술대 자국이 있으며 기부는 희 색의 열매꼭지 자국이 있다. 열매 껍질은 부드럽고 질기며 쭈글쭈글한 형태로서 과육은 육질이 부드럽고 물렁하다. 또한 열매 안에는 씨가 있는데 이는 20~50알 정도로 신장형에 가까우며, 납작하고 길이는 약 2mm, 너비 1~2mm로 연한 황색 또는 황갈색으로 약간의 냄새와 단맛이 있는 특징을 가지고 있다.Gugija is made of Lycium chinense Miller ) or Lycium (寧夏 枸杞) ( Lycium barbarum Linne ) has been used as a cure for a long time as a cure medicine for a long time. It is a fruit with a sharp pointed end, 6 ~ 20mm in length and 3 ~ 10mm in diameter. The outside is red or dark red, And the donation has the mark of the fruit of the white color. The fruit skin is soft, vaginal, and wrinkled, and the flesh is smooth and soft. The fruit is seeds with 20 to 50 eggs. It is close to the elongated form. It is flat, about 2mm in length and 1 ~ 2mm in width. It is light yellow or yellowish brown with a slight smell and sweet taste.

구기자의 성분으로는 carotenoids, choline, meliscic acid, zeaxanthin, physalin(dipalmity-zeaxanthin), betaine, β-sitosterol, vitamin B1, rutin과 불포화 지방산 등으로 기능성 성분이 다량 함유되어 있다. 이뿐만 아니라 항산화, 항노화효과, 항균효과, 간 기능 개선, 혈압강하 및 항당뇨, 면역증진, 혈중 콜레스테롤 저하, 심혈관 관련 질환 예방 및 항암효과 등의 다양한 연구가 보고되고 있다. 대표적으로 한약재 구기자의 주성분 중 대한약전에서는 구기자의 정량기준을 베타인(betaine)의 함량으로 설정하고 있으며, 이는 원래 엿기름, 사탕무우 등에 들어있는 결정성 알칼로이드로 아미노산의 한 종류로 인체의 대사 작용을 맡고 있는 간장에 좋을 뿐 아니라 해독제, 무산증, 위산결핍증, 동맥경화와 고혈압 예방 등의 약으로 쓰이고 있다. The components of gugija contain a large amount of functional components such as carotenoids, choline, meliscic acid, zeaxanthin, physalin (dipalmity-zeaxanthin), betaine, β-sitosterol, vitamin B1 and rutin and unsaturated fatty acids. In addition, various studies have been reported on antioxidant, anti-aging effect, antimicrobial effect, improvement of liver function, blood pressure lowering and anti-diabetic, immunity enhancement, blood cholesterol lowering, prevention of cardiovascular diseases and anticancer effect. As a representative, the main ingredient of herbal medicines is the betaine, which is a crystalline alkaloid originally contained in malt, sugar beet and the like, and is a kind of amino acid. Not only is it good for the liver that is in charge, it is also used as an antidote, asthma, acid deficiency, atherosclerosis and prevention of hypertension.

이와 같이 다양한 생리활성 및 효과 등을 고려할 때, 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합물은 그 이용가치가 충분한 것으로 판단된다.Considering the various physiological activities and effects, it is considered that the mixture of Hwangchulchu, Sansui, and Gugija is useful value.

그러나 상기와 같은 천연물을 이용하기 위하여, 종래에는 대부분 열수추출법이나 용매추출법을 통한 추출방법을 이용해왔다. 이와 같은 추출방법은, 추출 후 복잡한 정제과정을 거치며 이로 인한 유기용매의 잔존, 용매의 제거 및 오일성분의 낮은 분리효과 등의 문제점들이 있다.
However, in order to utilize the above-mentioned natural products, conventionally, most of them have used the extraction method using hot water extraction method or solvent extraction method. Such an extraction method involves complicated refining processes after extraction, resulting in problems such as residual organic solvent, removal of solvent, and low separation of oil components.

이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 초임계 이산화탄소 및 보조용매를 이용한 다단계 초임계 추출을 통해 황칠나무, 산수유 및 구기자로부터 항산화 및 항노화 활성을 갖는 혼합 추출물을 고효율로 추출할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Under these circumstances, the inventors of the present invention confirmed that a mixed extract having antioxidative and anti-aging activity can be extracted with high efficiency from multi-stage supercritical extraction using supercritical carbon dioxide and a co-solvent, Completed.

본 발명의 목적은 초임계 추출을 이용한 항산화 및 항노화 활성을 갖는 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조 방법을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a method for preparing a mixture of Hwangchu, Sansui, and Gugija with antioxidant and anti-aging activity using supercritical extraction.

본 발명의 다른 목적은 상기 방법으로 제조된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition having an antioxidative and anti-aging effect, which comprises the extract of Hwangchujang, Okusuriyu and Gugija, which is prepared by the above method, as an active ingredient.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 항산화 및 항노화 활성을 갖는 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법을 제공한다.In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides a method for producing a mixture of Hwangchu, Okusuriy and Gugija, which has antioxidant and anti-aging activity, comprising the following steps.

황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 포함하는 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 100bar 내지 250bar의 압력 하에서 초임계 이산화탄소로 1차 초임계 추출하는 단계(단계 1);(Step 1) with a supercritical carbon dioxide supercritical carbon dioxide at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and a pressure of 100 bar to 250 bar;

상기 1차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 1의 추출 압력에서부터 300bar 내지 450bar의 압력까지 압력을 증가시키면서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 2차 초임계 추출하는 단계(단계 2); 및Subjecting the raw material subjected to the first supercritical extraction to a second supercritical extraction with supercritical carbon dioxide and a co-solvent while increasing the pressure from a temperature of 35 ° C to 60 ° C and an extraction pressure of Step 1 to a pressure of 300 bar to 450 bar 2); And

상기 2차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 2의 최종 압력 하에서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 3차 초임계 추출하는 단계(단계 3).
(Step 3) a third supercritical extraction of the raw material subjected to the second supercritical extraction with a supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and a final pressure of the step 2.

바람직하기로, 본 발명의 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법은 상기 단계 3 이후에 초임계 추출된 추출물을 여과하여 상층액을 회수하는 단계(단계 4)를 추가로 포함할 수 있다.Preferably, the method of the present invention for preparing Hwanyeonggwa, mixed marine oil and gugija mixed extract may further include a step (step 4) of recovering the supernatant by filtering the supercritical extract after step 3.

바람직하기로, 상기 단계 3 및 단계 4 사이에 초임계 추출된 추출물을 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
Preferably, a step of concentrating the supercritical extract between steps 3 and 4 may be further included.

본 발명은 상기 단계 1 및 단계 2를 통하여 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 포함하는 원료에서 추출된 유지성분과 불순물을 회수하여 제거하고, 이어지는 단계 3의 초임계 이산화탄소 및 보조용매의 초임계 추출을 통해 항산화 및 항노화 활성을 갖는 혼합 추출물을 고순도로 수득할 수 있는 특징이 있다.The present invention rescues and removes the residual components and impurities extracted from the raw materials including the dried wood pulp, the corn oil and the dried pulverized gum, through the above step 1 and step 2, and then the supercritical carbon dioxide of the subsequent step 3 and the supercritical It is possible to obtain a high-purity mixed extract having antioxidative and anti-aging activity through extraction.

또한 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물의 혼합 원료를 사용함으로써 개별 생물소재로부터 얻어진 추출물보다 다양한 유효성분을 포함하며, 높은 항산화 및 항노화 활성을 갖는 추출물을 수득할 수 있는 특징이 있다.In addition, by using a mixed raw material of yellowtail, corn oil and dried gruel, it is possible to obtain an extract having various antioxidative and antioxidative activities and containing various active ingredients as compared with extracts obtained from individual biological materials.

나아가 상기 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물의 최적의 혼합 중량비를 제공함으로써 높은 항산화 및 항노화 활성을 갖는 혼합 추출물을 수득할 수 있는 특징이 있다.
Furthermore, it is characterized by being able to obtain a mixed extract having a high antioxidant and anti-aging activity by providing an optimum mixing weight ratio of the above-mentioned Yellowtail, Cornus syrup and Dried Garlic.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에 있어서, 상기 초임계 추출은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction, SFE)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다.In the present invention, the supercritical extraction refers to supercritical fluid extraction (SFE). Generally, the supercritical fluid is a supercritical fluid having a property of a liquid and a gas when a gas reaches a critical point under a high- And has chemically similar polarity to non-polar solvents. Due to these properties, supercritical fluids are being used to extract lipophilic substances.

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체의 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 원료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질인 유지성분과 그 외 다양한 물질들이 초임계 이산화탄소에 의해 추출되어 나온다. 특히 원료로부터 유지성분이 추출되어 제거되는 것을 탈지라 한다.Carbon dioxide is a supercritical fluid with both liquid and gaseous properties as the pressure and temperature reach critical points through the operation of supercritical fluid devices, resulting in increased solubility in oil soluble solutes. When supercritical carbon dioxide passes through an extraction vessel containing a certain amount of raw materials, supercritical carbon dioxide extracts the lipid-soluble material and other various substances contained in the sample. In particular, it is said that a fat component is extracted and removed from the raw material.

유지성분을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 원료(탈지된 원료)에 다시 소량의 보조용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다. 특히 본 발명은 상기와 같은 방법을 통해, 활성이 다소 떨어지는 유지성분과 기타 불순물을 먼저 분리하고, 탈지된 원료로부터 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않는 활성물질을 고순도로 얻을 수 있다는 특징이 있다.
When the supernatant carbon dioxide containing a small amount of auxiliary solvent is passed through the raw material (defatted raw material) remaining in the extraction vessel after extracting the fat component, pure supercritical carbon dioxide alone can extract the components that were not extracted by the pure supercritical carbon dioxide. Particularly, the present invention is characterized in that the active ingredient and other impurities, which are somewhat inferior in activity, are first separated from the raw material, and the active material that can not be extracted with pure supercritical carbon dioxide can be obtained in high purity from the defatted raw material.

본 발명에 있어서, 상기 황칠나무는 황칠나무의 다양한 기관 또는 부분(예를 들어 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질 및 종자 등)을 의미하고, 바람직하게는 잎, 줄기, 가지, 껍질 또는 뿌리를 의미하고, 가장 바람직하게는 줄기를 의미한다.In the present invention, the perennial tree means various organs or parts (for example, leaves, flowers, roots, stems, branches, bark, seeds, etc.) of woodblock trees and preferably leaves, stems, branches, Root, and most preferably stem.

본 발명에 있어서, 상기 산수유는 활성성분들이 주로 열매 부위에 다량 함유되어 있기 때문에, 바람직하게는 산수유 나무의 열매를 의미하나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, since the active ingredient is mainly contained in a large amount in the fruit part, the fruit is preferably fruit of the fruit of the sage, but the present invention is not limited thereto.

본 발명에 있어서, 상기 구기자는 활성성분들이 주로 열매 부위에 다량 함유되어 있기 때문에, 바람직하게는 구기자 나무의 열매를 의미하나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the gugija is preferably a fruit of the gugija because the active ingredients are contained mainly in the fruit region. However, the gugija is not limited thereto.

본 발명에서 사용하는 용어 "건조 분쇄물"은 상기 황칠나무, 산수유 및 구기자 각각을 건조시키고 분쇄시킨 결과물을 의미한다.The term " dried pulverized product "used in the present invention means a product obtained by drying and crushing each of the above-mentioned Yellow Hut tree, Sansui oil, and Gugija.

구체적으로 본 발명의 일 구현예로서, 황칠나무, 산수유 및 구기자 각각을 열풍 건조하고 핀형 분쇄기를 사용하여 분쇄할 수 있다. 상기 열풍 건조는 열풍건조기를 이용하여 건조하는 방식을 의미하며, 50 내지 60℃의 온도 범위에서 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한 상기 열풍 건조는 수일 동안, 바람직하기로 1 내지 3일 동안 수행될 수 있으며, 이는 각각의 수분 함량에 따라 적절히 조절될 수 있다.Specifically, as one embodiment of the present invention, each of yellowtail, Japanese mackerel and mackerel can be hot-air dried and pulverized using a pin mill. The hot air drying means a method of drying using a hot air drier, and may be performed at a temperature ranging from 50 to 60 ° C, but is not limited thereto. Also, the hot air drying can be performed for several days, preferably for 1 to 3 days, which can be appropriately adjusted according to the respective moisture contents.

상기 분쇄는 핀형 분쇄기를 사용하여 0.5 내지 2㎜ 크기의 입자로 분쇄할 수 있다. 만일 상기 분쇄 시 입자 크기가 상기 범위 밖일 경우, 추출 효율이 떨어지는 단점이 있다. 특히, 0.5㎜ 미만의 입자 크기에서는 초임계유체 추출 시 압력 부하로 인하여 추출 효율이 떨어지게 되고 2㎜ 보다 큰 입자 크기에서는 입자 속에 포함되어 있는 유효물질이 초임계유체에 의해 외부로 추출되기 어려워 결과적으로 유효물질의 추출 효율이 떨어지는 단점이 있다.The pulverization can be pulverized into particles having a size of 0.5 to 2 mm using a pin mill. If the particle size at the time of pulverization is out of the above range, there is a disadvantage that the extraction efficiency is inferior. Particularly, when the particle size is less than 0.5 mm, the extraction efficiency is lowered due to the pressure load during the supercritical fluid extraction. In the particle size larger than 2 mm, the effective substance contained in the particles is difficult to be extracted to the outside by the supercritical fluid. There is a disadvantage in that extraction efficiency of an effective substance is inferior.

바람직하기로, 상기 건조 분쇄물은 0.5㎜ 내지 1㎜의 입자 크기를 가질 수 있다.Preferably, the dried pulverized product may have a particle size of 0.5 mm to 1 mm.

본 발명에서는 상기 언급한 황칠나무 건조 분쇄물, 산수유 건조 분쇄물 및 구기자 건조 분쇄물을 혼합하여 초임계 추출을 위한 원료로 사용할 수 있다. 이들의 혼합은 각각의 건조 분쇄물을 제조한 뒤 이루어지거나, 혼합한 뒤 건조 분쇄하여 혼합 건조 분쇄물을 제조할 수 있으며, 특별히 순서에 제한이 되지 않는다.In the present invention, it is possible to use, as a raw material for the supercritical extraction, the above-mentioned dried wood pulp of Huangchu wood, dry millet of corn oil, and dry pulverized pulp of Gugija. The mixing may be carried out after each dry pulverized product is prepared, or may be mixed and dried to produce a dry pulverized product.

구체적으로, 상기 원료는 황칠나무 건조 분쇄물 : 산수유 건조 분쇄물 : 구기자 건조 분쇄물이 1~2 : 1~3 : 1의 중량비를 갖도록 혼합할 수 있으며, 가장 바람직하기로 2 : 3 : 1의 중량비를 갖도록 혼합할 수 있으며, 이러한 비율을 가질 때, 각각의 개별 생물소재에 비하여 더욱 우수한 항산화 및 항노화 활성을 갖는 추출물을 제조할 수 있다.
Specifically, the raw material may be mixed to have a weight ratio of dry wood pulverized product: dried mountain pulp: dried pulverized pulp with a weight ratio of 1: 2: 1 to 3: 1, and most preferably 2: 3: 1 Weight ratio, and when these ratios are used, it is possible to produce an extract having better antioxidative and anti-aging activity than each individual biomaterial.

상기 단계 1은, 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 포함하는 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 100bar 내지 250bar의 압력 하에서 초임계 이산화탄소로 1차 초임계 추출하는 단계로서, 비교적 저압의 압력조건 하에서 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 포함하는 원료에 함유된 유지성분 및 불순물을 주로 추출하여 제거하는 단계이다.Step 1 is a first supercritical extraction of supercritical carbon dioxide at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and a pressure of 100 bar to 250 bar with a feedstock containing sulfuric acid, And extracting and removing the main ingredients and impurities contained in the raw material including the dried wood pulp, the corn oil and the dried pulverized gugija under the condition.

상기 유지성분은 대표적으로 지질 및 지방과 같은 지용성 물질을 의미한다. 이들은 본 발명이 목적하는 항산화 및 항노화 활성을 갖는 유효성분의 함량이 낮고, 항산화 및 항노화 활성을 저해하는 요인으로 작용할 수 있다. 따라서 본 발명은 이들을 탈지하는 단계로서 이산화탄소만으로 1차 초임계 추출을 수행함으로써, 유지성분을 효율적으로 추출하여 제거할 수 있다.The sustaining component typically refers to a lipid-soluble material such as lipid and fat. These are low in the content of the active ingredient having the desired antioxidative and anti-aging activity of the present invention, and can act as a factor to inhibit the antioxidant and anti-aging activity. Therefore, the present invention is capable of efficiently extracting and removing the sustaining component by performing the first supercritical extraction using only carbon dioxide as a step of degreasing them.

또한 상기 단계 1을 통하여 원료에 포함된 다양한 불순물 역시 함께 추출되어 제거할 수 있다. 상기 불순물은 항산화 및 항노화 활성을 갖는 유효성분을 제외한 각종 물질로서, 나아가 추출물의 항산화 및 항노화 활성을 저해시킬 수 있는 성분들을 의미한다.Also, various impurities contained in the raw material can be extracted and removed together with the step 1 through the step 1. The impurities are various substances other than the active ingredient having antioxidative and anti-aging activity, and further, the ingredients that can inhibit the antioxidative and anti-aging activities of the extract.

단계 1에서 추출된 유지성분 및 불순물을 포함하는 추출물은 회수하여 제거하거나 필요에 따른 용도로 재활용할 수 있다.The extract containing the fat component and impurities extracted in step 1 may be recovered and removed or recycled for use as needed.

바람직하기로, 상기 단계 1은 약 30분간 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
Preferably, step 1 may be performed for about 30 minutes, but is not limited thereto.

상기 단계 2는, 상기 1차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 1의 추출 압력에서부터 300bar 내지 450bar의 압력까지 압력을 증가시키면서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 2차 초임계 추출하는 단계로서, 상기 단계 1과 마찬가지로 원료에 잔류하는 유지성분 및 불순물을 주로 추출하여 제거하는 단계이다. 나아가 상기 단계 2는, 유효 활성성분 추출을 위한 최종적 단계(단계 3)의 목적 압력과 온도에 다다르도록 설정하는 중간 단계의 의미를 갖는다.Wherein the step 2 is a step in which the raw material subjected to the first supercritical extraction is subjected to a supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent at a temperature of 35 to 60 DEG C and an extraction pressure of the step 1 to a pressure of 300 to 450 bar, And extracting and removing mainly the residual components and impurities remaining in the raw material as in step 1 above. Further, step 2 has the meaning of an intermediate step of setting the target pressure and the temperature of the final step (step 3) for extracting the active active ingredient to be different from each other.

구체적으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에 이어지면서 단계 1과 단계 3의 중간 단계로서의 역할을 하며, 단계 1의 추출 압력에서부터 비교적 고압의 압력조건인 300bar 내지 450bar의 압력까지 압력을 서서히 증가시키면서 진행될 수 있다. 또한 단계 2의 진행동안 공급되는 초임계 이산화탄소에 보조용매를 추가로 투입하여 공급시킬 수 있다. 이를 통하여 원료에 잔류하는 유지성분을 및 불순물을 상당히 제거할 수 있으며, 나아가 이어지는 단계 3에서 고순도의 항산화 및 항노화 성분을 고효율로 추출할 수 있게 할 수 있다.Specifically, the step 2 serves as an intermediate step between step 1 and step 3, continuing to step 1, and proceeds from the extraction pressure of step 1 to a pressure of 300 bar to 450 bar, which is a relatively high pressure condition, while gradually increasing the pressure . Further, supercritical carbon dioxide supplied during the progress of step 2 may be supplied with an additional auxiliary solvent. Thus, it is possible to remove the residual ingredients and impurities remained in the raw material, and further, in a subsequent step 3, high purity antioxidation and anti-aging components can be extracted with high efficiency.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 단계 2는 보조용매로서 에탄올(Ethanol)을 첨가하면서 수행될 수 있다. 이때 초임계 추출 장치에 있어서, 온도는 35 내지 60℃ 및 압력은 300 내지 450bar로 설정하여, 압력을 서서히 증가시키면서 보조용매인 에탄올을 초임계 이산화탄소와 함께 추출조로 흘려 보낸다. 이때 보조용매로 사용한 에탄올은 초임계 추출 장치의 관벽에 남아있는 잔류 오일(유지성분)까지 제거할 수 있는 효과가 있다.In one embodiment of the invention, step 2 can be carried out with the addition of ethanol as a co-solvent. At this time, in the supercritical extraction apparatus, the temperature is set to 35 to 60 ° C and the pressure is set to 300 to 450 bar, and the ethanol as the co-solvent is flowed to the extraction tank together with the supercritical carbon dioxide while gradually increasing the pressure. At this time, the ethanol used as the co-solvent has the effect of removing residual oil (maintenance component) remaining in the pipe wall of the supercritical extraction device.

상기 단계 1과 마찬가지로, 단계 2에서 추출된 유지성분 및 불순물을 포함하는 추출물을 회수하여 제거하거나 필요에 따른 용도로 재활용할 수 있다.As in step 1 above, the extract containing the fat and oil components extracted in step 2 can be recovered and removed or recycled for use as needed.

바람직하기로, 상기 단계 2는 약 30분에 걸쳐서 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
Preferably, step 2 may be carried out over a period of about 30 minutes, but is not limited thereto.

상기 단계 3은, 상기 2차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 2의 최종 압력 하에서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 3차 초임계 추출하는 단계로서, 상기 단계 1 및 단계 2를 통하여 항산화 및 항노화 활성을 저해하는 유지성분과 불순물이 상당량 제거된 원료로부터 항산화 및 항노화 성분을 고순도 및 고효율로 추출하여, 그 추출물을 수득하는 단계이다.The step 3 is a third supercritical extraction of supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent at a temperature of 35 to 60 DEG C and a final pressure of the step 2, 2, extracting antioxidative and anti-aging components with high purity and high efficiency from a raw material in which a maintenance component that inhibits antioxidant and anti-aging activity and a substantial amount of impurities are removed, and the extract is obtained.

특히 상기 단계 3은 활성 성분 추출을 위한 최적의 온도와 압력 하에서, 보조용매의 사용을 통해 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 활성 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있는 특징이 있다.Particularly, the step 3 is characterized in that active ingredients which have not been extracted only by pure supercritical carbon dioxide can be extracted through the use of an auxiliary solvent under optimum temperature and pressure for extracting the active ingredient.

바람직하기로, 상기 단계 3은 약 120분간 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
Preferably, step 3 can be performed for about 120 minutes, but is not limited thereto.

바람직하기로, 상기 단계 1 내지 단계 3의 초임계 이산화탄소는 5 ㎖/min 내지 60 ㎖/min의 체적유량으로 공급될 수 있고, 추출시간 대비 보다 많은 양의 추출물을 얻기 위하여 30 ㎖/min 내지 60 ㎖/min의 체적유량으로 공급됨이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, the supercritical carbon dioxide from step 1 to step 3 may be supplied at a volumetric flow rate of 5 ml / min to 60 ml / min and may be supplied at a rate of 30 ml / min to 60 Lt; RTI ID = 0.0 > ml / min. ≪ / RTI >

상기 체적유량은 이산화탄소 봄베이에서 나온 액화 이산화탄소가 초임계 고압펌프 전단계까지의 압력과 온도 상태에서 이산화탄소가 갖는 체적을 기준으로, 단위시간당 추출조 내로 들어가는 체적을 의미한다.
The volumetric flow rate refers to the volume of carbon dioxide introduced into the extraction tank per unit time, based on the volume of carbon dioxide in the pressure and temperature state before the supercritical high-pressure pump before the liquefied carbon dioxide from the carbon dioxide bombardment.

본 발명에서 사용하는 용어 "보조용매"는 초임계 이산화탄소와 함께 사용되는 유기용매를 의미하며, 이들의 복합으로 유효성분인 항산화 및 항노화 활성 성분을 보다 효율적으로 추출할 수 있다.The term "co-solvent" used in the present invention means an organic solvent used together with supercritical carbon dioxide, and it is possible to more efficiently extract the active ingredients of antioxidant and anti-aging, which are active ingredients.

상기 단계 2 및 단계 3의 보조용매는 전체 초임계 이산화탄소와의 혼합물 중 1 내지 30 부피%의 부피로 사용 가능하며, 바람직하기로는 10 부피%의 양으로 사용하는 것이 추출 효율면에서 바람직하다.The auxiliary solvent in the step 2 and the step 3 may be used in a volume of 1 to 30% by volume of the mixture with the total supercritical carbon dioxide, preferably in an amount of 10% by volume, from the viewpoint of extraction efficiency.

사용가능한 보조용매로는 에탄올, 메탄올, 클로로포름, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하기로 에탄올을 사용할 수 있다.
As the co-solvent which can be used, one or a mixture of two or more selected from the group consisting of ethanol, methanol, chloroform, water, ethyl acetate, hexane and diethyl ether may be used, preferably ethanol.

상기 단계 4는 상기 단계 1 내지 3을 통하여 초임계 추출된 추출물을 여과하여 상층액을 회수하는 단계로서, 여과된 추출물 중 바닥의 침전물을 제외한 순도높은 상층액을 유효성분으로 회수하는 단계이다. 이는 최종 추출물 내에서도 상층액 부분이 항산화 및 항노화 활성이 보다 우수하기 때문이다.The step 4 is a step of recovering the supernatant by filtering the supernatant-extracted extract through the steps 1 to 3, and recovering the supernatant having high purity excluding the bottom sediment as an active ingredient. This is because the supernatant portion of the final extract has better antioxidant and anti-aging activity.

구체적으로, 초임계 추출된 추출물의 여과는 각종 공지된 필터를 이용해 수행될 수 있으며, 종이 필터를 사용하는 것이 여과 효율과 경제적 측면에서 바람직하나, 이에 제한되는것은 아니다.
Specifically, the filtration of the supercritically extracted extract can be performed using various known filters, and the use of a paper filter is preferable, but not limited, from the viewpoint of filtration efficiency and economy.

나아가, 상기 단계 3 및 단계 4 사이에 초임계 추출된 추출물을 농축하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 이는 추출된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물 내 보조용매를 제거하기 위하여 추출물을 농축시키는 단계이다.Furthermore, it may further comprise concentrating the supercritically extracted extract between step 3 and step 4, which comprises concentrating the extract to remove the co-solvent in the extracted Hwangbok tree, corn oil and gugija mixed extract to be.

상기 농축은 당업계에 알려져 있는 통상의 농축기를 이용하여 수행 가능하다.
The concentration can be carried out using a conventional concentrator known in the art.

본 발명의 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법은 유지성분 등의 불순물을 제거하기 위한 단계 1 및 단계 2를 거침으로써, 단계 3에서 추출된 추출물이 단계 1 및 단계 2에서 추출된 추출물보다 항산화 및 항노화 활성이 더 우수함을 확인할 수 있었다.The method of the present invention for preparing a mixed extract of Hwanyeongnam, Sansui and Gugija comprises steps 1 and 2 for removing impurities such as a fat component and the like, so that the extract extracted in step 3 is superior to the extract extracted in steps 1 and 2 Antioxidative and anti-aging activities were more excellent.

또한 본 발명의 실험예를 통해, 본 발명의 제조방법에 따른 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물은 우수한 항산화(실험예 1 내지 3), 항노화(실험예 5) 활성을 갖으며, 나아가 엘라스틴 분해 효소인 Elastase 및 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 발현을 억제하는 효과를 갖음을 확인하였다.In addition, through the experimental examples of the present invention, it can be seen that the extracts of yellowtail, Japanese mulberry and gugija according to the production method of the present invention have excellent antioxidative activity (Experimental Examples 1 to 3) and anti-aging (Experimental Example 5) It has been confirmed that it has an effect of inhibiting the expression of Elastase, an enzyme, and MMP-1, a collagenase.

특히 본 발명의 제조방법에 따른 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물은 기존의 용매추출 및 열수추출에 비해 현저히 높은 항산화 및 항노화 활성을 갖으며, 나아가 원료 내의 황칠나무 : 산수유 : 구기자 = 2 : 3 : 1의 혼합 중량비를 갖을때 가장 우수한 효과를 보임을 확인하였다.
Particularly, the mixed extract of Hwangchujang, Sansui and Gugija according to the production method of the present invention has remarkably high antioxidant and anti-aging activity as compared with the conventional solvent extraction and hot water extraction. Further, : 1 in the weight ratio.

또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition having antioxidative and anti-aging effects, which comprises the extract of Hwangcholguk, Okwon, and Gugija, which is prepared by the above-mentioned method, as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 및 노화 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles and aging, which comprises the extract of Hwangchujang, Sansui, and Gugija, which is prepared by the above-mentioned method, as an active ingredient.

전술한 제조방법을 통하여 추출 및 수득된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 높은 항산화 및 항노화 활성을 가지므로 피부 주름 및 노화 개선에 효과적인 특징이 있다.The cosmetic composition comprising the extract of Hwangchujang, mixture of Sansui and Gugija extracted and obtained through the above-mentioned production method has a high antioxidative and anti-aging activity and is thus effective for improving the wrinkles and aging of the skin.

구체적으로, 상기 추출물은 우수한 프리 라디칼 소거능을 갖고, 자외선에 의한 피부세포 손상을 억제하며(광노화 억제), 엘라스틴 분해 효소인 Elastase 및 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 발현을 억제하는 효과를 갖음으로써 피부 주름 및 노화 개선용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.Specifically, the extract has an excellent free radical scavenging ability, inhibits skin cell damage by ultraviolet rays (inhibits photoaging), and has an effect of inhibiting the expression of Elastase, an elastinase, and MMP-1, a collagenase, Can be used as a cosmetic composition for improving wrinkles and aging.

예를 들면, 상기 추출물은 화장수, 스킨, 로션, 크림, 겔, 연고, 페이스트, 분말 파운데이션, 세럼, 유탁액 파운데이션, 에센스, 페이스트, 분말, 스프레이, 수증유(O/W)형 또는 유증수(W/O)형과 같은 제형으로 제형화 될 수 있다.For example, the extract may be in the form of lotion, skin, lotion, cream, gel, ointment, paste, powder foundation, serum, emulsion foundation, essence, paste, powder, spray, W / O) type.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 화장품 제형에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제형에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제형에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.In addition, the cosmetic composition according to the present invention may contain an acceptable carrier in the above cosmetic formulations. As used herein, the term "acceptable carrier for cosmetic formulations" refers to compounds or compositions already known and used that may be included in cosmetic formulations, or as compounds or compositions to be developed in the future that are toxic, instable or irritating It says nothing.

상기 담체는 본 발명의 화장용 조성물 전체 중량에 대하여 약 1 중량 ％ 내지 약 99.99 중량 ％, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량％ 내지 약 99.99 중량 ％로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장용 조성물이 제조되는, 전술한 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.The carrier may comprise from about 1% to about 99.99% by weight, preferably from about 90% to about 99.99% by weight of the composition, based on the total weight of the cosmetic composition of the present invention. However, since the above ratio depends on the above-mentioned formulation in which the cosmetic composition of the present invention is prepared and its specific application site (face, neck, etc.) or its preferable application amount and the like, And should not be construed as limiting the scope of the invention.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.Examples of the carrier include alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, humectants, moisturizers, viscosifiers, emulsifiers, stabilizers, sunscreens, coloring agents and perfumes. The compounds / compositions that can be used as the above-mentioned alcohol, oil, surfactant, fatty acid, silicone oil, humectant, humectant, viscosifier, emulsion, stabilizer, ultraviolet screening agent, coloring agent and fragrance are already known in the art The appropriate substance / composition can be selected and used.

본 발명의 일 구현예로서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 가지 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cosmetic composition according to the present invention may contain glycerin, butylene glycol, propylene glycol, polyoxyethylene hardened castor oil, ethanol, triethanolamine, , Coloring matter, purified water, and the like may be included as needed.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may further contain at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softening agents, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, perfumes, Or any other conventionally used in cosmetics such as nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, barrier agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, ≪ RTI ID = 0.0 > cosmetics < / RTI > such as botanical ingredients, or adjuvants conventionally used in the field of dermatology. And, the above ingredients can be introduced in amounts commonly used in the field of dermatology.

전술한 제조방법을 통하여 추출된 추출물의 화장료 조성물로의 응용은 예시적이며, 당업자라면, 본 발명의 범위 내에서, 상기 추출물의 항산화 및 항노화 활성에 따른 피부 주름 및 노화 개선 효과에 기초하여, 피부, 두피 및 음용될 수 있는 제약이나 샴푸 및 비누와 같은 세제, 식품 및 음료 등으로 제품화될 수 있으며, 이 또한 본 발명에 포함됨을 이해하여야 한다.
The application of the extract extracted through the above-described production method to a cosmetic composition is illustrative, and those skilled in the art can, based on the effect of improving the skin wrinkles and aging according to the antioxidant and anti- Such as pharmaceuticals, shampoos and soaps that can be applied to the skin, scalp and drink, foods and beverages, etc., which are also included in the present invention.

본 발명은 초임계 이산화탄소 및 보조용매를 이용한 다단계 추출을 통하여 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 원료로부터 항산화 및 항노화 활성을 갖는 혼합 추출물을 고순도로 제조하는 방법을 제공할 수 있으며, 상기 추출물은 우수한 프리 라디칼 소거능을 갖고, 자외선에 의한 피부세포 손상을 억제하며(광노화 억제), 엘라스틴 분해 효소인 Elastase 및 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 발현을 억제하는 효과를 갖음으로써 피부 주름 및 노화 개선용 화장료 조성물로 사용될 수 있다.
The present invention can provide a method for producing a mixed extract having antioxidative and anti-aging activity from a mixture of Hwanyeongchu, Porphyra japonica and Gougia with high purity through multi-stage extraction using supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent, The present invention relates to a cosmetic composition for improving skin wrinkles and aging by having a radical scavenging ability, suppressing damage to skin cells caused by ultraviolet rays (suppressing photoaging), inhibiting the elastinase enzyme Elastase and the collagenase enzyme MMP-1 Can be used.

도 1은 본 발명의 실시예 및 비교예에 따른, 원료 혼합 비율별, 추출 단계별로 추출된 추출물을 보여주는 사진도이다. 도 1 (A) 내지 (C)는 비교예 1 내지 3에서 얻어진 추출물의 모습이고, 도 1 (D) 내지 (F)는 비교예 4 내지 6에서 얻어진 추출물의 모습이고, 도 1 (G) 내지 (H)는 비교예 7, 8 및 실시예 1에서 얻어진 추출물의 모습이다.
도 2는 본 발명의 실시예 및 비교예에 따른 추출물에 대한 DPPH 라디칼 소거능에 대한 모니터링 실험의 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물에 대한 DPPH 라디칼 소거능에 대한 모니터링 실험의 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물에 대한 유사항산화(SOD-like)저해능 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물에 대한 농도별 세포독성(MTT assay) 평가 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 실시예 1-1에서 얻어진 추출물의 자외선으로 유도된 HS68 세포의 산화적 손상에 대한 항노화 효능 분석 결과이다.
도 7은 본 발명의 실시예 1-1에서 얻어진 추출물에 대한 MMP-1 저해활성 측정 분석 결과이다.
도 8은 본 발명의 실시예 및 비교예에 따른 추출물에 대한 지표성분(로가닌)을 HPLC로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다. 구체적으로, 도 8a는 지표성분(로가닌), 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2에 대한 HPLC결과이며, 도 8b는 비교예 3 내지 비교예 8에 대한 HPLC결과이다.FIG. 1 is a photograph showing the extracts extracted according to the raw material mixing ratio and the extraction step according to Examples and Comparative Examples of the present invention. FIG. 1 (A) to 1 (C) show the appearance of the extracts obtained in Comparative Examples 1 to 3, FIGS. 1 (D) to (F) show the extracts obtained in Comparative Examples 4 to 6, (H) are the appearance of the extracts obtained in Comparative Examples 7 and 8 and Example 1.
FIG. 2 is a graph showing the results of monitoring experiments on DPPH radical scavenging ability of extracts according to Examples and Comparative Examples of the present invention. FIG.
3 is a graph showing the results of monitoring experiments on the DPPH radical scavenging ability of the extracts obtained in Examples 1-1 and 1-2 of the present invention.
4 is a graph showing the results of measurement of the similar antioxidant (SOD-like) inhibitory effect on the extracts obtained in Examples 1-1 and 1-2 of the present invention.
FIG. 5 is a graph showing the results of measurement of cytotoxicity (MTT assay) of the extracts obtained in Examples 1-1 and 1-2 according to the present invention. FIG.
6 shows the anti-aging activity of the extract obtained in Example 1-1 of the present invention against the oxidative damage of HS68 cells induced by ultraviolet rays.
Fig. 7 shows the results of assaying MMP-1 inhibitory activity of the extract obtained in Example 1-1 of the present invention.
FIG. 8 is a graph showing the results of measurement of an indicator component (roganin) for an extract according to Examples and Comparative Examples of the present invention by HPLC. Specifically, FIG. 8A shows the HPLC results for the indicator component (roganine), Example 1, Comparative Example 1 and Comparative Example 2, and FIG. 8B shows the HPLC results for Comparative Examples 3 to 8.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These embodiments are only for describing the present invention more specifically, and the scope of the present invention is not limited by these examples.

비교예Comparative Example 1 내지 7 및  1 to 7 and 실시예Example 1: 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조  1: Dried yellowtail millet, cornstarch and gugija 분쇄물의Crushed 다단계  Multi-level 초임계Supercritical 추출 extraction

황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 1:1:1, 1:2:1 및 2:3:1 중량비로 혼합한 원료로부터 항산화 및 항노화 활성이 높은 성분을 효율적으로 얻기 위하여 다단계를 통한 초임계유체 추출 방법을 이용하였으며, 상기 단계에는 활성이 낮은 오일(유지) 성분을 제거하는 탈지 단계가 포함되었다. 이때 각각의 추출 단계에서 얻어지는 추출물을 모두 샘플로서 수득하였다.
In order to efficiently obtain components having high antioxidative and antioxidative activity from the raw materials obtained by mixing the dried wood pulp, corn oil, and dried ginger powder at a weight ratio of 1: 1: 1, 1: 2: 1 and 2: 3: 1, A critical fluid extraction method was used. In this step, a degreasing step for removing the low activity (oil) component was included. At this time, all the extracts obtained in the respective extraction steps were obtained as samples.

전처리로, 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합물을 60℃에서 1일 동안 열풍 건조한 후 핀형분쇄기를 이용하여 0.5㎜m의 입자 크기로 분쇄함으로써 혼합 추출 원료를 준비하였다. 상기 원료는 황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물이 각각 1:1:1의 중량비, 1:2:1의 중량비 및 2:3:1의 중량비를 갖는 세가지 원료 샘플로서 준비되었다.The pretreatment furnace, Hwacheon-myeon, Sansui, and Gugija mixture were hot-air dried at 60 ℃ for 1 day and then pulverized to a particle size of 0.5 mm using a pin mill. The raw materials were prepared as three raw material samples having a weight ratio of 1: 1: 1, a weight ratio of 1: 2: 1, and a weight ratio of 2: 3: 1, respectively.

첫 번째 단계로, 상기 전처리된 원료 각각을 150 g의 양으로 주입하고 초임계 추출 장치(ISA-SCFE-0050-0100-080-re, 일신오토클레이브, 한국)를 이용하여 50℃에서, 압력을 150bar로 조절하여 1차 초임계 추출을 실시하였다. 초임계 이산화탄소의 유량은 60 ㎖/min으로 30분 동안 추출하였으며(SFE 추출법), 여기서 추출된 추출물을 회수하여 샘플로서 수득하였다(비교예 1, 비교예 4, 비교예 7).As a first step, each of the pretreated raw materials was injected in an amount of 150 g, and pressure was measured at 50 ° C using a supercritical extraction apparatus (ISA-SCFE-0050-0100-080-re, Ilshin Autoclave, 150 bar for the first supercritical extraction. The flow rate of supercritical carbon dioxide was extracted at 60 ml / min for 30 minutes (SFE extraction method), and the extracted extract was collected as a sample (Comparative Example 1, Comparative Example 4, Comparative Example 7).

두 번째 단계로, 첫 번째 단계에 이어서 초임계 추출 장치의 압력을 조절하여 150bar에서부터 400bar까지 천천히 압력을 상승시킴과 동시에, 초임계 이산화탄소뿐만 아니라 보조용매로 에탄올(주정)을 추가로 공급하여 상기 1차 추출을 거친 원료의 2차 추출을 실시하였다. 이때 초임계 이산화탄소의 유량은 첫 번째 단계와 동일하게 유지시킨 상태로, 보조용매인 에탄올의 유량은 3 ㎖/min으로 30분 동안 추출하였으며, 여기서 추출된 추출물을 회수하여 샘플로서 수득하였다(비교예 2, 비교예 5, 비교예 8).In the second step, following the first step, the pressure of the supercritical extraction unit is adjusted to gradually increase the pressure from 150 bar to 400 bar, and ethanol (alcohol) is further supplied as an auxiliary solvent as well as supercritical carbon dioxide, Secondary extraction of the raw material after tea extraction was carried out. The flow rate of supercritical carbon dioxide was maintained at the same level as that of the first step. The flow rate of the ethanol as the co-solvent was extracted at 3 ml / min for 30 minutes, and the extracted extract was recovered as a sample 2, Comparative Example 5, and Comparative Example 8).

세 번째 단계로, 50℃에서 압력은 400bar인 상태로 초임계 이산화탄소 및 보조용매인 에탄올을 공급하여 상기 2차 추출을 거친 원료의 3차 추출을 실시하였다(SFE with co-solvent). 세 번째 단계의 각각의 유체에 대한 유량은 전술한 두 번째 단계와 동일하며, 120분 동안 추출하였으며, 여기서 추출된 추출물을 회수하여 샘플로서 수득하였다(비교예 3, 비교예 6, 실시예 1).As a third step, supercritical carbon dioxide and ethanol as a co-solvent were supplied at a pressure of 400 bar at 50 DEG C to carry out a third extraction (SFE with co-solvent) of the second extraction. The flow rate for each fluid in the third step was the same as the second step described above and was extracted for 120 minutes, and the extracted extract was collected as a sample (Comparative Example 3, Comparative Example 6, Example 1) .

상기 각각의 단계에 대하여, 초임계 추출이 완료되면 초임계 추출 장치의 추출조 압력을 낮춰 초임계유체 상태를 해제하여 추출물을 샘플로서 회수하였다. 상기 회수된 각각의 단계에 대한 샘플들을 농축기를 이용하여 농축하였다.For each of the above steps, when the supercritical extraction is completed, the extraction tank pressure of the supercritical water extraction system is lowered to release the supercritical fluid state to recover the extract as a sample. Samples for each of the recovered steps were concentrated using a concentrator.

이들 각각에 대하여 하기 표 1에 나타내었다.These are shown in Table 1 below.

번호number 황칠나무, 산수유, 구기자 건조 분쇄물 중량 혼합비Hwangchulchu, cornstarch, dried gugija, crushed water Weight mixing ratio 추출 온도
(℃)Extraction temperature
(° C) 추출 압력
(bar)Extraction pressure
(bar) 추출 시간
(min)Extraction time
(min) 보조용매
(에탄올)Co-solvent
(ethanol) 비교예 1
(1차 추출)Comparative Example 1
(Primary extraction) 1 : 1 : 11: 1: 1 5050 150150 3030 1차+2차+3차:
총 180분1st + 2nd + 3rd:
180 minutes in total -- 비교예 2
(2차 추출)Comparative Example 2
(Secondary extraction) 5050 150 부터
400 까지From 150
Up to 400 3030 3 ㎖/min3 ml / min 비교예 3
(3차 추출)Comparative Example 3
(Third extraction) 5050 400400 120120 3 ㎖/min3 ml / min 비교예 4
(1차 추출)Comparative Example 4
(Primary extraction) 1 : 2 : 11: 2: 1 5050 150150 3030 1차+2차+3차:
총 180분1st + 2nd + 3rd:
180 minutes in total -- 비교예 5
(2차 추출)Comparative Example 5
(Secondary extraction) 5050 150 부터
400 까지From 150
Up to 400 3030 3 ㎖/min3 ml / min 비교예 6
(3차 추출)Comparative Example 6
(Third extraction) 5050 400400 120120 3 ㎖/min3 ml / min 비교예 7
(1차 추출)Comparative Example 7
(Primary extraction) 2 : 3 : 12: 3: 1 5050 150150 3030 1차+2차+3차:
총 180분1st + 2nd + 3rd:
180 minutes in total -- 비교예 8
(2차 추출)Comparative Example 8
(Secondary extraction) 5050 150 부터
400 까지From 150
Up to 400 3030 3 ㎖/min3 ml / min 실시예 1
(3차 추출)Example 1
(Third extraction) 5050 400400 120120 3 ㎖/min3 ml / min

실시예Example 1-1 및  1-1 and 실시예Example 1-2:  1-2: 상층액과The supernatant 하층액의Sublayer 분리회수 Separation number

상기 3차 추출의 결과물인 실시예 1의 농축 샘플을 종이 필터(Whatman filter papers No. 1)를 이용하여 여과하였다. 그 후, 샘플의 상층액(실시예 1-1)을 회수하고, 침전물이 다소 포함된 하층액(실시예 1-2)을 각각 회수하였다.
The concentrated sample of Example 1, which is the result of the above third extraction, was filtered using a paper filter (Whatman filter papers No. 1). Thereafter, the sample supernatant (Example 1-1) was recovered, and the supernatant (Example 1-2) containing a small amount of precipitate was collected.

실험예Experimental Example 1:  One: 초임계Supercritical 유체 추출 조건에 따른 추출물의  Extracts according to fluid extraction conditions DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 실험 분석 Experimental analysis

상기 비교예 1 내지 8 및 실시예 1에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 DPPH 라디칼 소거 실험을 실시하였다. DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 그 자체가 매우 안정한 프리 라디칼(Free radical)로써, 517㎚에서 특정적인 광흡수를 나타내는 진한 보라색의 화합물을 측정하며, 라디칼 소거활성이 있는 항산화제에 의해 정량적으로 탈색됨으로 인해 항산화 활성을 쉽게 측정할 수 있다. 이러한 라디칼에 의한 소거활성은 지질과산화 억제활성을 비롯한 항산화 활성과의 상관관계를 보이므로 항산화제 검색에 널리 이용되고 있다.DPPH radical scavenging experiments were carried out on the extract samples obtained in the above Comparative Examples 1 to 8 and Example 1. DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) is a very stable free radical, measuring deep purple compounds that exhibit specific absorption of light at 517 nm, and antioxidants with radical scavenging activity , The antioxidant activity can be easily measured. These radical scavenging activities have been correlated with antioxidative activities including lipid peroxidation inhibitory activity and are widely used for antioxidant search.

상기 비교예 1 내지 8 및 실시예 1의 추출물 샘플의 항산화 활성 측정 (Electron donating abilities, EDA)은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 각 시료용액 2.0 ㎖에 0.2 mM의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 0.5 ㎖를 넣고 교반한 후 30분간 방치한 다음 517㎚에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여 효과는 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다. 결과적인 프리 라디칼 소거능을 하기의 수학식 1에 의하여 계산하였다.The antioxidant activity (EDA) of the extract samples of Comparative Examples 1 to 8 and Example 1 was measured by modifying the Blois method. 0.5 ml of DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) was added to 2.0 ml of each sample solution, and the mixture was left to stand for 30 minutes and the absorbance was measured at 517 nm. The electron donating effect was expressed as the absorbance reduction ratio of the sample solution and the no-added solution. The resultant free radical scavenging ability was calculated by the following equation (1).

[수학식 1][Equation 1]

프리 라디칼 소거활성(%)= {1-(B/A)}×100Free radical scavenging activity (%) = {1- (B / A)} 100

A: 비교예 1 내지 8 및 실시예 1의 추출물 샘플을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도A: The absorbance of the control wells not treated with the extract samples of Comparative Examples 1 to 8 and Example 1

B: 비교예 1 내지 8 및 실시예 1의 추출물 샘플을 처리한 실험군 웰의 흡광도B: Absorbance of experimental group wells treated with the extract samples of Comparative Examples 1 to 8 and Example 1

그 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.The results are shown in Table 2 and FIG.

비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 비교예 4Comparative Example 4 비교예 5Comparative Example 5 비교예 6Comparative Example 6 비교예 7Comparative Example 7 비교예 8Comparative Example 8 실시예 1Example 1 프리 라디칼 소거활성
(%)Free radical scavenging activity
(%) 14.914.9 80.8680.86 25.2425.24 33.2533.25 45.0445.04 87.3187.31 45.645.6 54.9454.94 88.9088.90

상기 결과를 통하여 실시예 1이 가장 우수한 DPPH 라디칼 소거능을 나타냄을 확인할 수 있었다.
From the above results, it can be confirmed that Example 1 exhibits the best DPPH radical scavenging ability.

실험예Experimental Example 2:  2: 실시예Example 1-1 및  1-1 and 실시예Example 1-2 추출물의  1-2 of extract DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 실험 분석 Experimental analysis

상기 실험예 1에서 확인하였듯이, 실시예 1의 추출물이 가장 우수한 프리 라디칼 소거능을 나타냄에 따라, 실시예 1의 추출물의 상층액(실시예 1-1)과 하층액(실시예 1-2)의 추가적인 DPPH 라디칼 소거능 실험을 수행하였다.As shown in Experimental Example 1, the extract of Example 1 exhibited the best free radical scavenging ability. Therefore, the extract of Example 1 (Example 1-1) and the lower layer solution (Example 1-2) Additional DPPH radical scavenging experiments were performed.

실시예 1-1 및 실시예 1-2 추출물 샘플 각각에 대하여, 1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖, 0.25 ㎎/㎖, 0.125 ㎎/㎖ 및 0.0625 ㎎/㎖로 희석된 농도별로 상기 실험예 1과 동일하게 실험을 수행하였다.For each of the extract samples of Example 1-1 and Example 1-2, the concentration of each of the extracts prepared in Experimental Example 1 (1 mg / ml, 0.5 mg / ml, 0.25 mg / ml, 0.125 mg / ml and 0.0625 mg / The experiment was carried out in the same way.

그 결과를 하기 표 3 및 도 3에 나타내었다.The results are shown in Table 3 and FIG.

프리 라디칼 소거활성(%)Free radical scavenging activity (%) 실시예 1-1Example 1-1 실시예 1-2Examples 1-2 1.000 ㎎/㎖1.000 mg / ml 86.56486.564 74.45074.450 0.500 ㎎/㎖0.500 mg / ml 73.45073.450 43.67643.676 0.250 ㎎/㎖0.250 mg / ml 38.55038.550 20.75620.756 0.125 ㎎/㎖0.125 mg / ml 27.57027.570 14.07214.072 0.0625 ㎎/㎖0.0625 mg / ml 30.64930.649 2.0602.060

상기 실험결과를 통하여, 실시예1-1의 추출물 샘플이 실시예 1-2의 추출물 샘플보다 더 우수한 프리 라디칼 소거활성을 갖으며, 실시예1-1의 추출물 샘플은 농도 의존적으로 프리 라디칼 소거활성이 증가함을 확인하였다.
From the above experimental results, the extract sample of Example 1-1 had better free radical scavenging activity than the extract sample of Example 1-2, and the extract sample of Example 1-1 had free radical scavenging activity .

실험예Experimental Example 3:  3: 실시예Example 1-1 및  1-1 and 실시예Example 1-2 추출물의  1-2 of extract 유사항산화(SOD-like)저해능Pseudo-antioxidant (SOD-like) inhibition 측정 실험 Measurement experiment

상기 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 SOD 효소 활성을 측정하였다. SOD assay Kit-WST를 이용하여 지시(메뉴얼)대로 측정하였으며, 96-well plate에 상기 추출물 샘플을 넣고 WST-1 (2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, mono-sodium salt)과 SOD enzyme activity was measured on the extract samples obtained in Examples 1-1 and 1-2. SOD assay Kit-WST, and the extract sample was added to a 96-well plate to obtain a solution of WST-1 (2- (4-iodophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5- , 4-disulfophenyl) -2H-tetrazolium, mono-sodium salt) and

잔틴산화효소(xanthine oxidase) working solution을 첨가한 후 37℃에서 20분간 인큐베이션한 다음 마이크로플레이트 리더(microplate reader)에서 450㎚ 파장을 측정하였다After adding xanthine oxidase working solution, incubation was carried out at 37 ° C for 20 minutes, and then 450 nm wavelength was measured in a microplate reader

유사항산화 활성(SOD-like activity)은 하기의 수학식 2에 따라 계산하였다.The similar antioxidative activity (SOD-like activity) was calculated according to the following equation (2).

[수학식 2]&Quot; (2) "

유사항산화(SOD-like)저해능(%) = [[(A1-A3)-(AS-A2)]/(A1-A3)]×100
SOD-like inhibition (%) = [[(A1-A3) - (AS-A2)] / (A1-A3)

여기서 A1, A2, A3, AS는 각각 uninhibited test, blank sample, blank reagent, 그리고 sample의 측정값을 넣어 계산하였다.Here, A1, A2, A3, and AS were calculated by adding uninhibited test, blank sample, blank reagent, and sample, respectively.

그 결과를 하기 표 4 및 도 4에 나타내었다.The results are shown in Table 4 and FIG.

유사항산화(SOD-like)저해능(%)Similar antioxidant (SOD-like) inhibition (%) 실시예 1-1Example 1-1 실시예 1-2Examples 1-2 1.000 ㎎/㎖1.000 mg / ml 32.9732.97 25.7125.71 0.500 ㎎/㎖0.500 mg / ml 25.1525.15 20.1820.18 0.250 ㎎/㎖0.250 mg / ml 17.7617.76 10.5910.59 0.125 ㎎/㎖0.125 mg / ml 9.249.24 4.394.39 0.0625 ㎎/㎖0.0625 mg / ml 2.072.07 1.381.38

상기 실험예 2의 DPPH 라디칼 소거활성 결과와 마찬가지로, 유사항산화 저해능 실험결과, 실시예1-1의 추출물 샘플이 실시예 1-2의 추출물 샘플보다 더 우수한 유사항산화 저해능을 갖으며, 실시예1-1의 추출물 샘플은 농도 의존적으로 항산화 효능이 증가함을 알 수 있었다.
As in the results of the DPPH radical scavenging activity of Experimental Example 2, the results of the similar antioxidant inhibiting activity test showed that the extract sample of Example 1-1 had a similar antioxidant inhibiting ability better than the extract sample of Example 1-2, 1 showed that the antioxidant activity was increased in a concentration - dependent manner.

실험예Experimental Example 4:  4: 실시예Example 1-1 및  1-1 and 실시예Example 1-2 추출물의 농도별 세포독성( Cytotoxicity of Extracts by Concentration MTTMTT assayassay ) 평가 측정 실험) Evaluation measurement experiment

상기 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 샘플의 농도별 세포독성(MTT assay) 평가 측정 실험을 수행하였다.Tests for evaluating cytotoxicity (MTT assay) of the extract samples obtained in Examples 1-1 and 1-2 were conducted.

HS68 세포를 48-well plate에 4×104 cells/well로 분주한 다음 24시간 후에 FBS를 포함하지 않는 배지로 교환하여 24시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1-1 및 실시예 1-2에서 얻어진 추출물 샘플을 처리한 다음 24시간 후에 배지를 제거하고 PBS로 워싱(washing) 하였다. 그 후 PBS 200 ㎕를 well에 분주 후 자외선 B를 120 mJ/cm2로 조사하였으며, 자외선 B 조사 후에 PBS를 제거하고 배지로 교환한 후 추출물을 처리한 다음 24시간 후에 배지를 제거하고 MTT 용액 (MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide])을 넣고 24시간 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 배양 후 MTT 용액을 제거하고 생성된 formazan crystal을 DMSO에 녹여 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader로 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이는 노란색의 tetrazolium이 살아있는 세포의 미토콘리아 효소에 의해 보라색의 formazan으로 변환되는 것을 측정하는 분석 방법이다.HS68 cells were divided into 48-well plates at 4 × 10 4 cells / well. After 24 hours, the medium was replaced with a medium containing no FBS and cultured for 24 hours. Then, the cells of Examples 1-1 and 1-2 And 24 hours later, the medium was removed and washed with PBS. After 200 μl of PBS was dispensed into the wells, the ultraviolet B was irradiated at 120 mJ / cm 2. After the ultraviolet B irradiation, the PBS was removed and the medium was replaced with the extract. After 24 hours, the medium was removed and MTT solution MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide] was added thereto and cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 24 hours. After the incubation, the MTT solution was removed and the formazan crystal was dissolved in DMSO and the absorbance was measured at 570 nm using a Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader. This is an analytical method that measures the conversion of yellow tetrazolium to purple formazan by mitochondrial enzymes in living cells.

그 결과를 하기 표 5 및 도 5에 나타내었다.The results are shown in Table 5 and FIG.

세포생존률(%)Cell viability (%) 실시예 1-1Example 1-1 실시예 1-2Examples 1-2 0 ppm0 ppm 98.7598.75 99.5099.50 10 ppm10 ppm 103.50103.50 96.7596.75 100 ppm100 ppm 98.0098.00 101.50101.50 200 ppm200 ppm 84.7584.75 98.5098.50 300 ppm300 ppm 84.5084.50 103.25103.25

그 결과, 실시예 1-1의 추출물은 100ppm 까지는 세포가 98%까지 생존하므로, 100ppm의 농도까지는 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다. 그러나 농도가 200 내지 300 ppm으로 진해졌을때는 세포생존률이 약 84%정도로 감소하여, 세포독성이 다소 나타남을 확인하였다.
As a result, it was confirmed that the extract of Example 1-1 did not show cytotoxicity up to a concentration of 100 ppm because the cells survived up to 98% up to 100 ppm. However, when the concentration was increased to 200 to 300 ppm, the cell viability decreased to about 84%, indicating that cytotoxicity was somewhat observed.

실험예Experimental Example 5:  5: 실시예Example 1-1 추출물의  1-1 of extract RNARNA 추출 ? extraction ? RTRT -- PCRPCR 에 따른 In accordance HS68HS68 세포의  Cell 산화적Oxidative 손상에 대한 항노화 효능 분석 Analysis of anti-aging efficacy against damage

상기 실시예 1-1에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 자외선으로 유도된 HS68 세포의 산화적 손상에 대한 항노화 효능 분석을 위한 RNA추출 ? RT-PCR 실험을 수행하였다.RNA extraction for analysis of antioxidative effect against oxidative damage of HS68 cells induced by ultraviolet rays on the extract samples obtained in Example 1-1. RT-PCR experiments were performed.

Total RNA의 추출은 TRIzol Reagent(Invitrogen 사)를 사용하여 제시된 방법에 따라 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA로 부터 cDNA 합성은 M-MLV Reverse Transcriptase를 사용하여 합성하였으며, 효소들의 유전자 발현을 비교 측정하기 위하여 PCR을 진행하였다. PCR 조건은 95℃에서 5분간 진행한 후 95℃ 30초, 53-61℃ 1분, 72℃ 1분을 40 cycle 수행 후 72℃ 5분간 더 반응시켰고 각 PCR 산물들은 edithium bromide를 포함하고 있는 1.5% 아가로오스 겔(agrose gel)에서 50 V로 전기영동 한 후 Image analysis 장비를 사용하여 type 1 collagen과 type 1 procollagen 노화관련 유전자 발현을 측정하였으며, Quantity One Software를 이용하여 분석하였다. 실험에 사용된 노화관련 단백질의 특정 프라이머(primer) 서열은 하기의 표와 같다.Total RNA was extracted using TRIzol Reagent (Invitrogen) according to the method described. The cDNA synthesis from the extracted RNA was synthesized using M-MLV Reverse Transcriptase, and PCR was performed to compare the gene expression of the enzymes. PCR was carried out at 95 ° C for 5 minutes, followed by 95 cycles of 30 sec, 53-61 ° C for 1 min and 72 ° C for 1 min, followed by further reaction at 72 ° C for 5 min. Each PCR product contained 1.5 μg of edithium bromide After electrophoresis at 50 V on agarose gel, the expression of gene related to type 1 collagen and type 1 procollagen senescence was measured using Image analysis equipment and analyzed using Quantity One Software. Specific primer sequences of the aging-related proteins used in the experiment are shown in the following table.

그 결과를 하기 도 6에 도시하였다.The results are shown in Fig.

Figure pat00001
Figure pat00001

본 실험에서 HS68 세포에 자외선 B를 노출시킨 경우 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen의 mRNA 합성이 현저히 감소되었으나, 실시예 1-1에서 얻어진 추출물을 처리하였을 때 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen의 mRNA 합성이 증가한 것을 관찰할 수 있었다.In this experiment, the expression of type Ⅰ collagen and type Ⅰ procollagen in HS68 cells was markedly reduced by exposure to ultraviolet B, but when the extract obtained in Example 1-1 was treated, mRNA synthesis of type Ⅰ collagen and type Ⅰ procollagen was observed And the increase of

결과적으로, 광노화에 의한 collagen의 감소는 깊은 주름과 같은 피부노화와 직접적으로 연관이 있고 할 수 있는데, 상기 실시예 1-1의 추출물은 이러한 광노화에 따른 피부 주름 및 노화 개선효과가 있음을 확인할 수 있었다.
As a result, the decrease of collagen due to photoaging is directly related to skin aging such as deep wrinkles. The extract of Example 1-1 has the effect of improving skin wrinkles and aging due to such photoaging there was.

실험예Experimental Example 6:  6: 실시예Example 1-1 추출물의  1-1 of extract MMPMMP -1 저해활성 측정 분석-1 inhibition activity assay analysis

상기 실시예 1-1에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 MMP-1 저해활성을 측정하였다.The MMP-1 inhibitory activity of the extract sample obtained in Example 1-1 was measured.

피부세포의 결합 조직을 구성하는 성분 중 콜라겐(collagen)은 피부 건조 중량의 90% 정도를 차지하는 주요 구성 단백질이다. 따라서 콜라겐의 분해는 결합 조직의 탄력 저하와 주름 생성 등에 직접적인 영향을 미치게 된다. 체내에서 생성되는 수종의 MMPs 가운데 MMP-1은 콜라겐에 특이적으로 작용하는 단백질 분해 효소(protease)로써, MMP-1의 활성을 억제하여 콜라겐의 분해를 감소시키면, 피부 조직의 탄력을 유지하고 주름 생성을 예방할 수 있다.Collagen (collagen), which constitutes the connective tissue of skin cells, is a major constituent protein that accounts for 90% of skin dry weight. Therefore, degradation of collagen directly affects the elasticity of the connective tissues and wrinkles. Among the several kinds of MMPs produced in the body, MMP-1 is a collagen-specific protease that inhibits the activity of MMP-1 and reduces collagen degradation, Generation can be prevented.

피부섬유아세포를 2×106개/2㎖의 세포를 6-well plate에 접종하였다. 그 후 각 well에 실시예 1-1의 추출물 샘플을 세포 독성이 미치지 않았던 100ppm으로 세포에 전처리하였으며, 비교군으로서 Vitamin C도 세포독성을 나타내지 않는 0.1ppm으로 전처리하였다. 그다음 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였으며, 이때 MMP-1의 활성을 높이기 위하여 TNF-α를 10 ng/㎖의 농도로 첨가하여 추가 처리하였다. 세포의 배양액을 수거하여 실험에 사용하였으며, Gross B. E.의 방법에 따라 Matrix Metalloproteinase-1 Biotrack activity Assay Kit (Amersham Bioscience)을 이용하여 플레이트 리더(plate reader)로 450㎚에서 흡광도를 측정하였다.Dermal fibroblasts were inoculated into 6-well plates at 2 × 10 6 cells / 2 ml. Thereafter, the extract samples of Example 1-1 were pretreated with 100 ppm, which was not cytotoxic, to each well, and Vitamin C as a comparative group was also pretreated with 0.1 ppm which does not show cytotoxicity. Then, the cells were cultured in CO 2 incubator for 24 hours. TNF-α was added at a concentration of 10 ng / ml to increase the activity of MMP-1. Cell cultures were collected and used for the experiment. Absorbance was measured at 450 nm using a Matrix Metalloproteinase-1 Biotrack Activity Assay Kit (Amersham Bioscience) according to Gross BE method using a plate reader.

그 결과를 하기 표 7 및 도 7에 나타내었다.The results are shown in Table 7 and FIG.

MMP-1 수준 (ng/㎖)MMP-1 levels (ng / ml) Con(-)Con (-) TNF-αTNF-a 실시예 1-1Example 1-1 Vit. CVit. C ppmppm 14.614.6 37.537.5 35.735.7 21.421.4

실험 결과, MMP-1활성도를 높이기 위해 처리되었던 TNF-α를 단독으로 처리한 군은 MMP-1 수준이 증가한 것을 관찰할 수 있었으며, 반면 추출물을 처리한 군에서는 MMP-1 수준이 TNF-α 단독 처리군 보다 약 2.2% 감소되게 나타났으며, 이는 실시예 1-1의 추출물이 콜라겐 분해에 영향을 미치는 MMP-1의 활성을 억제함으로써 피부노화를 억제할 수 있다는 것을 확인하였다.
As a result, the MMP-1 level was increased in the group treated with TNF-α alone to increase the MMP-1 activity, whereas in the group treated with the extract, the MMP- Treated group was about 2.2% lower than that of the control group, and it was confirmed that the extract of Example 1-1 can inhibit skin aging by inhibiting the activity of MMP-1 affecting collagen degradation.

실험예Experimental Example 7:  7: 실시예Example 1-1 추출물의  1-1 of extract ElastaseElastase 저해활성 측정 분석 Analysis of inhibitory activity measurement

상기 실시예 1-1에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여 Elastase 저해활성을 측정하였다.Elastase inhibitory activity of the extract sample obtained in Example 1-1 was measured.

Elastase는 진피 내 피부탄력을 유지하는 기질 단백질인 엘라스틴(elastin)의 분해에 관련되며, 콜라겐을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이며, 또한 조직파괴의 직접적인 원인이 되고, 피부의 주름 및 탄력성 소실 등을 유발한다. 따라서, elastase 저해제는 피부의 주름을 개선하는 효과를 갖는다고 볼 수 있다.Elastase is involved in the degradation of elastin, a substrate protein that maintains skin elasticity in the dermis. It is a nonspecific hydrolytic enzyme capable of degrading collagen, and is also a direct cause of tissue destruction. It also causes wrinkles and loss of elasticity ≪ / RTI > Therefore, it can be considered that the elastase inhibitor has an effect of improving the wrinkles of the skin.

상기 추출물 샘플의 elastase 저해활성은 James의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 0.05 M Tris-HCl buffer (pH 8.2)에 기질인 0.5 mM N-succinyl-Ala-Ala-Ala-pnitroniline (Sigma)를 용해시킨 후, 추출물 샘플과 효소인 elastase (1 unit/㎖, Sigma) 용액을 첨가하였고, 이 혼합액을 25℃에서 10분간 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 415㎚에서 흡광도를 측정하였다.The elastase inhibitory activity of the extract sample was measured according to James's method. After incubation with 0.5 mM N-succinyl-Ala-Ala-Ala-pnitroniline (Sigma) in 0.05 M Tris-HCl buffer (pH 8.2), the extract samples and elastase (1 unit / Solution. The mixture was reacted at 25 ° C for 10 minutes, and the absorbance was measured at 415 nm using an ELISA reader.

Elastase 억제율에 대한 결과를 하기 표 8에 나타내었다.The results for the Elastase inhibition rate are shown in Table 8 below.

실시예 1-1
(100 ppm/ ㎖)Example 1-1
(100 ppm / ml) Vit. C
(0.1 ppm/ ㎖)Vit. C
(0.1 ppm / ml) Elastase 억제율 (%)Elastase inhibition rate (%) 21.9±4.221.9 ± 4.2 75.5±2.475.5 ± 2.4

실험예Experimental Example 8:  8: 비교예Comparative Example 1 내지 7 및  1 to 7 and 실시예Example 1의 추출물의 지표성분  1 < / RTI > HPLCHPLC 분석 analysis

상기 비교예 1 내지 7 및 실시예 1에서 얻어진 추출물 샘플에 대하여, 추출물의 지표성분으로 산수유의 지표성분인 로가닌(Loganin)을 선정하였으며, 상기 추출물 각각을 HPLC를 이용하여 로가닌의 함량을 분석하였다.Loganin, an indicator component of corn oil, was selected as an index component of the extract from the extract samples obtained in Comparative Examples 1 to 7 and Example 1. The extracts were analyzed for the content of roganin Respectively.

상기 비교예 1 내지 7 및 실시예 1에서 얻어진 추출물 샘플을 10,000ppm으로 제조 한 후, 0.45㎛ membrane filter로 여과한 다음 HPLC(waters, USA)로 분석하였다. 분석조건 컬럼(columm)은 COSMOSIL 5C-18-MS-Ⅱ(4.6㎜×250㎜, 5㎛, USA)을 사용하였고, 이동상은 0.05M NaH2PO4(A)와 아세토나이트릴(Acetonitrile)(B)를 6 대 1비율로 혼합하여 사용하였으며, 혼합용매를 선형 그라디언트(linear gradient)로 20분 동안 분석하였다. 유속은 1 ㎖/min, 주입량은 10㎕, 컬럼의 온도는 30℃, 검출기는 photo diode array detector 및 파장은 240㎚에서 분석하였다.The extract samples obtained in Comparative Examples 1 to 7 and Example 1 were prepared at 10,000 ppm, filtered through a 0.45 μm membrane filter, and analyzed by HPLC (waters, USA). Analytical conditions Columns were COSMOSIL 5C- 18- MS-II (4.6 mm × 250 mm, 5 μm, USA) and mobile phase was 0.05 M NaH 2 PO 4 (A) and acetonitrile B) were mixed at a ratio of 6: 1, and the mixed solvent was analyzed with a linear gradient for 20 minutes. The flow rate was 1 ml / min, the injection amount was 10 μl, the column temperature was 30 ° C, the detector was a photo diode array detector and the wavelength was 240 nm.

그 결과를 하기 표 9 및 도 8에 나타내었다.The results are shown in Table 9 and FIG.

비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 비교예 4Comparative Example 4 비교예 5Comparative Example 5 비교예 6Comparative Example 6 비교예 7Comparative Example 7 비교예 8Comparative Example 8 실시예 1Example 1 10,000 ppm10,000 ppm 00 6.96.9 108.3108.3 00 11.211.2 308.2308.2 00 9.79.7 167167

상기 표 9의 결과를 통하여, 비교예 6의 추출물이, 지표성분 로가닌의 함량이 가장 높게 측정되었으며, 실시예 1의 추출물의 경우, 비교예 6 다음으로 지표성분이 높게 측정되었다. 이는 산수유의 함량이 많을수록 지표성분이 높게 측정된 것이다. 상기의 결과를 이용하여, 적정 범위의 추출물을 화장료 조성물을 제조하기 위한 지표로 활용할 수 있다.
From the results of Table 9, it can be seen that the extract of Comparative Example 6 has the highest content of ginseng as an indicator component, and that of the extract of Example 1 is higher than that of Comparative Example 6. This means that the higher the content of acidified milk, the higher the index component. Using the above results, an appropriate range of extracts can be utilized as an index for producing a cosmetic composition.

Claims (7)

하기의 단계를 포함하는, 항산화 및 항노화 활성을 갖는 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물의 제조방법:
황칠나무, 산수유 및 구기자 건조 분쇄물을 포함하는 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 100bar 내지 250bar의 압력 하에서 초임계 이산화탄소로 1차 초임계 추출하는 단계(단계 1);
상기 1차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 1의 추출 압력에서부터 300bar 내지 450bar의 압력까지 압력을 증가시키면서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 2차 초임계 추출하는 단계(단계 2); 및
상기 2차 초임계 추출 진행된 원료를 35℃ 내지 60℃의 온도 및 상기 단계 2의 최종 압력 하에서 초임계 이산화탄소 및 보조용매로 3차 초임계 추출하는 단계(단계 3).
A method for preparing a mixture of Hwangchu-wood, corn oil and Gugija having antioxidative and anti-aging activity, comprising the steps of:
(Step 1) with a supercritical carbon dioxide supercritical carbon dioxide at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and a pressure of 100 bar to 250 bar;
Subjecting the raw material subjected to the first supercritical extraction to a second supercritical extraction with supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and an extraction pressure of step 1 to a pressure of 300 bar to 450 bar 2); And
(Step 3) a third supercritical extraction of the raw material subjected to the second supercritical extraction with a supercritical carbon dioxide and an auxiliary solvent at a temperature of 35 ° C to 60 ° C and a final pressure of the step 2.
제1항에 있어서, 상기 단계 3 이후에 초임계 추출된 추출물을 여과하여 상층액을 회수하는 단계(단계 4)를 추가로 포함하는 제조방법.
The method according to claim 1, further comprising the step of filtering the supercritically extracted extract after step 3 to recover the supernatant (step 4).
제1항에 있어서, 상기 단계 1은 황칠나무 건조 분쇄물 : 산수유 건조 분쇄물 : 구기자 건조 분쇄물이 1~2 : 1~3 : 1의 중량비를 갖는 것인 제조방법.
[2] The method according to claim 1, wherein the step 1 has a weight ratio of dried Hwangbok tree dried crumbs: crude oil dried crumbs: dried crumbs at a weight ratio of 1: 2: 1 to 3: 1.
제1항에 있어서, 상기 보조용매는 에탄올을 포함하는 것인 제조방법.
The method of claim 1, wherein the co-solvent comprises ethanol.
제1항에 있어서, 상기 단계 2 내지 단계 3은 보조용매가 초임계 이산화탄소 및 보조용매 혼합물의 1 내지 30 부피%로 포함되는 것인 제조방법.
The process according to claim 1, wherein said step 2 to step 3 comprises the auxiliary solvent in an amount of 1 to 30% by volume of the mixture of supercritical carbon dioxide and the auxiliary solvent.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물.
A cosmetic composition having an antioxidative and anti-aging effect containing, as an active ingredient, a mixed extract of yellowtail, Japanese mackerel and gugija produced by the method of any one of claims 1 to 5.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 황칠나무, 산수유 및 구기자 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 및 노화 개선용 화장료 조성물.
6. A cosmetic composition for improving skin wrinkles and aging, which comprises the extract of Hwangchujang, Sansui and Gugija, which is prepared by the method of any one of claims 1 to 5, as an active ingredient.
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