KR20140130443A - 절두된 리소좀 산 리파제 - Google Patents

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KR20140130443A
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에린 레내 트리스
넬슨 시아
진안 시아
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시나게바 바이오파르마, 코포레이션
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Abstract

N 말단 절두를 포함하는 재조합 인간 리소좀 산 리파제(rhLAL), 절두된 재조합 인간 LAL(TLAL), TLAL을 포함하는 단리된 혼합물 및 rhLAL의 적어도 하나의 다른 형태의 조성물이 개시되어 있다. LAL 단백질의 혼합물로부터 TLAL을 정제하는 방법, TLAL을 포함하는 약제학적 조성물 및 TLAL을 제조하는 방법이 추가로 개시되어 있다.

Description

절두된 리소좀 산 리파제{TRUNCATED LYSOSOMAL ACID LIPASE}
본원은 2012년 3월 2일자에 출원된 미국 가출원 제61/605,850호의 이익을 주장한다. 상기 출원의 전체 교시내용은 본 명세서에 참조문헌으로 포함된다.
리소좀 산 리파제(lysosomal acid lipase: LAL)는 저밀도 지단백(LDL) 입자 수용체 매개 엔도사이토시스를 통해 리소좀으로 내재화되는 콜레스테릴 에스터 또는 트라이글라이세라이드를 가수분해한다. LAL 결함은 이환 개체의 중요 조직에서 콜레스테릴 에스터(CE) 및 트라이글라이세라이드(TG)의 과도한 축적을 특징으로 하는 LAL 결핍증이라 알려진 병증을 발생시킨다. LAL 결핍증의 중증 형태인 월만병은 통상적으로 중요 장기에서 지질의 과도한 축적과 관련되는 합병증으로 인해 1살 전에 사망한다. 나중 발병하는 LAL 결핍증인 콜레스테릴 에스터 저장 질환(CESD)은 다양한 중증도로 삶의 여러 단계에서 확인될 수 있다.
인간 LAL(hLAL, EC 3.1.1.13)은 10번 염색체에 국재화된(localized) 9개의 코딩 엑손을 포함하는 LIPA(NCBI 수탁 번호 U08464.1)라 알려진 유전자에 의해 코딩된다. 네이티브 신호 펩타이드를 갖는 비가공된 전장 인간 LAL은 399개의 아미노산 잔기를 포함한다. 인간 LIPA의 대립유전자 변이가 규명되었고, WD 및 CESD에 연결된 미스센스뿐만 아니라, 논센스 및 결실 돌연변이가 확인되었다(예를 들면, 문헌[Lugowska et al., Lysosomal Acid Lipase Deficiency: Wolman Disease and Cholesteryl Ester Storage Disease, Lysosomal Storage Diseases (2012) Vol. 10:1-8]을 참조한다].
LAL 단백질의 분자 및 생화학 분석은 인간 간에서 인간 LAL의 2가지 형태가 존재할 수 있다는 것을 제시한다. 쳔연 인간 LAL의 더 짧은 형태(41kDa)가 인간 간 추출물에서 전장 hLAL(56kDa)과 함께 검출되었다(Ameis, D. et al., Eur. J. Biochem. 219:905-914, 1994). 그러나, 실험실내 LAL의 짧은 형태를 발현시키고 단리하고자 하는 후속 시도는 LAL의 번역후 변형과 관련된 알려지지 않은 생물학적 기전으로 인해 계속해서 실패하였다(츠젠커(Zschenker) 등의 문헌(2004) 참조). 츠젠커 등(2004)은 LAL의 N 말단 구역이 단백질 폴딩, 안정성, 분비 및 효소 활성에 필수적이라고 결론지었다.
LAL 결핍증의 치료를 위한 효소 대체 치료법이 현재 실행 가능한 치료로서 조사되고 있다. 따라서, 가능하게는 투약 양 및 빈도를 최소화하고 LAL 결핍증을 앓고 있는 환자의 삶의 질을 증대시키는 재조합 인간 LAL의 다양한 활성 형태를 제공하고자 하는 수요가 존재한다.
본 발명은 rhLAL의 N 말단 구역이 단백질의 적절한 발현 및 가공처리에는 필요하지만, 효소 활성에는 필요하지 않다는 발견에 기초한다. 전장 rhLAL은 번역후 변형(즉, 단백질분해 개열)을 겪어 N 말단 부분이 미싱된 절두된 hLAL 단백질을 생성하는 것으로 보인다. C 말단 부분의 323-371개의 아미노산 잔기를 갖는 rhLAL의 N 말단 절두된 형태(이하, "TLAL")가 전장 단백질과 비교하여 동등하거나 이보다 높은 효소 활성을 나타낸다는 것을 예상치 못하게 놀랍게 발견하였다.
재조합 인간 리소좀 산 리파제(recombinant human lysosomal acid lipase: rhLAL)가 포유동물 세포에서 제조될 때, 세포 배양 배지는 예상된 크기(SDS 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동에 의해 56kDa의 겉보기 분자량)의 LAL 단백질뿐만 아니라 또한 더 작은 분자량(절두된) 형태(SDS-PAGE에서 41kDa의 겉보기 분자량)도 포함한다. 후속하는 분석은 이 절두된 rhLAL이 LAL의 C 말단 부분의 324개의 아미노산 잔기를 포함하고 56kDa의 LAL 단백질의 단백질분해에 의해 발생한다는 것을 나타낸다. TLAL은 50개, 60개 또는 70개까지의 아미노산 잔기의 N 말단 절두를 갖는다.
포유동물 세포주에서의 41kDa의 TLAL의 직접 발현은 검출 가능한 범위를 넘게 단백질을 제조하지 않고, 이는 N 말단 부분이 미싱된 발생기 LAL 단백질이 소포체(ER)에서 신속히 분해되고, N 말단 서열의 내포는 rhLAL이 분비 경로로 진입하게 한다는 것을 제시한다. 그러나, 전장 rhLAL의 단백질분해 개열에 의한 절두된 형태의 rhLAL(TLAL)의 제조에 의해, 41kDa의 재조합 TLAL 단백질이 전장 56kDa의 rhLAL에서 관찰되는 것보다 적어도 50% 또는 심지어 이보다 높은 LAL 활성을 보유한다는 발견에 이르렀다.
따라서, 본 명세서에 기재된 TLAL은 전장 LAL로부터의 N 말단 절두를 포함하고 효소 활성을 보유하는 재조합 단백질이다. 몇몇 양태에서, TLAL은 전장 rhLAL에서 관찰되는 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%의 효소 활성을 나타낸다. 몇몇 양태에서, TLAL은 전장 LAL과 동등하거나 이보다 높은 효소 활성 수치를 갖는다. 본 발명은 단리된 TLAL, TLAL을 포함하는 단리된 rhLAL의 혼합물 및 rhLAL의 적어도 하나의 다른 형태(예를 들면, 전장 rhLAL 또는 다른 TLAL)를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 TLAL을 포함하는 단리된 혼합물 및 rhLAL의 적어도 하나의 다른 형태로부터 TLAL을 정제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 rhLAL 단백질의 단리된 혼합물로부터 TLAL을 정제하는 방법을 포함한다. 본 발명은 TLAL 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 전장 rhLAL의 N 말단 절두에 의해 LAL 활성을 증가시키는 방법 및 포유동물 세포 배양물에서 절두된 rhLAL을 제조하는 방법이 또한 포함된다.
일 양태에서, 본 발명은 단리된 재조합 절두된 리소좀 산 리파제(truncated lysosomal acid lipase: TLAL)를 포함하는 조성물을 제공한다. 일 실시양태에서, TLAL은 서열 번호 10 내지 58에 기재된 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는다. 다른 실시양태에서, TLAL은 서열 번호 10 내지 58로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시양태에서, TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시양태에서, TLAL은 전장 재조합 인간 LAL(rhLAL)의 효소 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150% 또는 200%인 효소 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, TLAL은 전장 rhLAL과 적어도 동등하거나 이보다 높은 효소 활성을 갖는다.
다른 양태에서, 본 발명은 단리된 재조합 TLAL을 포함하는 조성물을 제공하고, TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 조성물은 포유동물 배양 배지를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 단리된 재조합 TLAL을 포함하는 조성물을 제공하고, TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 rhLAL의 단리된 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하고, 상기 혼합물은 재조합 TLAL의 적어도 하나의 형태를 포함한다. 일 실시양태에서, 상기 혼합물은 전장 rhLAL을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 재조합 TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 재조합 TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 단리된 재조합 인간 LAL을 포함하는 조성물을 제공하고, 상기 LAL은 제2 모이어티를 포함하는 융합 단백질이다. 일 실시양태에서, 제2 모이어티는 LAL의 N 말단에, LAL의 C 말단에 또는 LAL의 Pro31과 Gly77 사이의 임의의 아미노산 잔기 위치에 내부적으로 융합된다. 다른 실시양태에서, 제2 모이어티는 LAL에 재조합으로 융합된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 모이어티는 링커를 통해 rhLAL에 융합된다.
다른 양태에서, 본 발명은 제1항의 조성물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일 실시양태에서, 약제학적 조성물은 완충제를 추가로 포함한다. 일 실시양태에서, 약제학적 조성물은 부형제를 추가로 포함한다. 일 실시양태에서, 약제학적 조성물은 염을 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 전장 rhLAL 및 재조합 TLAL을 포함하는 단리된 혼합물로부터 rhLAL을 정제하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 혼합물로부터 재조합 전장 rhLAL 또는 TLAL을 정제하는 단계를 포함한다. 일 실시양태에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 선택적 침전, 결정화 및 접선 유동 여과로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 방법을 이용하여 정제를 수행한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자에서 LAL 결핍증을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 LAL 결핍증을 치료하기 위한 유효량의 본 발명의 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시양태에서, LAL 결핍증은 월만병(Wolman disease: WD)이다. 다른 실시양태에서, LAL 결핍증은 콜레스티릴 에스터 저장 질환(cholestryl ester storage disease: CESD)이다. 다른 실시양태에서, TLAL 또는 rhLAL을 정맥내로 투여한다. 다른 실시양태에서, TLAL 또는 rhLAL을 펌프를 통해 투여한다. 다른 실시양태에서, 양은 체중 1㎏당 0.1 내지 20㎎ 범위의 TLAL 또는 rhLAL이다.
도 1a 내지 도 1j는 비가공된 전장 LAL(서열 번호 1) 및 다양한 길이의 TLAL 단백질(서열 번호 2 내지 58)의 아미노산 서열을 도시한 것이다.
도 2는 펩타이드 N-글라이코시다제 F-아미다제(PNGase F)에 의한 rhLAL 분해의 SDS-PAGE 분석을 도시한 것이다. 레인 1, 분자량 마커; 레인 2, 오직 PNGase F; 레인 3, WO2011/133960에 기재된 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL 단백질(로딩 농도, 4㎍); 레인 4, PNGase F에 의해 분해된 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL(로딩 농도, 4㎍); 레인 5, 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL(로딩 농도, 8㎍); 레인 6, PNGase F에 의해 비분해된 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL(로딩 농도, 4㎍); 레인 7, PNGase F에 의해 분해된 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL(로딩 농도, 4㎍); 및 레인 8, PNGase F에 의해 비분해된 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL(로딩 농도, 8㎍). "SGG..."는 서열 번호 1의 22-399번 위치에 상응하는 N 말단 아미노산 서열이다. "KGP..."는 서열 번호 1의 76-399개의 N 말단 아미노산 서열(즉, 서열 번호 11)이다.
도 3은 PNGase에 의해 처리된 rhLAL 단백질의 웨스턴 블롯의 화학발광의 이미지를 도시한 것이다. 레인 1, 오직 PNGase F 레인 2, 비처리된 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL(4㎍); 레인 3, PNGase F에 의해 처리된 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL(4㎍); 레인 4, 비처리된 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL(4㎍); 및 레인 5, PNGase F에 의해 처리된 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL(4㎍).
도 4a는 HEK 293 세포에서 일시적인 발현 및 정제 단계 다이어그램을 도시한 것이다. 도 4b는 pTT22-LAL로 형질감염된 HEK 293 세포에서 제조된 rhLAL에 대한 크기 배제 크로마토그래피(SEC)의 S200 크로마토그램을 도시한 것이다.
도 5는 동시항온처리된 다양한 농도의 rhLAL 단백질(HEK 제조된 LAL, 왼쪽 막대; 닭 제조된 LAL, 오른쪽 막대)을 사용하여 세포 이하 LAL 활성(단위/세포)에서 측정된 인간 대식세포(NR8383) 섭취를 도시한 것이다.
도 6은 엔테로키나제(ek) 개열 자리("DDDDK"; 서열 번호 64) 및 FLAG 친화도 서열 둘 다를 포함하는 링커의 핵산 서열을 도시한 것이다.
도 7은 FLAG 친화도 서열 및 엔테로키나제(ek) 개열 자리의 아미노산 서열(서열 번호 60)을 도시한 것이다.
도 8a는 FLAG 친화도 및 ek 개열 자리(밑줄)(서열 번호 61)를 포함하는 rhLAL(전장, 비가공된 LAL)의 아미노산 서열을 도시한 것이다. 소 엔테로키나제 C 말단을 DDDDK(서열 번호 64)로 개열시켜, 서열 번호 10의 TLAL-G77 단백질을 제조한다. 도 8b는 ek 분해 시 서열 번호 11의 TLAL-K76 단백질을 제조하도록 설계된 FLAG 친화도 및 ek 개열 자리(밑줄)(서열 번호 68)를 포함하는 rhLAL(전장, 비가공된 LAL)의 아미노산 서열을 도시한 것이다.
도 9는 LAL 코딩 서열(서열 번호 62 및 63)로 ek 인식 자리를 도입하도록 설계된 정방향 및 역방향 프라이머를 도시한 것이다. 프라이머는 FLAG 친화도/ek 개열 서열을 포함한다.
도 10은 ekLAL 코딩 서열을 포함하는 pTT22로부터 작제된 벡터의 맵을 예시한 것이다.
도 11a는 쿠마시 블루로 염색된 SDS-폴리아크릴아마이드 겔의 이미지이다. ekLAL(서열 번호 61)은 pTT22-EK-gpLAL로 형질감염된 HEK293 세포에서 제조되고 실시예 2에 기재된 방법에 따라 정제된다. ekLAL-HEK의 단백질분해적 분해 및 분해 생성물의 후속 정제를 실시예 3에 기재된 바대로 수행한다. 레인 1, 분자량 마커; 레인 2, 2㎍의 α-FLAG 컬럼 시작 샘플; 레인 3, 2㎍의 α-FLAG 통과("TLAL-HEK", TLAL-G77에 상응하는 단백질분해적 분해 생성물); 레인 4, 12㎕의 α-FLAG 세척; 및 레인 5, 2㎍의 α-FLAG 분획("ekLAL-HEK", 비개열된 생성물). 도 11b는 SDS-폴리아크릴아마이드 겔의 이미지이다. MW: 분자 마커; 레인 1, 형질전환 닭에서 제조된 0.5㎍의 전장 rhLAL; 레인 2, HEK293 세포에서 제조된 0.5㎍의 전장 rhLAL; 레인 3, HEK293 세포에서 제조된 0.5㎍의 서열 번호 11의 TLAL-K76.
도 12는 TLAL-G77(서열 번호 10) 및 HEK293 세포에서 제조된 ekLAL(서열 번호 61)의 리파제 활성 수치를 도시한 막대 그래프이다. ekLAL-HEK 단백질을 순화 배지로부터 정제하고 후속 분석을 위해 동결시킨다. "비변경된" 샘플을 양성 대조군을 해동시킨 직후 분석한다. "비분해된" 샘플을 엔테로키나제의 부재 하에 실온에서 6일 동안 항온처리한다. ekLAL를 실온에서 6일 동안 엔테로키나제로 분해시킨다. 처리되었지만 비개열된 ekLAL("분해된 ekLAL-HEK") 및 개열된 생성물(서열 번호 10의 TLAL-G77에 상응하는 "분해된 TLAL-HEK")을 단리하고 친화도 크로마토그래피로 정제하고 효소 활성 검정으로 처리한다.
도 13은 다양한 단백질 농도에서 재조합 LAL의 효소 활성 수치를 도시한 그래프이다.
도 14는 형질전환 조류에서 제조된 전장 rhLAL(LAL-EW) 및 유사한 ek 처리되는 HEK293(LAL-HEK)과 비교한 TLAL-K76(서열 번호 11)의 효소 활성 수치를 도시한 것이다.
본 발명은 단리된 절두된 형태의 재조합 인간 LAL("TLAL")의 그룹에 관한 것이다. 몇몇 TLAL 단백질은 효소 활성을 보유하고 콜레스테릴 에스터(CE) 및 트라이글라이세라이드(TG)를 가수분해할 수 있다. 본 명세서에 기재된 조성물은 하나 이상의 TLAL 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함한다. 본 명세서에 "단리된"이라 칭하는 단백질 또는 폴리펩타이드는, 세포에 존재하는 상태 외의 상태로 정제되고, 본 명세서에 기재된 방법, 유사한 방법 또는 다른 적합한 방법에 의해 얻은 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함하고, 또한 실질적으로 순수한 단백질 또는 폴리펩타이드, 화학 합성 또는 생물학적 방법과 화학 방법의 조합에 의해 제조된 단백질 또는 폴리펩타이드, 및 단리되는 재조합 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드이다. 추가로, 본 명세서에 "재조합"이라 칭하는 단백질 또는 폴리펩타이드는 재조합 핵산의 발현에 의해 제조된다.
재조합 인간 LAL(rhLAL)의 아미노산 잔기의 위치는 비가공된 rhLAL에서 N 말단 Met1로부터 C 말단 Gln399로 숫자가 매겨지는 것으로 말해진다. 1 내지 399의 상응하는 아미노산 잔기 위치가 서열 번호 1(도 1)에 기재되어 있다. 본 명세서에 기재된 신호 펩타이드 서열이 네이티브 인간 신호 펩타이드 서열(예를 들면, 서열 번호 1)을 갖는 rhLAL의 N 말단에서의 임의의 제1의 21개 내지 27개의 아미노산 잔기인 것으로 이해된다. 따라서, 비가공된 전장 재조합 인간 리소좀 산 리파제(rhLAL)는 도 1에 도시된 바대로 N 말단에서 네이티브 신호 펩타이드 서열을 포함하는 399개 길이의 아미노산 잔기(서열 번호 1)이다. 신호 펩타이드의 개열 후, 가공된 전장 rhLAL은 399개 길이의 아미노산 잔기의 rhLAL로부터 개열되는 신호 펩타이드 서열의 길이에 따라 372개 내지 378개 길이의 아미노산 잔기일 수 있다. 따라서, 신호 펩타이드가 없는 전장 인간 rhLAL은 378개의 아미노산 잔기(즉, Ser22로부터 Gln399), 377개의 아미노산 잔기(즉, Gly23으로부터 Gln399), 376개의 아미노산 잔기(즉, Gly24로부터 Gln399), 375개의 아미노산 잔기(즉, Lys25로부터 Gln399), 374개의 아미노산 잔기(즉, Leu26으로부터 Gln399), 373개의 아미노산 잔기(즉, Thr27로부터 Gln399) 또는 372개의 아미노산 잔기(즉, Ala28로부터 Gln399)를 갖는 rhLAL을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "전장 rhLAL"은 상기 기재된 비가공된 및 가공된 rhLAL 둘 다를 포함한다.
TLAL 단백질
본 명세서에 기재된 모든 절두된 형태의 재조합 LAL("TLAL")은 전장 인간 LAL("hLAL")의 부분을 포함한다.
일 실시양태에서, 본 명세서에 기재된 TLAL은 서열 번호 2 내지 58에 기재된 315개 내지 371개 길이의 아미노산 잔기를 갖는 임의의 하나의 TLAL일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, TLAL은 hLAL의 C 말단 구역의 아미노산 서열(서열 번호 10 내지 58)을 갖는 323개 내지 371개 길이의 아미노산 잔기일 수 있다.
일 실시양태에서, TLAL은 hLAL의 C 말단 323개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 323개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Gly77에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-G77(서열 번호 10)이라 칭한다.
다른 실시양태에서, TLAL은 hLAL의 C 말단 324개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 324개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Lys76에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-K76(서열 번호 11)이라 칭한다.
본 명세서에 기재된 다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 325개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 325 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Asp75에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-D75(서열 번호 12)라 칭한다.
본 명세서에 기재된 다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 315개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 315개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Gln85에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-Q85(서열 번호 2)이라 칭한다.
본 명세서에 기재된 다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 316개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 316개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Leu84에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-L84(서열 번호 3)라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 317개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 317개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Phe83에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-F83(서열 번호 4)이라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 318개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 318개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Val82에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-V82(서열 번호 5)라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 319개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 319개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Val81에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-V81(서열 번호 6)이라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 320개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 320개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Pro80에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-P80(서열 번호 7)이라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 321개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 321개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Lys79에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-K79(서열 번호 8)라 칭한다.
다른 재조합 TLAL은 hLAL의 C 말단 322개의 아미노산 잔기를 포함하고, 다른 실시양태에서, 이 322개의 아미노산 잔기로 이루어진다. rhLAL의 이 절두된 형태의 N 말단은 hLAL의 Pro78에 상응한다. 이 절두된 형태는 TLAL-P78(서열 번호 9)이라 칭한다.
본 명세서에 기재된 TLAL 단백질은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 또는 20개까지의 아미노산 잔기의 C 말단에서 절두를 포함할 수 있다.
TLAL 을 포함하는 단리된 혼합물
본 발명은 TLAL 및 재조합 인간 LAL(rhLAL)의 적어도 하나 이상의 형태를 포함하는 재조합 리소좀 산 리파제 단백질의 단리된 혼합물의 조성물을 포함한다. 예를 들면, LAL 단백질의 혼합물은 TLAL의 적어도 하나의 형태 및 전장 LAL 단백질의 적어도 하나의 형태를 포함할 수 있다. LAL 단백질의 혼합물은 본 명세서에 기재된 TLAL 단백질의 2개 이상의 상이한 형태를 포함하는 혼합물일 수 있다.
이론에 구속되고자 의도하지 않고, 몇몇 TLAL이 번역후 변형(즉, 세포내 단백질 성숙 과정)에 의해 전장 rhLAL을 발현하는 포유동물 세포 배양물에서 제조될 수 있다고 생각된다. 일 실시양태에서, TLAL 및 전장 hLAL은 포유동물 세포 배양물로부터 제조된 재조합 단백질이다. 전장 rhLAL 및 TLAL을 포함하는 혼합물은 전장 rhLAL(후에 세포내 단백질분해 개열을 겪음)을 발현하는 포유동물 세포 배양물로부터 얻어질 수 있다. 따라서, 본 발명은 전장 hLAL 및 TLAL을 포함하는 단리된 혼합물을 고려한다. 상기 혼합물은 전장 LAL을 발현하는 포유동물 세포 배양물의 순화 배지로부터 얻어지고, LAL 단백질의 다양한 형태가 추가로 단리되고 정제될 수 있는 정제 단계로 처리될 수 있다. 특정한 일 실시양태에서, TLAL은 상기 혼합물에 포함된 rhLAL 단백질의 다른 형태, 예를 들면, 전장 rhLAL 단백질로부터 정제된다. 또 다른 실시양태에서, 전장 LAL 단백질은 혼합물에서 TLAL로부터 정제된다.
일 실시양태에서, 단리된 혼합물은 서열 번호 2 내지 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 TLAL의 적어도 하나의 형태 및 전장 rhLAL을 포함할 수 있다. 특정한 일 실시양태에서, 단리된 혼합물은 TLAL-D75(서열 번호 12), TLAL-K76(서열 번호 13) 또는 TLAL-G77(서열 번호 14) 및 본 명세서에 기재된 임의의 전장 rhLAL 단백질을 포함한다. 비가공된 rhLAL 단백질로부터 개열된 신호 펩타이드 서열의 길이에 따라, 상기 혼합물에 존재하는 전장 인간 LAL은 378개 길이의 아미노산 잔기(즉, Ser22로부터 Gln399), 377개 길이의 아미노산 잔기(즉, Gly23으로부터 Gln399), 376개 길이의 아미노산 잔기(즉, Gly24로부터 Gln399), 375개 길이의 아미노산 잔기(즉, Lys25로부터 Gln399), 374개 길이의 아미노산 잔기(즉, Leu26으로부터 Gln399), 373개 길이의 아미노산 잔기(즉, Thr27로부터 Gln399) 또는 372개 길이의 아미노산 잔기(즉, Ala28로부터 Gln399)일 수 있다.
다른 실시양태에서, TLAL을 포함하는 단리된 혼합물은 TLAL의 적어도 2개의 형태를 포함할 수 있다. 특정한 일 실시양태에서, TLAL을 포함하는 단리된 혼합물은 TLAL-D75(서열 번호 12), TLAL-K76(서열 번호 13) 및 TLAL-G77(서열 번호 14)로 이루어진 군으로부터 선택되는 TLAL의 적어도 2개의 형태를 포함할 수 있다.
LAL 융합 단백질
본 발명은 인간 LAL에 자연적으로 존재하지 않는 제2 모이어티에 연결된, 제1 모이어티로서의 rhLAL(즉, 전장 LAL 또는 TLAL)을 포함하는, 융합 단백질을 추가로 포함한다. 제2 모이어티는 rhLAL의 N 말단에, rhLAL의 C 말단에 또는 rhLAL의 Pro31 내지 Ala90의 임의의 아미노산 잔기 위치(서열 번호 1)에 내부적으로 융합된 아미노산 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 본 발명에서 고려되는 것처럼, 제2 모이어티는 당해 분야에 공지된 링커 및/또는 스페이서를 통해 재조합으로 또는 화학적으로(예를 들면, 공유로) 융합될 수 있다.
일 실시양태에서, 융합 단백질은, 제1 모이어티 및 제2 모이어티를 연결하는 링커 및/또는 스페이서와 같이 또는 이들 없이, TLAL 또는 전장 rhLAL 및 친화도 리간드를 포함하는 제2 모이어티를 포함한다. 친화도 리간드를 포함하는 융합 단백질은 숙주 세포에서 제조될 수 있고, 친화도 리간드에 결합하는 적합한 친화도 매트릭스를 사용하여 세포 용해물 또는 배양 배지로부터 정제될 수 있다. 이러한 친화도 리간드의 비제한적인 예는 리간드 서열(예를 들면, 도 8: 서열 번호 61)을 포함하는 rhLAL 단백질을 단리하기 위해 사용될 수 있는 도 7(서열 번호 60)에 도시된 FLAG 친화도 서열이다. 융합 단백질로 도입되는 친화도 리간드의 사용에 대해, 문헌[Ch. 16, sec. III in Current Protocols in Molecular Biology , Ausubel et al., eds., 2012년 1월 11일에 최종 개정]을 참조한다.
일 실시양태에서, 제2 모이어티는, 제1 모이어티 및 제2 모이어티를 연결하는 링커 및/또는 스페이서와 같이 또는 이들 없이, 단백질분해 개열 서열을 포함한다. 단백질분해 개열 서열은 rhLAL의 Pro31 내지 Ala90(서열 번호 1), 바람직하게는 rhLAL의 Pro31 내지 Gly77의 임의의 원하는 위치에 도입될 수 있다. 내부 개열 자리를 갖는 전장 LAL이 제조될 때, 실험실내 단백질분해 반응을 수행할 수 있어서, 원하는 자리에서 rhLAL의 개열이 허용된다. 특정한 일 실시양태에서, 개열 서열은 엔테로키나제("ek") 링커(즉, Asp-Asp-Asp-Asp-Lys; 서열 번호 64)이다. 엔테로키나제는 이의 개열 자리 DDDDK(서열 번호 64)에서 라이신(K) 잔기 후 단백질을 개열시키는 프로테아제이다.
몇몇 양태에서, 융합 단백질은 특이적 세포, 조직 또는 장기에 단백질을 표적화하도록 작용하는 하나 이상의 제2 모이어티를 포함하는 TLAL 단백질 또는 전장 rhLAL일 수 있다. 일 실시양태에서, 융합 단백질은 TLAL 및 수용체 리간드를 포함하는 제2 모이어티를 포함한다. 표적화 모이어티는 표적 세포에 존재하는 세포 표면 수용체에 결합할 수 있고, 이 표적 세포에서 엔도사이토시스를 통해 내재화된다. 표적 세포로 TLAL을 지시하는 데 유용한 표적화 모이어티는 p97, 인슐린양 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, 트랜스페린 수용체 리간드, RAP, ApoB, ApoE, 아프로티닌, 지단백 리파제, 저밀도 지단백 수용체 관련 단백질 1(LRP-1) 및 이들의 변이체, 동족체 또는 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이 표적화 모이어티는 신속한 내재화를 증가시키고, 약동학을 증대시키고, 특이적 세포, 조직 또는 장기로의 융합 단백질의 적절한 표적화를 지시할 수 있다.
다른 실시양태에서, 융합 단백질은 TLAL 또는 전장 LAL, 및 TLAL의 혈청 반감기를 조절하도록 기능하는 제2 모이어티를 포함한다. 예를 들면, TLAL 또는 전장 LAL 단백질의 폴리알킬렌 옥사이드 접합체는 또한 본 발명의 일부이다. 일 실시양태에서, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)은 링커, 예컨대 숙신이미딜 카보네이트, 티아졸리딘 티온, 유레탄 또는 아마이드 염기 링커를 통해 하나 이상의 자리에서, 예를 들면 라이신 잔기의 하나 이상의 엡실론 아미노기를 통해 TLAL에 접합된다. 재조합 기술에 의해 LAL 단백질에 융합될 수 있는 제2 모이어티의 비제한적인 예는 인간 면역글로불린, 인간 혈청 알부민(HSA), 트랜스페린, α2-마크로글로불린의 Fc 구역 및 이들의 변이체, 동족체 또는 단편을 포함한다.
대립유전자 변이체 및 변형
hLAL의 대립유전자 변이체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 TLAL 단백질은 또한 본 발명의 일부이다. hLAL에 정확히 상응하지 않는 아미노산 서열을 갖지만, 1개 이상(예를 들면, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 보존적 아미노산 치환을 갖는 TLAL 단백질은 또한 본 발명에 포함된다. 보존적 아미노산 치환은, 이러한 치환이 TLAL의 효소 활성을 허용하는 한, 아미노산 측쇄의 산성(Asp, Glu, Asn, Gln), 염기성(His, Lys, Arg), 극성(Ser, Cys, Thr, Met), 방향족(Phe, Tyr, Trp) 또는 소수성(Gly, Ala, Val, Leu, Ile) 특성의 보유를 허용하는 이 지정된 기 내에서 이루어지는 치환이다.
본 발명은 또한 효소 활성을 보유하는 변형 rhLAL 및 변형 TLAL을 고려한다. 일 실시양태에서, 변형 rhLAL은 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 변형 TLAL 단백질은 서열 번호 2 내지 58에 기재된 임의의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
효소 활성
본 발명의 일 실시양태에서, 단리된 재조합 TLAL은 리소좀 산 리파제(LAL)의 효소 활성을 갖는다. 다른 실시양태에서, LAL의 효소 활성은 콜레스테릴 에스터의 가수분해 및 트라이글라이세라이드의 가수분해로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 효소 활성을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. LAL의 효소 활성을 결정하는 검정은 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들면, WO/2011/133960의 실시예 12 및 문헌[Yan et al. (2006), American Journal of Pathology, 169(3):916-926(이의 전체 내용은 본 명세서에 참조문헌으로 포함됨)]에 기재된 형광원 기질 4-메틸움벨리페릴-올레에이트 검정을 이용하여 LAL 효소 활성을 결정할 수 있다. WO/2011/133960(이의 전체 내용은 본 명세서에 참조문헌으로 포함됨)의 실시예 13에 기재된 검정에 따라 대식세포 및 섬유아세포를 사용하여 rhLAL의 세포 흡수를 결정할 수 있다. 더구나, WO/2011/133960의 실시예 14 및 문헌[Kuriyama et al. (1990), Journal of Lipid Research, vol. 31, p 1605-1611; Nakagawa et al. (1995), Journal of Lipid Research, vol. 36, p 2212-2218; 및 Yoshida and Kuriyama (1990), Laboratory Animal Science, vol. 40, p 486-489(이들 각각의 전체 내용은 본 명세서에 참조문헌으로 포함됨)]에 기재된 검정에 따라 LAL 결핍 요시다(Yoshida) 래트(rat)에서 rhLAL의 효소 활성을 생체내 평가할 수 있다.
본 발명의 TLAL 단백질은 전장 rhLAL에서 관찰된 활성의 정상 수치의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%, 105%, 110%, 115%, 120%, 125%, 130%, 135%, 140%, 145%, 150%, 155%, 160%, 165%, 170%, 175%, 180%, 185%, 190%, 195% 또는 심지어 200%인 효소 수치 또는 활성을 갖는다. 본 명세서에 사용되는 "정상 수치"는 상응하는 야생형(즉, LAL+/LAL+) 세포에서 전장 hLAL의 LAL 활성의 수치 또는 유사한 조건으로 처리되거나 이러한 조건에 존재하는 비변형 전장 재조합 인간 LAL의 LAL 활성의 수치를 의미한다.
몇몇 실시양태에서, 본 발명의 TLAL은 양성 대조군(예를 들면, 유사한 조건으로 처리되거나 이러한 조건에 존재하는 전장 rhLAL)과 비교하여 적어도 1.25배, 1.5배, 1.75배 또는 심지어 2배 증가한 효소 활성 수치를 성취할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명의 TLAL은 표적 조직에서 적어도 대략 10n㏖/시간/㎎, 20n㏖/시간/㎎, 30n㏖/시간/㎎, 40n㏖/시간/㎎, 50n㏖/시간/㎎, 60n㏖/시간/㎎, 70n㏖/시간/㎎, 80n㏖/시간/㎎, 90n㏖/시간/㎎, 100n㏖/시간/㎎, 150n㏖/시간/㎎, 200n㏖/시간/㎎, 250n㏖/시간/㎎, 300n㏖/시간/㎎, 350n㏖/시간/㎎, 400n㏖/시간/㎎, 450n㏖/시간/㎎, 500n㏖/시간/㎎, 550n㏖/시간/㎎ 또는 600n㏖/시간/㎎의 효소 수치 또는 활성을 성취할 수 있다.
TLAL 의 제조
TLAL은 본 명세서에 기재된 방법을 이용하여 당해 분야에 공지된 형질전환 동물(예를 들면, 소, 양, 염소 및 새), 곤충 세포, 식물, 효모 또는 박테리아로부터 제조될 수 있다. 숙주 세포 및 이의 생물학적 기전에 따라, TLAL은 비변형 코딩 서열 rhLAL로부터 직접적으로 제조되거나, 제조된 더 긴 rhLAL로부터 지정된 N 말단 구역을 결실시키는 단백질분해 개열을 사용하여 간접적으로 제조될 수 있다.
포유동물 세포 배양물에서, 재조합 인간 LAL(rhLAL)은 가공된 전장 LAL 프로단백질을 생성시키는 신호 펩타이드의 개열 후에 SDS-PAGE에서 53kDa의 밴드가 관찰되었다(도 2 및 도 3에서 "SGP..."). 놀랍게도, 전장 rhLAL을 발현하는 HEK293 세포의 순화 배지에서 더 낮은 분자량 형태(겉보기 41kDa의 밴드 표지된 "KGP")가 발견되었다(도 2 및 도 3). 이 저분자량 LAL 단백질의 펩타이드 서열분석은 rhLAL의 이 형태가 TLAL-K76(서열 번호 11)이라는 것을 나타낸다. 정제된 TLAL-K76은 전장 rhLAL과 동등하거나 이보다 높은 효소 활성 수치를 갖는 것으로 결정되었다(실시예 4; 도 12 및 도 13).
따라서, 본 발명은 인공 단백질분해 개열 자리의 도입을 필요로 하지 않고 TLAL 단백질을 제조하는 재조합 방법을 포함한다. TLAL은 포유동물 세포 배양물(예를 들면, HEK293 세포)에 존재하는 hLAL의 전장 형태의 단백질분해로부터 제조될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 배양된 포유동물 세포에서 제조된 TLAL 단백질은 TLAL-K76(서열 번호 11) 및/또는 TLAL-G77(서열 번호 10)일 수 있다.
모든 TLAL 단백질이 모든 숙주 세포에서 안정할 수 있는 것은 아니다. 스포돕테라 프루지페르다(Spodoptera frugiperda) 곤충 세포에서의 LAL의 짧은 형태의 발현을 성취하지 못한 것을 기술하는 예를 들면, 츠젠커 등의 문헌[Zschenker, et al., J. Biochem . 136:65-72, 2004)]을 참조한다. 따라서, TLAL이 특정한 숙주 세포에서 적절히 발현되지 않는 경우, 원하는 길이의 TLAL을 얻기 위해 N 말단 구역 내에 인공 단백질분해 개열 자리를 도입하기 위해, 전장 또는 적절한 길이의 N 말단 구역을 갖는 임의의 rhLAL은 재조합으로 변형될 수 있다.
일 실시양태에서, 단백질분해 개열 자리를 포함하는 전장 rhLAL은 발현되고, 숙주 세포 배양물로부터 단리되고 이후 개열 자리에서 단백질분해로 처리되어 전장 rhLAL로부터 원하는 TLAL을 얻을 수 있다. 단백질분해 개열 자리는 rhLAL의 Pro31과 Ala90(서열 번호 1) 사이의 임의의 원하는 위치에서 도입될 수 있다. 내부 개열 자리를 갖는 전장 LAL이 제조될 때, 전장 단백질의 개열을 허용하도록 단백질분해 반응을 실험실내 수행할 수 있다.
일 실시양태에서, 개열 링커는 또한 FLAG 친화도 서열의 일부인 엔테로키나제("ek") 인식 서열(즉, Asp-Asp-Asp-Asp-Lys; 서열 번호 64)이다. 엔테로키나제는 이의 개열 자리 DDDDK(서열 번호 64)에서 라이신(K) 잔기 후 단백질을 개열시키는 특이적 프로테아제이다.
대안적으로, 단백질분해 링커는 Xa 인자 개열 서열(즉, Ile-Glu/Asp-Gly-Arg; 서열 번호 65)일 수 있다. Xa 인자는 아르기닌 잔기 후 Ile-Glu/Asp-Gly-Arg(서열 번호 65)의 개열 서열을 포함하는 펩타이드를 개열시킨다. 단백질분해 링커로서 퓨린 개열을 또한 사용할 수 있다. 분비 경로의 주요 가공 효소로서, 퓨린은 최소 개열 자리 Arg-X-X-Arg'(서열 번호 66)를 갖는 편재성 서브틸리신 유사 프로단백질 전환효소이다. 단백질분해에 의해 TLAL를 제조하기 위해 제네나제 I 및 이의 개열 서열을 또한 사용할 수 있다. 제네나제 I는 Tyr 잔기 후 Pro-Gly-Ala-Ala-His-Tyr(서열 번호 67)을 포함하는 단백질을 개열시킨다. 원하는 TLAL을 얻기 위해 rhLAL의 단백질분해 개열을 제조하도록 당해 분야에 공지된 특이적 개열 자리를 갖는 다른 프로테아제를 제한 없이 사용할 수 있다.
TLAL을 얻기 위해 사용될 수 있는 적합한 포유동물 세포는 임의의 발생 또는 성숙 단계에서 포유동물로부터 유도된 1차 세포 배양물을 포함한다. 포유동물 세포는 또한 무한한 생성을 위해 분열하도록 형질전환되는 포유동물 기원의 세포, 예컨대 인간 배아 신장 세포주(예를 들면, HEK293), 인간 섬유육종 세포주(예를 들면, HT1080), 인간 자궁경부암 세포(HeLa), 인간 폐 세포(W138), 인간 간 세포(Hep G2), 인간 망막모세포, BALB/c 마우스 골수종 세포주, COS-7, 베이비 햄스터 신장 세포(예를 들면, BHK), 중국 햄스터 난소 세포(예를 들면, CHO +/-DHFR), 마우스 세르톨리 세포(TM4), 래트 간 세포(BRL 3A), 마우스 유방 종양(예를 들면, MMT-060562), TRI 세포; MRC 5 세포, FS4 세포, 원숭이 신장 세포(예를 들면, CV1, VERO-76), 개과 신장 세포(예를 들면, MDCK)를 포함한다. 상이한 숙주 세포는 TLAL 단백질은 변형하고 가공하는 역량을 보장하도록 선택될 수 있다.
rhLAL 단백질 및/또는 TLAL을 코딩하는 벡터는 TLAL 단백질의 제조를 위해 숙주 세포로 도입될 수 있다. 숙주 세포는 TLAL의 코딩 서열이 발현되는 조건 하에 성장할 수 있다. 단백질은 적절하게 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제될 수 있다. 일 방법에서, (합성 제조된 cDNA 또는 DNA를 포함하는) 전장 hLAL에 대한 코딩 구역은 벡터에 효소적으로 도입되어 포유동물 세포, 식물 세포, 곤충 세포, 효모 또는 박테리아(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 적합한 단백질 발현계에서 유전자 발현에 필요한 프로모터 및 다른 제어 구역에 코딩 구역을 작동적으로 연결시킨다. 예를 들면, 포유동물 숙주 세포에서 사용하도록 이용 가능한 벡터는 이의 상응하는 발현계에서 단백질을 발현하기 위해 당해 분야에 공지된 임의의 벡터, 예를 들면 HEK293 세포의 경우 pTT22 및 CV1 세포주의 경우 SV40를 포함한다. 벡터 구성을 위한 방법은 일반적으로 당해 분야의 당업자에게 공지되어 있다. (예를 들면, 듀로처(Durocher) 등의 US 공보 2011/0039339A1 참조).
TLAL을 발현하기 위해 다양한 발현 벡터/숙주 시스템을 사용할 수 있다. 미생물은 재조합 박테리오파지, 플라즈미드 또는 코즈미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아; 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모, 바이러스 발현 벡터(예를 들면, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 또는 식물 세포를 포함한다. 더욱이, 본 발명은 또한, 제한 없이, 형질전환 포유동물 및 담배 식물 및 좀개구리밥을 포함하는 식물계를 포함하는 임의의 유용한 형질전환 발현계에서 제조되는 TLAL 단백질을 고려한다.
제어 구성요소 또는 조절 서열은 전사 및 번역을 수행하도록 숙주 세포내 단백질과 상호작용하는 벡터의 비번역 구역, 인핸서, 프로모터, 5' 및 3' 비번역 구역을 포함한다. 이러한 구성요소는 이의 길이 및 특이성이 변할 수 있다. 사용되는 벡터 시스템 및 숙주에 따라, 조직 특이적, 구성적 및 유도성 프로모터를 포함하는 임의의 수의 적합한 전사 및 번역 구성요소를 사용할 수 있다. 포유동물 세포 시스템에서, 포유동물 유전자 또는 포유동물 바이러스 유래의 프로모터가 바람직하다. TLAL을 코딩하는 서열의 다수의 카피를 포함하는 세포주를 원하는 경우, SV40 또는 EBV에 기초한 벡터는 적절한 선별 가능한 마커와 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 형질전환 조류 시스템에서 TLAL의 제조를 고려한다. 조류 발현계를 사용하는 경우, 미국 특허 제6,730,822호; 미국 특허 제6,825,396호; 미국 특허 제6,875,588호; 미국 특허 제7,294,507호; 미국 특허 제7,521,591호; 미국 특허 제7,534,929호; 및 미국 특허 공보 제2006/0185024호에 기재된 벡터가 바람직하다. 본 발명은 제2 모이어티(예를 들면, 표적화 또는 단백질분해 개열 서열)를 갖거나 갖지 않는 TLAL의 제조를 포함한다. 조류 발현 벡터는 하나 이상의 조절 서열, 예컨대 난관 특이적 프로모터, 예를 들면, 제한 없이, 오보뮤코이드 프로모터, 난알부민 프로모터, 라이소자임 프로모터, 콘알부민 프로모터, 오보뮤신 프로모터, 오보트랜스페린 프로모터 및 이 프로모터 각각의 기능적 부분을 포함할 수 있다. 적합한 비특이적 프로모터는, 예를 들면, 제한 없이, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, MDOT 프로모터 및 라우스 육종 바이러스(RSV) 프로모터, 쥣과 백혈병 바이러스(MLV) 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터 및 SV40 프로모터 및 이 프로모터 각각의 기능적 부분을 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 다른 프로모터의 비제한적인 예는, 제한 없이, Pol III 프로모터(예를 들면, 1형, 2형 및 3형 Pol III 프로모터), 예컨대 H1 프로모터, U6 프로모터, tRNA 프로모터, RNase MPR 프로모터 및 이 프로모터 각각의 기능적 부분을 포함할 수 있다. 통상적으로, 기능적 종결자 서열은 사용되는 프로모터에 따라 선택된다.
TLAL은 TLAL의 길이 및 제조되는 발현계에 따라 N 연결 글라이코실화에 대한 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 Asn(N) 자리에서 글라이코실화될 수 있다. 전장 LAL은 Asn36, Asn72, Asn101, Asn161, Asn273 및 Asn321에서 6개의 가능한 글라이코실화 자리를 갖는다. 본 발명은 임의의 또는 모든 이 자리에서 글라이코실화되는 글라이코실화 TLAL 단백질의 모든 형태를 포함한다. 본 발명은 또한 비글라이코실화 TLAL 단백질을 고려한다. 몇몇 실시양태에서, Asn72는 글라이코실화 되지 않을 수 있다(예를 들면, PCT/US2011/033699; WO/2011/133960 참조). 일 실시양태에서, TLAL 단백질은 C 말단 Asn101, Asn161, Asn273 및 Asn321 글라이코실화 자리에서 하나 이상의 글라이칸 구조를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, TLAL 단백질은 Asn36, Asn101, Asn161, Asn273 및 Asn321 글라이코실화 자리에서 하나 이상의 글라이칸 구조를 가질 수 있다. 또 다른 실시양태에서, TLAL 단백질은 Asn72, Asn101, Asn161, Asn273 및 Asn321 글라이코실화 자리에서 하나 이상의 글라이칸 구조를 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, TLAL 단백질은 Asn36, Asn72, Asn101, Asn161, Asn273 및 Asn321 글라이코실화 자리에서 하나 이상의 글라이칸 구조를 포함할 수 있다.
TLAL 의 정제
TLAL은 다양한 등급의 순도로 정제될 수 있다. 조성물에서의 TLAL의 순도는 HPLC 방법에 의해 결정되는 전체 단백질과 적어도 동일하거나 이보다 80%, 82%, 85%, 87%, 90%, 93%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 크다. 상기 조성물은 SDS-PAGE에서 약 30kDa 내지 37kDa의 임의의 검출 가능한 밴드가 없을 수 있다. 상기 조성물은 SDS-PAGE에서 약 50kDa 내지 60kDa의 임의의 검출 가능한 밴드가 없을 수 있다. TLAL을 포함하는 조성물은 실질적으로 비-LAL 단백질을 포함하지 않는 등급으로 정제될 수 있다. TLAL을 포함하는 조성물은 또한 TLAL 단백질이 실질적으로 순수한 상태로 정제될 수 있다. TLAL은 용액 또는 동결건조 제제 중에 존재할 수 있다. 상기 조성물은 또한 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 60% 내지 70%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90% 및 90% 내지 100%와 같은 다양한 TLAL 대 전장 형태(rhLAL)의 비율로 존재할 수 있다.
약제학적 조성물
TLAL의 하나 이상의 형태를 포함하는 약제학적 조성물이 본 발명에 고려된다. 몇몇 실시양태에서, 절두된 LAL을 포함하는 조성물은 또한 수성 또는 생리학적 상용성 유체 현탁액 또는 용액을 포함한다. TLAL의 조성물은 효소 활성 및 안정성과 상용성인 임의의 비독성 물질을 포함할 수 있다. 담체 물질은 무균수, 완충제, 예컨대 인산나트륨, 인산칼륨 및 다른 생리학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 시트르산염, 중탄산염 및 아세트산염 완충제, 염, 예컨대 염화나트륨 및 염화칼륨, 탄수화물, 예컨대 만니톨, 말토스, 수크로스, 소르비톨, 자일리톨 및 글루코스, 알코올, 글라이세롤, 아미노산, 유레아, EDTA, EGTA, 폴리비닐피롤리돈, 폴리사카라이드, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 글라이세롤, 아스코르브산, 지질, 인지질, 완충제, 분산제, 계면활성제, 예컨대 폴록사머 188, 폴리소르베이트 80, 크레모포어(Cremophore)-EL, 크레모포어-R, 라브로필 등을 포함할 수 있다. TLAL을 포함하는 조성물은 또한 다른 단백질, 예컨대 전장 rhLAL, TLAL로부터 완전히 정제되지 않은 불순물 또는 첨가된 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민, 콜라겐 및 젤라틴을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 상기 조성물은 벤질 알코올, 페놀 또는 m-크레솔을 포함할 수 있다. 상기의 임의의 조합을 포함하는 조성물은 본 발명에 포함된다.
특정한 예에서, 본 명세서에 개시된 바대로 제조된 재조합 인간 TLAL은 약제학적 제제에서 사용되고, 여기서 각각 1밀리리터는 TLAL(예를 들면, 2㎎의 LAL), 시트르산 삼나트륨 탈수물(예를 들면, 13.7㎎), 시트르산 1수화물(예를 들면, 1.57㎎) 및 인간 혈청 알부민(예를 들면, 10㎎)을 포함하고, 산성 pH, 예컨대 5.9±0.1로 제제화된다.
LAL을 포함하는 조성물은 동결건조되거나 액체로서 저장될 수 있다. 동결건조 형태의 활성제의 보존을 위해, 벌크화제, 예컨대 글라이신, 만니톨, 알부민 및 덱스트란이 유용할 수 있다. 저온보호를 위해, 다이사카라이드, 아미노산 및 폴리에틸렌 글라이콜이 유용할 수 있다. 당이 조성물에 포함될 때, 당은 약 2% 내지 약 40%의 중량 내지 용적의 농도로 포함될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 절두된 LAL을 포함하는 조성물은 pH가 4.0 내지 6.0 범위이다.
TLAL 또는 TLAL을 포함하는 조성물은 hLAL의 결핍증을 앓는 인간을 치료하는 방법에서 단독으로 또는 다른 약제학적 물질 또는 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. TLAL의 투여 방법, 투약 섭생, 치료 유효성의 평가 방법 및 TLAL을 위한 약제학적 조성물 및 제제는 2011년 9월 9일자에 출원된 US 특허 출원 제13/229,558호(본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 포함됨)에서 재조합 인간 LAL에 대해 기재되어 있다.
투여에 적합한 제제는 다양한 농도로 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 적합한 제제는 약 500㎎/㎖ 이하, 예를 들면 약 400㎎/㎖ 이하, 약 300㎎/㎖ 이하, 약 250㎎/㎖ 이하, 약 200㎎/㎖ 이하, 약 150㎎/㎖ 이하, 약 100㎎/㎖ 이하, 약 90㎎/㎖ 이하, 약 80㎎/㎖ 이하, 약 70㎎/㎖ 이하, 약 60㎎/㎖ 이하, 약 50㎎/㎖ 이하, 약 40㎎/㎖ 이하, 약 30㎎/㎖ 이하, 약 25㎎/㎖ 이하, 약 20㎎/㎖ 이하, 약 10㎎/㎖ 이하 또는 약 5㎎/㎖ 이하의 농도로 TLAL을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 적합한 제제는 약 1 내지 500㎎/㎖(예를 들면, 약 1 내지 250㎎/㎖, 약 1 내지 200㎎/㎖, 약 1 내지 150㎎/㎖, 약 1 내지 100㎎/㎖, 약 10 내지 100㎎/㎖, 약 1 내지 80㎎/㎖, 약 1 내지 70㎎/㎖, 약 1 내지 60㎎/㎖, 약 1 내지 50㎎/㎖, 약 1 내지 40㎎/㎖, 약 1 내지 30㎎/㎖)의 농도 범위로 TLAL을 포함할 수 있다.
본 발명은 적절한 세포, 장기 및 조직의 리소좀으로의 TLAL의 흡수를 촉진하는 임의의 투여 경로를 고려한다. 몇몇 실시양태에서, 정맥내 투여에 적합한 제제는 약 1㎎/㎖, 약 2㎎/㎖, 약 3㎎/㎖, 약 4㎎/㎖, 약 5㎎/㎖, 약 10㎎/㎖, 약 15㎎/㎖, 약 20㎎/㎖, 약 25㎎/㎖, 약 50㎎/㎖, 약 75㎎/㎖, 약 100㎎/㎖, 약 150㎎/㎖, 약 200㎎/㎖, 약 250㎎/㎖ 또는 300㎎/㎖의 농도로 TLAL을 포함할 수 있다.
LAL 결핍증의 치료
전장의 적어도 50%의 효소 활성 수치를 나타내는 본 명세서에 기재된 재조합 LAL 단백질은 LAL 결핍증(예를 들면, 월만병 및 콜레스테릴 에스터 저장 질환)을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명은 환자에게 TLAL 또는 LAL 융합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는 LAL 결핍증을 앓는 인간 환자를 치료하는 방법을 제공하고, 투여는 성장을 회복시키고/시키거나, 간 기능을 개선하고/하거나, 간 손상을 감소시키고/시키거나, LAL의 조직 수치를 증가시키고/시키거나, 환자에서 LAL 활성을 증가시키기에 충분하다. LAL 결핍증의 치료를 위해, 일반적으로 투여되는 TLAL 또는 LAL 융합 단백질의 양은 피험체의 연령, 건강 및 체중, 현재의 치료 유형, 치료 빈도수 등과 같은 공지된 인자에 따라 변할 수 있다. 일반적으로, 활성 성분의 용량은 체중 1킬로그램당 약 0.01 내지 약 50㎎일 수 있다. 일 실시양태에서, 본 발명에 따른 LAL의 용량은 체중 1킬로그램당 약 0.1 내지 0.5㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 1킬로그램당 약 0.1㎎ 내지 약 5.0㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 1킬로그램당 약 0.1㎎ 내지 약 5.0㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 1킬로그램당 약 0.1㎎ 내지 약 10㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 1킬로그램당 약 0.1㎎ 내지 약 20㎎이다. 일 실시양태에서 용량은 체중 1킬로그램당 약 0.1, 약 0.2, 약 0.25, 약 0.30, 약 0.35, 약 0.40, 약 0.45, 약 0.50㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 체중 1킬로그램당 약 1㎎ 내지 약 5㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 체중 1킬로그램당 약 1㎎이다. 일 실시양태에서, 용량은 체중 1킬로그램당 약 3㎎이다. 예를 들면, 체중 1킬로그램당 0.1㎎, 체중 1킬로그램당 0.2㎎, 체중 1킬로그램당 0.3㎎, 체중 1킬로그램당 0.4㎎, 체중 1킬로그램당 0.5㎎, 체중 1킬로그램당 1㎎, 체중 1킬로그램당 2㎎, 체중 1킬로그램당 3㎎, 체중 1킬로그램당 4㎎ 또는 체중 1킬로그램당 5㎎을 투여할 수 있다.
몇몇 양태에서, 본 명세서에 기재된 재조합 LAL 단백질은 체중 1킬로그램당 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 또는 30일 at 용량 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0 또는 10㎎으로 1회 인간 환자에게 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, LAL 단백질은 주마다, 2주마다 또는 달마다 투여된다.
몇몇 양태에서, 환자는 상승 용량 섭생에 놓인다. 예를 들면, 환자는 초기에 약 2주 또는 약 1개월 동안 1킬로그램당 약 0.1 내지 약 0.5㎎과 같은 용량으로 투여되고 후에 1킬로그램당 0.5㎎ 체중을 초과하는 높은 용량으로 투여될 수 있다. 몇몇 다른 양태에서, 환자는 치료 동안 초기에 높은 용량으로 투여되고 후에 초기 용량보다 낮은 용량으로 투여될 수 있다.
치료학적 단백질은 예를 들면 피하 주사, 근육내 주사 및 정맥내(IV) 점적주사 또는 주사에 의해 주사될 수 있다. 일 실시양태에서, TLAL 또는 LAL 융합 단백질은 임의의 유용한 방법에 의해 IV 점적주사로 정맥내로 투여된다. 일례에서, TLAL 또는 LAL 융합 단백질은 말초 라인을 통해 정맥내 점적주사에 의해 투여될 수 있다. 다른 예에서, TLAL 또는 LAL 융합 단백질은 말초 삽입된 중앙 카테터를 통해 정맥내 점적주사에 의해 투여될 수 있다. 다른 예에서, TLAL 또는 LAL 융합 단백질은 정맥 혈관 접근 포트에 부착된 보행 점적주사 기계에 의해 수월하게 되는 정맥내 점적주사에 의해 투여될 수 있다. 정맥내 점적주사의 일 실시양태에서, 당해 분야의 숙련의에 의해 결정되는, 점적주사되는 약제의 양 및 환자의 이전의 점적주사 관련 반응 이력에 따라, 1시간 내지 8시간의 기간 동안 약제를 투여한다. 다른 실시양태에서, IV 주사에 의해 정맥내로 TLAL 또는 LAL 융합 단백질을 투여한다. 다른 실시양태에서, 복강내 주사를 통해 TLAL 또는 LAL 융합 단백질을 투여할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 치료학적 단백질의 약제학적으로 허용되는 캡슐을 통해 TLAL을 투여한다. 예를 들면, 캡슐은 장용 코팅 젤라틴 캡슐일 수 있다.
몇몇 실시양태에서, 치료학적 단백질은 점적주사에 의해 투여되고, 점적주사는 예를 들면 30분 내지 10시간의 연장된 기간 동안 발생할 수 있다. 따라서, 점적주사는 예를 들면 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간 또는 약 5시간의 기간 동안 발생할 수 잇다. 점적주사는 또한 다양한 속도로 발생할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 점적주사 속도는 시간당 약 1㎖ 내지 시간당 20㎖일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 점적주사 속도는 시간당 5㎖ 내지 10㎖이다. 일 실시양태에서, 점적주사 속도는 시간당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20㎖이다. 일 실시양태에서, 점적주사 속도는 0.1 내지 5㎎/㎏/시간이다. 일 실시양태에서, 점적주사 속도는 약 0.1, 약 0.2, 약 0.3, 약 0.5, 약 1.0, 약 1.5, 약 2.0 또는 약 3㎎/㎏/시간이다.
TLAL 단백질을 투여하는 다양한 방법, 투약 섭생, 재조합 TLAL을 사용한 유효성 평가 방법이 2011년 9월 9일자에 출원된 US 특허 출원 제13/229,558호(본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 포함됨)에 재조합 인간 LAL에 대해 기재되어 있다.
실시예
실시예 1
TLAL - K76 및 TLAL - G77 의 확인 및 단리
HEK293E 세포(엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스의 EBNA-1 단백질을 안정하게 발현하는 인간 배아 신장 세포주)를 폴리에틸렌이민을 사용하여 pTT22-LAL(네이티브 인간 LAL 코딩 구역(서열 번호 1)의 삽입을 갖는 pTT22; pTT22 벡터에 대해 공보 US 2011/0039339 참조)로 형질감염시켰다. 배양 배지를 형질감염 24 내지 48시간 후 펩톤 TN1로 보충하였다. 배양물은 약 2x106개의 세포/㎖의 세포 밀도로 있었다. 배지를 형질감염 6일 후 수집하였다. 단백질을 페닐 소수성 상호작용(HIC) 컬럼 및 SP 세파로스(Sepharose)(상표명) 컬럼을 통해 정제하고, 이후 S200 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 컬럼에서 정제하였다.
쿠마시 블루로 염색된 12% 폴리아크릴아마이드 겔에서의 SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의한 정제된 샘플의 분석은 동시정제된 rhLAL의 2개의 형태의 존재를 나타냈다(도 2). 전장 rhLAL("SGG...")의 겉보기 분자량(MW)은 펩타이드 N-글라이코시다제 F-아미다제(PNGase F)에 의한 분해 후 53kDa 및 43kDa이고, rhLAL의 더 작은 형태("KGP...")의 겉보기 분자량은 대략 41 내지 43kDa이다(도 2).
더 작은 단백질이 rhLAL로부터 유래하는지를 결정하기 위해, 웨스턴 블롯에서 단백질을 분석하였다. 단백질을 겔로부터 피어스 패스트 세미-드라이 블로터(Pierce Fast Semi-Dry Blotter)를 사용하여 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 막으로 이동시켰다. 1차 및 2차 항체는 각각 α-LIPA pAb(압노바(Abnova) 카탈로그 H00003988-R01호) 및 염소 α-래빗-HRP IgG(H+L) pAb(써모 사이언티픽 피어스(Thermo Scientific Pierce) 카탈로그 31460호)이다. ECL 웨스턴 블로팅 기질(써모 사이언티픽 피어스)을 막에서 사용하여 알파 이노테크 겔 이미징 캐비넷(Alpha Innotech Gel Imaging Cabinet)(Scion Corporation)에서 화학발광의 측정을 허용하였다(도 3).
후속하여, rhLAL의 긴 형태 및 작은 형태 둘 다를 포함하는 순화 배지로부터 더 작은 LAL 단백질을 정제하였다. N 말단 아미노산 서열분석은 더 큰 rhLAL 단백질(53kD)이 실제로 SGG의 N 말단 아미노산 서열을 갖는 전장 rhLAL이고, rhLAL의 더 작은 형태(41 내지 43kD)가 KGP의 N 말단 아미노산 서열을 갖는 절두된 LAL이라는 것을 나타낸다. 절두된 rhLAL은 TLAL-K76이라 칭하고, 서열 번호 1의 76 내지 399번 위치의 아미노산 서열(즉, 서열 번호 11; 도 1 참조)을 갖는 것으로 확인되었다.
HEK293 세포에서 제조된 전장 rhLAL이 표적 세포로 내재화될 수 있고 효소적으로 활성인지를 결정하기 위해, 인간 대식세포(NR8383) 세포를 다양한 농도의 rhLAL-HEK("SBC-102-HEK293")와 동시항온처리하였다. 형질전환 닭으로부터 제조된 rhLAL("SBC-102-EW")을 양성 대조군으로서 사용하였다. LAL의 세포 이하 효소 활성을 PCT/US2011/033699(WO2011/133960)에 기재된 바대로 측정하였다(단위/세포). 도 5에 도시된 바대로, HEK293 세포에서 제조된 전장 rhLAL은 형질전환 닭에서 제조된 rhLAL과 비교하여 유사한 효소 활성 수치를 나타냈다.
실시예 2
EK - LAL 의 제조
pTT22-LAL로부터 시작하여 벡터 pTT22-EK-gp-LAL을 작제하였다. 도 6에 도시된 엔테로키나제(EK) 개열 자리를 코딩하는 서열을 갖는 정방향 및 역방향 프라이머(도 9; 서열 번호 62 및 63)를 KOD(써모코커스 코다카라엔시스(Thermococcus kodakaraensis)) 중합효소와 사용하여 주형으로서의 전체 pTT22-LAL 플라즈미드를 증폭하고 (서열 번호 1에 도시된 바대로) hLAL의 S74 내지 D75의 DYKDDD를 코딩하는 뉴클레오타이드의 삽입을 갖는 플라즈미드를 생성하였다. 초과의 아미노산 잔기 DYK는 항-FLAG 친화도 컬럼에 의한 친화도 인식 자리의 일부로서 포함되었다. hLAL에서 쳔연인 75번 및 76번 위치에서의 D 및 K 잔기에 의해, 삽입은 ek(소 엔테로키나제; EC 3.4.21.9)에 대한 DDDDK 인식 서열을 생성시키고(도 7 및 도 8 참조), 이는 C 말단을 K로 개열시켜, 서열 번호 1의 77 내지 399번 위치의 아미노산 서열(또한 서열 번호 10 참조)을 갖는 절두된 단백질의 N 말단 아미노산 잔기로서 G77을 남겼다. (ek 개열 자리의 삽입을 갖는) rhLAL 융합 단백질을 코딩하는 생성된 플라즈미드는 pTT22-EK-gpLAL이라 칭했다. pTT22-EK-gpLAL의 맵이 도 10에 도시되어 있고, pTT22-EK-gpLAL의 발현으로부터 제조된 ekLAL의 상응하는 아미노산 서열이 도 8에 도시되어 있다. DYKDDDDK(서열 번호 60)를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 삽입을 갖는 다른 플라즈미드를 또한 제조하여 유사한 방식으로 ...S- DYKDDDDK -K... 개열 서열을 생성하였다. 이 작제물은 ek(즉, 서열 번호 1의 아미노산 서열 76-399를 갖는 TLAL; 또한 서열 번호 11 참조)에 의한 분해 후 N 말단 아미노산 잔기로서 K76을 갖는 TLAL을 생성하도록 설계되었다.
HEK293 세포를 상기 기재된 플라즈미드로 형질감염시키고 세포 배양물에서 성장시켰다. ekLAL-HEK293 세포로부터의 배양 배지를 20mM Na3PO4, 137mM NaCl(pH 6.0)로 조정하였다(2리터의 최종 용적). 90㎛ 매트릭스에 기초한 소수성 상호작용 컬럼(HIC)(HiTrap Phenyl Sepharose 6 Fast Flow(상표명), GE Healthcare(상표명) 카탈로그 17-5193-01호)에 샘플을 로딩하고, 이 컬럼을 20mM Na3PO4, 137mM NaCl(pH 6.0)로 세척한 후, 5mM Na3PO4(pH 6.0)로 세척하였다. 단백질을 5mM 트리스(Tris), 50% 프로필렌 글라이콜(pH 7.2)로 용리시켰다. 최대 효소 활성을 갖는 단백질을 포함하는 분획을 이온 교환(IEX) 컬럼(HiTrap SP Fast Flow(상표명), GE Healthcare, 카탈로그 17-5157-01호)에서 추가의 정제에 사용하였다. SP 세파로스(상표명) 패스트 플로우는 비드가 있는 6%의 고 가교결합된 아가로스 매트릭스에 기초한 양이온 교환기이다. IEX 컬럼에 50mM NaOAc(pH 5.0)로 조정된 풀링된 분획을 로딩하고, 이 컬럼을 동일한 염의 완충제로 세척하였다. 단백질을 50mM NaOAc, 35mM CaCl2(pH 5,0)로 용리하였다. IEX 컬럼으로부터의 풀링된 분획을 TBS(pH 7.4)로 평형된 α-FLAG 친화도 컬럼(Anti-FLAG M2(상표명) Affinity Gel, 시그마(Sigma), 카탈로그 A2220호)에서 추가의 정제에 사용하고, 1M 트리스(pH 8.0)를 사용하여 용리하였다. α-FLAG 친화도 컬럼에서의 친화도 수지는 ekLAL의 옥타펩타이드 DYKDDDDK(서열 번호 60)에 결합하였다. ekLAL의 최대 활성을 포함하는 분획을 용리하고 풀링하고 농축시켰다.
N 말단 구역에서의 옥타펩타이드 DYKDDDDK(서열 번호 60) 태그를 포함하는 ekLAL의 효소 활성을 하기 섹션에 기재된 바대로 측정하였다. LAL의 N 말단 구역이 단백질 폴딩, 안정성, 분비 및 효소 활성에 필수적이라는 츠젠커 등이 발견한 것(2004)과 반대로, N 말단 구역에서 옥타펩타이드를 포함하는 ekLAL 단백질(예를 들면, 서열 번호 61 및 64)은 비변형 전장 야생형 rhLAL과 유사한 효소 활성 수치를 나타내고, 이는 N 말단 구역에서의 옥타펩타이드의 삽입에 의해 생성된 돌연변이가 rhLAL의 효소 활성에 영향을 미치지 않는다는 것을 제시한다.
실시예 3
엔테로키나제 ( ek ) 분해 및 TLAL - K76 및 TLAL - G77 의 제조
ek 태그화 LAL(즉, 서열 번호 61 및 68)의 정제된 샘플을 rEK 반응 완충제(45㎕의 dH2O 중의 5㎕의 10X EK 완충제)에 첨가하였다. 엔테로키나제(단백질 비율에 대해 1:20 단위)를 첨가하여 분해 반응을 개시하고, 반응 풀을 실온에서 6일 동안 항온처리하였다. 분해 반응 후, 단백질을 α-FLAG 친화도 컬럼에 의해 정제하여 ekLAL-HEK(전장)로부터 TLAL-HEK를 분리하였다. 다양한 α-FLAG 친화도 컬럼 분획을 12% SDS-PAGE에서 실행하였다(예를 들면 TLAL-G77에 대해 도 11a 참조). TLAL을 약 30kDa 내지 약 37kDa의 임의의 단백질을 실질적으로 포함하지 않도록 정제하고 대략 40 내지 43kDa인 것으로 나타났다(TLAL-G77에 대해 도 11a 3 레인; 및 TLAL-K76에 대해 도 11b 3 레인 참조). 서열 번호 61의 ekLAL의 ek 분해는 TLAL-G77로 대략 50% 개열시키는 반면(도 11a, 레인 2 참조), 서열 번호 64의 ekLAL의 ek 분해는 TLAL-K76으로 70% 초과만큼 개열시켰다(데이터 비도시). 형질전환 닭으로부터 제조된 rhLAL 단백질("LAL-EW"), HEK293("LAL-HEK") 및 비변경(즉, 해동 직후 평가됨) ekLAL-HEK를 대조군으로서 사용하여 LAL 단백질이 분해 동안 실온에서 6일 동안 항온처리된 후 무작위로 품질저하되지 않도록 보장하였다. 비분해된 LAL-EW 및 LAL-HEK와 분해된 것의 분자량은 동일한 것으로 보여, 비특이적 ek 개열이 분해 반응 동안 일어나지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 4
TLAL 활성의 실험실내 분석
문헌[Yan et al. (2006), American Journal of Pathology , Vol. 169, No. 3, p 916-926(이의 개시내용은 본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 포함됨)]에 실질적으로 기재된 형광원 기질 4-메틸움벨리페릴-올레에이트 검정을 이용하여 전장 rhLAL, ek 개열 자리를 포함하는 rhLAL 단백질(ekLAL) 및 TLAL을 포함하는 rhLAL의 다양한 형태의 효소 활성을 결정하였다.
4% 트라이톤 X-100 중의 2.5mM 4-메틸움벨리페릴 올레에이트(4-MUO)의 기질 스톡 용액을 제조하였다. 미량적정 플레이트에서 검정을 수행하고, 각각의 웰은 0.01%의 Tween80, 12.5㎕의 LAL 샘플 및 25㎕의 2.5mM 4-MUO 중의 62.5㎕의 0.2M 시트르산나트륨(pH 5.5)을 포함하였다. Bio-Tek Synergy HT 형광측정 마이크로플레이트 판독기(여기 360㎚ 및 방출 460㎚)를 사용하여 37℃에서 30분 동안 형광 변화를 모니터링하였다. 검정 전에, rhLAL을 포함하는 샘플을 적어도 30분 동안 반응이 연속하여 진행되게 하는 농도로 희석하였다. 반응을 50㎕의 0.75M 트리스-HCl(pH 8.0)로 중지시키고, 상기 사용되는 동일한 플레이트 판독기(여기 360㎚ 및 방출 460㎚)에서 종점 형광 신호를 측정하였다. 표준품으로서 4-메틸움벨리페릴을 사용하여 활성 단위를 결정하였다. 1단위(U)는 상기 기재된 검정 조건 하에 분당 1μ몰의 4-메틸움벨리페릴을 형성시키는 효소의 양으로 정의된다.
TLAL은 유사하게 처리된 ekLAL(도 12 및 도 13) 또는 비변형 야생형 전장 rhLAL(도 14)과 유사하거나 이보다 높은 효소 활성 수치를 나타냈다.
상기 명세서에서의 각각의 실시예는 본 발명의 제한이 아닌 본 발명의 설명의 방식으로 제공된다. 사실, 본 발명의 범위 또는 정신을 벗어나지 않고 본 발명에 다양한 변형, 조합, 첨가, 결실 및 변이가 이루어질 수 있고, 일 실시양태의 일부로서 예시되거나 기재된 피처(feature)가 다른 추가의 실시양태를 생성시키도록 다른 실시양태에서 사용될 수 있다는 것이 당해 분야의 당업자에게 명확할 것이다. 본 발명이 이러한 변형, 조합, 첨가, 결실 및 변이를 커버하도록 의도된다.
본 명세서에 인용된 모든 공보, 특허, 특허 출원, 인터넷 사이트 및 수탁 번호/데이터베이스 서열(폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열 둘 다 포함)은, 각각의 개별적인 공보, 특허, 특허 출원, 인터넷 사이트 또는 수탁 번호/데이터베이스 서열이 구체적으로 및 개별적으로 참조문헌으로 포함되도록 표시된 것과 동일한 정도로, 모든 목적을 위해 본 명세서에 그 전문이 참조문헌으로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> Synageva Bioharma Corporation <120> TRUNCATED LYSOSOMAL ACID LIPASE <130> 121424-00220 <150> 61/605,850 <151> 2012-03-02 <160> 68 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 399 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lys Met Arg Phe Leu Gly Leu Val Val Cys Leu Val Leu Trp Thr 1 5 10 15 Leu His Ser Glu Gly Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Val Asp Pro Glu 20 25 30 Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser 35 40 45 Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn 50 55 60 Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly Pro Lys Pro 65 70 75 80 Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn Trp Val 85 90 95 Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp Ala Gly 100 105 110 Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser Arg Lys 115 120 125 His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe Ser Tyr 130 135 140 Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe Ile Leu 145 150 155 160 Asn Lys Thr Gly 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Gly Leu Asp Ala Pro Trp 340 345 350 Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys Tyr Gln 355 360 365 <210> 54 <211> 367 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser 1 5 10 15 Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn 20 25 30 Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly Pro Lys Pro 35 40 45 Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn Trp Val 50 55 60 Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp Ala Gly 65 70 75 80 Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser Arg Lys 85 90 95 His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe Ser Tyr 100 105 110 Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe Ile Leu 115 120 125 Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His Ser Gln Gly 130 135 140 Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu Leu Ala Lys 145 150 155 160 Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser Val Ala Phe 165 170 175 Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp His Leu Ile 180 185 190 Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser Ala Phe Leu 195 200 205 Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His Val Ile Leu Lys Glu Leu 210 215 220 Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys Gly Phe Asn Glu Arg Asn Leu 225 230 235 240 Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr Thr His Ser Pro Ala Gly Thr 245 250 255 Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser Gln Ala Val Lys Phe Gln Lys 260 265 270 Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser Ala Lys Asn Tyr Phe His Tyr 275 280 285 Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Val Lys Asp Met Leu Val Pro 290 295 300 Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp Trp Leu Ala Asp Val Tyr Asp 305 310 315 320 Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr Asn Leu Val Phe His Glu Ser 325 330 335 Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile Trp Gly Leu Asp Ala Pro 340 345 350 Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys Tyr Gln 355 360 365 <210> 55 <211> 368 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Glu Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro 1 5 10 15 Ser Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu 20 25 30 Asn Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly Pro Lys 35 40 45 Pro Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn Trp 50 55 60 Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp Ala 65 70 75 80 Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser Arg 85 90 95 Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe Ser 100 105 110 Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe Ile 115 120 125 Leu Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His Ser Gln 130 135 140 Gly Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu Leu Ala 145 150 155 160 Lys Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser Val Ala 165 170 175 Phe Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp His Leu 180 185 190 Ile Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser Ala Phe 195 200 205 Leu Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His Val Ile Leu Lys 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Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser Asn 50 55 60 Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala Asp 65 70 75 80 Ala Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp Ser 85 90 95 Arg Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala Phe 100 105 110 Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn Phe 115 120 125 Ile Leu Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His Ser 130 135 140 Gln Gly Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu Leu 145 150 155 160 Ala Lys Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser Val 165 170 175 Ala Phe Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp His 180 185 190 Leu Ile Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser Ala 195 200 205 Phe Leu Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His Val Ile Leu Lys 210 215 220 Glu Leu Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys Gly Phe Asn Glu Arg 225 230 235 240 Asn Leu Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr Thr His Ser Pro Ala 245 250 255 Gly Thr Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser Gln Ala Val Lys Phe 260 265 270 Gln Lys Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser Ala Lys Asn Tyr Phe 275 280 285 His Tyr Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Val Lys Asp Met Leu 290 295 300 Val Pro Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp Trp Leu Ala Asp Val 305 310 315 320 Tyr Asp Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr Asn Leu Val Phe His 325 330 335 Glu Ser Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile Trp Gly Leu Asp 340 345 350 Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys Tyr 355 360 365 Gln <210> 57 <211> 370 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Asp Pro Glu Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly 1 5 10 15 Phe Pro Ser Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu 20 25 30 Cys Leu Asn Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys Gly 35 40 45 Pro Lys Pro Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser Ser 50 55 60 Asn Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu Ala 65 70 75 80 Asp Ala Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr Trp 85 90 95 Ser Arg Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp Ala 100 105 110 Phe Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile Asn 115 120 125 Phe Ile Leu Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr Val Gly His 130 135 140 Ser Gln Gly Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln Ile Pro Glu 145 150 155 160 Leu Ala Lys Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro Val Ala Ser 165 170 175 Val Ala Phe Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg Leu Pro Asp 180 185 190 His Leu Ile Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu Pro Gln Ser 195 200 205 Ala Phe Leu Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His Val Ile Leu 210 215 220 Lys Glu Leu Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys Gly Phe Asn Glu 225 230 235 240 Arg Asn Leu Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr Thr His Ser Pro 245 250 255 Ala Gly Thr Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser Gln Ala Val Lys 260 265 270 Phe Gln Lys Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser Ala Lys Asn Tyr 275 280 285 Phe His Tyr Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Val Lys Asp Met 290 295 300 Leu Val Pro Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp Trp Leu Ala Asp 305 310 315 320 Val Tyr Asp Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr Asn Leu Val Phe 325 330 335 His Glu Ser Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile Trp Gly Leu 340 345 350 Asp Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg Lys 355 360 365 Tyr Gln 370 <210> 58 <211> 371 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Val Asp Pro Glu Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp 1 5 10 15 Gly Phe Pro Ser Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile 20 25 30 Leu Cys Leu Asn Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Lys 35 40 45 Gly Pro Lys Pro Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala Asp Ser 50 55 60 Ser Asn Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe Ile Leu 65 70 75 80 Ala Asp Ala Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly Asn Thr 85 90 95 Trp Ser Arg Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu Phe Trp 100 105 110 Ala Phe Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala Ser Ile 115 120 125 Asn Phe Ile Leu 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Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile Trp Gly 340 345 350 Leu Asp Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu Met Arg 355 360 365 Lys Tyr Gln 370 <210> 59 <211> 24 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 59 gactacaagg atgacgatga caaa 24 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 61 <211> 405 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Met Lys Met Arg Phe Leu Gly Leu Val Val Cys Leu Val Leu Trp Thr 1 5 10 15 Leu His Ser Glu Gly Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Val Asp Pro Glu 20 25 30 Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser 35 40 45 Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn 50 55 60 Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp 65 70 75 80 Asp Lys Gly Pro Lys Pro Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu Ala 85 90 95 Asp Ser Ser Asn Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly Phe 100 105 110 Ile Leu Ala Asp Ala Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg Gly 115 120 125 Asn Thr Trp Ser Arg Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp Glu 130 135 140 Phe Trp Ala Phe Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro Ala 145 150 155 160 Ser Ile Asn Phe Ile Leu Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr Tyr 165 170 175 Val Gly His Ser Gln Gly Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser Gln 180 185 190 Ile Pro Glu Leu Ala Lys Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly Pro 195 200 205 Val Ala Ser Val Ala Phe Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly Arg 210 215 220 Leu Pro Asp His Leu Ile Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe Leu 225 230 235 240 Pro Gln Ser Ala Phe Leu Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr His 245 250 255 Val Ile Leu Lys Glu Leu Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys Gly 260 265 270 Phe Asn Glu Arg Asn Leu Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr Thr 275 280 285 His Ser Pro Ala Gly Thr Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser Gln 290 295 300 Ala Val Lys Phe Gln Lys Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser Ala 305 310 315 320 Lys Asn Tyr Phe His Tyr Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Val 325 330 335 Lys Asp Met Leu Val Pro Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp Trp 340 345 350 Leu Ala Asp Val Tyr Asp Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr Asn 355 360 365 Leu Val Phe His Glu Ser Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe Ile 370 375 380 Trp Gly Leu Asp Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn Leu 385 390 395 400 Met Arg Lys Tyr Gln 405 <210> 62 <211> 48 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 62 aagaaccatt ctgactacaa ggatgacgat gacaaaggtc ccaaacca 48 <210> 63 <211> 48 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 63 tggtttggga cctttgtcat cgtcatcctt gtagtcagaa tggttctt 48 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> None <400> 64 Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 65 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> None <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa can be Glu or Asp <400> 65 Ile Xaa Gly Arg 1 <210> 66 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> None <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 66 Arg Xaa Xaa Arg 1 <210> 67 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> None <400> 67 Pro Gly Ala Ala His Tyr 1 5 <210> 68 <211> 406 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Met Lys Met Arg Phe Leu Gly Leu Val Val Cys Leu Val Leu Trp Thr 1 5 10 15 Leu His Ser Glu Gly Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Val Asp Pro Glu 20 25 30 Thr Asn Met Asn Val Ser Glu Ile Ile Ser Tyr Trp Gly Phe Pro Ser 35 40 45 Glu Glu Tyr Leu Val Glu Thr Glu Asp Gly Tyr Ile Leu Cys Leu Asn 50 55 60 Arg Ile Pro His Gly Arg Lys Asn His Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp 65 70 75 80 Asp Lys Lys Gly Pro Lys Pro Val Val Phe Leu Gln His Gly Leu Leu 85 90 95 Ala Asp Ser Ser Asn Trp Val Thr Asn Leu Ala Asn Ser Ser Leu Gly 100 105 110 Phe Ile Leu Ala Asp Ala Gly Phe Asp Val Trp Met Gly Asn Ser Arg 115 120 125 Gly Asn Thr Trp Ser Arg Lys His Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Asp 130 135 140 Glu Phe Trp Ala Phe Ser Tyr Asp Glu Met Ala Lys Tyr Asp Leu Pro 145 150 155 160 Ala Ser Ile Asn Phe Ile Leu Asn Lys Thr Gly Gln Glu Gln Val Tyr 165 170 175 Tyr Val Gly His Ser Gln Gly Thr Thr Ile Gly Phe Ile Ala Phe Ser 180 185 190 Gln Ile Pro Glu Leu Ala Lys Arg Ile Lys Met Phe Phe Ala Leu Gly 195 200 205 Pro Val Ala Ser Val Ala Phe Cys Thr Ser Pro Met Ala Lys Leu Gly 210 215 220 Arg Leu Pro Asp His Leu Ile Lys Asp Leu Phe Gly Asp Lys Glu Phe 225 230 235 240 Leu Pro Gln Ser Ala Phe Leu Lys Trp Leu Gly Thr His Val Cys Thr 245 250 255 His Val Ile Leu Lys Glu Leu Cys Gly Asn Leu Cys Phe Leu Leu Cys 260 265 270 Gly Phe Asn Glu Arg Asn Leu Asn Met Ser Arg Val Asp Val Tyr Thr 275 280 285 Thr His Ser Pro Ala Gly Thr Ser Val Gln Asn Met Leu His Trp Ser 290 295 300 Gln Ala Val Lys Phe Gln Lys Phe Gln Ala Phe Asp Trp Gly Ser Ser 305 310 315 320 Ala Lys Asn Tyr Phe His Tyr Asn Gln Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn 325 330 335 Val Lys Asp Met Leu Val Pro Thr Ala Val Trp Ser Gly Gly His Asp 340 345 350 Trp Leu Ala Asp Val Tyr Asp Val Asn Ile Leu Leu Thr Gln Ile Thr 355 360 365 Asn Leu Val Phe His Glu Ser Ile Pro Glu Trp Glu His Leu Asp Phe 370 375 380 Ile Trp Gly Leu Asp Ala Pro Trp Arg Leu Tyr Asn Lys Ile Ile Asn 385 390 395 400 Leu Met Arg Lys Tyr Gln 405

Claims (30)

  1. 단리된 재조합 절두된 리소좀 산 리파제(truncated lysosomal acid lipase: TLAL)를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 TLAL은 서열 번호 10 내지 58에 기재된 아미노산 서열 중 임의의 하나에 대해서 적어도 90%, 95% 또는 99%의 동일성을 갖는 것인 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 TLAL은 서열 번호 10 내지 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 TLAL은 효소 활성이 전장 재조합 인간 LAL(recombinant human LAL: rhLAL)의 효소 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150% 또는 200%인 것인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 TLAL은 효소 활성이 전장 rhLAL의 효소 활성과 적어도 같거나 이보다 높은 것인 조성물.
  8. 단리된 재조합 TLAL을 포함하는 조성물로서, 상기 TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 포유동물 배양 배지를 추가로 포함하는 조성물.
  10. 단리된 재조합 TLAL을 포함하는 조성물로서, 상기 TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  11. rhLAL의 단리된 혼합물을 포함하는 조성물로서, 상기 혼합물은 재조합 TLAL의 적어도 하나의 형태를 포함하는 것인 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 혼합물은 전장 rhLAL을 추가로 포함하는 것인 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 재조합 TLAL은 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 상기 재조합 TLAL은 서열 번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  15. 단리된 재조합 인간 LAL을 포함하는 조성물로서, 상기 LAL은 제2 모이어티를 포함하는 융합 단백질인 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 제2 모이어티는 상기 LAL의 N 말단에, 상기 LAL의 C 말단에 또는 상기 LAL의 Pro31과 Gly77 사이의 임의의 아미노산 잔기 위치에 내부적으로 융합된 것인 조성물.
  17. 제15항에 있어서, 상기 제2 모이어티는 상기 LAL에 재조합으로 융합된 것인 조성물.
  18. 제15항에 있어서, 상기 제2 모이어티는 링커를 통해 rhLAL에 융합된 것인 조성물.
  19. 제1항의 조성물을 포함하는 약제학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 완충제를 추가로 포함하는 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 부형제를 추가로 포함하는 조성물.
  22. 제19항에 있어서, 염을 추가로 포함하는 조성물.
  23. 전장 rhLAL 및 재조합 TLAL을 포함하는 단리된 혼합물로부터 rhLAL을 정제하는 방법으로서, 상기 방법은, 상기 혼합물로부터 재조합 전장 rhLAL 또는 TLAL을 정제하는 단계를 포함하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 정제는 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 선택적 침전, 결정화 및 접선 유동 여과로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 방법을 이용하여 수행되는 것인 방법.
  25. 환자에서 LAL 결핍증을 치료하는 방법으로서,
    LAL 결핍증을 치료하기 위한 유효량의 제1항, 제8항, 제10항, 제11항 또는 제15항 중 임의의 한 항의 조성물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 LAL 결핍증은 월만병(Wolman disease: WD)인 것인 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상기 LAL 결핍증은 콜레스티릴 에스터 저장 질환(cholestryl ester storage disease: CESD)인 것인 방법.
  28. 제25항에 있어서, 상기 TLAL 또는 rhLAL은 정맥내로 투여되는 것인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 TLAL 또는 rhLAL은 펌프를 통해 투여되는 것인 방법.
  30. 제25항에 있어서, 상기 양은 체중 1㎏당 0.1 내지 20㎎ 범위의 TLAL 또는 rhLAL인 것인 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116917471A (zh) * 2020-12-09 2023-10-20 吉尼松公司 溶酶体酸性脂肪酶变体及其用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7033780B1 (en) * 1999-06-14 2006-04-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids corresponding to TANGO 294 a gene encoding a lipase—like protein
US20050208090A1 (en) * 2004-03-18 2005-09-22 Medtronic, Inc. Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system
WO2010033854A2 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Synageva Biopharma Corp. Avian derived fusion proteins
HUE062163T2 (hu) * 2010-04-23 2023-09-28 Alexion Pharma Inc Lizoszomális tárolási betegséggel asszociált enzim
KR20150038636A (ko) * 2010-09-09 2015-04-08 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 환자에서 리소좀 산 리파제 결핍증의 치료를 위한 리소좀 산 리파제의 용도
EP2675472A4 (en) * 2011-02-15 2014-09-17 Synageva Biopharma Corp METHOD FOR THE TREATMENT OF LACK OF LYSOSOMAL SAURER LIPASE
WO2012112677A2 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Children's Hospital Medical Center Methods for treating lysosomal acid lipase deficiency

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