KR20140125351A

KR20140125351A - Anti-cd98 antibodies and methods of use thereof

Info

Publication number: KR20140125351A
Application number: KR1020147016959A
Authority: KR
Inventors: 쟌 립핀코트; 데르 호르스트 에드워드 테인 턴 반; 죠셉 자크위자; 호앙 트란
Original assignee: 이제니카 바이오테라퓨틱스, 인크.
Priority date: 2011-11-23
Filing date: 2012-11-21
Publication date: 2014-10-28
Also published as: AU2012340623A1; RU2014124530A; EP2782935A1; JP2015501639A; PH12014501164A1; IL232755A0; ZA201403760B; BR112014012590A8; NZ626513A; BR112014012590A2; WO2013078377A9; CN104302669A; MX2014006272A; HK1202877A1; WO2013078377A1; CA2856873A1; SG11201402619VA

Abstract

본 발명은 CD98에 결합하는 항체, 및 암의 진단 및 치료에서 상기 항체를 사용하는 방법을 제공한다.The invention provides antibodies that bind to CD98, and methods of using the antibodies in the diagnosis and treatment of cancer.

Description

항-CD98 항체 및 이의 사용 방법{ANTI-CD98 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF}ANTI-CD98 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF < RTI ID = 0.0 >

본 발명은 일반적으로 항-CD98 항체 및 이러한 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.The present invention generally relates to anti-CD98 antibodies and methods of using such antibodies.

CD98(CD98 중쇄; 42F 중쇄; 또는 SLC3A2로서도 지칭됨)은 529개의 아미노산 잔기로 구성된 II형 경막 당단백질이다. 이 단백질은 75개의 아미노산으로 구성된 N-말단 세포내 세포질 도메인, 단일 경막 도메인, 및 426개의 아미노산으로 구성된 C-말단 세포외 도메인을 포함한다(Parmacek et al., Nucleic Acids Res. 17: 1915-1931, 1989). CD98은 L형 아미노산 수송자인 여러 경쇄들(SLC7A5, 6, 7, 8, 10 또는 11) 중 하나에 이황화 결합을 통해 공유연결된다. 이 상호작용은 경쇄의 세포 표면 발현 및 아미노산 수송 기능을 위해 요구된다. CD98은 인테그린 서브유닛과도 회합하여, 세포 증식, 생존, 이동 및 상피 부착/극성을 조절하는 인테그린 β 신호전달을 조절한다(Cai et al., J. Cell Sci. 118: 889-899, 2005).CD98 (CD98 heavy chain; 42F heavy chain; also referred to as SLC3A2) is a type II transmembrane glycoprotein composed of 529 amino acid residues. This protein contains a C-terminal extracellular domain consisting of a cytoplasmic domain in N-terminal cells consisting of 75 amino acids, a single transmembrane domain, and 426 amino acids (Parmacek et al., Nucleic Acids Res. 17: 1915-1931 , 1989). CD98 is covalently linked to one of several light chains (SLC7A5, 6, 7, 8, 10 or 11) which are L amino acid transporters through disulfide bonds. This interaction is required for light chain cell surface expression and amino acid transport function. CD98 also associates with integrin subunits to regulate integrin beta signaling, which regulates cell proliferation, survival, migration, and epithelial adhesion / polarity (Cai et al., J. Cell Sci. 118: 889-899, 2005) .

CD98은 처음에 림프구 활성화와 관련된 세포 표면 항원으로서 확인되었다(Haynes et al., J. Immunol. I26: 1409-1414, 1981). CD98은 그 이후로 혈소판을 제외한 모든 종류의 세포들에서 확인되었고 위장(GI)관 및 신장의 세뇨관에서 가장 높은 수준으로 발현된다(Verrey et al., Pflugers Arch. 440: 503-512, 2000). CD98의 상향조절은 장 염증에서 관찰되었다. 최근에, 장 CD98 발현은 장에서 항상성 및 선천성 면역 반응을 조절하는 데에 있어서 중요한 역할을 수행하는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 장 상피세포에서의 CD98 발현의 조절은 염증성 장 질환, 예컨대, 염증성 대장 질환(IBD) 및 결장염 관련 암의 치료 및 예방을 위한 기대되는 치료 전략으로서 제안되었다(Nguyen et al., J. Clin. Invest. 121: 1733-1747, 2011). 또한, CD98은 기원 조직과 관계없이 거의 모든 종양 세포들의 세포 표면 상에서 과다발현된다(Itoh et al., Jpn. J. Cancer Res. 92: 1313-1321, 2001).CD98 was initially identified as a cell surface antigen associated with lymphocyte activation (Haynes et al., J. Immunol. I26: 1409-1414, 1981). CD98 has since been identified in all types of cells except platelets and is expressed at the highest levels in the gastrointestinal (GI) tract and the renal tubule (Verrey et al., Pflugers Arch. 440: 503-512, 2000). Upregulation of CD98 was observed in intestinal inflammation. Recently, it has been shown that intestinal CD98 expression plays an important role in regulating homeostatic and innate immune responses in the intestine. Thus, modulation of CD98 expression in intestinal epithelial cells has been suggested as an expected therapeutic strategy for the treatment and prevention of inflammatory bowel disease, such as inflammatory bowel disease (IBD) and colitis-related cancer (Nguyen et al., J. Clin Invest., 121: 1733-1747, 2011). In addition, CD98 is overexpressed on the cell surface of almost all tumor cells regardless of the origin (Itoh et al., Jpn. J. Cancer Res. 92: 1313-1321, 2001).

CD98에 결합하는 경쇄들 중 하나인 L형 아미노산 수송자 1(LAT1; SLC7A5로서도 공지되어 있음)의 증가된 발현도 유방암, 결장암, 구강암, 난소암, 식도암, 신경아교종 및 백혈병을 비롯한 많은 종류의 인간 암세포들에서 관찰되었다(Fan et al., Biochem. Pharmacol. 80: 811-818, 2010). 증가된 아미노산 공급은 단백질 합성을 위한 아미노산 구축 블록을 제공하고 라파마이신의 포유동물 표적(mTOR)을 통해 생장을 자극함으로써 암세포의 높은 생장 속도를 뒷받침하기 위해 요구될 수 있다(Fan et al., supra; Imai et al., Anticancer Res. 30: 4819-4828, 2010). LAT1 및 CD98의 발현은 일차 부위에서보다는 인간 암의 전이성 부위에서 유의하게 더 높은데, 이것은 LAT1/CD98의 과다발현이 인간 암의 진행 및 전이를 위해 필수적일 수 있다는 것을 암시한다. 특히, LAT1/CD98 과다발현은 결장암을 갖는 환자에서 종양 전이를 위해 요구되는 듯하다(Kaira et al., Cancer Sci. 99: 2380-2386, 2008).Increased expression of L-amino acid transporter 1 (LAT1; also known as SLC7A5), one of the light chains that bind to CD98, is associated with many types of human, including breast, colon, ovarian, ovarian, Cancer cells (Fan et al., Biochem. Pharmacol. 80: 811-818, 2010). Increased amino acid supply may be required to provide an amino acid building block for protein synthesis and to support the high growth rate of cancer cells by stimulating growth through the mammalian target (mTOR) of rapamycin (Fan et al., Supra ; Imai et al., Anticancer Res. 30: 4819-4828, 2010). Expression of LAT1 and CD98 is significantly higher in the metastatic site of human cancer than in the primary site suggesting that overexpression of LAT1 / CD98 may be essential for the progression and metastasis of human cancer. In particular, overexpression of LAT1 / CD98 appears to be required for tumor metastasis in patients with colon cancer (Kaira et al., Cancer Sci. 99: 2380-2386, 2008).

CD98 및 LAT1의 발현 패턴 및 기능은 이들 단백질들이 다양한 인간 암들의 치료를 위한 기대되는 표적이라는 것을 암시한다. LAT1 활성의 억제제는 비-소세포 폐암(상기 문헌(Imai et al.), 결장암 세포(Oda et al., Cancer Sci. 101: 173-179, 2010), 구강암 세포(Kim et al., Biol. Pharm. Bull. 33: 1117-1121, 2010) 및 유방암 세포(Shennan and Thomson, Oncol. Rep. 20: 885-889, 2008)를 비롯한 다수의 종류의 암에서 항종양 활성을 나타내었다. LAT1은 난소암의 치료를 위한 표적으로서도 제안되었다(문헌(Fan et al.)).Expression patterns and function of CD98 and LAT1 suggest that these proteins are expected targets for the treatment of various human cancers. Inhibitors of LAT1 activity include, but are not limited to, non-small cell lung cancers (see Imai et al., Oda et al., Cancer Sci. 101: 173-179, 2010), oral cancer cells (Kim et al., Biol. Pharm LAT1 has been shown to have antitumor activity in many types of cancer including breast cancer cells (Shennan and Thomson, Oncol. Rep. 20: 885-889, 2008) (Fan et al.)). &Lt; / RTI >

HBJ127로서 확인된, CD98에 대한 뮤린 단일클론 항체는 림프구 증식을 억제하고(Yagita and Hashimoto, J. Immunol. 136: 2062-2068, 1986) 방광 종양 및 림프종 세포의 생장을 억제하는(Yagita et al., Cancer Res. 46: 1478-1489, 1986) 것으로 발견되었다. HJ127 항체에 대한 에피토프는 인간 CD98의 잔기 ₄₄₂AFS₄₄₄인 것으로 발견되었다(Itoh et al., 2007). CD98에 대한 상이한 뮤린 단일클론 항체는 신경아교종, 전립선암 및 결장암 세포의 경우 시험관내에서 종양 세포 생장을 유의하게 억제하는 것으로 밝혀졌다(Papetti and Herman, Am. J. Pathol. 159: 165-178, 2001). 인간 CD98에 대한 추가 단일클론 항체들은 미국 특허 공보 제20100143367호에 개시되어 있다. 이들 단일클론 항체들은 CD98의 아미노산 영역 372 내지 530 또는 104 내지 371 내의 에피토프에 결합한다. 이들 항체들 중 5개의 항체들은 방광암 세포에서 아미노산 섭취를 억제하는 것으로 발견되었고, 이들 항체들 중 3개의 항체들은 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하는 것으로 밝혀졌다.Murine monoclonal antibodies to CD98, identified as HBJ127, inhibit lymphocyte proliferation (Yagita and Hashimoto, J. Immunol. 136: 2062-2068, 1986) and inhibit the growth of bladder tumors and lymphoma cells (Yagita et al. , Cancer Res. 46: 1478-1489, 1986). The epitope for the HJ127 antibody was found to be residue ₄₄₂ AFS ₄₄₄ of human CD98 (Itoh et al., 2007). Different murine monoclonal antibodies to CD98 have been shown to significantly inhibit tumor cell growth in vitro in glioma, prostate, and colon cancer cells (Papetti and Herman, Am. J. Pathol. 159: 165-178, 2001). Additional monoclonal antibodies to human CD98 are disclosed in U.S. Patent Publication No. 20100143367. These monoclonal antibodies bind to an epitope within the amino acid region 372-530 or 104-371 of CD98. Five of these antibodies have been found to inhibit amino acid uptake in bladder cancer cells and three of these antibodies have been shown to inhibit tumor growth in mouse models.

본원에 개시된 바와 같이, 세포 표면 프로테옴의 표면 태깅된 항원 프로파일링(sTAg)을 이용하여 환자의 신선한 일차 급성 골수성 백혈병(AML) 종양 샘플을 분석하여 경막 단백질 CD98이 AML 종양 세포의 표면 상에서 고밀도로 존재한다는 것을 확인하였다. 따라서, CD98은 예를 들면, 결합제, 예컨대, CD98에 특이적으로 결합하는 항체의 사용에 의한 AML의 치료를 위한 표적이다. 또한, CD98에 대해 특이적 결합제, 예컨대, 항-CD98 항체는 다양한 생체내 이종이식편 모델들에서 AML뿐만 아니라 다양한 암들, 예컨대, 육종, 림프종, 비-소세포 폐암(NSCLC) 및 결장직장암을 치료하는 데에 있어서 유용한 것으로 밝혀졌다. As described herein, a patient's fresh primary acute myeloid leukemia (AML) tumor sample is analyzed using surface tagged antigen profiling (sTAg) of cell surface proteomes to determine whether the dermal protein CD98 is present at high density on the surface of AML tumor cells . Thus, CD98 is a target for the treatment of AML, for example, by the use of binding agents, such as antibodies specifically binding to CD98. In addition, specific binding agents for CD98, such as anti-CD98 antibodies, can be used to treat AML as well as various cancers such as sarcoma, lymphoma, non-small cell lung cancer (NSCLC) and colorectal cancer in a variety of in vivo xenograft models &Lt; / RTI >

본 발명자들은 다양한 종류의 인간 암들의 진단 및 치료에 유용한 CD98에 대한 항체를 제공한다.The present inventors provide antibodies against CD98 useful for the diagnosis and treatment of various types of human cancers.

온전한 AML 종양 세포 표면의 용액중 표지 부착 후 고해상 용액-기초 액체 크로마토그래피 커플링된 직렬 질량 분광측정(LC-MS/MS)을 이용하여, CD98이 발생중인 혈액 세포를 비롯한 정상 세포에 비해 대다수의 AML 세포 서브타입들의 표면 상에서 고밀도로 존재한다는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명은 항-CD98 항체, 및 AML 및 다른 암들(림프종, 육종, 비-소세포 폐암 및 결장직장암을 포함하나 이들로 한정되지 않음)의 치료에 있어서 이러한 항체를 사용하는 방법을 제공한다.Using a high-resolution solution-based liquid chromatography-coupled in-line mass spectrometry (LC-MS / MS) after labeling in the solution of intact AML tumor cell surface, the majority Lt; RTI ID = 0.0 > AML < / RTI > cell subtypes. Thus, the present invention provides methods of using such antibodies in the treatment of anti-CD98 antibodies and AML and other cancers including but not limited to lymphoma, sarcoma, non-small cell lung cancer and colorectal cancer.

한 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공하는데, 이때 상기 항체 또는 기능성 단편은 상기 인간 CD98의 잔기 A377, D397, I398, G400 및 A401을 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 D374 및 L378을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 P379 및 G380을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 F395 및 P396을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 Q381, P382 및 P399를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 D374, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396 및 P399로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추가 잔기를 추가로 포함한다.In one embodiment, the invention provides an isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98, wherein said antibody or functional fragment comprises residues A377, D397, I398, G400 and A401 of said human CD98 Lt; / RTI > In some embodiments, the epitope further comprises residues D374 and L378 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues P379 and G380 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues F395 and P396 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues Q381, P382 and P399 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises any one or more additional residues selected from the group consisting of D374, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396 and P399 of human CD98.

한 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공하는데, 이때 상기 항체는 인간 CD98의 잔기 P379, G380, D397 및 I398을 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 F395 및 P396을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 Q381, P382, P399, G400 및 A401을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 잔기 D374, A377 및 L378을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 에피토프는 인간 CD98의 D374, A377, L378, Q381, P382, F395, P396, P399, G400 및 A401로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추가 잔기를 추가로 포함한다.In one embodiment, the invention provides an isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98, wherein the antibody binds to an epitope comprising residues P379, G380, D397 and I398 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues F395 and P396 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues Q381, P382, P399, G400 and A401 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises residues D374, A377 and L378 of human CD98. In some embodiments, the epitope further comprises any one or more additional residues selected from the group consisting of D374, A377, L378, Q381, P382, F395, P396, P399, G400 and A401 of human CD98.

일부 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD98의 잔기 D374, A377, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396, D397, I398, P399, G400 및 A401을 포함하는 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공한다.In some embodiments, the invention provides an isolated antibody that binds to an epitope comprising residues D374, A377, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396, D397, I398, P399, G400 and A401 of human CD98 or And provides functional fragments thereof.

몇몇 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공하는데, 이때 상기 항체 또는 기능성 단편은 인간 CD98의 아미노산 잔기 369 내지 405 내에 포함된 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공하는데, 이때 상기 항체 또는 기능성 단편은 인간 CD98의 아미노산 잔기 369 내지 405로 구성된 에피토프에 결합한다.In some embodiments, the invention provides an isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98, wherein the antibody or functional fragment binds to an epitope contained within amino acid residues 369 to 405 of human CD98. In some embodiments, the invention provides an isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98, wherein said antibody or functional fragment binds to an epitope consisting of amino acid residues 369 to 405 of human CD98.

일부 실시양태에서, 본 발명의 단일클론 항체는 인간화된, 인간 또는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 기능성 단편은 Fab, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.In some embodiments, monoclonal antibodies of the invention are humanized, human or chimeric antibodies. In some embodiments, the antibody functional fragment of the invention is a Fab, F (ab ') 2, Fv or scFv fragment.

한 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 31 및 서열번호 35로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 중쇄 상보성 결정 영역들(CDR들), 및/또는 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 경쇄 CDR들을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공한다.In one embodiment, the invention provides all three heavy chain complementarity determining regions from the heavy chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: CDRs) and / or isolated light chain variable region comprising all three light chain CDRs from the light chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: Antibody or functional fragment thereof.

한 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 31 및 서열번호 35로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 중쇄 CDR들, 및 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 경쇄 CDR들을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 (a) 8-34B로서 명명된 항체; (b) 18-2A 2.2로서 명명된 항체; (c) 18-2A 7.1로서 명명된 항체; (d) 1-47C로서 명명된 항체; 또는 (e) 1-115A로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역들(CDR들)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 8-34B로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 18-2A 2.2로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 18-2A 7.1로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 1-47C로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 기능성 단편은 1-115A로서 명명된 항체로부터의 모든 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함한다.In one embodiment, the invention provides all three heavy chain CDRs from a heavy chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: The present invention provides isolated antibodies or functional fragments thereof comprising all three light chain CDRs from a light chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 37 . In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises (a) an antibody designated 8-34B; (b) an antibody named 18-2A 2.2; (c) an antibody named 18-2A 7.1; (d) an antibody designated 1-47C; Or (e) all heavy and light chain complementarity determining regions (CDRs) from an antibody named 1-115A. In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises all heavy and light chain CDRs from an antibody named 8-34B. In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises all heavy and light chain CDRs from an antibody named as 18-2A 2.2. In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises all heavy and light chain CDRs from an antibody named as 18-2A 7.1. In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises all heavy and light chain CDRs from an antibody named 1-47C. In some embodiments, the antibody or functional fragment thereof comprises all heavy and light chain CDRs from an antibody named 1-115A.

일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 31 및 서열번호 35로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 31 및 서열번호 35로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하고, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 추가로 포함한다.In some embodiments, the antibody comprises a heavy chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: In some embodiments, the antibody comprises a light chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: In some embodiments, the antibody comprises a heavy chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 35 and comprises SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: , SEQ ID NO: 33, and SEQ ID NO: 37.

한 실시양태에서, 항체는 서열번호 4의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 6의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 서열번호 8의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 10의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 서열번호 12의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 14의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 서열번호 31의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 33의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체는 서열번호 35의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 37의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.In one embodiment, the antibody comprises the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 4 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 6. In one embodiment, the antibody comprises the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 10. In one embodiment, the antibody comprises the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 12 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 14. In one embodiment, the antibody comprises the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 31 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 33. In one embodiment, the antibody comprises the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 35 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 37.

한 실시양태에서, 본 발명은 인간화된 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 22 및 서열번호 23으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양탱서, 인간화된 항체는 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 20 및 서열번호 21로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 22 및 서열번호 23으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하고 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 20 및 서열번호 21로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 15 및 서열번호 16으로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열, 및 서열번호 17, 서열번호 18 및 서열번호 19로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 15의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 18의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.In one embodiment, the invention provides a humanized antibody. In some embodiments, the humanized antibody comprises a heavy chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: Some embodiments of tantalum, humanized antibodies comprise light chain variable domain sequences selected from SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20 and SEQ ID NO: In some embodiments, the humanized antibody comprises a heavy chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 23 and comprises SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: Lt; RTI ID = 0.0 > 21 < / RTI > In some embodiments, the humanized antibody comprises a light chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 15 and SEQ ID NO: 16 and a heavy chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 and SEQ ID NO: In one embodiment, the humanized antibody comprises the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 15 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 18.

한 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 20의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 22의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 21의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 23의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 20의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 23의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간화된 항체는 서열번호 21의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 22의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 서열번호 21의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 22의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 대안적 실시양태에서, 본 발명은 도 1에 나타낸 바와 같이 bin 1 또는 bin 3 내지 7로부터의 항체에 의해 결합되는 에피토프와 본질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 결합제를 포함한다.In one embodiment, the humanized antibody comprises the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 20 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 22. In one embodiment, the humanized antibody comprises the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 21 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 23. In one embodiment, the humanized antibody comprises the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 20 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 23. In one embodiment, the humanized antibody comprises the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 21 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 22. In one embodiment, the invention provides an antibody that binds to the same epitope as the epitope bound by the humanized antibody comprising the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 21 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 22. In an alternative embodiment, the invention includes a binding agent that binds essentially the same epitope as an epitope bound by an antibody from bin 1 or bin 3 to 7, as shown in Fig.

추가 실시양태에서, 본 발명은 상기 개시된 항체들 중 어느 하나에 의해 결합되는 에피토프와 본질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 결합제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 결합제는 CD98을 발현하는 종양의 성장을 억제한다. 일부 실시양태에서, 결합제는 항체 또는 이의 기능성 단편이다. 다른 실시양태에서, 결합제는 안티칼린(anticalin), 애드넥틴(adnectin), 아피바디(affibody), DARPin, 파이노머(fynomer), 아피틴(affitin), 아필린(affilin), 아비머(avimer), 시스테인 풍부 노틴(knottin) 펩티드 또는 조작된 쿠니츠(Kunitz)형 억제제이다.In a further embodiment, the invention includes a binding agent that binds essentially the same epitope as an epitope bound by any of the antibodies disclosed above. In some embodiments, the binding agent inhibits the growth of tumors expressing CD98. In some embodiments, the binding agent is an antibody or functional fragment thereof. In another embodiment, the binder is selected from the group consisting of anticalin, adnectin, affibody, DARPin, fynomer, affitin, affilin, avimer, , Cysteine-rich knottin peptides or engineered Kunitz type inhibitors.

한 실시양태에서, 본 발명은 CD98에 결합할 수 있는 결합제를 제공하는데, 이때 상기 개시된 항체들 중 어느 하나는 경쟁 결합 분석에서 상기 결합제를 대체한다. 일부 실시양태에서, 결합제는 항체 또는 이의 기능성 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 CD98에 결합할 수 있는 결합제를 제공하는데, 이때 상기 결합제는 경쟁 결합 분석에서 상기 개시된 항체들 중 어느 하나를 대체한다. 일부 실시양태에서, 결합제는 항체 또는 이의 기능성 단편이다.In one embodiment, the present invention provides a binding agent capable of binding to CD98, wherein any one of the antibodies disclosed above replaces the binding agent in a competitive binding assay. In some embodiments, the binding agent is an antibody or functional fragment thereof. In another embodiment, the present invention provides a binding agent capable of binding to CD98, wherein said binding agent replaces any of the antibodies disclosed above in a competitive binding assay. In some embodiments, the binding agent is an antibody or functional fragment thereof.

일부 실시양태에서, 본 발명은 CD98에 결합하는 항체를 제공하는데, 이때 상기 항체는 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 31 및 서열번호 35로부터 선택된 아미노산 서열에 대한 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대한 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 31 및 서열번호 35로부터 선택된 아미노산 서열에 대한 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 33 및 서열번호 37로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대한 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 추가로 포함한다. In some embodiments, the invention provides an antibody that binds to CD98, wherein the antibody is selected from the group consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: At least 90%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97% and at least 98% amino acid sequence identity to the amino acid sequence selected from SEQ ID NO: Or greater or 99% or more sequence identity to a heavy chain variable domain. In some embodiments, the antibody comprises an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 6, 10, 14, 15, 16, 20, 21, 33, A light chain variable domain having 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more or 99% do. In some embodiments, the antibody comprises an amino acid sequence selected from SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 31, A heavy chain variable domain having a sequence identity of at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% At least 90% of the amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: , 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity.

일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 삽입 또는 변경을 갖는 상기 항체들 중 어느 하나의 변이체이고 상기 항체의 생물학적 기능을 보유하는 항체를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 본 발명은 세포 표면 상에서 발현된 CD98에 결합하고 세포의 생장을 억제하는 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-CD98 항체는 세포 표면 상에서 발현된 CD98에 결합하고 세포 증식을 억제한다. 일부 실시양태에서, 항-CD98 항체는 세포 표면 상에서 발현된 CD98에 결합하고 세포 사멸을 유도한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 성질, 예컨대, 결합 친화성, 특이성, 열안정성, 발현 수준, 이펙터 기능, 글리코실화, 감소된 면역원성 및 가용성 중 하나 이상의 성질이 비-변경된 항체에 비해 개선된, 상기 항체들 중 어느 하나의 변이체인 항체를 제공한다.In some embodiments, the invention provides an antibody that retains the biological function of the antibody and is a variant of any one of the above antibodies having one or more amino acid substitutions, deletions, insertions or alterations. In some embodiments, the invention provides an antibody that binds to CD98 expressed on the cell surface and inhibits cell growth. In some embodiments, the anti-CD98 antibody binds to CD98 expressed on the cell surface and inhibits cell proliferation. In some embodiments, the anti-CD98 antibody binds to CD98 expressed on the cell surface and induces apoptosis. In some embodiments, the present invention provides methods of modulating, modulating, and / or modulating one or more of the properties, such as binding affinity, specificity, thermal stability, expression level, effector function, glycosylation, reduced immunogenicity, An antibody that is any one of the above antibodies.

일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 제공하는데, 이때 상기 항체 또는 단편은 세포독성제에 접합되어 있다. 다양한 실시양태에서, 세포독성제는 화학치료제, 약물, 생장 억제제, 독소 및 방사성 동위원소로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 제공하는데, 이때 상기 항체 또는 단편은 검출가능한 마커에 접합되어 있다. 다양한 실시양태에서, 검출가능한 마커는 방사성 동위원소, 금속 킬레이터, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물 및 화학발광 화합물로부터 선택된다.In some embodiments, the invention provides any of the above antibodies or functional fragments, wherein the antibody or fragment is conjugated to a cytotoxic agent. In various embodiments, cytotoxic agents are selected from chemotherapeutic agents, drugs, growth inhibitors, toxins and radioactive isotopes. In some embodiments, the invention provides any of the above antibodies or functional fragments, wherein the antibody or fragment is conjugated to a detectable marker. In various embodiments, the detectable marker is selected from a radioactive isotope, a metal chelator, an enzyme, a fluorescent compound, a bioluminescent compound, and a chemiluminescent compound.

한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체를 생성하는 트랜스제닉(transgenic) 동물을 제공한다. In one embodiment, the invention provides a hybridoma that produces a monoclonal antibody of the invention. In one embodiment, the invention provides a transgenic animal that produces a monoclonal antibody of the invention.

일부 실시양태에서, 상기 항체들 중 어느 하나를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 한 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 제공된다. 한 실시양태에서, 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵 세포이다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 이. 콜라이 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 한 실시양태에서, 항-CD98 항체의 제조 방법이 제공되는데, 이때 상기 방법은 상기 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건 하에서 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체를 단리하는 단계를 포함한다.In some embodiments, polynucleotides encoding any of the above antibodies are provided. In one embodiment, a vector comprising the polynucleotide is provided. In one embodiment, host cells comprising the vector are provided. In one embodiment, the host cell is a prokaryotic cell. In one embodiment, the host cell is a human. Coli cells. In another embodiment, the host cell is a eukaryotic cell. In one embodiment, the host cell is a Chinese hamster ovary (CHO) cell. In one embodiment, a method of producing an anti-CD98 antibody is provided, wherein the method comprises culturing the host cell under conditions suitable for expression of the polynucleotide encoding the antibody and isolating the antibody.

한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 상기 항체 또는 이의 기능성 단편, 항체 접합체 및 결합제 중 어느 하나를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 추가 실시양태에서, 본 발명은 CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 방법으로서, 상기 세포를 본 발명의 상기 항체 또는 이의 기능성 단편, 항체 접합체 및 결합제 중 어느 하나 이상에 노출시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 암세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이로부터 유래된다.In one embodiment, the invention provides a pharmaceutical composition comprising the antibody or functional fragment thereof, an antibody conjugate, and a binding agent of the invention. In a further embodiment, the invention provides a method of inhibiting the growth of cancer cells expressing CD98, comprising exposing said cells to any one or more of said antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates and binding agents of the invention . In various embodiments, the cancer cells are selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia, It is derived from the transition of any one of these arms.

한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 상기 항체 또는 이의 기능성 단편, 항체 접합체 및 결합제 중 어느 하나를 포함하는 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 암은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택되거나 이들 암들 중 어느 하나의 전이이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병을 갖는다. 일부 실시양태에서, 암은 세포의 표면 상에서의 CD98의 증가된 발현과 관련되어 있다.In one embodiment, the invention provides a method of treating cancer in a subject, comprising administering to the subject a pharmaceutical composition comprising the antibody or a functional fragment thereof, an antibody conjugate and a binding agent of the invention do. In various embodiments, the cancer is selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia, . &Lt; / RTI > In some embodiments, the cancer is acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the subject has relapsed or refractory acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the cancer is associated with increased expression of CD98 on the surface of the cell.

일부 실시양태에서, 대상체는 항체 또는 기능성 단편과 함께 하나 이상의 화학치료 화합물을 투여받는데, 이때 상기 화학치료 화합물은 벤다무스틴 하이드로클로라이드, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 플루다라빈(fludurabine), 사이타라빈, 겜시타빈, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 파클리탁셀, 독세탁셀, 비노렐빈, 빈크리스틴, 에토포사이드, 이리노테칸, 안트라사이클린, 아드리아마이신, 시스플라틴, 카보플라틴 및 리툭시맙으로부터 선택된다.In some embodiments, a subject is administered one or more chemotherapeutic compounds with an antibody or functional fragment, wherein the chemotherapeutic compound is selected from the group consisting of vendamustine hydrochloride, cyclophosphamide, ifosfamide, fludurabine, Is selected from cytotoxic, cytotarin, cytarabine, gemcitabine, prednisone, prednisolone, methylprednisolone, paclitaxel, docked cell, vinorelbine, vincristine, etofoside, irinotecan, anthracycline, adriamycin, cisplatin, carboplatin and rituximab.

한 실시양태에서, 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법으로서, 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 생물학적 샘플을 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계, 및 상기 항체와 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함하나 이들로 한정되지 않는 세포 또는 조직의 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 포유동물의 생물학적 샘플이다.In one embodiment, there is provided a method of detecting the presence of CD98 in a biological sample comprising contacting said biological sample with any one of said antibodies under conditions that permit binding of the antibody to CD98, The method comprising the steps < RTI ID = 0.0 > of: < / RTI > In some embodiments, the biological sample is selected from the group consisting of bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia, Quot; is a biological sample of a mammal suspected of having or having cancer of a cell or tissue, including, but not limited to, any one of the following.

한 실시양태에서, CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법으로서, 시험 세포를 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계; 상기 항체와 CD98의 결합을 검출하여 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 시험 세포에 의한 CD98의 발현 수준을 대조군 세포에 의한 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 방법이 제공되는데, 이때 상기 대조군 세포에 비해 상기 시험 세포에 의한 CD98의 보다 높은 발현 수준은 CD98의 증가된 발현과 관련된 암의 존재를 표시한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 갖는 것으로 의심되는 환자의 세포이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계, 및 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 대조군 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 암세포이고, 대조군 세포는 동일한 조직 타입의 정상 세포이다.In one embodiment, a method of diagnosing cancer associated with increased expression of CD98 comprises contacting a test cell with any one of the antibodies; Detecting the binding of the antibody to CD98 and measuring the level of expression of CD98; And comparing the level of expression of CD98 by the test cell with the level of expression of CD98 by the control cell, wherein the higher expression level of CD98 by the test cell as compared to the control cell is a CD98 Indicating the presence of cancer associated with increased expression. In some embodiments, the test cell is a cancer selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, glioma, lymphoma and leukemia, It is a cell of a patient suspected of having one metastasis. In one embodiment, the method comprises the steps of determining the level of expression of CD98 on the surface of the test cell, and comparing the level of expression of CD98 on the surface of the test cell with the level of expression of CD98 on the surface of the control cell . In some embodiments, the test cells are cancer cells and the control cells are normal cells of the same tissue type.

한 실시양태에서, 본 발명은 약제의 제조에 있어서 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나의 용도를 제공하는데, 이때 상기 약제는 CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 방법에서 사용되기 위한 약제이다. 다양한 실시양태에서, 세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이로부터 유래된다.In one embodiment, the invention provides the use of any of the above antibodies or functional fragments in the manufacture of a medicament, wherein the medicament is for use in a method of inhibiting the growth of cancer cells expressing CD98 . In various embodiments, the cell is a cancer selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia or It is derived from the transition of any one of these arms.

한 실시양태에서, 본 발명은 CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 데에 사용되기 위한 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 제공한다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이로부터 유래된다.In one embodiment, the invention provides any of the above antibodies or functional fragments for use in inhibiting the growth of cancer cells expressing CD98. In various embodiments, the cell is a cancer selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma, Or from the transfer of either of these arms.

한 실시양태에서, 본 발명은 약제의 제조에 있어서 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 포함하는 약학 조성물의 용도를 제공하는데, 이때 상기 약제는 대상체에서 암을 치료하는 방법에서 사용되기 위한 약제이다. 다양한 실시양태에서, 암은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택되거나 이들 암들 중 어느 하나의 전이이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병을 갖는다. 일부 실시양태에서, 암은 세포의 표면 상에서의 CD98의 증가된 발현과 관련되어 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 항체 또는 기능성 단편과 함께 하나 이상의 화학치료 화합물을 투여받는데, 이때 상기 화학치료 화합물은 벤다무스틴 하이드로클로라이드, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 플루다라빈, 사이타라빈, 겜시타빈, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 파클리탁셀, 독세탁셀, 비노렐빈, 빈크리스틴, 에토포사이드, 이리노테칸, 안트라사이클린, 아드리아마이신, 시스플라틴, 카보플라틴 및 리툭시맙으로부터 선택된다.In one embodiment, the invention provides the use of a pharmaceutical composition comprising any of the above antibodies or functional fragments in the manufacture of a medicament, wherein the medicament is a medicament for use in a method of treating cancer in a subject to be. In various embodiments, the cancer is selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia, . &Lt; / RTI > In some embodiments, the cancer is acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the subject has relapsed or refractory acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the cancer is associated with increased expression of CD98 on the surface of the cell. In some embodiments, the subject is administered one or more chemotherapeutic compounds with the antibody or functional fragment, wherein the chemotherapeutic compound is selected from the group consisting of vendamustin hydrochloride, cyclophosphamide, ifosfamide, fluaravarin, , Gemcitabine, prednisone, prednisolone, methylprednisolone, paclitaxel, docked cells, vinorelbine, vincristine, etofoside, irinotecan, anthracycline, adriamycin, cisplatin, carboplatin and rituximab.

한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 데에 사용되기 위한, 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 상기 암은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택되거나 이들 암들 중 어느 하나의 전이이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병을 갖는다. 일부 실시양태에서, 암은 세포의 표면 상에서의 CD98의 증가된 발현과 관련되어 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 항체 또는 기능성 단편과 함께 하나 이상의 화학치료 화합물을 투여받는데, 이때 상기 화학치료 화합물은 벤다무스틴 하이드로클로라이드, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 플루다라빈, 사이타라빈, 겜시타빈, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 파클리탁셀, 독세탁셀, 비노렐빈, 빈크리스틴, 에토포사이드, 이리노테칸, 안트라사이클린, 아드리아마이신, 시스플라틴, 카보플라틴 및 리툭시맙으로부터 선택된다.In one embodiment, the invention provides a pharmaceutical composition comprising any of the above antibodies or functional fragments and a pharmaceutically acceptable carrier for use in treating cancer in a subject. In various embodiments, the cancer is selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia It is the transition of any one of the arms. In some embodiments, the cancer is acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the subject has relapsed or refractory acute myelogenous leukemia. In some embodiments, the cancer is associated with increased expression of CD98 on the surface of the cell. In some embodiments, the subject is administered one or more chemotherapeutic compounds with the antibody or functional fragment, wherein the chemotherapeutic compound is selected from the group consisting of vendamustin hydrochloride, cyclophosphamide, ifosfamide, fluaravarin, , Gemcitabine, prednisone, prednisolone, methylprednisolone, paclitaxel, docked cells, vinorelbine, vincristine, etofoside, irinotecan, anthracycline, adriamycin, cisplatin, carboplatin and rituximab.

한 실시양태에서, 본 발명은 약제의 제조에 있어서 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나의 용도를 제공하는데, 이때 상기 약제는 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법에서 사용되기 위한 약제이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계, 및 상기 항체와 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함하나 이들로 한정되지 않는 세포 또는 조직의 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 포유동물의 생물학적 샘플이다.In one embodiment, the invention provides the use of any of the above antibodies or functional fragments in the manufacture of a medicament, wherein the medicament is for use in a method of detecting the presence of CD98 in a biological sample. In some embodiments, the method comprises contacting a biological sample with any one of the antibodies under conditions that permit binding of the antibody to CD98, and detecting whether a complex is formed between the antibody and CD98 . In some embodiments, the biological sample is selected from the group consisting of bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia, Quot; is a biological sample of a mammal suspected of having or having cancer of a cell or tissue, including, but not limited to, any one of the following.

한 실시양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법에서 사용되기 위한 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계, 및 상기 항체와 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함하나 이들로 한정되지 않는 세포 또는 조직의 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되는 포유동물의 생물학적 샘플이다.In one embodiment, the invention provides any of the above antibodies or functional fragments for use in a method of detecting the presence of CD98 in a biological sample. In some embodiments, the method comprises contacting a biological sample with any one of the antibodies under conditions that permit binding of the antibody to CD98, and detecting whether a complex is formed between the antibody and CD98 . In some embodiments, the biological sample is selected from the group consisting of bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia, Quot; is a biological sample of a mammal suspected of having or having cancer of a cell or tissue, including, but not limited to, any one of the following.

한 실시양태에서, 본 발명은 약제의 제조에 있어서 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나의 용도를 제공하는데, 상기 약제는 CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법에서 사용되기 위한 약제이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포를 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계; 항체와 CD98의 결합을 검출하여 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 시험 세포에 의한 CD98의 발현 수준을 대조군 세포에 의한 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는데, 이때 대조군 세포에 비해 상기 시험 세포에 의한 CD98의 보다 높은 발현 수준은 CD98의 증가된 발현과 관련된 암의 존재를 표시한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 환자의 세포이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계, 및 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 대조군 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 암세포이고, 대조군 세포는 동일한 조직 타입의 정상 세포이다.In one embodiment, the invention provides the use of any of the above antibodies or functional fragments in the manufacture of a medicament for use in a method of diagnosing cancer associated with increased expression of CD98 . In some embodiments, the method comprises contacting a test cell with any one of the antibodies; Detecting the binding of the antibody to CD98 and measuring the level of expression of CD98; And comparing the level of expression of CD98 by the test cell with the level of expression of CD98 by the control cell wherein the higher expression level of CD98 by the test cell relative to the control cell is associated with increased expression of CD98 Indicates the presence of cancer. In some embodiments, the test cell is a cancer selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, glioma, lymphoma and leukemia, It is a cell of a patient suspected of having or having one metastasis. In one embodiment, the method comprises the steps of determining the level of expression of CD98 on the surface of the test cell, and comparing the level of expression of CD98 on the surface of the test cell with the level of expression of CD98 on the surface of the control cell . In some embodiments, the test cells are cancer cells and the control cells are normal cells of the same tissue type.

한 실시양태에서, 본 발명은 CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법에서 사용되기 위한 상기 항체들 또는 기능성 단편들 중 어느 하나를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포를 상기 항체들 중 어느 하나와 접촉시키는 단계; 항체와 CD98의 결합을 검출하여 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 시험 세포에 의한 CD98의 발현 수준을 대조군 세포에 의한 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는데, 이때 대조군 세포에 비해 상기 시험 세포에 의한 CD98의 보다 높은 발현 수준은 CD98의 증가된 발현과 관련된 암의 존재를 표시한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 갖는 것으로 의심되는 환자의 세포이다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계, 및 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 대조군 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 암세포이고, 대조군 세포는 동일한 조직 타입의 정상 세포이다.In one embodiment, the invention provides any of the above antibodies or functional fragments for use in a method of diagnosing cancer associated with increased expression of CD98. In some embodiments, the method comprises contacting a test cell with any one of the antibodies; Detecting the binding of the antibody to CD98 and measuring the level of expression of CD98; And comparing the level of expression of CD98 by the test cell with the level of expression of CD98 by the control cell wherein the higher expression level of CD98 by the test cell relative to the control cell is associated with increased expression of CD98 Indicates the presence of cancer. In some embodiments, the test cell is a cancer selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, glioma, lymphoma and leukemia, It is a cell of a patient suspected of having one metastasis. In one embodiment, the method comprises the steps of determining the level of expression of CD98 on the surface of the test cell, and comparing the level of expression of CD98 on the surface of the test cell with the level of expression of CD98 on the surface of the control cell . In some embodiments, the test cells are cancer cells and the control cells are normal cells of the same tissue type.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 전술된 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제품 또는 "키트"가 제공된다. 상기 제품은 용기, 및 이 용기 상에 있거나 이 용기에 동봉된 표지 또는 사용설명서를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대, 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 병태의 치료에 효과적인 항체 또는 항체-약물 접합체(ADC) 조성물을 보유하고 멸균 출입구를 가질 수 있다(예를 들면, 상기 용기는 피하 주사 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 상기 조성물 중의 하나 이상의 활성제는 항체 또는 ADC이다. 표지 또는 사용설명서는 상기 조성물이 선택된 병태, 예컨대, 암의 치료에 사용된다는 것을 표시한다. 대안적으로 또는 추가로, 제품은 약학적으로 허용가능한 완충제, 예컨대, 정균 주사용수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제품은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯한, 상업적 및 사용자 관점에서 볼 때 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.In another embodiment of the invention, a product or "kit" is provided that contains a substance useful for the treatment of the disorders described above. The product includes a container, and a label or instructions on the container or enclosed in the container. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes, blister packs, and the like. The container can be formed from a variety of materials, such as glass or plastic. The container may have an antibody or antibody-drug conjugate (ADC) composition effective for the treatment of the condition and may have a sterile access port (e.g., the container may be an intravenous solution bag having a cap which can be perforated by a hypodermic needle Or vial). One or more active agents in the composition are antibodies or ADCs. A label or instructions for use indicates that the composition is used for the treatment of a selected condition, such as cancer. Alternatively or additionally, the article further comprises a second (or third) container comprising a pharmaceutically acceptable buffer such as bacteriostatic water for injection (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution can do. The product may further comprise other materials desirable from a commercial and user standpoint, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.

도 1은 AML, CLL 및 CRC 표본들, 및 관련 정상 대조군에서 sTAg 분석에 의해 확인되고 정량된 CD98의 단백질 발현 수준을 보여준다. 선은 양성 대조군 샘플에서 % 표준화된 스펙트럼 존재도 인자(NSAF)의 평균을 표시한다.
도 2는 39개의 항-CD98 항체들에 대한 에피토프 비닝(binning)의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 키메라 항-CD98 단일클론 항체 8-34B, 18-2A 2.1, 18-2A 2.2 및 18-2A 2.7의 결합 성질을 보여준다. 도 3a는 키메라 항-CD98 단일클론 항체들에 대한 에피토프 비닝의 결과를 보여주는 그래프이다. 4개의 기준 항체들은 도 1에서와 같다. "동종형"은 CD98에 결합하지 않는 동일한 동종형의 대조군 항체이다. 도 3b는 결장암 세포주 DLD1을 사용한 FACS 분석에 의해 측정된 키메라 항-CD98 단일클론 항체의 Kd를 보여준다. 도 3c는 키메라 항-CD98 단일클론 항체들로 염색된, 3개의 AML 일차 종양 샘플 및 사이노몰구스 원숭이 CD98(cynCD98)을 발현하는 세포주의 FACS 분석 결과를 보여준다.
도 4는 인간화된 8-34B 항체의 구축을 보여준다. 도 4a는 인간 수용자 서열(AC) 및 인간화된 경쇄 L1 및 L2의 서열과 정렬된 뮤린 8-34B 경쇄 가변 도메인(IGN 34)의 서열을 보여준다. 카바트 넘버링에 따른 CDR들은 적색으로 표시되어 있고, L1에 비해 L2에서의 치환은 밑줄로 표시되어 있다. 도 4a는 나타나는 순서로 각각 서열번호 6, 38, 15, 16 및 38을 개시한다. 도 4b는 인간 수용자 서열(AC) 및 인간화된 중쇄 H1, H2 및 H3의 서열과 정렬된 뮤린 8-34B 중쇄 가변 도메인(IGN 34)의 서열을 보여준다. 카바트 넘버링에 따른 CDR들은 적색으로 표시되어 있고, H3에 비해 H2 및 H3에서의 치환은 밑줄로 표시되어 있다. 도 4b는 나타나는 순서로 각각 서열번호 4, 39, 17 내지 19 및 40을 개시한다.
도 5는 항-CD98 항체 치료가 확립된 라모스(Ramos) 종양에서 강한 종양 성장 억제를 유도한다는 것을 보여준다. 치료가 시작되는 시점에서의 종양 부피는 (a) 약 75 mm³부터 (b) 약 150 mm³ 내지 (c) 약 250 mm³까지 증가하였다. 항체의 투약은 29일째 날(a) 또는 22일째 날(b)에서 중단되었고, 연구 지속기간 동안 종양 재성장을 측정하였다. 리툭시맙(항-CD20 항체)을 양성 치료 대조군 항체로서 사용하였고, 항체 HB121(ATCC)을 IgG2a 동종형 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 6은 항-CD98 항체가 치료된 라모스 종양의 진행 시간을 유의하게 지연시킨다는 것을 보여준다. 이전 종양 재성장 데이터(도 4a 내지 4c)의 종양 배가(doubling) 시간을 계산하고 진행 시간(TTP)의 추가 예측을 위해 사용하였다. 그 다음, 2000 mm³에 도달하였을 때까지 TTP를 치료군 내의 각각의 동물에 대해 외삽하고 카플란-메이에르(Kaplan-Meier) 곡선으로서 그래프화하였다.
도 7은 림프종 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 리툭산 및 음성 대조군 IgG2a에 비해 항-CD98 단일클론 항체 18-2A에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 8은 급성 골수성 백혈병 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 음성 대조군 IgG2a에 비해 항-CD98 단일클론 항체 18-2A 및 8-34B에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 9는 결장직장암 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 에르비툭스 및 음성 대조군 IgG2a(제1 연구), 및 DC101 + CTX(사이클로포스파미드) 및 음성 대조군 IgG2a(제2 연구)에 비해 항-CD98 단일클론 항체 18-2A에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. DC101은 래트 항-마우스 VEGFR2/KDR IgG1 mAb(ATCC 번호 HB-11534)이고 양성 대조군으로서 작용한다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 10은 비-소세포 폐암종 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 에르비툭스(항-EGFR) 및 음성 대조군 IgG2a에 비해 항-CD98 단일클론 항체 18-2A에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 11은 상이한 면역결핍 배경을 갖는 마우스 품종들에서 림프종 이종이식편의 생체내 종양 성장에 대한 항-CD98 단일클론 항체의 효과를 보여준다: (A) NSG 마우스; (B) NOD.SCID 마우스 및 (C) SCID 마우스.
도 12는 림프종 이종이식편의 생체내 종양 성장에 대한 키메라 항-CD98 단일클론 항체들(18-2A-ch7.1 및 8-34B-ch)의 효과를 그들의 모 뮤린 단일클론 항체들(18-2A 및 8-34B)과 비교하여 보여준다.
도 13은 인간 CD98 서열(서열번호 1) 내로 치환되어 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 결합되는 인간 CD98 상의 에피토프를 맵핑하는 데에 사용된 13개의 마우스-인간 CD98 키메라 구축물들을 형성하는 마우스 CD98 서열(서열번호 96)의 영역들을 보여준다.
도 14는 FACS 분석에 의해 측정된, 인간화된 단일클론 항체 IGN523 및 대조군 항체와 13개의 마우스-인간 CD98 키메라 구축물들 각각의 결합을 보여준다.
도 15는 마우스-인간 CD98 키메라 구축물을 사용함으로써 확인된, IGN523이 결합하는 인간 CD98의 영역의 서열, 및 CD98의 3차원 구조 내에서의 이 서열의 위치를 보여준다. 아미노산 T358 내지 G368(밑줄로 표시됨)은 결정 구조에서 묻혀있고 결합 계면의 부분일 것 같지 않다. 인간 서열과 마우스 서열 사이의 비-보존된 잔기는 굵은 글자체로 표시되어 있다.
도 16은 마우스 CD98의 비-상동성 잔기를 인간 서열의 표적화된 루프 영역 내로 도입함으로써 제조된 4개의 구축물들과 IGN523의 결합을 보여준다. 구축물 4.1은 돌연변이 I371L, D374Q 및 A375G, 및 A376의 결실로 구성된다. 구축물 4.2는 돌연변이 M383A 및 E384K로 구성된다. 구축물 4.3은 돌연변이 D391N, F395I, P396F 및 D397H로 구성된다. 구축물 4.4는 돌연변이 G400R, A401P 및 A404L로 구성된다. 결합은 각각의 구축물로 형질감염된 CHO 세포의 FACS 분석에 의해 검출되었다.
도 17은 표적화된 루프 영역 내의 소수성 잔기들의 단일 돌연변이 구축물과 IGN523의 결합을 보여준다. 각각의 표시된 소수성 잔기는 나타낸 바와 같이 고도로 하전된 아미노산으로 치환되었다. 결합은 각각의 구축물로 형질감염된 CHO 세포의 FACS 분석에 의해 검출되었다.
도 18은 각각의 구축물로 형질감염된 CHO 세포의 FACS 분석에 의해 검출된, 표적화된 루프 영역 내에 잔기의 다수의 돌연변이를 함유하는 구축물과 IGN523의 결합을 보여준다. M1은 돌연변이 D374Q, D397H, G400R 및 A401P를 함유한다. M2는 돌연변이 D374E 및 A375E를 함유한다. M3은 돌연변이 D397S 및 I398T를 함유한다.
도 19는 인간화된 단일클론 항체 IGN523의 에피토프 맵핑을 위한 가변 길이 펩티드 스크린의 결과를 보여준다. 각각의 펩티드에 대한 ELISA 결과는 수평선으로서 표시되어 있다. 상기 선의 시작점 및 종점이 펩티드 내에 포함되어 있다. 상기 선의 Y 값은 그 펩티드에 대해 수득된 ELISA 결과를 보여준다. 결과는 ₃₉₅FPDIPGA₄₀₁에 대한 우세한 결합 및₃₇₉PGQP₃₈₂에 대한 부차적 결합을 시사한다(음영 표시 영역).
도 20은 가장 우수한 결합 단일 위치 알라닌 치환 펩티드 세트의 결과를 보여준다. 각각의 잔기는 A(원래의 아미노산이 A인 경우 G)로 치환되었다. 치환 문자가 그래프에서 작도되는 높이는 그 돌연변이된 펩티드에 대한 수득된 ELISA 값이다. 중앙선 및 음영 표시 간격은 기준 ELISA 값을 표시한다.
도 21은 인간 CD98의 2개의 부분 서열들을 조합한 CLIPS 입체구조형 매트릭스 구조로부터 수득된 데이터를 나타내는 열 맵을 보여준다(서열번호 45 내지 59는 X 축 상에 제시되어 있고, 서열번호 60 내지 74는 Y 축 상에 제시되어 있다).
도 22는 도 21에 나타낸 매트릭스 분석으로부터의 강한 결합 펩티드의 돌연변이유발 스크린의 결과를 보여준다. SEQ1은 펩티드의 서열을 보여주고, DIF1은 펩티드에서 돌연변이가 위치하는 곳을 표시한다. 회색 영역은 비-돌연변이된 서열을 갖는 펩티드를 표시한다. 마지막 칸은 야생형 펩티드와 돌연변이된 펩티드 사이의 ELISA 값의 차이를 보여준다. 높은 값은 돌연변이가 결합에 대한 강한 부정적인 효과를 갖는다는 것을 표시한다.
도 23은 인간화된 단일클론 항체 IGN523의 결합에 중요한 것으로 확인된 아미노산 잔기가 인간 CD98의 서열 및 표면에 존재하는 위치를 보여준다. 도 23a는 키메라 및 돌연변이유발 연구(굵은 글자체), 펩스캔 분석(회색) 또는 둘다(음영 표시)에 의해 확인된 잔기의 서열내 위치를 보여준다. 도 23b는 키메라 및 돌연변이유발 연구에 의해 확인된 잔기의 위치(어두운 회색)를 보여준다. 도 23c는 펩스캔 분석에 의해 확인된 잔기의 위치(밝은 회색)를 보여준다. 도 23d는 잔기들의 두 세트의 중첩(흑색)을 보여준다.
도 24는 라모스(RA.1) 버킷 림프종 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 리툭시맙 및 음성 대조군 IgG에 비해 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 항체를 11일째 날, 17일째 날 및 25일째 날 10 mg/kg의 용량으로 복강내로 투여하였다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 25는 DAU 버킷 림프종 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 리툭산 및 음성 대조군 IgG에 비해 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 항체를 20일째 날 및 26일째 날 10 mg/kg의 용량으로 복강내로 투여하였다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 26a는 IGN-LNG-12 폐 종양 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 카보플라틴 및 음성 대조군 IgG에 비해 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. IGN523 및 카보플라틴을 17일째 날, 24일째 날 및 31일째 날 각각 10 mg/kg 또는 75 mg/kg의 용량으로 복강내로 투여하였다. 화살표는 치료의 투여를 표시한다. 도 26b는 표시된 시약으로 치료된 도 26a의 마우스에 상응하는 체중 측정을 보여준다. 카보플라틴을, NOD-SCID 마우스에서 체중 손실을 유도하는 그의 최대 내약 용량으로 투여하였다.
도 27은 KG-1 급성 골수성 백혈병 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 리툭산 및 음성 대조군 IgG에 비해 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 억제되었다는 것을 보여준다. 상기 항체를 21일째 날, 28일째 날 및 34일째 날 15 mg/kg의 용량으로 복강내로 투여하였다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 28은 폐 종양 이종이식편에서 생체내 종양 성장이 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의해 용량 의존적으로 억제되었다는 것을 보여준다. 상기 항체를 12일째 날 및 19일째 날 표시된 용량으로 복강내로 투여하였다. 화살표는 항체 치료의 투여를 표시한다.
도 29는 인간화된 단일클론 항체 IGN523에 의한 인간 및 사이노몰구스 원숭이 동결 조직 박편의 염색을 보여준다. 인간 및 사이노몰구스 원숭이 신장, 대뇌 및 태반의 냉동박편을 10 ㎍/㎖의 IGN523으로 염색하였다. 면역조직화학을 위한 투손(Tuson), 풍(Fung) 및 히어크(Hierck)의 방법들의 변법을 이용하여 IGN523의 표지 부착에 대한 필요성을 없앴고 이차 표지된 항-인간 IgG와 검사되는 조직에 대한 내생성 IgG 사이의 비-특이적 반응성을 배제하였다(Fung 1992, Hierck 1994, Tuson 1990). 박편을 대략 5 ㎛로 절단하였다. 모든 슬라이드들을 먼저 조직 요소 및 염색의 적당함에 대해 평가한 후, 연구 병리학자가 염색의 강도에 대해 평가하고 주관적으로 등급화하였다. 대표적인 이미지는 인간 대뇌(20배)를 제외하고 40배 확대율로 제시되어 있다.Figure 1 shows the protein expression levels of CD98 identified and quantified by sTAg analysis in AML, CLL and CRC samples, and related normal controls. The line represents the mean of the% normalized spectral potency factor (NSAF) in the positive control sample.
Figure 2 is a graph showing the results of epitope binning for 39 anti-CD98 antibodies.
Figure 3 shows the binding properties of chimeric anti-CD98 monoclonal antibodies 8-34B, 18-2A 2.1, 18-2A 2.2 and 18-2A 2.7. Figure 3A is a graph showing the results of epitope-binning for chimeric anti-CD98 monoclonal antibodies. The four reference antibodies are shown in Fig. "Homologous" is a control antibody of the same isotype that does not bind to CD98. Figure 3b shows the Kd of the chimeric anti-CD98 monoclonal antibody as measured by FACS analysis using the colon cancer cell line DLDl. Figure 3c shows FACS analysis results of three AML primary tumor samples stained with chimeric anti-CD98 monoclonal antibodies and a cell line expressing cynomolgus monkey CD98 (cynCD98).
Figure 4 shows the construction of a humanized 8-34B antibody. Figure 4A shows the sequence of the human acceptor sequence (AC) and the murine 8-34B light chain variable domain (IGN 34) aligned with sequences of humanized light chains L1 and L2. The CDRs according to Kabat numbering are marked in red, and the substitution at L2 relative to L1 is underlined. Figure 4A discloses SEQ ID NOS: 6, 38, 15, 16 and 38, respectively, in the order in which they appear. Figure 4b shows the sequence of the human acceptor sequence (AC) and the murine 8-34B heavy chain variable domain (IGN 34) aligned with the sequence of the humanized heavy chain H1, H2 and H3. CDRs according to Kabat numbering are marked in red, and substitutions in H2 and H3 are underlined as compared to H3. Figure 4b discloses SEQ ID NOS: 4, 39, 17-19 and 40, respectively, in the order they appear.
Figure 5 shows that anti-CD98 antibody treatment induces strong tumor growth inhibition in established < RTI ID = 0.0 > Ramos < / RTI > tumors. At the beginning of treatment, the tumor volume increased from (a) about 75 mm ³ to (b) about 150 mm ³ to (c) about 250 mm ³ . Antibody dosing was discontinued on day 29 (a) or day 22 (b) and tumor regrowth was measured over the course of the study. Rituximab (anti-CD20 antibody) was used as a positive control control antibody and antibody HB121 (ATCC) was used as an IgG2a homologous negative control.
Figure 6 shows that the anti-CD98 antibody significantly delayed the progression time of the treated Ramos tumors. The tumor doubling time of the previous tumor regrowth data (Figures 4a-4c) was calculated and used for further prediction of progression time (TTP). TTP was then extrapolated to each animal in the treatment group and plotted as a Kaplan-Meier curve until 2000 mm ³ was reached.
Figure 7 shows that in vivo tumor growth in lymphoma xenografts was inhibited by anti-CD98 monoclonal antibody 18-2A compared to Rituxan and negative control IgG2a. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 8 shows that in vivo tumor growth in acute myelogenous leukemia xenografts was inhibited by anti-CD98 monoclonal antibodies 18-2A and 8-34B compared to negative control IgG2a. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 9 shows that in vivo tumor growth in colorectal carcinomatous grafts is more potent than that of erbuxox and negative control IgG2a (first study) and DC101 + CTX (cyclophosphamide) and negative control IgG2a (second study) RTI ID = 0.0 > monoclonal < / RTI > antibody 18-2A. DC101 is a rat anti-mouse VEGFR2 / KDR IgG1 mAb (ATCC No. HB-11534) and serves as a positive control. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 10 shows that in vivo tumor growth in non-small cell lung carcinoma xenografts was inhibited by anti-CD98 monoclonal antibody 18-2A relative to erbuxox (anti-EGFR) and negative control IgG2a. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 11 shows the effect of anti-CD98 monoclonal antibodies on in vivo tumor growth of lymphoma xenografts in mouse cultures with different immunodeficient backgrounds: (A) NSG mice; (B) NOD.SCID mouse and (C) SCID mouse.
Figure 12 shows the effect of chimeric anti-CD98 monoclonal antibodies (18-2A-ch7.1 and 8-34B-ch) on in vivo tumor growth of lymphoma xenografts in combination with their myilin monoclonal antibodies (18-2A And 8-34B.
Figure 13 depicts the murine CD98 sequence (SEQ ID NO: 1) which forms the 13 mouse-human CD98 chimeric constructs used to map epitopes on human CD98 bound by the humanized monoclonal antibody IGN523 substituted into the human CD98 sequence SEQ ID NO: 96).
Figure 14 shows the binding of humanized monoclonal antibody IGN523 and control antibody and 13 mouse-human CD98 chimeric constructs, respectively, as determined by FACS analysis.
Figure 15 shows the sequence of the region of human CD98 to which IGN523 binds and the position of this sequence within the three dimensional structure of CD98, confirmed by using a mouse-human CD98 chimeric construct. The amino acids T358 to G368 (underlined) are buried in the crystal structure and are unlikely to be part of the binding interface. The non-conserved residues between human and mouse sequences are indicated in bold typeface.
Figure 16 shows the binding of IGN523 to four constructs produced by introducing non-homologous residues of mouse CD98 into the targeted loop region of the human sequence. Construct 4.1 consists of deletions of mutations I371L, D374Q and A375G, and A376. Construct 4.2 consists of the mutations M383A and E384K. Construct 4.3 consists of the mutations D391N, F395I, P396F and D397H. Construct 4.4 consists of the mutations G400R, A401P and A404L. Binding was detected by FACS analysis of CHO cells transfected with each construct.
Figure 17 shows the binding of IGN523 to a single mutant construct of hydrophobic residues within the targeted loop region. Each labeled hydrophobic residue was replaced with a highly charged amino acid as shown. Binding was detected by FACS analysis of CHO cells transfected with each construct.
Figure 18 shows the binding of IGN523 to a construct containing multiple mutations of residues within the targeted loop region, detected by FACS analysis of CHO cells transfected with each construct. M1 contains the mutations D374Q, D397H, G400R and A401P. M2 contains the mutations D374E and A375E. M3 contains the mutations D397S and I398T.
Figure 19 shows the results of a variable length peptide screen for epitope mapping of the humanized monoclonal antibody IGN523. ELISA results for each peptide are indicated as horizontal lines. The starting and ending points of the line are contained within the peptide. The Y value of the line shows the ELISA results obtained for the peptides. The results suggest a predominant binding to ₃₉₅ FPDIPGA ₄₀₁ and a secondary binding to ₃₇₉ PGQP ₃₈₂ (shaded area).
Figure 20 shows the results of a set of best binding single-site alanine substituted peptides. Each residue was replaced with A (G if the original amino acid was A). The height at which the substitution character is constructed in the graph is the obtained ELISA value for the mutated peptide. The center line and the shaded display interval indicate the reference ELISA value.
21 shows a thermal map showing data obtained from a CLIPS conformational matrix structure combining two partial sequences of human CD98 (SEQ ID NOs: 45 to 59 are shown on the X-axis, SEQ ID NOs: 60 to 74 are Y Axis).
Figure 22 shows the results of a mutagenic screen of a strong binding peptide from the matrix assay shown in Figure 21. SEQ1 shows the sequence of the peptide, and DIF1 indicates where the mutation is located in the peptide. The gray areas indicate peptides with non-mutated sequences. The last column shows the difference in ELISA values between the wild type peptide and the mutated peptide. Higher values indicate that the mutation has a strong negative effect on binding.
Figure 23 shows the positions where amino acid residues found to be important in binding of the humanized monoclonal antibody IGN523 are present in the sequence and surface of human CD98. Figure 23a shows the positions in the sequence of residues identified by chimeric and mutagenic studies (bold letters), pepscan analysis (gray), or both (shaded). Figure 23b shows the location (dark gray) of the residues identified by chimeric and mutagenic studies. Figure 23C shows the location (light gray) of the residue identified by the Pepscan analysis. Figure 23d shows the overlap (black) of two sets of residues.
Figure 24 shows that in vivo tumor growth in the Ramis (RA. 1) buckling lymphoma xenograft was inhibited by the humanized monoclonal antibody IGN523 compared to rituximab and negative control IgG. Antibodies were administered intraperitoneally at a dose of 10 mg / kg on day 11, day 17 and day 25. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 25 shows that in vivo tumor growth in DAU buckling lymphoma xenografts was inhibited by the humanized monoclonal antibody IGN523 compared to Rituxan and negative control IgG. Antibodies were administered intraperitoneally at doses of 10 mg / kg on days 20 and 26. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 26a shows that in vivo tumor growth in the IGN-LNG-12 pulmonary tumor xenografts was inhibited by the humanized monoclonal antibody IGN523 compared to carboplatin and negative control IgG. IGN523 and carboplatin were intraperitoneally administered at a dose of 10 mg / kg or 75 mg / kg on the 17th day, 24th day and 31st day, respectively. The arrow indicates the administration of the treatment. Figure 26b shows a body weight measurement corresponding to the mouse of Figure 26a treated with the indicated reagent. Carboplatin was administered at its maximum dose to induce weight loss in NOD-SCID mice.
Figure 27 shows that in vivo tumor growth in KG-I acute myelogenous leukemia xenografts was inhibited by humanized monoclonal antibody IGN523 compared to Rituxan and negative control IgG. The antibodies were administered intraperitoneally at a dose of 15 mg / kg on days 21, 28, and 34. The arrows indicate administration of antibody therapy.
Figure 28 shows that in vivo tumor growth in lung tumor xenografts was dose-dependently inhibited by the humanized monoclonal antibody IGN523. The antibody was administered intraperitoneally at the indicated doses on day 12 and day 19. The arrows indicate administration of antibody therapy.
29 shows the staining of human and cynomolgus monkey frozen tissue flakes with the humanized monoclonal antibody IGN523. Human and Cynomolgus monkey kidneys, cerebral and placental frozen flakes were stained with 10 [mu] g / ml of IGN523. Using the variants of Tuson, Fung, and Hierck's methods for immunohistochemistry, the need for label attachment of IGN523 was eliminated, and the presence of secondary labeled anti-human IgG, Specific reactivity between intrinsic IgG (Fung 1992, Hierck 1994, Tuson 1990). The flakes were cut to approximately 5 탆. All slides were first assessed for tissue factor and staining suitability, and then evaluated by the pathologist for the intensity of the staining and subjectively graded. Representative images are presented at a magnification of 40 times except for the human brain (20 times).

일반적인 기법General technique

본원에 기재되어 있거나 언급되어 있는 기법 및 절차는 일반적으로 잘 이해되어 있고 당업자에 의해 보편적인 방법, 예를 들면, 문헌(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3^rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.); 문헌(Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003))); 문헌(Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed, Wiley, Hoboken N.J. (2009)); 문헌(Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, M. Albitar, ed., Humana Press, Totawa, N.J. (2010)); 및 문헌(Antibody Engineering, 2^nd Ed., Vols 1 and 2, Kontermann and Dubel, eds., Springer-Verlag, Heidelberg, 2010)에 기재된 널리 이용되는 방법의 이용을 통해 통상적으로 이용된다. The techniques and procedures described or referred to herein are generally well understood and can be performed by those skilled in the art, for example, as described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3 ^rd . Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY); Current Protocols in Molecular Biology (FM Ausubel, et al., Eds., (2003)); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed., Wiley, Hoboken NJ (2009)); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, M. Albitar, ed., Humana Press, Totawa, N.J. (2010)); ^And through the use of widely used methods described in literature (Antibody Engineering, 2 ^nd Ed., Vols 1 and 2, Kontermann and Dubel, eds., Springer-Verlag, Heidelberg, 2010).

정의 및 약어Definitions and Acronyms

정의Justice

본 명세서를 해석하기 위해, 하기 정의가 적용될 것이고, 적절할 때마다 단수형으로 사용된 용어는 복수형도 포함할 것이고 반대로 복수형으로 사용된 용어는 단수형도 포함할 것이다. 기재된 임의의 정의가 본원에 참고로 도입된 임의의 문헌과 불일치하는 경우, 하기 기재된 정의가 우선할 것이다.To interpret this specification, the following definitions shall apply and terms used singularly as appropriate will also include the plural, and conversely, the terms used in plural will also include the singular. In the event any discrepancy is inconsistent with any of the documents incorporated herein by reference, the definitions set forth below will take precedence.

본원에서 사용된 바와 같이, 달리 표시되어 있지 않은 한, 용어 "CD98"은 포유동물, 예컨대, 영장류(예를 들면, 인간, 사이노몰구스 원숭이(cyno)), 개 및 설치류(예를 들면, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터 유래된 임의의 천연 CD98을 지칭한다. 인간 CD98의 아미노산 서열 및 코딩 핵산 서열은 각각 서열번호 1 및 서열번호 2로서 하기 제공되어 있다.As used herein, unless otherwise indicated, the term "CD98" refers to a mammal such as a primate (e.g., human, cynomolgus cyno), dogs and rodents And rats). &Lt; / RTI > The amino acid sequence and coding nucleic acid sequence of human CD98 are provided below as SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, respectively.

용어 "CD98"은 프로세싱되지 않은 "전장" CD98뿐만 아니라 세포에서 프로세싱으로부터 발생되는 임의의 형태의 CD98도 포괄한다. 상기 용어는 CD98의 천연 발생 변이체 또는 돌연변이, 예를 들면, 스플라이스 변이체, 대립형질 변이체, SNP 변이체 및 동형체(isoform)도 포괄한다. 본원에 기재된 CD98 폴리펩티드는 다양한 공급원들, 예컨대, 인간 조직 종류 또는 또 다른 공급원으로부터 단리될 수 있거나 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. "천연 서열 CD98 폴리펩티드"는 자연으로부터 유래된 상응하는 CD98 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 천연 서열 CD98 폴리펩티드는 자연으로부터 단리될 수 있거나 재조합 또는 합성 수단에 의해 제조될 수 있다. 용어 "천연 서열 CD98 폴리펩티드"는 구체적으로 특정 CD98 폴리펩티드의 천연 발생 절두된 또는 분비된 형태(예를 들면, 세포외 도메인 서열), 상기 폴리펩티드의 천연 발생 변이체 형태(예를 들면, 대안적으로 스플라이싱된 형태) 및 천연 발생 대립형질 변이체를 포괄한다.The term "CD98" encompasses unprocessed "whole" CD98 as well as any form of CD98 resulting from processing in cells. The term encompasses naturally occurring variants or mutations of CD98, such as splice variants, allelic variants, SNP variants and isoforms. The CD98 polypeptides described herein can be isolated from a variety of sources, such as human tissue types or other sources, or can be prepared by recombinant or synthetic methods. "Natural sequence CD98 polypeptide" includes polypeptides having the same amino acid sequence as the corresponding CD98 polypeptide from nature. Such native sequence CD98 polypeptides can be isolated from nature or can be prepared by recombinant or synthetic means. The term "native sequence CD98 polypeptide" specifically refers to a naturally occurring truncated or secreted form of a particular CD98 polypeptide (e.g., an extracellular domain sequence), a naturally occurring variant form of the polypeptide (e.g., &Lt; / RTI > intact forms) and naturally occurring allelic variants.

용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 예를 들면, 하기 정의된 바와 같은 단일 항-CD98 단일클론 항체(작용제, 길항제, 중화 항체, 전장 또는 온전한 단일클론 항체를 포함함), 다중에피토프 특이성을 갖는 항-CD98 항체 조성물, 다중클론 항체, 다가 항체, 2개 이상의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예를 들면, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 이중특이적 항체), 단일 쇄 항-CD98 항체, 및 항-CD98 항체의 단편을 커버한다. 용어 "면역글로불린"(Ig)은 본원에서 항체와 상호교환적으로 사용된다. 항체는 인간 항체, 인간화된 항체 및/또는 친화성 성숙된 항체일 수 있다.The term "antibody" is used in its broadest sense and specifically includes, for example, monoclonal anti-CD98 monoclonal antibodies (including agonists, antagonists, neutralizing antibodies, full length or intact monoclonal antibodies) CD98 antibody composition, polyclonal antibody, multivalent antibody, multispecific antibody formed from two or more intact antibodies (e. G., As long as it exhibits the desired biological activity), single chain anti-CD98 Antibody, and fragments of the anti-CD98 antibody. The term "immunoglobulin" (Ig) is used interchangeably herein with antibodies. The antibody may be a human antibody, a humanized antibody, and / or an affinity matured antibody.

"항원"은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 예정된 항원이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 햅텐, 또는 다른 천연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 바람직하게는, 표적 항원은 폴리펩티드이다.An "antigen" is a predetermined antigen to which an antibody can selectively bind. The target antigen may be a polypeptide, a carbohydrate, a nucleic acid, a lipid, a hapten, or other naturally occurring or synthetic compound. Preferably, the target antigen is a polypeptide.

관심있는 항원에 "결합하는" 항체는 이 항체가 상기 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는 데에 있어서 치료제로서 유용하고 다른 단백질과 유의하게 교차반응하지 않도록 충분한 친화성으로 상기 항원에 결합하는 항체이다. 이러한 실시양태에서, 항체와 "비-표적" 단백질의 결합 정도는 형광 활성화된 세포 분류(FACS) 분석 또는 방사면역침전(RIA)에 의해 측정되었을 때 항원과 그의 특정 표적 단백질의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 항체와 표적 분자의 결합과 관련하여, 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적 상의 에피토프에 대한 용어 "특이적 결합", "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 대해 특이적인"은 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들면, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합에 비해 분자의 결합을 측정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적, 예를 들면, 과량의 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 측정될 수 있다. 이 경우, 특이적 결합은 표지된 표적과 프로브의 결합이 과량의 비-표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 표시된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적 상의 에피토프에 대한 용어 "특이적 결합", "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 대해 특이적인"은 예를 들면, 표적에 대한 약 10^-4 M 이상, 대안적으로 약 10^-5 M 이상, 대안적으로 약 10^-6 M 이상, 대안적으로 약 10^-7 M 이상, 대안적으로 약 10^-8 M 이상, 대안적으로 약 10^-9 M 이상, 대안적으로 약 10^-10 M 이상, 대안적으로 약 10^-11 M 이상 또는 대안적으로 약 10^-12 M 이상의 Kd를 갖는 분자에 의해 나타날 수 있다. 한 실시양태에서, 용어 "특이적 결합"은 분자가 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 경우의 결합을 지칭한다. An antibody that "binds" to an antigen of interest is an antibody that is useful as a therapeutic agent in targeting cells or tissues expressing the antigen and that binds to the antigen with sufficient affinity so that it does not cross- to be. In such embodiments, the degree of binding of the antibody to a "non-target" protein is about 10% of the binding of the antigen and its specific target protein when measured by fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis or radioimmunoprecipitation (RIA) . The terms "specific binding, "" specifically binding to, " or "specific to" for the epitope on a particular polypeptide or target of a particular polypeptide, Means measurable different bonds. Specific binding can be measured, for example, by measuring the binding of a molecule to a binding of a control molecule, which is a molecule of similar structure that generally has no binding activity. For example, specific binding can be measured by competition with a target, e. G., A control molecule similar to an excess of unlabeled target. In this case, the specific binding is indicated when the binding of the labeled target to the probe is competitively inhibited by an excess of non-labeled target. As used herein, the particular polypeptide or a term for an epitope on a particular polypeptide target "specific binding", "specifically binding to" or "specific for", for example, about 10 to target ^{- 4} M or more, alternatively at least about 10 ^-5 M, alternatively at least about 10 ^-6 M, alternatively at least about 10 ^-7 M, alternatively at least about 10 ^-8 M, alternatively about 10 ^{- 9} M, alternatively greater than about 10 ^-10 M, alternatively greater than about 10 ^-11 M, or alternatively greater than about 10 ^-12 M. In one embodiment, the term "specific binding" refers to the binding when a molecule binds to an epitope on a particular polypeptide or a particular polypeptide without substantially binding to any other polypeptide or polypeptide epitope.

용어 "항-CD98 항체" 또는 "CD98에 결합하는 항체"는 이 항체가 CD98을 표적화하는 데에 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용할 정도로 충분한 친화성으로 CD98에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 바람직하게는, 항-CD98 항체와 무관한 비-CD98 단백질의 결합 정도는 예를 들면, 형광 활성화된 세포 분류(FACS) 분석 또는 방사면역분석(RIA)에 의해 측정되었을 때 상기 항체와 CD98의 결합의 약 10% 미만이다. "CD98에 특이적으로 결합하는" 또는 "CD98에 대해 특이적인" 항체는 상기 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, CD98에 결합하는 항체는 1 μM 이하, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 1 nM 이하 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-CD98 항체는 상이한 종들의 CD98 사이에 보존되어 있는 CD98의 에피토프에 결합한다.The term "anti-CD98 antibody" or "antibody binding to CD98" refers to an antibody capable of binding to CD98 with sufficient affinity such that the antibody is useful as a diagnostic agent and / or therapeutic agent in targeting CD98 . Preferably, the degree of binding of the non-CD98 protein independent of the anti-CD98 antibody is determined by, for example, binding of the antibody to CD98 when measured by fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis or radioimmunoassay (RIA) &Lt; / RTI > The terms "specifically binding to CD98" or "CD98 specific" antibodies are as defined above. In certain embodiments, the antibody that binds to CD98 has a dissociation constant (Kd) of 1 μM or less, 100 nM or less, 10 nM or less, 1 nM or less, or 0.1 nM or less. In certain embodiments, the anti-CD98 antibody binds to an epitope of CD98 that is conserved among CD98 of different species.

"단리된 항체"는 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리되고/되거나 회수된 항체이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 치료 용도를 방해하고 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있는 물질들을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법(Lowry et al., J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951)에 의해 측정되었을 때 95 중량% 초과의 항체, 가장 바람직하게는 99 중량% 초과의 항체, (2) 회전 컵 서열분석기의 이용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 수득하기에 충분한 정도, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 이용하는 환원 또는 비-환원 조건 하에서의 SDS-PAGE에 의해 균질한 정도까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 하나 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 원위치 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.An "isolated antibody" is an antibody identified and separated and / or recovered from a component of its natural environment. Contaminants in his natural environment include, but are not limited to, substances that interfere with therapeutic uses for antibodies and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or non-proteinaceous solutes. In a preferred embodiment, the antibody comprises (1) greater than 95% by weight of antibody as measured by the Lowry method (Lowry et al., J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951) (2) to an extent sufficient to obtain at least 15 residues of the N-terminal or internal amino acid sequence by use of a rotating cup sequencer, or (3) Will be purified to homogeneity by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using staining. An isolated antibody includes an in situ antibody in a recombinant cell since one or more components of the natural environment of the antibody will not be present. Typically, however, the isolated antibody will be produced by one or more purification steps.

염기성 4-쇄 항체 유닛은 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. IgG의 경우, 상기 4-쇄 유닛은 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 이황화 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 동종형에 따라 1개 이상의 이황화 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 일정한 간격을 두고 쇄내 이황화 가교도 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에서 가변 도메인(V_H)을 갖고 이어서 α 및 γ 쇄 각각에 대한 3개의 불변 도메인(C_H) 및 μ 및 ε 동종형에 대한 4개의 C_H 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서 가변 도메인(V_L)을 갖고 이어서 그의 다른 말단에서 불변 도메인(C_L)을 갖는다. V_L은 V_H와 정렬되고, C_L은 중쇄의 제1 불변 도메인(C_H1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 생각된다. V_H와 V_L의 짝 형성은 단일 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 클래스의 항체들의 구조 및 성질에 대해서는 예를 들면, 문헌(Basic and Clinical Immunology, 8^th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6)을 참조한다.The basic four-chain antibody unit is a heterospray glycoprotein composed of two identical light chains (L) and two identical heavy chains (H). For IgG, the 4-chain unit is generally about 150,000 daltons. Each L chain is linked to the H chain by one covalent disulfide bond, while the two H chains are connected to each other by one or more disulfide bonds according to the H chain isoform. Each of the H and L chains has an intra-chain disulfide bridging at regular intervals. Each H chain has a variable domain (V _H ) at the N-terminus followed by three constant domains (C _H ) for each of the alpha and gamma chains and four C _H domains for the [mu] and [epsilon] isoforms. Each L chain has a variable domain (V _L ) at its N-terminus followed by a constant domain (C _L ) at its other terminus. V _L is aligned with V _H, and C _L is aligned with the first constant domain (C _H 1) of the heavy chain. It is believed that certain amino acid residues form an interface between the light chain variable domain and the heavy chain variable domain. Pairing of V _H and V _L forms a single antigen binding site. For the structure and properties of antibodies of a different class, for example, in (Basic and Clinical Immunology, 8 ^th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6).

항체의 "가변 영역", "가변 도메인" 또는 "V 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 도메인은 "V_H"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 도메인은 "V_L"로서 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은 가변 도메인들의 특정 절편들이 항체들 사이에 서열 면에서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 110-아미노산 영역에 걸쳐 균일하게 분포되어 있지 않다. 그 대신, V 영역은 각각 9개 내지 12개 아미노산 길이를 갖는 "초가변 영역"으로서 지칭되는 극도의 가변성을 나타내는 보다 짧은 영역에 의해 분리된, 15개 내지 30개의 아미노산으로 구성된 골격 영역(FR)으로서 지칭되는 상대적 불변성 스트레치로 구성된다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 루프 연결을 형성하는 3개의 초가변 영역들에 의해 연결된, 주로 β-시트 입체구조를 채택하고 몇몇 경우 β-시트 구조의 일부를 형성하는 4개의 FR들을 각각 포함한다. 각각의 쇄에서 초가변 영역은 FR에 의해 함께 가깝게 인접하여 존재하고, 다른 쇄의 초가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다(예를 들면, 문헌(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991) 참조). 불변 도메인은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 및 보체 의존적 세포독성(CDC)에서 항체의 참여를 나타낸다.Refers to the amino-terminal domain of the heavy or light chain of an antibody. The variable domain of the heavy chain may be referred to as "V _H ". The variable domain of the light chain may be referred to as "V _L ". The term "variable" refers to the fact that certain fragments of variable domains differ extensively in sequence from antibody to antibody. The V domain mediates antigen binding and defines the specificity of a particular antibody for its particular antigen. However, the variability is not uniformly distributed over the 110-amino acid region of the variable domain. Instead, the V region is a backbone region (FR) composed of 15 to 30 amino acids separated by shorter regions that exhibit extreme variability referred to as "hypervariable regions" with 9 to 12 amino acid residues each, Lt; / RTI > stretch. The variable domains of the native heavy and light chains each comprise four FRs connected by three hypervariable regions forming a loop linkage, each adopting a predominantly β-sheet steric structure and, in some cases, forming part of the β-sheet structure . The hypervariable regions in each chain are present in close proximity by the FRs together and contribute to the formation of the antigen binding site of the antibody together with the hypervariable regions of the other chain (see, for example, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 ^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991). The constant domains are not directly involved in the binding of the antibody to the antigen, but exhibit various effector functions, such as antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and complement dependent cytotoxicity (CDC).

"온전한(intact)" 항체는 항원 결합 부위뿐만 아니라 C_L 및 하나 이상의 중쇄 불변 도메인 C_H1, C_H2 및 C_H3도 포함하는 항체이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들면, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 바람직하게는, 온전한 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 갖는다.An "intact" antibody is an antibody that includes an antigen binding site as well as C _L and one or more heavy chain constant domains C _H 1, C _H 2, and C _H 3. The constant domain may be a native sequence constant domain (e. G., A human native sequence constant domain) or an amino acid sequence variant thereof. Preferably, the intact antibody has at least one effector function.

"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 바람직하게는 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')₂ 및 Fv 단편; 디아바디(diabodies) 및 디-디아바디(di-diabodies)(예를 들면, 문헌(Holliger, P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-8), 문헌(Lu, D. et al., (2005) J. Biol. Chem. 280:19665-72), 문헌(Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)), 국제 특허출원 공보 제WO 93111161호, 및 미국 특허 제5,837,242호 및 제6,492,123호 참조); 단일 쇄 항체 분자(예를 들면, 미국 특허 제4,946,778호, 제5,260,203호, 제5,482,858호 및 제5,476,786호 참조); 이중 가변 도메인 항체(예를 들면, 미국 특허 제7,612,181호 참조); 단일 가변 도메인 항체(SdAbs)(예를 들면, 문헌(Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999) 및 문헌(Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-12449, 2004) 참조); 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체가 있으나 이들로 한정되지 않는다. "Antibody fragments" comprise a portion of a whole antibody, preferably an antigen-binding or variable region of an intact antibody. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ', F (ab') ₂ and Fv fragments; Diabodies and di-diabodies (see, for example, Holliger, P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 6444-8) 9, pp. 129-134 (2003)), International Patent Application Publication (International Patent Application Publication) WO 93111161, and U.S. Patent Nos. 5,837,242 and 6,492,123); Single chain antibody molecules (see, for example, U.S. Patent Nos. 4,946,778, 5,260,203, 5,482,858, and 5,476,786); Double variable domain antibodies (see, for example, U.S. Patent No. 7,612,181); Single variable domain antibodies (SdAbs) (e.g., Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999) and Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA. 101: 12444-12449 (2004) Reference); And multispecific antibodies formed from antibody fragments.

치료 항체의 "기능성 단편"은 생물학적 기능의 일부 또는 전부가 온전한 항체에 기인하지 않는 경우 적어도 치료 항원과의 특이적 결합을 포함하는 하나 이상의 기능을 나타낼 것이다.A "functional fragment " of a therapeutic antibody will exhibit one or more functions, including at least a specific binding to a therapeutic antigen, if not all or a portion of the biological function is due to an intact antibody.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들로 구성된 집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다(즉, 상기 집단을 구성하는 개별 항체들은 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다). 수식어 "단일클론"은 임의의 특정 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것으로서 해석되어서는 안 된다. 예를 들면, 본 발명에서 유용한 단일클론 항체는 문헌(Kohler et al., Nature, 256:495 (1975))에 가장 먼저 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 세균, 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법의 이용을 통해 제조될 수 있다(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조). "단일클론 항체"는 예를 들면, 문헌(Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)) 및 문헌(Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991))에 기재된 기법의 이용을 통해 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수도 있다.As used herein, the term "monoclonal antibody" refers to an antibody obtained from a population consisting of substantially homogeneous antibodies (i.e., the individual antibodies that make up the population may contain a possible naturally occurring mutation &Lt; / RTI > The modifier "monoclonal" should not be construed as requiring the manufacture of antibodies by any particular method. For example, monoclonal antibodies useful in the present invention may be prepared by the hybridoma method first described in Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975), or may be produced by a bacterial, (See, for example, U.S. Patent No. 4,816,567). "Monoclonal antibodies" are described, for example, in Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 ). &Lt; / RTI >

본원의 단일클론 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래된 항체 또는 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열에 대한 동일성 또는 상동성을 갖지만, 상기 쇄(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래된 항체 또는 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열에 대한 동일성 또는 상동성을 갖는 "키메라" 항체뿐만 아니라 이러한 항체의 단편도 포함하되, 이들은 원하는 생물학적 활성을 나타내어야 한다(미국 특허 제4,816,567호 및 문헌(Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)) 참조).The monoclonal antibodies herein may have identity or homology to the corresponding sequences of the antibody or a portion of the light chain and / or light chain from an antibody derived from a particular species or an antibody belonging to a particular antibody class or subclass, but the remainder of the chain (s) Quot; chimeric "antibodies having homology or homology to corresponding sequences of antibodies belonging to another antibody class or subclass, as well as fragments of such antibodies, which have the desired biological activity (See US Pat. No. 4,816,567 and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)).

비-인간(예를 들면, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대체로, 인간화된 항체는 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 항체 특이성, 친화성 및 성능을 갖는 비-인간 종 항체(공여 항체), 예컨대, 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류 항체의 초가변 영역으로부터의 잔기로 치환되어 있는 인간 면역글로불린(수용 항체)이다. 몇몇 경우, 상응하는 비-인간 잔기는 인간 면역글로불린의 골격 영역(FR) 잔기를 치환시킨다. 더욱이, 인간화된 항체는 수용 항체 또는 공여 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변경들은 항체 성능을 더 향상시키기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 1개 이상, 전형적으로 2개의 가변 도메인들을 포함할 것이고, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프들이 비-인간 면역글로불린의 초가변 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR들이 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 인간화된 항체는 임의적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부도 포함할 것이다. 추가 세부사항에 대해서는 문헌(Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)); 문헌(Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)); 및 문헌(Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992))을 참조한다. 하기 문헌들, 및 이들에서 인용된 특허 및 참조문헌도 참조한다: 문헌(Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1:105-115 (1998)); 문헌(Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038 (1995)); 문헌(Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); 미국 특허 제5,585,089호; 미국 특허 제5,693,762호; 미국 특허 제6,180,370호; 및 미국 특허 제6,054,297호.A "humanized" form of a non-human (eg, rodent) antibody is a chimeric antibody that contains a minimal sequence derived from a non-human antibody. Generally, a humanized antibody is one in which the moiety from the hypervariable region of the recipient is a non-human species antibody (donor antibody) having the desired antibody specificity, affinity, and performance, such as a supernatant of a mouse, rat, rabbit or non-human primate antibody Is a human immunoglobulin (acceptor antibody) substituted with a residue from a variable region. In some cases, the corresponding non-human residue displaces the framework region (FR) residue of the human immunoglobulin. Furthermore, humanized antibodies may comprise residues that are not found in acceptor antibodies or donor antibodies. These changes are made to further improve antibody performance. In general, a humanized antibody will comprise substantially all of one or more, typically two, variable domains, wherein all or substantially all hypervariable loops correspond to hypervariable loops of a non-human immunoglobulin and all or substantially all All FRs are FRs of the human immunoglobulin sequence. The humanized antibody will optionally also comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically a constant region of a human immunoglobulin. For further details, see Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); (Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988)); And Presta, Curr., Op. Struct Biol., 2: 593-596 (1992). See also the following references, and the patents and references cited therein: Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1: 105-115 (1998); (Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23: 1035-1038 (1995)); Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)); U.S. Patent No. 5,585,089; U.S. Patent No. 5,693,762; U.S. Patent No. 6,180,370; And U.S. Patent No. 6,054,297.

"인간 항체"는 인간에 의해 제조된 항체의 아미노산 서열에 상응하거나 본원에 개시된 인간 항체의 제조 기법들 중 어느 하나를 이용함으로써 제조된 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이 정의는 구체적으로 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제한다. 인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리(Hoogenboom and Winter, J Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J Mol. Biol., 222:581 (1991)) 및 효소 디스플레이 라이브러리(Chao et al., Nature Protocols 1: 755-768 (2006))를 비롯한, 당분야에서 공지된 다양한 기법들을 이용함으로써 제조될 수 있다. 문헌(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)) 및 문헌(Boerner et al., J Immunol., 147(1):86-95 (1991))에 기재된 방법도 인간 단일클론 항체의 제조를 위해 이용될 수 있다. 문헌(Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001))도 참조한다. 인간 항체는 항원성 챌린지에 반응하여 이러한 항체를 제조하도록 변경되어 있지만 그의 내생성 좌위가 불능화되어 있는 트랜스제닉 동물, 예를 들면, 마우스에게 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들면, 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술에 대한 문헌(Jakobovits, A., Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6(5):561-6); 문헌(Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8(4):455-8); 및 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호 참조). 예를 들면, 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 발생된 인간 항체에 대한 문헌(Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006))도 참조한다.A "human antibody" is an antibody that has an amino acid sequence that corresponds to the amino acid sequence of an antibody produced by a human or that has been prepared by using any of the techniques of making a human antibody disclosed herein. This definition of a human antibody specifically excludes a humanized antibody comprising a non-human antigen binding residue. Human antibodies can be obtained from phage display libraries (Hoogenboom and Winter, J Mol Biol., 227: 381 (1991); Marks et al., J Mol Biol., 222: , Nature Protocols 1: 755-768 (2006)). (Boerner et al., J Immunol., 147 (1): 86-95 (1991)), which is described in Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, The methods described can also be used for the production of human monoclonal antibodies. See Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001). A human antibody can be produced by administering an antigen to a transgenic animal, e. G., A mouse, which has been altered to produce such an antibody in response to an antigenic challenge, but whose endogenous locus has been disabled (e. (Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8 (4)), in a document on XENOMOUSE ™ technology (Jakobovits, A., Curr. Opin. Biotechnol. : 455-8), and U.S. Patent Nos. 6,075,181 and 6,150,584). See, for example, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103: 3557-3562 (2006)) on human antibodies raised via human B cell hybridoma technology.

용어 "초가변 영역", "HVR" 또는 "HV"는 본원에서 사용될 때 서열 면에서 초가변성을 갖고/갖거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변 영역들(VH에서 3개의 초가변 영역들(H1, H2 및 H3), 및 VL에서 3개의 초가변 영역들(L1, L2 및 L3))을 포함한다. 다수의 초가변 영역 표현들이 본원에서 사용되고 포괄되어 있다. 카바트 상보성 결정 영역들(CDR들)은 서열 가변성에 기초하고 가장 통상적으로 사용된다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). 초티아(Chothia)는 대신에 구조 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)). 카바트 넘버링 약정을 이용하여 넘버링하였을 때 초티아 CDR-H1 루프의 말단은 상기 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34이다(이것은 카바트 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에서 삽입을 배치하기 때문이고; 35A 및 35B 중 어느 것도 존재하지 않는 경우, 상기 루프는 32에서 종결되고; 35A만이 존재하는 경우, 상기 루프는 33에서 종결되고; 35A 및 35B 둘다가 존재하는 경우, 상기 루프는 34에서 종결된다). AbM 초가변 영역은 카바트 CDR들과 초티아 구조 루프들 사이의 절충을 나타내고, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" 초가변 영역은 입수가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다. 이들 초가변 영역들 각각으로부터의 잔기는 하기 표시되어 있다.The term "hypervariable region "," HVR "or" HV ", as used herein, refers to a region of an antibody variable domain that forms a loop that is hypervariable and / or structurally defined in sequence. In general, the antibody comprises six hypervariable regions (three hypervariable regions (H1, H2 and H3) at VH and three hypervariable regions (L1, L2 and L3) at VL). Numerous hypervariable region representations are used and encompassed herein. Kabat complementarity determining regions (CDRs) are based on sequence variability and are most commonly used (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 ^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). Chothia refers instead to the location of the structural loop (Chothia and Lesk J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)). The ends of the multicellular CDR-H1 loops when numbered using the Kabat numbering convention are H32 to H34 depending on the length of the loop (this is because the Kabat numbering scheme positions inserts in H35A and H35B; 35A and 35B Loop is terminated at 32; if only 35A is present, the loop is terminated at 33; if both 35A and 35B are present, the loop is terminated at 34). The AbM hypervariable region represents a trade-off between Kabat CDRs and superanti-structured loops and is used by Oxford Molecular's AbM antibody modeling software. The "contact" hypervariable region is based on analysis of the available complex crystal structure. The residues from each of these hypervariable regions are indicated below.

초가변 영역은 다음과 같이 "연장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2), 및 89-97 또는 89-96(L3); 및 VH에서 26-35 또는 26-35A(H1), 50-65 또는 49-65(H2), 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3). 가변 도메인 잔기는 이들 정의들 각각에 대한 상기 문헌(Kabat et al.)에 따라 넘버링된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "HVR" 및 "CDR"은 상호교환적으로 사용된다. The hypervariable region may comprise an "extended hypervariable region" as follows: 24-36 or 24-34 (L1), 46-56 or 50-56 (L2) in VL, and 89-97 or 89 -96 (L3); And 26-35 or 26-35A (H1), 50-65 or 49-65 (H2), and 93-102, 94-102 or 95-102 (H3) at VH. Variable domain residues are numbered according to Kabat et al., Supra, for each of these definitions. As used herein, the terms "HVR" and "CDR" are used interchangeably.

"골격" 또는 "FR" 잔기는 본원에서 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.The "backbone" or "FR" moiety is a variable domain residue other than the hypervariable region residues as defined herein.

용어 "카바트에서와 같은 가변 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", 및 이들의 어미변화는 문헌(Kabat et al., Sequences of Proteins oflmmunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))에서 항체들의 집합물의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인을 위해 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이 넘버링 시스템을 이용하였을 때, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 이러한 FR 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 보다 적은 또는 추가 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 다음에 단일 아미노산 삽입물(카바트에 따른 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기(예를 들면, 카바트에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c)를 포함할 수 있다. 상동성 영역에서 항체의 서열을 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 정렬함으로써 주어진 항체에 대한 잔기의 카바트 넘버링을 결정할 수 있다.The term "variable domain residue numbering as in Kabat" or "amino acid position numbering as in Kabat", and their flexion is described (Kabat et al., Sequences of Proteins oflmmunological Interest, 5 ^th Ed. Public Health Service , The National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)), the numbering system used for the heavy or light chain variable domains of the assembly of antibodies. When using this numbering system, the actual linear amino acid sequence may contain fewer or additional amino acids corresponding to shortening of the FR or CDR of the variable domain, or insertion into such FR or CDR. For example, the heavy chain variable domain comprises a single amino acid insert (residue 52a according to Kabat) followed by a residue of H2, and a residue inserted after heavy chain FR residue 82 (e.g. residues 82a, 82b and 82c according to Kabat) ). By aligning the sequence of the antibody in the region of homology with the "standard" Kabat numbered sequence, the Kabat numbering of the residue for a given antibody can be determined.

카바트 넘버링 시스템은 가변 도메인 내의 잔기(경쇄의 대략 잔기 1 내지 107, 및 중쇄의 대략 잔기 1 내지 113)를 지칭할 때 일반적으로 사용된다(예를 들면, 문헌(Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) 참조). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 지수"는 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 지칭할 때 일반적으로 사용된다(예를 들면, 상기 문헌(Kabat et al.)에서 보고된 EU 지수). "카바트에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 본원에서 달리 기재되어 있지 않은 한, 항체의 가변 도메인에서 잔기 번호의 언급은 카바트 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에서 달리 기재되어 있지 않은 한, 항체의 불변 도메인에서 잔기 번호의 언급은 EU 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다.Kabat numbering systems are commonly used to refer to residues within the variable domains (about residues 1 to 107 of the light chain and about residues 1 to 113 of the heavy chain) (see, for example, Kabat et al., Sequences of Immunological 5 ^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). "EU numbering system" or "EU index" is commonly used to refer to residues in the immunoglobulin heavy chain constant region (e. G., The EU index reported in Kabat et al. "EU index as in Kabat" refers to residue numbering of human IgG1 EU antibody. Unless otherwise stated herein, reference to a residue number in the variable domain of an antibody means residue numbering by a Kabat numbering system. Unless otherwise stated herein, reference to a residue number in the constant domain of an antibody refers to residue numbering by the EU numbering system.

"친화성 성숙된" 항체는 변경(들)을 보유하지 않는 모 항체에 비해 항원에 대한 항체의 친화성을 개선하는 하나 이상의 변경을 그의 하나 이상의 HVR들 내에 갖는 항체이다. 바람직한 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 것이다. 친화성 성숙된 항체는 당분야에서 공지된 절차에 의해 제조된다. 검토를 위해서는 문헌(Hudson and Souriau, Nature Medicine 9:129-134 (2003)); 문헌(Hoogenboom, Nature Biotechnol. 23:1105-1116 (2005)); 및 문헌(Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51 (2010))을 참조한다.An "affinity matured" antibody is an antibody having one or more alterations in its one or more HVRs that improve the affinity of the antibody for the antigen relative to the parent antibody that does not possess the alteration (s). Preferred Affinity The matured antibody will have a nanomolar or even picomole affinity for the target antigen. Affinity matured antibodies are prepared by procedures known in the art. For review, see Hudson and Souriau, Nature Medicine 9: 129-134 (2003); (Hoogenboom, Nature Biotechnol. 23: 1105-1116 (2005)); And Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51 (2010).

"차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 바람직한 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.An "blocking" antibody or "antagonist" antibody is an antibody that inhibits or reduces the biological activity of the antigen to which it binds. Preferred blocking antibodies or antagonist antibodies substantially or completely inhibit the biological activity of the antigen.

본원에서 사용된 바와 같이, "작용제 항체"는 관심있는 폴리펩티드의 기능적 활성들 중 하나 이상을 모방하는 항체이다.As used herein, an "agonist antibody" is an antibody that mimics one or more of the functional activities of a polypeptide of interest.

"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들면, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 합계 총 강도를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 달리 표시되어 있지 않은 한, "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원들(예를 들면, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 그의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(Kd)로 표시될 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 방법을 비롯한, 당분야에서 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저친화성 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하고 용이하게 해리되는 경향을 나타내는 반면, 고친화성 항체는 일반적으로 보다 빨리 항원에 결합하고 보다 오래 결합된 상태로 남아있는 경향을 나타낸다. 다양한 결합 친화성 측정 방법들이 당분야에서 공지되어 있고, 이들 중 어느 한 방법은 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 구체적인 예시적 실시양태들이 후술되어 있다."Binding affinity" generally refers to the total total intensity of non-covalent interactions between a single binding site of a molecule (eg, an antibody) and its binding partner (eg, an antigen). As used herein, unless otherwise indicated, "binding affinity" refers to a unique binding affinity that reflects a 1: 1 interaction between members of a binding pair (e.g., an antibody and an antigen) do. The affinity of the molecule X to its partner Y can generally be expressed as the dissociation constant (Kd). The affinity may be determined by conventional methods known in the art, including those described herein. Low-affinity antibodies generally exhibit a tendency to bind slowly and easily dissociate to an antigen while highly-affinity antibodies generally tend to bind to the antigen more quickly and remain bound for longer. Various binding affinity determination methods are known in the art, and any of these methods can be used for the purposes of the present invention. Specific exemplary embodiments are described below.

"또는 보다 우수한"은 결합 친화성을 지칭하기 위해 본원에서 사용될 때 분자(예를 들면, 항체)와 그의 결합 파트너 사이의 보다 강한 결합을 지칭하고, 보다 작은 수치적 Kd 값으로 표시된다. 예를 들면, 항원에 대한 "0.6 nM 또는 보다 우수한" 친화성을 갖는 항체의 경우 상기 항원에 대한 상기 항체의 친화성은 0.6 nM 미만, 즉 0.59 nM, 0.58 nM, 0.57 nM 등, 또는 0.6 nM 미만의 임의의 값이다.Refers to a stronger association between a molecule (e. G., An antibody) and its binding partner when used herein to refer to a binding affinity, and is denoted by a smaller numerical Kd value. For example, for antibodies having "0.6 nM or better" affinity for the antigen, the affinity of the antibody for the antigen may be less than 0.6 nM, such as 0.59 nM, 0.58 nM, 0.57 nM, or less than 0.6 nM It is an arbitrary value.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 비-표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에서 Fab를 최소 농도의 (¹²⁵I)-표지된 항원으로 평형화시킨 후 결합된 항원을 항-Fab 항체로 코팅된 플레이트로 포획함으로써 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화성을 측정하는 하기 분석에 의해 기재된 바와 같이 관심있는 항체의 Fab 버전 및 이의 항원을 사용함으로써 수행된 방사성표지된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정된다(Chen, et al., (1999) J Mol Biol 293:865-881). 또 다른 실시양태에 따라, Kd 또는 Kd 값은 예를 들면, 비아코어(BIAcore)™-2000 또는 비아코어™-3000(비아코어 인코포레이티드(BIAcore, Inc.), 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 이용하는 표면 플라스몬 공명 분석을 이용함으로써 측정된다.In one embodiment, a "Kd" or "Kd value" according to the present invention is calculated by equilibrating a Fab with a minimal concentration of ( ¹²⁵ I) -labeled antigen in the presence of a titration series of non- Fab analysis was performed by using the Fab version of the antibody of interest and its antigen as described by the following assays to determine the solution binding affinity of the Fab for the antigen by capture with a plate coated with anti-Fab antibody (RIA) (Chen, et al., (1999) J Mol Biol 293: 865-881). According to another embodiment, the Kd or Kd value can be determined, for example, using the BIAcore 占 -2000 or Biacore 占 -3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ, USA) 0.0 > Plasmon < / RTI > Resonance Assay).

본 발명에 따른 "반응속도" 또는 "해리 속도", 또는 "결합 속도" 또는 "k_on"는 예를 들면, 비아코어™-2000 또는 비아코어™-3000(비아코어 인코포레이티드, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 사용하는 전술된 상기 표면 플라스몬 공명 기법에 의해 측정될 수도 있다."Response time" or "dissociation rate" according to the invention, or "association rate" or "k _on", for example, BIAcore ™ -2000 or a BIAcore ™ -3000 (BIAcore, Inc., New Jersey, USA Or a surface plasmon resonance technique described above using a microfluidic device (e.g., a primary Piscataway).

본원에서 사용된 어구 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 당업자가 2개 값들 사이의 차이를 상기 값들(예를 들면, Kd 값들)에 의해 측정된 생물학적 특성 면에서 생물학적으로 및/또는 통계학적으로 거의 또는 전혀 유의하지 않다고 간주할 정도로 2개 수치 값들(일반적으로 본 발명의 항체와 관련된 수치 값 및 기준 항체와 관련된 수치 값) 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 의미한다. 2개 값들 사이의 차이는 바람직하게는 기준 항체에 대한 값의 함수로서 약 50% 미만, 바람직하게는 약 40% 미만, 바람직하게는 약 30% 미만, 바람직하게는 약 20% 미만, 바람직하게는 약 10% 미만이다.As used herein, the phrase "substantially similar" or "substantially the same" means that the skilled artisan will be able to determine the difference between the two values biologically and / or statistically in terms of biological properties as measured by the values (e.g., Kd values) Means a sufficiently high degree of similarity between two numerical values (generally numerical values associated with the antibodies of the present invention and numerical values associated with the reference antibody) so as to be regarded as being of little or no significance. The difference between the two values is preferably less than about 50%, preferably less than about 40%, preferably less than about 30%, preferably less than about 20%, preferably less than about 20%, as a function of the value for the reference antibody Less than about 10%.

본원에서 사용된 어구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 2개 값들 사이의 차이를 상기 값들(예를 들면, Kd 값들, HAMA 반응)에 의해 측정된 생물학적 특성 면에서 통계학적으로 유의하다고 간주할 정도로 2개 수치 값들(일반적으로 본 발명의 항체와 관련된 수치 값 및 기준 항체와 관련된 수치 값) 사이의 충분히 높은 정도의 차이를 의미한다. 상기 2개 값들 사이의 차이는 기준 항체에 대한 값의 함수로서 바람직하게는 약 10% 초과, 바람직하게는 약 20% 초과, 바람직하게는 약 30% 초과, 바람직하게는 약 40% 초과, 바람직하게는 약 50% 초과 수준이다.As used herein, the phrase "substantially reduced" or "substantially different" means that a skilled artisan will appreciate that differences between the two values are not statistically significant in terms of biological properties as measured by the values (e.g., Kd values, Quot; means a sufficiently high degree of difference between two numerical values (generally the numerical value associated with the antibody of the present invention and the numerical value associated with the reference antibody) to the extent that it is considered significant. The difference between the two values is preferably greater than about 10%, preferably greater than about 20%, preferably greater than about 30%, preferably greater than about 40%, preferably greater than about 40% Is greater than about 50%.

"CD98 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포의 생장을 억제하는" 항체 또는 "생장 억제" 항체는 적절한 CD98 폴리펩티드를 발현하거나 과다발현하는 암세포의 측정가능한 생장 억제를 유발하는 항체이다. CD98 폴리펩티드는 암세포의 표면 상에서 발현된 경막 폴리펩티드일 수 있거나 암세포에 의해 생성되고 분비되는 폴리펩티드일 수 있다. 바람직한 생장 억제 항-CD98 항체는 전형적으로 시험되는 항체로 처리되지 않은 종양 세포인 적절한 대조군에 비해 CD98 발현 종양 세포의 생장을 20% 이상, 바람직하게는 약 20% 내지 약 50%, 훨씬 더 바람직하게는 50% 이상(예를 들면, 약 50% 내지 약 100%) 억제한다. 한 실시양태에서, 생장 억제는 세포 배양물 중의 약 0.1 ㎍/㎖ 내지 30 ㎍/㎖ 또는 약 0.5 nM 내지 200 nM의 항체 농도에서 측정될 수 있고, 이때 생장 억제는 종양 세포가 항체에 노출된 지 1일 내지 10일 후 측정된다. 생체내 종양 세포의 생장 억제는 후술된 바와 같은 다양한 방식으로 측정될 수 있다. 항체는 체중 kg 당 약 1 ㎍ 내지 약 100 mg의 항-CD98 항체의 투여가 항체의 제1 투여로부터 약 5일 내지 3개월 이내에, 바람직하게는 약 5일 내지 30일 이내에 종양 크기 또는 종양 세포 증식을 감소시키는 경우 생체내에서 생장 억제성을 나타낸다. An antibody or "growth inhibiting" antibody that inhibits the growth of tumor cells expressing a CD98 polypeptide is an antibody that induces measurable growth inhibition of cancer cells that express or overexpress an appropriate CD98 polypeptide. The CD98 polypeptide may be a dendritic polypeptide expressed on the surface of cancer cells or may be a polypeptide produced and secreted by cancer cells. A preferred growth inhibitory anti-CD98 antibody typically inhibits the growth of CD98 expressing tumor cells by 20% or more, preferably from about 20% to about 50%, even more preferably, (For example, from about 50% to about 100%). In one embodiment, the inhibition of growth may be measured at an antibody concentration of from about 0.1 [mu] g / ml to 30 [mu] g / ml in the cell culture or from about 0.5 nM to 200 nM, wherein the growth inhibition is It is measured after 1 to 10 days. Inhibition of growth of tumor cells in vivo can be measured in various ways as described below. The antibody can be administered in an amount of from about 1 [mu] g to about 100 mg of anti-CD98 antibody per kg of body weight, within about 5 to 3 months from the first administration of the antibody, preferably within about 5 to 30 days, It is possible to inhibit growth in vivo.

"아폽토시스를 유도하는" 항체는 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 소포체의 확장, 세포 단편화 및/또는 막 소낭(아폽토시스 소체로서 지칭됨)의 형성에 의해 측정되었을 때 프로그래밍된 세포 사멸을 유도하는 항체이다. 세포는 통상적으로 CD98 폴리펩티드를 과다발현하는 세포이다. 바람직하게는, 세포는 종양 세포이다. 아폽토시스와 관련된 세포내 사건을 평가하는 다양한 방법들이 이용될 수 있다. 예를 들면, 포스파티딜 세린(PS) 전위는 아넥신 결합에 의해 측정될 수 있고; DNA 단편화는 DNA 래더링을 통해 평가될 수 있고; DNA 단편화와 함께 핵/염색질 응축은 저이배체(hypodiploid) 세포의 임의의 증가에 의해 평가될 수 있다. 바람직하게는, 아폽토시스를 유도하는 항체는 아넥신 결합 분석에서 비-처리된 세포에 비해 상대적으로 아넥신 결합을 약 2배 내지 50배, 바람직하게는 약 5배 내지 50배, 가장 바람직하게는 약 10배 내지 50배 유도하는 항체이다.An "antibody that induces apoptosis" is a protein that has been programmed to cause apoptosis when measured by binding of annexin V, fragmentation of DNA, cell shrinkage, expansion of the endoplasmic reticulum, cell fragmentation, and / or formation of membrane vesicles (referred to as apoptotic bodies) Lt; / RTI > Cells are cells that overexpress CD98 polypeptides. Preferably, the cell is a tumor cell. Various methods of assessing intracellular events associated with apoptosis can be used. For example, the phosphatidylserine (PS) potential can be measured by annexin binding; DNA fragmentation can be assessed through DNA laddering; Nuclear / chromatin condensation with DNA fragmentation can be assessed by any increase in hypodiploid cells. Preferably, the antibody that induces apoptosis is about 2- to 50-fold, preferably about 5-fold to 50-fold, and most preferably about 2-fold to about 500-fold greater than that of the non-treated cells in the annexin binding assay 10-fold to 50-fold induction.

"세포 사멸을 유도하는" 항체는 생존 세포가 생존불가능하게 하는 항체이다. 세포는 CD98 폴리펩티드를 특이적으로 발현하거나 과다발현하는 세포 종류의 세포이다. 세포는 특정 세포 종류의 암세포 또는 정상 세포일 수 있다. CD98 폴리펩티드는 암세포의 표면 상에서 발현된 경막 폴리펩티드일 수 있거나 암세포에 의해 제조되고 분비된 폴리펩티드일 수 있다. 시험관내 세포 사멸은 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 또는 보체 의존적 세포독성(CDC)에 의해 유도된 세포 사멸과 구별하기 위해 보체 및 면역 이펙터 세포의 부재 하에서 측정될 수 있다. 따라서, 면역 이펙터 세포의 부재 하에서 열 불활성화된 혈청을 사용하여(즉, 보체의 부재 하에서) 세포 사멸에 대한 분석을 수행할 수 있다. 항체가 세포 사멸을 유도할 수 있는지를 확인하기 위해, 요오드화프로피듐(PI), 트립판 블루(문헌(Moore et al., Cytotechnology 17:1-11 (1995)) 참조) 또는 7AAD의 섭취에 의해 평가된 막 통합성의 상실을 비-처리된 세포에 비해 상대적으로 평가할 수 있다. 바람직한 세포 사멸 유도 항체는 BT474 세포에서 PI 섭취 분석에서 PI 섭취를 유도하는 항체이다.An "antibody that induces apoptosis " is an antibody that makes viable cells non-viable. A cell is a cell type that specifically expresses or overexpresses a CD98 polypeptide. The cell can be a cancer cell or a normal cell of a certain cell type. The CD98 polypeptide may be a dendritic polypeptide expressed on the surface of cancer cells or may be a polypeptide produced and secreted by cancer cells. In vitro cell death may be measured in the absence of complement and immune effector cells to distinguish from cell-induced cell-mediated cytotoxicity (ADCC) or complement-dependent cytotoxicity (CDC) induced apoptosis. Thus, an assay for apoptosis can be performed using heat-inactivated serum (i.e., in the absence of complement) in the absence of immune effector cells. (PI), trypan blue (see Moore et al., Cytotechnology 17: 1-11 (1995)) or by the ingestion of 7AAD to determine if the antibody can induce apoptosis The loss of assessed membrane integrity can be assessed relative to non-treated cells. A preferred cell death-inducing antibody is an antibody that induces PI uptake in a PI uptake assay in BT474 cells.

항체 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 지칭하고 항체 동종형에 따라 상이하다. 항체 이펙터 기능의 예로는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들면, B 세포 수용체)의 하향조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다. Antibody "effector function" refers to a biological activity that may be attributable to the Fc region (native sequence Fc region or amino acid sequence variant Fc region) of an antibody and is dependent upon the antibody isotype. Examples of antibody effector functions include C1q binding and complement dependent cytotoxicity; Fc receptor binding; Antibody-dependent cell mediated cytotoxicity (ADCC); Phagocytosis; Down regulation of cell surface receptors (e. G., B cell receptors); And B cell activation.

본원에서 용어 "Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 비롯한, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데에 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 상이할 것이지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226 또는 Pro230에 존재하는 아미노산 잔기부터 그의 카복실-말단까지 걸쳐 있다고 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들면, 항체의 제조 또는 정제 동안에 제거될 수 있거나, 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기들이 제거된 항체 집단, K447 잔기가 전혀 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기를 갖는 항체와 K447 잔기를 갖지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.The term "Fc region" is used herein to define the C-terminal region of an immunoglobulin heavy chain, including native sequence Fc regions and variant Fc regions. Although the boundaries of the Fc region of the immunoglobulin heavy chain will be different, it is defined that the human IgG heavy chain Fc region typically extends from the amino acid residue present at position Cys226 or Pro230 to its carboxyl-terminal end. The C-terminal lysine (residue 447 according to the EU numbering system) of the Fc region can be removed, for example, during the preparation or purification of the antibody, or can be removed by recombinant manipulation of the nucleic acid encoding the heavy chain of the antibody. Thus, a composition of intact antibody may comprise an antibody population in which all K447 residues have been removed, an antibody population in which no K447 residues have been removed, and a population of antibodies with a mixture of antibodies with K447 residues and antibodies without K447 residues .

"기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 보유한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들면, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들면, 항체 가변 도메인)과 조합될 것을 요구하고 예를 들면, 본원의 정의에 개시된 다양한 분석의 이용을 통해 평가될 수 있다."Functional Fc region" retains the "effector function" of the native sequence Fc region. An exemplary "effector function" CDC; Fc receptor binding; ADCC; Phagocytosis; Down regulation of cell surface receptors (e. G., B cell receptor; BCR), and the like. Such effector functions generally require that the Fc region be combined with a binding domain (e. G., An antibody variable domain) and may be assessed, for example, through the use of the various assays disclosed in the definition herein.

"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 동종이형 및 A 동종이형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 천연 발생 변이체들도 포함한다.The "native sequence Fc region" includes the same amino acid sequence as the amino acid sequence of the Fc region found in nature. The native sequence human Fc region comprises a native sequence human IgGl Fc region (non-A homologous and A homologous); Native sequence human IgG2 Fc region; Native sequence human IgG3 Fc region; And native sequence human IgG4 Fc regions as well as naturally occurring variants thereof.

"변이체 Fc 영역"은 하나 이상의 아미노산 변경, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 천연 서열 Fc 영역의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들면, 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 약 80% 이상의 상동성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 상동성, 가장 바람직하게는 약 95% 이상의 상동성을 보유할 것이다.A "variant Fc region" comprises an amino acid sequence that differs from the amino acid sequence of the native sequence Fc region by one or more amino acid alterations, preferably by one or more amino acid substitution (s). Preferably, the variant Fc region comprises at least one amino acid substitution relative to the native sequence Fc region or the Fc region of the parent polypeptide, e. G., From about 1 to about 10 amino acid substitutions in the Fc region of the native sequence Fc region or of the parent polypeptide, Preferably from about 1 to about 5 amino acid substitutions. The variant Fc region herein is preferably at least about 80% homologous, more preferably at least about 90% homologous, most preferably at least about 95% homologous to the native sequence Fc region and / or the Fc region of the parent polypeptide .

"항체 의존적 세포 매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포(예를 들면, 천연 살해(NK) 세포, 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR)에 결합된 분비된 Ig가 이들 세포독성 이펙터 세포로 하여금 항원 보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후 상기 표적 세포를 세포독소로 사멸할 수 있게 하는 형태의 세포독성을 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "무장"시키고 이러한 사멸을 위해 절대적으로 요구된다. ADCC를 매개하는 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵세포는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈세포 상에서의 FcR 발현은 문헌(Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991))의 제464면의 표 3에 요약되어 있다. 관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 분석, 예컨대, 미국 특허 제5,500,362호 및 제5,821,337호에 기재된 ADCC 분석을 수행할 수 있다. 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 천연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들면, 동물 모델, 예컨대, 문헌(Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998))에 개시된 동물 모델에서 평가될 수 있다."Antibody-dependent cell mediated cytotoxicity" or "ADCC" refers to secreted Ig bound to Fc receptors (FcR) present on certain cytotoxic cells (e.g., natural killer (NK) cells, neutrophils and macrophages) Refers to the cytotoxicity of these cytotoxic effector cells that specifically bind to antigen-bearing target cells and then kill the target cells with cytotoxins. Antibodies are "absolutely necessary" for "killing" cytotoxic cells and for this killing. NK cells that are primary cells mediating ADCC express only Fc [gamma] RIIII, whereas mononuclear cells express Fc [gamma] RI, Fc [gamma] RII and Fc [gamma] RIII. FcR expression on hematopoietic cells is summarized in Table 3 on page 464 of the literature (Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)). To assess ADCC activity of a molecule of interest, in vitro ADCC assays can be performed, for example, the ADCC assays described in U.S. Pat. Nos. 5,500,362 and 5,821,337. Effector cells useful for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells. Alternatively or additionally, the ADCC activity of the molecule of interest can be assessed in vivo, for example, in animal models such as those described in Clynes et al. (USA) 95: 652-656 (1998) .

"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 지칭한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은 IgG 항체에 결합하는 FcR(감마 수용체)이고 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체들(이들 수용체들의 대립형질 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함함)을 포함한다. FcγRII 수용체는 주로 그들의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함한다(문헌(M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)) 참조). FcR은 문헌(Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)), 문헌(Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)) 및 문헌(de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995))에서 검토되어 있다. 향후 확인될 FcR을 비롯한 다른 FcR들은 본원에서 용어 "FcR"에 의해 포괄된다. 상기 용어는 태아로의 모 IgG의 전달을 담당하는 신생아 수용체인 FcRn도 포함한다(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)). FcR과의 개선된 또는 감소된 결합을 갖는 항체 변이체는 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 2000/42072호, 및 미국 특허 제7,183,387호, 제7,332,581호 및 제7,335,742호에 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌(Shields et al. J Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001))도 참조한다."Fc receptor" or "FcR" refers to a receptor that binds to the Fc region of an antibody. A preferred FcR is a native sequence human FcR. Moreover, preferred FcRs are FcRs (gamma receptors) that bind to IgG antibodies and include receptors of the FcγRI, FcγRII, and FcγRIII subclasses, including allelic variants and alternatively spliced forms of these receptors. FcγRII receptors include FcγRIIA ("activation receptor") and FcγRIIB ("inhibitory receptor"), which have similar amino acid sequences that differ primarily in their cytoplasmic domains (M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 234 (1997)). FcR has been described by Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991), Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994) J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)). Other FcRs, including FcRs to be identified in the future, are encompassed by the term "FcR" herein. The term also includes FcRn, a neonatal receptor that is responsible for the transfer of parental IgG to the fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 1994). Antibody variants with improved or reduced binding to FcR are described, for example, in International Patent Application Publication No. WO 2000/42072, and U.S. Pat. Nos. 7,183,387, 7,332,581 and 7,335,742. See also, for example, Shields et al. J Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001).

"보체 의존적 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에서의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적인 보체 경로의 활성화는 보체 시스템의 제1 성분(C1q)과, 그의 동족 항원에 결합되는 (적절한 서브클래스의) 항체의 결합에 의해 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면, 문헌(Gazzano-Santoro et at., J. Immunol. Methods 202:163 (1996))에 기재된 CDC 분석을 수행할 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열(변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩티드) 및 증가된 또는 감소된 C1q 결합 성능을 갖는 폴리펩티드 변이체는 예를 들면, 미국 특허 제6,194,551B1호 및 국제 특허출원 공보 제WO 1999/51642호에 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌(Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000))도 참조한다."Complement dependent cytotoxicity" or "CDC" refers to the dissolution of target cells in the presence of complement. Activation of the classical complement pathway is initiated by the binding of the first component (C1q) of the complement system to the antibody (of the appropriate subclass) that binds to its cognate antigen. To assess complement activation, a CDC assay as described in, for example, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996) can be performed. Polypeptide variants with altered Fc region amino acid sequences (polypeptides having variant Fc regions) and increased or decreased C1q binding capabilities are described, for example, in U.S. Patent No. 6,194,551 B1 and International Patent Application Publication No. WO 1999/51642 . See, for example, Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).

CD98 폴리펩티드 "세포외 도메인" 또는 "ECD"는 경막 도메인 및 세포질 도메인을 본질적으로 갖지 않는 형태의 CD98 폴리펩티드를 지칭한다. 통상적으로, CD98 폴리펩티드 ECD는 1% 미만의 이러한 경막 도메인 및/또는 세포질 도메인을 가질 것이고, 바람직하게는 0.5% 미만의 이러한 도메인들을 가질 것이다. CD98의 경막 도메인은 아미노산 잔기 76 내지 103을 포함한다(Parmacek et al., Nucleic Acids Res. 17: 1915-1931, 1989). 경막 도메인의 정확한 경계는 상이할 수 있지만, 처음으로 확인된 바와 같이 상기 도메인의 어느 한 말단에 존재하는 약 5개 이하의 아미노산일 가능성이 가장 높다. 따라서, 임의적으로, CD98 폴리펩티드의 세포외 도메인은 상기 문헌(Parmacek et al.)에 개시된 바와 같이 CD98의 서열의 약 98 내지 108부터 529까지의 아미노산들을 포함할 수 있다.CD98 polypeptide "extracellular domain" or "ECD" refers to a form of CD98 polypeptide that is essentially free of the epidermal and cytoplasmic domains. Typically, a CD98 polypeptide ECD will have less than 1% of such a transmembrane domain and / or a cytoplasmic domain, preferably less than 0.5% of such domains. The transmembrane domain of CD98 contains amino acid residues 76-103 (Parmacek et al., Nucleic Acids Res. 17: 1915-1931, 1989). The exact boundaries of the transmembrane domain may be different, but it is most likely to be no more than about five amino acids present at either end of the domain as first identified. Thus, optionally, the extracellular domain of the CD98 polypeptide may comprise amino acids from about 98 to 108 to 529 of the sequence of CD98, as disclosed in that document (Parmacek et al.).

기준 폴리펩티드 서열에 대하여 "퍼센트(%) 아미노산 서열 동일성"은 서열들을 정렬하고 필요하다면 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입하고 임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로서 간주하지 않은 후 기준 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 측정하기 위한 정렬은 당분야의 기술 내에 있는 다양한 방식, 예를 들면, 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용함으로써 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열들의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 비롯한, 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다."Percent (%) amino acid sequence identity" for a reference polypeptide sequence means that the sequence is aligned and a gap is introduced to achieve maximum percent sequence identity if necessary, and any conservative substitution is not considered part of the sequence identity, Is defined as the percentage of amino acid residues of the same candidate sequence as the amino acid residue of the sequence. Alignment to determine percent amino acid sequence identity may be accomplished in a variety of ways within the skill of the art, for example, by using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN, or Megalign (DNASTAR) software . Those skilled in the art will be able to determine appropriate parameters for sequence alignment, including any algorithms necessary to achieve maximum alignment over the entire length of the sequences being compared.

본원에서 사용된 바와 같이, 아미노산 잔기/위치의 "변경"은 출발 아미노산 서열에 비해 일차 아미노산 서열의 변화를 지칭하는데, 이때 상기 변화는 상기 아미노산 잔기/위치를 포함하는 서열 변경으로부터 발생된다. 예를 들면, 전형적인 변경은 또 다른 아미노산에 의한 상기 잔기의 치환(예를 들면, 보존적 또는 비-보존적 치환), 상기 잔기/위치에 인접한 하나 이상(일반적으로 5개 또는 3개보다 더 적은) 아미노산의 삽입, 및 상기 잔기/위치의 결실을 포함한다.As used herein, "alteration" of an amino acid residue / position refers to a change in the primary amino acid sequence relative to the starting amino acid sequence, wherein the change results from altering the sequence comprising the amino acid residue / position. For example, a typical alteration may include substitution (e.g., conservative or non-conservative substitution) of the residue by another amino acid, one or more adjacent to the residue / position (generally less than five or three ) Amino acid insertion, and deletion of the residue / position.

"에피토프"는 단일 항체 분자가 결합하는 항원 분자의 표면 상의 부위이다. 일반적으로, 항원은 여러 또는 많은 상이한 에피토프들을 갖고 많은 상이한 항체들과 반응한다. 상기 용어는 구체적으로 선형 에피토프 및 입체구조형 에피토프를 포함한다.An "epitope" is a site on the surface of an antigen molecule to which a single antibody molecule binds. Generally, an antigen has several or many different epitopes and reacts with many different antibodies. The term specifically includes linear epitopes and stereostructured epitopes.

2개의 항체들이 동일한 또는 입체적으로 중첩되는 에피토프들을 인식하는 경우 항체는 기준 항체에 의해 결합되는 에피토프와 "본질적으로 동일한 에피토프"에 결합한다. 2개의 항체들이 동일한 또는 입체적으로 중첩되는 에피토프들에 결합하는지를 확인하는 가장 널리 사용되는 신속한 방법은 표지된 항원 또는 표지된 항체를 사용하는 경쟁 분석(모든 수의 상이한 포맷으로 구성될 수 있음)이다. 통상적으로, 항원은 96웰 플레이트 상에 고정되고, 방사성 또는 효소 표지를 사용하여 표지된 항체의 결합을 차단하는 비-표지된 항체의 능력을 측정한다.When two antibodies recognize identical or sterically overlapping epitopes, the antibody binds to "essentially the same epitope" with the epitope bound by the reference antibody. The most widely used rapid method of confirming whether two antibodies bind to identical or sterically overlapping epitopes is the competition assay (which may consist of any number of different formats) using the labeled antigen or labeled antibody. Typically, the antigen is immobilized on a 96-well plate and the ability of the non-labeled antibody to block binding of the labeled antibody is determined using radioactive or enzymatic labels.

"에피토프 맵핑"은 그들의 표적 항원 상의 항체의 결합 부위 또는 에피토프를 확인하는 과정이다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체구조형 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질에서 연속 아미노산 서열에 의해 형성된다. 입체구조형 에피토프는 단백질 서열에서 불연속적이지만 그의 3차원 구조로의 단백질의 폴딩 시 함께 존재하는 아미노산들로 형성된다."Epitope mapping" is the process of identifying binding sites or epitopes of an antibody on their target antigen. The antibody epitope may be a linear epitope or a conformational epitope. Linear epitopes are formed by consecutive amino acid sequences in proteins. A stereostructural epitope is formed in the amino acids that are discontinuous in the protein sequence but coexist with the folding of the protein into its three-dimensional structure.

본원에서 정의된 바와 같이 "에피토프 비닝"은 항체들이 인식하는 에피토프들에 기초하여 항체를 분류하는 과정이다. 보다 구체적으로, 에피토프 비닝은 그들의 에피토프 인식 성질에 기초하여 항체를 분류하는 컴퓨터 이용 방법과 조합된, 상이한 항체들의 에피토프 인식 성질을 구별하고 상이한 결합 특이성을 갖는 항체를 확인하는 방법 및 시스템을 포함한다.As defined herein, "epitope binding" is the process of classifying antibodies based on epitopes recognized by antibodies. More specifically, epitope vining includes methods and systems for distinguishing epitope recognition properties of different antibodies and identifying antibodies with different binding specificities, in combination with a computerized method of classifying antibodies based on their epitope recognition properties.

"장애"는 본 발명의 물질/분자 또는 방법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 임의의 병태 또는 질환이다. 이것은 포유동물이 해당 장애에 취약하게 만드는 병리학적 상태를 비롯한 만성 장애 및 급성 장애를 포함한다. 본원에서 치료될 장애의 비-한정적 예로는 암성 병태, 예컨대, 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병뿐만 아니라 이들 암들의 전이가 있다."Disability" is any condition or disease that would benefit from treatment with the substance / molecule or method of the present invention. This includes chronic and acute disorders, including pathological conditions that make mammals susceptible to the disorder. Non-limiting examples of disorders to be treated herein include cancerous conditions such as bladder, breast, colon, rectal, stomach, esophageal, lung, laryngeal, renal, oral, ovarian, prostate, sarcoma, melanoma, , Lymphoma or leukemia, as well as metastasis of these cancers.

용어 "세포 증식 장애" 및 "증식 장애"는 어느 정도의 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 지칭한다. 한 실시양태에서, 세포 증식 장애는 암이다.The terms " cell proliferative disorder "and" proliferative disorder "refer to disorders associated with some degree of abnormal cell proliferation. In one embodiment, the cell proliferative disorder is cancer.

본원에서 사용된 바와 같이, "종양"은 악성이든 아니면 양성이든 관계없이 모든 신생물성 세포 생장 및 증식, 및 모든 전구암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식 장애", "증식 장애" 및 "종양"은 본원에서 지칭된 바와 같이 상호 배타적이지 않다.As used herein, "tumor" refers to all neoplastic cellular growth and proliferation, whether malignant or benign, and to all prodrug and cancerous cells and tissues. The terms "cancer", "cancerous", "cell proliferative disorder", "proliferative disorder" and "tumor" are not mutually exclusive, as referred to herein.

용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비-조절된 세포 생장을 특징으로 하는 포유동물의 병리학적 상태를 지칭하거나 기술한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프 악성종양이 있으나 이들로 한정되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예로는 편평세포 암(예를 들면, 상피 편평세포 암); 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평암종을 비롯한 폐암; 복막암; 간세포암; 위장암을 비롯한 위암 또는 복부암; 췌장암; 신경아교모세포종; 자궁경부암; 난소암; 구강암; 간암; 방광암; 요로암; 간세포종; 유방암; 결장암; 직장암; 결장직장암; 자궁내막 또는 자궁암종; 타액선암종; 신장암 또는 신암; 전립선암; 음문암; 갑상선암; 간암종; 항문암종; 음경암종; 흑색종; 다발 골수종 및 B 세포 림프종; 뇌암뿐만 아니라 두경부암; 및 관련 전이가 있다. The terms "cancer" and "cancerous" refer to or describe the pathological condition of a mammal, which is typically characterized by non-regulated cell growth. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, and leukemia or lymphoma. More specific examples of such cancers include squamous cell cancer (e.g., epithelial squamous cell cancer); Small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung and squamous cell carcinoma of the lung; Peritoneal cancer; Hepatocellular carcinoma; Gastric or abdominal cancer including gastrointestinal cancer; Pancreatic cancer; Glioblastoma; Cervical cancer; Ovarian cancer; Oral cancer; Liver cancer; Bladder cancer; Urinary tract cancer; Hepatocellular carcinoma; Breast cancer; Colon cancer; Rectal cancer; Colorectal cancer; Endometrial or uterine carcinoma; Salivary gland carcinoma; Renal or neoplastic; Prostate cancer; Mun Mun; Thyroid cancer; Liver cancer; Anal carcinoma; Penis carcinoma; Melanoma; Multiple myeloma and B cell lymphoma; Brain cancer as well as head and neck cancer; And related transitions.

"CD98 발현 세포"는 세포 표면 상에서 내생성 또는 형질감염된 CD98을 발현하는 세포이다. "CD98 발현 암"은 세포 표면 상에 존재하는 CD98 단백질을 갖는 세포를 포함하는 암이다. "CD98 발현 암"은 항-CD98 항체가 그에 결합하여 암에 대한 치료 효과를 가질 수 있도록 그의 세포 표면 상에서 충분한 수준의 CD98을 생성한다. CD98을 "과다발현하는" 암은 동일한 조직 타입의 비-암성 세포에 비해 그의 세포 표면에서 유의하게 더 높은 수준의 CD98을 갖는 암이다. 이러한 과다발현은 유전자 증폭에 의해, 또는 증가된 전사 또는 번역에 의해 야기될 수 있다. CD98 과다발현은 세포의 표면 상에 존재하는 CD98 단백질의 증가된 수준을 (예를 들면, 면역조직화학 분석; FACS 분석을 통해) 평가함으로써 진단 또는 예후 분석에서 측정될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 예를 들면, 형광 원위치 혼성화(FISH; 1998년 10월에 공개된 국제 특허출원 공보 제W098/45479호 참조), 서던 블롯팅, 노던 블롯팅, 또는 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기법, 예컨대, 실시간 정량 PCR(RT-PCR)을 통해 세포에서 CD98 코딩 핵산 또는 mRNA의 수준을 측정할 수 있다. 상기 분석들 이외에, 다양한 생체내 분석들이 당업자에 의해 이용될 수 있다. 예를 들면, 환자의 체내 세포를 임의적으로 검출가능한 표지, 예를 들면, 방사성 동위원소로 표지되는 항체에 노출시킬 수 있고, 상기 환자에서 상기 항체와 세포의 결합을 예를 들면, 방사성에 대한 외부 스캐닝, 또는 상기 항체에 미리 노출된 환자로부터 채취된 생검의 분석으로 평가할 수 있다. CD98 발현 암은 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함하나 이들로 한정되지 않는다."CD98 expressing cell" is a cell expressing CD98 that is endogenous or transfected on the cell surface. A "CD98 expressing cancer" is a cancer comprising cells having a CD98 protein present on the cell surface. A "CD98 expressing cancer" produces sufficient levels of CD98 on its cell surface so that the anti-CD98 antibody binds to it and has a therapeutic effect on cancer. Cancer that "overexpresses" CD98 is a cancer that has significantly higher levels of CD98 on its cell surface than non-cancerous cells of the same tissue type. Such overexpression may be caused by gene amplification, or by increased transcription or translation. CD98 overexpression can be measured in a diagnostic or prognostic assay by assessing an increased level of CD98 protein present on the surface of the cell (e.g., via immunohistochemistry analysis; FACS analysis). Alternatively, or additionally, the nucleic acid can be detected by, for example, fluorescence in situ hybridization (FISH; see International Patent Application Publication No. WO98 / 45479 published October 1998), Southern blotting, Northern blotting, PCR) techniques, such as real-time quantitative PCR (RT-PCR), to determine the level of CD98-encoding nucleic acid or mRNA in the cells. In addition to the above assays, a variety of in vivo assays can be used by those skilled in the art. For example, the body cells of a patient can be exposed to an optionally labeled label, for example, an antibody labeled with a radioactive isotope, and the binding of the antibody and the cell in the patient can be monitored, for example, Scanning, or analysis of a biopsy taken from a patient previously exposed to the antibody. The CD98 expressing cancer may be any one of bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia, But are not limited to, transitions.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료"(및 어미변화, 예컨대, "치료한다" 또는 "치료하는")는 치료되는 개체 또는 세포의 천연 경과를 변경시키기 위한 시도에서의 임상적 시술을 지칭하고, 예방을 위해 수행될 수 있거나 임상 병리의 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 암의 경우 전이의 예방, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 호전 또는 경감, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 질환 또는 장애의 발생을 지연시키거나 질환 또는 장애의 진행을 늦추는 데에 사용된다.Refers to a clinical procedure in an attempt to alter the natural course of a subject or cell being treated, and includes, but is not limited to, a " treatment " Can be performed for prevention or can be performed during the course of clinical pathology. Preferred effects of the treatment include preventing the occurrence or recurrence of the disease, alleviating the symptoms, reducing any direct or indirect pathological consequences of the disease, preventing metastasis in the case of cancer, reducing the rate of disease progression, , And remission or improved prognosis. In some embodiments, the antibodies of the invention are used to slow the development of a disease or disorder or slow the progression of a disease or disorder.

성공적인 치료 및 질환의 개선을 평가하기 위한 상기 파라미터들은 의사에게 익숙한 관용적인 절차에 의해 용이하게 측정될 수 있다. 암 치료의 경우, 예를 들면, 질환 진행 시간(TTP)을 평가하고/하거나 반응 속도(RR)를 측정함으로써 효능을 측정할 수 있다. 효능을 측정하기 위한 다른 종점은 예를 들면, 전체 생존(OS), 질환 부재 생존(DFS) 및 재발병 부재(또는 재발 부재) 생존(RFS)을 포함한다. 전이는 병기분류 검사, 및 뼈로의 퍼짐을 확인하기 위한 칼슘 수준 및 다른 효소에 대한 뼈 스캔 및 검사에 의해 확인될 수 있다. 골반 및 이 영역 내의 림프절로의 퍼짐을 찾기 위해 CT 스캔도 수행할 수 있다. 흉부 X-선 및 공지된 방법에 의한 간 효소 수준의 측정은 각각 폐 및 간으로의 전이를 찾는 데에 이용된다. 질환을 모니터링하는 다른 관용적인 방법은 경직장 초음파검사(TRUS) 및 경직장 바늘 생검(TRNB)을 포함한다.These parameters for evaluating successful treatment and improvement of the disease can be easily measured by an idiomatic procedure familiar to the physician. In the case of cancer treatment, the efficacy can be measured, for example, by assessing the disease progression time (TTP) and / or measuring the rate of response (RR). Other endpoints for measuring efficacy include, for example, total survival (OS), disease free survival (DFS), and remyelinating (or recurrent) survival (RFS). Metastasis can be identified by staging and by bone scan and examination of calcium levels and other enzymes to confirm spread to the bone. CT scans can also be performed to find the pelvis and spread to the lymph nodes within this area. Measurements of liver enzyme levels by chest X-ray and known methods are used to find metastases to the lungs and liver, respectively. Other common methods of monitoring disease include transrectal ultrasound (TRUS) and transrectal needle biopsy (TRNB).

"개체"는 척추동물이다. 특정 실시양태에서, 척추동물은 포유동물이다. 포유동물은 농장 동물(예컨대, 소), 스포츠 동물, 애완 동물(예컨대, 고양이, 개 및 말), 영장류, 마우스 및 래트를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 포유동물은 인간이다."Entity" is a vertebrate animal. In certain embodiments, the vertebrate animal is a mammal. Mammals include, but are not limited to, farm animals (eg, cows), sports animals, pets (eg, cats, dogs and horses), primates, mice and rats. In certain embodiments, the mammal is a human.

"유효량"은 필요한 용량에서 필요한 기간 동안 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하는 데에 효과적인 양을 지칭한다. 본 발명의 물질/분자의 "치료 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 상기 물질/분자의 능력과 같은 인자에 따라 상이할 수 있다. 치료 유효량은 치료적으로 유리한 효과가 물질/분자의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가하는 경우의 양을 포괄한다. "예방 유효량"은 필요한 용량에서 필요한 기간 동안 원하는 예방 결과를 달성하는 데에 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로(그러나, 반드시는 아님), 예방 용량이 질환의 초기 단계 전에 또는 질환의 초기 단계에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 더 적을 것이다. 암의 경우, 약물의 치료 유효량은 예를 들면, 암세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나; 종양 크기를 감소시킬 수 있고/있거나; 말초 장기 내로의 암세포 침습을 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도까지 지연시킬, 바람직하게는 중단시킬 수 있고/있거나); 종양 전이를 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도까지 지연시킬, 바람직하게는 중단시킬 수 있고/있거나); 종양 성장을 어느 정도까지 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도까지 경감시킬 수 있다. "치료"의 상기 정의를 참조한다. 약물이 기존 암세포의 생장을 방해할 수 있고/있거나 기존 암세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 상기 약물은 세포증식억제성 및/또는 세포독성을 나타낼 수 있다."Effective amount" refers to an amount effective to achieve the desired therapeutic or prophylactic result for the required period of time at the required dose. The "therapeutically effective amount" of the substance / molecule of the present invention may vary depending on factors such as the disease state, age, sex and body weight of the individual, and the ability of the substance / molecule to elicit the desired response in the individual. A therapeutically effective amount encompasses an amount when the therapeutically beneficial effect exceeds any toxic or deleterious effect of the substance / molecule. A "prophylactically effective amount" refers to an amount effective to achieve the desired prophylactic result over a required period of time at the required dose. Typically, but not necessarily, the prophylactically effective amount will be less than the therapeutically effective amount, since the prophylactic dose is used in the subject prior to or at an early stage of the disease. In the case of cancer, the therapeutically effective amount of the drug can, for example, reduce the number of cancer cells and / or; Reduce tumor size and / or; May inhibit (i.e., delay to some extent, preferably stop and / or inhibit) cancer cell invasion into the peripheral organs; May inhibit (i.e., delay to some extent, preferably stop and / or inhibit) tumor metastasis; To some extent inhibit tumor growth and / or; One or more of the symptoms associated with cancer can be alleviated to some extent. See above definition of "treatment ". The drug may exhibit cell proliferation inhibition and / or cytotoxicity to the extent that the drug may interfere with the growth of existing cancer cells and / or may kill existing cancer cells.

"만성" 투여는 연장된 기간 동안 초기 치료 효과(활성)를 유지하도록 급성 방식과 대조적으로 만성 방식으로 약제(들)를 투여하는 것을 지칭한다. "간헐적" 투여는 중단 없이 연속적으로 수행되지 않고 오히려 성질 면에서 주기적인 치료이다."Chronic" administration refers to the administration of the agent (s) in a chronic manner, as opposed to an acute mode, to maintain an initial therapeutic effect (activity) over an extended period of time. "Intermittent" administration is not performed continuously without interruption, but rather is periodic treatment in nature.

하나 이상의 추가 치료제"와 함께" 투여는 동시적인(동시병행) 투여 및 임의의 순서로의 연속적인 투여를 포함한다. Administration together with one or more additional therapeutic agents includes simultaneous (concurrent) administration and sequential administration in any order.

본원에서 사용된 바와 같이, "담체"는 사용되는 용량 및 농도에서 그에 노출되는 세포 또는 포유동물에게 독성을 나타내지 않는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종, 생리학적으로 허용가능한 담체는 pH 완충 수용액이다. 생리학적으로 허용가능한 담체의 예로는 완충제, 예컨대, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산을 비롯한 항산화제; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이팅제, 예컨대, EDTA; 당 알코올, 예컨대, 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대, 나트륨; 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대, 트윈(TWEEN)™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS)™가 있다.As used herein, "carrier" includes pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or stabilizers that do not exhibit toxicity to cells or mammals exposed thereto at the dosages and concentrations employed. Often, the physiologically acceptable carrier is a pH buffered aqueous solution. Examples of physiologically acceptable carriers include buffers such as phosphate, citrate and other organic acids; Antioxidants including ascorbic acid; Low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; Proteins, such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; Monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose or dextrin; Chelating agents such as EDTA; Sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; Salt formation counter ions, such as sodium; And / or non-ionic surfactants such as TWEEN ™, polyethylene glycol (PEG) and PLURONICS ™.

용어 "약학 제제"는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이게 하는 형태로 존재하고 상기 제제가 투여될 대상체에게 허용불가능한 독성을 나타내는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 제제는 멸균 제제일 수 있다.The term "pharmaceutical formulation" refers to a formulation that exists in a form that makes the biological activity of the active ingredient effective and does not contain additional ingredients that exhibit unacceptable toxicity to the subject to which the formulation is to be administered. Such formulations may be sterile.

"멸균" 제제는 모든 생존 미생물 및 이들의 포자를 갖지 않는 무균 상태이다. 본원에 개시된 항체의 "유효량"은 구체적으로 언급된 목적을 달성하기에 충분한 양이다. "유효량"은 언급된 목적과 관련하여 실험적으로 및 관용적인 방식으로 결정될 수 있다.A "sterile" preparation is an aseptic condition that does not have all the surviving microorganisms and their spores. An "effective amount" of an antibody disclosed herein is an amount sufficient to achieve the specifically mentioned purpose. An "effective amount" may be determined in an empirical and generic manner in connection with the stated purpose.

용어 "치료 유효량"은 대상체 또는 포유동물에서 질환 또는 장애를 "치료하는" 데에 효과적인 항체 또는 다른 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우, 약물의 치료 유효량은 암세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나; 종양 크기를 감소시킬 수 있고/있거나; 말초 장기 내로의 암세포 침습을 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도까지 지연시킬, 바람직하게는 중단시킬 수 있고/있거나); 종양 전이를 억제할 수 있고/있거나(즉, 어느 정도까지 지연시킬, 바람직하게는 중단시킬 수 있고/있거나); 종양 성장을 어느 정도까지 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도까지 경감시킬 수 있다. 본원의 "치료"의 정의를 참조한다. 약물이 기존 암세포의 생장을 방해할 수 있고/있거나 기존 암세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지 상기 약물은 세포증식억제성 및/또는 세포독성을 나타낼 수 있다. "예방 유효량"은 필요한 용량에서 필요한 기간 동안 원하는 예방 결과를 달성하는 데에 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로(그러나, 반드시는 아님), 예방 용량이 질환의 초기 단계 전에 또는 질환의 초기 단계에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 더 적을 것이다.The term " therapeutically effective amount "refers to the amount of an antibody or other drug effective in" treating " a disease or disorder in a subject or mammal. In the case of cancer, the therapeutically effective amount of the drug may reduce the number of cancer cells; Reduce tumor size and / or; May inhibit (i.e., delay to some extent, preferably stop and / or inhibit) cancer cell invasion into the peripheral organs; May inhibit (i.e., delay to some extent, preferably stop and / or inhibit) tumor metastasis; To some extent inhibit tumor growth and / or; One or more of the symptoms associated with cancer can be alleviated to some extent. See the definition of "treatment" herein. The drug may exhibit cell proliferation inhibition and / or cytotoxicity to the extent that the drug may interfere with the growth of existing cancer cells and / or may kill existing cancer cells. A "prophylactically effective amount" refers to an amount effective to achieve the desired prophylactic result over a required period of time at the required dose. Typically, but not necessarily, the prophylactically effective amount will be less than the therapeutically effective amount, since the prophylactic dose is used in the subject prior to or at an early stage of the disease.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제하거나 방해하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소(예를 들면, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학치료제, 예를 들면, 메토트렉세이트(methotrexate), 아드리아마이신(adriamicin), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloids)(빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 에토포사이드(etoposide)), 독소루비신(doxorubicin), 멜팔란(melphalan), 미토마이신 C(mitomycin C), 클로람부실(chlorambucil), 다우노루비신(daunorubicin) 또는 다른 인터칼레이팅제; 효소 및 이의 단편, 예컨대, 핵분해 효소; 항생제; 세균, 진균, 식물 또는 동물 유래의 독소, 예컨대, 소분자 독소 또는 효소 활성 독소(이들의 단편 및/또는 변이체를 포함함); 및 하기 개시된 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하기 위한 것이다. 다른 세포독성제는 후술되어 있다. 살종양제는 종양 세포의 파괴를 야기한다.As used herein, the term "cytotoxic agent" refers to a substance that inhibits or prevents the function of cells and / or causes destruction of cells. The term includes radioactive isotopes such as At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , Pb ²¹² and Lu; Chemotherapeutic agents such as, for example, methotrexate, adriamicin, vinca alkaloids (vincristine, vinblastine, etoposide), doxorubicin, Melphalan, mitomycin C, chlorambucil, daunorubicin or other intercalating agents; Enzymes and fragments thereof, such as nucleolytic enzymes; Antibiotic; Bacterial, fungal, plant or animal-derived toxins, such as small molecule toxins or enzyme active toxins, including fragments and / or variants thereof; And various anti-tumor agents or anti-cancer agents disclosed below. Other cytotoxic agents are described below. Tumor agents cause destruction of tumor cells.

"독소"는 세포의 생장 또는 증식에 유해한 효과를 가질 수 있는 임의의 물질이다.A "toxin" is any substance that may have deleterious effects on cell growth or proliferation.

"화학치료제"는 작용의 기작과 관계없이 암의 치료에 유용한 화합물이다. 화학치료제는 "표적화된 치료" 및 통상적인 화학치료에서 사용되는 화합물을 포함한다. 화학치료제의 예로는 하기 물질들이 있으나 이들로 한정되지 않는다: 알킬화제, 예컨대, 티오테파(thiotepa), 사이톡산(CYTOXAN)^® 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판(busulfan), 임프로설판(improsulfan) 및 피포설판(piposulfan); 아지리딘(aziridine), 예컨대, 벤조도파(benzodopa), 카보쿠온(carboquone), 메투레도파(meturedopa) 및 우레도파(uredopa); 알트레타민(altretamine), 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜아민; 아세토게닌(acetogenins)(특히, 불라타신(bullatacin) 및 불라타시논(bullatacinone)); 델타-9-테트라하이드로카나비놀(드로나비놀(dronabinol), 마리놀(MARINOL)^®); 베타-라파콘(lapachone); 라파콜(lapachol); 콜히친(colchicines); 베툴린산(betulinic acid); 캄프토테신(camptothecin)(합성 유사체 토포테칸(topotecan)(하이캄틴(HYCAMTIN)^®)을 포함함), CPT-11(이리노테칸(irinotecan), 캄프토사르(CAMPTOSAR)^®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴(scopolectin) 및 9-아미노캄프토테신); 브리오스타틴(bryostatin); 칼리스타틴(callystatin); CC-1065(그의 아도젤레신(adozelesin), 카젤레신(carzelesin) 및 비젤레신(bizelesin) 합성 유사체를 포함함); 포도필로톡신(podophyllotoxin); 포도필린산(podophyllinic acid); 테니포사이드(teniposide); 크립토파이신(cryptophycins)(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴(dolastatin); 듀오카마이신(duocarmycin)(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함함); 엘레우테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴(pancratistatin); 사코딕티인(sarcodictyin); 스폰기스타틴(spongistatin); 질소 머스타드, 예컨대, 클로람부실(chlorambucil), 클로르나파진(chlornaphazine), 콜로포스파미드(cholophosphamide), 에스트라무스틴(estramustine), 이포스파미드(ifosfamide), 메클로르에타민(mechlorethamine), 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니무스틴(prednimustine), 트로포스파미드(trofosfamide), 우라실 머스타드; 니트로소우레아(nitrosureas), 예컨대, 카무스틴(carmustine), 클로로조토신(chlorozotocin), 포테무스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴(nimustine) 및 라님누스틴(ranimnustine); 항생제, 예컨대, 에네다이인(enediyne) 항생제(예를 들면, 칼리케아미신(calicheamicin), 특히 칼리케아미신 감마II 및 칼리케아미신 오메가II(예를 들면, 문헌(Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)) 참조); 다이네마이신(dynemicin) A를 포함하는 다이네마이신; 에스퍼아미신(esperamicin); 및 네오카지노스타틴(neocarzinostatin) 발색단 및 관련 발색단백질 에네다이인 항생제 발색단), 아클라시노마이신(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 아우쓰라마이신(authramycin), 아자세린(azaserine), 블레오마이신(bleomycins), 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신(carabicin), 카미노마이신(carminomycin), 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이시니스(chromomycinis), 닥티노마이신(dactinomycin), 다우노루비신, 데토루비신(detorubicin), 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신^®, 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함함), 에피루비신(epirubicin), 에소루비신(esorubicin), 이다루비신(idarubicin), 마셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신(olivomycins), 펩로마이신(peplomycin), 포트피로마이신(potfiromycin), 퓨로마이신(puromycin), 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신(rodorubicin), 스트렙토니그린(streptonigrin), 스트렙토조신(streptozocin), 튜버시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴(zinostatin), 조루비신(zorubicin); 항대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대, 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트, 프테로프테린(pteropterin), 트리메트렉세이트(trimetrexate); 퓨린 유사체, 예컨대, 플루다라빈(fludarabine), 6-머캡토퓨린, 티아미프린(thiamiprine), 티오구아닌(thioguanine); 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자유리딘(azauridine), 카모푸르(carmofur), 사이타라빈(cytarabine), 디데옥시유리딘, 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플록스유리딘(floxuridine); 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론(calusterone), 드로모스타놀론(dromostanolone) 프로피오네이트, 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스탄(mepitiostane), 테스토락톤(testolactone); 항-아드레날, 예컨대, 아미노글루테티미드, 미토탄(mitotane), 트리로스탄(trilostane); 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산(frolinic acid); 아세글라톤(aceglatone); 알도포스파미드 글리코사이드(aldophosphamide glycoside); 아미노레불린산(aminolevulinic acid); 에닐우라실(eniluracil); 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌(bisantrene); 에다트락세이트(edatraxate); 데포파민(defofamine); 데메콜친(demecolcine); 디아지쿠온(diaziquone); 엘포르니틴(elfornithine); 엘립티늄(elliptinium) 아세테이트; 에포틸론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난(lentinan); 로니다이닌(lonidainine); 메이탄시노이드(maytansinoids), 예컨대, 메이탄신(maytansine) 및 안사미토신(ansamitocins); 미토구아존(mitoguazone); 미톡산트론(mitoxantrone); 모피단몰(mopidanmol); 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴(pentostatin); 페나메트(phenamet); 피라루비신(pirarubicin); 로속산트론(losoxantrone); 2-에틸하이드라지드; 프로카바진(procarbazine); PSK^® 폴리사카라이드 결합체(제이에이치에스 네추랄 프로덕츠(JHS Natural Products), 미국 오레곤주 유진 소재); 라족산(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조푸란(sizofuran); 스피로게르마늄(spirogermanium); 테누아존산(tenuazonic acid); 트리아지쿠온(triaziquone); 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(trichothecenes)(특히 T-2 독소, 베라쿠린(verracurin) A, 로리딘(roridin) A 및 안구이딘(anguidine)); 우레탄(urethan); 빈데신(vindesine)(엘디신(ELDISINE)^®, 필데신(FILDESIN)^®); 다카바진(dacarbazine); 만노무스틴(mannomustine); 미토브로니톨(mitobronitol); 미톨락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가사이토신(gacytosine); 아라비노사이드("Ara-C"); 티오테파; 변성독소, 예를 들면, 탁솔^® 파클리탁셀(paclitaxel)(브리스톨-메이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재), 아브락산(ABRAXANE)™ 크레모포르(Cremophor) 무함유, 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제(아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 미국 일리노이주 샤움버그 소재) 및 탁소테레(TAXOTERE)^® 독세탁셀(론-포울렌크 로레르(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니 소재); 클로란부실(chloranbucil); 겜시타빈(겜자르(GEMZAR)^®); 6-티오구아닌; 머캡토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대, 시스플라틴 및 카보플라틴(carboplatin); 빈블라스틴(벨반(VELBAN)^®); 백금; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴(온코빈(ONCOVIN)^®); 옥살리플라틴(oxaliplatin); 류코보빈(leucovovin); 비노렐빈(vinorelbine)(나벨빈(NAVELBINE)^®); 노반트론(novantrone); 에다트렉세이트(edatrexate); 다우노마이신; 아미노프테린(aminopterin); 이반드로네이트(ibandronate); 토포이소머라제(topoisomerase) 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 카페시타빈(젤로다(XELODA)^®); 전술한 물질들 중 임의의 물질의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 및 전술한 물질들 중 2종 이상의 물질들의 조합물, 예컨대, CHOP(사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 조합치료에 대한 약어), 및 FOLFOX(5-FU 및 류코보빈과 조합된 옥살리플라틴(엘록사틴(ELOXATIN)™)을 사용한 치료 요법에 대한 약어). 추가 화학치료제는 항체 약물 접합체로서 유용한 세포독성제, 예컨대, 메이탄시노이드(예를 들면, DM1 및 DM4) 및 아우리스타틴(auristatins)(예를 들면, MMAE 및 MMAF)을 포함한다.A "chemotherapeutic agent" is a compound useful in the treatment of cancer regardless of the mechanism of action. Chemotherapeutic agents include those used in "targeted therapy" and conventional chemotherapy. Examples of chemotherapeutic agents are, but are not limited to, following materials: alkylating agents, e. G., Thiotepa (thiotepa), between toksan (CYTOXAN) ^® cyclophosphamide; Alkyl sulfonates such as busulfan, improsulfan and piposulfan; Aziridine, such as benzodopa, carboquone, meturedopa, and uredopa; Ethyleneimine and methylamelamine including altretamine, triethylenemelamine, triethylenepoformamide, triethylenethiophosphoramide, and trimethylolromelamine; Acetogenins (in particular, bullatacin and bullatacinone); Delta-9-tetrahydro-car butterfly play (play draw butterfly (dronabinol), horses play (MARINOL) ^®); Beta-lapachone; Lapachol; Colchicines; Betulinic acid; Camptothecin (camptothecin) (including the synthetic analogue topotecan (topotecan) (hayikamtin ^{(HYCAMTIN) ®)), CPT} -11 ( irinotecan (irinotecan), Kam neoplasm? Sar (CAMPTOSAR) ^®), acetyl camptothecin, Scotland Scopolectin and 9-aminocamptothecin); Bryostatin; Callystatin; CC-1065 (including its analogues adozelesin, carzelesin and bizelesin synthetic); Podophyllotoxin; Podophyllinic acid; Teniposide; Cryptophycins (especially cryptophycin 1 and cryptophycin 8); Dolastatin; Duocarmycin (including synthetic analogs, KW-2189 and CB1-TM1); Eleutherobin; Pancratistatin; Sarcodictyin; Spongistatin; Nitrogen mustards such as chlorambucil, chlornaphazine, cholophosphamide, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine, Norembichin, phenesterine, prednimustine, trofosfamide, uracil mustard, and the like; Nitrosureas such as carmustine, chlorozotocin, fotemustine, lomustine, nimustine and lanimnustine; Antibiotics such as enediyne antibiotics (e.g. calicheamicin, especially calicheamicin gamma II and calicheamicin omega II (see, for example, Angew. Chem Intl. Ed. Engl Dynemicin including esperamicin and neocarzinostatin chromophore and related chromogenic protein enediene (see, for example, Dynemicin A, 33: 183-186 (1994) Acacinomycins, actinomycin, authramycin, azaserine, bleomycins, cactinomycin, carabicin, and the like), antibiotics (such as antibiotics), aclacinomysins, actinomycin, , Carminomycin, carzinophilin, chromomycinis, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L - norleucine, adriamycin ^®, doxorubicin (morpholino-poison Epirubicin, esorubicin, idarubicin, and marcelolone (including but not limited to rubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolino-doxorubicin and deoxy doxorubicin) Marcellomycin, mitomycin such as mitomycin C, mycophenolic acid, nogalamycin, olivomycins, peplomycin, potfiromycin, puromycin, The compounds of the present invention include quelamycin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin); Antimetabolites such as methotrexate and 5-fluorouracil (5-FU); Folic acid analogs such as denopterin, methotrexate, pteropterin, trimetrexate; Purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiamiprine, thioguanine; Pyrimidine analogs such as ancitabine, azacitidine, 6-aza azauridine, carmofur, cytarabine, dideoxy vaculin, doxifluridine doxifluridine, enocitabine, floxuridine; Androgens, such as, for example, calusterone, dromostanolone propionate, epitiostanol, mepitiostane, testolactone; Anti-adrenals, such as aminoglutethimide, mitotane, trilostane; Folic acid supplements, such as frolinic acid; Aceglatone; Aldophosphamide glycoside; Aminolevulinic acid; Eniluracil; Amsacrine; Bestrabucil; Bisantrene; Edatraxate; Defofamine; Demecolcine; Diaziquone; Elfornithine; Elliptinium acetate; Epothilone; Etoglucid; Gallium nitrate; Hydroxyurea; Lentinan; Lonidainine; Maytansinoids such as maytansine and ansamitocins; Mitoguazone; Mitoxantrone; Mopidanmol; Nitraerine; Pentostatin; Phenamet; Pyrarubicin; Losoxantrone; 2-ethylhydrazide; Procarbazine; PSK ^® polysaccharide conjugate (JHS Natural Products, Eugene, OR); Razoxane; Rhizoxin; Sizofuran; Spirogermanium; Tenuazonic acid; Triaziquone; Trichothecenes (especially T-2 toxin, verracurin A, roridin A and anguidine), urethanes, urethanes, ; Vindesine (ELDISINE ^® , FILDESIN ^® ); dacarbazine; mannomustine; mitobronitol; mitolactol; million (pipobroman); lyrics Ito Shin (gacytosine); arabinoside ( "Ara-C");thiotepa; such a modified toxin, for example, Taxol ^® paclitaxel (paclitaxel) (Bristol-Myers Squibb on Blossom (Bristol (Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE ™ Cremophor free, albumin-engineered nanoparticle preparations of paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, USA Illinois syaum bugs material) and takso terephthalate (TAXOTERE) ^® dock, laundry cells (Rhone-poul Lenk in Sultanahmet (Rhone-Pou lenc Rorer), Antony, France material); claw is stale (chloranbucil); gemcitabine (Gem cut (GEMZAR) ^®); 6- thioguanine; Murray captopril purine; methotrexate; platinum analogs such as cisplatin and carboplatin (carboplatin ); vinblastine (belban (VELBAN) ^®); platinum; etoposide (VP-16); epoch spa imide; mitoxantrone; vincristine (on Corbin (ONCOVIN) leuco bobbin (; ^®); oxaliplatin (oxaliplatin) leucovovin); vinorelbine (vinorelbine) (or belbin (NAVELBINE) ^®); roadbed anthrone (novantrone); eda track glyphosate (edatrexate); daunomycin; aminopterin (aminopterin); ibandronate (ibandronate); Topo iso Topoisomerase inhibitors RFS 2000; Difluoromethylornithine (DMFO); Retinoids such as retinoic acid; Capecitabine (gel Roda (XELODA) ^®); A pharmaceutically acceptable salt, acid or derivative of any of the foregoing substances; And combinations of two or more of the foregoing substances, such as CHOP (acronym for combination therapy of cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone), and FOLFOX (oxaliplatin combined with 5-FU and leucovorbin (Abbreviation for therapeutic treatment with ELOXATIN (TM)). Additional chemotherapeutic agents include cytotoxic agents useful as antibody drug conjugates, such as maytansinoids (e.g., DM1 and DM4) and auristatins (e.g., MMAE and MMAF).

하기 물질들도 "화학치료제"의 정의에 포함된다: (i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하도록 작용하는 항-호르몬제, 예컨대, 타목시펜(tamoxifen)(놀바덱스(NOLVADEX)^® 타목시펜 시트레이트를 포함함), 랄록시펜(raloxifen), 드롤록시펜(droloxifene), 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜(trioxifene), 케옥시펜(keoxifene), LY117018, 오나프리스톤(onapristone) 및 파레스톤(FARESTON)^®(토레미펜(toremifene) 시트레이트)을 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM); (ii) 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소인 아로마타제(aromatase)를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가스(MEGASE)^®(메게스트롤 아세테이트), 아로마신(AROMASIN)^®(엑세메스탄(exemestane); 화이자), 포르메스타니(formestanie), 파드로졸(fadrozole), 리비저(RIVISOR)^®(보로졸(vorozole)), 페마라(FEMARA)^®(레트로졸(letrozole); 노바티스) 및 아리미덱스(ARIMIDEX)^®(아나스트로졸(anastrozole); 아스트라제네카); (iii) 항안드로겐, 예컨대, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤라이드 및 고세렐린뿐만 아니라, 트록사시타빈(troxacitabine)(1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); (iv) 단백질 인산화효소 억제제, 예컨대, MEK 억제제(국제 특허출원 공보 제WO 2007/044515호); (v) 지질 인산화효소 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적인 세포 증식에 관여하는 신호전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예를 들면, PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 예컨대, 오블리머센(oblimersen)(제나센스(GENASENSE)^®, 젠타 인코포레이티드(Genta Inc.)); (vii) 라이보자임, 예컨대, VEGF 발현 억제제(예를 들면, 안지오자임(ANGIOZYME)^®) 및 HER2 발현 억제제; (viii) 백신, 예컨대, 유전자 치료 백신, 예를 들면, 알로벡틴(ALLOVECTIN)^®, 레우벡틴(LEUVECTIN)^® 및 백시드(VAXID)^®; 프로류킨(PROLEUKIN)^® rIL-2; 토포이소머라제 1 억제제, 예컨대, 루르토테칸(LURTOTECAN)^®; 아바렐릭스(ABARELIX)^® rmRH; (ix) 항혈관신생제, 예컨대, 베바시주맙(bevacizumab)(아바스틴(AVASTIN)^®, 제넨텍(Genentech)); 및 전술된 물질들 중 임의의 물질의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체.The following materials are also included in the definition of "chemotherapeutic agent": (i) wherein that act to regulate hormone action on tumors, or inhibit-hormone, for example, tamoxifen (tamoxifen) (nolba index (NOLVADEX) ^® tamoxifen citrate Raloxifen, droloxifene, 4-hydroxy tamoxifen, trioxifene, keoxifene, LY117018, onapristone, and FARESTON. ^® anti-estrogens and selective estrogen receptor modulator (SERM), including (toremifene (toremifene) citrate); (ii) aromatase inhibitors that inhibit the adrenal enzyme aromatase (aromatase) that control estrogen production in, for example, 4 (5) -imidazole, amino glue teti imide, MB's (MEGASE) ^® (methoxy guest roll acetate), aromatic Shin (AROMASIN) ^® (exo shemesh tan (exemestane); Pfizer), formate scalpel Tani (formestanie), sol (fadrozole), Libby low (RIVISOR) in Pas ^® (Boro sol (vorozole)), pemara (FEMARA) ^® (letrozole (letrozole); Novartis), and ahrimidekseu (ARIMIDEX) ^® (anastrozole (anastrozole); AstraZeneca); (iii) troxacitabine (1,3-dioxolanucleoside cytosine analog) as well as anti-androgens such as flutamide, nilutamide, bicalutamide, leuprolide and goserelin; (iv) protein kinase inhibitors such as MEK inhibitors (International Patent Application Publication No. WO 2007/044515); (v) lipid-phosphorylase inhibitors; (vi) antisense oligonucleotides, such as antisense oligonucleotides, such as PKC-alpha, Raf and H-Ras, such as oblimersen, which inhibit the expression of genes in the signal transduction pathways involved in abnormal cell proliferation, (agent or sense (GENASENSE) ^®,, Inc. (Genta Inc.) Genta); (vii) ribozyme, e.g., VEGF expression inhibitors (e.g., are not geo-atom (ANGIOZYME) ^®) and HER2 expression inhibitors; (viii) vaccines such as gene therapy vaccines, for example, egg bektin (ALLOVECTIN) ^®, Leu bektin (LEUVECTIN) ^® and a back oxide (VAXID) ^®; PROLEUKIN ^® rIL-2; Topoisomerase 1 inhibitors such as, Ruhr totekan (LURTOTECAN) ^®; Abarelix (ABARELIX) ^® rmRH; (ix) anti-angiogenic agent, for example, bevacizumab (bevacizumab) (Avastin (AVASTIN) ^®, Genentech (Genentech)); And a pharmaceutically acceptable salt, acid or derivative of any of the foregoing.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전구약물"은 모 화합물 또는 약물에 비해 세포에 대한 보다 낮은 세포독성을 나타낼 수 있고 효소 또는 가수분해에 의해 보다 높은 활성을 갖는 모 형태로 활성화될 수 있거나 전환될 수 있는 본 발명의 화합물의 전구체 또는 유도체 형태를 지칭한다. 예를 들면, 문헌(Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615^th Meeting Belfast (1986)) 및 문헌(Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985))을 참조한다. 본 발명의 전구약물은 보다 높은 활성을 갖는 세포독성 결여 약물로 전환될 수 있는 포스페이트 함유 전구약물, 티오포스페이트 함유 전구약물, 설페이트 함유 전구약물, 펩티드 함유 전구약물, D-아미노산-변경된 전구약물, 글리코실화된 전구약물, β-락탐 함유 전구약물, 임의적으로 치환되는 페녹시아세트아미드 함유 전구약물, 임의적으로 치환되는 페닐아세트아미드 함유 전구약물, 5-플루오로사이토신 및 다른 5-플루오로유리딘 전구약물을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 본 발명에서 사용되기 위한 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예로는 본 발명의 화합물 및 화학치료제, 예컨대, 전술된 화학치료제들이 있으나 이들로 한정되지 않는다.As used herein, the term "prodrug" refers to a compound that may exhibit lower cytotoxicity to a cell than the parent compound or drug and may be activated in a mode that has higher activity by enzymatic or hydrolysis, Refers to a precursor or derivative form of a compound of the present invention that can be used. See, for example, Wilman, Prodrugs in Cancer Chemotherapy Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615 ^th Meeting Belfast (1986) and Stella et al., Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (Ed), pp. 247-267, Humana Press (1985). The prodrug of the present invention may be selected from the group consisting of a phosphate containing prodrug, a thiophosphate containing prodrug, a sulfate containing prodrug, a peptide containing prodrug, a D-amino acid-modified prodrug, a glyco A prodrug, a pyrogenic prodrug, a prodrug containing a? -Lactam, a prodrug containing an optionally substituted phenoxyacetamide, a prodrug containing an optionally substituted phenylacetamide, 5-fluorocytosine and another 5-fluoro uridine bulb But are not limited to, drugs. Examples of cytotoxic drugs that can be derivatized in the form of prodrugs for use in the present invention include, but are not limited to, the compounds of the present invention and chemotherapeutic agents such as the aforementioned chemotherapeutic agents.

"소분자"는 약 500 달톤 미만의 분자량을 갖는 것으로서 본원에서 정의된다."Small molecule" is defined herein as having a molecular weight of less than about 500 daltons.

"단리된 핵산"은 천연 서열과 천연적으로 동반되는 다른 게놈 DNA 서열뿐만 아니라 단백질 또는 복합체, 예컨대, 리보좀 또는 중합효소로부터 실질적으로 분리되어 있는 핵산, 예를 들면, RNA, DNA 또는 혼합된 중합체이다. 상기 용어는 그의 천연 발생 환경으로부터 제거되어 있는 핵산 서열을 포괄하고, 재조합체 또는 클로닝된 DNA 단리물, 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 단리된 형태의 분자를 포함한다."Isolated nucleic acid" is a nucleic acid, e.g., RNA, DNA, or a mixed polymer that is substantially separated from a protein or complex, such as a ribosome or a polymerase, as well as other genomic DNA sequences that are naturally associated with the native sequence . The term encompasses nucleic acid sequences that have been removed from its naturally occurring environment and includes recombinant or cloned DNA isolates and chemically synthesized analogs or analogs biologically synthesized by heterologous systems. Substantially pure molecules include molecules in isolated form.

본원에서 상호교환적으로 사용되는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드 중합체를 지칭하고 DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변경된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 또는 합성 반응에 의해 중합체 내로 도입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변경된 뉴클레오티드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오티드 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로(그러나, 반드시는 아님) 길이에 있어서 약 200개 미만의 뉴클레오티드를 갖는 짧은 (일반적으로) 단일 가닥 (일반적으로) 합성 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호 배타적이지 않다. 폴리뉴클레오티드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오티드에 동등하게 전체적으로 적용될 수 있다. "Polynucleotide" or "nucleic acid ", as used interchangeably herein, refers to a nucleotide polymer of any length and includes DNA and RNA. The nucleotide can be any substrate that can be introduced into the polymer by deoxyribonucleotides, ribonucleotides, modified nucleotides or bases, and / or analogs thereof, or by DNA or RNA polymerase or by synthetic reactions. Polynucleotides may include modified nucleotides, such as methylated nucleotides and analogs thereof. As used herein, "oligonucleotide" refers to short (generally) single-stranded (generally) synthetic polynucleotides having generally less than about 200 nucleotides in length, but not necessarily. The terms "oligonucleotide" and "polynucleotide" are not mutually exclusive. The above description of polynucleotides can be equally applied to oligonucleotides as a whole.

본 발명의 항-CD98 항체를 생성하는 세포는 상기 항체를 코딩하는 핵산이 도입되어 있는 모 하이브리도마 세포, 예를 들면, ATCC에 기탁된 하이브리도마 세포뿐만 아니라 세균 숙주 세포 및 진핵 숙주 세포도 포함할 것이다.The cells that produce the anti-CD98 antibody of the present invention may be selected from the group consisting of a hybridoma cell into which the nucleic acid encoding the antibody has been introduced, for example, a hybridoma cell deposited with the ATCC as well as a bacterial host cell and an eukaryotic host cell .

용어 "사용설명서(package insert)"는 치료 제품의 상업적 포장물 내에 통상적으로 포함되는 설명서로서, 증상, 용법, 용량, 투여, 사용금지사유, 및/또는 이러한 치료 제품의 사용에 관한 경고에 대한 정보를 함유하는 설명서를 지칭하기 위해 사용된다.The term "package insert" is a conventionally included instruction in a commercial package of a therapeutic product, and includes information about symptoms, usage, dosage, administration, reasons for use, and / Used to refer to the instructions contained.

조성물 및 이의 제조 방법Composition and process

CD98에 결합하는 항체가 제공된다. 항-CD98 항체를 포함하는 면역접합체가 제공된다. 본 발명의 항체 및 면역접합체는 예를 들면, CD98의 변경된 발현, 예를 들면, 증가된 발현과 관련된 장애의 진단 또는 치료에 유용하다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 세포 증식 장애, 예컨대, 암의 진단 또는 치료에 유용하다.Antibodies that bind to CD98 are provided. An immunoconjugate comprising an anti-CD98 antibody is provided. The antibodies and immunoconjugates of the invention are useful, for example, for the diagnosis or treatment of disorders associated with altered expression of, for example, increased expression of CD98. In certain embodiments, the antibodies or immunoconjugates of the invention are useful for the diagnosis or treatment of cell proliferative disorders, such as cancer.

항-CD98 항체Anti-CD98 antibody

한 실시양태에서, 본 발명은 본원에서 치료제로서 사용될 수 있는 항-CD98 항체를 제공한다. 예시적인 항체는 다중클론 항체, 단일클론 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 이중특이적 항체 및 이종접합체 항체뿐만 아니라, 개선된 친화성 또는 다른 성질을 갖는 이들의 변이체들도 포함한다.In one embodiment, the invention provides anti-CD98 antibodies that can be used as therapeutic agents herein. Exemplary antibodies include polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, humanized antibodies, human antibodies, bispecific antibodies and heteroconjugate antibodies as well as variants thereof with improved affinity or other properties.

1. 다중클론 항체 1. polyclonal antibody

본 발명의 항체는 다중클론 항체를 포함할 수 있다. 다중클론 항체의 제조 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 다중클론 항체는 예를 들면, 면역화제 및 원하는 경우 항원보강제의 1회 이상의 주사에 의해 포유동물에서 발생될 수 있다. 전형적으로, 면역화제 및/또는 항원보강제는 다회 피하 또는 복강내 주사에 의해 포유동물에게 주사될 것이다. 면역화제는 CD98 폴리펩티드 또는 이의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화될 포유동물에서 면역원성을 나타내는 것으로 공지된 단백질에 면역화제를 접합시키는 것이 유용할 수 있다. 이러한 면역원성 단백질의 예로는 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린 및 대두 트립신 억제제가 있으나 이들로 한정되지 않는다. 사용될 수 있는 항원보강제의 예로는 프로인트 완전 항원보강제 및 MPL-TDM 항원보강제(모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로스 디코리노마이콜레이트)가 있다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다. 그 다음, 포유동물을 채혈하고 혈청을 CD98 항체 역가에 대해 분석할 수 있다. 원하는 경우, 항체 역가가 증가하거나 정체 상태에 도달할 때까지 포유동물을 부스팅할 수 있다.The antibody of the present invention may comprise a polyclonal antibody. Methods for producing polyclonal antibodies are known to those skilled in the art. A polyclonal antibody can be generated in a mammal, for example, by one or more injections of an immunizing agent and, if desired, an adjuvant. Typically, the immunizing agent and / or adjuvant will be injected into the mammal by subcutaneous or intraperitoneal injection. The immunizing agent may comprise a CD98 polypeptide or a fusion protein thereof. It may be useful to conjugate the immunizing agent to a protein known to exhibit immunogenicity in the mammal to be immunized. Examples of such immunogenic proteins include, but are not limited to, keyhole limpet hemocyanin, serum albumin, sorbitol globulin, and soybean trypsin inhibitor. Examples of antigen adjuvants that may be used include Freund ' s complete antigen adjuvant and MPL-TDM antigen adjuvant (monophosphoryl lipid A, synthetic trehalose decolinomycolate). The immunization protocol may be selected by one skilled in the art without undue experimentation. The mammals can then be bled and the serum analyzed for CD98 antibody titer. If desired, the mammal can be boosted until the antibody titer increases or stagnation is reached.

2. 단일클론 항체 2. Monoclonal antibodies

본 발명의 항체는 대안적으로 단일클론 항체일 수 있다. 단일클론 항체는 문헌(Kohler et al., Nature, 256:495 (1975))에 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 이용함으로써 제조될 수 있거나 재조합 DNA 방법(예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조)에 의해 제조될 수 있다.The antibodies of the present invention may alternatively be monoclonal antibodies. Monoclonal antibodies can be prepared by using the hybridoma method first described in Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975) or by recombinant DNA methods (see, for example, U.S. Patent No. 4,816,567) . &Lt; / RTI >

하이브리도마 방법에서, 면역화를 위해 사용되는 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 이끌어내기 위해 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대, 햄스터를 전술된 바와 같이 면역화시킨다. 대안적으로, 림프구를 시험관내에서 면역화시킬 수 있다. 면역화 후, 림프구를 단리한 후 적절한 융합제, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).In the hybridoma method, a mouse or other appropriate host animal, such as a hamster, is immunized as described above to elicit a lymphocyte capable of producing or producing an antibody that will specifically bind to the protein used for immunization. Alternatively, the lymphocytes can be immunized in vitro. After immunization, the lymphocytes are isolated and fused with a myeloma cell line using a suitable fusing agent, such as polyethylene glycol (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986).

이로써 제조된 하이브리도마 세포를, 바람직하게는 비-융합된 모 골수종 세포(융합 파트너로서도 지칭됨)의 생장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적절한 배양 배지에 시딩하고 생장시킨다. 예를 들면, 모 골수종 세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)를 결여하는 경우, 하이브리도마에 대한 선택적 배양 배지는 전형적으로 HGPRT 결핍 세포의 생장을 방해하는 물질인 하이포잔틴, 아미노프테린 및 타이미딘을 포함할 것이다(HAT 배지).The hybridoma cells thus produced are preferably seeded and grown in a suitable culture medium containing one or more substances that inhibit the growth or survival of non-fused osteoma cells (also referred to as fusion partners). For example, when the amacrine cell cell lacks the enzyme hypoxanthine guanine phospholibosyl transferase (HGPRT or HPRT), the selective culture medium for the hybridoma typically contains hypoxanthine, a substance that interferes with the growth of HGPRT deficient cells , Aminopterin and tamidine (HAT medium).

바람직한 융합 파트너 골수종 세포는 선택된 항체 생성 세포에 의한 항체의 안정한 고수준 생성을 뒷받침하도록 효율적으로 융합되고 비-융합된 모 세포에 대해 선택하는 선택 배지에 대한 민감성을 나타내는 골수종 세포이다. 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대, 살크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)(미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)로부터 입수될 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 골수종 세포주, 및 SP-2 및 유도체, 예를 들면, 어메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)(미국 버지니아주 마나사스 소재)으로부터 입수될 수 있는 X63-Ag8-653 세포이다. 인간 골수종 세포주 및 마우스-인간 이종골수종 세포주도 인간 단일클론 항체의 제조용으로 기재되어 있다(Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); and Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).Preferred fusion partner myeloma cells are myeloma cells that exhibit sensitivity to a selection medium that is efficiently fused to support stable high-level production of antibodies by the selected antibody-producing cells and selected for non-fused parent cells. Preferred myeloma cell lines are murine myeloma cell lines, such as myeloma cell lines derived from MOPC-21 and MPC-11 mouse tumors, available from the Salk Institute Cell Distribution Center (San Diego, CA) And SP63 and derivatives, such as the X63-Ag8-653 cell, available from the American Type Culture Collection (Manassas, Va.). Human myeloma cell lines and mouse-human heteromyeloma cell lines have also been described for the preparation of human monoclonal antibodies (Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); and Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).

하이브리도마 세포가 생장하는 배양 배지를, 항원에 대해 유도된 단일클론 항체의 제조에 대해 분석한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 제조된 단일클론 항체의 결합 특이성을 면역침전 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대, 방사면역분석(RIA) 또는 효소-연결된 면역흡착 분석(ELISA)으로 측정한다. 단일클론 항체의 결합 친화성을, 예를 들면, 문헌(Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980))에 기재된 스캐차드(Scatchard) 분석으로 측정할 수 있다.The culture medium in which the hybridoma cells grow is analyzed for the production of monoclonal antibodies directed against the antigen. Preferably, the binding specificity of the monoclonal antibody produced by the hybridoma cells is determined by immunoprecipitation or in vitro binding assay, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA). The binding affinity of monoclonal antibodies can be measured, for example, by the Scatchard analysis described in Munson et al., Anal. Biochem., 107: 220 (1980).

일단 원하는 특이성, 친화성 및/또는 활성을 갖는 항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 클론을 제한 희석 절차로 서브클로닝하고 표준 방법으로 생장시킬 수 있다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 이 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 추가로, 예를 들면, 하이브리도마 세포를 마우스의 복강내로 주사하여 상기 하이브리도마 세포를 동물에서 복수 종양으로서 생체내 생장시킬 수 있다.Once hybridoma cells are identified that produce antibodies with the desired specificity, affinity and / or activity, the clones can be subcloned into a limiting dilution procedure and grown by standard methods (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)). Suitable culture media for this purpose include, for example, D-MEM or RPMI-1640 medium. In addition, for example, hybridoma cells can be injected into the abdominal cavity of mice to in vivo grow the hybridoma cells as multiple tumors in an animal.

서브클론에 의해 분비된 단일클론 항체를 보편적인 항체 정제 절차, 예컨대, 친화성 크로마토그래피(예를 들면, 단백질 A 또는 단백질 G 세파로스를 사용함) 또는 이온 교환 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등으로 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적절하게 분리한다.The monoclonal antibody secreted by the subclone can be isolated and purified by common antibody purification procedures such as affinity chromatography (using, for example, Protein A or Protein G Sepharose) or ion exchange chromatography, hydroxylapatite chromatography, Electrophoresis, dialysis or the like, from the culture medium, multiple liquids or serum.

단일클론 항체를 코딩하는 DNA를 통상적인 절차를 이용하여(예를 들면, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리하고 서열분석한다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 사용된다. 일단 단리되면, DNA를 발현 벡터 내에 배치할 수 있고, 항체 단백질을 다른 방식으로 생성하지 않는 숙주 세포, 예컨대, 이. 콜라이 세포, 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 상기 벡터를 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 단일클론 항체의 합성을 수득한다. 세균에서 항체를 코딩하는 DNA를 재조합 발현시키는 것에 대한 문헌은 문헌(Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993)) 및 문헌(Pluckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992))을 포함한다. DNA encoding monoclonal antibodies can be readily isolated and sequenced using conventional procedures (e.g., using oligonucleotide probes that are capable of specifically binding to the genes encoding heavy and light chains of murine antibodies) do. Hybridoma cells are used as a preferred source of such DNA. Once isolated, the DNA can be placed into an expression vector and host cells that do not otherwise produce the antibody protein, e. The synthesis of monoclonal antibodies in recombinant host cells is obtained by transfecting the vector into E. coli cells, monkey COS cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells or myeloma cells. References to recombinant expression of antibody-encoding DNA in bacteria include those described in Skerra et al., Curr Opinion in Immunol. 5: 256-262 (1993) and Pluckthun, Immunol. Revs. -188 (1992)).

추가 실시양태에서, 예를 들면, 문헌(Antibody Phage Display: Methods and Protocols, P.M. O'Brien and R. Aitken, eds, Humana Press, Totawa N.J., 2002)에 기재된 기법을 이용하여 발생시킨 항체 파지 라이브러리로부터 단일클론 항체 또는 항체 단편을 단리할 수 있다. 원칙적으로, 파지 코트 단백질에 융합된 항체 가변 영역(Fv)의 다양한 단편들을 디스플레이하는 파지를 함유하는 파지 라이브러리를 스크리닝함으로써 합성 항체 클론을 선택한다. 이러한 파지 라이브러리를 원하는 항원에 대해 스크리닝한다. 원하는 항원에 결합할 수 있는 Fv 단편을 발현하는 클론은 항원에 흡착되므로 라이브러리에서 비-결합 클론으로부터 분리된다. 그 다음, 결합 클론을 항원으로부터 용출하고 항원 흡착/용출의 추가 주기로 더 농축할 수 있다.In a further embodiment, an antibody-phage library generated using techniques described in, for example, Antibody Phage Display (Methods and Protocols, PM O'Brien and R. Aitken, eds, Humana Press, Totawa NJ, 2002) Monoclonal antibodies or antibody fragments may be isolated. In principle, a synthetic antibody clone is selected by screening a phage library containing phage displaying various fragments of the antibody variable region (Fv) fused to the phage coat protein. These phage libraries are screened against the desired antigen. Clones expressing Fv fragments capable of binding to the desired antigen are adsorbed to the antigen and thus are separated from the non-binding clone in the library. The binding clones can then be eluted from the antigen and further concentrated with additional cycles of antigen adsorption / elution.

가변 도메인은 문헌(Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12:433-455 (1994))에 기재된 바와 같이 VH와 VL이 짧은 유연성 펩티드를 통해 공유연결되어 있는 단일 쇄 Fv(scFv) 단편으로서, 또는 이들이 불변 도메인에 각각 융합되어 비-공유적으로 상호작용하는 Fab 단편으로서 파지 상에서 기능적으로 디스플레이될 수 있다.The variable domain is a single-chain Fv (scFv) fragment in which VH and VL are covalently linked via short flexible peptides as described in Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994) , Or they may be functionally displayed on the phage as Fab fragments that are each fused to an invariant domain and interact non-covalently.

VH 유전자 및 VL 유전자의 레퍼토리를 중합효소 연쇄 반응(PCR)으로 따로 클로닝하고 파지 라이브러리에서 무작위적으로 재조합할 수 있고, 그 후 상기 문헌(Winter et al.)에 기재된 바와 같이 항원 결합 클론에 대해 검색할 수 있다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마의 구축을 요구하지 않으면서 면역원에 대한 고친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 무경험 레퍼토리를 클로닝하여 문헌(Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993))에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비-자가 항원 및 자가 항원에 대한 인간 항체들의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, 줄기 세포로부터 비-재배열된 V 유전자 절편들을 클로닝하고, 문헌(Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992))에 기재된 바와 같이 고도 가변성 CDR3 영역들을 코딩하고 시험관내 재배열을 달성하도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써 무경험 라이브러리를 합성으로 제조할 수도 있다.The repertoire of VH and VL genes can be separately cloned by polymerase chain reaction (PCR) and randomly recombined in a phage library, followed by a search for antigen binding clones as described in Winter et al. can do. The library from the immunized source provides high affinity antibodies to the immunogen without requiring the construction of a hybridoma. Alternatively, the inexperienced repertoire can be cloned to generate a single, non-autologous, and a single, human antibody to autoantigens without any immunization, as described in Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993) Source. Finally, non-rearranged V gene segments from stem cells were cloned and coded for highly variable CDR3 regions as described in Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992) And in vitro libraries can be synthetically prepared by using PCR primers containing random sequences to achieve in vitro rearrangement.

당분야에서 공지된 다양한 기법으로 라이브러리의 스크리닝을 달성할 수 있다. 예를 들면, CD98은 흡착 플레이트의 웰을 코팅하는 데에 사용될 수 있거나, 흡착 플레이트에 고착된 또는 세포 분류에서 사용된 숙주 세포 상에서 발현될 수 있거나, 스트렙타비딘-코팅된 비드를 사용한 포획을 위해 바이오틴에 접합될 수 있거나, 디스플레이 라이브러리를 패닝(panning)하는 임의의 다른 방법에서 사용될 수 있다. 느린 해리 반응속도(및 우수한 결합 친화성)를 갖는 항체의 선택은 문헌(Basset al., Proteins, 8: 309-314 (1990)) 및 국제 특허출원 공보 제WO 92/09690호에 기재된 긴 세척 및 1가 파지 디스플레이, 및 문헌(Marks et al., Biotechnol., 10: 779-783 (1992))에 기재된 항원의 낮은 코팅 밀도의 이용에 의해 촉진될 수 있다.Screening of the library can be accomplished by a variety of techniques known in the art. For example, CD98 can be used to coat the wells of an adsorption plate, can be expressed on host cells that are fixed on an adsorption plate or used in cell sorting, or can be used for capture using streptavidin-coated beads May be conjugated to biotin, or may be used in any other way of panning the display library. The selection of antibodies with a slow dissociation kinetics (and good binding affinity) can be carried out using a long wash as described in Basset al., Proteins, 8: 309-314 (1990) and International Patent Application Publication No. WO 92/09690 1 phage display and the use of low coating densities of the antigens described in the literature (Marks et al., Biotechnol., 10: 779-783 (1992)).

관심있는 파지 클론에 대해 선택하는 적합한 항원 스크리닝 절차를 디자인한 후 관심있는 파지 클론의 Fv 서열 및 문헌(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3)에 기재된 적합한 불변 영역(Fc) 서열을 사용하여 전장 항-CD98 항체 클론을 구축함으로써 본 발명의 항-CD98 항체들 중 어느 한 항체를 수득할 수 있다.After designing the appropriate antigen screening procedure to select for the phage clone of interest, the Fv sequence of the phage clone of interest and the Fv sequence of interest (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD CD98 antibody can be obtained by constructing a full-length anti-CD98 antibody clone using a suitable constant region (Fc) sequence as described in Klein et al., 1991, vol. 1-3.

3. 항체 단편 3. Antibody fragments

본 발명은 항체 단편을 포괄한다. 특정 환경에서, 전체 항체보다는 항체 단편을 사용하는 것이 유리하다. 보다 작은 크기의 단편은 신속한 제거를 가능하게 하고, 고형 종양에의 개선된 접근을 이끌어낼 수 있다. 특정 항체 단편의 검토를 위해서는 문헌(Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134)을 참조한다.The present invention encompasses antibody fragments. In certain circumstances, it is advantageous to use antibody fragments rather than whole antibodies. Smaller size fragments allow rapid removal and can lead to improved access to solid tumors. For review of specific antibody fragments, see Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9: 129-134.

항체 단편의 제조를 위해 다양한 기법들이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 온전한 항체의 단백질용해성 분해를 통해 유도되었다(예를 들면, 문헌(Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)) 및 문헌(Brennan et al., Science, 229:81 (1985)) 참조). 그러나, 현재 이들 단편을 재조합 숙주 세포로 직접적으로 생성할 수 있다. Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편은 이. 콜라이 또는 효모 세포에서 모두 발현될 수 있고 이러한 세포로부터 분비될 수 있으므로, 다량의 이들 단편의 용이한 제조가 가능하다. 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 항체 단편을 단리할 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편을 이. 콜라이로부터 직접적으로 회수하고 화학적으로 커플링하여 F(ab')₂ 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., Biol/Technology 10:163-167 (1992)). 또 다른 방법에 따라, 재조합 숙주 세포 배양물로부터 F(ab')₂ 단편을 직접적으로 단리할 수 있다. 살비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')₂ 단편은 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 다른 항체 단편 제조 기법은 당업자에게 자명할 것이다. 특정 실시양태에서, 항체는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)이다. 국제 특허출원 공보 제WO 93116185호, 미국 특허 제5,571,894호 및 미국 특허 제5,587,458호를 참조한다. Fv 및 scFv는 불변 영역을 결여하는 온전한 조합 부위를 갖는 유일한 종이므로, 생체내 사용 동안 감소된 비-특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv의 아미노 또는 카복시 말단에서 이펙터 단백질의 융합을 발생시키도록 scFv 융합 단백질을 구축할 수 있다. 상기 문헌(Antibody Engineering, ed. Borrebaeck)을 참조한다. 항체 단편은 예를 들면, 상기 인용된 참고문헌에 기재된 바와 같이 "선형 항체"일 수도 있다. 이러한 선형 항체는 단일특이적 또는 다중특이적, 예컨대, 이중특이적일 수 있다.Various techniques have been developed for the production of antibody fragments. Traditionally, these fragments have been derived through proteolytic degradation of intact antibodies (see, for example, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992)) and Brennan et al. , Science, 229: 81 (1985)). However, these fragments can now be produced directly into recombinant host cells. The Fab, Fv, and ScFv antibody fragments are shown in FIG. Can be expressed both in E. coli or yeast cells, and secreted from such cells, thus facilitating the production of large quantities of these fragments. The antibody fragments can be isolated from the antibody phage libraries discussed above. Alternatively, Fab ' (Carter et al., Biol / Technology 10: 163-167 (1992)). The F (ab ') ₂ fragment can be recovered and chemically coupled directly from E. coli. According to another method, the F (ab ') ₂ fragment can be isolated directly from the recombinant host cell culture. Fab and F (ab ') ₂ fragments with increased in vivo half life including Salvage receptor binding epitope residues are described in U.S. Patent No. 5,869,046. Other techniques for producing antibody fragments will be apparent to those skilled in the art. In certain embodiments, the antibody is a single chain Fv fragment (scFv). International Patent Application Publication Nos. WO 93116185, US 5,571,894 and US 5,587,458. Since Fv and scFv are the only species with intact combining sites that lack constant regions, they may be suitable for reduced non-specific binding during in vivo use. The scFv fusion protein can be constructed to generate fusion of the effector protein at the amino or carboxy terminus of the scFv. See Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, supra. The antibody fragment may be, for example, a "linear antibody" as described in the above cited references. Such linear antibodies may be monospecific or multispecific, e.g., bispecific.

항체로부터 유도된 가장 작은 결합 구조물은 단일 가변 도메인 항체(SdAb)로서도 지칭되는 분리된 가변 도메인(V 도메인)이다. 특정 종류의 유기체, 즉 낙타 및 연골 어류는 그들의 면역 시스템의 일부로서 Fc 등가 도메인 구조물 상에 탑재된 고친화성 단일 V 유사 도메인을 보유한다(Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999; Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-12449, 2004). V 유사 도메인(낙타에서 VhH로서 지칭되고 상어에서 V-NAR로서 지칭됨)은 전형적으로 표적 항원의 캐비티(cavity)의 침투를 가능하게 하는 긴 표면 루프를 디스플레이한다. 또한, 이들은 소수성 표면 패치를 차폐함으로써 단리된 VH 도메인을 안정화시킨다. 이들 VhH 및 V-NAR 도메인은 sdAb를 조작하는 데에 사용되고 있다. 파지 라이브러리로부터의 선택, 및 안정한 고결합 VL-유도된 도메인 및 VH 유도된 도메인을 발생시키는 다른 방법을 이용하여 인간 V 도메인 변이체를 디자인하였다.The smallest binding construct derived from the antibody is a separate variable domain (V domain), also referred to as a single variable domain antibody (SdAb). Certain kinds of organisms, camel and cartilage fish, possess high-affinity single V-like domains mounted on Fc equivalent domain structures as part of their immune system (Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999; Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA 101: 12444-12449, 2004). V-like domains (referred to as VhH in camels and referred to as V-NARs in sharks) typically display long surface loops that allow penetration of the cavity of the target antigen. In addition, they stabilize the isolated VH domain by shielding the hydrophobic surface patch. These VhH and V-NAR domains are used to manipulate the sdAb. Human V domain variants were designed using selection from phage libraries and other methods of generating stable high-binding VL-derived domains and VH derived domains.

4. 인간화된 항체 4. Humanized antibodies

본 발명은 인간화된 항체를 포괄한다. 비-인간 항체를 인간화하는 다양한 방법들이 당분야에서 공지되어 있다. 예를 들면, 인간화된 항체에는 비-인간인 공급원으로부터 유래된 하나 이상의 아미노산 잔기가 도입되어 있을 수 있다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 전형적으로 "이입(import)" 가변 도메인으로부터 유래된 "이입" 잔기로서 종종 지칭된다. 인간 항체의 상응하는 서열을 초가변 영역 서열로 치환시킴으로써 본질적으로 문헌(Winter and co-workers (Jones et al. (1986) Nature 321: 522-525), 문헌(Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327) 및 문헌(Verhoeyen et al. (1988) Science 239: 1534-1536)의 방법에 따라 인간화를 수행할 수 있다.The present invention encompasses humanized antibodies. Various methods of humanizing non-human antibodies are known in the art. For example, the humanized antibody may have one or more amino acid residues introduced from a non-human source. These non-human amino acid residues are often referred to as "import" residues, typically derived from "import" By replacing the corresponding sequence of a human antibody with a hypervariable region sequence, it is essentially as described by Winter and co-workers (Jones et al. (1986) Nature 321: 522-525), Riechmann et al. (1988) Nature 332 : 323-327) and human (Verhoeyen et al. (1988) Science 239: 1534-1536).

몇몇 경우, 모 설치류 항체의 6개의 상보성 결정 영역들(CDR들)의 아미노산 서열을 인간 항체 골격 상으로 이식하는 CDR 이식으로 인간화된 항체를 구축한다. 문헌(Padlan et al., FASEB J. 9: 133-139, 1995)은 CDR들 내의 잔기들 중 단지 약 3분의 1만이 실제로 항원과 접촉한다는 것을 확인였고, 이들을 "특이성 결정 잔기" 또는 SDR로서 지칭하였다. SDR 이식 기법에서, SDR 잔기만을 인간 항체 골격 상에 이식한다(Kashmiri et al., Methods 36: 25-34, 2005).In some cases, humanized antibodies are constructed by CDR grafting, in which the amino acid sequences of the six complementarity determining regions (CDRs) of the parent rodent antibody are grafted onto a human antibody backbone. (Padlan et al., FASEB J. 9: 133-139, 1995) confirmed that only about one-third of the residues in the CDRs were actually in contact with the antigen, and identified them as " . In SDR transplantation techniques, only SDR residues are grafted onto human antibody scaffolds (Kashmiri et al., Methods 36: 25-34, 2005).

인간화된 항체의 제조에 사용될 인간 가변 도메인(경쇄 및 중쇄 둘다)의 선택은 항원성을 감소시키는 데에 있어서 중요할 수 있다. 소위 "최적-적합" 방법에 따라, 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대하여 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 스크리닝한다. 그 다음, 설치류의 서열과 가장 유사한 인간 서열은 인간화된 항체를 위한 인간 골격으로서 수용된다(Sims et al. (1993) J. Immunol. 151: 2296; Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196: 901). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위군의 모든 인간 항체들의 컨센서스 서열로부터 유도된 특정 골격을 사용한다. 동일한 골격이 여러 상이한 인간화된 항체를 위해 사용될 수 있다(Carter et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol., 151: 2623). 몇몇 경우, 골격은 가장 풍부한 인간 서브클래스, V_Lκ 하위군 I(V_LκI) 및 V_H 하위군 III(V_HIII)의 컨센서스 서열로부터 유도된다. 또 다른 방법에서, 인간 생식세포주 유전자는 골격 영역의 공급원에서 사용된다.The choice of human variable domains (both light and heavy chains) to be used in the production of humanized antibodies may be important in reducing antigenicity. According to the so-called "optimal-fit" method, the sequence of the variable domain of the rodent antibody is screened against the entire library of known human variable domain sequences. The human sequence most similar to the rodent sequence is then accepted as a human framework for humanized antibodies (Sims et al. (1993) J. Immunol. 151: 2296; Chothia et al. 196: 901). Another method uses a specific framework derived from the consensus sequence of all human antibodies of a particular subgroup of light or heavy chains. The same backbone can be used for several different humanized antibodies (Carter et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285; Presta et al. 2623). In some cases, the backbone is derived from a consensus sequence of the most abundant human subclasses, V _L κ subgroup I (V _L κI) and V _H subgroup III (V _H III). In yet another method, the human germline gene is used in a source of skeletal region.

CDR들의 비교에 기초한 대안적인 패러다임(초인간화로서 지칭됨)에서, FR 상동성은 무관하다. 이 방법은 비-인간 서열과 기능성 인간 생식세포주 유전자 레퍼토리의 비교로 구성된다. 그 다음, 뮤린 서열과 동일한 또는 밀접하게 관련된 정규 구조물을 코딩하는 유전자를 선택한다. 그 다음, 비-인간 항체와 정규 구조물을 공유하는 유전자들 중에서 CDR들 내에서 가장 높은 상동성을 갖는 유전자를 FR 공여자로서 선택한다. 마지막으로, 비-인간 CDR들을 이들 FR들 상에 이식한다(Tan et al., J. Immunol. 169: 1119-1125, 2002).In an alternative paradigm based on a comparison of CDRs (referred to as hyper-humanization), FR homology is irrelevant. This method consists of comparing the non-human sequence with the functional repertoire of human germline genes. Next, a gene encoding a regular construct that is identical or closely related to the murine sequence is selected. Then, among the genes sharing the normal structure with the non-human antibody, the gene having the highest homology in the CDRs is selected as the FR donor. Finally, non-human CDRs are grafted onto these FRs (Tan et al., J. Immunol. 169: 1119-1125, 2002).

항체는 항원에 대한 고친화성 및 다른 유리한 생물학적 성질을 보유하면서 인간화되는 것도 일반적으로 바람직하다. 이 목적을 달성하기 위해, 한 방법에 따라, 모 서열 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 다양한 개념적 인간화된 생성물을 분석하는 과정으로 인간화된 항체를 제조한다. 3차원 면역글로불린 모델은 통상적으로 입수될 수 있고 당업자에게 익숙할 것이다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 이들은 예를 들면, WAM(Whitelegg and Rees, Protein Eng. 13: 819-824, 2000), 모델러(Modeller)(Sali and Blundell, J. Mol. Biol. 234: 779-815, 1993), 및 스위스(Swiss) PDB 뷰어(Guex and Peitsch, Electrophoresis 18:2714-2713, 1997)를 포함한다. 이들 디스플레이의 조사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉 후보 면역글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 가능하게 한다. 이 방식으로, 원하는 항체 특성, 예컨대, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성이 달성되도록 수용자 서열 및 이입 서열로부터 FR 잔기들을 선택하고 조합할 수 있다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는 데에 있어서 직접적으로 및 가장 실질적으로 관여한다.It is generally preferred that the antibody be humanized while retaining high affinity for the antigen and other favorable biological properties. To accomplish this goal, humanized antibodies are prepared according to one method, using a three-dimensional model of the parent and humanized sequences to analyze the parent sequence and various conceptual humanized products. Three-dimensional immunoglobulin models are routinely available and will be familiar to those skilled in the art. A computer program can be used to illustrate and display the possible three-dimensional conformation of the selected candidate immunoglobulin sequence. These include, for example, WAM (Whitelegg and Rees, Protein Eng. 13: 819-824, 2000), Modeller (Sali and Blundell, J. Mol. Biol. 234: 779-815, Swiss PDB viewer (Guex and Peitsch, Electrophoresis 18: 2714-2713, 1997). Investigations of these displays enable the analysis of possible roles of residues in the function of candidate immunoglobulin sequences, i.e., analysis of residues that affect the ability of the candidate immunoglobulin to bind its antigen. In this manner, FR residues can be selected and combined from the acceptor sequence and the insertion sequence such that the desired antibody characteristics, such as increased affinity for the target antigen (s), is achieved. In general, hypervariable region residues are directly and most substantially involved in influencing antigen binding.

또 다른 항체 인간화 방법은 휴먼 스트링 컨텐트(Human String Content; HSC)로서 지칭되는 항체 인간성의 계량에 기초한다. 이 방법은 마우스 서열을 인간 생식세포주 유전자의 레퍼토리와 비교하고, 차이를 HSC로서 점수화한다. 그 다음, 전반적인 동일성 척도를 이용하기보다는 오히려 그의 HSC를 최대화하여 다수의 다양한 인간화된 변이체들을 발생시킴으로써 표적 서열을 인간화한다(Lazaret al., Mol. Immunol. 44: 1986-1998, 2007).Another method of antibody humanization is based on the measurement of antibody humanity referred to as Human String Content (HSC). This method compares the mouse sequence to the repertoire of human germline gene and scales the difference as HSC. The target sequence is then humanized by maximizing its HSC and generating a number of different humanized variants (Lazaret al., Mol. Immunol. 44: 1986-1998, 2007), rather than utilizing the overall identity scales.

전술된 방법과 대조적으로, 실험적 방법을 이용하여 인간화된 항체를 발생시키고 선택할 수 있다. 이들 방법은 인간화된 변이체의 큰 라이브러리의 발생, 및 농축 기술 또는 고속처리 스크리닝 기법을 이용한 가장 우수한 클론의 선택에 기초한다. 항체 변이체는 파지, 리보좀 및 효모 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있을 뿐만 아니라 세균 콜로니 스크리닝에 의해서도 단리될 수 있다(Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 23: 1105-1116, 2005; Dufner et al., Trends Biotechnol. 24: 523-529, 2006; Feldhaus et al., Nat. Biotechnol. 21: 163-70, 2003; Schlapschy et al., Protein Eng. Des. Sel. 17: 847-60, 2004).In contrast to the methods described above, humanized antibodies can be generated and selected using experimental methods. These methods are based on the generation of large libraries of humanized variants and selection of the best clones using enrichment techniques or high throughput screening techniques. Antibody variants can be isolated from phage, ribosome and yeast display libraries as well as by bacterial colony screening (Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 23: 1105-1116, 2005; Dufner et al., Trends Biotechnol. 24 : 523-529, 2006; Feldhaus et al., Nat Biotechnol. 21: 163-70, 2003; Schlapschy et al., Protein Eng. Des Sel 17: 847-60, 2004).

FR 라이브러리 방법에서, 잔기 변이체들의 수집물을 FR 내의 특정 위치에서 도입한 후 이식된 CDR을 가장 잘 뒷받침하는 FR을 선택하도록 라이브러리를 선택한다. 치환될 잔기는 CDR 구조에 잠재적으로 기여하는 잔기로서 확인된 "베르니에르(Vernier)" 잔기들 중 일부 또는 전부(Foote and Winter, J. Mol. Biol. 224: 487-499, 1992), 또는 문헌(Baca et al. (J. Biol. Chem. 272: 10678-10684, 1997))에서 확인된 표적 잔기들로 구성된 보다 한정된 세트로부터의 일부 또는 전부를 포함할 수 있다. In the FR library method, a library is selected to introduce a collection of residue variants at a particular location in the FR and then select the FR that best supports the transplanted CDR. The moiety to be substituted may be part or all of the " Vernier "moieties identified as residues potentially contributing to the CDR structure (Foote and Winter, J. Mol. Biol. 224: 487-499, 1992) (Baca et al. (J. Biol. Chem. 272: 10678-10684, 1997)).

FR 셔플링에서, 선택된 잔기 변이체들의 조합 라이브러리를 생성하는 대신에 전체 FR들을 비-인간 CDR들과 조합한다(Dall'Acqua et al., Methods 36: 43-60, 2005). 먼저 VL을 인간화한 후 VH를 인간화하는 2-단계 선택 과정에서 라이브러리를 결합에 대해 스크리닝할 수 있다. 대안적으로, 1-단계 FR 셔플링 과정을 이용할 수 있다. 이러한 과정은 발생된 항체가 향상된 발현, 증가된 친화성 및 열적 안정성을 비롯한 개선된 생화학적 성질 및 물리화학적 성질을 나타내기 때문에 2-단계 스크리닝보다 더 효율적인 것으로 밝혀졌다(Damschroder et al., Mol. Immunol. 44: 3049-60, 2007)In FR shuffling, instead of creating a combinatorial library of selected residue variants, the entire FRs are combined with non-human CDRs (Dall'Acqua et al., Methods 36: 43-60, 2005). The library can be screened for binding in a two-step selection process that first humanizes VL and then humanizes VH. Alternatively, a one-step FR shuffling process may be used. This process has been found to be more efficient than two-step screening because the antibodies generated exhibit improved biochemical and physicochemical properties including improved expression, increased affinity and thermal stability (Damschroder et al., Mol. Immunol. 44: 3049-60, 2007)

"휴머니어링(humaneering)" 방법은 필수적인 최소 특이성 결정인자들(MSD들)의 실험적 확인에 기초하고, 인간 FR들의 라이브러리 내로의 비-인간 단편의 순차적 치환 및 결합의 평가에 기초한다. 상기 방법은 비-인간 VH 및 VL 쇄의 CDR-3의 영역으로 시작되고 비-인간 항체의 다른 영역들(VH 및 VL 둘다의 CDR-1 및 CDR-2를 포함함)을 인간 FR들 내로 점진적으로 치환시킨다. 이 방법은 전형적으로 상이한 인간 V 절편 CDR들을 갖는 다수의 서브클래스들로부터의 항체의 에피토프 보유 및 확인을 가능하게 한다. 휴머니어링은 인간 생식세포주 유전자 항체에 대한 91% 내지 96% 상동성을 갖는 항체의 단리를 가능하게 한다(Aifenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007).The "humaneering" method is based on the experimental confirmation of the essential minimum specificity determinants (MSDs) and is based on the evaluation of sequential substitution and binding of non-human fragments into the library of human FRs. The method begins with the region of CDR-3 of the non-human VH and VL chains and begins by progressively transferring other regions of the non-human antibody (including CDR-1 and CDR-2 of both VH and VL) . This method typically enables epitope retention and identification of antibodies from multiple subclasses with different human V intercept CDRs. Humaneering enables the isolation of antibodies with 91% to 96% homology to human germline gene antibodies (Aifenito, Cambridge Health & Institute of Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007).

5. 인간 항체 5. Human Antibodies

인간으로부터 유래된 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열(들)을 전술된 바와 같이 공지된 인간 불변 도메인 서열(들)과 조합함으로써 본 발명의 인간 항-CD98 항체를 구축할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 인간 단일클론 항-CD98 항체를 하이브리도마 방법으로 제조할 수 있다. 인간 단일클론 항체의 제조를 위한 인간 골수종 세포주 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 예를 들면, 문헌(Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)), 문헌(Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)) 및 문헌(Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991))에 기재되어 있다.The human anti-CD98 antibodies of the invention can be constructed by combining the Fv clone variable domain sequence (s) selected from human derived phage display libraries with known human constant domain sequence (s) as described above. Alternatively, the human monoclonal anti-CD98 antibodies of the invention can be prepared by the hybridoma method. Human myeloma cell lines and mouse-human xenogeneic myeloma cell lines for the production of human monoclonal antibodies are described, for example, in Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984), Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) and Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)).

면역화 시 내생성 면역글로불린 생성의 부재 하에서 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생성할 수 있는 형질전한 동물(예를 들면, 마우스)을 생산하는 것도 가능하다. 인간 항체 레퍼토리를 발현하는 형질전환 마우스는 매우 다양한 잠재적인 약물 표적들에 대한 고친화성 인간 서열 단일클론 항체들을 발생시키는 데에 사용되고 있다. 예를 들면, 문헌(Jakobovits, A., Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6(5):561-6), 문헌(Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8(4):455-8), 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호, 및 문헌(Lonberg et al., Nature Biotechnol. 23: 1117-1125, 2005)을 참조한다.It is also possible to produce transgenic animals (e. G., Mice) capable of producing a full repertoire of human antibodies in the absence of endogenous immunoglobulin production upon immunization. Transgenic mice expressing human antibody repertoires have been used to generate high affinity human sequence monoclonal antibodies against a wide variety of potential drug targets. 1995, 6 (5): 561-6), Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8 (4): 455- 8), U.S. Patent Nos. 6,075,181 and 6,150,584, and Lonberg et al., Nature Biotechnol. 23: 1117-1125, 2005.

대안적으로, 표적 항원에 대해 유도된 항체를 생성하는 인간 B 림프구의 불멸화를 통해 인간 항체를 제조할 수 있다(이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나 시험관내에서 면역화되었을 수 있다). 예를 들면, 문헌(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)), 문헌(Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991)) 및 미국 특허 제5,750,373호를 참조한다.Alternatively, human antibodies can be produced through the immortalization of human B lymphocytes producing antibodies directed against the target antigen (such B lymphocytes may be recovered from the individual or may have been immunized in vitro). (Boerner et al., J. Immunol., 147 (1): 86-95 (1986)), as described in Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, (1991)) and U.S. Patent No. 5,750,373.

유전자 셔플링을 이용하여 비-인간, 예를 들면, 설치류 항체로부터 인간 항체를 유도할 수도 있고, 이때 상기 인간 항체는 출발 비-인간 항체와 유사한 친화성 및 특이성을 갖는다. "에피토프 각인" 또는 "안내된 선택"으로서도 지칭되는 이 방법에 따라, 본원에 기재된 파지 디스플레이 기법에 의해 수득된 비-인간 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 인간 V 도메인 유전자의 레퍼토리로 치환시켜 비-인간 쇄/인간 쇄 scFv 또는 Fab 키메라들의 집단을 생성한다. 항원을 사용한 선택은 비-인간 쇄/인간 쇄 키메라 scFv 또는 Fab를 단리시키는데, 이때 상기 인간 쇄는 일차 파지 디스플레이 클론에서 상응하는 비-인간 쇄의 제거 시 파괴되는 항원 결합 부위를 복구한다(즉, 에피토프는 인간 쇄 파트너의 선택을 안내한다(각인시킨다)). 남은 비-인간 쇄를 치환시키기 위해 상기 과정을 반복할 때, 인간 항체가 수득된다(국제 특허출원 공보 제WO 93/06213호 및 문헌(Osbourn et al., Methods., 36, 61-68, 2005) 참조). CDR 이식에 의한 비-인간 항체의 전통적인 인간화와 달리, 이 기법은 비-인간 유래의 FR 또는 CDR 잔기를 갖지 않는 완전한 인간 항체를 제공한다. 세포 표면 항원에 대한 마우스 항체를 인간화하는 안내된 선택의 예로는 난소암 세포 상에 존재하는 폴레이트 결합 단백질(Figini et al., Cancer Res., 58, 991-996, 1998) 및 간세포암종 상에서 고도로 발현되는 CD147(Bao et al., Cancer Biol. Ther., 4, 1374-1380, 2005)이 있다.Gene shuffling may be used to induce a human antibody from a non-human, e. G., Rodent antibody, wherein the human antibody has affinity and specificity similar to the starting non-human antibody. According to this method, also referred to as "epitope imprinting" or "guided selection ", the heavy or light chain variable region of the non-human antibody fragment obtained by the phage display technique described herein is replaced with a repertoire of human V- To produce a population of human chain / human chain scFv or Fab chimeras. Selection with an antigen will isolate the non-human chain / human chimeric scFv or Fab, wherein the human chain restores the antigen binding site that is destroyed upon removal of the corresponding non-human chain in the primary phage display clone (i. The epitopes guide (select) the selection of human chain partners. When the above procedure is repeated to replace the remaining non-human chain, human antibodies are obtained (see International Patent Application Publication No. WO 93/06213 and Osbourn et al., Methods., 36, 61-68, 2005 ) Reference). Unlike traditional humanization of non-human antibodies by CDR grafting, this technique provides a complete human antibody that does not have non-human derived FR or CDR residues. Examples of guided selection for humanizing mouse antibodies to cell surface antigens include folate binding proteins (Figini et al., Cancer Res., 58, 991-996, 1998) present on ovarian cancer cells and high- CD147 (Bao et al., Cancer Biol. Ther., 4, 1374-1380, 2005).

안내된 선택 방법의 잠재적인 단점은 다른 항체들을 불변 상태로 유지하면서 한 항체를 셔플링하는 것이 에피토프 변동을 초래할 수 있다는 것이다. 비-인간 항체에 의해 인식되는 에피토프를 유지하기 위해, CDR 보유를 적용할 수 있다(Kiimka et al., Br. J. Cancer., 83, 252-260, 2000; Beiboer et al., J. Mol. Biol., 296, 833-49, 2000). 이 방법에서, 비-인간 CDR-H3은 이 CDR이 항원 결합 부위의 중심에 존재하고 항원 인식에 있어서 항체의 가장 중요한 영역인 것으로 입증되었기 때문에 통상적으로 보유된다. 그러나, 일부 경우, 비-인간 항체의 CDR-H3 및 CDR-L3뿐만 아니라 CDR-H3, CDR-L3 및 CDR-L2도 보유될 수 있다.A potential disadvantage of the guided selection method is that shuffling one antibody can result in epitope variability while keeping other antibodies constant. CDR retention can be applied to retain epitopes recognized by non-human antibodies (Kiimka et al., Br. J. Cancer., 83, 252-260, 2000; Beiboer et al., J. Mol Biol., 296, 833-49, 2000). In this method, non-human CDR-H3 is typically retained because this CDR is located at the center of the antigen binding site and has proven to be the most important region of the antibody in antigen recognition. However, in some cases, CDR-H3, CDR-L3 and CDR-L2 as well as CDR-H3 and CDR-L3 of non-human antibodies can be retained.

6. 이중특이적 항체 6. Bispecific antibodies

이중특이적 항체는 2개 이상의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 인간 또는 인간화된 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 CD98에 대한 결합 특이성이고, 나머지 하나는 임의의 다른 항원에 대한 결합 특이성이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD98의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 CD98을 발현하는 세포에 세포독성제를 국소화시키는 데에 사용될 수도 있다. 이들 항체들은 CDR98 결합 아암(arm), 및 세포독성제, 예컨대, 사포린, 항-인터페론-α, 빈카 알칼로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 햅텐에 결합하는 아암을 보유한다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들면, F(ab')₂ 이중특이적 항체)로서 제조될 수 있다.Bispecific antibodies are monoclonal antibodies with binding specificities for two or more different antigens. In certain embodiments, the bispecific antibody is a human or humanized antibody. In certain embodiments, one of the binding specificities is the binding specificity for CD98, and the other is the binding specificity for any other antigen. In certain embodiments, bispecific antibodies can bind to two different epitopes of CD98. Bispecific antibodies may also be used to localize cytotoxic agents to cells expressing CD98. These antibodies possess a CDR98 binding arm and an arm that binds to a cytotoxic agent such as, for example, saponin, anti-interferon-alpha, vinca alkaloid, lysine A chain, methotrexate or radioisotope hapten. Bispecific antibodies can be produced as whole-length antibodies or antibody fragments (e. G., F (ab ') ₂ bispecific antibodies).

이중특이적 항체를 제조하는 방법, 예컨대, 2개의 중쇄가 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 동시발현은 당분야에서 공지되어 있다(Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)). 이중특이적 항체의 발생에 대한 추가 세부사항은 예를 들면, 문헌(Bispecific Antibodies, Kontermann, ed., Springer-Verlag, Hiedelberg (2011))을 참조한다.Methods for producing bispecific antibodies, such as the simultaneous expression of two immunoglobulin heavy-chain pairs with different specificity for two heavy chains, are known in the art (Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983) ). Further details on the generation of bispecific antibodies can be found, for example, in Bispecific Antibodies, Kontermann, ed., Springer-Verlag, Hiedelberg (2011).

7. 다가 항체 7. polyvalent antibody

다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빨리 내재화(및/또는 이화)될 수 있다. 본 발명의 항체는 항체의 폴리펩티드 쇄를 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있는, 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 (IgM 클래스의 항체를 제외한) 다가 항체(예를 들면, 4가 항체)일 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다(또는 이들 영역들로 구성된다). 이 시나리오에서, 항체는 Fc 영역, 및 이 Fc 영역의 아미노-말단에 있는 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. 특정 실시양태에서, 다가 항체는 3개 내지 약 8개의 항원 결합 부위를 포함한다(또는 이들 부위들로 구성된다). 한 이러한 실시양태에서, 다가 항체는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다(또는 이들 부위들로 구성된다). 다가 항체는 1개 이상의 폴리펩티드 쇄(예를 들면, 2개의 폴리펩티드 쇄)를 포함하고, 이때 상기 폴리펩티드 쇄(들)는 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들면, 상기 폴리펩티드 쇄(들)는 VD1-(X1)n -VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있고, 이때 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 1개의 폴리펩티드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 예를 들면, 폴리펩티드 쇄(들)는 VH-CH1-유연성 연결제-VH-CH1-Fc 영역 쇄 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본원에서 다가 항체는 2개 이상(예를 들면, 4개)의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 본원에서 다가 항체는 예를 들면, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 본원에서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고 임의적으로 CL 도메인을 추가로 포함한다.A polyvalent antibody can be internalized (and / or catabolized) more quickly than a divalent antibody by cells expressing the antigen to which the antibody binds. Antibodies of the present invention include multivalent antibodies (except for the antibodies of the IgM class) (e.g., having four or more antigens) with three or more antigen binding sites that can be readily generated by recombinant expression of a nucleic acid encoding the polypeptide chain of the antibody Antibody). The polyvalent antibody may comprise a dimerization domain and three or more antigen binding sites. In certain embodiments, the dimerization domain comprises (or consists of) the Fc region or hinge region. In this scenario, the antibody will comprise an Fc region and three or more antigen binding sites at the amino-terminus of the Fc region. In certain embodiments, the polyvalent antibody comprises (or consists of) three to about eight antigen binding sites. In one such embodiment, the polyvalent antibody comprises (or consists of) four antigen binding sites. The polyvalent antibody comprises at least one polypeptide chain (e.g., two polypeptide chains), wherein said polypeptide chain (s) comprises two or more variable domains. For example, the polypeptide chain (s) may comprise VD1- (X1) n-VD2- (X2) n-Fc, wherein VD1 is the first variable domain, VD2 is the second variable domain, and Fc Is one polypeptide chain of the Fc region, X1 and X2 are amino acids or polypeptides, and n is 0 or 1. For example, the polypeptide chain (s) may comprise a VH-CH1-flexible linker-VH-CH1-Fc region chain or a VH-CH1-VH-CH1-Fc region chain. The polyvalent antibody herein may further comprise two or more (e.g., four) light chain variable domain polypeptides. The polyvalent antibody herein may comprise, for example, from about 2 to about 8 light chain variable domain polypeptides. The light chain variable domain polypeptides contemplated herein comprise a light chain variable domain and optionally further comprise a CL domain.

8. 이펙터 기능 조작 8. Operating the effect function

이펙터 기능에 대하여, 예를 들면, 항체의 항원 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC)을 향상시키기 위해 본 발명의 항체를 변경하는 것이 바람직할 수 있다. 이것은 하나 이상의 아미노산 치환을 항체의 Fc 영역 내로 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 문헌(Lazaret al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006, 103(11):4005-4010); 문헌(Presta, L.G., Curr. Opin. Immunol. 2008, 20(4):460-70); 및 미국 특허 제7,183,387호, 제7,332,581호 및 제7,335,742호를 참조한다.For effector function, it may be desirable, for example, to modify the antibody of the invention to enhance antigen-dependent cellular mediated cytotoxicity (ADCC) and / or complement dependent cytotoxicity (CDC) of the antibody. This can be achieved by introducing one or more amino acid substitutions into the Fc region of the antibody. For example, Lazaret al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006, 103 (11): 4005-4010); Presta, L. G., Curr. Opin. Immunol. 2008,20 (4): 460-70); And U.S. Patent Nos. 7,183,387, 7,332,581, and 7,335,742.

대안적으로 또는 추가로, 시스테인 잔기(들)를 Fc 영역 내로 도입하여 이 영역에서 쇄간 이황화 결합 형성을 가능하게 할 수 있다. 이로써 발생된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 성능 및/또는 증가된 보체 매개 세포 사멸 및 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC)을 가질 수 있다. 문헌(Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)) 및 문헌(Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992))을 참조한다. 문헌(Wolff et al., Cancer Research 53:2560-2565 (1993))에 기재된 이종이작용성 가교연결제를 사용하여 향상된 항종양 활성을 갖는 동종이량체 항체를 제조할 수도 있다. 대안적으로, 이중 Fc 영역을 가짐으로써 향상된 보체 용해 및 ADCC 성능을 가질 수 있는 항체를 조작할 수 있다. 문헌(Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989))을 참조한다. 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들면, 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같이 살비지 수용체 결합 에피토프를 항체(특히, 항체 단편) 내로 도입할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "살비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는 것을 담당하는 IgG 분자(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.Alternatively or additionally, the cysteine residue (s) can be introduced into the Fc region to enable interchain disulfide bond formation in this region. The resulting allogeneic antibody may have improved internalization performance and / or increased complement mediated cell death and antibody dependent cellular mediated cytotoxicity (ADCC). See, for example, Caron et al., J. Exp Med. 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, B. J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992). Heterozygous cross-linking agents described in Wolff et al., Cancer Research 53: 2560-2565 (1993) may be used to prepare homodimeric antibodies with improved anti-tumor activity. Alternatively, by having a double Fc region, antibodies capable of improved complement dissolution and ADCC performance can be engineered. See Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989). To increase the serum half-life of the antibody, a Salvage receptor binding epitope can be introduced into an antibody (particularly an antibody fragment), for example, as described in U.S. Patent No. 5,739,277. As used herein, the term "Salvage receptor binding epitope" refers to an epitope of the Fc region of an IgG molecule (e.g., IgGl, IgG2, IgG3 or IgG4) responsible for increasing the in vivo serum half- Quot;

9. 대안적 결합제 9. Alternative binders

본 발명은 본원에 개시된 항-CD98 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 비-면역글로불린 결합제를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 결합제는 경쟁 결합 분석에서 본 발명의 항-CD98 항체를 대체하거나 본 발명의 항-CD98 항체에 의해 대체되는 물질로서 확인된다. 이들 대안적 결합제는 예를 들면, 당분야에서 공지된 조작된 단백질 스카폴드들 중 임의의 조작된 단백질 스카폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스카폴드는 예를 들면, 리간드 결합 부위를 형성하는 4개의 초가변 루프를 뒷받침하는 강성 베타-바렐(barrel)을 특징으로 하는 단백질 구조물인, 리포칼린 스카폴드에 기초한 안티칼린을 포함한다. 신규 결합 특이성을 기능성 디스플레이 및 안내된 선택과 함께 루프 영역에서의 표적화된 무작위 돌연변이유발로 조작한다(Skerra (2008) FEBS J. 275: 2677-2683). 다른 적합한 스카폴드는 예를 들면, 인간 피브로넥틴 III의 제10 세포외 도메인에 기초한 애드넥틴 또는 모노바디(Koide and Koide (2007) Methods Mol. Biol. 352: 95-109); 스타필로코커스 단백질 A의 Z 도메인에 기초한 아피바디(Nygren et al. (2008) FEBS J. 275: 2668-2676)); 앤키린(ankyrin) 반복부 단백질에 기초한 DARPin(Stumpp et al. (2008) Drug. Discov. Today 13: 695-701); 인간 Fyn 단백질 인산화효소의 SH3 도메인에 기초한 파이노머(Grabulovski et al. (2007) J. Biol. Chem. 282: 3196-3204); 설포로부스 악시도라리우스(Sulfolobus acidolarius)의 Sac7d에 기초한 아피틴(Krehenbrink et al. (2008) J. Mol. Biol. 383: 1058-1068); y-B-크리스탈린에 기초한 아필린(Ebersbach et al. (2007) J. Mol. Biol. 372: 172-185); 막 수용체 단백질의 A 도메인에 기초한 아비머(Silverman et al. (2005) Biotechnol. 23: 1556-1561); 시스테인 풍부 노틴(knottin) 펩티드(Kolmar (2008) FEBS J. 275: 2684-2690); 및 조작된 쿠니츠형 억제제(Nixon and Wood (2006) Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9: 261-268)를 포함할 수 있다. 검토를 위해 문헌(Gebauer and Skerra (2009) Curr. Opin. Chem. Biol. 13: 245-255)을 참조한다.The invention encompasses a non-immunoglobulin binding agent that specifically binds to the same epitope as the epitope bound by the anti-CD98 antibody disclosed herein. In some embodiments, the binding agent is identified as a substance that replaces the anti-CD98 antibody of the invention or is replaced by the anti-CD98 antibody of the invention in a competitive binding assay. These alternative binders can include, for example, any engineered protein scaffold of engineered protein scaffolds known in the art. Such scaffolds include, for example, anticalins based on lipocalin scaffolds, a protein construct characterized by a rigid beta-barrel backing of four hypervariable loops forming a ligand binding site. New binding specificities are engineered with targeted random mutagenesis in the loop region with functional display and guided selection (Skerra (2008) FEBS J. 275: 2677-2683). Other suitable scaffolds include, for example, adnexin or monobodies based on the 10th extracellular domain of human fibronectin III (Koide and Koide (2007) Methods Mol. Biol. 352: 95-109); ApiBody based on the Z domain of Staphylococcus protein A (Nygren et al. (2008) FEBS J. 275: 2668-2676); DARPin based on the ankyrin repeat protein (Stumpp et al. (2008) Drug. Discov. Today 13: 695-701); (Grabulovski et al. (2007) J. Biol. Chem. 282: 3196-3204) based on the SH3 domain of human Fyn protein kinase; Apitin based on Sac7d of Sulfolobus acidolarius (Krehenbrink et al. (2008) J. Mol. Biol. 383: 1058-1068); amylin based on yB-cristalline (Ebersbach et al. (2007) J. Mol. Biol. 372: 172-185); Avimers based on the A domain of membrane receptor proteins (Silverman et al. (2005) Biotechnol. 23: 1556-1561); Cysteine-rich knottin peptides (Kolmar (2008) FEBS J. 275: 2684-2690); And a modified Kunitz-type inhibitor (Nixon and Wood (2006) Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9: 261-268). See Gebauer and Skerra (2009) Curr. Opin. Chem. Biol. 13: 245-255 for review.

항체 변이체Antibody variant

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변경(들)이 고려된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 성질(특이성, 열안정성, 발현 수준, 이펙터 기능, 글리코실화, 감소된 면역원성 또는 가용성을 포함하나 이들로 한정되지 않음)을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 본원에 기재된 항-CD98 항체 이외에, 항-CD98 항체 변이체를 제조할 수 있다는 것이 고려된다. 적절한 뉴클레오티드 변화를 코딩 DNA 내로 도입하고/하거나 원하는 항체 또는 폴리펩티드를 합성함으로써 항-CD98 항체 변이체를 제조할 수 있다. 당업자는 아미노산 변화가 항-CD98 항체의 번역 후 과정을 변경시킬 수 있다는 것, 예를 들면, 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시킬 수 있거나 막 고착 특성을 변경시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다.In some embodiments, amino acid sequence alterations (s) of the antibodies described herein are contemplated. For example, it is desirable to improve the binding affinity and / or other biological properties of antibodies (including, but not limited to, specificity, thermal stability, expression level, effector function, glycosylation, reduced immunogenicity or solubility) can do. It is contemplated that, in addition to the anti-CD98 antibodies described herein, anti-CD98 antibody variants can be produced. Anti-CD98 antibody variants can be prepared by introducing appropriate nucleotide changes into the coding DNA and / or synthesizing the desired antibodies or polypeptides. Those skilled in the art will recognize that amino acid changes can alter the post-translational process of the anti-CD98 antibody, for example, alter the number or location of glycosylation sites or alter the membrane anchoring properties.

변이는 천연 서열 항체 또는 폴리펩티드에 비해 아미노산 서열을 변화시키는, 항체 또는 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 한 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 성질을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환시킨 결과, 예컨대, 류신을 세린으로 치환시킨 결과, 즉 보존적 아미노산 치환의 결과일 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의적으로 약 1개 내지 5개의 아미노산의 범위 내에 있을 수 있다. 서열에서 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 체계적으로 만들고 발생된 변이체를 전장 또는 성숙 천연 서열에 의해 나타나는 활성에 대해 시험함으로써 허용되는 변이를 확인할 수 있다.A mutation can be a substitution, deletion or insertion of one or more codons that encode an antibody or polypeptide that alters the amino acid sequence relative to a native sequence antibody or polypeptide. Amino acid substitution may be the result of substitution of one amino acid with another amino acid having similar structural and / or chemical properties, e. G., The result of substitution of leucine with serine, i. E. Conservative amino acid substitutions. Insertions or deletions may optionally be in the range of about 1 to 5 amino acids. By permitting the insertion, deletion or substitution of amino acids in a sequence, and by testing the resulting mutant for activity exhibited by a full-length or mature natural sequence, an acceptable mutation can be identified.

아미노산 서열 삽입은 1개 잔기의 길이부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드 길이까지 이르는 아미노-말단 및/또는 카복실-말단 융합뿐만 아니라, 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입도 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체가 있다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 N-말단 또는 C-말단에서 항체와 효소(예를 들면, 항체-유도된 효소 전구약물 치료의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드의 융합체를 포함한다.Amino acid sequence insertions also include insertions within the sequence of single or multiple amino acid residues, as well as amino-terminal and / or carboxyl-terminal fusions ranging from the length of one residue to the length of the polypeptide containing more than 100 residues. An example of terminal insertion is an antibody with an N-terminal methionyl residue. Other insertional variants of the antibody molecule include antibodies and enzymes at the N-terminus or C-terminus (e.g., in the case of antibody-induced enzyme prodrug therapy) or fusions of polypeptides that increase the serum half-life of the antibody.

(a) 치환 영역에서의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면, 시트 또는 나선 입체구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 용적을 유지하는 것에 대한 그들의 효과에서 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 항체의 생물학적 성질에서의 실질적인 변경을 달성한다. 아미노산들은 그들의 측쇄의 성질에서의 유사성에 따라 분류될 수 있다(A. L. Lehninger, in Biochemistry, 2nd Ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)):(b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, or (c) the effect of their effect on maintaining the volume of the side chain; and (c) the structure of the polypeptide backbone, Substantial changes in the biological properties of the antibody are achieved by selecting significantly different substitutions. Amino acids can be classified according to similarities in the properties of their side chains (A. L. Lehninger, in Biochemistry, 2nd ed., Pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)):

(1) 비-극성: Ala(A), Val(V), Leu(L), Ile(I), Pro(P), Phe(F), Trp(W), Met(M);(1) Non-polar: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M);

(2) 비-하전된 극성: Gly(G), Ser(S), Thr(T), Cys(C), Tyr(Y), Asn(N), Gln(Q);(2) Non-charged polarity: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q);

(3) 산성: Asp(D), Glu(E);(3) Acid: Asp (D), Glu (E);

(4) 염기성: Lys(K), Arg(R), His(H).(4) Basicity: Lys (K), Arg (R), His (H).

대안적으로, 천연 발생 잔기는 공통된 측쇄 성질에 기초하여 군으로 나누어질 수 있다:Alternatively, naturally occurring residues can be divided into groups based on common side chain properties:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;(1) hydrophobicity: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (2) Neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;(3) Acid: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg; (4) Basicity: His, Lys, Arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;(5) Residues affecting chain orientation: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.(6) Aromatic: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이들 클래스들 중 한 클래스의 구성원을 또 다른 클래스의 구성원으로 교체하는 것을 포함할 것이다. 이러한 치환된 잔기는 보존적 치환 부위 또는 남은 (비-보존된) 부위 내로 도입될 수도 있다. A non-conservative substitution would involve replacing a member of one of these classes with a member of another class. Such substituted moieties may be introduced into the conservative substitution moiety or into the remaining (non-conserved) moiety.

당분야에서 공지된 방법, 예컨대, 올리고뉴클레오티드 매개(부위-지정된) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝 및 PCR 돌연변이유발을 이용하여 변이를 만들 수 있다. 항-CD98 항체 변이체 DNA를 생성하기 위해 클로닝된 DNA에 대해 부위-지정된 돌연변이유발(Carter et al., Nucl. Acids Res., 13:4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids Res., 10:6487 (1987)), 카세트 돌연변이유발(Wells et al., Gene, 34:315 (1985)), 제한 선택 돌연변이유발(Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317:415 (1986)) 또는 다른 공지된 기법을 수행할 수 있다. Mutations can be made using methods known in the art, such as oligonucleotide-mediated (site-directed) mutagenesis, alanine scanning, and PCR mutagenesis. Acid Res., Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids Res., 1987), for DNA cloned to generate anti-CD98 antibody variant DNA. 10: 6487 (1987)), cassette mutagenesis (Wells et al., Gene, 34: 315 (1985)), restriction selection mutagenesis (Wells et al., Philos, Trans. R. Soc. London SerA, 415 (1986)) or other known techniques.

항-CD98 항체의 적절한 입체구조를 유지하는 데에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환시켜 분자의 산화 안정성을 개선시키고 비정상적인 가교연결을 방지할 수 있다. 대조적으로, 시스테인 결합(들)을 항-CD98 항체에 추가하여 그의 안정성을 개선할 수 있다(특히, 항체가 항체 단편, 예컨대, Fv 단편인 경우). 항체-약물 접합체를 발생시키는 데에 사용될 수 있는 시스테인-조작된 항체는 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 2006/034488호에 기재되어 있다.Any cysteine residues that do not participate in maintaining the proper steric structure of the anti-CD98 antibody can also be substituted with serine in general to improve the oxidative stability of the molecule and prevent abnormal cross-linking. In contrast, the cysteine bond (s) can be added to an anti-CD98 antibody to improve its stability (particularly when the antibody is an antibody fragment, such as an Fv fragment). Cysteine engineered antibodies that can be used to generate antibody-drug conjugates are described, for example, in International Patent Application Publication No. WO 2006/034488.

한 실시양태에서, 본 발명의 항-CD98 항체 분자는 "탈면역화된" 항체이다. "탈면역화된" 항-CD98 항체는 각각의 원래 비-탈면역화된 항체에 비해 항체의 면역원성을 감소시키는 하나 이상의 변경을 그의 아미노산 서열 내에 갖는, 인간화된 또는 키메라 항-CD98 항체로부터 유도된 항체이다. 이러한 항체 돌연변이체를 발생시키는 절차들 중 하나는 항체 분자의 T 세포 에피토프의 확인 및 제거를 포함한다. 제1 단계에서, 항체 분자의 면역원성을 당분야에서 공지된 여러 방법들, 예를 들면, T 세포 에피토프의 시험관내 확인 또는 이러한 에피토프의 인-실리코(in-silico) 예측으로 확인할 수 있다. 일단 T 세포 에피토프 기능에 중요한 잔기가 확인되면, 면역원성을 제거하고 항체 활성을 보유하기 위해 돌연변이를 만들 수 있다. 검토를 위해서는 예를 들면, 문헌(Jones et al., Methods in Molecular Biology 525: 405-423, 2009)을 참조한다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody molecule of the invention is a "de-immunized" antibody. A "de-immunized" anti-CD98 antibody is an antibody that is derived from a humanized or chimeric anti-CD98 antibody having within its amino acid sequence one or more alterations that reduce the immunogenicity of the antibody relative to each original non- de-immunized antibody to be. One of the procedures for generating such antibody mutants involves the identification and removal of T cell epitopes of antibody molecules. In the first step, the immunogenicity of the antibody molecule can be confirmed by a variety of methods known in the art, for example, in vitro confirmation of T cell epitopes or in-silico prediction of such epitopes. Once an important residue has been identified in T cell epitope function, mutations can be made to eliminate immunogenicity and retain antibody activity. For review, see, for example, Jones et al., Methods in Molecular Biology 525: 405-423, 2009.

시험관내 친화성 성숙In vitro affinity mature

한 실시양태에서, 모 항체에 비해 개선된 성질, 예컨대, 친화성, 안정성 또는 발현 수준을 갖는 항체 변이체는 시험관내에서 친화성 성숙될 수 있다. 천연 원형과 유사하게, 시험관내 친화성 성숙은 돌연변이 및 선택의 원리에 기초한다. 항체의 라이브러리는 유기체(예를 들면, 파지, 세균 또는 효모)의 표면 상에서, 또는 그들의 코딩 mRNA 또는 DNA와 (공유적으로 또는 비-공유적으로) 연결된 상태로 Fab, scFv 또는 V 도메인 단편으로서 디스플레이될 수 있다. 디스플레이된 항체의 친화성 선택은 상기 항체를 코딩하는 유전 정보를 보유하는 유기체 또는 복합체의 단리를 가능하게 한다. 디스플레이 방법, 예컨대, 파지 디스플레이를 이용한 2 또는 3 라운드의 돌연변이 및 선택은 통상적으로 낮은 나노몰 범위 내의 친화성을 갖는 항체 단편을 발생시킨다. 바람직한 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 것이다.In one embodiment, antibody variants having improved properties, such as affinity, stability or expression levels, as compared to the parent antibody can be matured in vitro. Similar to natural prototypes, in vitro affinity maturation is based on the principle of mutation and selection. The library of antibodies may be displayed as a Fab, scFv or V domain fragment on a surface of an organism (e.g., a phage, a bacterium, or a yeast) or in a state of being linked (either covalently or non- . The affinity selection of the displayed antibodies enables isolation of organisms or complexes bearing the genetic information encoding the antibody. Display methods, such as two or three rounds of mutagenesis and selection using phage display, typically generate antibody fragments with affinity within the low nanomolar range. Preferred Affinity The matured antibody will have a nanomolar or even picomole affinity for the target antigen.

파지 디스플레이는 가장 널리 이용되는 항체 디스플레이 및 선택 방법이다. 항체는 박테리오파지 코트 단백질과의 융합체로서 Fd 또는 M13 박테리오파지의 표면 상에서 디스플레이된다. 선택은 파지-디스플레이된 항체들이 그들의 표적에 결합하게 하는("패닝"으로서 지칭되는 과정) 항원에의 노출을 포함한다. 항원에 결합된 파지를 회수하여 세균을 감염시킴으로써 추가 라운드의 선택을 위한 파지를 생성한다. 검토를 위해서는 문헌(Hoogenboom, Methods. Mol. Biol. 178: 1-37, 2002) 및 문헌(Bradbury and Marks, J. lmmuno. Methods 290: 29-49, 2004)을 참조한다.Phage display is the most widely used antibody display and selection method. Antibodies are displayed on the surface of Fd or M13 bacteriophages as fusions with bacteriophage coat proteins. The selection includes exposure to the antigen, which allows the phage-displayed antibodies to bind to their target (the process referred to as "panning"). The phages bound to the antigen are recovered and infected with the bacteria to generate phage for selection of additional rounds. See, for example, Hoogenboom, Methods. Mol. Biol. 178: 1-37, 2002) and the literature (Bradbury and Marks, J. Immuno. Methods 290: 29-49, 2004).

효모 디스플레이 시스템(Boder et al., Nat. Biotech. 15: 553-57, 1997; Chao et al., Nat. Protocols 1:755-768, 2006)에서, 항체는 중쇄와 경쇄가 유연성 연결제에 의해 연결되어 있는 단일 쇄 가변 융합체(scFv)로서 디스플레이된다. scFv는 Aga1p와의 이황화 결합을 통해 효모 세포벽에 부착되는 효모 응집소 단백질 Aga2p의 부착 서브유닛에 융합된다. Aga2p를 통한 단백질의 디스플레이는 단백질이 세포 표면으로부터 돌출되게 하여 효모 세포벽 상의 다른 분자와의 잠재적 상호작용을 최소화한다. 자기 분리 및 유세포측정을 이용하여 라이브러리를 스크리닝함으로써 개선된 친화성 또는 안정성을 갖는 항체를 선택한다. 효모를 바이오티닐화된 항원 및 이차 시약, 예컨대, 형광단에 접합된 스트렙타비딘으로 표지함으로써 관심있는 가용성 항원과의 결합을 확인한다. scFv를 플랭킹하는 혈구응집소 또는 c-Myc 에피토프 태그의 면역형광 표지 부착을 통해 항체의 표면 발현에서의 변이를 측정할 수 있다. 발현은 디스플레이된 단백질의 안정성과 상관관계를 갖는 것으로 밝혀져 있으므로, 항체를 개선된 안정성 및 친화성에 대해 선택할 수 있다(Shusta et al., J. Mol. Biol. 292: 949-956, 1999). 효모 디스플레이의 추가 이점은 디스플레이된 단백질이 소포체 샤페론 및 품질 조절 기구를 이용하여 진핵 효모 세포의 소포체 내에서 폴딩된다는 점이다. 일단 성숙이 완결되면, 각각의 클론의 발현 및 정제에 대한 필요성을 없애면서 효모의 표면 상에서 디스플레이되어 있는 동안 항체 친화성을 편리하게 '적정'할 수 있다. 효모 표면 디스플레이의 이론적 한계는 다른 디스플레이 방법의 기능성 라이브러리 크기보다 잠재적으로 더 작은 기능성 라이브러리 크기이지만, 최근 방법은 효소 세포의 교배 시스템을 이용하여 크기에 있어서 10¹⁴로 추정되는 조합 다양성을 생성한다(미국 특허 공보 제2003/0186,374호 및 문헌(Blaise et al., Gene 342:211-218, 2004)).In the yeast display system (Boder et al., Nat. Biotech. 15: 553-57, 1997; Chao et al., Nat. Protocols 1: 755-768, 2006) And displayed as linked single chain variable fusions (scFv). The scFv is fused to the attachment subunit of the yeast aggregation protein Aga2p attached to the yeast cell wall via disulfide bonds with Aga1p. The display of proteins through Aga2p minimizes potential interactions with other molecules on the yeast cell wall by allowing proteins to protrude from the cell surface. Antibodies with improved affinity or stability are selected by screening the library using magnetic separation and flow cytometry. Yeast is labeled with biotinylated antigen and a secondary reagent, such as streptavidin conjugated to a fluorophore, to confirm binding of the soluble antigen of interest. Mutations in the surface expression of the antibody can be measured by immunofluorescence labeling of the hemagglutinin or c-Myc epitope tag flanking the scFv. Since expression has been shown to correlate with the stability of the displayed protein, antibodies can be selected for improved stability and affinity (Shusta et al., J. Mol. Biol. 292: 949-956, 1999). A further advantage of the yeast display is that the displayed protein folds within the endoplasmic reticulum of eukaryotic yeast cells using an endoplasmic reticulum chaperon and a quality control device. Once maturation is complete, antibody affinity can be conveniently 'titrated' while being displayed on the surface of the yeast, eliminating the need for expression and purification of each clone. The theoretical limit of the yeast surface display is potentially a smaller functional library size than the functional library size of the other display methods, but recent methods use a mating system of enzyme cells to generate a putative diversity estimated at 10 ¹⁴ in size Patent Publication No. 2003 / 0186,374 and Blaise et al., Gene 342: 211-218, 2004).

리보좀 디스플레이에서, 세포 무함유 시스템에서의 선택을 위해 항체-리보좀-mRNA(ARM) 복합체를 발생시킨다. 항체의 특정 라이브러리를 코딩하는 DNA 라이브러리를, 정지 코돈을 결여하는 스페이서 서열에 유전적으로 융합시킨다. 이 스페이서 서열은 번역될 때 펩티딜 tRNA에 여전히 부착되어 있고 리보좀 터널을 점유하므로, 관심있는 단백질이 리보좀으로부터 빠져나와 폴딩될 수 있게 한다. mRNA, 리보좀 및 단백질로 구성된 발생된 복합체는 표면-결합된 리간드에 결합하여, 상기 리간드에 의한 친화성 포획을 통한 항체 및 그의 코딩 mRNA의 동시적인 단리를 가능하게 한다. 그 다음, 리보좀-결합된 mRNA를 cDNA로 다시 역전사한 후, 상기 cDNA를 돌연변이시켜 다음 라운드의 선택에서 사용할 수 있다(Fukuda et al., Nucleic Acids Res. 34, e127, 2006). mRNA 디스플레이에서, 퓨로마이신을 어댑터 분자로서 사용하여 항체와 mRNA 사이의 공유결합을 확립한다(Wilson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 3750-3755, 2001).In the ribosomal display, an antibody-ribosome-mRNA (ARM) complex is generated for selection in a cell-free system. A DNA library encoding a particular library of antibodies is genetically fused to a spacer sequence that lacks a stop codon. This spacer sequence is still attached to the peptidyl tRNA when it is translated and occupies the ribosomal tunnel so that the protein of interest can be folded out of the ribosome and folded. The resulting complex consisting of mRNA, ribosomes and protein binds to the surface-bound ligand, enabling simultaneous isolation of the antibody and its coding mRNA through affinity capture by the ligand. The ribosome-associated mRNA can then be reverse transcribed back to the cDNA, which can then be used to mutate the next round of selection (Fukuda et al., Nucleic Acids Res. 34, e127, 2006). In mRNA display, puromycin is used as the adapter molecule to establish covalent linkage between antibody and mRNA (Wilson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 3750-3755, 2001).

이들 방법들이 전체적으로 시험관내에서 수행되기 때문에, 이들은 다른 선택 기술에 비해 2종의 주요 이점을 제공한다. 첫째, 라이브러리의 다양성이 세균 세포의 형질전환 효율에 의해 한정되지 않고 시험관에 존재하는 리보좀 및 상이한 mRNA 분자의 수에 의해서만 한정된다. 둘째, 라이브러리가 임의의 다양성화 단계 후 형질전환되어서는 안 되기 때문에, 각각의 선택 라운드 후, 예를 들면, 비-교정(proofreading) 중합효소로 무작위 돌연변이를 용이하게 도입할 수 있다. Because these methods are performed entirely in vitro, they offer two major advantages over other selection techniques. First, the diversity of the library is not limited by the transformation efficiency of bacterial cells, but is limited only by the number of ribosomes and different mRNA molecules present in the test tube. Second, since the library should not be transformed after an arbitrary diversification step, a random mutation can be easily introduced into each of the selection rounds, for example, with a proofreading polymerase.

표적화된 방식으로 또는 무작위 도입을 통해 다양성을 항체 라이브러리의 CDR들 또는 전체 V 유전자 내로 도입할 수 있다. 전자 방법(표적화된 방식)은 고수준 또는 저수준의 돌연변이유발을 통한 항체의 모든 CDR들의 순차적 표적화, 또는 체세포 과다돌연변이의 단리된 핫스폿(Ho, et al., J. Biol. Chem. 280: 607-617, 2005) 또는 실험에 기초할 때 또는 구조적 이유로 친화성에 영향을 미치는 것으로 의심되는 잔기의 표적화를 포함한다. DNA 중합효소(Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226: 889-896, 1992) 또는 RNA 복제효소를 사용한 이. 콜라이 돌연변이유발자 균주의 오류 유발 복제를 이용하여 무작위 돌연변이를 전체 V 유전자 전체에 도입할 수 있다. DNA 셔플링 또는 유사한 기법을 통해 천연적으로 다양한 영역을 치환시켜 다양성을 도입할 수도 있다(Lu et al., J. Biol. Chem 278: 43496-43507, 2003; 및 미국 특허 제5,565,332호 및 제6,989,250호). 골격 영역 잔기 내로 확장되는 초가변 루프를 표적화하는 대안적인 기법(Bond et al., J. Mol. Biol. 348: 699-709, 2005)은 CDR 내에서의 루프 결실 및 삽입을 이용하거나 혼성화에 기초한 다양화를 이용한다(미국 특허 공보 제2004/0005709호). CDR에서 다양성을 발생시키는 추가 방법은 미국 특허 제7,985,840호에 개시되어 있다.The diversity can be introduced into CDRs or whole V genes of the antibody library in a targeted manner or through random introduction. The electron method (targeted approach) is a sequential targeting of all CDRs of antibodies through high or low level mutagenesis, or isolated hot spots of somatic hypermutation (Ho, et al., J. Biol. Chem. 280: 607- 617, 2005) or targeting of residues that are suspected of affecting affinity on an experimental basis or for structural reasons. DNA polymerase (Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226: 889-896, 1992) Random mutations can be introduced into the entire V gene using error inducible replication of the E. coli mutant strain. (Lu et al., J. Biol. Chem 278: 43496-43507, 2003; and U.S. Patent Nos. 5,565,332 and 6,989,250 number). Alternative techniques for targeting hypervariable loops that extend into the framework region residues (Bond et al., J. Mol. Biol. 348: 699-709, 2005) use loop deletion and insertion in CDRs, (US Patent Publication No. 2004/0005709). An additional method of generating diversity in CDRs is disclosed in U.S. Patent No. 7,985,840.

라이브러리의 스크리닝을 당분야에서 공지된 다양한 기법으로 달성할 수 있다. 예를 들면, CD98은 고체 지지체, 컬럼, 핀 또는 셀룰로스/폴리(비닐리덴 플루오라이드) 막/다른 필터 상에 고정될 수 있거나, 흡착 플레이트에 고착된 또는 세포 분류에서 사용된 숙주 세포 상에서 발현될 수 있거나, 스트렙타비딘-코팅된 비드에 의한 포획을 위해 바이오틴에 접합될 수 있거나, 디스플레이 라이브러리를 패닝하는 임의의 다른 방법에서 사용될 수 있다.Screening of libraries can be accomplished by a variety of techniques known in the art. For example, CD98 can be immobilized on a solid support, column, pin or cellulose / poly (vinylidene fluoride) membrane / other filter, or can be expressed on a host cell affixed to an adsorption plate or used in cell sorting Or it may be conjugated to biotin for capture by streptavidin-coated beads, or it may be used in any other way of panning the display library.

시험관내 친화성 성숙 방법의 검토를 위해서는 문헌(Hoogenboom, Nature Biotechnology 23: 1105-1116, 2005) 및 문헌(Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51, 2010), 및 이들 내에서 인용된 참고문헌을 참조한다.For review of in vitro affinity maturation methods, see Hoogenboom, Nature Biotechnology 23: 1105-1116, 2005 and Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51, 2010, See literature.

항-CD98 항체의 변경Modification of anti-CD98 antibody

항-CD98 항체의 공유변경은 본 발명의 범위 내에 포함된다. 공유변경은 항-CD98 항체의 표적화된 아미노산 잔기를, 항-CD98 항체의 선택된 측쇄 또는 N-말단 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 단계를 포함한다. 다른 변경은 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 탈아미드화; 프롤린 및 라이신의 하이드록실화; 세릴 또는 쓰레오닐 잔기의 하이드록실 기의 인산화; 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화(T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)); N-말단 아민의 아세틸화; 및 임의의 C-말단 카복실 기의 아미드화를 포함한다.Sharing modifications of anti-CD98 antibodies are included within the scope of the present invention. Covalent modification comprises reacting a targeted amino acid residue of an anti-CD98 antibody with an organic derivatizing agent capable of reacting with a selected side chain or N-terminal or C-terminal residue of an anti-CD98 antibody. Other variations include the deamidation of the glutaminyl and asparaginyl moieties to the corresponding glutamyl and aspartyl residues, respectively; Hydroxylation of proline and lysine; Phosphorylation of hydroxyl groups of seryl or threonyl residues; (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)) of lysine, arginine and histidine side chains; Acetylation of the N-terminal amine; And amidation of any C-terminal carboxyl group.

본 발명의 범위 내에 포함된 항-CD98 항체의 다른 종류의 공유변경은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴의 변경(Beck et al., Curr. Pharm. Biotechnol. 9: 482-501, 2008; Walsh, Drug Discov. Today 15: 773-780, 2010), 및 미국 특허 제4,640,835호, 제4,496,689호, 제4,301,144호, 제4,670,417호, 제4,791,192호 또는 제4,179,337호에 기재된 방식으로 항체와 다양한 비-단백질성 중합체들 중 하나, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌의 연결을 포함한다.Other types of covalent modifications of the anti-CD98 antibodies included within the scope of the present invention include altering the native glycosylation pattern of the antibody or polypeptide (Beck et al., Curr. Pharm. Biotechnol. 9: 482-501, 2008; Walsh, Drug Discov. Today 15: 773-780, 2010), and in a manner described in U.S. Patent Nos. 4,640,835, 4,496,689, 4,301,144, 4,670,417, 4,791,192 or 4,179,337, One of the polymers, for example polyethylene glycol (PEG), polypropylene glycol or polyoxyalkylene.

본 발명의 항-CD98 항체는 또 다른 이종 폴리펩티드 또는 아미노산 서열, 예를 들면, 에피토프 태그(Terpe, Appl. Microbial. Biotechnol. 60: 523-533, 2003) 또는 IgG 분자의 Fc 영역(Aruffo, "Immunoglobulin fusion proteins" in Antibody Fusion Proteins, S.M. Chamow and A. Ashkenazi, eds., Wiley-Liss, New York, 1999, pp. 221-242)에 융합된 항-CD98 항체를 포함하는 키메라 분자를 형성하도록 변경될 수도 있다.The anti-CD98 antibodies of the invention may also be used in combination with another heterologous polypeptide or amino acid sequence, such as the epitope tag (Terpe, Appl. Microbial Biotechnol. 60: 523-533, 2003) or the Fc region of an IgG molecule (Aruffo, "Immunoglobulin to form a chimeric molecule comprising an anti-CD98 antibody fused to a fusion protein "in Antibody Fusion Proteins, SM Chamow and A. Ashkenazi, eds., Wiley-Liss, New York, 1999, pp. 221-242) It is possible.

항-CD98 항체의 제조Preparation of anti-CD98 antibody

항-CD98 항체 코딩 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환된 또는 형질감염된 세포를 배양하여 항-CD98 항체를 제조할 수 있다. 표준 재조합 기법을 이용하여 본 발명의 항체의 폴리펩티드 성분을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 수득할 수 있다. 항체 생성 세포, 예컨대, 하이브리도마 세포로부터 원하는 폴리뉴클레오티드 서열을 단리하고 서열분석할 수 있다. 대안적으로, 뉴클레오티드 합성기 또는 PCR 기법을 이용하여 폴리뉴클레오티드를 합성할 수 있다. 일단 폴리펩티드를 코딩하는 서열이 수득되면 숙주 세포에서 이종 폴리뉴클레오티드를 복제할 수 있고 발현할 수 있는 재조합 벡터 내로 상기 서열을 삽입한다. 당분야에서 입수될 수 있고 공지되어 있는 많은 벡터들이 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 주로 벡터 내로 삽입될 핵산의 크기 및 벡터로 형질전환될 구체적인 숙주 세포에 의존할 것이다. 본 발명의 항체를 발현하기에 적합한 숙주 세포는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체를 비롯한 원핵생물, 예컨대, 고세균 및 진정세균, 진핵 미생물, 예컨대, 사상 진균 또는 효모, 무척추동물 세포, 예컨대, 곤충 또는 식물 세포, 및 척추동물 세포, 예컨대, 포유동물 숙주 세포주를 포함한다. 숙주 세포를 전술된 발현 벡터로 형질전환시키고, 적절한 경우 변경된 보편적인 영양 배지에서 배양하여 프로모터를 유도하거나 형질전환체를 선택하거나 원하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭한다. 숙주 세포에 의해 생성된 항체를 당분야에서 공지된 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 정제한다.Anti-CD98 antibodies can be prepared by culturing transformed or transfected cells with a vector containing the anti-CD98 antibody encoding nucleic acid. Standard recombinant techniques can be used to obtain a polynucleotide sequence encoding the polypeptide component of the antibody of the invention. The desired polynucleotide sequence can be isolated and sequenced from antibody-producing cells, such as hybridoma cells. Alternatively, polynucleotides can be synthesized using a nucleotide synthesizer or PCR technique. Once the sequence encoding the polypeptide is obtained, the sequence is inserted into a recombinant vector capable of replicating and expressing the heterologous polynucleotide in the host cell. Many vectors available in the art and known in the art can be used for the purposes of the present invention. The selection of the appropriate vector will mainly depend on the size and vector of the nucleic acid to be inserted into the vector and the specific host cell to be transformed. Suitable host cells for expressing an antibody of the invention include prokaryotic organisms including gram negative or gram positive organisms such as archaea and calm bacteria, eukaryotic microorganisms such as filamentous fungi or yeasts, invertebrate cells such as insects or plant cells , And vertebrate cells such as mammalian host cell lines. The host cells are transformed with the expression vectors described above and, if appropriate, cultured in a modified universal nutrient medium to induce a promoter, select transformants or amplify the gene encoding the desired sequence. The antibody produced by the host cell is purified using standard protein purification methods known in the art.

벡터 구축, 발현 및 정제를 포함하는 항체 제조 방법은 하기 문헌들에 더 기재되어 있다: 문헌(Pluckthun et al., (1996) in Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation (McCafferty, J., Hoogenboom, H. R., and Chiswell, D. J., eds), 1 Ed., pp. 203-252, IRL Press, Oxford); 문헌(Kwong, K. & Rader, C. E. coli expression and purification of Fab antibody fragments. Current protocols in protein science editorial board John E Coligan et al., Chapter 6, Unit 6.10 (2009)); 문헌(Tachibana and Takekoshi, "Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli," in Antibody Expression and Production, M. Al-Rubeai, Ed., Springer, New York, 2011); 및 문헌(Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (ed Z. An), John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA).Methods of constructing antibodies, including vector construction, expression and purification, are further described in the following references: Pluckthun et al. (1996) in Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation (McCafferty, J , Hoogenboom, HR, and Chiswell, DJ, eds), 1 Ed., Pp. 203-252, IRL Press, Oxford); (Kwong, K. & Rader, C. E. coli expression and purification of Fab antibody fragments. Current protocols in protein science editorial board John E Coligan et al., Chapter 6, Unit 6.10 (2009)); (Tachibana and Takekoshi, "Production of Antibody Fab Fragments in Escherichia coli, " in Antibody Expression and Production, M. Al-Rubeai, Ed .; Springer, New York, 2011); And Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (Ed Z. An, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA).

물론, 당분야에서 잘 공지되어 있는 대안적 방법들을 이용하여 항-CD98 항체를 제조할 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들면, 고체상 기법을 이용한 직접적인 펩티드 합성으로 적절한 아미노산 서열 또는 이의 일부를 생성할 수 있다(예를 들면, 문헌(Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969)) 및 문헌(Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)) 참조). 수동 기법 또는 자동화를 이용하여 시험관내 단백질 합성을 수행할 수 있다. 화학적 또는 효소적 방법을 이용하여 항-CD98 항체의 다양한 부분을 따로 화학적으로 합성하고 조합하여 원하는 항-CD98 항체를 생성할 수 있다. 대안적으로, 예를 들면, 미국 특허 제5,545,807호 및 제5,827,690호에 개시된 바와 같이 항체를 발현하도록 조작된 트랜스제닉 동물의 세포 또는 체액, 예컨대, 유즙으로부터 항체를 정제할 수 있다.Of course, it is contemplated that anti-CD98 antibodies may be prepared using alternative methods well known in the art. For example, direct peptide synthesis using solid phase techniques can generate the appropriate amino acid sequence or a portion thereof (see, for example, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co., San Francisco, CA (1969) and Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149-2154 (1963)). In vitro protein synthesis can be performed using manual techniques or automation. Various portions of anti-CD98 antibodies can be chemically synthesized and combined using chemical or enzymatic methods to produce the desired anti-CD98 antibody. Alternatively, the antibody can be purified from cells or body fluids, such as lactose, of a transgenic animal engineered to express the antibody, for example, as disclosed in U.S. Patent Nos. 5,545,807 and 5,827,690.

면역접합체Immunoconjugate

본 발명은 합성 연결제에 의해 하나 이상의 세포독성제에 공유결합된 본 발명의 항-CD98 항체들 중 어느 하나를 포함하는 면역접합체("항체 약물 접합체" 또는 "ADC"로서 상호교환적으로 지칭됨)도 제공한다. ADC는 단일클론 항체의 높은 특이성과 세포독성 분자의 약리학적 효능을 겸비하여, 세포독성제가 종양 세포에 특이적으로 표적화될 수 있게 하고 대다수의 항암 약물들의 비-특이적 독성을 피한다. 검토를 위해서는 예를 들면, 문헌(Carter and Senter, Cancer J. 14: 154-169 (2008)); 문헌(Ducry and Stump, Bioconjugate Chem. 21:5-13 (2010)); 및 문헌(Beck et al., Discov. Med. 10: 329-339 (2010))을 참조한다.The present invention provides immunoconjugates (referred to interchangeably as "antibody drug conjugates" or "ADCs") comprising any of the anti-CD98 antibodies of the invention covalently linked to one or more cytotoxic agents by a synthetic linker ). The ADC combines the high specificity of monoclonal antibodies with the pharmacological efficacy of cytotoxic molecules, allowing cytotoxic agents to be specifically targeted to tumor cells and avoiding the non-specific toxicity of most anti-cancer drugs. For review, see, for example, Carter and Senter, Cancer J. 14: 154-169 (2008); (Ducry and Stump, Bioconjugate Chem. 21: 5-13 (2010)); And Beck et al., Discov. Med. 10: 329-339 (2010)).

본 발명의 면역접합체에서 사용되는 세포독성제는 전술된 화학치료제, 약물 또는 생장 억제제, 독소(예를 들면, 세균, 진균, 식물 또는 동물로부터 유래된 효소 활성 독소, 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위원소를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역접합체는 DNA 결합제(예를 들면, 칼리케아미신) 또는 튜불린 탈중합제(예를 들면, 메이탄시노이드 또는 아우리스타틴)를 포함한다. 본 발명은 항체와 핵용해 활성을 갖는 화합물(예를 들면, 리보핵산분해효소 또는 DNA 핵산내부분해효소, 예컨대, 데옥시리보핵산분해효소; DNase) 사이에 형성된 면역접합체도 고려한다.The cytotoxic agent used in the immunoconjugate of the present invention may be any of the aforementioned chemotherapeutic agents, drugs or growth inhibitors, toxins (for example, enzyme-activated toxins derived from bacteria, fungi, plants or animals, or fragments thereof) or radioactive isotopes . &Lt; / RTI > In some embodiments, the immunoconjugate comprises a DNA binding agent (e. G., Calicheamicin) or a tubulin depolymerizing agent (e. G., Maytansinoid or auristatin). The present invention also contemplates an immunoconjugate formed between an antibody and a compound having nuclear lysis activity (for example, a ribonucleic acid degrading enzyme or a DNA nucleic acid internal degrading enzyme such as a deoxyribonuclease degrading enzyme; DNase).

본 발명의 면역접합체에서 사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비-결합 활성 단편, (슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa)의) 외독소 A 쇄, 리신 A 쇄, 애브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 유동나무(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 93/21232호를 참조한다.Enzyme active toxins and fragments thereof that can be used in the immunoconjugates of the present invention include diphtheria A chain, non-binding active fragment of diphtheria toxin, exotoxin A chain (of Pseudomonas aeruginosa ), lysine A chain, Aleurites fordii protein, dianthine protein, Pitolaca americana protein (PAPI, PAPII and PAP-S), Momordica charantia inhibitor , Kursin, croutin, sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, mitogelin, restricin tosin, phenomycin, enomycin and tricothecene. See, for example, International Patent Application Publication No. WO 93/21232.

다양한 방사성 동위원소가 방사접합된 항체의 제조를 위해 사용될 수 있다. 예로는 At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², Pb²¹² 및 Lu의 방사성 동위원소가 있다. 접합체가 검출을 위해 사용되는 경우, 상기 접합체는 신티그래픽 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들면, tc^99m 또는 I¹²³, 또는 핵 자기 공명(NMR) 영상화(자기 공명 영상화 또는 MRI로서도 공지되어 있음)를 위한 스핀 표지, 예컨대, 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다. 방사성 동위원소는 예를 들면, 문헌(Reilly, "The radiochemistry of monoclonal antibodies and peptides," in Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer, R.M. Reilly, ed., Wiley, Hoboken N.J., 2010)에 기재된 공지된 방식으로 접합체 내로 도입될 수 있다.A variety of radioactive isotopes can be used for the production of radiolabeled antibodies. Examples include At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , Pb ²¹² and radioactive isotopes of Lu. When a conjugate is used for detection, the conjugate may be labeled with radioactive atoms for stereographic studies, e.g., tc ^99m or I ¹²³ , or nuclear magnetic resonance (NMR) imaging (also known as magnetic resonance imaging or MRI) For example, iodine-123, iodine-131, indium-111, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15, oxygen-17, gadolinium, manganese or iron. Radioactive isotopes are known, for example, as described in Reilly, " The radiochemistry of monoclonal antibodies and peptides, " in Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer, RM Reilly, ed., Wiley, Hoboken NJ, Can be introduced into the conjugate.

연결제는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 연결제"일 수 있지만, 절단불가능한 연결제도 본원에서 고려된다. 본 발명의 면역접합체에서 사용되는 연결제는 산 불안정 연결제(예를 들면, 하이드라존 연결제), 이황화 함유 연결제, 펩티다제 민감성 연결제(예를 들면, 펩티드 연결제, 예컨대, 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-라이신), 광 불안정 연결제, 디메틸 연결제(Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992) 및 미국 특허 제5,208,020호), 티오에테르 연결제, 또는 다중약물 수송자 매개 내성을 피하도록 디자인된 친수성 연결제를 포함하나 이들로 한정되지 않는다(Kovtun et al., Cancer Res. 70: 2528-2537, 2010).The linking agent may be a " cleavable linker "that facilitates release of the cytotoxic drug in the cell, but is not considered to be cleavable linkage. The linking agent used in the immunoconjugates of the invention may be selected from the group consisting of acid labile linkers (e.g., hydrazone linkers), disulfide containing linkers, peptidase sensitive linkers (e. G., Peptide linkers such as citrulline (Chari et al., Cancer Research 52: 127-131 (1992) and U.S. Pat. No. 5,208,020), thioether linkers, or multidrug transporters (Kovtun et al., Cancer Res. 70: 2528-2537, 2010). &Lt; / RTI >

다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예컨대, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC 및 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 항체와 세포독성제로 구성된 접합체를 제조할 수 있다. 예를 들면, 문헌(Vitetta et al., Science 238:1098 (1987))에 기재된 바와 같이 리신 면역독소를 제조할 수 있다. 본 발명은 당분야, 예를 들면, 문헌(Bioconjugate Techniques, 2^nd Ed., G.T. Hermanson, ed., Elsevier, San Francisco, 2008)에 개시된 임의의 적합한 방법을 이용하여 항체와 세포독성제로 구성된 접합체를 제조할 수 있다는 것도 고려한다.Various bifunctional protein coupling agents such as BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, Sulfo-EMS, Sulfo-GMBS, A conjugate composed of an antibody and a cytotoxic agent can be prepared using -MBS, sulfo-SIB, sulfo-SMCC and sulfo-SMPB, and SVSB (succinimidyl- (4-vinylsulfone) benzoate). For example, lysine immunotoxins can be prepared as described in Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987). The present invention provides a conjugate composed of an antibody and a cytotoxic agent using any suitable method disclosed in the art, for example, in Bioconjugate Techniques, 2 ^nd Ed., GT Hermanson, ed., Elsevier, San Francisco, It is also considered to be able to manufacture.

보편적인 항체-약물 접합 전략은 불균질한 접합체를 발생시키는, Lys 잔기의 ε-아미노 기 또는 Cys 잔기의 티올 기를 이용하는 무작위 접합 화학반응에 기초하였다. 최근에 개발된 기법은 균질한 약물 적재를 유발하고 변경된 항원 결합 또는 약동학적 성질을 갖는 ADC 하위집단을 방지하는, 항체와의 부위 특이적 접합을 가능하게 한다. 이들은 반응성 티올 기를 제공하고 면역글로불린 접합 및 조립을 파괴하지 않거나 항원 결합을 변경하지 않는 시스테인 치환을 중쇄 및 경쇄 상의 특정 위치에서 포함하는 "티오맙"의 조작을 포함한다(Junutula et al., J. Immunol. Meth. 332: 41-52 (2008); Junutula et al., Nat. Biotechnol. 26: 925-932, 2008). 또 다른 방법에서, 종결부터 셀레노시스테인 삽입까지 정지 코돈 UGA를 재코딩하여, 다른 천연 아미노산의 존재 하에서 셀레노시스테인의 친핵성 셀레놀 기에서 부위 특이적 공유접합을 가능하게 함으로써 셀레노시스테인을 항체 서열 내로 번역과 동시에 삽입한다(Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 12451-12456 (2008); Hofer et al., Biochemistry 48(50): 12047-12057, 2009).A universal antibody-drug conjugation strategy was based on a random conjugation chemistry using the ε-amino group of the Lys residue or the thiol group of the Cys residue to generate a heterogeneous conjugate. The recently developed technique enables site-specific conjugation with antibodies, which results in homogeneous drug loading and prevents ADC subpopulations with altered antigen binding or pharmacokinetic properties. These include the manipulation of "thiomaps" which provide reactive thiol groups and contain cysteine substitutions at certain positions on the heavy and light chains that do not destroy immunoglobulin junctions and assembly or alter antigen binding (Junutula et al. Immunol. Meth. 332: 41-52 (2008); Junutula et al., Nat. Biotechnol. 26: 925-932, 2008). In another method, the coding of the stop codon UGA from the termination to the insertion of Selenocysteine allows for the site specific covalent attachment of the selenocysteine in the presence of other natural amino acids to allow site specific covalent attachment of the selenocysteine to the antibody (Hofer et al., Proc Natl Acad Sci USA 105: 12451-12456 (2008); Hofer et al., Biochemistry 48 (50): 12047-12057, 2009).

약학 제제Pharmaceutical preparation

본 발명의 항체 또는 항체-약물 접합체(ADC)는 치료될 병태에 적합한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 상기 항체 또는 ADC는 전형적으로 비경구, 즉, 관주, 피하, 근육내, 정맥내, 피내, 경막내 및 경막외로 투여될 것이다.The antibody or antibody-drug conjugate (ADC) of the present invention may be administered by any route appropriate to the condition being treated. The antibody or ADC will typically be administered parenterally, i. E., Vaginally, subcutaneously, intramuscularly, intravenously, intradermally, intrathecally, and epidurally.

한 실시양태에서, 암의 치료를 위해, 상기 항체 또는 항체-약물 접합체는 정맥내 관주를 통해 투여된다. 관주를 통해 투여되는 용량은 총 1회, 2회, 3회 또는 4회 투약의 경우 일반적으로 매주 1회 투약으로 투약 당 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 10,000 ㎍/㎡의 범위 내에 있다. 대안적으로, 용량 범위는 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 1,000 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 800 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 600 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 400 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 500 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 300 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 200 ㎍/㎡, 및 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 200 ㎍/㎡이다. 상기 용량은 질환의 증상을 경감시키거나 완화시키기 위해 매일 1회, 매주 1회, 매주 다회(그러나, 매일 1회 미만), 매월 다회(그러나, 매일 1회 미만), 매월 다회(그러나, 매주 1회 미만), 매월 1회 또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 투여는 치료되는 종양 또는 암 증상이 관해될 때까지 개시된 간격들 중 임의의 간격으로 계속될 수 있다. 투여는 증상의 관해 또는 경감이 달성된 후 계속될 수 있고, 이때 이러한 관해 또는 경감은 이러한 계속된 투여에 의해 연장된다.In one embodiment, for the treatment of cancer, the antibody or antibody-drug conjugate is administered via an intravenous route. The dose administered through the route is in the range of about 1 [mu] g / m < 2 > to about 10,000 [mu] g / m < 2 > per dose, generally once per week for a total of 1, 2, 3 or 4 doses. Alternatively, the dosage range may be from about 1 μg / m2 to about 1,000 μg / m2, from about 1 μg / m2 to about 800 μg / m2, from about 1 μg / m2 to about 600 μg / From about 10 μg / m2 to about 200 μg / m2, and from about 1 μg / m2 to about 200 μg / m2, from about 10 μg / m2 to about 500 μg / Mu g / m < 2 >. (But less than once a day), monthly (but less than once a day), monthly (but once a week, once a week) to relieve or alleviate symptoms of the disease, Less than once per day), once a month or intermittently. Administration may continue at any of the intervals disclosed until the tumor being treated or the cancer symptoms are remedied. Administration may continue after remission or alleviation of symptoms is achieved, wherein such remission or relief is extended by such continued administration.

한 양태에서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 항-CD98 항체 및/또는 이의 하나 이상의 면역접합체 및/또는 본 발명의 하나 이상의 항-CD98 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 제제를 추가로 제공한다. 일부 실시양태에서, 약학 제제는 1) 항-CD98 항체 및/또는 항-CD98 항체-약물 접합체 및/또는 이의 면역접합체, 및 2) 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 약학 제제는 1) 항-CD98 항체 및/또는 이의 면역접합체, 및 임의적으로 2) 하나 이상의 추가 치료제를 포함한다.In one embodiment, the invention further provides a pharmaceutical formulation comprising one or more anti-CD98 antibodies of the invention and / or one or more immunoconjugates thereof and / or one or more anti-CD98 antibody-drug conjugates of the invention. In some embodiments, the pharmaceutical agent comprises 1) an anti-CD98 antibody and / or an anti-CD98 antibody-drug conjugate and / or an immunoconjugate thereof, and 2) a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the pharmaceutical agent comprises 1) an anti-CD98 antibody and / or an immunoconjugate thereof, and optionally 2) one or more additional therapeutic agents.

본 발명의 항체 또는 면역접합체, 또는 본 발명의 항체-약물 접합체를 포함하는 약학 제제는 원하는 순도를 갖는 상기 항체 또는 항체-약물 접합체를 임의적인 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 수용액, 또는 동결건조된 또는 다른 건조된 제제의 형태로 저장을 위해 제조된다(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 본원의 제제는 치료되는 구체적인 증상을 위해 필요한 하나 초과의 활성 화합물들, 바람직하게는 서로 불리하게 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 화합물들을 함유할 수도 있다. 예를 들면, 항-CD98 항체 이외에, 추가 항체, 예를 들면, CD98 폴리펩티드 상의 상이한 에피토프에 결합하는 제2 항-CD98 항체, 또는 일부 다른 표적, 예컨대, 특정 암의 성장에 영향을 미치는 성장 인자에 대한 항체를 한 제제 내에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은 화학치료제, 세포독성제, 사이토카인, 생장 억제제, 항호르몬제 및/또는 심장보호제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 분자는 적절하게는 의도된 목적에 효과적인 양으로 함께 존재한다.The pharmaceutical preparation comprising the antibody or immunoconjugate of the present invention or the antibody-drug conjugate of the present invention may be prepared by mixing the antibody or antibody-drug conjugate having the desired degree of purity with an optional physiologically acceptable carrier, excipient or stabilizer (Remington ' s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) in the form of aqueous solutions, or lyophilized or other dried formulations. The formulations herein may contain more than one active compound required for the particular condition being treated, preferably compounds having complementary activity that do not adversely affect each other. For example, in addition to an anti-CD98 antibody, additional antibodies, for example, a second anti-CD98 antibody that binds to a different epitope on the CD98 polypeptide, or a growth factor that affects the growth of some other target, It may be desirable to include the antibody in a preparation. Alternatively or additionally, the composition may further comprise a chemotherapeutic agent, a cytotoxic agent, a cytokine, a growth inhibitor, an anti-hormone agent and / or a cardioprotectant. Such molecules are suitably present together in effective amounts for the intended purpose.

본 발명의 항체 또는 면역접합체는 표적 세포/조직으로 전달하기에 적합한 임의의 형태, 예를 들면, 마이크로캡슐 또는 마크로에멀젼(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1980); Park et al., Molecules 10: 146-161 (2005); Malik et al., Curr. Drug. Deliv. 4: 141-151 (2007)); 지속 방출 제제(Putney and Burke, Nature Biotechnol. 16: 153-157, (1998)); 또는 리포좀(Maclean et al., Int. J. Oncol. 11:235-332 (1997); Kontermann, Curr. Opin. Mol. Ther. 8: 39-45 (2006))으로 제제화될 수 있다.The antibodies or immunoconjugates of the invention may be in any form suitable for delivery to the target cell / tissue, for example, microcapsules or macroemulsions (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. al., Molecules 10: 146-161 (2005); Malik et al., Curr. Drug. Deliv 4: 141-151 (2007)); Sustained-release preparations (Putney and Burke, Nature Biotechnol. 16: 153-157, (1998)); Or liposomes (Maclean et al., Int. J. Oncol. 11: 235-332 (1997), Kontermann, Curr. Opin. Mol. Ther. 8: 39-45 (2006)).

치료 방법Treatment method

본 발명의 항체 또는 면역접합체는 예를 들면, 시험관내, 생체외 및 생체내 치료 방법에서 사용될 수 있다. 한 양태에서, 본 발명은 생체내에서 또는 시험관내에서 세포 생장 또는 증식을 억제하는 방법으로서, 면역접합체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 세포를 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체에 노출시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. "세포 생장 또는 증식을 억제하는"은 세포 생장 또는 증식을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100%까지 감소시키는 것을 의미하고 세포 사멸을 유도하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 종양 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 방광, 유방, 결장, 직장, 위, 식도, 폐, 후두, 신장, 구강, 난소 또는 전립선 종양 세포, 또는 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병 세포이다.The antibodies or immunoconjugates of the present invention can be used, for example, in vitro, in vitro and in vivo therapeutics. In one aspect, the invention provides a method of inhibiting cell growth or proliferation in vivo or in vitro comprising exposing the cells to an anti-CD98 antibody or an immunoconjugate thereof, under conditions permitting binding of the immunoconjugate to CD98 . &Lt; / RTI > By "inhibiting cell growth or proliferation" is meant a decrease in cell growth or proliferation by at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% And includes inducing apoptosis. In certain embodiments, the cell is a tumor cell. In certain embodiments, the cell is a bladder, breast, colon, rectum, stomach, esophagus, lung, larynx, kidney, oral, ovarian or prostate tumor cell, or sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia cell.

한 양태에서, 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 세포 증식 장애, 예컨대, 암의 치료 또는 예방에 사용된다. 특정 실시양태에서, 세포 증식 장애는 CD98의 증가된 발현 및/또는 활성과 관련되어 있다. 예를 들면, 특정 실시양태에서, 세포 증식 장애는 암세포의 표면 상에서의 CD98의 증가된 발현과 관련되어 있다. 본 발명의 항체 또는 면역접합체에 의해 치료되는 세포 증식 장애의 예로는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이가 있으나 이들로 한정되지 않는다.In one embodiment, the antibody or immunoconjugate of the invention is used for the treatment or prophylaxis of a cell proliferative disorder, such as cancer. In certain embodiments, the cell proliferative disorder is associated with increased expression and / or activity of CD98. For example, in certain embodiments, the cell proliferative disorder is associated with increased expression of CD98 on the surface of cancer cells. Examples of cell proliferative disorders to be treated by the antibody or immunoconjugate of the present invention include bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, Glioma, lymphoma or leukemia, or metastasis of any of these cancers.

한 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 세포 증식 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 세포 증식 장애를 치료하는 방법은 항-CD98 항체 또는 항-CD98 면역접합체, 및 임의적으로 하나 이상의 추가 치료제, 예컨대, 하기 제공된 추가 치료제를 포함하는 약학 제제를 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-CD98 항체 또는 면역접합체는 면역접합체의 접합된 세포독성제가 세포의 내부에 접근하도록 상기 항체 또는 면역접합체를 CD98과 접촉시켜 항체 또는 면역접합체-항원 복합체를 형성함으로써 암세포 상의 CD98을 표적화하는 데에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 결합된 항체 또는 면역접합체는 CD98을 발현하는 암세포 내로 내재화된다.In one aspect, the invention provides a method of treating a cell proliferative disorder, comprising administering to the subject an effective amount of an anti-CD98 antibody or an immunoconjugate thereof. In certain embodiments, a method of treating a cell proliferative disorder comprises administering to a subject an effective amount of a pharmaceutical preparation comprising an anti-CD98 antibody or an anti-CD98 immunoconjugate, and optionally one or more additional therapeutic agents, such as the additional therapeutic agents provided below . In one embodiment, the anti-CD98 antibody or immunoconjugate can be conjugated to CD98 by forming an antibody or immunoconjugate-antigen complex by contacting the antibody or immunoconjugate with CD98 so that the conjugated cytotoxic agent of the immunoconjugate approaches the interior of the cell, Can be used to target. In one embodiment, the conjugated antibody or immunoconjugate is internalized into cancer cells expressing CD98.

항-CD98 항체 또는 면역접합체는 치료 목적으로 인간에게 투여될 수 있다. 더욱이, 항-CD98 항체 또는 면역접합체는 수의학 목적으로 또는 인간 질환의 동물 모델로서 항체가 교차반응하는 CD98을 발현하는 비-인간 포유동물(예를 들면, 영장류, 돼지, 래트 또는 마우스)에게 투여될 수 있다. 후자(인간 질환의 동물 모델)의 경우, 이러한 동물 모델은 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 치료 효능을 평가하는 데(예를 들면, 투여의 용량 및 시간 경과의 시험)에 유용할 수 있다.Anti-CD98 antibodies or immunoconjugates can be administered to humans for therapeutic purposes. Moreover, an anti-CD98 antibody or immunoconjugate may be administered to a non-human mammal (e.g., a primate, a pig, a rat or a mouse) expressing CD98 in which the antibody cross-reacts for veterinary purposes or as an animal model of human disease . In the latter case (an animal model of human disease), such an animal model may be useful in assessing the therapeutic efficacy of the antibody or immunoconjugate of the invention (e. G., Dose and time course studies of administration).

본 발명의 항체 또는 면역접합체는 치료에서 단독으로 또는 다른 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 하나 이상의 추가 치료제 및/또는 면역보강제와 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가 치료제는 세포독성제, 화학치료제 또는 생장 억제제이다. 일부 실시양태에서, 화학치료제는 약제 또는 약제들의 조합물, 예컨대, 알킬화제(예를 들면, 벤다무스틴 하이드로클로라이드, 사이클로포스파미드 또는 이포스파미드), 뉴클레오사이드 유사체(예를 들면, 플루다라빈, 사이타라빈 또는 겜시타빈), 코르티코스테로이드(예를 들면, 프레드니손, 프레드니솔론 또는 메틸프레드니솔론), 항유사분열제(예를 들면, 팍클리탁셀, 독세탁셀 또는 비노렐빈), 빈카 알칼로이드(예를 들면, 빈크리스틴 또는 에토포사이드), 토포이소머라제 억제제(예를 들면, 이리노테칸), 항생제(예를 들면, 안트라사이클린 또는 아드리아마이신), 백금 유사체(예를 들면, 시스플라틴 또는 카보플라틴), 치료 항체(예를 들면, 리툭시맙) 또는 약제들의 조합물(예를 들면, CHOP 또는 CVP)이고, 이때 조합치료가 암의 치료에 유용하다. 일부 실시양태에서, 추가 화합물은 항-CD98 항체 이외의 치료 항체(예를 들면, 리툭시맙)이다.The antibodies or immunoconjugates of the invention may be used alone or in combination with other compositions in therapy. For example, an antibody or immunoconjugate of the invention may be administered with one or more additional therapeutic agents and / or adjuvants. In certain embodiments, the additional therapeutic agent is a cytotoxic agent, a chemotherapeutic agent, or a growth inhibitor. In some embodiments, the chemotherapeutic agent is administered in combination with a medicament or combination of agents, such as an alkylating agent (e.g., vendamustine hydrochloride, cyclophosphamide or isopa-midi), a nucleoside analog (e. (Eg, paclitaxel, docked cell or vinorelbine), vinca alkaloids (eg, cyclophosphamide), corticosteroids (eg, prednisone, prednisolone or methylprednisolone) For example, vincristine or etoposide, topoisomerase inhibitors such as irinotecan, antibiotics such as anthracycline or adriamycin, platinum analogs such as cisplatin or carboplatin, A therapeutic antibody (e. G., Rituximab) or a combination of agents (e. G., CHOP or CVP), wherein the combination therapy is useful for the treatment of cancer. In some embodiments, the additional compound is a therapeutic antibody (e. G., Rituximab) other than an anti-CD98 antibody.

상기 인지된 이러한 조합치료는 조합된 투여(이때, 2개 이상의 치료제가 동일한 또는 분리된 제제 내에 포함됨), 및 분리된 투여를 포괄하고, 이 경우 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 투여는 추가 치료제 및/또는 면역보강제의 투여 전에, 투여와 동시에 및/또는 투여 후에 일어날 수 있다. 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 방사선 치료 및/또는 골수 및 말초 혈액 이식을 포함하나 이들로 한정되지 않는 추가 치료 요법과 함께 사용될 수도 있다.Such recognized combination therapies encompass a combined administration wherein the two or more therapeutic agents are included in the same or separate agent, and separate administration, wherein administration of the antibody or immunoconjugate of the invention results in the administration of an additional therapeutic agent and / / RTI > and / or the administration of the adjuvant, concurrently with administration and / or after administration. The antibodies or immunoconjugates of the invention may also be used in conjunction with additional therapies including, but not limited to, radiation therapy and / or bone marrow and peripheral blood transplantation.

본 발명의 항체 또는 면역접합체(및 임의의 추가 치료제 또는 면역보강제)는 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비내, 및 국소 치료를 위해 요구되는 경우 병변내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 관주는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 추가로, 항체 또는 면역접합체는 특히 이 항체 또는 면역접합체의 용량을 감소시키면서 펄스 관주에 의해 적절하게 투여된다. 투약은 부분적으로 투여가 단기 투여인지 아니면 장기 투여인지에 따라 임의의 적합한 경로, 예를 들면, 주사, 예컨대, 정맥내 또는 피하 주사에 의해 달성될 수 있다.The antibody or immunoconjugate of the invention (and any additional therapeutic or adjuvant) may be administered by any suitable means, including parenteral, subcutaneous, intraperitoneal, intrapulmonary, and intranasal, and, if desired, for topical treatment, &Lt; / RTI > Parenteral administration includes intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, or subcutaneous administration. In addition, the antibody or immunoconjugate is suitably administered by a pulse tube, particularly reducing the dose of the antibody or immunoconjugate. The dosage may be achieved in part by any suitable route, for example injection, e.g. intravenous or subcutaneous, depending on whether the administration is a short-term or long-term administration.

본 발명의 항체 또는 면역접합체는 우수한 의학적 관행과 일치하는 방식으로 제제화되고 투약되고 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려될 인자는 치료될 구체적인 장애, 치료받을 구체적인 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 약제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정 및 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체 또는 면역접합체는 임의적으로 해당 장애의 예방 또는 치료를 위해 현재 사용되는 하나 이상의 약제와 함께 제제화되지만 반드시 그러할 필요는 없다. 이러한 다른 약제의 유효량은 제제에 존재하는 항체 또는 면역접합체의 양, 장애 또는 치료의 종류 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 용량 및 투여 경로와 동일한 용량 및 투여 경로로 사용되거나, 본원에 기재된 용량의 약 1% 내지 99%로 사용되거나, 적절한 용량 및 경로로서 실험적으로/임상적으로 확인된 임의의 용량 및 임의의 경로로 사용된다. The antibodies or immunoconjugates of the invention will be formulated, dosed and administered in a manner consistent with good medical practice. Factors to be considered in this context include the specific disorder being treated, the particular mammal being treated, the clinical condition of the individual patient, the cause of the disorder, the delivery site of the agent, the method of administration, the schedule of administration, and other factors known to the physician. The antibody or immunoconjugate is optionally formulated with one or more agents currently used for the prophylaxis or treatment of the disorder, but need not be so. The effective amount of such other agents depends on the amount of antibody or immunoconjugate present in the formulation, the nature of the disorder or treatment, and other factors discussed above. They are generally used in the same dosage and route of administration as those described herein, or used in about 1% to 99% of the doses described herein, or as an appropriate dose / route of any of the experimentally / clinically identified Capacity and any path.

질환의 예방 또는 치료를 위해, (단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 추가 치료제, 예컨대, 화학치료제와 병용될 때) 본 발명의 항체 또는 면역접합체의 적절한 용량은 치료되는 질환의 종류, 항체 또는 면역접합체의 종류, 질환의 중증도 및 경과, 항체 또는 면역접합체가 예방 목적으로 투여되는지 아니면 치료 목적으로 투여되는지, 선행 치료, 환자의 임상 병력 및 항체 또는 면역접합체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체 또는 면역접합체는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다. 질환의 종류 및 중증도에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg(예를 들면, 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg)의 항체 또는 면역접합체가 예를 들면, 1회 이상의 분리된 투여에 의해 또는 연속 관주에 의해 환자에게 투여될 초기 후보 용량일 수 있다. 한 전형적인 1일 용량은 상기 언급된 인자들에 따라 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상일 것이다. 수일 또는 이보다 오랜 시간에 걸친 반복된 투여의 경우, 병태에 따라 치료는 일반적으로 질환 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다. 항체 또는 면역접합체의 한 예시적인 용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위 내에 있을 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg(또는 이들의 임의의 조합)의 1회 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 (예를 들면, 환자가 약 2회 내지 약 20회, 또는 예를 들면, 약 6회 용량의 항체 또는 면역접합체를 제공받도록) 간헐적으로, 예를 들면, 매주 또는 3주마다 투여될 수 있다. 초기 보다 높은 적재 용량에 이어서 1회 이상의 보다 낮은 용량이 투여될 수 있다. 예시적인 투약 요법은 약 4 mg/kg의 초기 적재 용량으로 항체를 투여한 후 약 2 mg/kg의 매주 유지 용량으로 항체를 투여하는 것을 포함한다. 그러나, 다른 투약 요법이 유용할 수 있다. 이 치료의 진행은 보편적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터링된다.The appropriate dose of an antibody or immunoconjugate of the invention (either alone or when used in combination with one or more other therapeutic agents, such as a chemotherapeutic agent) for the prevention or treatment of a disease will depend on the type of disease being treated, the antibody or immunoconjugate The severity and course of the disease, the severity and course of the disease, whether the antibody or immunoconjugate is administered for prophylactic or therapeutic purposes, the pre-treatment, the clinical history of the patient and the response to the antibody or immunoconjugate, and the discretion of the primary care physician. The antibody or immunoconjugate is suitably administered to the patient at one time or over a series of treatments. Depending on the type and severity of the disease, an antibody or immunoconjugate of about 1 ug / kg to 100 mg / kg (e.g., 0.1 mg / kg to 20 mg / kg) may be administered, for example, Or an initial candidate dose to be administered to a patient by a continuous conduit. A typical daily dose will be from about 1 [mu] g / kg to 100 mg / kg or more, depending on the factors mentioned above. In the case of repeated administrations over several days or longer, depending on the condition, the treatment will generally continue until the desired inhibition of the disease symptoms occurs. An exemplary dose of an antibody or immunoconjugate will be in the range of about 0.05 mg / kg to about 10 mg / kg. Thus, one or more doses of about 0.5 mg / kg, 2.0 mg / kg, 4.0 mg / kg, or 10 mg / kg (or any combination thereof) may be administered to a patient. Such a dose may be administered intermittently, e. G., Every week or every three weeks, (e. G., To provide the patient with about 2 to about 20 or, for example, about 6 doses of antibody or immunoconjugate) . One or more lower doses may be administered following the loading dose higher than the initial dose. Exemplary dosing regimens include administration of the antibody at an initial loading dose of about 4 mg / kg followed by administration of the antibody at a weekly maintenance dose of about 2 mg / kg. However, other dosing regimens may be useful. The progress of this treatment is easily monitored by universal techniques and analysis.

진단 방법 및 검출 방법Diagnostic and detection methods

한 양태에서, 본 발명의 항-CD98 항체 및 면역접합체는 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 데에 유용하다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "검출"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 조직은 다른 조직에 비해 상대적으로 더 높은 수준으로 CD98을 발현하는 정상 및/또는 암성 조직, 예를 들면, 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함한다.In one embodiment, the anti-CD98 antibodies and immunoconjugates of the invention are useful for detecting the presence of CD98 in a biological sample. As used herein, the term "detection " encompasses quantitative or qualitative detection. In certain embodiments, the biological sample comprises cells or tissues. In certain embodiments, such tissue is a normal and / or cancerous tissue that expresses CD98 at a relatively higher level than other tissues such as bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, Cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma or leukemia, or metastasis of any of these cancers.

한 양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 항-CD98 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 항-CD98 항체와 접촉시키는 단계, 및 항-CD98 항체와 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함한다.In one aspect, the invention provides a method of detecting the presence of CD98 in a biological sample. In certain embodiments, the method comprises contacting a biological sample with an anti-CD98 antibody under conditions that permit binding of the anti-CD98 antibody and CD98, and detecting whether a complex is formed between the anti-CD98 antibody and CD98 .

한 양태에서, 본 발명은 CD98의 증가된 발현과 관련된 장애를 진단하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 시험 세포를 항-CD98 항체와 접촉시키는 단계; 항-CD98 항체와 CD98의 결합을 검출함으로써 시험 세포에 의한 CD98의 발현 수준을 (정량적으로 또는 정성적으로) 측정하는 단계; 및 시험 세포에 의한 CD98의 발현 수준을 대조군 세포(시험 세포와 동일한 조직으로부터 유래된 정상 세포, 또는 이러한 정상 세포에 필적할만한 수준으로 CD98을 발현하는 세포)에 의한 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는데, 이때 대조군 세포에 비해 시험 세포에 의한 CD98의 보다 높은 발현 수준은 CD98의 증가된 발현과 관련된 장애의 존재를 표시한다. 특정 실시양태에서, 증가된 발현은 정상 세포에 비해 종양 세포의 표면 상에서의 CD98 발현의 보다 높은 밀도에 상응한다. 특정 실시양태에서, 시험 세포는 CD98의 증가된 발현과 관련된 장애를 갖는 것으로 의심되는 개체로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 장애는 세포 증식 장애, 예컨대, 암 또는 종양이다. 본 발명의 항체를 사용하여 진단할 수 있는 예시적인 세포 증식 장애는 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 또는 백혈병, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 포함한다.In one aspect, the invention provides a method of diagnosing a disorder associated with increased expression of CD98. In certain embodiments, the method comprises contacting a test cell with an anti-CD98 antibody; Measuring (quantitatively or qualitatively) the level of expression of CD98 by the test cell by detecting the binding of the anti-CD98 antibody to CD98; And comparing the level of expression of CD98 by the test cell with the level of expression of CD98 by control cells (normal cells derived from the same tissue as the test cells, or cells expressing CD98 at levels comparable to these normal cells) Wherein higher expression levels of CD98 by test cells relative to control cells indicate the presence of a disorder associated with increased expression of CD98. In certain embodiments, increased expression corresponds to a higher density of CD98 expression on the surface of tumor cells relative to normal cells. In certain embodiments, the test cell is obtained from an individual suspected of having a disorder associated with increased expression of CD98. In certain embodiments, the disorder is a cell proliferative disorder, such as cancer or a tumor. Exemplary cell proliferative disorders that can be diagnosed using the antibodies of the present invention include but are not limited to bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, Glioma, lymphoma or leukemia, or metastasis of any of these cancers.

일부 실시양태에서, 진단 또는 검출 방법, 예컨대, 전술된 방법은 세포 표면 상에서 발현된 CD98 또는 그의 표면 상에서 CD98을 발현하는 세포로부터 수득된 막 제제 중의 CD98과 항-CD98 항체의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 항-CD98 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 세포를 항-CD98 항체와 접촉시키는 단계, 및 항-CD98 항체와 세포 표면 상의 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함한다. 항-CD98 항체와 세포의 표면 상에서 발현된 CD98의 결합을 검출하는 예시적인 분석은 "FACS" 분석이다.In some embodiments, the diagnostic or detection method, e. G., The method described above, comprises detecting binding of CD98 and anti-CD98 antibodies in a membrane preparation obtained from cells expressing CD98 on CD98 or surface thereof expressed on the cell surface . In certain embodiments, the method comprises contacting the cell with an anti-CD98 antibody under conditions that permit binding of the anti-CD98 antibody and CD98, and detecting whether a complex is formed between the anti-CD98 antibody and CD98 on the cell surface . An exemplary assay for detecting binding of anti-CD98 antibody and CD98 expressed on the surface of a cell is "FACS" assay.

특정 다른 방법들을 이용하여 항-CD98 항체와 CD98의 결합을 검출할 수 있다. 이러한 방법은 당분야에서 잘 공지된 항원 결합 분석, 예컨대, 웨스턴 블롯, 방사면역분석, ELISA(효소 연결된 면역흡착 분석), "샌드위치" 면역분석, 면역침전 분석, 형광 면역분석, 단백질 A 면역분석 및 면역조직화학(IHC)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.Certain other methods can be used to detect binding of anti-CD98 antibody to CD98. Such methods include, but are not limited to, antigen binding assays well known in the art, such as Western blot, radioimmunoassay, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), "sandwich" immunoassay, immunoprecipitation assay, But are not limited to, immunohistochemistry (IHC).

특정 실시양태에서, 항-CD98 항체는 표지된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티(예컨대, 형광, 발색, 전자-조밀, 화학발광 및 방사성 표지)뿐만 아니라, 예를 들면, 효소 반응 또는 분자 상호작용을 통해 간접적으로 검출되는 모이어티, 예컨대, 효소 또는 리간드도 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 예시적인 표지는 방사성 동위원소 ³²P, ¹⁴C, ¹²⁵I, ³H 및 ¹³¹I, 형광단, 예컨대, 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 댄실, 움벨리페론, 루시퍼라제, 예를 들면, 초파리 루시퍼라제 및 세균 루시퍼라제(미국 특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 호스라디쉬 퍼록시다제(HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들면, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제 및 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제, 과산화수소를 사용하여 염료 전구체, 예컨대, HRP를 산화시키는 효소와 커플링된 헤테로사이클릭 옥시다제, 예컨대, 유리카제 및 잔틴 옥시다제, 락토퍼록시다제 또는 마이크로퍼록시다제, 바이오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파지 표지, 안정한 자유 라디칼 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.In certain embodiments, the anti-CD98 antibody is labeled. A label may be a moiety directly detectable, such as a label or moiety (e.g., fluorescent, chromogenic, electron-dense, chemiluminescent, and radiolabel), as well as a moiety indirectly detected through, for example, enzyme reaction or molecular interaction, , Enzymes, or ligands. Exemplary labels include radioisotopes ³² P, ¹⁴ C, ¹²⁵ I, ³ H and ¹³¹ I, fluorescent moieties such as rare earth chelates or fluorescein and derivatives thereof, rhodamine and derivatives thereof, dansyl, umbeliferone, (Lysine), such as, for example, the fruit fly luciferase and the bacterium luciferase (U.S. Patent No. 4,737,456), luciferin, 2,3-dihydrophthalazine diion, horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase, An enzyme that oxidizes a dye precursor such as HRP using glucose oxidase, glucose oxidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, hydrogen peroxide, Such as, for example, free radicals and xanthine oxidase, lactoperoxidase or microperoxidase, biotin / avidin, spin label, bacteriophage Branch, but are not limited to, such as the stable free radical to contain one of these.

일부 실시양태에서, 항-CD98 항체는 불용성 매트릭스 상에 고정된다. 고정은 용액에서 자유 상태로 남아 있는 임의의 CD98로부터 항-CD98 항체를 분리하는 것을 포함한다. 이것은 보편적으로 분석 절차 전 항-CD98 항체의 불용화, 수불용성 매트릭스 또는 표면에의 흡착(Bennich et al.., 미국 특허 제3,720,760호), (예를 들면, 글루타르알데하이드 교차연결을 이용한) 공유 커플링, 또는 항-CD98 항체와 CD98 사이의 복합체의 형성 후 항-CD98 항체의 불용화, 예를 들면, 면역침전에 의해 달성된다.In some embodiments, the anti-CD98 antibody is immobilized on an insoluble matrix. Immobilization involves separating the anti-CD98 antibody from any CD98 that remains free in solution. This is commonly done by insolubilization of the anti-CD98 antibody prior to the analytical procedure, adsorption to a water-insoluble matrix or surface (Bennich et al., U.S. Patent No. 3,720,760), (for example using glutaraldehyde cross-linking) CD98 antibody after formation of a complex between the anti-CD98 antibody and the CD98 antibody, or by formation of a complex between the anti-CD98 antibody and CD98, for example by immunoprecipitation.

항-CD98 항체 대신에 또는 항-CD98 항체 이외에 본 발명의 면역접합체를 사용하여 진단 또는 검출의 상기 실시양태들 중 임의의 실시양태를 수행할 수 있다.Any of the above embodiments of the diagnosis or detection can be performed using an immunoconjugate of the invention in place of or in addition to the anti-CD98 antibody.

분석analysis

당분야에서 공지된 다양한 분석으로 본 발명의 항-CD98 항체 및 면역접합체를 그들의 물리적/화학적 성질 및/또는 생물학적 활성에 대해 특징규명할 수 있다.Various assays known in the art can characterize the anti-CD98 antibodies and immunoconjugates of the invention in terms of their physical / chemical properties and / or biological activity.

활성 분석Activity analysis

한 양태에서, 생물학적 활성을 갖는 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체를 확인하는 분석이 제공된다. 생물학적 활성은 예를 들면, 세포 생장 또는 증식을 억제하는 능력(예를 들면, "세포 사멸" 활성), 또는 프로그래밍된 세포 사멸(아폽토시스)을 비롯한 세포 사멸을 유도하는 능력을 포함할 수 있다. 생체내에서 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체 또는 면역접합체도 제공된다.In one embodiment, an assay is provided to identify an anti-CD98 antibody having biological activity or an immunoconjugate thereof. Biological activity may include, for example, the ability to induce apoptosis, including the ability to inhibit cell growth or proliferation (e.g., "cell death" activity), or programmed cell death (apoptosis). Antibodies or immunoconjugates having such biological activity are also provided in vivo and / or in vitro.

특정 실시양태에서, 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체를 시험관내에서 세포 생장 또는 증식을 억제하는 그의 능력에 대해 시험한다. 세포 생장 또는 증식의 억제에 대한 분석은 당분야에서 잘 공지되어 있다. 본원에 기재된 "세포 사멸" 분석으로 예시된, 세포 증식에 대한 특정 분석은 세포 생존력을 측정한다. 한 이러한 분석은 프로메가(미국 위스콘신주 매디슨 소재)로부터 상업적으로 입수될 수 있는 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)™ 발광 세포 생존력 분석이다. 상기 분석은 대사적 활성 세포의 표시인 존재하는 ATP의 정량에 기초하여 배양물 중의 생존 세포의 수를 측정한다. 문헌(Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88) 및 미국 특허 제6602677호를 참조한다. 상기 분석은 이를 자동화된 고속처리 스크리닝(HTS)으로 처리하기에 적합한 96웰 또는 384웰 포맷으로 수행될 수 있다. 문헌(Cree et al., (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404)을 참조한다.In certain embodiments, the anti-CD98 antibody or immunoconjugate thereof is tested for its ability to inhibit cell growth or proliferation in vitro. Analysis of inhibition of cell growth or proliferation is well known in the art. A specific assay for cell proliferation, exemplified by the "apoptosis" assay described herein, measures cell viability. One such assay is the CellTiter-Glo ™ light-emitting cell viability assay commercially available from Promega (Madison, Wis.). The assay measures the number of viable cells in the culture based on the quantification of the ATP present, which is an indication of metabolic active cells. See Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160: 81-88) and U.S. Patent No. 6602677. The assay may be performed in a 96 well or 384 well format suitable for treating it with automated high throughput screening (HTS). See Cree et al., (1995) AntiCancer Drugs 6: 398-404.

또 다른 세포 증식 분석은 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드가 미토콘드리아 환원효소에 의해 포르마잔으로 산화되는 것을 측정하는 비색 분석인 "MTT" 분석이다. 셀타이터-글로™ 분석처럼, 이 분석은 세포 배양물에 존재하는 대사적 활성 세포의 수를 표시한다. 예를 들면, 문헌(Mosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65:55-63) 및 문헌(Zhang et al. (2005) Cancer Res. 65:3877-3882)을 참조한다.Another cell proliferation assay is the colorimetric assay, MTT, which measures the oxidation of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide to formazan by mitochondrial reductase "Analysis. Like the Celliter-Wright ™ assay, this assay indicates the number of metabolically active cells present in the cell culture. See, for example, Mosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65: 55-63) and Zhang et al. (2005) Cancer Res. 65: 3877-3882.

한 양태에서, 항-CD98 항체는 시험관내에서 세포 사멸을 유도하는 그의 능력에 대해 시험된다. 세포 사멸의 유도에 대한 분석은 당분야에서 잘 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 분석은 예를 들면, 프로피듐 요오다이드(PI), 트립판 블루(문헌(Moore et al. (1995) Cytotechnology, 17:1-11) 참조) 또는 7AAD의 섭취에 의해 표시되는 막 통합성의 손실을 측정한다. 예시적인 PI 섭취 분석에서, 세포를 둘베코 변경 이글 배지(D-MEM)(10% 열-불활성화된 FBS(하이클론) 및 2 mM L-글루타민으로 보충된 햄스 F-12(50:50))에서 배양한다. 따라서, 보체 및 면역 이펙터 세포의 부재 하에서 상기 분석을 수행한다. 세포를 100 x 20 mm 디쉬에 디쉬 당 3 x 10⁶개의 밀도로 시딩하고 밤새 부착시킨다. 상기 배지를 제거하고, 새로 만든 배지 단독, 또는 다양한 농도의 항체 또는 면역접합체를 함유하는 배지로 교체한다. 세포를 3일 동안 항온처리한다. 처리 후, 단일층을 PBS로 세척하고 트립신처리로 탈착시킨다. 그 다음, 세포를 4℃에서 1200 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, 펠렛을 3 ㎖의 냉각된 Ca²⁺ 결합 완충제(10 mM 헤페스, pH 7.4, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl₂)에 재현탁하고 세포 덩어리를 제거하기 위해 35 mm 스트레이너-캡핑된 12 x 75 mm 튜브(튜브 당 1 ㎖, 처리군 당 3개 튜브) 내로 분취한다. 그 다음, 튜브에 PI(10 ㎍/㎖)를 첨가한다. FACSCAN™ 유세포측정기 및 FACSCONVERT™ 셀퀘스트 소프트웨어(벡톤 딕킨슨)를 이용하여 샘플을 분석한다. 이로써, PI 섭취에 의해 측정된 통계학적으로 유의한 수준의 세포 사멸을 유도하는 항체 또는 면역접합체가 확인된다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody is tested for its ability to induce apoptosis in vitro. Analysis of the induction of apoptosis is well known in the art. In some embodiments, such assays are performed by, for example, administration of propidium iodide (PI), trypan blue (see Moore et al. (1995) Cytotechnology, 17: 1-11) Measure the loss of displayed film integrity. In an exemplary PI uptake assay, cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (D-MEM) (50:50 horses F-12 supplemented with 10% heat-inactivated FBS (hypoclone) and 2 mM L- Lt; / RTI > Thus, the assay is performed in the absence of complement and immune effector cells. The cells are seeded in a 100 x 20 mm dish at a density of 3 x 10 ⁶ per dish and allowed to attach overnight. The medium is removed and replaced with fresh medium alone, or medium containing various concentrations of antibody or immunoconjugate. Cells are incubated for 3 days. After treatment, the monolayer is washed with PBS and desorbed by trypsinization. The cells were then centrifuged at 1200 rpm for 5 minutes at 4 ° C and the pellet was resuspended in 3 ml of cold Ca ²⁺ binding buffer (10 mM HEPES, pH 7.4, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl ₂ ) Capsules are aliquoted into 35 mm strainer-capped 12 x 75 mm tubes (1 ml per tube, 3 tubes per treatment group) to remove turbid and cell clumps. PI (10 [mu] g / ml) is then added to the tube. Analyze the sample using a FACSCAN ™ flow cytometer and FACSCONVERT ™ Cell Quest software (Becton Dickinson). This confirms an antibody or immunoconjugate that leads to a statistically significant level of apoptosis as measured by PI uptake.

한 양태에서, 항-CD98 항체 또는 면역접합체는 시험관내에서 아폽토시스(프로그래밍된 세포 사멸)를 유도하는 그의 능력에 대해 시험된다. 아폽토시스를 유도하는 항체 또는 면역접합체에 대한 예시적인 분석은 예를 들면, 문헌(Zhang et al., BioTechniques 23: 525-531, 1997)에 기재된 아넥신 결합 분석이다. 아폽토시스를 유도하는 항체 또는 면역접합체에 대한 또 다른 예시적인 분석은 게놈 DNA의 뉴클레오좀간 분해를 검출하는 히스톤 DNA ELISA 비색 분석이다. 예를 들면, 세포 사멸 검출 ELISA 키트(로슈, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재)를 사용하여 이러한 분석을 수행할 수 있다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody or immunoconjugate is tested for its ability to induce apoptosis (programmed cell death) in vitro. An exemplary assay for antibodies or immunoconjugates that induce apoptosis is the Annexin binding assay described in, for example, Zhang et al., BioTechniques 23: 525-531, 1997. Another exemplary assay for an antibody or immunoconjugate that induces apoptosis is a histone DNA ELISA colorimetric assay that detects degradation of the nucleomes of genomic DNA. For example, such assays can be performed using a cell death detection ELISA kit (Roche, Palo Alto, Calif., USA).

상기 시험관내 분석들 중 임의의 시험관내 분석에서 사용되는 세포는 CD98을 천연적으로 발현하거나 CD98을 발현하도록 조작된 세포 또는 세포주를 포함한다. 이러한 세포는 동일한 조직으로부터 유래된 정상 세포에 비해 상대적으로 CD98을 과다발현하는 종양 세포를 포함한다. 이러한 세포는 CD98을 발현하는 세포주(종양 세포주를 포함함), 및 정상적으로 CD98을 발현하지 않지만 CD98을 코딩하는 핵산으로 형질감염된 세포주도 포함한다.Cells used in any of the in vitro assays in these in vitro assays include cells or cell lines that have been engineered to express CD98 naturally or to express CD98. These cells include tumor cells that overexpress CD98 relative to normal cells derived from the same tissue. Such cells include cell lines expressing CD98 (including tumor cell lines), and cell lines that do not normally express CD98 but are transfected with nucleic acid encoding CD98.

한 양태에서, 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체는 생체내에서 세포 생장 또는 증식을 억제하는 그의 능력에 대해 시험된다. 특정 실시양태에서, 항-CD98 항체 또는 이의 면역접합체는 생체내에서 종양 성장을 억제하는 그의 능력에 대해 시험된다. 생체 모델 시스템, 예컨대, 이종이식편 모델은 이러한 시험을 위해 사용될 수 있다. 예시적인 이종이식편 시스템에서, 인간 종양 세포는 적절하게 면역손상된 비-인간 동물, 예를 들면, SCID 마우스 내로 도입된다. 본 발명의 항체 또는 면역접합체는 동물에게 투여된다. 종양 성장을 억제하거나 감소시키는 상기 항체 또는 면역접합체의 능력이 측정된다. 상기 이종이식편 시스템의 특정 실시양태에서, 인간 종양 세포는 인간 환자의 종양 세포이다. 이종이식편 모델을 제조하는 데에 유용한 이러한 세포는 내생성 CD98을 발현하는 세포 및 CD98을 천연적으로 발현하는 세포를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 인간 종양 세포는 피하 주사 또는 이식에 의해 적절하게 면역손상된 비-인간 동물의 적절한 부위, 예컨대, 유선 지방 패드 내로 도입된다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody or immunoconjugate thereof is tested for its ability to inhibit cell growth or proliferation in vivo. In certain embodiments, the anti-CD98 antibody or immunoconjugate thereof is tested for its ability to inhibit tumor growth in vivo. Biometric model systems, such as xenograft models, may be used for such tests. In an exemplary xenograft system, human tumor cells are suitably introduced into immunologically impaired non-human animals, such as SCID mice. The antibody or immunoconjugate of the present invention is administered to an animal. The ability of the antibody or immunoconjugate to inhibit or reduce tumor growth is measured. In certain embodiments of the xenograft system, the human tumor cells are human tumor cells. Such cells useful for preparing xenograft models include, but are not limited to, cells that express endogenous CD98 and cells that naturally express CD98. In certain embodiments, the human tumor cells are introduced into a suitable site of a non-human animal, such as a wired fat pad, suitably immunocompromised by subcutaneous injection or implantation.

결합 분석 및 다른 분석Combination and other analyzes

한 양태에서, 항-CD98 항체는 그의 항원 결합 활성에 대해 시험된다. 예를 들면, 특정 실시양태에서, 항-CD98 항체는 세포의 표면 상에서 발현된 외생성 또는 내생성 CD98에 결합하는 그의 능력에 대해 시험된다. FACS 분석이 이러한 시험을 위해 사용될 수 있다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody is tested for its antigen binding activity. For example, in certain embodiments, the anti-CD98 antibody is tested for its ability to bind to exogenous or endogenous CD98 expressed on the surface of cells. FACS analysis can be used for these tests.

CD98에 대해 발생된 단일클론 항체들의 패널은 이들이 인식하는 에피토프에 기초하여 분류될 수 있다(에피토프 비닝으로서 공지된 과정). 에피토프 비닝은 전형적으로 또 다른 항체의 존재 하에서 항원에 결합하는 항체의 능력을 평가하는 경쟁 분석을 이용함으로써 수행된다. 예시적인 경쟁 분석에서, 고정된 CD98은 CD98에 결합하는 제1 표지된 항체, 및 CD98과의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험되는 제2 비-표지된 항체를 포함하는 용액에서 항온처리된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 CD98은 제1 표지된 항체를 포함하되 제2 비-표지된 항체를 포함하지 않는 용액에서 항온처리된다. 제1 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 항온처리된 후, 과량의 결합되지 않은 항체는 제거되고, 고정된 CD98과 회합된 표지의 양이 측정된다. 고정된 CD98과 회합된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 상대적으로 시험 샘플에서 실질적으로 감소되는 경우, 이것은 제2 항체가 CD98과의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 시사한다. 특정 실시양태에서, 고정된 CD98은 세포의 표면 상에 존재하거나 그의 표면 상에서 CD98을 발현하는 세포로부터 수득된 막 제제에 존재한다.Panels of monoclonal antibodies raised against CD98 can be classified based on the epitopes they recognize (a process known as epitope vining). Epitope-binning is typically performed by using competitive assays to assess the ability of an antibody to bind to an antigen in the presence of another antibody. In an exemplary competition assay, immobilized CD98 is conjugated to a solution comprising a first labeled antibody that binds to CD98 and a second non-labeled antibody that is tested for binding to CD98 for its ability to compete with the first antibody Lt; / RTI > The second antibody may be present in the hybridoma supernatant. As a control, immobilized CD98 is incubated in a solution containing the first labeled antibody but not the second unlabeled antibody. After incubation under conditions permitting binding of the first antibody to CD98, the excess unbound antibody is removed and the amount of label associated with immobilized CD98 is determined. If the amount of label associated with immobilized CD98 is substantially reduced in the test sample relative to the control sample, this suggests that the second antibody competes with the first antibody for binding to CD98. In certain embodiments, the immobilized CD98 is present on the surface of the cell or in a membrane preparation obtained from a cell expressing CD98 on its surface.

에피토프 비닝의 고속처리 방법도 당분야에서 공지되어 있다. 예를 들면, 단일클론 항체의 특징규명을 위한 다중화된 경쟁 항체 비닝 방법을 기술하는 문헌(Jia et al., J. Immunol. Methods 2004, 288(1-2): 91-98); 및 다중화된 쌍형성 분석에 의한 뮤린 단일클론 항체의 에피토프 비닝을 기술하는 문헌(Miller et al., J. Immunol. Methods 2011, 365(1-2): 118-25)을 참조한다.High-throughput processing of epitope vining is also known in the art. See, for example, Jia et al., J. Immunol. Methods 2004, 288 (1-2): 91-98), which describes a multiplexed competitive antibody bining method for characterization of monoclonal antibodies; And Miller et al., J. Immunol. Methods 2011, 365 (1-2): 118-25) describing epitope recognition of murine monoclonal antibodies by multiplexed pairing analysis.

에피토프 맵핑Epitope mapping

에피토프 맵핑은 그의 표적 단백질 항원 상에서 항원의 결합 부위 또는 에피토프를 확인하는 과정이다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체구조형 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질에서 연속 아미노산 서열에 의해 형성된다. 입체구조형 에피토프는 단백질 서열에서 불연속적이지만 그의 3차 구조로의 단백질의 폴딩 시 함께 존재하는 아미노산들로 형성된다.Epitope mapping is the process of identifying the binding site or epitope of an antigen on its target protein antigen. The antibody epitope may be a linear epitope or a conformational epitope. Linear epitopes are formed by consecutive amino acid sequences in proteins. A stereostructural epitope is discrete in the protein sequence but is formed from amino acids that coexist when folding the protein into its tertiary structure.

표적 단백질 항원 상에서 항체 에피토프를 맵핑하는 다양한 방법들이 당분야에서 공지되어 있다. 이들은 돌연변이유발 방법, 펩티드 스캐닝 방법, 디스플레이 방법, 질량 분광법을 포함하는 방법, 및 구조 결정을 포함한다.Various methods of mapping antibody epitopes on a target protein antigen are known in the art. These include mutagenesis methods, peptide scanning methods, display methods, methods involving mass spectroscopy, and structural determinations.

부위-지정된 돌연변이유발 방법은 단백질 서열을 따라 치환을 체계적으로 도입한 후 항체 결합에 대한 각각의 치환의 효과를 확인함으로써 중요한 아미노산을 확인하는 표적화된 부위-지정된 돌연변이유발을 포함한다. 이것은 문헌(Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085)에 기재된 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발", 또는 인간 CD98 내의 아미노산 잔기의 점 돌연변이유발의 일부 다른 형태에 의해 수행될 수 있다. 그러나, 돌연변이유발 연구는 CD98의 전체 3차원 구조에 중요하지만 항체-항원 접촉에 직접적으로 관여하지 않는 아미노산 잔기도 보여줄 수 있으므로, 이 방법을 이용함으로써 결정된 기능성 에피토프를 확인하기 위해 다른 방법이 필요할 수 있다.The site-directed mutagenesis method involves targeted site-directed mutagenesis that identifies important amino acids by systematically introducing substitutions along the protein sequence and then confirming the effect of each substitution on antibody binding. This can be carried out by the "alanine scanning mutagenesis" described in the literature (Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085), or some other form of point mutagenesis of amino acid residues in human CD98. However, mutagenesis studies may also show amino acid residues that are important for the overall three-dimensional structure of CD98 but not directly involved in antibody-antigen contact, and other methods may be required to identify functional epitopes determined by this method .

숏건(Shotgun) 돌연변이유발 맵핑은 표적 유전자에 대한 포괄적인 플라스미드-돌연변이 라이브러리를 사용하고, 이때 상기 라이브러리 내의 각각의 클론은 독특한 아미노산 돌연변이를 보유하고, 전체 라이브러리는 표적 단백질 내의 모든 아미노산을 커버한다. 돌연변이 라이브러리를 구성하는 클론은 마이크로플레이트에서 개별적으로 배열되고, 살아있는 포유동물 세포 내에서 발현되고, 관심있는 항체와의 면역반응성에 대해 시험된다. 항체 에피토프에 중요한 아미노산은 반응성의 손실에 의해 확인된 후, 에피토프를 가시화하도록 단백질 구조 상으로 맵핑된다. 분석을 자동화함으로써 신규 에피토프 맵을 수일 내지 수주 이내에 유도할 수 있다. 상기 기법은 포유동물 세포 내의 단백질의 천연 구조를 사용하기 때문에 선형 에피토프 구조 및 입체구조형 에피토프 구조 둘다가 복합체 단백질 상에 맵핑될 수 있게 한다(Paes et al., J. Am. Chem. Soc. 131 (20): 6952-6954 (2009); Banik and Doranz, Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28 (2010)).Shotgun mutagenesis mapping uses a comprehensive plasmid-mutation library for the target gene, wherein each clone in the library has a unique amino acid mutation, and the entire library covers all amino acids in the target protein. Clones that constitute the mutant library are individually arranged in microplates, expressed in living mammalian cells, and tested for immunoreactivity with antibodies of interest. Amino acids critical to the antibody epitope are identified by loss of reactivity and then mapped onto the protein structure to visualize the epitope. By automating the analysis, new epitope maps can be derived from days to weeks. Because this technique uses the native structure of proteins in mammalian cells, both the linear epitope structure and the stereostructured epitope structure can be mapped onto the complex protein (Paes et al., J. Am. Chem. Soc. 131 20: 6952-6954 (2009); Banik and Doranz, Genetic Engineering and Biotechnology News 3 (2): 25-28 (2010)).

항-CD98 항체에 의해 결합되는 에피토프는 펩티드 스캐닝 방법을 이용함으로써 확인될 수도 있다. 펩티드 스캐닝에서 표적 단백질 CD98의 중첩되는 절편들로부터의 짧은 펩티드 서열들의 라이브러리는 관심있는 항체에 결합하는 그들의 능력에 대해 시험된다. 상기 펩티드를 합성하고, 예를 들면, ELISA 또는 비아코어를 이용하여, 또는 칩 상에서 "펩스캔" 방법(국제 특허출원 공보 제WO 84/03564호 및 제WO 93/09872호)에서와 같이 다수의 고체상 스크리닝 방법들 중 임의의 방법(Reineke et al., Curr. Opin. Biotechnol. 12: 59-64, 2001)으로 상기 펩티드를 결합에 대해 스크리닝한다. 이러한 펩티드 스크리닝 방법은 일부 불연속 기능성 에피토프들, 즉 CD98 폴리펩티드 쇄의 일차 서열을 따라 인접하여 존재하지 않는 아미노산 잔기를 포함하는 기능성 에피토프를 검출할 수 없다. An epitope bound by an anti-CD98 antibody may be identified by using a peptide scanning method. Libraries of short peptide sequences from overlapping fragments of the target protein CD98 in peptide scanning are tested for their ability to bind to the antibody of interest. The peptides can be synthesized and used in a number of ways, such as, for example, in ELISA or via core, or on a chip on a "pesccan" method (WO 84/03564 and WO 93/09872) The peptide is screened for binding by any of the solid phase screening methods (Reineke et al., Curr. Opin. Biotechnol. 12: 59-64, 2001). Such peptide screening methods are incapable of detecting some discrete functional epitopes, i. E., Functional epitopes comprising amino acid residues that are not contiguous along the primary sequence of the CD98 polypeptide chain.

CLIPS(스카폴드 상으로의 펩티드의 화학적 연결)로서 지칭되는 최근에 개발된 기술을 이용하여 입체구조형 에피토프를 맵핑할 수 있다. 스카폴드 펩티드가 온전한 단백질의 상응하는 서열과 동일한 공간 구조를 채택할 수 있도록 펩티드의 느슨한 말단을 합성 스카폴드 상에 부착시킨다. 항원 결합에 대해 분석될 수 있는 입체구조형 에피토프를 생성하도록 CLIPS 기술을 이용하여 선형 펩티드를 환형 구조('단일-루프' 포맷)로 고정시키고 단백질 결합 부위의 상이한 부분들을 함께 존재하게 한다('이중-루프', '삼중-루프' 포맷 등)(미국 특허 제7,972,993호).Lt; RTI ID = 0.0 > CLIPS < / RTI > (the chemical linkage of peptides onto the scaffold) can be used to map the conformational epitopes. The loose ends of the peptides are attached to the synthetic scaffolds so that the scaffold peptides can adopt the same spatial structure as the corresponding sequence of the intact protein. The CLIPS technique is used to immobilize linear peptides in a cyclic structure ('single-loop' format) and to coexist with different portions of the protein binding site ('double-loop' format) to generate a conformational epitope that can be analyzed for antigen binding Loop, " triple-loop " format, etc.) (U.S. Patent No. 7,972,993).

예를 들면, 전술된 파지 디스플레이, 미생물 디스플레이 및 리보좀/mRNA 디스플레이를 포함하는 디스플레이 기법을 이용하여 본 발명의 항체에 의해 결합된 에피토프를 맵핑할 수도 있다. 이들 방법들에서, 펩티드 단편의 라이브러리를 파지 또는 세포의 표면 상에서 디스플레이한다. 그 다음, 선택적 결합 분석을 이용하여 이들 단편들에 대한 mAb들을 스크리닝함으로써 에피토프를 맵핑한다. 파지 디스플레이를 사용하여 수득한 선형 친화성-선택된 펩티드에 기초한 입체구조형 에피토프의 예측을 가능하게 하는 다수의 컴퓨터 수단이 개발되었다(Mayrose et al., Bioinformatics 23: 3244-3246, 2007). 파지 디스플레이에 의한 입체구조형 에피토프의 검출 방법도 이용될 수 있다. 미생물 디스플레이 시스템도 세포 표면 상에서 적절하게 폴딩된 항원성 단편을 발현시켜 입체구조형 에피토프를 확인하는 데에 이용될 수 있다(Cochran et al., J. Immunol. Meth. 287: 147-158, 2004; Rockberg et al., Nature Methods 5: 1039-1045, 2008).For example, epitopes bound by antibodies of the present invention may be mapped using display techniques including phage display, microbial display and ribosome / mRNA display described above. In these methods, a library of peptide fragments is displayed on the surface of the phage or cell. The epitopes are then mapped by screening the mAbs for these fragments using selective binding assays. A number of computer tools have been developed that allow the prediction of a conformational epitope based on linear affinity-selected peptides obtained using phage display (Mayrose et al., Bioinformatics 23: 3244-3246, 2007). A method for detecting a conformational epitope by phage display can also be used. Microbial display systems can also be used to identify appropriately folded antigenic fragments on cell surfaces to identify conformational epitopes (Cochran et al., J. Immunol. Meth. 287: 147-158, 2004; Rockberg et al., Nature Methods 5: 1039-1045, 2008).

단백질용해 및 질량 분광법을 포함하는 방법도 항체 에피토프를 확인하는 데에 이용될 수 있다(Baerga-Ortiz et al., Protein Sci. 2002 June; 11(6): 1300-1308). 한정된 단백질용해에서, 항원은 항체의 존재 및 부재 하에서 상이한 단백질분해효소에 의해 절단되고, 단편은 질량 분광측정에 의해 확인된다. 에피토프는 항체의 결합 시 단백질용해로부터 보호되게 되는 항원의 영역이다(Suckau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9848-9852, 1990). 추가 단백질용해-기초 방법은 예를 들면, 선택적 화학적 변경(Fiedler et al., Bioconjugate Chemistry 1998, 9(2): 236-234, 1998), 에피토프 절단(Van de Water et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85(3): 229-235, 1997), 및 최근에 개발된 수소-이중수소(H/D) 교환 방법(Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28, 2010)을 포함한다.Methods involving protein solubilization and mass spectrometry can also be used to identify antibody epitopes (Baerga-Ortiz et al., Protein Sci. 2002 June; 11 (6): 1300-1308). In limited protein lysis, the antigen is cleaved by different proteolytic enzymes in the presence and absence of antibody, and the fragments are identified by mass spectrometry. The epitope is the region of the antigen that is protected from protein lysis upon binding of the antibody (Suckau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9848-9852, 1990). Additional protein lysis-based methods can be used, for example, by selective chemical modifications (Fiedler et al., Bioconjugate Chemistry 1998, 9 (2): 236-234, 1998), epitope cleavage (Van de Water et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85 (3): 229-235, 1997) and a recently developed hydrogen-double hydrogen (H / D) exchange method (Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology News 3 28, 2010).

본 발명의 항체에 의해 결합된 에피토프는 구조적 방법, 예컨대, X-선 결정 구조 확인(예를 들면, 국제 특허출원 공보 제WO 2005/044853호), 분자 모델링 및 핵 자기 공명(NMR) 분광법(자유로울 때 및 관심있는 항체와의 복합체로 결합되어 있을 때 IL-23R에서 불안정한 아미드 수소의 H-D 교환 속도의 NMR 측정을 포함함)에 의해 확인될 수도 있다(Zinn-Justin et al. (1992) Biochemistry 31:11335-11347; Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32:6884-6891).Epitopes bound by the antibodies of the present invention can be identified by structural methods such as X-ray crystallographic structure identification (e.g., International Patent Application Publication No. WO 2005/044853), molecular modeling and nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy (Zinn-Justin et al. (1992) Biochemistry 31: < RTI ID = 0.0 > Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32: 6884-6891).

본 발명의 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프에 결합하는 추가 항체는 예를 들면, CD98에 대해 발생된 항체를 에피토프와의 결합에 대해 스크리닝함으로써, 에피토프 서열을 포함하는 인간 CD98의 단편을 포함하는 펩티드를 사용하여 동물을 면역화시킴으로써, 또는 파지 디스플레이를 이용하여 에피토프 서열과의 결합에 대해 항체를 선택함으로써 수득될 수 있다. 동일한 기능성 에피토프에 결합하는 항체들은 유사한 생물학적 활성, 예컨대, CD98의 생물학적 활성의 차단을 나타낼 것으로 예상되고, 이러한 활성은 항체의 기능성 분석에 의해 확인될 수 있다.Additional antibodies that bind to the same epitope as the epitope bound by the antibody of the present invention include, for example, those that comprise fragments of human CD98 comprising an epitope sequence, such as by screening antibodies raised against CD98 for binding to an epitope For example, by immunizing an animal with a peptide, or by selecting an antibody for binding to an epitope sequence using phage display. Antibodies that bind to the same functional epitope are expected to exhibit similar biological activity, e. G., Blockade of the biological activity of CD98, and such activity can be ascertained by functional analysis of the antibody.

추가 활성 분석Additional activity analysis

한 실시양태에서, 본 발명의 항-CD98 항체는 CD98의 생물학적 활성을 억제하는 길항제 항체이다. 본 발명의 항-CD98 항체는 이들이 CD98의 생물학적 활성, 예를 들면, 경쇄와의 결합을 억제하는지를 확인하기 위해 분석될 수 있다. 본 발명의 CD98 항체가 경쇄와의 결합을 억제하는지를 확인하기 위해, 암세포주에서 아미노산 섭취를 억제하는 CD98 항체의 능력을 문헌(Kim et al., Biochim. Biophys. Acta 1565: 112-122, 2002)에 기재된 방법에 따라 측정한다.In one embodiment, the anti-CD98 antibody of the invention is an antagonist antibody that inhibits the biological activity of CD98. The anti-CD98 antibodies of the present invention can be analyzed to ascertain whether they inhibit the biological activity of CD98, for example, binding to light chains. To confirm whether the CD98 antibody of the present invention inhibits binding to a light chain, the ability of CD98 antibody to inhibit amino acid uptake in cancer cell lines was examined (Kim et al., Biochim. Biophys. Acta 1565: 112-122, 2002) . &Lt; / RTI >

한 양태에서, 정제된 항-CD98 항체는 N-말단 서열분석, 아미노산 분석, 비-변성 크기 배제 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 질량 분광측정, 이온 교환 크로마토그래피 및 파파인 분해를 포함하나 이들로 한정되지 않는 일련의 분석에 의해 더 특징규명될 수 있다.In one embodiment, the purified anti-CD98 antibodies include, but are not limited to, N-terminal sequencing, amino acid analysis, non-denaturing size exclusion high pressure liquid chromatography (HPLC), mass spectrometry, ion exchange chromatography and papain digestion Can be further characterized by a series of analyzes that do not.

한 실시양태에서, 본 발명은 모든 이펙터 기능이 아니라 일부 이펙터 기능을 보유하기 때문에 생체내 항체의 반감기가 중요하지만 특정 이펙터 기능(예컨대, 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 많은 적용분야를 위한 바람직한 후보가 되는 변경된 항체를 고려한다. 특정 실시양태에서, 상기 항체의 Fc 활성은 원하는 성질만이 유지된다는 것을 확인하기 위해 측정된다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체가 FcγR 결합을 결여하지만(이로써 ADCC 활성을 결여할 가능성이 있음) FcRn 결합 능력을 보유한다는 것을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하는 시험관내 분석의 일례는 미국 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재되어 있다. 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 천연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들면, 동물 모델, 예컨대, 문헌(Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998))에 개시된 동물 모델에서 평가될 수 있다. C1q 결합 분석은 항체가 C1q에 결합할 수 없으므로 CDC 활성을 결여한다는 것을 확인하기 수행될 수도 있다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면, 문헌(Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996))에 기재된 CDC 분석을 수행할 수 있다. 당분야에서 공지된 방법을 이용하여 FcRn 결합 및 생체내 제거/반감기 측정도 수행할 수 있다. In one embodiment, the present invention contemplates that although the half-life of an antibody in vivo is important because it possesses some effector function rather than all effector functions, a desirable candidate for many applications where certain effector functions (e.g., complement and ADCC) Lt; / RTI > In certain embodiments, the Fc activity of the antibody is determined to ensure that only the desired properties are retained. In vitro and / or in vivo cytotoxicity assays can be performed to confirm the reduction / depletion of CDC and / or ADCC activity. For example, Fc receptor (FcR) binding assays can be performed to confirm that the antibody lacks Fc [gamma] R binding (thereby potentially lacking ADCC activity) but retains FcRn binding capacity. One example of an in vitro assay that assesses ADCC activity of a molecule of interest is described in U.S. Patent No. 5,500,362 or 5,821,337. Effector cells useful for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells. Alternatively or additionally, the ADCC activity of the molecule of interest can be determined in vivo, for example, in animal models such as those described in Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998) Can be evaluated. Clq binding assays may be performed to confirm that the antibody lacks CDC activity because it is unable to bind to C1q. To assess complement activation, a CDC assay as described in, for example, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996) can be performed. FcRn binding and in vivo elimination / half-life measurements can also be performed using methods known in the art.

상기 본 발명이 명확한 이해를 목적으로 설명 및 예에 의해 다소 상세히 기재되어 있지만, 상기 설명 및 예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로서 해석되어서는 안 된다. 본원에서 인용된 모든 특허 및 과학 문헌들의 개시는 전체적으로 명확히 참고로 도입된다.Although the foregoing invention has been described in some detail by way of illustration and example for purposes of clarity of understanding, the foregoing description and examples should not be construed as limiting the scope of the invention. The disclosures of all patents and scientific references cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety for clarity.

실시예Example

하기 실시예는 본 발명의 방법 및 조성물의 예이다. 상기 제공된 일반적인 설명을 고려할 때 다양한 다른 실시양태들이 실시될 수 있다는 것이 이해된다.The following examples are illustrative of the methods and compositions of the present invention. It is to be understood that various other embodiments may be practiced in light of the general description provided above.

실시예 1: 급성 골수성 백혈병(AML) 종양 세포의 표면 상의 CD98의 확인Example 1: Identification of CD98 on the surface of acute myelogenous leukemia (AML) tumor cells

총 16개의 일차 AML 샘플들을 프레드 허친슨 암 연구 센터(FHCRC)로부터 수득하였다. 건강한 공여자들의 11개 샘플들을 분석하였다. 개별 AML 샘플의 품질을 모니터링하기 위해, AML 모세포의 헤마톡실린 및 에오신 염색을 수행하였다. 75% 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플만을 분석하였다. 추가로, 빌링스 클리닉(Billings Clinic) 또는 플로리다 대학으로부터 수득된 23개의 일차 만성 림프구성 백혈병(CLL) 샘플들, 및 협력 인간 조직 네트워크(CHTN) 또는 국립 질환 연구 인터체인지(NDRI)로부터 수득된 22개의 정상 인접 결장 대조군 샘플들에 대한 분석을 수행하였다. 샘플 단리 동안 세포 생존력을 최대로 유지하기 위해 샘플 취급을 최적화하였다. 세포 통합성을 손상시키지 않으면서 효율적인 표지 부착이 가능하도록 AML, CLL 및 CRC 샘플에 대한 최적 표지 부착 시간을 측정하였다.A total of 16 primary AML samples were obtained from the Fred Hutchinson Cancer Research Center (FHCRC). Eleven samples of healthy donors were analyzed. Hematoxylin and eosin staining of AML cells was performed to monitor the quality of individual AML samples. Only samples containing 75% or more tumor cells were analyzed. In addition, there were 23 primary chronic lymphocytic leukemia (CLL) samples obtained from the Billings Clinic or the University of Florida, and 22 normal samples obtained from the Collaborative Human Tissue Network (CHTN) or the National Disease Research Interchange (NDRI) Analysis of adjacent colon control samples was performed. Sample handling was optimized to maximize cell viability during sample isolation. Optimal label attachment times for AML, CLL and CRC samples were measured to enable efficient label attachment without compromising cellular integrity.

표면 태깅된 항원 프로파일링(sTAg)을 이용하여 16개의 코어 AML 샘플들, 5개의 골수 단핵세포(BMMC) 대조군 및 6개의 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 대조군 샘플들, 20개의 코어 CLL 샘플들, 27개의 CRC 샘플들, 및 22개의 정상 인접 결장 샘플들에서 세포 상의 표면 단백질의 레퍼토리를 확인하고 정량적으로 프로파일링하였다. 온전한 일차 종양 세포의 AML 종양 세포 막과 관련된 단백질의 세포외 도메인을 화학적으로 태깅한 후 고체상 친화성 수지를 사용하여 태깅된 단백질을 크로마토그래피로 농축하였다. 용출된 단백질을 후술된 질량 분광측정 분석 전에 -80℃에서 저장하였다.Sixteen core AML samples, five bone marrow mononuclear cells (BMMC) controls and six peripheral blood mononuclear cell (PBMC) control samples, 20 core CLL samples, 27 with a surface tagged antigen profiling (sTAg) The repertoires of surface proteins on the cells in the CRC samples, and in the 22 normal adjacent colon samples were identified and quantitatively profiled. After chemically tagging the extracellular domain of the protein associated with the AML tumor cell membrane of intact primary tumor cells, the tagged protein was concentrated by chromatography using a solid phase affinity resin. The eluted proteins were stored at -80 캜 before the mass spectrometry analysis described below.

sTAg 방법에 의해 농축된 단백질을 고해상 숏건 액체 크로마토그래피 직렬 질량 분광측정(MS)을 이용하여 확인하고 정량하였다. 선형 이온 포획의 민감성과, 나노유동 액체 크로마토그래피 장치에 커플링된 혁신적인 오비트랩 질량 분석기(Olsen et al., Mol. Cell Proteomics 8: 2759-2769, 2009)에 의해 부여된 고해상 및 질량 정확성을 겸비하는 하이브리드 써모피셔 LTQ-오비트랩 벨로스 질량 분광측정기를 숏건-기초 하의상달 단백질체학(shotgun-based, bottoms-up proteomics)에 이용하여 AML 세포 표면 농축 분획 중의 단백질의 본질 및 정량적 존재도 측정치를 확인하였다(Yates et al., Annu. Rev. Biomed. Eng. 11: 49-79, 2009). 펩티드 질량 및 단편화 패턴이 질량 분광측정기에 의해 동역학적으로 기록되었기 때문에 농축된 표면 단백질의 트립신 분해물을 온라인 나노유동 액체 크로마토그래피를 통해 소수성으로 분리하였다. 펩티드 및 단백질 본질을 확인하기 위해, 신속 프로세싱 소서러(Sorcerer) 2 플랫폼(Lundgren et al., Curr. Protoc. Bioinformatics, Chapter 13: Unit 13.3, 2009) 상에서 실시된 SEQUEST 알고리즘을 이용하여 미처리 MS 데이터를 프로세싱하여, 실험적 단편화 패턴과 인간 프로테옴으로부터 인-실리코 확인된 단편화 패턴 사이의 최적-적합 매치를 확인하였다. 펩티드프로펫(PeptideProphet)(Keller et al., Anal. Chem. 74: 5383-5392, 2002) 및 프로테인프로펫(ProteinProphet)(Nesvizhskii et al., Anal. Chem. 75: 4646-4658, 2003) 소프트웨어 수단을 이용하여 발생된 매치를 통계학적으로 검증함으로써 가장 낮은 가능한 가짜 발견율(FDR)을 보장하여 확실히 확인된 단백질만이 후보 풀 내에 포함되도록 보장하였다.The protein concentrated by the sTAg method was identified and quantified using high resolution shorts liquid chromatography inline mass spectrometry (MS). The sensitivity of linear ion capture and the high resolution and mass accuracy conferred by the innovative Ovitrap mass spectrometer (Olsen et al., Mol. Cell Proteomics 8: 2759-2769, 2009) coupled to a nanofluidic liquid chromatographic apparatus The hybrid thermofixer LTQ-Orbit trap BELLOS mass spectrometer was used for shotgun-based bottoms-up proteomics to determine the nature and quantitative presence of protein in the AML cell surface enriched fraction (Yates et al., Annu. Rev. Biomed. Eng. 11: 49-79, 2009). Since the peptide mass and fragmentation pattern were dynamically recorded by mass spectrometry, trypsin digests of concentrated surface proteins were separated by hydrophobic on-line nano-flow liquid chromatography. To verify the identity of peptides and proteins, the raw MS data was processed using the SEQUEST algorithm implemented on the Rapid Processing Sorcerer 2 platform (Lundgren et al., Curr. Protoc. Bioinformatics, Chapter 13: Unit 13.3, 2009) To confirm an optimal-fit match between the experimental fragmentation pattern and the in-silico confirmed fragmentation pattern from the human proteome. (Keller et al., Anal. Chem. 74: 5383-5392, 2002) and ProteinProphet (Nesvizhskii et al., Anal. Chem. 75: 4646-4658, 2003) By statistically verifying the matches generated using this method, we ensure the lowest possible false detection rate (FDR), ensuring that only the confirmed protein is included in the candidate pool.

sTAg 샘플 중의 확인된 단백질의 상대적인 정량적 수준을 분광 카운팅 방법을 이용하여 측정하였다(Neilson et al., Proteomics 11: 535-553, 2011). 분광 카운팅은 각각의 단백질로부터의 펩티드와 관련되어 있는 배정된 (양성으로 확인된) 스펙트럼의 수가 원래의 혼합물 중의 그 단백질의 상대적인 존재도와 강한 상관관계를 갖는다는 실험적 입증에 기초한다(Liu et al., Anal. Chem. 76:4193-4201, 2004). SEQUEST에 의해 검색된 질량 분광측정 데이터의 결과를 디스플레이하고 분류하고 여과하는 스카폴드(프로테옴 소프트웨어) 및 프로테오IQ(NuSep)를 비롯한 단백질체학 분석 소프트웨어 플랫폼으로부터, 확인된 펩티드의 스펙트럼 카운트를 수득하였다. 미처리 스펙트럼 카운트를 % 표준화된 스펙트럼 존재도 인자(%NASF) 값(Zybailov et al., J. Proteome Res. 5: 2339-2347, 2006)으로 변환하여 단백질 길이의 차이 및 샘플 크기의 가변성을 해결하였다. 정량 FACS를 이용하여 일차 종양 세포 표면 발현의 sTAg 질량 분광측정-기초 단백질체학 프로파일링의 독립적인 외부 확인 척도로서 단백질체학 측정치를 검증하기 위해 선택된 단일클론 항체를 사용하였다.Relative quantitative levels of identified proteins in the sTAg sample were determined using a spectrophotometric method (Neilson et al., Proteomics 11: 535-553, 2011). Spectral counting is based on experimental evidence that the number of assigned (positively identified) spectra associated with peptides from each protein is strongly correlated with the relative presence of that protein in the original mixture (Liu et al. , Anal. Chem. 76: 4193-4201, 2004). Spectral counts of identified peptides were obtained from protein bacteriological analysis software platforms, including scaffold (Proteom Software) and Proteo IQ (NuSep), which displays, classifies and filters the results of mass spectrometry data retrieved by SEQUEST. The untreated spectral counts were converted to% normalized spectral presence factor (% NASF) values (Zybailov et al., J. Proteome Res. 5: 2339-2347, 2006) to resolve variability in protein length differences and sample size . Selected monoclonal antibodies were used to validate protein body measurements as an independent external confirmatory measure of sTAg mass spectrometry-based proteomic profiling of primary tumor cell surface expression using quantitative FACS.

sTAg를 사용하여, 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 이종이량체 II형 경막 당단백질 CD98이 AML, CLL 및 CRC 종양 세포의 표면 상에서 고밀도로 존재한다는 것을 확인하였다. 도 1에 나타낸 바와 같이, sTAg를 사용하여 0.11의 평균 %NSAF를 갖는 16개의 일차 AML 샘플들 중 7개 샘플들 및 0.15의 평균 %NSAF를 갖는 20개의 일차 CLL 샘플들 중 20개의 샘플들에서 CD98을 확인하였다. 각각 0.05 및 0.06의 평균 %NSAF를 갖는 5개의 골수 단핵세포(BMMC) 샘플들 중 5개의 샘플들 및 6개의 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 샘플들 중 5개의 샘플들에서 CD98을 확인하였다. 나아가, 0.10의 평균 %NSAF를 갖는 27개의 일차 CRC 샘플들 중 11개의 샘플들 및 0.01 미만의 평균 %NSAF를 갖는 단지 1개의 정상 인접 결장 샘플에서 CD98을 확인하였다. 이 분석에 기초할 때, CD98은 관련 정상 대조군에 비해 상대적으로 환자로부터 유래된 AML, CLL 및 CRC 일차 종양 표본의 상당한 부분 상에서 실질적으로 농축되어 있다.Using sTAg, it was confirmed that the heterodimeric type II transmembrane II glycoprotein CD98 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 was present at high density on the surface of AML, CLL and CRC tumor cells. As shown in Figure 1, using sTAg, 20 of the 20 primary CLL samples with 7 samples of 16 primary AML samples with an average% NSAF of 0.11 and an average% NSAF of 0.15 and CD98 Respectively. CD98 was identified in five of five bone marrow mononuclear cell (BMMC) samples and five in six peripheral blood mononuclear cell (PBMC) samples with an average% NSAF of 0.05 and 0.06, respectively. Further, CD98 was identified in only one normal adjacent colon sample with 11 samples out of 27 primary CRC samples with an average% NSAF of 0.10 and an average% NSAF below 0.01. Based on this analysis, CD98 is substantially enriched on a significant portion of the patient-derived AML, CLL and CRC primary tumor specimens relative to the relevant normal control.

실시예 2: 종양에서 CD98의 확인Example 2: Identification of CD98 in tumor

항-CD98 단일클론 항체 8-34B(실시예 3 참조) 및 동종형 대조군 항체 HB-121을 사용하여 항체 적정 실험을 수행함으로써 신호의 최소 배경 및 최대 검출을 가능하게 하는 희석비를 확립하였다. 1:50, 1:100, 1:200 및 1:400에서 증기-기초 항원 회수(pH 6.0 시트레이트 완충제)를 이용하여 포르말린-고정된 및 파라핀-포매된(FFPE) 조직 또는 새로 동결된 조직에 대한 연속 희석을 수행하였다. 동결된 대조군 세포주(F244 및 F244-P) 및 포르말린-고정된 대조군 세포주(F244, RM 및 F244-P)는 이제니카(Igenica)에 의해 제공되었고 라이프스판(LifeSpan)에 의해 제조되었다. 포르말린-고정된 및 파라핀-포매된 조직에 대한 연구를 위해 1:20 및 1:50의 8-34B의 희석비를 선택한 반면, 새로 동결된 조직에 대한 연구를 위해 1:400의 8-34B의 희석비를 선택하였다. Antibody titration experiments were performed using anti-CD98 monoclonal antibody 8-34B (see Example 3) and homologous control antibody HB-121 to establish dilution ratios that allow for minimal background and maximal detection of the signal. (FFPE) or freshly frozen tissue using steam-based antigen retrieval (pH 6.0 citrate buffer) at 1:50, 1: 100, 1: 200 and 1: Serial dilutions were performed. Frozen control cell lines (F244 and F244-P) and formalin-fixed control cell lines (F244, RM and F244-P) were now provided by Igenica and manufactured by LifeSpan. For studies on formalin-fixed and paraffin-embedded tissues, a dilution ratio of 8-34B of 1:20 and 1:50 was chosen, while 1: 400 of 8-34B Dilution ratio was selected.

주된 검출 시스템은 푸크시아-착색된 기탁물을 생성하는 데에 사용된 벡터 레드 기질 키트(SK-5100)와 함께 벡터 항-마우스 이차 항체(BA-2000) 및 벡터 ABC-AP 키트(AK-5000)로 구성되었다. 또한, 조직 항원이 보존되었고 면역조직화학적 분석을 위해 접근될 수 있었다는 것을 확인하기 위해 조직을 (CD31 및 비멘틴에 대한) 양성 대조군 항체로 염색하였다. CD31 및 비멘틴 염색에 대해 양성을 나타내는 조직만을 나머지 연구를 위해 선택하였다.The primary detection system was a vector anti-mouse secondary antibody (BA-2000) and a vector ABC-AP kit (AK-5000) together with the vector red substrate kit (SK-5100) used to generate the fucsia- ). Tissues were also stained with positive control antibodies (for CD31 and Vimentin) to confirm that the tissue antigens were preserved and accessible for immunohistochemical analysis. Only tissues showing positive for CD31 and vimentin staining were selected for the remainder of the study.

1:20 및 1:50의 희석비에서 항체 8-34B는 포르말린-고정된 및 파라핀-포매된 조직 상에서 15개의 악성 흑색종 중 10개의 악성 흑색종 및 18개의 폐암종 중 4개의 폐암종 내에서 양성 염색을 보였다. 추가로, 1:400의 희석비에서 항체 8-34B는 6개의 동결된 폐암종 샘플들 중 6개의 샘플들 및 2개의 동결된 흑색종 샘플들 중 2개의 샘플들의 양성 염색을 보였다.Antibodies 8-34B at dilution ratios of 1: 20 and 1: 50 were found in 10 of the 15 malignant melanomas on formalin-fixed and paraffin-embedded tissues and in 4 of 18 lung carcinomas Positive stain. In addition, antibody 8-34B at a dilution ratio of 1: 400 showed positive staining of 6 samples of 6 frozen lung cancer species samples and 2 of 2 frozen melanoma samples.

실시예 3: CD98에 대한 단일클론 항체의 제조Example 3: Preparation of monoclonal antibodies against CD98

단일클론 항체를 문헌("Antibodies A Laboratory Manual" (Harlow and Lane 1988 CSH Press))에 기재된 일반적인 방법에 따라 제조하였다. 타코닉 팜스(Taconic Farms)로부터 구입된 수컷 129S6/SvEv 마우스를 면역화에 사용하였다. 10⁶개의 인간 CD98(huCD98) 발현 종양 세포를 사용하여 마우스를 옆구리에서 피하 주사를 통해 면역화하였다. 면역화 후 39일째 날, 5백만 개의 huCD98 발현 종양 세포를 사용하여 마우스를 복강내로 부스팅하였다. 42일째 날, 비장을 회수하였다. 개별 비장세포를 준비하고 문헌("Antibodies A Laboratory Manual" (Harlow and Lane 1988 CSH Press))에 일반적으로 기재된 PEG-기초 방법을 이용하여 CRL-2016 골수종 세포(ATCC)와 융합시켜 하이브리도마를 확립하였다.Monoclonal antibodies were prepared according to the general methods described in the " Antibodies A Laboratory Manual "(Harlow and Lane 1988 CSH Press). Male 129S6 / SvEv mice purchased from Taconic Farms were used for immunization. 10 mice were immunized via lateral subcutaneous injection using ⁶ human CD98 (huCD98) expressing tumor cells. On day 39 after immunization, mice were boosted intraperitoneally using 5 million huCD98 expressing tumor cells. On day 42, the spleen was recovered. Individual splenocytes were prepared and fused with CRL-2016 myeloma cells (ATCC) using the PEG-based method described generally in the "Antibodies A Laboratory Manual" (Harlow and Lane 1988 CSH Press) Respectively.

하이브리도마를 384웰 조직 배양 플레이트에서 생장시켰고, huCD98을 인식하는 항체의 생성에 대해 개별 웰의 상청액을 ELISA로 스크리닝하였다. 그 다음, 양성 웰을 48웰 플레이트로 옮기고 증폭시켰고, ELISA로 huCD98 결합을 확인하기 위해 상청액을 수집하였다. 단일 하이브리도마 세포를 96웰 플레이트의 웰에 플레이팅함으로써 단일클론 항-huCD98 항체를 생성하는 확인된 독특한 클론으로서 항-huCD98 항체를 생성하는 개별 하이브리도마를 확립하였다. 이들 세포들을 콜로니로 생장시켰고, 이들 개별 콜로니의 상청액을 ELISA로 스크리닝하여 huCD98에 결합하는 단일클론 항체를 확인하였다. 클론 하이브리도마를 프리스탄으로 처리된 Balb/C 마우스 내로 주사하여 복수를 생성하였다. 써모 사이언티픽에 의해 공개된 일반적인 항체 정제 프로토콜(제품 설명서 #21001)에 따라 감마바인드(Gammabind) 세파로스(지이 헬쓰케어 제품 코드 17-0885-01), 단백질 A IgG 결합 완충제(써모 사이언티픽 파트 번호 21001) 및 IgG 용출 완충제(써모 사이언티픽 파트 번호 21004)를 사용하여 복수를 수집하고 정제하였다.Hybridomas were grown on 384-well tissue culture plates and the supernatant of individual wells was screened by ELISA for the generation of antibodies recognizing huCD98. The positive wells were then transferred to a 48 well plate and amplified and the supernatant was collected to confirm huCD98 binding by ELISA. Individual hybridomas were established that produced anti-HuCD98 antibodies as identified unique clones that produced monoclonal anti-huCD98 antibodies by plating single hybridoma cells into wells of 96 well plates. These cells were grown with a colony, and the supernatants of these individual colonies were screened by ELISA to identify monoclonal antibodies that bind to huCD98. Clonal hybridomas were injected into Pristane treated Balb / C mice to generate duplicates. Gammabind Sepharose (Gly Healthcare Product Code 17-0885-01), Protein A IgG binding buffer (Thermo Scientific Part Number < RTI ID = 0.0 > 21001) and IgG elution buffer (Thermo Scientific Part No. 21004).

항체 8-34B의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequences and amino acid sequences for the heavy chain variable region and the light chain variable region of antibody 8-34B are shown below:

8-34B 중쇄 가변 영역8-34B heavy chain variable region

8-34B 경쇄 가변 영역8-34B light chain variable region

항체 18-2A 2.2의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequences and amino acid sequences for the heavy chain variable region and the light chain variable region of antibody 18-2A 2.2 are shown below:

18-2A 2.2 중쇄 가변 영역18-2A 2.2 heavy chain variable region

18-2A 2.2 경쇄 가변 영역18-2A 2.2 Light chain variable region

항체 18-2A 7.1의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequences and amino acid sequences for the heavy chain variable region and the light chain variable region of antibody 18-2A 7.1 are shown below:

18-2A 7.1 중쇄 가변 영역18-2A 7.1 heavy chain variable region

18-2A 7.1 경쇄 가변 영역18-2A 7.1 Light chain variable region

항체 1-47C의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequence and amino acid sequence for the heavy chain variable region and the light chain variable region of antibody 1-47C are shown below:

1-47C 중쇄 가변 영역1-47C heavy chain variable region

1-47C 경쇄 가변 영역1-47C light chain variable region

항체 1-115A의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequences and amino acid sequences for the heavy chain variable region and the light chain variable region of antibody 1-115A are shown below:

1-115A 중쇄 가변 영역1-115A heavy chain variable region

1-115A 경쇄 가변 영역1-115A light chain variable region

실시예 4: 단일클론 항체의 동종형분류 및 비닝Example 4 Homologous Classification and Binding of Monoclonal Antibodies

잭슨 이뮤노로직칼스(Jackson Immunologicals)로부터 구입된 동종형 특이적 이차 항체(염소 x IgG1 HRP - 제품# 115-035-206, 염소 x IgG2a HRP - 제품# 115-035-206, 염소 x IgG2b HRP - 제품# 115-035-207, 염소 x IgG3 HRP - 제품# 115-035-209)를 사용하여 ELISA 상에서 검출함으로써 huCD98을 인식하는 항체를 함유하는 개별 하이브리도마 상청액을 동종형에 대해 평가하였다.Specific IgG2a HRP - product # 115-035-206, chlorine x IgG2b HRP - product # 115-035-206, goat x IgG2b HRP - product # 115-035-206, purchased from Jackson Immunologicals, Individual hybridoma supernatants containing antibodies recognizing huCD98 were evaluated for homologs by detection on ELISA using the product # 115-035-207, Chloro x IgG3 HRP-product # 115-035-209.

경쟁 ELISA를 수행하여 경쟁 결합 bin을 확립하였다. 개별 항-huCD98 동종형분류된 항체 함유 하이브리도마 상청액이 ELISA 플레이트의 개별 웰에서 huCD98에 결합하게 하였다. 1시간 후, 웰을 세척하고 4% 파라포름알데하이드를 사용하여 고정시켰다. 그 다음, 개별 항-huCD98 동종형분류된 항체(상이한 동종형의 항체) 함유 하이브리도마 상청액이 1시간 동안 ELISA 플레이트의 개별 웰에서 huCD98에 결합하게 하였다. 세척 후, 웰을 특이적 이차 항체(잭슨 이뮤노로직칼스 염소 x IgG2a HRP - 제품# 115-035-206)와 함께 항온처리하고 수퍼시그날(Supersignal) ELISA 피코 화학발광 기질(써모 사이언티픽 - 제품# 37069)로 검출하였다. IgG1의 존재 하에서 결합할 수 있었던 개별 IgG2a 동종형 항체는 그 특정 IgG1로부터의 독특한 에피토프 bin에 존재하는 것으로 간주된다. IgG1의 존재 하에서 결합할 수 없었던 개별 IgG2a 동종형 항체는 그 특정 IgG1과 동일한 에피토프 bin 내에 존재하는 것으로 간주된다. 이 방식으로 도 2에 예시된 바와 같이 huCD98 결합 항체에 대한 다수의 에피토프 bin들을 정의하였다.Competitive ELISA was performed to establish competitive binding bins. Individual hybrid anti-huCD98 homologous sorted antibody-containing hybridoma supernatants were allowed to bind to huCD98 in individual wells of ELISA plates. After 1 hour, the wells were washed and fixed using 4% paraformaldehyde. The hybridoma supernatants containing individual anti-huCD98 isoformed antibodies (antibodies of different isoforms) were then allowed to bind to huCD98 in individual wells of ELISA plates for 1 hour. After washing, the wells were incubated with a specific secondary antibody (Jackson Immunological Calc < RTI ID = 0.0 > 37069). Individual IgG2a allogeneic antibodies that could bind in the presence of IgG1 are considered to be present in a unique epitope bin from that particular IgG1. Individual IgG2a allogeneic antibodies that were unable to bind in the presence of IgG1 are considered to be present in the same epitope bin as that particular IgG1. In this way, multiple epitope bins for the huCD98 binding antibody were defined as illustrated in Fig.

실시예 5: 결합 친화성Example 5: Binding Affinity

정제된 항-CD98 단일클론 항체를 문헌(Carderelli et al. (2002) Cancer Immunol Immunother 51; 15-24)에 의해 공개된 일반적인 방법으로 친화성에 대해 시험한다. 요약하건대, CD98 발현 세포를 상이한 양의 항-CD98 단일클론 항체와 함께 밤새 항온처리한 후, 염소 항-인간 Fc 특이적 또는 항-마우스 Fc 특이적 PE-접합된 이차 항체(잭슨 이뮤노로직칼스)를 사용하여 FACS로 평가한다. 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 이용하여 FACS 데이터를 분석하고 그래프패드 프리즘 Kd 계산 수단을 이용하여 Kd를 측정한다.Purified anti-CD98 monoclonal antibodies are tested for affinity by the general methods disclosed by the literature (Carderelli et al. (2002) Cancer Immunol Immunother 51; 15-24). Briefly, CD98 expressing cells were incubated overnight with different amounts of anti-CD98 monoclonal antibodies followed by incubation with a goat anti-human Fc specific or anti-mouse Fc specific PE-conjugated secondary antibody (Jackson ImmunoLogic ). &Lt; / RTI > The FACS data is analyzed using the graph pad prism software and the Kd is measured using the graph pad prism Kd calculation means.

실시예 6: 키메라 항체의 제조 및 특징규명Example 6: Preparation and characterization of chimeric antibodies

퀴아젠(Qiagen) RNeasy 미니 키트(카탈로그 번호 74104)에 이어서 퀴아젠 원스텝 RT-PCR 키트(카탈로그 번호 210210)를 사용하여 항-CD98 단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마로부터 총 RNA를 추출하였다. 뮤린 중쇄 및 경쇄 서열에 대해 특이적인 프라이머 세트를 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. 각각의 RNA 샘플에 대해, 뮤린 가변 영역의 리더 서열을 커버하는 축퇴 정방향 프라이머 혼합물을 사용하여 12개의 개별 중쇄 및 11개의 경쇄 RT-PCR 반응을 셋업하였다. 역방향 프라이머는 뮤린 중쇄 및 경쇄의 불변 영역 내에 위치하였다. 제1 라운드 반응으로부터의 RT-PCR 생성물을 제2 라운드 PCR에서 더 증폭하였다. 항체 가변 영역에 대해 특이적인 세미-네스티드(semi-nested) 프라이머 세트를 사용하여 12개의 개별 중쇄 및 11개의 경쇄 RT-PCR 반응을 셋업하였다. PCR 반응을 아가로스 겔 상에서 런닝시켰고, 중쇄 및 경쇄 PCR 생성물을 겔로부터 절단하고 서열분석 벡터 내로 클로닝하였다. 하이브리도마 당 10개 내지 20개의 클론을 서열분석하여 항-CD98 단일클론 항체 가변 영역을 확인하였다. 그 다음, 중쇄 가변 영역을, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 서열을 함유하는 벡터 내로 인-프레임(in-frame)으로 클로닝하였고, 경쇄 가변 영역을, 인간 카파 경쇄 불변 영역 서열을 함유하는 벡터 내로 인-프레임으로 클로닝하였다. HEK293 프리스타일 세포의 일시적인 형질감염으로부터 키메라 항체를 발생시키고 실시예 3에 기재된 방법을 이용하여 정제하였다.Total RNA was extracted from a hybridoma producing the anti-CD98 monoclonal antibody using a Qiagen RNeasy mini kit (Cat. No. 74104) followed by a Qiagen One Step RT-PCR kit (Cat. No. 210210). RT-PCR was performed using a primer set specific for murine heavy and light chain sequences. For each RNA sample, twelve separate heavy and 11 light chain RT-PCR reactions were set up using a degenerate forward primer mixture covering the leader sequence of the murine variable region. The reverse primer was located within the constant region of the murine heavy and light chains. The RT-PCR product from the first round reaction was further amplified in the second round PCR. Twelve individual heavy and 11 light chain RT-PCR reactions were set up using a semi-nested set of primers specific for antibody variable regions. The PCR reaction was run on an agarose gel and the heavy and light chain PCR products were cut from the gel and cloned into a sequencing vector. 10 to 20 clones per hybridoma were sequenced to identify anti-CD98 monoclonal antibody variable regions. The heavy chain variable region was then cloned in-frame into a vector containing the human IgGl heavy chain constant region sequence and the light chain variable region was cloned into a vector containing the human kappa light chain constant region sequence, . Chimera antibodies were generated from transient transfection of HEK293 freestyles cells and purified using the method described in Example 3. [

정제된 키메라 항체를 마우스 단일클론 항-CD98 항체에 관하여 실시예 4에 기재된 바와 같이 결합에 대해 분석하였다. 도 3a는 8-34B, 18-2A 2.1, 18-2A 2.2 및 18-2A 7.1 키메라 항체에 대한 경쟁 결합 분석의 결과를 보여준다. 기준 항체 1 내지 4는 도 2에 나타낸 바와 같지만, "동종형"은 CD98에 결합하지 않는 대조군 IgG2a 항체이다. 도 3a에 나타낸 결과는 키메라 항체들이 이들의 기원이 되는 뮤린 항체들의 에피토프 결합 특이성을 보유한다는 것을 입증한다. 결장암 세포주 DLD1을 사용하여 실시예 5에 기재된 바와 같이 뮤린 항-CD98 단일클론 항체 및 키메라 항-CD98 단일클론 항체의 결합 친화성을 FACS 분석으로 측정하였다. Kd 값(0.9 nM 내지 4.5 nM)은 도 3b에 제시되어 있는데, 이들 값은 모든 이들 재조합 항체들이 그들의 모 뮤린 항체에 필적할만한, CD98에 대한 높은 결합 친화성을 보유한다는 것을 시사한다. 3개의 AML 일차 종양 샘플들 및 사이노몰구스 원숭이 CD98(cynCD98)을 발현하는 세포주를 사용하여 정제된 키메라 단일클론 항체도 실시예 5에 기재된 바와 같이 FACS로 분석하였다. 도 3c에 제시된 결과는 모든 키메라 항체들이 AML 세포 상의 인간 CD98 및 cynCD98과의 결합을 보유하였다는 것을 입증한다.Purified chimeric antibodies were analyzed for binding as described in Example 4 for mouse monoclonal anti-CD98 antibodies. Figure 3a shows the results of competitive binding assays for 8-34B, 18-2A 2.1, 18-2A 2.2 and 18-2A 7.1 chimeric antibodies. Reference antibodies 1 to 4 are as shown in Figure 2, but "homologous" is a control IgG2a antibody that does not bind to CD98. The results shown in Figure 3A demonstrate that chimeric antibodies retain epitope binding specificity for their origin of murine antibodies. The binding affinity of murine anti-CD98 monoclonal antibody and chimeric anti-CD98 monoclonal antibody was measured by FACS analysis as described in Example 5 using the colon cancer cell line DLD1. The Kd values (0.9 nM to 4.5 nM) are shown in Figure 3b, which suggests that all of these recombinant antibodies retain high binding affinity for CD98, comparable to their mimoline antibodies. The chimeric monoclonal antibodies purified using three AML primary tumor samples and a cell line expressing cynomolgus monkey CD98 (cynCD98) were also analyzed by FACS as described in Example 5. The results presented in Figure 3c demonstrate that all chimeric antibodies retained binding to human CD98 and cynCD98 on AML cells.

비아코어 시스템(문헌(Lipschultz et al., Methods 20: 310-318, 2000)에서 검토됨)을 사용하여 결합/해리 속도를 측정함으로써 뮤린 항-CD98 단일클론 항체 및 키메라 항-CD98 단일클론 항체의 결합 친화성을 측정하였다. 표 2에 제시된 바와 같이, 키메라 항체들의 친화성은 모 뮤린 항체들의 친화성과 유사하였다. 인간화된 항체 8-34B H2 L1에 대한 데이터(실시예 7 참조)도 제시되어 있다.CD98 monoclonal antibody and chimeric anti-CD98 monoclonal antibody by measuring the binding / dissociation rate using a Biacore system (reviewed in Lipschultz et al., Methods 20: 310-318, 2000) Binding affinity was measured. As shown in Table 2, the affinities of chimeric antibodies were similar to those of the mimic antibodies. Data for the humanized antibody 8-34B H2 L1 (see Example 7) are also presented.

실시예 7: 인간화된 항체의 제조Example 7: Preparation of humanized antibodies

도 4에 나타낸 바와 같이 뮤린 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 CDR들을 인간 수용자 골격 영역 내로 이식하여 인간화된 형태의 뮤린 단일클론 항체 8-34B를 제조하였다. 뮤린 경쇄의 CDR들을 인간 수용자 서열(진뱅크 수탁번호 ACJ71709.1) 내로 이식하여 인간화된 8-34B 경쇄 가변 도메인 L1(서열번호 15)을 구축하였다. 인간 수용자 경쇄의 FR3 내의 2개 잔기들을 뮤린 단일클론 항체의 상응하는 잔기로 치환시켜(카바트 넘버링에 따른 아미노산 치환 S63T 및 D70E; 도 4a 참조) 8-34B 인간화된 경쇄 가변 도메인 L2(서열번호 16)를 구축하였다. 뮤린 중쇄의 CDR들을 인간 수용자 서열(진뱅크 수탁번호 137782) 내로 이식하여 8-34B 인간화된 중쇄 H1(서열번호 17)을 구축하였다. 인간 수용자 중쇄의 FR2 내의 1개 잔기 및 FR3 내의 2개 잔기를 뮤린 단일클론 항체의 상응하는 잔기로 치환시켜 카바트 넘버링에 따른 아미노산 치환 I48L, V71K 및 F78V를 발생시켜 8-34B 인간화된 중쇄 가변 도메인 H2(서열번호 18)를 구축하였다(도 4b 참조). 8-34B 인간화된 중쇄 가변 도메인 H3(서열번호 19)은 도 4b에 나타낸 바와 같이 FR3 내의 뮤린 잔기로의 2개의 추가 역 치환 V67L 및 T73N을 추가하였다.As shown in Figure 4, the murine CDRs of the murine heavy and light chain variable domains were grafted into human acceptor framework regions to produce murine monoclonal antibody 8-34B in humanized form. The murine light chain CDRs were grafted into the human acceptor sequence (Jinbank Accession No. ACJ71709.1) to construct the humanized 8-34B light chain variable domain L1 (SEQ ID NO: 15). (Amino acid substitutions S63T and D70E according to Kabat numbering; see Fig. 4A), 8-34B humanized light chain variable domain L2 (SEQ ID NO: 16 ). The CDRs of the murine heavy chain were grafted into the human acceptor sequence (Jinbank Accession No. 137782) to construct the 8-34B humanized heavy chain H1 (SEQ ID NO: 17). Substitution of one residue in FR2 of the human acceptor heavy chain and two residues in FR3 with corresponding residues of the murine monoclonal antibody to generate amino acid substitutions I48L, V71K and F78V following carbation numbering to produce the 8-34B humanized heavy chain variable domain H2 (SEQ ID NO: 18) (see Fig. 4B). The 8-34B humanized heavy chain variable domain H3 (SEQ ID NO: 19) added two additional back-substitutions V67L and T73N to the murine residue in FR3 as shown in Figure 4b.

인간화된 항체 8-34B의 H2 중쇄 및 L1 경쇄 가변 영역들에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:The nucleic acid sequences and amino acid sequences for the H2 heavy chain and L1 light chain variable regions of humanized antibody 8-34B are shown below:

인간화된 8-34B 중쇄 가변 영역 H2The humanized 8-34B heavy chain variable region H2

인간화된 8-34B 경쇄 가변 영역 L1The humanized 8-34B light chain variable region L1

키메라 항체 18-2A 7.1의 뮤린 중쇄 및 경쇄 가변 도메인들의 CDR들을 인간 수용자 골격 영역 내로 이식하여 뮤린 단일클론 항체 18-2A의 인간화된 형태를 제조하였다. 뮤린 경쇄의 CDR들을 인간 수용자 서열(진뱅크 수탁번호 ACJ71709.1) 내로 이식하여 인간화된 18-2A 7.1 경쇄 가변 도메인 L1(서열번호 20)을 구축하였다. 특정 인간 골격 잔기를 뮤린 단일클론 항체의 상응하는 잔기로 치환시켜 18-2A 7.1 경쇄 가변 도메인 L2(서열번호 21)를 구축하였다. 뮤린 중쇄의 CDR들을 인간 수용자 서열 내로 이식하여 18-2A 7.1 인간화된 중쇄 가변 도메인 H1(서열번호 22)을 구축하였다. 특정 인간 골격 잔기를 뮤린 단일클론 항체의 상응하는 잔기로 치환시켜 18-2A 7.1 인간화된 중쇄 가변 도메인 H2(서열번호 23)를 구축하였다.The humanized forms of murine monoclonal antibody 18-2A were prepared by grafting the CDRs of the murine heavy and light chain variable domains of chimeric antibody 18-2A 7.1 into the human receptor framework region. The murine light chain CDRs were grafted into the human acceptor sequence (Jinbank Accession No. ACJ71709.1) to construct the humanized 18-2A 7.1 light chain variable domain L1 (SEQ ID NO: 20). A specific human framework residue was replaced with the corresponding residue of a murine monoclonal antibody to construct 18-2A 7.1 light chain variable domain L2 (SEQ ID NO: 21). The CDRs of the murine heavy chain were grafted into human acceptor sequences to construct 18-2A 7.1 humanized heavy chain variable domain H1 (SEQ ID NO: 22). A specific human backbone residue was replaced with the corresponding residue of a murine monoclonal antibody to construct the 18-2A 7.1 humanized heavy chain variable domain H2 (SEQ ID NO: 23).

인간화된 항체 18-2A 7.1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역들에 대한 핵산 서열 및 아미노산 서열은 하기 제시되어 있다:Nucleic acid and amino acid sequences for the heavy and light chain variable regions of humanized antibody 18-2A 7.1 are provided below:

인간화된 18-2A 7.1 중쇄 가변 영역 H1Humanized 18-2A 7.1 heavy chain variable region H1

인간화된 18-2A 7.1 경쇄 가변 영역 L1Humanized 18-2A 7.1 light chain variable region L1

인간화된 18-2A 7.1 중쇄 가변 영역 H2Humanized 18-2A 7.1 heavy chain variable region H2

인간화된 18-2A 7.1 경쇄 가변 영역 H2Humanized 18-2A 7.1 Light chain variable region H2

실시예 8: 생체내 종양의 항-CD98 단일클론 항체 매개 억제 Example 8: Anti-CD98 monoclonal antibody mediated inhibition of in vivo tumors

종양 성장 및 전이 형성에 대한 항체 효능을 예를 들면, 마우스 피하 또는 동소이식 암 이종이식편 모델에서 연구한다. 항체는 당분야에서 인식된 바와 같이 비-접합될 수 있거나 치료제에 접합될 수 있다.Antibody potency for tumor growth and metastasis formation is studied, for example, in subcutaneous or submucosal xenograft models. The antibody may be non-conjugated or conjugated to a therapeutic agent as is recognized in the art.

실시예 1에 기재된 바와 같이 CD98에 대한 단일클론 항체를 발생시키고, 전술된 바와 같이 정제하고 특징규명한다. 전술된 키메라 또는 인간화된 항체도 사용할 수 있다. 치료 단일클론 항체, 또는 개별 단일클론 항체들의 혼합물을 포함하는 칵테일을 제조하고 종양 이종이식편의 피하 또는 동소이식 주사를 제공받은 마우스의 치료에 사용한다.Monoclonal antibodies against CD98 are generated as described in Example 1 and purified and characterized as described above. The chimeric or humanized antibodies described above may also be used. Therapeutic monoclonal antibodies, or cocktails comprising a mixture of individual monoclonal antibodies, are used to treat mice treated with subcutaneous or isotopic injections of tumor xenografts.

1:1 비의 (마그네슘 또는 칼슘을 함유하지 않는) PBS와 BD 매트리겔(비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))의 혼합물 중의 1 x 10⁷개의 암세포를 암컷 SCID 또는 nu ^-/- 마우스의 우측 옆구리에 주사하여 피하 종양을 발생시킨다. 마우스 당 주사된 총 부피는 200 ㎖이고, 이때 50%는 매트리겔(비디 바이오사이언시스)이다. 일단 종양이 65 ㎣ 내지 200 ㎣의 크기에 도달하면 마우스를 무작위로 분류한다. 항체를 매주 투여하고, 체중 및 종양을 각각 매주 1회 및 2회 측정한다. 종양 부피를 전술된 바와 같이 계산한다(van der Horst et al., (2009) Neoplasia 11: 355-364). 음성 대조군으로서 정제된 마우스 IgG 또는 PBS; 또는 CD98 이외의 항원을 인식하는 정제된 단일클론 항체를 마우스에게 주사한다.1 x 10 ⁷ cancer cells in a mixture of 1: 1 (without magnesium or calcium) PBS and BD Matrigel (BD Biosciences) were injected into female right SCID or right flank of nu ^{- / -} mice To produce subcutaneous tumors. The total volume injected per mouse is 200 ml, where 50% is Matrigel (Vidi Biocysis). Once the tumors reach a size of 65 to 200 마우스, the mice are randomized. Antibody is administered weekly, body weight and tumor are measured once and twice each week. The tumor volume is calculated as described above (van der Horst et al., (2009) Neoplasia 11: 355-364). Purified mouse IgG or PBS as a negative control; Alternatively, mice are injected with a purified monoclonal antibody that recognizes an antigen other than CD98.

실시예 9: 마우스에서 B 세포 림프종 이종이식편의 성장에 대한 CD98 단일클론 항체의 효과Example 9: Effect of CD98 monoclonal antibody on growth of B cell lymphoma xenografts in mice

라모스(B 세포 림프종) 세포주를 ATCC로부터 수득하여 공급자의 프로토콜에 따라 배양하였다. 동물을 찰스 리버 레이보레이토리스(Charles River Laboratories)로부터 수득하였다.Ramos (B cell lymphoma) cell line was obtained from ATCC and cultured according to the supplier's protocol. Animals were obtained from Charles River Laboratories.

CB.17 배경을 갖는 4주령 내지 6주령의 면역결핍 SCID 암컷 마우스의 우측 옆구리에 1:1 비의 (마그네슘 또는 칼슘을 함유하지 않는) PBS와 BD 매트리겔(비디 바이오사이언시스)의 혼합물 중의 1 x 10⁷개의 생존 세포를 피하 주사하였다. 마우스 당 주사된 총 부피는 200 ㎕이고, 이때 50%는 매트리겔(비디 바이오사이언시스)이다. 일단 종양이 65 ㎣ 내지 200 ㎣의 크기에 도달하면 마우스를 무작위로 분류하였다. 항체를 매주 투여하고, 체중 및 종양을 각각 매주 1회 및 2회 측정하였다. 종양 부피를 전술된 바와 같이 계산하였다(van der Horst et al. (2009) Neoplasia 11: 355-364). 모든 실험을 실험 점 당 7마리 이상의 동물로 구성된 군에 대하여 수행하였다. 동물 실험을 이제니카 인코포레이티드의 임상시험 심사위원회 동물 보호 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행하였다.(1: 1) mixture of PBS (without magnesium or calcium) and BD Matrigel (Vidi Biocysis) in the right flank of an immunodeficient SCID female mouse from 4 to 6 weeks of age with CB.17 background x 10 ⁷ viable cells were subcutaneously injected. The total volume injected per mouse is 200 [mu] l, where 50% is Matrigel (Vidi Biocysis). Once the tumors reached a size of 65 to 200 마우스, the mice were randomly assigned. Antibodies were administered weekly, body weight and tumors were measured once and twice weekly, respectively. Tumor volume was calculated as described above (van der Horst et al. (2009) Neoplasia 11: 355-364). All experiments were performed on a group of 7 or more animals per experiment. Animal experiments were now carried out according to a protocol approved by the Committee on Animal Care and Use of the Clinical Trials Board of Nikka Corporation.

그래프패드 프리즘 소프트웨어 팩키지를 사용하고 스튜던트 양측 t-검정을 적용하여 치료군과 대조군 사이의 통계학적 유의도를 계산하였다. 0.05 미만의 p 값은 유의한 것으로 간주되었다. 배가 시간 및 진행 시간 분석을 문헌(Daniel et al. (2007) Blood 110:4037-4046)에 기재된 바와 같이 계산하였다.Statistical significance was calculated between the treatment group and the control group using the Graph Pad Prism software package and Student's t-test. A p value of less than 0.05 was considered significant. Doubling time and time analysis were calculated as described in Daniel et al. (2007) Blood 110: 4037-4046.

리툭시맙(항-CD20 항체)을 양성 치료 대조군 항체로서 사용하였다. 항체 HB121은 IgG2a 음성 대조군이었다. 리툭시맙 및 항-CD98 항체 8-93A 및 18-3A는 IgG1 항체인 반면, 모든 다른 항-CD98 항체들은 IgG2a 항체이다.Rituximab (anti-CD20 antibody) was used as a positive control control antibody. Antibody HB121 was an IgG2a negative control. Rituximab and anti-CD98 antibodies 8-93A and 18-3A are IgG1 antibodies, while all other anti-CD98 antibodies are IgG2a antibodies.

항-CD98 항체를 사용한 치료는 확립된 B 세포 림프종(라모스) 종양에서 강한 종양 성장 억제를 유도하는 것으로 밝혀졌다. 특히, 항-CD98 항체 치료는 종양 성장 억제의 유도에 있어서 리툭시맙보다 더 우수하였다(도 5a 및 5b 참조).Treatment with anti-CD98 antibody has been shown to induce strong tumor growth inhibition in established B cell lymphoma (Ramos) tumors. In particular, anti-CD98 antibody therapy was superior to rituximab in inducing tumor growth inhibition (see Figures 5a and 5b).

또한, 항-CD98 항체는 치료된 라모스 종양의 진행 시간을 유의하게 연장시키는 것으로 밝혀졌다. 도 5a 내지 5c의 종양 재성장 데이터의 종양 배가 시간을 전술된 바와 같이 계산하여 진행 시간(TTP)의 추가 예측에 사용하였다. 그 다음, 2000 ㎣에 도달할 때까지 TTP를 치료군 내의 각각의 동물에 대해 외삽하고 도 6a 내지 6c에 제시된 바와 같이 카플란-메이에르 곡선으로서 그래프화하였다. 도 6a 내지 6c에 제시된 바와 같이, 다양한 항-CD98 항체들은 라모스 종양에서 진행 시간을 연장시키는 데에 있어서 리툭시맙보다 더 우수하다.In addition, anti-CD98 antibodies have been found to significantly prolong the progression time of the treated Ramos tumors. Tumor doubling times of the tumor regrowth data of Figures 5A-5C were calculated as described above and used for further prediction of progression time (TTP). TTP was then extrapolated to each animal in the treatment group until 2000 ㎣ was reached and plotted as Kaplan-Meier curves as shown in Figures 6a-6c. As shown in FIGS. 6A-6C, various anti-CD98 antibodies are superior to rituximab in prolonging the progression time in Ramos tumors.

항-CD98 항체의 잠재적인 최대 치료 효능을 평가하기 위해 확립된 라모스 종양의 출발 종양 부피를 증가시켰다. 표 3은 증가하는 종양 부피 출발 크기를 갖는 라모스 이종이식편 종양 모델에서 항-CD98 항체의 치료 효능을 보여준다. 알 수 있는 바와 같이, 항-CD98 항체는 증가하는 종양 부피에서조차도 종양 성장 억제(TGI)를 보유한다.The starting tumor volume of established < RTI ID = 0.0 > Ramos < / RTI > tumors was increased to assess the potential maximum therapeutic efficacy of anti-CD98 antibodies. Table 3 shows the therapeutic efficacy of anti-CD98 antibodies in a Ramos xenograft tumor model with an increasing tumor volume starting size. As can be seen, the anti-CD98 antibody retains tumor growth inhibition (TGI) even in increasing tumor volume.

실시예 10: 생체내 종양 성장의 억제에 대한 항-CD98 단일클론 항체의 효과Example 10: Effect of anti-CD98 monoclonal antibody on inhibition of in vivo tumor growth

실시예 7에 기재된 프로토콜을 이용하여 항-CD98 단일클론 항체 8-34B 및 18-2A의 효과를 여러 이종이식편 모델에서 시험하였다.The effects of anti-CD98 monoclonal antibodies 8-34B and 18-2A using the protocol described in Example 7 were tested in several xenograft models.

DLD-1(결장직장암종), A549 (비-소세포 폐암종), 라모스(B 세포 림프종) 및 OCI-AML-3(급성 골수성 백혈병) 세포주를 ATCC로부터 수득하여 공급자의 프로토콜에 따라 배양하였다. 동물을 찰스 리버 레이보레이토리스로부터 수득하였다. CB.17 배경을 갖는 4주령 내지 6주령의 면역결핍 NOD.SCID 암컷 마우스를 육종 종양 모델용으로 사용하였고, CB.17 배경을 갖는 4주령 내지 6주령의 면역결핍 SCID 암컷 마우스를 라모스 및 DLD-1 종양 모델용으로 사용하였고, 4주령 내지 6주령의 면역결핍 nu ^-/- 암컷 마우스를 A549 및 OCI-AML-3 종양 모델용으로 사용하였다. 리툭시맙(IgG1 항-CD20 항체) 또는 에르비툭스(IgG1 항-EGFR 항체)를 양성 대조군 항체로서 사용하였고, 무관한 항원에 대한 IgG2a 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. DC101은 래트 항-마우스 VEGFR2/KDR IgG1 mAb(ATCC 번호 HB-11534)이고 양성 대조군으로서 사용된다. 주사, 항체 치료 및 통계학적 계산을 실시예 9에 기재된 바와 같이 수행하였다.Cell lines of DLD-1 (colorectal carcinoma), A549 (non-small cell lung carcinoma), Ramos (B cell lymphoma) and OCI-AML-3 (acute myeloid leukemia) cell lines were obtained from ATCC and cultured according to the supplier's protocol. The animals were obtained from Charles River Ray Borey Torres. Immuno-deficient NOD.SCID female mice with CB.17 background were used for sarcoma tumor models, and immunocompetent SCID female mice between 4 weeks and 6 weeks old with CB.17 background were treated with Ramos and DLD- 1 tumor model and immunoreactive nu ^{- / -} female mice between 4 weeks and 6 weeks of age were used for A549 and OCI-AML-3 tumor models. Rituximab (IgG1 anti-CD20 antibody) or erbitux (IgG1 anti-EGFR antibody) was used as a positive control antibody and IgG2a antibody to an irrelevant antigen was used as a negative control. DC101 is a rat anti-mouse VEGFR2 / KDR IgG1 mAb (ATCC No. HB-11534) and is used as a positive control. Injection, antibody treatment and statistical calculations were performed as described in Example 9.

도 6 내지 9에 나타낸 바와 같이, 항-CD98 단일클론 항체 18-2A는 결장직장암(DLD-1), 비-소세포 폐암(A549), 버킷 림프종(라모스) 및 AML(OCI-AML-3) 이종이식편에서 종양 성장의 강력한 억제제이다. 18-2A의 효과는 리툭산(도 7) 및 에르비툭스(도 9 및 도 10)의 효과와 유리하게 비교되었다.As shown in Figures 6-9, anti-CD98 monoclonal antibody 18-2A has been shown to be useful in the treatment of colorectal cancer (DLD-1), non-small cell lung cancer (A549), bucket lymphoma (Ramos) and AML (OCI- It is a potent inhibitor of tumor growth in the graft. The effect of 18-2A was advantageously compared with the effects of Rituxan (FIG. 7) and Erbitux (FIGS. 9 and 10).

항-CD98 단일클론 항체 8-34B는 도 7 및 8에 제시된 바와 같이 라모스 및 AML(OCI-AML-3) 이종이식편에서 종양 성장을 억제하였다.Anti-CD98 monoclonal antibody 8-34B inhibited tumor growth in Ramos and AML (OCI-AML-3) xenografts as shown in Figures 7 and 8.

실시예 11: 상이한 면역결핍 배경을 갖는 마우스 품종들에서 항-CD98 단일클론 항체Example 11: Anti-CD98 monoclonal antibody in mouse strains with different immunodeficiency backgrounds

상이한 마우스 품종을 사용하여 실시예 9에 기재된 바와 같이 라모스 이종이식편 모델에서 3개의 항-CD98 단일클론 항체 8-300B, 8-34B 및 18-2A를 시험하였다. IgG2a 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. 3마리의 면역결핍 마우스 품종은 덜 면역손상된 마우스 내지 고도로 면역손상된 마우스이다. SCID 마우스는 기능성 B 세포 및 T 세포를 결여하지만 천연 살해(NK) 세포 기능 및 일부 보체 기능을 보유한다. NOD.SCID 마우스는 보체 기능을 결여하고 부분적인 NK 기능만을 갖지만, NSG(NOD/SCID/감마) 마우스는 NK 기능을 결여한다.Three different anti-CD98 monoclonal antibodies 8-300B, 8-34B and 18-2A were tested in the Ramos xenograft model as described in Example 9 using different mouse strains. IgG2a antibody was used as a negative control. The three immunodeficient mouse varieties are less immunologically impaired mice or highly immunocompromised mice. SCID mice lack functional B cells and T cells but retain natural killer (NK) cell function and some complement function. NOD.SCID mice lack complement function and only partial NK function, while NSG (NOD / SCID / gamma) mice lack NK function.

도 11에 제시된 바와 같이, 라모스 이종이식편 모델에서 항-CD98 항체의 종양 성장 억제 효과는 면역능력이 보다 우수한 마우스 품종에서 평가될 때 증가하는데, 이것은 항-CD98 항체의 생체내 항종양 활성이 면역이펙터 기능과 CD98 활성의 억제의 조합에 기인한다는 것을 암시한다. 모든 ADCC 및 CDC 기능을 결여하는 NSG 마우스에서의 결과는 항-CD98 항체가 라모스 이종이식편에서 CD98의 생물학적 기능도 억제할 수 있고 CD98이 생체내에서 라모스 종양 성장 및/또는 유지에 중요할 수 있다는 것을 암시한다.As shown in Figure 11, the tumor growth inhibitory effect of the anti-CD98 antibody in the Ramos xenograft model increases when it is evaluated in a mouse strain with better immunity ability, which indicates that the in vivo antitumor activity of the anti-CD98 antibody is lower than that of the immune effector &Lt; / RTI > function and inhibition of CD98 activity. The results in NSG mice lacking all ADCC and CDC function suggest that the anti-CD98 antibody can also inhibit the biological function of CD98 in Ramos xenografts and that CD98 may be important for the growth and / or maintenance of Ramus tumor in vivo It implies.

실시예 12: 뮤린 및 키메라 항-CD98 단일클론 항체의 생체내 효능Example 12: In vivo efficacy of murine and chimeric anti-CD98 monoclonal antibodies

실시예 9에 기재된 바와 같이, 뮤린 항-CD98 항체 8-34B 및 18-2A의 생체내 효능을 라모스 이종이식편 모델에서 키메라 항체 8-34B-ch 및 18-2A-ch7.1의 생체내 효능을 비교하였다. 항체를 0.5 mg/kg 용량(약 30 nm)에서 시험하였다. 도 12에 제시된 결과는 키메라 항-CD98 항체들이 그들의 모 뮤린 대응물들과 유사한 효능으로 생체내 종양 성장을 억제한다는 것을 확인시켜준다.The in vivo efficacy of the murine anti-CD98 antibodies 8-34B and 18-2A, as described in Example 9, was tested in vivo by the chimeric antibodies 8-34B-ch and 18-2A-ch7.1 in a Ramos xenograft model Respectively. Antibodies were tested at a dose of 0.5 mg / kg (~ 30 nm). The results presented in Figure 12 confirm that chimeric anti-CD98 antibodies inhibit tumor growth in vivo with similar potency to their mimoline counterparts.

실시예 13: 인간화된 단일클론 항체 IGN523의 에피토프 맵핑Example 13: Epitope mapping of humanized monoclonal antibody IGN523

재료 및 방법Materials and methods

시약. 프리스타일(FREESTYLE)™ CHO-S 세포(인비트로겐)를 글루타맥스(GlutaMAX)™로 보충된 프리스타일™ CHO 발현 배지(인비트로겐)에서 유지하였다. 대조군 항체 4F2 및 MEM108을 각각 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology) 및 써모 사이언티픽으로부터 수득하였다. 적절한 제논(Zenon) 항체 표지 부착 키트(인비트로겐)를 사용하여 항체를 알렉사 플루오르 647로 표지하였다. reagent. FREESTYLE ™ CHO-S cells (Invitrogen) were maintained in Freestyle ™ CHO expression medium (Invitrogen) supplemented with GlutaMAX ™. Control antibodies 4F2 and MEM108 were obtained from Santa Cruz Biotechnology and Thermosynthetic, respectively. Antibodies were labeled with Alexa Fluor 647 using a suitable Zenon antibody label attachment kit (Invitrogen).

플라스미드 구축. 전장 CD98, CD98 점 돌연변이체, 및 마우스 및 인간 CD98 키메라를 유전자 합성(진위즈(GeneWiz)으로 구축하고 pCDNA3.1 벡터(인비트로겐) 내로 클로닝하였다. CD98 ECD, CD98 ECD 점 돌연변이체 및 CD98 ECD 키메라를 유전자 합성으로 구축하고 pDisplay 벡터(인비트로겐) 내로 클로닝하였다. 모든 구축물들을 DNA 서열분석으로 확인하였다.Plasmid construction. (CD98 ECD, CD98 ECD point mutants and CD98 ECD chimera were constructed by GeneWiz and cloned into the pCDNA3.1 vector (Invitrogen). The full-length CD98, CD98 point mutants, Were constructed by gene synthesis and cloned into the pDisplay vector (Invitrogen). All constructs were confirmed by DNA sequencing.

CD98에 결합하는 IGN523의 형광-활성화된 세포 분류기(FACS) 분석Fluorescence-activated cell sorter (FACS) analysis of IGN523 binding to CD98

뉴클레오펙터(Nucleofector) 4D 유닛(론자)을 사용하여 CD98 키메라, CD98 점 돌연변이 구축물 및 인간 야생형 대조군 구축물을 전기천공으로 형질감염시켰다. 구축물을 형질감염 용액과 혼합한 후 프리스타일™ CHO-S 세포 내로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염된 CHO-S 세포를 형질감염으로부터 24시간 후 수거하였다. 세포를 정량한 후 IGN523, MEM108 또는 4F2 항체로 염색하였다. 염색 전, 적절한 제논 항체 표지 부착 키트(인비트로겐)를 사용하여 항체를 알렉사 플루오르 647로 표지하였다. 밀테니이(Miltenyi) MACSQuant 분석기(밀테니이 바이오텍(Miltenyi Biotec)) 상에서 유동 데이터를 획득하였고 플로우조(FlowJo) 소프트웨어 버전 9.5.3(트리 스타 인코포레이티드(Tree Star, Inc.))을 사용하여 데이터 분석을 수행하였다.CD98 chimeric, CD98 point mutant constructs and human wild type control constructs were transfected electroporated using a Nucleofector 4D unit (loner). The constructs were mixed with the transfection solution and transiently transfected into the Freestyle ™ CHO-S cells. Transfected CHO-S cells were harvested 24 hours after transfection. Cells were quantified and stained with IGN523, MEM108 or 4F2 antibody. Prior to staining, the antibody was labeled with Alexa Fluor 647 using a suitable xenon antibody labeling kit (Invitrogen). Flow data was acquired on a Miltenyi MACSQuant analyzer (Miltenyi Biotec) and analyzed using FlowJo software version 9.5.3 (Tree Star, Inc.) Data analysis was performed.

CD98 상의 IGN523 결합 영역의 확인Identification of the IGN523 binding region on CD98

IGN523 결합에 관여하는 CD98의 영역을 확인하기 위해, 인간 CD98(서열번호 1)의 대략 40개 인접 아미노산의 영역을 마우스 CD98(서열번호 96)의 상응하는 영역으로 치환시켰고, IGN523의 전체 결합에 대한 이들 치환들의 효과를 FACS 분석을 이용하여 모니터링하였다. 도 13은 인간 서열 내로 치환되어 13개의 마우스-인간 CD98 키메라 구축물들을 형성하는 마우스 서열의 영역을 보여준다. 도 14는 IGN523 및 대조군 항체와 뮤린 CD98(Mu), 인간 CD98(Hu) 및 13개의 마우스-인간 키메라들의 결합을 보여준다. 결과는 키메라 구축물 10에서 치환된 영역이 IGN523과 CD98의 결합에 필요하다는 것을 입증한다. 대조적으로, 대조군 항체의 결합을 담당하는 영역이 키메라 11 및 12에서 치환된 영역에서 발견된다는 것을 알 수 있다.To identify the region of CD98 involved in IGN523 binding, the region of approximately 40 contiguous amino acids of human CD98 (SEQ ID NO: 1) was replaced with the corresponding region of mouse CD98 (SEQ ID NO: 96) The effects of these substitutions were monitored using FACS analysis. Figure 13 shows regions of the mouse sequence that are substituted into the human sequence to form thirteen mouse-human CD98 chimeric constructs. Figure 14 shows the binding of IGN523 and control antibody and murine CD98 (Mu), human CD98 (Hu) and thirteen mouse-human chimeras. The results demonstrate that the substituted region in chimeric construct 10 is required for the binding of IGN523 and CD98. In contrast, it can be seen that regions responsible for the binding of control antibodies are found in the substituted regions in chimeras 11 and 12.

도 15는 마우스-인간 CD98 키메라 구축물을 사용함으로써 확인된, IGN523이 결합하는 인간 CD98의 영역의 서열, 및 CD98의 3차원 구조 내에서의 이 서열의 위치를 보여준다. 키메라 10에 의해 정의된 영역은 인간 CD98의 아미노산 잔기 T358 내지 N405로 구성된다. 아미노산 T358 내지 G368(밑줄 표시)은 결정 구조에서 묻혀있고 결합 계면의 일부일 가능성이 없다. 인간 서열과 마우스 서열 사이의 비-보존된 잔기는 굵은 글자체로 표시되어 있다. 부위 D391에서 N의 치환은 인간에 비해 마우스 서열에서 가외의 글리코실화 부위를 발생시킨다.Figure 15 shows the sequence of the region of human CD98 to which IGN523 binds and the position of this sequence within the three dimensional structure of CD98, confirmed by using a mouse-human CD98 chimeric construct. The region defined by chimeric 10 consists of the amino acid residues T358 to N405 of human CD98. The amino acids T358 through G368 (underlined) are buried in the crystal structure and are unlikely to be part of the binding interface. The non-conserved residues between human and mouse sequences are indicated in bold typeface. Substitution of N at site D391 generates extra glycosylation sites in the mouse sequence relative to humans.

CD98에서 단일 돌연변이 및 다수의 돌연변이를 갖는 IGN523의 정교한 맵핑Sophisticated mapping of IGN523 with single mutations and multiple mutations in CD98

IGN523 에피토프를 더 정의하기 위해, 단일 아미노산 변화 또는 다수의 아미노산 변화를 마우스-인간 키메라 10에 의해 정의된 영역 내로 도입하였다. 마우스 CD98 서열의 일부로부터의 비-상동성 잔기들을 인간 CD98 서열 내로 각각 도입하여 4개의 구축물을 제조하였다. 구축물 4.1은 돌연변이 I371L, D374Q 및 A375G, 및 A376의 결실을 함유하였다. 구축물 4.2는 돌연변이 M383A 및 E384K를 함유하였다. 구축물 4.3은 돌연변이 D391N, F395I, P396F 및 D397H를 함유하였다. 구축물 4.4는 돌연변이 G400R, A401P 및 A404L을 함유하였다. 각각의 구축물로 형질감염된 CHO 세포의 FACS 분석은 구축물 4.1에 함유된 상기 돌연변이들이 IGN523과 CD98의 결합을 방해하였다는 것을 보여주었다(도 16). 구축물 4.4에 함유된 돌연변이도 보다 적은 정도로 IGN523과 CD98의 결합에 영향을 미쳤다(도 16).To further define the IGN523 epitope, single amino acid changes or multiple amino acid changes were introduced into the region defined by mouse-human chimeric 10. Four constructs were prepared by introducing non-homologous residues from a portion of the mouse CD98 sequence into the human CD98 sequence, respectively. Construct 4.1 contained deletions of mutations I371L, D374Q and A375G, and A376. Construct 4.2 contained the mutations M383A and E384K. Construct 4.3 contained the mutations D391N, F395I, P396F and D397H. Construct 4.4 contained the mutations G400R, A401P and A404L. FACS analysis of CHO cells transfected with each construct showed that the mutants contained in construct 4.1 interfered with the binding of IGN523 and CD98 (Figure 16). The mutations contained in construct 4.4 also affected the binding of IGN523 and CD98 to a lesser degree (Figure 16).

소수성 잔기가 IGN523과 인간 CD98의 결합 계면에 관여하는지를 확인하기 위해, 표적화된 루프 영역 내의 소수성 잔기들을 고도로 하전된 아미노산, 예컨대, 아스파르트산 또는 아스파라긴으로 치환시켜 이들 소수성 잔기들의 단일 돌연변이체 구축물들을 생성하였다. 상기 단일 돌연변이체 구축물들을 CHO 세포 내로 개별적으로 형질감염시키고 FACS로 분석하여 IGN523과의 결합을 확인하였다. 도 17에 나타낸 바와 같이, 하전된 아미노산으로의 소수성 잔기 A377 및 L378의 돌연변이는 IGN523 결합에 부정적으로 영향을 미쳤다. 보다 적은 정도로 잔기 I398 및 A401의 돌연변이는 IGN523의 결합에 대한 유사한 부정적 효과를 보였다.To confirm that the hydrophobic moiety is involved in the binding interface of IGN523 and human CD98, hydrophobic residues in the targeted loop region are replaced with highly charged amino acids such as aspartic acid or asparagine to produce single mutant constructs of these hydrophobic moieties . The single mutant constructs were individually transfected into CHO cells and analyzed by FACS to confirm binding with IGN523. As shown in Figure 17, the mutation of the hydrophobic residues A377 and L378 to the charged amino acid negatively affected IGN523 binding. To a lesser extent mutations of residues I398 and A401 showed a similar negative effect on binding of IGN523.

IGN523과 CD98의 결합에 중요한 추가 잔기를 확인하기 위해 다수의 돌연변이들을 함유하는 추가 구축물들을 제조하였다. 도 18에 나타낸 바와 같이, 구축물 M1 내의 다수의 돌연변이들(D374Q, D397H, G400R 및 A401P)은 IGN523이 결합하는 것을 완전히 방해하였는데, 이것은 이들 잔기들의 중요성을 시사한다. 구축물 M2(D374E 및 A375E) 및 M3(D397S 및 I398T)도 결합을 감소시켰다. A376의 결실을 포함하는 구축물을 사용한 추가 실험(제시되지 않음)은 이 잔기의 존재가 에피토프 루프 영역의 정확한 폴딩을 위해 요구되는 듯하다는 것을 시사하였다.Additional constructs containing multiple mutations were made to identify additional residues important for the binding of IGN523 and CD98. As shown in Figure 18, a number of mutations (D374Q, D397H, G400R and A401P) in construct M1 completely disrupted the binding of IGN523, suggesting the importance of these residues. Constructs M2 (D374E and A375E) and M3 (D397S and I398T) also reduced binding. Additional experiments (not shown) using constructs involving the deletion of A376 suggested that the presence of this residue appears to be required for correct folding of the epitope loop region.

마우스-인간 키메라, 소수성 잔기의 돌연변이 및 다수의 돌연변이를 사용한 결합 연구에 기초할 때, 하기 아미노산들은 IGN523 에피토프의 일부인 것으로 확인되었다: D374, A377, L378, D397, I398, G400 및 A401.The following amino acids have been identified as being part of the IGN523 epitope: mouse-human chimeras, mutations of hydrophobic residues and multiple mutations.

펩티드 스캐닝 분석Peptide scanning analysis

이들 돌연변이 연구에 대한 보충 연구로서, 펩티드 스캐닝 분석(펩스캔)을 이용하여 IGN523의 결합 에피토프를 추가로 분석하였다.As a complementary study to these mutation studies, binding epitopes of IGN523 were further analyzed using peptide scanning analysis (Pepscan).

펩티드의 합성: 표적 분자의 불연속 에피토프들을 재구축하기 위해, 펩스캔의 전매특허 기술인 스카폴드 상의 화학적으로 연결된 펩티드(CLIPS) 기술(펩스캔)을 이용하여 구조화된 펩티드들의 라이브러리를 합성하였다. 펩티드와 스카폴드의 화학적 연결을 본질적으로 다음과 같이 수행하였다: 펩티드 내의 다수의 시스테인들의 측쇄를 1개 또는 2개의 CLIPS 주형에 커플링하였다. T2 CLIPS 주형 1,3-비스(브로모메틸)벤젠의 0.5 mM 용액을 중탄산암모늄(20 mM, pH 7.9)/아세토니트릴(1:1(부피/부피))에 용해시켰다. 이 용액을 펩티드 어레이 상에 첨가하여, CLIPS 주형이 펩티드 어레이(3 ㎕ 웰을 갖는 455웰 플레이트)의 고체상 결합된 펩티드에 존재하는 2개의 시스테인들의 측쇄에 결합하게 하였다. 상기 용액으로 완전히 커버하면서 상기 펩티드 어레이를 상기 용액에서 30분 내지 60분 동안 약하게 진탕시켰다. 최종적으로, 펩티드 어레이를 과량의 H₂O로 광범위하게 세척하고, 70℃에서 PBS(pH 7.2) 중의 1% SDS/0.1% 베타-머캡토에탄올을 함유하는 파괴 완충제에서 30분 동안 초음파처리한 후, H₂O에서 45분 동안 초음파처리하였다. 문헌(Timmerman et al. (2007), J. Mol. Recognit. 20:283-99) 및 문헌(Slootstra et al. (1996), Molecular Diversity 1: 87-96)에 기재된 방법도 참조한다.Synthesis of peptides: To reconstruct the discrete epitopes of the target molecule, a library of structured peptides was synthesized using chemically linked peptide (CLIPS) technology (Pepscan) on the scaffold, a proprietary technology of Pepscan. The chemical linkage between the peptide and the scaffold was performed essentially as follows: the side chains of multiple cysteines in the peptide were coupled to one or two CLIPS templates. T2 CLIPS template A 0.5 mM solution of 1,3-bis (bromomethyl) benzene was dissolved in ammonium bicarbonate (20 mM, pH 7.9) / acetonitrile (1: 1 (volume / volume)). This solution was added onto the peptide array to allow the CLIPS template to bind to the side chains of the two cystines present in the solid phase bound peptide of the peptide array (455 well plate with 3 쨉 l wells). The peptide array was shaken vigorously in the solution for 30 to 60 minutes while fully covering with the solution. Finally, the peptide array was extensively washed with excess H ₂ O and sonicated in destruction buffer containing 1% SDS / 0.1% beta-mercaptoethanol in PBS (pH 7.2) at 70 ° C for 30 minutes , And sonicated in H ₂ O for 45 minutes. See also the method described by Timmerman et al. (2007), J. Mol. Recognit. 20: 283-99) and Slootstra et al. (1996), Molecular Diversity 1: 87-96.

ELISA 스크리닝: 항체와 합성된 펩티드 각각의 결합을 펩스캔-기초 ELISA에서 시험하였다. 펩티드 어레이를 일차 항체 용액과 함께 항온처리하였다(4℃에서 밤새). 세척 후, 펩티드 어레이를 25℃에서 항체 퍼록시다제 접합체(SBA, 카탈로그 번호 2010-05)의 1/1000 희석물과 함께 1시간 동안 항온처리하였다. 세척 후, 퍼록시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트(ABTS) 및 2 ㎕/㎖의 3% H₂O₂를 첨가하였다. 1시간 후, 발색을 측정하였다. 상기 발색을 전하 커플링된 디바이스(CCD)-카메라 및 영상 프로세싱 시스템으로 정량하였다.ELISA Screening: The binding of each of the synthesized peptides to the antibody was tested in a Pepscan-based ELISA. The peptide array was incubated with the primary antibody solution (4 < 0 > C overnight). After washing, the peptide arrays were incubated with a 1/1000 dilution of the antibody peroxidase conjugate (SBA, Catalog No. 2010-05) at 25 ° C for 1 hour. After washing, peroxidase substrate 2,2'-azino-di-3-ethylbenzthiazoline sulfonate (ABTS) and 2 μl / ml 3% H ₂ O ₂ were added. After one hour, the color development was measured. The color development was quantified by charge coupled device (CCD) -camera and image processing system.

데이터 프로세싱: CCD 카메라로부터 수득된 값은 표준 96웰 플레이트 ELISA 판독기와 유사한 0 mAU 내지 3000 mAU이다. 결과를 정량하여 펩랩(Peplab) 데이터베이스로 저장하였다. 종종, 웰은 가짜 양성 값을 초래하는 기포를 함유한다. 카드를 수동으로 검사하고 기포에 의해 야기된 임의의 값을 0으로서 점수화한다.Data Processing: The values obtained from the CCD camera are from 0 mAU to 3000 mAU, similar to a standard 96 well plate ELISA reader. The results were quantified and stored in a Peplab database. Often, wells contain bubbles that result in false positive values. The card is manually inspected and any value caused by bubbles is scored as zero.

합성 품질 조절: 합성된 펩티드의 품질을 검증하기 위해, 양성 대조군 펩티드 및 음성 대조군 펩티드의 분리된 세트를 동시에 합성하였다. 이들을 항체 57.9로 스크리닝하였다(Posthumus et al., J. Virology, 1990, 64: 3304-3309).Synthetic quality control: To verify the quality of the synthesized peptides, a separate set of positive control peptides and negative control peptides were synthesized simultaneously. They were screened with antibody 57.9 (Posthumus et al., J. Virology, 1990, 64: 3304-3309).

가변 길이 펩티드 스크리닝의 결과는 도 19에 제시되어 있다. 각각의 펩티드에 대한 ELISA 결과는 수평선으로 표시되어 있다. 상기 선의 시작점 및 종점은 어떤 잔기가 펩티드에 포함되어 있는지를 표시하고, 상기 선의 Y 값은 그 펩티드에 대해 수득된 ELISA 결과를 보여준다. 상기 펩티드에 대한 ELISA 결과는 ³⁹⁵FPDIPGA⁴⁰¹(서열번호 42)에 대한 우세한 결합 및 ³⁷⁹PGQP³⁸²(서열번호 43)에 대한 부차적 결합을 보여준다. 29개의 단일 위치 알라닌 치환 세트들의 전반적인 분석은 ³⁹⁴SFDIPGAVASANMTV⁴⁰⁷(서열번호 44)에 대한 가장 강한 결합을 보여주었다. 도 20은 가장 우수한 결합 단일 위치 알라닌 치환 펩티드 세트의 결과를 보여주는데, 이때 펩티드 서열번호 44의 각각의 잔기는 알라닌 또는 글리신(원래의 잔기가 알라닌인 경우)으로 치환되었다. 분석은 이 에피토프의 코어를 형성하는 듯한 잔기 F395, P396, D397 및 I398에 대한 가장 강한 의존성을 보여준다.The results of the variable length peptide screening are shown in Fig. The ELISA results for each peptide are indicated by the horizontal line. The starting and ending points of the line indicate which residues are included in the peptide, and the Y value of the line shows the ELISA results obtained for the peptides. The ELISA results for the peptides show the predominant binding to ³⁹⁵ FPDIPGA ⁴⁰¹ (SEQ ID NO: 42) and the secondary binding to ³⁷⁹ PGQP ³⁸² (SEQ ID NO: 43). The overall analysis of 29 single-site alanine substitution sets showed the strongest binding to ³⁹⁴ SFDIPGAVASANMTV ⁴⁰⁷ (SEQ ID NO: 44). Figure 20 shows the result of the best binding single position alanine substituted peptide set wherein each residue of peptide SEQ ID NO: 44 was replaced with alanine or glycine (if the original residue was alanine). The analysis shows the strongest dependence on the residues F395, P396, D397 and I398 which appear to form the core of this epitope.

다음으로, 항체와 입체구조형 에피토프의 결합을 분석하기 위해, CLIPS 입체구조형 매트릭스 구조를 사용하여 펩티드 스크린에서 확인된 2개의 영역들로부터의 펩티드 쌍들이 함께 존재하게 하였다. 도 21은 (X 축 및 Y 축 상에 나타낸) 인간 CD98의 2개의 부분적인 서열들을 조합한 CLIPS 입체구조형 매트릭스 구조로부터 수득된 데이터를 나타내는 열 맵을 보여준다. 결과는 이차 구조에 대한 높은 의존성을 시사하였다. ³⁹⁵FPDIPGAVSAN⁴⁰⁵(서열번호 70) 및 ³⁷²GLDAAALPGQP³⁸²(서열번호 50)를 조합한 펩티드의 경우 가장 우수한 결합이 관찰되었다. 이들 2개의 펩티드들을 도 22에 나타낸 돌연변이유발 스크린에 대한 기준으로서 사용하였다. SEQ1은 펩티드의 서열을 보여주고, DIF1은 돌연변이가 펩티드에서 위치하는 곳을 표시한다. 회색 영역은 비-돌연변이된 서열을 갖는 펩티드를 표시한다. 마지막 칸은 야생형 펩티드와 돌연변이된 펩티드 사이의 ELISA 값의 차이를 보여준다. 높은 값은 돌연변이가 결합에 대한 강한 부정적인 효과를 갖는다는 것을 시사한다. 돌연변이유발 스크린은 P379, G380, D397 및 I398을 중요한 결합 잔기로서 확인시켜주었다.Next, to analyze the binding of the antibody to the stereostructural epitope, a pair of peptides from the two regions identified in the peptide screen were coexisted using a CLIPS conformational matrix structure. Figure 21 shows a thermal map showing data obtained from a CLIPS conformational matrix structure combining two partial sequences of human CD98 (shown on the X and Y axes). The results suggested a high dependence on the secondary structure. ³⁹⁵ FPDIPGAVSAN ⁴⁰⁵ (SEQ ID NO: 70) and ³⁷² GLDAAALPGQP ³⁸² (SEQ ID NO: 50). These two peptides were used as a reference for the mutagenic screen shown in Fig. SEQ1 shows the sequence of the peptide, and DIF1 indicates where the mutation is located in the peptide. The gray areas indicate peptides with non-mutated sequences. The last column shows the difference in ELISA values between the wild type peptide and the mutated peptide. Higher values suggest that mutations have a strong negative effect on binding. The mutagenic screen identified P379, G380, D397 and I398 as important binding residues.

도 23은 인간화된 단일클론 항체 IGN523의 결합에 중요한 아미노산 잔기로서 확인된 아미노산 잔기의 인간 CD98 표면 상에서의 위치를 보여준다. 도 23a는 키메라 및 돌연변이유발 연구에 의해 확인된 잔기의 위치를 보여주는 반면, 도 23b는 펩스캔 분석에 의해 확인된 잔기의 위치를 보여준다. 도 23c는 잔기들의 두 세트가 실질적으로 중첩된다는 것을 보여주고, 이것은 강조된 루프 영역이 IGN523에 대한 결합 에피토프라는 것을 확인시켜준다. Figure 23 shows the location of the amino acid residues identified as important amino acid residues in the binding of the humanized monoclonal antibody IGN523 on the human CD98 surface. Figure 23a shows the location of residues identified by chimeric and mutagenic studies, while Figure 23b shows the location of residues identified by pepscan analysis. Figure 23C shows that the two sets of residues are substantially overlapping, confirming that the highlighted loop region is the binding epitope for IGN523.

실시예 14: 인간화된 항-CD98 단일클론 항체 IGN523의 생체내 항종양 활성Example 14: In vivo antitumor activity of the humanized anti-CD98 monoclonal antibody IGN523

실시예 8에 기재된 프로토콜을 이용하여 항-CD98 인간화된 단일클론 항체 IGN523의 효과를 여러 이종이식편 모델들에서 시험하였다. 주사, 항체 치료 및 통계학적 계산을 실시예 9에 기재된 바와 같이 수행하였다. IGN523을 라모스(RA.1) 및 DAU 버킷 림프종 모델(도 24 및 25)에서 표준 관리 약물 리툭시맙과 비교하였다. 그 다음, IGN523을 환자로부터 유래된 NSCLC 이종이식편 모델 IGN-LNG-12에서 그의 최대 내약 용량에서 카보플라틴과 비교하였다(도 26). IGN523을 AML 이종이식편 모델 KG-1에서도 시험하였다(도 27). 원래의 종양의 불균질성을 보존하기 위해, 사용된 종양을 임의의 개재 세포 배양 없이 NOD/SCID 마우스에서 최소한으로 계대배양하였다.The effect of anti-CD98 humanized monoclonal antibody IGN523 using the protocol described in Example 8 was tested in several xenograft models. Injection, antibody treatment and statistical calculations were performed as described in Example 9. IGN523 was compared to the standard control drug rituximab in the Ramos (RA.1) and DAU buckling lymphoma models (Figures 24 and 25). IGN523 was then compared to carboplatin at its maximum drug tolerance dose in patient-derived NSCLC xenograft model IGN-LNG-12 (Figure 26). IGN523 was also tested in the AML xenograft model KG-1 (Figure 27). To preserve the inherent heterogeneity of tumors, the tumors used were subcultured to a minimum in NOD / SCID mice without any intervening cell culture.

모든 경우에서 IGN523은 유의한 종양 성장 억제를 보였다. 흥미롭게도, IGN-LNG-12 환자로부터 유래된 종양은 NOD-SCID 마우스에서 체중 손실을 유발하였는데, 이것은 종양 부하와 상관관계를 가졌다(도 26a 및 26b). 카보플라틴은 그의 최대 내약 용량에서 유의한 종양 성장 억제를 유도하였지만, 체중 손실의 증가도 나타내었다. 다른 한편으로, IGN523 치료는 카보플라틴과 유사한 항종양 효과를 발휘하였지만, IGN-LNG-12에 의해 유도된 체중 손실을 감소시켰다. 이들 데이터는 IGN523 치료가 체중 손실을 유도하지 않으면서 이 NOD.SCID 모델에서 카보플라틴만큼 효과적이라는 것을 입증한다.In all cases, IGN523 showed significant tumor growth inhibition. Interestingly, tumors derived from IGN-LNG-12 patients caused weight loss in NOD-SCID mice, which correlated with tumor burden (FIGS. 26A and 26B). Carboplatin induced significant tumor growth inhibition at its maximum dose, but also increased weight loss. On the other hand, IGN523 treatment exerted an antitumor effect similar to carboplatin, but reduced weight loss induced by IGN-LNG-12. These data demonstrate that IGN523 treatment is as effective as carboplatin in this NOD.SCID model without inducing weight loss.

상기 데이터는 버킷 림프종 모델 라모스(RA.1) 및 DAU, 환자로부터 유래된 폐 종양 이종이식편 IGN-LNG-12, 및 AML 모델 KG-1에서 유의한 종양 성장 억제를 입증한다. 나아가, IGN523의 종양 성장 억제는 각각 항암제 카보플라틴 또는 리툭시맙에 필적할만하다(표 4).The data demonstrate significant tumor growth inhibition in the Burkitt lymphoma model Ramos (RA.1) and DAU, patient derived lung tumor xenograft IGN-LNG-12, and AML model KG-1. Further, inhibition of tumor growth of IGN523 is comparable to the anticancer agent carboplatin or rituximab, respectively (Table 4).

IGN-LNG-12 종양에서 IGN523의 용량 반응 관계도 조사하였다. "치료 투약 요법"을 이용하여 항체에 대한 용량 반응을 측정하기 위해 IGN-LNG-12를 선택하였다. 12일째 날 및 19일째 날, 1 mg/kg 내지 30 mg/kg의 IGN523을 투약하였다(도 15). 10 mg/kg 및 30 mg/kg의 용량은 IGN-LNG-12 폐 종양에서 대조군에 비해 상대적으로 50% 내지 66%의 최대 종양 성장 감소를 발생시켰다.The dose-response relationship of IGN523 in IGN-LNG-12 tumors was also investigated. IGN-LNG-12 was selected to measure the dose response to the antibody using "therapeutic dosing regimen ". On the 12th day and 19th day, 1 mg / kg to 30 mg / kg of IGN523 was administered (Fig. 15). A dose of 10 mg / kg and 30 mg / kg resulted in a maximum tumor growth reduction of 50% to 66% relative to the control group in IGN-LNG-12 pulmonary tumors.

종합하건대, 생체내 효능 데이터는 IGN523이 다양한 이종이식편 모델에서 표준 임상 약제의 종양 성장 억제에 적어도 필적할만한 유의한 종양 성장 억제를 유도한다는 것을 입증한다.Taken together, in vivo efficacy data demonstrate that IGN523 induces significant tumor growth inhibition that is at least comparable to tumor growth inhibition of standard clinical drugs in various xenograft models.

실시예 15: 인간화된 항-CD98 단일클론 항체 IGN523에 대한 수용체 결합 특이성Example 15: Receptor binding specificity for humanized anti-CD98 monoclonal antibody IGN523

표 5는 표시된 종들 사이의 CD98의 세포외 도메인(ECD) 및 IGN523이 결합하는 CD98의 에피토프의 서열 상동성의 백분율을 보여준다. 표 5에 나타낸 바와 같이, IGN523이 결합하는 CD98의 인간 에피토프와 사이노몰구스 원숭이 에피토프 사이의 상동성은 96%이다. 다양한 방법들, 예컨대, 표면 플라스몬 공명(SPR, 비아코어), 생체층 간섭측정(Octet) 또는 ELISA를 이용한 수용체 결합 특이성 연구는 IGN523이 인간 및 사이노몰구스 원숭이 CD98에 고친화성으로 결합하나, 감소하는 상동성으로 인해 CD98의 다른 종(뮤린, 래트, 토끼, 개 및 돼지 상동체를 포함함)에는 결합하지 않는다는 것을 확인시켜주었다(표 5). 비아코어 및 Octet 데이터는 IGN523의 K_D가 인간 CD98의 경우 2 nM 내지 6 nM이고 사이노몰구스 원숭이 CD98의 경우 8 nM 내지 14 nM이라는 것을 입증한다. ELISA 결합 데이터는 IGN523에 대한 EC₅₀이 인간 CD98의 경우 9 ng이고 사이노몰구스 원숭이 CD98의 경우 39 ng이라는 것을 보여준다.Table 5 shows the percentage of sequence homology of the extracellular domain (ECD) of CD98 and the epitope of CD98 to which IGN523 binds between the indicated species. As shown in Table 5, the homology between the human epitope of CD98 to which IGN523 binds and the cynomolgus monkey epitope is 96%. Receptor binding specificity studies using a variety of methods, such as surface plasmon resonance (SPR, Biacore), bio-layer interferometry (Octet) or ELISA, suggests that IGN523 binds to human and cynomolgus monkey CD98 with high affinity, (Including murines, rats, rabbits, dogs and pig homologues) of CD98 due to the homology of the CD98 (Table 5). Biacore and Octet data demonstrate that the K _D of IGN523 is 2 nM to 6 nM for human CD98 and 8 nM to 14 nM for cynomolgus monkey CD98. ELISA binding data shows that the EC ₅₀ for IGN523 is 9 ng for human CD98 and 39 ng for cynomolgus monkey CD98.

사이노몰구스 원숭이가 독성 연구에 적절한 종인지를 확인하기 위해, 신장, 태반 및 대뇌의 인간 및 사이노몰구스 동결 조직 박편을 IGN523으로 염색하였다(도 29). 인간 신장 및 태반(양성 대조군)의 냉동박편에서, 신장 세뇨관 상피(신장) 및 영양포 상피세포(태반)의 중간 내지 강한 막 및 세포질 염색이 관찰되었고, 이 염색 강도는 상응하는 사이노몰구스 원숭이 조직 박편에서의 염색 강도와 동일하지는 않지만 유사하였다. 인간 및 사이노몰구스 원숭이 대뇌의 경우, 신경망 및 세포질 과립 상피의 유사한 약한 내지 중간 세포질 염색이 관찰되었다. 종합하건대, 사이노몰구스 원숭이 조직에서의 염색은 인간 조직에서의 염색에 필적할만한 듯하다. 친화성 및 염색 데이터에 기초할 때, 사이노몰구스 원숭이는 IGN523의 안전성을 평가하기에 적절한 종인 것으로 간주된다.Human, and cynomolgus frozen tissue flakes of the kidney, placenta, and cerebrum were stained with IGN523 (Fig. 29) to confirm that the cynomolgus monkey was the appropriate species for toxicity studies. In the frozen flakes of the human kidney and placenta (positive control), moderate to strong membrane and cytoplasmic staining of the renal tubular epithelium (kidney) and the nutrient epithelial cells (placenta) were observed and the intensity of the staining was measured by the corresponding cynomolgus monkey tissue It was similar but not identical to the staining intensity in the flakes. In the case of human and cynomologus monkey cerebrum, similar weak to intermediate cytoplasmic staining of neural networks and cytoplasmic granular epithelium was observed. Putting it all together, the staining in the cynomolgus monkey tissue seems comparable to the staining in human tissue. Based on affinity and staining data, the cynomolgus monkey is considered to be a species suitable for assessing the safety of IGN523.

실시예 16: 사이노몰구스 원숭이에서 단일 용량 약동학 연구Example 16: Single dose pharmacokinetic study in cynomolgus monkeys

IGN523의 시험적인 비-GLP 단일 용량 정맥내 약동학 연구를 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg 및 100 mg/kg의 용량에서 수컷 사이노몰구스 원숭이 및 암컷 사이노몰구스 원숭이(성별/군 당 N=2)에서 수행하였다. 체중 kg 당 1 mg, 3 mg, 10 mg 또는 100 mg의 IGN523을 원숭이에게 단회 1시간 정맥내 관주한 후 IGN523의 현저한 용량 의존적 반응속도가 관찰되었다. 따라서, 이용된 비-구획 분석 방법의 적용에서 내포된 선형성에 대한 기본 가정은 연구된 전체 용량 범위에 걸쳐 IGN523에 적용되지 않고, 용량 군들 사이에 설명적으로 비교하기 위해 파라미터가 디스플레이된다. 성별 당 2마리의 동물만이 각각의 용량 수준에서 평가되었지만, 수컷 동물 대 암컷 동물의 PK 프로파일에 있어서 분명한 차이가 없었다. 수컷 동물 및 암컷 동물의 평균 농도-시간 프로파일은 체중 kg 당 1 mg 내지 100 mg의 IGN523의 용량에서 각각의 용량 군 내에서 유사하였다(표 6).Experimental non-GLP monoclonal intravenous pharmacokinetic studies of IGN523 were performed in male cynomolgus monkeys and female cynomolgus monkeys (sex / age) at doses of 1 mg / kg, 3 mg / kg, 10 mg / kg and 100 mg / N = 2 per group). A significant dose-dependent response rate of IGN523 was observed after intravenous administration of 1 mg, 3 mg, 10 mg or 100 mg of IGN523 per kg of body weight to the monkey for a single hour. Thus, the basic assumptions about the linearity implied in the application of the utilized non-compartmental analysis method are not applied to the IGN 523 over the entire capacity range studied, and the parameters are displayed for illustrative comparison between the capacity groups. Only 2 animals per sex were evaluated at each dose level, but there was no apparent difference in PK profiles between male and female animals. The mean concentration-time profiles of male and female animals were similar within each dose group at the dose of 1 mg to 100 mg of IGN 523 per kg body weight (Table 6).

종합하건대, 1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량 범위에 걸쳐 IGN523의 "겉보기" 혈장 CL에 있어서 10배 감소가 있었다. 평균 "겉보기" MRT 및 평균 "겉보기" T_1/2는 1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량 범위에 걸쳐 12배 내지 13배 증가하였다. 1 mg/kg, 3 mg/kg 또는 10 mg/kg의 용량에서 평균 "겉보기" V_ss에 있어서 차이가 없었지만, 100 mg/kg의 용량 군에서 평균 "겉보기" V_ss는 1 mg/kg, 3 mg/kg 또는 10 mg/kg 군에 비해 대략 30% 내지 40% 더 높았다. 이들 발견들 모두가 원숭이에서 IGN523의 비-선형 성향 특성이 표적 매개 약물 성향(TMDD)에 기인할 수 있다는 것을 암시한다. TMDD 모델은 다른 단일클론 항체의 비-선형 성향을 기술하는 데에 종래 사용되고 있다. TMDD는 항체가, 표적-항체 상호작용이 낮은 용량에서 정량적으로 중요한 제거 경로를 나타내도록 풍부하게 발현되는 조밀하게 밀집된 세포 표면 표적들에 대한 특이성을 가질 때 발생한다(Mager 2001, Mager 2003, Luu 2012).Taken together, there was a 10-fold reduction in the "apparent" plasma CL of IGN 523 over a dose range of 1 mg / kg to 100 mg / kg. The mean "apparent" MRT and the mean "apparent" T _1/2 were increased 12- to 13-fold over the dose range of 1 mg / kg to 100 mg / kg. 1 mg / kg, 3 mg / kg or 10 mg / in capacity kg I did not have a difference in average "apparent" V _ss, 100 mg / in the capacitor group kg average "apparent" V _ss is 1 mg / kg, 3 mg / kg or 10 mg / kg group. All of these findings suggest that the non-linear propensity of IGN523 in monkeys may be due to the target medication propensity (TMDD). The TMDD model has been used conventionally to describe the non-linearity of other monoclonal antibodies. TMDD occurs when an antibody has specificity for densely packed cell surface targets that are abundantly expressed to exhibit quantitatively significant removal pathways at low doses of target-antibody interaction (Mager 2001, Mager 2003, Luu 2012 ).

실시예 17: 사이노몰구스 원숭이에서 반복 용량 GLP 연구Example 17: Repeated dose GLP studies in cynomolgus monkeys

IGN523의 독성학, PK 및 면역원성을 사이노몰구스 원숭이에서 GLP 다회 용량 IV 투여 독성학 연구에서 연구한다. 이 연구는 광범위한 조직 목록(주사 부위를 포함함)을 포함하는, 임상 종점, 독성반응속도, 면역원성(항-IGN523 항체의 발생) 및 조직병리학에 대한 포괄적인 데이터를 제공하고, 임상시험에서 투여될 물질을 대표하는 제제화된 물질로 수행된다. 추가로, 선택된 안전성 약리학 종점(신경행동, 심전도검사, 호흡행동)도 평가된다.The toxicology, PK and immunogenicity of IGN523 are studied in GLP multi-dose IV dose toxicology studies in cynomolgus monkeys. This study provides comprehensive data on clinical endpoints, toxic kinetics, immunogenicity (development of anti-ANG523 antibodies), and histopathology, including extensive tissue listings (including injection sites) This is done with the formulated material that represents the material to be treated. In addition, selected safety pharmacological endpoints (nerve activity, ECG, respiration) are also evaluated.

투약 요법은 8주 동안 매주 1회 정맥내 60분 관주이다. 사용된 용량은 매주 1회 10 mg/kg, 30 mg/kg 및 100 mg/kg의 IGN523이고, 그 후 4주 치료 부재 회복 기간이 있다(표 5). 4주 회복 기간은 IGN523의 완전한 제거를 가능하게 하고 임의의 잠재적인 독성의 가역성을 평가하기에 충분한 시간인 것으로 간주된다. 가장 높은 용량은 MTD에 근접할 것으로 예상되고, 환자에서 예상된 노출을 훨씬 초과하는 상당한 노출을 제공한다. 면역원성(항-IGN523 항체) 및 독성반응속도를 모니터링한다.The dosing regimen is a 60 minute intravenous cycle once a week for 8 weeks. The doses used were IGN 523 at 10 mg / kg, 30 mg / kg and 100 mg / kg once weekly, followed by a recovery period of 4 weeks (Table 5). A four week recovery period is considered to be sufficient time to allow complete elimination of IGN523 and to assess the reversibility of any potential toxicity. The highest dose is expected to approach the MTD and provides significant exposure that far exceeds the expected exposure in the patient. Immunogenicity (anti-ANG523 antibody) and toxic reaction rate are monitored.

표 8은 다회 용량 사이노몰구스 GLP 독성학 연구를 위한 연구 디자인의 상세한 요약을 함유한다. 선택된 안전성 약리학 종점(신경행동, 심전도검사, 호흡행동)을 사이노몰구스 원숭이에서 GLP 반복 용량 연구와 관련하여 평가할 것이다.Table 8 contains a detailed summary of the study design for multi-dose, cytoplasmic GLP toxicology studies. The selected safety pharmacological endpoints (neurobehavioral, electrocardiographic, respiratory) will be evaluated in relation to the GLP repeat dose study in cynomolgus monkeys.

실시예 18: IGN523의 용혈력 평가Example 18: Evaluation of hemolytic activity of IGN523

사이노몰구스 전혈을 사용하여 IGN523의 용혈력을 시험관내에서 평가할 것이다. 이 시험의 결과를 이용하여 헤모글로빈에 대한 임의의 잠재적 효과를 확인할 것이다. 전혈 채취 당일 비-인간 영장류 전혈을 사용하여 연구를 수행할 것이다. 표 9는 IGN523의 용혈력 평가를 위한 GLP 연구 디자인의 요약을 함유한다.Cynomolgus whole blood will be used to assess the hemolytic potential of IGN523 in vitro. The results of this test will be used to identify any potential effects on hemoglobin. On the day of whole blood collection, non-human primate whole blood will be used for the study. Table 9 contains a summary of the GLP study design for the hemolytic potential assessment of IGN523.

실시예 19: 급성 정맥내 및 혈관주위 자극Example 19: Acute intravenous and perivascular stimulation

고농도에서 직접적인 주사 영역에서의 화합물의 단기 독성을 평가하기 위해 자극 및 국소 조직 내성 연구를 디자인한다. 이 연구의 일부로서 화합물을 정맥내 및 혈관주위에서 투여하여 초기 노출에 접할 것으로 예상되는 조직에 대한 효과를 확인한다. 토끼는 이 평가에 대한 표준 동물 모델이다.Design stimulus and focal tissue resistance studies to assess short-term toxicity of compounds at high concentrations at the direct injection site. As part of this study, compounds are administered intravenously and intravascularly to identify effects on tissues that are expected to encounter initial exposure. Rabbits are standard animal models for this evaluation.

실시예 20: IGN523의 조직 교차반응성Example 20: Tissue cross-reactivity of IGN523

FDA 지침서(Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use (February, 1997))에 상세히 기재된 바와 같이 전체 범위의 인간 조직들을 사용하여 IGN523의 조직 교차반응성 프로파일을 특징규명한다. 연구되는 조직의 포괄적인 목록은 표 10에 포함되어 있다.A full range of human tissues is used to characterize the tissue cross-reactive profile of IGN523 as detailed in the FDA Handbook (Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use (February, 1997)). A comprehensive list of organizations studied is included in Table 10.

실시예 21: 재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병을 갖는 환자에서 IGN523의 안전성 및 약동학을 평가하기 위한 I 기 임상 연구Example 21: Phase I clinical study to evaluate the safety and pharmacokinetics of IGN523 in patients with relapsed or refractory acute myelogenous leukemia

일차 목적Primary purpose

본 연구의 일차 목적은 다음과 같다:The primary objectives of this study are as follows:

재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병(AML)을 갖는 환자에게 매주 투약으로 시작되는 일정으로 투여된 IGN523의 안전성 및 내약성을 평가하는 것;

Assessing the safety and tolerability of IGN523 administered at a schedule beginning with weekly dosing to patients with relapsed or refractory acute myelogenous leukemia (AML);

매주 4회 투여된 경우 IGN523의 최대 내약 용량(MTD) 및 용량 제한 독성(DLT)을 측정하는 것; 및

Measuring the maximum tolerated dose (MTD) and dose-limiting toxicity (DLT) of IGN523 administered four times per week; And

안전성, 약동학 및 약력학 데이터에 기초하여 IGN523의 권장된 2 기 용량(RP2D)을 확인하는 것.

Identify the recommended second dose (RP2D) of IGN 523 based on safety, pharmacokinetic and pharmacodynamic data.

이차 목적Secondary purpose

IGN523에 대한 항체 형성률을 평가하는 것;

Assessing antibody formation rates against IGN523;

재발된 또는 불응성 AML을 갖는 환자에서 IGN523의 약동학을 특징규명하는 것;

Characterizing the pharmacokinetics of IGN523 in patients with relapsed or refractory AML;

재발된 또는 불응성 AML을 갖는 환자에서 IGN523의 항백혈병 활성을 예비적으로 평가하는 것; 및

Preliminary evaluation of the anti-leukemic activity of IGN523 in patients with relapsed or refractory AML; And

IGN523 항백혈병 활성을 예측할 생물학적 마커를 예비적으로 평가하는 것.

IGN523 Preliminary assessment of biological markers to predict anti-leukemia activity.

방법Way

표준 3+3 디자인을 이용한 대략 6회 용량 군, 및 MTD 또는 RP2D에서의 확장 군의 개방 표지 용량 상승 연구Approximately 6 dose groups using standard 3 + 3 design, and open label increase of extension groups in MTD or RP2D

피험자의 수Number of subjects

용량 상승: 대략 21명 내지 30명Capacity increase: approximately 21 to 30

용량 확장: 20명Capacity Expansion: 20

연구 약물Research drug

IGN523 약물은 25 ㎖ 일회용 유리 바이알 내의 20 ㎖의 10 mg/㎖ 용액으로서 공급될 것이다. 적절한 부피의 IGN523 약물은 250 ㎖까지 희석되어 1시간에 걸쳐 정맥내(IV)로 관주될 것이다. I 기 용량 상승 연구(단락 10.2.1의 프로토콜 시놉시스 참조)에서, 환자의 군들은 8회 용량의 경우 매주 30 mg/kg까지 상승 용량으로 치료될 수 있다. 8주를 초과한 계속된 치료가 계속되는 임상 이익(즉, 질환 진행의 부재 및 허용불가능한 독성의 부재)을 갖는 환자에게 제공될 것이다. 관련 용량에서 데이터의 축적을 최대화하고 잠재적으로 치료 용량 미만의 용량에서 환자의 치료를 최소화하기 위해 환자내 용량 상승은 특정 조건(단락 10.2.1에 기재됨) 하에서 허용될 수 있다. The IGN523 drug will be supplied as a 20 mg 10 mg / ml solution in a 25 ml disposable glass vial. An appropriate volume of IGN523 drug will be diluted to 250 ml and will be inoculated intravenously (IV) over 1 hour. In the I-dose escalation study (see protocol synopsis in paragraph 10.2.1), groups of patients can be treated with elevated doses up to 30 mg / kg weekly for 8 doses. Continued treatment beyond 8 weeks will be provided to patients with continued clinical benefit (i. E., Absence of disease progression and unacceptable toxicity). To maximize the accumulation of data at relevant doses and to minimize the patient's treatment at potentially less than therapeutic doses, patient dose escalation may be allowed under certain conditions (as described in paragraph 10.2.1).

진단 및 주요 포함 기준Diagnostic and Critical inclusion criteria

효과적인 표준 치료가 존재하지 않는 재발된 또는 치료 불응성 AMLRelapsed or refractory AML without effective standard therapy

측정가능한 질환을 가져야 함;

Have measurable disease;

18세 이상의 연령;

Age 18 or older;

이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group)(ECOG) 수행 상태 0 내지 2;

Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status 0 to 2;

12주 이상의 기대 수명;

Life expectancy over 12 weeks;

25,000/㎣ 이상의 혈소판 수(수혈에 의해 유지될 수 있음);

Platelet count above 25,000 / ((which may be maintained by transfusion);

2.5배 규격 정상 상한(ULN) 이하의 AST(SGOT)/ALT(SGPT);

2.5 times AST (SGOT) / ALT (SGPT) below the normal upper limit (ULN);

1.5배 규격 ULN 이하의 총 빌리루빈;

Total bilirubin less than 1.5 times ULN;

2배 규격 ULN 이하의 크레아티닌, 또는 50 ㎖/분 이상의 계산된 또는 측정된 크레아티닌 제거;

Creatinine less than or equal to double ULN, or calculated or measured creatinine greater than or equal to 50 ml / min;

임신가능 여성 및 남성의 경우, 연구 참여 전 및 연구 참여의 지속기간 동안 적절한 피임(또는 출산 조절의 호르몬 또는 차단제 방법; 금욕)에 대한 동의; 및

For pregnant women and men, consent to appropriate contraception (or hormone or blocker method of abstinence, abstinence) during pre-study participation and duration of study participation; And

작성된 사전 동의서를 이해하고 서명할 의지를 갖는 능력.

Ability to understand and sign the written consent form.

배제 기준Exclusion criteria

주기 1의 1일째 날 전, 4주 이내에 단일클론 항체 치료의 사용, 또는 2주 이내에 화학치료 또는 방사선치료의 사용(주기 1의 1일째 날 전 최대 72시간까지 말초 모세포 수를 조절하기 위해 제공되는 하이드록시우레아가 허용됨);

The use of monoclonal antibody therapy within the first day of cycle 1, within 4 weeks, or the use of chemotherapy or radiotherapy within 2 weeks (provided for up to 72 hours prior to the first day of cycle 1, Hydroxyurea is allowed);

선행 항암치료로부터 1 초과의 NCI CTCAE v4.0 등급의 미해결된 급성 독성;

Unresolved acute toxicity of more than 1 NCI CTCAE v4.0 grade from anticancer chemotherapy;

면역억제 치료를 현재 요구하는 선행 동종이계 줄기 세포 이식;

Previous allogeneic stem cell transplantation currently requiring immunosuppressive therapy;

단일클론 항체 치료에 대한 중증 알레르기 또는 아나필락시스 반응의 이력;

History of severe allergic or anaphylactic reactions to monoclonal antibody therapy;

백혈병의 공지된 연수막 또는 CNS 침습

Known leukemia or CNS invasion of leukemia

계속되는 또는 활성 감염, 증상을 나타내는 울혈성 심부전, 불안정한 협심증, 심장 부정맥, 또는 연구 요건에의 충족을 제한할 정신과적 질병/사회적 상황

Continuous or active infection, congestive heart failure with symptoms, unstable angina, cardiac arrhythmia, or psychiatric disease / social conditions that will limit the fulfillment of research requirements

주기 1의 1일 전 4주 이내의 최근 주요 수술

Recent major surgery within 4 weeks 1 day before cycle 1

임신 또는 수유 여성

Pregnant or lactating women

진단 계획Diagnostic plan

하기 이유에 근거하여, 연구 등록 후 말초 혈액(또는 골수)의 환자 AML 샘플을 CD98의 발현에 대해 후향적으로 분석할 것이다(환자 스크리닝의 일부로서 분석되지 않고 연구 적격성에 대한 조건으로서 사용되지는 않는다):Based on the following reasons, patient AML samples of peripheral blood (or bone marrow) following study enrollment will be retrospectively analyzed for expression of CD98 (not analyzed as part of patient screening and not used as a condition for study eligibility ):

CD98은 정상적인 골수 샘플들의 유사하게 "게이팅된" 세포에 비해 대다수(약 94%)의 AML 환자의 CD34⁺/CD33⁺ 및 CD34⁺/CD33^- 하위집단에서 상이하게 과다발현된다.

CD98 is overexpressed differentially in the CD34 ⁺ / CD33 ⁺ and CD34 ⁺ / CD33 ^- subpopulations of the majority (about 94%) of AML patients compared to similarly "gated" cells of normal bone marrow samples.

제안된 I 기 연구에 참여할 환자를 선택하기에(또는 참여로부터 환자를 배제하기에) 적절한 환자 샘플에 대한 CD98 발현을 검출하고 정량하는 임상적으로 검증된 방법은 없다.

There is no clinically proven method for detecting and quantifying CD98 expression on appropriate patient samples to select patients to participate in the proposed Phase I study (or to exclude patients from participation).

I 기 결과의 어세이 및 분석의 적격화는 환자 선택을 요구할 수 있는 향후 임상 연구의 디자인을 알려주는 데에 이용될 것이다.

Assessment of the I-outcomes and eligibility of analysis will be used to inform future designs of clinical studies that may require patient selection.

시험 제품, 투여 방식 및 출발 용량Test product, method of administration and starting dose

IGN523IGN523

정맥내 관주Intravenous line

출발 용량: GLP 다회 용량 사이노몰구스 독성 연구에서 관찰된 NOAEL(관찰된 부작용 부재 수준(No Observed Adverse Effect Level))의 인간 등가 용량(HED)의 1/6 이하Starting dose: less than 1/6 of the human equivalent capacity (HED) of NOAEL (No Observed Adverse Effect Level) observed in the GLP multi-dose cynomolgus toxicity study

치료의 군 개시 및 지속Military initiation and continuation of treatment

후속 환자 등록 또는 투약 결정에 영향을 미칠 가능한 중증 및/또는 심각한 급성(예를 들면, 관주 관련) 독성의 관찰을 가능하게 하기 위해, 각각의 새로운 용량 군에서 제1 환자는 그 군 내의 임의의 다른 환자보다 적어도 1일 전에 투약받을 것이다.To enable observation of possible severe and / or severe acute (e.g., related) toxicity that will affect subsequent patient registration or medication decisions, the first patient in each new dose group will be treated as any other It will be given at least 1 day before the patient.

환자는 8주(2회 28일 주기) 동안 매주 정맥내 용량의 IGN523을 제공받을 것이다. 8주를 초과하는 투약은 계속되는 임상 이익(즉, 질환 진행의 부재) 및 허용가능한 안전성에 대한 기준을 최대 1년 동안 충족시키는 환자의 경우 허용될 것이다. The patient will receive an intravenous dose of IGN 523 every 8 weeks (twice the 28 day cycle). Dosages above 8 weeks will be acceptable for patients who meet the criteria for continued clinical benefit (ie, no progression of disease) and acceptable safety for up to one year.

환자내 용량 상승Increased patient capacity

관련 용량에서 정보의 축적을 최대화하고 잠재적으로 최적 용량 미만의 용량에의 환자의 노출을 최소화하기 위해 환자내 용량 상승은 하기 조건 하에서 허용될 수 있다:To maximize the accumulation of information at relevant doses and potentially minimize patient exposure to doses below optimal doses, an increase in dose in a patient may be allowed under the following conditions:

환자는 임의의 용량 상승 전에 그들의 원래 배정된 용량 수준에서 적어도 2회 28일 주기에서 완료해야 한다.

Patients should complete at least two 28-day cycles at their original assigned dose levels before any dose increases.

환자는 IGN523 투여의 적어도 1회 28일 주기를 통해 완료된 3개 내지 6개 환자 용량 군에 의해 제거되는 최고 용량 수준까지 그들의 용량을 단지 상승시킬 수 있다.

The patient can only raise their dose to the highest dose level that is eliminated by the 3 to 6 patient dose group completed over at least once a 28 day cycle of IGN523 administration.

모든 환자내 용량 상승 결정은 환자에게 최선의 이익이라고 생각되는지에 대한 의료인과 협의된 연구자의 판단에 기초할 것이다.

The decision to increase the dose in all patients will be based on the judgment of the investigator in consultation with the healthcare provider as to whether or not they are considered to be the best benefit for the patient.

DLT의 정의Definition of DLT

DLT는 주기 1의 1일째 날 내지 28일째 날 동안 발생하는, IGN523과 관련되어 있는(그리고, 또 다른 명확히 식별가능한 원인에 기인하지 않는) 것으로서 연구자에 의해 간주되는 하기 부작용들 중 임의의 부작용일 것이다:DLT will be any of the following side effects considered by the investigator to be associated with IGN 523 (and not due to another clearly identifiable cause) that occur during day 1 to day 28 of cycle 1 :

하기 독성을 제외한 등급 3 또는 4 비-혈액학적 독성:

Grade

3 or 4 non-toxic: Non-hematological toxicity:

- 관주를 완료한 후 24시간 동안 또는 24시간 이내에 발생하고 감소된 관주 속도, 지지 치료 및/또는 코르티코스테로이드의 투여에 의해 24시간 이내에 해소되는 ((호흡 곤란의 징후/증상의 부재 하에서) 발열, 오한/경축, 구역, 구토, 소양증, 두통, 비염, 발진, 무력증, 및/또는 저산소증과 같은 증상을 비롯한) 가역적 등급 3 비-알레르기 관주 독성, 및 - fever (occurring in the absence of signs / symptoms of dyspnea) (occurring within 24 hours or 24 hours after completing the crossing) and resolved within 24 hours by administration of reduced pedicle velocity, supportive treatment and / or corticosteroids; Irritable, and / or hypoxic), reversible grade 3 non-allergic rhododendrity, and / or chronic allergic rhinitis, including, but not limited to,

- 일시적이고(즉, 48시간 미만 동안 지속) 및 임상 종양 용해 증후군의 증상 발현(즉, 1.5배 ULN 이상의 크레아티닌, 심부정맥, 갑작스런 사망 또는 발작)이 없는 경우 등급 3 또는 4 고요산혈증, 고인산혈증 또는 저칼슘혈증, 또는 등급 3 고칼륨혈증;- Grade 3 or 4 hyperuricemia, hyperphosphatemia, or hyperuricemia in the absence of symptomatic manifestations (ie, 1.5 times ULN or higher creatinine, cardiac arrhythmia, sudden death or seizure), transient (ie, lasting less than 48 hours) Hypocalcemia, or grade 3 hyperkalemia;

출혈을 초래하거나, 혈소판 수혈 없이 2주 이내에 기준 값의 80% 이상까지 개선되지 않는 (수혈 뒷받침을 요구하는 기존 혈소판감소증을 갖지 않는 환자에서) 등급 3 또는 4 혈소판감소증; 및

Grade

3 or 4 thrombocytopenia (in patients who do not have existing thrombocytopenia requiring blood transfusion) that do not lead to bleeding or improve to more than 80% of baseline values within 2 weeks without platelet transfusion; And

발열(100.4℉/38℃의 구강 또는 고실 온도)과 관련되어 있거나 성장 인자 뒷받침 없이 2주 이내에 기준 값의 80% 이상까지 개선되지 않는 (성장 인자 뒷받침을 요구하는 기존 호중구감소증을 갖지 않는 환자에서) 등급 3 또는 4 호중구감소증.

(In patients who do not have conventional neutropenia requiring growth factor support) that are associated with fever (oral or solid temperature at 100.4 ℉ / 38 캜) or that do not improve to more than 80% of the reference value within two weeks without growth

factor support Grade

3 or 4 neutropenia.

DLT 윈도우DLT window

주기 1의 1일째 날 내지 28일째 날Day 1 to day 28 of cycle 1

용량 상승 방식Capacity increase method

용량 상상은 주어진 군 내의 각각의 개체가 28일째 날에 도달한 후에만 일어날 수 있다. 질환 진행을 경험하고 DLT 없이 28일째 날 전에 연구로부터 철수된 환자는 DLT에 대해 평가되지 않을 것이고 교체될 것이다. 용량 상승은 하기 방식에 따라 군들 사이에 최대 100% 증가율(또는 유의한 AE가 관찰된 경우 이보다 더 적은 증가율)로 진행될 것이다:Capacity Imagery can only occur after each individual in a given group reaches the day of the 28th day. Patients who experienced disease progression and were withdrawn from the study before day 28 without DLT will not be evaluated for DLT and will be replaced. The capacity increase will proceed with a maximum 100% increase rate between the groups (or less if a significant AE is observed) according to the following scheme:

3명의 환자들 중 0명의 환자가 주어진 용량 수준에서 DLT를 갖는 경우, 3명의 환자들은 다음 용량 수준에서 등록될 수 있다.

If 0 out of 3 patients have DLT at a given dose level, 3 patients can be enrolled at the next dose level.

3명의 환자들 중 2명 이상의 환자들이 주어진 용량 수준에서 DLT를 경험하는 경우, 용량 증가는 중단될 것이고, 이 용량은 MTD를 초과하는 용량으로 공표될 것이다.

If two or more of the three patients experience DLT at a given dose level, the dose increase will cease and this dose will be announced at a dose exceeding the MTD.

3명의 환자들 중 1명의 환자가 주어진 용량 수준에서 DLT를 경험하는 경우, 적어도 3명 더 많은 환자들이 동일한 용량 수준에서 등록될 것이다. 이들 3명의 환자들 중 0명의 환자가 DLT를 경험하는 경우, (100% 미만의 용량 증가율일 수 있는) 다음 용량 수준으로 진행된다. 이 군의 1명 이상의 환자가 DLT를 경험한 경우, 용량 상승은 중단되고, 이 용량은 MTD를 초과하는 용량으로서 공표될 것이다.

If one of the three patients experiences DLT at a given dose level, at least three more patients will be enrolled at the same dose level. If 0 of these 3 patients experience DLT, they proceed to the next dose level (which may be a dose increase rate of less than 100%). If more than one patient in this group has experienced DLT, the dose escalation will cease and this dose will be published as a dose in excess of the MTD.

일단 MTD가 초과되면, 이전 용량 상승 증가율이 30% 이하인 경우, 이전 용량 수준을 MTD로서 평가하기 위해 최소 6명의 평가가능한 환자들이 이전 용량 수준에서 등록될 수 있다. 이전 용량 상승 증가율이 30%를 초과한 경우, 2개의 최고 용량 수준 사이의 중간에 있는 하나 이상의 용량 수준이 평가될 수 있다.

Once the MTD is exceeded, a minimum of six assessable patients can be enrolled at the previous dose level to assess the previous dose level as MTD, if the previous dose increase rate is less than 30%. If the previous capacity increase rate exceeds 30%, one or more capacity levels in the middle between the two highest capacity levels can be evaluated.

최소 6명의 환자들 중 3분의 1 미만의 환자에서 DLT를 발생시키는 최고 용량 수준은 MTD로서 공표될 것이다.

The highest dose level that causes DLT in less than one-third of patients in at least six patients will be published as MTD.

용량 상승 위원회Capacity increase committee

각각의 연구 군의 종결 시 의료인, 약물 안전성 대표 및 추가 즉석 연구 팀 구성원으로 구성된 내부 용량 상승 위원회는 연구자와 협의하여 용량 상승을 진행시키거나, 용량 상승 방식을 변경하거나, 연구를 중단하는 것에 대해 동의할 것이다. 이 위원회는 후속 군에 대한 용량 상승을 결정하기 전에 현재 군의 모든 이용가능한 연구 데이터 및 이전 군의 모든 이용가능한 안전성 데이터를 검토할 것이다. 모든 연구 피험자는 질환 진행, 허용불가능한 독성의 발생, 비-순응성, 또는 피험자 또는 연구자 결정에 의한 동의 철회가 있을 때까지 연구 치료를 제공받을 것이다.At the conclusion of each study group, the Internal Capacity Rise Committee, consisting of healthcare workers, drug safety representatives, and additional immediate research team members, agreed with the researchers to agree to proceed with capacity increases, change capacity- something to do. This committee will review all available research data for the current army and all available safety data for the previous army before determining the capacity increase for subsequent military units. All study subjects will receive research treatments until disease progression, the occurrence of unacceptable toxicity, non-compliance, or withdrawal by subject or researcher decision.

평가 효능에 대한 기준Criteria for evaluation efficacy

말초 혈액 카운트Peripheral blood count

골수 흡입 및 생검Bone marrow aspiration and biopsy

안전성safety

안전성 결과 척도는 다음과 같다: DLT의 발생률 및 성질, 및 부작용의 발생률 및 중증도.The safety outcome measures are as follows: Incidence and nature of DLT, incidence and severity of side effects.

PK 샘플링PK sampling

PK 평가는 하기 일정에 따라 수행될 것이다:PK evaluation will be performed according to the following schedule:

1일째 날 투약: 투약 전, 및 투약 후 30분, 4시간, 24시간 및 48시간(또는 72시간)Day 1 Dose: 30 minutes, 4 hours, 24 hours and 48 hours (or 72 hours) before, and after dosing,

8일째 날, 15일째 날 및 21일째 날 투약: 투약 전, 및 투약 후 30분, 4시간 및 48시간(또는 72시간)Day 8, Day 15 and Day 21 Dosage: 30 minutes, 4 hours and 48 hours (or 72 hours) before,

후속 투약: 투약 전, 및 투약 후 30분Subsequent doses: before and 30 minutes after dosing

확장 군Extension group

추가 안전성, 내약성 및 약동학 데이터, 및 임상 활성의 예비 증거를 수득하기 위해, 재발된 또는 불응성 AML을 갖는 최대 추가 20명의 환자들은 MTD 또는 RP2D에서 확장 군 내로 등록될 것이다. MTD가 I 기의 DLT 관찰 기간 동안 관찰된 안전성(DLT) 데이터에 의해 주로 결정될 것이지만, RP2D는 DLT 윈도우를 벗어나는 추가 안전성 데이터도 고려할 것이고, I 기 용량 상승 동안 수집된 정보(PK 및 표적 점유 데이터를 포함함)도 포함할 수 있다.To obtain additional safety, tolerability and pharmacokinetic data, and preliminary evidence of clinical activity, a maximum of 20 patients with relapsed or refractory AML will be enrolled in the expansion group at MTD or RP2D. Although the MTD will be largely determined by the safety (DLT) data observed during the DLT observation period I, the RP2D will also consider additional safety data beyond the DLT window and will also collect information (PK and target occupancy data collected during I- May also be included.

SEQUENCE LISTING <110> IGENICA, INC. <120> ANTI-CD98 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> IGN-0001 PCT <140> <141> <150> 61/563,443 <151> 2011-11-23 <160> 124 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 529 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Glu Val Glu Leu Asn Glu 1 5 10 15 Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Ser Gly Ala Ala Met 20 25 30 Ser Leu Ala Gly Ala Glu Lys Asn Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala 35 40 45 Glu Asp Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ala Lys Phe Thr Gly Leu Ser 50 55 60 Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser Pro Gly Trp Val Arg Thr 65 70 75 80 Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu Gly Trp Leu Gly Met Leu 85 90 95 Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala Pro Arg Cys Arg Glu Leu 100 105 110 Pro Ala Gln Lys Trp Trp His Thr Gly Ala Leu Tyr Arg Ile Gly Asp 115 120 125 Leu Gln Ala Phe Gln Gly His Gly Ala Gly Asn Leu Ala Gly Leu Lys 130 135 140 Gly Arg Leu Asp Tyr Leu Ser Ser Leu Lys Val Lys Gly Leu Val Leu 145 150 155 160 Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Asp Val Ala Gln Thr Asp Leu 165 170 175 Leu Gln Ile Asp Pro Asn Phe Gly Ser Lys Glu Asp Phe Asp Ser Leu 180 185 190 Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile Arg Val Ile Leu Asp Leu Thr 195 200 205 Pro Asn Tyr Arg Gly Glu Asn Ser Trp Phe Ser Thr Gln Val Asp Thr 210 215 220 Val Ala Thr Lys Val Lys Asp Ala Leu Glu Phe Trp Leu Gln Ala Gly 225 230 235 240 Val Asp Gly Phe Gln Val Arg Asp Ile Glu Asn Leu Lys Asp Ala Ser 245 250 255 Ser Phe Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile Thr Lys Gly Phe Ser Glu Asp 260 265 270 Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Asn Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Leu 275 280 285 Ser Leu Leu Glu Ser Asn Lys Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu 290 295 300 Ser Asp Ser Gly Ser Thr Gly Glu His Thr Lys Ser Leu Val Thr Gln 305 310 315 320 Tyr Leu Asn Ala Thr Gly Asn Arg Trp Cys Ser Trp Ser Leu Ser Gln 325 330 335 Ala Arg Leu Leu Thr Ser Phe Leu Pro Ala Gln Leu Leu Arg Leu Tyr 340 345 350 Gln Leu Met Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly 355 360 365 Asp 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Synthetic polypeptide" <400> 16 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Thr Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 100 105 110 Ile Lys <210> 17 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 17 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Trp Ala Gly Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 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155 160 Gln Lys Asp Glu Ile Asn Glu Thr Asp Leu Lys Gln Ile Asn Pro Thr 165 170 175 Leu Gly Ser Gln Glu Asp Phe Lys Asp Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys 180 185 190 Lys Ser Ile His Ile Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Gln Gly Gln 195 200 205 Asn Ala Trp Phe Leu Pro Ala Gln Ala Asp Ile Val Ala Thr Lys Met 210 215 220 Lys Glu Ala Leu Ser Ser Trp Leu Gln Asp Gly Val Asp Gly Phe Gln 225 230 235 240 Phe Arg Asp Val Gly Lys Leu Met Asn Ala Pro Leu Tyr Leu Ala Glu 245 250 255 Trp Gln Asn Ile Thr Lys Asn Leu Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala 260 265 270 Gly Thr Glu Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Val Asn Ile Leu Glu Ser 275 280 285 Thr Ser Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Ser Thr Phe 290 295 300 Thr Gly Glu Arg Thr Glu Ser Leu Val Thr Arg Phe Leu Asn Ala Thr 305 310 315 320 Gly Ser Gln Trp Cys Ser Trp Ser Val Ser Gln Ala Gly Leu Leu Ala 325 330 335 Asp Phe Ile Pro Asp His Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Leu Leu Phe 340 345 350 Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu 355 360 365 Gln Gly Ala Leu Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp 370 375 380 Asn Glu Ser Ser Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Val Ser Leu Asn Met 385 390 395 400 Thr Val Lys Gly Gln Asn Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Thr Gln Phe 405 410 415 Arg Arg Leu Ser Asp Leu Arg Gly Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly 420 425 430 Asp Phe His Ala Leu Ser Ser Ser Pro Asp Leu Phe Ser Tyr Ile Arg 435 440 445 His Trp Asp Gln Asn Glu Arg Tyr Leu Val Val Leu Asn Phe Arg Asp 450 455 460 Ser Gly Arg Ser Ala Arg Leu Gly Ala Ser Asn Leu Pro Ala Gly Ile 465 470 475 480 Ser Leu Pro Ala Ser Ala Lys Leu Leu Leu Ser Thr Asp Ser Ala Arg 485 490 495 Gln Ser Arg Glu Glu Asp Thr Ser Leu Lys Leu Glu Asn Leu Ser Leu 500 505 510 Asn Pro Tyr Glu Gly Leu Leu Leu Gln Phe Pro Phe Val Ala 515 520 525 <210> 97 <211> 48 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 97 Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Ile Gly Leu 1 5 10 15 Asp Ala Ala Leu Pro Gly Gln Pro Met Glu Ala Pro Val Met Leu 20 25 30 Trp Asp Glu Ser Ser Phe Pro Asp Ile Pro Gly Ala Val Ser Ala Asn 35 40 45 <210> 98 <211> 48 <212> PRT <213> Mus Musculus <400> 98 Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu 1 5 10 15 Gln Gly Ala Leu Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp 20 25 30 Asn Glu Ser Ser Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Val Ser Leu Asn 35 40 45

Claims

인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, 인간 CD98의 잔기 A377, D397, I398, G400 및 A401을 포함하는 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.An isolated antibody or functional fragment thereof that binds to an epitope comprising residues A377, D397, I398, G400 and A401 of human CD98, as an isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98.

제1항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 D374 및 L378을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 1, wherein said epitope further comprises residues D374 and L378 of human CD98.

제2항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 P379 및 G380을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.3. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 2, wherein the epitope further comprises residues P379 and G380 of human CD98.

제3항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 F395 및 P396을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.4. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 3, wherein said epitope further comprises residues F395 and P396 of human CD98.

제3항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 Q381, P382 및 P399를 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.4. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 3, wherein said epitope further comprises residues Q381, P382 and P399 of human CD98.

제1항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 D374, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396 및 P399로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추가 잔기를 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.The isolated antibody of claim 1, wherein said epitope further comprises any one or more additional residues selected from the group consisting of D374, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396 and P399 of human CD98 or Its functional fragment.

인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, 인간 CD98의 잔기 P379, G380, D397 및 I398을 포함하는 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.An isolated antibody or functional fragment thereof that specifically binds human CD98, or an isolated fragment thereof, which binds to an epitope comprising residues P379, G380, D397 and I398 of human CD98.

제7항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 F395 및 P396을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.8. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 7, wherein said epitope further comprises residues F395 and P396 of human CD98.

제8항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 Q381, P382, P399, G400 및 A401을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.9. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 8, wherein said epitope further comprises residues Q381, P382, P399, G400 and A401 of human CD98.

제8항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 잔기 D374, A377 및 L378을 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.9. The isolated antibody or functional fragment thereof of claim 8, wherein said epitope further comprises residues D374, A377 and L378 of human CD98.

제7항에 있어서, 상기 에피토프가 인간 CD98의 D374, A377, L378, Q381, P382, F395, P396, P399, G400 및 A401로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 추가 잔기를 추가로 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.8. The isolated polynucleotide of claim 7, wherein said epitope further comprises any one or more additional residues selected from the group consisting of D374, A377, L378, Q381, P382, F395, P396, P399, G400 and A401 of human CD98. Antibody or functional fragment thereof.

제1항에 있어서, 인간 CD98의 잔기 D374, A377, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396, D397, I398, P399, G400 및 A401을 포함하는 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편. The isolated antibody or its functional fragment thereof according to claim 1, which binds to an epitope comprising residues D374, A377, L378, P379, G380, Q381, P382, F395, P396, D397, I398, P399, G400 and A401 of human CD98 snippet.

인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, 인간 CD98의 아미노산 잔기 369 내지 405 내에 포함된 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.An isolated antibody or functional fragment thereof, which specifically binds to human CD98, as an isolated antibody or functional fragment thereof, which binds to an epitope contained within amino acid residues 369 to 405 of human CD98.

인간 CD98에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편으로서, 인간 CD98의 아미노산 잔기 369 내지 405로 구성된 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.An isolated antibody or functional fragment thereof, which specifically binds to human CD98, as an isolated antibody or functional fragment thereof, which binds to an epitope consisting of amino acid residues 369 to 405 of human CD98.

제1항에 있어서, 항체가 단일클론 항체인 항체 또는 이의 기능성 단편.The antibody or the functional fragment thereof according to claim 1, wherein the antibody is a monoclonal antibody.

제15항에 있어서, 단일클론 항체가 인간화된, 인간 또는 키메라 항체인 항체 또는 이의 기능성 단편.16. The antibody of claim 15, wherein the monoclonal antibody is a humanized human or chimeric antibody, or a functional fragment thereof.

제1항에 있어서, 단편이 Fab, F(ab')2, Fv 또는 Sfv 단편인 항체 또는 이의 기능성 단편.2. The antibody of claim 1, wherein the fragment is a Fab, F (ab ') 2, Fv or Sfv fragment, or a functional fragment thereof.

서열번호 8 및 서열번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 중쇄 상보성 결정 영역들(CDR들), 및/또는 서열번호 10 및 서열번호 14로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 경쇄 CDR들을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.All three heavy chain complementarity determining regions (CDRs) from the heavy chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 12, and / or amino acid sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: Wherein the light chain variable region comprises all three light chain CDRs from the light chain variable domain having the sequence.

서열번호 8 및 서열번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 중쇄 CDR들, 및 서열번호 10 및 서열번호 14로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인으로부터의 모든 3개의 경쇄 CDR들을 포함하는 단리된 항체 또는 이의 기능성 단편.All three heavy chain CDRs from the heavy chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 12, and a light chain variable domain having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14 An isolated antibody comprising all three light chain CDRs or a functional fragment thereof.

제19항에 있어서, 서열번호 8 및 서열번호 12로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 항체.20. The antibody of claim 19, comprising a heavy chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO:

제19항에 있어서, 서열번호 10 및 서열번호 14로 구성된 군으로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 항체.20. The antibody of claim 19, comprising a light chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14.

제20항에 있어서, 서열번호 10 및 서열번호 14로 구성된 군으로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 추가로 포함하는 항체.21. The antibody of claim 20, further comprising a light chain variable domain sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14.

제22항에 있어서, 서열번호 8의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 10의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 항체.23. The antibody of claim 22 comprising the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO:

제22항에 있어서, 서열번호 12의 중쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 14의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 항체.23. The antibody of claim 22 comprising the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 12 and the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO:

제16항에 있어서, 서열번호 22 및 서열번호 23으로부터 선택된 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체.17. The humanized antibody of claim 16 comprising a heavy chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO:

제16항에 있어서, 서열번호 20 및 서열번호 21로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체.19. The humanized antibody of claim 16 comprising a light chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 20 and SEQ ID NO:

제25항에 있어서, 서열번호 20 및 서열번호 21로부터 선택된 경쇄 가변 도메인 서열을 추가로 포함하는 인간화된 항체.26. The humanized antibody of claim 25, further comprising a light chain variable domain sequence selected from SEQ ID NO: 20 and SEQ ID NO: 21.

제27항에 있어서, 서열번호 20의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 22의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체.28. The humanized antibody of claim 27, comprising the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 20 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO:

제27항에 있어서, 서열번호 21의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 23의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체.28. The humanized antibody of claim 27, comprising a light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 21 and a heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO:

제27항에 있어서, 서열번호 21의 경쇄 가변 도메인 서열 및 서열번호 22의 중쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화된 항체.28. The humanized antibody of claim 27, comprising the light chain variable domain sequence of SEQ ID NO: 21 and the heavy chain variable domain sequence of SEQ ID NO:

제30항의 항체에 의해 결합되는 에피토프와 본질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체.33. An antibody that binds to an essentially identical epitope as an epitope bound by the antibody of claim 30.

제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 항체에 의해 결합되는 에피토프와 본질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 결합제.31. A binding agent which binds to essentially the same epitope as an epitope bound by the antibody of any one of claims 1 to 31.

제32항에 있어서, CD98을 발현하는 종양의 성장을 억제하는 결합제.33. The binding agent of claim 32, which inhibits the growth of tumors expressing CD98.

제32항에 있어서, 항체 또는 이의 기능성 단편인 결합제.33. The binder of claim 32, wherein the binder is an antibody or functional fragment thereof.

제32항에 있어서, 안티칼린(anticalin), 애드넥틴(adnectin), 아피바디(affibody), DARPin, 파이노머(fynomer), 아피틴(affitin), 아필린(affilin), 아비머(avimer), 시스테인 풍부 노틴(knottin) 펩티드 또는 조작된 쿠니츠(Kunitz)형 억제제인 결합제.33. The method of claim 32, wherein the anticalin, adnectin, affibody, DARPin, fynomer, affitin, affilin, avimer, A binder which is a cysteine-rich knottin peptide or a manipulated Kunitz type inhibitor.

CD98에 결합할 수 있는 결합제로서, 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 항체가 경쟁 결합 분석에서 상기 결합제를 대체하는 것인 결합제.31. A binding agent capable of binding to CD98, wherein the antibody of any one of claims 1 to 31 replaces said binding agent in a competitive binding assay.

CD98에 결합할 수 있는 결합제로서, 경쟁 결합 분석에서 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 항체를 대체하는 결합제.31. A binding agent capable of binding to CD98, wherein the binding agent replaces the antibody of any one of claims 1 to 31 in a competitive binding assay.

제36항에 있어서, 항체 또는 이의 기능성 단편인 결합제.37. The binder of claim 36, wherein the binder is an antibody or functional fragment thereof.

제37항에 있어서, 항체 또는 이의 기능성 단편인 결합제.38. The binder of claim 37, wherein the binder is an antibody or functional fragment thereof.

제1항 내지 제31항, 제34항, 제38항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성제에 접합되어 있는 항체 또는 이의 기능성 단편.40. An antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34, 38 and 39, attached to a cytotoxic agent.

제40항에 있어서, 세포독성제가 화학치료제, 약물, 생장 억제제, 독소 및 방사성 동위원소로부터 선택되는 것인 항체 또는 이의 기능성 단편.41. The antibody of claim 40, wherein the cytotoxic agent is selected from a chemotherapeutic agent, a drug, a growth inhibitor, a toxin, and a radioactive isotope, or a functional fragment thereof.

제1항 내지 제31항, 제34항, 제38항 및 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 검출가능한 마커에 접합되어 있는 항체 또는 이의 기능성 단편.39. The antibody or the functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34, 38 and 39, which is bound to a detectable marker.

제40항에 있어서, 검출가능한 마커가 방사성 동위원소, 금속 킬레이터, 효소, 형광 화합물, 생체발광 화합물 및 화학발광 화합물로부터 선택되는 것인 항체 또는 이의 기능성 단편.41. The antibody or functional fragment thereof of claim 40, wherein the detectable marker is selected from a radioactive isotope, a metal chelator, an enzyme, a fluorescent compound, a bioluminescent compound, and a chemiluminescent compound.

제15항의 단일클론 항체를 생성하는 트랜스제닉(transgenic) 동물.16. A transgenic animal producing the monoclonal antibody of claim 15.

제15항의 단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마.15. A hybridoma producing the monoclonal antibody of claim 15.

제1항 내지 제31항, 제34항, 제38항 및 제39항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.A vector comprising a polynucleotide encoding an antibody of any one of claims 1 to 31, 34, 38 or 39 or a fragment thereof.

제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.43. A pharmaceutical composition comprising an antibody of any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 or a functional fragment thereof and a pharmaceutically acceptable carrier.

CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 방법으로서, 상기 세포를 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편에 노출시키는 단계를 포함하는 방법.A method for inhibiting the growth of cancer cells expressing CD98, comprising exposing said cells to an antibody of any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 or a functional fragment thereof How to.

제48항에 있어서, 암세포가 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이로부터 유래되는 것인 방법.48. The method of claim 48, wherein the cancer cells are selected from the group consisting of bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, Or a transition of any one of these arms.

제49항에 있어서, 암세포가 급성 골수성 백혈병으로부터 유래되는 것인 방법.50. The method of claim 49, wherein the cancer cells are derived from acute myelogenous leukemia.

제47항의 약학 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법.47. A method of treating cancer in a subject, comprising administering to the subject a pharmaceutical composition of claim 47.

제51항에 있어서, 암이 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택되거나 이들 암들 중 어느 하나의 전이인 방법.53. The method of claim 51, wherein the cancer is selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, gastric cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia Wherein one of the arms is a transition.

제52항에 있어서, 암이 급성 골수성 백혈병인 방법.53. The method of claim 52, wherein the cancer is acute myelogenous leukemia.

제51항에 있어서, 대상체가 재발된 또는 불응성 급성 골수성 백혈병을 갖는 것인 방법.52. The method of claim 51, wherein the subject has relapsed or refractory acute myelogenous leukemia.

제51항에 있어서, 대상체가 항체 또는 기능성 단편과 함께 하나 이상의 화학치료 화합물을 투여받고, 이때 상기 화학치료 화합물이 벤다무스틴 하이드로클로라이드, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 플루다라빈, 사이타라빈, 겜시타빈, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 파클리탁셀, 독세탁셀, 비노렐빈, 빈크리스틴, 에토포사이드, 이리노테칸, 안트라사이클린, 아드리아마이신, 시스플라틴, 카보플라틴 및 리툭시맙으로부터 선택되는 것인 방법.52. The method of claim 51, wherein the subject is administered one or more chemotherapeutic compounds with the antibody or functional fragment, wherein the chemotherapeutic compound is selected from the group consisting of vendamustine hydrochloride, cyclophosphamide, Wherein the method is selected from the group consisting of lomycetin, lomycetin, lomex, lomycin, lomycetin, lomycin, lambin, gemcitabine, prednisone, prednisolone, methylprednisolone, paclitaxel, docked cell, vinorelbine, vincristine, etoposide, irinotecan, anthracycline, adriamycin, cisplatin, .

제51항에 있어서, 암이 세포의 표면 상에서의 CD98의 증가된 발현과 관련되어 있는 것인 방법.52. The method of claim 51, wherein the cancer is associated with increased expression of CD98 on the surface of the cell.

생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법으로서, 항체와 CD98의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 생물학적 샘플을 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 항체와 CD98 사이에 복합체가 형성되는지를 검출하는 단계를 포함하는 방법.31. A method of detecting the presence of CD98 in a biological sample comprising contacting the biological sample with an antibody of any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 under conditions that allow binding of the antibody to CD98 And detecting whether a complex is formed between the antibody and CD98.

제57항에 있어서, 생물학적 샘플이 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 포유동물의 생물학적 샘플인 방법.57. The method of claim 57, wherein the biological sample is selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia. , Or a biological sample of a mammal suspected of having or having a metastasis of any of these cancers.

시험 세포를 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체와 접촉시키는 단계; 상기 항체와 CD98의 결합을 검출하여 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 시험 세포에서의 CD98의 발현 수준을 대조군 세포에서의 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는, CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법으로서, 이때 상기 대조군 세포에 비해 상기 시험 세포에서의 CD98의 보다 높은 발현 수준이 CD98의 증가된 발현과 관련된 암의 존재를 표시하는 것인 방법.Contacting the test cell with the antibody of any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43; Detecting the binding of the antibody to CD98 and measuring the level of expression of CD98; And comparing the level of expression of CD98 in the test cell with the level of expression of CD98 in the control cell, wherein the expression of CD98 in the test cell relative to the control cell Wherein the higher expression level of CD98 is indicative of the presence of cancer associated with increased expression of CD98.

제59항에 있어서, 시험 세포가 방광암, 유방암, 결장암, 직장암, 위암, 식도암, 폐암, 후두암, 신장암, 구강암, 난소암, 전립선암, 육종, 흑색종, 신경아교종, 림프종 및 백혈병으로부터 선택된 암, 또는 이들 암들 중 어느 하나의 전이를 갖는 것으로 의심되는 환자로부터 유래되는 것인 방법.59. The method of claim 59, wherein the test cells are selected from bladder cancer, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, stomach cancer, esophageal cancer, lung cancer, laryngeal cancer, kidney cancer, oral cancer, ovarian cancer, prostate cancer, sarcoma, melanoma, glioma, lymphoma and leukemia. , Or a patient suspected of having a metastasis of either of these cancers.

제60항에 있어서, 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 측정하는 단계, 및 시험 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준을 대조군 세포의 표면 상에서의 CD98의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 방법.61. The method of claim 60, comprising measuring the level of expression of CD98 on the surface of the test cell, and comparing the level of expression of CD98 on the surface of the test cell with the level of expression of CD98 on the surface of the control cell Way.

제61항에 있어서, 시험 세포가 암세포이고, 대조군 세포가 동일한 조직 타입의 정상 세포인 방법.63. The method of claim 61, wherein the test cell is a cancer cell and the control cell is a normal cell of the same tissue type.

약제의 제조에 있어서 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편의 용도로서, 이때 상기 약제가 CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 방법에서 사용되기 위한 것인 용도.Use of an antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 in the manufacture of a medicament, wherein said medicament inhibits the growth of cancer cells expressing CD98 To be used in a method that is to be used.

CD98을 발현하는 암세포의 생장을 억제하는 데에 사용되기 위한 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편.An antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 for use in inhibiting the growth of cancer cells expressing CD98.

약제의 제조에 있어서 제47항의 약학 조성물의 용도로서, 이때 상기 약제가 대상체에서 암을 치료하는 방법에서 사용되기 위한 것인 용도.Use of the pharmaceutical composition of claim 47 in the manufacture of a medicament, wherein the medicament is for use in a method of treating cancer in a subject.

대상체에서 암을 치료하는 데에 사용되기 위한, 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.Comprising an antibody of any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 for use in treating cancer in a subject or a functional fragment thereof and a pharmaceutically acceptable carrier, A pharmaceutical composition.

약제의 제조에 있어서 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편의 용도로서, 이때 상기 약제가 생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법에서 사용되기 위한 것인 용도.Use of an antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 in the manufacture of a medicament, wherein the agent detects the presence of CD98 in a biological sample Use for use in a method.

생물학적 샘플에서 CD98의 존재를 검출하는 방법에서 사용되기 위한 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편.An antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 for use in a method for detecting the presence of CD98 in a biological sample.

약제의 제조에 있어서 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편의 용도로서, 이때 상기 약제가 CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법에서 사용되기 위한 것인 용도.Use of an antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 in the manufacture of a medicament, wherein the medicament is for the treatment of cancer associated with increased expression of CD98 Use for diagnostic methods.

CD98의 증가된 발현과 관련된 암을 진단하는 방법에서 사용되기 위한 제1항 내지 제31항, 제34항 및 제38항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 기능성 단편.An antibody or a functional fragment thereof according to any one of claims 1 to 31, 34 and 38 to 43 for use in a method for diagnosing cancer associated with increased expression of CD98.