KR20140096090A - 액체 효소 제제 및 그의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 액체 효소 제제, 상세하게 가교 효소 및/또는 효소 변형 우유 단백질을 포함하는 액체 및 안정한 제제에 대한 것이다. 특히, 본 발명은 액체 및 안정한 트랜스글루타미나아제 제제에 대한 것이다. 추가로, 본 발명은 액체 효소 제제의 제조방법에 대한 것이다.

Description

액체 효소 제제 및 그의 제조방법{A LIQUID ENZYME FORMULATION AND A PROCESS FOR ITS PREPARATION}
본 발명은 액체 효소 제제, 특히 가교 효소(crosslinking enzyme) 및/또는 우유 단백질 변형 효소(enzyme modifying milk protein)를 포함하는 액체 및 안정한 제제에 대한 것이다. 특히 본 발명은 액체 및 안정한 트랜스글루타미나아제(transglutaminase) 제제에 대한 것이다. 추가로, 본 발명은 액체 효소 제제를 제조하는 방법에 대한 것이다.
가교 효소 및/또는 우유 단백질, 예를 들어 라카아제(laccase), 티로시나아제(tyrosinase), 페록시다아제(peroxidase), 썰피드릴 옥시다아제(sulfhydryl oxidase) 또는 글루코스 옥시다아제(glucose oxidase)를 포함하는 효소 제제는 상업적으로 분말 및 액체 제제로 이용가능하다. 그러나, 트랜스글루타미나아제 및 단백질 글루타미나아제 제품은 현재 시장에서 분말 형태로만 존재한다. 분말 효소 제품의 이용은 모든 제품 공장에서 먼지 형성으로 인하여 전반적으로 수용되지 않는다. 상기 먼지로부터 초래되는 건강상 유해함이 특히 작업 노동자들 사이에서 근심으로 증가되고 있다.
스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense) 균주로부터 유래된 트랜스글루타미나아제 및 그의 제조 공정이 유럽 특허 번호 0 379 606 B1에 개시되어 있다. 게다가, 스트렙토마이세스 리디쿠스(Streptomyces lydicus) 균주로부터 분리한 유전자를 이용한 트랜스글루타미나아제의 생산방법이 유럽 특허 번호 0 777 726 B1에 개시되어 있다.
트랜스글루타미나아제와 같은 효소의 제제와 관련한 문제들의 하나는, 액체 형태에서, 상기 제제의 안정성 결여이다. 게다가, 본 액체 효소 제제와 관련된 단점은 적어도 하나의 방부제를 포함한다는 점이다.
본 발명의 목적은 그러므로 트랜스글루타미나아제 및/또는 다른 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소, 예를 들어 라카아제, 티로시나아제, 페록시다아제, 설피드릴 옥시다아제, 글루코스 옥시다아제 또는 단백질 글루타미나아제를 포함하는 액체 효소 제제를 제공하는 것으로서, 이는 안정하고 실온 또는 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 상업적 제제에서 요구되는 기한 동안 저장될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 트랜스글루타미나아제를 포함하는 액체 제제를 제공하는 것으로서, 이는 안정하고 실온 또는 냉장고 및/또는 냉동고에서 상업적 제제에서 요구되는 기한동안 저장될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 트랜스글루타미나아제 및/또는 다른 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소를 포함하는 안정한 액체 효소 제제의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 트랜스글루타미나아제를 포함하는 안정한 액체 제제의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 독립항에서 기재한 제제 및 방법에 의하여 성취된다. 본 발명의 바람직한 실시예는 종속항들에서 기재된다.
본 발명의 다른 목적들, 상세사항들 및 효과는 하기의 상세한 설명 및 예시들로부터 명백해 질 것이다.
우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소들, 예를 들어 트랜스글루타미나아제, 라카아제, 티로시나아제, 페록시다아제, 설피드릴 옥시다아제 및 단백질 글루타미나아제는 우유 단백질 변형을 촉매작용시킨다. 이들 효소들의 활성 및 글루코스 옥시다아제의 활성으로 상승작용이 있을 것이다. 다른 이론에 의하여 설명되지 않고, 글루코스 옥시다아제 및/또는 페록시다아제는 산소가 과산화수소(hydrogen peroxide) 형성을 통하여 유리되는 반응들을 촉매시킨다. 상기 산소는 그때 티로시나아제의 가교를 촉매(산화)시킨다.
우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소, 예를 들어 트랜스글루타미나아제, 라카아제, 티로시나아제, 페록시다아제, 설피드릴 옥시다아제 및 단백질 글루타미나아제는 선택적으로 글루코스 옥시다아제와 함께 가공된 생선, 고기, 및 난제품(egg products), 페이스트 및 파테(pastes and pates), 과일, 베리류 및 채소, 콩 제품, 곡류 제품, 빵 및 베이커리 제품들의 제조에서 사용된다.
다음의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소들은 모두 유제품 또는 다른 식품 카테고리의 식품 가공 처리와 관련이 있다.
트랜스글루타미나아제는 단백질 분자에 존재하는 글루타민과 리신 아미노산 잔기 사이의 공유결합의 생성을 촉매하는 효소(EC 2.3.2.13)의 패밀리이다. 결합들이 형성되면, 암모니아가 유리된다.
곰팡이 및 세균, 예를 들어 진균 트라메테스 헐스테(Trametes hirsute)로부터 유래된 라카아제(EC 1 .10.3.2)는 탄수화물(carbohydrates)과 단백질 사이의 가교를 촉매하여(방향족 화합물과 시스테인의 산화) 예를 들어 알레르기 유발 항원(allergenicity)의 감소를 위한 식품 가공에 응용된다.
티로시나아제 (EC 1 .14.18.1)는 티로신과 같은 페놀의 산화를 촉매하는 효소로서, 예를 들어 알레르기 유발 항원의 감소를 위한 식품 가공에 응용된다.
페록시다아제 (EC 1 .1 1 .1 .7)는 방향족 화합물의 산화를 촉매하는 효소의 패밀리로서, 예를 들어 알레르기 유발 항원의 감소를 위한 식품 가공에 응용된다.
설피드릴 옥시다아제(EC 1 .8.3.3)는 이황화결합(disulfide bond)의 형성 및 글루타티온(glutathione)의 산화를 촉매한다.
단백질 글루타미나아제는 글루타민 결합 단백질의 탈아미드화를 촉매하고, 글루타민(glutamine)은 글루타민산(glutamic acid)으로 변환된다.
글루코스 옥시다아제는 단백질 가교의 형성 및 펜토산의 산화적 겔화(oxidative gelation)를 촉매한다.
우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소, 예를 들어 트랜스글루타미나아제, 라카아제, 티로시나아제, 페록시다아제, 설피드릴 옥시다아제 및 단백질 글루타미나아제는 우유-기반 제품의 구조를 안정화시키기 위하여 유제품 산업에서 이용된다. 유제품 산업에 추가하여, 이들 효소들은 가공 생선, 육류 및 난제품, 페이스트 및 파테, 과일, 베리류 및 채소류, 콩 제품, 곡류 제품, 빵 및 베이커리 제품의 제조에서 사용된다. 따라서, 액체 효소 제제는 유제품, 가공 생선, 육류, 달걀, 페이스트 및 파테, 과일, 베리류 및 채소류, 콩, 곡류, 빵 및 베이커리 제품들 등의 제조에 적절하다. 액체 효소 제제의 이용은 산업 규모 제조에서는 특히 분말 제제의 이용보다 더 실용적이고 이점을 가지게 될 것이다.
트랜스글루타미나아제는 5.2 내지 8 사이의 pH 범위에서 가장 활성화된다. 액체화된 트랜스글루타미나아제는 pH5.2 또는 pH8에서 저장되고, 상기 효소는 그 활성을 빨리 상실한다. pH5.2에서 7일동안 실온에서, 또는 냉장고에서 트랜스글루타미나아제를 저장한 후에는 그 활성의 반만이 잔존한다.
본 발명은 트랜스글루타미나아제, 티로시나아제 또는 단백질 글루타미나아제가 pH 4.4 내지 5.1 범위에서 글리세롤 또는 솔비톨과 같은 폴리올(polyol) 및 물의 현탁액에 저장될 때, 실온에서 저장되는 동안, 더욱 탁월하게 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 저장되는 동안 그것의 활성이 적절히 유지되는 것을 발견하는데 기초한다. 추가로, 본 발명은 단백질 글루타미나아제와 함께 트랜스글루타미나아제가 pH 4.6에서 글리세롤 및 물의 현탁액에서 저장될 때, 실온에서 저장되는 동안 및 탁월하게는 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 저장되는 동안 상기 효소들의 활성이 적절히 유지되는 것을 발견하는데 기초한다. 게다가, 본 발명은 단백질 글루타미나아제 및 티로시나아제와 함께 트랜스글루타미나아제가 pH4.6에서 글리세롤 및 물의 현탁액에서 저장될 때, 실온에서 저장되는 동안 및 탁월하게는 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 저장되는 동안 상기 효소들의 활성이 적절히 유지되는 것을 발견하는데 기초한다. 추가로, 본 발명의 액체 제조는 또한 실온에서의 저장동안 및 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 저장 동안 미생물학적으로 안정하다. 게다가, 본 발명의 액체 효소 제제는 냉장고 및/또는 냉동고의 온도에서 제제 내에서 어떠한 방부제 없이 그것의 효소 활성 및 미생물학적 순수성 (어떠한 미생물의 성장 없음)이 유지되었을 기대치않게 발견하게 되었다.
일 실시예에서, 상기 폴리올-물 현탁액에서의 상기 액체 효소 제제는 4.4 내지 5.1 범위 내의 pH 수치를 가진다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 4.4 내지 4.8 사이의 범위 내이다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 4.4이다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 4.6이다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 4.8이다. 본 발명의 더 다른 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 5.1이다.
글리세롤(glycerol), 솔비톨(sorbitol), 자일리톨(xylitol) 및/또는 만니톨(mannitol)과 같은 폴리올은 본 발명의 액체 효소 제제에서 사용될 수 있다. 상기 폴리올들의 혼합물들, 예를 들어 글리세롤 및 다른 폴리올들의 혼합물이 또한 이용가능하다.
본 발명의 효소 제제의 형성에 적절한 폴리올 및 물의 현탁액 또는 2 이상의 폴리올 혼합물과 물의 현탁액은 글리세롤, 솔비톨, 자일리톨 및/또는 만니톨과 같은 폴리올들을 25% 내지 100%로, 바람직하게 50% 내지 100%(w/w%)로 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소는 25% 폴리올/75% 물 (w/w) 현탁액에 용해될 수 있다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 50% 폴리올/50% 물 (w/w) 현탁액에 용해될 수 있다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 75% 폴리올/25% 물 (w/w) 현탁액에 용해될 수 있다.
본 발명의 상기 효소 제제의 형성에 적절한 글리세롤 및 물의 현탁액은 25% 내지 100%의 글리세롤, 바람직하게는 50% 내지 100%의 글리세롤을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소는 25% 글리세롤 및 75% 물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 50% 글리세롤 및 50% 물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 75% 글리세롤 및 25% 물 현탁액에서 용해된다. 게다가, 본 발명의 상기 효소 제제의 형성에 적절한 솔비톨 및 물의 현탁액은 25% 내지 100%의 솔비톨, 바람직하게는 50% 내지 100%의 솔비톨을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소는 25% 솔비톨/75% 물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 50% 솔비톨/50% 물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 75% 솔비톨/25% 물 현탁액에서 용해된다.
상기 현탁액의 pH는 식품 용도로 승인된 산, 예를 들어 젖산(lactic acid), GDL(glucono-deltalactone), 구연산(citric acid), 아세트산(acetic acid), 옥살산(oxalic acid), 말산(malic acid), 판토텐산(pantothenic acid), 프로피온산(propionic acid), 및/또는 염산(hydrochloric acid), 또는 산 또는 염의 형태로 이들의 어떠한 혼합물/조합으로 목적 범위로 조정될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 젖산이 pH 조정을 위하여 사용된다.
본 발명의 액체 효소 제제는 안식향산나트륨(Na-benzoate)과 같은 방부제 또한 선택적으로 포함될 수 있다. 일 실시예에서, 본 발명의 상기 액체 효소 제제는 어떠한 부가적인 방부제를 포함하지 않는데, 상기 제제는 방부제 무첨가이다. 다른 일 실시예에서, 본 발명의 액체 효소 제제는 부가적인 방부제를 포함한다. 또 다른 일 실시예에서, 본 발명의 액체 효소 제제는 방부제로서 안식향산나트륨을 포함한다. 더 다른 일 실시예에서, 본 발명의 액체 효소 제제는 0.1 내지 1%의 양, 바람직하게 0.7%의 양의 안식향산나트륨을 방부제로서 포함한다.
본 발명의 액체 효소는 실온에서 약 2주동안, 냉장고에서 약 1.5개월 내지 6개월 동안, 냉동고에서 최소 5개월에서 최대 24개월까지 그 활성을 유지한다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 액체 제제는 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소를 포함한다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 액체 제제는 둘 이상의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소들을 포함한다. 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제이다. 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 티로시나아제이다. 또 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 단백질 글루타미나아제이다. 또 더 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 단백질 글루타미나아제이다. 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 티로시나아제이다. 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 라카아제이다. 또 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제, 단백질 글루타미나아제 및 라카아제이다. 또 더 다른 일 실시예에서, 본 발명의 제제에서 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제, 단백질 글루타미나아제 및 티로시나아제이다.
본 발명은 액체 효소 제제의 제조방법에 대한 것으로서, 여기에서 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 4.4 내지 5.1 범위의 pH 수치를 가지는 폴리올-물 현탁액에 첨가된다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.4 내지 5.1의 범위 내의 수치로 조정된다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.4 내지 4.8의 범위 내의 수치로 조정된다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 4.4로 조정된다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.6으로 조정된다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.8로 조정된다. 본 발명의 또 더 다른 일 실시예에서, 상기 효소 제제의 pH는 5.1로 조정된다.
본 발명의 방법을 위하여 적절한 폴리올 및 물의 현탁액은 25% 내지 100%(w/w%)의 폴리올을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 효소는 25% 폴리올-물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 50% 폴리올-물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 또 다른 일 실시예에서, 상기 효소는 75% 폴리올-물 현탁액에서 용해된다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 폴리올은 글리세롤이다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 폴리올은 솔비톨이다.
본 방법에서, 상기 현탁액의 pH는 식품용도로 승인된(식용, GRAS) 산, 예를 들어 젖산, GDL, 구연산, 아세트산, 옥살산, 말산, 판토텐산, 프로피온산 및/또는 염산, 또는 산 또는 염의 형태로 이들의 어떠한 혼합물/조합으로 목적 범위로 조정될 수 있다. 일 실시예에서, 젖산이 pH 조정제로서 본 발명의 방법에서 사용된다.
본 발명의 방법에서, 또한 안식향산나트륨과 같은 방부제가 상기 액체 효소 제제에 선택적으로 포함될 수 있다. 일 실시예에서, 본 발명의 방법은 어떠한 방부제의 첨가를 포함하지 않는다. 다른 일 실시예에서, 본 발명의 방법은 방부제의 첨가를 포함한다. 또 다른 일 실시예에서, 본 발명의 방법은 방부제로서 안식향산나트륨의 첨가를 포함한다. 또 더 다른 일 실시예에서, 본 발명의 방법은 방부제로서 0.1 내지 1% 양의, 바람직하게는 0.7%의 양의 안식향산나트륨의 첨가를 포함한다.
일 실시예에서, 본 발명의 방법은 다음 단계들을 포함한다:
a) 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.4 내지 5.1 범위 내의 수치로 식품용 산으로 조정되는 단계
b) 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 상기 현탁액에 첨가되는 단계
c) 선택적으로 방부제가 첨가되는 단계.
다른 일 실시예에서, 본 발명의 방법은 다음 단계들을 포함한다:
a) 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 폴리올-물 현탁액에 첨가되는 단계
b) 상기 현탁액의 pH가 4.4 내지 5.1 범위 내의 수치로 식품용 산으로 조정되는 단계
c) 선택적으로 방부제가 첨가되는 단계
본 발명의 일 실시예에서, 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 상기 현탁액에 첨가된다. 본 발명의 다른 일 실시예에서, 둘 이상의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 상기 현탁액에 첨가된다. 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제이다. 다른 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 티로시나아제이다. 다른 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 단백질 글루타미나아제이다. 다른 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 단백질 글루타미나아제이다. 다른 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 티로시나아제이다. 다른 일 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제 및 라카아제이다. 또 다른 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제, 단백질 글루타미나아제 및 라카아제이다. 또 더 다른 실시예에서, 상기 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소는 트랜스글루타미나아제, 단백질 글루타미나아제 및 티로시나아제이다.
본 발명은 다음 실시예들의 수단으로 더욱 상세하게 기재될 것이다. 실시예들은 어떠한 방법으로도 청구범위를 제한하지 않는 것으로 한다.
실시예
비교 실시예 1
4℃, pH5 .2에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토, Ajinomoto )
16.300 nkat/g의 활성을 갖는 스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense) 균주로부터 유래된 트랜스글루타미나아제 (Activa® TG, Ajinomoto)가 젖산으로 pH 5.2로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에 274 nkat/g의 활성으로 용해되었다. 상기 효소 활성은 7일동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
7일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 오직 50%만이 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 7일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
비교 실시예 2
4℃, pH5 .2에서의 물에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 트랜스글루타미나아제 (Activa® TG, Ajinomoto)가 젖산으로 pH5.2로 조정된 물에 274 nkat/g의 활성으로 용해되었다. 상기 현탁액은 또한 방부제로서 0.7% 안식향산나트륨이 포함되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 오직 43%만이 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 7일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 1
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 트랜스글루타미나아제 (Activa® TG, Ajinomoto)가 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에서 274 nkat/g의 활성으로 용해되었다.
상기 효소 활성은 7일동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
7일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 7일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 2
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 트랜스글루타미나아제 Activa® TG (Ajinomoto)가 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에서 326 nkat/g의 활성으로 용해되었다. 상기 현탁액은 또한 방부제로서 0.7% 안식향산나트륨을 포함하였다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 3
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG - YG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제가 스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense) 균주로부터 유래된 트랜스글루타미나아제를 포함하는 아지노모토의 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG-YG와 글루타티온을 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 4
4℃, pH 4.4에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제가 274 nkat/g의 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG(아지노모토)를 젖산으로 pH 4.4로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 5
4℃, pH 4.8에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제가 274 nkat/g의 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG(아지노모토)를 젖산으로 pH 4.8로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 6
4℃, pH 5.1에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제가 274 nkat/g의 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG(아지노모토)를 4℃에서 젖산으로 pH 5.1로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 7
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 사프로나( Saprona ) TG ( Yiming Biological Products Co , China )
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense) 균주로부터 유래된 트랜스글루타미나아제 이밍 사프로나 TG를 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 8
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 리액틴( Reactyn ) CL 1000 TG ( Campus SpA , Italy )
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 트랜스글루타미나아제 캠푸스 리액틴 CL 1000 TG를 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물 (w/w) 현탁액에 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 9
4℃, pH 4.6에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 TG-PG (아지노모토)
상기 액체 제제는 효소 제제 TG-PG (아지노모토)를 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물 현탁액에서 용해시킴으로써 제조되었다. 상기 제제 TG-PG(아지노모토)는 스트렙토버티실리움 모바라엔스(Streptoverticillium mobaraense) 균주로부터 유래된 트랜스글루타미나아제 및 크리서박테리움 프로테오라이티쿰(Chryseobacterium proteolyticum)으로부터 유래된 단백질 글루타미나아제를 포함한다.
상기 액체 제제의 트랜스글루타미나아제 활성은 100 U/g 이고, 상기 액체 제제의 단백질 글루타미나아제의 활성은 100 U/g 이다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제 및 상기 단백질 글루타미나아제의 활성의 100% 가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 10
4℃, pH 4.6에서의 75% 글리세롤/ 25% 물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa ® TG (아지노모토)
상기 트랜스글루타미나아제 Activa® TG (아지노모토)가 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 75% 글리세롤/ 25% 물 (w/w) 현탁액에서 326 nkat/g의 활성에서 용해되었다.
상기 효소 활성은 4℃의 온도에서 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 50일 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 11
4℃, pH 4.6에서의 25% 글리세롤/ 75% 물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa ® TG (아지노모토)
상기 트랜스글루타미나아제 Activa® TG (아지노모토)가 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 25% 글리세롤/ 75% 물 (w/w) 현탁액에서 326 nkat/g의 활성에서 용해되었다.
상기 효소 활성은 4℃의 온도에서 50일 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 72%가 남았다. 어떤 미생물 성장도 상기 보존 시험동안 검출되지 않았다.
실시예 12
22℃, pH 4.4-4.8에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 젖산으로 pH4.4-4.8으로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액으로 2789 nkat/g활성의 트랜스글루타미나아제 애티비아® TG (아지노모토)를 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 제제의 효소 활성은 22℃의 온도에서 13주 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
2주 저장한 후, 상기 제제의 효소의 활성이 감소되기 시작했다. 상기 보존 시험동안 어떠한 미생물의 성장도 검출되지 않았다.
실시예 13
4℃, pH 4.4-4.8에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 젖산으로 pH4.4-4.8로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액으로 2789 nkat/g의 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG (아지노모토)를 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 제제의 효소 활성은 4℃ 온도에서 26주 동안 모니터되었다. 추가로 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
26주 동안 저장된 후, 상기 효소의 활성의 89%가 남았다. 상기 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장도 검출되지 않았다.
실시예 14
-20℃, pH 4.4-4.8에서의 글리세롤-물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 젖산으로 pH 4.4-4.8로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액으로 2789 nkat/g 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG(아지노모토)를 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 제제의 효소 활성은 -20℃의 온도에서 26주 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
26주 저장된 후, 상기 효소의 활성의 97%가 남았다. 상기 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장이 검출되지 않았다.
실시예 15
4℃, pH 4.6에서 글리세롤-물 현탁액에서 티로시나아제 제제
상기 티로시나아제 효소는 젖산으로 pH4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물(w/w) 현탁액으로 100 U/g의 활성에서 용해되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일 저장된 후, 상기 티로시나아제의 활성의 97%가 남았다. 상기 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장이 검출되지 않았다.
실시예 16
4℃, pH4 .6에서 글리세롤-물 현탁액에서 단백질 글루타미나아제 제제
상기 단백질 글루타미나아제는 젖산으로 pH4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물 (w/w) 현탁액으로 100 U/g 활성에서 용해되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일 저장된 후, 상기 단백질 글루타미나아제의 활성의 96%가 남았다. 상기 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장이 검출되지 않았다.
실시예 17
4℃, pH4 .6에서 솔비톨 -물 현탁액에서 트랜스글루타미나아제 제제 Activa® TG (아지노모토)
상기 액체 트랜스글루타미나아제 제제는 젖산으로 pH 4.6으로 조정된 50% 솔비톨-물 (w/w) 현탁액으로 274 nkat/g 활성의 트랜스글루타미나아제 Activa® TG (아지노모토)를 용해시킴으로써 제조되었다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%가 남았다. 50일 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장이 검출되지 않았다.
실시예 18
4℃, pH4 .6에서 글리세롤-물 현탁액에서 TG - PG (아지노모토) 및 티로시나아제를 함유한 액체 효소 제제
상기 액체 제제는 젖산으로 pH4.6으로 조정된 50% 글리세롤-물 (w/w) 현탁액으로 효소 제제 TG-PG(아지노모토) 및 티로시나아제를 용해시킴으로써 제조되었다. 상기 액체 제제의 트랜스글루타미나아제 활성은 100 U/g였고, 상기 액체 제제의 단백질 글루타미나아제 활성은 100 U/g였고, 상기 액체 제제의 티로시나아제 활성은 100 U/g였다.
상기 효소 활성은 50일 동안 모니터되었다. 추가로, 상기 제제의 미생물학적 순수성이 모니터되었다.
50일째, 상기 트랜스글루타미나아제의 활성의 100%, 상기 단백질 글루타미나아제의 활성의 100%, 및 상기 티로시나아제의 활성의 98%가 남았다. 상기 보존 시험 동안 어떠한 미생물학적 성장이 검출되지 않았다.
본 발명의 컨셉은 다양한 방식으로 구현될 수 있음이 기술 진보에 따라 본 기술분야의 당업자에게 자명할 것이다. 본 발명 및 그 실시예들은 상기 기재된 예시들에 제한되지 않고 청구항의 범위 내에서 변형될 수 있다.

Claims (18)

  1. 25% 내지 100% (w/w) 폴리올을 포함하고 4.4 내지 5.1의 범위 내의 pH 수치를 갖는 폴리올-물 현탁액에서 적어도 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소를 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 폴리올-물 현탁액은 50% 내지 75%의 폴리올을 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 폴리올은 글리세롤 또는 솔비톨인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 4.6인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 트랜스글루타미나아제, 티로시나아제 또는 단백질 글루타미나아제를 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 트랜스글루타미나아제 및 단백질 글루타미나아제를 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서,
    상기 제제는 라카아제 및/또는 티로시나아제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 방부제 불포함인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제.
  9. 적어도 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가, 25% 내지 100% (w/w) 폴리올을 함유하고 4.4 내지 5.1 범위의 pH 수치를 갖는 폴리올-물 현탁액에 첨가되는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 방법은,
    a) 상기 폴리올-물 현탁액의 pH가 4.4 내지 5.1 범위가 되도록 식용산(food grade acid)으로 조정되는 단계;
    b) 적어도 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 상기 현탁액에 첨가되는 단계;
    c) 선택적으로 방부제가 첨가되는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 방법은,
    a) 적어도 하나의 우유 단백질 가교 및/또는 변형 효소가 25% 내지 100% 폴리올을 함유하는 폴리올-물 현탁액에 첨가되는 단계;
    b) 상기 현탁액의 pH가 4.4 내지 5.1 범위 내가 되도록 식용산(들)로 조정되는 단계;
    c) 선택적으로 방부제가 첨가되는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리올-물 현탁액은 50% 내지 75% 폴리올을 함유하는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리올-물 현탁액의 pH는 4.6인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어,
    상기 폴리올은 글리세롤 또는 솔비톨인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  15. 제9항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 트랜스글루타미나아제, 티로시나아제 또는 단백질 글루타미나아제인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  16. 제9항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 효소는 트랜스글루타미나아제 및 단백질 글루타미나아제인 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서,
    라카아제 및/또는 티로시나아제가 상기 현탁액에 더 첨가되는 것을 특징으로하는 액체 효소 제제의 제조방법.
  18. 제9항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 방부제의 첨가를 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 액체 효소 제제의 제조방법.
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