KR20140066671A

KR20140066671A - Microrna-31 compositions and methods for use in autoimmune disease

Info

Publication number: KR20140066671A
Application number: KR1020137035140A
Authority: KR
Inventors: 이홍 야오; 난 센; 웨이 판; 유안지아 탕
Original assignee: 메디뮨 엘엘씨; 상하이 렌지 하스피탈
Priority date: 2011-06-27
Filing date: 2012-06-26
Publication date: 2014-06-02
Also published as: EP2723349A2; CA2841158A1; EP2723349A4; RU2014102217A; WO2013003346A2; JP2014521600A; AU2012275552A1; WO2013003346A3; BR112013033794A2

Abstract

본 개시내용은 전신홍반루푸스 및 다른 자가면역 병태를 치료하는 방법을 제공한다.The present disclosure provides methods for treating systemic lupus erythematosus and other autoimmune conditions.

Description

자가면역 질환에서 사용되는 마이크로RNA-31 조성물 및 방법{MICRORNA-31 COMPOSITIONS AND METHODS FOR USE IN AUTOIMMUNE DISEASE}[0001] The present invention relates to a microRNA-31 composition and method for use in autoimmune diseases,

자가면역 병태는 상당한 이환율 및 몇몇 경우 사망률과 관련되어 있다. 자가면역 병태의 증상은 일하는 능력에 영향을 미칠 수 있고 환자의 삶의 질에 다른 방식으로 영향을 미칠 수 있다. Autoimmune conditions are associated with significant morbidity and, in some cases, mortality. Symptoms of autoimmune conditions can affect the ability to work and affect the quality of life of patients in different ways.

전신홍반루푸스(SLE)는 면역 시스템의 만성 활성화 및 다수의 면역학적 표현형을 특징으로 하는 다인성 자가면역 병태이다(Fairhurst et al., 2006; Anders et al., 2009). 대다수의 확인된 분자적 비정상이 루푸스에서 일부 확립된 세포 및 사이토카인 결함을 설명한다. 루푸스 환자의 T 세포는 다수의 신호전달 이상을 나타낸다(Nambiar et al., 2004; Fujii et al., 2006; Kong et al., 2003; Moulton et al., 2011). Systemic lupus erythematosus (SLE) is a multinational autoimmune condition characterized by chronic activation of the immune system and multiple immunological phenotypes (Fairhurst et al., 2006; Anders et al., 2009). The majority of identified molecular abnormalities explain some established cell and cytokine defects in lupus. T cells from patients with lupus have multiple signal transduction abnormalities (Nambiar et al., 2004; Fujii et al., 2006; Kong et al., 2003; Moulton et al., 2011).

인터류킨-2(IL-2)는 주로 T 세포에 의해 생성되는 다기능성 사이토카인이고 T 세포 활성화, 증식 및 수축을 위해 필수적이다(Lieberman et al., 2010). IL-2의 생성은 SLE T 세포에서 감소되고 IL-2 생성의 전사 또는 억제를 담당하는 전사 조절제는 SLE T 세포에서 불균형 상태라는 것이 보고되어 있다(Lieberman et al., 2010; Tenbrock et al., 2004; Katsiari et al., 2005; Juang et al., 2005; Herndon et al., 2002; Solomou et al., 2001). Interleukin-2 (IL-2) is a multifunctional cytokine that is mainly produced by T cells and is essential for T cell activation, proliferation and contraction (Lieberman et al., 2010). It has been reported that the production of IL-2 is reduced in SLE T cells and the transcriptional regulator responsible for the transcription or inhibition of IL-2 production is in an imbalanced state in SLE T cells (Lieberman et al., 2010; Tenbrock et al. 2004; Katsiari et al., 2005; Juang et al., 2005; Herndon et al., 2002; Solomou et al., 2001).

본 개시내용의 요약SUMMARY OF THE INVENTION

자가면역 병태의 진단, 관리 및 치료에서 사용되는 개선된 방법 및 조성물이 절실히 필요하다. 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체의 치료, 평가, 진단 및 예후에 적용될 수 있는 방법 및 조성물을 제공한다. 일부 실시양태들에서, 본원에서 제공된 방법은 대상체에서 마이크로RNA-31 발현과 IL-2 발현 사이의 상관관계에 기초한다.There is a desperate need for improved methods and compositions for use in the diagnosis, management and treatment of autoimmune diseases. The present disclosure provides methods and compositions that can be applied to the treatment, evaluation, diagnosis, and prognosis of autoimmune conditions, e.g., subjects with systemic lupus erythematosus. In some embodiments, the methods provided herein are based on a correlation between microRNA-31 expression and IL-2 expression in a subject.

제1 양태에서, 본 개시내용은 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 자가면역 병태를 갖는 대상체에서 인터류킨-2(IL-2) 발현을 증가시키는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 대상체는 전신홍반루푸스를 갖는 대상체이다. 다른 실시양태에서, 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 대상체는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태를 갖는 대상체이다.In a first aspect, the present disclosure provides a method of increasing interleukin-2 (IL-2) expression in a subject having an autoimmune condition requiring increased expression of interleukin-2 (IL-2). This method comprises administering to the subject an effective amount of a composition that increases expression of microRNA-31 or reduces expression of RhoA. In some embodiments, the subject in need of increased expression of interleukin-2 (IL-2) is a subject with systemic lupus erythematosus. In another embodiment, a subject in need of increased expression of interleukin-2 (IL-2) may be selected from a group that shares one or more characteristics with SLE, such as a mechanism of action, pathogenesis, Is another object with another autoimmune condition that shares a correlation with the error regulation of T cells, particularly the control of error in regulatory T cells.

제2 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태를 갖는 대상체의 T 세포에서 인터류킨-2(IL-2) 발현을 증가시키는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 T 세포를, 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. T 세포의 접촉은 예컨대, 조성물을 대상체에게 투여함으로써 생체내에서 달성될 수 있다. 대안적으로, T 세포의 접촉은 예컨대, 조성물을 세포 배양 배지에 포함시킴으로써 시험관내에서 달성될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태를 갖는 대상체는 전신홍반루푸스를 갖는다. 다른 실시양태에서, 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 대상체는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태를 갖는 대상체이다.In a second aspect, the disclosure provides a method of increasing interleukin-2 (IL-2) expression in a T cell of a subject having an autoimmune condition. This method comprises contacting the T cell with an effective amount of a composition that increases the expression of microRNA-31 or reduces the expression of RhoA. Contacting T cells can be accomplished in vivo, for example, by administering the composition to a subject. Alternatively, contact of the T cells can be accomplished in vitro, for example, by including the composition in a cell culture medium. In some embodiments, the subject with autoimmune disease has systemic lupus erythematosus. In another embodiment, a subject in need of increased expression of interleukin-2 (IL-2) may be selected from a group that shares one or more characteristics with SLE, such as a mechanism of action, pathogenesis, Is another object with another autoimmune condition that shares a correlation with the error regulation of T cells, particularly the control of error in regulatory T cells.

제3 양태에서, 본 개시내용은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물을 자가면역 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하여 자가면역 병태를 치료하는 단계를 포함하는, 자가면역 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 전신홍반루푸스이다. 다른 실시양태에서, 상기 병태는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태이다.In a third aspect, the disclosure provides a method of treating autoimmune disease comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a composition that increases expression of RhoA or reduces expression of RhoA Lt; RTI ID = 0.0 > autoimmune < / RTI > In some embodiments, the autoimmune condition is systemic lupus erythematosus. In another embodiment, the condition is selected from the group consisting of one or more features that share one or more characteristics, such as, for example, a mechanism of action, pathogenesis, a correlation with IL-2 dysregulation or an error control of T cells, Another autoimmune condition that shares a relationship.

제4 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태를 갖는 대상체에서 RhoA 발현을 감소시키는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 유효량의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 전신홍반루푸스이다. 다른 실시양태에서, 상기 병태는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태이다.In a fourth aspect, the disclosure provides a method of reducing RhoA expression in a subject having autoimmune disease. This method comprises administering to the subject an effective amount of a composition that increases the expression of microRNA-31. In some embodiments, the autoimmune condition is systemic lupus erythematosus. In another embodiment, the condition is selected from the group consisting of one or more features that share one or more characteristics, such as, for example, a mechanism of action, pathogenesis, a correlation with IL-2 dysregulation or an error control of T cells, Another autoimmune condition that shares a relationship.

제5 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태를 갖는 대상체의 T 세포에서 RhoA 발현을 감소시키는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 상기 T 세포를, 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 유효량의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. T 세포의 접촉은 예컨대, 조성물을 대상체에게 투여함으로써 생체내에서 달성될 수 있다. 대안적으로, T 세포의 접촉은 예컨대, 조성물을 세포 배양 배지에 포함시킴으로써 시험관내에서 달성될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태를 갖는 대상체는 전신홍반루푸스를 갖는다. 다른 실시양태에서, RhoA 발현의 감소를 필요로 하는 대상체는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태를 갖는 대상체이다.In a fifth aspect, the disclosure provides a method of reducing RhoA expression in a T cell of a subject having an autoimmune condition. This method comprises contacting the T cell with an effective amount of a composition that increases the expression of microRNA-31. Contacting T cells can be accomplished in vivo, for example, by administering the composition to a subject. Alternatively, contact of the T cells can be accomplished in vitro, for example, by including the composition in a cell culture medium. In some embodiments, the subject with autoimmune disease has systemic lupus erythematosus. In another embodiment, a subject in need of a reduction in RhoA expression is one that shares one or more characteristics with SLE, such as a mechanism of action, pathogenesis, a correlation with IL-2 overexpression, or an error control of T cells, It is a subject with another autoimmune condition that shares a correlation with cell error regulation.

본 개시내용은 하기 실시양태들이 본 개시내용의 상기 양태들 중 임의의 양태 및/또는 본 개시내용의 하기 실시양태들 중 임의의 실시양태에 적용될 수 있다는 것을 고려한다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 인간 대상체이다. 다른 실시양태에서, 대상체는 비인간 대상체이다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 질환 발적(flare)의 증상을 경험하고 있다(예컨대, 조성물의 투여 전에 질환 발적의 증상을 경험하고 있다). 다른 실시양태에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 예컨대, 조성물의 투여 전에 질환 발적의 증상을 경험하고 있지 않다. 일부 실시양태들에서, SLE의 증상은 루푸스 신장염을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 병태를 갖는다. 일부 실시양태들에서, 다른 자가 면역 병태는 류마티스성 관절염(RA) 또는 I형 당뇨병이다.The present disclosure contemplates that the embodiments below may be applied to any of the above aspects of the present disclosure and / or any of the following embodiments of the present disclosure. In some embodiments, the subject is a human subject. In another embodiment, the subject is a non-human subject. In some embodiments, the subject has systemic lupus erythematosus and is experiencing a symptom of a flare (e.g., experiencing a symptom of a febrile illness prior to administration of the composition). In another embodiment, the subject has systemic lupus erythematosus and is not experiencing symptoms of a disease anemia prior to administration of the composition, for example. In some embodiments, the symptoms of SLE include lupus nephritis. In some embodiments, the subject is treated with another autoimmune condition, e. G., A mechanism of action, pathogenesis, which correlates with one or more characteristics, such as an SLE, Lt; RTI ID = 0.0 > of T < / RTI > cells. In some embodiments, the other autoimmune condition is rheumatoid arthritis (RA) or type I diabetes.

일부 실시양태들에서, 조성물과 접촉되거나 조성물이 작용하는 T 세포는 활성화된 T 세포, 예컨대, 시험관내 또는 생체내에서 활성화된 T 세포이다.In some embodiments, the T cell in contact with or acting on the composition is an activated T cell, such as an activated T cell in vitro or in vivo.

전술된 내용들 중 임의의 내용의 일부 실시양태들에서, 조성물은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 조성물은 RhoA의 발현을 감소시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키고/시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 폴리펩티드 또는 유기 소분자를 포함한다. 발현을 증가시키거나 감소시킨다는 것은 본 개시내용이 전사체 및/또는 단백질 발현이 증가되거나 감소되는 실시양태를 고려한다는 것이다. In some embodiments of any of the foregoing, the composition comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that increases the expression of microRNA-31. In some embodiments, the composition comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that reduces expression of RhoA. In another embodiment, the composition comprises a polypeptide or organic small molecule that increases expression of microRNA-31 and / or reduces expression of RhoA. Increasing or decreasing expression means that the present disclosure contemplates embodiments in which transcript and / or protein expression is increased or decreased.

전술된 내용들 중 임의의 내용의 일부 실시양태들에서, 조성물은 외생적으로 첨가된 마이크로RNA-31을 포함한다. 이러한 마이크로RNA-31은 천연 발생 마이크로RNA-31에 상응할 수 있거나 합성 핵산을 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 조성물은 짧은 간섭 핵산(siNA), 예컨대, 마이크로RNA, siRNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 조성물은 RhoA에 혼성화할 수 있는 siNA를 포함한다.In some embodiments of any of the foregoing, the composition comprises exogenously added microRNA-31. Such microRNA-31 may correspond to naturally occurring microRNA-31 or may contain synthetic nucleic acid. In some embodiments, the composition comprises a short interfering nucleic acid (siNA), such as a microRNA, siRNA or antisense oligonucleotide. In some embodiments, the composition comprises an siNA that is capable of hybridizing to RhoA.

전술된 내용들 중 임의의 내용의 일부 실시양태들에서, RhoA의 발현을 감소시키는 것은 RhoA 전사체의 발현을 감소시키는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, RhoA의 발현을 감소시키는 것은 RhoA 단백질의 발현을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태들에서, IL-2의 발현을 증가시키는 것은 IL-2 전사체의 발현을 증가시키는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-2의 발현을 증가시키는 것은 IL-2 단백질의 발현을 증가시키는 것을 포함한다.In some embodiments of any of the foregoing, reducing the expression of RhoA involves reducing the expression of the RhoA transcript. In another embodiment, reducing the expression of RhoA involves reducing the expression of the RhoA protein. In some embodiments, increasing expression of IL-2 comprises increasing the expression of an IL-2 transcript. In another embodiment, increasing the expression of IL-2 comprises increasing the expression of the IL-2 protein.

전술된 내용들 중 임의의 내용의 일부 실시양태들에서, 방법은 하나 이상의 분석 단계를 추가로 포함한다. 예를 들면, 일부 실시양태들에서, 방법은 조성물을 투여한 후 일정 시점에서 대상체로부터 채취된 샘플에서 IL-2의 발현을 분석하는 단계를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 방법은 조성물을 투여한 후 일정 시점에서 대상체로부터 채취된 샘플에서 RhoA의 발현을 분석하는 단계를 추가로 포함한다. 이러한 샘플은 치료 조성물을 투여하는 건강관리 제공자와 동일한 건강관리 제공자에 의해 채취될 수 있거나 치료 조성물을 투여하는 시설과 동일한 시설에서 채취될 수 있거나, 이러한 샘플은 상이한 건강관리 제공자에 의해 채취될 수 있고/있거나 상이한 시설에서 채취될 수 있다.In some embodiments of any of the foregoing, the method further comprises one or more analysis steps. For example, in some embodiments, the method further comprises analyzing the expression of IL-2 in the sample taken from the subject at some point after administration of the composition. In another embodiment, the method further comprises analyzing the expression of RhoA in a sample taken from the subject at some point after administration of the composition. Such samples may be taken by the same healthcare provider as the healthcare provider administering the therapeutic composition, or may be taken from the same facility as the one administering the therapeutic composition, or the sample may be taken by a different healthcare provider And / or may be collected at different facilities.

일부 실시양태들에서, 분석 단계에서 사용된 샘플은 혈액 샘플을 포함한다. 예를 들면, 분석은 전혈 샘플을 사용함으로써, 혈액 샘플로부터 분리된 림프구를 사용함으로써, 또는 혈청 또는 혈액의 일부 다른 성분을 사용함으로써 수행될 수 있다. 관련 샘플은 이용되는 구체적인 분석에 기초하여 준비된다. 다른 실시양태에서, 분석 단계에서 사용된 샘플은 골수 샘플을 포함한다. 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, IL-2의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 IL-2 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-2 발현의 분석은 샘플에서 IL-2 단백질의 발현의 분석을 포함한다. 유사하게, 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, RhoA의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 RhoA 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, RhoA 발현의 분석은 샘플에서 RhoA 단백질의 발현의 분석을 포함한다.In some embodiments, the sample used in the analysis step comprises a blood sample. For example, the analysis can be performed by using whole blood samples, by using lymphocytes isolated from blood samples, or by using some other components of serum or blood. The relevant samples are prepared based on the specific analysis used. In another embodiment, the sample used in the analysis step comprises a bone marrow sample. Regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, the analysis of IL-2 expression includes, for example, the analysis of the expression of IL-2 transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of IL-2 expression involves the analysis of the expression of the IL-2 protein in the sample. Similarly, regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, analysis of the expression of RhoA involves, for example, analysis of the expression of RhoA transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of RhoA expression involves the analysis of the expression of the RhoA protein in the sample.

제6 양태에서, 본 개시내용은 방법을 제공한다. 상기 방법은 화합물/복합물(compound)을 투여받은, 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체에서 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2로부터 선택된 생체마커의 존재, 부재 또는 양을 분석하는 단계; 및 분석된 상기 생체마커의 존재, 부재 또는 양에 기초하여 상기 대상체에게 후속적으로 투여되는 화합물의 용량 또는 투약 요법(dosing regimen)이 조절되어야 하는지를 결정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 전신홍반루푸스이다. 다른 실시양태에서, 자가면역 병태는 SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유한다.In a sixth aspect, the present disclosure provides a method. The method comprises analyzing the presence, absence or amount of a biomarker selected from microRNA-31, RhoA and IL-2 in a subject having an autoimmune condition, such as systemic lupus erythematosus, to which the compound / compound has been administered ; And determining the dose of the compound or the dosing regimen to be subsequently administered to the subject based on the presence, absence or amount of the biomarker analyzed. In some embodiments, the autoimmune condition is systemic lupus erythematosus. In another embodiment, an autoimmune condition is one in which an autoimmune condition is associated with an SLE that shares one or more characteristics, such as a mechanism of action, pathogenesis, a correlation with IL-2 overexpression, or an error control of T cells, Share the correlation.

일부 실시양태들에서, 대상체는 인간 대상체이다. 다른 실시양태들에서, 대상체는 비인간 대상체이다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 질환 발적의 증상을 경험하고 있다. 다른 실시양태에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 질환 발적의 증상을 경험하고 있지 않다. 일부 실시양태들에서, SLE의 증상은 루푸스 신장염을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 병태를 갖는다. 일부 실시양태들에서, 다른 자가면역 병태는 류마티스성 관절염(RA) 또는 I형 당뇨병이다.In some embodiments, the subject is a human subject. In other embodiments, the subject is a non-human subject. In some embodiments, the subject has systemic lupus erythematosus and is experiencing symptoms of a disease anemia. In another embodiment, the subject has systemic lupus erythematosus and is not experiencing symptoms of a disease anemia. In some embodiments, the symptoms of SLE include lupus nephritis. In some embodiments, the subject is treated with another autoimmune condition, e. G., A mechanism of action, pathogenesis, which correlates with one or more characteristics, such as an SLE, Lt; RTI ID = 0.0 > of T < / RTI > cells. In some embodiments, the other autoimmune condition is rheumatoid arthritis (RA) or type I diabetes.

일부 실시양태들에서, 분석 단계를 위해 사용된 샘플은 혈액 샘플을 포함한다. 예를 들면, 분석은 전혈 샘플을 사용함으로써, 혈액 샘플로부터 분리된 림프구를 사용함으로써, 또는 혈청 또는 혈액의 일부 다른 성분을 사용함으로써 수행될 수 있다. 관련 샘플은 이용되는 구체적인 분석에 기초하여 준비된다. 다른 실시양태에서, 사용된 샘플은 골수 샘플을 포함한다. 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, IL-2의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 IL-2 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-2 발현의 분석은 샘플에서 IL-2 단백질의 발현의 분석을 포함한다. 유사하게, 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, RhoA의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 RhoA 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, RhoA 발현의 분석은 샘플에서 RhoA 단백질의 발현의 분석을 포함한다.In some embodiments, the sample used for the analysis step comprises a blood sample. For example, the analysis can be performed by using whole blood samples, by using lymphocytes isolated from blood samples, or by using some other components of serum or blood. The relevant samples are prepared based on the specific analysis used. In another embodiment, the sample used comprises a bone marrow sample. Regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, the analysis of IL-2 expression includes, for example, the analysis of the expression of IL-2 transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of IL-2 expression involves the analysis of the expression of the IL-2 protein in the sample. Similarly, regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, analysis of the expression of RhoA involves, for example, analysis of the expression of RhoA transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of RhoA expression involves the analysis of the expression of the RhoA protein in the sample.

일부 실시양태들에서, 화합물은 스테로이드 또는 면역억제제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 화합물은 본 개시내용의 조성물을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 화합물은 마이크로RNA-31 발현을 증가시키거나 RhoA 발현을 감소시키는 조성물을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 화합물은 IL-2를 포함한다.In some embodiments, the compound comprises a steroid or immunosuppressant. In another embodiment, the compound comprises a composition of the present disclosure. In some embodiments, the compound comprises a composition that increases microRNA-31 expression or reduces RhoA expression. In some embodiments, the compound comprises IL-2.

일부 실시양태들에서, 조사된 생체마커는 마이크로RNA-31이다. 다른 실시양태에서, 조사된 생체마커는 RhoA이다. 다른 실시양태에서, 조사된 생체마커는 IL-2이다. 다른 실시양태에서, 상기 생체마커들 중 하나 이상의 생체마커들의 조합물이 조사된다. 생체마커는 전사체 또는 단백질 수준에서 조사될 수 있다.In some embodiments, the biomarker irradiated is microRNA-31. In another embodiment, the irradiated biomarker is RhoA. In another embodiment, the biomarker irradiated is IL-2. In another embodiment, a combination of one or more biomarkers of the biomarkers is examined. Biomarkers can be examined at the transcript or protein level.

제7 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 진단하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; 및 상기 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 분석하는 단계를 포함한다.In a seventh aspect, the disclosure provides a method of diagnosing an autoimmune condition, e.g., systemic lupus erythematosus. The method comprising: obtaining a sample from a subject suspected of having an autoimmune condition, e. G., Systemic lupus erythematosus; And analyzing the expression of microRNA-31 or RhoA in the sample.

일부 실시양태들에서, 대상체는 인간 대상체이다. 다른 실시양태에서, 대상체는 비인간 대상체이다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 질환 발적의 증상을 경험하고 있다. 다른 실시양태에서, 대상체는 전신홍반루푸스를 갖고 질환 발적의 증상을 경험하고 있지 않다. 일부 실시양태들에서, SLE의 증상은 루푸스 신장염을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 대상체는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 병태를 갖는다. 일부 실시양태들에서, 다른 자가면역 병태는 류마티스성 관절염(RA) 또는 I형 당뇨병이다.In some embodiments, the subject is a human subject. In another embodiment, the subject is a non-human subject. In some embodiments, the subject has systemic lupus erythematosus and is experiencing symptoms of a disease anemia. In another embodiment, the subject has systemic lupus erythematosus and is not experiencing symptoms of a disease anemia. In some embodiments, the symptoms of SLE include lupus nephritis. In some embodiments, the subject is treated with another autoimmune condition, e. G., A mechanism of action, pathogenesis, which correlates with one or more characteristics, such as an SLE, Lt; RTI ID = 0.0 > of T < / RTI > cells. In some embodiments, the other autoimmune condition is rheumatoid arthritis (RA) or type I diabetes.

제8 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스의 치료를 모니터링하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스에 대한 치료를 받은 대상체의 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 검출하는 단계; 및 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 치료 전에 또는 치료 동안 초기 시점에서 수득된 동일한 대상체의 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 포함한다. 이러한 방법에서, 치료 전에 또는 치료 동안 초기 시점에서 수득된 샘플에 비해 치료 동안 후기 시점에서 수득된 샘플에서의 마이크로RNA-31의 증가 또는 RhoA의 감소는 치료의 효과성(effectiveness)을 나타냄으로써 치료를 모니터링한다.In an eighth aspect, the disclosure provides a method for monitoring autoimmune conditions, e. G., Treatment of systemic lupus erythematosus. The method comprising the steps of: detecting expression of microRNA-31 or RhoA in a sample of a subject who has been treated for an autoimmune condition, e. G., Systemic lupus erythematosus; And comparing the expression of microRNA-31 or RhoA with expression in a sample of the same subject obtained at an early time point prior to or during treatment. In such a method, an increase in microRNA-31 or a decrease in RhoA in the sample obtained at a later time point during treatment compared to the sample obtained at the initial point in time prior to or during the treatment indicates efficacy of the treatment, Monitoring.

일부 실시양태들에서, 분석 단계를 위해 사용된 샘플은 혈액 샘플을 포함한다. 예를 들면, 분석은 전혈 샘플을 사용함으로써, 혈액 샘플로부터 분리된 림프구를 사용함으로써, 또는 혈청 또는 혈액의 일부 다른 성분을 사용함으로써 수행될 수 있다. 관련 샘플은 이용되는 구체적인 분석에 기초하여 준비된다. 다른 실시양태에서, 사용된 샘플은 골수 샘플을 포함한다. 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, IL-2의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 IL-2 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, IL-2 발현의 분석은 샘플에서 IL-2 단백질의 발현의 분석을 포함한다. 유사하게, 분석 단계를 위해 사용된 샘플과 관계없이, 일부 실시양태들에서, RhoA의 발현의 분석은 예컨대, T 세포에서 RhoA 전사체의 발현의 분석을 포함한다. 다른 실시양태에서, RhoA의 발현의 분석은 샘플에서 RhoA 단백질의 발현의 분석을 포함한다.In some embodiments, the sample used for the analysis step comprises a blood sample. For example, the analysis can be performed by using whole blood samples, by using lymphocytes isolated from blood samples, or by using some other components of serum or blood. The relevant samples are prepared based on the specific analysis used. In another embodiment, the sample used comprises a bone marrow sample. Regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, the analysis of IL-2 expression includes, for example, the analysis of the expression of IL-2 transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of IL-2 expression involves the analysis of the expression of the IL-2 protein in the sample. Similarly, regardless of the sample used for the analysis step, in some embodiments, analysis of the expression of RhoA involves, for example, analysis of the expression of RhoA transcripts in T cells. In another embodiment, the analysis of the expression of RhoA involves the analysis of the expression of the RhoA protein in the sample.

제9 양태에서, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 자가면역 병태에 대한 특정 치료의 개시 전에 대상체로부터 채취된 샘플로부터의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 건강한 대상체로부터 채취된 샘플에서의 발현을 반영하는 표준 범위와 비교하는 단계를 포함하고, 이때 표준 범위 미만의 마이크로RNA-31의 발현 또는 표준 범위 초과의 RhoA의 발현은 예를 들면, 전신홍반루푸스에 대한 치료에 대한 감수성을 나타낸다. 상기 방법은 대상체가 전신홍반루푸스에 대한 치료에 대해 감수성을 나타내는 것으로 확인되는 경우 마이크로RNA-31, RhoA에 혼성화하는 siNA 또는 IL-2 단백질을 포함하는 유효량의 조성물 또는 본 개시내용의 또 다른 조성물로 상기 대상체를 치료하는 단계; 대상체의 치료 후 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 검출하는 단계; 및 치료 후 샘플에서의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 특정 치료의 개시 전에 채취된 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 추가로 포함한다.In a ninth aspect, the disclosure provides a method of treating a subject having an autoimmune condition, e. G., Systemic lupus erythematosus. The method comprises comparing the expression of microRNA-31 or RhoA from a sample taken from a subject to a standard range that reflects expression in a sample taken from a healthy subject prior to initiation of a particular treatment for an autoimmune condition , Wherein the expression of the microRNA-31 below the standard range or the expression of RhoA above the standard range indicates susceptibility to treatment, for example, for systemic lupus erythematosus. The method may further comprise administering to the subject an effective amount of a composition comprising a microRNA-31, a siNA or IL-2 protein that hybridizes to RhoA, or another composition of the disclosure, if the subject is found to be susceptible to treatment for systemic lupus erythematosus Treating the subject; Detecting expression of microRNA-31 or RhoA in a sample after treatment of the subject; And comparing the expression of microRNA-31 or RhoA in the sample after treatment with expression in a sample taken prior to initiation of the particular treatment.

본 개시내용은 상기 양태들 및 실시양태들 중 어느 하나 이상의 양태들 또는 실시양태들이 조합될 수 있고/있거나 상세한 설명 및 실시예에 기재된 실시양태들 중 임의의 실시양태와 조합될 수 있다는 것을 고려하다.The present disclosure contemplates that any one or more aspects or embodiments of the aspects and embodiments may be combined and / or combined with any of the embodiments described in the description and the examples .

도 1은 정상 대조군(NC) 대상체와 비교될 때 루푸스 환자에서 miR-31의 감소된 발현을 보여준다. (A) T 세포, B 세포 및 단핵구에서의 miR-31 발현을 택만(Taqman) 정량 PCR로 측정하였다. 결과는 3명의 건강한 공여자들로부터 채취된 B 세포의 발현으로 표준화된 평균±SEM으로서 표현된다. (B) 택만 정량 PCR을 이용하여 32명의 루푸스 환자 및 11명의 정상 대조군으로부터 채취된 T 세포에서 miR-31 발현의 독립적인 검증을 보여준다(P<0.0001). 상기 결과는 평균±SEM으로서 제시된다. P 값은 만-휘트니(Mann-Whitney) U 검정에 의해 측정되었다.
도 2는 miR-31의 발현을 보여준다. (A) miR-31 모방체(mimic) 또는 대조군(Ctrl)의 형질감염으로부터 24시간 후 활성화된 일차 T 세포에서 miR-31 발현의 택만 정량 PCR 분석. (B) 안타고미르(antagomir)-31 또는 대조군의 형질감염으로부터 24시간 후 활성화된 일차 T 세포에서 miR-31 발현의 택만 정량 PCR 분석.
도 3은 miR-31이 IL-2 발현 및 IL-2 프로모터의 활성을 조절한다는 것을 보여주는 실험 결과를 제시한다. (A) 일차 T 세포를 PMA 및 이노마이신(ionomycin)으로 자극하였고, miR-31 수준을 택만 정량 PCR로 상이한 시간에서 측정하였다. RNU48 수준을 이용하여 발현을 표준화하였다. 각각의 막대는 3회 독립적인 실험의 평균이다. (B) miR-31 모방체 또는 대조군(Ctrl) 및 안타고미르-31 또는 안타고미르-대조군(Ctrl)의 형질감염으로부터 24시간 후 활성화된 일차 T 세포에서 IL-2 발현의 정량 PCR 분석. 막대그래프는 하우스킵핑(housekeeping) 유전자 RPL13A를 사용한 표준화 후 대조군에 비해 mRNA 발현에서의 배수 변화를 보여준다. (C) miR-31 모방체 또는 대조군 모방체 및 안타고미르-31 또는 안타고미르-대조군으로 형질감염된 활성화된 일차 T 세포의 배양 상청액에서 IL-2 수준을 ELISA로 검출하였다. B 및 C에서의 값은 4명의 대표적인 건강한 공여자들에 대한 평균±SEM이다. (D) 루푸스를 갖는 환자의 활성화된 T 세포에서 IL-2의 발현과 miR-31의 발현 사이의 선형 상관관계 분석. (E) 주르카트(Jurkat) 세포를 형질감염의 표준화에 사용된 pGL3-기초-luc와 함께 miR-31 모방체 또는 대조군 모방체 및 IL-2 프로모터-luc 레포터 플라스미드로 동시형질감염시켰다. 세포를 자극하지 않았거나 PMA 및 이노마이신으로 24시간 동안 자극하였고, 상대적 프로모터 활성을 이중 루시퍼라제(luciferase) 분석으로 측정하였다. 각각의 막대는 3회 독립적인 실험의 평균이다. (F) miR-31은 용량 의존적 방식으로 IL-2 프로모터의 루시퍼라제 활성을 향상시켰다. 결과는 3회 대표적인 실험으로부터 수득된다. **P<0.01; ***P<0.001.
도 4는 RhoA 발현의 음성 조절제로서 miR-31을 확인하는 실험 결과를 제시한다. (A) miR-31 모방체 또는 대조군 모방체로 형질감염된 활성화된 T 림프구에서 RhoA mRNA 발현 수준을 RT-PCR로 분석하였다. 데이터는 3회 독립적인 실험으로부터 수득된다. 결과는 평균±SEM으로서 제시된다. (B) miR-31 모방체 또는 대조군 모방체의 형질감염으로부터 48시간 후 T 세포(n=3)에서 RhoA 단백질 발현의 면역블롯 분석. (C) SLE 환자(n=32) 및 정상 대조군(n=11)의 T 세포에서 RhoA의 발현을 RT-PCR로 측정하였다. 상기 결과는 평균±SEM으로서 제시된다. P 값은 만-휘트니 U 검정에 의해 측정되었다. (D) 루푸스 환자(n=32)의 일차 T 세포에서 RhoA의 발현과 miR-31의 발현 사이의 선형 상관관계 분석.
도 5는 RhoA에 대한 siRNA의 효과를 보여준다. (A) siRNA-1, siRNA-2 또는 대조군의 형질감염 후 일차 T 세포에서 RhoA 발현의 정량 PCR 분석. (B) RhoA에 대한 2개의 siRNA(siR-1 및 siR-2) 또는 대조군의 형질감염 후 일차 T 세포에서 RhoA 발현의 면역블롯 분석. 상기 결과는 평균±SEM으로서 제시된다. P 값은 만-휘트니 U 검정에 의해 측정되었다.
도 6은 RhoA의 siRNA 매개 넉다운(knockdown)이 IL-2 생성 및 IL-2 프로모터의 활성을 조절한다는 것을 보여주는 실험 결과를 제시한다. (A) miR-31 모방체 또는 대조군 모방체 및 2개의 siRNA의 형질감염으로부터 24시간 후 활성화된 일차 T 세포에서 IL-2 발현의 정량 PCR 분석. (B) miR-31 모방체, 대조군 모방체 또는 2개의 siRNA로 형질감염된 활성화된 일차 T 세포의 배양물 상청액 중의 IL-2 수준을 ELISA로 검출하였다. A 및 B에서의 값은 3명의 대표적인 건강한 공여자들에 대한 평균±SEM이다. (C) 형질감염의 표준화를 위해 사용된 pGL3-기초-luc와 함께 IL-2 프로모터 및 RhoA siRNA, miR-31 모방체 또는 대조군 모방체를 함유하는 레포터 벡터로 동시형질감염된 주르카트 세포의 이중 루시퍼라제 분석. 데이터는 3회 독립적인 실험으로부터 대조군에 비해 miR-31 형질감염된 세포 및 siRNA 형질감염된 세포의 상대적인 루시퍼라제 활성으로서 표시된다.
도 7은 SLE 환자의 활성화된 T 세포에서 miR-31, RhoA 및 IL-2의 역할을 확인시켜주는 실험 결과를 제시한다. (A) 15명의 SLE 환자 및 10명의 정상 대조군(NC)의 활성화된 T 세포에서 miR-31의 발현을 택만 정량 PCR로 검출하였다. (B) RhoA 발현을 상기 샘플에서 RT-PCR로 정량하였다. (C) 12명의 SLE 환자 및 10명의 정상 대조군의 활성화된 T 세포의 상청액 중의 IL-2 단백질 수준을 ELISA로 측정하였다. (D) miR-31 모방체 또는 대조군 모방체의 형질감염 후 SLE 환자(n=3)의 활성화된 T 세포의 배양물 상청액에서 IL-2 발현의 ELISA 분석. 상기 결과는 평균±SEM으로서 제시된다. P 값은 만-휘트니 U 검정에 의해 측정되었다.
표의 간단한 설명
표 1은 도 1B에 제시된 연구에서 사용된 환자의 임상 특징을 요약한다.
표 2는 도 7에 제시된 연구에서 사용된 환자의 임상 특징을 요약한다.Figure 1 shows reduced expression of miR-31 in patients with lupus when compared to normal control (NC) subjects. (A) Expression of miR-31 in T cells, B cells and monocytes was measured by Taqman quantitative PCR. Results are expressed as mean ± SEM normalized to the expression of B cells harvested from three healthy co-workers. (B) Tachman alone assay of miR-31 expression in T cells from 32 lupus patients and 11 normal controls using quantitative PCR ( P <0.0001). The results are presented as means ± SEM. P values were measured by a Mann-Whitney U test.
Figure 2 shows the expression of miR-31. (A) Taxonomic quantitative PCR analysis of miR-31 expression in primary T cells activated 24 hours after transfection of miR-31 mimic or control (Ctrl). (B) Taxonomic quantitative PCR analysis of miR-31 expression in primary T cells activated 24 hours after antagomir-31 or control transfection.
Figure 3 presents experimental results showing that miR-31 modulates IL-2 expression and IL-2 promoter activity. (A) Primary T cells were stimulated with PMA and ionomycin, and miR-31 levels were measured at different times by tame quantitative PCR. Expression was normalized using the RNU48 level. Each bar is an average of three independent experiments. (B) Quantitative PCR analysis of IL-2 expression in primary T cells activated 24 hours after transfection of miR-31 mimic or control (Ctrl) and anthagomir-31 or anthromycin-control (Ctrl). The bar graph shows the change in mRNA expression after standardization with the housekeeping gene RPL13A compared to the control. (C) IL-2 levels were detected by ELISA in cultured supernatant of activated primary T cells transfected with miR-31 mimic or control mimic and anthagomir-31 or anthagmir-control. The values at B and C are the mean ± SEM for four representative healthy volunteers. (D) Analysis of linear correlation between IL-2 expression and miR-31 expression in activated T cells of patients with lupus. (E) Jurkat cells were co-transfected with miR-31 mimetics or control mimic and IL-2 promoter-luc reporter plasmid with pGL3-based-luc used for normalization of transfection. Cells were not stimulated or stimulated with PMA and inomycin for 24 hours and relative promoter activity was measured by dual luciferase assay. Each bar is an average of three independent experiments. (F) miR-31 enhanced the luciferase activity of the IL-2 promoter in a dose-dependent manner. The results are obtained from three representative experiments. ** P < 0.01; ** * P <0.001.
Figure 4 presents experimental results confirming miR-31 as a negative regulator of RhoA expression. (A) RhoA mRNA expression levels were analyzed by RT-PCR in activated T lymphocytes transfected with miR-31 mimic or control mimic. Data are obtained from three independent experiments. Results are presented as means ± SEM. (B) Immunoblot analysis of RhoA protein expression in T cells (n = 3) 48 hours after transfection of miR-31 mimic or control mimic. (C) Expression of RhoA was measured by RT-PCR in T cells from SLE patients (n = 32) and normal controls (n = 11). The results are presented as means ± SEM. The P value was measured by the Mann-Whitney U test. (D) Linear correlation analysis between RhoA expression and miR-31 expression in primary T cells of patients with lupus (n = 32).
Figure 5 shows the effect of siRNA on RhoA. (A) Quantitative PCR analysis of RhoA expression in primary T cells after transfection of siRNA-1, siRNA-2 or control. (B) Immunoblot analysis of RhoA expression in primary T cells after transfection of two siRNAs (siR-1 and siR-2) or control for RhoA. The results are presented as means ± SEM. The P value was measured by the Mann-Whitney U test.
Figure 6 presents experimental results showing that siRNA mediated knockdown of RhoA modulates IL-2 production and IL-2 promoter activity. (A) Quantitative PCR analysis of IL-2 expression in activated primary T cells 24 hours after transfection of miR-31 mimic or control mimic and two siRNAs. (B) IL-2 levels in culture supernatant of activated primary T cells transfected with miR-31 mimic, control mimic, or two siRNAs were detected by ELISA. The values at A and B are the mean ± SEM for three representative healthy coexists. (C) duplication of Jurkat cells co-transfected with the reporter vector containing IL-2 promoter and RhoA siRNA, miR-31 mimetics or control mimetics with pGL3-base-luc used for normalization of transfection Luciferase analysis. The data are expressed as relative luciferase activity of miR-31 transfected cells and siRNA transfected cells compared to the control from three independent experiments.
Figure 7 shows experimental results confirming the role of miR-31, RhoA and IL-2 in activated T cells in SLE patients. (A) Expression of miR-31 in activated T cells of 15 SLE patients and 10 normal controls (NC) was detected by tactile quantitative PCR. (B) RhoA expression was quantitated by RT-PCR in the sample. (C) IL-2 protein levels in the supernatant of activated T cells from 12 SLE patients and 10 normal controls were measured by ELISA. (D) ELISA analysis of IL-2 expression in culture supernatants of activated T cells of SLE patients (n = 3) after transfection of miR-31 mimic or control mimic. The results are presented as means ± SEM. The P value was measured by the Mann-Whitney U test.
A brief description of the table
Table 1 summarizes the clinical characteristics of the patients used in the study presented in Figure IB.
Table 2 summarizes the clinical characteristics of the patients used in the study presented in FIG.

(i) 개요(i) Overview

전신홍반루푸스(SLE)는 면역 시스템의 만성 활성화 및 다수의 면역학적 표현형을 특징으로 하는 다인성 자가면역 장애이다. 본 개시내용은 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2를 통한 신호전달을 수반하는 자가면역 질환에서 기작의 확인에 부분적으로 기초한다.Systemic lupus erythematosus (SLE) is a multifactorial autoimmune disorder characterized by chronic activation of the immune system and multiple immunological phenotypes. This disclosure is based in part on the identification of mechanisms in autoimmune diseases involving signal transduction via microRNA-31, RhoA and IL-2.

마이크로RNA(miRNA)는 유전자 발현의 핵심 전사 후 조절제로서 작용하는 단일 가닥 비코딩 RNA의 한 클래스이다(Denli et al., 2004; Gregory et al., 2004). 동물에서, miRNA는 통상적으로 표적 유전자의 3' 비번역 영역(UTR)과 불완전한 염기쌍 형성을 수행하고 번역 억제 또는 mRNA 분해로 표적 유전자 발현을 조절한다(Ambros. 2004).MicroRNAs (miRNAs) are a class of single-stranded noncoding RNAs that act as post-transcriptional regulators of gene expression (Denli et al., 2004; Gregory et al., 2004). In animals, miRNAs typically undergo incomplete base pairing with the 3 'untranslated region (UTR) of the target gene and regulate target gene expression by translational inhibition or mRNA degradation (Ambros. 2004).

이론에 의해 구속받지 않지만, 본 개시내용은 하기 제공된 실시예에 부분적으로 기초한다. 실시예는 내생성 miR-31 수준의 과소발현이 SLE T 세포에서 확인된 연구를 반영한다. 또한, miR-31은 활성화된 T 세포에서 IL-2 생성의 양성 조절제이고 RhoA 발현은 miR-31 발현과 역 상관관계를 갖는다는 것도 확인되었다. 이 조절은 IL-2의 프로모터 활성의 조절을 통해 일어나는 것으로 보인다. 더욱이, RhoA의 발현은 건강한 지원자에 비해 루푸스 T 세포에서 훨씬 더 높았다.Without being bound by theory, the present disclosure is based in part on the embodiments provided below. The examples reflect a study in which underexpression of endogenous miR-31 levels was confirmed in SLE T cells. It was also found that miR-31 is a positive regulator of IL-2 production in activated T cells and that RhoA expression is inversely correlated with miR-31 expression. This modulation appears to occur via regulation of the promoter activity of IL-2. Moreover, the expression of RhoA was much higher in lupus T cells than in healthy volunteers.

(ii) 정의(ii) Definition

본 발명을 더 상세히 계속 기재하기 전에, 본 개시내용이 그 자체로 변경될 수 있는 특정 조성물 또는 방법 단계로 한정되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 단수형 "하나", "1개" 및 "상기"는 복수형 지시대상을 포함한다는 것을 인식해야 한다. Before proceeding to describe the invention in further detail, it is to be understood that this disclosure is not limited to any particular composition or method steps that may themselves vary. As used in this specification and the appended claims, the singular forms "a," "an," and "the" include plural referents unless the context clearly dictates otherwise.

달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들면, 문헌(the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press); 문헌(The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press); 및 문헌(the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press)은 본 개시내용에서 사용된 많은 용어들의 일반적인 사전을 당업자에게 제공한다. Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this disclosure belongs. See, for example, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press); The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press); And the Oxford Dictionary of Biochemistry & Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press provide a general dictionary of the many terms used in this disclosure to those skilled in the art.

본원에서 사용된 "및/또는"은 2개의 특정된 특징 또는 성분 각각이 나머지 하나와 함께 또는 나머지 하나 없이 구체적으로 개시된 것으로서 해석되어야 한다는 것을 여기에서 지적하는 것이 편리하다. 예를 들면, "A 및/또는 B"는 마치 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각이 본원에 개별적으로 기재되어 있는 것처럼 상기 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각의 구체적인 개시로서 해석되어야 한다.As used herein, "and / or" are convenient to point out here that each of the two specified features or components should be interpreted as being specifically disclosed with the remainder one or the other. (I) A, (ii) B and (iii) A and B, respectively, as described herein, (iii) A and B, respectively.

(iii) 조성물(iii)

본 명세서의 이 단락은 특허청구된 방법들 중 임의의 방법에서 사용되는 조성물을 기술한다. 본 개시내용은 본원에 기재된 방법들 중 임의의 방법에서 기능적 및/또는 구조적 특징들의 임의의 조합에 기초하여 기재된, 본 개시내용의 임의의 이러한 조성물의 사용을 고려한다.This section of the specification describes compositions used in any of the claimed methods. The present disclosure contemplates the use of any of these compositions described herein based on any combination of functional and / or structural features in any of the methods described herein.

본 개시내용은 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2 사이의 양성 및 음성 상관관계 및 기작적 연관성에 부분적으로 기초한다. 따라서, 본 개시내용은 생체내 및 시험관내에서 치료 방법 및 진단 방법을 비롯한 다양한 방법에서 유용한 조성물을 제공한다. 본 개시내용의 조성물은 활성 성분으로서 핵산, 폴리펩티드 또는 유기 소분자를 포함하는 조성물을 포함한다. 더욱이, 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 세포 조성물, 예컨대, 주어진 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하고 발현하는 세포가 투여되는 조성물이다.The present disclosure is based in part on the positive and negative correlation and the mechanical association between microRNA-31, RhoA and IL-2. Accordingly, the disclosure provides compositions useful in a variety of ways, including in vivo and in vitro, as well as therapeutic and diagnostic methods. The composition of the present disclosure comprises a composition comprising a nucleic acid, a polypeptide or an organic small molecule as an active ingredient. Moreover, in some embodiments, the composition of the present disclosure is a composition in which a cell composition, such as a cell containing and expressing a given nucleic acid or polypeptide, is administered.

용어 "본 개시내용의 조성물"은 진단 또는 치료 방법을 비롯한 본 방법에서 유용한 임의의 이러한 조성물을 지칭하기 위해 사용된다. 본 개시내용의 임의의 조성물은 본원에 기재된 방법들 중 임의의 방법에서 사용될 수 있다. 나아가, 본 개시내용의 조성물들 중 임의의 조성물은 본원에 기재된 구조적 및/또는 기능적 특징들 중 임의의 특징을 사용함으로써 기재될 수 있다.The term "composition of the present disclosure" is used to refer to any such composition useful in the present methods, including diagnostic or therapeutic methods. Any of the compositions of this disclosure may be used in any of the methods described herein. Further, any of the compositions of the present disclosure may be described by using any of the structural and / or functional features described herein.

핵산Nucleic acid

본원에서 사용된 바와 같이, "핵산"은 일반적으로 뉴클레오염기를 포함하는 DNA, RNA, 또는 이들의 유도체 또는 유사체의 분자(1개, 2개 또는 그 이상의 가닥)를 지칭한다. 뉴클레오염기는 예를 들면, DNA에서 발견되는 천연 발생 푸린 또는 피리미딘 염기(예를 들면, 아데닌 "A", 구아닌 "G", 타이민 "T" 또는 사이토신 "C") 또는 RNA에서 발견되는 천연 발생 푸린 또는 피리미딘 염기(예를 들면, A, G, 우라실 "U" 또는 C)를 포함한다. 용어 "핵산"은 용어 "핵산"의 아속(subgenus)으로서 각각 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"를 포괄한다. 본원에서 제공된 핵산은 (천연 발생 또는 합성) 마이크로RNA, siNA 및 안티센스 RNA를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 핵산은 길이에 있어서 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000개 이상 또는 이하의 뉴클레오티드, 또는 그 안에서 유도가능한 임의의 범위 내의 뉴클레오티드를 가질 수 있다. 일부 실시양태들에서, 이들 길이들은 핵산 모이어티(moiety)의 기능성 부분의 길이에만 상응하고 임의의 벡터 서열 또는 임의의 접합체 부분의 길이를 포함하지 않는다. 이러한 길이는 프로세싱된 miRNA 또는 siNA, miRNA 또는 siNA 분자, 전구체 miRNA 또는 siNA, miRNA 또는 siNA 함유 벡터, 대조군 핵산, 및 다른 분자, 프로브 및 프라이머를 커버한다. 일부 실시양태들에서, 핵산의 길이와 관계없이, 분자는 천연 발생 분자를 포함하지 않는다는 것을 이해한다. 예를 들면, 외생적으로 제공된 분자는 예를 들면, 서열, 길이, 변경, 가닥도 또는 몇몇 다른 성질 면에서 내생성 발생 분자와 상이하다. 많은 실시양태들에서, miRNA는 길이에 있어서 19 내지 24개의 뉴클레오티드를 갖는 반면, miRNA 전구체는 인간에서 일반적으로 62 내지 110개의 뉴클레오티드를 갖는다. 본원에서 제공된 핵산은 또 다른 핵산에 대한 동일성 또는 상보성 영역을 가질 수 있다. 상보성 또는 동일성 영역이 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000개 이상 또는 이하의 연속 뉴클레오티드를 갖는 것이 구체적으로 고려되지만, 상기 상보성 또는 동일성 영역이 5개 이상의 연속 잔기를 가질 수 있다는 것이 고려된다. 일부 실시양태들에서, 사용된 핵산 분자의 길이와 관계없이, 핵산 분자는 단편이고 결코 천연 발생 분자의 전체 길이 서열에 상응하지 않는다는 것을 이해한다.As used herein, "nucleic acid" refers to molecules (one, two or more strands) of DNA, RNA, or derivatives or analogs thereof, generally comprising a nucleobase. The nucleobase can be found in, for example, naturally occurring purines or pyrimidine bases found in DNA (e.g., adenine "A", guanine "G", tyramine "T" or cytosine "C" (E. G., A, G, uracil "U" or C). The term "nucleic acid" encompasses the terms "oligonucleotide" and "polynucleotide", respectively, as subgenus of the term "nucleic acid". The nucleic acids provided herein include, but are not limited to (naturally occurring or synthetic) microRNA, siNA and antisense RNA. Nucleic acids are approximately 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 or 1000 or more nucleotides, or any range of nucleotides derivable therein . In some embodiments, these lengths correspond only to the length of the functional portion of the nucleic acid moiety and do not include the length of any vector sequences or any of the junction regions. This length covers the processed miRNA or siNA, miRNA or siNA molecule, precursor miRNA or siNA, miRNA or siNA containing vector, control nucleic acid, and other molecules, probes and primers. In some embodiments, it is understood that, regardless of the length of the nucleic acid, the molecule does not comprise a naturally occurring molecule. For example, exogenously provided molecules differ from endogenous molecules in terms of, for example, sequence, length, alteration, strand or some other property. In many embodiments, miRNAs have 19 to 24 nucleotides in length, while miRNA precursors generally have 62 to 110 nucleotides in humans. The nucleic acid provided herein may have an identity or complementarity region for another nucleic acid. Wherein the complementarity or identity region is at least about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, It is specifically contemplated that the complementarity or identity region may have five, or more, consecutive nucleotides, such as 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 or 1000 or more consecutive nucleotides Or more contiguous residues. In some embodiments, it is understood that, regardless of the length of the nucleic acid molecule used, the nucleic acid molecule is a fragment and never corresponds to the full length sequence of the naturally occurring molecule.

핵산은 플라스미드 또는 바이러스를 포함하나 이들로 한정되지 않는 벡터도 포함할 수 있다. 벡터는 프로세싱 전 핵산 분자 또는 프로세싱 후 성숙 분자(예를 들면, 프로세싱 전 또는 프로세싱 후 miRNA 또는 siRNA)를 코딩할 수 있다.The nucleic acid may also include vectors including, but not limited to, plasmids or viruses. The vector may encode a pre-processing nucleic acid molecule or a post-processing mature molecule (e.g., miRNA or siRNA before or after processing).

본원에서 제공된 바와 같이, "합성 핵산"은 핵산이 천연 발생 핵산의 화학적 구조 또는 서열을 갖지 않는다는 것을 의미한다. 결과적으로, 용어 "합성 miRNA"는 세포로부터 단리되지 않고 인공적으로 제작되지만 종종 세포에서 또는 생리학적 조건 하에서 작용할 수 있는 "합성 핵산"을 지칭한다는 것을 이해한다.As provided herein, "synthetic nucleic acid" means that the nucleic acid does not have the chemical structure or sequence of the naturally occurring nucleic acid. As a result, it is understood that the term "synthetic miRNA" refers to a "synthetic nucleic acid " that is not isolated from a cell but is artificially produced, but can often function in cells or under physiological conditions.

본원에서 사용된 바와 같이, "엄격한 조건(들)" 또는 "높은 엄격도"는 상보적인 서열(들)을 함유하는 하나 이상의 핵산 가닥(들) 사이 또는 내부의 혼성화를 가능하게 하지만 무작위 서열들의 혼성화를 방해하는 조건이다. 엄격한 조건은 핵산과 표적 가닥 사이의 약간의 불일치(존재하는 경우)를 허용한다. 이러한 조건은 공지되어 있고 높은 선택성을 요구하는 적용분야의 경우 바람직하다. 비한정적 적용분야는 핵산, 예컨대, 유전자 또는 이의 핵산 절편의 단리, 또는 하나 이상의 특정 mRNA 전사체 또는 이의 핵산 절편의 검출 등을 포함한다.As used herein, "stringent condition (s)" or "high stringency" encompasses the hybridization between one or more nucleic acid strand (s) containing or containing the complementary sequence (s) . Strict conditions allow for slight discrepancies (if any) between the nucleic acid and the target strand. These conditions are well known and are desirable for applications requiring high selectivity. Non-limiting applications include the isolation of a nucleic acid, such as a gene or a nucleic acid fragment thereof, or the detection of one or more specific mRNA transcripts or a nucleic acid fragment thereof.

엄격한 조건은 저염 및/또는 고온 조건, 예컨대, 약 42℃ 내지 약 70℃의 온도에서 약 0.02 M 내지 약 0.5 M NaCl에 의해 제공된 조건을 포함할 수 있다. 원하는 엄격도의 온도 및 이온 강도는 부분적으로 구체적인 핵산(들)의 길이, 표적 서열(들)의 길이 및 뉴클레오염기 함량, 핵산(들)의 전하 조성, 및 혼성화 혼합물 중의 포름아미드, 테트라메틸암모늄 클로라이드 또는 다른 용매(들)의 존재 또는 농도에 의해 결정된다는 것을 이해한다.Strict conditions may include conditions provided by low salt and / or high temperature conditions, such as from about 0.02 M to about 0.5 M NaCl at a temperature of from about 42 [deg.] C to about 70 [deg.] C. The temperature and ionic strength of the desired stringency will depend in part on the length of the specific nucleic acid (s), the length and nucleobase content of the target sequence (s), the charge composition of the nucleic acid (s), and the formamide, tetramethylammonium Is determined by the presence or concentration of chloride or other solvent (s).

혼성화에 대한 이들 범위, 조성 및 조건은 비한정적 예로서만 언급되고 구체적인 혼성화 반응에 대한 원하는 엄격도는 종종 하나 이상의 양성 또는 음성 대조군과의 비교에 의해 실험적으로 결정된다는 것을 이해한다. 계획된 적용분야에 따라, 다양한 혼성화 조건을 이용하여 표적 서열에 대한 핵산의 다양한 선택성 정도를 달성할 수 있다. 비한정적 예에서, 엄격한 조건 하에서 핵산에 혼성화하지 않는 관련 표적 핵산의 확인 또는 단리는 저온 및/또는 높은 이온 강도에서의 혼성화에 의해 달성될 수 있다. 이러한 조건은 "낮은 엄격도" 또는 "낮은 엄격도 조건"으로 명명되고, 낮은 엄격도의 비한정적 예는 약 20℃ 내지 약 50℃의 온도 범위에서 약 0.15 M 내지 약 0.9 M NaCl에서 수행되는 혼성화를 포함한다. 낮은 또는 높은 엄격도 조건은 특정 적용분야에 적합하도록 더 변경될 수 있다.These ranges, compositions and conditions for hybridization are mentioned only as non-limiting examples and it is understood that the desired stringency for a specific hybridization reaction is often determined experimentally by comparison with one or more positive or negative controls. Depending on the intended application, various hybridization conditions can be used to achieve various degrees of selectivity of the nucleic acid to the target sequence. In a non-limiting example, identification or isolation of an associated target nucleic acid that does not hybridize to the nucleic acid under stringent conditions can be accomplished by hybridization at low temperature and / or high ionic strength. This condition is termed "low stringency" or "low stringency condition ", and a non-limiting example of low stringency is hybridization performed at about 0.15 M to about 0.9 M NaCl in a temperature range of about 20 & . Low or high stringency conditions can be further modified to suit a particular application.

siNAsiRNA

siNA는 서열 특이적 RNAi를 매개할 수 있는 핵산 분자의 한 클래스, 예를 들면, 짧은 간섭 RNA(siRNA), 이중 가닥 RNA(dsRNA), 마이크로-RNA(miRNA), 짧은 헤어핀 RNA(shRNA), 짧은 간섭 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 핵산, 짧은 간섭 변경된 올리고뉴클레오티드, 화학적으로 변경된 siRNA, 전사 후 유전자 침묵 RNA(ptgsRNA) 등을 지칭한다. 또한, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 RNAi는 서열 특이적 RNA 간섭, 예컨대, 전사 후 유전자 침묵 또는 후성유전학(epigenetics)을 기술하기 위해 사용되는 다른 용어들과 동등한 것으로 여겨진다. 예를 들면, siNA 분자는 전사 후 수준 및 전사 전 수준 중 하나 또는 둘다에서 유전자를 후성유전학적으로 침묵시키기 위해 사용될 수 있다. 비한정적 예에서, 상기 기술의 siNA 분자에 의한 유전자 발현의 후성유전학적 조절은 유전자 발현을 변경시키기 위한 염색질 구조의 siNA 매개 변경으로부터 비롯될 수 있다. 따라서, siNA는 폴리펩티드 또는 단백질의 수준을 조절하기 위해 치료적으로 사용될 수 있다. 이 조절은 예컨대, 그 자체가 관심 있는 단백질의 억제제인 단백질의 발현을 억제함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 달성될 수 있다.siNA is a class of nucleic acid molecules capable of mediating sequence specific RNAi, such as short interfering RNA (siRNA), double stranded RNA (dsRNA), microRNA (miRNA), short hairpin RNA Interfering oligonucleotides, short interfering nucleic acids, short interfering modified oligonucleotides, chemically modified siRNA, post-transcriptional gene silencing RNA (ptgsRNA), and the like. Also, as used herein, the term RNAi is considered equivalent to other terms used to describe sequence-specific RNA interference, such as post-transcriptional gene silencing or epigenetics. For example, a siNA molecule can be used to epigenetically silence a gene in one or both of post-transcriptional and transcriptional levels. In a non-limiting example, epigenetic regulation of gene expression by siNA molecules of the above art may result from siNA mediated alteration of the chromatin structure to alter gene expression. Thus, siNA can be used therapeutically to control the level of a polypeptide or protein. This modulation can be achieved, for example, directly or indirectly by inhibiting the expression of the protein itself, which is an inhibitor of the protein of interest.

siNA는 자체 상보적인 센스 영역 및 안티센스 영역을 포함하는 이중 가닥 폴리뉴클레오티드 분자일 수 있고, 이때 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 이의 일부에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다. siNA는 2개의 별도의 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있고, 이때 한 가닥은 센스 가닥이고, 나머지 가닥은 안티센스 가닥이고, 상기 안티센스 가닥 및 센스 가닥은 자체 상보적이다. 몇몇 실시양태들에서, 각각의 가닥은 다른 가닥의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다: 예컨대, 안티센스 가닥과 센스 가닥이 이중체 또는 이중 가닥 구조를 형성하는 경우, 예를 들면, 이중 가닥 영역이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개 이상의 염기쌍인 경우.The siNA may be a double-stranded polynucleotide molecule comprising a self-complementary sense region and an antisense region, wherein the antisense region comprises a nucleotide sequence complementary to a nucleotide sequence of the target nucleic acid molecule or a portion thereof, A nucleotide sequence corresponding to a nucleic acid sequence or a portion thereof. The siNA can be assembled from two separate oligonucleotides, where one strand is the sense strand and the remaining strand is the antisense strand, and the antisense strand and the sense strand are self complementary. In some embodiments, each strand comprises a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of another strand: for example, when the antisense strand and sense strand form a duplex or double stranded structure, for example, The present invention relates to the use of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, wherein said compound is selected from the group consisting of 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24 For more than 25 base pairs.

안티센스 가닥은 표적 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고, 센스 가닥은 표적 핵산 서열 또는 이의 일부에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태들에서, siNA는 단일 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있고, 이때 siNA의 자체 상보적인 센스 영역과 안티센스 영역은 핵산 기제의 또는 비핵산 기제의 연결제(들)에 의해 연결된다. siNA는 자체 상보적인 센스 영역 및 안티센스 영역을 갖는, 헤어핀 이차 구조를 갖는 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 이때 상기 안티센스 영역은 별도의 표적 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 이의 일부에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다. siNA는 2개 이상의 루프 구조, 및 자체 상보적인 센스 영역 및 안티센스 영역을 포함하는 줄기를 갖는 원형 단일 가닥 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 이때 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 이의 일부에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖고, 상기 원형 폴리뉴클레오티드는 생체내 또는 시험관내에서 프로세싱되어 RNAi를 매개할 수 있는 활성 siNA 분자를 발생시킬 수 있다.The antisense strand may comprise a nucleotide sequence complementary to a nucleotide sequence of a target nucleic acid molecule or a portion thereof, and the sense strand may comprise a nucleotide sequence corresponding to a target nucleic acid sequence or a portion thereof. In some embodiments, the siNA can be assembled from a single oligonucleotide, wherein the self-complementary sense and antisense regions of the siNA are joined by a linker (s) of a nucleic acid base or a non-nucleic acid base. The siNA may be a polynucleotide having a hairpin secondary structure with a self complementary sense region and an antisense region, wherein the antisense region comprises a nucleotide sequence complementary to a nucleotide sequence of a separate target nucleic acid molecule or a portion thereof, The sense region has a nucleotide sequence corresponding to the target nucleic acid sequence or a portion thereof. The siNA can be a circular single-stranded polynucleotide having two or more loop structures, and a stem comprising a self-complementary sense and antisense region, wherein the antisense region comprises a nucleotide sequence complementary to a nucleotide sequence of a target nucleic acid molecule or a portion thereof Wherein the sense region has a nucleotide sequence corresponding to a target nucleic acid sequence or a portion thereof and the circular polynucleotide can be processed in vivo or in vitro to generate an active siNA molecule capable of mediating RNAi .

몇몇 실시양태들에서, siNA는 2개의 RNA 가닥을 포함한다. 일부 실시양태들에서, siNA는 2개의 DNA 가닥을 포함한다. siNA는 종종 1개의 RNA 가닥 및 1개의 DNA 가닥을 포함하는 혼성체일 수 있다. 1개 또는 2개의 가닥은 혼합된 RNA 및 DNA도 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태들에서, siNA의 가닥(예를 들면, siRNA의 가닥)은 길이에 있어서 약 5 내지 약 60개의 뉴클레오티드(예를 들면, 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 41, 42, 43, 44 45 46 47 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 또는 59개의 뉴클레오티드)를 가질 수 있다. siNA 가닥은 종종 60개 초과의 뉴클레오티드를 가질 수 있다.In some embodiments, the siNA comprises two RNA strands. In some embodiments, the siNA comprises two DNA strands. The siNA can often be a hybrid comprising one RNA strand and one DNA strand. One or two strands may also contain mixed RNA and DNA. In some embodiments, a strand of the siNA (e.g., a strand of siRNA) comprises about 5 to about 60 nucleotides in length (e.g., about 6, 7, 8, 9, 10, 11, , 14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38 , 39, 40 41, 42, 43, 44 45 46 47 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 or 59 nucleotides). The siNA strand can often have more than 60 nucleotides.

siNA는 표적 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 단일 가닥 폴리뉴클레오티드도 포함할 수 있고(예를 들면, 이때 이러한 siNA 분자는 표적 핵산 서열 또는 이의 일부에 상응하는 뉴클레오티드 서열이 상기 siNA 분자 내에 존재할 것을 요구하지 않음), 이때 상기 단일 가닥 폴리뉴클레오티드는 말단 포스페이트 기, 예컨대, 5'-포스페이트 또는 5',3'-다이포스페이트를 추가로 포함할 수 있다.The siNA may also comprise a single-stranded polynucleotide having a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of the target nucleic acid molecule or a portion thereof (e.g., wherein such siNA molecule has the nucleotide sequence corresponding to the target nucleic acid sequence, or a portion thereof, siNA molecule, wherein the single-stranded polynucleotide may further comprise a terminal phosphate group, such as 5'-phosphate or 5'3'-diphosphate.

일부 실시양태들에서, siNA 분자는 별도의 센스 및 안티센스 서열 또는 영역을 포함할 수 있고, 이때 상기 센스 영역과 안티센스 영역은 당분야에서 공지되어 있는 바와 같이 뉴클레오티드 또는 비뉴클레오티드 연결제 분자에 의해 공유연결되거나, 대안적으로 이온 상호작용, 수소결합, 반 데르 발스 상호작용, 소수성 상호작용 및/또는 적층(stacking) 상호작용에 의해 비공유연결된다. 일부 실시양태들에서, siNA 분자는 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 몇몇 실시양태들에서, siNA 분자는 표적 유전자의 발현의 억제를 야기하는 방식으로 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열과 상호작용한다.In some embodiments, the siNA molecule may comprise a separate sense and antisense sequence or region, wherein the sense and antisense regions are joined by a nucleotide or non-nucleotide linker molecule, as is known in the art, Or alternatively, noncovalently connected by ionic interaction, hydrogen bonding, van der Waals interactions, hydrophobic interactions and / or stacking interactions. In some embodiments, the siNA molecule comprises a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of the target gene. In some embodiments, the siNA molecule interacts with the nucleotide sequence of the target gene in a manner that results in the inhibition of expression of the target gene.

몇몇 실시양태들에서, siNA의 하나 이상의 뉴클레오티드는 비변경된 기준 siNA(예를 들면, 천연 siNA)에 비해 상대적으로 또 다른 뉴클레오티드로 치환되고/되거나, 변경된 염기이고/이거나, 결실되고/되거나 삽입된다(예를 들면, siNA의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 뉴클레오티드가 치환되고/되거나, 변경된 염기이고/이거나, 결실되고/되거나 삽입된다). 생체내 또는 시험관내에서 이러한 변경된 siNA의 기능은 종종 기준 siNA의 기능과 동일하고, 종종 변경된다(예를 들면, 더 높거나 감소된다). 변경된 기능은 전형적으로 검출될 수 있고 종종 기준 siNA에 의해 유발된 기능의 100배 이내에서 더 높거나(예를 들면, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95배 더 높거나) 100배 이내에서 감소된다(예를 들면, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95배 감소된다). 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 siNA를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다시 말해, siNA 분자는 세포에 외생적으로 첨가되거나 환자에게 투여된다. 이러한 외생적으로 첨가된 siNA 분자는 그의 도입 후 발현된다. 이론에 의해 구속받지 않지만, 일부 실시양태들에서, 외생적으로 첨가된 siNA 분자는 전사체 또는 단백질의 내생성 발현을 상향조절하는 것을 돕는다. 다른 실시양태에서, 특정 분자의 발현은 siNA 분자를 외생적으로 첨가하여 세포에서 특정 분자를 과다발현함으로써 증가된다.In some embodiments, one or more nucleotides of the siNA are replaced with another nucleotide relative to the unmodified reference siNA (e. G., The native siNA) and / or are altered bases and / or are deleted and / or inserted For example, nucleotides 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 of siNA are substituted / Or is a modified base and / or is deleted and / or inserted). The function of these altered siNAs in vivo or in vitro is often the same as the function of the reference siNA and is often altered (e.g., higher or decreased). The altered function is typically detectable and is often higher (e.g., within 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 or 95 times higher or 100 times less (for example, 2, 4, 6, 8, 10, 15 , 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 or 95 times. In some embodiments, the methods of the present disclosure comprise administering a composition comprising a siNA. In other words, the siNA molecule is exogenously added to the cell or administered to the patient. These exogenously added siNA molecules are expressed after their introduction. Although not bound by theory, in some embodiments exogenously added siNA molecules help upregulate transgene expression or the endogenous expression of proteins. In another embodiment, the expression of a particular molecule is increased by exogenously adding siNA molecules and overexpressing certain molecules in the cell.

마이크로RNAMicroRNA

마이크로RNA(본원에서 상호교환적으로 "miRNA"로도 지칭됨)는 비코딩 조절 RNA의 한 클래스이다. 천연 발생 miRNA는 일반적으로 전구체 마이크로RNA로서 길이에 있어서 대략 15 내지 30개 뉴클레오티드 내지 최대 80 내지 120개 뉴클레오티드를 갖는다. 용어 "miRNA"는 일반적으로 단일 가닥 분자를 지칭하지만, 특정 실시양태에서 동일한 단일 가닥 분자의 또 다른 영역 또는 또 다른 핵산에 부분적으로 상보적인(가닥의 길이에 걸쳐 10% 내지 50% 상보적인), 실질적으로 상보적인(가닥의 길이에 걸쳐 50% 초과 내지 100% 미만 상보적인) 또는 완전히 상보적인 영역 또는 추가 가닥도 포괄할 수 있다. 따라서, miRNA는 단일 가닥, 이중 가닥 또는 부분적으로 단일 가닥 분자를 포괄할 수 있다. 예를 들면, 전구체 miRNA는 최대 100%까지 상보적인 자체 상보적인 영역을 가질 수 있다.MicroRNAs (also referred to herein interchangeably as "miRNAs ") are a class of non-coding regulatory RNAs. Naturally occurring miRNAs are generally precursor microRNAs having about 15 to 30 nucleotides to 80 to 120 nucleotides in length. The term "miRNA" refers generally to a single stranded molecule, but in certain embodiments is partially complementary (10% to 50% complementary over the length of the strand) to another region of the same single stranded molecule or another nucleic acid, Substantially complementary (over 50% to less than 100% complementary over the length of the strands) or fully complementary regions or additional strands may also be encompassed. Thus, miRNAs can encompass single-stranded, double-stranded, or partially single-stranded molecules. For example, a precursor miRNA can have its own complementary region complementing up to 100%.

많은 마이크로RNA들이 다수의 종들에 걸쳐 고도로 보존되어 있지만, 몇몇 마이크로RNA들은 종 특이적이다. 이들은 주로 그들의 조절 표적 mRNA의 3' 비번역 영역(UTR)과 결합함으로써 전사 후에 유전자 발현을 조절한다. 마이크로RNA는 세포 증식, 분화 및 아폽토시스뿐만 아니라 다른 세포, 분자 및 발생 경로와도 관련되어 있다. 몇몇 miRNA는 게놈 서열 또는 유전자로부터 유래된다는 것을 이해한다. 이와 관련하여, 용어 "유전자"는 주어진 miRNA에 대한 전구체 miRNA를 코딩하는 게놈 서열을 간결하게 지칭하기 위해 사용된다. 그러나, 몇몇 실시양태들은 그의 발현에 관여하는 miRNA의 게놈 서열, 예컨대, 프로모터 또는 다른 조절 서열을 수반할 수 있다. 용어 "재조합"이 사용될 수 있고, 이것은 일반적으로 시험관내에서 조작된 분자 또는 이러한 분자의 복제된 또는 발현된 생성물인 분자를 지칭한다. Although many microRNAs are highly conserved across many species, some microRNAs are species specific. They primarily regulate gene expression after transcription by binding with the 3 'untranslated region (UTR) of their regulatory target mRNA. MicroRNAs are also involved in cell proliferation, differentiation, and apoptosis as well as other cells, molecules, and developmental pathways. It is understood that some miRNAs are derived from genomic sequences or genes. In this regard, the term "gene" is used to concisely refer to a genomic sequence that encodes a precursor miRNA for a given miRNA. However, some embodiments may involve genomic sequences of miRNAs involved in its expression, such as promoters or other regulatory sequences. The term "recombinant" can be used, which generally refers to molecules manipulated in vitro or molecules that are replicated or expressed products of such molecules.

천연 miRNA는 복합체 RNA-유도된 침묵 복합체(RISC) 리보단백질 복합체의 인식 성분으로서 작용하는 조절 RNA이다. miRNA를 코딩하는 유전자는 프로세싱된 성숙 miRNA 분자보다 더 길다. 게놈 마이크로RNA는 개별 유전자, 다수의 마이크로RNA들의 유전 클러스터(cluster), 또는 단백질 코딩 유전자의 인트론 내에 코딩된 형태를 비롯한 많은 상이한 형태로 존재한다. miRNA는 일차 전사체로서 또는 평균 약 1.2 Kb의 RNA 전사체로 구성된 프리(pri)-miRNA로서 먼저 전사되거나 긴 단백질 코딩 전사체의 인트론 내에 존재한다. The natural miRNA is a regulatory RNA that acts as a recognition component of the complex RNA-induced silencing complex (RISC) riboprotein complex. The gene encoding the miRNA is longer than the processed mature miRNA molecule. Genomic microRNAs exist in many different forms, including individual genes, clusters of multiple microRNAs, or coded forms in introns of protein coding genes. The miRNA is either a primary transcript or a pri-miRNA consisting of an RNA transcript of an average of about 1.2 Kb and is first transcribed or present in the intron of a long protein coding transcript.

프리-miR은 세포 핵 내에서 드로사(Drosha) 효소에 의해 전구 또는 전구체 miRNA로서 공지된 짧은(대략 70 내지 120개 뉴클레오티드) 줄기-루프 구조로 프로세싱된다. 그 후, 이들 전구-miRNA들은 핵산내부분해효소(endonuclease) 아르고나우트(Argonaut), 다이서(Dicer) 등과의 상호작용에 의해 세포질 내에서 성숙 기능성 miRNA로 프로세싱되어 RISC 복합체를 생성한다. The pre-miR is processed into a short (approximately 70 to 120 nucleotides) stem-loop structure known as a precursor or precursor miRNA by Drosha enzyme in the cell nucleus. These pro-miRNAs are then processed into mature functional miRNAs in the cytoplasm by interaction with nucleic acid endonuclease Argonaut, Dicer et al. To generate RISC complexes.

마이크로RNA는 일반적으로 조절 표적 mRNA의 3' 비번역 영역(UTR) 내에서 부분적으로 상보적인 서열과 염기쌍을 형성함으로써 번역을 억제하거나 mRNA 분해를 촉진한다. 개별 메신저 RNA(mRNA)는 여러 miRNA들에 의해 표적화될 수 있고, 단일 miRNA는 다수의 표적 mRNA들을 조절할 수 있다. 마이크로RNA는 관련된 기능을 갖는 단백질들을 코딩하는 유전자 세트를 조화롭게 조절하여 유전자 조절의 엄청난 복잡성 및 잠재력을 제공할 수 있다.MicroRNAs generally inhibit translation or facilitate mRNA degradation by forming a partially complementary sequence and base pair within the 3 'untranslated region (UTR) of the regulatory target mRNA. Individual messenger RNAs (mRNAs) can be targeted by multiple miRNAs, and single miRNAs can regulate multiple target mRNAs. MicroRNAs can provide a tremendous complexity and potential for gene regulation by coordinating a set of genes encoding proteins with related functions.

마이크로RNA는 표지될 수 있거나, 어레이 분석에서 사용될 수 있거나, 또는 진단, 치료 또는 예후 적용분야에서 사용될 수 있다. RNA는 세포에 의해 내생적으로 생성되었을 수 있거나, 화학적으로 또는 재조합 기술에 의해 합성되었을 수 있거나 생성되었을 수 있다. 이들은 단리될 수 있고/있거나 정제될 수 있다. 인간 miRNA 분자는 종종 본원에서 접두사 "hsa-miR-"로 언급된다. 달리 표시되어 있지 않은 한, 본원에서 언급된 miRNA는 인간 서열이고, 비인간 miRNA 서열은 (예를 들면, 비인간 대상체에서의 적용을 위해) 이들로부터 결정되고 제조될 수 있다. MicroRNAs can be labeled, used in array assays, or used in diagnostic, therapeutic or prognostic applications. RNA may have been produced endogenously by the cell, or may have been synthesized or produced by chemical or recombinant techniques. They can be isolated and / or purified. Human miRNA molecules are often referred to herein as the prefix "hsa-miR- ". Unless otherwise indicated, the miRNAs referred to herein are human sequences and non-human miRNA sequences may be determined and prepared therefrom (e.g., for application in non-human subjects).

몇몇 실시양태들에서, 공지된 인간 miRNA에 상응하지 않는 miRNA가 사용될 수 있다.In some embodiments, miRNAs that do not correspond to known human miRNAs can be used.

몇몇 실시양태들에서, miRNA의 하나 이상의 뉴클레오티드는 비변경된 기준 miRNA(예를 들면, 천연 miRNA)에 비해 상대적으로 또 다른 뉴클레오티드로 치환되고/되거나, 변경된 염기이고/이거나, 결실되고/되거나 삽입된다(예를 들면, miRNA의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 뉴클레오티드가 치환되고/되거나, 변경된 염기이고/이거나, 결실되고/되거나 삽입된다). 생체내 또는 시험관내에서 이러한 변경된 miRNA의 기능은 종종 기준 miRNA의 기능과 동일하고, 종종 변경된다(예를 들면, 더 높거나 감소된다). 변경된 기능은 전형적으로 검출될 수 있고 종종 기준 miRNA에 의해 유발된 기능의 100배 이내에서 더 높거나(예를 들면, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95배 더 높거나) 100배 이내에서 감소된다(예를 들면, 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95배 감소된다).In some embodiments, one or more nucleotides of the miRNA are substituted and / or modified bases relative to the unmodified reference miRNA (e. G., A native miRNA) relative to another nucleotide and / or are deleted and / or inserted For example, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 nucleotides of miRNA are substituted / Or is a modified base and / or is deleted and / or inserted). The function of these altered miRNAs in vivo or in vitro is often the same as that of the reference miRNA and is often altered (e.g., higher or decreased). The altered function is typically detectable and is often higher (e.g., 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 or 95 times higher or 100 times less (for example, 2, 4, 6, 8, 10, 15 , 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 or 95 times.

몇몇 실시양태들에서, 본 개시내용은 세포 또는 샘플에서 마이크로RNA-31 수준의 발현을 분석하는 것에 기초한다. 발현을 분석할 때, 본 개시내용은 내생성 발현 수준이 측정되는 것을 고려하지만, 치료 중재시술 후 발현을 분석하는 것(이 경우, 내생성 발현과 일부 실시양태들에서 외생적으로 도입된 핵산의 발현의 조합이 평가될 수 있음)도 고려한다.In some embodiments, the disclosure is based on analyzing the expression of microRNA-31 levels in a cell or sample. When analyzing expression, the present disclosure contemplates that the level of endogenous expression is measured, but it is also possible to analyze expression after treatment intervention (in this case, endogenous expression and in some embodiments, exogenously introduced nucleic acid Expression combinations can be evaluated).

핵산 변경Nucleic acid modification

후술된 변경들 중 임의의 변경이 적절한 경우 핵산, 예컨대, miRNA 및 siRNA에 적용될 수 있다. 특정 핵산, 예컨대, miRNA-31을 비롯한 핵산은 핵산 변경도 포함할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 변경의 예로는 RNA 골격, 당 또는 염기에 대한 변경 및 이들의 다양한 조합이 있다. miRNA 또는 다른 핵산에서 임의의 적합한 수의 골격 연결, 당 및/또는 염기가 변경될 수 있다(예를 들면, 독립적으로 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 최대 100%의 골격 연결, 당 및/또는 염기가 변경되거나; 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 골격 연결, 당 및/또는 염기가 변경된다). 비변경된 miRNA 뉴클레오시드는 베타-D-리보-푸라노스의 1' 탄소에 연결된 염기 아데닌, 사이토신, 구아닌, 타이민 및 우라실 중 어느 하나이다.Any of the modifications described below may be applied to nucleic acids such as miRNA and siRNA where appropriate. It should be understood that certain nucleic acids, such as nucleic acids, including miRNA-31, may also contain nucleic acid modifications. Examples of modifications include modifications to the RNA backbone, sugars or bases, and various combinations thereof. Any suitable number of backbone linkages, sugars and / or bases in miRNA or other nucleic acids can be altered (e.g., independently about 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% A skeletal linkage, sugar, and / or base linkage of at least about 50%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 skeletal links, / / Base is changed). Unmodified miRNA nucleosides are any of the base adenine, cytosine, guanine, tyamine, and uracil linked to the 1 ' carbon of beta-D-ribo-furanos.

변경된 염기는 1' 위치에서 아데닌, 구아닌, 사이토신 및 우라실 이외의 뉴클레오티드 염기이다. 변경된 염기의 비한정적 예로는 이노신, 푸린, 피리딘-4-온, 피리딘-2-온, 페닐, 슈도우라실, 2,4,6-트라이메톡시 벤젠, 3-메틸 우라실, 다이하이드로우리딘, 나프틸, 아미노페닐, 5-알킬사이티딘(예를 들면, 5-메틸사이티딘), 5-알킬우리딘(예를 들면, 리보타이미딘), 5-할로우리딘(예를 들면, 5-브로모우리딘) 또는 6-아자피리미딘 또는 6-알킬피리미딘(예를 들면, 6-메틸우리딘), 프로핀 등이 있다. 변경된 염기의 다른 비한정적 예로는 니트로피롤릴(예를 들면, 3-니트로피롤릴), 니트로인돌릴(예를 들면, 4-니트로인돌릴, 5-니트로인돌릴, 6-니트로인돌릴), 하이포잔티닐, 이소이노시닐, 2-아자-이노시닐, 7-데아자-이노시닐, 니트로이미다졸릴, 니트로피라졸릴, 니트로벤즈이미다졸릴, 니트로인다졸릴, 아미노인돌릴, 피롤로피리미디닐, 다이플루오로톨릴, 4-플루오로-6-메틸벤즈이미다졸, 4-메틸벤즈이미다졸, 3-메틸 이소카보스티릴릴, 5-메틸 이소카보스티릴릴, 3-메틸-7-프로피닐 이소카보스티릴릴, 7-아자인돌릴, 6-메틸-7-아자인돌릴, 이미디조피리디닐, 9-메틸-이미디조피리디닐, 피롤로피리지닐, 이소카보스티릴릴, 7-프로피닐 이소카보스티릴릴, 프로피닐-7-아자인돌릴, 2,4,5-트라이메틸페닐, 4-메틸인돌릴, 4,6-다이메틸인돌릴, 페닐, 나프탈레닐, 안쓰라세닐, 페난쓰라세닐, 피레닐, 스틸베닐, 테트라세닐, 펜타세닐 등이 있다.The modified bases are nucleotide bases other than adenine, guanine, cytosine and uracil at the 1 ' position. Non-limiting examples of modified bases include, but are not limited to, inosine, purine, pyridin-4-one, pyridin-2-one, phenyl, pseudouracil, 2,4,6- trimethoxybenzene, 3- methyluracil, dihydrouridine, (For example, 5-hydroxyphenyl), 5-alkylthiidine (for example, 5-methylcytidine), 5-alkyluridine (for example, ribothiamidine) Myristyl) or 6-azapyrimidines or 6-alkylpyrimidines (e.g., 6-methyluridine), propyne and the like. Other non-limiting examples of modified bases include nitropyrrolyl (e.g., 3-nitropyrrolyl), nitroindolyl (e.g., 4-nitroindolyl, 5-nitroindolyl, Thiazolyl, thiazolyl, thiazolyl, thiazolyl, thiazolyl, thiazolyl, thiazolyl, thiomorpholinyl, thiomorpholinyl, 4-methylbenzimidazole, 3-methylisocarbostyril, 5-methylisocarbostyril, 3-methyl-7-methylbenzimidazole, 7-azaindolyl, imidizopyridinyl, 9-methyl-imidizopyridinyl, pyrrolopyridinyl, isocarbostyrilyl, 7-azaindolyl, 6- Propynyl isocarbostyryl, propynyl-7-azaindolyl, 2,4,5-trimethylphenyl, 4-methylindolyl, 4,6-dimethylindolyl, phenyl, naphthalenyl, Lanecyl, phenanthracenyl, pyrenyl, stilbenyl, tetracenyl, pentacenyl, and the like.

몇몇 실시양태들에서, 예를 들면, 핵산은 포스페이트 골격 변경을 갖는 변경된 핵산 분자를 포함할 수 있다. 골격 변경의 비한정적 예로는 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포트라이에스테르, 모르폴리노, 아미데이트 카바메이트, 카복시메틸, 아세트아미데이트, 폴리아미드, 설포네이트, 설폰아미드, 설파메이트, 포름아세탈, 티오포름아세탈 및/또는 알킬실릴 변경이 있다. 일부 경우, 뉴클레오사이드에서 천연적으로 발생하는 리보스 당 모이어티는 헥소스 당, 다환 헤테로알킬 고리 또는 사이클로헥세닐 기로 치환된다. 일부 경우, 헥소스 당은 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스 또는 이의 유도체이다. 헥소스는 D-헥소스, 글루코스 또는 만노스일 수 있다. 일부 경우, 다환 헤테로알킬 기는 고리 내에 1개의 산소 원자를 함유하는 이환 고리일 수 있다. 일부 경우, 다환 헤테로알킬 기는 비사이클로[2.2.1]헵탄, 비사이클로[3.2.1]옥탄 또는 비사이클로[3.3.1]노난이다.In some embodiments, for example, the nucleic acid may comprise a modified nucleic acid molecule having a phosphate backbone modification. Non-limiting examples of framework modifications include, but are not limited to, phosphorothioate, phosphorodithioate, methylphosphonate, phosphotrieryester, morpholino, amidate carbamate, carboxymethyl, acetamidate, polyamide, sulfonate, sulfone Amides, sulfamates, formacetals, thioformacetals and / or alkylsilyl modifications. In some cases, the naturally occurring per ribose moiety at the nucleoside is substituted with a hexose sugar, a polycyclic heteroalkyl ring or a cyclohexenyl group. In some cases, the hexose sugars are alos, altrose, glucose, mannose, gulose, idose, galactose, talos or derivatives thereof. The hexose may be D-hexose, glucose or mannose. In some cases, the polycyclic heteroalkyl group may be a heterocyclic ring containing one oxygen atom in the ring. In some cases, the polycyclic heteroalkyl group is bicyclo [2.2.1] heptane, bicyclo [3.2.1] octane or bicyclo [3.3.1] nonane.

니트로피롤릴 및 니트로인돌릴 뉴클레오염기는 보편적인 염기로서 공지된 한 화합물 클래스의 구성원이다. 보편적인 염기는 올리고뉴클레오티드 이중체의 용융 거동 또는 활성에 실질적으로 영향을 미치지 않으면서 4종의 천연 발생 염기들 중 임의의 염기를 치환시킬 수 있는 화합물이다. 천연 발생 뉴클레오염기와 관련된 안정화 수소결합 상호작용과 대조적으로, 3-니트로피롤릴 뉴클레오염기를 함유하는 올리고뉴클레오티드 이중체는 적층 상호작용에 의해서만 안정화될 수 있다. 니트로피롤릴 뉴클레오염기와의 상당한 수소결합 상호작용의 부재는 특정 상보적인 염기에 대한 특이성을 불필요하게 한다. 또한, 4-니트로인돌릴, 5-니트로인돌릴 및 6-니트로인돌릴은 4종의 천연 염기에 대한 특이성을 거의 나타내지 않는다. 1-(2'-0-메틸베타-D-리보푸라노실)-5-니트로인돌의 제조 절차는 문헌(Gaubert, G.; Wengel, J. Tetrahedron Letters 2004, 45, 5629)에 기재되어 있다. 다른 보편적인 염기는 하이포잔티닐, 이소이노시닐, 2-아자-이노시닐, 7-데아자-이노시닐, 니트로이미다졸릴, 니트로피라졸릴, 니트로벤즈이미다졸릴, 니트로인다졸릴, 아미노인돌릴, 피롤로피리미디닐 및 이들의 구조 유도체를 포함한다.Nitropyrrolyl and nitroindolyl nucleobases are members of one class of compounds known as universal bases. A universal base is a compound capable of substituting any of four natural occurring bases without substantially affecting the melting behavior or activity of the oligonucleotide duplex. In contrast to the stabilizing hydrogen bonding interactions associated with naturally occurring nucleobases, oligonucleotide duplexes containing a 3-nitropyrrolyl nucleobase can be stabilized only by laminar interactions. The absence of significant hydrogen bonding interactions with the nitropyrrolyl nucleobase makes the specificity for certain complementary bases unnecessary. In addition, 4-nitroindolyl, 5-nitroindolyl and 6-nitroindolyl exhibit little specificity for the four natural bases. The preparation procedure of 1- (2'-O-methylbeta-D-ribofuranosyl) -5-nitroindole is described in Gaubert, G .; Wengel, J. Tetrahedron Letters 2004, 45, 5629. Other common bases include, but are not limited to, hypoxanthinyl, isocyanin, 2-aza-inosinyl, 7-deaza-inosinyl, nitroimidazolyl, nitropyrazolyl, nitrobenzimidazolyl, Aminoindolyl, pyrrolopyrimidinyl, and structural derivatives thereof.

다이플루오로톨릴은 보편적인 염기로서 작용하는 비천연 뉴클레오염기이다. 다이플루오로톨릴은 천연 뉴클레오염기 타이민의 등배전자체이다. 그러나, 타이민과 달리, 다이플루오로톨릴은 천연 염기들 중 임의의 천연 염기에 대한 감지될 수 있는 선택성을 보이지 않는다. 보편적인 염기로서 작용하는 다른 방향족 화합물은 4-플루오로-6-메틸벤즈이미다졸 및 4-메틸벤즈이미다졸이다. 또한, 상대적으로 소수성을 나타내는 이소카보스티릴릴 유도체 3-메틸 이소카보스티릴릴, 5-메틸 이소카보스티릴릴 및 3-메틸-7-프로피닐 이소카보스티릴릴은 천연 염기만을 함유하는 올리고뉴클레오티드 서열에 비해 올리고뉴클레오티드 이중체의 경미한 불안정화만을 야기하는 보편적인 염기이다. 다른 비천연 뉴클레오염기는 7-아자인돌릴, 6-메틸-7-아자인돌릴, 이미디조피리디닐, 9-메틸-이미디조피리디닐, 피롤로피리지닐, 이소카보스티릴릴, 7-프로피닐 이소카보스티릴릴, 프로피닐-7-아자인돌릴, 2,4,5-트라이메틸페닐, 4-메틸인돌릴, 4,6-다이메틸인돌릴, 페닐, 나프탈레닐, 안쓰라세닐, 페난쓰라세닐, 피레닐, 스틸베닐, 테트라세닐, 펜타세닐 및 이들의 구조 유도체를 포함한다. 다이플루오로톨릴, 4-플루오로-6-메틸벤즈이미다졸, 4-메틸벤즈이미다졸 및 상기 언급된 다른 비천연 염기의 합성 절차를 비롯한 보다 상세한 논의에 대해서는 문헌(Schweitzer et al., J. Org Chem., 59:7238-7242 (1994))을 참조한다.The difluorotolyl is a non-natural nucleobase which functions as a universal base. The difluorotolyl is the isostatic self of the natural nucleobase thymine. However, unlike tymines, difluorotolyl does not exhibit detectable selectivity for any of the natural bases. Other aromatic compounds that serve as universal bases are 4-fluoro-6-methylbenzimidazole and 4-methylbenzimidazole. In addition, the isobarbostyrilyl derivatives 3-methylisocarbostyril, 5-methylisocarbostyrilyl and 3-methyl-7-propinyl isocarbostyril which exhibit relatively hydrophobicity have an oligonucleotide sequence containing only natural bases Lt; RTI ID = 0.0 > oligonucleotide < / RTI > duplexes. Other non-natural nucleobases include 7-azaindolyl, 6-methyl-7-azaindolyl, imidodipyridinyl, 9-methyl-imidizopyridinyl, pyrrolopyridinyl, isocarbostyrilyl, 4-methylindolyl, 4,6-dimethylindolyl, phenyl, naphthalenyl, anthracenyl, phenanthracenyl, phenanthridinyl, Tricenyl, pyrenyl, stilbenyl, tetracenyl, pentacenyl, and structural derivatives thereof. For a more detailed discussion including the synthesis procedure of difluorotolyl, 4-fluoro-6-methylbenzimidazole, 4-methylbenzimidazole and other unnatural bases mentioned above, see Schweitzer et al. Org Chem., 59: 7238-7242 (1994)).

핵산을 포함하는 조성물은 변경된, 즉 비천연 발생 뉴클레오시드간 연결을 함유하는 핵산도 포함한다. 이러한 비천연 뉴클레오시드간 연결은 바람직한 성질, 예를 들면, 향상된 세포 흡수, 다른 올리고뉴클레오티드 또는 핵산 표적에 대한 향상된 친화성 및 핵산분해효소의 존재 하에서의 증가된 안정성 때문에 천연 발생 형태에 비해 종종 선택된다. 본 발명의 올리고머 화합물은 하나 이상의 변경된 뉴클레오시드간 연결을 가질 수 있다. 본 명세서에서 정의된 바와 같이, 변경된 뉴클레오시드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오시드간 연결 및 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오시드간 연결을 포함한다.Compositions comprising nucleic acids also include nucleic acids containing modified, non-naturally occurring internucleoside linkages. Such unnatural nucleoside linkages are often selected for their natural properties, for example due to their enhanced cellular uptake, improved affinity for other oligonucleotides or nucleic acid targets, and increased stability in the presence of nucleolytic enzymes . The oligomeric compounds of the present invention may have one or more modified internucleoside linkages. As defined herein, oligonucleotides with modified internucleoside linkages include internucleoside linkages having phosphorus atoms and internucleoside linkages having no phosphorus atoms.

적합한 인 함유 변경된 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결이다. 내부에 인 원자를 함유하는 추가 변경된 올리고뉴클레오티드 골격(뉴클레오시드간 연결)은 예를 들면, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트, 포스포트라이에스테르, 아미노알킬포스포트라이에스테르, 메틸 및 다른 알킬 포스포네이트(3'-알킬렌 포스포네이트, 5'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함함), 포스피네이트, 포스포르아미데이트(3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아미노알킬포스포르아미데이트를 포함함), 티오노포스포르아미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트라이에스테르, 정상 3'-5' 연결을 갖는 셀레노포스페이트 및 보라노포스페이트, 이들의 2'-5' 연결된 유사체, 및 반전된 극성을 갖는 올리고뉴클레오티드 골격(이때, 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결이 3'-3', 5'-5' 또는 2'-2' 연결임)을 포함한다. 반전된 극성을 갖는 올리고뉴클레오티드는 가장 3' 쪽에 있는 뉴클레오티드간 연결에서 단일 3'-3' 연결, 즉 염기를 갖지 않을 수 있는(뉴클레오염기가 누락되어 있거나 그 대신에 하이드록실 기를 갖는) 단일 반전된 뉴클레오시드 잔기를 포함한다. 다양한 염, 혼합된 염 및 자유산 형태도 포함된다.A suitable phosphorylated modified internucleoside linkage is a phosphorothioate internucleoside linkage. Additional modified oligonucleotide backbones (internucleoside linkages) that contain phosphorus atoms inside include, for example, chiral phosphorothioates, phosphorodithioates, phosphoperthaiates, aminoalkylphosphotriesters, methyl and other alkyl Phosphonates (including 3'-alkylene phosphonates, 5'-alkylene phosphonates and chiral phosphonates), phosphinates, phosphoramidates (including 3'-aminophosphoramidates and amino Alkylphosphoramidates), thionophosphoramidates, thionoalkylphosphonates, thionoalkylphosphorate esters, selenophosphates having a normal 3'-5 'linkage and boranophosphates, their A 2'-5 'linked analogue, and an oligonucleotide backbone with inverted polarity wherein one or more nucleotide linkages are 3'-3', 5'-5 'or 2'-2' . Oligonucleotides with inverted polarity have a single 3'-3 'linkage in the internucleotide linkage at the 3'most side, that is, a single inversion (which may be missing a nucleobase or alternatively has a hydroxyl group) RTI ID = 0.0 > nucleoside < / RTI > Various salts, mixed salts and free acid forms are also included.

뉴클레오티드 유사체는 "잠금" 핵산도 포함할 수 있다. 일부 조성물들은 내생성 핵산을 특정 구조로 본질적으로 "고정"시키거나 "잠그는" 데에 사용될 수 있다. 고정 서열은 핵산 siNA 복합체의 해리를 방지하는 데에 기여하므로 복제를 방지할 수 있을 뿐만 아니라 내생성 서열의 표지, 변경 및/또는 클로닝도 가능하게 할 수 있다. 잠금 구조는 유전자 발현을 조절할 수 있거나(즉, 전사 또는 복제를 억제할 수 있거나 향상시킬 수 있거나), 내생성 핵산 서열을 표지하거나 다른 방식으로 변경하는 데에 사용될 수 있는 안정한 구조로서 사용될 수 있거나, 내생성 서열의 단리, 즉 클로닝에 사용될 수 있다.The nucleotide analog may also comprise a "locked" nucleic acid. Some compositions can be used to essentially "immobilize " or" lock " the endogenous nucleic acid to a particular structure. The fixed sequence contributes to prevent dissociation of the nucleic acid siNA complex, so that replication can be prevented, as well as labeling, alteration and / or cloning of the endogenous sequence can be made possible. The lockstructure can be used as a stable structure that can be used to control gene expression (i. E., Can inhibit or enhance transcription or replication), mark the endogenous nucleic acid sequence or otherwise alter it, Can be used for the isolation, i.e. cloning, of the endogenous sequence.

핵산 분자는 RNA 또는 DNA만을 함유하는 분자로 한정될 필요가 없고, 화학적으로 변경된 뉴클레오티드 및 비뉴클레오티드도 포괄한다. 비뉴클레오티드 또는 변경된 뉴클레오티드의 %는 1 내지 100%일 수 있다(예를 들면, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95%가 비뉴클레오티드 또는 변경된 뉴클레오티드이거나; 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 비뉴클레오티드 또는 변경된 뉴클레오티드가 핵산에 존재한다). 일부 실시양태들에서, 핵산은 2'-하이드록실(2'-OH) 함유 뉴클레오티드를 결여한다. 일부 실시양태들에서, 핵산은 기능을 매개하기 위해 2'-하이드록시 기를 갖는 뉴클레오티드의 존재를 요구하지 않으므로, 핵산은 리보뉴클레오티드(예를 들면, 2'-OH 기를 갖는 뉴클레오티드)를 포함하지 않을 수 있다. 그러나, 기능을 유지하기 위해 리보뉴클레오티드의 존재를 요구하지 않는 이러한 핵산 분자는 부착된 연결제 또는 연결제들, 또는 다른 부착된 또는 연결된 기, 모이어티, 또는 2'-OH 기를 갖는 하나 이상의 뉴클레오티드를 함유하는 쇄를 가질 수 있다. 종종 핵산 분자는 약 5, 10, 20, 30, 40 또는 50%의 뉴클레오티드 위치에서 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다.The nucleic acid molecule need not be limited to molecules containing only RNA or DNA, but also encompasses chemically modified nucleotides and non-nucleotides. The percentage of non-nucleotides or modified nucleotides may be between 1 and 100% (e.g., about 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, , 80, 85, 90 or 95% are non-nucleotides or modified nucleotides; or about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19 or 20 non-nucleotides or modified nucleotides are present in the nucleic acid). In some embodiments, the nucleic acid lacks 2'-hydroxyl (2'-OH) containing nucleotides. In some embodiments, the nucleic acid may not contain a ribonucleotide (e.g., a nucleotide having a 2'-OH group), since the nucleic acid does not require the presence of a nucleotide having a 2'-hydroxy group to mediate function have. However, such a nucleic acid molecule that does not require the presence of a ribonucleotide to retain its function may be attached to one or more nucleotides having attached or linking agents, or other attached or linked groups, moieties, or 2 ' -OH groups Containing chain. Often nucleic acid molecules can comprise ribonucleotides at about 5, 10, 20, 30, 40 or 50% of the nucleotide positions.

생체마커Biomarker

마이크로RNA(본원에서 "miRNA"로도 지칭됨) 생체마커뿐만 아니라 다른 생체마커도 본원에서 제공된다. 본 방법에서 사용되는 구체적인 생체마커는 miRNA-31, RhoA 및 IL-2를 포함한다. 생체마커의 사용은 본원의 후속 단락들에서 보다 상세히 논의되어 있다. 본 개시내용은 단백질 및/또는 전사체 수준의 검출을 고려한다. 예를 들면, 생체마커는 전사체 수준을 검출하기 위해 프로브 및 프라이머를 사용함으로써 검출될 수 있을 뿐만 아니라 단백질 수준을 검출하기 위해 항체를 사용함으로써 검출될 수도 있다.MicroRNAs (also referred to herein as "miRNAs ") Biomarkers as well as other biomarkers are provided herein. Specific biomarkers used in the method include miRNA-31, RhoA and IL-2. The use of biomarkers is discussed in more detail in the following paragraphs of the present application. The present disclosure contemplates detection of protein and / or transcript levels. For example, biomarkers may be detected not only by using probes and primers to detect transcript levels, but also by using antibodies to detect protein levels.

접합체(conjugates)Conjugates

일부 실시양태들에서, 본 개시내용은 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 활성 성분으로서 포함하는 조성물의 투여를 포함한다. 다시 말해, 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 세포 내로의 도입 후 발현하는 외생성 핵산 분자의 투여를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 이러한 핵산에는 발생된 올리고머 화합물의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 모이어티 또는 접합체가 부착될 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 변경된 핵산 조성물은 접합체 기를 작용기, 예컨대, 하이드록실 또는 아미노 기에 공유부착시킴으로써 제조된다. 본 개시내용의 접합체 기는 인터칼레이터(intercalator), 수용체 분자, 폴리아민, 폴리아미드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에테르, 올리고머의 약력학적 성질을 향상시키는 기, 및 올리고머의 약동학적 성질을 향상시키는 기를 포함한다. 전형적인 접합체 기는 콜레스테롤, 탄수화물, 지질, 인지질, 바이오틴, 페나진, 폴레이트, 페난쓰리딘, 안쓰라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린 및 안료를 포함한다. 약력학적 성질을 향상시키는 기는 핵산 흡수를 개선하고/하거나, 분해에 대한 내성을 향상시키고/시키거나 RNA와의 혼성화를 강화시키는 기를 포함한다. 약동학적 성질을 향상시키는 기는 흡수, 분포, 대사 또는 배출을 개선하는 기를 포함한다. 대표적인 접합체 기는 전체 개시내용이 본원에 참고로 도입되는, 1992년 10월 23일자로 출원된 국제 특허출원 제PCT/US92/09196호에 개시되어 있다. 접합체 모이어티는 지질 모이어티, 예컨대, 콜레스테롤 모이어티((Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), 콜산(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), 티오에테르, 예를 들면, 헥실-S-트라이틸티올(Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), 티오콜레스테롤(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), 지방족 쇄, 예를 들면, 도데칸다이올 또는 운데실 잔기(Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), 인지질, 예를 들면, 다이-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트라이에틸암모늄 1,2-다이-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 쇄(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), 아다만탄 아세트산(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), 팔미틸 모이어티(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.In some embodiments, the disclosure includes administration of a composition comprising a nucleic acid comprising a nucleotide sequence as an active ingredient. In other words, in some embodiments, the methods of the present disclosure include administration of exogenous nucleic acid molecules that are expressed after introduction into a cell. In some embodiments, the nucleic acid may be attached with one or more moieties or conjugates that enhance the activity, cell distribution, or cellular uptake of the oligomeric compounds generated. In one embodiment, such modified nucleic acid compositions are prepared by covalently attaching a conjugate group to a functional group, such as a hydroxyl or amino group. The conjugate of this disclosure includes intercalators, acceptor molecules, polyamines, polyamides, polyethylene glycols, polyethers, groups that enhance the pharmacodynamic properties of oligomers, and groups that enhance the pharmacokinetic properties of oligomers. Typical conjugate groups include cholesterol, carbohydrates, lipids, phospholipids, biotin, phenazine, folate, phenanthridine, anthraquinone, acridine, fluorescein, rhodamine, coumarin and pigments. Groups that enhance pharmacodynamic properties include groups that enhance nucleic acid uptake and / or enhance resistance to degradation and / or enhance hybridization with RNA. Pharmacokinetic properties include groups that improve absorption, distribution, metabolism or excretion. Representative conjugate groups are disclosed in International Patent Application No. PCT / US92 / 09196, filed October 23, 1992, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. The conjugate moiety may be a lipid moiety such as a cholesterol moiety (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556, Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), thioethers such as hexyl-S-tritylthiol (Manoharan et al., Ann. NY Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), aliphatic chains, e.g., < RTI ID = 0.0 & For example, dodecanediol or undecyl residues (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al Glycerol or triethylammonium 1,2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3-H ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,. Acid Res., 1990, 18, 3777-3783), polyphosphoric anhydride (Mw) (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), palmitic acid moieties (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995,14,969-973), adamantane acetic acid (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), or octadecylamine or hexylamino-carbonyl-oxycholesterol moiety (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).

나아가, 본 개시내용의 핵산 화합물은 올리고머 화합물의 능동 또는 수동 수송, 국소화 또는 구획화를 용이하게 하는, 결합된 또는 접합된 하나 이상의 모이어티를 가질 수 있다. 세포 국소화는 핵, 핵인 또는 세포질로의 국소화를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 구획화는 핵, 핵인 및 미토콘드리아를 포함하는 세포 구획으로의 임의의 유도된 이동, 또는 세포막 내로의 매립을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. Furthermore, the nucleic acid compounds of the present disclosure may have one or more conjugated or conjugated moieties that facilitate active or passive transport, localization or compartmentalization of oligomeric compounds. Cell localization includes, but is not limited to, localization to the nucleus, nucleus, or cytoplasm. The compartmentation may include, but is not limited to, any induced migration into the cell compartment, including nuclei, nuclei and mitochondria, or embedding into the cell membrane.

리보자임Ribozyme

본 개시내용의 조성물은 리보자임도 포함할 수 있다. 리보자임은 그 자신에 상보적인 영역을 갖는 단일 가닥 핵산, 예컨대, mRNA를 절단할 수 있는 리보핵산분해효소 활성을 갖는 촉매 RNA 분자이다. 따라서, 리보자임(예를 들면, 햄머헤드(hammerhead) 리보자임; 문헌(Haselhoff and Gerlach, 1988, Nature 334:585-591)에 기재되어 있음)은 mRNA 전사체를 촉매적으로 절단하여 상기 mRNA에 의해 코딩된 단백질을 번역을 억제하는 데에 사용될 수 있다. 예를 들면, RhoA를 코딩하는 핵산 분자에 대한 특이성을 갖는 리보자임은 RhoA의 뉴클레오티드 서열에 기초하여 디자인될 수 있다.Compositions of the present disclosure may also include ribozymes. A ribozyme is a single-stranded nucleic acid having a complementary region to itself, for example, a catalytic RNA molecule having ribonucleolytic enzyme activity capable of cleaving mRNA. Thus, ribozymes (such as those described in Haselhoff and Gerlach, 1988, Nature 334: 585-591) are catalytically cleaved mRNA transcripts, Lt; RTI ID = 0.0 > translation < / RTI > For example, a ribozyme with specificity for a nucleic acid molecule encoding RhoA can be designed based on the nucleotide sequence of RhoA.

사용된 구체적인 핵산 함유 조성물과 관계없이, 본 개시내용은 miRNA-31 발현을 증가시키는 핵산을 포함하는 조성물 및 RhoA 발현을 감소시키는 핵산을 포함하는 조성물을 고려한다. 특히 적합한 조성물은 IL-2의 발현을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 몇몇 핵산 조성물들은 예를 들면, 마이크로RNA-31의 내생성 발현을 증가시키는 기능을 할 수 있다는 것을 이해한다. 그러나, 일부 실시양태들에서, 마이크로RNA-31의 발현은 세포 내로 도입되었을 때 발현될 수 있는 형태, 예컨대, 실시예에 기재된 형태로 마이크로RNA-31을 세포에게 외생적으로 제공함으로써 증가된다. 발현 시 내생성 마이크로RNA-31의 서열을 모방하는 서열을 포함하는 외생적으로 제공된 분자(단일 가닥, 이중 가닥, 부분적으로 이중 가닥 등)의 투여는 siNA 분자의 한 예인 마이크로RNA-31 모방체로도 지칭될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 마이크로RNA-31 모방체는 천연 발생 인간 마이크로RNA-31 또는 전구-마이크로RNA-31의 서열에 상응하는 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드(단일 가닥, 이중 가닥, 부분적으로 이중 가닥 등)를 포함한다.Regardless of the specific nucleic acid-containing composition employed, this disclosure contemplates compositions comprising a nucleic acid that increases miRNA-31 expression and a composition comprising a nucleic acid that reduces RhoA expression. Particularly suitable compositions can be used to increase the expression of IL-2. It is understood that some nucleic acid compositions may function, for example, to increase endogenous expression of microRNA-31. However, in some embodiments, the expression of microRNA-31 is increased by exogenously providing microRNA-31 to cells in a form that can be expressed when introduced into cells, e. Administration of exogenously provided molecules (single-stranded, double-stranded, partially double-stranded, etc.) containing a sequence that mimics the sequence of endogenous microRNA-31 at the time of expression can be achieved using a microRNA-31 mimic, an example of a siNA molecule . In some embodiments, the microRNA-31 mimic is selected from the group consisting of oligonucleotides (including single-stranded, double-stranded, partially double-stranded, etc.) comprising a sequence corresponding to the sequence of naturally occurring human microRNA- ).

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 RhoA의 발현을 억제하는 siNA, 예컨대, RhoA에 혼성화하는 siRNA를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 마이크로RNA-31의 내생성 발현을 증가시키는 siNA를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 외생적으로 제공된 핵산의 발현이 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키도록 마이크로RNA-31의 뉴클레오티드 서열(천연 발생 서열 또는 이의 변경된 변이체)에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함한다.In certain embodiments, the compositions of the present disclosure comprise siNAs that inhibit the expression of RhoA, such as siRNAs that hybridize to RhoA. In another embodiment, the composition of the present disclosure comprises a siNA that increases endogenous expression of microRNA-31. In another embodiment, the composition of the present disclosure comprises a nucleotide sequence corresponding to a nucleotide sequence of microRNA-31 (a naturally occurring sequence or a modified variant thereof) such that the expression of the exogenously provided nucleic acid increases the expression of microRNA- / RTI >

핵산 조성물은 당분야에서 잘 공지되어 있는 방법을 이용함으로써 단리될 수 있고/있거나, 제조될 수 있고/있거나 전달될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 마이크로RNA-31 발현을 증가시키거나 RhoA 발현을 감소시키는 핵산을 포함하고, 상기 핵산은 적합한 숙주에서 상기 핵산을 발현하는 발현 벡터의 일부이다. 구체적으로, 이러한 핵산은 유도적 또는 항시적 및 임의적으로 조직 특이적인 프로모터, 예를 들면, 이종 프로모터를 가질 수 있다.The nucleic acid composition can be isolated and / or manufactured and / or delivered using methods well known in the art. In one embodiment, a composition of the present disclosure comprises a nucleic acid that increases microRNA-31 expression or reduces RhoA expression, wherein the nucleic acid is part of an expression vector that expresses the nucleic acid in an appropriate host. Specifically, the nucleic acid may have a promoter that is inducible or always and optionally tissue specific, for example, a heterologous promoter.

대상체 내로의 핵산의 전달은 직접적일 수 있거나(이 경우, 상기 대상체는 핵산 또는 핵산 보유 벡터에 직접적으로 노출됨) 또는 간접적일 수 있다(이 경우, 세포는 시험관내에서 핵산으로 먼저 형질전환된 후 대상체 내로 이식됨). 이들 2종의 방법들은 각각 생체내 또는 생체외 유전자 치료로서 공지되어 있다. 따라서, 일부 실시양태들에서, 본 개시내용은 세포 조성물의 사용을 포함한다.The delivery of the nucleic acid into the subject can be direct (in this case, the subject is exposed directly to the nucleic acid or nucleic acid-bearing vector) or indirect (in this case, the cell is first transformed into the nucleic acid in vitro, Lt; / RTI > Both of these methods are known as in vivo or in vitro gene therapy, respectively. Thus, in some embodiments, the present disclosure encompasses the use of a cell composition.

단리된 및/또는 재조합 핵산, 예컨대, miRNA 유전자 생성물은 다수의 표준 기법들을 이용함으로써 수득될 수 있다. 예를 들면, miRNA 유전자 생성물은 여러 방법들 중 하나를 이용함으로써 화학적으로 합성될 수 있다. 한 방법에서, miRNA 유전자 생성물은 적절하게 보호된 리보뉴클레오시드 포스포르아미다이트 및 보편적인 DNA/RNA 합성기를 이용함으로써 화학적으로 합성된다. 합성 RNA 분자 또는 합성 시약의 상업적 공급자는 프롤리고(Proligo)(독일 함부르그 소재), 다마콘 리서치(Dharmacon Research)(미국 콜로라도주 라파예트 소재), 피어스 케미칼(Pierce Chemical)(퍼바이오 사이언스(Perbio Science)의 일부, 미국 일리노이주 록포드 소재), 글렌 리서치(Glen Research)(미국 버지니아주 스털링 소재), 켐진스(ChemGenes)(미국 매사추세츠주 애슐랜드 소재) 및 크루아켐(Cruachem)(영국 글라스고우 소재)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.Isolated and / or recombinant nucleic acids, such as miRNA gene products, can be obtained by using a number of standard techniques. For example, miRNA gene products can be chemically synthesized by using one of several methods. In one method, the miRNA gene product is chemically synthesized by using a suitably protected ribonucleoside phosphoramidite and a universal DNA / RNA synthesizer. Commercial suppliers of synthetic RNA molecules or synthetic reagents are commercially available from Proligo (Hamburg, Germany), Dharmacon Research (Lafayette, Colo.), Pierce Chemical (Perbio) Glen Research (Stirling, VA), ChemGenes (Ashland, Mass., USA), and Cruachem (Glasgow, United States of America) Materials), but are not limited thereto.

대안적으로, 핵산, 예컨대, miRNA 유전자 생성물은 임의의 적합한 프로모터를 사용함으로써 재조합 원형 또는 선형 DNA 플라스미드로부터 발현될 수 있다. 플라스미드로부터 RNA를 발현하기에 적합한 프로모터는 U6 또는 H1 RNA pol III 프로모터 서열, 또는 사이토메갈로바이러스 프로모터를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 재조합 플라스미드는 암세포에서 miRNA 유전자 생성물을 발현하기 위해 유도성 또는 조절가능한 프로모터를 추가로 포함할 수 있다.Alternatively, a nucleic acid, such as an miRNA gene product, can be expressed from a recombinant circular or linear DNA plasmid by using any suitable promoter. Promoters suitable for expressing RNA from a plasmid include, but are not limited to, a U6 or H1 RNA pol III promoter sequence, or a cytomegalovirus promoter. The recombinant plasmid may further comprise an inducible or regulatable promoter to express the miRNA gene product in the cancer cell.

재조합 플라스미드로부터 발현되는 핵산 유전자 생성물, 예컨대, miRNA 유전자 생성물은 표준 기법에 의해 배양된 세포 발현 시스템으로부터 단리될 수 있다. Nucleic acid gene products, such as miRNA gene products, expressed from recombinant plasmids can be isolated from cell expression systems cultured by standard techniques.

예를 들면, miRNA 유전자 생성물을 발현하기에 적합한 플라스미드의 선택, 유전자 생성물을 발현하기 위해 핵산 서열을 플라스미드 내로 삽입하는 방법, 및 재조합 플라스미드를 관심 있는 세포 내로 전달하는 방법은 다수의 공개문헌들로부터 고찰될 수 있다. 예를 들면, 전체 개시내용이 본원에 참고로 도입되는 문헌(Zeng et al., Molecular Cell 9:1327-1333 (2002)); 문헌(Tuschl, Nat. Biotechnol 20:446-448 (2002)); 문헌(Brummelkamp et al., Science 296:550-553 (2002)); 문헌(Miyagishi et al., Nat. Biotechnol. 20:497-500 (2002)); 문헌(Paddison et al., Genes Dev. 16:948-958 (2002)); 문헌(Lee et al., Nat. Biotechnol. 20:500-505 (2002)); 및 문헌(Paul et al., Nat. Biotechnol. 20:505-508 (2002))을 참조한다.For example, selection of plasmids suitable for expressing miRNA gene products, methods of inserting nucleic acid sequences into plasmids to express gene products, and methods of delivering recombinant plasmids into cells of interest are reviewed from numerous publications . See, for example, Zeng et al., Molecular Cell 9: 1327-1333 (2002), the entire disclosure of which is incorporated herein by reference; (Tuschl, Nat. Biotechnol 20: 446-448 (2002)); Brummelkamp et al., Science 296: 550-553 (2002)); (Miyagishi et al., Nat. Biotechnol. 20: 497-500 (2002)); Paddison et al., Genes Dev. 16: 948-958 (2002)); Lee et al., Nat. Biotechnol. 20: 500-505 (2002)); And Paul et al., Nat. Biotechnol. 20: 505-508 (2002)).

miRNA 유전자 생성물은 재조합 바이러스 벡터로부터도 발현될 수 있다. miRNA 유전자 생성물은 2개의 별도의 재조합 바이러스 벡터 또는 동일한 바이러스 벡터로부터 발현될 수 있다는 것이 고려된다. 재조합 바이러스 벡터로부터 발현된 RNA는 표준 기법에 의해 배양된 세포 발현 시스템으로부터 단리될 수 있거나 시험관내 또는 생체내에서 세포를 감염시키는 데에 직접적으로 사용될 수 있다.miRNA gene products can also be expressed from recombinant viral vectors. It is contemplated that the miRNA gene product can be expressed from two separate recombinant viral vectors or from the same viral vector. RNA expressed from a recombinant viral vector can be isolated from a cell expression system cultured by standard techniques, or can be used directly to infect cells in vitro or in vivo.

재조합 바이러스 벡터는 miRNA 유전자 생성물을 코딩하는 서열, 및 RNA 서열을 발현하기 위한 임의의 적합한 프로모터를 포함할 수 있다. 적합한 프로모터는 예를 들면, U6 또는 H1 RNA pol III 프로모터 서열, 또는 사이토메갈로바이러스 프로모터를 포함한다.The recombinant viral vector may comprise a sequence encoding the miRNA gene product and any suitable promoter for expressing the RNA sequence. Suitable promoters include, for example, U6 or H1 RNA pol III promoter sequences, or cytomegalovirus promoters.

아데노바이러스(AV), 아데노 관련 바이러스(AAV), 레트로바이러스(예를 들면, 렌티바이러스(LV), 라브도바이러스, 뮤린 백혈병 바이러스), 헤르페스 바이러스 등으로부터 유래된 벡터들을 포함하나 이들로 한정되지 않는, miRNA 유전자 생성물에 대한 코딩 서열(또는 이의 상보적인 서열)을 수용할 수 있는 임의의 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 바이러스 벡터의 향성(tropism)은 적절한 경우 벡터를 다른 바이러스의 외피 단백질 또는 다른 표면 항원으로 슈도타이핑하거나 상이한 바이러스 캡시드 단백질로 치환시킴으로써 변경될 수 있다.But are not limited to, vectors derived from adenovirus (AV), adeno-associated virus (AAV), retrovirus (e.g., lentivirus (LV), Rabovirus, Murine Leukemia virus), herpes virus, , any viral vector capable of accepting a coding sequence (or a complementary sequence thereof) for an miRNA gene product may be used. The tropism of the viral vector can be altered, if appropriate, by pseudotyping the vector to the envelope protein or other surface antigen of another virus or by substituting a different viral capsid protein.

진핵세포에 대한 형질감염 방법은 세포의 핵 또는 전구핵 내로의 핵산의 직접적인 주입; 전기천공; 리포좀 전달 또는 친유성 물질에 의해 매개된 전달; 수용체에 의해 매개된 핵산 전달, 생체탄도(bioballistic) 또는 입자 가속화; 인산칼슘 침전; 및 바이러스 벡터에 의해 매개된 형질감염을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.Transfection methods for eukaryotic cells include direct injection of the nucleic acid into the nucleus or progenitor nucleus of the cell; Electric perforation; Delivery mediated by liposome delivery or lipophilic substances; Receptor mediated nucleic acid delivery, bioballistic or particle acceleration; Calcium phosphate precipitation; And viral vector-mediated transfection.

예를 들면, 세포는 리포좀 전달 화합물(즉, 예를 들면, DOTAP(N-[1-(2,3-다이올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트라이메틸-암모늄 메틸설페이트, 뵈링거-만하임) 또는 등가물, 예컨대, 리포펙틴으로 형질감염될 수 있다. 사용된 핵산의 양은 본 발명의 실시에 있어서 결정적으로 중요하지는 않고, 수용가능한 결과는 0.1 내지 100 마이크로그램의 핵산/10⁵개 세포를 사용하였을 때 달성될 수 있다. 예를 들면, 10⁵개 당 3 마이크로그램의 DOTAP에서 약 0.5 마이크로그램의 플라스미드 벡터의 비가 사용될 수 있다.For example, the cell can be a liposome delivery compound (i. E., DOTAP (N- [1- (2,3-dioleoyloxy) propyl] -N, N, N-trimethyl-ammonium methyl sulfate, The amount of nucleic acid used is not critical to the practice of the present invention, and acceptable results are obtained from 0.1 to 100 micrograms of nucleic acid / 10 ⁵ < RTI ID = 0.0 > For example, the ratio of a plasmid vector of about 0.5 micrograms per DOTAP of 3 micrograms per 10 ⁵ can be used.

전술된 내용은 본 개시내용의 조성물, 특히 핵산 기제의 조성물의 상세한 설명을 제공한다. 일부 실시양태들에서, 특허청구된 방법에서 사용되는 조성물은 임의적으로 벡터의 일부로서 제공된 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이 뉴클레오티드 서열로 구성된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 상기 핵산은 천연 발생 핵산 서열의 기능성 부분에 상응하는 올리고뉴클레오티드, 예컨대, siNA 분자인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 추가로, 본 개시내용의 조성물은 활성 물질이 폴리펩티드, 예컨대, 항체 또는 유기 소분자인 조성물을 포함한다. 화합물 클래스들 중 임의의 클래스의 화합물이 조성물로서 또는 약학 조성물로서 제제화될 수 있고 투여될 수 있다.The foregoing provides a detailed description of the compositions of the present disclosure, particularly compositions of nucleic acid bases. In some embodiments, the composition used in the claimed method optionally comprises a nucleic acid comprising or consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3 provided as part of a vector. In some embodiments, the nucleic acid comprises an oligonucleotide corresponding to a functional portion of a naturally occurring nucleic acid sequence, such as a nucleotide sequence that is a siNA molecule. In addition, compositions of the present disclosure include compositions wherein the active substance is a polypeptide, such as an antibody or an organic small molecule. Compounds of any of the classes of compounds may be formulated and administered as a composition or as a pharmaceutical composition.

폴리펩티드 및 펩티드 단편: 일부 실시양태들에서, 화합물은 폴리펩티드 또는 펩티드 단편이다. 예시적 폴리펩티드 또는 펩티드 단편은 야생형 서열뿐만 아니라 변이체 서열도 포함한다. 변이체 폴리펩티드는 특정 야생형 폴리펩티드와 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. Polypeptide and Peptide Fragments : In some embodiments, the compound is a polypeptide or a peptide fragment. Exemplary polypeptides or peptide fragments include variant sequences as well as wild-type sequences. Variant polypeptides include amino acid sequences that are 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or 99% identical to a particular wild-type polypeptide.

폴리펩티드 및 펩티드 단편 이외에, 본 발명은 상기 폴리펩티드 및 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산도 고려한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 단편을 등가물로서 포함하기 위한 것이고, 이때 이러한 단편은 그 자신이 유래된 전체 길이 핵산 서열과 실질적으로 동일한 기능을 갖는다. 등가 뉴클레오티드 서열은 하나 이상의 뉴클레오티드 치환, 추가 또는 결실에 의해 상이한 서열, 예컨대, 대립형질 변이체를 포함할 것이므로, 예를 들면, 천연 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 서열과 상이한 서열을 포함할 것이다. 등가 서열은 유전 코드의 축퇴성으로 인해 공지된 야생형 또는 변이체 서열과 상이한 서열을 포함한다. 등가 서열은 엄격한 조건(즉, 약 1 M 염에서 형성된 DNA 이중체의 용융 온도(T_m)보다 약 20℃ 내지 27℃ 더 낮은 온도에 해당하는 조건) 하에서 천연 뉴클레오티드 서열과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열도 포함할 수 있다. 엄격한 혼성화 조건의 추가 예는 65℃에서 0.2X SSC의 세척 단계를 포함한다. 등가 뉴클레오티드 서열은 천연 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드의 활성을 보유하는 폴리펩티드를 코딩한다는 것을 이해할 것이다. In addition to polypeptides and peptide fragments, the present invention also contemplates isolated nucleic acids comprising a nucleotide sequence encoding such polypeptides and fragments. As used herein, the term "nucleic acid" is intended to include fragments as equivalents, wherein such fragments have substantially the same function as the full-length nucleic acid sequence from which they are derived. An equivalent nucleotide sequence will include sequences that differ from the nucleotide sequence of a natural nucleotide sequence, for example, by one or more nucleotide substitutions, additions or deletions, which will include different sequences, such as allelic variants. Equivalent sequences include sequences that differ from known wild-type or mutant sequences due to degeneracy of the genetic code. The equivalent sequence also includes a nucleotide sequence that hybridizes with the natural nucleotide sequence under stringent conditions (i.e., a condition corresponding to a temperature of about 20 ° C to 27 ° C lower than the melting temperature (T _m ) of the DNA duplex formed in about 1 M salt) can do. A further example of stringent hybridization conditions includes a wash step of 0.2X SSC at 65 ° C. It will be appreciated that the equivalent nucleotide sequence encodes a polypeptide that retains the activity of the polypeptide encoded by the natural nucleotide sequence.

본원에 기재된 방법에서 사용되는 등가 뉴클레오티드 서열은 주어진 뉴클레오티드 서열과 60% 이상 동일한 서열도 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 뉴클레오티드 서열은 천연 서열의 뉴클레오티드 서열과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 이상 동일하다.Equivalent nucleotide sequences used in the methods described herein also include sequences that are 60% or more identical to the given nucleotide sequence. In another embodiment, the nucleotide sequence is 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% or 100% identical to the nucleotide sequence of the native sequence.

유전 코드의 축퇴성으로 인해 특정 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 상이한 서열을 갖는 핵산도 본 발명의 범위 내에 있다. 이러한 핵산은 기능적으로 동등한 펩티드를 코딩하지만 유전 코드의 축퇴성으로 인해 당분야에서 공지되어 있는 야생형 서열과 서열 면에서 상이하다. 예를 들면, 다수의 아미노산들이 1개 초과의 삼염기 코돈에 의해 표시된다. 동일한 아미노산을 특정하는 코돈들 또는 동의어 코돈들(예를 들면, CAU 및 CAC는 각각 히스티딘을 코딩함)은 아미노산 서열에 영향을 미치지 않는 "침묵" 돌연변이를 발생시킬 수 있다. 그러나, 아미노산 서열에서의 변화를 유발하는 DNA 서열 다형성도 존재할 것으로 예측된다. 당업자는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 하나 이상의 뉴클레오티드(최대 약 3% 내지 5%의 뉴클레오티드)에서의 이들 변이가 천연 대립형질 변이로 인해 주어진 종의 개체들 사이에 존재할 수 있다는 것을 인식할 것이다.Nucleic acid having a sequence different from the nucleotide sequence encoding a specific polypeptide due to degeneracy of the genetic code is also within the scope of the present invention. Such nucleic acids encode functionally equivalent peptides but differ in sequence from wild-type sequences known in the art due to degeneracy of the genetic code. For example, multiple amino acids are represented by more than one tribasic codon. Codons or synonymous codons (e.g., CAU and CAC, each coding for histidine) that specify the same amino acid can generate a "silent" mutation that does not affect the amino acid sequence. However, DNA sequence polymorphisms that cause changes in amino acid sequence are also expected to exist. Those skilled in the art will recognize that these mutations in one or more nucleotides of the nucleic acid encoding the polypeptide (up to about 3% to 5% of the nucleotides) may be between individuals of a given species due to natural allelic variation.

항체: 예시적 화합물은 항체도 포함한다. 항체는 특정 에피토프에 대한 놀라운 친화성 및 특이성을 가질 수 있다. 이론에 의해 구속받지 않지만, 항체는 세포에서 단백질의 활성 및 신호전달 경로를 억제하거나 증강시킴으로써 세포, 조직 또는 유기체에 대한 특정 효과를 발휘할 수 있거나 유도할 수 있다. Antibodies : Exemplary compounds also include antibodies. Antibodies can have remarkable affinity and specificity for a particular epitope. Without being bound by theory, it is believed that the antibody may or may not exert a particular effect on a cell, tissue or organism by inhibiting or enhancing the activity and signaling pathways of the protein in the cell.

단일클론 또는 다중클론 항체는 표준 프로토콜을 이용함으로써 제조될 수 있다(예를 들면, 문헌(Antibodies: A laboratory manual ed. by Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988)) 참조). 포유동물, 예컨대, 마우스, 햄스터 또는 토끼를 면역원성 형태의 펩티드로 면역화시킬 수 있다. 단백질 또는 펩티드에 면역원성을 부여하는 기법은 담체와의 접합 또는 당분야에서 잘 공지되어 있는 다른 기법을 포함한다. 단백질의 면역원성 부분은 항원보강제의 존재 하에서 투여될 수 있다. 면역화의 진행은 혈장 또는 혈청에서의 항체 역가의 검출에 의해 모니터링될 수 있다. 표준 ELISA 또는 다른 면역분석이 항체의 수준을 평가하기 위해 항원인 면역원과 함께 사용될 수 있다. 본 발명자들은 항체가 특정 단백질에 대해 면역특이적일 수 있거나, 특정 단백질 패밀리에 대해 면역특이적일 수 있거나, 관련된 단백질 패밀리의 다수의 단백질들에 대해 덜 면역특이적이고 교차반응할 수 있다는 것을 인식한다. 면역특이적인 항체는 비상동성 단백질과 실질적으로 교차반응하지 않는다. 실질적으로 교차반응하지 않는다는 것은 항체가 그 자신이 면역특이성을 나타내는 단백질 또는 단백질들에 대한 그 자신의 결합 친화성보다 1자릿수 이상, 보다 바람직하게는 2자릿수 이상, 훨씬 더 바람직하게는 3자릿수 이상 더 적은 비상동성 단백질에 대한 결합 친화성을 갖는다는 것을 의미한다.Monoclonal or polyclonal antibodies can be prepared using standard protocols (see, for example, Antibodies: A laboratory manual ed. By Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988)). Mammals, such as mice, hamsters or rabbits, may be immunized with peptides in an immunogenic form. Techniques for imparting immunogenicity to proteins or peptides include conjugation with carriers or other techniques well known in the art. The immunogenic portion of the protein may be administered in the presence of an adjuvant. The progress of immunization can be monitored by detection of antibody titer in plasma or serum. Standard ELISA or other immunoassays can be used with immunogens that are antigens to assess the level of antibody. The inventors recognize that the antibody may be immunospecific for a particular protein, may be immunospecific for a particular protein family, or may be less immunologically specific and cross-reactive to multiple proteins of the protein family of interest. Immunospecific antibodies do not substantially cross-react with non-aspartic proteins. Substantially no cross-reactivity means that the antibody itself has one or more digits or more, more preferably two or more digits or more preferably three or more digits more than its own binding affinity for proteins or proteins that exhibit immuno-specificity Which means that it has a binding affinity for a small number of heterologous proteins.

항체는 진단 방법에서, 예컨대, IL-2 또는 RhoA의 발현을 검출하기 위한 항체로서 특히 유용하다는 것도 인식한다.It is also recognized that antibodies are particularly useful as antibodies for the detection of IL-2 or RhoA expression in diagnostic methods, for example.

펩티도미메틱(Peptidomimetic): 다른 실시양태에서, 본 발명은 활성 물질이 펩티도미메틱인 것을 고려한다. 펩티도미메틱은 펩티드 및 단백질에 기초한 화합물, 또는 펩티드 및 단백질로부터 유래된 화합물이다. 펩티도미메틱은 비천연 아미노산의 사용을 통한 공지된 단백질의 아미노산 서열의 구조적 변경, 입체구조적 구속, 등배전자체 치환 등에 의해 수득될 수 있다. 본 펩티도미메틱은 펩티드와 비펩티드 합성 구조체 사이에 구조적 공간의 연속체를 구성한다. Peptidomimetic : In another embodiment, the present invention contemplates that the active substance is a peptidomimetic. Peptidomimetics are compounds based on peptides and proteins, or compounds derived from peptides and proteins. Peptidomimetics can be obtained by structural alteration of the amino acid sequence of known proteins through the use of unnatural amino acids, conformational restraint, etc., and by self-substitution of the distribution. The peptidomimetic constitutes a continuum of structural space between the peptide and the nonpeptide synthesis structure.

예시적 펩티도미메틱은 가수분해불가능성(예를 들면, 상응하는 펩티드를 분해하는 단백질분해효소 또는 다른 생리학적 조건에 대한 증가된 안정성), 증가된 특이성 및/또는 효능, 및 세포내 국소화에 대한 증가된 세포 투과성과 같은 특성을 가질 수 있다. 예시 목적으로, 본 발명의 펩티드 유사체는 예를 들면, 벤조다이아제핀(예를 들면, 문헌(Freidinger et al. in Peptides: Chemistry and Biology, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988) 참조), 치환된 감마 락탐 고리(Garvey et al. in Peptides: Chemistry and Biology, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988, p123), C-7 모방체(Huffman et al. in Peptides: Chemistry and Biologyy, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988, p. 105), 케토-메틸렌 슈도펩티드(Ewenson et al. (1986) J Med Chem 29:295; and Ewenson et al. in Peptides: Structure and Function (Proceedings of the 9th American Peptide Symposium) Pierce Chemical Co. Rockland, IL, 1985), β-회전 다이펩티드 코어(Nagai et al. (1985) Tetrahedron Lett 26:647; and Sato et al. (1986) J Chem Soc Perkin Trans 1:1231), β-아미노알코올(Gordon et al. (1985) Biochem Biophys Res Commun 126:419; and Dann et al. (1986) Biochem Biophys Res Commun 134:71), 다이아미노케톤(Natarajan et al. (1984) Biochem Biophys Res Commun 124:141), 및 메틸렌아미노 변경(Roark et al. in Peptides: Chemistry and Biology, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988, p134)을 사용함으로써 발생될 수 있다. 또한, 일반적으로 문헌(Session III: Analytic and synthetic methods, in Peptides: Chemistry and Biology, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988)을 참조한다.Exemplary peptidomimetics include those that are hydrolytically degradable (e.g., increased stability to proteolytic enzymes or other physiological conditions that degrade corresponding peptides), increased specificity and / or potency, And increased cellular permeability. For illustrative purposes, the peptide analogs of the present invention may be prepared, for example, by analogy with benzodiazepines (see for example Freidinger et al. In Peptides: Chemistry and Biology, GR Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, ), A substituted gamma-lactam ring (Grvey et al. In Peptides: Chemistry and Biology, GR Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988, p123), C-7 mimetics (Huffman et al. Ewenson et al. (1986) J Med Chem 29: 295; and Ewenson et al. in Peptides: < RTI ID = 0.0 & (1986) Tetrahedron Lett. 26: 647; and Sato et al. (1986), and the < RTI ID = 0.0 > ) J Chem Soc Perkin Trans 1: 1231),? -Aminoalcohols (Gordon et al. (1985) Biochem Biophys Res Commun 126: 419 and Dann et al. ophys Res Commun 134: 71), diaminoketones (Natarajan et al. (1984) Biochem Biophys Res Commun 124: 141), and methylene amino changes (Roark et al. in Peptides: Chemistry and Biology, G.R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988, p134). See also Session III: Analytic and synthetic methods, in Peptides: Chemistry and Biology, G. R. Marshall ed., ESCOM Publisher: Leiden, Netherlands, 1988.

본 펩티도미메틱을 발생시키기 위해 수행될 수 있는 다양한 측쇄 치환 이외에, 본 발명은 펩티드 이차 구조의 입체구조적으로 구속된 모방체의 사용을 구체적으로 고려한다. 펩티드의 아미드 결합에 대한 다수의 대용물들이 개발되었다. 아미드 결합에 대한 자주 활용되는 대용물은 하기 기들을 포함한다: (i) 트랜스-올레핀, (ii) 플루오로알켄, (iii) 메틸렌아미노, (iv) 포스폰아미드 및 (v) 설폰아미드.In addition to the various side chain substitutions that can be made to generate the present peptidomimetic, the present invention specifically contemplates the use of stereostically constrained mimics of the peptide secondary structure. Many alternatives to amide bonds of peptides have been developed. Frequently used alternatives to amide linkages include the following groups: (i) trans-olefins, (ii) fluoroalkenes, (iii) methylenamino, (iv) phosphonamides and (v) sulfonamides.

추가로, 펩티드의 골격의 보다 실질적인 변경에 기초한 펩티도미메틱이 사용될 수 있다. 이 카테고리에 속하는 펩티도미메틱은 (i) 레트로-인버소(retro-inverso) 유사체 및 (ii) N-알킬 글리신 유사체(소위 펩토이드)를 포함한다.In addition, peptidomimetics based on a more substantial modification of the backbone of the peptide may be used. Peptidomimetics belonging to this category include (i) retro-inverso analogues and (ii) N-alkylglycine analogs (so-called peptoids).

나아가, 조합 화학의 방법들이 신규 펩티도미메틱의 개발에 이용되고 있다(예를 들면, PCT 공보 제WO 99/48897호). 예를 들면, 소위 "펩티드 모르핑(morphing)" 기법의 한 실시양태는 광범위한 펩티드 결합 치환을 포함하는 펩티드 유사체의 라이브러리의 무작위 발생에 초점을 맞춘다. Furthermore, methods of combinatorial chemistry have been used in the development of novel peptidomimetics (e. G. PCT Publication No. WO 99/48897). For example, one embodiment of the so-called "peptide morphing" technique focuses on the random occurrence of a library of peptide analogs containing a broad range of peptide binding substitutions.

예시적 실시양태에서, 펩티도미메틱은 펩티드의 레트로-인버소 유사체로서 유도될 수 있다. 레트로-인버소 유사체는 당분야에서 공지되어 있는 방법, 예컨대, 미국 특허 제4,522,752호(Sisto et al.)에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다. 일반적인 지침으로서, 단백질분해에 대해 가장 민감한 부위는 전형적으로 변경되고, 덜 민감한 아미드 연결은 미메틱 전환의 경우 임의적으로 변경된다. 최종 생성물 또는 이의 중간체는 HPLC에 의해 정제될 수 있다.In an exemplary embodiment, the peptidomimetic can be derived as a retro-insoluble analog of the peptide. Retro-Inverso analogs can be prepared according to methods known in the art, for example, the method described in U.S. Patent No. 4,522,752 (Sisto et al.). As a general guideline, the most sensitive sites for proteolysis are typically modified, while the less sensitive amide linkage is arbitrarily changed in the case of unmatched conversion. The final product or its intermediate can be purified by HPLC.

또 다른 예시적 실시양태에서, 펩티도미메틱은 펩티드의 레트로-에난티오(enantio) 유사체로서 유도될 수 있다. 이와 같은 레트로-에난티오 유사체는 상업적으로 입수가능한 D-아미노산(또는 이의 유사체) 및 표준 고체-상 또는 용액-상 펩티드 합성 기법을 이용함으로써 합성될 수 있다. 예를 들면, 바람직한 고체-상 합성 방법에서, 적절하게 아미노 탈보호된(t-부틸옥시카보닐, Boc) 잔기(또는 이의 유사체)는 고체 지지체, 예컨대, 클로로메틸 수지에 공유결합된다. 상기 수지는 다이클로로메탄(DCM)으로 세척되고, BOC 보호기는 DCM 중의 TFA를 사용한 처리에 의해 제거된다. 상기 수지는 세척되고 중화되고, 다음 Boc 보호된 D-아미노산은 다이이소프로필카보다이이미드와의 커플링에 의해 도입된다. 상기 수지는 다시 세척되고, 그 다음 차례의 남은 아미노산들 각각에 대해 주기가 반복된다. 보호된 레트로-에난티오 펩티드의 합성이 완결되면, 보호기는 제거되고, 펩티드는 불화수소산/아니솔/다이메틸 설파이드/티오아니솔을 사용한 처리에 의해 고체 지지체로부터 절단된다. 최종 생성물은 HPLC로 정제되어 순수한 레트로-에탄티오 유사체를 제공한다.In another exemplary embodiment, the peptidomimetic can be derivatized as a retro-enantio analog of the peptide. Such retro-enanthio analogs can be synthesized by using commercially available D-amino acids (or analogs thereof) and standard solid-phase or solution-top peptide synthesis techniques. For example, in a preferred solid-phase synthesis method, a suitably amin-deprotected (t-butyloxycarbonyl, Boc) moiety (or analog thereof) is covalently bonded to a solid support such as a chloromethyl resin. The resin is washed with dichloromethane (DCM) and the BOC protecting group is removed by treatment with TFA in DCM. The resin is washed and neutralized, and the Boc protected D-amino acid is then introduced by coupling with diisopropylcarbodiimide. The resin is washed again and the cycle is repeated for each of the next remaining amino acids. When the synthesis of the protected retro-enantiopeptide is complete, the protecting group is removed and the peptide is cleaved from the solid support by treatment with hydrofluoric acid / anisole / dimethylsulfide / thioanisole. The final product is purified by HPLC to provide the pure retro-ethanthio analog.

또 다른 예시적 실시양태에서, 트랜스-올레핀 유도체가 본 폴리펩티드들 중 임의의 폴리펩티드에 대해 제조될 수 있다. 트랜스-올레핀 유사체는 문헌(Y.K. Shue et al. (1987) Tetrahedron Letters 28:3225)의 방법 및 당분야에서 공지되어 있는 다른 방법에 따라 합성될 수 있다. 인용된 절차 또는 다른 이용가능한 절차에서의 변경이 사용된 시약의 성질에 따라 필요할 수 있다는 것을 인식할 것이다.In another exemplary embodiment, a trans-olefin derivative may be prepared for any of the present polypeptides. The trans-olefin analog can be synthesized according to the method of Y. K. Shue et al. (1987) Tetrahedron Letters 28: 3225 and other methods known in the art. Those skilled in the art will recognize that changes in the recited or other available procedures may be necessary depending on the nature of the reagents used.

상기 방법에 의해 합성된 슈도다이펩티드를 다른 슈도다이펩티드와 커플링시켜 아미드 작용기 대신에 여러 올레핀 작용기를 갖는 펩티드 유사체를 제조하는 것도 가능하다. It is also possible to prepare a peptide analogue having a plurality of olefinic functional groups in place of an amide functional group by coupling the pseudo-diepeptide synthesized by the above method with another pseudo-diepeptide.

펩티도미메틱 유도체의 또 다른 클래스는 포스포네이트 유도체를 포함한다. 이러한 포스포네이트 유도체의 합성은 공지된 합성 절차로부터 개조될 수 있다. 예를 들면, 문헌(Loots et al. in Peptides: Chemistry and Biology, (Escom Science Publishers, Leiden, 1988, p. 118)) 및 문헌(Petrillo et al. in Peptides: Structure and Function (Proceedings of the 9th American Peptide Symposium, Pierce Chemical Co. Rockland, IL, 1985))을 참조한다.Another class of peptidomimetic derivatives includes phosphonate derivatives. The synthesis of such phosphonate derivatives can be adapted from known synthetic procedures. (Escom Science Publishers, Leiden, 1988, p. 118) and Petrillo et al. In Peptides: Structure and Function (Proceedings of the 9th American Peptide Symposium, Pierce Chemical Co. Rockland, IL, 1985).

많은 다른 펩티도미메틱 구조들이 당분야에서 공지되어 있고 펩티도미메틱의 디자인에 사용되도록 용이하게 개조될 수 있다. 예시하기 위해, 펩티도미메틱은 1-아자비사이클로[4.3.0]노난 대용물(문헌(Kim et al. (1997) J. Org. Chem. 62:2847) 참조), N-아실 피페라진산(문헌(Xi et al. (1998) J. Am. Chem. Soc. 120:80) 참조), 또는 2-치환된 피페라진 모이어티(문헌(Williams et al. (1996) J. Med. Chem. 39:1345-1348) 참조)를 구속된 아미노산 유사체로서 도입할 수 있다. 다른 실시양태에서, 일부 아미노산 잔기들은 아릴 및 바이아릴 모이어티, 예를 들면, 단환 또는 이환 방향족 또는 헤테로방향족 핵, 또는 이방향족, 방향족, 헤테로방향족 또는 이헤테로방향족 핵으로 치환될 수 있다.Many other peptidomimetic structures are known in the art and can be readily adapted for use in the design of peptidomimetics. For illustrative purposes, the peptidomimetics can be prepared by reacting 1-azabicyclo [4.3.0] nonane substituent (see Kim et al. (1997) J. Org. Chem. 62: 2847), N-acylpiperazine (See, e.g., Xi et al. (1998) J. Am. Chem. Soc., 120: 80) or a 2-substituted piperazine moiety (Williams et al. : 1345-1348)) can be introduced as the constrained amino acid analog. In other embodiments, some amino acid residues may be substituted with aryl and biaryl moieties, such as monocyclic or bicyclic aromatic or heteroaromatic nuclei, or aromatic, aromatic, heteroaromatic or heteroaromatic nuclei thereof.

유기 또는 무기 소분자: 일부 실시양태들에서, 화합물은 유기 또는 무기 소분자이다. 유기 또는 무기 소분자는 특정 단백질 또는 단백질 클래스의 기능을 작동시킬 수 있거나 길항할 수 있다. 유기 또는 무기 소분자는 5000 amu 미만, 바람직하게는 2500 amu 미만, 보다 바람직하게는 1500 amu 미만, 훨씬 더 바람직하게는 750, 500 또는 250 amu 미만의 분자량을 갖는 탄소 함유 분자를 의미한다. Organic or Inorganic Small Molecule : In some embodiments, the compound is an organic or inorganic small molecule. Organic or inorganic small molecules may be capable of or antagonizing the function of a particular protein or protein class. By organic or inorganic small molecule is meant a carbon containing molecule having a molecular weight of less than 5000 amu, preferably less than 2500 amu, more preferably less than 1500 amu, even more preferably less than 750, 500 or 250 amu.

유기 또는 무기 소분자는 유기 분자 및/또는 화합물의 라이브러리를 스크리닝하여 원하는 기능을 갖는 화합물을 확인함으로써 용이하게 확인될 수 있다. 대안적으로, 단일 화합물 또는 소수의 후보 화합물들을 개별적으로 또는 함께 스크리닝할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 소분자(예를 들면, 무기 또는 유기 분자)는 2개 이하 또는 1개 이하의 펩티드 및/또는 사카라이드 연결을 함유하거나 펩티드 및/또는 사카라이드 연결을 함유하지 않는 비펩티딜 화합물이다. Organic or inorganic small molecules can be easily identified by screening libraries of organic molecules and / or compounds to identify compounds having the desired function. Alternatively, a single compound or a small number of candidate compounds can be screened individually or together. In some embodiments, the small molecule (e.g., an inorganic or organic molecule) is a non-peptidyl compound that contains no more than two or no more than one peptide and / or saccharide linkage or no peptide and / or saccharide linkage to be.

RhoA의 소분자 억제제는 본 개시내용의 조성물에서 사용될 수 있는 소분자의 예이다. 여러 소분자 억제제가 상업적으로 입수될 수 있다. 이들은 그 자체가 약제로서 사용될 수 있거나 추가 소분자 RhoA 억제제를 발생시키기 위한 약품화학에 대한 출발점으로서 사용될 수 있다. Small molecule inhibitors of RhoA are examples of small molecules that can be used in the compositions of the present disclosure. Several small molecule inhibitors are commercially available. They may be used as medicines themselves or as starting points for drug chemistry to generate additional small molecule RhoA inhibitors.

(iv) 자가면역 병태(iv) autoimmune conditions

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물들 중 임의의 조성물을 사용하여 자가면역 병태를 진단하고 모니터링하고 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 개시내용의 조성물들 중 임의의 조성물이 본원에 기재된 자가면역 병태들 중 임의의 자가면역 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본원에서 제공된 방법은 특정 자가면역 병태를 갖는 대상체에서 마이크로RNA-31 발현과 IL-2 발현 사이의 상관관계에 기초한다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 SLE이거나, SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 또 다른 자가면역 병태이다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 발적 동안 또는 관해 기간 동안의 전신홍반루푸스(SLE)이다. 다른 실시양태에서, 자가면역 병태는 IL-2의 감소된 발현 및/또는 마이크로RNA-31의 감소된 발현과 상관관계를 갖는다. 일부 실시양태들에서, SLE의 증상 또는 징후는 루푸스 신장염을 포함한다.The present disclosure provides methods for diagnosing, monitoring and treating autoimmune conditions using any of the compositions of the present disclosure. Any of the compositions of the disclosure set forth herein may be used in a subject suspected of having or having any of the autoimmune conditions described herein. In some embodiments, the methods provided herein are based on a correlation between microRNA-31 expression and IL-2 expression in a subject having a particular autoimmune condition. In some embodiments, the autoimmune condition is an SLE or is associated with one or more features of SLE, such as, for example, a mechanism of action, pathogenesis, a correlation with IL-2 overexpression, or an error control of T cells, It is another autoimmune condition that shares a correlation with error control. In some embodiments, the autoimmune condition is systemic lupus erythematosus (SLE) during flare or during the remission period. In another embodiment, the autoimmune condition has a correlation with reduced expression of IL-2 and / or reduced expression of microRNA-31. In some embodiments, the symptoms or signs of SLE include lupus nephritis.

일부 실시양태들에서, 대상체는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 하나 이상의 특징을 공유하는, 예컨대, 작용 기작, 병인, IL-2 이상조절과의 상관관계 또는 T 세포의 오류조절, 특히 조절 T 세포의 오류조절과의 상관관계를 공유하는 병태를 갖는다. 일부 실시양태들에서, 다른 자가면역 병태는 류마티스성 관절염(RA), I형 당뇨병 또는 자가면역 갑상선 질환이다. 일부 실시양태들에서, 다른 자가면역 병태는 경피증이다. 일부 실시양태들에서, 자가면역 병태는 건강한 대상체에 비해 상대적으로 감소된 IL-2의 발현과 상관관계를 갖는다.In some embodiments, the subject is treated with another autoimmune condition, e. G., A mechanism of action, pathogenesis, which correlates with one or more characteristics, such as an SLE, Lt; RTI ID = 0.0 > of T < / RTI > cells. In some embodiments, the other autoimmune condition is rheumatoid arthritis (RA), type I diabetes or autoimmune thyroid disease. In some embodiments, the other autoimmune condition is scleroderma. In some embodiments, the autoimmune condition is correlated with the expression of relatively reduced IL-2 relative to a healthy subject.

이들 병태들의 증상을 포함하는 예시적 자가면역 병태는 후술되어 있다. 자가면역 병태를 위한 진단제 및 치료제를 평가하는 데에 사용되는 동물 모델의 몇몇 예도 제공되어 있다. 당분야에서 공지되어 있는 이들 또는 다른 동물 모델들은 진단 또는 치료 방법에서 사용되는 본 개시내용의 조성물을 개발하는 데에 사용될 수 있다. "치료하는"은 1회 이상의 투약 과정에 걸친 조성물의 투여가 상기 병태의 하나 이상의 증상을 감소시키거나 제거한다는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "증상"은 환자에 의해 또는 의학적 검사를 통해 직접적으로 관찰될 수 있는 병태의 징후 및 증상을 지칭하기 위해 널리 사용되고, 치료를 통해 완화될 수 있는 질환의 다운스트림 합병증도 지칭한다. Exemplary autoimmune conditions involving the symptoms of these conditions are described below. Several examples of animal models used to assess diagnostic and therapeutic agents for autoimmunity are also provided. These or other animal models known in the art can be used to develop compositions of the present disclosure for use in diagnostic or therapeutic methods. "Treating" means that administration of the composition over one or more dosing regimes reduces or eliminates one or more symptoms of the condition. As used herein, the term "symptom" is used broadly to refer to the signs and symptoms of conditions that can be directly observed by the patient or through medical examinations, and includes, but is not limited to, Quot;

전신홍반루푸스(SLE)Systemic lupus erythematosus (SLE)

종종 SLE로 약칭되는 전신홍반루푸스는 신체의 임의의 부분에 영향을 미칠 수 있는 전신 자가면역 병태이다. 이 질환은 적어도 부분적으로 항체-면역 복합체 형성에 의해 야기되는 III형 과민성 반응이다. Systemic lupus, often abbreviated as SLE, is a systemic autoimmune condition that can affect any part of the body. The disease is a type III hypersensitivity reaction caused, at least in part, by antibody-immune complex formation.

SLE는 심장, 관절, 피부, 폐, 혈관, 간, 신장 및 신경계를 가장 자주 손상시킨다. 관해와 번갈아가며 나타나는 아픈 기간(발적으로 지칭됨)을 갖는 상기 질환의 과정은 예측불가능하다. 상기 질환은 남성보다 여성에서, 특히 가임 여성에서 9배 더 자주 발생한다. SLE most commonly affects the heart, joints, skin, lungs, blood vessels, liver, kidneys and nervous system. The course of the disease with a painful period (referred to as a fever) that appears alternately with the remission is unpredictable. The disease occurs nine times more often in women than in men, especially in women with childbearing.

SLE에 대한 치유법은 현재 없고, 증상의 관리는 일반적으로 예컨대, 사이클로포스프아미드, 코르티코스테로이드 및 다른 면역억제제를 사용한 일반적인 면역억제의 이용으로 한정된다. There is currently no cure for SLE, and management of symptoms is generally limited to the use of general immunosuppression using, for example, cyclophosphamide, corticosteroids and other immunosuppressants.

SLE의 일반적인 증상은 관절염; 피로; 일반적인 불편한, 불안한 또는 불쾌한 감정(불안감); 관절 통증 및 팽윤; 근육통; 구역 및 구토; 및 피부 발진을 포함한다. 추가 증상은 복부 통증; 소변 중의 혈액; 압박 또는 냉각 시 색채를 변화시키는 손가락; 무감각 및 저림; 및 피부 상의 붉은 반점도 포함할 수 있다. 일부 환자들에서, SLE는 폐 또는 신장 침습을 갖는다. 몇몇 경우, SLE를 갖는 환자는 루푸스 신장염으로 지칭되는 특정 신장 병태를 발달시킨다. 본 개시내용은 필요로 하는 대상체가 이들 증상들 중 어느 하나 이상의 증상을 가질 수 있고 치료 이점이 이들 증상들 중 어느 하나 이상의 증상에서의 개선에 기초하여 측정될 수 있다는 것을 고려한다.Common symptoms of SLE include arthritis; fatigue; General uncomfortable, unstable or unpleasant emotions (anxiety); Joint pain and swelling; Muscle pain; Nausea and vomiting; And skin rash. Additional symptoms include abdominal pain; Blood in the urine; Fingers that change color when pressed or cooled; Numbness and numbness; And red spots on the skin. In some patients, SLE has lung or kidney involvement. In some cases, patients with SLE develop certain renal conditions, referred to as lupus nephritis. The present disclosure contemplates that the subject in need may have any one or more of these symptoms and the therapeutic benefit may be measured based on an improvement in one or more of these symptoms.

피부학적 발현증상Symptoms of dermatological manifestation

피부학적 증상은 매우 흔하고, 30% 내지 50%의 대상체들이 나비 발진으로도 공지되어 있는 고전적인 뺨 발진으로 고통받고 있다. 일부 환자들은 피부 상에 두꺼운 붉은 인설성 패취(scaly patche)(원판상 루스프로서 지칭됨)를 나타낼 수 있다. 다른 피부학적 발현증상은 탈모; 구강, 질, 비관 및/또는 뇨관의 궤양; 피부 병변; 및 눈 주변의 연약한 조직에서의 작은 인열을 포함한다. Dermatological symptoms are very common and 30% to 50% of subjects suffer from classic cheek rashes, also known as butterfly rashes. Some patients may exhibit a thick red scaly patche on the skin (referred to as discoid loose pros). Other dermatological manifestations include hair loss; Ulcers of the mouth, vagina, pituitary and / or urinary tract; Skin lesions; And small tears in soft tissue around the eyes.

근골격Musculoskeletal

관절 통증은 아픈 기간 동안 일정 시점에서 관절 및/또는 근육 통증을 호소하는 환자의 대략 90%의 환자가 갖는 SLE의 공통된 증상이다. 류마티스성 관절염과 SLE 사이의 가능한 관련성이 암시되었다.Joint pain is a common symptom of SLE in approximately 90% of patients who complain of joint and / or muscle pain at some point during the ill period. A possible association between rheumatoid arthritis and SLE was suggested.

혈액학적 발현증상Hematologic manifestation symptoms

SLE 환자의 최대 50%의 환자가 빈혈을 갖는다. 또한, SLE 환자는 혈청 중의 인지질에 대한 자가항체의 존재를 특징으로 하는 혈전 장애인 항인지질 항체 증후군의 증가된 발생을 갖는 것으로 보인다. 항인지질 항체 증후군의 특징은 연장된 부분적 트롬보플라스틴 시간 및 항인지질 항체에 대한 양성 시험을 포함하고, 이들 소견들의 발생은 "루프스 항응고제-양성"으로서 지칭된다.Up to 50% of patients with SLE have anemia. In addition, SLE patients appear to have an increased incidence of anti-phospholipid antibody syndrome, a thrombotic disorder characterized by the presence of autoantibodies to phospholipids in serum. Features of the anti-phospholipid antibody syndrome include prolonged partial thromboplastin time and positive tests for anti-phospholipid antibodies, and the occurrence of these findings is referred to as "loop anticoagulant-positive ".

심장Heart

SLE의 심장 증상은 심장막(심장막염), 심근(심근염) 및 심내막(심내막염)을 포함하는 심장의 일부의 염증을 포함한다. 죽상동맥경화증은 SLE 환자에서 가장 자주 발생하는 경향을 나타내고, 존재하는 경우 일반적인 집단에서 관찰되는 것보다 더 빨리 진행한다. Cardiac symptoms of SLE include inflammation of a portion of the heart, including the pericardium (myocarditis), myocardium (myocarditis), and the endocardium (endocarditis). Atherosclerosis shows the most frequent trends in SLE patients and progresses faster than is observed in the general population, if present.

폐lungs

SLE 환자들은 종종 폐 및 흉막 염증의 다양한 증상을 갖는다. 이러한 염증은 흉막염, 흉막 삼출, 루푸스 폐렴, 만성 확산성 간질 폐 질환, 폐 고혈압, 폐 색전증, 폐 출혈 및 수축 폐 증후군을 야기할 수 있다.SLE patients often have various symptoms of lung and pleural inflammation. Such inflammation can cause pleurisy, pleural effusion, lupus pneumonia, chronic diffuse interstitial lung disease, pulmonary hypertension, pulmonary embolism, pulmonary hemorrhage and constrictive pulmonary syndrome.

신장kidney

루푸스 신장염은 신장의 염증이고 전신홍반루푸스(SLE)의 심각한 합병증이다. SLE는 자연발생적 B 및 T 세포 자가반응성 및 다중장기 면역 손상을 특징으로 한다. 신장에서, 루푸스 신장염은 쇠약화 기능 손실을 유발할 수 있다. 루푸스 신장염을 갖는 환자는 궁극적으로 신부전을 발달시킬 수 있고 투석 또는 신장 이식을 필요로 할 수 있다.Lupus nephritis is a kidney inflammation and a serious complication of systemic lupus erythematosus (SLE). SLE is characterized by spontaneous B and T cell auto-reactivity and multiple long-term immune damage. In the kidney, lupus nephritis can cause a debilitating loss of function. Patients with lupus nephritis may ultimately develop renal failure and may require dialysis or kidney transplantation.

WHO는 루푸스 신장염을 생검 결과에 기초하여 5개의 클래스로 나누었다. 이 분류는 1982년에 정의되었고 1995년에 개정되었다. 클래스 I은 광학 현미경 상에서 조직학적으로 정상이지만 전자현미경 상에서 혈관사이 침착물을 갖는 최소 혈관사이 사구체신염이다. 클래스 II는 혈관사이 증식 루푸스 신장염의 발견에 기초한다. 클래스 III은 초점 증식 신장염이다. 클래스 IV는 확산성 증식 신장염이다. 클래스 V는 막 신장염이고 극도의 부종 및 단백질 손실을 특징으로 한다. 클래스 VI은 사구체경화증이다. 본 개시내용은 클래스 I, II, III, IV, V 및 VI 중 임의의 클래스로 분류된 루프스 신장염을 갖는 환자를 치료하는 것을 고려한다. 일부 실시양태들에서, 환자는 클래스 III 이상, 클래스 IV 이상 또는 클래스 V 이상으로 분류된 루푸스 신장염을 갖는다. 일부 실시양태들에서, 환자는 클래스 VI으로서 분류된 루푸스 신장염을 갖는다.WHO has divided lupus nephritis into five classes based on the biopsy results. This classification was defined in 1982 and revised in 1995. Class I is a minimally invasive glomerulonephritis with histologically normal but electron-microscopically intercalated deposits on the light microscope. Class II is based on the discovery of interstitial proliferative lupus nephritis. Class III is focal proliferative nephritis. Class IV is diffusible proliferative nephritis. Class V is a membrane nephritis and is characterized by extreme edema and protein loss. Class VI is glomerulosclerosis. The present disclosure contemplates treating patients with lupus nephritis classified as any class of Class I, II, III, IV, V and VI. In some embodiments, the patient has lupus nephritis classified as Class III or higher, Class IV or higher, or Class V or higher. In some embodiments, the patient has lupus nephritis classified as class VI.

루푸스 신장염의 증상은 소변 중의 혈액, 소변의 거품 외관, 높은 혈압, 소변 중의 단백질, 체액 보유 및 부종을 포함한다. 다른 증상은 신장 섬유증 및/또는 신부전의 징후 및 증상을 포함한다. 루푸스 신장염은 치료되지 않고 방치된 경우 신부전 및 심지어 말기 신장 질환을 유발할 수 있다.Symptoms of lupus nephritis include blood in the urine, bubble appearance in the urine, high blood pressure, protein in the urine, fluid retention and edema. Other conditions include signs and symptoms of renal fibrosis and / or renal failure. Lupus nephritis can cause kidney failure and even end-stage renal disease if left untreated.

루푸스 신장염은 혈액 또는 소변 검사뿐만 아니라 신장 생검을 이용함으로써 진단될 수 있고/있거나 모니터링될 수 있다. 이러한 검사는 치료 동안 또는 치료 후 증상의 개선을 모니터링하는 데에 이용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 치료는 이들 증상들 중 어느 하나 이상의 증상의 개선을 포함한다. 예를 들면, 루푸스 신장염은 소변 중의 혈액 및/또는 단백질 함량을 평가함으로써 진단될 수 있고/있거나 평가될 수 있다. 치료는 소변 중의 혈액 및/또는 단백질 함량을 예컨대, 정상 수준 또는 정상에 가까운 수준으로 감소시키는 것을 포함할 수 있다. 또한, 루푸스 신장염은 혈액 중의 크레아티닌 및/또는 우레아 수준을 평가함으로써, 및/또는 크레아티닌 점수에 기초한 사구체 여과 속도의 추정치에 의해 진단될 수 있고/있거나 평가될 수 있다. Lupus nephritis can be diagnosed and / or monitored using renal biopsy as well as blood or urine tests. Such tests can be used to monitor the improvement of symptoms during or after treatment. In some embodiments, the treatment comprises amelioration of any one or more of these symptoms. For example, lupus nephritis can be diagnosed and / or evaluated by assessing blood and / or protein content in the urine. Treatment may include reducing blood and / or protein content in the urine, for example, to a normal or near normal level. In addition, lupus nephritis can be diagnosed and / or assessed by assessing creatinine and / or urea levels in the blood, and / or estimates of glomerular filtration rate based on creatinine score.

신경정신질환적 발현증상Neuropsychiatric manifestation symptoms

미국 류마티스 학회는 전신홍반루푸스에서 19개의 신경정신질환적 증상을 정의하고, 이들은 중추신경계 및 말초신경계에 대한 영향으로 인해 발생할 수 있다. SLE 환자에서 가장 흔한 신경정신질환적 장애는 두통이다. 다른 흔한 증상은 인지 기능장애, 기분 장애, 뇌혈관, 발작, 다발신경병증, 불안 장애 및 정신병을 포함한다. 덜 흔하게 관찰되는 추가 증상은 급성 착란, 귈랭-바레 증후군, 무균 수막염, 자율신경 장애, 탈수초 증후군, 단일신경병증, 무도병, 중증근육무력증, 골수병증, 두개 신경병증 및 신경얼기병증을 포함한다.The American Society of Rheumatology defines 19 neuropsychiatric symptoms in systemic lupus erythematosus, which can occur due to effects on the central nervous system and peripheral nervous system. The most common neuropsychiatric disorder in SLE patients is headache. Other common symptoms include cognitive dysfunction, mood disorders, cerebrovascular events, seizures, multiple neuropathy, anxiety disorders and psychosis. Additional symptoms that are less common include acute confusion, Guillain-Barré syndrome, aphthous meningitis, autonomic dysfunction, dehydration syndrome, mononeuropathy, chorea, severe muscular atrophy, myelopathy, cranial neuropathy, and neuroleptics.

신경학적 발현증상Neurological manifestation symptoms

신경 증상은 SLE의 상당한 이환율 및 사망률을 나타낸다. 루푸스의 신경 발현증상은 신경정신질환적 전신홍반루푸스(NPSLE)로서 공지되어 있다. 이의 한 양태는 혈액-뇌 장벽의 상피세포에 대한 심각한 손상이다.Neurological symptoms represent a significant morbidity and mortality of SLE. Symptoms of neurological manifestations of lupus are known as neuropsychiatric systemic lupus erythematosus (NPSLE). This is a serious injury to the epithelial cells of the blood-brain barrier.

전신 발현증상Symptom of systemic manifestation

SLE의 가장 흔한 전신 증상은 피로이다. 피로는 빈혈, 갑상선기능저하증, 통증, 우울증, 수면 불량 및 질환 활성을 비롯한 다양한 요인들로 인한 것일 수 있다.The most common systemic symptom of SLE is fatigue. Fatigue can be due to a variety of factors including anemia, hypothyroidism, pain, depression, poor sleep and disease activity.

미국 류마티스 학회는 임상 시험에서 SLE의 정의를 분류하고 연산화하는 데에 사용되는 11개의 기준을 확립하였다. 이 분류 시스템은 개별 진단 체계로서 사용되기 위한 것이 아니었고, 오히려 임상 연구에서 사용되기 위한 것이었다. 임상 연구를 위해 환자를 확인하기 위한 목적으로, 하기 11개 증상들 중 임의의 4개 증상이 두 차례에 걸쳐 동시적으로 또는 연속적으로 제시되는 경우 그 사람은 SLE를 갖는다: 뺨 발진; 원판상 발진; 장막염 또는 심장막염; (구강 또는 코인두를 비롯한) 구강 궤양; 관절염(특히, 2개 이상의 말초 관절의 비미란성 관절염); 감광성; 혈액 장애, 특히 용혈성 빈혈, 백혈구감소증, 림프구감소증 또는 혈소판감소증; 신장 장애, 특히 소변 중의 단백질 또는 세포 원주; 양성 항핵 항체 검사; 면역학적 장애, 특히 양성 항-스미쓰, 항-이중가닥 DNA 또는 항인지질 검사; 및 신경학적 장애, 특히 발작 또는 정신병.The American College of Rheumatology has established 11 criteria that are used to classify and compute the definition of SLE in clinical trials. This classification system was not intended to be used as an individual diagnostic system, but rather to be used in clinical studies. For the purpose of identifying patients for clinical studies, if any of the following 11 symptoms are presented simultaneously or sequentially two times, the person has SLE: cheek rash; Circular plate rash; Serosa or pericarditis; Oral ulcers (including mouth or coin); Arthritis (especially, non-erosive arthritis of two or more peripheral joints); Photosensitivity; Blood disorders, particularly hemolytic anemia, leukopenia, lymphocytopenia or thrombocytopenia; Kidney disorders, in particular protein or cellular periphery in the urine; A positive ANA test; Immunological disorders, particularly positive anti-smith, anti-double stranded DNA or anti-phospholipid test; And neurological disorders, particularly seizures or psychoses.

개별 환자들을 진단할 때, 보다 총체적인 방법이 이용된다. 예를 들면, 항인지질 증후군을 갖는 일부 사람들은 상기 기준들 중 4개 기준을 충족시키지 않고도 SLE를 가질 수 있다. 더욱이, SLE는 상기 기준에 나열된 증상 및 특징 이외의 증상 및 특징을 제시할 수 있다.When diagnosing individual patients, a more holistic approach is used. For example, some people with anti-phospholipid syndrome may have SLE without meeting four of the above criteria. Furthermore, the SLE may present symptoms and characteristics other than those listed in the above criteria.

SLE 환자들에 대한 삶의 질은 발적 예방을 통해 개선될 수 있다. 임박한 발적의 경고 징후는 증가된 피로, 통증, 발진, 발열, 복강 불쾌감, 두통 및 현기증을 포함한다. 경고 징후의 초기 인지 및 의사와의 우수한 소통은 개체가 활동성을 유지하고 통증을 덜 경험하고 의료 방문을 감소시키는 데에 도움을 줄 수 있다. Quality of life for SLE patients can be improved through prevention of fever. Signs of warning of impending fever include increased fatigue, pain, rash, fever, abdominal discomfort, headache and dizziness. Early recognition of warning signs and good communication with physicians can help individuals maintain activity, experience less pain, and reduce medical visits.

SLE에 대한 현행 치료법은 발적의 예방, 및 발적의 중증도 및 지속시간의 감소뿐만 아니라 개별 증상의 관리도 포함한다. 치료는 코르티코스테로이드, 항-말라리아 약물 및 비스테로이드성 소염 약물을 포함할 수 있다. 일부 유형의 루푸스 신장염은 수차례의 세포독성 약물(사이클로포스프아미드 및 마이코페놀레이트를 포함함)을 필요로 한다.Current treatments for SLE include prevention of flares, and management of individual symptoms as well as reduction of severity and duration of flares. Treatment may include corticosteroids, anti-malaria drugs and non-steroidal anti-inflammatory drugs. Some types of lupus nephritis require several cytotoxic drugs (including cyclophosphamide and mycophenolate).

질환 변경 항류마티스 약물(DMARD)도 발적률 및 질환의 경과를 감소시키고 스테로이드 사용에 대한 필요성을 낮추는 데에 사용될 수 있다. 통상적으로 사용되는 DMARD는 항말라리아 약물, 예컨대, 플라쿠에닐(plaquenil), 및 면역억제제, 예컨대, 메토트렉세이트(methotexate) 및 아자티오프린(azathioprine)이다.Disease alterations Anti-rheumatic drugs (DMARDs) may also be used to reduce the rate of eruption and progression of the disease and to reduce the need for steroid use. Commonly used DMARDs are anti-malarial drugs such as plaquenil, and immunosuppressants such as methotexate and azathioprine.

코르티코스테로이드 및 면역억제제도 질환을 제어하고 발적을 예방하는 데에 사용된다. 그러나, 스테로이드의 사용은 쿠싱 증후군 및 다른 부작용을 초래할 수 있다. Corticosteroids and immunosuppressants are also used to control disease and prevent redness. However, the use of steroids can lead to Cushing's syndrome and other side effects.

SLE를 갖는 대부분의 사람들이 다양한 정도의 만성 통증을 앓고 있기 때문에, 통증을 관리하기 위한 다양한 유형의 약물이 종종 사용된다. 통증 관리는 전형적으로 처방전 없이 구입할 수 있는 약물, 예컨대, 비스테로이드성 소염제로 시작된다. 그러나, 중간 내지 심한 통증을 관리하기 위해, 약한 또는 강한 오피에이트가 필요할 수 있다.Because most people with SLE suffer from varying degrees of chronic pain, various types of drugs are often used to manage pain. Pain management typically begins with prescription-free drugs, such as non-steroidal anti-inflammatory drugs. However, to manage moderate to severe pain, a weak or strong opiate may be needed.

일부 실시양태들에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 조성물을 투여함으로써 SLE를 갖는 개체에서 SLE를 치료하고/하거나 IL-2 수준을 증가시키는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 조성물의 투여는 SLE의 하나 이상의 증상을 감소시키고/시키거나 발적의 빈도 또는 중증도를 감소시키는 데에 사용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물의 투여는 루푸스 신장염을 갖는 환자에서 SLE를 치료하는 데에 사용된다. 이러한 경우, SLE의 치료는 예컨대, 루푸스 신장염의 증상을 감소시킴으로써 루푸스 신장염을 치료하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태들에서, 치료는 SLE의 피부 증상을 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 치료는 루푸스 신장염의 하나 이상의 증상을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 치료는 투석에 대한 필요성을 감소시키거나, 지연시키거나 제거하는 것을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 치료는 신장 이식에 대한 필요성을 감소시키거나, 지연시키거나 제거하는 것을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 치료는 신부전 또는 말기 신장 질환으로의 루푸스 신장염의 진행을 지연시키거나 예방하는 것을 포함한다.In some embodiments, the disclosure provides methods of treating SLE and / or increasing IL-2 levels in an individual having SLE by administering an effective amount of a composition of the present disclosure. Administration of the compositions of the present disclosure may be used to reduce one or more symptoms of SLE and / or to reduce the frequency or severity of flares. In some embodiments, administration of the composition of the present disclosure is used to treat SLE in a patient with lupus nephritis. In such cases, treatment of SLE may include treating, for example, lupus nephritis by reducing the symptoms of lupus nephritis. In some embodiments, the treatment comprises treating a skin condition of SLE. In some embodiments, the treatment comprises reducing one or more symptoms of lupus nephritis. In some embodiments, the treatment includes reducing, delaying, or eliminating the need for dialysis. In some embodiments, the treatment includes reducing, delaying, or eliminating the need for kidney transplantation. In some embodiments, the treatment comprises delaying or preventing the progression of lupus nephritis to renal or end-stage renal disease.

본 발명은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 약물, 생물학적 약물 또는 다른 치료 방법과 조합되는 치료 요법의 일부로서 본 개시내용의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 SLE의 치료(루푸스 신장염의 치료를 포함함) 방법을 고려한다. 치료 요법의 일부로서 선택된 상기 다른 방법은 환자의 질환의 중증도 및 일차적으로 표적화되는 구체적인 증상에 따라 선택될 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 (예를 들면, 관절염 또는 다른 증상과 관련된 통증을 완화하는 것을 돕기 위한) 진통제 또는 다른 통증 관리 약물, 소염 약물, 스테로이드, 면역억제제, 항말라리아제 및 세포독성제 중 하나 이상과 함께 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 함께 사용될 수 있는 약제 및 치료 방법의 추가 예는 식이요법, 운동, 스트레스 관리, 침술 및 물리 치료를 포함한다. 다른 구체적인 예로는 루푸스 신장염의 증상을 완화하는 데에 특이적인 약제 및 치료, 예컨대, 혈압 강하 약물, 단백질, 칼륨 및/또는 나트륨 감소된 식이요법, 세포독성제 및/또는 면역억제제의 사용을 포함한다. 치료 방법은 투석, 신장 이식, 또는 신부전에 대한 하나 이상의 다른 치료와 함께 치료를 포함한다.The present invention provides a method of treating (including the treatment of Lupus Nephritis) comprising administering a composition of the present disclosure, either alone or as part of a therapeutic regimen in combination with one or more other drugs, biological drugs or other therapeutic methods . The other methods selected as part of the therapeutic regimen can be selected according to the severity of the patient ' s disease and the specific symptoms that are primarily targeted. For example, in some embodiments, the composition of the present disclosure may be used as an analgesic or other pain management drug, anti-inflammatory drug, steroid, immunosuppressant, anti-inflammatory, anti-inflammatory, May be administered as part of a therapeutic regimen with one or more of an anti-malaria agent and a cytotoxic agent. Additional examples of medicaments and methods of treatment that may be used together include dieting, exercise, stress management, acupuncture and physical therapy. Other specific examples include the use of drugs and treatments specific for relieving the symptoms of lupus nephritis, such as hypotensive drugs, protein, potassium and / or sodium reduced diet, cytotoxic agents and / or immunosuppressive agents . Treatment methods include treatment with one or more other treatments for dialysis, kidney transplantation, or renal failure.

질환 증상은 동물 모델에서 재현될 수 있고, 이러한 모델은 치료 또는 병용 치료의 효과를 확인하는 데에 용이하게 사용될 수 있다. 이를 위해, 많은 뮤린 모델들이 개발되었다(Foster, Relevance of Systemic Lupus Erythematosus Nepthritis Animal Models to Human Disease. Semin Nephrol. 1999, 19(1): 12-24). 모델은 숙주-이식편 상호작용(Bruijn et al., Murine Chronic Graft-Versus-Host Disease as a Model for Lupus Nephritis. Am J Pathol., 1988, 130(3): 639-641), 형질전환 마우스(Takahashi et al., Suppression of Experimental Lupus Nephritis by Aberrant Expression of the Soluble E-Selectin Gene. Pathology International, 2002, 52(3):175-180), 및 항-DNA 항체(Yung and Chan, Anti-DNA Antibodies in the Pathogenesis of Lupus Nephritis - The Emerging Mechanisms. Autoimmunity Reviews, 2008, 7(4): 317-321)를 사용한다. 이들 및 다른 이용가능한 동물 모델은 진단제 또는 치료제를 개발하는 과정에서 사용될 수 있다. 또한, 시험관내 시스템, 예컨대, SLE로 이미 진단된 대상체로부터의 혈액 및 조직 샘플이 사용될 수 있다. 예시적 조직 샘플은 혈액 샘플, 골수 샘플, 및 혈액 샘플로부터의 T 세포의 분리 후 발생된 T 세포의 배양물을 포함한다. Disease symptoms can be reproduced in animal models, and such models can be readily used to confirm the effectiveness of treatment or combination therapy. To this end, many murine models have been developed (Foster, Relevance of Systemic Lupus Erythematosus Nepthritis Animal Models to Human Disease, Semin Nephrol 1999, 19 (1): 12-24). Models have been used for host-graft interactions (Bruijn et al., Murine Chronic Graft-Versus-Host Disease as a Model for Lupus Nephritis. Am J Pathol., 1988, 130 (3): 639-641) Pathogen International, 2002, 52 (3): 175-180), and anti-DNA antibodies (Yung and Chan, Anti-DNA Antibodies in The Pathogenesis of Lupus Nephritis - The Emerging Mechanisms. Autoimmunity Reviews, 2008, 7 (4): 317-321). These and other available animal models may be used in the course of developing diagnostic or therapeutic agents. Blood and tissue samples from subjects already diagnosed with an in vitro system, such as SLE, may also be used. An exemplary tissue sample comprises a blood sample, a bone marrow sample, and a culture of T cells generated after separation of the T cells from the blood sample.

1형 당뇨병Type 1 diabetes

1형 진성 당뇨병(1형 당뇨병, IDDM, 또는 이전에 소아 당뇨병)은 췌장의 인슐린 생성 베타 세포의 자가면역 파괴로부터 발생되는 진성 당뇨병의 한 형태이다. 인슐린의 후속 결여는 증가된 혈액 및 소변 글루코스를 유발한다. 고전적인 증상은 다뇨증, 다음증, 다식증 및 체중 손실이다. Type 1 diabetes mellitus (Type 1 diabetes, IDDM, or previously childhood diabetes) is a form of diabetes mellitus that results from autoimmune destruction of insulin-producing beta cells in the pancreas. Subsequent lack of insulin causes increased blood and urine glucose. The classic symptoms are polyuria, vomiting, bulimia and weight loss.

현재, 1형 당뇨병은 일반적으로 인슐린으로 치료받지 않으면 치명적이고, 이러한 치료는 환자의 수명 전체에 걸쳐 계속되어야 한다. 치료받은 경우조차도, 발작, 무의식, 및 말초 신경 및 혈관에 대한 장기간 손상을 비롯한 낮은 및 높은 혈당의 합병증이 발생할 수 있다.Currently, type 1 diabetes is generally fatal if not treated with insulin, and such treatment should continue throughout the life of the patient. Even if treated, low and high blood sugar complications can occur, including seizures, unconsciousness, and long-term damage to the peripheral nerves and blood vessels.

일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 1형 당뇨병을 갖는 대상체에서 1형 당뇨병을 치료하고/하거나 IL-2 발현을 증가시키는 데에 사용될 수 있다. 이론에 의해 구속받지 않지만, 이러한 조성물의 사용은 췌장 세포에 대한 자가면역 공격을 저지하는 것을 도와 외생성 인슐린에 대한 의존성을 감소시키거나 제거하는 데에 도움을 줄 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 인슐린과 함께 사용되지만, 이러한 조성물의 사용은 인슐린 주사가 요구되는 빈도를 감소시키고/시키거나 환자 혈당 수준에서 스파이크스/딥스(spikes/dips)의 크기를 감소시킨다.In some embodiments, the compositions of the present disclosure can be used to treat type 1 diabetes and / or to increase IL-2 expression in a subject with type 1 diabetes. Without being bound by theory, the use of such compositions can help prevent autoimmune attack on pancreatic cells and help reduce or eliminate dependence on exogenous insulin. In some embodiments, the composition of the present disclosure is used with insulin, however, the use of such a composition may reduce the frequency with which insulin injections are required and / or reduce the size of the spikes / dips .

질환 증상은 동물 모델에서 재현될 수 있고, 이러한 모델은 치료 또는 병용 치료의 효과를 확인하는 데에 용이하게 사용된다. 다수의 1형 당뇨병 동물 모델들이 존재하고, 많은 이러한 이용가능한 모델들이 최근 논평에 요약되어 있다(Rees (2005) Diabetic Medicine 22: 359-370).Disease symptoms can be reproduced in animal models, and these models are readily used to confirm the effectiveness of treatment or combination therapy. There are a number of models of type 1 diabetic animals, and many such available models are summarized in a recent commentary (Rees (2005) Diabetic Medicine 22: 359-370).

류마티스성 관절염Rheumatoid arthritis

류마티스성 관절염은 신체의 임의의 부분에서 관절에 영향을 미칠 수 있지만 가장 흔하게는 손, 손목 및 무릎에 영향을 미칠 수 있는 장기 지속 질환이다. 류마티스성 관절염의 경우, 면역 시스템은 그 자신을 잘못 공격하여 관절 내층이 팽윤되게 한다. 그 후, 염증이 주변 조직으로 퍼지고 궁극적으로 연골 및 골을 손상시킬 수 있다. 보다 심각한 경우, 류마티스성 관절염은 신체의 다른 영역, 예컨대, 피부, 눈 및 신경에 영향을 미칠 수 있다.Rheumatoid arthritis is a long-lasting disease that can affect joints in any part of the body, but most commonly can affect hands, wrists, and knees. In the case of rheumatoid arthritis, the immune system erroneously attacks itself and causes the inner layer of the joint to swell. Inflammation can then spread to surrounding tissues and ultimately damage cartilage and bone. In more serious cases, rheumatoid arthritis can affect other areas of the body, such as skin, eyes and nerves.

류마티스성 관절염의 증상은 피로, 발열, 발진, 관절 염증, 통증, 영향받은 관절 주변의 압통, 경직, 영향받은 관절 주변의 붉음 및 온기, 및 감소된 운동 범위를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.Symptoms of rheumatoid arthritis include, but are not limited to, fatigue, fever, rash, joint inflammation, pain, tenderness around the affected joint, stiffness, redness and warmth around the affected joint, and reduced range of motion.

류마티스성 관절염은 임의의 연령에서 발생할 수 있지만, 통상적으로 25세 내지 55세에서 관찰된다. 남성보다 여성에서 2배 내지 3배 더 흔하다. 류마티스성 관절염은 미국에서만 2백10만 명의 사람들에게 영향을 미치는, 관절염의 두 번째로 가장 흔한 형태이다. Rheumatoid arthritis can occur at any age, but is usually observed at age 25 to 55 years. It is two to three times more common in women than in men. Rheumatoid arthritis is the second most common form of arthritis, affecting only 2.1 million people in the United States.

근육이 약화되고 힘줄이 수축하고 골의 단부가 손상되기 때문에 일부 사람들에서 류마티스성 관절염은 손 및 발의 기형을 야기할 수 있다. 현재 치료는 통증, 관절 팽윤 및 염증을 감소시키기 위한 약물을 포함한다. 이들 약물은 염증 반응을 전신적으로 약화시키기 위한 비스테로이드성 소염 약물, 코르티코스테로이드, 항유사분열제(메토트렉세이트 및 사이클로포스프아미드) 및 항-TNFα 약물을 포함한다. 추가 치료는 근육 강도 및 운동 범위를 유지하는 것을 도와 질환의 불능화 효과를 늦추기 위한 식이요법, 운동, 및 물리 치료를 포함한다.In some people, rheumatoid arthritis can cause malformations of the hands and feet because the muscles are weakened and tendons contract and the ends of the bones are damaged. Current therapies include drugs to reduce pain, joint swelling and inflammation. These drugs include non-steroidal anti-inflammatory drugs, corticosteroids, anti-mitotic agents (methotrexate and cyclophosphamide) and anti-TNFa drugs to systemically weaken the inflammatory response. Additional therapies include diet, exercise, and physical therapy to help maintain muscle strength and range of motion and to slow down the disabling effect of the disease.

본 개시내용의 방법은 류마티스성 관절염을 갖는 환자에서 류마티스성 관절염을 치료하고/하거나 IL-2 발현을 증가시키는 데에 이용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 류마티스성 관절염의 하나 이상의 증상을 감소시키는 데에 이용된다. 즉, "치료"는 류마티스성 관절염의 하나 이상의 증상을 감소시키거나 제거하는 것을 포함하기 위한 것이다. 더욱이, 본 개시내용은 본 개시내용의 조성물이 단독으로 투여될 수 있거나 류마티스성 관절염의 하나 이상의 증상을 감소시키는 데에 유용한 다른 약제와 함께 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 조성물은 진통제, 소염제, 및 류마티스성 관절염 생물학적 약제(예를 들면, 후미라, 심포니, 레미케이드 등)와 함께 사용될 수 있다.The methods of this disclosure can be used to treat rheumatoid arthritis and / or to increase IL-2 expression in patients with rheumatoid arthritis. In some embodiments, the methods of the present disclosure are used to reduce one or more symptoms of rheumatoid arthritis. That is, "treatment" is intended to include reducing or eliminating one or more symptoms of rheumatoid arthritis. Moreover, the present disclosure may be administered as part of a therapeutic regimen together with other medicaments which are useful for the composition of the present disclosure to be administered alone or to reduce one or more symptoms of rheumatoid arthritis. For example, the compositions of the present disclosure may be used with analgesics, anti-inflammatory agents, and rheumatoid arthritis biological agents (e.g., fumira, symphony, Remicade, etc.).

질환 증상은 동물 모델에서 재현될 수 있고, 이러한 모델은 치료 또는 병용 치료의 효과를 확인하는 데에 용이하게 사용된다. 다수의 류마티스성 관절염 동물 모델들이 당분야에 존재한다. 비한정적 예를 들면, 바이오메드코드 헬라스 에스에이(BioMedCode Hellas SA)는 염증 병태에 대한 동물 모델을 만든다. 많은 회사의 모델들이 RA에 대한 잠재적 치료를 시험하도록 FDA에 의해 승인되어 있다. 이들의 모델들은 Tg197 및 Tg5433 마우스를 포함한다.Disease symptoms can be reproduced in animal models, and these models are readily used to confirm the effectiveness of treatment or combination therapy. A number of rheumatoid arthritis animal models exist in the art. As a non-limiting example, BioMedCode Hellas SA creates animal models for inflammation. Many company models have been approved by the FDA to test potential treatments for RA. These models include Tg197 and Tg5433 mice.

관절염 및 류마티스성 관절염의 추가 동물 모델은 하기 문헌들에 기재된 모델들을 포함하나 이들로 한정되지 않는다: 문헌(Hammer et al., 1990, Cell 63: 1099-1112); 문헌(Haqqi et al., 1992, PNAS 89: 1253-1255); 문헌(Keffer et al., 1991, EMBO Journal 10: 4025-4031); 문헌(Pelletier et al., 1997, Arthritis Rheum 40: 1012-1029); 문헌(Trentham et al., 1977, Journal of Experimental Medicine 146: 857-868); 및 문헌(Wooley et al., 1981, Journal of Experimental Medicine 154: 688-700). 최근에, 비나(Bina) 및 윌더(Wilder)는 류마티스성 관절염에 대한 다수의 이용가능한 동물 모델들을 검토하였다(Bina and Wilder, 1999, Molecular Medicine Today 5: 367-369).Additional animal models of arthritis and rheumatoid arthritis include, but are not limited to, the models described in the following documents: Hammer et al., 1990, Cell 63: 1099-1112; Haqqi et al., 1992, PNAS 89: 1253-1255); (Keffer et al., 1991, EMBO Journal 10: 4025-4031); (Pelletier et al., 1997, Arthritis Rheum 40: 1012-1029); (Trentham et al., 1977, Journal of Experimental Medicine 146: 857-868); And Wooley et al., 1981, Journal of Experimental Medicine 154: 688-700). Recently, Bina and Wilder reviewed a number of available animal models for rheumatoid arthritis (Bina and Wilder, 1999, Molecular Medicine Today 5: 367-369).

자가면역 갑상선 질환Autoimmune thyroid disease

자가면역 갑상선 질환, 예컨대, 하시모토 갑상선염 또는 만성 림프구성 갑상선염으로도 공지되어 있는 자가면역 갑상선염은 면역 시스템이 신체 자신의 갑상선 샘을 공격하는 병태이다. 목의 전면에 위치하는 작은 샘인 갑상선 샘에서 만성적으로 염증이 생기게 되고 갑상선 호르몬인 트라이요오도티로닌 및 티록신의 생성이 감소된다. 이들 호르몬들이 신체의 거의 모든 곳에서 사용되기 때문에, 자가면역 갑상선 질환은 널리 퍼진 심각한 효과 및 많은 증상을 가질 수 있다.Autoimmune thyroid disease, also known as autoimmune thyroid disease, such as Hashimoto thyroiditis or chronic lymphocytic thyroiditis, is a condition in which the immune system attacks the body's own thyroid gland. Chronic inflammation of the thyroid gland, a small gland located in the front of the neck, reduces the production of the thyroid hormones triiodothyronine and thyroxine. Because these hormones are used almost everywhere in the body, autoimmune thyroid disease can have widespread serious effects and many symptoms.

약한 자가면역 갑상선염은 무증상일 수 있다. 그러나, 보다 심각한 경우, 갑상선의 염증은 비대(갑상선종)를 유발할 수 있다. 시간의 경과에 따라, 갑상선은 보다 많이 손상되어 갑상선기능저하증(과소활성 갑상선), 예컨대, 피로, 체중 증가, 신체 통증, 우울증 및 기면증을 유발할 수 있다. 만성 자가면역 갑상선 질환은 상당한 갑상선기능저하증으로 진행할 수 있다.Weak autoimmune thyroiditis can be asymptomatic. However, in more severe cases, inflammation of the thyroid gland may cause hypertrophy (goiter). Over time, the thyroid gland may be more damaged and can cause hypothyroidism (hypoactive thyroid), such as fatigue, weight gain, body pain, depression and narcolepsy. Chronic autoimmune thyroid disease can progress to considerable hypothyroidism.

자가면역 갑상선 질환(AITD)의 분류는 하시모토 갑상선염(HT) 또는 만성 자가면역 갑상선염 및 이의 변이체, 그레이브스병(GD) 및 자가면역 위축성 갑상선염을 포함한다. HT는 갑상선종, 갑상선 퍼록시다제(TPO)에 대한 갑상선 자가항체 및 혈청 중의 티로글로불린(Tg), 및 다양한 정도의 갑상선 기능장애의 존재를 특징으로 한다. HT 동안, 자가 반응성 CD4+ T 림프구(Th)는 B 세포 및 CD8+ T 세포(CTL)를 갑상선 내로 동원한다. 질환 진행은 갑상선 세포의 사멸 및 갑상선기능저하증을 유발한다. Classification of autoimmune thyroid disease (AITD) includes Hashimoto thyroiditis (HT) or chronic autoimmune thyroiditis and its variants, Graves' disease (GD) and autoimmune atrophy thyroiditis. HT is characterized by the presence of thyroid gland, thyroid autoantibodies to thyroid peroxidase (TPO), thyroglobulin (Tg) in serum, and various degrees of thyroid dysfunction. During HT, autoreactive CD4 + T lymphocytes (Th) mobilize B cells and CD8 + T cells (CTL) into the thyroid. Disease progression leads to death of thyroid cells and hypothyroidism.

자가항체 및 갑상선 특이적 세포독성 T 림프구(CTL) 둘다가 자가면역 갑상선 세포 고갈의 원인인 것으로 제안되었다. GD에서, TSH-R은 가장 중요한 자가항체이다. 이것에 대해 유도된 항체는 갑상선 세포에 대한 호르몬의 효과를 모방하여 티록신 및 트라이요오도티로닌의 자율 생성을 자극하고 갑상선기능항진증을 야기한다.Both autoantibodies and thyroid-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) have been suggested to be responsible for the depletion of autoimmune thyroid cells. In GD, TSH-R is the most important autoantibody. Antibodies directed against it stimulate autonomous production of thyroxine and triiodothyronine by mimicking the effects of hormones on thyroid cells and cause hyperthyroidism.

본 개시내용의 방법은 자가면역 갑상선 질환을 갖는 환자에서 자가면역 갑상선 질환을 치료하고/하거나 IL-2 발현을 증가시키는 데에 사용될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 자가면역 갑상선 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키는 데에 사용된다. 즉, "치료"는 자가면역 갑상선 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키거나 제거하는 것을 포함하기 위한 것이다. 더욱이, 본 개시내용은 본 개시내용의 조성물이 단독으로 투여될 수 있거나 자가면역 갑상선 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키는 데에 유용한 다른 약제와 함께 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다는 것을 고려한다.The methods of this disclosure can be used to treat autoimmune thyroid disease and / or to increase IL-2 expression in patients with autoimmune thyroid disease. In some embodiments, the methods of the disclosure are used to reduce one or more symptoms of autoimmune thyroid disease. Thus, "treatment" is intended to include reducing or eliminating one or more symptoms of autoimmune thyroid disease. Moreover, the present disclosure contemplates that the compositions of the present disclosure may be administered alone or as part of a therapeutic regimen together with other medicaments useful for reducing one or more symptoms of autoimmune thyroid disease.

질환 증상은 동물 모델에서 재현될 수 있고, 이러한 모델은 치료 또는 병용 치료의 효과를 확인하는 데에 용이하게 사용된다. 2종의 예시적 마우스 모델들이 문헌(Volpe et al., 1993, Horm Metab Res 25: 623-627)에 기재되어 있다.Disease symptoms can be reproduced in animal models, and these models are readily used to confirm the effectiveness of treatment or combination therapy. Two exemplary mouse models are described in the literature (Volpe et al., 1993, Horm Metab Res 25: 623-627).

경피증Scleroderma

경피증은 섬유증, 혈관 변경 및 자가항체를 특징으로 하는 만성 자가면역 질환이다. 2종의 주요 형태가 존재한다: 한정된 전신 경피증 및 확산성 전신 경피증. 한정된 전신 경피증의 피부 증상은 손, 팔 및 안면에 영향을 미친다. 이 형태의 경피증을 갖는 환자는 종종 하기 합병증들 중 하나 이상을 갖는다: 석회증, 레이나우드 현상, 식도 기능장애, 가락피부경화증, 및 모세관확장증.Scleroderma is a chronic autoimmune disease characterized by fibrosis, vascular changes and autoantibodies. There are two main types: limited systemic sclerosis and diffuse systemic scleroderma. Skin symptoms of limited systemic scleroderma affect the hands, arms and face. Patients with this type of scleroderma often have one or more of the following complications: lachrymia, Raynaud's phenomenon, esophageal dysfunction, rhabdomyosarcoma, and capillary dilatation.

확산성 전신 경피증은 신속히 진행하고 피부의 큰 영역 및 하나 이상의 내부 장기, 종종 신장, 식도, 심장 및/또는 폐에 영향을 미친다.Diffuse systemic sclerosis progresses rapidly and affects large areas of the skin and one or more internal organs, often the kidneys, esophagus, heart and / or lungs.

경피증은 모든 장기에서 소동맥으로서 공지된 작은 혈관에 영향을 미친다. 먼저, 소동맥의 내피 세포가 평활근 세포와 함께 아폽토시스적으로 사멸한다. 이들 세포들은 콜라겐 및 다른 섬유성 물질로 대체된다. 염증 세포, 특히 CD4+ 헬퍼 T 세포는 소동맥을 침윤하여 추가 손상을 야기한다. Scleroderma affects small blood vessels known as small arteries in all organs. First, the endothelial cells of the small arteries die apoptoticly with the smooth muscle cells. These cells are replaced by collagen and other fibrous materials. Inflammatory cells, particularly CD4 + helper T cells, infiltrate the small artery and cause further damage.

경피증의 피부 발현증상은 아플 수 있고, 영향받은 영역의 사용(예를 들면, 손, 손가락, 발가락, 발 등의 사용)을 손상시킬 수 있고 외관을 손상시킬 수 있다. 피부 궤양형성이 일어날 수 있고, 이러한 궤양은 감염 또는 심지어 괴저에 민감할 수 있다. 궤양이 형성된 피부는 치유하기 어려울 수 있거나 치유가 느릴 수 있다. 피부 궤양형성을 치유하는 데에 있어서 어려움은 특히 손상된 순환계를 갖는 환자, 예컨대, 레이나우드 현상을 갖는 환자에서 악화될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 환자에서 경피증, 예를 들면, 경피증의 피부 증상을 치료하고/하거나 IL-2 발현을 증가시키는 데에 사용된다. 일부 실시양태들에서, 경피증의 치료는 피부 궤양형성, 예컨대, 디지털 궤양의 치료를 포함한다. 본 개시내용의 조성물의 투여는 영향받은 조직 및/또는 장기에서 경피증의 섬유증 및/또는 염증 증상을 감소시키는 데에 사용될 수 있다.Skin manifestations of scleroderma can be painful and can impair the use of the affected area (e.g., the use of hands, fingers, toes, feet, etc.) and may damage the appearance. Skin ulceration can occur, and such ulcers can be susceptible to infection or even necrosis. An ulcerated skin can be hard to heal or it can be slow to heal. Difficulties in healing skin ulcer formation can be exacerbated, especially in patients with impaired circulatory system, such as patients with Raynaud's phenomenon. In some embodiments, the methods of this disclosure are used to treat scleroderma, e.g., scleroderma, and / or to increase IL-2 expression in a patient. In some embodiments, treatment of scleroderma includes treatment of skin ulceration, such as digital ulceration. Administration of the compositions of the present disclosure may be used to reduce fibrosis and / or inflammatory symptoms of scleroderma in affected tissues and / or organs.

피부 증상/발현증상 이외에, 경피증은 심장, 신장, 폐, 관절 및 소화관에도 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시양태들에서, 경피증의 치료는 예컨대, 섬유증 및/또는 염증 증상을 감소시킴으로써 이들 조직들 중 어느 하나 이상의 조직에서 질환의 증상을 치료하는 것을 포함한다.In addition to skin symptoms / manifestations, scleroderma can also affect the heart, kidneys, lungs, joints and digestive tract. In some embodiments, treatment of scleroderma includes treating the symptoms of the disease in one or more of these tissues, e.g., by reducing fibrosis and / or inflammatory symptoms.

일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 방법은 경피증, 예를 들면, 경피증과 관련된 폐 섬유증을 치료하는 데에 이용된다. 본 개시내용의 조성물의 투여는 폐에서 경피증의 섬유증 증상을 감소시키는 데에 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 폐 기능을 개선하고/하거나 경피증으로 인한 사망의 위험을 감소시키는 데에 사용될 수 있다.In some embodiments, the methods of this disclosure are used to treat pulmonary fibrosis associated with scleroderma, e.g., scleroderma. Administration of the compositions of this disclosure may be used to reduce fibrosis symptoms of scleroderma in the lungs. For example, the method may be used to improve lung function and / or reduce the risk of death from scleroderma.

일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 경피증, 예를 들면, 경피증과 관련된 신장 섬유증을 치료하는 데에 사용된다. 투여는 신장에서 경피증의 섬유증 증상을 감소시키는 데에 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 신장 기능의 개선, 소변 중의 단백질의 감소, 고혈압의 감소, 및/또는 치명적인 신부전을 유발할 수 있는 신발증의 위험의 감소를 위해 사용될 수 있다.In some embodiments, the compositions of the present disclosure are used to treat scleroderma, e.g., renal fibrosis associated with scleroderma. Administration can be used to reduce fibrosis symptoms of scleroderma in the kidneys. For example, the method may be used for improving renal function, decreasing protein in the urine, reducing hypertension, and / or reducing the risk of shoe growth that can lead to fatal kidney failure.

본 개시내용의 방법 및 조성물은 경피증의 치료에 사용될 수 있다. 치료될 수 있는 예시적 증상은 (관절 통증을 비롯한) 통증, 팽윤, 피부 궤양형성, 피부 자극, 발진, 운동 범위의 손실, 및 과제를 매일 수행하는 감소된 능력을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 치료될 수 있는 추가 증상은 폐 기능(예를 들면, 폐 기능이 개선될 수 있음) 및 신장 기능을 포함한다. 이들 증상들 중 임의의 증상의 개선은 예를 들면, 팽윤된 관절의 수의 감소, 통증 관절의 수의 감소, 증가된 운동 범위, 궤양이 형성된 조직의 치유의 증가, 피부 궤양형성의 수 및/또는 중증도의 감소, 과제를 매일 수행하는 증가된 능력, 감소된 피부 침습, 통증 또는 다른 약물에 대한 감소된 의존성, 통증 또는 삶의 질의 환자 자체 평가의 개선, 증가된 폐 기능, 감소된 고혈압, 소변 중의 감소된 단백질 등에 의해 측정될 수 있다.The methods and compositions of this disclosure may be used for the treatment of scleroderma. Exemplary conditions that may be treated include, but are not limited to, pain (including joint pain), swelling, skin ulceration, skin irritation, eruption, loss of range of motion, and reduced ability to perform tasks daily. Additional symptoms that may be treated include pulmonary function (e. G., Lung function may be improved) and renal function. Improvement of any of these symptoms may include, for example, a reduction in the number of swollen joints, a decrease in the number of pain joints, an increased range of motion, an increase in the healing of the ulcerated tissue, a number of skin ulcerations and / Or reduced severity, increased ability to perform tasks daily, reduced skin incidence, reduced dependence on pain or other drugs, improved patient self-assessment of pain or quality of life, increased pulmonary function, reduced hypertension, &Lt; / RTI >

일부 실시양태들에서, 경피증을 치료하는 방법은 하나 이상의 다른 약물, 생물학적 약물, 또는 경피증에 적합한 치료 중재시술과 함께 치료 요법의 일부로서 본 개시내용의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태들에서, 추가 약물, 생물학적 약물 또는 치료 중재시술은 경피증과 관련된 특정 증상에 적합하다. 예를 들면, 본 개시내용의 조성물은 하나 이상의 면역억제제, 예컨대, 메토트렉세이트, 사이클로포스프아미드, 아자티오프린 및 마이코페놀레이트와 함께 치료 요법의 일부로서 투여될 수 있다.In some embodiments, the method of treating scleroderma comprises administering a composition of the disclosure as part of a therapeutic regimen, with a therapeutic interventional treatment suited to one or more other drugs, biological drugs, or scleroderma. In some embodiments, the additional drug, biological drug or therapeutic intervention procedure is suitable for certain conditions associated with scleroderma. For example, the compositions of the present disclosure may be administered as part of a therapeutic regimen with one or more immunosuppressants, such as methotrexate, cyclophosphamide, azathioprine and mycophenolate.

나아가, 치료 방법은 식이요법, 운동요법, 스트레스 관리, 금연, 침술, 마사지 및/또는 물리 치료를 비롯한 치료 요법을 포함할 수 있다.Further, the methods of treatment may include therapeutic regimens, including diet, exercise therapy, stress management, smoking cessation, acupuncture, massage and / or physical therapy.

질환 증상은 동물 모델에서 재현될 수 있고, 이러한 모델은 치료 또는 병용 치료의 효과를 확인하는 데에 용이하게 사용될 수 있다. 예시적 모델은 경피증이 사이클로스포린 A(Damoiseaux et al., Cyclosporine A-Induced Autoimmunity: An Animal Model for Human Scleroderma. J. Experimental Animal Science, 2000, 41(1-2): 22-26) 또는 블레오마이신을 사용한 치료에 의해 유도된 설치류 모델뿐만 아니라, 형질전환 마우스 모델 및 이식편-대-숙주 모델(Yamamoto, Characteristics of Animal Models for Scleroderma. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1: 101-119; Clark, Animal Models in Scleroderma. Current Rheumatology Reports, 2005, 7(2): 150-155)도 포함한다.Disease symptoms can be reproduced in animal models, and such models can be readily used to confirm the effectiveness of treatment or combination therapy. An exemplary model is that scleroderma can be induced by cyclosporin A (Damoiseaux et al., Cyclosporine A-Induced Autoimmunity: An Animal Model for Human Scleroderma, J. Experimental Animal Science, 2000, 41 (1-2): 22-26) In addition to the rodent models induced by the treatment used, transgenic mouse models and graft-versus-host models (Yamamoto, Characteristics of Animal Models for Scleroderma. Current Rheumatology Reviews, 2005, 1: 101-119; Clark, Animal Models in Scleroderma Current Rheumatology Reports, 2005, 7 (2): 150-155).

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물들 중 임의의 조성물이 상기 병태들 중 임의의 병태의 치료(예를 들면, 하나 이상의 증상의 감소) 또는 IL-2 발현의 이상조절과 관련된 자가면역 병태의 치료에 사용될 수 있다는 것을 고려한다.The present disclosure contemplates that any of the compositions of the present disclosure may be used for the treatment of any of the above conditions (e. G., Reduction of one or more symptoms) or treatment of an autoimmune condition associated with aberrant modulation of IL-2 expression Lt; / RTI >

(v) 사용 방법(v) How to use

(a) 사용 진단 방법(a) Diagnosis method of use

일부 실시양태들에서, 본 개시내용은 자가면역 병태를 갖는 대상체의 진단, 모니터링 또는 예후에 도움을 주기 위해 생체내 및/또는 시험관내에서 사용될 수 있거나 심지어 약물(본 개시내용의 조성물을 포함하는 약물을 포함하나 이것으로 한정되지 않음)의 용량을 미세하게 조정하는 것을 돕기 위해 사용될 수 있는 진단 방법을 제공한다.In some embodiments, the disclosure may be used in vivo and / or in vitro to aid in the diagnosis, monitoring, or prognosis of a subject having an autoimmune condition, or even in combination with a drug (including a drug Such as, but not limited to, < RTI ID = 0.0 > a < / RTI >

예시적 방법에서, 하나 이상(1, 2 또는 3개)의 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2로부터 선택된 생체마커가 화합물(본 개시내용의 조성물을 포함하는 임의의 화합물)로 치료받은 대상체에서 분석된다. 상기 분석은 생체마커의 존재, 부재 또는 양에 대한 분석일 수 있다. 적합한 분석은 샘플에서 전사체 또는 단백질 발현을 검출하는 데에 적합한 정량 PCR, ELISA 등을 포함한다. 어세이는 세포 또는 샘플, 예컨대, 혈액 샘플에 대해 수행될 수 있다. 어세이 결과에 기초할 때, 화합물의 후속 용량 또는 투약 요법을 조절할지를 결정할 수 있다. 예를 들면, 1회 이상의 용량의 마이크로RNA-31 작용제의 투여 후, IL-2 발현의 증가가 관찰되지 않는 경우, IL-2 발현의 원하는 증가를 달성하기 위해 투여 용량 또는 투여 빈도를 증가시키는 것이 유리할 수 있다.In an exemplary method, a biomarker selected from one or more (1, 2 or 3) microRNA-31, RhoA and IL-2 is administered to a subject treated with a compound (any compound comprising a composition of the present disclosure) Is analyzed. The assay may be an analysis of the presence, absence or amount of a biomarker. Suitable assays include quantitative PCR, ELISA, and the like, suitable for detecting transcript or protein expression in a sample. Assays may be performed on cells or samples, such as blood samples. Based on the assay results, one can determine whether to adjust the subsequent dose of the compound or the dosage regimen. For example, if an increase in IL-2 expression is not observed after administration of one or more doses of a microRNA-31 agonist, increasing the dose or frequency of administration to achieve a desired increase in IL-2 expression Can be advantageous.

또 다른 예를 들면, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 진단하는 방법을 제공한다. 이러한 방법의 일부로서, 샘플은 자가면역 병태, 예컨대, SLE를 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터 수득된다. 이 샘플은 예를 들면, 골수 샘플, 혈액 샘플, 또는 혈액 샘플로부터 분리된 세포 샘플일 수 있다. 샘플은 병태를 갖는 것으로 의심되는 대상체가 상당한 증상을 경험하는 시점에서 단리될 수 있을 뿐만 아니라 증상이 덜 급성인 기간 동안 단리될 수 있다. 샘플의 수득 후, 샘플은 마이크로RNA-31 또는 RhoA, 또는 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2 중 어느 하나 이상의 발현에 대해 분석된다. 분석은 단백질 발현 및 전사체 발현의 분석을 포함한다.As another example, the disclosure provides a method of diagnosing autoimmune conditions, e. G. Systemic lupus erythematosus. As part of this method, the sample is obtained from a subject suspected of having an autoimmune condition, such as SLE. The sample can be, for example, a bone marrow sample, a blood sample, or a cell sample separated from a blood sample. The sample may be isolated at a point when the subject suspected of having the condition experiences significant symptoms, but may also be isolated during periods when the symptoms are less acute. After obtaining the sample, the sample is analyzed for expression of any one of microRNA-31 or RhoA, or microRNA-31, RhoA and IL-2. Analysis includes analysis of protein expression and transcript expression.

또 다른 예를 들면, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스의 치료를 모니터링하는 방법을 제공한다. 치료를 모니터링하기 위해, 마이크로RNA-31, IL-2 및/또는 RhoA의 발현은 치료를 받은 대상체의 샘플에서 검출된다. 이 발현은 이 특정 치료 요법의 개시 전에 또는 치료 동안 초기 시점에서 동일한 대상체로부터 수득된 샘플 중의 생체마커의 발현과 비교된다. 하나 이상의 기간에 걸친 마이크로RNA-31 및/또는 RhoA 및/또는 IL-2 발현의 비교는 치료의 진행을 모니터링하는 방식을 제공한다. 추후 샘플에서 마이크로RNA-31의 증가 또는 RhoA의 감소는 치료의 효과성을 나타낸다. 유사하게, 추후 샘플에서 IL-2의 증가는 치료의 효과성을 나타낸다. As another example, the present disclosure provides a method for monitoring autoimmune conditions, e. G., Treatment of systemic lupus erythematosus. To monitor treatment, expression of microRNA-31, IL-2 and / or RhoA is detected in a sample of the treated subject. This expression is compared to the expression of the biomarker in the sample obtained from the same subject either before the initiation of this particular therapy or at the initial time during the treatment. Comparison of microRNA-31 and / or RhoA and / or IL-2 expression over one or more periods provides a way to monitor the progress of treatment. An increase in microRNA-31 or a decrease in RhoA in subsequent samples indicates the effectiveness of the treatment. Similarly, an increase in IL-2 in later samples indicates the effectiveness of treatment.

추가로 예를 들면, 본 개시내용은 자가면역 병태, 예컨대, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 특정 치료의 개시 전에 대상체로부터 채취된 샘플로부터의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 건강한 대상체의 샘플에서의 발현을 반영하는 표준 범위와 비교하는 단계를 포함한다. 마이크로RNA-31의 발현이 표준 범위 미만이거나 RhoA의 발현이 표준 범위를 초과하는 경우, 대상체는 본 개시내용의 조성물을 사용한 치료에 잠재적으로 적합한 대상체로서 확인된다. 그 다음, 대상체가 치료에 대해 감수성을 나타내는 것으로 확인되면, 상기 대상체를 마이크로RNA-31, RhoA에 혼성화하는 siNA 또는 IL-2 단백질을 포함하는 유효량의 조성물 또는 본 개시내용의 또 다른 조성물로 치료한다.In addition, for example, the disclosure provides a method of treating an autoimmune condition, e. G., A subject with systemic lupus erythematosus. The method includes comparing the expression of microRNA-31 or RhoA from a sample taken from a subject with a standard range that reflects expression in a sample of a healthy subject prior to initiation of a particular treatment. When the expression of microRNA-31 is below the standard range or the expression of RhoA exceeds the standard range, the subject is identified as a potentially suitable subject for treatment with the compositions of this disclosure. The subject is then treated with an effective amount of a composition comprising siRNA or an IL-2 protein that hybridizes to microRNA-31, RhoA, or another composition of the disclosure, if the subject is found to be susceptible to treatment .

일부 실시양태들에서, 상기 방법은 동일한 대상체의 치료 후 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 검출하는 단계, 및 치료 후 샘플에서의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 특정 치료의 개시 전에 채취된 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 추가로 포함한다.In some embodiments, the method comprises the steps of detecting expression of microRNA-31 or RhoA in a sample after treatment of the same subject, and detecting expression of microRNA-31 or RhoA in the sample after treatment prior to initiation of a particular treatment Lt; RTI ID = 0.0 > Samples < / RTI >

일부 실시양태들에서, 특정 치료는 마이크로RNA-31 모방체, 예컨대, 마이크로RNA-31, RhoA에 혼성화하는 siNA, 또는 RhoA의 소분자 억제제이다.In some embodiments, the specific treatment is a microRNA-31 mimetic, such as microRNA-31, a siNA that hybridizes to RhoA, or a small molecule inhibitor of RhoA.

보다 일반적으로, 진단 사용은 예를 들면, 시험될 샘플을 임의적으로 대조군 샘플과 함께 핵산 또는 단백질의 검출에 적합한 시약과 접촉시킴으로써 달성될 수 있다.More generally, diagnostic use can be accomplished, for example, by contacting the sample to be tested with a reagent suitable for detection of the nucleic acid or protein, optionally with a control sample.

전술된 내용들 중 임의의 내용의 일부 실시양태들에서, 진단 어세이는 인간 환자 또는 인간 환자의 샘플에 대해 수행된다. 적합한 진단 시약은 마이크로RNA-31 또는 RhoA 발현을 검출하기에 적합한 프로브 및 프라이머뿐만 아니라, RhoA 단백질 발현을 검출하기에 적합한 항체도 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 시약은 분석에서 검출 및 정량을 용이하게 하도록 표지될 수 있거나, 검출은 이차 시약의 사용에 의존할 수 있다.In some embodiments of any of the foregoing, the diagnostic assay is performed on a sample of a human patient or human patient. Suitable diagnostic reagents include, but are not limited to, probes and primers suitable for detecting microRNA-31 or RhoA expression, as well as antibodies suitable for detecting RhoA protein expression. The reagent may be labeled to facilitate detection and quantitation in the assay, or the detection may depend on the use of the secondary reagent.

(b) 사용 치료 방법(b) Methods of treatment

일부 실시양태들에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 조성물이 치료적으로, 예를 들면, 인간 또는 비인간 대상체의 치료에 사용될 수 있다는 것을 고려한다. 본원에 기재된 조성물들 중 임의의 조성물이 본원에 기재된 자가면역 병태들 중 임의의 자가면역 병태의 치료에 사용될 수 있다. 적합한 조성물은 활성 성분으로서 핵산, 폴리펩티드 또는 소분자를 포함한다. 다른 적합한 조성물은 세포 조성물, 예컨대, 마이크로RNA-31을 발현하는 세포를 포함한다.In some embodiments, the disclosure contemplates that the compositions of the present disclosure may be used therapeutically, e.g., in the treatment of human or non-human subjects. Any of the compositions described herein may be used in the treatment of any autoimmune condition among the autoimmune conditions described herein. Suitable compositions include nucleic acids, polypeptides or small molecules as the active ingredient. Other suitable compositions include cell compositions, e. G., Cells expressing microRNA-31.

예시적 방법은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 조성물을 세포와 접촉시키거나 상기 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 이러한 조성물은 예를 들면, 자가면역 병태를 갖는 대상체에서 IL-2 발현을 증가시키는 데에 사용될 수 있다. 예시적 조성물은 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산, 또는 RhoA의 발현을 감소시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함한다.An exemplary method comprises contacting a cell with a composition that increases expression of microRNA-31 or reduces expression of RhoA, or administering the composition to a subject. Such a composition can be used, for example, to increase IL-2 expression in a subject with autoimmune disease. An exemplary composition comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that increases the expression of microRNA-31, or a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that reduces the expression of RhoA.

치료될 수 있는 예시적 병태는 자가면역 병태, 예컨대, SLE, 또는 작용 기작 또는 병인을 공유하는 다른 자가면역 병태를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 일부 실시양태들에서, 상기 방법은 대상체에서 IL-2 발현을 증가시키는 단계를 포함한다.Exemplary conditions that may be treated include, but are not limited to, autoimmune conditions such as SLE, or other autoimmune conditions that share a mechanism or pathogenesis. In some embodiments, the method comprises increasing IL-2 expression in a subject.

적합한 조성물은 예를 들면, 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함한다. 다른 적합한 조성물은 예를 들면, siNA를 포함하는 핵산, 마이크로RNA-31을 모방하는 핵산, 또는 RhoA에 혼성화하는 siNA를 포함한다. 핵산 조성물은 단일 가닥, 부분적으로 이중 가닥 또는 전체적으로 이중 가닥일 수 있다. 일부 실시양태들에서, 조성물의 투여는 내생성 마이크로RNA의 발현을 증가시킨다. 다른 실시양태에서, 조성물의 투여는 외생성 마이크로RNA-31 분자, 예컨대, 세포 내로의 도입 후 마이크로RNA-31을 발현하는 올리고뉴클레오티드의 도입을 포함한다. Suitable compositions include, for example, nucleic acids comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3. Other suitable compositions include, for example, nucleic acids comprising siNA, nucleic acids that mimic microRNA-31, or siNAs that hybridize to RhoA. The nucleic acid composition may be single stranded, partially double stranded or double stranded as a whole. In some embodiments, administration of the composition increases the expression of endogenous microRNAs. In another embodiment, administration of the composition comprises the introduction of an exogenous microRNA-31 molecule, such as an oligonucleotide that expresses microRNA-31 after introduction into a cell.

투여되는 구체적인 조성물과 관계없이, 유효량이 환자에게 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "유효량"은 질환 또는 장애의 중증도 및/또는 지속시간을 감소시키고/시키거나 완화하거나; 상기 질환 또는 장애의 진행을 예방하거나 지연시키거나; 상기 질환 또는 장애의 퇴행을 야기하거나; 상기 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 재발, 발생 또는 발병을 예방하거나 지연시키거나; 또 다른 치료의 효과(들)를 향상시키거나 개선하기에 충분한 치료의 양을 지칭한다. 효과의 측정가능한 징후는 단회 용량 후 관찰할 수 없을 수 있다는 것이 이해된다.Regardless of the specific composition to be administered, an effective amount is administered to the patient. As used herein, the term "effective amount" means reducing and / or alleviating the severity and / or duration of a disease or disorder; Preventing or delaying the progression of the disease or disorder; Causing regression of the disease or disorder; Preventing or delaying the recurrence, development or onset of one or more symptoms associated with the disease or disorder; Refers to an amount of treatment sufficient to improve or ameliorate the effect (s) of another treatment. It is understood that the measurable indications of the effect may not be observable after a single dose.

병태 또는 질환을 "치료하는"은 병태 또는 질환의 하나 이상의 증상을 치유하는 것뿐만 아니라 완화하는 것도 지칭하고, 대상체에서 의학적 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 발병을 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다.To treat or ameliorate one or more symptoms of a condition or disorder refers to alleviating as well as curing one or more symptoms of the condition or disorder and includes administration of a composition that reduces the frequency of symptoms of a medical condition in a subject or delayed the onset of the disease .

일부 실시양태들에서, 치료의 진행 및 효과는 치료 동안 및/또는 치료 후 모니터링된다. 예를 들면, 자가면역 병태는 특정 병태에 적합한 방법, 예컨대, 혈액 검사, 소변 샘플, 통증 및 피로의 자가 호소, 통증 약물치료의 필요성 감소, X-선, CT 스캔 등을 이용함으로써 모니터링될 수 있다. 나아가, 치료는 증상의 개선, 예컨대, 감소된 통증(예를 들면, 환자가 보다 적은 통증 약물치료를 요청/이용함), 보충 산소에 대한 감소된 의존성, 식욕의 개선, 체중 증가, 감소된 피로, 증가된 운동성 등의 평가에 기초하여 모니터링될 수 있다. 뿐만 아니라, 치료의 진행 및 효과는 상기 상세히 기재된 바와 같이 생체마커 마이크로RNA-31, RhoA 또는 IL-2 중 어느 하나 이상을 이용함으로써 모니터링될 수 있다.In some embodiments, the progress and effects of treatment are monitored during and / or after treatment. For example, autoimmune conditions can be monitored by using methods appropriate for the particular condition, such as blood tests, urine samples, self-appeal of pain and fatigue, reduced need for pain medication, x-rays, CT scans, . Further, the treatment may include the improvement of symptoms, such as reduced pain (e.g., the patient requests / uses less pain medication), reduced dependence on supplemental oxygen, improved appetite, weight gain, reduced fatigue, Increased mobility, and the like. In addition, the progress and effect of the treatment can be monitored by using one or more of biomarker microRNA-31, RhoA or IL-2 as described in detail above.

본 개시내용은 일부 실시양태들에서 본 개시내용의 조성물이 하나 이상의 다른 약제 및/또는 하나 이상의 다른 치료 방법과 함께 치료 요법의 일부로서 투여된다. 적합한 다른 약제 및/또는 치료 방법의 선택은 구체적인 질환, 환자의 상태, 환자의 연령, 증상 등에 의해 좌우될 수 있다. 예를 들면, 다른 적합한 치료 방법은 수술, 투석, 인슐린 치료, 식이요법, 물리 치료, 금연, 산소 치료, 인공호흡기 보조, 침술 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 예를 들면, 다른 적합한 약제는 진통제, 마취제(예컨대, 통증 관리용), 소염제, 면역억제제, 코르티코스테로이드, 항말라리아제 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 이들 약제들 및/또는 방법들 중 어느 하나 이상이 치료 요법의 일부로서 사용될 수 있다.The present disclosure contemplates that in some embodiments, the compositions of the present disclosure are administered as part of a therapeutic regimen together with one or more other agents and / or one or more other therapeutic methods. The choice of other suitable agents and / or methods of treatment may depend on the specific disease, the condition of the patient, the age of the patient, the symptoms, and the like. For example, other suitable methods of treatment include, but are not limited to, surgery, dialysis, insulin therapy, diet, physical therapy, smoking cessation, oxygen therapy, respiratory assistance, acupuncture and the like. For example, other suitable agents include, but are not limited to, analgesics, anesthetics (e.g., for pain management), antiinflammatory agents, immunosuppressants, corticosteroids, anti-malaria agents and the like. Any one or more of these agents and / or methods may be used as part of the therapeutic regimen.

약제 및/또는 치료의 조합을 투여하는 단계를 포함하는 임의의 치료 방법의 경우, 이러한 병용 치료는 치료의 개별 성분들의 동시적, 순차적 또는 별도의 투약에 의해 달성될 수 있다.In the case of any method of treatment comprising administering a combination of agents and / or treatments, such combination therapy may be achieved by simultaneous, sequential or separate administration of the individual components of the treatment.

일부 실시양태들에서, 치료 방법은 마이크로RNA-31, RhoA 및/또는 IL-2의 발현이 본 개시내용의 조성물을 사용한 치료 후 대상체에서 평가되는 분석 단계를 추가로 포함한다. 이러한 분석 단계는 적합한 방법을 이용하여 RNA 또는 단백질 발현을 평가할 수 있다.In some embodiments, the method of treatment further comprises an assay step in which the expression of microRNA-31, RhoA, and / or IL-2 is assessed in a subject following treatment using the composition of the present disclosure. Such an analysis step can evaluate RNA or protein expression using an appropriate method.

(vii) 용량 및 투여(vii) Dosage and administration

본 개시내용의 실시양태는 조성물을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 유용하고/하거나 진단 셋팅에서 사용되기에 유용한 멸균 약학 제제를 포함한다. 더욱이, 다양한 투여 및 전달 경로 및 방법이 유용할 수 있다. 본 개시내용은 임의의 제제 및/또는 투여 경로가 본 개시내용의 임의의 조성물과 함께 사용될 수 있다는 것을 고려한다. 뿐만 아니라, 본 개시내용은 다양한 제제 및 투여 경로가 다른 약제, 예컨대, 치료 요법의 일부로서 투여된 약제에도 적용될 수 있다는 것을 고려한다.Embodiments of the present disclosure include sterile pharmaceutical preparations useful for and / or useful for use in diagnostic settings in connection with administering compositions to a subject. Moreover, various administration and delivery routes and methods may be useful. The present disclosure contemplates that any formulation and / or route of administration may be used with any composition of the present disclosure. In addition, the present disclosure contemplates that various agents and routes of administration may be applied to other agents, such as agents administered as part of a therapeutic regimen.

다양한 전달 시스템이 공지되어 있고 본 개시내용의 조성물을 투여하는 데에 사용될 수 있다. 투여 방법은 비경구 투여(예를 들면, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외 투여, 국소 투여 및 점막 투여(예를 들면, 비강내 및 경구 경로)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 투여는 전신 또는 국소 투여일 수 있다. 제제가 병용 치료의 일부로서 투여되는 경우 본 개시내용은 다른 약제가 동일한 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다는 것을 고려한다는 것을 인지해야 한다.A variety of delivery systems are known and may be used to administer the compositions of this disclosure. Methods of administration include, but are not limited to, parenteral (e.g., intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous and subcutaneous), epidural, topical and mucosal (e.g. intranasal and oral) routes It is not limited. Administration may be systemic or topical. Where the agent is administered as part of a combination therapy, it should be appreciated that this disclosure contemplates that other agents may be administered by the same or different routes of administration.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 약학적으로 허용가능한 담체는 주사용수, USP, 물(D5W) 중의 5% 덱스트로스 또는 생리식염수이다. In certain embodiments, the compositions of the present disclosure comprise a pharmaceutically acceptable carrier. In a preferred embodiment, the pharmaceutically acceptable carrier is 5% dextrose in water for injection, USP, water (D5W) or physiological saline.

일부 제제들에서는 물 기제의 제제가 사용되는 반면, 다른 제제들에서는 지질 기제의 제제가 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 활성 약제 또는 이를 코딩하는 핵산을 포함하는 조성물은 물 기제의 제제로 존재한다. 다른 실시양태에서, 제제는 지질 기제의 제제이다. In some formulations, a water-based formulation is used, while in other formulations, a lipid-based formulation may be used. In certain embodiments, a composition comprising an active agent or a nucleic acid encoding it is present as a formulation of a water-based agent. In another embodiment, the agent is a lipid-based agent.

본원에 기재된 활성 약제의 용액은 자유 염기 또는 약학적으로 허용가능한 염으로서 제조될 수 있다. 이러한 약제는 몇몇 실시양태들에서 계면활성제, 예컨대, 하이드록시프로필셀룰로스와 적절하게 혼합된 물에서 제조될 수도 있다. 또한, 분산액이 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 이들의 혼합물 및 오일에서 제조될 수 있다. 통상의 저장 및 사용 조건 하에서, 이들 제제들은 미생물의 생장을 방지하기 위한 방부제를 함유할 수 있다. 주사 용도에 적합한 약학 제형은 멸균 수용액 또는 분산액, 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조용 멸균 분말을 포함한다. 상기 제형은 종종 용이한 주사가능성(syringeable)이 존재하는 정도까지 멸균성 및 유동성을 갖는다. 상기 제형은 제조 및 저장 조건 하에서 안정할 수 있고 미생물, 예컨대, 세균 및 진균의 오염 작용으로부터 보존될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들면, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다.Solutions of the active agents described herein may be prepared as free bases or as pharmaceutically acceptable salts. Such agents may be prepared in some embodiments in water suitably mixed with a surfactant, such as hydroxypropylcellulose. The dispersion may also be prepared from glycerol, liquid polyethylene glycols, mixtures thereof and oils. Under ordinary conditions of storage and use, these agents may contain preservatives to prevent microbial growth. Pharmaceutical formulations suitable for injectable use include sterile aqueous solutions or dispersions, and sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersions. The formulations often have sterility and fluidity to the extent that easy syringeability exists. The formulations may be stable under the conditions of manufacture and storage and may be preserved from the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi. Prevention of the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like.

사용될 정확한 용량 및 투약 요법은 투여 경로, 치료될 구체적인 질환, 환자 상태의 중증도, 사용되는 구체적인 조성물 등에 의해 좌우될 것이다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 추정될 수 있다.The exact dose and the dosage regimen to be employed will depend on the route of administration, the particular disease to be treated, the severity of the patient's condition, the particular composition employed, and the like. Effective doses can be estimated from dose-response curves derived from in vitro or animal model test systems.

일부 실시양태들에서, 특히 인간에게 투여될 제제의 경우, 제제는 내독소 및/또는 관련 발열원성 물질을 실질적으로 함유하지 않는 발열원 무함유 제제이다. 내독소는 미생물 내부에 갇혀 있고 미생물이 분해되거나 사멸한 때에만 방출되는 독소를 포함한다. 발열원성 물질은 세균 및 다른 미생물의 외막으로부터의 발열 유도 열안정성 물질(당단백질)도 포함한다. 이들 물질들 둘다가 인간에게 투여되는 경우 발열, 저혈압 및 쇼크를 야기할 수 있다. 잠재적 유해 효과로 인해, 소량의 내독소조차도 정맥내로 투여되는 약학 약물 용액으로부터 제거되어야 한다. 식품의약청("FDA")은 정맥내 약물 적용의 경우 1시간 이내에 체중 kg 당 5 내독소 유닛(EU)의 상한을 설정한다(The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)). 치료 단백질이 체중 kg 당 수백 또는 수천 mg의 양으로 투여되는 경우(항체의 경우 그러할 수 있음), 미량의 유해한 위험 내독소조차도 제거되어야 한다. 일부 특정 실시양태들에서, 조성물 중의 내독소 및 발열원 수준은 10 EU/mg 미만, 5 EU/mg 미만, 1 EU/mg 미만, 0.1 EU/mg 미만, 0.01 EU/mg 미만, 또는 0.001 EU/mg 미만이다.In some embodiments, particularly in the case of an agent to be administered to a human, the agent is a pyrogen-free preparation substantially free of endotoxins and / or related pyrogenic substances. Endotoxins contain toxins trapped inside microorganisms and released only when microorganisms are degraded or killed. The pyrogenic substances also include pyrogen-inducing heat-stable substances (glycoproteins) from the outer membrane of bacteria and other microorganisms. Both of these substances can cause fever, hypotension and shock when administered to humans. Because of the potential harmful effects, even small amounts of endotoxin should be removed from the pharmacological drug solution administered intravenously. The Food and Drug Administration ("FDA") sets an upper limit of 5 endotoxin units per kilogram of body weight within 1 hour for intravenous drug application (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1): 223 (2000) ). Even if the therapeutic protein is administered in amounts of hundreds or thousands of mg per kilogram of body weight (which may be true for antibodies), even trace amounts of harmful endotoxin should be removed. In some specific embodiments, endotoxin and pyrogens levels in the composition are less than 10 EU / mg, less than 5 EU / mg, less than 1 EU / mg, less than 0.1 EU / mg, less than 0.01 EU / mg, .

화합물(예컨대, 본 개시내용의 조성물 및 다른 약물)은 생체마커를 갖거나 본원에 기재된 병태의 치료를 필요로 하는 임의의 적절한 대상체에게 투여될 수 있다. 대상체의 비한정적 예로는 포유동물, 인간, 유인원, 원숭이, 유제류(예를 들면, 말, 소, 염소, 양, 돼지, 버팔로, 낙타 등), 개, 고양이, 설치류 등이 있다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있고, 약물은 예를 들면, 아동, 소아, 청소년, 성인 등을 포함하는 특정 연령 군 내의 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물 또는 다른 약물은 활성 성분으로서 항체, 항체 단편, 단일 쇄 항체, 소분자, 핵산, 핵산 유도체, miRNA, siNA, 펩티드, 폴리펩티드 등을 포함한다. 가공 후 miRNA 또는 siRNA, 가공 전 miRNA 또는 siRNA, 또는 가공 전 또는 가공 후 miRNA 또는 siRNA를 코딩하는 벡터를 포함하는 다양한 형태의 miRNA 또는 siRNA가 전달될 수 있다.The compounds (e. G., Compositions of this disclosure and other drugs) may be administered to any suitable subject having a biomarker or requiring treatment of the condition described herein. Non-limiting examples of subjects include mammals, humans, apes, monkeys, milk (eg, horses, cows, goats, sheep, pigs, buffalo, camels, etc.), dogs, cats and rodents. The subject may be male or female and the drug may be administered to a subject within a particular age group, including, for example, children, children, adolescents, adults, and the like. In some embodiments, the composition or other drug of the present disclosure comprises an antibody, antibody fragment, single chain antibody, small molecule, nucleic acid, nucleic acid derivative, miRNA, siNA, peptide, polypeptide, etc. as the active ingredient. After processing, miRNA or siRNA, various types of miRNA or siRNA can be delivered, including miRNA or siRNA, pre-processed miRNA or siRNA, or vectors encoding pre-or post-processing miRNA or siRNA.

본원에서 제시된 방법은 유효량의 핵산 또는 이를 코딩하는 발현 구축물의 전달을 포함하나 이것으로 한정되지 않는다. 약학 조성물의 "유효량"은 일반적으로 기재된 원하는 결과, 예를 들면, 질환 또는 이의 증상의 정도를 완화하거나, 감소시키거나, 최소화하거나 또는 한정하는 것을 검출가능하게 반복적으로 달성하기에 충분한 양으로서 정의된다. 몇몇 실시양태들에서, 치료의 효과를 평가하고 독성을 제어하기 위해 생체마커를 모니터링하는 단계가 존재할 수 있다.The methods provided herein include, but are not limited to, the delivery of an effective amount of a nucleic acid or an expression construct encoding it. An "effective amount" of a pharmaceutical composition is generally defined as an amount sufficient to detectably and repeatedly achieve the desired result described, e. G., Relieving, reducing, minimizing, or limiting the severity of the disease or symptom thereof . In some embodiments, there may be a step of monitoring the biomarker to assess the effectiveness of treatment and control toxicity.

약물은 투약 제제와 상용가능한 방식으로 치료적으로 효과적일 수 있는 양으로 투여된다. 핵산 및 임의의 관련 성분이 주사를 위해 요구된 특정 게이지의 바늘을 통과할 수 있는 한, 핵산의 주사는 주사기, 또는 용액의 주사에 이용되는 임의의 다른 방법에 의해 전달될 수 있다. 예정된 양의 용액을 임의의 깊이에서 정확히 다회 주사하는 것을 가능하게 하는 주사기 시스템도 유전자 치료에서 사용되는 것으로 기재되어 있다(미국 특허 제5,846,225호). The drug is administered in an amount that is therapeutically effective in a manner compatible with the dosage formulation. As long as the nucleic acid and any associated components can pass through the needle of the specific gauge required for the injection, the injection of the nucleic acid can be delivered by a syringe, or by any other method used for injecting the solution. Syringe systems have also been described that are used in gene therapy (US Pat. No. 5,846,225) which allows precise multi-injection of a predetermined amount of solution at any depth.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 마이크로RNA-31 발현을 증가시키거나 RhoA 발현을 감소시키는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태들에서, 이러한 핵산 기제의 조성물은 유전자 치료에 의해 투여될 수 있다. 유전자 치료는 발현된 또는 발현가능한 핵산을 대상체에게 투여함으로써 수행되는 치료를 지칭한다. 본 개시내용의 이 실시양태에서, 핵산(예컨대, 안티센스, siRNA 또는 마이크로RNA)이 예방 또는 치료 효과를 생성하고 매개한다.In certain embodiments, the compositions of the present disclosure include nucleic acids that increase microRNA-31 expression or decrease RhoA expression. In some embodiments, the composition of such a nucleic acid base may be administered by gene therapy. Gene therapy refers to a treatment performed by administering an expressed or expressible nucleic acid to a subject. In this embodiment of the disclosure, a nucleic acid (e.g., an antisense, siRNA or microRNA) produces and mediates a prophylactic or therapeutic effect.

당분야에서 이용가능한 유전자 치료를 위한 임의의 방법이 본 개시내용에 따라 이용될 수 있다. 예시적 방법은 후술되어 있다. 유전자 치료 방법의 일반적인 검토를 위해서는 문헌(Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488); 문헌(Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87); 문헌(Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573); 문헌(Mulligan, 1993, Science 260:926-932); 문헌(Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191); 및 문헌(May, 1993, TIBTECH 11:155)을 참조한다. 이용될 수 있는 재조합 DNA 기술의 분야에서 통상적으로 공지된 방법은 문헌(Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)); 및 문헌(Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990))에 기재되어 있다.Any method for gene therapy that is available in the art may be utilized in accordance with the present disclosure. An exemplary method is described below. For a general review of gene therapy methods, see Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12: 488; (Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3: 87); Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573); (Mulligan, 1993, Science 260: 926-932); (Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62: 191); And May, 1993, TIBTECH 11: 155). Methods commonly known in the art of recombinant DNA technology that can be used are described in Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); And Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990).

한 실시양태에서, 핵산 기제의 조성물은 적합한 숙주에서 핵산을 발현하는 발현 벡터의 일부로서 제공된다. 구체적으로, 이러한 핵산은 유도적 또는 항시적 및 임의적으로 조직 특이적인 프로모터, 예를 들면, 이종 프로모터를 갖는다.In one embodiment, the composition of the nucleic acid base is provided as part of an expression vector that expresses the nucleic acid in a suitable host. Specifically, such nucleic acids have inducible or always and optionally tissue specific promoters, for example, heterologous promoters.

대상체 내로의 핵산의 전달은 직접적일 수 있거나(이 경우, 상기 대상체는 핵산 또는 핵산 보유 벡터에 직접적으로 노출됨) 또는 간접적일 수 있다(이 경우, 세포는 시험관내에서 핵산으로 먼저 형질전환된 후 대상체 내로 이식됨). 따라서, 일부 실시양태들에서, 본 개시내용의 조성물은 세포 조성물을 포함한다. 이들 2종의 방법들은 각각 생체내 또는 생체외 유전자 치료로서 공지되어 있다. 적합한 벡터는 바이러스 벡터를 포함한다. 다른 실시양태에서, 핵산은 네이키드(naked) 핵산으로서 투여될 수 있다. 더욱이, 일부 실시양태들에서, 핵산 기제의 조성물은 형질도입/감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 리포펙션, 전기천공 및 이온영동에 의해 투여될 수 있다.The delivery of the nucleic acid into the subject can be direct (in this case, the subject is exposed directly to the nucleic acid or nucleic acid-bearing vector) or indirect (in this case, the cell is first transformed into the nucleic acid in vitro, Lt; / RTI > Thus, in some embodiments, the compositions of the present disclosure comprise a cell composition. Both of these methods are known as in vivo or in vitro gene therapy, respectively. Suitable vectors include viral vectors. In another embodiment, the nucleic acid can be administered as a naked nucleic acid. Moreover, in some embodiments, the composition of the nucleic acid base can be administered by transduction / infection, DEAE-dextran-mediated transfection, lipofection, electroporation and iontophoresis.

(viii) 제품(viii) Products

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물로 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 약학 팩 또는 키트를 제공한다. 유사하게, 본 개시내용은 실험 및/또는 진단 용도에 적합한 약학 팩 또는 키트를 제공한다. 본 개시내용은 본원에 기재된 조성물들 중 임의의 조성물, 예컨대, 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 조성물, 또는 RhoA의 발현을 감소시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 조성물이 키트의 일부로서 포장되어 시판될 수 있다는 것을 고려한다. 예시적 이러한 키트는 약학 키트이다.The present disclosure provides a pharmaceutical pack or kit comprising one or more containers filled with the composition of the present disclosure. Similarly, the present disclosure provides a pharmaceutical pack or kit suitable for experimental and / or diagnostic use. The present disclosure contemplates any composition of the compositions described herein, such as a composition comprising a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that increases the expression of microRNA-31, or a nucleic acid comprising a nucleotide sequence that reduces the expression of RhoA It is contemplated that the compositions comprising may be packaged and sold as part of a kit. An exemplary such kit is a pharmaceutical kit.

본 개시내용은 본원에 기재된 제제를 하나 이상의 제1 용기 내에 포함하고 자가면역 병태, 예컨대, SLE 또는 SLE와 유사한 작용 기작 또는 병인을 갖는 자가면역 병태(예를 들면, IL-2의 감소된 발현과 상관관계를 갖는 병태 또는 T 세포의 오류조절로부터 발생되는 병태)의 예방, 관리 또는 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제를 하나 이상의 제2 용기 내에 포함하는 약학 팩 또는 키트도 제공한다.The disclosure provides a method of treating an autoimmune condition, including, for example, reduced expression of IL-2 and an autoantibody with an autoimmune condition, such as an SLE or SLE-like action mechanism or pathogen, A condition resulting from a disease state, a condition with a causative relationship or a condition resulting from an error control of a T cell) in one or more second containers.

예시적 실시양태에서, 본 개시내용의 제제는 멸균 제제로서 단회 용량 바이알 내에 제제화된다. 임의적으로, 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 관청에 의해 지정된 형태의 안내문으로서, 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 관청에 의한 승인을 반영하는 안내문이 상기 용기(들)와 연결되어 있을 수 있다. In an exemplary embodiment, the formulation of the present disclosure is formulated as a sterile formulation in a single dose vial. Optionally, a statement reflecting the approval by the authority of manufacture, use or sale for human administration is provided as a guide in the form designated by a government agency regulating the manufacture, use or sale of pharmaceutical or biological products, Lt; / RTI >

실험 및/또는 진단 사용을 위해 판매되는 키트의 경우, 상기 키트는 임의적으로 적절한 용도, 안전성 고려사항 및 용도에 대한 임의의 한정을 표시하는 안내문을 함유할 수 있다. 나아가, 실험 및/또는 진단 사용을 위해 판매되는 키트의 경우, 상기 키트는 임의적으로 특정 진단 또는 실험 용도에 유용한 하나 이상의 다른 시약, 예컨대, 양성 또는 음성 대조군 시약을 포함할 수 있다.For kits sold for experimental and / or diagnostic use, the kits may optionally contain instructions that indicate any limitations on appropriate uses, safety considerations, and uses. Further, in the case of kits sold for experimental and / or diagnostic use, the kits may optionally comprise one or more other reagents, such as positive or negative control reagents, useful for certain diagnostic or experimental uses.

본 개시내용은 상기 방법들에서 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 하나 이상의 용기 내에 본원에 기재된 조성물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 하나 이상의 용기 내에 본원에 기재된 조성물 및 SLE 또는 자가면역병태, 예컨대, SLE와 유사한 작용 기작 또는 병인을 갖는 자가면역 병태(예를 들면, IL-2의 감소된 발현과 상관관계를 갖는 병태 또는 T 세포의 오류조절로부터 발생되는 병태)의 예방, 관리 또는 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제를 포함한다. 바람직하게는, 상기 키트는 장애의 예방, 치료, 관리 또는 완화(예를 들면, 설명된 제제를 단독으로 또는 또 다른 예방제 또는 치료제와 함께 사용하는 것), 및 이러한 사용에 대한 부작용 및 용량 정보에 대한 설명서를 추가로 포함한다. The present disclosure provides kits that can be used in the above methods. In one embodiment, the kit comprises the compositions described herein in one or more containers. In another embodiment, a composition as described herein and an autoimmune disease (e. G., A reduced expression of IL-2 with an SLE or autoimmune condition, e. Or conditions resulting from the modulation of T cell misregistration) in a patient in need of such treatment. Preferably, the kit can be used to prevent, treat, manage, or alleviate a disorder (e.g., using the described agent alone or in combination with another prophylactic or therapeutic agent), and side effects and dosage information for such use Additional documentation is included.

본 개시내용은 마감 포장되고 표지된 약학 제품도 포괄한다. 이 제품은 기밀 밀봉된 적절한 통 또는 용기, 예컨대, 유리 바이알 또는 다른 용기 내에 적절한 단위 투약 제형을 포함한다. 비경구 투여에 적합한 투약 제형의 경우, 활성 성분은 멸균되어 있고 투여에 적합하다. 일부 실시양태들에서, 제제는 정맥내 투여에 적합하다.The present disclosure also covers finished pharmaceutical products packaged and sealed. The product comprises an appropriate unit dosage form in a hermetically sealed container or container, such as a glass vial or other container. For dosage forms suitable for parenteral administration, the active ingredient is sterile and suitable for administration. In some embodiments, the formulation is suitable for intravenous administration.

바람직한 실시양태에서, 단위 투약 제형은 정맥내, 근육내, 비강내, 경구, 국소 또는 피하 전달에 적합하다. 따라서, 본 개시내용은 각각의 전달 경로에 적합한 용액, 바람직하게는 멸균 용액을 포괄한다. In a preferred embodiment, the unit dosage formulation is suitable for intravenous, intramuscular, intranasal, oral, topical or subcutaneous delivery. Accordingly, the present disclosure encompasses a solution, preferably a sterile solution, suitable for each delivery route.

임의의 약학 제품과 마찬가지로, 포장재 및 용기는 저장 및 운반 동안 생성물의 안정성을 보호하도록 다자인된다. 또한, 본 개시내용의 생성물은 해당 병태를 적절하게 예방하거나 치료하는 방법을 의사, 기술자 또는 환자에게 알려주는 사용 설명서 또는 다른 정보 자료를 포함한다. 즉, 제품은 실제 용량, 모니터링 절차 등 및 다른 모니터링 정보를 포함하나 이들로 한정되지 않는 투약 요법을 표시하거나 암시하는 설명 수단을 포함한다.Like any pharmaceutical product, the packaging material and containers are designed to protect the stability of the product during storage and delivery. In addition, the products of this disclosure include instructions or other informational material that inform the physician, technician, or patient how to properly prevent or treat the condition. That is, the product includes illustrative means to indicate or suggest dosage regimens, including but not limited to actual dosage, monitoring procedures, and other monitoring information.

구체적으로, 본 개시내용은 포장재, 예컨대, 상자, 병, 튜브, 바이알, 용기, 분무기, 취입기, 정맥내(i.v.) 백, 봉투 등; 및 상기 포장재 내에 함유된 약제의 하나 이상의 단위 투약 제형을 포함하는 제품을 제공하고, 이때 상기 약제는 본 개시내용의 조성물을 포함하고, 상기 포장재는 상기 조성물이 특정 용량을 투여하고 본원에 기재된 특정 투약 요법을 이용하여 SLE와 관련된 하나 이상의 증상, 또는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 유사한 작용 기작 또는 병인을 갖는 자가면역 병태(예를 들면, IL-2의 감소된 발현과 상관관계를 갖는 병태 또는 T 세포의 오류조절로부터 발생되는 병태) 또는 이의 하나 이상의 증상을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나 완화하는 데에 사용될 수 있다는 것을 표시하는 설명 수단을 포함한다.Specifically, the present disclosure includes packaging materials such as boxes, bottles, tubes, vials, containers, sprayers, dressings, intravenous (i.v.) bags, And one or more unit dosage forms of the medicament contained within the package, wherein the medicament comprises a composition of the present disclosure, wherein the package is adapted so that the composition is capable of administering the specified dose and the particular medicament described herein Therapy may be used to treat one or more symptoms associated with SLE, or another autoimmune condition, e. G. Autoimmune disease (e. G., A condition that correlates with reduced expression of IL-2, Or conditions that result from the modulation of T cells, or conditions resulting from the modulation of T cells), or one or more symptoms thereof.

본 개시내용은 포장재, 예컨대, 상자, 병, 튜브, 바이알, 용기, 분무기, 취입기, 정맥내(i.v.) 백, 봉투 등; 및 상기 포장재 내에 함유된 각각의 약제의 하나 이상의 단위 투약 제형을 포함하는 제품도 제공하고, 이때 한 약제는 본 개시내용의 조성물을 포함하고, 다른 약제는 본 개시내용의 조성물 이외의 예방제 또는 치료제를 포함하고, 상기 포장재는 상기 약제들이 특정 용량을 투여하고 본원에 기재된 특정 투약 요법을 이용하여 SLE와 관련된 하나 이상의 증상, 또는 또 다른 자가면역 병태, 예컨대, SLE와 유사한 작용 기작 또는 병인을 갖는 자가면역 병태(예를 들면, IL-2의 감소된 발현과 상관관계를 갖는 병태 또는 T 세포의 오류조절로부터 발생되는 병태) 또는 이의 하나 이상의 증상을 치료하고/하거나, 예방하고/하거나 완화하는 데에 사용될 수 있다는 것을 표시하는 설명 수단을 포함한다.The present disclosure includes packaging materials such as boxes, bottles, tubes, vials, containers, sprayers, dressings, intravenous (i.v.) bags, And one or more unit dosage forms of each agent contained in the package, wherein one agent comprises a composition of the present disclosure and the other agent comprises a prophylactic or therapeutic agent other than the composition of the present disclosure Wherein the package is adapted for administering to the subject an effective amount of one or more symptoms associated with SLE, or another autoimmune condition, such as an autoimmune disease having an SLE-like mechanism or pathology, using the particular dosage regimen described herein, (E.g., a condition resulting from a condition that correlates with a decreased expression of IL-2 or an error in the regulation of T cells) or one or more symptoms thereof, which may be used to treat, prevent, and / or alleviate one or more symptoms Lt; RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI >

일부 실시양태들에서, 특히 인간에게 투여될 제제를 포함하는 약학 키트의 경우, 상기 제제는 내독소 및/또는 관련 발열원성 물질을 실질적으로 함유하지 않는 발열원 무함유 제제이다. 내독소는 미생물 내부에 갇혀 있고 미생물이 분해되거나 사멸하는 때에만 방출되는 독소를 포함한다. 발열원성 물질은 세균 및 다른 미생물의 외막으로부터의 발열 유도 열안정성 물질(당단백질)도 포함한다. 이들 물질들 둘다가 인간에게 투여되는 경우 발열, 저혈압 및 쇼크를 야기할 수 있다. 잠재적 유해 효과로 인해, 소량의 내독소조차도 정맥내로 투여되는 약학 약물 용액으로부터 제거되어야 한다. 식품의약청("FDA")은 정맥내 약물 적용의 경우 1시간 이내에 체중 kg 당 5 내독소 유닛(EU)의 상한을 설정한다(The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)). 일부 특정 실시양태들에서, 조성물 중의 내독소 및 발열원 수준은 10 EU/mg 미만, 5 EU/mg 미만, 1 EU/mg 미만, 0.1 EU/mg 미만, 0.01 EU/mg 미만, 또는 0.001 EU/mg 미만이다.In some embodiments, particularly in the case of a pharmaceutical kit comprising a formulation to be administered to a human, the formulation is a pyrogen-free preparation substantially free of endotoxins and / or related pyrogenic substances. Endotoxins contain toxins that are trapped inside microorganisms and released only when the microorganisms are degraded or killed. The pyrogenic substances also include pyrogen-inducing heat-stable substances (glycoproteins) from the outer membrane of bacteria and other microorganisms. Both of these substances can cause fever, hypotension and shock when administered to humans. Because of the potential harmful effects, even small amounts of endotoxin should be removed from the pharmacological drug solution administered intravenously. The Food and Drug Administration ("FDA") sets an upper limit of 5 endotoxin units per kilogram of body weight within 1 hour for intravenous drug application (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1): 223 (2000) ). In some specific embodiments, endotoxin and pyrogens levels in the composition are less than 10 EU / mg, less than 5 EU / mg, less than 1 EU / mg, less than 0.1 EU / mg, less than 0.01 EU / mg, .

실시예Example

본 개시내용은 지금부터 하기 실시예에 대하여 기재된다. 이들 실시예들은 예시 목적으로만 제공되고, 본 개시내용은 이들 실시예로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 되고, 오히려 본원에서 제공된 교시의 결과로서 자명해지는 임의의 모든 변경을 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 일반적인 관점에서, 달리 표시되어 있지 않은 한, 본 개시내용은 분자생물학, 화학, 생화학, 물리학, 재조합 DNA 기술 및 면역학의 통상적인 기법을 이용한다. 물론, 구체적으로 명시되어 있지 않은 한, 사용된 특정 장치 및 시약, 크기, 제조자 등의 구체적인 목록 또는 설명이 본 개시내용에 대한 한정으로서 간주되어서는 안 된다는 것을 인식할 것이다. 유사하게 작용하는 다른 장치 및 시약이 용이하게 대체될 수 있다는 것도 인식할 것이다. The present disclosure is described below with reference to the following examples. These embodiments are provided for illustrative purposes only, and the present disclosure should not be construed as being limited to these embodiments, but rather should be construed as encompassing any and all variations that become evident as a result of the teachings provided herein. In general terms, unless otherwise indicated, the present disclosure uses conventional techniques of molecular biology, chemistry, biochemistry, physics, recombinant DNA technology, and immunology. It will, of course, be appreciated that the specific listing or description of particular devices and reagents, sizes, manufacturers, etc. used should not be construed as limiting the present disclosure, unless specifically stated otherwise. It will be appreciated that other similarly functioning devices and reagents may be readily substituted.

실시예 1 - 마이크로RNA-31의 발현Example 1 - Expression of microRNA-31

본 발명자들은 3명의 건강한 지원자들의 PBMC로부터 단리된 T 세포, B 세포 및 단핵구에서 miR-31의 발현 수준을 측정하였다. 도 1A에 나타낸 바와 같이, miR-31은 T 세포에서 선택적으로 발현되었는데, 이것은 miR-31이 T 세포 기능에서 일정한 역할을 수행한다는 것을 암시한다. We measured the expression levels of miR-31 in isolated T cells, B cells and monocytes from PBMC of three healthy volunteers. As shown in FIG. 1A, miR-31 was selectively expressed in T cells suggesting that miR-31 plays a role in T cell function.

그 다음, 본 발명자들은 32명의 SLE 환자 및 11명의 표준 대조군(NC)으로부터 수득된 T 세포에서 miR-31의 발현을 조사하였고, 도 1B에 나타낸 바와 같이 대조군에 비해 SLE 환자에서 상당히 하향 조절되었다는 것을 발견하였다(P<0.0001). 이들 연구들을 위해 사용된 대상체에 대한 추가 정보는 하기 표 1에 제공되어 있다.The inventors then examined the expression of miR-31 in T cells obtained from 32 SLE patients and 11 standard controls (NC) and found that they were significantly down-regulated in SLE patients compared to the control group as shown in Figure 1B ( P < 0.0001). Additional information about the subjects used for these studies is provided in Table 1 below.

실시예 2 - 마이크로RNA-31의 발현과 IL-2의 발현 사이의 상관관계Example 2 - Correlation between Expression of MicroRNA-31 and Expression of IL-2

루푸스 환자의 T 세포는 SLE의 발병에 기여할 수 있는 다수의 신호전달 이상을 나타낸다(Kong et al., 2003; Moulton et al. 2011). 하기 실험들은 SLE에서 T 세포 관련 사이토카인의 잘못된 발현에 있어서 miR-31의 역할을 조사하였다. 이들 실험들의 일부로서, 마이크로RNA-31 모방체를 디자인하여 마이크로RNA-31의 발현을 모방하는 데에 사용하였고, 안타고미르-31을 디자인하여 마이크로RNA-31의 발현을 감소시키는 데에 사용하였다. 적절한 대조군 올리고뉴클레오티드도 사용하였다. 도 2A 및 2B에 반영된 바와 같이, 일차 T 세포 내로의 이들 구축물들의 형질감염은 마이크로RNA-31의 발현을 효과적으로 증가시켰거나(모방체의 경우) 또는 감소시켰다(안타고미르의 경우). 일차 T 세포에서 miR-31의 성공적인 이소성 발현 또는 침묵을 택만 정량 PCR로 검증하였는데, 이 검증은 형질감염 후 miR-31의 과다발현 또는 억제가 miR-31 발현에서 각각 50배 증가 또는 25배 감소를 초래하였다는 것을 보여주었다(도 2). miR-31의 발현을 조절하는 데에 있어서의 이들 물질들의 효과를 고려하여, 이들을 사용하여 이들 세포들에서 신호전달을 더 연구하였다.T cells from patients with lupus have multiple signal transduction abnormalities that can contribute to the onset of SLE (Kong et al., 2003; Moulton et al. 2011). The following experiments investigated the role of miR-31 in the erroneous expression of T cell-associated cytokines in SLE. As part of these experiments, a microRNA-31 mimetic was designed and used to mimic the expression of microRNA-31, and antagomir-31 was designed to reduce the expression of microRNA-31. Appropriate control oligonucleotides were also used. As reflected in Figures 2A and 2B, transfection of these constructs into primary T cells effectively increased (in the case of the mimetics) or decreased (in the case of antagonists) the expression of microRNA-31. Successful ectopic expression or silencing of miR-31 in primary T cells was confirmed by taxonomic quantitative PCR, which demonstrated that overexpression or inhibition of miR-31 after transfection was 50-fold or 25-fold reduction in miR-31 expression, respectively (Fig. 2). Considering the effect of these substances in regulating the expression of miR-31, they were used to further study signaling in these cells.

TCR 참여가 miR-31 발현에 영향을 미치는지를 평가하기 위해, 건강한 공여자로부터 새로 정제된 CD3⁺ T 림프구를 시간 경과 연구에서 PMA 및 이노마이신으로 자극하였다. 도 3A에 나타낸 바와 같이, miR-31 발현은 자극 후 유도되어 약 12시간쯤 피크에 도달하였다.To assess whether TCR involvement affects miR-31 expression, freshly purified CD3 ⁺ T lymphocytes from healthy donors were stimulated with PMA and inomycin in a time course study. As shown in Fig. 3A, miR-31 expression was induced after stimulation and reached a peak about 12 hours.

TCR을 통한 T 세포 활성화가 IL-2의 유도를 향상시켰다는 점을 고려하여, miR-31에 의한 IL-2 생성의 잠재적 조절을 평가하였다. 이 질문을 해결하기 위해, 인간 일차 T 세포를 miR-31 모방체 또는 대조군 모방체로 형질감염시킨 후 PMA 및 이노마이신으로 24시간 동안 활성화시켰다. 세포 중의 IL-2 mRNA 수준 및 상청액 중의 IL-2 단백질 수준을 각각 RT-PCR 및 ELISA로 측정하였다. 도 3B 및 3C에 나타낸 바와 같이, miR-31 모방체는 상기 mRNA 및 단백질 수준 둘다에서 IL-2 발현을 증가시켰지만, 억제성 올리고뉴클레오티드 안타고미르-31을 사용한 형질감염을 통한 내생성 miR-31의 침묵은 IL-2 생성을 감소시켰다. 이들 결과와 일치하여, 도 3D에 나타낸 바와 같이, 활성화된 루푸스 T 세포(n=15)에서 miR-31의 발현 수준과 IL-2의 발현 수준 사이에 양의 상관관계도 관찰되었다. In view of the fact that T cell activation through TCR enhanced IL-2 induction, potential regulation of IL-2 production by miR-31 was assessed. To address this question, human primary T cells were transfected with miR-31 mimic or control mimic and then activated with PMA and inomycin for 24 hours. IL-2 mRNA levels in cells and IL-2 protein levels in supernatants were measured by RT-PCR and ELISA, respectively. As shown in FIGS. 3B and 3C, miR-31 mimetics increased IL-2 expression at both the mRNA and protein levels, but increased expression of endogenous miR-31 through transfection with the inhibitory oligonucleotide antagomir-31 Silencing reduced IL-2 production. Consistent with these results, a positive correlation was also observed between the expression levels of miR-31 and IL-2 in activated lupus T cells (n = 15), as shown in Figure 3D.

루시퍼라제 레포터 분석을 수행하여 miR-31이 IL-2 프로모터 활성을 조절하는지를 확인하였다. IL-2 프로모터를 루시퍼라제 레포터 벡터(IL-2-luc로 명명됨) 내로 클로닝하였다. IL-2-luc 및 miR-31 모방체 또는 대조군으로 동시형질감염된 주르카트 세포를 PMA 및 이노마이신으로 자극하였다. 도 3E에 나타낸 바와 같이, miR-31은 용량 의존적 방식으로 IL-2 프로모터 활성을 증가시켰다(도 3F). 더불어, 상기 데이터는 miR-31이 IL-2 프로모터의 활성을 향상시킴으로써 IL-2 생성을 촉진한다는 것을 암시한다. 추가로, IL-2와 miR-31 사이의 관계는 루푸스 환자의 샘플에서 일치하게 관찰되었다.Luciferase reporter assay was performed to confirm that miR-31 regulates IL-2 promoter activity. The IL-2 promoter was cloned into the luciferase reporter vector (designated IL-2-luc). Jurkat cells co-transfected with IL-2-luc and miR-31 mimic or control were stimulated with PMA and inomycin. As shown in Figure 3E, miR-31 increased IL-2 promoter activity in a dose dependent manner (Figure 3F). In addition, the data suggest that miR-31 promotes IL-2 production by enhancing the activity of the IL-2 promoter. In addition, the relationship between IL-2 and miR-31 was consistently observed in samples of patients with lupus.

실시예 3 - T 세포 내의 RhoAExample 3 - RhoA in T cells

miR-31이 IL-2 생성을 조절하는 분자 기작을 이해하기 위해, 생물정보학 수단을 이용하여 miR-31의 잠재적 표적을 확인하였다. 타겟스캔(TargetScan), 픽타르(PicTar) 및 미란다(MiRanda)로부터의 분석을 통합하는 miRGen 데이터베이스(www.diana.pcbi.upenn.edu/miRGen/v3/miRGen.html)는 예측된 miR-31 표적의 목록을 발생시켰다. T 세포 활성화에서 IL-2 유전자 발현을 조절하는 것으로 보고된(Helms et al., 2007) RhoA는 이 시스템에서 miR-31의 후보 표적이었다.In order to understand the molecular mechanisms by which miR-31 regulates IL-2 production, bio-informative means were used to identify potential targets for miR-31. The miRGen database (www.diana.pcbi.upenn.edu/miRGen/v3/miRGen.html), which integrates analysis from TargetScan, PicTar and MiRanda, provides predicted miR-31 targets . &Lt; / RTI > RhoA was a candidate target for miR-31 in this system as reported to modulate IL-2 gene expression in T cell activation (Helms et al., 2007).

miR-31이 T 세포에서 RhoA의 발현을 억제하는지를 평가하기 위해, 일차 T 세포를 miR-31 모방체 또는 대조군으로 형질감염시키고 RhoA의 발현을 RT-PCR 및 웨스턴 블롯팅 둘다로 측정하였다. RT-PCR은 miR-31이 RhoA mRNA의 발현을 억제한다는 것을 입증하였다(도 4A). 웨스턴 블롯 분석은 miR-31의 형질감염이 RhoA 단백질의 감소를 초래한다는 것을 보여주었다(도 4B). SLE 샘플 중의 miR-31 발현 수준이 NC 샘플 중의 miR-31 발현 수준보다 훨씬 더 낮았다는 점을 고려하여, 본 발명자들은 RhoA 발현이 SLE T 세포에서 증가되는지를 조사하였다. 32명의 SLE 환자 및 11명의 NC로부터 수득된 T 세포는 RhoA mRNA가 SLE T 세포에서 상당히 상향조절된다는 것을 보여주었다(도 4C). 나아가, 선형 상관관계 분석은 RhoA mRNA의 발현이 루푸스를 갖는 환자의 일차 T 세포에서의 miR-31의 발현과 음의 상관관계를 갖는다는 것을 입증하였다(도 4D). 더불어, 상기 데이터는 miR-31이 인간 일차 T 세포에서 RhoA를 표적화하고, RhoA mRNA 발현이 NC에 비해 루푸스 T 세포에서 훨씬 더 높다는 것을 암시한다.To assess whether miR-31 inhibits the expression of RhoA in T cells, primary T cells were transfected with miR-31 mimic or control and the expression of RhoA was measured by both RT-PCR and Western blotting. RT-PCR demonstrated that miR-31 suppressed the expression of RhoA mRNA (Fig. 4A). Western blot analysis showed that transfection of miR-31 resulted in a decrease in RhoA protein (Fig. 4B). In view of the fact that miR-31 expression levels in SLE samples were much lower than miR-31 expression levels in NC samples, we investigated whether RhoA expression was increased in SLE T cells. T cells obtained from 32 SLE patients and 11 NCs showed that RhoA mRNA was significantly up-regulated in SLE T cells (Fig. 4C). Furthermore, linear correlation analysis demonstrated that the expression of RhoA mRNA was negatively correlated with the expression of miR-31 in primary T cells of patients with lupus (Fig. 4D). In addition, the data suggest that miR-31 targets RhoA in human primary T cells and that RhoA mRNA expression is much higher in lupus T cells compared to NC.

실시예 4 - RhoA 발현의 억제Example 4 - Inhibition of RhoA Expression

miR-31이 RhoA를 통해 T 세포에서 IL-2 발현을 조절한다는 가설을 시험하기 위해, RhoA의 억제 효과를 이 시스템에서 조사하여 이러한 억제가 miR-31의 과다발현에 동등한 영향을 미칠 것인지를 평가하였다. RNA 간섭 기법을 이용하여 RhoA 발현을 넉다운시켰다. 도 5A 및 5B에 반영된 바와 같이, RhoA siRNA를 사용한 48시간 동안의 형질감염은 miR-31 모방체의 과다발현 후 관찰된 방식과 유사한 방식으로 RhoA mRNA 및 단백질 수준을 상당히 감소시켰다.In order to test the hypothesis that miR-31 regulates IL-2 expression in T cells through RhoA, the inhibitory effect of RhoA was examined in this system to assess whether this inhibition would have an equivalent effect on miR-31 overexpression Respectively. RNA interference was used to knock down RhoA expression. As reflected in FIGS. 5A and 5B, transfection with RhoA siRNA for 48 hours significantly reduced RhoA mRNA and protein levels in a manner similar to that observed after overexpression of miR-31 mimetics.

그 다음, 일차 T 세포를 RhoA에 대한 siRNA 또는 miR-31 모방체로 48시간 동안 형질감염시키고 PMA 및 이노마이신으로 24시간 동안 자극하였다. 형질감염 및 자극 후, IL-2 발현을 측정하였다. miR-31 모방체의 효과와 일치하여, RhoA의 넉다운은 IL-2 mRNA 및 이의 단백질 둘다의 발현을 현저히 증가시켰다(도 6A 및 6B). 추가 평가는 RhoA의 넉다운이 IL-2 프로모터의 활성을 향상시킨다는 결론을 뒷받침한다(도 6C).Primary T cells were then transfected with siRNA or miR-31 mimic for RhoA for 48 hours and stimulated with PMA and inomycin for 24 hours. After transfection and stimulation, IL-2 expression was measured. Consistent with the effect of the miR-31 mimic, knockdown of RhoA significantly increased expression of both IL-2 mRNA and its protein (FIGS. 6A and 6B). Further evaluation supports the conclusion that the knockdown of RhoA enhances the activity of the IL-2 promoter (Fig. 6C).

실시예Example 5 - 활성화된 5 - activated 루푸스Lupus T 세포에서 In T cells ILIL -2의 -2 of 상승된Elevated 발현 수준 Expression level

miR-31이 활성화된 T 세포에서 유도되었고 RhoA를 표적화함으로써 IL-2 생성을 조절하였다는 점을 고려하여, 본 발명자들은 15명의 SLE 환자 및 10명의 정상 대조군(NC)으로부터 단리된 활성화된 T 세포에서 miR-31, RhoA 및 IL-2의 발현 수준을 조사하였다. 이들 연구를 위해 사용된 대상체에 대한 추가 정보는 표 2에 제공되어 있다. 결과는 SLE 환자의 활성화된 T 세포에서의 miR-31 및 IL-2 발현이 NC에서 관찰된 발현보다 더 낮은 반면, RhoA의 발현은 더 높다는 것을 보여주었다(도 7A, B 및 C).Considering that miR-31 was induced in activated T cells and that IL-2 production was regulated by targeting RhoA, we found that activated T cells isolated from 15 SLE patients and 10 normal controls (NC) The expression levels of miR-31, RhoA and IL-2 were examined. Additional information about the subjects used for these studies is provided in Table 2. The results showed that miR-31 and IL-2 expression in activated T cells in SLE patients was lower than that observed in NC, whereas expression of RhoA was higher (Figures 7A, B and C).

이 관계를 더 조사하기 위해, miR-31 수준을 조작하여 SLE 환자의 T 세포에서 IL-2 생성에 대한 임의의 효과를 평가하였다. 루푸스 T 세포를 miR-31 모방체 또는 대조군 모방체로 형질감염시켰다. PMA 및 이노마이신으로 24시간 동안 자극한 후, 도 7D에 나타낸 바와 같이, miR-31로 형질감염된 활성화된 루푸스 T 세포에서 향상된 IL-2 단백질 발현이 관찰되었다. 이것은 루푸스 환자의 T 세포에서 관찰된 IL-2 생성의 결함을 구제하기 위한 miR-31 수준의 사용과 일치한다. To further investigate this relationship, miR-31 levels were manipulated to assess any effect on IL-2 production in T cells from SLE patients. Lupus T cells were transfected with miR-31 mimetics or control mimics. After stimulation with PMA and inomycin for 24 hours, enhanced IL-2 protein expression was observed in activated lupus T cells transfected with miR-31 as shown in Figure 7D. This is consistent with the use of the miR-31 level to relieve the deficiency of IL-2 production observed in T cells of patients with lupus.

재료 및 방법Materials and methods

하기 내용은 상기 실시예 1 내지 5를 수행하는 데에 사용된 일부 재료 및 방법을 요약한다. The following summarizes some of the materials and methods used to carry out Examples 1 to 5 above.

환자 및 건강한 대조군. 모든 SLE 환자 샘플들은 렌지(Renji) 병원 류마티스과(중국 상하이 소재)로부터 수득되었고 SLE에 대한 미국 류마티스 학회의 1982 개정 기준 중 4개 이상의 기준을 충족시켰다. SLE 활성을 SLE 질환 활성 지수(SLEDAI)로 평가하였다. 건강한 지원자의 건강한 대조군은 자가면역 질환 또는 면역억제 치료의 이력을 갖지 않았고, 연령, 성별 및 인종에 대해 환자와 일치하였다. 모든 참가자들은 중국 한족 출신이었다. 각각의 대상체로부터 수득된 말초혈 샘플(10 ㎖)을, 산 시트레이트 덱스트로스 포뮬라 A(ACD-A)를 함유하는 튜브 내에 수집하였다. 본 연구는 상하이 자오통 대학 의과대학 렌지 병원의 연구 윤리 위원회에 의해 승인받았다. Patients and healthy controls . All SLE patient samples were obtained from Renji Hospital Rheumatology Department (Shanghai, China) and met four or more of the 1982 revised standards of the American Rheumatology Society for SLE. SLE activity was assessed by the SLE disease activity index (SLEDAI). Healthy controls of healthy volunteers did not have a history of autoimmune disease or immunosuppressive therapy and were consistent with patients for age, sex, and race. All participants were from Chinese Han Chinese. Peripheral blood samples (10 ml) obtained from each subject were collected in tubes containing Acid Citrate Dextrose Formula A (ACD-A). This study was approved by the Research Ethics Committee of the Zhao Hospital of the University of Shanghai Zhao Tong University.

CD3 ⁺ T 세포의 단리. 림포프렙 피콜-파크(Lymphoprep Ficoll-Paque)™ 플러스(지이 헬쓰케어, 영국 찰폰트 소재) 상에서의 밀도 구배 원심분리를 통해 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 헤파린처리된 전혈로부터 분리하였다. 자성 CD3 마이크로비드(밀테니이 바이오텍(Miltenyi Biotec))를 제조자의 프로토콜에 따라 사용하여 양성 선별로 CD3⁺ T 세포를 새로운 PBMC로부터 정제하였다. T 림프구 순도는 FACSCalibur(벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))로 분석하였을 때 95%를 초과하였다. Isolation of CD3 ⁺ T cells . Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from heparinized whole blood through density gradient centrifugation on Lymphoprep Ficoll-Paque ™ Plus (GlyHealthcare, Charlotteton, UK). CD3 ⁺ T cells were purified from fresh PBMCs by positive selection using magnetic CD3 microbeads (Miltenyi Biotec) according to the manufacturer's protocol. T lymphocyte purity was greater than 95% when analyzed by FACSCalibur (Becton Dickinson).

세포 배양 및 자극 조건. 정제된 T 림프구를 5% CO₂ 하에 37℃에서 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하고 PMA(50 ng/㎖, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 및 이노마이신(1 ㎍/㎖, 시그마-알드리치)으로 상이한 시간 동안 자극하였다. T 세포 백혈병 세포주인 주르카트 세포를 5% CO₂ 하에 37℃에서 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신이 함유된 RPMI 1640 배지(라이프 테크놀로지스(Life Technologies), 미국 매릴랜드주 록빌 소재)에서 생장시켰다. 주르카트 세포를 PMA(50 ng/㎖) 및 이노마이신(1 ㎍/㎖)으로 자극하였다. Cell culture and stimulation conditions . Purified T lymphocytes were cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin / streptomycin at 37 ° C under 5% CO ₂ and PMA (50 ng / ml, Sigma- Aldrich) and inomycin (1 [mu] g / ml, Sigma-Aldrich) for different times. Jurkat cells, a T cell leukemia cell line, were grown in RPMI 1640 medium (Life Technologies, Rockville, Md.) Containing 10% FBS and 1% penicillin / streptomycin at 37 ° C under 5% CO ₂ . Jurkat cells were stimulated with PMA (50 ng / ml) and inomycin (1 μg / ml).

miRNA 모방체, 작은 간섭 RNA 및 안타고미르. 작은 간섭 RNA(siRNA) 및 miRNA 모방체는 젠파마(Genepharma)(중국 상하이 소재)에 의해 합성되었다. 문헌(Ahmed et al., 2005)에서 언급된 RhoA siRNA 서열은 다음과 같다: RhoA-siRNA-1: 5'-AAGATTATGACCGTCTGAGGC-3'(서열번호 1); RhoA-siRNA-2: 5'-AAGGATCTTCGGAATGATGAG-3'(서열번호 2). miRNA-31 모방체 서열은 다음과 같다: 모방체: 5'-AGGCAAGAUGCUGGCAUAGCU-3'(서열번호 3). 안타고미르-31 및 대조군 구축물은 리보 바이올로지(Ribo biology)(중국 광동 소재)로부터 주문되었다. 안타고미르-31 서열은 다음과 같다: 안타고미르: 5'-AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCU-3'(서열번호 4). 기능 획득(miRNA-31에 의해 정상적으로 억제된 표적 유전자의 모방체 유도된 하향조절) 실험과 기능 상실(miRNA-31에 의해 정상적으로 억제된 표적 유전자의 안타고미르 유도된 상향조절) 실험의 조합은 miRNA-표적 관계를 입증하였고 miRNA 기능 분석을 가능하게 하였다. 상기 올리고뉴클레오티드들의 경우, 사용된 siRNA 및 miRNA-31 모방체는 이중 가닥 분자이었고, 안타고미르는 단일 가닥 분자이었다. 리포펙타민 2000(인비트로겐(Invitrogen))을 사용하여 세포를 형질감염시킴으로써 올리고뉴클레오티드를 세포에서 외생적으로 발현하였다. miRNA mimics, small interfering RNAs, and antagomirs . Small interfering RNA (siRNA) and miRNA mimetics were synthesized by Gene Pharma (Shanghai, China). The RhoA siRNA sequences mentioned in the literature (Ahmed et al., 2005) are as follows: RhoA-siRNA-1: 5'-AAGATTATGACCGTCTGAGGC-3 '(SEQ ID NO: 1); RhoA-siRNA-2: 5'-AAGGATCTTCGGAATGATGAG-3 '(SEQ ID NO: 2). The miRNA-31 mimetic sequence is as follows: mimetic: 5'-AGGCAAGAUGCUGGCAUAGCU-3 '(SEQ ID NO: 3). Anthagomir-31 and control constructs were ordered from Ribo biology (Guangdong, China). The antagomir-31 sequence is: antagomir: 5'-AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCU-3 '(SEQ ID NO: 4). The combination of functional acquisition (mimic induced downregulation of the target gene normally repressed by miRNA-31) and loss of function (antagonist induced upregulation of the target gene normally repressed by miRNA-31) Proved the target relationship and enabled miRNA function analysis. In the case of the oligonucleotides, the siRNA and miRNA-31 mimic used were double stranded molecules and the antagomir was a single stranded molecule. Oligonucleotides were exogenously expressed in cells by transfection of cells using lipofectamine 2000 (Invitrogen).

형질감염. 인간 일차 T 세포를 RPMI 1640 내에 2시간 동안 놓아둔 후, 리포펙타민 2000(인비트로겐)을 제조자의 프로토콜에 따라 사용하여 miRNA 또는 siRNA 올리고뉴클레오티드로 형질감염시켰다. 형질감염으로부터 6시간 후, T 세포를 새로운 완전 배지(10% FBS로 보충된 RPMI 1640 배지)에 첨가하였다. 24시간 후, 세포를 5% CO₂ 하에 37℃에서 PMA 및 이노마이신으로 최대 24시간 동안 자극하였다. miR-31의 억제를 위해, 인간 일차 T 세포를 혈청 무함유 옵티-DMEM 배지(깁코(GIBCO))에 재현탁하고 500 nM 안타고미르-31 또는 대조군 스크램블드(scrambled) 안타고미르로 형질감염시켰다. 형질감염으로부터 6시간 후, 500 nM 안타고미르로 보충된 RPMI 배지를 첨가하고 24시간 후 세포를 전술된 바와 같이 자극하였다. Transfection . Human primary T cells were left in RPMI 1640 for 2 hours and then transfected with miRNA or siRNA oligonucleotides using lipofectamine 2000 (Invitrogen) according to the manufacturer's protocol. Six hours after transfection, T cells were added to fresh complete medium (RPMI 1640 medium supplemented with 10% FBS). After 24 hours, the cells were stimulated with PMA for up to 24 hours and Ino erythromycin at 37 ℃ under 5% CO _2. For inhibition of miR-31, human primary T cells were resuspended in serum-free Opti-DMEM medium (GIBCO) and transfected with 500 nM antagomir-31 or control scrambled antagomir. Six hours after transfection, RPMI medium supplemented with 500 nM antagonist was added and after 24 hours the cells were stimulated as described above.

정량 PCR. 총 RNA를 트라이졸(TRIzol) 시약(인비트로겐)으로 단리하였다. miRNA를 정량하기 위해, 택만^® 마이크로RNA 역전사 키트(어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재)를 사용하여 RNA(20 ng) 샘플을 역전사하였다. 택만 마이크로RNA 분석을 실시간 PCR에 대한 제조자의 권고(어플라이드 바이오시스템스)에 따라 사용하였다. RNU48(U48)을 발현 값의 표준화를 위한 내생성 대조군으로서 사용하였다. mRNA의 정량적 RT-PCR 분석을 위해, 500 ng의 총 RNA를 프라임스크립트(PrimeScript) RT 시약 키트(타카라(Takara), 일본 시가 소재)로 역전사하였다. SYBR 그린(SYBR 프리믹스 Ex Taq RT-PCR 키트; 타카라, 일본 시가 소재)을 사용한 실시간 PCR로 cDNA를 증폭하고, 리보좀 단백질 L13A(RPL13A)를 내부 대조군으로서 사용하여 cDNA의 양을 표준화하였다. 택만 및 SYBR 그린 분석을 7900HT 신속 실시간 PCR 기계(어플라이드 바이오시스템스) 상에서 이중으로 수행하였다. 2-^ΔΔ ^ct 방법을 이용하여 상대적 발현 수준을 계산하였다. 하기 주문제작 프라이머를 SYBR 그린 기제의 실시간 PCR을 위해 사용하였다: RPL13A, 정방향 5'-CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGA-3'(서열번호 5), 역방향 5'-TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAA-3'(서열번호 6). RhoA, 정방향 5'-TCTTCGGAATGATGAGCAC-3'(서열번호 7), 역방향 5'-CTTTGGTCTTTGCTGAACAC-3'(서열번호 8). IL-2, 정방향 5'-TGCCACAATGTACAGGATGC-3'(서열번호 9), 역방향 5'-GCCTTCTTGGGCATGTAAAA-3'(서열번호 10). 다른 프라이머들은 상업적으로 입수가능하였고/하였거나 공개된 서열에 상응한다. 대안적인 프라이머들은 용이하게 발생될 수 있다. Quantitative PCR . Total RNA was isolated as a TRIzol reagent (Invitrogen). In order to quantify the miRNA, using taekman ^® micro RNA reverse transcription kit (Applied Bio Systems (Applied Biosystems), Foster City, Calif.) was reverse transcribed sample RNA (20 ng). Tacman microRNA analysis was used according to manufacturer's recommendations for real-time PCR (Applied Biosystems). RNU48 (U48) was used as an endogenous control for normalization of expression values. For quantitative RT-PCR analysis of mRNA, 500 ng of total RNA was reverse transcribed with the PrimeScript RT reagent kit (Takara, Shiga, Japan). CDNA was amplified by real-time PCR using SYBR green (SYBR premix Ex Taq RT-PCR kit; Takara, Shiga, Japan) and the amount of cDNA was standardized using ribosomal protein L13A (RPL13A) as an internal control. The tack and SYBR green analyzes were performed in duplicate on an 7900HT rapid real time PCR machine (Applied Biosystems). Relative expression levels were calculated using the 2- ^Δ ^ct method. The following custom primers were used for real time PCR of the SYBR green base: RPL13A, forward 5'-CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGA-3 '(SEQ ID NO: 5), reverse 5'-TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAA-3' (SEQ ID NO: 6). RhoA, forward 5'-TCTTCGGAATGATGAGCAC-3 '(SEQ ID NO: 7), reverse 5'-CTTTGGTCTTTGCTGAACAC-3' (SEQ ID NO: 8). IL-2, forward 5'-TGCCACAATGTACAGGATGC-3 '(SEQ ID NO: 9), reverse 5'-GCCTTCTTGGGCATGTAAAA-3' (SEQ ID NO: 10). Other primers correspond to commercially available and / or published sequences. Alternative primers can be generated easily.

레포터 구축물의 클로닝 , 일시적 형질감염 및 루시퍼라제 분석. pGL3-기초 루시퍼라제 레포터 벡터(프로메가(Promega))를 IL-2 프로모터 레포터 구축물의 발생을 위해 사용하였다. 요약하건대, 884 bp 프로모터 영역(-59 내지 +825 bp 염기)을 PCR로 게놈 DNA로부터 증폭하였고, 사용된 프라이머는 다음과 같았다: 정방향 5'-CATTCATAGTGTCCCAGGTG-3'(서열번호 11), 역방향 5'-CATTGTGGCAGGAGTTGAG-3'(서열번호 12). Cloning, transient transfection and luciferase assay Les Potter structures. pGL3-based luciferase reporter vector (Promega) was used for generation of the IL-2 promoter reporter construct. Briefly, the 884 bp promoter region (-59 to +825 bp base) was amplified from genomic DNA by PCR and the primers used were: forward 5'-CATTCATAGTGTCCCAGGTG-3 '(SEQ ID NO: 11), reverse 5' -CATTGTGGCAGGAGTTGAG-3 '(SEQ ID NO: 12).

상기 정방향 프라이머 및 역방향 프라이머는 각각 Mlu I 부위 및 Xho I 부위를 생성하였고, PCR 생성물을 제조자의 설명서에 따라 pGL3-기초 플라스미드 내로 라이게이션시켰다. 주르카트 세포를 24웰 플레이트 내에 1X10⁶개 세포/웰의 밀도로 시딩하고 2시간 후 형질감염시켰다. 상기 IL-2 프로모터를 함유하는 pGL3-기초 루시퍼라제 레포터 플라스미드(lug), miRNA 올리고뉴클레오티드 또는 siRNA, 및 형질감염 효율의 표준화를 위해 사용된 50 ng pRL-기초-luc 벡터를, 리포펙타민 2000(인비트로겐)을 사용하여 주르카트 세포 내로 동시형질감염시켰다. 24시간의 회복 기간 후, 형질감염된 세포를 비처리된 상태로 방치하였거나 PMA 및 이노마이신으로 24시간 동안 자극하였다. 그 다음, CENTRO XS³ LB 960(버쏠드 테크놀로지스(Berthold Technologies)) 기계 상에서 수행된 이중 루시퍼라제 레포터 분석 시스템(프로메가, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 제조자의 프로토콜에 따라 사용하여 루시퍼라제 활성을 평가하였다. 레닐라 루시퍼라제 대 초파리 루시퍼라제의 비를 각각의 웰에 대해 수득하였다. 모든 실험들을 삼중으로 수행하였다.The forward primer and the reverse primer generated the Mlu I site and the Xho I site, respectively, and the PCR product was ligated into the pGL3-based plasmid according to the manufacturer's instructions. Jurkat cells were seeded at a density of 1 × 10 ⁶ cells / well in 24 well plates and transfected 2 hours later. Based on the pGL3-based luciferase reporter plasmid (lug), miRNA oligonucleotide or siRNA containing the IL-2 promoter, and the 50 ng pRL-based-luc vector used for normalization of transfection efficiency, Lipofectamine 2000 (Invitrogen) was used to co-transfect the cells into jurkat cells. After a recovery period of 24 hours, the transfected cells were left untreated or stimulated with PMA and inomycin for 24 hours. The double luciferase reporter assay system (Promega, Madison, Wis.) Was then run on a CENTRO XS ³ LB 960 (Berthold Technologies) machine using Luciferase activity according to the manufacturer's protocol Respectively. The ratio of Renilla luciferase to Drosophila luciferase was obtained for each well. All experiments were performed in triplicate.

효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA). 세포 배양물 상청액 내로 분비된 IL-2 단백질에 대한 ELISA를 상업적으로 입수가능한 키트(시탕 바이올로지(Xi Tang Biology), 중국 상하이 소재)를 제조자의 프로토콜에 따라 사용하여 정량하였다. Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) . ELISA for IL-2 protein secreted into cell culture supernatants was quantified using a commercially available kit (Xi Tang Biology, Shanghai, China) according to the manufacturer's protocol.

웨스턴 블롯팅. 6웰 플레이트에서, T 세포를 5X10⁶개 세포/웰의 밀도로 시딩하고 miRNA 올리고뉴클레오티드(웰 당 100 nM 최종 농도의 miR-31 모방체 또는 대조군 모방체 및 100 nM 최종 농도의 siRNA RhoA 또는 대조군)로 형질감염시켰다. 형질감염으로부터 6시간 후, T 세포를 새로운 완전 배지에 첨가하였다. 형질감염으로부터 2일 후, 세포를 용해시키고 단백질을 추출하였다. 그 다음, 상청액을 나트륨 도데실설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 분석하고 표시된 항체로 블롯팅하고 루미놀/인핸서 용액(피어스(Pierce), 미국 일리노이주 록포드 소재)으로 검출하였다. 마우스 항-RhoA 항체(산타 크루즈(Santa Cruz), 미국 캘리포니아주 소재, 1:200) 및 토끼 항-튜불린 항체(산타 크루즈, 미국 캘리포니아주 소재, 1:5,000)를 사용하여 RhoA 및 튜불린의 웨스턴 블롯팅을 수행하였다. 소프트웨어 콴터티 원(Quantity One)(바이오-라드)의 부피 툴을 제조자의 매뉴얼에 따라 이용하여 단백질 밴드를 정량하였다. Western blotting . In a 6-well plate, T cells were seeded at a density of ⁵ x 10 ⁶ cells / well and incubated with miRNA oligonucleotides (miR-31 mimic or 100 nM final concentration of siRNA RhoA or control) Lt; / RTI > Six hours after transfection, T cells were added to fresh complete medium. Two days after transfection, cells were lysed and protein extracted. The supernatant was then analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and blotted with the labeled antibody and detected with a luminol / enhancer solution (Pierce, Rockford, IL). (Santa Cruz, Calif., USA; 1: 5,000) were immunized with mouse anti-RhoA antibody (Santa Cruz, 1: 200, CA) and rabbit anti-tubulin antibody Western blotting was performed. Protein bands were quantified using a software Quantity One (Bio-Rad) volume tool according to the manufacturer's manual.

데이터 분석. 프리즘 4 소프트웨어 버전 4.03(그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software), 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)을 이용하여 데이터를 분석하였다. 비모수 만-휘트니 검정을 이용하여 2개의 군들 사이의 유전자 발현을 비교한 반면, 비대응 스튜던츠 t-검정을 이용하여 레포터 유전자 활성을 비교하였다. 0.05 미만의 P 값(2-측)은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다. Data analysis . Data was analyzed using Prism 4 software version 4.03 (GraphPad Software, San Diego, CA). The gene expression between the two groups was compared using the non-parametric only-Whitney test, while the non-corresponding Student's t-test was used to compare the reporter gene activity. P values less than 0.05 (2-side) were considered statistically significant.

서열목록Sequence List

서열번호 1(RhoA - siRNA-1) - AAGATTATGACCGTCTGAGGCSEQ ID NO: 1 (RhoA-siRNA-1) - AAGATTATGACCGTCTGAGGC

서열번호 2(RhoA - siRNA-2) - AAGGATCTTCGGAATGATGAGSEQ ID NO: 2 (RhoA-siRNA-2) - AAGGATCTTCGGAATGATGAG

서열번호 3(miRNA-31 모방체) - AGGCAAGAUGCUGGCAUAGCUSEQ ID NO: 3 (miRNA-31 mimic) - AGGCAAGAUGCUGGCAUAGCU

서열번호 4(miRNA-31 안타고미르) - AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCUSEQ ID NO: 4 (miRNA-31 antagomir) - AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCU

서열번호 5(RPL13A 정방향 프라이머) - CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGASEQ ID NO: 5 (RPL13A forward primer) - CCTGGAGGAGAAGAGGAAAGAGA

서열번호 6(RPL13A 역방향 프라이머) - TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAASEQ ID NO: 6 (RPL13A reverse primer) - TTGAGGACCTCTGTGTATTTGTCAA

서열번호 7(RhoA 정방향 프라이머) - TCTTCGGAATGATGAGCACSEQ ID NO: 7 (RhoA forward primer) - TCTTCGGAATGATGAGCAC

서열번호 8(RhoA 역방향 프라이머) - CTTTGGTCTTTGCTGAACACSEQ ID NO: 8 (RhoA reverse primer) - CTTTGGTCTTTGCTGAACAC

서열번호 9(IL-2 정방향 프라이머) - TGCCACAATGTACAGGATGCSEQ ID NO: 9 (IL-2 forward primer) - TGCCACAATGTACAGGATGC

서열번호 10(IL-2 역방향 프라이머) - GCCTTCTTGGGCATGTAAAASEQ ID NO: 10 (IL-2 reverse primer) - GCCTTCTTGGGCATGTAAAA

서열번호 11(프로모터 정방향 프라이머) - CAT TCATAGTGTCCCAGGTGSEQ ID NO: 11 (promoter forward primer) - CAT TCATAGTGTCCCAGGTG

서열번호 12(프로모터 역방향 프라이머) - CATTGTGGCAGGAGTTGAGSEQ ID NO: 12 (Promoter reverse primer) - CATTGTGGCAGGAGTTGAG

참고문헌references

참고도입Introduction of reference

본원에서 언급된 모든 공개문헌들 및 특허들은 각각의 개별 공개문헌 또는 특허가 참고로 도입되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 표시되어 있는 것처럼 전체적으로 본원에 참고로 도입된다.All publications and patents mentioned herein are incorporated herein by reference in their entirety as if each individual publication or patent was specifically and individually indicated to be incorporated by reference.

본 개시내용의 특정 양태들이 논의되어 있지만, 상기 명세서는 예시하기 위한 것이지 한정하기 위한 것이 아니다. 본 개시내용의 많은 변경들이 본 명세서 및 하기 특허청구범위의 검토 시 당업자에게 자명해질 것이다. 본 개시내용의 전체 범위는 이러한 변경과 함께 하기 특허청구범위(이의 등가물의 전체 범위와 함께) 및 본 명세서를 참조함으로써 결정되어야 한다.While certain aspects of the disclosure have been discussed, the foregoing description is intended to be illustrative, not limiting. Many modifications of the present disclosure will be apparent to those skilled in the art in view of this specification and the following claims. The full scope of the disclosure should be determined by reference to the following claims (together with the full scope of equivalents thereof) and the following claims, along with such modifications.

SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE, LLC <120> MICRORNA-31 COMPOSITIONS AND METHODS FOR USE IN AUTOIMMUNE DISEASE <130> MR31-100WO1 <140> PCT/US2012/044197 <141> 2012-06-26 <150> 61/501,482 <151> 2011-06-27 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 aagattatga ccgtctgagg c 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 aaggatcttc ggaatgatga g 21 <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 aggcaagaug cuggcauagc u 21 <210> 4 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 agcuaugcca gcaucuugcc u 21 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 5 cctggaggag aagaggaaag aga 23 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 6 ttgaggacct ctgtgtattt gtcaa 25 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 7 tcttcggaat gatgagcac 19 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 8 ctttggtctt tgctgaacac 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 9 tgccacaatg tacaggatgc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 10 gccttcttgg gcatgtaaaa 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 11 cattcatagt gtcccaggtg 20 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 12 cattgtggca ggagttgag 19 SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE, LLC <120> MICRORNA-31 COMPOSITIONS AND METHODS FOR USE IN AUTOIMMUNE DISEASE <130> MR31-100WO1 <140> PCT / US2012 / 044197 <141> 2012-06-26 <150> 61 / 501,482 <151> 2011-06-27 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 자이클립 <400> 1 aagattatga ccgtctgagg c 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 자이클립 <400> 2 aaggatcttc ggaatgatga g 21 <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 자이클립 <400> 3 aggcaagaug cuggcauagc u 21 <210> 4 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 자이클립 <400> 4 agcuaugcca gcaucuugcc u 21 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 5 cctggaggag aagaggaaag aga 23 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 6 ttgaggacct ctgtgtattt gtcaa 25 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 7 tcttcggaat gatgagcac 19 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 8 ctttggtctt tgctgaacac 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 9 tgccacaatg tacaggatgc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 10 gccttcttgg gcatgtaaaa 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 11 cattcatagt gtcccaggtg 20 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 12 cattgtggca ggagttgag 19

Claims

마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물을 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 인터류킨-2(IL-2) 발현을 증가시키는 방법으로서, 이때 인터류킨-2(IL-2) 발현의 증가를 필요로 하는 대상체가 전신홍반루푸스를 갖는 대상체인 방법.Comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a composition that increases the expression of microRNA-31 or reduces the expression of RhoA to a subject in need of increased expression of interleukin-2 (IL-2) (IL-2) expression, wherein a subject in need of increased expression of interleukin-2 (IL-2) is a subject with systemic lupus erythematosus.

T 세포를, 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체의 T 세포에서 인터류킨-2(IL-2) 발현을 증가시키는 방법.(IL-2) expression in T cells of a subject with systemic lupus erythematosus, comprising contacting the T cell with an effective amount of a composition that increases expression of RhoA or reduces the expression of RhoA. / RTI >

마이크로RNA-31의 발현을 증가시키거나 RhoA의 발현을 감소시키는 유효량의 조성물을 전신홍반루푸스의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하여 상기 자가면역 병태를 치료하는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스를 치료하는 방법.A method for treating systemic lupus erythematosus comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a composition that increases the expression of microRNA-31 or reduces the expression of RhoA, and treating said autoimmune disease How to.

마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 유효량의 조성물을 RhoA 발현의 감소를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 RhoA 발현을 감소시키는 방법으로서, 이때 RhoA 발현의 감소를 필요로 하는 대상체가 전신홍반루푸스를 갖는 대상체인 방법. 31. A method of decreasing RhoA expression in a subject, said method comprising administering to said subject an effective amount of a composition that increases expression of microRNA-31 to a subject in need of a reduction in RhoA expression, wherein said RhoA expression is decreased A method wherein the subject is a subject with systemic lupus erythematosus.

T 세포를, 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 유효량의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체의 T 세포에서 RhoA 발현을 감소시키는 방법.31. A method of reducing RhoA expression in a T cell of a subject with systemic lupus erythematosus comprising contacting the T cell with an effective amount of a composition that increases expression of microRNA-31.

제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체가 질환 발적(flare)의 증상을 경험하는 것인 방법.6. The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the subject with systemic lupus erythematosus is experiencing symptoms of a flare.

제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체가 질환 발적의 증상을 경험하지 않는 것인 방법.6. The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the subject with systemic lupus erythematosus does not experience symptoms of disease outbreak.

제6항 또는 제7항에 있어서, 대상체의 증상이 루푸스 신장염을 포함하는 것인 방법.8. The method according to claim 6 or 7, wherein the symptom of the subject comprises lupus nephritis.

제2항 또는 제5항에 있어서, T 세포가 시험관내에서 활성화된 T 세포인 방법.6. The method according to claim 2 or 5, wherein the T cell is an activated T cell in vitro.

제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 마이크로RNA-31의 발현을 증가시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 것인 방법.10. The method according to any one of claims 1 to 9, wherein the composition comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence which increases the expression of microRNA-31.

제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 RhoA의 발현을 감소시키는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 것인 방법.11. The method according to any one of claims 1 to 10, wherein the composition comprises a nucleic acid comprising a nucleotide sequence which reduces the expression of RhoA.

제10항 또는 제11항에 있어서, 조성물이 마이크로RNA-31을 포함하는 것인 방법.12. The method according to claim 10 or 11, wherein the composition comprises microRNA-31.

제10항 또는 제11항에 있어서, 조성물이 짧은 간섭 핵산(siNA)을 포함하는 것인 방법. 12. The method of claim 10 or 11, wherein the composition comprises a short interfering nucleic acid (siNA).

제13항에 있어서, 조성물이 RhoA에 혼성화할 수 있는 siNA를 포함하는 것인 방법.14. The method of claim 13, wherein the composition comprises a siNA capable of hybridizing to RhoA.

제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, RhoA의 발현을 감소시키는 것이 RhoA 전사체의 발현을 감소시키는 것을 포함하는 것인 방법.15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein reducing the expression of RhoA comprises reducing the expression of the RhoA transcript.

제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, RhoA의 발현을 감소시키는 것이 RhoA 단백질의 발현을 감소시키는 것을 포함하는 것인 방법.16. The method according to any one of claims 1 to 15, wherein decreasing the expression of RhoA comprises reducing the expression of the RhoA protein.

제1항 또는 제2항에 있어서, IL-2의 발현을 증가시키는 것이 IL-2 전사체의 발현을 증가시키는 것을 포함하는 것인 방법.3. The method of claim 1 or 2, wherein increasing expression of IL-2 comprises increasing expression of an IL-2 transcript.

제1항, 제2항 및 제17항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2의 발현을 증가시키는 것이 IL-2 단백질의 발현을 증가시키는 것을 포함하는 것인 방법.18. The method of any one of claims 1, 2 and 17, wherein increasing expression of IL-2 comprises increasing expression of IL-2 protein.

제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 투여한 후 일정 시점에서 대상체로부터 채취된 샘플에서 IL-2의 발현을 분석하는 단계를 추가로 포함하는 방법.19. The method of any one of claims 1 to 18, further comprising analyzing the expression of IL-2 in a sample taken from a subject at a point in time after administering the composition.

제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 투여한 후 일정 시점에서 대상체로부터 채취된 샘플에서 RhoA의 발현을 분석하는 단계를 추가로 포함하는 방법.20. The method of any one of claims 1 to 19, further comprising analyzing the expression of RhoA in a sample taken from a subject at a point in time after administering the composition.

제19항 또는 제20항에 있어서, 샘플이 혈액 샘플을 포함하는 것인 방법.21. The method of claim 19 or 20, wherein the sample comprises a blood sample.

제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2의 발현을 분석하는 단계가 T 세포에서 IL-2 전사체의 발현을 분석하는 단계를 포함하는 것인 방법.22. The method according to any one of claims 19 to 21, wherein the step of analyzing the expression of IL-2 comprises analyzing the expression of an IL-2 transcript in T cells.

제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2의 발현을 분석하는 단계가 샘플에서 IL-2 단백질의 발현을 분석하는 단계를 포함하는 것인 방법.22. The method of any one of claims 19 to 21, wherein analyzing the expression of IL-2 comprises analyzing the expression of the IL-2 protein in the sample.

제20항 또는 제21항에 있어서, RhoA의 발현을 분석하는 단계가 T 세포에서 RhoA 전사체의 발현을 분석하는 단계를 포함하는 것인 방법.22. The method of claim 20 or 21, wherein analyzing the expression of RhoA comprises analyzing the expression of the RhoA transcript in the T cells.

제20항 또는 제21항에 있어서, RhoA의 발현을 분석하는 단계가 샘플에서 RhoA 단백질의 발현을 분석하는 단계를 포함하는 것인 방법.22. The method of claim 20 or 21, wherein analyzing the expression of RhoA comprises analyzing the expression of the RhoA protein in the sample.

화합물이 투여된, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체에서 마이크로RNA-31, RhoA 및 IL-2로부터 선택된 생체마커의 존재, 부재 또는 양을 분석하는 단계; 및 분석된 상기 생체마커의 존재, 부재 또는 양에 기초하여 상기 대상체에게 후속적으로 투여되는 화합물의 용량 또는 투약 요법(dosing regimen)이 조절되어야 하는지를 결정하는 단계를 포함하는 방법.Analyzing the presence, absence or amount of a biomarker selected from microRNA-31, RhoA and IL-2 in a subject having a systemic lupus erythematosus to which the compound is administered; And determining the dose of the compound or the dosing regimen to be subsequently administered to the subject based on the presence, absence or amount of the biomarker analyzed.

제26항에 있어서, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체가 질환 발적의 증상을 경험하는 것인 방법.27. The method of claim 26, wherein the subject having systemic lupus erythematosus is experiencing symptoms of a disease anemia.

제26항에 있어서, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체가 질환 발적의 증상을 경험하지 않는 것인 방법.27. The method of claim 26, wherein the subject with systemic lupus erythematosus does not experience symptoms of disease outbreak.

제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 스테로이드 또는 면역억제제를 포함하는 것인 방법.29. The method according to any one of claims 26 to 28, wherein the compound comprises a steroid or immunosuppressant.

제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 마이크로RNA-31을 증가시키거나 RhoA를 감소시키는 조성물을 포함하는 것인 방법.29. The method according to any one of claims 26 to 28, wherein the compound comprises a composition that increases microRNA-31 or reduces RhoA.

제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 IL-2를 포함하는 것인 방법.29. The method according to any one of claims 26 to 28, wherein the compound comprises IL-2.

전신홍반루푸스를 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계; 및 상기 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 분석하는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스를 진단하는 방법.Obtaining a sample from a subject suspected of having systemic lupus erythematosus; And analyzing the expression of microRNA-31 or RhoA in said sample.

제32항에 있어서, 전신홍반루푸스를 갖는 것으로 의심되는 대상체가 질환 발적의 증상을 경험하지 않는 것인 방법.33. The method of claim 32, wherein the subject suspected of having systemic lupus erythematosus does not experience symptoms of a disease anemia.

전신홍반루푸스에 대한 치료를 받은 대상체의 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 검출하는 단계; 및 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 치료 전에 또는 치료 동안 초기 시점에서 수득된 동일한 대상체의 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스의 치료를 모니터링하는 방법으로서, 이때 치료 전에 또는 치료 동안 초기 시점에서 수득된 샘플에 비해 치료 동안 후기 시점에서 수득된 샘플에서의 마이크로RNA-31의 증가 또는 RhoA의 감소가 치료의 효과성(effectiveness)을 나타냄으로써 치료를 모니터링하는 것인 방법.Detecting expression of microRNA-31 or RhoA in a sample of a subject that has been treated for systemic lupus erythematosus; And comparing the expression of microRNA-31 or RhoA with expression in a sample of the same subject obtained at or earlier than the treatment, or at an early time during treatment, wherein the treatment of systemic lupus erythematosus Wherein an increase in microRNA-31 or a decrease in RhoA in the sample obtained at a later time point during treatment compared to the sample obtained at the initial time during treatment is to monitor the treatment by indicating the effectiveness of the treatment.

전신홍반루푸스에 대한 특정 치료의 개시 전에 대상체로부터 채취된 샘플로부터의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 건강한 대상체로부터 채취된 샘플에서의 발현을 반영하는 표준 범위와 비교하는 단계로서, 이때 표준 범위 미만의 마이크로RNA-31의 발현 또는 표준 범위 초과의 RhoA의 발현이 전신홍반루푸스에 대한 치료에 대한 감수성을 나타내는 것인 단계; 대상체가 전신홍반루푸스에 대한 치료에 대해 감수성을 나타내는 것으로 확인되는 경우 마이크로RNA-31, RhoA에 혼성화하는 siNA 또는 IL-2 단백질을 포함하는 유효량의 조성물로 상기 대상체를 치료하는 단계; 상기 대상체의 치료 후 샘플에서 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 검출하는 단계; 및 치료 후 샘플에서의 마이크로RNA-31 또는 RhoA의 발현을 특정 치료의 개시 전에 채취된 샘플에서의 발현과 비교하는 단계를 포함하는, 전신홍반루푸스를 갖는 대상체를 치료하는 방법.Comparing the expression of microRNA-31 or RhoA from a sample taken from a subject prior to the initiation of a particular treatment for systemic lupus erythematosus to a standard range that reflects expression in a sample taken from a healthy subject, Or expression of RhoA in excess of the standard range indicates susceptibility to treatment for systemic lupus erythematosus; Treating said subject with an effective amount of a composition comprising a microRNA-31, a siNA or an IL-2 protein that hybridizes to RhoA when the subject is found to be susceptible to treatment for systemic lupus erythematosus; Detecting expression of microRNA-31 or RhoA in a sample after treatment of said subject; And comparing the expression of microRNA-31 or RhoA in the sample after treatment with expression in a sample taken prior to initiation of the particular treatment.