KR20130005005A - Cosmetic composition and manufacturing process of plant extracts consisting of adansonia digitata, lithospermum erythrorhizon siebold and zuccarini., dioscorea japonica thunberg and nelumbo nucifera gaertner having anti-inflammation and anti-allergic effect - Google Patents

Abstract

PURPOSE: A method for preparing a mixture extract of Adansonia digitata, Lithospermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini, Dioscorea japonica Thunberg, and lotus roots and a cosmetic composition containing the extract are provided to ensure excellent anti-inflammatory and anti-allergic effects. CONSTITUTION: A cosmetic composition contains a mixture extract of Adansonia digitata, Lithospermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini, Dioscorea japonica Thunberg, and lotus roots. The cosmetic composition is prepared by fermentation using Bacillus sp. The extract is prepared using a mixture solvent of purified water, C1-C43 alcohol, hydrous C1-C4 alcohol, C1-C6 glycol, hydrous C1-C6 glycol, ethyl acetate, benzene, hexane, diethyl ether, or dichloromethane. The cosmetic composition is manufactured in the form of a lotion, a nutrition cream, a massage cream, an essence, or a pack. [Reference numerals] (AA) Adansonia digitata; (BB) Lithospermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini; (CC) Dioscorea japonica Thunberg; (DD) Lotus root; (EE) Mixed extract

Description

항염 및 항알러지 효과가 있는 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition and manufacturing process of plant extracts consisting of Adansonia digitata, Lithospermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini., Dioscorea japonica Thunberg and Nelumbo nucifera Gaertner having anti-inflammation and anti-allergic effect}Production method of anti-inflammatory and anti-allergic baobab, root, yam, lotus root mixed extract and cosmetic composition comprising same and Nelumbo nucifera Gaertner having anti-inflammation and anti-allergic effect}

본 발명은 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition containing baobab, root, yam, lotus root mixed extract.

대부분의 질환과 마찬가지로 피부 질환은 염증 반응을 동반하는데 대표적인 피부 질환인 알레르기 접촉피부염, 건선, 아토피성 피부염 등은 면역세포인 T세포가 매개하는 염증성 질환이다. 따라서 주요 피부 질환에 대한 관리 및 치료에는 반드시 항염증제가 응용되어야 한다. 이러한 염증성 질환을 치료하기 위해 스테로이드성 항염증 제제가 사용되고 있으나 스테로이드성 제제들은 여러 가지 많은 부작용을 나타내고 있어 그 사용을 제한하고 있다. Like most diseases, skin diseases are accompanied by an inflammatory response. Representative skin diseases such as allergic contact dermatitis, psoriasis, and atopic dermatitis are inflammatory diseases mediated by T cells, which are immune cells. Therefore, anti-inflammatory agents must be applied to the management and treatment of major skin diseases. Steroidal anti-inflammatory agents are used to treat these inflammatory diseases, but steroidal agents have many side effects and limit their use.

따라서, 현 시장에서는 NOS를 직접적으로 억제하여 알러지로부터 피부를 보호할 뿐만 아니라, 염증으로부터 피부를 보호하는 효과도 있는 천연 식물을 찾아내는 것이 요구되고 있다.
Therefore, there is a demand in the current market to find a natural plant that directly inhibits NOS to protect the skin from allergies and also protects the skin from inflammation.

한편, 바오밥나무(Adansonia digitata)는 열대 아프리카에서 자란다. 높이 20m, 가슴높이둘레 10m, 퍼진 가지 길이 10m 정도로 원줄기는 술통처럼 생긴 세계에서도 큰 나무 중의 하나이다. 아프리카에서는 신성한 나무 중 하나로 꼽고 있으며 구멍을 뚫고 사람이 살거나 시체를 매장하기도 한다. 열매가 달려 있는 모양이 쥐가 달린 것같이 보이므로 죽은쥐나무(dead rat tree)라고도 한다. 잎은 5∼7개의 작은잎으로 된 손바닥 모양 겹잎이다. 꽃은 흰색이며 지름 15cm 정도로 꽃잎은 5개이다. 열매는 수세미외처럼 생겨서 길이 20∼30cm로 털이 있고 딱딱하며 긴 과경(果梗)이 있다. 수령이 5,000년에 달한다고 한다. 바오밥나무의 학명은 이 나무를 발견한 프랑스의 식물학자 열대 아프리카에서 자란다.
Meanwhile, the baobabs (Adansonia digitata) grow in tropical Africa. The stem is one of the largest trees in the world that looks like a keg, with a height of 20m, a chest height of 10m, and a branch length of 10m. In Africa, it is considered one of the sacred trees, and people can dig through holes and bury their bodies. It is also called a dead rat tree because it looks like a mouse. The leaf is a palm leaf double leaf with 5 to 7 small leaves. The flower is white with 5 petals about 15cm in diameter. Fruits are like scrubbers and have hairs of 20 ~ 30cm long, hard, and have long fruits. It is said to reach 5,000 years of age. The scientific name of the baobab grows in tropical Africa, the French botanist who discovered it.

자근(Lithospermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini)은 지리적으로는 일본, 만주, 중국, 아무우르에 분포한다. 지치과에 속하며, 우리나라 전국 각처의 산야지초원에 자생하였으나 지금은 드물게 나타나며 전라남도 진도 지방에서 많이 재배하기도 한다. 씨로 번식한다. 꽃과 뿌리가 검붉은 가지색을 띠기 때문에 자초 또는 지치, 자근이라고 한다. 뿌리는 약간 가늘고 긴 원추형으로 흔히가지가 갈라지고, 길이 6~10cm, 지름 5~15mm이다. 바깥면은 어두운 적색~자갈색을 띠고, 피부는 거칠고 얇게 벗겨지기 쉽다. 지치의 뿌리를 자근 혹은 자초근이라고도 하는데, 생약(生藥)에서 뿌리를 가을에 캐서 물에 씻어 햇볕에 말려 약재로 사용하며, 맛은 조금 달고 냄새는 없다. 다년초, 높이 30-70cm, 줄기는 곧게 서고, 뿌리가 땅속 깊이 들어가고 굵으며 자주색이고, 원줄기는 가지가 갈라지며 잎과 더불어 털이 많다. 잎은 호생하고 피침형이며 양끝이 좁고 밑부분이 좁아져서 잎자루처럼 된다. 꽃은 5-6월에 피고 백색이며 줄기끝에 총상화서로 달리고, 잎모양의 포가 있으며, 꽃받침잎은 5개이고 녹색이며 넓은 선형으로 둔두(鈍頭)이고 화관통부(花冠筒部)보다 길다. 화관(花冠)은 길이 6-7mm, 지름 4mm이고 후부(喉部)에 5개의 인편(麟片)이 있다. 열매는 7월에 성숙되고 견과(堅果)는 회색이며 골질(骨質)로 되고 광택이 나며 난상 원형이다. Liotspermum erythrorhizon Siebold and Zuccarini are geographically distributed in Japan, Manchuria, China and Amur. It belongs to Chichiaceae, and it grows wild in Sanyajiwon grassland of all parts of Korea, but nowadays it rarely appears and is cultivated in Jindo province, Jeollanam-do. Breed as seeds. The flowers and roots are dark red branches, so it's called licorice or weary, root. Roots are slightly thin, long cone-shaped, often branched, 6-10cm long, 5-15mm in diameter. The outer surface is dark reddish-brownish, and the skin is rough and thin and easy to peel off. The roots of chichi are also known as root or japonica, but the roots of the herbal medicine (生 藥) are harvested in the fall and washed in water, dried in the sun and used as a medicinal herb. Perennial, 30-70cm high, stems stand straight, roots deep into the ground, thick and purple, main stem is branched, hairy with leaves. Leaves are regenerated, lanceolate, both ends are narrow, and the bottom is narrowed to become petioles. Flowers blossom in May-June, white, running on the tip of stems, with bracts. Leaf-shaped bracts are 5, calyx leaves are green, broad, dull, broad-headed, longer than corollas. Corollas are 6-7mm long, 4mm in diameter, with five scales on the rear part. Fruits mature in July, nuts are gray, bony, glossy, egg-shaped, round.

뿌리에 가지색을 띤 나프토키논유도체(1.8-3.5%)인 아세틸시코닌 (acethylshikonin), 시코닌, 이소발레릴시코닌, β-디메틸아크릴-시코닌, 테르아크릴-시코닌, β-히드록시 이소발레릴-시코닌, α-메틸-n-부틸시코닌, 데옥시시코닌, 안히드로알칸닌 등이 있다. 또한 알칸닌과 알칸난이 들어있다. 다른 자료에 의하면 뿌리의 색소함량이 7.1% 였고 30kg의 뿌리에서 435mg의 시코닌을 얻었다고 한다. 뿌리에서는 또한 알칼로이드, 트리테르펜사포닌, l-보르네시톨, 이노시트, 루틴, 니트릴배당체 등이 확인되었다. 지상분에 페놀카르본산이 0.2% 있다.
Acetylconkon (acethylshikonin), siconin, isovalerylsiconin, β-dimethylacrylic-siconin, teracryl-siconin, β-hydroxy Isovaleryl-siconin, α-methyl-n-butylsiconin, deoxysiconin, anhydroalkaninin and the like. It also contains alkanins and alkanans. According to other data, the pigment content of root was 7.1% and 435 mg of siconin was obtained from 30 kg of root. At the root, alkaloids, triterpensaponins, l-bornenesitol, inosit, rutin and nitrile glycosides were also identified. There is 0.2% phenolcarboxylic acid in the ground meal.

참마(Dioscorea japonica Thunberg)는 중국, 일본, 한국 거의 전도, 설악산, 군자산, 영종도가 산지로 2-8월이 채집시기이다. 맛은 달고, 약성은 따뜻하며 독이 없다. 마과(서예과)에 속하는 덩굴성 다년생초본으로서 괴근은 긴 원주상이며 길이 2m에 달한다. 줄기는 가늘고 길며, 덩굴로 분지(分枝)된다. 자색을 띤 잎은 대생(對生)하며 잎자루가 길고 난형-타원형이며, 심장형으로 끝이 뾰족하다. 엽액(葉腋)에 둥근 싹이 있다. 꽃은 자웅이가(雌雄二家)로서 수상화서이며 여러개가 액생(腋生)했고 자방은 하위이고 3실이다. 삭과(朔果)는 3개의 익상(翼狀)이고 원익(圓翼)의 종자가 있다. 꽃은 백색이고 6-7월에 핀다. 괴근을 약용으로 쓰는데 산약은 코르크층을 벗기어 말린 것이며 거의 원추형이며 다육질이고 외면은 미황백색이다. 당단백질(glucoprotein)로 된 뮤신(mucin)성의 점액 2-3%를 함유하고 가수분해에 의해 만노오즈(mannose), 포도당(glucose)과 그밖에 16종의 아미노(amino)산을 생성한다. Yam (Dioscorea japonica Thunberg) is mostly produced in China, Japan, and Korea. The taste is sweet, the weakness is warm and nonpoisonous. The vine is a perennial herbaceous genus belonging to the family of calligraphy, and the tuber is long circumferential and 2m long. Stems are thin and long, branched into vines. Purple leaves are macrophages, long petiole, ovate-ellipse, heart-shaped, pointed. Leaf buds have round buds. The flower is a jaungi family, and it is an aquatic inflorescence, several are alive. Zucchini is three pterygium and there are seeds of original wing. The flower is white and blooms in June-July. The medicinal root is used for medicinal purposes. The pesticide is dried by peeling off the cork layer. It contains 2-3% of mucin-like mucus, a glycoprotein, and hydrolyzes to produce mannose, glucose, and 16 other amino acids.

연근()은 수련과의 다년생 초본으로 아시아 남부, 북호주 원산이다. 진흙속에서 자라면서도 청결하고 고귀한 식물로, 여러 나라 사람들에게 친근감을 주어 온 식물이다. 연못에서 자라고 논밭에서 재배하기도 한다. 뿌리줄기는 굵고 옆으로 뻗어가며 마디가 많고 가을에는 특히 끝부분이 굵어진다. 늪이나 수전에서 지하경으로 재배되며 비교적 따뜻한 곳에서 좋은 것이 수확된다. 일반적으로 육질의 색깔이 희고 부드러우며 속의 구멍이 적은 것일 수록 좋은 품질이다. 원산지가 중국인 연근은 다년생 수생식물로 지하경은 땅 속으로 길게 뻗어가 끝에 덩이 줄기를 형성하며, 긴 것은 l.8 m 이상이 되는 것도 있다. 지름 40cm 내외로서 물에 젖지 않으며 잎맥이 방사상으로 퍼지고 가장자리가 밋밋하다. 잎자루는 겉에 가시가 있고 안에 있는 구멍은 땅속줄기의 구멍과 통한다. 꽃은 7∼8월에 피고 홍색 또는 백색이며 꽃줄기 끝에 1개씩 달리고 지름 15∼20cm이며 꽃줄기에 가시가 있다. 꽃잎은 달걀을 거꾸로 세운 모양이며 수술은 여러개이다. 꽃턱은 크고 편평하며 지름 10cm 정도이고 열매는 견과이다. 종자가 꽃턱의 구멍에 들어 있다. 종자의 수명은 길고 2000년 묵은 종자가 발아한 예가 있다. 잎은 반원형 혹은 줄부채 모양이나 펴보면 원형이다. 지름 20~50cm, 잎 가장자리는 평탄하거나 파상(波狀)이다. 윗면은 짙은 녹색 혹은 황록색이고 아랫면은 엷은 회갈색으로서 광택이 조금 나 있다. 잎자루가 있는 중심으로부터 21~22줄의 돌출된 엽맥이 사방으로 뻗어 나가 있다. 질은 무르고 부스러지기 쉽다. 특이한 냄새가 있고 맛은 약간 쓰다. 품종은 일반적으로 대륜·중륜·소륜으로 나눈다. 연근은 높은 온도를 좋아하여 생육 적온은 25~30도씨 이다.우리 나라에서 재배되고 있는 연근은 인도에서 유래한 재배종으로서 한국 재래종과 일본 종이 이에 속한다. 한국종은 만생종으로 꽃은 담홍색이고, 뿌리는 타원형이며, 분질, 다수성이다. 4~5윌에 뿌리를 심어 9윌초에서 이듬해 5월 상순까지 수시로 수확한다. Lotus root is a perennial herb of the lily family, native to southern Asia and North Australia. It is a plant that grows in the mud and is clean and noble, and has been friendly to people in many countries. It grows in ponds and grows in paddy fields. Root stock is thick and stretches to the side, with many nodes, especially at the end in autumn. It is cultivated in a swamp or faucet as a underground diameter and harvested in a relatively warm place. In general, the color of the flesh is white and soft, and the smaller the hole in the inside, the better the quality. The lotus root, native to China, is a perennial aquatic plant. The underground diameter extends into the ground, forming tubers at the end, and the longer one is more than l.8 m long. It is about 40cm in diameter and does not get wet. The leaf vein is radially spread and the edge is flat. The petioles have thorns on the outside and the holes in them communicate with the holes in the underground stems. Flowers bloom in July-August, red or white, hanging on one end of stalk, 15-20cm in diameter, with thorns on stalk. The petals are upside down, with several stamens. The stalk is large and flat, about 10cm in diameter, and the fruit is nut. Seeds enter the hole of the sill. Seeds have a long life, and there are examples of germination of 2000-year-old seeds. Leaves are semi-circular or row-shaped, or flattened if rounded. 20-50cm in diameter, leaf edge flat or wavy. The upper side is dark green or yellowish green and the lower side is light grayish brown with a slight gloss. 21-22 rows of protruding leaf veins extend from all sides of the petiole. The vagina is soft and brittle. It has an unusual smell and tastes a bit bitter. Varieties are generally divided into large, middle and small rings. Lotus roots like high temperature, and the growth temperature is 25 ~ 30 degrees C. Lotus roots grown in Korea are cultivated from India, and Korean and Japanese species belong to this species. The Korean species is an endangered species, the flowers are pink, the roots are elliptical, powdery and multiplicity. Roots are planted in 4-5 wills and harvested from 9 wills until early May.

연의 씨앗성분으로는 단백질이 8%이며 당질이 23%로 주로 전분이다. 연근 외에도 연방(꽃받침), 하엽(잎), 연술(수술), 우절(뿌리줄기의 마디), 연화(꽃봉오리)도 약으로 쓴다. 로에메린, 누씨페린은 진통작용, 진정작용이 있다. 연근의 성분은 탄수화물이 많으며(13.4%로 대부분이 전분) 지방이 8.1%, 단백질은 2.4% 정도로서 단백질의 소화율은 별로 좋지 않다. 비타민 C는 50 mg%로 비교적 많다. 열매의 탄수화물은 20%로서 역시 대부분이 전분이며 단백질은 8%나 있다. 연근의 갈변을 막기 위해서는 연한 산성용액(식초용액)에다 담그면 된다. 흰색의 연근조리를 할때엔 위에 말 한 산성용액으로 일단 데쳐낸 후 다시 식초, 설탕, 소금 등으로 조미를 하면 좋다. 이렇게 하면 아삭아삭하고 독특한 풍미가 있게 된다. 부원료로 사용할 수 있다. 변비가 있는 사람은 피하는 것이 좋다. 근경은 야채로 먹으며, 종자는 볶아 먹는다. 미숙한 종자는 생것으로 먹는다. 뿌리는 조리하는 이외에도 생식하고 열매는 생식, 당절임하기도 하며, 잎은 육류를 삶을 때 포장용으로 사용한다.
The seeds of lotus are 8% protein and 23% sugar, mainly starch. In addition to lotus root, the federal (calyx), lower lobe (leaves), softening (surgery), verse (root node), softening (bud) is also used as a medicine. Loemerin, nuciferin has analgesic, sedative action. Lotus root contains a lot of carbohydrates (13.4%, mostly starch), 8.1% fat and 2.4% protein, so the digestibility of protein is not good. Vitamin C is relatively high at 50 mg%. The carbohydrate is 20%, which is mostly starch and 8% protein. To prevent browning of lotus root, soak in soft acidic solution (vinegar solution). When cooking white lotus root, boil it with the acid solution mentioned above and season it with vinegar, sugar and salt again. This gives them a crisp and unique flavor. Can be used as an auxiliary ingredient. People with constipation should be avoided. Roots are eaten with vegetables, and seeds are roasted. Immature seeds are eaten raw. In addition to cooking roots, they are raw, fruits are raw and pickled, and leaves are used for packaging when meat is cooked.

지금까지 염증 및 알러지 완화용 조성물을 찾기 위해 여러 가지 시도가 있었으나, 위 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물의 상기 용도들은 개시되지 않았다.Various attempts have been made to find a composition for alleviating inflammation and allergies, but the above uses of the mixed baobab, root, yam, and lotus root extracts of the stomach have not been disclosed.

이에 본 발명자들은 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물이 항염 및 항알러지 효과가 있고 화장료 조성물로 적합함을 알아내어 본 발명을 완성하였다. The present inventors have completed the present invention by finding that the baobab, root, yam, lotus root mixed extract has an anti-inflammatory and anti-allergic effect and is suitable as a cosmetic composition.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 항염 및 항알러지 효과가 우수하다. The cosmetic composition according to the present invention is excellent in anti-inflammatory and anti-allergic effects.

도 1은 본 발명의 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 농도에 따른 세포 독성 확인 실험을 나타내는 그래프,
도 2는 본 발명의 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 농도에 따른 항염증 효과를 나타내는 그래프,
도 3은 본 발명의 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 Nitric Oxide 저해 효과를 나타내는 그래프,
도 4는 본 발명의 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 ß-hexosaminidase release 저해로 인한 항알러지 효과를 나타내는 그래프1 is a graph showing the cytotoxicity test according to the concentration of the mixed extract of Baobab, Ja root, yam, lotus root of the present invention,
Figure 2 is a graph showing the anti-inflammatory effect according to the concentration of the mixed extract of Baobab, Ja root, yam, lotus root of the present invention,
Figure 3 is a graph showing the Nitric Oxide inhibitory effect of the mixed extract of Baobab, Japonica, Yam, Lotus root of the present invention,
Figure 4 is a graph showing the anti-allergic effect of the ß-hexosaminidase release inhibition of the mixed extract of Baobab, Ja root, yam, lotus root of the present invention

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 고체 발효를 통한 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition containing a mixed extract through the solid fermentation of Baobab, Japonica, Yam, Lotus root.

본 발명에 사용되는 바오밥나무, 자근, 참마, 연근은 직접 재배하여 건조시킨 것을 사용하거나, 국내 재래시장 또는 한약재를 파는 곳에서 직접 구입하여 사용할 수 있다.Baobab trees, roots, yams, lotus root used in the present invention can be used directly cultivated and dried, or directly purchased in the domestic market or selling herbs.

본 발명의 혼합추출물은 고체 발효를 통한 추출방법에 의해 제조된다. 예를 들어, 바오밥나무, 자근, 참마, 연근을 세척하여 건조시킨 후, 이를 세절한 후에, 통상의 추출용매로 통상의 추출방법을 통해 제조하기 전에 고체 발효를 거치는 공정을 적용한다. The mixed extract of the present invention is prepared by an extraction method through solid fermentation. For example, after washing and drying Baobab trees, roots, yams, lotus root, and then chopped it, a process of undergoing a solid fermentation is applied before manufacturing through a conventional extraction method with a conventional extraction solvent.

본 발명은 바오밥나무, 자근, 참마, 연근을 각각 10 내지 30 중량%로 구성하여 건조 과정을 거친 후 혼합물을 80 내지 100도씨 온도에서 30분 내지 1시간 동안 습식 열처리를 하여 미생물 오염을 제거하며 각 혼합물을 구성하는 원료의 영양성분이 용출되어 이용되기 쉽도록 화학적 조건을 형성하는 단계를 거친 후 30 내지 60도씨 온도와 pH 5.5 내지 8.5 및 통성 혐기적인 발효 조건에서 바실러스속 미생물을 이용하여 고체 발효하여 고분자 물질을 생산한 후 제균 단계를 거치어 정제수 또는 유기용매로서 저급 알코올 특히 에탄올을 1:1 내지 5의 부피비로 혼합 첨가하여 열수 또는 초음파 추출 방법을 사용하여 교반하여 추출액을 회수하고 이를 농축하여 1차 정제하였다. 더욱 정제하고자 할 때는 4도씨에서 분자량 10kD의 막 필터를 이용한 투석을 통해 저분자량의 물질을 제거할 수 있다. 분리된 용액의 부피와 동일한 부피의 증류수를 첨가하여 추출물의 점도를 낮춘 후 동결건조하여 건조중량을 측정하여 생산성을 결정하였다. The present invention consists of baobab, root, yam, lotus root each 10 to 30% by weight after the drying process to remove the microbial contamination by wet heat treatment for 30 minutes to 1 hour at 80 to 100 ℃ temperature mixture After forming the chemical conditions so that the nutrients of the raw materials constituting each mixture are easily eluted and used, solids using Bacillus microorganisms at 30 to 60 degrees Celsius, pH 5.5 to 8.5, and anaerobic fermentation conditions After fermentation to produce a polymer material, the sterilization step is followed by mixing and adding a lower alcohol, particularly ethanol, in a volume ratio of 1: 1 to 5 as purified water or an organic solvent and agitating using hot water or ultrasonic extraction to recover the extract, and then concentrate it. It was purified first. For further purification, low-molecular-weight substances can be removed by dialysis using a membrane filter with a molecular weight of 10 kD at 4 ° C. Productivity was determined by adding distilled water in the same volume as the separated solution to lower the viscosity of the extract and freeze-drying to measure the dry weight.

이렇게 제조된 바오밥나무, 자근, 참마, 연근으로 구성된 고체 발효 단계를 거친 혼합 추출물을 화장료 제조시 첨가한다.The mixed extract, which has undergone a solid fermentation step consisting of baobab, japonica, yam, and lotus root, thus prepared, is added during cosmetic preparation.

본 발명의 바실러스속 균주의 특성은 그람 양성균으로서 내생 포자 형성능이 있으며, 장간균의 형태를 가지고 있다. 또한 호기성 또는 통성혐기성 조건에서 생장이 가능하지만 혐기적인 조건에서는 생장이 불가능하며 카탈라아제 생산 및 카제인과 젤라틴, 전분 분해능의 특징을 가진다. 생장 조건으로서는 7% 식염수 조건에서 생장이 가능하며 발효 조건인 약 45도씨에서 생장이 가능하며 약 pH 5.0 내지 7.5에서 생장이 활발하다. 또한 글루코오스, 아라비노오스, 크실로오스, 만니톨을 이용하여 산을 생성할 수 있는 특징을 가진다. The characteristics of the genus Bacillus strains are gram-positive bacteria, endogenous spore-forming ability, and has the form of enterococci. In addition, it is possible to grow under aerobic or anaerobic conditions, but not under anaerobic conditions, and has the characteristics of catalase production, casein, gelatin, and starch resolution. As the growth conditions, it is possible to grow at 7% saline, and it is possible to grow at about 45 ° C, which is a fermentation condition, and to grow at about pH 5.0 to 7.5. In addition, glucose, arabinose, xylose, and mannitol has the characteristic of generating an acid.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 제조된 바오밥나무, 자근, 참마, 연근으로 구성되어진 발효 추출물을 0.1 내지 20 중량%로 바람직하게는 2 중량%가 되게 함유하는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition according to the present invention is characterized in that the fermented extract consisting of baobab, japonica, yam and lotus root prepared above is 0.1 to 20 wt%, preferably 2 wt%.

본 발명에 따른 항염 및 항알러지 효과가 있는 화장료 조성물은 통상의 제형을 가질 수 있으며, 예를 들어 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림 등으로 제형화될 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 이하에 항염 및 항알러지 효과를 갖는 화장료 조성물의 대표적인 화장수와 영양로션 조성물을 예를 들어 설명한다.The cosmetic composition having an anti-inflammatory and anti-allergic effect according to the present invention may have a conventional formulation, for example, may be formulated with softening longevity, astringent longevity, nourishing longevity, nourishing cream, and the like. The composition of each of these formulations may contain a variety of bases and additives necessary for the formulation of the formulation and are suitable, and the types and amounts of these components can be readily selected by those skilled in the art. Hereinafter, a representative lotion and nutrient lotion composition of a cosmetic composition having an anti-inflammatory and anti-allergic effect will be described by way of example.

또한 본 발명에 따른 항염 및 항알러지 효과를 가지는 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.In addition, the cosmetic composition having an anti-inflammatory and anti-allergic effect according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may vary depending on the user's skin condition or taste.

이하 본 발명의 실시예를 통하여 본 발명의 항염 및 항알러지 효과를 가지는 화장료 조성물을 더욱 상세하게 설명하지만 본 발명이 이들 실시예에만 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the cosmetic composition having the anti-inflammatory and anti-allergic effect of the present invention will be described in more detail with reference to examples of the present invention, but the present invention is not limited to these examples.

본 발명의 혼합 추출물 제조에 사용되는 용매는 당업자에게 알려진 추출용매이면 어느 것이든 가능하다. 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올과 같은 C1~C4의 알코올, 또는 함수 C1-C4 알코올, 부틸렌글리콜과 같은 C1~C6의 글리콜, 함수 C1~C6의 글리콜, 에틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등이 있으며, 단일 또는 2종 이상의 혼합 용매를 혼합하여 사용할 수 있다. 바람직한 천연 식물 추출용매는 에탄올을 포함하는 C1~C4의 알코올, 함수 C1~C4알코올이다. 본 발명의 화장료 조성물에서, 혼합추출물의 함량은 사용목적 및 사용자의 대상에 따라 다양하게 함유될 수 있다. 바람직한 혼합추출물의 함량은 화장료 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 5.0 중량% 이다. 본 발명의 화장료 조성물은 항염증 또는 피부자극완화 효과가 있으므로, 항염증용 또는 피부자극완화용의 기능성 화장품으로 사용가능하다. The solvent used in the preparation of the mixed extract of the present invention may be any extraction solvent known to those skilled in the art. For example, C1-C4 alcohols such as water, methanol, ethanol, propanol, butanol, or C1-C4 glycols such as hydrous C1-C4 alcohols, butylene glycol, glycols of hydrous C1-C6, ethyl acetate, hexane , Benzene, diethyl ether, dichloromethane, and the like, and a single or two or more mixed solvents may be mixed and used. Preferred natural plant extractants are C1-C4 alcohols containing ethanol, hydrous C1-C4 alcohols. In the cosmetic composition of the present invention, the content of the mixed extract may be contained in various ways depending on the purpose of use and the user's object. The preferred amount of the mixed extract is 0.1 to 5.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. Since the cosmetic composition of the present invention has an anti-inflammatory or skin stimulating effect, it can be used as a functional cosmetic for anti-inflammatory or skin stimulating relief.

또한 본 발명의 화장료 조성물은 현재 시판되는 화장품, 화장용비누, 화장용 세안제의 제형을 가진다. 예를 들어, 본 발명의 화장료 조성물은 화장수(스킨로션), 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩 또는 유화형 화운데이션와 같은 화장품제형일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유아전용 화장수(스킨로션), 로션, 크림, 자외선차단 로션 또는 자외선차단 크림과 같은 화장품일 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 유아전용 목욕 세정제, 샴푸 또는 비누와 같은 화장용 세정제 일 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention has a formulation of commercially available cosmetics, cosmetic soap, cosmetic face wash. For example, the cosmetic composition of the present invention may be a cosmetic preparation such as a lotion (skin lotion), nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, pack or emulsified foundation. In addition, the cosmetic composition of the present invention may be cosmetics such as baby lotion (skin lotion), lotion, cream, sunscreen lotion or sunscreen cream. In addition, the cosmetic composition of the present invention may be a cosmetic cleaner such as a bath cleaner, shampoo or soap for infants.

이하, 실시예, 비교예, 실험예 및 비교실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하나, 본 발명이 이들로 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in detail with reference to Examples, Comparative Examples, Experimental Examples and Comparative Experimental Examples, but the present invention is not limited thereto.

실시예 1 : 천연 혼합 추출물 제조Example 1: Preparation of Natural Mixed Extract

바오밥나무 30g, 자근 30g, 참마 20g 및 연근 20g을 80 내지 100도씨 온도에서 1시간 동안 습식 열처리를 하여 미생물 오염을 차단하며 각 혼합물을 구성하는 원료의 영양성분이 용출되어 이용되기 쉽도록 조건을 형성하는 단계를 거친 후 60도씨 온도와 pH 5.5 내지 6.0 및 통성 혐기적인 발효 조건에서 바오밥나무, 자근, 참마, 연근으로 구성된 열처리된 혼합물을 건식 배양 조건하에서 바실러스속 미생물을 이용하여 24시간 동안 고체 발효하여 고분자 물질을 생산한 후 제균 단계를 거치어 에탄올을 500ml로 혼합하여 교반하여 추출액을 회수하고 이를 감압 농축하여 건조중량 기준으로 10 g의 혼합추출물을 제조하였다. 이 중 1 g을 각각 취하여 활성검색 시료로 하였다.
30g of Baobab, 30g of Root, 20g of Yam and 20g of Lotus Root are subjected to wet heat treatment at 80 ~ 100 ℃ for 1 hour to prevent microbial contamination and to make the nutritional ingredients of the raw materials of each mixture easy to elute. After the forming step, the heat-treated mixture consisting of baobab, root, yam and lotus root at 60 ° C, pH 5.5 to 6.0, and anaerobic fermentation conditions was dried for 24 hours using Bacillus microorganisms under dry culture conditions. After fermentation to produce a polymer material, the sterilization step was followed by mixing 500 ml of ethanol and stirring to recover the extract, and concentrated under reduced pressure to prepare a mixed extract of 10 g on a dry weight basis. 1 g of these was taken as an active screening sample.

비교예 1 : 바오밥나무 추출물의 제조Comparative Example 1: Preparation of Baobab Tree Extract

바오밥나무 30g을 취하여 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 건조중량 3g을 얻었다.
30 g of baobab was taken and extracted in the same manner as in Example 1 to obtain a dry weight of 3 g.

비교예 2 : 자근 추출물의 제조Comparative Example 2: Preparation of Root Extract

자근 30g을 비교예 1과 동일한 방법으로 하여 건조 중량 3g을 얻었다.
Dry weight 3g was obtained by carrying out 30 g of roots in the same method as the comparative example 1.

비교예 3 : 참마 추출물의 제조Comparative Example 3: Preparation of Yam Extract

참마 20g을 비교예 1과 동일한 방법으로 하여 건조 중량 2g을 얻었다.
20 g of yams were obtained in the same manner as in Comparative Example 1 to obtain 2 g of dry weight.

비교예 4 : 연근 추출물의 제조Comparative Example 4: Preparation of Lotus Root Extract

연근 20g을 비교예 1과 동일한 방법으로 하여 건조 중량 2g을 얻었다.
20 g of lotus root was carried out in the same manner as in Comparative Example 1 to obtain a dry weight of 2 g.

실험예 1 : 본 발명에 따른 피부 진정 효과가 있는 화장수 조성물의 제조Experimental Example 1: Preparation of the skin lotion composition having a skin calming effect according to the present invention

하기 표 1에 나타난 바와 같은 조성비율로 화장수를 제조하였다. 즉 성분 11번에 성분 2, 3, 4 및 8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시킨다. 그 후 성분 5번을 60도씨로 가열하여 용해시킨 후 성분 10을 투입, 교반하여 용해한 후 성분 11번을 투입한다. 마지막으로 성분 1, 6, 7 및 9번을 투입하고 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.Toner was prepared in a composition ratio as shown in Table 1 below. That is, components 2, 3, 4, and 8 are sequentially added to component 11, stirred, and dissolved. Thereafter, component 5 is heated to 60 ° C. to dissolve it, and then component 10 is added and stirred to dissolve, followed by ingredient 11. Finally, ingredients 1, 6, 7, and 9 are added, sufficiently stirred, and aged.

번호number 원료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 1One 혼합추출물(실시예1)Mixed Extract (Example 1) 2.02.0 22 글리세린glycerin 3.03.0 33 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 44 프로필렌글리콜Propylene glycol 1.01.0 55 피피지-26-부테스-26/피이지-40 히드로게네이티드 캐스터오일Fiji-26-Bootes-26 / Pig-40 Hydrogenated Castor Oil 1.11.1 66 에탄올ethanol 8.08.0 77 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 88 방부제antiseptic 미량a very small amount 99 색소Pigment 미량a very small amount 1010 향료Spices 미량a very small amount 1111 정제수Purified water to 100to 100

실험예 2 : 본 발명에 따른 피부 진정 효과가 있는 영양 로션 조성물의 제조Experimental Example 2 Preparation of Nutritional Lotion Composition with Skin Soothing Effect According to the Present Invention

하기 표 2에 나타난 바와 같은 조성비율로 실시예 2와 동일한 방법으로 영양 로션을 제조하였다. 즉 성분 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화한 후 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화한 후 성분 9를 60도씨에서 서서히 첨가하여 균질화한다. 그 후 성분 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화된 다음 숙성시킨다. To the nutritional lotion was prepared in the same manner as in Example 2 in the composition ratio as shown in Table 2. That is, components 2, 3, 4, 5, and 6 are homogenized at a constant temperature, then 1, 7, 8, and 14 are mixed, homogenized at a constant temperature, and then component 9 is gradually added and homogenized at 60 ° C. Thereafter, components 10, 11, 12, and 13 are added to disperse and stabilized, and then aged.

번호number 원료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 1One 혼합추출물(실시예1)Mixed Extract (Example 1) 2.02.0 22 시토스테롤Sitosterol 1.51.5 33 폴리글리세릴 2-올레이트Polyglyceryl 2-oleate 1.21.2 44 세라마이드Ceramide 0.20.2 55 세테아레스-4Setares-4 1.01.0 66 콜레스테롤cholesterol 1.21.2 77 디세틸포스페이트Dicetyl phosphate 0.50.5 88 부틸렌글리콜Butylene glycol 5.05.0 99 선플라워오일Sunflower oil 3.03.0 1010 카르복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.20.2 1111 산탄검Xanthan gum 0.10.1 1212 방부제antiseptic 미량a very small amount 1313 향료Spices 미량a very small amount 1414 정제수Purified water to 100to 100

실험예 3 : 본 발명에 따른 화장수의 피부 자극성 및 진정 효과 확인Experimental Example 3 Check the skin irritation and calming effect of the lotion according to the present invention

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 2에서 제조한 화장수를 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 화장수는 광독성이 없으므로서 피부 진정 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
Twenty healthy men and women (10 males and 10 females) were applied to the forearm of each of the lotions prepared in Example 2 by a predetermined amount (10 m / 5 cm 2), and the rest of the skin was covered with aluminum foil for 30 minutes. Long-wavelength ultraviolet rays were irradiated at a dose of 10.2 J / cm 2 using an ultraviolet irradiator and skin conditions (erythema, edema, papules, etc.) were observed after 24 hours. As a result of the observation, no side effects such as erythema were generated on the skin, and thus the lotion had no phototoxicity and thus had a calming effect on the skin.

실험예 4 : 본 발명에 따른 영양 로션의 피부 자극성 및 진정 효과 확인Experimental Example 4: Confirm the skin irritation and calming effect of the nutrient lotion according to the present invention

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 3에서 제조한 영양 로션을 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 영양 로션은 광독성이 없으며 피부 진정 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
Apply the nutrition lotion prepared in Example 3 (10m / 5cm2) to the forearm of 20 healthy males and females (10 males, 10 females) and cover the rest with aluminum foil for 30 minutes. Subsequently, long wavelength ultraviolet rays were irradiated at a dose of 10.2 J / cm 2 using an ultraviolet irradiator, and skin conditions (erythema, edema, papules, etc.) were observed after 24 hours. As a result of the observation, the side effects such as erythema did not occur on the skin, and thus the nutritional lotion had no phototoxicity and had a skin calming effect.

실험예 5 : 본 발명에 따른 화장수 및 영양 로션의 피부 안전성 확인 시험Experimental Example 5: Skin safety confirmation test of the lotion and nutrition lotion according to the present invention

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 2와 3에서 제조한 화장수 및 영양 로션을 인체 첩포 시험을 실시하였다. 시험대상자의 전박부를 70% 에탄올로 잘 닦은 다음 그 부위에, 통상의 화장료 기제에 상기 실시예 2와 3에서 제조한 화장수 및 영양 로션을 20㎕씩 담은 핀 챔버를 점착 테이프를 이용하여 24시간 폐쇄 부착시켰다. 24시간 후에 점착 테이프와 핀 챔버를 제거하고, 가제로 피부에 잔존된 시료를 가볍게 닦아 제거한 뒤에 피부 상태를 관찰하고 다시 24시간 후에 한번 더 관찰하였다. 실험 결과 표 3에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화장수 및 영양 로션의 피부 자극성을 확인하기 위한 인체 첩포 시험에서 양성 반응을 보이지 않아 인체 피부에 자극성이 전혀 없는 것으로 확인되었다.
A human patch test was carried out on the forearm of 20 healthy adult men and women (10 males, 10 females) prepared with the lotion and nutrition lotion prepared in Examples 2 and 3. Wipe the forearm of the subject well with 70% ethanol, and then close the pin chamber containing 20 µl of the lotion and nutrition lotion prepared in Examples 2 and 3 in a common cosmetic base using adhesive tape for 24 hours. Attached. After 24 hours, the adhesive tape and the pin chamber were removed, and the sample remaining on the skin with a gauze was lightly removed, and then the skin condition was observed, and again after 24 hours. Experimental results As shown in Table 3 in the human patch test to confirm the skin irritation of the lotion and nutrition lotion according to the present invention was confirmed that there is no irritation to the human skin at all.

시료sample 24시간 후(n=20)After 24 hours (n = 20) 48시간 후(n=20)After 48 hours (n = 20) 비고Remarks 스킨로션Skin lotion 0/200/20 0/200/20 반응양성자수/총대상자수Number of reaction quantums / total number of targets 밀크 로션Milk lotion 0/200/20 0/200/20

실험예 6 : 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물의 Experimental Example 6: Baobab, Japonica, Yam, Lotus root mixed extract of the present invention

세포 독성 확인 실험Cytotoxicity Test

MTT 정량법은 생존세포에만 활성이 있는 미토콘드리아의 탈수소 효소작용에 의해 색소로 변하는 현상을 이용한다. 살아있는 세포수가 증가하면 시료중의 미토콘드리아 탈수소효소의 전체 활성이 증가하며, 이 효소 활성의 증가가 Formazan 색소의 생성 증가를 유도하기 때문에, Formazan 색소와 배지중의 대사활성이 있는 세포의 수와는 직선적인 상관관계를 나타내게 된다. 노란색의 수용성 Tetrazolium MTT은 미토콘드리아의 탈수소효소 작용에 의하여 보라색의 불용성 Formazan crystal로 환원되며, 이를 용해시켜 570nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.MTT quantification utilizes the phenomenon of turning into pigment by the dehydrogenase action of mitochondria which is active only in living cells. As the number of living cells increases, the total activity of the mitochondrial dehydrogenase in the sample increases, and since the increase in the enzyme activity leads to an increase in the production of the Formazan pigment, the number of cells with metabolic activity in the Formazan pigment and medium is linear. The correlation is Yellow water-soluble Tetrazolium MTT was reduced to purple insoluble Formazan crystal by the action of dehydrogenase of mitochondria, and the absorbance was measured at 570 nm.

Human dermal fibroblast cell(cascade)을 3000~5000 cells/well의 농도로 하여 96 well plate에 seeding하였다. Medium은 FBS 10%를 함유한 DMEM (Dubelcco Modified Eagle Medium, Gibco)를 사용하였다. 24시간 후, 추출물을 농도별로 첨가하고, 37℃, 5% CO2에서 3일간 배양하였다. 상등액을 제거하고 0.5%(w/v) MTT 용액을 10ul/well씩 가한 후 4 시간 후에 MTT를 제거하고 DMSO를 첨가하여 570nm에서 흡광도를 측정하여 표 4와 도1에 나타내었다. 즉 피부 섬유아세포에 대하여 본 발명에 따른 혼합추출물은 독성이 없는 안전한 원료임을 알 수 있었다.
Human dermal fibroblast cells (cascade) were seeded in 96 well plates at a concentration of 3000-5000 cells / well. Medium used DMEM (Dubelcco Modified Eagle Medium, Gibco) containing 10% FBS. After 24 hours, extracts were added by concentration and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 for 3 days. After removing the supernatant and adding 0.5% (w / v) MTT solution by 10ul / well, after 4 hours, MTT was removed and DMSO was added to measure absorbance at 570 nm, and the results are shown in Table 4 and FIG. 1. That is, the mixed extract according to the present invention with respect to skin fibroblasts was found to be a safe raw material without toxicity.

추출물의 농도 (ug/ml)Concentration of extract (ug / ml) 세포 생존율 (%)Cell survival rate (%) 바오밥나무Baobab 자근Rooting 참마yam 연근Lotus root 혼합추출물Mixed extract 1010 9797 9898 9797 9999 9999 5050 9696 9595 9595 9797 102102 100100 9898 9696 9595 9898 101101

실험예 7 : 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물의 Experimental Example 7: Baobab tree, Root, Yam, Lotus root mixed extract of the present invention

항염증 효과 확인 실험 Anti-inflammatory effect confirmation experiment

리폭시게나제(5-LO, 5-lipoxygenase)는 리놀산, 리놀렌산, 아라키돈산과 같이 분자 내에 1,4-cis , cis-pentadiene(1,4-pentadiene) 구조를 갖는 불포화 지방산에 분자상 산소를　　첨가하여 1,3-cis , trans-diene 5-hydroperoxide를 생성하는 산화효소로 아라키돈산으로부터 각종 염증 및 알러지성 질환에 관여하는 로이코트리엔(leucotriene) 생합성의 첫번째 반응에 관여하는 효소이다. 따라서 구조적, 메커니즘적으로 5-LO와 유사한 SLO(soybean lipoxygenase)를 이용하여 리폭시게나제의 저해활성을 측정하여 항염 효과를 평가하였다.Lipoxygenase (5-LO, 5-lipoxygenase) adds molecular oxygen to unsaturated fatty acids with 1,4- cis and cis- pentadiene (1,4-pentadiene) structures in the molecule, such as linoleic acid, linolenic acid, and arachidonic acid. It is an oxidase that produces 1,3- cis and trans -diene 5-hydroperoxide. It is an enzyme involved in the first reaction of leucotriene biosynthesis from arachidonic acid, which is involved in various inflammatory and allergic diseases. Therefore, anti-inflammatory effect was evaluated by measuring the inhibitory activity of lipoxygenase using SLO (soybean lipoxygenase) similar to 5-LO structurally and mechanism.

리폭시게나제는 대두(soybean)에서 정제한 sigma사 제품을 사용하였으며 563 unit/ml로 희석하여 사용하였다. UV 통과 96 well plate에 Tris-HCl (100 mM, pH 8.5) buffer 155 ul에 sample 5ul와 20 ul의 효소액을 첨가하고 상온에서 5분 동안 방치 한다. 33 uM의 linolenic acid (sigma, USA) 20 ul를 첨가하고 234 nm에서 200초 동안 흡광도의 변화를 측정한다. 흡광도의 변화를 가지고 리폭시게나제 저해능을 측정하여 표 5와 도 2에 나타내었다. 즉 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물은 단일 물질인 quercetin과 비슷하게 높은 리폭시케나제 활성을 억제하는 효과를 나타내어 항염 효과가 우수함을 알 수 있었다.
Lipoxygenase was used as a product of sigma, purified from soybean, and diluted to 563 unit / ml. Add 5 ul of sample and 20 ul of enzyme solution to 155 ul of Tris-HCl (100 mM, pH 8.5) buffer in a UV well 96 well plate and leave for 5 minutes at room temperature. Add 20 uL of 33 uM linolenic acid (sigma, USA) and measure the change in absorbance for 200 seconds at 234 nm. The lipoxygenase inhibitory activity was measured with changes in absorbance, and is shown in Table 5 and FIG. 2. In other words, the mixed extract of baobab, japonica, yam, and lotus root according to the present invention showed a high anti-inflammatory effect by exhibiting an effect of inhibiting high lipoxykenase activity similar to quercetin as a single substance.

추출물의 농도 (v/v)Concentration of extract (v / v) LO inhibition activity (%)LO inhibition activity (%) 바오밥나무Baobab 자근Rooting 참마yam 연근Lotus root 혼합추출물Mixed extract QuercetinQuercetin 0.10.1 1.21.2 0.890.89 2.12.1 1.81.8 3.13.1 5.15.1 0.30.3 8.68.6 5.45.4 4.84.8 10.610.6 9.49.4 15.615.6 1.31.3 12.312.3 10.910.9 1111 13.813.8 20.620.6 27.427.4 2.52.5 2323 20.120.1 20.820.8 18.418.4 4545 5454

실험예 8 : 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 Nitric Oxide 저해 실험Experimental Example 8: Nitric Oxide Inhibition Experiment of Mixed Extract of Baobab Tree, Root Root, Yam, and Lotus Root of the Present Invention

Nitric oxide (NO)는 혈압조절, 신경전달, 혈소판 응집억제, 면역기능 등의 역할을 하는 것으로 알려져 있으며 여러 조직과 세포에서 L-arginine으로부터 nitric oxide synthase에 의해 합성된다. NOS는 크게 cNOS와 iNOS로 나눌수 있으며, iNOS는 세포내 칼슘 농도에 비의존성이며 대식세포, 혈관평활근세포, 내피세포, 간세포와 심근세포 등 여러 세포에서 LPS, IFN-r, IL-1과 TNF-a등의 자극에 의해 활성화되어 장시간동안 다량의 NO를 생성한다. 그러나 NO가 필요이상으로 생성되면 shock에 의한 혈관확장, 염증반응으로 유발되는 조직손상, 신경조직의 손상 등을 일으켜 생체에 유해한 작용을 나타낸다. 대식세포에서 L-arginine에 의해 생성된 NO는 종양세포와 균류를 제거하므로 면역반응에 관여하는 대식세포의 기능에 중요한 물질로서 작용한다. 또한 NO는 주요 혈관 확장물질로도 작용하는데 이런 경우에는 acetylcholine 이나 bradykinin을 수용체로 이용한다. 이때 주변의 평활근 세포로 확산된 NO가 cGMP를 증가시켜 결국 증가된 cGMP에 의해 근육세포를 이완시켜 혈관 확장을 일으킨다. 이와 같은 사실에 입각하여 현재 iNOS에 의한 NO의 생성을 저해하는 염증치료제 개발도 진행되고 있으며, 추출물에 대한 NO 생성능을 측정함으로써 염증반응 억제 효과를 판단할 수 있다.Nitric oxide (NO) is known to play a role in blood pressure regulation, neurotransmission, platelet aggregation inhibition, and immune function, and is synthesized by nitric oxide synthase from L-arginine in various tissues and cells. NOS can be largely divided into cNOS and iNOS. INOS is independent of intracellular calcium concentrations and is expressed in LPS, IFN-r, IL-1 and TNF- It is activated by a stimulus such as a to produce a large amount of NO for a long time. However, if NO is generated more than necessary, it causes harmful effects on the living body by causing vasodilation by shock, tissue damage caused by inflammatory reaction, and damage to nerve tissue. NO produced by L-arginine in macrophages removes tumor cells and fungi, and thus acts as an important substance in the function of macrophages involved in immune responses. NO also acts as a major vasodilator, in which case acetylcholine or bradykinin are used as receptors. At this time, NO diffused to surrounding smooth muscle cells increases cGMP and eventually relaxes muscle cells by increased cGMP, causing blood vessel expansion. On the basis of this fact, the development of an inflammatory treatment that inhibits the production of NO by iNOS is currently underway, and the inhibitory effect of inflammatory response can be determined by measuring the NO production ability of the extract.

실험 방법으로서는 Mouse macrophage cell인 RAW 264.7 cell에 염증 유발 물질인 LPS를 인위적으로 처리한 후 염증 억제 효과가 있는지를 평가하였다. 96 well plate에 well 당 2 x 105 cell 이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Overnight 한 다음, 새로운 배지로 교환해주고, LPS(1ug/ml)와 추출물을 농도별로 투여하여 24시간동안 배양하였다. 배양 후, 배지 상층액을 취해 13,000 rpm에서 3분동안 원심분리하여 상등액만 모은 후, Griess reagent 시약과 1:1로 반응시키고, 570nm에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 표 6과 도 3에 나타내었다. As an experimental method, we evaluated whether the RAW 264.7 cells, which are mouse macrophage cells, were artificially treated with LPS, which is an inflammation-inducing substance, and then had an anti-inflammatory effect. 2 x 105 cells per well were dispensed into a 96 well plate, and then incubated in a 37%, 5% CO2 incubator for 24 hours. After overnight, the cells were replaced with fresh medium, and LPS (1ug / ml) and extracts were administered at different concentrations and incubated for 24 hours. After incubation, the culture medium was collected, centrifuged at 13,000 rpm for 3 minutes to collect only the supernatant, reacted with Griess reagent reagent 1: 1, and the absorbance was measured at 570 nm. The results are shown in Table 6 and FIG. 3. .

즉 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근 혼합추출물의 RAW 264.7 cell에서 항염 효과를 평가한 결과, 농도의 증가에 따라 Nitric Oxide 생성을 감소시켜, 염증으로부터의 세포 보호 효과가 우수함을 확인하였다. .
In other words, as a result of evaluating the anti-inflammatory effect in RAW 264.7 cells of Baobab, Japonica, Yam, Lotus root mixed extract according to the present invention, it was confirmed that the reduction of Nitric Oxide production with increasing concentration, the cell protection from inflammation is excellent. . .

추출물의 농도 (ug/ml)Concentration of extract (ug / ml) NO inhibition activity(%)NO inhibition activity (%) 바오밥나무Baobab 자근Rooting 참마yam 연근Lotus root 혼합추출물Mixed extract QuercetinQuercetin 1010 5.65.6 10.610.6 2.92.9 8.38.3 15.315.3 9.59.5 5050 10.810.8 17.317.3 9.49.4 15.315.3 20.820.8 40.940.9 100100 25.925.9 27.627.6 16.816.8 31.831.8 42.842.8 60.860.8

실험예 9 : 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물의 ß-hexosaminidase release 저해로 인한 항알러지 효과 Experimental Example 9: Anti-allergic effect due to inhibition of ß-hexosaminidase release of mixed extract of Baobab, Japonica, Yam and Lotus root according to the present invention

아토피성 피부염에서 혈중 호산구수와 혈청 IgE 양의 증가가 나타나며, 이는 아토피성 피부염의 대표적인 지표로써 아토피성 피부염의 초기반응은 항원의 자극에 의해 항체 IgE가 생산된 후 항체가 비만세포 표면의 high affinity receptor에 결합하였을 때 항원이 재침입하면 수용체와 결합하고 있는 항체와 결합하여 비만세포 내로 신호를 빠르게 전달하여 알레르기를 일으키는 화학적 매개물질 (cytokine, histamine, leukotrienes)을 분비한다. Histamine 등의 매개물질에 의해서 혈관 투과성을 증가시키고, 혈관을 확장시키고, 평활근을 수축시키며, 분비선의 기능을 항진시키는 특징적인 반응을 일으키게 되며, 동반되는 염증반응에는 비만세포, 호산구, T세포에서 분비되는 인터루킨 등 여러가지 사이토카인에 의해 호산구가 염증 부위로 이동하는 것이 중요하다. Histamine과 함께 중요한 매개체로 작용하는 것으로 ß-hexosaminidase가 있으며, 세포로부터 ß-hexosaminidase 의 방출 또한 면역세포 탈과립의 지표로 사용된다.In atopic dermatitis, an increase in blood eosinophil count and serum IgE levels are indicated. This is a representative indicator of atopic dermatitis. The initial response of atopic dermatitis is that the antibody is produced by the stimulation of the antigen and then the antibody has a high affinity on the surface of mast cells. When bound to the receptor, the antigen re-invades and binds to the antibody that binds to the receptor, rapidly transmitting signals into mast cells to secrete allergic chemical mediators (cytokine, histamine, leukotrienes). Mediators such as histamine increase vascular permeability, dilate blood vessels, contract smooth muscle, and cause characteristic responses to secretory gland function.The accompanying inflammatory response is secreted by mast cells, eosinophils, and T cells. It is important that eosinophils move to the site of inflammation by various cytokines such as interleukin. An important mediator with Histamine is ß-hexosaminidase, and the release of ß-hexosaminidase from cells is also used as an indicator of immune cell degranulation.

RBL-2H3 cell을 10% FBS를 함유한 DMEM(Dulbecco modified Eagle's medium)에 현탁시킨 후 24 well plate에 각 well당 2 x 105 cell이 들어가도록 처리한 다음 각 well당 100ng/ml의 mouse monoclonal IgE로 감작시킨 후 5% CO2 incubator에서 24 시간동안 배양하였다. 세포를 well당 Tyrode buffer 500ul를 사용하여 헹구어내고, 농도별로 혼합 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 15분간 배양하고, 한 시간동안 DNP-BSA 100ng/ml을 처리한다. 상층액에 substrate (1mM p-nitrophenyl-N-acetyl-ß-D-glucosaminide) 50ul 처리 후 37℃, 5% CO2 incubator에서 한 시간 동안 incubation 한 후 ELISA reader를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 표 7과 도 4에 나타내었다. The RBL-2H3 cells were suspended in DMEM (Dulbecco modified Eagle's medium) containing 10% FBS, and then treated with a 24 well plate containing 2 x 105 cells per well, followed by 100 ng / ml mouse monoclonal IgE per well. After sensitization, the cells were incubated for 24 hours in a 5% CO2 incubator. The cells were rinsed using 500ul of Tyrode buffer per well, and the mixed extracts were treated by concentration, followed by incubation for 15 minutes at 37 ° C and 5% CO2 incubator, and treated with 100ng / ml of DNP-BSA for one hour. After 50ul of substrate (1mM p-nitrophenyl-N-acetyl-ß-D-glucosaminide) was incubated in the supernatant for 1 hour at 37 ° C and 5% CO2 incubator, the absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader. Are shown in Table 7 and FIG.

즉 본 발명에 따른 바오밥나무, 자근, 참마, 연근으로 구성된 혼합추출물을 첨가하였을 때 mast cell 탈과립 억제효과를 평가한 결과, 농도의 증가에 따라 ß-hexosaminidase의 방출양이 감소하여 그 억제 효과가 우수함을 확인하였다.
In other words, when the mixed extract consisting of baobab, japonica, yam, and lotus root according to the present invention was added to evaluate mast cell degranulation inhibitory effect, the amount of ß-hexosaminidase decreased with increasing concentration, and the inhibitory effect was excellent. Confirmed.

추출물의 농도 (ug/ml)Concentration of extract (ug / ml) ß-hexosaminidase release inhibition activity (%) ß-hexosaminidase release inhibition activity (%) 바오밥나무Baobab 자근Rooting 참마yam 연근Lotus root 혼합추출물Mixed extract QuercetinQuercetin 1010 2.92.9 3.83.8 3.73.7 5.95.9 6.46.4 18.918.9 5050 6.76.7 8.68.6 8.48.4 10.710.7 12.712.7 26.726.7 100100 16.716.7 17.617.6 20..720..7 22.922.9 30.830.8

Claims (7)

바오밥나무, 자근, 참마, 연근의 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물Cosmetic composition containing a mixed extract of baobab, root, yam, lotus root 제 1항에 있어서,
그람 양성균으로서 내생 포자 형성능이 있으며, 장간균의 형태를 가지며, 또한 호기성 또는 통성혐기성 조건에서 생장이 가능하지만 혐기적인 조건에서는 생장이 불가능하며 카탈라아제 생산 및 카제인과 젤라틴, 전분 분해능의 특징을 가지며, 생장 조건으로서는 7% 식염수 조건에서 생장이 가능하며 발효 조건인 약 45도씨에서 생장이 가능하며 약 pH 5.0 내지 7.5에서 생장이 활발하며, 글루코오스, 아라비노오스, 크실로오스, 만니톨을 이용하여 산을 생성할 수 있는 것을 특징으로 하는 바실러스 속 미생물을 사용하여 발효 단계를 거치는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
The method of claim 1,
As Gram-positive bacteria, it has endogenous spore-forming ability, has the form of enterococci, and can grow under aerobic or anaerobic conditions, but cannot grow under anaerobic conditions, and has the characteristics of catalase production, casein, gelatin, and starch resolution. As a condition, it is possible to grow at 7% saline, and it can grow at about 45 ° C which is a fermentation condition. It is active at about pH 5.0 to 7.5 and generates acid using glucose, arabinose, xylose, and mannitol. Cosmetic composition characterized in that the fermentation step using a microorganism of the genus Bacillus, characterized in that
제 1항에 있어서, 혼합 추출물이 정제수, C1~C4알코올, 함수 C1~C4알코올, C1~C6글리콜, 함수C1~C6글리콜, 에틸아세테이트, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르 또는 디클로로메탄으로 이루어진 그룹 중에서 단일 또는 2종 이상의 용매를 혼합한 것으로 추출된 화장료 조성물
The method of claim 1, wherein the mixed extract is selected from the group consisting of purified water, C1-C4 alcohol, hydrous C1-C4 alcohol, C1-C6 glycol, hydrous C1-C6 glycol, ethyl acetate, benzene, hexane, diethyl ether or dichloromethane. Cosmetic composition extracted by mixing single or two or more solvents
제 3항에 있어서, 혼합 추출물이 에탄올 또는 함수에탄올로 추출된 화장료 조성물
The cosmetic composition according to claim 3, wherein the mixed extract is extracted with ethanol or hydrous ethanol.
제 1항에 있어서, 바오밥나무, 자근, 참마, 연근으로 구성되어진 혼합물을 80 내지 100도씨 온도에서 30분 내지 1시간 동안 습식 열처리를 하여 미생물 오염을 제거하며 각 혼합물을 구성하는 원료의 영양성분이 화학적으로 용출되어 이용되기 쉽도록 조건을 형성하는 단계를 거친 후 30 내지 60도씨 온도와 pH 5.5 내지 8.5 및 통상 혐기적인 발효 조건에서 바실러스속 미생물을 이용하여 고체 발효하여 고분자 물질을 생산한 후 제균 단계를 거치어 정제수 또는 유기용매로서 C 1 내지 4로 구성된 저급 알코올 특히 에탄올을 1:1 내지 5의 부피비로 혼합 첨가하여 열수 또는 초음파 추출 방법을 사용하여 교반하여 추출액을 회수하고 이를 농축하여 1차 정제하는 단계로 구성되는 발효 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
According to claim 1, wherein the mixture consisting of baobabs, roots, yams, lotus roots is subjected to wet heat treatment at a temperature of 80 to 100 degrees Celsius for 30 minutes to 1 hour to remove microbial contamination and nutritional ingredients of the raw materials constituting each mixture After chemically eluting and forming conditions to facilitate use, the polymer is produced by solid fermentation using Bacillus microorganisms at a temperature of 30 to 60 degrees Celsius, pH 5.5 to 8.5, and usually anaerobic fermentation conditions. After the sterilization step, the lower alcohol, particularly ethanol, composed of C 1 to 4 as a purified water or an organic solvent is added and mixed in a volume ratio of 1: 1 to 5, and the mixture is stirred using hot water or ultrasonic extraction to recover the extract, and then concentrated. Cosmetic composition characterized in that it comprises a fermentation extract consisting of the step of purifying tea
제 1항 내지 제 4항에 있어서, 화장료 조성물이 항염 및 항알러지 효과를 가지는 화장료 조성물
The cosmetic composition according to claim 1, wherein the cosmetic composition has an anti-inflammatory and anti-allergic effect.
제 1항 내지 제 5항에 있어서, 화장료 조성물이 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 에센스 또는 팩 제형인 화장료 조성물

The cosmetic composition according to claim 1, wherein the cosmetic composition is a lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence or pack formulation.

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