KR20120129882A - Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof - Google Patents

Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof Download PDF

Info

Publication number
KR20120129882A
KR20120129882A KR1020127017595A KR20127017595A KR20120129882A KR 20120129882 A KR20120129882 A KR 20120129882A KR 1020127017595 A KR1020127017595 A KR 1020127017595A KR 20127017595 A KR20127017595 A KR 20127017595A KR 20120129882 A KR20120129882 A KR 20120129882A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acids
factor vii
polypeptide
leu
Prior art date
Application number
KR1020127017595A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR101770849B1 (en
Inventor
제니퍼 에이 듀몬트
수잔 로우
앨런 제이 비톤티
글렌 피어스
앨빈 룩
하이얀 장
바이런 맥키니
맷 오트머
위르크 좀머
카렌 누겐트
란 리
로버트 피터스
Original Assignee
바이오겐 이데크 헤모필리아 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이오겐 이데크 헤모필리아 인코포레이티드 filed Critical 바이오겐 이데크 헤모필리아 인코포레이티드
Publication of KR20120129882A publication Critical patent/KR20120129882A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101770849B1 publication Critical patent/KR101770849B1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
    • Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 인자 Ⅷ의 투여 방법; 인자 Ⅷ을 포함한 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드의 투여 방법; 인자 Ⅷ을 포함한 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드; 상기 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드; 및 상기 세포를 사용한 상기 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드의 제조 방법을 제공한다.The present invention provides a method of administering factor VII; Methods of administering chimeric and hybrid polypeptides including Factor VII; Chimeric and hybrid polypeptides including Factor VII; Polynucleotides encoding the chimeric and hybrid polypeptides; And a method for producing the chimeric and hybrid polypeptides using the cells.

Description

인자 ＦⅧ-Ｆｃ의 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드, 및 그의 사용방법 {FACTOR VIII-FC CHIMERIC AND HYBRID POLYPEPTIDES, AND METHODS OF USE THEREOF}Chimeras and Hybrid Polypeptides of Factor Fv-Fc, and Methods of Use {FACTOR VIII-FC CHIMERIC AND HYBRID POLYPEPTIDES, AND METHODS OF USE THEREOF}

본 발명은 혈액응고장애(hemostatic disorder)의 치료 분야 전반에 관한 것이다.The present invention relates generally to the field of treatment of hemostatic disorders.

A형 혈우병(Hemophilia A)은 인자 Ⅷ(FⅧ) 유전자의 돌연변이 및/또는 결실로 인해 인자 Ⅷ 활성이 결핍되는 X-염색체 연관의 출혈 질환이다. 이 질환은 자발성 출혈 및 외상 후 과다 출혈로 특징지을 수 있다. 흔히 유아기에 시작된 근육 및 관절 내로의 출혈이 반복되면 시간이 지나면서 혈우병성관절증(hemophilic arthropathy) 및 회복 불능의 관절 손상을 야기한다. 이러한 손상은 진행성이며, 관절 가동성의 심각한 제한, 근위축 및 만성 통증을 야기할 수도 있다(문헌[Rodriguez-Merchan, E.C., Semin. Thromb. Hemost. 29:87-96 (2003)]; 본 명세서에서 전문이 참조됨).Hemophilia A is a bleeding disease of X-chromosome association in which factor VII activity is deficient due to mutation and / or deletion of the factor VII (FVIII) gene. This disease can be characterized by spontaneous bleeding and post-traumatic excess bleeding. Repeated bleeding into muscles and joints beginning in infancy often leads to hemophilic arthropathy and irreparable joint damage over time. Such damage is progressive and may cause severe limitations of joint mobility, muscular atrophy and chronic pain (Rodriguez-Merchan, EC, Semin. Thromb. Hemost. 29: 87-96 (2003); Full text).

A2 도메인은 인자 Ⅷ 분자의 전구응고(procoagulant) 활성에 필요하다. 돼지의 인자 Ⅷ이 인간의 인자 Ⅷ보다 응혈 활성이 6배 높으며(문헌[Lollar, P., and E. T. Parker, J. Biol. Chem. 266:12481-12486 (1991)]), 인간 및 돼지의 응혈 활성 간의 차이는 인간 및 돼지 A2 도메인의 아미노산 서열 중 하나 이상의 잔기 차이에 기인한 것으로 보인다는 연구가 있다(문헌[Lollar, P., et al., J. Biol. Chem. 267:23652-23657 (1992)]; 본 명세서에서 전문이 참조됨).The A2 domain is required for the procoagulant activity of factor VIII molecules. Pig factor VII is 6 times higher in clotting activity than human factor VII (Lollar, P., and ET Parker, J. Biol. Chem. 266: 12481-12486 (1991)), and coagulation in humans and pigs There is a study that the difference between activities appears to be due to residue differences in one or more of the amino acid sequences of the human and porcine A2 domains (Lollar, P., et al., J. Biol. Chem. 267: 23652-23657 ( 1992); incorporated herein by reference in its entirety.

A형 혈우병 치료는 인자 Ⅷ의 수준을 정상 수준인 1 내지 5%로 회복하여 자발성 출혈을 방지하는 것을 목적으로 하는 치환 요법에 의한다(문헌[Mannucci, P.M., et al., N. Engl. J. Med. 344:1773-1779 (2001)]; 본 명세서에서 전문이 참조됨). 출혈 사례(bleeding episode)에 대한 주문형 치료(on-demand treatment)를 위하여, 또는 예방 치료에 의한 출혈 사례가 발생하는 것을 방지하기 위하여 사용되는 혈장 유래 및 재조합 인자 Ⅷ들도 있다. 상기 산물의 반감기에 기초하면, 치료 요법(regimen)들은 빈번한 정맥 투여를 요한다. 이러한 빈번한 투여는 고통스럽고 불편하다.Hemophilia A treatment is based on replacement therapy aimed at preventing the spontaneous bleeding by restoring the level of factor VII to normal levels of 1-5% (Mannucci, PM, et al., N. Engl. J). Med. 344: 1773-1779 (2001); incorporated herein by reference in its entirety). There are also plasma-derived and recombinant factor cells used for on-demand treatment of bleeding episodes or to prevent the occurrence of bleeding cases by preventive treatment. Based on the half-life of the product, treatment regimens require frequent intravenous administration. Such frequent administration is painful and inconvenient.

사망률 감소, 관절 손상 방지 및 삶의 질적 향상은 혈장 유래 및 재조합 인자 Ⅷ의 개발에 의하여 중요한 성취를 이뤄오고 있다. 출혈로부터의 보호를 연장하는 것 또한 A형 혈우병 환자 치료에 있어서 또 다른 중요한 발전상이 될 것이다. 그러나 지금까지 보호를 연장할 수 있게 한 산물은 개발되지 않았다. 따라서 인자 Ⅷ 결핍에 기인한 혈우병에 대하여, 현재의 치료법들보다 더 견딜만 하고 더 효과적인 개선된 치료법에 대한 필요성이 있다.Reduction of mortality, prevention of joint damage, and improvement in quality of life have been achieved by plasma development and the development of recombinant factor VII. Extending protection from bleeding will also be another important development in the treatment of hemophilia A patients. To date, however, no products have been developed that could extend protection. Thus, for hemophilia due to factor VII deficiency, there is a need for improved therapies that are more tolerable and more effective than current therapies.

본 발명은 인자 Ⅷ의 투여 방법, 인자 Ⅷ을 포함한 키메라 폴리펩티드 및 상기 키메라 폴리펩티드의 하이브리드의 투여 방법, 인자 Ⅷ을 포함한 키메라 폴리펩티드 및 상기 키메라 폴리펩티드의 하이브리드, 상기 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함한 세포, 및 상기 세포를 사용한 상기 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드의 제조 방법을 제공한다.The present invention relates to a method for administering factor VII, a method for administering a chimeric polypeptide comprising a factor VII and a hybrid of said chimeric polypeptide, a chimeric polypeptide comprising a factor VII and a hybrid of said chimeric polypeptide, a polynucleotide encoding said chimeric and hybrid polypeptide, said Cells comprising polynucleotides, and methods of making such chimeric and hybrid polypeptides using the cells are provided.

본 발명은 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법으로서, 치료용량(therapeutic dose)의 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, 예를 들어 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드를 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5배 더 긴 투여 간격으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method of administering Factor VII to a subject, wherein a therapeutic dose of a chimeric factor VII polypeptide, eg, chimeric factor VII-Fc polypeptide, is provided in an equivalent amount without a non-factor VII portion, eg an Fc portion. And administering to the subject at an administration interval of at least about 1.5 times longer than the administration interval required for said Factor VII (polypeptide consisting of said Factor VII moiety).

투여 간격은 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다, 적어도 약 1.5 내지 6배, 1.5 내지 5배, 1.5 내지 4배, 1.5 내지 3배 또는 1.5 내지 2배 더 길 수 있다. 투여 간격은 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다, 적어도 약 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 5.5배 또는 6배 더 길 수 있다. 투여 간격은 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일, 또는 그 이상마다 1회 일 수 있다.The dosing interval is at least about 1.5 to 6 times, 1.5 to 5 times, 1.5 than the dosing interval required for the same amount of the Factor VII (polypeptide consisting of the Factor VII moiety) without the non-Factor VII portion, e.g., the Fc portion. To 4 times, 1.5 to 3 times or 1.5 to 2 times longer. The dosing interval is at least about 1.5 times, 2 times, 2.5 times, 3 times greater than the dosing interval required for the same amount of said factor VII (polypeptide consisting of said factor VII moiety) without a non-factor VII moiety, eg an Fc moiety. , 3.5 times, 4 times, 4.5 times, 5 times, 5.5 times or 6 times longer. The dosing interval may be about once every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 days, or more.

투여 간격은 적어도 약 1.5 내지 5일, 1.5, 2, 3, 4 또는 5일 또는 그 이상 일 수 있다.The interval of administration can be at least about 1.5 to 5 days, 1.5, 2, 3, 4 or 5 days or more.

본 발명은 또한 인자 Ⅷ을 필요 대상체에 주입하는 방법으로서, 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 의해 얻어지는 AUC(area under the plasma concentration versus time curve; 혈장 내 농도 대 시간 곡선의 아래 면적)보다 적어도 1.25배 더 큰 AUC를 얻기 위해 치료용량 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, 예를 들어 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드를 필요 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of injecting Factor VII into a subject in need thereof, wherein the AUC (area under the A) obtained by an equivalent amount of the Factor VII (polypeptide consisting of the Factor VII moiety) without the Fc moiety administering to a subject in need thereof a therapeutic dose chimeric factor VII polypeptide, eg, chimeric factor VII-Fc polypeptide, to obtain an AUC that is at least 1.25 times greater than the plasma concentration versus time curve; It provides a method to include.

본 발명은 또한 인자 Ⅷ을 필요 대상체에 주입하는 방법으로서, 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 또는 그 이상마다 1회의 투여 간격으로 인자 Ⅷ 및 Fc를 포함하는 폴리펩티드의 치료용량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The invention also provides a method of injecting Factor VII into a subject in need thereof, wherein Factor VII and Fc are administered at one administration interval every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, or 14 days or more. It provides a method comprising administering to a subject a therapeutic dose of a polypeptide comprising a.

본 발명의 방법은 예방적 치료 또는 주문형 치료의 필요 하에 있는 대상체에 사용될 수 있다.The methods of the invention can be used in subjects in need of prophylactic or on-demand treatment.

주문형 치료는 출혈 사례(bleeding episode), 관절혈증, 근육 출혈, 구강 출혈, 대출혈, 근육 내로의 출혈, 구강 내 출혈, 외상, 두부 외상, 위장관출혈, 뇌내출혈, 복강내출혈, 흉강내출혈, 골절, 중추신경계출혈, 인두후강내출혈, 복막후극내출혈, 또는 장요근막내출혈에 대한 치료를 포함한다. 본 발명의 대상은 외과적수술 예방, 수술 전후 관리, 또는 수술을 위한 치료의 필요 하에 있을 수 있다. 상기 수술은 예를 들어 소수술(minor surgery), 대수술(major surgery), 발치, 편도선수술), 서혜부 헤르니아절제술, 활액막절제술, 슬관절 전치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술, 두개내 수술, 복강내수술, 흉강내수술, 또는 관절치환술을 포함한다.On-demand treatment includes bleeding episodes, arthrosis, muscle bleeding, oral bleeding, bleeding, intramuscular bleeding, intraoral bleeding, trauma, head trauma, gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhage, intraperitoneal bleeding, intrathoracic bleeding, fractures, Treatments for central nervous system bleeding, pharyngeal bleeding, peritoneal bleeding, or intestinal pleural bleeding. Subjects of the present invention may be in need of surgical prophylaxis, preoperative surgery, or treatment for surgery. The surgery includes, for example, minor surgery, major surgery, extraction, tonsillectomy, inguinal herniactomy, synovectomy, total knee arthroplasty, craniotomy, bone joint surgery, trauma surgery, intracranial surgery, abdominal cavity. Internal surgery, intrathoracic surgery, or arthroplasty.

주문형 치료를 위하여, 상기 키메라 폴리펩티드의 투여 간격은 약 매 24-36, 24-48, 24-72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 또는 72 시간 또는 그 이상마다 1회로 한다.For on-demand treatment, the administration interval of the chimeric polypeptide is about every 24-36, 24-48, 24-72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, One time every 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, or 72 hours or more.

본 발명의 방법에서 사용되는 치료용량은 약 10 내지 약 100 IU/㎏, 보다 바람직하게는 대략 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 또는 90-100 IU/㎏, 및 더욱 바람직하게는 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 IU/㎏이다.Therapeutic doses used in the methods of the invention are about 10 to about 100 IU / kg, more preferably about 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70- 80, 80-90, or 90-100 IU / kg, and more preferably about 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100 IU / kg.

본 발명의 방법에서 사용되는 치료용량은 약 10 내지 약 150 IU/㎏, 보다 바람직하게는 대략 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150 IU/㎏, 더욱 바람직하게는 약 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 또는 150 IU/㎏이다.Therapeutic doses used in the methods of the invention are about 10 to about 150 IU / kg, more preferably about 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150 IU / kg, more preferably Is about 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, or 150 IU / kg.

본 발명에 의한 방법의 대상체는 인간 개체이거나 또는 비인간 포유류일 수 있다. 비인간 포유류는 예를 들어 마우스, 개, 영장류, 원숭이, 고양이, 말, 소, 돼지 및 다른 가축 동물과 작은 동물을 포함한다. 투여 간격 및 AUC의 결정은 단일 대상체 또는 대상체 집단에서 실시될 수 있다.The subject of the method according to the invention can be a human subject or a non-human mammal. Non-human mammals include, for example, mice, dogs, primates, monkeys, cats, horses, cattle, pigs, and other livestock and small animals. Determination of the interval of administration and AUC can be made in a single subject or a population of subjects.

인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 인간의 인자 Ⅷ, 또는 비인간의 인자 Ⅷ 예를 들어 돼지, 마우스 또는 개의 인자 Ⅷ 일 수 있다. 인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 B 도메인의 전체적 또는 부분적 결실을 가질 수 있다.The factor VII (or factor VII portion of the chimeric polypeptide) may be a factor VII of human, or a nonhuman factor VII, such as a pig, mouse or dog factor VII. Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) may have a full or partial deletion of the B domain.

인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 표 2에서 나타낸 신호 서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. 인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 표 2에서 나타낸 신호 서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치할 수 있다.Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a Factor VII amino acid sequence (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to SEQ ID NO: 8) without the signal sequence shown in Table 2 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a Factor VII amino acid sequence (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to SEQ ID NO: 8) without the signal sequence shown in Table 2 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12).

인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 표 2에서 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. 인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)은 표 2에서 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ의 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치할 수 있다.Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a Factor VII amino acid sequence (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acid of SEQ ID NO: 8) with the signal sequence shown in Table 2. -19 to 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. Factor VII (or the factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises the amino acid sequence of Factor VII having the signal sequences shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8). Amino acids -19 to 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12).

Fc 부분(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)은 표 2에서 나타난 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. Fc 부분(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)은 표 2에서 나타난 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치할 수 있다.The Fc moiety (or the Fc moiety of the chimeric polypeptide) comprises the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8, and SEQ ID NO: 10). Amino acids 746 to 972, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. The Fc moiety (or the Fc moiety of the chimeric polypeptide) comprises the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8, and SEQ ID NO: 10). Amino acids 746 to 972, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12).

키메라 폴리펩티드는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함할 수 있다. 키메라 폴리펩티드는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하는 서열, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 일치하는 서열을 포함할 수 있다.The chimeric polypeptide is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (iii), or the signals shown in Table 2A (iii) And at least 90% or 95% identity with the sequenced Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids -19-1665 of SEQ ID NO: 2). Chimeric polypeptides include a factor VII without a signal sequence shown in Table 2A (iii) and a sequence corresponding to the Fc amino acid sequence (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2), or a factor VII with a signal sequence shown in Table 2A (iii) and It may comprise a sequence that matches the Fc amino acid sequence (amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2).

키메라 폴리펩티드는 상기 키메라 폴리펩티드와 연결된 제2 폴리펩티드를 포함한 하이브리드 형태일 수 있으며, 상기에서 제2 폴리펩티드는 Fc를 포함하거나 본질적으로 Fc로 이루어진다.The chimeric polypeptide may be in a hybrid form including a second polypeptide linked to the chimeric polypeptide, wherein the second polypeptide comprises or consists essentially of an Fc.

제2 폴리펩티드는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 내지 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 내지 95% 일치하는 서열을 포함하거나 본질적으로 그 서열로 이루어진다. 제 2 폴리펩티드는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 일치하는 서열을 포함하거나 본질적으로 그 서열로 이루어진다.The second polypeptide is at least 90% to 95% identical to the amino acid sequence without signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) or the amino acid sequence with the signal sequence shown in Table 2A (ii) Or comprise at least 90% to 95% identity with an amino acid sequence of amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4. The second polypeptide matches an amino acid sequence without the signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) or an amino acid sequence with a signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids of SEQ ID NO: 4). -20 to 227), or consist essentially of the sequence thereof.

키메라 폴리펩티드 또는 하이브리드는 적어도 하나의 부형제(excipient)를 포함한 약학 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.Chimeric polypeptides or hybrids may be administered as part of a pharmaceutical composition comprising at least one excipient.

본 발명은 또한 상술한 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드 그 자체, 그들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함한 인간 태아의 배양 세포, 및 상기 키메라 및 하이브리드 폴리펩티드의 제조 방법, 및 상기 방법으로 제조된 폴리펩티드를 제공한다.The present invention also provides the chimeric and hybrid polypeptides as described above, polynucleotides encoding them, cultured cells of a human fetus comprising the polynucleotides, and methods of making the chimeric and hybrid polypeptides, and polypeptides produced by the methods. .

도 1은 rFⅧFc 단량체의 개략도.
도 2는 A형 혈우병 마우스에서 50 IU/㎏의 정맥 투여 후 rFⅧFc의 WBCT과 ReFacto(등록상표)의 비교(n = 그룹당 6마리의 마우스).
도 3은 rFⅧFc, ReFacto(등록상표) 및 Advate(등록상표)의 1회 Ⅳ 50 IU/㎏ 투여 후, A형 혈우병 마우스에서의 혈장 내 발색 활성을 도시한 도면.
도 4는 A형 혈우병 개에서의 rFⅧFc 및 ReFacto(등록상표)의 WBCT, 도 4a는 rFⅧFc의 경우이고, 도 4B는 교차 연구시 ReFacto(등록상표) 투여 후 rFⅧFc 투여의 경우임.
도 5는 A형 혈우병 개에서의 정맥 투여된 rFⅧFc 및 ReFacto(등록상표)의 약동학(ELISA로 측정)을 도시한 도면.
도 6은 A형 혈우병 개에서의 1회 정맥 투여 후 rFVIIIIFc 및 ReFacto(등록상표)의 활성(FⅧ-특이적 발색 활성 에세이로 측정)의 도시한 도면.
도 7은 키노몽구스 원숭이에서의 rFⅧFc 및 Xyntha 1회 정맥 투여(125 IU/㎏) 후, 시간당 그룹 평균 혈장 내 농도의 도시(n = 6, 평균 ±SD). 혈장 내 농도는 ELISA로 측정되었다.
도 8은 키노몽구스 원숭이에서의 rFⅧFc 및 Xyntha 1회 정맥 투여(125 IU/㎏) 후, 개별 혈장 내 농도 대 시간 곡선(n = 6, 평균 ±SD). 혈장 내 농도는 ELISA로 측정되었다. 도 8a는 rFⅧFc(ELISA로 측정)의 경우이고, 도 8b는 Xyntha(ELISA로 측정)의 경우이다.
도 9는 키노몽구스 원숭이에서의 rFⅧFc 및 Xyntha 1회 정맥 투여(125 IU/㎏) 후, 그룹 평균 혈장내 발색 활성(n = 6, 평균 ±SD). FⅧ 활성은 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이로 측정되었다.
도 10은 키노몽구스 원숭이에서의 rFⅧFc 및 Xyntha 1회 정맥 투여(125 IU/㎏) 후, 개별 혈장내 발색 활성 대 시간 곡선(n = 6, 평균 ±SD). FⅧ 활성은 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이로 측정되었다. (a)는 rFⅧFc의 발색 활성이고, (b)는 Xyntha의 발색 활성이다.
도 11은 rFⅧFc의 생화학적 특성으로서, 인자 Ⅹ의 농도 함수로서 인자 Ⅹ의 활성화를 도시한 도면.
도 12는 rFⅧFc의 생화학적 특성으로서, 인자 Ⅸa의 농도 함수로서 인자 Ⅹ의 활성화를 도시한 도면.
도 13은 관찰된 시간당 그룹 평균 FⅧ 활성(±SE)을 도시(단일 단계 에세이에서 25 IU/㎏(a) 또는 65 IU/㎏(b), 및 발색 에세이에서 25 IU/㎏(c) 또는 65 IU/㎏(d)).
도 14는 관찰된 시간당 그룹 평균 FⅧ 활성(±SE)을 도시한 도면((a)는 단일 단계 에세이, (b)는 발색 에세이).1 is a schematic representation of an rFⅧFc monomer.
2 is a comparison of WFCT and ReFacto® of rFⅧFc after intravenous administration of 50 IU / kg in type A hemophilia mice (n = 6 mice per group).
3 is rFⅧFc, ReFacto (registered trademark) And plasma chromogenic activity in Hemophilia A mice after one IV 50 IU / kg administration of Advate®.
4 is the WBCT of rFⅧFc and ReFacto® in dogs with hemophilia A, FIG. 4A is the case of rFⅧFc, and FIG. 4B is the case of rFⅧFc administration after ReFacto® in the crossover study.
FIG. 5 shows pharmacokinetics (measured by ELISA) of rFⅧFc and ReFacto® administered intravenously in hemophilia A dogs.
FIG. 6 is a diagram of the activity of rFVIIIIFc and ReFacto® (measured by FVII-specific colorimetric activity assay) after single intravenous administration in hemophilia A dogs.
FIG. 7 is a plot of group mean plasma concentrations per hour following single intravenous administration of rFⅧFc and Xyntha (125 IU / kg) in cynomongus monkeys (n = 6, mean ± SD). Plasma concentrations were measured by ELISA.
FIG. 8 shows individual plasma concentration versus time curves (n = 6, mean ± SD) after single intravenous administration of rFⅧFc and Xyntha (125 IU / kg) in cynomongus monkeys. Plasma concentrations were measured by ELISA. FIG. 8A shows the case of rFcFc (measured by ELISA), and FIG. 8B shows the case of Xyntha (measured by ELISA).
FIG. 9 shows group average plasma color development activity (n = 6, mean ± SD) after single intravenous administration of rFⅧFc and Xyntha (125 IU / kg) in cynomongus monkeys. FVIII activity was determined by FVIII-specific colorimetric activity assays.
FIG. 10 shows individual plasma coloration activity versus time curves (n = 6, mean ± SD) after single intravenous administration of rFⅧFc and Xyntha (125 IU / kg) in cynomongus monkeys. FVIII activity was determined by FVIII-specific colorimetric activity assays. (a) is the color development activity of rFⅧFc, and (b) is the color development activity of Xyntha.
FIG. 11 shows the activation of Factor VII as a biochemical characteristic of rFⅧFc, as a function of concentration of Factor VII.
FIG. 12 shows activation of factor VII as a biochemical characteristic of rFⅧFc, as a function of concentration of factor VIIa.
FIG. 13 shows the observed group mean FVIII activity (± SE) per hour (25 IU / kg (a) or 65 IU / kg (b) in a single step assay, and 25 IU / kg (c) or 65 in a coloration assay). IU / kg (d)).
FIG. 14 shows the observed group mean FVIII activity (± SE) per hour ((a) single step assay, (b) colorimetric assay).

본 발명은 현재 알려진 인자 Ⅷ 산물의 경우보다 더 긴 투여 간격 및/또는 더 큰 AUC를 사용하여 A형 혈우병을 인자 Ⅷ로 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한, 개선된 인자 Ⅷ 키메라 폴리펩티드, 인자 Ⅷ 키메라 폴리뉴클레오티드 및 그의 제조 방법을 제공한다.The present invention provides methods for treating Type A hemophilia with factor A using longer AUCs and / or larger AUCs than currently known Factor VIII products. The invention also provides improved Factor VII chimeric polypeptides, Factor VII chimeric polynucleotides and methods of making the same.

A형 혈우병의 치료는 자발성 출혈을 방지하기 위해 인자 Ⅷ 활성을 정상 수준인 1 내지 5%로 회복하는 것을 목표로 하는 치환 요법에 의한다(문헌[Mannucci, P.M., et al., N. Engl. J. Med. 344:1773-9 (2001)], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 출혈 사례에 대한 주문형 치료를 위해, 또는 예방적 치료에 의한 출혈 사례를 방지하기 위해 사용되는 혈장 유래 및 재조합 FⅧ 산물들이 있다. 이들 산물의 반감기(10-12시간)에 기초하면(문헌[White G.C., et al., Thromb. Haemost. 77:660-7 (1997); Morfini, M., Haemophilia 9 (suppl 1):94-99; discussion 100 (2003)]), 치료 요법은 빈번한 정맥 투여, 일반적으로 예방 목적으로는 1 주일에 2 내지 3회, 및 주문형 치료 목적으로 매일 1 내지 3회의 정맥 투여를 요한다(문헌[Manco-Johnson, M.J., et al., N. Engl. J. Med. 357:535-544 (2007)], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 이러한 빈번한 투여는 고통스럽고 불편하다.Treatment of hemophilia A is by substitution therapy aimed at restoring factor Ⅷ activity to normal levels of 1-5% to prevent spontaneous bleeding (Mannucci, PM, et al., N. Engl. J. Med. 344: 1773-9 (2001), incorporated herein by reference in its entirety. There are plasma derived and recombinant FVIII products that are used for on-demand treatment of bleeding cases or to prevent bleeding cases by prophylactic treatment. Based on the half-life (10-12 hours) of these products (White GC, et al., Thromb. Haemost. 77: 660-7 (1997); Morfini, M., Haemophilia 9 (suppl 1): 94- 99; discussion 100 (2003))), treatment regimens require frequent intravenous administration, generally two to three times a week for prophylactic purposes and one to three intravenous daily for on-demand treatment purposes (Manco- Johnson, MJ, et al., N. Engl. J. Med. 357: 535-544 (2007), incorporated herein by reference in its entirety. Such frequent administration is painful and inconvenient.

본 발명은 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법으로서, 치료용량의 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, 예를 들어, 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 하이브리드를, 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어, Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5배 더 긴 투여 간격으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method of administering factor VII to a subject, wherein the therapeutic dose of a chimeric factor VII polypeptide, eg, a chimeric factor VII-Fc polypeptide, or a hybrid of the polypeptide, is a non-factor VII portion, eg, Fc. A method comprising administering to a subject at an administration interval of at least about 1.5 times longer than the administration interval required for a portionless equivalent amount of said Factor VII (polypeptide consisting of said Factor VII moiety).

투여 간격은 비-인자 Ⅷ 부분 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5 내지 6배, 1.5 내지 5배, 1.5 내지 4배, 1.5 내지 3배, 또는 1.5 내지 2배 더 길 수 있다. 투여 간격은 비-인자 Ⅷ 부분 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 5.5배, 또는 6배가 더 길 수 있다. 투여 간격은 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 또는 그 이상마다 1회일 수 있다.The dosing interval is at least about 1.5-6 times, 1.5-5 times, 1.5-4 times the dosing interval required for the same amount of said factor VII (polypeptide consisting of said factor VII moiety) without a non-factor VII portion, for example an Fc portion. Pear, 1.5 to 3 times, or 1.5 to 2 times longer. The dosing interval is at least about 1.5 times, 2 times, 2.5 times, 3 times, 3.5 times the dosing interval required for the same amount of said factor VII (polypeptide consisting of said factor VII moiety) without a non-factor VII portion, eg an Fc portion. Pear, 4, 4.5, 5, 5.5, or 6 times longer. The interval of administration may be about once every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 days or more.

투여 간격은 적어도 약 1.5 내지 5일 및 1.5일, 2일, 3일, 4일 또는 5일 또는 그 이상일 수 있다.The dosing interval may be at least about 1.5 to 5 days and 1.5 days, 2 days, 3 days, 4 days or 5 days or more.

본 발명은 또한 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법으로서, 비-인자 Ⅷ 부분 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드)에 의해 얻어지는 AUC(혈장 내 농도 대 시간 곡선의 아래 면적)에 비해 적어도 약 1.25배 더 큰 AUC를 얻기 위하여 치료용량의 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드 예를 들어 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 하이브리드를 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of administering Factor VII to a subject, wherein AUC (plasma concentration versus time) obtained by an equivalent amount of said Factor VII (polypeptide consisting of said Factor VII moiety) without a non-factor VII moiety, eg, an Fc moiety. Administering to the subject a therapeutic dose of a chimeric factor VIII polypeptide such as a chimeric factor VIII-Fc polypeptide, or a hybrid of the polypeptide, to obtain an AUC at least about 1.25 times larger than the area under the curve). to provide.

본 발명은 또한 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법으로서, 인자 Ⅷ 및 Fc를 포함한 치료용량의 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 하이브리드를 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일마다 1회의 투여 간격으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.The invention also provides a method of administering Factor VII to a subject, wherein the therapeutic dose of the polypeptide, including Factor VII and Fc, or a hybrid of the polypeptide is about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or Provided is a method comprising administering to a subject at one administration interval every 14 days.

본 발명의 방법은 예방적 치료 또는 주문형 치료의 필요 하에 있는 대상체에 사용될 수 있다.The methods of the invention can be used in subjects in need of prophylactic or on-demand treatment.

본 명세서에서 "투여"라 함은, 약학적으로 허용가능한 본 발명의 인자 Ⅷ 폴리펩티드를 약학적으로 허용가능한 경로를 통하여 대상체에 전달하는 것을 의미한다. 투여의 바람직한 경로는 정맥 투여, 예를 들어 정맥 주사 및 정맥내 주입이다. 투여의 추가적 경로는 예를 들어 피하, 근육내, 구강, 비강 및 폐 투여를 포함한다. 키메라 폴리펩티드 및 하이브리드 단백질은 적어도 하나의 부형제를 포함한 약학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.As used herein, "administration" means delivering a pharmaceutically acceptable Factor VII polypeptide of the invention to a subject via a pharmaceutically acceptable route. Preferred routes of administration are intravenous administration, for example intravenous injection and intravenous infusion. Additional routes of administration include, for example, subcutaneous, intramuscular, oral, nasal and pulmonary administration. Chimeric polypeptides and hybrid proteins can be administered as part of a pharmaceutical composition comprising at least one excipient.

본 명세서에서 "혈장 내 농도 대 시간 곡선의 아래 면적(AUC)"이라 함은, 약리학 용어와 동일하며 투여 후 인자 Ⅷ이 흡수되는 속도 및 정도를 기초로 한다. AUC은 특정 시간 간격, 예를 들어 12, 18, 24, 36, 48 또는 72 시간에 대해 결정되거나, 또는 곡선의 기울기에 기인한 보외법을 사용하여 무한대에 대해 결정된다. 본 명세서에서 달리 특정되지 않는 경우, AUC는 무한대에 대해 결정된다. AUC의 결정은 단일 대상체 또는 평균이 계산되는 대상체 집단에 대해 실시되며, 이후에 이들 집단의 평균을 계산한다.As used herein, the term “area under the plasma concentration versus time curve (AUC)” is the same as pharmacological term and is based on the rate and extent at which factor VII is absorbed after administration. AUC is determined for a specific time interval, for example 12, 18, 24, 36, 48 or 72 hours, or for infinity using extrapolation due to the slope of the curve. Unless otherwise specified herein, AUC is determined for infinity. Determination of AUC is made for a single subject or for a population of subjects for which the mean is calculated, and then the average of these populations is calculated.

본 명세서에서 인자 Ⅷ의 "B 도메인"이라 함은, 내부 아미노산 서열의 일치 및 트롬빈에 의한 단백질 절단 부분 예를 들어 인간의 전장 인자 Ⅷ의 741번째 Ser 내지 1648번째 Arg 잔기에 의해 정의되는, 당 업계에서 알려진 B 도메인과 동일하다. 인간 인자 Ⅷ의 다른 도메인은 하기의 아미노산 잔기들; A1, 잔기 Ala 1 - Arg 372; A2, 잔기 Ser373 - Arg740; A3, 잔기 Ser1690 - Ile 2032; C1, 잔기 Arg2033 - Asn 2172; C2, 잔기 Ser2173 - Tyr2332에 의해 정의된다. A3-C1-C2 서열은 Ser1690 - Tyr2332 잔기를 포함한다. 나머지 서열, 잔기 Glu 1649 - Arg 1689는 통상 인자 Ⅷ의 경사슬 활성화 펩티드라 한다. 돼지, 마우스 및 개의 인자 Ⅷ에 대한 B 도메인을 포함한 모든 도메인들의 경계 위치도 또한 당 업계에 알려져 있다. 바람직하게는 인자 Ⅷ의 B 도메인은 결실된다("B 도메인 결실 인자 Ⅷ"또는 "BDD FⅧ"). BDD FⅧ의 예는 REFACTO(재조합 BDD FⅧ)로서, 표 2A(ⅰ)의 인자 Ⅷ 부분의 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 또는 1 내지 1438)와 동일한 서열을 갖는다.As used herein, the "B domain" of factor VII is defined in the art as defined by the consensus of the internal amino acid sequence and the protein cleavage portion by thrombin, for example, the 741th Ser-1648th Arg residue of the full length factor VII of humans. Same as the B domain in Other domains of human factor VII include the following amino acid residues; A1, residues Ala 1-Arg 372; A2, residues Ser373-Arg740; A3, residues Ser1690-Ile 2032; C1, residues Arg2033-Asn 2172; C2, residues Ser2173-Tyr2332. The A3-C1-C2 sequence comprises Ser1690-Tyr2332 residues. The remaining sequence, residues Glu 1649-Arg 1689, is commonly referred to as the light chain activating peptide of Factor VIII. The location of the boundaries of all domains, including the B domain for swine, mouse and canine factor VII, is also known in the art. Preferably the B domain of factor VII is deleted ("B domain deletion factor VII" or "BDD FVIII"). An example of BDD F ′ is REFACTO (recombinant BDD F ′), which has the same sequence as the sequence of the Factor VII portion of Table 2A (VII) (amino acids -19 to 1438, or 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2).

"B 도메인 결실 인자 Ⅷ"는 미국 특허 제6,316,226호, 제6,346,513호, 제7,041,635호, 제5,789,203호, 제6,060,447호, 제5,595,886호, 제6,228,620호, 제5,972,885호, 제6,048,720호, 제5,543,502호, 제5,610,278호, 제5,171,844호, 제5,112,950호, 제4,868,112호, 및 제6,458,563호(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개된 전체 또는 부분 결실들을 가질 수 있다. 몇몇 구현예에서, 본 발명의 B 도메인 결실 인자 Ⅷ 서열은 미국 특허 제6,316,226호의 컬럼 4, 라인 4 내지 컬럼 5, 라인 28 및 실시예 1-5에 공개된 결실들 중 어떠한 것도 포함된다(또한 미국 특허 제6,346,513호에도 공개). 몇몇 구현예에서, 본 발명의 B 도메인 결실 인자 Ⅷ는 미국 특허 제5,789,203호의 컬럼 2, 라인 26 내지 51 및 실시예 5-8에 공개된 결실을 포함한다(또한 미국 특허 제6,060,447호, 제5,595,886, 및 제6,228,620호에서도 공개). 몇몇 구현예에서, B 도메인 결실 인자 Ⅷ는 미국 특허 제5,972,885호의 컬럼 1, 라인 25 내지 컬럼 2, 라인 40; 미국 특허 제6,048,720호의 컬럼 6, 라인 1-22 및 실시예 1; 미국 특허 제5,543,502호의 컬럼 2, 라인 17-46; 미국 특허 제5,171,844호의 컬럼 4, 라인 22 내지 컬럼 5, 라인 36; 미국 특허 제5,112,950호의 컬럼 2, 라인 55-68, 도 2 및 실시예 1; 미국 특허 제4,868,112호의 컬럼 2, 라인 2 내지 컬럼 19, 라인 21 및 표 2; 미국 특허 제7,041,635호의 컬럼 2, 라인 1 내지 컬럼 3, 라인 19, 컬럼 3, 라인 40 내지 컬럼 4, 라인 67, 컬럼 7, 라인 43 내지 컬럼 8, 라인 26, 및 컬럼 11, 라인 5 내지 컬럼 13, 라인 39; 또는 미국 특허 제6,458,563호의 컬럼 4, 라인 25-53에 기술된 결실을 갖는다. 몇몇 구현예에서, B 도메인 결실 인자 Ⅷ는 대부분의 B 도메인에 결실 부위가 있으나, WO 91/09122(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개된 바와 같이 1차 번역 산물이 2개의 폴리펩티드 사슬로 생체내 단백질분해 가공을 거치는데 필수적인 B 도메인의 아미노 말단 서열은 포함한다. 몇몇 구현예에서, B 도메인 결실 인자 Ⅷ는 아미노산 747-1638의 결실, 예를 들어 B 도메인의 실질적인 전체 결실체로 구성된다(문헌[Hoeben R.C., et al. J. Biol . Chem . 265(13): 7318-7323 (1990)], 본 명세서에서 전문이 참조됨). B 도메인 결실 인자 Ⅷ은 또한 인자 Ⅷ의 아미노산 771-1666, 또는 아미노산 868-1562의 결실을 포함한다(문헌[Meulien P., et al . Protein Eng . 2(4): 301-6(1988)]; 본 명세서에서 전문이 참조됨). 본 발명의 일부인 추가적 B 도메인 결실들은, 예를 들어 아미노산 982 내지 1562 또는 760 내지 1639(문헌[Toole et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1986) 83, 5939-5942)]), 797 내지 1562(문헌[Eaton, et al. Biochemistry(1986) 25:8343-8347)]), 741 내지 1646(Kaufman(PCT 국제출원공개 제WO 87/04187호)), 747 내지 1560(문헌[Sarver, et al., DNA (1987) 6:553-564)), 741 내지 1648(Pasek (PCT 출원 제88/00831호)]), 816 내지 1598 또는 741 내지 1689(문헌[Lagner(Behring Inst. Mitt. (1988) No 82:16-25, EP 295597])의 결실을 포함한다(상기 문헌 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨). 상기의 결실들 각각은 어떠한 인자 Ⅷ 서열에서도 만들어질 수 있다. "B domain deletion factor VII" is U.S. Pat.No. 6,316,226, 6,346,513, 7,041,635, 5,789,203, 6,060,447, 5,595,886, 6,228,620, 5,972,885, 6,048,720, 5,543,502 5,610,278, 5,171,844, 5,112,950, 4,868,112, and 6,458,563, which are hereby incorporated by reference in their entirety. In some embodiments, the B domain deletion factor VII sequences of the invention include any of the deletions disclosed in column 4, line 4 to column 5, line 28 and Examples 1-5 of US Pat. No. 6,316,226 (also US Also disclosed in Patent No. 6,346,513). In some embodiments, the B domain deletion factor VII of the present invention includes a deletion disclosed in US Pat. No. 5,789,203, column 2, lines 26-51 and Examples 5-8 (also US Pat. Nos. 6,060,447, 5,595,886, And 6,228,620). In some embodiments, the B domain deletion factor VII is selected from US Pat. No. 5,972,885, column 1, line 25 to column 2, line 40; Column 6, lines 1-22 and Example 1 of US Pat. No. 6,048,720; Column 2, lines 17-46 of US Pat. No. 5,543,502; Column 4, line 22 to column 5, line 36 of US Pat. No. 5,171,844; Column 2, lines 55-68, US Pat. No. 5,112,950, FIG. 2 and Example 1; Column 2, line 2 to column 19, line 21 and Table 2 of US Pat. No. 4,868,112; Column 2, lines 1 to 3, line 19, column 3, line 40 to column 4, line 67, column 7, line 43 to column 8, line 26, and column 11, line 5 to column 13 of US Pat. No. 7,041,635. , Line 39; Or the deletion described in US Pat. No. 6,458,563, column 4, lines 25-53. In some embodiments, the B domain deletion factor VII has a deletion site in most B domains, but the primary translation product is bioavailable in two polypeptide chains, as disclosed in WO 91/09122, incorporated herein in its entirety. It includes the amino terminal sequence of the B domain which is essential for undergoing proteolytic processing. In some embodiments, the B domain deletion factor VII consists of a deletion of amino acids 747-1638, eg, substantially the entire deletion of the B domain (Hoeben RC, et al. J. Biol . Chem . 265 (13): 7318-7323 (1990), incorporated herein by reference in its entirety. B domain deletion factor VII also includes deletions of amino acids 771-1666, or amino acids 868-1562 of factor VII (Meulien P., et al . Protein Eng . 2 (4): 301-6 (1988); Reference is made herein in its entirety). Additional B domain deletions that are part of this invention are described, for example, in amino acids 982-1562 or 760-1639 (Toole et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986) 83, 5939-5942), 797-1562 (Eaton, et al. Biochemistry (1986) 25: 8343-8347)), 741-1646 (Kaufman (PCT International Publication No. WO 87/04187)), 747-1560 (Sarver , et al., DNA (1987) 6: 553-564), 741-1648 (Pasek (PCT Application No. 88/00831)), 816-1598 or 741-1689 (Lagner (Behring Inst. Mitt) (1988) No 82: 16-25, EP 295597) (each of which is incorporated herein by reference in its entirety) Each of the above deletions may be made in any factor Ⅷ sequence.

본 명세서에서 "키메라 폴리펩티드"라 함은, 내부에 다른 공급원으로부터 온 적어도 2개의 폴리펩티드(또는 서브서열 또는 펩티드)를 포함한 폴리펩티드를 의미한다. 키메라 폴리펩티드는 다른 공급원, 즉 다른 유전자, 다른 cDNA, 또는 다른 동물이나 다른 종으로부터 얻은, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7개 또는 그 이상의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 키메라 폴리펩티드는 다른 서브서열들을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 따라서 서브 서열은 단일 키메라 폴리펩티드 내에서 직접적으로 연결되거나 또는 링커를 통하여 간접적으로 연결될 수 있으며, 두 경우가 함께 포함될 수도 있다. 키메라 폴리펩티드는 신호 서열 및 단백질 분리나 탐지를 돕는 6 His 및 FLAG와 같은 서열 등의 추가 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 키메라 폴리펩티드는 N 말단 및/또는 C 말단에 아미노산 또는 펩티드가 부가될 수도 있다.As used herein, "chimeric polypeptide" means a polypeptide comprising at least two polypeptides (or subsequences or peptides) from other sources therein. Chimeric polypeptides may include, for example, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or more polypeptides from other sources, ie from other genes, from other cDNAs, or from other animals or other species. Chimeric polypeptides may include one or more linkers that connect other subsequences. Thus, subsequences may be directly linked within a single chimeric polypeptide or indirectly via a linker, both of which may be included together. Chimeric polypeptides may include additional peptides such as signal sequences and sequences such as 6 His and FLAG to aid in protein isolation or detection. In addition, chimeric polypeptides may be added with amino acids or peptides at the N- and / or C-terminus.

몇몇 구현예에서, 키메라 폴리펩티드는 인자 Ⅷ 부분 및 비-인자 Ⅷ 부분을 포함한다. 예시적인 비-인자 Ⅷ 부분은 Fc, XTEN 및 알부민 등을 포함한다. 본 발명의 예시적인 키메라 폴리펩티드는 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드, 키메라 인자 Ⅷ-XTEN 폴리펩티드, 및 키메라 인자 Ⅷ-알부민 폴리펩티드 등을 포함한다.In some embodiments, the chimeric polypeptide comprises a factor VII moiety and a non-factor VII moiety. Exemplary non-factor VIII portions include Fc, XTEN, albumin, and the like. Exemplary chimeric polypeptides of the invention include chimeric factor VIII-Fc polypeptides, chimeric factor VIII-XTEN polypeptides, chimeric factor VIII-albumin polypeptides, and the like.

예시적인 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드는 예를 들어 신호 서열을 갖거나 또는 신호 서열을 갖지 않은 서열번호 2, 6, 8, 10 및 12(표 2), 및 서열번호 4(표 2)의 키메라 Fc 폴리펩티드를 포함한다.Exemplary chimeric factor VII-Fc polypeptides include, for example, the chimeric Fc of SEQ ID NOs: 2, 6, 8, 10 and 12 (Table 2), and SEQ ID NO: 4 (Table 2), with or without a signal sequence. Polypeptides.

키메라 폴리펩티드는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열을 갖지 않은 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함할 수 있다. 키메라 폴리펩티드는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 일치하는 서열을 포함할 수 있다.The chimeric polypeptide is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) that do not have the signal sequences shown in Table 2A (iii), or the signals shown in Table 2A (iii) And at least 90% or 95% identity with the sequenced Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids -19-1665 of SEQ ID NO: 2). The chimeric polypeptide matches the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (VII), or the Factor VII and Fc with signal sequences shown in Table 2A (VII) And amino acid sequences (amino acids -19-1665 of SEQ ID NO: 2).

상술한 바와 같이, 예시적인 키메라 폴리펩티드는 하나 이상의 XTEN 폴리펩티드와 융합된 인자 Ⅷ을 포함한다(문헌[Schellenburger et al., Nat. Biotech. 27:1186-90 (2009)], 본 발명에서 전문이 참조됨). 인자 Ⅷ는 XTEN 폴리펩티드의 N 말단이나 또는 XTEN 폴리펩티드의 C 말단 중 어느 하나에 융합될 수 있어, 인자 Ⅷ-XTEN 융합 단백질의 인자 Ⅷ 구성요소가 프로테아제에 의해 가공되면 폴리펩티드를 포함하는 가공된 인자 Ⅷ을 얻을 수 있다. 프로테아제 자리는 XTEN 부분와 인자 Ⅷ 부분 사이에 포함될 수 있어, 상기 가공이 허용된다. XTEN 폴리펩티드는 예를 들어 WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, 미국 2010/0189682, 및 미국 2009/0092582(상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개된 것들을 포함한다.As noted above, exemplary chimeric polypeptides include Factor VII fused with one or more XTEN polypeptides (Schellenburger et al., Nat. Biotech. 27: 1186-90 (2009), see the full text herein). being). Factor VII may be fused to either the N terminus of the XTEN polypeptide or to the C terminus of the XTEN polypeptide such that if the Factor VII component of the Factor VII-XTEN fusion protein is processed by a protease, the processed factor VII comprising the polypeptide may be modified. You can get it. Protease sites can be included between the XTEN moiety and the factor VII moiety, allowing for such processing. XTEN polypeptides include, for example, those disclosed in WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682, and US 2009/0092582, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

상술한 바와 같이, 예시적인 키메라 폴리펩티드는 또한 하나 이상의 알부민 폴리펩티드에 융합된 인자 Ⅷ을 포함한다. 바람직하게는 알부민은 인간의 알부민이다. 인자 Ⅷ는 알부민의 N 말단 또는 알부민의 C 말단 중 어느 하나에 융합될 수 있어, 인자 Ⅷ-알부민 융합 단백질의 인자 Ⅷ 구성요소가 효소 활성 전단백질(proprotein) 변환효소에 의해 가공되면 폴리펩티드를 포함하는 가공된 인자 Ⅷ을 얻을 수 있다. 알부민의 예들, 예를 들어 본 발명에서 사용된 그들의 절편들은 미국 특허 제7,592,010호, 미국 특허 제6,686,179호 및 문헌[Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl. 2:S6-S8 (2009)](상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨)에서 공개되었다.As noted above, exemplary chimeric polypeptides also include factor VII fused to one or more albumin polypeptides. Preferably the albumin is human albumin. Factor VII can be fused to either the N-terminus of albumin or the C-terminus of albumin such that the Factor VII component of the factor VII-albumin fusion protein is processed by an enzymatically active proprotein convertase to comprise a polypeptide. The processed factor Ⅷ can be obtained. Examples of albumin, eg, their fragments used in the present invention, are described in US Pat. No. 7,592,010, US Pat. No. 6,686,179 and Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl. 2: S6-S8 (2009), each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

몇몇 구현예에서, 인자 Ⅷ 부분을 포함한 키메라 폴리펩티드는 비-인자 Ⅷ 부분이 없이 동일한 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드에 비해 증가된 반감기(t1 /2)를 갖는다. 증가된 t1 /2를 갖는 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드를 본 명세서에서는 지속성(long acting) 인자 Ⅷ라 한다. 지속성 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드는 예를 들어 Fc에 융합된 인자 Ⅷ(예를 들어 FⅧFc 단량체 이량체 하이브리드와 같은 하이브리드 형태의 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드를 포함; 실시예 1, 도 1 및 표 2A; 및 미국 특허 제7,404,956호 및 제7,348,004호 참조), XTEN에 융합된 인자 Ⅷ, 및 알부민에 융합된 인자 Ⅷ을 포함한다.In some embodiments, the chimeric polypeptide, including factor Ⅷ part is a non-has an increased half-life (t 1/2) compared to the polypeptide consisting of the same factor Ⅷ part without factor Ⅷ part. In the chimeric factor Ⅷ polypeptide having increased t 1/2 is referred to herein persistent (long acting) factor Ⅷ. Persistent chimeric factor VII polypeptides include, for example, factor VII fused to Fc (eg, a hybrid form of chimeric factor VII polypeptides such as FⅧFc monomeric dimer hybrids; Example 1, FIG. 1 and Table 2A; and US Pat. 7,404,956 and 7,348,004), factor VII fused to XTEN, and factor VII fused to albumin.

본 명세서에서 "배양"이라 함은, 세포 성장 또는 분열 또는 살아있는 상태로 세포를 유지하도록 시험관 내 상태에서 세포를 배양하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 "배양된 세포"라 함은, 시험관 내 상태로 증식되는 세포를 의미한다.As used herein, "culture" means culturing a cell in vitro to maintain the cell in a cell growth or division or living state. As used herein, the term "cultured cells" refers to cells that proliferate in an in vitro state.

"인자 Ⅷ"는 본 명세서에서 달리 특정되지 않는 경우, 통상적으로 혈액 응고 기능을 하는 기능성 인자 Ⅷ 폴리펩티드를 의미한다. 따라서 인자 Ⅷ라는 용어는 기능성 변형 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 인자 Ⅷ 단백질은 인간, 돼지, 개 및 쥐의 인자 Ⅷ 단백질이다. 당 업계에서 자명한 바와 같이, 돌연변이 및 변형판(modified version)의 경우와 마찬가지로, 전장(full length) 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 서열도 많은 기능성 절편도 공지된다. 인간 인자 Ⅷ 서열의 예시는 서열번호 2, 6, 8, 10 및 12(표 2)의 서브서열로서 나타난다. 인자 Ⅷ 폴리펩티드는 예를 들어 전장 인자 Ⅷ, N 말단에 Met이 결실된 전장 인자 Ⅷ, 성숙한 인자 Ⅷ(신호 서열 결실), N 말단에 추가적 Met을 갖는 성숙한 인자 Ⅷ, 및/또는 B 도메인이 전체 또는 부분 결실된 인자 Ⅷ을 포함한다. 바람직한 인자 Ⅷ 변형체는 부분 또는 전체 결실이든 간에 B 도메인 결실을 포함한다."Factor VII" means a functional factor VII polypeptide that typically functions as a blood coagulation function, unless otherwise specified herein. The term factor VII thus encompasses functionally modified polypeptides. Preferred Factor VIII proteins are Factor VIII proteins of humans, pigs, dogs and mice. As will be apparent in the art, functional fragments are also known, as are the full length polypeptide and polynucleotide sequences, as in the case of mutations and modified versions. Examples of human factor VII sequences are shown as subsequences of SEQ ID NOs: 2, 6, 8, 10 and 12 (Table 2). Factor VII polypeptides include, for example, full length factor VII, full length factor VII with Met deleted at the N terminus, mature factor VII (signal sequence deletion), mature factor VII with additional Met at the N terminus, and / or the B domain as a whole or Includes the partially deleted factor Ⅷ. Preferred Factor VII variants include B domain deletions, whether partial or full deletions.

상기 및 하기에서 설명한 바와 같이, 매우 많은 기능성 인자 Ⅷ 변형체가 알려져 있다. 또한 인자 Ⅷ에 대한 수백개의 비기능성 돌연변이체들도 혈우병 환자들에서 밝혀졌으며, 이들 돌연변이의 인자 Ⅷ 기능상의 효과는 치환의 특성보다는 그들이 인자 Ⅷ의 3차원 구조상 어디에 위치하는가에 더 많이 기인한다는 사실도 결정되었다(문헌[Cutler et al., Hum. Mutat. 19:274-8 (2002)], 본 명세서에 전체적으로 참조됨). 추가로, 인간과 다른 종 유래의 인자 Ⅷ을 비교함으로써 그의 기능에 요구될 것 같은 보존된 잔기들도 밝혀내었다(문헌[Cameron et al., Thromb. Haemost. 79:317-22 (1998)]; 미국특허 제6,251,632호; 본 명세서에서 전문이 참조됨).As explained above and below, a great many functional factor VIII variants are known. Hundreds of nonfunctional mutants on factor VII have also been identified in hemophilia patients, and the fact that the factor VII functional effects of these mutants are more due to their location on the three-dimensional structure of factor VII than on the nature of the substitution. (Cutler et al., Hum. Mutat. 19: 274-8 (2002), incorporated herein by reference in its entirety). In addition, by comparing factor VII from humans with other species, conserved residues that may be required for their function have also been identified (Cameron et al., Thromb. Haemost. 79: 317-22 (1998)); US Patent No. 6,251,632, incorporated herein in its entirety.

인간의 인자 Ⅷ 유전자가 분리되어 포유류 세포에서 발현되었으며(문헌[Toole, J. J., et al., Nature 312:342-347 (1984); Gitschier, J., et al., Nature 312:326-330 (1984); Wood, W. I., et al., Nature 312:330-337 (1984); Vehar, G. A., et al., Nature 312:337-342 (1984); WO 87/04187; WO 88/08035; WO 88/03558]; 미국 특허 제4,757,006호, 본 명세서에서 전문이 참조됨), cDNA로부터 아미노산이 추론되었다. Capon et al., 미국 특허 제4,965,199호(본 명세서에서 전문이 참조됨)은 포유류 숙주 세포에서 인자 Ⅷ을 제조하기 위한 재조합 DNA 방법, 및 인간 인자 Ⅷ의 분리에 대해 공개하였다. CHO(중국 햄스터 난소(chinese hamster ovary)) 세포 및 BHKC(새끼 햄스터 신장 세포(baby hamster kidney cell))에서 인간의 인자 Ⅷ 발현도 보고되었다. 인간 인자 Ⅷ은 B 도메인의 일부 또는 전부가 결실되도록 변형되었고(미국 특허 제4,994,371호 및 제4,868,112호, 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨), 인간 인자 Ⅷ의 B 도메인을 인간 인자Ⅴ의 B 도메인으로 치환하는 실험도 수행되었다(미국 특허 제5,004,803호, 본 명세서에서 전문이 참조됨). 인간 인자 Ⅷ을 암호화하는 cDNA 서열 및 예측된 아미노산 서열도 미국 출원공개 제2005/0100990호(본 명세서에서 전문이 참조됨)의 서열번호 1 및 2에 각각 나타나있다.Human Factor VII genes have been isolated and expressed in mammalian cells (Toole, JJ, et al., Nature 312: 342-347 (1984); Gitschier, J., et al., Nature 312: 326-330) 1984); Wood, WI, et al., Nature 312: 330-337 (1984); Vehar, GA, et al., Nature 312: 337-342 (1984); WO 87/04187; WO 88/08035; WO 88/03558; US Pat. No. 4,757,006, incorporated herein in its entirety), and amino acids were deduced from cDNA. Capon et al., US Pat. No. 4,965,199, incorporated herein in its entirety, discloses recombinant DNA methods for producing factor VII in mammalian host cells, and isolation of human factor VII. Factor VII expression in humans has also been reported in CHO (chinese hamster ovary) cells and BHKC (baby hamster kidney cells). Human factor VII has been modified to delete some or all of the B domain (US Pat. Nos. 4,994,371 and 4,868,112, each of which is incorporated herein by reference in its entirety), and the B domain of human factor VII is referred to as B of human factor V. Experiments with substitution with domains were also performed (US Pat. No. 5,004,803, incorporated herein in its entirety). The cDNA sequence and the predicted amino acid sequence encoding human factor VIII are also shown in SEQ ID NOs: 1 and 2, respectively, in US Patent Application Publication No. 2005/0100990, incorporated herein in its entirety.

미국 특허 제5,859,204호, Lollar, J. S.(본 명세서에서 전문이 참조됨)는 감소된 항원성 및 감소된 면역 반응성을 갖는 인자 Ⅷ의 기능성 돌연변이를 보고하였다. 미국 특허 제6,376,463호, Lollar, J. S.(본 명세서에서 전문이 참조됨)도 또한 감소된 면역 반응성을 갖는 인자 Ⅷ의 돌연변이를 보고하였다. 미국 출원공개 제2005/0100990호, Saenko et al.(본 명세서에서 전문이 참조됨)은 인자 Ⅷ의 A2 도메인 상의 기능성 돌연변이를 보고하였다.U. S. Patent No. 5,859, 204, Lollar, J. S. (incorporated herein in its entirety) reported a functional mutation of Factor VII with reduced antigenicity and reduced immune reactivity. US Pat. No. 6,376,463, Lollar, J. S. (incorporated herein in its entirety) also reported mutations of factor VII with reduced immune reactivity. US Patent Application Publication No. 2005/0100990, Saenko et al., Incorporated herein in its entirety, reported a functional mutation on the A2 domain of factor VII.

B 도메인 결실을 포함한 다수의 기능성 인자 Ⅷ 분자들이 하기의 특허들(미국 특허 제6,316,226호 및 제6,346,513호, 둘 다 Baxter에 양도됨; 미국 특허 제7,041,635호 In2Gen에 양도; 미국 특허 제5,789,203호, 제6,060,447호, 제5,595,886호, 및 제6,228,620호 Chiron에 양도; 미국 특허 제5,972,885호 및 제6,048,720호 Biovitrum에 양도, 미국 특허 제5,543,502호 및 제5,610,278호 Novo Nordisk에 양도; 미국 특허 제5,171,844호 Immuno Ag에 양도; 미국 특허 제5,112,950호 Transgene S.A에 양도.; 미국 특허 제4,868,112호 Genetics Institute에 양도, 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개되었다.A number of functional factor VIII molecules, including a B domain deletion, are assigned the following patents (US Pat. Nos. 6,316,226 and 6,346,513, both assigned to Baxter; US Pat. No. 7,041,635 In2Gen; US Pat. No. 5,789,203, Pat. 6,060,447, 5,595,886, and 6,228,620 to Chiron; U.S. Patents 5,972,885 and 6,048,720 to Biovitrum, U.S. Patents 5,543,502 and 5,610,278 to Novo Nordisk; Assignment; U.S. Patent 5,112,950 to Transgene SA .; U.S. Patent 4,868,112 to the Genetics Institute, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

돼지의 인자 Ⅷ 서열이 공개되었고(Toole, J. J., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5939-5942 (1986), 본 명세서에서 전문이 참조됨), 돼지 지라의 cDNA 라이브러리 유래의 인자 Ⅷ을 PCR 증폭하여 얻은 전체 돼지 cDNA 서열이 보고되었다(문헌[Healey, J. F., et al., Blood 88:4209-4214 (1996)], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 모든 도메인, 모든 서브유닛 및 특정 아미노산 서열이 치환된 하이브리드 인간/돼지 인자 Ⅷ이 미국 특허 제5,364,771호(by Lollar and Runge) 및 WO 93/20093에 공개되었다(본 명세서에서 전문이 참조됨). 좀더 최근에는, 돼지 인자 Ⅷ의 A1 및 A2 도메인의 뉴클레오티드 및 그에 상응하는 아미노산, 및 상응하는 인간 도메인으로 치환된 돼지 A1 및/또한 A2 도메인을 갖는 키메라 인자 Ⅷ이 WO 94/11503(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개되었다. 미국 특허 제5,859,204호, Lollar, J. S.는 또한 돼지 cDNA 및 그의 추론된 아미노산 서열을 공개하였다. 미국 특허 제6,458,563호(본 명세서에서 전문이 참조됨, Emory에 양도)는 B 도메인이 결실된 돼지 인자 Ⅷ을 공개하였다.Porcine factor VII sequences have been published (Toole, JJ, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5939-5942 (1986), herein incorporated by reference in their entirety) and derived from the cDNA library of swine spleen The whole swine cDNA sequence obtained by PCR amplification of factor VII of has been reported (Healey, JF, et al., Blood 88: 4209-4214 (1996), incorporated herein by reference in its entirety). Hybrid human / swine factor VII with all domains, all subunits and specific amino acid sequences substituted are disclosed in US Pat. No. 5,364,771 (by Lollar and Runge) and WO 93/20093 (incorporated herein in its entirety). More recently, chimeric factor VII having the nucleotides of the A1 and A2 domains of the porcine factor VII and the corresponding amino acids, and the porcine A1 and / or A2 domains substituted with the corresponding human domains are described in WO 94/11503 (preamble herein). Is referenced). U. S. Patent No. 5,859, 204, Lollar, J. S., also published porcine cDNA and its deduced amino acid sequences. US Pat. No. 6,458,563 (incorporated herein by reference in its entirety, assigned to Emory) discloses swine factor VIII with the deletion of the B domain.

인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)는 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438; 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332; 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740; 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745; 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. 인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)는 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438; 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332; 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740; 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745; 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치할 수 있다.Factor VII (or factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a factor VII amino acid sequence without amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2; amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6; amino acids 1 to SEQ ID NO: 8). 740; amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10; or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. Factor VII (or factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a factor VII amino acid sequence without amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2; amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6; amino acids 1 to 1 of SEQ ID NO: 8). 740; amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10; or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12).

인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)는 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438; 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332; 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740; 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745; 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. 인자 Ⅷ(또는 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분)는 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438; 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332; 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740; 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745; 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치할 수 있다.Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a Factor VII amino acid sequence having the signal sequences shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2; amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6; amino acids of SEQ ID NO: 8). -19 to 740; amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10; or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. Factor VII (or Factor VII portion of the chimeric polypeptide) comprises a Factor VII amino acid sequence having the signal sequences shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2; amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6; amino acids of SEQ ID NO: 8). -19 to 740; amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10; or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12).

본 명세서에서 "동량"(equivalent amount)이라 함은, 미지의 폴리펩티드의 분자량과 무관하게 국제 단위로 나타낼 때 동일한 양의 인자 Ⅷ 활성을 의미한다. 1 국제 단위(IU)의 인자 Ⅷ 활성은 대략 정상 인간 혈장 1 밀리리터 중 인자 Ⅷ의 양에 상응한다. 유럽 약전 발색 기질 에세이(European Pharmacopoeia chromogenic substrate assay) 및 단일 단계 혈액 응고 에세이(one stage clotting assay)를 포함한 몇 가지 에세이들이 인자 Ⅷ 활성을 측정하는데 사용된다.As used herein, "equivalent amount" means the same amount of factor VII activity when expressed in international units, regardless of the molecular weight of the unknown polypeptide. Factor VII activity in one international unit (IU) corresponds approximately to the amount of Factor VII in 1 milliliter of normal human plasma. Several assays, including the European Pharmacopoeia chromogenic substrate assay and one stage clotting assay, are used to measure factor VIII activity.

본 명세서에서 "Fc"라 함은, 달리 특정하지 않는 경우 기능성 신생아 Fc 수용체(FcRn) 결합 파트너를 의미한다. FcRn 결합 파트너는 FcRn 수용체와 특이적으로 결합하여 FcRn 수용체에 의하여 계속 활발한 수송을 할 수 있게 되는 어떠한 분자이다. 따라서 Fc라는 용어는 IgG Fc의 어떠한 기능성 변형체도 포함한다. FcRn 수용체에 결합하는 IgG Fc 부위의 부분은 X선 결정에 기초하여 설명되었다(Burmeister et al. 1994, Nature 372:379, 본 명세서에서 전문이 참조됨). FcRn와 Fc의 주요 접촉 영역은 CH2 및 CH3 도메인의 연결부 근처에 있다. Fc-FcRn 접촉은 모두 단일 Ig 중사슬 내에서 이루어진다. FcRn 결합 파트너는 예를 들어 전체 IgG, IgG의 Fc 절편 및 FcRn의 전체 결합 부분을 포함한 IgG의 다른 절편을 포함한다. 주요 접촉 부분은 CH2 도메인의 아미노산 잔기 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 및 314, 및 CH3 도메인의 아미노산 잔기 385-387, 428 및 433-436를 포함한다. 이뮤노글로블린(immunoglobulin) 또는 이뮤노글로블린 절편 또는 일부분들의 아미노산 넘버링에 대한 참조는 문헌[Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda]; MD(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 기초하였다. FcRn 수용체가 인간을 포함한 몇 가지 포유류 종에서 분리되었다. 인간 FcRn, 래트 FcRn, 및 마우스 FcRn의 서열이 알려져 있다(문헌[Story et al. 1994, J. Exp. Med. 180: 2377], 본 명세서에서 전문이 참조됨). Fc는 이뮤노글로블린의 경첩 부분(hinge region)을 포함하거나 또는 포함하지 않는 이뮤노글로블린의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 예시적인 Fc 변형체들이 WO 2004/101740 및 WO 2006/074199(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 제공되었다.As used herein, “Fc” means a functional neonatal Fc receptor (FcRn) binding partner, unless otherwise specified. An FcRn binding partner is any molecule that specifically binds to the FcRn receptor and continues to be actively transported by the FcRn receptor. Thus the term Fc includes any functional variant of IgG Fc. Portions of IgG Fc sites that bind FcRn receptors have been described based on X-ray crystallography (Burmeister et al. 1994, Nature 372: 379, incorporated herein by reference in its entirety). The main contact region of FcRn and Fc is near the junction of the CH2 and CH3 domains. All Fc-FcRn contacts are made in a single Ig heavy chain. FcRn binding partners include, for example, whole IgG, Fc fragments of IgG and other fragments of IgG, including the entire binding portion of FcRn. Major contact moieties include amino acid residues 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 and 314 of the CH2 domain, and amino acid residues 385-387, 428 and 433-436 of the CH3 domain. References to amino acid numbering of immunoglobulins or immunoglobulin fragments or portions are described in Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda; Based on MD (incorporated herein in its entirety). FcRn receptors have been isolated from several mammalian species, including humans. The sequences of human FcRn, rat FcRn, and mouse FcRn are known (Story et al. 1994, J. Exp. Med. 180: 2377, incorporated herein by reference in its entirety). The Fc comprises the CH2 and CH3 domains of immunoglobulins with or without the hinge region of immunoglobulins. Exemplary Fc variants have been provided in WO 2004/101740 and WO 2006/074199, which are incorporated by reference in their entirety herein.

Fc(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)는 하나 이상의 돌연변이들, 및 돌연변이들의 조합을 포함할 수 있다.The Fc (or Fc portion of the chimeric polypeptide) may comprise one or more mutations, and a combination of mutations.

Fc(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)는 증가된 반감기를 부여하는 돌연변이들, 예를 들어 문헌[Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46:1750 (2009)](본 명세서에 전체적으로 참조됨)에 공개된 M252Y, S254T, T256E, 및 그들의 조합; 문헌[Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23:1283 (2005)](본 명세서에서 전문이 참조됨)에 공개된 H433K, N434F, 및 그들의 조합; 미국 2009/0264627 A1(본 명세서에서 전문이 참조됨)의 1-2 페이지 [0012] 단락, 및 실시예 9, 10에 공개된 돌연변이; 및 미국 20090163699 A1(본 명세서에서 전문이 참조됨)의 2 페이지 [0014] 내지 [0021] 단락에 공개된 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc (or the Fc portion of a chimeric polypeptide) is characterized by mutations that confer increased half-life, such as in Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46: 1750 (2009), incorporated herein by reference in its entirety; M252Y, S254T, T256E, and combinations thereof; Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23: 1283 (2005), incorporated herein by reference in its entirety, H433K, N434F, and combinations thereof; Paragraphs 1-2 of US 2009/0264627 A1, incorporated herein in its entirety, and the mutations disclosed in Examples 9, 10; And mutations disclosed in paragraphs [0014] to [0021] of page 2 of US 20090163699 A1, incorporated herein in its entirety.

Fc(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)는 또한 예를 들어 하기의 돌연변이들을 포함할 수 있다: IgG의 Fc 부분이 site directed mutagenesis 등과 같은 잘 알려진 공정에 의해 변이되어(modified), 변이된 IgG 또는 Fc 절편 또는 FcRn이 결합될 그들의 일부를 생성할 수 있다. 이러한 변이(modification)에는 예를 들어 FcRn 접촉 부분으로부터 멀리 떨어진 변이, 뿐만 아니라 FcRn와의 결합을 방해하거나 심지어 강화하는 접촉 부분 내부의 변이도 포함된다. 예를 들어 하기의 인간 IgG1 Fc(Fcy1) 상의 단일 아미노산 잔기들이 FcRn에 대한 Fc 결합 친화도의 중대한 손실 없이도 치환될 수 있다: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A, 및 K447A, 상기에서 예를 들어 P238A는 위치 번호 238에서 야생형 프롤린이 알라닌으로 치환된 것을 나타낸다. 알라닌 뿐만 아니라 다른 아미노산도 상기 특정 위치에서 야생형의 아미노산과 치환될 수 있다. 돌연변이가 Fc 내에 단일 도입되어, 원래의 Fc와 구별되는 100개 이상의 FcRn 결합 파트너를 발생시킬 수 있다. 부가적으로 2, 3, 또는 그 이상의 이들 개별 돌연변이들의 조합이 함께 도입되어, 수백개 이상의 FcRn 결합 파트너를 발생시킬 수도 있다. 이들 돌연변이들의 특정 일부는 FcRn 결합 파트너에 새로운 기능을 부여할 수도 있다. 예를 들어 한 구현예는 매우 보존된 N-당화(glycosylation) 부위를 제거한 N297A를 포함한다. 이 돌연변이의 효과는 면역원성을 감소시킴으로서 FcRn 결합 파트너의 순환 반감기를 증가시키고, FcRn에 대한 친화성을 손상시키지 않고서도 FcRn 결합 파트너가 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, 및 FcyRIIIA에 결합할 수 없도록 한다(문헌[Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847], 본 명세서에서 전문이 참조됨; 문헌[Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632], 본 명세서에서 전문이 참조됨; 문헌[Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 부가적으로, 적어도 3개의 인간 Fc 감마 수용체가 더 아래쪽의 경첩 부위 내부의 IgG 상의 결합 부분, 일반적으로 아미노산 234-237을 인식하는 것 같다. 따라서 새로운 기능이나 잠재적 감소된 면역원성의 다른 예들이 이 부분의 돌연변이로부터, 예를 들어 인간 IgG1 "ELLG"의 아미노산 232-236을 IgG2 "PVA"유래의 상응하는 서열과 치환함(하나의 아미노산 결실)으로서 발생한다. 다양한 이펙터 기능을 매개하는 FcyRI, FcyRⅡ, 및 FcyRⅢ은 상기 돌연변이가 도입되었을 때는 IgG1에는 결합하지 않는 것으로 보였다(문헌[Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77], 본 명세서에서 전문이 참조됨; 및 문헌[Armour et al.1999, Eur. J. Immunol. 29:2613], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 상술한 돌연변이로부터 발생하는 새로운 기능성의 추가 예로서, FcRn에 대한 친화도는 몇몇 예에서 야생형의 친화도 이상으로 증가할 수 있다. 이러한 증가된 친화도는 증가된 "on"속도, 감소된 "off"속도, 또는 증가된 "on"속도와 감소된 "off"속도 모두에 영향을 미친다. FcRn에 대한 증가된 친화도를 부여하는 것으로 여겨지는 돌연변이는, 예를 들어 T256A, T307A, E380A, 및 N434A를 포함한다(문헌[Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591], 본 명세서에서 전문이 참조됨).The Fc (or Fc portion of the chimeric polypeptide) may also include, for example, the following mutations: The mutated IgG or Fc fragment, wherein the Fc portion of the IgG is modified by well known processes such as site directed mutagenesis and the like. Or to generate some of them to which FcRn will bind. Such modifications include, for example, variations away from the FcRn contact portion, as well as variations within the contact portion that interfere with or even enhance binding to FcRn. For example, the following single amino acid residues on human IgG1 Fc (Fcy1) can be substituted without significant loss of Fc binding affinity for FcRn: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, R298 V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N3A 39 , S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A, and K447A, for example P238A is wild at position number 238 Proline hit by alanine Indicates that the. Alanine as well as other amino acids may be substituted with amino acids of the wild type at this particular position. Mutations can be introduced into the Fc singly, resulting in 100 or more FcRn binding partners that are distinct from the original Fc. In addition, a combination of two, three, or more of these individual mutations may be introduced together to generate hundreds of FcRn binding partners. Certain of these mutations may confer new functions to the FcRn binding partner. For example, one embodiment includes N297A with the highly conserved N-glycosylation site removed. The effect of this mutation is to reduce immunogenicity, thereby increasing the circulating half-life of the FcRn binding partner and preventing the FcRn binding partner from binding to FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, and FcyRIIIA without compromising affinity for FcRn (see Routledge et al. 1995, Transplantation 60: 847, incorporated herein by reference in its entirety; Freind et al. 1999, Transplantation 68: 1632, incorporated herein by reference in its entirety; Shields et al. 1995 J. Biol. Chem. 276: 6591, incorporated herein by reference in its entirety. In addition, at least three human Fc gamma receptors seem to recognize the binding portion on IgG inside the lower hinge region, generally amino acids 234-237. Thus, other examples of new functions or potentially reduced immunogenicity replace, for example, amino acids 232-236 of human IgG1 "ELLG" with corresponding sequences derived from IgG2 "PVA" from mutations in this region (one amino acid deletion) Occurs as). FcyRI, FcyRII, and FcyRIII, which mediate various effector functions, did not appear to bind IgG1 when the mutations were introduced (Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77, herein incorporated by reference in its entirety; and Armor et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29: 2613, incorporated herein by reference in its entirety. As a further example of new functionality resulting from the mutations described above, the affinity for FcRn may in some instances increase beyond the affinity of the wild type. This increased affinity affects both increased "on" speed, reduced "off" speed, or both increased "on" speed and reduced "off" speed. Mutations believed to confer increased affinity for FcRn include, for example, T256A, T307A, E380A, and N434A (Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276: 6591), Reference is made herein in its entirety).

Fc(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)는 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665; 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559 ; 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967; 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972; 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치할 수 있다. Fc(또는 키메라 폴리펩티드의 Fc 부분)는 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665; 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559; 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967; 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972; 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치한다.The Fc (or Fc portion of the chimeric polypeptide) comprises the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2; amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6; amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8; amino acids of SEQ ID NO: 10). 746-972; amino acids 685-924 of SEQ ID NO: 12) can be at least 90% or 95% identical. The Fc (or Fc portion of the chimeric polypeptide) comprises the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2; amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6; amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8; amino acids of SEQ ID NO: 10). 746 to 972; amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12).

본 명세서에서 "하이브리드" 폴리펩티드 및 단백질이라 함은, 제2 폴리펩티드와 키메라 폴리펩티드의 조합을 의미한다. 하이브리드의 키메라 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 전하-전하 또는 소수성 결합과 같은 단백질-단백질 결합에 의해 서로 연결될 수 있다. 하이브리드의 키메라 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 이황화 결합 또는 다른 공유결합에 의해 서로 연결될 수 있다. 하이브리드는 WO 2004/101740 및 WO 2006/074199(본 명세서에서 전문이 참조됨)에 기술되어 있다. 또한 이에 대해서는, 미국 특허 제7,404,956호 및 제7,348,004호도 참조할 수 있다(본 명세서에서 전문이 참조됨). 제2 폴리펩티드는 동일한 키메라 폴리펩티드의 제2 카피이거나 또는 비-동일 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 이에 대해서는 도 1, 실시예 1 및 표 2를 참조할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 제2 폴리펩티드는 Fc를 포함한 폴리펩티드이다. 바람직한 구현예에서, 키메라 폴리펩티드는 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드이며, 제 2 폴리펩티드는 본질적으로 Fc, 예를 들어 실시예 1의 하이브리드 폴리펩티드로 본질적으로 이루어졌으며, 이는 개재 링커 서열이 없이 인간 IgG1의 이량체 Fc 도메인에 융합된 한 분자의 재조합 B 도메인 결실 인간 FⅧ(BDD-rFⅧ)로 이루어진 rFⅧFc 재조합 융합 단백질이다. 이 하이브리드 폴리펩티드는 본 명세서에서 FⅧFc 단량체 Fc 융합 단백질, FⅧFc 단량체 하이브리드, 단량체 FⅧIFc 하이브리드, 및 FⅧFc 단량체-이량체라고도 한다. 이에 대해서는, 실시예 1, 도 1 및 표 2A를 참조할 수 있다. 이러한 실시예들은 상기 하이브리드 폴리펩티드에 대한 임상전 및 임상 데이터를 제공한다.As used herein, the term "hybrid" polypeptide and protein means a combination of a second polypeptide and a chimeric polypeptide. Hybrid chimeric polypeptides and second polypeptides may be linked to each other by protein-protein bonds such as charge-charge or hydrophobic bonds. The hybrid chimeric polypeptide and the second polypeptide may be linked to each other by disulfide bonds or other covalent bonds. Hybrids are described in WO 2004/101740 and WO 2006/074199, which are incorporated herein by reference in their entirety. See also US Pat. Nos. 7,404,956 and 7,348,004, which are hereby incorporated by reference in their entirety. The second polypeptide can be a second copy of the same chimeric polypeptide or a non-identical chimeric polypeptide. This may be referred to FIG. 1, Example 1, and Table 2. In a preferred embodiment, the second polypeptide is a polypeptide comprising an Fc. In a preferred embodiment, the chimeric polypeptide is a chimeric factor VII-Fc polypeptide and the second polypeptide consists essentially of the Fc, eg the hybrid polypeptide of Example 1, which is a dimer of human IgG1 without an intervening linker sequence. RF′Fc recombinant fusion protein consisting of a molecule of recombinant B domain deleted human F ′ (BDD-rF ′) fused to an Fc domain. This hybrid polypeptide is also referred to herein as the FⅧFc monomeric Fc fusion protein, the FⅧFc monomer hybrid, the monomeric FⅧIFc hybrid, and the FⅧFc monomer-dimer. For this, reference may be made to Example 1, FIG. 1 and Table 2A. These examples provide preclinical and clinical data for the hybrid polypeptide.

하이브리드 상의 제2 폴리펩티드는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하거나 본질적으로 그 서열로 이루어질 수 있다. 제 2 폴리펩티드는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 일치하는 서열을 포함하거나 본질적으로 그 서열로 이루어질 수 있다.The second polypeptide on the hybrid is at least 90% or 95% identical to the amino acid sequence without amino acid sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) or with the signal sequence shown in Table 2A (ii) It may comprise or consist essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to an amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4). The second polypeptide corresponds to an amino acid sequence without the signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) or an amino acid sequence with a signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids of SEQ ID NO: 4). -20 to 227), or may consist essentially of the sequence.

도 1은 B 도메인 결실 인자 Ⅷ-Fc 키메라 폴리펩티드와 Fc 폴리펩티드인 제 2 폴리펩티드와의 연결 구조를 보여주는 개략도이다. 상기 하이브리드를 얻기 위하여, 인간 재조합 B 도메인 결실 FⅧ의 암호화 서열은 FⅧ-특이적 프라이머를 사용하여 인간 간(liver) 폴리-A RNA(Clontech)로부터 역전사-중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 하여 얻을 수 있다. FⅧ 서열은 FⅧ의 원래 신호 서열을 포함한다. B-도메인 결실은 세린 743(S743; 2287bp)로부터 글루타민 1638(Q1638; 4969bp)까지 전체 2682bp을 결실하여 얻는다. 그리고 인간 재조합 Fc의 암호화 서열은 Fc 프라이머를 사용하여 인간 백혈구 cDNA 라이브러리(Clontech)로부터 RT-PCR 하여 얻는다. 프라이머는 B 도메인 결실 FⅧ 서열이 개재 링커 없이 Fc 서열의 N 말단에 직접 융합되도록 설계된다. FⅧFc DNA 서열이 CMV 프로모터의 조절하 포유류 이중 발현 벡터(dual expression vector) pBUDCE4.1(Invitrogen)에 클로닝된다. 마우스 Igκ 신호 서열을 포함한 제 2의 동일 Fc 서열이 RT-PCR에 의해 얻어지며, 이는 발현 벡터 pBUDCE4.1 내에서 제 2 프로모터 EF1α의 하류(downstream)에 클로닝된다.1 is a schematic diagram showing a linkage structure of a B domain deletion factor VII-Fc chimeric polypeptide and a second polypeptide which is an Fc polypeptide. To obtain the hybrid, the coding sequence of human recombinant B domain deletion FVIII was subjected to reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) from human liver poly-A RNA (Clontech) using FVIII-specific primers. You can get it. The FVIII sequence comprises the original signal sequence of FVIII. The B-domain deletion is obtained by deleting the entire 2682 bp from serine 743 (S743; 2287 bp) to glutamine 1638 (Q1638; 4969 bp). And the coding sequence of human recombinant Fc is obtained by RT-PCR from human leukocyte cDNA library (Clontech) using Fc primer. Primers are designed such that the B domain deleted FVII sequence is fused directly to the N terminus of the Fc sequence without intervening linkers. The FⅧFc DNA sequence is cloned into mammalian dual expression vector pBUDCE4.1 (Invitrogen) under the control of the CMV promoter. A second identical Fc sequence comprising the mouse Igκ signal sequence is obtained by RT-PCR, which is cloned downstream of the second promoter EF1α in the expression vector pBUDCE4.1.

rFⅧFc 발현 벡터는 Lipofectamine 2000 transfection reagent(Invitrogen)를 이용하여 인간 태아 신장 세포 293(HEK293H; Invitrogen)에 형질 감염(transfection)되었다. 안정된 복제 세포주들을 Zeocin(Invitrogen)으로 선별하여 생성하였다. 생체 내 특성화를 위하여 하나의 복제 세포주, 3C4-22를 사용하여 FⅧFc를 생성하였다. 재조합 FⅧFc는 Biogen Idec(매사추세츠주 캠브릿지에 소재)에서 생성되고 분리된다(McCue et al. 2009). 상술한 형질 감염 전략은 3개의 산물, 즉 단량체 rFⅧFc 하이브리드, 이량체 rFⅧFc 하이브리드, 및 이량체 Fc를 생산할 것으로 기대되었다. 그러나, 조정 배지(conditioned medium)에서는 상기 세포들에서 탐지된 이량체 rFⅧFc가 본질적으로 없었다. 차라리, 조정 배지는 Fc 및 단량체 rFⅧFc를 포함하였다. 이량체 rFⅧFc의 크기가 너무 커서 세포로부터 효율적으로 분비되는 것을 방해할 수도 있다. 이 결과는 모든 세 단백질이 존재할 때보다 단량체의 분리가 덜 복잡하게 하므로 유리하다. 상기 연구에 사용되는 물질은 대략 9000 IU/mg의 특이 활성을 갖는다.rF_Fc expression vectors were transfected into human fetal kidney cells 293 (HEK293H; Invitrogen) using Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen). Stable replicate cell lines were generated by selection with Zeocin (Invitrogen). FⅧFc was generated using one replicate cell line, 3C4-22, for in vivo characterization. Recombinant FVFc is produced and isolated from Biogen Idec (Cambridge, Mass.) (McCue et al. 2009). The transfection strategy described above was expected to produce three products: monomeric rF rFc hybrid, dimer rFⅧFc hybrid, and dimer Fc. However, there was essentially no dimer rF 이 Fc detected in the cells in the conditioned medium. Rather, the conditioned medium contained Fc and the monomers rFⅧFc. The size of the dimer rF_Fc may be too large to prevent efficient secretion from cells. This result is advantageous because the separation of monomers is less complicated than when all three proteins are present. The material used in this study has a specific activity of approximately 9000 IU / mg.

본 명세서에서 "투여 간격"라 함은, 대상체에 투여되는 다수의 투여 사이에 걸리는 시간의 양을 의미한다. 투여 간격의 비교는 단일 대상체에서 또는 대상체 집단에서 수행될 수 있으며, 그 후 집단에 속한 평균을 계산할 수 있다.By “administration interval” is meant herein the amount of time between multiple administrations to a subject. Comparison of dosing intervals can be performed in a single subject or in a population of subjects, and then the mean belonging to the population can be calculated.

키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, 예를 들어 본 발명의 키메라 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드(인자 Ⅷ을 포함한 폴리펩티드 또는 하이브리드)를 투여할 때 투여 간격은, 상기 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5배 더 길 수 있다. 투여 간격은 상기 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5 내지 6배, 1.5 내지 5배, 1.5 내지 4배, 1.5 내지 3배, 또는 1.5 내지 2배 더 길 수 있다. 투여 간격은 상기 비-인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없는 동량의 상기 인자 Ⅷ(상기 인자 Ⅷ로 이루어진 폴리펩티드)에 요구되는 투여 간격보다 적어도 약 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5배, 또는 6배 더 길 수 있다. 투여 간격은 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 또는 그 이상마다 1회일 수 있다. 투여 간격은 적어도 1.5 내지 5일, 1.5, 2, 3, 4 또는 5일 또는 그 이상일 수 있다. 주문형 치료를 위해서는, 상기 키메라 폴리펩티드 또는 하이브리드의 투여 간격은 약 매 24-36, 24-48, 24-72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 또는 72 시간 또는 그 이상마다 1회이다.When administering a chimeric factor VIII polypeptide, eg, a chimeric factor VIII-Fc polypeptide (polypeptide or hybrid comprising factor VIII) of the present invention, the interval of administration is the same amount without the non-factor VIII portion, eg the Fc portion. It may be at least about 1.5 times longer than the interval of administration required for said factor VII (polypeptide consisting of said factor VII). The administration interval is at least about 1.5 to 6 times, 1.5 to 5 times, 1.5 to 5 times the administration interval required for the same amount of the factor VII (polypeptide consisting of the factor VII) without the non-factor VII moiety, eg, the Fc moiety. Four times, 1.5 to 3 times, or 1.5 to 2 times longer. The dosing interval is at least about 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, greater than the dosing interval required for the same amount of said factor VII (polypeptide consisting of said factor VII) without said non-factor VII moiety, eg, an Fc moiety. 4.5, 5, 5.5, or 6 times longer. The interval of administration can be about once every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, or 14 days or more. The interval of administration can be at least 1.5 to 5 days, 1.5, 2, 3, 4 or 5 days or more. For on-demand treatment, the interval of administration of the chimeric polypeptide or hybrid is about every 24-36, 24-48, 24-72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, Once every 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, or 72 hours or more.

바람직하게는, 유효량은 25-65 IU/㎏(25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 62, 64, or 65 IU/㎏) 이고, 투여 간격은 매 3-5, 3-6, 3-7, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8일 또는 그 이상마다 1회, 또는 주당 3회 또는 주당 3회를 넘지 않게 한다. 바람직하게는, 유효량은 65 IU/㎏이고, 투여 간격은 주당 1회 또는 매 6-7일마다 1회이다.Preferably, the effective amount is 25-65 IU / kg (25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 , 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 62, 64, or 65 IU / kg) The dosing interval is no more than once every 3-5, 3-6, 3-7, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 days or more, or three times per week or three times per week. Preferably, the effective amount is 65 IU / kg and the dosing interval is once a week or once every 6-7 days.

"지속성 인자 Ⅷ"은 참고 인자 Ⅷ에 비해 증가된 반감기(또는 t1 /2, t1 /2 베타, 제거 반감기 및 HL이라고도 한다)를 갖는 인자 Ⅷ이다. 지속성 인자 Ⅷ의 증가된 반감기는 하나 이상의 비-인자 Ⅷ 폴리펩티드, 예를 들어 Fc, XTEN 또는 알부민에 융합되었기 때문일 수도 있다. 증가된 반감기는 하나 이상의 변형(modification), 예를 들어 페길화(pegylation) 때문일 수도 있다. 예시적인 지속성 인자 Ⅷ 폴리펩티드는, 예를 들어 Fc를 포함한 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, XTEN을 포함한 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드, 및 알부민을 포함한 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드을 포함한다. 추가적인 지속성 인자 Ⅷ 폴리펩티드는 예를 들어 페길화된 인자 Ⅷ을 포함한다. "Persistence Ⅷ factor" is a factor Ⅷ having a reference (or also referred to as t 1/2, t 1/ 2 beta, elimination half-life and a HL) an increased half-life compared to the Factor Ⅷ. The increased half-life of the persistent factor VII may be due to fusion to one or more non-factor VII polypeptides, such as Fc, XTEN or albumin. The increased half-life may be due to one or more modifications, eg pegylation. Exemplary persistent factor Ⅷ polypeptides include, for example, chimeric factor Ⅷ polypeptides including Fc, chimeric factor Ⅷ polypeptides including XTEN, and chimeric factor Ⅷ polypeptides including albumin. Additional persistent factor VII polypeptides include, for example, pegylated factor VII.

"기준 폴리펩티드"는 지속성 키메라 인자 Ⅷ 폴리펩티드의 경우 본질적으로 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분, 예를 들어 Fc 부분이 없거나 XTEN 부분이 없거나 또는 알부민 부분이 없는 동일한 인자 Ⅷ로 이루어진 폴리펩티드이다.A “reference polypeptide” is a polypeptide consisting essentially of the Factor VII portion of a chimeric polypeptide, eg, the same Factor VII without an Fc portion, without an XTEN portion, or without an albumin portion, for a persistent chimeric factor VII polypeptide.

몇몇 구현예에서, 지속성 인자 Ⅷ이 대상체에 투여되는 경우, 하나 이상의 하기의 특성들을 갖는다:In some embodiments, when the persistence factor VII is administered to a subject, it has one or more of the following properties:

상기 대상체에서의 약 14-41.3 시간의 평균 체류시간;An average residence time of about 14-41.3 hours in the subject;

상기 대상체에서의 약 1.22-5.19 ㎖/hr/㎏ 이하의 클리어런스(Clearance, CL)(활성);Clearance (CL) (activity) of about 1.22-5.19 ml / hr / kg or less in said subject;

상기 대상체에서의 약 11-26.4 시간의 t1 /2 베타(활성);About 11-26.4 time t 1/2 beta (activity) in the target object;

상기 대상체에서의 약 1.38-2.88 IU/㎏ 당 IU/㎗의 증분 회복도(incremental recovery, K 값)(관측 활성);Incremental recovery (K value) of about 1.38-2.88 IU / kg in said subject (observation activity);

대상체에서의 약 37.7-79.4 ㎖/㎏의 Vss(활성); 및Vss (activity) of about 37.7-79.4 ml / kg in the subject; And

상기 대상체에서의 약 19.2-81.7 IU/㎏ 당 IU*h/㎗의 AUC/투여량.AUC / dose of IU * h / dL per about 19.2-81.7 IU / kg in said subject.

몇몇 구현예에서, 지속성 인자 Ⅷ이 환자 집단에 투여되는 경우 하기의 특성들을 하나 이상 갖는다:In some embodiments, the persistence factor VII has one or more of the following characteristics when administered to a patient population:

1.38 IU/㎏ 당 IU/㎗ 초과의 평균 증분 회복도(K 값)(관측 활성);Mean incremental recovery (K value) of 1.38 IU / kg greater than IU / dl (observation activity);

적어도 약 1.5, 적어도 약 1.85, 또는 적어도 2.46 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K 값)(관측 활성);Mean incremental recovery (K value) of at least about 1.5, at least about 1.85, or at least 2.46 IU / kg (K value) (observation activity);

상기 환자 집단에서의 약 2.33±1.08 ㎖/hr/㎏ 이하의 평균 클리어런스(CL)(활성);Mean clearance (CL) (activity) of about 2.33 ± 1.08 ml / hr / kg or less in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 1.08-2.69 ㎖/hr/㎏의 평균 클리어런스(CL)(활성);Mean clearance (CL) (activity) of about 1.08-2.69 ml / hr / kg in the patient population;

변형되지 않은 상기 인자 Ⅷ을 포함한 폴리펩티드의 클리어런스의 약 65%에 해당하는, 상기 환자 집단에서의 평균 클리어런스(CL)(활성);Mean clearance (CL) (activity) in the patient population, which corresponds to about 65% of the clearance of the polypeptide containing the unmodified factor VII;

상기 환자 집단에서의 적어도 약 26.3±8.33 시간의 평균 체류시간(MRT);An average residence time (MRT) of at least about 26.3 ± 8.33 hours in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 25.9-26.5 시간의 평균 MRT(활성);Mean MRT (activity) of about 25.9-26.5 hours in the patient population;

변형되지 않은 상기 인자 Ⅷ을 포함한 폴리펩티드의 평균 MRT보다 약 1.5배 더 큰, 상기 환자 집단에서의 평균 MRT;Mean MRT in the patient population that is about 1.5 times larger than the mean MRT of the polypeptide comprising the unmodified factor VII;

상기 환자 집단에서의 약 18.3±5.79 시간의 평균 t1 /2 베타(활성);About 18.3 ± 5.79 Time Average t 1/2 beta (Active) in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 18-18.4 시간의 평균 t1 /2 베타(활성);Average t 1/2 beta (active) of about 18-18.4 time in the patient population;

변형되지 않은 상기 인자 Ⅷ을 포함한 폴리펩티드의 평균 t1 /2 베타보다 약 1.5배 더 큰, 상기 환자 집단에서의 평균 t1 /2 베타(활성);About 1.5 times the average t 1/2 beta of the polypeptide, including the factor Ⅷ unmodified greater, average t 1/2 beta (active) in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 2.01±0.44 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K 값)(관측 활성);Mean incremental recovery (K value) of about 2.01 ± 0.44 IU / kg in this patient population (K value) (observation activity);

상기 환자 집단에서의 약 1.85-2.46 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K 값)(관측 활성);Mean incremental recovery (K value) of about 1.85-2.46 IU / kg in this patient population (K value) (observation activity);

변형되지 않은 상기 인자 Ⅷ을 포함한 폴리펩티드의 평균 증분 회복도의 약 90%에 해당하는, 상기 환자 집단에서의 평균 증분 회복도(K 값)(관측 활성);Mean incremental recovery (K value) (observation activity) in the patient population, which corresponds to about 90% of the average incremental recovery of the polypeptide containing the unmodified factor VII;

상기 환자 집단에서의 약 55.1±12.3㎖/㎏의 평균 Vss(활성);Mean Vss (activity) of about 55.1 ± 12.3 ml / kg in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 45.3-56.1㎖/㎏의 평균 Vss(활성);Mean Vss (activity) of about 45.3-56.1 ml / kg in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 49.9±18.2 IU/㎏ 당 IU*h/㎗의 평균 AUC/투여량(활성);Mean AUC / dose (activity) of IU * h / dL per about 49.9 ± 18.2 IU / kg in the patient population;

상기 환자 집단에서의 약 44.8-57.6 IU/㎏ 당 IU*h/이의 평균 AUC/투여량(활성).Average AUC / dose (activity) of IU * h / its per about 44.8-57.6 IU / kg in this patient population.

본 명세서에서 "주문형 치료"라 함은, 단기간 실시될 예정이며, 현재의 상태 예를 들어 출혈 사례 또는 계획 수술과 같이 필요하다고 인식될 경우에 따른 치료를 의미한다. 주문형 치료를 요하는 질환들은, 예를 들어 출혈 사례, 관절혈증, 근육 출혈, 구강 출혈, 대출혈, 근육내 출혈, 구강내출혈, 외상, 두부 외상, 위장관출혈, 뇌내출혈, 복강내출혈, 흉강내출혈, 골절, 중추신경계출혈, 인두후강내출혈, 복막후극내출혈, 또는 장요근막내출혈을 포함한다. 그 대상은 외과적수술 예방, 수술전후 관리, 또는 수술을 위한 치료의 필요 하에 있을 수 있다. 상기 수술들은 예를 들어 소수술, 대수술, 발치, 편도선수술, 서혜부 헤르니아절제술, 활액막절제술, 슬관절 전치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술), 두개내수술, 복강내수술, 흉강내수술, 또는 관절치환술을 포함한다. As used herein, the term "on-demand treatment" means a treatment which is to be carried out for a short period of time and is recognized when it is necessary, such as a bleeding case or a planned operation. Diseases requiring on-demand treatment include, for example, bleeding cases, arthrosis, muscle bleeding, oral bleeding, major bleeding, intramuscular bleeding, oral bleeding, trauma, head trauma, gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhage, intraperitoneal bleeding, intrathoracic hemorrhage, Fractures, central nervous system bleeding, intrapharyngeal bleeding, peritoneal pulmonary bleeding, or intestinal pleural bleeding. The subject may be in need of surgical prophylaxis, pre-surgical management, or treatment for surgery. Such operations may include, for example, minority surgery, major surgery, extraction, tonsillectomy, inguinal herniactomy, synovectomy, total knee arthroplasty, craniotomy, bone joint surgery, traumatic surgery), intracranial surgery, intraperitoneal surgery, intrathoracic surgery, or Arthroplasty.

바람직하게는, 주문형 치료는 단일 투여로 출혈(예를 들어 자발성 출혈)의 80% 초과(80% 초과, 81% 초과, 82% 초과, 83% 초과, 84% 초과, 85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과, 또는 100%), 또는 80-100%, 80-90%, 85-90%, 90-100%, 90-95%, 또는 95-100%를 해결한다. 바람직하게는, 80% 초과(81% 초과, 82% 초과, 83% 초과, 84% 초과, 85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 또는 100%), 또는 80-100%, 80-90%, 85-90%, 90-100%, 90-95%, 또는 95-100%의 출혈 사례들은 주문형 치료 후 외과 의사들에게서 탁월함(excellent) 또는 우수함(good)의 평가를 받았다. 바람직하게는, 5% 초과, (6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 15% 초과, 16% 초과, 17% 초과, 18% 초과,19% 초과, 20% 초과), 또는 5-20%, 5-15%, 5-10%, 10-20%, 또는 10-15%의 출혈 사례들은 주문형 치료 후 외과 의사들에게서 양호함(fair)의 평가를 받았다.Preferably, the on-demand treatment is greater than 80% (more than 80%, more than 81%, more than 82%, more than 83%, more than 84%, more than 85%, more than 86%) of bleeding (eg spontaneous bleeding) in a single dose. , Greater than 87%, greater than 88%, greater than 89%, greater than 90%, greater than 91%, greater than 92%, greater than 93%, greater than 94%, greater than 95%, greater than 96%, greater than 97%, greater than 98%, 99 %, Or 100%), or 80-100%, 80-90%, 85-90%, 90-100%, 90-95%, or 95-100%. Preferably, greater than 80% (greater than 81%, greater than 82%, greater than 83%, greater than 84%, greater than 85%, greater than 86%, greater than 87%, greater than 88%, greater than 89%, greater than 90%, 91% Greater than, greater than 92%, greater than 93%, greater than 94%, greater than 95%, greater than 96%, greater than 97%, greater than 98%, or 100%), or 80-100%, 80-90%, 85-90% Hemorrhagic cases of 90-100%, 90-95%, or 95-100% were evaluated by the surgeons as excellent or good after on-demand treatment. Preferably, greater than 5%, greater than 6%, greater than 7%, greater than 8%, greater than 9%, greater than 10%, greater than 11%, greater than 12%, greater than 13%, greater than 14%, greater than 15%, 16 More than 17%, more than 17%, more than 18%, more than 19%, more than 20%), or 5-20%, 5-15%, 5-10%, 10-20%, or 10-15% After the on-demand treatment, the surgeons received a fair evaluation.

본 명세서에서 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 서로 바꿔쓸 수 있으며, 공유결합으로 연결된 아미노산 잔기로 이루어진 중합 화합물을 말한다.As used herein, "polypeptide", "peptide" and "protein" are interchangeable and refer to polymeric compounds consisting of covalently linked amino acid residues.

"폴리뉴클레오티드" 및 "핵산"은 서로 바꿔쓸 수 있으며, 공유결합으로 연결된 뉴클레오티드 잔기로 이루어진 중합 화합물을 말한다. 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥의 DNA, cDNA, RNA, 벡터, 플라스미드, 파지, 또는 바이러스일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 표2의 폴리펩티드를 암호화하는 것들로서, 표 1에 나타난다(표 1 참조). 폴리뉴클레오티드는 또한, 예를 들어 표 1의 폴리뉴클레오티드의 절편, 예를 들어 표 2의 폴리펩티드의 절편을 암호화하는 것들 즉 인자 Ⅷ, Fc, 신호 서열, 6His 및 표 2의 폴리펩티드의 또 다른 절편을 포함한다."Polynucleotide" and "nucleic acid" are interchangeable and refer to a polymeric compound consisting of nucleotide moieties covalently linked. The polynucleotide can be single stranded or double stranded DNA, cDNA, RNA, vector, plasmid, phage, or virus. Polynucleotides, for example, those encoding the polypeptides of Table 2, are shown in Table 1 (see Table 1). Polynucleotides also include, for example, those encoding the fragments of the polynucleotides of Table 1, for example the fragments of the polypeptides of Table 2, namely Factor VII, Fc, signal sequence, 6His and another fragment of the polypeptides of Table 2. do.

본 명세서에서 "예방적 치료"라 함은, 시간을 두고 인자 Ⅷ 폴리펩티드를 대상체에 여러 번 투여하여, 대상체의 혈장 내 인자 Ⅷ 활성 수준을 증가시키는 것을 의미한다. 바람직하게는, 증가된 수준은 자발성 출혈의 발생 빈도를 감소시키거나, 또는 예를 들어 예상치 못한 상처가 나는 경우 출혈을 방지하는데 충분하다. 바람직하게는 예방적 치료 동안, 대상의 혈장내 단백질 수준이 상기 대상체에 대한 하한 기준 이하로 떨어지지 않거나, 또는 심한 출혈의 특징이 되는 인자 Ⅷ의 수준(<1 IU/㎗ [1%]) 이하로 떨어지지 않는다. By “prophylactic treatment” herein is meant to increase the level of Factor 수준 activity in the subject's plasma by administering the Factor VII polypeptide to the subject several times over time. Preferably, the increased level is sufficient to reduce the incidence of spontaneous bleeding or to prevent bleeding, for example in the event of an unexpected wound. Preferably, during prophylactic treatment, the plasma protein level of the subject does not fall below the lower limit for the subject, or below the level of factor VII (<1 IU / dl [1%]) that is characteristic of severe bleeding. Does not fall

바람직하게는 예방 요법이 개별 환자에 따라 맞춰지며(tailored), 이는 각 환자에 대한 PK 데이터를 결정하고 본 발명의 인자 Ⅷ을 1-3% 인자 Ⅷ 활성의 최저 수준을 유지하는 투여 간격으로 투여함에 의한 것이 바람직하다. 대상이 계속된 두 달 동안 2번 이하의 자발성 출혈 사례로 정의되는, 허용될 수 없는 출혈 사례를 경험하는 경우 조정할 수도 있다. 이 경우에 조정은 3-5%의 최저 수준을 목표로 할 것이다. 바람직하게는 예방적 치료는 출혈의 방지 및 제어, 출혈의 지속적 제어, 출혈로부터의 지속적으로 보호, 및/또는 지속된 이점을 얻게 한다. 예방, 예를 들어 지속된 보호는 측정된 시점을 지속시키는 증가된 AUC(AUC-LAST) 및 감소된 클리어런스로부터 증명되며, 이로 인해 단속성 인자 Ⅷ에 비해 증가된 최종 t1 /2를 얻을 수 있다. 바람직하게는, 예방은 단속성 인자 Ⅷ에 비해 더 개선된 Cmax, Tmax, 및/또는 더 큰 평균 체류시간에 의해 입증된다. 바람직하게는, 예방은 주사(예를 들어 마지막 주사) 후 24, 36, 48, 72 또는 96 시간 내에(예를 들어, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 96, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 또는 96 시간, 바람직하게는 72 시간 내에) 자발성 출혈 사례가 없도록 한다. 바람직하게는, 예방은 주당 1회의 투여(예를 들어, 65 IU/㎏)로 연간 출혈 사례가 평균 30% 초과(예를 들어, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 96, 87, 88, 89, 또는 90% 이상, 바람직하게는 50% 초과)로 감소하게 한다.Preferably the prophylactic regime is tailored to the individual patient, which determines the PK data for each patient and administers factor VII of the present invention at dose intervals to maintain the lowest level of 1-3% factor VII activity. Is preferred. Adjustments may be made if the subject experiences an unacceptable bleeding event, defined as no more than two spontaneous bleeding events over two consecutive months. In this case, the adjustment will aim for the lowest level of 3-5%. Preferably, prophylactic treatment yields the prevention and control of bleeding, the continuous control of bleeding, the continuous protection from bleeding, and / or lasting benefits. Prevent, for example, a sustained protection is evident from the increased AUC (AUC-LAST) and reduced clearance to continue the measuring point, whereby it is possible to obtain an increased final t 1/2 compared to only attribute factor Ⅷ . Preferably, prevention is evidenced by improved Cmax, Tmax, and / or greater mean residence time compared to intermittent factor VII. Preferably, the prophylaxis is within 24, 36, 48, 72 or 96 hours after the injection (eg the last injection) (eg 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34). , 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 96, 87, There is no spontaneous bleeding event within 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, or 96 hours, preferably 72 hours). Preferably, the prophylaxis is performed once a week (eg 65 IU / kg) with an average of 30% more bleeding events per year (eg 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 96, 87, 88, 89, or 90% or more, preferably greater than 50%).

본 명세서에서 "대상체"라 함은, 인간 또는 비인간 포유류를 의미한다. 비인간 포유류는 예를 들어 마우스, 개, 영장류, 원숭이, 고양이, 말, 소, 돼지 및 다른 가축 동물 및 작은 동물을 포함한다.As used herein, the term "subject" means a human or non-human mammal. Non-human mammals include, for example, mice, dogs, primates, monkeys, cats, horses, cattle, pigs, and other domestic animals and small animals.

본 명세서에서 "치료용량"이라 함은, 상술한 바와 같이 치료 목적을 달성할 수 있는 용량을 의미한다. 인자 Ⅷ의 필요한 투여량의 계산은 체중 kg 당 평균 1 IU의 인자 Ⅷ에 의해 대략 2 IU/㎗만큼 혈장 인자 Ⅷ 활성이 증가한다는 실험적 발견에 기초한다. 필수 투여량은 하기의 식을 사용하여 결정한다. As used herein, the term "therapeutic dose" means a dose that can achieve the therapeutic purpose as described above. The calculation of the required dose of factor VII is based on experimental findings that the plasma factor VII activity is increased by approximately 2 IU / dl by an average factor of 1 IU / kg body weight. The required dose is determined using the formula below.

필수 단위 = 체중(kg) × 원하는 인자 Ⅷ의 상승(IU/㎗ 또는 보통 %) × 0.5(IU/㎗ 당 IU/㎏)Mandatory unit = body weight (kg) × desired factor 상승 increase (IU / ㎗ or normal%) × 0.5 (IU / kg per IU / ㎗)

본 발명의 방법에서 사용될 때 치료용량은, 약 10-100 IU/㎏, 보다 바람직하게는 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 또는 90-100 IU/㎏, 및 더욱 바람직하게는 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 IU/㎏이다.When used in the methods of the invention the therapeutic dose is about 10-100 IU / kg, more preferably 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80 , 80-90, or 90-100 IU / kg, and more preferably 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100 IU / kg.

본 발명의 방법에서 사용될 때 부가적인 치료용량은, 약 10 내지 약 150 IU/㎏, 보다 바람직하게는 약 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150 IU/㎏, 및 더욱 바람직하게는 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 또는 150 IU/㎏ 이다.Additional therapeutic doses when used in the methods of the present invention are from about 10 to about 150 IU / kg, more preferably from about 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150 IU / kg, And more preferably 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, or 150 IU / kg.

본 명세서에서 "변형체(variant)"라 함은, 원래의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 다르지만, 그들의 본질적 특성, 예를 들어 인자 Ⅷ 혈액 응고 활성 또는 Fc(FcRn 결합) 활성을 보유하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 의미한다. 일반적으로 변형체는 전체적으로 원래의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 매우 비슷하며, 많은 부분에서 원래의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 일치한다. 변형체는 예를 들어 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드의 절편, 결실체, 부가체, 및 원래 폴리펩티드의 변이형(modified version)을 포함한다.As used herein, "variant" means a polynucleotide or polypeptide that differs from the original polynucleotide or polypeptide but retains their essential properties, such as factor Ⅷ blood coagulation activity or Fc (FcRn binding) activity. do. Generally, the variants are very similar to the original polynucleotide or polypeptide as a whole, and in many ways coincide with the original polynucleotide or polypeptide. Variants include, for example, fragments, deletions, adducts, and modified versions of the original polypeptide.

변형체 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 서열번호 1, 3, 5, 7, 9, 또는 11의 뉴클레오티드 암호화 서열(인자 Ⅷ 부분, Fc 부분, 각각, 또는 함께)과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열 또는 그들의 상보적 서열, 공지된 돌연변이 및 문헌 및 본 명세서에 인용된 특허에 공개된 것과 같은 재조합 인자 Ⅷ 또는 Fc 또는 그들의 상보 서열, 서열번호 2, 4, 6, 8, 10 또는 12의 폴리펩티드(인자 Ⅷ 부분, Fc 부분, 각각 또는 함께)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열, 및/또는 상기의 어떠한 핵산의 폴리뉴클레오티드 절편(예를 들어 본 명세서에서 설명한 절편들)을 포함하거나, 그렇지 않으면 상기 폴리뉴클레오티드로 이루어져 있다. 엄격한 하이브리드화 조건이나 또는 그보다는 완화된 엄격한 하이브리드화 조건 하에서 이들의 핵산 분자와 하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드는 또한 변형체로도 포함되며, 이는 폴리뉴클레오티드가 기능성인 한 그에 의해 폴리펩티드가 암호화되는 것과 마찬가지이다. Variant polynucleotides, for example, at least 85%, 90%, 95%, 96 with the nucleotide coding sequence of SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, or 11 (factor VII part, Fc part, respectively, or together) %, 97%, 98%, or 99% identical nucleotide sequences or their complementary sequences, known mutations and recombinant factor VIII or Fc or their complementary sequences as disclosed in the literature and patents cited herein, SEQ ID NO: 2 , A nucleotide sequence encoding a polypeptide of 4, 6, 8, 10 or 12 (factor VII part, Fc part, each or together), and / or polynucleotide fragments of any of the above nucleic acids (eg, fragments described herein) Or otherwise consists of said polynucleotide. Polynucleotides that hybridize with their nucleic acid molecules under stringent hybridization conditions, or rather relaxed stringent hybridization conditions, are also included as variants, as long as the polynucleotide is functional, thereby encoding the polypeptide.

변형체 폴리펩티드는 예를 들어 서열번호 2, 4, 6, 8, 10 또는 12에 나타낸 폴리펩티드 서열(인자 Ⅷ 부분, Fc 부분, 각각 또는 함께), 및/또는 이들 폴리펩티드의 폴리펩티드 절편(예를 들어 본 명세서에서 상술한 절편들)과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 일치하는 아미노산 서열을 포함하거나 그렇지 않으면 본질적으로 상기 아미노산 서열로 이루어져 있다.Variant polypeptides include, for example, the polypeptide sequences shown in SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, or 12 (factor VII part, Fc part, each or together), and / or polypeptide fragments of these polypeptides (eg, herein And at least 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% coincident with the aforementioned fragments) or otherwise consist essentially of said amino acid sequence.

참고 뉴클레오티드 서열과 적어도 예를 들어 95% "일치"하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산이란, 그 핵산의 뉴클레오티드 서열이 참고 뉴클레오티드 서열 각 100개의 뉴클레오티드 당 많게는 5개의 점 돌연변이를 포함할 수 있다는 사실을 제외하고는 참고 뉴클레오티드 서열과 일치한다고 의도된다. 달리 말하면, 참고 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 일치하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산을 얻기 위해서는, 참고 서열의 많게는 5% 뉴클레오티드가 결실 또는 다른 뉴클레오티드로 치환될 수 있거나, 또는 참고 서열의 전체 뉴클레오티드의 많게는 5%의 다수의 뉴클레오티드가 참고 서열 내로 삽입되었을 수 있다. 인용 서열은 예를 들어 서열번호 1 또는 3에 나타낸 전체 서열, ORF(오픈 리딩 프레임(open reading frame)), 또는 상술한 특정 절편일 수 있다. A nucleic acid having a nucleotide sequence that is at least, for example, 95% "matched" to a reference nucleotide sequence, except that the nucleotide sequence of that nucleic acid may contain as many as five point mutations per 100 nucleotides of the reference nucleotide sequence. It is intended to match the reference nucleotide sequence. In other words, to obtain a nucleic acid having a nucleotide sequence that is at least 95% identical to a reference nucleotide sequence, as many as 5% nucleotides of the reference sequence may be deleted or substituted with other nucleotides, or as much as 5% of the total nucleotides of the reference sequence. Multiple nucleotides may have been inserted into the reference sequence. The cited sequence can be, for example, the entire sequence shown in SEQ ID NOs: 1 or 3, an open reading frame (ORF), or the specific fragments described above.

실용적인 측면에서는, 어떠한 특정 핵산 분자 또는 폴리펩티드가 본 발명의 뉴클레오티드 서열 또는 폴리펩티드와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 일치하는지 여부는, 공지의 컴퓨터 프로그램을 사용하여 통상 결정될 수 있다. 인용 서열(참고 또는 원래 서열) 및 대상 서열 간의 최적 총 일치도(match)(포괄적 서열 정렬(global sequence alignment)라고도 한다)를 결정하기 위한 바람직한 방법은, 본 명세서에 전문이 참고된 문헌[Brutlag et al. (1990) 6:237-245)]의 알고리즘에 기초한 FASTDB 컴퓨터 프로그램을 사용하여 결정한다. 서열 정렬에서, 인용 및 대상 서열은 모두 DNA 서열이다. RNA 서열은 U를 T로 변환하여 비교할 수 있다. 상기 포괄적 서열 정렬의 결과는 % 일치도로 나타낸다. % 일치도를 계산하기 위해 DNA 서열의 FASTDB 정렬법에 사용되는 바람직한 변수는; 매트릭스= 일원, k-투플=4, 미스매치 페널티=1, 결합 페널티=30, 무작위 그룹 길이=0, 컷오프 스코어=1, 갭 페널티=5, 갭 크기 페널티=0.05, 윈도우 크기=500 또는 더 짧은 대상 뉴클레오티드 서열의 길이이다.In practical terms, whether any particular nucleic acid molecule or polypeptide is at least 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% consistent with the nucleotide sequences or polypeptides of the present invention is known by a known computer program. It can usually be determined using. Preferred methods for determining the optimal total match (also known as global sequence alignment) between a cited sequence (reference or original sequence) and a subject sequence are described in Brutlag et al. . (1990) 6: 237-245), using a FASTDB computer program. In sequence alignment, both the citation and the subject sequence are DNA sequences. RNA sequences can be compared by converting U to T. The result of the global sequence alignment is shown in% concordance. Preferred variables used in the FASTDB alignment of DNA sequences to calculate% concordance; Matrix = member, k-tuple = 4, mismatch penalty = 1, combined penalty = 30, random group length = 0, cutoff score = 1, gap penalty = 5, gap size penalty = 0.05, window size = 500 or shorter The length of the nucleotide sequence of interest.

대상 서열이 내부 결실 때문이 아니라 5′및 3’결실 때문에 인용 서열보다 짧을 경우, 그 결과에 대해 수동적 보정을 해야 한다. 이는 FASTDB 프로그램이 % 일치도를 계산할 때, 대상 서열의 5′및 3’절단(truncation)을 고려하지 않기 때문이다. 인용 서열에 비하여 5′및 3’말단이 절단된 대상 서열의 경우에 % 일치도는, 일치/정렬되지 않는 대상 서열의 5′및 3’에 해당하는 인용 서열의 염기 수를, 인용 서열의 총 염기의 %로서 계산함으로서 보정할 수 있다. 뉴클레오티드가 일치/정렬될지 여부는 FASTDB 서열 정렬의 결과로서 결정된다. 최종 % 일치도 수치에 도달하기 위하여, 이러한 백분율은 특정 변수를 사용한 상기 FASTDB 프로그램을 사용하여 결정된 % 일치도로부터 삭감된다. 이러한 보정된 수치를 본 발명의 목적을 위해 사용한다. FASTDB 정렬에서 나타나듯이, 인용 서열과 일치/정렬되지 않은 대상 서열의 5′및 3’염기들 바깥쪽에 있는 염기들만, 수동적으로 % 일치도 수치를 조정할 목적으로 계산되었다.If the subject sequence is shorter than the cited sequence, not because of internal deletions but because of 5 'and 3' deletions, manual corrections should be made to the results. This is because the FASTDB program does not take into account the 5 'and 3' truncation of the subject sequence when calculating the% concordance. In the case of a subject sequence whose 5 ′ and 3 ′ ends are truncated relative to the cited sequence, the percent identity indicates the number of bases of the cited sequence corresponding to 5 ′ and 3 ′ of the subject sequence that are not matched / aligned. It can be corrected by calculating it as%. Whether nucleotides will be matched / aligned is determined as a result of FASTDB sequence alignment. In order to reach the final% agreement value, this percentage is subtracted from the% agreement determined using the FASTDB program using a particular variable. This corrected value is used for the purposes of the present invention. As shown in the FASTDB alignment, only bases outside the 5 'and 3' bases of the target sequence that did not match / align with the cited sequence were calculated for the purpose of manually adjusting the% concordance values.

예를 들어, 90개 염기의 대상 서열을 100개 염기의 인용 서열과 정렬하여 % 일치도를 결정하였다. 대상 서열의 5’말단에서 결실이 일어난 경우, FASTDB 정렬시 5’말단의 첫 10개의 염기들에 대한 일치/정렬에 대해서는 나타나지 않는다. 짝짓지 않은 10개의 염기들은 서열의 10%(5′및 3’말단의 매치되지 않은 염기의 수 /인용 서열의 총 염기의 수)를 나타내며, 10%는 FASTDB 프로그램에 의해 계산된 % 일치도 수치에서 삭감된다. 나머지 90개의 염기들이 완벽하게 매치되는 경우, 최종 % 일치도는 90%가 될 것이다. 다른 예로는, 90개 염기의 대상 서열이 100개 염기의 인용 서열과 비교된다. 이때 결실은 내부 결실이므로, 인용 서열과 일치/정렬되지 않은 대상 서열의 5′및 3’에 염기가 없다. 이 경우에, FASTDB에 의해 계산된 % 일치도는 수동 보정되지 않는다. 다시 한번, 대상 서열과 일치/정렬되지 않은 대상 서열의 5′및 3’염기들만 수동으로 보정된다. 다른 수동 보정은 본 발명의 목적을 위해서는 실시되지 않는다.For example, 90 base subject sequences were aligned with 100 base cited sequences to determine% concordance. If deletions occurred at the 5 ′ end of the sequence of interest, there is no match for the first 10 bases at the 5 ′ end in FASTDB alignment. The 10 unmatched bases represent 10% of the sequence (the number of unmatched bases at the 5 'and 3' ends / the total number of bases in the cited sequence) and 10% at the% concordance figure calculated by the FASTDB program. Is cut down. If the remaining 90 bases match perfectly, the final% concordance will be 90%. In another example, a 90 base subject sequence is compared with a reference sequence of 100 bases. Since the deletion is an internal deletion, there are no bases in 5 'and 3' of the sequence of interest that are not matched / aligned with the cited sequence. In this case, the% agreement calculated by FASTDB is not manually corrected. Once again, only 5 'and 3' bases of the target sequence that are not matched / aligned with the target sequence are manually corrected. No other manual corrections are made for the purposes of the present invention.

본 발명의 인용 아미노산 서열과 적어도 예를 들어 95% 일치하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드란, 대상 폴리펩티드 서열이 인용 아미노산 서열 각 100개의 아미노산 당 많게는 5개의 아미노산 교체(alternation)를 포함할 수 있다는 사실만 빼고는 대상 폴리펩티드의 아미노산 서열이 인용 서열과 일치한다고 의도된다. 달리 말하면, 인용 아미노산 서열과 적어도 95% 일치하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 얻기 위하여, 대상 서열의 많게는 5%의 아미노산 잔기가 삽입, 결실, (유전체 구조 변이(indel)되거나, 또는 다른 아미노산과 치환될 수 있다. 참고 서열의 이러한 교체는, 참고 아미노산 서열의 아미노 또는 카복시 말단 위치나, 또는 상기 말단 위치들 사이의 어떠한 부분, 참고 서열 상의 잔기들 사이에 개별적으로 흩어져 있거나 또는 참고 서열 내부에 하나 이상의 인접한 군에 흩어져서 발생할 수 있다.A polypeptide having an amino acid sequence that is at least 95% identical to a cited amino acid sequence of the present invention, except that the subject polypeptide sequence may comprise as many as 5 amino acid substitutions for each 100 amino acids of the cited amino acid sequence. It is intended that the amino acid sequence of the subject polypeptide matches the cited sequence. In other words, in order to obtain a polypeptide having an amino acid sequence that is at least 95% identical to a cited amino acid sequence, as many as 5% of the amino acid residues of the subject sequence may be inserted, deleted, (indeled), or substituted with other amino acids. Such replacement of a reference sequence can be either the amino or carboxy terminal position of the reference amino acid sequence, or any portion between said terminal positions, individually scattered between the residues on the reference sequence, or one or more adjacent within the reference sequence. It can be scattered around the group.

실질적으로, 특정 폴리펩티드는 예를 들어 서열번호 2(인자 Ⅷ 부분, Fc 부분, 이들이 각각 또는 함께) 또는 4의 아미노산 서열, 또는 공지의 인자 Ⅷ 또는 Fc 폴리펩티드 서열과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 일치할지 여부는, 공지의 컴퓨터 프로그램을 사용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 인용 서열(참고 또는 원래 서열)과 대상서열 간의 최적 총 일치도(포괄적 서열 정렬(global sequence alignment)라고도 한다)를 결정하기 위한 바람직한 방법은, 본 명세서에 전문이 참조된 문헌[Brutlag et al., Comp. App. Biosci.. 6:237-245(1990)] 알고리즘에 기초한 FASTDB 컴퓨터 프로그램을 사용하여 결정하였다. 서열 정렬에서, 인용 및 대상 서열은 모두 뉴클레오티드 서열이거나 모두 아미노산 서열이다. 상기 포괄적 서열 정렬의 결과는 % 일치도로 나온다. FASTDB 아미노산 나열법에 사용되는 바람직한 변수는; Matrix=PAM 0, k-tuple=2, Mismatch Penalty=1, Joining Penalty=20, Randomization Group Length=0, Cutoff Score=1, Window Size=sequence length, Gap Penalty=5, Gap Size Penalty=0.05, Window Size=500 또는 더 짧은 대상 아미노산 서열의 길이이다.Substantially, a particular polypeptide is at least 85%, 90%, 95% with, for example, an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 (factor VII moiety, Fc moieties, each or together) or 4, or a known factor VII or Fc polypeptide sequence Whether or not, 96%, 97%, 98% or 99% match can be determined conventionally using a known computer program. Preferred methods for determining the optimal total concordance (also called global sequence alignment) between the cited sequence (reference or original sequence) and the subject sequence are described in Brutlag et al., Comp. . App. Biosci .. 6: 237-245 (1990)]. In sequence alignment, the citation and subject sequences are both nucleotide sequences or both amino acid sequences. The result of this inclusive sequence alignment is in% concordance. Preferred variables used in the FASTDB amino acid sequence are: Matrix = PAM 0, k-tuple = 2, Mismatch Penalty = 1, Joining Penalty = 20, Randomization Group Length = 0, Cutoff Score = 1, Window Size = sequence length, Gap Penalty = 5, Gap Size Penalty = 0.05, Window Size = 500 or shorter in length of the subject amino acid sequence.

대상 서열이 내부 결실이 아니라 N- 또는 C-말단 결실 때문에 인용 서열보다 짧은 경우, 결과에 수동 보정을 해야 한다. 이는 FASTDB 프로그램이 포괄적 % 일치도를 계산할 때 대상 서열의 N- 또는 C-말단 절단(truncation)을 고려하지 않기 때문이다. 인용 서열에 비해서 N- 또는 C-말단이 절단된 대상 서열에 대해서는, 대응하는 대상 잔기와 일치/정렬되지 않은 대상 서열의 N 및 C 말단에 있는 인용 서열의 잔기의 수를 인용 서열의 총 염기의 %로 계산함으로서 % 일치도를 보정한다. 잔기가 일치/정렬되는지 여부는, FASTDB 서열 정렬의 결과로 결정한다. 최종 % 일치도 수치에 도달하기 위해서는, 특정 변수를 사용한 상기 FASTDB 프로그램에 의하여 계산된 % 일치도로부터 이러한 백분율로 삭감된다. 이러한 최종 % 일치도 수치는 본 발명의 목적을 위해 사용될 것이다. 단지 인용 서열과 일치/정렬되지 않은 대상 서열의 N- 및 C-말단의 잔기들만을 % 일치도 수치를 수동 조정할 목적으로 고려한다. 이는 단지 대상 서열의 N- 및 C-말단 잔기들에서 가장 먼 위치에 있는 인용 잔기 위치들만에 해당한다.If the subject sequence is shorter than the cited sequence because of N- or C-terminal deletions rather than internal deletions, manual corrections should be made to the results. This is because the FASTDB program does not take into account the N- or C-terminal truncation of the subject sequence when calculating the comprehensive% identity. For a subject sequence whose N- or C-terminus is truncated relative to the cited sequence, the number of residues in the cited sequence at the N and C ends of the subject sequence that are not matched / aligned with the corresponding subject residue is determined by the total base of the cited sequence. Correct the% agreement by calculating in%. Whether residues are matched / aligned is determined as a result of FASTDB sequence alignment. In order to reach the final% concordance number, this percentage is cut from the% concordance calculated by the FASTDB program using a particular variable. This final% consistency figure will be used for the purposes of the present invention. Only residues at the N- and C-terminus of the subject sequence that are not matched / aligned with the cited sequence are considered for the purpose of manually adjusting the percent identity values. This only corresponds to the citation residue positions at the furthest position from the N- and C-terminal residues of the subject sequence.

예를 들어, 90개 아미노산 잔기의 대상 서열을 100개 잔기의 인용 서열과 정렬하여 % 일치도를 결정하였다. 대상 서열의 N 말단에서 결실이 일어날 때, FASTDB 정렬에서 N 말단의 첫 10개 잔기의 일치/정렬이 보이지 않는다. 10개의 짝짓지 않은 잔기가 그 서열의 10%(N- 및 C 말단 상의 일치되지 않은 잔기의 수/인용 서열의 총 잔기의 수)를 나타내므로, 상기 10%는 FASTDB 프로그램에 의해 결정된 % 일치도 수치로부터 삭감된다. 남은 90개의 잔기가 완벽하게 일치하는 경우, 최종 % 일치도는 90%가 될 것이다. 다른 예로는 90개 잔기의 대상 서열이 100개 잔기의 인용 서열과 비교된다. 이때 결실이 내부 결실인 경우, 인용 서열과 일치/정렬되지 않는 대상 서열의 N- 및 C- 말단 상의 잔기는 없다. 이 경우에, FASTDB에 의하여 계산되는 % 일치도는 수동적으로 보정하지 않는다. 다시 한번, FASTDB 나열법에서 나타나듯이, 대상 서열의 N- 및 C-말단 바깥쪽에 위치하며 인용 서열과 일치/정렬되지 않는 잔기 위치들에 대해서만, 수동적으로 보정된다. 다른 수동적 보정은 본 발명의 목적을 위해서는 실시되지 않는다.For example, the subject sequence of 90 amino acid residues was aligned with the cited sequence of 100 residues to determine% identity. When deletions occur at the N terminus of the subject sequence, there is no coincidence / alignment of the first 10 residues at the N terminus in the FASTDB alignment. Since 10 unpaired residues represent 10% of the sequence (the number of mismatched residues on the N- and C termini / the total number of residues in the cited sequence), the 10% is the percent identity figure determined by the FASTDB program. It is reduced from. If the remaining 90 residues match perfectly, the final% concordance will be 90%. In another example, a 90 residue subject sequence is compared with a 100 residue reference sequence. If the deletion is an internal deletion then there are no residues on the N- and C- termini of the subject sequence that do not match / align with the cited sequence. In this case, the% agreement calculated by FASTDB is not manually corrected. Once again, as shown in the FASTDB enumeration, only the residue positions located outside the N- and C-terminus of the subject sequence and not matched / aligned with the cited sequence are manually corrected. No other manual corrections are made for the purposes of the present invention.

폴리펩티드 변형체는 암호화 위치, 비암호화 위치, 또는 양쪽 모두에서의 교체를 포함할 수 있다. 침묵 치환, 첨가, 또는 결실을 생성하는 교체를 포함하나, 암호화된 폴리펩티드의 특성 또는 활성을 변형시키지 않는 폴리펩티드 변형체가 특히 바람직하다. 유전 암호의 축퇴성(degeneracy)에 의한 침묵 치환으로 생성된 뉴클레오티드 변형체도 바람직하다. 나아가, 5-10, 1-5, 또는 1-2개 아미노산이 조합하여 치환, 결실 또는 첨가된 변형체도 또한 바람직하다. 폴리뉴클레오티드 변형체는 다양한 이유로, 예를 들어 특정 숙주에서의 코돈 발현을 최적화하기 위하여(인간의 mRNA 상의 코돈을 대장균(E.coli)과 같은 박테리아 숙주에 맞게 변환하기 위하여) 생성될 수 있다.Polypeptide variants may include replacement at coding positions, non-coding positions, or both. Particular preference is given to polypeptide variants that include silent substitutions, additions, or replacements that produce deletions, but which do not modify the properties or activity of the encoded polypeptide. Also preferred are nucleotide variants produced by silent substitutions by degeneracy of the genetic code. Furthermore, variants in which 5-10, 1-5, or 1-2 amino acids are combined, substituted, deleted or added are also preferred. Polynucleotide variants can be generated for a variety of reasons, for example, to optimize codon expression in a particular host (to convert codons on human mRNA to a bacterial host such as E. coli).

자연적으로 발생하는 변형체를 "대립 유전자 변형체(allelic variant)"라고 하며, 생명체의 염색체 상의 특정 부분에 위치하는 유전자의 몇몇 교체형 중 하나라고도 한다(문헌[Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)]). 이러한 대립유전자 변형체는 폴리뉴클레오티드 및/또는 폴리펩티드 중 어느 하나의 수준에서 변경될 수 있고, 본 발명에 포함된다. 그렇지 않으면, 자연적으로 발생하지 않는 변형체는 돌연변이 유발(mutagenesis) 기술 또는 직접적 합성에 의해 생성될 수 있다.Naturally occurring variants are referred to as "allelic variants" and are also known as one of several alterations of genes that are located in certain parts of the chromosome of life (Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)]. Such allelic variants may be altered at the level of either the polynucleotide and / or polypeptide and are included in the present invention. Otherwise, naturally occurring variants may be produced by mutagenesis techniques or direct synthesis.

공지된 단백질 공학 및 재조합 DNA 기술을 사용하여, 변형체가 폴리펩티드의 특징을 개선 또는 변형시키도록 만들 수 있다. 예를 들어 생물학적 기능을 많이 손상시키지 않고도 분비 단백질의 N 말단 또는 C 말단으로부터 하나 이상의 아미노산이 결실될 수 있다. 문헌[Ron et al., J. Biol . Chem .268:2984-2988(1993)](본 명세서에서 전문이 참조됨)의 저자들은 심지어 3, 8 또는 27개의 아미노 말단부의 아미노산 잔기들이 결실된 후에도 헤파린 결합 활성을 갖는 변형 KGD 단백질을 보고하였다. 마찬가지로, 인터페론 감마는 그의 카복시 말단부로부터 8-10개의 아미노산 잔기가 결실된 후 많게는 10배나 더 높은 활성을 보인다(문헌[Dobeli et al., J. Biotechnology 7:199-216 (1988)], 본 명세서에서 전문이 참조됨).Known protein engineering and recombinant DNA techniques can be used to make variants modify or modify the characteristics of a polypeptide. For example, one or more amino acids can be deleted from the N terminus or C terminus of a secreted protein without significantly impairing biological function. Ron et al., J. Biol . Chem . 268: 2984-2988 (1993), incorporated herein in its entirety, reported modified KGD proteins with heparin binding activity even after the deletion of 3, 8 or 27 amino terminus amino acid residues. Likewise, interferon gamma shows as much as 10-fold higher activity after the deletion of 8-10 amino acid residues from its carboxy terminus (Dobeli et al., J. Biotechnology 7: 199-216 (1988)). Is referenced in its entirety).

나아가, 변형체가 종종 자연적으로 발생하는 단백질과 유사한 생물학적 활성을 유지한다는 사실도 충분한 증거로 입증된다. 예를 들어, Gayle과 공동연구자들(문헌[J. Biol. Chem 268:22105-22111 (1993)](본 명세서에서 전문이 참조됨)는 인간 사이토카인 IL-1a의 광범위한 돌연변이 분석을 수행하였다. 그들은 무작위 돌연변이 유발법을 사용하여 전체 분자 길이에 걸쳐서 변형체 당 평균 2.5개의 아미노산이 변화된 3,500개의 개별 IL-1a 돌연변이체를 생성하였다. 다중 돌연변이들을 모든 가능한 아미노산 위치에서 검사하였다. 연구자들은 대부분의 분자가 결합 활성 또는 생물학적 활성 중 어느 하나에 거의 영향을 주지 않고도 변형될 수 있음을 발견하였다(요약 참조). 사실상, 조사한 3500개 이상의 뉴클레오티드 서열에서 단지 23개의 특이한 아미노산 서열만이 야생형과 활성이 매우 다른 단백질을 생성하였다.Furthermore, the evidence that the variants often retain biological activity similar to naturally occurring proteins is evidenced. For example, Gayle and co-workers (J. Biol. Chem 268: 22105-22111 (1993), incorporated herein in their entirety) performed extensive mutation analysis of the human cytokine IL-1a. They used random mutagenesis to generate 3,500 individual IL-1a mutants with an average of 2.5 amino acid changes per variant over the entire length of the molecule.Multiple mutations were examined at all possible amino acid positions. It was found that modifications can be made with little impact on either binding activity or biological activity (see summary) In fact, only 23 specific amino acid sequences in more than 3500 nucleotide sequences examined were very different from wild type in activity. Produced.

상술한 바와 같이, 폴리펩티드 변형체는 예를 들어 변이된(modified) 폴리펩티드를 포함한다. 변이(modification)는 예를 들어 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화 플라빈의 공유결합적 부가, 헴 일부의 공유결합적 부가, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 파생물의 공유결합적 부가, 지질 또는 지질 파생물의 공유결합적 부가, 폴리파티딜이노시톨의 공유결합적 부가, 교차결합, 고리화, 이황화결합 형성, 탈메틸화, 공유결합적 교차결합 형성, 시스테인 형성, 파이로글루타메이트(pyroglutamate) 형성, 포르밀화, 감마-카복실화, 당화, GP1 앵커 형성, 수산화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 페길화(문헌[Mei et al., Blood 116:270-79 (2010)], 본 명세서에서 전문이 참조됨), 단백질가수분해적 가공(proteolytic processing), 인산화, 프레닐화(prenylation), 라세미화(racemization), 셀레노일화(selenoylation), 황산화(sulfation), 아르기닐화 및 유비퀴틴화와 같이 운반-RNA 매개의 단백질에 대한 아미노산 부가를 포함한다. 몇몇 구현예에서, 인자 Ⅷ는 어떠한 편리한 위치에 대해서도 변이, 예를 들어 페길화될 수 있다. 몇몇 구현예에서, 인자 Ⅷ는 인자 Ⅷ의 표면 노출된 아미노산, 바람직하게는 표면 노출된 시스테인(가공된 시스테인도 가능)에 페길화된다(Mei et al. (2010)). 몇몇 구현예에서, 변이된 인자 Ⅷ, 예를 들어 페길화된 인자 Ⅷ는 지속성 인자 Ⅷ이다.As mentioned above, polypeptide variants include, for example, modified polypeptides. Modifications include, for example, acetylation, acylation, ADP-ribosylation, covalent addition of amidated flavins, covalent addition of a portion of heme, covalent addition of nucleotides or nucleotide derivatives, lipids or lipids Covalent addition of derivatives, covalent addition of polypatidylinositol, crosslinking, cyclization, disulfide formation, demethylation, covalent crosslink formation, cysteine formation, pyroglutamate formation, formylation , Gamma-carboxylation, glycosylation, GP1 anchor formation, hydroxide, iodide, methylation, myristoylation, oxidation, pegylation (Mei et al., Blood 116: 270-79 (2010)), which is hereby incorporated by reference in its entirety herein. Transport, such as proteolytic processing, phosphorylation, prenylation, racemization, selenoylation, sulfation, arginylation and ubiquitination RNA mediated It includes additional amino acids on the protein. In some embodiments, the factor VII can be varied, eg PEGylated, for any convenient location. In some embodiments, factor VII is pegylated to the surface exposed amino acids of factor VII, preferably surface exposed cysteines (processed cysteines are also possible) (Mei et al. (2010)). In some embodiments, the mutated factor VII, eg, pegylated factor VII, is a persistent factor VII.

본 명세서에서 "정상상태에서 분배되는 부피(volume of distribution at steady state(Vss))"라 함은, 약물학에 사용되는 용어와 같은 의미로서 약물이 분산하는 명확한 공간(부피)를 의미한다. Vss은 정상 상태에서의 혈장 내 농도당 체내 약물의 양이다.As used herein, the term "volume of distribution at steady state (Vss)", as used in pharmacology, means a clear space (volume) in which the drug is dispersed. Vss is the amount of drug in the body per concentration in plasma at steady state.

본 명세서에서 범위로 사용될 때"약"이라 함은, 범위의 양 말단을 변형한다. 따라서 "약 10-20"은 "약 10 내지 약 20"을 의미한다.As used in this specification, the term "about" modifies both ends of the range. Thus, "about 10-20" means "about 10 to about 20."

본 발명에 상술한 것들은 예시의 목적으로 본 발명에 포함된 하기의 실시예에 대한 참조에 의해 더욱 명확히 이해될 수 있을 것이며, 본 발명에 대한 제한으로 의도되지는 않는다. 본 발명에 언급된 모든 특허 및 문헌들은 명백히 참조로서 포함된다.What has been described above in the present invention will be more clearly understood by reference to the following examples included in the present invention for purposes of illustration, and are not intended as a limitation on the present invention. All patents and documents mentioned in the present invention are expressly incorporated by reference.

[[ 실시예Example 1] One]

요약summary

재조합 B-도메인 결실 인자 Ⅷ-Fc(rFⅧFc) 융합 단백질은 FⅧ의 반감기를 연장하도록 제조되었다. rFⅧFc는 중증의 A형 혈우병 마우스 및 개의 모델에서 연구되었고, rFⅧFc(ReFacto(등록상표))과 비교하였다. ReFacto(등록상표) 에 비해, A형 혈우병 마우스에서의 전혈 응고 시간(WBCT)은 대략 2 내지 3배 더 길도록 수정되었고, 혈장내 제거 반감기는 rFⅧFc가 거의 2배 더 길다. A형 혈우병 개에서, rFⅧFc(125 IU/㎏)를 정맥 투여하면 WBCT를 정상으로 수정한다. WBCT는 20분 이하로 유지되며, 이 시간은 ReFacto(등록상표)로 처리한 개에서 48시간인데 비해 FⅧ: C > 1%에서는 대략 96시간에 해당하는 시간이다. 개의 혈장에서의 rFⅧFc의 제거 반감기는 ELASA 또는 발색 활성 에세이를 사용하여 측정할 때, 각각 15.7±1.7 시간 및 15.4±0.3 시간이다. rFⅧFc 및 혈장 반감기가 7.0 시간인 경우 ReFacto(등록상표)은 WBCT를 대략 0.5배 수정한다. 따라서 FⅧ를 Fc와 융합하는 것은 증가된 혈장내 반감기 및 출혈로부터 연장된 보호를 제공할 수 있는 능력을 갖는 분자를 생성한다.Recombinant B-domain deletion factor VII-Fc (rFVIIFc) fusion proteins were made to extend the half-life of FVII. rFⅧFc was studied in models of severe hemophilia A mice and dogs and compared with rFⅧFc (ReFacto®). ReFacto (registered trademark) In comparison, whole blood clotting time (WBCT) in type A hemophilia mice has been modified to be approximately 2-3 times longer, and the plasma elimination half-life is nearly 2 times longer in rFⅧFc. In hemophilia A dogs, intravenous administration of rFⅧFc (125 IU / kg) corrects WBCT to normal. WBCT lasts less than 20 minutes, which is approximately 96 hours at Fac: C> 1%, compared to 48 hours in dogs treated with ReFacto®. The elimination half-life of rFⅧFc in the plasma of dogs is 15.7 ± 1.7 hours and 15.4 ± 0.3 hours, respectively, as measured using ELASA or chromogenic activity assays. ReFacto® corrects WBCT approximately 0.5-fold when rFⅧFc and plasma half-life is 7.0 hours. Thus fusion of FVIII with Fc produces molecules with the ability to provide extended protection from increased plasma half-life and bleeding.

서론Introduction

감소된 사망률, 관절 손상 방지, 및 삶의 질 개선은 혈장-유래 및 재조합 FⅧ의 발전에 기인한 중요한 성취이다. 출혈로부터 오래 보호할 수 있는 것은 A형 혈우병 환자의 치료에 또 다른 핵심 발전상이 될 것이다. 본 발명자들은 FⅧ의 반감기를 연장하기 위한 접근 수단으로서 재조합 인자 Ⅷ-Fc(rFⅧFc) 키메라 단백질 및 하이브리드를 제조하였다.Reduced mortality, preventing joint damage, and improving quality of life are important achievements due to the development of plasma-derived and recombinant FVIII. Long-term protection from bleeding is another key development in the treatment of patients with hemophilia A. We have produced recombinant factor VII-Fc (rFⅧFc) chimeric proteins and hybrids as an approach to extending the half-life of FVIII.

rFⅧFc은 인간 이뮤노글로블린 G1(IgG1)의 Fc 도메인(도 1, 서열번호 2, 표 2A)에 재조합적으로 융합된 B 도메인 결실 FⅧ로 이루어진 이종이량체 하이브리드 단백질이다(이 단백질은 본 명세서에서 FⅧFc 단량체 Fc 융합 단백질, FⅧFc 단량체 하이브리드, 단량체 FⅧFc 하이브리드, 및 FⅧFc 단량체-이량체라고도 한다). Fc는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 결합가능하게 하며, 이는 IgG가 분해되는 것으로부터 보호하는 역할을 하여, IgG가 인체에서의 3주간의 반감기를 갖도록 해준다(문헌[Ghetie V, and Ward ES., Annu. Rev. Immunol. 2000;18:739-766; Roopenian DC, 및 Akilesh S., Nature Rev. Immunol. 2007;7:715-725], 상기의 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨).rFⅧFc is a heterodimeric hybrid protein consisting of the B domain deletion F ′ fused recombinantly to the Fc domain of human immunoglobulin G1 (IgG1) (FIG. 1, SEQ ID NO: 2, Table 2A) (this protein is referred to herein as FⅧFc Also referred to as monomeric Fc fusion protein, FcFc monomer hybrid, monomeric FⅧFc hybrid, and FⅧFc monomer-dimer). Fc enables binding to the neonatal Fc receptor (FcRn), which serves to protect against IgG degradation, allowing IgG to have a three-week half-life in the human body (Ghetie V, and Ward ES., Annu. Rev. Immunol. 2000; 18: 739-766; Roopenian DC, and Akilesh S., Nature Rev. Immunol. 2007; 7: 715-725, each of which is incorporated herein by reference in its entirety).

IgG1의 Fc 도메인은 성장 인자, 사이토카인, 효소 및 수용체의 리간드 결합부분에 융합된다(문헌[Ashkanazi A, et al., Int. Rev. Immunol. 1993:10:219-27; Chamow SM, 및 Ashkanazi A, Trends Biotechnol. 1996:14:52-60; Fisher et al., N. Engl. J. Med. 1996:334(26):1697-702], 상기의 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨). 이들 중 몇몇은 중요한 치료용 분자로 사용되어 왔다. 이들 융합 단백질에서, 2개의 이펙터 분자가 2개의 Fc 분자에 연결된다. 본 실시예에서, rFⅧFc는 예를 들어 단지 한 카피의 이펙터 분자(도 1 참조)만을 갖는 단량체 Fc 융합 단백질(신호서열이 있거나 또는 없는 표 2A(ⅰ)의 서열(서열번호 2)로 이루어진 한 카피의 폴리펩티드, 및 신호서열이 있거나 또는 없는 표 2A(ⅱ)의 서열(서열번호 4)로 이루어진 한 카피의 폴리펩티드)로 제조되며, 본 명세서에서 주어진 연구에서는 A형 혈우병의 마우스 및 개 모델에서 새로운 이 단백질의 약역학 및 약동학을 rFⅧFc에 대해 비교하였다. 분비 도중 신호 서열은 잘린다. 이러한 단백질 구조는 본 명세서에서 FⅧFc 단량체 Fc 융합 단백질, FⅧFc 단량체 하이브리드, 단량체 FⅧFc 하이브리드 및 FⅧFc 단량체-이량체라고 한다. 이에 관해서는 실시예 1, 도 1, 표 2A 및 미국특허 제 7,404,956호 및 제7,348,004호(이 단백질의 구조 및 제조에 관하여 본 명세서에 전문이 참조됨)를 참고할 수 있다.The Fc domain of IgG1 is fused to the ligand binding portion of growth factors, cytokines, enzymes and receptors (Ashkanazi A, et al., Int. Rev. Immunol. 1993: 10: 219-27; Chamow SM, and Ashkanazi A, Trends Biotechnol. 1996: 14: 52-60; Fisher et al., N. Engl. J. Med. 1996: 334 (26): 1697-702, each of which is incorporated herein by reference in its entirety) . Some of these have been used as important therapeutic molecules. In these fusion proteins, two effector molecules are linked to two Fc molecules. In this example, rFⅧFc is a copy of, for example, a monomeric Fc fusion protein having only one copy of an effector molecule (see FIG. 1) (SEQ ID NO: 2) with or without a signal sequence (SEQ ID NO: 2). And a copy of the polypeptide consisting of the sequence of Table 2A (ii) with or without a signal sequence (SEQ ID NO: 4). The pharmacokinetics and pharmacokinetics of the proteins were compared against rFⅧFc. During secretion the signal sequence is cut off. Such protein structures are referred to herein as FⅧFc monomeric Fc fusion proteins, FⅧFc monomer hybrids, monomeric FⅧFc hybrids, and FⅧFc monomer-dimers. In this regard, reference may be made to Example 1, FIG. 1, Table 2A and US Pat. Nos. 7,404,956 and 7,348,004 (incorporated herein in their entirety with respect to the structure and preparation of this protein).

방법 및 재료Method and material

FⅧ 제조FⅧ manufacturing

재조합 FⅧRecombinant FⅧ FcFc

인간 재조합 B-도메인 결실 FⅧ의 암호화 서열은 FⅧ-특이적 프라이머를 사용하여 인간 간의 poly A RNA(Clontech)으로부터 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR)을 하여 얻었다. FⅧ 서열은 FⅧ에 대한 원래의 신호서열을 포함한다. B 도메인 결실은 세린 743(S743; 2287bp)부터 글루타민 1638(Q1638;4969bp)까지 전체 2682bp를 결실하여 얻었다. 이에 관해서는 실시예 1, 도 1, 표 2A 및 미국특허 제 7,404,956호 및 제7,348,004호(이 단백질의 구조 및 제조에 관하여 본 명세서에 전문이 참조됨)를 참고할 수 있다.The coding sequence of human recombinant B-domain deleted FVIII was obtained by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) from poly A RNA (Clontech) in human liver using FVIII-specific primers. The FVIII sequence contains the original signal sequence for FVIII. The B domain deletion was obtained by deleting the entire 2682 bp from serine 743 (S743; 2287 bp) to glutamine 1638 (Q1638; 4969 bp). In this regard, reference may be made to Example 1, FIG. 1, Table 2A and US Pat. Nos. 7,404,956 and 7,348,004 (incorporated herein in their entirety with respect to the structure and preparation of this protein).

인간 재조합 Fc의 암호화 서열은 Fc 특이적 프라이머를 사용하여 인간 백혈구의 cDNA 라이브러리(Clontech)로부터 RT-PCR을 하여 얻었다. 프라이머는 B 도메인 결실 FⅧ 서열이 개재 링커 없이 Fc의 N 말단에 직접 융합하도록 설계되었다. FⅧFc DNA 서열은 CMV 프로모터의 조절 하 포유류의 이중 발현 벡터 pBUDCE4.1(Invitrogen)에 클로닝되었다. 마우스 Igκ 신호 서열을 포함한 제2 일치 Fc 서열은 RT-PCR에 의해 얻어지며, 발현 벡터 pBUDCE4.1에서 제 2 프로모터, EF1α의 하류에 클로닝된다.The coding sequence of human recombinant Fc was obtained by RT-PCR from the cDNA library of human leukocytes (Clontech) using Fc specific primers. Primers were designed such that the B domain deleted FVIII sequence fused directly to the N terminus of the Fc without intervening linkers. The FⅧFc DNA sequence was cloned into the mammalian dual expression vector pBUDCE4.1 (Invitrogen) under the control of the CMV promoter. The second consensus Fc sequence comprising the mouse Igκ signal sequence is obtained by RT-PCR and cloned downstream of the second promoter, EF1α in the expression vector pBUDCE4.1.

rFⅧFc 발현 벡터는 Lipifectamine 2000 형질감염 시약(Invitrogen)을 사용하여 인간 태아 신장 293 세포(HEK293H; Invitrogen)로 형질감염시켰다. 안정된 복제 세포주를 Zeocin(Invitrogen)으로 선별하여 생성하였다. 하나의 복제 세포주, 3C4-22를 사용하여 생체내 특성화를 위한 FⅧFc를 생성하였다. 재조합 FⅧFc은 Biogen Idec(매사추세츠주 캠브릿지에 소재)으로 제조 및 분리하였다(문헌[McCue JT, et al., J. Chromatogr. A 2009;7824-7830], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 상술한 형질 감염 전략은 3개의 산물, 예를 들어 단량체 rFⅧFc 하이브리드, 이량체 rFⅧFc 하이브리드 및 이량체 Fc를 생성할 것으로 기대하였다. 그러나 조절 배지 상에서는 이들 세포들로부터 발견된 이량체 rFⅧFc가 본질적으로 없었다. 차라리, 조절 배지는 Fc 및 단량체 rFⅧFc를 포함하였다. 이량체 rFⅧFc의 크기가 너무 커서 세포로부터 분비되는 것을 방해할 수도 있다. 이 결과는 모든 3개의 단백질이 존재할 때보다 복잡하지 않게 단량체를 분리가능하게 하므로 유리하였다. 이들 연구에 사용된 재료는 대략 9,000 IU/mg의 특이적 활성을 갖는다. 게다가, 이들 인간 세포들은 본 실험에서 시도된 다른 세포들에서보다 높은 단백질 수준을 얻는다.rFⅧFc expression vectors were transfected with human fetal kidney 293 cells (HEK293H; Invitrogen) using Lipifectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen). Stable replicate cell lines were generated by selection with Zeocin (Invitrogen). One replicate cell line, 3C4-22, was used to generate FVIIFc for in vivo characterization. Recombinant FVFc was prepared and isolated by Biogen Idec (Cambridge, Mass.) (McCue JT, et al., J. Chromatogr. A 2009; 7824-7830, incorporated herein by reference in its entirety). The transfection strategy described above was expected to produce three products, for example the monomeric rFⅧFc hybrid, the dimeric rFⅧFc hybrid and the dimeric Fc. However, there was essentially no dimer rFⅧFc found in these cells on the control medium. Rather, the control medium contained Fc and the monomers rFⅧFc. The size of the dimer rFⅧFc may be too large to interfere with secretion from the cells. This result was advantageous because the monomer was separable not more complicated than when all three proteins were present. The materials used in these studies have a specific activity of approximately 9,000 IU / mg. In addition, these human cells obtain higher protein levels than in other cells attempted in this experiment.

재조합 FⅧRecombinant FⅧ FcFc

재조합 B 도메인 결실 FⅧ(ReFacto(등록상표))는 Novis Pharmaceutical에서 구입하였고, 제조업자의 설명서에 따라서 제조하였다. ReFacto(등록상표)(재조합 B 도메인 결실 FⅧ)은 서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438과 동일한 아미노산 서열을 갖는다.Recombinant B domain deletion FVII (ReFacto®) was purchased from Novis Pharmaceutical and prepared according to the manufacturer's instructions. ReFacto® (Recombinant B domain deleted FVII) has the same amino acid sequence as amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2.

A형 혈우병 동물Hemophilia A animals

A형 혈우병 마우스는 펜실베니아 대학의 Kazazian 박사로부터 얻었고 Syntonix에서 키운, 129 x B6 배경의 FⅧ 엑손 16 녹아웃 개체들(FⅧ exon 16 knockouts on a 129 x B6 background)이다(문헌[Bi L, et al., Nat. Genet. 1995;10(1):119-121], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 이들 마우스는 연장된 전혈 응고 시간(>60 분)을 보여주므로, 중증의 A형 혈우병의 좋은 모델이다. Hemophilia A mice were obtained from Dr. Kazazian of the University of Pennsylvania and grown on Syntonix, FⅧ exon 16 knockouts on a 129 x B6 background (Bi L, et al., Nat. Genet. 1995; 10 (1): 119-121, incorporated herein by reference in its entirety. These mice show extended whole blood clotting time (> 60 minutes), which is a good model of severe hemophilia A.

A형 혈우병 개는 노스캐롤리나 대학의 Francis Owen Blood Research Laboratory에 보관된 근친교배 콜로니로부터 얻었다(문헌[Graham, JB, et al., J. Exp. Med. 1949;90:97-111], 본 명세서에서 전문이 참조됨). 이 개들은 인간의 심각한 질병 형태에 비견될 수 있는 심각한 혈우병의 표현형을 갖는다(문헌[Graham, JB, et al., J. Exp. Med. 1949;90:97-111; Lozier, JN, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2002;99:12991-12996], 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨).Hemophilia A dogs were obtained from inbreeding colonies stored in the Francis Owen Blood Research Laboratory at the University of North Carolina (Graham, JB, et al., J. Exp. Med. 1949; 90: 97-111). Is referenced in its entirety). These dogs have a severe hemophilia phenotype that can be comparable to a serious form of human disease (Graham, JB, et al., J. Exp. Med. 1949; 90: 97-111; Lozier, JN, et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. 2002; 99: 12991-12996, each of which is incorporated herein by reference in their entirety).

연구 설계Study design

A형 혈우병 마우스 연구Hemophilia A mouse study

전혈 응고 시간(WBCT) 동안 rFⅧFc 및 ReFacto(등록상표)의 효과를 FⅧ-결핍 마우스에서 연구하였다. 각 단백질은 50 IU/㎏으로 정맥 투여되었고, 각각의 마우스는 투여 전 및 투여 후 다양한 시점에서 각 마우스 꼬리의 정맥으로부터 혈액을 채취하였다. 혈액 샘플을 37℃에서 마이크로튜브 내에서 배양하였고, 덩어리 존재하는지 여부를 1분당 1회로 외관을 관찰하였다. 60분 동안 덩어리 형성이 없는 경우, 응고 시간은 60분 초과로 기록된다. 정상 마우스로부터 채취한 혈액은 WBCT 에세이 상에서 대략 4분 내 응고한다(2-7분 범위, n=10 마우스).The effects of rFⅧFc and ReFacto® during whole blood clotting time (WBCT) were studied in FⅧ-deficient mice. Each protein was administered intravenously at 50 IU / kg and each mouse was drawn blood from the veins of each mouse tail before and after the administration at various time points. Blood samples were incubated in microtubes at 37 ° C. and appearance was observed once per minute to see if lumps were present. If there is no lump formation for 60 minutes, the solidification time is recorded above 60 minutes. Blood from normal mice clots within approximately 4 minutes on a WBCT assay (range 2-7 minutes, n = 10 mice).

제2 세트의 연구에서는, A형 혈우병 마우스에 50 IU/㎏의 rFⅧFc, ReFacto(등록상표),및 Advate(등록상표)을 1회 정맥 투여하였다(시점마다 4마리의 마우스). 투여 후 0.25, 8, 24, 48 및 72 시간에 1/10 부피의 3.2% 시트르산 나트륨을 주사한 후 심장천자로 혈액을 채취하였다. 혈장을 준비하고 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이를 사용하여 FⅧ 활성에 대한 분석을 할 때까지 -80℃에서 보관하였다.In a second set of studies, type I hemophilia mice were administered once intravenously with 50 IU / kg of rF_Fc, ReFacto® , and Advate® (4 mice per time point). Blood was collected by cardiac puncture after injection of 1/10 volume of 3.2% sodium citrate at 0.25, 8, 24, 48 and 72 hours after administration. Plasma was prepared and stored at −80 ° C. until analysis for FVIII activity using an FVIII-specific chromogenic activity assay.

A형 혈우병 개의 연구Hemophilia A Dogs

rFⅧ의 단일 투여 RK/PD 연구에서는, Chapel Hill colony로부터 얻은 2마리의 A형 혈우병 개에 125 IU/㎏로 1회 정맥 투여하고, 투여 전 및 투여 후 WBCT, 활성화된 부분 혈액응고 시간(activated partial thromboplastin time; aPTT), FⅧFc 혈장 농도, 혈액학 및 혈청 화학를 위해 선별된 시점에서 혈액을 채취하였다. WBCT를 위한 시점들은 투여 전, 및 투여 후 5 및 30분 및 1, 2, 4, 8, 24, 32, 48, 72, 96, 144 및 168시간을 포함한다. 혈액 응고 활성(aPTT) 및 FⅧFc 혈장 내 농도를 위한 혈액 채취는 WBCT를 위해 상기에 나열한 시점뿐만 아니라 투여 후 15분 및 3, 6, 12시간을 포함한다.In a single-dose RK / PD study of rFVIII, two dogs of type A hemophilia from the Chapel Hill colony were administered once intravenously at 125 IU / kg, WBCT, activated partial blood clotting time before and after dosing. Blood was collected at selected time points for thromboplastin time (aPTT), FⅧFc plasma concentration, hematology and serum chemistry. The time points for WBCT include 5 and 30 minutes and 1, 2, 4, 8, 24, 32, 48, 72, 96, 144 and 168 hours before and after administration. Blood sampling for blood coagulation activity (aPTT) and FⅧFc plasma concentrations includes the time points listed above for WBCT as well as 15 minutes and 3, 6, 12 hours after administration.

제 2 연구는 ReFacto(등록상표)를 정맥 주입하여 수행되었다(M12 개에 대해서는 114 IU/㎏, 및 M38 개에 대해서는 120 IU/㎏). 혈액 응고 시간이 20분 이상이 될 때까지(FⅧ:C > 1%에 해당) WBCT를 측정하였고, 그 후 125 IU/㎏의 rFⅧFc을 동일한 개에 정맥 투여하고, WBCT, aPTT, FⅧFc 혈장 내 농도, 혈액학 및 혈청 화학을 위해 혈액 샘플을 채취하였다. WBCT를 위한 시점들은 투여 전, 및 투여 후 5 및 30분 및 1, 2, 4, 8, 24, 32, 48, 72시간을 포함한다. 또한 FⅧFc 투여 후 96, 120, 144 및 168시간에 혈액을 채취한다. 혈액 응고 활성 및 FⅧFc 혈장 내 농도를 위한 혈액 채취는 WBCT를 위해 상기에 나열한 시점뿐만 아니라 투여 후 15분 및 3, 6, 12시간을 포함한다.The second study was performed intravenously with ReFacto® (114 IU / kg for M12 dogs and 120 IU / kg for M38 dogs). WBCT was measured until blood clotting time was greater than 20 minutes (corresponding to FⅧ: C> 1%), followed by intravenous administration of 125 IU / kg of rFⅧFc to the same dog and concentrations in WBCT, aPTT, and FⅧFc plasma. Blood samples were taken for hematology and serum chemistry. The time points for WBCT include 5 and 30 minutes and 1, 2, 4, 8, 24, 32, 48, 72 hours before and after administration. Blood is also collected at 96, 120, 144 and 168 hours after FⅧFc administration. Blood collection for blood coagulation activity and concentrations in FⅧFc plasma includes 15 minutes and 3, 6, 12 hours after administration as well as the time points listed above for WBCT.

A형 혈우병 개에서의 WBCT 공정은 A형 혈우병 마우스에서와는 조금 다르다. rFⅧFc 또는 ReFacto(등록상표)의 투여 후, 여러 시점에서 1ml의 혈액을 채취하여 0.5ml씩 2개의 실리콘 처리된 유리관에 분배한 후 28℃의 수조 내에 놓아둔다. 1분이 될 때 시작해서, 한 시험관은 30초마다 한번씩 기울여주고, 다른 하나는 분산하지 않고 그냥 두었다. 기울여준 시험관에 덩어리가 생길 때, 다른 시험관을 매 30초마다 덩어리가 생길 때까지 기울여주었다. 다른 시험관에 완전 겔화된 덩어리가 생기는 시간을 WBCT로 기록하였다.The WBCT process in hemophilia A dogs is slightly different from that in hemophilia mice. After administration of rFⅧFc or ReFacto®, 1 ml of blood is collected at various time points, dispensed into 0.5 ml of two siliconized glass tubes and placed in a 28 ° C. water bath. Starting at 1 minute, one examiner leaned once every 30 seconds, leaving the other undispersed. When lumps were formed in the tilted test tube, the other test tubes were tilted every 30 seconds until the mass formed. The time at which fully gelled masses formed in other tubes was recorded by WBCT.

혈장 내 FⅧ 활성FⅧ activity in plasma

FⅧ-특이적 FVII-specific 발색Color 에세이에 의한  By essay 혈장내In plasma FⅧ 활성의 측정 Measurement of FⅧ Activity

FⅧ 활성을 알아보기 위하여, 혈장 샘플을 자동 발색법에 의해 Sysmex CA1500 기기를 사용하여 테스트하였고, 시약은 Siemans Healthcare Diagnostics(텍사스주 달라스에 소재, 키트 #B4238-40)로부터 얻었다. rFⅧFc의 활성은 1.5-0.016 IU/mL 범위의 농도에서, 인간 FⅧ-결핍 혈장(Stago USA)에 투여된 7차 국제 표준 인자 FⅧ 농축물(NIBSC code 99/678)을 사용하여 생성한 표준 곡선을 이용하여 결정하였다.To determine FVIII activity, plasma samples were tested using a Sysmex CA1500 instrument by autochromation and reagents were obtained from Siemans Healthcare Diagnostics (Kit # B4238-40, Dallas, Texas). The activity of rF 활성 Fc was determined using standard curves generated using the 7th international standard factor FV concentrate (NIBSC code 99/678) administered to human FVIII-deficient plasma (Stago USA) at concentrations ranging from 1.5-0.016 IU / mL. Determined using.

ELISAELISA 를 이용한 Using rFrF ⅧⅧ FcFc 또는 FⅧ Or FⅧ FcFc 의 측정Measurement of

ELISAELISA 에 의한 개 혈장에서의 FⅧF in dog plasma by FcFc

A1 도메인에 특이적인 FⅧ 항체(Green Mountain Antibodies:GMA-8002)를 96 웰 플레이트에 코팅하고, 37℃에서 1시간 배양하였다. 코팅된 플레이트를 Tween 20, CaCl2 및 소혈청 알부민을 포함한 Tris-완충 식염수로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 표준, 대조군 및 정상 개 혈장에서 제조한 샘플을 1:10으로 희석하고, 이를 상기 플레이트에 부가하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 상기 플레이트를 씻어낸 후 당나귀(F(ab)’2)항-인간 Fc-HRP(Jackson: 709-036-098)을 첨가하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 씻어낸 후, TMB(BioFx supersensitive substrate: TMBS-0100-01)을 상기 플레이트에 첨가하고, 기질 반응을 산으로 중단하고(quench) 흡광도를 SpectraMax Plus 플레이트 판독기(Molecular Devices)로 450㎚에서 측정하였다.FVII antibodies specific for the A1 domain (Green Mountain Antibodies: GMA-8002) were coated on 96 well plates and incubated at 37 ° C. for 1 hour. The coated plate was blocked with Tris-buffered saline containing Tween 20, CaCl 2 and bovine serum albumin for 1 hour at room temperature, and then the samples prepared in standard, control and normal dog plasma were diluted 1:10, which In addition to the plate was incubated for 1 hour at 37 ℃. The plate was washed and then incubated at 37 ° C. for 1 hour with the addition of donkey (F (ab) ′ 2 ) anti-human Fc-HRP (Jackson: 709-036-098). After washing, TMB (BioFx supersensitive substrate (TMBS-0100-01) was added to the plate, the substrate reaction was quenched with acid and absorbance measured at 450 nm with SpectraMax Plus plate reader (Molecular Devices).

ELISAELISA 에 의한 개 혈장에서의 In dog plasma by ReFacto(등록상표)ReFacto (registered trademark)

중사슬 상의 A1 도메인에 특이적인 항-FⅧ 항체(Green Mountain Antibodies: GMA-8002)를 96 웰 플레이트에 코팅하고 실온에서 2시간 배양하였다. 코팅된 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 블로킹하고 씻어낸 후, 표준, 대조군 및 샘플을 정상인 개의 혈장에서 준비한 다음 1:10으로 희석하고, 이를 상기 플레이트에 부가하여 실온에서 2시간 배양하였다. 상기 플레이트를 씻어낸 후 탐지(detection) 항체, 미리 희석한 항-FⅧ 겨자무 과산화효소 컨쥬게이트(horseradish peroxidase conjugate)(Affinity Biologicals: F8C-EIA-D)로 처리한 후 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 씻어낸 후, TMB(BioFx supersensitive substrate: TMBS-0100-NN01)을 상기 플레이트에 10분간 첨가한다. 기질 반응을 산으로 중단하고, SpectraMax Plus 플레이트 판독기(Molecular Devices)로 450㎚에서 신호를 측정하였다.Anti-FVIII antibodies (Green Mountain Antibodies: GMA-8002) specific for the A1 domain on the heavy chain were coated in 96 well plates and incubated for 2 hours at room temperature. After the coated plate was blocked and washed for 1 hour at 37 ° C., the standard, control and samples were prepared in plasma of normal dogs and then diluted to 1:10 and added to the plate and incubated at room temperature for 2 hours. The plates were washed and treated with detection antibodies, pre-diluted anti-FⅧ horseradish peroxidase conjugate (Affinity Biologicals: F8C-EIA-D) and incubated at room temperature for 1 hour. . After rinsing, TMB (BioFx supersensitive substrate: TMBS-0100-NN01) is added to the plate for 10 minutes. Substrate reaction was stopped with acid and signal measured at 450 nm with SpectraMax Plus plate reader (Molecular Devices).

피브리노겐(Fibrinogen ( FibrinogenFibrinogen )의 측정)

혈장내 피브리노겐의 농도를 HemosILTM PT-Fibrinogen-HS 시약(매사추세츠주 렉싱턴시에 소재한 Instrumentation Laboratory, 카탈로그 0008468210호) 및 ACL 7000 Coagulation Analyzer(Beckman Coulter)를 포함한 키트를 사용하여 제조업자의 설명서에 따라서 Esoterix(노스캐롤라이나에 소재한 Research Triangle Park)에서 측정하였다.The concentration of fibrinogen in plasma was determined using Esoterix (Esoterix) kit using HemosIL ™ PT-Fibrinogen-HS reagent (Instrumentation Laboratory, Lexington, Mass., Catalog 0008468210) and ACL 7000 Coagulation Analyzer (Beckman Coulter), according to the manufacturer's instructions. The measurements were taken at Research Triangle Park, North Carolina.

혈소판의 측정Measurement of platelets

종 특이적 스마트 카드(일리노이주 거니에 소재한 SCIL Animal Care Co.)로 프로그램된 Vet-ABC-Diff Hematology Analyzer를 사용하여 자동화된 방법으로 EDTA 항-응고된 전체 혈액에서 혈소판을 측정하였다.Platelets were measured in EDTA anti-coagulated whole blood by an automated method using a Vet-ABC-Diff Hematology Analyzer programmed with a species specific smart card (SCIL Animal Care Co., Gunni, Ill.).

약동학적 분석Pharmacokinetic Analysis

약동학적 변수는 Pharsight, 버전 5.2(캘리포니아 마운틴 뷰)의 WinNonlin 소프트웨어를 사용하여 비구획 분석법(noncompartmental analysis)으로 계산하였다. PK 변수는 혈장내 최대 농도(Cmax), 혈장 내 농도 대 시간 곡선의 아래 면적(AUC), 제거 반감기(t1 /2), 분배 부피(Vss) 및 클리어런스(Cl)을 포함한다.Pharmacokinetic parameters were calculated by noncompartmental analysis using WinNonlin software from Pharsight, version 5.2 (Mountain View, California). The PK parameters included the maximum plasma concentration (C max), area under the plasma concentration vs. time curve (AUC), elimination half-life (t 1/2), volume of distribution (Vss) and clearance (Cl).

결과result

재조합 FⅧ-Recombinant FⅧ- FcFc

rFⅧFc는 인간 B 도메인 결실 FⅧ을 개재 링커 서열 없이 인간 IgG1의 Fc와 융합한 재조합 융합체이다(rFⅧFc; 도 1).rF′Fc is a recombinant fusion in which human B domain deletion F ′ is fused with Fc of human IgG1 without an intervening linker sequence (rF′Fc; FIG. 1).

분리된 rFⅧFc는 발색 활성 에세이를 사용하여 결정하면 대략 9000 IU/mg의 특이 활성도를 갖는다. 재조합 B 도메인 결실 FⅧ(ReFacto(등록상표))은 9100-13700 IU/mg의 보고된 특이 활성도를 갖는다. FⅧFc와 ReFacto(등록상표)의 크기 차이(각각 216kDa 및 170kDa)를 고려하기 위하여 IU/nmol로 특이 활성을 변환하는 경우, 두 단백질이 대략 동등한 특이 활성(rFⅧFc에 대해서는 1970 IU/nmol, 및 ReFacto(등록상표)에 대해서는 1521-2287 IU/nmol)을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서 rFⅧFc의 FⅧFc 활성은 인간 FⅧFc의 C 말단을 인간 Fc의 N 말단에 융합하는 것에 의해 영향을 받지 않는다.Isolated rFⅧFc has a specific activity of approximately 9000 IU / mg, as determined using the chromogenic activity assay. Recombinant B domain deletion FVIII (ReFacto®) has a reported specific activity of 9100-13700 IU / mg. When converting specific activity to IU / nmol to account for the size difference between FⅧFc and ReFacto® (216kDa and 170kDa, respectively), the two proteins are approximately equivalent specific activity (1500 IU / nmol for rFⅧFc, and ReFacto ( Trademark), 1521-2287 IU / nmol). Thus the FⅧFc activity of rFⅧFc is not affected by fusion of the C terminus of human FⅧFc to the N terminus of human Fc.

A형 혈우병 마우스로의 투여Administration to Hemophilia A mice

rFⅧFc 또는 ReFacto(등록상표) 50 IU/㎏를 FⅧ-결핍 마우스(n=6/그룹)에 1회 정맥 투여하였다. 혈액 샘플을 투여 전 및 투여 후 120 시간에 걸쳐 채취하여, 상기 재료 및 방법에서 설명한 바와 같이 WBCT를 결정하였다. 기준 WBCT는 60분 초과이다. 대표적 실험으로부터 얻은 데이터는 도 2 및 표 3에 나타나있다. rFⅧFc 또는 ReFacto(등록상표)중 어느 하나를 투여한 직후, WBCT는 2-17분으로 수정되었다. ReFacto(등록상표)로 처리한 마우스의 혈액이 42시간까지는 혈액 응고 능력을 상실한 반면, rFⅧFc로 처리한 모든 마우스의 혈액은 96시간에서 여전히 혈액 응고를 하였고, 6마리 중 한 마리의 혈액이 113 시간에서 혈액 응고를 하나, 120 시간이 되면 모두가 혈액 응고 능력을 상실하였다. 이들 데이터는 rFⅧFc에 대한 효과가 ReFacto(등록상표)에 대해서보다 대략 2 내지 3배 더 길게 지속된다는 것을 암시한다.rFⅧFc or ReFacto® 50 IU / kg was administered once intravenously to FVIII-deficient mice (n = 6 / group). Blood samples were taken before and over 120 hours after dosing to determine WBCT as described in the materials and methods above. Baseline WBCT is greater than 60 minutes. Data from representative experiments are shown in FIG. 2 and Table 3. Immediately after administration of either rFⅧFc or ReFacto® WBCT was corrected to 2-17 minutes. The blood of mice treated with ReFacto® lost blood coagulation capacity up to 42 hours, whereas the blood of all mice treated with rFⅧFc still coagulated at 96 hours, with one blood out of 6 113 hours At 120 hours, everyone lost blood clotting ability. These data suggest that the effect on rFⅧFc lasts approximately 2 to 3 times longer than for ReFacto®.

rFⅧFc, ReFacto(등록상표) 또는 Advate(등록상표)(전장 재조합 FⅧ)의 발색 활성을 50 IU/㎏의 1회 정맥 투여 후의 FⅧ-결핍 마우스에서 연구하였다. 혈액을 투여 전 및 투여 후 8, 24, 48 및 72시간에서 채취하였다. 활성을 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이를 사용하여 측정하여, 도 3에 나타내었다. 약동학적 변수는 표 4에 보고되었다. rFⅧFc에 대한 순환 반감기는 Advate(7시간) 및 ReFacto(등록상표)(5시간)에 비하여 대략 1.6 내지 2배 더 길었다(11.1 시간). Cmax는 Advate(등록상표)에서 0.47±0.30 IU/ml 및 ReFacto(등록상표)에서 0.67±0.44 IU/ml인 것에 비해, rFⅧFc에서는 1.6±0.36 IU/ml이었다. A형 혈우병 마우스에서, rFⅧFc의 전신 노출은 Advate(등록상표)(3.90 hr.IU/ml) 및 ReFacto(등록상표)(6.94 hr.IU/ml)에 비하여, rFⅧFc에서 매우 크고(22.6 hr.IU/ml), rFⅧFc에 대한 클리어런스는 Advate(등록상표)(12.8 ㎖/hr/㎏) 및 ReFacto(등록상표)(7.2 ㎖/hr/㎏) 모두에 비하여, 현저히 낮았다(2.09 ㎖/hr/㎏).The chromogenic activity of rFⅧFc, ReFacto® or Advate® (full length recombinant FVIII) was studied in FVIII-deficient mice after a single intravenous administration of 50 IU / kg. Blood was taken before and at 8, 24, 48 and 72 hours after dosing. Activity was measured using a FVII-specific chromogenic activity assay, shown in FIG. 3. Pharmacokinetic parameters are reported in Table 4. The circulatory half-life for rFⅧFc was approximately 1.6 to 2 times longer (11.1 hours) compared to Advate (7 hours) and ReFacto® (5 hours). C max was 1.6 ± 0.36 IU / ml for rFⅧFc, compared to 0.47 ± 0.30 IU / ml for Advate® and 0.67 ± 0.44 IU / ml for ReFacto®. In hemophilia A mice, systemic exposure of rFⅧFc was much higher in rFⅧFc (22.6 hr.IU) compared to Advate® (3.90 hr.IU / ml) and ReFacto® (6.94 hr.IU / ml). / ml), clearance for rFⅧFc was significantly lower (2.09 ml / hr / kg) compared to both Advate® (12.8 ml / hr / kg) and ReFacto® (7.2 ml / hr / kg). .

A형 혈우병 개에 대한 투여Dosage for hemophilia A dogs

rFⅧFc의 약역학(PD) 및 약동학(PK)을 Chapel Hill colony에서 얻은 A형 혈우병 개에서 연구하였다. 125 IU/㎏의 rFⅧFc를 4마리의 A형 혈우병 개 각각에 1회 정맥 투여하면 WBCT는 즉시 정상으로 수정되었다(도 4). 정상 개에서의 WBCT 범위는 8-12분이다. WBCT는 20분 이하를 유지하며, 이는 72시간에 걸쳐 20분 미만의 WBCT를 갖는 한 마리의 개를 제외하고 대략 96 시간에 걸쳐 FⅧ:C > 1%에 해당하는 시간이다. 게다가, aPTT도 즉시 정상으로 수정되었다(표 6). 혈장 내 rFⅧFc의 농도는, 분자의 FⅧ 및 Fc 부분 모두를 탐지하도록 고안된 특이적 ELISA를 사용하여 측정하였다. 혈장 내 농도 대 시간 곡선은 도 5에 나타낸다. 데이터의 PK 분석은 t1 /2가 15.7±1.7 시간임을 보여준다(표 5). FⅧ-특이적 발색 활성 에세이를 사용하여 rFⅧFc를 측정할 경우(t1 /2= 15.4±3 시간, 표 5)에도 유사한 결과를 얻었으며, 혈장 내 농도 대 시간 곡선은 양쪽 방법 모두를 사용해도 유사하였다(도 5 및 6). 활성도 데이터를 rFⅧFc에 대한 특이적 활성을 이용하여 IU/ml에서 ng/㎖로 변환하면, ELISA 데이터와 좋은 연관성이 있으며, 이로 인하여 ELISA로 측정된 단백질이 완전 활성화되었다는 것을 입증하였다.The pharmacodynamics (PD) and pharmacokinetics (PK) of rFⅧFc were studied in hemophilia A dogs obtained from Chapel Hill colony. Once intravenously administered 125 IU / kg rFⅧFc to each of four hemophilia A dogs, WBCT immediately corrected to normal (FIG. 4). The WBCT range in normal dogs is 8-12 minutes. The WBCTs remain below 20 minutes, corresponding to FⅧ: C> 1% over approximately 96 hours, except for one dog with less than 20 minutes of WBCT over 72 hours. In addition, aPTT was also immediately corrected to normal (Table 6). The concentration of rFⅧFc in plasma was measured using a specific ELISA designed to detect both the FⅧ and Fc portions of the molecule. Plasma concentration versus time curves are shown in FIG. 5. PK analysis shows that the data is t 1/2 is 15.7 ± 1.7 hours (Table 5). Use FⅧ- specific chromogenic activity assay when measuring rFⅧFc (t 1/2 = 15.4 ± 3 hours, Table 5) were obtained in a similar result, the plasma concentration versus time curve is similar to FIG using both methods (FIGS. 5 and 6). The conversion of activity data from IU / ml to ng / ml using the specific activity for rFcFc correlates well with the ELISA data, demonstrating that the protein measured by ELISA is fully activated.

rFⅧFc로 처리된 2마리의 개도 또한 rFⅧFc 투여 72시간 전에, ReFacto(등록상표)을 M12 개에 대해서는 114 IU/㎏, M38 개에 대해서는 120 IU/㎏로 1회 투여받았다. WBCT 및 aPTT는 ReFacto(등록상표)로 투여한 직후 정상으로 수정되었다. 그러나 rFⅧFc 1회 투여 후의 WBCT 정상화는, ReFacto(등록상표)에 비해 대략 2배 더 길게 지속되었다(도 4). 나아가, rFⅧFc의 혈장내 반감기(15.7±1.7 시간)는 혈장내 단백질 농도를 ELISA로 측정할 때 ReFacto(등록상표)에(7.0 및 6.7 시간) 비해 rFⅧFc에서 대략 2배 더 길었다(표 5). 비슷한 결과는 두 분자를 FⅧ-특이적 발색 활성에 의해 측정하는 경우에도 얻을 수 있었다.Two dogs treated with rF_Fc also received ReFacto® once at 114 IU / kg for M12 and 120 IU / kg for M38 dogs 72 hours prior to rF_Fc administration. WBCT and aPTT were corrected to normal immediately after administration with ReFacto®. However, WBCT normalization after one dose of rFⅧFc lasted approximately twice as long as ReFacto® (FIG. 4). Furthermore, the plasma half-life (15.7 ± 1.7 hours) of rF1.7Fc was approximately twice as long in rFⅧFc as compared to ReFacto® (7.0 and 6.7 hours) when plasma protein concentrations were measured by ELISA (Table 5). Similar results were obtained when both molecules were measured by FVIII-specific chromogenic activity.

트롬보겐화(thrombogenicity)의 잠재적 위험을 조사하기 위하여, 혈소판 및 피브리노겐을 측정하였다. rFⅧFc 또는 ReFacto(등록상표)중 어느 하나를 투여한 후, 혈소판 수 및 혈장내 피브리노겐 농도는 투여 전의 수치에서 변하지 않았다(데이타 미도시).Platelets and fibrinogen were measured to investigate the potential risk of thrombogenicity. After administration of either rFⅧFc or ReFacto®, platelet count and plasma fibrinogen concentration did not change from pre-administration values (data not shown).

논의Argument

안정적으로 형질감염된 세포주로부터 얻은 인간 태아 신장 293 세포(HEK 293)에서 재조합 FⅧFc를 생성하였고, 세포 배양 배지로부터 분리되었다. 인간 세포주에서 제조는 중국 헴스터 난소 세포 또는 유아 헴스터 신장 세포 중 어느 하나에서 생성되는 시판 중인 rFⅧ 산물과 비교할 때 제조상의 큰 변화를 보여준다. 이 변화의 이유는 인간 세포가 이 분자의 FⅧ 부분에 필요한 번역 후 변이(post-translational modification)의 수행하는데 최적으로 구비된 것으로 기대되기 때문이다.Recombinant FVIIFc was generated in human fetal kidney 293 cells (HEK 293) obtained from stably transfected cell lines and isolated from cell culture medium. Preparation in human cell lines shows significant manufacturing changes when compared to the commercially available rFVIII products produced in either Chinese hempster ovary cells or infant hempster kidney cells. The reason for this change is that human cells are expected to be optimally equipped to perform the post-translational modifications required for the FVIII portion of the molecule.

rFⅧFc 및 재조합 B 도메인 결실 FⅧ(ReFacto(등록상표))의 분자량의 차이를 고려하기 위하여 특이적 활성을 IU/nmol로 변환시키는 경우, 특이적 활성이 양쪽 단백질에서 유사하다는 것을 알 수 있다(rFⅧFc에 대하여 1970 IU/nmol, 및 ReFacto(등록상표)에 대하여 1521-2287 IU/nmol). FⅧ의 C1 및 C2 도메인이 전체 FⅧ의 활성에 필수적인 인지질 결합에 관여하므로, FⅧ의 C 말단을 Fc의 N 말단과 융합해도 rFⅧFc의 특이적 활성에 영향이 없다는 것은 다소 놀라운 일이다(문헌[Fay, PJ, J. Hematology 83:103-8 (2006) 및 Raut, S, et al., Br. J. Haematol. 107:323 (1999)], 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨).In order to account for the difference in molecular weight between rFⅧFc and recombinant B domain deletion FⅧ (ReFacto®), it can be seen that the specific activity is similar in both proteins (rFⅧFc). 1970 IU / nmol, and 1521-2287 IU / nmol for ReFacto®. Since the C1 and C2 domains of FVIII are involved in phospholipid binding, which is essential for the activity of the entire FVIII, it is rather surprising that fusion of the C terminus of FVIII with the N terminus of Fc does not affect the specific activity of rFVFc (Fay, PJ, J. Hematology 83: 103-8 (2006) and Raut, S, et al., Br. J. Haematol. 107: 323 (1999), each of which is incorporated herein by reference in their entirety).

A형 혈우병의 치료는 출혈 사례시의 주문형 치료이거나 또는 출혈 방지를 위한 예방으로 이루어진다. 주문형 치료가 여전히 자주 이용되기는 하나, 예방 및 관절 손상 방지를 지향하는 경향이 있다(문헌[Blanchette P, et al., Haemophilia 2004: 10;679-683, Manco-Johnson, MJ, et al., N. Engl. J. Med. 2007;357:535-544], 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨). 현재의 FⅧ 산물은 비교적 짧은 10-12시간의 반감기 때문에, 환자에게서 1% 초과의 FⅧ:C를 유지하기 위한 예방을 위하여 매 2 내지 3일마다 한 번씩 투여된다(문헌[Morfini, M, Haemophilia 2003;9 (suppl 1):94-99;discussion 100, White GC, et al., Thromb. Haemost. 1997:77:660-7, Blanchette, P, et al., J. Thromb. Haemost. 2008 Aug;6(8):1319-26], 상기 각각은 본 명세서에서 전문이 참조됨). 출혈로부터의 지속된 보호를 제공하는 지속성 FⅧ 치료법은, A형 혈우병 환자들의 삶의 질을 크게 개선시킬 것이다. 응고 인자의 반감기를 연장하기 위한 전략은, 페길화(문헌[Rostin J, et al., Bioconj. Chem. 2000;11:387-96], 본 명세서에 전문이 참조됨), 당-폐길화(glycopegylation)(문헌[Stennicke HR, et al., Thromb. Haemost. 2008;100:920-8], 본 명세서에 전문이 참조됨), 페길화된 리포솜으로 제형화(formulation with pegylated liposomes)(문헌[Spira J, et al., Blood 2006;108:3668-3673, Pan J, et al., Blood 2009;114:2802-2811], 본 명세서에 전문이 참조됨) 및 알부민과 컨쥬게이션(conjugation with albumin)(문헌[Schulte S., Thromb. Res. 2008;122 Suppl 4:S14-9], 본 명세서에 전문이 참조됨)을 포함하여 다른 분자에도 성공적이었던 것을 포함한다. 페길화는 클리어런스를 감소시키기 위한 접근법으로 보이나, 생체 내에서 변이의 효과는 현재 알려져 있지 않다. 생체 내에서 FⅧ에 대한 직접적 폐길화의 결과가 현재 알려져 있지 않으나, 페길화된 리포좀으로 제형화된 FⅧ는 임상적으로 연구되어 있고, 출혈 시기에 영향을 주지 않는 완화된 모습을 보여준다(문헌[Spira J, et al., Blood 2006;108:3668-3673, Spira J, et al., Thromb. Haemost. 2008 Sep;100(3):429-34], 본 명세서에서 전문이 참조됨).Treatment of hemophilia A consists of on-demand treatment in cases of bleeding or prevention of bleeding. While on-demand treatment is still frequently used, it tends to be directed towards prevention and prevention of joint damage (Blanchette P, et al., Haemophilia 2004: 10; 679-683, Manco-Johnson, MJ, et al., N Engl. J. Med. 2007; 357: 535-544, each of which is incorporated herein by reference in their entirety). Because the current FVIII product has a relatively short 10-12 hour half-life, it is administered once every two to three days for prevention to maintain> 1% FVIII: C in patients (Morfini, M, Haemophilia 2003 9 (suppl 1): 94-99; discussion 100, White GC, et al., Thromb. Haemost. 1997: 77: 660-7, Blanchette, P, et al., J. Thromb. Haemost. 2008 Aug; 6 (8): 1319-26, each of which is incorporated herein by reference in its entirety). Sustained FVII therapy, which provides continued protection from bleeding, will greatly improve the quality of life of patients with type A hemophilia. Strategies for extending the half-life of coagulation factors include PEGylation (Rostin J, et al., Bioconj. Chem. 2000; 11: 387-96, incorporated herein by reference in its entirety), sugar-lungylation ( glycopegylation) (Stennicke HR, et al., Thromb. Haemost. 2008; 100: 920-8, incorporated herein by reference in its entirety), formulation with pegylated liposomes Spira J, et al., Blood 2006; 108: 3668-3673, Pan J, et al., Blood 2009; 114: 2802-2811, herein incorporated by reference in its entirety) and albumin conjugation with albumin ), Which have been successful with other molecules, including (Schulte S., Thromb. Res. 2008; 122 Suppl 4: S14-9, incorporated herein by reference in its entirety). PEGylation appears to be an approach to reducing clearance, but the effects of mutations in vivo are currently unknown. Although the results of direct lung induction to FVIII in vivo are currently unknown, FVIII formulated with PEGylated liposomes has been clinically studied and shows a relaxed appearance that does not affect the timing of bleeding (Spira). J, et al., Blood 2006; 108: 3668-3673, Spira J, et al., Thromb. Haemost. 2008 Sep; 100 (3): 429-34, herein incorporated by reference in its entirety).

FⅧ의 반감기를 연장하기 위한 본 발명의 접근은 IgG1의 Fc 도메인에 FⅧ를 재조합적으로 융합하는 것이다. Fc는 자연적으로 발생하는 수용체, FcRn에 결합되며, 상기 FcRn은 정상적인 기능이 IgG1을 분해로부터 보호하는 것이다. 상술한 결과들은 A형 혈우병 마우스와 A형 혈우병 개에서의 rFⅧFc 산물에 비교한 rFⅧFc의 초기의 약동학 및 효능 특징을 보여준다. 양쪽 종에서, rFⅧFc의 반감기는 FⅧ 활성이나 또는 ELISA(개에서만)으로 측정할 때의 rFⅧFc의 반감기의 대략 2배이다. 이러한 데이터들은 양쪽 동물 모델로부터 얻은 WBCT 결과, 예를 들어 WBCT 상의 rFⅧFc의 효과 지속이 ReFacto(등록상표)에서와 비교하여 대략 2배 길다는 사실과 매우 연관성이 있다. 개에서, Cmax 및 클리어런스는 rFⅧFc 및 ReFacto(등록상표)에서 유사하나, 정상 상태에서 AUC 및 분배 부피는 ReFacto(등록상표)에 비해서 rFⅧFc이 각각 1.5배 및 2배 더 크다. 이 동물 모델에서, ReFacto(등록상표)에 대한 PK 변수는 문헌에서 보고된 값들과 일치한다(문헌[Brinkhous K, et al., Sem. Thromb. Haemost. 2002;28:269-272], 본 명세서에서 전문이 참조됨).The approach of the present invention to extend the half-life of FVIII is to recombinantly fuse FVIII into the Fc domain of IgG1. Fc binds to a naturally occurring receptor, FcRn, which is a normal function that protects IgG1 from degradation. The results above show the early pharmacokinetic and efficacy characteristics of rFⅧFc compared to rFⅧFc products in hemophilia A and hemophilia A dogs. In both species, the half-life of rFⅧFc is approximately twice the half-life of rFⅧFc as measured by FⅧ activity or by ELISA (dog only). These data are highly correlated with the WBCT results from both animal models, for example, that the duration of effect of rFⅧFc on WBCT is approximately twice as long as in ReFacto®. In dogs, C max and clearance are similar in rFⅧFc and ReFacto®, but at steady state the AUC and dispensing volume are 1.5 and 2 times greater than rFⅧFc, respectively, compared to ReFacto®. In this animal model, the PK variable for ReFacto® is consistent with the values reported in the literature (Brinkhous K, et al., Sem. Thromb. Haemost. 2002; 28: 269-272). Is referenced in its entirety).

이러한 발견들이 인체에서 동일한 반감기 연장으로 해석될 수 있다면, 이는 A형 혈우병 환자의 치료에 큰 발전을 보여줄 수 있을 것이다.If these findings could be interpreted as the same half-life prolongation in the human body, this could represent a major advance in the treatment of patients with type A hemophilia.

추가적 참고들(본 명세서에서 전문이 Additional references (full text here 참조됨Referenced ))

Berkner K., Methods Enzymol. 1993;222:450-477.Berkner K., Methods Enzymol. 1993; 222: 450-477.

Bitonti AJ, 및 Dumont JA., Adv. Drug Del. Rev. 2006;58:1106-1118.Bitonti AJ, and Dumont JA., Adv. Drug Del. Rev. 2006; 58: 1106-1118.

Dumont JA, et al., J. Aerosol Med. 2005;18:294-303.Dumont JA, et al., J. Aerosol Med. 2005; 18: 294-303.

Dumont JA, et al., BioDrugs 2006:20:151-160.Dumont JA, et al., BioDrugs 2006: 20: 151-160.

Ellis CN, 및 Krueger GG., N. Engl. J. Med. 2001;345:248-55.Ellis CN, and Krueger GG., N. Engl. J. Med. 2001; 345: 248-55.

Low SC, et al., Hum Reprod. 2005:7:1805-1813.Low SC, et al., Hum Reprod. 2005: 7: 1805-1813.

Manco-Johnson, M., Haemophilia 2007;13 Suppl;2: 4-9.Manco-Johnson, M., Haemophilia 2007; 13 Suppl; 2: 4-9.

Mannucci, PM, 및 Tuddenham, EGD., N. Engl. J. Med. 2001;344:1773-1779.Mannucci, PM, and Tuddenham, EGD., N. Engl. J. Med. 2001; 344: 1773-1779.

Peyvandi F, et al., Haemophilia 2006;12(Suppl 3):82-89.Peyvandi F, et al., Haemophilia 2006; 12 (Suppl 3): 82-89.

Rodriguez-Merchan, EC., Semin. Thromb. Hemost. 2003;29:87-96.Rodriguez-Merchan, EC., Semin. Thromb. Hemost. 2003; 29: 87-96.

Srour MA, et al., Ann. Hematol. 2008; 87:107-12.Srour MA, et al., Ann. Hematol. 2008; 87: 107-12.

[[ 실시예Example 2] 2]

본 연구의 목적은 키노몽구스 원숭이(cynomolgus monkeys)에서 1회의 정맥 투여 후, rFⅧFc 및 BDD-rFⅧ(Xyntha(등록상표))의 약역학 및 약동학을 결정하기 위한 것이다.The purpose of this study was to determine the pharmacokinetics and pharmacokinetics of rFⅧFc and BDD-rFⅧ (Xyntha®) after one intravenous administration in cynomolgus monkeys.

재료 및 방법Materials and methods

rFⅧFc(Biogen Idec.)은 1.2mg/ml 및 9882 IU/ml의 농도의 동결 액상으로 공급받았다. 특이적 활성은 8235 IU/mg이다. -70℃에서 보관하였고, 주사하기 전에 희석하였다.rFⅧFc (Biogen Idec.) was supplied in frozen liquid at concentrations of 1.2 mg / ml and 9882 IU / ml. Specific activity is 8235 IU / mg. Store at −70 ° C. and dilute before injection.

명칭: Xyntha(Novis Pharmaceuticals)은 동결건조된 분말로 공급되며 525 IU/ml의 극소 농도로 용액을 제조하기 위해 제조업자의 설명서에 따라서 용해하였다. 보관은 제조사의 추천 방법에 따랐다.Name: Xyntha (Novis Pharmaceuticals) was supplied in lyophilized powder and dissolved according to the manufacturer's instructions for preparing the solution at a minimum concentration of 525 IU / ml. Storage was according to the manufacturer's recommendations.

동물animal

New Iberia Research Center(NIRC) 콜로니로부터 얻은 키노몽구스 원숭이를 사용하여, 개선된 NIRC IAUCU 프로토콜(APS 2008-8733-058)을 따라서 LA의 New Iberia에 위치한 NIRC에서 연구(NIRC 연구 번호 8733-0903)를 수행하였다.Using a Kinomongus monkey obtained from the New Iberia Research Center (NIRC) colony, the study was conducted at NIRC in New Iberia, LA (NIRC Study No. 8733-0903) following the improved NIRC IAUCU protocol (APS 2008-8733-058). Was performed.

건강 상태가 양호하다고 결정된 6 마리의 투약 경험이 없는(naive) 키노몽구스 원숭이(3 마리는 수컷, 3 마리는 암컷)를 연구에 사용하였다.Six naive quinomongus monkeys (three males and three females) determined to be in good health were used in the study.

연구는 상기 프로토콜 및 UL Lafayette-NIRC 표준 작동 방법을 따라 행하였다.The study was done according to the above protocol and the UL Lafayette-NIRC standard operating method.

연구 설계Study design

rFⅧFc 125 IU/㎏를 6 마리의 원숭이(3마리는 수컷, 3마리는 암컷) 각각에 정맥 투여하였다. 교차 설계로서 Xyntha(BDD-rFⅧFc)도 동일한 동물들에 125 IU/㎏를 정맥 투여하였다. 그룹 1 동물(n=3)은 0일차에 Xyntha를, 3일차에 rFⅧFc을 받은 반면, 그룹 2 동물(n=3)는 0일차에 rFⅧFc를 받은 후 4일차에 Xyntha를 받았다. 그룹 2에 대한 투여들 사이에 부가적 일자가 생긴 것은, rFⅧFc가 예측된 기준(baseline) 수준 이하로 감소하는데 충분한 시간이 걸린다는 것을 확신케 한다. ELLSA나 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이에 의해 rFⅧFc 또는 Xyntha를 측정하기 위하여, 투여 전 및 투여 후 0.25, 4, 12, 24, 36, 48 및 72시간에 각 동물들로부터 혈장내 1/10 부피의 3.2% 시트르산 나트륨의 존재하에서 혈액을 채취하였다.rFⅧFc 125 IU / kg was intravenously administered to each of six monkeys (three males and three females). As a crossover design, Xyntha (BDD-rFⅧFc) also received 125 IU / kg intravenously in the same animals. Group 1 animals (n = 3) received Xyntha on day 0 and rFⅧFc on day 3, whereas group 2 animals (n = 3) received xyntha on day 4 after receiving rFⅧFc on day 0. An additional date between administrations for group 2 assures that it takes sufficient time for rF_Fc to decrease below the predicted baseline level. To determine rF rFc or Xyntha by ELLSA or FVIII-specific chromogenic activity assay, 1/10 volume of plasma from each animal at 0.25, 4, 12, 24, 36, 48 and 72 hours before and after dosing Blood was collected in the presence of 3.2% sodium citrate.

혈장 내 In plasma rFrF ⅧⅧ FcFc 및 FⅧ를 측정하기 위한  And to measure FⅧ ELISAELISA

원숭이 혈장 내의 Monkey within plasma rFrF ⅧⅧ FcFc 측정 방법 How to measure

본 효소결합면역흡착검사(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)는 원숭이 혈장내의 rFⅧFc을 정량하기 위하여 설계되었다. 본 ELISA 방법에서, Bethyl Laboratories에서 얻은 염소 항-인간 IgG-(H+L) 항체(원숭이 흡착)(Cat#A80-319A)을 코팅 버퍼로 희석하고, 96-웰 마이크로 타이터 샘플 플레이트에 고정시켰다. 이 플레이트에 공기를 보급하고(aspirated), 모든 비-흡착 부분은 블로킹 버퍼(3% BSA/1xTris)를 대략 2시간 동안 37℃에서 첨가하여 블로킹하였다. 혈장 샘플을 고칼슘 샘플 희석 버퍼(3% Non-Fat Dry Milk/TBST with 30 mM CaCl2)로 1:20으로 희석하여, 샘플 플레이트에 분배하였다. 상기 플레이트를 대략 2시간 동안 37℃에서 배양하였다. 그 후 플레이트를 씻어내고, Green Mountain Antibodies로부터 얻은 마우스 항-B 도메인 결실(α.BDDA1) 인자 Ⅷ(A1 도메인) 항체(Cat#GMA-8002)를 플레이트에 첨가하여, 대략 1시간 동안 37℃에서 배양하였다. 플레이트를 씻어낸 후, Southern Biotech으로부터 얻은 HRP-접합 항-마우스 IgG2a 항체(Cat#1080-05)를 플레이트에 첨가하여, 대략 30분 동안 실온에서 배양하였다. 플레이트를 다시 씻어내고 테트라메틸벤지딘(tetramethylbenzidine, TMB) 과산화효소(proxidase) 기질 용액을 첨가하여 대략 30분 동안 실온에서 배양하였다. 반응을 비-산성 정지 용액(stop solution)으로 중지한다. 샘플 상의 rFⅧFc 양에 따라 발색이 진행된다. 650㎚의 단일 탐지 파장을 사용하여 흡광도 플레이트 판독기(absorbance plate reader) 상에서 플레이트를 읽었다. rFⅧFc 농도는 4-변수 로지스틱 곡선적합화 프로그램(four-parameter logistic curve-fitting program)을 사용하여 광학밀도(OD) 대 농도로 플롯팅함으로서 얻은 표준 곡선 상에서 결정하였다. 이러한 방법의 보정(calibration) 곡선 범위는, 5% 원숭이 혈장에서 0.400 ng/㎖-51.2 ng/㎖이다(100% 원숭이 혈장에서는, 8.00 ng/㎖-1024 ng/㎖). 5% 원숭이 혈장 0.200 ng/㎖에서의 에세이에 대하여, 곡선 보정을 용이하게 하기 위한 고정점(anchor point)으로서 작용하기 위해 적격 범위 밖의 하나의 캘리브레이터(calibrator)가 포함될 수 있다. 고정점은 곡선의 최적 핏에 기초하여 제거되거나 유지된다(예를 들어, 정의된 정확도 내의 표준 리드의 최고 수치, %RE).This Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) was designed to quantify rFⅧFc in monkey plasma. In this ELISA method, goat anti-human IgG- (H + L) antibody (monkey adsorption) (Cat # A80-319A) obtained from Bethyl Laboratories was diluted with coating buffer and fixed in 96-well micro titer sample plate. . This plate was aspirated and all non-adsorbed portions were blocked by addition of blocking buffer (3% BSA / 1 × Tris) at 37 ° C. for approximately 2 hours. Plasma samples were diluted 1:20 with high calcium sample dilution buffer (3% Non-Fat Dry Milk / TBST with 30 mM CaCl 2 ) and distributed to sample plates. The plates were incubated at 37 ° C. for approximately 2 hours. The plate was then washed off and mouse anti-B domain deletion (α.BDDA1) Factor VII (A1 domain) antibody (Cat # GMA-8002) obtained from Green Mountain Antibodies was added to the plate at 37 ° C. for approximately 1 hour. Incubated. After washing off the plate, HRP-conjugated anti-mouse IgG2a antibody (Cat # 1080-05) from Southern Biotech was added to the plate and incubated at room temperature for approximately 30 minutes. The plates were washed again and incubated at room temperature for approximately 30 minutes by addition of tetramethylbenzidine (TMB) proxidase substrate solution. The reaction is stopped with a non-acidic stop solution. Color development proceeds according to the amount of rF_Fc on the sample. The plate was read on an absorbance plate reader using a single detection wavelength of 650 nm. rFⅧFc concentrations were determined on standard curves obtained by plotting optical density (OD) versus concentration using a four-parameter logistic curve-fitting program. The calibration curve range of this method is 0.400 ng / ml-51.2 ng / ml in 5% monkey plasma (8.00 ng / ml-1024 ng / ml in 100% monkey plasma). For assays at 0.200 ng / ml 5% monkey plasma, one calibrator outside of the eligible range may be included to serve as an anchor point to facilitate curve correction. The anchor point is removed or maintained based on the optimal fit of the curve (eg, the highest number of standard leads within a defined accuracy,% RE).

원숭이 monkey 혈장내In plasma FⅧ의 측정 방법 How to measure FⅧ

본 효소결합면역흡착검사(ELISA)는 원숭이 혈장내 FⅧ를 정량화하기 위하여 설계되었다. 본 ELISA 방법에서, Green Mountain Antibodies로부터 얻은 마우스 αBDDA1 FⅧ 항체(Cat# GMA-8002)를 코팅 버퍼에 희석하여, 96 웰 마이크로타이터 샘플 플레이트에 고정하였다. 이 플레이트에 공기를 공급하고, 모든 비-흡착 부분을 블로킹 버퍼(3% BST/1xTris)로 37℃에서 대략 1시간 동안 블로킹하였다. 혈장 샘플들을 고칼슘 샘플 희석 버퍼(100mM CaCl2를 첨가한 블로킹 버퍼)로 1:20으로 희석하여, 샘플 플레이트에 분배하였다. 플레이트를 37℃에서 대략 2시간 배양하였다. 플레이트를 씻어낸 후, Affinity Biologicals 키트의 탐지 항체인 HRP 레이블링(HRP-labeled) 다중 항체(Cat#F8C-EIA-D)를 추가로 TBS/0.05% Tween 20으로 희석하여 플레이트에 첨가하고, 실온에서 대략 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 다시 씻어낸 후, 테트라메틸벤지딘(TMB) 과산화효소 기질 용액을 첨가하고 대략 30분 동안 실온에서 배양하였다. 반응은 산성 정지 용액을 부가하여 중단시킨다. 샘플 내의 FⅧFc의 양에 따라 발색이 진행된다. 플레이트는 단일 탐지 파장, 450㎚를 사용하여 흡광도 플레이트 판독기 상에서 읽어낸다. FⅧ 농도는 4변수 로지스틱 곡선적합화 프로그램을 사용하여 광학 밀도(OD) 대 농도를 플롯팅하여 얻은 표준 곡선 상에서 결정된다. 이 방법의 보정 곡선 범위는, 5% 원숭이 혈장 내에서 0.625 ng/㎖ - 20 ng/㎖이다(100% 원숭이 혈장 내에서 12.5 ng/㎖ - 400 ng/㎖). 5% 원숭이 혈장 내의 에세이의 적격 범위 밖인 0.313 및 0.156 ng/㎖에 2개의 캘리브레이터가 추가되어 곡선-보정을 용이하게 하기 위한 고정점 역할을 할 수 있다. 그 고정점들은 곡선의 최적 핏에 기초하여 제거 또는 유지될 수 있다(예를 들어, 정의된 정확도 내의 표준 리드의 최소 수치, %RE).This enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was designed to quantify FVIII in monkey plasma. In this ELISA method, mouse αBDDA1 FVIII antibody (Cat # GMA-8002) obtained from Green Mountain Antibodies was diluted in coating buffer and fixed to 96 well microtiter sample plates. Air was supplied to this plate and all non-adsorbed portions were blocked with blocking buffer (3% BST / 1xTris) at 37 ° C. for approximately 1 hour. Plasma samples were diluted 1:20 with high calcium sample dilution buffer (blocking buffer with 100 mM CaCl 2 ) and dispensed onto sample plates. Plates were incubated at 37 ° C. for approximately 2 hours. After rinsing the plate, HRP-labeled multiple antibody (Cat # F8C-EIA-D), the detection antibody of the Affinity Biologicals kit, was further diluted with TBS / 0.05% Tween 20 and added to the plate and at room temperature. Incubate for approximately 1 hour. After washing the plate again, tetramethylbenzidine (TMB) peroxidase substrate solution was added and incubated at room temperature for approximately 30 minutes. The reaction is stopped by the addition of an acidic stop solution. Color development proceeds depending on the amount of FⅧFc in the sample. The plate is read on an absorbance plate reader using a single detection wavelength, 450 nm. FV concentration is determined on a standard curve obtained by plotting optical density (OD) versus concentration using a four-variable logistic curve fitting program. The calibration curve range of this method is 0.625 ng / ml-20 ng / ml in 5% monkey plasma (12.5 ng / ml-400 ng / ml in 100% monkey plasma). Two calibrators can be added at 0.313 and 0.156 ng / ml outside the eligibility range of the assay in 5% monkey plasma to serve as a fixation point to facilitate curve-correction. The fixation points can be removed or maintained based on the optimal fit of the curve (eg, the minimum number of standard leads within a defined accuracy,% RE).

FⅧ-특이적 FVII-specific 발색Color 에세이 Essay

키노몽구스 원숭이 혈장 샘플 내의 FⅧ 활성은 투여량에 기초하여 측정되며, 그 후 인간 FⅧ-결핍 혈장(Diagnostica Stago)으로 대략 0.25-1 IU/ml로 희석된다. 샘플들은 FⅧ 발색 키트(Siemens)를 사용하여 Sysmex CA1500(Siemens Diagnostic Healthcare)에서 분석되었다. 이 발색 에세이에서는, 혈장 샘플 내의 rFⅧFc가 트롬빈에 의해 활성화된다. 활성화된 인자 Ⅷ는 이어서 활성화된 인자Ⅸ(FⅨa), 인지질(PL) 및 칼슘 이온의 존재 하에서 인자Ⅹ(FⅩ)의 인자Ⅹa(FⅩa)로의 변환을 촉진한다. FⅩa 활성은 FⅩa에 특이적인 p-니트로아닐리드(p-nitroanilide) 기질의 가수분해에 의해 평가된다. 405㎚에서 측정된 p-니트로아닐리드(pNA)의 초기 이탈 속도는 FⅩa 활성에 비례하며, 따라서 샘플 내의 FⅧ 활성에도 비례한다. 이 에세이에서 rFⅧFc에 기인한 FⅧ 활성 정량화의 한계는 0.3 IU/ml까지이다. 이 에세이는 총 FⅧ 활성을 ±20%의 정확도로 적게는 대략 0.06 IU/ml보다 더 낮은 하한 한계까지 측정할 수 있다. 개별 동물에 대한 투여 전 샘플의 계산된 활성은 각 시점의 값에서 삭감되어 PD 곡선(FⅧ 활성 대 시간)을 생성한다.FVIII activity in a Kenomongus monkey plasma sample is measured based on dose and then diluted to approximately 0.25-1 IU / ml with human FVIII-deficient plasma (Diagnostica Stago). Samples were analyzed in Sysmex CA1500 (Siemens Diagnostic Healthcare) using the FVII colorimetric kit (Siemens). In this color assay, rF_Fc in the plasma sample is activated by thrombin. Activated factor VII then promotes the conversion of factor VII (FVII) to factor VIIa (FVIIa) in the presence of activated factor VII (FVIIa), phospholipids (PL) and calcium ions. FVIIa activity is assessed by hydrolysis of a p-nitroanilide substrate specific for FVIIa. The initial release rate of p-nitroanilide (pNA), measured at 405 nm, is proportional to the F 활성 a activity and therefore also to the FⅧ activity in the sample. In this assay, the limit of quantifying FVIII activity due to rFVFc is up to 0.3 IU / ml. This assay can measure the total FVIII activity to a lower limit of less than approximately 0.06 IU / ml with an accuracy of ± 20%. The calculated activity of the sample before administration to the individual animal is subtracted from the value at each time point to produce a PD curve (F ′ activity versus time).

표준 곡선은 NIBSC 7차 국제 표준 FⅧ 농축물을 인간 FⅧ-결핍 혈장에 1 IU/ml로 희석시켜서 얻는다. 표준 곡선은 Sysmex 기기에 단계적으로 희석하여 0.15, 0.1, 0.05, 0.025, 0.0053 및 0.0026 IU/ml의 농도를 얻는다. 상기 기기는 내부적으로 모든 샘플을 1:10으로 희석하므로, FⅧ 표준 농도는 측정가능한 FⅧ 활성 범위인 1.5-0.026 IU/ml의 혈장 농도에 상응한다.Standard curves are obtained by diluting NIBSC 7th International Standard FVIII Concentrate to 1 IU / ml in human FVIII-deficient plasma. The standard curve is diluted in Sysmex instruments stepwise to obtain concentrations of 0.15, 0.1, 0.05, 0.025, 0.0053 and 0.0026 IU / ml. The instrument internally dilutes all samples to 1:10, so the FVIII standard concentration corresponds to a plasma concentration of 1.5-0.026 IU / ml, the measurable FVIII activity range.

PKPK 분석 analysis

농도 시간 프로필은 WinNonlin 소프트웨어 프로그램(버전 5.2, 캘리포니아 마운틴 뷰에 소재한 Pharsight Corporation)의 비구획 분석 모듈을 사용하여 평가하였다.Concentration time profiles were evaluated using a noncompartmental analysis module from the WinNonlin software program (version 5.2, Pharsight Corporation, Mountain View, CA).

결과result

원숭이 혈장에서의 rFⅧ 농도는 분자의 FⅧ 및 Fc 부분 모두를 측정하는 샌드위치 ELISA 포맷을 사용하여 측정하였고, 그 결과를 표 7에 나타내었다. 모든 투여 전 샘플은 측정 한계 이하이다. 도 7은 시간에 따른 그룹 평균 rFⅧFc 및 Xyntha 혈장 농도 대 시간을 나타내며, 개별적 혈장 내 농도 대 시간 곡선은 도 8에 나타내었다. rFⅧFc 및 Xyntha에 대한 PK 변수의 요약은 표 9 및 10에 각각 나타내었다. rFⅧFc에 대한 평균 t1 /2는 11.9±1.7 시간(9.3 내지 14.1시간 범위)이고, Xyntha에 대해서는 평균 제거 t1 /2가 12.7±4.4시간(9.2 내지 19.9시간 범위)이다.RFVIII concentrations in monkey plasma were measured using the sandwich ELISA format, which measures both the FVIII and Fc portions of the molecule, and the results are shown in Table 7. All predose samples are below the measurement limit. FIG. 7 shows the group mean rFⅧFc and Xyntha plasma concentration versus time over time, and individual plasma concentration versus time curves are shown in FIG. 8. A summary of PK variables for rFⅧFc and Xyntha are shown in Tables 9 and 10, respectively. the mean t 1/2 was 11.9 ± 1.7 hours (9.3 to 14.1 time range), and the average removal t 1/2 is 12.7 ± 4.4 hours (9.2 to 19.9 time range) for Xyntha for rFⅧFc.

FⅧ 활성은 FⅧ-특이적 발색 활성 에세이를 사용하여 측정하였고, 그 데이터는 표 8에 나타내었다. 내재 FⅧ에 의한 투여 전 활성은 모든 샘플에서 삭감된다. 평균 그룹 데이터의 그래프는 도 9에 나타나있으며, 개별적 혈장 내 농도 대 시간 곡선은 도 10에 나타나있다. PK 변수의 요약은 rFⅧFc 및 Xyntha에 대하여 표 9 및 10에 각각 나타나있다. 평균 제거 t1 /2는 rFⅧFc에 대해서는 16.1±6.9시간(11.6 내지 29.4 시간 범위)이고, Xyntha에 대해서는 12.5±1.7시간(10.4 내지 14.3시간 범위)이다.FVIII activity was measured using an FVIII-specific chromogenic activity assay, and the data are shown in Table 8. The pre-administration activity by intrinsic FVII is reduced in all samples. A graph of mean group data is shown in FIG. 9 and the individual plasma concentration versus time curves are shown in FIG. 10. A summary of PK variables is shown in Tables 9 and 10 for rFⅧFc and Xyntha, respectively. Average removal t 1/2 is 16.1 ± 6.9 hours (11.6 to 29.4 time range) for rFⅧFc, is 12.5 ± 1.7 hours (10.4 to 14.3 time range) for Xyntha.

논의 및 결론Discussion and conclusion

시험 대상을 ELISA 또는 발색 활성 에세이 중 어떤 것으로 측정하든 간에, 제거 반감기는 125 IU/㎏을 1회 정맥 투여 후 rFⅧFc 및 Xyntha에서 유사하다.Whether the test subjects are measured by ELISA or chromogenic activity assays, the elimination half-life is similar in rFⅧFc and Xyntha after a single intravenous administration of 125 IU / kg.

[[ 실시예Example 3] 3]

본 연구는 중증의 A형 혈우병(내재 인자 Ⅷ(FⅧ)가 1 IU/㎗(1%) 미만)에 걸린 대상에 rFⅧFc를 1회 투여했을 때의 안정성, 내구성 및 약동학을 평가하기 위하여 설계된 Phase Ⅰ/Ⅱa, 공개 수준(open-label), 교차, 투여량 점증(dose-escalation), 다기관(multi-center), 및 인간에 대한 최초의 연구가 될 것이다. 과거 치료받은 적이 있는 총 대략 12명의 환자들을 등록하고 25 내지 65 IU/㎏으로 rFⅧFc를 투여하였다. (먼저 Advate(등록상표)[rFⅧFc], 참조 비교제제(comparator agent)를 1회 투여하기 전 28일 내에 예정된) 선별 작업 및 첫 번째 주사 전 FⅧ 처리를 안한 최소 4일(96시간)이 지난 후, 대략 6명의 대상이 Advate(등록상표) 25 IU/㎏을 1회 투여받고 3일(72시간)의 약동학 프로필 후, 교차하여 7일(168시간)의 PK 프로필을 위해 rFⅧFc를 25 IU/㎏ 1회 공개 투여하였다. 첫 번째 3명의 환자는 계속 투여할 것이다. 25 IU/㎏의 rFⅧFc로 투여한 첫 번째 3명의 환자에 대하여, 각 대상은 rFⅧFc 투여 후 14일차(336시간)에 저해제 평가를 받을 것이다. 다음 환자의 투여는 (단지 첫번째 3명의 환자에 대한) 저해제 평가가 완료된 후 바로 실시된다. 3번째 환자가 14일 저해제 평가를 마친 후, 25 IU/㎏를 투여한 나머지 3명의 환자 및 65 IU/㎏를 투여한 6명의 환자들이 각 투여 그룹 내에서 적어도 하루 간격을 두고 계속하여 등록을 시작할 것이다.This study was designed to evaluate the stability, durability, and pharmacokinetics of a single dose of rFⅧFc in subjects with severe hemophilia A (intrinsic factor Ⅷ (FⅧ) <1 IU / ㎗ (1%)). / IIa, open-label, crossover, dose-escalation, multi-center, and human will be the first of its kind. A total of approximately 12 patients who had been treated in the past were enrolled and administered rFⅧFc at 25-65 IU / kg. After at least 4 days (96 hours) of screening (first scheduled within 28 days before Advate® [rFⅧFc], a reference comparator agent) and no FⅧ treatment before the first injection Approximately 6 subjects received Advate® 25 IU / kg once and after 3 days (72 hours) of pharmacokinetic profile, crossed rFⅧFc to 25 IU / kg for 7 days (168 hours) of PK profile. One open dose. The first three patients will continue to be administered. For the first three patients administered rFⅧFc at 25 IU / kg, each subject will receive an inhibitor assessment 14 days (336 hours) after rFⅧFc administration. Dosing of the next patient takes place immediately after the inhibitor evaluation (only for the first three patients) is complete. After the third patient completed the 14-day inhibitor evaluation, the remaining three patients who received 25 IU / kg and six patients who received 65 IU / kg continued to enroll at least one day apart within each dosing group. will be.

마지막 환자가 25 IU/㎏의 rFⅧFc를 투여받은 지 일주일 후, 대략 6명의 특이한 환자들이 65 IU/㎏ 코호트(cohort)에 동원되었다. 65 IU/㎏ 코호트의 각 환자들은, Advate(등록상표) 65 IU/㎏을 1회 투여 받고 4일간(96시간)의 PK 프로파일링 후, 교차하여 1O일간(240시간)의 프로파일링을 위하여 65 IU/㎏의 rFⅧFc를 1회 공개 투여받었다. 어떤 코호트 내에서 rFⅧFc의 첫 번째 주사 이전에 출혈 사례가 발생하는 경우, 환자의 연구전 FⅧ 산물을 치료를 위해 사용해야 하며, PK 프로파일링을 위한 첫번째 rFⅧFc 주사를 맞기 전에 적어도 4일의 간격이 지나가야 할 것이다.One week after the last patient received 25 IU / kg of rFⅧFc, approximately 6 unique patients were recruited into the 65 IU / kg cohort. Each patient in the 65 IU / kg cohort received one dose of Advate® 65 IU / kg and 4 days (96 hours) of PK profiling, alternately for 10 days (240 hours) of profiling 65 One open dose of rFFc at IU / kg was received. If a bleeding event occurs prior to the first injection of rFⅧFc in a cohort, the patient's pre-study FⅧ product should be used for treatment and must be at least 4 days apart before the first rFⅧFc injection for PK profiling. something to do.

모든 환자들은 안전을 위하여 rFⅧFc 25 IU/㎏ 또는 65 IU/㎏ 투여 후에, 14일(336시간) 및 28일의 안전성 평가 기간을 가질 것이다. 모든 환자들은 지정된 시점에서 FⅧ 활성의 분석을 위하여 혈액 샘플과 함께 투여 전 및 투여 후 약동학 샘플링을 행할 것이다.All patients will have a safety assessment period of 14 days (336 hours) and 28 days after rFⅧFc 25 IU / kg or 65 IU / kg administration for safety. All patients will undergo pre and post pharmacokinetic sampling with blood samples for analysis of FVIII activity at designated time points.

[[ 실시예Example 4] 4]

Xase 복합체 내의 활성 Activity in the Xase Complex

FⅧ 단백질(rBDD FⅧ 및 rFⅧFc)과 FⅨa과의 결합을 조사하고 이들 단백질의 FⅩ 활성화 능력을 측정하기 위하여, Xase 복합체의 측면에서 이들의 상호작용을 조사하는 동역학적 연구가 실시되었다. 이 에세이는 칼슘의 존재 하에서 인지질 표면상의 활성화 FⅨ과 활성화 rBDD FⅧ 또는 rFⅧFc 단백질이 Xase 복합체를 형성하는 것과 관련있으며, 발색 또는 형광 기질이 잘려나올 때 측정되는 FⅩ의 FⅩa로의 변환을 모니터링한다.In order to investigate the binding of FV proteins (rBDD FV and rFVFc) to FVa and to measure the FV activation ability of these proteins, a kinetic study was conducted to investigate their interactions in terms of Xase complexes. This assay involves the formation of an Xase complex between the activated FVIII and the activated rBDD FV or rFVFc protein on the phospholipid surface in the presence of calcium, and monitors the conversion of FVF to FVa, which is measured when the chromogenic or fluorescent substrate is cut off.

간략히, FⅧ는 5분 동안 α-트롬빈으로 먼저 활성화된 후, Ca+2의 존재 하 FⅨa, 및 합성 인지질 비히클(25% 포스파티딜세린(PS)/75% 포스파티딜콜린(PC)) 또는 혈소판과 혼합한다. 하기의 조건 하에서, FⅧa 및 FⅨa는 인지질 표면 및 칼슘 이온의 존재 하에서 상호작용하여 활성 Xase 복합체를 형성하며, 이는 단백질 가수분해 과정을 통해 FⅩ의 FⅩa로의 변환을 매개한다. 결국, FⅩa은 FⅩa-특이적 발색 또는 형광 기질을 잘라낸다. 잘려진 기질은 발색을 하므로, 용액 내의 잘려나간 기질의 양이 생성된 FⅩa의 양의 지표가 된다. 이는 405㎚에서 용액의 흡광도를 측정함으로서 평가된다.Briefly, FVIII is first activated with α-thrombin for 5 minutes and then mixed with FVaa in the presence of Ca +2 , and synthetic phospholipid vehicle (25% phosphatidylserine (PS) / 75% phosphatidylcholine (PC)) or platelets. Under the following conditions, FVIIa and FVIIa interact in the presence of the phospholipid surface and calcium ions to form an active Xase complex, which mediates the conversion of FVII to FVIIa through proteolytic processes. Eventually, FVIIa cleaves FVIIa-specific chromogenic or fluorescent substrates. Since the cut substrate develops color, the amount of cut substrate in the solution is indicative of the amount of FⅩa produced. This is assessed by measuring the absorbance of the solution at 405 nm.

A. 인자 Ⅹ의 활성화A. Activation of Factor VII

rBDD FⅧ 및 rFⅧFc의 FⅩ 활성화 능력을 상술한 바와 같이 Xase 복합체의 측면에서 연구하였다. 트롬빈 활성화 FⅧ 단백질을 칼슘의 존재 하에서 FⅨa 및 인지질과 함께 배양한 후, FⅩ-특이적 기질의 존재하에서 다른 농도의 FⅩ에 첨가하고 FⅩa의 생성 속도를 결정하였다(도 11).The FV activation ability of rBDD FVIII and rFVFc was studied in terms of the Xase complex as described above. The thrombin activated FVIII protein was incubated with FVIII and phospholipids in the presence of calcium, then added to different concentrations of FVIII in the presence of FVIII-specific substrates and the rate of production of FVIII was determined (FIG. 11).

이들 데이터에 기초하여, 다른 FⅧ 단백질에 대한 Km 및 Vmax를 Xase 복합체의 측면에서 계산하였다(Chang 1997)(표 11). 데이터는 6번의 분석(중복 전개를 포함한 3번의 실험)의 평균치±상응하는 표준 편차로서 표현된다. 이들 데이터에 기초하여, 이들 단백질(rBDD FⅧ 및 rFⅧFc)은 상기 에세이의 변이 범주 내에서 비슷한(comparable) Km 및 Vmax를 갖는 것으로 밝혀졌다. 따라서 rFⅧFc로 형성한 Xase 복합체는 인지질과의 상호 작용 및 FⅩ 활성화 능력에 관하여, 허가 제품 rBDD FⅧ(ReFacto)로 형성한 Xase 복합체와 유사하게 행동한다. 또한 이들의 유사한 데이터는 rFⅧFc가 트롬빈과 함께 단시간 배양 후에 rBDD FⅧ에 필적할 정도로 활성화된다는 것을 입증한다는 사실에 주목하라.Based on these data, Km and Vmax for different FVIII proteins were calculated in terms of the Xase complex (Chang 1997) (Table 11). Data is expressed as mean ± corresponding standard deviation of 6 analyzes (3 experiments including duplicate developments). Based on these data, these proteins (rBDD FVIII and rFVFc) were found to have comparable Km and Vmax within the variant category of the assay. Thus, the Xase complex formed with rFⅧFc behaves similarly to the Xase complex formed with the licensed product rBDD FⅧ (ReFacto) with respect to its interaction with phospholipids and FⅩ activation ability. Note also that their similar data demonstrate that rFⅧFc is activated comparable to rBDD FⅧ after a short incubation with thrombin.

B. FⅨa와의 상호작용B. Interaction with FⅨa

rBDD FⅧ 및 rFⅧFc와 FⅨa 간의 상호작용도 또한 Xase 복합체의 측면에서 조사하였다. Xase 복합체는 고정량의 FⅩ 및 변동 수준의 FⅨa를 사용하여 상기와 같이 조립되었고, FⅨa 생성 속도를 결정하였다(도 12). 이들의 데이터로부터, 상기 FⅧ 단백질들과 FⅨa 간에 형성된 Xase 복합체의 Kd 값을 결정하였다(Chang 1997). 데이터는 6 번의 분석(중복 전개를 포함한 3번의 실험)의 평균치±상응하는 표준 편차로서 표현된다(표 12). 양쪽 단백질은 유사한 Kd 및 Vmax 값을 가지는 것으로 나타났고, 이는 rFⅧFc가 허가 제품 rBDD FⅧ 만큼이나 FⅨa와 유사한 상호작용을 한다는 사실을 나타낸다.The interaction between rBDD FVIII and rFVFc and FVa was also investigated in terms of Xase complex. Xase complexes were assembled as above using a fixed amount of FVIII and varying levels of FVa, and the rate of FVa production was determined (FIG. 12). From these data, the Kd value of the Xase complex formed between the FV proteins and FVa was determined (Chang 1997). Data are expressed as mean ± corresponding standard deviation of 6 analyzes (3 experiments including duplicate developments) (Table 12). Both proteins have been shown to have similar Kd and Vmax values, indicating that rFⅧFc has a similar interaction with FⅨa as well as the licensed product rBDD FⅧ.

[[ 실시예Example 5] 5]

실시예 3에서 논의한 Phase Ⅰ/Ⅱa 임상 실험에 대한 약동학 중간 데이터는 FⅧFc에 대한 아래의 결과를 입증한다. FⅧFc는 ADVATE(전장 rFⅧFc)에 비해서 전신 노출(AUCINF)에서 약 50% 증가, 클리어런스(CL)에서 약 50% 감소, 및 제거 반감기 및 MRT에서 약 50-70% 증가를 나타내었다. 추가로, FⅧFc는 ADVATE에 비해서 증가된 C168, TBLP1, TBLP3 및 TBLP5 값을 보인다.Intermediate pharmacokinetic data for the Phase I / IIa clinical trials discussed in Example 3 demonstrate the following results for FⅧFc. FⅧFc showed about 50% increase in systemic exposure (AUC INF ), about 50% decrease in clearance (CL), and about 50-70% increase in elimination half-life and MRT compared to ADVATE (full length rFⅧFc). In addition, FⅧFc shows increased C168, TBLP1, TBLP3 and TBLP5 values compared to ADVATE.

AUCINF: 0부터 무한대까지의 농도-시간 곡선의 아래 영역AUC INF : area below the concentration-time curve from 0 to infinity

베타 HL : 제거 단계 반감기, 또는 t1 /2β라고도 한다.Beta HL: Also called elimination stage half-life, or t 1/2 β .

C168 : 투여 후 대략 168시간에서 기준 초과의 예상 FⅧFc 활성C168: Expected FⅧFc activity above baseline at approximately 168 hours after administration

Cl: 클리어런스 Cl: clearance

MRT : 평균 체류시간MRT: Average residence time

TBLP1 : 투여 후 FⅧFc 활성이 기준보다 대략 1 IU/㎗ 높은 지점에 떨어질 때의 모델-예측 시간TBLP1: model-predicted time when F 투여 Fc activity drops to approximately 1 IU / mm higher than baseline after administration

TBLP3 : 투여 후 FⅧFc 활성이 기준보다 대략 3 IU/㎗ 높은 지점에 떨어질 때의 모델-예측 시간TBLP3: Model-predicted time when FⅧFc activity drops to approximately 3 IU / mm higher than baseline after administration

TBLP5 : 투여 후 FⅧFc 활성이 기준보다 대략 5 IU/㎗ 높은 지점에 떨어질 때의 모델-예측 시간TBLP5: Model-predicted time when FⅧFc activity drops to approximately 5 IU / mm higher than baseline after administration

[[ 실시예Example 6] 6]

재조합 B 도메인 결실 인자 Ⅷ-Fc(rFⅧFc) 융합 단백질을 FⅧ의 반감기를 연장시키기 위한 접근 수단으로서 제조하였다. rFⅧFc의 약동학(PK)을 A형 혈우병 마우스의 rFⅧ의 경우와 비교하였다. 본 발명자들은 최종 반감기가 rFⅧ에 비해 rFⅧFc의 경우 2배 더 길다는 사실을 발견하였다. 반감기 연장을 위한 근본적 메커니즘이 FcRn에 의한 rFⅧFc의 보호에 기인한다는 사실을 확인하기 위하여, FcRn 녹아웃 마우스 및 인간 FcRn 형질전환 마우스에서 PK를 평가하였다. 정맥 투여를 1회하고(125 IU/㎏), 발색 활성 에세이를 사용하여 혈장 내 농도를 측정하였다. 양쪽 마우스 계통에서 Cmax는 rFⅧFc 및 rFⅧ(Xyntha(등록상표)) 간에 유사하였다. 그러나, FcRn 녹아웃 마우스에서는 rFⅧFc의 반감기가 rFⅧ의 반감기와 유사한 반면, hFcRn 형질전환 마우스에서는 rFⅧFc의 반감기가 rFⅧ의 반감기에 비해 대략 2배 더 연장되었다. 이러한 결과들은 FcRn이 rFⅧ에 비해 연장된 rFⅧ의 반감기를 매개하거나 또는 그의 원인이 된다는 사실을 입증한다. 순환 혈전탄성측정기(rotation thromboelastometry(ROTEM))로 측정한 전체 혈액의 항상성이 혈우병 마우스의 출혈 모델에서의 응고 인자의 효능뿐만 아니라 임상적 응용과 관련있는 것으로 보여지므로, 본 발명자들은 ROTEM을 사용하여 A형 혈우병 마우스에서 rFⅧFc의 생체밖, 생체내 효능을 평가하기 위한 시도를 하였다. A형 혈우병 마우스에 50 IU/㎏의 rFⅧFc, Xyntha(등록상표)(FⅧ) 또는 ADVATE(등록상표)(FⅧ)를 1회 정맥 투여하였다. 투여 후 5분에 응혈 형성은, 응고 시간(CT), 응혈 형성 시간(CFT) 및 α-각도(angle)에 대하여 유사하였다. 그러나, rFⅧFc는 투여 후 72 및 96 시간에서 매우 향상된 CT를 보였고, CFT 및 α-각도도 또한 rFⅧFc의 연장된 PK와 일관되게 96 시간에서는 Xyntha(등록상표)(FⅧ) 및 ADVATE(등록상표)(FⅧ) 모두에 비해서 개선되었다. 따라서 FⅧ와 Fc 융합체의 제조는 증가된 반감기 및 출혈로부터 연장된 보호를 제공할 잠재성을 갖게 하는 확정된 메커니즘을 갖는 분자를 만들어낸다.Recombinant B domain deletion factor VII-Fc (rFVIIFc) fusion proteins were prepared as an access means to extend the half-life of FVII. The pharmacokinetics (PK) of rFⅧFc were compared with that of rFⅧ in hemophilia A mice. We have found that the final half-life is twice as long for rFⅧFc as compared to rFⅧ. To confirm that the underlying mechanism for half-life extension is due to the protection of rF rFc by FcRn, PK was evaluated in FcRn knockout mice and human FcRn transgenic mice. Intravenous administration was performed once (125 IU / kg) and the concentration in plasma was measured using a chromogenic activity assay. Cmax in both mouse lines was similar between rFⅧFc and rFⅧ (Xyntha®). However, in FcRn knockout mice, the half-life of rFⅧFc is similar to that of rFⅧ, whereas in hFcRn transgenic mice, the half-life of rFⅧFc is approximately 2 times longer than the half-life of rFⅧ. These results demonstrate that FcRn mediates or contributes to the half-life of extended rFVIII over rFVIII. Since the homeostasis of whole blood as measured by rotation thromboelastometry (ROTEM) has been shown to be related to the clinical application as well as the efficacy of coagulation factors in bleeding models of hemophilia mice, we used AOTEM Attempts have been made to evaluate the ex vivo and in vivo efficacy of rFⅧFc in hemophilia mice. Hemophilia A mice were administered once intravenously with 50 IU / kg of rF_Fc, Xyntha® (FVIII) or ADVATE® (FVIII). At 5 minutes post dosing, clotting was similar for coagulation time (CT), coagulation time (CFT) and α-angle. However, rFⅧFc showed very improved CT at 72 and 96 hours after administration, and CFT and α-angles were also consistent with the extended PK of rFⅧFc at Xyntha® (FⅧ) and ADVATE® (at 96 hours). FⅧ) improved over all. The manufacture of FVIII and Fc fusions thus results in molecules with established mechanisms that have the potential to provide extended half-life and prolonged protection from bleeding.

[[ 실시예Example 7] 7]

본 실시예는 25 및 65 IU/㎏의 FⅧ 산물로 치료한 16명의 환자로부터 얻은 FⅧ 활성에 대한 최종 분석 결과를 나타낸다. 이에 대해서는, 실시예 3 및 5를 참조할 수 있다.This example shows the final analysis of FVIII activity obtained from 16 patients treated with FVIII products of 25 and 65 IU / kg. For this, reference may be made to Examples 3 and 5.

본 실시예에서, rFⅧFc는 인간 IgG1의 이량체 Fc 도메인에 개재 링커 서열 없이 융합된 1 분자의 재조합 B 도메인 결실 인간 FⅧ(BDD-rFⅧ)로 이루어진 재조합 융합 단백질이다. 이 단백질 구조는 또한 rFⅧFc 이종이량체 하이브리드 단백질, FⅧFc 단량체 Fc 융합 단백질, FⅧFc 단량체 하이브리드, 단량체 FⅧFc 하이브리드, 및 FⅧFc 단량체-이량체라고도 한다. 이에 대해서는, 실시예 1, 도 1 및 표 2A를 참조할 수 있다.In this example, rF′Fc is a recombinant fusion protein consisting of one molecule of recombinant B domain deleted human F ′ (BDD-rF ′) fused without an intervening linker sequence to the dimeric Fc domain of human IgG1. This protein structure is also referred to as rFⅧFc heterodimeric hybrid protein, FⅧFc monomer Fc fusion protein, FⅧFc monomer hybrid, monomeric FⅧFc hybrid, and FⅧFc monomer-dimer. For this, reference may be made to Example 1, FIG. 1 and Table 2A.

rFⅧFc에 대한 임상전 연구는 시판되는 rFⅧFc 제품에 비하여 rFⅧ 활성의 반감기가 대략 2배 더 연장됨을 보여주었다. 본 연구의 이유는 동결 액상 제제에서의 rFⅧFc 단일 투여 시의 안정성 및 내구성을 평가하고, 중증의 A형 혈우병 대상체에서의 PK 데이터를 제공하기 위함이다. 본 연구를 위하여, 16명의 평가 가능한 환자에 대하여 PK 평가를 실시하였다. 체중당 25 및 65 IU/㎏의 미량의 두 투여량으로 rFⅧFc 및 Advate 양쪽에 대하여 각각 대략 10분에 걸쳐 1회씩 정맥 투여하였다. 혈장내 PK 평가를 위한 혈액 샘플을 투여전, 뿐만 아니라 투여 후 길게는 10일까지에 채취하였다. 양쪽 rFⅧFc 및 Advate을 위한 FⅧ 활성에 대한 PK는 본 연구에서 모델 의존적 방법을 사용하여 특징화하였다.Preclinical studies of rFⅧFc have shown that the half-life of rFⅧ activity is approximately twice as long as that of commercially available rFⅧFc products. The reason for this study is to assess the stability and durability of rFⅧFc single administration in frozen liquid formulations and to provide PK data in severe type A hemophilia subjects. For this study, PK evaluation was performed on 16 evaluable patients. Two doses of 25 and 65 IU / kg body weight were administered intravenously once over approximately 10 minutes for both rFⅧFc and Advate, respectively. Blood samples for plasma PK evaluation were taken before administration as well as up to 10 days after administration. PK for FVIII activity for both rFVFc and Advate was characterized using model dependent methods in this study.

목적purpose

본 연구의 근본적 목적은 과거 중증의 A형 혈우병으로 치료받은 적이 있는 12세 이상의 환자들에게 rFⅧFc을 2개의 투여량(25 및 65 IU/㎏)으로 1회 투여하였을 때의 안정성 및 내구성을 평가하기 위함이다.The primary purpose of this study was to evaluate the stability and durability of a single dose of rFⅧFc in two doses (25 and 65 IU / kg) in patients 12 years of age or older who have previously been treated with severe hemophilia A. For sake.

두 번째 목적은 단일 단계 혈액 응고 및 발색 에세이에서, Advate에 비하여, 25 및 65 IU/㎏의 rFⅧFc를 단일 투여한 후 시간에 따른 FⅧ 활성의 약역학(PD)에 의해 결정되는 약동학(PK) 변수를 결정하기 위함이다.The second objective is a pharmacokinetic (PK) variable determined by pharmacokinetics (PD) of FVIII activity over time after a single dose of 25 and 65 IU / kg of rFⅧFc, compared to Advate, in a single-step blood coagulation and coloration assay. To determine.

연구 설계(이에 관해서는 Study design (in this regard 실시예Example 3을 참고한다) See 3)

FⅧ 활성 PK 평가를 위하여, 선별 작업시(Advate 투여전 28일 내), 투여전 0일(Advate 투여시) 및 투여후 10 및 30분, 및 1, 3, 6 및 9 시간에; Advate 투여후 1일(24시간)에; Advate 투여 48시간 후, 2일에; Advate 투여 72시간 후, 3일에; 및 고용량의 Advate 투여(코호트 B만) 96시간 후, 4일에 혈액 샘플을 채취하였다. For evaluation of FVIII active PK, at screening operation (within 28 days prior to Advate), on day 0 before dosing (Advate) and at 10 and 30 minutes post-dose, and 1, 3, 6 and 9 hours; 1 day (24 hours) after Advate administration; 48 hours after Advate administration, on day 2; 72 hours after Advate administration, on day 3; And 96 hours after high dose Advate administration (cohort B only), blood samples were taken on day 4.

FⅧ 활성 PK 평가를 위하여, rFⅧFc 투여하는 날 rFⅧFc 투여 직전, rFⅧFc 투여 후 10 및 30분 및 1, 3, 6, 및 9시간에; rFⅧFc 투여 24시간 후, 1일에; rFⅧFc 투여 48, 72, 96 및 120시간 후, 2일 내지 5일에 걸쳐서; rFⅧFc 투여 168시간 후, 7일에; 고용량의 rFⅧFc 투여(코호트 B) 192, 216 및 240 시간 후, 8, 9, 10일에; 혈액 샘플을 채취하였다. FⅧ 활성은 또한 rFⅧFc 투여 672시간 후(rFⅧFc 투여 28일 후)인 최종 연구 작업에서 측정되었다.For FⅧ activity PK evaluation, on the day of rFⅧFc administration immediately before rFⅧFc administration, at 10 and 30 minutes and 1, 3, 6, and 9 hours after rFⅧFc administration; 24 hours after rFⅧFc administration, on day 1; 48, 72, 96 and 120 hours after rFⅧFc administration, over days 2-5; 168 hours after rFⅧFc administration, on day 7; At high doses of rFⅧFc (cohort B) at 192, 216 and 240 hours, on days 8, 9 and 10; Blood samples were taken. FVIII activity was also measured in the final study work 672 hours after rFⅧFc administration (28 days after rFⅧFc administration).

약동학 Pharmacokinetics 모델링modelling 및 계산 And calculation

약어들Abbreviations

TBLP1 = 투여 후 FⅧ 활성이 기준보다 대략 1 IU/㎗ 높은 지점으로 감소할 때의 모델 예측 시간TBLP1 = model prediction time when FVIII activity decreases to approximately 1 IU / kV above baseline after administration

TBLP3 = 투여 후 FⅧ 활성이 기준보다 대략 3 IU/㎗ 높은 지점으로 감소할 때의 모델 예측 시간TBLP3 = model prediction time when FVIII activity decreases to approximately 3 IU / kV above baseline after administration

KV_M = Cmax_M/실제 투여량(IU/㎏)KV_M = Cmax_M / actual dose (IU / kg)

KV_OB = Cmax_OB/실제 투여량(IU/㎏)KV_OB = Cmax_OB / actual dose (IU / kg)

IVR_M = 100 × Cmax_M × 혈장 부피(dl)/전체 투여량(IU); 상기 혈장 부피(ml) = (23.7 × Ht(cm))+(9.0 × Wt(kg))-1709IVR_M = 100 × Cmax_M × Plasma Volume (dl) / Total Dose (IU); The plasma volume (ml) = (23.7 × Ht (cm)) + (9.0 × Wt (kg))-1709

IVR_OB = 100 × Cmax_OB × 혈장 부피(dl)/전체 투여량(IU); 상기 혈장 부피(ml) = (23.7 × Ht(cm))+(9.0 × Wt(kg))-1709IVR_OB = 100 × Cmax_OB × Plasma Volume (dl) / Total Dose (IU); The plasma volume (ml) = (23.7 × Ht (cm)) + (9.0 × Wt (kg))-1709

결과result

도 13은 투여 수준으로 분류되고 화합물로 그룹을 나눈, 관측된 그룹 평균(+SE) FⅧ 활성 대 시간의 프로필이다(단일 단계 에세이, 25 IU/㎏(a) 및 65 IU/㎏(b); 발색 에세이, 25 IU/㎏(c) 및 65 IU/㎏(d)).FIG. 13 is a profile of observed group mean (+ SE) FVIII activity versus time, grouped by dose level and grouped by compound (single step assay, 25 IU / kg (a) and 65 IU / kg (b); Chromogenic assays, 25 IU / kg (c) and 65 IU / kg (d)).

도 14는 투여 수준 및 화합물로 그룹을 나눈, 관측된 그룹 평균(+SE) FⅧ 활성 대 시간의 프로필이다(단일 단계 에세이(a) 및 발색 에세이(b)).FIG. 14 is a profile of observed group mean (+ SE) F ′ activity versus time divided by dose level and compound (single step assay (a) and coloration assay (b)).

단일 투여시의 약동학(단일 단계 에세이)Pharmacokinetics at Single Dose (Single Step Essay)

관측된 FⅧ 활성은 Advate 또는 rFⅧFc 중 어느 하나를 단기 Ⅳ 투입 후, 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에 대하여 평균(±SD) 모델 예측 Cmax 값이 각각 Advate에 대해서는 56.6±4.74 및 121±28.2 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대해서는 55.6±8.18 및 108±16.9 IU/㎗로 급격히 증가하였다. Advate 및 rFⅧFc로 처리한 모든 환자들은 FⅧ 활성이 투여량에 관련하여 증가하였다. 평가된 투여량 범위에서, Cmax 및 AUCINF 둘다에서 관찰된 증가는 투여량에 비례한다고 보기에는 조금 부족하다.The observed FVIII activity was the mean (± SD) model predicted Cmax values for the Advate 56.6 ± 4.74 and 121 ± 28.2 IU / A for 25 and 65 IU / kg administration groups, respectively, after short-term IV infusion of either Advate or rFⅧFc. R and rapidly increased to 55.6 ± 8.18 and 108 ± 16.9 IU / mm for rFⅧFc. All patients treated with Advate and rFⅧFc increased FⅧ activity in relation to dose. In the dose range evaluated, the increase observed in both Cmax and AUC INF is slightly insufficient to be proportional to the dose.

투입 종료 후, 관측된 FⅧ 활성의 감소는 기준 수준에 도달할 때까지 1차 지수함수적 감소(decay) 특성을 보여주었다. FⅧ 활성의 감소 속도는 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹 각각에 대하여, 평균(±SD) 모델 예측 제거 반감기 값이 Advate가 11.9±2.98 및 10.4±3.03 시간이고, rFⅧFc은 18.0±3.88 및 18.4±6.99 시간으로, Advate에 비하여 rFⅧFc가 더 느렸다. 제거 반감기 값은 양쪽 FⅧ 산물에 대해서 평가된 투여량 범위에서 투여량과 무관한 것으로 보였다.After the end of the dosing, the observed decrease in FV activity showed a first-order exponential decay until reaching the baseline level. The rate of decrease of FVIII activity was the mean (± SD) model predicted elimination half-life of 11.9 ± 2.98 and 10.4 ± 3.03 hours for Advate and 18.0 ± 3.88 and 18.4 ± 6.99 for 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. By time, rFⅧFc was slower than Advate. The elimination half-life value appeared to be dose-independent in the dosage ranges evaluated for both FVIII products.

총 전신 FⅧ 노출(AUCINF에 의해 평가된)은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 수준에서, Advate 투여 후 보다는 rFⅧFc 투여 후에 많게는 48% 및 61% 더 크다. 평균(±SD) 모델 예측 AUCINF 값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에 대하여, Advate는 974±259 및 1810±606 hr*IU/㎗이고, rFⅧFc는 1440±316 및 2910±1320 hr*IU/㎗이다.Total systemic FVIII exposure (as assessed by AUC INF ) was as much as 48% and 61% greater after rFⅧFc administration than after Advate administration at 25 and 65 IU / kg dose levels, respectively. Mean (± SD) Model Predicted AUC INF values were 974 ± 259 and 1810 ± 606 hr * IU / dA, and rFⅧFc was 1440 ± 316 and 2910 ± 1320 hr * for 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. IU / ㎗.

제거 반감기와 유사하게, MRT도 Advate에 비해 rFⅧFc의 경우에 더 연장되었다. 평균(±SD) 모델 예측 MRT 값은 각각 25 및 65 IU/㎏의 투여 그룹에 대하여, Advate는 17.1±4.29 및 14.9±4.38 시간이고, rFⅧFc는 25.9±5.60 및 26.5±10.1 시간이다. MRT 값은 양쪽 FⅧ 산물에 대해서 평가된 투여량 범위에서 투여량에 무관한 것으로 보였다.Similar to elimination half-life, MRT was further prolonged in the case of rFⅧFc compared to Advate. Mean (± SD) model predicted MRT values were 17.1 ± 4.29 and 14.9 ± 4.38 hours and rFⅧFc was 25.9 ± 5.60 and 26.5 ± 10.1 hours, respectively, for administration groups of 25 and 65 IU / kg, respectively. MRT values seemed to be dose independent in the dose ranges evaluated for both FVIII products.

또한, CL 및 V에 대한 일차적 PK 변수 값이 결정되었다. rFⅧFc에 대한 CL 값은 동일 투여량으로 Advate에서 관찰된 것의 단지 많게는 66% 만을 차지한다. 평균(±SD) 모델 예측 CL 값은 각각 25 및 65 IU/㎏의 투여 그룹에 대하여, Advate는 2.70±0.729 및 4.08±1.69 ㎖/hr/㎏이고, rFⅧFc는 1.80±0.409 및 2.69±1.25 ㎖/hr/㎏이다. V 값은 각각 25 및 65 IU/㎏의 투여 그룹에 대하여, 평균(±SD) 모델 예측 V 값이 Advate는 43.9±4.27 및 56.1±13.4 ㎖/㎏이고 rFⅧFc는 45.3±7.23 및 61.6±10.6 ㎖/㎏으로, Advate와 rFⅧFc 간에 비슷하다. Advate와 rFⅧFc 투여량 증가시에 평균 CL 및 V 값이 약간 증가하였다. 그러나 제한 투여량 수준과 병용한 65 IU/㎏ 투여량에서의 표준 편차 상의 증가는, 이 변수의 투여량 의존성 평가를 좀더 높게 나오게 한다. 예를 들어, rFⅧFc 처리 그룹에 대한 CV% 기하 평균 CL값이 23%(25 IU/㎏)에서 48.5%(65 IU/㎏)로 증가하였다.In addition, the primary PK variable values for CL and V were determined. CL values for rFⅧFc account for only as much as 66% of that observed for Advate at the same dose. Mean (± SD) model predicted CL values were 2.70 ± 0.729 and 4.08 ± 1.69 mL / hr / kg, with rFⅧFc of 1.80 ± 0.409 and 2.69 ± 1.25 mL /, for 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. hr / kg. V values were mean (± SD) model predicted V values for Advate 43.9 ± 4.27 and 56.1 ± 13.4 ml / kg and rFⅧFc for 45.3 ± 7.23 and 61.6 ± 10.6 ml /, respectively, for dose groups of 25 and 65 IU / kg, respectively. In kg, it is similar between Advate and rFⅧFc. Mean CL and V values increased slightly with advate and rFⅧFc doses. However, an increase in the standard deviation at the 65 IU / kg dose in combination with the limiting dose level leads to a higher dose dependency assessment of this variable. For example, the CV% geometric mean CL value for the rFⅧFc treatment group increased from 23% (25 IU / kg) to 48.5% (65 IU / kg).

첫 번째 PK 변수에 더하여, 효과의 FⅧ 지속성 효과를 평가하기 위하여 2번째 PK 변수(예를 들어 K값, IVR 등)를 결정하였다. 또한 동일한 투여량에서의 Advate에 비해 증가된 TBLP1 및 TBLP3 값을 보이는 rFⅧFc에서, PK 차이의 증거가 관찰되었다. Advate 및 rFⅧFc에 대한 IVR 및 K 값은 비슷하게 나타난다. Advate 및 rFⅧFc의 투여량을 증가할 때, TBLP1 및 TBLP3 값에서의 약간의 증가가 관찰된다. 반대로, Advate 및 rFⅧFc의 투여량을 증가할 때, 평균 IVR 및 K 값에서의 약간의 감소도 나타났다. 상기에서 나타난 대로, 이 변수들의 투여량 의존성에 대한 평가는 제한된 투여량 수준으로 인해 더 높게 나타난다.In addition to the first PK variable, a second PK variable (eg K value, IVR, etc.) was determined to evaluate the FⅧ persistence effect of the effect. Also in rF PFc showing increased TBLP1 and TBLP3 values compared to Advate at the same dose, evidence of PK difference was observed. IVR and K values for Advate and rFⅧFc appear similar. When increasing the doses of Advate and rFⅧFc, a slight increase in TBLP1 and TBLP3 values is observed. Conversely, with increasing doses of Advate and rFⅧFc, there was also a slight decrease in mean IVR and K values. As indicated above, the assessment of dose dependence of these variables is higher due to limited dose levels.

평균(±SD) 관측 TBLP1은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 2.88±0.733 및 2.93±0.848 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 4.28±0.873 및 5.16±2.02 IU/㎏ 당 IU/㎗이다. 평균(±SD) 관측 TBLP3은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 2.06±0.527 및 2.26±0.666 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 3.09±0.623 및 3.93±1.59 IU/㎏ 당 IU/㎗이다.Mean (± SD) observed TBLP1 was 2.88 ± 0.733 and 2.93 ± 0.848 IU / kg for Advate and 4.28 ± 0.873 and 5.16 ± 2.02 IU / kg for rF IFc in 25 and 65 IU / kg dosing groups, respectively. IU / dl per kg. Mean (± SD) observed TBLP3 was 2.06 ± 0.527 and 2.26 ± 0.666 IU / kg per Advate in the 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively, and 3.09 ± 0.623 and 3.93 ± 1.59 IU / kg for rF rFc. IU / dl per kg.

관찰된 Cmax 값을 사용하여 계산된 평균 IVR 및 K값(모델 내에 기준선 및 잔류 약물을 삭감)은 일반적으로 모델 예측 Cmax 값을 사용하여 결정된 값들보다 크며, 이는 일 구획 모델을 사용하여 관찰된 피크 활성을 약간 과소평가(underestimation)한 값과 일치한다. 평균(±SD) 관측 K값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 2.57±0.198 및 2.13±0.598 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 2.46±0.330 및 1.85±0.332 IU/㎏ 당 IU/㎗이다. 평균(±SD) 관측 IVR값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 94.1±15.6 및 85.8±16.5 %이고, rFⅧFc에 대하여 89.5±11.9 및 74.8±6.72 %이다.The average IVR and K values (reduced baseline and residual drug in the model) calculated using the observed Cmax values are generally greater than those determined using the model predicted Cmax values, which is the peak activity observed using one compartment model. Matches a slightly underestimated value. Mean (± SD) K values are 2.57 ± 0.198 and 2.13 ± 0.598 IU / kg for Advate, 2.46 ± 0.330 and 1.85 ± 0.332 IU, for 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. IU / dl / kg. Mean (± SD) observed IVR values were 94.1 ± 15.6 and 85.8 ± 16.5% for Advate and 89.5 ± 11.9 and 74.8 ± 6.72% for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively.

단일 투여시의 약동학(Pharmacokinetics at Single Dose ( 발색Color 에세이) Essay)

관찰된 FⅧ 활성은 평균(±SD) 관측 Cmax 값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 70.2±9.60 및 157±38.6 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 70.3±10.0 및 158±34.7 IU/㎗로서, Advate 또는 rFⅧFc 중 어느 하나에 대한 짧은 Ⅳ 주입 직후에 급격히 증가한다.The observed FVIII activity was mean (± SD) Observed Cmax values were 70.2 ± 9.60 and 157 ± 38.6 IU / dL for Advate and 70.3 ± 10.0 and 158 ± 34.7 for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. As IU / d, it increases rapidly shortly after a short IV injection to either Advate or rF_Fc.

모든 Advate 및 rFⅧFc 처리 환자들은 FⅧ 활성에서 투여량에 따른 증가를 나타낸다. Cmax 및 AUCINF 모두에서 관찰된 증가는 평가된 투여량 범위에서 투여량에는 비례한다고 하기에는 조금 부족하다.All Advate and rFⅧFc treated patients showed a dose dependent increase in FⅧ activity. The increase observed in both Cmax and AUC INF is slightly insufficient to be proportional to dose in the range of doses evaluated.

투여 종료 후, 관찰된 FⅧ 활성의 감소는 기준 수준에 도달할 때까지 1차 지수함수적인 감소(decay) 특성을 보인다. FⅧ 활성의 감소 속도는 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, 평균(±SD) 모델 예측 제거 반감기 값이 Advate에 대하여 10.7±1.98 및 10.3±3.27 시간이고, rFⅧFc에 대하여 16.2±2.92 및 19.0±7.94 시간으로, Advate에 비해 rFⅧFc이 느리다. 제거 반감기 값은 양쪽 FⅧ 산물에 대해 평가된 투여량 범위에서 투여량과 무관한 것으로 보인다.After the end of dosing, the observed decrease in FVIII activity shows a first exponential decay until reaching the baseline level. The rate of decrease of FVIII activity was in the 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively, with mean (± SD) model predicted clearance half-life values of 10.7 ± 1.98 and 10.3 ± 3.27 hours for Advate and 16.2 ± 2.92 and 19.0 ± for rFⅧFc. At 7.94 hours, rFⅧFc is slower than Advate. Elimination half-life values appear to be dose-independent in the dosage ranges evaluated for both FVIII products.

총 전신 FⅧ 노출(AUCINF로 평가된)은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate보다 rFⅧFc 투여 후가 많게는 53% 및 84% 더 크다. 평균(±SD) 모델 예측 AUCINF 값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 1080±236 및 2320±784 hr*IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 1650±408 및 4280±1860 hr*IU/㎗이다.Total systemic FVIII exposure (assessed with AUC INF ) was 53% and 84% greater after rFVFc than Advate in the 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. Mean (± SD) model prediction AUC INF values were 1080 ± 236 and 2320 ± 784 hr * IU / dL for Advate and 1650 ± 408 and 4280 ± 1860 hr for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively * IU / ㎗

제거 반감기와 비슷하게, MRT는 Advate에 비해 rFⅧFc에 대해서 연장되었다. 평균(±SD) 모델 예측 MRT 값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 15.3±2.86 및 14.8±4.72 시간이고, rFⅧFc에 대하여 23.4±4.22 및 27.3±11.4 시간이다. MRT 값은 양쪽 FⅧ 산물에 대해 평가된 투여량 범위에서 투여량과 무관한 것으로 보인다.Similar to elimination half-life, MRT was extended for rFⅧFc compared to Advate. Mean (± SD) model predicted MRT values were 15.3 ± 2.86 and 14.8 ± 4.72 hours for Advate and 23.4 ± 4.22 and 27.3 ± 11.4 hours for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. MRT values appear to be dose independent in the dose ranges evaluated for both FVIII products.

추가로, CL 및 V에 대한 1차 PK 변수 값도 결정되었다. 단지 rFⅧFc에 대한 CL 값이 동일한 투여량에서 Advate에서 관찰될 것의 많게는 58-66%를 차지하였다. 평균(±SD) 모델 예측 CL 값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 2.39±0.527 및 3.21±1.40 ㎖/hr/㎏이고, rFⅧFc에 대하여 1.57±0.349 및 1.86±0.970 ㎖/hr/㎏이다. V 값은 평균(±SD) 모델 예측 V 값이 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 35.8±5.52 및 43.6±11.2 ㎖/㎏이고, rFⅧFc에 대하여 35.9±6.65 및 42.7±8.91 ㎖/㎏으로, Advate와 rFⅧFc 간에 유사하다. Advate와 rFⅧFc의 투여량 증가시 평균 CL 및 V 값의 증가를 알 수 있었으나, 제한 투여량 수준과 병행한 65 IU/㎏에서의 표준 편차 상의 증가는 이 변수들의 투여량 의존성의 평가를 조금 높게 나타나게 한다.In addition, the primary PK variable values for CL and V were also determined. Only CL values for rFⅧFc accounted for as much as 58-66% of what would be observed in Advate at the same dose. Mean (± SD) model predicted CL values are 2.39 ± 0.527 and 3.21 ± 1.40 mL / hr / kg for Advate and 1.57 ± 0.349 and 1.86 ± 0.970 mL / for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. hr / kg. V values were 35.8 ± 5.52 and 43.6 ± 11.2 ml / kg for Advate and 35.9 ± 6.65 and 42.7 ± 8.91 ml for rFⅧFc in mean (± SD) model predicted V values in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively / Kg, similar between Advate and rFⅧFc. Increasing the mean CL and V values with increasing doses of Advate and rFⅧFc showed an increase in the standard deviation at 65 IU / kg in parallel with the limiting dose level resulting in a slightly higher assessment of dose dependence of these variables. do.

1차 PK 변수에 덧붙여, FⅧ 지속 효과를 평가하기 위하여 2차 변수도 결정되었다. 동일한 투여량에서의 Advate에 비하여 rFⅧFc에서 증가된 TBLP1 및 TBLP3 값을 보일 때 PK 차이의 증거도 또한 관찰되었다. Advate 및 rFⅧFc에 대한 IVR 및 K 값은 비슷한 것으로 보인다.In addition to the primary PK variables, secondary variables were also determined to evaluate the FⅧ persistence effect. Evidence of PK differences was also observed when showing increased TBLP1 and TBLP3 values in rFⅧFc compared to Advate at the same dose. IVR and K values for Advate and rFⅧFc appear similar.

Advate 및 rFⅧFc의 투여량을 증가시킬 때, TBLP1 및 TBLP3 값에서의 약간의 증가가 관찰되었다. 반대로, Advate 및 rFⅧFc의 투여량을 증가시킬 때, 평균 IVR 및 K 값이 약간 감소한 것으로 나타났다. 상기에서 나타난 바와 같이, 이 변수들의 투여량 의존성에 대한 평가는 제한 투여 수준에 의하여 조금 높게 나타난다.When increasing the doses of Advate and rFⅧFc, a slight increase in TBLP1 and TBLP3 values was observed. Conversely, when increasing the doses of Advate and rFⅧFc, the average IVR and K values were found to decrease slightly. As indicated above, the assessment of dose dependence of these variables is slightly higher by the limiting dose level.

평균(±SD) 관측 TBLP1은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 2.70±0.511 및 3.09±0.978 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 4.06±0.798 및 5.66±2.38 IU/㎏ 당 IU/㎗이다. 평균(±SD) 관측 TBLP3은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 1.98±0.377 및 2.39±0.718 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 3.04±0.598 및 4.44±1.84 IU/㎏ 당 IU/㎗이다.Mean (± SD) observed TBLP1 is 2.70 ± 0.511 and 3.09 ± 0.978 IU / kg for Advate and 4.06 ± 0.798 and 5.66 ± 2.38 IU / kg for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively IU / dl per kg. Mean (± SD) observed TBLP3 was IU / kV per 1.98 ± 0.377 and 2.39 ± 0.718 IU / kg for Advate and 3.04 ± 0.598 and 4.44 ± 1.84 IU / kg for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively. IU / dl per kg.

관찰된 Cmax 값을 사용하여 계산된 평균 IVR 및 K값(모델 내의 기준선 및 잔류 약물을 삭감)은 일반적으로 모델 예측 Cmax 값을 사용하여 결정한 값들보다 크며, 이는 일-구획 모델을 사용하여 관찰된 피크 활성을 약간 과소평가한 값과 일치한다. 평균(±SD) 관측 K값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 3.08±0.429 및 2.85±0.721 IU/㎏ 당 IU/㎗이고, rFⅧFc에 대하여 3.12±0.451 및 2.92±0.985 IU/㎏ 당 IU/㎗이다. 평균(±SD) 관측 IVR값은 각각 25 및 65 IU/㎏ 투여 그룹에서, Advate에 대하여 112±14.5 및 116±26.9 %이고, rFⅧFc에 대하여 113±16.3 및 117±33.6 %이다.The average IVR and K values (reduced baseline and residual drug in the model) calculated using the observed Cmax values are generally greater than those determined using the model predicted Cmax values, which are peaks observed using the one-compartment model. This is consistent with a slight underestimation of activity. Mean (± SD) K values are 3.08 ± 0.429 and 2.85 ± 0.721 IU / kg per Advate and 3.12 ± 0.451 and 2.92 ± 0.985 IU for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dosing groups, respectively. IU / dl / kg. Mean (± SD) observed IVR values were 112 ± 14.5 and 116 ± 26.9% for Advate and 113 ± 16.3 and 117 ± 33.6% for rFⅧFc in 25 and 65 IU / kg dose groups, respectively.

결론conclusion

모든 Advate 및 rFⅧFc 처리된 환자들은 평가된 투여 범위에서 Cmax 및 AUCINF에서 유사한 투여량 관련 증가를 보였다. Advate 및 rFⅧFc 활성의 피크 혈장 수준은 일반적으로 투여 종료 후 첫 1시간 내에 관찰되며, 투여후 수일 동안 탐지가능하게 유지된다. 투여 종료 후, 수정된 기준 FⅧ 활성의 감소는 양쪽 산물에 대하여 기준선에 도달할 때까지 일차지수함수적 감소를 보여준다. 제거 반감기 및 MRT에 대한 변수값은 양쪽 FⅧ 산물에 대해 평가된 투여 범위 내에서 투여량과 무관한 것으로 보인다. Advate 및 rFⅧFc 투여량을 증가할 때 평균 CL 및 V 값이 약간 증가한 것을 알 수 있으나, 제한 투여량 수준과 병행한 65 IU/㎏에서 환자 간 다양성이 증가한 것은 이 변수들의 투여량 의존성 평가를 조금 높게 나타나게 한다.All Advate and rFⅧFc treated patients showed similar dose related increases in Cmax and AUC INF over the range of doses evaluated. Peak plasma levels of Advate and rFⅧFc activity are generally observed within the first hour after the end of dosing and remain detectable for several days after dosing. After the end of dosing, the modified decrease in baseline FVIII activity shows a linear exponential decrease until reaching baseline for both products. Variable values for elimination half-life and MRT appear to be dose-independent within the range of doses evaluated for both FVIII products. The mean CL and V values increased slightly with increasing advate and rFⅧFc doses, but increased inter-patient variability at 65 IU / kg in parallel with the limiting dose level increased the dose-dependent assessment of these variables. Make it appear.

Advate 및 rFⅧFc의 PK를 비교함으로서 유사한 투여량에서의 Advate에 비해 rFⅧFc의 경우 전신 노출에서 대략 48-61%(단일 단계 에세이) 또는 53-84%(발색 에세이)의 증가, 클리어런스에서는 대략 30-40% 감소, 및 제거 반감기 및 MRT 모두에서 대략 50-80% 증가한 것으로 드러났다. 또한 동일 투여량의 Advate에 비해 rFⅧFc가 증가된 TBLP1 및 TBLP3 값을 나타낼 때 PK 차이의 증거도 관찰되었다. Advate 및 rFⅧFc에 대한 IVR 및 K 값은 유사한 것으로 보인다.Comparing the PKs of Advate and rFⅧFc, an increase of approximately 48-61% (single-stage essay) or 53-84% (colored essay) in systemic exposure, approximately 30-40 in clearance, compared to Advate at similar doses It was found to increase approximately 50-80% in both% reduction, and elimination half-life and MRT. Evidence of PK differences was also observed when rFⅧFc showed increased TBLP1 and TBLP3 values compared to the same dose of Advate. IVR and K values for Advate and rFⅧFc appear to be similar.

발색 에세이에서 얻은 PK 변수는, 발색 에세이가 더 높은 노출 변수(예를 들어, Cmax, AUCINF 등)의 평가를 얻었다는 것만 제외하고는 일반적으로 단일 단계 에세이에서 얻은 변수와 일치되게 나왔다.The PK variables obtained in the coloration assays generally came out consistent with the variables obtained in the single step assays, except that the coloration assays obtained evaluation of higher exposure variables (eg, Cmax, AUCINF, etc.).

PK의 개선이 관찰됨으로서, rFⅧFc는 출혈로부터의 보호를 연장하여, A형 혈우병 개체들이 빈번한 주사를 덜 맞도록 해준다.As improvements in PK have been observed, rFⅧFc prolongs protection from bleeding, making hemophilia A patients less frequently injected.

[[ 실시예Example 8] 8]

rFⅧ:Fc에 대한 첫 번째 인체 연구로부터 얻은 PK 중간 분석(실시예 3)에 기초하여, A-LONG 연구가 설계되었다. A-LONG은 과거 중증의 A형 혈우병(1 IU/㎗ 미만(1% 미만)의 내재 FⅧ로 정의된)으로 치료받은 대상체에서의 출혈 예방 및 치료에 있어서, 재조합 인자 Ⅷ Fc 융합체(FⅧ:Fc)의 안전성, 약동학 및 효능에 대한 공개 수준의 다기관적 평가이다.Based on the PK intermediate analysis (Example 3) obtained from the first human study on rFⅧ: Fc, the A-LONG study was designed. A-LONG is a recombinant factor Ⅷ Fc fusion (FⅧ: Fc) for the prevention and treatment of bleeding in subjects previously treated with severe hemophilia A, defined as an intrinsic FV of less than 1 IU / dL (<1%). Open level multicenter assessment of the safety, pharmacokinetics, and efficacy of

대략 106명의 환자가 3개의 치료 요법, 즉 맞춤형 예방 요법(암(arm) 1), 일주일 투여 요법(암 2), 및 주문형 요법(암 3)을 위해 등록되었다.Approximately 106 patients were enrolled for three treatment regimens: customized prophylaxis (arm 1), weekly dosing regimen (cancer 2), and on-demand therapy (cancer 3).

암 1: 맞춤형 예방 요법Cancer 1: Customized Prophylaxis

암(arm) 1은 전체 그룹 및 PK 서브 그룹을 포함한다. 대략 66명의 환자들이 등록된다. 초기 요법은 첫날에 25 IU/㎏으로 일주일에 두 번씩, 그 후에는 그 주의 4일차에 50 IU/㎏으로 실시한다. 환자들에게는 이러한 일주일 예방 요법에서 rFⅧFc에 대한 PK 결과가 나올 때까지 rFⅧFc가 투여된다. 이러한 결과에 기초하여, 맞춤형 예방 요법은 각 개인에 대하여 확립되며, 1-3% FⅧ 활성의 최저 수준을 유지하도록 투여량 및 그 간격을 결정한다. 각 환자는 자신의 개별 맞춤 예방 요법으로 본 연구 동안 계속 투여받는다.Arm 1 includes the entire group and the PK subgroup. Approximately 66 patients are enrolled. Initial therapy is given twice a week at 25 IU / kg on the first day and then 50 IU / kg on the fourth day of the week. Patients receive rFⅧFc until this week's prophylaxis results in a PK result for rFⅧFc. Based on these results, tailored prophylaxis is established for each individual, and dosages and intervals are determined to maintain the lowest level of 1-3% FVIII activity. Each patient will continue to be administered during this study in their personalized prophylaxis.

환자들은 본 연구 내내 관찰되며, 투여량 및 간격에 대하여 계속적으로 조정될 것이다. 환자가 계속되는 2달의 기간 동안 2회 이상의 자발성 출혈로 정의되는 허용불가능한 출혈 사례를 경험하는 경우에만 조정이 이루어질 것이다. 이 경우, 조정은 3-5%의 최저 수준을 목표로 할 것이다.Patients will be observed throughout the study and will continue to adjust for dose and interval. Adjustments will only be made if the patient experiences an unacceptable bleeding event defined as two or more spontaneous bleedings over a two month period of duration. In this case, the adjustment will aim at the lowest level of 3-5%.

암 2: 일주일 투여 요법Cancer 2: weekly dosing regimen

대략 20명의 환자들을 등록/무작위로 순서를 정하여, 축약된 rFⅧFc PK 프로파일링을 하기와 같이 실시하였다: 적어도 96시간의 세척, rFⅧFc 65 IU/㎏의 1회 투여; 0일차에 시작하여 rFⅧFc 투여 전 및 투여 시작 후 10(±2)분, 3시간 (±15분), 72(±2) 시간[3일], 및 96(±2) 시간[4일]을 포함한 단축 샘플링. 단축 PK 프로파일링 이후에, 환자들은 매 7일마다 65 IU/㎏ 고정량의 rFⅧFc을 투여받았다.Approximately 20 patients were enrolled / randomly ordered and abbreviated rF_Fc PK profiling was performed as follows: at least 96 hours of washing, one dose of rF_Fc 65 IU / kg; Start on day 0 and receive 10 (± 2) minutes, 3 hours (± 15 minutes), 72 (± 2) hours [3 days], and 96 (± 2) hours [4 days] before and after rFⅧFc administration. Including uniaxial sampling. After short PK profiling, patients received a fixed dose of rF rFc at 65 IU / kg every 7 days.

암 3: 주문형 치료Cancer 3: On-demand Treatment

적어도 5명의 환자들이 받은 최소 10번의 대수술에 대해 본 연구에서 평가하였다. 대수술은 일반적 마취 및/또한 호흡 보조 수단을 수반하며, 주요 체강이 관통 및 노출되거나 또는 물리적 또는 생리적 기능의 심각한 장애가 생성되는 경우를 위한 외과적 과정(비응급 또는 응급)(예를 들어, 개복술, 개흉술, 개두술, 관절 치환술 및 사지 절단술)으로 정의된다.At least 10 major surgeries in at least 5 patients were evaluated in this study. Major surgery involves general anesthesia and / or respiratory aids and surgical procedures (non-emergency or emergency) for cases where the major body cavity penetrates and is exposed or a serious disorder of physical or physiological function is generated (e.g., laparotomy, Thoracotomy, craniotomy, arthroplasty and limb amputation).

수술 도중의 예방을 위하여, 환자들은 매 12 내지 24시간 마다 35 내지 50 IU/㎏의 rFⅧFc로 처리된다. 수술에 앞서, 의사들은 환자의 rFⅧFc PK 프로파일을 검토하고 환자의 계획된 수술 타입 및 임상 상태에 일반적으로 요구되는 인자 Ⅷ 치환의 투여 요법을 평가할 것이다. 재활 시간을 포함한 수술 치료 시기 도중 적절한 rFⅧFc 투여를 추천할 경우 상기 인자를 고려할 것이다.For prevention during surgery, patients are treated with rF_Fc of 35-50 IU / kg every 12-24 hours. Prior to surgery, doctors will review the patient's rFⅧFc PK profile and evaluate the dosing regimen of factor VII substitutions generally required for the patient's planned surgery type and clinical condition. These factors will be considered when recommending appropriate rFⅧFc administration during the surgical treatment period, including rehabilitation time.

본 연구의 1차적 목적은 (a) 예방, 주문형 치료 및 수술 치료 요법에서 투여된 rFⅧFc의 안정성 및 내구성을 평가하고, (b) 예방, 주문형 및 수술 치료 요법에서 투여되는 rFⅧFc의 효능을 평가하기 위함이다. 본 연구의 2번째 목적은 (a) rFⅧFc의 PK 프로파일을 특징화하여 시판 제품, Advate 및 FⅧFc의 PK와 비교하고, (b) FⅧFc에 대한 개별적 반응을 평가하고, 및 (c) FⅧFc 소비량을 평가하기 위함이다.The primary purpose of this study was to (a) assess the stability and durability of rFⅧFc administered in prophylactic, on-demand and surgical treatment regimens, and (b) to evaluate the efficacy of rFⅧFc administered in prophylactic, on-demand and surgical treatment regimens. to be. The second objective of this study was to (a) characterize the PK profile of rFⅧFc and compare it with the PKs of commercial products, Advate and FⅧFc, (b) evaluate individual responses to FⅧFc, and (c) evaluate FⅧFc consumption. To do this.

1차 목적Primary purpose

- 예방, 일주일 치료, 주문형 치료, 및 수술 치료 요법에서 투여되는 rFⅧFc의 안정성 및 내구성 평가Assessment of the stability and durability of rFⅧFc administered in prophylactic, weekly, on-demand, and surgical treatment regimens

- 맞춤형 예방, 주문형 치료, 및 수술 치료 요법에서 투여된 rFⅧFc의 효능 평가Evaluation of the efficacy of rFⅧFc administered in customized prophylaxis, on-demand treatment, and surgical treatment regimen

2차 평가2nd evaluation

- rFⅧFc의 PK 프로파일을 특성화하여 시판 제품인 Advate(등록상표)및 rFⅧFc의 PK와 비교Characterize the PK profile of rFⅧFc and compare it with the commercially available Pv of Advate® and rFⅧFc

- rFⅧFc에 대한 개별적 반응 평가-individual response to rFⅧFc

- 예방 요법에서 출혈을 적절히 방지하는데 요구되는 투여량 및 일정 범위의 특성화, 수술 세팅에서의 항상성 유지, 또는 주문형 치료, 일주일 치료 또는 예방적 세팅에서의 출혈 사례에 대한 치료Dosage and range of characterization required to adequately prevent bleeding in prophylaxis, maintain homeostasis in surgical settings, or treatment for cases of bleeding on-demand, weekly or prophylactic settings

- rFⅧFc 소비량 평가(예를 들어, 환자당 rFⅧFc의 총 연간 소비량)rFⅧFc consumption assessment (eg total annual consumption of rFⅧFc per patient)

[[ 실시예Example 9] 9]

실시예 8의 연구에서의 단일 단계 활성화된 부분 트로보플라빈 시간(aPTT) 에세이에 의한 혈장내 FⅧ 활성의 측정에 추가하여, 순환 혈전탄성측정기(ROTEM)을 또한 이용하여 2명의 환자들, 특히 저 투여량 코호트에서 1명 및 고 투여량에서 1명에 대하여 rFⅧFc 및 Advate에 의한 포괄적 항상성 개선을 평가하였다.In addition to the measurement of plasma FVIII activity by the single-step activated partial troboflavin time (aPTT) assay in the study of Example 8, two patients, especially low, were also using a circulating thrombus (ROTEM) Comprehensive homeostasis improvement by rFⅧFc and Advate was evaluated for one at the dose cohort and one at the high dose.

rFⅧFc 치료에 앞서 환자의 혈액으로 투입될 때, rFⅧFc 및 Advate는 응혈 형성에 대하여 동등한 활성을 갖는 것으로 보인다. 혈액 응고 시간(CT)는 정상인의 100%에 대한 대략 1%의 범위에서 rFⅧFc 및 Advate 투여량에 관하여 직선을 나타내며, 투여 반응은 동일 환자들에서 rFⅧFc 및 Advate 간에 유사하다.When injected into the patient's blood prior to rFⅧFc treatment, rFⅧFc and Advate appear to have equal activity against clot formation. Blood clotting time (CT) represents a straight line with respect to rFⅧFc and Advate doses in the range of approximately 1% for 100% of normal subjects, with the dose response being similar between rFⅧFc and Advate in the same patients.

Advate 및 그 후의 rFⅧFc 투여에 이어, 다양한 시점에서 시트르산 처리된 전혈 샘플을 채취하였고, 칼슘 보강 후 응혈 형성을 ROTEM으로 모니터하였다. rFⅧFc 또는 Advate 투여에 앞서 잔여 FⅧ 수준에 의해 기준 CT가 다양함에도 불구하고, 투여 30분 후에는 양쪽 산물에서 CT가 유사한 수준으로 효과적으로 수정된다. 게다가, CT 상의 개선은 저 투여량으로 투여된 환자들에서의 Advate에 비하여, 25 IU/㎏의 rFⅧFc를 투여한 때 투여 후 3시간 및 그 이후에 더 잘 유지된다. 그러나, 65 IU/㎏에서는 Advate에 비해 rFⅧFc의 차별화된 개선을 감지하기가 쉽지 않다.Following Advate and subsequent rFⅧFc administration, citric acid treated whole blood samples were taken at various time points and clot formation after calcium enrichment was monitored by ROTEM. Although the baseline CT varies by residual FV levels prior to rFⅧFc or Advate administration, CT is effectively corrected to similar levels in both products 30 minutes after administration. In addition, the improvement on CT is better maintained 3 hours after and after administration of 25 IU / kg of rFⅧFc compared to Advate in patients administered at low doses. However, at 65 IU / kg, it is not easy to detect the differential improvement of rFⅧFc compared to Advate.

Figure pct00001
Figure pct00001

Figure pct00002
Figure pct00002

Figure pct00003
Figure pct00003

Figure pct00004
Figure pct00004

Figure pct00005
Figure pct00005

Figure pct00006
Figure pct00006

Figure pct00007
Figure pct00007

Figure pct00008
Figure pct00008

Figure pct00009
Figure pct00009

Figure pct00010
Figure pct00010

Figure pct00011
Figure pct00011

Figure pct00012
Figure pct00012

Figure pct00013
Figure pct00013

Figure pct00014
Figure pct00014

Figure pct00015
Figure pct00015

Figure pct00016
Figure pct00016

Figure pct00017
Figure pct00017

Figure pct00018
Figure pct00018

Figure pct00019
Figure pct00019

Figure pct00020
Figure pct00020

Figure pct00021
Figure pct00021

Figure pct00022
Figure pct00022

Figure pct00023
Figure pct00023

Figure pct00024
Figure pct00024

Figure pct00025
Figure pct00025

Figure pct00026
Figure pct00026

Figure pct00027
Figure pct00027

Figure pct00028
Figure pct00028

Figure pct00029
Figure pct00029

Figure pct00030
Figure pct00030

Figure pct00031
Figure pct00031

Figure pct00032
Figure pct00032

Figure pct00033
Figure pct00033

Figure pct00034
Figure pct00034

SEQUENCE LISTING <110> BIOGEN IDEC INC. DUMONT, Jennifer A. LOW, Susan BITONTI, Alan J. PIERCE, Glenn LUK, Alvin JIANG, Haiyan MCKINNEY, Byron OTTMER, Matt OMMER, Jurg NUGENT, Karen LI, Lian PETERS, Robert <120> FACTOR VIII-Fc CHIMERIC AND HYBRID POLYPEPTIDES, AND METHODS OF USE THEREOF <130> 2159.274PC07 <140> PCT/US2010/059136 <141> 2010-12-06 <150> 61/419,676 <151> 2010-12-03 <150> 61/410,929 <151> 2010-11-07 <150> 61/373,113 <151> 2010-08-12 <150> 61/363,065 <151> 2010-07-09 <150> 61/301,592 <151> 2010-02-04 <150> 61/285,054 <151> 2009-12-09 <150> 61/267,070 <151> 2009-12-06 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5052 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Domain Deleted FVIIIFc Chain <220> <221> misc_feature <222> (1)..(57) <223> FVIII signal <220> <221> misc_feature <222> (4372)..(5052) <223> Fc region <400> 1 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctctcaaa acccaccagt cttgaaacgc catcaacggg aaataactcg tactactctt 2340 cagtcagatc aagaggaaat tgactatgat gataccatat cagttgaaat gaagaaggaa 2400 gattttgaca tttatgatga ggatgaaaat cagagccccc gcagctttca aaagaaaaca 2460 cgacactatt ttattgctgc agtggagagg ctctgggatt atgggatgag tagctcccca 2520 catgttctaa gaaacagggc tcagagtggc agtgtccctc agttcaagaa agttgttttc 2580 caggaattta ctgatggctc ctttactcag cccttatacc gtggagaact aaatgaacat 2640 ttgggactcc tggggccata tataagagca gaagttgaag ataatatcat ggtaactttc 2700 agaaatcagg cctctcgtcc ctattccttc tattctagcc ttatttctta tgaggaagat 2760 cagaggcaag gagcagaacc tagaaaaaac tttgtcaagc ctaatgaaac caaaacttac 2820 ttttggaaag tgcaacatca tatggcaccc actaaagatg agtttgactg caaagcctgg 2880 gcttatttct ctgatgttga cctggaaaaa gatgtgcact caggcctgat tggacccctt 2940 ctggtctgcc acactaacac actgaaccct gctcatggga gacaagtgac agtacaggaa 3000 tttgctctgt ttttcaccat ctttgatgag accaaaagct ggtacttcac tgaaaatatg 3060 gaaagaaact gcagggctcc ctgcaatatc cagatggaag atcccacttt taaagagaat 3120 tatcgcttcc atgcaatcaa tggctacata atggatacac tacctggctt agtaatggct 3180 caggatcaaa ggattcgatg gtatctgctc agcatgggca gcaatgaaaa catccattct 3240 attcatttca gtggacatgt gttcactgta cgaaaaaaag aggagtataa aatggcactg 3300 tacaatctct atccaggtgt ttttgagaca gtggaaatgt taccatccaa agctggaatt 3360 tggcgggtgg aatgccttat tggcgagcat ctacatgctg ggatgagcac actttttctg 3420 gtgtacagca ataagtgtca gactcccctg ggaatggctt ctggacacat tagagatttt 3480 cagattacag cttcaggaca atatggacag tgggccccaa agctggccag acttcattat 3540 tccggatcaa tcaatgcctg gagcaccaag gagccctttt cttggatcaa ggtggatctg 3600 ttggcaccaa tgattattca cggcatcaag acccagggtg cccgtcagaa gttctccagc 3660 ctctacatct ctcagtttat catcatgtat agtcttgatg ggaagaagtg gcagacttat 3720 cgaggaaatt ccactggaac cttaatggtc ttctttggca atgtggattc atctgggata 3780 aaacacaata tttttaaccc tccaattatt gctcgataca tccgtttgca cccaactcat 3840 tatagcattc gcagcactct tcgcatggag ttgatgggct gtgatttaaa tagttgcagc 3900 atgccattgg gaatggagag taaagcaata tcagatgcac agattactgc ttcatcctac 3960 tttaccaata tgtttgccac ctggtctcct tcaaaagctc gacttcacct ccaagggagg 4020 agtaatgcct ggagacctca ggtgaataat ccaaaagagt ggctgcaagt ggacttccag 4080 aagacaatga aagtcacagg agtaactact cagggagtaa aatctctgct taccagcatg 4140 tatgtgaagg agttcctcat ctccagcagt caagatggcc atcagtggac tctctttttt 4200 cagaatggca aagtaaaggt ttttcaggga aatcaagact ccttcacacc tgtggtgaac 4260 tctctagacc caccgttact gactcgctac cttcgaattc acccccagag ttgggtgcac 4320 cagattgccc tgaggatgga ggttctgggc tgcgaggcac aggacctcta cgacaaaact 4380 cacacatgcc caccgtgccc agctccagaa ctcctgggcg gaccgtcagt cttcctcttc 4440 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 4500 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 4560 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 4620 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 4680 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 4740 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 4800 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 4860 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgttggactc cgacggctcc 4920 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 4980 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 5040 tctccgggta aa 5052 <210> 2 <211> 1684 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B domain deleted FVIII-Fc chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(753) <223> Heavy chain (HC) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760)..(773) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1457)..(1684) <223> Fc region <400> 2 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser 20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg 35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val 50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser 100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp 130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile 180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr 195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly 210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val 260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile 275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser 290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro 340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp 355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser 370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn 420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met 435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu 450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys 500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe 515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp 530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val 580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu 595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp 610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe 660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr 675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro 690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys 740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu 755 760 765 Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln 770 775 780 Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu 785 790 795 800 Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe 805 810 815 Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp 820 825 830 Asp Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln 835 840 845 Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr 850 855 860 Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His 865 870 875 880 Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile 885 890 895 Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser 900 905 910 Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg 915 920 925 Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val 930 935 940 Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp 945 950 955 960 Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu 965 970 975 Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His 980 985 990 Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe 995 1000 1005 Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn 1010 1015 1020 Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys 1025 1030 1035 Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr 1040 1045 1050 Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr 1055 1060 1065 Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe 1070 1075 1080 Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met 1085 1090 1095 Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met 1100 1105 1110 Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly 1115 1120 1125 Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser 1130 1135 1140 Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg 1145 1150 1155 Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro 1160 1165 1170 Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser 1175 1180 1185 Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro 1190 1195 1200 Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe 1205 1210 1215 Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp 1220 1225 1230 Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu 1235 1240 1245 Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn 1250 1255 1260 Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro 1265 1270 1275 Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly 1280 1285 1290 Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys 1295 1300 1305 Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn 1310 1315 1320 Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln 1325 1330 1335 Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu 1340 1345 1350 Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val 1355 1360 1365 Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys 1370 1375 1380 Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu 1385 1390 1395 Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp 1400 1405 1410 Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr 1415 1420 1425 Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala 1430 1435 1440 Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr Asp 1445 1450 1455 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1460 1465 1470 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 1475 1480 1485 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 1490 1495 1500 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 1505 1510 1515 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 1520 1525 1530 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 1535 1540 1545 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 1550 1555 1560 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 1565 1570 1575 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 1580 1585 1590 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 1595 1600 1605 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 1610 1615 1620 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 1625 1630 1635 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 1640 1645 1650 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 1655 1660 1665 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1670 1675 1680 Lys <210> 3 <211> 741 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc region <220> <221> misc_signal <222> (1)..(60) <223> Mouse Ig kappa signal <400> 3 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggagg accgtcagtc 120 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 180 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 240 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 300 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 360 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 420 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgcgatga gctgaccaag 480 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 540 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gttggactcc 600 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 660 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 720 ctctccctgt ctccgggtaa a 741 <210> 4 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> heterologous signal from Mouse Ig kappa chain <400> 4 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 20 25 30 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 35 40 45 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 50 55 60 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 65 70 75 80 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 85 90 95 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 100 105 110 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 115 120 125 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 130 135 140 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 145 150 155 160 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 165 170 175 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 180 185 190 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 195 200 205 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 210 215 220 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 <210> 5 <211> 7734 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Full length FVIIIFc <220> <221> misc_signal <222> (1)..(57) <223> FVIII signal <220> <221> misc_feature <222> (7054)..(7734) <223> Fc region <400> 5 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctcccaga attcaagaca ccctagcact aggcaaaagc aatttaatgc caccacaatt 2340 ccagaaaatg acatagagaa gactgaccct tggtttgcac acagaacacc tatgcctaaa 2400 atacaaaatg tctcctctag tgatttgttg atgctcttgc gacagagtcc tactccacat 2460 gggctatcct tatctgatct ccaagaagcc aaatatgaga ctttttctga tgatccatca 2520 cctggagcaa tagacagtaa taacagcctg tctgaaatga cacacttcag gccacagctc 2580 catcacagtg gggacatggt atttacccct gagtcaggcc tccaattaag attaaatgag 2640 aaactgggga caactgcagc aacagagttg aagaaacttg atttcaaagt ttctagtaca 2700 tcaaataatc tgatttcaac aattccatca gacaatttgg cagcaggtac tgataataca 2760 agttccttag gacccccaag tatgccagtt cattatgata gtcaattaga taccactcta 2820 tttggcaaaa agtcatctcc ccttactgag tctggtggac ctctgagctt gagtgaagaa 2880 aataatgatt caaagttgtt agaatcaggt ttaatgaata gccaagaaag ttcatgggga 2940 aaaaatgtat cgtcaacaga gagtggtagg ttatttaaag ggaaaagagc tcatggacct 3000 gctttgttga ctaaagataa tgccttattc aaagttagca tctctttgtt aaagacaaac 3060 aaaacttcca ataattcagc aactaataga aagactcaca ttgatggccc atcattatta 3120 attgagaata gtccatcagt ctggcaaaat atattagaaa gtgacactga gtttaaaaaa 3180 gtgacacctt tgattcatga cagaatgctt atggacaaaa atgctacagc tttgaggcta 3240 aatcatatgt caaataaaac tacttcatca aaaaacatgg aaatggtcca acagaaaaaa 3300 gagggcccca ttccaccaga tgcacaaaat ccagatatgt cgttctttaa gatgctattc 3360 ttgccagaat cagcaaggtg gatacaaagg actcatggaa agaactctct gaactctggg 3420 caaggcccca gtccaaagca attagtatcc ttaggaccag aaaaatctgt ggaaggtcag 3480 aatttcttgt ctgagaaaaa caaagtggta gtaggaaagg gtgaatttac aaaggacgta 3540 ggactcaaag agatggtttt tccaagcagc agaaacctat ttcttactaa cttggataat 3600 ttacatgaaa ataatacaca caatcaagaa aaaaaaattc aggaagaaat agaaaagaag 3660 gaaacattaa tccaagagaa tgtagttttg cctcagatac atacagtgac tggcactaag 3720 aatttcatga agaacctttt cttactgagc actaggcaaa atgtagaagg ttcatatgac 3780 ggggcatatg ctccagtact tcaagatttt aggtcattaa atgattcaac aaatagaaca 3840 aagaaacaca cagctcattt ctcaaaaaaa ggggaggaag aaaacttgga aggcttggga 3900 aatcaaacca agcaaattgt agagaaatat gcatgcacca caaggatatc tcctaataca 3960 agccagcaga attttgtcac gcaacgtagt aagagagctt tgaaacaatt cagactccca 4020 ctagaagaaa cagaacttga aaaaaggata attgtggatg acacctcaac ccagtggtcc 4080 aaaaacatga aacatttgac cccgagcacc ctcacacaga tagactacaa tgagaaggag 4140 aaaggggcca ttactcagtc tcccttatca gattgcctta cgaggagtca tagcatccct 4200 caagcaaata gatctccatt acccattgca aaggtatcat catttccatc tattagacct 4260 atatatctga ccagggtcct attccaagac aactcttctc atcttccagc agcatcttat 4320 agaaagaaag attctggggt ccaagaaagc agtcatttct tacaaggagc caaaaaaaat 4380 aacctttctt tagccattct aaccttggag atgactggtg atcaaagaga ggttggctcc 4440 ctggggacaa gtgccacaaa ttcagtcaca tacaagaaag ttgagaacac tgttctcccg 4500 aaaccagact tgcccaaaac atctggcaaa gttgaattgc ttccaaaagt tcacatttat 4560 cagaaggacc tattccctac ggaaactagc aatgggtctc ctggccatct ggatctcgtg 4620 gaagggagcc ttcttcaggg aacagaggga gcgattaagt ggaatgaagc aaacagacct 4680 ggaaaagttc cctttctgag agtagcaaca gaaagctctg caaagactcc ctccaagcta 4740 ttggatcctc ttgcttggga taaccactat ggtactcaga taccaaaaga agagtggaaa 4800 tcccaagaga agtcaccaga aaaaacagct tttaagaaaa aggataccat tttgtccctg 4860 aacgcttgtg aaagcaatca tgcaatagca gcaataaatg agggacaaaa taagcccgaa 4920 atagaagtca cctgggcaaa gcaaggtagg actgaaaggc tgtgctctca aaacccacca 4980 gtcttgaaac gccatcaacg ggaaataact cgtactactc ttcagtcaga tcaagaggaa 5040 attgactatg atgataccat atcagttgaa atgaagaagg aagattttga catttatgat 5100 gaggatgaaa atcagagccc ccgcagcttt caaaagaaaa cacgacacta ttttattgct 5160 gcagtggaga ggctctggga ttatgggatg agtagctccc cacatgttct aagaaacagg 5220 gctcagagtg gcagtgtccc tcagttcaag aaagttgttt tccaggaatt tactgatggc 5280 tcctttactc agcccttata ccgtggagaa ctaaatgaac atttgggact cctggggcca 5340 tatataagag cagaagttga agataatatc atggtaactt tcagaaatca ggcctctcgt 5400 ccctattcct tctattctag ccttatttct tatgaggaag atcagaggca aggagcagaa 5460 cctagaaaaa actttgtcaa gcctaatgaa accaaaactt acttttggaa agtgcaacat 5520 catatggcac ccactaaaga tgagtttgac tgcaaagcct gggcttattt ctctgatgtt 5580 gacctggaaa aagatgtgca ctcaggcctg attggacccc ttctggtctg ccacactaac 5640 acactgaacc ctgctcatgg gagacaagtg acagtacagg aatttgctct gtttttcacc 5700 atctttgatg agaccaaaag ctggtacttc actgaaaata tggaaagaaa ctgcagggct 5760 ccctgcaata tccagatgga agatcccact tttaaagaga attatcgctt ccatgcaatc 5820 aatggctaca taatggatac actacctggc ttagtaatgg ctcaggatca aaggattcga 5880 tggtatctgc tcagcatggg cagcaatgaa aacatccatt ctattcattt cagtggacat 5940 gtgttcactg tacgaaaaaa agaggagtat aaaatggcac tgtacaatct ctatccaggt 6000 gtttttgaga cagtggaaat gttaccatcc aaagctggaa tttggcgggt ggaatgcctt 6060 attggcgagc atctacatgc tgggatgagc acactttttc tggtgtacag caataagtgt 6120 cagactcccc tgggaatggc ttctggacac attagagatt ttcagattac agcttcagga 6180 caatatggac agtgggcccc aaagctggcc agacttcatt attccggatc aatcaatgcc 6240 tggagcacca aggagccctt ttcttggatc aaggtggatc tgttggcacc aatgattatt 6300 cacggcatca agacccaggg tgcccgtcag aagttctcca gcctctacat ctctcagttt 6360 atcatcatgt atagtcttga tgggaagaag tggcagactt atcgaggaaa ttccactgga 6420 accttaatgg tcttctttgg caatgtggat tcatctggga taaaacacaa tatttttaac 6480 cctccaatta ttgctcgata catccgtttg cacccaactc attatagcat tcgcagcact 6540 cttcgcatgg agttgatggg ctgtgattta aatagttgca gcatgccatt gggaatggag 6600 agtaaagcaa tatcagatgc acagattact gcttcatcct actttaccaa tatgtttgcc 6660 acctggtctc cttcaaaagc tcgacttcac ctccaaggga ggagtaatgc ctggagacct 6720 caggtgaata atccaaaaga gtggctgcaa gtggacttcc agaagacaat gaaagtcaca 6780 ggagtaacta ctcagggagt aaaatctctg cttaccagca tgtatgtgaa ggagttcctc 6840 atctccagca gtcaagatgg ccatcagtgg actctctttt ttcagaatgg caaagtaaag 6900 gtttttcagg gaaatcaaga ctccttcaca cctgtggtga actctctaga cccaccgtta 6960 ctgactcgct accttcgaat tcacccccag agttgggtgc accagattgc cctgaggatg 7020 gaggttctgg gctgcgaggc acaggacctc tacgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 7080 ccagctccag aactcctggg cggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 7140 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 7200 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 7260 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 7320 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 7380 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 7440 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 7500 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 7560 aactacaaga ccacgcctcc cgtgttggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 7620 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 7680 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 7734 <210> 6 <211> 2578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Full length FVIIIFc chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(19) <223> FVIII signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(759) <223> HC <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760)..(1667) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2352)..(2578) <223> Fc region <400> 6 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser 20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg 35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val 50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser 100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp 130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile 180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr 195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly 210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val 260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile 275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser 290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro 340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp 355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser 370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn 420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met 435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu 450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys 500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe 515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp 530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val 580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu 595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp 610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe 660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr 675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro 690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys 740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro 755 760 765 Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp 770 775 780 Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys 785 790 795 800 Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser 805 810 815 Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr 820 825 830 Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn 835 840 845 Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly 850 855 860 Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu 865 870 875 880 Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys 885 890 895 Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn 900 905 910 Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met 915 920 925 Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys 930 935 940 Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu 945 950 955 960 Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu 965 970 975 Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe 980 985 990 Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala 995 1000 1005 Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser 1010 1015 1020 Asn Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser 1025 1030 1035 Leu Leu Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu 1040 1045 1050 Ser Asp Thr Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg 1055 1060 1065 Met Leu Met Asp Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met 1070 1075 1080 Ser Asn Lys Thr Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln 1085 1090 1095 Lys Lys Glu Gly Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met 1100 1105 1110 Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile 1115 1120 1125 Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro 1130 1135 1140 Ser Pro Lys Gln Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu 1145 1150 1155 Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys 1160 1165 1170 Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro 1175 1180 1185 Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu 1190 1195 1200 Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu 1205 1210 1215 Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile 1220 1225 1230 His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu 1235 1240 1245 Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr 1250 1255 1260 Ala Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn 1265 1270 1275 Arg Thr Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu 1280 1285 1290 Glu Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu 1295 1300 1305 Lys Tyr Ala Cys Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln 1310 1315 1320 Asn Phe Val Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg 1325 1330 1335 Leu Pro Leu Glu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp 1340 1345 1350 Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro 1355 1360 1365 Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala 1370 1375 1380 Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser 1385 1390 1395 Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser 1400 1405 1410 Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe 1415 1420 1425 Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys 1430 1435 1440 Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys 1445 1450 1455 Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly 1460 1465 1470 Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser 1475 1480 1485 Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp 1490 1495 1500 Leu Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His 1505 1510 1515 Ile Tyr Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser 1520 1525 1530 Pro Gly His Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr 1535 1540 1545 Glu Gly Ala Ile Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val 1550 1555 1560 Pro Phe Leu Arg Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser 1565 1570 1575 Lys Leu Leu Asp Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln 1580 1585 1590 Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys 1595 1600 1605 Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys 1610 1615 1620 Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys 1625 1630 1635 Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg 1640 1645 1650 Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu 1655 1660 1665 Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr 1670 1675 1680 Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile 1685 1690 1695 Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys 1700 1705 1710 Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr 1715 1720 1725 Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser 1730 1735 1740 Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr 1745 1750 1755 Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu 1760 1765 1770 His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp 1775 1780 1785 Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser 1790 1795 1800 Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly 1805 1810 1815 Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr 1820 1825 1830 Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu 1835 1840 1845 Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu 1850 1855 1860 Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His 1865 1870 1875 Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln 1880 1885 1890 Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp 1895 1900 1905 Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn 1910 1915 1920 Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His 1925 1930 1935 Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met 1940 1945 1950 Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser 1955 1960 1965 Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr 1970 1975 1980 Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr 1985 1990 1995 Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly 2000 2005 2010 Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly 2015 2020 2025 Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro 2030 2035 2040 Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala 2045 2050 2055 Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His 2060 2065 2070 Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser 2075 2080 2085 Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile 2090 2095 2100 Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser 2105 2110 2115 Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr 2120 2125 2130 Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn 2135 2140 2145 Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile 2150 2155 2160 Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg 2165 2170 2175 Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys 2180 2185 2190 Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln 2195 2200 2205 Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser 2210 2215 2220 Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp 2225 2230 2235 Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe 2240 2245 2250 Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys 2255 2260 2265 Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser 2270 2275 2280 Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys 2285 2290 2295 Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val 2300 2305 2310 Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His 2315 2320 2325 Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu 2330 2335 2340 Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 2345 2350 2355 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 2360 2365 2370 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 2375 2380 2385 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 2390 2395 2400 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 2405 2410 2415 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 2420 2425 2430 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 2435 2440 2445 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 2450 2455 2460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 2465 2470 2475 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 2480 2485 2490 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 2495 2500 2505 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 2510 2515 2520 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 2525 2530 2535 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 2540 2545 2550 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 2555 2560 2565 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 2570 2575 <210> 7 <211> 2958 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain (HC)-Fc <220> <221> misc_feature <222> (1)..(57) <223> Signal <220> <221> misc_feature <222> (2278)..(2958) <223> Fc region <400> 7 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagagac 2280 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagct ccagaactcc tgggcggacc gtcagtcttc 2340 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 2400 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 2460 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 2520 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 2580 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 2640 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 2700 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 2760 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgtt ggactccgac 2820 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 2880 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 2940 tccctgtctc cgggtaaa 2958 <210> 8 <211> 986 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC-Fc <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760)..(986) <223> Fc region <400> 8 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser 20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg 35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val 50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser 100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp 130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile 180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr 195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly 210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val 260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile 275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser 290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro 340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp 355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser 370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn 420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met 435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu 450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys 500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe 515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp 530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val 580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu 595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp 610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe 660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr 675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro 690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys 740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 755 760 765 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 770 775 780 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 785 790 795 800 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 805 810 815 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 820 825 830 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 835 840 845 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 850 855 860 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 865 870 875 880 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 885 890 895 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 900 905 910 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 915 920 925 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 930 935 940 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 945 950 955 960 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 965 970 975 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 980 985 <210> 9 <211> 2973 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain (HC)-Fc (5 amino acid linker between HC and Fc) <220> <221> misc_signal <222> (1)..(57) <223> Signal <220> <221> misc_feature <222> (2278)..(2292) <223> 5 amino acid linker <220> <221> misc_feature <222> (2293)..(2973) <223> Fc region <400> 9 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctcccaga atgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagctccaga actcctgggc 2340 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 2400 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 2460 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 2520 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 2580 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 2640 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 2700 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 2760 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 2820 gtgttggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 2880 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 2940 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 2973 <210> 10 <211> 991 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC+5-Fc <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760)..(764) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (765)..(991) <223> Fc region <400> 10 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser 20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg 35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val 50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser 100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp 130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile 180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr 195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly 210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val 260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile 275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser 290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro 340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp 355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser 370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn 420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met 435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu 450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys 500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe 515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp 530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val 580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu 595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp 610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe 660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr 675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro 690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys 740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Asp Lys Thr His 755 760 765 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 770 775 780 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 785 790 795 800 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 805 810 815 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 820 825 830 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 835 840 845 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 850 855 860 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 865 870 875 880 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 885 890 895 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 900 905 910 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 915 920 925 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 930 935 940 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 945 950 955 960 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 965 970 975 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 980 985 990 <210> 11 <211> 2793 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain (LC)-Fc <220> <221> misc_signal <222> (1)..(60) <223> Signal <220> <221> misc_signal <222> (2113)..(2793) <223> Fc region <400> 11 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gaaataactc gtactactct tcagtcagat caagaggaaa ttgactatga tgataccata 120 tcagttgaaa tgaagaagga agattttgac atttatgatg aggatgaaaa tcagagcccc 180 cgcagctttc aaaagaaaac acgacactat tttattgctg cagtggagag gctctgggat 240 tatgggatga gtagctcccc acatgttcta agaaacaggg ctcagagtgg cagtgtccct 300 cagttcaaga aagttgtttt ccaggaattt actgatggct cctttactca gcccttatac 360 cgtggagaac taaatgaaca tttgggactc ctggggccat atataagagc agaagttgaa 420 gataatatca tggtaacttt cagaaatcag gcctctcgtc cctattcctt ctattctagc 480 cttatttctt atgaggaaga tcagaggcaa ggagcagaac ctagaaaaaa ctttgtcaag 540 cctaatgaaa ccaaaactta cttttggaaa gtgcaacatc atatggcacc cactaaagat 600 gagtttgact gcaaagcctg ggcttatttc tctgatgttg acctggaaaa agatgtgcac 660 tcaggcctga ttggacccct tctggtctgc cacactaaca cactgaaccc tgctcatggg 720 agacaagtga cagtacagga atttgctctg tttttcacca tctttgatga gaccaaaagc 780 tggtacttca ctgaaaatat ggaaagaaac tgcagggctc cctgcaatat ccagatggaa 840 gatcccactt ttaaagagaa ttatcgcttc catgcaatca atggctacat aatggataca 900 ctacctggct tagtaatggc tcaggatcaa aggattcgat ggtatctgct cagcatgggc 960 agcaatgaaa acatccattc tattcatttc agtggacatg tgttcactgt acgaaaaaaa 1020 gaggagtata aaatggcact gtacaatctc tatccaggtg tttttgagac agtggaaatg 1080 ttaccatcca aagctggaat ttggcgggtg gaatgcctta ttggcgagca tctacatgct 1140 gggatgagca cactttttct ggtgtacagc aataagtgtc agactcccct gggaatggct 1200 tctggacaca ttagagattt tcagattaca gcttcaggac aatatggaca gtgggcccca 1260 aagctggcca gacttcatta ttccggatca atcaatgcct ggagcaccaa ggagcccttt 1320 tcttggatca aggtggatct gttggcacca atgattattc acggcatcaa gacccagggt 1380 gcccgtcaga agttctccag cctctacatc tctcagttta tcatcatgta tagtcttgat 1440 gggaagaagt ggcagactta tcgaggaaat tccactggaa ccttaatggt cttctttggc 1500 aatgtggatt catctgggat aaaacacaat atttttaacc ctccaattat tgctcgatac 1560 atccgtttgc acccaactca ttatagcatt cgcagcactc ttcgcatgga gttgatgggc 1620 tgtgatttaa atagttgcag catgccattg ggaatggaga gtaaagcaat atcagatgca 1680 cagattactg cttcatccta ctttaccaat atgtttgcca cctggtctcc ttcaaaagct 1740 cgacttcacc tccaagggag gagtaatgcc tggagacctc aggtgaataa tccaaaagag 1800 tggctgcaag tggacttcca gaagacaatg aaagtcacag gagtaactac tcagggagta 1860 aaatctctgc ttaccagcat gtatgtgaag gagttcctca tctccagcag tcaagatggc 1920 catcagtgga ctctcttttt tcagaatggc aaagtaaagg tttttcaggg aaatcaagac 1980 tccttcacac ctgtggtgaa ctctctagac ccaccgttac tgactcgcta ccttcgaatt 2040 cacccccaga gttgggtgca ccagattgcc ctgaggatgg aggttctggg ctgcgaggca 2100 caggacctct acgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagctccaga actcctgggc 2160 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 2220 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 2280 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 2340 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 2400 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 2460 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 2520 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 2580 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 2640 gtgttggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 2700 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 2760 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 2793 <210> 12 <211> 931 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC-Fc6His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (705)..(931) <223> Fc region <400> 12 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu 20 25 30 Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp 35 40 45 Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln 50 55 60 Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp 65 70 75 80 Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser 85 90 95 Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp 100 105 110 Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu 115 120 125 Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile Met 130 135 140 Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser 145 150 155 160 Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg Lys 165 170 175 Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gln 180 185 190 His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala 195 200 205 Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile 210 215 220 Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly 225 230 235 240 Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp 245 250 255 Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg 260 265 270 Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr 275 280 285 Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu 290 295 300 Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly 305 310 315 320 Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr 325 330 335 Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro 340 345 350 Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp 355 360 365 Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr 370 375 380 Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala 385 390 395 400 Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly 405 410 415 Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn 420 425 430 Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu 435 440 445 Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys 450 455 460 Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp 465 470 475 480 Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met 485 490 495 Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe 500 505 510 Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr 515 520 525 Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn 530 535 540 Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala 545 550 555 560 Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser 565 570 575 Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg 580 585 590 Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys 595 600 605 Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu 610 615 620 Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly 625 630 635 640 His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln 645 650 655 Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro 660 665 670 Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln 675 680 685 Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr 690 695 700 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 705 710 715 720 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 725 730 735 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 740 745 750 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 755 760 765 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 770 775 780 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 785 790 795 800 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 805 810 815 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 820 825 830 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 835 840 845 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 850 855 860 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 865 870 875 880 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 885 890 895 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 900 905 910 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 915 920 925 Pro Gly Lys 930                          SEQUENCE LISTING <110> BIOGEN IDEC INC.        DUMONT, Jennifer A.        LOW, Susan        BITONTI, Alan J.        PIERCE, Glenn        LUK, Alvin        JIANG, Haiyan        MCKINNEY, Byron        OTTMER, Matt        OMMER, Jurg        NUGENT, Karen        LI, Lian        PETERS, Robert   <120> FACTOR VIII-Fc CHIMERIC AND HYBRID POLYPEPTIDES, AND METHODS OF        USE THEREOF <130> 2159.274PC07 <140> PCT / US2010 / 059136 <141> 2010-12-06 <150> 61 / 419,676 <151> 2010-12-03 <150> 61 / 410,929 <151> 2010-11-07 <150> 61 / 373,113 <151> 2010-08-12 <150> 61 / 363,065 <151> 2010-07-09 <150> 61 / 301,592 <151> 2010-02-04 <150> 61 / 285,054 <151> 2009-12-09 <150> 61 / 267,070 <151> 2009-12-06 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5052 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B-Domain Deleted FVIIIFc Chain <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (57) <223> FVIII signal <220> <221> misc_feature (222) (4372) .. (5052) <223> Fc region <400> 1 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctctcaaa acccaccagt cttgaaacgc catcaacggg aaataactcg tactactctt 2340 cagtcagatc aagaggaaat tgactatgat gataccatat cagttgaaat gaagaaggaa 2400 gattttgaca tttatgatga ggatgaaaat cagagccccc gcagctttca aaagaaaaca 2460 cgacactatt ttattgctgc agtggagagg ctctgggatt atgggatgag tagctcccca 2520 catgttctaa gaaacagggc tcagagtggc agtgtccctc agttcaagaa agttgttttc 2580 caggaattta ctgatggctc ctttactcag cccttatacc gtggagaact aaatgaacat 2640 ttgggactcc tggggccata tataagagca gaagttgaag ataatatcat ggtaactttc 2700 agaaatcagg cctctcgtcc ctattccttc tattctagcc ttatttctta tgaggaagat 2760 cagaggcaag gagcagaacc tagaaaaaac tttgtcaagc ctaatgaaac caaaacttac 2820 ttttggaaag tgcaacatca tatggcaccc actaaagatg agtttgactg caaagcctgg 2880 gcttatttct ctgatgttga cctggaaaaa gatgtgcact caggcctgat tggacccctt 2940 ctggtctgcc acactaacac actgaaccct gctcatggga gacaagtgac agtacaggaa 3000 tttgctctgt ttttcaccat ctttgatgag accaaaagct ggtacttcac tgaaaatatg 3060 gaaagaaact gcagggctcc ctgcaatatc cagatggaag atcccacttt taaagagaat 3120 tatcgcttcc atgcaatcaa tggctacata atggatacac tacctggctt agtaatggct 3180 caggatcaaa ggattcgatg gtatctgctc agcatgggca gcaatgaaaa catccattct 3240 attcatttca gtggacatgt gttcactgta cgaaaaaaag aggagtataa aatggcactg 3300 tacaatctct atccaggtgt ttttgagaca gtggaaatgt taccatccaa agctggaatt 3360 tggcgggtgg aatgccttat tggcgagcat ctacatgctg ggatgagcac actttttctg 3420 gtgtacagca ataagtgtca gactcccctg ggaatggctt ctggacacat tagagatttt 3480 cagattacag cttcaggaca atatggacag tgggccccaa agctggccag acttcattat 3540 tccggatcaa tcaatgcctg gagcaccaag gagccctttt cttggatcaa ggtggatctg 3600 ttggcaccaa tgattattca cggcatcaag acccagggtg cccgtcagaa gttctccagc 3660 ctctacatct ctcagtttat catcatgtat agtcttgatg ggaagaagtg gcagacttat 3720 cgaggaaatt ccactggaac cttaatggtc ttctttggca atgtggattc atctgggata 3780 aaacacaata tttttaaccc tccaattatt gctcgataca tccgtttgca cccaactcat 3840 tatagcattc gcagcactct tcgcatggag ttgatgggct gtgatttaaa tagttgcagc 3900 atgccattgg gaatggagag taaagcaata tcagatgcac agattactgc ttcatcctac 3960 tttaccaata tgtttgccac ctggtctcct tcaaaagctc gacttcacct ccaagggagg 4020 agtaatgcct ggagacctca ggtgaataat ccaaaagagt ggctgcaagt ggacttccag 4080 aagacaatga aagtcacagg agtaactact cagggagtaa aatctctgct taccagcatg 4140 tatgtgaagg agttcctcat ctccagcagt caagatggcc atcagtggac tctctttttt 4200 cagaatggca aagtaaaggt ttttcaggga aatcaagact ccttcacacc tgtggtgaac 4260 tctctagacc caccgttact gactcgctac cttcgaattc acccccagag ttgggtgcac 4320 cagattgccc tgaggatgga ggttctgggc tgcgaggcac aggacctcta cgacaaaact 4380 cacacatgcc caccgtgccc agctccagaa ctcctgggcg gaccgtcagt cttcctcttc 4440 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 4500 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 4560 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 4620 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 4680 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 4740 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 4800 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 4860 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgttggactc cgacggctcc 4920 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 4980 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 5040 tctccgggta aa 5052 <210> 2 <211> 1684 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B domain deleted FVIII-Fc chain <220> <221> MISC_FEATURE (222) (1) .. (19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE (222) (20) .. (753) <223> Heavy chain (HC) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760) .. (773) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE (222) (1457) .. (1684) <223> Fc region <400> 2 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser             20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg         35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val     50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln                 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser             100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser         115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp     130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser                 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile             180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr         195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly     210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr                 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val             260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile         275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser     290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His                 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro             340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp         355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser     370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro                 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn             420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met         435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu     450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro                 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys             500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe         515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp     530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu                 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val             580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu         595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp     610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp                 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe             660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr         675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro     690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp                 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys             740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu         755 760 765 Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln     770 775 780 Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu 785 790 795 800 Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe                 805 810 815 Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp             820 825 830 Asp Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln         835 840 845 Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr     850 855 860 Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His 865 870 875 880 Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile                 885 890 895 Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser             900 905 910 Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg         915 920 925 Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val     930 935 940 Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp 945 950 955 960 Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu                 965 970 975 Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His             980 985 990 Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe         995 1000 1005 Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn     1010 1015 1020 Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys     1025 1030 1035 Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr     1040 1045 1050 Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr     1055 1060 1065 Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe     1070 1075 1080 Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met     1085 1090 1095 Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met     1100 1105 1110 Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly     1115 1120 1125 Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser     1130 1135 1140 Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg     1145 1150 1155 Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro     1160 1165 1170 Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser     1175 1180 1185 Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro     1190 1195 1200 Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe     1205 1210 1215 Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp     1220 1225 1230 Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu     1235 1240 1245 Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn     1250 1255 1260 Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro     1265 1270 1275 Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly     1280 1285 1290 Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys     1295 1300 1305 Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn     1310 1315 1320 Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln     1325 1330 1335 Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu     1340 1345 1350 Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val     1355 1360 1365 Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys     1370 1375 1380 Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu     1385 1390 1395 Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp     1400 1405 1410 Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr     1415 1420 1425 Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala     1430 1435 1440 Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr Asp     1445 1450 1455 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly     1460 1465 1470 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu     1475 1480 1485 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Asp Val     1490 1495 1500 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly     1505 1510 1515 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr     1520 1525 1530 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln     1535 1540 1545 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys     1550 1555 1560 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly     1565 1570 1575 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp     1580 1585 1590 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly     1595 1600 1605 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln     1610 1615 1620 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp     1625 1630 1635 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg     1640 1645 1650 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala     1655 1660 1665 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly     1670 1675 1680 Lys      <210> 3 <211> 741 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc region <220> <221> misc_signal <222> (1) (60) <223> Mouse Ig kappa signal <400> 3 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggagg accgtcagtc 120 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 180 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 240 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 300 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 360 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 420 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgcgatga gctgaccaag 480 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 540 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gttggactcc 600 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 660 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 720 ctctccctgt ctccgggtaa a 741 <210> 4 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> heterologous signal from Mouse Ig kappa chain <400> 4 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro             20 25 30 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys         35 40 45 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val     50 55 60 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 65 70 75 80 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr                 85 90 95 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp             100 105 110 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu         115 120 125 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg     130 135 140 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 145 150 155 160 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp                 165 170 175 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys             180 185 190 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser         195 200 205 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser     210 215 220 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys                 245 <210> 5 <211> 7734 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Full length FVIIIFc <220> <221> misc_signal (222) (1) .. (57) <223> FVIII signal <220> <221> misc_feature <222> (7054) .. (7734) <223> Fc region <400> 5 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctcccaga attcaagaca ccctagcact aggcaaaagc aatttaatgc caccacaatt 2340 ccagaaaatg acatagagaa gactgaccct tggtttgcac acagaacacc tatgcctaaa 2400 atacaaaatg tctcctctag tgatttgttg atgctcttgc gacagagtcc tactccacat 2460 gggctatcct tatctgatct ccaagaagcc aaatatgaga ctttttctga tgatccatca 2520 cctggagcaa tagacagtaa taacagcctg tctgaaatga cacacttcag gccacagctc 2580 catcacagtg gggacatggt atttacccct gagtcaggcc tccaattaag attaaatgag 2640 aaactgggga caactgcagc aacagagttg aagaaacttg atttcaaagt ttctagtaca 2700 tcaaataatc tgatttcaac aattccatca gacaatttgg cagcaggtac tgataataca 2760 agttccttag gacccccaag tatgccagtt cattatgata gtcaattaga taccactcta 2820 tttggcaaaa agtcatctcc ccttactgag tctggtggac ctctgagctt gagtgaagaa 2880 aataatgatt caaagttgtt agaatcaggt ttaatgaata gccaagaaag ttcatgggga 2940 aaaaatgtat cgtcaacaga gagtggtagg ttatttaaag ggaaaagagc tcatggacct 3000 gctttgttga ctaaagataa tgccttattc aaagttagca tctctttgtt aaagacaaac 3060 aaaacttcca ataattcagc aactaataga aagactcaca ttgatggccc atcattatta 3120 attgagaata gtccatcagt ctggcaaaat atattagaaa gtgacactga gtttaaaaaa 3180 gtgacacctt tgattcatga cagaatgctt atggacaaaa atgctacagc tttgaggcta 3240 aatcatatgt caaataaaac tacttcatca aaaaacatgg aaatggtcca acagaaaaaa 3300 gagggcccca ttccaccaga tgcacaaaat ccagatatgt cgttctttaa gatgctattc 3360 ttgccagaat cagcaaggtg gatacaaagg actcatggaa agaactctct gaactctggg 3420 caaggcccca gtccaaagca attagtatcc ttaggaccag aaaaatctgt ggaaggtcag 3480 aatttcttgt ctgagaaaaa caaagtggta gtaggaaagg gtgaatttac aaaggacgta 3540 ggactcaaag agatggtttt tccaagcagc agaaacctat ttcttactaa cttggataat 3600 ttacatgaaa ataatacaca caatcaagaa aaaaaaattc aggaagaaat agaaaagaag 3660 gaaacattaa tccaagagaa tgtagttttg cctcagatac atacagtgac tggcactaag 3720 aatttcatga agaacctttt cttactgagc actaggcaaa atgtagaagg ttcatatgac 3780 ggggcatatg ctccagtact tcaagatttt aggtcattaa atgattcaac aaatagaaca 3840 aagaaacaca cagctcattt ctcaaaaaaa ggggaggaag aaaacttgga aggcttggga 3900 aatcaaacca agcaaattgt agagaaatat gcatgcacca caaggatatc tcctaataca 3960 agccagcaga attttgtcac gcaacgtagt aagagagctt tgaaacaatt cagactccca 4020 ctagaagaaa cagaacttga aaaaaggata attgtggatg acacctcaac ccagtggtcc 4080 aaaaacatga aacatttgac cccgagcacc ctcacacaga tagactacaa tgagaaggag 4140 aaaggggcca ttactcagtc tcccttatca gattgcctta cgaggagtca tagcatccct 4200 caagcaaata gatctccatt acccattgca aaggtatcat catttccatc tattagacct 4260 atatatctga ccagggtcct attccaagac aactcttctc atcttccagc agcatcttat 4320 agaaagaaag attctggggt ccaagaaagc agtcatttct tacaaggagc caaaaaaaat 4380 aacctttctt tagccattct aaccttggag atgactggtg atcaaagaga ggttggctcc 4440 ctggggacaa gtgccacaaa ttcagtcaca tacaagaaag ttgagaacac tgttctcccg 4500 aaaccagact tgcccaaaac atctggcaaa gttgaattgc ttccaaaagt tcacatttat 4560 cagaaggacc tattccctac ggaaactagc aatgggtctc ctggccatct ggatctcgtg 4620 gaagggagcc ttcttcaggg aacagaggga gcgattaagt ggaatgaagc aaacagacct 4680 ggaaaagttc cctttctgag agtagcaaca gaaagctctg caaagactcc ctccaagcta 4740 ttggatcctc ttgcttggga taaccactat ggtactcaga taccaaaaga agagtggaaa 4800 tcccaagaga agtcaccaga aaaaacagct tttaagaaaa aggataccat tttgtccctg 4860 aacgcttgtg aaagcaatca tgcaatagca gcaataaatg agggacaaaa taagcccgaa 4920 atagaagtca cctgggcaaa gcaaggtagg actgaaaggc tgtgctctca aaacccacca 4980 gtcttgaaac gccatcaacg ggaaataact cgtactactc ttcagtcaga tcaagaggaa 5040 attgactatg atgataccat atcagttgaa atgaagaagg aagattttga catttatgat 5100 gaggatgaaa atcagagccc ccgcagcttt caaaagaaaa cacgacacta ttttattgct 5160 gcagtggaga ggctctggga ttatgggatg agtagctccc cacatgttct aagaaacagg 5220 gctcagagtg gcagtgtccc tcagttcaag aaagttgttt tccaggaatt tactgatggc 5280 tcctttactc agcccttata ccgtggagaa ctaaatgaac atttgggact cctggggcca 5340 tatataagag cagaagttga agataatatc atggtaactt tcagaaatca ggcctctcgt 5400 ccctattcct tctattctag ccttatttct tatgaggaag atcagaggca aggagcagaa 5460 cctagaaaaa actttgtcaa gcctaatgaa accaaaactt acttttggaa agtgcaacat 5520 catatggcac ccactaaaga tgagtttgac tgcaaagcct gggcttattt ctctgatgtt 5580 gacctggaaa aagatgtgca ctcaggcctg attggacccc ttctggtctg ccacactaac 5640 acactgaacc ctgctcatgg gagacaagtg acagtacagg aatttgctct gtttttcacc 5700 atctttgatg agaccaaaag ctggtacttc actgaaaata tggaaagaaa ctgcagggct 5760 ccctgcaata tccagatgga agatcccact tttaaagaga attatcgctt ccatgcaatc 5820 aatggctaca taatggatac actacctggc ttagtaatgg ctcaggatca aaggattcga 5880 tggtatctgc tcagcatggg cagcaatgaa aacatccatt ctattcattt cagtggacat 5940 gtgttcactg tacgaaaaaa agaggagtat aaaatggcac tgtacaatct ctatccaggt 6000 gtttttgaga cagtggaaat gttaccatcc aaagctggaa tttggcgggt ggaatgcctt 6060 attggcgagc atctacatgc tgggatgagc acactttttc tggtgtacag caataagtgt 6120 cagactcccc tgggaatggc ttctggacac attagagatt ttcagattac agcttcagga 6180 caatatggac agtgggcccc aaagctggcc agacttcatt attccggatc aatcaatgcc 6240 tggagcacca aggagccctt ttcttggatc aaggtggatc tgttggcacc aatgattatt 6300 cacggcatca agacccaggg tgcccgtcag aagttctcca gcctctacat ctctcagttt 6360 atcatcatgt atagtcttga tgggaagaag tggcagactt atcgaggaaa ttccactgga 6420 accttaatgg tcttctttgg caatgtggat tcatctggga taaaacacaa tatttttaac 6480 cctccaatta ttgctcgata catccgtttg cacccaactc attatagcat tcgcagcact 6540 cttcgcatgg agttgatggg ctgtgattta aatagttgca gcatgccatt gggaatggag 6600 agtaaagcaa tatcagatgc acagattact gcttcatcct actttaccaa tatgtttgcc 6660 acctggtctc cttcaaaagc tcgacttcac ctccaaggga ggagtaatgc ctggagacct 6720 caggtgaata atccaaaaga gtggctgcaa gtggacttcc agaagacaat gaaagtcaca 6780 ggagtaacta ctcagggagt aaaatctctg cttaccagca tgtatgtgaa ggagttcctc 6840 atctccagca gtcaagatgg ccatcagtgg actctctttt ttcagaatgg caaagtaaag 6900 gtttttcagg gaaatcaaga ctccttcaca cctgtggtga actctctaga cccaccgtta 6960 ctgactcgct accttcgaat tcacccccag agttgggtgc accagattgc cctgaggatg 7020 gaggttctgg gctgcgaggc acaggacctc tacgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 7080 ccagctccag aactcctggg cggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 7140 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 7200 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 7260 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 7320 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 7380 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 7440 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 7500 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 7560 aactacaaga ccacgcctcc cgtgttggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 7620 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 7680 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 7734 <210> 6 <211> 2578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Full length FVIIIFc chain <220> <221> MISC_FEATURE (222) (1) .. (19) <223> FVIII signal <220> <221> MISC_FEATURE (222) (20) .. (759) <223> HC <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760) .. (1667) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE (2222) (2578) <223> Fc region <400> 6 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser             20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg         35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val     50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln                 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser             100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser         115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp     130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser                 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile             180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr         195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly     210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr                 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val             260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile         275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser     290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His                 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro             340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp         355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser     370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro                 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn             420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met         435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu     450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro                 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys             500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe         515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp     530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu                 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val             580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu         595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp     610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp                 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe             660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr         675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro     690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp                 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys             740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro         755 760 765 Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp     770 775 780 Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys 785 790 795 800 Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser                 805 810 815 Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr             820 825 830 Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn         835 840 845 Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly     850 855 860 Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu 865 870 875 880 Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys                 885 890 895 Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn             900 905 910 Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met         915 920 925 Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys     930 935 940 Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu 945 950 955 960 Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu                 965 970 975 Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe             980 985 990 Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala         995 1000 1005 Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser     1010 1015 1020 Asn Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser     1025 1030 1035 Leu Leu Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu     1040 1045 1050 Ser Asp Thr Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg     1055 1060 1065 Met Leu Met Asp Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met     1070 1075 1080 Ser Asn Lys Thr Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln     1085 1090 1095 Lys Lys Glu Gly Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met     1100 1105 1110 Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile     1115 1120 1125 Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro     1130 1135 1140 Ser Pro Lys Gln Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu     1145 1150 1155 Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys     1160 1165 1170 Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro     1175 1180 1185 Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu     1190 1195 1200 Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu     1205 1210 1215 Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile     1220 1225 1230 His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu     1235 1240 1245 Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr     1250 1255 1260 Ala Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn     1265 1270 1275 Arg Thr Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu     1280 1285 1290 Glu Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu     1295 1300 1305 Lys Tyr Ala Cys Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln     1310 1315 1320 Asn Phe Val Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg     1325 1330 1335 Leu Pro Leu Glu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp     1340 1345 1350 Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro     1355 1360 1365 Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala     1370 1375 1380 Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser     1385 1390 1395 Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser     1400 1405 1410 Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe     1415 1420 1425 Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys     1430 1435 1440 Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys     1445 1450 1455 Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly     1460 1465 1470 Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser     1475 1480 1485 Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp     1490 1495 1500 Leu Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His     1505 1510 1515 Ile Tyr Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser     1520 1525 1530 Pro Gly His Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr     1535 1540 1545 Glu Gly Ala Ile Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val     1550 1555 1560 Pro Phe Leu Arg Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser     1565 1570 1575 Lys Leu Leu Asp Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln     1580 1585 1590 Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys     1595 1600 1605 Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys     1610 1615 1620 Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys     1625 1630 1635 Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg     1640 1645 1650 Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu     1655 1660 1665 Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr     1670 1675 1680 Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile     1685 1690 1695 Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys     1700 1705 1710 Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr     1715 1720 1725 Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser     1730 1735 1740 Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr     1745 1750 1755 Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu     1760 1765 1770 His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp     1775 1780 1785 Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser     1790 1795 1800 Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly     1805 1810 1815 Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr     1820 1825 1830 Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu     1835 1840 1845 Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu     1850 1855 1860 Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His     1865 1870 1875 Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln     1880 1885 1890 Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp     1895 1900 1905 Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn     1910 1915 1920 Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His     1925 1930 1935 Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met     1940 1945 1950 Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser     1955 1960 1965 Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr     1970 1975 1980 Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr     1985 1990 1995 Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly     2000 2005 2010 Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly     2015 2020 2025 Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro     2030 2035 2040 Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala     2045 2050 2055 Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His     2060 2065 2070 Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser     2075 2080 2085 Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile     2090 2095 2100 Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser     2105 2110 2115 Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr     2120 2125 2130 Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn     2135 2140 2145 Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile     2150 2155 2160 Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg     2165 2170 2175 Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys     2180 2185 2190 Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln     2195 2200 2205 Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser     2210 2215 2220 Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp     2225 2230 2235 Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe     2240 2245 2250 Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys     2255 2260 2265 Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser     2270 2275 2280 Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys     2285 2290 2295 Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val     2300 2305 2310 Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His     2315 2320 2325 Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu     2330 2335 2340 Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro     2345 2350 2355 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu     2360 2365 2370 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro     2375 2380 2385 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu     2390 2395 2400 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala     2405 2410 2415 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val     2420 2425 2430 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys     2435 2440 2445 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile     2450 2455 2460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln     2465 2470 2475 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln     2480 2485 2490 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile     2495 2500 2505 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys     2510 2515 2520 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr     2525 2530 2535 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val     2540 2545 2550 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr     2555 2560 2565 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys     2570 2575 <210> 7 <211> 2958 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain (HC) -Fc <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (57) <223> Signal <220> <221> misc_feature (2278) .. (2958) <223> Fc region <400> 7 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagagac 2280 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagct ccagaactcc tgggcggacc gtcagtcttc 2340 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 2400 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 2460 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 2520 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 2580 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 2640 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 2700 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 2760 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgtt ggactccgac 2820 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 2880 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 2940 tccctgtctc cgggtaaa 2958 <210> 8 <211> 986 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC-Fc <220> <221> MISC_FEATURE (222) (1) .. (19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760) .. (986) <223> Fc region <400> 8 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser             20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg         35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val     50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln                 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser             100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser         115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp     130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser                 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile             180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr         195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly     210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr                 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val             260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile         275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser     290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His                 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro             340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp         355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser     370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro                 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn             420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met         435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu     450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro                 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys             500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe         515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp     530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu                 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val             580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu         595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp     610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp                 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe             660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr         675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro     690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp                 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys             740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys         755 760 765 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro     770 775 780 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 785 790 795 800 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp                 805 810 815 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu             820 825 830 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu         835 840 845 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn     850 855 860 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 865 870 875 880 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu                 885 890 895 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr             900 905 910 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn         915 920 925 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe     930 935 940 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 945 950 955 960 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr                 965 970 975 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys             980 985 <210> 9 <211> 2973 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> Heavy chain (HC) -Fc (5 amino acid linker between HC and Fc) <220> <221> misc_signal (222) (1) .. (57) <223> Signal <220> <221> misc_feature (2278) .. (2292) <223> 5 amino acid linker <220> <221> misc_feature (222) (2293) .. (2973) <223> Fc region <400> 9 atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60 accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120 ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180 acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240 gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300 gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360 ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420 gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480 aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540 gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600 gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660 tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720 gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780 ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840 accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900 cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960 gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020 gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080 gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140 gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200 tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260 cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320 aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380 attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440 ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500 gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560 ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620 actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680 gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740 agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800 aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860 cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920 tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980 attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040 atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100 atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160 atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220 agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280 ttctcccaga atgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagctccaga actcctgggc 2340 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 2400 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 2460 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 2520 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 2580 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 2640 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 2700 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 2760 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 2820 gtgttggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 2880 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 2940 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 2973 <210> 10 <211> 991 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC + 5-Fc <220> <221> MISC_FEATURE (222) (1) .. (19) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (760) .. (764) <223> B domain <220> <221> MISC_FEATURE <765> (765) .. (991) <223> Fc region <400> 10 Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe 1 5 10 15 Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser             20 25 30 Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg         35 40 45 Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val     50 55 60 Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile 65 70 75 80 Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln                 85 90 95 Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser             100 105 110 His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser         115 120 125 Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp     130 135 140 Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu 145 150 155 160 Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser                 165 170 175 Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile             180 185 190 Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr         195 200 205 Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly     210 215 220 Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr                 245 250 255 Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val             260 265 270 Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile         275 280 285 Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser     290 295 300 Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met 305 310 315 320 Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His                 325 330 335 Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro             340 345 350 Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp         355 360 365 Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser     370 375 380 Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr 385 390 395 400 Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro                 405 410 415 Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn             420 425 430 Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met         435 440 445 Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu     450 455 460 Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu 465 470 475 480 Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro                 485 490 495 His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys             500 505 510 Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe         515 520 525 Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp     530 535 540 Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg 545 550 555 560 Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu                 565 570 575 Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val             580 585 590 Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu         595 600 605 Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp     610 615 620 Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val 625 630 635 640 Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp                 645 650 655 Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe             660 665 670 Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr         675 680 685 Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro     690 695 700 Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly 705 710 715 720 Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp                 725 730 735 Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys             740 745 750 Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Asp Lys Thr His         755 760 765 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val     770 775 780 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 785 790 795 800 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu                 805 810 815 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys             820 825 830 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser         835 840 845 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys     850 855 860 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 865 870 875 880 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro                 885 890 895 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu             900 905 910 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn         915 920 925 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser     930 935 940 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 945 950 955 960 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu                 965 970 975 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys             980 985 990 <210> 11 <211> 2793 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain (LC) -Fc <220> <221> misc_signal <222> (1) (60) <223> Signal <220> <221> misc_signal (222) (2113) .. (2793) <223> Fc region <400> 11 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gaaataactc gtactactct tcagtcagat caagaggaaa ttgactatga tgataccata 120 tcagttgaaa tgaagaagga agattttgac atttatgatg aggatgaaaa tcagagcccc 180 cgcagctttc aaaagaaaac acgacactat tttattgctg cagtggagag gctctgggat 240 tatgggatga gtagctcccc acatgttcta agaaacaggg ctcagagtgg cagtgtccct 300 cagttcaaga aagttgtttt ccaggaattt actgatggct cctttactca gcccttatac 360 cgtggagaac taaatgaaca tttgggactc ctggggccat atataagagc agaagttgaa 420 gataatatca tggtaacttt cagaaatcag gcctctcgtc cctattcctt ctattctagc 480 cttatttctt atgaggaaga tcagaggcaa ggagcagaac ctagaaaaaa ctttgtcaag 540 cctaatgaaa ccaaaactta cttttggaaa gtgcaacatc atatggcacc cactaaagat 600 gagtttgact gcaaagcctg ggcttatttc tctgatgttg acctggaaaa agatgtgcac 660 tcaggcctga ttggacccct tctggtctgc cacactaaca cactgaaccc tgctcatggg 720 agacaagtga cagtacagga atttgctctg tttttcacca tctttgatga gaccaaaagc 780 tggtacttca ctgaaaatat ggaaagaaac tgcagggctc cctgcaatat ccagatggaa 840 gatcccactt ttaaagagaa ttatcgcttc catgcaatca atggctacat aatggataca 900 ctacctggct tagtaatggc tcaggatcaa aggattcgat ggtatctgct cagcatgggc 960 agcaatgaaa acatccattc tattcatttc agtggacatg tgttcactgt acgaaaaaaa 1020 gaggagtata aaatggcact gtacaatctc tatccaggtg tttttgagac agtggaaatg 1080 ttaccatcca aagctggaat ttggcgggtg gaatgcctta ttggcgagca tctacatgct 1140 gggatgagca cactttttct ggtgtacagc aataagtgtc agactcccct gggaatggct 1200 tctggacaca ttagagattt tcagattaca gcttcaggac aatatggaca gtgggcccca 1260 aagctggcca gacttcatta ttccggatca atcaatgcct ggagcaccaa ggagcccttt 1320 tcttggatca aggtggatct gttggcacca atgattattc acggcatcaa gacccagggt 1380 gcccgtcaga agttctccag cctctacatc tctcagttta tcatcatgta tagtcttgat 1440 gggaagaagt ggcagactta tcgaggaaat tccactggaa ccttaatggt cttctttggc 1500 aatgtggatt catctgggat aaaacacaat atttttaacc ctccaattat tgctcgatac 1560 atccgtttgc acccaactca ttatagcatt cgcagcactc ttcgcatgga gttgatgggc 1620 tgtgatttaa atagttgcag catgccattg ggaatggaga gtaaagcaat atcagatgca 1680 cagattactg cttcatccta ctttaccaat atgtttgcca cctggtctcc ttcaaaagct 1740 cgacttcacc tccaagggag gagtaatgcc tggagacctc aggtgaataa tccaaaagag 1800 tggctgcaag tggacttcca gaagacaatg aaagtcacag gagtaactac tcagggagta 1860 aaatctctgc ttaccagcat gtatgtgaag gagttcctca tctccagcag tcaagatggc 1920 catcagtgga ctctcttttt tcagaatggc aaagtaaagg tttttcaggg aaatcaagac 1980 tccttcacac ctgtggtgaa ctctctagac ccaccgttac tgactcgcta ccttcgaatt 2040 cacccccaga gttgggtgca ccagattgcc ctgaggatgg aggttctggg ctgcgaggca 2100 caggacctct acgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagctccaga actcctgggc 2160 ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 2220 cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 2280 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 2340 aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 2400 aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 2460 tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 2520 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 2580 atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 2640 gtgttggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 2700 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 2760 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 2793 <210> 12 <211> 931 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> LC-Fc6His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Signal <220> <221> MISC_FEATURE 222 (705) .. (931) <223> Fc region <400> 12 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu             20 25 30 Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp         35 40 45 Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln     50 55 60 Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp 65 70 75 80 Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser                 85 90 95 Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp             100 105 110 Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu         115 120 125 Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile Met     130 135 140 Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser 145 150 155 160 Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg Lys                 165 170 175 Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gln             180 185 190 His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala         195 200 205 Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile     210 215 220 Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly 225 230 235 240 Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp                 245 250 255 Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg             260 265 270 Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr         275 280 285 Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu     290 295 300 Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly 305 310 315 320 Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr                 325 330 335 Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro             340 345 350 Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp         355 360 365 Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr     370 375 380 Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala 385 390 395 400 Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly                 405 410 415 Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn             420 425 430 Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu         435 440 445 Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys     450 455 460 Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp 465 470 475 480 Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met                 485 490 495 Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe             500 505 510 Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr         515 520 525 Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn     530 535 540 Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala 545 550 555 560 Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser                 565 570 575 Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg             580 585 590 Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys         595 600 605 Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu     610 615 620 Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly 625 630 635 640 His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln                 645 650 655 Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro             660 665 670 Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln         675 680 685 Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr     690 695 700 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 705 710 715 720 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met                 725 730 735 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His             740 745 750 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val         755 760 765 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr     770 775 780 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 785 790 795 800 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile                 805 810 815 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val             820 825 830 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser         835 840 845 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu     850 855 860 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 865 870 875 880 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val                 885 890 895 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met             900 905 910 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser         915 920 925 Pro Gly Lys     930

Claims (110)

인자 Ⅷ의 그것을 필요로 하는 대상체에의 투여방법으로서, 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 동량의 폴리펩티드에 필요한 투여 간격보다 적어도 약 1.5배 긴 투여 간격으로, 인자 Ⅷ 부분 및 제2 부분을 포함하는 키메라 폴리펩티드의 치료용량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.A method of administering a factor VII to a subject in need thereof, wherein the method comprises administering a chimeric polypeptide comprising the factor VII part and the second part at an interval of at least about 1.5 times longer than the administration interval required for the same amount of polypeptide consisting of the factor VII moiety. A method of administering Factor VIII to a subject, comprising administering a therapeutic dose to the subject. 제1항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 Fc 부분을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 1, wherein the chimeric polypeptide comprises an Fc moiety. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 투여 간격은 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 동량의 폴리펩티드에 필요한 투여 간격보다, 적어도 약 1.5 내지 6배, 1.5 내지 5배, 1.5 내지 4배, 1.5 내지 3배, 또는 1.5 내지 2배 긴 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method according to claim 1 or 2, wherein the administration interval is at least about 1.5 to 6 times, 1.5 to 5 times, 1.5 to 4 times, 1.5 to 3 times higher than the administration interval required for the same amount of polypeptide consisting of the factor VII portion. Or, 1.5 to 2 times longer. 제3항에 있어서, 상기 투여 간격이 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 동량의 폴리펩티드에 필요한 투여 간격보다, 약 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 5.5배 또는 6배 긴 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method according to claim 3, wherein the administration interval is about 1.5 times, 2 times, 2.5 times, 3 times, 3.5 times, 4 times, 4.5 times, 5 times, than the administration interval required for the same amount of polypeptide consisting of the factor VII moiety, A method of administering Factor VII to a subject of 5.5 times or 6 times longer. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 투여 간격이 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 또는 그 이상마다 1회인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 1, wherein the interval of administration of the chimeric polypeptide is once every about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 days or more. Which is a method of administering factor VII to a subject. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 예방적 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1-5, wherein the subject requires prophylactic treatment. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 주문형 치료(on-demand treatment)의 필요 하에 있는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1-4, wherein the subject is in need of on-demand treatment. 제7항에 있어서, 상기 대상체가 출혈 사례(bleeding episode) 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.8. The method of claim 7, wherein the subject needs treatment of a bleeding episode. 제8항에 있어서, 상기 대상체가 관절혈증, 근육 출혈, 구강 출혈, 대출혈, 근육 내로의 출혈, 구강 내 출혈, 외상, 두부 외상, 위장관출혈, 뇌내출혈, 복강내출혈, 흉강내출혈, 골절, 중추신경계출혈, 인두후강내출혈, 복막후극내출혈, 또는 장요근막내출혈에 대한 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 8, wherein the subject has arthrosis, muscle bleeding, oral bleeding, bleeding, intramuscular bleeding, intraoral bleeding, trauma, head trauma, gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhage, intraperitoneal bleeding, intrathoracic bleeding, fracture, central A method of administering Factor VII to a subject in need of treatment for neurological bleeding, pharyngeal bleeding, peritoneal pulmonary bleeding, or intestinal pleural bleeding. 제7항에 있어서, 상기 대상체가 외과적 수술 예방, 수술 전후 관리, 또는 수술을 위한 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.8. The method of claim 7, wherein the subject is in need of surgical prophylaxis, preoperative surgery, or treatment for surgery. 제10항에 있어서, 상기 수술은 소수술(minor surgery), 대수술(major surgery), 발치, 편도선수술, 서혜부 헤르니아절제술, 활액막절제술, 슬관절 전치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술, 두개내수술, 복강내수술, 흉강내수술, 또는 관절치환술인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.11. The method of claim 10, wherein the surgery is minor surgery, major surgery, extraction, tonsil surgery, inguinal herniactomy, synovectomy, total knee arthroplasty, craniotomy, bone joint surgery, trauma surgery, intracranial surgery , Intraperitoneal surgery, thoracic surgery, or arthroplasty. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 투여 간격이 약 매 24 내지 36, 24 내지 48, 24 내지 72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 또는 72 시간 또는 그 이상마다 1회인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 7, wherein the administration interval of the chimeric polypeptide is about every 24 to 36, 24 to 48, 24 to 72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, Administration of Factor VII to a subject once every 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 or 72 hours or more Way. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1-12, wherein the therapeutic dose is 10-100 IU / kg. 제12항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 60 내지 70, 70 내지 80, 80 내지 90 또는 90 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 12, wherein the therapeutic dose is 10 to 20, 20 to 30, 30 to 40, 40 to 50, 50 to 60, 60 to 70, 70 to 80, 80 to 90 or 90 to 100 IU / kg A method of administering phosphorus, factor VII to a subject. 제13항에 있어서, 상기 치료용량이 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 13, wherein the therapeutic dose is 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 or 100 IU / kg. A method of administering Factor VII to a subject. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1-15, wherein the subject is a human. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 인간의 인자 Ⅷ인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1 to 16, wherein the factor VII is a human factor VII. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 B 도메인의 전체 및 부분 결실을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.18. The method of any one of claims 1 to 17, wherein the factor VIII has a full and partial deletion of the B domain. 제17항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.18. The method according to claim 17, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide comprises a factor VII amino acid sequence having no signal sequence as shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, and SEQ ID NO: 8). And at least 90% or 95% of amino acids 1 to 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제19항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 19, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide is a factor VII amino acid sequence having no signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, and SEQ ID NO: 8). And amino acid 1 to 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제17항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The factor VII amino acid sequence of claim 17, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide has a signal sequence as set forth in Table 2. And at least 90% or 95% of amino acids -19 to 740 of SEQ ID NO: 8, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10 or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12) to the subject. 제21항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The factor VII amino acid sequence of claim 21, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide has the signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: And amino acids -19 to 740 of 8, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The amino acid sequence according to claim 17 or 18, wherein the second portion of the chimeric polypeptide is represented by the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, and amino acid of SEQ ID NO: 8). 741-967, amino acids 746-972 of SEQ ID NO: 10, amino acids 685-924 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제23항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 23, wherein the second portion of the chimeric polypeptide is the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8), And amino acids 746 to 972 of SEQ ID NO: 10, and amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12). 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 상기 키메라 폴리펩티드와 연결된 제2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드 형태이며, 상기 제 2 폴리펩티드가 본질적으로 Fc로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The subject of any one of claims 1-24, wherein the chimeric polypeptide is in hybrid form comprising a second polypeptide linked to the chimeric polypeptide, and wherein the second polypeptide consists essentially of Fc. Method of administration to 제25항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 25, wherein the chimeric polypeptide is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (iii), or a table A factor VII to a subject having a signal sequence shown in 2A (iii) comprising a sequence that matches at least 90% or 95% of said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids -19-1665 of SEQ ID NO: 2) Administration method. 제26항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 26, wherein the chimeric polypeptide is identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequence shown in Table 2A (VII) or shown in Table 2A (VIII). A method of administering Factor VII to a subject comprising a sequence consistent with said Factor VII and Fc amino acid sequence having amino acid sequences (amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2) having a signal sequence. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.28. The composition of any one of claims 25-27, wherein the second polypeptide is at least 90% or 95% identical to an amino acid sequence without amino acid sequences shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) Or to an object of factor (VII) consisting essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to the amino acid sequence having the signal sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4) Administration method. 제28항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 28, wherein the second polypeptide is identical to an amino acid sequence without amino acid sequence shown in Table 2A (ii) (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) or has a signal sequence as shown in Table 2A (ii). A method of administering Factor VIII to a subject consisting essentially of a sequence consistent with an amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4). 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 적어도 하나의 부형제를 포함한 약학적 조성물의 일부로서 투여되는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 1-29, wherein the chimeric polypeptide is administered as part of a pharmaceutical composition comprising at least one excipient. 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법으로서, 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 동량의 폴리펩티드에 의해 얻은 곡선의 아래 면적(area under the plasma concentration versus time curve : AUC)보다 적어도 약 1.25배 큰 혈장 내 농도 대 시간 곡선 AUC을 얻기 위하여 인자 Ⅷ 부분 및 제2 부분을 포함한 치료용량의 키메라 폴리펩티드를 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.A method for administering Factor VII to a subject, wherein the plasma concentration versus time curve is at least about 1.25 times greater than the area under the plasma concentration versus time curve (AUC) obtained by the same amount of polypeptide consisting of the Factor VII moiety. A method of administering Factor VIII to a subject, comprising administering to the subject a therapeutic dose of a chimeric polypeptide comprising a Factor VIII portion and a second portion to obtain an AUC. 제31항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 또는 그 이상의 투여 간격으로 투여되는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The factor VII of claim 31, wherein the chimeric polypeptide is administered at about every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 days or more administration intervals. Way. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 대상체가 예방적 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.33. The method of claim 31 or 32, wherein said subject is in need of prophylactic treatment. 제31항에 있어서, 상기 대상은 주문형 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 31, wherein the subject requires on-demand treatment. 제32항에 있어서, 상기 대상은 출혈 사례 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.33. The method of claim 32, wherein the subject is in need of treatment for a bleeding case. 제33항에 있어서, 상기 대상체가 관절혈증, 근육 출혈, 구강 출혈, 대출혈, 근육 내로의 출혈, 구강 내 출혈, 외상, 두부 외상, 위장관출혈, 뇌내출혈, 복강내출혈, 흉강내출혈, 골절, 중추신경계출혈, 인두후강내출혈, 복막후극내출혈, 또는 장요근막내출혈에 대한 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 33, wherein the subject has arthrosis, muscle bleeding, oral bleeding, bleeding, intramuscular bleeding, intraoral bleeding, trauma, head trauma, gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhage, intraperitoneal bleeding, intrathoracic bleeding, fracture, central A method of administering Factor VII to a subject in need of treatment for neurological bleeding, pharyngeal bleeding, peritoneal pulmonary bleeding, or intestinal pleural bleeding. 제34항에 있어서, 상기 대상체가 외과적 수술 예방, 수술 전후 관리 또는 수술을 위한 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.35. The method of claim 34, wherein the subject is in need of surgical prophylaxis, preoperative surgery or treatment for surgery. 제37항에 있어서, 상기 수술이 소수술, 대수술, 발치, 편도선수술, 서혜부 헤르니아절제술, 활액막절제술, 슬관절 전치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술, 두개내수술, 복강내수술, 흉강내수술, 또는 관절치환술인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.38. The method according to claim 37, wherein the operation is minor, major, extraction, tonsil, inguinal hernia, synovial resection, total knee arthroplasty, craniotomy, bone joint surgery, trauma surgery, intracranial surgery, intraperitoneal surgery, intrathoracic surgery Or arthroplasty. A method of administering factor VII to a subject. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 투여 간격이 약 매 24 내지 36, 24 내지 48, 24 내지 72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 또는 72 시간 또는 그 이상마다 1회인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 34, wherein the interval of administration of the chimeric polypeptide is about every 24 to 36, 24 to 48, 24 to 72, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, Administration of Factor VII to a subject once every 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 or 72 hours or more Way. 제31항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.40. The method of any one of claims 31 to 39 wherein the therapeutic dose is 10 to 100 IU / kg. 제40항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 60 내지 70, 70 내지 80, 80 내지 90, 또는 90 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 40, wherein the therapeutic dose is 10 to 20, 20 to 30, 30 to 40, 40 to 50, 50 to 60, 60 to 70, 70 to 80, 80 to 90, or 90 to 100 IU / kg. Which will be administered to the subject. 제41항에 있어서, 상기 치료용량이 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 41, wherein the therapeutic dose is 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100 IU / The method of administration to a subject of factor VII which is kg. 제31항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.43. The method of any one of claims 31-42, wherein said subject is a human. 제31항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 인간 인자 Ⅷ인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.44. The method of any one of claims 31-43, wherein said factor VII is human factor VII. 제31항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 B 도메인의 전체 및 부분 결실을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.45. The method of any one of claims 31-44, wherein said factor VII has a full and partial deletion of the B domain. 제44항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The Factor VII portion of the chimeric polypeptide according to claim 44, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide lacks the signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, and amino acid of SEQ ID NO: 8). 1 to 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제46항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.47. The method according to claim 46, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide has no factor VII amino acid sequence (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acid of SEQ ID NO: 8) without the signal sequence shown in Table 2. 1 to 740, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제44항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.45. The method of claim 44, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide comprises the factor VII amino acid sequence having the signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8). At least 90% or 95% identical to amino acids -19 to 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제48항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 인자 Ⅷ 부분이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The factor VII amino acid sequence according to claim 48, wherein the factor VII portion of the chimeric polypeptide has the signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8). And amino acids -19 to 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.45. The method according to claim 43 or 44, wherein the second portion of the chimeric polypeptide is the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids of SEQ ID NO: 8) 741-967, amino acids 746-972 of SEQ ID NO: 10, amino acids 685-924 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제50항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드의 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.51. The method of claim 50, wherein said second portion of said chimeric polypeptide comprises the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8), And amino acids 746 to 972 of SEQ ID NO: 10, and amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12). 제31항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 상기 키메라 폴리펩티드와 연결된 제2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드 형태이며, 상기 제 2 폴리펩티드가 본질적으로 Fc로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.52. The subject of any one of claims 31 to 51 wherein the chimeric polypeptide is in hybrid form comprising a second polypeptide linked to the chimeric polypeptide and the second polypeptide consists essentially of Fc. Method of administration to 제52항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.53. The method of claim 52, wherein the chimeric polypeptide is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (iii), or a table Administration of Factor VII to a subject having a sequence of at least 90% or 95% identity to Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids of SEQ ID NO: 2 to 1665) with the signal sequence shown in 2A (iii) Way. 제53항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.55. The method of claim 53, wherein the chimeric polypeptide is identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (VII) or shown in Table 2A (VII). A method of administering Factor VII to a subject VII comprising a sequence that is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequence having the signal sequence (amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2). 제52항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.55. The composition of any one of claims 52-54, wherein said second polypeptide is at least 90% or 95% with said amino acid sequence (amino acids 1-227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii) A subject of Factor VII, consisting essentially of a sequence which matches at least 90% or 95% of said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4) with the signal sequence shown in Table 2A (ii) Method of administration to 제55항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 55, wherein the second polypeptide is identical to the amino acid sequence (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii), or the signal sequence shown in Table 2A (ii) A method of administering Factor VII to a subject consisting essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4). 제31항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 적어도 하나의 부형제를 포함한 약학적 조성물의 일부로서 투여되는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 31-56, wherein the chimeric polypeptide is administered as part of a pharmaceutical composition comprising at least one excipient. 인자 Ⅷ의 그것을 필요로 하는 대상체에의 투여방법으로서, 약 매 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 또는 그 이상마다 1회의 투여 간격으로 인자 Ⅷ 및 Fc를 포함하는 폴리펩티드의 치료용량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.A method of administering Factor VII to a subject in need thereof, wherein Factor VII and Fc are administered at one administration interval about every 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 or 14 days or more. A method of administering Factor VII to a subject, comprising administering to the subject a therapeutic dose of a polypeptide comprising the same. 제58항에 있어서, 상기 대상체가 예방적 치료가 필요한 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.59. The method of claim 58, wherein the subject requires prophylactic treatment. 제58항 또는 제59항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.60. The method of claim 58 or 59, wherein the therapeutic dose is 10 to 100 IU / kg. 제60항에 있어서, 상기 치료용량이 10 내지 20, 20 내지 30, 30 내지 40, 40 내지 50, 50 내지 60, 60 내지 70, 70 내지 80, 80 내지 90, 또는 90 내지 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 60, wherein the therapeutic dose is 10 to 20, 20 to 30, 30 to 40, 40 to 50, 50 to 60, 60 to 70, 70 to 80, 80 to 90, or 90 to 100 IU / kg. Which will be administered to the subject. 제61항에 있어서, 상기 치료용량이 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 61, wherein the therapeutic dose is 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100 IU / The method of administration to a subject of factor VII which is kg. 제58항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.63. The method of any one of claims 58-62, wherein said subject is a human. 제58항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 인간의 인자 Ⅷ인 것인 방법.64. The method of any one of claims 58-63, wherein said factor VII is human factor VII. 제58항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 B 도메인의 전체 및 부분 결실을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.65. The method of any one of claims 58-64, wherein the factor VIII has a full and partial deletion of the B domain. 제64항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.65. The method according to claim 64, wherein the factor VII is a factor VII amino acid sequence without a signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to 740 of SEQ ID NO: 8), And at least 90% or 95% of amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12 to the subject. 제66항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.67. The method according to claim 66, wherein the factor VII is a factor VII amino acid sequence without a signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to 740 of SEQ ID NO: 8, And amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제64항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.65. The method according to claim 64, wherein the factor VII is a factor VII amino acid sequence having a signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acid -19 of SEQ ID NO: 8). To 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제68항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 68, wherein the factor VII is a factor VII amino acid sequence having a signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acid -19 of SEQ ID NO: 8). To 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제64항 또는 제65항에 있어서, 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 상기 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.66. The method according to claim 64 or 65, wherein the second portion is the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8) , Amino acids 746 to 972 of SEQ ID NO: 10, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제70항에 있어서, 상기 제2 부분이 표 2에 나타낸 상기 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of claim 70, wherein the second portion is the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10). And amino acids 746 to 972, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12). 제58항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 상기 키메라 폴리펩티드와 연결된 제2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드 형태의 인자 Ⅷ-Fc 키메라 폴리펩티드이며, 상기 제 2 폴리펩티드가 본질적으로 Fc로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The chimeric polypeptide of claim 58, wherein the chimeric polypeptide is a hybrid form Factor VII-Fc chimeric polypeptide comprising a second polypeptide linked to the chimeric polypeptide, and wherein the second polypeptide consists essentially of Fc. Which will be administered to the subject. 제72항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.73. The method of claim 72, wherein the chimeric polypeptide is at least 90% or 95% identical to the Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (iii), or a table A factor VII to a subject having a signal sequence shown in 2A (iii) comprising a sequence that matches at least 90% or 95% of said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids -19-1665 of SEQ ID NO: 2) Administration method. 제73항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.74. The method according to claim 73, wherein said chimeric polypeptide is identical to said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (VII) or shown in Table 2A (VII). A method of administering Factor VII to a subject having a signal sequence comprising at least 90% or 95% consensus of said Factor VII and Fc amino acid sequences (Amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2). 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.75. The composition of any one of claims 72-74, wherein said second polypeptide is at least 90% or 95% with said amino acid sequence (amino acids 1-227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii) A subject of Factor VII, consisting essentially of a sequence which matches at least 90% or 95% of said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4) with the signal sequence shown in Table 2A (ii) Method of administration to 제75항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.76. The method of claim 75, wherein the second polypeptide is identical to the amino acid sequence (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii), or the signal sequence shown in Table 2A (ii) is A method of administering Factor VII to a subject consisting essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4). 제58항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 적어도 하나의 부형제를 포함한 약학적 조성물의 일부로서 투여되는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.The method of any one of claims 58-76, wherein the chimeric polypeptide is administered as part of a pharmaceutical composition comprising at least one excipient. 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 인자 Ⅷ, 및 Fc를 포함하는 폴리펩티드.Factor Ⅷ amino acid sequence without signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to 740 of SEQ ID NO: 8, amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or A polypeptide comprising at least 90% or 95% identity of amino acids 1 to 684) of SEQ ID NO: 12, and an Fc. 제78항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 없는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 1 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 1 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 1 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 1 내지 684)과 일치하는 것인 폴리펩티드.The method according to claim 78, wherein the factor VII is a factor Ⅷ amino acid sequence without a signal sequence shown in Table 2 (amino acids 1 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids 1 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids 1 to 740 of SEQ ID NO: 8, Polypeptide according to amino acids 1 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids 1 to 684 of SEQ ID NO: 12). 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 인자 Ⅷ, 및 Fc를 포함하는 폴리펩티드.Factor Ⅷ amino acid sequence having the signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acids -19 to 740 of SEQ ID NO: 8, amino acid -19 of SEQ ID NO: 10); To 745, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12, at least 90% or 95% identical to the polypeptide VII, and a polypeptide comprising Fc. 제80항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ이 표 2에 나타낸 신호서열이 있는 인자 Ⅷ 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1438, 서열번호 6의 아미노산 -19 내지 2332, 서열번호 8의 아미노산 -19 내지 740, 서열번호 10의 아미노산 -19 내지 745, 또는 서열번호 12의 아미노산 -20 내지 684)과 일치하는 것인 폴리펩티드.The method of claim 80, wherein the factor VII is a factor VII amino acid sequence having a signal sequence shown in Table 2 (amino acids -19 to 1438 of SEQ ID NO: 2, amino acids -19 to 2332 of SEQ ID NO: 6, amino acid -19 of SEQ ID NO: 8). To 740, amino acids -19 to 745 of SEQ ID NO: 10, or amino acids -20 to 684 of SEQ ID NO: 12). 제78항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc가 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 것인 폴리펩티드.82. The compound according to any one of claims 78 to 81, wherein the Fc is an Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, and amino acids 741 to SEQ ID NO: 8). 967, amino acids 746 to 972 of SEQ ID NO: 10, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12) at least 90% or 95% identical. 제82항에 있어서, 상기 Fc가 표 2에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1439 내지 1665, 서열번호 6의 아미노산 2333 내지 2559, 서열번호 8의 아미노산 741 내지 967, 서열번호 10의 아미노산 746 내지 972, 서열번호 12의 아미노산 685 내지 924)과 일치하는 것인 폴리펩티드.The method of claim 82, wherein the Fc is the Fc amino acid sequence shown in Table 2 (amino acids 1439 to 1665 of SEQ ID NO: 2, amino acids 2333 to 2559 of SEQ ID NO: 6, amino acids 741 to 967 of SEQ ID NO: 8, amino acid 746 of SEQ ID NO: 10). To 972, amino acids 685 to 924 of SEQ ID NO: 12). 제78 항에 있어서, 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.79. The method of claim 78, at least 90% or 95% identical to said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (iii), or Table 2A (iii) A polypeptide comprising at least 90% or 95% consensus of said Factor VII and Fc amino acid sequences having amino acid sequences shown in SEQ ID NO: 2 (amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2). 제84항에 있어서, 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 1665)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅰ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 인자 Ⅷ 및 Fc 아미노산 서열(서열번호 2의 아미노산 -19 내지 1665)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.85. The method according to claim 84, wherein said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids 1 to 1665 of SEQ ID NO: 2) without the signal sequences shown in Table 2A (VII) are consistent with, or have the signal sequences shown in Table 2A (VII) Polypeptide comprising at least 90% or 95% identity to said Factor VII and Fc amino acid sequences (amino acids -19 to 1665 of SEQ ID NO: 2). 제78항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드 형태이며, 상기 제2 폴리펩티드가 본질적으로 Fc로 이루어진 것인 폴리펩티드.86. The polypeptide of any one of claims 78 to 85, wherein the polypeptide is in hybrid form comprising a second polypeptide, wherein the second polypeptide consists essentially of Fc. 제85항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인 폴리펩티드.86. The method of claim 85, wherein said second polypeptide is at least 90% or 95% identical to said amino acid sequence (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii), or Polypeptide consisting essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4) having a signal sequence as shown in FIG. 제86항에 있어서, 상기 제2 폴리펩티드가 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 없는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 1 내지 227)과 일치하거나, 또는 표 2A(ⅱ)에 나타낸 신호 서열이 있는 상기 아미노산 서열(서열번호 4의 아미노산 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 일치하는 서열로 본질적으로 이루어진 것인 폴리펩티드.87. The method of claim 86, wherein the second polypeptide is identical to the amino acid sequence (amino acids 1 to 227 of SEQ ID NO: 4) without the signal sequence shown in Table 2A (ii), or the signal sequence shown in Table 2A (ii) Polypeptide consisting essentially of a sequence that is at least 90% or 95% identical to said amino acid sequence (amino acids -20 to 227 of SEQ ID NO: 4). 제78항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 Ⅷ로 이루어진 폴리펩티드보다 적어도 1.5 내지 6배, 1.5 내지 5배, 1.5 내지 4배 및 1.5 내지 3배, 또는 1.5 내지 2배 긴 반감기를 갖는 것인 폴리펩티드.89. The half-life of any of claims 78-88, wherein the half-life of at least 1.5-6 times, 1.5-5 times, 1.5-4 times and 1.5-3 times, or 1.5-2 times longer than the polypeptide consisting of Factor VII. Polypeptide having. 제78항 내지 제85항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.86. A polynucleotide encoding the polypeptide of any one of claims 78-85. 제90항에 있어서, 표 1의 상기 인자 Ⅷ-Fc 뉴클레오티드 서열(서열번호 1, 5, 7, 9, 또는 11)을 포함하는 것인 폴리뉴클레오티드.The polynucleotide of claim 90 comprising the factor VII-Fc nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 (SEQ ID NOs: 1, 5, 7, 9, or 11). 인자 Ⅷ-Fc 폴리펩티드 및 제86항 내지 제89항 중 어느 한 항의 제 2 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.90. A polynucleotide encoding a Factor VII-Fc polypeptide and the second peptide of any one of claims 86-89. 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 벡터, 플라스미드, 파지 또는 바이러스인 것인 폴리뉴클레오티드.93. The polynucleotide of any one of claims 90-92, which is a vector, plasmid, phage or virus. 제90항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, DNA 또는 RNA인 것인 폴리뉴클레오티드.95. The polynucleotide of any one of claims 90-93, which is DNA or RNA. 제89항 내지 제94항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 배양된 인간 태아 세포.95. A cultured human fetal cell comprising the polynucleotide of any of claims 89-94. 제95항에 있어서, HEK293 세포인 것인, 배양된 인간 태아 세포.95. The cultured human fetal cell of claim 95 which is HEK293 cells. 인자 Ⅷ-Fc 하이브리드 단백질을 제조하는 방법으로서,
암호화된 인자 Ⅷ-Fc 키메라 폴리펩티드 및 본질적으로 Fc로 이루어진 암호화된 폴리펩티드를 발현시키는 조건 하에서 제95항 또는 제96항의 세포를 배양하는 단계; 및
암호화된 인자 Ⅷ-Fc 하이브리드 단백질을 회복하는 것을 포함하는, 인자 Ⅷ-Fc 하이브리드 단백질의 제조방법.A method for preparing a factor VIII-Fc hybrid protein,
Culturing the cells of claims 95 or 96 under conditions expressing the encoded factor VII-Fc chimeric polypeptide and the encoded polypeptide essentially consisting of Fc; And
A method for preparing a Factor VIII-Fc hybrid protein, comprising recovering the encoded Factor VIII-Fc hybrid protein. 제97항의 방법에 의하여 제조되는 단백질.A protein prepared by the method of claim 97. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인지질 비히클과의 상호작용 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체의 형성 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 5분 내에 알파-트롬빈에 의하여 활성화되는 능력; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅸa와의 상호작용 능력으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.58. The method of any one of claims 1-57, wherein the chimeric polypeptide is
Ability to interact with a phospholipid vehicle comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety;
The ability to form an Xase complex that activates Factor VII comparable to that of the polypeptide consisting of the Factor VII moiety;
The ability to be activated by alpha-thrombin within 5 minutes comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety; And
And at least one feature selected from the group consisting of the ability to interact with factor VII which is comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety. 제99항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Km에 대해 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Km으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Km이 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대해 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax이 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Kd의 약 1, 1.5, 또는 2의 표준 편차 내에 있는 Kd으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Kd가 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대해 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax이 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 특성을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.105. The method of claim 99, wherein said chimeric polypeptide is
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Km that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 KM of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Km is measured as a function of concentration of FactorVIII ;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of FactorVIII ;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Kd within a standard deviation of about 1, 1.5, or 2 of Kd of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Kd is measured as a function of concentration of FactorVIIa; And
Forming an Xase complex that activates Factor V with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the Factor VIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of Factor V A method of administering Factor VIII to a subject having one or more properties selected from the group consisting of: 제58항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드가
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인지질 비히클과의 상호작용 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체의 형성 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 5분 내에 알파 트롬빈에 의해 활성화되는 능력; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅸa와의 상호작용 능력으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 특성을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.78. The method of claim 58, wherein the polypeptide is
Ability to interact with a phospholipid vehicle comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety;
The ability to form an Xase complex that activates Factor VII comparable to that of the polypeptide consisting of the Factor VII moiety;
The ability to be activated by alpha thrombin within 5 minutes comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety; And
And at least one property selected from the group consisting of the ability to interact with factor VII comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety. 제101항에 있어서, 상기 폴리펩티드가
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Km에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Km으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Km이 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax가 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Kd에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Kd로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Kd이 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax이 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 특성을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.102. The method of claim 101, wherein said polypeptide is
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Km within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 KM of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Km is measured as a function of concentration of FactorVIII ;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of FactorVIII ;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Kd within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 Kd of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Kd is measured as a function of concentration of FactorVIIa ; And
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of FactorVIIa A method of administering Factor VIII to a subject having one or more properties selected from the group consisting of: 제78항 내지 제89항, 및 제98항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인지질 비히클과의 상호작용 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체의 형성 능력;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 5분 내에 알파-트롬빈에 의해 활성화되는 능력; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 상기 폴리펩티드의 능력에 필적할 만한 인자Ⅸa과의 상호작용 능력으로 이루어진 그룹에서 선택된 1, 약 1.5, 또는 약 2개, 또는 그 이상의 특성을 갖는 것인 폴리펩티드.99. The method of any of claims 78-89 and 98.
Ability to interact with a phospholipid vehicle comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety;
The ability to form an Xase complex that activates Factor VII comparable to that of the polypeptide consisting of the Factor VII moiety;
The ability to be activated by alpha-thrombin within 5 minutes comparable to that of the polypeptide consisting of the factor VII moiety; And
A polypeptide having one, about 1.5, or about two, or more properties selected from the group consisting of the ability to interact with factor VII a comparable ability of the polypeptide consisting of the factor VII moiety. 제101항에 있어서, 상기 폴리펩티드가
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Km의 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Km으로 인자Ⅹ를 활성화하는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Km이 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax으로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax가 인자Ⅹ의 농도 함수로서 측정되는 단계;
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Kd에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Kd로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Kd이 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계; 및
상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 Vmax에 대하여 약 1, 약 1.5, 또는 약 2의 표준 편차 내에 있는 Vmax로 인자Ⅹ를 활성화시키는 Xase 복합체를 형성하되, 상기 Vmax이 인자Ⅸa의 농도 함수로서 측정되는 단계로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 특성을 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.102. The method of claim 101, wherein said polypeptide is
Forming an Xase complex that activates Factor VII with a Km within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 Km of the polypeptide consisting of the Factor VII moiety, wherein Km is measured as a function of concentration of Factor VII;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of FactorVIII ;
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Kd within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 Kd of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Kd is measured as a function of concentration of FactorVIIa ; And
Forming an Xase complex that activates FactorVIII with a Vmax that is within a standard deviation of about 1, about 1.5, or about 2 with respect to Vmax of the polypeptide consisting of the FactorVIII moiety, wherein Vmax is measured as a function of concentration of FactorVIIa A method of administering Factor VIII to a subject having one or more properties selected from the group consisting of: 제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여량이 1.38 IU/㎏ 당 IU/㎗ 초과의 평균 증분 회복도(K 값)(관찰된 활성)를 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.78. The subject of any of claims 1-77, wherein the dose has an average incremental recovery (K value) (observed activity) of greater than IU / mm3 per 1.38 IU / kg. Method of administration. 제1항 내지 제77항, 및 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여량이 적어도 약 1.5, 적어도 약 1.85, 또는 적어도 약 2.46 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K 값)(관찰된 활성)를 갖는 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.108. The mean incremental recovery (K value) of any one of claims 1-77, and 104, wherein said dosage is at least about 1.5, at least about 1.85, or at least about 2.46 IU / kg. A method of administering Factor VII to a subject having (observed activity). 제1항 내지 제75항, 및 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩티드가 상기 환자 집단 또는 상기 대상체에서,
상기 환자 집단에서의 약 2.33±1.08 ㎖/hr/㎏ 이하의 평균 클리어런스(CL)(활성);
상기 환자 집단에서의 약 1.8 내지 2.69 ㎖/hr/㎏의 평균 클리어런스(CL)(활성);
상기 환자 집단에서의 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 클리어런스의 약 65%에 해당하는 평균 클리어런스(CL)(활성);
상기 대상체에서의 약 1.22 내지 5.19 ㎖/hr/㎏의 클리어런스(CL)(활성);
상기 환자 집단에서의 적어도 약 26.3±8.33 시간의 평균 체류시간(MRT)(활성);
상기 환자 집단에서의 약 25.9 내지 26.5 시간의 평균 MRT(활성);
상기 환자 집단에서의 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 평균 MRT 보다 약 1.5배 긴 평균 MRT(활성);
상기 대상체에서의 약 14 내지 41.3 시간의 평균 체류시간(MRT)(활성);
상기 환자 집단에서의 약 18.3±5.79 시간의 평균 t1 /2 베타(활성);
상기 환자 집단에서의 약 18 내지 18.4 시간의 평균 t1 /2 베타(활성);
상기 환자 집단에서의 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 평균 t1/2 베타보다 약 1.5배 긴 평균 t1 /2 베타(활성);
상기 대상체에서의 약 11 내지 26.4 시간의 t1 /2 베타(활성);
상기 환자 집단에서의 약 2.01±0.44 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K값)(관측 활성);
상기 환자 집단에서의 약 1.85 내지 2.46 IU/㎏ 당 IU/㎗의 평균 증분 회복도(K값)(관측 활성);
상기 환자 집단에서의 상기 인자 Ⅷ 부분으로 이루어진 폴리펩티드의 평균 증분 회복도의 약 90%에 해당하는 평균 증분 회복도(K값)(관측 활성);
상기 대상체에서의 약 1.38 내지 2.88 IU/㎏ 당 IU/㎗의 증분 회복도(K값)(관측 활성);
상기 환자 집단에서의 약 55.1±12.3 ㎖/㎏의 평균 Vss(활성);
상기 환자 집단에서의 약 45.3 내지 56.1 ㎖/㎏의 평균 Vss(활성);
상기 대상체에서의 약 37.7 내지 79.4 ㎖/㎏의 Vss(활성);
상기 환자 집단에서의 약 49.9±18.2 IU/㎏ 당 IU*h/㎗의 평균 AUC/투여량(활성);
상기 환자 집단에서의 약 44.8 내지 57.6 IU/㎏ 당 IU*h/㎗의 평균 AUC/투여량(활성); 및
상기 대상체에서의 약 19.2 내지 81.7 IU/㎏ 당 IU*h/㎗의 AUC/투여량(활성)으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 약동학 변수를 나타낸 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.107. The method of any one of claims 1-75, and 104-106, wherein the chimeric polypeptide is in the patient population or in the subject,
Mean clearance (CL) (activity) of about 2.33 ± 1.08 ml / hr / kg or less in the patient population;
Mean clearance (CL) (activity) of about 1.8 to 2.69 ml / hr / kg in the patient population;
An average clearance (CL) (activity) corresponding to about 65% of the clearance of the polypeptide consisting of the factor VII portion in the patient population;
Clearance (CL) (activity) of about 1.22-5.19 ml / hr / kg in said subject;
Mean residence time (MRT) (activity) of at least about 26.3 ± 8.33 hours in the patient population;
Mean MRT (activity) of about 25.9 to 26.5 hours in the patient population;
An average MRT (activity) that is about 1.5 times longer than the average MRT of the polypeptide consisting of the factor VII portion in the patient population;
Mean retention time (MRT) (activity) of about 14-41.3 hours in said subject;
About 18.3 ± 5.79 Time Average t 1/2 beta (Active) in the patient population;
Average t 1/2 beta (active) of about 18 to 18.4 at the time of the patient population;
About 1.5 times the average long t 1/2 beta (active) than the mean t 1/2 beta of the polypeptide consisting of the factor Ⅷ parts in the patient population;
Of about 11 to 26.4 hours t 1/2 beta of the target object in the (active);
Mean incremental recovery (K value) of about 2.01 ± 0.44 IU / kg in this patient population (K value) (observation activity);
An average incremental recovery (K value) of about 1.85-2.46 IU / kg in this patient population (K value) (observation activity);
An average incremental recovery (K value) (observation activity) corresponding to about 90% of the average incremental recovery of the polypeptide consisting of the factor VII portion in the patient population;
Incremental recovery (K value) of IU / dL per about 1.38-2.88 IU / kg in said subject (observation activity);
Mean Vss (activity) of about 55.1 ± 12.3 ml / kg in the patient population;
Mean Vss (activity) of about 45.3 to 56.1 ml / kg in the patient population;
Vss (activity) of about 37.7 to 79.4 ml / kg in said subject;
Mean AUC / dose (activity) of IU * h / dL per about 49.9 ± 18.2 IU / kg in the patient population;
Mean AUC / dose (activity) of IU * h / dL per about 44.8-57.6 IU / kg in the patient population; And
And at least one pharmacokinetic variable selected from the group consisting of AUC / dose (activity) of IU * h / dL per about 19.2 to 81.7 IU / kg in said subject. 제1항 내지 제77항, 및 제104 항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 부분이 XTEN 또는 알부민인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.108. The method of any one of claims 1-77 and 104-106, wherein the second portion is XTEN or albumin. 제1항 내지 제77항, 및 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용량이 약 10 내지 약 150, 100 내지 110, 110 내지 120, 120 내지 130, 130 내지 140, 140 내지 150, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 또는 150 IU/㎏인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.108. The method of any one of claims 1-77 and 104-106, wherein the therapeutic dose is about 10 to about 150, 100 to 110, 110 to 120, 120 to 130, 130 to 140, 140 To 150, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, or 150 IU / kg. 제1항 내지 제77항, 및 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 간격이 1.5 내지 5일, 1.5일, 2일, 3일, 4일, 또는 5일 또는 그 이상인 것인, 인자 Ⅷ의 대상체에의 투여방법.108. The method of any one of claims 1-77, and 104-106, wherein the administration interval is 1.5-5 days, 1.5 days, 2 days, 3 days, 4 days, or 5 days or more. Which will be administered to the subject.
KR1020127017595A 2009-12-06 2010-12-06 Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof KR101770849B1 (en)

Applications Claiming Priority (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26707009P 2009-12-06 2009-12-06
US61/267,070 2009-12-06
US28505409P 2009-12-09 2009-12-09
US61/285,054 2009-12-09
US30159210P 2010-02-04 2010-02-04
US61/301,592 2010-02-04
US36306510P 2010-07-09 2010-07-09
US61/363,065 2010-07-09
US37311310P 2010-08-12 2010-08-12
US61/373,113 2010-08-12
US41092910P 2010-11-07 2010-11-07
US61/410,929 2010-11-07
US41967610P 2010-12-03 2010-12-03
US61/419,676 2010-12-03
PCT/US2010/059136 WO2011069164A2 (en) 2009-12-06 2010-12-06 Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20120129882A true KR20120129882A (en) 2012-11-28
KR101770849B1 KR101770849B1 (en) 2017-09-05

Family

ID=44115536

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020127017595A KR101770849B1 (en) 2009-12-06 2010-12-06 Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof

Country Status (30)

Country Link
US (5) US9050318B2 (en)
EP (3) EP3906937A1 (en)
JP (7) JP5903048B2 (en)
KR (1) KR101770849B1 (en)
CN (1) CN102791285A (en)
AU (5) AU2010325787B2 (en)
BR (1) BR112012013502A2 (en)
CA (2) CA3121739A1 (en)
CO (1) CO6561782A2 (en)
CY (2) CY1119919T1 (en)
DK (1) DK2506868T3 (en)
EA (2) EA025416B1 (en)
ES (2) ES2659888T3 (en)
HK (1) HK1253887A1 (en)
HR (2) HRP20180135T1 (en)
HU (1) HUE036233T2 (en)
IL (2) IL220204B (en)
LT (1) LT2506868T (en)
ME (1) ME02964B (en)
MX (2) MX336830B (en)
MY (1) MY159135A (en)
NO (1) NO2506868T3 (en)
NZ (2) NZ600709A (en)
PL (2) PL3326643T3 (en)
PT (2) PT3326643T (en)
RS (1) RS56957B1 (en)
SG (3) SG181130A1 (en)
SI (1) SI2506868T1 (en)
WO (1) WO2011069164A2 (en)
ZA (1) ZA201204874B (en)

Families Citing this family (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6263355A (en) * 1985-09-13 1987-03-20 Hitachi Ltd Checking method for battery back-up ram
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
US8716448B2 (en) 2009-02-03 2014-05-06 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
PT3178835T (en) 2009-02-03 2019-06-19 Amunix Pharmaceuticals Inc Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
CA3121739A1 (en) 2009-12-06 2011-06-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
TW201217526A (en) 2010-07-09 2012-05-01 Biogen Idec Hemophilia Inc Chimeric clotting factors
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2625189B1 (en) 2010-10-01 2018-06-27 ModernaTX, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9676871B2 (en) 2010-11-05 2017-06-13 Pfizer Inc. Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
JP2014511687A (en) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド Engineered nucleic acid delivery and formulation
HUE043894T2 (en) 2011-06-10 2019-09-30 Bioverativ Therapeutics Inc Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
JP2014522838A (en) * 2011-07-08 2014-09-08 バイオジェン アイデック ヘモフィリア インコーポレイテッド Factor VIII chimeric and hybrid polypeptides and methods of use thereof
US10656167B2 (en) 2011-07-25 2020-05-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Assays to monitor bleeding disorders
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HUE057725T2 (en) 2011-10-03 2022-06-28 Modernatx Inc Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
HRP20220717T1 (en) 2011-12-16 2022-07-22 Modernatx, Inc. Modified mrna compositions
EA028309B1 (en) 2012-01-12 2017-11-30 Байоджен Эмэй Инк. Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof
CN108465106B (en) * 2012-01-12 2022-05-27 普吉特海湾血液中心 Methods of reducing immunogenicity to factor VIII in individuals undergoing factor VIII therapy
DK2822577T3 (en) 2012-02-15 2019-04-01 Bioverativ Therapeutics Inc RECOMBINANT FACTOR VIII PROTEINS
ES2935489T3 (en) * 2012-02-15 2023-03-07 Bioverativ Therapeutics Inc Factor VIII compositions and methods of preparation and use thereof
AU2013243947A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
EP2836518B1 (en) 2012-04-11 2019-01-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
WO2013185114A2 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Chimeric clotting factors
US10287564B2 (en) 2012-06-08 2019-05-14 Bioverativ Therapeutics Inc. Procoagulant compounds
WO2014008480A2 (en) * 2012-07-06 2014-01-09 Biogen Idec Ma Inc. Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof
PL2882450T3 (en) * 2012-07-11 2020-06-29 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii complex with xten and von willebrand factor protein, and uses thereof
EP2877202A4 (en) 2012-07-25 2016-06-01 Biogen Ma Inc Blood factor monitoring assay and uses thereof
EP2908847B1 (en) 2012-10-18 2022-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
WO2014070953A1 (en) * 2012-10-30 2014-05-08 Biogen Idec Ma Inc. Methods of Using FVIII Polypeptide
ES2921623T3 (en) 2012-11-26 2022-08-30 Modernatx Inc terminally modified RNA
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
EP4223772A3 (en) * 2013-02-15 2023-10-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor viii gene
SI2968477T1 (en) * 2013-03-15 2020-04-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii polypeptide formulations
US9090697B2 (en) * 2013-03-15 2015-07-28 Bayer Healthcare Llc Methods for treating bleeding disorders
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10364288B2 (en) 2013-05-24 2019-07-30 Biogen Ma Inc. Anti-GPIIB/IIIA antibodies or uses thereof
TW201536811A (en) * 2013-05-31 2015-10-01 Biogen Idec Inc Chimeric FVII-XTEN molecules and uses thereof
IL279313B (en) * 2013-06-20 2022-08-01 Baxalta Inc Pharmacokinetic drug dosing regimen apparatus and method
IL297611A (en) * 2013-06-28 2022-12-01 Bioverativ Therapeutics Inc Thrombin cleavable linker with xten and its uses thereof
WO2014210547A1 (en) * 2013-06-28 2014-12-31 Biogen Idec Ma Inc. Thrombin cleavable linker
US10195289B2 (en) 2013-07-31 2019-02-05 Rinat Neuroscience Corp. Engineered polypeptide conjugates using transglutaminase
TW202003554A (en) 2013-08-14 2020-01-16 美商百歐維拉提夫治療公司 Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
WO2015023894A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Biogen Idec Ma Inc. Recombinant factor viii proteins
US10611794B2 (en) 2013-09-25 2020-04-07 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US10584147B2 (en) 2013-11-08 2020-03-10 Biovertiv Therapeutics Inc. Procoagulant fusion compound
EP3083933A1 (en) 2013-12-20 2016-10-26 Biogen MA Inc. Use of perfusion seed cultures to improve biopharmaceutical fed-batch production capacity and product quality
EP4176894B1 (en) * 2014-01-10 2024-02-28 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii chimeric proteins and uses thereof
US20160347787A1 (en) 2014-02-04 2016-12-01 Biogen Ma Inc. Use of cation-exchange chromatography in the flow-through mode to enrich post-translational modifications
WO2015148454A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-01 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Optimized and modified factor viii genes for gene therapy
RU2674979C2 (en) 2014-04-25 2018-12-14 Ринат Ньюросайенс Корп. Antibody-drug conjugates with high drug loading
CN108064282A (en) 2014-10-14 2018-05-22 哈洛齐梅公司 Adenosine deaminase -2 (ADA2), its variant composition and use its method
MA40835A (en) 2014-10-23 2017-08-29 Biogen Ma Inc ANTI-GPIIB / IIIA ANTIBODIES AND THEIR USES
MA40864A (en) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc HYPOTAURINE, GABA, BETA-ALANINE AND CHOLINE FOR THE REGULATION OF THE ACCUMULATION OF RESIDUAL BY-PRODUCTS IN MAMMAL CELL CULTURE PROCESSES
MA40861A (en) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc ANTI-GLYCOPROTEIN IIB / IIIA ANTIBODIES
IL257231B (en) 2015-08-03 2022-09-01 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix fusion proteins and methods of making and using same
WO2017070167A1 (en) 2015-10-20 2017-04-27 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for modified factor ix fusion proteins
PT3411478T (en) 2016-02-01 2022-09-13 Bioverativ Therapeutics Inc Optimized factor viii genes
EP4343774A2 (en) 2016-04-15 2024-03-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment
TW201739448A (en) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 Methods and formulations for treatment and/or prevention of blood-associated disorders
WO2017222337A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 재단법인 목암생명과학연구소 Chimera protein comprising fviii and vwf factors, and use thereof
CN118027185A (en) 2016-08-05 2024-05-14 免疫医疗有限责任公司 Anti-O2 antibodies and uses thereof
CN106317226B (en) 2016-08-19 2017-09-05 安源医药科技（上海）有限公司 Connection peptide for construction of fusion protein
CN106279437B (en) * 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 Hyperglycosylated human coagulation factor VIII fusion proteins and preparation method thereof and purposes
SG11201903063UA (en) 2016-10-19 2019-05-30 Medimmune Llc Anti-o1 antibodies and uses thereof
CN108239151B (en) * 2016-12-23 2020-07-03 海门晟斯生物制药有限公司 Recombinant single-chain human FVIII-Fc fusion protein and application thereof
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
EA201991768A1 (en) 2017-01-31 2020-01-22 Байоверетив Терапьютикс Инк. FUSIONED PROTEINS BASED ON FACTOR IX AND METHODS OF PRODUCING THEM AND WAYS OF APPLICATION
AU2019282264A1 (en) 2018-06-05 2020-11-26 Amgen Inc. Modulating antibody dependent cellular phagocytosis
AU2019339895A1 (en) 2018-09-11 2021-03-11 Amgen Inc. Methods of modulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
WO2020086408A1 (en) 2018-10-26 2020-04-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services A high-yield perfusion-based transient gene expression bioprocess
WO2020118069A2 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Use of lentiviral vectors expressing factor ix
CA3144630A1 (en) 2019-06-19 2020-12-24 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods and compositions for treating hemophilia and low bone mineral density
WO2023211315A1 (en) * 2022-04-28 2023-11-02 Joint Stock Company "Biocad" Isolated nucleic acid that encodes fusion protein based on fviii-bdd and on heterologous signal peptide
CN114989307B (en) * 2022-05-11 2023-08-01 华兰生物工程股份有限公司 Recombinant human blood coagulation factor VIII-Fc fusion protein and preparation method thereof

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235881A (en) * 1978-12-04 1980-11-25 Cort Joseph H Method for producing high potency factor VIII
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
ES8801674A1 (en) 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Novel procoagulant proteins.
KR910006424B1 (en) 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 Method of manufacturing knitted briefs
JP2525022B2 (en) 1986-01-03 1996-08-14 ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド VIII: Improved production method for c-factor protein
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US5610278A (en) 1986-06-24 1997-03-11 Novo Nordisk A/S Process for producing a coagulation active complex of factor VIII fragments
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
CA1331157C (en) 1987-04-06 1994-08-02 Randal J. Kaufman Method for producing factor viii:c-type proteins
US6060447A (en) 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
US5171844A (en) 1987-06-12 1992-12-15 Gist-Brocades N.W. Proteins with factor viii activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
DE3720246A1 (en) 1987-06-19 1988-12-29 Behringwerke Ag FACTOR VIII: C-LIKE MOLECULE WITH COAGULATION ACTIVITY
FR2619314B1 (en) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa FACTOR VIII ANALOG, PREPARATION METHOD AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THE SAME
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5004803A (en) 1988-11-14 1991-04-02 Genetics Institute, Inc. Production of procoagulant proteins
SE465222C5 (en) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab A recombinant human factor VIII derivative and process for its preparation
CA2078721A1 (en) 1991-09-24 1993-03-25 Hiroshi Yonemura Process for preparing human coagulation factor viii protein complex
FR2686899B1 (en) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa NOVEL BIOLOGICALLY ACTIVE POLYPEPTIDES, THEIR PREPARATION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM.
US6376463B1 (en) 1992-04-07 2002-04-23 Emory University Modified factor VIII
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
US5364771A (en) 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
US5563045A (en) 1992-11-13 1996-10-08 Genetics Institute, Inc. Chimeric procoagulant proteins
SE504074C2 (en) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Protein preparation for subcutaneous, intramuscular or intradermal administration
US6818439B1 (en) 1994-12-30 2004-11-16 Chiron Corporation Methods for administration of recombinant gene delivery vehicles for treatment of hemophilia and other disorders
SE9503380D0 (en) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
US6458563B1 (en) 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
CA2225189C (en) 1997-03-06 2010-05-25 Queen's University At Kingston Canine factor viii gene, protein and methods of use
ES2269366T3 (en) 2000-02-11 2007-04-01 Merck Patent Gmbh IMPROVEMENT OF AVERAGE LIFE IN CIRCULATION OF FUSION PROTEINS BASED ON ANTIBODIES.
CA2405563A1 (en) * 2000-04-12 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP2004517950A (en) * 2001-02-05 2004-06-17 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト Combined use of factor VII and factor VIII polypeptides
ES2500918T3 (en) 2001-12-21 2014-10-01 Human Genome Sciences, Inc. Albumin and interferon beta fusion proteins
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
EP1444986A1 (en) * 2003-02-07 2004-08-11 Aventis Behring GmbH Pharmaceutical preparation for the improved treatment of blood-clotting disorders
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP2298347B1 (en) * 2003-05-06 2015-09-30 Biogen Hemophilia Inc. Clotting factor chimeric proteins for treatment of a hemostatic disorder
ES2527102T3 (en) * 2003-06-19 2015-01-20 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of disorders related to coagulation
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
DK2363414T3 (en) 2004-11-12 2022-08-08 Bayer Healthcare Llc Site-directed modification of FVIII
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
WO2007103515A2 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Amunix, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
JP2009532351A (en) * 2006-03-31 2009-09-10 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド PEGylated factor VIII
KR101542752B1 (en) 2006-12-22 2015-08-10 체에스엘 베링 게엠베하 Modified coagulation factors with prolonged in vivo half-life
EP2185701A4 (en) 2007-08-15 2011-03-02 Amunix Operating Inc Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides
US20130189239A1 (en) * 2008-02-27 2013-07-25 Novo Nordisk A/S Conjugated Factor VIII Molecules
PT3178835T (en) 2009-02-03 2019-06-19 Amunix Pharmaceuticals Inc Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
WO2010111414A1 (en) * 2009-03-24 2010-09-30 Bayer Healthcare Llc Factor viii variants and methods of use
GB0908515D0 (en) 2009-05-18 2009-06-24 Apitope Technology Bristol Ltd Peptide
CA3121739A1 (en) 2009-12-06 2011-06-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
JP2014522838A (en) 2011-07-08 2014-09-08 バイオジェン アイデック ヘモフィリア インコーポレイテッド Factor VIII chimeric and hybrid polypeptides and methods of use thereof
SI2968477T1 (en) * 2013-03-15 2020-04-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor viii polypeptide formulations
JP6083911B2 (en) 2014-12-19 2017-02-22 花王株式会社 Absorbent articles

Also Published As

Publication number Publication date
LT2506868T (en) 2018-02-26
HK1253887A1 (en) 2019-07-05
US20130274194A1 (en) 2013-10-17
NO2506868T3 (en) 2018-04-14
SI2506868T1 (en) 2018-04-30
MX353233B (en) 2018-01-08
JP6385410B2 (en) 2018-09-05
ZA201204874B (en) 2016-06-29
AU2021202912A1 (en) 2021-06-03
RS56957B1 (en) 2018-05-31
MX2012006347A (en) 2012-10-03
WO2011069164A2 (en) 2011-06-09
CA2782424C (en) 2021-07-27
MX336830B (en) 2016-02-03
PT3326643T (en) 2021-07-12
CY1124888T1 (en) 2023-01-05
JP7244688B2 (en) 2023-03-22
ES2659888T3 (en) 2018-03-19
ME02964B (en) 2018-07-20
NZ703153A (en) 2015-02-27
JP6641340B2 (en) 2020-02-05
CO6561782A2 (en) 2012-11-15
US9050318B2 (en) 2015-06-09
CA2782424A1 (en) 2011-06-09
US20220265780A1 (en) 2022-08-25
IL220204A0 (en) 2012-07-31
HUE036233T2 (en) 2018-06-28
AU2010325787A1 (en) 2012-07-12
AU2017268648A1 (en) 2017-12-21
JP2022051964A (en) 2022-04-01
AU2010325787A8 (en) 2012-07-19
SG10201907152YA (en) 2019-09-27
JP2013512678A (en) 2013-04-18
JP2018024706A (en) 2018-02-15
EA201691109A1 (en) 2017-01-30
JP2020019821A (en) 2020-02-06
JP5903048B2 (en) 2016-04-13
IL220204B (en) 2018-08-30
IL260769B (en) 2020-03-31
EP2506868A2 (en) 2012-10-10
HRP20211010T1 (en) 2021-09-17
PT2506868T (en) 2018-02-23
KR101770849B1 (en) 2017-09-05
AU2016213822A1 (en) 2016-09-01
ES2880038T3 (en) 2021-11-23
US20130108629A1 (en) 2013-05-02
WO2011069164A3 (en) 2011-07-28
MY159135A (en) 2016-12-15
HRP20180135T1 (en) 2018-04-06
CY1119919T1 (en) 2018-06-27
PL2506868T3 (en) 2018-06-29
PL3326643T3 (en) 2021-10-25
US20190262429A1 (en) 2019-08-29
US20160199455A1 (en) 2016-07-14
EA025416B1 (en) 2016-12-30
AU2010325787A2 (en) 2013-06-06
NZ600709A (en) 2015-01-30
JP2017025098A (en) 2017-02-02
SG10201408049SA (en) 2015-02-27
EP3326643B1 (en) 2021-04-07
EA038618B1 (en) 2021-09-23
EP2506868A4 (en) 2013-07-24
US9241978B2 (en) 2016-01-26
SG181130A1 (en) 2012-07-30
AU2016213822B2 (en) 2017-08-31
DK2506868T3 (en) 2018-01-29
AU2019202969A1 (en) 2019-05-16
JP2015083608A (en) 2015-04-30
EP2506868B1 (en) 2017-11-15
CA3121739A1 (en) 2011-06-09
JP2023071969A (en) 2023-05-23
JP6062459B2 (en) 2017-01-18
EP3326643A1 (en) 2018-05-30
US11266720B2 (en) 2022-03-08
EA201290443A1 (en) 2013-06-28
EP3906937A1 (en) 2021-11-10
BR112012013502A2 (en) 2017-01-10
CN102791285A (en) 2012-11-21
AU2017268648B2 (en) 2019-01-31
AU2010325787B2 (en) 2016-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101770849B1 (en) Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
AU2016204986B2 (en) Factor VIII Chimeric And Hybrid Polypeptides, And Methods Of Use Thereof
AU2019202656B2 (en) Factor VIII polypeptide formulations
AU2016202875B2 (en) Chimeric Factor VIII Polypeptides and Uses Thereof
US10968442B2 (en) Chimeric clotting factors
DK2802668T3 (en) METHODS FOR REDUCING IMMUNOGENICITY AGAINST FACT VIII OF INDIVIDUALS THAT UNDERSTAND FACT VIII THERAPY
AU2013331000B2 (en) Methods of using a fixed dose of a clotting factor
KR20210020030A (en) How to treat hemophilia A

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant