KR20120099862A - Pharmaceutical composition comprising neonatal fc receptor binding inhibitor - Google Patents

Abstract

PURPOSE: A pharmaceutical composition for retinal disorder including a FcRn binding inhibitor is provided to enhance medicinal effects for retinal disorder by improving pharmacodynamic efficiency of the retinal disorder therapeutic agent and to reduce side effects or skipping problems caused by frequent administration. CONSTITUTION: A pharmaceutical composition for retinal disorder includes a FcRn(neonate Fc receptor) binding inhibitor. The retinal disorder therapeutic agent is an anti-body medicine. The retinal disorder therapeutic agent is IgG based anti-body medicine. The retinal disorder therapeutic agent is Avastin. The FcRn binding inhibitor is a peptide which inhibits bondage of the Fc part of IgG with the FcRn. The FcRn binding inhibitor is Fc-III peptide. 0.0001-50 wt% of the FcRn binding inhibitor is included based on the total weight. The pharmaceutical composition for retinal disorder prevention includes the retinal disorder therapeutic agent and the FcRn binding inhibitor. The retinal disorder therapeutic agent and the FcRn binding inhibitor are included at a weight ratio of 1: 0.1-100. [Reference numerals] (AA) Avastin inside vitreous; (BB) Concentration; (CC) Avastin; (DD) Avastin+Fc-111

Description

ＦｃＲｎ 결합 저해제를 포함하는 약학적 조성물{Pharmaceutical composition comprising neonatal Fc receptor binding inhibitor}Pharmaceutical composition comprising neonatal Fc receptor binding inhibitor

본 발명은 FcRn(신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료제의 약효 증진용 약학적 조성물, 및 망막질환 치료제 및 FcRn의 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of a therapeutic agent for retinal disease, including an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor, and a pharmaceutical composition for treating retinal disease, including a therapeutic agent for retinal disease and a binding inhibitor for FcRn.

일반적으로, 단백질 약물(폴리펩티드, 펩티드 약물 등 포함)의 경우 안정성이 낮아 쉽게 변성되고 혈액 내 단백질 가수분해효소에 의해 분해되어 신장이나 간을 통해 쉽게 제거되기 때문에, 단백질 약물의 혈중 농도 및 역가를 유지하기 위해서는 단백질 약물을 환자에게 자주 투여할 필요가 있다. 그러나 단백질 약물의 경우, 활성 단백질의 혈중 농도를 유지하기 위해 자주 투여하는 것은 환자에게 고통 또는 불편함을 야기하게 되며, 이는 복약 불이행(non-compliance)을 야기하여 충분한 치료효과를 발현하지 못할 우려가 크다. 이러한 문제점을 해결하기 위해, 단백질 약물의 혈중 안정성을 증가시키고, 혈중 약물 농도를 오랫동안 높게 지속시켜 약효를 극대화하며, 결과적으로 복약순응도(compliance)를 높이기 위한 노력이 계속되어 왔다.
In general, protein drugs (including polypeptides, peptide drugs, etc.) have low stability and are easily denatured and degraded by proteolytic enzymes in the blood and are easily removed by the kidneys or liver, thus maintaining the blood protein concentration and titer of the protein drugs. To do this, the protein drug needs to be frequently administered to the patient. However, in the case of protein drugs, frequent administration to maintain blood levels of active protein may cause pain or discomfort in the patient, which may lead to non-compliance and may not produce sufficient therapeutic effects. . In order to solve this problem, efforts have been made to increase the blood stability of protein drugs, to maintain high blood drug concentrations for a long time to maximize the efficacy, and consequently to increase the medication compliance.

단백질 약물(폴리펩티드, 펩티드 약물 등 포함)의 지속성 제제는 단백질 약물의 안정성을 높이는 동시에 약물 자체의 역가가 충분히 높게 유지되어야 하고 환자에게 면역반응을 유발하지 않아야 한다. 망막질환과 관련해서도 단백질 약물의 한 범주로써 다수의 항체약이 개발되고 있기는 하나, 유리체강 내에 주입된 항체약은 빠르게 안구로부터 배출되는 문제점을 가지고 있다. 유리체강 내에 주입된 항체약(antibody drug)은 (ⅰ) 망막을 통한 배출, (ⅱ) 트라베큘라 및 쉴렘스 캐널(Trabecular and Schlemm's canal)을 통한 배출 및 (ⅲ) 홍채와 모양체 혈관을 통한 배출과 같은 3가지의 배출경로를 통해 안구 내에서 혈류로 배출되는데 이러한 빈번한 배출로 인하여 반감기는 짧아지고, 약효 유지를 위해서 더욱 자주 항체약을 유리체강 내에 주입하여야 하는 바, 이러한 빈번한 배출 및 주입으로 망막 박리(Retinal Detachment) 등이 일어나 이로 인한 시력 상실이 자주 보고되고 있는 실정이다. 또한 이러한 빈번한 배출 및 주입은 환자에게 상당한 불편함과 경제적 부담으로 작용하고 있다.Sustained preparations of protein drugs (including polypeptides, peptide drugs, etc.) should increase the stability of the protein drug while maintaining the titer of the drug itself sufficiently high and not elicit an immune response in the patient. Although a number of antibody drugs have been developed as a category of protein drugs in relation to retinal diseases, antibody drugs injected into the vitreous cavity have a problem of rapidly exiting the eye. Antibody drugs injected into the vitreous cavity may (i) be excreted through the retina, (ii) through the Trabecular and Schlemm's canal and (i) through the iris and ciliary vessels. It is discharged into the bloodstream in the eye through three discharge pathways, such as shortening the half-life due to such frequent discharge, and more frequent injection of antibody drug into the vitreous cavity to maintain the drug. Retinal Detachment has occurred and the loss of vision is frequently reported. In addition, these frequent discharges and infusions are a significant inconvenience and economic burden for the patient.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 망막질환 치료제, 특히 IgG 기반 항체약을 포함하는 다양한 약물에 있어 투여한 약물의 배출을 최소화하기 위한 방법을 연구하던 중, 본 발명을 완성하게 되었다.Against this background, the present inventors completed the present invention while studying a method for minimizing the release of the administered drug in various drugs including retinal disease therapeutic agents, especially IgG-based antibody drug.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of the cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety to better understand the state of the art to which the present invention pertains and the content of the present invention.

본 발명자는 유리체강내 주입된 항체약이 안구로부터 배출되는 모든 경로에 FcRn (신생아 Fc 수용체)가 발현되고 있음을 발견하였고(Kim H, Fariss RN, Zhang C, Robinson SB, Thill M, Csaky KG, Mapping of the neonatal Fc 수용체 in the rodent eye, Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 May;49(5):2025-2029), FcRn (신생아 Fc 수용체)의 결합 저해제를 처리하는 경우 망막질환 치료제의 배출을 줄여 약동학적 효율을 향상시킬 수 있다는 것을 규명하여 본 발명의 완성에 이르게 되었다.The inventors have found that FcRn (neonatal Fc receptor) is expressed in all pathways through which intravitreal injection of antibody drug is released from the eye (Kim H, Fariss RN, Zhang C, Robinson SB, Thill M, Csaky KG, Mapping of the neonatal Fc receptor in the rodent eye, Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 May; 49 (5): 2025-2029), treatment with binding inhibitors of FcRn (neonatal Fc receptor) reduces pharmacokinetics by reducing the release of therapeutic agents for retinal disease It has been found that the efficiency can be improved, which leads to the completion of the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 망막 질환 치료제의 약동학적 효율을 향상시켜 그 치료 효과를 증진시키기 위한 FcRn (신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 약학적 조성물을 제공함에 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor for improving the pharmacokinetic efficiency of a retinal disease therapeutic agent and enhancing its therapeutic effect.

본 발명의 또 다른 목적은 망막질환 치료제 및 FcRn (신생아 Fc 수용체)의 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료용 약학적 조성물을 제공함에 있다. Still another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating retinal disease, including a retinal disease therapeutic agent and an inhibitor of FcRn (neonatal Fc receptor) binding.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

FcRn 결합 저해제를 망막질환 치료제와 함께 투여함으로써, 망막질환 치료제의 배출을 최소화하여 자주 투여하는 데에 따른 불편함, 고통과 부작용을 경감시킬 수 있으며, 따라서 투여대상의 복약순응도(compliance)를 높일 수 있고, 망막질환 치료제의 치료효과를 극대화 할 수 있다는 장점이 있다.
By administering an FcRn binding inhibitor together with a retinal disease treatment agent, it is possible to reduce the discomfort, pain and side effects of frequent administration by minimizing the release of the retinal disease treatment agent, thereby increasing the medication compliance of the subject. And, there is an advantage that can maximize the therapeutic effect of the retinal disease treatment.

도 1은 정상 랫트 안구에서 FcRn mRNA의 발현을 보여주는 RT-PCR 결과이다.
도 2는 결막 조직의 동결 절편에 대하여 랫트의 FcRn 수용체를 면역조직화학적 염색한 결과를 도시한 것이다.
도 3은 모양체, 홍체 및 망막 조직의 동결 절편에 대하여 랫트의 FcRn 수용체를 면역조직화학적 염색한 결과를 도시한 것이다.
도 4는 수정체, 각막 및 시신경 조직의 동결 절편에 대하여 랫트의 FcRn 수용체를 면역조직화학적 염색한 결과를 도시한 것이다.
도 5는 랫트의 안구내 투여된 형광 염료 라벨링된 전장 IgG(붉은 색으로 보이는 부분)의 안구내 분포를 나타낸 것이다.
도 6은 랫트의 안구내 투여된 형광 염료 라벨링된 전장 IgG(붉은 색으로 보이는 부분)의 안구내 분포를 나타낸 것이다.
도 7은 FcRn 수용체의 발현 및 안구내 투여된 베바시주맙(bevacizumab)의 혈청중 농도 사이의 관계를 나타낸 것이다.
도 8은 FcRn 넉아웃 및 와일드-타입 마우스에 있어서 안구내 주사된 베바시주맙의 분포를 나타낸 것이다.
도 9는 랫트에 있어서, 안구내 주사된 베바시주맙 및 치킨 IgY의 약동학 실험결과를 나타낸 것이다.
도 10은 (아바스틴)과 (아바스틴 + Fc-III 펩티드)를 랫트의 유리체강 내에 투여한 후 6시간 뒤 아바스틴의 농도를 ELISA 기법을 이용하여 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.1 is RT-PCR results showing the expression of FcRn mRNA in normal rat eyes.
Figure 2 shows the results of immunohistochemical staining of the FcRn receptor of rats for frozen sections of conjunctival tissue.
Figure 3 shows the results of immunohistochemical staining of FcRn receptors of rats against frozen sections of ciliary, iris and retinal tissues.
Figure 4 shows the results of immunohistochemical staining of FcRn receptors of rats against frozen sections of the lens, cornea and optic nerve tissue.
FIG. 5 shows intraocular distribution of intraocularly administered fluorescent dye labeled full length IgG (parts shown in red) of rats.
FIG. 6 shows intraocular distribution of intraocularly administered fluorescent dye labeled full length IgG (parts shown in red) of rats.
FIG. 7 shows the relationship between expression of FcRn receptors and serum concentrations of bevacizumab administered intraocularly.
FIG. 8 shows the distribution of intraocularly injected bevacizumab in FcRn knockout and wild-type mice.
Figure 9 shows the results of pharmacokinetic experiments of intraocularly injected bevacizumab and chicken IgY in rats.
10 is a graph showing the results of analysis of the concentration of Avastin using ELISA technique 6 hours after administration of (Avastin) and (Avastin + Fc-III peptide) into the vitreous cavity of rats.

본 발명의 일 양태에 따르면, 망막질환 치료제의 약동학적 효율을 향상시켜 그 치료 효과를 증진시키기 위한 FcRn (신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor for improving the pharmacokinetic efficiency of a retinal disease therapeutic agent and enhancing its therapeutic effect.

본 발명의 일 양태에서, 상기 망막질환 치료제는 항체약일 수 있으며, 구체적으로 면역글로불린 G(IgG) 기반 항체약, 보다 구체적으로 아바스틴일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the retinal disease therapeutic agent may be an antibody drug, specifically, an immunoglobulin G (IgG) based antibody drug, more specifically, it may be avastin.

본 발명의 일 양태에서, 상기 FcRn 결합 저해제는 구체적으로 IgG의 Fc 부분과 FcRn의 결합을 억제할 수 있는 펩티드일 수 있으며, 보다 구체적으로 Fc-III 펩티드일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the FcRn binding inhibitor may specifically be a peptide capable of inhibiting FcRn binding with the Fc portion of the IgG, more specifically may be an Fc-III peptide.

본 발명의 일 양태에서, FcRn 결합 저해제는 총 조성물 중량의 0.0001 내지 50중량%의 비율로 포함될 수 있으나, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 기술자라면 필요에 따라 적당한 비율로 조정하여 약학적 조성물을 제조할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the FcRn binding inhibitor may be included in a ratio of 0.0001 to 50% by weight of the total composition weight, but those skilled in the art will adjust the pharmaceutical composition in a suitable ratio as needed It can manufacture.

본 발명의 일 양태에 따르면, 망막질환 치료제 및 FcRn(신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료용 약학적 조성물을 제공한다.According to an aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for treating retinal disease, including a retinal disease therapeutic agent and an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor.

본 발명의 일 양태에서, 상기 망막질환 치료제는 항체약일 수 있으며, 구체적으로 IgG 기반 항체약, 보다 구체적으로 아바스틴일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the retinal disease therapeutic agent may be an antibody drug, specifically, an IgG-based antibody drug, more specifically, Avastin.

본 발명의 일 양태에서, 상기 FcRn 결합 저해제는 구체적으로 IgG의 Fc 부분과 FcRn의 결합을 억제할 수 있는 펩티드일 수 있으며, 보다 구체적으로 Fc-III 펩티드(DeLano WL, Ultsch MH, de Vos AM, Wells JA, Convergent solutions to binding at a protein-protein interface, Science. 2000 Feb18;287(5456):1279-1283)일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the FcRn binding inhibitor may specifically be a peptide capable of inhibiting FcRn binding with the Fc portion of IgG, more specifically Fc-III peptides (DeLano WL, Ultsch MH, de Vos AM, Wells JA, Convergent solutions to binding at a protein-protein interface, Science. 2000 Feb 18; 287 (5456): 1279-1283).

본 발명의 일 양태에서, 망막질환 치료제 및 FcRn 결합 저해제는 조성물 중에 1: 0.1 내지 100의 중량비로 포함될 수 있으나, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 기술자라면 필요에 따라 적당한 중량비로 조정하여 약학적 조성물을 제조할 수 있다.In one aspect of the present invention, the retinal disease therapeutic agent and FcRn binding inhibitor may be included in the composition in a weight ratio of 1: 0.1 to 100, but those skilled in the art will be adjusted to the appropriate weight ratio if necessary The composition can be prepared.

본 발명에서 용어“망막질환”이란 망막의 기능손상 또는 장애로 인하여 발생하는 모든 질환을 포괄하는 의미이며, 망막혈관 폐쇄증, 노인성 황반부변성, 당뇨병성 망막증, 망막박리 등을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 경우, 망막을 통해 투여되는 모든 약물에 적용될 수 있다. The term "retinal disease" in the present invention is meant to encompass all diseases caused by impaired or impaired retinal function, including but not limited to retinal vascular obstruction, senile macular degeneration, diabetic retinopathy, retinal detachment, etc. . In the case of the present invention, it can be applied to all drugs administered through the retina.

본 발명에서 용어“약동학적 효율 향상”이란 약물을 투여한 후 체내 흡수, 분포, 대사 및 배출되는 단계 중 어느 하나 이상의 단계를 조절하여 약물의 치료효과를 높이는 것을 의미하나 본 발명의 특성상 본 명세서에서는 약물의 배출을 억제하여 약효를 높이는 것을 의미한다.In the present invention, the term "improvement of pharmacokinetic efficiency" refers to improving the therapeutic effect of the drug by adjusting any one or more of the steps of absorption, distribution, metabolism and excretion in the body after administration of the drug. It means to increase the drug efficacy by suppressing the discharge of the drug.

본 발명에서 용어“FcRn (신생아 Fc 수용체)의 결합 저해제”란 항체약과 FcRn (신생아 Fc 수용체)의 결합을 저해하는 화학제제 및 단백질, 펩티드 등의 생물학적 제제를 말한다. IgG의 Fc 부분과 FcRn (신생아 Fc 수용체)의 결합을 억제할 수 있는 화학제제, 단백질 또는 펩티드라면 어떤 것이든지 본 발명에 적용될 수 있으며, 보다 구체적으로는 Fc-III 펩티드이다.In the present invention, the term “binding inhibitor of FcRn (neonatal Fc receptor)” refers to a chemical agent that inhibits binding of antibody drug and FcRn (neonatal Fc receptor), and biological agents such as proteins and peptides. Any chemical agent, protein or peptide capable of inhibiting the binding of the Fc portion of IgG to the FcRn (neonatal Fc receptor) can be applied to the present invention, and more specifically, the Fc-III peptide.

본원에서 용어 "항체" 및 " 면역글로불린(Immunoglobulin)" 은, 폴리클론 항체 및 모노클론 항체를 포함하여, 모든 면역성 결합 제제를 광범위하게 의미한다. 중쇄의 불변 도메인의 형태에 따라, 항체는 5가지의 주요 클래스 (IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM)중 하나에 속한다. 이들 중 몇몇은, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등과 같이 서브클래스 또는 이소타입 (isotype)로 더 분류된다. 상이한 클래스의 면역 글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ이다. 상이한 클래스의 면역 글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 형태는 이미 잘 알려져 있다.The terms “antibody” and “Immunoglobulin” as used herein broadly mean all immune binding agents, including polyclonal and monoclonal antibodies. Depending on the form of the constant domain of the heavy chain, antibodies belong to one of five major classes (IgA, IgD, IgE, IgG and IgM). Some of these are further classified into subclasses or isotypes, such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 and the like. The heavy chain constant domains corresponding to the different classes of immunoglobulins are α, δ, ε, γ, and μ, respectively. Subunit structures and three-dimensional forms of different classes of immunoglobulins are well known.

본 발명에서 용어“IgG 기반 항체”는 상기 항체 중 IgG 클래스에 속하는 항체를 의미한다.As used herein, the term “IgG based antibody” refers to an antibody belonging to the IgG class of the above antibodies.

본 발명에서 “약학적 조성물”이란 인간이나 동물에게 투여될 경우 치료적 활성을 나타내는 물질을 의미하며, 폴리펩티드, 화합물, 추출물, 핵산 등을 포함하는 개념이나, 바람직하게는 본 발명의 특성상 항체를 포함하는 약학적 조성물을 의미한다.
As used herein, the term “pharmaceutical composition” refers to a substance that exhibits therapeutic activity when administered to a human or animal, and includes a polypeptide, a compound, an extract, a nucleic acid, and the like, but preferably includes an antibody due to the characteristics of the present invention. Means a pharmaceutical composition.

이하 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 설명하고자 한다. 그러나 이들은 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described by the following examples and experimental examples. However, these are provided only to more easily understand the present invention, but the scope of the present invention is not limited thereto.

실험예Experimental Example 1. 여러 안구 조직에서  1. in several eye tissues FcRnFcRn mRNAmRNA 검출을 위한  For detection RTRT -- PCRPCR 분석 analysis

두 마리의 랫트의 안구를 적출하여, 무균상태에서 안구 조직을 나누어 즉시 액화질소로 냉동시켰다. 각막, 망막, 결막, 모양체 및 홍채, 망막 색소상피, 맥락막 및 수정체로부터 총 (t)RNA를 분리 정제하였다 [(TRizol Plus RNA 정제 키트; Invitrogen, Carlsbad, CA), manufacturer's protocol에 따라 실험을 진행함]. 각 조직 총 RNA 2㎍으로 퍼스트-스트랜드 cDNA(first strand cDNA)를 합성하였다(SuperScript III first-strand synthesis system for RT-PCR; Invitrogen). 역전사효소를 제거한 것을 대조군으로 하였다. 수득된 퍼스트-스트랜드 cDNA는 사용 전에 -80℃에서 보관하였다. cDNA의 부분표본(aliquot)에 대하여 PCR 반응을 시켰다 (FcRn 서열에 대한 하기 증폭 프라이머 사용: 5‘-CTGTGGATGAAGCAACCTG-3' 및 5'-TCCACGTTTGACCTCTAGC-3', Integrated DNA Technologies, Coralville, IA). PCR 반응은 94℃에서 5분간 변성시키고, 95℃에서 30초간, 60℃에서 45초간, 72℃에서에서 42초간, 총 40 사이클을 돌려 증폭시키는 과정을 거쳤다. 각 PCR 샘플 생성물을 2% 아가로즈 겔에서 전기영동시키고, UV 하에서 관찰하기 위하여 겔을 에티디움 브로마이드로 염색하였다.The eyes of two rats were removed, and the eye tissues were separated in sterile state and immediately frozen with liquid nitrogen. Total (t) RNA was isolated and purified from cornea, retina, conjunctiva, ciliary and iris, retinal pigment epithelium, choroid and lens ([TRizol Plus RNA Purification Kit; Invitrogen, Carlsbad, CA), experimented according to manufacturer's protocol). ]. First strand cDNA was synthesized with 2 [mu] g of total tissue RNA (SuperScript III first-strand synthesis system for RT-PCR; Invitrogen). The reverse transcriptase was removed as a control. The first-strand cDNA obtained was stored at −80 ° C. before use. PCR reactions were performed on aliquots of cDNA (using the following amplification primers for FcRn sequences: 5′-CTGTGGATGAAGCAACCTG-3 ′ and 5′-TCCACGTTTGACCTCTAGC-3 ′, Integrated DNA Technologies, Coralville, IA). PCR reaction was denatured at 94 ° C for 5 minutes, amplified by 40 cycles for 30 seconds at 95 ° C, 45 seconds at 60 ° C, 42 seconds at 72 ° C. Each PCR sample product was electrophoresed on a 2% agarose gel and the gel was stained with ethidium bromide for observation under UV.

그 실험 결과는 도 1과 같으며, 랫트의 안구 조직의 여러 포션으로부터의 총 RNA에서 FcRn mRNA의 존재여부를 실험해 본 결과, 망막색소상피, 맥락막을 제외하고 모양체 및 홍채, 망막, 결막, 각막, 수정체 및 시신경다발에서 FcRn 트랜스크립트가 존재하는 것으로 나타났다.
The results of the experiment are shown in FIG. 1, and the results of experiments on the presence of FcRn mRNA in total RNA from various portions of the eye tissue of the rat showed that the ciliary and iris, the retina, the conjunctiva, and the cornea except for the retinal pigment epithelium and the choroid , FcRn transcripts were found in the lens and optic nerve bundles.

실험예Experimental Example 2.  2. 랫트의Rat 여러 안구 조직에서  In several eye tissues FcRnFcRn 의 면역조직화학적 국소화(Immunohistochemical localization of ImmunohistochemicalImmunohistochemical LocalizationLocalization ))

(1) 항-(1) anti- rFcRnrFcRn 모노클로날Monoclonal 항체 1 Antibodies 1 G3G3

뇌 미세혈관 내피(brain microvascular endothelium), 맥락총 상피세포(choroid plexus epithelium) 및 랫트의 폐포상피(alveolar epithelium)에 FcRn의 존재여부를 항-FcRn 마우스 모노클로날 항체, 1G3(랫트의 FcRn 중쇄에서 발견)를 사용하여 증명하였다. 이 모노클로날 1G3 항체는 마우스 미엘로마 하이브리도마 세포 라인 CRL-2434에서 수득되었다. 세포를 4 mM L-글루타민(Invitrogen), 1mM 소디움 피루베이트(Invitrogen), 페니실린-스트렙토마이신(Invitrogen) 및 1% 우태아혈청 공급 하에, HL-1 배지(Cambrex, Walkersville, MD)에서 배양하였다. 혈청-프리 배지에서 3일간 배양한 후, 세포 배지를 원심분리하여 세포를 제거하고, 세포-프리 배지 상등액(1G3 항체 함유)을 수확하였다. 수확된 배지 상등액을 원심여과기(MWCO 50 kDa; Millipore, Bedford, MA)로 농축하였다. 1G3을 함유하는 농축된 상등액 용액을 20°C에서 보관하였다.
The presence of FcRn in brain microvascular endothelium, choroid plexus epithelium and rat alveolar epithelium was found in anti-FcRn mouse monoclonal antibody, 1G3 (rat FcRn heavy chain) ) To prove. This monoclonal 1G3 antibody was obtained from mouse myeloma hybridoma cell line CRL-2434. Cells were cultured in HL-1 medium (Cambrex, Walkersville, MD) under 4 mM L-glutamine (Invitrogen), 1 mM sodium pyruvate (Invitrogen), penicillin-streptomycin (Invitrogen) and 1% fetal bovine serum feed. After 3 days incubation in serum-free medium, the cell medium was centrifuged to remove cells and cell-free medium supernatant (containing 1G3 antibody) was harvested. Harvested media supernatant was concentrated with a centrifugal filter (MWCO 50 kDa; Millipore, Bedford, Mass.). The concentrated supernatant solution containing 1G3 was stored at 20 ° C.

(2) (2) FcRnFcRn 수용체의 면역조직화학( Immunohistochemistry of receptors ImmunohistochemistryImmunohistochemistry forfor FcRnFcRn ReceptorsReceptors ))

랫트의 안구를 적출하여 즉시 OCT 화합물 중에서 냉동시키고, 6 또는 20μm-두께의 슬라이스로 잘랐다. 냉동된 섹션을 실온에서 1시간 동안 건조시키고, 4% 파라포름알데히드로 30분간 고정한 후, 1 X 인산완충식염수(PBS)로 세척하였다. 섹션을 1 X PBS로 희석된 5% 고우트 혈청(goat serum)으로 5시간 동안 블락하고, 1G3-함유 상등액 배지가 농축된 2% 고우트 혈청에서 4℃ 조건 하에 하룻밤 동안 배양하였다. 섹션을 알렉사 플루오르 555 고우트 안티 마우스 IgG (희석: 1:150; Invitrogen) 및 DAPI (4,6-diamino-2-phenylindole; 희석: 1:1000; Invitrogen)중에서 4℃ 조건 하 5시간 동안 배양하고, 안티페이드 마운팅 배지(antifade mounting media)에 올렸다. 1G3-함유 상등액 세포 배지에서 배양하지 않은 것을 음성 대조군으로 하였다.
The eyes of rats were extracted and immediately frozen in OCT compounds and cut into 6 or 20 μm-thick slices. Frozen sections were dried for 1 hour at room temperature, fixed for 4 minutes in 4% paraformaldehyde, and then washed with 1 × phosphate buffered saline (PBS). Sections were blocked for 5 hours with 5% goat serum diluted with 1 × PBS and incubated overnight at 4 ° C. in 2% goth serum enriched in 1G3-containing supernatant medium. Sections were incubated for 5 hours at 4 ° C. in Alexa Fluor 555 Gout anti mouse IgG (dilution: 1: 150; Invitrogen) and DAPI (4,6-diamino-2-phenylindole; dilution: 1: 1000; Invitrogen) On antifade mounting media. The negative control was not cultured in 1G3-containing supernatant cell medium.

(3) (3) FcRnFcRn 수용체를 갖는 림프관 또는 혈관의 면역조직화학 Immunohistochemistry of Lymphatic or Blood Vessels with Receptors

래빗 항-마우스 림프관 내피 수용체 (LYVE)-1 폴리클로날 항체(Cell Sciences, Inc., Canton, MA) 및 래빗 항-인간 본 빌레브란트 인자(von Willebrand factor, VWF) 폴리클로날 항체(DAKO, Carpinteria, CA)를 사용하여 림프관 및 혈관에 대하여 각각 면역조직화학적 염색을 실시하였다. 래빗 항-마우스 LYVE-1 폴리클로날 항체(희석: 1:150) 또는 래빗 항-인간 VWF 폴리클로날 항체(희석: 1:150)을 사용하여, 1G3-함유 상등액 세포 배지가 농축된 2% 고우트 혈청 중에서 더블 염색을 하였다. 1차 항체, 항-FcRn 및 항-LYVE-1 또는 항-VWF을 DAPI (희석 1:1000)과 함께 알렉사 플루오르 555 고우트 항-마우스 IgG (희석 1:150) 및 알렉사 플루오르 488 고우트 항-래빗 IgG (희석 1:150)으로 각각 검출하였다.
Rabbit anti-mouse lymphatic endothelial receptor (LYVE) -1 polyclonal antibody (Cell Sciences, Inc., Canton, Mass.) And rabbit anti-human von Willebrand factor (VWF) polyclonal antibody (DAKO, Carpinteria, CA) was used for immunohistochemical staining of lymphatic vessels and blood vessels, respectively. 2% enriched 1G3-containing supernatant cell medium using rabbit anti-mouse LYVE-1 polyclonal antibody (dilution: 1: 150) or rabbit anti-human VWF polyclonal antibody (dilution: 1: 150) Double staining was done in Gout serum. Primary antibody, anti-FcRn and anti-LYVE-1 or anti-VWF with DAPI (dilution 1: 1000) Alexa Fluor 555 Gout anti-mouse IgG (Dilution 1: 150) and Alexa Fluor 488 Gout anti- Each was detected with rabbit IgG (dilution 1: 150).

(4) 영상화(4) imaging

결막, 수정체 및 각막으로부터의 6μm-두께 동결절편(cryosection)에 대하여 면역조직화학적 염색을 실시하였으며, 형광현미경(epifluorescence microscopy, DM5000B; Leica Microsystems Inc., Bannockburn, IL)으로 사진을 얻었다. 20μm-두께 동결절편이 망막, 모양체, 홍채 및 시신경다발의 면역조직화학적 연구에 사용되었으며, 이는 혈관 구조를 검출하기 위한 것이다. 영상을 레이저 스캐닝 공초점 현미경(model SP2; Leica Microsystems, Exton, PA)으로 캡쳐하였다.
6 μm-thick cryosections from the conjunctiva, lens and cornea were immunohistochemically stained and photographed by fluorescence microscopy (DM5000B; Leica Microsystems Inc., Bannockburn, IL). A 20 μm-thick frozen section was used for immunohistochemical studies of the retina, ciliary body, iris and bundle of optic nerves to detect vascular structure. Images were captured with a laser scanning confocal microscope (model SP2; Leica Microsystems, Exton, PA).

실험 결과Experiment result

도 2를 보면, FcRn 수용체가 결막 조직에 발현되어 있음을 볼 수 있다. 결막 상피 세포에는 FcRn 수용체가 발현되어 있다. LYVE-1 및 VWF 마커를 포함한다는 것은 수용체가 림프관에 국소화되어 있는 반면 (도2C-E 참조), 혈관 내피세포에는 그러하지 않음을 의미한다 (도2F-H 참조). 2, it can be seen that the FcRn receptor is expressed in the conjunctival tissue. Conjunctival epithelial cells express FcRn receptors. Including LYVE-1 and VWF markers means that the receptor is localized in the lymphatic vessels (see Figures 2C-E), but not to vascular endothelial cells (see Figure 2F-H).

모양체, 특히 비색소성 모양체 상피세포(nonpigmented ciliary epithelial cell, 도 3A, 3B) 및 모양체 혈관 구조(도 3C-e)에 FcRn 수용체가 발현되는 것으로 나타났다.FcRn receptors have been shown to be expressed in ciliary bodies, particularly nonpigmented ciliary epithelial cells (FIGS. 3A, 3B) and ciliary vascular structures (FIGS. 3C-e).

홍채 내의 혈관 구조에는 수용체가 발현되었으나, 홍채 색소성 층에는 그렇지 않았다 (도 3F-H 참조). Receptors were expressed in the vascular structure in the iris, but not in the iris pigmented layer (see Figure 3F-H).

망막에서는, 안쪽 망막 혈관 구조에 FcRn 수용체가 발현되는 것으로 나타났으나 (도 3I-K 참조), RPE의 경우 대조군과 실험군에서 모두 전형적인 자발형광이 나타났다. In the retina, FcRn receptors were expressed in the inner retinal vascular structure (see FIGS. 3I-K), but RPE showed typical spontaneous fluorescence in both the control and experimental groups.

흥미롭게도, 수정체 상피층 (도 4A, 4B 참조) 및 각막의 내피세포층 및 상피세포층(도 4C-I 참조)에서 수용체가 발현되는 것으로 나타났다. Interestingly, receptors were shown to be expressed in the lens epithelial layer (see FIGS. 4A, 4B) and in the corneal endothelial and epithelial layers (see FIG. 4C-I).

시신경 혈관구조에서 또한 FcRn 수용체가 높은 레벨로 발현되는 것으로 나타났다 (도 3E 참조). It was also shown that FcRn receptors are expressed at high levels in the optic nerve vasculature (see FIG. 3E).

하기 표 1은 다양한 조직에서의 면역조직화학적 실험결과를 요약하여 도시한 것이다.
Table 1 summarizes the results of immunohistochemical experiments in various tissues.

랫트 안구에서의 FcRn 수용체의 분포Distribution of FcRn Receptors in Rat Eyes 구분division 안구 조직Eye tissue 8-12주령 랫트 안구에서의 반응Responses in 8- to 12-week-old Rat Eyeballs 각막cornea 상피층Epithelial layer ++ 스트로마Strom -- 케라토사이트Keratosite -- 내피층Inner cortex ++ 결막conjunctiva 상피층Epithelial layer ++ 스트로마Strom +(특정 세포에서만)+ (Only on specific cells) 림프관Lymphatic vessel ++ 혈관blood vessel -- 공막Sclera 피브로블라스트Fibroblast ++ 스트로마Strom -- 모양체Ciliary body 비색소성 상피층Non-pigmentary epithelial layer ++ 근육섬유Muscle fiber -- 혈관blood vessel ++ 홍채Iris 근육섬유Muscle fiber -- 스트로마Strom -- 혈관blood vessel ++ 수정체The lens 캡슐capsule -- 상피층Epithelial layer ++ 피질cortex -- 핵nucleus -- 망막retina 뮐러세포Müller cell -- 신경섬유층Nerve fiber layer -- 광수용체층Photoreceptor layer -- 망막색소성상피층Retinal Pigment Epithelium -- 혈관blood vessel ++ 망막세포층Retinal cell layer -- 시신경다발Optic nerve bundle 혈관blood vessel ++ 스트로마Strom -- 번들 월Bundle month ++

실험예Experimental Example 3. 안구에서의  3. In the eyeball FcRnFcRn 수용체-매개 약동학 실험 Receptor-Mediated Pharmacokinetic Experiments

(1) 실험 동물(1) experimental animals

수컷(250g) 브라운 노르웨이 랫트(Charles River Laboratories, Raleigh, NC)를 사용하였다. 모든 동물은 12시간 명-암 사이클 조건에서 표준식이 및 풍부한 물 공급 하에 사육되었다. (동물실험은 Guidelines from the Association for Research in Vision and Ophthalmology for the Use of Animals in Research에 따름)Male (250 g) Brown Norwegian rats (Charles River Laboratories, Raleigh, NC) were used. All animals were bred under standard diet and abundant water supply under 12 hour light-dark cycle conditions. (Animal testing according to Guidelines from the Association for Research in Vision and Ophthalmology for the Use of Animals in Research)

(2) 형광 (2) fluorescence 라벨링된Labeled 항체의  Antibody 랫트Rat 안내 주사 Intraocular injection

2 mL의 알렉사 555 컨쥬게이트된 고우트 항-래빗 IgG (GAR555; H+L; Invitrogen, Carlsbad, CA)를 1 X 인산완충식염수((PBS, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 1.8 mM KH₂PO₄, pH 7.4) 1000mL에서 투석 카세트(MWCO=10 kDa; Pierce, Rockford, IL)로 하룻밤 동안 2회 투석하여, 용해된 소디움 아자이드의 제거를 촉진하였다. 그 다음, 투석된 항체 용액을 16,873× g 로 4℃에서 5분간 원심분리하여 항체 응집체를 제거하였다. 동공을 10% 트로피카미드(Mydriacyl; Alcon, Fort Worth, TX)로 확장시키기 전에, 8 내지 12주령 랫트에 70 mg/kg의 케타민 및 30 mg/kg의 자일라진(xylazine)을 근육내 주사하여 마취하였다. 그 다음, 5μL의 상기 항체 용액(2 mg/ml)을 32-게이지 주사기로 오른쪽 안구내로 주사하였다. 이산화탄소로 안락사 시킨 후, 30분, 6시간 또는 15시간 시점에 각각 사후주사 후 주사된 안구를 적출하였다. 적출된 안구를 즉시 4% 파라포름알데히드(PFA) 용액에 담그고 4℃에서 하룻밤 동안 방치하였다. 고정된 안구를 1 X PBS에 4℃ 조건하에 다음 실험 전까지 방치해 두었다. 안구내 주사된 항체의 사후 안구내 분포도를 관찰하기 위하여 이산화탄소로 안락사 시킨 후, 즉시 5μL의 GAR555 (2mg/mL)를 주사하였다. 안구를 적출하였고, 4℃ 조건 하에 1 X PBS 중에 6시간 동안 방치하고, 그 후 이를 4℃ 조건 하에 4% PFA 용액으로 하룻밤 동안 고정하였다. 상기 언급한 바와 같이 다음 실험을 진행할 때까지 안구를 4℃ 조건 하에 1 X PBS 중에 저장하였다.
2 mL of Alexa 555 conjugated Gout anti-rabbit IgG (GAR555; H + L; Invitrogen, Carlsbad, Calif.) Was added to 1 × phosphate buffered saline ((PBS, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na ₂ HPO). ₄ , 1.8 mM KH ₂ PO ₄ , pH 7.4) Dialysis overnight at 1000 mL in dialysis cassette (MWCO = 10 kDa; Pierce, Rockford, IL) to facilitate removal of dissolved sodium azide. The dialyzed antibody solution was centrifuged at 16,873 × g for 5 minutes at 4 ° C. to remove antibody aggregates, 8-12 weeks old rats, before expanding the pupils to 10% tropicamide (Mydriacyl; Alcon, Fort Worth, TX) Was anesthetized by intramuscular injection of 70 mg / kg ketamine and 30 mg / kg xylazine, followed by injection of 5 μL of the antibody solution (2 mg / ml) into the right eye with a 32-gauge syringe. After euthanasia with carbon dioxide, the injected eyes were extracted after post-injection at 30, 6, or 15 hours, respectively. The prepared eye was immediately immersed in 4% paraformaldehyde (PFA) solution and left overnight at 4 ° C. The fixed eye was left in 1 × PBS under 4 ° C. until the next experiment. 5 μL of GAR555 (2 mg / mL) was injected immediately after euthanasia with carbon dioxide to observe the distribution in the eye, and the eyes were extracted and left for 6 hours in 1 × PBS under 4 ° C., followed by 4 ° C. conditions. Fixed overnight with 4% PFA solution, as mentioned above Eyes were stored in 1 × PBS under 4 ° C. conditions until the next experiment.

(3) 망막 레이저 (3) retina laser 광응고Photocoagulation 모델( Model( retinalretinal laserlaser photocoagulationphotocoagulation modelmodel ))

안구 내 주사된 항체의 레이저 광응고된 망막내 분포를 관찰하기 위하여, 레이저-광응고된 망막을 제조하였다. 실험동물을 전술한 바와 같이 마취하였다. 오른쪽 안구를 1% 트로피카마이드로 확장시켰다. 하이드록시프로필 메틸셀룰로오즈(Hydroxypropyl methylcellulose, DECA Pharmaceuticals, LLC, Bowling Green, KY)를 각 안구에 적용하고, 현미경 슬라이스 커버 글래스를 콘택트 렌즈로 사용하였다. 오른쪽 안구 각각의 경우, 망막혈관 사이에 루메니스 울티마 아르곤 레이저(Lumenis Ultima Argon Laser, Lumenis Inc., New York, NY)의 블루-그린 세팅을 사용하여 나인 레이저 (3×3 grid pattern)를 쪼였다. 레이저 파워는 180 mW로 하였고 0.1초간 50μm 스팟 직경으로 하였다. 망막에서 출혈이 없는 것을 확인하였다. 2주 후, 5μL의 GAR555 (2mg/mL)를 전술한 바와 같이 주사하였다. 4℃ 조건 하, 4% PFA 용액에 하룻밤 동안 즉시 고정하기 전에 1시간 또는 3시간 째 사후 주사 후 안구를 적출하였다. 고정된 안구를 다음 실험 전까지 4℃ 조건 하 1× PBS에 저장하였다. 공막 위의 시신경 및 결막 조직을 조심스럽게 제거하고 고정된 안구를 외과적 각막윤부(surgical limbus)에서 주변 절단(circumferential incision)법으로 열었다. 앞쪽 절편 및 수정체를 제거하고, 망막을 조심스럽게 공막 조직으로부터 분리해냈다. 망막을 7% 아가로즈 타입 XI 겔(Sigma, St. Louis, MO)에 넣고, 진동 블레이드 박편제작기(vibrating blade microtome, Leica, Bannockburn, IL)를 사용하여 100μm-두께 슬라이스로 나누었다. 안구 절편을 하룻밤 동안 ICC 완충액(PBS containing 0.5% BSA, 0.2% Triton X-100, and 0.05% sodium azide, pH 7.4)으로 희석된 1:1000 DAPI 용액 중에서 배양하고, 그 후 ICC 완충액으로 3시간 동안 3회 세척하였다. 마지막으로 레이카 레이저 스캐닝 공초점 현미경으로 보기 전에 안구 절편을 마운팅 배지(Vectashield, Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA)에 넣고 현미경 커버 글래스 슬라이드 밑에 봉인하였다.
To observe laser photocoagulated intraretinal distribution of intraocularly injected antibodies, laser-coagulated retinas were prepared. The experimental animals were anesthetized as described above. The right eye was extended to 1% trophamide. Hydroxypropyl methylcellulose (DECA Pharmaceuticals, LLC, Bowling Green, KY) was applied to each eye and a microscopic slice cover glass was used as the contact lens. In each case of the right eye, a nine laser (3 × 3 grid pattern) was split between the retinal vessels using the blue-green setting of Lumenis Ultima Argon Laser (Lumensis Inc., New York, NY). . The laser power was 180 mW and 50 μm spot diameter for 0.1 second. It was confirmed that there was no bleeding in the retina. Two weeks later, 5 μL of GAR555 (2 mg / mL) was injected as described above. Eyes were removed after post-injection 1 hour or 3 hours prior to immediate fixation in 4% PFA solution overnight at 4 ° C. conditions. Fixed eyes were stored in 1 × PBS under 4 ° C. until the next experiment. The optic nerve and conjunctival tissue on the sclera were carefully removed and the fixed eye was opened by circumferential incision in the surgical limbus. The anterior segment and lens were removed and the retina was carefully separated from the sclera tissue. The retina was placed in a 7% agarose type XI gel (Sigma, St. Louis, Mo.) and divided into 100 μm-thick slices using a vibrating blade microtome (Leica, Bannockburn, IL). Eye sections were incubated overnight in a 1: 1000 DAPI solution diluted with ICC buffer (PBS containing 0.5% BSA, 0.2% Triton X-100, and 0.05% sodium azide, pH 7.4) and then for 3 hours with ICC buffer. Wash three times. Finally, the eye sections were placed in mounting medium (Vectashield, Vector Laboratories, Inc., Burlingame, Calif.) And sealed under the microscope cover glass slide before being viewed with a Leica laser scanning confocal microscope.

(4) (4) 랫트의Rat 레이저- laser- 광응고된Photocoagulated 망막에서의  In the retina FcRnFcRn 수용체의 발현 Expression of receptors

하기 실험과정을 거쳐 레이저 광응고된 망막에서의 FcRn 수용체 레벨을 정상 망막에서의 레벨과 비교하였다. 실험동물의 각 안구에 20회의 레이저를 쪼였다. 이산화탄소를 사용하여 안락사시킨 실험동물로부터 적출된 안구로부터 즉시 망막 조직(각 그룹 n=4)을 조심스럽게 분리하였다. 망막조직으로부터 총 RNA를 분리 정제하였다 (Trizol + RNA 정제 키트, Invitrogen, 사용, 제조자 프로토콜에 따름). 2 μg의 총 RNA로부터 퍼스트-스트랜드 cDNA를 합성하였다 (RT-CR용 SuperScript III 퍼스트-스트랜드 합성 시스템 사용, Invitrogen, 제조자 프로토콜에 따름). 사용전에 수득된 퍼스트-스트랜드 cDNA를 -80℃에 보관하였다. cDNA의 부분표본을 하기 증폭 프라이머 5′- CTG TGG ATG AAG CAA CCT G-3′ 및 5′-TCC ACG TTT GAC CTC TAG C-3′ (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA)를 사용하여 PCR 반응을 실시하였다.
The FcRn receptor level in the laser photocoagulated retina was compared with that in the normal retina through the following experimental procedure. 20 lasers were applied to each eye of the test animal. Retinal tissue (each group n = 4) was carefully isolated immediately from the eye extracted from experimental animals euthanized using carbon dioxide. Total RNA was isolated and purified from retinal tissue (Trizol + RNA Purification Kit, Invitrogen, use, according to manufacturer protocol). First-strand cDNA was synthesized from 2 μg of total RNA (using SuperScript III first-strand synthesis system for RT-CR, Invitrogen, according to manufacturer protocol). The first-strand cDNA obtained before use was stored at -80 ° C. Partial cDNA PCR reactions were performed using the following amplification primers 5′- CTG TGG ATG AAG CAA CCT G-3 ′ and 5′-TCC ACG TTT GAC CTC TAG C-3 ′ (Integrated DNA Technologies, Coralville, IA). Was carried out.

(4) (4) FcRnFcRn 넉아웃Knockout 및 와일드 타입 마우스에  And wild type mouse 안구내Intraocular 주사된  Injected 베바시주맙(bevacizumab)의Of bevacizumab 분포 Distribution

1μL의 베바시주맙(25 mg/mL)을 FcRn 넉아웃 마우스(B6.129X1-Fcgrttm1Dcr/Dcr) 및 와일드-타입 마우스(C57BL/6J)에 주사하였다 (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)로부터 구입). 모든 실험동물을 무균조건시설 (specific pathogen-free facilities, SPF 시설)에서 사육하였다 (물 및 먹이는 자유롭게 공급). 주사후 5시간 뒤 안구를 적출하고 즉시 4% PFA 용액에 고정하였다. 고정된 안구를 각막윤부에서 주변 절단(circumferential incision)을 통해 열었다. 안구의 안쪽 절편 및 수정체를 제거한 후, 망막을 조심스럽게 공막 조직으로부터 분리하였다. 망막을 7% 아가로즈 타입 XI 겔 (Sigma)에 넣고 진동 블레이드 절단제조기(Leica)를 사용하여 100μm-두께의 슬라이스로 잘랐다. 망막 중 베바시주맙 (재조합 인간화한 IgG1)를 알렉사 488 컨쥬게이티드 고우트 항-인간 IgG를 사용하여 검출하였다. 분리된 망막을 하룻밤 동안 ICC 완충액으로 희석된 1:1,000 DAPI 및 1:200 알렉사 488 컨쥬게이티드 고우트 항-휴먼 IgG 중에서 배양하였다. 그 후 망막을 3시간 동안 3회 ICC 완충액으로 세척하였다. 안구 절편을 마운팅 배지(Vectashield)에 넣고, 현미경 커버 글래스 슬라이드 밑에 봉인하였다. 안구 절편을 레이저 스캐닝 공초첨 현미경으로 관찰하고, 망막 모세혈관을 가로질러 형광도를 영상 J를 사용하여 보았다(version 1.49 g; National Institutes of Health, Bethesda, MD). 마지막으로, 망막 모세혈관의 내강밖(abluminal) 쪽에서의 형광도값을 최대값으로 하여 보정하였다.1 μL of bevacizumab (25 mg / mL) was injected into FcRn knockout mice (B6.129X1-Fcgrttm1Dcr / Dcr) and wild-type mice (C57BL / 6J) (purchased from Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME). . All experimental animals were housed in specific pathogen-free facilities (SPF facilities) (water and food were freely supplied). Five hours after injection, the eye was removed and immediately fixed in 4% PFA solution. The fixed eye was opened through circumferential incision at the limbal limbus. After removal of the inner sections of the eye and the lens, the retina was carefully separated from the sclera tissue. The retina was placed in a 7% agarose type XI gel (Sigma) and cut into 100 μm-thick slices using a vibrating blade cleaver (Leica). Bevacizumab (recombinant humanized IgG1) in the retina was detected using Alexa 488 conjugated Gout anti-human IgG. The isolated retinas were incubated in 1: 1,000 DAPI and 1: 200 Alexa 488 conjugated goth anti-human IgG diluted overnight in ICC buffer. The retina was then washed three times with ICC buffer for 3 hours. Eye sections were placed in mounting medium (Vectashield) and sealed under the microscope cover glass slide. Eye sections were observed with a laser scanning confocal microscope and fluorescence across the retinal capillaries was viewed using Image J (version 1.49 g; National Institutes of Health, Bethesda, MD). Finally, the fluorescence value at the luminal side of the retinal capillaries was corrected to the maximum value.

(5) (5) 안구내Intraocular 주사된  Injected 베바시주맙의Bevacizumab 약동학 실험 Pharmacokinetic Experiment

레이저를 쏘인 후 2주 후에, 랫트에 대하여 레이저 처리된 그룹 및 레이저 처리되지 않은 연령-매칭된 대조군 그룹을 전술한 바와 같은 동일한 마취법을 사용하여 마취하였다. 또한, 좌측 안구에 대하여 0.5% 프로파라카인 하이드로클로라이드(Alcon, Barrio Palmas, Puerto Rico) 1방울 및 2.5% 페닐에프린 하이드로클로라이드(Akron, Inc., Decatur, IL) 1방울로 각각 통각상실증(analgesia) 및 동공확대를 야기시켰다. 좌측 안구에 대하여 레이저 광응고된 실험동물의 망막내 CNV를 확인하기 위하여 메틸셀룰로오즈 및 현미경 슬라이드 커버슬립을 사용하여 실험하였다. 레이저 광응고된 그룹과 레이저 미처리 대조군 그룹 모두, 좌측 망막에 대하여 슈페로템포럴 사분면(superotemporal quadrant)의 각막윤부 뒤 1 mm에 2 μL의 베바시주맙이 25 mg/ml (50 μg)용량으로 추후 러프하게 안구내 주사되었다(30게이지 주사기 사용, Hamilton, Reno, NV). 5시간 후 실험동물의 심장으로부터 혈액샘플을 채취하고, 이산화탄소를 사용하여 안락사시켰다. 혈청 샘플을 즉시 혈액 샘플로부터 모았다.
Two weeks after the laser was shot, the laser treated and unlased age-matched control groups for rats were anesthetized using the same anesthesia as described above. In addition, one drop of 0.5% propparacaine hydrochloride (Alcon, Barrio Palmas, Puerto Rico) and one drop of 2.5% phenylephrine hydrochloride (Akron, Inc., Decatur, IL) were applied to the left eye, respectively. ) And pupil dilation. The left eye was tested using methylcellulose and microscope slide coverslips to identify intraretinal CNV of laser photocoagulated experimental animals. In the laser photocoagulated and non-laser control groups, 2 μL of bevacizumab at a dose of 25 mg / ml (50 μg) at 1 mm behind the corneal limbus of the superotemporal quadrant for the left retina. Rough intraocular injection (using a 30 gauge syringe, Hamilton, Reno, NV). After 5 hours, blood samples were taken from the heart of experimental animals and euthanized using carbon dioxide. Serum samples were immediately collected from blood samples.

(6) (6) 베바시주맙Bevacizumab 효소-링크된 면역흡착  Enzyme-Linked Immunosorbent 어세이Assay

혈청 샘플 중 베바시주맙의 농도를 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)로 정량하였다. 모든 과정은 실온 하에서 수행하였다. 코팅 완충액(0.05 M carbonate-bicarbonate, pH 9.6)중에서 10μg/mL로 희석된 고우트 항-휴먼 IgG 친화성 정제된 항체(Bethyl Laboratories, Montgomery, TX)를 마이크로라이트2+고-결합성 96-웰 플레이트(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)에 코팅하였다. 1시간 동안 배양한 후, 각 웰을 200μL의 세척용액(50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 및 0.05% Tween-20 함유, pH 8.0)으로 3회 세척하였다. 샘플을 200 μL의 블락킹 용액(0 mM Tris, 0.14 M NaCl, 및 1% BSA 함유, pH 8.0)으로 30분 동안 블락하였다. 각 웰을 그 후 200μL의 세척용액으로 3회 세척하였다. 샘플을 샘플 희석액(50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 1% BSA, 및 0.05% Tween-20, pH 8.0)중에서 1:100으로 희석하였다. 약 100μL의 희석된 샘플을 각 웰에 균등배분하고, 샘플을 1시간 동안 배양하였다. 배양 후, 각 웰을 200μL의 세척용액으로 5회 세척하였다. 그 다음, 마우스 IgG(eBioScience, San Diego, CA) 에 대하여 최소 반응성을 가진 100μL의 비오틴-라벨링된 Fc 절편 특이적 고우트 항-휴먼 IgG을 전술한 샘플 희석액으로 20 μg/mL로 희석하고, 각 웰에 첨가하였으며, 샘플을 세척 용액으로 세척하기 전에 1시간 동안 배양하였다. 그 후, 100μL 알렉사 플루오르 488 컨쥬게이티드 스트렙타비딘 (샘플 희석액으로 10 μg/mL로 희석된 것)을 각 웰에 첨가하고, 샘플을 세척 용액으로 세척하기 전에 1시간 동안 배양하였다. 마지막으로, 100 μg/mL의 PBS를 각 웰에 첨가한 후, 플레이트에 대하여 485nm에서의 여기, 525nm에서의 방출 정도를 측정하였다. 25mg/mL 베바시주맙(Genentech Inc., SanFrancisco, CA)을 순차적으로 희석하여 표준곡선을 얻었다. 각 희석된 혈청 샘플 중의 베바시주맙의 농도를 직선회귀법을 사용하여 표준곡선을 도출해냈다. 상기 희석된 샘플 중의 베바시주맙 농도는 그 후 혈청 중 오리지날, 희석되지 않은 베바시주맙 농도를 계산하는 데 사용하였다.
The concentration of bevacizumab in serum samples was quantified by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). All procedures were performed at room temperature. Gout anti-human IgG affinity purified antibody (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) diluted to 10 μg / mL in coating buffer (0.05 M carbonate-bicarbonate, pH 9.6) was prepared using microlite 2+ high-binding 96-well. The plates were coated (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.). After incubation for 1 hour, each well was washed three times with 200 μL of washing solution (containing 50 mM Tris, 0.14 M NaCl, and 0.05% Tween-20, pH 8.0). Samples were blocked for 30 minutes with 200 μL of blocking solution (containing 0 mM Tris, 0.14 M NaCl, and 1% BSA, pH 8.0). Each well was then washed three times with 200 μL of wash solution. Samples were diluted 1: 100 in sample dilutions (50 mM Tris, 0.14 M NaCl, 1% BSA, and 0.05% Tween-20, pH 8.0). About 100 μL of the diluted sample was evenly distributed to each well and the sample was incubated for 1 hour. After incubation, each well was washed five times with 200 μL of wash solution. Next, 100 μL of biotin-labeled Fc fragment specific goth anti-human IgG with minimal reactivity to mouse IgG (eBioScience, San Diego, Calif.) Was diluted to 20 μg / mL with the sample dilution described above, and each The wells were added and the samples were incubated for 1 hour before washing with the wash solution. Then 100 μL Alexa Fluor 488 conjugated streptavidin (diluted at 10 μg / mL in sample dilution) was added to each well and samples were incubated for 1 hour before washing with wash solution. Finally, 100 μg / mL of PBS was added to each well and then the plates were measured for excitation at 485 nm and emission at 525 nm. 25 mg / mL bevacizumab (Genentech Inc., SanFrancisco, Calif.) Was serially diluted to obtain a standard curve. The concentration of bevacizumab in each diluted serum sample was derived using a linear regression method to derive a standard curve. Bevacizumab concentration in the diluted sample was then used to calculate the original, undiluted bevacizumab concentration in serum.

(7) (7) 랫트에서In rats 안구 내 주사된  Intraocular injection 베바시주맙Bevacizumab 및 치킨  And chicken IgYIgY 의 약동학 실험Pharmacokinetic Experiment

랫트에 각각 5.7 mg/mL 용량의 베바시주맙 또는 5.7 mg/mL 용량의 치킨 IgY (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA)를 안구내 주사하였다. 주사 후 5시간 뒤, 이산화탄소로 안락사시킨 실험동물로부터 안구를 적출하고 즉시 4% PFA로 고정하였다. 그 다음 베바시주맙 또는 치킨 IgY-주사된 안구의 10 μm-두께의 냉동절편을 전술한 바와 같이 제조하였다. 알렉사 염료 컨쥬게이트된 고우트 항-휴먼 IgG 또는 알렉사 염료 컨쥬게이트된 고우트 항치킨 IgG를 사용하여 냉동 절편중 베바시주맙 또는 치킨 IgY의 분포를 각각 관찰하였다.
Rats were injected intraocularly with 5.7 mg / mL doses of bevacizumab or 5.7 mg / mL doses of Chicken IgY (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA), respectively. Five hours after injection, eyes were extracted from experimental animals euthanized with carbon dioxide and immediately fixed with 4% PFA. A 10 μm-thick frozen section of bevacizumab or chicken IgY-injected eye was then prepared as described above. The distribution of bevacizumab or chicken IgY in frozen sections was observed using either Alexa dye conjugated Gout anti-human IgG or Alexa dye conjugated Gout anti-chicken IgG, respectively.

(8) 실험 결과(8) Experiment result

1) One) 랫트Rat 망막에서의  In the retina 안구내Intraocular 투여된 전장( Administered full length ( fullfull -- lengthlength ) 항체의 분포 A) distribution of antibodies

안구내 투여된 전장 항체의 경우, 레이저 광응고된 랫트 망막과 레이저 미처리된 랫트 망막 모두에서 내경계막(inner limiting membrane) 장벽을 통과하여 더 깊은 망막 구조내로 확산된 것으로 나타났다 (도 5A-C 참조). 레이저 미처리된 망막에서, 항체는 외경계막은 투과하지 못하였으나, 대신 외경계막을 따라 축적되는 것으로 나타났다 (도5C 참조). 반면, 레이저 광응고된 망막에서는 망막하층 및 브루크막(Bruch’s membrane) 부위내로 항체가 망막을 쉽게 투과되는 것으로 나타났다 (도 5D-E 참조). 도 5는 정상 및 레이저-광응고된 망막에서 망막 모세혈관과 연관된 IgG의 출현을 증명해 준다. 도 6A, B는 전장 IgG 항체를 생존시 망막 및 사후시 망막에 안구내 주사한 경우 생존시 안구 및 사후시 안구에 각각 다르게 분포하는 것을 보여준다. 생존시 망막에 비해 사후시 망막에서 좀 더 많은 항체가 발견되었으며, 이는 생존시 망막에서 IgG가 보다 더 활발하게 제거되는 메커니즘을 갖고 있다는 것을 의미한다.
Intraocularly administered full-length antibodies were found to diffuse through the inner limiting membrane barrier into deeper retinal structures in both the laser photocoagulated rat retina and the laser untreated rat retina (see FIGS. 5A-C). ). In the laser untreated retina, the antibodies did not penetrate the outer membrane but instead appeared to accumulate along the outer membrane (see FIG. 5C). On the other hand, in the laser photocoagulated retina, the antibody was easily transmitted through the retina into the subretinal layer and the Bruch's membrane (see FIGS. 5D-E). 5 demonstrates the appearance of IgG associated with retinal capillaries in normal and laser-coagulated retinas. 6A and 6B show that the intraocular injection of the full-length IgG antibody into the retina and the postretinal retina during survival is differently distributed between the eye and the postoperative eye during survival. More antibodies were found in the retina after death than in the retina at survival, indicating that IgG has a mechanism to more actively remove IgG from the retina at survival.

2) 레이저-2) Laser 광응고된Photocoagulated 랫트Rat 안구에서,  In the eyeball, 안구내Intraocular 주사된 전장  Injected full length IgGIgG 의 약동학Pharmacokinetics

레이저-미처리된 연령-매칭된 대조군의 망막에 비하여 레이저-광응고된 망막에서 FcRn 수용체가 1.82배 업레귤레이션 된다는 점을 실시간 RT-PCR로 밝혔다 (p<0.05) (도 7A 참조). 또한, (5시간 포스트 안구내 주사된) 베바시주맙의 혈청 중 농도는 대조군에서 279ng/mL, 레이저-광응고된 그룹에서 832ng/mL인 것으로 각각 나타났다(p<0.05; 도 7B 참조). 따라서, 망막의 레이저-광응고로 인하여 FcRn 발현이 업레귤레이션됨을 알 수 있고, 안구로부터 IgG가 전신순환계로 더욱 급속히 제거된다는 것을 의미한다.
Real-time RT-PCR revealed that the FcRn receptor upregulated 1.82-fold in the laser-photocoagulated retina compared to the retina of the laser-treated, age-matched control (p <0.05) (see FIG. 7A). In addition, the serum concentration of bevacizumab (injected for 5 hours post ocular) was 279 ng / mL in the control group and 832 ng / mL in the laser-coagulated group, respectively (p <0.05; see FIG. 7B). Thus, it can be seen that FcRn expression is upregulated due to laser-coagulation of the retina, which means that IgG is more rapidly removed from the eye into the systemic circulation.

3) 3) FcRnFcRn 넉아웃Knockout 및 와일드-타입 마우스 그룹에서  And wild-type mouse groups 안구내Intraocular 투여된 전장  Administered full length IgGIgG 의 분포Distribution

도 8은 안구내 투여된 베바시주맙, 전장 IgG의 망막 혈관 주사부위에서의 분포를 나타낸다. 흥미롭게도, FcRn 넉아웃 마우스의 경우 베바시주맙은 오직 망막 혈관의 애브루미널(루멘에서 먼 부위) 쪽에서 발견되었다 (도 8A 참조). 그러나, 와일드-타입 마우스의 망막에서는 베바시주맙이 애브루미널 뿐만 아니라 망막 혈관의 루멘에서도 발견되었다 (도 8B 참조). 또한, 와일드 타입 마우스의 망막 혈관의 혈관내피세포 내에서도 발견되었다. 도 8C는 망막 내피층을 가로질러, 보정된 형광도 프로파일 변화도를 보여주며, 베바시주맙이 망막 혈관내피층을 통과하여 와일드-타입 마우스의 순환계로 이행하였음을 증명해준다.
Figure 8 shows the distribution of intraocularly administered bevacizumab, full length IgG at the retinal vascular injection site. Interestingly, in the case of FcRn knockout mice, bevacizumab was found only on the abruminal (distant to lumen) side of the retinal vessel (see FIG. 8A). In the retina of wild-type mice, however, bevacizumab was found in lumens of retinal vessels as well as abrumin (see FIG. 8B). It was also found in vascular endothelial cells of retinal vessels of wild type mice. 8C shows the corrected fluorescence profile gradient across the retinal endothelial layer, demonstrating that bevacizumab has passed through the retinal vascular endothelial layer to the circulatory system of wild-type mice.

4) 4) 랫트Rat 안구에  In the eyeball 안구내Intraocular 주사된  Injected 베바시주맙Bevacizumab (( IgGIgG ) 및 치킨 ) And chicken IgYIgY 의 약동학Pharmacokinetics

도 9는 IgG 및 치킨 IgY(구조적으로 IgG와 유사하나 FcRn 수용체와 결합하지 아니함)의 망막내 분포를 비교한 것이다. 안구내 투여된 베바시주맙(IgG) 및 치킨 IgY는 모두 내경계막 장벽을 통과하여 더 깊은 망막 구조내로 확산된다 (도 9A, D 참조). 도 9E는 망막 베바시주맙이 혈액-망막 장벽을 통과하여 확산된 후 전신순환계로 누수됨을 증명하며, 따라서 왜 베바시주맙이 맥락막 맥관구조(choroidal vasculature)내에서 발견되는지를 설명해준다(도 9F 참조). 망막내 치킨 IgY는 오직 혈액-망막 장벽의 애브루미널 쪽을 따라 국소화된다 (도 9B 참조). 또한 맥락막의 혈관은 치킨 IgY의 존재에 대해 음성이다 (도 9C 참조).
FIG. 9 compares the intraretinal distribution of IgG and chicken IgY (structurally similar to IgG but not bound to the FcRn receptor). Both intraocularly administered bevacizumab (IgG) and chicken IgY diffuse through the inner membrane barrier and into the deeper retinal structures (see FIGS. 9A, D). 9E demonstrates that retinal bevacizumab leaks into the systemic circulation after spreading through the blood-retinal barrier, thus explaining why bevacizumab is found in the choroidal vasculature (see FIG. 9F). ). Intraretinal chicken IgY only localizes along the aluminal side of the blood-retinal barrier (see FIG. 9B). The vessels of the choroid are also negative for the presence of chicken IgY (see FIG. 9C).

5) 실험결과 종합5) Comprehensive Experiment Results

망막을 통한 항체약의 배출경로에서 FcRn (신생아 Fc 수용체)가 발현됨을 증명하였다. 즉, 망막을 통한 항체약의 배출은 FcRn (신생아 Fc 수용체)에 기인한다는 것을 규명하였다(Kim H, Robinson SB, Csaky KG, FcRn (신생아 Fc 수용체)-mediated pharmacokinetics of therapeutic IgG in the eye, Mol Vis. 2009Dec;15:2803-2812 참조). 또한, 트라베큘러 및 쉴렘스 캐널(Trabecular and Schlemm's canal)에서 다른 Fc 수용체는 발현되지 않는 반면, FcRn (신생아 Fc 수용체)는 상당한 정도로 발현되고 있음을 규명하였다. 세 번째 배출 경로인 홍채와 모양체에서의 FcRn (신생아 Fc 수용체) 발현과 항체약의 배출 경로가 일치한다는 것을 규명하였다.
It was demonstrated that FcRn (neonatal Fc receptor) is expressed in the pathway of release of antibody drug through the retina. That is, the release of antibody through the retina was confirmed to be due to FcRn (neonatal Fc receptor) (Kim H, Robinson SB, Csaky KG, FcRn (neonatal Fc receptor) -mediated pharmacokinetics of therapeutic IgG in the eye, Mol Vis 2009 Dec; 15: 2803-2812). It was also found that other Fc receptors are not expressed in Trabecular and Schlemm's canal, whereas FcRn (neonatal Fc receptor) is expressed to a significant extent. The third release pathway, the expression of FcRn (neonatal Fc receptor) in the iris and ciliary body, was found to coincide with the release route of antibody drugs.

실험예Experimental Example 4.  4. 아바스틴Avastin (250  (250 ugug /Of mlml )과 )and 아바스틴Avastin (250  (250 ugug /Of mlml ) 및 ) And FcFc -- IIIIII 혼합제의 비교 Comparison of mixtures

(1) Fc-III 용액의 제조(1) Preparation of Fc-III Solution

100 uL의 증류수를 10 mg 넣고(6.53 X 10^-6 mole), Fc-III의 최종 농도가 6.53 X 10^-8 mole/uL이 되도록 하였다.10 mg of 100 uL of distilled water was added (6.53 X 10 ^ -6 mole), and the final concentration of Fc-III was 6.53 X 10 ^-8 mole / uL.

(2) 아바스틴의 제조(250 uL/ml)(2) Preparation of Avastin (250 uL / ml)

10 uL의 아바스틴 (25 mg/ml)을 990 uL의 증류수에 넣었다.10 uL of Avastin (25 mg / ml) was added to 990 uL of distilled water.

(3) 아바스틴 및 Fc-III 혼합제의 제조(3) Preparation of Avastin and Fc-III Mixing Agent

5 uL 의 Fc-III 용액을 100 uL의 아바스틴(250 ug/ml)에 넣었다.5 uL of Fc-III solution was added to 100 uL of Avastin (250 ug / ml).

(4) 대조군 아바스틴의 제조(4) Preparation of Control Avastin

5 uL의 증류수를 100 uL의 아바스틴(250 ug/ml)에 넣었다.5 uL of distilled water was added to 100 uL of Avastin (250 ug / ml).

(5) 동물실험(5) Animal Experiment

2uL의 두가지 의약품을 세 마리 쥐의 눈의 유리체강 내에 주입하였다. (각 그룹별) 주입 후 6시간이 경과한 후에 눈을 적출하여 아바스틴의 농도를 ELISA 기법을 이용하여 분석하였다.Two medications of 2 uL were injected into the vitreous cavity of the eye of three rats. Six hours after the injection, the eyes were removed and the concentration of Avastin was analyzed using the ELISA technique.

(6) 실험결과(6) Experiment result

이 실험에서 Fc-III을 함께 주입함으로써 기존의 아바스틴 약제의 약동학을 향상시킬 수 있다는 것을 규명하였다(도 10 참조).
In this experiment, it was found that by injecting Fc-III together, the pharmacokinetics of the conventional Avastin drug can be improved (see FIG. 10).

Claims (14)

FcRn(신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료제의 약효 증진용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of a therapeutic agent for retinal disease, including an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor. 제1항에 있어서, 망막질환 치료제는 항체약인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the therapeutic agent for retinal disease is an antibody drug. 제1항에 있어서, 망막질환 치료제는 IgG 기반 항체약인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the therapeutic agent for retinal disease is an IgG-based antibody drug. 제1항에 있어서, 망막질환 치료제는 아바스틴인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the therapeutic agent for retinal disease is Avastin. 제1항에 있어서, FcRn 결합 저해제는 IgG의 Fc 부분과 FcRn의 결합을 억제할 수 있는 펩티드인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the FcRn binding inhibitor is a peptide capable of inhibiting FcRn binding with the Fc portion of IgG. 제1항에 있어서, FcRn 결합 저해제는 Fc-III 펩티드인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the FcRn binding inhibitor is an Fc-III peptide. 제1항에 있어서, FcRn 결합 저해제는 총 조성물 중량의 0.0001 내지 50중량%의 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the FcRn binding inhibitor is included in a proportion of 0.0001 to 50% by weight of the total composition weight. 망막질환 치료제 및 FcRn(신생아 Fc 수용체) 결합 저해제를 포함하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for treating retinal disease, comprising a retinal disease therapeutic agent and an FcRn (neonatal Fc receptor) binding inhibitor. 제8항에 있어서, 망막질환 치료제는 항체약인 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the retinal disease therapeutic agent is an antibody drug. 제8항에 있어서, 망막질환 치료제는 IgG 기반 항체약인 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the retinal disease therapeutic agent is an IgG-based antibody. 제8항에 있어서, 망막질환 치료제는 아바스틴인 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the retinal disease treatment agent is Avastin. 제8항에 있어서, FcRn 결합 저해제는 IgG의 Fc 부분과 FcRn의 결합을 억제할 수 있는 펩티드인 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the FcRn binding inhibitor is a peptide capable of inhibiting FcRn binding with the Fc portion of IgG. 제8항에 있어서, FcRn 결합 저해제는 Fc-III 펩티드인 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the FcRn binding inhibitor is an Fc-III peptide. 제8항에 있어서, 망막질환 치료제 및 FcRn 결합 저해제는 조성물 중에 1: 0.1 내지 100의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는 망막질환 치료용 약학적 조성물.


The pharmaceutical composition for treating retinal disease according to claim 8, wherein the retinal disease therapeutic agent and the FcRn binding inhibitor are included in the composition in a weight ratio of 1: 0.1 to 100.

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