KR20120078193A - Multiplex real time pcr method for discrimination of rice cultivar - Google Patents

Multiplex real time pcr method for discrimination of rice cultivar

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KR20120078193A
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Abstract

PURPOSE: A method for identifying Oryza sativa species using real time multiple PCR is provided to shorten PCR process and to lower probability of error occurrence. CONSTITUTION: A marker complex composition for identifying Oryza sativa species contains two selected from: probes of sequence numbers 1, 2, and 3; probes of sequence numbers 4, 5, and 6; probes of sequence number 7, 8, and 9; probes of sequence numbers 10, 11, and 12; probes of sequence numbers 13, 14, and 15; probes of sequence numbers 16, 17, and 18; probes of sequence numbers 19, 20, and 21; probes of sequence numbers 22, 23, and 24; probes of sequence numbers 25, 26, and 27; probes of sequence numbers 28, 29, and 30; probes of sequence numbers 31, 32, and 33; and probes of sequence number 34, 35, and 36.

Description

벼 품종을 식별하기 위한 다중 실시간 ＰＣＲ 방법{MULTIPLEX REAL TIME PCR METHOD FOR DISCRIMINATION OF RICE CULTIVAR}MULTIPLEX REAL TIME PCR METHOD FOR DISCRIMINATION OF RICE CULTIVAR}

본 발명은 벼 품종을 식별하기 위한 다중 실시간 PCR 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 67종의 벼(또는 쌀)를 신속, 정확하게 식별할 수 있는 자동화된 다중 실시간 PCR 방법에 관한 것이다.The present invention relates to multiple real time PCR methods for identifying rice varieties, and more particularly, to an automated multiple real time PCR method capable of quickly and accurately identifying 67 types of rice (or rice).

벼는 화본(Gramineae)과 벼속(genus Oryza) 식물로서, 국제 미작연구소(IRRI, Int'l Rice Research Institute)에 의하면 60,000여종이 있는 것으로 알려져 있다. 2004년 농림부의 보고에 따르면, 국내에는 정부에서 공급한 113개 품종과 195개 육종 품종이 있다. 재배벼에는 아시아벼(O. sativa)와 아프리카벼(O. glaberrima)의 두 종이 있으며, 이중에 아시아벼(O. sativa)가 세계적으로 더 널리 경작되고 있다. Rice is a plant of Gramineae and genus Oryza. According to the Int'l Rice Research Institute (IRRI), there are about 60,000 species. According to the 2004 Ministry of Agriculture, there are 113 varieties and 195 breeding varieties supplied by the government. There are two species of cultivated rice: Asian rice (O. sativa) and African rice (O. glaberrima), among which Asian rice (O. sativa) is more widely cultivated worldwide.

벼는, 최근 10여개국이 참여하는 국제 벼 게놈 염기해석 프로젝트(IRGSP: International Rice Genome Sequencing Project)를 통하여 니폰바레(Nipponbare) 품종에 대한 게놈 염기서열 분석이 이루어지고 있으며(Japan, America, China, France, India, Taiwan, Korea, Brazil, Thailand and England), 2002년도를 기준으로 니폰바레 게놈의 약 4억여 개의 염기서열 중 92％의 염기서열이 밝혀진 상태이다. Rice has been recently analyzed for genome sequencing of Nipponbare varieties through the International Rice Genome Sequencing Project (IRGSP), which includes 10 countries (Japan, America, China, France, India, Taiwan, Korea, Brazil, Thailand and England), as of 2002, 92% of the approximately 400 million sequences of the Nippon Barre genome have been identified.

한편, 우리나라에서는 쌀시장 개방에 대한 '도하 개발 아젠다'에 앞서, 고품질의 쌀 생산을 장려하기 위하여 2004년도부터 정부가 정부 품종제한 수매제를 시행하여, 지역별 3개의 품종을 선정하여 28개 품종에 대한 수매를 실시하고 있으며, 또한, 벼의 품종에 대한 정보를 포장지에 표시하도록 하는 포장양곡 표시제를 2004년도 1월부터 실시하여, 브랜드쌀 평가제의 실시를 통하여 농림부는 쌀의 고품질화와 유통질서 확립을 추진하고 있다.(Announcement of MAF: Law of rice management Subsection 1 of Article 20). 이러한 제도는 쌀의 품질에 대한 알권리 충족을 위한 것이며, 생산과 소비, 투명한 유통과정의 확립을 목적으로 하고 있다.Meanwhile, in 2004, in order to encourage the production of high-quality rice in Korea, the government has implemented a government limited purchase system to encourage the production of high-quality rice before opening the rice market. In January 2004, the Ministry of Agriculture and Forestry promoted the establishment of a high quality rice and distribution order through the Brand Rice Evaluation System. Announcement of MAF: Law of rice management Subsection 1 of Article 20. This system aims to satisfy the right to know the quality of rice and aims to establish the production, consumption and transparent distribution process.

따라서, 벼의 품종을 식별하는 기술에 대한 관심이 집중되고 있으며, 최근들어 여러가지 DNA 마커를 이용하여 벼 품종을 식별하기 위한 많은 연구들이 진행되었다. 그중에서도, RAPD(random amplified polymorphic DNA), AFLP(amplified fragment length polymorphism)와 마이크로세틀라이트(microsatellite)가 품종 식별에 사용되고 있다. 예로, Wang 등의 RFLP(restricted fragment length polymorphism) 마커를 이용한 품종을 식별 방법(Wang, Z.Y., Tanksley, S.D. 1989 L. Genome. 32, 1113-1118), Ryu의 단백질 모세관 전기영동 방법을 이용한 품종 식별 방법(Ryu, D.J. 1998 J. food science and nutrition. 3, 43-347), 6개의 마이크로세틀라이트 마커를 이용한 유전자 지도에서의 위치 확인으로 자포니카 벼 51개 품종의 식별 방법(Ji, H.S. et al., 1998 Korean J. Breed. 30, 350-360)이 보고되었으며, RAPD, 마이크로세틀라이트, STS(sequence tagged site), 및 PCR(polymerase chain reaction) 방법을 이용한 국내산 40개의 품종 식별 방법과 각 방법의 장단점이 비교되기도 하였다(Jeong O.Y. et al., Korean 1998 J. Breed. 30, 136-137). 아울러, RAPD와 마이크로세틀라이트를 이용한 31개 벼 품종의 식별 방법(Kwon, S.J. et al., 1999 Korean J Crop Science 44, 112-116), 화상분석기술을 이용한 벼 품종의 식별 방법Kwon, S.J. et al., 1998 Korean J Crop Science 43, 33-34)들도 보고되었다. Therefore, attention has been focused on techniques for identifying rice varieties, and recently, many studies have been conducted to identify rice varieties using various DNA markers. Among them, random amplified polymorphic DNA (RAPD), amplified fragment length polymorphism (AFLP) and microsatellite are used for breed identification. For example, Wang, ZY, Tanksley, SD 1989 L. Genome. 32, 1113-1118), and Ryu's protein capillary electrophoresis method to identify varieties using restricted fragment length polymorphism (RFLP) markers. Method (Ryu, DJ 1998 J. food science and nutrition. 3, 43-347), identification method of 51 varieties of Japonica rice (Ji, HS et al., 1998 Korean J. Breed. 30, 350-360), reported 40 varieties of domestic varieties using RAPD, microsatellite, sequence tagged site (STS), and polymerase chain reaction (PCR) methods, and their advantages and disadvantages. It was also compared (Jeong OY et al., Korean 1998 J. Breed. 30, 136-137). In addition, the identification method of 31 rice varieties using RAPD and microsatellite (Kwon, S.J. et al., 1999 Korean J Crop Science 44, 112-116), the identification method of rice varieties using image analysis technology Kwon, S.J. et al., 1998 Korean J Crop Science 43, 33-34).

그러나 이러한 식별 방법들과 이미지 기술은 특이적인 단일 밴드를 형성할 수 없으므로, 혼합된 품종들로부터 각각의 품종을 식별하기가 어렵고, 분석 결과를 논의하기가 어려운 단점이 있다.However, since these identification methods and imaging techniques cannot form a specific single band, it is difficult to identify each breed from mixed varieties and it is difficult to discuss the analysis results.

또한, 국내 출원번호 제2005-69858호에서도 프라이머를 이용한 PCR 방법에 의한 벼 품종 식별방법이 개시되어 있으며, 이는 현재 국내 표준검사법으로 고시되어 있다. 그러나, 상기한 방법은 1개의 벼 시료를 검사하였을 경우, 무작위적으로 선별된 24립의 벼(또는 쌀)로부터 각각 추출된 24개의 DNA를 주형으로 하여 9가지의 SNP 분석용 프라이머로 쌀 내재유전자를 포함하여, 총 240번 이상의 PCR 반응을 수행하여야 한다. 아울러, PCR 종료 후, 240개의 PCR 산물에 대하여 27 웰 아가로스 젤 10장의 전기영동이 요구된다. 또한, 이러한 과정은 1인의 검사원이 3일간 수행해야 하는 노동력 집약적이며, 결과를 얻기까지 장기간이 소요되는 문제가 있다. In addition, Korean Patent Application No. 2005-69858 discloses a rice variety identification method by the PCR method using a primer, which is currently published as a domestic standard test method. However, in the above method, when one rice sample was examined, the rice intrinsic gene was used as 9 SNP analysis primers with 24 DNAs extracted from randomly selected 24 rice (or rice) as templates. Including, a total of 240 or more PCR reactions should be performed. In addition, after completion of PCR, electrophoresis of 10 27-well agarose gels is required for 240 PCR products. In addition, this process is labor-intensive, which requires one inspector to perform for three days, there is a problem that takes a long time to obtain a result.

따라서, 각각의 벼 품종에 특이적인 식별 마커를 동시에 신속 정확하게 분석하여, 자동화된 방식으로 그 결과를 산출할 수 있는 보다 효율적인 방법이 필요한 실정이다.Therefore, there is a need for a more efficient method for simultaneously and accurately analyzing identification markers specific to each rice variety and calculating the result in an automated manner.

본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 국내산 벼 상호간에 품종을 복수개의 마커로 동시에 분석할 수 있는, 신속하고, 간단하며, 자동화된 식별 방법을 제공하는 것이다.The present invention is to solve the above problems, an object of the present invention is to provide a rapid, simple, automated identification method that can simultaneously analyze a variety of varieties of domestic rice with a plurality of markers.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 내지 (l)로 이루어진 군으로부터 선택된 벼 품종 식별용 마커 세트 2종 이상을 포함하는, 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a marker combination composition for identifying rice varieties, comprising two or more sets of markers for identifying rice varieties selected from the group consisting of (a) to (l):

(a) 서열번호 1을 포함하는 프라이머, 서열번호 2를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 3을 포함하는 프로브;(a) a primer comprising SEQ ID NO: 1, a primer comprising SEQ ID NO: 2, and a probe comprising SEQ ID NO: 3;

(b) 서열번호 4를 포함하는 프라이머, 서열번호 5를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 6을 포함하는 프로브;(b) a primer comprising SEQ ID NO: 4, a primer comprising SEQ ID NO: 5, and a probe comprising SEQ ID NO: 6;

(c) 서열번호 7을 포함하는 프라이머, 서열번호 8을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 9를 포함하는 프로브;(c) a primer comprising SEQ ID NO: 7, a primer comprising SEQ ID NO: 8, and a probe comprising SEQ ID NO: 9;

(d) 서열번호 10을 포함하는 프라이머, 서열번호 11을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 12를 포함하는 프로브;(d) a primer comprising SEQ ID NO: 10, a primer comprising SEQ ID NO: 11, and a probe comprising SEQ ID NO: 12;

(e) 서열번호 13을 포함하는 프라이머, 서열번호 14를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 15를 포함하는 프로브;(e) a primer comprising SEQ ID NO: 13, a primer comprising SEQ ID NO: 14, and a probe comprising SEQ ID NO: 15;

(f) 서열번호 16을 포함하는 프라이머, 서열번호 17을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 18을 포함하는 프로브;(f) a primer comprising SEQ ID NO: 16, a primer comprising SEQ ID NO: 17, and a probe comprising SEQ ID NO: 18;

(g) 서열번호 19를 포함하는 프라이머, 서열번호 20을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 21을 포함하는 프로브;(g) a primer comprising SEQ ID NO: 19, a primer comprising SEQ ID NO: 20, and a probe comprising SEQ ID NO: 21;

(h) 서열번호 22를 포함하는 프라이머, 서열번호 23을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 24를 포함하는 프로브;(h) a primer comprising SEQ ID NO: 22, a primer comprising SEQ ID NO: 23, and a probe comprising SEQ ID NO: 24;

(i) 서열번호 25를 포함하는 프라이머, 서열번호 26을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 27을 포함하는 프로브.(i) a primer comprising SEQ ID NO: 25, a primer comprising SEQ ID NO: 26, and a probe comprising SEQ ID NO: 27.

(j) 서열번호 28을 포함하는 프라이머, 서열번호 29를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 30을 포함하는 프로브.(j) a primer comprising SEQ ID NO: 28, a primer comprising SEQ ID NO: 29, and a probe comprising SEQ ID NO: 30.

(k) 서열번호 31을 포함하는 프라이머, 서열번호 32를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 33을 포함하는 프로브.(k) a primer comprising SEQ ID NO: 31, a primer comprising SEQ ID NO: 32, and a probe comprising SEQ ID NO: 33.

(l) 서열번호 34를 포함하는 프라이머, 서열번호 35를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 36을 포함하는 프로브.(l) a primer comprising SEQ ID NO: 34, a primer comprising SEQ ID NO: 35, and a probe comprising SEQ ID NO: 36.

또한, 본 발명은 상기 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물을 이용하여 벼로부터 추출한 DNA를 주형으로 실시간 PCR을 실시하는 단계; 상기 실시간 PCR 결과로 구현된 형광물질 피크를 감지하여, 각 벼 품종 식별용 마커 세트에 의한 PCR 증폭 여부를 확인하는 단계; 및 상기 PCR 증폭 여부에 따라 벼의 품종을 식별하는 단계를 포함하는, 복수개의 벼 품종용 식별 마커 세트를 이용한 벼 품종 식별 방법을 제공한다.In addition, the present invention comprises the steps of performing a real-time PCR with a DNA extracted from rice template using a marker combination composition for identifying the rice varieties; Detecting amplification of the fluorescence material implemented by the real-time PCR result and confirming PCR amplification by a set of markers for identifying each rice variety; And it provides a rice variety identification method using a plurality of rice varieties identification marker sets, comprising the step of identifying the rice varieties according to the PCR amplification.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 벼 품종 식별 방법은 벼 품종 식별용 마커 세트 2종, 3종, 4종 또는 5종 이상을 동시에 사용한 실시간 PCR 방법을 확립한 것으로, 기존의 벼 품종을 식별하기 위해 각 마커별로 실시하여야 하는 PCR 과정을 현저하게 단축시킬 수 있을 뿐만 아니라, 결과가 분석되어 검사가 종료되기까지 모든 시험과정이 자동 시스템으로 운영되기 때문에 시험자의 실수, 검사의 오류 등이 발생할 확률이 낮으며, 데이터의 수집, 분석이 용이하고 소요되는 검사시간과 노동력을 최소화시킬 수 있다는 점에서 매우 유용하다. 따라서, 현재 정부 품종제한 수매제, 포장양곡 표시제, 브랜드쌀 평가제 등의 다양한 정책을 과학적으로 뒷받침해 줄 수 있으며, 유통중인 쌀의 원산지 관리를 위한 품종 식별에도 유용하게 이용될 수 있다.As described above, the rice variety identification method of the present invention establishes a real-time PCR method using two, three, four, or five or more kinds of marker sets for identifying a rice variety, and to identify existing rice varieties. Not only can the PCR process that is performed for each marker significantly shorten, but all the test processes are operated by an automated system until the results are analyzed and the test is completed. It is very useful in that it is easy to collect and analyze data and minimizes inspection time and labor. Therefore, it can scientifically support a variety of policies, such as government varieties of purchase restrictions, packaging grain labeling, brand rice evaluation system, and can be usefully used to identify varieties for managing the origin of rice in circulation.

도 1 내지 67은 각각 남평벼, 대안벼, 동안벼, 동진 1호 벼, 상미벼, 새계화벼, 새추청벼, 수라벼, 신동진벼, 오대벼, 일미벼, 일품벼, 주남벼, 중화벼, 추청벼, 화봉벼, 화성벼, 화영벼, 동진벼, 운두벼, 태봉벼, 문장벼, 고시히카리, 히토메보레, 대평벼, 만주벼, 미향벼, 서간벼, 소백벼, 소비벼, 영안벼, 운봉벼, 적진주벼, 진부벼, 향남벼, 향미 1호벼, 향미 2호벼, 호평벼, 흑향벼, 간척벼, 고품벼, 금오벼, 눈보라벼, 다미벼, 삼광벼, 삼덕벼, 삼백벼, 상옥벼, 상주벼, 새상주벼, 오대 1호벼, 온누리벼, 운광벼, 평안벼, 풍미 1호벼, 풍미벼, 한마음벼, 호품벼, 화랑벼, 황금누리벼, 청호벼, 원황벼, 말그미벼, 오래벼, 칠보벼 및 새누리벼로부터 추출한 DNA를 주형으로 실시간 PCR을 실시한 결과를 나타낸 것이다. 1 to 67 are Nampyeong rice, alternative rice, yongpyeong, Dongjin No. 1 rice, Sangmi rice, Saegyehwa rice, Saechu Cheong rice, Sura rice, Sindong Jin rice, Odae rice, Ilmi rice, a la carte rice, Junam rice, Chinese rice, Chu Cheong rice, Hwabong rice, Hwaseong rice, Hwayoung rice, Dongjin rice, Unduk rice, Taebong rice, crest rice, Koshihikari, Hitomebore, Daepyeong rice, Manju rice, Mihyang rice, Seoganb rice, Sobaek rice, Consumption rice, Youngan rice, Unbong rice, Red rice wine, Jinbu Rice, Hyangnam Rice, Flavor No. 1 Rice, Flavor No. 2 Rice, Hopyeong Rice, Black Incense Rice, Reclaimed Rice, Fine Rice, Geumo Rice, Blizzard Rice, Dami Rice, Samgwang Rice, Samdeok Rice, Sambaek Rice, Sangok Rice, Sangju Rice, Bird Sangju Paddy, Odae No. 1 Rice, Onnuri Rice, Ungwang Rice, Pyeongan Rice, Flavor No. 1 Rice, Flavored Rice, Unimodal Rice, Hoummi Rice, Hwarang Rice, Golden Nuri Rice, Cheongho Rice, Wonsul Rice, Horse Rice, Long Rice, Chilbo Rice And it shows the results of real-time PCR with a template extracted from Saenuri rice.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자들은 하나의 SNP만을 검출할 수 있는 현재 국내 검사법은 시간, 비용, 노동력 측면에서 비효율적임을 인식하여, 다수종의 SNP를 한꺼번에 검출할 수 있는 프라이머 쌍과 프로브의 조합, PCR 조건 및 PCR 증폭 결과를 확인하는 방법에 대해 연구하던 중, 서로 다른 SNP를 타겟으로 하더라도 하나의 PCR 반응물에서 그 각각의 고유 PCR 증폭을 효율적으로 수행할 수 있는 프라이머 쌍과 프로브의 조합, 상기 프라이머 쌍과 프로브의 조합이 동시에 작용할 수 있는 PCR 조건 및 PCR 증폭 결과를 한꺼번에 파악할 수 있는 방법을 확립하게 되었으며, 이를 토대로 본 발명을 완성하였다.The present inventors recognize that the current domestic test method that can detect only one SNP is inefficient in terms of time, cost, and labor, and a combination of primer pairs and probes capable of detecting multiple SNPs at once, PCR conditions, and PCR amplification results While researching how to identify a combination of primer pairs and probes, the combination of primer pairs and probes that can efficiently perform their respective PCR amplification in one PCR reaction, even if different SNPs are targeted It was established a method that can simultaneously grasp the PCR conditions and PCR amplification results that can act at the same time, and completed the present invention based on this.

따라서, 본 발명은 각 벼 품종에 특이적인 SNP를 PCR을 통해 증폭시키고, 동시에 증폭 산물에 혼성가능하며 검출가능한 수단으로 표지된 프로브를 반응시킴으로써, 실시간 PCR 방법을 통해 테스트한 벼의 품종을 식별하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 각 벼 품종에 특이적인 SNP를 증폭시키는 프라이머 세트와 프로브를 한 세트로 하여, 2세트 이상의 벼 품종 식별용 마커 세트를 동시에 이용한 벼 품종 식별 방법에 관한 것으로, 벼 품종 식별에 필요한 과정을 현저하게 단축시킨 경제 효용성이 높은 방법이다.Accordingly, the present invention identifies a variety of rice tested by real-time PCR method by amplifying SNPs specific to each rice variety through PCR and simultaneously reacting labeled probes with hybridizable and detectable means to the amplification products. It is about a method. In particular, the present invention relates to a rice variety identification method using two or more sets of rice variety identification markers simultaneously using a primer set and a probe for amplifying SNPs specific to each rice variety. It is a highly economic method that has significantly shortened the process.

하기 표 1에 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트를 나타낸다.Table 1 shows a set of markers for identifying rice varieties of the present invention.

구분division 마커 명칭Marker Name 타입type 명명denomination 서열order 서열번호SEQ ID NO: aa DK17-1DK17-1 SNPSNP P1(정방향)P1 (forward direction) atc ccc ata att ctt gac aaatc ccc ata att ctt gac aa 1One P2(역방향)P2 (Reverse) gga atc cgt ctt gat ttg tggga atc cgt ctt gat ttg tg 22 프로브1Probe 1 tgt cgc gga gaa catatgt cgc gga gaa cata 33 bb DK2708DK2708 SNPSNP P3(정방향)P3 (forward direction) gat aat gga ata gtc atc ccg gcc ttt gctgat aat gga ata gtc atc ccg gcc ttt gct 44 P4(역방향)P4 (reverse direction) att ttt tct atc att tct gaa cta cac tcgatt ttt tct atc att tct gaa cta cac tcg 55 프로브2Probe 2 att aca att tag cac tct aatt aca att tag cac tct a 66 cc DK50DK50 SNPSNP P5(정방향)P5 (forward direction) cgc gaa cta aac aag ccc gacgc gaa cta aac aag ccc ga 77 P6(역방향)P6 (reverse direction) aac cct tcc gat atc ctg tcaac cct tcc gat atc ctg tc 88 프로브3Probe 3 ttg gtg tta cat cag atg ttg gtg tta cat cag atg 99 dd DK63DK63 SNPSNP P7(정방향)P7 (forward direction) aca cgc aat gag tgt ggc agt gtgaca cgc aat gag tgt ggc agt gtg 1010 P8(역방향)P8 (reverse direction) cgg cca tgt gtt tac cta ctgcgg cca tgt gtt tac cta ctg 1111 프로브4Probe 4 tgt atg gct ttt gta cctgt atg gct ttt gta cc 1212 ee DK560DK560 SNPSNP P9(정방향)P9 (forward direction) gcc acg tct tct tta aag attgcc acg tct tct tta aag att 1313 P10(역방향)P10 (Reverse) att agg ctg cat aca tta gtc atc catt agg ctg cat aca tta gtc atc c 1414 프로브5Probe 5 tag aat ccc gac ccc cttag aat ccc gac ccc ct 1515 ff DK1412DK1412 SNPSNP P11(정방향)P11 (forward direction) tat tgg gcc gaa tct gat tcg ttat tgg gcc gaa tct gat tcg t 1616 P12(역방향)P12 (Reverse) tct ccg aca gtt tag ggc tta gggtct ccg aca gtt tag ggc tta ggg 1717 프로브6Probe 6 tcg cag tac cgg ata tcttcg cag tac cgg ata tct 1818 gg DK2171DK2171 SNPSNP P13(정방향)P13 (forward direction) aca caa aat aat gtc cat att aaca caa aat aat gtc cat att a 1919 P14(역방향)P14 (Reverse) aac tag caa att gcc tat gcg ttgaac tag caa att gcc tat gcg ttg 2020 프로브7Probe 7 ctt tac aag tat gta gtg aag gactt tac aag tat gta gtg aag ga 2121 hh DK2394DK2394 SNPSNP P15(정방향)P15 (forward direction) tga tat ctt gga tta gaa gtt aactga tat ctt gga tta gaa gtt aac 2222 P16(역방향)P16 (Reverse) ctg ata cag aaa ctt tcc aac cat tggctg ata cag aaa ctt tcc aac cat tgg 2323 프로브8Probe 8 gaa cca caa cat ttt gcc gcgaa cca caa cat ttt gcc gc 2424 ii DK2401DK2401 SNPSNP P17(정방향)P17 (forward direction) cac atc atc ttc aat ttc aac caa aatcac atc atc ttc aat ttc aac caa aat 2525 P18(역방향)P18 (reverse direction) tat aca cca ttg att tct cta aat ggtat aca cca ttg att tct cta aat gg 2626 프로브9Probe 9 taa act ttg cgc tga actaa act ttg cgc tga ac 2727 jj DK1854DK1854 In/DelIn / Del P19(정방향)P19 (forward direction) agc atg gtc cca gac aaa tgagc atg gtc cca gac aaa tg 2828 P20(역방향)P20 (reverse direction) tgg atg att tct gtt agt ggt tca agtgg atg att tct gtt agt ggt tca ag 2929 프로브10Probe 10 ttc ttg atg ata aat tgc tct cattc ttg atg ata aat tgc tct ca 3030 kk DK6DK6 SNPSNP P21(정방향)P21 (forward direction) aac ttt agt gca ggg ttt tca tca caac ttt agt gca ggg ttt tca tca c 3131 P22(역방향)P22 (reverse direction) gaa cta caa gct caa gtc aag cccgaa cta caa gct caa gtc aag ccc 3232 프로브11Probe 11 agc ctc tag gta tta ttgagc ctc tag gta tta ttg 3333 ll DK721DK721 SNPSNP P23(정방향)P23 (forward direction) acg ggt ttt ctt ttt cat ttc gacg ggt ttt ctt ttt cat ttc g 3434 P27(역방향)P27 (reverse direction) tag gga gca cct act ata gaa ggt atgtag gga gca cct act ata gaa ggt atg 3535 프로브12


Probe 12


tt tgc gat ctt tctt tgc gat ctt tc 3636

상기 표 1의 마커는 서열번호 1 내지 36으로 염기 서열을 기재한 것이다. 상기 표 1에서, 마커 명칭은 임의로 설정한 것이며, 타입은 SNP 및 In/Del 마커 타입이다. SNP 마커는 어느 하나의 대립형질의 염기부가 정확하게 매치되어지지만, 이와는 다른 특정 대립형질에는 미스매치되어지는 염기로 치환되어져 있는 마커를 말하며, In/Del 마커는 어느 하나의 대립형질에는 정확하게 매치되는 염기를 가지지만, 이와는 다른 특정 대립형질에는 염기가 삽입(insertion) 또는 삭제(deletion)되어 미스매치되어지는 마커를 의미한다.The markers of Table 1 describe the nucleotide sequences of SEQ ID NOs: 1 to 36. In Table 1, the marker name is arbitrarily set, and the types are SNP and In / Del marker types. SNP markers refer to markers in which the base portion of any allele is exactly matched, but is substituted with a base that is mismatched to a particular allele, while the In / Del marker is a base that exactly matches either allele. In other alleles, the marker refers to a marker to which a base is inserted or deleted and mismatched.

상기 본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커에 따른 프라이머는 모든 벼 품종의 염기서열과 일치하나, 프로브는 SNP를 나타내는 특정 대립유전자(the specific allele)와 일치한다. 따라서 상보적으로 일치하는 대립유전자형에 대해서는 프로브가 특이적으로 주형 DNA에 혼성화(hybridization) 하나, 비 특이 대립유전자에 대해서는 프로브가 혼성화 하지 않는다. 이때 프로브는 검출가능한 수단으로 표지되므로 PCR로 증폭된 산물의 SNP 타입을 확인할 수 있다. 이러한 프라이머 쌍과 각 벼 품종에 특이적인 프로브 세트를 2 세트 이상으로 벼 품종을 쉽게 분석할 수 있다.
The primer according to the marker for identifying the rice variety according to the present invention is consistent with the nucleotide sequence of all rice varieties, the probe is consistent with the specific allele representing the SNP (the specific allele). Thus, the probe hybridizes specifically to the template DNA for complementary allelic types, but the probe does not hybridize to nonspecific alleles. In this case, since the probe is labeled with a detectable means, the SNP type of the product amplified by PCR can be confirmed. Rice varieties can be easily analyzed with more than two sets of primer pairs and probe sets specific to each rice variety.

본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커 세트는 자포니카 재배 벼(쌀)에 대한 품종 식별을 위해 고안되었다. 자포니카 벼 품종은 Oryza sativa L.의 학명을 가진 아종의 국내산 및 외국산 품종이다. 상기 본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커는 벼 게놈상의 DNA의 단일 염기차이를 이용한 것으로 벼의 12개 염색체 내에 산재하여 존재한다. 본 발명에 따른 상기 각각의 마커는 벼의 12개 염색체중 일본 니폰바레 품종에 대한 CAPS 사이트를 참고하여 일정 부위를 PCR을 이용하여 증폭한 후 이 부위의 염기서열을 분석하여 개별 벼 품종 중에 존재하는 SNP 또는 InDel 위치를 찾아내고, 이 위치를 이용하여 품종별 식별이 가능한 대립유전자 특이 프로브로서 고안한 것이다.The marker set for identifying a rice variety according to the present invention is designed for breed identification for japonica grown rice (rice). Japonica rice varieties Oryza sativa Domestic and foreign varieties of subspecies with the scientific name of L. The marker for identifying a rice variety according to the present invention uses a single base difference of DNA on the rice genome and is scattered within 12 chromosomes of rice. Each marker according to the present invention refers to the CAPS site for Japanese Nippon Barre varieties among 12 chromosomes of rice, and amplifies a certain region by PCR, and then analyzes the sequencing of the region. It was designed as an allele-specific probe that can identify the SNP or InDel position and identify the breed by using this position.

본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커 세트의 특징은 구체적으로 다음과 같다. The characteristics of the marker set for identifying a rice variety according to the present invention are as follows.

DK17-1: 8번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AP003886 클론DK17-1: present on chromosome 8 and site of site used for sequencing is clone AP003886

DK2708: 12번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AL731784 클론DK2708: located on chromosome 12 and site of site used for sequencing is AL731784 clone

DK50: 11번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AC145367 클론DK50: present on chromosome 11 and site of site used for sequencing is clone of AC145367

DK63: 3번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AC135495 클론DK63: located on chromosome 3 and site of site used for sequencing is AC135495 clone

DK560: 12번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 BX000560 클론DK560: located on chromosome 12 and site of site used for sequencing is BX000560 clone

DK1412: 7번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AP005198 클론DK1412: located on chromosome 7 and site of site used for sequencing is clone AP005198

DK2394: 7번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AP003866 클론DK2394: located on chromosome 7 and site of site used for sequencing is AP003866 clone

DK2401: 7번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AP004010 클론DK2401: located on chromosome 7 and site of site used for sequencing was cloned AP004010

DK1854: 4번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AL606616 클론DK1854: located on chromosome 4 and site of site used for sequencing was cloned AL606616

DK6: 11번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AC119073 클론DK6: present on chromosome 11 and site of site used for sequencing is AC119073 clone

DK721: 3번 염색체상에 존재하며, 염기서열 분석을 위하여 사용된 부위의 위치는 AC119747 클론
DK721: located on chromosome 3 and site of site used for sequencing is AC119747 clone

아울러, 본 발명의 벼 품종 식별 방법의 양성 대조군으로, 벼 내재 유전자, 예컨대 내재 유전자로서 벼에 존재하는 곡물중심체 염기서열(Cereal Centromeric Sequence)과 유사한 CCS1으로 AB013614 클론 위치에 존재하는 게놈 DNA를 이용할 수 있다. In addition, as a positive control of the rice variety identification method of the present invention, genomic DNA present at the AB013614 clone position can be used as a CCS1 similar to the Cereal Centromeric Sequence in rice as an endogenous gene, such as an endogenous gene. have.

본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트 총 12종, DK17-1, DK34, DK50, DK63, DK560, DK1412, DK2171, DK2394, DK2401, DK1854, DK6 및 DK721 중 이들의 2종 이상의 조합, 바람직하기로는, 3종 이상, 가장 바람직하기로는 4종의 조합을 동시에 사용하여 실시간 PCR을 수행할 수 있다. 이들 총 12종의 벼 품종 식별용 마커 세트의 조합은 프로브 표지에 이용할 수 있는 검출가능한 수단의 종류 및 개수에 따라 결정할 수 있다. 12 kinds of marker sets for identifying rice varieties of the present invention, DK17-1, DK34, DK50, DK63, DK560, DK1412, DK2171, DK2394, DK2401, DK1854, DK6, and a combination of two or more thereof, preferably, Real-time PCR can be performed using three or more, most preferably four combinations simultaneously. The combination of these 12 sets of rice varieties for identifying markers can be determined according to the type and number of detectable means available for probe labeling.

즉, 상기 검출가능한 수단은 실시하는 하나의 실시간 PCR 반응물에 동시에 사용할 수 있으며, 사용한 각각의 검출가능한 수단은 각각 검출할 수 있어야 한다. 예컨대, 단일 PCR 반응물에 동시에 사용가능하며 종류별로 특이적으로 검출할 수 있는 검출가능한 수단의 종류가 2종이라면, 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트는 총 2종을 조합하여 실시간 PCR을 동시 실시할 수 있다. 다른 예로, 특이적인 검출가능한 수단의 종류가 3종, 4종, 5종, 6종 또는 7종 이상인 경우, 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트는 각각 3종, 4종, 5종, 6종 또는 7종 이상의 조합으로 사용할 수 있다. 상기에서, 특이적인 검출가능한 수단에 사용된 "특이적인"은 단일 PCR 반응물에 2종 이상을 동시에 사용가능할 뿐만 아니라 검출가능한 조건에서 사용한 각각의 것을 별도로 검출할 수 있는 특성을 의미한다.That is, the detectable means can be used simultaneously in one real time PCR reactant, and each detectable means used must be detectable respectively. For example, if there are two kinds of detectable means that can be used simultaneously for a single PCR reaction and can be specifically detected for each kind, the set of markers for identifying rice varieties of the present invention simultaneously performs a real-time PCR in combination of two kinds. can do. As another example, when three, four, five, six, or seven or more kinds of specific detectable means are used, the marker set for identifying the rice variety of the present invention is three, four, five, six, respectively. Or a combination of seven or more kinds. As used above, "specific" as used in specific detectable means means a property capable of using two or more kinds of a single PCR reaction at the same time as well as separately detecting each of those used under detectable conditions.

상기 검출가능한 수단은 프로브에 연결, 결합, 또는 부착시켜 통상적인 방식으로 밀도, 농도, 양 등을 확인할 수 있는 화합물, 생체 분자 또는 생체 분자 모방체 등을 의미한다. 그 예로, 통상적으로 사용되는 형광물질, 발광물질, 생발광물질, 동위원소 등이 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다. 다른 예로, 형광물질이 가장 바람직하다. 형광물질은 현재 시중에 다수 종이 시판되고 있으므로, 용이하게 입수가능하다. 형광물질의 예로는, FAM™(6-카르복시플루오레세인), SYBR　 Green, VIC(2'-클로로-7'-페닐-1,4-디클로로-6-카르복시플루오레세인), JOE(카르복시-4', 5'-디클로로-2', 7'-디메톡시플루오레세인), NED™(2'-클로로-5'-플루오로-7' 8'-융합된 페닐-1,4-디클로로-6-카르복시플루오레세인), TAMRA™(카르복시테트라메틸로다민), Cy3™, ROX™(카르복시-X-로다민), HEX(2', 4', 5', 7'-테트라클로로-6-카르복시-4,7-디클로로플루오레세인), TET(2', 7'-디클로로-6-카르복시-4,7-디클로로플루오레세인), Texas Red, Cy5™ 등이 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다. 형광물질은 종류에 따라 여기 및 방사 파장이 다르면 사용방법 또한 상이하므로, 이를 고려하여 하나의 PCR 반응물에 함께 사용하는 형광물질은 별개로 검출가능한지 여부를 판단하여 선택 사용하여야 한다. 대표적인 형광물질의 특징은 아래 표 2에 간략하게 나타내었다.The detectable means means compounds, biomolecules or biomolecule mimetics, etc., which can be linked, bound, or attached to a probe to determine the density, concentration, amount, etc. in a conventional manner. Examples thereof include fluorescent materials, light emitting materials, bioluminescent materials, and isotopes which are commonly used, but are not limited thereto. As another example, fluorescent materials are most preferred. Since a large number of fluorescent materials are currently on the market, they are readily available. Examples of fluorescent materials include FAM ™ (6-carboxyfluorescein), SYBR 　 Green, VIC (2'-chloro-7'-phenyl-1,4-dichloro-6-carboxyfluorescein), JOE (carboxy-4 ', 5'-dichloro-2', 7'-dimethoxyfluoresce Phosphorus), NED ™ (2'-chloro-5'-fluoro-7 '8'-fused phenyl-1,4-dichloro-6-carboxyfluorescein), TAMRA ™ (carboxytetramethyldamine), Cy3 ™, ROX ™ (carboxy-X-rhodamine), HEX (2 ', 4', 5 ', 7'-tetrachloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), TET (2', 7'-dichloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), Texas Red, Cy5 ™ and the like, but is not limited thereto. If the fluorescent material has different excitation and emission wavelengths depending on the type, the method of use is also different. Therefore, the fluorescent material used together in one PCR reaction should be selected and used to determine whether the fluorescent material can be detected separately. Representative fluorescent material characteristics are briefly shown in Table 2 below.

FilterFilter 여기 파장Excitation wavelength 방사 파장Radiation wavelength 형광물질Fluorescent material 1One 490490 520520 FAM, SYBR GreenFAM, SYBR Green 22 520520 550550 JOE, VIC, HEX, TET JOE, VIC, HEX, TET 33 550550 580580 NED, TAMRA, CY3 NED, TAMRA, CY3 44 580580 610610 Taxas Red, ROX, RED610 Taxas Red, ROX, RED610 55 640640 670670 CY5, RED670 CY5, RED670

본 발명의 일 예로, 형광물질은 통상의 방법으로 본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커 세트에 포함된 프로브에 표지된다. 표지 방법은 인터컬레이팅(interchelating) 방법, TaqMan™ 프로브법 및 분자 비콘(Molecualr beacon) 방법들이 있다. 인터컬레이팅 방법은 이중가닥 DNA에 결합하여 형광을 나타내는 시약(inter-chelator: SYBR　 Green I, EtBr 등)을 PCR 반응에 첨가하여 증폭과 함께 발색하는 형광을 검출하는 방법으로, 인터컬레이터가 PCR 반응으로 합성된 이중가닥 DNA에 결합하여 형광을 발하며 이 형광강도를 검출하여 증폭산물의 생성량을 측정할 수 있다. TaqMan™ 프로브법은 5말단을 형광물질(FAM 등)로 3말단을 quencher 물질(TAMRA 등)로 수식한 올리고뉴클레오티드(TaqManTM probe)를 PCR 반응액에 첨가하는 방법으로, TaqManTM 프로브가 어닐링 단계에서 주형 DNA에 특이적으로 혼성화하지만, 프로브상의 quencher에 의해 형광 발생이 억제되고, 연장 단계에서 Taq DNA 중합효소가 갖는 5→ 3엑소뉴클레아제 활성으로 주형에 혼성화한 TaqMan™ 프로브만 분해되어 형광색소가 프로브에서 유리되므로서 quencher에 의한 억제가 해제되어 형광을 발하게 된다. 분자 비콘 방법은 양 말단을 형광물질(FAM, TAMRA 등)과 quencher 물질(DABCYL 등)로 수식한 헤어핀형 이차구조를 만드는 올리고뉴클레오티드 프로브(Molecular Beacon probe)를 PCR 반응계에 첨가하는 방법이다. 분자 비콘 프로브는 유리 상태에서 헤어핀 구조를 취하며 형광물질과 quencher 물질에 근접해 있어 형광발생이 억제되지만, 어닐링 단계에서 주형 DNA와 상보적인 영역에서 특이적으로 혼성화할때 형광물질과 quencher 물질과의 거리가 멀어져 quencher 물질에 의한 억제가 해소됨으로써 프로브상의 형광색소가 형광을 나타내게 된다. 그러나, 혼성화되지 않은 분자 비콘 프로브는 헤어핀 구조를 유지하고 있어 형광을 나타내지 않게 된다.In one embodiment of the present invention, the fluorescent material is labeled on a probe included in a marker set for identifying a rice variety according to the present invention in a conventional manner. Labeling methods include interchelating methods, TaqMan ™ probe methods, and molecular beacon methods. Intercalating method is a reagent that binds to double-stranded DNA and fluoresces (inter-chelator: SYBR). 　 Green I, EtBr, etc.) is added to the PCR reaction to detect fluorescence that develops with amplification.The intercalator binds to the double-stranded DNA synthesized by the PCR reaction and emits fluorescence. The amount of produced can be measured. TaqMan ™ probe method is a method in which an oligonucleotide (TaqManTM probe) modified with 5 ends of fluorescent material (FAM, etc.) and 3 ends of quencher material (TAMRA, etc.) is added to the PCR reaction solution. Fluorescence is inhibited by quencher on the probe, but only in the extension step, only the TaqMan ™ probe hybridized to the template by 5 → 3 exonuclease activity of Taq DNA polymerase is decomposed to cause fluorescence. As it is released from the probe, the inhibition by the quencher is released and fluoresces. The molecular beacon method is a method of adding a oligonucleotide probe (Molecular Beacon probe) to the PCR reaction system to form a hairpin secondary structure in which both ends are modified with a fluorescent material (FAM, TAMRA, etc.) and a quencher material (DABCYL, etc.). Molecular beacon probes have a hairpin structure in the glass state and are close to the fluorescent material and quencher material to suppress fluorescence, but the distance between the fluorescent material and quencher material when specifically hybridized in the region complementary to the template DNA in the annealing step The quenching of fluorescence on the probes fluoresces because the inhibition by the quencher material is eliminated. However, unhybridized molecular beacon probes retain their hairpin structure and thus do not fluoresce.

이러한 방법을 본 발명의 벼 품종을 식별하기 위한 다중 실시간 PCR 법에 적용할 수 있다. 상기한 방법들은 당업계에 공지된 것이므로, 반응 효율, 시간, 형광물질 타입 등을 적절히 고려하여, 특정 방법을 선택할 수 있을 것이다. 본 발명에서는 일 예로, TaqMan™ 프로브 방법을 사용할 수 있다. 예로, TaqMan™ 프로브 방법에 사용하기 위한, 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트의 형광물질 표지 예를 하기 표 3에 나타내었다. This method can be applied to multiple real time PCR methods for identifying rice varieties of the present invention. Since the above methods are known in the art, specific methods may be selected in consideration of reaction efficiency, time, fluorescent material type, and the like. In the present invention, for example, a TaqMan ™ probe method may be used. For example, fluorescent labeling examples of the marker set for identifying the rice variety of the present invention for use in the TaqMan ™ probe method are shown in Table 3 below.

마커 세트Marker set 타입type 명명denomination 서열order DK17-1DK17-1 SNPSNP P1(정방향)P1 (forward direction) atc ccc ata att ctt gac aaatc ccc ata att ctt gac aa P2(역방향)P2 (Reverse) gga atc cgt ctt gat ttg tggga atc cgt ctt gat ttg tg 프로브1Probe 1 FAM-tgt cgc gga gaa cata-MGBNFQFAM-tgt cgc gga gaa cata-MGBNFQ DK2708DK2708 SNPSNP P3(정방향)P3 (forward direction) gat aat gga ata gtc atc ccg gcc ttt gctgat aat gga ata gtc atc ccg gcc ttt gct P4(역방향)P4 (reverse direction) att ttt tct atc att tct gaa cta cac tcgatt ttt tct atc att tct gaa cta cac tcg 프로브2Probe 2 Cy5-att aca att tag cac tct a-MGBNFQCy5-att aca att tag cac tct a-MGBNFQ DK50DK50 SNPSNP P5(정방향)P5 (forward direction) cgc gaa cta aac aag ccc gacgc gaa cta aac aag ccc ga P6(역방향)P6 (reverse direction) aac cct tcc gat atc ctg tcaac cct tcc gat atc ctg tc 프로브3Probe 3 VIC-ttg gtg tta cat cag atg-MGBNFQVIC-ttg gtg tta cat cag atg-MGBNFQ DK63DK63 SNPSNP P7(정방향)P7 (forward direction) aca cgc aat gag tgt ggc agt gtgaca cgc aat gag tgt ggc agt gtg P8(역방향)P8 (reverse direction) cgg cca tgt gtt tac cta ctgcgg cca tgt gtt tac cta ctg 프로브4Probe 4 NED-tgt atg gct ttt gta cc-MGBNFQNED-tgt atg gct ttt gta cc-MGBNFQ DK560DK560 SNPSNP P9(정방향)P9 (forward direction) gcc acg tct tct tta aag attgcc acg tct tct tta aag att P10(역방향)P10 (Reverse) att agg ctg cat aca tta gtc atc catt agg ctg cat aca tta gtc atc c 프로브5Probe 5 FAM-tag aat ccc gac ccc ct-MGBNFQFAM-tag aat ccc gac ccc ct-MGBNFQ DK1412DK1412 SNPSNP P11(정방향)P11 (forward direction) tat tgg gcc gaa tct gat tcg ttat tgg gcc gaa tct gat tcg t P12(역방향)P12 (Reverse) tct ccg aca gtt tag ggc tta gggtct ccg aca gtt tag ggc tta ggg 프로브6Probe 6 VIC-tcg cag tac cgg ata tct-MGBNFQVIC-tcg cag tac cgg ata tct-MGBNFQ DK2171DK2171 SNPSNP P13(정방향)P13 (forward direction) aca caa aat aat gtc cat att aaca caa aat aat gtc cat att a P14(역방향)P14 (Reverse) aac tag caa att gcc tat gcg ttgaac tag caa att gcc tat gcg ttg 프로브7Probe 7 NED-ctt tac aag tat gta gtg aag ga-MGBNFQNED-ctt tac aag tat gta gtg aag ga-MGBNFQ DK2394DK2394 SNPSNP P15(정방향)P15 (forward direction) tga tat ctt gga tta gaa gtt aactga tat ctt gga tta gaa gtt aac P16(역방향)P16 (Reverse) ctg ata cag aaa ctt tcc aac cat tggctg ata cag aaa ctt tcc aac cat tgg 프로브8Probe 8 VIC-gaa cca caa cat ttt gcc gc-MGBNFQVIC-gaa cca caa cat ttt gcc gc-MGBNFQ DK2401DK2401 SNPSNP P17(정방향)P17 (forward direction) cac atc atc ttc aat ttc aac caa aatcac atc atc ttc aat ttc aac caa aat P18(역방향)P18 (reverse direction) tat aca cca ttg att tct cta aat ggtat aca cca ttg att tct cta aat gg 프로브9Probe 9 FAM-taa act ttg cgc tga ac-MGBNFQFAM-taa act ttg cgc tga ac-MGBNFQ DK1854DK1854 In/DelIn / Del P19(정방향)P19 (forward direction) agc atg gtc cca gac aaa tgagc atg gtc cca gac aaa tg P20(역방향)P20 (reverse direction) tgg atg att tct gtt agt ggt tca agtgg atg att tct gtt agt ggt tca ag 프로브10Probe 10 Cy5-ttc ttg atg ata aat tgc tct ca-MGBNFQCy5-ttc ttg atg ata aat tgc tct ca-MGBNFQ DK6DK6 SNPSNP P21(정방향)P21 (forward direction) aac ttt agt gca ggg ttt tca tca caac ttt agt gca ggg ttt tca tca c P22(역방향)P22 (reverse direction) gaa cta caa gct caa gtc aag cccgaa cta caa gct caa gtc aag ccc 프로브11Probe 11 Cy5-agc ctc tag gta tta ttg-MGBNFQCy5-agc ctc tag gta tta ttg-MGBNFQ DK721DK721 SNPSNP P23(정방향)P23 (forward direction) acg ggt ttt ctt ttt cat ttg gacg ggt ttt ctt ttt cat ttg g P27(역방향)P27 (reverse direction) tag gga gca cct act ata gaa ggt atgtag gga gca cct act ata gaa ggt atg 프로브12Probe 12 NED-tt tgc gat ctt tc-MGBNFQNED-tt tgc gat ctt tc-MGBNFQ

상기 표 3은 본 발명에 따른 벼 품종 식별용 마커 세트 3종을 포플렉스 실시간 PCR에 사용할 경우를 고려한 것으로, 형광물질로 FAM, VIC, Cy5 및 NEDTM 4종을 각각 사용하여 프로브 5' 말단에 표지하며, 프로브 3' 말단은 MGBNFQ(molecular grove binding non-fluorescence quencher)를 부착시킨다. 일예로, 포플렉스 실시간 PCR에 사용가능한 벼 품종 식별용 마커 세트의 조합은, 다음과 같을 수 있다:Table 3 considers the case of using three sets of rice varieties for identifying markers according to the present invention for the Popplex real-time PCR, using four FAM, VIC, Cy5 and NED TM as the fluorescent material at the probe 5 'end, respectively. The probe 3 'end attaches a molecular grove binding non-fluorescence quencher (MBGNFQ). In one example, a combination of a set of markers for identifying rice variety that can be used for Popplex real-time PCR may be as follows:

DK2401, DK50, DK2171 및 DK2708로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종;One set of markers selected from the group consisting of DK2401, DK50, DK2171 and DK2708;

DK17-1, DK1412, DK721 및 DK1854로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종; 및One marker set selected from the group consisting of DK17-1, DK1412, DK721 and DK1854; And

DK560, DK2394, DK63 및 DK6로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종.One marker set selected from the group consisting of DK560, DK2394, DK63, and DK6.

상기한 조합은 서로 다른 형광물질로 표지된 마커 세트를 함께 사용할 수 있다는 조건에 의한 것으로, 일 예에 불과하며, 상기 조합 외에도 형광물질을 변경하면서 다양한 조합을 만들 수 있다. 이는, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자라면 용이하게 이해 및 실시할 수 있을 것이다. 본 발명의 다른 예로, (1) DK2401(FAM), DK50(VIC), DK2171(NED), DK2708(Cy5); (2) DK17-1(FAM), DK1412(VIC), DK721(NED) 및 DK1854(Cy5); 및 (3) DK560(FAM), DK2394(VIC), DK63(NED), DK6(Cy5) 조합을 사용할 수 있다.The combination is based on the condition that a set of markers labeled with different fluorescent materials can be used together, and is only an example, and various combinations can be made while changing the fluorescent material in addition to the combination. This can be easily understood and implemented by those skilled in the art to which the present invention pertains. In another embodiment of the present invention, (1) DK2401 (FAM), DK50 (VIC), DK2171 (NED), DK2708 (Cy5); (2) DK17-1 (FAM), DK1412 (VIC), DK721 (NED) and DK1854 (Cy5); And (3) combinations of DK560 (FAM), DK2394 (VIC), DK63 (NED), and DK6 (Cy5).

또한, 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트는 통상적인 실시간 PCR 방법 및 장치를 사용하여, 실시할 수 있다. 상기 실시간 PCR 방법은 DNA 중합효소와 형광공명 에너지이동(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)의 원리에 의해 PCR의 매 주기마다 실시간으로 시행되는 형광을 검출하고 정량하는 방법이다. 이러한 방법은 특이적인 증폭산물을 비 특이적인 증폭산물로부터 구별하여 확인할 수 있으며, 자동화된 양상으로 분석 결과를 쉽게 입수할 수 있다.In addition, the marker set for rice variety identification of this invention can be implemented using a conventional real-time PCR method and apparatus. The real-time PCR method is a method for detecting and quantitating fluorescence performed in real time every cycle of PCR based on the principle of DNA polymerase and Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET). This method distinguishes specific amplification products from non-specific amplification products and can easily obtain analysis results in an automated manner.

본 발명에 사용가능한 실시간 PCR 기기로는 AB 사의 Real-time PCR 기기 7900, 7500, 7300, Stratagene 사의 Mx3000p, 및 BioRad 사의 Chromo 4 기기 등이 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다. PCR 종료시 이러한 실시간 PCR 기기의 레이저는 증폭된 PCR 산물의 프로브에 표지된 형광물질을 감지하여 도 1과 같은 피크를 구현한다. 이에, 전기영동과정 없이 기기에 내장된 프로그램을 실행시켜 자동으로 결과를 분석할 수 있다. Real-time PCR devices that can be used in the present invention include, but are not limited to, AB Real-time PCR devices 7900, 7500, 7300, Stratagene Mx3000p, and BioRad Chromo 4 devices. At the end of PCR, the laser of the real-time PCR device senses the fluorescent material labeled on the probe of the amplified PCR product to implement the peak as shown in FIG. 1. Thus, the results can be automatically analyzed by executing a program embedded in the device without the electrophoresis process.

본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트 및 이를 이용한 벼 품종 식별 방법을 통해, 수종의 벼 품종을 식별할 수 있으며, 특히 남평벼, 대안벼, 동안벼, 동진 1호 벼, 상미벼, 새계화벼, 새추청벼, 수라벼, 신동진벼, 오대벼, 일미벼, 일품벼, 주남벼, 중화벼, 추청벼, 화봉벼, 화성벼, 화영벼, 동진벼, 운두벼, 태봉벼, 문장벼, 고시히카리, 히토메보레, 대평벼, 만주벼, 미향벼, 서간벼, 소백벼, 소비벼, 영안벼, 운봉벼, 적진주벼, 진부벼, 향남벼, 향미 1호 벼, 향미 2호 벼, 호평벼, 흑향벼, 간척벼, 고품벼, 금오벼, 눈보라벼, 다미벼, 삼광벼, 삼덕벼, 삼백벼, 상옥벼, 상주벼, 새상주벼, 오대 1호 벼, 온누리벼, 운광벼, 평안벼, 풍미 1호 벼, 풍미벼, 한마음벼, 호품벼, 화랑벼, 황금누리벼, 청호벼, 원황벼, 말그미벼, 오래벼, 칠보벼 및 새누리벼의 총 67종의 벼 품종을 각각 식별할 수 있다.Through the marker set for identifying a rice variety of the present invention and a rice variety identification method using the same, it is possible to identify a variety of rice varieties. Saechu rice, Sura rice, Sindong Jin rice, Odae rice, Ilmi rice, a la carte rice, Junnam rice, Chinese rice, Chu cheung rice, Hwabong rice, Hwaseong rice, Hwayoung rice, Dongjin rice, Unduk rice, Taebong rice, crest rice, Koshihikari, Hitomebore, Daepyeong rice, Manju rice , Unflavored rice, Seogan rice, Sobaek rice, Consumption rice, Youngan rice, Unbong rice, Red rice wine, Jinbu rice, Hyangnam rice, Flavor No. 1 rice, Flavor No. 2 rice, Hopyeong rice, Black scent rice, Reclaimed rice , Gold rice, blizzard, dami rice, samgwang rice, samduk rice, sambaek rice, Sangok rice, Sangju rice, Sasang rice, Odae No. 1 rice, Onnuri rice, Ungwang rice, Pyeongan rice, Flavor No. 1 rice, flavor rice, 67 varieties of rice varieties, including one heart rice, good rice, hwarang rice, golden rice, blue rice, yellow rice, malmi rice, rice plant, chilbo rice, and saeuri rice Each can be identified.

구체적인 식별 방법은 다음과 같다. Specific identification method is as follows.

(1) 남평: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK560, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크(peak)가 나타날 경우 남평벼로 판정한다.  (1) Nampyeong: When the peaks appear at the location of the identification marker sets DK2401, DK17-1, DK560, DK721 and DK1854 for rice varieties, it is determined to be Nampyeong rice.

(2) 대안: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 대안벼로 판정한다. (2) Alternative: Identification Mark Set for Rice Varieties DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 and DK6 will be judged as alternative rice if peaks appear at positions.

(3) 동안: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 동안벼로 판정한다. (3) During: When the peaks appear at the DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854, and DK6 positions for the identification marker set for rice varieties, it is judged as rice.

(4) 동진1: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 동진1벼로 판정한다. (4) Dongjin 1: Identification Mark Set for Rice Varieties DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, and DK721 indicate peaks at the locations of Dongjin 1 rice.

(5) 상미: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 상미벼로 판정한다. (5) Rice taste: If the peaks appear at the DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK1854, and DK6 positions for the rice varieties, it is determined as rice.

(6) 새계화: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK560 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 새계화벼로 판정한다. (6) Birdification: If peaks appear at the DK560 and DK721 positions for the identification markers set for rice varieties, it is determined as newage.

(7) 새추청: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK721, DK1854 그리고 DK6위치에서 피크가 나타날 경우 새추청벼로 판정한다. (7) Saecheongcheong: If the peaks appear at the DK2401, DK17-1, DK721, DK1854 and DK6 positions for the identification marker set for rice varieties, saecheongcheong rice shall be determined.

(8) 수라: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK560 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 수라벼로 판정한다. (8) Sura: If a peak appears at the DK2401, DK560, and DK1854 positions for the identification marker set for rice cultivar, it is judged as Sura rice.

(9) 신동진: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63, DK560 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 신동진벼로 판정한다. (9) Sindongjin: If there is a peak at the position of DK50, DK17-1, DK63, DK560 and DK721 for the identification marker set for rice varieties, it is determined as Shindongjinbyeong.

(10) 오대: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 오대벼로 판정한다. (5) False: If a peak appears at the DK2394, DK560, DK2708, DK1854, and DK6 positions of the rice varieties, it is judged as a large rice.

(11) 일미: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2171, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 일미벼로 판정한다. (11) Japan-US: If the peaks appear at the positions DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2171, DK721, and DK1854 for the rice variety, it is determined as one rice.

(12) 일품: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK63, DK560, DK2708 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 일품벼로 판정한다. (12) Dishes: When the peaks appear at the DK63, DK560, DK2708 and DK6 positions for the identification marker sets for rice varieties, they are judged as a single rice.

(13) 주남: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 동안벼로 판정한다. (13) Chunam: A distinctive marker set for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK17-1, DK560, DK2708 and DK1854, they are judged to be rice.

(14) 중화: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK2401, DK17-1, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 중화벼로 판정한다. (14) Neutralization: Identifying marker sets for rice varieties DK2394, DK2401, DK17-1, DK560, DK2708 and DK1854 indicate peaks at the positions of neutralized rice.

(15) 추청: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 추청벼로 판정한다. (15) Referral: If the peaks appear at the DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854, and DK6 positions of the rice varieties, it is judged as a chopped rice.

(16) 화봉: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 화봉벼로 판정한다. (16) Hwabong: Identification marker sets for rice varieties DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 and DK6 if peaks appear at the positions shall be determined.

(17) 화성: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK63, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 화성벼로 판정한다. (17) Mars: Identification marker sets for rice varieties DK63, DK560, DK721, DK1854 and DK6854 If peaks appear at the positions, it is determined as Hwaseong rice.

(18) 화영: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 화영벼로 판정한다. (18) Hwayoung: If a peak appears at the DK50, DK17-1, DK560 and DK721 positions for the rice varieties, it is determined as Hwayoung rice.

(19) 동진: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK560, DK2171 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 동진벼로 판정한다. (19) Dongjin: If a peak appears at the DK50, DK2401, DK560, DK2171 and DK721 positions for the rice varieties, it is determined as the Dongjin rice.

(20) 운두: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560, DK2708, DK721 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 운두벼로 판정한다. (20) Mounds: Identification marker sets for rice varieties DK2394, DK17-1, DK560, DK2708, DK721 and if peaks appear at the positions DK6, it is determined as muddy rice.

(21) 태봉: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 태봉벼로 판정한다. (21) Taebong: If the peaks appear at the DK2394, DK2401, DK560, DK2708 and DK1854 positions for the rice varieties, it is determined as Taebong rice.

(22) 문장: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK560, DK2171, DK2708 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 문장벼로 판정한다. (22) Sentence: Identification Mark Set for Rice Varieties If peaks appear at positions DK2394, DK560, DK2171, DK2708, and DK6, they are judged to be rice.

(23) 고시히카리: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 고시히카리벼로 판정한다. (23) Koshihikari: When the peaks appear at the positions DK2394, DK560, DK2708 and DK1854 for the identification marker sets for rice varieties, it is determined as Koshihikari rice.

(24) 히토메보레: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 히토메보레벼로 판정한다. (24) Hitomebore: Identification marker sets for rice varieties If peaks appear at positions DK2394, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708 and DK1854, it is determined as Hitomebore rice.

(25) 대평: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 대평로 판정한다. (25) Large flat: If the peaks appear at the positions DK50, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854 for the rice variety, the flat verdict is determined.

(26) 만추: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK560, DK2171, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 만추벼로 판정한다. (26) Autumn: When peaks appear at the positions DK560, DK2171, DK721 and DK1854 for the identification marker set for rice varieties, it is determined as the autumn rice.

(27) 미향: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK721 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 미향벼로 판정한다. (27) Flavour: A set of identification markers for rice varieties DK50, DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK721, and DK6, where peaks appear, are determined as unflavored rice.

(28) 서간: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK63, 그리고 DK560 위치에서 피크가 나타날 경우 서간벼로 판정한다. (28) Letter: When the peaks appear at the DK50, DK2401, DK63, and DK560 positions of the identification marker sets for rice varieties, it is determined as the letter rice.

(29) 소백: 벼 품종용 식별 마커 세트 DK560, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 소백벼로 판정한다. (29) Sobaek: If peaks appear at the DK560, DK2708, DK1854, and DK6 positions for the rice varieties, it is determined as bovine rice.

(30) 소비 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK63 그리고 DK560 위치에서 피크가 나타날 경우 소비벼로 판정한다.(30) Consumption: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at the positions DK50, DK1412, DK17-1, DK63 and DK560, it is determined as consumption rice.

(31) 영안 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK2171, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 영안벼로 판정한다.(31) Mortuary: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK2171, DK721, and DK1854, they shall be judged as young rice.

(32) 운봉 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 운봉벼로 판정한다.(32) Clouds: Identification marker sets for rice varieties If peaks appear at the positions DK2394, DK560, DK2708, DK721, DK1854 and DK6, they are considered to be clouded rice.

(33) 적진주 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK17-1, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 적진주벼로 판정한다.(33) Red pearls: Set of identification markers for rice varieties DK17-1, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 and DK6 shall be judged as red pearls when peaks appear.

(34) 진부 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK63, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 진부벼로 판정한다. (34) Truth: A set of identification markers for rice varieties. If peaks appear at positions DK2394, DK63, DK560, DK2708 and DK1854, they are judged as true rice.

(35) 향남 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 향남벼로 판정한다. (35) Hyangnam: Identification Mark Set for Rice Varieties DK50, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708, DK721, DK1854, and DK6 indicate peaks at the positions of Hyangnam Rice.

(36) 향미 1호 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2708 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 향미 1호벼로 판정한다. (36) Flavor No. 1: If there is a peak at the DK2708 and DK721 positions for the identification marker set for rice varieties, it is determined as flavor No. 1 rice.

(37) 향미 2호 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2708 위치에서 피크가 나타날 경우 향미 2호벼로 판정한다. (37) Flavor No. 2: Identification Mark Set for Rice Varieties If a peak appears at position DK2708, flavor 2 is determined.

(38) 호평 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK1412, DK17-1, DK63, DK560 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 호평벼로 판정한다. (38) Reputation: Set of identification markers for rice varieties If peaks appear at the positions DK1412, DK17-1, DK63, DK560 and DK1854, they are judged as favorable rice.

(39) 흑향 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 흑향벼로 판정한다. (39) Black scent: A set of identification markers for rice varieties DK2394, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, DK1854 and DK6.

(40) 흑진주 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK63, DK560, DK2171, DK2708 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 흑진주벼로 판정한다. (40) Black pearl: A set of identification markers for rice varieties DK2401, DK17-1, DK63, DK560, DK2171, DK2708 and DK6. If peaks appear at the positions, it is determined as black pearl rice.

(41) 간척 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 간척벼로 판정한다. (41) Reclamation: Set of identification markers for rice varieties. DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854 and DK6 If peaks appear at the positions, reclamation is judged.

(42) 고품 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK17-1, DK63, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 고품벼로 판정한다. (42) High quality: discriminating marker sets for rice varieties If peaks appear at the positions DK17-1, DK63, DK560, DK2708 and DK1854, they are judged as high quality rice.

(43) 금오 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 금오벼로 판정한다. (43) Geumo: If the peaks appear at the positions DK560, DK2708 and DK1854 of the marker set for rice varieties, they are judged as gold.

(44) 눈보라 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2171, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 눈보라벼로 판정한다. (44) Blizzard: Identification Mark Set for Rice Varieties If peaks appear at positions DK2394, DK2401, DK560, DK2171, DK2708, and DK1854, they are considered to be blizzards.

(45) 다미 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63 그리고 DK560 위치에서 피크가 나타날 경우 다미벼로 판정한다. (45) Damiers: Identification marker sets for rice varieties If peaks appear at the positions DK50, DK17-1, DK63 and DK560, they are judged as dami-mi rice.

(46) 삼광 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 삼광벼로 판정한다. (46) Samkwang: Identification marker set for rice varieties. DK50, DK2401, DK17-1, DK2708, DK1854, and DK6 indicate peaks at the positions of three light rice.

(47) 삼덕 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 삼덕벼로 판정한다. (47) Samdeok: Identification marker set for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854, they are judged as samdeok rice.

(48) 삼백 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK560, DK1708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 삼백벼로 판정한다. (48) Three hundred: Set of identification markers for rice varieties. DK2401, DK560, DK1708, DK1854 and DK6854 If peaks appear at positions D, it is determined as three hundred rice.

(49) 상옥 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 상옥벼로 판정한다. (49) Jade: A distinctive marker set for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721 and DK6, they are judged as jade rice.

(50) 상주 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK17-1, DK2708, DK1854 그리고 DK6위치에서 피크가 나타날 경우 상주벼로 판정한다. (50) Resident: A set of identification markers for rice varieties, DK17-1, DK2708, DK1854 and DK6, if peaks appear at the position is determined as permanent rice.

(51) 새상주 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2708, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 새상주벼로 판정한다. (51) New resident rice: If the peaks appear at DK2394, DK2401, DK560, DK2708, DK1854 and DK6 positions for rice varieties, the new resident rice is determined.

(52) 오대 1호 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK63, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 오대 1호벼로 판정한다. (5) Five No. 1: Identification Mark Set for Rice Varieties If peaks appear at the positions DK63, DK560, DK2708 and DK1854, it is determined as five No.1 rice.

(53) 온누리 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 중산벼로 판정한다. (53) Onnuri: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK2401, DK17-1, DK560 and DK1854, they are judged as paddy rice.

(54) 운광 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 중산벼로 판정한다. (54) Clouds: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK1854 and DK6, they are judged as paddy rice.

(55) 평안 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1 그리고 DK560위치에서 피크가 나타날 경우 평안벼로 판정한다. (55) Peace: A set of identification markers for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK2401, DK17-1, and DK560, they are judged as peace rice.

(56) 풍미 1호 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK560, DK2171, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 풍미 1호벼로 판정한다. (56) Flavor No. 1: Identification marker set for rice varieties If peaks appear at positions DK2401, DK560, DK2171, DK721 and DK1854, it is determined as flavor No. 1 rice.

(57) 풍미 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 풍미벼로 판정한다. (57) Flavor: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at positions DK50, DK17-1, DK560, DK721 and DK1854, they are judged as flavored rice.

(58) 한마음 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560 그리고 DK2708 위치에서 피크가 나타날 경우 한마음벼로 판정한다. (58) One heart: When the peaks appear at the positions DK50, DK17-1, DK560 and DK2708 for the identification marker set for rice varieties, they are judged as one heart.

(59) 호품 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1 그리고 DK560위치에서 피크가 나타날 경우 호품벼로 판정한다. (59) Articles: When peaks appear at the positions DK50, DK17-1 and DK560 of the marker set for rice varieties, they are judged to be rice.

(60) 화랑 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK560, DK721, DK1854 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 화랑벼로 판정한다. (60) Galleries: Identification marker sets for rice varieties DK2401, DK560, DK721, DK1854 and DK6854 If peaks appear at the positions, judge the galley rice.

(61) 황금누리 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK560, DK2708 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 황금누리벼로 판정한다. (61) Golden nursing: When the peaks appear at the positions DK50, DK560, DK2708 and DK1854 for the identification marker set for rice varieties, the golden nursing is determined.

(62) 청호 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK1412, DK560 그리고 DK6 위치에서 피크가 나타날 경우 청호벼로 판정한다. (62) Blue lakes: Set of identification markers for rice varieties. If peaks appear at positions DK1412, DK560 and DK6, they are determined as green lakes.

(63) 원황 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2401, DK1412, DK560, DK721 그리고 DK6위치에서 피크가 나타날 경우 원황벼로 판정한다. (63) Pale color: Identification marker sets for rice varieties DK2401, DK1412, DK560, DK721 and DK6 If peaks appear at positions D, it is determined as Pale rice.

(64) 말그미 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708 그리고 DK721 위치에서 피크가 나타날 경우 말그미벼로 판정한다. (64) Malmium: A distinctive marker set for rice varieties shall be judged as malmium if peaks appear at positions DK50, DK17-1, DK560, DK2708 and DK721.

(65) 오래 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK63, DK560 그리고 DK2708 위치에서 피크가 나타날 경우 오래벼로 판정한다. (65) Long: When the peaks appear at positions DK63, DK560 and DK2708 for the identification marker sets for rice varieties, the rice is judged to be old.

(66) 칠보 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560 그리고 DK2708 위치에서 피크가 나타날 경우 칠보벼로 판정한다. (66) Cloisonne: Identification marker sets for rice varieties. If peaks appear at positions DK2394, DK17-1, DK560 and DK2708, the result is judged as cloisonne rice.

(67) 새누리 : 벼 품종용 식별 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708, DK721 그리고 DK1854 위치에서 피크가 나타날 경우 새누리벼로 판정한다.
(67) Saenuri: If a peak appears at the location of the identification marker set DK50, DK17-1, DK560, DK2708, DK721, and DK1854 for the rice variety, it is determined as saeuri.

상기한 본 발명의 벼 품종 식별용 마커 세트 2종, 3종, 4종 또는 5종 이상을 동시에 사용한 실시간 PCR 방법에 의해, 기존의 벼 품종을 식별하기 위해 각 마커별로 실시하여야 하는 PCR 과정을 현저하게 단축시킬 수 있을 뿐만 아니라, 그 결과를 실시간으로 신속하게 확인할 수 있다. 이러한 방법은 전기영동법으로는 분별하기 어려웠던 적은 농도의 DNA 절편의 유무나 100 bp 미만의 PCR 산물의 확인을 레이저 감광으로 구분할 수 있고, PCR 산물에 의한 오염에 대한 우려가 없으며, 결과가 분석되어 검사가 종료되기까지 모든 시험과정이 자동 시스템으로 운영되기 때문에 시험자의 실수, 검사의 오류 등이 발생할 확률이 낮으며, 데이터의 수집, 분석이 용이하고 소요되는 검사시간과 노동력을 최소화시킬 수 있다는 점에서 매우 유용하다.By the real-time PCR method using two, three, four or five or more of the above-described marker set for identifying the rice variety of the present invention, the PCR process to be performed for each marker to distinguish the existing rice variety is remarkable. Not only can it be shortened, but the result can be quickly confirmed in real time. This method can be distinguished by laser sensitization of the presence of small DNA fragments and identification of PCR products of less than 100 bp that were difficult to distinguish by electrophoresis, and there is no concern about contamination by PCR products. All test procedures are operated as an automatic system until the end of the test period. Therefore, it is unlikely that a mistake of a tester or an error of a test will occur, and it is easy to collect and analyze data, and minimize test time and labor required. Very useful.

하기 실시예를 들어 본 발명을 상세히 설명한다. 하기 실시예들은 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 보호 범위를 한정하는 것은 아니다.
The present invention is described in detail with reference to the following examples. The following examples are merely to illustrate the invention, but not to limit the protection scope of the invention.

실시예Example 1: 벼 품종 식별용  1: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 남평벼Nampyeong Rice 품종 식별 Breed Identification

1-1. 주형 DNA 추출1-1. Template DNA extraction

특허 출원 제2005-69858호의 방법에 따라, 시료 벼로부터 DNA를 추출하였다. 간략하게는, 식물에서 DNA를 추출할 때 일반적으로 사용되는 CTAB 방법을 변형하여 본 발명에 사용하였다. According to the method of patent application 2005-69858, DNA was extracted from the sample rice. Briefly, the CTAB method which is generally used when extracting DNA from a plant was modified and used in the present invention.

시료의 오염을 방지하기 위해, 기름종이에 올려놓고 남평벼 쌀 시료를 망치를 이용하여 아주 작은 조각으로 분쇄한다. 분쇄한 시료(약 30 ㎎)를 1.5 ㎖ 튜브에 넣고, CTBA 용액 500 ㎕를 첨가하여 잘 섞은 후, 65 ℃ 항온 수조에 30분간 담가 둔다. CTAB 용액의 조성은 다음과 같다: DNA 추출 완충액(Sorbitol 63.75 g, Tris-base 12.1 g, EDTA-Na2 1.68 g/1ℓ)와 핵 융해 완충액(CTAB 20 g, 1M Tris(pH 8.0) 200 ㎖, 0.25M EDTA 200 ㎖, 5M NaCl 400 ㎖/1ℓ)를 1:1로 섞고, 0.2 부피 10％ 사르코실, 0.2 부피 식염수, 1％ 2-머르캅토에탄올을 65 ℃ 항온 수조에서 혼합한다. 14,240 xg(15,000rpm)에서 10분 동안 원심분리한 후, 상등액에 3.8 g/ℓ 소디움 바이설파이트 1 부피와 페놀: 클로로포름: 이소아밀알콜(25:24:1) 1 부피를 섞어서 상온에서 5분 동안 방치한 후, 14,240 xg에서 5분 동안 원심분리 한다. 상등액을 1.5 ㎖ 튜브로 옮기고 클로로포름: 이소아밀알콜(24:1) 1 부피를 섞어서 상온에서 5분 동안 회전시켜 섞어준다. 14,240 xg에서 5분 동안 원심분리를 하여, 상등액을 1.5 ㎖ 튜브로 옮긴다. 상기의 절차를 경계면이 투명해질 때까지 반복한다. 동량의 이소프로판올을 넣고 5분 동안 잘 섞어주고, -20 ℃에 20분간 넣어두었다가 4 ℃에서 15분 동안 원심분리를 실시한다. 상등액을 버리고 DNA 펠렛을 70％ 에탄올 200 ㎕를 넣어서 4 ℃에서 5분 동안 원심분리를 실시한다. 상등액을 버리고 남은 에탄올을 바람이나 진공 건조기로 건조시킨다. 여기에 멸균 증류수 65㎕와 RNase A(1㎎/ ㎖) 15 ㎕를 넣어 37 ℃ 수조에 15분 동안 넣어둔다. To prevent contamination of the sample, place it on oil paper and grind the Nampyeong rice sample into a very small piece with a hammer. The ground sample (about 30 mg) is put in a 1.5 ml tube, 500 µl of CTBA solution is added, mixed well, and soaked for 30 minutes in a 65 ° C constant temperature water bath. The composition of the CTAB solution is as follows: DNA extraction buffer (Sorbitol 63.75 g, Tris-base 12.1 g, EDTA-Na2 1.68 g / 1 L) and nuclear fusion buffer (CTAB 20 g, 1M Tris (pH 8.0) 200 ml, 0.25 200 ml of M EDTA, 400 ml / 1 L of 5M NaCl) is mixed 1: 1, and 0.2 volume 10% sarcosyl, 0.2 volume saline, 1% 2-mercaptoethanol is mixed in a 65 DEG C constant temperature water bath. After centrifugation at 14,240 xg (15,000 rpm) for 10 minutes, the supernatant is mixed with 1 volume of 3.8 g / L sodium bisulfite and 1 volume of phenol: chloroform: isoamyl alcohol (25: 24: 1) at room temperature for 5 minutes. For 5 minutes at 14,240 xg. Transfer the supernatant to a 1.5 ml tube, mix 1 volume of chloroform: isoamyl alcohol (24: 1) and spin for 5 minutes at room temperature. Centrifuge at 14,240 × g for 5 minutes and transfer the supernatant to a 1.5 ml tube. Repeat the above procedure until the interface becomes transparent. Add the same amount of isopropanol and mix well for 5 minutes, put in 20 minutes at -20 ℃ and centrifuge for 15 minutes at 4 ℃. Discard the supernatant and centrifuge for 5 min at 4 ° C with 200 μl of 70% ethanol DNA pellet. Discard the supernatant and dry the remaining ethanol with air or vacuum dryer. Add 65 μl of sterile distilled water and 15 μl of RNase A (1 mg / ml) and place in a 37 ° C. water bath for 15 minutes.

1-2. 실시간 PCR 반응1-2. Real time PCR reaction

2x Master mix 12.5 ㎕, 10-20 ng 주형 DNA, 벼 품종 식별용 마커 세트 4 ㎕, 최종적으로 ddH2O를 포함하여 총 25 ㎕ 부피로 반응액을 혼합한다. 프라이머와 프로브의 적정 농도는 각각 900 nM 과 300 nM이다. 이때 벼 품족 식별용 마커세트는 (1) DK2401(FAM), DK50(VIC), DK2171(NED), DK2708(Cy5); (2) DK17-1(FAM), DK1412(VIC), DK721(NED), DK1854(Cy5); 및 (3) DK560(FAM), DK2394(VIC), DK63(NED), DK6(Cy5)의 조합을 사용하여 3번의 4-플렉스 실시간 PCR을 수행하였다.Mix the reaction solution in a total volume of 25 μl, including 12.5 μl 2x Master mix, 10 μl template DNA, 4 μl of rice varietal marker set, and finally ddH 2 O. Proper concentrations of primers and probes are 900 nM and 300 nM, respectively. At this time, a set of markers for identifying the rice varieties (1) DK2401 (FAM), DK50 (VIC), DK2171 (NED), DK2708 (Cy5); (2) DK17-1 (FAM), DK1412 (VIC), DK721 (NED), DK1854 (Cy5); And (3) three 4-plex real-time PCRs were performed using a combination of DK560 (FAM), DK2394 (VIC), DK63 (NED), and DK6 (Cy5).

이 반응액을 95 ℃에서 10분간 변성시킨 후, 95 ℃에서 15초, 60 ℃에서 1 분의 과정을 40회 반복하여 실시간 PCR을 수행한다. 실시간 PCR 기기는 ABI 7500 Real Time PCR을 사용한다. The reaction solution was denatured at 95 ° C. for 10 minutes, followed by 40 seconds of 15 seconds at 95 ° C. and 1 minute at 60 ° C. to perform real-time PCR. The real time PCR instrument uses ABI 7500 Real Time PCR.

1-3. 실시간 PCR을 이용한 PCR 산물의 분석1-3. Analysis of PCR Products Using Real-Time PCR

본 발명은 AB 사의 Real-time PCR 기기 7900, 7500, 7300, Stratagene 사의 Mx3000p, 그리고 BioRad 사의 Chromo 4 기기에 적용할 수 있다. PCR이 종료되면 기기의 레이저가 증폭된 PCR 산물의 프로브에 표지된 형광물질을 감지하여 도 1과 같은 피크로 구현된다. 즉, 전기영동과정없이도 기기에 내장된 프로그램을 실행시켜 자동적으로 결과를 분석할 수 있다.The present invention can be applied to AB Real-time PCR instruments 7900, 7500, 7300, Stratagene Mx3000p, and BioRad Chromo 4 instruments. When the PCR is terminated, the laser of the device detects the fluorescent material labeled on the probe of the amplified PCR product is implemented as a peak as shown in FIG. In other words, the results can be analyzed automatically by running the program embedded in the device without the electrophoresis process.

1-4. 최종 판정1-4. Final judgment

도 1은 남평벼로부터 추출한 DNA를 주형으로 실시간 PCR을 실시한 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of real-time PCR with a template extracted from Nampyeong rice.

도 1을 참조하면, 벼 품종 식별용 마커세트 DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 남평벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
Referring to FIG. 1, it was confirmed that the sample rice was correctly determined to be Nampyeong rice by specifically amplifying the rice seed set markers DK2401, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854.

실시예Example 2: 벼 품종 식별용  2: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 대안벼 품종 식별 Alternative Rice Variety Identification Using Sets

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 대안벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 2에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using alternative rice as a sample, and the results are shown in FIG. 2.

도 2의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 대안벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 2, DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as alternative rice. It was.

실시예Example 3: 벼 품종 식별용  3: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 동안벼Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 동안벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 3에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using the rice paddy as a sample, and the results are shown in FIG. 3.

도 3의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 동안벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 3, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined as rice.

실시예Example 4: 벼 품종 식별용  4: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 동진  Dongjin using sets 1호벼No. 1 rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 동진 1호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 4에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Dongjin No. 1 rice as a sample, and the results are shown in FIG. 4.

도 4의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 동진 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 4, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, and DK721 for rice variety identification to confirm that the sample rice was correctly determined to be Dongjin No. 1 rice. It was.

실시예Example 5: 벼 품종 식별용  5: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 상미벼 품종 식별 Identification of Rice Varieties Using Rice Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 상미벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 5에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Sangmi rice as a sample, and the results are shown in FIG. 5.

도 5의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 상미벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 5, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be rice.

실시예Example 6: 벼 품종 식별용  6: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 새계화벼 품종 식별 Identification of Saengyehwa Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 새계화벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 6에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Saegyehwa as a sample, the results are shown in FIG.

도 6의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK560 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 새계화벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 6, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK560 and DK721 for identifying the rice variety, and it was confirmed that the sample rice was correctly determined to be saehwa-si.

실시예Example 7: 벼 품종 식별용  7: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 새추청벼Sachuchu rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 새추청벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 7에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Saechu Cheongbap as a sample, and the results are shown in FIG. 7.

도 7의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 새추청벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 7, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK17-1, DK721, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as Sachuchu rice.

실시예Example 8: 벼 품종 식별용  8: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 수라벼Sura rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 수라벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 8에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Sura rice as a sample, and the results are shown in FIG. 8.

도 8의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK560 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 수라벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 8, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK560, and DK1854 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be rice rapeseed.

실시예Example 9: 벼 품종 식별용  9: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 신동진벼Shindongjin Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 신동진벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 9에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Shindong Jinpyeon as a sample, and the results are shown in FIG. 9.

도 9의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63, DK560 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 신동진벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 9, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK63, DK560, and DK721 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be Shindongjinp.

실시예Example 10: 벼 품종 식별용  10: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 오대벼 품종 식별 Identification of the Five Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 오대벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 10에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using five rice as a sample, and the results are shown in FIG.

도 10의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 오대벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 10, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK560, DK2708, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as five rice.

실시예Example 11: 벼 품종 식별용  11: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 일미벼Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 일미벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 11에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using ilmi rice as a sample, and the results are shown in FIG. 11.

도 11의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2171, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 일미벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 11, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2171, DK721, and DK1854 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be one rice. It was.

실시예Example 12: 벼 품종 식별용  12: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 일품벼 품종 식별 Identification of A La Carte Rice Varieties Using Sets

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 일품벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 12에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a la carte rice as a sample, the results are shown in FIG.

도 12의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK63, DK560, DK2708 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 일품벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 12, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK63, DK560, DK2708, and DK6 for identifying the rice varieties, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be excellent rice.

실시예Example 13: 벼 품종 식별용  13: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 주남벼Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 주남벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 13에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Junambap as a sample, and the results are shown in FIG. 13.

도 13의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 주남벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 13, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly judged as main rice.

실시예Example 14: 벼 품종 식별용  14: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 중화벼Chinese rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 중화벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 14에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice paddy as a sample, the results are shown in FIG.

도 14의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK2401, DK17-1, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 중화벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 14, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK2401, DK17-1, DK560, DK2708, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined as neutralized rice.

실시예Example 15: 벼 품종 식별용  15: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 추청벼 품종 식별 Identification of Cheongpyeong Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 추청벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 15에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Chuchubap as a sample, and the results are shown in FIG. 15.

도 15의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 추청벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 15, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be cold rice.

실시예Example 16: 벼 품종 식별용  16: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 화봉벼Flower bud 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 화봉벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 16에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hwabongbap as a sample, and the results are shown in FIG. 16.

도 16의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 화봉벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 16, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be flower bud rice. It was.

실시예Example 17: 벼 품종 식별용  17: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 화성벼Hwaseong Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 화성벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 17에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hwaseong rice as a sample, and the results are shown in FIG. 17.

도 17의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK63, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 화성벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 17, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK63, DK560, DK721, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as hwaseong rice.

실시예Example 18: 벼 품종 식별용  18: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 화영벼Hwayoung Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 화영벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 18에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hwayoungbap as a sample, and the results are shown in FIG. 18.

도 18의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 화영벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 18, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, and DK721 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined as Hwayoung rice.

실시예Example 19: 벼 품종 식별용  19: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 동진벼 품종 식별 Identification of Dongjin Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 동진벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 19에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Dongjinbyeong as a sample, and the results are shown in FIG. 19.

도 19의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK560, DK2171 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 동진벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 19, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK560, DK2171 and DK721 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be dongjinbyeong.

실시예Example 20: 벼 품종 식별용  20: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 운두벼Muddy rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 운두벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 20에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using muddy rice as a sample, and the results are shown in FIG. 20.

도 20의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560, DK2708, DK721 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 운두벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 20, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK17-1, DK560, DK2708, DK721, and DK6 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be mungbean rice.

실시예Example 21: 벼 품종 식별용  21: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 태봉벼Taebong Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 태봉벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 21에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Taebong rice as a sample, and the results are shown in FIG. 21.

도 21의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 태봉벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 21, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK2401, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be taebong rice.

실시예Example 22: 벼 품종 식별용  22: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 문장벼Crest 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 문장벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 22에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice plant as a sample, and the results are shown in FIG. 22.

도 22의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK560, DK2171, DK2708 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 문장벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 22, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK560, DK2171, DK2708 and DK6 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be rice.

실시예Example 23: 벼 품종 식별용  23: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 고시히카리벼Koshihikari rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 고시히카리벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 23에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Koshihikari rice as a sample, and the results are shown in FIG. 23.

도 23의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 고시히카리벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 23, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be Koshihikari rice.

실시예Example 24: 벼 품종 식별용  24: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 히토메보레벼 품종 식별 Identification of Hitomebore Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 히토메보레벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 24에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hitomebolebium as a sample, and the results are shown in FIG. 24.

도 24의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 히토메보레벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 24, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708 and DK1854 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as Hitomebore rice. It was.

실시예Example 25: 벼 품종 식별용  25: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 대평벼Flat rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 대평벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using large flat rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 대평벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be flat rice. It was.

실시예Example 26: 벼 품종 식별용  26: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 만추벼Late rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 만추벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 26에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice paddy as a sample, and the results are shown in FIG. 26.

도 26의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK560, DK2171, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 만추벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 26, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK560, DK2171, DK721, and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be full rice.

실시예Example 27: 벼 품종 식별용  27: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 미향벼Unflavored rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 미향벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 27에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using unflavored rice as a sample, and the results are shown in FIG. 27.

도 27의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK721 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 미향벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 27, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK63, DK560, DK2708, DK721, and DK6 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined as unflavored rice. It was.

실시예Example 28: 벼 품종 식별용  28: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 서간벼Episodic 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 서간벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 28에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice paddy as a sample, and the results are shown in FIG. 28.

도 28의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK63 및 DK560에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 서간벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 28, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK63, and DK560 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be episodic rice.

실시예Example 29: 벼 품종 식별용  29: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 소백 Sobaek with the set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 소백벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 29에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using bovine rice as a sample, and the results are shown in FIG. 29.

도 29의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK560, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 소백벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 29, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK560, DK2708, DK1854, and DK6 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be small white rice.

실시예Example 30: 벼 품종 식별용  30: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 소비 Consumption with sets 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 소비벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 30에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using consumable rice as a sample, and the results are shown in FIG.

도 30의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK63 및 DK560에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 소비벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 30, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK1412, DK17-1, DK63 and DK560 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be consumed rice.

실시예Example 31: 벼 품종 식별용  31: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 영안벼Youngan Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 영안벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 31에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using a young rice as a sample, and the results are shown in FIG. 31.

도 31의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK2171, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 영안벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 31, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK2171, DK721, and DK1854 for the rice variety identification, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be young rice.

실시예Example 32: 벼 품종 식별용  32: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 운봉벼Yunbong Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 운봉벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 32에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Unbongpung as a sample, and the results are shown in FIG. 32.

도 32의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK560, DK2708, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 운봉벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 32, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK560, DK2708, DK721, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be Yunbong rice.

실시예Example 33: 벼 품종 식별용  33: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 적진주벼Red rice wine 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 적진주벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 33에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using red rice wine as a sample, and the results are shown in FIG. 33.

도 33의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK17-1, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 적진주벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 33, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK17-1, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined as red rice wine. .

실시예Example 34: 벼 품종 식별용  34: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 진부 Cliché using set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 진부벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 34에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Jinbu rice as a sample, and the results are shown in FIG. 34.

도 34의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK63, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 진부벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 34, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK63, DK560, DK2708, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be true rice.

실시예Example 35: 벼 품종 식별용  35: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 향남벼Hyangnam Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 향남벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 35에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using hyangnam rice as a sample, the results are shown in FIG.

도 35의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 동진 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 35, DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, DK2171, DK2708, DK721, DK1854, and DK6 for the rice variety identification, and the sample rice was Dongjin No. 1 rice. It was confirmed that it was determined correctly.

실시예Example 36: 벼 품종 식별용  36: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 향미  Flavor with set 1호벼No. 1 rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 향미 1호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 36에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using flavor No. 1 as a sample, and the results are shown in FIG. 36.

도 36의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2708에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 향미 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 36, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified by the marker set DK2708 for rice variety identification to confirm that the sample rice was correctly determined to be No. 1 rice.

실시예Example 37: 벼 품종 식별용  37: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 향미 2 Flavors using sets 2 호벼Hump 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 향미 2호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 37에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using flavor No. 2 as a sample, and the results are shown in FIG. 37.

도 37의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK1412, DK17-1, DK63, DK560 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 동진 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 37, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK1412, DK17-1, DK63, DK560, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be Dongjin No. 1 rice.

실시예Example 38: 벼 품종 식별용  38: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 호평벼Popular rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 호평벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 38에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hopyeong rice as a sample, and the results are shown in FIG. 38.

도 38의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK1412, DK17-1, DK63, DK560 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 호평벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 38, DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK1412, DK17-1, DK63, DK560 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be well-reputed rice.

실시예Example 39: 벼 품종 식별용  39: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 흑향벼Black rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 흑향벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 39에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using black sauerkraut as a sample, and the results are shown in FIG. 39.

도 39의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 흑향벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 39, DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK2401, DK1412, DK17-1, DK560, DK2708, DK1854, and DK6 for rice variety identification, and the sample rice was correctly judged as black vinegar rice. It was confirmed.

실시예Example 40: 벼 품종 식별용  40: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 흑진주 Black pearl using set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 흑진주벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 40에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using black pearl rice as a sample, and the results are shown in FIG. 40.

도 40의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK17-1, DK63, DK560, DK2171, DK2708 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 흑진주벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 40, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK17-1, DK63, DK560, DK2171, DK2708 and DK6 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly judged as black pearl rice. It was.

실시예Example 41: 벼 품종 식별용  41: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 간척 Reclamation with Sets 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 간척벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 41에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using reclaimed rice as a sample, and the results are shown in FIG. 41.

도 41의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 간척벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 41, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK1412, DK560, DK721, DK1854, and DK6 for rice variety identification, and confirmed that the sample rice was correctly determined as reclaimed rice.

실시예Example 42: 벼 품종 식별용  42: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 고품벼 품종 식별 Identification of High Quality Rice Varieties Using Sets

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 고품벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 42에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using high quality rice as a sample, and the results are shown in FIG. 42.

도 42의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK17-1, DK63, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 고품벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 42, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK17-1, DK63, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly judged as high quality rice.

실시예Example 43: 벼 품종 식별용  43: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 금오벼 품종 식별 Identification of Rice Varieties Using Rice Sets

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 금오벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 43에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using gold rice as a sample, and the results are shown in FIG. 43.

도 43의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 금오벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 43, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be gold rice.

실시예Example 44: 벼 품종 식별용  44: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 눈보라 Snowstorm with sets 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 눈보라벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 44에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using blizzard as a sample, and the results are shown in FIG. 44.

도 44의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2171, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 눈보라벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 44, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK2401, DK560, DK2171, DK2708, and DK1854 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be blizzard.

실시예Example 45: 벼 품종 식별용  45: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 다미벼Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 다미벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 453에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using dama rice as a sample, and the results are shown in FIG. 453.

도 45의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK63 및 DK560에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 다미벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 45, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK63, and DK560 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined as dama rice.

실시예Example 46: 벼 품종 식별용  46: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 삼광벼Samgwang Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 삼광벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 46에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Samgwang rice as a sample, and the results are shown in FIG. 46.

도 46의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 K50, DK2401, DK17-1, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 삼광벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 46, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets K50, DK2401, DK17-1, DK2708, DK1854, and DK6 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be three-light rice.

실시예Example 47: 벼 품종 식별용  47: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 삼덕벼Samdeok Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 삼덕벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 471에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using Samdeok rice as a sample, and the results are shown in FIG. 471.

도 47의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 삼덕벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 47, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly judged as Samduk.

실시예Example 48: 벼 품종 식별용  48: For identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 삼백벼Three hundred rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 삼백벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 48에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using three hundred rice as a sample, the results are shown in FIG.

도 48의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK560, DK1708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 삼백벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 48, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK560, DK1708, DK1854 and DK6 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be three hundred rice.

실시예Example 49: 벼 품종 식별용  49: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 상옥벼Jade rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 상옥벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 49에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using sanggobap as a sample, the results are shown in FIG.

도 49의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 상옥벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 49, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK17-1, DK560, DK721, and DK6 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be jade rice.

실시예Example 50: 벼 품종 식별용  50: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 상주벼Sangju Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 상주벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Sangjub as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK17-1, DK2708, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 상주벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK17-1, DK2708, DK1854 and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be permanent rice.

실시예Example 51: 벼 품종 식별용  51: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 새상주 New resident using set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 새상주벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Sasangjub as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK2401, DK560, DK2708, DK1854 및 DK6 에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 새상주벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK2401, DK560, DK2708, DK1854, and DK6 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly judged as Sasangju.

실시예Example 52: 벼 품종 식별용  52: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 오대 1호벼 품종 식별 Identification of Five No.1 Rice Varieties Using a Set

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 오대 1호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using five No. 1 rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK63, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 오대 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK63, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be 5 rices.

실시예Example 53: 벼 품종 식별용  53: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 온누리벼Onnuri rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 온누리벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 21에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Onnuribap as a sample, and the results are shown in FIG. 21.

도 21의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1, DK560 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 온누리벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 21, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK17-1, DK560, and DK1854 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be onnuri rice.

실시예Example 54: 벼 품종 식별용  54: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 운광 Meteor with set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 운광벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 22에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a meteorite rice as a sample, and the results are shown in FIG. 22.

도 22의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK1854 및 DK60에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 운광벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 22, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK1412, DK17-1, DK560, DK1854, and DK60 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be meteorite rice.

실시예Example 55: 벼 품종 식별용  55: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 평안벼Peace 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 평안벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 23에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Pyeongan Rice as a sample, and the results are shown in FIG. 23.

도 23의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK2401, DK17-1 및 DK560에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 평안벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 23, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK2401, DK17-1, and DK560 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly determined to be flat rice.

실시예Example 56: 벼 품종 식별용  56: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 풍미  Flavor using set 1호벼No. 1 rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 풍미 1호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 24에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using flavor 1 rice as a sample, and the results are shown in FIG. 24.

도 24의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK560, DK2171, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 풍미 1호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 24, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK560, DK2171, DK721, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be flavor 1 rice.

실시예Example 57: 벼 품종 식별용  57: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 풍미벼Flavor 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 풍미벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 21에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using flavor rice as a sample, and the results are shown in FIG. 21.

도 21의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 풍미벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 21, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, DK721, and DK1854 for identifying the rice varieties, confirming that the sample rice was correctly judged as a flavor rice.

실시예Example 58: 벼 품종 식별용  58: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 한마음벼Unison rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 한마음벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 22에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hanmam rice as a sample, and the results are shown in FIG.

도 22의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560 및 DK2708에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 한마음벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 22, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, and DK2708 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined to be a unified rice.

실시예Example 59: 벼 품종 식별용  59: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 호품 Good article using set 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 호품벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 23에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice product as a sample, and the results are shown in FIG. 23.

도 23의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1 및 DK560에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 호품벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 23, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1 and DK560 for identifying the rice variety, confirming that the sample rice was correctly determined to be good rice.

실시예Example 60: 벼 품종 식별용  60: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 화랑벼Hwarang Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 화랑벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 24에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using Hwarang-Rip as a sample, and the results are shown in FIG. 24.

도 24의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK560, DK721, DK1854 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 화랑벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 24, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK560, DK721, DK1854, and DK6 for rice variety identification, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be a rice plant.

실시예Example 61: 벼 품종 식별용  61: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 황금누리벼Golden rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 황금누리벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using golden rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK560, DK2708 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 황금누리벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK560, DK2708 and DK1854 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be golden rice.

실시예Example 62: 벼 품종 식별용  62: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 청호벼Cheongho Rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 청호벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Chungho rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK1412, DK560 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 청호벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK1412, DK560 and DK6 for identifying the rice variety, and confirmed that the sample rice was correctly determined to be green rice.

실시예Example 63: 벼 품종 식별용  63: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 원황벼Yellow rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 원황벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using raw sulfur rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2401, DK1412, DK560, DK721 및 DK6에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 원황벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2401, DK1412, DK560, DK721, and DK6 for rice variety identification to confirm that the sample rice was correctly determined to be yellow rice.

실시예Example 64: 벼 품종 식별용  64: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한 말그미 Mummies using sets 벼rice plant 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 말그미벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using the rice cake as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708 및 DK721에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 말그미벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, DK2708 and DK721 for identifying the rice varieties to confirm that the sample rice was correctly determined to be rice.

실시예Example 65: 벼 품종 식별용  65: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 오래벼Long 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 오래벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using a rice paddy as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK63, DK560 및 DK2708에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 오래벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK63, DK560, and DK2708 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly judged as long rice.

실시예Example 66: 벼 품종 식별용  66: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 칠보벼Cloisonne 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 칠보벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 25에 나타내었다.According to the method of Example 1, real-time PCR was performed using Chilbo rice as a sample, and the results are shown in FIG. 25.

도 25의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK2394, DK17-1, DK560 및 DK2708에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 칠보벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.
According to the results of FIG. 25, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK2394, DK17-1, DK560, and DK2708 for rice variety identification, to confirm that the sample rice was correctly determined to be chilbo rice.

실시예Example 67: 벼 품종 식별용  67: for identifying rice varieties 복수개의Multiple 마커Marker 세트를 이용한  Set 새누리벼Saenuri rice 품종 식별 Breed Identification

상기 실시예 1의 방법에 따라, 시료로 새누리벼를 사용하여 실시간 PCR을 수행하여, 그 결과는 도 2에 나타내었다.In accordance with the method of Example 1, real-time PCR was performed using Saenuribap as a sample, and the results are shown in FIG. 2.

도 2의 결과에 따르면, 시료 벼로부터 추출한 DNA는 벼 품종 식별용 마커 세트 DK50, DK17-1, DK560, DK2708, DK721 및 DK1854에서 특이적으로 증폭되어, 시료 벼가 새누리벼로 바르게 판정되었음을 확인하였다.According to the results of FIG. 2, the DNA extracted from the sample rice was specifically amplified in the marker sets DK50, DK17-1, DK560, DK2708, DK721, and DK1854 for rice variety identification, confirming that the sample rice was correctly determined as saeuri rice.

<110> KogeneBiotech Co., LTD <120> MULTIPLEX REAL TIME PCR METHOD FOR DISCRIMINATION OF RICE CULTIVAR <130> DP100322 <160> 36 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK17-1 forward primer <400> 1 atccccataa ttcttgacaa 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK17-1 reverse primer <400> 2 ggaatccgtc ttgatttgtg 20 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK17-1 probe <400> 3 tgtcgcggag aacata 16 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2708 forward primer <400> 4 gataatggaa tagtcatccc ggcctttgct 30 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2708 reverse primer <400> 5 attttttcta tcatttctga actacactcg 30 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2708 probe <400> 6 attacaattt agcactcta 19 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK50 forward primer <400> 7 cgcgaactaa acaagcccga 20 <210> 8 <211> 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Sequence <220> <223> DK63 probe <400> 12 tgtatggctt ttgtacc 17 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK560 forward primer <400> 13 gccacgtctt ctttaaagat t 21 <210> 14 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK560 reverse primer <400> 14 attaggctgc atacattagt catcc 25 <210> 15 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK560 probe <400> 15 tagaatcccg accccct 17 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1412 forward primer <400> 16 tattgggccg aatctgattc gt 22 <210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1412 reverse primer <400> 17 tctccgacag tttagggctt aggg 24 <210> 18 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1412 probe <400> 18 tcgcagtacc ggatatct 18 <210> 19 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2171 forward primer <400> 19 acacaaaata atgtccatat ta 22 <210> 20 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2171 reverse primer <400> 20 aactagcaaa ttgcctatgc gttg 24 <210> 21 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2171 probe <400> 21 ctttacaagt atgtagtgaa gga 23 <210> 22 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2394 forward primer <400> 22 tgatatcttg gattagaagt taac 24 <210> 23 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2394 reverse primer <400> 23 ctgatacaga aactttccaa ccattgg 27 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2394 probe <400> 24 gaaccacaac attttgccgc 20 <210> 25 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2401 forward primer <400> 25 cacatcatct tcaatttcaa ccaaaat 27 <210> 26 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2401 reverse primer <400> 26 tatacaccat tgatttctct aaatgg 26 <210> 27 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK2401 probe <400> 27 taaactttgc gctgaac 17 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1854 forward primer <400> 28 agcatggtcc cagacaaatg 20 <210> 29 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1854 reverse primer <400> 29 tggatgattt ctgttagtgg ttcaag 26 <210> 30 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK1854 probe <400> 30 ttcttgatga taaattgctc tca 23 <210> 31 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK6 forward primer <400> 31 aactttagtg cagggttttc atcac 25 <210> 32 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK6 reverse primer <400> 32 gaactacaag ctcaagtcaa gccc 24 <210> 33 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK6 probe <400> 33 agcctctagg tattattg 18 <210> 34 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK721 forward primer <400> 34 acgggttttc tttttcattt cg 22 <210> 35 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK721 reverse primer <400> 35 tagggagcac ctactataga aggtatg 27 <210> 36 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DK721 probe <400> 36 tttgcgatct ttc 13

Claims (8)

(a) 내지 (i)로 이루어진 군으로부터 선택된 벼 품종 식별용 마커 세트 2종 이상을 포함하는, 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물:
(a) 서열번호 1을 포함하는 프라이머, 서열번호 2를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 3을 포함하는 프로브;
(b) 서열번호 4를 포함하는 프라이머, 서열번호 5를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 6을 포함하는 프로브;
(c) 서열번호 7을 포함하는 프라이머, 서열번호 8을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 9를 포함하는 프로브;
(d) 서열번호 10을 포함하는 프라이머, 서열번호 11을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 12를 포함하는 프로브;
(e) 서열번호 13을 포함하는 프라이머, 서열번호 14를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 15를 포함하는 프로브;
(f) 서열번호 16을 포함하는 프라이머, 서열번호 17을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 18을 포함하는 프로브;
(g) 서열번호 19를 포함하는 프라이머, 서열번호 20을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 21을 포함하는 프로브;
(h) 서열번호 22를 포함하는 프라이머, 서열번호 23을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 24를 포함하는 프로브;
(i) 서열번호 25를 포함하는 프라이머, 서열번호 26을 포함하는 프라이머, 및 서열번호 27을 포함하는 프로브.
(j) 서열번호 28을 포함하는 프라이머, 서열번호 29를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 30을 포함하는 프로브.
(k) 서열번호 31을 포함하는 프라이머, 서열번호 32를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 33을 포함하는 프로브.
(l) 서열번호 34를 포함하는 프라이머, 서열번호 35를 포함하는 프라이머, 및 서열번호 36을 포함하는 프로브.A marker combination composition for identifying a rice variety, comprising two or more marker sets for identifying a rice variety selected from the group consisting of (a) to (i):
(a) a primer comprising SEQ ID NO: 1, a primer comprising SEQ ID NO: 2, and a probe comprising SEQ ID NO: 3;
(b) a primer comprising SEQ ID NO: 4, a primer comprising SEQ ID NO: 5, and a probe comprising SEQ ID NO: 6;
(c) a primer comprising SEQ ID NO: 7, a primer comprising SEQ ID NO: 8, and a probe comprising SEQ ID NO: 9;
(d) a primer comprising SEQ ID NO: 10, a primer comprising SEQ ID NO: 11, and a probe comprising SEQ ID NO: 12;
(e) a primer comprising SEQ ID NO: 13, a primer comprising SEQ ID NO: 14, and a probe comprising SEQ ID NO: 15;
(f) a primer comprising SEQ ID NO: 16, a primer comprising SEQ ID NO: 17, and a probe comprising SEQ ID NO: 18;
(g) a primer comprising SEQ ID NO: 19, a primer comprising SEQ ID NO: 20, and a probe comprising SEQ ID NO: 21;
(h) a primer comprising SEQ ID NO: 22, a primer comprising SEQ ID NO: 23, and a probe comprising SEQ ID NO: 24;
(i) a primer comprising SEQ ID NO: 25, a primer comprising SEQ ID NO: 26, and a probe comprising SEQ ID NO: 27.
(j) a primer comprising SEQ ID NO: 28, a primer comprising SEQ ID NO: 29, and a probe comprising SEQ ID NO: 30.
(k) a primer comprising SEQ ID NO: 31, a primer comprising SEQ ID NO: 32, and a probe comprising SEQ ID NO: 33.
(l) a primer comprising SEQ ID NO: 34, a primer comprising SEQ ID NO: 35, and a probe comprising SEQ ID NO: 36. 제1항에 있어서, 벼 품종 식별용 마커 세트 3종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.According to claim 1, Marker combination composition comprising three or more marker sets for identifying the rice variety. 제1항에 있어서, 상기 마커 조합 조성물은 프로브 종류에 따라 별개의 검출가능한 수단으로 표지된 프로브를 포함하며, 상기 검출가능한 수단은 특이적인 PCR 산물이 증폭된 경우에 검출되는 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.The combination of markers according to claim 1, wherein the marker combination composition comprises a probe labeled with a separate detectable means according to the type of probe, and the detectable means is detected when a specific PCR product is amplified. Composition. 제3항에 있어서, 상기 검출가능한 수단이 형광물질인 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.4. A marker combination composition according to claim 3, wherein said detectable means is a fluorescent material. 제3항에 있어서, 상기 프로브는 5' 말단이 FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 및 NED로 이루어진 군으로부터 선택된 형광물질로 표지되며, 프로브 3' 말단이 MGBNFQ(molecular grove binding non-fluorescence quencher)로 표지된 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.According to claim 3, The probe is labeled with a fluorescent material selected from the group consisting of FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 and NED at the 5 'end, Marker combination composition, characterized in that the probe 3 'end is labeled with a molecular grove binding non-fluorescence quencher (MGGBFF). 제 1항에 있어서, 상기 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물은
프로브의 5' 말단이 FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 및 NED로 이루어진 군으로부터 선택된 1종의 형광물질로 표지되며 3' 말단이 MGBNFQ(molecular grove binding non-fluorescence quencher)로 표지된, (b), (c) (g) 및 (i)로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종;
프로브의 5' 말단이 FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 및 NED로 이루어진 군으로부터 선택된 1종의 형광물질로 표지되며 3' 말단이 MGBNFQ(molecular grove binding non-fluorescence quencher)로 표지된, (a), (f) (j) 및 (l)로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종; 및
프로브의 5' 말단이 FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 및 NED로 이루어진 군으로부터 선택된 1종의 형광물질로 표지되며 3' 말단이 MGBNFQ(molecular grove binding non-fluorescence quencher)로 표지된, (d), (e) (h) 및 (k)로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 세트 1종을 포함하며,
상기 선택된 마커 세트에 포함된 프로브는 종류에 따라 각각 별개의 형광물질로 표지된 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.The method of claim 1, wherein the marker combination composition for identifying rice varieties is
The 5 'end of the probe is labeled with one fluorescent material selected from the group consisting of FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 and NED and the 3' end is MGBNFQ one marker set selected from the group consisting of (b), (c) (g) and (i), labeled with a molecular grove binding non-fluorescence quencher;
The 5 'end of the probe is labeled with one fluorescent material selected from the group consisting of FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 and NED and the 3' end is MGBNFQ one marker set selected from the group consisting of (a), (f) (j) and (l), labeled with a molecular grove binding non-fluorescence quencher; And
The 5 'end of the probe is labeled with one fluorescent material selected from the group consisting of FAM, VIC, TET, JOE, HEX, TAMRA, CY3, CY5, ROX, RED610, TEXAS RED, RED670 and NED and the 3' end is MGBNFQ a marker set selected from the group consisting of (d), (e) (h) and (k), labeled with a molecular grove binding non-fluorescence quencher,
Probe included in the selected marker set is a marker combination composition, characterized in that each labeled with a separate fluorescent material. 제1항에 있어서, 상기 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물은 남평벼, 대안벼, 동안벼, 동진 1호 벼, 상미벼, 새계화벼, 새추청벼, 수라벼, 신동진벼, 오대벼, 일미벼, 일품벼, 주남벼, 중화벼, 추청벼, 화봉벼, 화성벼, 화영벼, 동진벼, 운두벼, 태봉벼, 문장벼, 고시히카리, 히토메보레, 대평벼, 만주벼, 미향벼, 서간벼, 소백벼, 소비벼, 영안벼, 운봉벼, 적진주벼, 진부벼, 향남벼, 향미 1호 벼, 향미 2호 벼, 호평벼, 흑향벼, 간척벼, 고품벼, 금오벼, 눈보라벼, 다미벼, 삼광벼, 삼덕벼, 삼백벼, 상옥벼, 상주벼, 새상주벼, 오대 1호 벼, 온누리벼, 운광벼, 평안벼, 풍미 1호 벼, 풍미벼, 한마음벼, 호품벼, 화랑벼, 황금누리벼, 청호벼, 원황벼, 말그미벼, 오래벼, 칠보벼 및 새누리벼로 이루어진 군으로부터 선택된 벼 품종을 식별하는데 사용되는 것을 특징으로 하는 마커 조합 조성물.The method of claim 1, wherein the marker combination composition for identifying the rice varieties Nampyeong rice, alternative rice, rice plant, Dongjin No. 1 rice, Sangmi rice, Saegyehwa rice, Sachuchu rice, Sura rice, Sindongjin rice, Odae rice, Ilmi rice, one rice , Chunambyeon, Chinese rice, Chuchung rice, Huabong rice, Hwaseong rice, Hwayoung rice, Dongjin rice, Unduk rice, Taebong rice, crest rice, Koshihikari, Hitomebore, Great flat rice, Manju rice, Unscented rice, Seoganb rice, Sobaek rice, Consumption rice, Yeongan Rice, Unbong Rice, Red Jinju Rice, Jinbu Rice, Hyangnam Rice, Flavor No. 1 Rice, Flavor No. 2 Rice, Hopyeong Rice, Heukhyang Rice, Reclaimed Rice, Fine Rice, Geummyeon Rice, Blizzard Rice, Dami Rice, Samgwang Rice, Samdeok rice, three hundred rice, Sangok rice, Sangju rice, Sasangju rice, Odae No. 1 rice, Onnuri rice, Ungwang rice, Pyeongan rice, Flavor No. 1 rice, Flavor rice, Haneum rice, Houmb rice, Hwarang rice, Golden rice, Characterized in that it is used to identify rice varieties selected from the group consisting of Cheongho rice, yellow rice, horse rice, long rice, chilbo rice, and saeuri rice. Marker combination composition. 제 1항 내지 7항 중 어느 한 항에 따른 벼 품종을 식별하기 위한 마커 조합 조성물을 이용하여 벼로부터 추출한 DNA를 주형으로 실시간 PCR을 실시하는 단계;
상기 실시간 PCR 결과로 구현된 형광물질 피크를 감지하여, 각 벼 품종 식별용 마커 세트에 의한 PCR 증폭 여부를 확인하는 단계; 및
상기 PCR 증폭 여부에 따라 벼의 품종을 식별하는 단계;
를 포함하는, 복수개의 벼 품종용 식별 마커 세트를 이용한 벼 품종 식별 방법.
Performing real-time PCR with a template extracted from rice using a marker combination composition for identifying rice varieties according to any one of claims 1 to 7;
Detecting amplification of the fluorescence material implemented by the real-time PCR result and confirming PCR amplification by a set of markers for identifying each rice variety; And
Identifying a variety of rice according to whether the PCR is amplified;
Rice variety identification method using a plurality of rice varieties identification marker set, comprising a.
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