KR20110124168A - Hpox compound, manufacturing method thereof, pharmaceutical composition for preventing or treatment of inflammatory disease, drug delivery vector and imaging contrast agents comprising hpox compound as an effective component - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: An HPOX(HBA-incorporatred copolyoxalate) compound is provided to ensure anti-inflammation and antioxidant effects by effectively reducing the concentration of NO and internal hydrogen peroxides through a target specific method. CONSTITUTION: An HPOX(HBA-incorporatred copolyoxalate) compound includes oxalyl chloride in which at least one monomer of 4-hydroxybenzly alcohol and vanillyl alcohol is integrated to a polymer skeleton. Nanoparticles are produced by performing polycondensation of oxalate, 1,4-cyclohexanedimethanol, and one or more monomers selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanillyl alcohol.

Description

ＨＰＯＸ 화합물과 그 제조 방법， 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 약물전달체 및 영상조영제{HPOX COMPOUND, MANUFACTURING METHOD THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATMENT OF INFLAMMATORY DISEASE, DRUG DELIVERY VECTOR AND IMAGING CONTRAST AGENTS COMPRISING HPOX COMPOUND AS AN EFFECTIVE COMPONENT}HPPO COMPOUND AND MANUFACTURING METHOD THEREOF, AND A PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND IMAGE CONTAINER FOR PROTECTION OR TREATMENT OF INflammatory Disease Containing It As An Active Ingredient AND IMAGING CONTRAST AGENTS COMPRISING HPOX COMPOUND AS AN EFFECTIVE COMPONENT}

본 발명은 HPOX(HBA-incorporatred copolyoxalate) 화합물과 그 제조 방법, 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환(inflammatory disease)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물과 약물전달체(drug delivery vector) 및 상기 화합물에 형광물질(fluorescent material)이 포접(inclusion)된 영상조영제(imaging contrast agent)에 관한 것이다.The present invention provides an HPBA (HBA-incorporatred copolyoxalate) compound, a method for preparing the same, a pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease containing the compound as an active ingredient, a drug delivery vector, and the compound. It relates to an imaging contrast agent in which a fluorescent material is included.

임상적으로 사용된 대다수의 약물은 짧은 혈액 순환 속도와 총체적인 대사율 가진 저분자 화합물이다. 약물의 투여에 있어, 이런 작은 분자 약물들은 악성 조직 모두로 빠르게 확산되고 몸 전체로 균등하게 분산된다. 결과적으로 상대적으로 적은 양의 약물만이 타겟 부위에 도달하고, 이에 따른 부작용도 발생한다. 이런 한계점을 극복하고 각각의 약물의 잠재력을 향상시키기 위해 약물 전달체의 개발을 위한 많은 노력이 있었다. 대부분의 약물 전달체는 다양한 구조와 물리화학적 특성을 가진 생체적합성과 생분해성에 기초한다. The majority of drugs used clinically are low molecular weight compounds with short blood circulation and overall metabolic rate. In the administration of the drug, these small molecule drugs spread rapidly throughout all malignant tissues and are evenly distributed throughout the body. As a result, only a relatively small amount of drug reaches the target site, resulting in side effects. Many efforts have been made to develop drug delivery vehicles to overcome these limitations and to improve the potential of each drug. Most drug carriers are based on biocompatibility and biodegradability with various structural and physicochemical properties.

일반적으로 고분자 약물 전달 시스템은 마이크로와 나노미립자 약물 전달 시스템으로서 또는 복합 고분자 약물로서 분류될 수 있다. 미립자 약물 전달 시스템은 물리적으로 약물을 혼합하게 하고 미셀과 고체 입자를 포함함으로써 환경으로부터 약물을 보호한다. 한편으로 복합 고분자 약물은 가교제(linker)를 통해 고분자 주사슬의 가지에 공유결합으로 첨부된 약물을 가지고 있다. 예로는 단백질, 다당류 또는 덴드리머(dendrimer)와 폴리하이드록시프로필 메타크릴아미드 (polyhydroxypropyl methacrylamide)와 같은 합성 고분자가 있다. 이런 접근은 약물의 안정성과 약동학적 특성의 큰 개선을 이루었다. 그러나 이렇게 적은 양의 약물을 함유한 고분자 약물 전달체는 응용에 있어 약점이 될 수도 있다.In general, polymeric drug delivery systems can be classified as micro and nanoparticulate drug delivery systems or as complex polymeric drugs. Particulate drug delivery systems physically mix the drug and protect the drug from the environment by including micelles and solid particles. On the other hand, the composite polymer drug has a drug covalently attached to the branch of the polymer main chain through a linker. Examples include proteins, polysaccharides or synthetic polymers such as dendrimers and polyhydroxypropyl methacrylamide. This approach has led to significant improvements in drug stability and pharmacokinetic properties. However, polymeric drug carriers containing such small amounts of drug may be a weak point in applications.

저분자 약물의 전달을 위한 새로운 접근 방법 중 하나로 저분자 약물자체를 고분자 주사슬에 결합하여 약물을 전달하는 방법이 있다. 이러한 약물전달체가 가지는 가장 좋은 기능은 고분자 자체가 통제된 약물 전달 시스템이란 것이다. 이것은 분해 산물 그 자체가 치료제이고, 고분자는 가수 분해성 불안정한 무수물과 주쇄(backbone) 내의 에스테르 결합이 완전히 분해되기 때문이다. One of the new approaches for the delivery of low molecular weight drugs is to combine the low molecular weight drug itself with the polymer main chain to deliver the drug. The best function of these drug carriers is that the polymer itself is a controlled drug delivery system. This is because the degradation product itself is a therapeutic agent, and the polymer is completely degradable of hydrolytic labile anhydrides and ester bonds in the backbone.

기존의 생분해성 고분자들은 여러 가지 문제점을 가지고 있다. 미국 식품의약청(FDA)의 승인을 받은 생체고분자인 PLGA(Polylactide-co-glycolide)와, 나노미립구와 미셀로 제조되어 약물전달체로 많은 연구가 이루어지고 있는 PCL(Polycaprolactone), Polyorthoester 및 Polyacetal 등은 높은 가격 및 분해 후에 염증을 유발하는 분해산물이 생성되거나 가수분해 속도가 느려 약물의 방출속도가 지연되는 문제점들을 가지고 있다. 이러한 고분자들은 또한 특정부위를 표적하거나 질병부위의 환경에 감응하는 능력이 없다.
Existing biodegradable polymers have various problems. PLGA (Polylactide-co-glycolide), a biopolymer approved by the US Food and Drug Administration, and PCL (Polycaprolactone), Polyorthoester, and Polyacetal, which are made of nanoparticles and micelles After the price and decomposition, there is a problem in that a degradation product that causes inflammation or a slow hydrolysis rate is delayed to release the drug. These polymers also lack the ability to target specific areas or to respond to the environment of diseased areas.

유리 산소 라디칼, 과산화수소(H2O2), 퍼옥시니트레이트(peroxinitrate), 오존과 같은 활성 산소종(Reactive oxygen species, ROS)은 세포 신호 전달에 중요한 역할을 하는 생물학적 메신지이지만, ROS의 농도 증가는 세포에 산화적 스트레스를 증가시켜 지질, 단백질 및 DNA 등의 세포구조에 손상을 준다. Reactive oxygen species (ROS), such as free oxygen radicals, hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), peroxynitrate, and ozone, are biological messages that play an important role in cell signal transduction, but the concentration of ROS The increase increases oxidative stress on the cells, damaging the cellular structure of lipids, proteins and DNA.

또한, 일산화질소(nitric oxide, NO)는 nitric oxide synthase(NOS)에 의하여 L-알라닌으로부터 합성되는데, 그 생물학적 중요성에도 불구하고 폐 등의 염증성 질환의 원인 물질로 알려져 있다.
In addition, nitric oxide (NO) is synthesized from L-alanine by nitric oxide synthase (NOS), and despite its biological significance, it is known as a causative agent of inflammatory diseases such as lung.

한편, p-하이드록시벤질 알코올(HBA)은 천마(Gastrodia elata)의 주요한 활성 성분으로서 예로부터 동양에서 두통, 파상풍(tetanus) 또는 염증성 질환에 한약재로서 널러 이용되어 왔다. HBA는 페놀성 화합물이고, 허혈성 뇌 손상(ischemic brain injury), 관상 심장병(coronary heart disease)과 같은 산화적 손상에 관련된 질병에 대한 치료제로 알려져 있다. 또한, 자유 라디칼의 포획자로서 항산화제로서 알려져 있으며, 최근에는 염증성 질환의 치료에 관련이 있는 것으로 알려지고 있다. On the other hand, p-hydroxybenzyl alcohol (HBA) has been widely used as a herbal medicine for headache, tetanus or inflammatory diseases from ancient times as a major active ingredient of Gastrodia elata. HBA is a phenolic compound and is known as a treatment for diseases related to oxidative damage such as ischemic brain injury, coronary heart disease. It is also known as an antioxidant as a trapping agent for free radicals and has recently been known to be involved in the treatment of inflammatory diseases.

본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 HBA가 고분자의 주쇄 내로 통합된 HPOX 화합물과 그 제조방법을 제공하고, 상기 HPOX 화합물의 나노입자를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 약물전달체를 제공하며, 상기 HPOX 화합물에 형광물질이 포접된 영상조영제를 제공하고자 하는 것이다.The problem to be solved by the present invention provides a HPOX compound and a method for preparing the HBA is integrated into the main chain of the polymer, and pharmaceutical compositions and drugs for the prevention or treatment of inflammatory diseases containing the nanoparticles of the HPOX compound as an active ingredient To provide a carrier, to provide an imaging contrast agent is embedded in the HPOX compound fluorescent material.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여,
In order to solve the above problems,

본 발명은 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzly alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol) 중 1종 이상의 단량체가 중합체 골격으로 통합된 옥살레이트(oxalate) 공중합체를 포함하는 나노입자를 제공한다.The present invention provides nanoparticles comprising an oxalate copolymer in which at least one monomer of 4-hydroxybenzly alcohol and vanillyl alcohol is integrated into the polymer backbone.

또한, 본 발명은 다음의 단량체가 공중합체로 통합되고, 상기 단량체는 공중합체를 합성하기 위하여 축합 반응을 수행하는 것을 특징으로 하는 나노입자를 제공한다:The present invention also provides nanoparticles wherein the following monomers are incorporated into the copolymer, the monomers performing a condensation reaction to synthesize the copolymer:

a) 옥살레이트;a) oxalate;

b) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및b) 1,4-cyclohexanedimethanol; And

c) 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 1종 이상의 단량체.c) at least one monomer selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol.

상기 c)로부터 선택된 단량체는 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.The monomer selected from c) is preferably 4-hydroxybenzyl alcohol.

상기 공중합체는 옥살레이트와 1,4-사이클로헥산디메탄올이 통합된 하나 이상의 제 1블록 및 옥살레이트와 4-하이드록시벤질 알코올 또는 바닐릴 알코올이 통합된 하나 이상의 제 2블록을 포함하는 것이 바람직하다. The copolymer preferably comprises at least one first block integrating oxalate and 1,4-cyclohexanedimethanol and at least one second block integrating oxalate and 4-hydroxybenzyl alcohol or vanylyl alcohol. Do.

상기 제 1블록은 다음의 화학식 1의 구조를 가지고, 상기 제 2블록은 다음의 화학식 2의 구조를 가지며, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The first block has the structure of Formula 1, and the second block has the structure of Formula 2, where R is H or OCH 3 .

[화학식 1][Formula 1]

Figure pat00001
Figure pat00001

[화학식 2][Formula 2]

Figure pat00002
Figure pat00002

상기 R은 H인 것이 바람직하다.It is preferable that said R is H.

상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The copolymer has the structure of Formula 3 wherein R is preferably H or OCH 3 :

[화학식 3](3)

Figure pat00003
Figure pat00003

상기 R은 H인 것이 바람직하다.It is preferable that said R is H.

상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the first block and the second block in the copolymer is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비는 4:1인 것이 바람직하다.It is preferable that the molar ratio of the 1st block and the 2nd block in the said copolymer is 4: 1.

상기 공중합체의 평균분자량은 20,000 내지 30,000달톤(Dalton)인 것이 바람직하다.The average molecular weight of the copolymer is preferably 20,000 to 30,000 Daltons (Dalton).

상기 공중합체의 평균분자량은 25,000달톤인 것이 바람직하다.The average molecular weight of the copolymer is preferably 25,000 Daltons.

상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 50~150인 것이 바람직하다.It is preferable that the average number of blocks in the said copolymer is 50-150.

상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 100인 것이 바람직하다.The average number of blocks in the copolymer is preferably 100.

상기 나노입자는 직경이 500나노미터(nm) 이하인 것이 바람직하다.The nanoparticles preferably have a diameter of 500 nanometers (nm) or less.

상기 나노입자는 나노입자 내에 약물(therapeutic agent) 또는 바이오영상화제(bioimaging agent)를 더 포함할 수 있다.The nanoparticles may further include a drug or a bioimaging agent in the nanoparticles.

상기 약물은 항아폽토시스제(anti-apoptotic agent), 혈전용해제(clot-dissolving agent), 항산화제(anti-oxidant agent) 및 항염증제(anti-inflammatory agent)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The drug is preferably selected from the group consisting of an anti-apoptotic agent, a clot-dissolving agent, an anti-oxidant agent and an anti-inflammatory agent.

상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN), N-(6-옥소-5,6-디하이드로페난트리딘-2-일)-N,N-디메틸아세트아미드 HCl(PJ34), 아우린트리카르복시산, 조직 플라스미노겐 활성화인자 단백질(tPA) 및 N-벤질옥시카보닐-발린-알라닌-아스파르트산-플루오로메틸케톤(Z-VAD-FMK)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The drug is 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN), N- (6-oxo-5,6-dihydrophenantridin-2-yl) -N, N-dimethylacetamide From the group consisting of HCl (PJ34), aurintricarboxylic acid, tissue plasminogen activator protein (tPA) and N-benzyloxycarbonyl-valine-alanine-aspartic acid-fluoromethylketone (Z-VAD-FMK) It is preferred to be selected.

상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN)인 것이 바람직하다.Preferably the drug is 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN).

상기 바이오영상화제는 형광안료(fluorescent agent), 근적외선 방출제, 방사선 트레이서, PET 조영제 및 MRI 조영제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The bioimaging is preferably selected from the group consisting of fluorescent agents, near infrared emitters, radiation tracers, PET contrast agents and MRI contrast agents.

상기 바이오영상화제는 루브렌(rubrene), 펜타센(pentacene), 인도시아닌 그린(indocyanine green), 가돌리늄(gadolinium), 테크네튬-99엠(technetium-99m) 및 플루오로데옥시글루코오스(18F)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
The bioimaging is rubrene (pentacene), indocyanine green (indocyanine green), gadolinium (gadolinium), technetium-99m (technetium-99m) and fluorodeoxyglucose (18F) It is preferable to select from the group which consists of.

또한, 본 발명은 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 다음을 포함하는 조성물을 접촉하여 제조되는 옥살레이트 공중합체를 제공한다:The present invention also provides an oxalate copolymer prepared by contacting oxalyl chloride with a composition comprising:

a) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및a) 1,4-cyclohexanedimethanol; And

b) 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물.b) a compound selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanillyl alcohol.

상기 b)의 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.It is preferable that the compound of b) is 4-hydroxybenzyl alcohol.

상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of a) and b) is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of a) and b) is preferably 4: 1.

상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The copolymer has the structure of Formula 3 wherein R is preferably H or OCH 3 :

[화학식 3](3)

Figure pat00004
Figure pat00004

상기 R은 H인 것이 바람직하다.
It is preferable that said R is H.

또한, 본 발명은 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol) 및 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물을 포함하는 조성물을 접촉하는 옥살레이트 공중합체의 제조 방법을 제공한다.In addition, the present invention is oxalyl chloride (oxalyl chloride) and 1,4-cyclohexanedimethanol (1,4-cyclohexanedimethanol) and 4-hydroxybenzyl alcohol (4-hydroxybenzyl alcohol) and vanillyl alcohol (vanillyl alcohol) Provided are methods for producing an oxalate copolymer in contact with a composition comprising a compound selected from the group consisting of:

상기 1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is preferably 4: 1.

상기 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.
It is preferred that the compound is 4-hydroxybenzyl alcohol.

또한, 본 발명은 본 발명의 나노입자를 유효성분으로 함유하는 염증성 질병 또는 산화적 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases or oxidative diseases containing the nanoparticles of the present invention as an active ingredient.

상기 염증성 질병은 페렴 또는 천식일 수 있다.The inflammatory disease may be pneumonia or asthma.

상기 조성물은 염증성 질병 부위 또는 산화적 질병 부위에 국부적으로 적용되는 것이 바람직하다.The composition is preferably applied locally to an inflammatory disease site or an oxidative disease site.

상기 산화적 질병은 허혈성 질병인 것이 바람직하다.The oxidative disease is preferably an ischemic disease.

상기 허혈성 질병은 신경 또는 심장 질환인 것이 바람직하다.The ischemic disease is preferably a neurological or heart disease.

상기 허혈성 질병은 뇌졸중, 뇌성마비, 심근경색증, 뇌출혈, 말초혈관 질환, 우회술 합병증, 저산소성 폐질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
The ischemic disease is preferably selected from the group consisting of stroke, cerebral palsy, myocardial infarction, cerebral hemorrhage, peripheral vascular disease, bypass surgery complications, hypoxic lung disease.

또한, 본 발명은 본 발명의 바이오영상화제를 더 포함하는 나노입자를 환자에 투여하여 허혈성 질환의 위험이 있는 부위나 허혈성 질환이 발생한 부위를 영상화하는 허혈성 질환의 진단 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for diagnosing ischemic disease by imaging a site at risk of ischemic disease or a site where ischemic disease is generated by administering to the patient a nanoparticle further comprising the bioimaging agent of the present invention.

상기 바이오영상화제는 형광안료인 것이 바람직하다.The bioimaging is preferably a fluorescent pigment.

상기 형광안료는 루브렌(rubrene)인 것이 바람직하다.The fluorescent pigment is preferably rubrene (rubrene).

상기 영상화는 광학 영상, 적외선 영상, 방사선 영상, MRI, PET로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The imaging is preferably selected from the group consisting of optical images, infrared images, radiation images, MRI, PET.

본 발명의 따른 HPOX 나노 입자는 표적 특이적 방식으로 체내 과산화수소와 NO의 농도를 효과적으로 감소시킴으로써 부작용이 없이 항염증 및 항산화 효과를 나타내며, 표적 특이적 작용 효과로 인하여 약물전달체 및 영상조영제로서 활용할 수도 있다.HPOX nanoparticles according to the present invention exhibits anti-inflammatory and antioxidant effects without side effects by effectively reducing the concentrations of hydrogen peroxide and NO in the body in a target-specific manner, and may also be used as drug carriers and imaging agents due to target-specific action effects. .

도 1은 HPOX(HBA-incorporated copolyoxalate)의 합성과 분해를 나타내고,
도 2는 CDCl3에서의 HPOX(HBA-incorporated copolyoxalate)의 1H-NMR 스펙트럼이고,
도 3은 THF에서의 HPOX의 GPC trace이고,
도 4는 HPOX의 가수분해 특성으로서, (A)는 가수분해 속도이고, (B)는 37℃에서 D2O에서의 가수분해 후 분해 산물의 1H-NMR 스펙트럼이고,
도 5는 HPOX의 SEM 이미지이고,
도 6은 RAW 264.7 세포를 사용한 HPOX의 MTT 분석 결과를 나타내고,
도 7은 LPS로 처리된 RAW 264.7 세포의 NO 생산에 대한 HPOX의 저해제 효과를 나타내고,
도 8은 LPS로 처리된 RAW 264.7 세포의 iNOS 생산에 대한 HPOX의 효과를 항-iNOS 항체로 면역형광법에 따른 결과를 나타낸 것이고,
도 9는 LPS로 처리된 RAW 264.7 세포의 iNOS의 생산에 대한 HPOX의 효과를 웨스턴블롯팅(Western blotting)으로 확인한 것이고,
도 10은 LPS로 처리된 RAW 264.7 세포의 HPOX에 의한 TNF-α 생산의 저해를 나타낸 것이고,
도 11은 HPOX의 농도별 과산화수소와의 반응성을 나타낸 그래프이고,
도 12는 1mg의 HPOX 나노입자의 과산화수소에의 감지능을 나타낸 그래프이고,
도 13은 과산화수소로 활성화된 대식세포에서 HPOX와 HBA의 항산화 효과를 보여주는 사진으로서, (a)는 대조군, (b)는 H2O2 처리군, (c)는 H2O2와 62μg의 HBA 처리군, (d)는 H2O2와 50μg의 HPOX 처리군을 나타내고,
도 14는 PMA로 처리된 대식세포에서 HPOX와 HBA의 항산화 효과를 보여주는 사진으로서, (a)는 대조군, (b)는 PMA 처리군, (c)는 PMA와 62μg의 HBA 처리군, (d)는 PMA와 50μg의 HPOX 처리군을 나타내고,
도 15는 유세포분석기를 사용한 HPOX와 HBA의 세포사멸 억제 작용의 결과를 나타낸 그래프이고,
도 16은 OVA로 염증이 유발된 생쥐 폐의 면역 염색 사진으로서, (a)는 PBS 처리군, (b)는 OVA 처리군, (c)는 OVA와 50μg의 HPOX 처리군, (d)는 OVA와 100μg의 HPOX 처리군을 나타내고,
도 17은 과산화수소 유무에 따른 형광물질로 포접한 HPOX의 발광스펙트럼이고,
도 18은 형광물질을 포접한 HPOX의 주사 후 시간 경과에 따른 생체 내 과산화수소의 영상을 나타낸 것이고,
도 19는 Catalase 주입 후의 형광물질을 포접한 HPOX 나노미립구의 생체 내 과산화수소 영상을 나타낸 것이고,
도 20은 형광물질(coumarin)을 HPOX 나노입자에 포접하여 대식세포에 이입되는 과정을 현미경으로 관찰한 것이고,
도 21은 HPOX 나노미립구의 약물모델인 4-AN 전달효율을 나타낸 그래프이고,
도 22는 허혈/재관류 손상부위의 mRNA 사이토카인의 western blotting의 결과를 나타낸 것이고,
도 23은 HPOX를 7일간 투여한 쥐의 주요 장기의 조직염색사진을 나타낸 것이다.1 shows the synthesis and degradation of HBA-incorporated copolyoxalate (HPOX),
2 is a 1 H-NMR spectrum of HPBA (HBA-incorporated copolyoxalate) in CDCl 3 ,
3 is a GPC trace of HPOX in THF,
4 is a hydrolysis characteristic of HPOX, (A) is the hydrolysis rate, (B) is the 1 H-NMR spectrum of the degradation product after hydrolysis in D 2 O at 37 ℃,
5 is an SEM image of HPOX,
6 shows the results of MTT analysis of HPOX using RAW 264.7 cells,
7 shows the inhibitory effect of HPOX on NO production of LPS treated RAW 264.7 cells,
8 shows the results of immunofluorescence with anti-iNOS antibody on the effect of HPOX on iNOS production of LPS treated RAW 264.7 cells,
9 shows the effect of HPOX on the production of iNOS in RAW 264.7 cells treated with LPS by Western blotting,
10 shows inhibition of TNF-α production by HPOX in RAW 264.7 cells treated with LPS,
11 is a graph showing the reactivity with hydrogen peroxide for each concentration of HPOX,
12 is a graph showing the detection of 1 mg of HPOX nanoparticles to hydrogen peroxide,
Figure 13 is a photograph showing the antioxidant effect of HPOX and HBA in hydrogen peroxide activated macrophages, (a) is a control group, (b) H 2 O 2 treatment group, (c) H 2 O 2 and 62μg HBA Treatment group, (d) represents H 2 O 2 and 50 μg of HPOX treatment group,
Figure 14 is a photograph showing the antioxidant effect of HPOX and HBA in PMA-treated macrophages, (a) is a control group, (b) PMA treatment group, (c) PMA and 62μg HBA treatment group, (d) Represents PMA and 50 μg of HPOX treated group,
15 is a graph showing the results of apoptosis inhibitory action of HPOX and HBA using a flow cytometer,
Figure 16 is an immunostaining photograph of the lungs of mice induced inflammation with OVA, (a) PBS treatment group, (b) OVA treatment group, (c) OVA and 50μg HPOX treatment group, (d) OVA And 100 μg of HPOX treatment group,
17 is a light emission spectrum of HPOX entrapped with a fluorescent material depending on the presence or absence of hydrogen peroxide,
FIG. 18 shows an image of hydrogen peroxide in vivo over time after injection of HPOX containing fluorescent material,
19 shows in vivo hydrogen peroxide images of HPOX nanoparticles encapsulated with fluorescent material after catalase injection,
20 is a microscope observation of a process of introducing a fluorescent material (coumarin) into the macrophages by inclusion in HPOX nanoparticles,
21 is a graph showing the 4-AN delivery efficiency of the drug model of HPOX nanoparticles,
22 shows the results of western blotting of mRNA cytokines in the ischemia / reperfusion injury site,
Figure 23 shows histological staining of major organs of rats administered with HPOX for 7 days.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, this invention is demonstrated in detail.

본 발명은 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzly alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol) 중 1종 이상의 단량체가 중합체 골격으로 통합된 옥살레이트(oxalate) 공중합체를 포함하는 나노입자를 제공한다.The present invention provides nanoparticles comprising an oxalate copolymer in which at least one monomer of 4-hydroxybenzly alcohol and vanillyl alcohol is integrated into the polymer backbone.

상기 화합물은 코폴리옥살레이트(copolyoxalate) 주사슬 내의 불안정한 퍼옥살레이트 에스테르(peroxalate esters) 결합 때문에 체내에서 쉽게 제거될 수 있는 1,4-사이클로헥산디메탄올, HBA, 옥살산 및/또는 이산화탄소로 완전히 분해된다(도 1 참조). 폴리옥살레이트 구조들은 수성 조건하에서 옥살산(oxalic acid)과 디올로 분해되기 위해서 에스테르 가수분해를 겪는다. 주쇄 내에 방향족 퍼옥살레이트 에스테르 결합을 포함하고 있는 폴리옥살레이트는 과산화수소(hydrogen peroxide)와 순간적으로 반응하여 디올과 이산화탄소로 분해된다.The compound is completely degraded into 1,4-cyclohexanedimethanol, HBA, oxalic acid and / or carbon dioxide, which can be easily removed from the body due to unstable peroxalate ester linkages in the copolyoxalate main chain. (See FIG. 1). Polyoxalate structures undergo ester hydrolysis to degrade to oxalic acid and diol under aqueous conditions. Polyoxalates containing aromatic peroxalate ester linkages in the main chain react with hydrogen peroxide instantaneously to decompose into diols and carbon dioxide.

과산화수소는 대식세포와 염증 부위에서 보충된 호중성 백혈구 (neutrophiles)에 의해서 과잉 생산되며, 방향족 퍼옥살레이트 에스테르 결합을 빠르게 절단시킨다.Hydrogen peroxide is overproduced by neutrophiles supplemented at macrophages and sites of inflammation and rapidly cleaves aromatic peroxalate ester bonds.

즉, 본 발명의 HPOX(HBA-incorporated copolyoxalate) 화합물은 염증세포에서 높은 농도로 생산되는 과산화수소에 반응해서 분해가 촉진되는 새로운 자극 감응형(stimulus responsive) 생분해성 고분자인 것이다. That is, the HPOX (HBA-incorporated copolyoxalate) compound of the present invention is a novel stimulus responsive biodegradable polymer that promotes degradation in response to hydrogen peroxide produced at high concentration in inflammatory cells.

또한, 본 발명은 다음의 단량체가 공중합체로 통합되고, 상기 단량체는 공중합체를 합성하기 위하여 축합 반응을 수행하는 것을 특징으로 하는 나노입자를 제공한다:The present invention also provides nanoparticles wherein the following monomers are incorporated into the copolymer, the monomers performing a condensation reaction to synthesize the copolymer:

a) 옥살레이트;a) oxalate;

b) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및b) 1,4-cyclohexanedimethanol; And

c) 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 1종 이상의 단량체.c) at least one monomer selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol.

상기 c)로부터 선택된 단량체는 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.The monomer selected from c) is preferably 4-hydroxybenzyl alcohol.

상기 공중합체는 옥살레이트와 1,4-사이클로헥산디메탄올이 통합된 하나 이상의 제 1블록 및 옥살레이트와 4-하이드록시벤질 알코올 또는 바닐릴 알코올이 통합된 하나 이상의 제 2블록을 포함하는 것이 바람직하다. The copolymer preferably comprises at least one first block integrating oxalate and 1,4-cyclohexanedimethanol and at least one second block integrating oxalate and 4-hydroxybenzyl alcohol or vanylyl alcohol. Do.

상기 제 1블록은 다음의 화학식 1의 구조를 가지고, 상기 제 2블록은 다음의 화학식 2의 구조를 가지며, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The first block has the structure of Formula 1, and the second block has the structure of Formula 2, where R is H or OCH 3 .

[화학식 1][Formula 1]

Figure pat00005
Figure pat00005

[화학식 2][Formula 2]

Figure pat00006
Figure pat00006

상기 R은 H인 것이 바람직하다.It is preferable that said R is H.

상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The copolymer has the structure of Formula 3 wherein R is preferably H or OCH 3 :

[화학식 3](3)

Figure pat00007
Figure pat00007

상기 R은 H인 것이 바람직하다.It is preferable that said R is H.

상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the first block and the second block in the copolymer is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비는 4:1인 것이 바람직하다.It is preferable that the molar ratio of the 1st block and the 2nd block in the said copolymer is 4: 1.

상기 공중합체의 평균분자량은 20,000 내지 30,000달톤(Dalton)인 것이 바람직하다.The average molecular weight of the copolymer is preferably 20,000 to 30,000 Daltons (Dalton).

상기 공중합체의 평균분자량은 25,000달톤인 것이 바람직하다.The average molecular weight of the copolymer is preferably 25,000 Daltons.

상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 50~150인 것이 바람직하다.It is preferable that the average number of blocks in the said copolymer is 50-150.

상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 100인 것이 바람직하다.The average number of blocks in the copolymer is preferably 100.

상기 나노입자는 직경이 500나노미터(nm) 이하인 것이 바람직하다.The nanoparticles preferably have a diameter of 500 nanometers (nm) or less.

상기 나노입자는 나노입자 내에 약물(therapeutic agent) 또는 바이오영상화제(bioimaging agent)를 더 포함할 수 있다.The nanoparticles may further include a drug or a bioimaging agent in the nanoparticles.

상기 약물은 항아폽토시스제(anti-apoptotic agent), 혈전용해제(clot-dissolving agent), 항산화제(anti-oxidant agent) 및 항염증제(anti-inflammatory agent)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The drug is preferably selected from the group consisting of an anti-apoptotic agent, a clot-dissolving agent, an anti-oxidant agent and an anti-inflammatory agent.

상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN), N-(6-옥소-5,6-디하이드로페난트리딘-2-일)-N,N-디메틸아세트아미드 HCl(PJ34), 아우린트리카르복시산, 조직 플라스미노겐 활성화인자 단백질(tPA) 및 N-벤질옥시카보닐-발린-알라닌-아스파르트산-플루오로메틸케톤(Z-VAD-FMK)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The drug is 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN), N- (6-oxo-5,6-dihydrophenantridin-2-yl) -N, N-dimethylacetamide From the group consisting of HCl (PJ34), aurintricarboxylic acid, tissue plasminogen activator protein (tPA) and N-benzyloxycarbonyl-valine-alanine-aspartic acid-fluoromethylketone (Z-VAD-FMK) It is preferred to be selected.

상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN)인 것이 바람직하다.Preferably the drug is 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN).

상기 바이오영상화제는 형광안료(fluorescent agent), 근적외선 방출제, 방사선 트레이서, PET 조영제 및 MRI 조영제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The bioimaging is preferably selected from the group consisting of fluorescent agents, near infrared emitters, radiation tracers, PET contrast agents and MRI contrast agents.

상기 바이오영상화제는 루브렌(rubrene), 펜타센(pentacene), 인도시아닌 그린(indocyanine green), 가돌리늄(gadolinium), 테크네튬-99엠(technetium-99m) 및 플루오로데옥시글루코오스(18F)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The bioimaging is rubrene (pentacene), indocyanine green (indocyanine green), gadolinium (gadolinium), technetium-99m (technetium-99m) and fluorodeoxyglucose (18F) It is preferable to select from the group which consists of.

상기 바이오영상화제를 포접한 나노입자는 생체 내 또는 생체 외의 과산화수소를 영상으로 이미징(imaging)할 수 있으며, 영상으로 이미징할 수 있는 과산화수소의 최소 농도는 20nM이다.
The nanoparticles encapsulated with the bioimaging agent may image hydrogen peroxide in vivo or in vitro, and the minimum concentration of hydrogen peroxide that may be imaged is 20 nM.

또한, 본 발명은 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 다음을 포함하는 조성물을 접촉하여 제조되는 옥살레이트 공중합체를 제공한다:The present invention also provides an oxalate copolymer prepared by contacting oxalyl chloride with a composition comprising:

a) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및a) 1,4-cyclohexanedimethanol; And

b) 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물.b) a compound selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanillyl alcohol.

상기 b)의 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.It is preferable that the compound of b) is 4-hydroxybenzyl alcohol.

상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of a) and b) is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of a) and b) is preferably 4: 1.

상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것이 바람직하다:The copolymer has the structure of Formula 3 wherein R is preferably H or OCH 3 :

[화학식 3](3)

Figure pat00008
Figure pat00008

상기 R은 H인 것이 바람직하다.
It is preferable that said R is H.

또한, 본 발명은 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol) 및 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물을 포함하는 조성물을 접촉하는 옥살레이트 공중합체의 제조 방법을 제공한다.In addition, the present invention is oxalyl chloride (oxalyl chloride) and 1,4-cyclohexanedimethanol (1,4-cyclohexanedimethanol) and 4-hydroxybenzyl alcohol (4-hydroxybenzyl alcohol) and vanillyl alcohol (vanillyl alcohol) Provided are methods for producing an oxalate copolymer in contact with a composition comprising a compound selected from the group consisting of:

상기 공중합은 질소충전 하의 건조 테트라하이드로푸란(Tetrahydrofuran, THF)에서 진행되는 것이 바람직하다. The copolymerization is preferably carried out in dry tetrahydrofuran (THF) under nitrogen charging.

보다 구체적으로, 상기 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol)은 뛰어난 생체적합성 때문에 이 공중합체의 구성성분으로서 사용되었다. 또한, 1,4-사이클로헥산디메탄올은 간접적인 식품 첨가제로서 인간이 섭취할 수 있는 것으로 승인되었고 뛰어난 toxicity profile(LD50 : 3200mg/kg 구강 섭취 양)을 가지고 있다. 게다가, 이는 생체 내에서 효소에 의한 변환을 겪지 않으며 몸으로부터 빠르게 제거된다. More specifically, the 1,4-cyclohexanedimethanol was used as a component of this copolymer because of its excellent biocompatibility. In addition, 1,4-cyclohexanedimethanol is an indirect food additive that is approved for human consumption and has an excellent toxicity profile (LD 50 : 3200 mg / kg oral intake). In addition, it does not undergo enzymatic transformation in vivo and is quickly removed from the body.

상기 4-하이드록시벤질 알코올은 당근과 손바닥 난초(Gymnadenia conopsea)를 포함한 다양한 식물에 있어 잘 알려진 페놀계 화합물의 하나이고, 전통적인 약초의 약품, 천마(Gastrodia elata)의 주요 활성 구성요소이다. 4-하이드록시벤질 알코올은 항염증, 항산화와 항-혈관생성(anti-angiogenic) 활성을 가진 것으로 많은 연구가 보고되고 있다. 게다가, 일시적인 국소 뇌 허혈 후 발생하는 항산화 단백질 관련 유전자 발현을 통해 뇌 손상을 예방하는 능력을 가지고 있다.The 4-hydroxybenzyl alcohol is one of the well-known phenolic compounds in a variety of plants, including carrots and palm orchids (Gymnadenia conopsea), and is the main active component of the traditional herbal medicine, Gastrodia elata. Many studies have reported that 4-hydroxybenzyl alcohol has anti-inflammatory, antioxidant and anti-angiogenic activity. In addition, it has the ability to prevent brain damage through expression of antioxidant protein-related genes that occur after transient focal cerebral ischemia.

4-하이드록시벤질 알코올은 알코올로 치환된 페놀과 메틸렌 유닛이 화합된 방향족 디올(diol) 화합물이고, 따라서 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)를 사용하여 폴리옥살레이트의 합성에 적합하다. 치료적 화합물 4-하이드록시벤질알코올은 곁사슬(side group)로서 첨가되지 않고 고분자 주쇄 내로 화학적으로 통합된다.4-hydroxybenzyl alcohol is an aromatic diol compound in which a phenol substituted with alcohol and a methylene unit are combined, and thus suitable for the synthesis of polyoxalate using oxalyl chloride. Therapeutic compound 4-hydroxybenzylalcohol is chemically integrated into the polymer backbone without being added as a side group.

상기 공중합은 질소 충전 하에서 건조된 테트라하이드로푸란(Tetrahydrofuran, THF)에서 진행되는 것이 바람직하다. 보다 자세하게는, 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol)과 4-히드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol)을 건조된 THF에 용해하고 트리에틸아민(triethylamine)을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 트리에틸아민은 옥살레이트(oxalate)를 만들기 위한 시약으로서 고분자 합성 단계에서 발생하는 HCl을 제거하여 반응을 촉진하는 촉매제 및 염기(base)로서 작용할 수 있다. 여기에 건조된 THF에 용해한 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)를 혼합물에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. The copolymerization is preferably carried out in tetrahydrofuran (THF) dried under nitrogen charge. More specifically, it is preferable to dissolve 1,4-cyclohexanedimethanol and 4-hydroxybenzyl alcohol in dried THF and add triethylamine. Do. The triethylamine may act as a catalyst and a base for promoting the reaction by removing HCl generated in the polymer synthesis step as a reagent for making oxalate. This may include adding oxalyl chloride dissolved in the dried THF to the mixture.

추출은 디클로로메탄을 사용하는 것이 바람직하고, 침전은 차가운 헥산을 사용하는 것이 바람직하다.Preferably, dichloromethane is used for extraction, and cold hexane is used for precipitation.

나노입자의 제조는 DCM에 용해된 상기 화학식 3으로 표시되는 HPOX 화합물을 유화제 용액에 첨가하여 제조할 수 있다. 상기 유화제로는 폴리(비닐 알코올(poly(vinyl alcohol))이 바람직하다. 상기 혼합물을 유/수 에멀젼 법(oil-in-water emulsion method)에 의해 나노미립구를 제조할 수 있다. 보다 자세하게는, 유/수 에멀젼을 형성하기 위해 유화제 용액에 첨가된 HPOX 혼합물을 초음파 처리를 하고 균질하게 한다. 상기 에멀젼은 폴리비닐알코올 용액으로 첨가되고 균질화한다. 남아있는 용매는 회전 증발기(rotary evaporator)를 사용하여 제거하고 나노입자는 원심분리기에 의해 획득할 수 있다.Preparation of the nanoparticles can be prepared by adding the HPOX compound represented by Formula 3 dissolved in DCM to the emulsifier solution. The emulsifier is preferably poly (vinyl alcohol). The nanoparticles can be prepared by the oil-in-water emulsion method. The HPOX mixture added to the emulsifier solution to form an oil / water emulsion is sonicated and homogenized, the emulsion is added and homogenized with a polyvinyl alcohol solution and the remaining solvent is added using a rotary evaporator. The nanoparticles can be removed and obtained by centrifuge.

상기 1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is preferably 3: 1 to 5: 1.

상기 1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것이 바람직하다.The mole ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is preferably 4: 1.

상기 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것이 바람직하다.
It is preferred that the compound is 4-hydroxybenzyl alcohol.

또한, 본 발명은 본 발명의 나노입자를 유효성분으로 함유하는 염증성 질병 또는 산화적 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases or oxidative diseases containing the nanoparticles of the present invention as an active ingredient.

상기 염증성 질병은 페렴 또는 천식일 수 있다.The inflammatory disease may be pneumonia or asthma.

상기 조성물은 염증성 질병 부위 또는 산화적 질병 부위에 국부적으로 적용되는 것이 바람직하다.The composition is preferably applied locally to an inflammatory disease site or an oxidative disease site.

상기 산화적 질병은 허혈성 질병인 것이 바람직하다.The oxidative disease is preferably an ischemic disease.

상기 허혈성 질병은 신경 또는 심장 질환인 것이 바람직하다.The ischemic disease is preferably a neurological or heart disease.

상기 허혈성 질병은 뇌졸중, 뇌성마비, 심근경색증, 뇌출혈, 말초혈관 질환, 우회술 합병증, 저산소성 폐질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The ischemic disease is preferably selected from the group consisting of stroke, cerebral palsy, myocardial infarction, cerebral hemorrhage, peripheral vascular disease, bypass surgery complications, hypoxic lung disease.

본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 구체예로서 과립제, 세립제, 산제, 경질캡슐제, 연질캡슐제, 시럽제, 유제, 현탁제 또는 액제 등의 경구 투여용 약학 조성물로서 투여해도 되고, 정맥내 투여, 근육내 투여, 또는 피하 투여용 주사제, 점액제, 좌제, 경피흡수제, 경점막 흡수제, 점비제, 점이제, 점안제, 흡입제, 크림제, 연고제, 파프제 등의 비경구 투여용 약학적 조성물로서 투여하는 것도 가능하다. 분말형태의 약학조성물로서 조제된 제제를 사용시에 용해하여 주사제 또는 점액제로서 사용해도 된다. 특히, 본 발명의 약학조성물은 페이스트 연고, 크림, 밀크, 파프제, 분제, 침투 패드, 용액, 겔, 분무제, 로션 또는 현탁액 형태의 제형인 것이 바람직할 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used. The pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, and specific examples include granules, fine granules, powders, hard capsules, soft capsules, syrups, emulsions, suspensions or solutions, and the like. It may be administered as a pharmaceutical composition for oral administration of, intravenous, intramuscular or subcutaneous injection, mucus, suppository, transdermal absorbent, transmucosal absorbent, nasal drops, ear drops, eye drops, inhalants, creams, It is also possible to administer it as a pharmaceutical composition for parenteral administration, such as an ointment and a pape. The formulation prepared as a pharmaceutical composition in powder form may be dissolved in use and used as an injection or mucus. In particular, the pharmaceutical composition of the present invention may be preferably in the form of a paste ointment, cream, milk, powder, powder, penetrating pad, solution, gel, spray, lotion or suspension.

본 발명의 약학적 조성물의 제조에는 고체 또는 액체의 제제용 첨가물을 사용할 수 있다. 제제용 첨가물은 유기 또는 무기 중 어느 것이어도 된다. In the preparation of the pharmaceutical compositions of the present invention, additives for the preparation of solids or liquids may be used. The additive for preparation may be either organic or inorganic.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 특별히 한정되지 않지만, 성인 1일당 유효성분인 상기 물질의 중량으로서 1kg당 0.01 내지 100mg/kg, 바람직하게는 0.1 내지 10mg/kg, 더욱 바람직하게는 1.5mg/kg일 수 있다. 이 투여량을 환자의 연령, 병태, 증상에 따라 적절히 증감하는 것이 바람직하다. 상기 1일 투여량은 1일에 1회, 또는 적당한 간격을 두고 하루에 2~3회에 나눠 투여해도 되고, 수일 간격으로 간헐적으로 투여해도 된다. 그러나, 본 발명의 약학적 조성물의 상기 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but is 0.01 to 100 mg / kg, preferably 0.1 to 10 mg / kg, more preferably 1.5 mg / kg, per kilogram, as the weight of the substance as an active ingredient per adult. may be kg. It is desirable to appropriately increase or decrease this dosage depending on the age, condition and symptoms of the patient. The daily dose may be administered once a day or divided into two to three times a day at appropriate intervals, or intermittently at several day intervals. However, since the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is determined in view of various related factors such as the route of administration, the age, sex, weight of the patient, the severity of the patient, the dosage limits the scope of the present invention in any aspect. It should not be understood to be.

또한, 본 발명은 본 발명의 바이오영상화제를 더 포함하는 나노입자를 환자에 투여하여 허혈성 질환의 위험이 있는 부위나 허혈성 질환이 발생한 부위를 영상화하는 허혈성 질환의 진단 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for diagnosing ischemic disease by imaging a site at risk of ischemic disease or a site where ischemic disease is generated by administering to the patient a nanoparticle further comprising the bioimaging agent of the present invention.

상기 바이오영상화제는 형광안료인 것이 바람직하다.The bioimaging is preferably a fluorescent pigment.

상기 형광안료는 루브렌(rubrene)인 것이 바람직하다.The fluorescent pigment is preferably rubrene (rubrene).

상기 영상화는 광학 영상, 적외선 영상, 방사선 영상, MRI, PET로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
The imaging is preferably selected from the group consisting of optical images, infrared images, radiation images, MRI, PET.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

<< 실시예Example >>

재료material

p-하이드록시벤질알콜(p-hydroxybenzyl alcohol), 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol), 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride), 폴리(비닐알코올)(MW 13,000~21,000)은 시그마 알드 리치사(MO. USA)로부터 구매했다. 테트라하이드로푸란(Tetrahydrofuran)과 트리에틸아민(triethylamine)은 Showa(Japan)로부터 획득했다. 테트라하이드로푸란(Tetrahydrofuran은 칼슘 수화물 하에서 증류되었다. 모든 시약들은 추가 정제 없이 사용되었다.
 p - hydroxybenzyl alcohol (p -hydroxybenzyl alcohol), 1,4- cyclohexanedimethanol (1,4-cyclohexanedimethanol), oxalyl chloride (oxalyl chloride), poly (vinyl alcohol) (MW 13,000 ~ 21,000) is sigma It was purchased from Aldrich (MO. USA). Tetrahydrofuran and triethylamine were obtained from Showa (Japan). Tetrahydrofuran was distilled under calcium hydrate. All reagents were used without further purification.

고분자 합성Polymer Synthesis

1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-Cyclohexanedimethanol)(21.96mmol)과 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol)(5.49 mmol)을 질소 충전 하에 잘 건조된 20mL의 테트라하이드로푸란(Tetrahydrofuran, THF)에 용해하고 4℃에서 트리에틸아민(triethylamine)(60 mmol)을 한 방울씩 첨가한다. 여기에 25 mL의 건조된 THF에 용해한 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)(27.45 mmol)를 4℃에서 혼합물에 한 방울씩 첨가했다. 이 반응물은 6시간 동안 상온에서 질소 존재 하에 유지되었고, 디클로로메탄(Dichloromethane)을 이용하여 생성된 고분자를 추출한 다음 차가운 헥산(hexane)에서 침전시켜 고분자를 얻었다. 고분자의 분자량은 폴리스티렌 표준(polystyrene standards)을 사용하고 겔 투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography, GPC, Futech,Korea)에 의해 ~25000(다분산도(polydispersity)=1.8)로 측정되었다. 고분자의 화학구조는 400MHz 1H-NMR 분광계(JNM-EX400JEOL)로 식별되었다. 400MHz spectrometer에 의해 중수소 치환된 (deuterated) 클로로포름(Chloroform)의 1H-NMR 은 : 7.2-7.3 (m,2H,Ar), 7.5-7.6 (m,2H,Ar), 5.3 (m,2HOCH 2 -PhO), 4.1-4.3 (m,4H,COOCH 2 CH), 1.8-2.0 (m,2H,C(CH2)3 HO), 1.0-1.8 (m,8H,Cyclic CH2)이었다.
20 mL of tetrahydrofuran (1,4-Cyclohexanedimethanol) (21.96 mmol) and 4-hydroxybenzyl alcohol (5.49 mmol) dried well under nitrogen charge. , THF) and triethylamine (60 mmol) was added dropwise at 4 ° C. To this was added dropwise oxalyl chloride (27.45 mmol) in 25 mL of dried THF to the mixture at 4 ° C. The reaction was maintained in the presence of nitrogen at room temperature for 6 hours, the resulting polymer was extracted using dichloromethane and precipitated in cold hexane (hexane) to obtain a polymer. The molecular weight of the polymer was measured at -25000 (polydispersity = 1.8) using polystyrene standards and by gel permeation chromatography (Gel Permeation Chromatography, GPC, Futech, Korea). The chemical structure of the polymer was identified by a 400 MHz 1 H-NMR spectrometer (JNM-EX400JEOL). 1 H-NMR of deuterated chloroform (Chloroform) by 400 MHz spectrometer was: 7.2-7.3 ( m , 2H, Ar ), 7.5-7.6 (m, 2H, Ar ), 5.3 (m, 2HO CH 2 -PhO), 4.1-4.3 (m, 4H, COO CH 2 CH), 1.8-2.0 (m, 2H, C (CH 2 ) 3 H O), 1.0-1.8 (m, 8H, Cyclic CH 2 ).

입자 준비 (Particle preparation)Particle Preparation

500μl의 DCM에 용해된 50 밀리그램의 고분자는 5mL의 10 (w/v)% 폴리(비닐 알코올) 용액에 첨가되었다. 혼합물은 초음파 파쇄기 (Sonicator, Fisher Scientific, Sonic Dismembrator 500)를 사용하여 30초 동안 초음파 처리되었고 정제한 오일/물 에멀젼을 형성하기 위해 2분 동안 균질화 되었다 (PRO Scientific, PRO 200-호모지나이저). 상기 에멀젼은 20 mL PVA (1w/w%) 용액 안으로 첨가 되었고 1분 동안 균질화되었다. 남아있는 용매는 회전 증발기 (rotary evaporator)를 사용하여 제거되었다. 나노미립구는 원심분리기에 의해 4℃에서 5분 동안 11,000rpm을 통해 획득했고, 탈이온수 (deionized water)로 두 번 씻고 이를 통해 얻어진 파티클 용액을 동결건조하여 건조된 나노미립구를 얻었다.
50 milligrams of polymer dissolved in 500 μl DCM was added to 5 mL of 10 (w / v)% poly (vinyl alcohol) solution. The mixture was sonicated for 30 seconds using an ultrasonic crusher (Sonicator, Fisher Scientific, Sonic Dismembrator 500) and homogenized for 2 minutes to form a purified oil / water emulsion (PRO Scientific, PRO 200-homogenizer). The emulsion was added into 20 mL PVA (1w / w%) solution and homogenized for 1 minute. The remaining solvent was removed using a rotary evaporator. Nanoparticles were obtained through centrifuge at 11,000rpm for 5 minutes at 4 ° C, washed twice with deionized water and lyophilized particle solution obtained to obtain dried nanoparticles.

물리화학적 특징 (Physicochemical characterization)Physicochemical characterization

코폴리옥살레이트 (copolyoxalate)의 가수분해 속도는 겔 투과 크로마토그래피 (Gel Permeation Chromatography, GPC, Futecs,Korea)에 의한 분자량을 측정함으로써 연구되었다. 고분자는 고운 입자로 갈아졌고 37℃에서 인산염완충액 (phosphate buffer)에 두었다. 고분자 샘플은 약하게 교반하여 섞여 졌고 수화된 (hydrolyzed) 고분자는 특정시간에서 수집되었다. 시간대별로 가수분해 되어진 분자량을 측정하여 감소된 양을 퍼센트 비율로 비교하기 위해 GPC를 통해 측정하였다. 폴리옥살레이트 나노미립구의 구조와 사이즈는 주사전자현미경 (Scanning Electron Microscopy, SEM, Hitachi)에 의해 관찰되었다.
The hydrolysis rate of copolyoxalate was studied by measuring the molecular weight by gel permeation chromatography (Gel Permeation Chromatography, GPC, Futecs, Korea). The polymer was ground to fine particles and placed in phosphate buffer at 37 ° C. Polymer samples were mixed with gentle stirring and hydrated (hydrolyzed) polymers were collected at specific times. The molecular weight hydrolyzed by time was measured and measured by GPC to compare the reduced amount in percentage ratio. The structure and size of the polyoxalate nanoparticles were observed by Scanning Electron Microscopy (SEM, Hitachi).

HPOX 분해 역학(Hydrolysis kinetics)HPOX Hydrolysis kinetics

HPOX 고분자(5mg)는 37℃상에서 1mL의 PBS (pH 7.4)를 포함하고 있는 시험관으로 첨가되었다. 시험관은 37℃ 인큐베이션에서 계속적으로 유지 보관되었다. 동일한 양의 HPOX 고분자를 넣은 시험관들을 준비한 후 측정하고자 하는 시간대 별로 시험관을 인큐베이션에서 꺼내 얼린 후 동결건조 한다. 건조가 된 샘플을 THF (Tetrahydro furan)에 녹여 시간대 별로 감소된 분자량을 분해되기 전 처음의 분자량에 대한 퍼센트 비율로 알아보기 위해 Gel Permeation Chromatography (GPC)를 통해 조사하였다.
HPOX polymer (5 mg) was added to a test tube containing 1 mL of PBS (pH 7.4) at 37 ° C. Test tubes were kept maintained in a 37 ° C. incubation. Prepare test tubes containing the same amount of HPOX polymer, remove the test tubes from the incubation at each time interval to be measured, freeze and freeze-dry. The dried samples were dissolved in THF (Tetrahydro furan) and examined by Gel Permeation Chromatography (GPC) to determine the reduced molecular weight by time as a percentage of the initial molecular weight before degradation.

세포독성검사 (cytotoxicity assay)Cytotoxicity assay

HPOX 나노 미립구의 세포독성은 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라 졸리움 브로마이드 (MTT) 환원 분석에 의해 RAW 264.7 세포를 이용하여 측정하였다. RAW 264.7 세포는 24 웰 플레이트 (well plate)안의 1×106 세포/웰의 농도로 접종하였다. 세포에 나노 미립구를 (10mg/mL ~ 100mg/mL)의 다양한 농도로 24시간 동안 배양한 후 배양액을 제거 후 1mL의 배양액을 넣어주고 20μl MTT 시약을 넣고 4시간 배양하였다. 보라색 결정이 생성되면 디메틸 설폭사이드 용액을 1mL 씩 넣어 10분 배양 후 흡광도 570nm에서 마이크로 플레이트 리더를 이용하여 측정하였다.
Cytotoxicity of HPOX nanoparticles was measured using RAW 264.7 cells by 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction assay. RAW 264.7 cells were seeded at a concentration of 1 × 10 6 cells / well in a 24 well plate. After incubating the cells for 24 hours at various concentrations (10mg / mL ~ 100mg / mL) of the nanoparticles to remove the culture medium, 1mL of the culture solution was added and 20μl MTT reagent was incubated for 4 hours. When purple crystals were produced, 1 mL of dimethyl sulfoxide solution was added thereto for 10 minutes, followed by measurement using a microplate reader at 570 nm of absorbance.

염증 반응 (Inflammatory response ( inflammatoryinflammatory responseresponse ))

RAW 264.7 세포 (24 웰 플레이트 (well plate)안의 1×106 세포/웰)는 HPOX 나노미립구의 농도별로 처리한 다음, HPOX 나노미립구 자체가 항염증효과에 관여하는지를 판단하기 위해 염증유발물질인 지질다당류 (LPS, 1mg/mL)를 2μl 처리함으로써 염증을 유도한 후 염증반응을 관여하는 전-염증성 사이토카인인 종양 괴사 인자의 방출량 (tumor necrosis factor alpha, TNF-α)을 측정하였다. RAW 264.7 cells (1 × 10 6 cells / well in a 24-well plate) were treated with HPOX nanoparticles at different concentrations, and then lipids, which are proinflammatory agents, to determine whether HPOX nanoparticles themselves are involved in anti-inflammatory effects. 2 μl of polysaccharide (LPS, 1 mg / mL) was used to measure tumor necrosis factor alpha (TNF-α), a pro-inflammatory cytokine involved in the inflammatory response after induction of inflammation.

NO 생성량과 TNF-α 방출량을 조사하여 코폴리옥살레이트 나노미립구의 항염증성 기능의 유무와 정도를 알아보았다. NO의 생성량은 배양 상충액을 모아 griess reagent로 10분간 차광시켜 반응시킨 후에 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)(E-Max, Molecular Device Co, US)를 사용하여 흡광도 570 nm에서 비색분석법 (colorimetric assay)을 사용함으로써 측정되었다. NO 표준 곡선은 알려진 아질산 나트륨 (sodium nitrite)의 농도를 사용함으로써 작도하였다. 세포 안에서 처리된 TNF-α 함량은 제조회사 (eBioScience, US)에 의해 권장된 ELISA 키트로 측정되었다. TNF-α 실험은 2번 시행되었고 TNF-α 함량은 표준 키트로부터 얻어진 표준 곡선을 사용하여 pg/mL 농도의 관점에서 계산되었다.
NO production and TNF-α release were investigated to determine the presence and extent of anti-inflammatory function of copolyoxalate nanoparticles. The amount of NO produced was collected by incubating the culture supernatant with a griess reagent for 10 minutes, followed by reaction using a microplate reader (E-Max, Molecular Device Co, US). It was measured by using NO standard curves were constructed by using known concentrations of sodium nitrite. TNF-α content treated in cells was measured with an ELISA kit recommended by the manufacturer (eBioScience, US). TNF-α experiments were performed twice and TNF-α content was calculated in terms of pg / mL concentration using standard curves obtained from the standard kit.

웨스턴블롯팅Western blotting ( ( WesternWestern blottingblotting ))

HPOX의 염증 완화작용을 입증하기 위한 것으로, iNOS생성에 관여하는 단백질인 iNOS (inducieble nitrix oxide synthase)를 항체로 사용하여 HPOX가 LPS처리된 세포에서 iNOS의 생성을 감소시키는지를 알아보기 위해 웨스턴블롯팅(western blotting)하였다. 세포는 RAW 264.7을 passage15에서 이용하였으며, 24 웰(well)에 세포를 1×106씩 분주 한 후, 하루 동안 보관 후 배지(DMEM Low)를 갈아주었다. 코폴리옥살레이트 미립구를 함량별로 각각 넣어주고, 코폴리옥살레이트 미립구 주입 후 2시간 후에 NO 생성을 위해 LPS를 2μl/ml씩 넣어주었다. 24시간 후에 RIPA buffer를 이용하여 lysis하고, BCA 정량법으로 단백질 정량을 하여 western blotting을 실시하였다. NO의 생성정도를 알아보기 위해 Antibody는 iNOS를 이용하였다.
To demonstrate the anti-inflammatory effects of HPOX, Western blotting was performed to determine if HPOX reduced iNOS production in LPS treated cells using inducible nitrix oxide synthase (iNOS), a protein involved in iNOS production. (western blotting). The cells were used in passage 15 RAW 264.7, 1 × 10 6 cells were dispensed in 24 wells, and then stored for one day, the medium (DMEM Low) was changed. Copolyoxalate microspheres were added to each content, and 2 μl / ml LPS was added for NO production 2 hours after copolyoxalate microsphere injection. After 24 hours, lysis was performed using RIPA buffer, and Western blotting was performed by quantifying proteins by BCA assay. Antibody was used iNOS to determine NO production.

코폴리옥살레이트와With copolyoxalate 과산화수소의 반응성 검사 Reactivity test of hydrogen peroxide

HPOX 나노미립구가 얼마나 과산화수소와 반응을 하는지 실험을 하였다. 과산화수소(H2O2) 10μM 용액에 HPOX 나노미립구를 농도별로 넣고 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션에 보관한 후 amplex red assay kit를 이용하여 H2O2 농도를 측정하였다.
We tested how HPOX nanoparticles react with hydrogen peroxide. HPOX nanoparticles were added to 10μM solution of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) by concentration and stored in incubation at 37 ° C for 24 hours, followed by H 2 O 2 using amplex red assay kit. The concentration was measured.

이하, 본 발명의 실시예에 따른 결과를 설명하면 다음과 같다.
Hereinafter, the results according to the embodiment of the present invention will be described.

HBAHBA 가 합성된 Synthesized 코폴리옥살레이트의Copolyoxalate 합성과 특징 Synthesis and Features

HPOX는 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 두 개의 디올(diol), 1,4-사이클로헥산디메탄올 (cyclohexanedimethanol)과 HBA 사이의 원 스텝 축합반응으로부터 합성되었다. 도 1은 코폴리옥살레이트의 합성과 분해를 나타낸다. 사이클로헥산디메탄올 이외 HBA의 도입은 어떤 합성 합병증에 원인이 되지 않았고 폴리옥살레이트의 합성에 사용된 절차는 공중합체의 합성에 적합하였다. 중합은 질소 기체 하에서 상응하는 공중합체를 발생시키기 위해 건조 THF에서 진행되었다. 결과물인 코폴리옥살레이트 (copolyoxalate)는 차가운 헥산에서 반복된 침전을 통해 정제되었고 고진공 하에서 건조 시킨 후에 노란 고체를 얻게 되었다. HPOX was synthesized from a one-step condensation reaction between oxalyl chloride and two diols, 1,4-cyclohexanedimethanol and HBA. 1 shows the synthesis and degradation of copolyoxalate. The introduction of HBAs other than cyclohexanedimethanol did not cause any synthetic complications and the procedure used for the synthesis of polyoxalates was suitable for the synthesis of copolymers. The polymerization proceeded in dry THF to generate the corresponding copolymer under nitrogen gas. The resulting copolyoxalate was purified by repeated precipitation in cold hexanes and after drying under high vacuum a yellow solid was obtained.

폴리옥살레이트의 화학적 구조는 1H-NMR로 확인되었다. 1,4-사이클로헥산디메탄올의 히드록실 그룹 (hydroxyl groups) 옆에 있는 메틸렌 수소는 3.5 ppm에서 나타난다. 4.2 ppm 이하에서 큰 피크는 인접한 옥살레이트 에스테르 결합의 메틸렌 수소에 일치했다. 두 개의 다중선 방향족 수소 피크는 7.2와 7.5 ppm에서 나타났고 벤질기 수소는 5.3ppm에서 나타났다. 이런 결과들은 퍼옥살레이트 에스테르(peroxalate esters) 결합을 포함하고 있는 퍼옥살레이트를 발생시키기 위한 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 두 개의 디올(diol), 1,4-사이클로헥산디메탄올 (cyclohexane dimethanol)과 HBA 사이의 축합 반응으로부터 성공적인 중합을 의미한다 (도 2). 고분자 합성을 위해 사용된 1,4-사이클로헥산디메탄올과 HBA의 몰비율은 4:1이었다. 2d 수소와 2c 수소의 통합 비율을 비교함으로서 공중합이 1,4-사이클로헥산디메탄올 (cyclohexane dimethanol)대 HBA가 4:1의 몰비율을 나타내는 것을 또한 확인하였다. 이 반응으로부터 획득한 HPOX는 1.8의 다분산 지수 (polydispersity index)를 가진 ~100 반복된 유닛의 중합정도와 일치하는 ~25000의 분자량 (MW)을 가지고 있다 (도 3).
The chemical structure of the polyoxalate was confirmed by 1 H-NMR. Methylene hydrogen next to the hydroxyl groups of 1,4-cyclohexanedimethanol appears at 3.5 ppm. Larger peaks below 4.2 ppm corresponded to the methylene hydrogens of adjacent oxalate ester bonds. Two polylinear aromatic hydrogen peaks were seen at 7.2 and 7.5 ppm and benzyl hydrogen at 5.3 ppm. These results indicate that oxalyl chloride, two diols, and 1,4-cyclohexanedimethanol to generate peroxalate containing peroxalate esters bonds. Means successful polymerization from the condensation reaction between and HBA (FIG. 2). The molar ratio of 1,4-cyclohexanedimethanol to HBA used for polymer synthesis was 4: 1. By comparing the integration ratio of 2d hydrogen and 2c hydrogen, it was also confirmed that the copolymer showed a molar ratio of 1,4-cyclohexane dimethanol to HBA 4: 1. The HPOX obtained from this reaction has a molecular weight (MW) of ˜25000 which corresponds to the degree of polymerization of ˜100 repeated units with a polydispersity index of 1.8 (FIG. 3).

공중합체의 가수분해와 Hydrolysis of the copolymer HBAHBA 의 방출Release of

HPOX의 가수분해 속도는 생리학상 (physiological)의 조건 하에서 측정되었다. 물의 가수분해에 의한 폴리옥살레이트의 분해는 고분자를 미세분말 (fine powder)로 잘게 부스고 수성조건 하에서 배양하는 동안 분자량을 측정함으로써 조사되었다. 도 4는 HPOX의 가수분해 특성을 나타낸다. 그것은 pH 7.4에서 12시간 이하의 반감기를 가지고 있고 HPOX는 가수분해성 분해된다는 것을 의미한다. HPOX의 가수분해성 분해를 확인하기 위해 미세한 공중합체 가루를 37℃에서 24시간 동안 D2O에서 배양하였고 상청액은 1H-NMR 분석을 위해 수집되었다. 인접한 옥살레이트 에스테르 결합의 메틸렌 수소에 일치하는 피크는 거의 사라졌고 1,4-사이클로 헥산디메탄올 (cyclohexanedimethanol)의 환식의 메틸렌 수소와 일치하는 다중선 피크는 3.3ppm에서 나타난다. 게다가 HBA의 벤질 수소는 4.6ppm에서 두 개의 방향족 수소 신호는 6.7과 7.1ppm에서 나타난다. 이 결과는 HPOX는 모노머, HBA와 1,4-사이클로헥산디메탄올을 발생시키기 위해 분명히 가수분해의 분해를 하는 것을 의미하는 것이다.
The hydrolysis rate of HPOX was measured under physiological conditions. The decomposition of polyoxalate by hydrolysis of water was investigated by pulverizing the polymer into fine powder and measuring the molecular weight during incubation under aqueous conditions. 4 shows the hydrolysis characteristics of HPOX. It has a half life of 12 hours or less at pH 7.4 and means that HPOX is hydrolytically degraded. To confirm the hydrolytic degradation of HPOX, the fine copolymer powder was incubated in D 2 O at 37 ° C. for 24 hours and the supernatant was collected for 1 H-NMR analysis. The peaks corresponding to the methylene hydrogens of adjacent oxalate ester bonds are almost gone and the polyline peaks matching the cyclic methylene hydrogens of 1,4-cyclohexanedimethanol appear at 3.3 ppm. In addition, HBA's benzyl hydrogen was found at 4.6 ppm and two aromatic hydrogen signals at 6.7 and 7.1 ppm. This result means that HPOX clearly decomposes hydrolysis to generate monomers, HBA and 1,4-cyclohexanedimethanol.

코폴리옥살레이트Copolyoxalate 나노미립구의Nanoparticles 특징 Characteristic

오일-물의 에멀젼 방법 (an oil-in-water emulsion method)에 의해 유화제로서 폴리(비닐 알코올)을 사용하여 HPOX는 나노미립구로 제형화 되었다. 입자 사이즈와 구조를 SEM (scanning electron microscope)을 사용하여 조사했다. HPOX 나노미립구는 매끄러운 표면과 세포에 대한 노출 면적을 크게 하기 위한 형태인, 500nm 이하의 평균지름을 가진 둥근 구형이었다 (도 5). 이 고분자는 12시간의 가수분해의 반감기를 가졌으나, 수성 상태 하에서 나노미립구로 제형화하기 위한 충분한 소수성 (hydrophobicity)을 가진 것처럼 보였다. 이 범위에서 HPOX 나노미립구는 세포내(intracellular)와 세포외 (exracellular) 약물 전달체의 응용을 위해 적당한 것일지도 모른다. 특별히, 그것은 대식세포는 0.5~3μm 범위의 이물질을 쉽게 식균작용을 함으로서 대식세포 (Macrophages)에 의한 식균 작용 (phagocytosis)을 포함한 약물 전달체로서 적합하다. HPOX 나노미립구 세포독성 (cytotoxicity)을 평가하기 위해서 MTT 분석은 RAW 264.7 세포를 사용함으로서 실행되었다. 세포는 24시간 동안 HPOX 나노미립구의 다양한 양에서 배양되었고, 세포의 생존력을 측정했다 (도 6). HPOX 나노미립구는 용량에 의존한 방식 (dose-dependant manner)에 있어 최소한의 세포독성을 나타냈다. 10μg의 나노미립구에서 세포독성이 없는 것이 관찰되었다. 50μg과 100μg의 나노미립구로 처리한 세포는 세포 생존력이 약간 감소하는 것으로 나타났다. 이것은 약물 전달체로서의 응용에 있어 코폴리옥살레이트 나노미립구 (copolyoxalate nanoparticles)가 수용될 수 있다는 것으로 암시될 수 있다.
HPOX was formulated into nanoparticles using poly (vinyl alcohol) as an emulsifier by an oil-in-water emulsion method. Particle size and structure were examined using a scanning electron microscope (SEM). HPOX nanoparticulates were round spheres with a smooth surface and an average diameter of 500 nm or less, a form for increasing the exposure area to cells (FIG. 5). This polymer had a half-life of 12 hours of hydrolysis but appeared to have sufficient hydrophobicity to formulate into nanoparticles under aqueous conditions. HPOX nanoparticles in this range may be suitable for the application of intracellular and extracellular drug carriers. In particular, it is well suited as a drug carrier, including phagocytosis by macrophages, because macrophages easily phagocytize foreign bodies in the range of 0.5-3 μm. MTT assay was performed using RAW 264.7 cells to assess HPOX nanoparticulate cytotoxicity. Cells were incubated in various amounts of HPOX nanoparticles for 24 hours and the viability of the cells was measured (FIG. 6). HPOX nanoparticulates showed minimal cytotoxicity in a dose-dependant manner. No cytotoxicity was observed in 10 μg of nanoparticles. Cells treated with 50 μg and 100 μg nanoparticles showed a slight decrease in cell viability. This may suggest that copolyoxalate nanoparticles can be accommodated for application as drug carriers.

코폴리옥살레이트Copolyoxalate 나노미립구의Nanoparticles 항염증 효과 Anti-inflammatory effect

NO는 발병의 염증에 있어 친염증성 매개자 (pro-inflammatory mediator)로 알려졌고 그것의 생산은 유도성 질소산화물 합성효소(inducible nitric oxide synthases, iNOS)에 의해 촉진된다. 코폴리옥살레이트로부터 방출된 HBA의 항염증 효과를 확인하기 위해 LPS로 처리된 RAW 264.7 대식세포의 염증 반응을 HPOX 나노미립구의 부존재와 존재 하에 조사했다. 첫 번째로 세포안의 LPS-유도된 NO 생산에 있어 HPOX 나노미립구로부터 방출된 HBA의 저해제 효과를 조사했다. 하루 LPS로 배양되는 동안, 세포는 12μM에 이르기까지 많은 양의 NO를 산출했다. 세포가 HPOX 나노미립구로 처리되었을 때, NO 생산은 두드러지게 약물 농도 의존성(dose dependent manner)에 따라 저해되었다 (도 7). HPOX 나노미립구의 25μg의 처리 후, NO 생산은 반으로 감소했고, 50μg의 HPOX 나노미립구는 NO 생산을 완전히 억제했다. 50μg의 HPOX 나노미립구는 0.1μM의 HBA처럼 같은 억제효과를 발휘했다. HPOX로부터 방출된 HBA의 항산화 효과를 추가 확인하기 위해서, HBA를 함유하지 않은 폴리옥살레이트 (POX)를 또한 테스트했다. POX 나노미립구에 의한 NO 생산은 저해되지 않았고, 이는 HPOX로부터 방출된 HBA는 NO 생산에 있어 억제효과를 발휘하는 것을 증명했다.NO is known as a pro-inflammatory mediator in the onset of inflammation and its production is promoted by inducible nitric oxide synthases (iNOS). In order to confirm the anti-inflammatory effect of HBA released from copolyoxalate, the inflammatory response of RAW 264.7 macrophages treated with LPS was examined in the absence and presence of HPOX nanoparticles. First, we investigated the inhibitory effect of HBA released from HPOX nanoparticles on LPS-induced NO production in cells. While incubated with LPS per day, cells yielded large amounts of NO down to 12 μM. When cells were treated with HPOX nanoparticulates, NO production was markedly inhibited in a dose dependent manner (FIG. 7). After 25 μg of HPOX nanoparticles, NO production was halved and 50 μg of HPOX nanoparticles completely inhibited NO production. 50 μg of HPOX nanoparticles showed the same inhibitory effect as 0.1 μM HBA. To further confirm the antioxidant effect of HBA released from HPOX, polyoxalate (POX) without HBA was also tested. NO production by POX nanoparticles was not inhibited, demonstrating that HBA released from HPOX exerts inhibitory effects on NO production.

또한, HPOX 나노미립구가 iNOS의 합성을 저해하는지 확인하기 위하여 RAW 264.7 세포를 이용한 항-iNOS 항체로 결과를 확인하고 도 8에 나타내었다. In addition, to confirm whether HPOX nanoparticles inhibit the synthesis of iNOS, the results were confirmed with anti-iNOS antibody using RAW 264.7 cells and shown in FIG. 8.

추가적으로, HPOX 나노미립구가 LPS로 처리된 RAW 264.7 대식세포에 iNOS의 생성을 감소시키는지 확인하기 위한 웨스턴블롯팅 (Western blotting)에 대한 결과는 다음과 같다. LPS를 처리하여 세포를 자극시키면 iNOS의 생성이 현저하게 증가하고 HBA를 투입하면 iNOS의 생성이 완전히 억제되었다. HPOX의 농도를 달리하면서 세포에 투입하였을 때 HPOX의 농도가 증가할수록 iNOS단백질의 생성이 점차 감소됨을 알 수가 있었다. 도 9을 보면, 검게 나타나는 띠의 세기가 진한 것이 단백질이 많다는 것으로 iNOS의 발생이 많다는 것이고, 세기가 약한 것은 iNOS의 생성이 감소된다는 것을 나타낸다. 이 결과로 HBA가 가지는 NO억제 효과는 iNOS의 생성 억제에 기인한다는 것을 확인할 수 있었다.
In addition, the results for Western blotting to confirm that HPOX nanoparticles reduce iNOS production in RAW 264.7 macrophages treated with LPS are as follows. Stimulation of cells by treatment of LPS significantly increased the production of iNOS, and the addition of HBA completely inhibited the production of iNOS. When the concentration of HPOX was added to the cells, the production of iNOS protein was gradually decreased as the concentration of HPOX was increased. Referring to FIG. 9, the darker the band, the stronger the protein, the more iNOS is generated, and the weaker the intensity, the less iNOS is produced. As a result, it was confirmed that the NO inhibitory effect of HBA is due to the inhibition of production of iNOS.

TNF-α의 발현량의 측정에 의해 LPS-처리된 대식세포의 염증 반응에 있어 HPOX 나노미립구의 효과를 추가 조사했다. TNF-α는 전신성 염증 (systemic inflammation)에 관계된 사이토카인 (cytokine)이고 LPS 또는 인터루킨-1 (interlukin-1, IL-1)에 의해 자극 후 대식 세포에 의해 생성된다. TNF-α는 다양한 약물과 약물 전달체로서 염증 반응 측정하기 위해 이전 연구에서 널리 사용되고 있다. 대식 세포는 사전에 LPS로 자극을 받고 HPOX 나노미립구로 처리되었고 TNF-α의 레벨은 1 day 후 처리 (post treatment) 시점에 측정되었다. 도 10은 TNF-α 생산에 있어 HPOX의 효과를 증명한다. LPS 처리는 대식 세포에 의해 TNF-α 생산에 있어 두드러진 증가의 결과를 가져왔다. 세포에 의해 용량에 의존한 방식 (dose-dependant manner)으로 HPOX 나노미립구는 LPS-유도 TNF-α 생산을 감소시켰다. 50μg 미만인 HPOX 나노미립구는 두드러지지는 않으나, 조금 TNF-α 생산을 감소시키는 것으로 나타났다. 그러나 POX는 TNF-α 생산을 억제하지는 못했다. 이런 결과들은 HPOX 나노미립구로부터 방출된 HBA는 항염증 효과를 발휘하는 것을 뒷받침한다. The effect of HPOX nanoparticles on the inflammatory response of LPS-treated macrophages was further investigated by measuring the expression level of TNF-α. TNF-α is a cytokine involved in systemic inflammation and is produced by macrophages after stimulation by LPS or interlukin-1 (IL-1). TNF-α is widely used in previous studies to measure inflammatory responses as a variety of drugs and drug carriers. Macrophages were previously stimulated with LPS and treated with HPOX nanoparticulates and levels of TNF-α were measured at 1 day post treatment. 10 demonstrates the effect of HPOX on TNF-α production. LPS treatment resulted in a marked increase in TNF-α production by macrophages. HPOX nanoparticulates reduced LPS-induced TNF-α production in a dose-dependant manner by the cells. HPOX nanoparticulates less than 50 μg were not noticeable but have been shown to slightly reduce TNF-α production. However, POX did not inhibit TNF-α production. These results support that HBA released from HPOX nanoparticles exert an anti-inflammatory effect.

코폴리옥살레이트의Copolyoxalate 과산화수소와의 반응성 Reactivity with Hydrogen Peroxide

처음 10μM 양의 과산화수소가 HPOX를 첨가함으로 인해 과산화수소의 농도가 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 또한 HPOX의 양이 증가할수록 줄어드는 농도가 더 많은 것을 확인할 수 있었다(도 11). 이러한 실험결과를 바탕으로 본 발명의 코폴리옥살레이트 나노미립구는 과산화수소(H2O2)와 반응하여 H2O2의 양을 감소시키는 역할을 하게 되어 염증완화역할을 하게 되는 것을 알 수 있었다. HPOX 나노미립구의 과산화수소 감지능력 평가로서 도 12와 같은 실험을 수행하였다. 즉, 1mg의 HPOX 나노미립구를 농도가 다른 과산화수소 용액에 첨가하여 luminometer를 이용하여 발광세기를 측정하였는데, 도 12에 나타난 바와 같이, 과산화수소의 농도가 증가할수록 발광의 세기가 선형으로 증가하며 HPOX 나노미립구는 약 200nM 이상의 과산화수소를 감지할 수 있는 능력이 있음을 확인할 수 있었다.
The first 10 μM amount of hydrogen peroxide reduced the concentration of hydrogen peroxide due to the addition of HPOX. In addition, as the amount of HPOX increased it was confirmed that the concentration decreased more (Fig. 11). Based on the results of these experiments, the copolyoxalate nanoparticles of the present invention were found to react with hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) to reduce the amount of H 2 O 2 and to act as an alleviation agent. An experiment as shown in FIG. 12 was performed to evaluate hydrogen peroxide detection ability of HPOX nanoparticles. That is, 1 mg of HPOX nanoparticles were added to different concentrations of hydrogen peroxide solution, and the luminescence intensity was measured by using a luminometer. As shown in FIG. 12, as the concentration of hydrogen peroxide increased, the intensity of luminescence increased linearly and HPOX nanoparticles. It was confirmed that the ability to detect more than about 200nM hydrogen peroxide.

또한, 과산화수소로 활성화된 대식세포에서 HPOX 나노미립구와 HBA의 항산화작용을 조사하고 그 결과를 도 13에 나타내었다. 도 13에 나타난 바와 같이, 정상상태(미처리시)에는 약 7%의 세포만 과산화수소를 생성하고 과산화수소 처리로 약 89%의 세포가 과산화수소를 생성하고 활성화됨을 알 수 있다. HBA는 과산화소수로 활성화된 세포에서 더 이상의 과산화수소의 생성을 억제하였으며(33%), HPOX는 과산화산소를 제거할 뿐 아니라 활성화된 세포에서 과산화수소의 생성을 억제함 발휘하였다. 이는 HPOX는 처리되는 과산화수소와 반응하여 그 농도를 감소시키고, 분해과정에서 HBA가 방출되어 더 이상의 과산화수소의 생성을 억제함을 암시한다.
In addition, the antioxidant activity of HPOX nanoparticles and HBA in macrophages activated with hydrogen peroxide were investigated and the results are shown in FIG. 13. As shown in FIG. 13, it can be seen that only about 7% of cells produce hydrogen peroxide in a steady state (untreated), and about 89% of cells generate and activate hydrogen peroxide. HBA inhibited the production of further hydrogen peroxide in cells activated with hydrogen peroxide (33%), and HPOX not only eliminated oxygen peroxide but also inhibited the production of hydrogen peroxide in activated cells. This suggests that HPOX reacts with the hydrogen peroxide to be treated to reduce its concentration, and HBA is released during decomposition to inhibit further hydrogen peroxide production.

또한, PMA로 처리된 대식세포에서 HPOX 나노미립구와 HBA의 항산화작용을 관찰하고, 그 결과를 도 13에 나타내었다. 도 13에 나타난 바와 같이, PMA 처리로 약 56%의 세포가 활성화되고, 과산화수소 등의 활성산소를 생성한다. HBA로 처리하면 약 31%의 세포가 PMA로 활성화되고, HPOX 나노미립구로 처리하면 약 4%의 세포가 PMA로 활성화됨을 확인함으로써, HBA보다 HPOX가 더 우수한 항산화 활성을 가짐을 확인하였다.
In addition, the antioxidant activity of HPOX nanoparticles and HBA was observed in macrophages treated with PMA, and the results are shown in FIG. 13. As shown in FIG. 13, PMA treatment activates about 56% of cells, producing active oxygen such as hydrogen peroxide. When treated with HBA, about 31% of the cells were activated with PMA, and when treated with HPOX nanoparticles, it was confirmed that about 4% of the cells were activated with PMA, confirming that HPOX had better antioxidant activity than HBA.

유세포Flow cell 분석기를 이용한  With analyzer HPOXHPOX 와 Wow HBAHBA 의 세포사멸 억제 작용Cell death inhibition

유세포 분석기를 이용하여 HPOX 나노미립구와 HBA의 세포사멸 억제능을 확인하고 그 결과를 도 15에 나타내었다.The flow cytometry was used to confirm the apoptosis inhibitory ability of HPOX nanoparticles and HBA and the results are shown in FIG. 15.

도 15에 나타난 바와 같이, 과산화수소는 대식세포를 사멸(apoptosis)시키지만 HPOX 나노미립구로 처리하면 세포사멸이 현저히 억제됨을 알 수 있으며, 세포사멸억제효과는 HPOX 나노미립구가 HBA보다 우수하다. b 피크의 세기가 약해지고 피크의 위치가 왼쪽으로 이동함을 알 수 있다.
As shown in FIG. 15, hydrogen peroxide kills macrophages (apoptosis), but treatment with HPOX nanoparticles can be seen that the cell death is significantly inhibited, the apoptosis inhibitory effect HPOX nanoparticles are superior to HBA. b It can be seen that the intensity of the peak is weakened and the position of the peak moves to the left.

호흡기염증질환에서In respiratory inflammatory disease HPOXHPOX 의 항산화 및 항염증작용And anti-inflammatory effects of

OVA로 염증이 유도된 생쥐 폐의 면역염색법 사진 (도 16의 상부)과 iNOS 발현에 대한 H & E immunohistochemistry(도 16의 하부)로부터 OVA처리에 의해 생쥐 폐의 기도에 많은 염증관련세포가 모여들고 점액을 생성되는 염증이 유도되었고 HPOX 나노미립구는 산화질소생성단백질 (iNOS)의 생성을 억제하여 염증을 완화시킴을 확인하였다.
Inflammation-induced OVA from the lungs of mice (top 16) and H & E immunohistochemistry (i.e., bottom 16) for iNOS expression resulted in the infiltration of many inflammation-related cells into the lungs of mouse lungs. Inflammation producing mucus was induced and HPOX nanoparticles were found to relieve inflammation by inhibiting the production of nitric oxide protein (iNOS).

과산화수소와의 반응성 및 영상Reactivity and Imaging with Hydrogen Peroxide

형광물질 (rubrene)을 포접한 HPOX 나노미립구의 발광스펙트럼을 관찰하였다. 과산화수소가 없는 상태에서는 발광이 일어나지 않지만 과산화수소가 존재할 시에 화학적발광현상 (chemiluminescence)에 의해 발광함을 알 수 있다(도 17). Rubrene의 경우 약 560nm의 파장에서 발광이 나타난다.
Luminescence spectra of HPOX nanoparticles enclosed with a luminescent substance (rubrene) were observed. It can be seen that light emission does not occur in the absence of hydrogen peroxide, but emits light by chemiluminescence when hydrogen peroxide is present (FIG. 17). In the case of Rubrene, light emission occurs at a wavelength of about 560 nm.

형광물질을 Fluorescent material 포접한Included HPOXHPOX 나노미립구의Nanoparticles 생체내In vivo 과산화수소 영상 Hydrogen peroxide imaging

생쥐의 하지 허혈모델을 이용하여 형광물질을 포접한 HPOX 나노미립구가 생체내에서 생성되는 과산화수소를 영상할 수 있다는 것을 확인하였다.Using the mouse's lower limb ischemia model, it was confirmed that HPOX nanoparticles encapsulated with fluorescent material could image hydrogen peroxide produced in vivo.

1시간의 허혈 후 재관류를 실시하며 나노미립구를 허혈 부위에 주사하여 시간경과에 따른 과산화수소를 영상하였다. 재관류 직후 과산화수소가 생성되고 2분 후 가장 높은 강도의 발광이 확인되었다(도 18).
After 1 hour of ischemia, reperfusion was performed, and nanoparticles were injected into the ischemic region to image hydrogen peroxide over time. Hydrogen peroxide was produced immediately after reperfusion and the highest intensity luminescence was observed after 2 minutes (FIG. 18).

또한, 과산화수소를 제거하는 효소인 catalase을 주입한 후 형광물질을 포접한 HPOX 나노미립구로 과산화수소를 영상하였다(도 19). 재관류 후 생성되는 과산화수소는 catalase에 의해 분해되어서 그 농도가 감소하므로 HPOX에 의해 낮은 강도의 발광이 나타남을 확인할 수 있다. 즉, 형광물질을 포접한 HPOX나노미립구는 화학적발광원리에 의해 과산화수소를 영상할 수 있었다.
In addition, after injection of catalase, an enzyme that removes hydrogen peroxide, hydrogen peroxide was imaged with HPOX nanoparticulates containing fluorescent material (FIG. 19). Hydrogen peroxide produced after reperfusion was decomposed by catalase and its concentration decreased, indicating that low-intensity luminescence appeared by HPOX. That is, HPOX nanoparticles encapsulated with a fluorescent substance could image hydrogen peroxide by the chemiluminescence principle.

형광물질로 With fluorescent material 포접한Included HPOXHPOX 나노미립구의Nanoparticles 대식세포 내로의 유입 영상 Imaging Imaging into Macrophages

형광을 띠는 Coumarin을 모델약물로 이용하여 HPOX 나노미립구에 포접하여 대식세포 내로 이입(endocytosis)되는 과정을 형광현미경으로 관찰하고, 그 결과를 도 20에 나타내었다. Coumarin이 포접된 HPOX 나노미립구를 대식세포에 주입하고 2시간 후 형광현미경으로 관찰한 결과, coumarin이 HPOX 나노미립구에서 방출되어 핵을 제외한 세포질에서 형광이 관찰됨을 확인함으로써, HPOX 나노미립구의 대식세포로 약물전달 기능을 확인하였다.
Using a fluorescent Coumarin as a model drug, the process of inclusion in HPOX nanoparticles and endocytosis into macrophages was observed under a fluorescence microscope, and the results are shown in FIG. 20. Two hours after the injection of Coumarin-encapsulated HPOX nanoparticles into macrophages, fluorescence microscopy confirmed that coumarin was released from HPOX nanoparticles and fluorescence was observed in the cytoplasm except the nucleus. Drug delivery function was confirmed.

HPOXHPOX 나노미립구의Nanoparticles 약물 전달 효율 Drug delivery efficiency

PARP와 caspase 3의 활성도를 감소시켜 세포사멸을 억제하는 것으로 알려진 4-AN을 모델약물로 이용하여 HPOX의 허혈/재관류 손상치료에서 약물전달체로서의 가능성을 시험하고, 그 결과를 도 21에 나타내었다. 도 21에 나타난 바와 같이, 과산화수소가 과잉 생성되는 부위에서는 HPOX 나노미립구가 PLGA보다 효과적인 4-AN의 전달체임을 확인할 수 있다.
Using 4-AN, which is known to reduce the activity of PARP and caspase 3 to inhibit cell death, as a model drug, the possibility of drug delivery in ischemia / reperfusion injury treatment of HPOX was tested, and the results are shown in FIG. 21. As shown in FIG. 21, it can be seen that HPOX nanoparticulates are more effective carriers of 4-AN than PLGA at sites where excess hydrogen peroxide is produced.

또한, HPOX 나노미립구의 자체적인 항산화효과로 인해 염증유도인자인 TNF-α, MCP-1, PCAM 및 ICAM의 발현을 억제하므로 미립구자제의 항산화 및 항염증효과를 확인하였다(도 22). 4-AN을 포접한 HPOX 나노미립구는 상승작용에 의해 더 우수한 항산화효과를 발휘한다.
In addition, the antioxidant effect of HPOX nanoparticles by inhibiting the expression of inflammatory inducers TNF-α, MCP-1, PCAM and ICAM due to its own antioxidant effect was confirmed (Fig. 22). HPOX nanoparticles incorporating 4-AN exert a superior antioxidant effect by synergy.

HPOXHPOX 나노미립구의Nanoparticles 생체 적합성 Biocompatibility

HPOX 나노미립구의 생체 적합성을 확인하였다. 50mg의 HPOX 나노미립구를 쥐에 7일간 투여한 후 모든 조직에서 saline을 주입한 대조군과의 차이를 관찰하였으며, 도 23에 나타난 바와 같이, saline을 주입한 대조군과 차이가 없음을 확인함으로써 HPOX 나노미립구의 우수한 생체적합성을 증명하였다.
The biocompatibility of HPOX nanoparticles was confirmed. After administration of 50 mg of HPOX nanoparticles to mice for 7 days, all tissues were observed a difference from the control group injected with saline. As shown in FIG. 23, the HPOX nanoparticles were confirmed to be not different from the control group injected with saline. Excellent biocompatibility of

이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. Although embodiments of the present invention have been described above with reference to the accompanying drawings, those skilled in the art to which the present invention pertains may be embodied in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. I can understand that. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.

Claims (41)

4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzly alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol) 중 1종 이상의 단량체가 중합체 골격으로 통합된 옥살레이트(oxalate) 공중합체를 포함하는 나노입자.A nanoparticle comprising an oxalate copolymer in which at least one monomer of 4-hydroxybenzly alcohol and vanillyl alcohol is integrated into a polymer backbone. 제 1항에 있어서,
다음의 단량체가 공중합체로 통합되고, 상기 단량체는 공중합체를 합성하기 위하여 축합 반응을 수행하는 것을 특징으로 하는 나노입자:
a) 옥살레이트;
b) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및
c) 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 1종 이상의 단량체.The method of claim 1,
The following monomers are incorporated into a copolymer, wherein the monomers are subjected to a condensation reaction to synthesize a copolymer:
a) oxalate;
b) 1,4-cyclohexanedimethanol; And
c) at least one monomer selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol. 제 2항에 있어서,
상기 c)로부터 선택된 단량체는 4-하이드록시벤질 알코올인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 2,
Nanoparticles, characterized in that the monomer selected from c) is 4-hydroxybenzyl alcohol. 제 2항에 있어서,
상기 공중합체는 옥살레이트와 1,4-사이클로헥산디메탄올이 통합된 하나 이상의 제 1블록 및 옥살레이트와 4-하이드록시벤질 알코올 또는 바닐릴 알코올이 통합된 하나 이상의 제 2블록을 포함하는 것을 특징으로 하는 나노입자. The method of claim 2,
The copolymer comprises at least one first block integrating oxalate and 1,4-cyclohexanedimethanol and at least one second block integrating oxalate and 4-hydroxybenzyl alcohol or vanylyl alcohol. Nanoparticles. 제 4항에 있어서,
상기 제 1블록은 다음의 화학식 1의 구조를 가지고, 상기 제 2블록은 다음의 화학식 2의 구조를 가지며, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것을 특징으로 하는 나노입자:
[화학식 1]
Figure pat00009

[화학식 2]
Figure pat00010
The method of claim 4, wherein
Wherein the first block has the structure of Formula 1, and the second block has the structure of Formula 2, wherein R is H or OCH 3 :
[Formula 1]
Figure pat00009

(2)
Figure pat00010
 제 5항에 있어서,
상기 R은 H인 것을 특징으로 하는 나노입자.6. The method of claim 5,
R is nanoparticles, characterized in that H. 제 5항에 있어서,
상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것을 특징으로 하는 나노입자:
[화학식 3]
Figure pat00011
6. The method of claim 5,
The copolymer has a structure of Formula 3 wherein R is H or OCH 3 Nanoparticles:
(3)
Figure pat00011
 제 7항에 있어서,
상기 R은 H인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 7, wherein
R is nanoparticles, characterized in that H. 제 5항에 있어서,
상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것을 특징으로 하는 나노입자.6. The method of claim 5,
The mole ratio (mole ratio) of the first block and the second block in the copolymer is 3: 1 to 5: 1 nanoparticles. 제 9항에 있어서,
상기 공중합체 내의 제 1블록과 제 2블록의 몰비는 4:1인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 9,
Nanoparticles, characterized in that the molar ratio of the first block and the second block in the copolymer is 4: 1. 제 2항에 있어서,
상기 공중합체의 평균분자량은 20,000 내지 30,000달톤(Dalton)인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 2,
The average molecular weight of the copolymer is 20,000 to 30,000 Daltons (Dalton), characterized in that the nanoparticles. 제 11항에 있어서,
상기 공중합체의 평균분자량은 25,000달톤인 것을 특징으로 하는 나노입자.12. The method of claim 11,
Nanoparticles, characterized in that the average molecular weight of the copolymer is 25,000 Daltons. 제 4항에 있어서,
상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 50~150인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 4, wherein
Nanoparticles, characterized in that the average number of blocks in the copolymer is 50 ~ 150. 제 13항에 있어서,
상기 공중합체 내의 블록의 평균 수는 100인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 13,
Nanoparticles, characterized in that the average number of blocks in the copolymer is 100. 제 1항에 있어서,
직경이 500나노미터(nm) 이하인 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 1,
Nanoparticles characterized in that the diameter of 500 nanometers (nm) or less. 제 1항에 있어서,
상기 나노입자 내에 약물(therapeutic agent) 또는 바이오영상화제(bioimaging agent)를 더 포함하는 나노입자.The method of claim 1,
Nanoparticles further comprising a drug (therapeutic agent) or a bioimaging agent (bioimaging agent) in the nanoparticles. 제 16항에 있어서,
상기 약물은 항아폽토시스제(anti-apoptotic agent), 혈전용해제(clot-dissolving agent), 항산화제(anti-oxidant agent) 및 항염증제(anti-inflammatory agent)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 나노입자.17. The method of claim 16,
The drug is nanoparticles, characterized in that selected from the group consisting of anti-apoptotic agent (clot-dissolving agent), antioxidant (anti-oxidant agent) and anti-inflammatory agent (anti-inflammatory agent) . 제 17항에 있어서,
상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN), N-(6-옥소-5,6-디하이드로페난트리딘-2-일)-N,N-디메틸아세트아미드 HCl(PJ34), 아우린트리카르복시산, 조직 플라스미노겐 활성화인자 단백질(tPA) 및 N-벤질옥시카보닐-발린-알라닌-아스파르트산-플루오로메틸케톤(Z-VAD-FMK)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 17,
The drug is 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN), N- (6-oxo-5,6-dihydrophenantridin-2-yl) -N, N-dimethylacetamide From the group consisting of HCl (PJ34), aurintricarboxylic acid, tissue plasminogen activator protein (tPA) and N-benzyloxycarbonyl-valine-alanine-aspartic acid-fluoromethylketone (Z-VAD-FMK) Nanoparticles, characterized in that selected. 제 18항에 있어서,
상기 약물은 4-아미노-1,8-나프탈이미드(4-AN)인 것을 특징으로 하는 나노입자.19. The method of claim 18,
The drug is a nanoparticle, characterized in that 4-amino-1,8-naphthalimide (4-AN). 제 16항에 있어서,
상기 바이오영상화제는 형광안료(fluorescent agent), 근적외선 방출제, 방사선 트레이서, PET 조영제 및 MRI 조영제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 나노입자.17. The method of claim 16,
The bioimaging is nanoparticles, characterized in that selected from the group consisting of a fluorescent pigment (near infrared ray emitter, radiation tracer, PET contrast agent and MRI contrast agent). 제 20항에 있어서,
상기 바이오영상화제는 루브렌(rubrene), 펜타센(pentacene), 인도시아닌 그린(indocyanine green), 가돌리늄(gadolinium), 테크네튬-99엠(technetium-99m) 및 플루오로데옥시글루코오스(18F)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 나노입자.The method of claim 20,
The bioimaging is rubrene (pentacene), indocyanine green (indocyanine green), gadolinium (gadolinium), technetium-99m (technetium-99m) and fluorodeoxyglucose (18F) Nanoparticles selected from the group consisting of. 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 다음을 포함하는 조성물을 접촉하여 제조되는 옥살레이트 공중합체:
a) 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol); 및
b) 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물.Oxalate copolymer prepared by contacting oxalyl chloride with a composition comprising:
a) 1,4-cyclohexanedimethanol; And
b) a compound selected from the group consisting of 4-hydroxybenzyl alcohol and vanillyl alcohol. 제 22항에 있어서,
상기 b)의 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것을 특징으로 하는 옥살레티트 공중합체.The method of claim 22,
Oxalite copolymer, characterized in that the compound of b) is 4-hydroxybenzyl alcohol. 제 22항에 있어서,
상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것을 특징으로 하는 옥살레이트 공중합체.The method of claim 22,
The molar ratio (ale) of the a) and b) is 3: oxalate copolymer, characterized in that. 제 24항에 있어서,
상기 a)와 b)의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것을 특징으로 하는 옥살레이트 공중합체.25. The method of claim 24,
The molar ratio of the a) and b) is oxalate copolymer, characterized in that 4: 1. 제 22항에 있어서,
상기 공중합체는 다음의 화학식 3의 구조를 가지고, 여기에서 R은 H 또는 OCH3인 것을 특징으로 하는 옥살레이트 공중합체:
[화학식 3]
Figure pat00012
The method of claim 22,
The copolymer has the structure of formula (3) wherein R is H or OCH 3
(3)
Figure pat00012
 제 26항에 있어서,
상기 R은 H인 것을 특징으로 하는 옥살레이트 공중합체.The method of claim 26,
R is an oxalate copolymer, characterized in that H. 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)와 1,4-사이클로헥산디메탄올(1,4-cyclohexanedimethanol) 및 4-하이드록시벤질 알코올(4-hydroxybenzyl alcohol) 및 바닐릴 알코올(vanillyl alcohol)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물을 포함하는 조성물을 접촉하는 옥살레이트 공중합체의 제조 방법.Selected from the group consisting of oxalyl chloride, 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanillyl alcohol A method of making an oxalate copolymer in contact with a composition comprising a compound. 제 28항에 있어서,
1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 3:1 내지 5:1인 것을 특징으로 하는 제조 방법.The method of claim 28,
A molar ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is 3: 1 to 5: 1. 제 29항에 있어서,
1,4-사이클로헥산디메탄올과 4-하이드록시벤질 알코올 및 바닐릴 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물의 몰비(mole ratio)는 4:1인 것을 특징으로 하는 제조 방법.30. The method of claim 29,
A molar ratio of the compound selected from the group consisting of 1,4-cyclohexanedimethanol, 4-hydroxybenzyl alcohol and vanylyl alcohol is 4: 1. 제 28항에 있어서,
상기 화합물은 4-하이드록시벤질 알코올인 것을 특징으로 하는 제조 방법.The method of claim 28,
Wherein said compound is 4-hydroxybenzyl alcohol. 제 1항의 나노입자를 유효성분으로 함유하는 염증성 질병 또는 산화적 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases or oxidative diseases containing the nanoparticles of claim 1 as an active ingredient. 제 32항에 있어서,
상기 염증성 질병은 페렴 또는 천식인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The method of claim 32,
The inflammatory disease is a pharmaceutical composition, characterized in that pneumonia or asthma. 제 32항에 있어서,
상기 조성물은 염증성 질병 부위 또는 산화적 질병 부위에 국부적으로 적용되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The method of claim 32,
The composition is a pharmaceutical composition, characterized in that applied locally to an inflammatory disease site or oxidative disease site. 제 32항에 있어서,
상기 산화적 질병은 허혈성 질병인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.The method of claim 32,
The oxidative disease is an ischemic disease, characterized in that the pharmaceutical composition. 제 35항에 있어서,
상기 허혈성 질병은 신경 또는 심장 질환인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.36. The method of claim 35,
The ischemic disease is a pharmaceutical composition, characterized in that the nerve or heart disease. 제 35항에 있어서,
상기 허혈성 질병은 뇌졸중, 뇌성마비, 심근경색증, 뇌출혈, 말초혈관 질환, 우회술 합병증, 저산소성 폐질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.36. The method of claim 35,
The ischemic disease is selected from the group consisting of stroke, cerebral palsy, myocardial infarction, cerebral hemorrhage, peripheral vascular disease, bypass surgery complications, hypoxic lung disease. 제 16항의 바이오영상화제를 더 포함하는 나노입자를 환자에 투여하여 허혈성 질환의 위험이 있는 부위나 허혈성 질환이 발생한 부위를 영상화하는 허혈성 질환의 진단 방법.A method for diagnosing ischemic disease in which a nanoparticle further comprising the bioimaging agent of claim 16 is imaged to a patient to image a site at risk for ischemic disease or a site where ischemic disease occurs. 제 38항에 있어서,
상기 바이오영상화제는 형광안료인 것을 특징으로 하는 진단 방법.The method of claim 38,
The bioimaging diagnostic method characterized in that the fluorescent pigment. 제 39항에 있어서,
상기 형광안료는 루브렌(rubrene)인 것을 특징으로 하는 진단 방법.40. The method of claim 39,
The fluorescent pigment is a diagnostic method, characterized in that (rubrene). 제 38항에 있어서,
상기 영상화는 광학 영상, 적외선 영상, 방사선 영상, MRI, PET로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 진단 방법.The method of claim 38,
The imaging method is characterized in that selected from the group consisting of optical image, infrared image, radiographic image, MRI, PET.
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WO2014052961A1 (en) * 2012-09-28 2014-04-03 Industrial Cooperation Foundation Chonbuk National University Pvax copolymer and pvax microparticles comprising the same
WO2014088349A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-12 전북대학교 산학협력단 Pvo copolymer and pvo microsphere including same
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US10329379B2 (en) * 2013-08-07 2019-06-25 Rutgers, The State University Of New Jersey Polymeric biomaterials derived from monomers comprising hydroxyacids and phenol compounds and their medical uses
KR102039813B1 (en) * 2018-01-17 2019-11-01 전북대학교산학협력단 POC compound, manufacturing method thereof and pharmaceutical composition for preventing or treatment of inflammatory disease

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014052961A1 (en) * 2012-09-28 2014-04-03 Industrial Cooperation Foundation Chonbuk National University Pvax copolymer and pvax microparticles comprising the same
KR101523231B1 (en) * 2012-09-28 2015-05-28 전북대학교산학협력단 PVAX copolymer and PVAX microparticle comprising the same
US9844564B2 (en) 2012-09-28 2017-12-19 Industrial Cooperation Foundation Chonbuk University PVAX copolymer and PVAX microparticles comprising the same
WO2014088349A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-12 전북대학교 산학협력단 Pvo copolymer and pvo microsphere including same
KR20190094671A (en) * 2018-02-05 2019-08-14 전북대학교산학협력단 novel macromolecular compound comprising UDCA and use thereof

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