KR20110086844A - Ｅｒｂｂ－３（ｈｅｒ３）－선택적 조합 요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 HER3-표적의 조합 요법을 위한 약학적 조성물 및 그의 치료방법에 관한 것이다. 본 발명은 HER3 및 선택적으로는 HER2 및/또는 EGFR의 발현의 감소를 가져오기 위한 세포 내의 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및EGFR) mRNA를 표적화하는 올리고머, 및 신호화(signaling) 및/또는 세포 내로의 수용체 다이머의 내부화의 억제를 유도하기 위한 하나 이상의 수용체 티로신 키나아제의 소분자 단백질 티로신 키나아제 억제제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 상기 조합 요법은 과다증식 질환(예. 암)과 같은 일정 범위의 질병에 혜택을 준다. 본 발명은 올리고머 및 단백질 티로신 키나아제 억제제의 조합을 통해 과다증식 질환의 치료 방법을 제공한다.

Description

ＥＲＢＢ－３（ＨＥＲ３）－선택적 조합 요법{ERBB-3 (HER3)-SELECTIVE COMBINATION THERAPY}

관련출원

본 출원은 2008년 11월 7일 출원된 미합중국 가출원 제61/112,549호에 기반하여 우선권을 주장하며, 상기 건은 본 내용에서 참조로 인용된다.

본 발명은 세포 내 HER3 mRNA를 표적화하는 올리고머 화합물(올리고머)의 유효량 및 단백질 티로신 키나아제(PTK)의 유효량을 세포로 투입하는 단계를 포함하는 세포 내 HER3(및 EGFR 및 HER2 중 선택적으로 하나 이상)의 발현 및/또는 활성을 하향조절하기 위한 방법, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이를 필요로 하는 환자에게 세포 내 HER3 mRNA를 표적화하는 올리고머의 유효량 및 PTK 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 질병 치료 방법, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HER3 mRNA를 표적화하는 올리고머의 유효량 및 PTK 억제제의 유효량을 포함하는 약학적 조성물, 또는 약학적으로 허용가능한 첨가제 내의 그의 약학적으로 허용가능한 유도체에 관한 것이다. 상기 조성물은 HER3(및 EGFR 및 HER2 중 선택적으로 하나 이상)의 발현 및/또는 활성을 하향조절하고 암과 같이 다양한 질병을 치료하는데 유용하다.

본 발명은 여기 게시된 올리고머 하나 이상과 같이 HER3를 표적화하는 잠금핵산("LNA") 올리고머의 약제 제제화에 대한 사용을 제공하며, 상기 약제는 단백질 티로신 키나아제 억제제와 조합되어 암의 치료에 사용되기 위한 것이다. 본 발명은 여기 게시된 하나 이상의 올리고머와 같이 HER3을 표적화하는 LNA 올리고머를 포함하는 약제를 제공하는 것으로, 상기 약제는 단백질 티로신 키나아제 억제제와 조합되어 암의 치료에 사용되기 위한 것이다.

1.1. 배경

HER3는, 4개의 다른 수용체인 ErbB-1 (EGFR, HER1), ErbB-2 (neu, HER2), ErbB-3 (HER3) 및 ErbB-4 (HER4)를 포함하는 수용체 티로신 키나아제(receptor tyrosine kinase)의 ErbB 계열에 속한다(Yarden et al, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol, 2001, 2(2):127-137). 이런 계열의 수용체 단백질들은 세포외 리간드 결합 도메인, 단일의 소수성 막통과 도메인 및 세포질 티로신 키나아제 포함 도메인으로 구성된다. EGF 계열에는 적어도 12 개의 성장인자가 대부분의 ErbB 수용체들에 결합하여 수용체 호모- 또는 헤테로-이합체화반응을 일으킨다. 이합체화반응(dimerization)은, 특히 예를 들면, 세포 생존, 사멸 및 확산 활성 등을 제어하는 하향 세포내 신호전달 경로는 물론, 리간드 결합 수용체의 재활용(또는 그 분해)을 촉발한다. 당업자 사이에서 HER3(ErbB)는 티로신 키나아제 활성이 결핍되는 것으로 간주된다.

EGFR, HER2 및 최근에 HER3는 종양 형성과 관련되어 있다. 예를 들어, 최근 연구는 많은 악성 인간 조직에서 정상인 조직 부분에 비교하였을 때, EGFR이 과발현되는 것을 보여주었다. EGFR을 암호화하는 유전자의 높은 빈도의 과발현, 증폭, 결핍 및 구조적 재배열은 유방암, 폐암, 자궁암 및 신장암에서 발견되었다. 교모세포종 다형성 종양(glioblastoma multiforme tumor)에서 EGFR 유전자의 증폭은 알려진 가장 일관된 유전적 변화 중 하나이다. EGFR 과발현 역시 많은 비소세포폐암(non-small cell lung carcinomas)에서 발견되었다.

종래의 화학요법은 세포 단백질 또는 기타 거대분자를 겨냥하여 세포사멸에 이르게 하는 것으로, 일반적으로 빠르게 분열하는 암세포와 빠르게 분열하는 일반 세포 사이에 차별을 두지 않는다. 골수세포 및 위장관 세포와 같은 일반 세포의 사멸은 독성 부작용을 유도한다. 또한, 세포독성의 화학요법에 대한 종양의 반응은 예측할 수가 없다.

최근 들어, 단백질 티로신 키나아제의 발현을 하향조절하는 방식으로, 여러 가지 단백질 티로신 키나아제 억제제를 소정 암에 대한 선택적 치료용으로 개발하기 시작했다. 그러나, 많은 암들이 단백질 티로신 키나아제 억제제 요법에 반응하지 않거나, 시간이 지남에 따라 상기 억제제에 대한 저항력이 발생하면서 이러한 요법의 효과에는 한계가 있었다. Arora et al. (2005) J. Pharmacol. and Exp. Therapies 315(3):971-971-979.

종양 세포를 표적화하고, 종래의 화학요법에 비해 더욱 효과적이면서 독성은 낮은, 그리고 현재 사용중인 선택적 요법에 비해 더욱 높은 반응율을 가지는 암 치료요법에 대한 필요가 있다.

1.2. 개요

특정 실시예에 따르면, 본 발명은 (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체를 가지며, 인접 단량체가 인산기(phosphate group) 또는 포스포로티오에이트기(phosphorothioate group)에 의해 공유 결합되는 올리고머; 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체가 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된(best-aligned) 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하고; (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제; 및 (c) 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 서열번호: 180에 도시된 서열로 구성되는 올리고머 및 단백질 티로신 키나아제 억제제 제피티니브(gefitinib)를 포함한다.

다른 실시예에 따르면, 상기 약학적 조성물은: (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 컨쥬게이트; 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA의 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하고, (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제; 및 (c) 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함한다.

본 발명은 또한 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법에 있어서, 상기 세포를 (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량, 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA의 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및 (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법에 관한 것이다.

다양한 실시예에 따르면, 상기 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법은 상기 셀을 서열번호: 180에 도시된 서열로 구성되는 올리고머의 유효량 및 제피티니브의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함한다.

다양한 실시예에 따르면, 포유류 체내 세포의 증식을 억제하기 위한 방법은 상기 포유류 조직을: (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량, 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA의 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및 (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법에 있어서, 상기 포유류로: (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량, 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA의 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및 (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법을 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 상기 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법은 서열번호: 180에 도시된 서열로 구성되는 올리고머의 유효량 및 제피티니브의 유효량을 상기 포유류로 투여하는 단계를 포함한다.

다양한 실시예에 따르면, 상기 암은 폐암, 전립선암, 유방암, 난소암, 직장암, 상피암, 및 위암으로 구성된 군에서 선택된다.

추가적 실시예에 따르면, 본 발명은 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법에 있어서, 상기 포유류로: (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 컨쥬게이트의 유효량, 여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고; 상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고; 상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA의 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및 (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법을 포함한다.

본 발명의 하나의 실시예는, (a.) 10 내지 50 개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머;

여기서 상기 올리고머는

5'-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 169); 및

5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 180)로 구성된 군에서 선택된 화합물 내에 존재하는 적어도 10 개의 연속적 단량체의 부위의 서열에 적어도 80% 동일한 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고,

여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체를, 아래첨자는 DNA 단량체를 나타내고, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내며, ^MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내고,

상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체가 뉴클레오시드 유사체이고,

상기 올리고머는 안티센스 억제제 또는 HER3 이며; 및

(b.) 제피티니브, 얼로티니브, 라파티니브 및 캐너티니브 및/또는 VEGFR2 및 VEGFR3, 예를 들면 소라페니브와 같은 VEGFR 계열 요소의 단백질 티로신 키나아제 억제제를 조합한 포유류 내 암 치료를 위한 사용을 제공한다.

상기 실시예의 일 변형예에 따르면, 상기 첫번째 부위의 서열은 5'-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 169); 또는 5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3'(서열번호: 180)에 존재하는 적어도 10개의 연속적 단량체 부위의 서열과 동일하다. 상기 실시예의 다른 변형예에 따르면, 상기 올리고머는 HER3의 안티센스 올리고머 억제제인 5'-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3'(서열번호: 169); 또는 5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3'(서열번호: 180)이다. 상기 사용에 대응되는 치료방법에 관한 실시예 또한 본 발명에 의해 제공된다. 상기 방법 실시예는 동시 또는 동시에 근접하도록(around) 암치료를 필요로 하는 인간 환자와 같은 포유류에 올리고머 및 PKI 억제제를 투여하는 단계를 포함한다.

1.3. 도면의 간단한 설명
도 1A-1C. 도 1A 및 1B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 A549 폐암 세포의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 1C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 A549 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.
도 2A-2C. 도 2A 및 2B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 H1993 전립선암 세포의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 2C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 H1993 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.
도 3A-3C. 도 3A 및 3B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 15PC3 전립선암 세포의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 3C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 15PC3 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.
도 4A-4C. 도 4A 및 4B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 DU145 전립선암 세포의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 4C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 DU145 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.
도 5A-5C. 도 5A 및 5B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 SKBR3 유방암 세포의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 5C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 SKBR3 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.
도 6A-6C. 도 6A 및 6B는 올리고머 화합물(서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가짐) 및 제피티니브의 조합에 의한 A431 상피암의 치료에 대한 항증식 효과를 도시한다. 도 6C는 서열번호: 180에 기술된 서열 및 고안을 가지는 올리고 화합물에 의한 A431 세포 내의 HER3 mRNA 발현의 억제를 도시한다.

1.4. 상세한 설명

일부 실시예에 따르면, 본 발명은 HER3(및 선택적으로 EGFR 및 HER2의 하나 이상)의 발현 및/또는 활성을 조절하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 세포간 조건 하에서 HER3(및 선택적으로 EGFR 및 HER2 의 하나 이상)를 암호화하는 핵산에 특이적으로 하이브리드되는 올리고머의 유효량 및 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 포함하는 약학적 조성물, 또는 약학적으로 허용가능한 부형제 내의 그의 약학적으로 허용가능한 유도체를 제공한다.

일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 유도체와 동일한 조성으로 존재한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머는 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제를 포함하는 조성물과 별개인 조성물 내에 존재한다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제 조성물과는 별개의 조성물에 존재하며, 이들 두 조성물들은 조합적 사용 용도로 포장된다.

일부 실시예에 따르면, 본 발명은 그를 필요로 하는 환자에게 본 발명의 약학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 암과 같은 질환을 치료 또는 방지하기 위한 방법들을 아우른다(encompass).

1.5. 약학적 조성물들

1.5.1. 올리고머( Oligomers )

하나의 관점에 따르면, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용되기 위한 올리고 화합물(이후 올리고머로 칭함)은, 예를 들면, 포유류 HER3를 암호화하는 핵산 분자의 기능을 조절하는 데에 유용하다. 일부 실시예의 경우, 상기 포유류 HER3를 암호화하는 핵산 분자는 서열번호: 197에 도시된 염기 서열을 가지는 핵산 및 자연적으로 발생하는 그의 대립변종을 포함한다. 본 발명의 올리고머는 공유결합된 단량체로 구성된다.

용어 "단량체"는, 핵산에 자연적으로 발생하며, 변형 당(modified sugars) 또는 뉴클레오염기(nucleobases) 뉴클레오시드 및 디옥시뉴클레오시드("뉴클레오시드"로 통칭함), 즉, 자연적으로 발생하는 비변형 뉴클레오염기(염기) 모이어티(즉, 퓨린 및 피리미딘 헤테로고리 아데닌, 구아닌, 시토신, 티민 또는 유라실) 및 핵산 내에 자연적으로 발생하거나 핵산 내에서 자연적으로 발생하지 않는 뉴클레오시드인 "뉴클레오시드 유사체"에 리보오스 당 또는 디옥시리보오스 당이 공유결합된 화합물로, 여기서 당 모이어티는 리보오스 또는 디옥시리보오스 당(예를 들면 두고리 당 또는 2' 치환 당과 같은 2' 변형 당) 이외이거나, 상기 염기 모이어티는 변형(예. 5'-메틸시토신) 이거나 둘 다 일 수 있다.

"RNA 단량체"는 리보오스 당 및 비변형 뉴클레오염기를 포함하는 뉴클레오시드이다.

"DNA 단량체"는 디옥시리보오스 당 및 비변형 뉴클레오염기를 포함하는 뉴클레오시드이다.

"잠금 핵산 단량체", "잠금 단량체" 또는 "LNA 단량체"는 이후 설명하는 바와 같이 두고리 당을 포함하는 뉴클레오시드 유사체이다.

용어 "상응하는 뉴클레오시드 유사체" 및 "상응하는 뉴클레오시드"는 뉴클레오시드 유사체 내의 염기 모이어티 및 뉴클레오시드간의 염기 모이어티가 동일함을 나타낸다. 예를 들어, "뉴클레오시드"가 아데닌에 결합된 2-디옥시리보오스 당을 포함할 경우, 상기 "상응하는 뉴클레오시드 유사체"는 예를 들면 아데닌 염기 모이어티에 결합되는 변형 당을 포함한다.

본 명세서에서 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머들의 단량체들은 결합기(linkage groups)를 통해 함께 결합된다. 적합하기로는, 각각의 단량체가 결합기를 통해 3' 인접 단량체로 결합된다.

용어 "결합기" 또는 "뉴클레오시드간의 결합"이란 두 개의 근접 단량체를 함께 공유결합할 수 있는 기(group)를 지칭한다. 특정 예를 들자면 인산기(인접 뉴클레오시드 단량체 사이에 포스포디에스테르를 형성함) 및 포스포로티오에이트 기(인접 뉴클레오시드 단량제 사이의 포스포로티오에이트 결합을 형성)를 포함한다.

적합한 결합기는 WO 2007/031091(여기서 참조로 인용됨)에 기재된 내용, 즉 예를 들면, WO 2007/031091(여기서 참조로 인용됨)의 34면의 제1 문단에 기재된 결합기가 될 수 있다.

일부 실시예에서, 상기 결합기는 일반적인 포스포디에스테르에서 뉴클리아제의 공격에 좀 더 저항력을 가지는 형태, 즉 예를 들면 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트(boranophosphate)와 같이 리보뉴클레아제 H(RNase H)에 의해 분할되어 표적 유전자의 발현에 RNase-매개의 안티센스 억제를 유도하는 형태로 변형된다.

용어 "올리고머", "올리고머 화합물" 및 "올리고뉴클레오티드"는 본 발명의 문맥에서 혼용되고 있으며, 예를 들면 인산기(뉴클레오시드 사이에 포스포디에스테르 결합을 형성함) 또는 포스포로티오에이트 기(뉴클레오시드 사이에 포스포로티오에이트 결합을 형성함)에 의해 두 개 이상의 인접 단량체의 공유결합에 의해 형성되는 분자를 의미한다. 상기 올리고머는 예를 들면 10 - 30 단량체와 같이 10 - 50 단량체를 포함 또는 구성될 수 있다.

일부 실시예에 따르면, 올리고머는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 유사체, 또는 여기서 지칭되는 바와 같이 그들의 혼합물일 수 있다. "LNA 올리고머" 또는 "LNA 올리고뉴클레오티드"는 6.1.2 섹션에서 정의한 바와 같이 하나 이상의 LNA 단량체를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다.

올리고머 내에 선택적으로 포함된 뉴클레오시드 유사체는 상응하는 뉴클레오시드와 유사한 기능을 가지거나, 특정 개선된 기능을 가지기도 한다. 그 내부에서 일부 또는 모든 단량체가 뉴클레오시드 유사체인 올리고머가 종종 천연 형태의 것보다 선호되는데, 이는, 예를 들면 개선된 세포막 침투능력, 세포외 및/또는 세포내 뉴클레아제에 대한 높은 저항성, 및 핵산 표적에 대한 높은 친화성 및 특이성에 기인한다. LNA 단량체가 특히 선호된다.

다양한 실시예에서, 올리고머 내에 존재하는 하나 이상의 뉴클레오시드 유사체는 상응하는 천연 뉴클레오시드에 비해 "침묵(silent)" 또는 "동등(equivalent)"의 기능을 갖는다. 즉, 이들은 표적 유전차 발현을 억제하는 올리고머 기능의 방식에 기능적 영향을 주는 바가 없다. 이와 같은 '동등의" 뉴클레오시드 유사체는 그럼에도 불구 하고 유용할 경우가 있으며, 이는 예를 들면 제조가 손쉽고 저렴하고나, 저장 또는 제조 조건 하에서 좀 더 안정적이고, 또는 태그 또는 라벨을 접목할 수 있기 때문이다. 그러나, 일반적으로, 이들 유사체들은 예를 들면, 표적 핵산의 표적 부위에 개선된 결합 친화성 및/또는 세포내 뉴클레아제에 대한 개선된 저항성 및/또는 세포 내로의 개선된 전송의 수월함 등을 제공함에 따라 발현을 억제하는 올리고머 기능의 방식에 기능적 효과를 제공하게 된다.

다양한 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 올리고머는 뉴클레오시드 단량체 및 적어도 하나의 뉴클레오시드 유사체 단량체, 즉 예를 들면 LNA 모너머, 또는 기타 뉴클레오시드 유사체 단량체들을 포함한다.

용어 "적어도 하나(적어도 one)"는 1 이상의 정수를 포함하며, 예를 들면, 1,2,3,4,5,6,7,8,9,,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20 등등을 포함한다. 다양한 실시예에 있어, 즉 예를 들면 본 발명의 화합물의 핵산 또는 단백질 표적에 관할 때, 용어 "적어도 하나"란 "적어도 두 개" 및 "적어도 세 개" 및 "적어도 네 개"를 포함한다. 이와 유사하게, 용어 "적어도 두 개"는 "적어도 세 개" 및 "적어도 네 개"를 포함한다.

일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 10-50 인접 단량체를 포함하며, 예를 들면 10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29 또는 30 개의 인접 단량체를 포함한다.

일부 실시예에서, 상기 올리고머는 10-25 단량체, 또는 10-16 단량체, 또는 12-16 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에서, 상기 올리고머는 10-25 인접 단량체, 10-24 인접 단량체, 12-25 또는 12-24 또는 10-22 인접 단량체, 즉 예를 들면, 12-18 인접 단량체, 예를 들면 13-17 또는 12-16 인접 단량체, 예를 들면 13, 14, 15, 16 인접 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에서, 상기 올리고머는 10-22 인접 단량체, 또는 10-18, 즉 예를 들면, 12-18 또는 13-17 또는 12-16, 예를 들면 13, 14, 15 또는 16 인접 단량체를 포함한다.

일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 10-16 또는 12-16 또는 12-14 인접 단량체를 포함한다. 다른 실시예에 있어, 상기 올리고머는 14-18 또는 14-16 인접 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에 있어, 상기 올리고머는 10, 11, 12, 13, 또는 14 인접 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에 있어, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머는 22 미만의 인접 단량체, 예를 들면 20 미만의 인접 단량체, 예를 들면 18 미만의 인접 보노머, 예를 들면 15, 16 또는 17 인접 단량체를 포함하다. 특정 실시예에 다르면, 본 발명의 상기 올리고머는 20 미만의 인접 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에 있어, 본 발명의 상기 올리고머는 RNA 단량체를 포함하지 않는다.

다양한 실시예에 있어, 상기 올리고머는 선형 분자 또는 합성되면 선형을 이룬다. 이러한 실시예의 경우, 상기 올리고머는 외가닥 분자이며, 일반적으로 예를 들면 동일 올리고머 내의 다른 부위에 상보적인 적어도 3, 4 또는 5 인접 단량체와 같은 짧은 부위를 포함하는 식으로 내부 중복(duplex)을 형성하지 않는다. 다양한 실시예에서, 상기 올리고머는 실질적으로 이중가닥, 즉 siRNA가 아니다.

일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 그 서열이 여기에 기재된 서열번호(예를 들어, 표 1 내지 12 참조)로 명기되는 인접한 연속적 스트레치(stretch)의 단량체를 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 올리고머는 인접한 연속적 단량체를 포함하는 첫번째 부위, 및 적어도 하나의 추가적 단량체를 포함하는 하나 이상의 추가적 부위를 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 상기 첫번째 부위의 서열은 여기 기재된 서열번호에 의해 명기된다.

1.5.2. 잠금 핵산( LNA ) 단량체

용어 "LNA 단량체"란 두고리 당("LNA 당")을 포함하는 뉴클레오시드 유사체를 지칭한다. 용어 "LNA 올리고뉴클레오티드" 및 "LNA 올리고머"는 하나 이상의 LNA 단량체를 포함하는 올리고머를 지칭한다.

특정 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고뉴클레오티드 화합물에 사용되는 LNA는 화학식 I의 구조를 갖는다:

(I)

상기 X는 O-, S-, -N(R^{N *})-, -C(R⁶R^{6 *})-으로부터 선택된다;

B는 수소(hydrogen), 선택적으로 치환된 C_{1 -4} 알콕시(alkoxy), 선택적으로 치환된 C_{1 -4} 알킬(alkyl), 선택적으로 치환된 C_{1 -4} 아실록시(acyloxy), 뉴클레오염기, DNA 삽입물질(intercalators), 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기(chelating group), 리포터기(reporter group), 및 리간드(ligands)로부터 선택된다;

P는 다음의 단량체, 또는 인터뉴클레오시드(internucleotide) 결합 또는 치환된 R⁵를 선택적으로 포함하거나 치환된 R^{5 *}를 동일하게 사용가능한 5'-말단기와 같은, 5'-말단기에 대한 인터뉴클레오시드 결합을 위한 라디칼 위치를 나타낸다;

P^*은 앞의 모노머, 또는 3'-말단기에 대한 인터뉴클레오시드 결합을 나타낸다;

R^{4 *} 및 R^{2 *}은 모두 C(R^aR^b)-, -C(R^a)=C(R^b)-, -C(R^a)=N-, -O-, -Si(R^a)₂-, -S-, -SO₂-, -N(R^a)-, 및 ＞C=Z로부터 선택되는 1 ~ 4 그룹/원자로 구성되는 이가라디칼(biradical)을 나타내고,

상기 Z는 각각 수소(hydrogen), 선택적으로 치환된 C_{1 -12}-알킬(alkyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12}-알케닐(alkenyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12} 알키닐(alkynyl), 하이드록시(hydroxy), C_{1 -12}-알콕시(alkoxy), C_{2 -12}-알콕시알킬(alkoxyalkyl), C_{2 -12}-알케닐록시(alkenyloxy), 카복시(carboxy), C_{1 -12}-알콕시카보닐(alkoxycarbonyl), C_{1 -12}-알킬카보닐(alkylcarbonyl), 포르밀(formyl), 아릴(aryl), 아릴옥시-카보닐(aryloxy-carbonyl), 아릴옥시(aryloxy), 아릴카보닐(arylcarbonyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 헤테로아릴옥시-카보닐(heteroaryloxy-carbonyl), 헤테로아릴옥시(heteroaryloxy), 헤테로아릴카보닐(heteroarylcarbonyl), 아미노(amino), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)아미노{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)amino}, 카바모일(carbamoyl), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)-아미노-카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)-amino-carbonyl}, 아미노-C_1-6-알킬-아미노카보닐{amino-C_{1 -6}-alkyl-aminocarbonyl}, 모노- 및 디(C_1-6-알킬)아미노-C_{1 -6}-알킬-아미노카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)amino-C_{1 -6}-alkyl-aminocarbonyl}, C_{1 -6}-알킬-카보닐아미노(C_{1 -6}-alkyl-carbonylamino), 카바미노(carbamido), C_{1 -6}-알카노일옥시(C_{1 -6}-alkanoyloxy), 설포노(sulphono), C_{1 -6}-알킬설포닐옥시(C_{1 -6}-alkylsulphonyloxy), 니트로(nitro), 아지도(azido), 설파닐(sulphanyl), C_{1 -6}-알킬티오(C_{1 -6}-alkylthio), 할로겐(halogen), DNA 삽입물질(intercalators), 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기(chelating group), 리포터기(reporter group), 및 리간드(ligands)로부터 독립적으로 선택되는 -O-, -S-, 및 -N(R^a)-, 및 R^a 및 R^b로부터 선택되고, 상기 아릴(aryl) 및 헤테로아릴(heteroaryl)은 선택적으로 치환되고 두 이중의 치환기 R^a 및 R^b 는 모두 선택적으로 치환된 메틸렌(=CH₂), 및 수소(hydrogen), 선택적으로 치환된 C_{1 -12}-알킬(alkyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12}-알케닐(alkenyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12} 알키닐(alkynyl), 하이드록시(hydroxy), C_{1 -12}-알콕시(alkoxy), C_{2 -12}-알콕시알킬(alkoxyalkyl), C_{2 -12}-알케닐록시(alkenyloxy), 카복시(carboxy), C_{1 -12}-(알콕시카보닐(alkoxycarbonyl), C_{1 -12}-알킬카보닐(alkylcarbonyl), 포르밀(formyl), 아릴(aryl), 아릴옥시-카보닐(aryloxy-carbonyl), 아릴옥시(aryloxy), 아릴카보닐(arylcarbonyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 헤테로아릴옥시-카보닐(heteroaryloxy-carbonyl), 헤테로아릴옥시(heteroaryloxy), 헤테로아릴카보닐(heteroarylcarbonyl), 아미노(amino), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)아미노{mono- 및 di(C_1-6-alkyl)amino}, 카바모일(carbamoyl), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)-아미노-카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)-amino-carbonyl}, 아미노-C_{1 -6}-알킬-아미노카보닐{amino-C_1-6-alkyl-aminocarbonyl}, 모노- 및 디(C_1-6-알킬)아미노-C_{1 -6}-알킬-아미노카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)amino-C_{1 -6}-alkyl-aminocarbonyl}, C_{1 -6}-알킬-카보닐아미노(C_{1 -6}-alkyl-carbonylamino), 카바미노(carbamido), C_{1 -6}-알카노일옥시(C_{1 -6}-alkanoyloxy), 설포노(sulphono), C_{1 -6}-알킬설포닐옥시(C_{1 -6}-alkylsulphonyloxy), 니트로(nitro), 아지도(azido), 설파닐(sulphanyl), C_{1 -6}-알킬티오(C_{1 -6}-alkylthio), 할로겐(halogen), DNA 삽입물질(intercalators), 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기(chelating group), 리포터기(reporter group), 및 리간드(ligands)로부터 독립적으로 선택되는, 각각의 치환기 R^{1 *}, R², R³, R⁵, R^{5 *}, R⁶ 및 R^{6 *}을 나타낼 수 있고, 상기 아릴(aryl) 및 헤테로아릴(heteroaryl)은 선택적으로 치환될 수 있고, 두 이중의 치환기 모두는 옥소(oxo), 치옥소(thioxo), 이미노(imino), 또는 선택적으로 치환된 메틸렌을 나타내고, 또는 모두는 하나 또는 그 이상의 헤테로원자/-O-, -S-, 및 -(NR^N)-로부터 선택되는 군에 의해 선택적으로 중단 및/또는 종결된 1 ~ 5 탄소 원자 알킬렌 체인으로 구성되는 스피노 이중 라디칼로 형성될 수 있고, 두 연속된(비-이중의) 치환기는 이중 결합에 따르는 추가적인 결합을 나타낼 수 있고; 이중 라디칼에 존재하고 연관되지 않는 경우, R^{N *}은 수소 및 C_{1 -4} 알킬(alkyl); 및 이의 염기성염(basic salts) 및 산부가염(acid addition salts)으로부터 선택된다;

일부 실시예에 있어서 R^{5 *}는 H, -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH₂-O-CH₃, 및 -CH=CH₂로부터 선택된다.

일부 실시예에 있어서 R^{4 *} 및 R^{2 *}는 모두 -C(R^aR^b)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-O-, -C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-O-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-, -C(R^a)=C(R^b)-C(R^cR^d)-, -C(R^aR^b)-N(R^c)-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-N(R^e)-, -C(R^aR^b)-N(R^c)-O-, 및 -C(R^aR^b)-S-, -C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-S-로부터 선택되는 이중 라티칼을 나타낸다. 상기 각각의 R^a, R^b, R^c, R^d, R^e, 및 R^f는 수소(hydrogen), 선택적으로 치환된 C_{1 -12}-알킬(alkyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12}-알케닐(alkenyl), 선택적으로 치환된 C_{2 -12} 알키닐(alkynyl), 하이드록시(hydroxy), C_{1 -12}-알콕시(alkoxy), C_{2 -12}-알콕시알킬(alkoxyalkyl), C_{2 -12}-알케닐록시(alkenyloxy), 카복시(carboxy), C_{1 -12}-(알콕시카보닐(alkoxycarbonyl), C_{1 -12}-알킬카보닐(alkylcarbonyl), 포르밀(formyl), 아릴(aryl), 아릴옥시-카보닐(aryloxy-carbonyl), 아릴옥시(aryloxy), 아릴카보닐(arylcarbonyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 헤테로아릴옥시-카보닐(heteroaryloxy-carbonyl), 헤테로아릴옥시(heteroaryloxy), 헤테로아릴카보닐(heteroarylcarbonyl), 아미노(amino), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)아미노{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)amino}, 카바모일(carbamoyl), 모노- 및 디(C_{1 -6}-알킬)-아미노-카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)-amino-carbonyl}, 아미노-C_1-6-알킬-아미노카보닐{amino-C_{1 -6}-alkyl-aminocarbonyl}, 모노- 및 디(C_1-6-알킬)아미노-C_{1 -6}-알킬-아미노카보닐{mono- 및 di(C_{1 -6}-alkyl)amino-C_{1 -6}-alkyl-aminocarbonyl}, C_{1 -6}-알킬-카보닐아미노(C_{1 -6}-alkyl-carbonylamino), 카바미노(carbamido), C_{1 -6}-알카노일록시(C_{1 -6}-alkanoyloxy), 설포노(sulphono), C_{1 -6}-알킬설포닐옥시(C_{1 -6}-alkylsulphonyloxy), 니트로(nitro), 아지도(azido), 설파닐(sulphanyl), C_{1 -6}-알킬티오(C_{1 -6}-alkylthio), 할로겐(halogen), DNA 삽입물질(intercalators), 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기(chelating group), 리포터기(reporter group), 및 리간드(ligands)로부터 독립적으로 선택되고, 상기 아릴(aryl) 및 헤테로아릴(heteroaryl)은 선택적으로 치환되고, 두 이중의 치환기 R^a 및 R^b는 모두는 선택적으로 치환된 메틸렌(=CH₂)을 나타낼 수 있다.

또 다른 실시태양에 있어서 R^{4 *} 및 R^{2 *}는 모두 -CH₂-O-, -CH₂-S-, -CH₂-NH-, -CH₂-N(CH₃)-, -CH₂-CH₂-O-, -CH₂-CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-S-, -CH₂-CH₂-NH-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-O-, -CH₂-CH₂-CH(CH₃)-, -CH=CH-CH₂-, -CH₂-O-CH₂-O-, -CH₂-NH-O-, -CH₂-N(CH₃)-O-, -CH₂-O-CH₂-, -CH(CH₃)-O-, -CH(CH₂-O-CH₃)-O-로부터 선택되는 이중 라디칼을 나타낸다.

모든 키랄 중심(chiral centers)에서, 비대칭기(asymmetric groups)는 R 또는 S 배향 중 어느 하나에 있을 수 있다.

다양한 실시예에 따르면, 올리고머에 사용되는 상기 LNA 단량체는 화학식 (II) 또는 (III)에 따른 LNA 단량체를 적어도 하나 포함한다:

여기서, Y 는 -O-, -O-CH₂- ,-S-, -NH-, 또는 N(R^H)이고; Z 및 Z* 는 뉴클레오시드간 결합, 말단기 또는 보호기 중에서 독립적으로 선택되며; B 는 핵산 내에서 자연적으로 발생하거나 핵산 내에서 자연적으로 발생하지 않는 비변형 염기 모이어티 또는 변형 염기 모이어티를 구성하며, R^H 은 수소 및 C_{1 -4}-알킬에서 선택된다.

본 발명의 다양한 실시예에 사용되는 LNA 단량체는 다음 화학식 (IV)-(VIII)에 도시된다:

용어 "티오-LNA" 란 상기 화학식 (II)의 Y가 S 또는 -CH₂-S- 에서 선택되는 LNA 단량체를 가리킨다. 티오-LNA 는 베타-D 또는 알파-L-배열 중에 있을 수 있다.

용어 "아미노-LNA" 란 상기 화학식(II) 의 Y 가 -N(H)-, N(R)-, CH₂-N(H)-, 및 -CH₂-N(R)- 에서 선택된 LNA 단량체를 지칭하며, 여기서 R 은 수소 및 C_{1 -4}-알킬에서 선택된다. 아미노-LNA 는 베타-D 또는 알파-L-배열 중에 있을 수 있다.

용어 "옥시-LNA" 란 상기 화학식(II)의 Y 가 -O- 또는 -CH₂-O- 를 나타내는 LNA 단량체를 지칭한다. 옥시-LNA 는 베타-D 또는 알파-L-배열 중에 있을 수 있다.

용어 "ENA" 란 상기 화학식(II)에서 Y 가 -CH₂-O- 인 LNA 단량체를 지칭한다(여기서 -CH₂-O- 의 산소원자는 염기 B 에 대한 2'-위치에 결합된다).

특정 실시예에 있어서, 상기 LNA 단량체는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 알파-L-옥시-LNA 단량체, 베타-D-아미노-LNA 단량체 및 베타-D-티오-LNA 단량체에서 선택되며, 바람직하게는 베타-D-옥시-LNA 단량체이다.

본 문맥상에서, 용어 "C_{1 -4}-알킬" 이란 선형 또는 갈래 포화 탄화수소 사슬을 지칭하며, 여기서 상기 사슬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 이차-부틸 및 삼차-부틸과 같이 하나 내지 네 개의 탄소수를 가진다.

잠금핵산(LNA)-포함 올리고머는 새로운 안티센스 올리고머 시대를 대표한다. 이전의 올리고뉴클레오티드와는 달리, LNA 올리고머 내의 뉴클레오시드 LNA 단량체는 당 내의 공학적 O2'- 내지 C4'-결합(상기 화학식 IV-VIII 참고)을 갖는다. 이는 RNA 결합에 선호되는 3'-엔도 구조적 형태 내의 리보오스를 안정화, 또는 "잠금" 역할을 한다. 따라서, LNA 올리고머는 종래 DNA 올리고머에 비해 LNA 올리고머는 의례적으로 높은 RNA에 대한 결합 친화도를 갖는다. 또한, LNA 변형은 실질적으로 뉴클레아제 저항을 개선하고 올리고뉴클레오티드 길이의 감소가 있게 한다(예. Vester B, et al. LNA(locked nucleic acid): high-affinity targeting of complemenary RNA and DNA. Biochemistry. 2004 Oct 26;43(42):13233-41; Lauritsen A, et al. Methylphosphonate LNA: a locked nucleic acid with a Methylphosphonate linkage. Bioorg med Chem Lett. 20003 Jan 20;13(2):253-6 참조).

LNA 단량체 및 LNA 단량체를 포함하는 올리고뉴클레오티드는 종래의 어떠한 방법에 의해서도 구해질 수 있다. 특정 실시예에 따르면, LNA 단량체 및 LNA 올리고뉴클레오티드는 본 명세서에서 참조로 인용된 PCT 공개 WO 07/031081에 게시된 절차에 의해 구해질 수 있다.

1.5.3. 기타 다른 뉴클레오시드 유사 단량체 및 결합

다양한 실시예에서, 올리고머 내에 존재하는 단량체 중 적어도 하나는, 5-메틸시토신, 이소시토신, 슈도이소시토신(pseudoisocytosine), 5-브로모우라실, 5-프로피닐우라실, 6-아미노푸린, 2-아미노푸린, 이노신, 디아미노푸린, 2-클로로-6-아미노푸린, 크산틴(xanthine) 및 히포크산틴(hypoxanthine) 에서 선택된 염기와 같은 변형 염기, 및/또는 예를 들면 2'-O-알킬-리보오스 당, 2'-아미노-디옥시리보오스 당, 2'-플루오로-디옥시리보오스 당, 및 2'-O-메톡시에틸-리보오스 당(2'MOE)과 같은 2'-치환기, 또는 상기 기술된 LNA 당, 또는 아라비노오스 당("ANA 단량체"), 또는 2'-플루오로-아라비노오스 당, 또는 d-아라비노-헥시톨 당("HNA 단량체")을 제공하도록 변형되는 당 모이어티와 같은 변형 당을 포함하는 뉴클레오시드 유사체이다.

본 명세서에 기재되는 올리고머에 유용한 뉴클레오시드 유사체의 특정 예는, 예를 들면, Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 및 Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213 에 기술되거나, 또는 본 명세서에서 참조로 인용된 WO 2007/031091 에 기술 또는 참조되었다.

다양한 실시예에 있어, 올리고머 내의 친화도-개선의 뉴클레오시드 유사체(즉, 올리고머/표적 부위 듀플렉스의 듀플렉스 안정성(Tm)을 증가시키는 뉴클레오시드 유사체), 즉 예를 들면 단량체 또는 2'-치환 당을 포함하는 단량체의 도입, 또는 변형된 결합 기의 도입으로 인해 뉴클레아제 내성이 증가했다. 다양한 실시예에 있어서, 이와 같은 친화도-개선의 뉴클레오시드 유사체의 도입으로 인해 올리고머의 크기가 축소되고, 길이가 더 짧은 올리고머의 서열 특화도(specificity)가 증가할 수 있다. 특정 올리고머 염기 서열에 관해서는, 특정 실시예에 있어서, 올리고머는 대응되는 LNA 단량체 또는 기타 대응 뉴클레오시드 유사체와 같은 대응되는 친화도-선의 뉴클레오시드 유사체를 포함한다.

뉴클레오시드 및/또는 뉴클레오시드 유사체 단량체를 포함하는 올리고뉴클레오티드는 공지된 기술에 의해 합성될 수 있다. 일부 실시예에 있어서, 본 발명의 방법 및 조성에 사용되는 올리고뉴클레오타이드는 요오드에 의한 산화를 동반하는 표준 포스포라미디트(phosphoramidite) 화학을 사용한 자동화된 DNA 합성기를 이용하여 합성될 수 있다. β-시아노에틸디이소프로필-포스포라미디트(β-cyanoethyldiisopropyl-phosphoramidites)는 Applied Biosystems(Foster City, Calif.)에서 구입할 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머 화합물에 사용되는 개선된 단량체는 공지된 방법, 즉 예를 들면 Jones R. and Herdewijn P., Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry (John Wiley & Sons, INc., eds. 2008) 등을 이용하여 획득될 수 있다.

일부 실시예에 따르면, 올리고머 내에서 적어도 두 개의 연속적 단량체 사이의 결합은 포스포디에스테르 결합 이외의 것이다.

특정 실시예 들에 따르면, 상기 올리고머는 변형 염기를 가지는 적어도 하나의 단량체, 변형 당을 가지는 적어도 하나의 단량체(이는 동일 단량체일 수 있음), 및 비자연적으로 발생하는 단량체 간 결합을 적어도 하나 포함한다.

1.5.4. 갭머 고안( Gapmer Design )

특정 실시예에 따르면, 본 발명의 올리고머는 갭머(gapmer)이다.

"갭머(gapmer)"란 이후 설명되는 RNAse(예. RNAseH)를 첨가할 수 있는 연속적 스트레치(sretch)의 단량체, 즉 이후 부위 B 로 지칭되는 적어도 6 또는 7 개의 DNA 단량체의 부위를 포함하는 올리고머를 말한다. 여기서, 부위 B 의 5' 및 3' 말단에는 부위 A 및 C 로 지칭되는 부위가 측면에 배치되며, 여기서 부위 A 및 C는 예를 들면 LNA 뉴클레오티드와 같은 1 - 6 친화도-개선 유사체 등의 친화도-개선 뉴클레오시드 유사체와 같은 뉴클레오시드 유사체를 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 부위 A 및 C 에 나타나는 뉴클레오시드 유사체는, 위에 언급한 바와 같이 변형 당 모이어티를 포함하며, 올리고머 내 또는 그 일정 부위 내의 모든 뉴클레오시드 유사체가 동일한 변형 당 모이어티를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 뉴클레오시드 유사체는 2'-MOE 당, 2'-플루오로-디옥시리보오스 당 또는 LNA 당을 포함한다. 올리고머 내의 뉴클레오시드 유사체는 이들 세 종류에서 독립적으로 선택될 수 있다. 뉴클레오시드 유사체를 포함하는 특정 올리고머 실시예에서, 뉴클레오시드 유사체 중 적어도 하나는 2'-MOE-당을 포함한다. 다양한 실시예에 따르면, 올리고머 내의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 뉴클레오시드 유사체가 2'-MOE-리보오스 당을 포함한다. 특정 실시예에 따르면, 뉴클레오시드 유사체 중 적어도 하나가 2'-플루오로-디옥시리보오스 당을 포함한다. 다양한 실시예에 따르면, 올리고머 내의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 뉴클레오시드 유사체가 2'-플루오로-디옥시리보오스 당을 포함한다.

전형적으로, 상기 갭머는 5' 내지 3', A-B-C, 또는 선택적으로 A-B-C-D 또는 D-A-B-C 부위를 포함하며, 여기서: 부위 A는 적어도 하나의 LNA 단량체, 1-6 뉴클레오시드 유사체, LNA 단량체들과 같은 적어도 하나의 뉴클레오시드 유사체를 포함하며; 및 부위 B 는 DNA 단량체와 같이 RNAse(mRNA 표적과 같이 표적 RNA 분자의 상보적 표적 부위와 듀플렉스 형성되는 경우)를 첨가할 수 있는 적어도 다섯 개의 연속적 단량체를 포함하며; 및 부위 C 는 적어도 하나의 LNA 단량체, 1-6 뉴클레오시드 유사체, LNA 단량체와 같은 적어도 하나의 뉴클레오시드 유사체로 구성되거나(consist of) 포함하고(comprise), 및; 부위 D 는, 존재할 경우에는, DNA 단량체와 같은 1, 2, 또는 3 단량체를 포함한다.

다양한 실시예에 있어서, 부위 A 는 LNA 단량체, 2-5 뉴클레오시드 유사체, 2-5 LNA 단량체, 3 또는 4 뉴클레오시드 유사체, 3 또는 4 LNA 단량체와 같은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오시드 유사체로 구성되며; 및/또는 부위 C 는 LNA 단량체, 2-5 뉴클레오시드 유사체, 2-5 LNA 단량체, 3 또는 4 뉴클레오시드 유사체, 3 또는 4 LNA 단량체와 같은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 뉴클레오시드 유사체로 구성된다. 일부 실시예에서, 모든 뉴클레오시드 유사체가 LNA 단량체이다.

특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 RNAse를 첨가할 수 있는 55, 6, 7, 8, 9,10,11 또는 12 연속적 단량체, 또는 RNAse를 첨가할 수 있는 8 연속적 단량체와 같이 6-10 또는 7-9를 포함한다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B는 1-12 DNA 단량체, 4-12 DNA 단량체, 또는 6-10 DNA 단량체, 7-10 DNA 단량체, 또는 8, 9, 또는 10 DNA 단량체와 같은 적어도 하나의 DNA 단량체를 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 부위 A 는 LNA 단량체와 같은 3 또는 4 뉴클레오시드 유사체로 구성되며, 부위 B 는 7, 8, 9 또는 10 DNA 단량체로 구성되고, 부위 C 는 LNA 모너머와 같은 3 또는 4 뉴클레오시드 유사체로 구성된다. 이와 같은 고안에는 (A-B-C) 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3 가 포함되며, DNA 단량체와 같이 하나 또는 2 개의 단량체를 포함할 수 있는 부위 D 를 더 포함할 수도 있다.

특정 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 10, 11, 12, 13 또는 14 연속적 단량체로 구성되며, 여기서 올리고머의 각 부위는 패턴 (5' - 3'), A-B-C, 또는 선택적으로, A-B-C-D 또는 D-A-B-C 를 가지고, 부위 A 는 LNA 단량체와 같은 1, 2 또는 3 뉴클레오시드 유사체루 구성되며; 부위 B 는 RNA 분자에 듀플렉스 형성될 경우 RNAse를 첨가할 수 있는(mRNA 표적의 경우처럼) 7, 8 또는 9 연속적 단량체로 구성되고; 및 부위 C 는 LNA 단량체와 같은 1, 2 또는 3 뉴클레오시드 유사체로 구성된다. 형성될 경우, 부위 D 는 단일의 DNA 단량체로 구성된다.

특정 실시예들에서, 부위 A 는 1 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 A 는 2 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 A 는 3 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 C 는 1 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 C 는 2 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 C 는 3 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 7 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 8 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 9 개의 LNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 DNA 단량체와 같이 1 - 9 DNA 단량체를 포함한다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 DNA 단량체로 구성된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 알파-L-배열을 가지는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 LNA 단량체와 같이 알파-L 배열의 적어도 하나의 LNA 단량체를 포함한다. 특정 실시예에 따르면, 부위 B 는 적어도 하나의 알파-L-옥시 LNA 단량체를 포함한다. 특정 실시예에 따르면, 알파-L-배열을 가지는 적어도 하나의 부위 B 내의 LNA 단량체는 모든 알파-L-옥시 LNA 단량체이다. 특정 실시예에 따르면, 올리고머의 A-B-C 부위 내에 존재하는 단량체의 수는 (뉴클레오시드 유사체 단량체 - 부위 B - 뉴클레오시드 유사체 단량체): 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, 또는; 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4,또는; 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 및 3-10-1 을 포함하는 군에서 선택된다. 특정 실시예에 따르면, 올리고머의 A-B-C 부위 내에 존재하는 단량체의 수는: 2-7-1, 1-7-2, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4, 및 4-7-3 을 포함하는 군에서 선택된다. 특정 실시예에 따르면, 부위 A 및 C 각각은 두 개의 LNA 단량체로 구성되고, 부위 B 는 특정 실시예의 경우 DNA 단량체인 8 또는 9 개의 뉴클레오시드 단량체로 구성된다.

다양한 실시예에 따르면, 기타 갭머 고안는 부위 A 및/또는 C 가 2'-O-메톡시에틸-리보오스 당(2'MOE)을 포함하는 단량체, 또는 2'-플루오로-디옥시리보오스 당을 포함하는 단량체와 같은 3, 4, 5 또는 6 개의 뉴클레오시드 유사체로 구성되고, 부위 B 는 부위 A-B-C 가 5-10-5 또는 4-12-4 단량체를 가지는 DNA 단량체와 같은 8, 9, 10, 11 또는 12 뉴클레오시드로 구성된다.

일부 실시예에 따르면, 상기 갭머는 여기 기재된 황-함유 결합기를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 갭머는 특히 갭 부위(B)에 포스포로티오에이트 결합기를 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 포스포로티에이트 결합은 인접 부위(flanking regions) A 및 C 내에서 단량체를 함께 결합한다. 다양한 실시예에 따르면, 포스포로티에이트 결합은 부위 A 또는 C 를 부위 D로연결하고, 부위 D 내의 단량체를 함께 결합한다.

다양한 실시예에 따르면, 부위 A, B 및 C 는 예를 들면 특히 뉴클레오시드 유사체(예. LNA 단량체)의 용도가 부위 A 및 C 내의 결합기를 엔도(endo) 뉴클레아제 분해에서 보호하기 위한 경우, 포스포디에스테르 결합과 같이 포스포로티에이트 외의 다른 결합기를 포함한다.

다양한 실시예에 있어서, 올리고머의 인접 단량체는 포스포로티에이트 기를 통한 수단으로 각각에 결합된다.

포스포로티에이트 백본을 가진 올리고머 내로 하나 또는 두 개의 결합과 같은 포스포디에스테르 결합을 포함, 특히 뉴포스포로티에이트 결합기가 클레오시드 유사체 단량체(일반적으로 부위 A 및/또는 C 내에 존재) 사이 또는 그에 인접하도록 함으로써 올리고머의 생체이용율 및/또는 생체분포도(bio-distribution)를 개선할 수 있다 - 이에 대해서는 참조로 인용된 WO 2008/053314를 참조한다.

일부 실시예에 따르면, 예를 들면 상기의 실시예와 같이 적절하나 명확히 한정 짓지 않은 실시예에 있어서, 남은 모든 결합기는 포스포디에스테르 또는 포스포로티에이트, 또는 그 혼합물일 수 있다.

일부 실시예에 따르면, 모든 뉴클레오시드간의 결합기는 포스포로티에이트이다.

여기에 기재된 것과 같은 특정한 갭머 올리고뉴클레오티드 서열에 있어서, 다양한 실시예에 따라, 결합이 여기에 기재된 바와 같이 포스포로티에이트 결합인 경우, 대체적(alternative) 결합이 사용될 수 있으며, 특히 LNA 단량체와 같은 뉴클레오시드 유사체 사이의 결합에 사용될 수 있다.

추가적 갭머 고안은 본 명세서에 참조로 인용된 WO 2004/046160 및 WO 2007/146511A2 에 게시되어 있다. 본 명세서에서 참조로 인용된 미합중국 가출원 제 60/977,409 호는 "숏머(shortmer)" 갭머 올리고머에 대해 논한다. 일부 실시예에 따라, 여기 제시된 올리고머는 그와 같은 숏머 갭머일 수 있다.

1.5.5. 올리고머의 서열 및 특이성

본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머는 HER3 및/또는 HER2 및/또는 EGFR 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 하이브리드화(hybridize)한다.

용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 서로 혼용되어 사용되며, 상기 설명한 바와 같이 두 개 이상의 단량체의 공유 결합에 의해 형성되는 분자로 정의된다. 두 개 또는 그 이상의 단량체를 포함하여, "핵산"의 길이는 어떠한 것도 될 수 있으며, 상기 용어는 본 명세서에 기재된 길이를 가지는 "올리고머"에 포괄적이다. 용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 단일-가닥, 이중-가닥, 부분적으로 이중-가닥 및 원형 분자를 포함한다.

다양한 실시예에 따라, 본 명세서에서 사용되는 용어 "표적 핵산"은, 포유류 HER3 폴리펩티드(예. 서열 서열번호 197을 가지는 인간 HER3 mRNA, 또는 GenBank Accession 번호 NM_001005915, NM_001982 및 대체적으로-스플라이싱된 형태 NP_001973.2 및 NP_001005915.1(인간); NM_017218(랫트, rat); NM_010153(마우스, mouse); NM_00110315(소, cow)을 가지는 포유류 mRNAs; 또는 GenBank Accession 번호 XM_001491896(horse), XM_001169469 및 XM_509131(침팬지)를 가지는 예측된 mRNA 서열)를 암호화하는 핵산(예. DNA 또는 RNA)를 지칭한다.

다양한 실시예에 있어, "표적 핵산"이란 또한 포유류 HER2 폴리펩티드(예. GenBank Accession 번호 NM_001005862 및 NM_004448 (human); NM_017003 및 NM_017218 (rat); NM_001003817 (mouse); NM_001003217 (dog); 및 NM_001048163 (cat)를 가지는 포유류 mRNA)를 암호화하는 핵산을 포함한다.

다양한 실시예에 있어서, "표적 핵산"은 포유류 EGFR 폴리펩티드(예. GenBank Accession 번호 NM_201284, NM_201283, NM_201282 및 NM_005228 (human); NM_007912 및 NM_207655 (mouse); NM_031507 (rat); 및 NM_214007 (pig)를 가지는 포유류 mRNA)를 암호화하는 핵산을 또한 포함한다.

상기 GeneBank Accession 번호는 cDNA 서열을 지칭하며 mRNA 서열 자체(per se)를 의미하는 것은 아님을 주지해야 할 것이다. 성숙한 mRNA의 서열은 상응하는 cDNA 서열에서 직접적으로 유래될 수 있으며, 여기서 티민염기(T)는 유라실 염기(U)에 의해 대체된다.

다양한 실시예에 있어, "표적 핵산"은 핵산 또는 자연적으로 발생하는 그 변종을 암호화하는 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR), 및 pre-mRNA 또는 성숙한 mRNA와 같은 그로부터 유래된 RNA 핵산을 또한 포함한다. 본 발명에 따른 올리고머는 일반적으로 상기 표적 핵산을 하이브리드화 할 수 있다.

용어 "그의 자연적으로 발생하는 변종"이란, 예를 들면 마우스, 원숭이 및 인류와 같은 포유류와 같은 정의된 분류학상 군 내에 자연적으로 존재하는 HER3(또는 HER2 또는 EGFR) 폴리펩티드 또는 핵산 서열의 변종을 지칭한다. 일반적으로, 폴리뉴클레오티드의 "자연적으로 발생하는 변종"이란 말은 염색체 전좌 또는 복제에 의해 Chromosome Chr 12: 54.76 - 54.78 Mb에서 발견되는 게놈의 DNA를 암호화하는 HER3(또는 HER2 또는 EGFR)의 대립유전자 변종, 및 그에서 유래된 mRNA와 같은 RNA를 망라할 수 있다. 예를 들어, 특정 폴리펩티드 서열을 지칭할 경우, 상기 용어는 예를 들면 자연적으로 발생하는 형태의 단백질이기 때문에 예를 들면, 단일 펩타이드 분열, 단백질 가수분해(proteolytic) 분열, 당화(glycosylation) 등과 같은 co-번역 또는 post-번역 변형 등에 의해 처리될 수 있는 형태를 또한 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 본 명세서에 게시된 올리고머는 올리고머 및 표적 핵산의 단량체 사이에 왓슨-크릭(Watson-Crick) 염기쌍, 후그스틴(Hoogsteen) 수소 결합, 또는 역 후그스틴 수소결합에 의해 표적 핵산("표적 부위")의 일 부위로 결합한다. 상기 결합은 또한 "하이브리드화"로 지칭된다. 달리 언급하지 않는 한, 결합은 상보 염기(즉, 아데닌과 티민(DNA) 또는 유라실(Ran), 및 구아닌과 시토신)의 왓슨-크릭쌍에 의해 이루어지며, 올리고머가 상기 표적 부위에 결합하는 이유는 올리고머의 서열이 표적 부위의 역상보(reverse complement) 서열과 동일하거나, 부분적으로 동일하기 때문이다; 여기서는, 상기 올리고머가 표적 부위에 "상보적" 또는 "부분적으로 상보적"이라고 말할 것이며, 상기 표적 부위에 대한 올리고머 서열의 "상보성" 퍼센트는 표적 부위 서열의 역 상보에 대한 퍼센트화된 "유사성(identity)"이 된다.

문맥상에서 달리 언급하지 않는 한, "표적 부위"란 여기서 본 명세서에서 기술되는 정렬 프로그램 및 파라미터를 사용하여 특정 올리고머(또는 그 부위)의 서열의 역 상보와 가장 최적으로 정렬되는 서열을 가지는 표적 핵산의 부위를 칭하게 될 것이다.

본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머(또는 그 부위들)과 본 명세서에 기재된 것과 같은 포유류 HER3(또는 HER2 또는 EGFR) 등을 암호화하는 핵산의 표적 부위 사이의 "상보성"의 정도를 판단하는데에 있어서, "상보성(또는 상동성(homology)"의 정도는 올리고머(또는 그 부위) 서열과 그와 최적으로 정렬되는 표적 부위 서열의 역 상보 사이의 퍼센트화 된 유사성으로 표현된다. 상기 퍼센트는 두 개 서열 사이에서 동일하게 정렬된 염기의 수를 계수하고, 올리고머(또는 그 부위) 내의 연속적 단량체의 총 수로 나눈 후, 이에 100을 곱함으로써 계산된다. 이와 같은 비교법에 있어서, 갭(gap)이 존재할 경우, 그러한 갭에 위치하는 단량체의 수가 본 발명의 올리고머와 표적 부위 사이에서 상이하게 되는 부위라기 보다 단순한 불일치(mismatch)에 해당하는 것이 바람직하다.

본 발명에서, 아미노산 및 폴리뉴클레오티드 배열, 퍼센트 서열 유사성 및 상보성의 정도는 다음의 표준 세팅을 이용하여 ClustalW 알고리즘에 의해 얻어질 수 있다: http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html, 방법: EMBOSS::water (local): Gap Open = 10.0, Gap extend = 0.5, using Blosum 62 (protein), or DNAfull for nucleotide/nucleobase sequences.

이후 설명할 것이나, 문맥에 따라, "불일치"란 서열 내의 비유사성(예를 들면, 올리고머의 뉴클레오염기 서열과 올리고머가 결합하는 표적 부위의 역 상보 사이; 예를 들면, 핵산을 암호화하는 두 개의 정렬된 HER3의 염기 서열 사이)를 의미하거나, 또는 서열(예를 들면, 올리고머와 그가 결합하는 표적 부위 사이)의 비 유사성을 의미한다.

적절하게는, 상기 올리고머(또는 이후 더 설명될 컨쥬게이트)는 HER3(및선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) 염색체의 발현을 억제(예를 들면 하향 조절)할 수 있다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 올리고머들은 HER3(및선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) mRNA 발현을 처리 직전의 발현 레벨에 비교할 때, 적어도 20%, 좀 더 바람직하게는 처리 직전의 발현 레벨에 비교할 때 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%로 억제하는 영향을 미친다. 다양한 실시예에 따르면, 본 발명의 올리고머는 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) 단백질 발현을 처리 직전의 발현 레벨에 비교할 때 적어도 10%, 좀 더 바람직하게는, 처리 직전의 발현 레벨에 비교할 때 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%로 억제하는 영향을 미친다. 일부 실시예에 있어서, 이와 같은 억제는 본 발명의 1 nM 올리고머 또는 컨쥬게이트를 사용할 때 관찰된다. 다양한 실시예에 있어서, 이와 같은 억제는 25nM 올리고머 또는 컨쥬게이트를 사용할 대 목격된다.

다양한 실시예에 있어서, mRNA 발현의 억제는 100% 미만(즉, 총 발현 억제율에 미치지 못함), 즉 예를 들면 98% 미만 억제, 95% 미만 억제, 90% 미만 억제, 80% 미만 억제, 예를 들면 70% 미만 억제에 해당한다. 다양한 실시예에 있어서, 단백질 발현의 억제는 100% 미만(즉, 총 발현 억제율에 미치지 못함), 즉 예를 들면 98% 미만 억제, 95% 미만 억제, 90% 미만 억제, 80% 미만 억제, 예를 들면 70% 미만 억제에 해당한다.

다른 실시예에 따르면, 발현 레벨의 조절은 노던 블랏팅 또는 정량적 RT-PCR 등에 의한 mRNA 레벨의 측정에 의해 판단될 수 있다. mRNA 레벨을 통한 측정이 이루어질 때, 적정 사용량, 예를 들면 1 및 25nM을 사용하면 억제 레벨은 일반적으로 본 발명의 화합물이 없을 경우의 레벨에 비해 10-20% 레벨에 이른다.

발현 레벨의 조절(즉, 억제 또는 증가)은 또한 예를 들면 SDS-PAGE 법과 이후에 표적 단백질에 대응하여 생성된 적절한 항체를 사용한 웨스턴 블랏팅 등을 통해 단백질 레벨을 측정함에 의해 판단될 수 있다.

일부 실시예에 따르면, 본 발명은 하나 이상의 대안적으로-스플라이싱된 HER3 mRNA의 아형 및/또는 그에서 유래된 단백질의 발현을 억제(예. 하향 조절)하는 올리고머를 제공한다. 일부 실시예에 따르면, 본 발명은 HER3((GenBank Accession 번호. NP_001973.2 및 NP_001005915.1)의 대안적으로-스플라이싱된 하나 이상의 HER3의 발현 및/또는 HER3 단백질 아형(GenBank Accession 번호. NM_001982 및 NM_001005915.1)을 암호화하는 핵산의 발현을 억제하는 올리고머를 제공한다. 일부 실시예에 따르면, HER3 아형 1을 암호화하는 mRNA는 표적 핵산이다. 다른 실시예에서, HER3 아형 2를 암호화하는 mRNA가 표적 핵산이다. 특정 실시예에서, HER3 아형 1 및 HER3 아형 2를 암호화하는 핵산이 표적 핵산으로, 예를 들면 서열 서열번호: 180을 가지는 올리고머이다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명은, HER3 핵산 내의 표적 부위의 서열에 상보적인 염기 서열을 가지는 올리고머 또는 그의 첫번째 부위를 제공하며, 올리고머는 HER3 mRNA 및/또는 HER3 단백질 발현을 하향조절, 및 mRNA 및/또는 HER2 및/또는 EGFR과 같이 하나 이상의 다른 ErbB 수용체 티로신 키나아제 계열 요소의 단백질의 발현을 하향 조절한다. 두 개의 각기 다른 ErbB 수용체 계열 핵산(예. HER2 및 HER3 mRNA)의 표적 부위에 효과적으로 결합하며, 두 개의 표적의 mRNA 및/또는 단백질 발현을 하향 조절하는 올리고머, 또는 그의 첫번째 부위를 "이중특이적(bispecific)"이라고 칭한다. 세 개의 각기 다른 ErbB 수용체 계열 요소의 표적 부위에 결합하고 효과적으로 모든 염색체를 하향 조절할 수 있는 올리고머, 또는 그의 첫번째 부위는 "삼중특이적(trispecific)"이라고 한다. 다양한 실시예에서, 본 발명의 올리고머 화합물은 다중특이적(polyspecific), 즉 ErbB 계열의 수용체 티로신 키나아제 복수 개 요소의 표적 핵산의 표적 부위에 결합할 수 있으며, 그들의 발현을 하향 조절할 수 있다. 본 명세서에서, 용어 "이중특이적" 및 "삼중특이적"은 어떠한 상황에서도 한정적으로 이해되어서는 안된다. 예를 들어, "이중특이적 올리고머"는 제 3의 표적 핵산에도 일정의 효과를 가질 수 있으며, "삼중특이적 올리고머"는 아주 미약하여 따라서 세 개의 표적 핵산에 그리 크지 않은 영향을 미칠 수도 있는 것이다.

다양한 실시예에 따라, 이중특이적 올리고머, 또는 그의 첫번째 부위는 HER3 핵산 내의 표적 부위 및 HER2 표적 핵산 내의 표적 부위에 결합할 수 있으며, HER3 및HER2 mRNA 및/또는 단백질의 발현을 효과적으로 하향 조절할 수 있다. 특정 실시예에 따르면, 상기 이중특이적 올리고머는 HER3 mRNA 및/또는 단백질 및 HER2 mRNA 및/또는 단백질의 발현을 동일한 수준으로 하향조절하지는 않는다. 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 상기 이중특이적 올리고머 또는 그 첫번째 부위는 HER3 표적 핵산 내의 표적 부위 및 EGFR 표적 핵산 내의 표적 부위에 결합할 수 있으며, HER3 mRNA 및/또는 단백질 및 EGFR mRNA 및/또는 단백질의 발현을 효과적으로 하향조절할 수 있다. 다양한 실시예에서, 상기 이중특이적 올리고머는 HER3 mRNA 및/또는 단백질 및 HER2 mRNA 및/또는 단백질의 발현을 동일한 수준으로 하향조절하지는 않는다. 또 다른 실시예들에 따르면, 삼중특이적 올리고머 또는 그의 첫번째 부위는 HER3 표적 핵산 내의 표적 부위, 및 두 개의 다른 ErbB 계역의 수용체 티로신 키나아제 표적 핵산 내의 표적 부위에 결합할 수 있으며, HER3 mRNA 및/또는 단백질 및 mRNA 및/또는 두 개의 기타 ErbB 계열의 수용체 티로신 키나아제의 단백질을 효과적으로 하양 조절할 수 있다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 삼중특이적 올리고머 또는 그 첫번째 부위는 HER3 mRNA 및/또는 단백질의 발현, HER2 mRNA 및/또는 단백질의 발현, 및 EGFR mRNA 및/또는 단백질의 발현을 효과적으로 하향 조절할 수 있다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 삼중특이적 올리고머는 HER3 mRNA 및/또는 단백질, HER2 mRNA 및/또는 단백질 및 EGFR mRNA 및/또는 단백질의 발현을 동일한 수준으로 하향조절하지는 않는다.

본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머는 인간 HER3 및/또는 인간 HER2 및/또는 인간 EGFR mRNA의 표적부위에 일반적으로 결합하기 때문에, 예를 들면 서열번호 197, 서열번호: 198 및/또는 서열번호: 199 염기 서열에 대해 상보적이거나 부분적으로 상보적인 염기 서열을 가지는 부위를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 실시예들에 따르면, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머의 서열은, 서열번호 197, 서열번호: 198 또는 199의 최적-얼라인된 표적 부위의 서열과 비교할 때, 선택적으로, 1, 2, 3, 4 또는 그 이상의 염기 불일치를 포함할 수 있다.

일부 실시예에 따르면, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용되기 위한 올리고머는 서열번호: 200-227, 1-140 및 228-233으로 구성된 군에서 선택되는 서열과 동일한 서열을 가진다(이하 표 1 내지 12 참조). 다른 실시예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되기 위한 올리고머는, 서열번호: 200-227, 1-140 및 228-233로 구성된 군에서 선택된 서열과 비교할 때, 1, 2 또는 3 개 염기 상에서 차이를 가지는 서열을 가진다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 10-16 연속적 단량체를 포함한다. 16 개의 연속적 단량체로 구성된 올리고머의 서열의 예로는 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 및 140 이 있다. 이 보다 짧은 서열이 그에서 유래될 수 있으며, 예를 들어, 좀 더 짧은 올리고머의 서열이 염기 서열 서열번호: 200-227, 1-140 및 228-233의 염기 서열을 가지는 것들에서 선택된 올리고머의 일 부위에 동일하게 존재할 수 있다. 다양한 실시예에 따라, 좀 더 긴 올리고머가 서열번호: 200-227, 1-140 및 228-233에 동일하게 존재하는 적어도 10 개의 연속적 단량체의 서열을 가지는 부위를 포함한다. 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 및 140의 서열을 가지는 올리고머에 상보적인 인간 HER3 mRNA의 표적 부위가 도 1에 도시되어 있다(진한 밑줄 표시. 올리고머에 상응하는 서열번호 표기됨).

다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머는 서열번호: 141-168에 표시되는 염기 서열을 가진다. 특정 실시예에 따르면, 상기 올리고머는, LNA 올리고머, 즉 예를 들면, 서열번호: 169-196 및 234 서열을 가지는 것들, 좀 더 바람직하게는, 서열번호: 169, 170, 173, 174, 180, 181, 183, 185, 187, 188, 189, 190, 191, 192 및 194 염기 서열을 가지는 것들이다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 올리고머는, 서열번호: 169, 170, 172, 174, 175, 176 및 179 염기 서열을 가지는 것과 같은 LNA 올리고머이다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머 또는 그 하나의 부위는 서열번호: 169, 180 또는 234에 도시된 염기 서열로 구성되거나 이를 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 본 발명의 컨쥬게이트는 서열번호: 169, 180 또는 234에 도시된 염기 서열을 가지는 올리고머를 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되기 위한 올리고머는, 적절하게는, 특정 서열을 가지는 부위, 즉 예를 들면, 본 발명의 조성물 및 방법에 또한 사용될 수 있는 좀 더 짧은 올리고머 내에 동일하게 존재하는 서열번호: 200-227 에서 선택된 서열을 가지는 부위를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 부위는 10-16 개의 단량체를 포함한다. 예를 들어, 염기 서열 서열번호: 200-227의 올리고머는 각각 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 및 140 서열을 가지는 더 짧은 올리고머 내에 동일하게 존재하는 부위를 각각 포함한다. 일부 실시예에 있어서, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 개 단량체와 같이 16 개 미만의 단량체를 가지는 올리고머는 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 또는 140 서열을 가지는 올리고머 내에 그 서열이 동일하게 존재하는 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14 또는 15 개의 연속적 단량체 부위를 가진다. 따라서, 다양한 실시예에 있어서, 더 짧은 올리고머의 서열은 더 긴 올리고머의 서열에서 유래된다. 일반적으로, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머는 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 또는 140 내에 동일하게 존재하는 서열을 가지는 첫번째 부위를 포함하며, 만일 상기 올리고머가 서열번호: 1, 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91, 92, 107, 122, 137, 138, 139, 또는 140 내에 동일하게 존재하는 상기 첫번째 부위보다 길 경우라면, 올리고머의 인접 부위(flanking regions)에 표적 핵산의 표적 부위를 플랭킹(flanking)하는 서열에 상보적인 서열이 포함된다. 두 개의 이와 같은 올리고머가 서열번호: 1 및 서열번호: 54 이다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머는 포유류 HER3를 암호화하는 표적 핵산의 표적 부위에 전적으로 상보적인(완전 상보관계) 단량체의 서열을 포함하거나 이로 구성된다.

그러나, 일부 실시예에서, 상기 올리고머의 서열이, HER3 표적 핵산의 최적-얼라인된 표적 부위에 비교할 때 1, 2, 3 또는 4(또는 그 이상)의 불일치를 포함하며, 그럼에도 HER3 mRNA 또는 단백질 발현의 억제 효과를 주기 위해 표적 부위에 충분히 결합할 수 있다. 왓슨-크릭 수소-결합 듀플렉스 상의 불일치로 인한 불안정화 효과는 예를 들면, 올리고머의 길이의 증가 및/또는 상기 올리고머 내에 존재하는 LNA 단량체와 같은 뉴클레오시드 유사체의 수를 증가함에 의해 보완될 수 있다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머 염기 서열은, 예를 들면 포유류 HER3를 암호화하는 표적 핵산 등의 베타-정렬의 표적 부위의 염기 서열과 비교할 때, 3 개 이하, 예를 들면 2 개 이하의 불일치를 포함한다.

본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머 또는 그 부위의 염기 서열은 다양한 실시예에 있어서, 서열번호: 200-227, 1-140 및 228-233으로 구성된 군에서 선택된 서열에 적어도 80% 동일한 것으로, 예를 들면, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 심지어 100% 까지 유사하다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머 또는 그 첫번째 부위의 염기 서열은 서열번호: 197, 198 및/또는 199 에 존재하는 표적 부위의 서열에 적어도 80% 상보적이며, 예를 들면, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 심지어 100% 상보적이다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 올리고머(또는 그의 첫번째 부위)의 서열은 서열번호: 200 - 227, 1 - 140 및 228 - 233 으로 구성된 군에서 선택되거나, 또는 서열번호: 200 - 227, 1 - 140 및 228 - 233 의 적어도 10 개의 연속적 단량체로 구성된 군에서 선택된다. 다른 실시예에 있어서, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머의 서열은, 선택된 서열 또는 그의 부위와 최적 배열 되었을 경우, 서열번호: 200 - 227, 1 - 140 및 228 - 233의 서열을 가지는 올리고머 내의 것들과 상이한 1, 2 또는 3 개의 염기 모이어티를 선택적으로 포함한다.

특정 실시예에 있어서, 상기 단량체 부위는 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29 개의 연속적 단량체로 구성되며, 예를 들면 10-15, 12-25, 12 -22, 예를 들면 12-18 단량체 등이다. 적절하게는, 다양한 실시예에 따라, 상기 부위는 본 발명의 올리고머의 길이와 동일한 길이를 갖는다.

일부 실시예에 있어서, 상기 올리고머는 5' 또는 3' 말단에 추가적 단량체를 포함하며, 예를 들면, 독립적으로, 올리고머의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 추가적 단량체를 포함하고, 이들은 표적 부위의 서열에 비상보적이다.

다양한 실시예에 있어서, 본 바명의 올리고머는 추가적 단량체에 의해 5' 및/도는 3' 플링크된 표적에 상보적인 일 부위를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 일 부위의 3' 말단은 1, 2 또는 3 DNA 또는 RNA 단량체에 의해 플링크된다. 3' DNA 단량체는 올리고머의 고체상 합성 동안에 자주 사용된다. 서로 동일하거나 상이할 수 있는 다양한 실시예에 따르면, 상기 올리고머의 5' 말단은 1, 2 또는 3 DNA 또는 RNA 단량체에 의해 플랭크 된다. 특정 실시예에서, 상기 추가적 5' 또는 3' 단량체는 예를 들면 DNA 또는 RNA 단량체와 같은 뉴클레오시드이다. 다양한 실시예에서, 상기 5' 또는 3' 단량체는 본 명세서의 갭머 올리고머의 문맥에서 칭해지는 부위 D 를 나타낼 수 있다.

갭머 서열(서열번호: 141-196 및 234)의 경우에 있어, 굵은 표시의 윗첨자는 뉴클레오시드가 LNA 당을 포함함을 의미하며, 아래첨자는 2'-디옥시뉴클레오시드를 의미한다. 아래첨자 "s" 표시는 인접 뉴클레오시드 사이의 포스포로티에이트 결합을 의미한다. LNA 단량체 내의 모든 시토신 염기가 5-메틸시토신이다. 24 개의 뉴클레오시드(서열번호: 211-227)를 가지는 올리고뉴클레오티드는 굵은 밑줄 표시로 표 1 내지 12에 나타나 있으며, 이는 더 긴 올리고뉴클레오티드 내로 도입된 더 짧은 올리고머 화합물의 염기 서열을 의미한다.

1.5.6. 컨쥬게이트( conjugates )

본 게시내용의 문맥에서는, 용어 "컨쥬게이트"는, 그 자신이 핵산 또는 단량체가 아닌 하나 이상의 모이어티("컨쥬게이트 모이어티")에 이후 기술된 바와 같이 올리고머가 공유 결합("컨쥬게이트")함에 의해 형성되는 화합물을 지칭한다. 이와 같은 컨쥬게이트 모이어티의 예는 단백질, 지방산 사슬, 당잔기, 당단백질, 폴리머 또는 그 조합과 같은 거대분자 화합물을 포함한다. 일반적으로, 단백질이 표적 단백질의 항체가 될 수 있다. 일반적인 폴리머로는 폴리에틸렌 글리콜이 있다. 본 명세서에서 참조로 인용된 WO 2007/031091에서는 적합한 모이어티 및 컨쥬게이트를 제공하고 있다.

따라서, 일부 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물 및 방법은 본 명세서에 기술된 올리고머를 포함하는 컨쥬게이트를 활용하는 것으로서, 핵산 또는 단량체가 아닌 적어도 하나의 컨쥬게이트 모이어티가 상기 올리고머에 공유 결합된다. 따라서, 올리고머가 본 명세서에 기술된 특정 염기 서열을 가지고 있는 연속적 단량체를 포함하는 경우의 특정 실시예에 따르면, 상기 컨쥬게이트는 또한 상기 올리고머에 공유 결합된 적어도 하나의 컨쥬게이트 모이어티를 포함한다.

다양한 실시예에서, 컨쥬게이트는 올리고머의 활성, 세포 내 분포 또는 세포 내 흡수를 향상할 수 있다. 이와 같은 모이어티는, 한정하는 것은 아니나, 항체, 폴리펩타이드, 콜레스테롤 모이어티, 담즙산, 티오에테르와 같은 지질 모이어티, 즉 예를 들면, 헥실-s-트리틸티올, 티오콜레스테롤, 지방족 사슬, 예를 들면, 도데칸디올(dodecandiol) 또는 운데실(undecyl) 잔기, 인지질, 에를 들면, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-o-헥사데실-rac-글레시로-3-h-인산기, 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리골 사슬, 아다만탄(adamantane) 아세트산, 팔미틸(palmityl) 모이어티, 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티를 포함한다.

특정 실시예들에 따르면,상기 올리고머는 올리고머 화합물의 새포 내 흡수를 증가시키는 모이어티에 컨쥬게이트된다.

특정 실시예들에 따르면, 상기 올리고머는 예를 들면, 아스피린, 이뷰프로펜, 술파제(sulfa drug), 당노병 약, 항균제, 또는 항셍제와 같은 활성 의약품 물질에 컨쥬게이트된다.

특정 실시예들에 따르면, 상기 컨쥬게이트 모이어티는 콜레스테롤과 같은 스테롤이다.

다양한 실시예들에 따르면, 상기 컨쥬게이트 모이어티는 예를 들면, 길이가 1-50, 예를 들면, 2 - 20, 예를 들면, 3 - 10 인 아미노산 잔기의 양으로 대전된 펩타이드, 및/또는 예를 들면 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜과 같은 폴리알칼린 산화물을 포함한다 - 참조로 인용된 WO 2008/034123 참조. 적합하게는, 폴리알칼린 산화물과 같이 양으로 대전된 폴리머가 WO 2008/034123에 기재된 해제가능한(releasable) 링커 등의 링커를 통해 상기 올리고머에 결합될 수 있다.

1.5.6.1.1. 활성화된 올리고머( activated oligomer )

본 명세서에서 사용되는 용어 "활성화된 올리고머"란 본 명세서에서 기술하는 올리고머와 하나 이상의 컨쥬게이트 모이어티, 즉 그 자신이 핵산 또는 단량체가 아닌 모이어티로의 공유 결합을 허용하는 적어도 하나의 기능적 모이어티에 공유 결합(즉, 기능화(functionalized))된 올리고머를 지칭한다. 일반적으로, 기능적 모이어티는 예를 들면, 3'-하이드록실기 또는 아데닌 염기의 외향고리 NH₂ 기 등을 통해 상기 올리고머로 공유 결합될 수 있는 화학기, 일부 실시예의 경우, 친수성인 스페이서, 및 컨쥬게이트 모이어티(예. 아미노, 설프히드릴 또는 하이드록실기)에 결합할 수 있는 말단기를 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 상기 말단기는 보호되지 않는, 즉 예를 들면 NH₂기이다. 기타 실시예에 따르면, 상기 말단기는 예를 들면 "Protective Groups in Organic Synthesis" by Theodora W Greene and Peter G M Wuts, 3rd edition (John Wiley & Sons, 1999)에 기술된 것과 같은 적절한 보호기 등에 의해 보호된다. 적절한 하이드록실 보호기의 예로는 아세테이트 에스테르와 같은 에스테르, 벤질, 디페닐메틸, 또는 트리페닐메틸 및 테트라하이드로피라닐과 같은 아랄킬기를 포함한다. 적절한 아미노 보호기의 예로는 벤질, 알파-메틸벤질, 디페닐메틸, 트리페닐메틸, 벤질옥시카르보닐, 삼차-부옥시카르보닐 및 트리클로로아세틸 또는 트리플루오로아세틸과 같은 아실기를 포함한다.

일부 실시예에서, 상기 기능 모이어티는 자가-절단성이 있다. 다른 실시예에서, 상기 기능 모이어티는 생물 분해성이 있다(참고문헌으로 본 명세서에서 인용된 미국 특허번호 7,087,229 참조).

일부 실시예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머는 5' 말단에 접합된 부분의 공유 접합을 허용하기 위해, 5' 말단에서 기능화된다. 다른 실시예에서, 본 발명의 올리고머는 3' 말단에서 기능화될 수 있다. 또 다른 실시예에서는, 본 발명의 올리고머는 골격 또는 헤테로고리 염기 부분이 기능화될 수 있다. 또 다른 실시예에서, 올리고머는 5' 말단, 3' 말단, 골격 및 염기로부터 선택된 어느 하나 이상의 위치에서 기능화될 수 있다.

일부 실시예에서, 활성화된 올리고머는 기능적 부분에 공유적으로 접합되는 하나 이상의 단량체를 합성하는 동안 통합됨으로써 합성된다. 다른 실시예에서, 본 발명의 활성화된 올리고머는 기능화되지 않은 단량체와 합성되고, 상기 올리고머는 합성의 완성에 의해 기능화된다.

일부 실시예에서, 상기 올리고머는 아미노알킬 링커를 포함하는 방해된 에스테르로 기능화되며, 여기서 알킬 위치는 일반식 (CH2)_w을 가지며, 여기서 w는 1 내지 10의 범위 내 정수, 예를 들면 약 6이며, 여기서 알킬아미노기의 알킬 위치는 직쇄 또는 측쇄일 수 있으며, 상기 기능기는 에스테르기 (-O-C(O)-(CH2)_wNH)를 통해 상기 올리고머에 접합된다.

다른 실시예에서, 상기 올리고머는 (CH₂)_w-설프하이드릴(SH) 링커를 포함하는 방해된 에스테르로 기능화되며, 여기서 w는 1 내지 10의 범위 내 정수, 예를 들면 약 6이며, 알킬아미노기의 알킬 위치는 직쇄 또는 측쇄일 수 있으며, 상기 기능기는 에스테르기 (-O-C(O)-(CH₂)_wSH)를 통해 상기 올리고머에 접합된다. 일부 실시예에 따르면, 설프하이드릴-활성의 올리고뉴클레오티드는 폴리에틸렌 글리콜 또는 펩타이드와 같은 폴리머 모이어티에 컨쥬게이트된다(이황화 결합의 형성을 통함).

적어도 하나의 기능모이어티에 공유적으로 접합된 활성화된 올리고머는 공지의 방법에 의해 합성될 수 있으며, 특히 본 명세서에서 참조로 인용된 미합중국 특허 제7,595,304, WO 2008/034122 및 WO 2008/034119 에 게시된 방법, 및 Zhao et al. (2007) J. Controlled Release 119:143-152; 및 Zhao et al . (2005) Bioconjugate Chem. 16:758-766. 의 방법에 의해 합성될 수 있다.

또 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 약학적 조성물 및 방법에 사용하기 위한 올리고머는 미합중국 특허 제4,962,029 및 4,914,210 에 실질적으로 기술된 기능화 시약을 통하여 올리고머 내로 설프히드릴, 아미노 또는 하이드록실기를 도입함에 의해 기능화된다. 즉, 실질적으로 선형의 시약이 일단에서 친수성 스페이서를 통해 보호 또는 미보호된 설프히드릴, 아미노 또는 하이드록실기를 포함하는 타단으로 접합된 포스포라미디트를 포함한다. 상기 시약은 일차적으로 올리고머의 하이드록실기와 반응한다. 일부 실시예의 경우에 있어, 상기 활성화된 올리고머는 올리고머의 5'-하이드록실기에 접합되는 기능화 시약을 가진다. 다른 실시예에 따르면, 상기 활성화된 올리고머는 3'-하이드록실기에 접합된 기능화 시약을 가진다. 또 다른 실시예에 따르면, 상기 활성화된 올리고머는 올리고머의 골격 상의 하이드록실기에 접합되는 기능화 시약을 가진다. 또 다른 실시예들에 따르면, 상기 올리고머는 본 명세서에서 참조로 인용된 미합중국 특허 제4,962,029 및 4,914,210에 기술된 기능화 시약 중 하나 이상에 의해 기능화된다. 이와 같은 기능화 시약을 합성하고 그들을 단량체 및 올리고머 내로 도입하는 방법은 미합중국 특허 제4,962,029 및 4,914,210에 기술되어 있다.

일부 실시예에 따르면, 고상 결합 올리고머(solid-phase bound oligomer)의 5' 말단은 디에닐 포스포라미다이트 유도체로 기능화되고, 이어서 Diels-Alder 고리화첨가 반응(cycloaddition reaction)을 통한 아미노산 또는 펩티드 등과 탈보호된 올리고머와 접합된다.

다양한 실시예에서, 상기 올리고머 내로 2'-카르바메이트 치환 당 또는 2'-(O-펜틸-N-프탈리미도)-디옥시리보즈 당과 같은, 2' 당 변형을 포함하는 단량체의 통합은 상기 올리고머의 당에 대한 접합된 부분의 공유 접합을 촉진시킨다. 다른 실시예에서, 한 개 이상의 단량체의 2'-위치에 아미노를 포함하는 링커를 갖는 올리고머는, 예를 들면 5'-디메톡시트리틸-2'-O-(e-프탈리미딜아미노펜틸)-2'-데옥시아데노신-3'--N,N-디이소프로필-시아노에톡시 포스포라미다이트 등의 시약을 이용하여 준비된다(Tetrahedron Letters, 1991, 34, 7171 참조).

또 다른 실시예에서, 상기 올리고머는 N6 퓨린 아미노기, 구아닌의 엑소사이클 N2, 또는 시토신의 N4 또는 N5를 포함하는, 뉴클레오염기에서 아민을 포함하는 기능성 모이어티를 가진다. 일부 실시예에서, 이런 기능성화는 상기 올리고머 합성에서 이미 기능성화된 상업적 시약을 이용하여 달성될 수 있다.

일부 기능성 부분은, 예를 들면, Pierce Co.(Rockford, Ill.)로부터 이용가능한 헤테로 이중기능성 및 호모 이중기능성 연결 부분과 같이 상업적으로 이용가능하다. 다른 상업적으로 이용가능한 연결기는 Glen Research Corporation (Sterling, Va.)로부터 이용가능한 5'-아미노-변경유전자 C6 및 3'-아미노-변경유전자 시약이 있다. 또한, 5'-아미노-변경유전자 C6은 아미노link-2로서 ABI (Applied Biosystems Inc., Foster City, Calif.)로부터 이용가능하며, 3'-아미노-변경유전자는 Clontech Laboratories Inc. (Palo Alto, Calif.)로부터 이용가능하다.

일부 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물은 두 개 또는 어떨 때는 세 개 모두의 표적 핵산을 표적화하는 하나 이상의 올리고머를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 본 발명은 HER3를 표적화하는 올리고머를 포함하는 약학적 조성물, 및 HER2 발현을 표적화하고 이를 하향 조절하는 올리고머에 관한 것이다. 동일하거나 상이할 수 있는 다른 실시예의 경우에 있어, 본 발명은 HER3에 표적화된 올리고머를 포함하는 약학적 조성물 및 더 나아가 EGFR 발현을 표적화하고 이를 하향조절하기 위한 올리고머에 관한 것이다.

일부 실시예에서, HER2 및/또는 EGFR mRNA(또는 그 컨쥬게이트)을 표적화하는 올리고머는 HER3를 표적화하는 올리고머와 동일한 고안(예. 갭머, 헤드머, 테일머)를 갖는다. 다양한 실시예에 있어, HER2 및/또는 EGFR mRNA(또는 그 컨쥬게이트)을 표적화하는 올리고머는 HER3를 표적화하는 올리고머와 상이한 고안을 갖는다.

일부 실시예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되기 위한 올리고머는 컨쥬게이트 모이어티에 공유 접합됨으로써 세포막을 통한 올리고머의 전달을 돕는다. 세포막을 통한 올리고머의 전달을 돕기 위한 컨쥬게이트 모이어티의 예는 콜레스테롤과 같은 지질 모이어티가 있다. 다양한 실시예에서, 본 발명의 약학적 조성에 사용되기 위한 올리고머는 예를 들면 Invitrogen에 의해 시판되는 LIpofectamine 2000 또는 Lipofectamine RNAiMAX와 같은 리포좀을 형성하는 지질 제제로 제제화된다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 하나 이상의 지질-유형의 비자연적 발생의 소분자(리피도이드(lipidoids))의 혼합물로 제제화된다. 리피도이드의 라이브러리는 종래의 합성 화학 방법에 의해 합성될 수 있으며, 리피도이드의 다양한 양과 조합을 분석함으로써(assay) 선택된 투여 경로에 의한 표적 조직으로의 특정 크기의 올리고머의 효과적 이송을 위한 이송체(vehicle)를 개발할 수 있다. 적정 리피도이드 라이브러리 및 조성은, 예를 들면 본 명세서에서 참조로 인용된 Akinc et al . (2008) Nature Biotechnol.(http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/abs/nbt1402.html에서 찾아볼 수 있음)를 참조한다.

1.6. 단백질 티로신 키나아제 억제제( Protein tyrosine kinase inhibitors )

이후 혼용되는 용어인 "단백질 티로신 키나아제 억제제", "PTK 억제제" 및 "티로신 키나아제 억제제"는 하나 이상의 티로신 키나아제 도메인에 결합하여 그 활성을 억제하는 분자를 지칭한다. 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 본 명세서에서 기재된 바와 같이 HER3를 표적화하는 올리고머가 아니다. 일부 실시예에 따르면, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 단일클론의 항체이다. 다른 실시예에 따르면, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 소분자로, 예를 들면 300 -700 Da 범위의 1000 Da 미만의 분자무게를 갖는 소분자이다.

특정 실시예에 있어서, 상기 PTK 억제제는 하나 이상의 EGFR 계열 요소의 티로신 키나아제에 결합하여 이를 억제한다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 PTK 억제제는 하나 이상의 EGFR 계열 요소와 반응하거나 그에 의해 조절되는 하나 이상의 단백질, 즉 예를 들면 하나 이상의 EGFR 계열 요소로 유래되는 하나 이상의 신호 캐스케이드(signaling cascade)에 연관되는 단백질의 티로신 키나아제에 결합하여 이를 억제한다. 일부 실시예에 있어서, 상기 티로신 키나아제는 수용체 티로신 키나아제, 즉 세포 외 리간드 바인딩을 가지는 더 큰 단백질의 세포 내 영역으로, 하나 이상의 리간드에 의한 바인딩에 의해 활성화된다. 특정 실시예에 따르면, 상기 단백질 티로신 키나아제는 비수용체 티로신 키나아제이다. 티로신 키나아제 효소는 인산화에 의해 하나 이상의 신호 경로 내의 다른 단백질의 활성을 제어한다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 단백질 티로신 키나아제 억제제는 EGFR 계열 요소의 티로신 키나아제 도메인에 선택적으로 바인딩하는 소분자 억제제를 포함한다. 특정 실시예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 단백질 티로신 키나아제 억제제는 하나 이상의 EGFR 계열 단백질의 티로신 키나아제 영역에 결합하여 그 활성을 억제하는 소분자 억제제를 포함한다. 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 단백질 티로신 키나아제 억제제는 수용체 티로신 키나아제의 EGFR 계역에 선택적으로 결합하지 않지만, VEGFR, PDGFR 및/또는 Raf와 같은 기타 계열의 단백질의 티로신 키나아제 도메인에 결합하는 PTK 억제제를 포함한다. 특정 실시예에 있어서, 상기 PTK 억제제는 가역적 저해제로, 즉 단백질에 결합하되 이를 비가역적으로 변형하지는 않는다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 PTK 억제제는 비가역적 억제제로, 즉 PTK 수용체 다이머를 공유 교차결합함에 의해 PTK를 억제한다.

다양한 실시예에 따르면, 본 발명은 단백질 티로신 키나아제 억제제의 약학적으로 허용가능한 유도체를 포함하는 약학적 조성물을 망라한다. 본 명세서에서 사용되는 문구 "약학적으로 허용가능한 유도체"란 PTK 억제제의 약학적으로 허용가능한 염, 프로드럭, 방사선 표지 형태, 입체이성체, 거울상이성질체(enantiomer), 부분입체 이성질체(diastereomer), 기타 입체이성질체 형태, 라세미 혼합물, 기하이성질체, 토토머(tautomer), 용매 (예. 수화물), 비결정 고체 형태 및 결정질 고체 형태를 포함한다. 하나의 실시예에 따르면, 상기 약학적으로 허용가능한 유도체는 PTK 억제제의 약학적으로 허용가능한 염, 방사선 표지 형태, 입체이성체, 거울상이성질체, 부분입체 이성질체, 기타 입체이성질체 형태, 라세미 혼합물, 기하이성질체, 및/또는 토토머를 포함한다. 또 다른 실시예에 따르면, 상기 약학적으로 허용가능한 유도체는 PTK 억제제의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.

특정 실시예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 PTK 억제제는 비염(non-salt) 형태(예. 유리산 또는 유리 염기의 형태)를 취한다. 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용되는 PTK 억제제는 약학적으로 허용가능한 염의 형태를 갖는다. 본 명세서에서 사용되는 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 문구는 바람직한 생물학적 활성을 유지하며 바람직하지 않은 독성 효과는 적정선으로 나타내는 염을 지칭한다.

티로신 키나아제 억제제의 약학적으로 허용가능한 염의 형태는 공지의 방법에 의해 제조될 수 있다. PTK 억제제가 산기를 포함하는 경우, 화합물을 적절한 염기와 반응시킴으로써 그에 대응되는 염기-첨가 염을 얻음에 의해 적정 염을 형성할 수 있다. 이와 같은 염기로는 알칼리 금속 수산화물을 포함하되, 이에 한정되는 것은 아니며, 이는 수산화칼륨, 수산화 나트륨, 및 수산화 리튬; 바륨 수산화물 및 칼슘 수산화물 등의 알칼리-토금속 수산화물; 예를 들면 칼륨 에톡시드 및 소듐 프로폭시드(sodium propoxide)와 같은 알칼리 금속 알콕시드; 및 피페리딘, 디에탄올아민 및 N-메틸글루타민 등의 다양한 유기 염기를 포함한다.

대안적인 예에 따르면, PTK 억제제의 산-첨가 염은 화합물을 약학적으로 허용가능한 유기 및 무기산으로 처리함에 따라 형성할 수 있으며, 이는 예를 들면, 할로겐화 수소, 염화수소, 브롬화수소 또는 요오드화 수소, 기타 무기산 및 그의 대응 염, 예를 들면, 황산염, 질산염 또는 인산기 및 등등, 및 알킬- 및 모노아릴설포네이트, 예를 들면 에탄술포네이트, 톨루엔술포네이트 및 벤젠술포네이트, 및 기타 유기산 및 그의 대응 염, 예를 들면, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 타르타르산염, 말레인산기, 숙신산염, 구연산염, 벤조산염, 살리실산염, 아스코브르산염 등등을 포함한다. 따라서, PTK 억제제의 약학적으로 허용가능한 산-첨가 염은 한정하는 것은 아니나, 아세테이트, 아디핀산염, 알긴산염, 아르기닌산염(arginate), 아스파르트산염, 벤조산염, 벤젠술폰산염(besylate), 중황산염, 중아황산염, 브롬화물, 낙산염(butyrate), 캄포레이트(camphorate), 캄포술포네이트(camphorsulfonate), 카프릴레이트(caprylate), 클로라이트, 클로로벤조에이트, 구연산염, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 디하이드로겐포스페이트, 디니트로벤조에이트, 도데실설페이트, 에탄술포네이트, 푸마르산염, 갈락터레이트(galacterate) (점액산 유래), 갈락투로네이트(galacturonate), 글루코헵타노에이트(glucoheptanoate), 글루콘산염(gluconate), 글루타민산염(glutamate), 글리세로포스페이트, 헤미숙신네이트(hemisuccinate), 헤미설페이트(hemisulfate), 헵타노에이트(heptanoate), 헥사노에이트(hexanoate), 마뇨산염(hippurate), 염산염, 브롬화수소산염, 하이드로이오디드(hydroiodide), 2-하이드록시에탄술포네이트, 요오드화물, 이세티오네이트(isethionate), 이소부티레이트(isobutyrate), 락테이트(lactate), 락토비오네이트(lactobionate), 말산염(malate), 말레인산기, 말론산, 만델레이트(mandelate), 메타포스페이트(metaphosphate), 메탄술포네이트, 메틸벤조에이트, 모노하이드로젠포스페이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트(nicotinate), 질산염, 수산염, 올레산염, 팔모에이트(palmoate), 펙티네이트(pectinate), 과황산염(persulfate), 페닐아세테이트, 3-페닐프로피오네이트, 인산기, 포스포네이트, 프탈레이트를 포함한다.

본 발명의 방법 및 조성에 유용한 PTK 억제제는 한정하는 것은 아니나, 제피티니브(제피티니브) (ZD-1839, Iressa®, 얼로티니브(erlotinib) (OSI-1774, Tarceva®, 캐너티니브(canertinib) (CI-1033), 밴드타니브(vandetanib) (ZD6474, Zactima®, 타이포스틴(티르포스틴) AG-825 (CAS 149092-50-2), 라파티니브(lapatinib) (GW-572016), 소라페니브(sorafenib) (BAY43-9006), AG-494 (CAS 133550-35-3), RG-13022 (CAS 149286-90-8), RG-14620 (CAS 136831-49-7), BIBW 2992 (Tovok), 타이포스틴(티르포스틴) 9 (CAS 136831-49-7), 타이포스틴(티르포스틴) 23 (CAS 118409-57-7), 타이포스틴(티르포스틴) 25 (CAS 118409-58-8), 타이포스틴(티르포스틴) 46 (CAS 122520-85-8), 타이포스틴(티르포스틴) 47 (CAS 122520-86-9), 타이포스틴(티르포스틴) 53 (CAS 122520-90-5), 부테인(butein) (1-(2,4-디하이드록시페닐)-3-(3,4-디하이드록시페닐)-2-프로펜-1-온 2',3,4,4'-테트라하이드록시캘콘; CAS 487-52-5), 커큐민 ((E,E)-1,7-비스(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-1,6-헵타디엔-3,5-디온; CAS 458-37-7), N4-(1-벤질-1H-인다졸-5-일)-N6,N6-디메틸-피리도-[3,,4-d]피리미딘-4,6-디아민 (202272-68-2), AG-1478, AG-879,시클로프로판카르복실산-(3-(6-(3-트리플루오로메틸-페닐아미노)-피리디민-4-일아미노)-페닐)-아미드 (CAS 879127-07-8), N8-(3-클로로-4-플루오로페닐)-N2-(1-메틸피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 2HCl (CAS 196612-93-8), 4-(4-벤질옥시아닐리노)-6,7-디메톡시퀴나졸린 (CAS 179248-61-4), N-(4-((3-클로로-4-플루오로페닐)아미노)피리도[3,4-d]피리미딘-6-일)2-부틴아미드 (CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272, 및 HKI-357를 포함한다.

일부 실시예에 따르면, 상기 PTK 억제제는 제피티니브, 얼로티니브, 라파티니브, 키너티니브 및 소라페니브에서 선택된다.

특정 실시예에 따르면, 상기 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브이다.

PTK 억제제는 종래에 공지된 방법에 의해 획득될 수 있다. 일부 실시예에 따르면, PTK 억제제는 예를 들면, Sigma-AldrichSigma-Aldrich^® 및 Cayman Chemical에 의해 상용되고 있다. 다양한 실시예에 있어서, PTK 억제제는 예를 들면, AstraZeneca, Roche, GlaxoSmithKline 및 Bayer Pharmaceuticals 에서 처방에 의해 시판된다. 다른 실시예에 따르면, PTK 억제제는 공지의 방법, 즉 예를 들면 Rewcastle, G.W. et al . (1996) J. Med. Chem. 39:918-928 에 기술된 방법에 의해 합성될 수 있다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하나 보다 많은 티로신 키나아제 억제제를 포함한다. 일부 실시예의 경우, 특정 수용체 티로신 키나아제(예. 제피티니브)를 위해 하나의 티로신 키나아제 억제제가 선택되고, 제2의 티로신 키나아제 억제제를 상대적으로 비선택적으로(예. 소라페니브) 할 수 있다. 다양한 실시예에 따르면, 제2의 티로신 키나아제 억제제가 하나 이상의 EGFR 계열 요소(예. 라파티니브)의 티로신 키나아제 영역에 결합한다. 또 다른 실시예들에 따르면, 제2의 티로신 키나아제 억제제는 VEGFR과 같은 상이한 계열 내의 PTK 수용체의 티로신 키나아제 영역에 결합한다.

1.6.1. 약학적으로 허용가능한 첨가제 및 제형

일부 실시예에 있어서, 본 발명의 약학적 조성물은 적어도 하나의 올리고머 화합물, 적어도 하나의 PTK 억제제 또는 그의 약학적으로 허용가능한 유도체, 및 적합량의 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함함으로써 환자로의 적합한 투여형태를 제공한다. 본 명세서에서는, 용어 "환자"란 한정하는 것은 아니나, 인간 또는 비인간 동물, 즉 예를 들면 동반 동물 또는 가축류, 예를 들면, 소, 원숭이, 개코원숭이, 침팬지, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼, 또는 기니피그를 포함한다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 적어도 하나의 올리고머 화합물 및 적어도 하나의 PTK 억제제는 단일의 약학적 조성물 내에 포함된다. 다른 실시예에 따르면, 상기 적어도 하나의 올리고머 화합물 및 적어도 하나의 PTK억제제는 개별적인 약학적 조성물 내에 포함된다. 활성 성분이 개별적 조성물 내에 포함되는 실시예의 경우, 상기 조성물은 HER3-표적의 조합 요법에 사용하기 위해 함께 동봉될 수 있다(코-패키지(co-package)).

상기 약학적 첨가제는 희석제, 현탁제, 가용화제, 결합제, 붕해제, 방부제, 착색제, 윤활제 등일 수 있다. 상기 약학적 첨가제는 물, 또는 석유, 동물, 식물 또는 합성 유래의 오일, 즉 예를 들면, 땅콩 기름, 콩기름, 미네랄유, 참기름 등과 같은 액체일 수 있다. 상기 약학적 첨가제는 식염수, 아라비아 고무, 젤라틴, 전분 페이스트, 알크, 케라틴, 콜로이드 규산, 우레아 등일 수 있다. 또한, 보조제,안정화제, 농조화제, 윤활제 및 착색제가 사용될 수 있다. 하나의 실시예에 따르면, 상기 약학적으로 허용가능한 첨가제는 환자에게 투여될 때는 살균된 상태이다. 올리고머 또는 PTK 억제제의 정맥주사 투여의 경우에서 물(water)은 특히 유용한 첨가제이다. 식염수 및 수성(aqueous) 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 특히 주사 용액용으로 액상 첨가제로 채용될 수 있다. 적합한 약학적 첨가제로는 또한 전문, 포도당, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 몰트, 쌀, 밀가루, 백악(chalk), 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 스킴 밀크, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 필요한 경우, 본 발명의 조성물은 또한 소량의 습윤 또는 에멀전화제, 또는 pH 버퍼제를 포함할 수 있다. 경구 제제를 제조하기 위해 사용될 수 있는 약학적으로 허용가능한 첨가제의 특정 예가 Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association (1986)에 기술되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물들은 용액, 현탁액, 에멀전, 타블릿, 알약, 환제(pellets), 캡슐, 액체를 포함하는 캡슐, 파우더, 서방형제제, 좌약, 에멀젼, 에어로졸, 스프레이, 현탁액, 또는 기타 사용에 적합한 형태일 수 있다. 기타 적합한 약학적 첨가제의 예가 본 명세서에서 참조로 인용된 Remington's Phaarmaceutical Sciences 1447-1676 (Alfonso R. Gennaro ed., 19th ed. 1995)에 기재되어 있다.

다양한 실시예에 있어서, 상기 조성물들은 인간에 대한 경구 투여에 적용되는 조성물로서의 정기적 공정에 따라 제제화된다. 경구 투여되기 위한 올리고머 또는 소분자 PTK 억제제는, 예를 들면 타블릿, 캡슐, 젤라틴캡슐(gelcaps), 당의정, 캔디(lozenges), 수성 또는 유분 용액, 현탁액, 그래뉼, 파우더, 에멀젼, 시럽, 또는 영약(elixirs) 등의 형태일 수 있다. 활성제가 경구 타블릿으로 포함되는 경우, 그와 같은 타블릿은 압축 타블릿, 습제정제(예. 파우더 또는 분쇄 타블릿), 장용정, 당의정, 필름제 피정, 다중압축정제 또는 다중층 타블릿(multiply layered tablets) 일 수 있다. 고형 경구 제제 형태를 제조하기 위한 기술 및 조성에 대해서는 Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman, Lachman and Schwartz, eds., 2nd ed.) published by Marcel Dekker, Inc에 기재되어 있다. 타블릿(압축 및 성형), 캡슐(경질 및 연질 젤라틴) 및 알약을 제조하기 위한 기술 및 조성 또한 Remington's Pharmaceutical Sciences 1553-1593 (Arthur Osol, ed., 16th ed., Mack Publishing, Easton, PA 1980) 에 기술되어 있다.

액상 경구 제제형은 수성 및 비수성 용액, 에멀전, 현탁액 및/또는 비발포 과립으로 재구성된 현탁액을 포함하며, 이는 선택적으로 하나 이상의 적합한 용매, 보존제, 에멀전화제, 서스펜션화제, 희석제, 감미료, 착색제, 방향제(flavoring agent) 등을 포함한다. 액상 경구 제제를 제조하기 위한 기술 및 조성은 Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, (Lieberman, Rieger and Banker, eds.) published by Marcel Dekker, Inc 에 기술되어 있다.

본 발명의 조성이 비경구 투입되는 경우, 이들은 예를 들면 등장성(isotonic) 멸균 용액의 형태를 가질 수 있다. 대안적으로, 상기 조성이 흡입되는 경우, 이들은 건식 에어로졸로 제제화되거나, 수성 또는 부분 수성의 용액으로 제제화될 수 있다.

경구 투여 조성물은 예를 들면 다음 중 하나 이상의 요소(agent)를 포함함으로써 약학적으로 구미에 맞는 제제를 제공할 수 있다: 프룩토스(fructose), 아스파탐 또는 사카린등의 감미료; 페퍼민트, 윈터그린 오일, 또는 체리 오일과 같은 방향제; 착색제; 및 보존제. 더 나아가, 상기 약학적 조성의 타블릿 또는 알약을 코팅하여 소화기관 내에서의 붕해 및 흡수를 지체시킴으로써 연장된 시간 동안 지연되도록 작용할 수 있도록 한다. 삼투성 활성의 driving 화합물을 둘러싸고 있는 선택적으로 투과가능한 막 또한 경구 투여 조성물로 적합하다. 상기 마지막 플랫폼의 경우, 캡슐을 둘러싼 환성에서 나오는 유체가 상기 driving 화합물에 의해 흡수되어, 팽창됨으로써 개구부를 통해 상기 요소(agent), 또는 요소 조성물을 대체한다. 이와 같은 전달 플랫폼은 즉각적 방출방식의 제제의 스파이크형 프로파일(spiked profiles)에 상반되는 근본적으로 제로-오더(zero order)의 전달 프로파일을 제공할 수 있다. 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 스테아레이트와 같은 시간 지연 재료 역시 사용될 수 있다. 경구 조성물들은 마니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스, 및 마그네슘 카보네이트와 같은 표준 첨가제를 포함할 수 있다. 하나의 실시예에 따르면, 상기 첨가제들은 약학적 등급을 갖는다.

다른 실시예의 경우, 상기 조성물들은 정맥주사 투여용으로 제제화될 수 있다. 일반적으로, 정맥주사 투여용 조성물은 멸균 등장성(isotonic) 수성 버퍼를 포함한다. 필요한 경우, 상기 조성물은 또한 가용화제를 포함할 수 있다. 정맥주사 투여용 조성물은 선택적으로 벤조케인 또는 프릴로케인과 같은 투여 부위의 통증을 감할 수 있는 국소 마취제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 성분들은 개별적, 또는 단위 제제 내에 혼합된 형태, 즉 예를 들면, 활성 성분의 용량을 표시하는 앰플 또는 포(sachette)와 같이 밀폐 용기 내의 건식 동결건조 파우더 또는 비수분 농축 등으로 공급된다. 조성물이 주입(infusion)에 의해 투여되는 경우, 이는 예를 들면 멸균 약학적 등급 물 또는 식염을 포함하는 주입병(infusion bottle) 등으로 보급될 수 있다. 활성 물질이 주사로 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 식염수 앰플을 제공하여 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 제어방식의 방출 또는 서방형 방출 수단, 또는 공지된 전달 장치에 의해 투여될 수 있다. 한정하는 것은 아니나, 이러한 예들이 본 명세서에서 참조로 각각 인용된 미합중국 특허 제 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; 4,008,719; 5,674,533; 5,059,595; 5,591,767; 5,120,548; 5,073,543; 5,639,476; 5,354,556; 및 5,733,566 에 기술되어 있다. 이와 같은 제형은 하나 이상의 활성 성분의 제어되거나 서방형 방출을 제공하기 위해 사용될 수 있으며, 이는 예를 들면, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 기타 폴리머 메트릭스,겔, 투과가능막, 삼투압 시스템, 다층 코팅, 극미립자, 다입자바이러스, 리포솜, 미소구체, 또는 이들의 조합으로 다양한 분량으로 원하는 방출 프로파일을 제공하게 된다. 본 명세서에 기술된 것을 포함하여 공지된 제어 또는 서방형 방출 제제는 본 발명의 활성 성분과 함께 사용되기 위해 적절히 그리고 빠르게 선택될 수 있다. 따라서, 본 발명은 한정하는 것은 아니나, 제어 또는 서방형 방출용의 타블릿, 캡슐, 젤라틴 캡슐 및 당의정과 같은 경구 투여에 적합한 단일 단위의 제제를 망라한다.

본 명세서에 기술된 약학적 조성물의 투여는 경구, 폐, 국소(예. 질 및 대장 전달을 포함하는 상피, 경피, 눈 및 점막), 또는 정맥, 동맥, 피하, 복강 또는 근육내 주사 또는 침출을 포함하는 비경구일 수 있다. 하나의 실시예에 따르면, 올리고머 치료제를 포함하는 약학적 조성물은 정맥(i.v.), 복강내(i.p.) 또는 대량 투여(bolus injection)로 투여된다. 비경구 경로는 본 발명의 많은 태양에 있어서 바람직하다. 적절한 제제화는 선택한 투여 경로, 즉 국소 또는 전신 치료 여부에 따라 결정된다. 상기 적어도 하나의 올리고머 및 적어도 하나의 PTK 억제제가 개별적 조성물로 제제화되는 다양한 실시예에 있어서, 상기 약학적 조성물들은 동일한 형태(예. 고체 제제, 액상 제제, 에어로졸)가 될 필요는 없으며, 동일 경로(예. 경구, 비경구, 국부)에 의해, 또는 동시에 투여될 필요는 없다. 예를 들어, 본 발명은 올리고머가 경구 투여를 위한 제제로 제제화되는 조성, 즉 예를 들면 타블릿, 캡슐, 경구 시럽 등으로 제제화되며, 상기 PTK 억제제가 정맥 투여 또는 흡입 투여의 제제형태로 제제화되는 약학적 조성을 망라한다.

1.6.2. 투여용법

HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EFGR)을 표적화하는 LNA 올리고머는 규칙적 간격("복용 간격" 또는 "DI")을 3일에서 2주 범위로 두고 투여될 수 있다. 일부 실시예에 따르면, 상기 DI는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 0, 11, 12, 또는 13일이다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 DI 는 약 1주이다. 또 다른 실시예들에서, 상기 DI는 6, 7 또는 8일이다. 적합하게는, 적어도 두 개의 복용이 제공되되, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 과 같은 상기 두 개의 복용 사이에 DI가 제공되며, 여기서 DI는 각각 LNA 올리고머의 연속적 복용 사이에 위치한다. 각각의 복용 사이의 DI 기간은 동일할 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 DI 기간은 3일에서 2주 범위이다. 다른 실시예에 따르면, 상기 DI 기간은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13일이다. 또 다른 실시예에 따르면, 상기 DI 기간은 약 1주이다. 특정 실시예에 따르면, 상기 DI 기간은 6, 7 또는 8일이다.

일부 실시예에 따르면, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머의 각각의 복용은 체중의 약 0.25 mg/kg 내지 약 10 mg/kg로, 예를 들면 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 또는 약 9 mg/kg 이다. 일부 실시예에 따르면, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머의 각각의 복용은 약 2 mg/kg 내지 약 8 mg/kg, or 약 4 내지 약 6 mg/kg, or 약 4 mg/kg 내지 약 5 mg/kg 범위이다. 일부 실시예에 따르면, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머의 각각의 복용은 적어도 2 mg/kg로, 예를 들면 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 mg/kg 이다. 다양한 실시예에 있어서, 각각의 복용은 6 mg/kg 이다.

LNA 올리고머의 투여는 일반적으로 비경구 투여, 즉 예를 들면 피하, 근육내, 정맥 또는 복강내 투여에 의해 이루어진다. 특정 실시예에 따르면, 투여방식은 정맥내 투여이다.

일부 실시예에서, LNA 올리고머의 투여용법은 첫 복용 용법 이후에 반복된다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 투여용법은 질병의 치료 또는 그 진행을 방지하기 위하여 필요한 만큼 반복된다.

특정 실시예에서, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머는 연속적이라기 보다는 상대적으로 짧은 시간에 걸쳐 투여된다. 다양한 실시예에 따르면, 짧은 투여 시간으로 인해 환자가 오랜 기간 병원에 입원할 필요가 없게 되어 삶의 질의 확연한 개선을 제공한다. 따라서, 다양한 실시예에 있어, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머는 지속적 침출에 의해 투여되지 않는다. 따라서 LN 올리고머의 각각의 복용량이 12 시간 미만의 시간, 즉 예를 들면 약 8 시간 미만, 약 4 시간 미만, 예를 들면 약 3 시간 미만에 걸쳐 환자에게 투여될 수 있다. 따라서, LNA 올리고머의 각각의 복용량은 약 1 시간 및 약 4 시간 범위의 시간, 즉 예를 들면, 약 2 시간 및 약 3 시간, 또는 약 2시간 범위 시간 내에 환자에게 투여될 수 있다. 상기 LNA 올리고머는 적어도 1 시간과 같이 적어도 30 분의 시간 내에 환자에게 투여될 수 있다. 이와 같은 투여는 예를 들면 정맥투여로 이루어질 수 있다.

일부 실시예에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제의 약학적으로 유효한 복용량이 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 LNA 올리고머의 하나 이상의 약학적으로 유효한 복용량의 투여 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 하나 이상의 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제의 복용량이 투여됨으로써 LNA 올리고머와 단백질 티로신 키나아제 모두가 환자에게 치료 효과를 동시에 제공할 수 있다.

1.6.3. 키트( Kits )

본 발명은 또한 제1 성분 및 제2 성분을 포함하는 키트를 제공한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 제1 성분은 HER3의 발현을 억제(예. 하향조절)할 수 있는 적어도 하나의 올리고머, 또는 컨쥬게이트 및/또는 그 약학적 조성을 포함하며, 상기 제2 성분은 하나 이상이 EGFR 계열 요소에 선별적인 적어도 하나의 소분자 단백질 티로신 키나아제 억제제를 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 키트는 올리고뉴클레오티드 또는 PTK 억제제가 아닌 다른 치료제, 즉 예를 들면 화학치료제(예 택솔(taxol))인 제3 성분을 포함한다. 일부 실시예에서, 본 발명의 키트는 암과 같이 과증식질환(hyperproliferative disorder)의 치료 방법에 사용되며, 이는 이를 필요로 하는 환자에게 상기 키트의 제1 및 제2 성분의 유효한 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 다양한 실시예에 있어서, 상기 제1 및 제2 성분은 동시에 또는 일제히(concurrently or simultaneously) 투여된다. 다른 실시예에서 상기 제1 및 제2 성분은 순차적으로 및 소정 순서에 따라 투여된다.

일부 실시예에 따르면, 상기 키트는 HER3의 발현을 억제(예. 하향 조절)할 수 있는 본 발명의 올리고머, 또는 컨쥬게이트 및/또는 그 약학적 조성을 포함하는 제1 성분, 및 단백질 티로신 키나아제 억제제인 제2 성분 및 본 명세서에 기재된 바와 같이 하나 이상의 HER2 및 EGFR의 발현을 억제(예. 하향조절)할 수 있는 올리고머, 또는 컨쥬게이트 및/또는 그 약학적 조성인 제3 성분을 포함한다.

본 발명의 하나의 실시예는 그 안에 상기 적어도 하나의 올리고머 화합물 및 상기 적어도 하나의 PTK 억제제를 개별적 조성으로 포함하는 키트를 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 일 실시예의 경우, 상기 키트는 서열번호: 180에 따르는 올리고머 화합물 및 PTK 억제제 제피티니브를 키트 내에 각각 개별적 조성으로 포함하고 있다.

1.7. 방법

특정 실시예에 따르면, 본 발명은 세포내의 HER3의 발현 및/또는 활성을 억제하기 위한 방법을 망라하며, 이는 상기 세포를 유효량의 올리고머 화합물(또는 그 컨쥬게이트) 및 유효량의 단백질 티로신 키나아제 억제제와 접촉시킴으로써 세포 내 HER(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) 발현 및/또는 활성의 억제(예. 하향조절)를 일으키도록 하는 단계를 포함한다. 특정 실시예에 따르면, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) mRNA 발현이 억제된다. 다른 실시예에 따르면, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) 단백질 발현이 억제된다. 또 다른 실시예에 따르면, EGFR 계열 요소의 티로신 키나아제의 활성이 억제(예. 하향조절)된다. 다양한 실시예에 있어서, HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)의 세포 내로의 내부화(internalization)가 억제된다(예. 하향조절). 다양한 실시예에 따르면, 상기 세포는 인간 세포와 같은 포유류 세포이다.

특정 실시예에 다르면, 상기 접촉단계는 시험관 내에서 발생한다. 다른 실시예에 따르면, 상기 접촉단계는 본 발명의 조성을 포유류에 투여함에 의해 생체내(in vivo)로 이루어진다. 다양한 실시예에 있어서, 본 발명은 HER3 단백질 및/또는 mRNA, 및/또는 세포 내로의 HER3의 내부화, 및 세포 내의 HER2 단백질 및/또는 mRNA 의 발현 및/도는 HER2 티로신 키나아제의 활성, 및/또는 세포 내로의 HER2의 내부화를 억제(예. 하향조절)하기 위한 방법을 제공한다. 상기 인간 HER2 mRNA의 서열은 서열번호:199에 도시된다. 또 다른 실시예에 따르면, 본 발명은 세포 내의 HER3 단백질 및/또는 mRNA의 발현, 및/또는 세포 내로의 HER3의 내부화, 및 세포 내의 EGFR 단백질 및/또는 mRNA의 발현, 및/또는 EGFR 티로신 키나아제의 활성, 및/또는 새포 내로의 EGFR의 내부화를 억제(예. 하향조절)하기 위한 방법을 제공한다. 상기 인간 EGFR mRNA의 서열은 서열번호: 198에 도시된다. 또 다른 실시예에 따르면, 본 발명은 세포 내의 HER3, HER2 및EGFR mRNA 및/또는 단백질의 발현, 및/또는 HER2 및 EGFR 티로신 키나아제의 활성, 및/또는 세포 내로의 HER3, HER2 및 EGFR의 내부화를 억제(예. 하향조절)하기 위한 방법을 제공한다.

특정 실시예에 따르면, 본 발명은 환자의 질병을 치료하기 위한 방법에 관한 것으로, 이는 이를 필요로 하는 환자에게 적어도 하나의 올리고머, 또는 그 컨쥬게이트의 유효량, 적어도 하나의 소분자 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량 및 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에서는, "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 발생한 질병(예. 이후 나열할 질병 또는 질환), 또는 프로필렉시스(propylaxis), 즉 질병의 예방 두 경우 모두에 관련한 것이다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명은 환자의 질병을 치료하기 위한 방법에 관한 것으로, 올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및 단백질 티로신 키나아제 억제제는 상이한 약학적 조성물로 존재한다. 특정 실시예에 따르면, 상기 두 가지 조성물은 동시에 또는 일제히 투여될 수 있다. 다른 실시예에 따르면, 상기 두 가지 조성물은 소정 순서에 따라 순차적으로 투여될 수 있다. 다양한 실시예에서, 올리고뉴클레오티드(또는 그 컨쥬게이트)를 포함하는 조성물 및 단백질 티로신 키나아제 억제제를 포함하는 조성물이 상이한 복용 스케쥴에 따라 상이한 농도로, 상이한 제형 및 상이한 투여 경로에 따라 투여될 수 있다.

한정하는 것은 아니나, 투여 방법은 피내(intradermal), 근육내, 복강경내, 비경구, 정맥, 피하, 비강내, 경막외, 경구, 혀 밑, 뇌 내, 질 내, 경피, 직장, 흡입, 또는 특히 귀, 코, 눈 또는 피부에 대한 국소 투여를 포함한다. 상기 투여방법은 의사의 재량에 따른다.

폐 투여 또한 채용이 가능하며, 예를 들면, 흡입기 또는 분무기, 및 에어로졸화제를 포함하는 제제, 또는 탄화플루오르 또는 허파 계면활성제 내의 관류를 사용할 수 있다. 특정 실시예에 따르면, 올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및/또는 단백질 티로신 키나아제 억제제는 기존의 결합제 및 트리글리세리드와 같은 첨가제를 사용하여 좌약으로 제제화할 수 있다.

올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및/또는 단백질 티로신 키나아제 억제제를 주사에 의한 비경구 투여로 사용할 경우(예. 연속주입 또는 급속주입), 상기 비경구 투여 제제는 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 매체 내의 에멀전의 형태일 수 있으며, 이들 제제는 또한 약학적으로 필요한 첨가제, 즉 예를 들면, 하나 이상의 안정화제, 현탁제, 분산제, 등을 포함할 추가로 포함할 수 있다. 올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및/또는 단백질 티로신 키나아제 억제제는 또한 주사 제제로의 재구성을 위한 파우더 형태로도 준비될 수 있다.

다른 실시예에 따르면, 올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및/또는 단백질 티로신 키나아제 억제제는 특히 리포좀과 같은 매체를 통해 전달이 가능하다(Langer, Science 249:1527-1533 (1990); and Treat et al., Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer 317-327 and 353-365 (1989) 참조).

또 다른 실시예에 따르면, 올리고머(또는 그 컨쥬게이트) 및/또는 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제어-방출 시스템 또는 지연-방출 시스템 내에서 전달될 수 있다(예. Goodson, "Dental Applications" (pp. 115-138) in Medical Applications of Controlled Release, Vol. 2, Applications and Evaluation, R.S. Langer and D.L. Wise eds., CRC Press (1984); Langer, Science 249:1527-1533 (1990) 참조). 다양한 실시예에 따르면, 제어-방출 또는 지연-방출 전달을 펌프에 의해(Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); and Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)), 또는 폴리머 재료에 의해 수행할 수 있다 (see Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., 1984); Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 (1983); Levy et al., Science 228:190 (1985); During et al., Ann. Neurol. 25:351 (1989); 및 Howard et al., J. Neurosurg. 71:105 (1989) 참조).

특정 실시예에 있어서, 본 발명의 조성물은 세포 증식의 억제에 유용하다. 다양한 실시예에 따르면, 항증식 효과는 비처리 세포 샘플에 비할 때 세포 증식에 있어 적어도 10% 감소, 적어도 20% 감소, 적어도 30% 감소, 적어도 40% 감소, 적어도 50% 감소, 적어도 60% 감소, 적어도 70% 감소, 적어도 80% 감소, 또는 적어도 90% 감소이다. 다른 실시예에 따르면, 상기 항증식 효과는 올리고머 화합물 또는 소분자 단백질 티로신 키나아제 억제제 단독("단일요법")으로 처리된 세포샘플에 비교할 때, 적어도 10% 감소, 적어도 20% 감소, 적어도 30% 감소, 적어도 40% 감소, 적어도 50% 감소, 적어도 60% 감소, 적어도 70% 감소, 적어도 80% 감소, 또는 적어도 90% 감소이다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 세포는 암세포이다. 일부 실시예에 있어서, 상기 암세포는 유방암 세포, 전립선암 세포, 폐암 세포 및 상피내암 세포에서 선택된다.

따라서, 본 발명의 조성물은암과 같은 과증식 질환(hyperproliferative disease)의 치료에 유용하다. 일부 실시예에 따르면, 본 발명의 HER3-표적의 조합요법에 의해 치료대상이 되는 암은: 임파종 및 백혈병(예를 들면, 비-Hodgkin's 임파종, Hodgkin's 임파종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종), 대장암, 직장암, 상피암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 신세포암, 간암, 담관암, 융모막암종, 자궁경부암, 고환암, 폐암, 방광암, 악성 흑색종, 머리 및 목 암, 뇌암, 초기 장소가 알려지지 않은 암, 종양, 말초 신경계의 암, 중추 신경계의 암, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, Ewing's 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 편평세포암, 기저세포암, 선암, 땀샘암, 피지선암, 유두암, 유두 선암, 낭선암, 수질암, 기관지암, 정상피종, 태생암, Wilms' 종양, 소세포 폐암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 신경아세포종, 및 망막아세포종, 중쇄 질환, 암 전이, 또는 비조절 또는 비정상적인 세포 성장에 의해 특정되는 질환 또는 장애로 구성되는 군으로부터 선택되는 것이다.

특정 실시예에 따르면, 상기 질환은 폐암, 전립선암, 유방암, 난소암, 직장암, 상피암, 및 위암으로 구성된 군에서 선택된다.

기타 다른 특정 실시예에 따르면, 상기 폐암은 비소세포 폐암이다.

이하 실험예에서 도시된 바와 같이, 본 발명의 조합적 요법(combination therapy regimens)은 예를 들면 제피티니브 또는 기타 PTK 억제제를 사용한 단일요법에 내성을 가진 암을 치료하도록 한다.

다양한 실시예에 있어서, 본 발명에 따르는 질병 치료는 방사선 요법, 화학요법 또는 면역요법과 같은 하나 이상의 항암 치료와 함께 조합될 수 있다.

특정 실시예에 따르면, 상기 질병은 HER3 유전자(및/또는 HER2 유전자 및/또는 EGFR 유전자) 내의 돌연변이, 또는 그 단백질 부산물이 HER3와 연관되거나 반응하게 된 유전자와 연관된다. 일부 실시예에 다르면, 상기 변이 유전자는 티로신 키나아제 영역 내의 변이를 가지는 단백질에 대해 암호화된다(themutated gene codes for a protein with a mutation in the tyrosine kinase domain). 다양한 실시예에 있어서, 상기 티로신 키나아제 영역 내의 변이는 소분자 PTK억제제의 결합 부위 및/또는 ATP 결합 부위 내에 위치한다. 따라서, 다양한 실시예에 있어서, 표적 mRNA는 HER3(및또는 EGFR) 서열의 변형 형태로; 예를 들면, 암과 연관된 SNP와 같은 하나 이상의 단일 점 돌연변이를 포함한다.

특정 실시예에 따르면, 상기 질병은 HER3의 변형 형태의 비정상적 레벨과 연관된다. 특정 실시예에서, 상기 질병은 표현형 HER3(wild-type form of HER3)의 비정상 레벨과 연관된다. 본 발명의 하나의 관점은 비정상 수준의 HER3와 연관된 질환으로 고통받거나 이의 위험에 놓인 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 환자에게 약학적으로 유효한 양의 HER3 표적의 올리고머 또는 그 컨쥬게이트, 및 EGFR 계열 요소의 티로신 키나아제 영역에 결합하는 소분자 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량 및/또는 하나 이상의 EGFR 계역 요소와 반응하는 단백질의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 하나 이상의 LNA 유닛을 구비한다. 다양한 실시예에서, 상기 PTK 억제제는 게피니티브이다.

다른 실시예에 따르면, 상기 발명은 HER2의 비정상적 수준의 변이, 또는 표현형 HER2의 비정상적 수준과 연관된 질환으로 고통받거나 그 위험에 놓인 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것으로, 포유류에게 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 올리고머의 약학적 유효량, 및 하나 이상의 EGFR 계열 요소의 티로신 키나아제 영역에 결합하는 소분자 티로신 키나아제 억제제의 유효량 및/또는 하나 이상의 EGFR 계열 요소와 반응하는 단백질의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시예에 있어서, 상기 올리고머는 하나 이상의 LNA 유닛을 포함한다. 다양한 실시예에 따르면, 상기 PTK 억제제는 제피티니브이다.

또 다른 실시예에 따르면, 본 발명은 변형 EGFR의 비정상적 수준, 또는 표현형 EGFR의 비정상적 수준과 연관된 질환으로 고통받거나 그 위험에 놓인 환자를 치료하기 위한 방법에 관한 것으로, 상기 환자에게 HER3(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR)을 표적화하는 올리고머 및 그 컨쥬게이트의 약학적 유효량, 및 EGFR 계열 요소 및/또는 하나 이상의 EGFR 계열 요소와 반응하는 단백질의 티로신 키나아제 영역에 결합하는 소분자 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시예에 따르면, 상기 올리고머는 하나 이상의 LNA 유닛을 포함한다. 다양한 실시예에서, 상기 PTK억제제는 제피티니브이다.

다양한 실시예에 따르면, 본 명세서에서 기술된 발명은 치료를 필요로 하는 인간에게 HER3 조절 올리고머(및 선택적으로 하나 이상의 HER2 및 EGFR) 또는 그 컨쥬게이트의 약학적 유효량, 및 EGFR 계열 요소 및/또는 하나 이상의 EGFR 계열 요소와 반응하는 단백질의 티로신 키나아제 영역에 결합하는 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

질병의 치료 또는 예방에 효과적인 적어도 하나의 올리고머 및 적어도 하나의 PTK 억제제의 양은 표준 임상기술에 의해 정해질 수 있다. 일반적으로, 복용 범위는 시험관 내 및 생체 동물 모델에서 효과적으로 발견된 EC₅₀ 에 기준하여 예측될 수 있다. 적용되는 정확한 복용량은, 예를 들면 투여경로 및 질병의 중증도 등에 따를 수 있으며, 의사의 판단 및/또는 환자의 각각의 상황에 따라 정해질 수 있다. 다른 실시예의 경우, 여러 가지 중 예를 들자면, 치료 대상이 되는 환자의 체중 및 신체상태(예. 간 및 신장 기능), 치료 대상이 되는 증세(affliction), 증세의 중증도, 복용 시간의 횟수, 유해한 부작용 및 사용되는 특정 올리고뉴클레오티드 및 PTK 억제제 등에 따라 변경상황이 필수적으로 따를 수 있다.

다양한 실시예에서, 올리고머의 복용량은 체중 kg 당 약 0.01 μg 내지 약 1 g에 이르며, 매일, 매주, 매달, 또는 매년 일 회 이상, 심지어 2년 내지 10 년 간격으로 한 번씩, 또는 수시간에서 수달 동안 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 특정 실시예에 따르면, PTK 억제제의 복용량은 1일 약 50 mg 내지 약 500 mg 이다. 다양한 실시예에 있어서, PTK 억제제의 복용량은 1일 약 100 mg 내지 약 400 mg 에 이른다. 다른 실시예에 따르면, PTK 억제제의 복용량은 1일 약 150 mg 내지 약 300 mg 에 이른다. 특정 실시예에 따르면, 복용의 반복 횟수는 체액 또는 조직 내 활성물질의 체류 시간 및 농도의 측정 결과에 따라 예측될 수 있다. 치료가 성공적으로 이루어진 후, 환자는 HER3-표적 조합 요법으로 유지 치료를 받음으로써, 질병 상태의 재발을 방지하도록 할 수 있다.

1.8. 실험예

실험예 1: ErbB -3 ( HER3 )-표적의 조합요법으로 암세포 증식이 감소한다.

실험 과정

1. 세포 배양

서열번호: 180 에 기재된 염기 서열 및 고안을 가지는 올리고머(이후 "ON180")와 제피티니브, EGFR 억제제의 혼합 효과를 여러 개의 암 세포주 내에서 검사했다. 세포는 하기의 배지 내에서 배양되었으며, 37℃, 습도 95% 및 5% CO₂ 로 유지되었다. 세포는 일주일에 2-3 회씩 규칙적으로 계대(passaged) 되었다.

15 PC -3( Santaris Pharma ): 인간 전립선암 세포주(15PC-3)을 DMEM (ATCC) + 10% fetal bovine serum (FBS) + 2mM Glutamax^TM + gentamicin (25 μg/ml)에서 배양하였다.

A549 ( ATCC ): 인간 폐암 세포주(A549)을 F12K Medium+ 10% FBS + 2mM Glutamax^TM + Penicillin (100u/ml) / Streptomycin (100 μg/ml)에서 배양하였다.

DU145 ( ATCC ): 인간 전립선암 세포주(DU145)을 Eagle's Minimum Essential Medium (ATCC) + 10% FBS + 2mM Glutamax^TM + Penicillin (100u/ml) / Streptomycin (100 μg/ml)에서 배양하였다.

A431 ( ATCC ): 인간 상피암 세포주(A431)을 DMEM (ATCC) + 10% fetal bovine serum (FBS) + 2mM Glutamax^TM + Penicillin (100u/ml) / Streptomycin (100 μg/ml)에서 배양하였다.

SKBR -3 ( ATCC ): 인간 유방암 세포주(SKBR3)을 McCoy's 5A Medium Modified (ATCC) + 10% FBS + 2mM Glutamax^TM + Penicillin (100u/ml) / Streptomycin (100 μg/ml)에서 배양하였다.

H1993 ( ATCC ): 인간 폐암 세포주(H1993)을 RPMI-1640 (ATCC) + 10% FBS + 2mM Glutamax^TM + Penicillin (100u/ml) / Streptomycin (100 μg/ml)에서 배양하였다.

2. ON180 및 제피티니브의 조합 치료

상기 세포를 ON180 또는 서열번호: 236에 기술된 스크램블된 염기 서열을 가지는 올리고뉴클레오티드(이후 ONCONT)를 포함하는 LNA에 의해 형질도입 매체(vehicle)로 양이온 리포좀 제제 Lipofectamine^TM-2000 (Invitrogen^TM) 을 이용하여 처리되었다. 6-웰 플레이트(NUNC^TM) 내에 세포를 파종하고(seeded) 50-60% 컨플루언트(confluent)했을 때 처리하였다. ON180에 의한 세포의 형질전환이 무혈청(serum-free) OptiMEM^®(Gibco^TM and 5 μg/ml Lipofectamine^TM-2000을 사용하여 제조사에 의해 기술된 방법에 따라 수행되었다. ONCONT는 음성 대조군이었다. 상기 처리된 세포를 37℃에서 4 시간 동안 배양한 후, OptiMEM^®로 세척하고, 그 이후 일반적인 혈청이 포함된 배지를 추가하였다.

올리고뉴클레오티드(ON180 또는 ONCONT)에 따른 형질전환을 수행하고 24 시간 이후, 상기 세포를 제피티니브(Amfinecom, Inc.), 판매되는 EGFR 억제제(1 μM 내지 40 μM 최종 농도)로 48 시간 동안 처리했다. 상기 처리된 세포는 그 다음으로 MTS에 의한 증식 분석 및 qRT-PCR에 의한 ErbB mRNA 양 측정을 각각 거쳤다(아래 참조). 각 실험은 적어도 2 회 실시되었다

3. 세포 증식 분석( MTS 분석)

CellTiter 96^® Aqueous One 용액 시약(Promega, Cat# 358B)를 이용하여 제조사의 설명에 따라 증식 분석을 수행하였다. 간단히 설명하자면, MTS 화합물을 6-웰 플레이트의 배양물에 첨가하고, 37℃, 95% 습도 및 5% CO₂ 에서 1-3 시간 동안 배양한 후 측정해 보았다. MTS 시약을 포함하는 배지를 96-웰 플레이트로 이동시켰다. 흡수율이 표준 650 nm에 대해 490 nm로, ELISA 해독기(분자 소자)를 사용하여 측정했다. 상기 분석의 바탕(background)을 배지만 포함하는 웰에서 측정하였으며, 세포를 포함하는 웰에서 나온 신호에서 감산되었다. 490 nm(OD490 nm)에서의 흡수율은 배양 내 생존세포의 수에 비례한다.

4. qRT - PCR 에 의한 ErbB mRNA 레벨의 검사

Qiagen RNeasy Plus Mini Kit (Cat# 74134)를 사용하여, 상기 처리 세포에서 총 RNA를 추출하였다. 세포 내 ErbB mRNA 레벨을 측정하기 위해 제조사의 설명에 따른 QiantiTect 프로브 RT-PCR 키트(Cat#: 204443; Qiagen)를 이용하였다. 프라이머 및 프로브의 서열은 다음과 같다:

인간 ErbB3 PCR 프라이머/프로브 세트:

프로브: CATTGCCCAACCTCCGCGTG (서열번호: 250)

프라이머-1: TGCAGTGGATTCGAGAAGTG (서열번호: 251)

프라이머-2: GGCAAACTTCCCATCGTAGA (서열번호: 252)

인간 GAPDH 프라이머/프로브 세트:

프로브: ACTGGCGCTGCCAAGGCTGT (서열번호: 253)

프라이머-1: CCACCCAGAAGACTGTGGAT (서열번호: 254)

프라이머-2: TTCAGCTCAGGGATGACCTT (서열번호: 255)

총 RNA 샘플 중 120 ng을 이용하여 Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System에 대해 qRT-PCR이 수행되었다. GAPDH mRNA가 내부 대조군(internal control)으로 사용되었다.

결과

A549 세포는 제피티니브에 내성이 있다. 제피티니브 단독으로는 상기 세포주 내의 40 μM에서 증식에 영향을 주지 않았다(도 1A). ON180 혼자서 ErbB mRNA 생산(IC50 < 2nM; 도 1C)의 발현 및 세포 성장을 유력하게 억제하였다(IC₅₀ < 5 nM)(도 1A, 1B). 제피티니브와 조합하여 2 nM ON180에 의한 처리로 A549 세포 상의 제피티니브의 항증식 효과를 크게 향상시켰다(도 1A, 1B). 도 1B에 도시된 바와 같이, 40 μM 제피티니브 및 2 nM ON180 조합으로 인해 A549의 성장률이 40 μM 제피티니브 단독요법에 의해 처리된 A549에 비할 때, 약 50% 감소되었다.

H1993 세포는 제피티니브(IC₅₀ = 40 nM)에 대해 상대적으로 둔감하다(도 2A. ON180 혼자만이 ErbB3 mRNA의 발현(도 2C) 및 세포성장(IC₅₀ 1 nM)(도 2A, 2B)을 강력하게 억제했다. 1 nM ON180 및 제피티니브의 조합으로 인해 H1993 세포에 대한 제피티니브의 항증식 효과가 향상되었다(도 2A, 2B). 도 2B에 도시된 바와 같이, 40 μM 제피티니브 및 1 nM ON180 의 조합으로 인해, 40μM 제피티니브 단독요법에 의해 처리된 경우에 비해 H1993 세포의 성장률이 50 % 이상 증가하였다.

15PC3 세포는 제피티니브에 내성이 있다. 제피티니브는 본 세포주 내의 20 μM에서는 증식에 영향을 미치지 않았다(도 3A). ON180 혼자만이 ErbB3 mRNA 발현(도 3C) 및 세포성장(IC₅₀ < 2 nM)을 유력하게 억제했다(도 3A, 3B). 15PC3 세포를 1 nM ON180 및 20 μM 제피티니브의 조합으로 처리함에 의해, 20μM 제피티니브 단독요법에 의한 처리에 비해, 15PC3 세포에 대한 제피티니브의 항증식 효과가 크게(즉, 거의 70%) 향상되었다(도 3A, 3B).

DU145 세포는 제피티니브에 내성이 있다. 제피티니브는 본 세포주 내에서 40μM 에서는 증식에 영향을 미치지 않았다(도 4A). ON180 혼자만이 ErbB3 mRNA 발현(도 4C) 및 세포성장(IC₅₀ < 5 nM)을 효과적으로 억제하였다(도 4A, 4B). DU145 세포를 1 nM ON180 및 40 μM 제피티니브의 혼합으로 처리함에 따라, 40μM 제피니티브 단독요법에 의한 처리에 비해 DU145 세포에 대한 제피티니브의 항증식 효과가 크게 (즉, 약 40%) 향상되었다(도 4A, 4B).

SKBR3 세포는 제피티니브에 대해 민감하다(도 5A). SKBR3 세포를 ON180 만에 노출함으로써 ErbB3 mRNA 발현(도 5C) 및 세포성장(IC₅₀ < 5 nM)을 효과적으로 억제하였다(도 5A, 5B). 이들 암세포를 1 nM ON180 및 20 μM 제피티니브는, 20μM 제피니티브 단독요법에 의한 처리에 비해 SKBR3 세포에 대한 제피니티브의 항증식효과를 크게(즉, 50% 이상) 향상하였다(도 5A, 5B).

A431 세포는 제피티니브에 민감하다(도 6A). 이들 암세포를 ON180 만에 노출시킴으로써 ErbB3 mRNA 발현(도 6C) 및 세포성장(IC₅₀ < 1 nM)이 효과적으로 억제되었다(도 6A, 6B). A431 세포를 1 nM ON180 및 40 μM 제피티니브 조합으로 처리함에 따라, 20 μM 제피니티브 단독요법에 의한 처리에 비해A431 세포에 대한 제피티니브의 항증식 효과를 크게(즉, 약 50%) 향상시켰다(도 6A, 6B).

Conclusions

올리고머 화합물(ON180)은 ErbB3 mRNA의 발현 및 상기 검사 대상인 6 가지 세포주(A549, H1993, 15PC3, DU145, A431 and SKBR3) 내의 세포증식을 유력하게 억제했다. 이 중 두 개의 세포주, SKBR3 및 A431,은 제피티니브에 민감하고, 네 가지, A549, H1993, 15PC3 및 DU145, 가 PTK 억제제에 둔감하거나 내성을 가진다. 그러나, ON180 및 제피티니브 조합에 의한 처리의 세포증식에 대한 효과가 이 모든 여섯 종류의 검사 암세포주에서 관찰되었다. ON180 처리로 인해 저항성을 갖는 암세포(A549, H1993, DU145 및 15PC3)의 낮은 농도(1~5 nM)에서의 제피티니브에 대한 민감도가 향상된 것이다.

본 출원서에 언급된 모든 공개, 특허, 특허출원 및 기타 문헌들은 각각의 개별적 공개, 특허, 특허 출원 또는 기타 문헌들이 모든 경우에 있어서 참조의 용도로 인용되었다고 개별적으로 언급한 것과 같은 효과로 본 명세서에서 참조로 인용되었다.

다양한 특정 실시예를 도시하고 설명하였으나, 본 발명(들)의 정신을 벗어나지 않는다면 다양한 변화가 가능함을 이해해야 할 것이다.

<110> ENZON PHARMACEUTICALS, INC. SANTARIS PHARMA A/S <120> ERBB-3(HER3)-SELECTIVE COMBINATION THERAPY <130> 11fpi-04-08 <150> US61/112,549 <151> 2008-11-07 <150> PCT/US2009/063357 <151> 2009-11-05 <160> 255 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 gctccagaca tcactc 16 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 gctccagaca tcact 15 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 ctccagacat cactc 15 <210> 4 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 gctccagaca tcac 14 <210> 5 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 5 ctccagacat cact 14 <210> 6 <211> 14 <212> 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Synthetic oligonucleotide <400> 12 ctccagacat ca 12 <210> 13 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 13 tccagacatc ac 12 <210> 14 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 14 ccagacatca ct 12 <210> 15 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 15 cagacatcac tc 12 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 16 ctccagacat cactct 16 <210> 17 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 17 cagacatcac tctggt 16 <210> 18 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 18 agacatcact ctggtg 16 <210> 19 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 57 aagtccaggt tgccca 16 <210> 58 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 58 cattcaagtt cttcat 16 <210> 59 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 59 cactaatttc cttcag 16 <210> 60 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 60 cactaatttc cttca 15 <210> 61 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 61 actaatttcc ttcag 15 <210> 62 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 62 cactaatttc cttc 14 <210> 63 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 76 cacacacttt gccctc 16 <210> 77 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 77 cacacacttt gccct 15 <210> 78 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 78 acacactttg ccctc 15 <210> 79 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 79 cacacacttt gccc 14 <210> 80 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 80 acacactttg ccct 14 <210> 81 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 81 cacactttgc cctc 14 <210> 82 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 82 cacacacttt gcc 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Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 108 gtgtgtgtat ttccc 15 <210> 109 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 109 tgtgtgtatt tccca 15 <210> 110 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 110 gtgtgtgtat ttcc 14 <210> 111 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 111 tgtgtgtatt tccc 14 <210> 112 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 112 gtgtgtattt ccca 14 <210> 113 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 113 gtgtgtgtat ttc 13 <210> 114 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 114 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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 127 ctctgatgac tctg 14 <210> 128 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 128 ccctctgatg act 13 <210> 129 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 129 cctctgatga ctc 13 <210> 130 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 130 ctctgatgac tct 13 <210> 131 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 131 tctgatgact ctg 13 <210> 132 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 132 ccctctgatg ac 12 <210> 133 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 133 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 146 tcacaccata gctcca 16 <210> 147 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 147 catccaacac ttgacc 16 <210> 148 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 148 atccaacact tgacca 16 <210> 149 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 149 caatcatcca acactt 16 <210> 150 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 150 tcaatcatcc aacact 16 <210> 151 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 151 catgtagaca tcaatt 16 <210> 152 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: 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agatagtggt 720 gaaggacaat ggcagaagct gtcccccctg tcatgaggtt tgcaaggggc gatgctgggg 780 tcctggatca gaagactgcc agacattgac caagaccatc tgtgctcctc agtgtaatgg 840 tcactgcttt gggcccaacc ccaaccagtg ctgccatgat gagtgtgccg ggggctgctc 900 aggccctcag gacacagact gctttgcctg ccggcacttc aatgacagtg gagcctgtgt 960 acctcgctgt ccacagcctc ttgtctacaa caagctaact ttccagctgg aacccaatcc 1020 ccacaccaag tatcagtatg gaggagtttg tgtagccagc tgtccccata actttgtggt 1080 ggatcaaaca tcctgtgtca gggcctgtcc tcctgacaag atggaagtag ataaaaatgg 1140 gctcaagatg tgtgagcctt gtgggggact atgtcccaaa gcctgtgagg gaacaggctc 1200 tgggagccgc ttccagactg tggactcgag caacattgat ggatttgtga actgcaccaa 1260 gatcctgggc aacctggact ttctgatcac cggcctcaat ggagacccct ggcacaagat 1320 ccctgccctg gacccagaga agctcaatgt cttccggaca gtacgggaga tcacaggtta 1380 cctgaacatc cagtcctggc cgccccacat gcacaacttc agtgtttttt ccaatttgac 1440 aaccattgga ggcagaagcc tctacaaccg gggcttctca ttgttgatca tgaagaactt 1500 gaatgtcaca tctctgggct tccgatccct gaaggaaatt agtgctgggc gtatctatat 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phosphorothiate linkage <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> LNA nucleobases <220> <221> misc_feature <222> (14)..(16) <223> LNA nucleobases <400> 249 tagcctttga cctctc 16 <210> 250 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 250 cattgcccaa cctccgcgtg 20 <210> 251 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 251 tgcagtggat tcgagaagtg 20 <210> 252 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 252 ggcaaacttc ccatcgtaga 20 <210> 253 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic probe <400> 253 actggcgctg ccaaggctgt 20 <210> 254 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 254 ccacccagaa gactgtggat 20 <210> 255 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 255 ttcagctcag ggatgacctt 20

Claims (48)

1. (a.) 10 내지 50 개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기(phosphate group) 또는 포스포로티오에이트기(phosphorothioate group)에 의해 공유 결합되는 올리고머;
   여기서 상기 올리고머는
   5'-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 169); 및
   5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 180)로 구성된 군에서 선택된 화합물 내에 존재하는 적어도 10 개의 연속적 단량체의 부위의 서열에 적어도 80% 동일한 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고,
   여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체를, 아래첨자는 DNA 단량체를 나타내고, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합을 나타내며, ^MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내고,
   상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체가 뉴클레오시드 유사체이고; 및
   (b.) EGFR(HER1)의 단백질 티로신 키나아제 억제제의 조합의 포유류 내의 암 치료를 위한 용도.
   
2. 제 1항에 있어서, EGFR(HER1)의 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브(gefitinib), 얼로티니브(erlotinib), 라파티니브(lapatinib) 및 캐너티니브(canertinib)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
   
3. 제 2항에 있어서, EGFR(HER1)의 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 용도.
   
4. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 부위의 상기 서열은 서열번호: 169 또는 180 내에 존재하는 적어도 10개의 연속적 단량체 부위의 서열과 동일한 것을 특징으로 하는 용도.
   
5. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머의 상기 첫번째 부위는 10개 내지 18개의 연속적 단량체로 구성되는 것을 특징으로 하는 용도.
   
6. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머의 상기 첫번째 부위는 16개의 연속적 단량체로 구성되는 것을 특징으로 하는 용도.
   
7. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 뉴클레오시드 유사체는 LNA 단량체, 2'-O-알킬-리보오스(alkyl-ribose) 당을 포함하는 단량체, 2'-O-메틸-리보오스(methyl-ribose) 당을 포함하는 단량체, 2'-아미노디옥시리보오스(aminodeoxyribose) 당을 포함하는 단량체, 및 2'플루오로-디옥시리보오스(2'fluoro-deoxyribose) 당을 포함하는 단량체로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
   
8. 제 7항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 유사체는 LNA 단량체인 것을 특징으로 하는 용도.
   
9. 제 1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머는:
   5'-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 169); 및
   5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 180)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
   
10. 제 9항에 있어서, 상기 올리고머는
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3' (서열번호: 180)인 것을 특징으로 하는 용도.
    
11. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유류는 인간인 것을 특징으로 하는 용도.
    
12. 상기 청구항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 폐암, 전립선암, 유방암, 상피암 및 표피암으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
    
13. 제 1항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 비-Hodgkin's 임파종, Hodgkin's 임파종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 대장암, 직장암, 상피암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 신세포암, 간암, 담관암, 융모막암종, 자궁경부암, 고환암, 폐암, 방광암, 악성 흑색종, 머리 및 목 암, 뇌암, 초기 장소가 알려지지 않은 암, 종양, 말초 신경계의 암, 중추 신경계의 암, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, Ewing's 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 편평세포암, 기저세포암, 선암, 땀샘암, 피지선암, 유두암, 유두 선암, 낭선암, 수질암, 기관지암, 정상피종, 태생암, Wilms' 종양, 소세포 폐암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 신경아세포종, 및 망막아세포종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
    
14. (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체를 가지며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머;
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체가 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된(best-aligned) 표적 부위의 역상보적으로 적어도 80% 동일하고;
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제; 및
    (c) 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
15. 제 14항에 있어서, 상기 올리고머의 첫번째 부위의 서열은 서열번호: 1-140 및 169-234 내에 존재하는 적어도 10개의 연속적 단량체 부위의 서열에 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
16. 제 15항에 있어서, 상기 올리고머의 첫번째 부위의 서열은 서열번호: 1, 54, 200 또는 211 내에 존재하는 적어도 10개의 연속적 단량체 부위의 서열에 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
17. 제 15항에 있어서, 상기 올리고머의 첫번째 부위의 서열은 서열번호: 169 또는 180 내에 존재하는 적어도 10개의 연속적 단량체 부위의 서열에 적어도 80% 동일한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
18. 제 14항에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브(gefitinib), 얼로티니브(erlotinib), 캐너티니브(canertinib), 밴드태니브(vandetanib), 라파티니브(lapatinib), 소라페니브(sorafenib), AG-494, RG-13022, RG-14620, BIBW 2992, 티르포스틴(tyrphostin) AG-825, 티르포스틴 9, 티르포스틴 23, 티르포스틴 25, 티르포스틴 46, 티르포스틴 47, 티르포스틴 53, 부테인, 커큐민, AG-1478, AG-879, 시클로프로판카르복실산-(3-(6-(3-트리플루오로메틸-페닐아미노)-피리미딘-4-일아미노)-페닐)-아미드, N8-(3-Chloro-4-플루오로페닐)-N2-(1-메틸피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 2HCl (CAS 196612-93-8), 4-(4-벤질옥시아닐리노)-6,7-디메톡시퀴나졸린, N-(4-((3-클로로-4-플루오로페닐)아미노)피리도[3,4-d]피리미딘-6-일)2-부틴아미드(CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272, 및 HKI-357로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
    
19. 제 18항에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브, 얼로티니브, 라파티니브, 캐너티니브 및 소라페니브로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
    
20. 제 14항에 있어서, 상기 첫번째 부위 내의 상기 적어도 하나의 단량체는 LNA 단량체, 2'-O-알킬-리보오스 당을 포함하는 단량체, 2'-O-메틸-리보오스 당을 포함하는 단량체, 2'-아미노-디옥시리보오스 당을 포함하는 단량체, 및 2'플루오로-디옥시리보오스 당을 포함하는 단량체로 구성된 군에서 선택되는 뉴클레오시드 유사체인 것을 특징으로 하는 조성물.
    
21. 제 20항에 있어서, 상기 첫번째 부위 내의 상기 적어도 하나의 단량체는 LNA 단량체인 것을 특징으로 하는 조성물.
    
22. (a) 서열 5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3'(서열번호: 180)로 구성된 올리고머;
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체를, 아래첨자는 DNA 단량체를, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 ^MeC 는 5-메틸사이토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 가리키고,
    (b) 제피티니브; 및
    (c) 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
23. (a) 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되는 올리고머의 컨쥬게이트;
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하고,
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제; 및
    (c) 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
24. 제 23항에 있어서, 상기 컨쥬게이트는 서열:
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3'(서열번호: 180)으로 구성된 올리고머의 컨쥬게이트로:
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 및 아래첨자는 DNA 단량체, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 ^MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내며,
    상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
    
25. 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법에 있어서, 상기 세포를
    (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량,
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
26. 제 25항에 있어서, 상기 올리고머는 서열:
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC -3'(서열번호: 180)로 구성되며,
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 아래첨자는 DNA 단량체, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 ^MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내며; 및
    상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
27. 제 25항에 있어서, 상기 세포의 증식은 동일 유형의 비처리 세포의 증식에 비교할 때 적어도 약 30%로 억제되는 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
28. 제 25항에 있어서, 상기 세포는 전립선암세포, 유방암세포, 폐암세포 및 상피암세포로 구성된 군에서 선택되는 암 세포인 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
29. 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법에 있어서, 상기 세포를
    (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 컨쥬게이트의 유효량,
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
30. 제 29항에 있어서, 상기 컨쥬게이트는 서열:
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC -3'(서열번호: 180)로 구성되는 올리고머의 컨쥬게이트로,
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 아래첨자는 DNA 단량체, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내며; 및
    상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 포유류 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
31. 포유류 체내 세포의 증식을 억제하기 위한 방법에 있어서, 상기 포유류 조직을
    (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며,
    인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량,
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량에 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 체내 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
32. 제 31항에 있어서, 상기 올리고머는 서열:
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC -3'(서열번호: 180)로 구성되며,
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 아래첨자는 DNA 단량체, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내며; 및
    상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 포유류 체내 세포의 증식을 억제하기 위한 방법.
    
33. 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법에 있어서, 상기 포유류에:
    (a) 10개 내지 50개의 연속적 단량체로 구성되며, 인접 단량체가 인산기 또는 포스포로티오에이트기에 의해 공유 결합되는 올리고머의 유효량,
    여기서 상기 올리고머는 적어도 10개의 연속적 단량체의 첫번째 부위를 포함하고;
    상기 첫번째 부위의 적어도 하나의 단량체는 뉴클레오시드 유사체이고;
    상기 첫번째 부위의 서열은 포유류 HER3 유전자 또는 포유류 HER3 mRNA에 최적-얼라인된 표적 부위의 역상보에 적어도 80% 동일하며; 및
    (b) 단백질 티로신 키나아제 억제제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
34. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머는 서열:
    5'-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC -3'(서열번호: 180)로 구성되며,
    여기서 윗첨자는 베타-D-옥시-LNA 단량체, 아래첨자는 DNA 단량체, 아래첨자 "s"는 포스포로티오에이트 결합, 및 MeC 는 5-메틸시토신 염기를 포함하는 베타-D-옥시-LNA 단량체를 나타내며; 및
    상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
35. 제 34항에 있어서, 상기 암은 비-Hodgkin's 임파종, Hodgkin's 임파종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 대장암, 직장암, 상피암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 신세포암, 간암, 담관암, 융모막암종, 자궁경부암, 고환암, 폐암, 방광암, 악성 흑색종, 머리 및 목 암, 뇌암, 초기 장소가 알려지지 않은 암, 종양, 말초 신경계의 암, 중추 신경계의 암, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, Ewing's 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 편평세포암, 기저세포암, 선암, 땀샘암, 피지선암, 유두암, 유두 선암, 낭선암, 수질암, 기관지암, 정상피종, 태생암, Wilms' 종양, 소세포 폐암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 수막종, 신경아세포종, 및 망막아세포종으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
36. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머 및 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 개별적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
37. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머 및 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 동시에 또는 일제히(concurrently or simultaneously) 투여되는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
38. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머 및 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
39. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머 및 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 경구 투여용에 적합한 약학적 제형인 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
40. 제 33항에 있어서, 상기 올리고머는 정맥 투여용으로 적합한 약학적 제형이고 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 경구 투여용으로 적합한 약학적 제형인 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
41. 제 35항에 있어서, 상기 암은 폐암, 전립선암, 유방암 및 상피암으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
42. 제 33항에 있어서, 상기 포유류는 인간인 것을 특징으로 하는 포유류 내의 암을 치료하기 위한 방법.
    
43. 단백질 티로신 키나아제 억제제와 조합하여 암의 치료에 사용하기 위한, 약제 제조를 위한 HER3 표적의 LNA 올리고머의 용도.
    
44. 제 43항에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브(gefitinib), 얼로티니브(erlotinib), 캐너티니브(canertinib), 밴드태니브(vandetanib), 라파티니브(lapatinib), 소라페니브(sorafenib), AG-494, RG-13022, RG-14620, BIBW 2992, 티르포스틴(tyrphostin) AG-825, 티르포스틴 9, 티르포스틴 23, 티르포스틴 25, 티르포스틴 46, 티르포스틴 47, 티르포스틴 53, 부테인, 커큐민, AG-1478, AG-879, 시클로프로판카르복실산-(3-(6-(3-트리플루오로메틸-페닐아미노)-피리미딘-4-일아미노)-페닐)-아미드, N8-(3-Chloro-4-플루오로페닐)-N2-(1-메틸피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, 2HCl (CAS 196612-93-8), 4-(4-벤질옥시아닐리노)-6,7-디메톡시퀴나졸린, N-(4-((3-클로로-4-플루오로페닐)아미노)피리도[3,4-d]피리미딘-6-일)2-부틴아미드(CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272, 및 HKI-357로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
    
45. 제 44항에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브, 얼로티니브, 라파티니브, 캐너티니브 및 소라페니브로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
    
46. 제 44항에 있어서, 상기 단백질 티로신 키나아제 억제제는 제피티니브인 것을 특징으로 하는 용도.
    
47. HER3 표적의 LNA 올리고머를 포함하는 약제에 있어서, 상기 약제는 단백질 티로신 키나아제 억제제와 조합하여 암의 치료에 사용하기 위한 것을 특징으로 하는 약제.
    
48. 단백질 티로신 키나아제 및 HER3 표적의 LNA 올리고머를 포함하는, 암 치료용 키트(kit).

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