KR20110071139A - Ｄｃ­ｓｉｇｎ에 대한 결합 특이성을 갖는 리간드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항-수지상세포-특이적 ICAM-3 포착 비-인테그린(DC-SIGN; CD209) 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 또한 폴리펩티드, 리간드 및 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물이 발현을 위한 이러한 면역글로불린을 엔코딩하는 핵산 및 벡터 및 숙주 세포와 함께 개시된다. 본 발명은 또한 이러한 DC-SIGN-결합제를 포함하는 제형, 조성물, 장치 및 용도와 관련이 있다.

Description

ＤＣ­ＳＩＧＮ에 대한 결합 특이성을 갖는 리간드{LIGANDS THAT HAVE BINDING SPECIFICITY FOR DC-SIGN}

본 발명은 DC-SIGN에 결합하는 물질에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 DC-SIGN에 결합하는 면역글로불린 단일 가변 도메인에 관한 것이다. 본 발명은 또한 그러한 DC-SIGN-결합제를 포함하는 장치, 조성물, 제형, 및 이의 용도와 관련이 있다.

발명의 배경

수지상세포-특이적 ICAM-3 포착 비-인테그린(DC-SIGN 또는 CD209)은, 만노오스 특이적 칼슘 의존성(C-타입) 렉틴인 타입 II 막 단백질이다. DC-SIGN은 수지상세포(DCs)와 T 세포 사이의 상호작용을 매개하고, 관련 분자, DC-SIGNR와 77% 상동성을 나타낸다. DC-SIGN과 DC-SIGNR 둘 모두는 HIV, C형 간염 당단백질, 에볼라바이러스 글리콜 단백질 및 세포 부착 단백질 ICAM-3에 결합하는 것으로 밝혀졌다. DC-SIGN은 수지상세포 상에서 유일하게 발현되나, DC-SIGNR은 간, 림프동(lymph node sinuses) 내의 내피세포 상에서 그리고 태반 내 내피세포 내에서 발견된다.

수지상세포(DCs)는 무경험(naive) 및 메모리 T-림프구를 활성화시킬 수 있는 전문화된 항원-제시 세포이다. 이들의 특성들을 활용하는 것은 암을 포함하는 질병에 대한 면역요법적 전략의 중심이 되어 왔다.

DC-SIGN에 결합하는 항체가 생산되었으나 개선된 결합제에 대한 요구는 존재한다.

발명의 요약

일 양상에서, 본 발명은 항-수지상세포-특이적 ICAM-3 포착 비-인테그린 (DC-SIGN; CD209) 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다.

일 구체예에서, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인은 표면 플라스몬 공명으로 측정할 때, 1 내지 50 μM의 해리 상수(Kd)로 인간 DC-SIGN에 결합한다.

일 양상에서, 본 발명은 도 4에 도시되어 있고 SEQ ID NO: 19 내지 36으로 제시된, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 70, 75, 80, 85 또는 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 일 구체예에서, 퍼센트 동일성은 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 일 구체예에서, 폴리펩티드는 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나이다. 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 모노머 중의 어느 하나의 (실질적으로) 순수한 모노머를 추가로 제공한다. 일 구체예에서, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나는 98, 99, 99.5% 이상 순수하거나 100% 순수한 모노머이다. 적합하게는, 폴리펩티드는 DC-SIGN와 결합한다.

일 양상에서, 본 발명은 도 3에 도시되어 있고 SEQ ID NO: 1 내지 18에 제시되어 있는 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 뉴클레오티드 서열과 60, 65, 70, 75 또는 80% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드를 제공한다. 일 구체예에서, 퍼센트 동일성은 70, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 적합하게는, 상기 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드는 DC-SIGN과 결합한다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 70, 75, 80, 85 또는 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-수지상세포-특이적 ICAM-3 포착 비-인테그린(DC-SIGN; CD209) 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 퍼센트 동일성은 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 도 4에 도시되어 있고 SEQ ID NO: 19 내지 36으로 제시되어 있는 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-29의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 LIP1-30의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나, 25개 이하(no more than)의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나, 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-A-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상 동일하다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나, 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 지니며, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 지니며 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나, 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르며, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 지니고 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 동일하거나, 25개 이하의 아미노산 위치에서 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열과 다르고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 지니고, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 지니며, LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 지니는, 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다.

일 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중 어느 하나로부터의 CDR3 서열 또는 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중 어느 하나로부터의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 차이는 단지 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 아미노산 위치에 존재한다. 일 구체예에서, CDR 서열 동일성은 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 일 구체예에서, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중 어느 하나로부터의 CDR3 서열을 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32, LIP1-33 중의 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3(예를 들어, CDR1, CDR2, CDR3, CDR1 및 2, CDR1 및 3, CDR2 및 3 또는 CDR1, 2 및 3)의 서열을 포함하는 항- DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 제공한다.

일 구체예에서, 본 발명에 따른 임의의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 CDR 서열 1, 2 또는 3는 도 5, 6 또는 8에 제시된 것과 같다. 본 발명의 임의 양상의 일 구체예에서, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 DC-SIGN에 결합한다.

일 구체예에서, 본 발명의 임의 양상에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 DC-SIGN에 특이적으로 결합하나 DC-SIGNR에 결합하지 않는다.

일 구체예에서, 본 발명의 임의 양상에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 낮은 친화력으로 DC-SIGN에 결합한다. 일 구체예에서, DC-SIGN에 대한 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 친화력은 1 μM 이상이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 DC-SIGN에 대한 결합 특이성을 지니고 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 아미노산 서열을 지니는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 DC-SIGN에 대한 결합을 억제하는 리간드를 제공한다.

본 발명의 추가 양상에서, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인이 제공되는데, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인은 LIP1-12, LIP1-13 , LIP1-15 , LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중 어느 하나, 즉, SEQ ID NO: 19 내지 36 중 어느 하나의 결합 특이성을 지닌다.

일 구체예에서, 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 아미노산 서열은 폴리펩티드 또는 단일 가변 도메인의 발현 및/또는 사용을 용이하게 하기 위하여 N 또는 C 말단에 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 상기 폴리펩티드 또는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 SEQ ID NO: 19 내지 36 중 어느 하나로 제시된 아미노산 서열에 아미노산 ST N-말단을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 상기 폴리펩티드 또는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 폴리히스티딘 태그(His-tag)와 같은 태그 서열을 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 폴리펩티드 또는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 C-말단에 His-태그를 포함할 수 있다.

일 양상에서, 본 발명은 도 3에 도시되어 있고 SEQ ID NO: 1 내지 18에 제시되어 있는 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 뉴클레오티드 서열과 80% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드를 제공하는데, 여기서 상기 폴리펩티드는 임의의 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33의 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일 구체예에서, 뉴클레오티드 서열의 퍼센트 동일성은 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상이다. 일 구체예에서, 아미노산 서열의 퍼센트 동일성은 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 이상 또는 100%이다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열은 임의의 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33의 뉴클레오티드 서열의 코돈-최적화된 버전일 수 있다. 서열의 코돈 최적화는 당업계에 공지되어 있다. 일 구체예에서, 뉴클레오티드 서열은 박테리아(예를 들어, E. coli 또는 슈도모나스(Pseudomonas), 예를 들어, P. 플루오레센스(P. fluorescens)), 포유동물(예를 들어, CHO) 또는 효모 숙주 세포(예를 들어, 피치아(Picchia) 또는 사카로미세스(Saccharomyces), 예를 들어, P. 파스토리스(P. pastoris) 또는 S. 세레비시애(S. cerevisiae))에서의 발현을 위해 최적화된다.

일 양상에서, 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다.

일 양상에서, 본 발명은 본 발명의 임의 양상에 따른 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 엔코딩하는 분리된 또는 재조합 핵산을 제공한다. 일 양상에서, 본 발명은 상기 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 일 구체예에서, 상기 벡터는 세포 상청액에서 발현을 보장하기 위한 GAS 선도 서열(예를 들어, WO 2005/093074호에 기재됨)과 같은 선도 서열을 포함하는 발현 벡터이다. 일 양상에서, 본 발명은 상기 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일 구체예에서, 상기 숙주 세포는 E. Coli이다. 적합한 E. coli 균주는 당업계의 통상의 기술자에게 친숙할 것이고, 예를 들어, HB2151 세포 또는 BL21 세포를 포함한다. 일 양상에서, 본 발명은 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 생산하는 방법을 제공하는데, 당해 방법은 상기 숙주 세포를 상기 핵산 또는 벡터의 발현에 적합한 조건하에서 유지시키고, 그 결과로써 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드가 생산되는 것을 포함한다. 당해 방법은 폴리펩티드의 정제를 추가로 포함할 수 있다. 당해 방법은 폴리펩티드, 가변 도메인 또는 결합제(binding agent)를 분리하는 단계 및 임의로, 상기 분리된 폴리펩티드, 가변 도메인 또는 결합제보다 개선된 친화력 및/또는 ND50(50% 중화 용량(neutralizing dose))을 갖는, 변이체(variant), 예를 들어, 돌연변이된 변이체를 생산하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 면역글로불린 단일 가변 도메인의 결합 친화력을 개선시키는 기법들은, 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 친화력 성숙 기법이 있다.

일 양상에서, 본 발명은 본 발명의 임의 양상에 따른 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드 또는 결합제와, 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

일 구체예에서, 본 발명에 따른 면역글로불린 단일 가변 도메인은 항체 불변 도메인, 예를 들어, 항체 Fc를 포함하는데, 임의로 여기서 상기 Fc의 N-말단은 가변 도메인의 C-말단에 연결(임의로 직접적으로 연결)된다.

본 발명의 폴리펩티드 또는 가변 도메인은 분리되고/거나 재조합된 것일 수 있다.

일 양상에서, 본 발명의 임의 양상에 따른 폴리펩티드 또는 가변 도메인을 포함하는 DC-SIGN 결합제가 제공된다. 적합하게는, "DC-SIGN 결합제"는 DC-SIGN에 결합하고, 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 물질이다. 일 구체예에서, 상기 결합제는 담체 중의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인이다. 적합하게는, 상기 담체는 지질-기반 담체, 예컨대, 막 소포(membrane vesicle) 또는 리포좀일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 담체에 의해 운반되거나 담체 상에 존재한다.

일 구체예에서, 담체 중에 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인에 대한 증가된 반감기를 부여한다.

또 다른 양상에서, 증가된 반감기는 또 다른 모이어티(moiety)와의 융합을 통해 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인에 부여될 수 있다.

본원은 DC-SIGN이 샘플 내에 존재하는지 여부 또는 얼마나 많은 DC-SIGN이 샘플 내에 존재하는지 여부를 측정하기 위한, 본 발명의 폴리펩티드, 면역글로불린 가변 도메인 (dAb) 또는 결합제과 사용설명서(예를 들어, 샘플 내의 DC-SIGN의 존재 및/또는 양을 측정하기 위한 사용설명서)를 포함하는 진단 키트를 추가로 개시한다. 일부 구체예들에서, 상기 키트는 하나 이상의 보조 시약, 예컨대, 적합한 완충액 또는 적합한 검출 시약(예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드 또는 dAb 또는 이들에 결합되거나 컨주게이션된 모이어티에 결합하는 검출가능하게 표지된 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 추가로 포함한다.

또한 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드, 길항제 또는 dAb가 고정되어, 상기 고정된 폴리펩티드 또는 dAb가 DC-SIGN에 결합하게 되는 고체 표면을 포함하는 장치와 관련이 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 고정될 수 있는 임의의 적합한 고체 표면이 사용될 수 있는데, 일예로, 유리, 플라스틱, 탄수화물(예를 들어, 아가로스 비드)이 있다. 필요한 경우, 상기 지지체는 고정을 용이하게 하는 바람직한 작용기를 함유하거나 함유하도록 변형될 수 있다. 상기 장치, 및/또는 지지체는 임의의 적합한 형상, 예를 들어, 시트(sheet), 로드(rod), 스트립, 플레이트, 슬라이드, 비드, 펠렛, 디스크, 겔, 튜브, 구체(sphere), 칩(chip), 플레이트 또는 접시(dish) 형상 등을 지닐 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 장치는 딥스틱(dipstick)이다. 일 구체예에서, 그러한 장치는 수지상세포의 정제 또는 분리를 위해 사용될 수 있다.

또 다른 양상에서, 의약(medicament)으로 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물이 제공된다. 일 구체예에서, 상기 항-DC-SIGN 단일 가변 도메인은 DC-SIGN에 대한 이의 특이적 결합을 통해 수지상세포로의 화합물의 전달에 활용될 수 있다. 그러한 전달을 위한 한 가지 적합한 용도는 면역 반응을 생성시키는 것일 수 있다. 특히, 항종양 반응이 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암, 예를 들어, 흑색종(melanoma)의 치료에 사용하기 위한 조성물을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 감염증의 치료에 사용하기 위한 조성물을 제공하는데, 여기서 상기 감염성 물질은 DC-SIGN에 대한 결합을 통해 세포로 진입한다. 그러한 감염증의 일예는 HIV, C형 간염 및 에볼라 바이러스와 같은 바이러스 감염증을 포함한다. 따라서, 본 발명은 HIV, C형 간염 또는 에볼라를 치료하는데 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물을 추가로 제공한다. 또한 본 발명은 감염증의 치료에 사용하기 위한 의약의 제조시 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물의 용도를 제공한다. 본 발명은 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 단일 가변 도메인을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암 또는 감염증을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

도면의 간단한 설명

도 1은 DC-SIGN 코팅된 플레이트에 결합한 LIP1 파지 입자들을 도시한다. 개개의 LIP1 클론으로부터의 파지 입자들을 제조하고, 일련의 파지 입자들의 희석물을 ELISA로 시험하였다. ELISA 웰을 4℃에서 밤새 DC-SIGN(PBS 또는 0.1 M NaHCO₃ 완충액(pH 9.6) 중에서 1-10 μg/ml)로 코팅시켰다. 2% 스킴 밀크 분말을 함유하는 PBS(PBSM)로 상기 웰을 블록킹한 후, 파지를 1시간 동안 PBSM에서 인큐베이션하였다. PBS로 세척한 후, 결합된 파지를 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘을 사용하는 항-M13 모노클로날 항체(Amersham)와 호스래디시 퍼옥시다제의 컨주게이트를 사용하여 검출하였다. HEL4(Jespers et al, J. Mol. Biol. (2004) 337, 893-903) 및 VKdummy는 비결합 음성 대조군이다.

도 2는 DC-SIGN 펩티드와 DC SIGN에 결합한 LIP1-33 파지를 도시한다. LIP1-33으로부터의 파지 입자들을 제조하고, 일련의 파지 입자들의 희석물을 ELISA로 시험하였다. ELISA 웰을 4℃에서 밤새 DC-SIGNR, 뉴트라비딘(neutravidin), DC-SIGN 또는 DC-SIGN 펩티드(PBS 또는 0.1M NaHCO₃ 완충액(pH 9.6) 중에서 1-10 μg/ml)로 코팅시켰다. 2% 스킴 밀크 분말을 함유하는 PBS(PBSM)로 상기 웰을 블록킹한 후, 파지를 1시간 동안 PBSM에서 인큐베이션하였다. PBS로 세척한 후, 결합된 파지를 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘을 사용하는 항-M13 모노클로날 항체(Amersham)와 호스래디시 퍼옥시다제의 컨주게이트를 사용하여 검출하였다. HEL4 및 VK더미(dummy)는 비결합 음성 대조군이다.

도 3은 LIP1 VH 및 VK dAbs로부터의 뉴클레오티드 서열들을 도시한다. "~"는 dAb 서열들의 정렬을 가능하도록 도 3에 제시된 서열들내로 도입된 공간을 나타낸다.

도 4는 LIP1 VH 및 VK dAbs로부터의 아미노산 서열들을 도시한다. "~"는 dAb 서열들의 정렬이 가능하도록 도 4에 제시된 서열들내로 도입된 공간을 나타낸다.

도 5는 LIP1 VK dAbs로부터의 서열들의 아미노산 정렬을 도시한다. 아미노산 넘버링은 케이벳(Kabat)에 따른다. 점(".")이 상기 정렬내에 표기된 경우, 해당 dAb 서열은 첫 번째에 나열된 참조 dAb와 동일하다. 변이체 아미노산들은 단일 문자 아미노산 코드로 표기된다. 본 도면에 제시된 서열들은 또한 도 4에 완전하게 도시되어 있다. 진한 글씨와 밑줄로 강조된 서열들은, 연속하여, CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 나타낸다. "-"는 모든 dAb 서열들의 서열 정렬이 가능하도록 도 5에 제시된 서열들내로 도입된 공간을 나타낸다.

도 6은 LIP1 VH dAbs로부터의 서열들의 아미노산 정렬을 도시한다. 아미노산 넘버링은 케이벳(Kabat)에 따른다. 점(".")이 상기 정렬내에 표기된 경우, 해당 dAb 서열은 첫 번째에 나열된 참조 dAb와 동일하다. 변이체 아미노산들은 단일 문자 아미노산 코드로 표기된다. 본 도면에 제시된 서열들은 또한 도 4에 완전하게 도시되어 있다. 진한 글씨와 밑줄로 강조된 서열들은, 연속하여, CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 나타낸다. "-"는 모든 dAb 서열들의 서열 정렬이 가능하도록 도 5에 제시된 서열들 내로 도입된 공간을 나타낸다.

도 7은 인간 DC-SIGN 대비 DC-SIGNR의 정렬을 도시한다. 동일한 아미노산들을 비롯한 보존적 치환들이 제시되어 있다. 전장 단백질(A)에 대한 상동성은 69%이고, 탄수화물 인식 도메인(carbohydrate recognition 도메인, CRD)(B)의 경우 71%이다. DC-SIGN (SEQ ID NO: 39) and DC-SIGNR (SEQ ID NO : 40)의 탄수화물 인식 도메인(CRD)과 함께 DC-SIGN(SEQ ID NO: 41)과 DC-SIGNR(SEQ ID NO: 42)의 아미노산 서열이 도시되어 있다.

도 8은 LIP1 VK와 VH dAbs의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 서열을 도시한다.

발명의 상세한 설명

본 명세서 내에서, 본 발명은 명확하고 구체적인 명세서가 기술될 수 있는 방식으로, 구체예들을 참조하여 기재된다. 본 발명의 기술 사상에서 벗어나지 않으면서 구체예들은 다양하게 조합되거나 분리될 수 있다는 것이 의도되고 이해되어야 한다.

달리 규정하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 당업계(예를 들어, 세포 배양, 분자 유전학, 핵산 화학, 혼성화 기법 및 생화학 분야)의 통상의 기술자에 의해 공통적으로 이해된다. 분자적, 유전자적 및 생화학적 방법들에 관한 표준 기술들(일반적으로, 참고문헌으로써 본원에 포함되는, 하기 문헌을 참조하기 바람: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed. (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. 및 Ausubel et al ., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4th Ed, John Wiley & Sons, Inc.)과 화학적 방법에 관한 표준 기술들을 사용한다.

본원에 사용된, "펩티드"는 펩티드 결합을 통해 함께 결합된 약 2개 내지 약 50개의 아미노산들을 의미한다.

본원에 사용된, "폴리펩티드"는 펩티드 결합을 통해 함께 결합된 약 50개 이상의 아미노산들을 의미한다. 폴리펩티드는 일반적으로 3차 구조를 포함하고 기능성 도메인들로 폴딩된다.

"분리된(isolated)" 또는 "정제된(purified)" 폴리펩티드, 항체 or 이의 생물학적으로 활성 부분은 폴리펩티드, 항체 또는 이의 생물학적으로 활성 부분이 유래된 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포 물질 또는 기타 오염 단백질이 실질적으로 결여되거나, 화학적으로 합성되는 경우 화학 전구체 또는 기타 화합물이 실질적으로 결여되어 있다. 용어 "세포 물질이 실질적으로 결여된"은 분리되거나 재조합적으로 생산된 세포의 세포 성분들로부터 단백질이 분리된 폴리펩티드, 항체 또는 이의 생물학적으로 활성 부분의 제조물을 포함한다. 일 구체예에서, 용어 "세포 물질이 실질적으로 결여된"은 약 30% (중량 기준) 미만의 비-항체(본원에서 "오염 단백질"로도 지칭됨"), 일예로, 약 20% 미만의 비-항체 단백질, 또 다른 일예로, 약 10% 미만의 비-항체 단백질, 또 다른 일예로, 약 5% 미만의 비-항체 단백질을 지니는 폴리펩티드, 항체 또는 이의 생물학적으로 활성 부분의 제조물을 포함한다. 상기 폴리펩티드, 항체 또는 이의 생물학적으로 활성 부분이 재조합 공급원에서 정제된 경우, 이것은 또한 배양 배지가 실질적으로 결여되어 있는데, 즉, 배양 배지가 단백질 제조물의 부피의 약 20% 미만, 일예로, 약 10% 미만, 또 다른 일예로 약 5% 미만으로 존재한다.

수지상세포-특이적 ICAM-3 포착 비-인테그린(DC-SIGN 또는 CD209)은 만노오스 특이적 칼슘 의존성(C-타입) 렉틴인 타입 II 막 단백질이다. DC-SIGN은 수지상세포(DCs)와 T 세포 간의 상호작용을 매개하고, 예를 들어, 문헌[Geijtenbeek et al. Cell (2000); 100, 565-585, Soilleux, Clinical Science (2003), 104, 437-446에 기재되어 있으며, 서열 데이터는 NM_021155(mRNA)와 NP 066978 (단백질)로 제공되어 있다. 인간 DC-SIGN의 아미노산 서열은 또한 도 7(SEQ ID NO: 41)에 제시되어 있다.

적합하게는, 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 임의의 항체 포맥으로 제공될 수 있다.

본원에 사용된 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE 또는 단편(예컨대, Fab, F(ab')₂, Fv, 2황화 결합된 Fv, scFv, 폐쇄된 형태의 다중특이적 항체, 2황화-결합된 scFv, 디아바디(diabody))를 의미하는데, 천연적으로 항체를 생산하는 임의의 종들에서 유래되거나, 재조합 DNA 기술에 의해 생성되거나; 혈청, B-세포, 하이브리도마(hybridomas), 형질주입종(transfectomas), 효모 또는 박테리아에서 분리된다.

본원에 사용된, "항체 포맷"은 항원에 대한 결합 특이성을 해당 구조물에 부여하기 위해 하나 이상의 항-DC SIGN 항체 단일 가변 도메인이 통합될 수 있는 임의의 적합한 폴리펩티드 구조물을 의미한다. 다양한 적합한 항체 포맷은 당업계에 공지되어 있는데, 예컨대, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 이특이적(bispecific) 항체, 항체 중쇄, 항체 경쇄, 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 동형이합체(homodimers) 및 이형이합체(heterodimers), 상기한 것들 중 임의의 것의 항원-결합 단편(예를 들어, Fv 단편(예를 들어, 단일 쇄 Fv(scFv), 2황화 결합된 Fv), Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편), 단일 항체 가변 도메인(예를 들어, dAb, V_H, V_HH, V_K, V_L), 및 상기한 것들 중 임의의 것을 변형된 버전(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 기타 적합한 폴리머 또는 인간화된 V_HH의 공유결합성 부착에 의해 변형된 것)가 있다.

본 발명에 따른 가변 도메인은 비-면역글로불린 다중-리간드 구조물에 연결되어 다가 복합체를 형성할 수 있는데, 상기 복합체는 동일한 항원을 지니는 표적 분자들에 결합하고, 그 결과로써 우수한 결합도(avidity)를 제공하며, 한편 하나 이상의 가변 도메인이 항원에 결합하여 다합체의 반감기를 증가시킨다. 예를 들어, 천연 박테리아 수용체, 예컨대, SpA는 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 리간드를 생성시키기 위하여 CDRs 이식(grafting)용 스캐폴드로 사용되었다. 이 절차에 대한 자세한 내용은 US 5,831,012호에 기재되어 있다. 기타 적합한 스캐폴드는 피브로넥틴에 기반한 것들과 Affibodies™를 포함한다. 적당한 절차에 대한 자세한 내용은 WO 98/58965호에 기재되어 있다. 기타 적합한 스캐폴드는 문헌[van den Beuken et al., J. Mol. Biol. (2001) 310, 591-601]에 기재되어 있는, 리포칼린과 CTLA4, WO00/69907(Medical Research Council)에 기재된 것들과 같은 스캐폴드를 포함하며, 이러한 스캐폴드들은, 예를 들어, 박테리아 GroEL 또는 기타 샤페론 폴리펩티드의 고리 구조에 기반하고 있다.

어구 "면역글로불린 단일 가변 도메인"은 기타 V 영역 또는 도메인과 독립적으로 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 가변 도메인(VH, VHH, VK, VL)을 의미한다. 또한 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인은, 이들이 DC-SIGN에 대한 결합 리간드인 이상, 본원에서 리간드로서 기재된다. "항-DC-SIGN" 면역글로불린 단일 가변 도메인은 DC-SIGN을 인지하거나 DC-SIGN에 특이적으로 결합하는 그러한 것이다. 일 구체예에서, DC-SIGN은 인간 DC-SIGN이다. 면역글로불린 단일 가변 도메인은 다른 가변 영역 또는 가변 도메인을 지니는 포맷(예를 들어, 호모- 또는 헤테로-다합체)으로 존재할 수 있는데, 여기서 상기 다른 영역 또는 도메인은 상기 단일 면역글로불린 가변 도메인에 의한 항원 결합에 필요하지 않다(즉, 여기서 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인은 추가적인 가변 도메인과 독립적으로 항원에 결합한다). "도메인 항체" 또는 "dAb"는 본원에 사용된 용어 "면역글로불린 단일 가변 도메인"과 같은 의미이다. "단일 면역글로불린 가변 도메인"은 본원에 사용된 용어 "면역글로불린 단일 가변 도메인"과 같은 의미이다. "단일 항체 가변 도메인" 또는 "항체 단일 가변 도메인"은 본원에 사용된 용어 "면역글로불린 단일 가변 도메인"과 같은 의미이다. 면역글로불린 단일 가변 도메인은, 일 구체예에서, 인간 항체 가변 도메인이나, 또한 설치류와 같은 기타 종으로부터의 단일 항체 가변 도메인(예를 들어, 그 내용이 전체로써 참고문헌으로써 본원에 포함되는, WO 00/29004호에 개시된 것), 너스 샤크(nurse shark) 및 카멜리드(Camelid) V_HH dAbs를 포함한다. 카멜리드 V_HH는 카멜, 라마, 알파카, 단봉낙타(dromedary), 및 과나코(guanaco)를 포함하는 종들에서 유래된 면역글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드를 포함하며, 상기 종들은 천연적으로 경쇄가 없는 중쇄 항체를 생산한다. V_HH는 인간화될 수 있다.

단일 도메인 항체(단일 가변 도메인 폴리펩티드, dAbs)는 월등한 생체물리적 특성들을 지니도록 생성될 수 있고 모노클로날 항체를 능가하는 많은 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, dAbs는 회합(aggregation), 단백질가수분해 및 변성에 내성을 나타내도록 생성될 수 있는데, 이는 이들을 임상적 세팅에 더 잘 따르도록 만든다. 더욱이, 이들의 포맷은 이들에게 더 나은 적응성(flexibility)을 제공한다. 또한 (포유동물 발현 세포로부터 생산된) 모노클로날 항체에는 유의한 포맷팅 및 제조상 문제점들이 존재할 수 있는 반면, dAbs는 더 용이하게 생산될 수 있다.

"도메인"은 단백질의 나머지 부분과 독립적인 3차 구조를 갖는 폴딩된 단백질 구조이다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 분리된(discrete) 기능적 특성들에 관여하고, 많은 경우에 있어서, 단백질 및/또는 도메인의 잔여부(remainder)의 기능 손실 없이 다른 단백질에 부가되거나, 제거되거나 전이될 수 있다. "단일 항체 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 특징적인 서열들을 포함하는 폴딩된 폴리펩티드 도메인이다. 따라서, 이것은 완전한 항체 가변 도메인과 변형된 가변 도메인, 예를 들어, 상기 도메인 내의 하나 이상의 루프들이 항체 가변 도메인의 특징적이지 않은 서열들로 대체된 변형된 가변 도메인, 절두된(truncated) 항체 가변 도메인을 포함하거나, N- 또는 C-말단 신장부(extensions), 뿐만 아니라, 적어도 전장 도메인의 결합 활성 및 특이성을 보유하는 가변 도메인의 폴딩된 단편들을 포함한다.

항체 또는 면역글로불린 단일 가변 도메인과 같은 결합제의 결합, 특이적 결합 및 결합 친화력은 해리 상수(K_d)를 측정함으로써 결정될 수 있다. Kd를 결정하기 위한 적합한 방법들은 표면 플라즈마 공명(surface plasma resonance)을 포함한다. 그러한 한 방법은 GE로부터 입수가능한 Biacore 장치를 포함한다. 다른 적합한 방법은 ELISA를 포함한다. 결합 친화력을 결정하기 위한 경쟁 ELISA 및 경쟁 BiaCore 실험 방법에 대한 자세한 내용은 WO2006038027호를 참조하기 바란다.

일예로, 결합은 모노클로날 파지 ELISA를 사용하여 시험된다. 파지 ELISA는 임의의 적합한 절차에 따라 수행될 수 있다. 전형적으로, 결합제를 발현하는 파지에 관한 각 라운드의 선별에서 생산된 파지 개체군은, "폴리클로날" 파지 항체를 식별하기 위해, 선택된 항원 또는 에피토프에 대한 ELISA에 의한 결합에 대해 스크리닝될 수 있다. 이후 이러한 개체군으로부터의 단일 감염된 박테리아 콜로니들로부터의 파지는 "모노클로날" 파지 항체를 식별하기 위해 ELISA에 의해 스크리닝될 수 있다. 또한 항원 또는 에피토프에 대한 결합에 관해 용해성 항체 단편들을 스크리닝하는 것이 바람직할 수 있고 이것은 또한 시약, 예를 들어, C- 또는 N-말단 태그에 대한 시약을 사용하여 ELISA에 의해 수행될 수 있다(예를 들어, 문헌[Winter et al., (1994) Ann. Rev. Immunology 12, 433-55]과 본원에 인용된 참고문헌들을 참조하라). 일 구체예에서, 파지 ELISA는 단백질 L 또는 단백질 A의 존재시 수행될 수 있다.

특정 구체예에서, 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 특이적으로 결합하고, 표면 플라스몬 공명으로 측정할 때, 300 nM 내지 1pM 또는 30OnM 내지 5pM 또는 5OnM 내지 1pM 또는 5OnM 내지 5pM 또는 5OnM 내지 20 pM 또는 약 10 pM 또는 약 15pM 또는 약 2OpM의 해리 상수(K_d)로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 다른 구체예에서, 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN에 특이적으로 결합하고, 40OnM 내지 1μM 또는 50OnM 내지 1μM 또는 60OnM 내지 1μM 또는 70OnM 내지 1μM 또는 80OnM 내지 1μM 또는 90OnM 내지 1μM의 해리 상수(K_d)로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 다른 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN에 특이적으로 결합하고, 1 내지 2μM 또는 1μM 내지 5μM 또는 1μM 내지 1OμM 또는 5μM 내지 1OμM 또는 10 내지 20, 30, 40 또는 50μM의 해리 상수(K_d)로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 특정 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 특이적으로 결합하고, 표면 플라스몬 공명으로 측정할 때 5×1O^-1 s^-1 내지 1×IO^-7 s^-1 또는 1×1O^-3 s^-1 내지 1×1O^-7 s^-1 또는 1×1O^-4 s^-1 내지 1×1O^-7 s^-1 또는 1×1O^-5 s^-1 내지 1×1O^-7 s^-1 또는 1×1O^-4 s^-1 또는 1×1O^-5 s^-1의 K_off 속도 상수로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 특정 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 1×1O^-3 M^-1S^-1 내지 1×1O^-7 M^-1S^-1 또는 1×1O"3 M^-1S^-1 내지 1×1O^-6 M^-1S^-1 또는 약 1×1O^-4 M^-1S^-1 또는 약 1×1O^-5 M^-1S^-1의 Kon으로 특이적으로 결합한다. 일 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 특이적으로 결합하고, 본 단락에서 정의된 것과 같은 해리 상수(K_d)와 K_off로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 일 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 특이적으로 결합하고, 본 단락에서 정의된 것과 같은 해리 상수(Kd)와 K_on으로 인간 DC-SIGN으로부터 해리된다. 일부 구체예에서, 상기 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 본 단락에 언급된 Kd 및/또는 K_off 및/또는 K_on으로 DC-SIGN(예를 들어, 인간 DC-SIGN)와 특이적으로 결합하고, LIP1-29의 아미노산 서열과 적어도 또는 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일 구체예에서, "고 친화력" 결합제는, 모노머 형태일 때, 수지상세포와 같은 세포에 결합할 수 있는 세포 표면 상에 발현된 DC-SIGN 분자와 결합하는 것이다.

전형적으로, "고 친화력" 결합제, 예컨대, 본 발명에 따른 폴리펩티드, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb는 단지 약 300 nM 내지 1pM 또는 30OnM 내지 5pM 또는 5OnM 내지 1pM 또는 5OnM 내지 5pM 또는 5OnM 내지 20 pM 또는 약 10 pM 또는 약 15pM 또는 약 2OpM의 결합 친화력(Kd) 값으로 표적 분자, 항원 또는 에피토프에 결합하는 결합제이다. 적합하게는, 본 발명에 따른 "저 친화력" 결합제는 40OnM 내지 1μM 또는 50OnM 내지 1μM 또는 60OnM 내지 1μM 또는 70OnM 내지 1μM 또는 80OnM 내지 1μM 또는 90OnM 내지 1μM의 Kd 값으로 표적 분자 또는 항원에 결합하는 결합제이다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 "저 친화력" 결합제는 DC-SIGN, 예를 들어, 인간 DC-SIGN와 특이적으로 결합하고, 1 내지 2μM 또는 1μM 내지 5μM 또는 1μM 내지 lOμM 또는 5μM 내지 1OμM, 또는 10 내지 20, 30, 40 또는 50μM의 해리 상수(Kd)로 인간 DC-SIGN로부터 해리된다.

일 구체예에서, 친화력은 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 다가 파지로 제시되거나 단백질 L과 교차결합된 경우 측정될 수 있다.

본원에 기재되고 예시된 바와 같이, 본 발명의 dAbs는 저 친화력으로 이들의 표적 DC-SIGN에 결합할 수 있다. 저 친화력을 지니는 면역글로불린 단일 가변 도메인을 사용하는 것은 유리할 수 있다.

특히, 다수의 또는 복수의 저 친화력 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들은 한 담체 물질 중에 조합될 수 있고, 그리하여 단일 가변 도메인 분자들과 이들의 동족(cognate) 결합 분자들 간의 다수의 상호작용이 일어날 수 있다. 이런 방식으로, 단일 가변 도메인 분자는 다수 또는 복수의 동족 결합 분자들을 운반하는 세포를 표적으로 삼는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자와 같은, 저 친화력 결합제가 다수의 디스플레이 포맷으로 담체 분자 상에 통합된 경우, 다수의 결합제는 담체 물질이 세포에 결합하도록 하기 위해 또는 세포와 회합되도록 하기 위해 다수의 DC-SIGN 분자들과 결합하여야 한다. 그러한 담체 물질은, 유리하게도, 높은 DC-SIGN 발현을 나타내는 그러한 세포에 결합할 수 있고, 낮은 DC-SIGN 발현을 나타내는 그러한 세포와 결합하지 않을 수 있다. 이러한 방식으로, 본 발명의 저 친화력 결합제는 특정 세포를 표적으로 삼는데 사용될 수 있고, 조합하여, 전반적으로 높은 친화력 결합을 제공할 수 있다. 또한, 복수의 저 친화력 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 담체는, 저 복제수의 DC-SIGN을 지니는 세포에 대해서 오직 약한 결합력을 갖는 한편, 수지상세포와 같은 고 복제수의 DC-SIGN를 지니는 세포에 대한 높은 결합력을 가질 수 있다. 따라서, 그러한 담체는 더 높은 수준의 DC-SIGN을 발현하는 세포를 선별할 수 있다.

적합한 담체들은, 예를 들어, WO 2007/072022호에 기재되어 있다. 일 구체예에서, 담체는 본 발명에 따른 복수의 결합제를 제시한다. 예를 들어, 담체는 100개 이상 또는 1000개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들을 제시할 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 양상에서, 다수의 디스플레이 포맥으로 저 친화력 dAb를 포함하는 조성물이 제공된다. 다수의 디스플레이 포맷은 본 발명에 따른 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들의 다합체를 비롯한 상기한 복수의 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들을 포함하는 담체를 포함할 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 DC-SIGN 수용체 결합제가 제공된다. 적합하게는, 상기 결합제는 이의 표면상에 디스플레이된 하나 이상의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 구조물일 수 있다.

다수의 디스플레이 포맷으로 저 친화력 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들을 사용하는 것은 편리한 제형을 제공하는데, 상기 제형에서 투여를 위한 조성물 제형으로부터 담체 상에 통합되지 않은 비결합된 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들을 제거하는 것이 반드시 필요하지 않다. 유리형(free) 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들은 생체내에서 빠르게 제거된다. 이러한 면역글로불린 단일 가변 도메인 분자들이 이들의 동족 결합 분자들에 대해 저 친화력을 지니는 경우, 이들은 수용체에 결합할 가능성이 없고 그에 따라 자유롭게 순환하는 상태로 유지될 가능성이 있고 제거될 것이다.

두 서열들 간의 "상동성" 또는 "동일성" 또는 "유사성"의 계산(이 용어들은 본원에서 상호교환가능하게 사용됨)은 다음과 같이 수행된다. 서열들은 최적 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어, 갭은 최적 정렬을 위해 제 1 및 제 2 아미노산 또는 핵산 서열 중 어느 하나 또는 둘 모두에 도입될 수 있고 비-상동성 서열은 비교 목적을 위해 무시되 수 있다). 일 구체예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 참조 서열의 길이는 참조 서열의 길이의 30% 이상, 또는 40% 이상, 또는 50% 이상, 또는 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 100%이다. 그런 다음 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 잔기 또는 뉴클레오티드가 비교된다. 제 1 서열의 한 위치가 제 2 서열의 상응하는 위치의 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유된 경우, 분자들은 해당 위치에서 동일하다(본원에 사용된 아미노산 또는 핵산 "상동성"은 아미노산 또는 핵산 "동일성"과 동등하다). 2 서열들 간의 퍼센트 동일성은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치들의 개수의 함수인데, 2개의 서열들의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는, 갭의 개수, 및 각 갭의 길이를 고려한다. 본원에 정의된, 아미노산과 뉴클레오티드 서열 정렬 및 상동성, 유사성 또는 동일성은 디폴트 파라미터들을 사용하는, 알고리즘 BLAST 2 서열를 사용하여 준비되고 결정될 수 있다(Tatusova, T. A. et al, FEMS Microbiol Lett, 774:187-188 (1999)).

상보성 결정 영역(CDRs)과 프레임워크 영역은 면역글로불린 가변 도메인의 그러한 영역들이다. 특히, 특정 변이성(variability)을 나타내는 단일 항체 가변 도메인의 서열의 영역, 즉 CDR(상보성 결정 영역) 서열이 존재한다. CDRs은 항체 가변 도메인의 서열 내의 규정된 위치에 존재한다. 서열의 CDR 영역을 정의하기 위한 수 많은 시스템들이 당업계의 통상의 기술자에게 친숙할 것이다. 일 구체예에서, 본 발명의 CDR 서열은, 일치된 방식으로 항체내의 잔기들을 넘버링하기 위한 표준 넘버링 체계를 제공하는, 면역학적 관심 대상 단백질 서열의 케이벳 데이타베이스에 정의된 것과 같다(Kabat E.A., Wu,T.T., Perry, H., Gottesman, K. and Foeller, C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No. 91-3242). 본원에 기재된 면역글로불린 단일 가변 도메인(dAbs)은 상보성 결정 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3)를 함유한다. 일 구체예에서, 본 발명에 따른 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 CDR 서열들은 도 8에 제시된 것과 같은 그러한 CDR 1, 2 및 3이다.

본원에 개시된 V_H(CDRH1 등) 및 V_L(CDRL1 등)(Vκ) dAbs의 CDRs(CDR1, CDR2, CDR3)의 아미노산 서열은 공지된 케이벳 아미노산 넘버링 시스템 및 CDRs의 정의에 기초하여 당업계의 통상의 기술자에게 자명할 것이다. 케이벳 넘버링 시스템에 따라서, 가장 흔하게 사용되는 방법은 서열 변이성에 기초하며, 중쇄 CDR-H3는 다양한 길이를 가지고, 삽입은 최대 K개의 문자로 잔기 H1OO과 H1O1 사이에 넘버링된다(즉, H1OO, H1OOA ... H1OOK, H1O1). CDRs은 대안적으로 하기한 바와 같이, (구조적 루프 영역의 위치에 기반한) 초씨아의 시스템(Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342 (6252), p877-883)을 사용하거나, AbM(케이벳과 초씨아의 절충)에 따르거나 (결정 구조 및 항원과의 접촉 잔기들의 예상에 기반한) 콘택트(Contact) 방법에 따라서 결정된다. CDRs 결정을 위한 적합한 방법에 관하여, http://www.bioinf.org. uk / abs /을 참조하라.

일단 각각의 잔기가 넘버링되면, 당업자는 이후 하기 CDR 정의를 적용할 수 있다:

케이벳:

CDR H1: 31-35/35A/35B

CDR H2: 50-65

CDR H3: 95-102

CDR L1: 24-34

CDR L2: 50-56

CDR L3: 89-97

초씨아:

CDR H1: 26-32

CDR H2: 52-56

CDR H3: 95-102

CDR L1: 24-34

CDR L2: 50-56

CDR L3: 89-97

AbM:

(케이벳 넘버링 사용): (초씨아 넘버링 사용):

CDR H1: 26-35/35A/35B 26-35

CDR H2: 50-58 -

CDR H3: 95-102 -

CDR L1: 24-34 -

CDR L2: 50-56 -

CDR L3: 89-97 -

콘택트

(케이벳 넘버링 사용): (초씨아 넘버링 사용):

CDR H1: 30-35/35A/35B 30-35

CDR H2: 47-58 -

CDR H3: 93-101 -

CDR L1: 30-36 -

CDR L2: 46-55 -

CDR L3: 89-96 -

("-"는 케이벳과 동일한 넘버링을 의미한다)

본 발명은 본원에 기재된 펩티드 또는 폴리펩티드를 엔코딩하는 분리되고/거나 재조합된 핵산과 관련이 있다.

"분리된"으로 본원에 지칭된 핵산은 이의 본래 환경 내(예를 들어, 세포 내 또는 라이브러리와 같은 핵산의 혼합물 내)에서 기타 물질(예를 들어, 기타 핵산, 예컨대, 게놈 DNA, cDNA 및/또는 RNA)와 따로 떨어져 있는 핵산이다. 분리된 핵산은 벡터(예를 들어, 플라스미드)의 일부로써 분리될 수 있다.

본원에서 "재조합"으로 지칭된 핵산은 예를 들어, 제한 효소, 상동성 재조합, 바이러스 등을 사용하여 벡터 또는 염색체내로의 클로닝과 같은, 인공 재조합에 의존하는 방법을 포함하는 재조합 DNA 방법학에 의해 생산된 핵산, 및 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 사용하여 제조된 핵산이다.

또한 본 발명은 본원에 기재된 펩티드 또는 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산을 포함하는 (하나 이상의) 재조합 핵산 또는 발현 컨스트럭트를 포함하는 재조합 숙주 세포와 관련이 있다. 또한 펩티드 또는 폴리펩티드의 발현에 적절한 조건하에 본 발명의 재조합 숙주 세포를 유지하는 단계를 포함하는, 펩티드 또는 폴리펩티드를 제조하는 방법이 제공된다. 방법은, 필요한 경우, 펩티드 또는 폴리펩티드를 분리 또는 회수하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자(즉, 하나 이상의 핵산 분자), 또는 그러한 핵산 분자를 포함하는 발현 컨스트럭트(즉, 하나 이상의 컨스트럭트)는, 상기 핵산 분자(들)이 (예를 들어, 숙주 세포 게놈내로 통합된, 벡터 내, 세포 내 과정들에 의해 생성된 컨스트럭트 내) 하나 이상의 발현 조절 엘리먼트에 작동가능하게 연결되도록, 선택된 숙주 세포에 적절한 임의의 방법(예를 들어, 형질전환, 형질감염, 전기천공, 감염)을 사용하여 재조합 숙주 세포를 생성하기 위해 적합한 숙주 세포내로 도입될 수 있다. 그 결과 얻어진 재조합 숙주 세포는 (예를 들어, 적합한 동물 내에서, 적절한 염, 성장 인자, 항생제, 영양 보충물 등이 보충된 적합한 배양 배지 내에서, 인듀서의 존재시) 발현에 적합한 조건하에 유지될 수 있고, 그 결과로써, 엔코딩된 펩티드 또는 폴리펩티드가 생산된다. 필요한 경우, 엔코딩된 펩티드 또는 폴리펩티드는 (예를 들어, 동물, 숙주 세포, 배지, 젖으로부터) 분리 또는 회수될 수 있다. 이 방법은 트랜스제닉 동물의 숙주 세포에서의 발현을 포함한다(예를 들어, 다음 문헌을 참조하기 바람: WO 92/03918, GenPharm International).

본원에 기재된 펩티드 또는 폴리펩티드는 또한 화학 합성 또는 임의의 다른 적합한 방법에 의해, 적합한 시험관내 발현 시스템에서 생산될 수 있다. 폴리펩티드, dAb 또는 길항제는 E. coli 또는 피치아(Pichia) 종(예를 들어, P. 파스토리스)에서 발현될 수 있다. 일 구체예에서, 리간드 또는 dAb 모노머는 E. coli 또는 피치아(Pichia) 종(예를 들어, P. 파스토리스)에서 발현될 때 약 0.5 mg/L 이상의 양으로 분비된다. 일 구체예에서, 발현 벡터는 숙주 세포 상청액 내로 발현을 증가시키도록 선택될 수 있다. 일 구체예에서, 발현 벡터는 본원에 기재된 GAS 선도 서열을 포함한다. 비록, 본원에 기재된 리간드와 dAb 모노머가 E. coli 또는 피치아(Pichia) 종(예를 들어, P. 파스토리스)에서 발현될 때 분비될 수 있지만, 이것들은 임의의 적합한 방법, 예컨대, E. coli 또는 피치아(Pichia) 종에 적용되지 않는 합성 화학 방법 또는 생물학적 생산 방법을 사용하여 생산될 수 있다.

어구 "반감기"는, 예를 들어, 천연 메카니즘에 의한 리간드의 변성 및/또는 리간드의 제거 또는 격리(sequestration)로 인한, 생체내에서, 50% 까지 리간드 (예를 들어, dAb, 폴리펩티드 또는 길항제)의 혈청 농도를 감소시키는데 걸치는 시간을 의미한다. 본 발명의 리간드는 생체내에서 안정화될 수 있고, 이들의 반감기는 변경 및/또는 제거 또는 격리에 저항하는 분자에 대한 결합에 의해 증가된다. 전형적으로, 그러한 분자는 그 자체로 생체내에서 긴 반감기를 갖는 천연적으로 생성되는 단백질이다. 리간드의 기능적 활성이 생체내에서 반감기를 증가시키는 분자에 비특이적인 유사한 리간드보다 더 긴 기간 동안 지탱된다면, 리간드의 반감기는 증가된다. 예를 들어, 인간 혈청 알부민(HAS)과 표적 분자에 특이적인 리간드는 HSA에 결합하지 않으나 또 다른 분자에는 결합하는, HSA에 대한 특이성을 나타내지 않는 동일한 리간드와 비교된다. 예를 들어, 이것은 세포 상의 제 3의 표적과 결합할 수 있다. 전형적으로, 반감기는 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 이상 증가된다. 반감기의 2×, 3×, 4×, 5×, 10×, 2O×, 30×, 4O×, 5O× 이상 범위에서의 증가가 가능하다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 반감기의 최대 30×, 4O×, 5O×, 6O×, 7O×, 80×, 9O×, 10O×, 15O× 범위에서의 증가가 가능하다.

리간드 반감기의 약동학적 분석 및 측정을 위한 방법은 당업계의 통상의 기술자에게 익숙할 것이다. 자세한 내용은 하기 문헌들에서 찾아 볼 수 있다: Kenneth, A et al., Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and in Peters et al., Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). 또한 t 알파와 t 베타 반감기와 곡선하면적(area under the curve, AUC)과 같은 약동학 파라미터들에 대해 기술하고 있는, 마르셀 덱커(Marcel Dekker)에 의해 출간된, 문헌["Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, 2^nd Rev. ex edition (1982)]가 참조된다.

반감기(t^{1 /2} 알파 및 t^{1 /2} 베타)와 AUC는 시간에 대한 리간드의 혈청 농도 곡선으로부터 결정될 수 있다. WinNonlin 분석 패키지(Pharsight Corp.(Mountain View, CA94040, USA)로부터 구입가능함)를 사용하여, 예를 들어, 곡선을 모델링할 수 있다. 제 1 기(알파 기)에서, 리간드는, 일부 제거를 동반하며, 환자에서 주로 분배를 겪게 된다. 제 2 기(베타 기)는 리간드가 분배된 말기이고, 혈청 농도는 리간드가 환자로부터 제거됨에 따라 감소된다. t 알파 반감기는 상기 제 1 기의 반감기이고, t 베타 반감기는 상기 제 2 기의 반감기이다. 따라서, 유리하게도, 본 발명은 리간드 또는 15분 이상의 범위에서 반감기를 지니는 본 발명에 따른 리간드를 포함하는 조성물을 제공한다. 일 구체예에서, 범위의 하한은 30분, 45분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 10시간, 11시간 또는 12시간이다. 또한, 또는 대안적으로, 본 발명에 따른 리간드 또는 조성물은 12시간을 포함하는 최대 12시간까지의 범위에서 tα 반감기를 지닐 수 있다. 일 구체예에서, 상기 범위의 상한은 11, 10, 9, 8, 7, 6 또는 5시간이다. 적합한 범위의 일예는 1 내지 6시간, 2 내지 5시간 또는 3 내지 4시간이다.

유리하게는, 본 발명은 2.5시간 이상의 범위에서 tβ 반감기를 갖는 본 발명에 따른 리간드 또는 리간드를 포함하는 조성물을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 범위의 하한은 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 10시간, 11시간, 또는 12시간이다. 또한, 또는 달리, 본 발명에 따른 리간드 또는 조성물은 21일을 포함하는 최대 21일까지의 범위에서 tβ 반감기를 갖는다. 일 구체예에서, 상기 범위의 상한은 12시간, 24시간, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일 또는 20일이다. 유리하게도, 본 발명에 따른 리간드 또는 조성물은 12 내지 60시간 범위에서 tβ 반감기를 지닐 것이다. 추가 구체예에서, 상기 반감기는 12 내지 48시간 범위 이내일 것이다. 여전히 추가 구체예에서, 상기 반감기는 12 내지 26시간 범위 이내일 것이다.

상기 범위 이외에, 또는 달리, 본 발명은 1 mg/min/ml 이상 범위 이내에서 AUC 값(곡선하면적)을 갖는 본 발명에 따른 리간드 또는 리간드를 포함하는 조성물을 제공한다. 일 구체예에서, 상기 범위의 하한은 5, 10, 15, 20, 30, 100, 200 또는 300 mg/min/ml이다. 또한, 또는 달리, 본 발명에 따른 리간드 또는 조성물은 최대 600 mg/min/ml의 범위에서 AUC를 갖는다. 일 구체예에서, 상기 범위의 상한은 500, 400, 300, 200, 150, 100, 75 또는 50 mg/min/ml이다. 유리하게도, 본 발명에 따른 리간드는 하기로 구성된 군에서 선택된 범위에서 AUC를 가질 것이나, 바람직하게는, 이로 제한되지 않는다: 15 내지 150mg/min/ml, 15 내지 100 mg/min/ml, 15 내지 75 mg/min/ml, 및 15 내지 50 mg/min/ml.

일 구체예에서, (하나 이상의) 반감기 연장 모이어티(예를 들어, 알부민, 트랜스페린 및 이의 단편 및 유사체)는 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 dAb와 컨주게이션되거나 결합된다. 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인-결합 포맷으로 사용하기 위한 적합한 알부민, 알부민 단편 또는 알부민 변이체의 일예는, 교시내용이 참고문헌으로서 본원에 통합되는, WO 2005077042호에 개시되어 있고, 본 명세서의 교시의 일부를 이룬다.

항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인-결합 포맷으로 사용하기 위한 적합한 알부민, 단편 및 유사체의 추가 일예들은, 교시내용이 참고문헌으로서 본원에 통합되는 WO 03076567호에 개시되어 있고, 본 명세서의 교시의 일부를 이룬다.

(하나 이상의) 반감기 연장 모이어티(예를 들어, 알부민, 트랜스페린 및 이의 단편 및 유사체) 또는 기타 융합 단백질이 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드와 dAbs를 포매팅하기 위해 사용되는 경우, 이것은 임의의 적합한 방법을 사용하여, 예컨대, 직접 융합 to 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인(예를 들어, dAb)에 대한 직접 융합에 의해, 예를 들어, 융합 단백질을 엔코딩하는 단일 뉴클레오티드 컨스트럭트를 사용함으로써, 컨주게이션될 수 있다. 상기 융합 단백질은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 N- 또는 C-말단에 위치된 반감기 연장 모이어티와 함께 단일 폴리펩티드로써 엔코딩된다. 달리, 컨주게이션은 모이어티들 사이의 펩티드 링커, 예를 들어, WO 03076567호 또는 WO 2004003019호에 기재된 것과 같은 펩티드 링커를 사용하여 달성될 수 있다(이러한 링커에 대한 교시는 본원의 교시에 참고문헌으로써 통합되어 본 발명에 사용하기위한 일예들을 제공한다). 전형적으로, 생체내에서 혈청 반감기를 증강시키는 폴리펩티드는 생체내에서 천연적으로 생겨나고, 개체(예를 들어, 인간)으로부터의 원치 않는 물질을 제거하는 내생성 메카니즘에 의한 변성 또는 제거에 내성을 나타내는 폴리펩티드이다. 예를 들어, 생체내에서 혈청 반감기를 향상시키는 폴리펩티드는 세포외 기질(extracellular matrix)로부터의 단백질, 혈액에서 발견되는 단백질, 혈뇌 장벽에서 또는 뇌 조직내에서 발견되는 단백질, 신장, 간, 폐, 심장, 피부 또는 뼈에 자리잡고 있는 단백질, 스트레스 단백질, 질병-특이적 단백질, 또는 Fc 운송에 관여하는 단백질 중에서 선택될 수 있다.

본원 전체에 기재된 본 발명의 구체예들에서, 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인 "dAb"의 사용 대신, 당업자는 DC-SIGN에 결합하는 본 발명의 dAb의 하나 이상 또는 모두 3개의 CDRs을 포함하는 폴리펩티드 또는 도메인(예를 들어, 적합한 단백질 스캐폴드 또는 골격 상으로 이식된 CDRs, 예를 들어, 어피바디, SpA 스캐폴드, LDL 수용체 클래스 A 도메인 또는, 예를 들어, F 도메인)을 사용할 수 있다. 따라서, 전체로서 상기 교시는 dAb 대신하여 그러한 도메인을 사용하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드의 교시를 제공하는 것으로 고려된다. 이와 관련하여, WO 2008/096158호를 참조하라.

일반적으로, 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제는 약제학적으로 적절한 담체와 함께 정제된 형태로 사용될 수 있을 것이다. 전형적으로, 이러한 담체는 수성 또는 알코올성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액, 염수 및/또는 완충 매질을 포함하는 임의의 것을 포함한다. 비경구 비히클은 소듐 클로라이드 용액, 링거(Ringer)의 덱스트로즈, 덱스트로즈 및 소듐 클로라이드 및 락테이트화된(lactated) 링거액을 포함한다. 현탁액 중에 폴리펩티드 복합체를 유지하는 것이 필요하다면, 적합한 생리학적으로 허용되는 애주번트가 증점제(thickeners), 예컨대, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴 및 아기네이트 중에서 선택될 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인은 미셀 또는 리포좀과 같은 비히클 상에 배열될 수 있다.

정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충물 및 전해질 보충물, 예컨대, 링거의 덱스트로즈에 기반한 것들을 포함한다. 보존제 및 기타 첨가물, 예컨대, 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제 및 불활성 기체가 또한 존재할 수 있다(Mack (1982) Remington 's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition). 연장 방출 제형을 포함하는, 다양한 적합한 제형이 사용될 수 있다.

본 발명의 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제는 별개로 투여되는 조성물로서 또는 다른 제제와 연계하여 사용될 수 있다. 약제학적 조성물은, 이들이 투여하기에 앞서 풀링되든 그렇지 않든 간에, 본 발명의 리간드와 연계하여 다양한 세포독성 또는 기타 물질이 "칵테일", 또는 심지어 상이한 표적 항원 또는 에피토프를 사용하여 선택된 리간드와 같은, 상이한 특이성을 갖는 본 발명에 따른 리간드의 조합물을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여 경로는 당업계의 통상의 기술자에게 흔히 알려진 경로들 중 임의 경로일 수 있다. 이로만 국한되는 것은 아니지만 면역치료법을 포함하는, 치료법의 경우, 본 발명의 선택된 면역글로불린 단일 가변 도메인은 표준 기법에 따라 임의의 환자에게 투여될 수 있다.

투여는, 비경구적, 정맥내, 근육내, 복강내, 경피, 폐 경로, 또는 적절하게는, 카테터를 사용한 직접 주입을 포함하는, 임의의 적절한 방식에 의해 이루어질 수 있다. 투여의 용량 및 빈도는 환자의 연령, 성별 및 상태, 다른 약물의 동시 투여, 임상의에 의해 고려되는 금기사항(counterindications) 및 기타 파라미터에 좌우될 것이다. 투여는 지시된 바와 같이 국소(예를 들어, 폐 투여, 예를 들어, 비내 투여에 의한 폐로의 국소 전달) 또는 전신으로 이루어질 수 있다.

본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제는 저장을 위해 동결건조되고 사용하기에 앞서 적합한 담체 중에서 재구성될 수 있다. 이 기술은 관용적인 면역글로불린에 효과적인 것으로 드러났고, 당업계에 공지된 동결건조 및 재구성 기술이 사용될 수 있다. 당업자는 동결건조 및 재구성이 항체 활성 손실도의 변화를 야기시킬 수 있다(예를 들어, 관용적인 면역글로불린, IgM 항체는 IgG 항체보다 훨씬 더 크게 활성의 손실을 나타내는 경향이 있음)는 것과 사용 수준이 보상을 위해 상향 조정되어야 할 수 있다는 것을 이해할 것이다.

본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제 또는 이의 칵테일을 함유하는 조성물은 예방적 및/또는 치료적 처치를 위해 투여될 수 있다. 특정 치료적 적용에서, 선택된 세포의 집단의, 적어도 부분적 저해, 억제, 조절, 사멸, 또는 기타 다른 측정가능한 파라미터를 달성하기에 적절한 양이 "치료학적으로-유효한 용량(therapeutically-effective dose)"으로 정의된다. 이러한 투여량을 달성하는데 필요한 양은 질병의 극심도 및 환자 자신의 면역계의 전반적인 상태에 의존할 것이나, 일반적으로 투여량 범위는 체중 킬로그램 당 0.005 내지 5.0 mg의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 예를 들어, dAb 또는 길항제이고, 0.05 내지 2.0 mg/kg/용량의 용량이 더 흔히 사용된다. 예방적 적용의 경우, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 함유하는 조성물 또는 이의 칵테일은 또한 질병의 발병을 예방, 억제 또는 지연(예를 들어, 진정(remission) 또는 정지를 지탱하기 위해, 또는 급성기를 예방하기 위해)하기 위해, 비슷하거나 조금 더 낮은 투여량으로 투여될 수 있다. 당업자는 질병을 치료, 억제 또는 예방하기 위하여 적절한 투약 간격을 결정할 수 있을 것이다.

본원에 기재된 조성물을 사용한 치료 또는 치료법은, 치료 전에 존재하는 그러한 증상들과 비교하여, 또는 그러한 조성물로 치료되지 않는 개체(인간 또는 모델 동물) 또는 기타 적합한 대조군에서 그러한 증상과 비교하여, 하나 이상의 증상이 감소(예를 들어, 10% 이상 또는 임상 평가 척도 상 1점 이상)되면, "유효"한 것으로 간주된다. 증상은 표적으로 삼은 질병 또는 장애에 따라 명백히 달라질 것이나, 당업계의 통상의 임상의 또는 기술자에 의해 측정될 수 있다. 그러한 증상은, 예를 들어, 질병 또는 장애의 하나 이상의 생화학적 지시자의 수준(예를 들어, 질병과 관련된 효소 또는 대사산물의 수준, 영향받은 세포수 등)을 모니터링함으로써, 물리적 징후(예를 들어, 염증, 종양 크기 등)를 모니터링함으로써, 또는 승인된 임상 평가 척도에 의해, 측정될 수 있다. 10% 이상 또는 해당 임상 척도 상에서 1점 이상 질병 또는 장애 증상의 지연된(예를 들어, 1일 이상, 또는 더 긴 기간) 감소는 "유효한" 치료의 지표이다. 유사하게, 본원에 기재된 조성물을 사용하여 실행된 예방은 하나 이상의 증상의 발병 또는 극심도가 조성물로 치료되지 않은 유사한 개체(인간 또는 동물 모델)에서 그러한 증상과 비교하여 지연, 감소 또는 폐기된다면 "유효한" 것이다.

본 발명에 따른 면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제 또는 이의 칵테일을 함유하는 조성물은 포유동물 내의 선택된 표적 세포 집단의 변형, 불활성화, 사멸 또는 제거를 보조하기 위한 예방적 및 치료적 세팅에서 사용될 수 있다. 또한 조성물은 HIV, C형 간염 또는 에볼라 바이러스와 같은 감염성 물질의 진입을 정상적으로 매개하는 수용체를 블록킹함으로써 감염을 차단할 수 있다. 또한, 본원에 기재된 폴리펩티드의 선택된 레퍼토리는 체외에서 또는 시험관내에서 선택적으로 표적 세포 집단 또는 세포의 이종성 집단으로부터의 감염성 물질을 사멸, 감소 또는 달리 효과적으로 제거시키는데 사용될 수 있다. 포유동물로부터의 혈액은 리간드와 함께 체외에서 조합될 수 있고, 그 결과로써 바람직하지 않은 세포 또는 감염성 물질은 표준 기술에 따라 포유동물로의 복귀를 위해 혈액으로부터 사멸되거나 달리 제거될 수 있다.

본 발명에 따른 리간드(예를 들어, 길항제)를 함유하는 조성물은 포유동물에서 선택된 표적 세포 집단의 변형, 불활성화, 사멸 또는 제거를 보조하기 위하여 예방적 및 치료적 세팅에서 사용될 수 있다.

면역글로불린 단일 가변 도메인, 폴리펩티드, 리간드 또는 결합제는 하나 이상의 추가의 치료제 또는 활성제와 함께 투여되고/거나 제형화될 수 있다. 면역글로불린 단일 가변 도메인(예를 들어, dAb)이 추가의 치료제와 함께 투여되는 경우, 리간드는 상기 추가 치료제의 투여 이전, 동시 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 리간드와 추가 물질은 치료적 효과의 오버랩을 제공하는 방식으로 투여된다.

본원에 사용된, 용어 "용량(dose)"은 한번에 모두(단위 용량), 또는 규정된 시간 간격에 걸쳐 2회 이상 투여로 투여되는 리간드의 양을 의미한다. 예를 들어, 용량은 (예를 들어, 1회 투여, 또는 2회 이상 투여에 의해) 1일(24시간)(일일 용량), 2일, 1주, 2주, 3주 또는 1개월 이상의 경과에 걸쳐 피검체에 투여되는 리간드(예를 들어, 표적 항원에 결합하는 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 리간드)의 양을 의미할 수 있다. 용량들 간의 간격은 임의의 바람직한 시간의 양일 수 있다.

본 발명은 단지 설명을 하기 위한 목적으로, 하기 실시예들에서 더 상세히 기술된다.

실시예

실시예 1. DC - SIGN 에 관한 도메인 항체의 납 선별( lead selection ) 및 특성규명.

4G 및 6G 파지 라이브러리에서 유래된 도메인 항체를 얻었다. 상기 4G 라이브러리는 공지의 분자 구조로 항원과 접촉되게 하는 항원 결합 부위 내의 위치들에 통합된 측쇄 다양성과 함께 VH (V3-23[locus] DP47[V Base Entry] 및 JH4b) 및 VL(012/02[locus] DPκ9 [V Base Entry] 및 Jκ1)에 관한 단일 인간 프레임워크에 기반한다(WO 2005093074호 참조). 중요하게는, 이러한 위치들은 또한 성숙 레퍼토리에서 다양성이 매우 높다. 이러한 프레임워크에 의해 엔코딩된 표준 구조(VH: 1-3, Vκ: 2-1-1)는 인간 항체 레퍼토리에서 단연 가장 공통적이다. 중쇄의 CDR3는 여전히 항원 결합 표면을 형성할 수 있도록 가능한 짧게 디자이되었다. 라이브러리가 선별될 수 있고 친화력은 선택된 클론의 서열을 알지 못한 성숙될 수 있다.

6G 라이브러리는 공지의 분자 구조로 항원과 접촉되게 하는 항원 결합 부위 내의 위치들에 통합된 측쇄 다양성과 함께 VH(V3-23[locus] DP47[V Base Entry] 및 JH4b) 및 VL(012/02[locus] DPκ9[V Base Entry] 및 Jκ1)에 관한 단일 인간 프레임워크에 기반한다(WO 04101790호 참조).

6G dAb 라이브러리는 4G 라이브러리의 폴딩 효율을 개선시키기 위해 추가의 다양성을 포함한다. VH와 Vκ 서열에서, 소수의 아미노산들만 폴딩 효율에 중요하다. 이들은 VH DP-47의 H1 루프 내 및 VK DPK9 내 프레임워크 2/CDR2의 경계에 자리하고 있다. 라이브러리 6G에서, 개선된 폴딩을 동반한 dAbs를 선별할 가능성을 개선시키기 위해 이러한 영역을 다양화(diversification)를 위한 표적으로 삼았다. 위치 32와 49의 티로신은 각각 VH와 VK 스캐폴드에서 다변화되었다. Vκ 스캐폴드에서, 잔기 27 및 89은 또한 연속되고 더 많이 다변화된 표면을 생성시키기 위해 다변화되었다. 개선된 폴딩은 단백질-A 또는 -L에 대한 제거에 앞서 일차(primary) 파지 라이브러리의 열 처리에 이해 선별되었다. 그런 다음, 라이브러리는, 일차 라이브러리에서 유래된, 풀링된 CDR 1+2 라이브러리 단편과 풀링된 CDR3 단편의 라이브러리를 재조합시킴으로써 생성되었다.

선별을 위해, 9×HIS 태그, 링커 및 DC-SIGN의 C-말단에 상응하는 인간 DC-SIGN 또는 DC-SIGN 펩티드(아미노산 서열: HHHHHHHHH-SGSG-KKSAASCSRDEEQFLSPAPATPNPPPA (SEQ ID NO: 37))를 Maxisorp 면역튜브(Nunc)(PBS 또는 0.1 M NaHCO₃ 완충액(pH 9.6) 중의 5-50 μg/ml)에 코팅시켰다. 전형적으로, 50 μg/ml 항원이 제 1 라운드의 선별에서 1 ml PBSM 중의 10¹² TU의 파지로 사용된다. 후속 라운드에서, 항원의 양은 각 라운드에서 줄어든다. 파지/항원 혼합물은 1시간 동안 인큐베이션된다. 면역튜브 비드는 PBST로 8회 세척되고 PBS로 8회 세척된다. 결합된 파지를 10분 동안 PBS 중의 100 μg/ml 트립신의 0.5 ml로 용리시킨 후, 이를 사용하여 30분 동안 37℃에서 2 ml의 대수기(log-phase) E. coli TG1 세포를 감염시킨다. (파지 역가를 위한) 연속 희석과 라이브러리 플레이팅을 2×TY-Tet 아가 플레이트에서 실행하였다. 다음 선별 라운드의 경우, 세포를 플레이트에서 긁어내고, 이것을 파지 증폭을 위해 37℃에서 200 ml의 2×TY-Tet에 접종하였다. 상청액을 파지 제조를 위해 사용하였고, 박테리아 세포 펠렛을 사용하여 박테리아 발현 벡터 pDOM5 내로 풀링된 dAb 유전자의 서브클로닝을 위한 파지 dsDNA를 분리하였다(아래 참조).

파지 ELISA의 경우, ELISA 웰을 PBS 또는 0.1 M NaHCO₃ 완충액(pH 9.6) 중에서 1-10 μg/ml로 DC-SIGN 또는 DC-SIGNR(R&D Cat nr 162-D2)로 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 2% 스킴-밀크 분말을 함유한 PBS(PBSM)로 상기 웰을 블록킹시킨 후, 파지를 1시간 동안 PBSM에서 인큐베이션하였다. PBS로 세척한 후, 결합된 파지를 기질로서 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘을 사용하는 항-M13 모노클로날 항체 (Amersham)와 호스래디쉬 퍼옥시다제의 컨주게이트를 사용하여 검출하였다.

DC-SIGN를 인지하나 DC-SIGNR를 인지하지 못한 특이적 포지티브 파지를 2 및 3 라운드의 선별 후 획득하였다. 선택된 dAb 유전자를 pDOM4 파지 벡터로부터 pDOM5로 서브클로닝하였다. (WO 2007/085815호에 기재된, pDOM4는 유전자 III 시그날 펩티드 서열이 효모 당지질 부착 표면 단백질(glycolipid anchored surface protein, GAS) 시그날 펩티드로 대체된 Fd 파지 벡터의 유도체이다(WO 2005/093074). 또한 pDOM4는 선도 서열과 유전자 III 사이에 c- myc 태그를 함유하고 있으며, 이 태그는 상기 유전자 III를 프레임내의 제자리에 위치시킨다.). pDOM5는 LacZ 프로모터의 조절하의 pUC119-기반 발현 벡터이다.

dAbs의 상청액내로의 발현은 N-말단에서 범용 GAS 선도 서열 시그날 펩티드에 융합에 의해 보장된다(예를 들어, WO 2005/093074호에 기재되어 있음). SalI 클로닝 부위를 수용하기 위해 폴리링커 내에 존재하는 Ser-Thr 잔기들이 dAbs 앞에 존재한다. 또한, c- myc-tag를 dAbs의 C-말단에 부착시켰다. E. coli HB2151 세포의 형질변형후, 콜로니를 사용하여 카르베니시린(carbenicillin)(100 μg per mL)이 보충된 50 내지 500 mL의 테리픽 브로쓰(Terrific Broth) 배지에 접종하였다. 접종을 제조업자의 사용설명서에 따라 OVERNIGHT EXPRESS™ SYSTEM 1(고-수준 단백질 발현 시스템, Novagen)으로 수행하였다. 배양물을 250 rpm에서 진탕시키면서 30℃에서 24 내지 48시간 동안 인큐베이션하였다. 원심분리(20분 동안 4,000 rpm)에 의한 세포 펠렛화후, 상청액을 0.45 μm 필터를 사용하여 여과시키고, VH dAbs를 위한 스트림라인-단백질 A 비드(Amersham Biosciences, 결합 용량: 비드의 mL 당 5 mg의 dAb), 또는 VL dAbs를 위한 단백질 L-세파로즈 비드(Affitech, 결합 용량: 비드의 mL 당 2 mg의 dAb)와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 그런 다음 비드를 드림 컬럼에 패킹시키고, 10 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 결합된 dAbs를 각각, VH 및 VL dAbs에 대해 0.1 M 글리신-HCl(pH 2.0 또는 3.0)으로 용리시켰다. 1M Tris-HCl(pH 8.0)로 중화시킨후, 단백질 샘플을 PBS에서 투석시키고, Vivaspin 5-kDa 농축기(Vivascience)에서 농축시킨 다음 4℃에 저장하였다. 단백질 순도를 12% 아크릴아미드 Tris-글리신 겔(Invitrogen)에서 SDS-PAGE후 시각 분석으로 평가하였다. 단백질 농도 및 수율(박테리아 배양물 L 당 mg)을 280 nm에서 아미노산 조성물로부터 계산된 흡광계수(extinction coefficient)를 이용하여 측정하였다.

가용성 dAbs로 ELISA 분석을 위해, 항원을 파지 ELISA 프로토콜에 기재된 대로 코팅시켰다. 웰을 2% Tween(PBST)을 함유하는 PBS로 블록킹시키고, dAbs를 1시간 동안 PBST에서 인큐베이션시켰다. PBS로 세척한 후, 결합된 dAbs를 mAb 9E10(Sigma, 1/2000 희석비)으로 검출하고 난 다음 후속하여 호스래디쉬 퍼옥시다제와 컨주게이션된 래빗 항-마우스(Sigma, 1/2000 희석비)로 검출하였다. 또한 ELISA를 실행하여 그 결과로써 얻은 dAbs를 단백질 L(1 ug/ml)의 존재하에 인큐베이션하였다.

dAbs는 가용성 dAbs로 시험하였을 때 임의의 포지티브 ELISA 시그널을 양산하지 못하였다. 모노머 dAbs로서 친화력이 매우 낮았을 가능성이 잇다.

단백질 L 교차-결합의 경우, 129개 결합 클론들이 확인되었다. 이들의 서열을 분석하고, DC-SIGN과 DC-SIGNR에 대한 ELISA로 결합에 관해 재시험하였다. 40개의 독특한 클론들이 확인되었다. 일부 클론들은 단백질 L의 존재하에 DC-SIGN에 특이적으로 결합되었다(DC-SIGNR에 특이적으로 결합되지 않았음).

파지로서 DC-SIGN에 특이적으로 결합된(DC-SIGNR에 특이적으로 결합되지 않았음) 몇몇 클론들이 확인되었으나 이들은 가용성 dAbs로서 검출불가능한 결합을 제공한다. 이것은 몇몇 VH 클론들을 양산하였다(도 1 참조).

몇몇 선별 방법을 실해하여 DC-SIGN과 DC-SIGN 펩티드(DC-SIGN의 독특한 C-말단)에만 결합하는 클론들을 확인하였다.

선별 방법:

1. DC-SIGN 단백질로 라운드 1, 라운드 2 및 라운드 3.

2. DC-SIGN 단백질로 라운드 1 및 라운드 2 및 DC-SIGN 펩티드에 대한 라운드 3.

3. DC-SIGN 단백질로 라운드 1 및 라운드 3 및 DC-SIGN 펩티드에 대한 라운드 2.

상기 방법들로부터의 총 2200개의 클론들을 파지 ELIAS로 스크리닝하였다. 1000개의 클론들을 DC-SIGN 펩티드를 이용한 선별로 스크리닝하였다(DC-SIGN 단백질로 R1 및 R3 및 상기 펩티드에 대한 R2). 선별된 클론들의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열들은 도 3과 4에 제시되어 있다. 일차 스크리닝으로 얻은 7개의 포지티브 파지들 중 1개의 클론(LIP1-33)만 DC-SIGN과 DC-SIGN 펩티드에 특이적으로 결합하는 것으로 확인되었다. 또한 DC-SIGN 펩티드에 결합하는 LIP1-33은 DC-SIGN과 HIS 태깅되고 비오티닐화된 DC-SIGN 펩티드에 의해 억제될 수 있으나 대조군 단백질로 억제될 수 없다는 것이 확인되었다(데이타 미제시).

DC-SIGN 선별로부터의 LIP1-33 및 다른 DC-SIGN 특이적 파지 VH 클론들을, GHHGHHGHHGHHGHH 태그(SEQ ID NO: 38)를 C-말단에 부착시킨, pDOM5로 재클로닝시켰다. 가용성 dAbs를 발현시키고 정제하였다. VH dAb HEL4(Jespers et al, J. Mol. Biol. (2004) 337, 893-903))를 음성 대조군으로써 포함시켰다.

표 1: GHHGHHGHHGHHGHH 태그(1 OxHIS )를 지니는 dAbs ( SEQ ID NO : 38)

본 발명은 이의 구체예들을 참조하여 특별히 제시 및 설명되었으나, 당업자는 형태와 세부내용에서 다양한 변형이 첨부된 특허청구범위에 속하는 본 발명의 범위를 벗어나지 않으면서 행해질 수 있다는 것을 이해할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Domantis Limited de Wildt, Rudolf Maria <120> Ligands that have binding specificity for DC-SIGN <130> DB00060 WO <150> 61/107085 <151> 2008-10-21 <160> 96 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 325 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-12 <400> 1 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtag gccgattggg actaatttat attggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatcgttggg ggttcctttt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtggtcag cgggcgcggt atcctggtac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acggg 325 <210> 2 <211> 325 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-13 <400> 2 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggtatttgg caggagttaa agtggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaggctcct gatctatagg gggtccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag tcgttttatc cgccttatac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acggg 325 <210> 3 <211> 325 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-15 <400> 3 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtcg ggcgattggt acgtatttag cttggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatcttgtgg gggtccgtgt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtgctcag ttggcgcagc gtccttcgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acggg 325 <210> 4 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-17 <400> 4 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gaggattggt cataagttac attggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatctt gggtcccggt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag aatgcttcta ggccttatac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgg 324 <210> 5 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-19 <400> 5 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gaggattggg cgtgatttag agtggtacca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattgg gggtccattt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag actatgcgtt atccttttac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgg 324 <210> 6 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-21 <400> 6 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggtatttgg caggcgttac gttggtacca gcagaaacca 120 gggagagccc ctaagctcct gatctataat gggtccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgcttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag cgtttttatc ctccttatac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgg 324 <210> 7 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-22 <400> 7 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gaatattatg acgcatttag cttggtatca gcagaaacca 120 gggaaggccc ctaagctcct gatctatagt cattcctatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag aagtattggc ctccttttac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgg 324 <210> 8 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-23 <400> 8 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga ccgtgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca ggatatttgg cgtgagttaa ggtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatcgt gcttccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cgtctcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg ctacgtacta ctgtcaacag acgttttatc ctccttatac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgg 324 <210> 9 <211> 361 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-26 <400> 9 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt caccttttcg cattatacga tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtctcaagt atttcgtcta ctggttttaa gacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggat accgcggtat attactgtgc gaaatggaat 300 cctcataggt cgacgtattt tgactactgg ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360 g 361 <210> 10 <211> 361 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-28 <400> 10 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttgtt gctactccta tgcattgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagggtgg 300 gatccttctt tggagcggtt tgactactgg ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360 g 361 <210> 11 <211> 358 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-30 <400> 11 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttagt gggtatagta tggcgtgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtctcacag attgggccgc ttggtgttaa gacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaactgacg 300 tcggatgctc atgattttga ctactggggt cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagcg 358 <210> 12 <211> 364 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-32 <400> 12 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttgtt atgtatccga tgggttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcaaag attgggcctc atggtcggct gacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaagggaat 300 ctgtgggaga tgagtcgtag gtttgactac tggggtcagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agcg 364 <210> 13 <211> 358 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-24 <400> 13 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgcgcag cctccggatt cacctttagt agtactggta tgcattgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcatcg attgcggctg atggtcatac tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaatctccg 300 tgggtgctgg ataggtttga ctactggggt cagggaacnc tggtcaccgt ctcgagcg 358 <210> 14 <211> 352 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-25 <400> 14 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttccg gatgcggata tggtgtgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcatct atttctgatc atggttttaa tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggat accgcggtat attactgtgc gaaatctcct 300 ttggcgacgt ttgactactg gggtcaggga accctggtca ccgtctcgag cg 352 <210> 15 <211> 364 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-27 <400> 15 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttgag cagactgata tgcattgggc ccgccaggct 120 ccagggaagg gtccagagtg ggtctcatct atttcgcctt tgggtgcttt tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggat accgcggtat attactgtgc gaaaagtccg 300 ctggttcgta ataatggtca gtttgactac tggggtcagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agcg 364 <210> 16 <211> 358 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-29 <400> 16 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttgat cgtcgtgcta tggggtgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcatct attgagtcgg atggtactag gacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggat accgcggtat attactgtgc gaaacatcct 300 ggtagttctt atgtttttga ctactggggt cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagcg 358 <210> 17 <211> 367 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-31 <400> 17 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttgag atgtatggta tggcttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcatct attagtcctt cgggtcgtca tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggat accgcggtat attactgtgc gaaacatcct 300 cttgatctgg gggagtctgg tgagtttgac tactggggtc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcgagcg 367 <210> 18 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-33 <400> 18 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgtctc 60 tcctgtgcag cctccggatt cacctttccg tcgggtacga tggggtgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctagagtg ggtctcatat attgatccga gtggttttat gacttactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcccgcgaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgccgaggac accgcggtat attactgtgc gaaaagtatt 300 gtgccgcgtt cgggtacttt tgactactgg ggtcagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 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Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Tyr Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 21 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-15 <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Ala Ile Gly Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Leu Trp Gly Ser Val Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Leu Ala Gln Arg Pro Ser 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 22 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LIP1-17 <400> 22 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Gly His Lys 20 25 30 Leu His Trp Tyr 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Sequence <400> 55 Ala Thr Pro Met His 1 5 <210> 56 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 56 Arg Arg Ala Met Gly 1 5 <210> 57 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 57 Gly Tyr Ser Met Ala 1 5 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 58 Met Tyr Gly Met Ala 1 5 <210> 59 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 59 Met Tyr Pro Met Gly 1 5 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 60 Ser Gly Thr Met Gly 1 5 <210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 61 Gly Gly Ser Phe Leu Gln Ser 1 5 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 62 Arg Gly Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 63 Trp Gly Ser Val Leu Gln Ser 1 5 <210> 64 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 64 Leu Gly Ser Arg Leu Gln Ser 1 5 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 65 Trp Gly Ser Ile Leu Gln Ser 1 5 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 66 Asn Gly Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 67 Ser His Ser Tyr Leu Gln Ser 1 5 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 68 Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 69 Ser Ile Ala Ala Asp Gly His Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 70 Ser Ile Ser Asp His Gly Phe Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 71 Ser Ile Ser Ser Thr Gly Phe Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 72 Ser Ile Ser Pro Leu Gly Ala Phe Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 73 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 73 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> artficial sequence <400> 74 Ser Ile Glu Ser Asp Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 75 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 75 Gln Ile Gly Pro Leu Gly Val Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 76 Ser Ile Ser Pro Ser Gly Arg His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 77 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 77 Lys Ile Gly Pro His Gly Arg Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 78 Tyr Ile Asp Pro Ser Gly Phe Met Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 79 Gly Gln Arg Ala Arg Tyr Pro Gly Thr 1 5 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 80 Gln Gln Ser Phe Tyr Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 81 Ala Gln Leu Phe Gln Arg Pro Ser Thr 1 5 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 82 Gln Gln Asn Ala Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 83 Gln Gln Thr Met Ser Arg Pro Phe Thr 1 5 <210> 84 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 84 Gln Gln Arg Phe Tyr Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> 85 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 85 Gln Gln Lys Tyr Trp Pro Pro Phe Thr 1 5 <210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 86 Gln Gln Thr Phe Tyr Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> 87 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 87 Ser Pro Trp Val Leu Asp Arg Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 88 Ser Pro Leu Ala Thr Phe Asp Tyr Trp 1 5 <210> 89 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 89 Trp Asn Pro His Arg Ser Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 90 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 90 Ser Pro Leu Val Arg Asn Asn Gly Gln Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 91 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 91 Gly Trp Asp Pro Ser Leu Glu Arg Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 92 His Pro Gly Ser Ser Tyr Val Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 93 Leu Thr Ser Asp Ala His Asp Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 94 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 94 His Pro Leu Asp Leu Gly Glu Ser Gly Glu Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 95 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 95 Gly Asn Leu Trp Glu Met Ser Arg Arg Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 96 Ser Ile Val Pro Arg Ser Gly Thr Phe Asp Tyr Trp 1 5 10

Claims (29)

1. 항-DC-SIGN(dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing non-integrin; CD209) 면역글로불린 단일 가변 도메인.
2. 제 1항에 있어서, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인이, 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance)으로 측정할 때, 1 내지 50 μM의 해리 상수(K_d)로 인간 DC-SIGN에 결합하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
3. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 70% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 인간 DC-SIGN에 결합하는, 분리된 폴리펩티드.
4. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 폴리펩티드.
5. SEQ ID NO: 1(LIP1-12), SEQ ID NO: 2(LIP1-13), SEQ ID NO: 3(LIP1-15), SEQ ID NO: 4(LIP1-17), SEQ ID NO: 5(LIP1-19), SEQ ID NO: 6(LIP1-21), SEQ ID NO: 7(LIP1-22), SEQ ID NO: 8(LIP1-23), SEQ ID NO: 9(LIP1-26), SEQ ID NO: 10(LIP1-28), SEQ ID NO: 11(LIP1-30), SEQ ID NO: 12(LIP1-32), SEQ ID NO: 13(LIP1-24), SEQ ID NO: 14(LIP1-25), SEQ ID NO: 15(LIP1-27), SEQ ID NO: 16(LIP1-29), SEQ ID NO: 17(LIP1-31) 및 SEQ ID NO 18(LIP1-33)로 구성된 군에서 선택된 뉴클레오티드 서열과 60% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되며, 인간 DC-SIGN에 결합하는, 분리된 폴리펩티드.
6. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 어느 한 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 인간 DC-SIGN에 결합하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
7. SEQ ID NO: 32(LIP1-29), SEQ ID NO: 33(LIP1-30), 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
8. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
9. 25개 이하(no more than)의 아미노산 위치에서 변형되고,
   SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 포함하는,
   SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
   항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
10. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
11. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
12. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 포함하며,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
13. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 포함하며,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
14. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 포함하며,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
15. 25개 이하의 아미노산 위치에서 변형되고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중 어느 하나의 CDR1 서열과 50% 이상 동일한 CDR1 서열을 포함하며,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중 어느 하나의 CDR2 서열과 50% 이상 동일한 CDR2 서열을 포함하고,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중 어느 하나의 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 제시된 아미노산 서열들 중의 어느 한 아미노산 서열을 포함하는,
    항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
16. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR3 서열로 구성된 군에서 선택된 CDR3 서열과 50% 이상 동일한 CDR3 서열을 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
17. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR3 서열로 구성된 군에서 선택된 CDR3 서열을 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
18. CDR1, CDR2, 및 CDR3로 구성된 군에서 선택된, 하나 이상의 CDR을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인으로서,
    여기서 상기 CDR1, CDR2, 또는 CDR3가 SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 또는 SEQ ID NO: 36(LIP1-33) 중의 어느 하나의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 서열과 동일한, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
19. 저 친화력으로 DC-SIGN에 결합하는 제 1항 내지 제 18항중 어느 한 항에 청구된 것과 같은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
20. SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 결합을 억제시키고, DC-SIGN에 대한 결합 특이성을 지니는 리간드.
21. SEQ ID NO: 1(LIP1-12), SEQ ID NO: 2(LIP1-13), SEQ ID NO: 3(LIP1-15), SEQ ID NO: 4(LIP1-17), SEQ ID NO: 5(LIP1-19), SEQ ID NO: 6(LIP1-21), SEQ ID NO: 7(LIP1-22), SEQ ID NO: 8(LIP1-23), SEQ ID NO: 9(LIP1-26), SEQ ID NO: 10(LIP1-28), SEQ ID NO: 11(LIP1-30), SEQ ID NO: 12(LIP1-32), SEQ ID NO: 13(LIP1-24), SEQ ID NO: 14(LIP1-25), SEQ ID NO: 15(LIP1-27), SEQ ID NO: 16(LIP1-29), SEQ ID NO: 17(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 18(LIP1-33)로 구성된 군에서 선택된 뉴클레오티드 서열과 80% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 엔코딩되며,
    SEQ ID NO: 19(LIP1-12), SEQ ID NO: 20(LIP1-13), SEQ ID NO: 21(LIP1-15), SEQ ID NO: 22(LIP1-17), SEQ ID NO: 23(LIP1-19), SEQ ID NO: 24(LIP1-21), SEQ ID NO: 25(LIP1-22), SEQ ID NO: 26(LIP1-23), SEQ ID NO: 27(LIP1-26), SEQ ID NO: 28(LIP1-28), SEQ ID NO: 29(LIP1-30), SEQ ID NO: 30(LIP1-32), SEQ ID NO: 31(LIP1-24), SEQ ID NO: 32(LIP1-25), SEQ ID NO: 33(LIP1-27), SEQ ID NO: 34(LIP1-29), SEQ ID NO: 35(LIP1-31) 및 SEQ ID NO: 36(LIP1-33)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는,
    분리된 폴리펩티드.
22. DC-SIGN에 특이적으로 결합하나 DC-SIGNR에 특이적으로 결합하지 않는, 제 1항 내지 제 21항중 어느 한 항에 청구된 것과 같은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 펩티드.
23. 제 1항 내지 제 22항중 어느 한 항에 청구된 것과 같은 항- DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 엔코딩하는 분리된 핵산 또는 재조합 핵산.
24. 제 23항에 청구된 것과 같은 핵산을 포함하는 벡터.
25. 제 23항에 청구된 것과 같은 핵산 또는 제 24항에 청구된 것과 같은 벡터를 포함하는 숙주 세포.
26. 제 25항에 청구된 것과 같은 숙주 세포를 핵산 또는 벡터의 발현에 적합한 조건하에서 유지하고, 상기 유지의 결과로써, 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드가 생산되는 것을 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드의 생산 방법.
27. 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인으로서, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인이 LIP1-12, LIP1-13, LIP1-15, LIP1-17, LIP1-19, LIP1-21, LIP1-22, LIP1-23, LIP1-24, LIP1-25, LIP1-26, LIP1-27, LIP1-28, LIP1-29, LIP1-30, LIP1-31, LIP1-32 또는 LIP1-33 중의 어느 하나의 결합 특이성을 지니는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
28. 제 1항, 제 2항, 제 6항 내지 제 19항, 또는 제 22항중 어느 한 항에 청구된 것과 같은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인으로서, 상기 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 아미노산 서열이 N-말단에 ST 아미노산들을 추가로 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
29. 제 1항, 제 2항, 제 6항 내지 제 19항, 또는 제 22항중 어느 한 항에 청구된 것과 같은 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인으로서, 상기 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인의 아미노산 서열이 C-말단에 His-태그(tag)를 추가로 포함하는, 항-DC-SIGN 면역글로불린 단일 가변 도메인.
    
    

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