KR20110000356A - 미백 활성을 나타내는 까실쑥부쟁이 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 까실쑥부쟁이 (Aster ageratoides Turcz. var. ageratoides)의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 시험관 내 (in vitro) 실험에서 우수한 티로시나제 저해활성을 나타내고, 동물세포 내 실험에서 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내는 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

미백 활성을 나타내는 까실쑥부쟁이 추출물을 함유하는 화장료 조성물 {Cosmetic composition comprising an extract of Aster ageratoides Turcz. var. ageratoides having whitening activities}

본 발명은 까실쑥부쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

동아시아 여성들 특히 한국, 일본, 중국의 여성들에게 가장 관심이 큰 화장품 분야중 하나는 피부 미백이다, "피부 미백"이란 자외선, 스트레스, 호르몬 분비 이상 및 임신 등과 같은 환경 변화에 의해 피부 내에 색소의 생성이 과하게 일어나 발생하는 피부색의 변화를 정돈하여 주는 개념이라 할 수 있다, 이와 관련하여 가장 중요한 요소는 피부 색소인 멜라닌 (melanin)이다. 멜라닌은 표피 내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트 (melanocyte)에서 합성되고, 주변의 각질세포로 전이되어 피부색을 결정짓는다. 원래 멜라닌은 동물, 식물, 미생물 등에서 발견되는 검은 색소로 생육이나 발달에 필수적이진 않지만 어떤 환경에 대한 생존력과 경쟁력을 높여주는 물질이며, 특히 동물에서의 멜라닌은 피부병 및 악성 흑색종 (melanomas)과 관계가 있으며, 티로시나제 (tyrosinase)에 의해 티로신(tyrosine) 으로부터 생산되는 도파 멜라닌(DOPA melanin) 외에도 1,8-디히드록시나프탈렌 멜라닌 (DHN melanin; 1,8-Dihydroxynaphtalene melanin), 오르쏘-디페놀 멜라닌 (GDHB melanin; ο-diphenol melanin), 카테콜 멜라닌 (catechol melanin) 등이 보고되어 있다 (Bell AA and Wheeler MH, Annu. Rev. Phytopathol., 24, pp411-451, 1986). 멜라닌은 생물체에서 발견된 색소로는 특이하게 안정된 색소로서 거의 모든 용매에 불용이며, 추출이나 화학적인 취급이 쉽지 않다. 이 때문에 멜라닌의 화학적인 면에 대해 밝혀지지 않은 점들이 많고 연구의 진보도 부진한 편이다.

멜라닌 색소 합성 (melanogenesis) 과정은 멜라노사이트 (melanocytes)라고 하는 특별히 분화된 세포의 멜라노좀 (melanosome)이라는 소기관에서 일어나는 것으로 명확하게 밝혀지고 있다.

즉, 피부색은 멜라닌의 함량, 분포 등에 따라 결정되며 멜라노사이트 (melanocyte) 내에서 생성된 후 세포 외부로 방출되는 멜라노좀의 수와 분포에 연관되어 있다. 피부의 과색소침착 (hyperpigmentation)은 피부의 염증 반응 이후의 체내 호르몬 이상, 유전질환 및 자외선 조사 등 여러 요인에 의해 발생될 수 있는데, 주된 요인은 멜라닌 색소 합성 이상 및 분포 이상에 의한 것이다. 멜라닌의 주요한 기능은 산소 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것으로 멜라닌이 많다는 것은 물리적, 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호하기위한 효과적인 대응체계를 가지고 있음을 의미한다.

피부에서 색소침착 방지는 다음의 세 가지 관점에서 연구가 가능하다. 1) 멜라닌 합성의 주효소인 티로시나제 (tyrosinase) 활성을 조절하기 위하여 티로시 나제 합성 저해물질이나 티로시나제의 기질에 대한 길항제 (antagonist) 개발, 2) 동물의 멜라닌 생합성 장소인 멜라노사이트의 기능을 저하시키기 위해 멜라노사이트에 독성을 나타내는 물질 개발, 3) 3,4-디히드록시페닐알라닌 (DOPA)의 산화방지를 위해 3,4-디히드록시페닐알라닌 환원물질 개발 및 멜라닌 생성기구인 제 1효소 티로시나제와 도파크롬 (DOPAchrome)에서 5,6-디히드록시인돌-2-카르복시산 (DHICA; 5,6-Dihydroxyindole-2-carboxylic acid)로의 변환을 촉매하는 제 2효소인 도파크롬 튜토머라제 (DOPAchrome tautomerase) 또는 5,6-디히드록시인돌-2-카르복실산에서 인돌-5,6-퀴논-2-카르복시산 (indole-5,6-quinone-2-carboxylic acid)으로의 변환을 촉매하는 제 3의 효소의 활성 조절 등이 주목받고 있다.

과도한 멜라닌의 침착은 피부 등의 병리적 문제의 원인이 되기도 하지만, 기미, 주근깨, 점, 검버섯과 같은 미용적인 측면의 문제로 인식되고 있으며, 따라서 멜라닌 형성을 억제할 수 있는 미백제에 대한 관심이 증가되고 많은 연구가 진행되고 있다.

티로시나제 (tyrosinase ; monophenol, dihydroxy-L-phenylalanine : oxygen oxidoreductase, EC 1.14.18.1)는 넓은 범위의 페놀화합물을 기질로 이용하는 구리함유 효소로서, 티로신 (tyrosine)을 기질로 이용하여 L-3,4-디하이드록시페닐알라닌 (L-3,4-dihydroxyphenylalanine)을 생성시키고 이를 다시 도파퀴논 (L-DOPAquinone)으로 전이시키는 연속된 효소적 산화 (hydroxylation and oxidation)를 거쳐, 각 생성물의 중합반응에 의해 멜라닌 (melanin)이 생합성 된다. 자외선에 의하여 멜라노사이트의 유사분열이 일어나 멜라노사이트가 활성화 되고, 활성화된 멜라노사이트에서는 티로시나제 합성이 촉진되어 멜라닌의 생성이 촉진되며 과량 생성된 멜라닌은 결국 표피 밖으로 운반 배출 되어 기미, 주근깨와 같은 색소 침착의 원인이 된다. 멜라닌이 비정상적으로 과잉 생산되면 기미나 주근깨를 생성하며, 이와 반대로 적게 생산되면 백반등과 같은 피부 병변이 유발된다. 색소 침착은 외부로부터 자외선, 염증 등의 각종 자극에 의해 발생되며, 이 색소침착의 정도는 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트가 반응한 양이다. 색소침착 메커니즘의 중심이 되는 것은 티로시나제이다.

현대는 아름다움과 건강을 중시하는 사회 문화적 추세에 따라 화장품은 단순히 치장을 넘어서서 건강한 피부를 유지 관리하기 위한 생활 필수품으로 자리잡게 되었다. 또한, 자연 지향적이고 환경 친화적인 소비 추세에 따라 다양한 천연소재를 이용한 기능성을 가진 기능성 화장품의 개발이 활발히 이루어지고 있다. 이러한 화장품 산업은 화학, 생명과학, 약학, 생리학 등의 기초과학과 응용기술이 바탕이 되는 전형적인 정밀화학 산업이며 최근 화장품 산업이 급속도로 발전함에 따라 제품의 피부 안전성 등이 확보되면서 효능에 주목하게 되었다.

국내에서 출원되는 기능성화장품 관련 특허를 분석하여 보면 미백, 주름개선 및 자외선 차단의 기능을 효과적으로 나타내는 활성성분에 관한 내용이 주를 이루며 특히, 하얀 피부를 갈망하는 동양권을 중심으로 관심이 집중되고 있는 피부 미백에 관한 저자극, 고효능 원료 및 그 원료의 안정화에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 미백활성 성분별로 천연식물 추출물이 44%, 신규 화합물이 25%, 기존 미백성분으로 알려진 비타민 C 유도체 등 그 밖의 물질이 31%로 나타났고, 천연식 물을 통한 새로운 미백물질의 탐색은 국내 뿐 만아니라 전 세계적으로 큰 관심을 보이고 있으며 기능성을 확인하여 유효물질을 찾아내는 것은 매우 중요하게 여겨지고 있다.

현재 미백화장품 소재로서 아스코르빈산 (ascorbic acid), 코직산 (kojic acid), 알부틴 (arbutin), 하이드로퀴논 (hydroquinone), 유용성 감초산 추출물 (licorice extract) 및 각종 식물 추출물 등이 사용되어 지고 있다. 이들 중에서 코직산 (kojic acid)은 티로시나제 (tyrosinase)의 활성부위에 존재하는 구리이온을 킬레이트시켜 효소활동을 저해하는 작용을 하는데, 성능이 좋은 반면 화장품에 배합시 안정성 및 경제성에 문제점이 있어 사용하는데 부적절하며, 하이드로퀴논 (hydroquinone)은 피부에 대한 자극성이 높아 안전성 문제로 인하여 현재 화장품에 사용하지 못하고 있다. 그밖에 천연물 특히 식물 중에서 미백 활성 성분을 찾기 위한 연구가 계속 이루어져왔고, 그 중 상백피, 감초, 작약, 계피, 고삼, 갈근, 당귀, 목단피, 반하, 알로에 등 다수의 식물 추출물 및 생약재 추출물 등이 티로시나제 (tyrosinase) 억제 활성이 있다는 사실은 밝혀졌으나, 이들 역시 안전성, 변색 가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 갖고 있으며, 미백 효능이 명백하지 않다는 한계가 있다.

본 발명은 까실쑥부쟁이 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 티로시나제 저해활성이 우수한 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 피부 미백용 조성물로 유용한 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 바람직한 일구현예로서, 까실쑥부쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 구현예에서, 까실쑥부쟁이 추출물은 꽃, 가지, 줄기, 잎, 미성숙열매, 열매를 포함하는 지상부; 뿌리줄기; 및 뿌리 중 선택된 하나 이상의 추출물인 것일 수 있다.

상기 구현예에서, 까실쑥부쟁이 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 프로필렌글리콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르 및 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합 용매로 추출된 것일 수 있다.

상기 구현예에서, 화장료 조성물은 까실쑥부쟁이 추출물을 0.001 내지 90 중량%로 포함하는 것일 수 있다.

상기 구현예에서, 화장료는 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 오일, 왁스, 파우더, 스프레이, 비누, 클린징, 팩, 파운데이션 및 모발화장료로 구성된 군으로부터 선택된 제형인 것일 수 있다.

본 발명은 바람직한 제2구현예로서, 까실쑥부쟁이를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 프로필렌글리콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르 및 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합 용매로 추출하는 단계; 추출액을 여과하는 단계; 및 상기 여과 후 감압농축하는 단계를 포함하는 경구 투여용 조성물 제조방법을 제공한다.

상기 구현예에 의한 경구 투여용 조성물 제조방법 중 추출하는 단계에서 혼합 용매는 까실쑥부쟁이 시료 중량의 1~30배로 혼합하는 것일 수 있다.

상기 구현예에서, 추출하는 단계는 10~100℃에서 1시간~4일동안 추출하는 것일 수 있다.

상기 구현예에서, 추출하는 단계는 열탕 추출, 환류 순환 추출, 침지 추출 및 압력 추출 중 선택된 방법으로 추출하는 것일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 시험관 내 (in vitro) 실험에서 우수한 티로시나제 저해활성을 나타내며 동물세포를 이용한 실험에서 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내는 까실쑥부쟁이 추출물을 함유하는바 피부 미백용 조성물로 유용한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

까실쑥부쟁이 (Aster ageratoides Turcz. var. ageratoides)는 국화과로 생약명은 산백국(山白菊)이며, 속명은 껄큼취, 까실쑥부장이, 산쑥부쟁이라고 한다. 분포 국가는 한국, 중국, 러시아, 인도북부 등이고 원산지는 우리나라로 전국의 들판, 숲 가장자리에 여러해살이 형태로 자라며 키는 100cm이고 꽃색은 연한 보라이며 꽃피는 시기는 8월~10월이고 열매 맺는 시기는 10월이며 특징은 잎 끝이 뾰족하며 길이 10~14cm, 폭 3~6cm로 표면이 거칠고, 가장자리에 톱니가 있으며 줄기와 잎에 잔털이 있어 까실까실한 느낌이 있다. 연한 잎을 식용으로 이용하며 어린 잎을 생채로 먹거나 살짝 데쳐 무쳐 먹기도 하고 나물을 뜨거운 물에 데쳐 햇볕에 말려 묵나물로 사용하거나 순을 잘게 썰어 쌀과 섞어 나물밥을 지어 먹는다. 성분은 kaempferol, quercetin, quercetin rhamnoside 등이 함유되어 있으며 보고되고 있는 성분 연구는 Aster ageratoides Turcz. 꽃봉오리의 물-에탄올 추출물로부터 쿠마로일퀴닉산 (p-coumaroylquinic acid), 카페오일퀴닉산 (caffeoylquinic acid), 페룰로일퀴닉산 (feruloylquinic acid), 디카페오일퀴닉산 (dicaffeoylquinic acid)과 디페룰로일퀴닉산 (diferuloylquinic acid)에 대해 각각 3개의 이성체와 쿠마로일-카페오일퀴닉산 (p-coumaroyl-caffeoylquinic acid), 쿠마로일-페룰로일퀴닉산 (p-coumaroyl-feruloylquinic acid), 카페오일-페룰로일퀴닉산 (caffeoyl-feruloylquinic acid)의 각각 6개의 이성체로 총 33종류의 클로로제닉산 (chlorogenic acid)이 분리되었다 (Clifford MN et al, Phytochem. Anal., 17(6), pp384-393), 2006). 또한 Yan FL 등의 보고에 의하면 Aster ageratoides var. pilosus로 부터 2개의 새로운 펜타사이클릭 트리터페노이드 (pentacyclic triterpenoids)인 2-알파,3-베타-16알파-트리하이드록실-24알파-알-올리안-12-엔-28-오익 산 [2beta,3beta,16alpha-trihydroxyl-24alpha-al-olean-12-en-28-oic acid (1)]과 2-베타,3-베타-디하이드록실-16-O-베타-D-글루코피라노즈-24-알파-알-올리안-12-엔-28-오익 산[2beta,3beta-dihydroxyl-16-O-beta-D-glucopyranose-24alpha-al-olean-12-en-28-oic acid (2)]와 이미 알려진 2개의 펜타사이클릭 트리터페노이드 (pentacyclic triterpenoids)를 분리동정하고 항균성 및 항종양활성을 시험하였다 (Yan FL et al, Pharmazie, 59(11), pp882-884, 2004). 또한 Aster ageratoides로부터 기존물질인 크로토코릴리퓨란 (crotocorylifuran)과 오플로파논 (oplopanone) 분리동정 되었다 (Ahmed AA et al, Pharmazie, 57(8), 567-569). 까실쑥부쟁이의 약리작용에 대하여 그다지 연구되어있지 않으며 항암작용, 항균작용, 항소포작용 등에 대한 보고가 있을 뿐이다(김창진 등, 한국농화학회지, 39(5), pp409-413, 1996).

한의에서는 뿌리가 달린 전초를 산백국이라 하여 거풍, 청열, 해독, 소담, 지해의 효능이 있고, 풍열에 의한 감기, 편도선염, 기관지염, 독사교상, 벌에 쏘인 자상을 치료한다고 알려져 있다(한국의 약용식물, 배기환 저, 학창사, pp491, 2000).

이처럼 까실쑥부쟁이에는 다양한 기능이 있다고 알려졌으나, 과학적으로 증명된 결과는 제한된 상태이다. 또한, 까실쑥부쟁이의 생리활성기능과 관련된 특허는 없으며 발명 제목 '국화꽃 쑥연초' (대한민국 공개특허 제2002-0046108호)에서 까실쑥부쟁이가 언급되고 있을 뿐이며 까실쑥부쟁이의 미백활성과 관련된 내용으로는 어떠한 교시나 개시된 바는 없었다.

이에 본 발명자는 종래의 미백 원료들이 가지고 있는 문제점을 해결하고 보 다 미백 효과가 뛰어난 원료를 찾기 위하여 200여종의 천연물로부터 효능물질을 탐색한 결과, 까실쑥부쟁이 추출물이 우수한 티로시나제 저해활성을 가짐을 시험관 내 및 세포 내 실험을 통해 확인하였으며, 까실쑥부쟁이 추출물의 미백효능이 매우 강력할 뿐만 아니라, 이러한 천연물은 오랜 기간 동안 인류가 이용하여 왔기 때문에 인간에게 비교적 안전한 성분을 함유할 것으로 여겨짐으로 미백화장품의 기능성 소재로 개발될 수 있을 것으로 여겨진다.

본 발명은 바람직한 일구현예로서, 까실쑥부쟁이 (Aster ageratoides Turcz. var. ageratoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 까실쑥부쟁이 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

까실쑥부쟁이는 세척 후 까실쑥부쟁이 시료 중량의 약 1 내지 30배, 바람직하게는 약 1 내지 15배에 달하는 용매를 첨가하여 약 10 ℃ 내지 100 ℃에서 약 1시간 내지 4일, 바람직하게는 2시간 내지 2일 동안 열탕 추출, 환류 순환 추출, 침지 추출 또는 압력추출 등의 추출방법을 사용하여, 여과(또는 원심분리 후 여과), 감압농축 및 동결 건조하여 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물을 수득할 수 있다.

상기 까실쑥부쟁는 꽃, 가지, 줄기, 잎, 미성숙열매, 열매를 포함하는 지상부; 뿌리줄기; 및 뿌리 중 선택된 하나 이상의 추출물인 것일 수 있다.

상기 용매는 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 프로필렌글리콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르 및 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합 용매인 것일 수 있다.

상기 추출방법에 의해 얻어진 까실쑥부쟁이 추출물의 티로시나제 저해활성을 측정한 결과, 미백효과가 탁월하여 미백용 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

또한, 까실쑥부쟁이는 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출된 본 발명의 추출물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없으며, 피부 첩포 시험에서 무자극 시료임이 입증되었으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 티로시나아제 활성 억제 및 멜라닌 세포에서의 멜라닌 생성 저해를 통한 미백효과의 개선과 피부 민감성을 고려하여, 화장료 총 중량에 대하여 상기 까실쑥부쟁이 추출물을 0.001 내지 90 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 70중량%, 가장 바람직하게는 0.001 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사 용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-α-토코페롤, d-α-토코페롤, d-δ-토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-α-토코페롤, 니코틴산dl-α-토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피트스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리 스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴ㅇ카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데 실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, α-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산,도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㅇ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㅇ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㅇ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㅇ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㅇPOP (폴리옥시에틸렌ㅇ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㅇPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, α-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민, 카본블랙 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㅇ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-β-알라닌칼슘, N-라우로일-β-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; Nε-라우로일-L-리진, N-ε-팔미토일리진, N-α-파리토일올니틴, N-α-라우로일아르기닌, N-α-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; α-아미노카프릴산, α-아미노라우린산 등 의 α-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠·스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리친산페닐, 살리친산옥틸, 살리친산벤질, 살리친산부틸페닐, 살리친산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㅇ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키치올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 ∼ 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.01∼ 3 중량% 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 까실쑥부쟁이 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들면, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 오일, 왁스, 파우더, 스프레이, 비누, 클린징, 팩, 파운데이션, 모발화장료 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료의 구체예로서는 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 영양 화장수, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 콜드크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 에프터세이빙크림, 썬텐방지크림, 썬텐용 오일, 헤어샴푸, 헤어린스, 핸드크림, 파운데이션, 바디로션, 바디클린저 등을 들 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 클린징, 즉 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예 1. 동물세포주 배양

본 발명에 사용된 동물세포주인 마우스 유래의 멜라노사이트인 멜란-에이 (Melan-a) 세포주는 영국의 베넷박사 (Dr. D.C. Bennett, University of London)로부터 분양받았으며, 2 mM 글루타민 (glutamine), 100 U/㎖ 페니실린 G (penicillin G), 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 (streptomycin, Gibco, USA), 10 % 우태아혈청 (FBS, fetal bovine serum, Gibco, USA), 100 nM 티피에이 (TPA, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, Sigma, USA)를 포함하는 RPMI 1640 (Gibco, USA) 배지를 첨가하여 37 ℃의 10 % 이산화탄소 및 90 % 공기 조성의 배양기 (CO₂ incubator) 내에서 계대배양하면서 실험에 이용하였다.

제조예 1. 까실쑥부쟁이 추출물의 제조

본 발명에 사용한 까실쑥부쟁이는 꽃, 가지, 줄기, 잎, 미성숙열매, 열매를 포함하는 지상부; 뿌리줄기; 및 뿌리를 채취하고 선택된 하나 이상의 검정된 공시재료 를 세척한 후 절단하여 사용하였다. 시료인 까실쑥부쟁이 1 ㎏에 80 % 에탄올을 1: 5 (w/v)의 비율로 첨가하고 혼합 후 상온에서 48시간 동안 3회 반복 환류 추출하여 획득한 추출액을 여지 No.2 (Advantec TOYO, Japan)로 여과한 후 50 ℃에서 회전감압농축기 (Rotary vacuum evaporator ; Heidolph VV2011, Switzerland)로 감압농축한 후에 동결 건조하여 갈색의 까실쑥부쟁이 에탄올 추출물을 수득하였으며, -20 ℃에 보관하며 티로시나제 저해활성 분석을 위한 시료로 사용하였다.

실험예 1. 까실쑥부쟁이 추출물의 티로시나제 저해활성 측정 ( in vitro )

티로시나제 (Tyrosinase; monophenol monooxygenase, E.C.1.14.18.1, Sigma, USA) 저해 활성 측정은 티로시나제의 작용 결과 생성되는 도파퀴논을 비색법에 의해 측정하는 마사모토 등 (Masamoto Y et al., Planta Med., 40(4), pp361-365, 1980)의 방법을 일부 변형하여 실험하였다.

100 mM 인산나트륨완충액 (sodium phosphate buffer, pH 6.8) 0.6 ㎖과 버섯 유래의 티로시나제 (mushroom tyrosinase, 40 unit, Sigma, USA) 15 ㎕와 디메틸설폭사이드 (Dimethylsulfoxide)로 20 mg/㎖ 농도가 되도록 녹인 제조예 1의 까실쑥부쟁이 추출물을 최종 농도가 50, 100, 250 μg/㎖이 되도록 첨가하고 최종 0.86 ㎖이 되도록 증류수로 보정하였다. 상기 혼합액을 실온에서 5분간 방치한 다음 기질로서 3.4 mM 디페닐알라닌 (DOPA, L-3,4-dihydroxyphenylalanine) 0.14 ㎖을 첨가한 후 분광광도계 (spectrophotometer; U-3000, Hitachi, Japan)로 475 nm에서 반응액 중 생성된 도파퀴논 (Dopaquinone)의 변화량을 실온에서 10분간 측정 (time scanning)하여 시료용액 대신 용제를 첨가한 대조구의 흡광도와 비교하여 티로시나제 저해율(inhibition rate, %)을 구하여, 그 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 까실쑥부쟁이 추출물을 50, 100, 250 μg/ml 첨가하고 티로시나제에 의한 도파 (DOPA)의 도파퀴논 (DOPAquinone)으로의 시간적 변환을 스캐닝한 결과 농도의존적으로 티로시나제 저해활성은 나타냈다.

자세하게는 도 2에 나타난 바와 같이, 까실쑥부쟁이 추출물을 50 μg/㎖ 첨가시 31.7 %, 100 μg/㎖ 첨가시 50.8 %, 250 μg/㎖ 첨가시 60.3 % 티로시나제 활성을 저해하였다. 상기 결과로부터 까실쑥부쟁이 추출물은 탁월한 티로시나제 저해활성을 가짐을 확인할 수 있다.

까실쑥부쟁이 추출물 처리 농도 (μg/㎖)	티로시나제 저해활성 (%)
50	31.7
100	50.8
250	60.3

실험예 2. 까실쑥부쟁이 추출물의 멜라닌합성 저해 효능 측정 (동물세포주를 이용한 시험)

동물세포주에서 타이로시나제 저해 효능 측정은 까실쑥부쟁이 추출물을 처리한 마우스의 멜라노사이트 세포주인 멜란-에이 세포의 멜라닌 생성 억제 활성을 측정함으로써 이뤄졌다. 멜라닌 정량은 호소이 등 (Hosoi J et al., Cancer Res., 45(4), pp1474-1478, 1985)의 방법을 변형하여 사용하였다.

마우스의 멜라노사이트 (melanocyte)인 멜란-에이 (Melan-a) 세포를 6-웰 플레이트 (6-well plate)에 3× 10⁴ 세포수/well로 분주하고 48시간 배양하여 세포를 부착시킨 후, 까실쑥부쟁이 추출물을 최종농도 10, 20, 30 μg/㎖이 되도록 처리하고 5일 동안 배양하였다. 배양세포를 염화칼슘 (CaCl₂), 염화마그네슘 (MgCl₂)이 들어있지 않은 인산염완충액 (DPBS; Dulbecco's Phosphated Buffered Saline)으로 2회 세척하고 트립신 (trypsin, Gibco, USA)을 처리하여 세포를 분리하여 각 군당 동일한 수의 세포를 수집하였다. 세포침전물을 염화칼슘 (CaCl₂), 염화마그네슘 (MgCl₂)이 들어있지 않은 인산염완충액 (DPBS; Dulbecco's Phosphated Buffered Saline)으로 세척하고 100 ㎕의 10% 디메틸술폭시화물 (DMSO)이 첨가된 1 노르말농도 (N)의 수산화나트륨 (NaOH) 용액으로 현탁한 후 60 ℃에서 30분간 처리하고 475 nm에서 흡광도를 측정하여 합성 멜라닌으로 작성된 표준곡선으로부터 멜라닌양을 환산하여 표 2, 도 3 에 나타내었으며 까실쑥부쟁이 추출물에 의해 갈색의 멜라닌색소가 감소되는 것은 도 4에 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물을 최종 농도가 10, 20, 30 μg/㎖이 되도록 배지에 첨가하여 배양한 마우스의 멜란-에이 세포주로 상기의 시험방법에 따라 멜라닌양을 비교하여 티로시나제 (tyrosinase) 저해능을 실험한 결과, 까실쑥부쟁이 추출물을 10 μg/㎖ 첨가시 15.9 %, 20 μg/㎖ 첨가시 75.3 %, 30 μg/㎖ 첨가시 82.4 % 멜라닌 합성을 저해하였다. 상기 결과로부터 멜란-에이 세포주에서의 까실쑥부쟁이 추출물의 멜라닌합성 저해활성에 따른 IC₅₀는 6.1 μg/㎖으로 나타났다. 또한 도 4에 나타난 바와 같이, 까실쑥부쟁이 추출물 첨가량이 증가함에 따라 갈색의 멜라닌 색소가 현저히 감소하였으며, 또한 도 5에서 기존 미백제로 사용되고 있는 2 mM 알부틴 (α-arbutin, Sigma, USA)의 티로시나제 저해율이 62.3%인 것을 감안할 때 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물의 티로시나제 저해활성으로 인한 멜라닌 합성 저해효능은 상당히 강력함을 확인할 수 있었다.

까실쑥부쟁이 추출물 처리 농도 (μg/㎖)	멜라닌 생성 억제 활성 (%)
10	15.9
20	75.3
30	82.4
2 mM 알부틴	62.3

따라서 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물은 시험관 내 (in vitro) 실험에서 우수한 티로시나제 저해활성을 나타내며 동물세포를 이용한 실험에서 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내는 바 피부미백용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

실험예 3. 까실쑥부쟁이 추출물의 세포독성실험

까실쑥부쟁이 추출물의 세포 독성을 알아보기 위하여, MTT 분석법으로 독성 여부를 확인하였다. 사람 섬유아세포(fibroblast, 한국세포주은행)를 96-웰 플레이트에 각 웰당 8× 10³ cell/well로 접종하여 200㎕ DMEM(Dulbecco Minimum Essential Medium) 배지에서 24시간동안 배양한 후, 각 웰당 0~0.2%의 농도별로 까실쑥부쟁이 추출물을 처리하여 다시 24시간동안 배양하였다. 배양한 플레이트는 0.5mg/㎖ MTT 용액(시그마, 미국)을 첨가한 후 4시간 후 배지를 제거하고 200㎕의 DMSO 용액으로 세포를 용해하였고, 그 반응액을 ELISA Reader(Molecular Device, 미국)를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 까실쑥부쟁이 추출물 무처리군을 대조군으로 하였으며, 하기 식 1에 따라 세포 증식율을 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 3과 같다.

<식 1>

세포 증식율(%) = (실험군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) × 100

까실쑥부쟁이 추출물 처리 농도 (%)	세포 증식율 (%)
0.01	101.1
0.05	101.8
0.10	102.2
0.15	102.6
0.20	103.1
0.25	102.8
0.30	103.2
대조군	100.0

이하, 본 발명의 제형예로서 크림, 맛사지크림, 로션, 스킨로션, 에센스, 팩, 클렌징폼의 제형을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장품 조성물을 포함하는 제형은 이에 한정되는 것은 아니다.

제형예 1. 크림 조성물

하기 표 4의 조성으로, 유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 혼합한 후 실온으로 냉각하여 제조하였다.

번호	원료명	실시예1	비교예1
1	세토스테아릴 알코올	1.0	1.0
2	자기유화형 모노스테아린산 글리세린	1.0	1.0
3	친유형 모노스테아린산 글리세린	2.5	2.5
4	마이크로 스탈린 납	2.0	2.0
5	파라옥시안식향산메틸	0.2	0.2
6	파라옥시안식향산프로필	0.1	0.1
7	밀납	2.0	2.0
8	모노스테아린산 폴리에틸렌글리콜	2.0	2.0
9	모노스테아린산 소르비탄	1.0	1.0
10	트리 (카프릴, 카프린산) 글리세린	5.0	5.0
11	액상 리놀린	5.0	5.0
12	미리스틴산 옥틸도데실	8.0	8.0
13	스쿠알란	8.0	8.0
14	농글리세린	5.0	5.0
15	1,3-부틸렌글리콜	5.0	5.0
16	알란토인	0.1	0.1
17	까실쑥부쟁이추출물	10.0	-
18	향료	미량	미량
19	황색4호	미량	미량
20	정제수	잔량	잔량
계		100	100

(단위 : 중량%)

제형예 2. 맛사지크림 조성물

하기 표 5의 조성으로, 유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 용해 혼합한 후 실온으로 냉각하였다.

번호	원료명	실시예2
1	세토스테아릴 알코올	2.0
2	친유형 모노스테아린산 글리세린	2.5
3	자기유화형 모노스테아린산 글리세린	1.5
4	파라옥시안식향산메틸	0.2
5	파라옥시안식향산프로필	0.1
6	바셀린	3.5
7	모노스테아린산 폴리에틸렌글리콜	3.5
8	세스퀴올레인산 소르비탄	1.8
9	유동 파라핀	35.0
10	트리 (카프릴, 카프린산) 글리세린	3.0
11	옥틸도데칸올	5.0
12	스쿠알렌	2.0
13	농글리세린	5.0
14	까실쑥부쟁이추출물	5.0
15	히아루로닉애씨드추출물	1.0
16	향료	미량
17	정제수	잔량
계		100

(단위 : 중량%)

제형예 3. 로션 조성물

하기 표 6의 조성으로, 유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 혼합 유화한 후 실온으로 냉각하였다.

번호	원료명	실시예3	비교예2
1	세토스테아릴 알코올	2.0	2.0
2	스테아린산	1.0	1.0
3	친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0	1.0
4	자기유화형 모노스테아린산 글리세린	2.0	2.0
5	바셀린	1.0	1.0
6	모노스테아린산 폴리에틸렌글리콜	1.5	1.5
7	세스퀴올레인산 소르비탄	1.0	1.0
8	유동 파라핀	5.0	5.0
9	스쿠알렌	5.0	5.0
10	파라옥시안식향산프로필	0.2	0.2
11	파라옥시안식향산메틸	0.2	0.2
12	농글리세린	5.0	5.0
13	까실쑥부쟁이추출물	15.0	-
14	트리에탄올아민	0.5	0.5
15	카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
16	향료	미량	미량
17	정제수	잔량	잔량
계		100	100

(단위 : 중량%)

제형예 4. 스킨로션 조성물

하기 표 7의 조성으로, 수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과하였다.

번호	원료명	실시예4
1	글리세린	2.0
2	1,3-부틸렌글리콜	2.0
3	구연산	0.01
4	에탄올	15.0
5	폴리옥시에틸렌경화피마자유	1.0
6	까실쑥부쟁이추출물	25.0
7	향료	미량
8	위치하젤추출물	1.0
9	정제수	잔량
계		100

(단위 : 중량%)

제형예 5. 에센스 조성물

하기 표 8의 조성으로, 수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과하였다.

번호	원료명	실시예5	비교예3
1	농글리세린	15.0	15.0
2	1,3-부틸렌글리콜	5.0	5.0
3	알란토인	0.1	0.1
4	에탄올	7.0	7.0
5	파라옥시안식향산메틸	0.15	0.15
6	트리에탄올아민	0.15	0.15
7	폴리옥시에틸렌경화피마자유	1.0	1.0
8	초산토코페롤	0.5	0.5
9	카르복시비닐폴리머	0.15	0.15
10	까실쑥부쟁이추출물	30.0	-
11	향료	미량	미량
12	정제수	잔량	잔량
계		100	100

(단위 : 중량%)

제형예 6. 팩 조성물

하기 표 9의 조성으로, 수상과 에탄올상을 각각 분산 용해하여 혼합시킨 후 실온으로 냉각하였다.

번호	원료명	실시예6
1	폴리비닐알코올	15.0
2	카르복시메틸셀룰로이스나트륨	0.3
3	농글리세린	3.0
4	알란토인	0.1
5	에틸렌디아민테트라초산디나트륨	0.01
6	폴리에틸렌글리콜	1.0
7	에탄올	6.0
8	파라옥시안식향산메틸	0.15
9	타라옥시안식향산프로필	0.05
10	디엘판테놀	0.1
11	폴리옥시에틸렌(12)노닐페닐에테르	0.5
12	까실쑥부쟁이추출물	45.0
13	향료	미량
14	정제수	잔량
계		100

(단위 : 중량%)

제형예 7. 클렌징폼 조성물

하기 표 10의 조성으로, 수상과 오일상을 각각 분산 용해하여 혼합 검화한 후 실온으로 냉각하였다.

번호	원료명	실시예7
1	스테아린산	6.5
2	미리스틴산	28.0
3	자기유화형 모노스테아린산 글리세린	3.0
4	프로필렌 글리콜	5.0
5	농글리세린	10.0
6	수산화나트륨	7.0
7	에틸렌디아민테트라초산나트륨	0.1
8	태반 추출물	0.5
9	까실쑥부쟁이추출물	15.0
10	향료	미량
11	정제수	잔량
계		100

(단위 : 중량%)

실험예 4. 화장료 조성물의 미백효과 확인

상기 실시예 1, 3, 5 및 비교예 1, 2, 3에서 제조된 화장료 조성물을 20~50세의 특히 피부가 검은 여성 30명을 대상으로 10주간 사용하게 하여 피부 상태의 변화를 관찰하였다. 측정부위는 팔의 6곳에 1㎝× 1㎝씩 표시하고 상기 실시예 1, 3, 5 및 비교예 1, 2, 3에서 제조된 화장료 조성물을 각각 도포하였다. 10주 후 Minolta CR 300을 이용하여 피부색(L)을 측정한 후 피부색 변화도(ΔL)를 하기 식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 11과 같다.

<식 2>

피부색 변화도(ΔL) = 화장료 조성물 적용 전 L - 화장료 조성물 적용 후 L

구분	실시예1	실시예3	실시예5	비교예1	비교예2	비교예3	대조군
ΔL	1.53	1.47	1.75	0.25	0.18	0.30	0.00

실험예 5. 화장료 조성물의 피부자극성 확인

건강한 성인 남녀 50명을 대상으로 상기 실시예 1, 3, 5, 6 및 비교예 1, 2, 3에서 제조된 화장료 조성물을 약 0.1g씩 24시간 첩포한 후 제거하고 1시간 및 24시간 경과 후 육안으로 피부 상태 변화를 확인하고 다음의 기준으로 평가하였으며, 그 결과는 표 12와 같다.

홍반이나 특이한 현상 없음 : ×

주위보다 약간 붉어짐 : △

주위보다 현저하게 붉어짐 : ○

주위보다 심하게 붉어지고 부풀음 : ◎

구분	실시예1	실시예3	실시예5	실시예6	비교예1	비교예2	비교예3
×	49	48	48	47	48	47	48
△	1	2	2	3	2	3	2
○	-	-	-	-	-	-	-
◎	-	-	-	-	-	-	-

(단위 : 명)

도 1은 도파 (DOPA; 3,4-dihydroxyphenylalanine)의 도파퀴논 (DOPAquinone)으로의 변환에 있어 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물의 농도별 (50, 100, 250 μg/㎖) 시간에 따른 변환 억제 활성을 나타낸 그래프,

도 2는 본 발명의 까실쑥부쟁이 추출물의 농도별 (50, 100, 250 μg/㎖) 티로시나제 억제 활성을 나타낸 그래프,

도 3는 마우스 멜라노사이트 세포주인 멜란-에이 (Melan-a)에 대한 까실쑥부쟁이 추출물의 농도별 (10, 20, 30 μg/㎖) 처리에 의한 멜라닌 색소 형성 억제율을 나타낸 그래프,

도 4은 마우스 멜라노사이트 세포주인 멜란-에이 (Melan-a)에 대한 까실쑥부쟁이 추출물의 농도별 (10, 20, 30 μg/㎖)처리 후 세포주가 형성한 멜라닌 색소의 변화를 나타낸 사진,

도 5는 마우스 멜라노사이트 세포주인 멜란-에이 (Melan-a)에 대한 알부틴 (α-arbutin)의 농도별 (0.5, 1, 2 mM) 처리에 의한 멜라닌 색소 형성 억제율을 나타낸 그래프이다.

Claims (9)

1. 까실쑥부쟁이 (Aster ageratoides Turcz. var. ageratoides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,

   까실쑥부쟁이 추출물은 까실쑥부쟁이의 꽃, 가지, 줄기, 잎, 미성숙열매, 열매를 포함하는 지상부; 뿌리줄기; 및 뿌리 중 선택된 하나 이상의 추출물인 것임을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,

   까실쑥부쟁이 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 프로필렌글리콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르 및 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합 용매로 추출된 것임을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,

   까실쑥부쟁이 추출물을 0.001 내지 90 중량%로 포함하는 것임을 특징으로 하는 미백용 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,

   화장료는 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 오일, 왁스, 파우더, 스프레이, 비누, 클린징, 팩, 파운데이션 및 모발화장료로 구성된 군으로부터 선택된 제형인 미백용 화장료 조성물.
6. 까실쑥부쟁이를 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 프로필렌글리콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르 및 클로로포름으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 혼합 용매로 추출하는 단계;

   추출액을 여과하는 단계; 및

   상기 여과 후 감압농축하는 단계를 포함하는 경구 투여용 조성물 제조방법.
7. 제6항에 있어서,

   추출하는 단계에서 혼합 용매는 까실쑥부쟁이 시료 중량의 1~30배로 혼합하는 것임을 특징으로 하는 경구 투여용 조성물 제조방법.
8. 제6항에 있어서,

   추출하는 단계는 10~100℃에서 1시간~4일동안 추출하는 것임을 특징으로 하는 경구 투여용 조성물 제조방법.
9. 제6항에 있어서,

   추출하는 단계는 열탕 추출, 환류 순환 추출, 침지 추출 및 압력 추출 중 선택된 방법으로 추출하는 것임을 특징으로 하는 경구 투여용 조성물 제조방법.

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