KR20100104109A - Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same - Google Patents

Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same Download PDF

Info

Publication number
KR20100104109A
KR20100104109A KR1020090022290A KR20090022290A KR20100104109A KR 20100104109 A KR20100104109 A KR 20100104109A KR 1020090022290 A KR1020090022290 A KR 1020090022290A KR 20090022290 A KR20090022290 A KR 20090022290A KR 20100104109 A KR20100104109 A KR 20100104109A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
breast cancer
peroxyredoxin
cancer
marker
breast
Prior art date
Application number
KR1020090022290A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
김일한
Original Assignee
배재대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 배재대학교 산학협력단 filed Critical 배재대학교 산학협력단
Priority to KR1020090022290A priority Critical patent/KR20100104109A/en
Priority to PCT/KR2009/001943 priority patent/WO2010107157A1/en
Publication of KR20100104109A publication Critical patent/KR20100104109A/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Abstract

PURPOSE: A marker and kit for diagnosing breast cancer containing peroxiredoxin I are provided to early predict diagnosis or prognosis of breast cancer. CONSTITUTION: A marker for diagnosing breast cancer contains peroxiredoxin I as an active ingredient. The marker is specific to breast cancer of stage II-IV. A kit for diagnosing breast cancer contains an antibody which specifically binds to peroxiredoxin I. Peroxiredoxin I is detected through antibody-antigen binding reaction using the antibody. Peroxiredoxin is highly expressed in breast cancer tissue of stage II-IV comparing to normal breast tissue or breast cancer tissue of stage I.

Description

퍼옥시레독신 Ⅰ을 유효성분으로 하는 유방암 진단용 마커, 및 이를 이용한 유방암 진단 키트{Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin Ⅰ, and diagnosis kit of breast cancer using the same}Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin I, and diagnosis kit of breast cancer using the same}

본 발명은 퍼옥시레독신 Ⅰ을 유효성분으로 하는 유방암 진단용 마커, 및 이를 이용한 유방암 진단 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a marker for diagnosing breast cancer using peroxyredoxin I as an active ingredient, and a breast cancer diagnostic kit using the same.

현재 유방암의 발병 원인으로 여성 호르몬, 가족력, 과거력, 출산력, 식생활 습관 등의 다양한 인자들이 거론되고 있지만 아직까지 명확하게 규명된 것은 없다. 최근 통계청의 조사에 의하면, 한국 여성의 유방암 발생은 최근 급격히 증가하여 1998년 자궁경부암을 추월한 이래 2001년 발생한 한국 여성암 환자의 16.1%를 차지하면서 위암을 제치고 여성암 1위가 되었다. 특히, 2002년에는 2001년에 비해 유방암(11.1%)이 가장 급증한 암으로 나타나 저출산, 짧은 수유기간, 이른 초경, 늦은 폐경 등의 요인과 함께 생리적으로 왕성한 신체적 변화를 겪는 시기에 여성 호르몬의 자극을 받는 횟수의 급격한 증가로 인한 유선조직의 민감도 증가, 식생활의 서구화, 생활 환경의 오염 등의 이유로 유방암 발생이 급격하게 증가하고 있다.Currently, various factors such as female hormones, family history, past history, fertility, and dietary habits have been discussed as the causes of breast cancer, but there is no clear explanation yet. According to a recent survey by the Korea National Statistical Office, breast cancer in Korean women has recently increased rapidly, surpassing cervical cancer in 1998, accounting for 16.1% of Korean cancer patients in 2001, surpassing stomach cancer. In 2002, breast cancer (11.1%) was the most prevalent cancer compared to 2001, and female hormones were stimulated during physiologically active physical changes with factors such as low fertility, short lactation, early menarche and late menopause. The incidence of breast cancer is increasing rapidly due to the increased sensitivity of the mammary gland due to the rapid increase in the number of times of receiving, the westernization of the diet, and the pollution of the living environment.

이러한 유방암의 발생빈도 및 유방암으로 인한 사망률의 증가는 현재의 서구 화 실태로 보아 앞으로도 상당기간 지속될 것으로 예상된다. 유방암은 암세포의 성장으로 인한 주변 조직의 침범 또는 림프절 전이 등의 증상을 초래하는 것이 보통이지만, 대부분이 아무런 증상 없이도 자가검진으로 진단될 수 있다. 따라서, 유방암으로 인한 사망률을 줄이기 위해서는 유방암을 효과적으로 조기에 진단하는 것이 매우 중요하다.The increase in the incidence of breast cancer and mortality due to breast cancer is expected to continue for a long time in light of the current westernization. Breast cancer usually causes symptoms such as invasion of surrounding tissues or lymph node metastasis due to the growth of cancer cells, but most of them can be diagnosed by self-examination without any symptoms. Therefore, it is very important to diagnose breast cancer effectively early in order to reduce mortality from breast cancer.

유방암을 진단하기 위해서 여러 가지 방법이 복합적으로 사용되고 있는데, 현재까지는 유방암 환자의 70%가 자가진단에 의해서 내원하고 있다. 그러나, 이러한 자가진단 방법은 악성 종양과 양성 종양을 구분하는 것이 매우 어렵다는 단점이 있다. 그 밖에, 유방암의 진단방법으로 X-선 유방촬영법, 초음파검사법, 세침흡입세포검사법, 자기공명촬영법 등이 있는데, 최종적으로는 조직검사를 통해 확인하는 것이 중요하다. X-선 유방촬영법은 X-선으로 유방을 찍어 검사하는 방법으로 종양이 양성인지 악성인지를 감별하는데 우수할 뿐만 아니라, 숨어 있는 종양을 발견하는 방법으로서 자가진단으로 혹이 만져지기 이전에 초기의 유방암을 진단하는데 가장 효과적인 방법이다. 그러나, 유방촬영법은 젊은 여성같이 유선이 많이 발달되어 있다거나 유방이 작고 섬유질이 많은 우리나라 여성에게서는 진단율이 떨어지는 단점이 있으며, 자주 찍으면 오히려 유방암이 유발될 수도 있다는 논란이 있다. 이러한 유방촬영법의 대안으로 초음파검사법이 사용되고 있는데, 초음파검사법은 물혹과 단단한 혹을 구별하는데 효과적이긴 하지만, 악성 종양과 양성 종양을 감별하는 능력은 떨어진다.Various methods are used to diagnose breast cancer. To date, 70% of breast cancer patients come by self-diagnosis. However, this self-diagnosis method has a disadvantage in that it is very difficult to distinguish between malignant and benign tumors. In addition, X-ray mammography, ultrasonography, fine needle aspiration cytology, magnetic resonance imaging, etc. are diagnosed as breast cancer, and finally, it is important to confirm through histological examination. X-ray mammography is a method of screening the breast with X-rays, which is excellent for discriminating whether a tumor is benign or malignant, and is a method for detecting hidden tumors. It is the most effective way to diagnose breast cancer. However, mammography has a disadvantage in that a lot of mammary glands are developed like young women, or in Korean women with small breasts and a lot of fiber, the diagnosis rate is lowered, and frequent taking may cause breast cancer. Ultrasonography is used as an alternative to mammography, which is effective in distinguishing between water and hard bumps, but lacks the ability to distinguish between malignant and benign tumors.

이러한 기존 진단방법의 단점을 보완하기 위한 방법으로 환자의 혈액에서 종 양 마커의 농도를 측정하여 유방암을 진단하려는 시도가 있어 왔다. 그러나, 이러한 종양 마커들의 진단 또는 예후 인자로서의 가치가 연구되고는 있지만, 아직까지 제한적으로 사용되고 있을 뿐으로 공식적으로 권장되고 있는 유방암 마커는 없는 실정이다.As a way to compensate for the shortcomings of the existing diagnostic methods, there have been attempts to diagnose breast cancer by measuring the concentration of tumor markers in the blood of patients. However, although the value of these tumor markers as a diagnostic or prognostic factor is being studied, there are no breast cancer markers that are officially recommended due to their limited use.

한편, 퍼옥시레독신(peroxiredoxins, Prxs)은 살아있는 세포에서 높은 항산화능을 갖는 티올-함유 단백질로서, 퍼옥시다제의 새로운 타입이다. 퍼옥시다제의 주요 기능은 산화적 스트레스에 대한 세포 보호, 제 2 전달 분자로서 과산화수소를 통해 세포내 신호의 변화, 및 세포 증식의 조절을 포함한다. 포유류의 퍼옥시레독신은 6개의 Prx Ⅰ~Ⅵ로 이루어져 있으며, 이들은 산화적 스트레스가 가장 뚜렷한 과산화소체(peroxisome) 및 미토콘드리아를 포함하는 다수의 세포 내 위치에 분포되어 있다. 퍼옥시레독신은 반응성 산소종(reactive oxygen species, ROS) 독성으로부터 세포를 보호할 수 있고, c-AbI, 카스파제, NF-kB(nuclear factor-kappaB) 및 활성제 단백질-1을 이용하여 세포 성장 및 아폽토시스에 영향을 주는 신호 변환을 조절할 수 있다. 반응성 산소종은 초기, 증진, 진행을 포함하는 모든 단계에서 발암에 관여한다. 초과산화물 음이온(O2 -)과 같은 반응성 산소종의 농도는 암에서 증가하며, 반응성 산소종의 생산은 종양 유도를 가속화시킨다고 알려져 있다. 퍼옥시레독신 Ⅰ~Ⅵ는 세포 내 과산화수소의 농도가 증가할 때 과발현되며, 이들 중 몇몇은 세포 증식, 세포 분화 및 아폽토시스에 영향을 미친다고 알려져 있다. 특히 시토졸 형태인 퍼옥시레독신 Ⅰ은 포유류의 퍼옥시레독신 군 중 가장 풍부하고, c- AbI과 같은 종양유전자 산물과의 상호작용으로 세포 증식, 세포 분화 및 아폽토시스를 조절한다고 알려져 있다.On the other hand, peroxiredoxins (Prxs) are thiol-containing proteins with high antioxidant capacity in living cells and are a new type of peroxidase. The main functions of peroxidases include cell protection against oxidative stress, changes in intracellular signals through hydrogen peroxide as the second delivery molecule, and regulation of cell proliferation. Mammalian peroxyredoxin is composed of six Prx I-VI, which are distributed in a number of intracellular locations, including peroxisome and mitochondria, where oxidative stress is most pronounced. Peroxyredoxin can protect cells from reactive oxygen species (ROS) toxicity and cell growth using c-AbI, caspase, nuclear factor-kappaB (NF-kB) and activator protein-1 And signal transduction that affects apoptosis. Reactive oxygen species are involved in carcinogenesis at all stages, including initiation, promotion, and progression. The concentration of reactive oxygen species, such as superoxide anions (O 2 − ), is known to increase in cancer, and the production of reactive oxygen species is known to accelerate tumor induction. Peroxyredoxin I-VI are overexpressed when the concentration of hydrogen peroxide in cells increases, some of which are known to affect cell proliferation, cell differentiation and apoptosis. In particular, the cytosolic form of peroxyredoxin I is the most abundant of the peroxyredoxin family of mammals and is known to regulate cell proliferation, cell differentiation and apoptosis by interaction with oncogene products such as c-Abl.

퍼옥시레독신 I은 잠재적인 마커로서 여러 인간 암 시료에서 연구되어왔다. 그러나, 퍼옥시레독신 I과 암 사이의 관계는 아직 명확하게 밝혀지지 않았으며, 퍼옥시레독신 I의 상승된 발현은 폐, 식도, 구강 및 갑상선을 포함하는 여러 인간 암에서 관찰되었다. 또한, 구강 편평세포암에서, 야나가와 등은 커다란 종양 덩어리, 림프절 전이, 및 불완전하게 분화된 암과 관련하여 퍼옥시레독신 I의 낮은 발현 정도를 발견하였다(Yanagawa T., Iwasa S., Ishii T., Tabuchi K., Yusa H., Onizawa K., Omura K., Harada H., Suzuki H., Yoshida H. Peroxiredoxin I expression in oral cancer: a potential new tumor marker. Cancer Lett., 156: 27-35, 2000.). 이에 반해, 카리탈라 등은 유방암에서 퍼옥시레독신 I과 임상병리학적 특징 사이에 상호관련이 없음을 발견하였다(Peeter Karihtala, Anne Mantyniemi, Sang Won Kang, Vuokko L. Kinnula and Ylermi Soini Clinical Cancer Research Vol. 9, 3418-3424, August 2003 Peroxiredoxins in Breast). 대신, 퍼옥시레독신 Ⅲ, Ⅳ 및 Ⅴ의 발현 정도는 유방암이 불완전하게 분화되었을 때 유의하게 높았으며, 이는 이들의 유방암과의 관계를 암시하는 것이다.Peroxyredoxin I has been studied in several human cancer samples as potential markers. However, the relationship between peroxyredoxin I and cancer is not yet clear, and elevated expression of peroxyredoxin I has been observed in several human cancers including lung, esophagus, oral cavity and thyroid gland. In oral squamous cell carcinoma, Yanagawa et al. Also found low levels of peroxyredoxin I associated with large tumor masses, lymph node metastases, and incompletely differentiated cancers (Yanagawa T., Iwasa S., Ishii T) ., Tabuchi K., Yusa H., Onizawa K., Omura K., Harada H., Suzuki H., Yoshida H. Peroxiredoxin I expression in oral cancer: a potential new tumor marker. Cancer Lett., 156: 27- 35, 2000.). In contrast, Karitala et al. Found no correlation between peroxyredoxin I and clinical pathologic features in breast cancer (Peeter Karihtala, Anne Mantyniemi, Sang Won Kang, Vuokko L. Kinnula and Ylermi Soini Clinical Cancer Research Vol. 9, 3418-3424, August 2003 Peroxiredoxins in Breast). Instead, the expression levels of peroxyredoxins III, IV and V were significantly higher when breast cancers were incompletely differentiated, suggesting their relationship with breast cancer.

그러나, 퍼옥시레독신 I이 유방암 진단용 마커로서 작용하는지에 대한 연구는 아직까지 미미한 실정이다. 따라서, 유방암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있는 유방암 진단용 마커의 필요성이 요구되고 있다.However, little is known about whether peroxyredoxin I acts as a diagnostic marker for breast cancer. Thus, there is a need for a marker for diagnosing breast cancer that can predict the diagnosis or prognosis of breast cancer early.

본 발명자들은 유방암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있는 유방암 진단용 마커에 대해 연구하던 중, 퍼옥시레독신 I이 정상 유방 조직에서는 낮게 발현되지만 유방암 조직에서는 매우 높게 발현됨을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.The present inventors have been studying the marker for diagnosing breast cancer which can predict the diagnosis or prognosis of breast cancer early, and confirmed that peroxyredoxin I was expressed low in normal breast tissue but very high in breast cancer tissue, and completed the present invention. It was.

본 발명은 퍼옥시레독신 Ⅰ을 유효성분으로 하는 유방암 진단용 마커, 및 이를 이용한 유방암 진단 키트를 제공하고자 한다.The present invention is to provide a marker for diagnosing breast cancer using peroxyredoxin I as an active ingredient, and a breast cancer diagnostic kit using the same.

본 발명은 퍼옥시레독신 Ⅰ을 유효성분으로 하는 유방암 진단용 마커를 제공한다.The present invention provides a marker for diagnosing breast cancer using peroxyredoxin I as an active ingredient.

또한, 본 발명은 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 유방암 진단 키트를 제공한다.The present invention also provides a breast cancer diagnostic kit comprising an antibody that specifically binds to peroxyredoxin I.

또한, 본 발명은 유방암 마커인 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 유방 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ을 검출하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for detecting peroxyredoxin I in breast tissue through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to breast cancer marker peroxyredoxin I.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에 따른 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 정도를 인간 정상 조직과 인간 암조직에서 qRT-PCR과 웨스턴 블롯을 통해 관찰한 결과, 퍼옥시레독신 Ⅰ은 48개의 인간 정상 조직 중 유방 조직에서 가장 낮게 발현되며, 유방암 조직에서는 가장 높게 발현된다. 또한, 암의 진행도가 높아질수록 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 더 높게 나타나, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 Ⅱ~Ⅳ기 유방암, 특히 Ⅳ기 암인 전이성 유방암과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있다. 또한, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 암의 진행도가 높을수록 증가하므로, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 암의 세분화와 관련이 있음을 알 수 있다.As a result of observing the expression level of peroxyredoxin I according to the present invention through qRT-PCR and Western blot in human normal tissue and human cancer tissue, peroxyredoxin I was the lowest in breast tissue among 48 human normal tissues. Expressed in breast cancer tissues. In addition, the higher the cancer progression, the higher the induced fold of the mRNA expression of peroxyredoxin I. The induced fold of the mRNA expression of peroxyredoxin I was associated with metastatic breast cancer of stage II to IV breast cancer, especially stage IV cancer. There is a close connection. In addition, since the induced fold of mRNA expression of peroxyredoxin I increases as the cancer progresses, it can be seen that the induced fold of mRNA expression of peroxyredoxin I is associated with cancer segmentation.

상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 퍼옥시레독신 Ⅰ은 인간 유방암 조직에서 과발현되어 유방암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있으므로, 유방암 진단용 마커로서 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the peroxyredoxin I according to the present invention can be used as a marker for diagnosing breast cancer since it is overexpressed in human breast cancer tissues and can predict the diagnosis or prognosis of breast cancer early.

또한, 본 발명의 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 유방암 진단 키트는, 상기 마커를 이용하여 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조방법에 의하여 용이하게 제조될 수 있다.In addition, a breast cancer diagnostic kit including an antibody that specifically binds to peroxyredoxin I of the present invention can be easily prepared by a manufacturing method commonly used in the art using the marker.

상기 유방암 진단 키트는 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체, 기질과의 반응에 의해서 발색하는 표지체가 접합된 2차 항체 접합체(conjugate), 상기 표지체와 발색 반응할 발색 기질 용액, 세척액 및 효소반응 정지용액 등을 포함할 수 있다.The breast cancer diagnostic kit includes an antibody that specifically binds to peroxyredoxin I, a secondary antibody conjugate conjugated with a label that develops by reaction with a substrate, a color substrate solution that will react with the label, and a wash solution. And enzymatic stop solutions.

상기 2차 항체 접합체의 표지체는 발색반응을 하는 통상의 발색제가 바람직하며, HRP(horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소(alkaline phosphatase), 콜로이드 골드(coloid gold), FITC(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 등의 형광물질(fluorescein), 및 색소(dye) 등 이 사용될 수 있다.The label of the secondary antibody conjugate is preferably a conventional coloring agent that performs a color reaction, horseradish peroxidase (HRP), basic dephosphatase (alkaline phosphatase), colloidal gold (coloid gold), poly L-lysine-fluorescein (FITC) isothiocyanate), fluorescent materials such as rhodamine-B-isothiocyanate (RITC), and dyes may be used.

상기 발색 기질 용액은 표지체에 따라 사용하는 것이 바람직하며, TMB (3,3',5,5'-tetramethyl bezidine), ABTS[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)], OPD(o-phenylenediamine) 등을 사용할 수 있다. 이때, 발색 기질은 완충용액(0.1M NaOAc, pH 5.5)에 용해된 상태로 제공되는 것이 더욱 바람직하다.The chromogenic substrate solution is preferably used according to the label, TMB (3,3 ', 5,5'-tetramethyl bezidine), ABTS [2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid )], OPD (o-phenylenediamine) and the like can be used. At this time, the color development substrate is more preferably provided in a dissolved state in a buffer solution (0.1M NaOAc, pH 5.5).

세척액은 인산염 완충용액, NaCl 및 트윈 20을 포함하는 것이 바람직하며, 0.02M 인산염 완충용액, 0.13M NaCl, 및 0.05% 트윈 20으로 구성된 완충용액 (PBST)이 더욱 바람직하다. 세척액은 항원-항체 결합반응 후 항원-항체 결합체에 2차 항체를 반응시킨 다음 적당량을 고정체에 가하여 3 내지 6회 세척한다. 반응 정지용액은 황산 용액이 사용될 수 있다.The wash preferably comprises phosphate buffer, NaCl and Tween 20, more preferably a buffer consisting of 0.02M phosphate buffer, 0.13M NaCl, and 0.05% Tween 20 (PBST). After washing the antigen-antibody-binding reaction, the washing solution is reacted with the secondary antibody to the antigen-antibody conjugate, and then washed 3 to 6 times by adding an appropriate amount to the fixture. As the reaction terminating solution, sulfuric acid solution may be used.

또한, 본 발명은 유방암 마커인 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 유방 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ을 검출하여, 유방암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있다. 구체적으로, 퍼옥시레독신 Ⅰ을 SDS-PAGE에서 전기영동하여 분획하고 고정체로 전이하여 고정시킨 후, 고정된 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 가하여 항원-항체 결합반응을 수행하고, 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준을 측정한다. 즉, 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준을 측정하고, 상기 측정된 발현 수준을 정상 유방 조직에서의 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준과 비교하여, 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준이 정상 유방 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준보다 높으면, 유방암을 갖는 것으로 진단하거나 유방암의 가능성을 가질 것으로 예측하는 것이다.In addition, the present invention detects peroxyredoxin I in breast tissue through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to breast cancer marker peroxyredoxin I, thereby predicting the diagnosis or prognosis of breast cancer early. Can be. Specifically, peroxyredoxin I was fractionated by electrophoresis on SDS-PAGE, transferred to immobilized and immobilized, and then antibody-specific binding to immobilized peroxyredoxin I was added to perform antigen-antibody binding reaction. The expression level of peroxyredoxin I is measured. That is, the expression level of peroxyredoxin I in breast cancer tissue is measured by measuring the expression level of peroxyredoxin I in breast cancer tissue and comparing the measured expression level with the expression level of peroxyredoxin I in normal breast tissue. If the level is higher than the expression level of peroxyredoxin I in normal breast tissue, it is either diagnosed as having breast cancer or predicted to have the potential for breast cancer.

상기 퍼옥시레독신 Ⅰ의 발현 수준은 Ⅰ기 유방암 조직 또는 정상 유방 조직에 비해 Ⅱ~Ⅳ기 유방암 조직에서 높게 나타난다.The expression level of peroxyredoxin I is higher in stage II to IV breast cancer tissues than in stage I breast cancer tissues or normal breast tissues.

상기 항원-항체 결합반응을 위한 고정체로는 니트로셀룰로오스 막, PVDF 막 (polyvinylidene difluoride membrane), 폴리비닐 수지 또는 폴리스티렌 수지로 합성된 96 웰 플레이트, 및 유리로 된 슬라이드글라스 등이 사용될 수 있다.As the fixture for the antigen-antibody coupling reaction, a nitrocellulose membrane, a polyvinylidene difluoride membrane (PVDF) membrane, a 96 well plate synthesized with a polyvinyl resin or polystyrene resin, a glass slide glass, or the like may be used.

상기 항원-항체 결합반응은 통상의 효소면역분석법(ELISA), 방사능면역분석법(radioimmnoassay, RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 웨스턴 블롯, 면역침강법, 면역조직화학염색법(immnohistochemical staining), 형광면역법, 효소기질발색법, 항원-항체 응집법 등의 방법을 이용하여 측정할 수 있다.The antigen-antibody binding reaction is conventional enzyme immunoassay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), sandwich assay (sandwich assay), Western blot, immunoprecipitation, immunohistochemical staining (fluorescence immunoassay) It can be measured using a method such as enzyme substrate coloration, antigen-antibody aggregation.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples.

실시예 1Example 1 : qRT-PCR 분석 : qRT-PCR Analysis

인간 표적 유전자의 발현 프로파일을 특징지우기 위하여, qRT-PCR (Quantitative real-time Polymerase Chain Reaction) 어레이를 이용하여 하기와 같은 반응을 수행하였다.In order to characterize the expression profile of the human target gene, the following reaction was carried out using a quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) array.

OriGene으로부터의 인간 주요 48 조직 real-time (HMRT) qPCR 어레이, Cancer Survey real-time (CSRT 96-I) qPCR 어레이, 및 인간 유방암 real-time (BCRT I-V) qPCR 어레이 (OriGene Technologies, Inc, Rockville, MD, USA)를 사용하였다. 48개의 다른 조직에서 표적 유전자 발현의 동시 측정은 다른 인종의 개체로부터 선택된 인간 조직으로부터 제 1 가닥 cDNA의 패널로 이루어진 HMRT 어레이를 이용하여 수행하였다. 8개의 다른 암(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 표적 유전자의 발현 수준을 I기에서 IV기까지의 암을 갖는 각 암 타입으로부터의 12개 시료로 이루어진 CSRT 어레이를 이용하여 측정하였다. 유방암에서 표적 유전자의 발현은 192개 시료에는 4개의 다른 세트의 어레이(BCRT I~IV)를 이용하고, 12개 시료에는 CSRT 96-I 어레이를 이용하여 측정하였다. 204개의 시료에서, 암의 진행도를 하기와 같이 분류하였다: 0기(정상), 19; I기, 37; Ⅱ기, 76; Ⅲ기, 60; 및 Ⅳ기, 12. 암조직 타입은 수질(medullary), 무친(mucinous), 관 (tubular), 재현(recurrent), 및 유두(papillary)를 포함하는 도관(ductal, n=154), 소엽(lobular, n=13), 전이성(metastatic, n=12) 및 기타 조직학적 타입의 암(n=25)으로 이루어진다. 각 환자의 임상병리학적 정보는 OriGene's 제품표에 기재되어 있다.Human major 48 tissue real-time (HMRT) qPCR arrays from OriGene, Cancer Survey real-time (CSRT 96-I) qPCR arrays, and human breast cancer real-time (BCRT IV) qPCR arrays (OriGene Technologies, Inc, Rockville, MD, USA). Simultaneous measurement of target gene expression in 48 different tissues was performed using an HMRT array consisting of a panel of first strand cDNA from human tissues selected from individuals of different races. CSRT array of 12 samples from each cancer type with cancers from stages I to IV in eight different cancers (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate and thyroid) Measured using. The expression of target genes in breast cancer was measured using four different sets of arrays (BCRT I-IV) for 192 samples and CSRT 96-I array for 12 samples. In 204 samples, cancer progression was classified as follows: stage 0 (normal), 19; I, 37; Group II, 76; Group III, 60; And stage IV, 12. Cancer tissue types include ductal, n = 154, lobular, including medullary, mucinous, tubular, recurrent, and papillary. , n = 13), metastatic ( n = 12) and other histological types of cancer ( n = 25). The clinicopathological information for each patient is listed in the OriGene's product table.

Prx I~VI, β-액틴, GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)에 특이적인 프라이머를 갖는 iCycler(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA), 및 iQ SYBR Green Supermix(Bio-Rad)를 이용하여 96-웰 광학 플레이트에서 PCR을 수행하였다. 증폭된 DNA의 양에 비례하는 형광을 530㎚에서 각 연장시기(elongation phase)의 끝에서 측정하였다. 일련의 희석된 표적 유전자들로부터 얻어진 CT(형광이 발단을 가로지르는 시점)의 표준 그래프를 모든 반응에 대해 구성하여 이들이 증폭되고 주형에 비례하게 기록하였다. CT 값은 방정식 2△△CT를 이용하여 주형 cDNA의 유전자 복사 수로 전환하였다. △CT는 각 시점에서 β-액틴 및 GAPDH에 표준화된 각 유전자의 전사를 위한 다량의 cDNA이다. △△CT는 분석한 각 유전자 전사용 측정값을 빼서 얻어진다. 각 cDNA 시료와 동시에, 표적 유전자의 일련의 희석액을 이용하여 CT 값을 상호관련시켜 표준 곡선을 이루었다. 표준 곡선의 특성은 기울기 및 상관계수로부터 평가하였다. 미지의 농도의 PCR 산물의 형광을 여러 가지 희석액의 형광과 비교하여 정량화를 수행하였다. 산물 검증을 위해 융해곡선분석을 사용하였다. β-액틴 및 GAPDH의 프라이머는 Origene으로부터 공급받았다. 다른 프라이머의 서열은 하기 표 1에 나타내었다.Using iCycler (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) with primers specific for Prx I-VI, β-actin, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), and iQ SYBR Green Supermix (Bio-Rad) PCR was performed on 96-well optical plates. Fluorescence proportional to the amount of DNA amplified was measured at the end of each elongation phase at 530 nm. Standard graphs of C T (points of fluorescence across the incidence) obtained from a series of diluted target genes were constructed for all reactions so that they were amplified and recorded proportionally to the template. The C T value was converted to the gene copy number of the template cDNA using the equation 2 ΔΔCT . ΔC T is a large amount of cDNA for transcription of each gene normalized to β-actin and GAPDH at each time point. ΔΔC T is obtained by subtracting the analyzed gene transcription measurements. Simultaneously with each cDNA sample, a series of dilutions of the target genes were used to correlate the C T values to form a standard curve. The characteristics of the standard curve were evaluated from slope and correlation coefficient. Quantification was performed by comparing the fluorescence of unknown concentrations of PCR products with the fluorescence of various dilutions. Melting curve analysis was used for product verification. Primers of β-actin and GAPDH were supplied from Origene. The sequences of the different primers are shown in Table 1 below.

RT-PCR 증폭용 프라이머의 서열Sequence of RT-PCR Amplification Primer 프라이머primer 방향direction 프라이머 서열(5'->3')Primer Sequence (5 '-> 3') 인간 퍼옥시레독신 I
(Prx I)Human peroxyredoxin I
(Prx I) 정방향Forward tttggtatcagacccgaagctttggtatcagacccgaagc 역방향Reverse tccccatgtttgtcagtgaatccccatgtttgtcagtgaa 인간 퍼옥시레독신 Ⅱ
(Prx Ⅱ)Human Peroxyredoxin II
(Prx II) 정방향Forward ccagacgcttgtctgaggatccagacgcttgtctgaggat 역방향Reverse acgttgggcttaatcgtgtcacgttgggcttaatcgtgtc 인간 퍼옥시레독신 Ⅲ
(Prx Ⅲ)Human Peroxyredoxin III
(Prx III) 정방향Forward gttgtcgcagtctcagtggagttgtcgcagtctcagtgga 역방향Reverse gacgctcaaatgcttgatgagacgctcaaatgcttgatga 인간 퍼옥시레독신 Ⅳ
(Prx Ⅳ)Human Peroxyredoxin IV
(Prx IV) 정방향Forward cagctgtgatcgatggagaacagctgtgatcgatggagaa 역방향Reverse taatccaggccaaatgggtataatccaggccaaatgggta 인간 퍼옥시레독신 Ⅴ
(Prx Ⅴ)Human Peroxyredoxin V
(Prx V) 정방향Forward ccctggatgttccaagacacccctggatgttccaagacac 역방향Reverse aagatggacaccagcgaatcaagatggacaccagcgaatc 인간 퍼옥시레독신 Ⅵ
(Prx Ⅵ)Human Peroxyredoxin VI
(Prx VI) 정방향Forward cgtgtggtgtttgtttttggcgtgtggtgtttgtttttgg 역방향Reverse tcttcttcagggatggttggtcttcttcagggatggttgg

1-1. 48개의 다른 인간 정상 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 전사 농도1-1. Transcriptional Concentrations of Peroxyredoxin I in 48 Different Human Normal Tissues

다른 인종의 개체로부터 선택된 48개의 다른 인간 정상 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 전사 농도를 96-웰 HMRT qPCR 어레이를 이용하여 측정하였으며, 결과는 도 1에 나타내었다.Transcription concentrations of peroxyredoxin I in 48 different human normal tissues selected from individuals of different races were measured using a 96-well HMRT qPCR array and the results are shown in FIG. 1.

도 1에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 Ⅰ의 전사 농도는 48개의 인간 주요 정상 조직 중 유방 조직에서 가장 낮게 발현되었다(0.65×10-4 pg).As shown in FIG. 1, the transcription concentration of peroxyredoxin I was the lowest expressed in breast tissue among the 48 human major normal tissues (0.65 × 10 −4 pg).

1-2. 8개의 인간 정상 조직(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 퍼옥시레독신 I~VI의 전사 농도1-2. Transcription levels of peroxyredoxin I-VI in eight human normal tissues (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate, and thyroid gland)

인간 유방 조직에서 퍼옥시레독신 I의 낮은 발현이 퍼옥시레독신 I에 특이적인지 아닌지를 확인하기 위하여, 8개의 인간 정상 조직(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 동일한 96-웰 HMRT qPCR 어레이를 이용하여 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도를 측정하였다.In eight human normal tissues (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate and thyroid gland) to determine whether low expression of peroxyredoxin I in human breast tissue is specific to peroxyredoxin I MRNA concentrations of peroxyredoxin I-VI were measured using the same 96-well HMRT qPCR array.

결과는 도 2에 나타내었다.The results are shown in Fig.

도 2에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 I~VI의 발현 프로파일은 다른 인간 정상 조직에서보다 유방 조직에서 가장 낮게 발현되어, 인간 유방 조직에서 퍼옥시레독신 I의 낮은 발현이 퍼옥시레독신 I에만 특이적이지 않다는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 2, the expression profile of peroxyredoxin I-VI is lowest in breast tissue than in other human normal tissues, such that the lower expression of peroxyredoxin I in human breast tissue is It was confirmed that not specific only.

1-3. 인간 고형암 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ~VI의 mRNA 농도1-3. MRNA Concentrations of Peroxyredoxin I-VI in Human Solid Cancer Tissues

8개의 고형암(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 CSRT 96-I 어레이를 이용하여 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도를 측정하였다.MRNA concentrations of peroxyredoxin I-VI were measured using CSRT 96-I arrays in eight solid cancers (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate and thyroid).

결과는 도 3에 나타내었다.The results are shown in FIG.

도 3에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 I의 발현 프로파일은 8개의 고형암 중 유방암 조직에서 가장 높게 발현되었으며(9.12±1.86), 퍼옥시레독신 Ⅱ~VI의 발현 프로파일은 다른 암 조직과 유의한 차이가 없었다.As shown in FIG. 3, the expression profile of peroxyredoxin I was the highest in breast cancer tissue among the eight solid cancers (9.12 ± 1.86), and the expression profile of peroxyredoxin II to VI was significantly different from other cancer tissues. There was no difference.

1-4. 인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ~VI의 mRNA 농도1-4. MRNA Concentrations of Peroxyredoxin I-VI in Human Breast Cancer Tissues

유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 발현 프로파일을 확인하기 위하여, 48-웰 BCRT Ⅱ 어레이를 이용하여 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도를 측정하였다. 상기 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도로부터 유도배수를 얻었다.To confirm the expression profile of peroxyredoxin I in breast cancer tissues, mRNA concentrations of peroxyredoxin I-VI were measured in breast cancer tissues using a 48-well BCRT II array. Induced folds were obtained from the mRNA concentrations of peroxyredoxin I-VI.

유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도(A) 및 이로부터 얻은 유도배수(B)는 도 4에 나타내었다.MRNA concentrations of peroxyredoxin I-VI (A) and induced folds (B) obtained from breast cancer tissues are shown in FIG. 4.

도 4에 나타난 바와 같이, 정상 유방 조직에서는 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도가 모두 낮게 발현되었으나, 유방암 조직에서는 퍼옥시레독신 I 및 Ⅱ의 mRNA 농도가 각각 8.11±1.58 x 10-4 pg, 10.53±1.33 x 10-4pg로 발현되었고 퍼옥시레독신 Ⅲ~VI의 mRNA 농도는 매우 낮게 발현되었다(A). 또한, 유방암 조직에서 mRNA의 유도 배수는 퍼옥시레독신 I이 가장 높게 발현됨을 확인하였다(8.64±1.40) (B).As shown in FIG. 4, mRNA levels of peroxyredoxin I-VI were low in normal breast tissues, but mRNA concentrations of peroxyredoxin I and II were 8.11 ± 1.58 x 10 -4 pg in breast cancer tissues, respectively. , 10.53 ± 1.33 x 10 -4 pg and mRNA levels of peroxyredoxin III-VI were very low (A). In addition, it was confirmed that the induction fold of mRNA in breast cancer tissue was the highest expression of peroxyredoxin I (8.64 ± 1.40) (B).

1-5. 인간 유방암 진행도와 퍼옥시레독신 Ⅰ의 연관성 실험1-5. Relationship between progression of human breast cancer and peroxyredoxin I

유방암 진행도와 퍼옥시레독신 I과의 연관성을 평가하기 위하여, 0~IV기 범위의 정상 및 악성 유방 조직의 204개의 시료에서 mRNA 발현 정도를 5개의 다른 세트의 qRT-PCR [Cancer Survey real-time (CSRT 96-I) qPCR 어레이 (n=9), 및 인간 유방암 real-time (BCRT I-V) qPCR 어레이 I~V (n=176)]로 측정하였으며, 정상(0기)부터 악성(I, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 기)까지의 유도배수를 측정하였다.To assess the association between breast cancer progression and peroxyredoxin I, mRNA expression levels in five different sets of qRT-PCR [Cancer Survey real-time] were evaluated in 204 samples of normal and malignant breast tissues in the 0-IV range. (CSRT 96-I) qPCR array (n = 9), and human breast cancer real-time (BCRT IV) qPCR arrays I-V (n = 176)], from normal (stage 0) to malignant (I, II). , Ⅲ, Ⅳ) were measured induction fold up to.

인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수를 산점도로 나타낸 결과(A), 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현과 암의 진행도와의 관계를 상자-수염 그림(box-and-whisker plot)으로 나타낸 결과(B), 및 암의 진행도를 더 세분화(I, ⅡA, ⅡB, ⅢA, ⅢB, ⅢC, 및 Ⅳ 기)한 인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수(C)를 도 5에 나타내었다.Scattered plot of the induction fold of mRNA expression of peroxyredoxin I in human breast cancer tissues (A). Box-and-whisker shows the relationship between peroxyredoxin I mRNA expression and cancer progression. Induced folds of mRNA expression of peroxyredoxin I in human breast cancer tissues (B), and further refined cancer progression (phases I, IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC, and IV) (C) is shown in FIG.

도 5에 나타난 바와 같이, 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 2배 과발현은 185건 중 181건에서 발생하였으며(97.8%), 유도배수는 7.90±0.45이었다(A). 또한, 암의 진행도가 높아질수록 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 더 높게 나타나, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 Ⅱ~Ⅳ기 유방암, 특히 Ⅳ기 암인 전이성 암과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있다(B). 또한, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 암의 진행도가 높을수록 증가하므로, 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수는 암의 세분화와 관련이 있음을 알 수 있다(P = 0.0181)(C).As shown in FIG. 5, doubling overexpression of peroxyredoxin I occurred in 181 of 185 cases (97.8%) and induced fold was 7.90 ± 0.45 in breast cancer tissues (A). In addition, the higher the cancer progression, the higher the induced fold of the mRNA expression of peroxyredoxin I. The induced fold of the mRNA expression of peroxyredoxin I was higher than that of metastatic cancer of stage II-IV breast cancer, especially stage IV cancer. There is a close correlation (B). In addition, since the induced fold of mRNA expression of peroxyredoxin I increases with the progression of cancer, it can be seen that the induced fold of mRNA expression of peroxyredoxin I is associated with cancer segmentation (P = 0.0181) (C).

실시예 2Example 2 : 웨스턴-블롯 분석 : Western-Blot Analysis

인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I 단백질의 발현 정도를 알아보기 위하여, 웨스턴 블롯 분석을 통해 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the expression level of the peroxyredoxin I protein in human breast cancer tissue, the following experiment was performed through Western blot analysis.

임상적으로 정의된 인간 암조직 및 정상조직으로부터의 총 막과 가용성 단백질은 Capital Biosciences (Gaithersburg, MD, USA)로부터 얻었다. 면역학적 분석을 위해, 다른 개체 및 조화된 쌍개체(정상조직 및 원발성 암; 원발성 및 전이성 암)로부터의 단백질을 사용하였다. 암 조직의 임상병리학적 특징은 하기 표 2에 나타내었다.Total membranes and soluble proteins from clinically defined human cancer and normal tissues were obtained from Capital Biosciences (Gaithersburg, MD, USA). For immunological analysis, proteins from other individuals and coordinated pairs (normal tissue and primary cancer; primary and metastatic cancer) were used. The clinicopathological features of cancer tissues are shown in Table 2 below.

분리된 7개의 암조직(뇌, 유방, 결장, 신장, 간, 폐 및 난소)으로부터 총 막과 가용성 단백질 용해물(15㎍)을 환원성 및 비환원성 SDS-PAGE에 로딩하여 Amersham ECL Western blotting system (GE Healthcare, Chalfont St. Giles, United Kingdom)을 이용하여 웨스턴 블롯을 수행하였다. 상응하는 인간 단백질과 함께 교차-반응성을 갖는 항-퍼옥시레독신 I, 항-퍼옥시레독신 Ⅱ 및 항-Cu/Zn SOD(superoxide dismutase) 토끼 다클론 항체(rabbit polyclonal antibodies)는 AbFrontier(Seoul, Korea)로부터 구입하였다. 시료는 4~20% 기울기 SDS-PAGE (GenScript Corp, Piscataway, NJ, USA)에서 전기영동하여 분획하고 PVDF 막 (polyvinylidene difluoride membrane)으로 옮겼다. 막을 봉쇄하고 0.1% 트윈 20을 함유한 PBS에서 2시간 동안 실온에서 항체(부피비로 1:1000)와 함께 배양하였다. 여러 번 세척한 후, 막을 HRP(horseradish peroxidase)로 결합된 다클론 염소 항-토끼 IgG 항체(부피비로 1:2000)와 함께 배양하였다. 그 다음, 막을 PBS로 세척하였고, 화학발광 기질을 가하였다. 로딩 시료의 검증을 위해, 막을 Coomassie Blue R-250으로 염색하였다.Total membranes and soluble protein lysates (15 μg) were loaded from 7 isolated cancer tissues (brain, breast, colon, kidney, liver, lung and ovary) into reducing and non-reducing SDS-PAGE to determine the Amersham ECL Western blotting system ( Western blot was performed using GE Healthcare, Chalfont St. Giles, United Kingdom. Anti-peroxyredoxin I, anti-peroxyredoxin II and anti-Cu / Zn superoxide dismutase (SOD) rabbit polyclonal antibodies with cross-reactivity with the corresponding human protein are AbFrontier (Seoul). , Korea). Samples were electrophoresed on 4-20% gradient SDS-PAGE (GenScript Corp, Piscataway, NJ, USA) and transferred to PVDF membrane (polyvinylidene difluoride membrane). The membrane was blocked and incubated with antibody (volume ratio 1: 1000) at room temperature for 2 hours in PBS containing 0.1% Tween 20. After washing several times, the membrane was incubated with polyclonal goat anti-rabbit IgG antibody (1: 2000 by volume) bound with horseradish peroxidase (HRP). The membrane was then washed with PBS and a chemiluminescent substrate was added. For validation of loading samples, membranes were stained with Coomassie Blue R-250.

Figure 112009015823169-PAT00001
Figure 112009015823169-PAT00001

결과는 도 6에 나타내었다.The results are shown in FIG.

도 6에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 I 단백질은 인간 유방암 조직에서 가장 높게 발현되었다(A). 인간 유방암 시료의 웨스턴 블롯 분석은 대략 40kDa에서 밴드를 나타내었다(B). 환원성 겔에서의 밴드가 더 높은 분자량 형태로 완전히 이동하였으며, 이는 40kDa 밴드가 퍼옥시레독신 I의 다이머 형태를 나타낸다는 것을 암시한다.As shown in FIG. 6, peroxyredoxin I protein was highest expressed in human breast cancer tissues (A). Western blot analysis of human breast cancer samples showed a band at approximately 40 kDa (B). The band in the reducing gel has shifted completely to higher molecular weight forms, suggesting that the 40 kDa band represents the dimer form of peroxyredoxin I.

2-1. 인간 정상 조직 및 암 조직(유방, 폐, 난소)에서 퍼옥시레독신 Ⅰ 단백질의 발현 정도 측정2-1. Determination of Peroxyredoxin I Protein Expression in Human Normal and Cancerous Tissues (breast, Lungs, Ovary)

다른 개체로부터 4개의 정상 조직과 4개의 암 조직의 시료에서 퍼옥시레독신 Ⅰ 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블롯으로 측정하였다.The expression level of peroxyredoxin I protein in samples of 4 normal tissues and 4 cancer tissues from other individuals was measured by Western blot.

결과는 도 7에 나타내었다.The results are shown in FIG.

도 7에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 I 단백질은 유방암 조직에서 과발현됨을 확인하였다.As shown in Figure 7, it was confirmed that the peroxyredoxin I protein is overexpressed in breast cancer tissue.

2-2. 유방암 조직의 쌍과 다른 암조직의 쌍(폐 및 결장)에서 퍼옥시레독신 Ⅰ 단백질의 발현 정도 측정2-2. Determination of Peroxyredoxin I Protein Expression in Pairs of Breast Cancer Tissues and Pairs of Other Cancer Tissues (Lungs and Colon)

유방암 조직의 쌍(같은 개체로부터 정상 및 원발성 암의 쌍; 같은 개체로부터 원발성 및 전이성 암의 쌍)과 다른 암조직의 쌍(폐 및 결장)에서 퍼옥시레독신 I 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블롯으로 측정하였다. 양성대조군으로 Cu/Zn SOD를 사용하였다.Western blot expression of peroxyredoxin I protein expression in pairs of breast cancer tissues (pairs of normal and primary cancers from the same individual; pairs of primary and metastatic cancers from the same individual) and pairs of other cancer tissues (lung and colon) Measured. Cu / Zn SOD was used as a positive control.

결과는 도 8에 나타내었다.The results are shown in FIG.

도 8에 나타난 바와 같이, 퍼옥시레독신 I 단백질이 유방암 조직에서 과발현됨을 확인하였다. 유사하게, 퍼옥시레독신 Ⅱ 단백질은 유방암 조직에서 과발현되었으나, 정상 조직에서의 퍼옥시레독신 Ⅱ 단백질의 농도는 정상 조직에서의 퍼옥시레독신 I보다 더 높게 발현되었다.As shown in Figure 8, it was confirmed that the peroxyredoxin I protein is overexpressed in breast cancer tissue. Similarly, peroxyredoxin II protein was overexpressed in breast cancer tissues, but the concentration of peroxyredoxin II protein in normal tissues was higher than peroxyredoxin I in normal tissues.

본 발명에 따른 퍼옥시레독신 Ⅰ은 인간 유방암 조직에서 과발현되어 유방암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있으므로, 유방암 진단용 마커로서 유용하게 사용될 수 있다.Since peroxyredoxin I according to the present invention is overexpressed in human breast cancer tissue and can predict the diagnosis or prognosis of breast cancer early, it can be usefully used as a marker for diagnosing breast cancer.

도 1은 다른 인종의 개체로부터 선택된 48개의 다른 인간 정상 조직에서 퍼옥시레독신 Ⅰ의 전사 농도를 96-웰 HMRT qPCR 어레이를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 도이다.FIG. 1 shows the results of measuring the transcriptional concentration of peroxyredoxin I using a 96-well HMRT qPCR array in 48 different human normal tissues selected from individuals of different races.

도 2는 8개의 인간 정상 조직(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 퍼옥시레독신 I~VI의 전사 농도를 96-웰 HMRT qPCR 어레이를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 도이다.FIG. 2 shows the results of measurement of the transcriptional concentrations of peroxyredoxin I-VI using 96-well HMRT qPCR arrays in eight human normal tissues (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate and thyroid gland). The figure shown.

도 3은 8개의 고형암(유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 전립선 및 갑상선)에서 CSRT 96-I 어레이를 이용하여 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도를 측정한 결과를 나타낸 도이다.3 is a diagram showing the results of measuring mRNA levels of peroxyredoxin I-VI using CSRT 96-I array in eight solid cancers (breast, colon, kidney, liver, lung, ovary, prostate, and thyroid gland). .

도 4는 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I~VI의 mRNA 농도(A) 및 이로부터 얻은 유도배수(B)를 나타낸 도이다.Figure 4 is a diagram showing the mRNA concentration (A) of peroxyredoxin I-VI and induced folds (B) obtained from breast cancer tissues.

도 5는 인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수를 산점도로 나타낸 결과(A), 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현과 암의 진행도와의 관계를 상자-수염 그림(box-and-whisker plot)으로 나타낸 결과(B), 및 암의 진행도를 더 세분화(I, ⅡA, ⅡB, ⅢA, ⅢB, ⅢC, 및 Ⅳ 기)한 인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I의 mRNA 발현의 유도 배수(C)를 나타낸 도이다.FIG. 5 is a scatter plot showing the induction fold of mRNA expression of peroxyredoxin I in human breast cancer tissues (A). mRNA expression of peroxyredoxin I in human breast cancer tissues (B), and further refined cancer progression (I, IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC, and IV) as indicated by the and-whisker plot) Is a diagram showing an induction multiple (C) of.

도 6은 인간 유방암 조직에서 퍼옥시레독신 I 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블롯 분석을 통해 관찰한 도이다.Figure 6 is a diagram observing the degree of expression of peroxyredoxin I protein in human breast cancer tissue by Western blot analysis.

도 7은 다른 개체로부터 4개의 정상 조직과 4개의 암 조직의 시료에서 퍼옥 시레독신 Ⅰ 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블롯을 통해 관찰한 도이다.FIG. 7 is a diagram illustrating Western blot expression of peroxyredoxin I protein in samples of 4 normal tissues and 4 cancer tissues from different individuals.

도 8은 유방암 조직의 쌍(같은 개체로부터 정상 및 원발성 암의 쌍; 같은 개체로부터 원발성 및 전이성 암의 쌍)과 다른 암조직의 쌍(폐 및 결장)에서 퍼옥시레독신 I 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블롯을 통해 관찰한 도이다.8 shows the expression level of peroxyredoxin I protein in a pair of breast cancer tissues (a pair of normal and primary cancers from the same individual; a pair of primary and metastatic cancers from the same individual) and a pair of other cancer tissues (lung and colon). Figures observed through Western blot.

Claims (5)

퍼옥시레독신 Ⅰ을 유효성분으로 하는 유방암 진단용 마커.A marker for diagnosing breast cancer using peroxyredoxin I as an active ingredient. 제 1항에 있어서, 상기 마커는 Ⅱ~Ⅳ기 유방암에 특이적인 것을 특징으로 하는 마커.The marker according to claim 1, wherein the marker is specific for stage II to IV breast cancer. 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 유방암 진단 키트.A breast cancer diagnostic kit comprising an antibody that specifically binds to peroxyredoxin I. 유방 조직에서 유방암 마커인 퍼옥시레독신 Ⅰ에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 퍼옥시레독신 Ⅰ을 검출하는 방법.A method for detecting peroxyredoxin I through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to peroxyredoxin I, a breast cancer marker in breast tissue. 제 4항에 있어서, 상기 퍼옥시레독신 Ⅰ은 Ⅰ기 유방암 조직 또는 정상 유방 조직에 비해 Ⅱ~Ⅳ기 유방암 조직에서 높게 발현되는 것을 특징으로 하는, 퍼옥시레독신 Ⅰ을 검출하는 방법.5. The method of claim 4, wherein the peroxyredoxin I is expressed more in stage II to IV breast cancer tissues than in stage I breast cancer tissues or normal breast tissues.
KR1020090022290A 2009-03-16 2009-03-16 Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same KR20100104109A (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090022290A KR20100104109A (en) 2009-03-16 2009-03-16 Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same
PCT/KR2009/001943 WO2010107157A1 (en) 2009-03-16 2009-04-15 Diagnostic marker for breast cancer with peroxiredoxin i as active reagent and diagnostic kit for breast cancer using same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090022290A KR20100104109A (en) 2009-03-16 2009-03-16 Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20100104109A true KR20100104109A (en) 2010-09-29

Family

ID=42739807

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020090022290A KR20100104109A (en) 2009-03-16 2009-03-16 Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20100104109A (en)
WO (1) WO2010107157A1 (en)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1599607A2 (en) * 2003-03-04 2005-11-30 Arcturus Bioscience, Inc. Signatures of er status in breast cancer
WO2005098037A1 (en) * 2003-03-07 2005-10-20 Arcturus Bioscience, Inc. Breast cancer signatures
WO2005123944A1 (en) * 2004-06-18 2005-12-29 Roche Diagnostics Gmbh Use of protein pdx1 as a marker for breast cancer

Also Published As

Publication number Publication date
WO2010107157A1 (en) 2010-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101058230B1 (en) Marker for diagnosis of breast cancer comprising thioredoxin 1, and diagnosis kit of breast cancer using the same
JP7109008B2 (en) Methods and compositions for detecting pancreatic cancer
Gao et al. Roles of fibroblast activation protein and hepatocyte growth factor expressions in angiogenesis and metastasis of gastric cancer
Sheen-Chen et al. Circulating soluble Fas in patients with breast cancer
Zougman et al. Retinoic acid-induced protein 3: identification and characterisation of a novel prognostic colon cancer biomarker
JP2015503922A (en) Biomarkers for breast cancer prediction and diagnosis
KR101065900B1 (en) Marker for diagnosis of lung cancer and colon cancer comprising glutaredoxin 3, and diagnosis kit of lung cancer and colon cancer using the same
Tobi et al. Prospective markers for early diagnosis and prognosis of sporadic pancreatic ductal adenocarcinoma
KR101388711B1 (en) Complement C9 as markers for the diagnosis of cancer
Li et al. Increased expression of stomatin-like protein 2 (STOML2) predicts decreased survival in gastric adenocarcinoma: a retrospective study
TWI399541B (en) Method for prognosis of gastric cancer
Wang et al. The significance of biomarkers in nipple discharge and serum in diagnosis of breast cancer
US9382587B2 (en) Diagnosis of breast cancer based on expression level of thioredoxin-1
Sashide et al. CA19-9 as a serum marker for poor prognosis in urothelial carcinoma
KR20100104109A (en) Marker for diagnosis of breast cancer comprising peroxiredoxin i, and diagnosis kit of breast cancer using the same
CN110261618B (en) Application of SPRR4 protein as gastric cancer serum biomarker and kit thereof
KR102164525B1 (en) A biomarker composition for diagnosing or prognosising thyroid cancer comprising GDF 15
KR102097008B1 (en) A biomarker composition for diagnosing or prognosising thyroid cancer comprising FGF 21
KR20110076830A (en) Complement c9 as markers for the diagnosis of small cell lung cancer and non-small cell lung cancer
Martinelli et al. Preoperative Anti-Class III β-Tubulin Antibodies As Relevant Clinical Biomarkers in Ovarian Cancer
KR20190035539A (en) Composition or kit comprising PHD3 measuring agent for diagnosis of renal cell carcinoma and method for diagnosis using the same
Kojima et al. Titration of serum CEA, p53 antibodies and CEA-IgM complexes in patients with colorectal cancer
KR20120021518A (en) Composition and method for diagnosing hepatocellular carcinoma
CN110261610B (en) Application of ZNF74 protein as gastric cancer serum biomarker and kit thereof
US20220390453A1 (en) Ovarian cancer biomarker and methods of using same

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application