KR20100100201A - Mass production method of pholiota adiposa using short tree cultivation - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 대량생산방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 검은비늘버섯(Pholiota adiposa)의 생산방법에 있어서, 균사체의 선발단계; 상기 균사체를 액체배양 배지에 첨가하고, 배양시키는 단계; 상기 배양된 액체배지종균을 단목에 접종시키는 단계; 및 상기 액체배지종균이 접종된 단목에서 검은비늘버섯의 자실체를 형성시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 생산방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for mass production of black scale mushrooms using cultivated lumber , and more particularly, to a method for producing black scale mushrooms ( Pholiota adiposa ), selecting a mycelium; Adding the mycelium to a liquid culture medium and culturing; Inoculating the cultured liquid medium spawn on single head; And a step of forming a fruiting body of black scale mushrooms from the single medium in which the liquid medium spawn is inoculated. It relates to a method of producing black scale mushrooms using single tree cultivation, comprising:
검은비늘버섯은 담자균류 주름버섯목 독청버섯과의 버섯으로 학명은 Pholiota adipose 이며, 분포지역은 한국, 중국, 일본, 유럽, 북아메리카 등이다. 북한에서는 기름비늘갓버섯이라고 한다. 갓은 지름 3~8cm로 어릴 때는 둥근 모양이나 차차 편평하게 펴진다. 갓 표면은 습하며 점성이 있고 황갈색이며, 갓 둘레는 담황색이고 갓 전면에 삼각형의 백색 비늘조각들이 있으며 점차 갈황색이 된다. 가 장자리는 처음에는 안쪽으로 말리며 실모양의 갓막이 있다. 주름살은 완전히 붙은 형이며 약간 빽빽하고 처음에는 황백색이나 차차 갈색으로 변한다. 대는 길이가 7∼14cm, 직경 0.7∼0.9cm이며 구부러졌다. 위 아래 굵기가 같고, 아랫부분은 황갈색의 비늘조각으로 덮여 있고 담황색 턱받이가 있다. 대의 속은 처음에는 차 있다가 차차 해면질로 되거나 거의 빈다. 포자는 타원형이며, 표면은 매끈하고 포자문은 적갈색이다.Black scale mushroom is a mushroom of the basidiomycetes fold fungi, poisonous mushroom and the scientific name Pholiota adipose , and its distribution area is Korea, China, Japan, Europe and North America. In North Korea, it is called oil scales. The shade is 3 ~ 8cm in diameter, and when it is young, it is rounded or gradually flattened. The surface of the lampshade is wet, viscous and yellowish brown, and the circumference of the lampshade is pale yellow with triangular white scales on the front of the lampshade, and gradually becomes brownish yellow. The edge is initially inwardly curled and has a threaded cap. Wrinkles are completely glued, slightly dense, initially yellowish or gradually brown. The stand was 7-14 cm in length and 0.7-0.9 cm in diameter and bent. The upper and lower thickness is the same, and the lower part is covered with yellowish brown scale pieces and has a pale yellow bib. The stomach is initially cold and gradually becomes spongy or almost empty. Spores are oval, smooth in surface, and spores reddish brown.
검은비늘버섯은 식용버섯이며, 활엽수톱밥을 이용한 인공 재배가 가능하며, 봄부터 가을에 걸쳐 활엽수의 죽은가지 그루터기에 속생하는 목재 갈색부후성 버섯이다. 포자는 타원형이며 표면은 평활하고 발아공이 있으며 포자문은 적갈색이다. 검은비늘버섯은 한국, 일본, 중국 등 북반구 일대에 자생하며 항종양 등 약리작용이 우수한 것으로 알려져 있다. 현재 검은비늘버섯의 재배는 치감과 맛 향 그리고 생리활성 물질 때문에 중국 및 일본 등에서는 톱밥을 이용한 인공재배가 이루어지고 있으나 우리나라에서는 인공재배에 관한 연구가 미흡한 실정으로 느타리버섯 계통의 대체 버섯식품으로의 대량재배기술이 필요한 실정이다. Black scale mushroom is an edible mushroom and can be artificially cultivated using hardwood sawdust. It is a woody brownish fungus that grows on the dead branches of hardwoods from spring to autumn. Spores are oval, the surface is smooth, germinated, and the spores are reddish brown. Black scale mushroom grows in the northern hemisphere around Korea, Japan and China, and is known for its excellent pharmacological action such as anti-tumor. Currently, the cultivation of black scale mushroom is artificial cultivation using sawdust in China and Japan due to the sense of persimmon, taste, and bioactive substances. However, the research on artificial cultivation is insufficient in Korea. Mass cultivation technology is needed.
우리나라에서 검은비늘버섯에 관한 연구는 미미한 실정이며, 비늘버섯속균(Pholioa sp)의 특징과 자실체형성(1998, 성재모 등)에 대한 연구보고가 있으며, 이상선 등에 의해서 야생에서 채집된 검은비늘버섯(Pholioa adiposa)균에 관한 연구(1998,한국균학회지26(4):574~582)가 시작되었다. 이후 검은비늘버섯에 관한 연구는 주로 성분분석과 균사생장 특성에 관한 연구가 있으며, 그중 금봉이 검은비늘버섯과 Pholiota 속간 유연관계 및 생리활성 분석(장후봉 외4인), 금봉이 검은비늘 버섯 수량 증수를 위한 배지 개발(장후봉 외3, 2004)에서는 균사생장특성 규명 및 최적배지 조성에 관한 연구가 이루어졌다. 검은비늘버섯의 인공재배에 관한 연구는 이민웅의 유용버섯자원의 발굴과 대량 재배기술개발에 관한 연구보고서에서 톱밥을 이용한 인공재배법 대하여 보고되었다. 그러나 톱밥을 이용한 인공재배보다 재배방법이 훨씬 용이하고 생산성이 향상된 단목재배에 관한 연구보고는 없는 실정이다.Study on black scaly mushrooms in our country is the situation negligible, scaly mushrooms spp (Pholioa sp) features and fruiting body formation (1998, seongjaemo etc.) black scales collected from the wild and reporting research, such as by yisangseon for mushrooms (Pholioa adiposa ) (1998, Korean Journal of Mycology 26 (4): 574 ~ 582) began. Since then, studies on black scale mushrooms have mainly been carried out on the component analysis and mycelial growth. Among them, Geumbong has a flexible relation between the black scale mushroom and Pholiota genus and its physiological activity (Jang Hobong et al. 4), and Geumbong increases the number of black scale mushrooms. In the development of medium for cultivation (Jang, Huong et al. A study on artificial cultivation of black scale mushrooms was reported on the method of artificial cultivation using sawdust in Lee Minwoong's research report on the discovery of useful mushroom resources and development of mass cultivation technology. However, there have been no reports on cultivation of single-wood cultivation, which is much easier and more productive than artificial cultivation using sawdust.
본 발명의 목적은 기존의 검은비늘버섯의 재배방법에 비하여 훨씬 용이하고 생산성이 향상된 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 대량생산방법을 제공하고자 함이다.It is an object of the present invention to provide a mass production method of black scale mushrooms using cultivated lumber, which is much easier and more productive than conventional methods of growing black scale mushrooms.
상기의 과제를 해결하기 위하여,In order to solve the above problems,
본 발명은 검은비늘버섯의 생산방법에 있어서, 균사체의 선발단계; 상기 균사체를 액체배양 배지에 첨가하고, 배양시키는 단계; 상기 배양된 액체배지종균을 단목에 접종시키는 단계; 및 상기 액체배지종균이 접종된 단목에서 검은비늘버섯의 자실체를 형성시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 생산방법을 제공한다.The present invention provides a method for producing black scale mushrooms, selection step of mycelium; Adding the mycelium to a liquid culture medium and culturing; Inoculating the cultured liquid medium spawn on single head; It provides a method for producing black scale mushrooms using cultivation of black scale, characterized in that it comprises; and the step of forming a fruiting body of black scale mushroom in the monophyllum inoculated with the liquid medium spawn.
본 발명은 환경오염 및 자생지 파괴, 무분별한 채취로 산림버섯유전자원의 고갈로 인한 식용버섯인 검은비늘버섯의 대량생산기술에 관한 것으로 기존의 톱밥재배를 이용한 버섯재배 방법에서 탈피하여 산림내 간벌목을 일차적으로 이용할 수 있도록 균주선발 및 액체배양 기법을 확립하고 검은비늘버섯의 자실체 유도 및 대량생산기술을 도모함으로써 농가의 신소득자원의 확보는 물론 청정 식용 임산버섯 으로 버섯산업의 활력을 개척할 수 있을 것이다.The present invention relates to a mass production technology of black scale mushrooms, which is an edible mushroom caused by depletion of forest mushroom gene sources due to environmental pollution, native soil destruction, and indiscriminate sampling, and is separated from the mushroom cultivation method using conventional sawdust cultivation. By establishing strain selection and liquid cultivation techniques for primary use, and promoting fruiting and mass production of black scale mushrooms, we can secure new income resources for farmers and pioneer the mushroom industry with clean edible forest mushrooms. will be.
또한 본 발명을 통하여 검은비늘버섯의 대량생산기술을 확립하여 침체된 버섯산업의 활로를 개척하고 버섯농가의 신소득자원으로 육성할 수 있을 것이다.In addition, through the present invention to establish a mass production technology of black scale mushrooms will be able to exploit the stagnation of the stagnant mushroom industry and foster as a new income resources of mushroom farms.
본 발명은 검은비늘버섯(Pholiota adiposa)의 생산방법에 있어서, 균사체의 선발단계; 상기 균사체를 액체배양 배지에 첨가하고, 배양시키는 단계; 상기 배양된 액체배지종균을 단목(short tree)에 접종시키는 단계; 및 상기 액체배지종균이 접종된 단목에서 검은비늘버섯의 자실체를 형성시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 생산방법을 제공한다.The present invention provides a method for producing a black scale mushroom ( Pholiota adiposa ), the selection step of the mycelium; Adding the mycelium to a liquid culture medium and culturing; Inoculating the cultured liquid medium spawn on a short tree; It provides a method for producing black scale mushrooms using cultivation of black scale, characterized in that it comprises; and the step of forming a fruiting body of black scale mushroom in the monophyllum inoculated with the liquid medium spawn.
본 발명에서 상기 균사체는 검은비늘버섯(Pholiota adiposa) 균주가, YMA(Yeast extract malt extract agar) 배지에서 pH 6~8, 20~30℃의 조건하에서 6~8일간 배양되어 선발된 것일 수 있다.In the present invention, the mycelium may be a black scale mushroom ( Pholiota adiposa ) strain is selected by culturing for 6-8 days under conditions of pH 6-8, 20-30 ℃ in YMA (Yeast extract malt extract agar) medium.
또한 본 발명에서 상기 액체배양 배지는 SDB(Soybean powder Dextrose Broth) 배지이며, 배양시 통기량은 0.5~1.5 vvm으로 조절된 것일 수 있다. In addition, the liquid culture medium in the present invention is SDB (Soybean powder Dextrose Broth) medium, the aeration rate during the culture may be adjusted to 0.5 ~ 1.5 vvm.
또한 본 발명에서 상기 균사체 배양은 상기 선발된 균사체를 상기 액체배양 배지에 첨가하고 23~27℃의 무균실에서 6~8일간 배양하는 것일 수 있다.In addition, the mycelium culture in the present invention may be to add the selected mycelium to the liquid culture medium and incubated for 6 to 8 days in a sterile chamber of 23 ~ 27 ℃.
또한 본 발명에서 상기 단목은 참나무이며 상기 참나무를 지름 18~22㎝, 길이 23~27㎝로 절단하고, 무수황산마그네슘(Magnesium Sulfate Anhydrous), 질산칼륨(Potassium Nitrate) 및 버섯전용제제를 함유하는 용수에 1~3일간 침수시킨 후, 118~124℃에서 50~70분간 고압 멸균 후 상온에서 냉각한 것일 수 있다.In the present invention, the single tree is oak, and the oak is cut to 18-22 cm in diameter, 23-27 cm in length, and contains water containing anhydrous magnesium sulfate (Magnesium Sulfate Anhydrous), potassium nitrate (Potassium Nitrate), and mushroom preparations. After immersion in 1-3 days, it may be one that has been cooled at room temperature after autoclaving at 118 ~ 124 ℃ for 50 to 70 minutes.
또한 본 발명에서 상기 검은비늘버섯의 자실체 형성은 14~16℃에서 7~20일간의 조건에서 자실체가 형성되는 것일 수 있다.In addition, the fruit body of the black scale mushroom in the present invention may be that the fruiting body is formed under the conditions of 7 to 20 days at 14 ~ 16 ℃.
본 발명은 상기의 방법으로 생산된 검은비늘버섯을 제공한다.The present invention provides a black scale mushroom produced by the above method.
이하 본 발명의 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 대량생산방법에 대하여 보다 상세하게 설명한다.Hereinafter will be described in more detail with respect to the mass production method of black scale mushrooms using the cultivated wood of the present invention.
본 발명은 검은비늘버섯의 단목재배를 통한 대량생산기술을 위한 목적으로 균주의 선발로부터 자실체 발생까지의 과정을 통하여 검은비늘버섯의 단계별 과정을 특성화하는 것으로 다음과 같이 구성된다.The present invention is configured to characterize the step-by-step process of the black scale mushroom through the process from the selection of the strain to the generation of fruiting bodies for the purpose of mass production technology through the cultivation of black scale mushroom.
제 1단계 : 검은비늘버섯(Pholiota adiposa)의 단목재배에 적합한 균주의 선발과정, 제 2단계 : 검은비늘버섯의 단목재배에 적합한 액체배양 배지조성 과정, 제 3단계 : 액체배양된 균사체의 접종 및 단목재배과정 유도과정, 제 4단계 : 검은비늘버섯의 자실체 발생환경조성 과정을 포함하여 구성된다.Step 1: Selection of strains suitable for cultivation of black scale mushrooms ( Pholiota adiposa ), Step 2: Preparation of liquid culture medium suitable for cultivation of black scale mushrooms, Step 3: Inoculation of liquid cultured mycelia Induction process of lumberjack, 4th stage: It includes the process of creating the fruiting body of black scale mushroom.
상기 제 1단계에서 상기 균사체는 검은비늘버섯(Pholiota adiposa) 균주가, YMA 배지에서 pH 6~8, 20~30℃의 조건에서 6~8일간 배양되어 선발된 것일 수 있다. In the first step, the mycelium may be a black scale mushroom ( Pholiota adiposa ) strain is selected by incubating for 6-8 days in a condition of pH 6 ~ 8, 20 ~ 30 ℃ in YMA medium.
바람직하게는 상기 균사체는 검은비늘버섯(Pholiota adiposa) 균주로서, 균사 신장력이 우수한 춘천 1호 균주(GFRI200601P: Gangwon Forest Research Institut 200601P) 또는 IUM909 균주(Incheon University Mushroom 909)를, YMA 배지에서 pH 7, 25℃의 조건에서 7일간 배양되어 선발된 것일 수 있다. Preferably, the mycelia are Pholiota adiposa strain, Chuncheon No. 1 strain (GFRI200601P: Gangwon Forest Research Institut 200601P) or IUM909 strain (Incheon University Mushroom 909) having excellent mycelial extension, pH 7, in YMA medium It may be selected by incubating for 7 days at 25 ℃ conditions.
상기 제 2단계에서 상기 액체배양 배지는 SDB 배지이며, 배양시 통기량은 0.5~1.5 vvm으로 조절된 것일 수 있다. In the second step, the liquid culture medium is SDB medium, the aeration rate during the culture may be adjusted to 0.5 ~ 1.5 vvm.
바림직하게는 상기 액체배양 배지는 SDB 배지이며, 배양시 통기량은 1 vvm으로 조절된 것일 수 있다. Preferably the liquid culture medium is SDB medium, the aeration rate in culture may be adjusted to 1 vvm.
상기 제 3단계에서 상기 균사체 접종은 상기 선발된 균사체를 상기 액체배양배지에 첨가하고 23~27℃의 무균실에서 6~8일간 배양시킨 것일 수 있다.The mycelium inoculation in the third step may be to add the selected mycelium to the liquid culture medium and incubated for 6-8 days in a sterile room at 23 ~ 27 ℃.
바람직하게는 상기 균사체 접종은 상기 선발된 균사체를 상기 액체배양배지에 첨가하고 25℃의 무균실에서 7일간 배양시킨 것일 수 있다.Preferably, the mycelia inoculation may be one of the selected mycelium is added to the liquid culture medium and incubated in a clean room at 25 ° C. for 7 days.
또한 상기 제 3단계에서 상기 단목은 참나무이며 상기 참나무를 지름 18~22㎝, 길이 23~27㎝로 절단하고, 무수황산마그네슘, 질산칼륨 및 버섯전용제제를 함유하는 용수에 1~3일간 침수시킨 후, 118~124℃에서 50~70분간 고압 멸균 후 상온에서 냉각한 것일 수 있다. In the third step, the lumber is oak, and the oak is cut into 18-22 cm in diameter and 23-27 cm in length, and immersed in water containing anhydrous magnesium sulfate, potassium nitrate, and mushroom preparation for 1 to 3 days. After, high-pressure sterilization for 50 to 70 minutes at 118 ~ 124 ℃ may be cooled at room temperature.
상기에서 버섯전용제제는 버섯의 영양생리에 알맞도록 대구에서 개발된 것으로 발아균일, 초기생육촉진, 수확시기단축, 병발생 감소 등에 효과가 탁월한 시판되는 액제(주식회사 대유에서 생산하는 제품[버섯나라액제])를 말한다. 상기 버섯전용제제에는 수용성 붕소 0.07%, 수용성 아연 0.05% 및 수용성 몰리브덴 0.002%를 포함하고 있다. The above-mentioned mushroom preparations were developed in Daegu to suit the nutritional physiology of mushrooms and are commercially available liquid preparations with excellent effects on germination uniformity, early growth promotion, shortening of harvesting time, and reduction of disease (products produced by Daeyu Co., Ltd. ]) The mushroom preparation includes water soluble boron 0.07%, water soluble zinc 0.05% and water soluble molybdenum 0.002%.
바람직하게는 상기 단목은 참나무이며 상기 참나무를 지름 20㎝, 길이 25㎝로 절단하고, 무수황산마그네슘, 질산칼륨 및 버섯전용제제를 함유하는 용수에 2일간 침수시킨 후, 121℃에서 60분간 고압 멸균 후 상온에서 냉각한 것일 수 있다.Preferably, the lumber is oak, and the oak is cut into 20 cm in diameter and 25 cm in length, immersed in water containing anhydrous magnesium sulfate, potassium nitrate and mushroom preparation for 2 days, and then autoclaved at 121 ° C. for 60 minutes. After cooling may be at room temperature.
상기 제 4단계에서 상기 검은비늘버섯의 자실체 형성은 14~16℃에서 7~20일간의 조건에서 자실체가 형성되는 것일 수 있다.In the fourth step, the fruiting body of the black scale mushroom may be a fruiting body formed under the conditions of 7-20 days at 14 ~ 16 ℃.
바람직하게는 상기 검은비늘버섯의 자실체 형성은 15℃에서 15일간의 조건에서 자실체가 형성되는 것일 수 있다.Preferably, the fruiting body of the black scale mushroom may be that the fruiting body is formed under the conditions of 15 days at 15 ℃.
본 발명은 상기의 방법으로 생산된 검은비늘버섯을 제공한다. 상기의 방법은 기존의 톱밥재배방식으로 생산된 것에 비하여 보다 신속하며, 다량의 검은비늘버섯을 생산해 낼 수 있다. 검은비늘버섯은 맛 뿐만 아니라, 항종양 등의 약리작용도 우수하여 여러가지 식품용이나 의약용으로의 이용이 가능하다.The present invention provides a black scale mushroom produced by the above method. The above method is faster than the conventional sawdust cultivation method, and can produce a large amount of black scale mushrooms. Black scale mushroom is not only delicious, but also has excellent pharmacological action such as anti-tumor, and can be used for various foods and medicines.
이하 본 발명의 실시예 및 실험예를 설명한다. 다만, 이하의 실시예 등은 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한 것으로, 본 발명의 권리범위를 이들에 한정하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, examples and experimental examples of the present invention will be described. However, the following examples are intended to explain the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not intended to be limited thereto.
<실시예 1> 단목재배를 이용한 검은비늘버섯의 생산Example 1 Production of Black Scale Mushroom Using Cultivated Wood
1. 춘천 1호 균주(GFRI200601P: Gangwon Forest Research Institut 200601P)를 YMA 배지에서 pH 7 및 25℃의 조건하에 7일간 배양하여 균사체를 제조하였다. 1. Chuncheon No. 1 strain (GFRI200601P: Gangwon Forest Research Institut 200601P) was cultured in YMA medium under conditions of pH 7 and 25 ° C. for 7 days to prepare mycelia.
2. 상기 균사체를 SDB 배지에 첨가하고, 통기량은 1 vvm으로 조절하여 25℃의 무균실에서 7일간 배양하였다.2. The mycelium was added to the SDB medium, and the aeration amount was adjusted to 1 vvm and incubated in a clean room at 25 ° C. for 7 days.
3. 참나무를 지름 20㎝, 길이 25㎝로 절단하고, 무수황산마그네슘, 질산칼륨 및 버섯전용제제를 함유하는 용수에 2일간 침수시킨 후, 121℃에서 60분간 고압 멸 균 후 상온에서 냉각하고, 상기 참나무의 상부에 상기 2.의 배양된 액체배지종균을 접종하고, 참나무를 밀봉하였다.3. Cut oak to 20cm in diameter and 25cm in length, and soak it in water containing anhydrous magnesium sulfate, potassium nitrate and mushroom preparation for 2 days, and then sterilize at 121 ℃ for 60 minutes, and then cool it at room temperature. On top of the oak was inoculated with the culture broth of the culture medium of 2. and the oak was sealed.
4. 상기 3.의 밀봉된 참나무를 15℃에서 15일간 두어 자실체를 형성시켰다.4. Sealed oak of the above 3. was placed at 15 ° C. for 15 days to form fruiting body.
<실시예 2-10 및 비교예 1> 최적의 균사체의 선발Example 2-10 and Comparative Example 1 Selection of Optimal Mycelium
1. 본 발명의 생산방법으로 대량의 검은비늘버섯을 얻기 위해서는 버섯생산의 시발점이 되는 균사체의 엄선이 요구된다. 따라서 최초 이용 균주, 상기 균주를 키울 배지 및 최적의 균사체 생산의 환경조건을 검토하여 보았다.1. In order to obtain a large amount of black scale mushrooms by the production method of the present invention, careful selection of mycelium which is the starting point of mushroom production is required. Therefore, the first use strain, the medium to grow the strain and the environmental conditions of the optimum mycelium production was examined.
2. 상기 실시예 1의 1. 과 같은 방법을 포함하여 균사체를 제조하되 균주, 배지, 배양시 pH 및 온도를 달리하여 균사체를 선발하였다(이하 표 1 참조).2. Preparation of the mycelium including the same method as in Example 1. 1. The mycelium was selected by varying the pH and temperature of the strain, medium, and culture (see Table 1 below).
[표 1]TABLE 1
배지의 종류Initial strain and
Type of badge
춘천 1호 균주
(YMA 배지)
Chuncheon No. 1 Strain
(YMA Badge)
(YMA 배지)IUM 909 strain
(YMA Badge)
(PDA 배지)Chuncheon No. 1 Strain
(PDA badge)
(상기 표 1에서 IUM 909 균주는 Incheon University Mushroom 909로서, 검은비늘버섯의 일종이다.)(In Table 1, IUM 909 strain is Incheon University Mushroom 909, which is a kind of black scale mushroom.)
(1) PDA(Potato dextrose agar) 배지 또는 YMA 배지를 1000ml 삼각플라스크에 500ml 분주한 후, 121℃에서 20분간 가압멸균하여 평판배지를 만들고 평판배지에 멸균된 코크보러를 이용하여 균주별로 접종하여 25℃항온기에서 7일간 배양하여 각 균주의 균사 신장력을 조사하였다.(1) 500ml aliquots of PDA (Potato dextrose agar) or YMA medium into a 1000ml Erlenmeyer flask, followed by autoclaving at 121 ° C. for 20 minutes to make a plate medium, and inoculated by strain using a sterilized cokeborough plate 25 7 days of incubation in the thermostat was investigated for mycelial extension of each strain.
또한 균사생장에 적합한 pH를 알기위해 배지의 pH를 4.0에서 8.0까지 1.0간격으로 조절하여 배지를 만들었고, 평판 배지 위에서 균사 신장력이 우수한 IUM 909 균주와 춘천1호 균주를 접종하여 pH별 균사 신장력을 조사 하였다. 배지내 균사생장 최적 온도를 파악하기 위해 배양온도를 20℃에서 30℃범위에서 각각 접종된 균주를 10일간 배양하여 조사 하였다.In addition, in order to know the proper pH for mycelial growth, the medium was prepared by adjusting the pH of the medium from 1.0 to 4.0 to 1.0 interval. It was. In order to determine the optimal temperature for mycelial growth in the medium, the cultured temperature was examined by incubating the inoculated strains for 10 days at 20 ° C to 30 ° C.
(2) 상기의 실시예에 따라 생산된 균주의 균사 신장력을 조사한 결과 YMA배지에서 균사생장이 우수한 것으로 조사되었다[실시예 1-10]. 이에 반하여 PDA 배지를 사용한 경우[비교예 1]에는 균사 신장력이 현저히 떨어졌다. 최초 이용 균주의 선택에 있어서는, 수치상의 임계적 차이는 없었으나 IUM 909 균주보다는 춘천1호 균주 이용시[실시예 1-9] 균사 생장이 더욱 우수했다.(2) As a result of examining the mycelial extension of the strain produced according to the above example, it was found that the mycelial growth was excellent in YMA medium [Example 1-10]. In contrast, in the case of using PDA medium [Comparative Example 1], the mycelial elongation was remarkably decreased. In the selection of the first strain, there was no critical difference in numerical value, but the mycelial growth was more excellent when the Chuncheon No. 1 strain was used [Example 1-9] than the IUM 909 strain.
또한 균사성장이 우수한 춘천1호 균주를 YMA배지에서 배양하며, pH별 균사생장 신장력을 조사한 결과 pH 6~8에서 균사신장력이 우수하며, 특히 pH 7에서 균사신장력이 가장 우수하다는 것을 알 수 있었다. 배양온도가 균사생장에 미치는 영향을 조사한 결과 25℃에서 가장 빠른 균사 신장력을 나타냈으며 대체로 20℃에서 30 ℃사이에서 고른 균사생장이 이루어졌다.In addition, Chuncheon No. 1 strains with excellent mycelial growth were cultured in YMA medium, and the mycelial growth of each pH was examined, and the mycelial extension was excellent at pH 6 ~ 8, especially at pH 7. As a result of investigating the effect of incubation temperature on mycelial growth, it showed the fastest mycelial elongation at 25 ℃ and evenly developed mycelial growth between 20 ℃ and 30 ℃.
결론적으로 검은비늘버섯의 생산을 위한 최적의 균사 신장력의 조건은 춘천 1호 균주를 이용하며, YMA 배지를 사용하고, 배양조건은 pH 6~8(보다 최적은 pH 7) 및 20~30℃(보다 최적은 25℃)임을 알 수 있었다. In conclusion, the optimal conditions for mycelial growth for the production of black scale mushrooms were Chuncheon No. 1 strains, YMA medium was used, and the culture conditions were pH 6-8 (more optimal pH 7) and 20-30 ° C ( More optimum is 25 ℃).
상기 실시예 1에서 선발된 균사체를 이용하여, 보다 경제적이며 효율적인 검은비늘버섯의 생산을 위한 최적의 조건을 찾기 위하여, 액체배양 배지 및 자실체 형성시의 조건(온도, 일수)을 각각 달리하여 이하를 실시하였다.Using the mycelium selected in Example 1, in order to find the optimal conditions for the production of more economical and efficient black scale mushrooms, the conditions (temperature, days) at the time of forming the liquid culture medium and the fruiting body are respectively different. Was carried out.
<실시예 11-17> <Example 11-17>
1. 액체배양 배지조건을 달리한 산물 생산1. Production of products with different culture medium conditions
상기 실시예 1과 같은 방법으로 검은비늘버섯을 생산하되, 배지를 이하의 표 2와 같이하여 생산하였다.Black scale mushrooms were produced in the same manner as in Example 1, but the medium was produced as shown in Table 2 below.
[표 2]TABLE 2
(1) 검은비늘버섯의 단목재배에 적합한 배지를 선발하기 위해 GPB(Glucose Peptone Broth) ,PDB(Potato Dextrose Broth), MEB(Malt Extract Broth), SDB(Soybean poweder Dextrose Broth)등의 혼합배지를 121℃ 1.2기압에서 30분간 고압멸균후 P.D.A 배지에서 10일간 배양한 균사체(실시예 1의 1.로 제조된 균사체)를 코크 보러를 이용 5개씩 각 액체배지에 접종하였다. 각 배지별로 5회 반복하여 25℃ 온도에서 120rpm으로 진탕배양하였다. 10일 배양후 균사체를 종이필터에 거르고 증류수 세척후 건조한후 건조량을 측정하였다.(1) 121 mixed mediums such as GPB (Glucose Peptone Broth), PDB (Potato Dextrose Broth), MEB (Malt Extract Broth), SDB (Soybean poweder Dextrose Broth) After autoclaving for 30 minutes at 1.2 atm, mycelium (mycelium prepared in 1. of Example 1) incubated for 10 days in PDA medium was inoculated into each liquid medium by 5 using a coke borer. Repeated five times for each medium was incubated at 120 ° C shaking at 120 rpm. After incubation for 10 days, the mycelia were filtered through a paper filter, washed with distilled water, dried, and then dried.
또한 액체배양 기간별 적합성을 알아보기 위하여 20L 유리병으로 만들어진 액체 배양병에 SDB 배지를 이용하여 25℃에서 암배양하여 15일간 액체배양을 하면서 3일 간격으로 균사체의 건중량을 측정하였다.In addition, the dry weight of the mycelia was measured at 3 days intervals for 15 days of liquid culture in SLC medium using a SDB medium in a liquid culture bottle made of a 20L glass bottle to determine the suitability of the liquid culture period.
(2) 상기 (1)의 실험결과, 각 배지별로 유사한 균사성장률과 균체량을 보였으나 가장 저렴하고 쉽게 구할수 있는 SDB 배지를 검은비늘버섯의 최적 배지로 선발하였다. 또한 액체배양 기간별 적합성을 알아보기 위한 실험에서, 균사체의 양은 일정기간을 기점으로 증가량의 속도가 감소하는 현상이 일어났으며 최적 배양기간은 7일이 가장 적당한 것으로 판단되었다.(2) As a result of the experiment of (1), each medium showed similar mycelial growth rate and cell weight, but the cheapest and easily available SDB medium was selected as the optimum medium of black scale mushroom. In addition, in experiments to determine the suitability of the liquid culture period, the rate of increase of the mycelium decreased after a certain period of time, and the optimum incubation period was 7 days.
2. 배양시 통기량을 달리한 산물 생산2. Production of products with different aeration in culture
상기 실시예 1과 같은 방법을 포함하여 검은비늘버섯을 생산하되, 배양시 통기량을 이하의 표 3과 같이하여 생산하였다.Black scale mushrooms were produced, including the same method as in Example 1, but the aeration amount during the culture was produced as shown in Table 3 below.
[표 3][Table 3]
(단위: vvm)Aeration amount
(Unit: vvm)
(1) 액체배양시 통기량에 따른 균사체의 증가량을 알아보기 위하여 25℃에서 암배양하며 통기량을 0.1vvm, 0.5vvm, 1.0vvm, 1.5vvm, 2.0vvm으로 조절하여 7일간 배양한 후 균사체의 건조중량을 측정하였다.(1) To find out the increase of mycelium according to the amount of aspirated liquid during culture, the culture was carried out at 25 ° C. and the aeration was adjusted to 0.1vvm, 0.5vvm, 1.0vvm, 1.5vvm, 2.0vvm and cultured for 7 days. Dry weight was measured.
(2) 통기량이 균사체 생산에 미치는 영향을 조사한 결과 일반적으로 통기량이 증가할수록 건조 균체량은 증가하였다. 그러나 통기량의 증가는 배지내 수분의 증발을 유도하므로 적정한 통기량은 1.0vvm(vol.of air/vol.of medium/min)인 것으로 조사되었다.(2) As a result of examining the effect of aeration on mycelial production, dry cell mass increased with increasing aeration. However, the increase in the amount of air induces the evaporation of water in the medium, so the proper amount of air was found to be 1.0vvm (vol.of air / vol.of medium / min).
<실시예 18-25 및 비교예 2-4> <Example 18-25 and Comparative Example 2-4>
1. 단목재배 이용여부를 달리한 산물 생산 1. Production of products with different use of lumber growing
(1) 검은비늘버섯의 생산을 위한 액체배지종균의 접종 대상별 균사 신장력을 측정하기 위하여 톱밥배지[비교예 2], 혼합배지(면자각+비트펄프+톱밥)[비교예 3], 폐면배지[비교예 4] 및 참나무 단목을 이용하여 검은비늘버섯[실시예 1]을 제조하였다. 각각의 배지(접종 대상)에서의 균사생장 속도 및 균사의 밀도를 측정하였으며 각 배지는 2kg 멸균용 비닐봉지에 1.5kg 중량을 재고 적외선 수분측정기를 이용 하여 65±1%로 조정하고 액체배지종균 50ml을 무균상에서 접종후 25℃의 배양실에서 배양하여 최종 배양일수를 측정하였다. (1) Sawdust medium [Comparative Example 2], mixed medium (face crust + beet pulp + sawdust) [Comparative Example 3], waste cotton [ Comparative Example 4] and black scale mushroom [Example 1] was prepared using oak lumber. Mycelial growth rate and mycelial density in each medium (inoculation subject) were measured, and each medium was weighed 1.5kg in a 2kg sterile plastic bag and adjusted to 65 ± 1% using an infrared moisture meter. After inoculation in sterile phase was incubated in a culture room at 25 ℃ to measure the final culture days.
(2) 상기 (1)의 실험결과, 실시예 및 비교예들의 결과는 이하 표 4와 같음을 알 수 있었다(다만, 비교예들의 경우도 다른 조건은 실시예 1과 같은 조건으로 하되, 배지(액체배지종균 접종 대상)만을 달리하여 검은비늘버섯을 생산한 것이다.).(2) As a result of the experiment of (1), the results of Examples and Comparative Examples were found to be shown in Table 4 below (However, in the case of the comparative examples, other conditions were the same as in Example 1, but the medium ( Liquid medium spawn inoculated only) to produce a black scale mushroom.
[표 4][Table 4]
상기 표 4에서 알 수 있듯이, 실시예의 방법으로 제조된 검은비늘버섯이 비교예들의 방법으로 제조된 검은비늘버섯보다 균사생장속도 및 균사의 밀도가 높다는 것을 알 수 있었다. 또한 최종배양일수는 오히려 짧아, 보다 신속한 버섯의 생산이 가능하다는 것도 알 수 있었다.As can be seen in Table 4, it was found that the mycelial growth rate and mycelial density of black scaly mushrooms prepared by the method of Example were higher than those of black scaly mushrooms prepared by the comparative examples. In addition, the final culture days are rather short, it can be seen that more rapid production of mushrooms.
2. 검은비늘버섯 자실체 형성시의 조건을 달리한 산물 생산 2. Production of products under different conditions when forming black scale mushroom fruiting bodies
상기 실시예 1과 같은 방법으로 검은비늘버섯을 생산하되, 자실체 형성의 단계서 유지온도에 따른 자실체 발생 시간을 이하의 표 5와 같이하여 생산하였다.Black scale mushrooms were produced in the same manner as in Example 1, but the fruiting body generation time according to the holding temperature in the step of fruiting body formation was produced as shown in Table 5 below.
[표 5]TABLE 5
(상기 표 5에서 실시예 1은 다른 실시예들 및 비교예와의 비교를 위하여 표에 첨부한 것이다.)(Example 1 in Table 5 is attached to the table for comparison with other examples and comparative examples.)
(1) 버섯의 생육에 온도가 미치는 영향을 살펴보기 위하여, 버섯 생육실의 온도를 10℃~20℃(각 1℃마다 실험)로 각각 조절하여 버섯의 생육정도를 측정하였다. 또한 초기버섯 자실체의 발생까지 걸리는 기간도 측정하였다. (1) In order to examine the effect of temperature on the growth of mushrooms, the growth rate of the mushrooms was measured by controlling the temperature of the mushroom growth room at 10 ° C. to 20 ° C. (experiment every 1 ° C.). In addition, the time taken for the development of the early mushroom fruiting body was also measured.
상기 각각의 결과확인을 위하여, 자실체 형성 수량 및 개체중량을 측정하기 위해 15℃ 생육실에서 상대습도 90%이상을 유지하고 버섯 발생을 유도하여 자실체 수량 및 개체중량을 측정하였다.In order to confirm the results of the above, in order to measure the fruiting body formation quantity and individual weight, the relative humidity was maintained at 90% or higher in the 15 ° C. growth room, and the yield of the fruiting body and the individual weight were measured.
(2) 배양이 완료된 배지에 자실체를 형성시키기 위하여 생육 온도를 달리하여 자실체 발생을 유도한 결과, 14~16℃의 온도에서 가장 빨리 자실체가 발생되었고 10℃ 및 20℃에서는 자실체 발생이 상당히 늦어졌다.(2) Inducing fruiting body at different growth temperatures in order to form fruiting body in cultured medium, fruiting body was generated at the temperature of 14 ~ 16 ℃ fastest, and fruiting body development was considerably slower at 10 ℃ and 20 ℃. .
환기는 이산화탄소 측정기를 사용하여 500ppm에서부터 1500ppm까지 측정하여 자실체 수확량을 비교 측정하였으나 느타리처럼 자실체 수량에 환기가 큰 영향을 미치지 않았다. 그러나 온도에 따라서 자실체 색택이 변화하는 것을 알 수 있었다. 낮은 온도에서는 진한 갈색을 유지하였고 높은 온도에서는 황금색을 유지하였다. Ventilation was measured from 500ppm to 1500ppm using a carbon dioxide meter to compare fruiting yields. However, ventilation did not significantly affect fruiting yield. However, it was found that fruit body color changes with temperature. It remained dark brown at low temperatures and golden at high temperatures.
액체접종 및 혼합접종시의 수량성 측정은 이미 실험을 통하여 액체종균을 접종한 배지는 균사의 활착일수 및 자실체 발생시기 등 고체종균 접종에 비해서 경제성을 갖춘 것으로 판단되었으나 액체 고체 혼합접종의 수량성도 액체종균 접종때와 거의 유사하게 나타났으나 두가지 종균을 반복 접종한다는 번거로운점도 있다. 따라서 균 접종시의 무균성만 보장된다면 액체종균 단일접종이 가장 경제성 있는 종균접종 방법으로 나타났다. The measurement of the water quality at the time of liquid inoculation and mixed inoculation showed that the medium inoculated with liquid spawn through experiments had more economical efficiency than the solid spawn inoculation, such as the days of mycelial growth and the time of fruiting. It is almost the same as the spawn seed, but it is cumbersome to repeat the two spawns. Therefore, as long as sterility at the time of inoculation is guaranteed, liquid seed single vaccination is the most economical seed vaccination method.
또한 자실체 개체중량 및 주기별 소요일수는 1주기 145g 7일, 2주기150g 15일, 3주기 120g 20일로 나타났다. 따라서 검은비늘버섯의 자실체 발생 기간은 7~20일(보다 최적은 15일)이 최적의 기간임을 알 수 있었다.In addition, the fruiting body weight and the number of days per cycle were 145g 7 days for 1 cycle, 150g 15 days for 2 cycles, and 120g 20 days for 3 cycles. Therefore, the fruiting period of the black scale mushroom was 7-20 days (more optimal 15 days) was the optimal period.
본 발명은 검은비늘버섯의 신속, 대량생산을 위한 정립된 제조방법을 제공하여 식품분야나 의약분야에의 버섯이용을 가능하게 하며, 검은비늘버섯을 이용하려는 소비자의 욕구를 충족시키며 공급자의 이윤창출에도 기여하여, 궁극적으로 국가의 산업발전에 이바지 할 수 있을 것으로 기대된다. The present invention provides an established manufacturing method for rapid and mass production of black scale mushrooms, enabling the use of mushrooms in the food and pharmaceutical fields, satisfying the desire of consumers to use black scale mushrooms and generating profits from suppliers. In addition, it is expected that it will eventually contribute to the national industrial development.
도 1은 시료가 채취된 모본 버섯자실체를 나타낸다.1 shows a mother mushroom fruit body from which a sample is taken.
도 2는 모본으로부터 분리한 검은비늘버섯 균주를 나타낸다.Figure 2 shows a black scale mushroom strain isolated from the parent.
도 3은 균주를 진탕배양시키는 것을 나타낸다.3 shows shaking culture of the strain.
도 4는 정치배양(좌), 통기배양(중), 배양전(우)의 상태를 나타낸 것이다.Figure 4 shows the state of stationary culture (left), aeration culture (middle), pre-culture (right).
도 5는 단목배양 중인 상태를 나타낸 것이다. Figure 5 shows a state in single tree culture.
도 6은 혼합배양 중인 상태를 나타낸 것이다.Figure 6 shows a state in the mixing culture.
도 7은 액체배양을 통한 단목접종 자실체 발이 초기를 나타낸다.Fig. 7 shows the initials of the single-occupied fruiting body feet through liquid culture.
도 8은 단목과 혼합배지에서의 자실체를 나타낸다.Figure 8 shows the fruiting body in lumber and mixed media.
도 9는 단목재배에 의한 자실체를 나타낸다.9 shows a fruiting body by cultivation of single tree.
도 10은 수확된 검은비늘버섯을 나타낸다.10 shows the harvested black scale mushrooms.
도 11은 검은비늘버섯 표피를 확대한 것을 나타낸다.11 shows an enlarged scale of the black scale mushroom.
도 12는 검은비늘버섯 갓, 포자를 확대한 것을 나타낸다.12 shows an enlarged black scale mushroom shade and spores.
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