KR20100066870A - 신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물은 조골세포의 활성을 증가시킬 뿐 아니라 동시에 파골세포 형성을 효과적으로 억제하므로, 골다공증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
3-니트로피리딘 유도체, 골다공증

Description

신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 {Novel 6-Indazolylamino-3-nitropyridine derivative compounds, preparation thereof and pharmaceutical composition comprising the same}
본 발명은 신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
골(骨)은 신체의 물리적 지지체로서 필요한 골량과 구조를 보존하는 역할을 하며, 칼슘(Ca2+) 등의 보관고로서 칼슘 등의 혈중 농도 유지에 중요한 역할을 한다. 이러한 기능을 수행하기 위한 필요한 대응으로서 골은 항상 분해 작용과 리모델링(remodelling)을 조정하여 이행한다. 따라서, 골 조직은 파골세포에 의한 파괴와 조골세포에 의한 골조직의 형성이 끊임없이 반복되어, 대사적인 면에서 평형에 이르는 동적인 상태이다. 이러한 골 흡수와 골 형성간의 평형 관계가 파괴되면 골 흡수가 골 형성에 상대적으로 상회하게 되어 골밀도 또는 골량의 감소를 야기시켜 골강도가 유지되지 못하는 상태인 골다공증(osteoporosis)이 나타날 수 있다.
골다공증은 주로 중-노년층의 여성에게 특히 많이 나타나는 질환으로, 골 조직의 석회가 감소되어 뼈의 치밀질이 엷어지고 그로 인해 골수강(骨髓腔)이 넓어지며, 증세가 진전됨에 따라 뼈가 약해지기 때문에 작은 충격에도 골절되기 쉽다.
골다공증과 관련하여 과거에는 주로 골의 무기질, 즉 칼슘과 인의 대사이상을 중심으로 그 연구가 진행되어 왔으나, 이의 발병 기전 규명에는 큰 진전을 보지 못하였다.
현재 골다공증 치료제로 사용되고 있는 물질로는 비스포스포네이트 제제(알렌드로네이트, 에티드로네이트), 호르몬 제제(랄록시펜), 비타민 D 제제, 칼시토닌 제제, 칼슘 제제 등이 있다. 그러나, 비스포스포네이트 제제는 흡수율이 떨어지며 복용방법이 까다롭고 식도염을 유발시키며, 호르몬 제제는 평생 복용하여야 하며 장기 투여할 경우 유방암, 자궁암, 담석 및 혈전증 등의 부작용이 나타나고, 비타민 D 제제는 고가이며 효과가 확실하지 않고, 칼시토닌 제제는 고가이며 투여방법이 어렵고, 칼슘제제는 부작용은 적지만 치료보다는 예방효과에 국한되는 단점이 있다.
골다공증은 약물의 단기 투여만으로는 치료할 수 없으며 약물의 장기 투여가 필수적이다. 따라서, 약물을 장기 투여할 때에 상기와 같은 부작용이 없고 우수한 약효를 갖는 새로운 물질의 필요성이 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 골다공증에 대한 효과적인 치료제를 개발하기 위하여 연구하던 중, 신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체들을 합성하게 되었고, 이들 화합물들에서 파골세포의 형성을 억제시켜 골흡수를 효과적으로 억제할 뿐 아니라 동시에 조골세포의 활성을 촉진시켜 골생성을 효과적으로 증가시킴으로 골다공증의 치료 및 예방에 우수한 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체를 포함하는, 골다공증의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112008085084827-PAT00001
상기 화학식 1에서,
R 1 은 NR3(CH2)nR4로, 여기서 R3는 H, 치환되거나 비치환된 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6 알킬기, 또는 치환되거나 비치환된 C3~C6 인 고리화 알킬화합물이고, 여기서 치환기는 히드록시기 또는 아민기이며; R4는 H, 히드록시기, 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6 알킬아민기 또는 말단에 N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 포화 또는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이고; 또한, R3와 R4가 서로 연결되어 R1은 N, O 및 S 중에서 선택된 0~3개의 헤테로 원자를 추가로 포함하는 포화 또는 불포화된 5 ~ 6원자의 헤테로 고리화 아미노화합물일 수 있으며, 이 경우 이들은 비치환되거나 다양한 위치에 C1~C3 알킬기, 아민기, 히드록시기 및 C1~C2의 히드록시알킬기로 선택된 1종 이상으로 치환될 수 있으며; 또한 R3와 R4가 서로 연결되어 R1은
Figure 112008085084827-PAT00002
일 수 있으며, 여기서 R5는 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6의 알킬기, C3~C6의 고리화 알킬기, C1~C6의 직쇄 또는 분쇄 상 히드록시알킬기 또는 N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이며, 여기서 헤테로 고리화합물은 비치환되거나 C1~C6 알킬기, 할로겐 또는 SCH3로 치환되어있고,
n은 0 내지 3인 정수이며;.
R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이다.
본 발명에서 할로겐은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
상기 화학식1에서, 바람직하게는 R 1 은 NR3(CH2)nR4이고 여기서 R3는 H, 이소프 로필, 이소부틸, t-부틸, 시클로프로필 또는 4-trans-히드록시시클로헥실이며; R4는 H, 피페리딘-1-일, 모르포닐, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일 또는 이미다졸-1-일 이고; 또는 R3와 R4가 서로 연결되어 R1은 피페라진, 메틸피페라진, 히드록시피페리딘 또는
Figure 112008085084827-PAT00003
이며, 여기서 R5는 히드록시메틸, 히드록시이소부틸, 피리딘-3-일 또는 (2-메틸티오)피리딘-3-일이며; n은 0 내지 3인 정수이고; R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이다.
본 발명의 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 중 바람직한 화합물은 다음과 같다:
1) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-시클로프로필아미노-3-니트로피리딘,
2) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-이소프로필아미노-3-니트로피리딘,
3) 6-(1H-인다졸-6-일)아미노-2-이소프로필아미노-3-니트로피리딘,
4) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-이소부틸아미노-3-니트로피리딘,
5) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-t-부틸아미노-3-니트로피리딘,
6) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(2-피페리디노)에틸아미노-3-니트로피리딘,
7) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(2-모르포리노)에틸아미노-3-니트로피리딘,
8) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(trans-4-히드록시)시클로헥실아미노-3-니트 로피리딘,
9) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(3-피리딜)메틸아미노-3-니트로피리딘,
10) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[2-(2-피리딜)에틸아미노]-3-니트로피리딘,
11) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[3-(모르포린-1-일)프로필아미노]-3-니트로피리딘,
12) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[3-(이미다졸-1-일)프로필아미노]-3-니트로피리딘,
13) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(4-히드록시피페리딘-1-일)-3-니트로피리딘,
14) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(4-메틸피페라진-1-일)-3-니트로피리딘,
15) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(피페라진-1-일)-3-니트로피리딘,
16) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(히드록시아세틸)피페라진-1-일]-3-니트로피리딘,
17) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(디메틸히드록시아세틸)피페라진-1-일]-3-니트로피리딘,
18) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-{4-[(3-피리딜)카보닐]피페라진-1-일}-3-니트로피리딘 및
19) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-{4-[(3-(2-메틸티오)피리딜)카보닐]피페라진-1-일}-3-니트로피리딘.
본 발명에서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 통상적으로 약제조업자가 의약품을 제조하는데 사용하는 무기산 및 유기산염을 의미하며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 말레인산, 벤조산, 글루콘산, 글리콜산, 숙신산, 4-모폴린에탄술폰산, 캠포술폰산, 4-니트로벤젠술폰산, 히드록시-O-술폰산, 4-톨루엔술폰산, 칼룩투론산, 엠보산, 글루탐산, 아스파르트산 등을 사용할 수 있다. 무기산으로서 염산, 유기산으로서 메탄술폰산이 바람직하다.
또한, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 하기 화학식 1의 6-인다졸릴아미노 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법을 제공한다:
1) 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 화학식 3의 아민을 염기 존재 하에 반응시켜 2-위치에 아민이 치환된 화학식 4의 6-클로로-3-니트로피리딘 유도체 화합물을 제조하는 단계; 및
2) 단계 1에서 제조된 화학식 4의 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 염기 하에서 반응시켜 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물을 제조하는 단계.
[화학식 3]
HR1
[화학식 4]
Figure 112008085084827-PAT00004
[화학식 1]
Figure 112008085084827-PAT00005
상기 화학식에서, R1 및 R2는 앞의 화학식 1의 화합물에서 정의한 바와 같다.
상기 단계 1 및 단계 2에서 출발물질 및 반응 물질로 사용되는 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 화학식 3의 아민은 상업적으로 시판되는 물질로서 용이하게 구입하여 사용할 수 있다.
또한 상기 단계 2의 5-아미노인다졸 및 6-아미노인다졸 역시 상업적으로 시판되는 물질로서 용이하게 구입하여 사용할 수 있다.
상기 단계 1 및 단계 2에서, 반응 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등의 알코올류와 아세토니트릴, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 테트라히드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리디논 등에서 선택되는 단일용매 또는 혼합용매 를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 단계 1 및 단계 2에서 염기는 일반적으로 당업자에게 알려진 다양한 유기 염기를 적절히 선택하여 사용할 수 있으며, 예를 들어 이 반응에서 사용되는 유기염으로는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸모르포린, DBU (1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene), N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종이상의 일반적인 삼급 유기 염기를 사용하는 것이 바람직하다.
또한 본 발명은 하기 단계를 포함하는 하기 화학식 1B의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법을 제공한다:
1) 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 1-t-BOC-피페라진을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 5의 2-(4-t-BOC피페라진-1-일)-6-클로로-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계;
2) 단계 1에서 제조된 화학식 5의 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 6의 6-인다졸일아미노-2-(4-t-BOC-피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계;
3) 단계 2에서 제조된 화학식 6의 화합물에서 아민보호기 "B0C"(tert-butoxy carbonyl)을 탈보호시키는 반응으로 화학식 7의 6-인다졸일아미노-2-(피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계; 및
4) 단계 3에서 제조된 화학식 7의 화합물과 화학식 8의 에시드클로라이드 화합물을 염기 존재하에 반응시켜 화학식 1B의 화합물을 제조하는 단계.
[화학식 5]
Figure 112008085084827-PAT00006
[화학식 6]
Figure 112008085084827-PAT00007
[화학식 7]
Figure 112008085084827-PAT00008
[화학식 8]
Figure 112008085084827-PAT00009
[화학식 1B]
Figure 112008085084827-PAT00010
상기 화학식에서,
R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이고;
R 5 는 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6의 알킬기; C3~C6의 고리화 알킬기; C1~C6의 직쇄 또는 분쇄 상 히드록시알킬기; N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이며, 여기서 헤테로 고리화합물은 비치환되거나 C1~C6 알킬기, 할로겐 또는 SCH3로 치환될 수 있다.
상기 단계 1에서 출발물질 및 반응 물질로 사용되는 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 t-BOC-피페라진은 상업적으로 시판되는 물질로서 용이하게 구입하여 사용할 수 있다. 또한 상기 단계 2의 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸 및 단계 4의 화학식 8의 에시트클로라이드 화합물 역시 상업적으로 시판되는 물질로 용이하게 구입하여 사용할 수 있다.
상기 단계 1 및 2에서 반응 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등의 알코올류와 아세토니트릴, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 테트라히드로푸란, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸피롤리디논 등에서 선택되는 단일용매 또는 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하며, 반응온도는 0~80℃인 것이 바람직하고, 25~80℃인 것이 보다 바람직하다.
상기 단계 3에서 반응 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등의 알코올류 와 아세토니트릴, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 테트라히드로푸란 등에서 선택되는 단일 용매 또는 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하다. 상기 단계 3에서 보호기인“BOC”(t-butoxy carbonyl)을 탈보호시키는 반응은 당업자에게 이미 공지된 “BOC" 탈보호 반응을 의미하는 것으로, 예를 들어, 산을 처리하고, 이후 염기 처리를 통해 이루어지는 반응을 의미한다. 여기서 보호기인“BOC”(t-butoxy carbonyl)을 제거하기 위해 사용되는 산은 염산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 황산과 같이 당업자가“BOC”를 제거하기 위해 사용하는 산을 의미하며, 그 사용 당량은 화합물의 특성에 따라 조절하여 사용할 수 있다. 또한, 염기는 수산화나트륨, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 등과 같은 것을 사용할 수 있다.
상기 단계 3의 반응온도 역시 0~80℃인 것이 바람직하다.
상기 단계 4에서 반응 용매는 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 테트라히드로푸란 등에서 선택되는 단일 용매 또는 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하고, 반응 온도는 0~80℃인 것이 바람직하다.
상기 단계 1, 단계 2 또는 단계 4에서의 염기는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸모르포린, DBU (1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene), N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하다.
또한 본 발명은 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 약제학적적으로 허용되는 그 염을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
여기서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 앞에서 설명한 바와 같다.
또한, 본 발명은 앞서 언급한 상기 화학식 1 화합물의 유효량을 골다공증 예방 또는 치료를 요하는 인간을 포함하는 포유류에게 투여함으로서 골다공증을 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 골다공증 예방 또는 치료위한 약제학적 제제를 제조하는데 앞서 언급한 상기 화학식 1 화합물을 사용하는 용도를 제공한다.
본 발명에서 용어 "골다공증"은 남아 있는 뼈에는 구조상으로 아무런 이상이 없으면서 뼈를 형성하는 무기질과 기질의 양이 과도하게 감소되어 뼈에 스펀지처럼 작은 구멍이 많이 나서 무르고 쉽게 부러지는 상태를 일컬으며, 골소송증이라고도 한다. 구체적 실시예에서, 본 발명 화학식 1의 2, 6-위치가 치환된-3-니트로피리딘 유도체 화합물은 조골세포활성을 촉진해 골생성을 효과적으로 증가시켜 뼈의 생성을 촉진시킬 뿐 아니라, 파골세포의 형성을 억제해 골흡수를 억제시킨다. 따라서 본 발명의 2, 6-위치가 치환된-3-니트로피리딘 유도체 화합물 및 그의 약제학적으 로 허용되는 염은 골다공증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 상기 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염에 추가하여 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기한 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용) 할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중 증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체의 일일 투여량은 약 10 내지 1,000㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 50 내지 500㎎/㎏ 이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 조성물은 골다공증의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 신규한 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체는 조골세포활성을 촉진해 골생성을 효과적으로 증가시켜 뼈의 생성을 촉진시킬 뿐 아니라, 파골세포의 형성을 억제해 골흡수를 억제하는 능력도 우수함으로 골다공증의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
또한, 이하에서 언급된 시약 및 용매는 특별한 언급이 없는 한 Aldrich 사, 또는 Cambridge Isotope Labortories사로부터 구입한 것이며, 1H-NMR 데이터는 JNM-LA400(JEOL 사) 기계로 측정한 값이며, Mass 데이터는 1100MSD(Hewlett Packard 사)기계로 측정한 값이다.
I. 하기 반응식 1을 이용한 본 발명의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피린딘 (1a)의 합성
[반응식 1]
Figure 112008085084827-PAT00011
<제조예 1> 상기 반응식 1에 따른 6-클로로-2-시클로프로필아미노-3-니트로피리딘 화합물 (4a)의 제조
메틸렌클로라이드 50ml에 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘 (2) 500mg(2.59 mmol)과 트리에틸아민 0.71ml(5.18 mmol)를 가한 후 시클로프로필아민 0.18ml(2.59 mmol)을 0~5℃에서 서서히 가한 후 상온(20~30℃)에서 약 30시간 반응시켰다. 반응이 완결된 후 메틸렌클로라이드 50ml를 가한 후 물 100ml로 추출하고 유기층을 감압증류한 후 n-핵산: 초산에틸=6:1 (v/v)를 전개 용매로하여 컬럼크로마토그래피 방법으로 정제를 한 후 약 40℃에서 진공 건조하여 목적 화합물 306mg(수율: 55%)을 얻었다.
Mass (M+) : 214.1
1H-NMR (DMSO-d6) (ppm) : 0.70(m, 2H), 0.81(m, 2H), 2.97(m, 1H), 6.84(d, 1H), 8.41(d, 2H).
<실시예 1> : 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-시클로프로필아미노-3-니트로피리딘 화합물 (1a) 제조
아세토니트릴 10ml에 상기 제조예 1에서 얻은 6-클로로-2-시클로프로필아미노-3-니트로피리딘 화합물 (4a) 300mg(1.39 mmol), 트리에틸아민 0.2ml(1.52 mmol), DBU 0.42ml(1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene, 2.78mmol) 및 5-아미노인다졸 (5) 194mg(1.45 mmol)를 가한 후, 65-82℃에서 24시간 반응시켰다. 반응 완료 후 용매를 감압증류하고, 그 농축물에 메탄올 5ml을 가하고 1시간 동안 상온 교반하였다. 이때 생성된 고체를 여과하고 메탄올 5ml로 세척한 후 약 40℃에서 진공 건조하여 목적화합물 397mg (수율: 91%)을 얻었다.
Mass (M+) : 311.1
1H-NMR (DMSO-d6) (ppm) : 0.74(m, 2H), 0.94(m, 2H), 3.00(m, 1H), 6.28(d, 2H), 7.53(d, 1H), 7.63(d, 1H), 8.03(s, 1H), 8.11(d, 1H), 8.71(brm, 1H0, 8.82(d, 1H), 10.14(s, 1H).
<실시예 2 내지 14>
상기 제조예 1에서 시클로프로필아민 대신에 하기 표 1에 기재된 아민 화합물 (3a)를 사용한 것을 제외하고는 제조예 1과 동일한 방법을 이용하여 2위치에 다양한 아민이 치환된 6-클로로-3-니트로피리딘 화합물 (4a)을 합성하였으며, 합성한 (4a) 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 실시예 1과 동일한 방법으로 반응시켜 하기 표 1에 기재된 목적 화합물 (1a)을 수득하였다.
하기 표 1에 실시예 2 내지 실시예 14 에서 제조된 화합물(1a)의 명칭, 반응식 1에서 화합물 (4a)를 제조하기 위하여 제조예에서 사용한 아민 (3a), 상기 반응식 (1a)를 제조하기위하여 사용한 아민 (5)의 명칭, 수율, 그리고 Mass결과와 NMR 결과를 나타내었다.
[표 1]
Figure 112008085084827-PAT00012
Figure 112008085084827-PAT00013
상기 표에서, *은 합성한 (4a) 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 실시예 1과 동일한 방법으로 반응시킨 경우의 수율(%)을 의미하며, ** 는 화합물 (1a)의 Mass 데이터이다.
II. 하기 반응식 2를 이용한 본 발명의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피린딘 (1b)의 합성
[반응식 2]
Figure 112008085084827-PAT00014
<제조예 2-1> 반응식 2에 따른 2-(4- t -BOC-피페라진-1-일)-6-클로로-3-니트로피리딘 화합물 (4b)의 제조
메틸렌클로라이드 300ml에 2, 6-디클로로니트로-3-피리딘 (2) 5g(25.9 mmol)과 트리에틸아민 3.97ml (28.5 mmol)을 가한 용매의 온도를 0~5℃로 냉각한 후 1-(t-부톡시카보닐)피페라진 (3b) 5.06g(27.1 mmol)을 서서히 가하고 같은 온도(0~5℃)에서 3시간 내지는 4시간 교반하였다. 반응 완료 후 메틸렌클로라이드와 물로 추출한 후 마그네슘설페이트를 사용하여 물을 제거하고, 감압증류하여 목적 화합물 8.7g(수율: 99%)을 얻어 다음반응으로 진행하였다.
Mass (M+) : 343.1
1H-NMR (DMSO-d6) (ppm) : 1.41(s, 9H), 3.37(m, 4H), 3.46(m, 4H), 6.95(d, 1H), 8.31(d, 1H).
<제조예 2-2> 6-(인다졸-5-일)아미노-2-(4- t -BOC-피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물 (6b)의 제조
상기 제조예 2-1에서 얻은 2-(4-t-BOC-피페라진-1-일)-6-클로로-3-니트로피리딘 화합물 (4b) 8.7g(25.4 mmol)을 아세토니트릴 150ml에서 녹이고, 트리에틸아민 4.2ml (36.4 mmol)를 가하고 여기에 5-아미노인다졸 (5) 4.8g(36.4 mmol)을 가한 후 3일간 환류교반시켰다. 반응완료 후 상온으로 온도를 내리고, 물을 약 100ml 적가한 후 약 1시간 상온에서 교반시켰다. 이때 생성된 고체를 여과한 후 물 50ml로 세척한 후 40℃에서 진공 건조하여 목적 화합물 8.9g (수율: 80%)을 얻었다.
Mass (M+) : 440.2
1H-NMR (DMSO-d6) : 1.41(s, 9H), 3.39(brm, 4H), 3.47(brm, 4H), 6.30(d, 2H), 7.52(m, 2H), 8.06(s, 1H), 8.11(m, 1H), 8.17(d, 1H), 9.94(s, 1H).
<실시예 15> 6-(인다졸-5-일)아미노-2-(피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물 (7b)의 제조
상기 제조예 2-2에서 얻은 6-(인다졸-5-일)아미노-2-(4-t-BOC-피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물 (6b) 300mg(0.68 mmol)을 메틸렌클로라이드 20ml에서 녹이고, 트리플루오로아세트산 0.5ml (6.8 mmol)를 가하고 상온에서 8시간 교반시켰다. 반응완료 후 용매를 감압증류하여 제거하고 5ml의 메탄올을 가하여 반응물을 녹였다. 이를 0~5℃로 온도를 내려 3N의 수산화나트륨수용액을 적가하여 용액의 pH가 8~9정도가 되도록 한 후 같은 온도에서 약 30분 교반시켰다. 이때 생성된 고체를 여과하고, 이를 물 10ml로 세척 후, 40℃에서 진공 건조하여 목적 화합물 220mg (수율: 95%)을 얻었다.
Mass (M+) : 440.2
1H-NMR (DMSO-d6) (ppm) : 2.87(brm, 4H), 3.11(brm, 2H), 3.35(brm, 2H), 6.25(d, 2H), 7.50(m, 2H), 8.03(s, 1H), 8.14(m, 2H), 9.89(s, 1H).
<실시예 16> 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(히드록시아세틸)피페라진-1-일]-3-니트로피리딘 (1b)의 제조
상기 실시예 15에서 얻은 6-(인다졸-5-일)-2-(피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물 (7b) 500mg(1.5 mmol)을 메틸렌클로라이드 10ml에 녹인 후 트리에틸아민 0.5ml(3.52 mmol)을 넣고 온도를 0~5℃로 내린 후 반응용액에 아세톡시아세틸클로라이드 (8) 0.19ml(1.8 mmol)을 서서히 적가하였다. 같은 온도에서 3시간 반응한 후 메틸렌클로라이드와 물로 추출과정을 거친 후, 2-[(아세톡시아세틸)피페라진-1-일]-6-(1H-인다졸-5-일)아미노-3-니트로피리딘 화합물 650mg (수율: 98%)을 얻어 다음 반응으로 진행하였다.
Mass (M+) : 440.2
상기 반응에서 얻어진 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(아세톡시아세틸)피페라 진-1-일]-3-니트로피리딘 화합물 645mg(1.47 mmol)을 메탄올 30ml에 녹이고, 탄산나트륨 460mg(4.41 mmol)을 물 20ml에 녹여 위 반응 용액에 적가하고 30~40℃에서 3시간 반응시켰다. 반응 완료 후 생성된 고체를 여과하고 물 10ml로 세척한 후 40℃에서 진공 건조하여 목적 화합물 420mg (수율: 81%)을 얻었다.
Mass (M+): 398.2
NMR (DMSO-d6) (ppm) :3.37(brm, 4H), 3.52(m, 2H), 3.62(m, 2H), 4.13(d, 2H), 4.63(t, 1H), 6.31(d, 1H), 7.53(m, 2H), 8.07(s, 1H), 8.12(s, 1H), 8.18(d, 1H), 9.94(s, 1H).
<실시예 17 내지 19>
실시예 16에서, 아세톡시아세틸클로라이드 대신에 하기 표 2에 기재된 에시드클로라이드 (8)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 16과 동일한 방법으로 합성하여, 하기 표 2에 기재된 목적 화합물 (1b)를 수득하였다.
하기 표 2에 실시예 17 내지 실시예 19에서 제조된 화합물 (1b)의 명칭, 사용한 에시드클로라이드 (8)의 명칭, 수율, 그리고 Mass결과와 NMR 결과를 나타내었다.
[표 2]

실시예 		사용한 에시드 클로라이드 ( 8) 화합물 (1b)의 명칭 수율(%)*
화합물 (1b)의 1 H-NMR 값(DMSO-d 6 ) M(+)**


17		 2-아세톡시이소부트릴클로라이드 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(디메틸히드록시아세틸)피페라진-1-일-3-니트로피리딘 72
1.34(s, 6H), 3.54(brm, 4H), 3.71(brm, 2H), 4.18(bem, 2H), 5.26(brs, m, 2H), 5.51(s, 1H), 6.88(s, 1H), 7.99(d, 1H), 7.41(d, 1H), 8.27(s, 1H), 8.30(d, 1H), 8.46(d, 1H).
426.1


18		 니코티노일클로라이드 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[4-[(3-피리딜)카보닐]피페라진-1-일]-3-니트로피리딘 91
3.44(m, 2H), 3.53(brm, 4H), 3.80(m, 2H), 6.32(d, 1H), 7.50(m, 3H), 7.89(d, 1H), 8.04(s, 1H), 8.10(s, 1H), 8.19(d, 1H), 8.66(m, 2H), 9.97(s, 1H).
445.2


19		 2-메틸티오니코티노일클로라이드 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-{4-[(3-(2-메틸티오)피리딜)카보닐]피페라진-1-일}-3-니트로피리딘 94
3.32(m, 2H), 3.35(s, 3H), 3.41(m, 2H), 3.54(m, 2H), 3.80(m, 2H), 6.32(d, 1H), 7.19(t, 1H), 7.51(m, 2H), 7.64(d, 1H), 8.02(s, 1H), 8.08(s, 1H), 8.19(d, 1H), 8.52(d, 1H), 9.96(s, 1H).
491.2
상기 표에서, *은 합성한 (4a) 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 실시예 1과 동일한 방법으로 반응시킨 경우의 수율을 의미하며, ** 는 화합물(1a)의 Mass 데이터이다.
<실험예 1. 공존배양에 의한 파골세포 형성 저해효과>
본 화합물의 파골세포 형성 저해효과를 확인하기 위하여, 공존배양법 (co-culture system)(Reference: Endocrinology 137(1996), 2187∼2190, E. Jimi et al.)을 이용하였으며, 구체적인 실험방법은 다음과 같다.
1) 골수세포와 골아세포의 준비
골수세포는 6-8 주령된 수컷 ddY 마우스로부터 대퇴골 및 경골을 적출하여 주사기를 이용한 일반적인 방법으로 회수하였다. 간단히 요약하면, 적출한 뼈로부터 조직들을 제거하고 양끝을 가위로 자른 후, 배지가 든 23G 주사기를 사용하여 잘려진 한쪽 뼈에 대고 밀면서 골수를 분리하였다. 분리한 골수는 주사기를 이용하여 단일세포가 되도록 반복적으로 피스톤 운동을 실시하였다. (Reference: Endocrinology 123(1988), 2600～2602, Takahashi et al.). 골수 내 적혈구를 제거한 후, 원심분리를 통해 회수한 골수세포를 10% 우태아혈청이 첨가된 α-MEM 배지에서 넣어 유핵 세포수를 확인하고, 공존배양을 위해 바로 사용하였다.
골아세포(Calvarial cell)의 경우, 생후 1-2일 된 ICR 마우스로부터 두개골을 적출하고 0.2% 콜라게네즈 효소용액과의 연속적인 반응을 통해 골아세포를 분리하였다. 세포부유 상층액을 원심하여 회수한 골아세포는 10% 우태아혈청이 첨가된 α-MEM배지에서 완전히 채워질 때까지 증식시킨 후, 원하는 세포수가 되도록 희석하여 사용하였다.
2) 공존배양에 의한 파골세포 형성 저해 실험
공존배양에 사용되는 모든 배양액은 10% 우태아혈청이 첨가된 α-MEM 배지에 분화인자인 1α,25-디히드록시비타민D3 (10-8M)와 덱사메타손(10-8M)이 첨가된 분화배지를 사용하여 파골세포 형성을 유도하였다. 먼저, DMSO(Dimethyl sulfoxide) 용매에 1mM 농도로 용해되어 있는 화합물들은 상기 언급된 분화배지를 이용하여 2uM이 되도록 희석하고, 용매대조군으로는 0.2%(v/v) DMSO가 첨가되도록 준비하여 96- 웰에 각각 100uL씩 첨가하였다. 이와 더불어 상기에서 준비한 골수세포와 골아세포를 96웰 당 각각 1x105 cells/50uL와 3,000 cells/50uL가 되도록 희석하여 각 웰에 첨가하였다. 이때의 총 부피는 각 웰당 200uL이며, 최종 화합물농도는 1uM이고, 대조군은 0.1%(v/v) DMSO이었다. 세포들은 매 2-3일마다 분화인자와 시험물질이 포함된 신선한 배지로 교환되었다.
배양개시 7일 후에 다핵을 지닌 파골세포가 형성되었음을 현미경 관찰을 통해 확인한 후, 배지를 제거하고 10% 인산완충포르말린 용액으로 세포를 고정하였다. 성숙한 파골세포의 형성정도는 주석산저항성산성포스파타제 (이하 TRAP) 염색액에 양성반응을 가진 파골세포의 특성을 이용하여 측정하였다. TRAP 염색완충용액은 기질 나프톨 AS-MS 포스페이트 및 색소(Fast Red Violet LB salt)을 N,N-디메틸포름아마이드에 녹여 50mM 타르타르산을 포함한 0.1 N NaHCO3 완충액을 첨가하여 제조하였다. 광학현미경하에서 TRAP에 양성반응을 보이는 세포들 중 6-7개 이상의 다핵을 지닌 세포를 성숙파골세포로 인정하였다.
파골세포형성저해정도는 하기 식1을 이용하여 계산하였으며, 이를 정리하여 표 3에 나타내었다. (각 실험군 당 4개 웰의 개체수 (n=4)로 실험하였고, 결과는 평균값± 표준편차로 나타내어 계산하였다.)
[식1]
(1-실험군에서 관찰된 파골세포의 수/용매만을 사용한 대조군의 파골세포 수)×100(%)= 파골세포형성저해정도(%)
[표 3]
Figure 112008085084827-PAT00015
상기 표 3에 나타난바와 같이, 본 발명의 화합물은 대부분 파골세포의 형성을 제해하는 것으로 관찰되었다. 따라서 본 발명의 화합물은 우수한 골다공증 예방 및 치료제로 사용될 수 있음이 확인되었다.
<실험예 2. ALP 활성 검증 실험>
뼈의 형성과 밀접한 관계를 갖고 있는 ALP(Alkaline Phosphatase)의 활성을 측정하여 조골세포의 분화 및 활성의 정도를 간접적으로 평가하였다.
상기 실험예 1에서 준비한 골아세포(Calvarial cell)를 10% 우태아혈청이 첨가된 α-MEM 배지에서 모아 세포수를 측정한 뒤, 24-well culture ware에 well당 20,000 cells씩 분주하여 자라도록 하였다. 배양 24시간 후에 기존의 배지를 버리고, 검증하고자 하는 화합물이 1uM의 농도로 희석된 새로운 배지(1mL/well)로 교환하였다. 이때, 0.1% DMSO가 포함된 용매대조군도 같이 처리하였다. 화합물이 처리된 상태에서 세포를 3일 동안 37℃, 5% CO2 inhibitor 조건에서 배양하였고, 실험종료와 함께 상등액을 제거하고, 4℃의 차가운 인산화완충용액으로 세포를 3번 세척하였다. 세척된 세포에 0.2% Triton X-100을 첨가한 후, -70℃에서 얼렸다 상온에서 녹이는 과정을 3번 반복하여 세포를 완전히 용해시켰다. 세포 추출물을 모아 원심분리하여 채취한 세포 상등액을 ALP 활성과 단백질 측정에 사용하였다. 단백질의 농도측정은 BCA assay kit(제조사: Sigma-Aldrich 사)를 이용하여 측정하였다. ALP활성 측정은 세포 상등액에 p-nitrophenylphosphate을 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시키고, 0.2N 수산화나트륨을 50ul 첨가하여 반응을 정지시켰다. 표준물질로 p-nitrophenol을 사용하여 405 nm의 흡광도에서 표준곡선을 그린 후, 반응한 실험물질의 흡광도를 측정하여 생성된 p-nitrophenol의 양을 측정하였다.
ALP 활성은 각 실험물질에 의해 생성된 p-nitrophenol을 단백질량과 반응시간으로 나누어 계산함으로써, ALP 활성의 단위(unit)를 p-nitrophenol/ug protein/min으로 나타내었다. 결과는 각 실험물질의 ALP 활성 단위를 용매대조군(control)과 상호 비교하여 변화된 정도로 표시하여 표 4에 나타내었다.
[표 4]
Figure 112008085084827-PAT00016
상기 표 4에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 화합물은 Calvarial cell에서 우수한 ALP활성이 있음이 확인되었다.
<실험예 3. 세포독성 실험>
본 발명 화합물의 세포독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
약물을 10% 우태아혈청이 포함된 α-MEM 배양배지에 2uM의 농도로 희석하였고, 용매대조군으로는 0.2% DMSO가 포함되도록 하였다. 희석된 약물을 96웰 플레이트에 100㎕씩 분주한 후, 실험예 1에서 준비된 골아세포(calvarial cell)를 각 웰에 1.0×104 세포/100㎕로 첨가하였다. 이때, 세포배양액 내의 최종 화합물의 농도는 1uM이며, 용매대조군은 0.1% DMSO를 포함하고 있다. 72시간 동안 37℃, 5% CO2 inhibitor 내에서 배양된 세포는 배양 종결 4시간 전에 PBS에 용해된 2㎎/㎖의 MTT[3-(4,5-dimetyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide]를 각 세포배양액에 25㎕ 첨가하였다. 반응 종결 후 플레이트를 원심분리하고 배지를 제거한 후, 포르마잔(formazan)을 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 100㎕첨가하여 용해시켰다. 마지막으로 발색된 플레이트를 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존 정도는 용매대조군(control)과 대비하여 % 농도로 나타내었으며, 그 결과는 표 5와 같다.
[표 5]
Figure 112008085084827-PAT00017
상기 표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 화합물은 세포 독성이 거의 없음이 확인되었으며, 화합물 5 내지 10, 14 내지 19는 무독성일 뿐만 아니라, 파골세포의 형성을 저해함과 동시에 조골세포의 형성을 촉진시키는 효과가 있는 것으로 확인되었다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure 112008085084827-PAT00018
    R 1 은 NR3(CH2)nR4로, 여기서 R3는 H, 치환되거나 비치환된 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6 알킬기, 또는 치환되거나 비치환된 C3~C6 인 고리화 알킬화합물이고, 여기서 치환기는 히드록시기 또는 아민기이며; R4는 H, 히드록시기, 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6 알킬아민기 또는 말단에 N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 포화 또는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이고; 또한, R3와 R4가 서로 연결되어 R1은 N, O 및 S 중에서 선택된 0~3개의 헤테로 원자를 추가로 포함하는 포화 또는 불포화된 5 ~ 6원자의 헤테로 고리화 아미노화합물일 수 있으며, 이 경우 이들은 비치환되거나 다양한 위치에 C1~C3 알킬기, 아민기, 히드록시기 및 C1~C2의 히드록시알킬기로 선택된 1종 이상으로 치환될 수 있으며; 또한 R3와 R4가 서로 연결되어 R1은
    Figure 112008085084827-PAT00019
    일 수 있으며, 여기서 R5는 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6의 알킬기, C3~C6의 고리화알킬기, C1~C6의 직쇄 또는 분쇄 상 히드록시알킬기 또는 N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이며, 여기서 헤테로 고리화합물은 비치환되거나 C1~C6 알킬기, 할로겐 또는 SCH3로 치환되어있고,
    n은 0 내지 3인 정수이며;.
    R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이다.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 화학식 1의 치환기가 하기와 같은 것을 가지는 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    R 1 은 NR3(CH2)nR4이고 여기서 R3는 H, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸, 시클로프로필 또는 4-trans-히드록시시클로헥실이며; R4는 H, 피페리딘-1-일, 모르포닐, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일 또는 이미다졸-1-일 이고; 또는 R3와 R4가 서로 연결되어 R1은 피페라진, 메틸피페라진, 히드록시피페리딘 또는
    Figure 112008085084827-PAT00020
    이며, 여기서 R5는 히드록시메틸, 히드록시이소부틸, 피리딘-3-일 또는 (2-메틸티오)피리딘-3-일이며;
    n은 0 내지 3인 정수이고;
    R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이다.
  3. 제 2항에 있어서,
    1) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-시클로프로필아미노-3-니트로피리딘,
    2) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-이소프로필아미노-3-니트로피리딘,
    3) 6-(1H-인다졸-6-일)아미노-2-이소프로필아미노-3-니트로피리딘,
    4) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-이소부틸아미노-3-니트로피리딘,
    5) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-t-부틸아미노-3-니트로피리딘,
    6) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(2-피페리디노)에틸아미노-3-니트로피리딘,
    7) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(2-모르포리노)에틸아미노-3-니트로피리딘,
    8) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(trans-4-히드록시)시클로헥실아미노-3-니트로피리딘,
    9) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(3-피리딜)메틸아미노-3-니트로피리딘,
    10) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[2-(2-피리딜)에틸아미노]-3-니트로피리딘,
    11) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[3-(모르포린-1-일)프로필아미노]-3-니트로피리딘,
    12) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[3-(이미다졸-1-일)프로필아미노]-3-니트로피리딘,
    13) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(4-히드록시피페리딘-1-일)-3-니트로피리딘,
    14) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(4-메틸피페라진-1-일)-3-니트로피리딘,
    15) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-(피페라진-1-일)-3-니트로피리딘,
    16) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(히드록시아세틸)피페라진-1-일]-3-니트로피리딘,
    17) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-[(디메틸히드록시아세틸)피페라진-1-일]-3-니트로피리딘,
    18) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-{4-[(3-피리딜)카보닐]피페라진-1-일}-3-니트로피리딘 및
    19) 6-(1H-인다졸-5-일)아미노-2-{4-[(3-(2-메틸티오)피리딜)카보닐]피페라진-1-일}-3-니트로피리딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 6-인다졸릴아미노-3-니트로피 리딘 유도체 화합물의 염산염 또는 메탄술폰산염.
  5. 하기 단계를 포함하는, 하기 화학식 1의 6-인다졸릴아미노 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법:
    1) 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 화학식 3의 아민을 염기 존재 하에 반응시켜 2-위치에 아민이 치환된 화학식 4의 6-클로로-3-니트로피리딘 유도체 화합물을 제조하는 단계; 및
    2) 단계 1에서 제조된 화학식 4의 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 염기 하에서 반응시켜 화학식 1의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물을 제조하는 단계.
    [화학식 3]
    HR1
    [화학식 4]
    Figure 112008085084827-PAT00021
    [화학식 1]
    Figure 112008085084827-PAT00022
    상기 화학식에서, R1 및 R2는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  6. 제 5항에 있어서, 단계 1 또는 단계 2의 염기가, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸모르포린, DBU (1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene), N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인 제조방법.
  7. 하기 단계를 포함하는 하기 화학식 1B의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법:
    1) 2, 6-디클로로-3-니트로피리딘과 1-t-BOC-피페라진을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 5의 2-(4-t-BOC-피페라진1-일)-6-클로로-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계;
    2) 단계 1에서 제조된 화학식 5의 화합물과 5-아미노인다졸 또는 6-아미노인다졸을 염기 존재 하에 반응시켜 화학식 6의 6-인다졸일아미노-2-(4-t-BOC-피페라진-1-일)-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계;
    3) 단계 2에서 제조된 화학식 6의 화합물에서 아민보호기 "B0C"(tert-butoxy carbonyl)을 탈보호시키는 반응으로 화학식 7의 6-인다졸일아미노-2-(피페라진-1- 일)-3-니트로피리딘 화합물을 제조하는 단계; 및
    4) 단계 3에서 제조된 화학식 7의 화합물과 화학식 8의 에시드클로라이드 화합물을 염기 존재하에 반응시켜 화학식 1B의 화합물을 제조하는 단계.
    [화학식 5]
    Figure 112008085084827-PAT00023
    [화학식 6]
    Figure 112008085084827-PAT00024
    [화학식 7]
    Figure 112008085084827-PAT00025
    [화학식 8]
    Figure 112008085084827-PAT00026
    [화학식 1B]
    Figure 112008085084827-PAT00027
    상기 화학식에서,
    R 2 는 인다졸-5-일아민기 또는 인다졸-6-일아민기이고;
    R 5 는 직쇄 또는 분쇄상의 C1~C6의 알킬기; C3~C6의 고리화알킬기; C1~C6의 직쇄 또는 분쇄 상 히드록시알킬기; N, O 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 불포화의 5~6원자 헤테로 고리화 화합물이며, 여기서 헤테로 고리화합물은 비치환되거나 C1~C6 알킬기, 할로겐 또는 SCH3로 치환될 수 있다.
  8. 제 7항에 있어서, 단계 3의 BOC 탈보호 반응은 산을 처리이후 염기 처리를 통해 이루어지는 제조방법.
  9. 제 7항에 있어서, 단계 1, 단계 2 또는 단계 4의 염기가 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸모르포린,DBU(1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene), N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인 제조방법.
  10. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 6-인다졸릴아미노-3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 그의 약제학적적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 골다공증의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
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