KR20100063030A

KR20100063030A - 바리셀라 조스터 바이러스-바이러스 유사 입자(ＶＬＰｓ) 및 항원

Info

Publication number: KR20100063030A
Application number: KR1020107003716A
Authority: KR
Inventors: 게일 스미스; 피터 푸시코
Original assignee: 노바백스, 인코포레이티드
Priority date: 2007-07-19
Filing date: 2008-07-21
Publication date: 2010-06-10
Also published as: AU2008275895A1; US20100330122A1; WO2009012486A1; EP2175882A1; CN101801412A; CA2729011A1; EP2175882A4; RU2010105858A

Abstract

본 발명은 VZV의 당단백질(glycoprotein) E를 포함하는 새로운 바리셀라 조스터 바이러스(VZV, Varicella Zoster Virus)의 바이러스 유사 입자(VLP, virus-like particle)를 개시한다. 본 발명은 또한 VZV-VLP의 백신 제형 및 환자에서 면역 반응을 유도하는 방법을 개시한다.

Description

바리셀라 조스터 바이러스-바이러스 유사 입자(ＶＬＰｓ) 및 항원{VARICELLA ZOSTER VIRUS-VIRUS LIKE PARTICLES (VLPS) AND ANTIGENS}

본 발명은 VZV의 당단백질(glycoprotein) E를 포함하는 새로운 바리셀라 조스터 바이러스(VZV, Varicella Zoster Virus)의 바이러스 유사 입자(VLP, virus-like particle) 및 상기 VZV-VLP의 백신 제형 및 환자에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.

본 출원은 전체 목적을 위해 본원에서 전체가 참조로서 인용된 2007년 7월 19일에 출원된 미국 출원 60/950,707호에 대한 우선권을 주장한다.

인간 헤르페스 바이러스-3(HHV-3, human herpesvirus-3)으로도 알려져 있는 바리셀라 조스터 바이러스(VZV, Varicella Zoster Virus)는 헤르페스 바이러스과(Herpesviridae family)의 알파헤르페스 바이러스 아과(subfamily)의 일원이다. VSV는 약 125,000 뉴클레오타이드의 이중 가닥 DNA 유전체를 가지는 외피(envelope)-보유 바이러스이다. 상기 VSV의 유전체는 20면체의 뉴클레오캡시드(nucleocapsid)에 의해 둘러싸여 있다. 뉴클레오캡시드와 바이러스 외피(envelope) 사이의 공간에 위치한 테규먼트(테규먼트, 표피)는 바이러스에 의해 인코딩된(virally-encoded) 단백질 및 효소로 구성된 구조이다. 바이러스 외피는 숙주 세포 막으로부터 획득되고 바이러스 인코딩된 당단백질을 포함한다.

인간 헤르페스바이러스 중에서 가장 작은 VZV 유전체는 70개 이상의 오픈 리딩 프레임(ORF, open reading frame)을 인코딩하고, 그 중 8개는 바이러스 복제 사이클에서 상이한 단계에서 기능을 하는 것으로 추정되는 당단백질(gE, gI, gB, gH, gK, gI, gC 및 gM)을 인코딩한다. 당단백질 E(gE, 또는 ORF 68로 지시됨)는 바이러스 복제에 필수적이고(문헌 [Mallory et al. (1997) J. Virol. 71: 8279-8288]; 및 문헌 [Mo et al. (2002) Virology 304: 176-186]), 성숙한 비리온(virion)뿐만 아니라 감염된 세포에서 가장 많이 발견되는 당단백질이다(문헌 [Grose, 2002, The predominant varicella-zoster virus gE and gl glycoprotein complex, In Structure-function relationships of human pathogenic viruses, Holzenburg and Bogner (eds.), Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, NY]). 당단백질 I(gI, 또는 ORF 67로 지시됨)는 감염된 세포에서 gE와 복합체를 형성하고, 이는 양쪽 당단백질의 세포내이입(endocytosis)를 용이하게 하고, 이들을 최종 바이러스 외피가 수득되는 트랜스-골지로 보낸다(문헌 [Olson and Grose (1998) J. Virol. 72: 1542-1551]). 바이러스 진입에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨지는 당단백질 B(gB, 또는 ORF 31로 지시됨)는 중화된 항체에 바인딩하고, 두번째로 많은 당단백질이다(문헌 [Arvin (1996) Clin. Microbiol. Rev. 9: 361-381]에서 확인됨). 당단백질 H(gH)는 바이러스의 세포에서 세포로의 확산을 촉진하는 융합 역할을 갖는 것으로 여겨진다. gE, gB 및 gH에 대한 항체는 자연 감염 및 백신 접종 후에 증가되고, 실험관에서 바이러스 감염성을 중화시키는 것으로 나타났다(문헌 [Keller et al. (1984) J. Virol. 52: 293-297]; 문헌 [Arvin et al. (1986) J. Immunol. 137: 1346-1351]; 문헌 [Vafai et al. (1988) J. Virol. 62: 2544-2551]; 및 문헌 [Forghani et al. (1990) J. Clin. Microbiol. 28: 2500-2506]).

VZV의 일차 감염은 주로 얼굴 및 몸통에 발생하는 매우 전염성이 강한 피부 발진을 특징으로 하는 수두(바리셀라)를 일으킨다. 초기 감염 후, 바이러스 DNA는 숙주의 신경 세포(neuronal cell)의 유전체로 혼입되고, 수년 동안 휴면할 수 있다. 바이러스는 다시 활성화되어 성인들의 대상포진(헤르페스 조스터) 질환을 발생시킬 수 있다. 대상포진은 1차 감염 동안 생성된 것과 구별되는 피부 발진을 야기한다. 상기 발진은 심한 동통을 동반하고, 포진후신경통(PHN, post-herpetic neuralgia)와 같은 더욱 심각한 상태를 일으킬 수 있다.

바리셀라 백신(바리백스, Varivax)은 일반적인 대중들이 입수가능하고, 미국을 포함하는 몇몇 나라에서는 어린이용 추천 백신 스케쥴에 추가되어 있다. 바리셀라 백신의 좀 더 농축된 제형(조스타백스, Zostavax)이 인구의 보다 노년층에서 대상포진의 예방용으로 식품의약청의 승인을 받았다. 바리셀라 백신은 비록 안전한 것으로 증명되었지만, VZV 감염에 대한 면역력이 시간이 지남에 따라 상기 백신의 효과가 사라지는 것에 대한 몇 가지 증거가 있다(문헌 [Chaves et al. (2007) N. Engl. J. Med. 356: 1121-1129]). 따라서, 상기 백신을 접종한 개인이 VZV에 의해 야기되는 보다 심각한 상태인 대상포진에 걸리기 쉬운 채로 남아 있을 수 있다. 게다가, 상기 백신은 살아 있는 약화시킨 바이러스로 제조되므로, 이 때문에 백신 접종으로 인해 개인이 수두 또는 대상포진에 걸릴 가능성이 있게 된다. 사실, 상기 백신에서 사용된 바이러스 주에 발병된 것으로 판명된 것으로 보고된 몇 건의 대상포진 케이스가 존재한다(문헌 [Matsubara et al. (1995). Acta Paediatr Jpn 37: 648-50]; 및 문헌 [Hammerschlag et al. (1989). J Infect Dis. 160: 535-7]). 또한, 상기 백신에 존재하는 살아있는 약화된 바이러스로 인해 면역기능 저하된 개인에게는 상기 백신의 사용이 제한될 수 있다.

바이러스-유사 입자(VLP, virus-like particle)는 구조적으로 성숙한 비리온과 유사하지만, 바이러스 복제가 발생할 수 없도록 바이러스 유전체를 제거한 것이다. VLP는 완전한 바이러스 같이 캡시드(capsid) 및 바이러스 외피(envelope) 단백질과 같은 항원 단백질을 포함하고, 뿐만 아니라 그 표면에 외부 구조 단백질을 발현하도록 구성될 수 있다. 따라서, VLP는 면역성 조성물(예를 들어, 백신)만큼 안전하게 투여될 수 있다. 더욱이, VLP는 자연적인 바이러스와 비슷하고, 다면 미립자 구조이기 때문에, VLP는 용해된 항원보다 항체의 중화를 유도하는데 더욱 효과적일 수 있다.

당단백질 또는 테규먼트를 발현하는 VLP는 이미 상이한 헤르페스바이러스 과 일원으로부터 제조된 바 있다. 외피로 둘러싸인 테규먼트 단백질로 구성된 Light-입자(L-입자)는 단순 포진 바이러스 타입 1(HSV-1), 말 헤르페스바이러스 타입 1(EHV-1), 또는 수도레이비스바이러스에 감염된 세포에서 수득하였다(문헌 [McLauchlan and Rixon (1992) J. Gen. Virol. 73: 269-276; US Pat. No. 5, 384, 122]). 프리-바이러스 DNA 복제 외피 보유 입자(PREP, pre-viral DNA replication enveloped particle)로 불리는 상이한 타입의 VLP는 바이러스 DNA 복제 억제제의 존재하에서 HSV-1이 감염된 세포로부터 제조될 수 있다. 상기 PREP는 L-입자와 구조적으로 유사하지만, 구별되는 단백질 조성물을 포함한다(문헌 [Dargan et al. (1995) J. Virol. 69: 4924-4932]; 미국 특허 제 5,994,116 호). VZV로부터 유래한 gE 단백질의 단편을 발현하는 하이드브리드 VLP는 효모 Ty 레트로트랜스포존(retrotransposon)에 의해 인코딩되는 단백질 p1을 사용하는 기법에 의해 제조되었다(문헌 [Garcia-Valcarcel et al. (1997) Vaccine 15: 709-719]; 문헌 [Welsh et al. (1999) J. Med. Virol. 59: 78-83]; 미국 특허 제 6,060,064호).

상술한 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 효모 Ty 단백질의 발현 및 바이러스 자체의 감염이 필요없는 신규한 VZV로부터 유도된 VLP 및 항원을 기재한다. 이러한 신규한 VLP는 항원 제형 또는 백신 제제로서 유용하다.

본 발명은 바리셀라 조스터 바이러스(VZV, Varicella Zoster Virus)의 당단백질 E(gE) 단백질을 포함하되, VZV 핵산 및 효모 Ty 단백질은 불포함하는 정제된 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자를 포함한다. 본 발명의 한 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 다른 태양에서, 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 바이러스 유래이다. 또 다른 태양에서, 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 곰팡이 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 기생충 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 박테리아 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 VZV-VLP의 표면에 발현된다. 또 다른 태양에서 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 복제된 gE VZV를 포함하는 재조합 발현 시스템에서 유래된다.

본 발명은 또한 VZV gE 및 추가적인 VZV 단백질을 포함하되 VZV 핵산 또는 효모 Ty 단백질을 불포함하는 정제된 VZV-VLP를 포함한다. 하나의 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 더 포함한다.

본 발명은 또한 VZV gE를 암호화하는 벡터를 적합한 숙주 세포에 감염시키는 단계 및 상기 VZV gE 단백질을 VLP를 형성, 단리 및/또는 정제할 수 있는 조건 하에서 발현시키는 단계를 포함하고, 상기 숙주 세포는 효모 Ty 단백질을 포함하지 않으며, 상기 VLP는 VZV 핵산을 포함하지 않는 VLP의 제조 방법을 제공한다. 하나의 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 다른 태양에서, 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 바이러스 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 곰팡이 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 기생충 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 박테리아 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 VZV-VLP의 표면에 발현된다. 또 다른 태양에서 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 수숙주 세포는 포유류 세포이다. 또 다른 태양에서 상기 숙주 세포는 조류 세포이다. 또 다른 태양에서 상기 숙주 세포는 양서류 세포이다. 또 다른 태양에서, 상기 숙주 세포는 효모 세포이다. 바람직한 태양에서, 상기 숙주 세포는 곤충 세포이다. 다른 바람직한 태양에서, 상기 곤충 세포는 Sf9 세포이다.

본 발명은 또한 VZV gE를 암호화하는 벡터를 적합한 숙주 세포에 감염시키는 단계 및 상기 VZV gE 단백질을 VLP를 형성, 단리 및/또는 정제할 수 있는 조건 하에서 발현시키는 단계를 포함하고, 상기 숙주 세포는 효모 Ty 단백질을 포함하지 않으며, 상기 VLP는 VZV 핵산을 포함하지 않고, 상기 VLPsms 추가 VZV 단백질을 더 포함하는 것인 VLP의 제조 방법을 포함한다. 한 태양에서 상기 추가 VZV 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서 상기 추가 VZV 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 추가로 더 포함한다.

본 발명은 또한 VZV gE를 포함하고 VLP가 효모 Ty 단백질 및 VZV 핵산을 불포함하는 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형을 포함한다. 한 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 감염체에서 유래한 단백질은 바이러스 유래이다. 또 다른 태양에서, 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 곰팡이 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 기생충 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 박테리아 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 VZV-VLP의 표면에 발현된다. 또 다른 태양에서 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 항원 제형은 보조제(adjuvant)를 더 포함한다.

본 발명은 또한 VZV-VLP를 포함하고, 상기 VZV-VLP는 VZV gE를 포함하고, 상기 VLP는 효모 Ty 단백질을 불포함하고, VZV 핵산을 불포함하는 백신을 포함한다. 하나의 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 다른 태양에서, 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 바이러스 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 곰팡이 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 기생충 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 박테리아 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체에서 유래한 추가 단백질은 VZV-VLP의 표면에 발현된다. 또 다른 태양에서 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 백신은 보조제를 더 포함한다.

본 발명은 VZV gE 및 추가적인 VZV 단백질을 포함하되 VZV 핵산 또는 효모 Ty 단백질을 불포함하는 백신을 포함한다. 하나의 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 더 포함한다.

본 발명은 또한 사람 또는 동물에게 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신을 투여하는 것을 포함하고, 상기 VZV-VLP는 VZV gE를 포함하고 상기 VLP는 효모 Ty 단백질 및 VZV 핵산을 불포함하는 것인 사람 또는 동물에서 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법을 포함한다. 한 태양에서 상기 VZV-VLP는 감염체에서 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 다른 태양에서, 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 바이러스 유래이다. 또 다른 태양에서, 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 곰팡이 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 기생충 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 박테리아 유래이다. 또 다른 태양에서 상기 감염체로부터 유래한 추가 단백질은 VZV-VLP의 표면에 발현된다. 또 다른 태양에서 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 복제된 gE VZV를 포함하는 재조합 발현 시스템에서 유래된다.

본 발명은 또한 사람 또는 동물에게 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신을 투여하는 것을 포함하고, 상기 VZV-VLP는 VZV gE 및 추가 VZV 단백질을 포함하되, VZV 핵산 및 효모 Ty 단백질을 불포함하는 것인 사람 또는 동물에서 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법을 포함한다. 하나의 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 더 포함한다.

본 발명은 효모 Ty 단백질의 발현 및 바이러스 자체의 감염이 필요없는 신규한 VZV로부터 유도된 VLP 및 항원을 기재한다. 이러한 신규한 VLP는 항원 제형 또는 백신 제제로서 유용하다.

도 1은 VZV 발현 구조체의 SDS-PAGE 및 두 개의 웨스턴 블롯 결과를 개시한다.
도 2는 gE VLPs S400 겔 여과의 입자 분석 결과이다.
도 3은 (A)AcMNPV 바큘로바이러스 폴리헤드린 프로모터(PoIH)의 전사 조절 하에서 IE62 (ICP4) 테규먼트 유전자를 포함하는 pFastBacl 플라스미드의 다이아그램이고, (B) 쿠마시 블루로 염색한 SDS-PAGE(왼쪽 패널) 및 안티-IE62 모노클로날 항체에 대한 웨스턴 블롯(오른쪽 패널) 결과이다.
레인 1. 재조합 IE62를 발현하는 전체 감염된 Sf9 세포의 샘플
레인 2. 균질화 및 원심분리에 의해 세포 부스러기 제거한 세포 용출물
레인 3. TMAE 이온 교환 컬럼의 흐름 통과
레인 4 및 5. IE62를 함유한 TMAE 분획
레인 6. Fractogel 양이온 교환 설페이트(SO3-) 컬럼 상에 로딩된 샘플
레인 7. SO3- 컬럼 흐름 통과
레인 8. 정제된 IE62 용리물
도 4는 (A) Sf9 세포에서 VZV gE 및 gI 발현 탠덤 재조합 바큘로바이러스 만드는데 사용되는 pFastBacl 전이 벡터를 개시한다. gE 및 gI 유전자는 바큘로바이러스 폴리헤드린 프로모터(PoIH)의 전사 조절 하에 있다. gI는 천연, 분리성 시그널 펩타이드를 가지고, gE는 바큘로바이러스 엔벨롭 당단백질 GP64로부터 유래한 시그널 서열로 대체되었다. (b)는 쿠마시 블루로 염색된 SDS-PAGE 겔(왼쪽 패널), 안티-gE에 대한 웨스턴 블롯(중간 패널), 및 안티-전 바이러스 VZV(오른쪽 패널)이다.
레인 1. S200 겔 투과 컬럼에 대한 로딩
레인 2. S200 컬럼에서 최종 정제된 gE/gI 헤테로다이머
안티-gE는 분비된 gE를 인식하고, 주요 단백질이 gE의 예상 중량이 약 60KDa이고(중간 패널), 폴리헤드린 항체는 30KDa gI와 반응한다(오른쪽 패널).
도 5는 (A) C-말단 절단된 VZV gE 유전자를 포함하는 pcDNA3.1 플라스미드(Invitrogen)이고, (B) 쿠마시 블루로 염색한 SDS-PAGE(왼쪽 패널) 및 안티-gE 모노클로날 항체에 대한 웨스턴 블롯(오른쪽 패널) 결과이다.
겔의 첫 번째 레인은 단백질 크기 마커이고, 두 번째 레인은 플라스미드 DNA로 형질전환 후 4일된 HEK293 세포로부터 수득된 2 μl 조직 배양 상등액이 로딩되었고, 세 번째 레인은 렉틴 친화도 컬럼에서 수득한 4 μl 정제된 gE이다.

본 발명에 따르는 VLP 및 상기 VLP 의 제조 방법

본원에서 사용되는 용어 "바이러스 유사 입자(VLP, virus-like particle)"는 하나 이상의 속성이 바이러스와 유사하지만, 비감염성으로 증명된 구조를 지칭한다. 본 발명에 따르는 바이러스 유사 입자는 바이러스 유사 입자의 단백질을 인코딩하는 유전 정보를 가지고 있지 않다. 일반적으로 바이러스 유사 입자는 바이러스의 유전체가 없으므로, 스스로 복제할 수 없다. 게다가, 바이러스 유사 입자는 이종 발현(heterologous expression)으로 대량으로 생산될 수 있으며, 쉽게 정제될 수 있다. 상기 용어는 또한 하술되는 방법에 의해 생성된 임의의 부-바이러스(subviral) 입자를 지칭한다. 상기 용어는 하술되거나 이 분야에서 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 정제될 수 있는 단백질 집합체를 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "항원 제형" 또는 "항원 조성물"은 척추동물, 예를 들어 포유류에게 투여시 면역 반응을 유도할 수 있는 제제를 지칭한다.

본원에서 사용된 용어 "정제된 VLP"는 기타 분자(용질 제외)를 제거하여 본 발명의 VLP가 혼합물 중에서 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 존재하는 본 발명의 VLP의 제제를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 VLP는 본 발명의 VLP의 제조 방법과 관련된 다른 바이러스, 단백질, 지방 및 탄수화물이 실질적으로 제거된 것일 수 있다. 상기 용어는 또한 VZV 유전 DNA 또는 그 일부로 오염된 VLP에서 단리된 VLP를 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "키메라 VLP(chimeric VLP)"는 두 개 이상의 상이한 감염체로부터 유래한 단백질 또는 그 일부(이종 단백질)를 포함하는 VLP를 지칭한다. 통상, 상기 단백질 중 하나는 숙주 세포로부터 VLP의 형성을 유도할 수 있는 바이러스로부터 유래하고(예를 들어, VZV gE), 다른 하나는 이종의 감염체에서 유래한다.

용어 "감염체"는 척추동물에서 감염을 야기하는 미생물을 지칭한다. 감염체는 바이러스, 곰팡이, 박테리아 및/또는 기생충일 수 있다. VZV-VLP의 표면에 발현될 수 있는 단백질은 바이러스, 곰팡이, 박테리아 및/또는 기생충으로부터 유래될 수 있다. 바이러스, 곰팡이, 박테리아 및/또는 기생충으로부터 유래된 단백질은 척추동물에서 (세포성 및/또는 체액성) 면역 반응을 유도할 수 있고, 상기 면역반응은 상기 척추동물에서 감염성 질환을 예방, 치료, 관리 및/또는 개선할 것이다.

본원에서 사용된 용어 "백신"은 본 발명에 따르는 VLP를 포함하는 제형을 지칭하고, 이는 척추동물에게 투여될 수 있는 형태이고, 감염을 예방 및/또는 개선하고/하거나, 감염의 하나 이상의 증상을 경감시키고/시키거나, VLP의 또 다른 투여량의 효능을 향상시키기에 충분한 보호 면역 반응을 유도한다.

본원에서 사용된 용어 "유효량"은 원하는 생물학적 효과를 실현시키기에 필요하거나 충분한 VLP의 양을 지칭한다. 조성물의 유효량은 선택된 결과를 달성하는 양이고, 이러한 양은 당 분야에서 숙련된 사람에 의해 일상적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 감염을 예방, 치료 및/또는 개선하기 위한 유효량은 면역 시스템의 활성화를 일으키는데 필수적인 양으로, 이는 본 발명에 따르는 VLP에 노출 시 항원 특이적인 면역 반응의 발달을 야기할 수 있다. 상기 용어는 또한 "충분양"과 같은 의미이다.

본원에서 사용된 용어 "예방 면역" 또는 "예방 면역 반응"은 척추동물(예를 들어, 인간)에서 나타나는 감염체에 대항한 면역력 또는 면역 반응의 유도를 의미하고, 이는 감염을 예방 또는 개선하거나, 또는 하나 이상의 증상을 경감시킨다.

본원에서 사용된 용어 "척추동물" 또는 "대상" 또는 "환자"는 비-제한적으로 인간; 및 침팬지와 같은 비-인간 영장류 및 다른 유인원 및 원숭이 종을 포함하는 기타 영장류를 포함하는 코르다타 아문(subphylum cordata)의 임의의 일원을 지칭한다. 농장 동물, 예컨대 소, 양, 돼지, 염소 및 말; 가축, 예컨대 개 및 고양이; 생쥐, 래트(코튼 래트 포함) 및 기니아 피그와 같은 설치류를 포함하는 실험실 동물; 닭, 칠면조 및 기타 가금류, 오리, 거위 등과 같은 집새, 야생 조류 및 사냥 조류를 포함하는 조류도 역시 비-제한적인 예이다. 용어 "포유류" 및 "동물"은 상기 정의에 포함된다. 성체 및 신생 동물 모두가 포함된다.

본 발명자는 세포에서 VZV gE 단백질 발현이 VLP 형성을 유도하는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명은 VZV gE의 발현으로 형성되는 VZV-VLP를 포함한다. 본 발명자는 또한 gE 및 하나 이상의 추가 VZV 단백질을 발현하는 숙주 세포로부터 신규한 VLP를 개발하였다. 게다가, 상기 VLP는 다른 감염체로부터 유래한 항원 단백질을 발현할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명에 따르는 VZV-VLP를 포함하는 "항원 제형"의 제조 방법 및 투여 방법을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명에 따르는 VZV-VLP를 포함하는 백신의 제조 방법 및 투여 방법을 포함한다. 상기 신규한 백신 제형은 살아 있는 약화된 바이러스로 제조되는 최근 입수 가능한 백신이 맞닥뜨리는 문제 및 우려의 일부를 극복한다.

본 발명은 VZV의 gE를 포함하는 VZV-VLP를 포함하고, 상기 VZV-VLP는 VZV 핵산 또는 효모 Ty 단백질을 포함하지 않는다. 다른 태양에서, 본 발명의 VLP는 필수적으로 gE 단백질로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 VZV 캡시드(capsid) 단백질(예, ORF 20, ORF 40, ORF 41)을 포함하지 않는다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 VLP는 VLP로 혼입되는 VZV 단백질을 하나 이상 추가로 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI (ORF 67) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gM (ORF 50) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질을 하나 이상 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI, gM, gH, gB 또는 테규먼트 단백질의 조합을 포함한다.

본 발명의 또 다른 태양은 VZV gE 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라 VZV-VLP를 포함한다. 한 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 다른 태양에서 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충에서 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP의 표면에서 발현된다.

본 발명의 키메라 VLP의 또 다른 타입은 또한 VZV gE 단백질, VZV에서 유래한 하나 이상의 다른 단백질, 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 VLP를 포함한다. 한 태양에서 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP의 표면에서 발현된다.

상기 감염체 단백질이 유래될 수 있는 바이러스의 비-제한적인 예는 하기와 같다: 인플루엔자 (A 및 B, 예 HA 및/또는 NA), 코로나바이러스(예, SARS), 간염 바이러스 A, B, C, D 및 E3, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 헤르페스 바이러스 1, 2, 6 및 7, 사이토메갈로 바이러스, 바리셀라 조스터, 유두종 바이러스, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스, 아데노 바이러스, 분야(Bunya) 바이러스(예, 한타 바이러스), 콕사키 바이러스, 피코마 바이러스, 로타 바이러스, 리노 바이러스, 루벨라 바이러스, 멈프스 바이러스, 홍역 ㅂ바이러스, 루벨라 바이러스, 폴리오 바이러스(다중 타입), 아데노 바이러스(다중 타입), 파라인플루엔자 바이러스(다중 타입), 조류 인플루엔자(다양한 타입), 수송열(shipping fever) 바이러스, 북미서부말 뇌염 및 북미동부말 뇌염(Western and Eastern equine encephalomyelitis) 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 계두(fowl pox) 바이러스, 광견병 바이러스, 슬로우 브레인(slow brain) 바이러스, 라우스 육종(rous sarcoma) 바이러스, 파포비리데(Papovaviridae), 파르보비리데(Parvoviridae), 피코마비리데(Picomaviridae), 폭스비리데(Poxviridae)(예컨대, 천연두 또는 우두), 레오비리데(Reoviridae)(예, 로타 바이러스), 레트로비리데(Retroviridae)(HTLV-I, HTLV-II, 렌티바이러스), 토가비리데(Togaviridae)(예, 루비 바이러스), 뉴캐슬 병(Newcastle disease) 바이러스, 서부 나일강 열 바이러스, 진드기매개 뇌염 바이러스, 황열 바이러스, 치쿤구니야(chikungunya) 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스 및 뎅기 바이러스(모든 혈청형).

다른 양태에서, 바이러스로부터 유래한 특정 단백질은 인플루엔자 바이러스(조류 인플루엔자 바이러스 포함)로부터 유래한 HA 및/또는 NA, 코로나바이러스로부터 유래한 S 단백질, HIV 유래 gp160, gp140 및/또는 gp41, 호흡기 세포융합 바이러스로부터 유래한 F 또는 G 단백질, 황열 바이러스, 뎅기 바이러스(모든 혈청형) 또는 임의의 플라비바이러스로부터 유래한 E 및 프리M/M을 포함할 수 있다. 또한 척추동물에서 (세포성 및/또는 체액성) 면역 반응을 유도하여 상기 척추동물에서 감염성 질환을 예방, 치료, 관리 및/또는 개선할 수 있는 바이러스로부터 유래한 임의의 단백질이 포함된다.

상기 감염체 단백질이 유도될 수 있는 박테리아의 비-제한적인 예는 하기와 같다: B. 페르투시스, 렙토스피라 포모나, S. 파라타이피 A 및 B, C. 디프테리애, C. 테타니, C. 보툴리눔, C. 페르프린겐스, C. 페세리 및 기타 가스 괴저 박테리아, B. 안트라시스, P. 페스티스, P. 물토시다, 네이세리아 메닌기티디 스, N. 고노레애, 해모필러스 인플루엔자, 액티노마이세스(예, 노르카디아), 아시네토박터, 바실라세애(예, 바실러스 안트라시스), 박테로이데스(예, 박테로이데스 프라질리스), 블라스토마이세스, 보르데텔라, 보렐리아(예, 보렐리아 부르그도르페리), 브루셀라, 캄필로박터, 클라미디아, 콕시디오이데스, 코리네박테리아(예, 코리네박테 리움 디프테리애), 대장균(예, 장독소생산 E. 콜라이 및 장출혈성 E. 콜라이), 엔테로박터(예, 엔테로박터 애로게네스), 엔테로박테리아(클레브시엘라, 살모넬라(예, 살모넬라 타이피, 살모넬라 안테리티디스), 세라티아, 여시니아, 시겔라), 에리시펠로트릭스, 해모필러스(예, 해모필러스 인플루엔자 타입 B), 헬리코박터, 레지오넬라(예, 레지오넬라 뉴모필라), 렙토스피라, 리스레티리아(예, 리스테리아 모 노사이토게네스), 미코플라스마, 미코박테리아(예, 미코박테리움 레프래 및 미코박 테리움 튜베르큘로시스), 비브리오(예, 비브리오 콜레래), 파스퇴렐라세아, 프로테우스, 수도모나스(예, 수도모나스 애루기노사), 리케치시아세애, 스피로캐에데스(예, 트레포네마 spp., 렙토스피라 spp., 보렐리아 spp.), 시겔라 spp., 메닌지오코커스, 뉴모코커스 및 스트렙토코커스(예, 스트렙토코커스 뉴모니애 및 그룹 A, B, 및 C 스트렙토코커스), 유레아플라스마, 트레포네마 폴리덤, 스타필로코커스 아우레우스, 파스퇴렐라 해모라이티카, 코리네박테리움 디프페리애 변성독소, 메닌고코칼 다당류, 보르데탈라 페르투시스, 스트렙토코커스 뉴모니애, 클로스트리디움 테타니 변성독소, 및 미코박테리움 보비스.

상기 감염체 단백질이 유도될 수 있는 기생충의 비-제한적인 예는 하기와 같다: 리슈만편모충(리슈마니아 트로피카 멕시카나, 리슈마니아 트로피카, 리슈마니 아 메이저, 리슈마니아 애티로피카, 리슈마니아 브라질리엔시스, 리슈마니아 도노 바니, 리슈마니아 인판텀, 리슈마니아 카가시), 파동편모충(트리파노소마 브루세이 감비엔세, 트리파노소마 브루세이 로데시엔세), 톡소포자충(톡소플라스마 곤디이), 주혈흡충(슈스토소마 해마토비움, 슈스토소마 야포니쿰, 슈스토소마 만소니, 슈스 토소마 메콘기, 슈스토소마 인테르칼라툼), 말라리아(플라스모디움 비락스, 플라스 모디움 팔시파리움, 플라스모디움 말라리애 및 플라스모디움 오발레) 아메바(엔타 모에바 히스토라이티카), 바베스열원충(바베시오세스 마이크로티), 와포자충(크립 토스포리디움 파르붐), 디엔타모에비아시스(디엔타모에바 프라길리스), 람블편모충(기아르디아 람블리아), 연충(Helminthiasis) 및 트리코모나스(트리코모나스 바기날리스).

상기 감염체 단백질이 유도될 수 있는 곰팡이의 비-제한적인 예는 하기와 같다: 압시디아(예, 압시디아 코림비페라), 아젤로마이세스(예, 아젤로마이세스 캡슐 라투스, 아젤로마이세스 데르마티티디스), 아르트로데르마(예, 아르트로데르마 베 하미애, 아르트로데르마 풀붐, 아르트로데르마 깁세움, 아르트로데르마 인큐르바 툼, 아르트로데르마 오태, 아르트로데르마 반브레우세게미이), 아스페르길루스(예, 아스페르길루스 푸미가투스, 아스페르길루스 나이게르), 칸디다(예, 칸디다 알비칸 스, 칸디다 알비칸스 바르 . 스텔라토이데아 , 칸디다 두블리넨시스 , 칸디다 글라브 라타, 칸디다 귈리에르몬디이(피치아 귈리에르몬디이), 칸디다 크루세이(이사츠쉔 키아 오리엔탈리스), 칸디다 파랍실로시스, 칸디다 페리큘로사(피치아 아노말라), 칸디다 트로피랄리스), 코시디오이데스(예, 코시디오이데스 이미티스), 크립토코커스(예, 크립토코커스 네오포르만스(필로바시디엘라 네오포르만스), 히스토플라스마(예, 히스토플라스마 캡슐라튬(아젤로마이세스 캡슐라투스), 마이크로스포룸(예, 마이크로스포룸 카나스(아르트로데르마 오태), 마이크로포룸 풀붐(아르트로데르마 풀붐), 마이크로포룸 깁세움, 피치아 속(예, 피치아 아노말라, 피치아 귈리에르몬 디이), 뉴모시스티스(예, 뉴모시스티스 지로베시이), 크립토스포리디움, 말라세지 아 푸르푸르, 파라코시디오데스. 상기 리스트는 예시하기 위한 의도이며, 어떤 수단으로든 본 발명을 이러한 특정 박테리아, 바이러스, 곰팡이 또는 기생충 생명체로 한정하려는 의도가 아니다.

본 발명은 또한 상기 본 발명에 따르는 VLP 상에 또는 내에 발현되는 당단백질(단백질)의 변형체(상기 키메라 포함)를 포함한다. 상기 변형체는 구성 단백질의 아미노산 서열 상의 변경을 포함할 수 있다. 폴리펩타이드에 대하여 용어 "변형체"는 기준 서열에 대하여 하나 이상의 아미노산이 변경된 아미노산 서열을 의미한다. 상기 변형체는 치환된 아미노산이 유사한 구조적 또는 화학적 특성을 갖는 변화, 예를 들어 류신을 아이소류신으로 치환와 같은 "보존성" 변화를 가질 수 있다. 다르게는, 변형체는 글리신을 트립토판으로 치환하는 것과 같은 "비보전성" 변화를 가질 수 있다. 유사한 마이너 변형으로는 또한 아미노산 제거, 삽입 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 어떠한 아미노산 잔기가 생물학적 또는 면역학적 활성을 없애지 않고 치환, 삽입 또는 제거될 수 있는 것인지 결정하는 가이드라인은 당 분야에서 잘 공지된 컴퓨터 프로그램, 예를 들어 DNASTAR 소프트웨어를 사용하여 알아낼 수 있다.

분자 생물학 기법을 설명하는 일반적인 문헌의 내용, 예컨대 복제, 돌연변이, 세포 배양 등이 본 발명에 적용가능하며, 문헌 [Berger and Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology volume 152 Academic Press, Inc., San Diego, Calif. (Berger)]; 문헌 [Sambrook et ah, Molecular Cloning?A Laboratory Manual (3rd Ed.), Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 2000 ("Sambrook")] 및 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al, eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., ("Ausubel")]을 포함한다. 상기 내용은 예를 들어 VZV의 gE, gI, gM, gH, gB 또는 테규먼트 단백질의 복제 및 돌연변이 등과 같은 돌연변이 생성(mutagenesis), 벡터의 사용, 프로모터 및 기타 수많은 관련 주제를 개시한다. 따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 VLP 상에 또는 내에 발현된 단백질의 특성을 개선하거나 변경시키는 단백질 엔지니어링 및 재조합 DNA 기술의 공지된 방법을 사용하는 것을 포함한다. 다양한 형태의 돌연변이 생성이 사용되어 본 발명의 VLP 내에 또는 상의 단백질 분자를 인코딩하는 변형체 핵산을 생성하고/하거나 단리하고/하거나 본 발명의 VLP 내에 또는 상의 단백질을 추가로 개선 또는 돌연변이시킬 수 있다. 이러한 돌연변이 생성은 장소-지시, 랜덤 포인트 돌연변이 생성, 동종 재조합(DNA 셔플링), 우라실 함유 템플릿을 사용한 돌연변이 생성, 올리고뉴클레오타이드-지시 돌연변이 생성, 포스포로티오에이스-변경된 DNA 돌연변이 생성, 공간이 있는 듀플렉스 DNA를 사용한 돌연변이 생성 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 추가적인 적합한 방법은 포인트 미스매치 리페어(point mismatch repair), 리페어-부재 숙주 균주를 사용한 돌연변이 생성, 제한-선택 및 제한-정제, 제거 돌연변이 생성, 전체 유전자 합성에 의한 돌연변이 생성, 이중-나선 브레이크 리페어 등을 포함한다.

본 발명의 VZV 단백질의 복제 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 특정 VZV 단백질을 인코딩하는 유전자를 VZV 바이러스로 감염된 세포로부터 추출된 폴리아데닐화된 mRNA로부터 RT-PCR로 분리하여 단리할 수 있다. 생성된 산물 유전자는 벡터에 DNA 삽입체로서 복제될 수 있다. 용어 "벡터"는 생물체, 세포 또는 세포 성분 사이에서 전파 및/또는 전이될 수 있는 핵산에 의한 수단을 의미한다. 벡터는 자동적으로 복제되고 숙주 세포의 염색체 속에 혼입될 수 있는 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 프로바이러스, 파지미드(phagemid), 트랜스포존(transposon), 인공 염색체 등을 포함한다. 백터는 또한 자동적으로 복제하지 않는 네이키드 RNA 폴리뉴클레오타이드, 네이키드 DNA 폴리뉴클레이타이드, 동일 가닥 내에 DNA와 RNA를 모두 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 폴리-라이신-접합된 DNA 또는 RNA, 펩타이드-접합된 DNA 또는 RNA, 또는 리포좀-접합된 DNA 등일 수 있다. 본 발명의 벡터는 전부는 아니지만 대부분의 태양에서 플라스미드이다.

따라서, 본 발명은 본 발명에 따르는 VLP의 형성을 유도하는, 세포에서 발현될 수 있는 발현 벡터로 복제된 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. "발현 벡터"는 발현 및 그 내부에 혼입된 핵산의 복제를 촉진할 수 있는 플라스미드와 같은 벡터이다. 전형적으로 상기 발현되는 핵산은 프로모터 및/또는 인핸서에 작동가능하게 연결되어 있고, 상기 프로모터 및/또는 인핸서에 의해 전사 조절 제어에 종속된다. 한 태양에서, 상기 뉴클레오타이드는 VZV gE (ORF 68) 단백질을 인코딩한다. 다른 태양에서, 상기 벡터는 VZV gE 및 감염체로부터 유래한 하나 이상의 추가 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 벡터는 VZV gE 단백질 및 gI (ORF 67), gM (ORF 50), gH, gB 및/또는 테규먼트 VZV 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 태양에서, 발현 벡터는 바큘로바이러스 벡터이다.

본 발명의 일부 태양에서, 단백질은 침묵 치환, 삽입 또는 제거를 일으키는 변경을 포함하는 돌연변이를 포함하지만, 인코딩된 단백질의 특성 또는 활성 또는 단백질의 생성 방법이 변경되지 아니할 수 있다. 뉴클레오타이드 변형체는, 예를 들어 특정 숙주에 코돈 발현(Sf9 세포와 같은 곤충 세포에 의해 선호되는 것에 대하여 인간 mRNA에서 변화 코돈)에 최적화시키기 위한 것과 같은 다양한 이유로 제조될 수 있다.

게다가, 뉴클레오타이드는 올바른 코딩 지역이 복제되고 원치않는 돌연변이가 포함되지 않도록 서열화될 수 있다. 상기 뉴클레오타이드는 임의의 세포에서 발현되는 발현 벡터(예, 바큘로바이러스) 내로 서브복제될 수 있다. 상기는 VZV 바이러스 단백질이 복제될 수 있는 방법의 하나의 예이다. 당분야의 기술자는 추가적인 방법이 가능함을 이해할 것이다.

본 발명은 또한 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부를 포함하는 VZV 단백질을 인코딩하는 VZV 뉴클레오타이드를 포함하는 구조체 및/또는 벡터를 제공한다. 벡터는 예를 들어, 파아지, 플라이스미드, 바이러스 또는 레트로바이러스 벡터일 수 있다. gE, gI, gM, gH, gB 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부를 포함하는 VZV 유전자를 포함하는 구조체 및/또는 단백질은, 비-제한적인 예로서 AcMNPV 폴리헤드린 프로모터 (또는 기타 바큘로바이러스), 파아지 람다 PL 프로포터, E. coli lac, phoA 및 tac 프로모터, SV40 초기 및 후기 프로모터, 및 레트로바이러스의 LTR의 프로모터와 같은 적절한 프로모터에 작동가능하게 연결되어야 한다. 기타 적합한 프로모터는 바람직한 숙주 세포 및/또는 발현 속도에 따라 당업자는 쉽게 알 수 있을 것이다. 발현 구조체는 전사 개시, 종료를 위한 자리 및 전사되는 지역 내에, 단백질로 번역되기 위한 리보좀-바인딩 자리를 추가로 포함할 것이다. 상기 구조체에 의해 발현된 전사체의 부분은 바람직하게 시작되는 번역 개시 코돈 및 번역될 폴리펩타이드의 끝에 적절하게 위치되는 종료 코돈을 포함할 것이다.

발현 벡터는 바람직하게 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함한다. 이러한 마커는 다이하이드로 폴레이트 리덕타제, 진핵 세포 배양하기 위한 네오마이신 저항성 또는 G418, 및 테트라시클린, E. 콜라이 및 기타 박테리아에서 배양하기 위한 카나마이신 또는 암피실린 저항성 유전자를 포함한다. 상술한 벡터 중 바람직한 벡터는, 바이러스 벡터, 예컨대 바큘로바이러스, 폭스바이러스(예, 백시니아 바이러스, 아비폭스 바이러스, 카나리폭스 바이러스, 파울폭스 바이러스, 라쿤폭스 바이러스, 스와인폭스 바이러스 등), 아데노바이러스(예, 개 아데노바이러스), 헤르페스바이러스, 및 레트로바이러스이다. 본 발명에서 사용될 수 있는 기타 벡터는 박테리아에서 사용될 수 있는 벡터를 포함하고, 이는 pQE70, pQE60 및 pQE-9, p블루스트립트(pBluescript) 벡터, 파아지스크립트 벡터, pNH8A, pNH16a, pNH18A, pNH46A, ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5를 포함한다. 상술한 벡터 중 바람직한 진핵세포 벡터는 pFastBacl pWINEO, pSV2CAT, pOG44, pXT1 및 pSG, pSVK3, pBPV, pMSG, 및 pSVL이다. 기타 적합한 벡터는 숙련된 기술자에게 쉽게 명확해질 수 있다.

다음으로, 상술한 재조합 구조체는 핵산감염, 감염 또는 형질전환에 사용될 수 있고, 진핵세포 및/또는 원핵세포로 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질, 또는 이들의 일부를 포함하는 VZV 단백질을 발현할 수 있다. 따라서, 본 발명은 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질, 또는 이들의 일부를 포함하는 VZV 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하고, 조건하에서 상기 숙주 세포에서 VLP를 형성케하는 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질, 또는 이들의 일부를 포함하는 VZV 유전자의 발현을 허용하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

상술한 진핵 숙주 세포는 효모, 곤충, 양서류, 조류, 식물, C. 엘레강스(또는 선충) 및 포유류 숙주 세포이다. 곤충 세포의 비-제한적인 예는 스포돕테라 프루기페르다(Sf) 세포, 예를 들어 Sf9, Sf21, 트리초플러시아 니 세포, 예를 들어 하이 파이브 세포, 및 드로소필라 S2 세포이다. (효모를 포함하는) 곰팡이 숙주 세포의 예는 S. 세레비지애, 클루이베로마이세스 락티스(K. 락티스), C. 알비칸스 및 C. 글라브라타를 포함하는 칸디다 종, 아스페르길루스 니둘란스, 쉬조사카로마이세 스 폼베(S. 폼베), 피치아 파스토리스, 및 야로위아 리포리티카이다. 포유류 세포의 예는 COS 세포, 아기 햄스터 신장 세포, 쥐 L 세포, LNCaP 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 인간 배아 신장(HEK) 세포, 및 아프리카 녹색 원숭이 세포, CV1 세포, HeLa 세포, MDCK 세포, 베로(Vero) 및 Hep-2 세포이다. 제노푸스 라에비스 옥시테스, 또는 기타 양서류 기원 세포도 사용될 수 있다. 원핵 숙주 세포는 박테리아 세포, 예를 들어 E. 콜라이, B. 서브틸리스, 및 미코박테리아를 포함한다.

벡터, 예를 들어 VZV gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터는 당분야에서 공지된 방법에 따라 숙주 세포로 핵산감염될 수 있다. 예를 들어, 진핵 세포로 핵산을 혼입하는 것은 칼슘 포스페이트 공침, 전기천공, 마이크로인젝션, 리포펙션, 및 폴리아민 핵산감염 시약을 사용한 핵산감염에 의할 수 있다. 한 태양에서, 상기 벡터는 재조합 바큘로바이러스이다. 다른 태양에서, 상기 재조합 바큘로바이러스는 진핵 세포로 핵산감염될 수 있다. 바람직한 태양에서, 상기 숙주 세포는 곤충 세포이다. 또 다른 태양에서 곤충 세포는 Sf9 세포이다.

다른 태양에서, 상기 벡터 및/또는 숙주 세포는 VZV 단백질 gE 또는 그의 일부를 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 벡터 및/또는 숙주 세포는 필수적으로 VZV 단백질 gE 또는 그의 일부를 인코딩하는 뉴클레오타이드로 구성된다. 추가적인 태양에서, 상기 벡터 및/또는 숙주 세포는 VZV 단백질 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부를 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함한다. 상술된 벡터 및/또는 숙주 세포는 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부 및 선택적으로 감염체로부터 유래한 임의의 추가 단백질을 포함하고, 세포 단백질, 바큘로바이러스 단백질, 지질, 탄수화물 등과 같은 추가 세포 구성성분을 포함할 수 있으나, Ty 트랜스포존 또는 Ty 트랜스포존에 의해 인코딩되는 임의의 단백질을 불포함한다.

본 발명은 또한 VLP의 제조 방법을 제공하고, 상기 제조 방법은 gE, gI, gM, gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 일부, 및 선택적으로 VLP 형성이 허용되는 조건 하에서 감염체로부터 유래한 임의의 추가 단백질을 포함하는 VZV 유전자를 발현시키는 단계를 포함한다. 선택된 발현 시스템 및 숙주 세포에 따른 재조합 단백질이 발현되고 VLP가 형성되도록 하는 조건 하에서, 발현 벡터에 의해 핵산감염된 성장하는 숙주 세포에서 VLP가 생성된다. 다른 태양에서, 상기 진핵 세포는 효모, 곤충, 양서류, 조류 또는 포유류 세포로 이루어진 그룹에서 선택된다. 적합한 성장 조건의 선택은 당 분야의 통상적인 기술을 가진 자의 기술 범위 내에 있다.

본 발명에 따르는 VLP의 제조를 위해 조합된 세포를 성장시키는 방법은 이에 한정되는 것은 아니지만, 배치, 배치-투입, 연속 및 관류 세포 배양 기법을 포함한다. 세포 배양은 정제 및 단리를 위해 세포가 증식하고 단백질(예, 재조합 단백질)을 발현하는 바이오반응기(발효 챔버)에서 세포의 성장 및 증식을 의미한다. 전형적으로, 세포 배양은 바이오반응기에서 멸균된 온도 및 분위기 조건이 제어된 조건하에서 수행된다. 바이오반응기는 세포를 배양하는데 사용되는 챔버로, 상기 챔버는 온도, 분위기, 교반 및/또는 pH와 같은 환경 조건이 모니터링될 수 있다.

그 후 VLP는 구배 원심분리, 예를 들어 세슘 클로라이드, 수크로오스 및 아이오딕사놀 VLP의 온전성이 보전되는 방법, 및 예를 들어 이온 교환 및 겔 투과 크로마토그래피를 포함하는 표준 정제 기법을 사용하여 단리된다. 한 태양에서, 본 발명은 본 발명에 따라 정제된 VLP를 포함한다. 다른 태양에서, 본 발명의 VLP는 혼합물 중에서 기타 분자(용질 제외)를 제거하여 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 존재한다. 또 다른 태양에서, 본 발명의 VLP는 본 발명의 VLP 제조에 관련된 기타 바이러스, 단백질, 지방 및 탄수화물이 실질적으로 제거된 것이다. 하기는 VLP가 제조, 단리, 정제되는 방법의 예이다. 통상 VLP는 상기 세포가 세포 배양으로 성장시 VLP를 생성하도록 조합된 재조합 세포주로부터 제조된다(상술한 내용 참조). 당 분야의 숙련된 자는 본 발명의 VLP가 제조되고 정제되는데 사용될 수 있는 다른 방법이 존재하는 것을 이해할 것이며, 따라서 본 발명은 설명된 방법으로 제한되지 않는다.

본 발명의 VLP의 제조는 성장 및 증식함에 따라 확장 및 스케일 업을 할 수 있는 쉐이커 플라스크로 Sf9 세포를 시딩(seeding)함으로써 시작될 수 있다. 세포를 서장시키는데 사용된 배지(바람직하게 세럼 프리 배지, 예를 들어 곤충 배지 ExCell-420, JRH)는 적절한 세포주에 따라 배합된다. 그 후, 상기 세포를 가장 효율적인 감염 다중도에서(예, 약 1 내지 약 3 pfu(plaque forming unit)/cell) 재조합 바큘로바이러스로 감염시킨다. 감염이 일어나면, VZV gE 및/또는 기타 단백질은 VLP로 자가 조합되고 감염 후 약 24 내지 72 시간에서 세포로부터 분비된다. 통상 감염은 세포가 성장 곡선에서 중간 로그 상(4 x 10⁶ 내지 8 x 10⁶ cells/ml)이고, 적어도 약 90%가 생존가능할 때 가장 효과적이다.

본 발명의 VLP는 세포 배양 배지에서 VLP의 레벨이 최대치에 가깝되, 대량 세포 용해 전인 감염 후 대략 48 내지 96시간에서 수확될 수 있다. 수확 시 Sf9 세포 밀도 및 생존성은 염색 배제법에 의해 볼 수 있는 바와 같이 20% 이상의 생존성에 약 0.5 x 10⁶ cells/ml 내지 약 1.5 x 10⁶ cells/ml 일 수 있다. 다음으로, 배지를 제거하고, 깨끗이 한다. VLP 응집을 막기 위해 NaCl을 배지에 첨가하여 약 0.4 내지 약 1.0 M, 바람직하게 약 0.5M 농도로 만든다. 본 발명의 VLP를 포함하는 세포 배양 배지로부터 세포 및 세포성 부스러기의 제거는 예비-살균된 중공 섬유 0.5 또는 1.00 ㎛ 필터 카트리지 또는 유사한 장치를 단독으로 사용하며 접선 유동 여과(TFF, tangential flow filtration)를 동반할 수 있다.

그 후, 세포 및 세포 부스러기가 제거된 깨끗해진 배양 배지중의 VLP를 일회용 예비-살균된 500,000 분자 중량 컷 오프 중공 섬유 카트리지를 사용하여 한외여과(ultrafiltration)하여 농축시킬 수 있다. 농축된 VLP는 0.5M NaCl을 포함하는 pH 7.0 내지 8.0의 포스페이트-완충된 식염수(PBS, phosphate-buffered saline) 10 부피에 대하여 정용여과(diafiltration)되어 잔류 배지 성분을 제거할 수 있다. 농축되고 정용여과된 VLP는 약 4℃ 내지 약 10℃에서 18시간 동안 6,500 x g에서 원심분리에 의해 0.5M NaCl로 pH 7.2 PBS 완충액 중에서 20% 내지 60%의 불연속적 수크로오스 구배에서 추가적으로 정제될 수 있다. 통상 VLP는 구배로부터 수집 및 저장될 수 있는 약 30% 내지 약 40% 수크로오스 사이 또는 계면(20% 및 60% 단계 구배)에서 구별되는 눈에 보이는 밴드를 형성할 것이다. 상기 산물은 희석되어 정제 공정에서 다음 단계를 위해 제제 중에서 200mM의 NaCl을 포함할 수 있다. 상기 산물은 VLP를 포함하고, 온전한 바큘로바이러스 입자를 포함할 수 있다.

VLP의 추가 정제는 음이온 교환 크로마토그래피 또는 44% 등밀도 수크로오스 쿠션 원심분리에 의해 달성될 수 있다. 음이온 교환 크로마토그래피에서, 수크로오스 구배로부터 수득된 샘플(상술한 내용 참조)은 음이온을 갖는 배지를 포함하는 컬럼(예, 매트릭스 프락토겔 EMD TMAE)으로 로딩되고, 기타 오염물질로부터 VLP를 분리할 수 있는 염 구배(약 0.2M 내지약 1.0M의 NaCl)를 통해 용리된다. 수크로오스 쿠션 방법에서, VLP를 포함하는 샘플은 44% 수크로오스 쿠션에 첨가되고 30,000 g에서 약 18시간 동안 원심분리된다. 바큘로바이러스가 바닥에 침전되고 기타 오염 단백질이 꼭대기의 0% 수크로오스 층에 머무르는 반면에, VLP는 44% 수크로오스 위에 ℃밴드를 형성한다. VLP 피크 또는 밴드를 수집한다.

온전한 바큘로바이러스는 필요시 비활성화된다. 비활성화는 화학적 방법, 예를 들어 포르말린 또는 β-프로피오락톤(BPL)에 의해 수행될 수 있다. 온전한 바큘로바이러스의 제거 및/또는 비활성화는 또한 주로 상기 예시된 바 있는 당분야에 공지된 선택적 침전 및 크로마토그래피 방법을 사용함으로써 수행될 수 있다. 비활성화 방법은 약 25℃ 내지 약 27℃에서 3시간 동안 0.2% BPL에서 VLP를 포함하는 샘플을 인큐베이션하는 것을 포함한다. 비활성화/제거 단계 후, VLP를 포함하는 산물은 또 다른 정용여과 단계를 통하여 비활성화 단계로부터 첨가된 임의의 시약 및/또는 임의의 잔류 수크로오스를 제거하고, VLP를 원하는 완충액(예, PBS) 중에 넣을 수 있다. VLP를 포함하는 용액은 당분야에서 공지된 방법에 의해 살균되고(예, 살균 여과), 냉장고 또는 냉동고에 보관될 수 있다.

상기 기법은 예를 들어, T-플라스크, 쉐이크-플라스크, 스피너 병, 산업용 크기의 바이오반응기까지 다양한 스케일을 통해 수행될 수 있다. 바이오반응기는 스테인리스 강철 탱크 또는 예비-살균된 플라스틱 백(예를 들어, NJ, 브릿지워터 소재의 웨이브 바이오텍(Wave Biotech)에 의해 시판중인 시스템)을 포함할 수 있다. 당 분야에 통상의 기술자는 무엇이 그들의 목적에 가장 바람직한 것인지 알 수 있다.

약학 또는 백신 제형 및 투여

본원에서 유용한 약학 조성물은 본 발명의 VLP 및 임의의 적합한 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하고, 이는 그 자체로서 조성물을 섭취하는 척추동물에게 해로운 면역 반응의 생성을 유도하지 않으며, 과도한 독성 없이 투여될 수 있는 임의의 약제를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "약학적으로 허용가능한"이란 포유동물, 보다 구체적으로 인간에의 사용이 연방 또는 주 정부의 조절국에 의해 승인되거나 미국 의약품, 유럽 의약품 또는 기타 일반적인 인식가능한 의약품에 리스트가 존재하는 것을 의미한다. 이들 조성물은 척추동물에서 예방 면역 반응을 유도하기 위한 백신 및/또는 항원 제형으로서 유용할 수 있다.

본 발명은 VZV gE 단백질을 포함하되, VZV 핵산 또는 효모 Ty 단백질을 불포함하는 VLP를 포함하는 항원 제형을 포함한다. 한 태양에서, 상기 항원 제형은 필수적으로 gE 단백질로 구성된 VLP를 포함한다. 다른 태양에서, 상기 항원 제형은 VLP로 혼입된 하나 이상의 추가 VZV 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI(ORF 67) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gM(ORF 50) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가 VZV 단백질은 테규먼트 단백질을 포함한다. 또 다른 양태에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI, gM, gH, gB 또는 테규먼트 단백질의 조합을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 VZV 캡시드 단백질(예 ORF 20, ORF 40, ORF 41)을 포함하지 않는다.

본 발명은 또한 VZV gE 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라(chimeric) VLP를 포함하는 항원 제형을 포함한다. 한 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다. 본 발명은 또한 VZV gE 단백질, VZV로부터 유래한 하나 이상의 다른 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 정제된 키메라 VLP를 포함하는 항원 제형을 제공한다. 한 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다.

전형적으로, 백신은 본 발명의 조성물이 현탁되거나 용해된 통상적인 식염수 또는 완충된 수용액 배지를 포함한다. 상기 형태에서, 본 발명의 조성물은 통상적으로 감염을 예방, 개선 또는 다르게는 치료하는데 사용될 수 있다. 숙주로 도입 시, 백신은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 항체 및/또는 사이코카인의 생산, 및/또는 세포독성 T 세포, 항원 표시 세포, 수지상(dendritic) 세포의 활성화, 및/또는 기타 세포 반응을 포함하는 면역 반응을 유발할 수 있다.

본 발명은 또한 VZV gE 단백질을 포함하되 VZV 핵산 및 효모 Ty 단백질을 불포함하는 VLP를 포함하는 백신 제형을 포함한다. 한 태양에서, 상기 백신 제형은 필수적으로 gE 단백질로 구성된 VLP를 포함한다. 다른 태양에서, 상기 백신 제형은 VLP 내로 혼입된 추가적인 VZV 단백질을 하나 이상 포함하는 VLP를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gI(ORF 67) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gM(ORF 50) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 양태에서, 상기 추가 VZV 단백질은 gI, gM, gH, gB 또는 테규먼트 단백질의 조합을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 VZV 캡시드 단백질(예 ORF 20, ORF 40, ORF 41)을 포함하지 않는다.

본 발명은 또한 VZV gE 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라 VLP를 포함하는 백신 제형을 포함한다. 한 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다.

본 발명은 또한 VZV gE 단백질, VZV로부터 유래한 하나 이상의 다른 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라 VLP를 포함하는 백신 제형을 제공한다. 한 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gI(ORF 67)이다. 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gM(ORF 50)이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 테규먼트 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다.

상기 본 발명의 항원 제형 및 백신 제형은 상술한 본 발명의 VLP 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함한다. 약학적으로 허용가능한 담체는, 이에 한정되지는 않지만, 식염수, 완충된 식염수, 텍스트로오스, 물, 글리세롤, 살균된 등장 수성 완충액 및 이들의 조합을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및 기타 부형제에 대한 철저한 논의는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. NJ. current edition)]에 개시되어 있다. 제형은 투여의 방법에 적합하여야 한다. 바람직한 태양에서, 제형은 사람에게 투여하기에 적합하고, 살균된 비-미립자 및/또는 비-발열성이 바람직하다.

약학 조성물은, 필요시, 소량의 습윤제 또는 에멀젼화제, 또는 pH 완충제를 포함할 수 있다. 조성물은 재구성에 적합한 동결건조 분말과 같은 고체, 액체 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 서방형 제형, 또는 분말 형태일 수 있다. 경구 제형은 약학적 등급의 만니톨, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로오스, 마그네슘 카르보네이트 등과 같은 표준 담체를 포함할 수 있다.

본 발명은 조성물의 양이 표시된 앰풀 또는 사켓과 같은 밀폐된 용기에 패킹된 VLP 제형을 제공한다. 한 태양에서, VLP 조성물은 액체로서 공급되고, 다른 태양에서 건조 살균된 동결건조 분말 또는 밀폐된 용기 중의 수분 제거된 농축물로서 제공되고 대상에 투여를 위해 적합한 농도로 예를 들어 물 또는 식염수로 재구성될 수 있다.

또 다른 태양에서, VLP 조성물은 VLP 조성물의 양과 농도가 표시된 밀폐된 용기 중에 액체 형태로 제공된다. 바람직하게 VLP 조성물의 액체 형태는 약 50 μg/ml 이상, 더욱 바람직하게 약 100 μg/ml 이상, 약 200 μg/ml 이상, 약 500 μg /ml 이상, 또는 1 mg/ml 이상으로 제공된다.

일반적으로, 본 발명의 VZV-VLP는 VZV의 하나 이상의 균주에 대항하여 면역 반응ㄹ 자극하기에 충분한 유효량으로 투여된다. 바람직하게, 본 발명의 VLP의 투여는 VZV에 대한 면역력을 도출한다. 전형적으로 투여량은 예를 들어 나이, 신체적 상태, 몸무게, 성별, 식단, 투여 시간, 및 기타 임상적 요인을 기준으로 상기 범위 내에서 조정될 수 있다. 예방 백신 제형은 예를 들어, 주사 및 실린지를 사용한 피하 또는 정맥 주사, 또는 주사없는 주입 장치에 의해 전신으로 투여된다. 다르게는 백신 제형은 큰 입자의 에어로졸(약 10㎛ 이상)의 점적에 의해 또는 상부 기도로 분무에 의해 비강으로 투여된다. 상기 임의의 전달 경로가 면역 반응을 야기하는 반면, 비강 투여는 VZV를 포함하는 수많은 바이러스의 출입 장소에서 점액 면역을 유도하는 추가적인 이점이 있다.

따라서, 본 발명은 포유류에게 감염 또는 하나 이상의 감염 증상에 대해 면역력을 유도하는 백신 또는 항원 조성물을 제형 방법을 포함하고, 상기 제형 방법은 VZV-VLP의 유효량을 상기 제형에 첨가하는 단계를 포함한다. 한 태양에서, 상기 감염은 VZV 감염이다. "유효 투여량"은 일반적으로 면역력을 유도하여, 감염을 예방 및/또는 개선하거나 감염의 하나 이상의 증상을 경감시키고/거나, VLP의 다른 투여량의 효능을 강화하기에 충분한 본 발명의 VLP의 양을 지칭한다. 유효 투여량은 감염의 발병을 지연시키거나 최소화하기에 충분한 VLP의 양을 지칭할 수 있다. 유효 투여량은 또한 감염의 치료 또는 관리에 치료 혜택을 제공하는 VLP의 양을 지칭한다. 또한, 본 발명의 VLP 단독 또는 다른 치료와의 조합에서 감염의 치료 또는 관리에서 치료 혜택을 제공하는 양이다. 유효 투여량은 또한 감염체에 후속 노출에 대하여 환자(예, 인간) 자체의 면역 반응을 향상시키기에 충분한 양일 수 있다. 면역력의 수준은 예를 들어 분비성 및/또는 혈청 항체의 중화된 양을 예를 들어 플라크 중화, 보체 고정, 효소-연결된 면역흡착제, 또는 마이크로중화 분석에 의해 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 백신의 경우, "유효 투여량"은 질병을 예방하고/하거나, 증상의 심각성을 경감시키는 것이다.

단일 투여로 면역력이 자극되는 것이 바람직하지만, 추가적인 투여량도 바람직한 효과를 달성하기 위하여 동일 또는 상이한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 신생아 및 영아는 다중 투여가 충분한 수준의 면역력을 도출하기 위하여 필요할 수 있다. 투여는, 예를 들어 VZV 감염과 같은 감염에 대항하여 충분한 수준의 방어를 유지하기 위해 필요한 한, 어린 시절 내내 간격을 두고 계속될 수 있다. 유사하게, 예를 들어 건강 관리 요원, 주간 관리 요원, 어린 자녀, 노인, 및 심폐 기능이 약화된 개인의 가족과 같이 반복적이거나 심각한 감염에 특히 약한 성인의 경우도 예방 면역 반응을 성립하고/하거나 유지하기 위하여 다중 면역화가 요구될 수 있다. 유도된 면역 수준은 예를 들어 분비성 및 혈청 항체의 중화된 양을 측정함으로써 모니터링되고, 투여량은 조절되고, 백신 접종은 원하는 수준의 방어를 도출하고 유지하기 위해 필요에 따라 반복될 수 있다.

VLP를 포함하는 조성물(백신 제형 및/또는 항원 제형)의 투여 방법은, 이에 한정되는 것은 아니지만, 비경구 투여(예, 진피내, 근육내, 정맥내 및 피하 투여), 경막외 투여 및 점막 투여(예, 비강내 투여 및 경구 또는 폐 경로 또는 좌약에 의해)를 포함한다. 특정한 태양에서, 본 발명의 조성물은 경구, 진피내, 비강내, 근육내, 복강내, 정맥내, 또는 피하로 투여된다. 조성물은 임의의 통상적인 경로, 예를 들어, 주입 또는 볼러스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝(예, 경구 점막, 대장, 결막, 코인두, 입인두, 질, 요도, 방광 및 창자 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 다른 태양에서, 본 발명의 VLP를 포함하는 조성물의 비강내 또는 다른 점막성 경로로의 투여는 다른 경로의 투여에 비하여 보다 높은 면역 반응 또는 항체를 유도할 수 있다. 투여는 전신 또는 국소적일 수 있다.

본 발명의 백신 제형 및/또는 항원 제형은 또한, 예를 들어, 백신 조성물의 최초 투여와 후속적인 추가 투여와 같은 투여 스케쥴에 따라 투여될 수 있다. 특정 태양에서, 조성물의 두 번째 용량(dose)은 초기 투여 후 2주 내지 1년, 바람직하게는 약 1개월 내지 약 6개월, 약 2개월 내지 약 6개월, 약 3개월 내지 약 6개월, 약 4개월 내지 약 6개월, 약 5개월 내지 약 6개월 사이에 아무 때나 투여될 수 있다. 추가적으로, 세 번째 용량은 두 번째 투여 후 약 3개월 내지 약 2년 사이, 또는 그 이후, 바람직하게 최초 투여 후 약 4개월 내지 약 1년 사이, 약 5개월 내지 약 1년 사이, 또는 약 6개월 내지 약 1년 사이, 또는 약 7개월 내지 약 1년 사이에 투여될 수 있다. 세 번째 용량은 두 번째 투여 후 환자의 혈청 및/또는 소변 또는 점액 분비물에서 특정 면역글로불린이 없거나 낮은 수준으로 탐지되는 경우 선택적으로 투여될 수 있다. 바람직한 태양에서, 두 번째 용량은 최초 투여 후 약 1개월에 투여되고, 세 번째 용량은 최초 투여 후 약 6개월에 투여된다. 다른 태양에서, 두 번째 용량은 최초 투여 후 약 6개월에 투여된다. 또 다른 태양에서, 상기 본 발명의 VLP는 조합 치료의 일부로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 VLP는 다른 면역원성 조성물, 항바이러스제 및/또는 항생제와 함께 제형화될 수 있다.

약학 제형의 투여량은, 예를 들어, 예방 또는 치료 면역 반응을 도출하기에 유효한 용량을 먼저 확인함으로써, 예컨대 바이러스 특이적 면역글로불린의 혈청 역가(titer)를 측정하거나 혈청 샘플 또는 소변 샘플 또는 점액 분비물 중의 항체 저해 비율을 측정함으로써, 숙련자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 상기 투여량은 동물 연구로부터 결정될 수 있다. 백신의 효능을 연구하기 위해 사용되는 동물의 비-제한적인 예는 기니아 피그, 햄스터, 페렛, 친칠라, 마우스 및 코튼 래트를 포함한다. 대부분의 동물은 감염체에 대하여 자연적인 숙주는 아니지만, 질병의 다양한 관점의 연구에 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 동물 중 임의의 동물에게 백신 후보, 예를 들어 본 발명의 VLP를 투여하여, 유도되는 면역 반응을 부분적으로 특성분석하고/하거나 중화된 항체가 생성되었는지 여부를 확인할 수 있다. 예를 들어, 마우스는 크기가 작고, 가격이 저렴하여 연구자에게 보다 대규모의 연구를 수행할 수 있게 해주기 때문에, 수많은 연구가 마우스 모델에서 수행되었다.

또한, 인간 임상 연구가 수행되어 숙련자들에 의해 인간의 바람직한 유효 투여량이 결정될 수 있다. 이러한 임상 연구는 통상적인 것이며 당 분야에 잘 알려져 있다. 적용될 정확한 투여량은 또한 투여 경로에 의존될 것이다. 유효 투여량은 시험관 또는 동물 테스트 시스템에서 도출되는 투여량-반응 곡선으로부터 추론될 수 있다.

또한, 당 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 특정 조성물의 면역원성은 보조제로 알려진 면역 반응의 비-특이적 촉진제의 사용에 의해 향상될 수 있다. 용어 "보조제(adjuvant)"는 하나의 제형에서 특이적 면역원(예, VLP)과 함께 사용 시 생성되는 면역 반응을 증강시키거나 다르게 변화시키거나 변경시킬 수 있는 화합물을 지칭한다. 면역 반응의 변경은 항체 및 세포성 면역 반응 중 어느 하나 또는 둘 다의 특이성을 강화 또는 확대하는 것을 포함한다. 면역 반응의 변경은 또한 특정 항원-특이적 면역 반응을 감소시키거나 억제하는 것을 의미한다. 보조제는 실험적으로 사용되어 알려지지 않은 항원에 대하여 면역력의 일반적인 증가를 촉진시켜 왔다(예, 미국 특허 제4,877,611호). 면역법의 프로토콜은 수년동안 반응을 자극하기 위해 보조제를 사용하여 왔고, 이로써 보조제는 당 분야의 통상의 기술을 가진 자에게 잘 알려져 있다. 일부 보조제는 항원이 제시되는 방법에 영향을 미친다. 예를 들어, 단백질 항원이 백반(alum)에 의해 침전되는 경우 면역 반응이 증가된다. 또한, 항원의 유화(emulsification)도 항원 제시의 지속 기간을 연장한다. 모든 목저에서 본원에서 전체가 참조로서 인용된 문헌 [Vogel et ciL, "A Compendium of Vaccine Adjuvants and Excipients (2nd Edition),"]에 개시된 임의의 보조제로 포함된 것들이 본 발명의 범위 내로 간주된다.

예시적인 보조제는 완전한 프뢴트 보조제(Freund's adjuvant, 죽은 미코박테리움 튜베르큘로시스를 포함하는 면역 반응의 비-특이적 자극제, 불완전한 프뢴트 보조제 및 알루미늄 하이드록사이드 보조제를 포함한다. 기타 보조제는 GMCSP, BCG, 알루미늄 하이드록사이드, MDP 화합물, 예컨대 thur-MDP 및 nor-MDP, CGP (MTP-PE), 리피드 A, 및 모노포스포릴 리피드 A(MPL, monophosphoryl lipid A)를 포함한다. 박테리아에서 추출된 세 가지 성분을 함유하는 RIBI, MPL, 트레할로오스 디미콜레이트(TDM, trehalose dimycolate) 및 2% 스쿠알렌/트윈(Tween) 80 유화물 중의 세포 벽 스켈레톤(CWS, cell wall skeleton)도 고려된다. MF-59, 노바좀(Novasomes), MHC 항원도 사용될 수 있다.

본 발명의 한 태양에서, 보조제는 지질 이중층이 없는 큰 무정형 중앙 공동(cavity)을 둘러싼 수성층에 의해 분리된 실질적으로 구형 쉘 형태로 배열된 2 내지 10개의 이중층을 갖는 소수층상(paucilamellar) 지질 비히클이다. 소수층상 지질 비히클은 비-특이적인 자극제로서, 항원에 대한 담체로서, 다른 보조제의 담체로서, 또는 이들의 조합으로서 여러 방법으로 면역 반응을 자극하기 위한 역할을 할 수 있다. 소수층상 지질 비히클은, 예를 들어 백신이 예비형성된 비히클과 함께 항원을 섞음으로써 제조되는 경우, 비-특이적 면역 자극제로서 역할하여, 항원을 비히클에 세포외에 남도록 한다. 비히클의 중항 동공 내에 항원을 캡슐화함으로써, 비히클은 면역 자극제 및 항원의 담체로서 역할을 한다. 다른 태양에서, 비히클은 주로 비인지질 비히클로 제조된다. 또 다른 태양에서, 비히클은 노바좀이다. 노바좀(Novasomes®)은 약 100 nm 내지약 500 nm 범위의 소수층상 비지질 비히클이다. 상기 비히클은 Brij 72, 콜레스테롤, 올레산 및 스쿠알렌을 포함한다. 노바좀은 인플루엔자 항원에 효과적인 보조제로 개시되어 있다(모든 목적으로 본원에서 전체가 참조로 인용된 미국 특허 제5,629,021호, 제6,387,373호 및 제4,911,928호를 참조한다).

본 발명의 VLP는 또한 "면역 자극제"와 함께 제형될 수 있다. 용어 "면역 자극제"는 신체의 자체적인 화학 전달자(사이토킨)를 통해 면역 반응을 강화하는 화합물을 지칭한다. 이러한 분자는 면역자극, 면역증강 및 전염증성(proinflammatory) 활성을 갖는 다양한 사이토킨, 림포킨 및 케모킨, 예컨대 인터루킨(예, IL-I, IL-2, IL-3, IL-4, IL-12, IL-13); 성장 인자(예, 괴립성 백혈구-대식세포(GM, granulocyte-macrophage)-세포군 촉진 인자(CSF, colony stimulating factor)); 및 기타 면역자극성 분자, 예컨대 대식세포 염증성 인자, Flt3 리간드, B7.1; B7.2, 등을 포함한다. 면역 자극제 분자는 본 발명의 VLP와 동일한 제형으로 투여될 수 있거나, 분리되어 투여될 수 있다. 단백질 또는 단백질을 인코딩하는 발현 백터 중의 하나가 면역자극성 효과를 생성하기 위하여 투여될 수 있다. 따라서, 하나의 태양에서, 본 발명은 보조제 및/또는 면역 자극제를 포함하는 항원 제형 및 백신 제형을 포함한다.

면역 반응의 자극 방법

본 발명의 VLP는 감염체에 대하여 면역력 또는 실질적인 면역력을 부여하는 면역 반응을 자극하는 조성물을 제조하는데 유용하다. 점액성 및 세포성 면역력 둘 다는 감염체 및 질환에 대한 면역력을 부여할 수 있다. 상부 기도에 국소적으로 분비되는 항체는 자연적인 감염에 저항하는 주요 인자이다. 분비성 면역글로불린 A(sIgA)는 상부 기도의 보호에 관여되고, 혈청 IgG는 하부 기도의 보호에 관여된다. 기도의 보호는 다른 헤르페스바이러스와는 달리 VZV는 호흡계를 통해 전파되기 때문에 VZV 감염의 경우 기도의 보호가 중요하다. 동일한 바이러스 또는 항원적으로 유사한 바이러스 주의 재감염에 대한 감염 방어에 의해 면역 반응이 유도된다.

본 발명의 VLP는 예를 들어, 감염체를 중화시키고, 감염체가 세포로 들어가는 것을 막고, 상기 감염체의 복제를 방지하고/하거나 감염 및 파괴로부터 숙주 세포를 보호하는 항체의 생성을 자극할 수 있다. 상기 용어는 또한 척추동물(예, 인간)에 의해 나타나는 T-림프구 및/또는 감염체에 대항하는 기타 백혈 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 의미하고, 이는 VZV 감염을 예방하거나 개선하거나 VZV 감염의 하나 이상의 증상을 감소시킨다.

본 발명은 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신 제형을 환자에 투여하는 것을 포함하는 환자에게 감염에 대한 보호성 면역력 도출 방법을 포함하고, 이 때 상기 VZV-VLP는 VZV gE 단백질을 포함하되, VZV 핵산 또는 효모 Ty 단백질을 불포함한다. 한 태양에서, 상기 감염은 바이러스에 의해 야기된다. 다른 태양에서, 상기 감염은 곰팡이에 의해 야기된다. 또 다른 태양에서, 상기 감염은 기생충에 의해 야기된다. 또 다른 태양에서, 상기 감염은 박테리아에 의해 야기된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 필수적으로 VZV gE 단백질로 구성된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 복제된 VZV gE를 포함하는 재조합 발현 벡터로부터 유래된다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV-VLP는 VLP로 혼입된 추가적인 VZV 단백질을 하나 이상 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gI(ORF 67) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gM(ORF 50) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 테규먼트 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gI, gM, gH, gB 또는 테규먼트 단백질의 조합을 포함한다.

본 발명의 또 다른 태양은 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 감염에 대한 방어적 면역력을 유도하는 방법을 포함하고, 이 때 상기 VZV-VLP는 VZV gE 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라 VLP를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다.

본 발명은 또한 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에게 감염에 대한 방어적 면역력을 유도하는 방법을 포함하고, 이 때 상기 VZV-VLP는 VZV gE 단백질, VZV로부터 유래한 하나 이상의 다른 단백질 및 다른 감염체로부터 유래한 하나 이상의 단백질을 포함하는 키메라 VLP를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gI(ORF 67) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 VZV로부터 유래한 다른 단백질은 gM(ORF 50) 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gH이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 gB이다. 또 다른 태양에서, 상기 추가적인 VZV 단백질은 테규먼트 단백질을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 바이러스 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 박테리아 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 곰팡이 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 기생충으로부터 유래한 단백질이다. 또 다른 태양에서, 상기 다른 감염체로부터 유래한 단백질은 VLP 표면에 발현된다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 VLP는 환자에서 VZV 감염의 하나 이상의 증상을 예방하거나 경감한다. VZV 감염에 의해 야기되는 두 가지 질환의 증상은 당 분야에 잘 공지되어 있다. 1차 VZV 감염에 의해 야기되는 계두(바리셀라)의 증상은 열, 권태감, 두총, 복부 통증, 피로, 식욕부진 및 두피, 얼굴 및 몸통 상에 주로 발생하는 피부 병변을 포함한다. 잠복 VZV의 재활성화로 야기되는 대상포진(헤르페스 조스터)은 하기 증상들에 의해 구별된다: 통상 가슴 피부분절에서 일방적으로 나타나는 피부 발진, 급성 신경 통증 및 과민성. 따라서, 본 발명의 방법은 VZV 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 예방 또는 경감을 포함한다. 증상의 경감은, 예를 들어 환자에 의한 자가 평가, 임상 의사의 평가에 의해 또는 예를 들어 삶의 질 평가, VZV 감염 또는 추가 증상의 늦춰진 진행, VZV 증상의 경감된 심각성 또는 적절한 분석(예, 항체 타이터 및/또는 T-세포 활성화 분석)을 포함하는 적절한 분석 또는 측정(예, 체온)을 수행함으로써 주관적으로 또는 객관적으로 측정될 수 있다. 객관적인 평가는 동물 및 인간 평가를 둘 다 포함한다.

본 발명은 제한적으로 간주되지 않는 하기 실시예에 의하여 추가로 예시된다. 본 출원의 전체에 걸쳐서 인용된 모든 참조 문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용 및 도면은 본원에서 모든 목적을 위해 참조로서 포함된다.

실시예

실시예 1

세포, 바이러스 및 구조체

스포도프테라 프루지페르다(Spodoptera frugiperda) Sf9 곤충 세포(ATCC CRL-1711)를 28℃에서 HyQ-SFX 곤충 혈청 배제 배지(HyClone, Logan, UT) 중의 현탁액 배양으로 유지시켰다. Bac-to-Bac 바큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 인플루엔자 유전자를 발현하는 재조합 바큘로바이러스 벡터의 생성을 위해 E. 콜라이 DH1OBac 세포에서 pFastBacl 전이 백터와 함께 사용하였다.

VZV 유전자는 젠뱅크(GenBank) 서열 NC_OO1348를 기초로 한다. 단백질을 인코딩하는 유전자(상술한 내용 참조)는 Sf9 세포에서 높은 수준의 발현을 위해 코돈-최적화되었고, 진아트(GeneArt, Regensburg, Germany)에서 합성되었다. 이미 인플루엔자 바이러스에서 상세하게 설명한 바와 같이 합성 유전자는 AcMNPV 폴리헤드린 프로모터의 pFastBacl 다운스트림으로 전이되었다(Pushko et al, 2005).

대상이 되는 VZV 유전자를 포함하는 전이 플라스미드를 AcMNPV 바큘로바이러스 유전체(Invitrogen)를 포함하는 E. 콜라이 DH1OBac 적격 세포로 형질전환한 후, 재조합 바큘로바이러스를 자리-특이적 동종 재조합에 의해 생성하였다. 재조합 백미드(Bacmid, 바큘로바이러스의 유전체를 이용한 벡터) DNA를 E. 콜라이 세포로부터 추출하고, 셀펙틴(CellFectin, Invitrogen)을 이용하여 Sf9 세포로 핵산감염시켰다. 재조합 바큘로바이러스를 회수하고, 플라크 정제하고, 증폭하고, 재조합 바큘로바이러스 스톡의 역가(titer)를 Sf9 세포를 사용한 아가로오스 플라크 분석에 의해 측정하였다.

하기는 복제되고 rBV 벡터에서 발현되고 VLP의 형성에 대해 평가된 VZV 단백질 및 유전자 서열이다.

곤충 세포에 대해 코돈 최적화된 VZV DNA 서열은 바큘로바이러스 벡커로 들어가고, VLP의 조립에 대해 평가된다.

VZV gE 유전자 서열, 코돈-최적화되고 바큘로바이러스 발현 벡터로 복제됨.

젠뱅크 AB097933 (VZV 오카 모 주(Oka parental strain))로부터 ORF62 단백질에 대한 젠뱅크 NC-001348(VZV 듀마스 주(Dumas strain))로부터 ORF62 단백질의 배열

실시예 2

VZV gE 단백질 단독 발현으로 VLP 형성함

VZV gE 만을 포함하는 바큘로바이러스 구조체를 Sf9 세포에서 발현시키고, 상기 과정에 따라 분석하였다. 입자를 상술한 과정을 사용하여 20% 내지 60% 수크로오스 밀도 구배 계단을 통해 BV-VZV gE 벡터로 감염된 Sf9 세포로부터 정제하였다. 겔 및 웨스터 블롯으로 VZV gE가 수크로오스 구배의 입자 분획에서 회수된 것을 확인하였다. 샘플을 SDS 겔 상에 러닝(running)하고(도 1A), 단리된 상등액의 웨스턴 블롯을 VZV gE에 대해 탐침하고(도 1B), 또는 인플루엔자 매트릭스 단백질에 대해 탐침하였다(도 1C). 도 1B의 레인 2 및 레인 3에서 볼 수 있는 바와 같이, VZV gE 단백질 단독 발현은 VZV-VLP의 형성을 야기한다.

또한, 세파크릴(Sephacryl) S-400 겔 투과 크로마트로그래피 컬럼 상에서 크기 분획화에 의해 분석된 구배 정제된 입자의 분석이 수행되었다. gE 단백질의 대부분은 6,000 kDa 이하이며, 이는 VLP와 일치한다(도 2). 따라서, VZV gE 단독 발현은 바이러스 유사 입자를 형성하기에 충분하다. 또한, 대조군으로서, 인플루엔자 M1을 단독으로 또는 키메라 gE(인플루엔자 HA의 트랜스멤브레인 및 세포질에 융합된 gE)와 함께 발현시켰다. 이들 대조군은 인플루엔자 M1의 발현 및 키메라 VZV gE 단백질과 M1의 발현으로부터 제조된 VLP가 형성되는 것을 보여준다.

실시예 3

IE62 의 발현

IE62는 VZV의 주요 테규먼트 단백질이다. 면역화는 VZV를 투여시 기니아 피그를 보호하는 특이적 항체 및 세포 매개 면역력(CMI, cell mediated immunity)을 유도한다. 바큘로바이러스 발현 벡터로 복제된 전장 VZV IE62 유전자(도 3A), Sf9 곤충 세포에서 생성된 재조합 IE 62, 및 세포내 IE62를 추출하고 정제하기 위한 비-변성 과정을 개시한다.

방법

바큘로바이러스는 VZ의 오카 주로부터 IE62의 전장, 코돈 최적화된 유전자를 발현하기 위해 조립되었다. 유전자가 합성되고(Gene Art, Germany), 바큘로바이러스 폴리헤드린 프로모터(Invitrogen)의 제어 하에서 pFastBacl 벡터로 복제되었다. 상기 유전자는 AcMNPV 바큘로바이러스 백미드(Invitrogen)로 형질전환되고, 상기 백미드 DNA는 Sf9 곤충 세포를 형질전환시키는데 사용되었다. 생성되는 재조합 바큘로바이러스는 플라크-정제되고, 바이러스 스톡이 Sf9 세포에서 제조되었다.

1L 쉐이커 플라스크 중에 약 2 x 10⁶ cells/ml 농도의 Sf9 세포 약 800ml을, 1 내지 3 pfu/cell의 감염 다중도(MOI, multiplicity of infection)로, IE62 발현하는 재조합 바큘로바이러스로 감염시키고, 계속 교반하면서 27℃에서 배양한 후, 감염 후 약 64시간에 수확하였다. 배지를 저속 원심분리로 제거하고, 25 mM TrisCl(pH 7.5), 250 mM NaCl 중에서 6000 rpm 고전단 균질화에 의해 세포를 용해시켰다. 원심분리 후, 세포 용해물을 음이온 교환 컬럼(Fractogel TMAE, Merck KGaA, Germany) 상에 로딩하고, 5 mM TrisCl pH 7.5, 500 mM NaCl로 용리하였다. 용리물을 세파덱스(Sephadex G25, GE Healthcare) 크로마토그래피 컬럼과 25 mM NaPi pH 7.5, 375 mM NaCl로 완충액 교환하였다. G25 컬럼으로부터 수득한 유동 통과 분획을 양이온 교환 컬럼(Fractogel SO3-, Merck KGaA, Germany) 상에 로딩하고, 25 mM NaPi pH 7.5, 625 mM NaCl로 용리하였다. SO3- 컬럼으로부터 수득된 용리물은 정제된 IE62의 최종 산물이다(도 3B, 레인 8).

결과

정제된 재조합 IE62는 90% 이상의 순도를 가지고, 전장 단백질(150KDa) 및 약 6KDa 정도의 작은 단백질(p6)을 모두 포함한다. IE62 및 p6은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 분리되지 않았고, 대략 동등한 몰 양으로 존재한다. IE62 및 p6은 헤테로다이머(heterodimer) 또는 기타 안정한 복합체를 형성할 수 있다.

실시예 4

gE / gI 의 발현 및 정제

Sf9 곤충 세포로부터 재조합 VZV gE/gI 수용체 헤테로다이머를 위한 발현 및 신규한 정제 과정이 개시된다. gE 및 gI는 표면 당단백질이고, 인간 및 면역화된 동물에서 VZV에 대항하는 항체의 중화를 이끌어낸다. 용해가능한 형태의 gE/gI 헤테로다이머가 Sf9 곤충 세포에서 생성되고, 정제 과정은 숙주 세포 및 바큘로바이러스 오염물질로부터 분비된 단백질 복합체로 분리되도록 개발되었다.

방법

바큘로바이러스를 VZV의 오카 주로부터 끝이 잘린 코돈 최적화된 gE 및 gI의 유전자를 발현하도록 조립하였다(상술한 부분 참조). gE 및 gI 둘 다 각각 트랜스멤브레인 및 카르복실기 종료 도메인이 제거되었고, gI는 자연 gI 시그널 펩타이드를 사용하여 제조되었고, 바큘로바이러스 GP64 시그널 펩타이드가 gE 시그널 펩타이드 서열을 대체하였다. 유전자가 합성되고(GeneArt, Germany), 바큘로바이러스 폴리헤드린 프로모터의 조절 하에서 각각의 유전자와 pFastBac 1 벡터로 동시에 복제되었다(도 4A). 탠덤(tandem) 유전자 카세트(cassette)는 AcMNPV 바큘로바이러스 백미드(Invitrogen)로 형질전환되고, 그 후 백미드 DNA는 정제되어 Sf9 곤충 세포를 형질전환시키는데 사용되었다. 생성된 재조합 바큘로바이러스는 플라크-정제되고, 바이러스 스톡은 Sf9 세포에서 제조되었다.

1L 쉐이커 플라스크 중에 약 2 x 10⁶ cells/ml 농도의 Sf9 세포 약 800ml을, 1 내지 3 pfu/cell의 감염 다중도(MOI, multiplicity of infection)로, C-말단이 잘린 gE 및 gI 유전자를 발현하는 재조합 바큘로바이러스로 감염시키고, 계속 교반하면서 27℃에서 배양한 후, 감염 후 약 64시간에 수확하였다. 세포를 회수하고, 배지를 저속 원심분리로 제거하고, 배지 중의 gE/gI 다이머를 렌틸 렉틴(Lentil Lectin) 친화도 컬럼에 로딩하고, 당단백질을 500 mM 메틸-알파-D-만노피라노사이드(Methyl-alpha-D-Mannopyranoside)로 용리하였다. 렉틴 컬럼으로부터 수득한 용리물을 세파덱스 G25 컬럼과 5 mM TrisCl pH 8.0 50 mM NaCl로 완충액 교환하였다. G25 크로마토그래피 단백질 피크를 동일한 완충액으로 평형이 유지된 Fractogel TMAE 이온 교환 컬럼 상에 로딩하였다. gE/gI는 컬럼에 바인딩되고, 직선상의 NaCl 구배로 용리되었다. 아미콘 울트라(Amicon Ultra) 10 kDa 여과기로 농축된 후, 물질을 세파크릴 S200 크기 배제 컬럼 상에 로딩하여 고분자량 오염물질을 제거하였다. 최종 산물을 SDS-PAGE 및 웨스터 블롯 분석으로 분석하였다(도 4B).

결과

Sf9 곤충 세포에서 발현된 전장 gE는 당화되지 않았고, 렌틸 렉틴 친화력 레진에 바인딩되지 않고, 불용성이고, 세포에 연결된 채로 남는다. C-말단 엔도도메인(endodomain) 및 트랜스멤브레인 서열의 말단 절단은 비-당화 분비를 야기하고, 항원의 유사 변성 형태가 형성된다(도시되지 않음). Sf9 세포 중의 재조합 gE 및 gI의 공동-발현은 gI의 당화 덕분에 렉틴 친화도 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있는 gE/gI 헤테로다이머를 생성한다. 상기 용해성 VZV 당단백질 복합체는 방어 항체 및 중화를 유도할 수 있고, VZV 백신의 하나의 성분이다. 또한, 상기 헤테로다이머는 우수한 백신 또는 항원 제형을 위해 IE62와 함께 제형화될 수 있다.

실시예 5

HEK293 세포에서 gE 의 발현

인간 HEK293 세포에서 분비된 VZV gE 당단백질의 발현이 개시된다. VZV 당단백질, 예를 들어 gE, gI 또는 gE/gI, gB는 또한 인간 또는 기타 포유 동물 세포 또는 조류 세포 주에서 발현될 수 있고, 전부 당화될 것으로 기대될 수 있다. 정제된 당단백질은, 예를 들어 곤충 세포에서 제조된 재조합 IE62와 혼합되어 VZV 백신의 한 성분으로서 사용될 수 있다.

방법

GP64 시그널 펩타이드와 VZV gE에 대한 코딩 서열 및 제거된 트랜스멤브레인/카복시 말단 도메인을 BamHI 및 Hind III 자리를 통해 pcDNA3.1 플라스미드에 삽입시켰다(Invitrogen)(도 5A). 최종 플라스미드를 사용하여 HEK293 프리스타일 세포를 형절전환시켰다(Invitrogen 및 개시된 바와 같음). HEK293 프리스타일 세포 배양 배지를 핵산감염 후 96 시간에 수확하였다. 배지를 렌틸 렉틴 친화도 컬럼 상에 로딩하고 500 mM 메틸-알파-D-만노피라노사이드로 용리하였다. 하나의 렌틸 렉틴 컬럼으로부터 수득된 gE는 90% 이상의 순도를 보였다.

결과

gE 단백질은 그 트랜스멤브레인 도메인이 제거되었기 때문에 배양 배지로 분비시켰다(도 5B). 포유류 세포에서 발현되는 gE 단백질은 정확한 당화 패턴을 갖는다. HEK293 세포로부터 발현된 용해성 gE(~70 kDa)는 곤충 세포에서 발현된 비-당화된 gE(~60 kDa)와 비교시 매우 많이 당화되었다.

본원에서 모든 특허, 문헌 및 모출원은 각각의 개별적인 특허, 문헌 또는 인용된 모출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로서 인용된 것으로 표시된 것과 동일한 정도로 참조로서 인용된다.

전술한 발명의 상세한 설명은 단지 이해의 명확성을 위해 제시된 것이며, 변경은 당 분야에 숙련자에게 명확할 것이므로 상기 상세한 설명으로부터 불필요한 제한을 의미하는 것으로 이해되지 않아야 한다. 본원에서 제공된 어떠한 정보도 종래 기술이거나 현재 청구된 발명에 관련이 된다거나, 특정하게 또는 내포적으로 인용된 어떠한 문헌도 종래 기술이라고 인정되는 것은 아니다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술을 가진 자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

본 발명은 그의 특정한 태양과 관련하여 설명되었으나, 추가적인 변경이 이뤄질 수 있으며, 본 출원은 일반적으로 발명의 원리에 따라서 발명의 임의의 변경, 사용 또는 적용을 포함하는 것으로 의도되고, 본 명세서로부터 출발하여 발명이 속하는 분야에서 공지 또는 통상적인 수행, 전술한 필수적인 특징 및 하술하는 첨부된 발명의 범위에 적용될 수 있는 것으로 이해될 수 있을 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Novavax, Inc. <120> Varicella Zoster Virus VLPs <130> NOVV-019/01WO <150> US 60/950,707 <151> 2007-07-19 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 435 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 1 Met Gly Thr Gln Lys Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Val Ser Pro Tyr 1 5 10 15 Asp Thr Thr Thr Pro Glu Val Glu Ala Leu Asp His Gln Met Asp Thr 20 25 30 Leu Asn Trp Arg Ile Trp Ile Ile Gln Val Met Met Phe Thr Leu Gly 35 40 45 Ala Val Met Leu Leu Ala Thr Leu Ile Ala Ala Ser Ser Glu Tyr Thr 50 55 60 Gly Ile Pro Cys Phe Tyr Ala Ala Val Val Asp Tyr Glu Leu Phe Asn 65 70 75 80 Ala Thr Leu Asp Gly Gly Val Trp Ser Gly Asn Arg Gly Gly Tyr Ser 85 90 95 Ala Pro Val Leu Phe Leu Glu Pro His Ser Val Val Ala Phe Thr Tyr 100 105 110 Tyr Thr Ala Leu Thr Ala Met Ala Met Ala Val Tyr Thr Leu Ile Thr 115 120 125 Ala Ala Ile Ile His Arg Glu Thr Lys Asn Gln Arg Val Arg Gln Ser 130 135 140 Ser Gly Val Ala Trp Leu Val Val Asp Pro Thr Thr Leu Phe Trp Gly 145 150 155 160 Leu Leu Ser Leu Trp Leu Leu Asn Ala Val Val Leu Leu Leu Ala Tyr 165 170 175 Lys Gln Ile Gly Val Ala Ala Thr Leu Tyr Leu Gly His Phe Ala Thr 180 185 190 Ser Val Ile Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Gly Lys Leu Asp Glu 195 200 205 Thr Asn Ile Lys Ala Val Ala Asn Leu Arg Gln Gln Ser Val Phe Leu 210 215 220 Tyr Arg Leu Ala Gly Pro Thr Arg Ala Val Phe Val Asn Leu Met Ala 225 230 235 240 Ala Leu Met Ala Ile Cys Ile Leu Phe Val Ser Leu Met Leu Glu Leu 245 250 255 Val Val Ala Asn His Leu His Thr Gly Leu Trp Ser Ser Val Ser Val 260 265 270 Ala Met Ser Thr Phe Ser Thr Leu Ser Val Val Tyr Leu Ile Val Ser 275 280 285 Glu Leu Ile Leu Ala His Tyr Ile His Val Leu Ile Gly Pro Ser Leu 290 295 300 Gly Thr Leu Val Ala Cys Ala Thr Leu Gly Thr Ala Ala His Ser Tyr 305 310 315 320 Met Asp Arg Leu Tyr Asp Pro Ile Ser Val Gln Ser Pro Arg Leu Ile 325 330 335 Pro Thr Thr Arg Gly Thr Leu Ala Cys Leu Ala Val Phe Ser Val Val 340 345 350 Met Leu Leu Leu Arg Leu Met Arg Ala Tyr Val Tyr His Arg Gln Lys 355 360 365 Arg Ser Arg Phe Tyr Gly Ala Val Arg Arg Val Pro Glu Arg Val Arg 370 375 380 Gly Tyr Ile Arg Lys Val Lys Pro Ala His Arg Asn Ser Arg Arg Thr 385 390 395 400 Asn Tyr Pro Ser Gln Gly Tyr Gly Tyr Val Tyr Glu Asn Asp Ser Thr 405 410 415 Tyr Glu Thr Asp Arg Glu Asp Glu Leu Leu Tyr Glu Arg Ser Asn Ser 420 425 430 Gly Trp Glu 435 <210> 2 <211> 1310 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 2 Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser 1 5 10 15 Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val 50 55 60 Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp 65 70 75 80 Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln 85 90 95 Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr 100 105 110 Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser 115 120 125 Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro 130 135 140 Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala 165 170 175 Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr 180 185 190 Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln 195 200 205 Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His 210 215 220 Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro 225 230 235 240 Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro 245 250 255 Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln 260 265 270 Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala 275 280 285 Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala 290 295 300 Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro 305 310 315 320 Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile 325 330 335 Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val 340 345 350 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu 355 360 365 Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser 370 375 380 Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser 385 390 395 400 Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr 405 410 415 Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu 420 425 430 Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg 435 440 445 Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro 450 455 460 Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val 465 470 475 480 Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu 485 490 495 Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val 500 505 510 Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala 515 520 525 Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu 530 535 540 Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr 545 550 555 560 Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser 565 570 575 Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu 580 585 590 Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg 595 600 605 Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg 610 615 620 Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala 625 630 635 640 Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln 645 650 655 Ala Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys 660 665 670 Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro 675 680 685 Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala 690 695 700 Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg 705 710 715 720 Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro 725 730 735 Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe 740 745 750 Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln 755 760 765 Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp 770 775 780 Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro 785 790 795 800 Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg 805 810 815 Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala 820 825 830 Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile 835 840 845 Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr 850 855 860 Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu 865 870 875 880 Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr 885 890 895 His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu 900 905 910 Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala 915 920 925 Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg 930 935 940 Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly 945 950 955 960 Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro 965 970 975 Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly 980 985 990 Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser Ser Arg Thr Phe Gly Pro Ala Ser 995 1000 1005 Phe Ala Arg Ile Glu Thr Ala Phe Ala Asn Leu Tyr Pro Gly Glu 1010 1015 1020 Gln Pro Leu Cys Leu Cys Arg Gly Gly Asn Val Ala Tyr Thr Val 1025 1030 1035 Cys Thr Arg Ala Gly Pro Lys Thr Arg Val Pro Leu Ser Pro Arg 1040 1045 1050 Glu Tyr Arg Gln Tyr Val Leu Pro Gly Phe Asp Gly Cys Lys Asp 1055 1060 1065 Leu Ala Arg Gln Ser Arg Gly Leu Gly Leu Gly Ala Ala Asp Phe 1070 1075 1080 Val Asp Glu Ala Ala His Ser His Arg Ala Ala Asn Arg Trp Gly 1085 1090 1095 Leu Gly Ala Ala Leu Arg Pro Val Phe Leu Pro Glu Gly Arg Arg 1100 1105 1110 Pro Gly Ala Ala Gly Pro Glu Ala Gly Asp Val Pro Thr Trp Ala 1115 1120 1125 Arg Val Phe Cys Arg His Ala Leu Leu Glu Pro Asp Pro Ala Ala 1130 1135 1140 Glu Pro Leu Val Leu Pro Pro Val Ala Gly Arg Ser Val Ala Leu 1145 1150 1155 Tyr Ala Ser Ala Asp Glu Ala Arg Asn Ala Leu Pro Pro Ile Pro 1160 1165 1170 Arg Val Met Trp Pro Pro Gly Phe Gly Ala Ala Glu Thr Val Leu 1175 1180 1185 Glu Gly Ser Asp Gly Thr Arg Phe Val Phe Gly His His Gly Gly 1190 1195 1200 Ser Glu Arg Pro Ser Glu Thr Gln Ala Gly Arg Gln Arg Arg Thr 1205 1210 1215 Ala Asp Asp Arg Glu His Ala Leu Glu Leu Asp Asp Trp Glu Val 1220 1225 1230 Gly Cys Glu Asp Ala Trp Asp Ser Glu Glu Gly Gly Gly Asp Asp 1235 1240 1245 Gly Asp Ala Pro Gly Ser Ser Phe Gly Val Ser Ile Val Ser Val 1250 1255 1260 Ala Pro Gly Val Leu Arg Asp Arg Arg Val Gly Leu Arg Pro Ala 1265 1270 1275 Val Lys Val Glu Leu Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Glu 1280 1285 1290 Asp Asp Val Trp Gly Gly Arg Gly Gly Arg Ser Pro Pro Gln Ser 1295 1300 1305 Arg Gly 1310 <210> 3 <211> 278 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 3 Met Phe Cys Thr Ser Pro Ala Thr Arg Gly Asp Ser Ser Glu Ser Lys 1 5 10 15 Pro Gly Ala Ser Val Asp Val Asn Gly Lys Met Glu Tyr Gly Ser Ala 20 25 30 Pro Gly Pro Leu Asn Gly Arg Asp Thr Ser Arg Gly Pro Gly Ala Phe 35 40 45 Cys Thr Pro Gly Trp Glu Ile His Pro Ala Arg Leu Val Glu Asp Ile 50 55 60 Asn Arg Val Phe Leu Cys Ile Ala Gln Ser Ser Gly Arg Val Thr Arg 65 70 75 80 Asp Ser Arg Arg Leu Arg Arg Ile Cys Leu Asp Phe Tyr Leu Met Gly 85 90 95 Arg Thr Arg Gln Arg Pro Thr Leu Ala Cys Trp Glu Glu Leu Leu Gln 100 105 110 Leu Gln Pro Thr Gln Thr Gln Cys Leu Arg Ala Thr Leu Met Glu Val 115 120 125 Ser His Arg Pro Pro Arg Gly Glu Asp Gly Phe Ile Glu Ala Pro Asn 130 135 140 Val Pro Leu His Arg Ser Ala Leu Glu Cys Asp Val Ser Asp Asp Gly 145 150 155 160 Gly Glu Asp Asp Ser Asp Asp Asp Gly Ser Thr Pro Ser Asp Val Ile 165 170 175 Glu Phe Arg Asp Ser Asp Ala Glu Ser Ser Asp Gly Glu Asp Phe Ile 180 185 190 Val Glu Glu Glu Ser Glu Glu Ser Thr Asp Ser Cys Glu Pro Asp Gly 195 200 205 Val Pro Gly Asp Cys Tyr Arg Asp Gly Asp Gly Cys Asn Thr Pro Ser 210 215 220 Pro Lys Arg Pro Gln Arg Ala Ile Glu Arg Tyr Ala Gly Ala Glu Thr 225 230 235 240 Ala Glu Tyr Thr Ala Ala Lys Ala Leu Thr Ala Leu Gly Glu Gly Gly 245 250 255 Val Asp Trp Lys Arg Arg Arg His Glu Ala Pro Arg Arg His Asp Ile 260 265 270 Pro Pro Pro His Gly Val 275 <210> 4 <211> 302 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 4 Met Ala Ser Ser Asp Gly Asp Arg Leu Cys Arg Ser Asn Ala Val Arg 1 5 10 15 Arg Lys Thr Thr Pro Ser Tyr Ser Gly Gln Tyr Arg Thr Ala Arg Arg 20 25 30 Ser Val Val Val Gly Pro Pro Asp Asp Ser Asp Asp Ser Leu Gly Tyr 35 40 45 Ile Thr Thr Val Gly Ala Asp Ser Pro Ser Pro Val Tyr Ala Asp Leu 50 55 60 Tyr Phe Glu His Lys Asn Thr Thr Pro Arg Val His Gln Pro Asn Asp 65 70 75 80 Ser Ser Gly Ser Glu Asp Asp Phe Glu Asp Ile Asp Glu Val Val Ala 85 90 95 Ala Phe Arg Glu Ala Arg Leu Arg His Glu Leu Val Glu Asp Ala Val 100 105 110 Tyr Glu Asn Pro Leu Ser Val Glu Lys Pro Ser Arg Ser Phe Thr Lys 115 120 125 Asn Ala Ala Val Lys Pro Lys Leu Glu Asp Ser Pro Lys Arg Ala Pro 130 135 140 Pro Gly Ala Gly Ala Ile Ala Ser Gly Arg Pro Ile Ser Phe Ser Thr 145 150 155 160 Ala Pro Lys Thr Ala Thr Ser Ser Trp Cys Gly Pro Thr Pro Ser Tyr 165 170 175 Asn Lys Arg Val Phe Cys Glu Ala Val Arg Arg Val Ala Ala Met Gln 180 185 190 Ala Gln Lys Ala Ala Glu Ala Ala Trp Asn Ser Asn Pro Pro Arg Asn 195 200 205 Asn Ala Glu Leu Asp Arg Leu Leu Thr Gly Ala Val Ile Arg Ile Thr 210 215 220 Val His Glu Gly Leu Asn Leu Ile Gln Ala Ala Asn Glu Ala Asp Leu 225 230 235 240 Gly Glu Gly Ala Ser Val Ser Lys Arg Gly His Asn Arg Lys Thr Gly 245 250 255 Asp Leu Gln Gly Gly Met Gly Asn Glu Pro Met Tyr Ala Gln Val Arg 260 265 270 Lys Pro Lys Ser Arg Thr Asp Thr Gln Thr Thr Gly Arg Ile Thr Asn 275 280 285 Arg Ser Arg Ala Arg Ser Ala Ser Arg Thr Asp Thr Arg Lys 290 295 300 <210> 5 <211> 410 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 5 Met Glu Cys Asn Leu Gly Thr Glu His Pro Ser Thr Asp Thr Trp Asn 1 5 10 15 Arg Ser Lys Thr Glu Gln Ala Val Val Asp Ala Phe Asp Glu Ser Leu 20 25 30 Phe Gly Asp Val Ala Ser Asp Ile Gly Phe Glu Thr Ser Leu Tyr Ser 35 40 45 His Ala Val Lys Thr Ala Pro Ser Pro Pro Trp Val Ala Ser Pro Lys 50 55 60 Ile Leu Tyr Gln Gln Leu Ile Arg Asp Leu Asp Phe Ser Glu Gly Pro 65 70 75 80 Arg Leu Leu Ser Cys Leu Glu Thr Trp Asn Glu Asp Leu Phe Ser Cys 85 90 95 Phe Pro Ile Asn Glu Asp Leu Tyr Ser Asp Met Met Val Leu Ser Pro 100 105 110 Asp Pro Asp Asp Val Ile Ser Thr Val Ser Thr Lys Asp His Val Glu 115 120 125 Met Phe Asn Leu Thr Thr Arg Gly Ser Val Arg Leu Pro Ser Pro Pro 130 135 140 Lys Gln Pro Thr Gly Leu Pro Ala Tyr Val Gln Glu Val Gln Asp Ser 145 150 155 160 Phe Thr Val Glu Leu Arg Ala Arg Glu Glu Ala Tyr Thr Lys Leu Leu 165 170 175 Val Thr Tyr Cys Lys Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Gln Gly Thr Ala Lys 180 185 190 Arg Thr Thr Ile Gly Leu Asn Ile Gln Asn Pro Asp Gln Lys Ala Tyr 195 200 205 Thr Gln Leu Arg Gln Ser Ile Leu Leu Arg Tyr Tyr Arg Glu Val Ala 210 215 220 Ser Leu Ala Arg Leu Leu Tyr Leu His Leu Tyr Leu Thr Val Thr Arg 225 230 235 240 Glu Phe Ser Trp Arg Leu Tyr Ala Ser Gln Ser Ala His Pro Asp Val 245 250 255 Phe Ala Ala Leu Lys Phe Thr Trp Thr Glu Arg Arg Gln Phe Thr Cys 260 265 270 Ala Phe His Pro Val Leu Cys Asn His Gly Ile Val Leu Leu Glu Gly 275 280 285 Lys Pro Leu Thr Ala Ser Ala Leu Arg Glu Ile Asn Tyr Arg Arg Arg 290 295 300 Glu Leu Gly Leu Pro Leu Val Arg Cys Gly Leu Val Glu Glu Asn Lys 305 310 315 320 Ser Pro Leu Val Gln Gln Pro Ser Phe Ser Val His Leu Pro Arg Ser 325 330 335 Val Gly Phe Leu Thr His His Ile Lys Arg Lys Leu Asp Ala Tyr Ala 340 345 350 Val Lys His Pro Gln Glu Pro Arg His Val Arg Ala Asp His Pro Tyr 355 360 365 Ala Lys Val Val Glu Asn Arg Asn Tyr Gly Ser Ser Ile Glu Ala Met 370 375 380 Ile Leu Ala Pro Pro Ser Pro Ser Glu Ile Leu Pro Gly Asp Pro Pro 385 390 395 400 Arg Pro Pro Thr Cys Gly Phe Leu Thr Arg 405 410 <210> 6 <211> 623 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 6 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly 530 535 540 Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr 545 550 555 560 Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr 565 570 575 Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp 580 585 590 Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly 595 600 605 Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg 610 615 620 <210> 7 <211> 575 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Orf68TCM variant of gE; transmembrane (TM) domain and COOH of gE replaced with influenza A/Fujian TM domain and COOH <400> 7 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp 50 55 60 Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro 65 70 75 80 Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His 85 90 95 Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu 100 105 110 Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp 115 120 125 Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His 130 135 140 Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly 145 150 155 160 Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val 165 170 175 Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr 180 185 190 Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys 195 200 205 Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr 210 215 220 Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr 225 230 235 240 Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys 245 250 255 Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp 260 265 270 Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val 275 280 285 Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg 290 295 300 Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys 305 310 315 320 Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro 325 330 335 Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser 530 535 540 Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys Val Ala Leu Leu Gly Phe Ile 545 550 555 560 Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys Ile 565 570 575 <210> 8 <211> 841 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 8 Met Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Val Ile Leu Pro Leu Trp Thr Thr 1 5 10 15 Ala Asn Lys Ser Tyr Val Thr Pro Thr Pro Ala Thr Arg Ser Ile Gly 20 25 30 His Met Ser Ala Leu Leu Arg Glu Tyr Ser Asp Arg Asn Met Ser Leu 35 40 45 Lys Leu Glu Ala Phe Tyr Pro Thr Gly Phe Asp Glu Glu Leu Ile Lys 50 55 60 Ser Leu His Trp Gly Asn Asp Arg Lys His Val Phe Leu Val Ile Val 65 70 75 80 Lys Val Asn Pro Thr Thr His Glu Gly Asp Val Gly Leu Val Ile Phe 85 90 95 Pro Lys Tyr Leu Leu Ser Pro Tyr His Phe Lys Ala Glu His Arg Ala 100 105 110 Pro Phe Pro Ala Gly Arg Phe Gly Phe Leu Ser His Pro Val Thr Pro 115 120 125 Asp Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Phe Ala Pro Tyr Leu Thr Thr Gln 130 135 140 His Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Pro Pro Asn Pro Leu Val Trp His 145 150 155 160 Leu Glu Arg Ala Glu Thr Ala Ala Thr Ala Glu Arg Pro Phe Gly Val 165 170 175 Ser Leu Leu Pro Ala Arg Pro Thr Val Pro Lys Asn Thr Ile Leu Glu 180 185 190 His Lys Ala His Phe Ala Thr Trp Asp Ala Leu Ala Arg His Thr Phe 195 200 205 Phe Ser Ala Glu Ala Ile Ile Thr Asn Ser Thr Leu Arg Ile His Val 210 215 220 Pro Leu Phe Gly Ser Val Trp Pro Ile Arg Tyr Trp Ala Thr Gly Ser 225 230 235 240 Val Leu Leu Thr Ser Asp Ser Gly Arg Val Glu Val Asn Ile Gly Val 245 250 255 Gly Phe Met Ser Ser Leu Ile Ser Leu Ser Ser Gly Pro Pro Ile Glu 260 265 270 Leu Ile Val Val Pro His Thr Val Lys Leu Asn Ala Val Thr Ser Asp 275 280 285 Thr Thr Trp Phe Gln Leu Asn Pro Pro Gly Pro Asp Pro Gly Pro Ser 290 295 300 Tyr Arg Val Tyr Leu Leu Gly Arg Gly Leu Asp Met Asn Phe Ser Lys 305 310 315 320 His Ala Thr Val Asp Ile Cys Ala Tyr Pro Glu Glu Ser Leu Asp Tyr 325 330 335 Arg Tyr His Leu Ser Met Ala His Thr Glu Ala Leu Arg Met Thr Thr 340 345 350 Lys Ala Asp Gln His Asp Ile Asn Glu Glu Ser Tyr Tyr His Ile Ala 355 360 365 Ala Arg Ile Ala Thr Ser Ile Phe Ala Leu Ser Glu Met Gly Arg Thr 370 375 380 Thr Glu Tyr Phe Leu Leu Asp Glu Ile Val Asp Val Gln Tyr Gln Leu 385 390 395 400 Lys Phe Leu Asn Tyr Ile Leu Met Arg Ile Gly Ala Gly Ala His Pro 405 410 415 Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Asp Leu Ile Phe Ala Asp Pro Ser Gln 420 425 430 Leu His Asp Glu Leu Ser Leu Leu Phe Gly Gln Val Lys Pro Ala Asn 435 440 445 Val Asp Tyr Phe Ile Ser Tyr Asp Glu Ala Arg Asp Gln Leu Lys Thr 450 455 460 Ala Tyr Ala Leu Ser Arg Gly Gln Asp His Val Asn Ala Leu Ser Leu 465 470 475 480 Ala Arg Arg Val Ile Met Ser Ile Tyr Lys Gly Leu Leu Val Lys Gln 485 490 495 Asn Leu Asn Ala Thr Glu Arg Gln Ala Leu Phe Phe Ala Ser Met Ile 500 505 510 Leu Leu Asn Phe Arg Glu Gly Leu Glu Asn Ser Ser Arg Val Leu Asp 515 520 525 Gly Arg Thr Thr Leu Leu Leu Met Thr Ser Met Cys Thr Ala Ala His 530 535 540 Ala Thr Gln Ala Ala Leu Asn Ile Gln Glu Gly Leu Ala Tyr Leu Asn 545 550 555 560 Pro Ser Lys His Met Phe Thr Ile Pro Asn Val Tyr Ser Pro Cys Met 565 570 575 Gly Ser Leu Arg Thr Asp Leu Thr Glu Glu Ile His Val Met Asn Leu 580 585 590 Leu Ser Ala Ile Pro Thr Arg Pro Gly Leu Asn Glu Val Leu His Thr 595 600 605 Gln Leu Asp Glu Ser Glu Ile Phe Asp Ala Ala Phe Lys Thr Met Met 610 615 620 Ile Phe Thr Thr Trp Thr Ala Lys Asp Leu His Ile Leu His Thr His 625 630 635 640 Val Pro Glu Val Phe Thr Cys Gln Asp Ala Ala Ala Arg Asn Gly Glu 645 650 655 Tyr Val Leu Ile Leu Pro Ala Val Gln Gly His Ser Tyr Val Ile Thr 660 665 670 Arg Asn Lys Pro Gln Arg Gly Leu Val Tyr Ser Leu Ala Asp Val Asp 675 680 685 Val Tyr Asn Pro Ile Ser Val Val Tyr Leu Ser Arg Asp Thr Cys Val 690 695 700 Ser Glu His Gly Val Ile Glu Thr Val Ala Leu Pro His Pro Asp Asn 705 710 715 720 Leu Lys Glu Cys Leu Tyr Cys Gly Ser Val Phe Leu Arg Tyr Leu Thr 725 730 735 Thr Gly Ala Ile Met Asp Ile Ile Ile Ile Asp Ser Lys Asp Thr Glu 740 745 750 Arg Gln Leu Ala Ala Met Gly Asn Ser Thr Ile Pro Pro Phe Asn Pro 755 760 765 Asp Met His Gly Asp Asp Ser Lys Ala Val Leu Leu Phe Pro Asn Gly 770 775 780 Thr Val Val Thr Leu Leu Gly Phe Glu Arg Arg Gln Ala Ile Arg Met 785 790 795 800 Ser Gly Gln Tyr Leu Gly Ala Ser Leu Gly Gly Ala Phe Leu Ala Val 805 810 815 Val Gly Phe Gly Ile Ile Gly Trp Met Leu Cys Gly Asn Ser Arg Leu 820 825 830 Arg Glu Tyr Asn Lys Ile Pro Leu Thr 835 840 <210> 9 <211> 354 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 9 Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln 1 5 10 15 Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val 20 25 30 Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr 35 40 45 Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr 50 55 60 Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val 65 70 75 80 Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro 85 90 95 Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp 100 105 110 His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly 115 120 125 Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr 130 135 140 Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile 145 150 155 160 Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly 165 170 175 Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala 180 185 190 Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly 195 200 205 Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys 210 215 220 Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu 225 230 235 240 Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr 245 250 255 Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu Asn 260 265 270 Leu Leu Ile Ile Ile Pro Ile Val Ala Ser Val Met Ile Leu Thr Ala 275 280 285 Met Val Ile Val Ile Val Ile Ser Val Lys Arg Arg Arg Ile Lys Lys 290 295 300 His Pro Ile Tyr Arg Pro Asn Thr Lys Thr Arg Arg Gly Ile Gln Asn 305 310 315 320 Ala Thr Pro Glu Ser Asp Val Met Leu Glu Ala Ala Ile Ala Gln Leu 325 330 335 Ala Thr Ile Arg Glu Glu Ser Pro Pro His Ser Val Val Asn Pro Phe 340 345 350 Val Lys <210> 10 <211> 868 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 10 Met Phe Val Thr Ala Val Val Ser Val Ser Pro Ser Ser Phe Tyr Glu 1 5 10 15 Ser Leu Gln Val Glu Pro Thr Gln Ser Glu Asp Ile Thr Arg Ser Ala 20 25 30 His Leu Gly Asp Gly Asp Glu Ile Arg Glu Ala Ile His Lys Ser Gln 35 40 45 Asp Ala Glu Thr Lys Pro Thr Phe Tyr Val Cys Pro Pro Pro Thr Gly 50 55 60 Ser Thr Ile Val Arg Leu Glu Pro Thr Arg Thr Cys Pro Asp Tyr His 65 70 75 80 Leu Gly Lys Asn Phe Thr Glu Gly Ile Ala Val Val Tyr Lys Glu Asn 85 90 95 Ile Ala Ala Tyr Lys Phe Lys Ala Thr Val Tyr Tyr Lys Asp Val Ile 100 105 110 Val Ser Thr Ala Trp Ala Gly Ser Ser Tyr Thr Gln Ile Thr Asn Arg 115 120 125 Tyr Ala Asp Arg Val Pro Ile Pro Val Ser Glu Ile Thr Asp Thr Ile 130 135 140 Asp Lys Phe Gly Lys Cys Ser Ser Lys Ala Thr Tyr Val Arg Asn Asn 145 150 155 160 His Lys Val Glu Ala Phe Asn Glu Asp Lys Asn Pro Gln Asp Met Pro 165 170 175 Leu Ile Ala Ser Lys Tyr Asn Ser Val Gly Ser Lys Ala Trp His Thr 180 185 190 Thr Asn Asp Thr Tyr Met Val Ala Gly Thr Pro Gly Thr Tyr Arg Thr 195 200 205 Gly Thr Ser Val Asn Cys Ile Ile Glu Glu Val Glu Ala Arg Ser Ile 210 215 220 Phe Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Leu Ser Thr Gly Asp Ile Ile Tyr Met 225 230 235 240 Ser Pro Phe Phe Gly Leu Arg Asp Gly Ala Tyr Arg Glu His Ser Asn 245 250 255 Tyr Ala Met Asp Arg Phe His Gln Phe Glu Gly Tyr Arg Gln Arg Asp 260 265 270 Leu Asp Thr Arg Ala Leu Leu Glu Pro Ala Ala Arg Asn Phe Leu Val 275 280 285 Thr Pro His Leu Thr Val Gly Trp Asn Trp Lys Pro Lys Arg Thr Glu 290 295 300 Val Cys Ser Leu Val Lys Trp Arg Glu Val Glu Asp Val Val Arg Asp 305 310 315 320 Glu Tyr Ala His Asn Phe Arg Phe Thr Met Lys Thr Leu Ser Thr Thr 325 330 335 Phe Ile Ser Glu Thr Asn Glu Phe Asn Leu Asn Gln Ile His Leu Ser 340 345 350 Gln Cys Val Lys Glu Glu Ala Arg Ala Ile Ile Asn Arg Ile Tyr Thr 355 360 365 Thr Arg Tyr Asn Ser Ser His Val Arg Thr Gly Asp Ile Gln Thr Tyr 370 375 380 Leu Ala Arg Gly Gly Phe Val Val Val Phe Gln Pro Leu Leu Ser Asn 385 390 395 400 Ser Leu Ala Arg Leu Tyr Leu Gln Glu Leu Val Arg Glu Asn Thr Asn 405 410 415 His Ser Pro Gln Lys His Pro Thr Arg Asn Thr Arg Ser Arg Arg Ser 420 425 430 Val Pro Val Glu Leu Arg Ala Asn Arg Thr Ile Thr Thr Thr Ser Ser 435 440 445 Val Glu Phe Ala Met Leu Gln Phe Thr Tyr Asp His Ile Gln Glu His 450 455 460 Val Asn Glu Met Leu Ala Arg Ile Ser Ser Ser Trp Cys Gln Leu Gln 465 470 475 480 Asn Arg Glu Arg Ala Leu Trp Ser Gly Leu Phe Pro Ile Asn Pro Ser 485 490 495 Ala Leu Ala Ser Thr Ile Leu Asp Gln Arg Val Lys Ala Arg Ile Leu 500 505 510 Gly Asp Val Ile Ser Val Ser Asn Cys Pro Glu Leu Gly Ser Asp Thr 515 520 525 Arg Ile Ile Leu Gln Asn Ser Met Arg Val Ser Gly Ser Thr Thr Arg 530 535 540 Cys Tyr Ser Arg Pro Leu Ile Ser Ile Val Ser Leu Asn Gly Ser Gly 545 550 555 560 Thr Val Glu Gly Gln Leu Gly Thr Asp Asn Glu Leu Ile Met Ser Arg 565 570 575 Asp Leu Leu Glu Pro Cys Val Ala Asn His Lys Arg Tyr Phe Leu Phe 580 585 590 Gly His His Tyr Val Tyr Tyr Glu Asp Tyr Arg Tyr Val Arg Glu Ile 595 600 605 Ala Val His Asp Val Gly Met Ile Ser Thr Tyr Val Asp Leu Asn Leu 610 615 620 Thr Leu Leu Lys Asp Arg Glu Phe Met Pro Leu Gln Val Tyr Thr Arg 625 630 635 640 Asp Glu Leu Arg Asp Thr Gly Leu Leu Asp Tyr Ser Glu Ile Gln Arg 645 650 655 Arg Asn Gln Met His Ser Leu Arg Phe Tyr Asp Ile Asp Lys Val Val 660 665 670 Gln Tyr Asp Ser Gly Thr Ala Ile Met Gln Gly Met Ala Gln Phe Phe 675 680 685 Gln Gly Leu Gly Thr Ala Gly Gln Ala Val Gly His Val Val Leu Gly 690 695 700 Ala Thr Gly Ala Leu Leu Ser Thr Val His Gly Phe Thr Thr Phe Leu 705 710 715 720 Ser Asn Pro Phe Gly Ala Leu Ala Val Gly Leu Leu Val Leu Ala Gly 725 730 735 Leu Val Ala Ala Phe Phe Ala Tyr Arg Tyr Val Leu Lys Leu Lys Thr 740 745 750 Ser Pro Met Lys Ala Leu Tyr Pro Leu Thr Thr Lys Gly Leu Lys Gln 755 760 765 Leu Pro Glu Gly Met Asp Pro Phe Ala Glu Lys Pro Asn Ala Thr Asp 770 775 780 Thr Pro Ile Glu Glu Ile Gly Asp Ser Gln Asn Thr Glu Pro Ser Val 785 790 795 800 Asn Ser Gly Phe Asp Pro Asp Lys Phe Arg Glu Ala Gln Glu Met Ile 805 810 815 Lys Tyr Met Thr Leu Val Ser Ala Ala Glu Arg Gln Glu Ser Lys Ala 820 825 830 Arg Lys Lys Asn Lys Thr Ser Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Thr Gly 835 840 845 Leu Ala Leu Arg Asn Arg Arg Gly Tyr Ser Arg Val Arg Thr Glu Asn 850 855 860 Val Thr Gly Val 865 <210> 11 <211> 1872 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon-optimized VZV Orf68 gE for expression in insect cells <400> 11 atgggcaccg tgaacaagcc cgtggtgggc gtgctgatgg gtttcggtat catcaccggc 60 accctgcgta tcaccaaccc cgtgcgtgct tccgtgctgc gttacgacga cttccacacc 120 gacgaggaca agctggacac caactccgtg tacgagccct actaccactc cgaccacgct 180 gagtcctctt gggtgaaccg tggcgagtcc tcccgtaagg cttacgacca caactccccc 240 tacatctggc cccgtaacga ctacgacggt ttcctcgaga acgctcacga gcaccacggt 300 gtctacaacc agggtcgtgg tatcgactcc ggcgagcgtc tgatgcagcc cacccagatg 360 tccgctcagg aggacctggg cgacgacacc ggtatccacg tgatccccac cctgaacggt 420 gacgaccgtc acaagatcgt gaacgtggac cagcgccagt acggtgacgt gttcaagggt 480 gacctgaacc ccaagcccca gggccagcgt ctgatcgagg tgtccgtgga ggagaaccac 540 cccttcaccc tgcgtgctcc catccagcgt atctacggtg tccgttacac cgagacctgg 600 tccttcctcc cctccctgac ctgcaccggt gacgctgctc ccgctatcca gcacatctgc 660 ctgaagcaca ccacctgctt ccaggacgtg gtggtggacg tggactgcgc tgagaacacc 720 aaggaggacc agctggctga gatctcctac aggttccagg gcaagaagga ggctgaccag 780 ccctggatcg tggtgaacac ctccaccctg ttcgacgagc tggagctgga cccccccgag 840 atcgagcccg gtgtcctgaa ggtgctgcgt accgagaagc agtacctggg cgtgtacatc 900 tggaacatgc gtggttccga cggcacctcc acctacgcta ccttcctcgt gacctggaag 960 ggtgacgaaa agacccgtaa ccccaccccc gctgtgaccc cccagccccg tggtgctgaa 1020 ttccatatgt ggaactacca ctctcacgtg ttctccgtgg gtgacacctt ctccctggct 1080 atgcacctgc agtacaagat ccacgaggct cccttcgacc tgctgctcga gtggctgtac 1140 gtgcccatcg accccacctg ccagcccatg cgcctgtact ccacctgcct gtaccacccc 1200 aacgctcccc agtgcctgtc ccacatgaac tccggttgca ccttcacctc cccccacctg 1260 gcccagcgtg tggcttccac cgtgtaccag aactgcgagc acgctgacaa ctacaccgct 1320 tactgcctgg gtatcagcca catggagcct tccttcggtc tgatcctgca cgacggtggc 1380 accaccctga agttcgtgga cacccccgag tccctgtccg gtctgtacgt gttcgtggtg 1440 tacttcaacg gtcacgtgga ggctgtcgct tacaccgtgg tgtccaccgt ggaccacttc 1500 gtgaacgcta tcgaggagcg tggtttcccc cccaccgctg gccagccccc tgctaccacc 1560 aagcccaagg agatcacccc cgtcaacccc ggcacctccc ctctgctgcg ctacgctgct 1620 tggaccggtg gtctggctgc tgtggtgctg ctgtgcctgg tgatcttcct gatctgcacc 1680 gctaagagga tgcgtgtgaa ggcttaccgt gtggacaagt ccccttacaa ccagtccatg 1740 tactacgctg gtctgcccgt cgacgacttc gaggactccg agtccaccga caccgaggag 1800 gagttcggta acgctatcgg tggttcccac ggtggttcct cctacaccgt gtacatcgac 1860 aagacccgct aa 1872 <210> 12 <211> 1728 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon-optimized VZV Orf68TCM for expression in insect cells <400> 12 atgggcaccg tgaacaagcc cgtggtgggc gtgctgatgg gtttcggtat catcaccggc 60 accctgcgta tcaccaaccc cgtgcgtgct tccgtgctgc gttacgacga cttccacacc 120 gacgaggaca agctggacac caactccgtg tacgagccct actaccactc cgaccacgct 180 gagtcctctt gggtgaaccg tggcgagtcc tcccgtaagg cttacgacca caactccccc 240 tacatctggc cccgtaacga ctacgacggt ttcctcgaga acgctcacga gcaccacggt 300 gtctacaacc agggtcgtgg tatcgactcc ggcgagcgtc tgatgcagcc cacccagatg 360 tccgctcagg aggacctggg cgacgacacc ggtatccacg tgatccccac cctgaacggt 420 gacgaccgtc acaagatcgt gaacgtggac cagcgccagt acggtgacgt gttcaagggt 480 gacctgaacc ccaagcccca gggccagcgt ctgatcgagg tgtccgtgga ggagaaccac 540 cccttcaccc tgcgtgctcc catccagcgt atctacggtg tccgttacac cgagacctgg 600 tccttcctcc cctccctgac ctgcaccggt gacgctgctc ccgctatcca gcacatctgc 660 ctgaagcaca ccacctgctt ccaggacgtg gtggtggacg tggactgcgc tgagaacacc 720 aaggaggacc agctggctga gatctcctac aggttccagg gcaagaagga ggctgaccag 780 ccctggatcg tggtgaacac ctccaccctg ttcgacgagc tggagctgga cccccccgag 840 atcgagcccg gtgtcctgaa ggtgctgcgt accgagaagc agtacctggg cgtgtacatc 900 tggaacatgc gtggttccga cggcacctcc acctacgcta ccttcctcgt gacctggaag 960 ggtgacgaaa agacccgtaa ccccaccccc gctgtgaccc cccagccccg tggtgctgaa 1020 ttccatatgt ggaactacca ctctcacgtg ttctccgtgg gtgacacctt ctccctggct 1080 atgcacctgc agtacaagat ccacgaggct cccttcgacc tgctgctcga gtggctgtac 1140 gtgcccatcg accccacctg ccagcccatg cgcctgtact ccacctgcct gtaccacccc 1200 aacgctcccc agtgcctgtc ccacatgaac tccggttgca ccttcacctc cccccacctg 1260 gcccagcgtg tggcttccac cgtgtaccag aactgcgagc acgctgacaa ctacaccgct 1320 tactgcctgg gtatcagcca catggagcct tccttcggtc tgatcctgca cgacggtggc 1380 accaccctga agttcgtgga cacccccgag tccctgtccg gtctgtacgt gttcgtggtg 1440 tacttcaacg gtcacgtgga ggctgtcgct tacaccgtgg tgtccaccgt ggaccacttc 1500 gtgaacgcta tcgaggagcg tggtttcccc cccaccgctg gccagccccc tgctaccacc 1560 aagcccaagg agatcacccc cgtcaacccc ggcacctccc ctctgctgcg cgactggatc 1620 ttgtggatct ccttcgctat ctcctgcttc ctgctgtgcg tggctctgct gggtttcatc 1680 atgtgggctt gccagaaggg taacatccgt tgcaacatct gcatctaa 1728 <210> 13 <211> 1310 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 13 Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser 1 5 10 15 Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val 50 55 60 Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp 65 70 75 80 Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln 85 90 95 Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr 100 105 110 Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser 115 120 125 Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro 130 135 140 Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala 165 170 175 Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr 180 185 190 Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln 195 200 205 Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His 210 215 220 Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro 225 230 235 240 Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro 245 250 255 Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln 260 265 270 Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala 275 280 285 Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala 290 295 300 Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro 305 310 315 320 Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile 325 330 335 Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val 340 345 350 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu 355 360 365 Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser 370 375 380 Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser 385 390 395 400 Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr 405 410 415 Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu 420 425 430 Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg 435 440 445 Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro 450 455 460 Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val 465 470 475 480 Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu 485 490 495 Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val 500 505 510 Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala 515 520 525 Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu 530 535 540 Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr 545 550 555 560 Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser 565 570 575 Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu 580 585 590 Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg 595 600 605 Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg 610 615 620 Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala 625 630 635 640 Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln 645 650 655 Thr Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys 660 665 670 Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro 675 680 685 Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala 690 695 700 Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg 705 710 715 720 Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro 725 730 735 Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe 740 745 750 Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln 755 760 765 Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp 770 775 780 Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro 785 790 795 800 Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg 805 810 815 Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala 820 825 830 Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile 835 840 845 Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr 850 855 860 Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu 865 870 875 880 Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr 885 890 895 His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu 900 905 910 Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala 915 920 925 Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg 930 935 940 Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly 945 950 955 960 Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro 965 970 975 Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly 980 985 990 Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser Ser Arg Thr Phe Gly Pro Ala Ser 995 1000 1005 Phe Ala Arg Ile Glu Thr Ala Phe Ala Asn Leu Tyr Pro Gly Glu 1010 1015 1020 Gln Pro Leu Cys Leu Cys Arg Gly Gly Asn Val Ala Tyr Thr Val 1025 1030 1035 Cys Thr Arg Ala Gly Pro Lys Thr Arg Val Pro Leu Ser Pro Arg 1040 1045 1050 Glu Tyr Arg Gln Tyr Val Leu Pro Gly Phe Asp Gly Cys Lys Asp 1055 1060 1065 Leu Ala Arg Gln Ser Arg Gly Leu Gly Leu Gly Ala Ala Asp Phe 1070 1075 1080 Val Asp Glu Ala Ala His Ser His Arg Ala Ala Asn Arg Trp Gly 1085 1090 1095 Leu Gly Ala Ala Leu Arg Pro Val Phe Leu Pro Glu Gly Arg Arg 1100 1105 1110 Pro Gly Ala Ala Gly Pro Glu Ala Gly Asp Val Pro Thr Trp Ala 1115 1120 1125 Arg Val Phe Cys Arg His Ala Leu Leu Glu Pro Asp Pro Ala Ala 1130 1135 1140 Glu Pro Leu Val Leu Pro Pro Val Ala Gly Arg Ser Val Ala Leu 1145 1150 1155 Tyr Ala Ser Ala Asp Glu Ala Arg Asn Ala Leu Pro Pro Ile Pro 1160 1165 1170 Arg Val Met Trp Pro Pro Gly Phe Gly Ala Ala Glu Thr Val Leu 1175 1180 1185 Glu Gly Ser Asp Gly Thr Arg Phe Val Phe Gly His His Gly Gly 1190 1195 1200 Ser Glu Arg Pro Ala Glu Thr Gln Ala Gly Arg Gln Arg Arg Thr 1205 1210 1215 Ala Asp Asp Arg Glu His Ala Leu Glu Pro Asp Asp Trp Glu Val 1220 1225 1230 Gly Cys Glu Asp Ala Trp Asp Ser Glu Glu Gly Gly Gly Asp Asp 1235 1240 1245 Gly Asp Ala Pro Gly Ser Ser Phe Gly Val Ser Ile Val Ser Val 1250 1255 1260 Ala Pro Gly Val Leu Arg Asp Arg Arg Val Gly Leu Arg Pro Ala 1265 1270 1275 Val Lys Val Glu Leu Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Glu 1280 1285 1290 Asp Asp Val Trp Gly Gly Arg Gly Gly Arg Ser Pro Pro Gln Ser 1295 1300 1305 Arg Gly 1310 <210> 14 <211> 1310 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <220> <221> misc_feature <222> (657)..(657) <223> Xaa may be Thr or Ala <220> <221> misc_feature <222> (1208)..(1208) <223> Xaa may be Ala or Ser <220> <221> misc_feature <222> (1228)..(1228) <223> Xaa may be Pro or Leu <400> 14 Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser 1 5 10 15 Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val 50 55 60 Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp 65 70 75 80 Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln 85 90 95 Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr 100 105 110 Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser 115 120 125 Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro 130 135 140 Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala 165 170 175 Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr 180 185 190 Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln 195 200 205 Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His 210 215 220 Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro 225 230 235 240 Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro 245 250 255 Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln 260 265 270 Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala 275 280 285 Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala 290 295 300 Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro 305 310 315 320 Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile 325 330 335 Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val 340 345 350 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu 355 360 365 Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser 370 375 380 Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser 385 390 395 400 Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr 405 410 415 Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu 420 425 430 Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg 435 440 445 Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro 450 455 460 Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val 465 470 475 480 Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu 485 490 495 Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val 500 505 510 Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala 515 520 525 Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu 530 535 540 Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr 545 550 555 560 Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser 565 570 575 Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu 580 585 590 Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg 595 600 605 Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg 610 615 620 Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala 625 630 635 640 Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln 645 650 655 Xaa Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys 660 665 670 Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro 675 680 685 Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala 690 695 700 Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg 705 710 715 720 Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro 725 730 735 Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe 740 745 750 Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln 755 760 765 Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp 770 775 780 Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro 785 790 795 800 Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg 805 810 815 Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala 820 825 830 Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile 835 840 845 Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr 850 855 860 Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu 865 870 875 880 Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr 885 890 895 His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu 900 905 910 Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala 915 920 925 Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg 930 935 940 Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly 945 950 955 960 Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro 965 970 975 Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly 980 985 990 Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser Ser Arg Thr Phe Gly Pro Ala Ser 995 1000 1005 Phe Ala Arg Ile Glu Thr Ala Phe Ala Asn Leu Tyr Pro Gly Glu 1010 1015 1020 Gln Pro Leu Cys Leu Cys Arg Gly Gly Asn Val Ala Tyr Thr Val 1025 1030 1035 Cys Thr Arg Ala Gly Pro Lys Thr Arg Val Pro Leu Ser Pro Arg 1040 1045 1050 Glu Tyr Arg Gln Tyr Val Leu Pro Gly Phe Asp Gly Cys Lys Asp 1055 1060 1065 Leu Ala Arg Gln Ser Arg Gly Leu Gly Leu Gly Ala Ala Asp Phe 1070 1075 1080 Val Asp Glu Ala Ala His Ser His Arg Ala Ala Asn Arg Trp Gly 1085 1090 1095 Leu Gly Ala Ala Leu Arg Pro Val Phe Leu Pro Glu Gly Arg Arg 1100 1105 1110 Pro Gly Ala Ala Gly Pro Glu Ala Gly Asp Val Pro Thr Trp Ala 1115 1120 1125 Arg Val Phe Cys Arg His Ala Leu Leu Glu Pro Asp Pro Ala Ala 1130 1135 1140 Glu Pro Leu Val Leu Pro Pro Val Ala Gly Arg Ser Val Ala Leu 1145 1150 1155 Tyr Ala Ser Ala Asp Glu Ala Arg Asn Ala Leu Pro Pro Ile Pro 1160 1165 1170 Arg Val Met Trp Pro Pro Gly Phe Gly Ala Ala Glu Thr Val Leu 1175 1180 1185 Glu Gly Ser Asp Gly Thr Arg Phe Val Phe Gly His His Gly Gly 1190 1195 1200 Ser Glu Arg Pro Xaa Glu Thr Gln Ala Gly Arg Gln Arg Arg Thr 1205 1210 1215 Ala Asp Asp Arg Glu His Ala Leu Glu Xaa Asp Asp Trp Glu Val 1220 1225 1230 Gly Cys Glu Asp Ala Trp Asp Ser Glu Glu Gly Gly Gly Asp Asp 1235 1240 1245 Gly Asp Ala Pro Gly Ser Ser Phe Gly Val Ser Ile Val Ser Val 1250 1255 1260 Ala Pro Gly Val Leu Arg Asp Arg Arg Val Gly Leu Arg Pro Ala 1265 1270 1275 Val Lys Val Glu Leu Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Glu 1280 1285 1290 Asp Asp Val Trp Gly Gly Arg Gly Gly Arg Ser Pro Pro Gln Ser 1295 1300 1305 Arg Gly 1310 <210> 15 <211> 1310 <212> PRT <213> Varicella Zoster Virus <400> 15 Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser 1 5 10 15 Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu 35 40 45 Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val 50 55 60 Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp 65 70 75 80 Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln 85 90 95 Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr 100 105 110 Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser 115 120 125 Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro 130 135 140 Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala 165 170 175 Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr 180 185 190 Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln 195 200 205 Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His 210 215 220 Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro 225 230 235 240 Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro 245 250 255 Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln 260 265 270 Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala 275 280 285 Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala 290 295 300 Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro 305 310 315 320 Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile 325 330 335 Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val 340 345 350 Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu 355 360 365 Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser 370 375 380 Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser 385 390 395 400 Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr 405 410 415 Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu 420 425 430 Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg 435 440 445 Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro 450 455 460 Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val 465 470 475 480 Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu 485 490 495 Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val 500 505 510 Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala 515 520 525 Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu 530 535 540 Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr 545 550 555 560 Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser 565 570 575 Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu 580 585 590 Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg 595 600 605 Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg 610 615 620 Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala 625 630 635 640 Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln 645 650 655 Ala Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys 660 665 670 Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro 675 680 685 Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala 690 695 700 Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg 705 710 715 720 Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro 725 730 735 Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe 740 745 750 Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln 755 760 765 Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp 770 775 780 Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro 785 790 795 800 Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg 805 810 815 Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala 820 825 830 Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile 835 840 845 Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr 850 855 860 Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu 865 870 875 880 Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr 885 890 895 His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu 900 905 910 Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala 915 920 925 Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg 930 935 940 Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly 945 950 955 960 Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro 965 970 975 Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly 980 985 990 Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser Ser Arg Thr Phe Gly Pro Ala Ser 995 1000 1005 Phe Ala Arg Ile Glu Thr Ala Phe Ala Asn Leu Tyr Pro Gly Glu 1010 1015 1020 Gln Pro Leu Cys Leu Cys Arg Gly Gly Asn Val Ala Tyr Thr Val 1025 1030 1035 Cys Thr Arg Ala Gly Pro Lys Thr Arg Val Pro Leu Ser Pro Arg 1040 1045 1050 Glu Tyr Arg Gln Tyr Val Leu Pro Gly Phe Asp Gly Cys Lys Asp 1055 1060 1065 Leu Ala Arg Gln Ser Arg Gly Leu Gly Leu Gly Ala Ala Asp Phe 1070 1075 1080 Val Asp Glu Ala Ala His Ser His Arg Ala Ala Asn Arg Trp Gly 1085 1090 1095 Leu Gly Ala Ala Leu Arg Pro Val Phe Leu Pro Glu Gly Arg Arg 1100 1105 1110 Pro Gly Ala Ala Gly Pro Glu Ala Gly Asp Val Pro Thr Trp Ala 1115 1120 1125 Arg Val Phe Cys Arg His Ala Leu Leu Glu Pro Asp Pro Ala Ala 1130 1135 1140 Glu Pro Leu Val Leu Pro Pro Val Ala Gly Arg Ser Val Ala Leu 1145 1150 1155 Tyr Ala Ser Ala Asp Glu Ala Arg Asn Ala Leu Pro Pro Ile Pro 1160 1165 1170 Arg Val Met Trp Pro Pro Gly Phe Gly Ala Ala Glu Thr Val Leu 1175 1180 1185 Glu Gly Ser Asp Gly Thr Arg Phe Val Phe Gly His His Gly Gly 1190 1195 1200 Ser Glu Arg Pro Ser Glu Thr Gln Ala Gly Arg Gln Arg Arg Thr 1205 1210 1215 Ala Asp Asp Arg Glu His Ala Leu Glu Leu Asp Asp Trp Glu Val 1220 1225 1230 Gly Cys Glu Asp Ala Trp Asp Ser Glu Glu Gly Gly Gly Asp Asp 1235 1240 1245 Gly Asp Ala Pro Gly Ser Ser Phe Gly Val Ser Ile Val Ser Val 1250 1255 1260 Ala Pro Gly Val Leu Arg Asp Arg Arg Val Gly Leu Arg Pro Ala 1265 1270 1275 Val Lys Val Glu Leu Leu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Glu 1280 1285 1290 Asp Asp Val Trp Gly Gly Arg Gly Gly Arg Ser Pro Pro Gln Ser 1295 1300 1305 Arg Gly 1310 <210> 16 <211> 3933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon-optimized VZV Orf IE62 for expression in insect cells <400> 16 atggacaccc cccccatgca gcgttccacc ccccagcgtg ctggttcccc cgacaccctc 60 gagctgatgg acctgctgga cgctgctgct gccgctgccg agcaccgtgc tcgtgtggtg 120 acctcctccc agcccgacga cctgctgttc ggcgagaacg gtgtcatggt cggtcgtgag 180 cacgagatcg tgtccatccc ttccgtgtcc ggtctgcagc ccgagccccg taccgaggac 240 gtgggcgaag agctgaccca ggacgactac gtgtgcgagg acggccagga cctgatgggt 300 tcccccgtga tccccctggc tgaggtgttc cacacccgtt tctccgaggc tggtgctcgt 360 gagcccaccg gtgctgaccg ttccctcgag accgtgtccc tgggcaccaa gctggctcgt 420 tcccccaagc cccccatgaa cgacggcgag accggtcgtg gcaccacccc ccccttccct 480 caggctttct cccctgtgtc ccccgcttcc cccgtgggtg acgctgctgg taacgaccag 540 cgtgaggacc agcgttccat ccctcgtcag accacccgtg gtaactcccc cggtctgccc 600 tccgtggtgc accgtgaccg tcagacccag tccatctccg gcaagaagcc cggcgacgag 660 caggctggtc acgctcacgc ttccggtgac ggtgttgtgc tgcaaaaaac ccaacgtccc 720 gcccagggaa agtctcccaa gaagaaaacc ctgaaggtca aggtgcccct gcccgctcgt 780 aagcccggtg gtcccgtgcc cggtcccgtg gagcagctgt accacgtgct gtccgactcc 840 gtgcccgcta agggtgctaa ggctgacctg cctttcgaga ccgacgacac ccgtccccgt 900 aagcatgacg ctaggggcat cactcctcgt gtgcccggtc gttcctccgg tggcaagccc 960 cgtgctttcc tggctctgcc tggtcgttcc cacgctcccg accccatcga ggacgactcc 1020 cccgtggaga agaagcccaa gtcccgcgag ttcgtgtcct cctcctccag ctcctcctcc 1080 tggggttcca gctccgagga cgaggacgac gagccccgtc gtgtgtccgt gggttccgag 1140 accaccggtt cccgttccgg tcgcgagcac gccccctccc catccaactc tgacgactcc 1200 gactccaacg acggtggttc caccaagcag aacatccagc ccggctaccg ttccatttct 1260 ggtcccgacc cccgtatccg taagaccaag cgtctggctg gcgaaccagg ccgtcagcgt 1320 cagaagtcct tctccctgcc ccgttcccgt acccctatca tccctcctgt ctccggccct 1380 ctgatgatgc ccgacggttc cccctggccc ggttccgctc ccctgccctc caaccgtgtg 1440 cgtttcggtc cctccggcga gacccgtgag ggccactggg aggacgaggc tgtgcgtgct 1500 gctcgtgctc gttacgaggc ttccaccgag cccgtgcccc tgtacgtgcc cgaactgggt 1560 gaccctgccc gtcagtaccg tgctctgatc aacctgatct actgccccga ccgtgacccc 1620 atcgcttggc tgcagaaccc caagctgacc ggtgtcaact ccgctctgaa ccagttctac 1680 cagaagctgc tgccccctgg tcgtgctggc accgctgtga ccggttccgt ggcttcccct 1740 gtgccccacg tgggagaggc tatggctacc ggcgaggctc tgtgggctct gcctcacgct 1800 gccgccgctg tggctatgtc ccgtcgttac gaccgtgctc agaagcactt catcctgcag 1860 tccctgcgtc gtgctttcgc ttccatggct taccccgagg ctaccggttc ctcccccgct 1920 gctcgtatct cccgtggtca cccctccccc accacccccg ctacccaggc tccagacccc 1980 caaccctctg ctgctgctcg ttccctgtcc gtgtgccccc ctgacgaccg tctgcgtacc 2040 ccccgtaagc gcaagtccca gcccgtggag tcccgttccc tgctggacaa gatccgtgag 2100 accccagtgg ctgacgctcg cgtggctgac gaccacgtcg tgtccaaggc taagaggcgc 2160 gtgtccgagc ctgtgaccat cacctccggt cctgtggtgg acccccctgc tgtgatcacc 2220 atgcccctgg acggtcccgc tcccaacggt ggtttccgtc gtatccctcg tggtgctctg 2280 cacacccccg tgccctccga ccaggctcgt aaggcttact gcacccccga gaccatcgct 2340 cgtctggtgg acgaccccct gttccccacc gcttggcgtc ctgctctgtc cttcgacccc 2400 ggtgctctgg ctgagatcgc tgctcgccgt cccggtggcg gtgatcgtcg cttcggtcct 2460 ccctccggtg tcgaggctct gcgtcgtcgt tgcgcttgga tgcgtcagat ccccgaccct 2520 gaggacgtgc gcctgctgat catctacgac cctctgcccg gcgaggacat caacggtcct 2580 ctcgagtcca ccctggctac cgaccccggt ccctcctggt ccccctcccg tggtggtctg 2640 tccgtggtgc tggctgccct gtccaaccgt ctgtgcctgc cttccaccca cgcttgggct 2700 ggtaactgga ccggtccccc cgacgtgtcc gccctgaacg ctcgcggtgt cttgctcctg 2760 tccacccgtg atctggcttt cgctggtgct gtggagtacc tgggttcccg tctggcttcc 2820 gctcgtcgtc gtctgctggt cctggacgct gtggctctcg agcgttggcc ccgtgacggt 2880 ccagccctgt ctcaatacca cgtgtacgtg cgcgctcccg ctcgtcccga cgctcaggct 2940 gtggtgcgct ggcccgactc cgctgtcacc gagggtctgg ctcgtgctgt gttcgcttcc 3000 tcccgtacct tcggtcccgc ttccttcgct cgtatcgaga ccgctttcgc taacctgtac 3060 cccggcgagc agcccctgtg cctgtgccgt ggtggtaacg tggcttacac cgtgtgcacc 3120 cgtgctggtc ccaagacccg tgtgcctctg tccccccgtg agtaccgcca gtacgtgctg 3180 cccggtttcg acggttgcaa ggacctggct cgtcagtccc gcggtctggg tctgggtgct 3240 gctgacttcg tcgacgaggc tgctcactcc caccgtgctg ctaaccgttg gggcctgggc 3300 gctgctctgc gtcccgtgtt cctgcccgag ggtcgtcgtc ctggtgctgc tggtcccgag 3360 gctggcgacg tgcccacctg ggctcgtgtg ttctgccgtc acgctctgct cgagcccgac 3420 cctgctgccg agcctctggt gctgcccccc gtggctggtc gttctgtggc tctgtacgct 3480 tccgccgacg aggctcgcaa cgctctgccc cccatccccc gtgtgatgtg gccccctggt 3540 ttcggcgctg ctgagaccgt cctcgagggt tccgacggca cccgtttcgt gttcggtcac 3600 cacggcggtt ccgagcgtcc ctccgagacc caggctggtc gccagcgccg taccgctgac 3660 gaccgtgagc acgctctcga gctggacgac tgggaggtcg gctgcgagga cgcttgggac 3720 tccgaagagg gtggtggcga cgacggtgac gctcccggct cctccttcgg tgtctccatc 3780 gtgtccgtgg ctcccggtgt cctgcgtgac cgtcgtgtgg gtctgcgtcc tgctgtgaag 3840 gtggagctgc tgtcctcctc ttcctcttct gaggatgagg atgacgtgtg gggtggtcgt 3900 ggtggtcgct ccccccctca gtcccgtggt taa 3933 <210> 17 <211> 1608 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon-optimized VZV gE DeltaTMCT for expression in insect cells <400> 17 atggtgtccg ctatcgtgct gtacgtgctg ctggctgctg ctgctcactc cgctttcgct 60 cgtatcacca accccgtgcg tgcttccgtg ctgcgttacg acgacttcca caccgacgag 120 gacaagctgg acaccaactc cgtgtacgag ccctactacc actccgacca cgctgagtcc 180 tcttgggtga accgtggcga gtcctcccgt aaggcttacg accacaactc cccctacatc 240 tggccccgta acgactacga cggtttcctc gagaacgctc acgagcacca cggtgtctac 300 aaccagggtc gtggtatcga ctccggcgag cgtctgatgc agcccaccca gatgtccgct 360 caggaggacc tgggcgacga caccggtatc cacgtgatcc ccaccctgaa cggtgacgac 420 cgtcacaaga tcgtgaacgt ggaccagcgc cagtacggtg acgtgttcaa gggtgacctg 480 aaccccaagc cccagggcca gcgtctgatc gaggtgtccg tggaggagaa ccaccccttc 540 accctgcgtg ctcccatcca gcgtatctac ggtgtccgtt acaccgagac ctggtccttc 600 ctcccctccc tgacctgcac cggtgacgct gctcccgcta tccagcacat ctgcctgaag 660 cacaccacct gcttccagga cgtggtggtg gacgtggact gcgctgagaa caccaaggag 720 gaccagctgg ctgagatctc ctacaggttc cagggcaaga aggaggctga ccagccctgg 780 atcgtggtga acacctccac cctgttcgac gagctggagc tggacccccc cgagatcgag 840 cccggtgtcc tgaaggtgct gcgtaccgag aagcagtacc tgggcgtgta catctggaac 900 atgcgtggtt ccgacggcac ctccacctac gctaccttcc tcgtgacctg gaagggtgac 960 gaaaagaccc gtaaccccac ccccgctgtg accccccagc cccgtggtgc tgaattccat 1020 atgtggaact accactctca cgtgttctcc gtgggtgaca ccttctccct ggctatgcac 1080 ctgcagtaca agatccacga ggctcccttc gacctgctgc tcgagtggct gtacgtgccc 1140 atcgacccca cctgccagcc catgcgcctg tactccacct gcctgtacca ccccaacgct 1200 ccccagtgcc tgtcccacat gaactccggt tgcaccttca cctcccccca cctggcccag 1260 cgtgtggctt ccaccgtgta ccagaactgc gagcacgctg acaactacac cgcttactgc 1320 ctgggtatca gccacatgga gccttccttc ggtctgatcc tgcacgacgg tggcaccacc 1380 ctgaagttcg tggacacccc cgagtccctg tccggtctgt acgtgttcgt ggtgtacttc 1440 aacggtcacg tggaggctgt cgcttacacc gtggtgtcca ccgtggacca cttcgtgaac 1500 gctatcgagg agcgtggttt cccccccacc gctggccagc cccctgctac caccaagccc 1560 aaggagatca cccccgtcaa ccccggcacc tcccctctgc tgcgctaa 1608 <210> 18 <211> 535 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VZV gE DeltaTMCT <400> 18 Met Val Ser Ala Ile Val Leu Tyr Val Leu Leu Ala Ala Ala Ala His 1 5 10 15 Ser Ala Phe Ala Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val Leu Arg 20 25 30 Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn Ser Val 35 40 45 Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp Val Asn 50 55 60 Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro Tyr Ile 65 70 75 80 Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His Glu His 85 90 95 His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu Arg Leu 100 105 110 Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp Asp Thr 115 120 125 Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile 130 135 140 Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu 145 150 155 160 Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu 165 170 175 Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val 180 185 190 Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly 195 200 205 Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys 210 215 220 Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu 225 230 235 240 Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala 245 250 255 Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp Glu Leu 260 265 270 Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg 275 280 285 Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser 290 295 300 Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp 305 310 315 320 Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly 325 330 335 Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser Val Gly 340 345 350 Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala 355 360 365 Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr 370 375 380 Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala 385 390 395 400 Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro 405 410 415 His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His 420 425 430 Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro 435 440 445 Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val 450 455 460 Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe 465 470 475 480 Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp 485 490 495 His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly 500 505 510 Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro 515 520 525 Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg 530 535 <210> 19 <211> 816 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Codon-optimized VZV gI DeltaTMCT for expression in insect cells <400> 19 atgttcctca tccagtgcct gatctccgct gtgatcttct acatccaagt gaccaacgct 60 ctgatcttca agggtgacca cgtgtccctg caggtcaact cctccctgac ctccatcctg 120 atccccatgc agaacgacaa ctacaccgag atcaagggcc agctggtgtt catcggcgag 180 cagctgccca ccggcaccaa ctactccggc accctcgagc tgctgtacgc tgacaccgtc 240 gctttctgct tccgttccgt gcaggtgatc cgttacgacg gttgcccccg tatccgtacc 300 tccgctttca tctcctgccg ttacaagcac tcctggcact acggtaactc caccgaccgt 360 atctccaccg agcccgacgc tggtgtcatg ctgaagatca ccaagcccgg tatcaacgac 420 gctggcgtgt acgtgctgct ggtccgtctg gaccactccc gttccaccga cggtttcatc 480 ctgggtgtca acgtgtacac cgctggttcc caccacaaca tccacggtgt catctacacc 540 tccccctccc tgcagaacgg ttactccacc cgtgctctgt tccagcaggc tcgtctgtgc 600 gacctgcccg ctacccccaa gggttccggc acctccctct tccagcacat gctggacctg 660 cgtgctggca agtccctcga ggacaacccc tggctgcacg aggacgtggt gaccaccgag 720 accaagtccg tggtgaagga aggtatcgag aaccacgtgt accccaccga catgtccacc 780 ctgcccgaga agtccctgaa cgaccccccc gagtaa 816 <210> 20 <211> 271 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VZV gI Delta TMCT <400> 20 Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln 1 5 10 15 Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val 20 25 30 Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr 35 40 45 Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr 50 55 60 Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val 65 70 75 80 Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro 85 90 95 Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp 100 105 110 His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly 115 120 125 Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr 130 135 140 Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile 145 150 155 160 Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly 165 170 175 Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala 180 185 190 Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly 195 200 205 Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys 210 215 220 Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu 225 230 235 240 Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr 245 250 255 Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu 260 265 270

Claims

바리셀라 조스터 바이러스(VZV, Varicella Zoster Virus)의 gE(당단백질 E)를 포함하는 정제된 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VLP, virus like particle)로서, 상기 VLP는 효모 Ty 단백질 및 VZV 핵산을 불포함하는 것인 정제된 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제1항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체(infectious agent)로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제2항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 바이러스, 곰팡이, 기생충 또는 박테리아 또는 이들의 조합으로부터 유래하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제3항에 있어서,
상기 바이러스 단백질은 인플루엔자 바이러스, 뎅기 바이러스, 황열 바이러스, 단순 포진(Herpes simplex) 바이러스 I, 단순 포진 바이러스 II, 파라인플루엔자 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 광견병 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스, 코로나 바이러스 또는 간염 바이러스로부터 유래한 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제2항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 상기 VZV-VLP의 표면에 발현되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제4항에 있어서,
상기 바리셀라 조스터 바이러스(VZV)로부터 유래한 단백질은 gI (ORF67), gM (ORF50), gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제6항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유리한 단백질을 추가로 포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제1항에 있어서,
상기 VLP는 필수적으로 gE로 구성되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제1항에 있어서,
상기 VLP는 복제된 gE VZV를 포함하는 재조합 발현 시스텝으로부터 유래한 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
VZV gE를 인코딩하는 벡터를 적합한 숙주 세포에 감염시키는 단계(transfecting) 및 상기 VZV gE 단백질을 VLP를 생성, 단리 및/또는 정제할 수 있는 조건 하에서 발현시키는 단계를 포함하고, 상기 숙주 세포는 효모 Ty 단백질을 불포함하고, 상기 VLP는 VZV 핵산을 불포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VLP)의 제조 방법.
제10항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VLP)의 제조 방법.
제11항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 바이러스, 곰팡이, 기생충, 박테리아 또는 이들의 조합에서 유래하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VLP)의 제조 방법.
제12항에 있어서,
상기 바이러스 단백질은 인플루엔자 바이러스, 뎅기 바이러스, 황열 바이러스, 단순 포진 바이러스 I, 단순 포진 바이러스 II, 파라인플루엔자 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 광견병 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스, 코로나 바이러스 또는 간염 바이러스로부터 유래한 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제11항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 상기 VZV-VLP의 표면에 발현되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제13항에 있어서,
상기 바리셀라 조스터 바이러스(VZV)로부터 유래한 단백질은 gI (ORF67), gM (ORF50), gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제15항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제10항에 있어서,
상기 VLP는 필수적으로 gE로 구성되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제10항에 있어서,
상기 숙주 세포는 효모, 곤충, 양서류, 조류 또는 포유류 세포로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제18항에 있어서,
상기 숙주 세포는 곤충 세포인 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
제18항에 있어서,
상기 곤충 세포는 스포돕테라 프루기페르다 9(Sf9) 세포인 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)의 제조 방법.
바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)는 VZV gE(당단백질 E)을 포함하고, 상기 VLP는 효모 Ty 단백질 및 VZV 핵산을 불포함하는 항원 제형(antigenic formulation).
제21항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 것인 항원 제형.
제22항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 바이러스, 곰팡이, 기생충, 박테리아 또는 이들의 조합에서 유래하는 것인 항원 제형.
제23항에 있어서,
상기 바이러스 단백질은 인플루엔자 바이러스, 뎅기 바이러스, 황열 바이러스, 단순 포진(Herpes simplex) 바이러스 I, 단순 포진 바이러스 II, 파라인플루엔자 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 광견병 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스, 코로나 바이러스 또는 간염 바이러스로부터 유래한 것인 항원 제형.
제22항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질이 상기 VZV-VLP의 표면에 발현되는 것인 항원 제형.
제24항에 있어서,
상기 바리셀라 조스터 바이러스(VZV)로부터 유래한 단백질은 gI (ORF67), gM (ORF50), gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 항원 제형.
제26항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 포함하는 ㄱ것인 항원 제형.
제21항에 있어서,
상기 VLP는 필수적으로 gE로 구성되는 것인 항원 제형.
제21항에 있어서,
상기 항원 제형은 보조제(adjuvant) 또는 면역 자극제(immune stimulator)를 포함하는 것인 항원 제형.
제21항에 있어서,
상기 제형은 척추동물(vertebrate)에게 경구, 진피내, 비강내, 근육내, 복강내, 정맥내 또는 피하로 투여되는 것인 항원 제형.
바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신으로, 상기 VZV-VLP는 VZV gE를 포함하고, 상기 VLP는 효모 Ty 단백질을 불포함하고 VZV 핵산을 불포함하는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제31항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 것이 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제32항에 있어서,
상기 감염체에서 유래한 추가적인 단백질은 바이러스, 곰팡이, 기생충, 박테리아 또는 이들의 조합에서 유래한 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제33항에 있어서,
상기 바이러스 단백질은 인플루엔자 바이러스, 뎅기 바이러스, 황열 바이러스, 단순 포진(Herpes simplex) 바이러스 I, 단순 포진 바이러스 II, 파라인플루엔자 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 광견병 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스, 코로나 바이러스 또는 간염 바이러스로부터 유래한 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제32항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 상기 VZV-VLP의 표면에서 발현되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제34항에 있어서,
상기 바리셀라 조스터 바이러스(VZV)로부터 유래한 단백질은 gI (ORF67), gM (ORF50), gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제36항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 추가로 포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제31항에 있어서,
상기 VLP는 필수적으로 gE로 구성되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제32항에 있어서,
상기 백신은 보조제 또는 면역 자극제와 함께 제형되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
제31항에 있어서,
상기 백신은 척추동물(vertebrate)에게 경구, 진피내, 비강내, 근육내, 복강내, 정맥내 또는 피하로 투여되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP)를 포함하는 백신.
사람 또는 동물에게 VZV-VLP를 포함하는 항원 제형 또는 백신을 투여하는 것을 포함하고, 상기 VZV-VLP는 VZV gE를 포함하고 상기 VLP는 효모 Ty 단백질 및 VZV 핵산을 불포함하는 사람 또는 동물에서 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법.
제41항에 있어서,
상기 감염은 바이러스, 곰팡이, 기생충, 박테리아 또는 이들의 조합에 의해 유발되는 것인 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법.
제41항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 것인 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법.
제43항에 있어서,
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 바이러스, 곰팡이, 기생충, 박테리아 또는 이들의 조합으로부터 유래한 것인 감염에 대한 예방 면역을 유도하는 방법.
상기 바이러스로부터 유래한 단백질은 인플루엔자 바이러스, 뎅기 바이러스, 황열 바이러스, 단순 포진 바이러스 I, 단순 포진 바이러스 II, 파라인플루엔자 바이러스, 바리셀라 조스터 바이러스, 호흡기 세포 융합 바이러스, 광견병 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스, 코로나 바이러스 또는 간염 바이러스로부터 유래한 것인 제44항에 따르는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
상기 감염체로부터 유래한 추가적인 단백질은 상기 VZV-VLP의 표면에서 발현되는 것인 제43항에 따르는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제45항에 있어서,
상기 VZV로부터 유래한 단백질은 gI (ORF67), gM (ORF50), gH, gB, 테규먼트 단백질 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹에서 선택되는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
제47항에 있어서,
상기 VZV-VLP는 감염체로부터 유래한 단백질을 하나 이상 추가로 포함하는 것인 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
상기 VLP가 필수적으로 gE로 구성되는 것인 제41항에 따르는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).
상기 VLP가 복제된 gE VZV를 포함하는 재조합 발현 시스템으로부터 유래한 것인 제41항에 따르는 바리셀라 조스터 바이러스의 바이러스 유사 입자(VZV-VLP).