KR20090129025A

KR20090129025A - Sphingosine kinase activator and skin disease treating agent containing the same

Info

Publication number: KR20090129025A
Application number: KR1020080055079A
Authority: KR
Inventors: 박병덕; 곽형섭; 정세규; 권미정
Original assignee: (주)네오팜
Priority date: 2008-06-12
Filing date: 2008-06-12
Publication date: 2009-12-16

Abstract

PURPOSE: A sphingosine activating agent and a skin therapeutic agent containing the same are provided to promote synthesis of spingosine-1-phosphate and recover injured skin function. CONSTITUTION: A therapeutic agent for treating skin scar, wrinkle, atopic dermatitis, or psoriasis contains sphingosine kinase as an active ingredient. The activating agent of sphingosine kinase contains at least one compound among compounds of chemical formulas 1 to 8. The activating agent of sphingosine suppresses cell proliferation in keratinocytes and promotes differentiation. In addition, the agent promotes cell proliferation and collagen synthesis in fibroblasts. The therapeutic agent is used in the form of toner, lotion, cream, essence, pack, powder, ointment, suspension, emulsion, spray, soap, shampoo, or gel.

Description

스핑고신키나제 활성화제 및 이를 포함하는 피부질환치료제{SPHINGOSINE KINASE ACTIVATOR AND SKIN DISEASE TREATING AGENT CONTAINING THE SAME}Sphingosine kinase activator and skin disease treatment including the same {SPHINGOSINE KINASE ACTIVATOR AND SKIN DISEASE TREATING AGENT CONTAINING THE SAME}

본 발명은 피부질환치료제로서 유효한 비천연 세라미드 화합물에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 스핑고신키나제에 의한 스핑고신-1-포스페이트의 생합성을 촉진함으로서 스핑고신-1-포스페이트가 보유하는 다양한 생리활성효과, 즉 세포 내 칼슘변화를 유도하여 피부세포에 있어서 각질형성세포의 증식 및 분화, 섬유아세포의 증식 및 콜라겐 합성을 조절함으로서 상처치유 효과와, 아토피 피부염, 건선에서의 손상된 피부기능 회복 효과와, 자외선에 의한 주름유발 및 피부자극 억제에 따른 주름개선 및 피부노화 억제 효과 등을 얻을 수 있는 특정한 스핑고신키나제 활성화제에 관한 것으로서, 피부 상처, 또는 주름, 또는 아토피 피부염, 습진, 또는 건선과 같은 피부질환의 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a non-natural ceramide compound effective as a therapeutic agent for skin diseases, and more particularly, by promoting the biosynthesis of sphingosine-1-phosphate by sphingosine kinase, various physiological activity effects possessed by sphingosine-1-phosphate, That is, by inducing intracellular calcium changes, regulating the proliferation and differentiation of keratinocytes, the proliferation of fibroblasts, and collagen synthesis in skin cells, the effects of wound healing, atopic dermatitis, repair of damaged skin function in psoriasis, and UV rays. The present invention relates to a specific sphingosine kinase activator capable of obtaining wrinkle improvement and skin aging inhibitory effect according to wrinkle induction and skin irritation, and the like, which relates to skin wounds or wrinkles, or skin diseases such as atopic dermatitis, eczema, or psoriasis. It can be usefully used as a therapeutic agent.

종래 스핑고신-1-포스페이트(S1P, sphingosine-1-phosphate)는 단순히 스핑고 지질의 대사산물 중 하나로만 알려져 있었으나, 최근의 연구는 상기한 화합물이 생리활성능력을 가지고 있어 다양한 생물학적 단계를 조절하는 것으로 보고하고 있다. 즉, 세포내적으로는 세포의 증식 및 생존을 조절하는 2차 신호전달자로서, 세 포외적으로는 G-단백질 결합 수용체(G-protein coupled receptor)의 일종인 EDG(내피세포분화유전자: endothelial differentiation gene) 수용체들(EDG-1,3,5,6,8)의 리간드로서 작용하는 것으로 보고하고 있다(Spiegel S et al., Biochem. Biophys. Acta, 1484, 107-116, 2000).Conventional sphingosine-1-phosphate (S1P, sphingosine-1-phosphate) has been known only as one of the metabolites of sphingolipids, but recent studies have shown that the compounds have bioactive capacity to control various biological stages. It is reported. In other words, EDG (endothelial differentiation gene), which is a secondary signal transmitter that controls cell proliferation and survival intracellularly, is a type of G-protein coupled receptor. ) As a ligand of the receptors (EDG-1,3,5,6,8) (Spiegel S et al., Biochem. Biophys. Acta, 1484, 107-116, 2000).

특히 세포 내에서 스핑고신-1-포스페이트는 이노시톨 1,4,5-트리포스페이트에 의한 칼슘신호전달체계와는 독립적으로 내부저장고에서 칼슘을 세포질 내로 이동시켜서 세포의 증식, 세포사의 억제 등을 유도하는 다양한 신호전달경로를 유도하며, 스핑고신키나제의 경쟁적인 저해제는 스핑고신-1-포스페이트의 생성을 막고, 선택적으로 칼슘의 이동을 저해하며, 세포 종류에 따라 다양한 자극에 의한 세포의 증식, 분화 및 생존에 영향을 주는 것으로 보고하고 있다(Spiegel S et al., J. Leukoc. Biol., 65, 341-344, 1999).In particular, sphingosine-1-phosphate in cells moves calcium into the cytoplasm in the internal reservoir independent of the calcium signaling system by inositol 1,4,5-triphosphate, which induces cell proliferation and inhibition of cell death. Induces a variety of signaling pathways, competitive inhibitors of sphingosine kinase prevent the production of sphingosine-1-phosphate, selectively inhibit the movement of calcium, depending on the type of cell proliferation, differentiation and It has been reported to affect survival (Spiegel S et al., J. Leukoc. Biol., 65, 341-344, 1999).

또한, 스핑고신-1-포스페이트는 인체 혈소판에 저장되어 있다가 상처부위 등에 방출되어 피부의 상처치료과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 보고하고 있다(Lee et al, Am J Physiol Cell Physiol, 278, C612-C618, 2000). 아울러 스핑고신키나제의 활성화제로 알려져 있는 1알파,25-디하이드록시비타민 D₃는 각질형성세포의 세포사를 억제하는 것으로 보고하고 있고(Manggau et al., J Invest Dermatol, 117, 1241-1249, 2001), 피부세포에 대한 스핑고신-1-포스페이트의 기능으로서 각질형성세포에 대해서는 세포사를 억제하고, 세포의 이동을 촉진하며, 섬유아세포에 대해서는 세포증식을 촉진하고, 세포 밖의 기질단백질 형성을 촉진하는 것에 의해 스핑고신-1-포스페이트가 피부의 상처치료에 있어서 매우 중요한 역할을 하는 것으로 보고하고 있다(Vogler et al., J Invest Dermatol, 120, 693-700, 2003).In addition, sphingosine-1-phosphate is stored in human platelets and released to wound sites, and has been reported to play an important role in wound healing of skin (Lee et al, Am J Physiol Cell Physiol, 278, C612-). C618, 2000). In addition, 1alpha, 25-dihydroxyvitamin D ₃ , known as an activator of sphingosine kinase, has been reported to inhibit cell death of keratinocytes (Manggau et al., J Invest Dermatol, 117, 1241-1249, 2001). As a function of sphingosine-1-phosphate on skin cells, it inhibits cell death for keratinocytes, promotes cell migration, promotes cell proliferation for fibroblasts, and promotes the formation of extracellular matrix proteins. It has been reported that sphingosine-1-phosphate plays a very important role in the treatment of skin wounds (Vogler et al., J Invest Dermatol, 120, 693-700, 2003).

그러나 현재까지 스핑고신키나제를 활성화하여 스핑고신-1-포스페이트의 생합성을 촉진하는 물질로서는 1알파,25-디하이드록시비타민 D₃, PMS(phorbol myristate acetate), N-formyl-methionyl-leucylphenylalane, 혈소판-유래(platelet-drived) 성장인자, 신경성장인자 등이 알려져 있으나, 현재 상업적으로 1알파,25-디하이드록시비타민 D₃만이 건선치료제로서 이용되고 있는 실정이며, 그 외의 경우에는 암을 유발하는 강한 독성물질이거나, 합성이 용이하지 않는 등 상업적으로 이용하기 어려운 단점을 갖고 있다. 다른 한편으로 스핑고신-1-포스페이트 자체를 합성하여 사용하는 방법도 있을 수 있으나, 합성이 용이하지 않고, 합성 비용이 매우 높아 경제성 측면에서도 바람직하지 못한 것으로 알려져 있다.However, to date, substances that activate sphingosine kinase to promote the biosynthesis of sphingosine-1-phosphate include 1 alpha, 25-dihydroxyvitamin D ₃ , PMS (phorbol myristate acetate), N-formyl-methionyl-leucylphenylalane, and platelets. Platelet-driven growth factors and nerve growth factors are known, but currently only 1 alpha, 25-dihydroxyvitamin D ₃ is used as a treatment for psoriasis. It is a strong toxic substance, or is difficult to commercially use, such as the synthesis is not easy. On the other hand, there may be a method of synthesizing sphingosine-1-phosphate itself, but the synthesis is not easy, and the synthesis cost is very high, so it is known to be undesirable in terms of economics.

따라서, 본 발명의 목적은 스핑고신-1-포스페이트의 생성을 촉진함으로서 스핑고신-1-포스페이트가 갖는 생리활성효과를 효과적으로 이용함으로써 피부상처, 아토피 피부염 및 습진, 건선, 주름 개선 등의 피부 치료에 효과적으로 사용될 수가 있는 스핑고신키나제의 활성화제를 제공하고자 하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to promote the production of sphingosine-1-phosphate, thereby effectively utilizing the physiological activity effect of sphingosine-1-phosphate to treat skin such as skin wound, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, wrinkle improvement, etc. It is an object of the present invention to provide an activator of sphingosine kinase that can be effectively used.

본 발명의 다른 목적은 상기한 첫 번째 목적에 따른 스핑고신키나제의 활성화제를 포함하는 피부질환 치료용 조성물을 제공하고자 하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a composition for treating skin diseases comprising an activator of sphingosine kinase according to the first object described above.

본 발명의 또 다른 목적은 상기한 스핑고신키나제의 활성화제를 유효성분으로 포함하는 피부질환 치료제를 제공하고자 하는 것이다. Still another object of the present invention is to provide a therapeutic agent for skin diseases comprising the above-mentioned activator of sphingosine kinase as an active ingredient.

본 발명의 여전히 또 다른 목적은 상기한 피부질환 치료제 제조를 위한 상기한 스핑고신키나제의 활성화제의 사용방법에 관한 것이다. Still another object of the present invention relates to a method of using the activating agent of the sphingosine kinase for the preparation of the aforementioned skin disease therapeutic agent.

본 발명은 피부상처, 아토피 피부염 및 습진, 건선, 주름 개선 및 피부노화억제와 같은 피부질환 치료에 효과적으로 사용될 수가 있는 하기의 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 스핑고신카나제의 활성화제를 제공한다.The present invention is at least one sping selected from the group consisting of compounds represented by the following formulas 1 to 8 which can be effectively used for treating skin diseases such as skin wounds, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, wrinkle improvement and skin aging inhibition It provides an activator of high shinkanase.

[화학식 1][Formula 1]

(식 중에서, R₁ 및 R₂는 각각 탄소수 0∼22의 직쇄 또는 분지형 또는 방향족 알킬기이다. 단, R₁이 탄소수 4∼22이면 R₂는 탄소수 0∼3이고, R₂가 탄소수 4∼22이면 R₁은 탄소수 0∼3이다.)(Wherein R ₁ and R ₂ are each a linear or branched or aromatic alkyl group having 0 to ₂₂ carbon atoms, provided that when R ₁ is 4 to ₂₂ carbon atoms, R ₂ is 0 to 3 carbon atoms and R ₂ is 4 to 4 carbon atoms; 22, R ₁ has 0 to 3 carbon atoms.)

[화학식 2][Formula 2]

[화학식 3][Formula 3]

[화학식 4][Formula 4]

[화학식 5][Formula 5]

[화학식 6][Formula 6]

[화학식 7][Formula 7]

[화학식 8][Formula 8]

또한 본 발명은 적어도 1종의 상기한 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 스핑고신키나제의 활성화제를 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50.0 중량%로 포함하는 피부질환 치료용 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention is a skin disease comprising at least one activating agent of sphingosine kinase selected from the group consisting of at least one compound represented by Formula 1 to 8 in an amount of 0.001 to 50.0% by weight based on the total weight of the composition A therapeutic composition is provided.

또한, 본 발명은 상기한 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 스핑고신카나제의 활성화제를 유효성분으로서 함유하는 피부상처, 아토피 피부염 및 습진, 건선, 주름 개선 치료제를 제공한다.In addition, the present invention improves skin wounds, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, wrinkles containing at least one sphingosine kinase activator selected from the group consisting of the compounds represented by the formulas (1) to (8) as an active ingredient Provide a cure.

아울러, 본 발명은 피부상처, 아토피 피부염 및 습진, 건선, 주름 개선 치료제 제조를 위한 상기한 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 스핑고신카나제의 활성화제의 사용방법을 제공한다.In addition, the present invention is the use of at least one sphingoshinkanase activator selected from the group consisting of compounds represented by the above formulas 1 to 8 for the preparation of therapeutic agents for skin wounds, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, wrinkles Provide a method.

상기한 본 발명에 있어서의 스핑고신키나제의 활성화제를 유효성분으로서 포함하는 피부질환 치료제는 피부상처치료, 아토피 피부염, 습진 및 건선 증상 등의 완화, 경감 및 치료, 주름개선을 위한 용도로 효과적으로 사용될 수 있다.The skin disease treatment agent comprising the above-mentioned activating agent of sphingosine kinase as an active ingredient can be effectively used for the treatment of skin wounds, atopic dermatitis, eczema and psoriasis symptoms, relief and treatment, and wrinkle improvement. Can be.

본 발명에 있어서의 스핑고신키나제의 활성화제를 포함하는 치료제는 피부 내 스핑고신키나제를 활성화시킴으로서, 그 결과 스핑고신-1-포스페이트의 생합성이 증가되어 스핑고신-1-포스페이트에 의한 다양한 생리활성효과를 준다.In the present invention, the therapeutic agent containing the activator of sphingosine kinase activates sphingosine kinase in the skin, and as a result, the biosynthesis of sphingosine-1-phosphate is increased and various physiological activity effects by sphingosine-1-phosphate Gives.

본 발명자들은 먼저 상기의 스핑고신키나제의 활성화제가 각질형성세포에 있 어서는 세포 증식을 억제하고 분화를 촉진하며, 섬유아세포에 있어서는 세포증식을 촉진하고 콜라겐 합성을 촉진한다는 사실을 확인함으로서 아토피 피부염 및 습진, 건선에 있어서 손상된 피부기능을 회복시키는 효과를 발휘할 수 있다.The present inventors first confirmed that the sphingosine kinase activator inhibits cell proliferation and promotes differentiation in keratinocytes, promotes cell proliferation and promotes collagen synthesis in fibroblasts. Eczema and psoriasis can be effective in restoring damaged skin function.

본 발명에 따른 피부질환치료제에 있어서 스핑고신키나제 활성화제의 함량은 특별히 한정되어 있지는 않으나, 바람직하게는 치료제 총 중량에 대하여 0.001 내지 50.0 중량%로 포함되는 것이 좋고, 보다 바람직하게는 0.01 내지 30.0 중량%로 포함하는 것이 좋다. 상기 함량 이 외의 경우에는 효과가 미미하거나 제조단가가 매우 높아져 바람직하지 않을 수 있다.In the skin disease treatment agent according to the present invention, the content of the sphingosine kinase activator is not particularly limited, but is preferably included in 0.001 to 50.0% by weight relative to the total weight of the therapeutic agent, more preferably 0.01 to 30.0 weight It is good to include in%. If the content is other than the above, the effect may be insignificant or the manufacturing cost may be very high.

본 발명의 스핑고신키나제의 활성화제를 유효성분으로서 함유하는 치료제는 피부에 적용되는 모든 제형에서 적용될 수 있으며, 보다 구체적으로는 토너, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파우더, 연고, 서스펜션, 에멀젼, 스프레이, 미용액, 비누, 샴푸, 피부접착용 패치, 겔 등으로 제조될 수 있다. 또한, 상기의 스핑고신키나제의 활성화제는 화장, 세제 및 섬유 등 피부에 접촉하는 피부접촉물질로서도 제조될 수 있다.Therapeutic agents containing the active agent of the sphingosine kinase of the present invention as an active ingredient may be applied in all formulations applied to the skin, and more specifically, toners, lotions, creams, essences, packs, powders, ointments, suspensions, emulsions, It may be prepared as a spray, cosmetic liquid, soap, shampoo, skin patch, gel and the like. In addition, the activator of the sphingosine kinase may also be prepared as a skin contact material in contact with the skin, such as makeup, detergents and fibers.

본 발명에 있어서 상기한 스핑고신키나제의 활성화제는 스핑고신-1-포스페이트의 생성을 촉진함으로써 스핑고신-1-포스페이트가 갖는 다양한 생리활성효과를 효과적으로 이용 가능하도록 한다. 구체적으로는 본 발명에 따른 스핑고신카나제의 활성화제를 유효성분으로 포함하는 피부질환치료제는 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하여 상처치료, 아토피 피부염 및 습진, 건선에서 손상된 피부기능을 회복시켜 주며, 눈가 주름을 개선시켜 줌으로서 주름개선 및 피부노화를 억제하는 효과를 줌으로써 다양한 피부 질환 경감제제에 사용할 수 있다.In the present invention, the activator of the sphingosine kinase facilitates the production of sphingosine-1-phosphate, thereby making it possible to effectively utilize various physiological activity effects of the sphingosine-1-phosphate. Specifically, a skin disease treatment agent comprising an activator of sphingosine canase according to the present invention as an active ingredient promotes collagen synthesis of fibroblasts to restore damaged skin function in wound treatment, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, It can be used in various skin disease alleviating agents by improving the wrinkles around the eyes and thereby reducing wrinkles and inhibiting skin aging.

이하 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 하나, 이는 본 발명을 예증하기 위한 것일 뿐 본 발명의 영역을 한정하기 위한 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following Examples, which are intended to illustrate the present invention but are not intended to limit the scope of the present invention.

이하의 실시예에서 사용한 스핑고신키나제의 활성화제는 상기한 화학식 1 내지 8 중에서 R₁=H₃, R₂=Bn인 예로서, 2-벤질-N-(1,3-디히드록시이소프로필)-3-옥소-부탄아미드(이하 'K1BnPC-5'로 약칭함)와 2-벤질-N- (1,2-사이크로이소프로판디올포스페이트)-3-옥소-부탄아미드 (이하 'K1BnPC-5p'로 약칭함), 또는, R₁=R₂=Ph인 예로서, N-(1,3 디히드록시이소프로필)-3-옥소-2,4-디페닐부탄아미드 (이하 'KPhPC-5'로 약칭함)와 N-(1,3-사이크로이소프로판디올포스페이트)-3-옥소-2,4-디페닐부탄아미드 (이하 'KPhPC-5p'로 약칭함), 또는 R₁=H₃, R₂=H₂인 예로서, N-(1,3 디히드록시이소프로필)-3-옥소-부탄아미드 (이하 'K100PC-5'로 약칭함)와 N-(1,3 사이크로이소프로판디올포스페이트)-3-옥소-부탄아미드 (이하 'K100PC-5p'로 약칭함)를 통해 수행하였다.The activator of the sphingosine kinase used in the following examples is R ₁ = H ₃ , R ₂ = Bn in the above Chemical Formulas 1 to 8, for example, 2-benzyl-N- (1,3-dihydroxyisopropyl ) -3-oxo-butanamide (abbreviated as 'K1BnPC-5') and 2-benzyl-N- (1,2-cycloisopropanediolphosphate) -3-oxo-butanamide (hereinafter referred to as 'K1BnPC-' 5p '), or as an example where R ₁ = R ₂ = Ph, N- (1,3 dihydroxyisopropyl) -3-oxo-2,4-diphenylbutanamide (hereinafter' KPhPC- Abbreviated 5 ′) and N- (1,3-cycloisopropanediolphosphate) -3-oxo-2,4-diphenylbutanamide (hereinafter abbreviated as 'KPhPC-5p'), or R ₁ = As an example where H ₃ , R ₂ = H ₂ , N- (1,3 dihydroxyisopropyl) -3-oxo-butanamide (hereinafter abbreviated as 'K100PC-5') and N- (1,3 cycl Lysopropanediolphosphate) -3-oxo-butanamide (hereinafter abbreviated as 'K100PC-5p').

본 실시예에서 상기의 물질 각각에 대한 스핑고신키나제 활성 능력, 섬유아세포에 대한 콜라겐 합성 능력, 각질형성세포에 대한 분화 능력을 평가함으로서 본 발명에서 목적으로 하는 상처치료, 아토피 피부염 및 습진, 건선 등에서 있어서 피부장벽회복효과를 통한 치료 효과를 확인하였다.In the present embodiment, by evaluating the sphingosine kinase activity ability, collagen synthesis ability to fibroblasts, and differentiation capacity to keratinocytes for each of the above substances, in wound treatment, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, etc. In this regard, the therapeutic effect through the skin barrier recovery effect was confirmed.

실시예 1∼3에서는 K1BnPC-5, K1BnPC-5p, KPhPC-5, KPhPC-5p, K100PC-5, K100PC-5p에 대한 in vitro 평가를 실시하였다. 본 실시예에서 상기의 물질 각각에 대한 스핑고신키나제 (SPHK)의 발현 능력 및 스핑고신-1-포스페이트 생성에 관여하는 스핑고신-1-포스페이트 포스파테이즈 (SPP)와 스핑고신-1-포스페이트 라이에이즈 (SPL)의 발현 능력을 확인하였다. 또한 스핑고신-1-포스페이트의 수용체인 EDG 수용체의 발현 능력을 평가함으로써, 본 화합물이 스핑고신키나제 활성화 및 스핑고신-1-포스페이트 수용체를 증가시킴으로써 스핑고신-1-포스페이트가 생리적으로 갖는 상처치료, 주름 치료 및 피부노화방지 등에 효과가 있을 것으로 사료된다. 또한 각질형성세포에 대한 분화 능력과 섬유아 세포의 콜라겐 합성능력을 평가함으로써 본 발명에서 목적으로 하는 상처치료, 아토피 피부염 및 습진, 건선 등에서 있어서 피부장벽회복효과를 통한 치료 효과 등을 확인하였다.In Examples 1 to 3, in vitro evaluation of K1BnPC-5, K1BnPC-5p, KPhPC-5, KPhPC-5p, K100PC-5, and K100PC-5p was performed. In this example, sphingosine-1-phosphate phosphate (SPP) and sphingosine-1-phosphate lysine, which are involved in the expression of sphingosine kinase (SPHK) and sphingosine-1-phosphate production for each of the above substances. The ability to express HIV (SPL) was confirmed. In addition, by evaluating the expression ability of the EDG receptor, which is a receptor of sphingosine-1-phosphate, the present invention increases the sphingosine kinase activation and the sphingosine-1-phosphate receptor, thereby treating physiological wounds of sphingosine-1-phosphate, It is thought to be effective in treating wrinkles and preventing skin aging. In addition, by evaluating the differentiation ability of keratinocytes and collagen synthesis ability of fibroblasts, the therapeutic effect through the skin barrier recovery effect in the wound treatment, atopic dermatitis and eczema, psoriasis, etc., which is the object of the present invention was confirmed.

실시예 1: 세포 내 스핑고신키나제 활성 측정Example 1 Intracellular Sphingosine Kinase Activity Measurement

먼저 상기의 물질이 스핑고신-1-포스페이트를 생성하는 주요 효소인 스핑고신키나제 1, 2 (SPHK 1, SPHK 2)의 발현량을 확인하였다.First, the expression levels of sphingosine kinase 1 and 2 (SPHK 1 and SPHK 2), which are the main enzymes that produce sphingosine-1-phosphate, were confirmed.

인간 케라티노사이트(Human keratinocyte, HaCaT)를 10% 우태아 혈청을 포함하는 DMEM을 이용하여, 37℃, 5％ CO₂의 환경 하에 인큐배이션하였다. 6 웰 플레이트에 1*10⁵ cells/well로 각 웰에 넣은 후 24시간 동안 배양하고, 화합물을 처리하 기 전에 무혈청 배지로 옮겨준 뒤 24시간 이후에 합성물질을 첨가하여 24시간동안 반응시켰다. 합성물질 무처리군을 대조군으로 사용하였다. 상기와 같이 접촉시킨 후, 상층액을 버리고, 세포를 PBS(Phosphate Buffer Saline)로 세척하였다. 반응이 끝난 후 세포를 튜브에 모았다. RNA를 추출하기 위해 트라이졸 시약을 1ml 첨가하였다. 상온에서 15초 반응시킨 후 클로로포름(chloroform)을 200ul 첨가하였다. 13,000 rpm에서 10분간 원심분리하였다. 상층액을 다른 튜브에 옮겨 담은 후 이소프로판올(isopropanol) 500ul를 첨가한 후 13,000 rpm에서 10분간 원심 분리하였다. 침전된 RNA를 70% 에탄올 이용하여 세척을 수행하였다. 2번 연속 수행 후 3차 증류수를 이용하여 RNA를 용해시켰다. 희석한 RNA를 260과 280㎚ 사이에서 분석하여 정량하였다.Human keratinocytes (Human keratinocyte, HaCaT) were incubated in DMEM containing 10% fetal bovine serum under an environment of 37 ° C., 5% CO ₂ . Each well was placed in each well at 1 * 10 ⁵ cells / well in a 6-well plate and incubated for 24 hours.The compound was transferred to serum-free medium before the compound was treated and reacted for 24 hours with the addition of a compound after 24 hours. . The synthetic untreated group was used as a control. After contacting as above, the supernatant was discarded and the cells were washed with PBS (Phosphate Buffer Saline). After the reaction, cells were collected in a tube. 1 ml of trizol reagent was added to extract RNA. After 15 seconds of reaction at room temperature, 200ul of chloroform was added. It was centrifuged for 10 minutes at 13,000 rpm. After transferring the supernatant to another tube, 500ul of isopropanol was added, and then centrifuged at 13,000 rpm for 10 minutes. The precipitated RNA was washed with 70% ethanol. After two consecutive runs, RNA was dissolved using third distilled water. Diluted RNA was quantified by analyzing between 260 and 280 nm.

이렇게 얻은 RNA를 RT-PCR 과정을 통해 cDNA를 얻었다. RT-PCR을 하기 위해 MgCl₂ 2ul, RT buffer 1ul, dNTP mix1 ul, Rnase inhibitor 0.25ul, RTase 0.5ul, 올리고 dT 0.5ul, 증류수 3.75ul, RNA 2ug을 튜브에 넣은 후 반응시겼다. RT-PCR 반응 조건은 45℃에서 1시간, 95℃에서 5분간 수행하였다. 이렇게 얻어진 각각의 cDNA에 GAPDH, SPHK 1 및 SPHK 2 프라이머를 이용하여 실시간 PCR을 수행하였다. 사용한 프라이머는 하기의 표 1과 같다.Thus obtained RNA was obtained cDNA through RT-PCR process. For RT-PCR, 2ul of MgCl ₂ , RTulul 1ul, dNTP mix1ul, Rnase inhibitor 0.25ul, RTase 0.5ul, oligo dT 0.5ul, distilled water 3.75ul, RNA 2ug was added to the tube and reacted. RT-PCR reaction conditions were carried out for 1 hour at 45 ℃, 5 minutes at 95 ℃. Each cDNA thus obtained was subjected to real time PCR using GAPDH, SPHK 1 and SPHK 2 primers. Primers used are shown in Table 1 below.

[표 1]TABLE 1

센스sense 안티센스Antisense GAPDHGAPDH 5`- TGAGCTGAACGGGAAG -3`5`- TGAGCTGAACGGGAAG -3` 5`- CTGTAGCCAAATTCGTTGT -3`5`- CTGTAGCCAAATTCGTTGT -3` SPHK 1SPHK 1 5`- GTTCTCTGCTTCCCAGTTGC -3`5`- GTTCTCTGCTTCCCAGTTGC -3` 5`- AGAGGGGATGCTTGAGGTTT -3`5`- AGAGGGGATGCTTGAGGTTT -3` SPHK 2SPHK 2 5`- TGGCTGCTAGAGTTGTGGTG -3`5`- TGGCTGCTAGAGTTGTGGTG -3` 5`- CCAGCCAGTACATTCCAGGT -3`5`- CCAGCCAGTACATTCCAGGT -3` SPP SPP 5`- TATTGCGGATCCTCATAGGG -3`5`- TATTGCGGATCCTCATAGGG -3` 5`- TGTGATGGAGAAACCAACCA -3`5`- TGTGATGGAGAAACCAACCA -3` SPL SPL 5`- GAAAGAGCACCCGTAGCAAG -3`5`- GAAAGAGCACCCGTAGCAAG -3` 5`- CCTGTGCTGCTCCCTTTTAG -3`5`- CCTGTGCTGCTCCCTTTTAG -3` CollagenCollagen 5`- GGCGGCCAGGGCTCCGACCC -3`5`- GGCGGCCAGGGCTCCGACCC -3` 5`- AATTCCTGGTCTGGGGCACC -3`5`- AATTCCTGGTCTGGGGCACC -3`

Sybergreen 5 ul, Primer sense(10uM) 1ul, Primer anti-sense(10uM) 1ul, cDNA 1ul, 증류수 2ul를 넣은 후 반응시켰다.5 ul of Sybergreen, 1ul of Primer sense (10uM), 1ul of Primer anti-sense (10uM), 1ul of cDNA, 2ul of distilled water and reacted.

이 결과로 얻은 결과물을 프로그램을 이용 분석하였다. 얻어진 결과를 도 1에 나타내며, 이러한 결과로부터 본 합성물질은 세포내에서 S1P를 증가시키는 효소인 스핑고신키나제의 활성을 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.The results obtained as a result were analyzed using the program. The obtained results are shown in FIG. 1, and from these results, it was confirmed that the synthetic material promotes the activity of sphingosine kinase, an enzyme that increases S1P in cells.

실시예 2: 세포 내 스핑고신-1-포스페이트 포스파테이즈 및 스핑고신-1-포스페이트 라이에이즈에 대한 활성 측정Example 2: Determination of activity against intracellular sphingosine-1-phosphate phosphatase and sphingosine-1-phosphate lyase

다음으로 상기한 화합물이 스핑고신-1-포스페이트의 분해와 관련된 효소의 활성 여부를 확인하였다. 실험은 실시예 1과 동일한 정차 및 방법으로 수행하였다. 그 결과, 스핑고신-1-포스페이트를 분해하여 스핑고신-1-포스페이트의 기질이 되는 스핑고신으로 분해하는 스핑고신-1-포스페이트 포스파테이즈 (SPP)의 경우 높은 활성을 보이는 반면, 스핑고신-1-포스페이트를 생체내에서 분해시켜 버리는 스핑고신-1-포스페이트 라이에이즈 (SPL)의 활성은 거의 증가시키지 않은 것으로 확인되었으며, 결과를 도 2에 나타낸다.Next, the above compound was confirmed whether the activity of the enzyme associated with the degradation of sphingosine-1-phosphate. The experiment was carried out in the same manner and in the same manner as in Example 1. As a result, spingosine-1-phosphate phosphate (SPP), which degrades sphingosine-1-phosphate to sphingosine, which is a substrate of sphingosine-1-phosphate, exhibits high activity, while sphingosine- The activity of sphingosine-1-phosphate lyase (SPL), which degrades 1-phosphate in vivo, was found to hardly increase, and the results are shown in FIG. 2.

실시예 3: 세포 내 스핑고신-1-포스페이트 수용체의 발현 측정Example 3: Measurement of expression of sphingosine-1-phosphate receptors in cells

스핑고신-1-포스페이트 수용체로 알려진 EDG 수용체는 현재 5가지로 알려져 있고, 이는 각각 S1P 1 (Edg 1), S1P 2 (Edg 5), S1P 3 (Edg 3), S1P 4 (Edg 6), S1P 5 (Edg 8)이다. 따라서 본 화합물이 스핑고신-1-포스페이트 수용체의 발현에 영향을 미치는지 확인하기 위해 각각의 수용체의 발현 정도를 측정하였다. 실험은 실시예 1과 동일한 절차 및 방법으로 수행하였다. 결과적으로 S1P 1, S1P 2, S1P 3는 거의 모든 화합물에서 증가되는 반면, S1P 4, S1P 5는 증가되지 않는 것을 확인하였으며 그 결과를 도 3에 나타낸다.There are currently five known EDG receptors known as sphingosine-1-phosphate receptors, which are S1P 1 (Edg 1), S1P 2 (Edg 5), S1P 3 (Edg 3), S1P 4 (Edg 6), and S1P, respectively. 5 (Edg 8). Therefore, the expression level of each receptor was measured to determine whether the present compound affects the expression of sphingosine-1-phosphate receptor. The experiment was performed by the same procedure and method as in Example 1. As a result, it was confirmed that S1P 1, S1P 2 and S1P 3 were increased in almost all compounds, while S1P 4 and S1P 5 were not increased, and the results are shown in FIG. 3.

실시예 4: 섬유아세포에 대한 콜라겐 발현 측정Example 4: Measurement of Collagen Expression on Fibroblasts

섬유아세포를 이용하여 본 발명에 있어서의 스핑고신키나제 활성화제가 콜라겐 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 본 실험에서는 섬유아세포의 증식을 증가시키지 않는 KPhPC-5, KPhPC-5p는 제외하였다. 실험은 실시예 1과 동일한 절차 및 방법에 따라 수행하였다. 결과적으로 K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5 모두에서 2∼3배 정도의 증가를 보였으며 그 결과를 도 4에 나타낸다.Fibroblasts were used to confirm the effect of the sphingosine kinase activator in the present invention on collagen expression. In this experiment, KPhPC-5 and KPhPC-5p, which do not increase fibroblast proliferation, were excluded. The experiment was carried out according to the same procedure and method as in Example 1. As a result, K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5 showed an increase of 2 to 3 times and the results are shown in FIG.

실시예 5: 섬유아세포에 대한 콜라겐 단백질 분비 측정Example 5: Determination of Collagen Protein Secretion on Fibroblasts

실시예 4를 통해 스핑고신키나제 활성화제가 콜라겐 mRNA의 발현이 증가되는 것을 확인하였고, 직접적인 콜라겐 합성에 주는 효과를 평가하였다.Example 4 confirmed that the sphingosine kinase activator increased the expression of collagen mRNA and evaluated the effect on direct collagen synthesis.

인체 적용 시 콜라겐 합성을 촉진하는 것은 상처가 났을 때 그 치료를 촉진하고, 피부 노화에 의한 주름을 개선시킬 수 있으며, 스테로이드의 대표적인 부작용인 피부 위축을 억제할 수 있다는 점에서 다양한 영역에서 응용이 가능할 것으로 기대되었다.Promoting collagen synthesis in the human body can be applied in various areas in that it can promote the treatment of wounds, improve wrinkles caused by skin aging, and suppress skin atrophy, which is a typical side effect of steroids. Was expected to.

K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5p를 각각 10mM의 농도가 되도록 DMSO에 용해시켜 스톡(stock)을 제조하였으며, 최종 10uM의 농도가 되도록 DMEM 배지에 희석하여 사용하였다. 시료 처리 전 혈청이 없는 배지에 24시간 배양 한 후, 시료를 처리하였다. 24시간 후에 상등액을 이용하여 콜라겐 합성량을 분석하였다. 콜라겐 합성량 측정은 PICP(procollagen type I C-peptide) 키트를 사용하여 새로 합성된 콜라겐을 분석하였다. 하기의 표 2에 나타낸 바와 같이 콜라겐 측정 키트에 포함된 표준용액을 샘플 희석한 후 450㎚에서 흡광도를 측정하여 표준 농도 곡선을 작성하였다.K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5p were dissolved in DMSO to a concentration of 10 mM, respectively, to prepare a stock, and diluted in DMEM medium to a final concentration of 10 uM was used. After the sample was incubated for 24 hours in a serum-free medium, the sample was treated. After 24 hours, the amount of collagen synthesis was analyzed using the supernatant. Collagen synthesis amount measurement was analyzed for newly synthesized collagen using a PICP (procollagen type I C-peptide) kit. As shown in Table 2 below, after diluting the sample solution included in the collagen measurement kit, absorbance was measured at 450 nm to prepare a standard concentration curve.

[표 2] TABLE 2

표준 농도 곡선 작성을 위한 표준용액과 샘플희석의 비율Ratio of standard solution and sample dilution to prepare standard concentration curve

최종농도 (ng/㎖)Final concentration (ng / ml) 00 1010 2020 4040 8080 160160 320320 640640 샘플희석Sample dilution 400㎕400 μl 393.75㎕393.75 μl 387.5㎕387.5 μl 375㎕375 μl 350㎕350 μl 300㎕300 μl 200㎕200 μl -- 표준액 (640ng/㎖)Standard solution (640ng / ml) -- 6.25㎕6.25 μl 12.5㎕12.5 μl 25㎕25 μl 50㎕50 μl 100㎕100 μl 200㎕200 μl 400㎕400 μl

1차 콜라겐 항체가 균일하게 도포된 항체 코팅 마이크로역가-플레이트( antibody Coated Microtiter-plate)에 항체-POD 컨쥬게이트 용액(antibody-POD conjugate solution) 100㎕과 채취된 세포 상등액을 넣고 3시간 동안 37℃로 배양 하여 항원 항체 반응을 유도하였다. 이후 세척, 발색반응을 시켰다. 반응색은 노란색을 띄며 반응의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다. 노란색을 띈 96 웰 플레이트를 마이크로역가 플레이트 판독기(Microtiter plate reader)를 이용하여 450㎚에서 측정하였다.100 μl of antibody-POD conjugate solution and the collected cell supernatant were added to an antibody coated microtiter-plate coated with a uniform collagen antibody. Cultured with to induce the antigen antibody response. After washing, color reaction was performed. The reaction color was yellow and yellow was different according to the reaction. Yellowish 96 well plates were measured at 450 nm using a Microtiter plate reader.

섬유아세포에 대한 콜라겐 합성량을 평가한 결과, 하기의 표 4에 나타낸 바와 같이 대조 무처리와 비교하여 K1BnPC-5에서 약 1.7배, K1BnPC-5p에서 약 2.4배, K100PC-5에서 약 3.0배, K100PC-5p에서 약 2.1배 정도의 콜라겐 합성량을 증가시킴을 확인하였다.As a result of evaluating the amount of collagen synthesis for fibroblasts, as shown in Table 4, it was about 1.7-fold in K1BnPC-5, about 2.4-fold in K1BnPC-5p, about 3.0-fold in K100PC-5, as compared to the control-free treatment. It was confirmed that the amount of collagen synthesis increased by about 2.1 times in K100PC-5p.

따라서, 하기의 표 3에 나타낸 바와 같은 결과는 상기의 시료 물질을 인체 적용 시 콜라겐 합성을 증가시켜 상처 치료, 주름 개선 및 스테로이드 부작용 감소에 유용한 효과를 줄 수 있음을 암시하는 것으로 해석되었다.Therefore, the results as shown in Table 3 below were interpreted to suggest that the application of the sample material to increase the collagen synthesis in the human body can have a useful effect in wound healing, wrinkle improvement and steroid side effects.

[표 3] 섬유아세포에서 생성된 PICP의 퍼센트Table 3 Percentage of PICP Produced in Fibroblasts

농도(uM)Concentration (uM) 처리 시료Processed sample 대조 무처리Contrast no treatment K1BnPC-5K1BnPC-5 K1BnPC-5pK1BnPC-5p K100PC-5K100PC-5 K100PC-5pK100PC-5p 0.00.0 100100 10.010.0 170170 240240 300300 210210

실시예 6: 각질형성세포의 분화유도 효과Example 6 Induction of Differentiation of Keratinocytes

각질형성세포를 이용하여 본 발명에 있어서의 스핑고신키나제의 활성화제가 세포증식억제효과 및 분화에 미치는 효과를 평가하였다.Keratinocytes were used to evaluate the effect of sphingosine kinase activator on cell proliferation inhibitory effect and differentiation in the present invention.

각질형성세포는 피부의 최외각층을 형성하여 피부의 보습 및 보호기능에 매 우 중요한 역할을 하는 세포로서 과도한 증식은 억제되고, 세포사가 억제되며, 분화를 촉진하는 것이 바람직하며, 과도한 증식은 피부각질층을 비정상적으로 비대하게 하여 피부가 거칠어지고 두꺼워지는 원인이 되고, 비정상적인 분화로 인해 정상적인 피부장벽기능을 수행할 수 없게 되므로 피부건조증, 아토피 피부염, 건선 등과 같은 여러 가지 문제를 야기할 가능성을 높이게 된다.Keratinocytes form the outermost layer of the skin and play a very important role in moisturizing and protective function of the skin. Excessive proliferation is suppressed, cell death is suppressed, and it is preferable to promote differentiation. This causes the skin to become rough and thick due to abnormally enlarged, and can not perform normal skin barrier function due to abnormal differentiation, thereby increasing the likelihood of causing various problems such as dry skin, atopic dermatitis, psoriasis.

따라서 각질형성세포에 대한 분화에 주는 영향을 평가하기 위해서 K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5p에 대해 각각 10mM의 농도가 되도록 DMSO에 용해시켜 스톡(stock)을 제조하였으며, 최종 10uM의 농도가 되도록 DMEM 배지에 희석하여 사용하였다. 웨스턴 블롯팅(Western blotting)법으로 평가하였다. 분화마커로는 각질형성세포의 분화마커인 인볼루크린과 로리크린을 측정하였다. 시료 처리 후 48시간 지난 후에, 배양액을 버리고 세포를 PBS로 세척한 후 세포를 필터하여 수거하였다. 이를 재세척한 후 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 세포를 용해액으로 용해시킨 후 12,000rpm에서 10분간 원심 분리하여 세포막 성분 등을 제거하였다. 단백질 농도는 브래드포드(Bradford)법을 이용하여 정량하였다. 정량된 단백질을 7.5% 미니겔(mini gel) SDS-PAGE(Polyacrylamide Gel Electrophoresis)로 분리 한 후, PVDF막(Polyvinylidene fluoride membrane)에 100V, 1시간 트랜스퍼(transfer)하여 겔상의 단백질을 트랜스퍼막(transfer membrane)으로 블롯팅(blotting)하였다. Ponceau S 용액으로 트랜스(transfer)한 막(membrane)을 염색하여, 트랜스퍼(transfer)를 확인하였다. 5% 탈지 건조 밀크(nonfat dried milk)가 함유된 TTBS(TBS+0.1% Tween 20) 용액을 이용하여 막(membrane)을 블록킹(blocking)하였 다. 각질형성세포의 분화마커인 인볼루크린의 발현 양을 검토하기 위해 제1 항체 인볼루크린(Primary antibody Involucrin: Santacruze Co.)은 약 1/200에서 1/400으로 희석하였으며, 로리크린(Loricrin: Covance Co.)은 약 1/500으로 희석하여 사용하였고, 반응은 4℃에서 밤새 진행하였다. 제2 항체(Secondary antibody)는 서양고추냉이 퍼옥시다제(Horseradish Peroxidase: HRP)가 결합된 항-마우스(anti-mouse) IgG를 1:2000으로 희석하여 이용하였으며, 반응은 상온에서 1시간 진행하여 제1 항체에 결합시켰다. 막(membrane)을 TTBS로 3회 세정하여 ECL 기질(Amersham Co.)과 1∼3분간 반응시킨 후 X-선 필름에 감광시켰다.Therefore, to evaluate the effect on the differentiation of keratinocytes, K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, and K100PC-5p were dissolved in DMSO so as to have a concentration of 10 mM, respectively, and a stock was prepared. Diluted in DMEM medium to a concentration of 10 uM was used. It was evaluated by Western blotting method. Differentiation markers were measured for the differentiation markers of keratinocytes, Involukrin and LoriClean. After 48 hours after sample treatment, the cultures were discarded, the cells were washed with PBS, and the cells were collected by filtration. It was rewashed and centrifuged to remove supernatant. The cells were lysed with lysate and centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes to remove cell membrane components. Protein concentration was quantified using the Bradford method. The quantified protein was separated by 7.5% mini gel SDS-PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis), and then transferred to a PVDF membrane (Polyvinylidene fluoride membrane) at 100 V for 1 hour to transfer the gel protein. membrane) and blotting. Transfer was confirmed by staining a membrane transferred with Ponceau S solution. The membrane was blocked using TTBS (TBS + 0.1% Tween 20) solution containing 5% nonfat dried milk. Primary antibody Involucrin (Santacruze Co.) was diluted from about 1/200 to 1/400 in order to examine the expression level of keratinocyte differentiation marker Involukrin. Covance Co.) was used diluted to about 1/500, the reaction proceeded overnight at 4 ℃. Second antibody was used by diluting anti-mouse IgG conjugated with horseradish peroxidase (HRP) to 1: 2000, and the reaction proceeded at room temperature for 1 hour. Bound to the first antibody. The membrane was washed three times with TTBS, reacted with ECL substrate (Amersham Co.) for 1 to 3 minutes, and then exposed to X-ray film.

각질형성세포의 분화에 주는 효과를 평가한 결과, K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, K100PC-5p 모두에서 분화마커가 발현되는 것을 확인할 수 있었으며, 인볼루크린에서 보다 좋은 효과가 발현됨을 확인하였고, 그 결과를 도 5에 나타낸다. 따라서 상기의 화합물들이 각질형성세포에 대한 분화 효과가 있음을 확인하였다. 이러한 분화마커가 대조구와 비교하여 높게 발현됨을 확인함으로서 본 발명에 따른 화합물이 각질형성세포의 분화를 촉진하여 결과적으로 피부장벽기능을 신속히 회복시켜 줄 수 있다는 사실이 규명되었다. As a result of evaluating the effect on the differentiation of keratinocytes, it was confirmed that differentiation markers were expressed in K1BnPC-5, K1BnPC-5p, K100PC-5, and K100PC-5p, and that better effect was expressed in involuclin. It confirmed, and the result is shown in FIG. Therefore, it was confirmed that the above compounds have differentiation effects on keratinocytes. By confirming that the differentiation marker is expressed higher than the control, it was found that the compound according to the present invention promotes the differentiation of keratinocytes and consequently restores the skin barrier function.

도 1은 본 발명에 있어서의 스핑고신키나제-1, 스핑고신키나제-2 활성에 대한 그래프도이다.1 is a graph showing sphingosine kinase-1 and sphingosine kinase-2 activity in the present invention.

도 2는 본 발명에 있어서의 스핑고신-1-포스페이트 포스파테이즈 (SPP)와 스핑고신-1-포스페이트 라이에이즈 (SPL) 활성에 대한 그래프도이다.2 is a graph showing sphingosine-1-phosphate phosphatase (SPP) and sphingosine-1-phosphate lyase (SPL) activity in the present invention.

도 3은 각각의 스핑고신-1-포스페이트 수용체의 발현에 대한 그래프도이다.3 is a graphical representation of the expression of each sphingosine-1-phosphate receptor.

도 4는 섬유아세포에서 콜라겐 발현에 대한 그래프도이다.4 is a graphical representation of collagen expression in fibroblasts.

도 5는 스핑고신키나제의 활성화제가 각질형성세포의 분화에 미치는 영향을 평가한 결과를 나타내는 폴리아크릴 아미드 겔 전기영동 사진도이다.5 is a polyacrylamide gel electrophoresis photograph showing the results of evaluating the effect of sphingosine kinase activator on the differentiation of keratinocytes.

Claims

스핑고신키나제의 활성화제로서의 하기의 화학식 1 내지 8로 표시되는 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 화합물을 유효 성분으로 하는 피부 상처 치료, 또는 주름 치료, 또는 아토피 피부염, 또는 습진, 또는 건선 치료제.Skin wound treatment, or wrinkle treatment, or atopic dermatitis, eczema, or psoriasis, comprising as an active ingredient at least one compound selected from the group consisting of compounds represented by the following formulas (1) to (8) as an activator of sphingosine kinase: remedy.

[화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

(식 중에서, R₁ 및 R₂는 각각 탄소수 0∼22의 직쇄 또는 분지형 또는 방향족 알킬기이다. 단, R₁이 탄소수 4∼22이면 R₂는 탄소수 0∼3이고, R₂가 탄소수 4∼22 이면 R₁은 탄소수 0∼3이다.)(Wherein R ₁ and R ₂ are each a linear or branched or aromatic alkyl group having 0 to ₂₂ carbon atoms, provided that when R ₁ is 4 to ₂₂ carbon atoms, R ₂ is 0 to 3 carbon atoms and R ₂ is 4 to 4 carbon atoms; 22, R ₁ has 0 to 3 carbon atoms.)

[화학식 3] [Formula 3]