KR20090123720A - Bio bar-coding sensing device using silicon nanowires and method therefor - Google Patents

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KR20090123720A
KR20090123720A KR1020080049937A KR20080049937A KR20090123720A KR 20090123720 A KR20090123720 A KR 20090123720A KR 1020080049937 A KR1020080049937 A KR 1020080049937A KR 20080049937 A KR20080049937 A KR 20080049937A KR 20090123720 A KR20090123720 A KR 20090123720A
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dna
barcoding
bio
silicon nanowires
attached
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이민호
성우경
이국녕
정석원
김원효
신규식
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전자부품연구원
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    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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    • B82Y5/00Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery

Abstract

PURPOSE: An apparatus and a method for sensing bio bar-coding are provided to quickly and accurately perform analysis of bar-coding DNA isolated from gold nanoparticle. CONSTITUTION: An apparatus for sensing bio bar-coding comprises: a magnetic part which removes protein by magnetic separation of reactant; and a separation part which separates bar-coding DNA attached on gold nanoparticle. A method for producing the bio bar-coding sensing apparatus comprises: a first step of forming silicon nanowire on a substrate having thermal oxide film; a second step of depositing electrode; a third step of exposing partial electrode which exists at lower portion; a fourth step of etching partial exposed electrode to exposure the particle for silicon nanowire; a fifth step of activating the surface of the silicon nanowire; and a sixth step of attaching complementary DNA on the activated silicon nanowire.

Description

실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치 및 방법{Bio bar-coding sensing device using silicon nanowires and method therefor }Bio bar-coding sensing device using silicon nanowires and method therefor}

본 발명은 바이오 바코딩 감지 장치 및 방법에 관한 것으로, 보다 자세하게는 바코딩 DNA와 상보적으로 결합할 수 있는 상보적 DNA를 실리콘 나노와이어에 부착시키고, 실리콘 나노와이어의 우수하고 편리한 전기적 특성을 이용하여 바코딩 DNA와 상보적 DNA가 결합하여 형성된 이중가닥 DNA에 의해 생성된 전류 증감을 측정하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바코딩 감지 장치 및 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a bio-barcoding sensing device and method, and more particularly, to complementary DNA that is complementary to the barcoding DNA attached to the silicon nanowire, using the excellent and convenient electrical properties of the silicon nanowire The present invention relates to a barcoding sensing device and method using silicon nanowires to measure the current increase and decrease generated by double-stranded DNA formed by combining barcoding DNA and complementary DNA.

종래의 바코딩 감지 장치는 골드나노입자와 자성입자의 반응부, 자석, 그리고 광학 진단부로 구성되어 있다.Conventional barcoding sensing device is composed of a reaction unit, a magnet, and an optical diagnostic unit of gold nanoparticles and magnetic particles.

단일클론(monoclonal) 항체로 코팅된 자성입자와 다클론(polyclonal) 항체와 바코딩 DNA로 구성된 골드나노입자가 특이 항원 단백질과 반응하여 자성입자, 항원 단백질, 골드나노입자로 구성된 복합체를 형성한다. Magnetic nanoparticles coated with monoclonal antibodies, gold nanoparticles consisting of polyclonal antibodies and barcoding DNA react with specific antigenic proteins to form complexes consisting of magnetic particles, antigenic proteins and gold nanoparticles.

예를 들어 혈액을 이 장치에 도입했을 때, 타겟 항원 단백질만이 복합체를 형성하는데, 이 복합체를 자성으로 고정시켜 놓은 상태에서 불필요한 단백질 등을 제거한다.For example, when blood is introduced into this device, only the target antigen protein forms a complex, and the protein is removed while the complex is magnetically fixed.

자성을 제거하고 골드나노입자에 부착된 바코딩 DNA를 분리시킨 뒤 상보적 DNA를 기판에 도입한다Demagnetization is removed, barcoded DNA attached to gold nanoparticles is separated, and complementary DNA is introduced to the substrate.

결합(hybridization)이 유도되어 형성된 이중가닥 DNA에 골드입자 또는 실버입자 등을 도입하여 정량분석을 위한 준비를 한다. 정량분석은 광학적 방법으로 이루어지는데, 골드입자 또는 실버입자에 의한 특이파장에 대한 강도(intensity)로서 그 결과를 가늠한다. Incorporation of gold particles or silver particles into double-stranded DNA formed by hybridization is prepared for quantitative analysis. Quantitative analysis is performed by optical method, and the result is measured as intensity for specific wavelength by gold particles or silver particles.

종래 기술의 바코딩 감지 장치는 바코딩 DNA 감지부에서 다시 광학 시스템을 구성해야 하는 번거로움이 있으며, 광학 시스템의 추가는 추가비용의 증가로 이로 인한 상용화의 한계가 있다. 그리고 광원에서부터 강도(intensity)를 통한 정량화는 그 자체로 정확한 수치를 제공하기가 어렵다.Prior art bar code detection device has a hassle to configure the optical system again in the bar code DNA detection unit, the addition of the optical system is limited due to the increase in additional costs due to the commercialization. And quantification by intensity from the light source is difficult to give an accurate figure by itself.

또한, 기판 위에 상보적 DNA를 부착시켜야 하며, 결합(hybridization)이 형성된 뒤에 광학 시스템에 반응하는 입자를 제조하여 다시 이중가닥 DNA에 부착시키는 단계가 필요하다. 이러한 부가적인 단계를 거치면서 상당수의 DNA를 놓칠 수 있다는 문제점이 있다. In addition, complementary DNA must be attached to the substrate, and a step of preparing a particle that reacts to the optical system after the hybridization is formed and attaching it to the double-stranded DNA is required. There is a problem that a lot of DNA can be missed through these additional steps.

상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 본 발명은 상보적 DNA를 실리콘 나노와이어에 부착시키고, 실리콘 나노와이어의 우수하고 편리한 전기적 특성을 이용하여 바코딩 DNA와 상보적 DNA가 결합하여 형성된 이중가닥 DNA으로 인한 전류 증감을 측정하여, 별도의 광학적 시스템이 필요없이 DNA 단위 농도에 대한 정량화가 신속하고 정확하게 전개되는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법 및 장치을 제공함에 그 목적이 있다.The present invention devised to solve the problems of the prior art as described above is formed by attaching the complementary DNA to the silicon nanowires, using the excellent and convenient electrical properties of the silicon nanowires are formed by binding the barcode DNA and the complementary DNA It is an object of the present invention to provide a method and apparatus for detecting bio-barcoding using silicon nanowires, by measuring current increase and decrease due to double-stranded DNA, in which quantification of DNA unit concentration is rapidly and accurately developed without the need for a separate optical system.

본 발명의 상기 목적은 수용체가 부착되어 있는 자성나노입자, 수용체와 바코딩 DNA가 부착되어 있는 금나노입자 및 검출물질을 이용하는 바이오 바코딩 감지 장치에 있어서, 상기 자성나노입자, 금나노입자 및 검출물질이 반응하여 형성된 반응체를 자성분리하여 반응체 이외의 단백질을 제거하는 자성부; 상기 금나노입자에 부착되어 있는 바코딩 DNA를 분리하는 분리부; 및 상기 바코딩 DNA와 실리콘 나노와이어에 부착된 상보적 DNA의 결합으로 인한 전류 증감을 측정하는 탐지부를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치에 의해 달성된다.The above object of the present invention is a bio-barcoding sensing device using magnetic nanoparticles to which a receptor is attached, gold nanoparticles to which a receptor and barcoded DNA are attached, and a detection material, wherein the magnetic nanoparticles, gold nanoparticles, and detection are used. A magnetic part for removing a protein other than the reactant by magnetically separating a reactant formed by reacting a substance; Separation unit for separating the bar coding DNA attached to the gold nanoparticles; And it is achieved by the bio-barcoding sensing device using silicon nanowires comprising a detection unit for measuring the current increase and decrease due to the binding of the barcode DNA and the complementary DNA attached to the silicon nanowires.

또한, 본 발명의 상기 자성부, 분리부 및 탐지부는 한개의 장치 안에 형성됨이 바람직하다.In addition, the magnetic part, the separation part and the detection part of the present invention is preferably formed in one device.

또한, 본 발명의 상기 탐지부는 상기 바코딩 DNA와 상기 상보적 DNA가 결합 하여 이중가닥 DNA가 형성됨이 바람직하다.In addition, it is preferable that the detection unit of the present invention combines the barcoded DNA and the complementary DNA to form a double stranded DNA.

또한, 본 발명의 다른 목적은 바이오 바코딩 감지 장치의 제조방법에 있어서, 열산화막이 형성된 기판에 실리콘 나노와이어를 형성하는 제 1단계; 상기 실리콘 나노와이어의 전기적 컨택을 위한 전극을 증착하는 제 2단계; 상기 전극을 포함한 기판에 절연층을 증착하고 패터닝하여 하부에 존재하는 전극의 일부를 노출시키는 제 3단계; 노출된 상기 전극의 일부를 식각하여 실리콘 나노와이어 일부를 노출시키는 제 4단계; 노출된 상기 실리콘 나노와이어의 표면을 활성화시키는 제 5단계; 및 활성화된 상기 실리콘 나노와이어 표면에 상보적 DNA를 부착하는 제 6단계를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치의 제조방법에 의해 달성된다.In addition, another object of the present invention is a method for manufacturing a bio-barcoding sensing device, comprising: a first step of forming silicon nanowires on a substrate on which a thermal oxide film is formed; Depositing an electrode for electrical contact of the silicon nanowires; Depositing and patterning an insulating layer on a substrate including the electrode to expose a portion of an electrode existing below; Etching a portion of the exposed electrode to expose a portion of the silicon nanowires; A fifth step of activating the exposed surface of the silicon nanowires; And a sixth step of attaching complementary DNA to the activated silicon nanowire surface.

또한, 본 발명의 다른 목적은 수용체가 부착되어 있는 자성나노입자, 수용체와 바코딩 DNA가 부착되어 있는 금나노입자 및 검출물질을 이용하는 바이오 바코딩 감지 방법에 있어서, 상기 자성나노입자, 금나노입자 및 검출물질을 반응시켜 반응체를 형성하는 제 1단계; 상기 반응체를 자성부를 통해 자성분리하고 버퍼용액으로 반응체 이외의 단백질을 제거하는 제 2단계; 상기 금나노입자에 부착된 상기 바코딩 DNA를 분리부를 통해 분리하는 제 3단계; 및 분리된 상기 바코딩 DNA와 탐지부의 실리콘 나노와이어에 부착된 상보적 DNA가 결합하는 제 4단계를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법에 의해 달성된다.In addition, another object of the present invention in the bio-barcoding detection method using the magnetic nanoparticles to which the receptor is attached, the gold nanoparticles to which the receptor and the barcode DNA is attached and the detection material, the magnetic nanoparticles, gold nanoparticles And a first step of reacting the detection material to form a reactant; A second step of magnetically separating the reactant through a magnetic part and removing proteins other than the reactant with a buffer solution; A third step of separating the barcoding DNA attached to the gold nanoparticles through a separation unit; And a fourth step in which the separated barcoded DNA and the complementary DNA attached to the silicon nanowires of the detector are coupled to each other.

또한, 본 발명의 상기 제 3단계는 상기 반응체에 열을 가하여 상기 금나노입자에 부착되어 있는 바코딩 DNA를 변형하는 단계; 및 원심분리를 통해 상기 자성나 노입자, 금나노입자 및 검출물질을 제거하는 단계를 포함함이 바람직하다.In addition, the third step of the present invention comprises the steps of modifying the barcode DNA attached to the gold nanoparticles by applying heat to the reactant; And removing the magnetic particles, the old particles, the gold nanoparticles, and the detection material by centrifugation.

또한, 본 발명의 상기 제 4단계는 상기 바코딩 DNA와 상기 상보적 DNA가 결합하여 이중가닥 DNA가 형성됨이 바람직하다.In addition, in the fourth step of the present invention, it is preferable that double-stranded DNA is formed by combining the barcoding DNA and the complementary DNA.

또한, 본 발명의 상기 검출물질은 DNA, RNA, 항원, 항체, 합텐 및 단백질 중 어느 하나임이 바람직하다.In addition, the detection material of the present invention is preferably any one of DNA, RNA, antigen, antibody, hapten and protein.

또한, 본 발명의 상기 수용체는 DNA, RNA, 항원, 항체, 합텐 및 단백질 중 어느 하나임이 바람직하다.In addition, the receptor of the present invention is preferably any one of DNA, RNA, antigen, antibody, hapten and protein.

따라서, 본 발명의 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치 및 방법은 고감도 신뢰성이 있는 실리콘 나노와이어의 특성을 이용하여 금나노입자에서 분리된 바코딩 DNA의 분석이 신속하고 정확하게 이루어진다.Accordingly, the biobarcoding sensing device and method using the silicon nanowires of the present invention can quickly and accurately analyze barcoded DNA separated from gold nanoparticles using the characteristics of highly sensitive silicon nanowires.

또한, 부가적이고 복잡한 광학 시스템이 필요하지 않기 때문에 한개의 장치 안에서 검출물질의 전처리부터 전도성 측정까지 가능하며, 실리콘 나노와이어에 형성되는 전류 측정으로 인한 정량화가 가능하다는 현저하고도 유리한 효과가 있다. In addition, since there is no need for an additional and complicated optical system, there is a remarkable and advantageous effect that it is possible to measure the conductivity from the pretreatment of the detection material to the conductivity measurement in one device, and to quantify by measuring the current formed on the silicon nanowire.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.The terms or words used in this specification and claims are not to be construed as being limited to their ordinary or dictionary meanings, and the inventors may appropriately define the concept of terms in order to best describe their invention. It should be interpreted as meaning and concept corresponding to the technical idea of the present invention based on the principle that the present invention.

따라서, 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.Therefore, the embodiments described in the specification and the drawings shown in the drawings are only the most preferred embodiment of the present invention and do not represent all of the technical idea of the present invention, various modifications that can be replaced at the time of the present application It should be understood that there may be equivalents and variations.

이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, exemplary embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

도 1은 나노와이어를 이용한 바코딩 DNA 감지 방법이다. 도 1을 참조하면, 수용체(130)가 부착되어 있는 자성나노입자(110) 및 수용체(130)와 바코딩 DNA(140)가 부착되어있는 금나노입자(120)가 검출물질(150)과 반응하여 자성나노입자(110), 검출물질(150), 금나노입자(120)로 구성된 샌드위치 형태의 반응체(160)를 형성한다.1 is a barcoding DNA detection method using nanowires. Referring to FIG. 1, the magnetic nanoparticles 110 to which the receptor 130 is attached and the gold nanoparticles 120 to which the receptor 130 and the barcoded DNA 140 are attached react with the detection material 150. As a result, a sandwich-type reactant 160 including the magnetic nanoparticles 110, the detection material 150, and the gold nanoparticles 120 is formed.

본 발명에 따른 자성나노입자(110)는 자성재료로 구성될 수 있다. 자성재료로는 Fe2O3, Fe3O4 또는 FePt 중 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하며, 이러한 자성나노입자(110)는 수 내지 수십 ㎚의 크기인 것을 사용할 수 있다.Magnetic nanoparticles 110 according to the present invention may be composed of a magnetic material. As the magnetic material, it is preferable to use any one of Fe 2 O 3 , Fe 3 O 4, or FePt, and such magnetic nanoparticles 110 may have a size of several to several tens of nm.

자성나노입자(110) 표면에는 수용체(130)를 하나 이상 고정시킨 것을 사용하는 것이 바람직하며, 수용체(130)로는 DNA, RNA, 항원, 항체, 합텐 또는 단백질을 사용할 수 있다.It is preferable to use one or more fixing the receptor 130 on the surface of the magnetic nanoparticles 110, DNA, RNA, antigen, antibody, hapten or protein may be used as the receptor 130.

본 발명에 따른 금나노입자(120)는 표면에 검출물질(150)이 결합할 수 있는 수용체(130)가 부착되어 있고, 금나노입자(120) 표면의 대부분은 바코딩 DNA(140)가 부착되어 있다.Gold nanoparticles 120 according to the present invention is attached to the receptor 130 to the detection material 150 is coupled to the surface, the gold nanoparticles 120, most of the surface is barcoded DNA 140 is attached It is.

본 발명에 따른 검출물질(150)은 올리고뉴클레오티드 또는 단백질이 바람직하며, 보다 구체적으로는 DNA, RNA, 항원, 항체 또는 합텐을 포함한다.The detection material 150 according to the present invention is preferably an oligonucleotide or protein, more specifically DNA, RNA, antigen, antibody or hapten.

자성나노입자(110)와 금나노입자(120)의 제조가 완료되면, 자성나노입자(110), 금나노입자(120) 및 검출물질(150)을 혼합하여 반응시킨다. 검출물질(150)은 자성나노입자(110)와 금나노입자(120)가 완성된 이후에 각 입자의 용액 속에 따로 첨가해도 되고 또는 두 가지 용액을 혼합한 후 투입해도 상관없다. 혼합 후에는 검출물질(150)이 자성나노입자(110)와 금나노입자(120) 모두와 충분히 반응할 수 있는 시간 동안 반응을 진행시킨다.When the manufacturing of the magnetic nanoparticles 110 and the gold nanoparticles 120 is completed, the magnetic nanoparticles 110, the gold nanoparticles 120, and the detection material 150 are mixed and reacted. The detection material 150 may be added separately into the solution of each particle after the magnetic nanoparticles 110 and the gold nanoparticles 120 are completed, or may be added after mixing the two solutions. After mixing, the detection material 150 proceeds with the reaction for a time sufficient to react with both the magnetic nanoparticles 110 and the gold nanoparticles 120.

검출물질(150)은 자성나노입자(110)와 금나노입자(120)가 혼합되어 있는 용액에 첨가될 경우 검출물질(150)은 두 입자를 연결하는 고리역할을 하고, 자성나노입자(110), 검출물질(150), 금나노입자(120)로 구성된 샌드위치 형태의 반응체(160)가 형성된다.When the detection material 150 is added to a solution in which the magnetic nanoparticles 110 and the gold nanoparticles 120 are mixed, the detection material 150 serves as a ring connecting the two particles and the magnetic nanoparticles 110. In addition, a sandwich 160 reactant 160 including a detection material 150 and gold nanoparticles 120 is formed.

자성나노입자(110)와 금나노입자(120)의 표면에 부착된 수용체(130)는 각각 하나 이상이 존재할 수 있다. 특히 금나노입자(120) 표면에 수용체(130)가 복수개 존재하는 경우에는 하나의 금나노입자(120)에 복수개의 자성나노입자(110)가 결합하는 것이 가능하다.At least one receptor 130 attached to the surface of the magnetic nanoparticles 110 and the gold nanoparticles 120 may be present. In particular, when a plurality of receptors 130 are present on the surface of the gold nanoparticles 120, the plurality of magnetic nanoparticles 110 may be coupled to one gold nanoparticle 120.

본 발명에 따른 샌드위치 형태의 반응체(160)는 통상적인 자성분리를 이용하여 분리하고, 자석(190)으로 고정시켜 놓은 상태에서 버퍼용액 등으로 불필요한 단 백질을 제거한다.The sandwich-type reactant 160 according to the present invention is separated using a conventional magnetic separation, and removes unnecessary protein with a buffer solution in a state in which the magnet 190 is fixed.

그 다음, 금나노입자(120)에 부착된 바코딩 DNA(140)를 분리한다. 바코딩 DNA(140)를 분리하는 방법은 샌드위치 형태의 반응체(160)에 열을 가하여 금나노입자(120)에 존재하는 바코딩 DNA(140)를 변성시켜 금나노입자(120)로부터 떨어뜨리고, 원심분리를 통해 자성나노입자(110), 금나노입자(120) 및 검출물질(150)을 제거하여 바코딩 DNA(140)를 분리한다.Next, the barcode DNA 140 attached to the gold nanoparticles 120 is separated. The method of separating the barcode DNA 140 is to deform the barcode DNA 140 present in the gold nanoparticles 120 by applying heat to the reactant 160 in the form of a sandwich and drop it from the gold nanoparticles 120. By removing the magnetic nanoparticles 110, gold nanoparticles 120 and the detection material 150 through centrifugation, the barcode DNA 140 is separated.

본 발명에 따른 분리된 바코딩 DNA(140)는 실리콘 나노와이어(180)에 부착되어 있는 상보적 DNA(170)와 결합한다.The separated barcoded DNA 140 according to the present invention binds to the complementary DNA 170 attached to the silicon nanowires 180.

기본적으로 DNA는 당, 인산 및 염기가 조합되어 하나의 단위로 된 뉴클레오티드들의 결합에 의한 이중나선구조를 가지고 있다. 이러한 DNA는 반응온도를 비등점 근처까지 가열하거나 pH 3 이하 또는 10 이상으로 만들어 주면 이중나선구조의 수소결합이 끊어지면서 단일가닥 DNA(single strand DNA, ssDNA) 구조로 만들어지며, 다시 주변 조건을 원상태로 복원시킬 시에는 상보적 배열을 갖는 DNA 간에 가역적 반응이 발생된다.Basically, DNA has a double helix structure by combining nucleotides of one unit by combining sugar, phosphoric acid and base. When the DNA is heated to the boiling point near the boiling point or made below pH 3 or above 10, the double-stranded hydrogen bonds are broken to form single stranded DNA (ssDNA) structure. Upon reconstruction, reversible reactions occur between DNAs with complementary sequences.

따라서 DNA는 매우 안정한 물질로서 감지 장치의 고정화 및 결합재료로서 적당한 물질이다. 또한, 이러한 DNA의 가역적 상보적 특이반응과 DNA는 안정성 및 나노수준에서 제어가 가능하다는 장점이 있다.Therefore, DNA is a very stable material and is suitable as an immobilization and binding material of a sensing device. In addition, the reversible complementary specific reaction of such DNA and DNA has the advantage that can be controlled at the stability and nano level.

본 발명에 따른 바코딩 DNA(140)와 실리콘 나노와이어(180)에 부착되어 있는 상보적 DNA(170)가 결합(hybridization)하면서 형성되는 이중가닥 DNA(double strand DNA, dsDNA)가 가지고 있는 전하에 의해 전도성 전류가 유도되고 이로 인한 전류 증감을 측정한다.On the charges of the double-stranded DNA (dsDNA) formed by the hybridization of the complementary DNA 170 attached to the barcode DNA 140 and the silicon nanowires 180 according to the present invention. By this conduction current is induced and the current increase and decrease is measured.

실리콘 나노와이어(silicon nanowire, SiNW)는 기존의 감지 장치들과는 비교할 수 없을 정도의 높은 효율과 탐지능력을 지닌다. 그 이유는 실리콘 나노와이어가 부피 대비 표면적 비율이 높고, 전기적 특성을 조절할 수 있으며, 바이오 분야에도 응용 가능한 특성을 가지고있기 때문이다.Silicon nanowires (SiNWs) are more efficient and detectable than conventional sensing devices. The reason is that silicon nanowires have a high surface area to volume ratio, can control electrical properties, and have properties that can be applied to biotechnology.

실리콘 나노와이어를 DNA 감지 장치로 이용할 때의 메커니즘은 전하 밀도 변화에 의한 것이다. 즉, 실리콘 나노와이어가 DNA와 결합(hybridization)할 때, 실리콘 나노와이어 표면에서 전기장이 변하고 이것이 전하 밀도의 변화를 야기함으로써 감지 장치로서의 탐지 능력을 갖게 한다는 것이다. The mechanism when using silicon nanowires as DNA sensing devices is due to charge density changes. In other words, when silicon nanowires hybridize with DNA, the electric field changes on the silicon nanowire surface, which causes a change in charge density, thus making it possible to detect as a sensing device.

따라서 기존 베이스에 대한 전류 증감으로 좀 더 쉽게 DNA 단위 농도에 대한 정량화가 신속하고 정확하게 전개된다.Therefore, quantification of DNA unit concentrations can be easily and quickly developed by increasing or decreasing the current base.

도 2는 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치의 사시도이다. 도 2를 참조하면, DNA 바코딩 감지 장치는 자성부(210), 분리부(220) 및 탐지부(230)로 이루어져 있다. 2 is a perspective view of an apparatus for detecting DNA barcodes using silicon nanowires. Referring to FIG. 2, the DNA barcoding sensing device includes a magnetic unit 210, a separation unit 220, and a detection unit 230.

자성부(210)에서는 본 발명의 샌드위치 형태의 반응체(160)를 자석(190)으로 고정시켜 불필요한 단백질을 제거한다. 검출물질(150)만이 샌드위치 형태의 반응체(160)를 형성할 수 있으므로 불필요한 단백질은 버퍼용액을 사용하여 씻어낼 수 있다.The magnetic part 210 removes unnecessary protein by fixing the reactant 160 having the sandwich form of the present invention with the magnet 190. Since only the detection material 150 can form the reactant 160 in the form of a sandwich, unnecessary protein can be washed out using a buffer solution.

분리부(220)에서는 금나노입자(120)에 부착된 바코딩 DNA(140)를 분리하며, 탐지부(230)에서는 실리콘 나노와이어(180)에 부착된 상보적 DNA(170)를 이용하여 바코딩 DNA(140)를 탐지한다.The separation unit 220 separates the barcoding DNA 140 attached to the gold nanoparticles 120, and the detection unit 230 uses the complementary DNA 170 attached to the silicon nanowires 180. Coding DNA 140 is detected.

본 발명에 따른 실리콘 나노와이어(180)를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치는 실리콘 나노와이어(180)에 부착되어 있는 상보적 DNA(170)와 바코딩 DNA(140)가 결합할 때 형성되는 전하 밀도 변화를 측정하는 것으로, 별도의 광학 시스템이 필요하지 않기 때문에 한개의 장치 내에서 검출물질(150)의 전처리에서 부터 전도성 측정까지 가능하다.DNA barcoding detection device using the silicon nanowires 180 according to the present invention is the charge density change formed when the complementary DNA 170 and the barcoded DNA 140 attached to the silicon nanowires 180 are combined By measuring, since a separate optical system is not required, it is possible to measure conductivity from pretreatment of the detection material 150 in one device.

도 3은 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치 중 탐지부를 나타낸 사시도이다. 도 3을 참조하면, 탐지부(230)는 열산화막(320)이 형성된 기판(310)상에 실리콘 나노와이어(180)와 전극(330)이 형성되어 있다. 실리콘 나노와이어(180)에는 바코딩 DNA(140)와 상보적 결합을 하는 상보적 DNA(170)가 부착되어 있다. 따라서, 바코딩 DNA(140)는 상보적 DNA(170)와 결합하여 이중가닥 DNA를 형성하면서 전도성 전류가 유도되고 이로 인한 전류 증감을 측정하여 바코딩 DNA(140)를 탐지할 수 있다. 3 is a perspective view illustrating a detector in a DNA barcoding sensing device using silicon nanowires. Referring to FIG. 3, the detector 230 has a silicon nanowire 180 and an electrode 330 formed on a substrate 310 on which a thermal oxide film 320 is formed. The silicon nanowires 180 are attached with complementary DNA 170 that complementarily binds to the barcoded DNA 140. Accordingly, the barcoded DNA 140 may detect the barcoded DNA 140 by combining with the complementary DNA 170 to form a double-stranded DNA and inducing a conductive current, thereby measuring the current increase and decrease.

도 4 내지 도 6은 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치 중 탐지부 제조 방법을 나타내는 단면도이다. 도 4에 도시된 바와 같이, 열산화막(320)이 형성된 기판(310)상에 실리콘 나노와이어(180)를 형성한 후, 실리콘 나노와이어(180)의 전기적 컨택을 위하여 금속물질을 증착한 후 식각하여 전극을 형성한다.4 to 6 are cross-sectional views illustrating a method of manufacturing a detector in a DNA barcoding sensing device using silicon nanowires. As shown in FIG. 4, after the silicon nanowires 180 are formed on the substrate 310 on which the thermal oxide film 320 is formed, a metal material is deposited and then etched for electrical contact of the silicon nanowires 180. To form an electrode.

기판(310)은 실리콘, 수정, 세라믹, 유리 및 폴리머 등을 사용할 수 있으며, 실리콘을 사용할 경우 열산화막이 형성된 기판이나 기타 절연막이 형성된 기판을 사용하는 것이 바람직하다.The substrate 310 may be made of silicon, quartz, ceramic, glass, polymer, or the like. When silicon is used, it is preferable to use a substrate on which a thermal oxide film is formed or a substrate on which an insulating film is formed.

전극(330)은 금속물질로써 금을 증착함으로써 단층구조로 형성하거나, 티탄을 증착한 후, 금을 증착한 다층구조로 형성할 수 있으며, 은, 구리, 니켈 또는 백금을 사용할 수 있다.The electrode 330 may be formed in a single layer structure by depositing gold as a metal material, or may be formed in a multilayer structure in which gold is deposited after titanium is deposited, and may be silver, copper, nickel, or platinum.

도 5에 도시된 바와 같이, 전극(330)을 포함한 기판(310) 전체에 절연층(340)을 증착한 후, 패터닝하여 하부에 존재하는 전극(330)의 일부를 노출시킨다. 또한, 노출된 전극(330)의 일부를 습식 식각하여 실리콘 나노와이어(180) 일부를 노출시킨다.As illustrated in FIG. 5, the insulating layer 340 is deposited on the entire substrate 310 including the electrode 330, and then patterned to expose a portion of the electrode 330. In addition, a portion of the exposed electrode 330 is wet etched to expose a portion of the silicon nanowires 180.

형성된 전극(330)의 상부에 절연층을 증착하고 패터닝하여 절연층 보호막을 형성할 수도 있다. 바이오 센서의 경우, 전해질 용액이 검사시료로 사용되므로 전극의 상부에 형성된 절연층 보호막이 전해질 용액과 전극이 접하는 것을 방지할 수 있다. 절연층 보호막은 전해질 용액에 의한 노이즈를 감소시키고 전해질 용액에 존재할 수 있는 검출대상 물질이 나노와이어에서 감지되어 나오는 신호만을 용이하게 검출할 수 있도록 하여 감지 장치의 감도를 향상시킬 수 있게 된다.An insulating layer protective film may be formed by depositing and patterning an insulating layer on the formed electrode 330. In the case of the biosensor, since the electrolyte solution is used as the test sample, the insulating layer protective film formed on the upper portion of the biosensor can prevent the electrolyte solution from contacting the electrode. The insulating layer protective layer may reduce noise caused by the electrolyte solution and may easily detect only a signal detected from the nanowires, which may be present in the electrolyte solution, thereby improving the sensitivity of the sensing device.

도 6에 도시된 바와 같이, 노출된 실리콘 나노와이어(180)를 탐지부(230)로 적용하기 위하여 노출된 실리콘 나노와이어(180) 표면을 활성화한 후 실리콘 나노와이어(180) 표면에 바코딩 DNA(140)와 상보적으로 결합하는 상보적 DNA(170)를 도입한다.As shown in FIG. 6, in order to apply the exposed silicon nanowires 180 to the detector 230, the bare silicon nanowires 180 are activated, and the barcoded DNAs are formed on the silicon nanowires 180. Complementary DNA 170 that complementarily binds 140 is introduced.

실리콘 나노와이어(180)의 표면을 선택적으로 기능화하는 것으로, 실록산 파생물을 사용할 수 있다. 또한, 아민기는 산소 플라즈마 또는 산 및 산화제에 의해 나노와이어를 먼저 친수성으로 만들고 아미노 시레인을 함유하는 용액에 실리콘 나 노와이어(180)를 담금으로써 부착될 수 있다. 상보적 DNA(170)는 상기 설명된 바와 같이, 아민기를 먼저 부착하고 상보적 DNA(170)를 함유하는 용액에 실리콘 나노와이어(180)를 담금으로써 부착할 수 있다.By selectively functionalizing the surface of the silicon nanowires 180, siloxane derivatives may be used. In addition, the amine group may be attached by first making the nanowires hydrophilic by oxygen plasma or an acid and an oxidizing agent and immersing the silicon nanowires 180 in a solution containing amino silane. The complementary DNA 170 may be attached by first attaching an amine group and immersing the silicon nanowires 180 in a solution containing the complementary DNA 170, as described above.

본 발명은 이상에서 살펴본 바와 같이 바람직한 실시예를 들어 도시하고 설명하였으나, 상기한 실시예에 한정되지 아니하며 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변경과 수정이 가능할 것이다.Although the present invention has been shown and described with reference to the preferred embodiments as described above, it is not limited to the above embodiments and those skilled in the art without departing from the spirit of the present invention. Various changes and modifications will be possible.

도 1은 나노와이어를 이용한 바코딩 DNA 감지 방법1 is a barcoding DNA detection method using nanowires

도 2는 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치의 사시도2 is a perspective view of an apparatus for detecting DNA barcodes using silicon nanowires

도 3은 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치 중 탐지부를 나타낸 사시도Figure 3 is a perspective view showing a detection unit of the DNA bar coding detection device using silicon nanowires

도 4 내지 도 6은 실리콘 나노와이어를 이용한 DNA 바코딩 감지 장치 중 탐지부 제조 방법을 나타내는 단면도4 to 6 are cross-sectional views illustrating a method of manufacturing a detector in a DNA barcoding sensing device using silicon nanowires.

<도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명><Explanation of symbols for the main parts of the drawings>

110 : 자성나노입자 120 : 금나노입자110: magnetic nanoparticles 120: gold nanoparticles

130 : 수용체 140 : 바코딩 DNA130 receptor 140 barcoded DNA

150 : 검출물질 160 : 반응체150: detection material 160: reactant

170 : 상보적 DNA 180 : 실리콘 나노와이어170: complementary DNA 180: silicon nanowire

190 : 자석 210 : 자성부190: magnet 210: magnetic part

220 : 분리부 230 : 탐지부220: separation unit 230: detection unit

310 : 기판 320 : 열산화막310: substrate 320: thermal oxide film

330 : 전극 340 : 절연층330 electrode 340 insulating layer

Claims (9)

수용체가 부착되어 있는 자성나노입자, 수용체와 바코딩 DNA가 부착되어 있는 금나노입자 및 검출물질을 이용하는 바이오 바코딩 감지 장치에 있어서,In a bio-barcoding sensing device using magnetic nanoparticles to which a receptor is attached, gold nanoparticles to which a receptor and barcode DNA are attached, and a detection material, 상기 자성나노입자, 금나노입자 및 검출물질이 반응하여 형성된 반응체를 자성분리하여 반응체 이외의 단백질을 제거하는 자성부;A magnetic part which magnetically separates the reactant formed by the reaction of the magnetic nanoparticles, the gold nanoparticles, and the detection material to remove proteins other than the reactant; 상기 금나노입자에 부착되어 있는 바코딩 DNA를 분리하는 분리부; 및Separation unit for separating the bar coding DNA attached to the gold nanoparticles; And 상기 바코딩 DNA와 실리콘 나노와이어에 부착된 상보적 DNA의 결합으로 인한 전류 증감을 측정하는 탐지부Detection unit for measuring the current increase and decrease due to the combination of the barcode DNA and the complementary DNA attached to the silicon nanowires 를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치.Bio-barcoding sensing device using a silicon nanowire comprising a. 제 1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 자성부, 분리부 및 탐지부는 한개의 장치 안에 형성된 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치.The magnetic part, the separating part and the detecting part bio barcoding sensing device using silicon nanowires formed in one device. 제 1항에 있어서, 상기 탐지부는The method of claim 1, wherein the detection unit 상기 바코딩 DNA와 상기 상보적 DNA가 결합하여 이중가닥 DNA가 형성되는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치.Bio-barcoding sensing device using the silicon nanowires that the double-stranded DNA is formed by combining the barcoding DNA and the complementary DNA. 바이오 바코딩 감지 장치의 제조방법에 있어서,In the manufacturing method of the bio-barcoding detection device, 열산화막이 형성된 기판에 실리콘 나노와이어를 형성하는 제 1단계;Forming a silicon nanowire on a substrate on which a thermal oxide film is formed; 상기 실리콘 나노와이어의 전기적 컨택을 위한 전극을 증착하는 제 2단계;Depositing an electrode for electrical contact of the silicon nanowires; 상기 전극을 포함한 기판에 절연층을 증착하고 패터닝하여 하부에 존재하는 전극의 일부를 노출시키는 제 3단계;Depositing and patterning an insulating layer on a substrate including the electrode to expose a portion of an electrode existing below; 노출된 상기 전극의 일부를 식각하여 실리콘 나노와이어 일부를 노출시키는 제 4단계;Etching a portion of the exposed electrode to expose a portion of the silicon nanowires; 노출된 상기 실리콘 나노와이어의 표면을 활성화시키는 제 5단계; 및A fifth step of activating the exposed surface of the silicon nanowires; And 활성화된 상기 실리콘 나노와이어 표면에 상보적 DNA를 부착하는 제 6단계Step 6 attaching complementary DNA to the activated silicon nanowire surface 를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 장치의 제조방법.Method of manufacturing a bio-barcoding sensing device using a silicon nanowire comprising a. 수용체가 부착되어 있는 자성나노입자, 수용체와 바코딩 DNA가 부착되어 있는 금나노입자 및 검출물질을 이용하는 바이오 바코딩 감지 방법에 있어서,In the bio-barcoding detection method using magnetic nanoparticles to which the receptor is attached, gold nanoparticles to which the receptor and barcode DNA are attached, and a detection material, 상기 자성나노입자, 금나노입자 및 검출물질을 반응시켜 반응체를 형성하는 제 1단계;A first step of forming a reactant by reacting the magnetic nanoparticles, gold nanoparticles, and a detection material; 상기 반응체를 자성부를 통해 자성분리하고 버퍼용액으로 반응체 이외의 단 백질을 제거하는 제 2단계;A second step of magnetically separating the reactant through a magnetic part and removing proteins other than the reactant with a buffer solution; 상기 금나노입자에 부착된 상기 바코딩 DNA를 분리부를 통해 분리하는 제 3단계; 및A third step of separating the barcoding DNA attached to the gold nanoparticles through a separation unit; And 분리된 상기 바코딩 DNA와 탐지부의 실리콘 나노와이어에 부착된 상보적 DNA가 결합하는 제 4단계A fourth step in which the separated barcoded DNA and the complementary DNA attached to the silicon nanowires of the detector bind 를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법.Bio bar coding detection method using a silicon nanowire comprising a. 제 5항에 있어서, 상기 제 3단계는The method of claim 5, wherein the third step 상기 반응체에 열을 가하여 상기 금나노입자에 부착되어 있는 바코딩 DNA를 변형하는 단계; 및Modifying the barcode DNA attached to the gold nanoparticles by applying heat to the reactant; And 원심분리를 통해 상기 자성나노입자, 금나노입자 및 검출물질을 제거하는 단계Removing the magnetic nanoparticles, gold nanoparticles and the detection material by centrifugation 를 포함하는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법.Bio bar coding detection method using a silicon nanowire comprising a. 제 5항에 있어서, 상기 제 4단계는The method of claim 5, wherein the fourth step 상기 바코딩 DNA와 상기 상보적 DNA가 결합하여 이중가닥 DNA가 형성되는 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법.Bio-barcoding detection method using a silicon nanowire that the double-stranded DNA is formed by combining the barcoding DNA and the complementary DNA. 제 5항에 있어서,The method of claim 5, 상기 검출물질은 DNA, RNA, 항원, 항체, 합텐 및 단백질 중 어느 하나인 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법.The detection material is a bio-barcoding detection method using silicon nanowires of any one of DNA, RNA, antigen, antibody, hapten and protein. 제 5항에 있어서,The method of claim 5, 상기 수용체는 DNA, RNA, 항원, 항체, 합텐 및 단백질 중 어느 하나인 실리콘 나노와이어를 이용한 바이오 바코딩 감지 방법.The receptor is a bio-barcoding detection method using silicon nanowires of any one of DNA, RNA, antigen, antibody, hapten and protein.
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