KR20090097059A - Composition for melanin induction containing hesperetin - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 헤스페레틴을 포함하는 멜라닌 생성 촉진 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a melanin production promoting composition comprising hesperetin.
사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(melanin) 농도와 분포에 따라 결정되어진다. 인체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 자외선으로 발생하는 피부손상을 차단하는 중요한 역할을 하고 있다. 멜라닌 합성은 복잡한 효소적, 화학적 반응에 의해 이루어지며, 멜라닌 생합성에는 멜라닌 세포에 존재하는 티로시나제(tyrosinase)의 작용이 가장 중요한 것으로 보고되어 있다. 티로시나제는 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)을 멜라닌 중합체 생성의 중간산물인 도파(DOPA, 디히드록시페닐알라닌)와 도파퀴논(dopaquinone)으로 전환함으로써 멜라닌 생성에 핵심적 역할을 수행한다.Human skin color is determined by the concentration and distribution of melanin inside the skin. Melanin pigment produced by melanocytes of human skin is a phenolic polymer having a complex form of black pigment and protein, and plays an important role in preventing skin damage caused by ultraviolet rays. Melanin synthesis is performed by complex enzymatic and chemical reactions, and the action of tyrosinase in melanocytes is reported to be the most important for melanin biosynthesis. Tyrosinase plays a key role in melanin production by converting tyrosine, an amino acid, into dopa (DOPA, dihydroxyphenylalanine) and dopaquinone, which are intermediates of melanin polymer production.
모발에 있어서, 멜라닌 생성세포의 기능항진 또는 티로시나제의 활성화 등에 의해 멜라닌 생성량이 증대되면, 백발이 되는 것을 방지하거나, 백발을 개선할 수 있다. 또한 구릿빛 피부를 위해 의도적으로 전신을 태닝하는 경우, 일반적으로 선 탠 오일을 이용하여 일광욕을 하거나, 디하이드록시아세톤(dihydroxyaceton, DHA)을 이용하여 화학반응을 일으켜 인위적으로 피부의 색을 검게 만들고 있다. 그러나 DHA는 피부를 거칠게 하며, 자극을 유발하는 등의 단점이 있다. In the hair, when the amount of melanin produced is increased due to hyperfunction of melanocyte-producing cells or activation of tyrosinase, the occurrence of gray hair can be prevented or gray hair can be improved. In addition, when intentionally tanning the whole body for coppery skin, it is generally sunbathing using tanning oil or chemical reaction using dihydroxyaceton (DHA) to artificially blacken the skin color. . However, DHA has disadvantages such as roughening the skin and causing irritation.
본 발명자들은 멜라닌 합성을 촉진시키고 피부에 대한 부작용 없이 안전하게 사용할 수 있는 피부 흑화용 조성물을 개발하는 것이다.The present inventors have developed a composition for skin blackening that promotes melanin synthesis and can be safely used without side effects on the skin.
감귤 유래의 플라보노이드인 헤스페레틴이 멜라닌 생성과 티로시나제 활성을 증대시켜 피부 흑화를 유도하고, 피부에 대한 안전성이 우수하며, 피부에 대한 부작용이 없음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.Hesperetin, a flavonoid derived from citrus fruits, increased melanogenesis and tyrosinase activity to induce skin blackening, safety for the skin, and no side effects on the skin, thus completing the present invention.
본 발명에 따른 헤스페레틴은 멜라닌 생성과 티로시나제 활성을 증대시킴으로써 흑화효과가 우수하고, 피부에 대한 안전성이 우수하며, 피부에 대한 부작용이 없으므로, 피부 흑화에 매우 효과적이다.Hesperetin according to the present invention is excellent in the blackening effect by increasing the melanin production and tyrosinase activity, excellent safety for the skin, there is no side effect to the skin, it is very effective for skin blackening.
본 발명은 헤스페레틴을 포함하는 멜라닌 생성 촉진 조성물을 제공한다.The present invention provides a melanin production promoting composition comprising hesperetin.
본 발명에 따른 멜라닌 생성 촉진 조성물은 화장료 조성물 및 약학 조성물을 포함한다.Melanin production promoting composition according to the present invention includes a cosmetic composition and a pharmaceutical composition.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명에 따른 헤스페레틴은 멜라닌 생성과 티로시나제 활성을 증대시켜 흑화를 유도하며, 피부에 대한 안전성이 우수하며, 피부에 대한 부작용이 없으므로, 피부 흑화용 또는 백발 방지용 조성물로서 매우 효과적이다. 따라서, 본 발명에 따른 헤 스페레틴을 포함하는 조성물은 흑화 유도를 위한 화장품 또는 의약품에 유용하게 사용할 수 있다.Hesperetin according to the present invention increases melanin production and tyrosinase activity, induces blackening, has excellent safety for the skin, and has no side effects on the skin, and thus is very effective as a composition for preventing skin blackening or gray hair. Therefore, the composition containing hesperetin according to the present invention can be usefully used in cosmetics or pharmaceuticals for induction of blackening.
본 발명의 멜라닌 생성 촉진 조성물에서, 헤스페레틴의 함량은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%를 포함할 수 있다. 만일 헤스페레틴의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 흑화 효과가 너무 미약하고, 15 중량%를 초과하는 경우에는 함량 증가에 따른 흑화 효과의 증가가 미비하고 제형상의 안정성이 확보되지 않는 문제점이 있다.In the melanin production promoting composition of the present invention, the content of hesperetin may include 0.0001 to 15% by weight, preferably 0.001 to 5% by weight based on the total composition. If the content of hesperetin is less than 0.0001% by weight, the blackening effect is too weak, and if it exceeds 15% by weight, the increase in the blackening effect due to the increase of the content is insufficient and the stability of the formulation is not secured. .
본 발명의 피부 흑화용 조성물은, 헤스페레틴과 함께 피부 흑화 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.The composition for skin blackening of this invention may contain 1 or more types of well-known active ingredients which have a skin blackening effect with hesperetin.
본 발명의 조성물은 피부 흑화 효과를 갖기 위하여, 유효성분인 헤스페레틴이외에 추가로 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 첨가제, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및/또는 담체를 포함하여 화장료 조성물을 제조할 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은 피부 흑화 효과를 증진시키기 위하여, 피부 흡수 촉진 물질을 추가로 포함할 수 있다.The composition of the present invention, in order to have a skin blackening effect, in addition to the active ingredient hesperetin, additives commonly used in cosmetic compositions, for example, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings Cosmetic compositions can be prepared including phosphorus adjuvants and / or carriers. In addition, the cosmetic composition may further include a skin absorption promoting substance, in order to enhance the skin blackening effect.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 의 제형으로 제조될 수 있다.Cosmetic compositions of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art and include, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing , Oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays, and the like, but are not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 오일, 식물성 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components. have.
상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.If the formulation is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray additionally chlorofluorohydrocarbon, propane / Propellants, such as butane or dimethyl ether.
상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.If the formulation is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as carrier component, for example water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, Fatty acid esters of 1,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycols or sorbitan.
상기 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스; 알루미늄 메타히드록사이드; 벤토나이트; 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.If the formulation is a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier component; Suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters; Microcrystalline cellulose; Aluminum metahydroxide; Bentonite; Agar or tracant and the like can be used.
상기 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는, 담체 성분으로서 지방족 알콜 설페이트, 지방족 알콜 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이 트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알콜, 지방산 글리세라이드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 오일, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.If the formulation is a surfactant-containing cleansing, the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivatives, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amides. Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
본 발명의 화장료 조성물에서, 헤스페레틴의 함량은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%를 포함할 수 있다.In the cosmetic composition of the present invention, the content of hesperetin may include 0.0001 to 15% by weight, preferably 0.001 to 5% by weight based on the total composition.
또한, 본 발명의 조성물은 피부 흑화 효과를 갖기 위하여, 유효성분인 헤스페레틴 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물을 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 통상적인 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구용 제형; 연고, 크림 등의 외용제; 좌제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제제화하여 사용할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.In addition, the composition of the present invention, in order to have a skin blackening effect, in addition to hesperetin as an active ingredient, it can be prepared a pharmaceutical composition comprising one or more pharmaceutically acceptable carriers. Pharmaceutically acceptable carriers may be used in combination with saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, and one or more of these components, as necessary. And other conventional additives such as bacteriostatic agents can be added. Oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., in accordance with conventional methods with the addition of diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants in addition; External preparations such as ointments and creams; It may be used in any form suitable for pharmaceutical preparations, including suppositories and sterile injectable solutions. Furthermore, it may be preferably formulated according to each disease or component by an appropriate method in the art or using a method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA.
본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 외용제의 경우, 상기 헤스페레틴의 일일 투여량은 1.0 내지 3.0㎖가 바람직하고, 하루 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 더욱 바람직하다. 또한, 경구용 제형의 경우, 상기 헤스페레틴의 일일 투여량은 0.1 내지 100㎎/㎏이 바람직하고, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) according to the desired method, and the dosage is based on the weight, age, sex and health of the patient. The range varies depending on the condition, diet, administration time, administration method, excretion rate and severity of the disease. In the case of external preparations, the daily dose of hesperetin is preferably 1.0 to 3.0 ml, more preferably 1 to 5 times per day, and more preferably for 1 month or more. In addition, in the oral dosage form, the daily dose of hesperetin is preferably 0.1 to 100 mg / kg, and more preferably administered once to several times a day.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are provided to aid in understanding the present invention. However, the following examples are merely provided to more easily understand the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the examples.
실시예Example 1 One : 멜라닌 생성 증대 효과 : Increase melanin production
본 발명에 따른 헤스페레틴의 멜라닌 생성 증대 효과를 알아보기 위하여, 쥐의 색소세포(B16 melanoma cells)를 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the effect of increasing the melanin production of hesperetin according to the present invention, the following experiments were performed using mouse pigment cells (B16 melanoma cells).
본 실험에 사용한 헤스페레틴은 Cayman으로부터 구입하여 사용하였다.Hesperetin used in this experiment was purchased from Cayman.
murine melanoma(B16 F10) 세포를 10%의 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지로 배양용기에 각 1×105 개로 접종한 후, 5% CO2 및 37℃ 하에서 세포가 용기 바닥에 약 80% 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시 료를 적당 농도로 희석된 배지에 교체한 후, 5% CO2 및 37 ℃ 하에서 2일간 배양하였다. 헤스페레틴의 농도범위는 세포독성이 없는 10 μM, 50 μM, 100 μM로 결정하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS(phosphated buffer saline)로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 혈구계 (hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛(pellet)을 얻었다. 이 세포 펠렛을 60℃에서 건조한 후, 1N 수산화나트륨액 100 ㎕를 넣어 60℃ 항온조에서 세포 내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)로 490㎚에서 흡광도를 측정하여, 세포 일정수당 멜라닌 양을 구하였다. 결과는 표 1과 도면 1에 나타내었다. After inoculating murine melanoma (B16 F10) cells with DMEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) in 1 × 10 5 cells in a culture vessel, 5% CO 2 And Cells were incubated at 37 ° C. until at least about 80% adhered to the bottom of the vessel. After replacing the removed and then the culture medium was diluted to a suitable concentration of the charge upon the medium, 5% CO 2 And incubated at 37 ° C. for 2 days. Hesperetin concentration range was determined to be 10 μM, 50 μM, 100 μM without cytotoxicity. The cells from which the medium was removed were washed with phosphated buffer saline (PBS) and treated with trypsin to recover the cells. The collected cells were measured by using a hematocytometer, and then centrifuged at 5,000 rpm for 10 minutes, and then the supernatant was removed to obtain pellets. After drying the cell pellet at 60 ° C, 100 µl of 1N sodium hydroxide solution was added thereto to obtain intracellular melanin in a 60 ° C thermostat. Using this solution, absorbance was measured at 490 nm with a microplate reader to determine the amount of melanin per cell. The results are shown in Table 1 and Figure 1.
표 1과 도면 1에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 헤스페레틴은 대조군에 비해 멜라닌 생성 촉진율이 높게 나타났다. As shown in Table 1 and Figure 1, hesperetin according to the present invention showed a higher rate of melanin production than the control group.
실시예Example 2 2 : : 티로시나제Tyrosinase 활성 증대 효과 Increase activity
본 발명에 따른 헤스페레틴의 티로시나제 활성 증대 효과를 알아보기 위하여, 쥐의 색소세포(B16 melanoma cells)를 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the effect of increasing the tyrosinase activity of hesperetin according to the present invention, the following experiments were performed using mouse pigment cells (B16 melanoma cells).
murine melanoma(B16 F10) 세포를 10%의 FBS가 함유된 DMEM 배지로 6-웰 플레이트에 웰당 1×105 개로 접종한 후, 5% CO2 및 37℃ 하에서 세포가 웰 바닥에 약 80% 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 시료를 적당 농도로 희석된 배지에 교체한 후, 5% CO2 및 37 ℃ 하에서 2일간 배양하였다. 헤스페레틴의 농도범위는 세포독성이 없는 10 μM, 50 μM, 100 μM로 결정하였다. 배지를 제거한 세포를 PBS로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포는 혈구계를 이용하여 세포수를 측정한 후 5,000 내지 10,000 rpm으로 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 펠렛을 얻었다. 이 세포 펠렛을 분해완충액 (lysis buffer)을 이용하여 분쇄한 후, 12,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 상층액을 수집하였다. 이 액을 가지고 마이크로플레이트 리더로 492㎚에서 흡광도를 측정하여, 세포 일정수당 티로시나제 활성을 구하였다. Inoculate murine melanoma (B16 F10) cells in 6-well plates at 1 × 10 5 per well in DMEM medium containing 10% of FBS, followed by 5% CO 2 And Cells were incubated at 37 ° C. until at least about 80% adhered to the bottom of the well. After incubation, the medium was removed and the sample was replaced with medium diluted to the appropriate concentration, followed by 5% CO 2 And incubated at 37 ° C. for 2 days. Hesperetin concentration range was determined to be 10 μM, 50 μM, 100 μM without cytotoxicity. The cells from which the medium was removed were washed with PBS and treated with trypsin to recover the cells. The recovered cells were measured by using a hemocytometer and centrifuged at 5,000 to 10,000 rpm for 10 minutes, and then the supernatant was removed to obtain pellets. The cell pellet was pulverized using a lysis buffer and centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes to collect supernatant. Using this solution, the absorbance was measured at 492 nm with a microplate reader to determine cell tyrosinase activity.
결과는 표 2에 나타내었다.The results are shown in Table 2.
표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 헤스페레틴은 대조군에 비해 티로시나제 활성율이 높게 나타났다.As shown in Table 2, the hesperetin according to the present invention showed a higher tyrosinase activity rate than the control group.
실시예Example 3 3 : 동물수준에서의 At the animal level 흑화Black flower 효과 평가 Effect evaluation
본 발명에 따른 헤스페레틴의 동물수준에서의 흑화 효과를 알아보기 위하여, 사람과 유사하게 자외선에 의해 색소침착이 생긴다고 알려진 갈색 몰모트 (Tortoiseshell guinea pigs; Brown guinea pigs)를 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to examine the blackening effect of the hesperetin according to the present invention at the animal level, the following experiments were carried out using brown morphine (Tortoiseshell guinea pigs; Brown guinea pigs), which are known to cause pigmentation by ultraviolet rays similarly to humans. Was performed.
상기 갈색 몰모토에서 갈색 몰모트 배위의 털을 제거한 피부에 3×3 ㎠의 정방형 창문이 뚫린 차광용 알루미늄 호일을 접착시킨 후, 각 시료를 도포하였다. 도포 횟수는 1일 1회 또는 2회로, 50일간 계속하였다. 시료는 특정한 용매(프로필렌 글리콜:에탄올:물 = 5:3:2의 혼합용매)를 사용하여 용해 및 희석하였으며, 면봉으로 도포하고, 다른 부위에 반드시 용매를 도포하는 대조부위를 마련하였다. 효과 판정과 함께 누적자극성 여부도 관찰하였다.The light-shielding aluminum foil having a square window of 3 × 3
색차계(미놀타 CR2002 chromameter)를 사용하여 피부의 흑백정도를 측정하여 효과를 판정하였다. 색을 표시하는데는 L*A*B* 표색계를 사용하며, 본 발명에서는 L*값을 지표로 하였다. L*값은 표준 백판으로 교정하며, L*값은 1개 부위에 5회 이상 반복하여 측정하였다. 도포 시작시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 1로 구하고, 이 값으로 효과를 판정하였다.The effect was determined by measuring the degree of black and white of the skin using a color difference meter (Minolta CR2002 chromameter). L * A * B * color system is used to display color, and L * value was used as an index in this invention. L * values were calibrated with standard whiteboard, and L * values were measured at least 5 times in one site. The difference (ΔL * ) of the skin color at the start of application and at the time of completion was obtained by the following equation, and the effect was determined by this value.
△L* 값을 시료도포 부위와 대조군 부위에 대해서 구한 후 비교하면, 시료의 흑화 효과를 알 수 있다. Comparing the ΔL * value with respect to the sample application site and the control site, the blackening effect of the sample can be seen.
결과는 표 3에 나타내었다.The results are shown in Table 3.
표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 헤스페레틴은 뚜렷한 흑화효과를 나타내었다. 또한, 시료도포시험 중 누적 자극을 보이지 않았으므로 안전성 또한 우수한 것으로 나타났다.As shown in Table 3, the hesperetin according to the present invention showed a marked blackening effect. In addition, since the cumulative stimulus was not shown during the sample coating test, the safety was also excellent.
실시예 4Example 4 : 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험 : Safety verification experiment on human skin
본 발명에 따른 헤스페레틴의 인체 피부에 대한 안전성을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. In order to confirm the safety of the hesperetin according to the present invention on the human skin, the following experiment was performed.
1. 피부 외용제의 제조1. Preparation of external preparation for skin
헤스페레틴을 함유한 피부 외용제는 하기 표 4의 성분 함량으로 제조하였다. 피부 외용제의 제조를 위하여, 정제수, 글리세린, 부틸렌 글리콜을 혼합하고 70℃에서 용해하였으며(수상 파트), 상기 세 성분과 트리메탄올아민을 제외한 나머지 성분을 70℃에서 용해하였다(유상 파트). 상기 유상 파트를 수상 파트에 첨가하고 호모믹서(일본 Tokushu Kika사)로 교반하여 1차 유화하였고, 여기에 트리메탄올아민을 최종 첨가하였다. 혼합액에 생성된 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 피부 외용제를 제조하였다.Skin external preparations containing hesperetine were prepared with the component contents shown in Table 4 below. For the preparation of the external preparation for skin, purified water, glycerin and butylene glycol were mixed and dissolved at 70 ° C. (aqueous part), and the other components except the above three components and trimethanolamine were dissolved at 70 ° C. (oil phase part). The oily part was added to the aqueous part and stirred with a homomixer (Tokushu Kika, Japan) to emulsify first, to which trimethanolamine was finally added. After removing the bubbles generated in the mixed solution, and cooled to room temperature to prepare a skin external preparation.
2. 피부누적 자극 시험2. Accumulated skin irritation test
상기 1에서 제조한 각 피부 외용제를 사용하여, 20~40대의 건강한 성인 남녀 30명(남자-15명, 여자-15명)을 대상으로 윗 팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적첩포를 시행하여, 헤스페레틴이 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다.Using the external skin preparations prepared in 1 above, a total of nine 24-hour cumulative blisters were performed on the upper forearm every other day for 30 healthy men and women in their 20s and 40s (man-15 and woman-15). Then, it was measured whether hesperetin irritates the skin.
첩포 방법은 핀 챔버(Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였다. 챔버에 상기 1에서 제조한 각 피부 외용제를 15㎕씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응 정도를 하기 수학식 2를 이용하여 점수화하였다.The patch method used the fin chamber (Finn chamber, Epitest Ltd, Finland). 15 mu l of each of the external preparations for skin prepared in the above 1 was dropped into the chamber, and then patched. The degree of response that appeared on the skin each time was scored using
이때, 반응도에서 ±는 1점, +는 2점, ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균 반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정하였다.At this time, ± 1 point, + 2 points, + + 4 points in the reaction degree, and when the average reactivity was less than 3 was determined as a safe composition.
결과는 표 5에 나타내었다.The results are shown in Table 5.
표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 헤스페레틴을 포함하는 피부 외용제의 경우 ±, +, ++에 해당하는 사람의 수가 각각 2명, 0명, 0명이었고, 그 외 나머지는 반응이 나타나지 않았다. 또한, 평균 반응도가 0.18로 3 미만이므로, 안전한 조성물로 판단되었다.As shown in Table 5, in the case of the external preparation for skin containing hesperetine of the present invention, the number of persons corresponding to ±, +, and ++ was 2, 0, and 0, respectively, and the rest of the subjects showed no response. Did. In addition, since the average reactivity was 0.18 and less than 3, it was judged as a safe composition.
따라서, 본 발명의 헤스페레틴을 포함하는 피부 외용제는 뚜렷한 누적자극 양상을 나타내지 않아, 인체 피부에 안전한 물질로 판정되었다.Therefore, the external preparation for skin containing the hesperetin of the present invention does not show a distinct cumulative stimulation pattern, and was determined to be a safe substance for human skin.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.Examples of preparations for the compositions of the present invention are illustrated below.
제제예 1Formulation Example 1 : 화장료 제제 Cosmetic preparations
1. 유연화장수 (함량 : 중량%)1. Flexible cosmetics (content: wt%)
헤스페레틴 0.01Hesperetin 0.01
글리세린 3.0Glycerin 3.0
부틸렌 글리콜 2.0Butylene Glycol 2.0
프로필렌 글리콜 2.0Propylene Glycol 2.0
카복시비닐폴리머 0.1Carboxy Vinyl Polymer 0.1
에탄올 10.0Ethanol 10.0
트리에탄올아민 0.1Triethanolamine 0.1
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
2. 영양화장수 (함량 : 중량%)2. Nutritional Cosmetics (Content: Weight%)
헤스페레틴 0.01Hesperetin 0.01
밀납 4.0Beeswax 4.0
폴리소르베이트 60 1.5Polysorbate 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.5Sorbitan Sesquioleate 0.5
유동파라핀 5.0Liquid Paraffin 5.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0Caprylic / Capric Triglycerides 5.0
글리세린 3.0Glycerin 3.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene Glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene Glycol 3.0
카복시비닐폴리머 0.1Carboxy Vinyl Polymer 0.1
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
3. 영양크림 (함량 : 중량%)3. Nutrition Cream (Content: Weight%)
헤스페레틴 0.005Hesperetin 0.005
밀납 10.0Beeswax 10.0
폴리소르베이트 60 1.5Polysorbate 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.5Sorbitan Sesquioleate 0.5
유동파라핀 10.0Liquid Paraffin 10.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0Caprylic / Capric Triglycerides 5.0
글리세린 5.0Glycerin 5.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene Glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene Glycol 3.0
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
4. 맛사지 크림 (함량 : 중량%)4. Massage cream (content: wt%)
헤스페레틴 0.005Hesperetin 0.005
밀납 10.0Beeswax 10.0
폴리소르베이트 60 1.5Polysorbate 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.8Sorbitan Sesquioleate 0.8
유동파라핀 40.0Liquid Paraffin 40.0
스쿠알란 5.0Squalane 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 4.0Caprylic / Capric Triglycerides 4.0
글리세린 5.0Glycerin 5.0
부틸렌 글리콜 3.0Butylene Glycol 3.0
프로필렌 글리콜 3.0Propylene Glycol 3.0
트리에탄올아민 0.2Triethanolamine 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
5. 팩 (함량 : 중량%)5. Pack (Content: Weight%)
헤스페레틴 0.005Hesperetin 0.005
폴리비닐알콜 13.0Polyvinyl Alcohol 13.0
소듐카복시메틸셀룰로스 0.2Sodium Carboxymethylcellulose 0.2
알란토인 0.1Allantoin 0.1
에탄올 5.0Ethanol 5.0
노닐페닐에테르 0.3Nonylphenyl Ether 0.3
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
6. 헤어 트리트먼트 로션 (함량 : 중량%)6. Hair Treatment Lotion (Content: Weight%)
헤스페레틴 0.01Hesperetin 0.01
글리세린 2.0Glycerin 2.0
1,3-부틸렌글리콜 1.01,3-butylene glycol 1.0
염화스테아릴트리메틸암모늄 0.5Stearyltrimethylammonium Chloride0.5
메틸페닐폴리실록산 1.0Methylphenylpolysiloxane 1.0
콜라겐 가수분해물 1.0Collagen Hydrolyzate 1.0
에탄올 50.0Ethanol 50.0
정제수 잔량 Purified water level
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량Preservatives, trace pigments, trace fragrances, trace amount of purified water
총계 100.0Total 100.0
7. 샴 푸 (함량 : 중량%)7. Shampoo (content: wt%)
헤스페레틴 0.005Hesperetin 0.005
에칠렌디아민테트라초산디나트륨 0.1Ethylenediaminetetradiacetic acid sodium 0.1
글리세린 2.0Glycerin 2.0
벤조페논-9 0.05Benzophenone-9 0.05
폴리옥시에칠렌라우릴에텔황산나트륨 12.0Sodium polyoxyethylene lauryl ether sulfate 12.0
라우릴황산트리에탄올아민 15.0Lauryl Sulfate Triethanolamine 15.0
코카미도프로필베타인 7.0Cocamidopropyl Betaine 7.0
야자유지방산 디에탄올아미드 4.0Palm oil fatty acid diethanolamide 4.0
폴리쿼터늄-7 4.0Polyquaternium-7 4.0
D-판테놀 0.2D-panthenol 0.2
dl-멘톨 0.1dl-menthol 0.1
염산피리독신 0.1Pyridoxine hydrochloride 0.1
방부제 미량Preservative traces
색소 미량A small amount of pigment
향료 미량 A small amount of spices
정제수 잔량Purified water level
총계 100.0 Total 100.0
제제예Formulation example 2 2 : 약학적 제제 : Pharmaceutical Formulations
1. 산제의 제조1. Preparation of powder
헤스페레틴 2gHesperetin 2g
유당 1g1g lactose
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.The above ingredients were mixed and filled in airtight cloth to prepare a powder.
2. 정제의 제조2. Preparation of Tablets
헤스페레틴 100㎎Hesperetin 100mg
옥수수전분 100㎎Corn Starch 100mg
유 당 100㎎Lactose 100mg
스테아린산 마그네슘 2㎎2 mg magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
3. 캡슐제의 제조3. Preparation of Capsule
헤스페레틴 100㎎Hesperetin 100mg
옥수수전분 100㎎Corn Starch 100mg
유 당 100㎎Lactose 100mg
스테아린산 마그네슘 2㎎2 mg magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After mixing the above components, the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.
도 1은 마우스 B16 melanoma 세포에서 헤스페레틴이 멜라닌 함량을 증가시키는 것을 나타내는 그림이다.1 is a diagram showing that hesperetin increases melanin content in mouse B16 melanoma cells.
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- 2008-03-10 KR KR1020080022228A patent/KR20090097059A/en not_active IP Right Cessation
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