KR20090082110A - External skin treatment composition comprising silybin glycosides - Google Patents

Abstract

A composition for the skin preparation for external use is provided to improve the skin antiaging effect and the collagen production accelerating effect. A composition for the skin preparation for external use comprises silybin glycosides. The silybin glycosides are the silybin lactoside represented by the formula 1 or the silybin maltoside represented by the formula 2. A wrinkle formation inhibitor contains the silybin glycosides.

Description

실리빈 배당체 함유 피부 외용 조성물{External skin treatment composition comprising silybin glycosides}External skin treatment composition comprising silybin glycosides

본 발명은 피부 외용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an external composition for skin.

실리빈을 주성분으로서 함유하는 실리마린(silymarin)은 피부의 노화를 방지하는데 유용하고, 홍반, 화상, 피부 또는 점막의 디스트로피 상태, 피부염 등의 치료에 있어서 치유를 촉진하며, 외부환경으로부터의 자극(방사선, 바람, 태양 등)으로부터 피부를 보호하는데 유용한 것이 알려져 있다(특허문헌 1: 일본국 특허공개 평1-100132호 공보 참조). 또한, 실리빈의 표피 각화세포(角化細胞)의 분화 억제효과(특허문헌 2: 일본국 특허공개 제2004-91397호 공보 참조), 실리빈을 주성분으로서 함유하는 실리마린의 I형 콜라겐 생산 촉진작용(특허문헌 3: WO2004/85429호 공보 참조)이 알려져 있다.Silymarin, which contains silibine as a main ingredient, is useful for preventing skin aging, promotes healing in the treatment of erythema, burns, dystrophic condition of skin or mucous membranes, dermatitis, and irritation from the external environment. It is known to be useful for protecting the skin from radiation, wind, sun, etc. (see Patent Document 1: Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-100132). In addition, the effect of inhibiting the differentiation of epidermal keratinocytes of silbin (see Patent Document 2: Japanese Patent Laid-Open No. 2004-91397), and promoting the production of type I collagen of silymarin containing silib as a main component (See Patent Document 3: WO2004 / 85429).

한편, 실리빈은 물, 기름에는 거의 용해되지 않기 때문에, 수계 조성물에는 배합하기 어렵다는 과제점을 가지고 있어, 실리마린을 분산시킨 음료의 기술(특허문헌 4: 일본국 특허공개 제2002-34505호 공보 참조), 실리마린을 인지질 착체로 함으로써 생체 적성을 유리하게 하는 기술(특허문헌 1: 일본국 특허공개 평1- 100132호 공보 참조), 마이크로 에멀젼 조성물로 하여 생체 이용률을 향상시키는 기술(특허문헌 5: 일본국 특허공표 제2003-503441호 공보 참조), 시클로덱스트린 유도체를 사용하여 실리빈의 봉입 착체를 제조하는 기술(특허문헌 6: 일본국 특허공개 평3-206090호 공보 참조)이 개시되어 있다.On the other hand, since lysine is hardly dissolved in water and oil, it has a problem that it is difficult to mix it with an aqueous composition, and the technology of the beverage which disperse | distributed silymarin (patent document 4: Unexamined-Japanese-Patent No. 2002-34505) ), A technique that favors biocompatibility by making silymarin a phospholipid complex (see Patent Document 1: Japanese Patent Application Laid-open No. Hei 1-100132), and a technique for improving bioavailability by using a microemulsion composition (Patent Document 5: Japan). Japanese Patent Laid-Open Publication No. 2003-503441), and a technique for producing an inclusion complex of silibine using a cyclodextrin derivative (see Patent Document 6: Japanese Patent Application Laid-open No. Hei 3-206090).

그러나, 이들의 기술을 사용해도 반드시 실리빈의 석출을 충분히 억제할 수 없는 경우가 있고, 실리빈의 석출을 억제할 수 있었다 하더라도 처방설계상 제약이 있다.However, even if these techniques are used, the precipitation of silinine may not always be sufficiently suppressed, and there is a limitation in prescription design even if the precipitation of silicide is suppressed.

실리빈의 글루코오스 배당체, 갈락토오스 배당체, 락토오스 배당체, 말토오스 배당체가 항산화 작용을 가지고, 실리빈과 비교하여 수용성이 우수한 것이 알려져 있지만(비특허문헌 1: Kosina P. et al., Phytother. Res. 16, S33-S39(2002) 참조), 실리빈 배당체를 함유하는 피부 외용 조성물, 실리빈 배당체의 주름 형성 억제효과, 표피 각화세포 분화 억제효과, I형 콜라겐 생산 촉진효과는 알려져 있지 않다.It is known that glucose glycosides, galactose glycosides, lactose glycosides, and maltose glycosides of sillybin have antioxidant activity and are superior in water solubility compared to sillybin (Non-Patent Document 1: Kosina P. et al., Phytother.Res. 16, S33-S39 (2002)), the composition for external application containing silibine glycosides, the inhibitory effect of wrinkle formation of the siline glycosides, the inhibitory effect of epidermal keratinocyte differentiation, and the type I collagen production promoting effect are not known.

특허문헌 1: 일본국 특허공개 평1-100132호 공보Patent Document 1: Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-100132

특허문헌 2: 일본국 특허공개 제2004-91397호 공보Patent Document 2: Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-91397

특허문헌 3: WO2004/85429호 공보Patent Document 3: WO2004 / 85429

특허문헌 4: 일본국 특허공개 제2002-34505호 공보Patent Document 4: Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-34505

특허문헌 5: 일본국 특허공표 제2003-503441호 공보Patent Document 5: Japanese Patent Publication No. 2003-503441

특허문헌 6: 일본국 특허공개 평3-206090호 공보Patent Document 6: Japanese Patent Application Laid-Open No. 3-206090

비특허문헌 1: Kosina P. et al., Phytother. Res. 16, S33-S39(2002)[Non-Patent Document 1] Kosina P. et al., Phytother. Res. 16, S33-S39 (2002)

본 발명은 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 피부 외용 조성물 등을 개발하는 것을 과제로 한다.An object of the present invention is to develop a composition for external application of the skin containing silicide glycoside as an active ingredient.

본 발명자 등은 실리빈 배당체를 사용함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors completed this invention by using a silinic glycoside.

즉, 본 발명의 주된 구성은 다음과 같다.That is, the main structure of this invention is as follows.

(1) 실리빈 배당체를 함유하는 피부 외용 조성물.(1) A composition for external application of skin containing silvin glycosides.

(2) 실리빈 배당체가 화학식 1의 실리빈 락토시드 또는 화학식 2의 실리빈 말토시드인 것을 특징으로 하는 (1)에 기재된 피부 외용 조성물.(2) The composition for external application for skin according to (1), wherein the silin glycoside is silyl lactoside of formula (1) or silin maltoside (2).

(3) 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 주름 형성 억제제.(3) Wrinkle formation inhibitor which uses a silicide glycoside as an active ingredient.

(4) 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 표피 각화세포 분화 억제제.(4) An epidermal keratinocyte differentiation inhibitor comprising silicide glycoside as an active ingredient.

(5) 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 I형 콜라겐 생산 촉진제.(5) Type I collagen production promoter which uses a silybin glycoside as an active ingredient.

(6) 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 햇볕에 그을림에 의한 피부 거칠어짐 개선제.(6) The skin roughening improvement agent by sun-burning which uses a silicide glycoside as an active ingredient.

(7) 실리빈 배당체가 화학식 1의 실리빈 락토시드 또는 화학식 2의 실리빈 말토시드인 것을 특징으로 하는 (3)~(6) 중 어느 하나에 기재된 제(劑).(7) The agent according to any one of (3) to (6), wherein the silinic glycoside is silyl lactoside of formula (1) or silin maltoside of formula (2).

[화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

(8) 물을 용매로 하고, 실리빈 배당체를 0.0008~5.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 (2)에 기재된 피부 외용 조성물 또는 (7)에 기재된 제.(8) The composition for external application for skin according to (2) or the agent according to (7), wherein water is used as a solvent and the polyvinyl glycoside contains 0.0008 to 5.0% by weight.

1. 용해성이 높은 실리빈 배당체를 사용함으로써, 실리빈의 작용 메커니즘을 향상시킨 피부 외용 조성물, 주름 형성 억제제, 표피 각화세포 분화 억제제, 노화 방지용 피부 외용 조성물, I형 콜라겐 생산 촉진제, 햇볕에 그을림에 의한 피부 거칠어짐 개선제를 제공하는 것이 가능해졌다. 특히, 수용해성이 높아, 안전성, 저자극성, 사용범위가 향상된다.1. By using highly soluble silin glycosides, the composition for external application of the skin, the anti-wrinkle inhibitor, the epidermal keratinocyte differentiation inhibitor, the anti-aging skin composition, the type I collagen production promoter, the sunburn It has become possible to provide a skin roughening improver. In particular, water solubility is high, and safety, hypoallergenicity, and the range of use are improved.

2. 특히, 실리빈 배당체로서, 화학식 1에 나타내어지는 실리빈 락토시드 또는 화학식 2에 나타내어지는 실리빈 말토시드가 유효하다.2. Particularly, as the silinic glycoside, the silinic lactoside represented by the formula (1) or the silin maltoside represented by the formula (2) is effective.

3. 본 발명에서 사용하는 실리빈 배당체는 수용성이 높아, 수용액 타입의 제형으로서 이용할 수 있다. 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 피부 외용 조성물, 메이크업 베이스 로션, 메이크업 크림, 유액상 또는 크림상의 파운데이션 등의 메이크업 피부 외용 조성물, 핸드크림, 레그 크림, 바디로션 등의 신체용 피부 외용 조성물, 입욕제 등으로 할 수 있다.3. The silinic glycosides used in the present invention have high water solubility and can be used as an aqueous solution type formulation. External skin composition such as lotion, milky lotion, cream, pack, make-up base lotion, makeup cream, makeup external composition such as emulsion or creamy foundation, external skin composition for body such as hand cream, leg cream, body lotion, bath Or the like.

4. 본 발명에서 사용하는 실리빈 배당체는 0.0008~5.0 중량%를 물에 용해시킬 수 있다. 유액 등의 경우에도 수성 부분에 고배합할 수 있다.4. The silinic glycosides used in the present invention can dissolve 0.0008 to 5.0% by weight in water. Even in the case of emulsion, it can be highly blended in the aqueous part.

실리빈(Silybin; CAS No. 22888-70-6)은, 국화과 마리아 엉겅퀴(학명 실리붐·마리아눔 Silibum marianum Gaertn, 별명 오오아자미, 오오히레아자미, 밀크 엉겅퀴; CAS No. 84604-20-6)로부터 추출되는 플라보노리그난(Flavonolignan)의 일종이다. 마리아 엉겅퀴로부터 추출되는 플라보노리그난은 실리마린(Silymarin; CAS No. 65666-07-1)의 총칭으로 불리고, 실리빈 이외에, 실리디아닌(Silydianin; CAS No. 29782-68-1), 실리크리스틴(Silychristin; CAS No.33889-69-9), 이소실리빈(Isosilybin; CAS No. 72581-71-6) 등이 포함되어 있다.Silybin (CAS No. 22888-70-6) is an asteraceae Maria thistle (Scilium marianum Gaertn, nickname OH-Azami, Oh-Hyre-Azami, Milk Thistle; CAS No. 84604-20-6) It is a kind of Flavonolignan extracted from. Flavonolignans extracted from Maria thistle are called generic names of Silymarin (CAS No. 65666-07-1), and in addition to silybin, Silydianin (CAS No. 29782-68-1), silycristine ( Silychristin; CAS No. 33889-69-9), Isosilybin (CAS No. 72581-71-6), and the like.

실리빈은 실리마린으로부터 크로마토그래피를 사용하여 단리하는 것이 가능하고, 또한 시약을 구입하여 입수하는 것이 가능하다.Silybin can be isolated from silymarin using chromatography, and reagents can be purchased and obtained.

실리빈 배당체는 문헌(Kren V. et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans 1, 2467-2474(1997))에 따라서 루이스산을 촉매로 하고, 실리빈에 아세틸기로 수산기를 보호한 당을 결합하여, 탈아세틸화함으로써 조제할 수 있다. 이 반응계에서는 실리마린의 제1급 알코올의 수산기에 당이 선택적으로 글리코시드 결합한다.Silybin glycosides are sugars prepared by catalyzing Lewis acid and protecting hydroxy groups with acetyl groups in silicide according to Kren V. et al., J. Chem. Soc., Perkin Trans 1, 2467-2474 (1997). It can be prepared by combining and deacetylating. In this reaction system, sugars selectively bind glycosides to the hydroxyl groups of the primary alcohols of silymarin.

실리빈에, 루이스산을 촉매로 하여, 퍼아세틸락토오스를 반응시켜 글리코시드 결합을 생성하고, 탈아세틸화함으로써, 화학식 1의 실리빈 락토시드가 얻어진다.Silyl lactoside of formula (1) is obtained by reacting silicine with Lewis acid, peracetyl lactose to generate glycoside bonds, and deacetylation.

[화학식 1][Formula 1]

실리빈에, 루이스산을 촉매로 하여, 퍼아세틸말토오스를 반응시켜 글리코시드 결합을 생성하고, 탈아세틸화함으로써, 화학식 2의 실리빈 말토시드가 얻어진다.Silyl maltoside of the formula (2) is obtained by reacting silicine with Lewis acid as a catalyst, peracetyl maltose to generate a glycoside bond, and deacetylation.

[화학식 2][Formula 2]

본 발명에 사용하는 실리빈 배당체는 수용성이 우수하여, 실리빈 락토시드, 실리빈 말토시드는 물에 약 5% 용해할 수 있다. 따라서, 실리빈을 배합할 수 없었던 화장수류에도 실리빈 배당체라면 배합할 수 있다.The silinic glycosides used in the present invention are excellent in water solubility, so that the silinic lactoside and the silinic maltoside can be dissolved in about 5% in water. Therefore, it can also mix | blend with the silvin glycoside in the cosmetic water which was unable to mix | blend silicide.

본 발명의 피부 외용 조성물에는, 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 유제(油劑), 계면활성제, 방부제, 다가 알코올, 에탄올, 당류, 금속 이온 봉쇄제, 수용성 고분자와 같은 고분자, 증점제, 분체성분, 자외선 흡수제, 자외선 차단제, 보습제, 향료, pH 조정제 등을 함유시킬 수 있다. 또한, 비타민류, 피부 부활제, 혈행 촉진제, 상재균 조절제, 활성 산소 소거제, 항염증제, 미백제, 살균제 등의 다른 약효성분, 생리활성성분을 함유시키는 것도 가능하다.In the external composition for skin of the present invention, polymers such as emulsions, surfactants, preservatives, polyhydric alcohols, ethanol, sugars, metal ion sequestrants, and water-soluble polymers, and thickeners within a range that does not impair the effects of the present invention. , Powder component, ultraviolet absorber, sunscreen, moisturizer, fragrance, pH adjuster and the like. It is also possible to contain other active ingredients such as vitamins, skin activators, blood circulation promoters, fungal control agents, active oxygen scavengers, anti-inflammatory agents, whitening agents, fungicides, and physiologically active ingredients.

본 발명은, 본 발명에 사용하는 실리빈 배당체는 수용성이 우수하여, 실리빈 락토시드, 실리빈 말토시드는 물에 약 5% 용해할 수 있다. 따라서, 실리빈을 배합하는 것이 곤란하였던 화장수류에도 실리빈 배당체를 배합할 수 있다.In the present invention, the lysine glycoside used in the present invention is excellent in water solubility, so that the lysine lactoside and the lysine maltoside can be dissolved in about 5% in water. Therefore, the silicide glycoside can also be blended in the cosmetic water which has been difficult to blend.

본 발명의 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 주름 형성 억제제로서는, 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 주름 개선용 피부 외용 조성물, 주름 개선용 의약부외품, 주름 개선용 의약을 들 수 있다. 유액의 경우에도, 수성 부분에 실리빈 배당체 를 고농도로 배합할 수 있다.Examples of the anti-wrinkle inhibitor comprising the silinic glycoside of the present invention as an active ingredient include skin care compositions for improving wrinkles such as lotion, milky lotion, cream, and packs, quasi-drugs for improving wrinkles, and drugs for improving wrinkles. Even in the case of emulsion, the silicide glycoside can be blended in a high concentration in the aqueous portion.

본 발명의 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 표피 각화세포 분화 억제제는, 표피 각화세포의 분화를 억제하고, 증식을 유지하여, 턴오버의 지연을 예방, 방지, 개선하고, 가령(加齡)이나 자외선 조사에 의해 발생되는 표피의 편평화를 방지하고, 노화된 피부를 재생하는 작용을 갖기 때문에, 노화 방지용 피부 외용 조성물로서 사용할 수 있다.The epidermal keratinocyte differentiation inhibitor comprising the silinic glycoside of the present invention as an active ingredient inhibits the differentiation of the epidermal keratinocytes, maintains proliferation, prevents, prevents and improves the delay of turnover, such as Since it has the effect of preventing the flattening of the epidermis generated by ultraviolet irradiation and regenerating aged skin, it can be used as an anti-aging skin composition.

본 발명의 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 I형 콜라겐 생산 촉진제는, 피부의 탱탱함과 탄력성을 향상시키고, 주름과 처짐을 예방, 방지, 개선하는 것을 기대할 수 있기 때문에, 노화 방지용 피부 외용 조성물로서 사용할 수 있다.Since the type I collagen production promoter using the silinic glycoside of the present invention as an active ingredient can be expected to improve the firmness and elasticity of the skin, and to prevent, prevent and improve wrinkles and sagging, it can be used as an anti-aging skin composition. Can be.

[실리빈 락토시드의 합성][Synthesis of Silybin Lactoside]

헬페리히(Helferich)의 방법에 따라서 실리빈 락토시드를 합성하였다.Silybin lactoside was synthesized according to the method of Helferich.

실리빈(3.0 g, 6.2 ㏖)과 옥타-O-아세틸-D-락토오스(6.3 g, 9.2 ㏖)를 180 ㎖의 디클로로메탄-아세토니트릴(1:1, v/v)의 용매 중에서, 삼플루오르화붕소 디메틸에테르 착체(1.14 ㎖, 12.4 m㏖)를 질소 존재하, 실온에서 19시간 교반 반응시켰다. 반응 종료 후, 빙냉하면서 포화 탄산수소나트륨수용액을 첨가하고, 150 ㎖ 디클로로메탄으로 2회 추출처리하여, 무수 황산나트륨처리 후에 추출용매를 증발기(evaporator)로 제거하였다.Silyl (3.0 g, 6.2 mol) and octa-O-acetyl-D-lactose (6.3 g, 9.2 mol) were trifluorinated in 180 ml of a solvent of dichloromethane-acetonitrile (1: 1, v / v). The boron dimethyl ether complex (1.14 ml, 12.4 mmol) was stirred for 19 hours at room temperature in the presence of nitrogen. After completion of the reaction, saturated sodium hydrogencarbonate aqueous solution was added with ice cooling, followed by extraction treatment twice with 150 ml dichloromethane, and the extraction solvent was removed by an evaporator after anhydrous sodium sulfate treatment.

트리에틸아민-메탄올-물(1:8:1)을 35℃에서 30시간 반응시킨 후, 증발기로 용매를 제거하였다. BONDESIL-C18(Varian)을 사용해서 정제를 행하여, 실리빈 락토시드(1.0 g, 수율 20%)를 얻었다. 얻어진 실리빈 락토시드를 MS 스펙트럼으로 확인 하고, [M+H]⁺: 807.5의 피크를 검출하였다.After triethylamine-methanol-water (1: 8: 1) was reacted at 35 ° C. for 30 hours, the solvent was removed by an evaporator. Purification was carried out using BONDESIL-C18 (Varian) to obtain silybin lactoside (1.0 g, yield 20%). The obtained silvin lactoside was confirmed by MS spectrum, and a peak of [M + H] ⁺ : 807.5 was detected.

[실리빈 말토시드의 합성][Synthesis of Silybin Maltoside]

헬페리히의 방법에 따라서 실리빈 말토시드를 합성하였다.Silybin maltoside was synthesized according to Helperrich's method.

실리빈(3.0 g, 6.2 ㏖)과 옥타-O-아세틸-D-말토오스(6.3 g, 9.2 ㏖)를 180 ㎖의 디클로로메탄-아세토니트릴(1:1, v/v)의 용매 중에서, 삼플루오르화붕소 디메틸에테르 착체(1.14 ㎖, 12.4 m㏖)를 질소 존재하, 실온에서 19시간 교반 반응시켰다. 반응 종료 후, 빙냉하면서 포화 탄산수소나트륨수용액을 첨가하고, 150 ㎖ 디클로로메탄으로 2회 추출처리하여, 무수 황산나트륨처리 후에 추출용매를 증발기로 제거하였다.Silyl (3.0 g, 6.2 mol) and octa-O-acetyl-D-maltose (6.3 g, 9.2 mol) were trifluorinated in 180 ml of a solvent of dichloromethane-acetonitrile (1: 1, v / v). The boron dimethyl ether complex (1.14 ml, 12.4 mmol) was stirred for 19 hours at room temperature in the presence of nitrogen. After completion of the reaction, saturated sodium hydrogencarbonate aqueous solution was added while cooling with ice, followed by extraction treatment twice with 150 ml dichloromethane, and the extraction solvent was removed by an evaporator after anhydrous sodium sulfate treatment.

트리에틸아민-메탄올-물(1:8:1)을 35℃에서 30시간 반응시킨 후, 증발기로 용매를 제거하였다. BONDESIL-C18(Varian)을 사용해서 정제를 행하여, 실리빈 말토시드(1.0 g, 수율 20%)를 얻었다. 얻어진 실리빈 락토시드를 MS 스펙트럼으로 확인하고, [M+H]⁺: 807.5의 피크를 검출하였다.After triethylamine-methanol-water (1: 8: 1) was reacted at 35 ° C. for 30 hours, the solvent was removed by an evaporator. Purification was performed using BONDESIL-C18 (Varian) to obtain silibine maltoside (1.0 g, yield 20%). The obtained silvin lactoside was confirmed by MS spectrum, and a peak of [M + H] ⁺ : 807.5 was detected.

[실시예 1]Example 1

수용성 시험Water solubility test

1. 실험방법1. Experimental method

실리빈, 실리빈 락토시드, 실리빈 말토시드(이하, 실리빈을 SB, 실리빈 락토시드를 SBL, 실리빈 말토시드를 SBM으로 기재하는 경우가 있다)를 1.5 ㎖ 튜브에 적량을 측정하여 취하고, 거기에 정제수를 각 농도가 되도록 첨가하여, 외관의 투 명성, 또한 실온에서 원심분리(15000 rpm, 5 min)하였을 때 침전으로서 석출되는지 여부를 육안으로 판정하였다. 또한 SB에 대해서는, 매우 수용성이 나쁘기 때문에 비커 내에 소량을 측정하여 취하고, 물을 첨가하여 교반기(stirrer)로 약 1시간 휘저어 혼합하고, 혼합조작을 멈추고 1시간 후에 침전물이 확인되지 않는 것을 용해된 것으로 판정하였다.Silybin, sylbin lactoside, sylbin maltoside (hereinafter referred to as SB, sylbin lactoside may be described as SBL, and sylbin maltoside as SBM) are measured in an appropriate 1.5 ml tube. Purified water was added thereto so as to have respective concentrations, and it was visually judged whether or not precipitated as a precipitate when centrifuged (15000 rpm, 5 min) at room temperature and at room temperature. In addition, about SB, since water solubility is very bad, a small amount was measured in a beaker, water was added, and it stirred and stirred for about 1 hour with a stirrer, and after 1 hour of mixing stopped, it was dissolved that the precipitate was not confirmed. Determined.

실험결과, SB와 비교하여 SBL, SBM 양자는 극적인 수용성의 향상이 확인되어, 약 5000배 이상으로 수용성이 개선되었다. SBL, SBM 사이에서의 용해성의 우열은 검출할 수 없었다. SB 농도 0.01 mM은 0.0005%(w/v)에 상당한다. SBL 및 SBM의 농도 50 mM, 60 mM은 각각 4.1%(w/v), 4.9%(w/v)에 상당한다. 따라서, SB와 SBL, SBM의 용해성을 질량/용량%로 비교하면, SBL, SBM의 용해성은 SB와 비교하여 약 10,000배 개선되어 있다. 수용성 타입의 피부 외용 조성물 등의 제(劑)로는, SB의 경우 0.0005%(w/v)의 농도로 함유시키는 것도 어려웠지만, SBL의 경우는 4.1%(w/v)의 농도로 함유시키는 것이 가능하고, SBM의 경우는 5.0%(w/v)의 농도로 함유시키는 것이 가능하다. 또한, SBL, SBM의 농도 0.01 mM은 0.0008%(w/v)에 상당한다.As a result, both SBL and SBM were found to have dramatic water solubility as compared with SB, and the water solubility was improved to about 5000 times or more. The superior solubility between SBL and SBM could not be detected. SB concentration of 0.01 mM corresponds to 0.0005% (w / v). The concentrations of SBL and SBM 50 mM and 60 mM correspond to 4.1% (w / v) and 4.9% (w / v), respectively. Therefore, when the solubility of SB, SBL, and SBM is compared by mass / volume%, the solubility of SBL and SBM is about 10,000 times improved compared to SB. In the case of SB, it was also difficult to contain at a concentration of 0.0005% (w / v) in the case of SB, but in the case of SBL, at a concentration of 4.1% (w / v) in the case of SBL. In the case of SBM, it is possible to contain at a concentration of 5.0% (w / v). In addition, 0.01 mM of SBL and SBM correspond to 0.0008% (w / v).

[실시예 2]Example 2

표피 각화세포 분화 억제시험·증식 유지작용Epidermal keratinocyte differentiation inhibitory test

1. 실험재료1. Experimental Materials

1.1 인간 정상 표피 각화세포1.1 Human Normal Epidermal Keratinocytes

인간 정상 표피 각화세포 NHEK(아사히 테크노글래스)를 표피 각화세포용 배지: KGM(아사히 테크노글래스)에서 37℃-5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 본 실험에는 계대 수가 3~5대인 세포를 이용하였다.Human normal epidermal keratinocytes NHEK (Asahi Technoglass) were incubated in a 37 ° C.-5% CO ₂ incubator in epidermal keratinocyte medium: KGM (Asahi Technoglass). In this experiment, cells with three to five passages were used.

1.2 KGM(표피 각화세포용 배지)1.2 KGM (medium for epidermal keratinocytes)

KGM은 표피 각화세포 기초 배지에 인간 상피세포 증식인자(0.1 ng/㎖), 인슐린(5.0 ㎍/㎖), 하이드로코르티손(0.5 ㎍/㎖), 겐타마이신(50 ㎍/㎖), 암포테리신 B(50 ㎍/㎖), 소 뇌하수체 추출액(2 ㎖)을 첨가한 것이다. 실리빈 배당체를 비롯한 샘플을 세포에 첨가하는 경우에는, 소 뇌하수체 추출액만을 제거한 KGM 배지를 사용하여 실험을 행하였다.KGM contained epidermal keratinocyte basal medium in human epidermal growth factor (0.1 ng / ml), insulin (5.0 μg / ml), hydrocortisone (0.5 μg / ml), gentamicin (50 μg / ml), amphotericin B (50 µg / ml) and cerebellar pituitary extract (2 ml) were added. In the case of adding the sample including the silbin glycoside to the cells, the experiment was performed using KGM medium in which only the cerebellar pituitary extract was removed.

1.3 첨가 샘플1.3 Addition Sample

실리빈(SB), 실리빈 말토시드(SBM), 실리빈 락토시드(SBL)를 DMSO(디메틸설폭시드: 와코순약)에 용해하고, 각종 농도로 첨가하였다.Silybin (SB), silybin maltoside (SBM), and silybin lactoside (SBL) were dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide: Wako Pure Chemical Co.) and added at various concentrations.

2. 실험방법2. Experimental method

2.1 표피 각화세포 분화 억제시험2.1 Epidermal keratinocyte differentiation inhibition test

NHEK를 KGM에서 5×10⁴/㎖가 되도록 현탁하고, 4 ㎖/웰로 6웰 플레이트에 파종하여, 24시간 배양해서, 플레이트에 세포를 접착시켰다. 각 화합물을 첨가한 소 뇌하수체 추출액을 제거한 KGM을 4 ㎖/웰로 처리하고, 이틀마다 배지를 교환하면서, 8~10일간 배양하였다. 매일 현미경으로 형태관찰을 행하여, DMSO 처리한 대조 세포가 분화 유사의 형태 변화(편평화)를 나타낸 시점에서 사진 촬영을 행하고, 배양을 종료하였다.NHEK was suspended in KGM to 5 × 10 ⁴ / ml, seeded in 6-well plates at 4 ml / well, incubated for 24 hours, and cells adhered to the plates. KGM from which the cerebellar pituitary extracts to which each compound was added was treated with 4 ml / well, and cultured for 8 to 10 days while changing the medium every two days. Morphological observation was carried out with a microscope every day, photographs were taken when DMSO-treated control cells showed differentiation-like morphological changes (flattening), and the culture was terminated.

2.2 표피 각화세포 증식 유지시험2.2 Epidermal keratinocyte proliferation maintenance test

상기 실험에서 얻어진 세포를 트립신처리에 의해 플레이트로부터 박리한 후에, KGM 중에서 2.5×10⁴/㎖가 되도록 현탁하였다. 세포 현탁액을 2 ㎖/웰로 24웰 플레이트에 파종하여, 이틀마다 배지를 교환하면서, 8일간 배양하였다. 배양 후, NHEK를 트립신처리에 의해 플레이트로부터 박리하고, 콜 카운터(베크만쿨터)에 의해 세포수를 측정하였다.The cells obtained in the above experiment were detached from the plate by trypsin treatment, and then suspended to 2.5 × 10 ⁴ / ml in KGM. Cell suspensions were seeded in 24-well plates at 2 ml / well and cultured for 8 days with medium change every two days. After incubation, NHEK was peeled from the plate by trypsin treatment, and the cell number was measured by a Cole counter (Beckman Coulter).

3. 실험결과3. Experimental Results

3.1 표피 각화세포 분화 억제시험3.1 Epidermal keratinocyte differentiation inhibition test

얻어진 실험결과를 도 1에 나타낸다. 이 도면은, 세포의 현미경 사진이다.The obtained experimental result is shown in FIG. This figure is a micrograph of a cell.

DMSO를 처리한 비교대조군인 Control 및 SB 3 μM(실리빈을 3 μM 첨가한 배지에서 배양)에서는, 표피 각화세포는 편평화되어, 분화 유사의 형태 변화를 나타내었다. 그에 대해, SBM 3 μM, SBL 3μM에서는 분화 유사의 형태는 확인되지 않았다. SB, SBL, SBM을 각각 10 μM 첨가한 배지에서 배양한 경우에는, 모두 표피 각화세포의 분화가 억제되었다. SB, SBL, SBM은 표피 각화세포의 분화 억제작용을 갖지만, SBM, SBL은 SB에 비해 표피 각화세포 분화 억제효과가 우수하다.In control and SB 3 μM, which were treated with DMSO (cultivated in medium added with 3 μM of silbin), epidermal keratinocytes were flattened and showed differentiation-like morphological changes. In contrast, no differentiation-like morphology was confirmed in SBM 3 μM and SBL 3 μM. When cultured in a medium containing 10 µM of SB, SBL, and SBM, respectively, the differentiation of epidermal keratinocytes was suppressed. SB, SBL, and SBM have an effect of inhibiting the differentiation of epidermal keratinocytes, but SBM and SBL have superior effect on inhibiting epidermal keratinocyte differentiation compared to SB.

3.2 표피 각화세포 증식 유지시험3.2 Epidermal keratinocyte proliferation maintenance test

상기의 표피 각화세포 분화 억제시험에 있어서, 분화가 억제되어 있으면 세포는 증식능을 유지하여, 계대작업을 함으로써 순차 증식할 것이다. 분화 유도된 세포는 분화가 부가역적(付加逆的)인 반응이기 때문에 증식하는 것은 불가능하다.In the epidermal keratinocyte differentiation inhibition test, if the differentiation is inhibited, the cells will continue to proliferate by maintaining the proliferative capacity and performing passage work. Differentiation-induced cells are unable to proliferate because differentiation is a reversible reaction.

이에 상기 시험에서 얻어진 세포를 계대하여, 유지되어 있는 증식능을 증식한 세포의 수를 측정함으로써 조사하였다.The cells obtained in the above test were passaged and examined by measuring the number of cells which proliferated and maintained proliferative capacity.

그 결과를 도 2에 나타낸다. 시료 농도 3 μM에서는 SB를 첨가한 것에 대해서 세포 증식능은 대부분 유지되어 있지 않지만, SBM은 시료 무첨가와 비교하여 1.8배, SBL은 시료 무첨가와 비교하여 1.4배로 세포수가 증가하여, 세포 증식능의 유지효과가 인정되었다. 시료농도 10 μM에서는 SB, SBM, SBL 모두 세포수가 증가하고, SB는 시료 무첨가와 비교하여 1.5배, SBM은 시료 무첨가와 비교하여 2.1배, SBL은 시료 무첨가와 비교하여 1.8배로 세포수가 증가하여, 세포 증식능의 유지효과가 인정되었다. SB와 비교하여, SBM, SBL의 세포 증식능의 유지효과가 높은 것을 알 수 있다.The result is shown in FIG. At the concentration of 3 μM, most of the cell proliferation was not maintained with the addition of SB, but SBM increased 1.8 times compared with no sample and SBL increased 1.4 times compared with no sample, maintaining the effect of maintaining cell proliferation. Admitted. SB, SBM, and SBL all increase the cell number at 10 μM sample concentration, SB 1.5 times compared to sample no addition, SBM 2.1 times compared to sample no addition, SBL increase 1.8 times compared to sample no addition, The maintenance effect of cell proliferation ability was recognized. Compared with SB, it can be seen that SBM and SBL have a high effect of maintaining cell proliferation.

[실시예 3]Example 3

I형 콜라겐 생산 촉진작용Type I collagen production promoting action

1. 실험재료1. Experimental Materials

1.1 인간 피부 섬유아세포1.1 Human Skin Fibroblasts

인간 피부 섬유아세포 CCD1074SK(다이닛폰 스미토모 제약)를 D-MEM 중에서 37℃-5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 본 실험에는 계대 수가 10~15대인 세포를 이용하였다.Human skin fibroblast CCD1074SK (Dainippon Sumitomo Pharmaceuticals) was incubated in 37 ° C.-5% CO ₂ incubator in D-MEM. In this experiment, cells with passage numbers of 10 to 15 were used.

1.2 D-MEM1.2 D-MEM

D-MEM은, D-MEM 기초 배지(GIBCO)에 소 태아 혈청(Hyclone)을 10%가 되도록 첨가하여 사용하였다. 또한 샘플을 처리할 때에는, 소 태아 혈청을 넣지 않는 D-MEM을 사용하여 실험을 행하였다.D-MEM was used by adding 10% fetal bovine serum (Hyclone) to D-MEM basal medium (GIBCO). In addition, when processing a sample, experiment was performed using D-MEM which does not add fetal bovine serum.

2. 실험방법2. Experimental method

인간 피부 섬유아세포 CCD1074SK를 10% 소 태아 혈청을 포함하는 D-MEM 배지에서 3×10⁵/㎖가 되도록 현탁하고, 10 ㎝ 샬레에 1 ㎖ 파종하여, 24시간 배양해서, 플레이트에 세포를 접착시켰다.Human skin fibroblast CCD1074SK was suspended in D-MEM medium containing 10% fetal bovine serum to 3 × 10 ⁵ / ml, seeded in 1 ml in a 10 cm chalet, incubated for 24 hours, and cells adhered to the plate. .

배지를 DMSO에 용해시킨 각 샘플을 각 농도로 첨가한 소 태아 혈청을 넣지 않는 D-MEM 배지로 교환하였다. 배지 교환 48시간 후에 세포 배양액을 회수하고, 한외여과장치를 사용하여 배양액을 농축하였다. 약 500 ㎖ 이하로 농축한 후, 단백질 정량을 행하여, 단백질량을 맞춘 후에, 세포 배양액 농축 샘플로서 웨스턴 블로팅에 사용하였다.Each sample dissolved in DMSO was exchanged with D-MEM medium without fetal bovine serum added at each concentration. After 48 hours of medium exchange, the cell culture was recovered, and the culture was concentrated using an ultrafiltration apparatus. After concentration to about 500 mL or less, the protein was quantified, the protein amount was adjusted, and then used for western blotting as a cell culture concentrated sample.

1레인당 10 ㎍의 단백질을 사용하여, SDS-PAGE로 분리한 후, 니트로셀룰로오스막에 전사하였다. 전사 후의 니트로셀룰로오스막을 블로킹 용액(탈지유를 5% 농도가 되도록 0.1%의 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트를 포함하는 PBS로 용해한 용액)에 침지하고, 4℃에서 하루 블로킹하였다. 세정액{0.1%의 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노라우레이트를 포함하는 PBS}으로 세정한 후, 1차 항체{세정액으로 500 ng/㎖로 조제한 I형 콜라겐에 대한 다중클론항체(록랜드)}에 침지하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 세정 후, 2차 항체(세정액으로 250 ng/㎖로 조제한 호스래디쉬 퍼옥시다아제 표지화 항 토끼 면역글로불린 G)에 침지하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 세정 후, ECL 플러스 웨스턴 블로팅 검출시약(아머샴 바이오사이언스사)을 사용하여 검출하였다.10 µg of protein per lane was used to isolate by SDS-PAGE, and then transferred to nitrocellulose membrane. The nitrocellulose membrane after transfer was immersed in a blocking solution (solution in which skim milk was dissolved in PBS containing 0.1% of polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate so as to have a 5% concentration) and blocked at 4 ° C for one day. Polyclonal antibody against collagen type I (Rockland) prepared after washing with washing solution {PBS containing 0.1% polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate} and 500 ng / ml with washing solution } Was immersed and reacted at room temperature for 1 hour. After washing, the mixture was immersed in a secondary antibody (horseradish peroxidase-labeled anti rabbit immunoglobulin G prepared at 250 ng / ml as a washing solution) and allowed to react at room temperature for 1 hour. After washing, detection was performed using an ECL plus western blotting detection reagent (Amersham Biosciences).

실험결과Experiment result

실험결과, SB와 마찬가지로 SBL, SBM 양자에도 I형 콜라겐 생산 촉진작용이 확인되었다. 실험결과를 도 3에 나타낸다.As a result, the SBL and SBM as well as SB was confirmed to promote the production of collagen type I. The experimental results are shown in FIG.

얻어진 밴드의 강도를 프로그램 소프트 Image J에 의해 수치화한 결과를 표 2에 나타내고, DMSO 처리시의 I형 콜라겐의 생산량을 1로 하였을 때의 비교 생산량을 도 4로서 나타낸다.The result of having quantified the intensity | strength of the obtained band by the program software Image J is shown in Table 2, and the comparative production amount at the time of making the production amount of type I collagen in DMSO treatment into 1 is shown as FIG.

SB, SBM, SBL 모두 I형 콜라겐 생산 촉진작용을 나타내었다. SB와 비교하여, SBM, SBL은 I형 콜라겐 생산 촉진효과가 강하다. 특히, 시료농도 10 μM에서는 SBM, SBL의 작용효과가 커, 고농도에서의 현저한 작용효과가 인정된다.SB, SBM, SBL all showed the type I collagen production promoting action. Compared with SB, SBM and SBL have a strong effect of promoting type I collagen production. In particular, at a sample concentration of 10 µM, the effect of SBM and SBL is large, and a significant effect at high concentration is recognized.

[실시예 4]Example 4

자외선 조사에 의한 수분 증산 억제작용 주름 형성 억제작용Inhibition of moisture evaporation by UV irradiation Inhibition of wrinkle formation

1. 실험재료·기구1. Experimental Materials

실험동물 무모 마우스 Hos; HR 1 ♀ 5주령(호시노 실험재료)Laboratory animal hairless mouse Hos; HR 1 ♀ 5 weeks old (Hoshino experimental material)

1.2 자외선 조사장치1.2 UV irradiation device

자외선 A파(FL32SBL/DMR: (주)클리니컬 서플라이제)Ultraviolet rays A wave (FL32SBL / DMR: product made in Clinical Supply)

자외선 B파(FL32SE/DMR: (주)클리니컬 서플라이제)Ultraviolet B wave (FL32SE / DMR: product made in Clinical Supply)

1.3 경피(經皮) 수분 증산량 측정장치1.3 Percutaneous moisture evaporation measuring device

Vapometer(키 사이언스사제)Vapometer (product made by Key Science, Inc.)

1.4 레플리카 채취기구 및 레플리카 해석 시스템1.4 Replica Collection Apparatus and Replica Analysis System

(유)아사히 바이오메드제 반사형 레플리카 채취 키트 및 레플리카 해석 시스템 ASA-03RXDAsahi Biomed reflective reflection collection kit and replica analysis system ASA-03RXD

2. 실험방법2. Experimental method

2.1 사육환경2.1 Breeding environment

25℃±2℃, 습도 50%±5%, 식이는 사료 MR, 수돗물을 각각 자유 섭취할 수 있는 통상의 사육환경에서 사육하였다.25 ℃ ± 2 ℃, humidity 50% ± 5%, diet was fed in the normal breeding environment where the feed MR and tap water can be freely ingested respectively.

1군당 5마리를 군을 나누어 동일한 케이지에서 사육하였다.Five birds per group were divided and raised in the same cage.

일조는 오전 7시~오후 7시까지의 12시간마다 주야를 설정하였다.Daylight sets day and night every 12 hours from 7:00 am to 7:00 pm.

2.2 자외선 조사2.2 UV irradiation

무모 마우스 Hos; HR 1을 1주간 순화(馴化)한 후 자외선 조사를 개시하였다. 자외선 조사시는 무모 마우스를 전용 케이지로 옮기고, 1군씩 UVB 20 mJ/㎠ 및 UVA 10 J/㎠의 자외선을 조사하였다. 조사는 월, 수, 금의 주 3일의 사이클로 10주간 실시하여, 합계 30회 자외선을 조사하였다.Hairless Mouse Hos; Ultraviolet irradiation was started after HR1 was refine | purified for 1 week. At the time of ultraviolet irradiation, hairless mice were transferred to dedicated cages, and UV-rays of UVB 20 mJ / cm 2 and UVA 10 J / cm 2 were irradiated one by one. Irradiation was carried out for 10 weeks in a cycle of 3 days a week for months, Wednesdays and Fridays, and 30 times of ultraviolet rays were irradiated.

2.3 군 설정2.3 Military Setup

자외선 조사 후 30분 이내에 SB, SBL, SBM 메탄올 용액 또는 용매(메탄올)를 마우스 등(背部) 피부 전면에 100 μL 처리하였다. SB, SBL, SBM 도포의 농도설정을 각각 1.0%, 0.3%, 0.1%의 3점 설정하고, 이들 전체 군에 대해서는 자외선 조사를 행하였다. 용매인 메탄올만을 도포하는 것에 대해서, 자외선 비조사 및 자외선 조사군을 준비하였다. 용매로 메탄올을 사용한 것은 SB를 용해하기 위함이다. 메탄올 중에서, SBM, SBL은 1% 농도에서도 완전히 용해되어 있었지만, SB는 0.1%만이 완전히 용해되고, 0.3%는 약간 석출이 확인되며, 1%에서는 불용물이 확인되었다. SB 메탄올 용액에 불용물이 확인된 경우도 그대로 실험에 사용하였다.Within 30 minutes after UV irradiation, 100 μL of SB, SBL, SBM methanol solution or solvent (methanol) was treated over the entire skin of the mouse's back. The concentration settings of SB, SBL, and SBM coating were set at three points of 1.0%, 0.3%, and 0.1%, respectively, and all of these groups were irradiated with ultraviolet rays. About the application | coating only methanol which is a solvent, the ultraviolet irradiated group and the ultraviolet irradiated group were prepared. Methanol was used as a solvent to dissolve SB. In methanol, SBM and SBL were completely dissolved at 1% concentration, but only 0.1% of SB was completely dissolved, 0.3% was slightly precipitated, and 1% of insoluble matter was confirmed. Even when an insoluble matter was confirmed in the SB methanol solution, it was used for the experiment as it is.

2.4 경피 수분 증산량의 측정2.4 Determination of Transdermal Water Evaporation

경피 수분 증산량의 측정은 VapoMeter(키스톤 사이언티픽사제)를 사용하여, 등의 꼬리가 붙어 있는 밑동부분에서 목을 향해서 2 ㎝, 요추에서 오른쪽으로 0.5 ㎝ 부위를 3회 측정하여 평균을 구하였다. 측정 말단의 개구부는 Nail 모드(개구부를 좁게 함으로써, 마우스 피부의 좁은 범위에 대응한)를 사용하여, 1회마다 측정시간에 약 19초를 소요하였다. 측정일은 자외선 조사 10주간 후에 행하였다.The transdermal moisture evaporation amount was measured using VapoMeter (manufactured by Keystone Scientific, Inc.) and measured 2 cm from the base of the dorsal part of the back to the neck and 0.5 cm from the lumbar spine to the right three times. The opening of the measurement terminal used the nail mode (corresponding to the narrow range of the mouse skin by narrowing the opening), which took about 19 seconds for each measurement time. The measurement day was performed after 10 weeks of ultraviolet irradiation.

2.5 레플리카 화상 해석2.5 Replica Image Analysis

주름의 형성을 정확하게 파악하기 위해 레플리카를 채취하였다. 레플리카 화상 해석은 반사용 레플리카 해석 시스템 ASA-03RXD((유)아사히 바이오메드제)를 사용해서 행하였다. ASA-03RXD를 사용하여, 채취한 레플리카에 각도 27도로부터의 평행광(LED광원)을 조사함으로써 얻어지는 주름의 형상에 따른 음영화상을 CCD 카메라로 촬상하고, 컴퓨터로 읽어들여 화상처리함으로써 레플리카 표면의 주름 체적율(μ㎥/㎟/100)을 계측하였다.Replicas were taken to accurately identify the formation of wrinkles. The replica image analysis was performed using the reflection replica analysis system ASA-03RXD (made by Asahi Biomed). Using the ASA-03RXD, a shadow image according to the shape of the wrinkles obtained by irradiating parallel light (LED light source) from an angle of 27 degrees with the collected replica is captured by a CCD camera, and read by a computer to perform image processing on the replica surface. The wrinkle volume ratio (μm 3 / mm 2/100) was measured.

2.6 통계해석2.6 Statistical Analysis

시험결과는 평균값±표준편차(S.D.)로 표시하고, 유의차 검정은 등분산성의 검정을 바틀릿 검정(Bartlett's test)으로 행하였다. 등분산성의 가정이 기각되지 않았을 때는 던넷(Dunnett)의 다중검정을 행하고, 등분산성의 가정이 기각되었을 때는 참고 데이터로서 던넷(Dunnett)의 다중검정을 행하였다.The test results were expressed as the mean value ± standard deviation (S.D.), and the significant difference test was performed by Bartlett's test on the test of equal dispersion. Dunnett's multiple test was performed when the assumption of equal variances was not rejected, and Dunnett's multiple test was performed as reference data when the assumption of equal variances was rejected.

3. 시험결과3. Test result

3.1 체중변동, 외관관찰3.1 weight change, appearance observation

10주간 조사 종료 후, 각 군 사이에서 체중 변천에 눈에 띄는 차이는 없었다. 심각한 병변을 나타낸 마우스도 없었다. After 10 weeks of study, there was no noticeable difference in body weight change between groups. No mice showed severe lesions.

마우스 피부의 외관을 관찰한 결과, 군 2의 자외선 조사 메탄올 처리군에서는 주름 형성이 확인되는 것에 대해, 군 4의 0.3% 실리빈 도포군, 군 6~군 8의 모든 SBM 도포군, 군 9~군 11의 모든 SBL 도포군에 있어서 주름 억제작용이 확인되었다.As a result of observing the appearance of the mouse skin, in the ultraviolet irradiation methanol treatment group of group 2, while wrinkle formation was confirmed, 0.3% silinic coating group of group 4, all SBM coating groups of group 6 to group 8, groups 9 to 9 Wrinkle inhibitory effect was confirmed in all SBL coating groups of group 11.

3.2 경피 수분 증산량3.2 Transdermal Moisture Evaporation

피부 거칠어짐의 지표로서, 자외선 조사 10주간 후에 VapoMeter를 사용하여 각 군의 수분 증산량을 측정하였다. 결과를 표 3과 도 5에 나타낸다.As an indicator of skin roughness, the water evaporation amount of each group was measured using VapoMeter after 10 weeks of ultraviolet irradiation. The results are shown in Table 3 and FIG. 5.

군 1 자외선 비조사군에 비해 군 2의 자외선 조사군에서는 경피 수분 증산량이 높아진다. 군 3~군 11의 실리빈(SB), 실리빈 배당체(SBM, SBL) 도포군에서는 위험률 1% 이하에서 유의하게 경피 수분 증산량의 상승이 억제되어 있었다.The amount of transdermal moisture evaporation increases in the ultraviolet irradiation group of Group 2 compared with the group 1 ultraviolet irradiation group. The increase in transdermal water evaporation was significantly suppressed in the silicide (SB) and silvin glycosides (SBM, SBL) coated groups in groups 3 to 11 at a risk of 1% or less.

1군(자외선 비조사, 메탄올 도포)의 수분 증산량을 0%, 2군(자외선 조사, 메탄올 도포)의 수분 증산량을 100%로 하였을 때, 3~5군(자외선 조사, SB 0.1~1% 도포)의 수분 증산량은 26~76%, 6~8군(자외선 조사, SBM 0.1~1% 도포)의 수분 증산량은 11~21%, 9~11군(자외선 조사, SBL 0.1~1% 도포)의 수분 증산량은 24~27%가 되어, SB, SBM, SBL을 첨가함으로써 수분 증산량의 상승이 억제되었다. 특히, 실리빈 배당체인 SBM, SBL의 수분 증산량의 상승 억제효과가 높다. 즉 햇볕에 그을림에 의한 피부 거칠어짐을 개선하는 효과가 있다.When the amount of moisture evaporation in group 1 (non-ultraviolet irradiation, methanol coating) is 0% and the amount of water evaporation in group 2 (ultraviolet irradiation, methanol coating) is 100%, 3 to 5 groups (ultraviolet irradiation, SB 0.1-1% coating) The amount of water evaporation of) is 26-76%, the amount of water evaporation of 6-8 groups (ultraviolet irradiation, SBM 0.1-1% application) of 11-21%, 9-11 group (ultraviolet irradiation, SBL 0.1-1% application) The amount of water evaporation became 24 to 27%, and the increase of the amount of water evaporation was suppressed by adding SB, SBM, and SBL. In particular, the inhibitory effect of the increase in the amount of water evaporation of the silicide glycosides SBM and SBL is high. In other words, there is an effect of improving the roughness of the skin by sunburn.

3.3 주름 체적율3.3 Crease Volume Ratio

10주간 조사 종료 후, 주름의 형성을 정확하게 파악하기 위해 레플리카를 채취하고, 화상해석에 의해 레플리카 표면의 주름 체적율(μ㎥/㎟/100)을 계측하였다. 결과를 표 4, 도 6에 나타낸다.After 10 weeks of irradiation, replicas were taken to accurately determine the formation of wrinkles, and the wrinkle volume fraction (μm 3 / mm 2 // 100) on the replica surface was measured by image analysis. The results are shown in Table 4 and FIG. 6.

던넷(Dunnett)의 유의차 검정을 실시한 결과, 군 2(자외선 조사 메탄올 도포)에 대해, 군 1(자외선 비조사 메탄올 도포), 군 4(자외선 조사 SB 0.3% 도포), 군 7(자외선 조사 SBM 0.3% 도포), 군 11(자외선 조사 SBL 1.0% 도포)은 각각 위험률 5% 이하에서 유의하게 주름 체적이 억제되었다.As a result of the significant difference test of Dunnett, about group 2 (ultraviolet irradiation methanol application), group 1 (ultraviolet irradiation non-irradiation methanol application), group 4 (ultraviolet irradiation SB 0.3% application), group 7 (ultraviolet irradiation SBM 0.3% application), group 11 (ultraviolet irradiation SBL 1.0% application) significantly inhibited the wrinkle volume at a risk of 5% or less, respectively.

[처방예 1 화장수][Prescription 1 lotion]

질량%mass%

1. 실리빈 락토시드 0.3Silybin lactoside 0.3

2. 디글리세린 5.02. Diglycerin 5.0

3. 1,3-부틸렌글리콜 2.03. 1,3-butylene glycol 2.0

4. 디프로필렌글리콜 3.04. Dipropylene Glycol 3.0

5. 수산화칼륨 적량5. Potassium hydroxide appropriate amount

6. 구연산 적량6. Citric Acid Proper

7. 정제수 잔여7. Purified water residual

(제법)(quite)

7에 1~6을 용해하였다.1 to 6 were dissolved in 7.

[처방예 2 유액][Prescription 2 Latex]

질량%mass%

1. 실리빈 말토시드 0.3Silybin Maltoside 0.3

2. 수소첨가 대두 인지질 0.72. Hydrogenated Soybean Phospholipids 0.7

3. 스테아르산 데카글리세릴(HLB 12) 2.03. Decaglyceryl Stearate (HLB 12) 2.0

4. 글리세린 8.04. Glycerin 8.0

5. 올리브유 8.05. Olive Oil 8.0

6. 베헤닐알코올 1.06. Behenyl Alcohol 1.0

7. 디프로필렌글리콜 8.07. Dipropylene Glycol 8.0

8. 카르복시비닐폴리머 0.18. Carboxyvinyl Polymer 0.1

9. 크산탄검 0.29. Xanthan Gum 0.2

10. 수산화칼륨 적량10. Potassium hydroxide appropriate amount

11. 구연산 적량11. Citric Acid Proper

12. 정제수 잔여12. Residual Purified Water

(제법)(quite)

1~4 및 7~12를 80℃에서 가온 용해한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 5, 6을 첨가하여, 호모믹서로 교반 혼합하고, 30℃까지 냉각하여, 유액을 얻었다.1-4 and 7-12 are heated and dissolved at 80 degreeC. 5 and 6 heated at about 80 degreeC were added here, stirred and mixed by the homomixer, it cooled to 30 degreeC, and the emulsion was obtained.

[처방예 3 모이스처 미용액][Prescription 3 Moisture Serum]

질량%mass%

1. 실리빈 락토시드 0.2Silybin lactoside 0.2

2. 수소첨가 대두 인지질 0.62. Hydrogenated Soy Phospholipids 0.6

3. 모노올레산 데카글리세릴(HLB 12) 1.53.Decaglyceryl Monooleate (HLB 12) 1.5

4. 글리세린 7.04. Glycerin 7.0

5. 1,3-부틸렌글리콜 5.05. 1,3-butylene glycol 5.0

6. 폴리에틸렌글리콜4000 0.16. Polyethylene glycol 4000 0.1

7. 스쿠알렌 5.07. Squalene 5.0

8. 실리콘 0.58. Silicone 0.5

9. 라우로일글루타민산 디(피토스테릴/옥틸도데실)9. Lauroylglutamic acid di (phytosteryl / octyldodecyl)

0.20.2

10. 크산탄검 0.310.Xanthan Gum 0.3

11. 수산화칼륨 적량11. Potassium hydroxide appropriate amount

12. 구연산 적량12. Citric Acid Proper

13. 정제수 잔여13. Purified water residual

(제법)(quite)

1 및 11~13을 교반 용해하고, 4~6, 10을 첨가한 후, 약 80℃로 가온 용해한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 2, 3, 7~9를 첨가하고, 30℃까지 냉각하여, 모이스처 미용액을 얻었다.After stirring and dissolving 1 and 11-13, and adding 4-6 and 10, it heat-dissolves at about 80 degreeC. 2, 3, and 7-9 which heated at about 80 degreeC were added here, it cooled to 30 degreeC, and the moisturizing cosmetic liquid was obtained.

[처방예 4 에몰리언트 크림][Prescription 4 Emollient Cream]

질량%mass%

1. 실리빈 말토시드 0.51.Silbin Maltoside 0.5

2. 디글리세린 10.02. Diglycerin 10.0

3. 디프로필렌글리콜 8.03. Dipropylene Glycol 8.0

4. 1,2-펜탄디올 0.54. 1,2-pentanediol 0.5

5. L-세린 0.015.L-serine 0.01

6. 디스테아르산 데카글리세릴(HLB 9.5) 0.56. Distearic acid decaglyceryl (HLB 9.5) 0.5

7. 모노미리스트산 데카글리세릴(HLB 14) 1.57. Monomyritic Decaglyceryl (HLB 14) 1.5

8. 올리브유 10.08. Olive Oil 10.0

9. 마카다미아 너트유 1.09. Macadamia Nut Oil 1.0

10. 베헤닐알코올 1.510.Behenyl Alcohol 1.5

11. 실리콘 2.011.Silicone 2.0

12. 호호바 오일 3.012.Jojoba Oil 3.0

13. 토코페롤 0.00113. Tocopherol 0.001

14. SIMULGEL NS(SEPPIC사제) 2.014.SIMULGEL NS (manufactured by SEPPIC) 2.0

15. 크산탄검 0.115.Xanthan Gum 0.1

16. 수산화칼륨 적량16. Potassium hydroxide appropriate amount

17. 구연산 적량17. Citric Acid Proper

18. 정제수 잔여18. Residual Purified Water

(제법)(quite)

1 및 16~18을 교반 용해하고, 2~5를 첨가한 후, 약 80℃로 가온 용해한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 6~14를 첨가하고, 30℃까지 냉각하여, 에몰리언트 크림을 얻었다.After stirring and dissolving 1 and 16-18, and adding 2-5, it melt | dissolves by heating at about 80 degreeC. 6-14 heated at about 80 degreeC were added here, it cooled to 30 degreeC, and the emollient cream was obtained.

[처방예 5 바디용 유액][Prescription 5 Body emulsion]

질량%mass%

1. 실리빈 락토시드 0.2Silybin lactoside 0.2

2. PEG-60 수소첨가 피마자유(HLB 14) 1.52. PEG-60 hydrogenated castor oil (HLB 14) 1.5

3. 글리세린 9.03. Glycerin 9.0

4. 디프로필렌글리콜 7.04. Dipropylene Glycol 7.0

5. 히알루론산 Na 0.0015. Hyaluronic acid Na 0.001

6. 유동 파라핀 10.06. Floating Paraffin 10.0

7. 실리콘 3.07. Silicon 3.0

8. 옥틸도데칸올 4.08. Octyldodecanol 4.0

9. (아크릴산/아크릴산알킬(C10-30)) 코폴리머 0.29. (Acrylic acid / alkyl acrylate (C10-30)) copolymer 0.2

10. 수산화칼륨 적량10. Potassium hydroxide appropriate amount

11. 구연산 적량11. Citric Acid Proper

12. 정제수 잔여12. Purified water residual

13. 에탄올 2.513. Ethanol 2.5

(제법)(quite)

1 및 10~12를 교반 용해하고, 2~5, 9를 첨가한 후, 약 80℃로 가온 용해한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 6~8을 첨가하여, 30℃까지 냉각하고, 13을 첨가하여, 바디용 유액을 얻었다.After stirring and dissolving 1 and 10-12, and adding 2-5 and 9, it heat-dissolves at about 80 degreeC. 6-8 heated at about 80 degreeC were added here, it cooled to 30 degreeC, 13 was added, and the body milk liquid was obtained.

[처방예 6 마사지 크림][Prescription 6 Massage Cream]

질량%mass%

1. 실리빈 말토시드 0.05Silybin Maltoside 0.05

2. 글리세린 10.02. Glycerin 10.0

3. 디글리세린 2.03. Diglycerin 2.0

4. 프로필렌글리콜 7.04. Propylene Glycol 7.0

5. 모노스테아르산 데카글리세릴(HLB 12) 1.05.Decaglyceryl Monostearate (HLB 12) 1.0

6. 에틸헥산산세틸 12.06.Acetyl Cetyl Ethyl 12.0

7. 베헤닐알코올 2.07. Behenyl Alcohol 2.0

8. 스테아르산 0.58. Stearic Acid 0.5

9. 세피노브 EMT10(SEPPIC사제) 0.59. Sepinov EMT10 (manufactured by SEPPIC) 0.5

10. 향료 적량10. Spices suitable

11. 페녹시에탄올 0.311.Phenoxyethanol 0.3

12. 수산화칼륨 적량12. Potassium hydroxide appropriate amount

13. 구연산 적량13. Citric Acid Proper

14. 정제수 잔여14. Purified water residual

(제법)(quite)

1 및 11~14를 교반 용해하고, 2~4를 첨가한 후, 약 80℃로 가온 용해한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 5~9를 첨가하여, 30℃까지 냉각하고, 10을 첨가하여, 마사지 크림을 얻었다.After stirring 1 and 11-14, and adding 2-4, it melt | dissolves by heating at about 80 degreeC. 5-9 heated at about 80 degreeC were added here, it cooled to 30 degreeC, 10 was added, and the massage cream was obtained.

[처방예 7 유화형 파운데이션][Prescription 7 Oil-Based Foundation]

질량%mass%

1. 실리빈 락토시드 0.1Silybin lactoside 0.1

2. 글리세린 10.02. Glycerin 10.0

3. 디프로필렌글리콜 8.03. Dipropylene Glycol 8.0

4. 1,2-펜탄디올 1.04. 1,2-pentanediol 1.0

5. 크산탄검 0.35. Xanthan Gum 0.3

6. 트리이소스테아르산 폴리글리세릴-2 1.06. Triisostearic Acid Polyglyceryl-2 1.0

7. 시클로메티콘 8.07. Cyclomethicone 8.0

8. 실리콘 5.08. Silicon 5.0

9. 네오펜탄산 이소스테아릴 5.09. Neopentanoic acid isostearyl 5.0

10. 이소스테아르산 1.510. Isostearic Acid 1.5

11. 베헤닐알코올 0.511.Behenyl Alcohol 0.5

12. 팔미트산 덱스트린 1.012. Palmitate Dextrin 1.0

13. 탈크 3.013. Talc 3.0

14. 이산화티탄 5.014. Titanium Dioxide 5.0

15. 벵갈라 0.515. Bengala 0.5

16. 황산화철 1.416. Iron Sulfate 1.4

17. 흑산화철 0.117. Iron Oxide 0.1

18. 수산화칼륨 적량18. Potassium hydroxide appropriate amount

19. 구연산 적량19. Citric Acid Proper

20. 정제수 잔여20. Residual Purified Water

(제법)(quite)

1 및 18~20을 교반 용해하고, 2~5를 첨가한 후, 약 70℃로 가온 용해한다. 다음으로, 잘 분쇄한 13~17을 첨가하여, 교반 혼합한다. 여기에, 약 80℃로 가온한 6~12를 첨가하고, 30℃까지 냉각하여, 유화형 파운데이션을 얻었다.1 and 18-20 are stirred and melt | dissolved, and after adding 2-5, it heat-dissolves at about 70 degreeC. Next, 13-17 which are well grind | pulverized are added, and it stirs and mixes. 6-12 which heated at about 80 degreeC was added here, it cooled to 30 degreeC, and the emulsion type foundation was obtained.

도 1은 표피 각화세포 분화 억제 시험결과를 나타내는 도면이다.1 shows epidermal keratinocyte differentiation inhibition test results.

도 2는 표피 각화세포 증식 유지 시험결과를 나타내는 그래프이다.2 is a graph showing epidermal keratinocyte proliferation maintenance test results.

도 3은 I형 콜라겐 생산 촉진 시험결과를 나타내는 도면이다.3 is a view showing the results of type I collagen production promotion test.

도 4는 도 3에 나타내어지는 밴드 강도를 이미지 처리하여 수치화하여 나타낸 그래프이다.FIG. 4 is a graph showing image values of the band intensities shown in FIG.

도 5는 자외선 조사시험을 행한 마우스의 수분 증산량을 측정한 값을 나타내는 그래프이다.5 is a graph showing a value of measuring the amount of water evaporation of a mouse subjected to an ultraviolet irradiation test.

도 6은 자외선 조사시험을 행한 마우스의 피부 레플리카 표면의 주름 체적율을 나타내는 그래프이다.It is a graph which shows the wrinkle volume ratio of the skin replica surface of the mouse which performed the ultraviolet irradiation test.

Claims (8)

실리빈 배당체를 함유하는 피부 외용 조성물.A composition for external application of skin containing silibine glycosides. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 실리빈 배당체가 화학식 1의 실리빈 락토시드 또는 화학식 2의 실리빈 말토시드인 것을 특징으로 하는 피부 외용 조성물.The composition for external application of skin, characterized in that the silin glycoside is a silin lactoside of formula (1) or a silin maltoside of formula (2). [화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 주름 형성 억제제.Wrinkle formation inhibitor which uses a silicide glycoside as an active ingredient. 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 표피 각화세포 분화 억제제.Epidermal keratinocyte differentiation inhibitor comprising a silicide glycoside as an active ingredient. 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 I형 콜라겐 생산 촉진제.Type I collagen production promoter using a silicide glycoside as an active ingredient. 실리빈 배당체를 유효성분으로 하는 햇볕에 그을림에 의한 피부 거칠어짐 개선제.Skin roughening improvement agent by sun-burning which uses silybin glycoside as an active ingredient. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,The method according to any one of claims 3 to 6, 실리빈 배당체가 화학식 1의 실리빈 락토시드 또는 화학식 2의 실리빈 말토시드인 것을 특징으로 하는 제(劑).(I) The silybin glycoside is a silybin lactoside of formula (1) or a silybin maltoside of formula (2). [화학식 1][Formula 1]

[화학식 2][Formula 2]

물을 용매로 하고, 실리빈 배당체를 0.0008~5.0 중량% 함유하는 것을 특징으 로 하는 제2항의 피부 외용 조성물 또는 제7항의 제.The external composition for skin of claim 2 or claim 7 containing water as a solvent and containing 0.0008 to 5.0% by weight of silin glycoside.

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