KR20090075282A - 천연방부효과를 갖는 초피추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천연방부제에 관한 것으로, 좀 더 상세하게는 화장품, 생활용품 등에서 항균 및 항산화 및 노화억제 기능을 가짐으로써 제품의 안전성과 안정성을 높이고 인체에서 안전하고 내성이 유발되지 않으면서 적절한 항산화 및 노화억제 기능까지 보유하고 있어 화장료 또는 생활용품에서 기존의 화학 합성방부제가 인체에 대하여 나타내는 부작용을 전혀 나타내지 않으면서 방부능력이 보다 우수한, 새로운 방부효과를 갖는 초피추출물을 함유하는 천연방부제에 관한 것이다.

방부효과, 초피추출물, 화장료

Description

천연방부효과를 갖는 초피추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition for the Natural preservative from decay containing the extract of the chopi}

식품, 의약품, 화장품 등의 많은 제품의 품질을 오랫동안 유지하기 위해서는 미 생물에 의한 부패를 막아주는 방부제가 필수적이며 유통기간이 비교적 길며 미생물 영양원이 많은 화장품의 경우는 더욱 그러하다. 기존의 방부제로서 가장 안전하며 화장품, 의약품에 범용적으로 사용되는 파라벤류의 방부제들 조차 피부알러지 (Andrea Counti등, Contact Dermatitis,1997,37;35-36.) 및 환경호르몬으로서의 가능성(Edwin등,Toxicology and Applied Pharmacology,1998, 153;12-19) 을 가지고 있고 식품용 방부제들도 허용된 기준내의 사용도 불신되고 있고 지속적인 체내 축적은 급, 만성독성, 돌연변이 유발 등의 새로운 문제 가능성이 대두되고 있다(신동화, 식품과학 과 산업,1990,23(4) 68-72). 따라서, 제품의 안전성과 경제성을 향상시킬 수 있는 천연방부제가 필요한 실정이다. 천연항균성 물질에 대한 연구는 많은 연구자들에 의해 연구되었는데 항신료, 우유 및 어류 등의 식품류, 정유, 한약재 등으로부터 많은 천연 항균성 물질이 보고되었고 알카로이드 (alkaloid), 후라보노이드(flavonoid), 피토알렉신(phytoalexin), 항균펩타이드에 대한 것도 보고되었고, 유기산과 지방산 등의 항균성에 대한 것도 보고되었으며 산의 pH에 의한 효과 및 킬레이트에 의한 효과가 주 메카니즘일 것으로 추정했다(EI-shenawy,MA등,J.Food Protec.1989,52(11):771 -778 )(Bizri,JN 등, J Food Science, 1994, 59(1),130-135). 그에 따라 근래에는 항생제의 감수성을 높이기 위해 천연물에서 후라보노이드와 같이 사용하여 감수성을 높였다는 보고가 있으며(IAIN X,Liu 등 J. Pharm. Pharmacol, 000,52:361-366), 항균 펩타이드 (Giacometti A 등, J. Antimicrob. Chemother 2000 Nov;46(5):807-811)도 병용효과를 위한 대안으로 많은 연구가 진행되었지만, 항균펩타이드는 항균성만 나타내는 제한성이 있으며 경제적 대량생성방법에 문제가 있다(Lee JH 등 , Protein. Expr. Purif. 1998 Feb;12 (1),53-60).

나이신(Nisin)은 식품이나 화장품을 부패시키는 일부 세균에 대한 항균작용을 지니고 있는 펩타이드로 식용세균인 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactics)의 발효산물로 식품방부제로서의 안전성과 효능이 탁월하여 미국을 포함한 세계 각국에서 우유 및 치즈에 널리 사용되고 있다. 나이신은 란티오닌이라는 아미노산을 함유하여 란티바이오틱스(Lantibiotics) 라는 항균물 질의 범주에 속하며, FDA에서 식품방부제로의 사용을 허가하였고 CTFA에서도 화장품 원료로서 사용을 허가하였다.

본 발명은 천연방부제 제조방법 및 이를 이용한 제품에 관한 것으로, 좀 더 상세하게는 부패 및 화학적 변화가 우려되는 화장료의 제품의 보존용으로 사용하기 위한 천연방부제 제조방법 및 이를 이용한 제품에 관한 것이다.

우리 생활주변에서 널리 이용되는 식품 및 화장품 등에는 미생물에 의한 부패 및 화학적 변화를 방지하여 일정한 기간 동안 보존을 위해 방부제를 첨가하게 된다. 방부제는 세균 및 곰팡이 등의 이 물질들의 작용을 효과적으로 저해하여 식품 및 화장품 등이 변성되는 것을 막아주게 된다. 이러한 방부효과를 갖는 방부제로는 천연에서 추출되는 물질도 있으나 대부분은 제조가 쉽고 원가가 싸며 대량생산이 용 이한 인공적으로 화학 합성한 물질이 주로 이용되고 있다. 예를 들어 비교적 부패가 잘되고 유통기한이 긴 햄, 소시지 등의 저장식품에서 주로 사용 하는 방부제인 BHA(butylated hydroxyanisole)와 BHT(butylated hydroxytoleuene)는 페놀 유도 체다. 이들 방부제는 항균효과 뿐만 아니라 불포화지방이 들어있는 음식물의 산화를 방지하 는 부수적인 효과도 있다. 즉 이들은 금속을 붙잡는 능력을 갖고 있어 효율적으로 산화방지제 역할 을 한다. 다른 종류의 화학방부제는 세균과 곰팡이 등의 미생물이 번식해 식품이 부패하는 것을 막는 프로피온산 세균, 벤조산나트륨, 아질산나트륨과 소르브산 등이 있다.

프로피온산은 곰팡이가 생기는 것을 막아 주며 빵, 치즈, 초콜릿 등에 사용한다.

벤조산나트륨은 오렌지 주스나 그레이프루트 주스에 첨가하면 0.1% 이하로도 미생물의 성장을 막는 것으로, 마가린, 잼, 과일통조림 등에도 이 첨가제를 넣는다. 아질산나트륨은 육류에서 미생물이 자라는 것을 막아 준다. 소르브산과 그 염은 특히 치즈에서 곰팡이나 효모가 자라는 것을 억제한다. 이와 같은 합성 방부제는 지질친화성이 많으므로 식품으로 섭취하였을 경우 체내 지방조직에 축적되어 장기적으로 독성을 유발할 가능성이 크다. 또 일부는 발암성 물질형성에 참여하기도 하며 세포벽 파괴, 원형질과의 반응, 효소의 파괴, 단백질의 변성 등 세포기능을 저하 또는 파괴하여 면역기능을 약화시킬 수 있는 다양한 문제점을 갖고 있다.

이러한 방부제는 일반적으로 식품 화장품 의약 등의 변질을 막고 그것을 사용하거나 보존하는 동안에 그 순도를 유지시키기 위해서 첨가한다. 따라서 인체에 해가 없어야 한다는 것이 필수 조건이고, 또 그 첨가로 인해 품질을 손상시키지 않아야 한다. 식품방부제는 식품보존제라고 하며 음식물이 공기 중에 노출될 때 산화되는 것을 막아주거나 곰팡이나 박테리아 같은 미생물이 음식물을 부패시키는 것을 방지해야 한다. 종래 식품 방부제로는 프로피온산칼슘, 벤조산나트륨, 아질산나트륨과 소르브산 등과 같은 화학 방부제가 사용되어 왔다. 프로피온산은 곰팡이가 생기는 것을 막아주며 빵 치즈 초콜릿 등에 사용한다. 벤조산나트륨은 오렌지 주스나 그레이프프루트 주스에 첨가하면 미생물의 성장을 막는다.

아질산나트륨은 육류에서 미생물이 자라는 것을 막아준다. 소르브산과 그 염은 특히 치즈에서 곰팡이나 효모가 자라는 것을 억제한다. 그러나, 이러한 화학 방부제는 양이 초과되면 사람이나 가축에 모두 유해하므로 법(약사법 식품위생법)으로 그 사용이 규제되고 있다.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 기존의 화학방부제가 갖는 인체에 자극이 있는 단점을 해결할 수 있는 천연 유래로 안전성이 확보되고, 습득이 용이하여 경제적이며, 또한 기존의 천연방부제가 갖는 좁은 범위의 항균 스펙트럼을 극복하여 넓은 항균 스펙트럼을 가지는 새로운 천연 항균성 물질을 제공하는 것이다. 또한, 상술한 바와 같은 천연 항균성 물질을 활성 성분으로 포함하여 화장료의 여러 제품으로 응용될 수 있는 조성물을 제고하는 것이다. 이에, 본 발명자들은 초피나무 잎의 수 추출물과는 전혀 다른 초피 씨앗 초음파 추출물이 우수한 항 Staphylococcus aureus 억제능 및 Escherichia coli 억제능을 나타냄을 확인하였 고, 초피나무 씨앗 외에 초피나무 잎, 뿌리, 심재, 수피 등의 다른 부위에서도 항 Staphylococcus aureus 억제능과 Escherichia coli 억제능이 현저히 우수하게 나타났으며, 또한 초피나무 뿐만 아니라 이를 포함하는 초피 속 식물에서도 항 Staphylococcus aureus 억제능과 Escherichia coli 억제능이 우수하게 나타났음을 밝히며 이에 천연방부제로서 초피추출물을 사용한 화장료를 제조하여 기존에 사용하던 방부제를 사용한 것과 같은 우수한 결과가 나왔으므로 본 발명을 완성하게 되었다.

초피나무는 해발 1,000m 아래 남쪽지방에 주로 많이 분포하고 중부내륙지방에서는 볼 수 없으나 해안을 따라서는 중부지방까지 올라온다. 향신료로 쓰이는 것이 초피나무이고 초피는 봄에 꽃이 피는데 잔 잎이 9-11개로 1~3cm크기의 잎가에 파상거치가 있고 잎 중앙부에 연한 황록색의 무늬가 있고 엽액 밑으로 굽은 가시가 대생하고 있으며 잎이나 열매의 향기가 좋다. 초피나무는 톡 쏘는 매운 맛과 상쾌하고 시원한 맛 때문에 향신료로 이용하며 추어탕, 민물고기 요리에는 비린내 제거를 위해 초피가루가 필수적으로 들어간다.

초피는 음식의 맛을 나게 하고 채소의 풋 냄새와 민물고기. 생선의 비린내. 육류의 누린내 등 기타 잡냄새를 없애고 입맛을 개운하게 하여 소화작용을 돕고 각종 질병을 예방 치료하는 약효가 있어 한방과 민간약으로 많이 사용했다.

또한 식품첨가물로 사용하면 위와 같은 효과 외에 산패방지 효과가 우수하여 김치에 넣으면 빨리 시지 않아 신선한 맛을 오래 즐길 수 있다. 초피는 잎이나 열매 줄기를 깨물어서 조금 있다 쏘는 맛이 있는 것은 초피이다.

초피 (제피 ; 남쪽지방에 분포하고 중부내륙에서는 보기 힘듬) 가지는 마주나기 때문에 쉽게 구별할 수 있으며 꽃은 봄에 피우기 때문에 더욱 산초와는 구별된다.

초피나무는 가지에 달리는 가시가 마주나고 잎 가장자리의 톱니수가 3~5개 정도로 산초보다 적고 꽃잎이 없으며 또한 열매가 붉은빛이 도는 갈색으로 익는 점에서 산초나무와 다르다.

일본의 관서지방 사람들은 초피가루를 우리나라 고추가루 사용하듯 거의 모든 음식물에 넣어 먹고 있다는 사실에 놀라지 않을 수 없다. 뿐만 아니고 정원이 있는 집에는 한두 그루의 초피나무를 심어 놓고 어린 잎사귀를 향내와 제독에 이용하고 있다. 초피나무는 곳에 따라 조피나무, 지피나무, 쥐피나무, 죄피나무 라고도 한다. 초피는 기름을 짜는 것이 아니고 양념으로 쓴다. 고추같이 맵고 탁 쏘는 맛이 나기 때문이다. 나무의 크기며 뻗어난 가지며 잎과 열매까지 조금도 다르지 않았기 때문이다.

중부 이남의 산에서 높이 3m 정도까지 자라는 '갈잎떨기나무'이다. 가지에는 1쌍의 마주나는 가시가 있으며, 어긋나는 잎은 깃꼴겹 잎이다. 암수딴그루이며, 잎겨드랑이에 조로록 달린 총상 꽃차례에 자잘한 연 노랑색 꽃이 핀다.

작고 둥근 열매는 익으면 적갈색으로 변하고 저절로 벌어져 속에 있는 까만 씨가 드러난다. 초피나무는 남부지방의 가정집에서 흔히 볼 수 있다. 초피나무는 두 개 씩 마주 달리며, 작은 잎이 초피나무는 둥근 느낌이다. 또 초피나무의 잎을 가만히 들여다보면 가장자리 톱니 사이에 약간 돌출된 작은 선점(腺點)이 보이는데 바로 이곳에서 독특한 향기가 나온다. 초피나무는 산초나무보다 두어 달 빠른 초여름에 꽃이 피는 게 다르다. 초피나무는 주로 열매의 껍질을 갈아서 가루를 만들어 먹는다. 초피가루는 톡 쏘는 듯하고 매운 듯한 그 맛 때문에 주로 향신료로 이용해 왔다. 왕 초피나무는 키 3m, 지름 15cm까지 자라는 낙엽떨기나무다. 조피, 재피, 지피, 천초, 남초, 진초, 산초, 파초, 촉초 등 이름이 많다. 초피나무와 닮은 것으로 산초나무가 있는데, 일본인들이 초피나무를 산초나무로 부르기 시작하면서 이제는 초피나무를 산초나무와 혼동하여 부르고 있다.

초피는 전국의 해발 1000m 아래의 산야에 자생하거나 심어 키운다.

6월에 황록색 꽃이 피어 가을에 지름 4mm쯤의 둥근 열매가 갈색으로 익는다. 열매가 다 익으면 껍질이 터져 새까만 씨앗이 밖으로 튀어나온다. 대개 열매 껍질을 향신료와 약으로 쓰고, 씨앗이나 어린 잎, 나무줄기도 여러 용도로 쓴다. 우리나라에서는 추어탕에 넣어 먹고 김치를 시지 않게 하기 위해 넣고, 껍질로는 물고기를 잡는 데에 써 왔을 뿐인 초피가 요즈음 후추와 겨자를 능가하는 세계 제일의 천연 향신료이자 에이즈 균까지 죽일 수 있다는 훌륭한 약재로 세계적인 각광을 받고 있다.

한약재로서 초피 열매는 해독, 구충, 진통, 건위약으로 많이 쓴다. 초피나무 열매 껍질을 베개 속에 넣고 자면 두통이나 불면증에 신기할 정도로 효과가 있다. 또 여름철에 잎이 붙은 연한 가지를 잘라 그늘에서 말렸다가 가루 내어 계란 흰자위와 밀가루를 섞어서 이겨 화장 크림처럼 만들어 동상, 타박상, 요통, 근육통, 종기 등에 바르면 효과가 신통하다. 초피나무는 균을 죽이는 힘이 대단히 강하여 미국의 어느 의학자는 초피나무가 에이즈 균을 죽일 수 있다는 주장을 펴기도 했다. 초피는 성질이 뜨거우므로 속을 따뜻하게 하고 기를 내리며 양기를 돕고 소화를 잘되게 하는 등의 약리작용이 있다. 초피를 약으로 쓸 때는 씨앗을 추려 내고 열매껍질만을 쓴다.

본 발명은 초피에서 추출한 초피추출물을 함유하는 천연 방부제에 관한 것으로, 더욱 상세하게 는 초피을 짧게 절단하여 추출기에 넣고, 물을 가열하여 증류된 수증기에 의해서 초피의 활성성 분을 추출하고, 추출된 추출액을 모아 오일(oil) 층과 물(water) 층을 분리하여 제조된 초피 정유 또는 초피 워터를 함유하는 천연 방부제, 및 이를 이용한 각종 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 초피 추출물이 기존 화학방부제에 버금가는 우수한 방부 활성를 가짐에도 인체에 해를 주지 않는 안전성을 가지므로 식품 방부제, 화장품 방부제, 의약품 방부제, 목재 방부제, 방부 활성 식품포장재 등에 천연 방부제로서 효과적으로 이용될 수 있다. 본 발명에 따르는 조성물에서 초피로 부터 추출한 다당류는 줄기와 잎으로 나누어 각각 나누어 얻어 조합하여 사용할 수 있다. 즉 한국산 초피의 조직 부위에 따라 구성하는 다당류의 종류가 다르기 때문에 이들을 조합하거나 각각의 다당류 추출물을 사용한다. 즉, 줄기와 잎을 각각 나누어 분쇄하여 에탄올로 24시간 추출하여 추출물을 제거한 후 건조시 킨다. 여기서 얻어진 탈지 성분을 48시간 볼 밀링하여 입자크기가 10 내지 50㎛ 정도가 되도록 미세하게 분쇄한 후 사용한다. 상기 분쇄물을 증류수 를 가하여 6시간 2~3회 반복 추출한 후 여과하고, 감압 증류하여 소량의 물만 남긴 후, 에탄올을 가하여 침전을 유도시키고 원심분리 후 침전물을 동결 건조시킨다. 건조 시료를 15% TCA(Trichloroacetic acid)를 첨가하여 단백질을 제거하고 에탄올로 침전 후 동결 건조시키고 화장료 제조시 첨가한다. 본 발명에 따른 조성물은 상기 제조된 한국산 초피의 줄기와 잎에서 추출한 다당류 추출물을 부피비로 1:1 내지 1:3의 비율로서 0.1 ~ 5 중량%로 바람직하게는 2 ~ 3 중량%가 되게 함유하는 것을 특징으로 한다. 상기 제조된 한국산 초피의 잎에서 추출한 수용성 다당류는 갈락토스가 가장 많은 양이 존재하였으며, 줄기에서 추출한 수용성 다당류는 아라비노스와 갈락토스가 비교적 같은 양으로 가장 풍부하게 존재하였으며, 보다 자세하게 DEAE-셀룰로스 음이온 교환 크로마토그래피를 실시하여 (1→3)글리코시드 결합된 갈락탄이 골격구조를 이루며, (1→5)글리코시드 결합된 알파-L-아라비노푸라노실 잔기가 곁가지를 이루고 있으며, 또한 (1→6)글리코시드 결합된 베타-D-갈락토피라노실 잔기도 곁가지를 가지고 있는 것으로 나타났다. 본 발명에 따른 방부제를 사용하지 않아 피부에 자극이 적은 효과를 가지는 조성물은 통상의 제형을 가질 수 있으며, 예를 들어 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 바디로션, 바디오일, 바디에센스 등으로 제형화 될 수 있다.

이상 상기 실시 예와 실험 예를 통하여 본 발명의 화장료 조성물은 한국산 초피추출물의 씨앗에서 유래한 천연 유효성분으로서 다당류를 함유함으로써 기존의 방 부제를 사용하지 않고 피부에 자극이 적은 화장료 조성물을 제공하는 것이다

실시예 1 : 초음파추출에 의한 초피나무 씨앗껍질 추출물 제조

초피나무 씨앗껍질을 깨끗한 물로 씻고 건조분쇄한 후 분쇄물 건조중량 10g에 75% 에탄올 200g을 넣고 상온에서 4시간 동안 초음파추출기에서 교반(400rpm) 하였다. 추출액을 원심분리(5,000rpm, 10분)하여 상층액만을 취하고 이를 필터(Gelman사, 0.45um)를 사용하여 여과하여 초피나무 씨앗껍질 추출물을 얻었다.

비교실시예 1: 교반에 의한 초피나무 씨앗껍질 추출물 제조

초피나무 씨앗껍질을 깨끗한 물로 씻고 건조 분쇄한 후 분쇄물 건조중량 10g에 75% 에탄올 200g을 넣고 상온에서 4시간 동안 교반추출기에서 교반(400rpm)하였다. 추출액을 원심분리(5,000rpm, 10분)하여 상층액 만을 취하고 이를 필터(Gelman사, 0.45um)를 사용하여 여과하여 초피나무 씨앗껍질 추출물을 얻었다.

비교실시예 2: 침적에 의한 초피나무 씨앗껍질 추출물 제조

초피나무 씨앗껍질을 깨끗한 물로 씻고 건조분쇄한 후 분쇄물 건조중량 10g에 75% 에탄올 200g을 넣고 상온에서 4일 동안 침적하였다. 추출액을 원심분리 (5,000rpm, 10분)하여 상층액만을 취하고 이를 필터(Gelman사, 0.45um)를 사용하여 여과한 후 초피나무 씨앗껍질 추출물을 얻었다.

비교실시예 3 : 가열에 의한 초피나무 씨앗껍질 추출물 제조

초피나무 씨앗껍질을 깨끗한 물로 씻고 건조분쇄한 후 분쇄물 건조중량 10g에 75% 에탄올 200g을 넣고 80℃에서 4시간동안 가열하여 추출하였다. 추출액을 원심분리(5,000rpm, 10분)하여 상층액만을 취하고 이를 필터(Gelman사,0.45um)를 사용하여 여과한 후 초피나무 씨앗껍질 추출물을 얻었다.

항균 효과에 대한 스크리닝 결과 요약

추출 원료	Staphylococcus aureus 억제능	Escherichia coli 억제능
초피추출물(실 시 예1)	+++	+++
초피추출물(비교실시예1)	+++	++
초피추출물(비교실시예2)	++	+++
초피추출물(비교실시예3)	++	+++
녹차추출물	++	++
카모마일추출물	++	++
자몽추출물	+++	++
목련추출물	++	+++
프로폴리스추출물	++	++
나한백추출물	++	+++
버드나무추출물	++	++

+ : 투명대의 크기가 3 mm 이하

++ : 투명대의 크기가 4 내지 10 mm

+++ : 투명대의 크기가 11 내지 13 mm

++++ : 투명대의 크기가 14 내지 16 mm

+++++ : 투명대의 크기가 17 mm 이상

실시예 2: 초피추출물의 항균 활성

초피추출물을 이용한 방부실험은 항균 활성을 한천확산법으로 조사하였다. 실시예 1의 농도를 0.25 %, 0.5 %, 1.0 %, 2.0 %로 정해 시험하였다. 미생물 균주로는 그람 양성균인 Staphylococcus aureus, 그람 음성균인 Escherichia coli, 진균류인 Candida albicans를 이용하였다. 여러 개의 원반에 기지 농도의 항생물질 용액을 묻혀 시험균주가 도포된 고체 한천배지에 올려놓고 배양한 후 원반 주변의 투명대의 크기를 측정하였다. 시험 결과는 표 2에 나타낸 바와 같이, Staphylococcus aureus와 Candida albicans에 대해 높은 항균 활성을 보였고, 반면에 E. coli에 대해서는 상대적으로 낮은 항균 활성을 나타내었다. 초피추출물 천연방부제에 의한 원반 주변의 투명대의 크기가 표 2에 나타나 있다.

원반 주변의 투명대의 크기 측정

	E coli S				Aureus C				Albicans
농도	0.25	0.5	1.0	2.0	0.25	0.5	1.0	2.0	0.25	0.5	1.0	2.0
억제존의 직경(mm)	4.3	5.2	6.1	7.2	10.0	11.0	12.3	15.4	10.9	11.8	15.2	16.7

실시예 3 : 초피추출물의 최소억제농도 (MIC) 결정

실시예 1의 미생물의 성장을 억제하는 최소 농도인 최소억제농도 (MIC)를 측정하였다. 24시간 동안 배양한 Staphylococcus aureus, Candida albicans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillusniger를 배지 (brain heart infusion broth) 3 ml에 넣고, 동시에 초피추출물를 각각 농도별로 첨가한 후 37 ℃에서 24시간 동안 배양하였다. 2배 연속 희석법을 이용하였다. 표 3에 나타나 있듯이, Escherichia coli에 대한 실시예 1 초피추출물의 MIC는 0.120 %이고, Staphylococcus aureus에 대한 MIC는 0.0025 %, Candida albicans에 대해선 0.025 %, Pseudomonas aeruginosa에 대해선 1.1 %, Aspergillus niger에 대해선 0.53%임을 확인하였다. 초피추출물의 항균활성은 그람 양성균인 Staphylococcus aureus에 대해 가장 높은 항균 활성을 보임을 알 수 있다.

실시예 1의 최소억제농도 (MIC)

균주	MIC (%)
Escherichia coli	0.120
Pseudomonas aeruginosa	1.100
Staphylococcus aureus	0.0025
Candida albicans	0.025
Aspergillus niger	0.530

실시예 4 : 초피추출물의 항산화 효능 평가

실시예 1의 초피추출물의 항산화효과를 확인하기 위해 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 방법을 이용하였다. DPPH은 색을 띄는 라디칼로서 이를 이용해 시료의 라디칼 제거능력을 직접 확인할 수 있다. 실시예 1을 증류수 또는 용매 4 ml에 녹인 후, 100 uM DPPH 1 ml을 섞은 후, 상온에서 30분 동안 인큐베이션 하였다. 517 nm에서 흡광도를 측정하여 남아있는 DPPH의 양을 파악하였다. (블랭크: 증류수 또는 용매, 대조군: 시료를 넣지 않고 DPPH와 증류수 또는 용매로 만 구성된 시험군). 항산화력 (Radical Scavenging Activity: RSA)을 하기 수학식을 사용하여 각 대조군의 흡광도와 비교하여 낮아진 비율로 나타내었다

초피추출물의 농도 (%)

초피추출물의 농도 (%)	0	0.01	0.05	0.1	0.2	0.4	0.6	0.8	1	비타민C (1mM)
RSA (%)	100	81	51	41	32	24	22	18.5	14	36

표 4에 제시된 것과 같이, 실시예 1의 초피추출물은 농도 의존적으로 생성된 라디칼을 제거하는 능력을 나타내었다.

실시예 5: 초피추출물을 함유한 화장품의 자극성 실험

화장료의 자극성 정도를 측정하기 위해, 초피추출물을 3%의 농도로 포함하는 스킨과 로션을 하기와 같이 제조하였다.

스킨로션의 처방예

번호	원료	실시예 5	비교예 5
1	추출물	5.0	5.0
2	글리세린	3.0	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0	2.0
5	폴리옥시에칠렌(60) 경화피마자유	1.0	1.0
6	에탄올	10.0	10.0
7	트리에탄올아민	0.1	0.1
8	초피추출물	3.00	-
9	색소	미량	미량
10	방부제	-	미량
11	향료	미량	미량
12	점증제(1%)	10.0-30.0	10.0-30.0
13	정제수	잔량	잔량

<제조방법> 실시예 5 : 6번에 5, 9, 11번을 순서대로 투입하여 교반하며 용해시킨 후(A), 13번에 1, 2, 3, 4, 7, 8, 12번을 투입 교반하여 용해시킨다(B). 마지막으로 (B)에 (A)를 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.

비교예 5 : 6번에 5, 9, 10, 11번을 순서대로 투입하여 교반하며 용해시킨 후(A), 13번에 1, 2, 3, 4, 7, 12번을 투입 교반하여 용해시킨다(B). 마지막으로 (B)에 (A)를 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시킨다.

실시예 6. 초피추출물을 함유한 로션 제조예

초피추출물을 함유한 로션을 하기 표 6의 조성으로 통상적인 방법을 통해 제조하였다.

로션 제조 예

번호	원료명	실시예 6	비교예 6
1	스테아린산	2.1	2.1
2	세탄올	1.3	1.3
3	유동파라핀	7.0	7.0
4	스쿠알렌	0.5	0.5
5	이소프로필 미리스테이트	1.0	1.0
6	글리세릴 모노스테아레이트	0.5	0.5
7	아라셀-60	0.85	0.85
8	Tween-20	0.1	0.1
9	이소스테아릴-이소스테아레이트	0.5	0.5
10	프로필파라벤	0.1	0.1
11	알라닌 200F/100CS	0.1	0.1
12	정제수	69.65	69.65
13	트리에탄올아민	0.7	0.7
14	프로필렌글리콜	7.0	7.0
15	글리세린	5.5	5.5
16	메틸파라히드록시벤조익산	-	0.02
17	초피추출물	3.0	-
	합계	to 100	to 100

<제조방법> 실시예 5 : 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11번을 순서대로 투입하여 교반하며 융해시킨 후, 75℃로 온도를 가온시킨 후. 12번에 14, 15, 17번을 순서대로 투입하여 교반하며 용해시킨 후, 75℃로 온도를 가온시킨 후 13번을 투입한 후 3,600rpm으로 10분간 호모믹싱 시킨 다음 기포를 제거하고 40도까지 냉각한다.

비교예 5 : 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11번을 순서대로 투입하여 교반하며 융해시킨 후, 75℃로 온도를 가온시킨 후. 12번에 14, 15, 16번을 순서대로 투입하여 교반하며 용해시킨 후, 75℃로 온도를 가온시킨 후 13번을 투입한 후 3,600rpm으로 10분간 호모믹싱 시킨 다음 기포를 제거하고 40도까지 냉각한다.

실험예 1 : 본 발명에 따른 스킨 로션의 피부 자극성 시험

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 5에서 제조한 스킨 로션 을 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그 외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태 (홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 스킨 로션은 피부 자극성이 없음을 확인할 수 있었다.

실험예 2 : 본 발명에 따른 밀크 로션의 피부 자극성 시험

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 6에서 제조한 밀크 로션을 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그 외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 밀크 로션은 피부 자극성이 없음을 확인할 수 있었다.

실험예 3 : 본 발명에 따른 스킨, 로션의 아토피성 피부염에 대한 자극성 확인 시험

아토피성 피부염 증상을 나타내는 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)을 대상으로 아토피성 피부염 발병 부위에 상기 실시예 5에서 제조한 스킨 로션을 1일 2회씩 도포하였다. 2주의 도포 후에 그 치료효과를 판단하였다. 실험결과 표 7에 나타난 바와 같이 20명 중 12명에게서 그 아토피성 피부염 증상을 개선시키는 효과 내지 자극을 주지 않는 것으로 나타났으며, 장기 투여에 따른 부작용이 없는 것으로 나타났다.

실험예 4 : 본 발명에 따른 밀크 로션의 아토피성 피부염에 대한 자극성 확인 시험

아토피성 피부염 증상을 나타내는 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)을 대상으로 아토피성 피부염 발병 부위에 상기 실시예 6에서 제조한 밀크 로션을 1일 2회씩 도포하였다. 2주의 도포 후에 그 치료효과를 판단하였다. 실험결과 표 7에 나타난 바와 같이 20명중 14명에게서 그 아토 피성 피부염 증상을 개선시키는 효과 내지 자극을 주지 않는 것으로 나타났으며, 장기 투여에 따른 부작용이 없는 것으로 나타났다.

아토피성 피부염에 대한 자극성 확인 시험 결과

시료	매우 양호	양호	변화없슴	나쁨
스킨로션	3	9	5	3
밀크 로션	4	10	5	1

Claims (8)

1. 초피추출물을 짧게 절단하여 추출기에 넣고, 물을 가열하여 증류된 수증기에 의해서 초피추출물의 활성성분을 추출하고, 추출된 추출액을 모아 오일(oil)층과 물(water)층을 분리함으로써 제조된 초피추출물 정유 0.1~2.0 중량% 또는 쑥 워터 1~10 중량%를 함유하는 천연방부제.
2. 제 1 항에 있어서, 초피추출물을 화장료의 건조중량에 대해 0.0001~5%(w/w), 바람직하게는 0.001~1%(w/w) 함유함을 특징으로 하는 천연방부 화장료 조성물.
3. 제 1 항에 있어서, 초피추출물을 사용한 천연방부 화장료로서 유연화장수, 영양화장수,영양크림, 맛사지크림, 엣센스, 또는 팩 등의 화장료 형태임을 특징으로 하는 화장료 조성물
4. 제 1 항에 있어서, 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 엣센스, 팩 의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 초피추출물을 천연방부제로 사용하는 화장료.
5. 제 1 항에 있어서, 초피추출물을 화장품 방부제로 사용되는 것을 특징으로 하는 천연방부제.
6. 제 1 항에 있어서, 초피추출물을 의약품 방부제로 사용되는 것을 특징으로 하는 천연방부제
7. 제 1 항에 있어서, 초피추출물을 목재 방부제로 사용되는 것을 특징으로 하는 천연방부제.
8. 제 1 항에 따른 초피추출물을 천연 방부제를 함유하는 방부 활성 식품 포장재.