KR20090024656A - 근육 및 심장 강화제의 타겟으로서 trim72의 용도 - Google Patents
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Abstract
Description
증폭 대상 | Primers 서열 | 제한효소 | |
IRS-1 구조체 | full-length, 1-3729 | Forward:GAATTCATGGCGAGCCCTCCGGAGAGCGAT Reverse:GTCGACCTACTGACGGTCCTCTGGCTGGCTTCTG | EcoRI SalI |
PH-PTB domain, 1-900 | Forward:GAATTCATGGCGAGCCCTCCGGAGAGCGAT Reverse:GTCGACGGTCAGCCCCACCTGGCTGGG | EcoRI SalI | |
Mid-region, 880-2608 | Forward:GAATTCCCCAGCCAGGTGGGGCTGACC Reverse:GTCGACTGCTGGCCTTGGGATCCCCCAGGGACAGCTTC | EcoRI SalI | |
Rear-region, 2581-3729 | Forward:GAATTCCTGTCCCTGGGGGATCCCAAGGCCAGCACCTT Reverse:GTCGACCTACTGACGGTCCTCTGGCTGGCTTCTG | EcoRI SalI | |
TRIM72 cDNA 구조체 | full-length, 1-1431 | Forward:GAATTCATGTCGGCTGCGCCCGGCCTC Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI |
ΔRING, 181-1431 | Forward:GAATTCCGGCCGCAGGCACTCAGCACC Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI | |
coiled-coil, 367-1020 | Forward:GAATTCGCCGAGGCCCACGCACGCCTC Reverse:GGATCCGAGCTGCTGGTGCGCCACCAC | EcoRI BamHI | |
CCSPRY, 367-1431 | Forward:GAATTCGCCGAGGCCCACGCACGCCTC Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI | |
SPRY, 687-1431 | Forward:GAATTCCCGCAGACTGAGTTCCTCATG Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI | |
Δcoiled-coil (397-696제거) | Front_Forward:GAATTCATGTCGGCTGCGCCCGGCCTC Front_Reverse:CTCAGTCTGCGGCTGTGTCTTGAGGCGTGC Rear_Forward:CTCAAGACACAGCCGCAGACTGAGTTCCTC Rear_Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI | |
TRIM72 C14A | Forward:GAATTCATGTCGGCTGCGCCCGGCCTCCTGCACCAGGAGCTGTCCGCCCCGCTGTGCCTG Reverse:GGATCCGGCCTCGGCGCCTTCGGGACC | EcoRI BamHI | |
TRIM72 promoter | 1269 bp | Forward: AAAGGTACCGAGCTTTGCAATATCTGG Reverse: CAGCAAGCTTGGTGAGCCTGGGAAGAGG | KpnI HindIII |
1144 bp | Forward: GCCGGTACCGGAATAAATTGTAGGTCA Reverse: CAGCAAGCTTGGTGAGCCTGGGAAGAG | KpnI HindIII | |
883 bp | Forward: CCAGGTACCGAGTTAGCACCATTAGCG Reverse: CAGCAAGCTTGGTGAGCCTGGGAAGAGG | KpnI HindIII | |
E2 and E3 boxes Site-directed mutagenesis | E3mutant: Forward: CCACTATATGCCTATAACCTTTTGCATCCACCCACT Reverse: AGTGGGTGGATGCAAAAGGTTATAGGCATATAGTGG E2mutant: Forward: GCATCCACCCACTGCAATCTTGCCCTGAATCCC Reverse: GGGATTCAGGGCAAGATTGCAGTGGGTGGATGC | KpnI HindIII |
Claims (32)
- TRIM72 단백질의 발현 또는 작용 억제제를 유효성분으로 포함하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 발현 또는 작용 억제제는 TRIM72 유전자의 전사 또는 번역을 하향조절하거나 TRIM72 단백질의 작용을 억제하는 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 발현 억제제는 TMRIM72 유전자의 mRNA와 상보적인 염기서열을 갖는 TRIM72 siRNA(short interfering RNA) 또는 이를 전사하는 유전자인 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 4항에 있어서, 상기 TRIM72 siRNA는 서열번호 3의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 작용 억제제는 상기 TRIM72와 IRS-1 또는 M-Cadherin의 상호작용을 저해하는 물질인 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 발현 또는 작용 억제제는 IGF-1에 의한 PI3K/AKT 활성화를 증가시키는 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 발현 또는 작용 억제제는 IRS-1의 티로신 인산화를 증가시켜 IRS-1과 PI3K의 상호작용을 향상시키는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질의 발현 또는 작용 억제제는 상기 TRIM 72에 의한 IRS-1 또는 M-Cadherin의 유비퀴티네이션을 저해하는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 다음의 단계를 포함하는 근육 또는 심장강화제의 스크리닝 방법:(a) TRIM72 단백질을 발현하는 동물세포에 임의의 약제를 처리하는 단계; 및(b) 상기 동물세포에서 약제를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 TRIM72 단백질을 발현이 감소되는지 여부를 결정하는 단계.
- 다음의 단계를 포함하는 근육 또는 심장강화제의 스크리닝 방법:(a) TRIM72 단백질을 발현하는 동물세포에 임의의 약제를 처리하는 단계; 및(b) 상기 동물세포에서 TRIM72과 IRS-1 또는 M-Cadherin의 상호작용이 저해되는지 여부를 결정하는 단계.
- 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 갖는 TRIM72 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 12항에 있어서, 상기 유전자는 동물세포 발현벡터에 삽입되어 있는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 13항에 있어서, 상기 동물세포 발현벡터는 아데노바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 12항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질은 IGF-1에 의한 PI3K/AKT 활성화를 억제시키는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 12항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질은 IRS-1에 결합하여 IRS-1의 티로신 인산화를 감소시켜 IRS-1과 PI3K의 상호작용을 억제하는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 제 12항에 있어서, 상기 TRIM72 단백질은 IRS-1 또는 M-Cadherin과 상호작용을 통하여 그들의 유비퀴티네이션을 촉진하는 것을 특징으로 하는 근육분화 억제용 조성물.
- 서열번호 3의 염기서열을 갖는 TRIM72 유전자에 대한 siRNA(short interfering RNA) 분자.
- 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열중에서 RING 도메인을 결실된 것을 특징으로 하는 TRIM72 돌연변이 단백질 (△RING TRIM72).
- 제 19항에 있어서, 서열번호 4 또는 5의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 TRIM72 돌연변이 단백질.
- 제 19항의 TRIM72 돌연변이 단백질 (△RING TRIM72)을 코딩하는 염기서열을 갖는 TRIM72 돌연변이 유전자.
- 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열중에서 14번째 아미노산인 시스틴이 알라닌으로 치환된 것을 특징으로 하는 TRIM72 돌연변이 단백질 (DN-TRIM72).
- 제 22항의 RIM72 돌연변이 단백질 (DN-TRIM72)을 코딩하는 염기서열을 갖는 TRIM72 돌연변이 유전자.
- 제 19항 내지 제 23항중 어느 한항에 따른 TRIM72 돌연변이 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 24항에 있어서, 상기 유전자는 동물세포 발현벡터에 삽입되어 있는 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장강화용 조성물.
- 제 25항에 있어서, 상기 동물세포 발현벡터는 아데노바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 근육 또는 심장 강화용 조성물.
- 제 21항 또는 제 23항에 따른 TRIM72 돌연변이 유전자를 포함하는 동물세포 발현벡터.
- 제 27항에 있어서, 상기 동물세포 발현벡터는 아데노바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 동물세포 발현벡터.
- 제 28항에 따른 아데노바이러스 벡터를 293T 세포에서 패키징시킨 바이러스 클론.
- 제 29항에 따른 동물세포 발현벡터로 형질전환된 동물세포.
- 서열번호 6 내지 8 중 어느 하나의 염기서열중에서 E2 또는 E3 box가 상실되거나 돌연변이된 것을 특징으로 하는 TRIM72 프로모터.
- 제 31항에 있어서, 서열번호 9 또는 10의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 TRIM72 프로모터.
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