KR20080016674A - 트랜스글루타미나제 매개 성장 호르몬 컨쥬게이션 - Google Patents

트랜스글루타미나제 매개 성장 호르몬 컨쥬게이션 Download PDF

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플로렌시오 자라고자 도르왈드
닐스 랑겔란 요한센
라르스 포그 이베르센
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노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트
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Abstract

본 발명은 성장 호르몬을 PEG화하기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은, og TGase의 존재 하에 제 1 작용기를 추가로 포함하는 아민 포함 친핵체와, 성장 호르몬을 반응시켜, 트랜스아민화된 성장 호르몬을 형성시키고, 그 후에는 상기 트랜스아민화된 성장 호르몬을 제 2 작용기로 작용화된 PEG와 함께 반응시키는 것을 포함하고, 여기에서 제 1 및 제 2 작용기는 서로 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있도록 선택되는 것을 특징으로 한다.
성장 호르몬, PEG, 반감기, 트랜스글루타미나제, 친핵체

Description

트랜스글루타미나제 매개 성장 호르몬 컨쥬게이션{TRANSGLUTAMINASE MEDIATED CONJUGATION OF GROWTH HORMONE}
본 발명은 PEG가 선택적으로 부착될 수 있는 펩티드내의 특정한 위치에 부착 지점을 도입하는데 트랜스글루타미나제가 사용되는, 성장 호르몬의 해독후 신규 컨쥬게이션 방법에 관한 것이다. 상기 컨쥬게이팅된 성장 호르몬은 변경된 특징을 가지고 이에 따라 치료적인 용도로 활용될 수 있다.
펩티드에 펩티드의 성질을 알맞게 변화시키는 작용기를 컨쥬게이팅하는 것에 의해, 펩티드의 성질 및 특징을 변화시키는 것은 익히 공지되어 있다. 이러한 컨쥬게이션은 일반적으로는 컨쥬게이팅기내의 다른 작용기와 반응하는 펩티드내의 일부 작용기를 요구한다. 전형적으로는 아미노기, 예컨대 N-말단 아미노기 또는 라이신내의 ε-아미노기가 적당한 아실화 시약과 배합되어 사용된다. 이것은 컨쥬게이팅 반응을 조절하는데 있어, 즉 컨쥬게이팅 화합물이 부착되는 곳을 조절하고 얼마나 많은 컨쥬게이팅기가 부착되는지를 조절하는데 있어 종종 바람직하거나 심지어 요구된다. 이것은 종종 특이성이라고 언급된다.
일반적으로 펩티드의 컨쥬게이션은 오래전부터 공지되어 있었는데, US 4,179,337은 20년보다 더 오래 전에 펩티드, 더욱 구체적으로는 폴리에틸렌 또는 폴리에틸렌 글리콜에 컨쥬게이팅된 성장 호르몬에 대해 기술하고 있다.
펩티드와 펩티드에 컨쥬게이팅되는 잔기 간의 결합을 형성하는데 효과적인 상이한 유형의 화합물들이 기술된 바 있다. EP 605 963은 단백질 상에 알데하이드기와 옥심 결합을 형성하는 수성 중합체의 그래프팅을 기술하고 있다. 천연 아미노산 중에는 알데하이드를 포함하는 것이 없기 때문에, 컨쥬게이팅 과정에서 첫번째 단계로서 하이드록실기가 산화된다. WO 96/41813은 컨쥬게이션 반응에 유용한 아미노-옥시 옥심 형성기로 작용화된 중합체를 기술하고 있다. WO 98/05363은 펩티드 및 수용성 중합체를 포함하는 화합물을 기술하고 있는데, 여기에서 상기 두가지는 N-말단 아미노산 잔기에서 옥심 결합을 통해 공유결합적으로 결합된 것이다.
또한, 펩티드의 더욱 특이적인 컨쥬게이션을 허용하는 효소의 사용도 공지되어 있다. EP 243 929는 단백질 분해 효소의 사용을 기술하고 있는데, 예를 들면, 작용기를 갖는 화합물을 펩티드의 C-말단에 혼입하기 위한 카르복시펩티다제의 사용을 기술하고 있는데, 여기에서 상기 작용기는 세포독성 작용기, 기타 펩티드의 분석을 용이하게 하는데 사용되는 다른 펩티드 또는 리포터기, 예컨대 형광기를 부착하는데 추후적으로 사용될 수 있는 것이다. 하지만 이 기술은 부착 지점을 C-말단 아미노산 잔기로 제한하고, 이는 C-말단 잔기가 펩티드 활성에 필수적인 일부의 경우에는 심각한 한계점을 구성하게 된다.
트랜스글루타미나제는 펩티드의 성질을 변화시키는데 예전부터 사용되어 왔다. 식품 산업에서, 더욱 구체적으로는 유제품 산업에서 트랜스글루타미나제를 사용하여 펩티드를 교차결합시키는데 많은 기술이 사용가능하다. 다른 문헌들은 생 리학적으로 활성인 펩티드의 성질을 변화시키기 위해 트랜스글루타미나제를 사용하는 것을 기술하고 있다. EP 950665, EP 785276 및 Sato, Adv. Drug Delivery Rev. 54, 487-504 (2002)는 트랜스글루타미나제의 존재하에 적어도 하나의 Gln 및 아민-작용화된 PEG 또는 유사 리간드를 포함하는 펩티드 간의 직접 반응을 기술하고 있고, Wada, Biotech. Lett. 23, 1367-1372 (2001)는 트랜스글루타미나제를 사용하여 지방산과 β-락토글로불린을 직접 컨쥬게이팅하는 것을 기술하고 있다. WO 2005/070468으로서 공개된 국제특허출원은 컨쥬게이팅기가 부착될 수 있는 핸들을 혼입하기 위해 트랜스글루타미나제를 사용하는 것을 기술하고 있다.
본 발명의 목적은 높은 정도의 특이성을 갖는 특이적 위치에서 성장 호르몬이 PEG와 컨쥬게이팅될 수 있는 방법을 제공하는 것이다. 이 방법에 의해 수득된 컨쥬게이트는 개선되거나 대안적인 특징, 예를 들면 약학적 특징을 갖는데, 이는 이러한 컨쥬게이트로 하여금 적합하게, 더 구체적으로는 치료시에 적합하게 한다.
발명의 개요
일 구체예에서, 본 발명은 성장 호르몬에 PEG 잔기를 공유결합적으로 부착시키는 방법에 관한 것으로서, 이 방법은 트랜스글루타미나제의 존재하에, 화학식 [Ia]에 의해 나타내어지는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬을, 화학식 [II]의 질소 함유 친핵체와 하나 이상의 단계에서 반응시켜, 화학식 [IIIa]의 트랜스아민화된 성장 호르몬을 형성시키는 단계와:
Figure 112007093066825-PCT00001
[Ia]
상기 식에서 GH는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 성장 호르몬 라디칼을 나타낸다:
H2N-D-R-X
[II]
상기 식에서 D는 -O- 또는 단일결합을 나타내고;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5 - 15헤테로알킬렌을 나타내며;
X는 -O-NH2, 알데하이드, 케톤, 또는 추가의 반응시 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기(latent group)를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00002
[IIIa]
이 때 임의선택적으로는 X가 숨은 기인 경우, 상기 숨은 기를 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환시키는 단계도 포함하며,
상기 트랜스아민화된 성장 호르몬을 화학식 [IV]의 제 2 화합물과 추가로 반응시켜, 화학식 [Va]의 PEG화된 성장 호르몬을 형성시키는 단계를 포함한다:
Y-Z
[IV]
여기에서 Y는,
X가 알데하이드, 케톤 또는 추가의 반응시 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, -O-NH2를 나타내거나, 또는
X가 -O-NH2, 또는 추가의 반응시 -O-NH2으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, 알데하이드 또는 케톤을 나타낸다; 그리고
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00003
,
Figure 112007093066825-PCT00004
,
Figure 112007093066825-PCT00005
,
Figure 112007093066825-PCT00006
,
Figure 112007093066825-PCT00007
,
Figure 112007093066825-PCT00008
,
Figure 112007093066825-PCT00009
,
Figure 112007093066825-PCT00010
,
Figure 112007093066825-PCT00011
,
Figure 112007093066825-PCT00012
,
Figure 112007093066825-PCT00013
,
Figure 112007093066825-PCT00014
,
Figure 112007093066825-PCT00015
,
Figure 112007093066825-PCT00016
,
Figure 112007093066825-PCT00017
,
Figure 112007093066825-PCT00018
.
Figure 112007093066825-PCT00019
,
Figure 112007093066825-PCT00020
, 및
Figure 112007093066825-PCT00021
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내고;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00022
인 경우, PEG는 10 kDa PEG이다:
Figure 112007093066825-PCT00023
[Va]
상기 식에서, A는 옥심 결합을 나타낸다.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 [V] 또는 [Va]의 화합물과 이의 임의의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그(prodrug) 또는 용매화합물(solvate)을 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명은 SEQ ID No. 1의 위치 40 및/또는 141에 해당하는 위치에서 PEG화된 hGH를 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 [V] 또는 [Va]의 화합물을 포함하는 조성물, 더욱 구체적으로는 화학식 [Va]의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명은 치료시 화학식 [Va]의 화합물의 용도를 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명은 혈장 성장 호르몬 수준을 증가시키면 유용한 질병의 치료 방법을 제공하는데, 상기 방법은 화학식 [Va]의 화합물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 것이다.
일 구체예에서, 본 발명은 혈장 성장 호르몬 수준을 증가시키면 유용한 질병의 치료를 위한 의약의 제조시 화학식 [Va]의 화합물의 용도를 제공한다.
일 구체예에서, 본 발명은 성장 호르몬의 약학적 성질을 개선시키거나 변형시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 본 발명의 방법에 따라 상기 성장 호르몬을 PEG화하는 것을 포함하는 것이다.
서열의 간단한 설명
SEQ ID No. 1은 22K-hGH로서 공지되어 있는 인간 성장 호르몬의 아미노산 서열이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 N-말단, 더욱 구체적으로는 hGH의 C-말단에서 PEG화하면 두개의 말단 사이의 특정 아미노산에서 PEG화된 것보다, 즉 사슬내 PEG화보다 더욱 활성을 감소시키는 것을 유발한다는 관찰에 기초한다. 특히 SEQ ID No.1의 서열을 갖는 hGH내 위치 40 및/또는 141에 해당하는 위치에서의 PEG화는 더욱 높은 비율의 활성이 보유되는 PEG화된 hGH를 유발한다. 위치 40 및 141은 모두 글루타민이고, 사실 SEQ ID No. 1의 서열을 갖는 hGH는 추가의 11개 글루타민 잔기를 포함하는데, 즉 위치 22, 29, 46, 49, 68, 69, 84, 91, 122, 137, 및 181에서 글루타민 잔기를 포함한다. 하지만, 트랜스글루타미나제(TGase), 더욱 구체적으로는 Streptoverticillium mobaraenae 또는 Streptomyces lydicus 유래 TGase를 사용하면, 위치 40 및/또는 141에서의 선택적인 PEG화를 허용하며, 그 외의 11개 글루타민은 글루타민이 트랜스글루타미나제에 대한 기질이라는 사실에도 불구하고 그대로 남아있다.
본 발명의 방법은 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함하는 임의의 폴리펩티드를, 예를 들면 치료적으로 유용한 폴리펩티드를 사슬내 PEG화하는데 유용할 수 있다. 이는 특히 하나 이상의 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드를 PEG화하는데 유용한데, 여기에서는 자리 특이적인 PEG화가 바람직하지만, 이 방법은 임의의 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드를 트랜스글루타민화하는데 사용될 수 있다.
그러므로 본 발명은 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드에 PEG를 공유결합적으로 부착시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 트랜스글루타미나제의 존재하에, 화학식 [I]에 의해 나타내어지는 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드를, 화학식 [II]의 질소 함유 친핵체와, 하나 이상의 단계에서 반응시켜 화학식 [III]의 트랜스아민화된 폴리펩티드를 형성시키는 단계와:
Figure 112007093066825-PCT00024
[I]
상기 식에서 PP는 폴리펩티드에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 폴리펩티드 라디칼을 나타내고:
H2N-D-R-X
[II]
여기에서 D는 -O- 또는 단일결합을 나타내고;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
X는 -O-NH2, 알데하이드, 케톤, 또는 추가의 반응시 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00025
[III]
이 때 임의선택적으로는 X가 숨은 기인 경우, 상기 숨은 기를 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환시키는 단계도 포함하며,
상기 트랜스아민화된 폴리펩티드를 화학식 [IV]의 제 2 화합물과 추가로 반응시켜, 화학식 [V]의 PEG화된 폴리펩티드, 또는 이의 임의의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물을 형성시키는 단계를 포함한다:
Y-Z
[IV]
여기에서 Y는,
X가 알데하이드, 케톤 또는 추가의 반응시 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, -O-NH2를 나타내거나, 또는
X가 -O-NH2, 또는 추가의 반응시 -O-NH2으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, 알데하이드 또는 케톤을 나타낸다; 그리고
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00026
,
Figure 112007093066825-PCT00027
,
Figure 112007093066825-PCT00028
,
Figure 112007093066825-PCT00029
,
Figure 112007093066825-PCT00030
,
Figure 112007093066825-PCT00031
,
Figure 112007093066825-PCT00032
,
Figure 112007093066825-PCT00033
,
Figure 112007093066825-PCT00034
,
Figure 112007093066825-PCT00035
,
Figure 112007093066825-PCT00036
,
Figure 112007093066825-PCT00037
,
Figure 112007093066825-PCT00038
,
Figure 112007093066825-PCT00039
,
Figure 112007093066825-PCT00040
,
Figure 112007093066825-PCT00041
.
Figure 112007093066825-PCT00042
,
Figure 112007093066825-PCT00043
, 및
Figure 112007093066825-PCT00044
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내고;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00045
인 경우, PEG는 10 kDa PEG이다:
Figure 112007093066825-PCT00046
[V]
여기에서, A는 옥심 결합을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 폴리펩티드는 임의의 적당한 폴리펩티드를 포함하고, 본원에서 달리 언급하지 않거나 문맥상 반대로 말하지 않는 한, 용어 펩티드 및 단백질과 호환되어 사용될 수 있다. 용어 폴리펩티드는 본원에서 일반적으로 임의의 적당한 크기와 조성(아미노산 수 및 단백질 분자내 회합된 사슬의 수에 관하여)의 임의의 적당한 폴리펩티드를 언급하는 것으로 이해된다. 또한 본원에서 기술된 본 발명의 방법 및 조성물에 사용될 때 폴리펩티드는, 달리 언급하지 않거나 문맥상 반대로 말하지 않는 한, 인공적 및/또는 L-형이 아닌 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 또한 유도체화될 수도 있다. 유도체화된 폴리펩티드는, 달리 언급하지 않거나 문맥상 반대로 말하지 않는 한, 일반적으로 폴리펩티드 중 하나 이상의 아미노산 잔기가 화학적으로 변형되거나(예를 들면, 알킬화, 아실화, 에스테르 형성 또는 아미드 형성), 하나 이상의 비아미노산 유기 및/또는 무기 원자 또는 분자 치환체와 회합하며, 비필수아미노산, 인공적 및/또는 L-형이 아닌 아미노산 잔기를 추가로 또는 대안적으로 포함할 수 있다. 이러한 아미노산 잔기의 비제한적인 예에는 예를 들면, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, β-알라닌, β-아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프르산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 2,4-디아미노부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라진, 하이드록시라이신, 알로하이드록시라이신, 3-하이드록시프롤린, 4-하이드록시프롤린, 이소데스모신, 알로이소루신, N-메틸글리신, N-메틸이소루신, 6-N-메틸라이신, N-메틸발린, 노르발린, 노르루신, 오르니틴, 및 스태틴 할로겐화 아미노산이 있다. 치료적으로 유용하고, 폴리펩티드를 활용하는 치료가 예를 들면 증가된 보유 시간에서 유용한 폴리펩티드는 특히 본 발명의 방법에 사용하기에 적합하다.
일 구체예에서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타낸다.
그러므로 본 발명은 성장 호르몬에 PEG를 공유결합적으로 부착시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 트랜스글루타미나제의 존재하에, 화학식 [Ia]에 의해 나타내어지는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬을, 화학식 [II]의 질소 함유 친핵체와, 하나 이상의 단계에서 반응시켜 화학식 [IIIa]의 트랜스아민화된 성장 호르몬을 형성시키는 단계와:
Figure 112007093066825-PCT00047
[Ia]
상기 식에서 GH는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 성장 호르몬 라디칼을 나타낸다:
H2N-D-R-X
[II]
여기에서 D는 -O- 또는 단일결합을 나타내고;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
X는 -O-NH2, 알데하이드, 케톤, 또는 추가의 반응시 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다;
Figure 112007093066825-PCT00048
[IIIa]
이 때 임의선택적으로는 X가 숨은 기인 경우, 상기 숨은 기를 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환시키는 단계도 추가로 포함하며,
상기 트랜스아민화된 성장 호르몬을 화학식 [IV]의 제 2 화합물과 추가로 반응시켜, 화학식 [Va]의 PEGg화된 성장 호르몬, 또는 이의 임의의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물을 형성시키는 단계를 포함한다:
Y-Z
[IV]
여기에서 Y는,
X가 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤을 나타낸다; 그리고
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00049
,
Figure 112007093066825-PCT00050
,
Figure 112007093066825-PCT00051
,
Figure 112007093066825-PCT00052
,
Figure 112007093066825-PCT00053
,
Figure 112007093066825-PCT00054
,
Figure 112007093066825-PCT00055
,
Figure 112007093066825-PCT00056
,
Figure 112007093066825-PCT00057
,
Figure 112007093066825-PCT00058
,
Figure 112007093066825-PCT00059
,
Figure 112007093066825-PCT00060
,
Figure 112007093066825-PCT00061
,
Figure 112007093066825-PCT00062
,
Figure 112007093066825-PCT00063
,
Figure 112007093066825-PCT00064
.
Figure 112007093066825-PCT00065
,
Figure 112007093066825-PCT00066
, 및
Figure 112007093066825-PCT00067
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내고;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00068
인 경우, PEG는 10 kDa PEG이다:
Figure 112007093066825-PCT00069
[Va]
여기에서, A는 옥심 결합을 나타낸다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "성장 호르몬"(GH)은 본원에서의 분석방법 I에 의해 측정되는 바와 같은 성장 호르몬 활성을 보이는 단백질을 지칭하고자 하는 것이다. 상기 분석방법에서 hGH의 20% 이상의 활성, 예컨대 40% 이상의 활성, 예컨대 60% 이상의 활성, 예컨대 80% 이상의 활성을 보이는 단백질은 성장 호르몬으로 정의된다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "트랜스아민화" 및 이에 관련된 용어는 글루타민의 곁사슬내 질소가 다른 화합물로부터의 질소, 더욱 구체적으로는 다른 질소 함유 친핵체로부터의 질소로 교환되는 반응을 나타내고자 하는 것이다.
용어 "라디칼" 또는 "2가 라디칼"은 각각 짝지워지지 않은 전자가 하나 또는 두개 있는 분자 단편을 나타내고자 하는 것이다. 이러한 단편은 하나(예를 들면, 수소) 또는 두개의 원자 또는 원자단(예를 들면 하이드록실기)을 균등 결합 절단, 즉 두개의 생성된 단편 각각이 원래 결합을 형성하는 두개의 전자 중 하나씩을 함유하는 결합 절단에 의해 제거함으로써 일반적으로 생성될 수 있다. 본원에 사용된 "hGH(141)"은 hGH에 있는 글루타민(141)에서 CONH2-기가 형식적으로 제거됨으로써 형성된 라디칼을 의미하고, "hGH(40)"은 hGH에 있는 글루타민(40)에서 CONH2-기가 형식적으로 제거됨으로써 형성된 라디칼을 의미하며, "hGH(40, 141)"은 hGH에 있는 글루타민(40) 및 글루타민(141)에서 CONH2-기가 형식적으로 제거됨으로써 형성된 라디칼을 의미한다. hGH(40/141)은 hGH에 있는 글루타민(40) 및/또는 글루타민(141)에서 CONH2-기가 형식적으로 제거됨으로써 형성된 라디칼을 의미하는데, hGH(40), hGH(141), 및 hGH(40,141) 중 두개 이상의 혼합물도 포함하는 것이다.
용어 "알킬렌"은 포화된 선형, 분지형 및/또는 고리형 사이클릭 탄화수소의 2가 라디칼을 지칭하고자 하는 것이다. 탄소 수에 대해서 특별히 언급하지 않는 한, 이 용어는 2 내지 6(상기 수 포함)의 탄소 원자, 예컨대 2 내지 5(상기 수 포함), 예컨대 2 내지 4(상기 수 포함), 예를 들면 2 내지 3(상기 수 포함)의 탄소 원자를 갖는 탄화수소를 지칭하고자 하는 것이다. 구체적인 예에는 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌 및 헥실렌이 포함된다.
용어 헤테로알킬렌은 하나 이상의 메틸렌기가 -O-로 치환된, 상기 언급한 바와 같은 알킬렌을 지칭하고자 하는 것이다. 구체적인 예에는 폴리에틸렌 글리콜의 2가 라디칼이 포함된다.
용어 "PEG" 또는 "Peg"는 하기 구조식의 다분산 또는 단순분산 2가라디칼을 의미하는 것이다:
Figure 112007093066825-PCT00070
여기에서, n은 1보다 큰 정수이고, 이의 분자량은 대략 100 내지 대략 1,000,000 Da이다.
용어 "mPEG" 또는 "mPeg"는 하기 구조식의 다분산 또는 단순분산 라디칼을 의미하는 것이다:
Figure 112007093066825-PCT00071
여기에서 m은 1보다 큰 정수이다. 그러므로 m이 90인 mPEG는 분자량이 3991 Da, 즉 대략 4kDa이다. 마찬가지로, 평균 20 kDa의 분자량을 갖는 mPEG는 454의 평균 m을 갖는다. mPEG를 제조하는 절차 때문에, 이러한 분자는 종종 분자량의 분산을 가진다. 이러한 분산은 다분산 지수에 의해 기술된다.
본원에서 사용된 용어 "다분산 지수"는 고분자 화학의 당업계에 공지되어 있는 바와 같이(참조:예를 들면, "Polymer Synthesis and Characterization" J.A. Nairn, University of Utah, 2003), 평균 분자량과 수분자량 간의 비율을 의미한다. 다분산 지수는 1보다 크거나 이와 같은 수인데, 이것은 겔투과 크로마토그래피 자료로부터 추정될 수 있다. 다분산 지수가 1인 경우, 생성물은 단순분산이고, 즉 단일 분자량을 갖는 화합물로 만들어진다. 다분산 지수가 1보다 큰 경우라면, 그 중합체의 다분산의 척도, 즉 중합체에 상이한 분자량이 얼마나 넓게 분포하고 있는지를 나타내는 척도가 된다.
예를 들어 화학식, 화합물 이름 또는 분자 구조식에서 "mPEG20000" 또는 "mPEG(20k)"가 사용된 경우, mPEG가 다분산이고 분자량이 대략 20 kDa인 mPEG 잔기임을 나타내는 것이다.
다분산 지수는 전형적으로는 PEG 또는 mPEG의 분자량과 함께 증가한다. 기준이 20 kDa PEG, 더욱 구체적으로는 20 kDa mPEG로 만들어진 경우라면, 다분산 지수가 1.06 이하, 예컨대 1.05 이하, 예컨대 1.04 이하, 예컨대 1.03 이하, 예컨대 1.02 내지 1.03인 화합물(또는 사실은 화합물의 혼합물)을 나타내고자 하는 것이다. 기준이 30 kDa PEG, 더욱 구체적으로는 30 kDa mPEG로 만들어진 경우라면, 다분산 지수가 1.06 이하, 예컨대 1.05 이하, 예컨대 1.04 이하, 예컨대 1.03 이하, 예컨대 1.02 내지 1.03인 화합물(또는 사실은 화합물의 혼합물)을 나타내고자 하는 것이다. 기준이 40 kDa PEG, 더욱 구체적으로는 40 kDa mPEG로 만들어진 경우라면, 다분산 지수가 1.06 이하, 예컨대 1.05 이하, 예컨대 1.04 이하, 예컨대 1.03 이하, 예컨대 1.02 내지 1.03인 화합물(또는 사실은 화합물의 혼합물)을 나타내고자 하는 것이다.
용어 "PEG화된 GH" 또는 "PEG화된 hGH"는 PEG에 공유결합적으로 부착된 GH 또는 hGH를 나타내고자 하는 것인데, 즉 GH 또는 hGH가 PEG와 공유결합적으로 서로 결합된, GH 또는 hGH 및 PEG를 포함하는 컨쥬게이트를 나타내고자 하는 것이다. 상기 부착은 링커를 통해 이루어질 수 있다.
용어 "컨쥬게이트"는 변형된 펩티드, 즉 펩티드의 성질이 변형되도록 결합된 잔기를 갖는, 변형된 펩티드를 지칭하고자 하는 명사이다. 동사로서는, 이 용어는 펩티드의 성질을 변화시키기 위하여 펩티드에 잔기를 결합시키는 과정을 나타내는 것이다.
용어 "옥심 결합"은 구조식 -O-N=의 화학 구조를 지칭하고자 하는 것이다. 본원에 사용된 구조식에서 A로 표현되는 옥심 결합은 -O-N= 또는 =N-O- 방향으로 배치될 수 있다. 일 구체예에서, 소정의 구조식에서의 옥심 결합의 방향은 -O-N=이다. 다른 구체예에서, 소정의 구조식에서 옥심 결합의 방향은 =N-O-이다.
본 명세서에서, 용어 "약학적으로 수용가능한 염"은 환자에게 해롭지 않은 염을 나타내고자 하는 것이다. 이러한 염은 약학적으로 수용가능한 산 첨가 염, 약학적으로 수용가능한 금속 염, 암모늄 및 알킬화된 암모늄 염을 포함한다. 산 첨가 염은 무기산 뿐만 아니라 유기산의 염을 포함한다. 대표적인 적당한 무기산 염의 예는 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 포스포르산, 황산, 질산 등의 염을 포함한다. 적당한 유기산 염의 예는 포름산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 벤조산, 시남산, 시트르산, 퓨마르산, 글리콜산, 락트산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 옥살산, 피크르산, 피루브산, 살리실산, 숙신산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 타타르산, 아스코브산, 파모산, 비스메틸렌 살리실산, 에탄디설폰산, 글루콘산, 시트라콘산, 아스파트산, 스테아르산, 팔미트산, EDTA, 글리콜산, p-아미노벤조산, 글루탐산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 등의 염을 포함한다. 추가의 약학적으로 수용가능한 무기산 또는 유기산 첨가 염의 예는 본원에 참조로서 인용되는 J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2에 기재된 약학적으로 수용가능한 염을 포함한다. 금속 염의 예는 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘 염 등을 포함한다. 암모늄 및 알킬화된 암모늄 염의 예는 암모늄, 메틸암모늄, 디메틸암모늄, 트리메틸암모늄, 에틸암모늄, 하이드록시에틸암모늄, 디에틸암모늄, 부틸암모늄, 테트라메틸암모늄 염 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "프로드러그"는 치료적 활성을 가지지 않거나 또는 활성을 반드시 가지지는 않지만 투여시 체내에서 반응이 발생함으로써 치료적으로 활성인 화합물로 전환되는 화합물을 지칭하고자 하는 것이다. 전형적으로 상기의 반응은 예컨대 에스터라제에 의한 가수분해 또는 산화이다. 프로드러그의 예는 생분해가능한 아미드 및 생분해가능한 에스테르를 포함하고, 또한 a) 이러한 프로드러그의 생분해가능한 작용기가 본 발명에 따른 화합물에 포함되는 화합물, 및 b) 소정의 작용기에서 생물학적으로 산화되거나 환원되어 본 발명에 따른 약물 물질을 생성시킬 수 있는 화합물을 포함한다. 이러한 작용기의 예는 1,4-디하이드로피리딘, N-알킬카르보닐-1,4-디하이드로피리딘, 1,4-사이클로헥사디엔, tert-부틸 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "생분해가능한 아미드"는 약물 물질(본 발명에 따른 화합물)의 아미드로서, a) 모(母)물질의 생물학적 활성을 방해하지는 않지만 인비보에서 유리한 성질을, 예컨대 활동 기간, 활동 시작 등의 성질을 물질에게 부여하고, b) 생물학적으로 비활성이지만 피험체에 의해 인 비보에서 생물학적 활성 상태로 쉽게 전환되는 것을 말한다. 예를 들면, 용해도를 증가시키기 위해서는 생분해가능한 아미드가 장으로부터 입으로 흡수되면 혈장내에서 본 발명에 따른 화합물로 변하게 하는 것이 유리하다. 상기와 같은 예는 당업계에 공지되어 있고, 저급 알킬 아미드, α-아미노산 아미드, 알콕시아실 아미드, 및 알킬아미노알킬카르보닐 아미드를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "생분해가능한 에스테르"는 약물 물질(본 발명에 따른 화합물)의 에스테르로서, a) 모(母)물질의 생물학적 활성을 방해하지는 않지만 인비보에서 유리한 성질을, 예컨대 활동 기간, 활동 시작 등의 성질을 물질에게 부여하고, b) 생물학적으로 비활성이지만 피험체에 의해 인 비보에서 생물학적 활성 상태로 쉽게 전환되는 것을 말한다. 예를 들면, 용해도를 증가시키기 위해서는 생분해가능한 에스테르가 장으로부터 입으로 흡수되면 혈장내에서 본 발명에 따른 화합물로 변하게 하는 것이 유리하다. 상기와 같은 예는 당업계에 공지되어 있고, C1-C4알킬 에스테르, C1-C4아실옥시알킬 에스테르, C1-C4a알콕시아실옥시알킬 에스테르, 알콕시아실옥시 에스테르, 알킬 아실아미노 알킬 에스테르, 및 콜린 에스테르를 포함한다.
트랜스글루타미나제(E.C.2.3.2.13)는 단백질-글루타민-γ-글루타밀트랜스퍼라제로도 알려져 있으며, 하기의 개괄적인 반응을 촉매한다:
Figure 112007093066825-PCT00072
Q-C(O)-NH2 (아민 받게)는 글루타민 잔기 함유 펩티드를 나타낼 수 있고, Q'-NH2(아민 주게)는 아민 함유 친핵체를 나타낸다. 또는 달리, Q-C(O)-NH2 및 Q'-NH2는 각각 아민 받게 및 라이신 함유 펩티드를 나타낼 수 있다. 하지만 본 발명에서 Q-C(O)-NH2는 글루타민 잔기를 함유하는 성장 호르몬을 나타내고, Q'-NH2는 상기에도 나타낸 바와 같이 아민 함유 친핵체를 나타낸다.
인 비보에서 흔한 아민 주게는 펩티드 결합된 라이신이고, 이에 따라 상기의 반응은 펩티드의 교차결합을 허용한다. 응고인자인 제XIII 인자는 상처가 생길 때 혈액을 응고시키는 트랜스글루타미나제이다. 다른 종류의 트랜스글루타미나제는 다른 것과 서로 다르며, 예를 들면, 글루타민 잔기(또는 Gln) 주위의 어떤 아미노산이 기질이 될 단백질에 대해 요구되는지의 면에서 다른데, 즉 상이한 트랜스글루타미나제는 어떤 아미노산 잔기가 Gln 잔기 주위에 있느냐에 따라, 기질로서 상이한 Gln-함유 펩티드를 취할 것이다. 이러한 측면은 변형하고자 하는 성장 호르몬이 하나 이상의 Gln 잔기를 가지는 경우에 활용할 수 있다. 존재하는 Gln 잔기 중 일부에서만 오로지 선택적으로 성장 호르몬을 컨쥬게이팅하는 것이 바람직한 경우라면, 이것은 기질로서 해당 Gln 잔기만을 수용하는 트랜스글루타미나제를 선택함으로써 달성할 수 있다. 또는 달리, 예를 들면 상기의 Gln 잔기에 소정의 트랜스글루타미나제의 활성을 변형시키기 위한 유전자 변형을 함으로써 Gln 근처의 하나 이상의 아미노산 잔기를 변경시킬 수 있다. 글루타민 잔기는 물론, 컨쥬게이팅될 소수의 또는 단 하나의 글루타민 잔기를 가지는 성장 호르몬을 얻기 위하여 성장 호르몬으로부터 결실될 수도 있거나, 다른 아미노산으로 치환될 수도 있다.
화합물이 예를 들면, 시간, 온도 등과 같은 반응 조건에 따라 기본적으로 소정의 효소에 대한 기질이 되는지 아닌지 여부에 대해서는 알려져 있다. 충분한 시간이 주어지는 경우, 기질로서 보통은 간주되지 않는 다수의 화합물도 실제로 기질이 된다. 상기에서 언급될 때 소정의 트랜스글루타미나제에 대해서 일부 Gln 잔기는 기질일 수 있지만, 반면에 다른 것은 아닐 수도 있으며 이 때 "다른 것"이란 희망하는 선택성이 달성될 수 있는 정도의 것은 아닌 것을 나타내고자 하는 것이다. 컨쥬게이팅되지 않고 남아있는 것이 바람직한 하나 이상의 Gln 잔기가 존재하는 경우에는, 사실상, 연장된 기간 동안에 트랜스글루타미나제와 접촉될 때 트랜스글루타미나제에 대한 기질 선택성은, 적당한 시간 후에 트랜스글루타미나제를 제거하거나 비활성화시킴으로써 달성할 수 있다.
유용한 트랜스글루타미나제의 예는 미생물 트랜스글루타미나제, 예컨대 Streptomyces mobaraense , Streptomyces cinnamoneum 및 Streptomyces griseocarneum (본원에 참조로서 인용되는 US 5,156,956에 기재되어 있는 것이다) 유래의 것, 및 Streptomyces lavendulae (본원에 참조로서 인용되는 US 5,252,469에 기재되어 있는 것이다) 유래의 것 및 Streptomyces ladakanum (본원에 참조로서 인용되는 JP2003199569에 기재되어 있는 것이다) 유래의 것을 포함한다. 예전의 Streptoverticillium속의 구성원은 지금은 Streptomyces속에 포함됨을 주의해야 한다(Kaempfer, J. Gen. Microbiol. 137, 1831-1892 (1991)). 다른 유용한 미생물 트랜스글루타미나제는 Bacillus subtilis (본원에 참조로서 인용되는 US 5,731,183에 기재되어 있는 것이다)에서 분리되었고, 각종 Myxomycetes에서 분리되었다. 다른 유용한 미생물 트랜스글루타미나제의 예는 모두 본원에 참조로서 인용되는 WO 96/06931(예를 들면, Bacilus lydicus 유래 트랜스글루타미나제) 및 WO 96/22366에 기재된 것들이다. 유용한 비-미생물 트랜스글루타미나제는 기니아-피그 간 트랜스글루타미나제, 및 넙치 Pagrus major(본원에 참조로서 인용되는 EP-0555649에 기재된 것이다), 그리고 일본 굴 Crassostrea gigas (본원에 참조로서 인용되는 US 5,736,356에 기재된 것이다)과 같은 각종 해양 생물 유래의 트랜스글루타미나제를 포함한다.
일 구체예에서, PEG화될 글루타민 잔기 포함 성장 호르몬은 인간 성장 호르몬(hGH)이고, 이것은 인간 소마토트로핀으로서 공지되어 있다. 상이한 hGH의 변이체가 공용 데이터 베이스인 SwissProt에 기재되어 있는 바와 같이 존재한다. 이것은 26개의 아미노산 신호 펩티드를 포함하고, 191 아미노산 성숙한 펩티드를 포함한다.
일 구체예에서, hGH는 본원에서 SEQ ID No. 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다(또한 22K-hGH라고도 공지되어 있다).
일 구체예에서, hGH는 J.Clin.Endocrin.Metabol. 89, 1562-1571 (2004) 및 Endocrine J., 47, S49-S52 (2000)에 기술된 바와 같이, 20 kDa hGH(또는 20K-hGH)이다. 20 kDa hGH는 20 kDa의 분자량을 가지며(20k-hGH), 이것은 뇌하수체 전엽에서 스플라이스 변이체로서 분비되는 것으로(엑손3의 얼터네이티브 스플라이싱), 순환 혈장 hGH의 대략 5-10%를 차지하는 것으로 보고되어 있다(Baumann, Endocr. Rev. 12, 424-449 (1991)). 20K-hGH는 22K-hGH에 비해서 15개 아미노산(잔기 32-46)이 결실되어 있다. 22K-hGH는 hGH 대체 및 약학적 치료에서 현재에도 개선되고 있고 또한 사용되고 있지만, 20K-hGH는 이러한 치료에 사용된 적이 한번도 없다. 20K-hGH는 시상하부를 제거한 래트 및 드와프 래트에서 성장을 촉진하는 것을 담당하는 완전한 아고니스트이고, 이에 따라 22K-hGH만큼 효능이 있다(Wada et al., Mol. Cellu. Endocr. 113, 99-107 (1997), Ishikawa et al., Growth Horm. IGF Res. 10, 199-206 (2000)). 또한 인간 조골세포에서 20K-hGH의 조골능력은 22K-hGH의 능력과 동등하다. 재조합 20K-hGH, 22K-hGH 및 대조군을 사용한 24시간 주입 연구(래트에 주입)에서, 20K-hGH는 대조군과 비교하여 정상혈당 클램프에서 글루코스 주입 속도(GIR)에 대해 그다지 영향을 미치지 않았다. 반대로, 22K-hGH는 20K-hGH 및 대조군과 비교하여 GIR을 상당히 낮추었다(Takahashi et al., Growth Horm. IGF Res. 11, 110-116 (2001)). 그러므로 낮은 피크(일정한 피크)를 가진 20K-hGH 혈장 프로파일은 당뇨병유발능이 더 낮은 것으로 보이고, 22K-hGH에 비해 인슐린-길항 작용을 감소시키는 것으로 보인다. 또한, 정상적인 래트에서 20K-hGH는 22K-hGH보다 요폐(부종형성)를 일으키는 데 있어 더 낮은 능력을 보여주었다(Satozawa et al., Growth Horm. IGF Res. 10, 187-192 (2000)). 장기작용성 성장 호르몬 제품은 주입을 사용하여 수득된 것과 유사한 혈장 프로파일을 가질 것이다. 그러므로 20K-hGH의 유도체를 사용하면 22K-hGH 유도체와 유사한 바람직한 약학적 성질을 가지지만, 부작용은 개선되게 할 것이다. 뿐만 아니라, 20K-hGH는 22K-hGH에 비해 30% 더욱 긴, 인간에서 타고난 혈장 반감기를 가지는 장기작용성 성장 호르몬 제품을 만들게 하기 위한 경향을 더욱 키울 것이다. 감소된 제거능은 더욱 낮아진 수용체 매개 제거능 때문인 것으로 생각된다(Leung et al., Am. J. Physiol Endocr. Metab. 283, 836-843 (2002)). 또한, 낮은 농도(0.1 nM)에서 20K-hGH는 IGF-1 발현을 유도하기 위해서 22K-hGH보다 3배 더 효과적인 것으로 보였다(Yoshizato et al., Endocr. J. 47, 37-40 (2000)). - 이는 다시 장기작용성 성장 호르몬 제품에 대한 더욱 양호한 프로파일임을 나타내는 것이다.
일 구체예에서, PEG화될 성장 호르몬은 hGH의 변이체인데, 여기에서 변이체는 다른 천연 또는 인공 아미노산으로 hGH 서열내 하나 이상의 아미노산 잔기를 치환함으로써; 그리고/또는 hGH 서열에 하나 이상의 천연 또는 인공 아미노산을 첨가함으로써; 그리고/또는 hGH 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 결실시킴으로써 수득된 화합물로 이해되고, 여기에서 이러한 단계 중 임의의 단계 다음에는 임의선택적으로는 하나 이상의 아미노산 잔기의 추가의 유도체화, 예를 들면, 2중-PEG화 또는 다중-PEG화된 성장 호르몬 변이체를 생성시키는 PEG화가 이루어질 수 있는 것이다. 구체적으로는, 이러한 치환은 하나의 아미노산 잔기가 동일한 군내의 다른 아미노산 잔기로 치환된다는 점에서, 즉 유사한 성질을 가진 다른 아미노산 잔기로 치환된다는 점에서 보존적이다. 아미노산은 편의를 위해 이들의 성질을 기준으로 하기의 군으로 분류할 수 있다: 염기성 아미노산군(예컨대 아르지닌 및 라이신), 산성 아미노산군(예컨대 글루탐산 및 아스파트산), 극성 아미노산군(예컨대 글루타민, 히스티딘, 시스테인 및 아스파라진), 소수성 아미노산군(예컨대 루신, 이소루신, 프롤린, 메싸이오닌 및 발린), 방향족 아미노산군(예컨대 페닐알라닌, 트립토판, 티로신) 및 소형 아미노산군(예컨대 글리신, 알라닌, 세린 및 트레오닌).
일 구체예에서, hGH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기가 결실되거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH이다. 일 구체예에서, hGH는 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기가 결실되거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH이다. 일 구체예에서, hGH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기, 및 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기가 결실되거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH로서, 이 때 글루타민 잔기는 성장 호르몬 중의 다른 위치에도 존재한다. 추가의 구체예에서, 상기 다른 아미노산은 아스파라진이다.
일 구체예에서, PEG화될 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬은 hGH와 적어도 80%, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 98% 동일성을 가진다. 일 구체예에서, hGH에 대한 동일성은 본원에서의 분석방법 I에서 결정된 바에 따르면 hGH의 성장 호르몬 활성의 적어도 20%, 예컨대 적어도 40%, 예컨대 적어도 60%, 예컨대 적어도 80%에 상응한다.
용어 "동일성"은 당업계에 공지되어 있는 바와 같이 서열을 대조함으로써 측정되는, 두개 이상의 단백질의 서열 간의 관계를 말하는 것이다. 당업계에서, "동일성"은 또한 두 개 이상의 아미노산 잔기 간에 일치하는 수를 측정함으로써 결정되는, 단백질 간의 서열 연관성의 정도를 말하는 것이기도 하다. "동일성"은 특정한 통계학적 모델이나 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")을 통해 어드레싱되는 갭 정렬(존재하는 경우)을 사용하여 두 개 이상의 서열 간의 일치의 퍼센트를 측정한다. 관련 단백질의 동일성은 공지된 방법을 통해 쉽게 계산할 수 있다. 이러한 방법은 예를 들면 [Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; and Carillo et al., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988)]에 기술된 것들이지만 이에 국한되는 것은 아니다.
동일성을 측정하기 위한 바람직한 방법은 시험된 서열 간에 가장 긴 일치 서열을 만들도록 고안하는 것이다. 동일성을 측정하기 위한 방법은 공용 컴퓨터 프로그램에 기술되어 있다. 두 서열 간의 동일성을 측정하기 위한 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법은 GAP(Devereux et al., Nucl. Acid. Res., 12:387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA(Altschul et al., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990))를 포함하는 GCG 프로그램 패키지를 포함한다. BLASTX 프로그램은 National Center for Biotechnology Information (NCBI) 및 기타 공급처(BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul et al., 상기의 문헌)에서 공개적으로 구할 수 있다. 익히 공지되어 있는 Smith Waterman 알고리즘도 동일성을 측정하는데 사용될 수 있다.
예를 들면, 컴퓨터 알고리즘 GAP(Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.)를 사용하여, 서열 동일성 %를 측정할 두개의 단백질을 해당 아미노산의 최적의 일치에 대해 정렬한다(알고리즘에 의해 측정되는 바와 같은 "일치되는 스팬"). 갭 열림 벌점(이는 3회 측정된 것으로서, 평균 항(項): "평균 항"은 사용되는 대조 매트릭스의 항의 평균을 말하고; "항"은 특정 대조 매트릭스에 의한 각각의 완전한 아미노산 일치로 할당받은 점수 또는 숫자이다), 및 갭 연장 벌점(이는 보통 {프랙션 (1/10)} 곱하기 갭 열림 벌점이다), 뿐만 아니라, PAM 250 또는 BLOSUM 62와 같은 대조 매트릭스를 알고리즘과 함께 사용한다. 표준 대조 매트릭스(참조: PAM 250 대조 매트릭스에 대해서는 Dayhoff et al., Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 (1978); BLOSUM 62 대조 매트릭스에 대해서는 Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89:10915-10919 (1992))를 알고리즘에 사용하였다.
단백질 서열 대조를 위한 바람직한 매개변수는 하기를 포함한다:
알고리즘: Needleman et al., J. Mol. Biol, 48:443-453 (1970); 대조 매트릭스: Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915-10919 (1992)의 BLOSUM 62 ; 갭 벌점: 12, 갭 길이 벌점: 4, 유사도의 역치: 0.
GAP 프로그램은 상기 매개변수를 사용하여 유용하다. 상기 언급한 매개변수는 GAP 알고리즘을 사용한 단백질 대조에 대해 디폴트 매개변수(말단 갭에 대해 페널티가 없는 것과 함께)이다.
상기 서술한 PEG화될 성장 호르몬은 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하여야 하는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 용어 "글루타민 잔기"는 트랜스아민화에 적합한 글루타민 잔기 유사체도 포함한다. 적당한 글루타민 잔기 유사체는 부분적으로 플루오르화된, 알킬화된, 또는 중복된(deuterated) 글루타민 잔기 유사체, 또는 글루타민 잔기의 동족체, 즉 하나, 둘, 또는 그 이상의 메틸렌기(-CH2-)를 글루타민의 C-C, C-H, 또는 C-N-결합에 형식적으로 삽입한 결과로서 생성된 화합물을 포함하나 이에 국한되는 것은 아니다.
성장 호르몬은 표준 단백질 합성 방법에 의해 수득될 수 있거나, 성장 호르몬은 해당 성장 호르몬을 코딩하는 DNA로 적당한 숙주 세포를 형질감염시킴으로써 수득될 수 있다. 이것은 당업자라면 익히 할 수 있는 것이다. 본 발명에 따른 방법을 사용하여 수득될 수 있는 PEG화된 성장 호르몬은 바람직한 경우에 PEG화 이외의 다른 방식에 의해 유도체화될 수도 있다. 이러한 부가적인 유도체화는 본 발명의 방법의 단계를 사용하기 전, 사용하는 동안, 또는 사용한 후에 수행할 수 있다. 이러한 부가적인 유도체화를 하는 시기를 결정하는 것은 당업자라면 능숙히 해낼 수 있을 것이다. 사용되는 성장 호르몬은 본 발명에 따른 방법을 사용하여 PEG화되는 자리 또는 PEG화될 자리 이외의 하나 이상의 추가적인 위치에서 이미 PEG화된 것일 수 있다.
일 구체예에서, D는 -O-를 나타낸다. 다른 구체예에서, D는 단일 결합을 나타낸다.
링커 R은 성장 호르몬에 혼입될 친핵체의 아민기 및 작용기 또는 숨은 작용기 간에 적당한 간격을 제공한다. 일 구체예에서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타낸다. 일 구체예에서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타낸다. 일 구체예에서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타낸다. 일 구체예에서, R은 메틸렌, 에틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다. 일 구체예에서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다.
일 구체예에서, Z는 하기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00073
,
Figure 112007093066825-PCT00074
,
Figure 112007093066825-PCT00075
,
Figure 112007093066825-PCT00076
,
Figure 112007093066825-PCT00077
,
Figure 112007093066825-PCT00078
,
Figure 112007093066825-PCT00079
,
Figure 112007093066825-PCT00080
,
Figure 112007093066825-PCT00081
,
Figure 112007093066825-PCT00082
,
Figure 112007093066825-PCT00083
,
Figure 112007093066825-PCT00084
,
Figure 112007093066825-PCT00085
,
Figure 112007093066825-PCT00086
,
Figure 112007093066825-PCT00087
,
Figure 112007093066825-PCT00088
.
Figure 112007093066825-PCT00089
,
Figure 112007093066825-PCT00090
, 및
Figure 112007093066825-PCT00091
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
X내에 포함된 작용기는 Y-Z와 반응하기 전에 활성화되어야 하는 점에서 숨은 기일 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들면, X는 적당한 시약과 반응시 알데하이드 및 케톤으로 전환되는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 잔기의 예는 하기를 포함한다:
Figure 112007093066825-PCT00092
여기에서, R9은 H, C1 - 6알킬, 아릴 또는 헤테로아릴을 나타낸다. 적당한 예에는 메틸, 에틸 및 프로필을 포함한다. 상기 잔기는 적당한 시약, 예컨대 페리오데이트로의 산화, 또는 임의선택적으로는 촉매, 예컨대 촉매, 구리, 은, 또는 수은 염의 존재하에 산 수용액으로의 가수분해를 통해 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "아릴"은 호모사이클릭 방향족 고리 라디칼 또는 융합된 호모사이클릭 고리 시스템 라디칼을 나타내고자 하는 것으로서, 이 때 적어도 하나의 고리는 방향족이다. 전형적인 아릴기는 페닐, 비페닐, 나프틸, 테트라리닐 등을 포함한다.
본원에서 용어 "헤테로아릴"은, 단독으로 또는 합하여, 예를 들면 5 내지 7 고리 원자를 갖는 방향족 고리 라디칼, 또는 예를 들면 7 내지 18 고리 원자를 갖는 융합된 방향족 고리 시스템 라디칼을 나타내는 것으로, 여기에서 적어도 하나의 고리는 방향족이고, 질소, 산소, 또는 황 헤테로원자 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 고리 원자로서 함유하며, 여기에서 N-옥사이드 및 황 모노옥사이드 및 황 디옥사이드는 허용가능한 헤테로원자 치환의 예이다. 예에는 퓨라닐, 티에닐, 티오페닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소자졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피라지닐, 피리미디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤조퓨라닐, 벤조티오페닐, 인돌릴 및 인다졸릴 등을 포함한다.
X 및 Y는 옥심 결합을 형성하기 위하여 서로 반응할 수 있어야 하는 점에서 상보적이어야 한다. 이는 X가 알데하이드 또는 케톤(또는 알데하이드 또는 케톤으로 활성화될 수 있는 것)이라면, Y는 아미노옥시이어야 함을 뜻하는 것이다. X가 아미노옥시인 경우라면, Y는 알데하이드 또는 케톤이어야 한다. Y가 알데하이드 또는 케톤이라면, X는 아미노옥시이어야 한다. Y가 아미노옥시인 경우라면, X는 알데하이드 또는 케톤이어야 한다(또는 알데하이드 또는 케톤으로 활성화되어야 한다).
화학식 [II]의 화합물의 구체적인 예는 1,3-디아미노옥시 프로판 및 1,3-디아미노-2-프로판올을 포함한다. 후자의 화합물이 사용된 경우, 숨은 알데하이드기는 산화되어야 하는데, 예를 들면 페리오데이트를 사용하여 알데하이드로 전환되어야 한다.
일 구체예에서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 알데하이드 또는 추가로 반응하여 알데하이드를 형성할 수 있는 숨은 기를 나타낸다. 일 구체예에서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 케톤 또는 추가로 반응하여 케톤을 형성할 수 있는 숨은 기를 나타낸다. 일 구체예에서, 화학식 [II]의 화합물:
H2N-D-R-X
[II]
은 1,3-디아미노-2-프로판올을 나타내고, Y는 -O-NH2를 나타낸다.
추가의 구체예에서, 화학식 [IV]의 화합물:
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00093
,
Figure 112007093066825-PCT00094
,
,
Figure 112007093066825-PCT00096
,
Figure 112007093066825-PCT00097
,
Figure 112007093066825-PCT00098
,
Figure 112007093066825-PCT00099
,
Figure 112007093066825-PCT00100
,
Figure 112007093066825-PCT00101
,
Figure 112007093066825-PCT00102
,
Figure 112007093066825-PCT00103
,
Figure 112007093066825-PCT00104
, 및
Figure 112007093066825-PCT00105
,
여기에서 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미한다.
일 구체예에서, Y는 알데하이드를 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다. 추가의 구체예에서, 화학식 [II]의 화합물:
H2N-D-R-X
[II]
은 1,3-디아미노옥시 프로판을 나타내고, Y는 알데하이드를 나타낸다.
추가의 구체예에서, 화학식 [IV]의 화합물
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00106
,
Figure 112007093066825-PCT00107
,
Figure 112007093066825-PCT00108
,
Figure 112007093066825-PCT00109
,
Figure 112007093066825-PCT00110
, 및
Figure 112007093066825-PCT00111
,
여기에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미한다.
일 구체예에서, Y는 케톤을 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다. 추가의 구체예에서, 화학식 [II]의 화합물:
H2N-D-R-X
[II]
은 1,3-디아미노옥시 프로판을 나타내고, Y는 케톤을 나타낸다.
추가의 구체예에서, 화학식 [IV]의 화합물:
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00112
,
Figure 112007093066825-PCT00113
,
Figure 112007093066825-PCT00114
,
Figure 112007093066825-PCT00115
,
Figure 112007093066825-PCT00116
, 및
Figure 112007093066825-PCT00117
,
여기에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미한다.
화학식 [IV]의 화합물은 시중에서 구입할 수 있는데, 예를 들면 Shearwater사나 NOF로부터 구입할 수 있거나, 시중에서 구입할 수 있는 화합물로부터 단순한 화학적 변형시 쉽게 수득할 수 있다.
화학식 V의 화합물은 해당하는 비-컨쥬게이팅된 성장 호르몬, 즉 모성장 호르몬에 비해 개선되거나 대안적인 약학적 성질을 가질 수 있다. 그러므로, 일 구체예에서, 본 발명은 성장 호르몬의 약학적 성질을 변형시키는 방법에 관한 것이고, 이 방법은 본 발명의 방법에 따라 성장 호르몬에 PEG를 부착시키는 것을 포함한다. 이러한 약학적 성질의 예는 작용성 인 비보 반감기, 면역력, 신장여과, 프로테아제 보호 및 알부민 결합을 포함한다.
용어 "작용성 인 비보 반감기"는 이의 일반적인 의미로 사용되는 것으로서, 즉 성장 호르몬 또는 컨쥬게이팅된 성장 호르몬의 생물학적 활성의 50%가 체내/표적 기관에 존재하는 시간, 또는 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 컨쥬게이트의 활성이 초기값의 50%인 시간을 말한다. 작용성 인 비보 반감기를 결정하기 위한 다른 방법으로서, "인 비보 혈장 반감기"를 측정할 수 있는데, 즉 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 컨쥬게이트의 50%가, 제거되기 전 혈장이나 혈류내에서 순환하는 시간을 말한다. 혈장 반감기의 측정은 종종 작용성 반감기를 측정하는 것보다 더 간편하며, 보통 혈장 반감기의 정도는 작용성 인 비보 반감기의 정도에 대한 좋은 지표가 된다. 혈장 반감기에 대한 대안적인 용어는 혈청 반감기, 순환 반감기, 순환 반감기, 혈청 제거능, 혈장 제거능, 및 제거 반감기를 포함한다.
본원에서 작용성 인 비보 반감기 또는 혈장 반감기와 관련하여 사용된 용어 "증가된"은 성장 호르몬 컨쥬게이트의 해당 반감기가 비교가능한 조건 하에 측정하였을 때 모성장 호르몬의 것에 비하여 통계학적으로 상당히 증가된 것을 나타낼 때 사용된다. 예를 들면 해당 반감기는 적어도 약 25%, 예컨대 적어도 약 50%, 예를 들면 적어도 약 100%, 150%, 200%, 250%, 또는 500%까지 증가할 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 화합물은 모GH의 반감기에 비하여, 적어도 약 5시간, 바람직하게는 적어도 약 24시간, 더욱 바람직하게는 적어도 약 72시간, 가장 바람직하게는 적어도 약 7일의 증가된 반감기를 보인다.
인 비보 혈장 반감기의 측정은 문헌에 기재된 바와 같은 다수의 방식으로 수행될 수 있다. 인 비보 혈장 반감기의 증가는 제거능(CL)의 감소로서, 또는 평균 체류 시간(MRT)의 증가로서 정량할 수 있다. CL이 적당한 분석방법으로 측정된 모성장 호르몬의 CL의 70% 이하, 예컨대 50% 이하, 예컨대 20% 이하, 예컨대 10% 이하로 감소된, 본 발명의 컨쥬게이팅된 성장 호르몬은 증가된 인 비보 혈장 반감기를 가진 것으로 언급된다. MRT가 적당한 분석방법으로 측정된 모성장 호르몬의 MRT의 130% 이상, 예컨대 150% 이상, 예컨대 200% 이상, 예컨대 500% 이상으로 증가된, 본 발명의 컨쥬게이팅된 성장 호르몬은 증가된 인 비보 혈장 반감기를 가진 것으로 언급된다. 제거능 및 평균 체류 시간은 적당한 시험 동물을 사용하여 표준 약물동력학 연구에서 측정할 수 있다. 소정의 단백질에 대해 적합한 시험 동물을 선택하는 것은 당업자라면 충분히 할 수 있다. 인간에서의 시험이 물론 최종적인 시험을 나타낸다. 적당한 시험 동물은 정상적인 Sprague-Dawley 수컷 래트, 마우스 및 사이노몰거스 원숭이를 포함한다. 전형적으로는 마우스 및 래트에게는 단일 피하 볼루스로 주사되지만, 원숭이에게는 단일 iv 투여량으로 또는 단일 피하 볼루스로 주사될 수 있다. 주사되는 양은 시험 동물에 따라 달라진다. 이어서 CL 및 MRT의 측정을 위해 적당한 5일 중 하루의 기간 동안에 혈액 샘플을 취한다. 혈액 샘플은 편리하게는 ELISA 기술에 의해 분석한다.
용어 "면역력"이란 인간에게 투여되었을 때 체액성이든 세포성이든 또는 둘다이든 해로운 면역 반응을 일으킬 수 있는 화합물의 능력을 말하는 것이다. 임의의 인간 하위집단에서, 구체적인 투여된 단백질에 대해 감수성을 보이는 구성원이 존재할 수 있다. 면역력은 당업계에 공지된 통상의 방법을 사용하여 감수성을 보이는 구성원에서 성장 호르몬 항체 및/또는 성장 호르몬 반응성 T-세포의 존재를 정량함으로써 측정할 수 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 GH는 모GH의 구성원에 대한 면역력에 비하여, 적어도 약 10%, 바람직하게는 적어도 약 25%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40%, 가장 바람직하게는 적어도 약 50%의 감수성 구성원 중에서의 면역력의 감소를 보인다. 다른 구체예에서, 면역력은 유사한 개체의 집단에서의 전형적인 반응을 가리키는데, 예컨대 임상 시험 중인 환자 집단내에서의 전형적인 반응을 가리키는 것이다.
본원에 사용된 "프로테아제 보호" 또는 "프로테아제 보호된"은 본 발명의 컨쥬게이팅된 성장 호르몬이 모성장 호르몬보다 혈장 펩티다제 또는 프로테아제에 대해 더 저항성이라는 것을 나타내고자 하는 것이다. 혈장내에 존재하는 프로테아제 및 펩티다제 효소는 순환 단백질의 파괴에 관여하는 것으로 공지되어 있는데, 에를 들면 순환 펩티드 호르몬, 예컨대 성장 호르몬의 파괴에 관여하는 것으로 공지되어 있다.
예를 들면 디펩티딜 아미노펩티다제 IV(DPPIV)에 의한 파괴에 대한 단백질의 저항성은 하기의 파괴 분석방법에 의해 측정할 수 있다: 단백질 분취액(5 nmol)을, 100 ㎕의 0.1M 트리에틸아민-HCl 완충액, pH 7.4에서 10-180분 동안 5 mU의 효소 활성에 해당하는 정제된 디펩티딜 아미노펩티다제 IV 1 ㎕과 함께 37℃에서 인큐베이팅한다. 효소 반응은 5 ㎕의 10% 트리플루오로아세트산을 첨가하여 중단시키고, 단백질 파괴 산물을 분리하여 HPLC 분석을 사용하여 정량한다. 이러한 분석방법을 수행하는 하나의 방법은: Siegel et al., Regul. Pept. 79, 93-102 (1999) 및 Mentlein et al. Eur. J. Biochem. 214, 829-35 (1993)에 기술된 바에 따라, 혼합물을 Vydac C18 widepore (30 nm 세공, 5 ㎛ 입자) 250 x 4.6 mm 컬럼에 적용하고 0.1% 트리플루오로아세트산 중의 아세토니트릴의 선형 단계적 구배(3분간 0% 아세토니트릴, 17분간 0-24% 아세토니트릴, 1분간 24-48% 아세토니트릴)를 사용하여 1 ml/분의 유속으로 용리하는 것이다. 단백질 및 이의 파괴 산물을 220 nm(펩티드 결합) 또는 280 nm(방향족 아미노산)에서의 흡광도를 통해 모니터링하고, 표준에 대비하여 이의 피크 영역들을 더함으로써 정량한다. 디펩티딜 아미노펩티다제 IV에 의한 단백질의 가수분해 속도는 가수분해되는 펩티드의 10% 미만을 생성하는 인큐베이션 시간에서 측정한다. 다른 혈장 프로테아제 또는 펩티다제의 저항성도 유사한 방식으로 측정할 수 있다. 일 구체예에서, 성장 호르몬 컨쥬게이트의 가수분해 속도는 모성장 호르몬의 70% 미만, 예컨대 40% 미만, 예컨대 10% 미만이다.
포유류 종의 순환 혈류 중에 가장 많이 존재하는 단백질 성분은 혈청 알부민으로서, 이것은 보통 전혈 100 mL당 대략 3 내지 4.5 g의 농도로 존재한다. 혈청 알부민은 순환계에서 몇가지 중요한 기능을 갖는 대략 70,000 달톤의 혈장 단백질이다. 이것은 혈류내에서 발견되는 각종 유기 분자의 수송체로서, 혈류를 통한 지방산과 빌리루빈과 같은 각종 대사체의 주요 수송체로서, 또한 이의 풍부함에 기인하여 순환 혈류의 삼투압 조절자로서 기능한다. 혈청 알부민은 1주 이상의 반감기를 가지는데, 단백질의 혈장 반감기를 증가시키는 하나의 접근법은 혈청 알부민에 결합하는 작용기를 단백질에 컨쥬게이팅하는 것이다. 알부민 결합 성질은 본원에 참조로서 인용되는 J. Med. Chem, 43, 1986-1992 (2000)에 기술된 바와 같이 측정할 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 [V]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물에 관한 것이다:
Figure 112007093066825-PCT00118
[V]
상기 식에서 PP는 폴리펩티드내에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00119
,
Figure 112007093066825-PCT00120
,
Figure 112007093066825-PCT00121
,
Figure 112007093066825-PCT00122
,
Figure 112007093066825-PCT00123
,
Figure 112007093066825-PCT00124
,
Figure 112007093066825-PCT00125
,
Figure 112007093066825-PCT00126
,
Figure 112007093066825-PCT00127
,
Figure 112007093066825-PCT00128
,
Figure 112007093066825-PCT00129
,
Figure 112007093066825-PCT00130
,
Figure 112007093066825-PCT00131
,
Figure 112007093066825-PCT00132
,
Figure 112007093066825-PCT00133
,
Figure 112007093066825-PCT00134
.
Figure 112007093066825-PCT00135
,
Figure 112007093066825-PCT00136
, 및
Figure 112007093066825-PCT00137
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
일 구체예에서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타낸다.
일 구체예에서, 본 발명은 hGH와 같은 성장 호르몬에 관한 것인데, 이 성장 호르몬은 PEG, 더욱 구체적으로는 mPEG를 포함하는 하나 이상의 잔기에 공유결합적으로 부착되어 있는 것이고, 상기 PEG-포함 잔기는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬에 부착되어 있는 것이다. 일 구체예에서, 본 발명은 hGH에 관한 것인데, 이 성장 호르몬은 PEG, 더욱 구체적으로는 mPEG를 포함하는 잔기에 공유결합적으로 부착되어 있는 것이고, 상기 PEG-포함 잔기는 SEQ ID No. 1의 위치 40, 위치 141, 또는 위치 40 및 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기의 곁사슬에 부착된 것으로서, 단 하기는 아닌 것이다:
Nε141-[2-(4-(4-(mPEG(20k)일부타노일)-아미노-부틸옥시아미노)-에틸] hGH,
Nε141-[2-(1-(헥사데카노일)피페리딘-4-일)에틸옥시아미노)-에틸] hGH,
Nε141(2-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(2,6-비스(mPEG(20k)일옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(4-(mPEG(30k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(4-(mPEG(20k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH, 또는
Nε141(2-(4-(3-(mPEG(30k)일옥시)프로파노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH.
일 구체예에서, 본 발명은 화학식 [Va]의 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물에 관한 것으로,
Figure 112007093066825-PCT00138
[Va]
상기 식에서, GH는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 성장 호르몬 라디칼을 나타내고,
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00139
,
Figure 112007093066825-PCT00140
,
Figure 112007093066825-PCT00141
,
Figure 112007093066825-PCT00142
,
Figure 112007093066825-PCT00143
,
Figure 112007093066825-PCT00144
,
Figure 112007093066825-PCT00145
,
Figure 112007093066825-PCT00146
,
Figure 112007093066825-PCT00147
,
Figure 112007093066825-PCT00148
,
Figure 112007093066825-PCT00149
,
Figure 112007093066825-PCT00150
,
Figure 112007093066825-PCT00151
,
Figure 112007093066825-PCT00152
,
Figure 112007093066825-PCT00153
,
Figure 112007093066825-PCT00154
.
Figure 112007093066825-PCT00155
,
Figure 112007093066825-PCT00156
, 및
Figure 112007093066825-PCT00157
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00158
인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG이다.
일 구체예에서, D는 -O-를 나타낸다.
일 구체예에서, D는 단일 결합을 나타낸다.
일 구체예에서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타낸다.
일 구체예에서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서, R은 메틸렌, 에틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서 R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다.
일 구체예에서, Z는 하기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00159
,
Figure 112007093066825-PCT00160
,
Figure 112007093066825-PCT00161
,
Figure 112007093066825-PCT00162
,
Figure 112007093066825-PCT00163
,
Figure 112007093066825-PCT00164
,
Figure 112007093066825-PCT00165
,
Figure 112007093066825-PCT00166
,
Figure 112007093066825-PCT00167
,
Figure 112007093066825-PCT00168
,
Figure 112007093066825-PCT00169
,
Figure 112007093066825-PCT00170
,
Figure 112007093066825-PCT00171
,
Figure 112007093066825-PCT00172
,
Figure 112007093066825-PCT00173
,
Figure 112007093066825-PCT00174
.
Figure 112007093066825-PCT00175
,
Figure 112007093066825-PCT00176
, 또는
Figure 112007093066825-PCT00177
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
일 구체예에서, GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 라디칼을 나타낸다.
일 구체예에서, GH는 20 kDa hGH에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 라디칼을 나타낸다.
일 구체예에서, GH는 hGH의 글루타민 40의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 라디칼을 나타낸다. 구체적으로는 상기 hGH는 글루타민 141을 결실시키거나, 글루타민 141을 다른 아미노산, 구체적으로는 아스파라진으로 치환시켜 추가로 변형시킬 수 있다.
일 구체예에서, GH는 hGH의 글루타민 141의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 라디칼을 나타낸다. 구체적으로는 상기 hGH는 글루타민 40을 결실시키거나, 글루타민 40을 다른 아미노산, 구체적으로는 아스파라진으로 치환시켜 추가로 변형시킬 수 있다.
일 구체예에서, GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치와 상이한 위치에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬 및 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치와 상이한 위치에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기, 및 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기는 각각 결실되거나 다른 아미노산, 구체적으로는 아스파라진으로 치환된 것이다.
화학식 [Va]의 화합물의 구체적인 예는 하기를 포함한다:
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리디엔}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일)prop-1-일옥시)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노-부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴-아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N ε141-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)부틸)-옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε141-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε141-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε141/40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε141/40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)프로필옥시이미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)-옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
Figure 112007093066825-PCT00178
;
Figure 112007093066825-PCT00179
;
Figure 112007093066825-PCT00180
;
Figure 112007093066825-PCT00181
;
Figure 112007093066825-PCT00182
;
Figure 112007093066825-PCT00183
;
Figure 112007093066825-PCT00184
;
Figure 112007093066825-PCT00185
;
Figure 112007093066825-PCT00186
;
Figure 112007093066825-PCT00187
;
Figure 112007093066825-PCT00188
;
Figure 112007093066825-PCT00189
;
Figure 112007093066825-PCT00190
;
Figure 112007093066825-PCT00191
;
Figure 112007093066825-PCT00192
;
Figure 112007093066825-PCT00193
;
Figure 112007093066825-PCT00194
;
Figure 112007093066825-PCT00195
;
Figure 112007093066825-PCT00196
;
Figure 112007093066825-PCT00197
;
Figure 112007093066825-PCT00198
;
Figure 112007093066825-PCT00199
;
Figure 112007093066825-PCT00200
;
Figure 112007093066825-PCT00201
;
Figure 112007093066825-PCT00202
;
Figure 112007093066825-PCT00203
;
Figure 112007093066825-PCT00204
;
Figure 112007093066825-PCT00205
;
Figure 112007093066825-PCT00206
;
Figure 112007093066825-PCT00207
;
Figure 112007093066825-PCT00208
;
Figure 112007093066825-PCT00209
;
Figure 112007093066825-PCT00210
;
Figure 112007093066825-PCT00211
;
Figure 112007093066825-PCT00212
;
Figure 112007093066825-PCT00213
;
Figure 112007093066825-PCT00214
;
Figure 112007093066825-PCT00215
;
Figure 112007093066825-PCT00216
;
Figure 112007093066825-PCT00217
;
Figure 112007093066825-PCT00218
;
Figure 112007093066825-PCT00219
;
Figure 112007093066825-PCT00220
;
Figure 112007093066825-PCT00221
;
Figure 112007093066825-PCT00222
;
Figure 112007093066825-PCT00223
;
Figure 112007093066825-PCT00224
; 및
Figure 112007093066825-PCT00225
.
상기의 그림으로 나타낸 것 중 일부는 또한 또는 달리 하기와 같이 표현될 수도 있다:
N δ141-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH,
N δ141-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH,
N δ40-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH,
N δ40-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH,
N δ141-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ40-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ141-(2-O-(4-(5-(3-(오메가-(3-(2,3-비스-(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필옥시)-폴리옥시에틸에닐옥시)프로필아미노)-1,5-디옥소펜틸아미노)부틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ141-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH
N δ141-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH
N δ40-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH
N δ40-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH
N δ141-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH
N δ40-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ141-(2-O-(4-(5-(3-(오메가-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필옥시)폴리옥시-에틸에닐옥시)프로필아미노)-1,5-디옥소펜틸아미노)부틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ141-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH,
N δ141-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH,
N δ40-(2-(O-(2-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸)옥시미노)에틸) hGH,
N δ40-(2-(O-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)프로필)옥시미노)에틸) hGH,
N δ141-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH,
N δ40-(2-O-(2-옥소-2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)에틸)옥시미노에틸) hGH, 및
N δ141-(2-O-(4-(5-(3-(오메가-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)-프로필옥시)-프로필옥시)-폴리옥시에틸에닐옥시)프로필아미노)-1,5-디옥소펜틸아미노)부틸)옥시미노에틸) hGH.
일 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 [VI]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물에 관한 것이다:
Figure 112007093066825-PCT00226
[VI]
상기 식에서, PP는 폴리펩티드내에 존재하는 두 개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00227
,
Figure 112007093066825-PCT00228
,
Figure 112007093066825-PCT00229
,
Figure 112007093066825-PCT00230
,
Figure 112007093066825-PCT00231
,
Figure 112007093066825-PCT00232
,
Figure 112007093066825-PCT00233
,
Figure 112007093066825-PCT00234
,
Figure 112007093066825-PCT00235
,
Figure 112007093066825-PCT00236
,
Figure 112007093066825-PCT00237
,
Figure 112007093066825-PCT00238
,
Figure 112007093066825-PCT00239
,
Figure 112007093066825-PCT00240
,
Figure 112007093066825-PCT00241
,
Figure 112007093066825-PCT00242
.
Figure 112007093066825-PCT00243
,
Figure 112007093066825-PCT00244
, 및
Figure 112007093066825-PCT00245
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
일 구체예에서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 두 개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것이다.
일 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 [VIa]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물을 제공한다:
Figure 112007093066825-PCT00246
[VIa]
여기에서 GH는 성장 호르몬에 존재하는 두 개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 성장 호르몬 라디칼을 나타내고,
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00247
,
Figure 112007093066825-PCT00248
,
Figure 112007093066825-PCT00249
,
Figure 112007093066825-PCT00250
,
Figure 112007093066825-PCT00251
,
Figure 112007093066825-PCT00252
,
Figure 112007093066825-PCT00253
,
Figure 112007093066825-PCT00254
,
Figure 112007093066825-PCT00255
,
Figure 112007093066825-PCT00256
,
Figure 112007093066825-PCT00257
,
Figure 112007093066825-PCT00258
,
Figure 112007093066825-PCT00259
,
Figure 112007093066825-PCT00260
,
Figure 112007093066825-PCT00261
,
Figure 112007093066825-PCT00262
.
Figure 112007093066825-PCT00263
,
Figure 112007093066825-PCT00264
, 및
Figure 112007093066825-PCT00265
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
일 구체예에서, D는 -O-를 나타낸다.
일 구체예에서, D는 단일 결합을 나타낸다.
일 구체예에서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타낸다.
일 구체예에서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서, R은 메틸렌, 에틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다. 추가의 구체예에서 R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타낸다.
일 구체예에서, Z는 하기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00266
,
Figure 112007093066825-PCT00267
,
Figure 112007093066825-PCT00268
,
Figure 112007093066825-PCT00269
,
Figure 112007093066825-PCT00270
,
Figure 112007093066825-PCT00271
,
Figure 112007093066825-PCT00272
,
Figure 112007093066825-PCT00273
,
Figure 112007093066825-PCT00274
,
Figure 112007093066825-PCT00275
,
Figure 112007093066825-PCT00276
,
Figure 112007093066825-PCT00277
,
Figure 112007093066825-PCT00278
,
Figure 112007093066825-PCT00279
,
Figure 112007093066825-PCT00280
,
Figure 112007093066825-PCT00281
.
Figure 112007093066825-PCT00282
,
Figure 112007093066825-PCT00283
, 또는
Figure 112007093066825-PCT00284
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타낸다.
일 구체예에서, 화학식 [VIa]에서의 GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타낸다.
일 구체예에서, 화학식 [VIa]에서의 GH는 20 kDa hGH에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타낸다.
일 구체예에서, 화학식 [VIa]에서의 GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기의 곁사슬로부터, 그리고 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나; 또는
SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기의 곁사슬로부터(여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기는 결실되었거나, 다른 아미노산으로 치환된 것이다), 그리고 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나; 또는
SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기의 곁사슬로부터(여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치에서 글루타민 잔기는 결실되었거나, 다른 아미노산으로 치환된 것이다), 그리고 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나; 또는
SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 hGH에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치에 존재하는 임의의 글루타민 잔기는 결실되었거나, 다른 아미노산으로 치환된 것이다.
추가의 또는 대안적인 구체예에서, 본 발명은 본원에 기술된 방법 및 화합물을 제공하는데, 여기에서 각 "mPEG"의 경우는 하기 화학식의 알콕시PEG 또는 "aPEG" 화합물로 대체된다:
Figure 112007093066825-PCT00285
여기에서, m은 1보다 큰 정수이다. 각 R1은 분지형 또는 (C3 -10에 대해) 분지형이 아닌 임의의 적당한 C1 -10 알킬기일 수 있는데, 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 방법을 사용함으로써 수득되는 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 방법을 사용함으로써 수득될 수 있는 화합물을 제공한다.
본 발명의 화합물은 성장 호르몬 활성을 가지는 것이고, 순환 성장 호르몬의 양이 증가되면 유리할 질병이나 증상의 치료에서 이러한 것이 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명은 성장호르몬 결핍증(GHD); 터너증후군; Prader-Willi 증후군(PWS); Noonan 증후군; 다운증후군; 만성신장질병, 소아 류마티스성 관절염; 낭포성 섬유증, HAART 치료를 받은 유아에서의 HIV-감염(HIV/HALS 유아); 제태기간에 비해 저체중아(short children born short for gestational age) (SGA); 극저출생시 저체중아(VLBW)로서 SGA가 아닌 것; 골격 형성장애; 연골형성저하증; 연골무형성증; 특발성 저신장(ISS); 성인에서의 GHD; 긴뼈, 예컨대 경골, 비골, 대퇴골, 상박골, 요골, 척골, 쇄골, 마타카피아(matacarpea), 마타타시아(matatarsea) 및 손가락뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 스폰지성 뼈, 예컨대 두개골, 손바닥뼈, 베이스 오브 푸드뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 예를 들면, 손, 무릎, 또는 어깨의 힘줄이나 인대 수술 후의 환자; 정신착란 골형성을 앓거나 진행중인 환자; 골반 또는 디스크 교체, 관절반달 교체, 척수 융합 또는 인공삽입물 고정, 예컨대 무릎, 골반, 어깨, 팔꿈치, 허리 또는 턱과 같은 곳에서의 고정 후의 환자; 조골 물질, 예컨대 못, 나사 및 판이 고정된 환자; 골절 후 교합이 되지 않았거나 잘못 교합된 환자; 골종, 예컨대 경골이나 첫번째 발가락 뼈의 골종 후의 환자; 그래프트 이식 후의 환자; 외상이나 관절염 유발성 무릎내 관절 연골의 퇴화; 터너증후군을 가진 환자에서 골다공증; 남성 골다공증; 성인 만성 투석 환자(APCD); APCD에서 영양결핍성 혈관 질병; APCD에서 카켁시아의 반복; APCD에서 암; APCD에서 만성 폐질환; APCD에서 HIV; APCD를 앓는 노인; APCD에서 만성 간 질환, APCD에서 피로 증후군; 크론병; 간기능손상; HIV 감염된 남성; 작은창자 증후군; 중추 비만; HIV-관련 지방이상 증후군(HALS); 남성 불임; 주요 예정 수술 후의 환자, 알콜/약물 탈독소 또는 신경 외상; 노화; 허약한 노인; 뼈관절염; 외상으로 손상입은 연골; 발기부전; 섬유근육통; 기억 이상; 우울증; 뇌 외상; 척수 외상; 거미막하부 출혈; 매우 낮은 출생시 체중; 대사증후군; 글루코르티코이드 근육병증; 또는 소아에서 글루코코르티코이드 치료로 인한 저신장증의 치료를 위한 방법을 제공하는데, 그 방법은 필요로 하는 환자에게 본 발명에 따른 화합물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 구체적으로, 상기 화합물은 화학식 [Va] 또는 화학식 [VIa]의 화합물이다.
본원에 사용된 용어 "치료" 및 "치료하는"은 질병이나 질환과 같은 증상을 퇴치하기 위한 목적으로 환자를 돌보고 관리하는 것을 의미한다. 이 용어는 환자가 앓고 있는 징후나 합병증을 완화시키기 위해, 질병, 질환 또는 증상의 진행을 지연시키기 위해, 징후나 합병증을 완화시키거나 낮게 하기 위해, 그리고/또는 질병, 질환, 또는 증상을 치료하거나 감소시키기 위해서 뿐만 아니라, 증상을 예방하기 위해 활성 화합물을 투여하는 것과 같이, 소정의 증상을 위한 모든 스펙트럼의 치료를 포함하고자 의도하는 것으로서, 여기에서 예방은 질병, 증상 또는 질환을 퇴치할 목적으로 환자를 관리하고 돌보는 것으로 이해되어야 하고, 징후나 합병증의 발병을 예방하기 위하여 활성 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 치료되어야 할 환자는 바람직하게는 포유류이고, 구체적으로는 인간이지만, 개, 고양이, 소, 양 및 돼지와 같은 동물을 포함할 수도 있다. 말할 것도 없이, 치료적 섭생 및 예방적 섭생은 본 발명의 다른 측면을 구성하는 것으로 인식되어야 한다.
본원에 사용된 화합물의 "치료 유효량"은 소정의 질병 및 이의 합병증의 임상적 심각도를 치료, 완화 또는 부분적으로 정지시키기에 충분한 양을 의미한다. 이것을 달성하기 위해 적당한 양을 "치료 유효량"이라고 정의한다. 각 목적에 대한 유효량은 질병이나 상처의 심각도 뿐만 아니라, 피험체의 체중, 성별, 나이 및 일반적인 상태에 따라 달라질 것이다. 적당한 용량을 결정하는 것은 수치의 매트릭스를 만들고, 이러한 매트릭스의 상이한 지점을 시험하는 것에 의해, 통상적인 실험절차를 통해 달성할 수 있고, 이러한 것은 숙련된 의사나 수의사라면 능숙히 할 수 있는 것이다.
그러므로 본 발명은 치료시 용도를 위한 본 발명에 따른 화합물을 제공한다.
하나의 측면에서, 본 발명은 근육 조직, 신경 조직 또는 상처의 치료를 가속화하기 위한 방법; 손상받은 조직에 혈류를 가속화하거나 개선시키는 방법; 또는 손상받은 조직내의 감염 속도를 감소시키는 방법을 제공하는데, 이 방법은 본 발명의 화합물의 치료 유효량의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 구체적으로 상기 화합물은 화학식 [Va] 또는 화학식 [VIa]의 화합물이다.
일 구체예에서, 본 발명은 상기에 언급한 질병과 같이, 성장 호르몬의 혈장내 수준이 증가되면 유리한 질병을 위한 약물의 제조시 본 발명에 따른 화합물의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 상기 화합물은 화학식 [Va] 또는 화학식 [VIa]의 화합물이다.
전형적인 비경구용 투여는 1회 투여당 10-9 내지 약 100 mg/kg 체중의 범위이다. 전형적인 투여 용량은 1회 투여당 약 0.0000001 내지 약 10 mg/kg 체중이다. 정확한 용량은 주의사항, 의약, 투여 빈도 및 투여 방식, 치료받아야 할 피험체의 성별, 나이 및 일반적 상태와, 치료되어야 할 질병이나 증상의 성질 및 심각도에 따라 달라질 것이고, 치료의 바람직한 효과 및 다른 인자는 당업계에 공지되어 있다.
전형적인 투여 빈도는 하루에 두번, 하루에 한번, 격일로, 1주에 두번, 1주에 한번 또는 더욱 긴 투여 간격을 가지는 것일 수 있다. 본 발명의 화합물이 컨쥬게이팅되지 않은 성장 호르몬에 비해 더욱 반감기가 길기 때문에, 더욱 긴 간격을 둔 투여 섭생, 예컨대 1주에 두번, 1주에 한번 또는 더욱 긴 투여 간격을 가진 것이 본 발명의 구체예를 구성한다.
다수의 질병은 동시에 투여되거나, 순차적으로 투여되는, 투여에서 하나 이상의 의약을 사용하여 치료한다. 그러므로 상기 언급한 질병 중 하나의 치료를 위한 치료 방법에서, 상기 질병의 치료에 보통 사용되는 하나 이상의 다른 치료적 활성 화합물과 배합하여 본 발명의 화합물을 사용하는 것도 본 발명의 범위내에 속한다. 마찬가지로, 상기 질병을 위한 의약의 제조시, 상기 언급한 질병 중 하나의 치료에 보통 사용되는 다른 치료적 활성 화합물과 배합하여 본 발명의 화합물을 사용하는 것도 본 발명의 범위내에 속한다.
약학적 조성물
본 발명의 다른 목적은 10-15 mg/ml 내지 200 mg/ml, 예를 들면 10-10 mg/ml 내지 5 mg/ml의 농도로 존재하는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것인데, 여기에서 상기 조성물의 pH는 2.0 내지 10.0이다. 조성물은 완충액, 보존제, 삼투압제, 킬레이트제, 안정제 및 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 일 구체예에서, 약학적 조성물은 수성 조성물인데, 즉 물을 포함하는 조성물이다. 이러한 조성물은 전형적으로는 용액이거나 현탁액이다. 본 발명의 또다른 구체예에서, 약학적 조성물은 수용액이다. 용어 "수성 조성물"은 적어도 50% w/w 물을 포함하는 조성물로서 정의된다. 마찬가지로, 용어 "수용액"은 적어도 50% w/w 물을 포함하는 용액으로서 정의되고, 용어 "수성 현탁액"은 적어도 50% w/w 물을 포함하는 현탁액으로서 정의된다.
또다른 구체예에서, 약학적 조성물은 동결건조된 조성물이고, 이것에는 사용전 의사나 환자가 용매 및/또는 희석제를 첨가하여 사용한다.
또다른 구체예에서, 약학적 조성물은 건조된(예를 들면 동결건조된 또는 방사건조된) 조성물이고, 사전 용해시킬 필요 없이 즉석에서 사용가능한 것이다.
본 발명의 추가의 측면은 본 발명의 화합물과 완충액의 수용액을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것인데, 여기에서 상기 화합물은 0.1-100 mg/ml 또는 그 이상으로 존재하는 것이고, 상기 조성물의 pH는 약 2.0 내지 약 10.0이다.
본 발명의 추가의 구체예에서 조성물의 pH는 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 및 10.0.
본 발명의 추가의 측면에서, 완충액은 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 아세트산 나트륨, 탄산 나트륨, 시트레이트, 글리실글리신, 히스티딘, 글리신, 라이신, 아르지닌, 나트륨 디하이드로겐 포스페이트, 디나트륨 하이드로겐 포스페이트, 인산 나트륨, 및 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 비신, 트리신, 말산, 숙시네이트, 말레산, 퓨마르산, 타타르산, 아스파트산 또는 이의 혼합물. 상기 열거된 완충액 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 또다른 구체예에서, 조성물은 약학적으로 수용가능한 보존제를 추가로 포함한다. 또다른 구체예에서, 보존제는 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 페놀, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 메틸 p-하이드록시벤조에이트, 프로필 p-하이드록시벤조에이트, 2-페녹시에탄올, 부틸 p-하이드록시벤조에이트, 2-페닐에탄올, 벤질 알콜, 클로로부탄올, 및 티오메로살, 브로노폴, 벤조산, 이미드우레아,클로로헥시딘, 나트륨 디하이드로아세테이트, 클로로크레졸, 에틸 p-하이드록시벤조에이트, 벤제토늄 클로라이드, 클로로페네신 (3p-클로로페녹시프로판-1,2-디올) 또는 이들의 혼합물. 본 발명의 추가적인 구체예에서, 보존제는 0.1 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가적인 구체예에서, 보존제는 0.1 mg/ml 내지 5 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가적인 구체예에서, 보존제는 5 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가적인 구체예에서, 보존제는 10 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재한다. 상기 열거된 보존제 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다. 약학적 조성물 중에 보존제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기 문헌을 참조하면 된다: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000.
본 발명의 추가의 구체예에서, 조성물은 등장화제를 추가로 포함한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 등장화제는 하기로 구성되는 군 중에서 선택된다: 염(염화 나트륨), 당 또는 당 알콜, 아미노산(예를 들면, L-글리신, L-히스티딘, 아르지닌, 라이신, 이소루신, 아스파트산, 트립토판, 트레오닌), 알디톨(예를 들면, 글리세롤(글리세린), 1,2-프로판디올(프로필렌글리콜), 1,3-프로판디올, 1,3-부탄디올), 폴리에틸렌글리콜(예를 들면, PEG 400), 또는 이들의 혼합물. 단당류, 이당류 또는 다당류와 같은 당, 또는 수용성 글루칸을, 예컨대 프럭토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 말토스, 락토스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 수용성 녹말, 하이드록시에틸 녹말 및 카르복시메틸셀룰로스-Na를 포함하여 사용할 수 있다. 하나의 구체예에서, 당 첨가물은 수크로스이다. 당 알콜은 적어도 하나의 -OH기를 가지는 C4-C8 탄화수소로서 정의되며, 예를 들면, 마니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨 및 아라비톨을 포함한다. 일 구체예에서, 당 알콜 첨가물은 마니톨이다. 상기 언급된 당 또는 당 알콜은 각각 또는 배합되어 사용될 수 있다. 당 또는 당 알콜이 액체 제조물에 용해될 수 있고, 본 발명의 방법을 사용하여 수득되는 용매 효과에 악영향을 미치지 않는 한, 이들이 사용되는 양에 굳이 제한을 두지 않는다. 일 구체예에서, 당 또는 당 알콜 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 150 mg/ml이다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 등장화제는 1 mg/ml 내지 50 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 등장화제는 1 mg/ml 내지 7 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 등장화제는 8 mg/ml 내지 24 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 등장화제는 25 mg/ml 내지 50 mg/ml의 농도로 존재한다. 상기 열거된 등장화제 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다. 약학적 조성물 중에 등장화제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기 문헌을 참조하면 된다: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000.
본 발명의 추가의 구체예에서, 조성물은 킬레이트제를 추가로 포함한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 킬레이트제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 시트르산, 및 아스파트산 및 이들의 혼합물 중에서 선택된다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 킬레이트제는 0.1mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 킬레이트제는 0.1mg/ml 내지 2mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 킬레이트제는 2mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다. 상기 열거된 킬레이트제 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다. 약학적 조성물 중에 킬레이트제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기 문헌을 참조하면 된다: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000.
본 발명의 추가의 구체예에서, 조성물은 안정제를 추가로 포함한다. 약학적 조성물 중에 안정제를 사용하는 것은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기 문헌을 참조하면 된다: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000.
더욱 구체적으로는, 본 발명의 조성물은, 이의 치료적 활성 성분이 액체 약학적 조성물로 보관되는 동안에 응집물 형성을 보일 수 있는 단백질을 포함하는, 안정화된 액체 약학적 조성물이다. "응집물 형성"은 올리고머의 형성을 초래하는, 단백질 분자간의 물리적 상호 작용을 의미하고자 하는 것으로서, 상기 올리고머는 용액에서 가용성으로 남아있거나, 용액으로부터 침전되는 눈에 보이는 큰 응집물일 수도 있다. "보관되는 동안에"는 일단 액체 약학적 조성물 또는 조성물이 제조된 후 피험체에게 즉시 투여되지 않는 것을 의미하고자 하는 것이다. 그보다는, 제조된 다음에 액체 형태, 냉동된 상태, 추후에 액체 형태로 타서 쓰기 위한 건조된 형태, 또는 피험체에 투여하기 위해 적합한 다른 형태로 포장된다. "건조된 형태"는 동결 건조(참조: 예를 들면, Williams and Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59), 또는 방사 건조(참조: 예를 들면 Masters (1991) in Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; and Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11:12-20), 또는 공기 건조(Carpenter and Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; and Roser (1991) Biopharm. 4:47-53)에 의해 액체 약학적 조성물 또는 조성물이 건조된 것을 의미하고자 하는 것이다. 액체 약학적 조성물이 보관되는 동안에 단백질에 의해 응집물이 형성되는 것은 그 단백질의 생물학적 활성에 악영향을 미쳐서, 결국 약학적 조성물의 치료 효능 손실을 유발할 수도 있다. 또한, 응집물 형성은 단백질 함유 약학적 조성물이 주입 시스템을 사용하여 투여된 경우에, 튜브, 멤브레인, 또는 펌프를 막는 것과 같은 다른 문제점을 일으킬 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 조성물이 보관되는 동안에 단백질에 의해 응집물이 형성되는 것을 감소시키는데 충분한 양의 아미노산 염기를 추가로 포함할 수도 있다. "아미노산 염기"는 아미노산 또는 아미노산 배합물을 의미하고자 하는 것으로, 이 때 소정의 아미노산은 유리 염기 형태 또는 이의 염 형태로 존재하는 것을 말한다. 아미노산 배합물이 사용된 경우, 모든 아미노산은 유리 염기 형태로 존재할 수 있고, 모든 아미노산은 이의 염 형태로 존재할 수도 있으며, 또는 일부는 이의 유리 염기 형태로 존재하는 반면에 나머지는 이의 염 형태로 존재할 수도 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물을 제조하는데 사용되는 아미노산은 전하를 띤 곁사슬을 가지는 것들인데, 예를 들면, 아르지닌, 라이신, 아스파트산, 및 글루탐산이 그것이다. 특정 아미노산(메싸이오닌, 히스티딘, 아르지닌, 라이신, 이소루신, 아스파트산, 트립토판, 트레오닌 및 이의 혼합물)의 임의의 입체이성질체(즉, 이의 L 또는 D 이성질체, 또는 이의 혼합물) 또는 이러한 입체이성질체 또는 글리신 또는 이미다졸과 같은 것이지만 이에 제한되는 것은 아닌 유기 염기의 배합물은, 특정 아미노산 또는 유기 염기가 이의 유리 염기 형태 또는 염 형태로 존재하는 한, 본 발명의 약학적 조성물 중에 존재할 수 있다. 일 구체예에서, 아미노산의 L-입체이성질체가 사용된다. 일 구체예에서, L-입체이성질체가 사용된다. 본 발명의 조성물은 이러한 아미노산의 유사체와 함께 제형될 수도 있다. "아미노산 유사체"는 본 발명의 액체 약학적 조성물이 보관되는 동안에 단백질에 의해 응집물이 형성되는 것을 감소시키는, 바람직한 효과를 유발하는 천연 아미노산의 유도체를 포함한다. 적당한 아르지닌 유사체는 예를 들면, 아미노구아니딘, 오르니틴 및 N-모노에틸 L-아르지닌을 포함하고, 적당한 메싸이오닌 유사체는 에티오닌, 및 부티오닌을 포함하며, 적당한 시스테인 유사체는 S-메틸-L-시스테인을 포함한다. 다른 아미노산에 대해서, 아미노산 유사체는 이의 유리 염기 형태 또는 염 형태로 조성물 중에 혼입된다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 아미노산 또는 아미노산 유사체는 단백질의 응집을 예방하거나 지연시키기에 충분한 농도로 사용된다.
본 발명의 추가의 구체예에서 메싸이오닌(또는 다른 황 아미노산 또는 아미노산 유사체)은, 치료제로서 작용하는 단백질이 산화에 취약한 적어도 하나의 메싸이오닌 잔기를 포함하는 경우에, 메싸이오닌 잔기가 메싸이오닌 설폭사이드로 산화되는 것을 억제하기 위해 첨가될 수 있다. "억제"란 시간이 흐르는 동안에 산화된 메싸이오닌 종의 축적을 최소화하는 것을 의미하고자 하는 것이다. 메싸이오닌 산화를 억제시키면, 적당한 분자 형태를 띤 단백질의 보유능이 커지는 것을 초래한다. 메싸이오닌의 임의의 입체이성질체(L 또는 D 이성질체) 또는 이의 배합물이 사용될 수 있다. 첨가되는 양은, 메싸이오닌 설폭사이드의 양이 조절가능하도록, 메싸이오닌 잔기의 산화를 억제시키기에 충분한 양이어야 한다. 전형적으로, 이는 조성물이 약 10% 내지 약 30% 미만의 메싸이오닌 설폭사이드를 함유해야 함을 뜻한다. 일반적으로, 이것은 첨가되는 메싸이오닌 대 메싸이오닌 잔기의 비율이 약 1:1 내지 약 1000:1, 예컨대 10:1 내지 약 100:1 범위이도록 메싸이오닌을 첨가함으로써 수득될 수 있다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 조성물은 고분자량 폴리머 또는 저분자량 화합물의 군 중에서 선택되는 안정제를 추가로 포함한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 안정제는 폴리에틸렌 글리콜(예를 들면 PEG 3350), 폴리비닐 알콜(PVA), 폴리비닐피롤리돈, 카브옥시-/하이드록시셀룰로스 또는 이의 유도체(예를 들면, HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 황-함유 물질, 예컨대 모노티오글리세롤, 티오글리콜산 및 2-메틸티오에탄올, 및 상이한 염(예를 들면 염화나트륨) 중에서 선택된다. 상기 열거한 안정제 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
약학적 조성물은 추가의 안정제를 포함할 수도 있는데, 추가의 안정제란 치료적 활성인 단백질의 안정도를 추가로 향상시키는 것을 말한다. 본 발명에서 특히 흥미 있는 안정제는 메싸이오닌 및 EDTA(이것은 메싸이오닌 산화에 대해 단백질을 보호하는 것이다), 및 비이온성 계면활성제(이것은 동결-해동 또는 기계적 전단과 관련된 응집에 대해 단백질을 보호하는 것이다)를 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 조성물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 계면활성제는 세제, 에톡실화 카스터 오일, 폴리글리콜화 글리세리드, 아세틸화 모노글리세리드, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 블록 공중합체(예를 들면, Pluronic® 68, poloxamer 188 및 407, Triton X-100과 같은 폴록사머), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 및 폴리에틸렌 유도체, 예컨대 알킬화 및 알콕실화된 유도체(tweens, 예를 들면, tween-40, Tween-80 및 Brij-35), 이의 모노글리세리드 또는 에톡실화된 유도체, 이의 디글리세리드 또는 폴리옥시에틸렌 유도체, 알콜, 글리세롤, 렉틴 및 인지질(예를 들면, 포스파티딜 세린, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 디포스파티딜 글리세롤 및 스핑고미엘린), 인지질의 유도체(예를 들면, 디팔미토일 포스파티드산) 및 리소포스포리피드의 유도체(예를 들면, 에탄올아민, 콜린, 세린 또는 트레오닌의 팔미토일 리소포스파티딜-L-세린 및 1-아실-sn-글리세로-3-포스페이트 에스테르) 및 리소포스파티딜 및 포스파티딜콜린의 알킬, 알콕실(알킬 에스테르), 알콕시(알킬 에테르)-유도체, 예를 들면, 리소포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린의 라우릴 및 미리스토일 유도체, 극성 헤드기, 즉 콜린, 에탄올아민, 포스파티드산, 세린, 트레오닌, 글리세롤, 이노시톨 및 양전하를 띤 DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, 리소포스파티딜세린 및 리소포스파티딜트레오닌의 변형, 및 글리세로포스포리피드(예를 들면, 세팔린), 글리세로글리코리피드(예를 들면, 갈락토피란소이드), 스핑고글리코리피드(예를 들면, 세라마이드, 강글리오시드), 도데실포스포콜린, 달걀 노른자 리소레시틴, 후시딘산 유도체-(예를 들면, 나트륨 토로-디하이드로후시데이트 등), 장쇄 지방산 및 이의 C6-C12 염(예를 들면, 올레산 및 카프릴산), 아실카르니틴 및 유도체, 라이신, 아르지닌 또는 히스티딘의 Na-아실화된 유도체, 또는 라이신 또는 아르지닌의 곁사슬 아실화된 유도체, 라이신, 아르지닌 또는 히스티딘 및 중성 또는 산성 아미노산의 임의의 배합물을 포함하는 디펩티드의 Na-아실화된 유도체, 중성 아미노산 및 두개의 전하를 띤 아미노산의 임의의 배합물을 포함하는 트리펩티드의 Na-아실화된 유도체, DSS (도큐세이트 나트륨, CAS registry no [577-11-7]), 도큐세이트 칼슘, CAS registry no [128-49-4]), 도큐세이트 칼륨, CAS registry no [7491-09-0]), SDS (나트륨 도데실 설페이트 또는 나트륨 라우릴 설페이트), 나트륨 카프릴레이트, 콜린산 또는 이의 유도체, 담즙산 및 이의 염 및 글리신 및 타우린 컨쥬게이트, 우르소데옥시콜린산, 나트륨 콜레이트, 나트륨 데옥시콜레이트, 나트륨 토로콜레이트, 나트륨 글리콜레이트, N-헥사데실-N,N-디메틸-3-암모니오-1-프로판설포네이트, 음이온성(알킬-아릴-설포네이트) 1가 계면활성제, 쌍성이온성 계면활성제(예를 들면, N-알킬-N,N-디메틸암모니오-1-프로판설포네이트, 3-콜라미도-1-프로필디메틸암모니오-1-프로판설포네이트, 양이온성 계면활성제(4가 암모늄 염)(예를 들면, 세틸-트리메틸암모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드), 비이온성 계면활성제(예를 들면, 도데실 β-D-글루코피라노사이드), 폴록사민(예를 들면, Tetronic's)(이것은, 에틸렌디아민에 프로필렌 옥사이드 및 에틸렌 옥사이드를 순차적으로 첨가한 것으로부터 유래한 4가 작용성 블록 공중합체이다) 중에서 선택되거나, 계면활성제는 이미다졸린 유도체, 또는 이의 혼합물의 군 중에서 선택된다. 상기 열거한 계면활성제 중 각각의 하나는 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
약학적 조성물 중에 계면활성제를 사용하는 것은 당업계에 익히 공지되어 있다. 편의를 위해 하기 문헌을 참조하면 된다: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000.
본 발명의 약학적 조성물에는 기타 성분이 존재할 수도 있다. 이러한 추가의 성분에는 습윤제, 유화제, 항산화제, 벌크제, 삼투압조정제, 킬레이트제, 금속이온, 유질 베히클, 단백질(예를 들면 인간 혈청 알부민, 젤라틴 또는 단백질) 및 쌍성 이온(예를 들면, 베타인, 타우린, 아르지닌, 글리신, 라이신 및 히스티딘과 같은 아미노산)이 포함될 수 있다. 이러한 추가 성분은 물론 본 발명의 약학적 조성물의 전체적인 안정도에 부작용을 미쳐서는 아니된다.
본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 이러한 치료를 필요로 하는 환자의 여러 부위에, 예를 들면 국소 부위에, 예를 들면 피부 및 점막부에, 우회 흡수되는 부위에, 예를 들면, 동맥, 정맥, 심장에, 또한 흡수가 관여되는 부위에, 예를 들면, 피부, 피부아래, 근육, 또는 복강내에 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여는 여러가지 투여 경로를 통해 이루어질 수 있는데, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 예를 들면, 혀, 혀아래, 볼, 입, 경구, 위, 장, 코, 폐에, 예를 들면 세기관지 및 폐포 또는 이들 모두에, 상피, 진피, 경피, 질, 직장, 눈, 예를 들면 결막, 요도를 통해, 그리고 비경구로 투여가 이루어질 수 있다.
본 발명의 조성물은 여러가지 투여 형태로 투여될 수 있는데, 예를 들면, 용액, 현탁액, 유제, 미소유제, 다중유제, 발포, 셀브즈(salves), 페이트스, 플라스터, 연고, 정제, 코팅된 정제, 린스, 캡슐, 예를 들면 경질 젤라틴 캡슐 및 연질 젤라틴 캡슐, 좌약, 항문용 캡슐, 드롭, 겔, 스프레이, 분말, 에어로졸, 흡입제, 점안액, 안내연고, 안내린스, 질내 삽입물, 질내 링, 질내 연고, 주사 용액, 인시츄 변환 용액, 예를 들면, 인 시츄 겔, 인 시츄 셋팅, 인 시츄 침전, 인 시츄 결정화, 주입 용액, 및 임플란트가 있다.
본 발명의 조성물은, GH 컨쥬게이트의 안정성을 추가로 향상시키고, 생물학적 능력을 증가시키고, 용해도를 증가시키고, 부작용을 감소시키고, 당업계에 공지되어 있는 바와 같은 생체리듬치료를 달성하며, 환자의 편안함을 증가시키기 위하여, 또는 상기 중 여러가지를 달성하기 위하여, 예를 들면, 공유결합, 소수성결합 및 정전기결합을 통해서, 약물 담체, 약물 전달 시스템 및 향상된 약물 전달 시스템에, 추가로 배합되거나, 이에 부착될 수 있다. 담체, 약물 전달 시스템 및 향상된 약물 전달 시스템의 예는 폴리머, 예를 들면 셀룰로스 및 유도체, 다당류, 예를 들면 덱스트란 및 유도체, 녹말 및 유도체, 폴리(비닐 알콜), 아크릴레이트 및 메타크릴레이트 폴리머, 폴리락트산 및 폴리글리콜산과 이의 블록 공중합체, 폴리에틸렌 글리콜, 담체 단백질, 예를 들면, 알부민, 겔, 예를 들어, 써모겔링 시스템, 예를 들어 당업자에게 공지되어 있는 블록 공중합체 시스템, 미셀, 리포솜, 미소구체, 나노입자, 액정 및 이의 분산액, 액체-물 시스템에서 상 행동의 당업자에게 익히 공지되어 있는 L2 상 및 이의 분산액, 폴리머 미셀, 다중 유제, 자가-유제, 자가-미소유제, 사이클로덱스트린 및 이의 유도체, 및 덴드라이머를 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은, 예를 들면, 눈금이 매겨진 흡입기, 건조분말 흡입기 및 네뷸라이저를 사용하는, 화학식 [Va] 또는 화학식 [VIa]의 화합물의 폐투여용 고체, 반고체, 분말 및 용액의 조성물에서 유용하고, 상기의 모든 장치는 당업자에게 익히 공지되어 있다.
본 발명의 조성물은 제어된, 지속적인, 연장된, 지연된, 그리고 느린 방출 약물 전달 시스템의 조성물 중에서 특히 유용하다. 더욱 구체적으로는, 이에 국한하는 것은 아니지만, 조성물은 당업자에게 익히 공지되어 있는 비경구용 제어된 방출 및 지속적인 방출 시스템의 조성물에서 유용하다(두 시스템은 여러번의 투여 횟수를 몇배 감소시킨다). 더욱 더 바람직한 것은 피하에 투여된 조절된 방출 및 지속적인 방출 시스템이다. 본 발명의 범위를 국한시키는 것은 아니지만, 유용한 제어된 방출 시스템 및 조성물의 예는 하이드로겔, 유질 겔, 액정, 폴리머 미셀, 미소구체, 나노입자이다.
본 발명의 조성물에 유용한 제어된 방출 시스템을 제조하기 위한 방법은, 국한하는 것은 아니지만, 결정화, 응축, 공결정화, 침전, 공침전, 유화, 분산화, 고압 균질화, 캡슐화, 방사건조, 미소캡슐화, 코아세르베이션, 상분리, 미소구체를 제조하기 위한 용매 증발, 압출 및 초임계 유체 과정을 포함한다. 일반적으로 Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., ed. Marcel Dekker, New York, 2000) 및 Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Composition and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, New York, 2000)를 참조하면 된다.
비경구 투여는 주사기, 임의선택적으로는 펜형 주사기를 사용하여, 피하, 근육내, 복막내, 또는 정맥내 주사에 의해 수행할 수 있다. 또는 달리, 비경구 투여는 주입 펌프를 사용하여 수행할 수도 있다. 다른 옵션은 비강 또는 폐 스프레이 형태로 본 발명의 화합물을 투여하기 위한 용액 또는 현탁액일 수 있는 조성물이다. 또다른 옵션으로서, 본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 예를 들면, 주사바늘이 없는 주사 또는 패치, 임의선택적으로는 이온토포레틱(iontophoretic) 패치를 사용하는 경피내 투여를 위해 변형될 수 있거나, 예를 들면 볼에 투여하기 위해서 근육내 투여를 위해 변형될 수 있다.
용어 "안정화된 조성물"은 증가된 물리학적 안정도, 증가된 화학적 안정도 또는 증가된 물리적 및 화학적 안정도를 갖는 조성물을 언급하는 것이다.
본원에 사용된 용어 "물리학적 안정도"란 단백질이 열-기계적 압력 및/또는 소수성 표면 및 계면과 같이 안정화를 방해하는 계면 및 표면과의 상호작용에 노출됨으로써 발생한 생물학적 비활성 및/또는 비용해성 단백질 응집물을 형성하는 단백질의 성향을 말하는 것이다. 수성 단백질 조성물의 물리학적 안정도는 적당한 용기(예를 들면, 카트리지 또는 바이얼)내에 채워진 조성물을 기계적/물리적 응력(예를 들면, 교반)에 다양한 시간 동안 상이한 온도에서 노출시킨 다음의 육안 관찰 및/또는 탁도를 사용하여 평가한다. 조성물의 육안 관찰은 암소에서 집중적인 한줄기 빛을 통해 수행한다. 조성물의 탁도는 예를 들면 0 내지 3의 범위의 탁도 정도로 매겨지는 육안 관찰 점수로 특징분석된다(탁하지 않은 조성물은 0점의 육안 관찰 점수에 해당하고, 직사광선에서 탁한 조성물은 3점의 육안 관찰 점수에 해당한다). 직사광선에서 육안으로 관찰하여 탁한 조성물은 단백질 응집물에 관하여 물리적으로 불안정한 것으로 분류된다. 또는 달리, 조성물의 탁도는 당업자에게 익히 공지되어 있는 단순한 탁도 측정법에 의해 평가될 수도 있다. 수성 단백질 조성물의 물리적 안정도는 분광기용 약제 또는 단백질의 분자배열 상태의 프로브를 사용하여 평가할 수도 있다. 프로브는 바람직하게는 단백질의 비천연 컨포머에 차별적으로 결합하는 소형 분자이다. 이러한 단백질 구조의 분광기용 프로브인 소형 분자의 예로는 티오플라빈 T(Thioflavin T)가 있다. 티오플라빈 T는 아밀로이드 섬유를 검출하는데 널리 사용되는 형광 염료이다. 상기 섬유와, 가능하게는 다른 단백질 구조가 존재하면, 티오플라빈 T는 섬유 단백질 형태에 결합하였을 때 약 450 nm에서 최대의 신규 들뜸을 유발하고, 또한 약 482 nm에서 향상된 방출도를 유발한다. 결합하지 않은 티오플라빈 T는 본질적으로 그 해당 파장에서 형광을 발하지 않는다.
본래 상태에서 그렇지 않은 상태로 단백질 구조가 변화되는 것에 대한 프로브로서 다른 소형 분자가 사용될 수도 있다. 예를 들면 "소수성 패치" 프로브는 단백질의 노출된 소수성 패치에 차별적으로 결합하는 프로브이다. 소수성 패치는 일반적으로는 본래 상태에서는 단백질의 3차 구조 속에 파묻혀있지만, 폴딩되지 않거나 변성된 단백질에서는 노출된다. 이러한 소형 분자인 분광기용 프로브의 예는 방향족, 소수성 염료, 예컨대 안트라센, 아크리딘, 페난트롤린 등이 있다. 다른 분광기용 프로브로는 금속-아미노산 복합체, 예컨대 소수성 아미노산, 예컨대 페닐알라닌, 루신, 이소루신, 메싸이오닌 및 발린 등과 코발트 금속의 복합체가 있다.
본원에 사용된 용어 단백질 조성물의 "화학적 안정도"는 본래 아미노산 구조에 비해, 잠재적인 생물학적 능력이 낮고 그리고/또는 잠재적인 면역력 특성이 증가된 화학적 파괴 산물을 형성할 수 있는 단백질 구조내 화학적 공유 결합의 변화를 말하는 것이다. 본래 단백질의 유형 및 성질에 따라, 또한 단백질이 노출되는 환경에 따라 여러가지 화학적 파괴 산물이 형성될 수 있다. 화학적 파괴를 완전히 없애는 것은 아마도 피할 수 없을 것으로 보이고, 화학적 파괴 산물의 양이 증가되는 것은, 당업자에게 익히 공지되어 있는 바와 같이, 단백질 조성물의 보관이나 사용 동안에 종종 관찰된다. 대부분의 단백질은 탈아미노화에 취약한데, 탈아미노화란 글루타민이나 아스파라진의 잔기내 아미드 곁사슬기가 가수분해되어 자유 카르복실산을 형성하는 과정을 말한다. 다른 파괴 경로는 두개 이상의 단백질 분자가 서로, 트랜스아민화 및/또는 이황화 상호작용을 통해 공유결합적으로 결합하여 공유결합적으로 결합된 이량체, 올리고머 및 폴리머 파괴 산물을 형성시키는, 고분자량 전환 산물의 형성을 포함한다(Stability of Protein Pharmaceuticals , Ahern . T.J. & Manning M.C., Plenum Press , New York 1992). 산화(예를 들면 메싸이오닌 잔기의 산화)는 화학적 파괴의 다른 유형으로 언급할 수 있다. 단백질 조성물의 화학적 안정도는 상이한 환경 조건에 노출시킨 후의 여러가지 시점에서의 화학적 파괴 산물의 양을 측정함으로써 평가할 수 있다(파괴 산물의 형성은 예를 들면 온도를 증가시킴으로써 종종 가속화될 수 있다). 각각의 개별적인 파괴 산물의 양은, 각종 크로마토그래피 기술(예를 들면, SEC-HPLC 및/또는 RP-HPLC)을 사용하여 분자 크기 및/또는 전하에 따라 파괴 산물을 분리함으로써 종종 측정할 수 있다.
그러므로, 상기에 개괄 설명한 바와 같이 "안정화된 조성물"은 증가된 물리학적 안정도, 증가된 화학적 안정도 또는 증가된 물리학적 및 화학적 안정도를 갖는 조성물을 언급하는 것이다. 일반적으로, 조성물은 유효기간이 만기되기 전 사용하는 동안과 보관되는 동안에 안정해야 한다(권장사항 및 보관 조건에 따름).
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 6주 이상의 사용기간 동안, 그리고 3년 이상의 보관기간 동안 안정하다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 4주 이상의 사용기간 동안, 그리고 3년 이상의 보관기간 동안 안정하다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 4주 이상의 사용기간 동안, 그리고 2년 이상의 보관기간 동안 안정하다.
본 발명의 추가의 구체예에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 2주 이상의 사용기간 동안, 그리고 2년 이상의 보관기간 동안 안정하다.
지금부터는 구체예에 번호를 붙인 것을 제시하며, 이것은 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다:
구체예 1. 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드에 PEG를 공유결합적으로 부착시키기 위한 방법으로서, 상기 방법은 트랜스글루타미나제의 존재하에, 화학식 [I]에 의해 나타내어지는 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드를, 화학식 [II]의 질소 함유 친핵체와, 하나 이상의 단계에서 반응시켜 화학식 [III]의 트랜스아민화된 폴리펩티드를 형성시키는 단계와:
Figure 112007093066825-PCT00286
[I]
상기 식에서 PP는 폴리펩티드에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 폴리펩티드 라디칼을 나타내고:
H2N-D-R-X
[II]
상기 식에서 D는 -O- 또는 단일결합을 나타내고;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
X는 -O-NH2, 알데하이드, 케톤, 또는 추가의 반응시 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00287
[III]
이 때 임의선택적으로는 X가 숨은 기인 경우, 상기 숨은 기를 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환시키는 단계도 포함하고,
상기 트랜스아민화된 폴리펩티드를 화학식 [IV]의 제 2 화합물과 추가로 반응시켜, 화학식 [V]의 PEG화된 폴리펩티드, 또는 이의 임의의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물을 형성시키는 단계를 포함한다:
Y-Z
[IV]
여기에서 Y는,
X가 알데하이드, 케톤 또는 추가의 반응시 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, -O-NH2를 나타내거나, 또는
X가 -O-NH2, 또는 추가의 반응시 -O-NH2으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, 알데하이드 또는 케톤을 나타낸다; 그리고
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타낸다:
Figure 112007093066825-PCT00288
,
Figure 112007093066825-PCT00289
,
Figure 112007093066825-PCT00290
,
Figure 112007093066825-PCT00291
,
Figure 112007093066825-PCT00292
,
Figure 112007093066825-PCT00293
,
Figure 112007093066825-PCT00294
,
Figure 112007093066825-PCT00295
,
Figure 112007093066825-PCT00296
,
Figure 112007093066825-PCT00297
,
Figure 112007093066825-PCT00298
,
Figure 112007093066825-PCT00299
,
Figure 112007093066825-PCT00300
,
Figure 112007093066825-PCT00301
,
Figure 112007093066825-PCT00302
,
Figure 112007093066825-PCT00303
.
Figure 112007093066825-PCT00304
,
Figure 112007093066825-PCT00305
, 및
Figure 112007093066825-PCT00306
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00307
인 경우, PEG는 10 kDa PEG이다:
Figure 112007093066825-PCT00308
[V]
상기 식에서, A는 옥심 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 2. 제 1 구체예에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 3. 제 1 구체예에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 4. 제 1 구체예 내지 제 3 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 5. 제 1 구체예 내지 제 3 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 C1-6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 6. 제 5 구체예에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 7. 제 6 구체예에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 8. 제 1 구체예 내지 제 7 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
Figure 112007093066825-PCT00309
,
Figure 112007093066825-PCT00310
,
Figure 112007093066825-PCT00311
,
Figure 112007093066825-PCT00312
,
Figure 112007093066825-PCT00313
,
Figure 112007093066825-PCT00314
,
Figure 112007093066825-PCT00315
,
Figure 112007093066825-PCT00316
,
Figure 112007093066825-PCT00317
,
Figure 112007093066825-PCT00318
,
Figure 112007093066825-PCT00319
,
Figure 112007093066825-PCT00320
,
Figure 112007093066825-PCT00321
,
Figure 112007093066825-PCT00322
,
Figure 112007093066825-PCT00323
,
Figure 112007093066825-PCT00324
.
Figure 112007093066825-PCT00325
,
Figure 112007093066825-PCT00326
, 또는
Figure 112007093066825-PCT00327
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00328
인 경우, PEG는 10 kDa PEG인 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 9. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 알데하이드 또는 추가의 반응시 알데하이드를 형성할 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 10. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 케톤 또는 추가의 반응시 케톤을 형성할 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 11. 제 9 구체예 또는 제 10 구체예에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물:
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00329
,
Figure 112007093066825-PCT00330
,
Figure 112007093066825-PCT00331
,
Figure 112007093066825-PCT00332
,
Figure 112007093066825-PCT00333
,
Figure 112007093066825-PCT00334
,
Figure 112007093066825-PCT00335
,
Figure 112007093066825-PCT00336
,
Figure 112007093066825-PCT00337
,
Figure 112007093066825-PCT00338
,
Figure 112007093066825-PCT00339
,
Figure 112007093066825-PCT00340
, 및
Figure 112007093066825-PCT00341
,
상기 식에서 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미하는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 12. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Y는 알데하이드를 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 13. 제 12 구체예에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00342
,
Figure 112007093066825-PCT00343
,
Figure 112007093066825-PCT00344
,
Figure 112007093066825-PCT00345
,
Figure 112007093066825-PCT00346
, 및
Figure 112007093066825-PCT00347
,
상기 식에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미하는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 14. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Y는 케톤을 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 15. 제 14 구체예에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물:
Y-Z
[IV]
은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
Figure 112007093066825-PCT00348
,
Figure 112007093066825-PCT00349
,
Figure 112007093066825-PCT00350
,
Figure 112007093066825-PCT00351
,
Figure 112007093066825-PCT00352
, 및
Figure 112007093066825-PCT00353
,
상기 식에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 16. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, 화학식 [II]의 화합물:
H2N-D-R-X
[II]
은 1,3-디아미노-2-프로판올을 나타내고, Y는 -O-NH2를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 17. 제 1 구체예 내지 제 8 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, 화학식 [II]의 화합물:
H2N-D-R-X
[II]
은 1,3-디아미노옥시 프로판을 나타내고, Y는 알데하이드를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 18. 제 1 구체예 내지 제 17 구체예 중 어느 한 구체예의 방법에 따라 성장 호르몬에 PEG를 공유결합적으로 부착시키는 것을 포함하는, 성장 호르몬의 약리학적 성질을 변형시키는 방법.
구체예 19. 제 1 구체예 내지 제 18 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 20. 제 19 구체예에 있어서, 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬은 인간 성장 호르몬을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 21. 제 20 구체예에 있어서, 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬은 하기 a) 내지 e):
a) SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH,
b) 20 kDa hGH,
c) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH,
d) SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH,
e) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서, 그리고 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 각각 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH를 나타내고, 글루타민 잔기는 성장 호르몬의 또다른 위치에도 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 22. 제 21 구체예에 있어서, 성장 호르몬은 hGH를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 23. 화학식 [V]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물로서:
Figure 112007093066825-PCT00354
[V]
상기 식에서 PP는 폴리펩티드내에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타내며:
Figure 112007093066825-PCT00355
,
Figure 112007093066825-PCT00356
,
Figure 112007093066825-PCT00357
,
Figure 112007093066825-PCT00358
,
Figure 112007093066825-PCT00359
,
Figure 112007093066825-PCT00360
,
Figure 112007093066825-PCT00361
,
Figure 112007093066825-PCT00362
,
Figure 112007093066825-PCT00363
,
Figure 112007093066825-PCT00364
,
Figure 112007093066825-PCT00365
,
Figure 112007093066825-PCT00366
,
Figure 112007093066825-PCT00367
,
Figure 112007093066825-PCT00368
,
Figure 112007093066825-PCT00369
,
Figure 112007093066825-PCT00370
.
Figure 112007093066825-PCT00371
,
Figure 112007093066825-PCT00372
, 및
Figure 112007093066825-PCT00373
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만, Z가
Figure 112007093066825-PCT00374
인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 24. 제 23 구체예에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 25. 제 23 구체예에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 26. 제 23 구체예 내지 제 25 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 27. 제 23 구체예 내지 제 25 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 28. 제 27 구체예에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 29. 제 28 구체예에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 30. 제 23 구체예 내지 제 29 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
Figure 112007093066825-PCT00375
,
Figure 112007093066825-PCT00376
,
Figure 112007093066825-PCT00377
,
Figure 112007093066825-PCT00378
,
Figure 112007093066825-PCT00379
,
Figure 112007093066825-PCT00380
,
Figure 112007093066825-PCT00381
,
Figure 112007093066825-PCT00382
,
Figure 112007093066825-PCT00383
,
Figure 112007093066825-PCT00384
,
Figure 112007093066825-PCT00385
,
Figure 112007093066825-PCT00386
,
Figure 112007093066825-PCT00387
,
Figure 112007093066825-PCT00388
,
Figure 112007093066825-PCT00389
,
Figure 112007093066825-PCT00390
.
Figure 112007093066825-PCT00391
,
Figure 112007093066825-PCT00392
, 또는
Figure 112007093066825-PCT00393
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00394
인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 31. 제 23 구체예 내지 제 30 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 32. 제 31 구체예에 있어서, GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH 중에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 33. 제 31 구체예에 있어서, GH는 20 kDa hGH에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 34. 제 31 구체예에 있어서,
GH는
a) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기, 또는
b) SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
또는
GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 이때 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환되었거나;
또는
GH는 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 이때 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환되었거나;
또는
GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치와는 다른 위치 및 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기 및 SEQ ID No. 1의위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기는 각각 결실되었거나 또다른 아미노산으로 치환된 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 35. 하기로부터 선택되는, 제 23 구체예에 따른 화합물:
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리디엔}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일)prop-1-일옥시)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41/40-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ1 41-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노-부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴-아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
N δ40 -2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
N ε141-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)부틸)-옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε141-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε141-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε141-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)옥시이미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε141/40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε141/40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε141/40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)프로필옥시이미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)-옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
N ε40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
N ε40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
N ε40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
Figure 112007093066825-PCT00395
;
Figure 112007093066825-PCT00396
;
Figure 112007093066825-PCT00397
;
Figure 112007093066825-PCT00398
;
Figure 112007093066825-PCT00399
;
Figure 112007093066825-PCT00400
;
Figure 112007093066825-PCT00401
;
Figure 112007093066825-PCT00402
;
Figure 112007093066825-PCT00403
;
Figure 112007093066825-PCT00404
;
Figure 112007093066825-PCT00405
;
Figure 112007093066825-PCT00406
;
Figure 112007093066825-PCT00407
;
Figure 112007093066825-PCT00408
;
Figure 112007093066825-PCT00409
;
Figure 112007093066825-PCT00410
;
Figure 112007093066825-PCT00411
;
Figure 112007093066825-PCT00412
;
Figure 112007093066825-PCT00413
;
Figure 112007093066825-PCT00414
;
Figure 112007093066825-PCT00415
;
Figure 112007093066825-PCT00416
;
Figure 112007093066825-PCT00417
;
Figure 112007093066825-PCT00418
;
Figure 112007093066825-PCT00419
;
Figure 112007093066825-PCT00420
;
Figure 112007093066825-PCT00421
;
Figure 112007093066825-PCT00422
;
Figure 112007093066825-PCT00423
;
Figure 112007093066825-PCT00424
;
Figure 112007093066825-PCT00425
;
Figure 112007093066825-PCT00426
;
Figure 112007093066825-PCT00427
;
Figure 112007093066825-PCT00428
;
Figure 112007093066825-PCT00429
;
Figure 112007093066825-PCT00430
;
Figure 112007093066825-PCT00431
;
Figure 112007093066825-PCT00432
;
Figure 112007093066825-PCT00433
;
Figure 112007093066825-PCT00434
;
Figure 112007093066825-PCT00435
;
Figure 112007093066825-PCT00436
;
Figure 112007093066825-PCT00437
;
Figure 112007093066825-PCT00438
;
Figure 112007093066825-PCT00439
;
Figure 112007093066825-PCT00440
;
Figure 112007093066825-PCT00441
; 및
Figure 112007093066825-PCT00442
.
구체예 36. 하기 화학식 [VI]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물로서:
Figure 112007093066825-PCT00443
[VI]
여기에서, PP는 폴리펩티드내에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
A는 옥심 결합을 나타내며;
Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타내며:
,
Figure 112007093066825-PCT00445
,
Figure 112007093066825-PCT00446
,
Figure 112007093066825-PCT00447
,
Figure 112007093066825-PCT00448
,
Figure 112007093066825-PCT00449
,
Figure 112007093066825-PCT00450
,
Figure 112007093066825-PCT00451
,
Figure 112007093066825-PCT00452
,
Figure 112007093066825-PCT00453
,
Figure 112007093066825-PCT00454
,
Figure 112007093066825-PCT00455
,
Figure 112007093066825-PCT00456
,
Figure 112007093066825-PCT00457
,
Figure 112007093066825-PCT00458
,
Figure 112007093066825-PCT00459
.
Figure 112007093066825-PCT00460
,
Figure 112007093066825-PCT00461
, 및
Figure 112007093066825-PCT00462
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며,
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00463
인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 37. 제 36 구체예에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 38. 제 36 구체예에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 39. 제 36 구체예 내지 제 38 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 40. 제 36 구체예 내지 제 38 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 41. 제 40 구체예에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 42. 제 41 구체예에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 43. 제 36 구체예 내지 제 42 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
Figure 112007093066825-PCT00464
,
Figure 112007093066825-PCT00465
,
Figure 112007093066825-PCT00466
,
Figure 112007093066825-PCT00467
,
Figure 112007093066825-PCT00468
,
Figure 112007093066825-PCT00469
,
Figure 112007093066825-PCT00470
,
Figure 112007093066825-PCT00471
,
Figure 112007093066825-PCT00472
,
Figure 112007093066825-PCT00473
,
Figure 112007093066825-PCT00474
,
Figure 112007093066825-PCT00475
,
Figure 112007093066825-PCT00476
,
Figure 112007093066825-PCT00477
,
Figure 112007093066825-PCT00478
,
Figure 112007093066825-PCT00479
.
Figure 112007093066825-PCT00480
,
Figure 112007093066825-PCT00481
, 또는
Figure 112007093066825-PCT00482
;
상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
다만 Z가
Figure 112007093066825-PCT00483
인 경우, PEG는 10 kDa PEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 44. 제 36 구체예 내지 제 43 구체예 중 어느 한 구체예에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 45. 제 44 구체예에 있어서, GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH 중에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 46. 제 44 구체예에 있어서, GH는 20 kDa hGH에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 47. 제 44 구체예에 있어서,
GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬, 및 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
또는
GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼(이때 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환된 것이다), 및 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
또는
GH는 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼(이때 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환된 것이다), 및 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
또는
GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 hGH에 존재하는 두개의 글루타민의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치에 존재하는 임의의 글루타민 잔기는 결실되었거나, 다른 아미노산으로 치환된 것을 특징으로 하는 화합물.
구체예 48. PEG, 더욱 구체적으로는 mPEG를 포함하는 잔기에 공유결합적으로 부착되어 있는 인간 성장 호르몬으로서, 상기 PEG를 포함하는 잔기는 인간 성장 호르몬의 글루타민 잔기 40의 곁사슬에, 글루타민 141의 곁사슬에, 또는 글루타민 40 및 글루타민 141의 곁사슬에 부착된 것으로서, 단 하기는 아닌 것을 특징으로 하는 인간 성장 호르몬:
Nε141-[2-(4-(4-(mPEG(20k)일부타노일)-아미노-부틸옥시아미노)-에틸] hGH,
Nε141-[2-(1-(헥사데카노일)피페리딘-4-일)에틸옥시아미노)-에틸] hGH,
Nε141(2-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(2,6-비스(mPEG(20k)일옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(4-(mPEG(30k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
Nε141(2-(4-(4-(mPEG(20k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH, 또는
Nε141(2-(4-(3-(mPEG(30k)일옥시)프로파노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH.
구체예 49. 제 1 구체예 내지 제 22 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 방법의 사용에 의해 수득된 화합물.
구체예 50. 제 1 구체예 내지 제 22 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 방법의 사용에 의해 수득될 수 있는 화합물.
구체예 51. 제 19 구체예 내지 제 22 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 방법의 사용에 의해 수득된 화합물.
구체예 52. 제 19 구체예 내지 제 22 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 방법의 사용에 의해 수득될 수 있는 화합물.
구체예 53. 제 31 구체예 내지 제 35 구체예 중 어느 한 구체예, 제 44 구체예 내지 제 52 구체예 중 어느 한 구체예, 제 51 구체예, 또는 제 52 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 화합물의 치료시 용도.
구체예 54. 제 31 구체예 내지 제 35 구체예 중 어느 한 구체예, 제 44 구체예 내지 제 52 구체예 중 어느 한 구체예, 제 51 구체예, 또는 제 52 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 화합물을 포함하는 약학적 조성물.
구체예 55. 성장호르몬 결핍증(GHD); 터너증후군; Prader-Willi 증후군(PWS); Noonan 증후군; 다운증후군; 만성신장질병, 소아 류마티스성 관절염; 낭포성 섬유증, HAART 치료를 받은 유아에서의 HIV-감염(HIV/HALS 유아); 제태기간에 비해 저체중아 (SGA); 극저출생시 저체중아(VLBW)로서 SGA가 아닌 것; 골격 형성장애; 연골형성저하증; 연골무형성증; 특발성 저신장(ISS); 성인에서의 GHD; 긴뼈, 예컨대 경골, 비골, 대퇴골, 상박골, 요골, 척골, 쇄골, 마타카피아, 마타타시아 및 손가락뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 스폰지성 뼈, 예컨대 두개골, 손바닥뼈, 베이스 오브 푸드뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 예를 들면, 손, 무릎, 또는 어깨의 힘줄이나 인대 수술 후의 환자; 정신착란 골형성을 앓거나 진행중인 환자; 골반 또는 디스크 교체, 관절반달 교체, 척수 융합 또는 인공삽입물 고정, 예컨대 무릎, 골반, 어깨, 팔꿈치, 허리 또는 턱과 같은 곳에서의 고정 후의 환자; 조골 물질, 예컨대 못, 나사 및 판이 고정된 환자; 골절 후 교합이 되지 않았거나 잘못 교합된 환자; 골종, 예컨대 경골이나 첫번째 발가락 뼈의 골종 후의 환자; 그래프트 이식 후의 환자; 외상이나 관절염 유발성 무릎내 관절 연골의 퇴화; 터너증후군을 가진 환자에서 골다공증; 남성 골다공증; 성인 만성 투석 환자(APCD); APCD에서 영양결핍성 혈관 질병; APCD에서 카켁시아의 반복; APCD에서 암; APCD에서 만성 폐질환; APCD에서 HIV; APCD를 앓는 노인; APCD에서 만성 간 질환, APCD에서 피로 증후군; 크론병; 간기능손상; HIV 감염된 남성; 작은창자 증후군; 중추 비만; HIV-관련 지방이상 증후군(HALS); 남성 불임; 주요 예정 수술 후의 환자, 알콜/약물 탈독소 또는 신경 외상; 노화; 허약한 노인; 뼈관절염; 외상으로 손상입은 연골; 발기부전; 섬유근육통; 기억 이상; 우울증; 뇌 외상; 거미막하부 출혈; 매우 낮은 출생시 체중; 대사증후군; 글루코르티코이드 근육병증; 또는 소아에서 글루코코르티코이드 치료로 인한 저신장증을 치료하고; 근육 조직, 신경 조직 또는 상처의 치료를 가속화하며; 손상 받은 조직의 혈류를 가속화 또는 개선시키며; 손상받은 조직의 감염 속도를 감소시키기 위한 방법으로서, 이 방법은 제 31 구체예 내지 제 35 구체예 중 어느 한 구체예, 제 44 구체예 내지 제 52 구체예 중 어느 한 구체예, 제 51 구체예, 또는 제 52 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 화합물, 또는 제 54 구체예에 따른 약학적 조성물의 치료 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
구체예 56. 성장호르몬 결핍증(GHD); 터너증후군; Prader-Willi 증후군(PWS); Noonan 증후군; 다운증후군; 만성신장질병, 소아 류마티스성 관절염; 낭포성 섬유증, HAART 치료를 받은 유아에서의 HIV-감염(HIV/HALS 유아); 제태기간에 비해 저체중아 (SGA); 극저출생시 저체중아(VLBW)로서 SGA가 아닌 것; 골격 형성장애; 연골형성저하증; 연골무형성증; 특발성 저신장(ISS); 성인에서의 GHD; 긴뼈, 예컨대 경골, 비골, 대퇴골, 상박골, 요골, 척골, 쇄골, 마타카피아, 마타타시아 및 손가락뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 스폰지성 뼈, 예컨대 두개골, 손바닥뼈, 베이스 오브 푸드뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 예를 들면, 손, 무릎, 또는 어깨의 힘줄이나 인대 수술 후의 환자; 정신착란 골형성을 앓거나 진행중인 환자; 골반 또는 디스크 교체, 관절반달 교체, 척수 융합 또는 인공삽입물 고정, 예컨대 무릎, 골반, 어깨, 팔꿈치, 허리 또는 턱과 같은 곳에서의 고정 후의 환자; 조골 물질, 예컨대 못, 나사 및 판이 고정된 환자; 골절 후 교합이 되지 않았거나 잘못 교합된 환자; 골종, 예컨대 경골이나 첫번째 발가락 뼈의 골종 후의 환자; 그래프트 이식 후의 환자; 외상이나 관절염 유발성 무릎내 관절 연골의 퇴화; 터너증후군을 가진 환자에서 골다공증; 남성 골다공증; 성인 만성 투석 환자(APCD); APCD에서 영양결핍성 혈관 질병; APCD에서 카켁시아의 반복; APCD에서 암; APCD에서 만성 폐질환; APCD에서 HIV; APCD를 앓는 노인; APCD에서 만성 간 질환, APCD에서 피로 증후군; 크론병; 간기능손상; HIV 감염된 남성; 작은창자 증후군; 중추 비만; HIV-관련 지방이상 증후군(HALS); 남성 불임; 주요 예정 수술 후의 환자, 알콜/약물 탈독소 또는 신경 외상; 노화; 허약한 노인; 뼈관절염; 외상으로 손상입은 연골; 발기부전; 섬유근육통; 기억 이상; 우울증; 뇌 외상; 거미막하부 출혈; 매우 낮은 출생시 체중; 대사증후군; 글루코르티코이드 근육병증; 소아에서 글루코코르티코이드 치료로 인한 저신장증을 치료하고; 근육 조직, 신경 조직 또는 상처의 치료를 가속화하며; 손상 받은 조직의 혈류를 가속화 또는 개선시키며; 손상받은 조직의 감염 속도를 감소시키는데 사용되는 의약의 제조시, 제 31 구체예 내지 제 35 구체예 중 어느 한 구체예, 제 44 구체예 내지 제 52 구체예 중 어느 한 구체예, 제 51 구체예, 또는 제 52 구체예 중 어느 한 구체예에 따른 화합물의 용도.
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본 발명을 설명하는 명세서에서 단수의 표현 및 그와 유사한 표현이 사용된 것은, 본 명세서에서 달리 지적하거나 명백하게 반대되는 언급을 하지 않은 한, 단수 및 복수 형태 모두를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 예를 들어, "화합물"은 달리 지적하지 않은 한, 기술하는 특정 구체예, 또는 본 발명의 각종 "화합물들"을 언급하는 것으로 이해되어야 한다.
수치의 범위를 언급할 때에는 주로, 본원에서 달리 지적하지 않은 한, 그 범위내에 속하는 각각의 개별적인 수치를 독립적으로 언급하기 위한 간단한 방법으로서 기여하고자 의도하였는데, 각각의 개별적인 값은 본원에 독립적으로 언급된 것과 같은 경우처럼 본 명세서에 포함되는 것이다.
달리 지적하지 않은 한, 본원에 제공된 모든 정확한 수치는 대략적인 수치에 해당하는 값의 대표값이다(예를 들면, 특정한 인자 또는 측정에 대해 제공된 모든 정확한 실험적 수치는, 적당한 경우 "약"이 붙여진, 해당하는 대략적인 측정값으로 간주될 수도 있다).
본원에 기술된 모든 방법은, 본원에서 달리 지적하거나 명백하게 반대되는 언급을 하지 않은 한, 임의의 적당한 순서로 수행될 수 있다.
본원에 제공된 모든 예, 및 예시적인 언어(예를 들면, "예컨대")는 본 발명을 더욱 잘 설명하기 위한 것으로서, 달리 지적하지 않은 한, 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다. 명세서내의 어떤 언어도, 그렇게 설명되어 있지 않은 한, 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 성분을 나타내는 것으로 한정되어서는 아니된다.
본원의 인용문헌 및 특허문서의 인용은 단지 편의를 위한 것으로서, 이러한 특허 문헌의 유효성, 특허가능성 및/또는 집행력을 반영하는 것은 아니다.
본 발명의 임의의 측면 또는 측면들의 본원에서의 설명은, 성분이나 성분들과 관련하여 "포함하는", "갖는", "포함하는", 또는 "함유하는"이라는 용어를 사용하는데, 이것은 달리 언급하지 않거나 명백히 반대되는 언급을 하지 않은 한, 특정 성분 또는 성분들로 "구성되고", "필수적으로 구성되고", 또는 "실질적으로 포함하는" 본 발명의 유사한 측면을 보충하기 위해 제공되는 것이다(예를 들면, 특정 성분을 포함하는 것으로 본원에 기술된 조성물은, 달리 언급하지 않거나 명백히 반대되는 언급을 하지 않는 한, 그 성분으로 구성되는 조성물을 기술하는 것으로서 이해되어야 한다). 이러한 본 발명의 측면에 대한 기본적 특징 및 신규 특징도 본원에 모두 제공된다.
본 발명은 법에 의해 허용되는 최대한의 범위까지 본원에 제공된 구체예나 청구항에 열거된 물질의 모든 변형물 및 등가물도 포함한다.
실시예에 사용된 TGase는 US5156956에 따른 Streptoverticillium mobaraenae 유래 미생물 트랜스 글루타미나제 또는 WO 9606931-A1에 따른 Streptomyces Lydicus 유래 미생물 트랜스글루타미나제이다.
분석 방법:
Maldi - Tof 질량분석기
Autoflex Maldi-Tof 장치(Bruker)를 사용하여 분자량을 측정하였다. 샘플을 샌드위치법에 따라 준비하였다. 매트릭스 1은 1 ml 아세톤 중의 10 mg 알파-시아노-4-하이드록시-시남산의 용액이었다. 매트릭스 2는 물 중의 1 ml 50% 아세토니트릴 중의 10 mg 알파-시아노-4-하이드록시-시남산의 용액이었다. 순서대로, 1 ㎕의 매트릭스 1을 적용하고, 공기 건조시킨 다음, 1 ㎕의 3% 트리플루오로아세트산을 적용하고, 1 ㎕의 샘플을 적용하고, 1 ㎕의 매트릭스 2를 적용한 다음 공기 건조시킨 후, 표적 플레이트를 물로 씻어내고 최종적으로 공기 건조시켜서, 가겟 상에 샘플을 제조하였다. 20% 레이저 동력 및 장치에 제공된 3-20 kDa 범위에 대한 표준 방법을 사용하여 스펙트럼을 얻었다.
단백질의 정량
UV-분광광도계를 사용하여 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 단백질 농도를 추정하였다. 16170 M÷1 Cm÷1의 몰 소광 계수를 사용하였다. 부피 및 농도로부터 양을 계산하였다.
SDS PAGE
NuPAGE 4% - 12 % 비스-Tris 겔(Invitrogen NP0321BOX)을 사용하여 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 수행하였다. 겔을 은 염색(Invitrogen LC6100)하거나 코마시 염색(Invitrogen LC6065)하고, M. M. Kurfurst, Anal.Biochem. 200(2), 244-248 (1992)에 기술된 바와 같이, 상응하는 곳에 바륨 아이오다이드로 PEG에 대해 염색하였다.
RP - HPLC 분석
시스템 A: Merck-Hitachi 시스템은 L-7400 UV 검출기, L-7200 자동샘플러 및 L-7100 펌프로 구성된다. Zorbax SB-300 4.6mm x 50mm 5㎛ C-18 실리카 컬럼 (Agilent Technologies)을 사용하였고, 검출은 214 nm에서 UV로 수행하였다. 컬럼을 0.1% 트리플루오로산 / H2O로 평형을 유지하고, 실온에서, 1ml/분의 유속으로 10분 동안, 0.1% 트리플루오로산/H2O에 대해 0 내지 90% 아세토니트릴의 구배로 용리하였다.
CE (모세 전기영동) 분석:
Agilent Technologies 3DCE 시스템 (Agilent Technologies)을 사용하여 모세 전기영동을 수행하였다. Agilent Technologies 3DCE ChemStation를 사용하여 데이터를 수집하고 시그널 프로세싱을 수행하였다. 모세관은 64.5cm (56.0 cm 유효 길이) 50 ㎛ i.d. Agilent로부터의 "Extended Light Path Capillary"였다. UV 검출은 200 nm에서 수행하였다(16 nm Bw, 기준 380 nm 및 50 nm Bw). 전개용 전해질은 포스페이트 완충액 50 mM pH7(방법 A)이거나, 포스페이트 완충액 50 mM pH 2.5(방법 B)이었다. 모세관은 0.1M NaOH로 3분간 컨디셔닝하고, 이어서 Milli-Q 물로 2분간 컨디셔닝 한 다음에, 전해질로 3분간 컨디셔닝하였다. 각 전개 후에, 모세관을 milli-Q 물로 2분간 씻어내고, 포스포르산으로 2분간 세척한 다음, milli-Q 물로 2 분간 세척하였다. 4.0초간 50 mbar에서 하이드로다이내믹 주사를 수행하였다. 전압은 +25 kV였다. 모세관 온도는 30℃였고, 런타임은 10.5분(방법 A) 또는 20분(방법 B)이었다.
실시예 1 및 2는 숨은 알데하이드로 트랜스아민화하는 것을 사용하는, hGH의 PEG화의 예시적인 구체예를 제공하고자 하는 것이다. 또한 WO2005070468를 참조하라.
Figure 112007093066825-PCT00484
I. hGH, 인간 성장 호르몬
II. Nε40/Nε141-(2-하이드록시-3-아미노-프로필) hGH
III. Nε40/Nε141-(2-옥소에틸) hGH
IV. Nε40/Nε141-[2-(O-(4-(4-(mPEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시이미노)에틸] hGH
실시예 1
N ε141 -[2-O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴 아미노 )부틸) 옥시이미노 )에틸] hGH 의 제조
Figure 112007093066825-PCT00485
(a) hGH (I.)의 트랜스아민화로 , N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH ( II .)를 생성시킴
hGH (I.) (200 mg)를 포스페이트 완충액(50 mM, pH 8.0, 14 ml)에 용해시켰다.
이 용액을 포스페이트 완충액 중에 용해된 1,3-디아미노프로판-2-올(4 mmol, 378 mg)의 용액(50 mM, 1 ml, pH 8.0, 1,3-디아미노-프로판-2-올을 용해시킨 다음에 희석된 염산을 사용하여 pH를 8로 조정)과 혼합하였다.
마지막으로, 포스페이트 완충액 (50 mM, pH 8.0, 1 ml) 중에 용해시킨 TGase (18 mg ~ 40 U) 용액을 첨가하고, 포스페이트 완충액(50 mM, pH 8.0)을 첨가하여 20 ml로 부피를 조정하여, 1,3-디아미노프로판-2-올의 농도가 0.2 M이 되게 하였다. 합쳐진 혼합물을 4시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하였다.
온도를 실온으로 낮추고, N-에틸렌이미드를 첨가하여 최종 농도가 1 mM가 되게 하였다.
그 후 1시간 더 혼합물을 10 부피의 트리스 완충액(50 mM, pH 8.5)을 사용 하여 희석하였다.
생성된 혼합물의 CE 분석 결과, hGH 및 Nε141-(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH (II.)에 해당하는 2개의 큰 피크와, Nε40-(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH (II.) 및 Nε40, Nε141 -비스(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH에 해당하는 2개의 작은 피크가 나타났다. 마지막 두개의 성분은 추후의 정제 동안에 제거되었지만, 이들은 회수되었을 수도 있다.
(b) N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH ( II .)의 이온 교환 크로마토그래피
(a)로부터 생성된 용액을, 완충액 A (50 mM tris, pH 8.5)로 예비평형유지되는, MonoQ 10/100 GL 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17- 5167-01)에 적용하였다. 그 다음, 2.5 ml/분의 유속과, 완충액 A에서의 0% 내지 100%의 완충액 B(50 mM 트리스, 0.2 M NaCl, pH 8.5)의 구배로 63분간 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡광에 근거하여 수집하고, Maldi-Tof 분석을 선택된 분획에 대해 수행하였다. Maldi-Tof 질량분석기에 따라 예상되는 mw를 산출할 가장 큰 피크에 해당하는 분획을 풀(pool)로 만들었다. 이러한 풀은 CE(방법 A)에 의하면, hGH (I.) 및 Nε141-(2-하이드록시-3-아미노-프로필) hGH (II.)을 60:40의 비율로 함유하였다. 국제특허출원 WO2005DK000028에 기술된 바와 같이 펩티드 매핑 실험을 수행한 것은, (a) 및 (b) 절차를 모두 수행한 것의 결과로 Gln-141에서 선택적인 유도체화를 유발하였음을 입증하였다.
(c) N-(4-( tert - 부틸옥시카르보닐아미노옥시 )부틸) 프탈리미드의 합성
Figure 112007093066825-PCT00486
N-(4-브로모부틸)프탈리미드 (18.9 g, 67.0 mmol), MeCN (14 ml), 및 N-Boc-하이드록실아민 (12.7 g, 95.4 mmol)의 교반되고 있는 혼합물에 DBU(15.0 ml, 101 mmol)를 일부 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 물(300 ml) 및 12 M HCl(10 ml)을 첨가하였고, 생성물을 AcOEt로 3회 추출하였다. 합쳐진 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키며(MgSO4), 감압하에 농축시켰다. 생성된 오일(28 g)을 크로마토그래피(140 g SiO2, 헵탄/AcOEt로 구배 용리)로 정제하였다. 17.9 g (80%)의 타이틀(title) 화합물을 오일로서 수득하였다. 1H NMR (DMSO-d 6) δ 1.36 (s, 9H), 1.50 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 3.58 (t, J = 7 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 7 Hz, 2H), 7.85 (m, 4H), 9.90 (s, 1H).
(d) 4-( tert - 부틸옥시카르보닐아미노옥시 ) 부틸아민의 합성
Figure 112007093066825-PCT00487
EtOH (10 ml) 중의, (a) 로부터 수득한 N-(4-(tert-부틸옥시카르보닐아미노옥시)부틸)프탈리미드(8.35 g, 25.0 mmol) 용액에, 히드라진 하이드레이트(20 ml)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 38시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔여물을 EtOH 및 PhMe를 사용하여 증발시켰다. 잔여물에 EtOH(50 ml)를 첨가하고, 침전된 프탈하이드라자이드를 여과시키며, EtOH(50 ml)로 세척하였다. 합쳐진 여과물의 농축액은 5.08 g의 오일을 생성시켰다. 이 오일은 물 (20 ml) 중의 K2CO3 (10 g)이 용액과 혼합하고, 생성물을 CH2Cl2로 추출하였다. 건조(MgSO4) 및 농축시킨 결과, 2.28 g (45%)의 타이틀 화합물이 오일로서 생성되었으며, 이를 추가의 정제없이 사용하였다. 1H NMR (DMSO-d 6) δ 1.38 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.51 (m, 2H), 2.51 (t, J = 7 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 7 Hz, 2H).
(e) N- Boc -O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )-부틸) 하이드록실 - 아민의 합성
Figure 112007093066825-PCT00488
(mPeg(20000)-NH-CO-O-CH2)2CH-O-(CH2)3-CO-OSu (Nektar, 2Z3Y0T01, 2.0 g, 50 μmol)를 DCM (12 ml) 중의 4-(Boc-아미노옥시)부틸아민 (187 mg, 915 μmol)의 용액과 혼합하였다. 실온에서 43시간 동안 교반한 다음에, 혼합물을 교반되고 있는 Et2O (200 ml)에 한방울씩 첨가하였다. 여과하고, Et2O로 세척하였다. 생성물을 DCM (10 ml)에 재용해시키고, Et2O (200 ml)로 다시 한번 침전시켰다. 이러한 침전 과정을 3회 반복하였다. 이어서 생성물을 DCM (100 ml)에 용해시키고, Amberlyst 15 (11 g; DCM으로 세척)로 5분간 처리하였다. 여과 및 농축 후에 생성물을 상기와 같이 Et2O로 침전시켰다. 여과 및 감압 하에서 건조시킨 결과, 1. 98g의 타이틀 화합물이 고체로서 생성되었다.
(f) O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )부틸)- 하이드록실아민의 합성
Figure 112007093066825-PCT00489
전단계 반응으로부터의 생성물(1.0 g)을 DCM에 용해시키고, Amberlyst 15 (8.0 g; DCM으로 세척)을 첨가하였다. 10분간 교반한 다음에 혼합물을 여과시키고, 여과물을 농축시켰다. 잔기에 DCM(25 ml) 및 TFA(25 ml)를 첨가하였다. 실온에서 0.5 시간 동안 방치한 다음에, 혼합물을 농축시키고, 잔여물을 DCM 및 톨루엔으로 2회 증발시킨 다음에, 감압하에서 밤새 건조시켰다. 잔여물을 물(15 ml)에 용해시키고, Amicon Ultra-15 한외여과 장치((Millipore)를 사용하여 물로 2회 세척하였다. 이어서 2-메틸피리딘을 pH 6까지 첨가하여, 용액을 중화시켰다. 이 용액을 옥 심화에 바로 사용하였다.
(g) N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH ( II .)를 산화시켜, N ε141 -(2- 옥소에틸 ) hGH ( III .)를 생성시킴.
(I.) 및 (II.) 53.8 mg을 함유하는 (b) 2로부터의 모아진 분획의 완충액을, Amicon Ultra-15 한외여과 장치((Millipore)를 사용하여, 15 mM 트리에탄올아민/ 137mM 3-(메틸티오)-1-프로판올 pH 8.5 (1 N 염산으로 조정) 완충액으로 4회 교환하였다. 이어서, 용액을 5.4 ml까지 농축시켰다. 이 용액에 수용액 중의 0.54 ml의 25 mM 나트륨 페리오데이트를 첨가하였고, 이 혼합물을 30분 동안 실온 및 암소에서 인큐베이팅하였다.
그 다음 Amicon Ultra-15 한외 여과 장치(Millipore)를 사용하여, 용액을 15 mM 트리에탄올아민 완충액 pH 8.5로 3회 세척하였다. 그 다음에 이것을 얼음 위에서 냉각시키고, 1.62 ml의 얼음 위에서 냉각시킨 N,N-디메틸포름아미드를 첨가하였다.
(h) O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )부틸) 하이드록실아민으로 N ε141 -(2- 옥소에틸 ) hGH ( III .)를 옥심화하여 , N ε141 -[2-(O-(4-(4-(1,3-비스( mPEG (20000)옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )부틸) 옥시이미노 )에틸] hGH 을 생성시킴
(g)로부터 생성된 혼합물을 (f)로부터 생성된 PEG 용액에 부드럽게 혼합하면 서 천천히 첨가하였고, 반응을 실온에서 72시간 동안 진행되게 두었다.
(i) N ε141 -[2-(O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )부틸) 옥시이미노 )에틸] hGH 의 이온 교환 크로마토그래피
(h)로부터 생성된 용액을, 완충액 A(10 mM 트리스, pH 8.0)로 예비평형유지되는 MonoQ 10/100 GL 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17- 5167-01)에 적용하였다.
그 다음에 완충액 A 중에서 0% 내지 100%의 완충액 B(10 mM tris, 0.2 M NaCl, pH 8.0)의 구배로, 79분 동안에 유속 2.0 ml/분으로 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡수에 근거하여 수집하였다. 원하는 피크에 해당하는 분획을 풀로 만들고, 이를 Amicon Ultra-15 한외여과 장치 (Millipore) 상에서 10 ml까지 농축시켰다.
(j) N ε141 -[2-(O-(4-(4-(1,3- 비스 ( mPEG (20000)옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 )부틸) 옥시이미노 )에틸] hGH 의 크기 배제 크로마토그래피
(i)에서 생성된 농축된 용액을 완충액 C (50mM 암모늄 하이드로겐 카보네이트, pH 8.0)로 예비평형유지되는 HiLoad 26/60 Superdex 200 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17-1071-01)에 적용하였다. 그 다음에 956분 동안 0.5 ml/분 완충액 C의 유속으로 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡광도에 근거하여 모으 고, 이전에 수행된 시험에 따라 풀로 만들었다.
SDS PAGE 결과, 120 kDa보다 큰 겉보기 분자량을 갖는 단일 밴드를 보였다.
실시예 2
N ε141 -[2-(O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시) 부티릴아미노 )-부틸) 옥시이미노 )-에틸] hGH의 제조
Figure 112007093066825-PCT00490
(a) hGH (I.)를 트랜스아민화하여 , N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH (II.)를 생성시킴
hGH (I.) (200 mg)를 포스페이트 완충액(50 mM, pH 8.0, 14 ml)에 용해시켰다.
이 용액을 포스페이트 완충액 중에 용해된 1,3-디아미노프로판-2-올(378 mg)의 용액(50 mM, 0.5 ml, pH 8.0, 1,3-디아미노-프로판-2-올을 용해시킨 다음에 희석된 염산을 사용하여 pH를 8로 조정)과 혼합하였다.
마지막으로, 포스페이트 완충액 (50 mM, pH 8.0, 0.5 ml) 중에 용해시킨 TGase (18 mg ~ 40 U) 용액을 첨가하고, 포스페이트 완충액(50 mM, pH 8.0)을 첨가하여 20 ml로 부피를 조정하여, 1,3-디아미노프로판-2-올의 농도가 0.2 M이 되게 하였다. 합쳐진 혼합물을 4시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하였다.
온도를 실온으로 낮추고, N-에틸-말레이미드를 첨가하여 최종 농도가 1 mM가 되게 하였다.
1시간 후에, 혼합물을 10 부피의 트리스 완충액(50 mM, pH 8.5)을 사용하여 희석하였다. 생성된 혼합물의 CE 분석 결과, hGH 및 Nε141-(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH (II.)에 해당하는 2개의 큰 피크와, Nε40-(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH (II.) 및 Nε40, Nε141 -비스(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH에 해당하는 2개의 작은 피크가 나타났다. 마지막 두개의 성분은 추후의 정제 동안에 제거되었지만, 이들은 회수되었을 수도 있다.
(b) N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH ( II .)의 이온 교환 크로마토그래피
(a)로부터 생성된 용액을, 완충액 A (50 mM tris, pH 8.5)로 예비평형유지되는, MonoQ 10/100 GL 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17- 5167-01)에 적용하였다. 그 다음, 2 ml/분의 유속과, 하기의 단계적 구배로 용리하였다.
단계 1: 완충액 A 중의, 0 내지 60% 완충액 B(50 mM tris, 0.2M NaCl, pH 8.5), 12분
단계 2: 완충액 A 중의 60 내지 64% 완충액 B, 8분
단계 3: 완충액 A 중의 64% 완충액 B, 16분
단계 4: 완충액 A 중의 64 내지 67% 완충액 B, 16분
단계 5: 완충액 A 중의 67% 완충액 B, 16분
단계 6: 완충액 A 중의 67 내지 100% 완충액 B, 12분.
분획을 280 nm에서의 UV 흡광에 근거하여 수집하고,가장 큰 피크에 해당하는 분획을 수집하였다. 이러한 풀(pool)은 CE(방법 A)에 의하면, hGH (I.) 및 Nε141-(2-하이드록시-3-아미노-프로필) hGH (II.)을 58:42의 비율로 함유하였다. 국제특허출원 WO2005DK000028에 기술된 바와 같이 펩티드 매핑 실험을 수행한 것은, (a) 및 (b) 절차를 모두 수행한 것의 결과로 Gln-141에서 선택적인 유도체화를 유발하였음을 입증하였다.
(c) O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시) 부티릴아미노 )부틸) 하이드록실아민의 합성
Figure 112007093066825-PCT00491
DCM (40 ml) 중의 4-(N-Boc-아미노옥시)부틸아민(0.43 g, 2.10 mmol)의 용액에 mPeg(30000)-O-(CH2)3-CO-OSu (Nektar, 2M450R01, MW 30 kDa, 5.0 g, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 5일 동안 실온에서 교반하였고, 감압하에서 농축시켰으며, 잔여물을 진공 하에서 건조시켰다. iPrOH (4 x 80 ml)에서 재결정화한 다음, DCM에 의해 동시증발시키고, 감압하에서 건조시켰더니, 4.14 g의 Boc-보호된 알콕실아민이 생성되었다.
전단계 반응으로부터의 생성물(0.65 g)을 20 ml DCM에 용해시키고, Amberlyst 15 (6.0 g; DCM으로 세척)을 첨가하였다. 10분간 교반한 다음에 혼합물을 여과시키고, 여과물을 농축시켰다. 잔기에 DCM(25 ml) 및 TFA(25 ml)를 첨가하였다. 실온에서 0.5 시간 동안 방치한 다음에, 혼합물을 농축시키고, 잔여물을 DCM 및 톨루엔으로 2회 증발시킨 다음에, 감압하에서 밤새 건조시켰다. 잔여물을 물(15 ml)에 용해시키고, Amicon Ultra-15 한외여과 장치((Millipore)를 사용하여 물로 2회 세척하였다. 이어서 2-메틸피리딘을 pH 6까지 첨가하여, 용액을 중화시켰다. 이 용액을 옥심화에 바로 사용하였다.
(d) N ε141 -(2- 하이드록시 -3-아미노프로필) hGH ( II .)을 산화시켜, N ε41 -(2- 옥소에 틸) hGH ( III .)을 생성시킴
(I.) 및 (II.) 78.14 mg을 함유하는 (b) 2로부터의 모아진 분획의 완충액을, Amicon Ultra-15 한외여과 장치((Millipore)를 사용하여, 15 mM 트리에탄올아민/ 137mM 3-(메틸티오)-1-프로판올 pH 8.5 (1 N 염산으로 조정) 완충액으로 4회 교환하였다. 최종적으로 용액을 3.3 ml까지 농축시켰다. 이 용액에 물 중의 0.33 ml의 25 mM 나트륨 페리오데이트를 첨가하였고, 이 혼합물을 30분 동안 실온 및 암 소에서 인큐베이팅하였다.
그 다음 Amicon Ultra-15 한외 여과 장치(Millipore)를 사용하여, 용액을 15 mM 트리에탄올아민 완충액 pH 8.5로 3회 세척하였다. 그 다음에 이것을 얼음 위에서 냉각시키고, 1.0 ml의 얼음 위에서 냉각시킨 N,N-디메틸포름아미드를 첨가하였다.
(e) O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시)- 부티릴아미노 )-부틸)- 하이드록실아민으로 N ε141 -(2-옥소에틸) hGH ( III .)을 옥심화하여 , N ε141 -[2-(O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시)- 부티릴 아미노)-부틸) 옥시이미노 )에틸] hGH 를 생성시킴
(d)로부터 생성된 혼합물을 부드럽게 혼합하면서 (c)로부터의 PEG 용액에 천천히 첨가하였고, 반응을 144 시간 동안 실온에서 진행되게 두었다.
(f) N ε141 -[2-(O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시)- 부티릴아미노 )부틸) 옥시이미노 )-에틸] hGH의 이온 교환 크로마토그래피
(e)로부터 생성된 용액을, 완충액 A(10 mM 트리스, pH 8.0)으로 예비평형유지되는 MonoQ 10/100 GL 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17- 5167-01)에 적용하였다. 그 다음에 완충액 A 중에서 0% 내지 100%의 완충액 B(10 mM tris, 0.2 M NaCl, pH 8.0)의 구배로, 107분 동안에 유속 1.5 ml/분의 유속으로 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡광도에 근거하여 수집하였다. 원하는 피크에 해당하는 분획을 풀로 만들고, 이를 Amicon Ultra-15 한외여과 장치 (Millipore) 상에서 10 ml 까지 농축시켰다.
(g) N ε141 -[2-(O-(4-(4-( mPEG (30000)옥시) 부티릴아미노 )-부틸) 옥시이미노 )-에틸] hGH의 크기 배제 크로마토그래피
(f)에서 생성된 농축된 용액을 완충액 C (50mM 암모늄 하이드로겐 카보네이트, pH 8.0)로 예비평형유지되는 HiLoad 26/60 Superdex 200 컬럼 (Amersham Biosciences cat. No. 17-1071-01)에 적용하였다. 그 다음에 956분 동안 0.5 ml/분 완충액 C의 유속으로 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡광도에 근거하여 모으고, 이전에 수행된 시험에 따라 풀로 만들었다.
SDS PAGE 결과, 대략 117 kDa보다 큰 겉보기 분자량을 갖는 단일 밴드를 보였다.
실시예 3
N ε141 -(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3- 비스 ( mPeg (20000)일아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 부틸리덴 ) 아미노옥시 ) 프로필옥 시) hGH ( VII .)의 제조
Figure 112007093066825-PCT00492
디-아미노옥시 화합물로 트랜스아민화하는 것을 사용하는, mPEG로 hGH를 컨 쥬게이션하는 개요도는 실시예 3에 제시되어 있다.
Figure 112007093066825-PCT00493
(a) (I.)를 트랜스아민화하여 , N ε141 -(3-( 아미노옥시 ) prop옥시 ) hGH (V.)를 생성시킴
하기의 용액을 제조하였다:
1) 100 mg hGH (I.)를 Na-포스페이트 완충액(50 mM, pH 6.0)에 전체 9 ml가 되도록 용해시켰다. 그 다음에 Na-포스페이트 완충액 (50 mM, pH 6.0)을 사용하여 pH를 6으로 조정하고, 부피를 10 ml로 조정하였다.
2) 2.00 g 1,3-비스아미노옥시프로판. 2HCl (A. Shirayev, P. K. Thoo lin, and I. K. Moiseev, Synthesis, 38-40 (1997)을 Na-포스페이트 완충액(50 mM, pH 6.0) 중에 전체 5 ml까지 용해시킨 다음에, pH 및 부피를 1과 같이 조정하였다.
3) 30 mg 트랜스글루타미나제 Activa WM (Ajinomoto, 0.3 mg 효소)를 Na- 포스페이트 완충액(50 mM, pH 6.0) 중에 전체 9 ml가 될 때까지 용해시킨 다음에, pH 및 부피를 1과 같이 조정하였다.
용액 1 + 2 + 3을 혼합하고, 0.45 ㎛ 여과기를 통해 여과한 다음, 2.5시간의 기간 동안 22℃에서 반응하도록 두었다. 이 시점에서 CE(방법 B) 및 Maldi-Tof 분광기는 대략 50%의 hGH 전환율을 보였으며, 이중 희망하는 hGH-유도체(V.)인 생성물을 대략 70% 함유하는 것이 보였다. 반응 혼합물에 30 ml의 2 mM 수성 N-에틸말레이미드(NEM)을 첨가하였다. pH를 8.0으로 조정하였으며, 용액의 완충액을, NEM 2 mM 및 포스페이트 완충액 50 mM, pH 8.0의 1:1 혼합물을 사용하여, 한외여과 (Amicon Ultra 15 (Millipore) 10000 Da 컷-오프 여과기, 3600 RCF, 실온에서, 1/10으로 부피를 감소시킴)함으로써 6회 교환하였다.
(b) 4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3- 비스 ( mPeg (20000)일아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 ) 부티 릴아미노) 에톡시 )- 에톡시 )- 에톡시 )- 에톡시 ) 부탄알 ( VI .)로 N ε141 -(3-( 아미노옥시 ) prop 옥시) hGH (V.)를 옥심화하여 , N ε141 -(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스( mPeg (20000)일- 아미노카르보닐옥시 )-2- 프로필옥시 )- 부티릴아미노 )- 에톡시 )- 에톡 시)- 에톡시 )- 에톡시 ) 부틸리덴 ) 아미노옥시 ) 프로필옥시 ) hGH ( VII .)를 생성시킴.
(a) 단계의 최후의 세척 후, pH를 6.0으로 조정하였다. 10 ml 완충액 중의 180 mg mPEG2-ButyrALD-40K (VI., Nektar 083Y0T01)를 첨가하였다. 반응은 3시간 안에 완성되었다. RP-HPLC (시스템 A) 및 SDS-page 결과, hGH-유도체 V에서 PEG화된 hGH (VII.)로 대략100% 전환되었음을 보여주었다. 반응 완충액을 상기에 기술된 바와 같이 한외여과에 의해 10 mM TRIS 완충액 pH 8.5로 3회 교체하였다.
(c) N ε141 -(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3- 비스 ( mPeg (20000)일- 아미노카르보닐옥시 )-2- 프로필옥시 ) 부티릴아미노 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 부틸리덴 ) 아미노옥시 ) 프로필옥시 ) hGH ( VII .)의 이온 교환 크로마토그래피
10 mM TRIS pH 8.5 (완충액 A) 및 10 mM TRIS pH 8.5 + 200 mM NaCl (완충액 B)을 출발 완충액 및 용리 완충액으로서 각각 사용하여, MonoQ 10/100 음이온 교환 컬럼(Amersham Biosciences) 상에서 조생성물을 정제하였다. 용리는 80분간의 기간 동안 0 내지 100% B의 구배로, 2.0 ml/분의 유속으로 수행하였다. 생성물(VII.)은 대략 24% 완충액 B를 용리하였다. 희망하는 생성물(VII.)을 함유하는 분획을 모으고, 풀로 만들며, 완충액을 50 mM NH4HCO3 완충액 pH 8.0으로 6회 교환한 다음에, 최종적으로 동결건조시켰다.
순수한 생성물(VII.)을 두가지 부산물과 함께 수득하였다: 대략 20%의 이성질체인 위치 Gln-40에서의 PEG화된 hGH, 및 대략 10%의 이량체인 위치 Gln-40 및 Gln-141에서의 PEG화된 hGH. 이들 생성물은 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 분리가능하다. 생성물의 동일성은 펩티드 매핑 실험 및 SDS-PAGE에 의해 측정하였다.
실시예 4
N ε141 -[2-(2-(2,3-비스( mPeg (20000)일옥시) 프로필옥시카르보닐아미노 ) 에틸옥시미노 ) -에틸] hGH 의 제조
Figure 112007093066825-PCT00494
(a), (b) N ε141 -(2- 옥소에틸 ) hGH
Nε141-(2-옥소에틸) hGH (252 mg)를 실시예 1에 기술된 바와 같이 제조하였다.
(c) O-(2-(2,3-( mPeg (20000)일옥시) 프로필옥시카르보닐아미노 )에틸) 하이드록실아민 ( Sunbright GL2 -400 CA , NOF Corp ., Tokyo , Japan )로, N ε141 -(2- 옥소에틸 ) hGH ( III .)를 옥심화시켜 , N ε141 -[2-(2-(2,3-( mPeg (20000)일옥시) 프로필옥시카르보 닐아미노)- 에틸옥시미노 )에틸] hGH 를 생성시킴.
아미노옥시-PEG 유도체(452 mg Sunbright GL2-400 CA , NOF Corp.)를 5.5 ml 완충액(2-(N-모르폴리노)에탄설폰산 (MES), 0.3 M, pH 6.5)에 용해시켰다. 그 다음 산화로부터 농축된 풀을 1.25 ml 얼음으로 냉각시킨 NMP로 희석시키고, PEG 시약 용액에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 2일 동안 천천히 교반하였다.
(d) N ε141 -[2-(2-(2,3-( mPeg (20000)일옥시) 프로필옥시카르보닐아미노 ) 에틸옥시미 노 )에틸] hGH 의 이온 교환 크로마토그래피
탈염 컬럼 (HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01) 및 완충액 A (20 mM trethanolamine, pH 8.5)로 예비평형유지되는 이온 교환 크로마토그래피 (HiLoad 26/10 Q Sepharose HP, Ammersham Biosciences)에 적용된 단백질을 사용하여, (c)로부터의 반응 혼합물을 20 mM 트리에탄올아민 완충액 pH 8.5로 완충액 교환하였다. 그 다음, 완충액 A 중의 0% 내지 100%의 완충액 B 구배로, 10 컬럼 용적으로 5 ml/분의 유속으로 용리하였다. 분획을 280 nm에서의 UV 흡수에 근거하여 모았다. 희밍하는 피크에 해당하는 분획을 풀로 만들었다.
(e) N ε141 -[2-(2-(2,3-( mPeg (20000)일옥시) 프로필옥시카르보닐아미노 ) 에틸옥시미 노)에틸] hGH 의 크기 배제 크로마토그래피
한외여과로 (d)로부터의 풀을 15 ml까지 농축시킨 다음, 탈염 컬럼(HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01)을 사용하여, 50 mM 암모늄 하이드로겐 카보네이트 pH 8.0으로 단백질 완충액을 교환하였다. 단백질을 크기 배제 크로마토그래피 컬럼(HiLoad 26/10 Superdex 200, Amersham Biosciences cat. No. 17-1071-01, 50mM 암모늄 하이드로겐 포스페이트, pH 8.0로 예비평형유지되는 것)에 적용하였다. 그 후 1.0 ml/분의 유속으로 용리하였다. 분획을 280 nm UV 흡광도에 근거하여 모았다.
실시예 5
N ε141 -[2-(O-(2-(2-( mPEG (40000)일옥시) 에틸아미노 )-2- 옥소에틸 ) 옥시미노 )에틸] hGH 의 제조
Figure 112007093066825-PCT00495
(a) 트랜스아민화
hGH (I) (100mg)을 1,3-디아미노프로판-2-올로 트랜스아민화하고, 생성물을 실시예 1 (a) 및 (b)와 유사한 절차를 사용하여 정제하였다. UV 분광기 및 CE 분석 결과에 따르면, 정제로부터 수득된 풀은 30 mg 단백질을 함유하고, 여기에서 20 mg은 hGH (I) (100mg) Nε141-(2-하이드록시-3-아미노프로필) hGH (II)였다.
(b) O-(2-(2-( mPEG (40000k)일옥시) 에틸아미노 )-2- 옥소에틸 ) 하이드록실아민의 합성
Figure 112007093066825-PCT00496
DMF (1 ml) 중의 비스-Boc-아미노옥시아세트산 (0.30 mg, 0.10 mmol)의 용액에, 디이소프로필에틸아민 (0.034 ml, 0.2 mmol), N-하이드록시숙신이미드 (10 mg, 0.1 mmol) 및 디이소프로필카르보디이미드 (0.016 ml, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 15분간 교반하고, 소량의 DCM에 용해시킨 mPeg(40000)-O-(CH2)2-NH2 (Product 008-028, Chirotech Ltd. Cambridge UK, MW 40 kDa, 1.0 g, 0.025 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반한 다음, 생성물을 침전시키고, 디에틸에테르로 세척하였다. 침전물을 0.5 ml DMF 및 1 ml DCM 혼합물에 용해시킨 다음에, 침전시키고, 디에틸에테르로 세척하였다. 이 과정을 1회 더 반복하고, 건조시킨 다음에 770 mg의 침전물을 분리하였다.
200 mg의 건조 침전물을 6 ml DCM에 용해시키고, 5 ml TFA를 첨가하였다. 30분 후에, 혼합물을 회전 증발기에서 농축시키고, 10 ml 에탄올로 2회 스트리핑하였다. 잔여 오일을 0.5 ml DMF 및 2 ml DCM의 혼합물에 재용해시키고, 침전시킨 다음, 디에틸에테르로 세척하였다. 이 과정을 1회 더 반복하고, 침전된 PEG 유도체를 건조시킨 다음, 1 ml 완충액에 용해시켰다(0.3 M MES, pH 6.5).
(a)에서 얻어진 트랜스아민화된 생성물을 완충액(20 mM 트리에탄올아민, pH 8.5) 중에 용해시키고, 3-(메틸티오)-1-프로판올 (1 ml의 683 mM 용액)을 첨가하였다. 그 다음 소듐페리오데이트(5 mg, 10 eq.)를 첨가한 다음에 혼합물을 30분 동안 반응하게 둔 다음, 메싸이오닌 수용액(168 mM)으로 3회 세척한 다음에, 한외여과 장치(Amicon Ultra-15, Millipore)를 사용하여 4.5 ml까지 농축시켰다. 그 다음 0.5 ml의 얼음에서 냉각시킨 N-메틸-피롤리돈을 첨가하고, PEG 유도체 용액에 이를 천천히 첨가하였으며, 혼합물을 밤새 반응하도록 두었다.
반응 혼합물의 완충액을 탈염 컬럼(HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01, 완충액(tris 10 mM, pH 8.5)으로 예비평형유지되고 용리되는 것)에서 교환하였고, 풀은 10 mM Tris pH 8.5로 예비평형유지되는 이온 교환 컬 럼(HiLoad 26/10 QSepharose, Amersham Biosciences cat. No. 17-1066-01)에 적용하고, 10 컬럼 용적에 걸쳐 4 ml/분의 유속으로 10 mM Tris ph 8.5 중의 0.2M NaCl의 구배로 용리하였다. RP-HPLC에 따라 PEG화된 hGH를 함유하는 분획을 풀로 만들고, 완충액을 완충액(암모늄 비카보네이트 50 mM, pH 8.5)으로 예비평형유지되고 용리되는 컬럼인 탈염 컬럼 (HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01) 상에서 교환하였다. 풀을 동결건조하였다. 표적 화합물의 수율은 3.25 mg이었다.
실시예 6
N ε141 -[2-(3-(4-((1,3- 비스 ( mPeg (30000)일아미노카르보닐옥시)-2- 프로필옥시 )- 부틸리덴 ) 아미노옥시 ) 프로필옥시이미노 )에틸] hGH ( VII .)의 제조
Figure 112007093066825-PCT00497
hGH (100 mg)를 완충액(7 ml, 모노-나트륨 포스페이트 125 mM, pH 6.0). 1,3- 비스-아미노옥시프로판 중에 용해시켰다. 2HCl(5.0 ml 125 mM 모노나트륨 포스페이트 중의 2.0 g, pH 6.0으로 조정)을 첨가하고, 마지막으로 TGase (Activa WM, Ajinomoto, 2 ml 모노-나트늄 포스페이트 125 mM 중의 30 mg, pH 6.0)를 첨가한 다음에, 모노-나트륨 포스페이트 완충액(125 mM, pH 6.0)을 사용하여 부피를 30 ml로 조정하였다.
37℃에서 4시간 후에, NEM (100 ul, 100mM NEM)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 1시간 후에, 37℃에서, 과량의 비스-아미노옥시프로판을 제거한 다음에, 완충액(Tris 10 mM, pH 8.5)으로 예비평형유지되는 탈염 컬럼(HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01) 상에서 완충액을 교환하였다.
단백질 함유 풀(82 mg 단백질을 함유하는 32 ml)에 60 kDa 2-암(arm) PEG 알데하이드(Nektar, 083Y0V01 MPEG2-BUTYRALD-60K, 10 ml 물 중의 800mg)의 용액을 한방울씩 첨가하였다. 실온에서 밤새 인큐베이팅한 후에, 완충액을 탈염 컬럼(HiPrep 26/10 Amersham Biosciences cat. No. 17-5087-01)에서 10 mM Tris pH 8.5로 4부 교환하였다. 합쳐진 단백질 함유 풀을 10 mM Tris pH 8.5로 평형유지되는 MonoQ 10/100 GL 컬럼에 3부 적용하고, 10 mM Tris pH 8.5 중의 0.2M NaCl의 구배로, 4 ml/분의 유속 및 20 컬럼 용적으로 용리하였다. 표적 화합물을 함유하는 분획을 모으고, 상기와 같이 완충액을 교환하며 다시 크로마토그래피하였다. 마지막으로 표적 화합물을 함유하는 분획을 풀로 만들고, 그 풀을 50 mM 암모늄 비카보네이트로 예비평형유지되고 용리되는 HiLoad 26/60 Superdex 200 PG 겔 여과 컬럼(Amersham Biosciences cat. No. 171071-01)에 적용하였다. 표적 화합물을 함유하는 분획을 풀로 만들어 동결건조시켰다. 수율은 희망하는 생성물 35.74 mg이었다.
약리학적 방법
분석방법 (I) 인 비트로 성장 호르몬 활성을 측정하기 위한 BAF hGH -R 분석 방법
BAF hGH-R 분석방법은 인 비트로 증식 분석방법으로서, 여기에서 BAF-3 세포는 성장 및 생존을 성장 호르몬(GH)에 의존하도록 변형시킨 것이다. BAF-3은 영구(immortalized) 쥣과 골수 유래 프로-B 세포주이다. 원래는 BAF-3은 성장 및 생존을 IL-3에 의존한다. IL-3 신호전달은, 먼저 하나의 IL-3 분자가 결합하여 두개의 IL-3 수용체로 이량체화될 때 시작된다. 이것은 JAK-2/STAT 신호전달 경로를 환성화시키고, 이에 의해 성장 및 생존에 중요한 유전자의 전사를 조절하게 된다. GH-수용체(GH-R)는 IL-3R과 동일한 수용체 수퍼패밀리(사이토카인/헤마토포이에틴 수용체 수퍼패밀리)에 속하고, 동일한 세포내 JAK/STAT 신호전달 경로를 공유한다. 그러므로, 인간 GH-R이 BAF-3 세포주로 형질감염되면, 세포주는 GH-의존성 세포주로 바뀌게 되는 것이다. 세포주는, 인간 GH 또는 화합물의 농도가 첨가되어 증가됨에 따라서 성장을 용량 의존적으로 자극하는 것으로 밝혀졌다.
BAF hGH-R 분석방법은 24시간 동안 37℃에서 5% CO2에 대해서 hGh에 대한 세포를 기근시킴으로써(hGh 없는 배양 배지) 시작된다. 세포를 원심분리하고, 배지를 제거한 다음에, 세포를 기근 배지에 재현탁시킨다. 20.000 세포/웰을 마이크로적정 플레이트(96웰 NUNC TC microwell 96F SI w/lid NUNCLON D cat. No. 167008)에 심는다. 인간 GH(상이한 농도) 또는 시험 화합물(상이한 농도)을 세포에 첨가하고, 플레이트를 68시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이팅한다.
세포의 대사 활성을 AlamarBlue®(BioSource cat no Dal 1025)에 의해 측정 하였다. AlamarBlue는 산화환원반응의 지시자인데, 이는 세포내 대사반응에 의해 본래적으로 환원되고, 이에 따라 가능한 세포수를 간접적으로 제공해 준다. AlamarBlue®를 각 웰에 첨가하고, 세포를 4시간 더 인큐베이팅하였다. 흡광도를 형광 플레이트 판독기에서 544 nM의 발광 필터 및 590 nM의 방출 필터를 사용하여 측정하였다.
샘플의 흡광도를 GH/시험 화합물의 농도에 따라 플롯팅하였다. 용량-반응 곡선으로부터, EC50 수치 (최대 반응의 절반을 유발시키는 GH/시험 화합물의 양)로 표현되는 능력을 계산할 수 있다. 또한, 시험 화합물의 상대적인 인 비트로 활성은 EC50(화합물)/EC50(hGH)로 정의되는 비율로서 설명할 수 있다. 상기의 비율이 1인 것은, 시험 화합물이 인간 GH에 비해 능력이 낮다는 것을 의미한다.
표 1은 실시예에 기술된 바와 같은 화합물에 대한 결과를 제시한다.
BAF hGH -R 분석방법으로 측정한, 실시예에 기술된 상이한 hGH 화합물의 인 비트로 상대적인 능력. 모든 수치는 평균 ± SD 로 나타냄
각 실시예로부터의 화합물 비율 EC50(화합물)/EC50(hGH) [평균 ± SD]
실시예 1 10 ±5
실시예 2 6 ±2
실시예 3 9 ±1
실시예 4 10 ±4
실시예 5 7 ±2
실시예 6 20 ±6
약물 동력학
실시예의 화합물의 약물동력학에 대해서, 정맥내(i.v.) 및 피하(s.c.) 단일 용량 투여한 후, 수컷 Spraque Dawley 래트에서 연구하였다.
pH를 8.2로 조정한, 글리신 20 mg/ml, 마니톨 2 mg/ml, NaHCO3 2.5 mg/ml로 구성되는 희석 완충액 중에서, 최종 농도 1 mg/ml까지 시험 화합물을 희석시켰다.
시험 화합물을 체중이 250 g인 수컷 Spraque Dawley 래트에서 연구하였다. 시험 화합물을 꼬리 정맥에 i.v 또는 목에 s.c.로, 25G 바늘로, 1 mg/kg 체중의 용량으로, 단일 주사로서 투여하였다.
각 시험 화합물에 대해서, 표 2에 제시된 하기의 스케쥴에 따라 혈액 샘플링을 수행하였다.
각 시험 화합물에 대한 혈액 샘플링 스케쥴
샘플링 시간(h)
동물번호 RoA 사전투여 0.08 0.25 0.5 1 2 4 6 8 18 24 48 72
1 s.c. X X X X X X
2 X X X X X X
3 X X X X
4 X X X X
5 X X
6 X X
7 i.v. X X X X X X X
8 X X X X X X X
9 X X X
10 X X X
각각의 채취시, 25 G 바늘을 사용하여 0.25 ml의 혈액을 꼬리 정맥으로부터 뽑았다. 혈액을 EDTA 코팅된 시험관에 샘플링하고, 1200 x G로 10분간 4℃에서 원심분리하기 전까지 얼음 위에 보관하였다. 혈장을 마이크로닉 튜브에 옮기고, 분석하기 전까지 -20℃에 보관하였다.
시험 화합물 농도는 캐쳐로 기니아 피그 항-hGH 폴리클로날 항체를 사용하고, 검출자로 비오틴화된 hGH 결합 단백질(인간 GH 수용체의 가용성 부분)을 사용하여, 샌드위치 ELISA에 의해 측정하였다.
WinNonlin Professional (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)을 사용하여, 각 시험 화합물의 평균 농도-시간 프로파일에 대해, 비-분획화 약물동력학 분석을 수행하였다. 최종 반감기(t1 /2) 및 평균 체류 시간(MRT)의 약물동력학적 매개변수 추정값은 표 3에 제시된다.
단일 용량 i.v. 및 s.c. 투여 후의, Spraque Dawley 래트에서 , 실시예의 hGH 화합물의 반감기( t 1 /2 ) 및 평균 체류 시간( MRT )
하기 실시예로부터의 화합물 RoA t1 /2(h) MRT (h)
실시예 1 i.v. 8.3 12.7
실시예 2 i.v. 10.6 6.4
실시예 4 i.v. 4.7 9.6
실시예 6 i.v. 7.3 13.1
SEQUENCE LISTING <110> Novo Nordisk <120> TGase mediated conjugation og growth hormone <130> 7217.204 WO <160> 1 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 191 <212> PRT <213> human growth hormone <400> 1 Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg 1 5 10 15 Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu 20 25 30 Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro 35 40 45 Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg 50 55 60 Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu 65 70 75 80 Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val 85 90 95 Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp 100 105 110 Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu 115 120 125 Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser 130 135 140 Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr 145 150 155 160 Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe 165 170 175 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe 180 185 190

Claims (56)

  1. 적어도 하나의 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드에 PEG를 공유결합적으로 부착시키기 위한 방법으로서, 상기 방법은 트랜스글루타미나제의 존재하에, 화학식 [I]에 의해 나타내어지는 글루타민 잔기를 포함하는 폴리펩티드를, 화학식 [II]의 질소 함유 친핵체와, 하나 이상의 단계에서 반응시켜 화학식 [III]의 트랜스아민화된 폴리펩티드를 형성시키는 단계와;
    Figure 112007093066825-PCT00498
    [I]
    (상기 식에서 PP는 폴리펩티드에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득된 폴리펩티드 라디칼을 나타낸다.)
    H2N-D-R-X
    [II]
    (상기 식에서 D는 -O- 또는 단일결합을 나타내고;
    R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-, 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
    X는 -O-NH2, 알데하이드, 케톤, 또는 추가의 반응시 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타낸다.)
    Figure 112007093066825-PCT00499
    [III]
    이 때 임의선택적으로는 X가 숨은 기인 경우, 상기 숨은 기를 -O-NH2, 알데하이드 또는 케톤으로 전환시키는 단계도 포함하고,
    상기 트랜스아민화된 폴리펩티드를 화학식 [IV]의 제 2 화합물과 추가로 반응시켜, 화학식 [V]의 PEG화된 폴리펩티드, 또는 이의 임의의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물을 형성시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
    Y-Z
    [IV]
    (여기에서 Y는,
    X가 알데하이드, 케톤 또는 추가의 반응시 알데하이드 또는 케톤으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, -O-NH2를 나타내거나, 또는
    X가 -O-NH2, 또는 추가의 반응시 -O-NH2으로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 경우, 알데하이드 또는 케톤을 나타내고; 그리고
    Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타내며:
    Figure 112007093066825-PCT00500
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00501
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00502
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00503
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00504
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00505
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00506
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00507
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00508
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00509
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00510
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00511
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00512
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00513
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00514
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00515
    .
    Figure 112007093066825-PCT00516
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00517
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00518
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
    다만 Z가
    Figure 112007093066825-PCT00519
    인 경우, PEG는 10 kDa PEG이다.)
    Figure 112007093066825-PCT00520
    [V]
    (상기 식에서, A는 옥심 결합을 나타낸다.)
  2. 제 1 항에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 5 항에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 6 항에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
    Figure 112007093066825-PCT00521
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00522
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00523
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00524
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00525
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00526
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00527
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00528
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00529
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00530
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00531
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00532
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00533
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00534
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00535
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00536
    .
    Figure 112007093066825-PCT00537
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00538
    , 또는
    Figure 112007093066825-PCT00539
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
    다만 Z가
    Figure 112007093066825-PCT00540
    인 경우, PEG는 10 kDa PEG인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 알데하이드 또는 추가의 반응시 알데하이드를 형성할 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 -O-NH2를 나타내고, X는 케톤 또는 추가의 반응시 케톤을 형성할 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물:
    Y-Z
    [IV]
    은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
    Figure 112007093066825-PCT00541
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00542
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00543
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00544
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00545
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00546
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00547
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00548
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00549
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00550
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00551
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00552
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00553
    ,
    상기 식에서 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 알데하이드를 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물
    Y-Z
    [IV]
    은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
    Figure 112007093066825-PCT00554
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00555
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00556
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00557
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00558
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00559
    ,
    상기 식에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 의미하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 케톤을 나타내고, X는 -O-NH2 또는 추가의 반응시 -O-NH2로 전환될 수 있는 숨은 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 14 항에 있어서, 화학식 [IV]의 화합물:
    Y-Z
    [IV]
    은 하기 중에서 선택되는 화합물을 나타내고;
    Figure 112007093066825-PCT00560
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00561
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00562
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00563
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00564
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00565
    ,
    상기 식에서, 달리 언급하지 않는 한, mPEG는 10 kDa, 20 kDa 또는 30 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 의미하고, PEG는 2 kDa 내지 5 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 [II]의 화합물:
    H2N-D-R-X
    [II]
    은 1,3-디아미노-2-프로판올을 나타내고, Y는 -O-NH2를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 [II]의 화합물:
    H2N-D-R-X
    [II]
    은 1,3-디아미노옥시 프로판을 나타내고, Y는 알데하이드를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 성장 호르몬에 PEG를 공유결합적으로 부착시키는 것을 포함하는, 성장 호르몬의 약리학적 성질을 변형시키는 방법.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 19 항에 있어서, 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬은 인간 성장 호르몬을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 20 항에 있어서, 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬은 하기 a) 내지 e):
    a) SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH,
    b) 20 kDa hGH,
    c) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH,
    d) SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH,
    e) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서, 그리고 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기에서 각각 결실되었거나 다른 아미노산으로 치환된 hGH를 나타내고, 글루타민 잔기는 성장 호르몬의 또다른 위치에도 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 21 항에 있어서, 성장 호르몬은 hGH를 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 화학식 [V]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물로서:
    Figure 112007093066825-PCT00566
    [V]
    상기 식에서 PP는 폴리펩티드내에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
    D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
    R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
    A는 옥심 결합을 나타내며;
    Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타내며:
    Figure 112007093066825-PCT00567
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00568
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00569
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00570
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00571
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00572
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00573
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00574
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00575
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00576
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00577
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00578
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00579
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00580
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00581
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00582
    .
    Figure 112007093066825-PCT00583
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00584
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00585
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
    다만, Z가
    Figure 112007093066825-PCT00586
    인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하 는 화합물.
  24. 제 23 항에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  25. 제 23 항에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  26. 제 23 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  27. 제 23 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 제 27 항에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 제 28 항에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 제 23 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
    Figure 112007093066825-PCT00587
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00588
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00589
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00590
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00591
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00592
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00593
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00594
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00595
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00596
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00597
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00598
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00599
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00600
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00601
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00602
    .
    Figure 112007093066825-PCT00603
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00604
    , 또는
    Figure 112007093066825-PCT00605
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고 PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
    다만 Z가
    Figure 112007093066825-PCT00606
    인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
  31. 제 23 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  32. 제 31 항에 있어서, GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH 중에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 제 31 항에 있어서, GH는 20 kDa hGH에 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  34. 제 31 항에 있어서,
    GH는
    a) SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기, 또는
    b) SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
    또는
    GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 이때 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환되었거나;
    또는
    GH는 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 이때 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환되었거나;
    또는
    GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치와는 다른 위치 및 SEQ ID No. 1의 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40에 해당하는 위치의 글루타민 잔기 및 SEQ ID No. 1의위치 141에 해당하는 위치의 글루타민 잔기는 각각 결실되었거나 또다른 아미노산으로 치환된 것을 특징으로 하는 화합물.
  35. 하기로부터 선택되는, 제 23 항에 따른 화합물:
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리디엔}아미노옥시)prop-1-일 옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티 릴}아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에 틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일)prop-1-일옥시)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41/40-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ1 41-3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로 필옥시 hGH;
    N δ1 41-3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ1 41-2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노-부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(mPEG(10k)일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(10k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(10k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아 미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(mPEG(10k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({3-(mPEG(10k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(10k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(20k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥 시)-부티릴아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(mPEG(20k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({3-(mPEG(20k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴}-아미노부틸)-옥시미노)-에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{3-(mPEG(30k)일옥시)프로피오닐}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부티릴}아미노부틸)옥시 미노)에틸 hGH;
    N δ40 -2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)일옥시-5-옥소펜타노일}아미노부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)-부티릴-아미노)-에톡시)-에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴}아미노옥시)prop-1-일옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(1,3-비스(mPEG(30k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부틸리덴}-아미노옥시)-프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(mPEG(30k)일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)부틸리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({3-(mPEG(30k)일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-(O-(2-(3-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)프로필옥시)프로필아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N δ40 -3-({4-(2,3-비스(mPEG(30k)일옥시)prop-1-일옥시)프로필리덴}아미노옥시)프로필옥시 hGH;
    N δ40 -3-({4-{(2,3-비스(mPEG(20k)일옥시)prop-1-일)PEG일옥시}부틸리덴}아미노옥시) 프로필옥시 hGH;
    N δ40 -2-((4-(4-((2,3-비스(mPEG(20k)일)프로필)PEG일옥시)부티릴아미노)부틸)옥시미노)에틸 hGH;
    N ε141-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)부틸)-옥시이미노)에틸] hGH;
    N ε141-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
    N ε141-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
    N ε141-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
    N ε141-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
    N ε141-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
    N ε141/40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)옥시이미노)에틸] hGH;
    N ε141/40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
    N ε141/40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
    N ε141/40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
    N ε141/40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
    N ε141/40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)프로필옥시이미노)에틸] hGH;
    N ε40-[2-O-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부티릴아미노)부틸)-옥시이미노)-에틸] hGH;
    N ε40-[2-(O-(4-(4-(mPEG(30K)옥시)부티릴아미노)-부틸)옥시이미노)-에틸] hGH;
    N ε40-(3-((4-(2-(2-(2-(2-(4-(1,3-비스(mPEG(20K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)-부티릴-아미노)에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)부틸리덴)아미노옥시)프로필옥시) hGH ;
    N ε40-[2-(2-(2,3-(mPEG(20K)일옥시)프로필옥시카르보닐아미노)에틸옥시미노)에틸] hGH;
    N ε40-[2-(O-(2-(2-(mPEG(40K)일옥시)에틸아미노)-2-옥소에틸)옥시미노)에틸] hGH;
    N ε40-[2-(3-(4-((1,3-비스(mPEG(30K)일아미노카르보닐옥시)-2-프로필옥시)부틸리덴)-아미노옥시)-프로필옥시이미노)에틸] hGH;
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00608
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00609
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00610
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00611
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00612
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00613
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00614
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00615
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00616
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00617
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00618
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00619
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00620
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00621
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00622
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00623
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00624
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00625
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00626
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00627
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00628
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00629
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00630
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00631
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00632
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00633
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00634
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00635
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00636
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00637
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00638
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00639
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00640
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00641
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00642
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00643
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00644
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00645
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00646
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00647
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00648
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00649
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00650
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00651
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00652
    ;
    Figure 112007093066825-PCT00653
    ; 및
    Figure 112007093066825-PCT00654
    .
  36. 하기 화학식 [VI]에 따른 화합물, 및 이의 약학적으로 수용가능한 염, 프로드러그 또는 용매화합물로서:
    Figure 112007093066825-PCT00655
    [VI]
    여기에서, PP는 폴리펩티드내에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 폴리펩티드 라디칼을 나타내고;
    D는 -O- 또는 결합을 나타내며;
    R은 C1 - 6알킬렌, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2- 또는 C5-15헤테로알킬렌을 나타내며;
    A는 옥심 결합을 나타내며;
    Z는 하기 중에서 선택되는 잔기를 나타내며:
    Figure 112007093066825-PCT00656
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00657
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00658
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00659
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00660
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00661
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00662
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00663
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00664
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00665
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00666
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00667
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00668
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00669
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00670
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00671
    .
    Figure 112007093066825-PCT00672
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00673
    , 및
    Figure 112007093066825-PCT00674
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며,
    다만 Z가
    Figure 112007093066825-PCT00675
    인 경우, mPEG는 10 kDa mPEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 제 36 항에 있어서, D는 -O-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  38. 제 36 항에 있어서, D는 단일 결합을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  39. 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- 또는 -(CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  40. 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, R은 C1 - 6알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  41. 제 40 항에 있어서, R은 C1 - 3알킬렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제 41 항에 있어서, R은 메틸렌 또는 프로필렌을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제 36 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 하기를 나타내고:
    Figure 112007093066825-PCT00676
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00677
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00678
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00679
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00680
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00681
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00682
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00683
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00684
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00685
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00686
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00687
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00688
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00689
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00690
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00691
    .
    Figure 112007093066825-PCT00692
    ,
    Figure 112007093066825-PCT00693
    , 또는
    Figure 112007093066825-PCT00694
    ;
    상기 식에서, 달리 언급하지 않은 한, mPEG는 5 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 갖는 mPEG를 나타내고, PEG는 1 kDa 내지 10 kDa의 분자량을 갖는 PEG를 나타내며;
    다만 Z가
    Figure 112007093066825-PCT00695
    인 경우, PEG는 10 kDa PEG인 것을 특징으로 하는 화합물.
  44. 제 36 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 글루타민 잔기를 포함하는 성장 호르몬이고, PP는 성장 호르몬에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 성장 호르몬 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  45. 제 44 항에 있어서, GH는 SEQ ID No.1의 아미노산 서열을 포함하는 hGH 중에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  46. 제 44 항에 있어서, GH는 20 kDa hGH에 존재하는 두개의 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  47. 제 44 항에 있어서,
    GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬, 및 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
    또는
    GH는 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼(이때 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환된 것이다), 및 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
    또는
    GH는 SEQ ID No.1의 위치 141에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼(이때 SEQ ID No.1의 위치 40에 해당하는 위치에 있는 글루타민 잔기는 결실되었거나, 또다른 아미노산으로 치환된 것이다), 및 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 위치 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 존재하는 다른 글루타민 잔기의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내거나,
    또는
    GH는 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치와는 다른 위치에서 hGH에 존재하는 두개의 글루타민의 곁사슬로부터 -C(=O)-NH2를 제거함으로써 수득되는 라디칼을 나타내는데, 여기에서 SEQ ID No. 1의 위치 40 및 141에 해당하는 위치에 존재하는 임의의 글루타민 잔기는 결실되었거나, 다른 아미노산으로 치환된 것을 특징으로 하는 화합물.
  48. PEG, 더욱 구체적으로는 mPEG를 포함하는 잔기에 공유결합적으로 부착되어 있는 인간 성장 호르몬으로서, 상기 PEG를 포함하는 잔기는 인간 성장 호르몬의 글루타민 잔기 40의 곁사슬에, 글루타민 141의 곁사슬에, 또는 글루타민 40 및 글루타민 141의 곁사슬에 부착된 것으로서, 단 하기는 아닌 것을 특징으로 하는 인간 성장 호르몬:
    Nε141-[2-(4-(4-(mPEG(20k)일부타노일)-아미노-부틸옥시아미노)-에틸] hGH,
    Nε141-[2-(1-(헥사데카노일)피페리딘-4-일)에틸옥시아미노)-에틸] hGH,
    Nε141(2-(4-(4-(1,3-비스(mPEG(20k)일아미노카르보닐옥시)prop-2-일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
    Nε141(2-(4-(2,6-비스(mPEG(20k)일옥시카르보닐아미노)헥사노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
    Nε141(2-(4-(4-(mPEG(30k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH,
    Nε141(2-(4-(4-(mPEG(20k)일옥시)부티릴아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH, 또는
    Nε141(2-(4-(3-(mPEG(30k)일옥시)프로파노일아미노)부틸옥시이미노)에틸) hGH.
  49. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 방법의 사용에 의해 수득된 화합물.
  50. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 방법의 사용에 의해 수득될 수 있는 화합물.
  51. 제 19 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 방법의 사용에 의해 수득된 화합물.
  52. 제 19 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 따른 방법의 사용에 의해 수득될 수 있는 화합물.
  53. 제 31 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항, 제 44 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항, 제 51 항, 또는 제 52 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 치료시 용도.
  54. 제 31 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항, 제 44 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항, 제 51 항, 또는 제 52 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 약학적 조성물.
  55. 성장호르몬 결핍증(GHD); 터너증후군; Prader-Willi 증후군(PWS); Noonan 증후군; 다운증후군; 만성신장질병, 소아 류마티스성 관절염; 낭포성 섬유증, HAART 치료를 받은 유아에서의 HIV-감염(HIV/HALS 유아); 제태기간에 비해 저체중아 (SGA); 극저출생시 저체중아(VLBW)로서 SGA가 아닌 것; 골격 형성장애; 연골형성저하증; 연골무형성증; 특발성 저신장(ISS); 성인에서의 GHD; 긴뼈, 예컨대 경골, 비골, 대퇴골, 상박골, 요골, 척골, 쇄골, 마타카피아, 마타타시아 및 손가락뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 스폰지성 뼈, 예컨대 두개골, 손바닥뼈, 베이스 오브 푸드뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 예를 들면, 손, 무릎, 또는 어깨의 힘줄이나 인대 수술 후의 환자; 정신착란 골형성을 앓거나 진행중인 환자; 골반 또는 디스크 교체, 관절반달 교체, 척수 융합 또는 인공삽입물 고정, 예컨대 무릎, 골반, 어깨, 팔꿈치, 허리 또는 턱과 같은 곳에서의 고정 후의 환자; 조골 물질, 예컨대 못, 나사 및 판이 고정된 환자; 골절 후 교합이 되지 않았거나 잘못 교합된 환자; 골종, 예컨대 경골이나 첫번째 발가락 뼈의 골종 후의 환자; 그래프트 이식 후의 환자; 외상이나 관절염 유발성 무릎내 관절 연골의 퇴화; 터너증후군을 가진 환자에서 골다공증; 남성 골다공증; 성인 만성 투석 환자(APCD); APCD에서 영양결핍성 혈관 질병; APCD에서 카켁시아의 반복; APCD에서 암; APCD에서 만성 폐질환; APCD에서 HIV; APCD를 앓는 노인; APCD에서 만성 간 질환, APCD에서 피로 증후군; 크론병; 간기능손상; HIV 감염된 남성; 작은창자 증후군; 중추 비만; HIV-관련 지방이상 증후군(HALS); 남성 불임; 주요 예정 수술 후의 환자, 알콜/약물 탈독소 또는 신경 외상; 노화; 허약한 노인; 뼈관절염; 외상으로 손상입은 연골; 발기부전; 섬유근육통; 기억 이상; 우울증; 뇌 외상; 거미막하부 출혈; 매우 낮은 출생시 체중; 대사증후군; 글루코르티코이드 근육병증; 또는 소아에서 글루코코르티코이드 치료로 인한 저신장증을 치료하고; 근육 조직, 신경 조직 또는 상처의 치료를 가속화하며; 손상 받은 조직의 혈류를 가속화 또는 개선시키며; 손상받은 조직의 감염 속도를 감소시키기 위한 방법으로서, 이 방법은 제 31 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항, 제 44 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항, 제 51 항, 또는 제 52 항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 제 54 항에 따른 약학적 조성물의 치료 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 성장호르몬 결핍증(GHD); 터너증후군; Prader-Willi 증후군(PWS); Noonan 증후군; 다운증후군; 만성신장질병, 소아 류마티스성 관절염; 낭포성 섬유증, HAART 치료를 받은 유아에서의 HIV-감염(HIV/HALS 유아); 제태기간에 비해 저체중아 (SGA); 극저출생시 저체중아(VLBW)로서 SGA가 아닌 것; 골격 형성장애; 연골형성저 하증; 연골무형성증; 특발성 저신장(ISS); 성인에서의 GHD; 긴뼈, 예컨대 경골, 비골, 대퇴골, 상박골, 요골, 척골, 쇄골, 마타카피아, 마타타시아 및 손가락뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 스폰지성 뼈, 예컨대 두개골, 손바닥뼈, 베이스 오브 푸드뼈 내부 또는 이러한 뼈의 골절; 예를 들면, 손, 무릎, 또는 어깨의 힘줄이나 인대 수술 후의 환자; 정신착란 골형성을 앓거나 진행중인 환자; 골반 또는 디스크 교체, 관절반달 교체, 척수 융합 또는 인공삽입물 고정, 예컨대 무릎, 골반, 어깨, 팔꿈치, 허리 또는 턱과 같은 곳에서의 고정 후의 환자; 조골 물질, 예컨대 못, 나사 및 판이 고정된 환자; 골절 후 교합이 되지 않았거나 잘못 교합된 환자; 골종, 예컨대 경골이나 첫번째 발가락 뼈의 골종 후의 환자; 그래프트 이식 후의 환자; 외상이나 관절염 유발성 무릎내 관절 연골의 퇴화; 터너증후군을 가진 환자에서 골다공증; 남성 골다공증; 성인 만성 투석 환자(APCD); APCD에서 영양결핍성 혈관 질병; APCD에서 카켁시아의 반복; APCD에서 암; APCD에서 만성 폐질환; APCD에서 HIV; APCD를 앓는 노인; APCD에서 만성 간 질환, APCD에서 피로 증후군; 크론병; 간기능손상; HIV 감염된 남성; 작은창자 증후군; 중추 비만; HIV-관련 지방이상 증후군(HALS); 남성 불임; 주요 예정 수술 후의 환자, 알콜/약물 탈독소 또는 신경 외상; 노화; 허약한 노인; 뼈관절염; 외상으로 손상입은 연골; 발기부전; 섬유근육통; 기억 이상; 우울증; 뇌 외상; 거미막하부 출혈; 매우 낮은 출생시 체중; 대사증후군; 글루코르티코이드 근육병증; 소아에서 글루코코르티코이드 치료로 인한 저신장증을 치료하고; 근육 조직, 신경 조직 또는 상처의 치료를 가속화하며; 손상 받은 조직의 혈류를 가속화 또는 개선시키며; 손상받은 조직의 감염 속도를 감소시 키는데 사용되는 의약의 제조시, 제 31 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항, 제 44 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항, 제 51 항, 또는 제 52 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
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