KR20070035555A

KR20070035555A - Method for treating lupus

Info

Publication number: KR20070035555A
Application number: KR1020077000108A
Authority: KR
Inventors: 폴 지. 브루네타
Original assignee: 제넨테크, 인크.
Priority date: 2004-06-04
Filing date: 2005-06-02
Publication date: 2007-03-30

Abstract

B-세포 표면 마커와 결합하는 항체의 유효량을, 치료에 적격한 대상체에게 투여하여 특정의 투여 섭생 내에서 항체에 대한 초기 노출 및 후속 노출을 제공해 주는 것을 포함하여, 상기 대상체에게서 루푸스를 치료하는 방법, 및 이를 위한 제조품이 제공된다.A method of treating lupus in a subject, including administering an effective amount of the antibody that binds the B-cell surface marker to a subject eligible for treatment to provide initial and subsequent exposure to the antibody within a particular dosage regimen. , And articles of manufacture are provided therefor.

루푸스, B-세포 표면 마커, CD20 항체, 특수 투여 섭생, 루푸스 신염, 전신성 홍반성 루푸스 Lupus, B-cell surface marker, CD20 antibody, special administration regimen, lupus nephritis, systemic lupus erythematosus

Description

루푸스의 치료 방법 {Method for treating lupus}Method for treating lupus

본 발명은 특수 투여 섭생 및 프로토콜을 사용하여 특정 대상체에게서 루푸스 (lupus)를 치료하는 방법, 및 이러한 사용에 대한 지시사항을 수반하는 키트에 관한 것이다.The present invention relates to methods of treating lupus in certain subjects using special dosing regimens and protocols, and kits with instructions for such use.

루푸스Lupus

자가면역 질환, 특히 예를 들어 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 중증 근무력증 (MG) 및 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP)은 인간에게서 여전히 임상적으로 중요한 질환이다. 자가면역 질환은 그 이름이 암시하는 바와 같이, 자신의 신체 면역계를 통하여 자신을 파괴한다. 자가면역 질환의 개개 유형들 간의 병리적 기전은 상이하지만, 한 가지 일반적인 기전은 환자 혈청 내에 존재하는 특정의 항체 (본원에서 자기-반응성 항체 또는 자기항체로서 지칭됨)가 자기-핵 또는 세포성 항원과 결합하는 것과 관련이 있다.Autoimmune diseases, in particular systemic lupus erythematosus (SLE), myasthenia gravis (MG) and idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP) are still clinically important diseases in humans. Autoimmune diseases, as the name suggests, destroy themselves through their body's immune system. Although the pathological mechanisms between the individual types of autoimmune disease are different, one common mechanism is that certain antibodies (herein referred to as self-reactive antibodies or autoantibodies) present in patient serum are self-nuclear or cellular antigens. Is associated with

루푸스는 결합 조직을 공격하는 항체와 관련된 자가면역 질환이다. 이러한 질환은 거의 1백만 미국인들에게 발생하는 것으로 추정되는데, 주로 20세 내지 40세 여성에게서 발병한다. 루푸스의 주요 형태는 전신성으로 나타난다 (전신성 홍반성 루푸스: SLE). SLE는 순환성 면역 복합체인 항핵 항체의 생성과, 보체 시스 템의 활성화와 연관이 있다. SLE는 20세 내지 60세 여성 700명 중의 1명 꼴로 발병한다. SLE는 모든 기관 시스템에서 발생할 수 있고 중증의 조직 손상을 유발시킬 수 있다. 상이한 특이성의 수 많은 자기항체가 SLE에 존재한다. SLE 환자는 항-DNA, 항-Ro, 및 항-혈소판 특이성을 지닌 자기항체를 생성시키기도 하고, 사구체신염, 관절염, 장막염, 신생아의 완전 심장차단, 및 혈액학적 이상과 같은 질환의 임상적 특징을 개시할 수 있다. 이들 자기항체는 중추 신경계 장애와 관계가 있는 것으로 또한 추정된다. 문헌 [참고: Arbuckle et al. N. Engl. J. Med. 349 (16): 1526-1533 (2003)]에는 SLE가 임상적으로 나타나기 전에 자기항체가 발생하였다고 기재되어 있다.Lupus is an autoimmune disease associated with antibodies that attack connective tissue. The disease is estimated to occur in nearly one million Americans, mostly in women aged 20 to 40. The main form of lupus is systemic (systemic lupus erythematosus: SLE). SLE is associated with the production of antinuclear antibodies, circulating immune complexes, and the activation of complement systems. SLE affects one in 700 women aged 20 to 60 years. SLE can occur in all organ systems and can cause severe tissue damage. Many autoantibodies of different specificity are present in SLE. SLE patients also produce autoantibodies with anti-DNA, anti-Ro, and anti-platelet specificity, and clinical features of diseases such as glomerulonephritis, arthritis, meningitis, neonatal complete heart block, and hematological abnormalities. May be initiated. These autoantibodies are also believed to be associated with central nervous system disorders. See Arbuckle et al. N. Engl. J. Med . 349 (16): 1526-1533 (2003) describe autoantibodies occurring before SLE is clinically manifested.

루푸스를 치료하지 않으면, 이는 피부와 관절 공격에서부터 내부 장기 (기관), 예를 들어 폐, 심장 및 신장 공격으로 진행되기 때문에 치명적일 수 있다 (그 중에서도 신장 질환이 가장 우려된다). 루푸스는 주로, 그의 돌연한 재발이 연달이 일어나며, 그 사이에는 질병 징후가 거의 또는 전혀 나타나지 않는다.If lupus is not treated, it can be fatal as it progresses from skin and joint attacks to internal organs (organs), such as lung, heart, and kidney attacks (most of which is kidney disease). Lupus is mainly a series of his sudden recurrences, with little or no signs of disease in between.

소변 중의 단백뇨 양으로써 측정된 신장 손상이, SLE의 병원성과 연관된 가장 급성 손상 부위 중의 하나이고, 이는 이러한 질환 사망률과 발병률의 50％ 이상을 차지한다.Kidney damage, measured as the amount of proteinuria in urine, is one of the most acute areas of injury associated with the pathogenicity of SLE, which accounts for more than 50% of these disease mortality and incidence.

이중 가닥의 본래의 DNA와 면역반응성인 항체가 존재한다는 것이 SLE에 대한 진단 마커로서 사용된다.The presence of antibodies that are immunoreactive with the double stranded native DNA is used as a diagnostic marker for SLE.

현재에는, SLE로 진단된 환자에 대한 확실한 치유법이 없다. 실제적인 관점에서 보면, 의사들은 일반적으로 수 많은 강력한 면역억제제, 예를 들어 고용량의 코르티코스테로이드, 예를 들면 프레드니손, 또는 아자티오프린 또는 시클로포스파미드를 사용하고 있는데, 이는 돌연한 재발이 일어나는 동안에 제공되지만, 돌연한 재발이 자주 발생하는 환자에 대해서는 지속적으로 제공될 수도 있다. 증상들을 경감시키고 수명을 연장시켜 주는 유효한 치료법임에도 불구하고, 이들 약물의 상당 수는 치료받고 있는 환자에게서 잠재적으로 해로운 부작용을 나타낸다. 또한, 이들 면역억제 약물은 자기-반응성 항-DNA 항체가 아닌, 기타 모든 항체를 생성시킬 수 있는 개개인의 능력을 방해한다. 면역억제제는 또한, 기타 잠재적 병원체에 대항한 신체 방어 능력을 약화시킴으로써, 환자가 감염 및 기타 잠재적으로 치명적인 질병 (예를 들어, 암)에 잘 걸리게 한다. 이러한 몇몇 상황 하에서는, 해당 질병 징후가 지속적으로 저수준으로 나타나는 것과 연계된, 현 치료 양식에 있어서의 부작용은 심각한 장해와 조기 사망을 유발시킬 수 있다. 최근의 치료적 섭생에는 시클로포스파미드, 메토트렉세이트, 항말라리아제, 호르몬 치료 (예: DHEA), 및 항호르몬 요법 (예: 항프폴락틴제 브로모크립틴)이 포함된다.At present, there is no definite cure for patients diagnosed with SLE. In practical terms, doctors generally use a number of potent immunosuppressive agents, such as high doses of corticosteroids such as prednisone, or azathioprine or cyclophosphamide, during which sudden recurrences occur. It may be given, but may continue to be provided for patients with frequent recurrences. Although effective treatments relieve symptoms and prolong life, many of these drugs have potentially harmful side effects in the patients being treated. In addition, these immunosuppressive drugs interfere with the individual's ability to produce all other antibodies, but not self-reactive anti-DNA antibodies. Immunosuppressants also weaken the body's ability to defend against other potential pathogens, making the patient susceptible to infection and other potentially fatal diseases (eg cancer). Under some of these circumstances, side effects in current treatment modalities, associated with persistently low levels of the disease's symptoms, can lead to severe disability and premature death. Recent therapeutic regimens include cyclophosphamide, methotrexate, antimalarial agents, hormonal therapies (such as DHEA), and antihormonal therapies (such as the anti-fopolactin bromocriptine).

항체와 관련된 SLE의 치료 방법이 또한 보고되었다. 미국 특허 제4,690,905호 (Diamond et al.)에 기재된 방법은 항-DNA 항체에 대항한 모노클로날 항체 [이러한 모노클로날 항체는 항-개체특이형 (anti-idiotypic) 항체로서 상기 문헌에서 지칭된다]를 생성시킨 다음, 이들 항-개체특이형 항체를 사용하여 환자의 시스템으로부터 병원성 항-DNA 항체를 제거시키는 것을 포함한다. 그러나, 치료를 위해 다량의 혈액을 제거하는 것은 위험할 수 있는 복잡한 과정이다. 미국 특허 제6,726,909호에는 환자에게 투여된 항체 조성물이 정제된 항-DNA 항-개체특이형 항 체를 포함하고, 이러한 투여를 위해서는 주사 투여 방식이나 기타 등가의 투여 방식이 요구되는, SLE를 치료하는 것에 관해 기재되어 있다.Methods of treating SLE associated with antibodies have also been reported. The method described in US Pat. No. 4,690,905 (Diamond et al.) Refers to monoclonal antibodies against anti-DNA antibodies (such monoclonal antibodies are referred to in the literature as anti-idiotypic antibodies). ], Followed by removal of the pathogenic anti-DNA antibody from the patient's system using these anti-idiotypic antibodies. However, removing large amounts of blood for treatment is a complex process that can be dangerous. U. S. Patent No. 6,726, 909 describes a method for treating SLE, wherein the antibody composition administered to the patient comprises a purified anti-DNA anti-idiotypic antibody, which requires an injection or other equivalent mode of administration for such administration. It is described about.

특정의 자가면역 질환을 치료하는데 있어, 고 용량의 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 주입제가 또한 사용되어 왔다. 현재까지도, IVIG를 이용하여 SLE를 치료하는 것은 혼합적인 결과를 가져다 주었는데, 예를 들어 루푸스 신염은 없애주었지만 [참고: Akashi et al., J. Rheumatology 17: 375-379 (1990)], 몇몇 경우에는 단백뇨와 신장 손상을 악화시켰다 [참고: Jordan et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 53:S164-169 (1989)]. In treating certain autoimmune diseases, high doses of intravenous immunoglobulin (IVIG) infusions have also been used. To date, treatment of SLE with IVIG has yielded mixed results, for example, eliminating lupus nephritis (see Akashi et al., J. Rheumatology 17: 375-379 (1990)). Cases worsened proteinuria and kidney damage. See Jordan et al., Clin. Immunol. Immunopathol . 53: S164-169 (1989).

CD20 항체 및 이를 이용한 치료CD20 Antibodies and Therapies Using The Same

림프구는 조혈 과정 동안 골수에서 생성된 많은 유형의 백혈구 중의 하나이다. 림프구에는 2가지 주요 집단이 있다: B 림프구 (B 세포) 및 T 림프구 (T 세포). 본원에서 특히 관심있는 림프구가 B 세포이다.Lymphocytes are one of many types of white blood cells produced in the bone marrow during the hematopoietic process. There are two main populations of lymphocytes: B lymphocytes (B cells) and T lymphocytes (T cells). Lymphocytes of particular interest herein are B cells.

B 세포는 골수 내에서 성숙하여, 그들의 세포 표면 상에 항원-결합성 항체를 발현하는 골수가 되도록 한다. 타고난 본래의 B 세포가 그의 막 결합된 항체에 대해 특이적인 항원과 처음으로 직면하게 되면, 이 세포는 신속하게 분할하기 시작하고 그의 자손은 기억 B 세포와 효과기 세포 ("플라즈마 세포"로 불리운다)로 분화된다. 기억 B 세포는 수명이 더 길고 본래의 모 세포와 동일한 특이성을 지닌 막 결합된 항체를 지속적으로 발현시킨다. 플라즈마 세포는 막 결합된 항체를 생성시키지 않지만, 대신 이러한 항체를 분비될 수 있는 형태로 생성시킨다. 분비된 항체는 체액성 면역의 주요 효과기 분자이다.B cells mature in the bone marrow to allow the bone marrow to express antigen-binding antibodies on their cell surface. When a native native B cell is first encountered with an antigen specific for its membrane bound antibody, the cell begins to divide rapidly and its progeny are called memory B cells and effector cells (called "plasma cells"). Differentiate Memory B cells have a longer lifespan and continue to express membrane bound antibodies with the same specificities as the original parental cells. Plasma cells do not produce membrane bound antibodies, but instead produce such antibodies in a form that can be secreted. Secreted antibodies are the major effector molecules of humoral immunity.

CD20 항원 (인간 B-림프구-제한된 분화 항원인 Bp35로 지칭되기도 함)은 프리 (pre)-B 및 성숙한 B 림프구 상에 위치한, 분자량이 대략 35 kD인 소수성 막관통 단백질이다 [참고: Valentine et al. J. Biol. Chem. 264(19): 11282-11287 (1989); and Einfeld et al. EMBO J. 7(3): 711-717 (1988)]. 상기 항원은 또한, 90％ 초과의 B 세포 비호지킨 림프종 [non-Hodgkin's lymphomas (NHL)] 상에서 발현되지만 [참고: Anderson et al., Blood 63(6): 1424-1433 (1984)], 조혈 줄기 세포, 프로-B 세포, 정상 플라즈마 세포 또는 기타 정상 조직 상에서는 발견되지 않는다 [참고: Tedder et al., J. Immunol. 135(2): 973-979 (1985)]. CD20은 세포 주기 개시 및 분화에 대한 활성화 과정 중의 초기 단계(들)를 조절하고 [Tedder et al, 상기 참고], 칼슘 이온 채널로서 기능하는 것으로 예상된다 [참고: Tedder et al., J. Cell. Biochem 14D: 195 (1990)]. CD20 antigen (also referred to as human B-lymphocyte-limited differentiation antigen Bp35) is a hydrophobic transmembrane protein with a molecular weight of approximately 35 kD, located on pre-B and mature B lymphocytes. See Valentine et al. . J. Biol. Chem . 264 (19): 11282-11287 (1989); and Einfeld et al. EMBO J. 7 (3): 711-717 (1988). The antigen is also expressed on more than 90% of B cell non-Hodgkin's lymphomas (NHL), but sees Anderson et al., Blood 63 (6): 1424-1433 (1984)]. It is not found on cells, pro-B cells, normal plasma cells or other normal tissues. See Tedder et al., J. Immunol . 135 (2): 973-979 (1985)]. CD20 modulates early stage (s) during the activation process for cell cycle initiation and differentiation [Tedder et al, supra], and is expected to function as calcium ion channels [Tedder et al., J. Cell. Biochem 14D: 195 (1990)].

CD20이 B-세포 림프종에서 발현된다면, 이러한 항원은 상기 림프종을 "표적화"하기 위한 후보로서 작용할 수 있다. 본질적으로, 이러한 표적화는 다음과 같이 일반화시킬 수 있다: B 세포의 CD20 표면 항원에 대해 특이적인 항체를 환자에게 투여한다. 이들 항-CD20 항체는 (표면상으로는) 정상 B 세포와 악성 B 세포 둘 다의 CD20 항원과 특이적으로 결합하고; CD20 표면 항원과 결합된 항체는 종양성 (신생) B 세포의 파괴와 고갈을 유발시킬 수 있다. 부가적으로, 종양을 파괴시킬 수 있는 능력을 지닌 화학제 또는 방사성 표지를 항-CD20 항체와 접합시켜, 상기 작용제가 종양성 B 세포에 특이적으로 "전달"되도록 할 수 있다. 이러한 접근법과는 무관하게, 일차적인 목표는 종양을 파괴시키는 것이고; 구체적인 접근법은 활용 되고 있는 특정한 항-CD20 항체에 의해 결정할 수 있으므로, CD20 항원을 표적화하는데 이용 가능한 접근법은 상당히 다양할 수 있다.If CD20 is expressed in B-cell lymphoma, this antigen can serve as a candidate for "targeting" the lymphoma. In essence, this targeting can be generalized as follows: An antibody specific for the CD20 surface antigen of B cells is administered to the patient. These anti-CD20 antibodies specifically bind (surface) CD20 antigens of both normal and malignant B cells; Antibodies bound to the CD20 surface antigen can cause destruction and depletion of neoplastic (neoplastic) B cells. In addition, a chemical or radiolabel with the ability to destroy the tumor may be conjugated with an anti-CD20 antibody such that the agent is specifically "delivered" to the neoplastic B cells. Regardless of this approach, the primary goal is to destroy the tumor; As the specific approach can be determined by the specific anti-CD20 antibody being utilized, the approaches available for targeting the CD20 antigen can vary considerably.

리툭시마브 [rituximab (RITUXAN®)] 항체는 CD20 항원에 대항하여 유도되고 유전 공학적으로 처리시킨 키메라 뮤린/인간 모노클로날 항체이다. 리툭시마브는 1998년 4월 7일자로 허여된 미국 특허 제5,736,137호 (Anderson et al.)에서 "C2B8"로서 지칭된 항체이다. 리툭시마브는 재발되거나 난치성의 저 악성도 또는 소포성이고 CD20-양성인 B 세포 비호지킨 림프종 환자를 치료하는데 사용되고 있다. 시험관내 작용 기전 연구 결과, 리툭시마브는 인간 보체와 결합하고, 보체-의존성 세포독성 (CDC)을 통하여 림프계 B 세포주를 용해시키는 것으로 입증되었다 [참고: Reff et al. Blood 83(2): 435-445 (1994)]. 부가적으로, 이는 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 알아보기 위한 검정에서 상당한 활성을 지니고 있다. 보다 최근에는, 리툭시마브가 삼중 수소 처리된 티미딘 혼입 검정에서 항증식 효과를 나타내고 세포소멸을 직접적으로 유도시키지만, 기타 항-CD19 및 항-CD20 항체는 그렇치 못한 것으로 밝혀졌다 [참고: Maloney et al. Blood 88 (10):637a (1996)]. 리툭시마브와 화학요법제 및 독소 간의 상승 작용이 또한 실험적으로 관찰되었다. 특히, 리툭시마브는 약물-내성 인간 B-세포 림프종 세포주가 독소루비신, CDDP, VP-16, 디프테리아 독소, 및 리신 (ricin)의 세포독성 효과에 감작하도록 한다 [참고: Demidem et al. Cancer Chemotherapy ＆ Radiopharmaceuticals 12(3): 177-186 (1987)]. 생체내 예비임상 연구 결과, 리툭시마브가 아마도 보체 및 세포-매개형 공정을 통하여, 시노몰구스 원숭이(cynomolgus monkeys)의 말초혈, 림프절 및 골수로부터 B 세포를 고갈시키는 것으로 밝혀졌다 [참고: Reff et al. Blood 83(2): 435-445 (1994)].Rituximab (RITUXAN®) antibodies are chimeric murine / human monoclonal antibodies directed against the CD20 antigen and genetically engineered. Rituximab is an antibody referred to as "C2B8" in US Pat. No. 5,736,137 to Anderson et al., Issued April 7, 1998. Rituximab has been used to treat relapsed or refractory low malignant or vesicular and CD20-positive B cell non-Hodgkin's lymphoma patients. In vitro mechanism of action studies have shown that rituximab binds to human complement and lyses lymphoid B cell lines through complement-dependent cytotoxicity (CDC). Reff et al. Blood 83 (2): 435-445 (1994)]. In addition, it has significant activity in assays for detecting antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). More recently, rituximab has been shown to have antiproliferative effects and directly induce apoptosis in tritiated thymidine incorporation assays, while other anti-CD19 and anti-CD20 antibodies have not been found. Maloney et al. Blood 88 (10): 637a (1996). Synergy between rituximab and chemotherapeutic agents and toxins has also been observed experimentally. In particular, rituximab allows drug-resistant human B-cell lymphoma cell lines to sensitize the cytotoxic effects of doxorubicin, CDDP, VP-16, diphtheria toxin, and lysine. Demidem et al. Cancer Chemotherapy & Radiopharmaceuticals 12 (3): 177-186 (1987)]. In vivo preclinical studies have shown that Rituximab depletes B cells from the peripheral blood, lymph nodes and bone marrow of cynomolgus monkeys, possibly via complement and cell-mediated processes. Reff et al. Blood 83 (2): 435-445 (1994)].

리툭시마브는 매주 375 mg/㎡ 용량을 4회분 투여하여, 재발되거나 난치성의 저 악성도 또는 소포성 CD20⁺ B 세포 NHL 환자를 치료하는 것으로 1997년 11월에 미국에서 승인되었다. 2001년 4월에는 식품 의약국 (FDA)이 저 악성도 NHL의 치료에 대한 부가의 청구 사항, 즉 재치료 (매주 4회분 용량을 이용함) 및 부가의 투여 섭생 (매주 8회분 용량을 이용함)을 승인하였다. 300,000명 이상의 환자들이 리툭시마브를 단일 요법으로서 치료받고 있거나, 또는 면역억제제 또는 화학요법제와 병용해서 치료받고 있다. 환자들은 또한, 2년 정도 리툭시마브를 유지 요법으로서 치료받고 있다 [참고: Hainsworth et al. J Clin Oncol 21: 1746-51 (2003); Hainsworth et al. J Clin Oncol 20: 4261-7 (2002)]. Rituximab was approved in the United States in November 1997 to treat relapsed or refractory low malignant or vesicular CD20 ⁺ B cell NHL patients with four doses of 375 mg / m 2 weekly. In April 2001, the Food and Drug Administration (FDA) approved an additional claim for the treatment of low-malignant NHL, namely retreatment (using four doses weekly) and an additional dosing regimen (using eight doses weekly). It was. More than 300,000 patients are being treated with rituximab as a monotherapy or in combination with immunosuppressants or chemotherapeutic agents. Patients are also treated with rituximab as maintenance therapy for about two years. See Hainsworth et al. J Clin Oncol 21: 1746-51 (2003); Hainsworth et al. J Clin Oncol 20: 4261-7 (2002).

리툭시마브는 또한, B 세포와 자기항체가 질병 병리생리학에서 일정 역할을 하는 것으로 여겨지는 각종 비-악성 자가면역 질환에 연구되어 왔다 [참고: Edwards et al., Biochem Soc. Trans. 30:824-828 (2002)]. 리툭시마브는, 예를 들어 류마티스성 관절염 (RA) [참고: Leandro et al., Ann. Rheum. Dis. 61:883-888 (2002); Edwards et al., Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S46 (2002); Stahl et al., Ann. Rheum. Dis., 62 (Suppl. 1): OP004 (2003); Emery et al., Arthritis Rheum. 48(9): S439 (2003)], 루푸스 [참고: Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5/4:157-159 (2003); Leandro et al. Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002); Gorman et al., Lupus, 13: 312-316 (2004)], 면역 혈소판감소성 자반증 [참고: D'Arena et al., Leuk. Lymphoma 44: 561-562 (2003); Stasi et al., Blood, 98: 952-957 (2001); Saleh et al., Semin. Oncol., 27 (Supp 12):99-103 (2000); Zaia et al., Haematolgica, 87: 189-195 (2002); Ratanatharathorn et al., Ann . Int . Med., 133:275-279 (2000)], 진성 적혈구계 무형성증 [참고: Auner et al., Br. J. Haematol., 116: 725-728 (2002)]; 자가면역성 빈혈 [참고: Zaja et al., Haematologica 87:189-195 (2002) (erratum appears in Haematologica 87: 336 (2002))], 저온 응집소 질환 [참고: Layios et al., Leukemia, 15: 187-8 (2001); Berentsen et al., Blood, 103: 2925-2928 (2004); Berentsen et al., Br . J. Haematol., 115: 79-83 (2001); Bauduer, Br. J. Haematol., 112: 1083-1090 (2001); Damiani et al., Br. J. Haematol., 114: 229-234 (2001)], 중증 인슐린 저항성의 유형 B 증후군 [참고: Coll et al., N. Engl. J. Med., 350: 310-311 (2004)], 혼합 한랭글로불린혈증 [참고: DeVita et al., Arthritis Rheum. 46 Suppl. 9: S206/S469 (2002)], 중증 근무력증 [참고: Zaja et al., Neurology, 55: 1062-63 (2000); Wylam et al., J. Pediatr., 143: 674-677 (2003)], 베게너 육아종증 (Wegener's granulomatosis) [참고: Specks et al., Arthritis ＆ Rheumatism 44: 2836-2840 (2001)], 난치성 심상성 천포창 (pemphigus vulgaris) [참고: Dupuy et al., Arch Dermatol., 140: 91-96 (2004)], 피부근염 [참고: Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S1299 (2002)], 쇼그렌 증후군 (Sjogren's syndrome) [참고: Somer et al., Arthritis ＆ Rheumatism, 49: 394-398 (2003)], 활동성 유형- II 혼합 한랭글로불린혈증 [참고: Zaja et al., Blood, 101: 3827-3834 (2003)], 심상성 천포창 [참고: Dupay et al., Arch. Dermatol., 140: 91-95 (2004)], 자가면역성 신경병증 [참고: Pestronk et al., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 74: 485-489 (2003)], 종양연관성 안진전-간대성 근경련증 (paraneoplastic opsoclonus-myoclonus) 증후군 [참고: Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl. 1) P05.128:A395 (2003)], 및 재발-차도 다발성 경화증 (RRMS) [참고: Cross et al. (abstract) "Preliminary results from a phase II trial of rituximab in MS" Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003)]의 징후 및 증상을 잠재적으로 경감시키는 것으로 보고되었다.Rituximab has also been studied in a variety of non-malignant autoimmune diseases in which B cells and autoantibodies are believed to play a role in disease pathology. Edwards et al., Biochem Soc. Trans. 30: 824-828 (2002). Rituximab is described, for example, in rheumatoid arthritis (RA) [Leandro et al., Ann. Rheum. Dis. 61: 883-888 (2002); Edwards et al., Arthritis Rheum ., 46 (Suppl. 9): S46 (2002); Stahl et al., Ann. Rheum. Dis. 62 (Suppl. 1): OP004 (2003); Emery et al., Arthritis Rheum . 48 (9): S439 (2003)], lupus [see: Eisenberg, Arthritis. Res. Ther. 5/4: 157-159 (2003); Leandro et al. Arthritis Rheum . 46: 2673-2677 (2002); Gorman et al., Lupus , 13: 312-316 (2004)], immune thrombocytopenic purpura [D'Arena et al., Leuk. Lymphoma 44: 561-562 (2003); Stasi et al., Blood , 98: 952-957 (2001); Saleh et al., Semin. Oncol. 27 (Supp 12): 99-103 (2000); Zaia et al., Haematolgica , 87: 189-195 (2002); Ratanatharathorn et al., Ann . Int . Med ., 133: 275-279 (2000)], true erythroid aplasia [Auner et al., Br. J. Haematol ., 116: 725-728 (2002); Autoimmune anemia (Zaja et al., Haematologica 87: 189-195 (2002) (erratum appears in Haematologica 87: 336 (2002))), cryoaggregate disease [Layios et al., Leukemia , 15: 187] -8 (2001); Berentsen et al., Blood , 103: 2925-2928 (2004); Berentsen et al., Br . J. Haematol ., 115: 79-83 (2001); Bauduer, Br. J. Haematol ., 112: 1083-1090 (2001); Damiani et al., Br. J. Haematol ., 114: 229-234 (2001)], type B syndrome of severe insulin resistance [Col et al., N. Engl. J. Med ., 350: 310-311 (2004)], mixed cold globulinemia [DeVita et al., Arthritis Rheum . 46 Suppl. 9: S206 / S469 (2002)], myasthenia gravis [Zaja et al., Neurology , 55: 1062-63 (2000); Wylam et al., J. Pediatr ., 143: 674-677 (2003)], Wegener's granulomatosis [Specks et al., Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001)], refractory images Pemphigus vulgaris (see Dupuy et al., Arch Dermatol ., 140: 91-96 (2004)), dermatitis [see: Levine, Arthritis Rheum ., 46 (Suppl. 9): S1299 (2002) ], Sjogren's syndrome [see: Somer et al., Arthritis & Rheumatism , 49: 394-398 (2003)], active type-II mixed cold globulinemia [Zaja et al., Blood , 101: 3827-3834 (2003)], vulgaris celestial lanceolate [Dupay et al., Arch. Dermatol ., 140: 91-95 (2004)], autoimmune neuropathy [Pestronk et al., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry 74: 485-489 (2003)], tumor associated opacity-paraneoplastic opsoclonus-myoclonus syndrome [see Pranzatelli et al. Neurology 60 (Suppl. 1) P05.128: A395 (2003)], and recurrent-driven multiple sclerosis (RRMS) [Cross et al. (abstract) "Preliminary results from a phase II trial of rituximab in MS" Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003)]. .

제II상 연구 (WA16291)를 류마티스성 관절염 (RA) 환자에게서 수행하여, 리툭시마브의 안전성과 효능에 관한 48시간 추적 데이터를 제공하였다 [참고: Emery et al. Arthritis Rheum 48(9):S439 (2003); Szczepanski et al. Arthritis Rheum 48(9):S121 (2003)]. 총 161명 환자를 균등하게 무작위로 분류하여 다음 4가지 처리군으로 나누었다: 메토트렉세이트, 리툭시마브 단독, 리툭시마브 + 메토트렉세이트, 및 리툭시마브 + 시클로포스파미드 (CTX). 리툭시마브의 치료 섭생은 1일 및 15일 째에 1 그램을 정맥내 투여하는 것이다. 리툭시마브를 대부분의 RA 환자에게 주입하는 것을 대부분의 환자들은 잘 견뎌내는데, 이러한 제1 주입 동안 환자의 36％가 한 가지 이상의 불리한 사건을 경험한다 (플라시보를 투여한 환자의 경우에는 30％가 경험한다). 전반적으로 대다수의 불리한 사건들은 중증도 면에서 약하거나 적당한 (중간) 수준인 것으로 간주되며, 모든 처리군들 간에 잘 균형을 이루었다. 48주 동안 상기 4가지 처리군에 대해 총 19개의 중증의 불리한 사건이 발생하였는데, 이는 리툭시마브/CTX 처리군에서 약간 더 자주 발생하였다. 감염 발생률은 모든 처리군 간에 잘 균형을 이루었다. 이러한 RA 환자 집단에서의 평균 중증 감염률은 매년 100명 환자당 4.66명인데, 이는 지역 밀착형 (community-based) 역학적 연구에서 보고된 RA 환자들 중에 입원을 요하는 감염률 (매년 100명 환자당 9,57명) 보다는 낮다 [참고: Doran et al., Arthritis Rheum. 46: 2287-2293 (2002)]. Phase II study (WA16291) was performed in patients with rheumatoid arthritis (RA) to provide 48 hour follow-up data on the safety and efficacy of Rituximab. See Emery et al. Arthritis Rheum 48 (9): S439 (2003); Szczepanski et al. Arthritis Rheum 48 (9): S121 (2003). A total of 161 patients were equally randomized and divided into four treatment groups: methotrexate, rituximab alone, rituximab + methotrexate, and rituximab + cyclophosphamide (CTX). The treatment regimen for rituximab is intravenous administration of 1 gram on days 1 and 15. Most patients tolerate rituximab infusion for most RA patients, with 36% of patients experiencing one or more adverse events during this first infusion (30% for patients receiving placebo). Experience). Overall, the majority of adverse events are considered mild or moderate (medium) at severity and are well balanced among all treatment groups. A total of 19 severe adverse events occurred for the four treatment groups over 48 weeks, which occurred slightly more frequently in the rituximab / CTX treatment group. Infection rates were well balanced between all treatment groups. The average severe infection rate in this population of RA patients is 4.66 per 100 patients per year, which means hospitalization rates among hospitalized RA patients reported in community-based epidemiological studies (9 per 100 patients per year). 57) (see Doran et al., Arthritis Rheum . 46: 2287-2293 (2002).

자가면역성 신경병증 [Pestronk et al., 상기 참고], 안진전-간대성 근경련증 증후군 [Pranzatelli et al., 상기 참고] 및 RRMS [Cross et al., 상기 참고]를 포함한, 소수의 신경 장애 환자에게서 보고된 리툭시마브의 안전성 프로파일은 종양학 또는 RA에서 보고된 바와 유사하였다. 현재 진행 중인 연구자들의 후원 하에 RRMS [Cross et al., 상기 참고] 환자에게서 리툭시마브를 인터페론-β (IFN-β) 또는 글라티라머 아세테이트와 병용한 시험 (IST)에서는, 치료받은 환자 10명 중의 1명이, 리툭시마브를 처음 주입한 후 적당한 수준의 발열과 경직을 경험한 후에 밤새 관찰하기 위해 입원시킨 반면, 나머지 9명의 환자들은 4회 주입 섭생을 완료하였는데, 불리한 사건은 전혀 보고되지 않았다.A small number of neurological disorder patients, including autoimmune neuropathy [Pestronk et al., Supra], nystagmus-myoclonic syndrome [Pranzatelli et al., Supra] and RRMS [Cross et al., Supra] The safety profile of rituximab reported in was similar to that reported in oncology or RA. In the study with rituximab combined with interferon-β (IFN-β) or glatiramer acetate in RRMS [Cross et al., Supra] under the auspices of ongoing researchers, 10 patients treated One of the patients was hospitalized overnight to observe moderate levels of fever and stiffness after the first infusion of rituximab, while the other nine patients completed four infusion regimens with no adverse events reported. .

CD20 항체 및 CD20-결합성 분자에 관한 특허 및 특허 공개공보에는 다음이 포함된다: 미국 특허 제5,776,456호, 제5,736,137호, 제5,843,439호, 제6,399,061호 및 제6,682,734호 뿐만 아니라 US 2002/0197255, US 2003/0021781, US 2003/0082172, US 2003/0095963, US 2003/0147885 (Anderson et al.); 미국 특허 제6,455,043호, US 2003/0026804, 및 WO 2000/09160 (Grillo-Lopez, A.); WO 2000/27428 (Grillo-Lopez and White); WO 2000/27433 및 US 2004/0213784 (Grillo-Lopez and Leonard); WO 2000/44788 (Braslawsky et al.); WO 2001/10462 (Rastetter, W.); WO 2001/10461 (Rastetter and White); WO 2001/10460 (White and Grillo-Lopez); US 2001/0018041, US 2003/0180292, WO 2001/34194 (Hanna and Hariharan); US 2002/0006404 및 WO 2002/04021 (Hanna and Hariharan); US 2002/0012665 및 WO 2001/74388 (Hanna, N.); US 2002/0058029 (Hanna, N.); US 2003/0103971 (Hariharan and Hanna); US 2002/0009444 및 WO 2001/80884 (Grillo-Lopez, A.); WO 2001/97858 (White, C.); US 2002/0128488 및 WO 2002/34790 (Reff, M.); WO 2002/060955 (Braslawsky et al.); WO 2002/096948 (Braslawsky et al.); WO 2002/079255 (Reff and Davies); 미국 특허 제6,171,586호 및 WO 1998/56418 (Lam et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); WO 1999/22764 (Raju, S.); WO 1999/51642 및 미국 특허 제6,194,551호, 제6,242,195호, 제6,528,624호, 및 제6,538,124호 (Idusogie et al.); WO 2000/42072 (Presta, L.); WO 2000/67796 (Curd et al.); WO 2001/03734 (Grillo-Lopez et al.); US 2002/0004587 및 WO 2001/77342 (Miller and Presta); US 2002/0197256 (Grewal, I.); US 2003/0157108 (Presta, L.); WO 04/056312 (Lowman et al.); US 2004/0202658 및 WO 2004/091657 (Benyunes, K.); WO 2005/000351 (Chan, A.); US 2005/0032130A1 (Beresini et al.); US 2005/0053602Al (Brunetta, P.); 미국 특허 제6,565,827호, 제6,090,365호, 제6,287,537호, 제6,015,542호, 제5,843,398호, 및 제5,595,721호 (Kaminski et al.); 미국 특허 제5,500,362호, 제5,677,180호, 제5,721,108호, 제6,120,767호, 및 제6,652,852호 (Robinson et al.); 미국 특허 제6,410,391호 (Raubitschek et al.); 미국 특허 제6,224,866호 및 WO OO/20864 (Barbera-Guillem, E.); WO 2001/13945 (Barbera-Guillem, E.); WO 2000/67795 (Goldenberg); US 2003/0133930 및 WO 2000/74718 (Goldenberg and Hansen); US 2003/0219433 및 WO 2003/68821 (Hansen et al.); W0 2004/058298 (Goldenberg and Hansen); WO 2000/76542 (Golay et al.); WO 2001/72333 (Wolin and Rosenblatt); 미국 특허 제6,368,596호 (Ghetie et al.); 미국 특허 제6,306,393호 및 US 2002/0041847 (Goldenberg, D. ); US 2003/0026801 (Weiner and Hartmann); WO 2002/102312 (Engleman, E.); US 2003/0068664 (Albitar et al.); WO 2003/002607 (Leung, S.); WO 2003/049694, US 2002/0009427, 및 US 2003/0185796 (Wolin et al.); WO 2003/061694 (Sing and Siegall); US 2003/0219818 (Bohen et al.); US 2003/0219433 및 WO 2003/068821 (Hansen et al.); US 2003/0219818 (Bohen et al.); US 2002/0136719 (Shenoy et al.); WO 2004/032828 (Wahl et al.); 및 WO 2002/56910 (Hayden-Ledbetter). 또한, 미국 특허 제5,849,898호 및 EP 330,191 (Seed et al.); EP 332,865A2 (Meyer and Weiss); 미국 특허 제4,861,579호 (Meyer et al.); US 2001/0056066 (Bugelski et al.); WO 1995/03770 (Bhat et al.); US 2003/0219433 Al (Hansen et al.); WO 2004/035607 (Teeling et al.); US 2004/0093621 (Shitara et al.); WO 2004/103404 (Watkins et al.); WO 2005/000901 (Tedder et al.); US 2005/0025764 (Watkins et al.); WO 2005/016969 및 US 2005/0069545 Al (Carr et al.); WO 2005/014618 (Chang et al.); US 2005/0079174 (Barbera-Guillem and Nelson); 및 US 2005/0106108 (Leung and Hansen)을 참고할 수 있다. 이들 중의 특정한 것에는 특히 루푸스의 치료법이 포함된다.Patents and patent publications relating to CD20 antibodies and CD20-binding molecules include: US Pat. Nos. 5,776,456, 5,736,137, 5,843,439, 6,399,061 and 6,682,734, as well as US 2002/0197255, US 2003/0021781, US 2003/0082172, US 2003/0095963, US 2003/0147885 (Anderson et al.); US Patent No. 6,455,043, US 2003/0026804, and WO 2000/09160 (Grillo-Lopez, A.); WO 2000/27428 (Grillo-Lopez and White); WO 2000/27433 and US 2004/0213784 (Grillo-Lopez and Leonard); Braslawsky et al., WO 2000/44788; WO 2001/10462 (Rastetter, W.); WO 2001/10461 (Rastetter and White); WO 2001/10460 to White and Grillo-Lopez; US 2001/0018041, US 2003/0180292, WO 2001/34194 (Hanna and Hariharan); US 2002/0006404 and WO 2002/04021 (Hanna and Hariharan); US 2002/0012665 and WO 2001/74388 (Hanna, N.); US 2002/0058029 (Hanna, N.); US 2003/0103971 (Hariharan and Hanna); US 2002/0009444 and WO 2001/80884 (Grillo-Lopez, A.); WO 2001/97858 (White, C.); US 2002/0128488 and WO 2002/34790 (Reff, M.); Braslawsky et al., WO 2002/060955; Braslawsky et al., WO 2002/096948; WO 2002/079255 to Reff and Davies; US Patent No. 6,171,586 and WO 1998/56418 (Lam et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); WO 1999/22764 (Raju, S.); WO 1999/51642 and US Pat. Nos. 6,194,551, 6,242,195, 6,528,624, and 6,538,124 (Idusogie et al.); WO 2000/42072 (Presta, L.); Curd et al., WO 2000/67796; WO 2001/03734 (Grillo-Lopez et al.); US 2002/0004587 and WO 2001/77342 (Miller and Presta); US 2002/0197256 (Grewal, I.); US 2003/0157108 (Presta, L.); Lowman et al., WO 04/056312; US 2004/0202658 and WO 2004/091657 (Benyunes, K.); WO 2005/000351 (Chan, A.); US 2005 / 0032130A1 (Beresini et al.); US 2005/0053602 Al (Brunetta, P.); US Pat. Nos. 6,565,827, 6,090,365, 6,287,537, 6,015,542, 5,843,398, and 5,595,721 (Kaminski et al.); US Pat. Nos. 5,500,362, 5,677,180, 5,721,108, 6,120,767, and 6,652,852 (Robinson et al.); US Patent No. 6,410,391 to Laubitschek et al .; US Patent No. 6,224,866 and WO OO / 20864 (Barbera-Guillem, E.); WO 2001/13945 (Barbera-Guillem, E.); Goldenberg, WO 2000/67795; US 2003/0133930 and WO 2000/74718 (Goldenberg and Hansen); US 2003/0219433 and WO 2003/68821 to Hansen et al .; WO 2004/058298 (Goldenberg and Hansen); Golay et al., WO 2000/76542; WO 2001/72333 (Wolin and Rosenblatt); US Patent No. 6,368,596 to Ghetie et al .; US Patent No. 6,306,393 and US 2002/0041847 (Goldenberg, D.); US 2003/0026801 (Weiner and Hartmann); WO 2002/102312 to Engleman, E .; US 2003/0068664 to Albitar et al .; WO 2003/002607 (Leung, S.); WO 2003/049694, US 2002/0009427, and US 2003/0185796 (Wolin et al.); Sing and Siegall, WO 2003/061694; US 2003/0219818 (Bohen et al.); US 2003/0219433 and WO 2003/068821 (Hansen et al.); US 2003/0219818 (Bohen et al.); US 2002/0136719 (Shenoy et al.); WO 2004/032828 (Wahl et al.); And WO 2002/56910 (Hayden-Ledbetter). See also US Pat. Nos. 5,849,898 and EP 330,191 (Seed et al.); EP 332,865 A2 (Meyer and Weiss); U.S. Patent 4,861,579 to Meyer et al .; US 2001/0056066 to Bugelski et al .; Bhat et al., WO 1995/03770; US 2003/0219433 Al (Hansen et al.); Teeling et al., WO 2004/035607; US 2004/0093621 (Shitara et al.); WO 2004/103404 (Watkins et al.); WO 2005/000901 (Tedder et al.); US 2005/0025764 (Watkins et al.); WO 2005/016969 and US 2005/0069545 Al (Carr et al.); Chang et al., WO 2005/014618; US 2005/0079174 (Barbera-Guillem and Nelson); And US 2005/0106108 (Leung and Hansen). Certain of these especially include the treatment of lupus.

리툭시마브를 이용한 치료에 관한 공개문헌에는 다음 문헌이 포함된다 [참고: Perotta and Abuel, "Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab" Abstract # 3360 Blood 10(1) (part 1-2): p. 88B (1998); Perotta et al., "Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)", Blood, 94: 49 (abstract) (1999); Matthews, R., "Medical Heretics" New Scientist (7 April, 2001); Leandro et al., "Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion" Ann Rheum Dis, supra; Leandro et al., "Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response" Arthritis and Rheumatism 44 (9): S370 (2001); Leandro et al., "An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus", Arthritis and Rheumatism, 46:2673-2677 (2002) (여기서, 2주의 기간 동안에 각 환자는 2회의 500 mg 리툭시마브 주입, 2회의 750 mg 시클로포스파미드 주입, 및 고용량의 경우 코르티코스테로이드를 투여받았고, 치료된 환자들 중 2명은 각각 7개월 및 8개월 째에 재발하여 상이한 프로토콜로 다시 치료받았다); "Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy" Weide et al., Lupus, 12: 779-782 (2003) (여기서, 한 환자 는 리툭시마브 (375 mg/㎡ x 4, 매주 간격으로 반복)로 치료되었고, 추가로 매 5 내지 6개월마다 리툭시마브를 투여받았으며, 이후에 매 3개월마다 375 mg/㎡ 유지 요법을 받았고, 난치성 SLE를 앓고 있는 제2 환자는 리툭시마브로 성공적으로 치료되었고, 매 3개월마다 유지 요법을 받고 있으며, 상기 두 환자 모두 리툭시마브 요법에 잘 반응하였다); Edwards and Cambridge, "Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes" Rheumatology 40: 205-211 (2001); Cambridge et al., "B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters" Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S 1350 (2002); Edwards et al., "B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders" Biochem Soc. Trans., supra; Edwards et al., "Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46 (9): 197 (2002); Edwards et al., "Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis" N Engl. J. Med. 350: 2572-82 (2004); Pavelka et al., Ann. Rheum. Dis. 63:(Sl):289-90 (2004); Emery et al., Arthritis Rheum. 50(S9):S659 (2004); Levine and Pestronk, "IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using rituximab" Neurology 52: 1701-1704 (1999); DeVita et al., "Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis" Arthritis ＆ Rheum 46:2029-2033 (2002); Hidashida et al. "Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab." Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002; Tuscano, J. "Successful treatment of infliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab" Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002; "Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic" Martin and Chan, Immunity 20: 517-527 (2004); Silverman and Weisman, "Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy", Arthritis and Rheumatism, 48: 1484-1492 (2003); Kazkaz and Isenberg, "Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases", Current opinion in pharmacology, 4: 398-402 (2004); Virgolini and Vanda, "Rituximab in autoimmune diseases", Biomedicine ＆ pharmacotherapy, 58: 299-309 (2004); Klemmer et al., "Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with a AntiCD20 monoclonal antibody Rituximab", Arthritis And Rheumatism, 48: (9) 9,S (SEP), page: S624-S624(2003); Kneitz et al., "Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases", Immunobiology, 206: 519-527 (2002); Arzoo et al., "Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab)" Annals of the Rheumatic Diseases, 61 (10), p922-4 (2002) Comment in Ann Rheum Dis. 61: 863-866 (2002); "Future Strategies in Immunotherapy" by Lake and Dionne, in Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 by John Wiley ＆ Sons,Inc.) Article Online Posting Date: January 15, 2003 (Chapter 2 " Antibody-Directed Immunotherapy"); Liang and Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine, Section: CD20 as an Immunotherapy Target, article online posting date: 15 January, 2002 entitled "CD20"; Appendix 4A entitled "Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens" by Stockinger et al., eds: Coligan et al., in Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley ＆ Sons, Inc) Online Posting Date: May, 2003; Print Publication Date: February, 2003; Penichet and Morrison, "CD Antibodies/molecules: Definition; Antibody Engineering" in Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section: Chimeric, Humanized and Human Antibodies; posted online 15 January, 2002; Specks et al. "Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy" Arthritis ＆ Rheumatism 44: 2836-2840 (2001); online abstract submission and invitation Koegh et al., "Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients", American College of Rheumatology, Session Number: 28-100, Session Title: Vasculitis, Session Type: ACR Concurrent Session, Primary Category: 28 Vasculitis, Session 10/18/2004 (http://www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp); Eriksson, "Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab", Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003); Jayne et al., "B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis" Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003); Jayne, poster 88 (11^th International Vasculitis and ANCA workshop), 2003 American Society of Nephrology; Stone and Specks, "Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis", in the Clinical Trial Research Summary of the 2002-2003 Immune Tolerance Network, http://www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html; Leandro et al., "B cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus" Arthritis Rheum., 48 (Suppl 9):S1160 (2003)]. Publications on treatment with rituximab include the following: Perotta and Abuel, "Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab" Abstract # 3360 Blood 10 (1) (part 1-2) : p. 88B (1998); Perotta et al., “Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)”, Blood , 94: 49 (abstract) (1999); Matthews, R., "Medical Heretics" New Scientist (7 April, 2001); Leandro et al., "Clinical outcome in 22 patients with rheumatoid arthritis treated with B lymphocyte depletion" Ann Rheum Dis , supra; Leandro et al., "Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response" Arthritis and Rheumatism 44 (9): S370 (2001); Leandro et al., "An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus", Arthritis and Rheumatism , 46: 2673-2677 (2002) (where, during the two-week period, each patient received two 500 mg rituximab infusions, two 750 mg cyclophosphamide infusions, and a corticosteroid for high doses, treatment Two of the old patients relapsed at 7 and 8 months, respectively, and were treated again with different protocols); "Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy" Weide et al., Lupus , 12: 779-782 (2003) (wherein one patient is Rituximab (375 mg / m 2 x 4 at weekly intervals). Rituximab every 5 to 6 months, followed by 375 mg / m 2 maintenance therapy every 3 months, and the second patient with refractory SLE was successfully treated with rituximab. Treated, receiving maintenance therapy every three months, and both patients responded well to rituximab therapy); Edwards and Cambridge, "Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes" Rheumatology 40: 205-211 (2001); Cambridge et al., "B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters" Arthritis Rheum ., 46 (Suppl. 9): S 1350 (2002); Edwards et al., "B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders" Biochem Soc. Trans., Supra ; Edwards et al., "Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis.Arthritis and Rheumatism 46 (9): 197 (2002); Edwards et al. , "Efficacy of B-cell-targeted therapy with rituximab in patients with rheumatoid arthritis" N Engl. J. Med . 350: 2572-82 (2004); Pavelka et al., Ann. Rheum. Dis . 63: (Sl) : 289-90 (2004); Emery et al., Arthritis Rheum . 50 (S9): S659 (2004); Levine and Pestronk, "IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using rituximab" Neurology 52: 1701- 1704 (1999); DeVita et al., "Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis" Arthritis & Rheum 46: 2029-2033 (2002); Hidashida et al. "Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab . Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology ; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002; Tuscano, J. "Successful treatment of inflix." imab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab "Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology ; Oct 24-29; New Orleans, LA 2002; "Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic" Martin and Chan, Immunity 20: 517-527 (2004); Silverman and Weisman, "Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy", Arthritis and Rheumatism , 48: 1484-1492 (2003); Kazkaz and Isenberg, "Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases", Current opinion in pharmacology , 4: 398-402 (2004); Virgolini and Vanda, "Rituximab in autoimmune diseases", Biomedicine & pharmacotherapy , 58: 299-309 (2004); Klemmer et al., "Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with a AntiCD20 monoclonal antibody Rituximab", Arthritis And Rheumatism , 48: (9) 9, S (SEP), page: S624-S624 (2003); Kneitz et al., "Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases", Immunobiology , 206: 519-527 (2002); Arzoo et al., "Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab)" Annals of the Rheumatic Diseases , 61 (10), p922-4 (2002) Comment in Ann Rheum Dis . 61: 863-866 (2002); "Future Strategies in Immunotherapy" by Lake and Dionne, in Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 by John Wiley & Sons, Inc.) Article Online Posting Date: January 15, 2003 (Chapter 2 "Antibody-Directed Immunotherapy"); Liang and Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine , Section: CD20 as an Immunotherapy Target, article online posting date: 15 January, 2002 entitled "CD20"; Appendix 4A entitled "Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens" by Stockinger et al., Eds: Coligan et al., In Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley & Sons, Inc) Online Posting Date: May, 2003; Print Publication Date: February, 2003; Penichet and Morrison, "CD Antibodies / molecules: Definition; Antibody Engineering" in Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section: Chimeric, Humanized and Human Antibodies; posted online 15 January, 2002; Specks et al. "Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy" Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001); online abstract submission and invitation Koegh et al., "Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients", American College of Rheumatology, Session Number: 28-100, Session Title : Vasculitis, Session Type: ACR Concurrent Session, Primary Category: 28 Vasculitis, Session 10/18/2004 ( http://www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp ); Eriksson, "Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab", Kidney and Blood Pressure Research , 26: 294 (2003); Jayne et al., “B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis” Kidney and Blood Pressure Research , 26: 294 (2003); Jayne, poster 88 (11 ^th International Vasculitis and ANCA workshop), 2003 American Society of Nephrology; Stone and Specks, "Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis", in the Clinical Trial Research Summary of the 2002-2003 Immune Tolerance Network, http://www.immunetolerance.org/research/autoimmune/ trials / stone.html ; Leandro et al., "B cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus" Arthritis Rheum ., 48 (Suppl 9): S1160 (2003)].

항-CD20 항체를 사용하여 루푸스를 치료하는 것에 관해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: "B lymphocyte depletion in the treatment of systemic lupus (SLE): Phase I/II trial of rituximab (Rituxan®) in SLE" Anolik et al., Arthritis And Rheumatism, 46/9: S289-S289 (September 2002); "A phase I trial of rituximab (anti-CD20) for treatment of systemic lupus erythematosus" Albert et al., Arthritis And Rheumatism, 48 (12): 3659-3659 (December 2003); "B cell depletion in autoimmune disease" Gorman et al. Arthritis Research and Therapy, 5/SUPPL. 4: S17-S21 (2003); "B-cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus treated with rituximab" Leandro et al. Arthritis And Rheumatism 48 (9): S464-S464 (September 2003); "Rituximab: expanding role in therapy for lymphomas and autoimmune diseases" Rastetter et al. Annual review of medicine 55, p477-503 (2004); "B-cell biology" Weinstein et al. Rheumatic Disease Clinics of North America 30/1 (159-174) (2004); "Treatment of refractory autoimmune diseases with ablative immunotherapy" Cohen and Nagler, Autoimmunity Reviews, 3 (2), p21-9 (Feb 2004); "A Phase I trial of B-cell depletion with anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) in the treatment of systemic lupus erythematosus" Eisenberg et al., Arthritis Res Ther 5/3, page:S9-S10 (2003); "Recent Advances in the Pathogenesis of Lupus Nephritis: Autoantibodies and B Cells" Su and Madaio, Seminars in Nephrology, 23/6: 564-568 (2003); "Management of refractory systemic rheumatic diseases" Houssiau Acta Clinica Belgica, 58/5: 314-317 (2003); "Novel therapies in pediatric rheumatic diseases" Chira and Sandborg Current Opinion in Pediatrics 15/6: 579-585 (2003); "B lymphocytes contribute to autoimmune disease pathogenesis: Current trends and clinical implications" Tuscano et al. Autoimmunity Reviews 2/2: 101-108 (2003); "The annual European Congress of Rheumatology: Recent advances in the treatment of rheumatic diseases" Hellmich and Gross, Expert Opinion on Investigational Drug, 12/10: 1713-1719 (2003); "Antibodies as therapeutic agents: Vive la renaissance!" Stockwin and Holmes, Expert Opinion on Biological Therapy 3/7: 1133-1152 (2003); "Successful treatment with anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) of life-threatening refractory systemic lupus erythematosus with renal and central nervous system involvement" Saito et al. Lupus, 12/10: 798-800 (2003); "Rituximab therapy for multisystem autoimmune diseases in pediatric patients" Binstadt et al. Journal Of Pediatrics, 143/5: 598-604 (November 2003); "Cytokines in systemic lupus erythematosus" Rahman Arthritis Res Ther, 5/4 (160-164) (2003); "Rituximab in lupus" Eisenberg Arthritis Res Ther, 5/4, supra; "Antibody therapy for rheumatoid arthritis" Taylor Current Opinion in Phamlacology 3/3:323-328 (2003); "Molecular differences in anticytokine therapies" Calabrese, Clinical and Experimental Rheumatology 21/2: 241-248 (2003); "Lupus pregnancy" Lockshin and Sammaritano, Autoimmunity, 36/1: 33-40 (2003); "BAFF: B cell survival factor and emerging therapeutic target for autoimmune disorders" Kalled et al. Expert Opinionon Therapeutic Targets 7/1: 115-123 (2003) "Upcoming biologic agents for the treatment of rheumatic diseases" Shanahan et al. Current Opinion In Rheumatology, 15 (3): 226-236 (May 2003); "B cells as a therapeutic target in autoimmune disease" Goronzy and Weyand Arthritis Research ＆ Therapy, 5 (3): 131-135 (2003); "Remission of refractory lupus nephritis with a protocol including rituximab" Fra et al. Lupus, 12 (10): 783-7 (2003); "B cell depletion therapy in systemic lupus erythematosus" Anolik et al. Current rheumatology reports, 5, (5), p350-356 (Oct 2003); "A prospective, open label trial of B-cell depletion with rituximab in refractory systemic lupus erythematosus" Smith and Jayne, Journal of the American Society of Nephrology, Volume: 14, Number: Abstracts Issue, Page: 380A, November 2003, Conference: Meeting of the American Society of Nephrology Renal Week, San Diego, CA, USA, November 12-17 2003; "An open study of B cell depletion in patients with proliferative lupus nephritis: Preliminary results" Boletis et al., Journal of the American Sociey of Nephrology, Volume: 14, Number: Abstracts Issue, Page: 379A (November 2003); "The role of plasmapheresis in the treatment of severe central nervous system neuropsychiatric systemic lupus erythematosus" Neuwelt Therapeutic apheresis and dialysis - official peer-reviewed journal of the International Society for Apheresis, the Japanese Society for Apheresis, the Japanese Society for Dialysis Therapy 7 (2): 173-82 (April 2003); "Rituximab therapy and autoimmune disorders: prospects for anti-B cell therapy" Silverman and Weisman, Arthritis and rheumatism, 48 (6): 1484-92 (June 2003); "Treatment of refractory autoimmune diseases with ablative immunotherapy using monoclonal antibodies and/or high dose chemotherapy with hematopoietic stem cell support" Cohen et al. Current Pharmaceutical Design 9 (3): 279-88 (2003); "The relationship of FcgammaRIIIa genotype to degree of B cell depletion by rituximab in the treatment of systemic lupus erythematosus" Anolik et al. Arthritis and rheumatism, 48 (2):455-459 (Feb 2003); Oelke IDrugs 5/1 30-31 (2002); "New therapies in systemic lupus erythematosus" Solsky and Wallace Bailliere's Best Practice and Research in Clinical Rheumatology 16/2: 293-312 (2002); Dumont Current Opinion in Investigational Drugs, 3/5: 725-734 (May 1, 2002); "Workshop report on some new ideas about the treatment of systemic lupus erythematosus" Linnik et al. Lupus 11/12: 793-796 (2002); "Treatment of refractory autoimmune diseases with lymphoablation and hematopoietic stem cell support" Cohen and Nagler Israel Medical Association Journal 4/11 SUPPL.: 865-867 (Nov 1, 2002); "Biological treatments for systemic lupus erythematosus" Isenberg and Leckie Scandinavian Journal of Rheumatology, 31/4: 187-191 (2002); "Novel therapeutic agents for systemic lupus erythematosus" Gescuk and Davis Jr Current Opinion in Rheumatology, 14/5, 515-521 (2002); "Management of lupus erythematosus: Recent insights" Wallace Current Opinion in Rheumatology, 14/3: 212-219 (2002); "B-lymphocyte depletion therapy in rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders" Edwards et al., Biochemical Society Transactions 30/4: 824-828 (August 2002); "Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases" Kneitz et al. Immunobiology, 206, (5), p519-27 (Dec 2002); "Anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) for life-threatening autoimmune haemolytic anaemia in a patient with systemic lupus erythematosus" Perrotta et al. British Journal Of Haematology, 116 (2): 465-7 (Feb 2002); "Monoclonal antibody therapy" Park and Smolen Advances in Protein Chemistry, 56: 369-421 (2001); "B lymphocyte depletion as a novel treatment for systemic lupus erythematosus (SLE): Phase I/II trial of rituximab (Rituxan®) in SLE" Anolik et al., Arthritis And Rheumatism, 44 (9): S387-S387 (September 2001); "Exacerbation of lupus while receiving rituximab for chronic refractory thrombocytopenia" Mehta et al. Blood, 98/11 Part 2: 61b-62b (November 16 2001); Perrotta et al., Blood 94:646, abstract 2869 (1999), "Hypocomplementemic urticarial vasculitis with angioedema, a rare presentation of systemic lupus erythematosus: rapid response to rituximab" Saigal et al. Journal of the American Academy of Dermatology 49, (5 Suppl), pS283-5 (Nov 2003); "Anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab, RTX) therapy in a hemodialysis (HD) patient (Pt) with severe systemic lupus erythematosis (SLE)" Valentine et al. Journal of the American Society of Nephrology, Volume: 13, Number: Program and Abstracts Issue, Page: 683A, September 2002, "Anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) for refractory autoimmune thrombocytopenia in a girl with systemic lupus erythematosus" ten Cate et al. Rheumatology, 43 (2): 244 (Feb 2004); "Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy" Weide et al. Lupus, 12 (10): 779-782 (2003); "Cytokine-receptor pairing: Accelerating discovery of cytokine function" Foster et al. Nature Reviews Drug Discovery 3/2: 160-170 (2004); "Rituximab: expanding role in therapy for lymphomas and autoimmune diseases" Rastetter et al. Annual review of medicine 55: 477-503 (2004); "B cell therapy for rheumatoid arthritis: The rituximab (anti-CD20) experience" Shaw et al. Annals of the Rheumatic Diseases, 62/SUPPL. 2, pp. 55-59 (2003); "Severe hypercoagulable state and concomitant life threatening bleeding successfully treated with rituximab" Ahn et al., Blood, 102/11: 108b (November 16 2003); and "Graft-versus-Kaposi's Sarcoma effect and reversal of Lupus Anticoagulant Syndrome and Thalassemia Intermedia after non-myeloablative allogeneic stem cell transplant" Patel et al. Blood, 98/11 Part 2: 370b (November 16 2001); "Remission of Proliferative Lupus Nephritis Following B Cell Depletion Therapy Is Preceded by Down-Regulation of the T Cell Costimulatory Molecule CD40 Ligand" Sfikakis et al. Arthrit. Rheumat., 52 (2): 501-513 (2005) and "B Cell Deletion in SLE" presented by D. Isenberg at the 6^th European Lupus Meeting on March 4, 2005, including slide 38 on retreatment of seven patients]. Regarding the treatment of lupus with anti-CD20 antibodies, reference may be made to the following literature [see: "B lymphocyte depletion in the treatment of systemic lupus (SLE): Phase I / II trial of rituximab (Rituxan®) in SLE '' Anolik et al., Arthritis And Rheumatism , 46/9: S289-S289 (September 2002); "A phase I trial of rituximab (anti-CD20) for treatment of systemic lupus erythematosus" Albert et al., Arthritis And Rheumatism , 48 (12): 3659-3659 (December 2003); "B cell depletion in autoimmune disease" Gorman et al. Arthritis Research and Therapy , 5 / SUPPL. 4: S17-S21 (2003); "B-cell repopulation occurs mainly from naive B cells in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus treated with rituximab" Leandro et al. Arthritis And Rheumatism 48 (9): S464-S464 (September 2003); "Rituximab: expanding role in therapy for lymphomas and autoimmune diseases" Rastetter et al. Annual review of medicine 55, p477-503 (2004); "B-cell biology" Weinstein et al. Rheumatic Disease Clinics of North America 30/1 (159-174) (2004); "Treatment of refractory autoimmune diseases with ablative immunotherapy" Cohen and Nagler, Autoimmunity Reviews , 3 (2), p21-9 (Feb 2004); "A Phase I trial of B-cell depletion with anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) in the treatment of systemic lupus erythematosus" Eisenberg et al., Arthritis Res Ther 5/3, page: S9-S10 (2003); "Recent Advances in the Pathogenesis of Lupus Nephritis: Autoantibodies and B Cells" Su and Madaio, Seminars in Nephrology , 23/6: 564-568 (2003); "Management of refractory systemic rheumatic diseases" Houssiau Acta Clinica Belgica , 58/5: 314-317 (2003); "Novel therapies in pediatric rheumatic diseases" Chira and Sandborg Current Opinion in Pediatrics 15/6: 579-585 (2003); "B lymphocytes contribute to autoimmune disease pathogenesis: Current trends and clinical implications" Tuscano et al. Autoimmunity Reviews 2/2: 101-108 (2003); "The annual European Congress of Rheumatology: Recent advances in the treatment of rheumatic diseases" Hellmich and Gross, Expert Opinion on Investigational Drug , 12/10: 1713-1719 (2003); "Antibodies as therapeutic agents: Vive la renaissance!" Stockwin and Holmes, Expert Opinion on Biological Therapy 3/7: 1133-1152 (2003); "Successful treatment with anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) of life-threatening refractory systemic lupus erythematosus with renal and central nervous system involvement" Saito et al. Lupus , 12/10: 798-800 (2003); "Rituximab therapy for multisystem autoimmune diseases in pediatric patients" Binstadt et al. 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루푸스를 앓고 있는 환자, 예를 들어 루푸스 신염에 대한 명백한 임상 증거를 나타내는 SLE 환자, 및 루프스 신염 환자는 결국에는 신부전증을 유발시키는 조직 손상을 완화시키는데 도움을 줄 비용면에서 효율적이면서도 안전한 치료법을 필요로 하고, 이들 질환에 의해 유발된 만성 혈액투석 및/또는 신장 이식에 대해서도 필요로 한다.Patients with lupus, for example SLE patients with clear clinical evidence for lupus nephritis, and lupus nephritis patients need a cost-effective and safe treatment that will eventually help alleviate the tissue damage that causes kidney failure. And chronic hemodialysis and / or renal transplantation caused by these diseases.

발명의 요약Summary of the Invention

본 발명은 적어도 부분적으로는, 루푸스, 예를 들어 SLE 또는 루푸스 신염에 걸린 대상체에게 안전하고도 적극적인 치료 섭생을 제공해 주는 CD20 항체에 대한 용량 선택과 관련이 있다. 따라서, 본 발명은 청구된 바와 같다. 제1 국면에서, 본 발명은 유효량의 CD20 항체를 특정 대상체에게 투여하여 약 0.5 내지 4 그램의 초기 항체 노출을 제공한 한 다음, 약 0.5 내지 4 그램의 제2 항체 노출을 제공하는 것을 포함하여 (이러한 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공된다), 상기 대상체에게서 루푸스를 치료하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates, at least in part, to dose selection for CD20 antibodies that provide a safe and active treatment regimen to a subject with lupus, eg, SLE or lupus nephritis. Accordingly, the invention is as claimed. In a first aspect, the present invention comprises administering an effective amount of a CD20 antibody to a particular subject to provide about 0.5-4 grams of initial antibody exposure, and then providing about 0.5-4 grams of a second antibody exposure ( This second exposure is not given until about 16-54 weeks from the initial exposure, and each antibody exposure is provided to the subject as a single dose of the antibody or as two or three separate doses of the antibody). To a method of treatment.

이러한 제1 국면의 한 양태에서는, 제2 약물을 초기 노출 및/또는 후속 노출과 함께 투여하는데, CD20 항체가 제1 약물이다. 바람직한 양태에서는, 제2 약물이 화학요법제, 면역억제제, 항말라리아제, 세포독성제, 인테그린 길항제, 사이토킨 길항제, 또는 호르몬이다. 보다 바람직한 양태에서는, 제2 약물이 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제이다. 또 다른 바람직한 양태에서는, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제를 초기 노출과 함께 투여한다. 기타 양태에서는, 이를 제2 노출 및/또는 후속 노출과 함께 투여하고/하거나 초기 노출과 함께 투여하고, 바람직하게는 모든 노출과 함께 투여한다. 여전히 바람직한 양태에서는, 코르티코스테로이드, 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 미코페놀레이트 모페틸, 또는 6-머캅토퓨린을 투여한다. 또 다른 국면에서는, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제를 제2 노출과 함께 투여하지 않거나, 또는 초기 노출과 함께 사용된 양 보다 적은 양으로 투여된다. 이러한 방법에서는, 대상체가 기존에 CD20 항체로 치료한 적이 전혀 없는 대상체인 것이 바람직하다.In one aspect of this first aspect, the second drug is administered with initial exposure and / or subsequent exposure, wherein the CD20 antibody is the first drug. In a preferred embodiment, the second drug is a chemotherapeutic agent, immunosuppressant, antimalarial agent, cytotoxic agent, integrin antagonist, cytokine antagonist, or hormone. In a more preferred embodiment, the second drug is an immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent. In another preferred embodiment, an immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent is administered with the initial exposure. In other embodiments, it is administered with the second and / or subsequent exposures and / or with the initial exposure, preferably with all the exposures. In a still preferred embodiment, corticosteroids, hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, methotrexate, cyclophosphamide, azathioprine, mycophenolate mofetil, or 6-mercaptopurine are administered. In another aspect, the immunosuppressive agent, antimalarial agent or chemotherapeutic agent is not administered with the second exposure or in an amount less than the amount used with the initial exposure. In this method, it is preferred that the subject is a subject who has never been previously treated with a CD20 antibody.

또 다른 양태에서는, CD20 항체 이외의 기타 약물을 대상체에게 전혀 투여하지 않고서도 루푸스를 치료한다.In another embodiment, lupus is treated without administering any drug other than a CD20 antibody to the subject.

또 다른 바람직한 양태에서는, 대상체가 상승된 수준의 침윤성 CD20 세포, 항핵 항체 (ANA), 항-이중가닥 DNA (dsDNA) 항체, 항-Sm 항체, 항핵 리보뉴클레오단백질 항체, 항인지질 항체, 항-리보솜성 P 항체, 항-Ro/SS-A 항체, 항-Ro 항체 또는 항-La 항체, 또는 이러한 세포 또는 항체 2개 이상의 조합물을 갖고 있다.In another preferred embodiment, the subject has elevated levels of invasive CD20 cells, antinuclear antibody (ANA), anti-double stranded DNA (dsDNA) antibody, anti-Sm antibody, antinuclear ribonucleoprotein antibody, antiphospholipid antibody, anti- Ribosomal P antibody, anti-Ro / SS-A antibody, anti-Ro antibody or anti-La antibody, or a combination of two or more such cells or antibodies.

부가적으로, 본 발명은In addition, the present invention

(a) CD20 항체를 포함하는 용기; 및(a) a container comprising a CD20 antibody; And

(b) 대상체에게서 루푸스를 치료하는 것에 대한 지시사항을 포함하는 패키지 삽입물 (이러한 지시사항은 약 0.5 내지 4 그램의 초기 항체 노출을 제공한 다음, 약 0.5 내지 4 그램의 제2 항체 노출을 제공하는데 유효한 양의 항체를 대상체에게 투여하는데, 이러한 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공된다는 것을 나타낸다)(b) a package insert comprising instructions for treating lupus in a subject (the instructions provide about 0.5 to 4 grams of initial antibody exposure and then about 0.5 to 4 grams of a second antibody exposure An effective amount of antibody is administered to a subject, wherein the second exposure is not given from about 16 to 54 weeks from the initial exposure, each antibody exposure being as a single dose of the antibody or as two or three separate doses of the antibody. To the subject)

을 포함하는 제조품을 제공한다.It provides a manufactured product comprising a.

본 발명은 종종 CD20 항체를 사용한 경우에 필요한 것 보다 더 많은, 루푸스 대상체를 치료하는데 있어서의 필요성을 저하시키거나 최소화시켜 주는 투여량 및 투여 섭생과 관련이 있다. 본 발명은 또한 바람직하게는, 환자에 대한 편의성 (예를 들어, 시간 편의성)을 증가시키고 비용을 감소시킬 뿐만 아니라 다음 표준 치료법의 부작용을 가능한 한 많이 피하기 위해, 상기 대상체에 대해 통상적인 표준 치료법인 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제의 공동-투여, 전-투여 또는 후-투여에 대한 필요성을 감소, 최소화 또는 없애준다. 그러나, 본 발명은 또한, 이러한 동시에 수반되는 치료법의 사용도 고려하고 있다.The present invention is often associated with dosages and dosing regimens that reduce or minimize the need for treating lupus subjects, more than is needed with CD20 antibodies. The invention also preferably provides a standard standard of care for the subject, in order to increase convenience (e.g., time convenience) and reduce costs for the patient, as well as avoid side effects of the following standard of care as much as possible. Reduce, minimize or eliminate the need for co-administration, pre-administration or post-administration of immunosuppressants, antimalarials or chemotherapeutic agents. However, the present invention also contemplates the use of such concurrent treatments.

도 1A는 뮤린 2H7의 경쇄 가변 도메인 (V_L)의 아미노산 서열 (서열 1), 인간화 2H7.v16 변이체의 경쇄 가변 도메인 (V_L)의 아미노산 서열 (서열 2), 및 인간 카파 경쇄 아군 I의 경쇄 가변 도메인 (V_L)의 아미노산 서열 (서열 3)을 비교하는 서열 정렬이다. 2H7 및 hu2H7.vl6의 V_L의 CDRs은 다음과 같다: CDR1 (서열 4), CDR2 (서열 5), 및 CDR3 (서열 6). Figure 1A is the amino acid sequence (SEQ ID NO: 2), and a light chain of human kappa light chain ally I of the amino acid sequence (SEQ ID NO: 1), the light chain variable domain of the humanized 2H7.v16 variant (V _L) of the light chain variable domain (V _L) of the murine 2H7 Sequence alignment comparing the amino acid sequence of the variable domain (V _L ) (SEQ ID NO: 3). CDRs of V _L of 2H7 and hu2H7.vl6 are as follows: CDR1 (SEQ ID NO: 4), CDR2 (SEQ ID NO: 5), and CDR3 (SEQ ID NO: 6).

도 1B는 뮤린 2H7의 중쇄 가변 도메인 (V_H)의 아미노산 서열 (서열 7), 인간화 2H7.v16 변이체의 중쇄 가변 도메인 (V_H)의 아미노산 서열 (서열 8), 및 중쇄 아군 III의 인간 컨센서스 서열의 중쇄 가변 도메인 (V_H)의 아미노산 서열 (서열 9)을 비교하는 서열 정렬이다. 2H7 및 hu2H7.vl6의 V_H의 CDRs은 다음과 같다: CDR1 (서열 10), CDR2 (서열 11), 및 CDR3 (서열 12). Figure 1B is an amino acid sequence (SEQ ID NO: 7) and amino acid sequence of the heavy chain variable domain (V _H) of the humanized 2H7.v16 variant (SEQ ID NO: 8), and the human consensus sequence of the heavy chain of the murine 2H7 spiked III heavy chain variable domain (V _H) A sequence alignment comparing the amino acid sequence (SEQ ID NO: 9) of the heavy chain variable domain of (V _H ). The CDRs of V _H of 2H7 and hu2H7.vl6 are as follows: CDR1 (SEQ ID NO: 10), CDR2 (SEQ ID NO: 11), and CDR3 (SEQ ID NO: 12).

도 1A 및 도 1B에서, 각 쇄 중의 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 표시된 바와 같이 골격 영역 FR1 내지 FR4에 의해 플랭킹되어, 사각 괄호 ([]) 안에 봉입되어 있다. 2H7은 뮤린 2H7 항체를 지칭한다. 두 서열 열 사이의 별표는 두 서열 간의 상이한 위치를 나타낸다. 잔기 넘버링은 문헌 [참고: Kabat et al. Sequences of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에 따르고, 삽입물은 a, b, c, d, 및 e로서 제시된다.1A and 1B, CDR1, CDR2, and CDR3 in each chain are flanked by framework regions FR1 to FR4 as indicated and enclosed in square brackets ([]). 2H7 refers to murine 2H7 antibody. Asterisks between two sequence columns indicate different positions between the two sequences. Residue numbering is described in Kabat et al. Sequences of Immunological Interest , 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), the inserts are presented as a, b, c, d, and e.

도 2는 성숙한 2H7.v16 L 쇄의 아미노산 서열 (서열 13)을 도시한 것이다.2 depicts the amino acid sequence of the mature 2H7.v16 L chain (SEQ ID NO: 13).

도 3은 성숙한 2H7.v16 H 쇄의 아미노산 서열 (서열 14)을 도시한 것이다.3 shows the amino acid sequence of the mature 2H7.v16 H chain (SEQ ID NO: 14).

도 4는 성숙한 2H7.v31 H 쇄의 아미노산 서열 (서열 15)을 도시한 것이다. 2H7.v31의 L 쇄는 2H7.v16에 대해서와 동일하다.4 shows the amino acid sequence of the mature 2H7.v31 H chain (SEQ ID NO: 15). The L chain of 2H7.v31 is the same as for 2H7.v16.

도 5는 카바트 (Kabat) 가변-도메인 잔기 넘버링 및 Eu 불변-도메인 잔기 넘버링을 사용한, 성숙한 2H7.v16 및 2H7.v511 경쇄 (각각 서열 13 및 16)의 정렬을 도시한 것이다.FIG. 5 shows alignment of mature 2H7.v16 and 2H7.v511 light chains (SEQ ID NOS: 13 and 16, respectively) using Kabat variable-domain residue numbering and Eu constant-domain residue numbering.

도 6은 카바트 가변-도메인 잔기 넘버링 및 Eu 불변-도메인 잔기 넘버링을 사용한, 성숙한 2H7.v16 및 2H7.v511 중쇄 (각각 서열 14 및 17)의 정렬을 도시한 것이다.FIG. 6 shows alignment of mature 2H7.v16 and 2H7.v511 heavy chains (SEQ ID NOS: 14 and 17, respectively) using Kabat variable-domain residue numbering and Eu constant-domain residue numbering.

I. 정의I. Definition

본원에 사용된 바와 같은 "루푸스"는 결합 조직을 공격하는 항체가 관여하는 자가면역 질환 또는 장애이다. 루푸스의 주요 형태는 전신성 질환, 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 예를 들어 피부 SLE 및 아급성 피부 SLE 뿐만 아니라 기타 유형의 루푸스 (신염, 신외성, 뇌염, 소아과, 비-신성, 원판상, 및 탈모증 포함)이다.As used herein, “lupus” is an autoimmune disease or disorder involving antibodies that attack connective tissue. The main forms of lupus are systemic diseases, systemic lupus erythematosus (SLE), for example cutaneous SLE and subacute cutaneous SLE, as well as other types of lupus (nephritis, nephropathy, encephalitis, pediatrics, non-neoplastic, discoid, and Alopecia included).

"B 세포"는 골수 내에서 성숙하는 림프구이고, 이에는 타고난 본래의 B 세포, 기억 B 세포, 또는 효과기 B 세포 (플라즈마 세포)가 포함된다. 본원에서의 B 세포는 정상 또는 비-악성 B 세포일 수 있다."B cells" are lymphocytes that mature in the bone marrow, including innate native B cells, memory B cells, or effector B cells (plasma cells). The B cells herein can be normal or non-malignant B cells.

본원에서의 "B-세포 표면 마커" 또는 "B-세포 표면 항원"은 이와 결합하는 길항제를 이용하여 표적화시킬 수 있는 B 세포의 표면 상에 발현된 항원이다. 예시되는 B-세포 표면 마커에는 CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86 백혈구 표면 마커가 포함된다 [이에 대한 설명은 문헌 (The Leukocyte Antigen Facts Book, 2^nd Edition. 1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace ＆ Co., New York)을 참고할 수 있다]. 기타 B-세포 표면 마커에는 RP105, FcRH2, B-세포 CR2, CCR6, P2X5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRHl, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTAl, FcRH6, BCMA, 및 239287이 포함된다. 특히 관심있는 B-세포 표면 마커는 포유류의 기타 비-B-세포 조직과 비교해서 B 세포 상에 우선적으로 발현되고, 전구체 B 세포와 성숙한 B 세포 둘 다 상에서 발현될 수 있다. 본원에서 바람직한 B-세포 표면 마커는 CD20 및 CD22이다.A “B-cell surface marker” or “B-cell surface antigen” herein is an antigen expressed on the surface of a B cell that can be targeted using an antagonist that binds to it. Exemplary B-cell surface markers include CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85, and CD86 leukocyte surface markers are included [Description of this can be found in The Leukocyte Antigen Facts Book, 2 ^nd Edition. 1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace & Co., New York]. Other B-cell surface markers include RP105, FcRH2, B-cell CR2, CCR6, P2X5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRHl, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTAl, FcRH6, BC And 239287. Particularly interesting B-cell surface markers are preferentially expressed on B cells as compared to other non-B-cell tissues in mammals and can be expressed on both precursor B cells and mature B cells. Preferred B-cell surface markers herein are CD20 and CD22.

"CD20" 항원, 또는 "CD20"은 말초혈 또는 림프계 기관으로부터 B 세포의 90％ 초과 표면 상에서 발견되는, 분자량이 대략 35 kD인 비-당화 (non-glycosylated) 인단백질이다. CD20은 정상 B 세포 뿐만 아니라 악성 B 세포 상에도 존재하지만, 줄기 세포 상에서는 발현되지 않는다. 당해 분야의 문헌에 보고된 CD20에 대한 다른 명칭에는 "B-림프구-제한된 항원" 및 "Bp35"가 포함된다. CD20 항원은, 예를 들어 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: Clark et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82: 1766 (1985)].The "CD20" antigen, or "CD20" is a non-glycosylated phosphoprotein with a molecular weight of approximately 35 kD found on more than 90% surface of B cells from peripheral blood or lymphoid organs. CD20 is present on malignant B cells as well as normal B cells, but is not expressed on stem cells. Other names for CD20 reported in literature in the art include "B-lymphocyte-restricted antigen" and "Bp35". CD20 antigens are described, for example, in Clark et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 82: 1766 (1985).

BL-CAM 또는 Lyb8로서 공지되기도 한 "CD22" 항원, 또는 "CD22"은 분자량이 약 130 (환원된 형태) 내지 140 kD (환원되지 않은 형태)인 유형 1 통합 막 당단백질이다. 이는 B-림프구의 세포질과 세포막 둘 다에서 발현된다. CD22 항원은 CD19 항원과 대략 동일한 단계에서 B-세포 림프구 분화 초기에 나타난다. 기타 B-세포 마커와는 달리, CD22 막 발현은 성숙한 B-세포 (CD22+)와 플라즈마 세포 (CD22-) 사이에 포함된 후기 분화 단계로 제한된다. CD22 항원은, 예를 들어 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: Wilson et al. J. Exp. Med. 173:137 (1991) and Wilson et al. J. Immunol. 150:5013 (1993)]. The "CD22" antigen, or "CD22", also known as BL-CAM or Lyb8, is a type 1 integrated membrane glycoprotein having a molecular weight of about 130 (reduced form) to 140 kD (unreduced form). It is expressed in both the cytoplasm and cell membrane of B-lymphocytes. The CD22 antigen appears early in B-cell lymphocyte differentiation at approximately the same stage as the CD19 antigen. Unlike other B-cell markers, CD22 membrane expression is limited to later stages of differentiation comprised between mature B-cells (CD22 +) and plasma cells (CD22-). CD22 antigens are described, for example, in Wilson et al. J. Exp. Med. 173: 137 (1991) and Wilson et al. J. Immunol . 150: 5013 (1993).

본원에서의 "항체 길항제"는 B 세포 상의 B 세포 표면 마커와의 결합시, 포유류 내의 B 세포를 파괴 또는 고갈시키고/시키거나, 예를 들어 B 세포에 의해 유발된 체액성 반응을 저하 또는 방지시킴으로써 한 가지 이상의 B 세포 기능을 방해하는 항체이다. 항체 길항제는 바람직하게, 이들로 처리된 포유류에서 B 세포를 고갈시킬 수 있다 (즉, 순환성 B 세포 수준을 감소시킬 수 있다). 이러한 고갈은 각종 기전, 예를 들어 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC), B 세포 증식 억제, 및/또는 B 세포 사멸 유도 (예를 들어, 세포소멸을 통하여 이루어짐)를 통하여 달성될 수 있다.An “antibody antagonist” herein refers to disruption or depletion of B cells in a mammal upon binding to B cell surface markers on B cells, and for example by lowering or preventing a humoral response induced by B cells. It is an antibody that interferes with one or more B cell functions. Antibody antagonists preferably can deplete B cells (ie, reduce circulating B cell levels) in mammals treated with them. Such depletion can lead to a variety of mechanisms, eg, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and / or complement-dependent cytotoxicity (CDC), inhibition of B cell proliferation, and / or induction of B cell death (eg, Through apoptosis).

본원에서의 용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 사용되고, 구체적으로는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 2개 이상의 본래 항체로부터 형성된 다중-특이적 항체 (예: 이중-특이적 항체), 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편이 포함된다.The term “antibody” herein is used in its broadest sense and is specifically a monoclonal antibody, a polyclonal antibody, a multispecific antibody formed from two or more original antibodies (eg, bispecific antibodies), and Antibody fragments that exhibit the desired biological activity are included.

"항체 단편"은 바람직하게는 그의 항원 결합성 영역을 포함하는, 본래 항체의 일부를 포함한다. 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')₂, 및 Fv 단편; 디아보디 (diabody); 선형 항체; 단일 쇄 항체 분자; 및 항체 단편(들)으로부터 형성된 다중-특이적 항체가 포함된다.An "antibody fragment" includes a portion of an original antibody, preferably comprising its antigen binding region. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ', F (ab') ₂ , and Fv fragments; Diabody; Linear antibodies; Single chain antibody molecules; And multispecific antibodies formed from antibody fragment (s).

본원의 목적상, "본래 항체"는 중쇄-가변 및 경쇄-가변 도메인 뿐만 아니라 Fc 영역을 포함하는 것이다.For the purposes herein, an "original antibody" is intended to include Fc regions as well as heavy- and light-variable domains.

"B-세포 표면 마커와 결합하는 항체"는 B 세포 표면 마커와의 결합시, 포유류 내의 B 세포를 파괴 또는 고갈시키고/시키거나, 예를 들어 B 세포에 의해 유발된 체액성 반응을 저하 또는 방지시킴으로써 한 가지 이상의 B 세포 기능을 방해하는 분자이다. 이러한 항체는 바람직하게, 이들로 처리된 포유류에서 B 세포를 고갈시킬 수 있다 (즉, 순환성 B 세포 수준을 감소시킬 수 있다). 이러한 고갈은 각종 기전, 예를 들어 ADCC 및/또는 CDC, B 세포 증식 억제, 및/또는 B 세포 사멸 유도 (예를 들어, 세포소멸을 통하여 이루어짐)를 통하여 달성될 수 있다. 바람직하게는 B-세포 표면 마커가 CD20이므로, B-세포 표면 마커와 결합하는 항체는 CD20과 결합하는 항체, 또는 "CD20 항체"이다.“Antibody that binds to B-cell surface markers” destroys or depletes B cells in mammals when bound to B cell surface markers, and reduces or prevents humoral responses e.g. caused by B cells. It is a molecule that interferes with one or more B cell functions. Such antibodies can preferably deplete B cells (ie, reduce circulating B cell levels) in mammals treated with them. Such depletion can be achieved through various mechanisms, such as ADCC and / or CDC, inhibiting B cell proliferation, and / or inducing B cell death (eg, via apoptosis). Preferably, since the B-cell surface marker is CD20, the antibody that binds to the B-cell surface marker is an antibody that binds to CD20, or an "CD20 antibody."

CD20 항체의 예에는 현재 "리툭시마브"("RITUXAN®")로 불리우는 "C2B8" [참고: 미국 특허 제5,736,137호]; "Y2B8" 또는 "이브리투모마브 티욱세탄 (Ibritumomab Tiuxetan)" (ZEVALIN®)로 명명된 이트륨-[90]-표지된 2B8 뮤린 항체 (공급처: IDEC Pharmaceuticals, Inc.) [참고: 미국 특허 제5,736,137호; 1993년 6월 22일자로 기탁 번호 HB11388로 ATCC에 기탁된 2B8]; "131I-B1" 또는 "요오드 I131 토시투모마브 (tositumomab)" 항체 (BEXXAR™) (공급처: Corixa)를 생성시키기 위해 ¹³¹I로 임의로 표지시킨 뮤린 IgG2a "B1" (또한, "토시투모마브"로 불리우기도 한다) [참고: 미국 특허 제5,595,721호]; 뮤린 모노클로날 항체 "1F5" [참고: Press et al. Blood 69 (2): 584-591 (1987)] 및 그의 변이체 (이에는 "골격 패치되거나" 또는 인간화 1F5가 포함된다) [참고: W0 03/002607, Leung, S.; ATCC 기탁번호 HB-96450]; 뮤린 2H7 및 키메라 2H7 항체 [참고: 미국 특허 제5,677,180호]; 인간화 2H7; HUMAX-CD20™ 항체 (공급처: Genmab, Denmark); WO 2004/035607 (Teeling et al.)에 제시된 인간 모노클로날 항체; AME-133™ 항체 (공급처: Applied Molecular Evolution); A20 항체 또는 그의 변이체, 예를 들어 키메라 또는 인간화 A20 항체 (각각 cA20, hA20) [참고: US 2003/0219433, Immunomedics]; 및 모노클로날 항체 L27, G28-2, 93-1B3, B-C1 또는 NU-B2 (공급처: International Leukocyte Typing Workshop) [참고: Valentine et al., In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., p. 440, Oxford University Press (1987))]이 포함된다.Examples of CD20 antibodies include "C2B8" currently referred to as "rituximab"("RITUXAN®") (US Pat. No. 5,736,137); Yttrium- [90] -labeled 2B8 murine antibody designated "Y2B8" or "Ibritumomab Tiuxetan" (ZEVALIN®) (IDEC Pharmaceuticals, Inc.) [Reference: US Patent No. 5,736,137 number; 2B8 deposited with ATCC under accession number HB11388, dated June 22, 1993; Murine IgG2a "B1" (also referred to as "Tositumomab") optionally labeled with ¹³¹ I to generate "131I-B1" or "Iodine I131 tositumomab" antibody (BEXXAR ™) from Corixa Also referred to) (see US Pat. No. 5,595,721); Murine monoclonal antibody “1F5” [Press et al. Blood 69 (2): 584-591 (1987)] and variants thereof, including " skeleton patched " or humanized 1F5. See WO 03/002607, Leung, S .; ATCC Accession No. HB-96450; Murine 2H7 and chimeric 2H7 antibodies (see US Pat. No. 5,677,180); Humanized 2H7; HUMAX-CD20 ™ antibody (Genmab, Denmark); Human monoclonal antibodies set forth in WO 2004/035607 (Teeling et al.); AME-133 ™ antibody (Applied Molecular Evolution); A20 antibodies or variants thereof, such as chimeric or humanized A20 antibodies (cA20, hA20, respectively) (US 2003/0219433, Immunomedics); And monoclonal antibodies L27, G28-2, 93-1B3, B-C1 or NU-B2 (International Leukocyte Typing Workshop). Valentine et al., In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., P.) 440, Oxford University Press (1987)).

본원에서의 용어 "리툭시마브" 또는 "리툭산 (RITUXAN®)"은 CD20 항원에 대항하여 유도되고 미국 특허 제5,736,137호에서 "C2B8"로 명명된, 유전공학적으로 처리시킨 키메라 뮤린/인간 모노클로날 항체, 및 CD20과 결합할 수 있는 능력을 보유하고 있는 그의 단편을 지칭한다.The term "rituximab" or "Rituxan®" herein is a genetically engineered chimeric murine / human monoclonal derived against the CD20 antigen and named "C2B8" in US Pat. No. 5,736,137. It refers to antibodies and fragments thereof that retain the ability to bind CD20.

순전히 본원의 목적상, 그리고 달리 지시되지 않는 한, "인간화 2H7"은 인간화 CD20 항체, 또는 그의 항원-결합성 단편을 지칭하는데, 이러한 항체는 생체 내에서 영장류 B 세포를 고갈시키는데 유효하고, 그의 H-쇄 가변 영역 (V_H) 내에, 항-인간 CD20 항체로부터의 서열 12의 적어도 CDR H3 서열 (도 1B)과, 실질적으로 인간 중쇄 아군 III (V_HIII)의 인간 컨센서스 골격 (FR) 잔기를 포함한다. 바람직한 양태에서는, 상기 항체가 서열 10의 H 쇄 CDR H1 서열 및 서열 11의 CDR H2 서열을 추가로 포함하고, 보다 바람직하게는 서열 4의 L 쇄 CDR L1 서열, 서열 5의 CDR L2 서열, 서열 6의 CDR L3 서열, 및 실질적으로 인간 경쇄 아군 I (VI)의 인간 컨센서스 골격 (FR) 잔기를 추가로 포함하는데, V_H 영역은 인간 IgG 쇄 불변 영역에 연결될 수 있고, 이 영역은, 예를 들어 IgG1 또는 IgG3일 수 있다. 바람직한 양태에서는, 상기 항체가 서열 8의 V_H 서열 (도 1B에 도시된 바와 같은 v16)을 포함하고, 또한 서열 2의 V_L 서열 (도 1A에 도시된 바와 같은 v16)을 임의로 포함하는데, 이는 H 쇄 내에 D56A 및 N100A의 아미노산 치환물을 갖고 L 쇄 내에 S92A의 아미노산 치환물을 가질 수 있다 (v96). 바람직하게는, 상기 항체가 도 2 및 3에 도시된 바와 같은 서열 13 및 14의 경쇄 아미노산 서열과 중쇄 아미노산 서열을 각각 포함하는 본래 항체이다. 또 다른 바람직한 양태는 항체가 도 2 및 4에 도시된 바와 같은 서열 13 및 15의 경쇄 아미노산 서열과 중쇄 아미노산 서열을 각각 포함하는 2H7.v31이다. 본원의 항체는 Fc 영역 내에, ADCC 및/또는 CDC 활성을 개선시켜 주는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들어 아미노산 치환이 S298A/E333A/K334A인 것, 보다 바람직하게는 서열 15의 중쇄 아미노산 서열을 갖는 2H7.v31이다 (도 4에 도시된 바와 같음). 이들 항체 모두는 Fc 영역 내에, CDC 활성을 저하시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들어 적어도 치환 K322A을 포함한다 [참고: 미국 특허 제6,528,624B1호 (Idusogie et al.)]. Purely for the purposes of this disclosure and unless otherwise indicated, "humanized 2H7" refers to a humanized CD20 antibody, or antigen-binding fragment thereof, which antibody is effective for depleting primate B cells in vivo, and its H In the -chain variable region (V _H ), at least the CDR H3 sequence of SEQ ID NO: 12 from the anti-human CD20 antibody (FIG. 1B) and the human consensus framework (FR) residues of human heavy chain subgroup III (V _H III) are substantially Include. In a preferred embodiment, the antibody further comprises an H chain CDR H1 sequence of SEQ ID NO: 10 and a CDR H2 sequence of SEQ ID NO: 11, more preferably an L chain CDR L1 sequence of SEQ ID NO: 4, a CDR L2 sequence of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 Further comprising a CDR L3 sequence of, and substantially a human consensus framework (FR) residue of human light chain subgroup I (VI), wherein the V _H region can be linked to a human IgG chain constant region, for example, May be IgG1 or IgG3. In a preferred embodiment, the antibody comprises the V _H sequence of SEQ ID NO: 8 (v16 as shown in FIG. 1B) and optionally also comprises the V _L sequence of SEQ ID NO: 2 (v16 as shown in FIG. 1A), which is May have amino acid substitutions of D56A and N100A in the H chain and amino acid substitutions of S92A in the L chain (v96). Preferably, the antibody is an original antibody comprising the light chain amino acid sequences and heavy chain amino acid sequences of SEQ ID NOs: 13 and 14, respectively, as shown in FIGS. Another preferred embodiment is 2H7.v31 wherein the antibody comprises the light and heavy chain amino acid sequences of SEQ ID NOs: 13 and 15, respectively, as shown in FIGS. 2 and 4. Antibodies herein may further comprise one or more amino acid substitutions within the Fc region that enhance ADCC and / or CDC activity, eg, the amino acid substitution is S298A / E333A / K334A, more preferably SEQ ID NO: 15 2H7.v31 with a heavy chain amino acid sequence of (as shown in FIG. 4). All of these antibodies may further comprise one or more amino acid substitutions in the Fc region that reduce CDC activity, for example at least the substitution K322A. See US Pat. No. 6,528,624B1 (Idusogie et al.). .

바람직한 인간화 2H7은 가변 경쇄 서열Preferred humanized 2H7 is a variable light chain sequence

;

및 가변 중쇄 서열And variable heavy chain sequences

을 포함하는 본래 항체 또는 항체 단편이다.Original antibody or antibody fragment comprising a.

인간화 2H7 항체가 본래 항체인 경우에는, 바람직하게 이것이 경쇄 아미노산 서열If the humanized 2H7 antibody is originally an antibody, preferably it is a light chain amino acid sequence

;

및 중쇄 아미노산 서열And heavy chain amino acid sequences

또는 중쇄 아미노산 서열:Or heavy chain amino acid sequence:

을 포함한다.It includes.

본 발명의 바람직한 양태에서는, 2H7 버젼 16에 기초한 변이체의 V 영역이 다음 표에 나타낸 아미노산 치환 위치를 제외하고는, v16의 아미노산 서열을 가질 것이다. 달리 지시되지 않는 한, 2H7 변이체는 v16과 동일한 L 쇄를 가질 것이다.In a preferred embodiment of the invention, the V region of the variant based on 2H7 version 16 will have the amino acid sequence of v16, except for the amino acid substitution positions shown in the following table. Unless otherwise indicated, 2H7 variants will have the same L chain as v16.

2H7 V 버젼2H7 V version 중쇄 (V_H) 변화Heavy chain (V _H ) change 경쇄 (V_L) 변화Light chain (V _L ) change Fc 변화Fc change 3131 -- -- S298A, E333A, K334AS298A, E333A, K334A 9696 D56A, N100AD56A, N100A S92AS92A 114114 D56A, N100AD56A, N100A M32L,S92AM32L, S92A S298A, E333A, K334AS298A, E333A, K334A 115115 D56A, N100AD56A, N100A M32L,S92AM32L, S92A S298A, E333A, K334A, E356D, M358LS298A, E333A, K334A, E356D, M358L

"항체-의존성 세포-매개된 세포독성" 및 "ADCC"는 Fc 수용체 (FcRs)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포 [예: 천연 킬러 (NK) 세포, 호중구, 및 대식 세포]가 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식한 다음, 연속해서 이러한 표적 세포의 용해를 유발시키는 세포-매개된 반응을 지칭한다. ADCC를 매개하는데 있어 주요 세포인 NK 세포는 FcγRIII 만을 발현하는 반면, 단구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [참고: Ravetch and Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92]의 464면의 표 3에 요약되어 있다. 관심있는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 검정, 예를 들어 미국 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재된 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정에 유용한 효과기 세포에는 말초혈 단핵 세포 (PBMC) 및 천연 킬러 (NK) 세포가 포함된다. 또 다른 한편 또는 부가적으로, 관심있는 분자의 ADCC 활성은 생체 내에서, 예를 들어 문헌 [참고: Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998)]에 기재된 바와 같이 동물 모델에서 평가할 수 있다."Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity" and "ADCC" refers to the binding of nonspecific cytotoxic cells (eg, natural killer (NK) cells, neutrophils, and macrophages) expressing Fc receptors (FcRs) onto target cells. Recognizing an antibody then refers to a cell-mediated response that subsequently induces lysis of such target cells. NK cells, the major cells in mediating ADCC, express only FcγRIII, whereas monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression on hematopoietic cells is described in Ravetch and Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92, summarized in Table 3 on page 464. To assess ADCC activity of a molecule of interest, in vitro ADCC assays can be performed, such as those described in US Pat. No. 5,500,362 or 5,821,337. Effector cells useful for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells. Alternatively or additionally, ADCC activity of the molecule of interest can be determined in vivo, for example in Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998) can be evaluated in animal models.

"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcRs를 발현하고 효과기 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 상기 세포가 적어도 FcγRIII를 발현하고 ADCC 효과기 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예에는 말초혈 단핵 세포 (PBMC), 천연 킬러 (NK) 세포, 단구, 세포독성 T 및 호중구가 포함되는데, PBMCs 및 NK 세포가 바람직하다."Human effector cells" are leukocytes that express one or more FcRs and perform effector functions. Preferably, the cells express at least FcγRIII and perform ADCC effector functions. Examples of human leukocytes that mediate ADCC include peripheral blood mononuclear cells (PBMC), natural killer (NK) cells, monocytes, cytotoxic T and neutrophils, with PBMCs and NK cells being preferred.

"Fc 수용체" 및 "FcR"은 항체의 Fc 영역과 결합하는 수용체를 기재하기 위해 사용된다. 바람직한 FcR은 본래 서열 인간 FcR이다. 더우기, 바람직한 FcR은 IgG 항체와 결합하는 것이고 (감마 수용체), 이에는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 아부류의 수용체가 포함되는데, 이에는 이들 수용체의 대립 유전자성 변이체 및 대체 스플라이싱된 형태 또한 포함된다. FcγRII 수용체에는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제성 수용체")가 포함되는데, 이는 그의 세포질성 도메인에 있어서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질성 도메인 내에 면역수용체 티로신-기재 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제성 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질성 도메인 내에 면역수용체 티로신-기재 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 [참고: Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234 (1997)]. FcRs는 다음 문헌에 고찰되었다 [참고: Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-492 (1991); Capel et al. Immunomethods 4: 25-34 (1994); and de Haas et al. J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)]. 기타 FcRs는 앞으로 확인될 것을 포함하여, 본원의 용어 "FcR"에 포괄된다. 상기 용어에는 또한, 모계 IgGs를 태아에게 전이시키는데 책임이 있는 신생아 수용체 FcRn이 포함된다 [참고: Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)]. "Fc receptor" and "FcR" are used to describe receptors that bind to the Fc region of an antibody. Preferred FcRs are originally sequence human FcRs. Moreover, preferred FcRs bind to IgG antibodies (gamma receptors), which include receptors of the FcγRI, FcγRII and FcγRIII subclasses, including allelic variants and alternative spliced forms of these receptors. . FcγRII receptors include FcγRIIA (“activating receptor”) and FcγRIIB (“inhibiting receptor”), which have similar amino acid sequences that differ primarily in their cytoplasmic domains. Activating receptor FcγRIIA contains an immunoreceptor tyrosine-based activating motif (ITAM) in its cytoplasmic domain. The inhibitory receptor FcγRIIB contains an immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif (ITIM) in its cytoplasmic domain . See Daeron, Annu. Rev. Immunol . 15: 203-234 (1997). FcRs have been reviewed in Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-492 (1991); Capel et al. Immunomethods 4: 25-34 (1994); and de Haas et al. J. Lab. Clin. Med . 126: 330-41 (1995). Other FcRs are encompassed by the term "FcR" herein, including those to be identified in the future. The term also includes neonatal receptor FcRn, which is responsible for transferring maternal IgGs to the fetus. Guyer et al., J. Immunol . 117: 587 (1976) and Kim et al., J. Immunol . 24: 249 (1994).

"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에서 표적을 용해시킬 수 있는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체 시스템의 제1 성분 (Clq)을, 동족 항원과 복합체를 형성한 분자 (예: 항체)와 결합시킴으로써 개시시킨다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어 문헌 [참고: Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정을 수행할 수 있다."Complement dependent cytotoxicity" or "CDC" refers to the ability of a molecule to dissolve a target in the presence of complement. The complement activation pathway is initiated by binding the first component (Clq) of the complement system with a molecule (eg an antibody) complexed with a cognate antigen. To assess complement activation, see, eg, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996) can be performed a CDC assay.

"성장 억제성" 항체는 이러한 항체와 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 방지 또는 저하시키는 것이다. 예를 들어, 이러한 항체는 시험관내 및/또는 생체 내에서 B 세포의 증식을 방지 또는 저하시킬 수 있다.A "growth inhibitory" antibody is one that prevents or reduces the proliferation of cells expressing antigens that bind to such antibodies. For example, such antibodies may prevent or reduce the proliferation of B cells in vitro and / or in vivo.

"세포소멸을 유도시키는" 항체는 표준 세포소멸 검정, 예를 들어 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 내형질 세망의 확장, 세포 단편화 및/또는 막 소포 (세포소멸체로 불리움)의 형성에 의해 결정된 바와 같이, 예를 들어 B 세포의 프로그램된 세포 사멸을 유도시키는 것이다. Antibodies that “induce apoptosis” are those of standard apoptosis assays, such as binding of Annexin V, fragmentation of DNA, cell contraction, expansion of endoplasmic reticulum, cell fragmentation and / or membrane vesicles (called apoptotic bodies). As determined by formation, for example, induction of programmed cell death of B cells.

"본래 항체"는 통상적으로, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종-사량체성 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 디설파이드 연쇄 수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄들 간에 다양하다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한, 규칙적으로 이격된 쇄내 디설파이드 브릿지를 갖는다. 각 중쇄는 한 말단에 가변 도메인 (V_H)에 이어 수 많은 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 한 말단에 가변 도메인 (V_L)을 갖고, 그의 다른 말단에 불변 도메인을 갖는다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 간의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.A “original antibody” is typically a hetero-tetrameric glycoprotein of about 150,000 Daltons, composed of two identical light chains (L) and two identical heavy chains (H). Each light chain is linked to the heavy chain by one covalent disulfide bond, while the disulfide chain number varies between the heavy chains of different immunoglobulin isotypes. Each heavy and light chain also has regularly spaced intrachain disulfide bridges. Each heavy chain has at one end a variable domain (V _H ) followed by a number of constant domains. Each light chain has a variable domain (V _L ) at one end and a constant domain at its other end. The constant domain of the light chain is aligned with the first constant domain of the heavy chain, and the light chain variable domain is aligned with the variable domain of the heavy chain. Particular amino acid residues are believed to form an interface between the light chain and heavy chain variable domains.

용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체들 간의 서열에 있어 광범위하게 상이하고, 이러한 부분은 특정한 각 항체가 그의 특정한 항원에 대한 특이성과 결합을 위해 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성이 항체의 가변 도메인 전반에 걸쳐 균등한 수준으로 분포되지는 않는다. 이는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 둘 다 내에 초가변 영역으로 불리우는 3가지 절편에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분이 골격 영역 (FRs)으로 지칭된다. 본래 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FRs을 포함하는데, 이는 β-시트 구조를 연결하고 몇몇 경우에는 이러한 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는, 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 β-시트 입체 배치를 상당 부분 채택하고 있다. 각 쇄 내의 초가변 영역은 상기 FRs에 의해 아주 근접하게 함께 결합되어 있고, 다른 쇄로부터의 초가변 영역은 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다 [참고: Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]. 불변 영역은 항원에 대한 항체 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 각종의 효과기 기능, 예를 들어 ADCC에 있어서의 항체 참여를 나타낸다.The term “variable” refers to the fact that certain portions of the variable domains differ widely in sequence between antibodies, and that portions refer to the fact that each particular antibody is used for binding to specificity for that particular antigen. However, the variability is not evenly distributed throughout the variable domains of antibodies. It is concentrated in three segments called hypervariable regions in both the light chain and heavy chain variable domains. The more highly conserved portions of variable domains are referred to as framework regions (FRs). The variable domains of the original heavy and light chains each comprise four FRs, which are linked by three hypervariable regions, linking the β-sheet structure and in some cases forming a loop that forms part of this β-sheet structure. The β-sheet three-dimensional configuration is adopted in large part. The hypervariable regions in each chain are bound together very closely by the FRs, and the hypervariable regions from the other chain contribute to the formation of the antigen binding site of the antibody. Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]. The constant region does not directly participate in antibody binding to the antigen but exhibits a variety of effector functions, for example antibody participation in ADCC.

항체를 파파인 분해시키면, "Fab" 단편으로 불리우는 2개의 동일한 항원 결합성 단편 (각각은 단일 항원 결합 부위를 갖는다)과 잔류성 "Fc" 단편 (이의 명칭은 용이하게 결정화될 수 있는 그의 능력을 반영한다)이 생성된다. 펩신 처리하면, 2개의 항원 결합 부위를 갖고 항원과 여전히 가교 결합할 수 있는 F(ab')₂ 단편이 생성된다.Papain digestion of antibodies reflects two identical antigen-binding fragments, each with a single antigen-binding site, called "Fab" fragments, and residual "Fc" fragments, whose names reflect their ability to readily crystallize. ) Is generated. Pepsin treatment results in an F (ab ′) ₂ fragment having two antigen binding sites and still capable of crosslinking with the antigen.

"Fv"는 완전한 항체 인식 및 항체 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 영역은 1개의 중쇄 가변 도메인과 1개의 경쇄 가변 도메인이 단단하게 비공유적으로 연합된 이량체로 이루어진다. 이러한 입체 배치에서는, 각 가변 도메인의 3개 초가변 영역이 V_H-V_L 이량체 표면 상에 항원 결합 부위를 명백히 규정하도록 상호 작용한다. 집합적으로, 6개 초가변 영역이 항체에 항원 결합 특이성을 부여해 준다. 그러나, 전체 결합 부위 보다는 낮은 친화도이긴 하지만, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 특정 항원에 대해 특이적인 3개의 초가변 영역 만을 포함하는 Fv의 절반)도 항원을 인식하고 결합할 수 있는 능력을 지니고 있다."Fv" is the minimum antibody fragment which contains a complete antibody recognition and antibody binding site. This region consists of a dimer in which one heavy chain variable domain and one light chain variable domain are tightly noncovalently associated. In this steric configuration, the three hypervariable regions of each variable domain interact to clearly define the antigen binding site on the V _H -V _L dimer surface. Collectively, six hypervariable regions confer antigen binding specificity to the antibody. However, even with a lower affinity than the entire binding site, even a single variable domain (or half of the Fv containing only three hypervariable regions specific for a particular antigen) has the ability to recognize and bind antigen.

Fab 단편은 또한, 경쇄의 불변 도메인과, 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 (hinge) 영역으로부터의 1개 이상 시스테인을 포함한 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 수 개의 잔기를 부가한다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 1개 이상의 자유 티올기를 보유하고 있는, Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')₂ 항체 단편은 본래에는, 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 기타 화학적 커플링물이 또한 공지되어 있다.The Fab fragment also contains the constant domain of the light chain and the first constant domain (CH1) of the heavy chain. Fab 'fragments differ from Fab fragments in that they add several residues to the carboxy terminus of the heavy chain CH1 domain, including one or more cysteines from the antibody hinge region. Fab'-SH is the name herein for Fab 'wherein the cysteine residue (s) of the constant domains bear at least one free thiol group. F (ab ') ₂ antibody fragments were originally produced as pairs of Fab' fragments with hinge cysteines between them. Other chemical couplings of antibody fragments are also known.

모든 척추동물 종으로부터의 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2가지 명백한 별개 유형 [카파 (κ) 및 람다 (λ)로 지칭됨] 중의 하나로 지정될 수 있다.The “light chains” of antibodies (immunoglobulins) from all vertebrate species can be assigned to one of two distinct distinct types, called kappa (κ) and lambda (λ), based on the amino acid sequences of their constant domains. have.

그들 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 항체는 상이한 부류로 지정될 수 있다. 5가지 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있고, 이들 중의 몇 가지는 아부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가로 분할될 수 있다. 상이한 부류의 항체에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 명명된다. 상이한 부류의 면역글로불린의 소단위체 구조 및 3차원적 입체 배치는 널리 공지되어 있다.Depending on the amino acid sequences of the constant domains of their heavy chains, antibodies can be assigned to different classes. There are five main classes of antibodies: IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, some of which are further divided into subclasses (isotypes), for example IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, and IgA2. Can be. The heavy chain constant domains that correspond to the different classes of antibodies are named α, δ, ε, γ, and μ, respectively. Subunit structures and three-dimensional conformational arrangements of different classes of immunoglobulins are well known.

"단일 쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 V_H 및 V_L 도메인을 포함하는데, 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재한다. 바람직하게, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성할 수 있게 해주는, V_H 및 V_L 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv 고찰에 대해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]."Single chain Fv" or "scFv" antibody fragments comprise the V _H and V _L domains of an antibody, which domains are present in a single polypeptide chain. Preferably, the Fv polypeptide further comprises a polypeptide linker between the V _H and V _L domains, which allows the scFv to form the desired structure for antigen binding. For a review of scFv, reference may be made to Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).

용어 "디아보디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하는데, 이들 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 내에 가변 경쇄 도메인 (V_L)과 연결된 가변 중쇄 도메인 (V_H)을 포함한다 (V_H - V_L). 동일한 쇄 상에서 두 도메인 간에 짝짓기를 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 이들 도메인을 또 다른 쇄의 상보적 도메인와 짝짓기시킴으로써, 2개의 항원-결합 부위를 창출시킨다. 디아보디는, 예를 들어 다음 문헌에 보다 상세히 기재되었다 [참고: EP 404,097; WO 1993/11161; and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]. The term “diabody” refers to small antibody fragments having two antigen binding sites, which fragments comprise a variable heavy domain (V _H ) linked with a variable light domain (V _L ) in the same polypeptide chain (V _H − V _L ). By using a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain, the two antigen-binding sites are created by pairing these domains with the complementary domain of another chain. Diabodies are described, for example, in more detail in the following references [EP 404,097; WO 1993/11161; and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 90: 6444-6448 (1993).

본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동질적 항체 집단, 즉 집단을 차지하고 있는 개개의 항체가, 모노클로날 항체 생성 동안 유발될 수도 있는 가능한 변이체 (이러한 변이체는 일반적으로 미량으로 존재한다)를 제외하고는 동일하고/하거나 동일한 에피토프와 결합하는 집단으로부터 수득한 항체를 지칭한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대항하여 유도된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 달리, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대항하여 유도된다. 모노클로날 항체는 그의 특이성 이외에도, 기타 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 채로 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동질적 항체 집단으로부터 수득되는 바와 같은 항체의 형질을 지시하고, 특별한 방법에 의한 항체의 생성을 요구하는 것으로 추론되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라서 사용하고자 하는 모노클로날 항체는 문헌 [참고: Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 만들 수 있거나 또는 재조합 DNA 방법 [참고: 미국 특허 제4,816,567호]에 의해 만들 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한, 예를 들어 문헌 [참고: Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol.Biol., 222:581-597 (1991)]에 기재된 기술을 사용하여 파아지 (phage) 항체 라이브러리로부터 분리할 수 있다.As used herein, the term “monoclonal antibody” refers to a possible variant of a substantially homogeneous antibody population, i.e., an individual antibody that occupies the population, which may be caused during monoclonal antibody production (these variants are generally minor). Refers to an antibody obtained from a population that binds the same and / or the same epitope. Unlike polyclonal antibody preparations, which typically include different antibodies directed against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody is directed against a single determinant on an antigen. In addition to its specificity, monoclonal antibodies are advantageous in that they remain uncontaminated by other immunoglobulins. The modifier “monoclonal” indicates the trait of the antibody as obtained from a substantially homogeneous antibody population and is not inferred to require the production of the antibody by a particular method. For example, monoclonal antibodies to be used in accordance with the present invention can be made by the hybridoma method first described in Kohler et al., Nature , 256: 495 (1975) or by recombinant DNA methods. Reference: US Pat. No. 4,816,567. "Monoclonal antibodies" are also described, eg, in Clackson et al., Nature , 352: 624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol. , 222: 581-597 (1991), can be used to isolate from phage antibody libraries.

본원에서의 모노클로날 항체에는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄 일부가 특별한 종으로부터 유래되거나 특별한 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 반면, 나머지 쇄(들)은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 "키메라" 항체 (면역글로불린) 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 상기 항체의 단편이 포함된다 [참고: 미국 특허 제4,816,567호; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)]. 본원에서 관심있는 키메라 항체에는 비-인간 영장류 [예: 구세계 원숭이, 예를 들어 개코 원숭이 (baboon), 붉은털 원숭이 (rhesus) 또는 시노몰구스 원숭이]로부터 유래된 가변 도메인 항원 결합성 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화" 항체가 포함된다 [참고: 미국 특허 제5,693,780호].Monoclonal antibodies herein specifically include a heavy and / or light chain portion that is identical or homologous to the corresponding sequence in an antibody derived from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass, while the remaining chain (s) "Chimeric" antibodies (immunoglobulins) identical or homologous to the corresponding sequences in an antibody derived from another species or belonging to another antibody class or subclass, as well as fragments of said antibodies exhibiting the desired biological activity [ See, US Patent No. 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81: 6851-6855 (1984). Chimeric antibodies of interest herein include variable domain antigen binding sequences derived from non-human primates such as Old World monkeys such as baboon, rhesus or cynomolgus monkeys and human constants. Included are “primatized” antibodies comprising region sequences (US Pat. No. 5,693,780).

"인간화" 형태의 비-인간 (예: 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는, 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기를 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 보유하고 있는 비-인간 종 (공여자 항체), 예를 들어 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체시킨 인간 면역글로불린 (수용자 항체)이다. 몇몇 경우에는, 인간 면역글로불린의 골격 영역 (FR) 잔기를 상응하는 비-인간 잔기로 대체시킨다. 더우기, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 정련시키기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 1개 이상, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FRs는 인간 면역글로불린 서열의 것인데, 상기 언급된 바와 같은 FR 치환물은 제외된다. 인간화 항체는 임의로, 면역글로불린 불변 영역, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 상세 내역에 대해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)].Non-human (eg murine) antibodies in the “humanized” form are chimeric antibodies that contain minimal sequences derived from non-human immunoglobulins. In most cases, humanized antibodies are non-human species (donor antibodies) that retain the desired specificity, affinity, and capacity for residues from the hypervariable region of the recipient, for example mice, rats, rabbits, or non-humans. Human immunoglobulins (receptor antibodies) replaced with residues from the hypervariable regions of primates. In some cases, skeletal region (FR) residues of human immunoglobulins are replaced with corresponding non-human residues. Moreover, humanized antibodies may comprise residues not found in the recipient antibody or the donor antibody. These modifications are made to further refine antibody performance. In general, humanized antibodies will comprise substantially all of one or more, typically two, variable domains, where all or substantially all hypervariable loops correspond to non-human immunoglobulins and all or substantially all FRs Is of the human immunoglobulin sequence, except for the FR substitutions as mentioned above. The humanized antibody will optionally comprise an immunoglobulin constant region, typically at least a portion of the constant region of human immunoglobulin. For further details, reference may be made to Jones et al., Nature , 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature , 332: 323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol . 2: 593-596 (1992).

본원에 사용된 경우의 용어 "초가변 영역"은 항원 결합에 책임이 있는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 [예를 들면, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3); 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 31-35 (Hl), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); 참고: Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] 및/또는 "초가변 루프"로부터의 아미노산 잔기 [예를 들면, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3); 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); 참고: Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)]를 포함한다. "골격" 또는 "FR" 잔기는 본원에 규정된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.As used herein, the term “hypervariable region” refers to an amino acid residue of an antibody that is responsible for antigen binding. Hypervariable regions include amino acid residues from “complementarity determining regions” or “CDRs” (eg, residues 24-34 (L1), 50-56 (L2) and 89-97 (L3) in the light chain variable domain); And residues 31-35 (H1), 50-65 (H2) and 95-102 (H3) in the heavy chain variable domains; See: Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] and / or amino acid residues from “hypervariable loops” (eg, residues 26-32 (L1), 50-52 (L2) and 91-96 (L3) in the light chain variable domain); And residues 26-32 (H1), 53-55 (H2) and 96-101 (H3) in the heavy chain variable domains; See Chothia and Lesk, J. Mol. Biol . 196: 901-917 (1987). "Framework" or "FR" residues are those variable domain residues other than the hypervariable region residues as herein defined.

"있는 그대로의 (naked) 항체"는 이종 분자, 예를 들어 세포독성 부분 또는 방사성표지와 접합되지 않은 항체 (본원에 정의된 바와 같음)이다.A “naked antibody” is an antibody (as defined herein) that is not conjugated with a heterologous molecule, eg, a cytotoxic moiety or radiolabel.

"분리된" 항체는 그의 천연 환경의 특정 구성분으로 확인되어, 이러한 환경으로부터 격리 및/또는 회수시킨 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단적 또는 치료적 용도를 방해할 수도 있는 물질인데, 이에는 효소, 호르몬, 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질이 포함될 수 있다. 바람직한 양태에서는, 항체를 (1) 로리 (Lowry) 방법에 의해 결정된 바와 같이 항체의 95 중량％ 초과, 가장 바람직하게는 99 중량％ 초과로 정제시키거나, (2) 스피닝 컵 시퀘네이터 (spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상 잔기를 수득하기에 충분한 정도로 정제시키거나, 또는 (3) 쿠마시 블루, 또는 바람직하게는 은 염색 (silver stain)을 이용하여 환원성 또는 비환원성 조건 하에 SDS-PAGE에 의해 균질하도록 정제할 것이다. 분리된 항체에는 재조합 세포 내의 계내 항체가 포함되는데, 이는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로 분리된 항체는 한 가지 이상의 정제 단계에 의해 제조할 것이다.An “isolated” antibody is one that has been identified as a specific component of its natural environment and has been isolated and / or recovered from such an environment. Contaminant components of its natural environment are substances that may interfere with diagnostic or therapeutic uses for antibodies, which may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or nonproteinaceous solutes. In a preferred embodiment, the antibody is purified by (1) greater than 95%, most preferably greater than 99%, by weight of the antibody as determined by the Lowry method, or (2) a spinning cup sequenator. Purified to a degree sufficient to obtain at least 15 residues of the N-terminal or internal amino acid sequence by the use of C), or (3) reducible using Coomassie blue, or preferably silver stain, or Purification to be homogeneous by SDS-PAGE under non-reducing conditions. Isolated antibodies include antibodies in situ within recombinant cells since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. Ordinarily, isolated antibodies will be prepared by one or more purification steps.

본원에서의 "대상체"는 인간 대상체이다. 일반적으로, 이러한 대상체는 루푸스에 대한 치료법에 적격하다. 본원의 목적상, 이와 같이 적격한 대상체는, 예를 들어 루푸스에 걸린 것으로 새로이 진단되든지, 기존에 루푸스로 진단되었는데 새로이 재발(돌발)되었든지 아니면 만성적으로 스테로이드 의존성인데 새로이 재발되었든지 간에 루푸스에 걸린 것으로 진단되었거나; 루푸스의 한 가지 이상 징후, 증상 또는 기타 적응증을 경험하고 있거나 경험한 적이 있거나; 또는 루푸스에 걸릴 위험이 있는 대상체이다. 루푸스 치료에 적격한 대상체는 임의로는, 상승된 수준의 침윤성 CD20 세포에 대해 알아보기 위해 스크리닝한 적이 있거나, 또는 다음에 언급된 바와 같은 자기항체를 탐지하기 위한 검정을 사용하여 스크리닝하는 대상체로서 확인될 수 있는데, 자기항체 생성은 정성적으로 평가하고, 바람직하게는 정량적으로 평가한다. SLE와 연관된 자기항체의 예로는 항핵 Ab (ANA), 항-이중가닥 DNA (dsDNA) Ab, 항-Sm Ab, 항핵 리보뉴클레오단백질 Ab, 항인지질 Ab, 항-리보솜성 P Ab, 항-Ro/SS-A Ab, 항-Ro Ab, 및 항-La Ab가 있다.A “subject” herein is a human subject. Generally, such subjects are eligible for the treatment for lupus. For the purposes of this application, such eligible subjects, whether newly diagnosed with lupus, or previously diagnosed as lupus and newly relapsed (breaks) or chronically steroid-dependent but newly relapsed, develop lupus. Diagnosed as; Have or have experienced one or more signs, symptoms, or other indications for lupus; Or subjects at risk for lupus. Subjects eligible for lupus treatment have optionally been screened to learn for elevated levels of invasive CD20 cells or to be identified as subjects to be screened using assays to detect autoantibodies as mentioned below. Autoantibody production can be assessed qualitatively, preferably quantitatively. Examples of autoantibodies associated with SLE include antinuclear Ab (ANA), anti-double stranded DNA (dsDNA) Ab, anti-Sm Ab, antinuclear ribonucleoprotein Ab, antiphospholipid Ab, anti-ribosome P Ab, anti-Ro / SS-A Ab, anti-Ro Ab, and anti-La Ab.

신염성 루푸스 돌발은 (1) 1개월 내에 Scr의 >30％ 증가; (2) 신 증후군의 재발 또는 출현; 또는 (3) 기선 단백뇨 > 1 gm/24 hrs를 수반하거나 또는 실시예 1에 언급된 바와 같은 뇨 단백질의 3배 증가로서 정의된다. 루푸스 신염의 경우, 치료 적격성은 다음 실시예 1에 기재된 바와 같은 신장 기준에 의해 정의된 바와 같은 신염 돌발에 의해 명백하게 입증될 수 있다.Nephrogenic lupus outbreaks resulted in (1) a> 30% increase in Scr within 1 month; (2) relapse or appearance of nephrotic syndrome; Or (3) with baseline proteinuria> 1 gm / 24 hrs or as a threefold increase in urine protein as mentioned in Example 1. In the case of lupus nephritis, treatment eligibility can be clearly demonstrated by nephritis outbreaks as defined by the renal criteria as described in Example 1 below.

SLE의 진단은 현 미국 류마티스 학회 (ACR) 기준에 따를 수 있다. 활동성 질환은 실시예 2에 언급된 바와 같은, 1개의 영국 제도 (British Isles) 루푸스 활성 군 (BILAG) "A" 기준 또는 2개의 BILAG "B" 기준에 의해 규정될 수 있다. 문헌 [참고: Tan et al. "The Revised Criteria for the Classification of SLE" Arth Rheum 25 (1982)]의 내용을 각색한, SLE를 진단하기 위해 사용되어 온 몇몇 징후, 증상 또는 기타 적응증은 협부(뺨) 발진, 예를 들어 볼 전반에 걸친 발진, 원판상 발진 또는 붉게 도드라진 반점 (red raised patches), 광민감증, 예를 들어 피부 발진을 발생시키거나 증가시키는 일광에 대한 반응, 구강 궤양, 예를 들어 코 또는 입 안의 궤양, 통상적으로 무통의 관절염, 예를 들어 2개 이상의 말초 관절이 관여하는 비-미란성 관절염 (관절 주변 뼈가 파괴되지 않은 관절염), 장막염, 흉막염 또는 심막염, 신장 장애, 예를 들어 과도한 뇨 단백질 (1일 0.5 gm 초과 또는 시험 스틱 상의 3+) 및/또는 세포성 원주 (뇨 및/또는 백혈구 및/또는 신장 세관 세포로부터 유래된 비정상적 요소), 신경학적 징후, 증상 또는 기타 적응증, 발작 (경련), 및/또는 정신병 유발요인인 것으로 공지된 약물 또는 대사 장애의 부재 하에서의 정신병, 및 혈액학적 징후, 증상 또는 기타 적응증, 예를 들어 용혈성 빈혈 또는 백혈구 감소증 (백혈구 계수치가 평방 밀리리터당 4,000개 이하 세포이다) 또는 림프구 감소증 (평방 밀리리터당 1,5000개 미만 림프구) 또는 저혈소판증 (평방 밀리리터당 100,000개 미만 혈소판)일 수 있다. 백혈구 감소증과 림프구 감소증은 2가지 이상의 직접적인 원인에 근거하여 탐지해야만 한다. 저혈소판증은 이를 유도시키는 것으로 공지된 약물의 부재 하에서 탐지해야만 한다. 본 발명은 루푸스의 이들 징후, 증상 또는 기타 적응증으로만 제한되지 않는다.The diagnosis of SLE may be in accordance with the current American Rheumatic Society (ACR) criteria. Active disease may be defined by one British Isles lupus active group (BILAG) "A" criteria or two BILAG "B" criteria, as mentioned in Example 2. See Tan et al. Some signs, symptoms, or other indications that have been used to diagnose SLE, adapted from "The Revised Criteria for the Classification of SLE" Arth Rheum 25 (1982), are associated with buccal rashes, e.g. Rash over, disc rash or red raised patches, photosensitivity, such as response to sunlight causing or increasing skin rash, oral ulcers, such as ulcers in the nose or mouth, Usually painless arthritis, for example non-erosive arthritis involving two or more peripheral joints (arthritis without bone fracture around the joints), meningitis, pleurisy or pericarditis, kidney disorders, eg excessive urine protein (Greater than 0.5 gm per day or 3+ on test sticks) and / or cellular columnar (abnormal elements derived from urine and / or leukocytes and / or renal tubular cells), neurological signs, symptoms or other indications, seizures ( ) And / or psychosis in the absence of a drug or metabolic disorder known to be a psychotic trigger, and hematological signs, symptoms or other indications, such as hemolytic anemia or leukopenia (leukocyte count less than 4,000 per square milliliter). Cells) or lymphocytosis (less than 15,000 lymphocytes per milliliter) or hypothrombocytosis (less than 100,000 platelets per milliliter). Leukopenia and lymphocytosis should be detected based on two or more direct causes. Hypothelium must be detected in the absence of a drug known to induce it. The present invention is not limited to only these signs, symptoms or other indications of lupus.

본원에서 특정 대상체의 "치료 (처치)"는 치료적 처치와 예방적 조치 둘 다를 지칭한다. 치료가 필요한 대상체에는 이미 루푸스에 걸린 대상체 뿐만 아니라 루푸스를 예방하고자 하는 대상체가 포함된다. 따라서, 본원의 대상체는 루푸스에 걸린 것으로 진단될 수 있거나 또는 루푸스에 걸릴 것으로 예측되거나 걸리기 쉽다."Treatment (treatment)" of a particular subject herein refers to both therapeutic and prophylactic measures. Subjects in need of treatment include those already suffering from lupus, as well as those who wish to prevent lupus. Thus, a subject herein may be diagnosed with lupus or is predicted or susceptible to lupus.

루푸스의 "증상"은 대상체가 경험하고 질병의 지표인, 구조, 기능 또는 감각 면에서 정상적인 것으로부터 일탈되거나 병적인 모든 현상이다.Lupus's "symptoms" are any phenomena that deviate or are pathological from normal in terms of structure, function, or sensation that a subject experiences and is an indicator of disease.

"유효량"이란 표현은 루푸스를 예방, 경감 또는 치료하는데 유효한 항체의 양을 지칭한다.The expression “effective amount” refers to the amount of antibody effective to prevent, alleviate or treat lupus.

"항체 노출"은 약 1일 내지 약 5주 간에 걸쳐 투여된 1회 이상 용량에서 본 발명의 항체와 접촉하거나 이에 노출되는 것을 지칭한다. 이들 용량은 1회로 제공하거나 또는 노출 전 기간에 걸쳐 고정되거나 불규칙적인 시간 간격으로 제공할 수 있는데, 예를 들어 4주 동안 매주 1회 투여하거나 2회 용량을 약 13일 내지 17일 간격으로 나누어 투여할 수 있다. 초기 및 후속 항체 노출은 본원에 상세히 기재되는 바와 같이 서로 일정 시간 간격을 둘 수 있다."Antibody exposure" refers to contacting or being exposed to an antibody of the invention at one or more doses administered over about 1 day to about 5 weeks. These doses may be given once or at fixed or irregular time intervals throughout the pre-exposure period, for example, once a week for four weeks or two doses divided about 13 to 17 days apart. can do. Initial and subsequent antibody exposures can be spaced apart from one another as described in detail herein.

보조 요법을 위해 본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역억제제"는 본원에서 치료하고자 하는 포유류의 면역계를 억제하거나 은폐시키는 작용을 하는 물질을 지칭한다. 이에는 사이토킨 생성을 억제하거나, 자기 항원 발현을 하향 조절 또는 억제시키거나, 또는 MHC 항원을 은폐시키는 물질이 포함될 것이다. 이러한 작용제의 예에는 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘 [참고: 미국 특허 제4,665,077호]; 비스테로이드계 소염 약물 (NSAIDs); 강시클로비르 (ganciclovir), 타크롤리무스 (tacrolimus), 글루코코르티코이드, 예를 들어 코르티솔 또는 알도스테론, 소염제, 예를 들어 시클로옥시게나제 억제제, 5-리폭시게나제 억제제, 또는 류코트리엔 수용체 길항제; 퓨린 길항제, 예를 들어 아자티오프린 또는 미코페놀레이트 모페틸 (MMF); 알킬화제, 예를 들어 시클로포스파미드; 브로모크립틴; 다나졸; 다프손; 글루타르알데히드 (미국 특허 제4,120,649호에 기재된 바와 같이, MHC 항원을 은폐시킨다); MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-개체특이형 항체; 시클로스포린 A; 스테로이드, 예를 들어 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드 유사체, 예를 들어 프레드니손, 메틸프레드니솔론 및 덱사메타손; 디히드로폴레이트 리덕타제 억제제, 예를 들어 메토트렉세이트 (경구 또는 피하); 히드록시클로로퀸; 설파살라진; 레플루노미드; 사이토킨 또는 사이토킨 수용체 항체, 예를 들어 항-인터페론-알파, -베타, 또는 -감마 항체, 항종양 괴사 인자-알파 항체 [인플릭시마브 (infliximab) 또는 아달리무마브 (adalimumab)], 항-TNF-알파 면역부착인자 (에탄에르셉트), 항종양 괴사 인자-베타 항체, 항-인터루긴-2 항체 및 항-IL-2 수용체 항체; 항-LFA-1 항체, 예를 들어 항-CD11a 및 항-CD18 항체; 항-L3T4 항체; 이종 항-림프구 글로불린; 범-T 항체, 바람직하게는 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3 결합성 도메인을 함유하는 가용성 펩티드 [참고: WO 1990/08187 (1990년 7월 26일자로 공개됨)]; 스트렙토키나제; TGF-베타; 스트렙토도르나제; 숙주로부터의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 데옥시스페르구알린; 라파마이신; T-세포 수용체 [참고: Cohen et al., 미국 특허 제5,114,721호]; T-세포 수용체 단편 [참고: Offner et al., Science, 251: 430-432 (1991); WO 1990/11294; Ianeway, Nature, 341: 482 (1989); and WO 1991/01133]; 및 T-세포-수용체 항체 [참고: EP 340,109], 예를 들어 T10B9가 포함된다.The term “immunosuppressant” as used herein for adjuvant therapy refers to a substance that functions to inhibit or conceal the immune system of the mammal to be treated herein. This will include substances that inhibit cytokine production, downregulate or inhibit self antigen expression, or conceal MHC antigens. Examples of such agents include 2-amino-6-aryl-5-substituted pyrimidines (US Pat. No. 4,665,077); Nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs); Ganciclovir, tacrolimus, glucocorticoids such as cortisol or aldosterone, anti-inflammatory agents such as cyclooxygenase inhibitors, 5-lipoxygenase inhibitors, or leukotriene receptor antagonists; Purine antagonists such as azathioprine or mycophenolate mofetil (MMF); Alkylating agents such as cyclophosphamide; Bromocriptine; Danazol; Daphson; Glutaraldehyde (covers MHC antigens, as described in US Pat. No. 4,120,649); Anti-idiotypic antibodies against MHC antigens and MHC fragments; Cyclosporin A; Steroids such as corticosteroids or glucocorticosteroids or glucocorticoid analogs such as prednisone, methylprednisolone and dexamethasone; Dihydrofolate reductase inhibitors such as methotrexate (oral or subcutaneous); Hydroxychloroquine; Sulfasalazine; Leflunomide; Cytokine or cytokine receptor antibodies, such as anti-interferon-alpha, -beta, or -gamma antibodies, anti-tumor necrosis factor-alpha antibodies [infliximab or adalimumab], anti- TNF-alpha immunoadhesion factor (ethanehercept), antitumor necrosis factor-beta antibody, anti-interlugin-2 antibody and anti-IL-2 receptor antibody; Anti-LFA-1 antibodies, such as anti-CD11a and anti-CD18 antibodies; Anti-L3T4 antibodies; Heterologous anti-lymphocyte globulin; Pan-T antibodies, preferably anti-CD3 or anti-CD4 / CD4a antibodies; Soluble peptide containing LFA-3 binding domain (WO 1990/08187, published July 26, 1990); Streptokinase; TGF-beta; Streptodonase; RNA or DNA from the host; FK506; RS-61443; Deoxyspergualin; Rapamycin; T-cell receptor (Cohen et al., US Pat. No. 5,114,721); T-cell receptor fragments (Offner et al., Science , 251: 430-432 (1991); WO 1990/11294; Ianeway, Nature , 341: 482 (1989); and WO 1991/01133; And T-cell-receptor antibodies [EP 340,109], for example T10B9.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/하거나 세포의 파괴를 유발시키는 물질을 지칭한다. 이 용어에는 방사성 동위원소 (예: At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제, 및 독소, 예를 들어 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소 또는 소분자 독소, 또는 그의 단편이 포함된다.As used herein, the term “cytotoxic agent” refers to a substance that inhibits or prevents the function of a cell and / or causes cell destruction. The term includes radioisotopes (e.g., radioactive isotopes of At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , and Lu), chemotherapeutic agents, and toxins For example enzymatically active toxins or small molecule toxins of bacterial, fungal, plant or animal origin, or fragments thereof.

"화학요법제"는 암을 치료하는데 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예에는 알킬화제, 예를 들어, 티오테파 및 CYTOXAN^® 시클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예를 들어 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예를 들어 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예를 들어 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸롤로멜라민; 아세토게닌 (특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 [합성적으로 유사한 토포테칸 포함]; 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예를 들어 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예를 들어 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제, 예를 들어 엔디인 (enediyne) 항생제 [예를 들어, 칼리케아미신 (calicheamicin), 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (참고: Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. 33: 183-186 (1994)); 디네미신 (디네미신 A 포함); 비스포스포네이트, 예를 들어 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색단백질 엔디인 항생제 발색단], 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, ADRIAMYCIN^® 독소루비신 (모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 (예: 미토마이신 C), 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사제, 예를 들어 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예를 들어, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예를 들어 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들어 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예를 들어 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예를 들어 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예를 들어 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예를 들어 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK^® 다당류 복합체 (공급처: JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 TAXOL^® 파클리탁셀 (공급처: Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE™ 크레모포르-무함유, 파클리탁셀의 알부민-공학 처리시킨 나노입자 제형 (공급처: American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), 및 TAXOTERE^® 독세탁셀 (공급처: Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로람부실; GEMZAR^® 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예를 들어 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE^® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 (예: 레티노산); 카페시타빈; 및 상기 언급된 제제의 제약상 허용 가능한 염, 산 또는 유도체가 포함된다.A "chemotherapeutic agent" is a chemical compound useful for treating cancer. Examples of chemotherapeutic agents include alkylating agents such as thiotepa and CYTOXAN ^® cyclophosphamide; Alkyl sulfonates such as busulfan, improsulfan and pipeosulfan; Aziridine such as benzodopa, carbocuone, meturedopa, and uredopa; Ethyleneimines and methyllamelamines such as altretamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide and trimethylololomamine; Acetogenin (particularly bulatacin and bulatacinone); Camptothecins (including synthetically similar topotecans); Bryostatin; Calistatin; CC-1065 (including its adozelesin, carzelesin and bizelesin synthetic analogues); Cryptophycin (particularly cryptophycin 1 and cryptophycin 8); Dolastatin; Duocarmycin (including the synthetic analogues KW-2189 and CB1-TM1); Eleuterobins; Pankratisstatin; Sarcodictin; Spongestatin; Nitrogen mustards such as chlorambucil, chlornaphazine, colophosphamide, esturamustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, melphalan, nochevicin, phenesterin, Prednismustine, trophosphamide, uracil mustard; Nitrosureas such as carmustine, chlorozotocin, potemustine, lomustine, nimustine, and rannimustine; Antibiotics, for example enediyne antibiotics (for example calicheamicin, in particular calicheamicin gamma1I and calicheamicin omegal (see Agnew, Chem Intl. Ed. Engl . 33: 183). -186 (1994)); Dinemycin (including dinemycin A); Bisphosphonates such as clodronate; Esperamicin; As well as neochrominostatin chromophores and related chromoprotein endyne antibiotic chromophores], aclacinomycin, actinomycin, autamycin, azaserine, bleomycin, coctinomycin, carabicin, carminomycin, carcinophylline , Chromomycin, dactinomycin, daunorubicin, detorrubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, ADRIAMYCIN ^® doxorubicin (morpholino-doxorubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolino-doxorubicin and deoxydoxorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomycin, mitomycin (eg mitomycin C), mycophenolic acid, nogalamycin, olibomycin, Peplomycin, fort pyromycin, puromycin, quelamycin, rhorubicin, streptonigrin, streptozosin, tubercidine, ubenimex, ginostatin, zorubicin; Antimetabolic agents such as methotrexate and 5-fluorouracil (5-FU); Folic acid analogs such as denophtherine, methotrexate, pterophtherin, trimetrexate; Purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiamiprine, thioguanine; Pyrimidine analogs such as ancitabine, azacytidine, 6-azauridine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxyfluridine, enositabine, phloxuridine; Androgens such as calusosterone, dromostanolone propionate, epithiostanol, mepitiostane, testosterone; Antiadreners such as aminoglutetimides, mitotans, trilostane; Folic acid supplements such as proline acid; Aceglaton; Aldophosphamide glycosides; Aminolevulinic acid; Eniluracil; Amsacrine; Vestravusyl; Bisantrene; Edatraxate; Depopamine; Demecolsin; Diajikuon; Elponnitine; Elftinium acetate; Epothilones; Etogluside; Gallium nitrate; Hydroxyurea; Lentinane; Ronidinin; Maytansinoids such as maytansine and ansamitocin; Mitoguazone; Mitoxantrone; Fur coat; Nitraerin; Pentostatin; Penammet; Pyrarubicin; Roxanthrone; Grape filinic acid; 2-ethylhydrazide; Procarbazine; PSK ^® polysaccharide complex from JHS Natural Products, Eugene, OR; Lakamic acid; Lysine; Sizopyran; Spirogermanium; Tenuazone acid; Triazcuone; 2,2 ', 2 "-trichlorotriethylamine; trichothecene (especially T-2 toxin, veracrine A, loridine A and anguidine); urethane; bindesin; dacarbazine; mannosestin; mitobronititol ; Mitolactol; pipobroman; pricktocin; arabinoxide ("Ara-C");cyclophosphamide;thiotepa; taxoids, such as TAXOL ^® paclitaxel (source: Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE ™ cremophor-free, albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), and TAXOTERE ^® docetaxel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); chlorambucil; GEMZAR ^® gemcitabine; 6-thioguanine; mercaptopurine; methotrexate; platinum analogs such as cisplatin and carboplatin; vinblastine; platinum; etoposide (VP-16); epoch spa imide; mitoxantrone; vincristine; NAVELBINE vinorelbine ^®; no adjuvant ; Teniposide; edratrexate; daunomycin; aminopterin; xceloda; ibandronate; CPT-11; topoisomerase inhibitor RFS 2000; difluoromethylornithine (DMFO); retinoid (e.g. Retinoic acid), capecitabine, and pharmaceutically acceptable salts, acids or derivatives of the aforementioned agents.

상기 정의에는 또한, 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제시키는 작용을 하는 항호르몬제, 예를 들어 항에스트로겐제 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERMs)가 포함되는데, 예를 들어 타목시펜 (NOLVADEX^® 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FARESTON^® 토레미펜; 부신에서의 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE^® 메게스트롤 아세테이트, AROMASIN^® 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, RIVISOR^® 보로졸, FEMARA^® 레트로졸 및 ARIMIDEX^® 아나스트로졸; 및 항안드로겐, 예를 들어 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상한 세포 증식에 밀접한 영향을 미치는 신호 전달 경로에 있어 유전자, 예를 들어 PKC-알파, Ralf, 및 H-Ras의 발현을 억제시키는 안티센스 올리고뉴클레오티드; 백신, 예를 들어 유전자 요법 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN^® 백신, LEUVECTIN^® 백신 및 VAXID^® 백신; PROLEUKIN^® rIL-2; LURTOTECAN^® 토포이소머라제 1 억제제; ABARELIX^® rmRH; 및 이들의 제약상 허용 가능한 염, 산 또는 유도체가 포함된다.The definition also, there is included a section which serves to control the hormone action on tumors, or inhibit hormones, for example anti-estrogen agent and selective estrogen receptor modifiers (SERMs), such as tamoxifen (including NOLVADEX ^® tamoxifen) , Raloxifene, droroxifene, 4-hydroxytamoxifen, trioxyphene, keoxyphene, LY117018, onafristone and FARESTON ^® toremifene; Aromatase inhibitors that inhibit the enzyme aromatase that modulates estrogen production in the adrenal glands, such as 4 (5) -imidazole, aminoglutetimides, MEGASE ^® megestrol acetate, AROMASIN ^® exemestane, formemstan , Padrozole, RIVISOR ^® Borazole, FEMARA ^® Letrozole and ARIMIDEX ^® Anastrozole; And antiandrogens such as flutamide, nilutamide, bicalutamide, leuprolide and goserelin; As well as troxacitabine (1,3-dioxolane nucleoside cytosine analogue); Antisense oligonucleotides, in particular antisense oligonucleotides that inhibit expression of genes such as PKC-alpha, Ralf, and H-Ras in signal transduction pathways that have a close effect on abnormal cell proliferation; Vaccines, such as gene therapy vaccines, such as the ALLOVECTIN ^® vaccine, LEUVECTIN ^® vaccine and VAXID ^® vaccine; PROLEUKIN ^® rIL-2; LURTOTECAN ^® topoisomerase 1 inhibitor; ABARELIX ^® rmRH; And pharmaceutically acceptable salts, acids or derivatives thereof.

용어 "사이토킨"은 또 다른 세포 상에서 세포간 매개인자로서 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질에 대한 일반적 용어이다. 이러한 사이토킨의 예는 림포카인, 모노카인; 인터루킨 (ILs), 예를 들어 IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-15; 종양 괴사 인자, 예를 들어 TNF-α 또는 TNF-β; 및 기타 폴리펩티드 인자 [이에는 LIF 및 kit 리간드 (KL)가 포함된다]이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 사이토킨에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 사이토킨의 생물학적 활성 등가물, 예를 들어 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 제약상 허용 가능한 유도체 및 염이 포함된다.The term “cytokine” is a generic term for a protein released by one cell population that acts as an intercellular mediator on another cell. Examples of such cytokines include lymphokine, monocaine; Interleukins (ILs), for example IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL- 11, IL-12, IL-15; Tumor necrosis factors such as TNF-α or TNF-β; And other polypeptide factors, including LIF and kit ligands (KL). The term cytokine as used herein includes proteins from natural sources or recombinant cell culture, and biologically active equivalents of the original sequence cytokines, such as synthetically produced small molecule entities and pharmaceutically acceptable derivatives and salts thereof. do.

용어 "호르몬"은 관을 지닌 선상 기관에 의해 일반적으로 분비되는 폴리펩티드 호르몬을 지칭한다. 이러한 호르몬에 포함되는 것은 특히, 예를 들어 성장 호르몬, 예를 들면 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소의 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예를 들어 난포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 프롤락틴; 태반 락토겐; 마우스 성선자극호르몬 관련 펩티드; 인히빈; 악티빈; 뮐러의 억제성 물질; 및 트롬보포이에틴이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 호르몬에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 호르몬의 생물학적 활성 등가물, 예를 들어 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 제약상 허용 가능한 유도체 및 염이 포함된다.The term “hormone” refers to a polypeptide hormone that is normally secreted by the glandular organs with tubes. Included in such hormones are in particular, for example, growth hormones such as human growth hormone, N-methionyl human growth hormone, and bovine growth hormone; Parathyroid hormone; Thyroxine; insulin; Proinsulin; Relaxine; Prorelaxin; Glycoprotein hormones such as follicle stimulating hormone (FSH), thyroid stimulating hormone (TSH), and luteinizing hormone (LH); Prolactin; Placental lactogen; Mouse gonadotropin-related peptide; Inhibin; Actibin; Inhibitors of Müller; And thrombopoietin. The term hormone as used herein includes proteins from natural sources or recombinant cell cultures, and biologically active equivalents of the original sequence hormones, such as synthetically produced small molecule entities and pharmaceutically acceptable derivatives and salts thereof. do.

용어 "성장 인자"는 성장을 증진시키는 단백질을 지칭하고, 이에는, 예를 들어 간 성장 인자; 섬유아세포 성장 인자; 혈관 내피 성장 인자; 신경 성장 인자, 예를 들어 NGF-β; 혈소판-유래된 성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGFs), 예를 들어 TGF-α 및 TGF-β; 인슐린 유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도성 인자; 인터페론, 예를 들어 인터페론-α, -β 및 -γ; 및 콜로니 자극 인자 (CSFs), 예를 들어 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF)이 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 성장 인자에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 성장 인자의 생물학적 활성 등가물, 예를 들어 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 제약상 허용 가능한 유도체 및 염이 포함된다.The term “growth factor” refers to a protein that promotes growth, including, for example, liver growth factor; Fibroblast growth factor; Vascular endothelial growth factor; Nerve growth factors such as NGF-β; Platelet-derived growth factor; Transforming growth factors (TGFs) such as TGF-α and TGF-β; Insulin-like growth factor-I and -II; Erythropoietin (EPO); Osteoinductive factor; Interferons such as interferon-α, -β and -γ; And colony stimulating factors (CSFs) such as macrophage-CSF (M-CSF); Granulocyte-macrophage-CSF (GM-CSF); And granulocyte-CSF (G-CSF). As used herein, the term growth factor includes proteins from natural sources or recombinant cell cultures, and biologically active equivalents of the original sequence growth factor, such as synthetically produced small molecule entities and pharmaceutically acceptable derivatives and salts thereof. This includes.

용어 "인테그린"은 세포가 세포외 매트릭스와 결합할 수 있게 해주고 세포외 매트릭스와 반응할 수 있게 해주는 수용체 단백질을 지칭하고, 이는 각종 세포성 기능, 예를 들어 상처 치유, 세포 분화, 종양 세포의 귀소, 및 세포소멸에 관여한다. 이들은 세포-세포외 매트릭스 및 세포-세포 상호 작용에 관여하는 큰 계열의 세포 부착 수용체의 일부이다. 기능적 인테그린은 비-공유적으로 결합되는, 알파 및 베타로 지칭되는 2개의 막관통 당단백질 소단위체로 이루어진다. 알파 소단위체는 모두, 서로에 대한 몇몇 상동성을 공유하고 있는데, 이는 베타 소단위체에 대해서도 마찬가지이다. 상기 수용체는 항상 1개의 알파 쇄와 1개의 베타 쇄를 함유하고 있다. 이의 예에는 알파6베타1, 알파3베타1, 알파7베타1, LFA-1 등이 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 인테그린에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 인테그린의 생물학적 활성 등가물, 예를 들어 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 제약상 허용 가능한 유도체 및 염이 포함된다.The term “integrin” refers to a receptor protein that allows cells to bind to and react with the extracellular matrix, which refers to a variety of cellular functions such as wound healing, cell differentiation, homing of tumor cells. And cell death. They are part of a large family of cell adhesion receptors involved in extracellular matrix and cell-cell interactions. Functional integrins consist of two transmembrane glycoprotein subunits called alpha and beta that are non-covalently bound. Alpha subunits all share some homology to each other, as do beta subunits. The receptor always contains one alpha chain and one beta chain. Examples thereof include alpha 6 beta 1, alpha 3 beta 1, alpha 7 beta 1, LFA-1 and the like. The term integrin, as used herein, includes proteins from natural sources or recombinant cell culture, and biologically active equivalents of the original sequence integrin, such as synthetically produced small molecule entities and pharmaceutically acceptable derivatives and salts thereof. do.

본원의 목적상, "종양 괴사 인자-알파 (TNF-알파)"는 문헌 [참고: Pennica et al., Nature, 312: 721 (1984) or Aggarwal et al., JBC, 260: 2345 (1985)]에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 인간 TNF-알파 분자를 지칭한다.For purposes herein, "tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha)" is described in Pennica et al., Nature , 312: 721 (1984) or Aggarwal et al., JBC , 260: 2345 (1985). Refers to a human TNF-alpha molecule comprising the amino acid sequence as described in.

본원에서의 "TNF-알파 억제제"는 일반적으로 TNF-알파와의 결합과 그의 활성 중화를 통하여, TNF-알파의 생물학적 기능을 어느 정도 억제시키는 작용제이다. 본원에서 구체적으로 고려된 TNF 억제제의 예는 에탄에르셉트 (ENBREL^®), 인플릭시마브 (REMICADE^®), 및 아달리무마브 (HUMIRA™)이다.A “TNF-alpha inhibitor” herein is an agent that generally inhibits to some extent the biological function of TNF-alpha through binding to TNF-alpha and neutralizing its activity. Examples of TNF inhibitors specifically contemplated herein are ethanehercept (ENBREL ^® ), infliximab (REMICADE ^® ), and adalimumab (HUMIRA ™).

"질병 완화 항류마티스약" 또는 "DMARDs"의 예에는 히드록시클로로퀸, 설파살라진, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 에탄에르셉트, 인플릭시마브 (+ 구강 및 피하 메토트렉세이트), 아자티오프린, D-페니실라민, 금 염 (경구), 금 염 (근육내), 미노사이클린, 시클로스포린, 스타필로코쿠스성 (staphylococcal) 단백질 A 면역흡착 (그의 염 및 유도체 포함) 등이 포함된다.Examples of "disease relief antirheumatic drugs" or "DMARDs" include hydroxychloroquine, sulfasalazine, methotrexate, leflunomide, ethanehercept, infliximab (+ oral and subcutaneous methotrexate), azathioprine, D-pheny Silamine, gold salt (oral), gold salt (intramuscular), minocycline, cyclosporin, staphylococcal Protein A immunosorbent (including salts and derivatives thereof) and the like.

"비스테로이드계 소염 약물" 또는 "NSAIDs"의 예는 아세틸살리실산, 이부프로펜, 나프록센, 인도메타신, 술린닥, 톨메틴 (그의 염 및 유도체 포함) 등이다.Examples of "nonsteroidal anti-inflammatory drugs" or "NSAIDs" are acetylsalicylic acid, ibuprofen, naproxen, indomethacin, sulindac, tolmetin (including salts and derivatives thereof) and the like.

본원에서의 "인테그린 길항제 또는 항체"의 예에는 LFA-1 항체, 예를 들어 에팔리주마브 [efalizumab (RAPTIVA^®); Genentech으로부터 시판중임], 또는 알파 4 인테그린 항체, 예를 들어 나탈리주마브 [natalizumab (ANTEGREN^®); Biogen으로부터 입수 가능함], 또는 디아자사이클릭 페닐알라닌 유도체 [참고: WO 2003/89410], 페닐알라닌 유도체 [참고: WO 2003/70709, WO 2002/28830, WO 2002/16329 및 WO 2003/53926], 페닐프로피온산 유도체 [참고: WO 2003/10135], 엔아민 유도체 [참고: WO 2001/79173], 프로파노산 유도체 [참고: WO 2000/37444], 알카노산 유도체 [참고: WO 2000/32575], 치환된 페닐 유도체 [참고: 미국 특허 제6,677,339호 및 제6,348,463호], 방향족 아민 유도체 [참고: 미국 특허 제6,369,229호], ADAM 디스인테그린 도메인 폴리펩티드 [참고: US 2002/0042368], 알파v베타3 인테그린에 대한 항체 [참고: EP 633945], 아자-브릿지된 바이사이클릭 아미노산 유도체 [참고: WO 2002/02556] 등이 포함된다.Examples of “integrin antagonists or antibodies” herein include LFA-1 antibodies such as efalizumab (RAPTIVA ^® ); Commercially available from Genentech], or alpha 4 integrin antibodies such as natalizumab (ANTEGREN ^® ); Available from Biogen], or diazacyclic phenylalanine derivatives [cf. WO 2003/89410], phenylalanine derivatives [cf. WO 2003/70709, WO 2002/28830, WO 2002/16329 and WO 2003/53926], phenylpropionic acid derivatives [Reference: WO 2003/10135], enamine derivatives [reference: WO 2001/79173], propanoic acid derivatives [reference: WO 2000/37444], alkanoic acid derivatives [reference: WO 2000/32575], substituted phenyl derivatives [US Pat. Nos. 6,677,339 and 6,348,463], aromatic amine derivatives [US Pat. No. 6,369,229], ADAM disintegrin domain polypeptides [US 2002/0042368], antibodies to alphavbeta3 integrin [ Reference: EP 633945, aza-bridged bicyclic amino acid derivatives (WO 2002/02556) and the like.

"코르티코스테로이드"는 천연 발생적 코르티코스테로이드의 효과를 모방하거나 증대시키는 스테로이드의 일반적 화학 구조를 지닌 몇 가지 합성 또는 천연 발생적 물질 중의 어느 하나를 지칭한다. 합성 코르티코스테로이드의 예에는 프레드니손, 프레드니솔론 (메틸프레드니솔론 포함), 덱사메타손 트리암시놀론, 및 베타메타손이 포함된다."Corticosteroids" refers to any of several synthetic or naturally occurring substances having the general chemical structure of a steroid that mimics or augments the effects of naturally occurring corticosteroids. Examples of synthetic corticosteroids include prednisone, prednisolone (including methylprednisolone), dexamethasone triamcinolone, and betamethasone.

"패키지 삽입물"은 적응증, 활용, 투여량, 투여, 금기사항, 패키지된 제품과 병용될 기타 치료 제품, 및/또는 이러한 치료 제품의 사용과 관련한 경고에 관한 정보를 함유하고 있는, 치료 제품의 상업적 패키지에 통상적으로 포함되는 지시사항을 지칭하기 위해 사용된다.A "package insert" is a commercial product of a therapeutic product that contains information about indications, utilization, dosage, administration, contraindications, other therapeutic products to be used with the packaged product, and / or warnings regarding the use of such therapeutic products. It is used to refer to instructions that are typically included in a package.

"초기 노출로부터" 또는 앞서 노출로부터 일정 시간까지 투여 또는 제공되지 않는 노출이란, 1회분 이상 용량을 해당 노출시 투여하는 경우에는, 제2 또는 후속 노출에 대한 시간이 앞서 노출로부터의 용량이 투여된 시점으로부터 측정된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 2회분 용량이 초기 노출시 투여된 경우에는, 제1회분 또는 제2회분 용량을 초기 노출 내에서 투여한 시점으로부터 측정된 바와 같이 적어도 약 16주 내지 54주까지는 제2 노출이 제공되지 않는다. 유사하게, 3회분 용량이 투여된 경우에는, 제1회분, 제2회분 또는 제3회분 용량을 초기 노출 내에서 투여한 시점으로부터 제2 노출 제공 시점을 결정할 수 있다. 바람직하게는, "초기 노출로부터"는 제1회분 용량 투여 시점으로부터 측정한다.An exposure that is not administered or provided from the initial exposure or until a predetermined time from the previous exposure means that when a dose of one or more doses is administered at the time of exposure, the dose from the previous exposure has been administered prior to the second or subsequent exposure. It is measured from the point of view. For example, if two doses are administered at the initial exposure, the second exposure is provided at least about 16 to 54 weeks as measured from the time point at which the first or second dose was administered within the initial exposure. It doesn't work. Similarly, when a three dose dose is administered, the second exposure donor can be determined from the point at which the first, second or third dose was administered within the initial exposure. Preferably, "from initial exposure" is determined from the time of first dose administration.

"약물"은 루푸스 또는 그의 증상 또는 부작용을 치료하기 위한 활성약이다.A "drug" is an active agent for treating lupus or its symptoms or side effects.

II. 치료 (처치)II. Treatment (Treatment)

본 발명은 B-세포 표면 마커와 결합하는 항체 (바람직하게는 CD20 항체)의 유효량을 치료에 적격한 대상체에게 투여하여 약 0.5 내지 4 그램 (바람직하게는 약 1.5 내지 3.5 그램, 보다 바람직하게는 약 1.5 내지 2.5 그램)의 초기 항체 노출을 제공한 다음, 약 0.5 내지 4 그램 (바람직하게는 약 1.5 내지 3.5 그램, 보다 바람직하게는 약 1.5 내지 2.5 그램)의 제2 항체 노출을 제공하는 것을 포함하여 [이러한 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주 (바람직하게는 약 20주 내지 30주, 보다 바람직하게는 약 46주 내지 54주)까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공된다], 상기 치료에 적격한 대상체에게서 루푸스를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 목적상, 제2 항체 노출은 초기 항체 노출 후 대상체를 CD20 항체로 치료하는 다음 차례이므로, 초기 노출과 제2 노출 사이에는 어떠한 CD20 항체 치료나 노출도 개입되지 않는다.The present invention is directed to administering an effective amount of an antibody (preferably a CD20 antibody) that binds a B-cell surface marker to a subject eligible for treatment to about 0.5 to 4 grams (preferably about 1.5 to 3.5 grams, more preferably about 1.5 to 2.5 grams) of initial antibody exposure, followed by about 0.5 to 4 grams (preferably about 1.5 to 3.5 grams, more preferably about 1.5 to 2.5 grams) of the second antibody exposure [This second exposure is not provided from the initial exposure to about 16 to 54 weeks (preferably about 20 to 30 weeks, more preferably about 46 to 54 weeks), and each antibody exposure is a single dose of the antibody. Or as two or three separate doses of an antibody], a method of treating lupus in a subject eligible for such treatment. For the purposes of the present invention, since the second antibody exposure is the next time the subject is treated with the CD20 antibody after the initial antibody exposure, no CD20 antibody treatment or exposure is involved between the initial exposure and the second exposure.

상기 방법은 바람직하게, 대상체에게 유효량의 CD20 항체를 투여하여 약 0.5 내지 4 그램 (바람직하게는 약 1.5 내지 3.5 그램, 보다 바람직하게는 약 1.5 내지 2.5 그램)의 제3 항체 노출을 제공하는 것을 포함한다 [이러한 제3 노출은 초기 노출로부터 약 46주 내지 60주 (바람직하게는 약 46주 내지 55주, 보다 바람직하게는 약 46주 내지 52주)까지는 제공되지 않는다]. 바람직하게는, 초기 노출로부터 적어도 약 70주 내지 75주까지는 추가의 항체 노출이 전혀 제공되지 않고, 보다 더 바람직하게는 초기 노출로부터 약 74주 내지 80주 까지는 추가의 항체 노출이 전혀 제공되지 않는다.The method preferably comprises administering to the subject an effective amount of a CD20 antibody to provide a third antibody exposure of about 0.5 to 4 grams (preferably about 1.5 to 3.5 grams, more preferably about 1.5 to 2.5 grams) [This third exposure is not provided from the initial exposure to about 46 to 60 weeks (preferably about 46 to 55 weeks, more preferably about 46 to 52 weeks)]. Preferably, no further antibody exposure is provided at least from about 70 to 75 weeks from the initial exposure, and even more preferably no further antibody exposure is provided from about 74 to 80 weeks from the initial exposure.

본원에서 한 가지 이상의 항체 노출은 대상체에게 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 (즉, 제1회분 용량과 제2회분 용량으로 구성되거나, 또는 제1회분, 제2회분 또는 제3회분 용량으로서 구성된다) 제공될 수 있다. 각 항체 노출에 이용된 특정한 용량 수 (1회, 2회 또는 3회 든지 간에)는, 예를 들어 치료받는 루푸스의 유형, 이용된 항체의 유형, 제2 약물이 다음에 언급된 바와 같이 이용되는지의 여부 및 이용된 제2 약물의 유형, 및 투여 방법 및 투여 횟수에 좌우된다. 별개 용량을 투여하는 경우에는, 제2회분 용량 또는 제3회분 용량을 앞서 용량 투여 시점으로부터 바람직하게는 약 1일 내지 20일, 보다 바람직하게는 약 6일 내지 16일, 가장 바람직하게는 약 14일 내지 16일 후에 투여한다. 별개 용량은 바람직하게는 총 약 1일 내지 4주, 보다 바람직하게는 총 약 1일 내지 20일의 기간 (예를 들어, 6일 내지 18일의 기간) 내에 투여한다. 이러한 하나의 국면에서는, 별개 용량을 대략 매주 투여하는데, 제2회분 용량은 제1회분 용량 투여로부터 대략 1주 후에 투여하고, 제3회분 용량은 제2회분 용량 투여로부터 대략 1주 후에 투여한다. 이러한 항체의 별개 용량 각각은 바람직하게는 약 0.5 내지 1.5 그램, 보다 바람직하게는 약 0.75 내지 1.3 그램이다.Exposure of one or more antibodies herein refers to a subject as a single dose of antibody, or as two or three separate doses of antibody (ie, consisting of a first dose and a second dose, or a first dose, a second Configured as a batch or as a third batch dose). The specific number of doses (either once, twice or three times) used for each antibody exposure is, for example, the type of lupus to be treated, the type of antibody used, and whether the second drug is used as mentioned below. And the type of second drug used, and the method and number of administrations. In the case of administering separate doses, the second or third dose is preferably about 1 to 20 days, more preferably about 6 to 16 days, most preferably about 14 Dosing after 1 to 16 days. The separate doses are preferably administered within a period of about 1 to 4 weeks in total, more preferably about 1 to 20 days in total (eg, a period of 6 to 18 days). In one such aspect, separate doses are administered approximately weekly, with the second dose administered approximately one week after the first dose administered and the third dose administered approximately one week after the second dose administered. Each of the separate doses of such antibodies is preferably about 0.5 to 1.5 grams, more preferably about 0.75 to 1.3 grams.

한 양태에서는, 대상체에게 약 3회 이상의 항체 노출, 예를 들어 약 3 내지 60회 노출, 보다 바람직하게는 약 3 내지 40회 노출, 가장 바람직하게는 약 3 내지 20회 노출을 제공한다. 바람직하게는, 이러한 노출을 각각 약 24주 간격으로 투여한다. 한 양태에서는, 각 항체 노출을 단일 용량의 항체로서 제공한다. 또 다른 양태에서는, 각 항체 노출을 별개 용량의 항체로서 제공한다. 그러나, 모든 항체 노출이 단일 용량 또는 별개 용량으로서 제공될 필요는 없다.In one embodiment, the subject is provided with at least about 3 antibody exposures, eg, about 3 to 60 exposures, more preferably about 3 to 40 exposures, and most preferably about 3 to 20 exposures. Preferably, each of these exposures is administered about 24 weeks apart. In one embodiment, each antibody exposure is provided as a single dose of the antibody. In another embodiment, each antibody exposure is provided as a separate dose of antibody. However, not all antibody exposures need to be provided as a single dose or as separate doses.

항체는 있는 그대로의 항체이거나 또는 또 다른 분자, 예를 들어 세포독성제 (예: 방사성 화합물)와 접합될 수 있다. 본원에서 바람직한 항체는 리툭시마브, 인간화 2H7 (예를 들어, 서열 2 및 8 중의 가변 도메인 서열을 포함함) 또는 HUMAX-CD20™ 항체 (젠마브: Genmab), 보다 바람직하게는 리툭시마브 또는 인간화 2H7이다.The antibody may be an antibody as it is or may be conjugated with another molecule, for example a cytotoxic agent (eg a radioactive compound). Preferred antibodies herein are rituximab, humanized 2H7 (eg comprising the variable domain sequences in SEQ ID NOs: 2 and 8) or HUMAX-CD20 ™ antibodies (Genmab: Genmab), more preferably rituximab or humanized 2H7.

한 양태에서는, 루푸스를 치료하기 위해 대상체에게 기존에 면역억제제와 같은 약물(들)로 치료한 적이 결코 없고/없거나 기존에 B-세포 표면 마커에 대한 항체 (예: CD20 항체)로 치료한 적이 결코 없다. 또 다른 양태에서는, 루푸스를 치료하기 위해 대상체에게 기존에 약물(들)로 치료한 적이 있고/있거나 기존에 상기 항체로 치료한 적이 있다. 또 다른 양태에서는, CD20 항체가 루푸스를 치료하기 위해 대상체에게 투여되는 유일한 약물이다. 또 다른 양태에서는, CD20 항체가 루푸스를 치료하기 위해 사용되는 약물들 중의 하나이다. 추가의 양태에서는, 대상체가 류마티스성 관절염을 앓고 있지 않다. 또한 추가의 양태에서는, 대상체가 다발성 경화증을 앓고 있지 않다. 또 다른 양태에서는, 대상체가 루푸스 이외의 자가면역 질환을 앓고 있지 않다. 가장 나중 언급한 것에 관해 설명하자면, 본원에서의 "자가면역 질환"은 개개인 자신의 조직 또는 기관이나 그의 공동-분리물 또는 발현으로부터 유발되고 이에 대항하여 유도된 질병 또는 장애, 또는 이로부터 비롯되는 질환이다. 한 양태에서는, 상기 질환이 정상적인 신체 조직 및 항원과 반응성인 항체가 B 세포에 의해 생성됨으로써 비롯되거나 이에 의해 악화되는 질환을 지칭한다. 기타 양태에서는, 자가면역 질환이 자기 항원 (예: 핵 항원)으로부터의 에피토프에 대해 특이적인 자기항체의 분비와 관련이 있는 질환이다.In one embodiment, the subject has never been previously treated with a drug (s) such as an immunosuppressant to treat lupus and / or has never been previously treated with an antibody against a B-cell surface marker (eg, a CD20 antibody). none. In another embodiment, the subject has previously been treated with the drug (s) and / or has previously been treated with the antibody to treat lupus. In another embodiment, the CD20 antibody is the only drug administered to a subject to treat lupus. In another embodiment, the CD20 antibody is one of the drugs used to treat lupus. In a further embodiment, the subject is not suffering from rheumatoid arthritis. In still further embodiments, the subject is not suffering from multiple sclerosis. In another embodiment, the subject does not have an autoimmune disease other than lupus. As for the last mention, the term "autoimmune disease" herein refers to a disease or disorder caused by, or derived from, an individual's own tissue or organ or co-separation or expression thereof, or a disease resulting therefrom. to be. In one embodiment, the disease refers to a disease caused by or aggravated by antibodies produced by B cells that are reactive with normal body tissues and antigens. In other embodiments, the autoimmune disease is a disease associated with the secretion of autoantibodies specific for epitopes from self antigens (eg, nuclear antigens).

항체는 적합한 모든 수단, 예를 들어 비경구, 국부, 피하, 복강내, 폐내, 비내 및/또는 병변내 투여에 의해 투여한다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 수막강내 투여가 또한 고려된다 [참고: US 2002/0009444, Grillo-Lopez, A concerning intrathecal delivery of a CD20 antibody]. 또한, 항체는 펄스 주입 (예를 들어, 항체 용량을 감소시키면서 투여한다)에 의해 투여하는 것이 적합할 수 있다. 바람직하게는, 정맥내 또는 피하 투여하고, 보다 바람직하게는 정맥내 주입한다. 각 노출은 동일하거나 상이한 투여 수단을 이용하여 제공할 수 있다. 한 양태에서는, 각 노출이 정맥내 투여에 의해 이루어진다. 또 다른 양태에서는, 각 노출이 피하 투여에 의해 이루어진다. 또 다른 양태에서는, 노출이 정맥내 투여와 피하 투여 둘 다에 의해 이루어진다.The antibody is administered by any suitable means, for example parenteral, topical, subcutaneous, intraperitoneal, intrapulmonary, intranasal and / or intralesional administration. Parenteral infusions include intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal or subcutaneous administration. Intramedullary administration is also contemplated [US 2002/0009444, Grillo-Lopez, A concerning intrathecal delivery of a CD20 antibody]. In addition, it may be suitable to administer the antibody by pulse infusion (eg, with decreasing antibody dose). Preferably, intravenous or subcutaneous administration, more preferably intravenous infusion. Each exposure may be provided using the same or different means of administration. In one embodiment, each exposure is by intravenous administration. In another embodiment, each exposure is made by subcutaneous administration. In another embodiment, the exposure is by both intravenous and subcutaneous administration.

한 양태에서는, CD20 항체를 정맥내 푸쉬 또는 거환이 아닌 느린 정맥내 주입제로서 투여한다. 예를 들어, 메틸프레드니솔론 (예: 약 80 내지 120 mg 정맥내, 보다 바람직하게는 약 100 mg 정맥내)을, CD20 항체 주입하기 대략 30분 전에 투여한다. CD20 항체는, 예를 들어 전용선을 통하여 주입한다.In one embodiment, the CD20 antibody is administered as a slow intravenous infusion that is not an intravenous push or a bolus. For example, methylprednisolone (eg, about 80-120 mg intravenously, more preferably about 100 mg intravenously) is administered approximately 30 minutes prior to CD20 antibody injection. CD20 antibody is injected, for example via a leased line.

CD20 항체에 대한 복수회 용량 노출 중의 초기 용량에 대해, 또는 노출이 단지 1회 용량 만을 포함하는 경우에는 단일 용량에 대해서는, 상기 주입을 시간당 약 50 mg의 속도로 시작하는 것이 바람직하다. 이는 약 30분 마다 시간당 약 50 mg의 속도에서 시간당 최대 약 400 mg으로 단계적으로 상승시킬 수 있다. 그러나, 대상체가 주입과 관계된 반응을 일으킨다면, 이러한 주입 속도는, 예를 들어 현재 주입 속도의 절반으로, 예를 들어 시간당 100 mg에서 시간당 50 mg으로 감속시키는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 이러한 용량의 CD20 항체 (예를 들어, 약 1000-mg 총 용량)의 주입을 약 255분 (4시간 15분)에 완료한다. 바람직하게는, 주입을 시작하기 약 30분 내지 60분 전에 예방적 처치를 위해 아세트아미노펜/파라세타몰 (예: 약 1 g) 및 디펜히드라민 HCl (예: 약 50 mg 또는 유사한 작용제의 등가 용량)을 대상체에게 구강 투여한다.For the initial dose during multiple dose exposure to the CD20 antibody, or for a single dose if the exposure comprises only one dose, it is desirable to start the infusion at a rate of about 50 mg per hour. It can be stepped up to a maximum of about 400 mg per hour at a rate of about 50 mg per hour every about 30 minutes. However, if the subject has a reaction associated with infusion, it is desirable to reduce this infusion rate, for example to half the current infusion rate, for example from 100 mg per hour to 50 mg per hour. Preferably, the infusion of this dose of CD20 antibody (eg, about 1000-mg total dose) is completed at about 255 minutes (4 hours 15 minutes). Preferably, acetaminophen / paracetamol (eg, about 1 g) and diphenhydramine HCl (eg, an equivalent dose of about 50 mg or similar agent) are administered for prophylactic treatment about 30 to 60 minutes prior to beginning infusion. Oral administration to the subject.

1회 이상 주입 (용량)의 CD20 항체를 제공하여 총 노출을 달성하는 경우에는, 이러한 주입 양태에서 제2 또는 후속 CD20 항체 주입을 초기 주입 속도 보다 높은 속도, 예를 들어 시간당 약 100 mg으로 시작하는 것이 바람직하다. 이러한 속도는 약 30분 마다 시간당 약 100 mg의 속도에서 시간당 최대 약 400 mg으로 단계적으로 상승시킬 수 있다. 대상체가 주입과 관계된 반응을 일으킨다면, 이러한 주입 속도는 상기 주입 속도의 절반으로, 예를 들어 시간당 100 mg에서 시간당 50 mg으로 감속시키는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 제2 또는 후속 용량의 CD20 항체 (예를 들어, 약 1000-mg 총 용량)의 주입을 대략 195분 (3시간 15분)에 완료한다.If at least one injection (dose) of CD20 antibodies is provided to achieve total exposure, then in this embodiment of infusion the second or subsequent CD20 antibody infusion begins at a rate higher than the initial infusion rate, for example about 100 mg per hour. It is preferable. This rate can be stepped up from about 100 mg / hour up to about 400 mg / hour every about 30 minutes. If the subject has a reaction associated with infusion, it is desirable to reduce this infusion rate to half of the infusion rate, for example from 100 mg per hour to 50 mg per hour. Preferably, the infusion of the second or subsequent dose of CD20 antibody (eg, about 1000-mg total dose) is completed at approximately 195 minutes (3 hours 15 minutes).

B 세포 표면 마커와 결합하는 항체 (예: CD20 항체)를 제2 약물, 예를 들어 세포독성제, 화학요법제, 항말라리아제, 면역억제제, 사이토킨, 사이토킨 길항제 또는 항체, 성장 인자, 호르몬, 인테그린, 인테그린 길항제 또는 항체와 함께 투여할 수 있다.Antibodies that bind B cell surface markers (e.g., CD20 antibodies) may be selected from a second drug such as a cytotoxic agent, chemotherapeutic agent, antimalarial agent, immunosuppressant, cytokine, cytokine antagonist or antibody, growth factor, hormone, integrin, It can be administered in combination with an integrin antagonist or an antibody.

예를 들어, 항체를 화학요법제, 인터페론 부류 약물, 예를 들어 IFN-베타-la (REBIF^® 및 AVONEX^®) 또는 IFN-베타-lb (BETASERON^®), 올리고펩티드, 예를 들어 글라티라머 아세테이트 (COPAXONE^®), 세포독성제 [예를 들어, 미톡산트론 (NOVANTRONE^®), 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 클로람부실 및 아자티오프린], 정맥내 면역글로불린 (감마 글로불린), 림프구-고갈 요법 (예: 미톡산트론, 시클로포스파미드, CAMPATH™ 항체, 항-CD4, 클라드리빈, 전신 조사, 골수 이식), 코르티코스테로이드 [예: 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 예를 들어 저용량 프레드니손, 덱사메타손 또는 글루코르티코이드 (예를 들어, 전신 코르티코스테로이드 요법을 포함한 관절 주사를 통함)], 비-림프구-고갈성 면역억제 요법 (예: MMF 또는 시클로스포린), "스타틴" 부류의 콜레스테롤 저하성 약물 [이에는 세리바스타틴 (BAYCOL™), 플루바스타틴 (LESCOL™), 아토르바스타틴 (LIPITOR™), 로바스타틴 (MEVACOR™), 프라바스타틴 (PRAVACHOL™), 및 심바스타틴 (ZOCOR™)이 포함된다], 에스트라디올, 테스토스테론 (임의로는 상승된 투여량; 참고: Stuve et al. Neurology 8:290-301 (2002)], 호르몬-대체 요법, 항말라리아제, 예를 들어 히드록시클로로퀸, 클로로퀸 또는 퀴나크린, 루푸스와 관계되거나 이차적 증상 (예: 경직, 실금, 통증, 피로)에 대한 치료제, TNF 억제제, DMARD, NSAID, 항-인테그린 항체 또는 길항제, 혈장분리반출술 (plasmapheresis), 레보티록신, 시클로스포린 A, 소마타스타틴 유사체, 사이토킨, 항-사이토킨 길항제 또는 항체, 항대사제, 면역억제제, 재활 수술, 방사성요오드, 갑상선절제술, 또 다른 B-세포 표면 길항제/항체 등과 병용할 수 있다.For example, the antibody may be a chemotherapeutic agent, an interferon class of drugs, such as IFN-beta-la (REBIF ^® and AVONEX ^® ) or IFN-beta-lb (BETASERON ^® ), oligopeptides such as glatiramer acetate (COPAXONE ^® ), cytotoxic agents [eg, mitoxantrone (NOVANTRONE ^® ), methotrexate, cyclophosphamide, chlorambucil and azathioprine], intravenous immunoglobulins (gamma globulin), lymphocyte-depletion therapy (E.g. mitoxantrone, cyclophosphamide, CAMPATH ™ antibody, anti-CD4, cladribine, systemic irradiation, bone marrow transplantation), corticosteroids [e.g. methylprednisolone, prednisone, e.g. low dose prednisone, dexamethasone or glue Corticosteroids (eg, via joint injection, including systemic corticosteroid therapy), non-lymphocyte-depleting immunosuppressive therapy (eg, MMF or cyclosporin), cholesterol-lowering drugs of the "statin" class [Includes cerivastatin (BAYCOL ™), fluvastatin (LESCOL ™), atorvastatin (LIPITOR ™), lovastatin (MEVACOR ™), pravastatin (PRAVACHOL ™), and simvastatin (ZOCOR ™)], estradiol , Testosterone (optionally elevated dose; see Stuve et al. Neurology 8: 290-301 (2002)), hormone-replacement therapy, antimalarial agents such as hydroxychloroquine, chloroquine or quinacrine, lupus Or treatment for secondary or secondary symptoms (eg, stiffness, incontinence, pain, fatigue), TNF inhibitors, DMARDs, NSAIDs, anti-integrin antibodies or antagonists, plasmaapheresis, levothyroxine, cyclosporine A, somatostatin May be used in combination with analogs, cytokines, anti-cytokine antagonists or antibodies, anti-metabolic agents, immunosuppressants, rehabilitation surgery, radioiodine, thyroidectomy, another B-cell surface antagonist / antibody, and the like.

CD20 항체가 제1 약물로 지칭되는 경우, 이러한 제2 약물의 보다 구체적인 예에는 화학요법제, 세포독성제, 항-인테그린, 항말라리아제, 예를 들어 히드록시클로로퀸, 클로로퀸 또는 퀴나크린, 감마 글로불린, 항-CD4, 클라드리빈, 코르티코스테로이드, MMF, 시클로스포린, 스타틴 부류의 콜레스테롤 저하성 약물, 에스트라디올, 테스토스테론, 호르몬-대체 약물, TNF 억제제, DMARD, NSAID, 레보티록신, 시클로스포린 A, 소마타스타틴 유사체, 사이토킨 길항제 또는 사이토킨-수용체 길항제, 항대사제, 면역억제제, 및/또는 또 다른 B 세포 표면 마커 항체, 예를 들어 리툭시마브와 인간화 2H7의 병용물이 포함된다. 또한 보다 바람직한 것은 화학요법제, 면역억제제, 세포독성제, 인테그린 길항제, 항말라리아제, 사이토킨 길항제 또는 호르몬, 또는 이들 약물의 한 가지 이상 병용물이다.When CD20 antibodies are referred to as first drugs, more specific examples of such second drugs include chemotherapeutic agents, cytotoxic agents, anti-integrins, antimalarial agents such as hydroxychloroquine, chloroquine or quinacrine, gamma globulin, Anti-CD4, cladribine, corticosteroid, MMF, cyclosporine, statins cholesterol lowering drugs, estradiol, testosterone, hormone-replacement drugs, TNF inhibitors, DMARD, NSAID, levothyroxine, cyclosporin A, somata Statin analogues, cytokine antagonists or cytokine-receptor antagonists, anti-metabolic agents, immunosuppressants, and / or other B cell surface marker antibodies, such as combinations of rituximab with humanized 2H7. Also more preferred are chemotherapeutic agents, immunosuppressants, cytotoxic agents, integrin antagonists, antimalarial agents, cytokine antagonists or hormones, or combinations of one or more of these drugs.

이들 제2 약물은 일반적으로, 본원에서 앞서 사용된 바와 동일한 투여량과 투여 경로로 사용하거나, 또는 지금까지 이용되어온 투여량의 약 1 내지 99％로 사용한다. 이러한 제2 약물을 반드시 사용하는 경우에는, 이로써 유발되는 부작용을 없애거나 저하시키기 위해, 특히 항체를 이용한 초기 투여를 벗어난 후속 투여에서 CD20 항체가 존재하지 않는 경우 보다 더 낮은 양으로 이들 제2 약물을 사용하는 것이 바람직하다.These second drugs are generally used at the same dosages and routes of administration as previously used herein, or at about 1 to 99% of the dosages used so far. If such second drugs must be used, these second drugs may be used in a lower amount than in the absence of a CD20 antibody in subsequent administrations beyond the initial administration with the antibody, in order to eliminate or reduce the side effects caused thereby. It is preferable to use.

제2 약물을 항체 노출과 함께 유효한 양으로 투여하는 경우에는, 이를 모든 노출과 함께, 예를 들어 단지 1회 노출과 함께 투여하거나, 또는 1회 이상 노출과 함께 투여할 수 있다. 한 양태에서는, 제2 약물을 초기 노출과 함께 투여한다. 또 다른 양태에서는, 제2 약물을 초기 및 제2 노출과 함께 투여한다. 또한 추가의 양태에서는, 제2 약물을 모든 노출과 함께 투여한다.If the second drug is administered in an effective amount with the antibody exposure, it can be administered with all the exposures, eg with only one exposure, or with one or more exposures. In one embodiment, the second drug is administered with the initial exposure. In another embodiment, the second drug is administered with the initial and second exposures. In still further embodiments, the second drug is administered with all exposures.

병용 투여에는 별개의 제형 또는 단일 제약 제형을 사용하여 공동-투여 (동시 투여)하는 것과, 어느 한 순서로 연속적으로 투여하는 것이 포함되는데, 양 활성제 (또는 모든 활성제)가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 데에는 일정 시간이 소요된다. 바람직한 양태에서는, 초기 노출 후, 상기 작용제의 양을 감소시키거나 없애 대상체가 부작용을 수반하는 작용제, 예를 들어 프레드니손 및 시클로포스파미드, 특히 코르티코스테로이드에 노출되는 것을 감소시킨다. 또 다른 양태에서는, 제2 약물의 양을 감소시키지 않거나 없애지도 않는다.Combination administration includes co-administration (simultaneous administration) using separate formulations or a single pharmaceutical formulation, and continuous administration in either order, in which both active agents (or all active agents) simultaneously exert their biological activity. It takes some time. In a preferred embodiment, after initial exposure, the amount of the agent is reduced or eliminated to reduce the subject's exposure to agents with side effects such as prednisone and cyclophosphamide, especially corticosteroids. In another embodiment, the amount of the second drug is not reduced or eliminated.

바람직한 양태에서는, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제를 초기 노출과 함께 투여하는데, 보다 바람직하게는 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 아자티오프린, 미코페놀레이트 모페틸 또는 6-머캅토퓨린을 투여한다. 또 다른 국면에서는, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제를 후속 노출과 함께 투여하지 않거나, 또는 초기 노출과 함께 투여되는 양 보다 적은 양으로 투여한다. 그러나, 이러한 작용제는 임의로, 초기 투여에 수반되는 바와 동일하거나 유사한 양으로, 1회 초과 노출 (모든 노출 포함)과 함께 투여된다.In a preferred embodiment, an immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent is administered with initial exposure, more preferably corticosteroid, methotrexate, cyclophosphamide, hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, azathioprine, mycophenol Late mofetil or 6-mercaptopurine is administered. In another aspect, the immunosuppressive agent, antimalarial agent or chemotherapeutic agent is not administered with subsequent exposure, or in an amount less than that administered with initial exposure. However, such agents are optionally administered with one overexposure (including all exposures) in the same or similar amount as involved with the initial administration.

루푸스가 루푸스 신염인 경우에는, 바람직하게 약 2 내지 3 그램, 보다 바람직하게 약 2 그램의 CD20 항체를 초기 노출로서 투여한다. 또 다른 바람직한 양태에서 3 그램을 투여하는 경우에는, 약 1 그램의 CD20 항체을 초기 노출로서 약 3주 동안 매주 투여한다. 또 다른 바람직한 양태에서 2 그램을 투여하는 경우에는, 약 1 그램의 CD20 항체를 투여한 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체를 초기 노출로서 투여한다. 또 다른 국면에서는, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 2 그램의 양으로 투여된다. 또 다른 국면에서는, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 1 그램의 항체를 투여한 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체를 투여한다.If lupus is lupus nephritis, preferably about 2-3 grams, more preferably about 2 grams of CD20 antibody is administered as the initial exposure. In another preferred embodiment, when administering 3 grams, about 1 gram of CD20 antibody is administered weekly for about 3 weeks as the initial exposure. In another preferred embodiment, when administering 2 grams, about 1 gram of CD20 antibody is administered followed by another about 1 gram of antibody as initial exposure within about 2 weeks. In another aspect, the second exposure is about 6 months from the initial exposure and is administered in an amount of about 2 grams. In another aspect, the second exposure is about 6 months from the initial exposure, about 1 gram of antibody is administered, and then another about 1 gram of antibody within about 2 weeks.

바람직하게, 루푸스 신염의 경우에는 코르티코스테로이드, 예를 들어 메틸프레드니솔론 및/또는 프레드니손을, CD20 항체 투여 전 및/또는 CD20 항체와 함께 대상체에게 투여한다. 바람직하게는, 제1 항체 노출시 2일 동안 매일 약 1000 mg의 메틸프레드니솔론을 대상체에게 정맥내 투여한다. 제1 항체 노출의 경우, 이러한 처치 후에 약 4주 동안 프레드니손을 1일 약 0.75 mg/kg의 초기 용량으로 경구 투여하고, 약 16주 까지 1일 약 10 내지 15 mg으로 점점 줄이는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 초기 용량 투여로부터 후속 용량의 CD20 항체를 주입하기 약 30 내지 60분 전에, 메틸프레드니솔론 약 100 mg을 정맥내 투여한다. 프레드니손을 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여하거나, 프레드니손을 제2 노출과 함께 투여하지 않거나, 또는 프레드니손을 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여하지만 제3 또는 후속 노출에서는 투여하지 않는 것이 또한 바람직하다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, MMF를 초기 항체 노출과 함께 투여하는 것이 바람직하며, MMF와 코르티코스테로이드를 동시에 투여하는 것이 특히 바람직하다. 바람직하게는, MMF를, 1일 약 1500 mg을 여러 회분으로 나누어 (1일 3회) 초기에 CD20 항체와 함께 투여하고, 대상체에게 관용되는 바 대로 약 4주까지 1일 약 3 g 이하의 표적 용량을 여러 회분으로 나누어 (1일 3회) 적정시킨다. 용량 감소가 필요한 경우에는, 약 250 내지 500 mg씩 감소시키는 것이 허용될 것이다. 또 다른 국면에서는, 시클로포스파미드를 초기 항체 노출시 코르티코스테로이드와 함께 또는 코르티코스테로이드 없이 대상체에게 투여할 수 있다. 시클로포스파미드를 투여하는 경우에는, 이를 제2 노출과 함께 투여하지 않는 것이 바람직하거나, 또는 제2 노출과 함께 투여하긴 하지만 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 투여한다. 시클로포스파미드를 제3 또는 후속 노출과 함께 투여하지 않는 것이 또한 바람직하다.Preferably, in the case of lupus nephritis, corticosteroids such as methylprednisolone and / or prednisone are administered to the subject before and / or with the CD20 antibody. Preferably, about 1000 mg of methylprednisolone is administered intravenously to the subject daily for two days upon exposure to the first antibody. For first antibody exposure, it is desirable to orally administer prednisone at an initial dose of about 0.75 mg / kg per day for about 4 weeks after such treatment, and gradually reduce to about 10-15 mg per day by about 16 weeks. Preferably, about 100-60 minutes prior to injecting subsequent doses of CD20 antibody from the initial dose administration, about 100 mg of methylprednisolone is administered intravenously. Prednisone is administered with the second exposure in a lesser amount than used with the initial exposure, prednisone is not administered with the second exposure, or prednisone is used in an amount less than that used with the initial exposure. It is also preferred to administer together but not at the third or subsequent exposure. Additionally or alternatively, it is preferred to administer MMF with initial antibody exposure, with particular preference for simultaneous administration of MMF and corticosteroids. Preferably, MMF is administered initially with CD20 antibody in several batches of about 1500 mg daily (three times daily) and up to about 4 g of target per day up to about 4 weeks as tolerated by the subject. The dose is divided into several portions (three times a day) and titrated. If dose reduction is needed, it will be acceptable to reduce by about 250 to 500 mg. In another aspect, cyclophosphamide may be administered to a subject with or without a corticosteroid upon initial antibody exposure. When cyclophosphamide is administered, it is preferred not to administer it with the second exposure, or in combination with the second exposure but in a smaller amount than that used with the initial exposure. It is also preferred that the cyclophosphamide is not administered with a third or subsequent exposure.

루푸스가 전신성 홍반성 루푸스인 경우에는, 약 2 그램의 CD20 항체를 초기 노출로서 투여하는 것이 바람직하다. 약 1 그램의 CD20 항체를 투여한 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체를 초기 노출로서 투여하는 것이 또한 바람직하다. 바람직하게는, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 2 그램의 양으로 투여된다. 또 다른 바람직한 국면에서는, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 1 그램의 항체를 투여한 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체를 투여한다.If lupus is systemic lupus erythematosus, it is preferred to administer about 2 grams of CD20 antibody as the initial exposure. It is also preferred to administer about 1 gram of CD20 antibody, followed by another about 1 gram of antibody as initial exposure within about 2 weeks. Preferably, the second exposure is about 6 months from the initial exposure and is administered in an amount of about 2 grams. In another preferred aspect, the second exposure is about 6 months from the initial exposure, about 1 gram of antibody is administered, and then another about 1 gram of antibody within about 2 weeks.

SLE의 경우에는, 바람직하게 프레드니손을 초기 노출 전 및/또는 초기 노출과 함께 투여하는데, 예를 들어 초기 노출 1주 전에 1일 약 0.4 내지 1 mg/kg의 양으로 투여한다. 보다 바람직하게는, 7일 기간에 걸쳐 그들의 BILAG 스코어 및 예비연구 프레드니손 용량을 기초로 하여, 1일 0.5 mg/kg, 0.75 mg/kg 또는 1.0 mg/kg의 초기 경구 프레드니손 섭생을 대상체에게 투여한다. 초기 CD20 항체 투여 후 약 16일 째에, 약 10주간에 걸쳐 대상체에게 프레드니손 용량을 점점 줄여 투여하여 프레드니손 용량이 1일 약 10 mg 미만이 되도록 하는 것이 바람직하다. 대상체에게 그들의 코르티코스테로이드 용량을 관용되는 바 대로 점점 지속적으로 줄여 1일 약 5 mg 이하의 표적 용량이 되도록 한다. 프레드니손을 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여하거나, 프레드니손을 제2 노출과 함께 투여하지 않거나, 또는 프레드니손을 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여하지만 제3 또는 후속 노출에서는 투여하지 않는 것이 또한 보다 바람직하다. 또 다른 바람직한 국면에서는 프레드니손 이외에, 항말라리아제, 예를 들어 히드록시클로로퀸, 클로로퀸 또는 퀴나크린, 또는 메토트렉세이트, 미코페놀레이트 모페틸, 아자티오프린 또는 6-머캅토퓨린을 투여한다. 이는 1회 이상 노출, 예를 들어 초기 또는 제2 노출, 또는 후속 노출 또는 모든 노출 동안에 투여할 수 있다. 이러한 양태에서는, 항말라리아제, 메토트렉세이트, 미코페놀레이트 모페틸, 아자티오프린 또는 6-머캅토퓨린을 임의로 단지 초기 노출 동안에만 투여하거나, 또는 임의로 제2 노출과 함께 투여하긴 하지만 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 투여한다.In the case of SLE, prednisone is preferably administered before and / or with the initial exposure, for example in an amount of about 0.4 to 1 mg / kg per day, one week before the initial exposure. More preferably, subjects are administered an initial oral prednisone regimen of 0.5 mg / kg, 0.75 mg / kg or 1.0 mg / kg per day based on their BILAG score and preliminary prednisone dose over a 7-day period. About 16 days after the initial CD20 antibody administration, it is desirable to gradually reduce the prednisone dose to the subject over about 10 weeks so that the prednisone dose is less than about 10 mg per day. Subjects will continue to gradually reduce their corticosteroid dose to a target dose of about 5 mg or less per day. Prednisone is administered with the second exposure in a lesser amount than used with the initial exposure, prednisone is not administered with the second exposure, or prednisone is used in an amount less than that used with the initial exposure. It is also more preferred to administer together but not at the third or subsequent exposure. In another preferred aspect, in addition to prednisone, antimalarial agents are administered, for example hydroxychloroquine, chloroquine or quinacrine, or methotrexate, mycophenolate mofetil, azathioprine or 6-mercaptopurine. It may be administered during one or more exposures, for example initial or second exposure, or subsequent or all exposures. In this embodiment, the antimalarial agent, methotrexate, mycophenolate mofetil, azathioprine, or 6-mercaptopurine is optionally administered only during the initial exposure, or optionally in combination with the second exposure but used with the initial exposure. It is administered in a smaller amount than that.

상기 항체의 생성, 변형 및 제형화 방법에 관한 논의는 다음과 같다.Discussion of methods for the generation, modification and formulation of the antibodies follows.

III. 항체 생성III. Antibody Production

본 발명의 방법 및 제조품은 B-세포 표면 마커와 결합하는 항체, 특히 CD20과 결합하는 항체를 사용하거나 이를 혼입시킬 수 있다. 따라서, 이러한 항체의 생성 방법이 본원에 기재된다.The methods and articles of manufacture of the present invention may employ or incorporate antibodies that bind to B-cell surface markers, particularly antibodies that bind to CD20. Thus, methods of producing such antibodies are described herein.

항체(들) 생성을 위해 또는 항체(들) 스크리닝을 위해 사용될 CD20 항원은, 예를 들어 목적하는 에피토프를 함유하는 가용성 형태의 CD20 또는 그의 일부일 수 있다. 또 다른 한편 또는 부가적으로, 그들의 세포 표면에 CD20을 발현하는 세포를 사용하여 항체(들)을 생성시키거나 이에 대해 스크리닝할 수 있다. 항체를 생성시키는데 유용한 기타 형태의 CD20은 당업자에게 명백할 것이다.The CD20 antigen to be used for antibody (s) production or for antibody (s) screening may be, for example, a soluble form of CD20 or a portion thereof containing the desired epitope. Alternatively or additionally, cells expressing CD20 on their cell surface can be used to generate or screen for antibody (s). Other forms of CD20 useful for producing antibodies will be apparent to those skilled in the art.

다음 설명은 본 발명에 따라서 사용된 항체를 생성하기 위한 기술을 예시한 것이다.The following description illustrates techniques for generating antibodies used in accordance with the present invention.

(i) 폴리클로날 항체(i) polyclonal antibodies

폴리클로날 항체는 관련 항원 및 아쥬반트를 수회 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사함으로써 동물에게서 생성시키는 것이 바람직하다. 이관능성 또는 유도체화제, 예를 들어 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시석신이미드 (리신 잔기를 통함), 글루타르알데히드, 석신산 무수물, SOCl₂ 또는 R¹N=C=NR (여기서, R 및 R¹은 상이한 알킬기이다)를 사용하여, 면역시키고자 하는 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin), 혈청 알부민, 소의 티로글로불린 또는 대두 트립신 억제제에 관련 항원을 접합시키는 것이 유용할 수 있다. Polyclonal antibodies are preferably produced in animals by several subcutaneous (sc) or intraperitoneal (ip) injections of the relevant antigen and adjuvant. Difunctional or derivatizing agents such as maleimidobenzoyl sulfosuccinimide esters (conjugation via cysteine residues), N-hydroxysuccinimides (through lysine residues), glutaraldehyde, succinic anhydride, SOCl ₂ or Using R ¹ N═C═NR where R and R ¹ are different alkyl groups, proteins that are immunogenic in the species to be immunized, such as keyhole limpet hemocyanin, serum albumin, It may be useful to conjugate the relevant antigen to bovine tyroglobulin or soybean trypsin inhibitor.

예를 들어, (각각, 토끼 또는 마우스에 대한) 100 ㎍ 또는 5 ㎍의 단백질 또는 접합체를 3 용적의 프로인트 완전 아주반트와 합하고, 이 용액을 다중 부위에 피내 주사함으로써, 동물을 항원, 면역원성 접합체 또는 유도체에 대항하여 면역시킨다. 1개월 후, 프로인트 완전 아주반트 중의 펩티드 또는 접합체 본래 양의 1/5 또는 1/10을 다중 부위에 피하 주사함으로써, 상기 동물을 추가 면역시킨다. 7 내지 14일 후에, 상기 동물을 출혈시키고, 혈청을 대상으로 하여 항체 역가에 대해 검정한다. 역가가 일정한 수준에 도달할 때까지 동물을 추가 면역시킨다. 바람직하게는, 동일한 항원의 접합체이긴 하지만, 상이한 단백질과 접합되고/되거나 상이한 가교결합 시약을 통하여 접합된 접합체를 이용하여 동물을 추가 면역시킨다. 접합체를 재조합 세포 배양물 내에서 단백질 융합물로서 만들 수도 있다. 또한, 백반 등의 응집제를 적합하게 사용하여 면역 반응을 증강시킨다.For example, by combining 100 μg or 5 μg of protein or conjugate (for rabbits or mice, respectively) with 3 volumes of Freund's complete adjuvant and injecting this solution intramultipleally, the animal is antigen, immunogenic Immunize against a conjugate or derivative. One month later, the animal is further immunized by subcutaneous injection of 1/5 or 1/10 of the original amount of peptide or conjugate in Freund's complete adjuvant into multiple sites. After 7-14 days, the animals are bleeding and assayed for antibody titers in serum. The animal is further immunized until the titer reaches a certain level. Preferably, the conjugate is conjugated to the same antigen but conjugated to different proteins and / or conjugated via different crosslinking reagents to further immunize the animal. Conjugates can also be made as protein fusions in recombinant cell culture. In addition, flocculants such as alum are suitably used to enhance the immune response.

(ii) 모노클로날 항체(ii) monoclonal antibodies

모노클로날 항체는 실질적으로 동질적 항체 집단, 즉 집단을 차지하고 있는 개개의 항체가, 모노클로날 항체 생성 동안 유발될 수도 있는 가능한 변이체 (이러한 변이체는 일반적으로 미량으로 존재한다)를 제외하고는 동일하고/하거나 동일한 에피토프와 결합하는 집단으로부터 수득한다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 형질이 별개의 또는 폴리클로날 항체의 혼합물이 아니라는 것을 지시해준다.Monoclonal antibodies are substantially identical except for possible variants in which the population of homogeneous antibodies, ie the individual antibodies that occupy the population, may be induced during monoclonal antibody production (these variants are generally present in minor amounts). And / or from a population that binds to the same epitope. Thus, the modifier “monoclonal” indicates that the trait of the antibody is not a mixture of discrete or polyclonal antibodies.

예를 들어, 모노클로날 항체는 문헌 [참고: Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975)]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 [참고: 미국 특허 제4,816,567호]에 의해 제조할 수 있다. For example, monoclonal antibodies can be prepared using the hybridoma method first described in Kohler et al., Nature , 256: 495 (1975), or recombinant DNA methods [see US Patent No. 4,816,567.

하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 기타 적당한 숙주 동물, 예를 들어 햄스터를 상기 언급된 바와 같이 면역시켜, 면역을 위해 사용된 단백질과 특이적으로 결합하는 항체를 생성시키거나 생성시킬 수 있는 림프구를 유도시킨다. 또 다른 한편, 림프구를 시험관 내에서 면역시킬 수 있다. 이어서, 적합한 융합제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여, 림프구를 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성시킨다 [참고: Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]. In the hybridoma method, mice or other suitable host animals, such as hamsters, are immunized as mentioned above to induce lymphocytes which can produce or produce antibodies that specifically bind to the protein used for immunity. Let's do it. On the other hand, lymphocytes can be immunized in vitro. Lymphocytes are then fused with myeloma cells to form hybridoma cells using a suitable fusing agent, such as polyethylene glycol, see Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice , pp. 59-103 (Academic Press, 1986)].

이로써 제조된 하이브리도마 세포를 시딩하고, 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 한 가지 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에게 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍된 경우에는, 하이브리도마에 대한 배양 배지가 전형적으로, HGPRT-결핍성 세포의 성장을 방지시키는 물질인 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)를 포함할 것이다.The hybridoma cells thus prepared are seeded and preferably grown in a suitable culture medium containing one or more substances that inhibit the growth or survival of unfused fused myeloma cells. For example, if the parental myeloma cells lack the enzyme hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase (HGPRT or HPRT), the culture medium for hybridoma typically prevents the growth of HGPRT-deficient cells. Substances will include hypoxanthine, aminopterin and thymidine (HAT medium).

바람직한 골수종 세포는 효율적으로 융합시켜 주고, 선별된 항체 생산 세포에 의한 안정한 고수준의 항체 생성을 뒷받침해주며, HAT 배지 등의 배지에 민감한 세포이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예를 들어 공급처 [Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA]로부터 입수 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것; 및 공급처 [American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA]로부터 입수 가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종-골수종 세포주 또한, 인간 모노클로날 항체를 생산하는 것으로 보고되었다 [참고: Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]. Preferred myeloma cells are cells that fuse efficiently, support stable high-level antibody production by selected antibody producing cells, and are sensitive to media such as HAT medium. Among these, preferred myeloma cell lines are derived from murine myeloma cell lines, eg, MOPC-21 and MPC-11 mouse tumors available from Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA; And SP-2 or X63-Ag8-653 cells available from the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA. Human myeloma and mouse-human hetero-myeloma cell lines have also been reported to produce human monoclonal antibodies (Kozbor, J. Immunol ., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications , pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)].

하이브리도마 세포가 성장하고 있는 배양 배지를 대상으로 하여, 항원에 대항하여 유도된 모노클로날 항체의 생성에 대해 검정한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성된 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전법, 또는 시험관내 결합 검정, 예를 들어 방사성 면역검정 (RIA) 또는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 결정한다.Culture medium in which hybridoma cells are growing is assayed for production of monoclonal antibodies directed against the antigen. Preferably, the binding specificity of the monoclonal antibodies produced by the hybridoma cells is determined by immunoprecipitation or in vitro binding assays such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Decide

모노클로날 항체의 결합 친화성은, 예를 들어 문헌 [참고: Munson et al., Anal. Biochem., 107: 220 (1980)]의 스캐챠드 (Scatchard) 분석에 의해 결정할 수 있다.The binding affinity of monoclonal antibodies is described, for example, in Munson et al., Anal. Biochem ., 107: 220 (1980)] by Scatchard analysis.

목적하는 특이성, 친화성, 및/또는 활성의 항체를 생성시키는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 제한 희석 과정에 의해 클론을 아클로닝시킨 다음, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 [참고: Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]. 이러한 목적에 적합한 배양 배지에는, 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지가 포함된다. 또한, 하이브리도마 세포를 동물 중에서 복수 (ascites) 종양으로서 생체 내에서 성장시킬 수 있다.After identifying hybridoma cells that produce antibodies of the specificity, affinity, and / or activity of interest, the clones can be cloned by limiting dilution and then grown by standard methods. See Goding, Monoclonal. Antibodies: Principles and Practice , pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]. Suitable culture media for this purpose include, for example, D-MEM or RPMI-1640 medium. In addition, hybridoma cells can be grown in vivo as ascites tumors in animals.

상기 아클론에 의해 분비된 모노클로날 항체를, 통상적인 면역글로불린 정제 과정, 예를 들어 단백질 A-SEPHAROSE™, 가교결합된 아가로스, 히드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 격리시킨다.The monoclonal antibodies secreted by the aclones are subjected to conventional immunoglobulin purification procedures such as protein A-SEPHAROSE ™, crosslinked agarose, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis or affinity chromatography. Is suitably isolated from the culture medium, ascites fluid or serum.

모노클로날 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 과정 (예를 들면, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자와 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함)을 사용하여 용이하게 분리 및 서열 분석한다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 제공된다. 일단 분리되면, DNA를 발현 벡터 내로 위치시킨 다음, 숙주 세포, 예를 들어 이. 콜라이 (E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 중국산 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 (이들은 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는다) 내로 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 획득할 수 있다. 항체를 암호화하는 DNA를 세균 내에서 재조합 발현시키는 것에 관한 고찰 문헌에는 다음 문헌이 포함된다 [참고: Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5: 256-262 (1993) and Pluckthun, Immunol. Revs., 130: 151-188 (1992)].DNA encoding monoclonal antibodies is readily isolated and sequenced using conventional procedures (e.g., using oligonucleotide probes that can specifically bind to genes encoding the heavy and light chains of murine antibodies). do. Hybridoma cells are provided as a preferred source of such DNA. Once isolated, the DNA is placed into an expression vector, and then the host cell, eg, E. coli. Transfection into E. coli cells, monkey COS cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells, or myeloma cells (which do not produce immunoglobulin proteins) to obtain the synthesis of monoclonal antibodies in recombinant host cells. Can be. Review articles on recombinant expression of bacteria encoding DNA in bacteria include the following: Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol ., 5: 256-262 (1993) and Pluckthun, Immunol. Revs ., 130: 151-188 (1992).

추가의 양태에서는, 항체 또는 항체 단편을 문헌 [참고: McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파아지 라이브러리로부터 분리시킬 수 있다. 문헌 [참고: Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991)]에는 파아지 라이브러리를 사용하여 뮤린 및 인간 항체를 각각 분리시키는 방법이 기재되어 있다. 후속 공개 문헌에는 매우 큰 파아지 라이브러리를 구축하기 위한 전략으로서 조합 감염 및 생체내 재조합 [참고: Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21: 2265-2266 (1993)] 뿐만 아니라 연쇄 셔플링 [참고: Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)]에 의해 고 친화성 (nM 범위) 인간 항체를 생성시키는 방법이 기재되어 있다. 따라서, 이들 기술은 모노클로날 항체를 분리시키기 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행 가능한 대체 방안이다.In a further embodiment, the antibody or antibody fragment can be isolated from the resulting antibody phage library using the techniques described in McCafferty et al., Nature , 348: 552-554 (1990). See Clackson et al., Nature , 352: 624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol ., 222: 581-597 (1991) describe the isolation of murine and human antibodies, respectively, using phage libraries. Subsequent publications describe combinatorial infection and in vivo recombination as a strategy for constructing very large phage libraries [Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res ., 21: 2265-2266 (1993)] as well as chain shuffling [Marks et al., Bio / Technology , 10: 779-783 (1992)] to produce high affinity (nM range) human antibodies. Methods of making are described. Thus, these techniques are viable alternatives to traditional monoclonal antibody hybridoma techniques for isolating monoclonal antibodies.

DNA는, 예를 들어, 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 암호화 서열로 치환시키거나 [참고: 미국 특허 제4,816,567호; Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81: 6851 (1984)], 또는 면역글로불린 암호화 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 암호화 서열의 전부 또는 일부를 공유 결합시킴으로써 변형시킬 수도 있다.DNA can, for example, substitute human coding sequences for human heavy and light chain constant domains with coding sequences instead of homologous murine sequences (see US Pat. No. 4,816,567; Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA , 81: 6851 (1984)], or by covalently binding all or a portion of the coding sequence for a non-immunoglobulin polypeptide to an immunoglobulin coding sequence.

전형적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드를 항체의 불변 도메인 대신 사용하거나, 또는 항체의 하나의 항원 결합 부위의 가변 도메인 대신 사용하여, 항원에 대한 특이성을 지닌 하나의 항원 결합 부위와, 상이한 항원에 대한 특이성을 지닌 또 다른 항원 결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 창출시킨다.Typically, such non-immunoglobulin polypeptides are used in place of the constant domains of an antibody, or in place of the variable domains of one antigen binding site of an antibody, with one antigen binding site having specificity for the antigen and for different antigens. Create a chimeric bivalent antibody comprising another antigen binding site with specificity.

(iii) 인간화 항체(iii) humanized antibodies

비-인간 항체를 인간화시키는 방법이 당해 분야에 보고되었다. 바람직하게는, 인간화 항체가 비-인간 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입 (import)" 잔기로서 지칭되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 취한다. 인간화는 필수적으로, 인간 항체의 상응하는 서열을 초가변 영역 서열로 대체함으로써, 다음 문헌의 방법에 따라서 수행할 수 있다 [참고: Winter and co-workers (Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al, Science, 239: 1534-1536 (1988)]. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 실질적으로 덜한 본래의 인간 가변 도메인을 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 대체시킨 키메라 항체 [참고: 미국 특허 제4,816,567호]이다. 실제적으로, 인간화 항체는 전형적으로, 몇몇 초가변 영역 잔기와 가능하게는 몇몇 FR 잔기를 설치류 항체 내의 유사한 부위로부터의 잔기로 대체시킨 인간 항체이다.Methods for humanizing non-human antibodies have been reported in the art. Preferably, the humanized antibody has one or more amino acid residues introduced from a non-human source. These non-human amino acid residues are often referred to as "import" residues, which are typically taken from an "import" variable domain. Humanization can be performed according to the methods of the following literature, essentially replacing the corresponding sequence of the human antibody with the hypervariable region sequence. See Winter and co-workers (Jones et al., Nature , 321: 522-). 525 (1986); Riechmann et al., Nature , 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al, Science , 239: 1534-1536 (1988). Thus, such "humanized" antibodies are substantially less native. Chimeric antibodies in which human variable domains have been replaced with corresponding sequences from non-human species [US Pat. No. 4,816,567] In practice, humanized antibodies typically have several hypervariable region residues and possibly some FR residues. Is a human antibody replaced with residues from similar sites in rodent antibodies.

인간화 항체를 제조하는데 사용될, 경쇄 및 중쇄의 인간 가변 도메인의 선택이 항원성을 저하시키는데 있어 매우 중요하다. 소위 "베스트-피트 (best-fit)" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열을 공지된 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대항하여 스크리닝한다. 이때, 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열을 인간화 항체에 대한 인간 골격 영역 (FR)으로서 허용한다 [참고: Sims et al., J. Immunol., 151: 2296 (1993); Chothia et al., J. Mol . Biol., 196: 901 (1987)]. 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 아군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특별한 골격 영역을 이용한다. 동일한 골격을 여러 개의 상이한 인간화 항체에 사용할 수 있다 [참고: Carter et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 89: 4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 15-1 :2623 (1993)]. The choice of light and heavy human variable domains, which will be used to prepare humanized antibodies, is very important for reducing antigenicity. According to the so-called "best-fit" method, the variable domain sequences of rodent antibodies are screened against an entire library of known human variable domain sequences. The human sequence closest to the sequence of rodents is then accepted as the human framework region (FR) for humanized antibodies (Sims et al., J. Immunol ., 151: 2296 (1993); Chothia et al., J. Mol . Biol ., 196: 901 (1987)]. Another method utilizes a special framework region derived from the consensus sequence of all human antibodies of a particular subgroup of light or heavy chain variable regions. The same backbone can be used for several different humanized antibodies. See Carter et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA , 89: 4285 (1992); Presta et al., J. Immunol ., 15-1: 2623 (1993).

항원에 대한 고 친화성과 기타 바람직한 생물학적 특성을 유지하고 있는 항체로 인간화시키는 것이 추가로 중요하다. 이를 달성하기 위한 바람직한 양태에 따르면, 모 서열과 인간화 서열의 3차원적 모델을 이용하여 모 서열과 각종 개념적 인간화 생성물의 분석 공정에 의해 인간화 항체를 제조한다. 3차원적 면역글로불린 모델은 시판되고 있으며, 당업자에게 널리 알려져 있다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 추정상의 3차원 입체 형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램도 입수 가능하다. 이들 디스플레이를 검사하여, 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어 잔기의 예상 역할을 분석할 수 있는데, 즉 후보 면역글로불린이 그의 항원과 결합할 수 있는 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선별하고, 이를 수용자로부터 유입 서열과 합하여, 목적하는 항체 특징, 예를 들면, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성을 달성하도록 한다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합성에 영향을 미치는데 있어 직접적이면서도 가장 실재적으로 관여한다.It is further important to humanize with antibodies that retain high affinity for antigens and other desirable biological properties. According to a preferred embodiment for achieving this, humanized antibodies are prepared by a process of analyzing the parental sequences and various conceptual humanized products using three-dimensional models of the parental and humanized sequences. Three-dimensional immunoglobulin models are commercially available and are well known to those skilled in the art. Computer programs are also available that illustrate and display putative three-dimensional conformational structures of selected candidate immunoglobulin sequences. These displays can be examined to analyze the expected role of residues in the function of candidate immunoglobulin sequences, ie, residues that affect the ability of a candidate immunoglobulin to bind its antigen. In this way, FR residues are selected and combined with the incoming sequence from the recipient to achieve the desired antibody characteristics, eg, increased affinity for the target antigen (s). In general, hypervariable region residues are directly and most practically involved in influencing antigen binding.

(iv) 인간 항체(iv) human antibodies

인간화에 대한 대체 방안으로서, 인간 항체를 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 면역시 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에 완전한 레퍼토리의 인간 항체를 생성시킬 수 있는 트랜스제닉 (transgenic) 동물 (예: 마우스)를 생산하는 것이 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 생식세포계 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (J_H) 유전자의 동형접합성 결실로 인해, 내인성 항체 생성이 완전히 억제되는 것으로 보고되었다. 이러한 생식세포계 돌연변이체 마우스에서 인간 생식세포계 면역글로불린 유전자 어레이를 전이시키면, 항원 챌린지시 인간 항체가 생성될 것이다 [참고: 예를 들어, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7: 33 (1993); 및 미국 특허 제5,591,669호, 제5,589,369호 및 제5,545,807호].As an alternative to humanization, human antibodies can be generated. For example, it is currently possible to produce transgenic animals (eg mice) capable of producing complete repertoires of human antibodies in the absence of endogenous immunoglobulin production upon immunity. For example, due to homozygous deletion of the antibody heavy chain linkage region (J _H ) gene in chimeric and germline mutant mice, it has been reported that endogenous antibody production is completely inhibited. Transferring the human germline immunoglobulin gene array in such germline mutant mice will produce human antibodies upon antigen challenge. See, eg, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature , 362: 255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno ., 7: 33 (1993); And US Pat. Nos. 5,591,669, 5,589,369 and 5,545,807.

또 다른 한편, 파아지 디스플레이 기술 [참고: McCafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990)]을 사용하여, 면역시키지 않은 공여자로부터의 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관 내에서 생성시킬 수 있다. 이러한 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자를 필라멘트상 박테리오파아지, 예를 들어 M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 외피 단백질 유전자 내로 동일 프레임 내에서 클로닝시키고, 파아지 입자 표면 상에서 기능적 항체 단편으로서 디스플레이한다. 필라멘트상 입자는 파아지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피 (copy)를 함유하기 때문에, 항체의 기능적 특성을 기준으로 하여 선별하게 되면, 이들 특성을 나타내는 항체를 암호화하는 유전자를 선별할 수 있다. 따라서, 파아지는 B 세포의 특성들 중의 몇 가지 특성을 모방한다. 파아지 디스플레이는 각종 포맷으로 수행할 수 있으며, 이들에 대한 고찰은, 예를 들어 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3: 564-571 (1993)]. V-유전자 절편의 몇 가지 공급원을 파아지 디스플레이를 위해 사용할 수 있다. 문헌 [참고: Clackson et al., Nature, 352 : 624-628 (1991)]에서는 면역시킨 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 무작위 조합 라이브러리로부터 항옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 분리하였다. 면역시키지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자 레퍼토리를 구축할 수 있고, 다양한 항원 (자기 항원 포함) 어레이에 대한 항체는 본질적으로, 문헌 [참고: Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991), 또는 Griffith et al., EMBO J. 12: 725-734 (1993)]에 기재된 기술에 따라서 분리시킬 수 있다 [또한, 미국 특허 제5,565,332호 및 제5,573,905호 참고].On the other hand, human antibodies and antibody fragments from immunoglobulin variable (V) domain gene repertoires from unimmunized donors using phage display techniques (Mcafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990)). Can be generated in vitro. According to this technique, antibody V domain genes are cloned in the same frame into a major or minor coat protein gene of filamentous bacteriophage, eg, M13 or fd, and displayed as functional antibody fragments on the phage particle surface. Since the filamentous particles contain a single stranded DNA copy of the phage genome, selection based on the functional properties of the antibody allows selection of genes encoding antibodies exhibiting these properties. Thus, phage mimics some of the properties of B cells. Phage display can be performed in a variety of formats, for a review thereof, see, for example, Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3: 564-. 571 (1993). Several sources of V-gene segments can be used for phage display. Clackson et al., Nature , 352: 624-628 (1991) isolated various arrays of antioxazolone antibodies from a small random combinatorial library of V genes derived from the spleen of immunized mice. V gene repertoires from non-immunized human donors can be constructed, and antibodies against various antigen (including self antigen) arrays are essentially described in Marks et al., J. Mol. Biol . 222: 581-597 (1991), or Griffith et al., EMBO J. 12: 725-734 (1993). See also US Pat. Nos. 5,565,332 and 5,573,905.

인간 항체는 시험관내 활성화 B 세포에 의해 생성시킬 수도 있다 [참고: 미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호]. Human antibodies can also be produced by in vitro activated B cells (see US Pat. Nos. 5,567,610 and 5,229,275).

(v) 항체 단편(v) antibody fragments

항체 단편을 생성시키기 위한 각종 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 본래의 항체를 단백질 분해적 분해시킴으로써 유도되었다 [참고: 예를 들어, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992) and Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)]. 그러나, 이들 단편은 현재, 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 상기 논의된 항체 파아지 라이브러리로부터 분리할 수 있다. 또 다른 한편, Fab'-SH 단편을 이. 콜라이로부터 직접 회수하고, 이를 화학적으로 커플링시켜 F(ab')₂ 단편을 형성시킬 수 있다 [참고: Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)]. 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')₂ 단편을 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 분리시킬 수 있다. 항체 단편을 생성시키기 위한 기타 기술은 당업자에게 명백할 것이다. 기타 양태에서는 선택되는 항체가 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다 [참조: WO 93/16185; 미국 특허 제5,571,894호; 및 제5,587,458호]. 항체 단편은 예를 들어, 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수도 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일-특이적 또는 이중-특이적일 수 있다.Various techniques have been developed for generating antibody fragments. Traditionally, these fragments have been derived by proteolytic digestion of the original antibody. See, for example, Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992) and Brennan et al., Science . , 229: 81 (1985). However, these fragments can now be produced directly by recombinant host cells. For example, antibody fragments can be isolated from the antibody phage libraries discussed above. On the other hand, the Fab'-SH fragment was separated from E. coli. Recovery directly from E. coli can be chemically coupled to form F (ab ') ₂ fragments (Carter et al., Bio / Technology 10: 163-167 (1992)). According to another approach, F (ab ') ₂ fragments can be isolated directly from recombinant host cell culture. Other techniques for generating antibody fragments will be apparent to those skilled in the art. In other embodiments the antibody of choice is a single chain Fv fragment (scFv). See WO 93/16185; US Patent No. 5,571,894; And 5,587,458. The antibody fragment may be, for example, a "linear antibody" as described in US Pat. No. 5,641,870. Such linear antibody fragments may be monospecific or bispecific.

(vi) 이중-특이적 항체(vi) bispecific antibodies

이중-특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 지닌 항체이다. 예시되는 이중-특이적 항체는 CD20 항원의 2개의 상이한 에피토프와 결합할 수 있다. 이러한 기타 항체는 CD20과 결합할 수 있고, 제2의 B-세포 표면 마커와 추가로 결합할 수 있다. 또 다른 한편, 항-CD20-결합성 암을, B 세포에 대한 세포성 방어 기전에 집중하도록, 백혈구 상의 촉발성 분자, 예를 들어 T-세포 수용체 분자 (예: CD2 또는 CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예를 들면 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)와 결합하는 암과 합할 수 있다. 이중-특이적 항체를 사용하여 세포독성제를 B 세포에 국재시킬 수도 있다. 이들 항체는 CD20-결합성 암과, 세포독성제 (예: 사포린, 항인터페론-α, 빈카 알카로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)과 결합하는 암을 보유하고 있다. 이중-특이적 항체는 완전한 길이의 항체 또는 항체 단편 (예: F(ab')₂ 이중-특이적 항체)로서 제조할 수 있다.Bi-specific antibodies are antibodies that have binding specificities for at least two different epitopes. Exemplary bi-specific antibodies may bind to two different epitopes of the CD20 antigen. Such other antibodies may bind to CD20 and may further bind to a second B-cell surface marker. On the other hand, anti-CD20-binding cancer may be directed to triggering molecules on leukocytes, such as T-cell receptor molecules (eg, CD2 or CD3), or IgGs, to focus on cellular defense mechanisms against B cells. And Fc receptor (FcγR), for example FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) and FcγRIII (CD16). Bi-specific antibodies can also be used to localize cytotoxic agents to B cells. These antibodies have CD20-binding cancers and cancers that bind to cytotoxic agents such as saporin, antiinterferon-α, vinca alkaloids, lysine A chains, methotrexate or radioisotope hapten. Bispecific antibodies can be prepared as full length antibodies or antibody fragments (eg, F (ab ') ₂ bispecific antibodies).

이중-특이적 항체의 제조 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 완전한 길이의 이중-특이적 항체의 전통적인 생성 방법은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍을 동시 발현시키는 것에 기초하는데, 상기 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다 [참고: Millstein et al., Nature, 305: 537-539 (1983)]. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이들 하이브리도마 [쿠아드로마(quadromas)]는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생성시키는데, 이들 중에서 1개 만이 정확한 이중-특이적 구조를 갖는다. 친화 크로마토그래피 단계에 의해 통상 수행되는, 상기 정확한 분자의 정제는 다소 성가시고, 생성물 수율도 낮다. 유사한 과정이 문헌 [참고: WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991)]에 기재되어 있다.Methods of making bispecific antibodies are known in the art. Traditional methods of producing full-length bispecific antibodies are based on the simultaneous expression of two immunoglobulin heavy chain-light chain pairs, which have different specificities. See Millstein et al., Nature , 305: 537-539 (1983). Due to the random classification of immunoglobulin heavy and light chains, these hybridomas (quadromas) produce a potential mixture of ten different antibody molecules, of which only one has the correct bispecific structure. Purification of the exact molecule, usually carried out by an affinity chromatography step, is rather cumbersome and the product yield is low. Similar procedures are described in WO 93/08829, and Traunecker et al., EMBO J. , 10: 3655-3659 (1991).

상이한 접근법에 따르면, 목적하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 지닌 항체 가변 도메인을 면역글로불린 불변 도메인 서열과 융합시킨다. 이러한 융합은 바람직하게, 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는, 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과 이루어진다. 융합물 중의 적어도 하나에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합물과, 경우에 따라 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA를 별개의 발현 벡터 내로 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 공동-형질감염시킨다. 이는 구축에 사용된 3가지 폴리펩티드 쇄의 불균등한 비율이 최적의 수율을 제공해주는 경우의 양태에서, 3가지 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 큰 융통성을 제공해준다. 그러나, 2가지 이상의 폴리펩티드 쇄를 균등한 비율로 발현시키는 것이 고 수율을 가져다 주거나, 또는 이들 비율이 특별한 의미를 갖지 않은 경우에, 2가지 또는 3가지 모두의 폴리펩티드 쇄에 대한 암호화 서열을 하나의 발현 벡터에 삽입하는 것이 가능하다.According to a different approach, antibody variable domains with the desired binding specificities (antibody-antigen binding sites) are fused with immunoglobulin constant domain sequences. This fusion preferably consists of an immunoglobulin heavy chain constant domain, comprising at least a portion of a hinge, CH2, and CH3 region. It is preferred to have a first heavy chain constant region (CH1) containing a site necessary for light chain binding, present in at least one of the fusions. The immunoglobulin heavy chain fusions and, optionally, the DNA encoding the immunoglobulin light chain, are inserted into separate expression vectors and co-transfected into suitable host organisms. This provides great flexibility in adjusting the mutual proportions of the three polypeptide fragments in embodiments where the uneven proportions of the three polypeptide chains used in the construction provide optimal yields. However, if equal expression of two or more polypeptide chains results in high yield, or if these ratios do not have special significance, the expression of coding sequences for two or all three polypeptide chains in one expression It is possible to insert into a vector.

상기 접근법의 바람직한 양태에서는, 이중-특이적 항체가 하나의 암 중에 제1의 결합 특이성을 지닌 하이브리드 면역글로불린 중쇄와, 다른 암 중에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2의 결합 특이성을 제공함)으로 구성된다. 이러한 비대칭 구조가 목적하는 이중-특이적 화합물을 불필요한 면역글로불린 쇄 조합물로부터 격리시키는 것을 촉진시켜 주는데, 이는 이중-특이적 분자의 단지 절반에만 면역글로불린 경쇄가 존재하는 것이 용이한 격리 방식을 제공해주기 때문이다. 이러한 접근법은 WO 1994/04690에 기재되어 있다. 이중-특이적 항체를 생성시키기 위한 추가의 상세 내역에 대해서는, 예를 들어 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986)]을 참고할 수 있다.In a preferred embodiment of the approach, the bispecific antibody is a hybrid immunoglobulin heavy chain with a first binding specificity in one cancer and a hybrid immunoglobulin heavy chain-light chain pair in the other cancer (providing a second binding specificity). It is composed. This asymmetric structure facilitates the sequestration of the desired bispecific compound from unnecessary immunoglobulin chain combinations, providing an isolation scheme where it is easy for the immunoglobulin light chain to be present in only half of the bispecific molecule. Because. This approach is described in WO 1994/04690. For further details for generating bi-specific antibodies, see, eg, Suresh et al., Methods in Enzymology , 121: 210 (1986).

미국 특허 제5,731,168호에 기재된 또 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 간의 계면을 공학적으로 처리하여, 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종-이량체의 비율 (％)을 최대화할 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 C_H3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서는, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄를 보다 큰 측쇄 (예: 티로신 또는 트립토판)으로 대체시킨다. 큰 측쇄와 동일하거나 유사한 크기의 대상성 "강(cavity)"은, 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것 (예: 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체시킴으로써 제2 항체 분자의 계면 상에서 창출시킨다. 이는 기타 불필요한 최종 생성물, 예를 들면, 동종-이량체에 비해 이종-이량체의 수율을 증가시켜 주는 기전을 제공한다.According to another approach described in US Pat. No. 5,731,168, the interface between a pair of antibody molecules can be engineered to maximize the percentage of hetero-dimer recovered from recombinant cell culture. Preferred interfaces include at least a portion of the C _H 3 domain of the antibody constant domains. In this method, one or more small amino acid side chains from the interface of the first antibody molecule are replaced with larger side chains (eg tyrosine or tryptophan). Subjective “cavities” of the same or similar size as the large side chains are created on the interface of the second antibody molecule by replacing the large amino acid side chains with smaller ones (eg alanine or threonine). This provides a mechanism to increase the yield of hetero-dimer over other unnecessary end products, such as homo-dimer.

이중-특이적 항체에는 가교결합되거나 "이종-접합체" 항체가 포함된다. 예를 들어, 이종-접합체 내의 항체들 중의 하나를 아비딘에 커플링시킬 수 있고, 다른 것은 바이오틴에 커플링시킬 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어 면역계 세포를 불필요한 세포에 대해 표적화시키고 [참고: 미국 특허 제4,676,980호], HIV 감염을 치료하는 것으로 제안되었다 [참조: WO 1991/00360, WO 1992/200373, 및 EP 03089]. 이종-접합체 항체는 편리한 모든 가교결합 방법을 사용하여 만들 수 있다. 적합한 가교결합제는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 수 많은 가교결합 기술과 함께 미국 특허 제4,676,980호에 기재되어 있다.Bi-specific antibodies include crosslinked or "hetero-conjugate" antibodies. For example, one of the antibodies in the hetero-conjugate can be coupled to avidin and the other can be coupled to biotin. Such antibodies have been proposed, for example, to target immune system cells against unwanted cells (US Pat. No. 4,676,980) and to treat HIV infections (WO 1991/00360, WO 1992/200373, and EP 03089). ]. Hetero-conjugate antibodies can be made using any convenient crosslinking method. Suitable crosslinkers are well known in the art and are described in US Pat. No. 4,676,980 with numerous crosslinking techniques.

항체 단편으로부터 이중-특이적 항체를 생성시키는 기술 또한 당해 분야의 문헌에 보고되었다. 예를 들어, 이중-특이적 항체는 화학적 연쇄를 이용하여 제조할 수 있다. 문헌 [참조: Brennan et al, Science, 229: 81 (1985)]에는 본래의 항체를 단백질 분해적으로 절단시켜 F(ab')₂ 단편을 생성시키는 과정이 기재되어 있다. 이들 단편을 디티올 착화제 나트륨 아비산염의 존재 하에 환원시켜 근접한 디티올을 안정화시키고 분자간 디설파이드 형성을 방지시킨다. 이어서, 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. 이어서, 머캅토에틸아민으로 환원시킴으로써, Fab'-TNB 유도체들 중의 하나를 Fab'-티올로 재전환시키고, 이를 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중-특이적 항체를 형성시킨다. 이로써 생성된 이중-특이적 항체를, 효소를 선택적으로 고정화시키기 위한 작용제로서 사용할 수 있다.Techniques for generating bispecific antibodies from antibody fragments have also been reported in the literature. For example, bispecific antibodies can be prepared using chemical chains. Brennan et al, Science , 229: 81 (1985) describe the process of proteolytically cleaving the original antibody to produce F (ab ') ₂ fragments. These fragments are reduced in the presence of the dithiol complexing agent sodium arsenite to stabilize the adjacent dithiol and prevent intermolecular disulfide formation. The Fab 'fragments generated are then converted to thionitrobenzoate (TNB) derivatives. Subsequently, by reducing with mercaptoethylamine, one of the Fab'-TNB derivatives is reconverted to Fab'-thiol and mixed with an equimolar amount of another Fab'-TNB derivative to form a bispecific antibody. The bispecific antibodies thus produced can be used as agents for selectively immobilizing enzymes.

재조합 세포 배양물로부터 이중-특이적 항체 단편을 직접적으로 제조 및 분리하기 위한 각종 기술이 또한 보고되었다. 예를 들어, 루이신 지퍼를 사용하여 이중-특이적 항체를 생성시켰다 [참고: Kostelny et al., J. Immunol., 148 (5): 1547-1553 (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 루이신 지퍼 펩티드를 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결시켰다. 항체 동종-이량체를 힌지 영역에서 환원시켜 단량체를 형성시킨 다음, 재산화시켜 항체 이종-이량체를 형성시켰다. 이러한 방법은 항체 동종-이량체를 생성시키기 위해 활용할 수도 있다. 문헌 [참조: Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아보디" 기술은 이중-특이적 항체 단편을 제조하기 위한 대체 기전을 제공하였다. 이러한 단편은 동일한 쇄 상에서 두 도메인 간에 짝짓기를 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 V_H 및 V_L 도메인을 또 다른 단편의 상보적 V_L 및 V_H 도메인과 짝짓기시킴으로써, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일 쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용함으로써 이중-특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략이 또한 보고되었다 [참고: Gruber et al., J. Immunol, 152: 5368 (1994)].Various techniques have also been reported for preparing and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell culture. For example, leucine zippers were used to generate bi-specific antibodies (Kostelny et al., J. Immunol ., 148 (5): 1547-1553 (1992)). Leucine zipper peptides from Fos and Jun proteins were linked to Fab 'portions of two different antibodies by gene fusion. The antibody homo-dimer was reduced in the hinge region to form monomers and then reoxidized to form antibody hetero-dimer. Such methods can also be utilized to generate antibody homo-dimer. See Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 90: 6444-6448 (1993), provided the "diabody" technique provided an alternative mechanism for preparing bi-specific antibody fragments. Such fragments comprise a heavy chain variable domain (V _H ) linked to the light chain variable domain (V _L ) by a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain. Thus, by pairing the V _H and V _L domains of one fragment with the complementary V _L and V _H domains of another fragment, two antigen-binding sites are formed. Another strategy for preparing bispecific antibody fragments by using single chain Fv (sFv) dimers has also been reported (Gruber et al., J. Immunol , 152: 5368 (1994)).

2 원자가 이상을 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중 특이적 항체를 제조할 수 있다 [참고: Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)].Antibodies having two or more valences are contemplated. For example, trispecific antibodies can be prepared. Tutt et al. J. Immunol . 147: 60 (1991).

IV. 항체의 접합체 및 기타 변형물IV. Conjugates and Other Modifications of Antibodies

본원의 방법에 사용된 방법 또는 제조품에 포함된 항체는 임의로 세포독성제와 접합시킨다. 예를 들어, (CD20) 항체를 WO 2004/032828에 기재된 바와 같은 약물에 접합시킬 수 있다.Antibodies included in the methods or articles of manufacture used in the methods herein are optionally conjugated with cytotoxic agents. For example, the (CD20) antibody can be conjugated to a drug as described in WO 2004/032828.

이러한 항체-세포독성제 접합체를 생성시키는데 유용한 화학요법제는 상기 언급되었다.Chemotherapeutic agents useful for producing such antibody-cytotoxic agent conjugates have been mentioned above.

항체와 하나 이상의 소분자 독소, 예를 들어 칼리케아미신, 마이탄신 [참고: 미국 특허 제5,208,020호], 트리코텐 및 CC1065가 또한 본원에 고려된다. 본 발명의 한 양태에서는, 항체를 1개 이상의 마이탄신 분자와 접합시킨다 (예를 들어, 항체 분자당 약 1 내지 약 10개의 마이탄신 분자). 마이탄신은, 예를 들어 May-SS-Me로 전환시킬 수 있고, 이는 May-SH3로 환원시킬 수 있으며 변형된 항체와 반응시켜 [참고: Chari et al. Cancer Research 52: 127-131(1992)] 마이탄시노이드-항체 접합체를 생성시킬 수 있다.Antibodies and one or more small molecule toxins such as calicheamicin, maytansine (US Pat. No. 5,208,020), tricotene and CC1065 are also contemplated herein. In one embodiment of the invention, the antibody is conjugated with one or more maytansine molecules (eg, about 1 to about 10 maytansine molecules per antibody molecule). Maytansine can be converted, for example, to May-SS-Me, which can be reduced to May-SH3 and reacted with a modified antibody [Chari et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)] maytansinoid-antibody conjugates can be generated.

또 다른 한편으론, 항체를 1개 이상의 칼리케아미신 분자와 접합시킨다. 칼리케아미신 계열의 항생제는 이중 가닥 DNA 절단물을 피코몰 이하 농도로 생성시킬 수 있다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조적 유사체에는 γ₁ ^I, α₂ ^I, α₃ ^I, N-아세틸-γ₁ ^I, PSAG 및 θ^I ₁이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다 [참고: Hinman et al., Cancer Research, 53: 3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research, 58: 2925-2928 (1998)].On the other hand, the antibody is conjugated with one or more calicheamicin molecules. Antibiotics of the calicheamicin family can produce double stranded DNA cleavage at sub-picomole concentrations. Structural analogs of calicheamicin that may be used include, but are not limited to, γ ₁ ^I , α ₂ ^I , α ₃ ^I , N-acetyl-γ ₁ ^I , PSAG, and θ ^I _1. Hinman et al. , Cancer Research , 53: 3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research , 58: 2925-2928 (1998).

사용될 수 있는 효소적 활성 독소 및 그의 단편에는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비-결합성 활성 단편, 외독소 A 쇄 [슈도모나스 애루기노사 (Pseudomonas aeruginosa)로부터 유래됨], 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 (Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나 (Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 (momordica charantia) 억제제, 쿠르신 (curcin), 크로틴 (crotin), 사파오나리아 오피시날리스 (sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센이 포함된다 [참고: 예를 들어, WO 1993/21232 (1993년 10월 28일자로 공개됨)].Enzymatically active toxins and fragments thereof that can be used include diphtheria A chain, non-binding active fragment of diphtheria toxin, exotoxin A chain (derived from Pseudomonas aeruginosa ), lysine A chain, abrin A chain , Modesin A chain, alpha- sarsine , Aleurites fordii protein, diantine protein, Phytolaca americana protein (PAPI, PAPII, and PAP-S), Momordica Charantia (momordica charantia) inhibitors, curcin, crotin, sapaonaria officinalis inhibitors, gelonin, mitogeline, restrictocin, phenomycin, enomycin and trichothecene (See, eg, WO 1993/21232, published October 28, 1993).

본 발명은 추가로, 핵산분해 활성을 지닌 화합물 (예: 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제, 예를 들어 데옥시리보뉴클레아제; DNase)와 접합된 항체를 고려한다.The present invention further contemplates antibodies conjugated with compounds having nucleolytic activity (eg ribonucleases or DNA endonucleases such as deoxyribonuclease; DNase).

각종 방사성 동위원소가 방사성접합된 항체 생성을 위해 이용 가능하다. 이의 예에는 At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³², 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다.Various radioisotopes are available for the production of radioconjugated antibodies. Examples include radioisotopes of At ²¹¹ , I ¹³¹ , I ¹²⁵ , Y ⁹⁰ , Re ¹⁸⁶ , Re ¹⁸⁸ , Sm ¹⁵³ , Bi ²¹² , P ³² , and Lu.

각종 이관능성 단백질 커플링제, 예를 들어 N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트 (SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카복실레이트, 이미노티올란 (IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체 (예를 들어, 디메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르 (예: 디석신이미딜 수베레이트), 알데히드 (예: 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물 [예: 비스 (p-아지도벤조일)헥산디아민], 비스-디아조늄 유도체 [예: 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민], 디이소시아네이트 (예: 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물 (예: 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여, 항체와 세포독성제의 접합체를 만들 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소를 문헌 [참고: Vitetta et al., Science. 238: 1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)이, 방사뉴클레오티드를 항체에 접합시키기 위한 킬레이트제의 한 예이다 [참고: WO 94/11026]. 이러한 링커는 세포에서 세포독성 약물의 방출을 촉진시켜 주는 "절단 가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정 링커, 펩티다제-민감성 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드 함유 링커 [참고: Chari et al., Cancer Research, 52: 127-131 (1992)]를 사용할 수 있다.Various difunctional protein coupling agents such as N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithiol) propionate (SPDP), succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1 Carboxylates, iminothiolanes (IT), difunctional derivatives of imidoesters (e.g. dimethyl adipimidate HCl), active esters (e.g. disuccinimidyl suverate), aldehydes (e.g. glutaraldehyde) , Bis-azido compounds [e.g. bis (p-azidobenzoyl) hexanediamine], bis-diazonium derivatives [e.g. bis- (p-diazoniumbenzoyl) -ethylenediamine], diisocyanates (e.g. tolyene 2,6-diisocyanate), and bis-active fluorine compounds such as 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene can be used to make conjugates of antibodies and cytotoxic agents. For example, lysine immunotoxins are described in Vitetta et al., Science . 238: 1098 (1987). Carbon-14-labeled 1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid (MX-DTPA) is an example of a chelating agent for conjugation of radionucleotides to antibodies. See WO 94 / 11026]. Such linkers may be "cleavable linkers" which facilitate the release of cytotoxic drugs in cells. For example, acid-labile linkers, peptidase-sensitive linkers, dimethyl linkers or disulfide containing linkers (Chari et al., Cancer Research , 52: 127-131 (1992)) can be used.

또 다른 한편으론, 항체와 세포독성제를 포함하는 융합 단백질을, 예를 들어 재조합 기술 또는 펩티드 합성에 의해 만들 수 있다.Alternatively, fusion proteins comprising antibodies and cytotoxic agents can be made, for example, by recombinant techniques or peptide synthesis.

또 다른 양태에서는, 항체를 종양 예비표적화에 활용하기 위해 "수용체" (예: 스트렙타비딘)에 접합시킬 수 있는데, 이러한 항체-수용체 접합체를 환자에게 투여한 다음, 제거제 (clearing agent)를 사용하여 결합되지 않은 접합체를 순환시 제거하고, 이어서 세포독성제 (예: 방사성뉴클레오티드)와 접합되는 "리간드" (예: 아비딘)을 투여한다.In another embodiment, the antibody can be conjugated to a "receptor" (eg, streptavidin) for use in tumor pretargeting, wherein the antibody-receptor conjugate is administered to the patient, followed by the use of a clearing agent. Unbound conjugates are removed in circulation and then administered "ligand" (eg avidin) conjugated with a cytotoxic agent (eg radionucleotide).

프로드럭 (prodrug)을 활성 항암 약물로 전환시켜 주는 프로드럭-활성화 효소 (예: 펩티딜 화학요법제; 참고: W0 81/01145)에 본 발명의 항체를 접합시킬 수도 있다 [참고: 예를 들어, WO 1988/07378 및 미국 특허 제4,975,278호]. Antibodies of the invention may also be conjugated to prodrug-activating enzymes (eg peptidyl chemotherapeutic agents; see W0 81/01145) that convert prodrugs into active anticancer drugs. , WO 1988/07378 and US Pat. No. 4,975,278.

이러한 접합체의 효소 성분에는, 프로드럭이 그의 보다 활성인 세포독성 형태로 전환되도록 하는 방식으로 프로드럭 상에서 작용할 수 있는 모든 효소가 포함된다.Enzymatic components of such conjugates include all enzymes that can act on the prodrug in such a way that the prodrug is converted to its more active cytotoxic form.

본 발명의 방법에 유용한 효소에는 포스페이트-함유 프로드럭을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리성 포스파타제; 설페이트-함유 프로드럭을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 아릴설파타제; 비-독성 5-플루오로시토신을 항암 약물인 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 시토신 데아미나제; 펩티드-함유 프로드럭을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 프로테아제, 예를 들어 세라티아 프로테아제, 더모리신, 서브틸리신, 카복시펩티다제 및 카텝신 (예: 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 함유하는 프로드럭을 전환시키는데 유용한 D-알라닐카복시펩티다제; 당화 프로드럭을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 탄수화물-절단성 효소, 예를 들어 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐으로 유도체화시킨 약물을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마제; 및 그들의 아민 질소에서 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸기로 각각 유도체화시킨 약물을 자유 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 아미다제, 예를 들어 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 또 다른 한편, 당해 분야에서 "아브자임 (abzyme)"으로서 공지되기도 한, 효소적 활성을 지닌 항체를 사용하여 본 발명의 프로드럭을 자유 활성 약물로 전환시킬 수 있다 [참고: 예를 들어, Massey, Nature, 328: 457-458 (1987)]. 아브자임을 종양 세포 집단에 전달하기 위하여, 항체-아브자임 접합체를 본원에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다.Enzymes useful in the methods of the invention include alkaline phosphatase useful for converting phosphate-containing prodrugs into free drugs; Arylsulfatase useful for converting sulfate-containing prodrugs into free drugs; Cytosine deaminase useful for converting non-toxic 5-fluorocytosine into the anti-cancer drug 5-fluorouracil; Proteases useful for converting peptide-containing prodrugs into free drugs, such as Serratia protease, demorisine, subtilisin, carboxypeptidase and cathepsin (eg cathepsin B and L); D-alanylcarboxypeptidase useful for converting prodrugs containing D-amino acid substituents; Carbohydrate-cleaving enzymes such as β-galactosidase and neuraminidase useful for converting glycosylated prodrugs into free drugs; β-lactamase useful for converting drugs derivatized with β-lactams into free drugs; And penicillin amidase, such as penicillin V amidase or penicillin G amidase, useful for converting drugs derivatized with phenoxyacetyl or phenylacetyl groups, respectively, in their amine nitrogen to free drugs. Alternatively, an antibody with enzymatic activity, also known in the art as “abzyme”, can be used to convert prodrugs of the invention to free active drugs. See, eg, Massey , Nature , 328: 457-458 (1987). To deliver azyme to tumor cell populations, antibody-abzyme conjugates can be prepared as described herein.

당해 분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 상기 논의된 이종-이관능성 가교결합 시약을 사용함으로써, 본 발명의 효소를 항체에 공유적으로 결합시킬 수 있다. 또 다른 한편, 본 발명의 효소의 적어도 기능적 활성 부분과 연결된, 본 발명의 항체의 적어도 항원 결합성 영역을 포함하는 융합 단백질을, 당해 분야에 널리 공지된 재조합 DNA 기술을 이용하여 구축할 수 있다 [참고: Neuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984)]. By using techniques well known in the art, for example the hetero-bifunctional crosslinking reagents discussed above, the enzymes of the invention can be covalently bound to an antibody. Alternatively, a fusion protein comprising at least the antigen binding region of an antibody of the invention, linked to at least a functionally active portion of the enzyme of the invention, can be constructed using recombinant DNA techniques well known in the art [ See Neuberger et al., Nature , 312: 604-608 (1984).

항체의 기타 변형물이 본원에 고려된다. 예를 들어, 항체를 각종 비단백질성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체 중의 하나와 연결시킬 수 있다. 하나 이상의 PEG 분자와 연결된 항체 단편, 예를 들어 Fab'가 본 발명의 특히 바람직한 양태이다.Other variations of the antibodies are contemplated herein. For example, the antibody can be linked with one of a variety of nonproteinaceous polymers, such as polyethylene glycol (PEG), polypropylene glycol, polyoxyalkylene, or copolymers of polyethylene glycol and polypropylene glycol. Antibody fragments, such as Fab ', linked to one or more PEG molecules are particularly preferred embodiments of the invention.

본원에 기재된 항체는 리포좀으로서 제형화할 수 있다. 항체를 함유하는 리포좀은 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어 문헌 [참고: Epstein et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc . Natl Acad . Sci . USA 77:4030 (1980); 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호; 및 WO 1997/38731 (1997년 10월 23일자로 공개됨)]에 기재된 방법에 의해 제조한다. 순환 시간이 증강된 리포좀이 미국 특허 제5,013,556호에 기재되어 있다.The antibodies described herein can be formulated as liposomes. Liposomes containing antibodies can be prepared by methods known in the art, for example in Epstein et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc . Natl Acad . Sci . USA 77: 4030 (1980); U.S. Patents 4,485,045 and 4,544,545; And WO 1997/38731 (published October 23, 1997). Liposomes with enhanced circulation time are described in US Pat. No. 5,013,556.

특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하는 역상 증발 방법에 의해 생성시킬 수 있다. 리포좀은 한정된 공극 크기의 필터를 통하여 압출시켜 목적하는 직경을 갖는 리포좀을 수득한다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편을 디설파이드 쇄간 반응을 통하여 문헌 [참고: Martin et al., J. Biol. Chem. 257:286-288 (1982)]에 기재된 바와 같이 리포좀에 접합시킬 수 있다. 화학요법제가 리포좀에 임의로 함유된다 [참고: Gabizon et al., J. National Cancer Inst. 81(19): 1484 (1989)].Particularly useful liposomes can be produced by reverse phase evaporation methods using lipid compositions comprising phosphatidylcholine, cholesterol and PEG-derivatized phosphatidylethanolamine (PEG-PE). Liposomes are extruded through filters of defined pore size to yield liposomes with the desired diameter. Fab 'fragments of the antibodies of the invention are described by disulfide interchain reactions as described in Martin et al., J. Biol. Chem . 257: 286-288 (1982) can be conjugated to liposomes. Chemotherapeutic agents are optionally contained in liposomes. See Gabizon et al., J. National Cancer Inst . 81 (19): 1484 (1989).

본원에 기재된 단백질 또는 펩티드 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 적당한 뉴클레오티드 변화를 항체 핵산 내로 도입하거나, 또는 펩티드 합성에 의해 제조한다. 이러한 변형에는, 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실, 및/또는 잔기 내로의 삽입 및/또는 잔기의 치환이 포함된다. 모든 결실, 삽입 및 치환 조합을 만들어 최종 구조물에 도달시키는데, 단 이러한 최종 구조물은 목적하는 특징을 보유하고 있어야 한다. 아미노산 변화가 항체의 해독 후 프로세스를 변경시킬 수도 있는데, 예를 들어 당화 부위의 수 또는 위치를 변화시킬 수 있다.Amino acid sequence modification (s) of the proteins or peptide antibodies described herein are contemplated. For example, it may be desirable to improve the binding affinity and / or other biological properties of the antibody. Amino acid sequence variants of the antibody are prepared by introducing appropriate nucleotide changes into the antibody nucleic acid, or by peptide synthesis. Such modifications include, for example, deletions from residues in the amino acid sequence of the antibody, and / or insertion into and / or substitution of residues. All deletion, insertion and substitution combinations are made to reach the final structure, provided that these final structures possess the desired characteristics. Amino acid changes may alter the process after translation of the antibody, eg, alter the number or location of glycosylation sites.

돌연변이를 위한 바람직한 위치인 항체의 특정 잔기 또는 영역을 확인하는데 유용한 방법은 문헌 [참고: Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"인데, 여기서는 특정 잔기, 또는 표적 잔기 군을 확인하고 (예를 들어, arg, asp, his, lys, 및 glu 등의 전하를 띤 잔기), 이를 중성 또는 음전하를 띤 아미노산 (가장 바람직하게는, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체시켜, 상기 아미노산과 항원 간의 상호 작용에 영향을 미친다. 이어서, 이러한 치환물에 대한 기능적 민감도를 입증하는 아미노산 위치는 치환 부위에 추가의 또는 기타 변이체를 도입함으로써 정련시킨다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위가 예정되긴 하였지만, 돌연변이 자체의 특성이 예정될 필요는 없다. 예를 들어, 소정의 부위에서의 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이 유발을 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고, 발현된 항체 변이체를 대상으로 하여 목적하는 활성에 대해 스크리닝한다.A useful method for identifying specific residues or regions of antibodies that are preferred positions for mutations is "alanine scanning mutagenesis" as described in Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989), where certain Identify residues or groups of target residues (eg, charged residues such as arg, asp, his, lys, and glu), and neutral or negatively charged amino acids (most preferably alanine or polyalanine) Substituted with, affects the interaction between the amino acid and the antigen. Subsequently, amino acid positions demonstrating functional sensitivity to these substitutions are refined by introducing additional or other variants at the site of substitution. Thus, although sites for introducing amino acid sequence variations are intended, the nature of the mutations need not be intended. For example, to analyze the performance of mutations at a given site, ala scanning or random mutagenesis is performed at the target codon or region and the expressed antibody variants are screened for the desired activity.

아미노산 서열 삽입물에는 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입물 뿐만 아니라 1개 잔기부터 수 백개 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지 길이의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합물이 포함된다. 말단 삽입물의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 수반한 항체, 또는 세포독성 폴리펩티드와 융합된 항체가 포함된다. 항체 분자의 기타 삽입형 변이체에는 항체의 N- 또는 C-말단과 효소, 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드와의 융합물이 포함된다.Amino acid sequence inserts include amino- and / or carboxyl-terminal fusions of length from one residue to a polypeptide containing hundreds of residues, as well as intrasequence inserts of single or multiple amino acid residues. Examples of terminal inserts include an antibody carrying an N-terminal methionyl residue, or an antibody fused with a cytotoxic polypeptide. Other insertional variants of the antibody molecule include fusions of the N- or C-terminus of the antibody with an enzyme or polypeptide which increases the serum half-life of the antibody.

또 다른 유형의 변이체는 아미노산 치환형 변이체이다. 이들 변이체에서는 항체 분자 내의 1개 이상의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체시켰다. 항체의 치환형 돌연변이 유발을 위한 가장 관심있는 부위에는 초가변 영역이 포함되지만, FR 변경물도 또한 고려된다. 보존적 치환이 "바람직한 치환물"이란 표제 하에 표 1에 나타나 있다. 이러한 치환으로 인해 생물학적 활성 상의 변화가 이루어진다면, 표 1에서 "예시 치환물"로 명명되거나 아미노산 부류와 관련하여 다음에 추가로 기재되는 바와 같은 보다 실재적인 변화를 도입하고 생성물을 스크리닝할 수 있다.Another type of variant is an amino acid substitution variant. These variants have replaced one or more amino acid residues in an antibody molecule with different residues. Sites of most interest for substitutional mutagenesis of antibodies include hypervariable regions, but FR modifications are also contemplated. Conservative substitutions are shown in Table 1 under the heading of "preferred substitutions". If such substitutions result in a change in the biological activity, then more realistic changes, as referred to in Table 1 as “example substituents” or further described below with respect to the amino acid class, can be introduced and the product screened.

항체의 생물학적 특성 면에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 치환 부위에서 폴리펩티드 주쇄의 구조를, 예를 들어 시트 또는 나선 입체 형태로 유지시키는데 대한 그의 효과, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지시키는데 대한 그의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지시키는데 대한 그의 효과 면에서 상당히 상이한 치환을 선택함으로써 달성한다. 아미노산은 그들의 측쇄 특성 면에서의 유사성에 따라서 분류될 수 있다 [참고: A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)]:Substantial modifications in the biological properties of the antibody include (a) its effect on maintaining the structure of the polypeptide backbone at the site of substitution, for example in sheet or helical conformation, (b) the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site By selecting significantly different substitutions in terms of their effect on maintaining, or (c) their effect on maintaining the bulk of the side chain. Amino acids can be classified according to similarities in their side chain properties. See AL Lehninger, in Biochemistry , second ed., Pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)]:

(1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (T), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)(1) Non-polar: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (T), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)

(2) 전하를 띠지 않은 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q) (2) Uncharged Polarity: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)

(3) 산성: Asp (D), Glu (E)(3) Acid: Asp (D), Glu (E)

(4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H)(4) basic: Lys (K), Arg (R), His (H)

또 다른 한편, 천연 발생적 잔기는 공통의 측쇄 특성을 기초로 하여 다음 군으로 나눈다:On the other hand, naturally occurring residues are divided into the following groups based on common side chain properties:

(1) 소수성: 노르루이신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;(1) hydrophobic: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;(2) neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;(3) acidic: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;(4) basic: His, Lys, Arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;(5) residues affecting chain orientation: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.(6) aromatic: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나를 또 다른 부류로 교환시키는 것을 수반할 것이다.Non-conservative substitutions will entail exchanging one of these classes for another class.

항체의 적당한 입체 형태를 유지하는데 관여하지 않은 시스테인 잔기는 일반적으로 세린으로 치환시켜 분자의 산화적 안정성을 개선시키고 이상한 가교결합을 방지할 수도 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 항체에 가하여 그의 안정성을 개선시킬 수 있다 (특히, 항체가 Fv 단편 등의 항체 단편인 경우).Cysteine residues that are not involved in maintaining the proper conformation of the antibody may generally be substituted with serine to improve the oxidative stability of the molecule and to prevent abnormal crosslinking. Conversely, cysteine bond (s) can be added to the antibody to improve its stability (particularly when the antibody is an antibody fragment such as an Fv fragment).

특히 바람직한 유형의 치환형 변이체는 모 항체의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 이로써 생성된 추가의 개발을 위해 선택된 변이체(들)는, 이들을 생성시킨 모 항체와 비교해서 개선된 생물학적 특성을 지닐 것이다. 이러한 치환형 변이체를 생성시키기 위한 편리한 방식은 파아지 디스플레이를 이용하는 친화 돌연변이 방법이다. 간략하게 언급하면, 몇 가지 초가변 영역 부위 (예를 들어, 6 내지 7개 부위)를 돌연변이시켜 각 위치에 가능한 모든 아미노산 치환물을 생성시킨다. 이로써 생성된 항체 변이체를, 각 입자 내에 패키지된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합물로서 필라멘트상 파아지 입자로부터 1가 방식으로 디스플레이한다. 이어서, 이와 같이 파아지-디스플레이된 변이체를 대상으로 하여, 본원에 기재된 바와 같은 그들의 생물학적 활성 (예: 결합 친화성)에 대해 스크리닝한다. 변형시키기 위한 후보 초가변 영역 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발을 수행하여 항원 결합성에 상당히 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 또 다른 한편, 또는 부가적으로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 항원 간의 접촉점을 확인하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이와 이웃하는 잔기는 본원에서 상세히 설명된 기술에 따라서 치환시키기 위한 후보이다. 이러한 변이체가 일단 생성되면, 변이체 패널을 대상으로 하여 본원에 기재된 바와 같이 스크리닝하고, 한 가지 이상 관련 검정에서 탁월한 특성을 지닌 항체를 추가 개발을 위해 선별할 수 있다.Particularly preferred types of substitutional variants include substituting one or more hypervariable region residues of the parent antibody. In general, the variant (s) selected for further development thus produced will have improved biological properties compared to the parent antibody that produced them. A convenient way to generate such substitutional variants is affinity mutation methods using phage display. Briefly stated, several hypervariable region sites (eg, 6-7 sites) are mutated to produce all possible amino acid substitutions at each position. The resulting antibody variants are displayed in a monovalent fashion from filamentary phage particles as a fusion to the gene III product of M13 packaged in each particle. These phage-displayed variants are then screened for their biological activity (eg binding affinity) as described herein. To identify candidate hypervariable region sites for modification, alanine scanning mutagenesis can be performed to identify hypervariable region residues that contribute significantly to antigen binding. Alternatively, or in addition, it may be advantageous to analyze the crystal structure of the antigen-antibody complex to identify the point of contact between the antibody and the antigen. Such contact residues and neighboring residues are candidates for substitution according to the techniques described in detail herein. Once such variants are generated, a panel of variants can be screened as described herein and antibodies with superior properties in one or more related assays can be selected for further development.

항체의 또 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 본래의 당화 패턴을 변경시킨다. 이러한 변경에는 항체에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 부분을 결실시키고/시키거나 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 당화 부위를 부가하는 것이 포함된다.Another type of amino acid variant of an antibody alters the original glycosylation pattern of the antibody. Such alterations include deleting one or more carbohydrate moieties found in the antibody and / or adding one or more glycosylation sites that are not present in the antibody.

폴리펩티드의 당화는 전형적으로, N-연결 또는 O-연결된다. N-연결된이란 탄수화물 부분을 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착시킨 것을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 모든 아미노산이다)은 탄수화물 부분을 아스파라긴 측쇄에 효소적 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 어느 하나가 폴리펩티드에 존재하는 것은 잠재적 당화 부위를 창출시켜 준다. O-연결된 당화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.Glycosylation of polypeptides is typically either N-linked or O-linked. N-linked refers to the attachment of a carbohydrate moiety to the side chain of an asparagine residue. Tripeptide sequences asparagine-X-serine and asparagine-X-threonine, where X is all amino acids except proline, are recognition sequences for enzymatic attachment of the carbohydrate moiety to the asparagine side chain. Thus, the presence of any of these tripeptide sequences in a polypeptide creates a potential glycosylation site. O-linked glycosylation refers to attaching one of the sugars N-acetylgalactosamine, galactose or xylose to hydroxyamino acid, most commonly serine or threonine, but does not attach 5-hydroxyproline or 5-hydroxylysine Can also be used.

당화 부위를 항체에 부가하는 것은 (N-연결된 당화 부위의 경우에는) 상기 언급된 트리펩티드 서열 중의 하나 이상를 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 수행된다. 이러한 변경은 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 본래의 항체에 부가하거나, 또는 이들 잔기에 의해 치환시킴으로써 만들 수 있다 (O-연결된 당화 부위의 경우).The addition of glycosylation sites to the antibody is conveniently carried out by altering the amino acid sequence to contain one or more of the above-mentioned tripeptide sequences (in the case of N-linked glycosylation sites). Such alterations can be made by adding one or more serine or threonine residues to the original antibody, or by substituting these residues (for O-linked glycosylation sites).

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우에는, 이에 부착된 탄수화물을 변경시킬 수 있다. 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착된 푸코스가 결여된 성숙한 탄수화물 구조를 지닌 항체가 문헌 [참고: US 2003/0157108 (Presta, L.)]에 기재되어 있다 [또한, US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.)을 참고할 수 있다]. 항체의 Fc 영역에 부착된 탄수화물 내에 이등분 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc)을 갖는 항체가 다음 문헌에 인용되었다 [참고: WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.) 및 미국 특허 제6,602,684호 (Umana et al.)]. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고당류 내에 하나 이상의 갈락토스 잔기를 갖는 항체가 문헌 [참고: WO 1997/30087 (Patel et al.)]에 보고되었다. 그의 Fc 영역에 부착된 변경된 탄수화물을 수반한 항체에 관해서 다음 문헌을 또한 참고할 수 있다 [참고: WO 1998/58964 (Raju, S.) and WO 1999/22764 (Raju, S.)].If the antibody comprises an Fc region, the carbohydrate attached thereto can be altered. For example, antibodies with mature carbohydrate structures lacking fucose attached to the Fc region of the antibody are described in US 2003/0157108 (Presta, L.) [see also US 2004/0093621 ( Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.). Antibodies with bisected N-acetylglucosamine (GlcNAc) in carbohydrates attached to the Fc region of the antibody are cited in WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.) And US Pat. No. 6,602,684 (Umana et. al.)]. Antibodies with one or more galactose residues in oligosaccharides attached to the Fc region of the antibody have been reported in WO 1997/30087 (Patel et al.). Reference may also be made to the following with respect to antibodies with altered carbohydrates attached to their Fc regions (WO 1998/58964 (Raju, S.) and WO 1999/22764 (Raju, S.)).

본원에서 바람직한 당화 변이체는 Fc 영역을 포함하는데, 여기서는 Fc 영역에 부착된 탄수화물 구조물에 푸코스가 결여된다. 이러한 변이체는 개선된 ADCC 기능을 지니고 있다. 임의로는, Fc 영역이 ADCC를 추가로 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환물을 그 내부에 추가로 포함하는데, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334 (Eu 잔기 넘버링에 따름)에서의 치환물을 포함한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍성" 항체와 관련된 공개 문헌의 예에는 다음 문헌이 포함된다 [참고: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); and Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]. 탈푸코실화 항체를 생산하는 세포주의 예에는 단백질 푸코실화에 있어 결핍성인 Lecl3 CHO 세포 [참고: Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); US 2003/0157108, Presta, L; and WO 2004/056312, Adams et al., especially at Example 11], 및 녹아웃 (knockout) 세포주, 예를 들어 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8-녹아웃 CHO 세포 [참고: Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]가 포함된다. Preferred glycosylation variants herein include an Fc region, wherein the carbohydrate structure attached to the Fc region lacks fucose. These variants have improved ADCC function. Optionally, the Fc region further comprises one or more amino acid substitutions therein that further improve ADCC, for example, at positions 298, 333, and / or 334 of the Fc region (according to Eu residue numbering). It includes a substituent. Examples of publications related to “defucosylated” or “fucose-deficient” antibodies include the following references: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; Okazaki et al. J. Mol. Biol . 336: 1239-1249 (2004); and Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004). Examples of cell lines producing defucosylated antibodies include Lecl3 CHO cells deficient in protein fucosylation [Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys . 249: 533-545 (1986); US 2003/0157108, Presta, L; and WO 2004/056312, Adams et al., especially at Example 11], and knockout cell lines, such as the alpha-1,6-fucosyltransferase gene, FUT8 -knockout CHO cells [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng . 87: 614 (2004).

항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당해 분야에 공지된 각종 방법에 의해 제조한다. 이들 방법에는 천연 공급원으로부터의 분리 방법 (천연 발생적 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 앞서 제조된 변이체 또는 항체의 비-변이체 버젼을 올리고뉴클레오티드-매개된 (또는 부위-지시된) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발 및 카세트 돌연변이 유발시킴으로써 제조하는 방법이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.Nucleic acid molecules encoding amino acid sequence variants of the antibody are prepared by a variety of methods known in the art. These methods include methods of isolation from natural sources (for naturally occurring amino acid sequence variants), or oligonucleotide-mediated (or site-directed) mutagenesis, PCR mutagenesis of non-variant versions of previously prepared variants or antibodies. And methods of making by cassette mutagenesis.

예를 들어, 항체의 ADCC 및/또는 CDC를 증강시키도록 효과기 기능 측면에서 본 발명의 항체를 변형시키는 것이 요망될 수 있다. 이는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환물을 도입함으로써 달성할 수 있다. 또 다른 한편, 또는 부가적으로, 시스테인 잔기를 Fc 영역 내로 도입함으로써, 이러한 영역 내에 쇄간 디설파이드 결합을 형성시킬 수 있다. 이로써 생성된 동종-이량체성 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개성 세포 사멸 및 ADCC를 지닐 수 있다 [참고: Caron et al., J. Exp Med. 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)]. 항종양 활성이 증강된 동종-이량체성 항체는 다음 문헌에 기재된 바와 같이 이종-이관능성 가교 결합제를 사용하여 제조할 수도 있다 [참고: Wolff et al., Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)]. 또 다른 한편, 이중 Fc 영역을 갖도록 항체를 공학처리함으로써, 증강된 보체 용해 및 ADCC 능력을 지니도록 할 수 있다 [참고: Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)].For example, it may be desirable to modify the antibodies of the invention in terms of effector function to enhance ADCC and / or CDC of the antibody. This can be accomplished by introducing one or more amino acid substitutions into the Fc region of the antibody. Alternatively, or in addition, by introducing a cysteine residue into the Fc region, interchain disulfide bonds can be formed in this region. Homo-dimeric antibodies thus produced may have improved internalization capacity and / or increased complement-mediated cell death and ADCC. See Caron et al., J. Exp Med. 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992). Homo-dimeric antibodies with enhanced anti-tumor activity can also be prepared using hetero-bifunctional cross-linking agents as described in Wolff et al., Cancer Research 53: 2560-2565 (1993). . On the other hand, by engineering the antibody to have a double Fc region, one can have enhanced complement lysis and ADCC ability (see Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)). .

WO 2000/42072 (Presta, L.)에는 인간 효과기 세포의 존재 하에 개선된 ADCC 기능을 지닌 항체가 기재되어 있는데, 이러한 항체는 그의 Fc 영역에 아미노산 치환물을 포함한다. 바람직하게는, 개선된 ADCC를 수반한 항체가 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에 치환물을 포함한다. 바람직하게는, 변경된 Fc 영역이, 이들 위치 중의 1개, 2개 또는 3개에서의 치환물을 포함하거나 이로 이루어진 인간 IgGl Fc 영역이다.WO 2000/42072 (Presta, L.) describes antibodies with improved ADCC function in the presence of human effector cells, which comprise amino acid substitutions in their Fc region. Preferably, the antibody with improved ADCC comprises a substitution at positions 298, 333, and / or 334 of the Fc region. Preferably, the altered Fc region is a human IgGl Fc region comprising or consisting of substitutions at one, two or three of these positions.

변경된 Clq 결합성 및/또는 CDC를 지닌 항체가 WO 1999/51642 및 미국 특허 제6,194,551호, 제6,242,195호, 제6,528,624호 및 제6,538,124호 (Idusogie et al.)에 기재되어 있다. 이 항체는 그의 Fc 영역의 아미노한 위치 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333, 및/또는 334 중의 하나 이상의 위치에 아미노산 치환물을 포함한다.Antibodies with altered Clq binding and / or CDC are described in WO 1999/51642 and US Pat. Nos. 6,194,551, 6,242,195, 6,528,624 and 6,538,124 (Idusogie et al.). This antibody comprises an amino acid substitution at one or more of the amino positions 270, 322, 326, 327, 329, 313, 333, and / or 334 of its Fc region.

항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같이, 재이용 (salvage) 수용체 결합성 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편) 내로 혼입시킬 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "재이용 수용체 결합성 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는데 책임이 있는 IgG 분자 (예: IgG_l, IgG₂, IgG₃, 또는 IgG₄)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다. 그의 Fc 영역에 치환물을 갖고 혈청 반감기가 증가된 항체가 또한 WO 2000/42072 (Presta, L.)에 기재되어 있다.To increase the serum half-life of the antibody, a salvage receptor binding epitope can be incorporated into an antibody (particularly an antibody fragment), as described, for example, in US Pat. No. 5,739,277. As used herein, the term “reuse receptor binding epitope” refers to the Fc region of an IgG molecule (eg IgG _l , IgG ₂ , IgG ₃ , or IgG ₄ ) responsible for increasing the serum half-life of the IgG molecule in vivo. Refers to epitopes. Antibodies with substitutions in their Fc region and increased serum half-life are also described in WO 2000/42072 (Presta, L.).

3개 이상 (바람직하게는, 4개)의 기능적 항원-결합 부위를 갖는, 공학적으로 처리시킨 항체가 또한 고려된다 [참고: US 2002/0004587 Al, Miller et al.].Engineered antibodies that have three or more (preferably four) functional antigen-binding sites are also contemplated (US 2002/0004587 Al, Miller et al.).

V. 제약 제형 (제제)V. Pharmaceutical Formulations (Formulations)

본 발명에 따라서 사용된 항체의 치료적 제형은, 목적하는 순도를 지닌 항체를 임의의 제약상 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 [참고: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]와 혼합하여, 동결건조된 제형 또는 수성 용제 형태로 저장하기 위해 제조한다. 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 이용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 이에는 완충제, 예를 들어 인산염, 시트레이트 및 기타 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 방부제 (예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예를 들면 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레솔); 저분자량 (약 10개 미만 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨; 염 형성 반대-이온, 예를 들어 나트륨; 금속 착물 (예: Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 PEG가 포함된다.Therapeutic formulations of the antibodies used in accordance with the present invention may be prepared by any suitable pharmaceutically acceptable carrier, excipient or stabilizer of the antibody having the desired purity. Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980), for storage in lyophilized formulation or aqueous solvent form. Acceptable carriers, excipients or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations employed, including buffers such as phosphate, citrate and other organic acids; Antioxidants such as ascorbic acid and methionine; Preservatives (e.g. octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride; benzetonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorci Knoll; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol); Low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; Proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; Monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates such as glucose, mannose, or dextrins; Chelating agents such as EDTA; Sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; Salt-forming counter-ions such as sodium; Metal complexes such as Zn-protein complexes; And / or nonionic surfactants such as TWEEN ™, PLURONICS ™ or PEG.

예시되는 항-CD20 항체 제형은 W0 1998/56418에 기재되어 있다. 이러한 공개공보에는 2 내지 8℃ 하의 저장시 최소 2년의 저장 수명을 갖는, 40 mg/ml 리툭시마브, 25 mM 아세테이트, 150 mM 트레할로스, 0.9％ 벤질 알코올, 0.02％ POLYSORBATE™ 20 유화제 (pH 5.0)를 포함하는 반복투여용 액상 제형이 기재되어 있다. 관심있는 또 다른 항-CD20 제형은 9.0 mg/ml 염화나트륨 중의 10 mg/ml 리툭시마브, 7.35 mg/ml 나트륨 시트레이트 이수화물, 0.7 mg/ml POLYSORBATE™ 80 유화제, 및 멸균성 주사용 수 (pH 6.5)를 포함한다.Exemplary anti-CD20 antibody formulations are described in WO 1998/56418. This publication discloses 40 mg / ml Rituximab, 25 mM acetate, 150 mM trehalose, 0.9% benzyl alcohol, 0.02% POLYSORBATE ™ 20 emulsifier (pH 5.0) having a shelf life of at least 2 years when stored under 2-8 ° C. There is described a liquid dosage form for repeated administration comprising a). Another anti-CD20 formulation of interest is 10 mg / ml rituximab in 9.0 mg / ml sodium chloride, 7.35 mg / ml sodium citrate dihydrate, 0.7 mg / ml POLYSORBATE ™ 80 emulsifier, and sterile injectable water (pH 6.5).

피하 투여용으로 적응시킨 동결건조된 제형이, 예를 들어 미국 특허 제6,267,958호 (Andya et al.)에 기재되어 있다. 이러한 동결건조된 제형은 적합한 희석제를 사용하여 고 단백질 농도가 되도록 재구성할 수 있고, 이와 같이 재구성된 제형은 본원에서 치료하고자 하는 포유류에게 피하 투여할 수 있다.Lyophilized formulations adapted for subcutaneous administration are described, for example, in US Pat. No. 6,267,958 (Andya et al.). Such lyophilized formulations may be reconstituted to high protein concentrations using suitable diluents, and such reconstituted formulations may be administered subcutaneously to the mammal to be treated herein.

결정화 형태의 항체가 또한 고려된다 [참고: 예를 들어, US 2002/0136719Al (Shenoy et al.)]. Antibodies in crystallized form are also contemplated (see, eg, US 2002/0136719 Al (Shenoy et al.)).

본원의 제형은 치료하고자 하는 특정한 적응증에 대해 필요한 만큼의 한 가지 이상의 활성 화합물 (제2 약물), 바람직하게는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 지닌 화합물을 함유할 수도 있다. 예를 들어, 세포독성제 [예를 들면, 미톡산트론 (NOVANTRONE^®), 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 클로람부실 또는 아자티오프린], 화학요법제, 면역억제제, 사이토킨, 사이토킨 길항제 또는 항체, 성장 인자, 호르몬 (예: 테스토스테론 또는 호르몬 대체 요법), 인테그린, 인테그린 길항제 또는 항체 [예: LFA-1 항체, 예를 들어 에팔리주마브/RAPTIVA^®; Genentech으로부터 시판중임, 또는 알파 4 인테그린 항체, 예를 들어 나탈리주마브/ANTEGREN^®; Biogen으로부터 입수 가능함, 또는 상기 언급된 바와 같은 기타 항체], 인터페론 부류 약물, 예를 들어 IFN-베타-la (REBIF^® 및 AVONEX^®) 또는 IFN-베타-lb (BETASERON^®), 올리고펩티드, 예를 들어 글라티라머 아세테이트 (COPAXONE^®), 정맥내 면역글로불린 (감마 글로불린), 림프구-고갈 약물 (예: 미톡산트론, 시클로포스파미드, CAMPATH™ 항체, 항-CD4, 또는 클라드리빈), 비-림프구-고갈성 면역억제제 (예: MMF 또는 시클로스포린), "스타틴" 부류의 콜레스테롤 저하성 약물, 에스트라디올, 루푸스와 관계되거나 이차적 증상 (예: 경직, 실금, 통증, 피로)을 치료하기 위한 약물, TNF 억제제, DMARD, NSAID, 코르티코스테로이드 [예: 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 덱사메타손 또는 글루코르티코이드], 레보티록신, 시클로스포린 A, 소마타스타틴 유사체, 항대사제, 또 다른 B-세포 표면 길항제/항체 등을 제형에 추가로 제공하는 것이 요망될 수 있다. 이러한 기타 작용제 (본원에서 제2 약물로 지칭되는데, 제1 약물은 CD20 항체이다)의 유형과 유효량은, 예를 들어 제형에 존재하는 항체의 양, 치료하고자 하는 루푸스의 유형, 및 대상체의 임상 파라미터에 좌우된다.The formulations herein may contain as many as one or more active compounds (second drugs) as necessary for the particular indication to be treated, preferably compounds with complementary activity that do not adversely affect each other. For example, cytotoxic agents (eg mitoxantrone (NOVANTRONE ^® ), methotrexate, cyclophosphamide, chlorambucil or azathioprine], chemotherapeutic agents, immunosuppressants, cytokines, cytokine antagonists or antibodies, Growth factors, hormones (eg testosterone or hormone replacement therapy), integrins, integrin antagonists or antibodies [eg LFA-1 antibodies such as efalizumab / RAPTIVA ^® ; Commercially available from Genentech, or alpha 4 integrin antibodies such as Natalizumab / ANTEGREN ^® ; Available from Biogen, or other antibodies as mentioned above], interferon class drugs such as IFN-beta-la (REBIF ^® and AVONEX ^® ) or IFN-beta-lb (BETASERON ^® ), oligopeptides, eg Eg glatiramer acetate (COPAXONE ^® ), intravenous immunoglobulin (gamma globulin), lymphocyte-depleting drugs (eg mitoxantrone, cyclophosphamide, CAMPATH ™ antibody, anti-CD4, or cladribine), b Lymphocyte-depleting immunosuppressive agents (e.g. MMF or cyclosporine), cholesterol-lowering drugs of the "statin" class, estradiol, lupus related or secondary to treating symptoms (e.g., stiffness, incontinence, pain, fatigue) Drugs, TNF inhibitors, DMARDs, NSAIDs, corticosteroids [eg methylprednisolone, prednisone, dexamethasone or glucocorticoids], levothyroxine, cyclosporin A, somatostatin analogs, anti-metabolic agents, another B-cell It is to provide additional surface antagonist / antibody, such as in the formulation may be desired. The type and effective amount of such other agents (herein referred to as second drugs, where the first drug is a CD20 antibody) is, for example, the amount of antibody present in the formulation, the type of lupus to be treated, and the clinical parameters of the subject. Depends on.

활성 성분을, 예를 들어 액적형성 (coacervation) 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 미소캡슐, 예를 들어 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴 미소캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미소캡슐; 콜로이드상 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀션, 나노-입자 및 나노-캡슐); 또는 매크로에멀션 내에 포착시킬 수도 있다. 이러한 기술은, 예를 들어 문헌 [참고: Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기재되어 있다.The active ingredient is, for example, microcapsules prepared by, for example, coacervation techniques or interfacial polymerization, such as hydroxymethylcellulose or gelatin microcapsules and poly- (methylmethacrylate) microcapsules; Colloidal drug delivery systems (eg, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nano-particles and nano-capsules); Alternatively, it can be captured in a macroemulsion. Such techniques are described, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980).

지속 방출 제제를 제조할 수 있다. 지속 방출 제제의 적합한 예에는 상기 항체를 함유하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되는데, 이러한 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 미소캡슐 형태이다. 지속 방출 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 히드로겔 [예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)], 폴리락티드 [참고: 미국 특허 제3,773,919호], L-글루탐산과 γ에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 LUPRON DEPOT™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사용 미소구), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다.Sustained release formulations may be prepared. Suitable examples of sustained release formulations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, eg, films, or microcapsules. Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels [eg, poly (2-hydroxyethyl-methacrylate) or poly (vinylalcohol)], polylactide [see US Pat. No. 3,773,919], L Copolymers of glutamic acid with γethyl-L-glutamate, non-degradable ethylene-vinyl acetate, degradable lactic acid-glycolic acid copolymers, for example LUPRON DEPOT ™ (injectables consisting of lactic acid-glycolic acid copolymers and leuprolide acetate Microspheres), and poly-D-(-)-3-hydroxybutyric acid.

생체내 투여에 사용하고자 하는 제형은 멸균성이어야만 한다. 이는 멸균성 여과 막을 통하여 여과시킴으로써 용이하게 달성된다.Formulations to be used for in vivo administration must be sterile. This is readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes.

VI. 제조품VI. Manufactured goods

본 발명의 또 다른 양태에서는, 상기 언급된 루푸스를 치료하는데 유용한 물질을 함유하는 제조품이 제공된다. 바람직하게는, 이러한 제조품이 (a) B-세포 표면 마커와 결합하는 항체 (예: CD20 항체)와 제약상 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 포함하는 용기; 및 (b) 대상체에게서 루푸스를 치료하는 것에 대한 지시사항을 수반하는 패키지 삽입물 (이러한 지시사항은 약 0.5 내지 4 그램의 초기 항체 노출을 제공한 한 다음, 약 0.5 내지 4 그램의 제2 항체 노출을 제공하는데 유효한 양의 항체를 대상체에게 투여하는데, 이러한 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공된다는 것을 나타낸다)을 포함한다.In another aspect of the invention, an article of manufacture containing a substance useful for treating the aforementioned lupus is provided. Preferably, such article of manufacture comprises (a) a container comprising a composition comprising an antibody (eg, a CD20 antibody) that binds a B-cell surface marker and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent; And (b) a package insert accompanying instructions for treating lupus in a subject, wherein the instructions provide about 0.5 to 4 grams of initial antibody exposure and then about 0.5 to 4 grams of the second antibody exposure. An effective amount of antibody is administered to a subject, wherein the second exposure is not given from about 16 to 54 weeks from the initial exposure, each antibody exposure being a single dose of the antibody, or two or three separate doses of As an antibody to a subject).

패키지 삽입물은 상기 용기와 연합되거나 그 위에 존재한다. 적합한 용기에는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기 등이 포함된다. 용기는 각종 재료, 예를 들어 유리 또는 플라스틱으로부터 형성할 수 있다. 용기는 루푸스를 치료하는데 유효한 조성물을 보유하고 있거나 이를 함유하고, 멸균성 유입 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 상기 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용제 봉지 또는 바이알일 수 있다). 조성물 내의 한 가지 이상 활성제가 상기 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 해당 조성물이 치료에 적격한 대상체에게서, 항체 및 제공되는 기타 약물의 투여량과 투여 간격에 관한 구체적인 지침을 이용하여 루푸스를 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 본 발명의 제조품은 제약상 허용 가능한 희석 완충제, 예를 들어 제균성 주사용 수 (BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제조품은 제2 약물을 포함하는 제2 또는 제3 용기를 추가로 포함할 수 있으며, CD20 항체가 제1 약물이고, 제조품은 이러한 제2 약물을 사용하여 대상체를 치료한다는 지시사항을 패키지 삽입물 상에 추가로 포함한다. 예시되는 제2 약물에는 화학요법제, 면역억제제, 항말라리아제, 세포독성제, 인테그린 길항제, 사이토킨 길항제 또는 호르몬이 포함된다. 바람직한 제2 약물은 화학요법제, 항말라리아제 또는 면역억제제, 가장 바람직하게는 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 시클로포스파미드, 프레드니손, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 아자티오프린 또는 6-머캅토퓨린이다. 보다 구체적으로 언급하면, 루푸스가 SLE인 경우에는, 상기 제2 약물이 바람직하게, 코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니손 (임의로, 6-머캅토퓨린을 수반하거나 수반하지 않으면서, 메토트렉세이트, 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, MMF 또는 아자티오프린과 함께 사용함)이고, 루푸스가 루푸스 신염인 경우에는, 제2 약물이 바람직하게 코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니손 뿐만 아니라 MMF 또는 시클로포스파미드이다. 본 발명의 제조품은 상업적 및 사용자 측면에서 바람직한 기타 물질, 예를 들어 기타 완충제, 희석제, 충진제, 바늘 및 주사기를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 추가의 상세 내역은 다음 비-제한적 실시예에 의해 예시된다. 본 명세서 내의 모든 인용 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 삽입된다.The package insert is associated with or present on the container. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes and the like. The container may be formed from various materials, for example glass or plastic. The container may contain or contain a composition effective for treating lupus, and may have a sterile inlet port (e.g., the container may be an intravenous solvent bag or vial with a stopper pierceable by a hypodermic needle) Can be). At least one active agent in the composition is said antibody. The label or package insert indicates that the composition is used to treat lupus in subjects eligible for treatment using specific instructions regarding the dosages and intervals of administration of antibodies and other drugs provided. The article of manufacture may further comprise a second container comprising a pharmaceutically acceptable dilution buffer such as sterile injectable water (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. The article of manufacture may further comprise a second or third container comprising a second drug, wherein the CD20 antibody is the first drug and the article of manufacture provides instructions on the package insert to treat the subject. Include in addition to. Illustrative second drugs include chemotherapeutic agents, immunosuppressants, antimalarial agents, cytotoxic agents, integrin antagonists, cytokine antagonists or hormones. Preferred second drugs are chemotherapeutic, antimalarial or immunosuppressive agents, most preferably hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, cyclophosphamide, prednisone, mycophenolate mofetil, methotrexate, azathioprine or 6-mer Captopurine. More specifically, when lupus is SLE, the second drug is preferably a corticosteroid, for example prednisone (optionally with or without 6-mercaptopurine, methotrexate, hydroxychloroquine, Chloroquine, quinacrine, MMF or azathioprine), and when lupus is lupus nephritis, the second drug is preferably corticosteroids such as prednisone as well as MMF or cyclophosphamide. The article of manufacture may further comprise other materials desirable from a commercial and user standpoint, such as other buffers, diluents, fillers, needles and syringes. Further details of the invention are illustrated by the following non-limiting examples. All cited references in this specification are hereby incorporated by reference in their entirety.

실시예 1Example 1

ISN/RPS 2003 부류 III 또는 IV 루푸스 신염에 걸린 대상체에게서 리툭시마 브의 효능 및 안전성에 관한 연구Efficacy and Safety of Rituximab in Subjects with ISN / RPS 2003 Class III or IV Lupus Nephritis

본 연구는 활동성 ISN/RPS 2003 부류 III 또는 IV 루푸스 신염에 걸린 대상체에게서 미코페놀레이트 모페틸 (MMF) + 코르티코스테로이드 단독과 비교해서, MMF 및 코르티코스테로이드에 부가된 리툭시마브 (MABTHERA^®/RITUXAN^®)의 효능과 안전성의 탁월함을 평가하였다. 리툭시마브 (1000 mg x 2)를 정맥내 및 경구 코르티코스테로이드와 함께 1일 및 15일 째에 2개 초기 용량으로 정맥내 투여한 다음, 6개월 째에 1 g씩 2회 투여하였다. 이러한 실험적 섭생 (리툭시마브를 MMF + 코르티코스테로이드에 부가함)을 플라시보 (플라시보를 MMF + 코르티코스테로이드에 부가함)와 비교하였다. 이와 같이 리툭시마브에 의거한 섭생은 현 주의 표준에 챌린지하였고, CYTOXAN^® 시클로포스파미드 (CYC) 및 그의 공지된 독성에 대한 환자 노출을 없애주었으며, 개선된 총체적인 임상 이점을 입증해주었다. 52주 간의 연구 기간 전반에 걸쳐 환자를 대상으로 하여, 신장 및 신외성 질병 활성, 병의 돌발 (재발) 및 안전성 사건에 대해 모니터링하였다. 본 시험의 일차적 효능 종점은 52주째이다. 어느 쪽이 나중에 일어나든지 간에, 리툭시마브를 마지막으로 투여한 후 12개월 까지 또는 B 세포를 회수할 때 까지는 안전성 추적이 요구된다.This research activity ISN / RPS 2003 class III or IV, as compared to the mycophenolate mofetil (MMF) + corticosteroid alone from a subject suffering from lupus nephritis, MMF and ^® with rituximab MAB (MABTHERA addition to a corticosteroid / RITUXAN ^® ) Efficacy and safety excellence were evaluated. Rituximab (1000 mg × 2) was administered intravenously with two intravenous doses on days 1 and 15 with intravenous and oral corticosteroids, followed by two doses of 1 g at 6 months. This experimental regimen (adding rituximab to MMF + corticosteroid) was compared to placebo (adding placebo to MMF + corticosteroid). Thus, a regimen based on rituximab Marv was the challenge to the current state standards, CYTOXAN ^® cyclophosphamide (CYC) and gave eliminate patient exposure to its well-known toxicity, it was demonstrated improved overall clinical benefit. Patients were monitored for renal and extrinsic disease activity, disease outbreak (relapse) and safety events throughout the 52 week study period. The primary efficacy endpoint for this study is week 52. Either way, safety tracking is required until 12 months after the last dose of rituximab or until B cells are recovered.

일차적인 목표는 완전한 또는 부분적 신장 반응을 나타내는 환자의 비율을 결정하는 것이다.The primary goal is to determine the proportion of patients with complete or partial renal response.

완전한 신장 반응은 다음과 같이 정의된다:The complete elongation response is defined as follows:

1. 정상 크레아티닌, 또는 기선 크레아티닌이 정상 범위 보다 낮을 경우에는 크레아티닌이 기선 범위 (±0.2 mg/dL)가 되도록 표준화시킨다.1. If normal creatinine, or baseline creatinine, is below the normal range, normalize creatinine to the baseline range (± 0.2 mg / dL).

2. 불활성 뇨 침강 [< 10 적혈구 (RBCs)/고배율 시야 (HPF) 및 적혈구 원주의 부재에 의해 입증된 바와 같음].2. Inactive urine sedimentation (as evidenced by <10 erythrocytes (RBCs) / high magnification field of view (HPF) and absence of erythrocyte columnar].

3. 뇨 단백질 대 크레아티닌 비 < 0.5. 3. Urinary protein to creatinine ratio <0.5.

부분 신장 반응은 다음과 같이 정의된다:The partial elongation response is defined as follows:

1. 안정하거나 (스크리닝 값으로부터 ±10％) 개선된 추정 사구체 여과속도 (GFR) [신장 질환에서 식이의 변형 (MDRD) 방정식에 의해 계산된 바와 같음].1. Estimated glomerular filtration rate (GFR) that is stable (± 10% from screening value) or improved (as calculated by dietary modification (MDRD) equation in kidney disease).

2. 기선으로부터의 뇨 침강의 악화가 없음.2. There is no exacerbation of urine sedimentation from the baseline.

3. 기선 뇨 단백질 대 크레아티닌 비가 ≤3.5인 경우에는, < 1.0의 단백뇨 대 뇨 단백질 대 크레아티닌 비 감소가 관찰되거나, 또는 기선 뇨 단백질 대 크레아티닌 비가 > 3.5인 경우에는, 단백뇨가 ≥50％ 정도 감소되어 3.5의 뇨 단백질 대 크레아티닌 비 보다 낮은 수준으로 된다.3. A decrease in proteinuria to urine protein to creatinine ratio of <1.0 was observed when the base urine protein to creatinine ratio was ≤3.5, or when urinary protein to creatinine ratio was> 3.5, proteinuria was reduced by ≥50%. Urine protein of 3.5 becomes lower than the creatinine ratio.

승낙한 대상체는 적격성을 결정하기 위해 14일 까지의 스크리닝 기간에 참여하였다. 스크리닝 후, MMF를 투여하지 않은 대상체에게 1일 1500 mg 양의 MMF를 여러 회분으로 나누어 (1일 3회) 투여하기 시작하였다. 대상체에게 관용되는 바 대로 약 4주까지 1일 3 g 이하의 표적 용량을 여러 회분으로 나누어 (1일 3회) 적정시킨다. 용량 감소가 필요한 경우에는, 250 내지 500 mg씩 감소시키는 것이 허용될 것이다. MMF 투여를 지속한 후 또는 시작한 후에 대상체에게 무작위로, 메틸프레드니솔론 1000 mg을 2일 동안 1일 1회씩 정맥내 투여한 다음, 3일 째부터는 환자에게 경구 프레드니손을 1일 0.75 mg/kg씩 투여하고, 16주 까지 1일 10 내지 15 mg으로 점점 줄여나간다. 대상체에게 1일 및 15일째 및 168일 및 182일 째에는 리툭시마브 또는 플라시보를 투여하고, 15일, 168일 및 182일 째에 주입하기 30 내지 60분 전에 100 mg의 메틸프레드니솔론을 정맥내 투여한다. 신장 기능 악화를 경험한 대상체는 철수시켜 (빼내어) 연구자들의 재량 하에 치료할 수 있다. 이들 대상체는 치료가 실패한 것으로서 간주될 것이지만, 안전성 추적은 면밀하게 계속 진행시켰다.Accepted subjects participated in the screening period of up to 14 days to determine eligibility. After screening, subjects who did not receive MMF began administering 1500 mg amounts of MMF in multiple batches (three times a day). As the subject is tolerated, the target dose of up to 3 g per day is titrated in multiple batches (3 times a day) until about 4 weeks. If dose reduction is needed, it will be allowed to decrease by 250 to 500 mg. Subjects were randomly administered intravenously with 1000 mg of methylprednisolone once a day for 2 days after continuing or starting MMF, and from day 3 the patient received 0.75 mg / kg oral prednisone daily Gradually decrease to 10-15 mg per day until week 16. Subjects received rituximab or placebo on days 1 and 15 and on 168 and 182, and 100 mg of methylprednisolone intravenously 30 to 60 minutes prior to infusion on days 15, 168 and 182 do. Subjects experiencing renal impairment can be withdrawn (pulled out) and treated at the discretion of the investigators. These subjects would be considered failed treatment, but safety tracking continued closely.

다음 3가지 기준 모두를 충족시킨 경우에는, 대상체가 본 연구에 적격한 것이다:Subjects are eligible for this study if all three criteria are met:

· 대상체가 스크리닝한지 12개월 내에 수행된 신장 생검에서 사구체의 <50％가 경화증을 나타낸 것으로써 입증된 바와 같은 ISN/RPS 부류 III 또는 IV 루푸스 신염에 걸린 것으로 진단되었고;Kidney biopsies performed within 12 months of screening of the subject were diagnosed as having ISN / RPS Class III or IV lupus nephritis as demonstrated by <50% of glomeruli showing sclerosis;

· 대상체가 단백뇨에 의해 입증된 바와 같이 활동성 질환을 갖고 있는데, 뇨 단백질 대 크레아티닌 비가 >1.0이고, 스크리닝한지 3개월 내에 신장 생검이 ISN/RPS 2003 부류 III 또는 IV 루푸스 신염을 나타내거나 또는 > 10 RBCs/HPF 또는 적혈구 원주의 존재를 수반한 활성 뇨 침강을 나타내었으며;Subject has active disease, as evidenced by proteinuria, with urine protein to creatinine ratio> 1.0 and kidney biopsy showing ISN / RPS 2003 Class III or IV lupus nephritis within 3 months of screening or> 10 RBCs Activated urine sedimentation with presence of / HPF or erythrocyte columnar;

· 대상체가 스크리닝에 앞서 12주 동안 ≥30 ml/min의 GFR (MDRD 방정식에 의해 계산된 바와 같음)을 나타낸 것으로 추정되었다.Subject was estimated to have a GFR of ≧ 30 ml / min (as calculated by the MDRD equation) for 12 weeks prior to screening.

B-세포 계수치 (CD19)는 기선에서, 리툭시마브/플라시보의 각 과정이 끝날 무렵에서, 그리고 본 연구 전반에 걸쳐 그 후 4주 마다 평가하였다. 모든 B-세포 계수치는 후원자가 지정한 중앙 실험실에서 수행하였다. 78주가 끝날 무렵, 플라 시보 리툭시마브 또는 활동성 리툭시마브를 투여한 대상체가 B-세포 회수를 나타내면, 이의 연구 참여를 완료시켰다. 리툭시마브를 투여한 대상체가 B-세포 회수를 나타내지 않는다면, 이는 B-세포를 회수할 때까지 연구를 계속 진행시켰으며, 이는 어느 것이 더 낮든지 간에 기선이나 정상치의 보다 낮은 한계치로써 규정된다.B-cell counts (CD19) were assessed at baseline, at the end of each course of rituximab / placebo, and every four weeks thereafter throughout the study. All B-cell counts were performed in a central laboratory designated by the sponsor. At the end of week 78, if subjects receiving placebo rituximab or active rituximab showed B-cell recovery, their participation in the study was complete. If subjects receiving rituximab did not exhibit B-cell recovery, the study continued until the B-cells were recovered, which is defined as the lower limit of baseline or normal, whichever is lower.

52주 후, 대상체는 리툭시마브 주입에 적격할 수 있다. 52주 후에 일정 용량의 리툭시마브를 투여한 모든 대상체를 대상으로 하여, 어느 것이 더 늦든지 간에 리툭시마브를 마지막으로 투여한 후 12개월 동안 또는 B-세포 회수때까지 관찰하였다.After 52 weeks, the subject may be eligible for rituximab infusion. All subjects receiving a dose of Rituximab after 52 weeks were observed for 12 months after the last dose of Rituximab or until B-cell recovery.

상기 제시된 프로토콜에서 대상체에게 리툭시마브 또는 인간화 2H7을 투여하면, 대조군에 비해 루푸스 신염의 한 가지 이상 징후, 증상 또는 기타 적응증이 경감될 것으로 예상 및 예측된다. CD20 항체를 이용한 초기 요법 후 12개월 내지 18개월 사이에 CD20 항체 2 g을 한번에 모두 투여하거나 또는 1 그램의 양으로 약 14일 내지 16일에 걸쳐 나누어 투여하는 것이, 프레드니손 및/또는 기타 면역억제제의 존재 또는 부재 하에 대상체가 병의 돌발(재발)을 경험한 경우에는 또 다른 완전한/부분적 반응을 유도시키거나 초기 요법의 반응을 지속시키는데 유효할 것으로 또한 예상된다. 따라서, CD20 항체를 초기에 약 2주 기간 내에 투여한 다음, 대략 6개월 경에 또 다른 치료를 한 후, 초기 치료로부터 대략 1년 내지 1년 반이 지난 시점 (용량 1회분을 투여한 시점으로부터 측정함)에 또 다른 잠재적 치료를 수행하는 것으로 성공을 가져다 줄 것으로 예상된다. 이와 같이 여러 차례 치료(재치료)를 수행하는 프로토콜이 증식성 루푸스 신염을 치료하는데 성공적으로 이용될 것으 로 예상된다.Administration of rituximab or humanized 2H7 to a subject in the protocol presented above is expected and predicted to alleviate one or more signs, symptoms or other indications of lupus nephritis compared to the control. Administration of 2 g of the CD20 antibody all at once or 12 to 18 months after initial therapy with the CD20 antibody, or in divided doses over a period of about 14 to 16 grams of prednisone and / or other immunosuppressive agents It is also expected that if the subject experiences a breakout (relapse) of the disease in the presence or absence, it will be effective to induce another complete / partial response or to sustain the response of the initial therapy. Thus, the CD20 antibody was initially administered within a period of about 2 weeks, followed by another treatment at approximately 6 months, then approximately one year to one and a half years after the initial treatment (from the point of dose administration). It is expected that success will be achieved by performing another potential treatment. It is anticipated that this protocol of several treatments (retreatments) will be successfully used to treat proliferative lupus nephritis.

실시예 2Example 2

적당한 수준 내지 중증의 전신성 홍반성 루푸스에 걸린 대상체에게서 리툭시마브의 효능과 안전성을 평가하기 위한 연구Study to evaluate the efficacy and safety of Rituximab in subjects with moderate to severe systemic lupus erythematosus

본 연구는 제II/III상 시험을 위한 등록시 활동성 사구체신염을 나타내지 않고 활동성 SLE를 나타내는 대상체에게서 플라시보와 비교하여, 프레드니손 및 하나의 부가의 면역억제제 [MMF, 메토트렉세이트 (MTX), 아지티오프린 (AZA), 또는 6-머캅토퓨린 (6-MP)]에 부가된 리툭시마브 (MABTHERA^®/RITUXAN^®)의 효능과 안전성을 평가하였다. 1개의 새로운 BILAG A 기준 또는 2개의 새로운 BILAG B 기준으로써 정의된 바와 같은 중중의 루푸스 돌발을 나타내는 것으로써 대상체를 한정할 수 있고, 이러한 대상체에게 그들의 BILAG 스코어 및 예비연구 프레드니손 용량을 기준으로 하여, 7일 간에 걸쳐 1일 0.5 mg/kg, 0.75 mg/kg 또는 1.0 mg/kg의 초기 경구 프레드니손 섭생을 제공하였다. 이어서, 대상체에게 무작위로 리툭시마브 또는 플라시보를 투여하고, 16일 째부터 시작하여 10주 동안 프레드니손 용량을 점차적으로 줄여 1일 <10 mg의 프레드니손 용량이 되도록 하였다. 대상체에게 관용되는 바 대로 코르티코스테로이드 용량을 점차적으로 줄이기 시작하여 1일 ≤5 mg의 표적 용량이 되도록 하였다. 52주 간의 연구 전 기간에 걸쳐 대상체를 대상으로 하여, 질병 활성, 부가의 면역억제제 사용, 질병의 재발(돌발), 프레드니손 사용, 및 안전성 사건에 대해 모니터링하였다. 본 시험의 일차적 효능 종점은 52주째이다. 어느 쪽이 나중에 일어나든지 간에, 리툭시마브를 마지막으로 투여한 후 12개월 까지 또는 B 세포를 회수할 때 까지는 안전성 추적이 요구된다.This study compared prednisone and one additional immunosuppressive agent [MMF, methotrexate (MTX), azithioprine (AZA) as compared to placebo in subjects who did not exhibit active glomerulonephritis at the time of registration for phase II / III trials and showed active SLE. ), or to evaluate the efficacy and safety of 6-mercapto-purine (6-MP)] the MAB rituximab (MABTHERA ^{^®} / RITUXAN ^®) in addition to. Subjects can be defined as exhibiting moderate lupus outbreaks as defined by one new BILAG A criterion or two new BILAG B criteria and based on their BILAG score and preliminary prednisone dose, 7 An initial oral prednisone regimen of 0.5 mg / kg, 0.75 mg / kg or 1.0 mg / kg was given over a day. Subjects were then randomly administered rituximab or placebo and the prednisone dose was gradually reduced for 10 weeks starting on day 16 to give a prednisone dose of <10 mg per day. As the subject is tolerated, the corticosteroid dose is gradually reduced to a target dose of ≦ 5 mg per day. Subjects were monitored for disease activity, additional immunosuppressant use, disease recurrence (breakthrough), prednisone use, and safety events over a 52-week study period. The primary efficacy endpoint for this study is week 52. Either way, safety tracking is required until 12 months after the last dose of rituximab or until B cells are recovered.

본 연구의 일차적인 목표는 BILAG 평가에 의해 평가된 바와 같이, 적당한 수준 내지 중중의 전신성 홍반성 루푸스 (SLE)에 걸린 대상체에게서 주요 임상 반응 (MCR) 또는 부분 임상 반응 (PCR)을 달성하고 유지하는데 있어서의 리툭시마브의 효능을 플라시보와 비교하여 평가하였다. 임상 반응은 다음 3가지 상호 배타적 카테고리에 의해 분류하였다:The primary goal of this study was to achieve and maintain a major clinical response (MCR) or partial clinical response (PCR) in subjects with moderate to moderate systemic lupus erythematosus (SLE), as assessed by the BILAG assessment. The efficacy of rituximab in was evaluated by comparison with placebo. Clinical responses were classified into three mutually exclusive categories:

· MCR을 달성한 대상체.Subjects who have achieved MCR.

· MCR을 달성하지는 않았지만 PCR은 달성한 대상체.Subjects who did not achieve MCR but achieved PCR.

· MCR 또는 PCR 중의 어느 것도 달성하지 않은 [즉, 비-임상 반응 (NCR)] 대상체. Subjects who did not achieve either MCR or PCR [ie, non-clinical response (NCR)].

MCR, PCR, 및 NCR은 다음과 같이 정의하였다:MCR, PCR, and NCR were defined as follows:

· MCR: 대상체가 24주 째에 BILAG C 스코어 또는 보다 우수한 스코어를 획득하고, 돌연한 재발 (BILAG A 또는 B 스코어를 나타내는 하나 이상의 새로운 도메인)의 발생없이 이 반응을 52주까지 유지시킨다.MCR: Subjects acquire a BILAG C score or better score at week 24 and maintain this response up to 52 weeks without the occurrence of sudden relapse (one or more new domains exhibiting BILAG A or B scores).

· PCR: 대상체가 24주 째에 BILAG C 스코어 또는 보다 우수한 스코어를 획득하고, 돌연한 재발 (BILAG B 스코어를 나타내는 하나 이상의 새로운 도메인)의 발생없이 이 반응을 16주 연속해서 유지시키거나, 또는 24주 째에 BILAG B 스코어를 나타내는 최대 1개 도메인을 획득하고 돌연한 재발 (BILAG B 또는 새로운 BILAG A 스코어를 나타내는 하나 이상의 새로운 도메인)의 발생없이 이 반응을 52주까지 유지시킨다.PCR: subject obtains a BILAG C score or better score at 24 weeks and maintains this response for 16 consecutive weeks without the occurrence of sudden relapse (one or more new domains exhibiting BILAG B scores), or 24 At week, up to 1 domain is obtained that exhibits a BILAG B score and this response is maintained up to 52 weeks without the occurrence of sudden relapse (one or more new domains exhibiting a new BILAG A score).

· NCR: 모든 대상체가 1일 째부터 24주 째까지 중증의 돌연한 재발 (BILAG A 스코어를 나타내는 1개의 새로운 도메인 또는 BILAG B 스코어를 나타내는 2개의 새로운 도메인)을 경험하거나, 또는 모든 대상체가 상기 정의된 바와 같은 MCR 또는 PCR의 정의를 충족시키지 못한다.NCR: All subjects experience severe sudden relapse (1 new domain representing BILAG A score or 2 new domains representing BILAG B score) from day 1 to week 24, or all subjects are defined above It does not meet the definition of MCR or PCR as shown.

본 연구의 이차적 목표 또는 효능 결과 측정 (리툭시마브를 플라시보와 비교함)은 다음을 평가하는 것이다:The secondary goal or efficacy outcome measure of this study (compare Rituximab with placebo) is to assess:

· 52주에 걸쳐 BILAG 평가를 이용하여 스코어링한 곡선 마이너스 기선 하의 시간-조정된 면적 (AUCMB)으로써 측정된 바와 같은, 전반적인 SLE 질병 활성을 저하시킬 수 있는 리툭시마브의 능력.Rituximab's ability to lower overall SLE disease activity, as measured by time-adjusted area under the curve minus baseline (AUCMB) scored using the BILAG assessment over 52 weeks.

· 예를 들어, 52주 째에 MCR (PCR 배제)을 획득한 대상체의 비율 및 PCR (MCR 포함)을 획득한 대상체의 비율에 의해 측정된 바와 같은, MCRs (PCRs 배제) 또는 PCRs (MCRs 포함)을 유도시킬 수 있는 리툭시마브의 능력.MCRs (excluding PCRs) or PCRs (including MCRs), for example, as measured by the proportion of subjects who acquired MCR (excluding PCR) at week 52 and the proportion of subjects who obtained PCR (including MCR) Rituximab's ability to induce.

· 리툭시마브의 안전성 및 관용성.Safety and tolerability of Rituximab.

· 예를 들어, 24주 째에 모든 도메인에서 BILAG C 스코어 또는 보다 우수한 스코어를 획득하는 대상체의 비율에 의해 측정된 바와 같이, 24주 째에 BILAG C 스코어 또는 보다 우수한 스코어를 획득할 수 있는, 리툭시마브-처치된 대상체의 능력.Ritux, which can obtain a BILAG C score or better score at 24 weeks, for example, as measured by the percentage of subjects attaining a BILAG C score or better score in all domains at week 24 Shima-treated subject's ability.

· 52주에 걸쳐 적당한 수준 또는 중증의 병 재발 시간을 연장시킬 수 있는 리툭시마브의 능력.Rituximab's ability to prolong moderate to severe disease relapse times over 52 weeks.

52주째 기선으로부터 SLE 연장 건강 조사 신체적 기능 스코어로써 측정된 바와 같은 삶의 질을 개선시킬 수 있는 리툭시마브의 능력 (루푸스에 대해 특이적인 부가 요소를 수반한 SF-36).Rituximab's ability to improve quality of life as measured by SLE Extended Health Survey Physical Function Score from baseline at week 52 (SF-36 with additional factors specific for lupus).

· 24주부터 52주까지 매일 <10 mg의 프레드니손을 사용하여 MCR을 획득한 대상체의 비율에 의해 측정된 바와 같이, 리툭시마브를 투여한 대상체에게서 코르티코스테로이드-절약 효과.Corticosteroid-saving effect in subjects receiving rituximab, as measured by the proportion of subjects who obtained MCR using <10 mg of prednisone daily from week 24 to week 52.

· SLE에 걸린 대상체에게서 리툭시마브의 약동학.Pharmacokinetics of Rituximab in subjects with SLE.

승낙한 대상체는 적격성을 결정하기 위해 7일 까지 지속되는 스크리닝 기간에 참여하였다. 대상체는 배경 면역억제제 상에서 활동성 사구체신염 징후가 전혀 없는, ACR 기준 및 1개의 새로운 BILAG 카테고리 "A" 또는 2개의 새로운 BILAG 카테고리 "B" 기준에 의해 결정된 활동성 루푸스를 나타내야만 한다. 스크리닝시, 초기 BILAG 스코어 및 예비-스크리닝 코르티코스테로이드 용량을 기준으로 하여, 대상체를 초기에 경구 프레드니손 0.5mg/kg, 0.75 mg/kg 또는 1.0 mg/kg으로 7일 동안 매일 치료하였다. 적격한 대상체를 2:1 비율로 무작위로 골라, 52주 치료 및 관찰 기간 동안 리툭시마브 1000mg을 정맥내 2회 (1일 및 15일째) 투여하고 프레드니손 용량을 점점 줄여 투여하거나, 또는 리툭시마브 플라시보 등가량을 정맥내 투여하고 프레드니손 용량을 점점 줄여 투여하였다. 제1 리툭시마브/플라시보 주입은 1일 째에 일어났고, 제2 주입은 15일 째에 일어났다. 계획하에 프레드니손 용량을 점점 줄이는 것은 연구 16일 째부터 시작하였고, 환자에게 프레드니손 용량을 조금씩 감소시켜 10주에 걸쳐 1일 10 mg으로 경구 투여한 다음, 관용되는 바 대로 52주까지 1일 < 5 mg으로 지속적으로 용량을 줄여나갔다. 연구 요원은 리툭시마브를 어떻게 적절히 투여하는 지에 관해 교육받았다. 대상체는 연구자의 판단 하에 특히 그들의 제1 주입에 대해 관찰하기 위해 입원시킬 수 있다. 리툭시마브는 면밀한 지시 하에 투여해야만 하고, 완전한 소생 시설을 즉시 이용할 수 있어야만 한다. 모든 대상체에게 24주 및 26주 째에 리툭시마브 또는 플라시보를 재투여하였다. 또한, 대상체에게 각 연구 약물 (리툭시마브 또는 플라시보)을 주입하기 30 내지 60분 전에 100 mg 솔루메드롤 (solumedrol)을 정맥내 투여하였다.Accepted subjects participated in the screening period lasting up to 7 days to determine eligibility. Subjects must exhibit active lupus determined by ACR criteria and one new BILAG category "A" or two new BILAG category "B" criteria, with no signs of active glomerulonephritis on the background immunosuppressive agent. At screening, based on initial BILAG scores and pre-screening corticosteroid doses, subjects were initially treated daily with oral prednisone 0.5 mg / kg, 0.75 mg / kg or 1.0 mg / kg for 7 days. Eligible subjects were randomly selected at a 2: 1 ratio, administered 1000 mg of rituximab intravenously (day 1 and 15) twice during the 52 week treatment and observation period, and gradually reduced with prednisone dose, or rituximab Placebo equivalents were given intravenously and prednisone doses were gradually reduced. The first rituximab / placebo injection took place on day 1 and the second injection took place on day 15. The planned reduction of prednisone dose gradually began on day 16 of the study, and the patient was given a small reduction in prednisone dose at oral doses of 10 mg per day over 10 weeks, followed by up to 52 weeks per day <5 mg. Continuously reduced capacity. The researcher was instructed on how to properly administer Rituximab. Subjects may be hospitalized at the investigator's discretion, particularly to observe for their first infusion. Rituximab must be administered under close instruction and a complete resuscitation facility must be readily available. All subjects were re-administered rituximab or placebo at 24 and 26 weeks. In addition, subjects received 100 mg solumedrol intravenously 30 to 60 minutes prior to injecting each study drug (rituximab or placebo).

치료를 행하는 연구자에 의해 달리 지시되지 않는 한은 변경없이 본 연구 기간 내내, 스크리닝시 제시된 기선 면역억제성 약물 (예: MMF, AZA/6-MP, MTX)을 지속적으로 투여하고, 그들의 항말라리아성 약물 (지시된 경우) 뿐만 아니라 그들의 기선 비-코르티코스테로이드 SLE 약물(들)을 지속적으로 투여하도록 모든 대상체에게 지시하였다. 순한 증상을 나타내는 질환을 치료하는 경우에는 NSAIDs가 허용되었다. 면역억제제 용량을 점점 줄여나가는 것에 관한 요청은 의학적 모니터링 이전에 논의되어야만 한다. 다음 표에는, 해당 약물이 지시된 경우에는, 시험 과정 동안 사용될 것으로 예상되는 항말라리아제 및 그의 용량 범위가 열거되어 있다:Unless otherwise instructed by the investigating investigator, the baseline immunosuppressive drugs (eg, MMF, AZA / 6-MP, MTX) presented at screening will continue to be administered throughout the study period without modification, and their antimalarial drugs All subjects were instructed to continue to administer their baseline non-corticosteroid SLE drug (s) as well as (if indicated). NSAIDs were allowed for the treatment of mildly symptomatic diseases. Requests to gradually reduce immunosuppressant doses should be discussed prior to medical monitoring. The following table lists the antimalarial agents that are expected to be used during the test process and the range of dosages thereof, if the drug is indicated:

항말라이아 약물Anti-malian drugs 용량 범위 (경구)Capacity range (oral) 히드록시클로로퀸Hydroxychloroquine 1일 100 내지 250 mg100 to 250 mg per day 클로로퀸Chloroquine 매일 또는 격일로 500 mg500 mg daily or every other day 퀴나크린Quinacrine 매일 100 mg100 mg daily

프로토콜-한정된 적당한 수준 내지 중중의 SLE 재발(돌발) (치료 실패)을 경험한 대상체에게, 담당 연구자가 임상적으로 적당하다고 판단한 경우에는 부가의 경구 코르티코스테로이드를 이용한 치료를 행할 수 있다. 이들 대상체를 질병 중증도에 기초하여 프레드니손 (0.5 내지 1.0 mg/kg)으로 다시 치료할 수 있다. 등가 용량의 정맥내 코르티코스테로이드는, 위장 병발이 경구 코르티코스테로이드를 일시적으로 방해하는 경우에 허용될 수 있다. 코르티코스테로이드에 대해 반응성이지 않은 돌발을 경험한 대상체는 코르티코스테로이드 치료를 증가시킨지 2주 후에도 BILAG A 또는 B 증상에 있어서 전혀 개선되지 않았다. 이들 대상체는 대상체와 연구자가 원할 경우에는, 개방 표지 연장 시험에서 구조 치료에 등록할 자격이 있다. 새로운 면역억제제 또는 기타 새로운 SLE 약물 투여를 시작한 대상체를 대상으로 하여, 안전성 추적 시험을 수행하며, 이와 동시에 투여되는 약물을 제2 연구용 약물 섭생 (6개월째)에 앞서 투여하기 시작하는 경우에는 상기 대상체에게 추가의 연구용 약물을 투여하지 않았다.Subjects who have experienced protocol-limited moderate to moderate SLE relapses (breaks) (failure of treatment) may be treated with additional oral corticosteroids if the investigator determines that they are clinically appropriate. These subjects can be treated again with prednisone (0.5-1.0 mg / kg) based on disease severity. Equivalent doses of intravenous corticosteroids may be acceptable when gastrointestinal involvement temporarily disrupts oral corticosteroids. Subjects who experienced an unresponsive outbreak for corticosteroids did not improve at all in BILAG A or B symptoms even after two weeks of increasing corticosteroid treatment. These subjects are eligible to enroll in rescue treatment in the open label extension trial if desired by the subject and the investigator. Subjects who have started a new immunosuppressant or other new SLE drug are to be subjected to a safety follow-up study and at the same time the drug being administered begins prior to the second study drug regimen (6 months) Did not receive additional study drugs.

환자를 12개월 동안 매달 평가하였다. B-세포 계수치는 기선에서, 리툭시마브/플라시보 주입의 각 과정이 끝날 무렵에서, 그리고 치료/관찰 전 기간에 걸쳐 그 후 4주 마다 평가하였다. 모든 B-세포 계수치는 중앙 실험실에서 수행하였고, 의사에게는 B-세포 계수치에 대한 내용을 전혀 알리지 않았다. 78주가 끝날 무렵, 리툭시마브 플라시보 또는 리툭시마브를 투여한 대상체가, 어느 것이 더 낮든지 간에 기선이나 정상치의 보다 낮은 한계치로써 규정된 바와 같은 B-세포 회수를 나타낸다면, 이의 연구 참여를 완료시켰다. 리툭시마브를 투여한 대상체가 78주 째에도 B-세포 회수를 나타내지 않는다면, B-세포를 회수할 때까지 대상체를 관찰하였다.Patients were evaluated monthly for 12 months. B-cell counts were evaluated at baseline, at the end of each course of rituximab / placebo infusion, and every four weeks thereafter over the treatment / observation period. All B-cell counts were performed in a central laboratory and the doctor was not informed of any B-cell counts. At the end of week 78, if the subject receiving Rituximab placebo or Rituximab showed B-cell recovery as defined by the baseline or the lower threshold of normal, whichever is lower, completed their study participation I was. If subjects receiving rituximab did not show B-cell recovery even at week 78, the subjects were observed until B-cells were recovered.

상기 제시된 프로토콜에서 대상체에게 리툭시마브 또는 인간화 2H7을 투여하면, 대조군에 비해 SLE의 한 가지 이상 징후, 증상 또는 기타 적응증이 경감될 것으로 예상 및 예측된다. CD20 항체를 이용한 초기 요법 후 12개월 내지 18개월 사이에 CD20 항체 2 g을 한번에 모두 투여하거나 또는 1 그램의 양으로 약 14일 내지 16일에 걸쳐 나누어 투여하는 것이, 프레드니손 및/또는 기타 면역억제제의 존재 또는 부재 하에 대상체가 병의 재발을 경험한 경우에는 또 다른 완전한/부분적 반응을 유도시키거나 초기 요법의 반응을 지속시키는데 유효할 것으로 또한 예상된다. 따라서, CD20 항체를 초기에 약 2주 기간 내에 투여한 다음, 대략 6개월 경에 또 다른 치료를 한 후, 초기 치료로부터 대략 1년 내지 1년 반이 지난 시점 (용량 1회분을 투여한 시점으로부터 측정함)에 또 다른 잠재적 치료를 수행할 수 있다. 이와 같이 여러 차례 치료를 수행하는 프로토콜이 SLE를 치료하는데 성공적으로 이용될 것으로 예상된다.Administration of rituximab or humanized 2H7 to a subject in the protocol presented above is expected and predicted to alleviate one or more signs, symptoms or other indications of SLE compared to the control. Administration of 2 g of the CD20 antibody all at once or 12 to 18 months after initial therapy with the CD20 antibody, or in divided doses over a period of about 14 to 16 grams of prednisone and / or other immunosuppressive agents It is also expected that if present or absent the subject experiences a relapse of the disease, it will be effective to induce another complete / partial response or to sustain the response of the initial therapy. Thus, the CD20 antibody was initially administered within a period of about 2 weeks, followed by another treatment at approximately 6 months, then approximately one year to one and a half years after the initial treatment (from the point of dose administration). To measure another potential treatment. Such multiple treatment protocols are expected to be successfully used to treat SLE.

실시예 3Example 3

본원에 유용한 인간화 2H7 변이체Humanized 2H7 Variants Useful herein

본원 목적상 유용한 것은 다음 CDR 서열들 중의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개를 포함하는 인간화 2H7 항체이다:Useful for the purposes herein are humanized 2H7 antibodies comprising one, two, three, four, five or six of the following CDR sequences:

CDR L1 서열 RASSSVSYXH [여기서, X는 M 또는 L이다 (서열 18)], 예를 들어 서열 4 (도 1A),CDR L1 sequence RASSSVSYXH, where X is M or L (SEQ ID NO: 18), for example SEQ ID NO: 4 (FIG. 1A),

서열 5의 CDR L2 서열 (도 1A),CDR L2 sequence of SEQ ID NO: 5 (FIG. 1A),

CDR L3 서열 QQWXFNPPT [여기서, X는 S 또는 A이다 (서열 19)], 예를 들어 서열 6 (도 1A),CDR L3 sequence QQWXFNPPT where X is S or A (SEQ ID NO: 19), for example SEQ ID NO: 6 (FIG. 1A),

서열 10의 CDR H1 서열 (도 1B),CDR H1 sequence of SEQ ID NO: 10 (FIG. 1B),

CDR H2 서열 AIYPGNGXTSYNQKFKG [여기서, X는 D 또는 A이다 (서열 20)], 예를 들어 서열 11 (도 1B), 및CDR H2 sequence AIYPGNGXTSYNQKFKG (where X is D or A (SEQ ID NO: 20)), for example SEQ ID NO: 11 (FIG. 1B), and

CDR H3 서열 VVYYSXXYWYFDV [여기서, 위치 6에서의 X는 N, A, Y, W, 또는 D이고, 위치 7에서의 X는 S 또는 R이다 (서열 21)], 예를 들어 서열 12 (도 1B). CDR H3 sequence VVYYSXXYWYFDV where X at position 6 is N, A, Y, W, or D and X at position 7 is S or R (SEQ ID NO: 21), for example SEQ ID NO: 12 (FIG. 1B) .

상기 CDR 서열은 일반적으로, 인간 가변 경쇄 및 가변 중쇄 골격 서열, 예를 들어 실질적으로 인간 경쇄 카파 아군 I (V_LκI)의 인간 컨센서스 FR 잔기, 및 실질적으로 인간 중쇄 아군 III (V_HIII)의 인간 컨센서스 FR 잔기 내에 제시된다 [참고: WO 2004/056312 (Lowman et al.)]. The CDR sequences are generally, human variable light and variable heavy framework sequences, such as substantially the human consensus FR residues, and a substantially human heavy chain spiked III (V _H III) of the human light chain kappa ally I (V _L κI) of Presented within the human consensus FR residues (WO 2004/056312 (Lowman et al.)).

가변 중쇄 영역은 인간 IgG 쇄 불변 영역에 연결시킬 수 있는데, 이러한 영역은 예를 들어, IgG1 또는 IgG3 (본래 서열 및 비-본래 서열 불변 영역 포함)일 수 있다.The variable heavy chain region can be linked to a human IgG chain constant region, which region can be, for example, IgG1 or IgG3 (including the original sequence and the non-original sequence constant region).

바람직한 양태에서는, 상기 항체가 위치 56, 100 및/또는 100a에서 하나 이상의 아미노산 치환물(들), 예를 들어 가변 중쇄 도메인 중의 D56A, N100A, 또는 N100Y, 및/또는 S100aR; 및 위치 32 및/또는 92에서 하나 이상의 아미노산 치환물(들), 예를 들어 가변 경쇄 도메인 중의 M32L 및/또는 S92A를 임의로 포함하는, 서열 2의 가변 경쇄 도메인 서열 (v16, 도 1A에 도시된 바와 같음)을 또한 임의로 포함하는, 서열 8의 가변 중쇄 도메인 서열 (v16, 도 1B에 도시된 바와 같음)을 포함 한다. 바람직하게는, 상기 항체가 서열 13 또는 16의 경쇄 아미노산 서열과, 서열 14, 15, 17, 또는 22의 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 본래 항체이고, 서열 22를 아래에 나타내었다.In a preferred embodiment, the antibody comprises one or more amino acid substitution (s) at positions 56, 100 and / or 100a, for example D56A, N100A, or N100Y, and / or S100aR in a variable heavy domain; And the variable light chain domain sequence of SEQ ID NO: 2 (v16, as shown in FIG. 1A), optionally comprising one or more amino acid substitution (s) at position 32 and / or 92, eg, M32L and / or S92A in the variable light domain. The variable heavy chain domain sequence of SEQ ID NO: 8 (v16, as shown in FIG. 1B), optionally also). Preferably, the antibody is an original antibody comprising the light chain amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or 16 and the heavy chain amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, 15, 17, or 22, and SEQ ID NO: 22 is shown below.

바람직한 인간화 2H7 항체는 오크렐리주마브 (ocrelizumab) (공급처: Genentech, Inc.)이다.Preferred humanized 2H7 antibody is ocrelizumab (Genentech, Inc.).

본원의 항체는 Fc 영역 내에, ADCC 활성을 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들어 아미노산 치환이 중쇄 잔기의 Eu 넘버링을 이용하여 위치 298, 333, 및 334에서 이루어진 것인데, 바람직하게는 S298A, E333A, 및 K334A이다 [참고: 미국 특허 제6,737,056호 (L. Presta)]. Antibodies herein may further comprise one or more amino acid substitutions within the Fc region that improve ADCC activity, eg, amino acid substitutions made at positions 298, 333, and 334 using Eu numbering of the heavy chain residues, Preferably S298A, E333A, and K334A (see US Pat. No. 6,737,056 to L. Presta).

이들 항체 모두는 Fc 영역 내에, FcRn 결합성 또는 혈청 반감기를 개선시키는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있는데, 예를 들어 중쇄 위치 434에서의 치환, 예를 들어 N434W을 포함한다 [참고: 미국 특허 제,737,056 (L. Presta)]. All of these antibodies may contain one or more substitutions within the Fc region that improve FcRn binding or serum half-life, including, for example, substitutions at heavy chain position 434, eg, N434W. 737,056 (L. Presta)].

이들 항체 모두는 Fc 영역 내에, CDC 활성을 증가시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들어 위치 326에서의 하나 이상의 치환, 바람직하게는 K326A 또는 K326W을 포함할 수 있다 [참고: 미국 특허 제6,528,624호 (Idusogie et al.)].All of these antibodies may further comprise one or more amino acid substitutions within the Fc region that increase CDC activity, for example one or more substitutions at position 326, preferably K326A or K326W. US Patent No. 6,528,624 to Idusogie et al.

몇몇 바람직한 인간화 2H7 변이체는 서열 2의 가변 경쇄 도메인 및 서열 8의 가변 중쇄 도메인을 포함하는 것인데, 이에는 Fc 영역 (존재한다면)에서의 치환을 수반하거나 수반하지 않는 것, 및 N100A; 또는 D56A 및 N100A; 또는 D56A, N100Y, 및 S100aR의 서열 8에서의 변경을 수반한 가변 중쇄 도메인과, M32L; 또는 S92A; 또는 M32L 및 S92A의 서열 2에서의 변경을 수반한 가변 경쇄 도메인을 포함하는 것이 포함된다.Some preferred humanized 2H7 variants are those comprising the variable light domain of SEQ ID NO: 2 and the variable heavy chain domain of SEQ ID NO: 8, including or without substitutions in the Fc region (if present), and N100A; Or D56A and N100A; Or the variable heavy domain with an alteration in SEQ ID NO: 8 of D56A, N100Y, and S100aR, and M32L; Or S92A; Or comprises a variable light domain with an alteration in SEQ ID NO: 2 of M32L and S92A.

2H7.v16의 가변 중쇄 도메인 중의 M34는 항체 안정성의 잠재적 공급원으로서 확인되었고, 이는 치환을 위한 또 다른 잠재적 후보이다.M34 in the variable heavy chain domain of 2H7.v16 has been identified as a potential source of antibody stability, which is another potential candidate for substitution.

본 발명의 각종의 몇몇 바람직한 양태를 요약해 보면, 2H7.v16에 기초한 변이체의 가변 영역은 다음 표 2에 나타낸 아미노산 치환 위치를 제외하고는, v16의 아미노산 서열을 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 2H7 변이체는 v16과 동일한 경쇄를 갖는다.Summarizing some of the various preferred embodiments of the present invention, the variable regions of the variants based on 2H7.v16 include the amino acid sequence of v16, except for the amino acid substitution positions shown in Table 2 below. Unless otherwise indicated, the 2H7 variant has the same light chain as v16.

한 가지 바람직한 인간화 2H7은 2H7.v16 가변 경쇄 도메인 서열One preferred humanized 2H7 is the 2H7.v16 variable light chain domain sequence

;

및 2H7.v16 가변 중쇄 도메인 서열And 2H7.v16 variable heavy chain domain sequences

을 포함한다.It includes.

인간화 2H7.v16 항체가 본래 항체인 경우, 이는 경쇄 아미노산 서열If the humanized 2H7.v16 antibody is the original antibody, it is a light chain amino acid sequence

;

및 서열 14의 중쇄 아미노산 서열, 또는 다음 중쇄 아미노산 서열And the heavy chain amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, or the next heavy chain amino acid sequence

을 포함할 수 있다.It may include.

또 다른 바람직한 인간화 2H7 항체는 2H7.v511 가변 경쇄 도메인 서열Another preferred humanized 2H7 antibody is the 2H7.v511 variable light chain domain sequence.

및 2H7.v511 가변 중쇄 도메인 서열:And 2H7.v511 variable heavy chain domain sequence:

을 포함한다.It includes.

인간화 2H7.v511의 성숙한 경쇄 및 중쇄 각각을 인간화 2H7.v16의 성숙한 경쇄 및 중쇄와 정렬시킨 도 5 및 6을 참고할 수 있다.See FIGS. 5 and 6 in which each mature light and heavy chain of humanized 2H7.v511 is aligned with the mature light and heavy chain of humanized 2H7.v16.

인간화 2H7.v31 항체가 본래 항체인 경우, 이는 경쇄 아미노산 서열If the humanized 2H7.v31 antibody is the original antibody, it is a light chain amino acid sequence

및 서열 15의 중쇄 아미노산 서열, 또는 다음 중쇄 아미노산 서열And the heavy chain amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, or the next heavy chain amino acid sequence

을 포함할 수 있다.It may include.

본원의 바람직한 양태는 항체가 서열 2 및 8 중의 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화 2H7인 것이다. 본원의 또 다른 바람직한 양태는 항체가 서열 23 및 24 중의 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화 2H7인 것이다.A preferred embodiment herein is that the antibody is humanized 2H7 comprising the variable domain sequence in SEQ ID NOs: 2 and 8. Another preferred embodiment herein is that the antibody is humanized 2H7 comprising the variable domain sequences in SEQ ID NOs: 23 and 24.

<110> GENENTECH, INC. et al. <120> METHOD FOR TREATING LUPUS <130> P2133R1 PCT <140> PCT/US2005/019550 <141> 2005-06-02 <150> US 60/577,235 <151> 2004-06-04 <150> US 60/617,997 <151> 2004-10-11 <160> 24 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg 100 105 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence is synthesized <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 3 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence is synthesized <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 4 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence is synthesized <400> 4 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Ala Pro Ser Asn Leu Ala 1 5 10 15 Ser Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr 20 25 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence is synthesized <400> 5 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Ala Pro Ser Asn Leu Ala 1 5 10 15 Ser Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr 20 25 <210> 6 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence is synthesized <400> 6 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Ala Ala Ser Ser Leu 1 5 10 15 Glu Ser Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr 20 25 <210> 7 <211> 122 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 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Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Ala Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Tyr Arg Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims

유효량의 CD20 항체를 특정 대상체에게 투여하여 약 0.5 내지 4 그램의 초기 항체 노출을 제공한 한 다음, 약 0.5 내지 4 그램의 제2 항체 노출을 제공하는 것을 포함하며, 상기 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인, 상기 대상체에게서 루푸스를 치료하는 방법.Administering an effective amount of a CD20 antibody to a particular subject to provide about 0.5-4 grams of initial antibody exposure, and then providing about 0.5-4 grams of a second antibody exposure, wherein the second exposure from the initial exposure No up to about 16-54 weeks, wherein each antibody exposure is provided to the subject as a single dose of the antibody or as two or three separate doses of the antibody.

제1항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 20주 내지 30주까지는 제공되지 않는 것인 방법.The method of claim 1, wherein the second exposure is not provided until about 20-30 weeks from the initial exposure.

제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 46주 내지 54주까지는 제공되지 않는 것인 방법.The method of claim 1 or 2, wherein the second exposure is not provided until about 46 to 54 weeks from the initial exposure.

제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 초기 및 제2 항체 노출이 각각 약 1.5 내지 3.5 그램의 양으로 제공되는 것인 방법.4. The method of claim 1, wherein the initial and second antibody exposures are each provided in an amount of about 1.5 to 3.5 grams.

제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 초기 및 제2 항체 노출이 각각 약 1.5 내지 2.5 그램의 양으로 제공되는 것인 방법.The method of any one of claims 1-4, wherein the initial and second antibody exposures are each provided in an amount of about 1.5 to 2.5 grams.

제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 유효량의 CD20 항체를 상기 대상체에게 투여하여 약 0.5 내지 4 그램의 제3 항체 노출을 제공하는 것을 부가적으로 포함하며, 상기 제3 노출은 초기 노출로부터 약 46주 내지 60주까지는 제공되지 않고, 제3 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인 방법.6. The method of claim 1, further comprising administering an effective amount of a CD20 antibody to the subject to provide about 0.5-4 grams of a third antibody exposure, wherein the third exposure is initial. No up to about 46-60 weeks from exposure and the third antibody exposure is given to the subject as a single dose of the antibody or as two or three separate doses of the antibody.

제6항에 있어서, 제3 항체 노출이 약 1.5 내지 3.5 그램의 양으로 제공되는 것인 방법.The method of claim 6, wherein the third antibody exposure is provided in an amount of about 1.5 to 3.5 grams.

제6항 또는 제7항에 있어서, 제3 항체 노출이 약 1.5 내지 2.5 그램의 양으로 제공되는 것인 방법.8. The method of claim 6 or 7, wherein the third antibody exposure is provided in an amount of about 1.5 to 2.5 grams.

제6항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, 제3 노출이 초기 노출로부터 약 46주 내지 55주까지는 제공되지 않는 것인 방법.9. The method of claim 6, wherein the third exposure is not provided until about 46 to 55 weeks from the initial exposure. 10.

제6항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 초기 노출로부터 적어도 약 70주 내지 75주까지는 추가의 항체 노출이 전혀 제공되지 않는 것인 방법.The method of any one of claims 6-9, wherein no further antibody exposure is provided at least from about 70 to 75 weeks from the initial exposure.

제10항에 있어서, 초기 노출로부터 약 74주 내지 80주까지는 추가의 항체 노출이 전혀 제공되지 않는 것인 방법.The method of claim 10, wherein no further antibody exposure is provided from initial exposure to about 74-80 weeks.

제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서, 한 가지 이상의 항체 노출이 단일 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인 방법.The method of claim 1, wherein the one or more antibody exposures are provided to the subject as a single dose of the antibody.

제12항에 있어서, 각 항체 노출이 단일 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인 방법.The method of claim 12, wherein each antibody exposure is provided to the subject as a single dose of the antibody.

제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서, 한 가지 이상의 항체 노출이 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인 방법.The method of claim 1, wherein the one or more antibody exposures are provided to the subject as separate doses of the antibody.

제14항에 있어서, 각 항체 노출이 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공되는 것인 방법.The method of claim 14, wherein each antibody exposure is provided to the subject as a separate dose of antibody.

제14항 또는 제15항에 있어서, 별개 용량이 제1회분 용량과 제2회분 용량으로 구성되는 것인 방법.16. The method of claim 14 or 15, wherein the separate dose consists of a first batch dose and a second batch dose.

제14항 또는 제15항에 있어서, 별개 용량이 제1회분 용량, 제2회분 용량 및 제3회분 용량으로 구성되는 것인 방법.16. The method of claim 14 or 15, wherein the separate dose consists of a first batch dose, a second batch dose and a third dose dose.

제15항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2회분 용량 또는 제3회분 용량이, 앞서 용량이 투여된 시점으로부터 약 1일 내지 20일 후에 투여되는 것인 방법.18. The method of any one of claims 15 to 17, wherein the second or third dose is administered about 1 to 20 days after the previous dose was administered.

제15항 내지 제18항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2회분 용량 또는 제3회분 용량이, 앞서 용량이 투여된 시점으로부터 약 6일 내지 16일 후에 투여되는 것인 방법.19. The method of any one of claims 15-18, wherein the second or third dose is administered about 6 to 16 days after the previous dose was administered.

제15항 내지 제19항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2회분 용량 또는 제3회분 용량이, 앞서 용량이 투여된 시점으로부터 약 14일 내지 16일 후에 투여되는 것인 방법.20. The method of any one of claims 15-19, wherein the second or third dose is administered about 14-16 days after the previous dose was administered.

제15항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 있어서, 별개 용량이 총 약 1일 내지 4주 기간 내에 투여되는 것인 방법.21. The method of any one of claims 15-20, wherein the separate dose is administered within a total of about 1 day to 4 weeks.

제21항에 있어서, 별개 용량이 총 약 1일 내지 25일 기간 내에 투여되는 것인 방법.The method of claim 21, wherein the separate doses are administered in a total period of about 1 day to 25 days.

제15항 내지 제22항 중의 어느 한 항에 있어서, 별개 용량이 대략 매주 투여되고, 제2회분 용량이 제1회분 용량 투여로부터 약 1주 후에 투여되고, 제3회분 용량이 존재하는 경우에 제2회분 용량 투여로부터 약 1주 후에 투여되는 것인 방법.23. The method of any one of claims 15-22, wherein the separate dose is administered approximately weekly, the second dose is administered about 1 week after the first dose dose, and the third dose is present if present. And about one week after two dose administrations.

제15항 내지 제23항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체의 각 별개 용량이 약 0.5 내지 1.5 그램인 방법.24. The method of any one of claims 15-23, wherein each separate dose of the antibody is about 0.5-1.5 grams.

제15항 내지 제24항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체의 각 별개 용량이 약 0.75 내지 1.3 그램인 방법.The method of any one of claims 15-24, wherein each separate dose of the antibody is about 0.75 to 1.3 grams.

제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 있어서, 4 내지 20회 항체 노출이 대상체에게 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 1-25, wherein 4-20 antibody exposures are administered to the subject.

제1항 내지 제26항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 약물이 항체 노출과 함께 유효량으로 투여되고, CD20 항체가 제1 약물인 방법.27. The method of any one of claims 1 to 26, wherein the second drug is administered in an effective amount with antibody exposure and the CD20 antibody is the first drug.

제27항에 있어서, 제2 약물이 초기 노출과 함께 투여되는 것인 방법.The method of claim 27, wherein the second drug is administered with an initial exposure.

제27항 또는 제28항에 있어서, 제2 약물이 초기 노출 및 제2 노출과 함께 투여되는 것인 방법.The method of claim 27 or 28, wherein the second drug is administered with an initial exposure and a second exposure.

제27항 내지 제29항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 약물이 모든 노출과 함께 투여되는 것인 방법.30. The method of any one of claims 27-29, wherein the second drug is administered with all exposures.

제27항 내지 제30항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 약물이 화학요법제, 면역억제제, 항말라리아제, 세포독성제, 인테그린 길항제, 사이토킨 길항제, 또는 호르몬인 방법.31. The method of any one of claims 27-30, wherein the second drug is a chemotherapeutic agent, immunosuppressant, antimalarial agent, cytotoxic agent, integrin antagonist, cytokine antagonist, or hormone.

제27항 내지 제31항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 약물이 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제인 방법.32. The method of any one of claims 27-31, wherein the second drug is an immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent.

제32항에 있어서, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제가 초기 노출과 함께 투여되는 것인 방법.33. The method of claim 32, wherein the immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent is administered with initial exposure.

제33항에 있어서, 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 아자티오프린, 미코페놀레이트 모페틸, 또는 6-머캅토퓨린이 투여되는 것인 방법.The method of claim 33, wherein the corticosteroid, methotrexate, cyclophosphamide, hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, azathioprine, mycophenolate mofetil, or 6-mercaptopurine is administered.

제32항 내지 제34항 중의 어느 한 항에 있어서, 면역억제제, 항말라리아제 또는 화학요법제가 제2 노출과 함께 투여되지 않거나, 또는 초기 노출과 함께 사용된 양 보다 적은 양으로 투여되는 것인 방법.35. The method of any one of claims 32-34, wherein the immunosuppressant, antimalarial or chemotherapeutic agent is not administered with the second exposure or in an amount less than the amount used with the initial exposure.

제1항 내지 제35항 중의 어느 한 항에 있어서, 루푸스가 루푸스 신염인 방 법.36. The method of any one of claims 1 to 35 wherein lupus is lupus nephritis.

제36항에 있어서, 약 2 그램의 CD20 항체가 초기 노출로서 투여되는 것인 방법.The method of claim 36, wherein about 2 grams of CD20 antibody is administered as the initial exposure.

제36항 또는 제37항에 있어서, 약 1 그램의 CD20 항체가 투여된 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 상기 항체가 초기 노출로서 투여되는 것인 방법.38. The method of claim 36 or 37, wherein about 1 gram of CD20 antibody is administered and then another about 1 gram of the antibody is administered as initial exposure within about 2 weeks.

제36항 내지 제38항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 2 그램의 양으로 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 36-38, wherein the second exposure is about 6 months from the initial exposure and is administered in an amount of about 2 grams.

제36항 내지 제39항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 1 그램의 항체가 투여된 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체가 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 36-39, wherein the second exposure is about 6 months from the initial exposure and about 1 gram of antibody is administered, followed by another about 1 gram of antibody within about 2 weeks. Is administered.

제36항 내지 제40항 중의 어느 한 항에 있어서, 코르티코스테로이드가 투여되는 것인 방법.41. The method of any one of claims 36-40, wherein the corticosteroid is administered.

제41항에 있어서, 코르티코스테로이드가 메틸프레드니솔론 또는 프레드니손, 또는 이들 둘 다인 방법.The method of claim 41, wherein the corticosteroid is methylprednisolone or prednisone, or both.

제36항 내지 제42항 중의 어느 한 항에 있어서, 미코페놀레이트 모페틸이 투여되는 것인 방법.43. The method of any one of claims 36-42, wherein mycophenolate mofetil is administered.

제36항 내지 제43항 중의 어느 한 항에 있어서, CD20 항체에 대한 제3 노출이 초기 노출로부터 약 1년 내지 18개월 째에 이루어지는 것인 방법.The method of any one of claims 36-43, wherein the third exposure to the CD20 antibody is about 1 year to 18 months from the initial exposure.

제1항 내지 제35항 중의 어느 한 항에 있어서, 루푸스가 전신성 홍반성 루푸스인 방법.36. The method of any one of claims 1-35, wherein lupus is systemic lupus erythematosus.

제45항에 있어서, 약 2 그램의 CD20 항체가 초기 노출로서 투여되는 것인 방법.The method of claim 45, wherein about 2 grams of CD20 antibody is administered as the initial exposure.

제45항 또는 제46항에 있어서, 약 1 그램의 CD20 항체가 투여된 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 상기 항체가 초기 노출로서 투여되는 것인 방법.The method of claim 45 or 46, wherein about 1 gram of CD20 antibody is administered and then another about 1 gram of the antibody is administered as an initial exposure within about 2 weeks.

제45항 내지 제47항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 2 그램의 양으로 투여되는 것인 방법.48. The method of any one of claims 45-47, wherein the second exposure is about 6 months from the initial exposure and is administered in an amount of about 2 grams.

제45항 내지 제48항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 노출이 초기 노출로부터 약 6개월 째에 이루어지고, 약 1 그램의 항체가 투여된 다음, 약 2주 내에 또 다른 약 1 그램의 항체가 투여되는 것인 방법.49. The method of any one of claims 45-48, wherein the second exposure is about 6 months from the initial exposure and about 1 gram of antibody is administered, then another about 1 gram of antibody within about 2 weeks. Is administered.

제45항 내지 제49항 중의 어느 한 항에 있어서, 프레드니손이 초기 노출 전 또는 초기 노출과 함께 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 45-49, wherein the prednisone is administered before or with the initial exposure.

제50항에 있어서, 프레드니손이 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여되거나, 프레드니손이 제2 노출과 함께 투여되지 않거나, 또는 프레드니손이 초기 노출과 함께 사용된 것 보다는 적은 양으로 제2 노출과 함께 투여되지만 제3 노출 또는 후속 노출에서는 투여되지 않는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein prednisone is administered with the second exposure in an amount less than that used with the initial exposure, prednisone is not administered with the second exposure, or prednisone is used with the initial exposure. Wherein the amount is administered with the second exposure but not with the third or subsequent exposure.

제50항 또는 제51항에 있어서, 부가적으로 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 메토트렉세이트, 미코페놀레이트 모페틸, 아자티오프린, 또는 6-머캅토퓨린이 투여되는 것인 방법.52. The method of claim 50 or 51, wherein additionally hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, methotrexate, mycophenolate mofetil, azathioprine, or 6-mercaptopurine is administered.

제45항 내지 제52항 중의 어느 한 항에 있어서, CD20 항체에 대한 제3 노출이 초기 노출로부터 약 1년 내지 18개월 째에 이루어지는 것인 방법.The method of any one of claims 45-52, wherein the third exposure to the CD20 antibody is about 1 year to 18 months from the initial exposure.

제1항 내지 제53항 중의 어느 한 항에 있어서, 대상체가 기존에 CD20 항체로 치료한 적이 전혀 없는 대상체인 방법.The method of any one of claims 1-53, wherein the subject is a subject who has never been previously treated with a CD20 antibody.

제1항 내지 제54항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 있는 그대로의 (naked) 항체인 방법.55. The method of any one of claims 1-54, wherein the antibody is a naked antibody.

제1항 내지 제54항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 또 다른 분자와 접합된 것인 방법.55. The method of any one of claims 1-54, wherein the antibody is conjugated with another molecule.

제56항에 있어서, 다른 분자가 세포독성제인 방법.The method of claim 56, wherein the other molecule is a cytotoxic agent.

제1항 내지 제57항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 정맥내 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 1-57, wherein the antibody is administered intravenously.

제58항에 있어서, 항체가 각 항체 노출에 대해 정맥내 투여되는 것인 방법.The method of claim 58, wherein the antibody is administered intravenously for each antibody exposure.

제1항 내지 제57항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 피하 투여되는 것인 방법.The method of any one of claims 1-57, wherein the antibody is administered subcutaneously.

제60항에 있어서, 항체가 각 항체 노출에 대해 피하 투여되는 것인 방법.The method of claim 60, wherein the antibody is administered subcutaneously for each antibody exposure.

제1항 내지 제26항, 제36항 내지 제40항, 제44항 내지 제49항 및 제53항 내 지 제61항 중의 어느 한 항에 있어서, 루푸스를 치료하기 위해, CD20 항체 이외의 어떠한 기타 약물도 투여되지 않는 것인 방법.63. The method according to any one of claims 1 to 26, 36 to 40, 44 to 49 and 53 to 61, for treating lupus, any other than a CD20 antibody. No other drug is administered.

제1항 내지 제62항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 리툭시마브 (rituximab)인 방법.The method of any one of claims 1-62, wherein the antibody is rituximab.

제1항 내지 제62항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 2 및 8 중의 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화 2H7인 방법.63. The method of any one of claims 1-62, wherein the antibody is humanized 2H7 comprising the variable domain sequence in SEQ ID NOs: 2 and 8.

제1항 내지 제62항 중의 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 23 및 24 중의 가변 도메인 서열을 포함하는 인간화 2H7인 방법.63. The method of any one of claims 1-62, wherein the antibody is humanized 2H7 comprising the variable domain sequences in SEQ ID NOs: 23 and 24.

제1항 내지 제65항 중의 어느 한 항에 있어서, 대상체가 상승된 수준의 침윤성 CD20 세포, 항핵 항체 (ANA), 항-이중가닥 DNA (dsDNA) 항체, 항-Sm 항체, 항핵 리보뉴클레오단백질 항체, 항인지질 항체, 항-리보솜성 P 항체, 항-Ro/SS-A 항체, 항-Ro 항체 또는 항-La 항체, 또는 이러한 세포 또는 항체 2개 이상의 조합물을 갖고 있는 것인 방법.66. The method of any one of claims 1-65, wherein the subject has elevated levels of invasive CD20 cells, antinuclear antibody (ANA), anti-double stranded DNA (dsDNA) antibody, anti-Sm antibody, antinuclear ribonucleoprotein The antibody, antiphospholipid antibody, anti-ribosome P antibody, anti-Ro / SS-A antibody, anti-Ro antibody or anti-La antibody, or a combination of two or more such cells or antibodies.

(b) 대상체에게서 루푸스를 치료하는 것에 대한 지시사항을 포함하는 패키지 삽입물(b) a package insert comprising instructions for treating lupus in a subject

을 포함하며, 상기 지시사항은 약 0.5 내지 4 그램의 초기 항체 노출을 제공한 다음, 약 0.5 내지 4 그램의 제2 항체 노출을 제공하는데 유효한 양의 항체를 대상체에게 투여하며, 상기 제2 노출은 초기 노출로부터 약 16주 내지 54주까지는 제공되지 않고, 각 항체 노출은 단일 용량의 항체로서, 또는 2회 또는 3회 별개 용량의 항체로서 대상체에게 제공된다는 것을 나타내는 것인 제조품.Wherein the instructions provide about 0.5 to 4 grams of initial antibody exposure, and then administer to the subject an amount of antibody effective to provide about 0.5 to 4 grams of a second antibody exposure, wherein the second exposure is No up to about 16-54 weeks from the initial exposure, indicating that each antibody exposure is given to the subject as a single dose of the antibody or as two or three separate doses of the antibody.

제67항에 있어서, 제2 약물을 포함하는 용기를 추가로 포함하고 (여기서, CD20 항체가 제1 약물이다), 이러한 제2 약물을 사용하여 대상체를 치료하는 것에 관한 지시사항을 패키지 삽입물 상에 추가로 포함하는 제조품.The method of claim 67, further comprising a container comprising a second drug, wherein the CD20 antibody is the first drug, and instructions for treating the subject using this second drug on the package insert. Further comprising the article of manufacture.

제68항에 있어서, 제2 약물이 화학요법제, 면역억제제, 항말라리아제, 세포독성제, 인테그린 길항제, 사이토킨 길항제, 또는 호르몬인 제조품.69. The article of manufacture of claim 68, wherein the second drug is a chemotherapeutic agent, an immunosuppressant, an antimalarial agent, a cytotoxic agent, an integrin antagonist, a cytokine antagonist, or a hormone.

제68항 또는 제69항에 있어서, 제2 약물이 화학요법제, 항말라리아제 또는 면역억제제인 제조품.70. The article of manufacture of claim 68 or 69, wherein the second drug is a chemotherapeutic agent, an antimalarial agent or an immunosuppressive agent.

제68항 내지 제70항 중의 어느 한 항에 있어서, 제2 약물이 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 히드록시클로로퀸, 클로로퀸, 퀴나크린, 아자티오프린, 또는 6-머캅토퓨린인 제조품.The method of claim 68, wherein the second drug is methylprednisolone, prednisone, mycophenolate mofetil, methotrexate, hydroxychloroquine, chloroquine, quinacrine, azathioprine, or 6-mercaptopurine Manufactured products.