KR20070023666A - Dihydrotetrabenazines and pharmaceutical compositions containing them - Google Patents

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Abstract

본 발명은 디하이드로테트라베나진의 신규의 이성체, 그의 개별적인 거울상 이성체 및 혼합물을 제공하며, 이때 상기 디하이드로테트라베나진은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진이다. 상기 신규의 이성체의 제조 방법, 상기 이성체를 함유하는 약학 조성물 및 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료에서의 그의 용도를 또한 제공한다.The present invention provides novel isomers of dihydrotetrabenazine, individual enantiomers and mixtures thereof, wherein the dihydrotetrabenazine is 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine. Methods of preparing the novel isomers, pharmaceutical compositions containing the isomers and their use in the treatment of hyperkinetic movement disorders such as Huntington's disease, anti-martial disease, geriatric chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette's syndrome to provide.

디하이드로테트라베나진, 신규의 이성체, 거울상 이성체, 헌팅톤 병, 반무도병Dihydrotetrabenazine, New Isomers, Enantiomers, Huntington's Disease, Anti-Colade

Description

디하이드로테트라베나진 및 이를 함유하는 약학 조성물{DIHYDROTETRABENAZINES AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM}Dihydrotetrabenazine and a pharmaceutical composition containing the same {DIHYDROTETRABENAZINES AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM}

본 발명은 신규의 디하이드로테트라베나진 이성체, 이를 함유하는 약학 조성물, 이의 제조 방법 및 이의 치료학적 용도에 관한 것이다.The present invention relates to novel dihydrotetrabenazine isomers, pharmaceutical compositions containing them, methods for their preparation and therapeutic uses thereof.

테트라베나진(화학명: 1,3,4,6,7,11b-헥사하이드로-9,10-디메톡시-3-(2-메틸프로필)-2H-벤조(a)퀴놀리진-2-온)은 1950년대 말 이래로 약학적 약물로 사용 중에 있다. 처음에 정신병 치료제로서 사용되었던 테트라베나진은 현재 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱(tic), 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료에 사용된다(예를 들어 문헌[Jankovic et al ., Am . J. Psychiatry. (1999) Aug; 156(8):1279-81 및 Jankovic et al ., Neurology(1997) Feb; 48(2):358-62]을 참조하시오).Tetrabenazine (chemical name: 1,3,4,6,7,11b-hexahydro-9,10-dimethoxy-3- (2-methylpropyl) -2H-benzo (a) quinolinzin-2-one ) Has been used as a pharmaceutical drug since the late 1950s. Tetrabenazine, which was initially used as an antipsychotic, is currently used for the treatment of hypermotor disorders such as Huntington's disease, anti-martial arts, elderly chorea, tic, dyskinesia and Tourette's syndrome (e.g. Jankovic et. al ., Am . J. Psychiatry. (1999) Aug; 156 (8): 1279-81 and Jankovic et al ., Neurology (1997) Feb; 48 (2): 358-62).

테트라베나진의 주요 약리 작용은 인간 소포 모노아민 전달체(vesicular monoamine transporter) 동형 2(hVMAT2)를 억제함으로써 중추 신경계에서 모노아민(예를 들어 도파민, 세로토닌 및 노르에피네프린)의 공급을 감소시키는 것이다. 상기 약물은 또한 시냅스 후 도파민 수용체를 차단한다.The main pharmacological action of tetrabenazine is to reduce the supply of monoamines (eg dopamine, serotonin and norepinephrine) in the central nervous system by inhibiting human vesicular monoamine transporter isoform 2 (hVMAT2). The drug also blocks post-synaptic dopamine receptors.

테트라베나진은 각종 과운동성 운동 장애의 치료에 유효하고 안전한 약물이 며, 전형적인 신경 이완제와 대조적으로 지연운동 이상증을 유발하는 것은 입증되지 않았다. 그럼에도 불구하고, 테트라베나진은 우울증, 파킨슨증, 졸음, 신경과민증 또는 불안증, 불면증, 및 드물게는 항정신병약물 악성 증후군을 포함한 다수의 용량 관련 부작용(dose-related side effects)을 나타낸다.Tetrabenazine is an effective and safe drug for the treatment of various hyperkinetic movement disorders and has not been demonstrated to cause delayed dyskinesia in contrast to typical neuroleptics. Nevertheless, tetrabenazine exhibits a number of dose-related side effects, including depression, Parkinsonism, drowsiness, neurosensitivity or anxiety, insomnia, and rarely antipsychotic malignant syndrome.

테트라베나진의 중심 효과는 레세르핀의 효과와 매우 닮았으나, VMAT1 전달체에 대한 활성이 없다는 점에서 레세르핀과 다르다. 상기 VMAT1 전달체에 대한 활성의 결여는 테트라베나진이 레세르핀보다 적은 말초 활성을 가지며 결과적으로 저혈압과 같은 VMAT1-관련 부작용을 생성시키지 않음을 의미한다.The central effect of tetrabenazine is very similar to that of reserpin, but differs from reserpin in that it has no activity on the VMAT1 transporter. Lack of activity on the VMAT1 transporter means that tetrabenazine has less peripheral activity than reserpin and consequently does not produce VMAT1-related side effects such as hypotension.

테트라베나진의 화학적 구조는 하기 도 1에 나타낸 바와 같다.The chemical structure of tetrabenazine is as shown in Figure 1 below.

Figure 112006064994282-PCT00001
Figure 112006064994282-PCT00001

도 1 - 테트라베나진의 구조Figure 1-The structure of tetrabenazine

상기 화합물은 3 번 및 11b 번 탄소 원자에서 키랄 중심을 가지며 따라서 이론적으로는 도 2에 나타내는 바와 같이 총 4 개의 이성체 형태로 존재할 수 있다.The compound has chiral centers at carbon atoms 3 and 11b and thus can theoretically exist in a total of four isomeric forms as shown in FIG. 2.

Figure 112006064994282-PCT00002
Figure 112006064994282-PCT00002

도 2 - 가능한 테트라베나진 이성체들Figure 2-Possible tetrabenazine isomers

도 2에서, 각 이성체의 입체 화학을 칸, 잉골드 및 프레로그(Cahn, Ingold and Prelog)에 의해 개발된 "R 및 S" 명명법을 사용하여 정의한다(문헌, [Jerry March, Advanced Organic Chemistry, 4th Edition, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 109-114]을 참조하시오). 도 2 및 그 밖의 본 특허 출원에서, "R" 또는 "S" 표시는 탄소 원자의 위치 순서로 제공한다. 따라서, RS는 3R,11bS에 대한 속기 표시이다. 유사하게, 3 개의 키랄 중심이 존재하는 경우, 하기 개시하는 디하이드로테트라베나진에서와 같이, "R " 또는 "S " 표시는 탄소 원자 2, 3 및 11b의 순서로 열거된다. 따라서, 2S,3R,11 bR 이성체는 속기 형태로 SRR 등으로 지칭된다.In Figure 2, the stereochemistry of each isomer is defined using the "R and S" nomenclature developed by Cahn, Ingold and Prelog (Jerry March, Advanced). Organic Chemistry , 4th Edition, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 109-114). In Figure 2 and elsewhere in this patent application, "R" or "S" designations are provided in the order of the position of the carbon atoms. Therefore, RS is shorthand for 3 R , 11b S. Similarly, when three chiral centers are present, the " R " or " S " designations are listed in the order of carbon atoms 2, 3 and 11b, as in dihydrotetrabenazine described below. Thus, the 2 S , 3 R , 11 bR isomers are referred to in the shorthand form as SRR and the like.

상업적으로 입수할 수 있는 테트라베나진은 RR 및 SS 이성체의 라세미 혼합물이며, 상기 RR 및 SS 이성체(3 및 11b 번 위치의 수소 원자가 트랜스 상대 배향을 가지므로 이후부터는 개별적으로 또는 집합적으로 트랜스-테트라베나진이라 칭 한다)가 가장 열역학적으로 안정한 이성체인 것으로 나타날 수 있다.Tetra vena binary commercially available is RR and a racemic mixture of the SS isomer, wherein the RR and SS isomers (3 and because 11b one of the hydrogen atoms are trans relative orientation of the position, either individually or collectively hereafter ever trans- Tetrabenazine) may appear to be the most thermodynamically stable isomer.

테트라베나진은 다소 불충분하고 가변적인 생물학적 이용 효능을 갖는다. 상기는 약물 첫 번째 통과 대사에 의해 광범위하게 대사되며, 전형적으로는 거의 또는 전혀 변하지 않은 테트라베나진이 뇨에서 검출된다. 주요 대사산물은 디하이드로테트라베나진(화학명: 2-하이드록시-3-(2-메틸프로필)-1,3,4,6,7,11b-헥사하이드로-9,10-디메톡시-벤조(a)퀴놀리진)이며, 이는 테트라베나진 중의 2-케토 그룹의 환원에 의해 형성되고 약물의 활성에 주로 기여하는 것으로 여겨진다(문헌[Mehvar et al., Drug Metab . Disp, 15, 250-255(1987) 및 J. Pharm . Sci ., 76, No. 6, 461-465(1987)]을 참조하시오).Tetrabenazine is somewhat insufficient and has variable bioavailability. It is metabolized extensively by drug first pass metabolism, and tetrabenazine, which is typically little or no change, is detected in urine. The main metabolite is dihydrotetrabenazine (chemical name: 2-hydroxy-3- (2-methylpropyl) -1,3,4,6,7,11b-hexahydro-9,10-dimethoxy-benzo ( a) quinolizine, which is formed by reduction of the 2-keto group in tetrabenazine and is believed to contribute primarily to the activity of the drug (Mehvar et al., Drug Metab . Disp , 15, 250-255 (1987) and J. Pharm . Sci . , 76, No. 6, 461-465 (1987)).

4 개의 디하이드로테트라베나진 이성체가 앞서 동정되고 특성화되었으며, 이들은 모두 모 테트라베나진의 보다 안정한 RR 및 SS 이성체로부터 유도되고 3 및 11b 번 위치의 수소 원자 사이에 트랜스 상대 배향을 갖는다(문헌[Kilbourn et al., Chirality, 9:59-62(1997) 및 Brossi et al., Helv . Chim . Acta ., vol.XLI, No. 193, pp 1793-1806(1958)]을 참조하시오). 상기 4 개의 이성체는 (+)-α-디하이드로테트라베나진, (-)-α-디하이드로테트라베나진, (+)-β-디하이드로테트라베나진 및 (-)-β-디하이드로테트라베나진이다. 상기 4 개의 공지된 디하이드로테트라베나진 이성체들의 구조는 도 3에 나타낸 바와 같은 것으로 고려된다.Four dihydrotetrabenazine isomers have been identified and characterized previously, all derived from the more stable RR and SS isomers of the parent tetrabenazine and have a trans relative orientation between hydrogen atoms at positions 3 and 11b (Kilbourn et. al., Chirality , 9: 59-62 (1997) and Brossi et al., Helv . Chim . Acta . , vol . XLI, No. 193, pp 1793-1806 (1958)). The four isomers are (+)-α-dihydrotetrabenazine, (-)-α-dihydrotetrabenazine, (+)-β-dihydrotetrabenazine and (-)-β-dihydrotetra Benazin. The structure of the four known dihydrotetrabenazine isomers is considered as shown in FIG. 3.

Figure 112006064994282-PCT00003
Figure 112006064994282-PCT00003

도 3 - 디하이드로테트라베나진의 공지된 이성체들의 구조Figure 3-Structure of known isomers of dihydrotetrabenazine

킬번(Kilbourn) 등(문헌[Eur . J. Pharmacol ., 278:249-252(1995) 및 Med . Chem. Res ., 5:113-126(1994)]을 참조하시오)은 의식이 있는 래트의 뇌에서 개별적인 방사성 표지된 디하이드로테트라베나진의 특이적인 결합을 연구하였다. 이들은 상기 뇌의 영역에 축적된 (+)-α-[11C]디하이드로테트라베나진(2R,3R,11bR) 이성체가 신경세포막 도파민 전달체(DAT) 및 소수포성 모노아민 전달체(VMAT2)의 보다 높은 농도와 관련이 있음을 발견하였다. 그러나, 필수적으로 불활성인 (-)-α-[11C]디하이드로테트라베나진 이성체는 상기 뇌 중에 거의 균일하게 분포되어 있었으며, 이는 DAT 및 VMAT2에 대해 특이적인 결합이 발생한 것은 아님을 암시한다. 상기 생체 내 연구는 (+)-α-[11C]디하이드로테트라베나진 이성체가 (-)-α-[11C]디하이드로테트라베나진 이성체에 대한 Ki보다 >2000 배 더 큰 [3H]메톡시테트라베나 진에 대한 Ki를 나타냄을 입증한 생체 외 연구와 상관되었다.Kilbourn et al. (See Eur . J. Pharmacol . , 278: 249-252 (1995) and Med . Chem. Res . , 5: 113-126 (1994)) of conscious rats. Specific binding of individual radiolabeled dihydrotetrabenazine in the brain was studied. These are the (+) accumulated in regions of the brain - α- [11 C] tetra-dihydro vena binary (2 R, 3 R, 11b R) isomer a nerve cell membrane dopamine transporter (DAT) and a small number of vesicular monoamine transporter (VMAT2 Found to be associated with higher concentrations of). However, the essentially inactive (-)-α- [ 11 C] dihydrotetrabenazine isomer was distributed almost uniformly in the brain, suggesting that no specific binding to DAT and VMAT2 occurred. The in vivo study showed that the (+)-α- [ 11 C] dihydrotetrabenazine isomer was> 2000 times larger than the K i for the (-)-α- [ 11 C] dihydrotetrabenazine isomer [ 3 Correlated with in vitro studies demonstrating K i for H] methoxytetrabenazine.

지금까지는, 출원인이 아는 한, 테트라베나진의 불안정한 RS 및 SR 이성체로부터 유도된 디하이드로테트라베나진 이성체(3 및 11b 번 위치의 수소 원자가 시스 상대 배향을 가지므로 이후부터는 개별적으로 또는 집합적으로 시스 테트라베나진이라 칭한다)는 앞서 단리되지 않았으며, 이들 화합물의 생물 활성도 지금까지 공개되지 않았다.To date, to the best of the applicant's knowledge, the dihydrotetrabenazine isomers derived from the unstable RS and SR isomers of tetrabenazine (the hydrogen atoms at positions 3 and 11b have cis relative orientation, and subsequently cis tetra separately or collectively). Benazine is not previously isolated, and the biological activity of these compounds has not been published to date.

발명의 요약Summary of the Invention

본 발명에 이르러 테트라베나진의 불안정한 RS 및 SR 이성체로부터 유도된 디하이드로테트라베나진 이성체가 안정할뿐만 아니라 뜻밖의 양호한 생물학적 성질을 가짐을 발견하였다. 특히, 상기 이성체들 중 일부는 현재 사용 중인 RR/SS 테트라베나진에 비해 다수의 이점을 시사하는 수용체 활성 계수(receptor-activity profile)를 갖는다. 예를 들어, 상기 이성체들 중 다수는, VMAT2에 대해 높은 친화성을 갖지만, 도파민 수용체에 대한 결합이 크게 감소되거나 무시할만하며, 이는 상기 이성체들이, 테트라베나진이 부닥치는 도파민 부작용을 발생시키지 않는듯함을 가리킨다. 상기 이성체들 중 어느 것도 도파민 전달체(DAT)의 억제를 나타내지 않았다. 또한, 다수의 이성체들에 대한 래트에서의 연구는 상기 이성체들이 테트라베나진과 관련된 바람직하지 못한 진정 부작용이 없음을 입증하였다. 진정 활성의 결여는 아드레날린 수용체에 대한 상기 이성체들 중 일부의 매우 낮은 친화성에 기인할 수 있다. 더욱 또한, 테트라베나진의 부작용들 중 하나는 우울증인 데 반해, 상기 디하이드로테트라베나진 이성체들 중 다수는 세로토닌 전달체(SERT) 단백질에 대해 친화성을 보이며, 이는 상기 이성체들이 우울증 억제 활성을 가질 수 있음을 가리킨다.It has now been found that the dihydrotetrabenazine isomers derived from the unstable RS and SR isomers of tetrabenazine are not only stable but also have unexpectedly good biological properties. In particular, some of these isomers have a receptor-activity profile that suggests a number of advantages over the RR / SS tetrabenazines currently in use. For example, many of these isomers have high affinity for VMAT2, but the binding to dopamine receptors is greatly reduced or negligible, indicating that the isomers do not appear to cause the dopamine side effects encountered with tetrabenazine. Point. None of these isomers showed inhibition of dopamine transporter (DAT). In addition, studies in rats of a number of isomers have demonstrated that the isomers do not have the undesirable soothing side effects associated with tetrabenazine. Lack of sedation activity may be due to the very low affinity of some of these isomers for adrenergic receptors. Furthermore, one of the side effects of tetrabenazine is depression, whereas many of the dihydrotetrabenazine isomers show affinity for serotonin transporter (SERT) proteins, which may have antidepressant activity. Indicates that there is.

따라서, 첫 번째 태양에서, 본 발명은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 제공한다.Thus, in a first aspect, the present invention provides 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine.

또 다른 태양에서, 본 발명은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명은 또한 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 실질적으로 순수한 형태, 예를 들어 90% 초과, 전형적으로는 95% 초과, 보다 바람직하게는 98% 초과의 이성체 순도로 제공한다.The present invention also provides 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine in substantially pure form, for example, in isomeric purity of greater than 90%, typically greater than 95%, more preferably greater than 98%.

본 발명과 관련하여 "이성체 순도"란 용어는 모든 이성체 형태의 디하이드로테트라베나진의 전체 량 또는 농도에 대해 존재하는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 양을 지칭한다. 예를 들어, 조성물 중에 존재하는 전체 디하이드로테트라베나진의 90%가 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진인 경우, 상기 이성체 순도는 90%이다.The term “isomer purity” in the context of the present invention refers to the amount of 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine present relative to the total amount or concentration of dihydrotetrabenazine in all isomeric forms. For example, when 90% of the total dihydrotetrabenazine present in the composition is 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine, the isomer purity is 90%.

본 발명은 또한 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 실질적으로 없는, 바람직하게는 5% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진, 보다 바람직하게는 3% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진, 가장 바람직하게는 1% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진을 함유하는, 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 포함하는 조성물을 제공한다.The invention also relates to 3,11b- trans -dihydrotetrabenazine, substantially free of 3,11b- trans -dihydrotetrabenazine, preferably less than 5% 3,11b- trans-tetrahydro-dihydro vena Jin, and most preferably less than 1% of 3,11b- trans-provides a composition comprising a binary-dihydro-tetra-vena-containing tetra-dihydro vena Jin, 3,11b- cis.

또 다른 태양에서, 본 발명은 약물 또는 요법, 예를 들어 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료, 또는 우울증의 치료에 사용하기 위해 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 제공한다.In another aspect, the present invention is used for the treatment of drugs or therapies, such as hyperkinetic movement disorders such as Huntington's disease, anti-martial disease, geriatric chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette syndrome, or in the treatment of depression. To provide 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine.

추가의 태양에서, 본 발명은 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료, 또는 우울증의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 용도를 제공한다.In a further aspect, the present invention provides a method for the preparation of a medicament for the treatment of hyperkinetic movement disorders such as Huntington's disease, anti- chorea, elderly chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette's syndrome, or depression, 11b- cis -dihydrotetrabenazine is provided.

더욱 추가의 태양에서, 본 발명은 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 예방 또는 치료, 또는 우울증의 치료가 필요한 환자에서 예방 또는 치료 유효량의 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 투여함을 포함하는, 상기 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In a still further aspect, the present invention is directed to the prevention or treatment of hyperkinetic movement disorders, such as Huntington's disease, anti- chorea, elderly chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette syndrome, or in patients in need of treatment of depression or Provided is the above prophylactic or therapeutic method comprising administering a therapeutically effective amount of 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine.

본 발명에 사용된 "3,11b-시스-"란 용어는 디하이드로테트라베나진 구조의 3- 및 11b-위치의 수소 원자가 시스 상대 배향으로 존재함을 의미한다. 따라서 본 발명의 이성체들은 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 대장체(거울상)이다.The term "3,11b- cis- " as used herein means that the hydrogen atoms in the 3- and 11b-positions of the dihydrotetrabenazine structure are present in cis relative orientation. The isomers of the present invention are therefore compounds of the formula (I) and their colon (mirrors).

Figure 112006064994282-PCT00004
Figure 112006064994282-PCT00004

3,11b-시스 배위를 갖는 디하이드로테트라베나진의 4 개의 가능한 이성체들이 존재하며, 이들은 2S,3S,11bR 이성체, 2R,3R,11bS 이성체, 2R,3S,11bR 이성체 및 2S,3R,11bS 이성체이다. 상기 4 개의 이성체들은 단리 및 특성화되었으며, 또 다른 태양에서 본 발명은 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 개별적인 이성체들을 제공한다. 특히 본 발명은There are tetra-dihydro vena spirit four possible isomers having a 3,11b- cis coordinated, and these 2 S, 3 S, 11b R Isomers, 2 R , 3 R , 11b S Isomers, 2 R , 3 S , 11b R The isomers and 2 S, 3 R, 11b S isomer. The four isomers have been isolated and characterized and in another aspect the present invention provides the individual isomers of 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine. In particular, the present invention

(a) 하기 화학식 Ia를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3S,11bR 이성체:(a) a 3,11b- cis having the formula Ia - dihydro tetrahydro vena Qin 2 S, 3 S, 11b R isomer:

Figure 112006064994282-PCT00005
Figure 112006064994282-PCT00005

(b) 하기 화학식 Ib를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3R,11bS 이성체:(b) having the formula (Ib) to 3,11b- cis-dihydro-tetra vena Qin 2 R, 3 R, 11b S isomer:

Figure 112006064994282-PCT00006
Figure 112006064994282-PCT00006

(c) 하기 화학식 Ic를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3S,11bR 이성체:(c) to 3,11b- cis having Formula Ic - dihydro tetrahydro vena Qin 2 R, 3 S, 11b R isomer:

Figure 112006064994282-PCT00007
Figure 112006064994282-PCT00007

(d) 하기 화학식 Id를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bS 이성체:(d) having the formula Id to 3,11b- cis-dihydro-tetra vena Qin 2 S, 3 R, 11b S isomer:

Figure 112006064994282-PCT00008
Figure 112006064994282-PCT00008

를 제공한다.To provide.

본 발명의 개별적인 신규의 이성체들은 그의 분광학, 광학 및 크로마토그래피 성질들을 특징으로 할 수 있다.Individual novel isomers of the invention may be characterized by their spectroscopic, optical and chromatographic properties.

바람직한 이성체는 우선성(+) 이성체이다.Preferred isomers are preferential (+) isomers.

임의의 특정한 절대 배위 또는 입체 화학을 포함시키지 않으면서, 상기 4 개의 신규의 이성체들을 하기와 같이 특성화할 수 있다:Without including any particular absolute configuration or stereochemistry, the four novel isomers can be characterized as follows:

이성체 AIsomer A

ORD(메탄올, 21 ℃): 좌선성(-), 실질적으로 표 1에 개시하는 바와 같은 IR 스펙트럼(KBr 고체), 1H-NMR 스펙트럼(CDCl3) 및 13C-NMR 스펙트럼(CDCl3)에 의해 측정된 바와 같은 광학 활성.ORD (Methanol, 21 ° C.): Left linear (−), substantially in IR spectrum (KBr solid), 1 H-NMR spectrum (CDCl 3 ) and 13 C-NMR spectrum (CDCl 3 ) as described in Table 1 Optical activity as measured by.

이성체 BIsomer B

ORD(메탄올, 21 ℃): 우선성(+), 실질적으로 표 1에 개시하는 바와 같은 IR 스펙트럼(KBr 고체), 1H-NMR 스펙트럼(CDCl3) 및 13C-NMR 스펙트럼(CDCl3)에 의해 측정된 바와 같은 광학 활성.ORD (Methanol, 21 ° C.): Priority (+), substantially in IR spectrum (KBr solid), 1 H-NMR spectrum (CDCl 3 ) and 13 C-NMR spectrum (CDCl 3 ) as described in Table 1 Optical activity as measured by.

이성체 CIsomer C

ORD(메탄올, 21 ℃): 우선성(+), 실질적으로 표 2에 개시하는 바와 같은 IR 스펙트럼(KBr 고체), 1H-NMR 스펙트럼(CDCl3) 및 13C-NMR 스펙트럼(CDCl3)에 의해 측정된 바와 같은 광학 활성.ORD (Methanol, 21 ° C.): Priority (+), substantially in IR spectrum (KBr solid), 1 H-NMR spectrum (CDCl 3 ) and 13 C-NMR spectrum (CDCl 3 ) as described in Table 2. Optical activity as measured by.

이성체 DIsomer D

ORD(메탄올, 21 ℃): 좌선성(-), 실질적으로 표 2에 개시하는 바와 같은 IR 스펙트럼(KBr 고체), 1H-NMR 스펙트럼(CDCl3) 및 13C-NMR 스펙트럼(CDCl3)에 의해 측정된 바와 같은 광학 활성.ORD (Methanol, 21 ° C.): Left linear (−), substantially in IR spectrum (KBr solid), 1 H-NMR spectrum (CDCl 3 ) and 13 C-NMR spectrum (CDCl 3 ) as described in Table 2. Optical activity as measured by.

각각의 이성체에 대한 ORD 값을 하기 실시예에 제공하나, 상기와 같은 값은 예로서 제공되는 것이며 상기 이성체의 순도 및 다른 변수의 영향, 예를 들어 온도 변화 및 잔류 용매 분자의 영향에 따라 변할 수 있다.ORD values for each isomer are provided in the examples below, but such values are provided by way of example and may vary depending on the purity of the isomer and the effects of other variables, such as temperature changes and the influence of residual solvent molecules. have.

거울상 이성체 A, B, C 및 D를 각각 실질적으로 거울상 이성체적으로 순수한 형태로 또는 본 발명의 다른 거울상 이성체들과의 혼합물로서 제공할 수 있다.Enantiomers A, B, C and D can each be provided in substantially enantiomeric pure form or as a mixture with other enantiomers of the invention.

본 발명과 관련하여 "거울상 이성체 순도" 및 "거울상 이성체적으로 순수한"이란 용어는 모든 거울상 이성체 및 이성체 형태의 디하이드로테트라베나진의 전체 량 또는 농도에 대해 존재하는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 주어진 거울상 이성체의 양을 지칭한다. 예를 들어, 조성물 중에 존재하는 전체 디하이드로테트라베나진의 90%가 단일 거울상 이성체의 형태인 경우, 상기 거울상 이성체 순도는 90%이다.The terms "enantiomer purity" and "enantiomerically pure" in the context of the present invention refer to all enantiomeric and isomeric forms of dihydrotetrabenazine in the total amount or concentration of 3,11b- cis -dihydrotetra Refers to the amount of the given enantiomer of benazine. For example, when 90% of the total dihydrotetrabenazine present in the composition is in the form of a single enantiomer, the enantiomeric purity is 90%.

예로서, 본 발명의 각각의 태양 및 실시태양에서, 이성체 A, B, C 및 D 중에서 선택된 각각의 개별적인 거울상 이성체는 55% 이상(예를 들어 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 100% 이상)의 거울상 이성체 순도로 존재할 수 있다.For example, in each aspect and embodiment of the present invention, each individual enantiomer selected from isomers A, B, C, and D may be at least 55% (eg, 60%, 65%, 70%, 75%, 80). %, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% or 100% or more) of enantiomeric purity.

본 발명의 이성체들을 또한 이성체 A, B, C 및 D 중 하나 이상의 혼합물의 형태로 제공할 수 있다. 상기와 같은 혼합물은 라세미 혼합물 또는 비 라세미 혼합물일 수 있다. 라세미 혼합물의 예로는 이성체 A와 이성체 B의 라세미 혼합물 및 이성체 C와 이성체 D의 라세미 혼합물이 있다.Isomers of the invention may also be provided in the form of a mixture of one or more of isomers A, B, C and D. Such mixtures may be racemic mixtures or non-racemic mixtures. Examples of racemic mixtures include racemic mixtures of isomers A and B and racemic mixtures of isomers C and D.

약학적으로 허용 가능한 염Pharmaceutically acceptable salts

달리 나타내지 않는 한, 본 원에서 디하이드로테트라베나진 및 그의 이성체에 대한 언급은 그의 범위 내에 상기 디하이드로테트라베나진의 유리 염기뿐만 아니라 그의 염 및 특히 산 부가염을 포함한다.Unless otherwise indicated, references herein to dihydrotetrabenazine and isomers thereof include within its scope not only the free base of dihydrotetrabenazine, but also salts and especially acid addition salts thereof.

산 부가염을 형성하는 특정한 산에는 3.5 미만, 보다 대개는 3 미만의 pKa 값을 갖는 산이 포함된다. 예를 들어, 상기 산 부가염을 +3.5 내지 -3.5 범위의 pKa를 갖는 산으로부터 형성시킬 수 있다.Particular acids that form acid addition salts include acids having pKa values of less than 3.5, more often less than 3. For example, the acid addition salt can be formed from an acid having a pKa in the range of +3.5 to -3.5.

바람직한 산 부가염은 설폰산, 예를 들어 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠 설폰산, 톨루엔 설폰산, 캄포르 설폰산 및 나프탈렌 설폰산과 형성된 염을 포함한다.Preferred acid addition salts include salts formed with sulfonic acids, for example methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzene sulfonic acid, toluene sulfonic acid, camphor sulfonic acid and naphthalene sulfonic acid.

산 부가염이 형성될 수 있는 하나의 특정한 산은 메탄설폰산이다.One particular acid in which acid addition salts can be formed is methanesulfonic acid.

산 부가염을 본 발명에 개시된 방법 또는 통상적인 화학적 방법, 예를 들어 문헌[Pharmaceutical Salts : Properties , Selection , and Use, P. Heinrich Stahl(Editor), Camille G. Wermuth(Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002]에 개시된 방법에 의해 제조할 수 있다. 일반적으로는, 상기와 같은 염을, 상기 화합물의 유리 염기 형태를 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물(일반적으로는 비 수성 매질, 예를 들어 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴이 사용된다) 중에서 적합한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.Acid addition salts can be prepared by the methods disclosed herein or by conventional chemical methods such as, for example, Pharmaceutical. Salts : Properties , Selection , and Use , P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Generally, such salts may be prepared by the free base form of the compound in water or an organic solvent, or a mixture of the two (generally non-aqueous media such as ether, ethyl acetate, ethanol, isopropanol or acetonitrile). Are used) to react with a suitable base or acid.

상기 염은 전형적으로는 약학적으로 허용 가능한 염이다. 그러나, 약학적으로 허용 가능하지 않은 염을 또한 중간체 형태로서 제조할 수 있으며, 이어서 상기를 약학적으로 허용 가능한 염으로 전환시킬 수 있다. 상기와 같은 약학적으로 허용 가능하지 않은 염도 또한 본 발명의 일부를 형성한다.Such salts are typically pharmaceutically acceptable salts. However, pharmaceutically unacceptable salts can also be prepared as intermediate forms, which can then be converted into pharmaceutically acceptable salts. Such pharmaceutically unacceptable salts also form part of the present invention.

디하이드로테트라베나진Dihydrotetrabenazine 이성체의 제조 방법 Method of Preparation of Isomers

추가의 태양에서, 하기 화학식 II의 화합물을 상기 화학식 II 화합물 중의 2,3-이중 결합을 수화시키기에 적합한 시약 또는 시약들과 반응시키고, 그 후에 요구될 경우 목적하는 디하이드로테트라베나진 이성체 형태를 분리 및 단리시킴을 포함하는, 본 발명의 디하이드로테트라베나진의 제조 방법(방법 A)을 제공한다:In a further aspect, the compound of formula II is reacted with a reagent or reagents suitable for hydrating the 2,3-double bond in the compound of formula II, and then, if desired, the desired dihydrotetrabenazine isomeric form Provided is a process for preparing the dihydrotetrabenazine of the present invention (method A) comprising isolation and isolation:

Figure 112006064994282-PCT00009
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상기 2,3-이중 결합의 수화는 보란 시약, 예를 들어 디보란 또는 보란-에테르(예를 들어 보란-테트라하이드로푸란(THF))를 사용하여 하이드로보레이션에 의해 중간체 알킬 보란 부가물(adduct)을 제공한 다음 상기 알킬 보란 부가물을 산화시키고 염기의 존재 하에서 가수분해시켜 수행할 수 있다. 상기 하이드로보레이션을 전형적으로는 무수 극성 비 양성자성 용매, 예를 들어 에테르(예: THF) 중에서 대개는 비 승온, 예를 들어 실온에서 수행한다. 상기 보란 알켄 부가물을 전형적으로는 하이드록사이드 이온 공급원을 제공하는 염기, 예를 들어 수산화 암모늄 또는 알칼리 금속 수산화물, 예를 들어 수산화 칼륨 또는 수산화 나트륨의 존재 하에서 산화제, 예를 들어 과산화 수소로 산화시킨다. 방법 A의 반응들의 하이드로보레이션-산화-가수분해 시퀀스는 전형적으로는 2 및 3 번 위치의 수소 원자가 트랜스 상대 배향을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체를 제공한다.Hydration of the 2,3-double bonds is carried out by intermediate boron adducts by hydroboration using borane reagents such as diborane or borane-ether (eg borane-tetrahydrofuran (THF)). ) And then oxidize the alkyl borane adduct and hydrolyze in the presence of a base. The hydroboration is typically carried out in anhydrous polar aprotic solvents, for example ethers such as THF, usually at elevated temperatures, for example at room temperature. The borane alkene adduct is typically oxidized with an oxidizing agent such as hydrogen peroxide in the presence of a base, such as ammonium hydroxide or an alkali metal hydroxide such as potassium hydroxide or sodium hydroxide, which provides a source of hydroxide ions. . The hydroboration-oxidation-hydrolysis sequence of the reactions of Method A typically provides dihydrotetrabenazine isomers in which the hydrogen atoms at positions 2 and 3 have a trans relative orientation.

화학식 II의 화합물을, 테트라베나진을 환원시켜 디하이드로테트라베나진을 제공한 다음 상기 디하이드로테트라베나진을 탈수시켜 제조할 수 있다. 상기 테트라베나진의 환원은 수소화 알루미늄 시약, 예를 들어 리튬 알루미늄 하이드라이드, 또는 보로하이드라이드 시약, 예를 들어 나트륨 보로하이드라이드, 칼륨 보로하이드라이드 또는 보로하이드라이드 유도체, 예를 들어 알킬 보로하이드라이드, 예를 들어 리튬 트리-2급-부틸 보로하이드라이드를 사용하여 수행할 수 있다. 한편으로, 상기 환원 단계를 예를 들어 라니 니켈 또는 산화 백금 촉매 상에서의 접촉 수소화를 사용하여 수행할 수 있다. 상기 환원 단계의 수행에 적합한 조건은 하기에 보다 상세히 개시되어 있으며 미국 특허 제 2,843,591 호(Hoffmann-La Roche) 및 문헌[Brossi et al ., Helv . Chim . Acta ., vol. XLI, No. 193, pp1793-1806(1958)]에서 찾을 수 있다.Compounds of formula (II) can be prepared by reducing tetrabenazine to give dihydrotetrabenazine and then dehydrotetrabenazine. Reduction of the tetrabenazine is an aluminum hydride reagent such as lithium aluminum hydride, or a borohydride reagent such as sodium borohydride, potassium borohydride or borohydride derivatives such as alkyl borohydride, For example lithium tri-tert-butyl borohydride. On the one hand, the reduction step can be carried out using, for example, catalytic hydrogenation on Raney nickel or platinum oxide catalysts. Conditions suitable for carrying out the reduction step are disclosed in more detail below and described in US Pat. No. 2,843,591 to Hoffmann-La Roche and Brossi et. al ., Helv . Chim . Acta . , vol. XLI, No. 193, pp 1793-1806 (1958).

상기 환원 반응에 대한 출발 물질로서 사용된 테트라베나진은 전형적으로는 RR 및 SS 이성체(즉 트랜스-테트라베나진)의 혼합물이므로, 상기 환원 단계에 의해 형성된 디하이드로테트라베나진은 상기 3 및 11b 번 위치에 대해 동일한 트랜스 배 위를 가질 것이며 상기 도 3에 나타낸 공지된 디하이드로테트라베나진 이성체들 중 하나 이상의 형태를 취할 것이다. 따라서 방법 A는 디하이드로테트라베나진의 공지된 이성체들을 취하고, 이들을 탈수시켜 알켄 II을 형성시키고 이어서 본 발명의 목적하는 신규의 시스 디하이드로테트라베나진 이성체를 제공하는 조건을 사용하여 알켄 II을 "재수화시킴"을 포함할 수 있다.Since tetrabenazine used as starting material for the reduction reaction is typically a mixture of the RR and SS isomers (ie trans -tetrabenazine), the dihydrotetrabenazine formed by the reduction step is characterized in that 3 and 11b. It will have the same trans configuration relative to the position and will take the form of one or more of the known dihydrotetrabenazine isomers shown in FIG. 3 above. Thus method A takes known isomers of dihydrotetrabenazine, dehydrates them to form alkenes II, and then uses the conditions to provide the desired novel cis dihydrotetrabenazine isomers of the present invention to "Conjugation".

상기 디하이드로테트라베나진의 알켄 II으로의 탈수를 알켄을 형성시키기 위한 알콜의 다양한 표준 탈수 조건을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[J. March(동일 문헌) pages 389-390] 및 상기 문헌 중의 참고문헌을 참조하시오). 상기와 같은 조건의 예는 인 기재 탈수제, 예를 들어 인 할라이드 또는 인 옥시할라이드, 예를 들어 POCl3 및 PCl5의 사용을 포함한다. 탈수에 대한 대안으로서, 상기 디하이드로테트라베나진의 하이드록실 그룹을 이탈 그룹 L, 예를 들어 할로겐(예를 들어 염소 또는 브롬)으로 전환시키고 이어서 H-L의 제거 조건(예를 들어 염기의 존재)을 가할 수 있다. 상기 하이드록실 그룹의 할라이드로의 전환을 숙련된 화학자에게 잘 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어 트리알킬 또는 트리아릴 포스핀, 예를 들어 트리페닐 포스핀 또는 트리부틸 포스핀의 존재 하에서 사염화 탄소 또는 사브롬화 탄소와의 반응에 의해 성취할 수 있다.Dehydration of the dihydrotetrabenazine to alkenes II can be carried out using various standard dehydration conditions of alcohols to form alkenes (see, for example, J. March, pages 389-390 and above). See references in the literature). Examples of such conditions include the use of phosphorus based dehydrating agents such as phosphorus halides or phosphorus oxyhalides such as POCl 3 and PCl 5 . As an alternative to dehydration, the hydroxyl group of the dihydrotetrabenazine is converted to a leaving group L, for example halogen (e.g. chlorine or bromine), followed by the addition of HL removal conditions (e.g. the presence of a base). Can be. The conversion of hydroxyl groups to halides using methods well known to the skilled chemist, for example trialkyl or triaryl phosphines such as triphenyl phosphine or tributyl phosphine Or by reaction with carbon tetrabromide.

디하이드로테트라베나진을 제공하기 위해 상기 환원에 대한 출발 물질로서 사용된 테트라베나진을 상업적으로 수득하거나 또는 미국 특허 제 2,830,993 호(Hoffmann-La Roche)에 개시된 방법에 의해 합성할 수 있다.Tetrabenazine used as starting material for the reduction to provide dihydrotetrabenazine can be obtained commercially or synthesized by the method disclosed in US Pat. No. 2,830,993 (Hoffmann-La Roche).

본 발명은 또한 하기 화학식 III의 화합물에 상기 화학식 III 화합물 중의 2,3-에폭사이드 그룹의 개환 조건을 가하고 그 후에 요구될 경우 하이드로테트라베나진 이성체 형태를 분리 및 단리시킴을 포함하는, 본 발명의 디하이드로테트라베나진의 제조 방법(방법 B)을 제공한다:The present invention also includes subjecting a compound of formula III to a ring opening condition of a 2,3-epoxide group in said compound of formula III and thereafter isolating and isolating the hydrotetrabenazine isomeric form as required. Provided is a process for preparing dihydrotetrabenazine (method B):

Figure 112006064994282-PCT00010
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상기 개환을 에폭사이드 개환에 공지된 방법에 따라 수행할 수 있다. 그러나, 현재 바람직한 상기 에폭사이드의 개환 방법은 보란-THF와 같은 환원제를 사용하여 성취할 수 있는 환원적 개환이다. 보란-THF와의 반응을 대개는 실온에서 극성 비 양성자성 용매, 예를 들어 에테르(예를 들어 테트라하이드로푸란) 중에서 수행할 수 있으며, 상기와 같이 형성된 보란 착체는 후속적으로 물 및 염기의 존재 하에서 상기 용매의 환류 온도에서의 가열에 의해 가수분해된다. 방법 B는 전형적으로는 2 및 3 번 위치의 수소 원자가 시스 상대 배향을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체를 생성시킨다.The ring opening can be carried out according to a method known for epoxide ring opening. However, the presently preferred method of ring opening of the epoxide is reductive ring opening which can be achieved using a reducing agent such as borane-THF. The reaction with borane-THF can usually be carried out at room temperature in a polar aprotic solvent, for example ether (eg tetrahydrofuran), wherein the borane complex formed as described above is subsequently subjected to the presence of water and base It is hydrolyzed by heating at the reflux temperature of the solvent. Method B typically produces dihydrotetrabenazine isomers in which the hydrogen atoms at positions 2 and 3 have a cis relative orientation.

화학식 III의 에폭사이드 화합물을 상기 화학식 II의 알켄의 에폭시화에 의해 제조할 수 있다. 상기 에폭시화 반응을 숙련된 화학자에게 잘 공지된 조건 및 시약을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[J. March(동일 문헌), pages 826- 829] 및 상기 문헌 중의 참고문헌을 참조하시오). 전형적으로는 메타-클로로퍼벤조산(MCPBA)과 같은 과산, 또는 과산과 추가의 산화제, 예를 들어 과염소산과의 혼합물을 사용하여 에폭시화를 수행할 수 있다.Epoxide compounds of formula III can be prepared by epoxidation of alkenes of formula II above. The epoxidation reaction can be carried out using conditions and reagents well known to the skilled chemist (see, eg, J. March, pages 826-829, and references therein). ). Typically epoxidation can be carried out using a peracid, such as meta -chloroperbenzoic acid (MCPBA), or a mixture of peracid and an additional oxidizing agent, for example perchloric acid.

상기 방법 A 및 B의 출발 물질이 거울상 이성체들의 혼합물인 경우, 상기 방법들의 생성물은 전형적으로는 거울상 이성체들의 쌍, 예를 들어 라세미 혼합물(가능하게는 부분 입체 이성체 불순물과 함께)일 것이다. 불필요한 부분입체 이성체를 크로마토그래피(예를 들어 HPLC)와 같은 기법에 의해 제거할 수 있으며 개별적인 거울상 이성체들을 숙련된 화학자에게 공지된 다양한 방법에 의해 분리시킬 수 있다. 예를 들어, 이들을If the starting material of methods A and B is a mixture of enantiomers, the product of the methods will typically be a pair of enantiomers, for example a racemic mixture (possibly with diastereomeric impurities). Unnecessary diastereoisomers can be removed by techniques such as chromatography (eg HPLC) and the individual enantiomers can be separated by various methods known to the skilled chemist. For example,

(i) 키랄 크로마토그래피(키랄 지지체 상의 크로마토그래피); 또는(i) chiral chromatography (chromatography on chiral support); or

(ii) 광학적으로 순수한 키랄 산과의 염을 형성시키고, 2 개의 부분 입체 이성체의 염을 분별 결정에 의해 분리시키고 이어서 상기 염으로부터 디하이드로테트라베나진을 방출시키거나; 또는(ii) forming a salt with optically pure chiral acid, separating the salts of the two diastereoisomers by fractional crystals and then releasing dihydrotetrabenazine from the salts; or

(iii) 유도체(예를 들어 에스테르)를 광학적으로 순수한 키랄 유도체화제(예를 들어 에스테르화제)로 형성시키고, 생성된 에피머를 분리시키고(예를 들어 크로마토그래피에 의해), 이어서 상기 유도체를 디하이드로테트라베나진으로 전환시킴(iii) forming derivatives (e.g. esters) with optically pure chiral derivatization agents (e.g. esterification agents), separating the resulting epimers (e.g. by chromatography) and then derivatizing the derivatives. Convert to hydrotetrabenazine

으로써 분리시킬 수 있다.Can be separated.

공정 A 및 B 각각으로부터 수득된 거울상 이성체의 쌍을 분리시키는 하나의 방법이고,특히 효과적인 것으로 밝혀진 것은 상기 디하이드로테트라진의 하이드록실 그룹을 모셔 산(Mosher's acid)의 광학 활성 형태, 예를 들어 하기 나타낸 R(+) 이성체 또는 그의 활성 형태로 에스테르화시키는 것이다:One method of separating the pairs of enantiomers obtained from each of steps A and B, which has been found to be particularly effective, involves the hydroxyl group of the dihydrotetrazine, an optically active form of acid's, for example shown below. Esterification with the R (+) isomer or active form thereof:

Figure 112006064994282-PCT00011
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이어서 상기 디하이드로베나진의 2 개의 거울상 이성체의 생성된 에스테르를 크로마토그래피(예를 들어 HPLC)에 의해 분리시키고 상기 분리된 에스테르를 가수분해시켜 메탄올과 같은 극성 용매 중에서 알칼리 금속 수산화물(예를 들어 NaOH)과 같은 염기를 사용하여 개별적인 디하이드로베나진 이성체를 제공할 수 있다.The resulting esters of the two enantiomers of the dihydrobenazine are then separated by chromatography (eg HPLC) and the separated esters are hydrolyzed to give alkali metal hydroxides (eg NaOH) in a polar solvent such as methanol. Bases such as can be used to provide the individual dihydrobenazineazine isomers.

방법 A 및 B에서 출발 물질로서 거울상 이성체의 혼합물을 사용하고 이어서 후속적으로 거울상 이성체의 분리를 수행하는 것에 대한 대안으로서, 방법 A 및 B를 각각 단일 거울상 이성체 출발 물질상에서 수행하여 단일 거울상 이성체가 우세한 생성물을 생성시킬 수 있다. 알켄 II의 단일 거울상 이성체를, RR/SS 테트라베나진에 리튬 트리-2급-부틸 보로하이드라이드를 사용하는 입체선택적 환원을 가하여 디하이드로테트라베나진의 SRR 및 RSS 거울상 이성체들의 혼합물을 제공하고, 상기 거울상 이성체들을 분리시키고(예를 들어 분별 결정), 이어서 디하이드로테트라베나진의 분리된 단일 거울상 이성체를 탈수시켜 화학식 II 화합물의 단일 거울상 이성체를 우세하게 또는 독점적으로 제공함으로써 제조할 수 있다.As an alternative to using a mixture of enantiomers as starting materials in methods A and B and subsequently performing separation of the enantiomers, methods A and B are each performed on a single enantiomeric starting material to predominate the single enantiomer. The product can be produced. A single enantiomer of alkene II is subjected to stereoselective reduction using lithium tri-tert-butyl borohydride to RR / SS tetrabenazine to provide a mixture of SRR and RSS enantiomers of dihydrotetrabenazine, said It can be prepared by separating enantiomers (eg, fractional crystallization) and then dehydrating a separate single enantiomer of dihydrotetrabenazine to predominantly or exclusively provide a single enantiomer of the compound of formula II.

방법 A 및 B를 각각 하기 반응식 1 및 2에 보다 상세히 예시한다.Methods A and B are illustrated in more detail in Schemes 1 and 2, respectively.

Figure 112006064994282-PCT00012
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반응식 1은 2 및 3 번 위치에 결합된 수소 원자가 트랜스 상대 배향으로 배열된 2S,3S,11bR 및 2R,3R,11bS 배위를 갖는 개별적인 디하이드로테트라베나진 이성체의 제조를 예시한다. 이 반응식은 상기 정의된 방법 A를 포함한다.Scheme 1 illustrates the preparation of individual dihydro-tetra vena binary isomer having the hydrogen atom of trans arranged in a relative orientation 2 S, 3 S, 11b R and 2 R, 3 R, 11b S coordinate bond to the 2 and 3-position do. This scheme includes Method A as defined above.

반응식 1의 반응 시퀀스에 대한 출발 점은 테트라베나진의 RR 및 SS 광학 이 성체들의 라세미 혼합물인 상업적으로 입수할 수 있는 테트라베나진 IV이다. 상기 각각의 RR 및 SS 이성체에서, 3 및 11b 번 위치의 수소 원자들은 트랜스 상대 배향으로 배열된다. 상기 상업적으로 입수할 수 있는 화합물의 사용에 대한 대안으로서, 테트라베나진을 미국 특허 제 2,830,993 호(특히 실시예 11 참조)에 개시된 과정에 따라 합성할 수 있다.The starting point for the reaction sequence of Scheme 1 is the commercially available tetrabenazine IV, which is a racemic mixture of RR and SS optical isomers of tetrabenazine. In each of the above RR and SS isomers, the hydrogen atoms at positions 3 and 11b are arranged in a trans relative orientation. As an alternative to the use of such commercially available compounds, tetrabenazine can be synthesized according to the procedures disclosed in US Pat. No. 2,830,993 (see especially Example 11).

RR 및 SS 테트라베나진의 라세미 혼합물을 보로하이드라이드 환원제 리튬 트리-2급-부틸 보로하이드라이드("L-셀렉트라이드")를 사용하여 환원시켜 디하이드로테트라베나진의 공지된 2S,3R,11bR 및 2R,3S,11bS 이성체 V의 혼합물을 제공하며, 간략히 나타내기 위해 이중 단지 2S,3R,11bR 이성체만을 나타낸다. 보로하이드라이드 환원제로서 나트륨 보로하이드라이드보다는 더 입체장애가 큰 L-셀렉트라이드를 사용함으로써 상기 디하이드로테트라베나진의 RRR 및 SSS 이성체의 형성을 최소화 또는 억제시킨다.RR and SS tetrahydro vena spirit racemic mixture of the borohydride reducing agent lithium tri-sec-butyl borohydride ( "L- select fluoride") to the reduced by-dihydro-tetra vena spirit known 2 S using, 3 R, 11b R and 2 R, 3 S, 11b S provides a mixture of isomers V, dual only 2 S, 3 R, 11b R isomer shows only to indicate briefly. The use of L-selectide, which is more steric hindrance than sodium borohydride, as the borohydride reducing agent minimizes or inhibits the formation of the RRR and SSS isomers of the dihydrotetrabenazine.

상기 디하이드로테트라베나진 이성체 V를 비 양성자성 용매, 예를 들어 염소화된 탄화수소(예를 들어 클로로포름 또는 디클로로메탄, 바람직하게는 디클로로메탄) 중에서 오염화 인과 같은 탈수제와 반응시켜 거울상 이성체의 쌍으로서 불포화된 화합물 II를 형성시키며, 단지 이의 R-거울상 이성체만을 반응식에 나타낸다. 상기 탈수 반응을 전형적으로는 실온 미만의 온도, 예를 들어 약 0 내지 5 ℃에서 수행한다.The dihydrotetrabenazine isomer V is unsaturated as a pair of enantiomers by reaction with a dehydrating agent such as phosphorus contaminated in a non-protic solvent, for example chlorinated hydrocarbons (e.g. chloroform or dichloromethane, preferably dichloromethane). To form Compound II, only its R -enantiomer is shown in the scheme. The dehydration reaction is typically carried out at a temperature below room temperature, for example about 0-5 ° C.

이어서 상기 불포화된 화합물 II를 입체선택적으로 재 수화시켜 디하이드로테트라베나진 VI와 그의 거울상 또는 대장체(도시 안됨)를 생성시키며, 상기에서 3 및 11b 번 위치의 수소 원자는 시스 상대 배향으로 배열되고 2 및 3 번 위치의 수소 원자는 트랜스 상대 배향으로 배열된다. 상기 입체선택적인 재수화를 테트라하이드로푸란(THF) 중의 보란-THF를 사용하여 하이드로보레이션 과정에 의해 수행하여 중간체 보란 착체(도시 안됨)를 형성시키고 이어서 상기를 수산화 나트륨과 같은 염기의 존재 하에서 과산화 수소로 산화시킨다.The unsaturated compound II is then stereoselectively rehydrated to produce dihydrotetrabenazine VI and its mirror or colon (not shown) wherein the hydrogen atoms at positions 3 and 11b are arranged in cis relative orientation Hydrogen atoms at positions 2 and 3 are arranged in a trans relative orientation. The stereoselective rehydration is carried out by hydroboration using borane-THF in tetrahydrofuran (THF) to form an intermediate borane complex (not shown) which is then peroxidized in the presence of a base such as sodium hydroxide. Oxidize with hydrogen.

이어서 초기 정제 단계를 수행하여(예를 들어 HPLC에 의해) 2S,3S,11bR 및 2R,3R,11bS 이성체의 혼합물로서 상기 재수화 반응 시퀀스의 생성물 V를 제공할 수 있으며, 반응식에는 이중 단지 2S,3S,11bR 이성체만을 나타낸다. 상기 이성체들을 분리시키기 위해서, 상기 혼합물을 디클로로메탄 중의 염화 옥살릴 및 디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재 하에서 R(+) 모셔 산으로 처리하여 부분 입체 이성체 에스테르 VII의 쌍(이중 단지 하나의 부분 입체 이성체만을 나타냄)을 제공하고, 이어서 이를 HPLC에 의해 분리시킬 수 있다. 이어서 개별적인 에스테르들을 수산화 나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물을 사용하여 가수분해시켜 단일 이성체 VI를 제공할 수 있다.Followed by performing the initial purification step (e.g. by HPLC) 2 S, 3 S, 11b R and 2 R, may provide a product V of the rehydration reaction sequence as a mixture of 3 R, 11b S isomers, scheme is shown only dual only 2 S, 3 S, 11b R isomer. To separate the isomers, the mixture is treated with R (+) mosher acid in the presence of oxalyl chloride and dimethylaminopyridine (DMAP) in dichloromethane to form a pair of diastereomeric esters VII (only one diastereomer) Only), which can then be separated by HPLC. Individual esters can then be hydrolyzed using alkali metal hydroxides such as sodium hydroxide to provide a single isomer VI.

반응식 1에 나타낸 단계들의 시퀀스의 변화에서, RR/SS 테트라베나진의 환원에 이어, 디하이드로테트라베나진 V의 거울상 이성체들의 생성 혼합물을 분리시켜 개별적인 거울상 이성체를 수득할 수 있다. 분리는, 키랄 산, 예를 들어 (+) 또는 (-) 캄포설폰산과의 염을 형성시키고, 생성된 부분 입체 이성체들을 분별 결정에 의해 분리시켜 단일 거울상 이성체의 염을 제공하고 이어서 상기 염으로부터 유리 염기를 방출시킴으로써 수행할 수 있다.In a change in the sequence of steps shown in Scheme 1, following the reduction of RR / SS tetrabenazine, the resulting mixture of enantiomers of dihydrotetrabenazine V may be separated to yield individual enantiomers. Separation forms salts with chiral acids, such as (+) or (-) camphorsulfonic acid, and the resulting diastereoisomers are separated by fractional crystallization to provide salts of the single enantiomer and then free from the salts. This can be done by releasing the base.

상기 분리된 디하이드로테트라베나진 거울상 이성체를 탈수시켜 알켄 II의 단일 거울상 이성체를 제공할 수 있다. 이어서 상기 알켄 II의 후속적인 재수화로 시스 디하이드로테트라베나진 VI의 단일 거울상 이성체가 우세하게 또는 독점적으로 제공될 것이다. 상기 변형의 이점은 상기가 모셔 산 에스테르의 형성을 수반하지 않으며 따라서 모셔 산 에스테르의 분리에 전형적으로 사용되는 크로마토그래피 분리를 피한다는 것이다.The separated dihydrotetrabenazine enantiomer can be dehydrated to provide a single enantiomer of alkene II. Subsequent rehydration of the alkene II will then predominantly or exclusively provide a single enantiomer of cis dihydrotetrabenazine VI. The advantage of this modification is that it does not involve the formation of Mosher acid esters and thus avoids chromatographic separations typically used for separation of Mosher acid esters.

반응식 2는 2 및 3번 위치에 결합된 수소 원자가 시스 상대 배향으로 배열된 2R,3S,11bR 및 2S,3R,11bS 배위를 갖는 개별적인 디하이드로테트라베나진 이성체의 제조를 예시한다. 이 반응식은 상기 정의된 방법 B를 포함한다.Scheme 2 illustrates the preparation of individual dihydrotetrabenazine isomers in which the hydrogen atoms bonded to positions 2 and 3 have 2 R , 3 S , 11b R and 2 S , 3 R , 11b S configurations arranged in cis relative orientation. do. This scheme includes Method B as defined above.

Figure 112006064994282-PCT00013
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반응식 2에서, 테트라베나진을 환원시켜 디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bR 및 2R,3S,11bS 이성체 V를 제공하고 상기 반응식 1에 개시한 방식으로 PCl5 탈수시켜 불포화된 화합물 II를 생성시킨다. 그러나, 화합물 II에 하이드로 보레이션을 가하는 대신에, 2,3-이중 결합을 메타-클로로퍼벤조산(MCPBA) 및 과염소산과의 반응에 의해 에폭사이드로 전환시킨다. 상기 에폭시화 반응을 편의상 전형적으로는 대략 실온에서 메탄올과 같은 알콜 용매 중에서 수행한다.In Scheme 2, tetrabenazine is reduced to give 2S, 3R, 11bR and 2R, 3S, 11bS isomers of dihydrotetrabenazine and PCl 5 dehydration in the manner described in Scheme 1 above to yield unsaturated compound II. . However, instead of adding hydroboration to compound II, 2,3-double bonds are converted to epoxides by reaction with meta -chloroperbenzoic acid (MCPBA) and perchloric acid. The epoxidation reaction is conveniently carried out in an alcoholic solvent such as methanol, typically at room temperature.

이어서 상기 에폭사이드 VII에 대해 친전자성 환원제로서 보란-THF를 사용하여 환원적 개환을 수행하여 중간체 보란 착체(도시 안됨)를 제공하고 이어서 이를 산화시키고 수산화 나트륨과 같은 알칼리의 존재 하에서 과산화 수소로 절단시켜 2R,3S,11bR 및 2S,3R,11bS 이성체의 혼합물로서 디하이드로테트라베나진 VIII을 제공하며, 간략성을 위해서 이중 단지 2R,3S,11bR만을 나타낸다. 이성체 VIII의 혼합물을 디클로로메탄 중의 염화 옥살릴 및 디메틸아미노피리딘(DMAP)의 존재 하에서 R(+) 모셔 산으로 처리하여 에피머 에스테르 IX의 쌍(이중 단지 하나의 에피머만을 나타낸다)을 제공하며, 이어서 이를 반응식 1과 관련하여 상술한 방식으로 크로마토그래피에 의해 분리시키고 메탄올 중의 수산화 나트륨으로 가수분해시킬 수 있다.The epoxide VII was then subjected to reductive ring opening using borane-THF as an electrophilic reducing agent to give an intermediate borane complex (not shown) which was then oxidized and cleaved with hydrogen peroxide in the presence of an alkali such as sodium hydroxide. to 2 R, 3 S, 11b R and 2 S, 3 R, 11b S isomers as a mixture of tetra-dihydro provides vena Gene VIII, only dual R 2, represents only 3 S, 11b R for simplicity. The mixture of isomer VIII is treated with R (+) mosher acid in the presence of oxalyl chloride and dimethylaminopyridine (DMAP) in dichloromethane to give a pair of epimer esters IX (only one of which represents an epimer), It can then be separated by chromatography in the manner described above with respect to Scheme 1 and hydrolyzed with sodium hydroxide in methanol.

화학적 중간체 II 및 III은 신규의 것으로 여겨지며 본 발명의 추가의 태양을 나타낸다.Chemical intermediates II and III are considered novel and represent a further aspect of the invention.

생물학적 성질 및 치료학적 용도Biological Properties and Therapeutic Uses

테트라베나진은 뇌에서 소수포성 모노아민 전달체 VMAT2를 억제하고 시냅스 전 및 시냅스 후 도파민 수용체를 모두 억제함으로써 그의 치료 효과를 발휘한다.Tetrabenazine exerts its therapeutic effect by inhibiting the hydrophobic monoamine transporter VMAT2 in the brain and by inhibiting both presynaptic and postsynaptic dopamine receptors.

본 발명의 신규의 디하이드로테트라베나진 이성체는 또한 VMAT2의 억제제이며, 이성체 C 및 B는 가장 큰 정도의 억제를 생성시킨다. 테트라베나진과 마찬가 지로, 본 발명의 화합물들은 말초 조직 및 일부 내분비 세포에서 발견되는 VMAT 동형인 VMAT1에 대해 단지 낮은 친화성을 가지며, 이는 상기에 의해 상기 화합물이 레세르핀과 관련된 부작용을 생성시키지 않을 것임을 가리킨다. 화합물 C 및 B는 또한 카테콜 O-메틸 트랜스퍼라제(COMT), 모노아민 옥시다제 동형 A 및 B, 및 5-하이드록시트립타민 동형 1d 및 1b에 대해 억제 활성을 나타내지 않는다.The novel dihydrotetrabenazine isomers of the invention are also inhibitors of VMAT2, and isomers C and B produce the greatest degree of inhibition. Like tetrabenazine, the compounds of the present invention have only low affinity for VMAT1, a VMAT isoform found in peripheral tissues and some endocrine cells, which will not produce side effects associated with reserpin by this compound. Indicates that Compounds C and B also show no inhibitory activity against catechol O-methyl transferase (COMT), monoamine oxidase isoforms A and B, and 5-hydroxytrytamine isoforms 1d and 1b.

놀랍게도, 동형 C 및 B는 또한 이들이 VMAT2와의 결합에 매우 활성이지만, 상기 두 화합물 모두 단지 약하거나 존재하지 않는 도파민 수용체 결합 활성을 나타내고 도파민 전달체(DAT) 결합 활성은 없다는 점에서 VAMT2 및 도파민 수용체 활성의 현저한 분리를 보인다. 실제로, 상기 이성체들 중 어느 것도 현저한 DAT 결합 활성을 나타내지 않는다. 이는 상기 화합물들이 테트라베나진에 의해 생성되는 도파민 부작용이 없을 수 있음을 암시한다. 이성체 C 및 B는 또한 아드레날린 수용체의 억제제로서 약하게 활성이거나 불활성이며, 이는 상기 화합물들이, 테트라베나진이 종종 부닥치는 아드레날린 부작용이 없을 수 있음을 시사한다. 실제로, 래트 상에서 수행된 운동 연구에서, 테트라베나진은 용량 관련된 진정 효과를 나타낸 반면, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 이성체 B 및 C의 투여 후에 진정 효과는 관찰되지 않았다.Surprisingly, isoforms C and B are also highly active in binding to VMAT2, but both compounds exhibit only weak or non-existing dopamine receptor binding activity and do not have dopamine transporter (DAT) binding activity. There is a marked separation. Indeed, none of these isomers show significant DAT binding activity. This suggests that the compounds may be free of the dopamine side effects produced by tetrabenazine. Isomers C and B are also weakly active or inactive as inhibitors of the adrenergic receptor, suggesting that these compounds may be free of the adrenergic side effects often encountered with tetrabenazine. Indeed, in kinetic studies conducted on rats, tetrabenazine showed a dose related sedative effect, while no sedative effect was observed after administration of the dihydrotetrabenazine isomers B and C of the present invention.

더욱 또한, 이성체 C 및 이성체 B는 모두 세로토닌 전달체 단백질 SERT의 효능 있는 억제제이다. SERT의 억제는 플루옥세틴(Prozac(등록상표))과 같은 우울증 치료제가 그의 치료 효과를 발휘하는 하나의 기구이다. 따라서, SERT를 억제하는 이성체 C 및 B의 능력은 상기 이성체들이, 우울증이 널리 인식된 부작용인 테 트라베나진과 현저히 대조적으로, 우울증 치료제로서 작용할 수 있음을 가리킨다.Moreover, both isomer C and isomer B are potent inhibitors of serotonin transporter protein SERT. Inhibition of SERT is one mechanism by which antidepressants such as fluoxetine (Prozac®) exert their therapeutic effect. Thus, the ability of isomers C and B to inhibit SERT indicates that the isomers can act as antidepressants, in marked contrast to tetrabenazine, a widely recognized side effect of depression.

지금까지 수행된 연구들을 토대로, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물이, 현재 테트라베나진이 사용되거나 제안된 질병 상태 및 증상의 예방 또는 치료에 유용할 것으로 예견된다. 따라서, 예로서, 비 제한적으로, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물을 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱 장애, 지연운동 이상증, 디스토니아(dystonia) 및 뚜렛 증후군의 치료에 사용할 수 있다.Based on the studies conducted so far, it is envisaged that the dihydrotetrabenazine compounds of the present invention will be useful in the prevention or treatment of disease states and symptoms in which tetrabenazine is currently used or proposed. Thus, by way of example and not limitation, the dihydrotetrabenazine compounds of the present invention may be used to treat hypermotor movement disorders, such as Huntington's disease, anti- chorea, elderly chorea, tic disorders, dyskinesia, dystonia and It can be used to treat Tourette's syndrome.

또한 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물이 우울증의 치료에 유용할 수 있을 것으로 예견된다.It is also envisaged that the dihydrotetrabenazine compounds of the invention may be useful in the treatment of depression.

상기 화합물을 일반적으로는 상기와 같은 투여가 필요한 환자, 예를 들어 인간 또는 동물 환자, 바람직하게는 인간에게 투여할 것이다.The compound will generally be administered to a patient in need of such administration, for example a human or animal patient, preferably a human.

상기 화합물을 전형적으로는 치료학적으로 또는 예방학적으로 유용하고 일반적으로는 무독성인 양으로 투여할 것이다. 그러나, 일부 상황 하에서, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물을 투여하는 이점은 임의의 독성 효과 또는 부작용의 단점보다 가치가 있을 수 있으며, 이 경우 화합물을 독성 정도와 관련된 양으로 투여하는 것이 바람직한 것으로 간주될 수 있다.The compound will typically be administered in an amount that is therapeutically or prophylactically useful and generally non-toxic. However, under some circumstances, the benefit of administering the dihydrotetrabenazine compound of the present invention may be worth more than any toxic effect or disadvantage of side effects, in which case it is desirable to administer the compound in an amount related to the degree of toxicity. Can be considered.

상기 화합물의 전형적인 1일 용량은 체중 1킬로그램당 0.025 밀리그램 내지 5 밀리그램, 예를 들어 3 밀리그램 이하, 보다 전형적으로는 0.15 내지 5 밀리그램의 범위일 수 있지만, 필요에 따라 보다 많거나 보다 적은 용량을 투여할 수도 있다.Typical daily doses of the compounds may range from 0.025 milligrams to 5 milligrams, eg, 3 milligrams or less, more typically 0.15 to 5 milligrams per kilogram of body weight, although more or less doses may be administered as needed. You may.

예로서, 12.5 ㎎의 초기 출발 용량을 하루에 2 내지 3 회 투여할 수 있다. 상기 투여량을 의사에 의해 판단 시 개인에게 최대의 허용 및 유효 용량이 도달될 때까지 매 3 내지 5일마다 하루에 12.5 ㎎ 까지 증가시킬 수 있다. 최종적으로, 투여되는 화합물의 양은 치료되는 질병 또는 생리학적 증상의 성질, 및 치료 이점 및 제공된 투여 섭생에 의해 생성된 부작용의 존재 또는 부재에 상응할 것이며, 의사가 판단할 것이다.For example, an initial starting dose of 12.5 mg may be administered 2-3 times a day. The dosage may be increased by 12.5 mg per day every 3 to 5 days until the maximum acceptable and effective dose is reached in the individual as determined by the physician. Finally, the amount of compound administered will correspond to the nature of the disease or physiological condition being treated, and the presence or absence of the therapeutic benefit and side effects produced by the provided administration regimen, as will be determined by the physician.

약학 제형Pharmaceutical formulation

본 발명은 또한 이전에 정의한 바와 같은 디하이드로테트라베나진 화합물을 약학 조성물의 형태로 제공한다.The present invention also provides a dihydrotetrabenazine compound as previously defined in the form of a pharmaceutical composition.

상기 약학 조성물은 경구, 비 경구, 국소, 비강 내, 기관지 내, 눈, 귀, 직장, 질 내 또는 경피 투여에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 상기 조성물을 비 경구 투여하고자 하는 경우, 상기를 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 투여, 또는 주사, 주입 또는 다른 전달 수단에 의한 표적 기관 또는 조직 내로의 직접 투여를 위해 제형화할 수 있다.The pharmaceutical composition may be in any form suitable for oral, oral, topical, intranasal, bronchial, eye, ear, rectal, intravaginal or transdermal administration. If the composition is intended to be administered orally, it may be formulated for intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous administration or direct administration into a target organ or tissue by injection, infusion or other means of delivery.

경구 투여에 적합한 약학적 투여형으로는 정제, 캡슐, 캐플릿, 환제, 로젠지, 시럽, 용액, 스프레이, 분말, 과립, 엘릭시르(elixir) 및 현탁액, 설하 정제, 스프레이, 카세제 또는 패치 및 구강 패치가 있다.Pharmaceutical dosage forms suitable for oral administration include tablets, capsules, caplets, pills, lozenges, syrups, solutions, sprays, powders, granules, elixirs and suspensions, sublingual tablets, sprays, cachets or patches, and oral cavity There is a patch.

본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물을 함유하는 약학 조성물을 공지된 기법에 따라 제형화할 수 있다(예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA]을 참조하시오).Pharmaceutical compositions containing the dihydrotetrabenazine compounds of the present invention may be formulated according to known techniques (see, eg, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA).

따라서, 정제 조성물은 단위 투여량의 활성 화합물을 불활성 희석제 또는 담체, 예를 들어 당 또는 당 알콜, 예를 들어 락토오즈, 슈크로즈, 솔비톨 또는 만니톨; 및/또는 비 당 유도된 희석제, 예를 들어 탄산 나트륨, 인산 칼슘, 활석, 탄산 칼슘, 또는 셀룰로즈 또는 그의 유도체, 예를 들어 메틸 셀룰로즈, 에틸 셀룰로즈, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 및 전분, 예를 들어 옥수수 전분과 함께 함유할 수 있다. 정제는 또한 결합 및 과립화제와 같은 표준 성분들, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈, 붕해제(예를 들어 팽창성 가교결합된 중합체, 예를 들어 가교결합된 카복시메틸셀룰로즈), 윤활제(예를 들어 스테아레이트), 보존제(예를 들어 파라벤), 산화방지제(예를 들어 BHT), 완충제(예를 들어 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 및 발포제, 예를 들어 시트레이트/비카보네이트 혼합물을 함유할 수 있다. 상기와 같은 부형제들은 널리 공지되어 있으며 여기에서 상세히 논의할 필요는 없다.Thus, tablet compositions may contain unit doses of the active compound in an inert diluent or carrier, such as a sugar or sugar alcohol, such as lactose, sucrose, sorbitol or mannitol; And / or non-sugar derived diluents such as sodium carbonate, calcium phosphate, talc, calcium carbonate, or cellulose or derivatives thereof such as methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose and starch such as corn It can be contained together with starch. Tablets may also contain standard components such as binding and granulating agents, for example polyvinylpyrrolidone, disintegrants (eg expandable crosslinked polymers such as crosslinked carboxymethylcellulose), lubricants (eg Stearates), preservatives (e.g. parabens), antioxidants (e.g. BHT), buffers (e.g. phosphates or citrate buffers), and blowing agents, e.g. citrate / bicarbonate mixtures. . Such excipients are well known and need not be discussed in detail herein.

캡슐 제형은 다양한 경질 젤라틴 또는 연질 젤라틴의 것일 수 있으며 상기 활성 성분을 고체, 반 고체 또는 액체 형태로 함유할 수 있다. 젤라틴 캡슐을 동물 젤라틴 또는 그의 합성 또는 식물 기원의 등가물로부터 제조할 수 있다.Capsule formulations may be of various hard gelatins or soft gelatins and may contain the active ingredient in solid, semi-solid or liquid form. Gelatin capsules can be made from animal gelatin or equivalents of synthetic or plant origin thereof.

고체 투여형(예를 들어 정제, 캡슐 등)을 코팅시키거나 코팅시키지 않을 수 있지만, 전형적으로는 코팅층, 예를 들어 보호 필름 코팅층(예를 들어 왁스 또는 니스) 또는 방출 조절 코팅층이 있을 수 있다. 상기 코팅층(예를 들어 EudragitTM 유형 중합체)을 위장관 내부의 목적하는 위치에 상기 활성 성분을 방출하도록 구상 할 수 있다. 따라서, 상기 코팅층을 위장관 내의 특정 pH 조건 하에서 분해되도록 선택하여, 상기 화합물을 위 또는 회장 또는 십이지장에 선택적으로 방출시킨다.Solid dosage forms (eg tablets, capsules, etc.) may or may not be coated, but typically there may be a coating layer, such as a protective film coating layer (eg wax or varnish) or a release controlling coating layer. The coating layer (eg Eudragit ™ type polymer) can be envisioned to release the active ingredient at the desired location inside the gastrointestinal tract. Thus, the coating is chosen to degrade under certain pH conditions in the gastrointestinal tract, thereby selectively releasing the compound into the stomach or ileum or duodenum.

코팅층 대신에 또는 상기 이외에, 상기 약물을 방출 조절제, 예를 들어 위장관 중의 변화하는 산도 또는 알칼리도의 조건 하에서 상기 화합물을 선택적으로 방출시키기에 적합할 수 있는 방출 지연제를 포함하는 고체 기질 중의 것으로 제공할 수 있다. 한편으로, 상기 기질 물질 또는 방출 지연 코팅층은 부식성 중합체(예를 들어 말레산 무수물 중합체)의 형태를 취할 수 있으며, 상기 중합체는 상기 투여형이 위장관을 통과함에 따라 실질적으로 연속적으로 부식된다.Instead of or in addition to the coating layer, the drug may be provided in a solid substrate comprising a release modulator, for example a release retardant, which may be suitable for selectively releasing the compound under conditions of varying acidity or alkalinity in the gastrointestinal tract. Can be. On the one hand, the matrix material or release delay coating layer can take the form of a corrosive polymer (eg maleic anhydride polymer), the polymer corroding substantially continuously as the dosage form passes through the gastrointestinal tract.

국소용 조성물은 연고, 크림, 스프레이, 패치, 젤, 액체 점적제 및 삽입제(예를 들어 안 내 삽입제)를 포함한다. 상기와 같은 조성물을 공지된 방법에 따라 제형화할 수 있다.Topical compositions include ointments, creams, sprays, patches, gels, liquid drops and inserts (eg intraocular inserts). Such compositions can be formulated according to known methods.

비 경구 투여용 조성물을 전형적으로는 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 미세 현탁액으로서 제공하거나, 또는 주사용 멸균수와 함께 즉석에서 구성되는 미분된 멸균 분말 형태로 제공할 수 있다.Compositions for non-oral administration may typically be presented as sterile aqueous or oily solutions or microsuspensions, or in the form of finely divided sterile powders which are configured on the fly together with sterile water for injection.

직장 또는 질 내 투여용 제형의 예로는 페서리 및 좌약이 있으며, 상기를 예를 들어 활성 화합물을 함유하는 성형된 성형성 또는 왁스질 물질로부터 제조할 수 있다.Examples of formulations for rectal or vaginal administration include pessaries and suppositories, which may be prepared, for example, from shaped moldable or waxy materials containing the active compound.

흡입에 의한 투여 조성물은 흡입성 분말 조성물 또는 액체 또는 분말 스프레이의 형태를 취할 수 있으며 상기 조성물을 분말 흡입기 장치 또는 에어로졸 분배 장치를 사용하여 표준 형태로 투여할 수 있다. 상기와 같은 장치는 널리 공지되어 있다. 흡입에 의한 투여를 위해서, 상기 분말화된 제형은 전형적으로는 활성 화합물을 락토오즈와 같은 불활성 고체 분말화된 희석제와 함께 포함한다.Dosing by inhalation The composition may take the form of an inhalable powder composition or a liquid or powder spray and the composition may be administered in standard form using a powder inhaler device or an aerosol dispensing device. Such devices are well known. For administration by inhalation, the powdered formulation typically contains the active compound together with an inert solid powdered diluent such as lactose.

본 발명의 화합물을 일반적으로는 단위 투여형으로 제공할 것이며, 그 자체가 전형적으로는 목적하는 생물 활성 수준을 제공하기에 충분한 화합물을 함유할 것이다. 예를 들어 경구 투여용 제형은 2 내지 200 밀리그램, 보다 대개는 10 내지 100 밀리그램, 예를 들어 12.5 밀리그램, 25 밀리그램 및 50 밀리그램의 활성 성분을 함유할 수 있다.The compounds of the present invention will generally be presented in unit dosage form and will typically contain enough compounds to provide the desired level of biological activity. For example, formulations for oral administration may contain from 2 to 200 milligrams, more usually from 10 to 100 milligrams, for example 12.5 milligrams, 25 milligrams and 50 milligrams of active ingredient.

상기 활성 화합물을 치료가 필요한 환자(예를 들어 인간 또는 동물 환자)에게 목적하는 치료 효과를 성취하기에 충분한 양으로 투여할 것이다.The active compound will be administered to a patient in need thereof (eg a human or animal patient) in an amount sufficient to achieve the desired therapeutic effect.

하기의 비 제한적인 실시예들은 본 발명의 디하이드로테트라베나진 화합물의 합성 및 성질을 예시한다.The following non-limiting examples illustrate the synthesis and properties of the dihydrotetrabenazine compounds of the present invention.

실시예Example 1 One

디하이드로테트라베나진의Of dihydrotetrabenazine 2 2 SS ,3, 3 SS ,11, 11 bb RR 및 2 And 2 RR ,3, 3 RR ,11b, 11b SS 이성체의 제조 Preparation of Isomers

1A. 1A. RRRR /Of SSSS 테트라베나진의Tetrabenazine 환원 restoration

Figure 112006064994282-PCT00014
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테트라하이드로푸란(135 ㎖, 135 밀리몰, 2.87 당량) 중의 1M L-셀렉트라이드(등록상표)를 0 ℃에서 에탄올(75 ㎖) 및 테트라하이드로푸란(75 ㎖) 중의 테트라베나진 RR / SS 라세메이트(15 g, 47 밀리몰)의 교반된 용액에 30 분에 걸쳐 서서히 가하였다. 첨가를 완료한 후에, 상기 혼합물을 0 ℃에서 30 분간 교반하고 이어서 실온으로 가온시켰다.1M L-Selectide® in tetrahydrofuran (135 mL, 135 mmol, 2.87 equiv) was added to tetrabenazine RR / SS racemate (75 mL) in ethanol (75 mL) and tetrahydrofuran (75 mL) at 0 ° C. 15 g, 47 mmol) was added slowly over 30 minutes. After the addition was complete, the mixture was stirred at 0 ° C. for 30 minutes and then warmed to room temperature.

상기 혼합물을 분쇄된 얼음(300 g) 상에 붓고 물(100 ㎖)을 가하였다. 상기 용액을 디에틸 에테르(2 x 200 ㎖)로 추출하고 합한 에테르성 추출물을 물(100 ㎖)로 세척하고 무수 탄산 칼륨 상에서 부분적으로 건조시켰다. 건조를 무수 황산 마그네슘을 사용하여 완료시키고, 여과 후에, 용매를 감압 하에서 제거하여(빛을 차단시킴, 욕 온도 <20 ℃) 담황색 고체를 수득하였다.The mixture was poured onto crushed ice (300 g) and water (100 mL) was added. The solution was extracted with diethyl ether (2 x 200 mL) and the combined ethereal extracts were washed with water (100 mL) and partially dried over anhydrous potassium carbonate. Drying was completed with anhydrous magnesium sulfate and after filtration, the solvent was removed under reduced pressure (blocking light, bath temperature <20 ° C.) to give a pale yellow solid.

상기 고체를 석유 에테르(30-40 ℃)로 슬러리화하고 여과하여 백색 분말 고체(12 g, 80%)를 수득하였다.The solid was slurried with petroleum ether (30-40 ° C.) and filtered to give a white powdered solid (12 g, 80%).

1B. 환원된 1B. Reduced 테트라베나진의Tetrabenazine 탈수 dehydration

Figure 112006064994282-PCT00015
Figure 112006064994282-PCT00015

오염화 인(32.8 g, 157.5 밀리몰, 2.5 당량)을 0 ℃에서 디클로로메탄(200 ㎖) 중의 실시예 1A로부터의 환원된 테트라베나진 생성물(20 g, 62.7 밀리몰)의 교반된 용액에 30 분에 걸쳐 나누어 가하였다. 상기 첨가의 완료 후에, 반응 혼합물을 0 ℃에서 추가로 30 분 동안 교반하고 상기 용액을 분쇄된 얼음(0 ℃)을 함유하는 2M 탄산 나트륨 수용액에 서서히 부었다. 일단 초기 산 기체 발포가 멈추면, 상기 혼합물을 고체 탄산 나트륨을 사용하여 염기성으로 만들었다(약 pH 12).Phosphorus pentachloride (32.8 g, 157.5 mmol, 2.5 equiv) was added to a stirred solution of reduced tetrabenazine product (20 g, 62.7 mmol) from Example 1A in dichloromethane (200 mL) at 0 ° C. in 30 min. Divided over. After completion of the addition, the reaction mixture was stirred for an additional 30 minutes at 0 ° C. and the solution was slowly poured into a 2M aqueous sodium carbonate solution containing crushed ice (0 ° C.). Once the initial acid gas foaming had stopped, the mixture was made basic with solid sodium carbonate (about pH 12).

상기 알칼리성 용액을 에틸 아세테이트(800 ㎖)를 사용하여 추출하고 합한 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시켰다. 여과 후에 상기 용매를 감압 하에서 제거하여 갈색 오일을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 황색 고체로서 반 순수한 알켄(10.87 g, 58%)을 수득하였다.The alkaline solution was extracted with ethyl acetate (800 mL) and the combined organic extracts were dried over anhydrous magnesium sulfate. After filtration the solvent was removed under reduced pressure to give a brown oil which was purified by column chromatography (silica, ethyl acetate) to give semi pure alkene (10.87 g, 58%) as a yellow solid.

1C. 1C. 실시예Example 1B로부터의 조  Joe from 1B 알켄의Alken 수화 Sign Language

Figure 112006064994282-PCT00016
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실온에서 무수 THF(52 ㎖) 중의 실시예 1B로부터의 조 알켄(crude alkene,10.87 g, 36.11 밀리몰) 용액을 적가 방식으로 첨가된 1M 보란-THF(155.6 ㎖, 155.6 밀리몰, 4.30 당량)로 처리하였다. 상기 반응물을 2 시간 동안 교반하고, 물(20 ㎖)을 가하고 상기 용액을 30% 수산화 나트륨 수용액으로 pH 12로 염기성으로 만들었다.A crude alkene (10.87 g, 36.11 mmol) solution from Example 1B in dry THF (52 mL) was treated with 1M borane-THF (155.6 mL, 155.6 mmol, 4.30 equiv) added dropwise. . The reaction was stirred for 2 hours, water (20 mL) was added and the solution was made basic to pH 12 with 30% aqueous sodium hydroxide solution.

30% 과산화 수소 수용액(30 ㎖)을 상기 교반된 알칼리성 반응 혼합물에 가하고 상기 용액을 1 시간 동안 가열 환류시킨 후에 냉각시켰다. 물(100 ㎖)을 가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 250 ㎖)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과 후에 용매를 감압 하에서 제거하여 황색 오일(9 g)을 수득하였다.30% aqueous hydrogen peroxide solution (30 mL) was added to the stirred alkaline reaction mixture and the solution was heated to reflux for 1 hour and then cooled. Water (100 mL) was added and the mixture was extracted with ethyl acetate (3 x 250 mL). The organic extracts were combined and dried over anhydrous magnesium sulfate and after filtration the solvent was removed under reduced pressure to give a yellow oil (9 g).

상기 오일을 예비 HPLC(컬럼: Lichrospher Si60, 5 ㎛, 250 x 21.20 ㎜, 이동 상: 헥산:에탄올:디클로로메탄(85:15:5); UV 254 ㎚, 유속: 10 ㎖/분)를 사용하 여 주입 당 350 ㎎으로 정제한 다음 진공 하에서 관심 분획을 농축시켰다. 이어서 상기 생성물 오일을 에테르에 용해시키고 진공 하에서 1 회 더 농축시켜 황색 폼으로서 상기 나타낸 디하이드로테트라베나진 라세메이트(5.76 g, 50%)를 제공하였다.The oil was purified using preparative HPLC (column: Lichrospher Si60, 5 μm, 250 × 21.20 mm, mobile phase: hexanes: ethanol: dichloromethane (85: 15: 5); UV 254 nm, flow rate: 10 ml / min) Purification to 350 mg per injection and then concentrated the fraction of interest under vacuum. The product oil was then dissolved in ether and concentrated once more in vacuo to give the dihydrotetrabenazine racemate (5.76 g, 50%) indicated above as a yellow foam.

1D. 1D. 모셔의Mosher 에스테르 유도체의 제조 Preparation of Ester Derivatives

Figure 112006064994282-PCT00017
Figure 112006064994282-PCT00017

R-(+)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐 아세트산(5 g, 21.35 밀리몰), 염화 옥살릴(2.02 ㎖) 및 DMF(0.16 ㎖)를 무수 디클로로메탄(50 ㎖)에 가하고 상기 용액을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 상기 용액을 감압 하에서 농축시키고 잔사를 무수 디클로로메탄(50 ㎖)에 한번 더 용해시켰다. 생성 용액을 빙수 욕을 사용하여 냉각시키고 디메틸아미노피리딘(3.83 g, 31.34 밀리몰)을 가한 다음 실시예 1C의 고체 생성물(5 g, 15.6 밀리몰)의 무수 디클로로메탄 중의 예비 건조된 용액(4Å 체 상에서)을 가하였다. 실온에서 45 분간 교반한 후에, 물(234 ㎖)을 가하고 상기 혼합물을 에테르(2 x 200 ㎖)로 추출하였다. 상기 에테르 추출물을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 실리카 패드에 통과시키고 생성물을 에테르를 사용하여 용출시켰다.R-(+)-α-methoxy-α-trifluoromethylphenyl acetic acid (5 g, 21.35 mmol), oxalyl chloride (2.02 mL) and DMF (0.16 mL) were added to anhydrous dichloromethane (50 mL) and The solution was stirred at rt for 45 min. The solution was concentrated under reduced pressure and the residue was dissolved once more in anhydrous dichloromethane (50 mL). The resulting solution was cooled using an ice water bath and dimethylaminopyridine (3.83 g, 31.34 mmol) was added followed by a pre-dried solution of solid product (5 g, 15.6 mmol) in anhydrous dichloromethane (on 4 메탄 sieve) of Example 1C. Was added. After stirring for 45 min at room temperature, water (234 mL) was added and the mixture was extracted with ether (2 x 200 mL). The ether extract was dried over anhydrous magnesium sulfate, passed through a pad of silica and the product eluted with ether.

상기 수거된 에테르 용출물을 감압 하에서 농축시켜 오일을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 헥산:에테르(10:1))를 사용하여 정제시켰다. 상기 수거된 관심 컬럼 분획을 증발시키고 감압 하에서 용매를 제거하여 고체를 제공하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 헥산:에틸 아세테이트(1:1))를 사용하여 추가로 정제시켜 3 개의 주성분을 제공하고 이를 모셔의 에스테르(Mosher's ester) 피크 1 및 2로 부분적으로 분리시켰다.The collected ether eluate was concentrated under reduced pressure to give an oil which was purified using column chromatography (silica, hexanes: ether (10: 1)). The collected column fractions of interest were evaporated and the solvent was removed under reduced pressure to give a solid which was further purified using column chromatography (silica, hexanes: ethyl acetate (1: 1)) to give three main components This was partially separated by Mosher's ester peaks 1 and 2.

상기 3 개 성분을 300 ㎎ 로딩 하에 예비 HPLC(컬럼: 2 x Lichrospher Si60, 5 ㎛, 250 x 21.20 ㎜, 이동 상: 헥산:이소프로판올(97:3), UV 254 ㎚; 유속: 10 ㎖/분)시킨 다음 진공 하에서 관심 분획을 농축시켜 순수한 모셔의 에스테르 유도체를 제공하였다.Preparative HPLC (Column: 2 × Lichrospher Si60, 5 μm, 250 × 21.20 mm, Mobile Phase: Hexane: Isopropanol (97: 3), UV 254 nm; Flow rate: 10 mL / min) under 300 mg loading of the three components The fraction of interest was then concentrated in vacuo to give an ester derivative of pure Mosher.

피크 1(3.89 g, 46.5%)Peak 1 (3.89 g, 46.5%)

피크 2(2.78 g, 33%)Peak 2 (2.78 g, 33%)

상기 2 개의 피크에 상응하는 분획들을 가수분해시켜 이성체 A 및 B로서 확인되고 특성화된 개별적인 디하이드로테트라베나진 이성체를 유리시켰다. 이성체 A 및 B는 각각 하기의 구조들 중 하나를 갖는 것으로 여겨진다.Fractions corresponding to the two peaks were hydrolyzed to liberate the individual dihydrotetrabenazine isomers identified and characterized as Isomers A and B. Isomers A and B are each considered to have one of the following structures.

Figure 112006064994282-PCT00018
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1E. 피크 1을 가수분해시켜 이성체 A를 제공함1E. Hydrolyze Peak 1 to Provide Isomer A

20% 수산화 나트륨 수용액(87.5 ㎖)을 메탄올(260 ㎖) 중의 모셔의 에스테르 피크 1(3.89 g, 7.27 밀리몰) 용액에 가하고 상기 혼합물을 교반하고 150 분 동안 가열 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에 물(200 ㎖)을 가하고 상기 용액을 에테르(600 ㎖)로 추출하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에 감압 하에서 농축시켰다.20% aqueous sodium hydroxide solution (87.5 ml) was added to a solution of Mosher's ester peak 1 (3.89 g, 7.27 mmol) in methanol (260 ml) and the mixture was stirred and heated to reflux for 150 minutes. After cooling to room temperature water (200 mL) was added and the solution was extracted with ether (600 mL), dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure after filtration.

잔사를 에틸 아세테이트(200 ㎖)를 사용하여 용해시키고, 상기 용액을 물(2 x 50 ㎖)로 세척하고, 유기상을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 감압 하에서 농축시켜 황색 폼을 수득하였다. 상기 물질을 컬럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트:헥산(1:1)에서 에틸 아세테이트로의 기울기 용리)에 의해 정제시켰다. 관심 분획들을 합하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 에테르에 용해시키고 용매를 감압 하에서 1 회 더 제거하여 회색 폼(1.1 g, 47%)으로서 이성체 A를 수득하였다.The residue was dissolved using ethyl acetate (200 mL) and the solution was washed with water (2 x 50 mL) and the organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give a yellow foam. The material was purified by column chromatography (silica, ethyl acetate: hexanes (1: 1) gradient elution to ethyl acetate). Fractions of interest were combined and the solvent was removed under reduced pressure. The residue was dissolved in ether and the solvent was removed once more under reduced pressure to give Isomer A as a gray foam (1.1 g, 47%).

2S,3S,11bR 또는 2R,3R,11bS 배위(절대 입체 화학은 측정하지 않았다) 중 어느 하나를 갖는 것으로 여겨지는 이성체 A를 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분광측정, 키랄 HPLC 및 ORD에 의해 특성화하였다. 이성체 A에 대한 IR, NMR 및 MS 데이터를 표 1에 나타내며, 키랄 HPLC 및 ORD 데이터를 표 3에 나타낸다.2 S, 3 S, 11b R or 2 R, 3 R, 11b S coordinated to the isomer A is considered to have any one of (the absolute stereochemistry was not determined) 1 H-NMR, 13 C -NMR, IR, Characterized by mass spectrometry, chiral HPLC and ORD. IR, NMR and MS data for isomer A are shown in Table 1 and chiral HPLC and ORD data are shown in Table 3.

1F. 피크 2를 가수분해시켜 이성체 B를 제공함1F. Hydrolyze Peak 2 to Provide Isomer B

20% 수산화 나트륨 수용액(62.5 ㎖)을 메탄올(185 ㎖) 중의 모셔의 에스테르 피크 2(2.78 g, 5.19 밀리몰) 용액에 가하고 상기 혼합물을 교반하고 150 분 동안 가열 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에 물(142 ㎖)을 가하고 상기 용액을 에테르(440 ㎖)로 추출하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에 감압 하에서 농축시켰다.A 20% aqueous sodium hydroxide solution (62.5 mL) was added to a solution of Mosher's ester peak 2 (2.78 g, 5.19 mmol) in methanol (185 mL) and the mixture was stirred and heated to reflux for 150 minutes. After cooling to room temperature water (142 mL) was added and the solution was extracted with ether (440 mL), dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure after filtration.

잔사를 에틸 아세테이트(200 ㎖)를 사용하여 용해시키고, 상기 용액을 물(2 x 50 ㎖)로 세척하고, 유기상을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 감압 하에서 농축시켰다. 석유 에테르(30-40 ℃)를 잔사에 가하고 상기 용액을 진공 하에서 1 회 더 농축시켜 백색 폼(1.34 g, 81%)으로서 이성체 B를 수득하였다.The residue was dissolved using ethyl acetate (200 mL) and the solution was washed with water (2 × 50 mL) and the organic phase was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. Petroleum ether (30-40 ° C.) was added to the residue and the solution was once more concentrated in vacuo to give Isomer B as a white foam (1.34 g, 81%).

2S,3S,11bR 또는 2R,3R,11bS 배위(절대 입체 화학은 측정하지 않았다) 중 어느 하나를 갖는 것으로 여겨지는 이성체 B를 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분광측정, 키랄 HPLC 및 ORD에 의해 특성화하였다. 이성체 B에 대한 IR, NMR 및 MS 데이터를 표 1에 나타내며, 키랄 HPLC 및 ORD 데이터를 표 3에 나타낸다.2 S, 3 S, 11b R or 2 R, 3 R, 11b S coordinate (the absolute did stereochemistry not determined) to the isomer B is considered to have either a 1 H-NMR, 13 C- NMR, IR, Characterized by mass spectrometry, chiral HPLC and ORD. IR, NMR and MS data for isomer B are shown in Table 1 and chiral HPLC and ORD data are shown in Table 3.

실시예Example 2 2

디하이드로테트라베나진의Of dihydrotetrabenazine 2 2 RR ,3, 3 SS ,11, 11 bb RR 및 2 And 2 SS ,3, 3 RR ,11, 11 bb SS 이성체의 제조 Preparation of Isomers

2A. 2,3-2A. 2,3- 데하이드로테트라베나진의Dehydrotetrabenazine 제조 Produce

테트라하이드로푸란 중의 RR 및 SS 테트라베나진 거울상 이성체의 라세미 혼합물(15 g, 47 밀리몰)을 함유하는 용액을 실시예 1A의 방법에 의해 L-셀렉트라이드(등록상표)로 환원시켜 백색 분말 고체(12 g, 80%)로서 디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bR 및 2R,3S,11bS 거울상 이성체의 혼합물을 제공하였다. 이어서 상 기 부분적으로 정제된 디하이드로테트라베나진을 실시예 1B의 방법에 따라 PCl5를 사용하여 탈수시켜 황색 고체(12.92 g, 68%)로서 2,3-데하이드로테트라베나진의 11bR 및 11bS 이성체의 반 순수한 혼합물(하기에 나타낸 11bR 거울상 이성체)을 제공하였다.A solution containing a racemic mixture (15 g, 47 mmol) of RR and SS tetrabenazine enantiomers in tetrahydrofuran was reduced to L-selectide® by the method of Example 1A to obtain a white powder solid ( 12 g, was as 80%) provided a mixture of tetra-dihydro vena Qin 2 S, 3 R, 11b R and 2 R, 3 S, 11b S enantiomers. The partially purified dihydrotetrabenazine was then dehydrated using PCl 5 according to the method of Example 1B to give 11b R and 11b of 2,3-dehydrotetrabenazine as a yellow solid (12.92 g, 68%). A semi pure mixture of S isomers (11b R enantiomer shown below) was provided.

Figure 112006064994282-PCT00019
Figure 112006064994282-PCT00019

2B. 2B. 실시예Example 2A로부터의 조  Joe from 2A 알켄의Alken 에폭시화Epoxidation

Figure 112006064994282-PCT00020
Figure 112006064994282-PCT00020

메탄올(215 ㎖) 중의 실시예 2A(12.92 g, 42.9 밀리몰)로부터의 조 알켄의 교반된 용액에 메탄올(215 ㎖) 중의 70% 과염소산(3.70 ㎖, 43 밀리몰) 용액을 가하였다. 77% 3-클로로퍼옥시벤조산(15.50 g, 65 밀리몰)을 상기 반응물에 가하고 생성 혼합물을 실온에서 빛을 차단하여 18 시간 동안 교반하였다.To a stirred solution of crude alkene from Example 2A (12.92 g, 42.9 mmol) in methanol (215 mL) was added a 70% perchloric acid (3.70 mL, 43 mmol) solution in methanol (215 mL). 77% 3-chloroperoxybenzoic acid (15.50 g, 65 mmol) was added to the reaction and the resulting mixture was stirred for 18 hours, blocking light at room temperature.

상기 반응 혼합물을 포화된 아황산 나트륨 수용액(200 ㎖)에 붓고 물(200 ㎖)을 가하였다. 클로로포름(300 ㎖)을 생성 유화액에 가하고 상기 혼합물을 포화된 수성 중탄산 나트륨(400 ㎖)으로 염기성으로 만들었다.The reaction mixture was poured into saturated aqueous sodium sulfite solution (200 mL) and water (200 mL) was added. Chloroform (300 mL) was added to the resulting emulsion and the mixture was basified with saturated aqueous sodium bicarbonate (400 mL).

유기층을 수거하고 수성 상을 추가의 클로로포름(2 x 150 ㎖)으로 세척하였다. 합한 클로로포름 층을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 용매를 감압 하에서 제거하여 갈색 오일을 제공하였다(14.35 g, 수율 > 100% - 추정 상 용매가 생성물 중에 남아있다). 상기 물질을 추가의 정제 없이 사용하였다.The organic layer was collected and the aqueous phase was washed with additional chloroform (2 x 150 mL). The combined chloroform layers were dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered before the solvent was removed under reduced pressure to give a brown oil (14.35 g, yield> 100%-presumed solvent remained in the product). The material was used without further purification.

2C. 2B로부터의 2C. From 2B 에폭사이드의Epoxide 환원적Reductive 개환 Ring opening

Figure 112006064994282-PCT00021
Figure 112006064994282-PCT00021

무수 THF(80 ㎖) 중의 실시예 2B로부터의 조 에폭사이드(14.35 g, 42.9 밀리몰, 100% 수율로 추정됨)의 교반된 용액을 15 분에 걸쳐 1M 보란/THF(184.6 ㎖, 184.6 밀리몰)로 서서히 처리하였다. 상기 반응물을 2 시간 동안 교반하고, 물(65 ㎖)을 가하고 상기 용액을 30 분 동안 교반하면서 가열 환류시켰다.A stirred solution of crude epoxide (14.35 g, 42.9 mmol, estimated 100% yield) from Example 2B in dry THF (80 mL) was added to 1M borane / THF (184.6 mL, 184.6 mmol) over 15 minutes. Treatment was slow. The reaction was stirred for 2 hours, water (65 mL) was added and the solution was heated to reflux with stirring for 30 minutes.

냉각 후에, 30% 수산화 나트륨 용액(97 ㎖)을 반응 혼합물에 가한 다음 30% 과산화 수소 용액(48.6 ㎖)을 가하고 반응물을 추가로 1 시간 동안 교반하고 가열 환류시켰다.After cooling, 30% sodium hydroxide solution (97 mL) was added to the reaction mixture followed by 30% hydrogen peroxide solution (48.6 mL) and the reaction was stirred for an additional hour and heated to reflux.

상기 냉각된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(500 ㎖)로 추출하고 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 용매를 감압 하에서 제거하여 오일을 제공하였다. 헥산(230 ㎖)을 상기 오일에 가하고 상기 용액을 감압 하에서 재 농축시켰다.The cooled reaction mixture was extracted with ethyl acetate (500 mL), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and the solvent removed under reduced pressure to give an oil. Hexane (230 mL) was added to the oil and the solution was reconcentrated under reduced pressure.

상기 유질 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켰다. 관심 분획들을 합하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 상기 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 구배, 헥산에서 에테르)를 사용하여 1 회 더 정제시켰다. 관심 분획들을 합하고 용매를 감압 하에서 증발시켜 담황색 고체(5.18 g, 38%)를 제공하였다.The oily residue was purified by column chromatography (silica, ethyl acetate). Fractions of interest were combined and the solvent was removed under reduced pressure. The residue was purified once more using column chromatography (silica, gradient, ether in hexanes). Fractions of interest were combined and the solvent was evaporated under reduced pressure to give a pale yellow solid (5.18 g, 38%).

2D. 디하이드로테트라베나진의 2 R ,3 S ,11 b R 및 2 S ,3 R ,11 b S 이성체의 모셔의 에스테르 유도체의 제조 D. 2-dihydro-tetra vena Qin 2 R, 3 S, 11 b R And 2 Preparation of S, 3 R, 11 b S-isomer of the ester derivatives of the escort

Figure 112006064994282-PCT00022
Figure 112006064994282-PCT00022

R-(+)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐 아세트산(4.68 g, 19.98 밀리몰), 염화 옥사릴(1.90 ㎖) 및 DMF(0.13 ㎖)를 무수 디클로로메탄(46 ㎖)에 가하고 상기 용액을 실온에서 45 분 동안 교반하였다. 상기 용액을 감압 하에서 농축시키고 잔사를 무수 디클로로메탄(40 ㎖)에 한번 더 용해시켰다. 생성 용액을 빙수 욕을 사용하여 냉각시키고 디메틸아미노피리딘(3.65 g, 29.87 밀리몰)을 가한 다음 실시예 2C의 고체 생성물(4.68 g, 14.6 밀리몰)의 무수 디클로로메탄(20 ㎖) 중의 예비 건조된 용액(4Å 체 상에서)을 가하였다. 실온에서 45 분간 교반한 후에, 물(234 ㎖)을 가하고 상기 혼합물을 에테르(2 x 200 ㎖)로 추출하였다. 상기 에테르 추출물을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 실리카 패드에 통과시키고 생성물을 에테르를 사용하여 용출시켰다.R-(+)-α-methoxy-α-trifluoromethylphenyl acetic acid (4.68 g, 19.98 mmol), oxaryl chloride (1.90 mL) and DMF (0.13 mL) were added to anhydrous dichloromethane (46 mL) and The solution was stirred at rt for 45 min. The solution was concentrated under reduced pressure and the residue was dissolved once more in anhydrous dichloromethane (40 mL). The resulting solution was cooled using an ice water bath and dimethylaminopyridine (3.65 g, 29.87 mmol) was added followed by a pre-dried solution of solid product (4.68 g, 14.6 mmol) in anhydrous dichloromethane (20 mL) of Example 2C ( On a 4 mm sieve). After stirring for 45 min at room temperature, water (234 mL) was added and the mixture was extracted with ether (2 x 200 mL). The ether extract was dried over anhydrous magnesium sulfate, passed through a pad of silica and the product eluted with ether.

상기 수거된 에테르 용출물을 감압 하에서 농축시켜 오일을 수득하고 이를 컬럼 크로마토그래피(실리카, 헥산:에테르(1:1))를 사용하여 정제시켰다. 상기 수거된 관심 컬럼 분획을 증발시키고 감압 하에서 용매를 제거하여 분홍색 고체(6.53 g)를 제공하였다.The collected ether eluate was concentrated under reduced pressure to give an oil which was purified using column chromatography (silica, hexane: ether (1: 1)). The collected column fractions of interest were evaporated and the solvent was removed under reduced pressure to give a pink solid (6.53 g).

상기 고체를 100 ㎎ 로딩 하에 예비 HPLC(컬럼: 2 x Lichrospher Si60, 5 ㎛, 250 x 21.20 ㎜; 이동상: 헥산:이소프로판올(97:3); UV 254 ㎚; 유속: 10 ㎖/분)시킨 다음 진공 하에서 관심 분획을 농축시켜 고체를 제공하고 이를 석유 에테르(30-40 ℃)로 슬러리화하고 여과에 의해 수거하여 순수한 모셔의 에스테르 유도체를 제공하였다.The solid was subjected to preparative HPLC (column: 2 × Lichrospher Si60, 5 μm, 250 × 21.20 mm; mobile phase: hexanes: isopropanol (97: 3); UV 254 nm; flow rate: 10 mL / min) under 100 mg loading and vacuum The fraction of interest was concentrated under to give a solid which was slurried with petroleum ether (30-40 ° C.) and collected by filtration to give the ester derivative of pure Mosher.

피크 1(2.37 g, 30%)Peak 1 (2.37 g, 30%)

피크 2(2.42 g, 30%)Peak 2 (2.42 g, 30%)

상기 2 개의 피크에 상응하는 분획들을 가수분해시켜 이성체 C 및 D로서 확인되고 특성화된 개별적인 디하이드로테트라베나진 이성체를 유리시켰다. 이성체 C 및 D는 각각 하기의 구조들 중 하나를 갖는 것으로 여겨진다.Fractions corresponding to the two peaks were hydrolyzed to free individual dihydrotetrabenazine isomers identified and characterized as Isomers C and D. Isomers C and D are each considered to have one of the following structures.

Figure 112006064994282-PCT00023
Figure 112006064994282-PCT00023

2F. 피크 1을 가수분해시켜 이성체 C를 제공함2F. Hydrolyze Peak 1 to Provide Isomer C

20% 수산화 나트륨 수용액(53 ㎖)을 메탄올(158 ㎖) 중의 모셔의 에스테르 피크 1(2.37 g, 4.43 밀리몰)의 교반된 용액에 가하고 상기 혼합물을 150 분 동안 환류 하에서 교반하였다. 냉각 후에 상기 반응 혼합물에 물(88 ㎖)을 가하고 생성 용액을 에테르(576 ㎖)로 추출하였다. 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에 용매를 감압 하에서 제거하였다. 에틸 아세테이트(200 ㎖)를 상기 잔사에 가하고 상기 용액을 물(2 x 50 ㎖)로 세척하였다. 유기 용액을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 용매를 감압 하에서 제거하였다.A 20% aqueous sodium hydroxide solution (53 mL) was added to a stirred solution of Mosher's ester peak 1 (2.37 g, 4.43 mmol) in methanol (158 mL) and the mixture was stirred at reflux for 150 minutes. After cooling water (88 mL) was added to the reaction mixture and the resulting solution was extracted with ether (576 mL). The organic extract was dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent was removed under reduced pressure after filtration. Ethyl acetate (200 mL) was added to the residue and the solution was washed with water (2 x 50 mL). The organic solution was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered and the solvent removed under reduced pressure.

상기 잔사를 석유 에테르(30-40 ℃)로 처리하고 생성된 현탁된 고체를 여과에 의해 수거하였다. 상기 여액을 감압 하에서 농축시키고, 현탁된 고체의 두 번째 배치를 여과에 의해 수거하였다. 상기 두 수거된 고체를 모두 합하고 감압 하에서 건조시켜 이성체 C(1.0 g, 70%)를 수득하였다.The residue was treated with petroleum ether (30-40 ° C.) and the resulting suspended solids were collected by filtration. The filtrate was concentrated under reduced pressure and a second batch of suspended solids was collected by filtration. Both of the collected solids were combined and dried under reduced pressure to give Isomer C (1.0 g, 70%).

2R,3S,11bR 또는 2S,3R,11bS 배위(절대 입체 화학은 측정하지 않았다) 중 어느 하나를 갖는 것으로 여겨지는 이성체 C를 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분광측정, 키랄 HPLC 및 ORD에 의해 특성화하였다. 이성체 C에 대한 IR, NMR 및 MS 데이터를 표 2에 나타내며, 키랄 HPLC 및 ORD 데이터를 표 4에 나타낸다.2 R, 3 S, 11b R or 2 S, 3 R, 11b S coordinate (the absolute did stereochemistry not determined) to the isomer C is considered to have either a 1 H-NMR, 13 C- NMR, IR, Characterized by mass spectrometry, chiral HPLC and ORD. IR, NMR and MS data for isomer C are shown in Table 2 and chiral HPLC and ORD data are shown in Table 4.

2G. 피크 2를 가수분해시켜 이성체 D를 제공함2G. Hydrolyze Peak 2 to Provide Isomer D

20% 수산화 나트륨 수용액(53 ㎖)을 메탄올(158 ㎖) 중의 모셔의 에스테르 피크 2(2.42 g, 4.52 밀리몰)의 교반된 용액에 가하고 상기 혼합물을 교반하고 150 분 동안 환류 하에서 교반하였다. 냉각 후에 상기 반응 혼합물에 물(88 ㎖)을 가하고 생성 용액을 에테르(576 ㎖)로 추출하였다. 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후에 용매를 감압 하에서 제거하였다. 에틸 아세테이트(200 ㎖)를 상기 잔사에 가하고 상기 용액을 물(2 x 50 ㎖)로 세척하였다. 유기 용액을 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 여과시킨 후에 용매를 감압 하에서 제거하였다.20% aqueous sodium hydroxide solution (53 mL) was added to a stirred solution of Mosher's ester peak 2 (2.42 g, 4.52 mmol) in methanol (158 mL) and the mixture was stirred and stirred under reflux for 150 minutes. After cooling water (88 mL) was added to the reaction mixture and the resulting solution was extracted with ether (576 mL). The organic extract was dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent was removed under reduced pressure after filtration. Ethyl acetate (200 mL) was added to the residue and the solution was washed with water (2 x 50 mL). The organic solution was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered and the solvent removed under reduced pressure.

상기 잔사를 석유 에테르(30-40 ℃)로 처리하고 생성된 현탁된 오렌지색 고체를 여과에 의해 수거하였다. 상기 고체를 에틸 아세테이트:헥산(15:85)에 용해시키고 컬럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트:헥산(15:85)에서 에틸 아세테이트로의 구배)에 의해 정제시켰다. 관심 분획들을 합하고 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 석유 에테르(30-40 ℃)로 슬러리화시키고 생성 현탁액을 여과에 의해 수거하였다. 상기 수거된 고체를 감압 하에서 건조시켜 백색 고체(0.93 g, 64%)로서 이성체 D를 제공하였다.The residue was treated with petroleum ether (30-40 ° C.) and the resulting suspended orange solid was collected by filtration. The solid was dissolved in ethyl acetate: hexanes (15:85) and purified by column chromatography (silica, ethyl acetate: hexanes (15:85) to ethyl acetate). Fractions of interest were combined and the solvent was removed under reduced pressure. The residue was slurried with petroleum ether (30-40 ° C.) and the resulting suspension was collected by filtration. The collected solid was dried under reduced pressure to give Isomer D as a white solid (0.93 g, 64%).

2R,3S,11bR 또는 2S,3R,11bS 배위(절대 입체 화학은 측정하지 않았다) 중 어 느 하나를 갖는 것으로 여겨지는 이성체 D를 1H-NMR, 13C-NMR, IR, 질량 분광측정, 키랄 HPLC 및 ORD에 의해 특성화하였다. 이성체 D에 대한 IR, NMR 및 MS 데이터를 표 2에 나타내며, 키랄 HPLC 및 ORD 데이터를 표 4에 나타낸다.2 R , 3 S , 11b R Or isomer D, which is believed to have any of the 2 S , 3 R , 11b S configuration (absolute stereochemistry was not measured), 1 H-NMR, 13 C-NMR, IR, mass spectrometry, chiral HPLC and Characterized by ORD. IR, NMR and MS data for isomer D are shown in Table 2 and chiral HPLC and ORD data are shown in Table 4.

표 1 및 2에서, KBr 디스크 방법을 사용하여 적외선 스펙트럼을 측정하였다. 1H NMR 스펙트럼을 배리안 제미니(Varian Gemini) NMR 분광계(200 MHz)를 사용하여 중수소화된 클로로포름 중의 용액 상에서 수행하였다. 13C NMR 스펙트럼을 배리안 제미니 NMR 분광계(50 MHz)를 사용하여 중수소화된 클로로포름 중의 용액 상에서 수행하였다. 질량 스펙트럼을 마이크로매스 플랫폼(Micromass Platform) II(ES+ 조건) 분광계를 사용하여 수득하였다. 표 3 및 4에서, 광회전분산 수를 24 ℃에서 메탄올 용액 중의 광학 활성 PolAAr 2001 장비를 사용하여 수득하였다. HPLC 체류 시간 측정을 UV 검출과 함께 HP 1050 HPLC 크로마토그래프를 사용하여 수행하였다.In Tables 1 and 2, infrared spectra were measured using the KBr disk method. 1 H NMR spectra were performed on solutions in deuterated chloroform using a Varian Gemini NMR spectrometer (200 MHz). 13 C NMR spectra were performed on solutions in deuterated chloroform using a Varian Gemini NMR spectrometer (50 MHz). Mass spectra were obtained using a Micromass Platform II (ES + Condition) spectrometer. In Tables 3 and 4, the photodispersion numbers were obtained using optically active PolAAr 2001 equipment in methanol solution at 24 ° C. HPLC retention time measurements were performed using an HP 1050 HPLC chromatograph with UV detection.

Figure 112006064994282-PCT00024
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Figure 112006064994282-PCT00025
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Figure 112006064994282-PCT00026
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Figure 112006064994282-PCT00027
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Figure 112006064994282-PCT00028
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Figure 112006064994282-PCT00030
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Figure 112006064994282-PCT00031
Figure 112006064994282-PCT00031

실시예Example 3 3

이성체 B의 또 다른 제조 방법 및 Another method for preparing isomer B and 메실레이트Mesylate 염의 제조 방법 Preparation method of the salt

3A. 3A. RRRR /Of SSSS 테트라베나진의Tetrabenazine 환원 restoration

Figure 112006064994282-PCT00032
Figure 112006064994282-PCT00032

테트라하이드로푸란(52 ㎖, 52 밀리몰, 1.1 당량) 중의 1M L-셀렉트라이드(등록상표)를 30 분에 걸쳐 테트라하이드로푸란(56 ㎖) 중의 테트라베나진 라세메이트(15 g, 47 밀리몰)의 냉각된(빙욕) 교반 용액에 30 분에 걸쳐 서서히 가하였다. 첨가를 완료한 후에, 상기 혼합물을 실온으로 가온하고 추가로 6 시간 동안 교반하였다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)은 단지 매우 소량의 출발 물질만이 남았음을 보였다.Cooling of 1M L-Selectide® in tetrahydrofuran (52 mL, 52 mmol, 1.1 equiv) over 30 minutes of tetrabenazine racemate (15 g, 47 mmol) in tetrahydrofuran (56 mL) It was slowly added over 30 minutes to a stirred (ice bath) solution. After the addition was complete, the mixture was warmed to room temperature and stirred for a further 6 hours. TLC analysis (silica, ethyl acetate) showed that only a very small amount of starting material remained.

상기 혼합물을 분쇄된 얼음(112 g), 물(56 ㎖) 및 빙초산(12.2 g)의 교반된 혼합물에 부었다. 생성되는 황색 용액을 에테르(2 x 50 ㎖)로 세척하고 고체 탄산 나트륨(약 13 g)을 서서히 가하여 염기성으로 만들었다. 석유-에테르(30-40 ℃)(56 ㎖)를 교반하면서 상기 혼합물에 가하고 조 β-DHTBZ를 여과에 의해 백색 고체로서 수거하였다.The mixture was poured into a stirred mixture of crushed ice (112 g), water (56 mL) and glacial acetic acid (12.2 g). The resulting yellow solution was washed with ether (2 × 50 mL) and made basic by the addition of solid sodium carbonate (about 13 g) slowly. Petroleum-ether (30-40 ° C.) (56 mL) was added to the mixture with stirring and crude β-DHTBZ was collected by filtration as a white solid.

조 고체를 디클로로메탄(약 150 ㎖)에 용해시키고 생성 용액을 물(40 ㎖)로 세척하고, 무수 황산 마그네슘을 사용하여 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 약 40 ㎖로 농축시켰다. 백색 고체의 농후한 현탁액이 형성되었다. 석유 에테르(30-40 ℃)(56 ㎖)를 가하고 상기 현탁액을 실험실 온도에서 15 분 동안 교반하였다. 생성물을 여과에 의해 수거하고 석유 에테르(30-40 ℃)(40 내지 60 ㎖)를 사용하여 새하얗게 될 때까지 필터 상에서 세척한 후에 실온에서 공기 건조시켜 백색 고체로서 β-DHTBZ(10.1 g, 67%)를 수득하였다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)은 단지 하나의 성분만을 나타내었다.The crude solid was dissolved in dichloromethane (about 150 mL) and the resulting solution was washed with water (40 mL), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated to about 40 mL under reduced pressure. A thick suspension of white solid was formed. Petroleum ether (30-40 ° C.) (56 mL) was added and the suspension was stirred at laboratory temperature for 15 minutes. The product was collected by filtration and washed on a filter with petroleum ether (30-40 ° C.) (40-60 mL) until white, then air dried at room temperature to give β-DHTBZ (10.1 g, 67% as a white solid) ) Was obtained. TLC analysis (silica, ethyl acetate) showed only one component.

3B. 3B. 라세미Racemic β- β- DHTBZDHTBZ 의 of 캄포르설폰산Camphorsulfonic acid 염의 제조 및 분별 결정화 Preparation and Fractional Crystallization of Salts

실시예 3A의 생성물 및 1 당량의 (S)-(+)-캄포르-10-설폰산을 최소량의 메탄올 중에 가열하면서 용해시켰다. 생성 용액을 냉각시키고 이어서 생성 고체가 완전히 침전될 때까지 에테르로 서서히 희석하였다. 생성되는 백색 결정성 고체를 여과에 의해 수거하고 에테르로 세척한 후에 건조시켰다.The product of Example 3A and 1 equivalent of ( S )-(+)-camphor-10-sulfonic acid were dissolved while heating in a minimum amount of methanol. The resulting solution was cooled and then diluted slowly with ether until the resulting solid completely precipitated. The resulting white crystalline solid was collected by filtration, washed with ether and dried.

상기 10 g의 캄포르설폰산 염을 고온 무수 에탄올(170 ㎖) 및 메탄올(30 ㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 생성 용액을 교반하고 냉각시켰다. 2 시간 후에 형성된 침전물을 백색 결정성 고체(2.9 g)로서 여과에 의해 수거하였다. 결정성 물질의 샘플을 과잉의 포화된 수성 탄산 나트륨 및 디클로로메탄과 함께 분리 깔때기에서 진탕시켰다. 유기 상을 분리시키고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에테르(30-40 ℃)를 사용하여 연마하고 유기 용액을 한번 더 농축시켰다. 키렉스(Chirex) (S)-VAL 및 (R)-NEA 250 x 4.6 ㎜ 컬럼, 및 유속 1 ㎖/분의 헥산:에탄올(98:2) 용출제를 사용한 상기 염의 키랄 HPLC 분석은 단리된 β-DHTBZ에 하나의 거울상 이성체(e.e. 약 80%)가 풍부함을 나타내었다.The 10 g of camphorsulfonic acid salt was dissolved in a mixture of hot anhydrous ethanol (170 mL) and methanol (30 mL). The resulting solution was stirred and cooled. A precipitate formed after 2 hours was collected by filtration as a white crystalline solid (2.9 g). Samples of crystalline material were shaken in a separating funnel with excess saturated aqueous sodium carbonate and dichloromethane. The organic phase was separated, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was triturated with petroleum ether (30-40 ° C.) and the organic solution was concentrated once more. Chiral HPLC analysis of the salt using a Chirex (S) -VAL and (R) -NEA 250 × 4.6 mm column and hexane: ethanol (98: 2) eluent at a flow rate of 1 mL / min yielded isolated β. -DHTBZ is rich in one enantiomer (ee about 80%).

상기 풍부한 캄포르설폰산 염(14 g)을 고온 무수 에탄올(140 ㎖)에 용해시키고 프로판-2-올(420 ㎖)을 가하였다. 생성 용액을 교반하고 침전물이 1 분 내에 형성되기 시작하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 1 시간 동안 교반하였다. 형성된 침전물을 여과에 의해 수거하고, 에테르로 세척하고 건조시켜 백색 결정성 고체(12 g)를 수득하였다.The rich camphorsulfonic acid salt (14 g) was dissolved in hot anhydrous ethanol (140 mL) and propan-2-ol (420 mL) was added. The resulting solution was stirred and a precipitate began to form in 1 minute. The mixture was cooled to rt and stirred for 1 h. The precipitate formed was collected by filtration, washed with ether and dried to give a white crystalline solid (12 g).

상기 결정성 물질을 과잉의 포화된 수성 탄산 나트륨 및 디클로로메탄과 함께 분리 깔때기에서 진탕시켰다. 유기 상을 분리시키고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 석유 에테르(30-40 ℃)로 연마하고 유기 용액을 한번 더 농축시켜 (+)-β-DHTBZ(6.6 g, ORD +107.8°)를 수득하였다(진공 하에서 건조 후에). 단리된 거울상 이성체는 e.e. >97%를 갖는다.The crystalline material was shaken in a separating funnel with excess saturated aqueous sodium carbonate and dichloromethane. The organic phase was separated, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was triturated with petroleum ether (30-40 ° C.) and the organic solution was concentrated once more to give (+)-β-DHTBZ (6.6 g, ORD + 107.8 °) (after drying under vacuum). Isolated enantiomers are described in e.e. > 97%.

3C. 이성체 B의 제조3C. Preparation of Isomer B

디클로로메탄(55 ㎖) 중의 오염화 인(4.5 g, 21.6 밀리몰, 1.05 당량) 용액을 디클로로메탄(90 ㎖) 중의 실시예 3B의 생성물(6.6 g, 20.6 밀리몰)의 교반된 냉각(빙수 욕) 용액에 10 분에 걸쳐 꾸준히 가하였다. 상기 첨가의 완료 시에, 생성되는 황색 용액을 추가로 10 분간 교반한 후에 물(90 ㎖) 및 분쇄된 얼음(90 g) 중의 탄산 나트륨(15 g)의 고속 교반된 혼합물에 부었다. 상기 혼합물을 추가로 10 분간 교반하고 분리 깔때기로 옮겼다.A solution of phosphorus contaminated (4.5 g, 21.6 mmol, 1.05 eq.) In dichloromethane (55 mL) was stirred with a cooled (ice water bath) solution of the product of Example 3B (6.6 g, 20.6 mmol) in dichloromethane (90 mL). Was added steadily over 10 minutes. Upon completion of the addition, the resulting yellow solution was stirred for a further 10 minutes and then poured into a high speed stirred mixture of sodium carbonate (15 g) in water (90 mL) and crushed ice (90 g). The mixture was stirred for a further 10 minutes and transferred to a separatory funnel.

일단 상기 상들이 분리되었으면, 갈색 디클로로메탄 층을 제거하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜 갈색 오일(약 6.7 g)로서 조 알켄 중간체를 제공하였다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)은 상기 조 생성물 중에 (+)-β-DHTBZ가 남아있지 않음을 보였다.Once the phases were separated, the brown dichloromethane layer was removed, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give crude alkene intermediate as a brown oil (about 6.7 g). TLC analysis (silica, ethyl acetate) showed no (+)-β-DHTBZ remaining in the crude product.

조 알켄을 무수 테트라하이드로푸란(40 ㎖)에 용해시키고(무수 질소 분위기) THF(1M 용액, 2.5 당량, 52 ㎖) 중의 보란 용액을 15 분에 걸쳐 교반하면서 가하였다. 이어서 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. TLC 분석(실리카, 에틸 아세테이트)은 반응 혼합물 중에 알켄 중간체가 남아있지 않음을 보였다.The crude alkenes were dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (40 mL) (anhydrous nitrogen atmosphere) and the borane solution in THF (1M solution, 2.5 equiv, 52 mL) was added over 15 minutes with stirring. The reaction mixture was then stirred at rt for 2 h. TLC analysis (silica, ethyl acetate) showed no alkene intermediate left in the reaction mixture.

물(10 ㎖) 중의 수산화 나트륨(3.7 g) 용액을 교반된 반응 혼합물에 가한 다음, 과산화 수소 수용액(50%, 약 7 ㎖)을 가하고, 상기 형성된 2 상 혼합물을 1 시간 동안 환류 하에서 교반하였다. 이 시점에서 유기 상의 TLC 분석(실리카. 에틸 아세테이트)은 이성체 B에 대해 예상된 바와 같은 Rf를 갖는 생성물의 출현을 보였다. 특징적인 비 극성 성분이 또한 보였다.A solution of sodium hydroxide (3.7 g) in water (10 mL) was added to the stirred reaction mixture, then an aqueous solution of hydrogen peroxide (50%, about 7 mL) was added and the biphasic mixture formed was stirred under reflux for 1 hour. At this point TLC analysis of the organic phase (silica. Ethyl acetate) showed the appearance of a product with Rf as expected for isomer B. Characteristic non-polar components were also shown.

상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 분리 깔때기에 부었다. 상부 유기 층을 제거하고 감압 하에서 농축시켜 대부분의 THF를 제거하였다. 상기 잔사를 에테르(안정화된(BHT), 75 ㎖)에 용해시키고, 물(40 ㎖)로 세척하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜 담황색 오일(8.1 g)을 수득하였다.The reaction mixture was cooled to room temperature and poured into a separatory funnel. The upper organic layer was removed and concentrated under reduced pressure to remove most of THF. The residue was dissolved in ether (stabilized (BHT), 75 mL), washed with water (40 mL), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure to give a pale yellow oil (8.1 g).

상기 황색 오일을 컬럼 크로마토그래피(실리카, 에틸 아세테이트:헥산(80:20), 100% 에틸 아세테이트로 증가시킴)를 사용하여 정제시키고 목적하는 컬럼 분획들을 수거하고, 합하고 감압 하에서 농축시켜 옅은 색의 오일을 수득하고, 이를 에테르(안정화된 것, 18 ㎖)로 처리하고 감압 하에서 농축시켜 담황색 고체 폼(2.2 g)으로서 이성체 B를 수득하였다.The yellow oil was purified using column chromatography (silica, ethyl acetate: hexanes (80:20), increased to 100% ethyl acetate) and the desired column fractions were collected, combined and concentrated under reduced pressure to give a pale oil. Was obtained, which was treated with ether (stabilized, 18 mL) and concentrated under reduced pressure to give Isomer B as a pale yellow solid foam (2.2 g).

실시예 3B에서 설정된 조건을 사용하는 키랄 HPLC는 이성체 B가 97% 초과의 광학적순도(e.e.)로 생성되었음을 입증하였다.Chiral HPLC using the conditions set forth in Example 3B demonstrated that Isomer B was produced with greater than 97% optical purity (e.e.).

광학 회전을 벨링햄 스탠리(Bellingham Stanley) ADP220 편광계를 사용하여 측정하고 +123.5°의 [αD]를 획득하였다.Optical rotation was measured using a Bellingham Stanley ADP220 polarimeter and [α D ] of + 123.5 ° was obtained.

3D. 이성체 B의 3D. Of isomer B 메실레이트Mesylate 염의 제조 Preparation of Salt

이성체 B의 메탄설포네이트 염을, 실시예 3C로부터의 1 당량의 이성체 B 및 1 당량의 메탄 설폰산의 혼합물을 최소량의 에탄올에 용해시키고 이어서 디에틸 에테르를 가하여 제조하였다. 상기 형성된 백색 침전물을 여과에 의해 수거하고 진공 하에서 건조시켜 메실레이트 염을 약 85%의 수율 및 약 96%의 순도(HPLC에 의해)로 수득하였다.The methanesulfonate salt of isomer B was prepared by dissolving a mixture of 1 equivalent of isomer B and 1 equivalent of methane sulfonic acid from Example 3C in a minimum amount of ethanol and then adding diethyl ether. The white precipitate formed was collected by filtration and dried under vacuum to give the mesylate salt in about 85% yield and about 96% purity (by HPLC).

실시예Example 4 4

[[ 33 H]H] 디하이드로테트라베나진Dihydrotetrabenazine 결합 분석을 사용하는  Using binding analysis VMATVMAT -2 결합 활성의 선별Screening of -2 Binding Activity

디하이드로테트라베나진은 매우 효능 있고 선택적인 VMAT-2 억제제이며, 상기 소수포성 전달체에 높은 친화성(nM 범위)으로 결합한다. [3H]디하이드로테트라베나진은 수년간 인간, 소 및 설치류의 뇌에서 VMAT-2를 표지하기 위한 방사성 리간드로서 성공적으로 사용되어 왔다(예를 들어 문헌[Scherman et al., J. Neurochem . 50, 1131-1136(1988); Near et al., Mol . Pharmacol . 30, 252-257(1986); Kilbourn et al., Eur . J. Pharmacol . 278, 249-252(1995); 및 Zucker et al. Life Sci . 69, 2311-2317(2001)]을 참조하시오).Dihydrotetrabenazine is a very potent and selective VMAT-2 inhibitor and binds to the hydrophobic carrier with high affinity (nM range). [ 3 H] dihydrotetrabenazine has been successfully used as a radioligand for labeling VMAT-2 in human, bovine and rodent brains for many years (see, eg, Scherman et al., J. Neurochem . 50 , 1131-1136 (1988); Near et al., Mol . Pharmacol . 30, 252-257 (1986); Kilbourn et al., Eur . J. Pharmacol . 278, 249-252 (1995); and Zucker et al. Life Sci . 69, 2311-2317 (2001).

4 개의 디하이드로테트라베나진 이성체 A, B, C 및 D를 하기 개시된 분석을 사용하여 VMAT-2 전달체를 억제하는 그들의 능력에 대해 시험하였다.Four dihydrotetrabenazine isomers A, B, C and D were tested for their ability to inhibit VMAT-2 transporters using the assays described below.

방법 및 물질Method and substance

성숙한 래트(Wistar strain)의 전뇌 막을 필수적으로 문헌[Chazot et al .(1993) Biochem . Pharmacol . 45, 605-610]에 개시된 바와 같이 준비하였다. 성숙한 래트의 선조체 소포 막을 필수적으로 문헌[Roland et al .(2000), JPET 293, 329-335]에 개시된 바와 같이 준비하였다. 10 ㎍ 막을 25 ℃에서 60 분 동안 50 mM HEPES pH 8.0(분석 완충액) 중의 [3H]디하이드로테트라베나진(18-20 nM)과 함께 배양시키고, 결합된 방사성 리간드를 진공 하에서 고속 여과에 의해 GF/B 유리 섬유 필터 상에서 수거하였다. 비 특이적인 결합을 2 μM의 표지되지 않은 테트라베나진의 존재 하에서 대응하는 샘플들에 대해 측정하였다. 방사 활성을 β 계수기에서 섬광 유체 중에서 카운트하였다. 4 개의 시험 화합물(이성체 A, B, C 및 D)의 전체 농도 범위(로그 및 1/2 로그 단위)를 3 중으로 분석하였다(범위: 10-11 내지 10-4 M). 시험 화합물 및 테트라베나진을 10 mM의 모액 농도로 DMSO에 용해시키고, 이어서 분석 완충액 중의 희석액을 제조하였다. 3 개의 독립적인 실험을 각 화합물에 대해 수행하였다. 데이터를 분석하고 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 3.2 패키지를 사용하여 곡선을 정합시켰다.The whole brain membrane of mature rats (Wistar strain) is essentially described by Chazot et. al . (1993) Biochem . Pharmacol . 45, 605-610. Structural vesicle membranes of mature rats are essentially described in Roland et. al . (2000), JPET 293, 329-335). 10 μg membranes were incubated with [ 3 H] dihydrotetrabenazine (18-20 nM) in 50 mM HEPES pH 8.0 (assay buffer) at 25 ° C. for 60 minutes, and the bound radioligand was subjected to rapid filtration under vacuum. Harvest was on GF / B glass fiber filters. Nonspecific binding was measured on corresponding samples in the presence of 2 μM of unlabeled tetrabenazine. Radioactivity was counted in scintillation fluid in a β counter. The total concentration ranges (log and half log units) of four test compounds (isomers A, B, C and D) were analyzed in triplicate (range: 10 −11 to 10 −4 M). Test compounds and tetrabenazine were dissolved in DMSO at a mother liquor concentration of 10 mM, followed by dilution in assay buffer. Three independent experiments were performed for each compound. Data was analyzed and curves were matched using the GraphPad Prism 3.2 package.

결과result

처음에는, 성숙한 래트의 전뇌 P2 막 제제(Chazot et al ., 1993)를 준비하고 원래의 프로토콜에 개시된 바와 같이 분석하였다. 이는 매우 낮은 수준의 특이적인 결합 활성을 제공하였다.Initially, whole brain P 2 membrane preparations from mature rats (Chazot et. al . , 1993) and analyzed as disclosed in the original protocol. This gave very low levels of specific binding activity.

이어서 성숙한 래트의 선조체 소포 제제를 제조하였으며, 이는 현저한 수준의 안정한 특이적인 [3H]디하이드로테트라베나진 결합 부위(5 내지 6 pmol/단백질 ㎎)를 제공하였다. 이는 공개된 데이터(Roland et al., 2000)에 잘 비교된다. 상기 제법은 모든 후속 분석들에 사용되었다.Progenitor vesicle preparations of mature rats were then prepared, which gave significant levels of stable specific [ 3 H] dihydrotetrabenazine binding sites (5-6 pmol / protein mg). This compares well with published data (Roland et al. , 2000). The preparation was used for all subsequent analyzes.

Figure 112006064994282-PCT00033
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Figure 112006064994282-PCT00034
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데이터는 3 개의 독립적인 실험들에 대한 평균±SD이다. KI 값을 1.2 nM의 공개된 래트 선조체 KD 값(Roland et al ., 2000)을 기준으로 측정하였다.Data is mean ± SD for three independent experiments. The K I value was determined from the published rat striatum K D value of 1.2 nM (Roland et. al . , 2000).

전체 KI 값에 대한 전체 약물학적 프로파일은 이성체 C > 이성체 B > 이성체 D >> 이성체 A이다.The overall pharmacological profile for the overall K I value is isomer C> isomer B> isomer D >> isomer A.

현저하게는, 이성체 B와 이성체 A는 모두 얕은 경쟁 곡선을 제공하였으며, 이는 2 부위 결합 모델에 가장 적합하였다.Remarkably, Isomer B and Isomer A both provided a shallow competition curve, which was best suited for the two site binding model.

이성체 A는 높은 친화성(KI = 59 nM) 및 낮은 친화성 부위(KI < 5.9 μM 친화성)를 나타내었으며, 각각은 전체 부위의 약 50%에 기여하였다. 이는 이성체 A가 상이한 선조체 VMAT-2 결합 부위들을 식별할 수 있음을 가리킬 수 있다.Isomer A showed high affinity (K I = 59 nM) and low affinity sites (K I <5.9 μM affinity), each contributing to about 50% of the total site. This may indicate that Isomer A can identify different striatum VMAT-2 binding sites.

실시예Example 5 5

VMATVMAT 작용성 분석 Functional Analysis

A. A. VMAT2VMAT2 작용성 분석 Functional Analysis

래트의 선조체 시냅스 소포를 필수적으로 실시예 3에 개시된 바와 같이 준비하였다. 따라서, 래트 선조체 P2 막 제제(Chazot et al ., 1993)를 재 현탁시키고 빙냉 증류수에서 균질화하였다. 25 mM HEPES 및 100 mM 칼륨 타르트레이트(pH 7.5, 4C)를 가하여 오스몰 농도를 회복시켰다. 이어서 상기 제제를 20,000 x g(4 ℃)에서 20 분간 원심분리시켰다. 생성된 S3 분획을 제거하고, 황산 마그네슘을 가하고(1 mM의 최종 농도를 제공함, pH 7.5, 4 ℃), 상기 혼합물을 100,000 x g에서 45 분 동안 원심분리시켰다. 최종 P4 분획은 상기 분석의 경우 시냅스 소포를 함유한다.The striatum synaptic vesicles of rats were prepared essentially as described in Example 3. Thus, rat striatum P 2 membrane preparations (Chazot et. al . , 1993) were resuspended and homogenized in ice cold distilled water. 25 mM HEPES and 100 mM potassium tartrate (pH 7.5, 4C) were added to restore osmolality. The formulation was then centrifuged at 20,000 × g (4 ° C.) for 20 minutes. The resulting S 3 fraction was removed, magnesium sulfate was added (giving a final concentration of 1 mM, pH 7.5, 4 ° C.) and the mixture was centrifuged at 100,000 × g for 45 minutes. The final P 4 fraction contains synaptic vesicles for this assay.

시냅스 소포 100 ㎕(대략 2.5 ㎍ 단백질)의 분액을 증가하는 농도의 시험 화합물 C 및 B(DMSO 중의 10-2 M의 모액으로서 새로 제조된 것)와 30 분간 예비 배양시키고(농도 범위 10-9 M 내지 10-4 M), 이어서 30 ℃에서 [3H] 도파민(30 nM 최종 농도)의 존재 하에 분석 완충액(25 mM HEPES, 100 mM 칼륨 타르트레이트, 1.7 mM 아스코르브산, 0.05 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 2 mM ATP-Mg2 +, pH 7.5) 중에서 3 분간 예비 배양시켰다. 이어서 2 mM ATP-Mg2 + 대신에 2 mM MgSO4를 함유하는 빙냉 완충 분석 완충제 pH 7.5를 첨가하여 반응을 종료시키고, 0.5% 폴리에틸렌이민 중에 침지시킨 와트만 필터를 통해 고속 여과를 성취하였다. 상기 필터를 브랜델 하베스터(Brandel Harvester)를 사용하여 저온 완충제로 3 회 세척하였다. 상기 필터 상에 포착된 방사 활성을 액체 섬광 계수기를 사용하여 카운트하고 비 특이적인 결합을 4 ℃에서 소포 [3H] 도파민 흡수를 측정함으로써 측정하였다. 상기 방법은 문헌[Ugarte YV et al.(2003) Eur . J. Pharmacol . 472, 165-171]에 개시된 것을 기본으로 하였다. 선택적인 VMAT-2 흡수를 10 μM 테트라베나진을 사용하여 한정하였다.Incubate 100 μl of synaptic vesicles (approximately 2.5 μg protein) with increasing concentrations of Test Compounds C and B (newly prepared as a stock solution of 10 -2 M in DMSO) for 30 minutes (concentration range 10 -9 M). To 10 −4 M), followed by assay buffer (25 mM HEPES, 100 mM potassium tartrate, 1.7 mM ascorbic acid, 0.05 mM EGTA, 0.1 mM EDTA in the presence of [ 3 H] dopamine (30 nM final concentration) at 30 ° C.). , 2 mM ATP-Mg 2 + , pH 7.5) were incubated in pre-three minutes. Then 2 mM ATP-Mg 2 + instead of 2 mM MgSO 4 was added to ice-cold buffer assay buffer pH 7.5 containing the end the reaction, has achieved a high speed and filtered through a filter only soaking watts in 0.5% polyethyleneimine for. The filter was washed three times with cold buffer using Brandel Harvester. Radioactivity captured on the filter was counted using a liquid scintillation counter and nonspecific binding was measured by measuring vesicle [ 3 H] dopamine uptake at 4 ° C. The method is described in Ugarte YV et al . (2003) Eur . J. Pharmacol . 472, 165-171. Selective VMAT-2 uptake was defined using 10 μM tetrabenazine.

화합물 C(겉보기 IC50 = 18 ± 2 nM) 및 화합물 B(겉보기 IC50 = 30 ± 3 nM)는 모두 상기 [3H] 디하이드로테트라베나진 결합 분석을 사용하여 측정한 이들 각각의 결합 친화성과 유사한 작용성 친화성(프로파일 C > B)으로 VMAT-2 전달체를 통해 래트의 선조체 소포로의 [3H] 도파민 흡수를 억제하였다.Compound C (apparent IC 50 = 18 ± 2 nM) and Compound B (apparent IC 50 = 30 ± 3 nM) were both determined by their respective binding affinity as measured using the above [ 3 H] dihydrotetrabenazine binding assay. Similar functional affinity (profile C> B) inhibited [ 3 H] dopamine uptake into the striatum's vesicle vesicles via the VMAT-2 transporter.

B. B. VMAT1VMAT1 작용성 분석 Functional Analysis

VMAT2와 분리하여, VMAT1만을 갖는 매우 제한된 고유 조직이 존재한다. 그러나, 테트라베나진은 VMAT1에 비해 VMAT2에 200 배 이상 더 높은 친화성을 나타내며, 이러한 차별을 사용하여 작용성 분석에서 VMAT2의 영향을 차단할 수 있다(Erickson et al.(1996) PNAS (USA) 93, 5166-5171). 부신 크롬친화 세포를 필수적으로 문헌[Moshharov et al.(2003) J Neurosci. 23, 5835-5845]에 개시된 바와 같이 어린 성숙한 SD 래트로부터 단리시켰다. 따라서, 부신을 빙냉 PBS에서 절제하고, 상기 부신의 피막 및 피질을 제거하고 나머지 속질은 다졌다. PBS로 수 회 세척한 후에, 상기 조직을 서서히 교반하면서 30 ℃에서 30분 동안 Ca2+ 비 함유 콜라게나제 IA 용액(250 U/㎖)과 함께 배양하였다. 상기 절단된 조직을 3 회 헹구고 분리된 세포를 3000 rpm에서 원심분리시켜 펠릿을 형성시키고, 이를 PBS에 재 현탁시켰다. 소포 분획을 상기 뇌 제제에 대해 개시한 바와 동일한 방식으로 단리시켰다.Apart from VMAT2, there is a very limited unique organization with only VMAT1. However, tetrabenazine exhibits a 200-fold higher affinity for VMAT2 than VMAT1, and this discrimination can be used to block the effects of VMAT2 in functional assays (Erickson et al. (1996) PNAS (USA) 93 , 5166-5171). Adrenal chromaffin cells are essentially described in Moshharov et al. (2003) J Neurosci . 23, 5835-5845 , isolated from young mature SD rats. Thus, the adrenal glands were excised in ice-cold PBS, the adrenal glands and cortex were removed and the remaining semen was compacted. After washing several times with PBS, the tissues were incubated with Ca2 + free collagenase IA solution (250 U / ml) at 30 ° C. for 30 minutes with gentle stirring. The cut tissue was rinsed three times and the isolated cells were centrifuged at 3000 rpm to form pellets which were resuspended in PBS. Vesicle fractions were isolated in the same manner as described for the brain preparation.

시냅스 소포 100 ㎕(대략 2.5 ㎍ 단백질)를 증가하는 농도의 시험 화합물(상기 결합 분석에 대해 개시한 바와 같이 제조됨)과 30 분간 예비 배양시켰다(농도 범위 10-9 M 내지 10-4 M). 상기 분석을 30 ℃에서 [3H] 도파민(30 nM 최종 농도)의 존재 하에 분석 완충액(25 mM HEPES, 100 mM 칼륨 타르트레이트, 1.7 mM 아스코르브산, 0.05 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 2 mM ATP-Mg2 +, pH 7.5) 중에서 3 분간 수행하였다. [3H] 도파민 흡수를 10 μM 테트라베나진(이 농도에서 VMAT2를 선택적으로 차단함)의 존재 하에서 측정하였다. 비 특이적인 흡수를 4 ℃에서 소포 [3H] 도파민 흡수를 측정함으로써 측정하였다. 이어서 2 mM ATP-Mg+2 대신에 2 mM MgSO4를 함유하는 빙냉 완충 분석 완충제 pH 7.5를 첨가하여 반응을 종료시키고, 0.5% 폴리에틸렌이민 중에 침지시킨 와트만 필터를 통해 고속 여과를 성취하였다. 상기 필터를 브랜델 하베스터를 사용하여 저온 완충제로 3 회 세척하고 필터 상에 포착된 방사활성을 액체 섬광 계수기로 카운트하였다. 100 μl of synaptic vesicles (approximately 2.5 μg protein) were preincubated with increasing concentrations of test compound (prepared as described for the binding assays above) for 30 minutes (concentration range 10 −9 M to 10 −4 M). The assay was carried out at 30 ° C. in the presence of [ 3 H] dopamine (30 nM final concentration) in assay buffer (25 mM HEPES, 100 mM potassium tartrate, 1.7 mM ascorbic acid, 0.05 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 2 mM ATP- Mg 2 +, was carried out 3 minutes in pH 7.5). [ 3 H] dopamine uptake was measured in the presence of 10 μM tetrabenazine (selectively blocking VMAT2 at this concentration). Nonspecific absorption was measured by measuring vesicle [ 3 H] dopamine uptake at 4 ° C. The reaction was then terminated by addition of ice cold buffer assay buffer pH 7.5 containing 2 mM MgSO 4 instead of 2 mM ATP-Mg +2 and fast filtration was achieved through Whatman filters immersed in 0.5% polyethyleneimine. The filter was washed three times with cold buffer using a Brandel Harvester and the radioactivity captured on the filter was counted with a liquid scintillation counter.

10 μM 테트라베나진의 존재 하에서, 화합물 B 및 화합물 C는 모두 [3H] 도파민 흡수를 불충분하게 억제하였으며, IC50 값은 상기 두 화합물 모두에 대해 10-5 M을 초과하였다. 이는 상기 두 화합물이 모두 VMAT-1에 대해 낮은 친화성을 가짐을 가리킨다. 더욱이, 상기 데이터는 상기 두 화합물이 모두 VMAT-1에 비해 VMAT-2에 대한 선택성 크기가 2 정도 이상임을 나타낸다.In the presence of 10 μM tetrabenazine, both Compound B and Compound C insufficiently inhibited [ 3 H] dopamine uptake and the IC 50 value exceeded 10 −5 M for both compounds. This indicates that both compounds have low affinity for VMAT-1. Moreover, the data indicate that both compounds have a selectivity of at least 2 for VMAT-2 over VMAT-1.

실시예Example 6 6

수용체 및 전달체 단백질 결합 연구Receptor and Transporter Protein Binding Studies

수용체 및 전달체 단백질에 대한 결합 능력을 시험하기 위해 4 개의 디하이드로테트라베나진 이성체 A, B, C 및 D에 대해 특이적인 결합 분석을 하기에 개시된 바와 같이 수행하였다. 결과를 표 6에 나타낸다.Binding assays specific for the four dihydrotetrabenazine isomers A, B, C and D were performed as described below to test the binding ability to receptor and transporter proteins. The results are shown in Table 6.

(a) 아드레날린 α(a) adrenaline α 2A2A 수용체: Receptor:

참고문헌: S. Uhlcn et al ., J. Pharmacol . Exp . Ther., 271:1558-1565(1994)References: S. Uhlcn et al ., J. Pharmacol . Exp . Ther ., 271: 1558-1565 (1994)

출처: 인간 재조합 곤충 Sf9 세포Source: Human Recombinant Insect Sf9 Cells

리간드: 1 nM [3H] MK-912Ligand: 1 nM [ 3 H] MK-912

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 60 분 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 60 minutes @ 25 ℃

배양 완충제: 75 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 12.5 mM MgCl2, 2 mM EDTACulture buffer: 75 mM Tris-HCl, pH 7.4, 12.5 mM MgCl 2 , 2 mM EDTA

비 특이적인 리간드: 10 μM WB-4101Nonspecific ligand: 10 μM WB-4101

Kd: 0.6 nMK d : 0.6 nM

Bmax: 4.6 pmole/단백질 ㎎B max : 4.6 pmole / protein mg

특이적인 결합: 95%Specific binding: 95%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(b) 아드레날린 α(b) adrenaline α 2B2B 수용체: Receptor:

참고문헌: S. Uhlen et al., Eur . J. Pharmacol., 33(1):93-1-1(1998)Reference: S. Uhlen et al., Eur . J. Pharmacol ., 33 (1): 93-1-1 (1998)

출처: 인간 재조합 CHO-K1 세포Source: human recombinant CHO-K1 cells

리간드: 2.5 nM [3H] 라울사인(Rauwolscine)Ligand: 2.5 nM [3H] Raulsine

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 60 분 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 60 minutes @ 25 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, 1 mM EDTA, 12.5 mM MgCl2, pH 7.4, 0.2% BSA @ 25 ℃Culture buffer: 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 12.5 mM MgCl 2 , pH 7.4, 0.2% BSA @ 25 ° C

비 특이적인 리간드: 10 μM 프라조신(Prazosin)Nonspecific Ligands: 10 μΜ Prazosin

Kd: 2.1 nMK d : 2.1 nM

Bmax: 2.1 pmole/단백질 ㎎B max : 2.1 pmole / protein mg

특이적인 결합: 90%Specific binding: 90%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(c) 도파민 (c) dopamine DD 1One 수용체: Receptor:

참고문헌: Dearry et al ., Nature, 347:72-76,(1990)References: Dearry et al ., Nature , 347: 72-76, (1990)

출처: 인간 재조합 CHO 세포Source: human recombinant CHO cells

리간드: 1.4 nM [3H] SCH-23390Ligand: 1.4 nM [3H] SCH-23390

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 2 시간 @ 37 ℃Incubation time / temperature: 2 hours @ 37 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM 아스코르브산, 0.001% BSACulture buffer: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM Ascorbic Acid, 0.001% BSA

비 특이적인 리간드: 10 μM (+)-부타클라몰(butaclamol)Nonspecific Ligands: 10 μΜ (+)-butaclamol

Kd: 1.4 nMK d : 1.4 nM

Bmax: 0.63 pmole/단백질 ㎎B max : 0.63 pmole / protein mg

특이적인 결합: 90%Specific binding: 90%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(d) 도파민 (d) dopamine DD 2L2L 수용체: Receptor:

참고문헌: Bunzo et al ., Nature, 336:783-787(1998)References: Bunzo et al ., Nature , 336: 783-787 (1998)

출처: 인간 재조합 CHO 세포Source: human recombinant CHO cells

리간드: 0.16 nM [3H] 스피페론(Spiperone)Ligand: 0.16 nM [3H] Spiperone

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 2 시간 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 2 hours @ 25 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM 아스코르브산, 0.001% BSACulture buffer: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM Ascorbic Acid, 0.001% BSA

비 특이적인 리간드: 10 μM 할로페리돌(Haloperidol)Nonspecific Ligand: 10 μM Haloperidol

Kd: 0.08 nMK d : 0.08 nM

Bmax: 0.48 pmole/단백질 ㎎B max : 0.48 pmole / protein mg

특이적인 결합: 85%Specific binding: 85%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(e) 도파민 (e) dopamine DD 33 수용체: Receptor:

참고문헌: Sokoloff et al ., Nature, 347:146-151,(1990)References: Sokoloff et al ., Nature , 347: 146-151, (1990)

출처: 인간 재조합 CHO 세포Source: human recombinant CHO cells

리간드: 0.7 nM [3H] 스피페론Ligand: 0.7 nM [3H] Spiferon

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 2 시간 @ 37 ℃Incubation time / temperature: 2 hours @ 37 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM 아스코르브산, 0.001% BSACulture buffer: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 nM NaCl, 1.4 nM Ascorbic Acid, 0.001% BSA

비 특이적인 리간드: 25 μM S(-)-설피라이드(Sulpiride)Nonspecific Ligand: 25 μM S (-)-Sulpiride

Kd: 0.36 nMK d : 0.36 nM

Bmax: 1.1 pmole/단백질 ㎎B max : 1.1 pmole / protein mg

특이적인 결합: 85%Specific binding: 85%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(f) (f) 이미다졸린Imidazoline II 22 (중추) 수용체: (Central) receptors:

참고문헌: Brown et al ., Brit . J. Pharmacol., 99:803-809,(1990)References: Brown et al ., Brit . J. Pharmacol ., 99: 803-809, (1990)

출처: 위스타 래트 대뇌 피질Source: Wistar Rat Cerebral Cortex

리간드: 2 nM [3H] 아이다족산(Idazoxan)Ligand: 2 nM [3H] Aidazoic Acid (Idazoxan)

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 30 분 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 30 minutes @ 25 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, 0.5 mM EDTA, pH 7.4 @ 25 ℃Culture buffer: 50 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA, pH 7.4 @ 25 ° C

비 특이적인 리간드: 1 μM 아이다족산Nonspecific Ligands: 1 μM Aidamic Acid

Kd: 4 nMK d : 4 nM

Bmax: 0.14 pmole/단백질 ㎎B max : 0.14 pmole / protein mg

특이적인 결합: 85%Specific binding: 85%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(g) 시그마 σ(g) sigma σ 1One 수용체: Receptor:

참고문헌: Ganapathy et al., Pharmacol . Exp . Ther., 289:251-260,(1999)Reference: Ganapathy et al., Pharmacol . Exp . Ther ., 289: 251-260, (1999)

출처: 인간 주르캣 세포Source: Human Jurkat Cells

리간드: 8 nM [3H] 할로페리돌Ligand: 8 nM [3H] haloperidol

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 4 시간 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 4 hours @ 25 ℃

배양 완충제: 5 mM K2HPO4/KH2PO4 완충제 pH 7.5Culture buffer: 5 mM K2HPO4 / KH2PO4 buffer pH 7.5

비 특이적인 리간드: 10 μM 할로페리돌Nonspecific Ligands: 10 μM Haloperidol

Kd: 5.8 nMK d : 5.8 nM

Bmax: 0.71 pmole/단백질 ㎎B max : 0.71 pmole / protein mg

특이적인 결합: 80%Specific binding: 80%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(h) 시그마 σ(h) sigma σ 22 수용체: Receptor:

참고문헌: Hashimoto et al ., Eur . J. Pharmacol., 236:159-163,(1993)References: Hashimoto et al ., Eur . J. Pharmacol ., 236: 159-163, (1993)

출처: 위스타 래트 뇌Source: Wistar Rat Brain

리간드: 3 nM [3H] 아이펜프로딜(Ifenprodil)Ligand: 3 nM [3H] Ifenprodil

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 60 분 @ 37 ℃Incubation time / temperature: 60 minutes @ 37 ℃

배양 완충제: 50 mM 트리스-HCl, pH 7.4Culture buffer: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4

비 특이적인 리간드: 10 μM 아이펜프로딜Nonspecific Ligands: 10 μM Ipenprodil

Kd: 4.8 nMK d : 4.8 nM

Bmax: 1.3 pmole/단백질 ㎎B max : 1.3 pmole / protein mg

특이적인 결합: 85%Specific binding: 85%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(i) 세로토닌 전달체((i) serotonin transporters ( SERTSERT ):):

참고문헌: Gu et al ., J. Biol . Chem., 269(10):7124-7130,(1994)References: Gu et al ., J. Biol . Chem ., 269 (10): 7124-7130, (1994)

출처: 인간 재조합 HEK-293 세포Source: human recombinant HEK-293 cells

리간드: 0.15 nM [125I] RTI-55Ligand: 0.15 nM [125I] RTI-55

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 3 시간 @ 4 ℃Incubation time / temperature: 3 hours @ 4 ℃

배양 완충제: 100 mM NaCl, 50 mM 트리스 HCl, 1 μM 류펩틴(Leupeptin), 10 μM PMSF, pH 7.4Culture buffer: 100 mM NaCl, 50 mM Tris HCl, 1 μM Leupeptin, 10 μM PMSF, pH 7.4

비 특이적인 리간드: 10 μM 이미프라민(Imipramine)Nonspecific Ligands: 10 μM imipramine

Kd: 0.17 nMK d : 0.17 nM

Bmax: 0.41 pmole/단백질 ㎎B max : 0.41 pmole / protein mg

특이적인 결합: 95%Specific binding: 95%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(j) 도파민 전달체((j) dopamine transporters ( DATDAT ):):

참고문헌: Giros et al., Trends Pharmacol . Sci., 14, 43-49(1993)References: Giros et al., Trends Pharmacol . Sci ., 14, 43-49 (1993)

Gu et al ., J. Biol . Chem., 269(10):7124-7130(1994)Gu et al ., J. Biol . Chem ., 269 (10): 7124-7130 (1994)

출처: 인간 재조합 CHO 세포Source: human recombinant CHO cells

리간드: 0.15 nM [125I] RTI-55Ligand: 0.15 nM [ 125 I] RTI-55

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

배양 시간/온도: 3 시간 @ 4 ℃Incubation time / temperature: 3 hours @ 4 ℃

배양 완충제: 100 mM NaCl, 50 mM 트리스 HCl, 1 μM 류펩틴, 10 μM PMSF, pH 7.4Culture buffer: 100 mM NaCl, 50 mM Tris HCl, 1 μM Lupeptin, 10 μM PMSF, pH 7.4

비 특이적인 리간드: 10 μM 노미펜신(Nomifensine)Nonspecific Ligands: 10 μM Nomifensine

Kd: 0.58 nMK d : 0.58 nM

Bmax: 0.047 pmole/단백질 ㎎B max : 0.047 pmole / protein mg

특이적인 결합: 90%Specific binding: 90%

정량적인 방법: 방사성 리간드 결합Quantitative Methods: Radioligand Binding

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

수용체 및 전달체 단백질에서 특이적인 결합의 디하이드로테트라베나진 이성체 10 μM 용액에 의한 억제 퍼센트(측정 시 IC50 값을 괄호 안에 나타낸다)Percent inhibition by 10 μM solution of dihydrotetrabenazine isomers of specific binding in receptor and transporter proteins (IC 50 values in parentheses when measured) 수용체/단백질Receptor / protein 이성체 AIsomer A 이성체 BIsomer B 이성체 CIsomer C 이성체 DIsomer D (a) α2A 수용체(a) α 2A receptor 8686 1212 1313 8787 (b) α2B 수용체(b) α 2B receptor 4444 1414 -7-7 5050 (c) D1 수용체(c) D 1 receptor 7878 1One 66 3838 (d) D2L 수용체(d) D 2L receptor 8787 1616 -14-14 5858 (e) D3 수용체(e) D 3 receptor 6969 77 99 6363 (f) I2 수용체(f) I 2 receptor 7474 88 00 5555 (g) σ1 수용체(g) σ 1 receptor 4848 8282 5959 8282 (h) σ2 수용체(h) σ 2 receptor 6464 6464 6161 6969 (i) SERT(i) SERT 1919 86(0.35)86 (0.35) 77(2.75)77 (2.75) 88 (j) DAT(j) DAT 33 44 -2-2 22

실시예Example 7 7

효소 분석Enzyme analysis

이성체 B 및 C를 CNS에서 모노아민의 처리에 관여하는 효소, 즉 카테콜 O-메틸 트랜스퍼라제(COMT), 모노아민 옥시다제 A 및 모노아민 옥시다제 B를 억제하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 상기 사용된 분석 방법을 하기에 개시하며 결과를 표 7에 나타낸다.Isomers B and C were tested for their ability to inhibit enzymes involved in the treatment of monoamines in the CNS, namely catechol O-methyl transferase (COMT), monoamine oxidase A and monoamine oxidase B. The analytical method used above is described below and the results are shown in Table 7.

(a) 카테콜 O-(a) catechol O- 메틸methyl 트랜스퍼라제Transferase (( COMTCOMT ) 억제Suppress

출처: 돼지 간Source: Pig Liver

기질: 3 mM 카테콜 + S-아데노실-L-[3H]메티오닌Substrate: 3 mM catechol + S-adenosyl-L- [ 3 H] methionine

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

예비 배양 시간/온도: 없음Preincubation Time / Temperature: None

배양 시간: 60 분 @ 37 ℃Incubation time: 60 minutes @ 37 ℃

배양 완충제: 100 mM 인산 칼륨, 10 mM MgCl2, 12 단위/㎖ 아데노신 데아미나제를 함유하는 3 mM DTT, pH 7.4Culture buffer: 3 mM DTT with 100 mM potassium phosphate, 10 mM MgCl 2 , 12 units / ml adenosine deaminase, pH 7.4

정량적인 방법: [3H] 구이아콜(guiacol)의 정량분석Quantitative method: [ 3 H] quantitative analysis of guiacol

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(b) 모노아민 (b) monoamines 옥시다제Oxidase MAOMAO -A 억제-A suppression

출처: 인간 재조합체Source: human recombinant

기질: 50 μM 키누라민(kynuramine)Substrate: 50 μM kynuramine

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

예비 배양 시간/온도: 15 분 @ 37 ℃Pre-incubation time / temperature: 15 minutes @ 37 ℃

배양 시간: 60 분 @ 37 ℃Incubation time: 60 minutes @ 37 ℃

배양 완충제: 100 mM KH2PO4, pH 7.4Culture buffer: 100 mM KH 2 PO 4 , pH 7.4

정량적인 방법: 4-하이드록시퀴놀린의 분광형광 측정에 의한 정량분석Quantitative method: Quantitative analysis by spectrofluorescence measurement of 4-hydroxyquinoline

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

(c) 모노아민 (c) monoamines 옥시다제Oxidase MAOMAO -B 억제-B suppress

출처: 인간 재조합체Source: human recombinant

기질: 50 μM 키누라민Substrate: 50 μM Kinuramine

비히클: 1% DMSOVehicle: 1% DMSO

예비 배양 시간/온도: 15 분 @ 37 ℃Pre-incubation time / temperature: 15 minutes @ 37 ℃

배양 시간: 60 분 @ 37 ℃Incubation time: 60 minutes @ 37 ℃

배양 완충제: 100 mM KH2PO4, pH 7.4Culture buffer: 100 mM KH 2 PO 4 , pH 7.4

정량적인 방법: 4-하이드록시퀴놀린의 분광형광 측정에 의한 정량분석Quantitative method: Quantitative analysis by spectrofluorescence measurement of 4-hydroxyquinoline

유의수준 기준: ≥50%의 최대 자극 또는 억제Significance level criteria: Maximum stimulation or inhibition of ≥50%

디하이드로테트라베나진 이성체 10 μM 용액에 의한 효소 활성의 억제 퍼센트Percent Inhibition of Enzyme Activity by 10 μM Solution of Dihydrotetrabenazine Isomer 효소enzyme 이성체 AIsomer A 이성체 BIsomer B 이성체 CIsomer C 이성체 DIsomer D (a) COMT(a) COMT -12-12 -22-22 (b) MAO-A(b) MAO-A 33 33 (c) MAO-B(c) MAO-B -5-5 -5-5

실시예Example 8 8

세포 분석Cell analysis

인간 배아 신장 세포에 의한 세로토닌(5-하이드록시트립타민)의 흡수를 억제하는 이성체 B 및 C의 능력을 하기의 분석 조건을 사용하여 측정하였다.The ability of isomers B and C to inhibit the uptake of serotonin (5-hydroxytryptamine) by human embryonic kidney cells was measured using the following analytical conditions.

표적: 인간 HEK-293 세포Target: Human HEK-293 Cells

비히클: 0.4% DMSOVehicle: 0.4% DMSO

배양 시간/온도: 10 분 @ 25 ℃Incubation time / temperature: 10 minutes @ 25 ℃

배양 완충제: 5 mM 트리스-HCl, 7.5 mM HEPES, 120 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.2 mM CaCl2, 1.2 mM MgSO4, 5 mM 글루코스, 1 mM 아스코르브산, pH 7.1Culture buffer: 5 mM Tris-HCl, 7.5 mM HEPES, 120 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.2 mM CaCl 2 , 1.2 mM MgSO 4 , 5 mM Glucose, 1 mM Ascorbic Acid, pH 7.1

정량적인 방법: [3H] 세로토닌 흡수의 정량분석Quantitative Methods: [ 3 H] Quantitative Analysis of Serotonin Uptake

유의수준 기준: 플럭세틴 반응에 대한 [3H] 세로토닌 흡수의 ≥50%의 억제Level of significance criteria: Inhibition of ≧ 50% of [ 3 H] serotonin uptake on fluxetine response

결과result

화합물 B는 길항물질이고 10 μM의 농도에서 세로토닌 흡수의 56%를 억제하는 것으로 나타났다. 화합물 B는 7.53 μM의 IC50을 가졌다.Compound B was antagonist and was shown to inhibit 56% of serotonin uptake at a concentration of 10 μM. Compound B had an IC 50 of 7.53 μM.

화합물 C는 또한 길항물질이고 10 μM의 농도에서 세로토닌 흡수의 86%를 억제하는 것으로 나타났다. 화합물 B는 1.29 μM의 IC50을 가졌다.Compound C is also an antagonist and has been shown to inhibit 86% of serotonin uptake at a concentration of 10 μM. Compound B had an IC 50 of 1.29 μM.

실시예Example 9 9

5-5- HTHT 1D1D /1B/ 1B 결합 분석 Binding analysis

5-HT1D /1B 수용체에 결합하는 화합물 B 및 화합물 C의 능력을 문헌[Millan, MJ et al.(2002) Pharmacol . Biochem . Behav . 71, 589-598]에 개시된 것에 근거한 분석을 사용하여 시험하였다. [N-메틸 3H]GR-125743을 5-HT1D 및 5-HT1B 수용체 모두에 대한 방사성 리간드로서 사용하였다. 성숙한 SD 래트 전뇌 P2 막(Chazot et al., 1993)을 상기 분석에 사용하였다. 상기 사용된 분석 완충제는 4 mM 염화 칼슘, 0.1% 아스코르브산 및 10 μM 파길린을 함유하는, 실온에서 pH 7.7의 50 mM 트리스-HCl이었다. 5-HT(10 μM)를 사용하여 비 특이적인 결합을 한정하였다. 1 nM [3H] GR-125743과의 배양을 실온에서 1 시간 동안 수행하였으며, 상기 반응을 0.1% 폴리에틸렌이민 중에 예비 침지시킨 GF/B 필터를 통해 브랜델 하베스터를 사용하는 고속 여과에 의해 종결시킨 다음, 빙수 완충제(0.1% BSA가 보충됨)로 3 회 세척하였다. 10-10 내지 10-4 M의 용량 범위를 사용하였다. 생성된 경쟁 곡선을 그래프패드 프리즘 4 패키지를 사용하여 분석하였다.The ability of Compound B and Compound C to bind the 5-HT 1D / 1B receptor is described in Millan, MJ et al . (2002) Pharmacol . Biochem . Behav . 71, 589-598, using the assays based on those disclosed. [N-methyl 3 H] GR-125743 was used as radioligand for both 5-HT 1D and 5-HT 1B receptors. Mature SD rat forebrain P 2 membrane (Chazot et al ., 1993) was used for this analysis. The assay buffer used was 50 mM Tris-HCl, pH 7.7 at room temperature, containing 4 mM calcium chloride, 0.1% ascorbic acid and 10 μM pagiline. 5-HT (10 μM) was used to define nonspecific binding. Incubation with 1 nM [ 3 H] GR-125743 was performed at room temperature for 1 hour and the reaction was terminated by high speed filtration using a Brandel Harvester through a GF / B filter pre-soaked in 0.1% polyethyleneimine. It was then washed three times with ice water buffer (supplemented with 0.1% BSA). Doses ranging from 10 −10 to 10 −4 M were used. The resulting competition curve was analyzed using GraphPad Prism 4 package.

화합물 B와 C는 모두 래트 전뇌 막에 대한 [3H][N-메틸]GR-125743 결합의 불충분한 치환(IC50 값 > 10-4 M)을 나타내었으며, 이는 B와 C가 모두 5-HT1D /B 수용체에 대해 낮은 친화성을 가짐을 시사한다.Compounds B and C both exhibited insufficient substitution of [ 3 H] [N-methyl] GR-125743 binding to the rat forebrain membrane (IC 50 value> 10 -4 M), where both B and C are 5- Suggests a low affinity for the HT 1D / B receptor.

실시예Example 10 10

CacoCaco -2 흡수 분석을 사용한 -2 using absorption analysis 디하이드로테트라베나진Dihydrotetrabenazine 이성체 A, B, C 및 D의 장 침투성의 측정 Determination of intestinal permeability of isomers A, B, C and D

Caco-2 흡수 분석은 약물의 생체 내 장 흡수의 생체 외 평가에 잘 확립된 시스템이다(문헌[Meunier et al., Cell Biology and Toxicology, 11:187-194, Wils et al., Cell Biology and Toxicology, 10:393-397 및 Gres et al., Pharm Sci., 15(5):726-732]을 참조하시오).Caco-2 uptake assay is a well established system for the in vitro evaluation of in vivo intestinal absorption of drugs (Meunier et al., Cell Biology and Toxicology , 11: 187-194, Wils et al., Cell Biology and Toxicology 10: 393-397 and Gres et al., Pharm Sci ., 15 (5): 726-732).

상기 분석은 미세다공성 필터에서 대략 21일의 기간 동안 배양 시 장 세포로 분화하는 Caco-2 세포의 능력에 의존한다. 상기 배양 기간 동안, Caco-2 세포는 자발적인 형태 및 생화학적 변화를 겪으며, 밀착된 세포 연접뿐만 아니라 정단표면 (apical surface)상의 잘 한정된 잇솔질(brush) 경계와 극성화된 단층을 생성한다. 따라서, 상기 세포를 약물 침투성의 분석에 대한 생체 외 모델로서 사용할 수 있다.The assay relies on the ability of Caco-2 cells to differentiate into intestinal cells in culture for a period of approximately 21 days in a microporous filter. During this incubation period, Caco-2 cells undergo spontaneous morphology and biochemical changes, producing not only tight cell junctions but also well defined brush boundaries and polarized monolayers on the apical surface. Thus, the cells can be used as an in vitro model for analysis of drug permeability.

상기 Caco-2 단층을 통한 흡수를 2 개의 방향으로, 즉 정점에서 기저 쪽으로 (apical-to-basolateral)또는 기저 쪽에서 정점으로(basolateral-to-apical), 상기 화합물을 각각 정점 또는 기저 쪽 실(chamber)에 가함으로써 측정할 수 있다. 다양한 시점에서, 샘플들을 상기 단층을 통한 겉보기 침투성 계수(Papp)에 의해 측정되는 흡수율 분석을 위해 상기 수용기-실로부터 수거한다.Absorption through the Caco-2 monolayer in two directions, i.e., apical-to-basolateral or basolateral-to-apical, from the apex to the apex or basal chamber, respectively. Can be measured. At various time points, samples are collected from the receiver-chamber for absorption analysis as measured by the apparent permeability coefficient ( Papp ) through the monolayer.

상기 Papp 값은 세포 통과(세포막을 통한) 및 세포 주위(세포 간의 밀착된 연접부를 통해) 경로 모두를 통한 시험 제품 침투성의 조합을 반영한다. 이러한 경로의 상대적인 기여는 주어진 pH에서 상기 시험 제품의 pKa, 분배 계수(log D), 분자 반경 및 전하에 따라 변한다. 이어서 Papp 값을 사용하여 Caco-2 단층을 통한 침투성에 대해 상기 화합물들을 등급화할 수 있다.The Papp value reflects the combination of test product permeability through both cell passage (through the cell membrane) and around the cell (via tight junctions between cells). The relative contribution of this pathway varies with the pKa, partition coefficient (log D), molecular radius and charge of the test product at a given pH. Then Papp Values can be used to grade these compounds for permeability through Caco-2 monolayers.

50 μM에서 4 개의 디하이드로테트라베나진 이성체 A, B, C 및 D의 겉보기 침투성 계수(Papp)를 Caco-2 흡수 모델을 사용하여 측정하고 낮은, 중간 및 높은 침투성의 비교 화합물에 대해 등급화하였다. 방사성 표지된 비교 표준 만니톨(낮은), 살리실산(중간) 및 테스토스테론(높은)을 사용하여 침투성 등급을 설정하였다. 각각의 디하이드로테트라베나진 시험 제품의 Papp 값을 1 시간 후에 공여 및 수용 구획 중의 그의 농도를 측정함으로써 평가하였다. pH 7.4에서 정점에서 기저 쪽으로의 세포 단층을 통한 흡수를 측정하였다. Papp 값의 평가에 사용된 Caco-2 세포를 26일 동안 12-웰 플레이트 중의 트랜스웰(Transwell) 삽입물 상에서 증식시켰다. 단층 완전성이 상피통과 전기 저항(Ohm-㎠) 및 루시퍼 옐로우(Lucifer Yellow)의 방법에 의해 상기 흡수 분석 전후에 입증되었다.Apparent permeability coefficients ( Papp ) of the four dihydrotetrabenazine isomers A, B, C and D at 50 μM were measured using Caco-2 uptake model and graded for low, medium and high permeability comparative compounds . Permeability grades were set using the radiolabeled comparative standards mannitol (low), salicylic acid (medium) and testosterone (high). The Papp value of each dihydrotetrabenazine test product was evaluated after 1 hour by measuring its concentration in the donor and receiving compartments. Uptake through the cell monolayer from the apex to the basal at pH 7.4 was measured. Caco-2 cells used for evaluation of Papp values were grown on Transwell inserts in 12-well plates for 26 days. Monolayer integrity was demonstrated before and after the absorption assay by methods of epithelial pain electrical resistance (Ohm-cm 2) and Lucifer Yellow.

물질 및 방법Substances and Methods

만니톨, 살리실산 및 테스토스테론의 모액들을 50 mM로 메탄올 중에서 제조하였다. 상기 분석일에, 비교 표준물들을 행크의 균형 염 용액(HBSS)(pH 7.4)으로 50 μM의 최종 농도로 희석하였다. 이어서 방사성 표지된 14C-만니톨, 3H-테스토스테론 및 14C-살리실산을 이들의 상응하는 표지되지 않은 배지에 가하여 0.35 내지 0.65 μCi/㎖의 최종 비 활성을 얻었다. 디하이드로테트라베나진 이성체 샘플을 DMSO 중의 50 mM의 농도로 제조하였다. 각각의 모액을 HBSS 완충제(pH 7.4)로 50 μM의 최종 작용 온도로 추가 희석하였다.Mother liquors of mannitol, salicylic acid and testosterone were prepared in methanol at 50 mM. On the day of the assay, the comparative standards were diluted to a final concentration of 50 μM with Hank's Balanced Salt Solution (HBSS), pH 7.4. Radiolabeled 14 C-mannitol, 3 H-testosterone and 14 C-salicylic acid were then added to their corresponding unlabeled media to obtain a final specific activity of 0.35 to 0.65 μCi / ml. Dihydrotetrabenazine isomer samples were prepared at a concentration of 50 mM in DMSO. Each mother liquor was further diluted with HBSS buffer (pH 7.4) to a final working temperature of 50 μM.

상기 Caco-2 세포 현탁액을 하기와 같이 제조하였다. 계대 번호 29(아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(VA, USA))로부터의 Caco-2 초기 세포 ID No. Caco-29-080299의 하나의 바이알을 해동시키고 Caco-2 배양 배지를 함유하는 150 ㎠ 플라스크 중의 배양물에 넣었다. 융합 시, 상기 배양 배지를 제거하고 세포를 PBS 5 ㎖로 세척하였다. 세포가 37 ℃에서 약 10 분 동안 0.25% 트립신-EDTA(플라스크당 2.0 ㎖)를 첨가하고 배양한 후에 탈착되었다. 세포의 탈착을 현미경 하에서 모니터하고 Caco-2 배양 배지 10 ㎖을 첨가하여 중지시켰다. 세포 생육성 및 농도를 트립판 블루 제외 방법에 의해 평가하였다. 일단 세포 밀도 및 생육성을 측정하였으면, Caco-2 세포를 2.0 x 105 세포/㎖의 최종 작용 농도로 배양 배지로 희석하였다. 상기 Caco-2 배양 배지는 둘베코의 변경된 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium), 10% 소 태아 혈청, 100 μM 불필수 아미노산, 100 U/㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 함유하였다.The Caco-2 cell suspension was prepared as follows. Caco-2 initial cell ID No. from passage number 29 (American type culture collection (VA, USA)). One vial of Caco-29-080299 was thawed and placed in culture in a 150 cm 2 flask containing Caco-2 culture medium. Upon fusion, the culture medium was removed and cells were washed with 5 ml PBS. Cells were detached after adding and incubating 0.25% trypsin-EDTA (2.0 ml per flask) at 37 ° C. for about 10 minutes. Desorption of cells was monitored under the microscope and stopped by addition of 10 ml of Caco-2 culture medium. Cell viability and concentration were assessed by trypan blue exclusion method. Once cell density and viability were measured, Caco-2 cells were diluted in culture medium to a final working concentration of 2.0 × 10 5 cells / ml. The Caco-2 culture medium contained Dulbecco's Modified Eagle Medium, 10% fetal bovine serum, 100 μM essential amino acid, 100 U / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin.

코스타 폴리카보네이트 멤브레인(0.4 ㎛ 기공 크기)을 37 ℃ 물 재킷(water-jacketed) 배양기에서 1 시간 동안 5% CO2와 함께 Caco-2 배양 배지로 예비 평형화시켰다. 상기 정점 실의 내용물을 제거하고 500 ㎕의 Caco-2 세포 현탁액(200 000 세포/㎖)으로 대체시켰다. 세포를 37 ℃ 물 재킷 배양기에서 26일 동안 5% CO2와 함께 배양물에서 추가로 유지시켰다.Costa polycarbonate membranes (0.4 μm pore size) were pre-equilibrated with Caco-2 culture medium with 5% CO 2 for 1 hour in a 37 ° C. water-jacketed incubator. The contents of the apical chamber were removed and replaced with 500 μl of Caco-2 cell suspension (200 000 cells / ml). Cells were further maintained in culture with 5% CO 2 for 26 days in a 37 ° C. water jacketed incubator.

상기 분석 전에, 모든 단층들을 HBSS로 2 회 세척하고 그들의 상피통과 전기 저항(TEER)을 밀리셀(Millicell)-ERS 미터로 측정하였다. 세포의 부재 하에서 획득한 TEER 값을 백그라운드 신호로서 제하였다. 150 Ohm-㎠ 이상의 TEER 값을 갖는 단층만을 상기 흡수 분석 실험에 사용하였다.Prior to the analysis, all monolayers were washed twice with HBSS and their epithelial pain and electrical resistance (TEER) were measured by Millicell-ERS meters. TEER values obtained in the absence of cells were subtracted as background signal. Only monolayers with TEER values of at least 150 Ohm-cm 2 were used in the absorption assay.

모든 흡수 실험을 pH 7.4에서 3 중으로 수행하였다. 각각의 비교 표준물 및 디하이드로테트라베나진 시험 제품의 흡수율을 정점에서 기저 쪽으로 평가하였다. 각 작용 용액(50 μM의 비교 표준물 및 시험 제품)의 분액(100 ㎕)을 초기 농도(C0)의 측정을 위해 분석 시작 시 챙겨두었다.All absorption experiments were performed in triplicate at pH 7.4. The absorbance of each comparative standard and dihydrotetrabenazine test product was evaluated from peak to base. Aliquots (100 μl) of each working solution (50 μM of comparative standard and test product) were taken at the start of the assay for determination of initial concentration (C 0 ).

공여 실의 내용물을 시험 제품 또는 비교 화합물을 함유하는 행크스 균형 염 용액 500 ㎕로 대체시킴으로써 흡수 실험을 개시시켰다. 세포를 흡수 분석을 위해 상기 CO2 배양기로 반송시켰다. 100 ㎕의 샘플을 1 시간 후에 수용 및 공여 실로부터 수거하고 이를 사용하여 회수율을 측정하였다. 방사성 표지된 비교 표준물, 만니톨, 살리실산 및 테스토스테론을 품질 대조군으로서 및 디하이드로테트라베나진 시험 제품의 비교 등급화를 위해 사용하였다.Absorption experiments were initiated by replacing the contents of the donor chamber with 500 μl Hanks balanced salt solution containing the test product or comparative compound. Cells were returned to the CO 2 incubator for uptake analysis. 100 μl of sample was collected from the receiving and donor chamber after 1 hour and used to determine recovery. Radiolabeled comparative standards, mannitol, salicylic acid and testosterone were used as quality controls and for comparative grading of the dihydrotetrabenazine test product.

상기 흡수 실험의 끝에서, 각 세포 단층의 완전성을 상기 정점에서 기저 쪽으로부터의 루시퍼 옐로우의 누출을 모니터함으로써 평가하였다. 모든 용액들을 상기 정점 및 기저 쪽 실로부터 제거하였다. 상기 기저 쪽실을 새로운 HBSS 1.5 ㎖로 다시 채운 반면, 정점 실은 120 ㎍/㎖ 루시퍼 옐로우 용액 0.5 ㎖로 충전시켰다. 세포를 1 시간 동안 상기 배양기로 반송하고, 그 후에 100 ㎕의 샘플을 수거하고 428 ㎚에서 스펙트라맥스(SpectraMax) 340PC-플레이트 판독기로 분광측정에 의해 정량분석하였다.At the end of the uptake experiment, the integrity of each cell monolayer was assessed by monitoring the leakage of lucifer yellow from the base at the apex. All solutions were removed from the vertex and base seals. The basal thread was refilled with 1.5 mL of fresh HBSS, while the apex thread was filled with 0.5 mL of 120 μg / mL lucifer yellow solution. Cells were returned to the incubator for 1 hour, after which 100 μl of sample was collected and quantitated by spectrophotometry with a SpectraMax 340PC-plate reader at 428 nm.

20 ㎕ 부피의 각각의 방사성 표지된 샘플을 섬광 칵테일(ScintiSafe 30%) 10 ㎖에 가하고 액체 섬광 분석기(1900CA Tri-Carb)로 5 분까지 카운트하였다.A 20 μl volume of each radiolabeled sample was added to 10 ml of scintillation cocktail (ScintiSafe 30%) and counted up to 5 minutes with a liquid scintillation analyzer (1900CA Tri-Carb).

Caco-2 세포 배양을 액체 크로마토그래피-직렬/질량 분광측정(LC-MS/MS) 방법을 사용하여 디하이드로테트라베나진의 존재에 대해 분석하였다.Caco-2 cell cultures were analyzed for the presence of dihydrotetrabenazine using liquid chromatography-serial / mass spectrometry (LC-MS / MS) methods.

겉보기 침투성 계수를 식 Papp = dQ/dt x 1/A x 1/C0(㎝/초)(여기에서 dQ/dt는 화합물의 확산 속도(㎍/초 또는 적분 면적/초)이고, A는 전체 세포막 표면적(㎠)이고, C0는 초기 농도(㎍/㎖ 또는 적분 면적/초)이다)을 사용하여 계산하였다.The apparent permeability coefficient is given by the formula Papp = dQ / dt x 1 / A x 1 / C 0 (cm / sec), where dQ / dt is the diffusion rate of the compound (μg / sec or integral area / sec) and A is the total Calculated using cell membrane surface area (cm 2) and C 0 is the initial concentration (μg / ml or integral area / sec).

상기 상이한 디하이드로테트라베나진 시험 제품의 정점에서 기저 쪽으로의 Papp 값을 비교 표준에 대해 측정한 Papp 값과 비교하였다. 결과를 표 8에 나타낸다. 디하이드로테트라베나진의 화합물 C, D 및 A는 21.14 x 10-6, 24.87 x 10-6, 및 25.52 x 10-6 ㎝/초의 각각의 Papp 값을 가지며, 이는 테스토스테론 비교 표준물에 필적할만하다.The different-dihydro-tetra vena binary one Papp measured over a Papp value of the bottom side at the height of the specimen compared to standard Compared with value. The results are shown in Table 8. Compounds C, D and A of dihydrotetrabenazine were 21.14 × 10 −6 , 24.87 × 10 −6 , and 25.52 × 10 −6 cm / sec, respectively. Papp Value, which is comparable to a testosterone comparison standard.

화합물 B는 11.98 x 10-6 ㎝/초의 Papp 값을 가지며, 이는 살리실산 비교 표준과 유사하다.Compound B has a Papp value of 11.98 × 10 −6 cm / sec, which is similar to the salicylic acid comparison standard.

Figure 112006064994282-PCT00035
Figure 112006064994282-PCT00035

화합물 C, D 및 A는 테스토스테론 값에 가까운 Papp 값을 가지며, 이는 상기 화합물들이 caco-2 모델에서 높은 침투성을 가짐을 가리키는 반면, 화합물 B는 살리실산과 테스토스테론 값 사이의 Papp 값을 갖고, 이는 상기가 Caco-2 모델에서 중간 침투성을 가짐을 가리킨다. 이러한 결과는 상기 4 개의 디하이드로테트라베나진 이성체들이 생체 내에서 장 상피를 통해 고도로 흡수될 것임을 시사한다.Compounds C, D and A have a Papp value close to the testosterone value, indicating that the compounds have high permeability in the caco-2 model, while compound B has a Papp value between salicylic acid and testosterone values, It has a medium permeability in Caco-2 model. These results suggest that the four dihydrotetrabenazine isomers will be highly absorbed through the intestinal epithelium in vivo.

실시예Example 11 11

테트라베나진Tetrabenazine 및  And 디하이드로테트라베나진Dihydrotetrabenazine 이성체 B 및 C의 진정 성질의 비교 Comparison of soothing properties of isomers B and C

연구를 본 발명의 디하이드로테트라베나진 이성체가 진정 성질을 갖는 지의 여부를 측정하기 위해 래트에서 수행하였다. 상기 이성체들의 래트에서의 자발적인 운동 활동에 대한 효과를 하기 나타낸 방법을 사용하여 테트라베나진 및 할로페리돌에 의해 생성된 효과와 비교하였다.Studies were conducted in rats to determine whether the dihydrotetrabenazine isomers of the present invention had sedative properties. The effect on spontaneous motor activity in rats of these isomers was compared with the effect produced by tetrabenazine and haloperidol using the method shown below.

방법Way

수컷 스프래그 다우리 래트(Sprague-Dawley rats: Charles River Laboratories, Saint-Germain/L'Arbresle, France)(연구 시작 시 체중 200 내지 250 g)를 연구에 사용하였다. 상기 래트를 하기의 환경 조건을 갖는 방 시설에서 마크롤론 유형 III 우리에서 우리당 2 또는 3 마리씩 수용하였다: 온도: 20±2℃, 습도: 최소 45%, 공기 변화: >12/시간, 명암 주기 12시간/12시간[7:00 a.m. 시작]. 상기 래트를 상기 연구의 개시 전에 5일 이상 상기 조건에 익숙하게 하였다. 상기 래트에게 먹이(Dietex, Vigny, France, ref. 811002)와 물(수통 중의 수돗물)을 자유롭게 제공하였다.Male Sprague-Dawley rats: Charles River Laboratories, Saint-Germain / L'Arbresle, France (200-250 g body weight at the start of the study) were used for the study. The rats were housed 2 or 3 birds per cage in macrolon type III cages in a room facility with the following environmental conditions: temperature: 20 ± 2 ° C., humidity: at least 45%, air change:> 12 / hour, contrast cycle 12 Time / 12 hours [7:00 am start]. The rats were accustomed to the conditions for at least 5 days prior to commencement of the study. The rats were freely given food (Dietex, Vigny, France, ref. 811002) and water (tap water in the water bottle).

옥수수 오일 중의 각 시험 화합물의 용액을 실험 당일에 새로 제조하였다. 할로페리돌을 탈이온수 중의 0.5% 하이드록시에틸셀룰로즈 중에서 제조하였다. 비히클 또는 시험 화합물을 단일 용량(0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏, 2 ㎖/㎏ i.p.)으로 투여하였다. 비교 화합물 할로페리돌(1 ㎎/㎏)을 i.p.(복강 내) 투여하였다(2 ㎖/㎏).A solution of each test compound in corn oil was freshly prepared on the day of the experiment. Haloperidol was prepared in 0.5% hydroxyethylcellulose in deionized water. Vehicle or test compound was administered in single doses (0.3, 1, 3 and 10 mg / kg, 2 ml / kg i.p.). Comparative compound haloperidol (1 mg / kg) was administered i.p. (intraperitoneally) (2 mL / kg).

동물들을 낮은 빛 강도(최대 50 룩스)의 방에서 비디오 카메라 하에 플렉시유리 우리에 넣었다. 투여 후 45 분 및 3 시간 후에, 운동 활동을 비디오 영상 분석기(Videotrack, View Point, France)를 사용하여 20 분의 기간 동안 측정하였다. 운동 활동을 투여 후 1 시간째에 비교 그룹(할로페리돌)에서 기록하였다. 보행 운동의 회수 및 지속기간 및 비활동 지속기간을 측정하였다. 상기 운동 활동 측정의 끝에서(45 분 및 3 시간), 눈꺼풀 닫힘 및 각성을 상기 플렉시유리 우리에서 하기와 같이 기록하였다:Animals were placed in plexiglass cages under video cameras in rooms of low light intensity (up to 50 lux). 45 minutes and 3 hours after dosing, motor activity was measured over a 20 minute period using a video image analyzer (Videotrack, View Point, France). Motor activity was recorded in the comparison group (haloperidol) 1 hour after administration. The number and duration of walking exercise and duration of inactivity were measured. At the end of the motor activity measurement (45 minutes and 3 hours), eyelid closure and awakening were recorded in the plexiglass cage as follows:

눈꺼풀 닫힘:Eyelid closed:

0: (정상적인) 눈꺼풀 확장 개방0: open (normal) eyelid extension

1: 눈꺼풀 약간 처짐1: slightly sagging eyelid

2: 눈꺼풀 처짐, 눈꺼풀이 대략 반으로 처짐2: sagging eyelids, sagging eyelids in half

3: 눈꺼풀 완전히 닫힘3: eyelid fully closed

각성:Awakening:

1: 매우 낮음, 혼미, 혼수상태, 거의 또는 전혀 반응없음1: very low, mixed, coma, little or no response

2: 낮음, 약간 혼미, <<둔함>>, 약간의 머리 또는 몸 움직임2: low, slightly confused, << dull >>, slight head or body movements

3: 다소 낮음, 가벼운 혼미, 고정기간 동안 약간의 탐험적 움직임3: rather low, mild chaos, some exploratory movements during fixed periods

4: 보통, 경계, 탐험적 움직임/느린 얼어붙음4: normal, vigilant, exploratory movement / slow freezing

5: 다소 높음, 가벼운 흥분, 긴장, 갑작스런 돌진 또는 얼어붙음5: rather high, mild excitement, strain, sudden rush or freezing

6: 매우 높음, 과도한 경계, 흥분, 달리기 또는 신체 움직임의 갑작스런 발작6: very high, excessive alertness, excitement, sudden seizures of running or physical movement

보행(큰) 움직임의 발생 횟수 및 지속기간(초) 및 비활동 지속기간(초)을 비디오 영상 분석기(Videotrack, ViewPoint, Lyon, France)를 사용하여 2 회 20 분간(투여 후 45 분 및 3 시간째) 측정하였다. 영상 추적을 상기 플렉시유리 우리 위에 놓인 비디오 카메라를 사용하여 수행하였으며, 이는 전체 운동 활동을 기록하였다. 상기 비디오 카메라에 의해 기록된 영상들을 디지털화하고 디지털 영상 점의 무게 중심 이동을 하기의 방법을 사용하여 추적하고 분석하였다: 상기 점의 무게 중심의 이동 속도를 측정하고 2 개의 임계값, 즉 임계 1(고속) 및 임계 2(저속)를 움직임 유형을 한정하기 위해 설정하였다. 동물이 움직이고 상기 점의 무게 중심 이동 속도가 임계 1을 초과하는 경우, 상기 움직임을 보행 움직임으로서 간주하였다. 상기 동물이 비활동인 채로 있고, 속도가 임계 2 미만인 경우, 상기 움직임을 비활동으로서 간주하였다.The number and duration of walking (large) movements (seconds) and duration of inactivity (seconds) were recorded twice using a video image analyzer (Videotrack, ViewPoint, Lyon, France) for 20 minutes (45 minutes and 3 hours after administration). I) measurement. Image tracking was performed using a video camera placed on the plexiglass cage, which recorded the overall athletic activity. Images recorded by the video camera were digitized and the center of gravity movement of the digital image point was tracked and analyzed using the following method: the speed of movement of the center of gravity of the point was measured and two thresholds, threshold 1 ( High speed) and threshold 2 (low speed) were set to define the type of movement. When the animal moves and the center of gravity movement speed of the point exceeds the threshold 1, the movement is considered as a walking movement. If the animal remained inactive and the speed was below threshold 2, the movement was considered inactive.

결과를 12 개의 개별적인 값들의 평균±SEM으로서 나타내었다. 통계학적 분석을 진정 작용에 대해 ANOVA(일방) 및 듄넷트(Dunnett's) t-시험 및 크루스칼 왈리스(Kruskal-Wallis)의 비 매개변수 시험에 이은 만 위트니(Mann & Whitney) U-시험을 사용하여 수행하였다. p<0.05의 p 값을 유의수준을 가리키는 것으로서 취하였다.Results are shown as mean ± SEM of 12 individual values. Statistical analyzes were conducted on the ANOVA and Dunnett's t-tests and the non-parametric tests of Kruskal-Wallis for sedation, followed by the Mann & Whitney U-test. Was carried out. A p value of p <0.05 was taken as indicating the significance level.

프로토콜protocol

그룹 크기 n=12Group size n = 12

그룹 1: 비교, 할로페리돌(1 ㎎/㎏ i.p.)Group 1: comparison, haloperidol (1 mg / kg i.p.)

그룹 2: 비히클 대조군(2 ㎖/㎏ i.p.)Group 2: vehicle control (2 mL / kg i.p.)

그룹 3: 테트라베나진(0.3 ㎎/㎏ i.p.)Group 3: tetrabenazine (0.3 mg / kg i.p.)

그룹 4: 테트라베나진(1 ㎎/㎏ i.p.)Group 4: tetrabenazine (1 mg / kg i.p.)

그룹 5: 테트라베나진(3 ㎎/㎏ i.p.)Group 5: tetrabenazine (3 mg / kg i.p.)

그룹 6: 테트라베나진(10 ㎎/㎏ i.p.)Group 6: tetrabenazine (10 mg / kg i.p.)

그룹 7: 이성체 C(0.3 ㎎/㎏ i.p.)Group 7: isomer C (0.3 mg / kg i.p.)

그룹 8: 이성체 C(1 ㎎/㎏ i.p.)Group 8: isomer C (1 mg / kg i.p.)

그룹 9: 이성체 C(3 ㎎/㎏ i.p.)Group 9: isomer C (3 mg / kg i.p.)

그룹 10: 이성체 C(10 ㎎/㎏ i.p.)Group 10: Isomer C (10 mg / kg i.p.)

그룹 11: 이성체 B(0.3 ㎎/㎏ i.p.)Group 11: isomer B (0.3 mg / kg i.p.)

그룹 12: 이성체 B(1 ㎎/㎏ i.p.)Group 12: isomer B (1 mg / kg i.p.)

그룹 13: 이성체 B(3 ㎎/㎏ i.p.)Group 13: isomer B (3 mg / kg i.p.)

그룹 14: 이성체 B(10 ㎎/㎏ i.p.)Group 14: Isomer B (10 mg / kg i.p.)

결과result

Figure 112006064994282-PCT00036
Figure 112006064994282-PCT00036

Figure 112006064994282-PCT00037
Figure 112006064994282-PCT00037

** ANOVA 일방에 이은 듄네트의 시험, 비히클 그룹(p,0.01)과 현저하게 상이함** Test of the Aneta one side of the net, significantly different from the vehicle group (p, 0.01)

상기 결과는 테트라베나진이 투여 후 45 분 및 3 시간째에 용량-의존적인 진정 효과를 생성시키는 반면, 이성체 B 및 이성체 C는 어느 시간에도 진정 효과를 보이지 않지만, 이성체 C는 투여 후 3 시간째에 가볍고 현저하지 않은 운동과다 효과를 보임을 입증한다.The results show that tetrabenazine produces a dose-dependent sedative effect at 45 minutes and 3 hours after administration, while isomer B and isomer C show no sedative effect at any time, while isomer C is 3 hours after administration. Demonstrates a light and not noticeable overweight effect.

실시예Example 12 12

약학 조성물Pharmaceutical composition

(i) 정제 제형 - I(i) Tablet Formulations-I

본 발명의 디하이드로테트라베나진을 함유하는 정제 조성물을, 디하이드로테트라베나진 50 ㎎을 희석제로서 락토오즈(BP) 197 ㎎ 및 윤활제로서 마그네슘 스테아레이트 3 ㎎과 혼합하고 압착시켜 공지된 방식으로 정제를 형성시킴으로써 제조한다.The tablet composition containing the dihydrotetrabenazine of the present invention was purified in a known manner by mixing and pressing 50 mg of dihydrotetrabenazine with 197 mg of lactose (BP) as a diluent and 3 mg of magnesium stearate as a lubricant and pressing. To form.

(( iiii ) 정제 제형 - Tablet formulation- IIII

본 발명의 디하이드로테트라베나진을 함유하는 정제 조성물을, 상기 화합물(25 ㎎)을 산화 철, 락토오즈, 마그네슘 스테아레이트, 옥수수 화이트 전분 및 활석과 혼합하고 압착시켜 공지된 방식으로 정제를 형성시킴으로써 제조한다.The tablet composition containing the dihydrotetrabenazine of the present invention is mixed with the compound (25 mg) with iron oxide, lactose, magnesium stearate, corn white starch and talc and compressed to form a tablet in a known manner. Manufacture.

(( iiiiii ) 캡슐 제형Capsule formulation

캡슐 제형을, 본 발명의 디하이드로테트라베나진 100 ㎎을 락토오즈 100 ㎎과 혼합하고 생성 혼합물을 표준 불투명 경질 젤라틴 캡슐에 충전시켜 제조한다.Capsule formulations are prepared by mixing 100 mg of the dihydrotetrabenazine of the invention with 100 mg of lactose and filling the resulting mixture into standard opaque hard gelatin capsules.

상당 내용Equivalent

다수의 변경 및 변화들을 본 발명의 기초가 되는 원리로부터 이탈됨 없이 상술한 본 발명의 특정 실시태양으로부터 수행할 수 있음은 쉽게 자명할 것이다. 모든 상기와 같은 변경 및 변화를 본 원에 의해 포함하고자 한다.It will be readily apparent that many modifications and variations can be made from the specific embodiments of the invention described above without departing from the underlying principles of the invention. All such modifications and variations are intended to be included herein.

Claims (34)

3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine. 실질적으로 순수한 형태인, 예를 들어 이성체 순도가 90% 초과, 전형적으로는 95% 초과, 보다 바람직하게는 98% 초과인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine in substantially pure form, for example, having an isomeric purity of greater than 90%, typically greater than 95%, more preferably greater than 98%. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,The method according to claim 1 or 2, (+)-이성체 형태인 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine in the (+)-isomeric form. 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진이 실질적으로 없는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 포함하는 조성물.A composition comprising 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine, substantially free of 3,11b- trans -dihydrotetrabenazine. 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진을 포함하고 5% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진, 바람직하게는 3% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진, 보다 바람직하게는 1% 미만의 3,11b-트랜스-디하이드로테트라베나진을 함유하는 조성물.3,11b- trans -dihydrotetrabenazine, including 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine, preferably less than 3%, 3,11b- trans -dihydrotetrabenazine, more Preferably, the composition contains less than 1% 3,11b- trans -dihydrotetrabenazine. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,The method according to claim 4 or 5, 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진이 (+)-이성체인 조성물.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine is a (+)-isomer. 하기 화학식 Ia를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3S,11bR 이성체:2 S , 3 S , 11b R of 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine having the formula (Ia) Isomers: 화학식 IaFormula Ia
Figure 112006064994282-PCT00038
Figure 112006064994282-PCT00038
 하기 화학식 Ib를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3R,11bS 이성체:2 R , 3 R , 11b S isomers of 3,11b- cis -dihydrotetrabenazine having the formula (Ib): 화학식 IbFormula Ib
Figure 112006064994282-PCT00039
Figure 112006064994282-PCT00039
 하기 화학식 Ic를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2R,3S,11bR 이성체:3,11b- cis to having Formula Ic - dihydro tetrahydro vena Qin 2 R, 3 S, 11b R Isomers: 화학식 IcFormula Ic
Figure 112006064994282-PCT00040
Figure 112006064994282-PCT00040
 하기 화학식 Id를 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진의 2S,3R,11bS 이성체:3,11b- cis to having Formula Id - dihydro tetrahydro vena Qin 2 S, 3 R, 11b S isomer: 화학식 IdChemical Formula Id
Figure 112006064994282-PCT00041
Figure 112006064994282-PCT00041
 21 ℃에서 메탄올 중에서 측정 시 -114.6°의 ORD[αD] 값을 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진 이성체.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine isomer having an ORD [α D ] value of −114.6 ° when measured in methanol at 21 ° C. 21 ℃에서 메탄올 중에서 측정 시 대략 +123°의 ORD[αD] 값을 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진 이성체.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine isomer having an ORD [α D ] value of approximately + 123 ° when measured in methanol at 21 ° C. 21 ℃에서 메탄올 중에서 측정 시 +150.9°의 ORD[αD] 값을 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진 이성체.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine isomer having an ORD [α D ] value of + 150.9 ° when measured in methanol at 21 ° C. 21 ℃에서 메탄올 중에서 측정 시 -145.7°의 ORD[αD] 값을 갖는 3,11b-시스-디하이드로테트라베나진 이성체.3,11b- cis -dihydrotetrabenazine isomer having an ORD [α D ] value of -145.7 ° when measured in methanol at 21 ° C. 본 발명의 표 1에 나타낸 분광학적 특성 및 본 발명의 표 3에 나타낸 크로마토그래피 및 임의로 ORD 특성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체.Dihydrotetrabenazine isomers having the spectroscopic properties shown in Table 1 of the present invention and the chromatography and optionally ORD properties shown in Table 3 of the present invention. 본 발명의 표 2에 나타낸 분광학적 특성 및 본 발명의 표 4에 나타낸 크로마토그래피 및 임의로 ORD 특성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체.Dihydrotetrabenazine isomers having the spectroscopic properties shown in Table 2 of the present invention and the chromatography and optionally ORD properties shown in Table 4 of the present invention. 본 발명의 표 1에 나타낸 분광학적 특성, 본 발명의 표 3에 나타낸 크로마토그래피 특성 및 좌선성 광학 활성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체 A.Dihydrotetrabenazine isomer A having the spectroscopic properties shown in Table 1 of the present invention, the chromatographic properties shown in Table 3 of the present invention, and left-right optical activity. 본 발명의 표 1에 나타낸 분광학적 특성, 본 발명의 표 3에 나타낸 크로마토그래피 특성 및 우선성 광학 활성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체 B.Dihydrotetrabenazine isomer B having spectroscopic properties shown in Table 1 of the present invention, chromatographic properties shown in Table 3 of the present invention and preferential optical activity. 본 발명의 표 2에 나타낸 분광학적 특성, 본 발명의 표 4에 나타낸 크로마토그래피 특성 및 우선성 광학 활성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체 C.Dihydrotetrabenazine isomer C having the spectroscopic properties shown in Table 2 of the present invention, the chromatographic properties shown in Table 4 of the present invention and preferential optical activity. 본 발명의 표 2에 나타낸 분광학적 특성, 본 발명의 표 4에 나타낸 크로마토그래피 특성 및 좌선성 광학 활성을 갖는 디하이드로테트라베나진 이성체 D.The dihydrotetrabenazine isomer D. having spectroscopic properties shown in Table 2 of the present invention, chromatographic properties shown in Table 4 of the present invention and left-handed optical activity. 유리 염기의 형태인 선행하는 청구항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진.Dihydrotetrabenazine as defined in any of the preceding claims in the form of a free base. 산 부가염의 형태인 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진.Dihydrotetrabenazine as defined in any one of claims 1 to 20 in the form of an acid addition salt. 제 22 항에 있어서,The method of claim 22, 염이 메탄 설포네이트 염인 디하이드로테트라베나진.Dihydrotetrabenazine, whose salt is a methane sulfonate salt. 약물 또는 요법, 예를 들어 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료, 또는 우울증의 치료에 사용하기 위한 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진.Claims 1 to 23 for use in the treatment of drugs or therapies, for example hypermotor movement disorders such as Huntington's disease, anti- chorea, elderly chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette's syndrome, or depression Dihydrotetrabenazine as defined in claim 1. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.A pharmaceutical composition comprising dihydrotetrabenazine as defined in any one of claims 1 to 23 and a pharmaceutically acceptable carrier. 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 치료, 또는 우울증의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진의 용도.The method according to any one of claims 1 to 23, for the manufacture of a medicament for the treatment of hyperkinetic movement disorders such as Huntington's disease, anti-balloon disease, geriatric chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette syndrome, or depression. Use of dihydrotetrabenazine as defined in the paragraph. 과운동성 운동 장애, 예를 들어 헌팅톤 병, 반무도병, 노인 무도병, 틱, 지연운동 이상증 및 뚜렛 증후군의 예방 또는 치료, 또는 우울증의 치료가 필요한 환자에서, 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 예방 또는 치료 유효량의 디하이드로테트라베나진을 투여함을 포함하는, 상기 예방 또는 치료 방법.Any one of claims 1 to 23 in a patient in need of the prevention or treatment of hyperkinetic movement disorders such as Huntington's disease, anti-balloon disease, geriatric chorea, tics, delayed dyskinesia and Tourette syndrome, or treatment of depression. A prophylactic or therapeutic method comprising administering a prophylactic or therapeutically effective amount of dihydrotetrabenazine as defined in claim. 하기 화학식 II의 화합물을 상기 화학식 II 화합물 중의 2,3-이중 결합을 수화시키기에 적합한 시약 또는 시약들과 반응시키고, 그 후에 요구될 경우 목적하는 디하이드로테트라베나진 이성체 형태를 분리 및 단리시킴을 포함하는, 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진의 제조 방법:Reacting a compound of formula II with a reagent or reagents suitable for hydrating the 2,3-double bond in the compound of formula II, and then separating and isolating the desired dihydrotetrabenazine isomeric form if desired A process for preparing dihydrotetrabenazine as defined in any one of claims 1 to 23 comprising: 화학식 IIFormula II
Figure 112006064994282-PCT00042
Figure 112006064994282-PCT00042
 하기 화학식 III의 화합물에 상기 화학식 III 화합물 중의 2,3-에폭사이드 그룹의 개환 조건을 가하고 그 후에 요구될 경우 목적하는 디하이드로테트라베나진 이성체 형태를 분리 및 단리시킴을 포함하는, 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 디하이드로테트라베나진의 제조 방법:To a compound of the formula A process for preparing dihydrotetrabenazine as defined in claim 23: 화학식 IIIFormula III
Figure 112006064994282-PCT00043
Figure 112006064994282-PCT00043
 제 29 항에 있어서,The method of claim 29, 제 27 항에 정의된 바와 같은 화학식 II의 알켄 화합물을 에폭사이드 그룹의 형성에 적합한 산화제(예를 들어 퍼옥시 산)와 반응시킴을 포함하는, 화학식 III 화합물의 제조 방법.A process for preparing a compound of formula III comprising reacting an alkene compound of formula II as defined in claim 27 with an oxidizing agent (eg, peroxy acid) suitable for the formation of an epoxide group. 제 28 항에 있어서,The method of claim 28, 3,11-트랜스-디하이드로테트라베나진을 인 할라이드 또는 인 옥시할라이드와 같은 탈수제로 탈수시킴을 포함하는, 화학식 II 화합물의 제조 방법.A process for preparing a compound of Formula II comprising dehydrating 3,11- trans -dihydrotetrabenazine with a dehydrating agent such as phosphorus halide or phosphorus oxyhalide. 하기 화학식 II의 화합물:A compound of formula II: 화학식 IIFormula II
Figure 112006064994282-PCT00044
Figure 112006064994282-PCT00044
 하기 화학식 III의 화합물:A compound of formula III: 화학식 IIIFormula III
Figure 112006064994282-PCT00045
Figure 112006064994282-PCT00045
 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물의 모셔(Mosher)의 산 에스테르.An acid ester of Mosher of a compound as defined in any one of claims 1 to 23.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN114106073A (en) * 2021-12-15 2022-03-01 湖北竹溪人福药业有限责任公司 Method for separating testosterone and testosterone isomer

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