KR20060014048A

KR20060014048A - 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법

Info

Publication number: KR20060014048A
Application number: KR1020057021572A
Authority: KR
Inventors: 하쎈 세란; 토마스 엠 디모로; 모하메드 애타위아; 멜리사 그레이스; 수드하카르 카디얄라; 데이비드 우르반스; 스코트 브루더; 그레고리 콜린스; 로라 제이 브라운; 제프 게신; 파멜라 엘 플로우하르; 캐써린 스미쓰; 존 시키어카
Original assignee: 디퍼이 스파인 인코포레이티드
Priority date: 2003-05-13
Filing date: 2004-05-13
Publication date: 2006-02-14
Also published as: AU2004251042A1; EP1631266B1; EP2286804A1; AU2004251042A2; JP2007502327A; MXPA05012275A; WO2005000283A2; EP1631266A2; WO2005000283A3; BRPI0410331A; CA2525928A1

Abstract

본 발명은 고특이성 사이토킨 길항제, MMP의 고친화성 길항제, 고특이성 p38 키나제 억제제 및 사이클린 화합물과 같은 길항제를 발병된 추간판으로 주사함에 의해 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

디스크 질환, 추간판, 섬유테, 수핵, 사이토킨 길항제

Description

퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법{A method of treating degenerative disc disease}

관련 출원

본 출원은 2003년 5월 13일자로 출원된 미국 특허원 제60/470,098호의 우선권을 주장하는, 2003년 6월 6일자로 출원된 미국 특허원 제10/456,948호의 부분 계속 출원인 2003년 6월 30일자로 출원된 미국 특허원 제10/610,355호의 부분 계속 출원인 2003년 8월 13일자 출원된 미국 특허원 10/640,412호 및 2003년 7월 31일자 출원된 미국 특허원 제10/631,487호의 부분 계속 출원이다. 당해 출원의 전반적인 교시는 본원에 참조로서 인용된다.

천연의 추간판은 섬유성 섬유테(fibrous annulus fibrosus)에 의해 둘려싸인 젤리형 수핵(nucleus pulposus)을 포함한다. 축 방향의 하중하에, 수핵은 압박되어 당해 하중을 섬유테로 방사상으로 전달한다. 적층된 특성의 섬유테는 수핵에 높은 인장력을 제공하여 이것이 전달된 하중에 응답하여 방사상으로 확장하도록 한다.

건강한 추간판에서, 수핵내 세포는 높은 %의 프로테오글리칸을 함유하는 세 포외 기질(ECM)를 생성한다. 이들 프로테오글리칸은 황화된 기능성 그룹을 함유함으로써 수분을 보유하게 되고 수핵에 쿠션 성질을 부가한다. 이들 수핵 세포는 또한 소량의 사이토킨 뿐만 아니라 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)를 분비할 수 있다. 이들 사이토킨 및 MMP는 수핵 세포 대사를 조절하는데 일조한다.

퇴행성 디스크 질환(DDD)의 몇몇 경우에, 추간판은 척추의 기타 부분에서의 물리적 불안정으로 인해 점차적으로 퇴행성이 된다. 이들 경우에, 수핵에 대한 증가된 하중 및 압력은 디스크내 세포(또는 침습성 대식세포)가 정상적인 양 보다 훨씬 많은 양의 상기 언급된 사이토킨을 방출하도록 한다. DDD의 또 다른 경우에, 유전학적 인자 또는 아폽토시스는 또한 수핵내 세포가 독성 양의 당해 사이토킨 및 MMP를 방출하도록 할 수 있다. 몇몇 경우에, 디스크의 펌프 작용이 작동하지 않아(예를 들어, 수핵내 프로테오글리칸의 농도의 감소로 인해) 디스크로의 영양물의 유입 뿐만 아니라 폐기물의 디스크 외부로의 유출을 지연시킬 수 있다. 이러한 폐기물을 제거하는 능력의 감소는 고수준의 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP를 축적시켜 신경 자극 및 통증을 유발할 수 있다.

DDD가 진행됨에 따라, 독성 수준의 사이토킨 및 MMP가 수핵에 존재하게 되어 세포외 기질을 분해하기 시작한다. 특히, MMP(사이토킨에 의해 매개되는 바와 같이)는 프로테오글리칸의 수분 함유 부분을 절단하기 시작하여 이의 수분 함유 능력을 감소시키기 시작한다. 당해 분해는 수핵의 유연성을 약화시키고 디스크내 하중 패턴을 변화시켜 섬유테를 판분리(delamination)시킬 수 있다. 이들 변화는 보다 물리적 불안정성을 유발함에 따라 세포가 보다 많은 사이토킨을 방출하도록 하고, 전형적으로는 MMP을 상향조절하도록 한다. 이러한 연속적증폭의 파괴 반응이 계속되고 DDD가 추가로 진행됨에 따라서 디스크는 부풀기("헤르니화된 디스크") 시작하여 결국 붕괴되어 수핵이 척수와 접촉하게 되어 통증을 유발하게 된다.

발명의 개요

본 발명자는 퇴행성 디스크 질환을 약물 치료 요법에 의해 효과적으로 치료하기 위한 다수의 과정을 개발하였다.

본 발명의 일 양태에 따라, 본 발명자는 길항제(예를 들어, 단백질)가 디스크 관통 투여되는 추간판(즉, 표적 조직은 퇴행성 디스크이다)을 치료하는 방법을 개발하였다. 본원에 사용된 바와 같이, 길항제는 억제제, 예를 들어, 수핵 및/또는 섬유테 세포로부터 방출되는 단백질과 같은 단백질 또는 단백질들(예를 들어, 사이토킨 및 MMP)의 억제제를 말한다. 당해 단백질은 DDD의 결과로서 독성 양으로 방출될 수 있다. 몇몇 양태에서, 길항제는 고특이성의 사이토킨 길항제(HSCA), 고친화성 항매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP), p38 키나제의 길항제 또는 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

당해 길항제를 표적화된 디스크로 직접 디스크 관통(transdiscally) 투여하는데는 몇가지 잇점이 있는 것으로 사료된다:

첫 번째로, HSCA는 사이토킨의 활성을 억제한다. HAAMMP 및 사이클린 화합물은 MMP의 활성을 억제한다. 사이토킨(예를 들어, 인터류킨 및 TNF-α) 및 MMP가 수핵의 세포외 기질(ECM)를 분해하는데 주요 역할을 하는 것으로 공지되어 있기 때 문에, 길항제를 치료학적 유효량으로 디스크 내로 직접 주사함에 의해 사이토킨 및/또는 MMP가 ECM을 추가로 분해시키는 것을 예방할 수 있다. 실제로, 길항제(예: HAAMMP)의 디스크 관통 투여는 퇴행성 디스크의 노화 과정을 효과적으로 중단시키는데 일조한다. 따라서, 본 발명은 DDD의 보다 조기 단계에서 퇴행성 디스크의 치료를 추구하여 ECM의 분해를 예방하는 것이다.

두 번째로, 사이클린 화합물 및 몇몇 HSCA는 TNF-α의 활성을 억제한다. 신경 말단 통각수용기가 섬유테내에 존재하고 TNF-α가 신경 자극에 관여한다는 것은 추가로 공지되어 있다. 디스크 공간으로 TNF-α 길항제(예를 들어, 사이클린 화합물)를 주사함으로써 또한 TNF-α가 디스크내에서 신경 자극을 유발하는 것을 예방하는 것으로 사료된다. 따라서, 이들 신경 자극으로 인한 통증은 효과적으로 제거될 수 있다.

세 번째로, 몇몇 길항제는 특이적이기 때문에, 이들은 비표적화된 세포, 조직 또는 단백질을 억제하지 않는다. 추가로, 길항제는, 당해 제제의 효과의 감소 없이 또한 디스크내로 주사될 수 있는 기타(예를 들어, 추가의) 치료학적 제제(예를 들어, 성장 인자)와 배합될 수 있다.

네 번째로, 디스크의 섬유테 부분은 치밀한 섬유 구조를 포함하기 때문에, 당해 디스크의 외부 성분은 길항제에 대한 적합한 저장소(depot)를 제공하여 디스크내에서의 반감기를 증가시킬 수 있다.

다섯 번째로, 하나 이상의 MMP는 침습성 대식세포, 수핵 세포 또는 섬유테 세포중 적어도 하나에 의해 분비될 수 있기 때문에, 사이클린 화합물의 디스크 관 통 주사는 유리하게도 본래의 공급처에서 MMP를 공격할 것이다.

따라서, 본 발명의 한 측면에서, 길항제가 a) 고특이성의 사이토킨 길항제, b) 고친화성의 항-매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP), c) p38 키나제의 길항제(즉, p38 키나제 억제제) 및 d) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 유효량의 제제를 포함하는 제제를 디스크 관통 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

일 양태에서, a) 고특이성의 사이토킨 길항제, b) 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP), c) p38 키나제의 길항제 및 d) 사이클린 화합물을 포함하는 유효량의 제제를 디스크 관통 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

일 양태에서, p38 키나제 억제제와 같은 길항제는 국소 조직에서의 농도가 약 5㎍/kg 내지 약 50㎍/kg이 되게하는 용량으로 투여된다. 일 양태에서, 당해 제제는 약 1cc 미만의 양으로 투여된다. 일 양태에서, 길항제는 제제중에 약 100mg/ml 이상의 양으로 존재한다. 일 양태에서, 길항제는 제제중에 약 0.5mg 이하의 양으로 존재한다.

본원에 기재된 몇몇 양태에서, 당해 제제는 지속 방출 장치, 예를 들어, 하이드로겔을 포함하는 지속 방출 장치를 추가로 포함한다. 일 양태에서, 지속 방출 장치는 방출 조절을 제공한다. 또 다른 양태에서, 지속 방출 장치는 연속 방출을 제공한다. 또 다른 양태에서, 지속 방출 장치는 간헐적 방출을 제공한다.

일 양태에서, 지속 방출 장치는 생체감지기를 포함한다. 일 양태에서, 지속 방출 장치는 다수의 미소구를 포함한다. 일 양태에서, 지속 방출 장치는 염증 반응 전달 시스템을 포함한다.

또 다른 양태에서, 길항제는 주로 지속 전달 장치를 통한 확산에 의해 지속 전달 장치로부터 방출된다. 또 다른 양태에서, 지속 전달 장치는 중합체이다. 일 양태에서, 길항제는 주로 지속 전달 장치의 생체분해에 의해 지속 전달 장치로부터 방출된다.

일 양태에서, 당해 제제는 추가로 하나 이상의 추가의(예를 들어, 제2, 제3 또는 제4) 치료제를 포함한다. 일 양태에서, 하나 이상의 추가의 치료제는 당해 길항제와 함께 공동(예를 들어, 연속적으로 또는 일시에) 투여된다. 일 양태에서, 당해 제제는 통증을 감소시키는 유효량으로 투여된다. 일 양태에서, 당해 제제는 수핵의 세포외 기질의 분해를 억제하는 유효량으로 투여된다. 추가의 치료제는 본원에 기재된 임의의 추가의 제제를 포함할 수 있고 본원에 기재된 임의의 길항제를 포함한다.

일 양태에서, 추가의 치료제는 성장 인자이다. 당해 성장 인자는 디스크 조직을 복구시키는 유효량으로 존재할 수 있다. 일 양태에서, 성장 인자는 TGF-β이다. 일 양태에서, 성장 인자는 혈소판 농축물에 의해 제공된다.

일 양태에서, 추가의 치료학적 제제는 플라스미드 DNA이다.

일 양태에서, 수핵은 제제를 디스크 관통 투여하기 전에 제거된다.

일 양태에서, 당해 제제는 약물 펌프를 통해 투여된다. 또 다른 양태에서, 당해 제제는 바늘을 통해 투여된다. 일 양태에서, 바늘의 최대 게이지는 24게이지 이다. 또 다른 양태에서, 당해 제제는 약 0.03ml 내지 약 0.3ml의 용적으로 투여된다.

발명의 몇몇 양태에서, 당해 투여는 섬유테의 외부 벽에 부착된 패치 내로 제제를 제공함을 포함한다. 또 다른 양태에서, 당해 투여는 섬유테의 외부 벽에 밀접한 위치에서 저장소 내로 제제를 제공함을 포함한다. 또 다른 양태에서, 당해 투여는 인접한 척추골체(vertebral body)의 종판(endplate)에 밀접한 위치에서 저장소 내로 제제를 제공함을 포함한다. 또 다른 양태에서, 당해 제제는 섬유테의 외부벽과 밀접하게 제공된다. 또 다른 양태에서, 당해 제제는 수핵으로 주사된다. 일 양태에서, 당해 제제는 섬유테로 주사된다.

일 양태에서, 퇴행성 디스크는 손상되지 않은 디스크이다. 또 다른 양태에서, 퇴행성 디스크는 붕괴된 디스크이다. 일 양태에서, 퇴행성 디스크는 판분리된 것이다. 일 양태에서, 퇴행성 디스크는 균열을 갖는다.

또한,

a) 고특이성의 사이토킨 길항제,

b) 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제 HAAMMP,

c) p38 키나제의 길항제,

d) 사이클린 화합물 및

e) i) 성장 인자 및

ii) 플라스미드 DNA로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 추가의 치료제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 포함하여, 퇴행성 디스크 질환을 치료하 기 위한 제제가 제공된다.

또한,

a) 디스크내에서 전염증성 단백질 수준을 측정하는 단계,

b) 상기 수준을 미리 결정된 전염증성 단백질의 수준과 비교하는 단계 및

c) i) 고특이성의 사이토킨 길항제,

ii) 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제 HAAMMP,

iii) p38 키나제 억제제의 고특이성 길항제 및

iv) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 디스크내로 주사하는 단계를 포함하여, 퇴행성 추간판을 치료학적으로 치료하는 방법이 제공된다.

일 양태에서, 전염증성 단백질은 인터류킨이다. 일 양태에서, 미리 결정된 인터류킨의 수준은 100pg/ml 이상이다.

일 양태에서, 전염증성 단백질은 인터류킨-6이다. 일 양태에서, 미리 결정된 인터류킨-6의 수준은 100pg/ml 이상이다. 일 양태에서, 미리 결정된 인터류킨-6의 수준은 250pg/ml 이상이다.

일 양태에서, 전염증성 단백질은 인터류킨-8이다. 일 양태에서, 미리 결정된 인터류킨-8의 수준은 500pg/ml 이상이다.

일 양태에서, 전염증성 단백질은 PGE2이다. 일 양태에서, 미리 결정된 PGE2의 수준은 1000pg/ml 이상이다.

일 양태에서, 전염증성 단백질은 TNF-α이다. 일 양태에서, 미리 결정된 TNF-α의 수준은 20pg/ml 이상이다. 일 양태에서, 미리 결정된 TNF-α의 수준은 30pg/ml 이상이다. 일 양태에서, 미리 결정된 TNF-α의 수준은 디스크당 1000pg 이상이다.

또한,

a) 개체의 유전학적 프로필을 결정하는 단계,

b) 개체의 프로필을 미리 결정된 위험에 처한 사람의 유전학적 프로필 수준과 비교하는 단계,

c) 개체가 위험에 처한 환자임을 결정하는 단계 및

d) i) 고특이성의 사이토킨 길항제,

ii) 고친화성의 MMP 길항제,

iii) 고특이성의 p38 키나제의 길항제 및

iv) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 개체의 디스크내로 주사하는 단계를 포함하여, 사람 개체의 추간판의 퇴행을 예방하는 방법이 제공된다.

또한, COX-2 효소의 길항제, 고특이성 NO 신타제의 길항제, 고특이성의 산화방지제, 고특이성의 증식 억제제 및/또는 고특이성의 아폽토시스 억제제를 포함하는 유효량의 제제를 추간판에 디스크 관통 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판에서의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

몇몇 양태에서, 제제는 사이토킨 화합물, 및

i) 전염증성 인터류킨의 억제제,

ii) TNF-α합성 억제제,

iii) 막 결합 TNF-α의 억제제,

iv) TNF-α의 천연 수용체의 억제제,

v) NO 신타제의 억제제,

vi) PLA₂ 효소의 억제제,

vii) 증식 억제제,

viii) 산화방지제,

ix) EPO 모사 펩타이드, EPO 모사체, IGF-I, IGF-II 및 카스파제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아폽토시스 억제제,

x) MMP의 억제제 및

xi) p38 키나제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 고특이성 길항제(HSA)를 포함한다.

본 발명의 목적을 위해, 용어 "억제제" 및 "길항제"는 상호교환적으로 사용된다. 단백질은 합성 단계 또는 해독 단계에서 쉐딩(shedding), 항체 또는 가용성 수용체에 의해 억제될 수 있다. 용어 "환자"는 퇴행성 디스크를 갖는 사람을 말한다. 본원에 사용된 바와 같이, 길항제는 예를 들어, DDD를 앓는 환자의 디스크 기원의 물질 또는 디스크에 존재하는 물질의 억제제를 포함한다. 예를 들어, 당해 물질은 사이토킨 또는 MMP일 수 있다. 당해 길항제는 예를 들어, 고특이성의 사이토킨 길항제, 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP), p38 키나제 억제제(즉, p38 키나제의 길항제)(예를 들어, 고특이성의 p38 키나제의 길항제) 및 사이클린 화합물을 포함할 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, "디스크 관통 투여"는,

a) 제제를, 비교적 온전한 퇴행성 디스크와 같은 퇴행성 디스크의 수핵으로 주사하는 것,

b) 제제를, 비교적 온전한 퇴행성 디스크와 같은 퇴행성 디스크의 섬유테로 주사하는 것,

c) 섬유테의 외부 벽에 부착된 패치 내로 제제를 제공하는 것,

d) 섬유테의 외부벽 바깥쪽이지만 밀접한 위치에서 저장소 내로 제제를 제공하는 것("테 관통 투여(trans-annular administration))" 및

e) 인접한 척추의 종판의 외부이지만 밀접한 위치에서 저장소 내로 제제를 제공하는 것("종판 관통투여(trans-endplate administration))"을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

DDD는 연속 과정이기 때문에, 치료 약물이 투여되는 퇴행성 디스크는 다수의 퇴행성 상태중 어느 하나로 존재할 수 있다. 따라서, 퇴행성 디스크는 손상되지 않은 디스크일 수 있다. 퇴행성 디스크는 헤르니아화된 디스크(즉, 섬유테 일부가 부풀어 오름)일 수 있다. 퇴행성 디스크는 붕괴된 디스크(즉, 섬유테가 붕괴되고 대량의 수핵이 삼출됨)일 수 있다. 퇴행성 디스크는 판분리(즉, 섬유테의 인접한 층들이 분리됨)일 수 있다. 퇴행성 디스크는 균열을 갖는다(즉, 섬유테가 미세한 틈새 또는 흠을 가져, 이를 통해 수핵으로부터 선택된 분자가 누출될 수 있다). 이들 모든 퇴행성 상태에서, 섬유테 또는 수핵의 세포외 기질은 또한 분해된다.

일 양태에서, 본 발명은 발병된 추간판 디스크에 직접적으로 디스크내에 존재하는 물질을 특이적으로 억제할 수 있는 하나 이상의 길항제를 제공하는 것이고, 여기서, 길항제는 a) 고특이성의 사이토킨 길항제, b) 고친화성 항매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP), c) p38 키나제의 길항제 또는 d) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

미국 특허원 제2003/0039651호("올마커 I(Olmarker I)")는 MMP의 억제제, 및 TNF 억제제, IL-1 억제제, IL-6 억제제, IL-8 억제제, FAS 억제제, FAS 리간드 억제제 및 IFN-감마 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 2개의 이상의 물질(모두 특이적이고 비특이적임)을 포함하는, 치료학적 유효량의 화합물을 투여함을 포함하는, 신경 장애의 치료를 교시하고 있다.

올마커 I의 예시에서, 치료학적 화합물은 전신 경로를 통해 투여되어야함을 교시하고 있다. 특히, 올마커 I는 TNF-알파의 주요 기여가 점증되고 응집된 백혈구로부터 유래하는 것일 수 있고 심지어 삼출된 백혈구일 수 있음을 교시하고 있고 성공적인 약리학적 차단은 단지 전신 치료에 의해서만 성취될 수 있음을 교시하고 있다. 당해 교시된 것으로부터, 올마커 I는 척수에 적용된 자가이식된 수핵으로 하나 이상의 치료학적 화합물(독시사이클린)을 국소 첨가하지 말 것을 당부하는 것으로 나타난다.

PCT 공개된 특허원 제WO 02/100387호("올마커 II")는 혈관형성 억제 물질을 투여하여 추간판의 혈관 신생 및/또는 새로운 신경 분포를 차단하는 것을 교시하고 있다. 그러나, 다시, 올마커 II는 이들 치료제의 전신 투여를 교시하고 있다.

미국 특허 제6,419,944호("토비닉(Tobinick)")는 헤르니화된 디스크를 사이토킨 길항제로 치료하는 것을 기재하고 있다. 토비닉은 국소 투여가 척수 근처의 피하 주사를 수반함을 교시하고 있다. 따라서, 토비닉은 DDD의 치료 약물의 지속 전달과 관련된 과정 또는 약물을 디스크내로 직접 투여하는 것을 교시하고 있지 않다.

미국 공개된 특허원 제2003/0049256호("토비닉 II")는 척추에 인접한 해부학적 영역으로 당해 치료학적 분자의 주사는 척추간 주사(interspinous injection)에 의해 성취되고 바람직하게는 척주의 2개의 인접한 축추돌기 사이의 해부학적 영역에서 피부를 통해 주사함에 의해 성취됨을 기재하고 있다.

토비닉 II는 추가로 치료학적 화합물은 사람에서 척추간 주사에 의해 성취되고 용량 수준은 투여당 1mg 내지 300mg의 범위이고 투여 간격은 2일 정도로 짧다. 토비닉 II는 추가로 기타 치료학적 화합물이 일반적으로 투여당 10mg 내지 200mg인 치료학적 유효량으로 투여되고 이의 투여 간격은 하루에 1회 정도로 짧다는 것을 기재하고 있다.

문헌[Tobinick, Swiss Med. Weekly, 133: 170-7(2003)]("토비닉 III")은 TNF 억제제를 척추 주변 및 경막 위로 투여하는 것을 교시하고 있다.

카르피넨(Karppinen)(Spine, 28(8): 750-4(2003))은 인플릭시마브를 좌골 신경통을 앓고 있는 환자에게 피하 주사 또는 경구로 투여하는 것을 교시하고 있다.

토비닉 I 및 II와 같이, 카르피넨은 DDD의 치료를 위한 약물의 지속 전달과 관련된 과정 또는 약물을 디스크 공간으로 직접 투여하는 것을 교시하고 있지 않다.

미국 특허 제6,352,557호(페레(Ferree))는 소염 약제와 같은 치료학적 물질을 분쇄된(morselized) 세포외 기질로 첨가하는 것과 당해 배합물을 추간판으로 주사하는 것을 교시하고 있다. 그러나, 많은 소염제는 비특이적이고 따라서 기타 세포, 단백질 및 조직에 대해 원치않는 부작용을 유발할 수 있다. 추가로, 이들 제제의 통증 감소 효과는 전형적으로 단지 일시적이다. 마지막으로 이들 제제는 전형적으로 통증만을 경감시키고 치료제이거나 회복제가 아니다.

문헌[참조: Alini, Eur. Spine J., 11(Supp. 2): S215-220(2002)]은, 단백질 분해 효소의 억제제 또는 세포 대사 활성을 자극하는 생물학적 인자(즉, 성장 인자)의 억제제를 주사하여 퇴행 과정을 느리게함을 포함하는, 초기 단계의 DDD에 대한 치료를 교시하고 있다. 단백질 분해 효소의 억제제는 i) 단백질 분해 효소 합성의 억제제 및 ii) 단백질 분해 효소 활성의 억제제를 포함하는, 광범위한 부류의 화합물로 구성된다. 알리니((Alini) I는 임의의 목적하는 유형의 단백질 분해 효소의 억제제를 특정하고 있지 않다.

미국 공개된 특허원 제2002/0026244호("트리오(Trieu)")는 목적하는 약리학적 제제를 전달할 수 있는 하이드로겔을 포함하는 추간판 핵질을 기재하고 있다. 트리오는 이들 약리학적 제제가 TGF-β와 같은 성장 인자 및 스테로이드를 포함하는 소염 약물을 포함할 수 있다고 교시하고 있다. 트리오는 추가로, 이들 약리학적 제제가 목적하는 속도로 약리학적 제제를 방출시키기 위해 적절한 수준의 공극을 갖고 있는 하이드로겔내에 분산될 수 있음을 교시하고 있다. 트리오는 이들 제제가 주기적 적재 또는 재흡수시 방출될 수 있음을 교시하고 있다.

문헌[참조: Goupille, Spine, 23(14): 1612-1626(1998)]은 MMP 활성의 분해자로서 MMP의 조직 억제제("TIMP")를 동정하였다. 고우필(Goupille)은 TIMP-1 및 TIMP-2가 1:1의 몰비로 활성 MMP에 비공유적으로 결합하여 특이적으로 이들의 효소 활성을 억제한다는 것을 보고하였다. 그러나, 고우필은 또한 MMP 합성 억제제로서, 코르티코스테로이드, 레티노산, TGF-β, PEG1 및 PEG2를 동정하였고 MMP 활성의 억제제로서, α2-마크로글로불린, 하이드록삼산, 유도체, 테트라사이클린 및 퀴놀론을 동정하였으며 TIMP의 자극제로서, bFGF, EGF, 레텐산, TGF-β, IL-6, IL-1 LIF, 덱사메타손, 포르볼 에스테르 및 합성 비타민 A 유사체를 동정하였다. 더욱이, 투여 경로에 관하여, 고우필은 명백하게 경구 투여 경로만을 동정하였다.

문헌[참조: Takegami, Spine, 27(12):1318-25(2000)]은 디스크 공간으로 TGF-β를 주사하면 사이토킨에 의해 손상된 세포외 기질의 보충을 증진시킴을 교시하고 있다. 추가로 다케가미(Takegami)는 수핵이 섬유테의 섬유 구조로 둘려싸여 있어 국한된 환경을 제공하므로 추간판으로 주사된 성장 인자의 반감기가 활막 관절로 주사되는 경우보다 연장될 수 있을 것으로 예상된다고 교시하고 있다. 문헌[참조:Diwan, Tissue Engineering in Orthopedic Surgery, 31(3):453-464(2000)]은 전달 연장(3일 초과)을 허용하는 전달 시스템이 성장 인자의 관찰된 효과를 수득하기 위해 사용되어야만 한다고 결론지은 또 다른 다케가미 논문에 대해 보고하고 있다.

문헌[참조: Alini, Spine 28(5):446-54(2003)]은 수핵을 재생시키기는데 사용하기 위한 TGF-β, bFGF 및 IGF-1과 같은 성장 인자가 보충된 세포 씨딩된(seeded) 콜라겐-하이알루로난 스캐폴드(scaffold)를 기재하고 있다.

문헌[참조: Maeda et al. Spine 25(2):166-169(2000)]은 IL-1에 노출된 래빗 섬유테의 인터류킨-1 수용체 길항제 단백질(IRAP)에 대한 시험관내 반응에 대해 보고하고 있다. 마에다(Maeda)는 IRAP가 디스크의 분해를 억제하는데 유용할 수 있음을 제안하였다.

문헌[참조: Yabuki, Spine, 26(8):870-5(2001)]은 좌골 신경통을 치료하기 위한 항-TNF 약물의 용도를 교시하고 있다.

미국 특허 제6,277,969호("레(Le)")는 TNF-매개 병증을 치료하기 위한 항-TNF 항체의 용도를 기재하고 있다. 레는 항체의 비경구 투여를 교시하고 있다.

문헌[참조: Ariga, Spine, 28(4):1528-33(2003)]은 기관 배양된 추간판의 배양물에 p38 MAP 키나제 억제제를 적용하는 경우 배양물내 종판 연골세포에서의 아폽토시스의 발생을 증가시킴을 보고하였다.

문헌[참조: Olmaker, Spine, 26(8): 863-9(2001)("올마커 I") 및 Aoki, Spine, 27(15): 1614-17(2002)는 TNF-α(TNF-알파)가 수핵이 척수의 신경근과 접촉하는 것과 연관된 통증을 유발하는데 특정 역할을 하는 것으로 나타난다고 교시하고 있다. 올마커는 척추 관련 약물 치료에서 비특이적 TNF-α 억제제 및 특히 항생제 효과를 갖는 억제제를 사용하지 말 것을 당부하였다.

미국 공개된 특허원 제2003/0039651호("올마커 II")는 사이클린 화합물을 포함하는, 치료학적 유효량의 다수의 화합물을 투여함을 포함하는, 신경 장애의 치료를 교시하고 있다. 올마커에 따르면, 테트라사이클린은 TNF-α의 비특이적 억제제이다.

올마커 II의 예시에서, 올마커 II는 추가로 이들 약물은 전신 경로로 투여되어야한다고 교시하고 있다. 특히, 올마커 II는 TNF-알파의 주요 기여가, 점증되고 응집된 백혈구로부터 유래하는 것일 수 있고 심지어 삼출된 백혈구일 수 있음을 교시하고 있고 성공적인 약리학적 차단은 단지 전신 치료에 의해서만 성취될 수 있음을 교시하고 있다. 특히, 올마커 II는 척수에 적용된 자가이식된 수핵으로 하나 이상의 치료학적 화합물(독시사이클린)을 국소적으로 첨가하지 말 것을 당부한다.

PCT 공개된 특허원 제WO 02/100387호("올마커 III")는 혈관 형성 억제제를 투여하여 혈관 신생 및/또는 새로운 신경 분포를 예방하는 것을 교시하고 있다. 그러나 다시, 올마커 III는 이들 치료제의 전신 투여를 교시하고 있다.

미국 특허 제6,419,944호("토비닉")는 헤르니화된 디스크를 사이토킨 길항제(인플릭시마브를 포함)로 치료하는 것을 기재하고 있다. 그러나 토비닉은 국소 투여가 척수 근처의 피하 주사와 연계됨을 교시하고 있다. 따라서, 토비닉은 DDD의 치료 약물의 지속 전달과 관련된 과정 또는 사이클린 화합물을 디스크내로 직접 투여하는 것을 교시하고 있지 않다.

미국 공개된 특허원 제2003/0049256호("토비닉 II")는 척추에 인접한 해부학적 영역으로 당해 치료학적 분자의 주사는 척추간 주사에 의해 성취되고 바람직하게는 척주의 2개의 인접한 척추돌기 사이의 해부학적 영역에서 피부를 통해 주사함에 의해 성취됨을 기재하고 있다.

문헌[Tobinick, Swiss Med. Weekly, 133: 170-7(2003)]("토비닉 III")은 특이적 TNF-α 억제제를 척추 주변 및 경막 위로 투여하는 것을 교시하고 있다.

토비닉 I 및 II와 같이, 카르피넨은 DDD의 치료를 위한 약물의 지속 전달과 관련된 과정 또는 사이클린 화합물을 디스크내로 직접 투여하는 것을 교시하고 있지 않다.

요약해서, 연구자가 척추 관련 치료를 위한 사이클릭 화합물의 투여 방식을 구체적으로 기재하는 데 있어서, 단백질분해 효소의 억제제를 디스크 관통 투여하는 것을 교시하고 있지만 당해 연구자는 특정 길항제(예를 들어, 사이클린 화합물)를 디스크 외부의 조직으로 투여하는 것만을 교시하고 있는 것으로 나타난다. 더욱이, 올마커 II는 사이클린 화합물을 수핵으로 투여하지 말것을 당부한다.

고친화성 항-매트릭스 메탈로프로테아제( HAAMMP )

일 양태에서, HAAMMP는 퇴행성 과정 동안에 디스크 세포에 의해 방출되는 MMP의 특정 작용을 억제하는 유효량으로 투여된다. 일 양태에서, HAAMMP는 수핵에 존재하는 MMP를 억제하는 유효량으로 투여되어 세포외 기질의 분해를 정지시키는데 일조한다.

일 양태에서, HAAMMP는 재조합체이다. 일 양태에서, HAAMMP는 자가 형태로 존재한다. HAAMMP는 예를 들어, 자가 농축된 형태로 존재할 수 있다. 몇몇 양태에서, HAAMMP는 MMP의 활성 부위에 존재하는 아연 성분에 강하게 결합하는 킬레이팅 그룹을 포함한다. 당해 HAAMMP는 문헌[참조: Gordon, Clin. Exp. Rheumatol., 11(Supp 8): S91-4(1993); and Johnson, J., Enzyme Inhib., 2:1-22(1987)]에 기재된 물질로부터 선택될 수 있다.

몇몇 양태에서, HAAMMP는 MMP의 천연 억제제, 예를 들어, MMP의 조직 억제제(TIMP)이다. 몇몇 양태에서, TIMP는 TIMP-1 및 TIMP-2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, TIMP는 자가유래성이고 여과, 원심분리 또는 면역 접착 과정에 의해 농축된다. 기타 양태에서, TIMP는 재조합적으로 제조되고 바람직하게, 정상적으로 환자에서 발견되는 것 보다 1000배 이상의 농도로 존재한다. 몇몇 양태에서, TIMP는 이종 공급원으로부터 수득될 수 있다.

몇몇 양태에서, HAAMMP는 어그레카나제의 특이적 억제제(즉, 항-어그레카나제)이다. 일 양태에서, 항-어그레카나제는 자가 농축 형태로 존재한다. 일 양태에서, 항-어그레카나제는 재조합 항-어그레카나제이다.

몇몇 양태에서, HAAMMP는 콜라겐아제 MMP의 특이적 길항제이다. 몇몇 양태에서, HAAMMP는 스트로멜라이신 MMP의 특이적 길항제이다. 몇몇 양태에서, HAAMMP는 겔라틴아제 MMP의 특이적 길항제이다. 몇몇 양태에서, HAAMMP는 막 MMP의 특이적 길항제이다.

몇몇 양태에서, 표적 MMP는 MMP-2, MMP-3 및 MMP-8로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. MMP-2 및/또는 MMP-3은 프로테오글리칸을 분해시키는 것으로 사료되기때문에 이들 MMP를 표적으로 하는 것이 바람직할 수 있다. MMP-8은 어그레칸을 분해하는 것으로 사료되기때문에 당해 MMP를 표적으로 하는 것이 바람직할 수 있다.

몇몇 양태에서, 길항제가 HAAMMP인 경우, 추가의 치료 물질(즉, 제제)은 고특이성의 사이토킨 길항제("HSCA")이다. 예를 들어, 고친화성의 사이토킨 길항제는 TNF-α의 HSCA 및 인터류킨의 HSCA로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 일 양태에서, 하나 이상의 치료제는 TNF-α의 길항제이다. 일 양태에서, 또 다른 치료제는 인터류킨의 길항제이다.

많은 전염증성 단백질은 디스크 분해에 관여하고 본 발명의 많은 길항제는 고도로 특이적이기때문에, 본 발명의 2개 이상의 고특이성 길항제를 디스크에 직접 투여하는 것이 추가로 유리할 것으로 사료된다.

따라서, 본 발명에 따라, HAAMMP, 및 TNF-α, 인터류킨(바람직하게, IL-1, IL-6 및 IL-8), FAS, FAS 리간드 및 IFN-감마로 이루어진 그룹으로부터 선택된 전염증성 사이토킨의 2개 이상의 고특이성 길항제를 포함하는 제제를 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판내에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

사이토킨 길항제

일 양태에서, HSCA는 퇴행성 과정동안에 디스크 세포 또는 침습성 대식 세포에 의해 방출되는 특이적인 전염증성 사이토킨의 작용을 억제한다.

몇몇 양태에서, 당해 길항제는 TNF-α, 인터류킨(바람직하게, IL-1, IL-6 및 IL-8), FAS, FAS 리간드 및 IFN-감마로 이루어진 그룹으로부터 선택된 전염증성 사이토킨을 특이적으로 억제할 수 있다. 당해 특이적 억제제는 올마커 II 문헌의 5 내지 18면에 기재된 것들을 포함한다.

몇몇 양태에서, HSCA는 사이토킨의 생산을 차단하여 사이토킨을 억제한다. 몇몇 양태에서, HSCA는 막 결합된 사이토킨과 결합하여 사이토킨을 억제한다. 기타 양태에서, HSCA는 가용화된, 예를 들어, 가용성 사이토킨과 결합하여 사이토킨을 억제한다. 몇몇 양태에서, HSCA 억제제는 막 결합된 사이토킨 및 가용화된 사이토킨 둘다에 결합하여 사이토킨을 억제한다. 몇몇 양태에서, HSCA는 모노클로날 항체("mAb")이다. mAb의 사용은 이들이 특정 표적 단백질에 특이적으로 결합하고 기타 단백질에는 결합하지 않기때문에 매우 바람직하다. 몇몇 양태에서, HSCA는 표적 사이토킨의 천연 수용체에 결합함에 의해 사이토킨을 억제한다.

몇몇 양태에서, HSCA는 사이토킨의 생산을 차단하여 사이토킨을 억제한다. 이의 한 예는 p38 유사분열인자(mitogen) 활성화된 단백질(MAP) 키나제의 억제제이다.

몇몇 양태에서, HSCA는 TNF-α의 특이적 길항제이다. 몇몇 양태에서, TNF 억제제는 막 결합 TNF에 결합하여 막으로부터 이의 방출을 차단함으로써 TNF를 억제한다. 기타 양태에서, TNF 억제제는 가용화된 TNF와 결합하여 TNF를 억제한다. 이의 한 예는 에탄에르셉트(엔브렐(ENBREL^R), Amgen)이다. 몇몇 양태에서, TNF 억제제는 막 결합된 TNF 및 가용화된 TNF 둘다에 결합하여 TNF를 억제한다. 이의 한 예는 레미카데(REMICADE^R) 인플릭시마브이다. 몇몇 양태에서, HSCA는 표적 사이토킨의 천연 수용체에 결합하여 사이토킨(예를 들어, TNF-α)을 억제한다. 몇몇 양태에서, TNF-α 억제제는 TNF-α 합성의 억제제이다.

바람직한 TNF 길항제는 하기에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 에탄에르셉트(엔브렐. Amgen); 인플릭시마브(레미카데-Johnson and Johnson); D2E7, 사람 항-TNF 모노클로날 항체(문헌참조: Knoll Pharmaceuticals, Abbott Laboratories); CDP 571(사람화된 항-TNF IgG4 항체); CDP 870(항 TNF 알파 사람화된 모노클로날 항체 단편)(이 둘다는 제조원(Celltech)으로부터 시판됨); 가용성 TNF 수용체 1형(Amgen); 페길화된 가용성 TNF 수용체 1형(PEG TNF-R1)(Amgen); 및 오네르셉트, 재조합 TNF 결합 단백질(r-TBP-1)(Serono).

본 발명의 조성물, 배합 치료, 공동-투여,장치 및/또는 방법에 적합한 TNF 길항제(임의로, 본 발명의 항체, 이의 특정 부분 및/또는 변이체중 하나 이상을 추가로 포함함)는 항-TNF 항체[예를 들어, 하나 이상의 TNF 길항제(예를 들어, TNF 화학적 또는 단백질 길항제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다), TNF 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 또는 단편, 가용성 TNF 수용체(예를 들어, p55, p70 또는 p85) 또는 이의 단편, 융합 폴리펩타이드 또는 소분자 TNF 길항제, 예를 들어, TNF 결합 단백질 I 또는 II(TBP-I 또는 TBP-II), 네레리몬마브, 레미카데^R 인플릭시마브, 엔테라셉트(엔브렐^R), 아달리물라브(후미라(HUMIRA)^TM), CDP-571, CDP-870, 아펠리모마브, 레너셉트등], 이의 항원 결합 단편 및 TNF에 특이적으로 결합하는 수용체 분자; TNF 합성, TNF 방출 또는 표적 세포에 대한 이의 작용을 차단하고/하거나 억제하는 화합물, 예를 들어, 탈리도미데, 테니다프, 포스포디에스테라제 억제제(예를 들어, 펜톡시필린 및 롤리프람), A2b 아데노신 수용체 효능제 및 A2b 아데노신 수용체 증진제; TNF 수용체 시그날 전달을 차단하고/하거나 억제하는 화합물, 예를 들어, 유사분열인자 활성화된 단백질(MAP) 키나제 억제제; 막 TNF 절단을 차단하고/하거나 억제하는 화합물, 예를 들어, 메탈로프로테이나제 억제제; TNF 활성을 차단하고/하거나 억제하는 화합물, 예를 들어, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제(예를 들어, 카프토프릴); 및 TNF 생산을 차단하고/하거나 억제하는 화합물, 예를 들어, MMP 키나제 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

본원에 사용되는 바와 같은, "종양 괴사 인자 항체", "TNF 항체", "TNFα 항체" 또는 단편 등은 시험관내, 동일계에서 및/또는 바람직하게 생체내에서 TNFα 활성을 감소시키거나 차단하거나 억제하거나 제거하거나 방해한다. 예를 들어, 본 발명의 적합한 TNF 사람 항체는 TNFα와 결합할 수 있고 항-TNF 항체, 이의 항원 결합 단편 및 특이적으로 TNF 알파(TNFα)에 결합하는 특정 돌연변이 또는 이의 도메인을 포함한다. 적합한 TNF 항체 또는 단편은 또한 TNF RNA, DNA 또는 단백질 합성, TNF 방출, TNF 수용체 시그날 전달, 막 TNF 절단, TNF 활성, TNF 생산 및/또는 합성을 감소시키고/시키거나 차단하고/하거나 제거하고/하거나 방해하고/하거나 방지하고/하거나 억제할 수 있다.

키메릭 항체 cA2는 A2로 명명된 고특이성의 중화 마우스 항사람 TNFα IgG1 항체의 항원 결합 가변 영역 및 사람 IgG1, 카파 면역글로불린의 불변 영역으로 이루어진다. 사람 IgG1 Fc 영역은 동종 항체(allogenic antibody) 효능인자 기능을 개선시키고 순환 혈청 반감기를 증가시키며 항체의 면역원성을 감소시킨다. 키메릭 항체 cA2의 결합력 및 에피토프 특이성은 쥐 항체 A2의 가변 영역으로부터 유래한다. 특정 양태에서, 쥐 항체 A2의 가변 영역을 암호화하는 핵산에 대한 바람직한 공급원은 A2 하이브리도마 세포주이다.

키메릭 A2(cA2)는 용량 의존 방식으로 천연 및 재조합 사람 TNFα 둘다의 세포독성 효과를 중화시킨다. 키메릭 항체 cA2 및 재조합 사람 TNFα의 결합 분석으로부터 키메릭 항체 cA2의 특이성 상수는 1.04 x 1010M-1로 계산된다. 경쟁 억제에 의해 모노클로날 항체 특이성을 결정하기 위한 바람직한 방법은 본원에 전반적으로 참조로서 인용되는 문헌[참조: Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1988); Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, New York, (1992-2000); Kozbor et al., Immunol. Today, 4: 72-79 (1983); Ausubel et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York (1987-2000); and Muller, Meth. Enzymol., 92: 589-601 (1983)]에 기재되어 있다.

특정 양태에서, 쥐 모노클로날 항체 A2는 c134A로 명명된 세포주에 의해 생산된다. 키메릭 항체 cA2는 c168A로 명명된 세포주에 의해 생산된다.

본 발명에 사용될 수 있는 모노클로날 항-TNF 항체의 추가의 예는 본원에 전반적으로 참조로서 인용되는 문헌[참조: 미국 특허 제5,231, 024호; Moller, A. et al., Cytokine 2 (3): 162-169 (1990); 미국 특허원 제07/943,852호 (1992년 9월11일자로 출원됨); Rathjen et al., 국제 공개 공보 제WO 91/02078호 (1991년 2월21일자로 공개됨); Rubin et al., EPO 특허 공개 공보 제0 218 868호 (1987년 4월 22일자로 공개됨) ; Yone et al., EPO 특허 공개 공보 제0 288 088호 (1988년 10월 26일자) ; Liang, et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 137: 847-854 (1986); Meager, et al., Hybridoma 6: 305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 (1987); Bringman, et al., Hybridoma 6: 489-507 (1987); and Hirai, et al., J. Immunol. Meth. 96: 57-62 (1987)]에 기재되어 있다.

본 발명에 유용한 바람직한 TNF 수용체 분자는 고특이성으로 TNFα와 결합하는 것들이고[문헌참조: Feldmann et al., 공제 공개 공보 제WO 92/07076호 (1992년 4월 30일자로 공개됨) ; Schall et al., Cell, 61: 361-370 (1990); and Loetscher et al., Cell 61: 351-359 (1990); 본원에 전반적으로 참조로서 인용됨] 임의로, 면역원성이 낮다. 특히, 55kDa(p55 TNF-R) 및 75kDa(p75 TNF-R) TNF 세포 표면 수용체는 본 발명에 유용하다. 당해 수용체의 절두된(truncated) 형태는 수용체 또는 이의 기능성 부분의 세포외 도메인(ECD)를 포함하고[문헌참조: Corcoran et al., Eur. J. Biochem. 223: 831-840 (1994)] 본 발명에 또한 유용하다. TNF 수용체의 절두된 형태는 ECD를 포함하고 소변 및 혈청에서 30kDa 및 40kDa TNF 억제 결합 단백질로서 검출되었다[문헌참조: Engelmann, H. et al., J. Biol. Chem. 265: 1531-1536 (1990)]. TNF 수용체 다량체성 분자 및 TNF 면역수용체 융합 분자 및 이의 유도체 및 단편 또는 일부는 본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 TNF 수용체 분자에 대한 추가의 예이다. 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자는 연장된 기간동안 증상을 양호하게 내지 우수하게 경감시키고 낮은 독성과 함께 환자를 치료하는 이의 능력을 특징으로 한다. 기타 정의되지 않은 성질 뿐만 아니라 낮은 면역원성 및/또는 고특이성은 성취되는 치료 결과에 기여할 수 있다.

본 발명에 유용한 TNF 수용체 다량체성 분자는 하나 이상의 폴리펩타이드 링커 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)와 같은 기타 비펩타이드 링커를 통해 연결되는 2개 이상의 TNF 수용체의 ECD의 모든 부분 또는 기능성 부분을 포함한다. 다량체성 분자는 추가로 다량체성 분자의 발현을 지시하는 분비된 단백질의 시그날 펩타이드를 포함할 수 있다. 당해 다량체성 분자 및 이의 제조 방법은 본원에 전반적으로 참조로서 인용되는 미국 특허원 제08/437,533호(1995년 5월 9일자로 출원됨)에 기재되어 있다.

본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 TNF 면역수용체 융합 분자는 하나 이상의 면역글로불린 분자의 하나 이상의 부분 및 하나 이상의 TNF 수용체의 모든 부분 또는 기능성 부분을 포함한다. 이들 면역수용체 융합 분자는 단량체 또는 이종 또는 동종 다량체로서 어셈블리될 수 있다. 면역수용체 융합 분자는 또한 1가 또는 다가일 수 있다. 당해 TNF 면역수용체 융합 분자의 예는 TNF 수용체/IgG 융합 단백질이다. TNF 면역수용체 융합 분자 및 이의 제조 방법은 문헌[참조:Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 21: 2883-2886 (1991); Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539 (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174: 1483- 1489 (1991); Kolls et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 215-219 (1994); Butler et al., Cytokine 6 (6): 616-623 (1994); Baker et al., Eur. J. Immunol. 24: 2040-2048 (1994); Beutler et al., 미국 특허 제No. 5,447, 851호; 및 미국 특허원 제08/442,133호 (1995년 5월 16일자로 출원됨)]에 기재되어 있다. 면역수용체 융합 분자의 제조 방법은 또한 본원에 전반적으로 참조로서 인용되는 문헌[참조: Capon et al., 미국 특허 제5,116, 964호; Capon et al., 미국 특허 제5,225, 538호; 및 Capon et al., Nature 337: 525-531 (1989)]에 기재되어 있다.

TNF 수용체 분자의 기능성 등가물, 유도체, 단편 또는 영역은 TNF 수용체 분자의 일부, TNF 수용체 분자를 암호화하는 TNF 수용체 분자 서열의 일부를 말하고 이는 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자와 기능적으로 유사(예를 들어, 고특이성으로 TNFα와 결합하고 면역원성이 낮다)하기에 충분한 크기 및 서열을 갖는다. TNF 수용체 분자의 기능성 등가물은 또한 본 발명에 사용될 수 있는 TNF 수용체 분자와 기능적으로 유사(예를 들어, 고특이성으로 TNFα와 결합하고 면역원성이 낮다)한 변형된 TNF 수용체 분자를 포함한다. 예를 들어, TNF 수용체 분자의 기능성 등가물은 "사일런트(silent)" 코돈 또는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어, 하나의 산성 아미노산의 또 다른 산성 아미노산으로의 치환, 또는 동일하거나 상이한 소수성 아미노산을 암호화하는 한 코돈의 소수성 아미노산을 암호화하는 또 다른 코돈으로의 치환)을 포함할 수 있다[문헌참조: Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley-Interscience, New York (1987-2003)].

몇몇 양태에서, TNF-α를 억제하는 모노클로날 항체는, TNF와 결합하는 모노클로날 설치류-사람 항체, 설치류 항체, 사람 항체, 또는 면역글로불린 가변 영역의 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖고 있는 임의의 이의 일부로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직하게, 당해 모노클로날 항체는 미국 특허 제6,277,969호에 기재된 화합물 그룹으로부터 선택된다. 몇몇 양태에서, 레미카데^R 인플릭시마브는 약 30mg/ml 내지 약 60mg/ml의 인플릭시마브 농도를 갖는 제제로 전달된다.

추가로, 전염증성 화합물에 대한 유효량의 기타 길항제의 디스크 관통 투여는 또한 DDD를 갖는 환자에게 치료법을 제공하는데 일조할 것으로 사료된다. 많은 양태에서, 길항제는 키나제 효소와 같은 효소의 길항제이다.

추가로, p38 키나제의 길항제의 유효량을 디스크 관통 투여하는 것이 또한 DDD를 갖는 환자에게 치료법을 제공하는데 일조할 것으로 사료된다. p38 키나제 부위는 TNF-α, IL-1 및 COX-2 효소의 생성을 조절하는 것으로 사료된다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태에 따라, p38 키나제에 대한 고특이성의 길항제를 포함하는 유효량의 제제를 추간판에 디스크 관통 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판 디스크내에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

따라서, 몇몇 양태에서, 길항제, 예를 들어, 고도로 특이적인(즉, 고특이성)의 길항제는 p38 MAP 키나제의 억제제, 바람직하게는 p38 MAP 키나제의 소분자 억제제이다. p38 MAP 키나제의 억제는 TNF-α 및 IL-2 둘다(이들은 전염증성 사이토킨이다)의 생산을 차단하는 것으로 사료된다. p38 MAP 키나제의 소분자 억제제는 매우 특이적이고 효능적(∼nM)이다. 특정 이론에 얽매이지 않고, p38의 억제는 TGF 시그날 전달 또는 TGF 활성을 차단하지 말아야 할 것으로 사료된다.

추가로, p38 억제제는 또한 몇몇 메탈로프로테이나제, COX 2 및 NO 신테타제의 유도를 차단할 수 있는 것으로 사료된다. 추가로, p38 억제제는 IL-2와 같은 면역 세포 증식에 관여하는 인터류킨을 억제하지 않는 것으로 사료된다. 바람직하게, 이들은 10nM 내지 10μM 용량으로 제공된다. p38 키나제의 몇몇 길항제는 본원에 전반적으로 참조로서 인용되는 문헌[참조: Zhang, J. Biol. Chem., 272 (20), May 16 1997 (13397- 402); Pargellis, Nature Structural Biology, 9 (4), April 2002268-272, and Chae, Bone, 28 (1), 45-53 (January 2001), and in U. S. Patent No. 6,541, 477 ("Goehring")]에 기재되어 있다. 일 양태에서, p38 키나제의 HSA는 국소 조직 농도가 약 5㎍/kg 내지 약 50㎍/kg이 되게하는 용량으로 투여된다.

몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는,

a) 디아릴 이미디졸;

b) N,N'-디아릴 우레아(제조원(Bayer, Boehringer Ingelheim and Vertex)으로부터 개발됨);

c)N,N-디아릴 우레아(제조원(Vertex)으로부터 개발됨);

d) 벤조페논(제조원(Leo Pharmaceuticals)으로부터 개발됨);

e) 피라졸 케톤(제조원(Hoffman-LaRoche)으로부터 개발됨);

f) 인돌 아미드(제조원(GlaxoSmithKline and Scios)으로부터 개발됨);

g) 디아미드(제조원(AstraZeneca)으로부터 개발됨);

h) 퀴나졸린(제조원(GlaxoSmithKline)으로부터 개발됨);

i) 피리미도[4,5-d]피리미디논(제조원(GlaxoSmithKline and Hoffman LaRoche)으로부터 개발됨); 및

j) 피리딜아미노-퀴나놀린(제조원(Scios)으로부터 개발됨)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

당해 그룹의 구성원은 예를 들어, 문헌[참조: Zhang et al., supra, Pargellis et al., supra, Chae et al., supra, and Cirillo et al., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2: 1021-1035 (2002), Boehm et al., Exp. Opin, Ther. Patents, 10 (1) : 25-38 (2000), and Lee et al., Immunopharmacology, 47: 185-2001 (2000)]에 기재되어 있다.

몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는,

a) SK&F 86002;

b) SB 203580;

c) L-167307;

d) HEP 689;

e) SB220025;

f) VX-745 ;

g) SU4984;

h) RWJ 68354;

i) ZM336372;

j) PD098059;

k) SB235699; 및

1) SB220025으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는 1-아릴-2-피리디닐 헤테로사이클로서 특징화된다. 몇몇 양태에서, 1-아릴-2-피리디닐 헤테로사이클은,

a) 4,5-치환된 이미다졸;

b) 1,4,5-치환된 이미디졸;

c) 2,4,5-치환된 이미디졸;

d) 1,2,4,5-치환된 이미디졸 및

e) 비-이미디졸 5원 환 헤테로사이클로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는 3개 이상의 사이클릭 그룹을 갖는다.

몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는 물에 쉽게 용해(수용성)된다. 몇몇 양태에서, p38 키나제 억제제는 실질적으로 수불용성 분자이다. 실질적으로 수불용성 p38 억제제는, 수핵으로 주사되는 경우, 수핵내 고체로서 잔류하고 시간 경과에 따라 단지 약간 가용화됨에 따라 지속 방출을 제공한다는 점에서 유리할 수 있다.

일 양태에서, 당해 제제는 추가로 p38 키나제 억제제 및 글리코사미노글리칸을 포함한다.

몇몇 양태에서, HSCA는 인터류킨의 특이적 길항제이다. 바람직하게, 표적 인터류킨은 IL-1, IL-2, IL- 6, IL-8 및 IL-12로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 길항제는 Kineretg(재조합 IL 1-RA, Amigen), IL1-수용체 2형(Amgen) 및 IL-1 트랩(레게네론)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

추가로, 본 발명은 또한,

a) 개체의 유전자적 프로필을 결정하는 단계;

b) 위험에 처한 사람의 미리 결정된 유전자적 프로필 수준과 개체의 프로필을 비교하는 단계;

c) 개체가 위험에 처한 환자임을 결정하는 단계 및

d) 길항제를 개체의 디스크내로 주사하는 단계를 포함하는 과정에 따라, 사람 개체에서 추간판의 퇴행을 방지하는데 사용될 수 있는 것으로 사료된다.

사이클린 화합물

한 측면에서, 본 발명은 사이클린 화합물을 발병된 추간판에 직접(예를 들어, 관통시켜) 제공하는 것이다. 일 양태에서, 사이클린 화합물을 포함하는 제제를 추간판에 디스크 관통 투여함을 포함하는, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 또 다른 양태에서, 당해 제제는 완충제를 추가로 포함한다.

일 양태에서, 사이클린 화합물은 전염증성 사이토킨(예를 들어, TNF-α) 또는 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)의 작용을 억제하는 유효량으로 투여된다. 이들 사이토킨은 수핵에 존재할 수 있다. 일 양태에서, 사이클린 화합물은 퇴행성 과정 동안에 디스크 세포에 의해 방출되는 MMP의 작용을 억제하는 유효량으로 투여된다. 일 양태에서, 사이클린 화합물은 a) 특이적인 전염증성 사이토킨(예를 들어, TNF-α)을 억제하고 b) 퇴행성 과정동안에 국소 세포에 의해 방출되는 ECM-분해 MMP를 억제하는 유효량으로 투여된다. 일 양태에서, 사이클린 화합물은 MMP(예를 들어, 수핵에 존재하는 MMP)를 억제함으로써 세포외 기질의 분해를 정지시키는 유효량으로 투여된다. 일 양태에서, 사이클린 화합물은 TNF-α(예를 들어, 수핵에 존재하는 TNF-α)를 억제하여 세포외 기질의 분해를 정지시키고/시키거나 통증을 감소시키는 유효량으로 투여된다.

몇몇 양태에서, 사이클린 화합물은 독시사이클린, 리메사이클린, 옥시사이클린 화합물, 테트라사이클린, 미노사이클린, 화학적으로 변형된 테트라사이클린(CMT) 및 KB-R7785로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직하게, 독시사이클린 또는 미노사이클린이 선택된다.

몇몇 양태에서, 길항제(예를 들어, 사이클린 화합물)는 추가의 치료제와 함께 투여된다. 일 양태에서, 추가의 치료제는 전염증성 인터류킨, 즉, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12 및 IL-19를 포함한다.

일 양태에서, 추가의 치료제는 TNF-α의 길항제이다. 일 양태에서, TNF-α의 길항제는 가용성 TNF-α, TNF-α 합성, TNF-α의 천연 수용체, p38 키나제 및/또는 실질적으로 수불용성인 p38 키나제의 억제제이다.

몇몇 양태에서, HSCA는 인터류킨, 예를 들어, 전염증성 인터류킨의 특이적 억제제(예를 들어, 고특이성 길항제)이다. 바람직하게, 표적 인터류킨은 IL-1, IL-lβ, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12 및 IL-19로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 길항제는 Kineretg(재조합 IL 1-RA, Amgen), IL-1 수용체 2형(Amgen) 및 IL-1 트랩(레게네론)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

많은 전염증성 단백질은 디스크 퇴행에 관여하고 이의 길항제는 바람직하게 고도로 특이성이기때문에, 본 발명의 고도로 특이적인 길항제 2개 이상을 디스크내로 직접 주사하는 것이 유리할 것으로 추가로 사료된다.

따라서, 본 발명에 따르면,

i) 사이클린 화합물 및

ii) TNF-α, 인터류킨(예를 들어, IL-1, IL-6 및 IL-8), FAS, FAS 리간드 및 IFN-감마로 이루어진 그룹으로 부터 선택된 전염증성 사이토킨의 2 이상의 고특이성의 길항제를 포함하는 제제를 추간판 내로 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

사이클린 화합물은 비특이적 방식으로 TNF-α를 억제한다. TNF-α 및 기타 유사한 생물활성 물질은 먼저 불활성 형태로 제조되고 세포막으로 이송된다. 활성화 즉시, 프로-TNF-α의 활성부는 절단되고 방출된다. 당해 과정은 쉐딩으로 불리우고 하나 이상의 효소에 의해 개시될 수 있다. 이들 효소 모두는 공통적으로 금속 이온을 갖고 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)로 불리운다. 사이클린 화합물은 금속 이온과 결합하여 MMP의 작용을 억제하고 이어서 비특이적 방식으로 TNF-α 및 기타 전염증성 사이토킨을 방출시키는 것으로 공지되어 있다.

다른 길항제 및 제제

또한, COX-2 효소의 길항제의 유효량을 디스크 관통으로 투여하는 것은 DDD에 걸린 환자에 대한 치료법을 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다. COX-2 효소는, 염증 및 통증 발생 모두에 관여하는 프로스타글란딘 생산의 조절인자로 생각된다. 따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 고친화성의 COX-2 효소의 길항제를 포함한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

COX-2 효소의 일반적인 길항제에는 셀레콕시브(Searle), 로페콕시브(Merck)l 멜로시칸(Boehringer Manheim); 니메설라이드; 디클로페낙 및 로딘이 있다.

또한, PLA₂ 효소의 길항제의 유효량을 디스크 관통으로 투여하는 것은 DDD에 걸린 환자에 대한 치료법을 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다. PLA₂ 효소는 프로스타글란딘 생산의 조절인자로 생각된다. 따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 친화성이 높은 PLX₂ 효소의 길항제를 포함한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 양태에 있어서, PLA₂의 길항제는 전신 투여될 수도 있다.

PLA₂의 1종 이상의 길항제는 문헌[Kawakami, Clin.Orthop., 351:241-51(1998)]에 개시되어 있다.

또한, NO 신타제(Synthase) 효소의 길항제의 유효량을 디스크 관통으로 투여하는 것은 DDD에 걸린 환자에 대한 치료법을 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다. NO 신타제 효소는, 전염증성 효과가 있는 것으로 공지된 NO의 생산을 조절하는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 고친화성의 NO 신타제의 길항제를 함유한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 양태에 있어서, NO 신타제의 길항제는 전신 투여될 수도 있다.

몇몇 NO 신타제 길항제는 N-이미노에틸-L-리신(L-NIL) 및 N^G-모노메틸-L-아르기닌이다.

또한, 고특이성의 산화방지제의 유효량을 디스크 관통 투여하는 것은 DDD에 걸린 환자에 대한 치료법을 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다. 산화제는 수핵 세포외 기질을 분해한다고 생각되고 있다. 일반적인 산화방지제에는 유리 라디칼 스캐빈저 및 초과산화물 디스뮤타제 효소가 있다. 따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 고친화성의 산화방지제를 함유한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 양태에 있어서, 고특이성의 산화방지제는 전신 투여될 수도 있다.

또한, 고특이성의 증식억제제를 디스크 관통으로 유효량 투여하는 것은 DDD에 걸린 환자에 대한 치료법을 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다. 증식억제제는, 염증성 사이토킨의 생산이 제한되는 염증 조직에 영향을 미쳐 염증에 효과를 나타내는 것으로 생각된다. 일부 양태에서, 고특이성 소염제는 a) 라파마이신; (b) 사이클린 의존적 키나제 9(cdk); 및 c) 스타틴(예, MEVASTATIN™ 및 LOVASTATIN™)으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다른 양태에서, 라파마이신이 선택되는 경우, 투여량은 약 0.5㎍/kg 내지 약 50㎍/kg 사이의 국소 조직 농도를 만드는 투여량으로 사용한다.

따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 고특이성의 증식억제제를 함유한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

라파마이신은 TOR(라파마이신의 표적) 단백질의 하류 시그날 전달의 강력한 억제제이다. 라파마이신 자체는 단백질 합성과 단백질 분해 사이의 균형을 조정하는 역할을 한다. DDD는 세포외 기질 합성과 분해 사이의 균형 상실로 인해 전파되는 것으로 생각된다. TOR 단백질은 다수의 대사 경로를 조절하기 때문에, 라파마이신은 주기(cycle)의 균형을 안정시킬 수 있다. 또한, 라파마이신은 연골세포의 증식 및 후속 면역반응에 직접 영향을 미칠 수 있다. 또한, 퇴행성 연골세포는 활성을 전혀 보이지 않는 정상 연골세포와 달리, 낮은 수준의 증식 활성을 보인다. 이는 연골내에 연골세포의 군집화를 초래하는 것으로 생각된다. 따라서, 라파마이신은 부정형 연골세포 증식을 제거하는 작용을 할 수 있다. 일 양태에서, 라파마이신은 약 0.1 내지 약 10μM 용량으로 제공된다.

cdk 억제제는 연골세포의 증식 및 후속 면역반응에 직접 영향을 미칠 수 있다. 또한, cdk 억제제는 특징적인 퇴행성 반응으로 공지되어 있는 연골세포 군집화에 직접 영향을 미칠 수 있다. cdk 억제제의 예로는 플라보피리돌, 로스코비틴 및 PCT 특허공개 WO 02/057240(Lin) 및 미국 특허 가출원 60/257,703(각 명세서는 전문이 본 발명에 참조인용됨)에 개시된 화합물이 포함된다. 일 양태에서, cdk 억제제는 1 내지 10μM 용량으로 제공된다.

또한, 본 발명은 환부 관절에 고특이성의 아폽토시스 억제 분자를 제공하는 것에 관한 것이다. 이러한 분자는 연골세포 아폽토시스를 예방하는 작용을 한다. 바람직한 화합물에는 EPO, 에리트로포에틴 모사 펩타이드, EPO 모사 항체 융합 단백질, IGF-1, IGF-II 및 카스파제 억제제가 포함된다.

따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 고특이성의 아폽토시스 억제제를 함유한 제제의 유효량을 추간판으로 디스크 관통 투여하는 것을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

또한, 비스테로이드성 소염 약물(NSAID)은 제2 치료제로서 선택될 수 있다. 일부 양태에서, NSAID는 동화작용성이며, TOLMETIN™(Ortho-MacNeil로부터 입수용이함), SUPROL™(Johnson & Johnson으로부터 입수용이함) 및 티아프로펜산(Roussel Labs로부터 입수용이함)으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 동화작용성 NSAID는 초기 국소 조직 농도가 약 5㎍/kg 내지 약 500㎍/kg 사이가 되게 하기에 충분한 투여량으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 양태에서, NSAID는 COX 경로 및 LOX 경로 모두의 이중 억제제로서, TEPOXALIN™(Johnson & Johnson에서 입수용이함)인 것이 바람직하다.

또한, 항카텝신도 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 이러한 효소의 억제작용은 세포외 기질의 파괴를 억제하는 것으로 생각된다. 이러한 길항제는 카텝신 B, 카텝신 L 및 카텝신 K로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 카텝신을 억제하는 것이 바람직하다.

일부 양태에서, 추가 치료제는

i) 성장인자, 및

ii) 플라스미드 DNA로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것이다.

퇴행성 디스크 질환을 가진 환자에 대한 투여

DDD는 다양한 인자가 관련되어 있는 디스크의 진행성 퇴행을 수반한다. 1회 투여를 단순히 제공하거나 또는 심지어 몇 일간의 간격을 둔 요법도 DDD를 해소하는데 충분치 않은 경우가 많다. 예를 들어, DDD가 기능적 척수 단위의 기계적 불안정성에 의해 부분적으로 유발되는 경우, 디스크 관통 세포에 대해 단지 1회 치료만을 제공하는 것은 DDD의 발병을 지연시키는 작용만을 할 가능성이 있다. 따라서, 수회의 주사를 필요로 하지 않는 DDD의 장기간 약물 치료법적 치료가 필요로 되고 있다.

DDD는 연속적인 과정이고, 당해의 일부 사이토킨이 통증을 일으키고 수핵에 존재할 때 ECM을 분해하는 것으로 생각되기 때문에, 길항제는 약제학적 유효량으로서 가능한 한 장기간 동안 수핵 내에 존재하는 것이 바람직하다. 수핵에서 길항제의 반감기는 길항제의 크기 및 그 적재량을 비롯하여 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 길항제는 분자량이 클수록, 디스크의 섬유테 부위에 함유되어 유지될 가능성이 커진다.

반감기가 짧은 길항제가 사용되는 경우에는, 비교적 대용량의 길항제가 디스크 관통(즉, 디스크 내로) 투여되는 것이 바람직할 것이다. 이러한 조건에서, 길항제는 급속히 고갈되어도 장시간이 경과될 때까지 디스크에서 치료적 유효량 이하로 떨어지지 않을 것이다.

이러한 경우에 길항제의 대용량이 바람직하기는 하지만, 임계량의 물의 주사는 수핵의 압력을 증가시킬 수 있다. 섬유테의 내벽에 존재하는 통각수용기는 이와 같이 증가된 압력에 반응하고 통증을 유발한다. 몇몇 경우에는 1 부피cc 정도의 소량이 첨가되어 통증을 유발할 수도 있다. 따라서, 대용량을 제공하기 위해 희석 농도의 길항제를 수핵에 첨가하면, 이러한 첨가 용량에 의해 유발되는 압력 증가는 급성 통증 유발에 충분할 수 있다.

예를 들어, 수핵의 치료적 효과에 필요한 길항제의 양이 약 100mg인 것으로 측정되고, 길항제가 약 30 내지 약 60mg/ml의 농도로 제공된다면, 목적하는 치료 효과를 얻기 위해서는 약 1.5ml 이상의 길항제가 수핵에 주사되어야 할 필요가 있다. 하지만, 수핵에 주사될 때, 전달되는 약물의 용량은 약 1ml 이하인 것이 적당하고, 바람직하게는 약 0.5ml 이하(즉, 최대 0.5ml), 보다 바람직하게는 약 0.1 내지 약 0.3ml인 것이 바람직하다. 이러한 소용량으로 주사될 때, 첨가 용량은 수핵에 인지할 수 있는 압력 증가를 유발하지 않을 것으로 생각된다.

따라서, 일부 양태에서, 투여 제제에 함유된 길항제의 농도는 적어도 약 100mg/ml이다. 약 100mg의 길항제가 목적하는 치료 결과를 제공하는데 필요하다면, 약 1ml 이하의 약물이 주사되어야 할 것이다. 일부 양태에서는, 투여 약물에 존재하는 길항제의 농도가 적어도 약 200mg/ml이다. 이러한 조건에서는 약 0.5ml 이하의 약물이 주사되어야 할 것이다. 일부 양태에서는, 투여 약물에 존재하는 길항제의 농도가 적어도 약 500mg/ml이다. 이러한 조건에서는 제제의 약 0.03 내지 약 0.3ml가 주사되어야 할 것이다.

다른 예로서, 수핵의 치료적 효과에 필요한 사이클린 화합물의 양이 약 2mg인 것으로 측정되고, 사이클린 화합물이 약 2mg/ml의 농도로 제공된다면, 목적하는 치료 효과를 얻기 위해서는 약 1ml 이상의 사이클린 화합물이 수핵에 주사되어야 할 필요가 있다. 하지만, 수핵에 주사될 때, 전달되는 약물의 용량은 1ml 미만인 것이 적당하고, 바람직하게는 약 0.5ml 이하, 보다 바람직하게는 약 0.03 내지 약 0.3ml인 것이 바람직하다. 이러한 소용량으로 주사될 때, 첨가 용량은 수핵에 인지할 수 있는 압력 증가를 유발하지 않을 것으로 생각된다.

따라서, 일부 양태에서, 투여 약물, 즉 제제(예컨대, 지속 전달 장치)에 함유된 사이클린 화합물의 농도는 적어도 약 20mg/ml이다. 이러한 조건에서, 약물은 0.1ml 이하로 주사될 필요가 있다. 투여 약물에 존재하는 사이클린 화합물의 농도는 적어도 약 50mg/ml인 것이 바람직하다. 이러한 조건에서는 약 0.05ml 이하(즉, 최대 0.05ml)의 약물이 주사되어야 할 것이다. 일 양태에서, 제제에 존재하는 사이클린 화합물의 농도는 약 100mg/ml 미만이다.

일부 양태에서, 길항제는 지속 방출 장치(즉, 지속 전달 장치)를 통해 제공된다. 이러한 지속 방출 장치는 장기간 동안 디스크 내에 유지되도록 개조되어, 장치에 담겨있는 길항제를 주위 환경으로 서서히 방출시킨다. 이러한 전달 방식은 길항제가 장기간 동안 디스크 내에 치료적 유효량으로 잔류할 수 있게 한다.

일부 양태에서는, 지속 전달 장치(예, 중합체)를 통해 확산에 의해 길항제가 지속 전달 장치로부터 주로 방출된다. 다른 양태에서는, 지속 전달 장치의 생체분해(즉, 중합체의 생체분해)를 통해 길항제가 지속 전달 장치로부터 주로 방출되기도 한다.

일부 양태에서, 지속 방출 장치(즉, 지속 전달 장치)는 점진적 부식으로 길항제를 디스크 환경으로 점차 방출시키는 생체재흡수성 물질을 포함한다. 일부 양태에서, 지속 방출 장치는 생체재흡수성 중합체를 포함한다. 일부 양태에서, 생체재흡수성 중합체는 반감기가 적어도 1개월, 보다 바람직하게는 적어도 2개월, 보다 바람직하게는 적어도 6개월인 것이다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치는 생체부식성 거대구를 포함한다. 길항제는 캡슐내의 젤라틴(또는 물이나 다른 용매)에 함유되고, 외피가 부식될 때 디스크 환경으로 방출되는 것이 바람직하다. 이러한 장치는 다양한 두께의 외피를 보유한 복수의 캡슐을 포함할 수 있고, 이러한 외피의 연속 붕괴가 길항제를 주기적으로 방출시킨다.

일부 양태에서, 지속 방출 장치는 조절 방출을 제공한다. 일부 양태에서는 연속 방출을 제공한다. 일부 양태에서는 간헐 방출을 제공하기도 한다. 일부 양태에서, 지속 방출 장치는 생체감지기를 포함한다. 또한, 다른 방출 방식이 사용될 수 있다.

일부 양태에서, 지속 방출 장치는 침습성 대식세포에 의해 부식되는 생체부식성 미소구를 함유하는 것과 같은 염증 반응성 전달 시스템을 포함한다. 이러한 기술은 디스크 환경의 생리적 염증과 그 환경으로의 길항제의 방출 사이의 긴밀한 상응성을 제공한다. 일 양태에서는, 문헌[Brown et al., Arthritis.Rheum.Dec., 41(12): 2185-95(1998)]에 개시된 기술이 선택된다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치는 전문이 참조인용된 미국 특허 제5,728,396호("Peery")에 개시된 장치를 포함한다. 일부 양태에서, 이러한 지속 전달 장치는 WO 03/000190에 개시된 것과 같은 리포좀 전달 시스템을 포함하기도 한다. 리포좀은 벽이 물과 지질의 층으로 이루어진 작은 구이다. 리포좀은 형성될 때 물 및 존재하는 임의의 수용성 용질을 포획한다. 이러한 포획능 때문에, 전달 시스템으로서 유용하다. 본 발명의 목적에서, 바람직일 양태에는 다층 소포, 및 임의의 자연발생의 인지질, 예컨대 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC)의 사용이 포함된다.

리포좀은 내부 액체상 주위에 적어도 하나의 액체 이중층을 보유한 소포일 수 있다(액체 코어 주위의 지질 이중층 또는 이 이중층과 다른 지질 이중층 사이에 분산된 액체 상 주위의 지질 이중층). 리포좀은 다층 소포(MLV), 단층 소포(ULV) 및 소수층 소포(PLV)와 같은 다양한 구조일 수 있다. 이러한 리포좀의 최종 구조는 부분적으로 소수성 상을 형성하는 물질의 선택 및 제조 공정 변수, 예컨대 온도 및 항온배양 시간에 따라 달라진다.

일부 리포좀은 적어도 하나의 양친매성 이중층 형성 물질을 포함한다. 여기에 함유된 치료 물질은 리포좀의 지질 이중층이나 친수성 구역에 함유될 수 있다. 양친매성 이중층 형성 물질은 친수성 그룹과 친지성 그룹을 모두 포함하여, 단독으로 또는 다른 지질과 함께 리포좀의 이중층을 형성할 수 있다. 지질은 본래 포화 또는 불포화성이고, 구조가 분지형 또는 선형인 친지성 측쇄를 하나 또는 복수개 보유할 수 있다. 양친매성 이중층 형성 물질은 인지질 또는 세라마이드일 수 있다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치는 챔버마다 길항제가 담겨있는 복수(예컨대, 적어도 100개)의 함수 챔버를 포함한다. 챔버는 천연의 지질을 합성한 이중체를 포함하는 이중층 지질 막으로 규정된다. 약물의 방출은 수성 부형제, 지질 성분 및 제조 공정 변수 중 적어도 하나를 변화시켜 조절할 수 있다. 제제의 지질 함량은 10% 이하인 것이 바람직하다. 일부 양태에서는 Skyepharma PLC(영국, 런던)의 DEPOFOAM™ 기술이 선택된다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치는 전문이 참조인용된 미국 특허 제5,270,300호("Hunziker")에 개시된 전달 시스템을 포함한다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치는 공중합체 폴리-DL-락타이드-코-글리콜라이드(PLG)를 포함하는 것이다. 제제는 길항제 또는 추가 치료제, 공중합체 및 용매를 혼합하여 소적을 형성시킨 뒤, 용매를 증발시켜 미소구를 형성시킴으로써 제조하는 것이 바람직하다. 그 다음, 복수의 미소구를 생체적합성 희석제 중에서 혼합한다. 길항제 또는 추가 치료제는 공중합체를 통한 확산과 공중합체의 생체분해를 통해 공중합체에서 방출되는 것이 바람직하다. 일부 양태에서는 알커메스(매사츄세츠 캠브리지 소재)의 PROLEASE™ 기술이 선택된다.

또한, 길항제를 지속 방출 방식으로 디스크 환경으로 전달하는 데에는 하이드로겔이 사용될 수 있다. "하이드로겔"은 유기 중합체(천연 또는 합성)가 경화 또는 고화하여 수용액 또는 다른 용액의 분자를 포획하여 겔을 형성시키는 3차원 개방 격자 구조를 만들 때 형성되는 물질이다. 고화는 예컨대 응집, 응고, 소수성 상호작용 또는 가교에 의해 일어날 수 있다. 본 발명에 이용된 하이드로겔은 급속히 고화하여 HAAMMP를 적용 부위에 유지시켜 디스크 내로부터의 불필요한 이동을 제거할 수 있다. 또한, 하이드로겔은 이 하이드로겔에 현탁되어 있는 물질과 생체적합성, 예컨대 무독성인 것이다.

"하이드로겔-길항제 조성물"은 목적한 길항제를 함유하는 하이드로겔의 현탁액이다. 하이드로겔-길항제 조성물은 공지된, 정확하게 조절가능한 밀도를 가진 길항제의 균일한 균포를 형성한다. 더욱이, 하이드로겔은 밀도가 매우 큰 길항제를 지지할 수 있다. 또한, 하이드로겔은 종판으로 영양소의 확산 및 폐기물의 종판으로부터의 폐기를 허용하여 조직 성장을 촉진한다.

본 발명에 사용하기에 적당한 하이드로겔에는 함수성 겔, 즉 친수성 및 수-불용성을 특징으로 하는 중합체와 같은 함수 겔이 포함된다. 이에 대해서는 전문이 본 발명에 참조인용된 문헌["Hydrogels", p.458-459, Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, Eds. Mark et al., Wiley and Sons(1990)]을 참조한다. 이들의 사용은 본 발명에서 선택이기는 하나, 하이드로겔은 바람직한 특성을 다수 보유하는 경향이 있기 때문에 하이드로겔의 첨가는 매우 바람직할 수 있다. 하이드로겔은 이들의 친수적 함수성으로 인해, 디스크의 적재량 보유능에 도움을 줄 수 있다.

일 양태에서, 하이드로겔은 미세 분말의 합성 하이드로겔이다. 적당한 하이드로겔은 선택된 기질 중합체와의 혼화성 및 생체적합성과 같은 성질이 최적으로 조합된 것이다. 이러한 하이드로겔에는 다음과 같은 종류 중의 하나 이상이 포함될 수 있다: 다당류, 단백질, 폴리포스파젠, 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌) 블록 중합체, 에틸렌 디아민의 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌) 블록 중합체, 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴산), 아크릴산과 메타크릴산의 공중합체, 폴리(비닐 아세테이트) 및 설폰화된 중합체.

일반적으로, 이러한 중합체는 수용액, 예컨대 물에, 또는 하전성 측쇄 그룹을 보유한 알코올 수용액에 또는 이의 1가 이온성 염에 적어도 부분적으로 용해성인 것이다. 양이온과 반응할 수 있는 산성 측쇄 그룹을 보유한 중합체의 예에는 다음과 같은 많은 종류가 있다: 폴리(포스파젠), 폴리(아크릴산) 및 폴리(메타크릴산). 산성 그룹의 예에는 카르복시산 그룹, 설폰산 그룹, 및 할로겐화된(바람직하게는 플루오르화된) 알코올 그룹이 있다. 음이온과 반응할 수 있는 염기성 측쇄 그룹을 가진 중합체의 예는 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐 피리딘), 및 폴리(비닐 이미다졸)이다.

일부 양태에서, 지속 전달 장치에는 PLA, PGA, PCL 및 이의 혼합물로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 중합체가 포함된다.

디스크에서 길항제의 반감기가 비교적 길다면, 그러한 길항제는 비교적 소 용량으로 디스크에 투여될 수 있을 것으로 생각될 수 있다. 이러한 조건에서, 길항제의 느린 고갈은 장시간이 경과하여도 길항제가 디스크에서 치료적 유효량 이하로 떨어지지 않게 할 것이다.

디스크 공간에서 길항제의 반감기가 긴 일부 양태에서, 투여 용량은 매우 소량일 수 있다.

예를 들어, 길항제가 약 1 내지 약 10mg/kg 범위 또는 약 1 내지 약 10ppm 범위(예컨대, TNF 길항제인 REMICADE® 인플릭시마브의 경우와 같은)로 존재할 때 효과적인 것으로 추정된다면, 디스크의 전형적인 수핵의 용량은 약 3ml(또는 3cc, 또는 3g)이므로, 디스크에 장기 지속적 유효량의 길항제를 제공하기 위해 투여되어야 하는 길항체의 양은 약 3 내지 약 30㎍이다. 이러한 제제는 1cc 미만의 양으로 투여될 수 있다. 비교 차원으로서, 토비니크(Tobinick)는 요통 치료를 위해 사이토킨 길항제의 적어도 1mg이 척추주위로 투여되어야 한다고 개시한다. 이와 유사하게, 올마커는 추출된 수핵 40mg에, 모노클론 항체 1.11mg/ml를 함유한 제제 100ml을 혼합하여 약 3/1000 부의 모노클로날 항체 농도를 생산했다. 이러한 경로를 통해 수득할 수 있는 소량은 길항제의 유해 부작용의 기회를 감소시킨다.

예를 들어, 임상의가 REMICADE® 인플릭시마브와 같은 길항제 60mg/ml를 2.7cc 디스크에 0.3ml 투여한다면, 디스크의 길항제 농도는 약 6mg/ml, 또는 6/1000 부가 될 것이다. 이론적 한정을 원하지는 않지만, 길항제가 전신 투여될 때에도 수핵에서 동일한 반감기를 나타낸다면(즉, 약 1주), 길항제 농도는 약 9주 동안 약 10ppm 이상으로 유지될 수 있을 것이다. 따라서, 추가 용량이 필요한 경우에는 임상의는 약 2개월 후 2차 용량을 제공하기만 하면 될 것이다.

따라서, 일부 양태에서, 길항제는 약 1mg 미만의 용량, 예컨대 약 0.5mg 미만, 보다 바람직하게는 약 0.1mg 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01mg 미만, 보다 바람직하게는 약 0.001 mg 미만의 용량으로 제공한다. 이러한 경로로 수득할 수 있는 소량은 길항제의 유해 부작용의 기회를 감소시킨다. 길항제가 HSCA인 경우, 이러한 소량으로 제공되는 HSCA로는 TNF 길항제가 바람직하고, REMICADE® 인플릭시마브가 보다 바람직하다.

일부 양태에서, 본 발명의 제제는 섬유테의 외벽을 통해 디스크에 직접 투여되기도 한다. 이러한 직접 투여로서, 디스크의 수핵 부위에 길항제를 침착시키는 방법이 보다 바람직하다. 이러한 상태에서, 수핵을 둘러싼 섬유테의 섬유 성질은 길항제가 디스크에 함유되어 있도록 도와줄 것이다.

일부 양태에서, 본 발명의 제제는 소구경의 주사 바늘을 통해 디스크 내로 주사되기도 한다. 일부 양태에서, 주사바늘은 헤르니화가 완화되도록 약 22 게이지 이하의 구경을 갖는 것이다. 예를 들어, 헤르니화의 발생 가능성을 더욱 완화시키기 위해서 주사바늘은 약 24게이지 이하의 구경을 가질 수도 있다.

제제의 직접 투여 용량이 수핵을 지나치게 압박하는 문제점을 유발할 정도로 매우 높다면, 직접 주사 전에 수핵의 적어도 일부를 제거하는 것이 바람직하다. 일부 양태에서, 제거되는 수핵의 용량은 주사되는 제제의 용량과 거의 유사한 정도이다. 예를 들어, 제거되는 수핵의 용량이 주사되는 제제 용량의 80 내지 120% 범위내일 수 있다. 또한, 이 절차는 환자로부터 약간의 퇴행성 디스크를 적어도 부분적으로 제거하는 추가 이점을 제공한다.

다른 양태에서, 제제는 대향된 척추골체의 종판을 통해 디스크 공간으로 전달된다. 이러한 경로는 섬유테를 천공해야 하는 필요성을 없애주어, 헤르니화 가능성을 제거해준다.

길항제는 MMP에 결합하여 통증을 경감시키고 ECM의 분해를 정지시켜 디스크를 치료적으로 치료하기는 하지만, 이러한 길항제의 적어도 일부는 ECM에 대한 MMP에 의해 가해지는 손상이 복원되는 것을 돕지 않는 것으로 생각된다.

이러한 본 발명에 따르면,

a) 길항제를 퇴행성 디스크 내로 디스크 관통 투여하는 단계를 포함하여, 수핵을 갖는 추간판의 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

다른 양태에서는, b) 적어도 하나의 추가 치료제가 디스크 관통 투여되되, 추가 치료제가 디스크(즉, 디스크 조직)을 적어도 부분적으로 복원시키기에 효과적인 양으로 투여되는 단계를 포함하여, ECM의 복원을 돕는 치료법이 필요로 되기도 한다.

본 발명의 일 관점에 따라, 길항제와 적어도 하나의 추가(예컨대, 제2) 치료제는 모두 디스크 공간으로 국소 투여된다. 길항제가 HSCA인 경우, HSCA는 특이적이기 때문에 국소 투여되는 추가 치료제를 방해하지 않으며, 각 제제는 환부 디스크에 치료력을 제공하기 위해 독립적으로 작용할 수 있다.

추가 치료제는 하나보다 많은 종류가 투여될 수 있다. 예를 들어, 3종, 4종 및 5종의 치료제가 사용될 수 있다.

일부 양태에서, 길항제 및 추가 치료제(즉, 추가 치료 물질)은 동시에 투여된다. 일 양태에서, 길항제와 추가 치료제는 길항제와 추가 치료제를 함유한 제제로 공동투여되기도 한다. 한편, 길항제가 먼저 투여될 수 있다. 또한, 제2 치료제가 먼저 투여될 수도 있다.

추가 치료제는 본 상세한 설명에 개시된 길항제 중 하나 이상일 수 있다. 예를 들어, 디스크에 첨가될 수 있는 다른 화합물에는 비타민 및 다른 영양 보충물; 호르몬; 당단백질; 피브로넥틴; 펩타이드 및 단백질; 탄수화물(단순 및/또는 복합); 프로테오글리칸; 올리고뉴클레오타이드(센스 및/또는 안티센스 DNA 및/또는 RNA); 골 형태발생성 단백질(BMP); 항체(예컨대, 감염 인자, 종양, 약물 또는 호르몬 항-안지오제닌에 대한 항체); 탈회된 골 기질(DBM); 항체(예컨대, 감염 인자, 종양 또는 약물에 대한 항체); 유전자 치료법 시약; 및 항암제가 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 필요하다면, 진통제 및 마취제와 같은 물질이, 디스크 공간에 전달 및 방출하기 위해 중합체와 혼합될 수도 있다.

일부 양태에서, 성장 인자는 추가 치료제이다. 본 상세한 설명에 사용된 바와 같이, "성장 인자"란 용어는 다른 세포, 특히 결합조직의 선조 세포의 성장이나 분화를 조절하는 임의의 세포 산물을 포괄한다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 성장 인자에는 산성 및 염기성 섬유아세포 성장 인자(FGF-1 및 FGF-2) 및 FGF-4를 비롯한 섬유아세포 성장 인자 계열의 구성원; PDGF-AB, PDGF-BB 및 PDGF-AA를 비롯한 혈소판 유래 성장인자(PDFG) 계열의 구성원; IGF-I 및 -II를 비롯한 인슐린 유사 성장 인자(IGF) 계열의 구성원인 EGF; TGF-β 상위계열, 예컨대 TGF-β1, 2 및 3(MP-52 포함), 유골 유도 인자(OIF), 안지오제닌, 엔도텔린, 간세포 성장 인자 및 각질세포 성장 인자; 골 형태발생성 단백질(BMP)의 구성원, BMP-1, BMP-3, BMP-2, OP-1, BMP-2A, -2B, -4, -7 및 -14; HBGF-1 및 HBGF-2; 성장 분화 인자(GDF), 헤지호그(hedgehog) 계열 단백질의 구성원, 예컨대 인디안, 소닉 및 데저트 헤지호그; ADMP-1; GDF-5; 및 콜로니 자극 인자(CSF) 계열의 구성원, 예컨대 CSF-1, G-CSF 및 GM-CSF; 및 이의 이소폼이 포함되나, 이에 국한되는 것은 아니다.

일부 양태에서, 성장 인자는 TGF-β, bFGF 및 IGF-1로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것이다. 이러한 성장 인자는 수핵의 재생 촉진, 증식 자극 및/또는 연골세포 분화 뿐만 아니라 ECM 분비를 촉진하는 것으로 생각된다. 일 양태에서, 성장인자는 TGF-β이다. 보다 바람직하게는, TGF-β는 약 10ng/ml 내지 약 5000ng/ml, 예컨대, 약 50ng/ml 내지 약 500ng/ml, 예컨대 약 100ng/ml 내지 약 300ng/ml의 양으로 투여한다.

일부 양태에서는, 추가 치료제로서 혈소판 농축물이 제공되기도 한다. 일 양태에서, 혈소판에 의해 방출되는 성장 인자는 혈소판이 채취된 혈액에서 발견되는 양의 적어도 2배(예컨대 4배) 이상의 양으로 존재한다. 일부 양태에서, 혈소판 농축물은 자가유래인 것이다. 일부 양태에서, 혈소판 농축물은 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)인 것이다. PRP는 ECM의 성장을 재자극할 수 있는 성장인자를 함유하고, 그 섬유소 기질이 신생 조직 성장에 적당한 스캐폴드를 제공하기 때문에 바람직하다.

일 양태에서, 추가 치료제는 NO 신타제의 길항제인 것이다. 일 양태에서, 길항제는 L-NIN 및 N^G-모노메틸-L-아르기닌인 것이다. 일 양태에서, 추가 치료제는 PLA₂의 길항제이다. 일 양태에서, 추가 치료제는 고특이성의 증식억제제인데, 그 예로는 라파마이신, cdk 억제제, 스타틴 및 산화방지제를 포함한 고특이성 증식억제제가 있다. 또 다른 양태에서, 산화방지제는 초과산화물 디스뮤타제인 것이다.

일 양태에서, 추가 치료제는 EPO 모사 펩타이드 및 EPO 모사 항체 융합 단백질로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 고특이성 아폽토시스 억제제이다. 일 양태에서, 추가 치료제는 IGF-I 및 IGF-II로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 고특이성 아폽토시스 억제제인 것이다. 일 양태에서, 추가 치료제는 고특이성 카스파제 억제제인 것이다. 일 양태에서, 추가 치료제에는 글리코사미노글리칸이 포함된다.

일 양태에서, 제제는 리포좀 전달 시스템을 포함하기도 한다.

일부 양태에서, 제제는 식염수와 같은 적당한 생체적합성 담체를 포함한다. 일부 양태에서, 담체는 전문이 참조인용된 미국 특허 제6,277,969호("Le")에 개시된 담체 중에서 선택되는 것이다.

일부 양태에서, 제제는 약물 펌프를 통해 투여된다.

본 발명에 따르면, 퇴행성 디스크를 적어도 부분적으로 복구하기에 유효한 양으로 존재하는 길항제를 함유하는 장치를 포함하는 키트가 제공된다.

본 발명에 따르면, a) 길항제 및 b) 성장인자를 함유하는, 퇴행성 디스크 질환 치료용 제제가 제공된다.

일부 바람직일 양태에서, 길항제는 점도보충제(viscosupplement)와 함께 제제에 배합된다. 점도보충제는 건강한 자연 수핵 ECM의 특성과 거의 유사한 것이다.

점도보충제는 글리코사미노글리칸(GAGS)을 포함하는 것이 바람직하다. GAGS는 반복 다당류 단위로 이루어진 생체중합체로서, 동물의 세포외 기질뿐만 아니라 세포 표면에 본래 존재한다. GAGS는 반복 이당류 단위를 함유하는 긴 선형 다당류이다. 상기 이당류 단위는 2개의 변형 당, 즉 N-아세틸갈라토사민 또는 N-아세틸글루코사민 중 어느 하나와 글루쿠로네이트 또는 이두로네이트와 같은 우론산을 함유한다. GAGS는 용액에 높은 점도를 부여하는 신장된 형태의 고도 음하전성 분자이다. 높은 점도 외에, GAGS는 통상적으로 낮은 압축성을 보유하여, 관절의 윤활액으로서 이상적인 분자로서 작용한다. 동시에, 이 분자의 경직성은 세포에 구조적 보존성을 제공하여 세포 사이의 통로를 제공함으로써 세포 이동을 허용한다.

최근 연구에 따르면, 플라스미드 DNA가 바이러스 벡터 사용에서와 같은 염증 반응을 유인하지 않는 것으로 밝혀져 있다. 연골(동화작용성) 인자, 예컨대 BMP를 암호화하는 유전자는 관절에 주사될 때 효능적일 수 있다. 또한, 본 상세한 설명에 제공된 임의의 성장 인자 또는 국소 MMP 활성을 제한할 수 있는 MMP의 조직 억제제(TIMP)와 같은 다른 인자의 과잉발현은 연골세포 및 ECM 보호에 유리한 효과를 나타낼 것이다. 일부 양태에서, TIMP는 TIMP-1 및 TIMP-2로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것이다. 일부 양태에서, TIMP는 자가유래이고, 여과, 원심분리 및 면역부착 과정에 의해 농축되기도 한다. 다른 양태에서, TIMP는 재조합적으로 제조되고, 환자에서 발견되는 농도의 1000배 이상의 농도로 존재하는 것이 바람직하다. 일 양태에서, 플라스미드는 사람 TGF-β 또는 EPO에 대한 유전자 암호를 함유하는 것이다.

히알우론산(HA)은 모든 포유동물의 다양한 조직과 일부 박테리아 종에서 자연발생하는 N-아세틸 글루코사민 및 글루쿠론산 분자로 이루어진 고분자량 다당류이다. 본 발명의 목적을 위해, HA는 히알우로난 및 COO- 그룹에 H+ 이온이 부착되어 있는 히알우론산 자체, 및 H+ 이온이 다른 양이온으로 치환된 히알우론산 염(예컨대 Na+으로 치환된 경우 히알우론산 나트륨을 형성한다)과 같은 임의의 유도체를 포함한다. 또한, HA의 정의에는 임의의 물리적 또는 화학적 가교결합된 히알우론산 또는 유도체가 포함된다. HA는 GAGS 중에서 독특한 것인데, 그 이유는 어떠한 황산염도 함유하지 않고, 프로테오글리칸처럼 단백질에 공유 결합된 상태로 발견되지 않기 때문이다. HA 중합체는 매우 큰 분자로서, 분자량이 약 100,000 내지 10,000,000이고, 다량의 물을 배수할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 바람직일 양태는 분자량이 0.5 내지 10M 달톤인 비가교결합된 HA를 포함하는 것이다.

점도보충제는 히알우론산 및 히알우로네이트(가교결합 여부에 관계없이)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 일부 양태에서, 점도보충제는 ARTHREASE™(DyPuy Ltd., 영국 리즈 소재)인 것이다. 일부 양태에서, 점도보충제는 전문이 참조인용된 미국 특허 일련번호 09/298,539[명칭: "Method of Treating Diseased, Injured or Abnormal Cartilage with Hyaluronic Acid and Growth Factors"(Radomsky et al.)]에 개시된 히알우론산 중에서 선택되는 히알우론산이다.

최근 연구에 따르면, 플라스미드 DNA가 바이러스 벡터 사용에서와 같은 염증 반응을 유인하지 않는 것으로 밝혀져 있다. 연골(동화작용성) 인자, 예컨대 BMP를 암호화하는 유전자는 관절에 주사될 때 효능적일 수 있다. 또한, 본 상세한 설명에 제공된 임의의 성장 인자 또는 국소 MMP 활성을 제한할 수 있는 TIMP와 같은 다른 인자의 과잉발현은 연골세포 및 ECM 보호에 유리한 효과를 나타낼 것이다. 일 양태에서, 플라스미드는 사람 TGF-β 또는 EPO에 대한 유전자 암호를 함유하는 것이다.

하요통의 무수한 원인과 일부 길항제의 상당한 비용 때문에, 주사에 앞서서 표적 디스크에 높은 수준의 표적 단백질(예컨대, 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP)이 존재하는지를 확인하기 위하여 먼저 진단 시험을 수행하는 것이 유용할 수 있다.

일 양태에서, 진단 시험은 MRI 등을 이용하는 것을 포함하는 비침습적 진단 시험을 포함한다. 일부 양태에서, MRI는 디스크에 존재하는 어그레칸의 수준을 정량분석할 수 있다.

일 양태에서는, 환자의 하요통에 디스크가 원인인지를 확인하기 위하여, 먼저 추간판사진을 촬영할 수도 있다. 그 다음, 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP의 존재 확인 또는 수준 정량을 분석하기 위해 표적 디스크에 대해 침습성 또는 비침습성 검사를 수행할 수 있다.

일 양태에서, 진단 시험은 디스크의 일부를 분리하여 분석하는 침습성 시험을 포함한다. 일부 양태에서, 임상의는 수핵의 일부는 떼어낸다. 일부 양태에서, 임상의는 섬유테의 일부를 떼어낸다. 분리된 물질은 수핵의 일부인 것이 바람직하다. 분리된 물질에 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP의 존재는 전기영동 또는 효소 결합된 면역흡착성 분석법(ELISA)(Burke, Br.JBJS, 84-B(2), 2002)에 기술된 바대로)을 이에 제한됨이 없이 포함하는 과정을 통해 측정할 수 있다.

일부 양태에서, 미국 특허 6,277,969("Le")에 개시된 진단 방법이 선택된다. 이러한 방법에서, TNF-α를 다량 보유하는 것으로 의심되거나 알려진 환자 중에서 TNF-α를 검출하는 진단 기구로서 고특이성의 항-TNF-α 화합물이 사용된다.

퇴행성 디스크에서 여러 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP의 수준을 측정한 후, 임상의는 이와 같이 진단된 수준과, 예비측정된 단백질(예컨대, 사이토킨 및 MMP)의 수준을 비교하는 것이 바람직하다. 전염증성 사이토킨 및/또는 MMP의 진단된 수준이 예비측정된 수준을 초과한다면, 임상의는 이러한 높은 수준이 불필요한 염증 작용을 유발하는 바, 표적 단백질을 억제할 수 있는 디스크 내로 바람직한 길항제(예컨대, 고특이성 p38 키나제 억제제)를 직접 주사해야 한다는 결론을 내릴 수 있다.

일부 양태에서는 "랩온어칩(lab on a chip)"을 함유하는 bioMEMS 장치를 진단 시험에 사용했다.

일부 양태에서, 인터루킨의 예비측정된 수준은 적어도 100pg/ml이다. 일부 양태에서, IL-6의 예비측정된 수준은 적어도 250pg/ml이다. 일부 양태에서, IL-8의 예비측정된 수준은 적어도 500pg/ml이다. 일부 양태에서, PGE2의 예비측정된 수준은 적어도 1000pg/ml이다. 일부 양태에서, TNF-α의 예비측정된 수준은 적어도 500pg/ml이다. 다른 양태에서, TNF-α의 예비측정된 수준은 적어도 20pg/ml, 보다 바람직하게는 적어도 30pg/ml, 보다 더 바람직하게는 적어도 50pg/ml, 보다 더 바람직하게는 적어도 1ng/ml이다. 다른 양태에서, TNF-α의 예비측정된 수준은 적어도 1ng/디스크 이고, 다른 양태에서는 적어도 1000pg/디스크이다.

또한, 본 발명의 치료 물질을 직접 투여하는 것이 실제 효능적인지를 측정할 수 있는 것이 유용할 수도 있다. 따라서, 투여 후 디스크에 남아있는 사이토킨 또는 MMP의 수준을 측정할 수 있다.

실시예 I

다음의 비제한적 예상 실시예는 HAAMMP 및 식염수를 함유하는 제제를 퇴행성 디스크의 수핵으로 디스크 관통 투여하는 방식을 설명하기 위한 것이다.

먼저, 임상의는 환자 중의 특정 디스크가 높은 MMP 수준을 보유하는지를 확인하는 진단 시험을 실시한다.

다음, 피하 통증을 감소시키기 위해, 문제의 디스크의 등쪽 부위에 국소 마취제(예컨대 리도카인 5ml)를 투여한다.

그 다음, 소침(stylet)이 내재된 비교적 큰(예, 18 내지 19 게이지) 주사바늘을 문제 디스크의 환자 등쪽 피부를 찔러, 피하 지방 및 엉치허리 인대 및 근육을 통해 추간판의 외연으로 통과시킨다.

그 다음, 소침을 바늘에서 제거한다.

그 다음, 임상의는 큰 게이지 바늘 안에 꼭 맞는 작은 게이지 바늘을 가진 주사기를 사용한다. 이 주사바늘은 일반적으로 22 또는 24게이지 바늘이다. 이 주사기 안에는 본 발명의 제제가 담겨있다.

제제는 HAAMMP를 함유하는데, HAAMMP의 농도는 약 30mg/ml 내지 약 60mg/ml 범위이다.

그 다음, 작은 바늘을 큰 바늘의 동축을 통해 큰 바늘의 원말단을 지나서 이동시켜, 섬유테를 찌르도록 한다. 그 다음, 작은 바늘을 수핵의 중심으로 진입시킨다. 마지막으로, 주사기 플런저를 눌러서 수핵에 약 0.1 내지 1ml의 제제를 주사한다.

실시예 II

비제한적인 가상의 본 실시예는 실시예 I과 거의 유사하되, 공중합체 폴리-DL-락타이드-코-글리콜라이드(PLG)를 함유한 지속 방출 장치로 구성된 제제를 사용했다. 이 제제는 길항제로서 HAAMMP를 함유하는데, HAAMMP의 농도는 약 30mg/ml 내지 약 60mg/ml의 농도로 사용했다.

실시예 III

비제한적인 가상의 본 실시예는 HSCA와 식염수를 함유한 제제를 퇴행성 디스크의 수핵으로 디스크 관통 투여하는 방식을 설명한 것이다.

먼저, 임상의는 환자의 특정 디스크에 특정 전염증성 사이토킨이 높은 수준으로 존재하는지를 확인하는 진단 시험을 실시한다.

그 다음, 소침(stylet)이 내재된 비교적 큰(예, 18 내지 19 게이지) 주사바늘을 문제의 디스크의 환자 등쪽 피부로 찔러, 이 주사바늘을 피하 지방 및 등쪽 엉치허리 인대 및 근육을 통해 추간판의 외연으로 진입시킨다.

그 다음, 소침을 바늘에서 제거한다.

그 다음, 임상의는 큰 게이지 바늘 안에 꼭 맞는 작은 게이지 바늘을 가진 주사기를 사용한다. 이 주사바늘은 일반적으로 22 또는 24게이지 바늘이다. 이 주 사기의 몸체에는 본 발명의 제제가 담겨있다.

제제는 REMICADE® 인플릭시마브를 함유하는데, 인플릭시마브의 농도는 약 30mg/ml 내지 약 60mg/ml 범위이다.

실시예 IV

비제한적인 가상의 본 실시예는 실시예 III과 거의 유사하되, 공중합체 폴리-DL-락타이드-코-글리콜라이드(PLG)를 함유한 지속 방출 장치로 구성된 제제를 사용했다. 이 제제는 길항제로서 인플릭시마브를 함유하는데, 인플릭시마브의 농도는 약 30mg/ml 내지 약 60mg/ml의 농도로 사용했다.

본 발명은 바람직한 구체예를 참고로 하여 구체적으로 제시하고 설명하였지만, 형태 및 세부사항의 변형이 후속되는 청구의 범위에 의해 포괄되는 본 발명의 범위를 이탈하지 않는 범위 내에서 다양하게 실시될 수 있음을 당업자는 잘 알고 있을 것이다.

실시예 V

비제한적인 가상의 본 실시예는 사이클린 화합물을 함유한 제제를 퇴행성 디 스크의 수핵으로 디스크 관통 투여하는 방식을 설명한 것이다.

먼저, 임상의는 환자의 특정 디스크에 특정 전염증성 사이토킨 및 MMP가 높은 수준으로 존재하는지를 확인하는 진단 시험을 실시한다.

다음, 피하 통증을 감소시키기 위해, 문제 디스크의 등쪽 부위에 국소 마취제(예컨대 리도카인 5ml)를 투여한다.

그 다음, 소침(stylet)이 내재된 비교적 큰(예, 18 내지 19 게이지) 주사바늘을 문제 디스크의 환자 등쪽 피부로 찔러, 피하 지방 및 등쪽 엉치허리 인대 및 근육을 통해 추간판의 외연으로 진입시킨다.

그 다음, 소침을 바늘에서 제거한다.

일 양태로서, 수핵의 일부를 사이클린 화합물 투여 전에 제거한다.

그 다음, 큰 게이지 바늘 안에 꼭 맞는 작은 게이지 바늘을 가진 주사기를 사용한다. 이 주사바늘은 일반적으로 22 또는 24게이지 바늘이다. 이 주사기의 몸체에는 본 발명의 제제가 담겨있다.

제제는 독시사이클린 약 50mg/ml를 함유한 것이다.

실시예 VI

비제한적인 가상의 본 실시예는 실시예 I과 거의 유사하되, 공중합체 폴리-DL-락타이드-코-글리콜라이드(PLG)를 함유한 지속 방출 장치로 구성된 제제를 사용했다. 이 제제는 독시사이클린을 함유한다.

Claims

a) 고특이성의 사이토킨 길항제,

b) 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제(HAAMMP),

c) p38 키나제의 억제제 및

d) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 포함하는 유효량의 제제를 추간판에 디스크 관통 투여함을 포함하여, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가,

i) 디아릴 이미디졸;

ii) N,N'-디아릴 우레아;

iii)N,N-디아릴 우레아;

iv) 벤조페논;

v) 피라졸 케톤;

vi) 인돌 아미드;

vii) 디아미드;

viii) 퀴나졸린;

ix) 피리미도[4,5-d]피리미디논; 및

x) 피리딜아미노-퀴나놀린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 1-아릴-2-피리디닐 헤테로사이클인 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 3개 이상의 사이클릭 그룹을 갖는 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 수불용성이거나 실질적으로 수불용성인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 TIMP인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 항-어그레카나제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 콜라겐아제 MMP; 스트로멜리신 MMP 및 겔라틴아제 MMP로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 MMP의 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 MMP-2, MMP-3 및 MMP-8로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 MMP의 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, 사이클린 화합물이 독시사이클린, 리메사이클린, 옥시사이 클린 화합물, 테트라사이클린, 미노사이클린, 화학적으로 변형된 테트라사이클린 및 KB-R7785로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 지속 전달 장치를 통한 확산 또는 지속 전달 장치의 생체분해에 의해 지속 전달 장치로부터 주로 방출되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 통증을 감소시키는 유효량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 수핵의 세포외 기질의 분해를 억제하는 유효량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 길항제가, 국소 조직 농도가 약 5㎍/kg 내지 약 50㎍/kg이 되게하는 용량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 약 1cc 미만의 양으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 제제중에 약 100mg/ml 이상의 양으로 존재하는 방 법.
제1항에 있어서, 제제가 지속 방출 장치 또는 글리코사미노글리칸을 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 섬유테의 외부 벽과 밀접하게 제공되는 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 제제중에 약 0.5mg 이하의 양으로 존재하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 디스크 조직을 복구시키는 유효량으로 존재하는 성장 인자를 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 약물 펌프를 통해 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 수핵내로 주사되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 섬유테내로 주사되는 방법.
제1항에 있어서, 수핵 부분이 제제를 디스크 관통 투여하기 전에 제거되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 바늘을 통해 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 0.03ml 내지 약 0.3ml의 용량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 투여가,

a) 섬유테의 외부벽에 부착된 패치 내로 제제를 제공하고,

b) 섬유테의 외부벽에 밀접한 위치에서의 저장소 내로 제제를 제공하고,

c) 인접한 척추골체(vertebral body)의 종판에 밀접한 위치에서의 저장소 내로 제제를 제공함을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 손상되지 않은 디스크인 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 붕괴된 디스크인 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 판분리된 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 균열을 갖는 방법.
a) 고특이성의 사이토킨 길항제,

b) 고친화성의 항매트릭스 메탈로프로테이나제 HAAMMP,

c) p38 키나제 억제제,

d) 사이클린 화합물 및

e) i) 성장 인자,

ii) 플라스미드 DNA,

iii) 전염증성 인터류킨의 고특이성 길항제,

iv) TNF-α에 대한 고특이성 길항제,

v) PLA2에 대한 고특이성 길항제,

vi) 고특이성 증식 억제제 및

vii) 고도로 특이적인 아폽토시스 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 추가의 치료제

로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 포함하는, 퇴행성 디스크 질환을 치료하기 위한 제제.
a) 디스크내에 전염증성 단백질의 수준을 측정하는 단계,

b) 상기 수준과 미리 결정된 전염증성 단백질의 수준을 비교하는 단계, 및

c) i) 고특이성 사이토킨 길항제,

ii) 고친화성 항매트릭스 메탈로프로테이나제 HAAMMP,

iii) p38 키나제 억제제 및

iv) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제의 제제를 디스크내로 주사하는 단계를 포함하여, 퇴행성 추간판을 치료학적으로 치료하는 방법.
제34항에 있어서, 전염증성 단백질이 인터류킨-6 또는 인터류킨-8인 방법.
제34항에 있어서, 미리 결정된 TNF-α에 대한 수준이 20pg/ml 이상, 30pg/ml 이상 또는 1000pg/디스크 이상인 방법.
a) 개체의 유전자적 프로필을 결정하는 단계,

b) 당해 개체의 프로필과 위험에 처한 사람의 미리 결정된 유전자적 프로필 수준을 비교하는 단계,

c) 개체가 위험에 처한 환자임을 결정하는 단계 및

d) i) 고특이성 사이토킨 길항제,

ii) MMP의 고친화성 길항제,

iii) p38 키나제 억제제 및

iv) 사이클린 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 길항제를 상기 개체의 디스크내로 주사하는 단계를 포함하여, 사람 개체에서 추간판의 퇴행을 방지하는 방법.
COX-2 효소의 길항제, NO 신타제의 길항제, 고특이성 산화방지제, 고특이성 증식 억제제 또는 고특이성 아폽토시스 억제제를 포함하는 유효량의 제제를 추간판에 디스크 관통 투여함을 포함하는, 수핵을 갖는 추간판에서 퇴행성 디스크 질환을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 고특이성의 사이토킨 길항제가 TNF-α를 억제하는 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 수핵내에 존재하는 MMP를 억제하여 세포외 기질의 분해를 정지시키는데 일조하는 유효량으로 투여되는 방법.
제6항에 있어서, TIMP가 재조합 TIMP인 방법.
제6항에 있어서, TIMP가 자가(autologous) 농축된 형태로 존재하는 방법.
제7항에 있어서, 항-어그레카나제가 자가 농축된 형태로 존재하는 방법.
제7항에 있어서, 항-어그레카나제가 재조합 항-어그레카나제인 방법.
제1항에 있어서, 제제내 HAAMMP의 농도가 100mg/ml 이상인 방법.
제1항에 있어서, 제제가 지속 방출 장치를 추가로 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 하이드로겔을 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 조절된 방출을 제공하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 연속 방출을 제공하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 간헐적 방출을 제공하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 생체감지기를 포함하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 미소구를 포함하는 방법.
제46항에 있어서, HAAMMP가 주로 지속 전달 장치를 통한 확산 또는 지속 전달 장치의 생체분해에 의해 지속 방출 장치로부터 방출되는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 염증 반응성 전달 시스템을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 약 0.5mg의 최대량으로 제제내에 존재하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 디스크 조직을 복구하는 유효량으로 존재하는 성장 인자를 추가로 포함하는 방법.
제56항에 있어서, 성장 인자가 TGF-β인 방법.
제56항에 있어서, 성장 인자가 혈소판 농축물에 의해 제공되는 방법.
제1항에 있어서, 제제내 사이클린 화합물의 농도가 약 100mg/ml 미만인 방법.
제1항에 있어서, 제제가 수핵 내로 주사되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 섬유테 내로 주사되는 방법.
제26항에 있어서, 바늘이 최대 24 게이지를 갖는 방법.
제1항에 있어서, 투여가 섬유테의 외부 벽에 부착된 패치 내로 제제를 제공함을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 투여가 섬유테의 외부벽에 밀접한 저장소 내로 제제를 제공함을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 투여가 인접한 척추골체의 종판에 밀접한 저장소 내로 제제를 제공함을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 손상되지 않은 디스크인 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 붕괴된 디스크인 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 판분리된 방법.
제1항에 있어서, 퇴행성 디스크가 균열을 갖는 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 주로 지속 전달 장치를 통한 HAAMMP의 확산에 의해 지속 전달 장치로부터 방출되는 방법.
제70항에 있어서, 지속 전달 장치가 중합체인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 주로 지속 전달 장치의 생체분해에 의해 지속 전 달 장치로부터 방출되는 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 콜라겐아제 MMP의 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 스트로멜리신 MMP의 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 겔라틴아제 MMP의 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 막 MMP에 대한 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 MMP-2에 대한 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 MMP-3에 대한 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, HAAMMP가 MMP-8에 대한 특이적 길항제인 방법.
제1항에 있어서, 사이클린 화합물의 농도가 약 20mg/ml 이상인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 성장인자인 방법.
제1항에 있어서, 사이클린 화합물이 수핵내에 존재하는 TNF-α를 억제하여 세포외 기질의 분해를 정지시키는 유효량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 투여가 섬유테의 외부벽에 부착된 패치 내로 제제를 제공함을 포함하는 방법.
제33항에 있어서, HAAMMP가 TIMP-1 및 TIMP-2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제제.
제33항에 있어서, HAAMMP가 항-어그레카나제인 제제.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 실질적으로 수불용성인 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제가, 국소 조직 농도가 약 5㎍/kg 내지 50㎍/kg이 되게하는 용량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 수용성인 방법.
제3항에 있어서, 1-아릴-2-피리디닐 헤테로사이클이,

f) 4,5 치환된 이미다졸,

g) 1,4,5 치환된 이미디졸,

h) 2,4,5 치환된 이미디졸,

i) 1,2,4,5 치환된 이미디졸 및

j) 비-이미디졸 5원 환 헤테로사이클로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 3개 이상의 사이클릭 그룹을 갖는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 제제중에 약 100mg/ml 이상의 양으로 존재하는 방법.
제1항에 있어서, p38 키나제 억제제가 제제중에 약 0.5mg 이하의 양으로 존재하는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 글리코사미노글리칸을 추가로 포함하는 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 플라스미드 DNA인 제제.
제34항에 있어서, 전염증성 단백질이 인터류킨인 방법.
제35항에 있어서, 인터류킨에 대한 미리 결정된 수준이 100pg/ml 이상인 방법.
제35항에 있어서, 인터류킨-6에 대한 미리 결정된 수준이 100pg/ml 이상인 방법.
제35항에 있어서, 인터류킨-6에 대한 미리 결정된 수준이 250pg/ml 이상인 방법.
제35항에 있어서, 인터류킨-8에 대한 미리 결정된 수준이 500pg/ml 이상인 방법.
제34항에 있어서, 전염증성 단백질이 PGE2인 방법.
제100항에 있어서, PGE2에 대한 미리 결정된 수준이 1000pg/ml 이상인 방법.
제34항에 있어서, 전염증성 단백질이 TNF-α인 방법.
제102항에 있어서, TNF-α에 대한 미리 결정된 수준이 20pg/ml 이상인 방법.
제102항에 있어서, TNF-α에 대한 미리 결정된 수준이 30pg/ml 이상인 방법.
제35항에 있어서, TNF-α에 대한 미리 결정된 수준이 1000pg/디스크 이상인 방법.
제38항에 있어서, NO 신타제의 고특이성 길항제가 N-이미노에틸-L-라이신(L-NIL) 및 N^G-모노메틸-L-아르기닌으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
제38항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 라파마이신인 방법.
제107항에 있어서, 라파마이신이 약 0.1 내지 약 10μM 용량으로 제공되는 방법.
제107항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 cdk 억제제인 방법.
제109항에 있어서, cdk 억제제가 약 0.1 내지 약 10μM 용량으로 제공되는 방법.
제38항에 있어서, 아폽토시스 억제제가 EPO, 에리트로포에틴 모사 펩타이드, EPO 모사 항체 융합 단백질, IGF-I, IGF-II 및 카스파제 억제제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서, 제제가 완충제를 추가로 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 사이클린 화합물이 수핵내 존재하는 MMP를 억제하여 세포외 기질의 분해를 정지시키는 유효량으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 사이클린 화합물이 수핵내 존재하는 TNF-α를 억제하여 통증을 감소시키는 유효량으로 투여되는 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 전염증성 인터류킨의 고특이성 길항제를 포함하는 방법.
제115항에 있어서, 인터류킨이 IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12 또는 IL-19인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 TNF-α의 고특이성 길항제인 방법.
제117항에 있어서, TNF-α의 고특이성 길항제가 가용성 TNF-α의 억제제인 방법.
제117항에 있어서, TNF-α의 고특이성 길항제가 TNF-α합성의 억제제인 방법.
제117항에 있어서, TNF-α의 고특이성 길항제가 TNF-α에 대한 천연 수용체의 억제제인 방법.
제117항에 있어서, TNF-α의 고특이성 길항제가 p38 키나제의 억제제인 방법.
제117항에 있어서, TNF-α의 고특이성 길항제가 실질적으로 수불용성인 p38 키나제의 억제제인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 NO 신타제의 고특이성 길항제인 방법.
제123항에 있어서, 고특이성 길항제가 L-NIL인 방법.
제123항에 있어서, 고특이성 길항제가 N^G-모노메틸-L-아르기닌인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 PLA₂의 고특이성 길항제인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 고특이성 증식 억제제인 방법.
제127항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 라파마이신을 포함하는 방법.
제127항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 cdk 억제제를 포함하는 방법.
제127항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 스타틴을 포함하는 방법.
제127항에 있어서, 고특이성 증식 억제제가 산화방지제를 포함하는 방법.
제131항에 있어서, 산화방지제가 초과산화물 디스뮤타제를 포함하는 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 EPO 모사 펩타이드 및 EPO 모사체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 고특이성 아폽토시스 억제제인 방법.
제33항에 있어서, 추가의 치료제가 IGF-I 및 IGF-II로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 고특이성 아폽토시스 억제제인 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 모노클로날 항체인 방법.
제1항에 있어서, 모노클로날 항체가 인플릭시마브인 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 에타너셉트인 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 막 결합 사이토킨에 결합하는 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 가용성 사이토킨과 결합하는 방법.
제46항에 있어서, 지속 방출 장치가 대형구를 포함하는 방법.