KR20050040123A - Food composition comprising extract of rosa multiflora with antioxdative activity - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항산화 활성을 가지는 찔레나무(Rosa multiflora) 추출물을 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 프로시아니딘 B3 (procyanidin B3)를 함유하며 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물을 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 찔레나무 추출물 및 이를 포함하는 조성물은 활성산소에 의해 유발되는 질병의 치료 또는 예방, 식품의 품질 유지 및 피부의 산화에 의한 손상을 방지하는데 매우 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a food composition comprising an extract of Rosa multiflora having antioxidant activity. Specifically, the present invention relates to a food composition containing procyanidin B3 and comprising brier extract having antioxidant activity. Brier extract according to the present invention and a composition comprising the same can be very useful for the treatment or prevention of diseases caused by free radicals, maintaining the quality of food and preventing damage due to oxidation of the skin.
Description
본 발명은 항산화 활성을 가지는 찔레나무(Rosa multiflora) 추출물, 그 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 프로시아니딘 B3를 함유하며 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물, 찔레나무의 지하부를 유기용매로 추출하고 크로마토그래피로 분리·정제함을 특징으로 하는 찔레나무 추출물의 제조방법 및 상기 찔레나무 추출물을 포함하며 항산화 활성을 가지는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an extract of Rosa multiflora having antioxidant activity, a method for preparing the same, and a composition comprising the same. Specifically, the present invention provides a method for preparing a brier extract, which contains procyanidine B3 and has an antioxidant activity, extracts the basement of brier with an organic solvent, and separates and purifies by chromatography. It relates to a composition comprising an antioxidant activity.
항산화 활성이란 생체 내 활성산소의 생성을 방지하고 세포에 회복 불가능한 손상을 야기하는 산화현상을 방지하는 활성을 말한다. 안정한 상태의 산소 (triplet oxygen)는 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질, 광화학 반응과 같은 환경적 및 생화학적 요인 등에 의해 수퍼옥사이드 라디칼, 하이드록시 라디칼, 과산화수소와 같은 반응성이 큰 활성산소(Reactive Oxygen Species: ROS)로 전환되어 세포구성성분을 비가역적으로 파괴한다. 이들 활성산소의 작용은 체내 방어기구인 수퍼옥사이드디스뮤타제(SOD), 카탈라아제(catalase), 퍼옥시다아제(peroxidase) 등의 항산화성 효소 및 비타민 C(vitamin C), 비타민 E(vitamin E), 글루타티온 (glutathione) 등의 항산화 물질의 작용에 의하여 최소화 될 수 있다. 그러나, 이러한 생체 방어력에 이상이 생기거나 과도한 활성산소에 노출될 경우, 이 균형이 깨어져서 활성산소가 지질, 단백질, DNA 등을 비가역적으로 파괴하게 된다. 그 결과, 노화(aging), 암(cancer), 복합성 동맥경화(multiple atherosclerosis), 관절염 및 파킨슨병(Parkinson's disease)과 같은 각종 질병이 유발된다.Antioxidant activity refers to an activity that prevents the production of free radicals in vivo and prevents oxidative phenomena that cause irreparable damage to cells. The stable oxygen (triplet oxygen) is a reactive reactive oxygen such as superoxide radical, hydroxy radical, hydrogen peroxide due to enzymatic system, reducing metabolism, chemicals, pollutants, and photochemical reactions Oxygen Species (ROS), which irreversibly destroy cellular components. The action of these free radicals is antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD), catalase, peroxidase, and vitamin C, vitamin E, glutathione ( It can be minimized by the action of antioxidants such as glutathione). However, if the biological defenses are abnormal or exposed to excessive free radicals, the balance is broken and the free radicals irreversibly destroy lipids, proteins, DNA, and the like. As a result, various diseases such as aging, cancer, multiple atherosclerosis, arthritis and Parkinson's disease are caused.
지금까지 개발된 합성 항산화제로는, BHA(butylated hydroxy anisole), BHT (butylated hydroxy toluene) 및 NDGA(nordihydro-guaiare tic acid) 등이 있으며, 천연 항산화제로는 수퍼옥사이드 디스뮤타제, 퍼옥시다아제, 카탈라아제, 글루타티온 퍼옥시다아제 등의 항산화효소와 토코페롤(비타민 E), 비타민 C(Vitamin C, ascorbic acid), 카로테노이드, 글루타티온 등의 비효소적 항산화물질 등이 있다.Synthetic antioxidants developed so far include butylated hydroxy anisole (BHA), butylated hydroxy toluene (BHT) and nordihydro-guaiare tic acid (NDGA), and natural antioxidants include superoxide dismutase, peroxidase, catalase, Antioxidant enzymes such as glutathione peroxidase and non-enzymatic antioxidants such as tocopherol (vitamin E), vitamin C (Vitamin C, ascorbic acid), carotenoids and glutathione.
그러나, 합성 항산화제는 생체 내에서 독성을 나타내어 알러지와 종양을 발생시킬 수 있는 단점이 있으며 온도에 약해 한번 열을 가하면 쉽게 파괴되는 단점이 있다. 반면에, 천연 항산화제는 합성 항산화제에 비해 생체에 안전하다는 장점이 있으나, 그 효과가 약하다는 단점이 있다. 따라서, 항산화 활성이 탁월하고 보다 안전한 새로운 천연 항산화제의 개발이 절실히 요구되고 있다.However, synthetic antioxidants are toxic in vivo and can cause allergies and tumors. On the other hand, natural antioxidants have the advantage of being safe to the living body compared to synthetic antioxidants, but the disadvantage is that the effect is weak. Therefore, there is an urgent need for the development of new natural antioxidants that are excellent in antioxidant activity and safer.
한편, 현재까지 개발된 천연 항산화제 중에서 안전하고 항산화 활성이 우수하다고 알려진 프로시아니딘(procyanidin)은 광범위한 식물체에 존재하는 프로안토시아니딘(proanthocyanidin) 중의 하나이다. 프로안토시아니딘은 축합형 탄닌의 일종으로 플라반-3-올(flavan-3-ol) 또는 플라반-3,4-디올(flavan-3,4-diol)을 구성단위로 해서 축합 또는 중합에 의해 결합된 화합물 군을 말한다. 이 중에서 프로시아니딘은 카테킨(Catechin), 에피카테킨(Epicatechin), 카테킨갈레이트(Cate chingallate), 에피카테킨갈레이트(Epicatechingallate), 갈로카테킨갈레이트(Gal locatechingallate) 또는 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechingallate)를 기본 골격(backbone)으로 하는 이중체(dimer)이상의 올리고머(Oligomer) 및 다중체 (Polymer)를 통칭하는 명칭이다. 프로시아니딘은 기본 골격 및 결합 형태에 따라 여러 종류로 분류된다. 예를 들면, 프로시아니딘 B3는 카테킨-(4α→8)-카테킨의 구조를 가지고 있으며, 프로시아니딘 B1은 에피카테킨-(4β→8)-카테킨의 구조를 가지고 있다. 프로시아니딘 B2는 에피카테킨-(4β→8)-에피카테킨의 구조를 가지고 있으며, 프로시아니딘 B5는 에피카테킨-(4β→6)-에피카테킨의 구조를 가지고 있다(Walter Feucht et al., Z. Naturforsch., 54c, 942-945, 1999).Meanwhile, procyanidin, which is known to be safe and excellent in antioxidant activity among natural antioxidants developed to date, is one of proanthocyanidins present in a wide range of plants. Proanthocyanidins are a type of condensed tannins that are condensed using flavan-3-ol or flavan-3,4-diol as structural units. Refers to a group of compounds bound by polymerization. Of these, procyanidins are the basic skeletons of catechin, epicatechin, catechin gallate, epicatechin gallate, epicateching allate, gallocatechin gallate, or epigallocatechin gallate. It is a generic name for oligomers and polymers of dimers or more as backbone. Procyanidins are classified into several types according to their basic backbone and binding forms. For example, procyanidin B3 has the structure of catechin- (4α → 8) -catechin, and procyanidin B1 has the structure of epicatechin- (4β → 8) -catechin. Procyanidin B2, epicatechin - (4β → 8) - has the structure of epicatechin, procyanidin B5 is epicatechin - (4β → 6) -. .. Has the structure of epicatechin (Walter Feucht et al, Z Naturforsch, 54c, 942 -945, 1999).
프로시아니딘은 다양한 종류의 식물체로부터 용매 추출하거나 또는 크로마토그래피로 분리·정제함으로써 수득할 수 있으며, 와인이나 맥주로부터도 분리할 수 있다고 알려져 있다. 문헌에는 팥(Vigna angularis Ohwi et Ohashi)(Toshiaki Ariga et al., Agricultural Biological Chemistry, Vol. 45, 2709-2712, 1981), 소나무 수피(Loblolly pine)(R. W. Hemingway et al., Phytochemistry, Vol. 22, 275-281, 1983) 및 마디풀(Polygonum multiflorum)의 뿌리(Nonaka et al., Phytochemistry, Vol. 21, 429-432, 1982)에서 용매추출 및 크로마토그래피에 의해 프로시아니딘을 분리한 바 있다.Procyanidins can be obtained by solvent extraction from various kinds of plants or by separation and purification by chromatography, and are known to be separated from wine or beer. Literature ( Vigna angularis Ohwi et Ohashi) (Toshiaki Ariga et al., Agricultural Biological Chemistry , Vol. 45, 2709-2712, 1981), Loblolly pine (RW Hemingway et al., Phytochemistry , Vol. 22) , 275-281, 1983) and at the root of Polygonum multiflorum (Nonaka et al., Phytochemistry , Vol. 21, 429-432, 1982), procyanidins were isolated by solvent extraction and chromatography.
프로시아니딘은 단백질과의 결합능을 가지고 있으며, 항염증효과가 있다고 보고된 바 있다. 특히, 녹차 탄닌으로 알려져 있는 카테킨은 탁월한 항암효과까지 있는 것으로 보고된 바 있다. 미국특허 제4797421호에는 프로시아닌의 항산화 효과가 개시된 바 있으며 미국특허 제5646178호에는 산앵도나무 속(Vaccinium sp.)에 속하는 크랜베리 추출물로부터 수득한 프로시아니딘의 항세균 효과가 개시된 바 있다. 대한민국특허 공개 제2001-10154호에는 기질 금속단백질 분해효소와 관련된 상처, 암전이, 치주질환, 관절염과 같은 질환의 예방 및 치료를 위한 프로시아니딘을 유효성분으로 하는 약제가 개시된 바 있다. 대한민국특허 공개 제1998-702533호에는 타마린드 종피 추출물로부터 분리한 프로시아니딘을 유효성분으로 하는 항비만제가 개시된 바 있다.Procyanidins have the ability to bind proteins and have been reported to have anti-inflammatory effects. In particular, catechin, known as green tea tannin, has been reported to have excellent anticancer effects. U.S. Patent No. 4797421 discloses the antioxidant effect of Procyanine and U.S. Pat.No.5646178 discloses the antibacterial effect of Procyanidin obtained from cranberry extract belonging to the genus Vaccinium sp. Korean Patent Laid-Open No. 2001-10154 discloses a medicament using procyanidine as an active ingredient for the prevention and treatment of diseases such as wounds, cancer metastasis, periodontal disease, and arthritis related to matrix metalloproteinases. Korean Patent Laid-Open Publication No. 1998-702533 discloses an anti-obesity agent using procyanidin isolated from tamarind seed extract as an active ingredient.
그러나, 아직까지 찔레나무 추출물의 항산화효과는 보고된 바 없으며, 찔레나무 추출물에 프로시아니딘이 함유되어 있다고 보고된 바 없다.However, the antioxidant effect of the brier extract has not been reported so far, and it has not been reported that the brier extract contains procyanidins.
이에 본 발명자들은 새로운 천연 항산화제를 연구하던 중 찔레나무(Rosa mulgiflora) 지하부를 유기용매로 추출한 추출물이 항산화 활성을 지니고 있으며 상기 추출물에는 프로시아니딘 B3(procyanidin B3) 화합물이 포함되어 있다는 새로운 사실을 발견하고, 항산화 활성을 지니는 찔레나무 추출물 및 상기 추출물을 포함하는 조성물을 제조함으로써 본 발명을 완성하였다.Therefore, the present inventors discovered a new fact that the extract extracted from the underground part of the brier ( Rosa mulgiflora) with an organic solvent while studying a new natural antioxidant has an antioxidant activity and the extract contains a procyanidin B3 compound. The present invention has been completed by preparing a brier extract having antioxidant activity and a composition comprising the extract.
따라서, 본 발명의 목적은 찔레나무(Rosa multiflora) 지하부를 유기용매로 추출하여 수득한 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a brier extract having antioxidant activity obtained by extracting a brier ( Rosa multiflora ) basement with an organic solvent.
본 발명의 다른 목적은 (a) 찔레나무의 지하부를 유기용매에 침지시켜 추출하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 추출물을 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention (a) extracting by immersing the basement of the brier in an organic solvent; And (b) separating and purifying the extract of step (a) by chromatography to provide a method for producing a brier extract having antioxidant activity, characterized in that it comprises a step of purification.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 찔레나무 추출물을 포함하며 항산화 활성을 가지는 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a composition comprising the brier extract and having an antioxidant activity.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 찔레나무(Rosa multiflora) 지하부를 유기용매로 추출하여 수득한 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a brier extract having antioxidant activity obtained by extracting the brier ( Rosa multiflora ) basement with an organic solvent.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 찔레나무의 지하부를 유기용매에 침지시켜 추출하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 추출물을 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물의 제조방법을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention comprises the steps of (a) extracting by immersing the base of the brier in an organic solvent; And (b) separating and purifying the extract of step (a) by chromatography.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 찔레나무 추출물을 포함하며 항산화 활성을 가지는 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a composition comprising the brier extract and having an antioxidant activity.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
찔레나무(Rosa multiflora)는 장미과의 낙엽관목으로 전국의 산기슭이나 하천유역에 광범위하게 분포하는 식물이다. 한방에서는 열매를 영실이라는 약제로 사용하는데, 불면증, 건망증, 성기능 감퇴, 부종에 효과가 있다고 알려져 있으며 이뇨제로도 사용된다. Rosa multiflora is a deciduous shrub of the family Rosaceae and is widely distributed in foothills and river basins throughout the country. In oriental medicine, fruit is used as a drug called Youngsil, and it is known to be effective in insomnia, forgetfulness, decreased sexual function, and edema. It is also used as a diuretic.
본 발명에 따른 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물은 찔레나무 지하부를 유기용매로 추출함으로써 수득할 수 있다. 유기용매로는 에틸아세테이트, 아세톤, 에탄올, 메탄올, 물 및 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다. 바람직하게는 아세톤을 사용한다. 추출용매로서 아세톤을 사용할 경우에 수용성 에탄올을 사용하는 경우에 비하여 추가로 용매 분획하는 단계를 거치지 않고도 항산화 활성물질이 다량 포함된 추출물을 수득할 수 있는 장점이 있다. 한편, 추출용매로서 수용성 에탄올을 사용하는 경우에는 전체적으로 추출 수율이 높은 장점이 있는 반면 지나치게 극성이 높은 물질이 다량 추출되어진다. 따라서, 이후의 정제과정에서 크로마토그래피의 사용을 용이하게 하기 위해서 에탄올 추출물을 수득한 다음 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 에틸아세테이트 분획과 물 분획을 수득하고 상기 물 분획에 부탄올을 첨가하여 물 분획과 부탄올 분획을 수득하는 단계를 추가로 수행한다. 이와 같이 추출용매로서 에탄올 또는 수용성 에탄올을 사용하여 추출한 추출물은 식품원료로 사용하기에 안전하다는 장점이 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 찔레나무 뿌리를 수용성 에탄올로 추출한 다음 상기 에탄올 추출물에 증류수와 에틸아세테이트를 첨가하여 물과 에틸아세테이트 층으로 2회 분획하고 물층에 부탄올을 첨가하여 물층과 부탄올 층으로 2회 분획함으로써 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획 및 물 분획을 각각 수득하였다. 수득된 각각의 분획에는 활성 성분이 모두 존재하나 에틸아세트 분획이 항산화 활성이 가장 높으면서 분리가 용이한 물질들이 분포하는 분획으로 확인되었다. 이는 TLC 플레이트상에 전개된 양상으로 확인할 수 있었다.The brier extract with antioxidant activity according to the present invention can be obtained by extracting the brier basement with an organic solvent. As the organic solvent, ethyl acetate, acetone, ethanol, methanol, water, and a mixed solvent thereof can be used. Preferably acetone is used. In the case of using acetone as an extraction solvent, there is an advantage that an extract containing a large amount of antioxidant active material can be obtained without further solvent fractionation as compared with the case of using water-soluble ethanol. On the other hand, in the case of using the water-soluble ethanol as the extraction solvent as a whole has the advantage of high extraction yield, a large amount of the material is too high polarity is extracted. Therefore, in order to facilitate the use of chromatography in the subsequent purification process, an ethanol extract was obtained, and then ethyl acetate and water were added to obtain an ethyl acetate fraction and a water fraction. Butanol was added to the water fraction to add water fraction and butanol. The step of obtaining fractions is further carried out. Thus, the extract extracted using ethanol or water-soluble ethanol as the extraction solvent has the advantage that it is safe to use as a food raw material. In one embodiment of the present invention, the extract of the brier root with water-soluble ethanol, and then distilled water and ethyl acetate added to the ethanol extract fractionated twice into water and ethyl acetate layer and added twice butanol to the water layer and butanol layer By fractionation, an ethyl acetate fraction, butanol fraction, and water fraction were obtained, respectively. In each of the obtained fractions, all of the active ingredients were present, but the ethyl acetate fraction was identified as the fraction having the highest antioxidant activity and easy separation of the substances. This was confirmed by the development on the TLC plate.
추출시의 찔레나무 지하부와 추출용매의 비율은 특별히 한정되지 않으나, 찔레나무 지하부의 생체중 1g에 대하여 추출용매를 1배 내지 20 배(중량기준)로 사용할 수 있다. 추출효율을 증가시키기 위해서는 바람직하게는, 찔레나무 지하부의 생체중 1g에 대하여 추출용매 3배 내지 10배(중량기준)를 사용하여 2회 반복할 수 있다.The ratio between the basement of the brier and the extraction solvent during extraction is not particularly limited, but the extraction solvent is applied to 1 g of the live weight of the basement of the brier. It can be used 1 to 20 times (by weight). In order to increase the extraction efficiency, it can be repeated twice using an extraction solvent 3 times to 10 times (by weight) with respect to 1 g of live weight of the brier underground.
추출온도는 상압하에서 실온에서 수행하는 것이 바람직하며, 추출시간은 추출온도에 따라 다르지만, 1시간 내지 48시간, 바람직하게는 12시간 내지 24시간 추출한다. 또한, 추출시 교반기(shaker)로 교반할 경우에 더욱 추출효율을 증대시킬 수 있다.The extraction temperature is preferably carried out at room temperature under atmospheric pressure, the extraction time depends on the extraction temperature, but 1 to 48 hours, preferably Extract from 12 hours to 24 hours. In addition, the extraction efficiency can be further increased when stirring with a shaker (shaker) during extraction.
추출에 사용되는 찔레나무 지하부는 찔레나무 뿌리 또는 그 건체를 사용할 수 있으며, 추출효율을 증대시키기 위해 찔레나무 뿌리 또는 그 건체를 분쇄기로 분쇄한 것을 사용할 수 있다.The brier base used for extraction may use brier roots or its dry matter, and to increase the extraction efficiency, a brittle root or its dry matter may be crushed by a grinder.
상기와 같은 방법으로 제조된 본 발명에 따른 찔레나무 추출물의 항산화 활성을 항산화활성측정법(한국식품영양학회, 식품영양실험핸드북, 651p, 2000; Blois, M. S., Nature, 4617:1198, 1958)으로 조사한 결과, 종래의 합성 항산화제인 BHA 또는 천연 항산화제인 토코페롤에 비해 비교적 높게 나타남을 확인하였다.The antioxidant activity of the brier extract according to the present invention prepared by the above method was investigated by antioxidant activity measurement method (Korean Society of Food and Nutrition , Food and Nutrition Experiment Handbook , 651p, 2000; Blois, MS, Nature , 4617: 1198, 1958). As a result, it was confirmed that the BHA, which is a conventional synthetic antioxidant, or tocopherol, which is a natural antioxidant, was relatively high.
나아가, 본 발명은 상기에서 수득한 찔레나무 추출물을 크로마토그래피에 의해 분리·정제함으로써 항산화 활성을 나타내는 활성분획을 수득할 수 있다. 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 1회 내지 2회 수행하는 것이 바람직하다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 수득한 활성분획을 추가로 ODS 컬럼 크로마토그래피를 실시함으로써 보다 순수하게 정제된 활성분획을 수득할 수 있다. 크로마토그래피를 수행할 때 전개용매로는 클로로포름과 메탄올 또는 메탄올과 증류수가 혼합된 혼합용매를 사용할 수 있다. 전개용매의 유속은 5㎖/시간 내지 1000㎖/시간이 되도록 하며, 바람직하게는 20㎖/시간 내지 500㎖/시간이 되도록 한다. 상기 크로마토그래피에서 용출된 분획은 시험관에 5㎖ 내지 100㎖씩 수집하고, 수집된 분획의 항산화 활성을 측정하여 항산화 활성을 나타내는 활성분획을 수득할 수 있다. 항산화 활성은 종래에 공지된 방법에 따라 측정할 수 있다(한국식품영양학회, 식품영양실험핸드북, 651p, 2000; Blois, M. S., Nature, 4617: 1198, 1958). 본 발명의 일 실시예에 따라, 수득된 활성분획의 항산화 활성을 측정한 결과, 합성 항산화제인 BHA 및 천연 항산화제인 α-토코페롤의 항산화 활성에 비해 각각 2.7배 및 3.8배 강하게 나타났다.Furthermore, according to the present invention, an active fraction showing antioxidant activity can be obtained by separating and purifying the brier extract obtained above by chromatography. Chromatography is preferably performed once or twice using silica gel column chromatography. The active fraction obtained by silica gel column chromatography can be further subjected to ODS column chromatography to obtain a more purely purified active fraction. When the chromatography is carried out as a developing solvent may be used a mixed solvent of chloroform and methanol or a mixture of methanol and distilled water. The flow rate of the developing solvent is 5 ml / hour to 1000 ml / hour, preferably 20 ml / hour to 500 ml / hour. The fraction eluted in the chromatography may be collected in a test tube of 5 ml to 100 ml, and the active fraction showing the antioxidant activity may be obtained by measuring the antioxidant activity of the collected fraction. Antioxidant activity can be measured according to a method known in the art (Korea Food and Nutrition Society, Food and Nutrition Experiment Handbook, 651p, 2000; Blois, M. S., Nature, 4617: 1198, 1958). According to one embodiment of the present invention, the antioxidant activity of the obtained active fraction was measured, and 2.7 times and 3.8 times stronger than the antioxidant activities of the synthetic antioxidant BHA and the natural antioxidant α-tocopherol, respectively.
본 발명자들은 상기 크로마토그래피에 의해 분리·정제된 활성분획의 이화학적 성질을 수소 및 탄소 핵자기 공명 스펙트럼으로 조사하였다. 그 결과, 하기 화학식으로 표시되는 카테킨-(4α→8)-카테킨 구조를 갖는 프로시아니딘 B3 (procyanidine B3) 화합물임을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 찔레나무 추출물은 그 활성성분으로 프로시아니딘 B3를 포함함을 특징으로 한다.The present inventors investigated the physicochemical properties of the active fraction separated and purified by chromatography using hydrogen and carbon nuclear magnetic resonance spectra. As a result, it was confirmed that it is a procyanidine B3 compound having a catechin- (4α → 8) -catechin structure represented by the following formula. Therefore, the brier extract according to the present invention is characterized in that it comprises procyanidin B3 as its active ingredient.
또한, 본 발명은 (a) 찔레나무의 지하부를 유기용매에 침지시켜 추출하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 추출물을 크로마토그래피로 분리·정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 활성을 가지는 찔레나무 추출물의 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention (a) extracting by immersing the basement of the brier in an organic solvent; And (b) separating and purifying the extract of step (a) by chromatography.
(a) 단계에서 유기용매는 상술한 바와 같이 아세톤 또는 에탄올을 사용할 수 있다. 에탄올을 사용하는 경우에는 에탄올 추출물을 수득한 다음 상기 에탄올 추출물에 에틸아세테이트와 물을 첨가하여 에틸아세테이트 분획과 물 분획을 수득하고 상기 물 분획에 부탄올을 첨가하여 물 분획과 부탄올 분획을 수득하는 단계를 추가로 수행한다. 이때, 추출조건은 상기에 기재한 바와 같다.In the step (a), the organic solvent may be acetone or ethanol as described above. When ethanol is used, obtaining an ethanol extract and then adding ethyl acetate and water to the ethanol extract to obtain an ethyl acetate fraction and a water fraction, and adding butanol to the water fraction to obtain a water fraction and a butanol fraction. Additionally. At this time, the extraction conditions are as described above.
(b) 단계에서는 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피와 ODS 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 시행할 수 있으며, 크로마토그래피 조건은 상기에 기재한 바와 같다.In step (b), the chromatography may be sequentially subjected to silica gel column chromatography and ODS column chromatography, and the chromatography conditions are as described above.
본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 찔레나무 추출물을 포함하며 항산화 활성을 가지는 조성물을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본 발명의 찔레나무 추출물은 유효성분으로 하며 항산화 활성을 가지는 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a composition comprising the brier extract and having an antioxidant activity. More specifically, the brier extract of the present invention as an active ingredient provides a pharmaceutical composition having an antioxidant activity.
본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함되는 찔레나무 추출물은 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제된 것이 바람직하나, 단순히 용매 추출법에 의해 수득된 추출물도 포함될 수 있다.The brier extract included in the pharmaceutical composition according to the present invention is preferably purified through column chromatography, but may also include an extract obtained by a simple solvent extraction method.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여가 가능하다. 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 예를 들면, 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 설하 또는 국소 투여가 가능하다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally. Routes of administration of the pharmaceutical compositions according to the invention are not limited to these, for example, oral, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, Intestinal, sublingual or topical administration is possible.
이와 같은 임상 투여를 위해 본 발명의 약학적 조성물은 공지의 기술을 이용하여 적합한 제형으로 제제화 할 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 불활성 희석제 또는 식용 담체와 혼합하거나, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐에 밀봉되거나 또는 정제로 압형하여 투여 할 수 있다. 경구 투여용의 경우, 활성 화합물은 부형제와 혼합되어 섭취형 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 주사용, 비경구 투여용 등의 각종 제형은 당해 기술 분야의 공지된 기법 또는 통용되는 기법에 따라 제조할 수 있다. For such clinical administration, the pharmaceutical compositions of the present invention can be formulated into suitable formulations using known techniques. For example, in oral administration, it may be mixed with an inert diluent or an edible carrier, sealed in hard or soft gelatin capsules, or pressed into tablets. For oral administration, the active compounds can be mixed with excipients and used in the form of intake tablets, buccal tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers and the like. In addition, various formulations, such as for injection and parenteral administration, can be prepared according to techniques known in the art or commonly used techniques.
본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 찔레나무 추출물의 유효량은 0.1 mg/kg 내지 500mg/kg 이다. 바람직하게는 1mg/kg 내지 100mg/kg이며, 하루 1회 내지 5회 투여될 수 있다. 그러나, 최종 투여량 및 투여 횟수는 환자의 상태, 연령 등을 고려하여 임상의 판단에 따라 필요한 범위로 조정될 수 있다.The effective amount of the brier extract contained in the pharmaceutical composition of the present invention is 0.1 mg / kg to 500 mg / kg. Preferably it is 1mg / kg to 100mg / kg, it may be administered once to 5 times a day. However, the final dose and frequency of administration may be adjusted to the required range according to the clinical judgment in consideration of the condition, age, etc. of the patient.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 활성산소에 의한 세포구성 성분의 산화에 의해 유발되는 질병의 치료 또는 예방에 유용하게 사용될 수 있다. 이러한 질병으로는 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 노화(aging), 암(cancer), 복합성 동맥경화(multiple atherosclerosis), 관절염 및 파킨슨병(Parkinson's disease)이 포함된다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be usefully used for the treatment or prevention of diseases caused by oxidation of cellular components by free radicals. Such diseases include, but are not limited to, aging, cancer, multiple atherosclerosis, arthritis, and Parkinson's disease, for example.
또한, 본 발명은 본 발명의 찔레나무 추출물을 포함하며 항산화 활성을 가지는 식품 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 찔레나무 추출물은 항산화 활성이 우수하며 산화에 의해서 일어나는 식품의 냄새나 풍미의 변화, 유지의 산패, 그리고 식품의 변색을 효과적으로 방지 할 수 있다. 따라서, 상기 찔레나무 추출물을 종래의 각종 식품류에 배합함으로써 이들 식품류를 보존하거나 식품의 신선도 및 품질을 장기간에 걸쳐 유지하기 위해 사용할 수 있다. The present invention also provides a food composition comprising the brier extract of the present invention and having an antioxidant activity. Brier extract according to the present invention is excellent in antioxidant activity and can effectively prevent the smell or flavor of food caused by oxidation, rancidity of oil and fat, and discoloration of food. Accordingly, the brier extract can be used to preserve these foods or to maintain the freshness and quality of foods for a long time by blending them with various conventional foods.
용어 식품류는 전형적인 식품뿐만 아니라, 음료(알콜성 음료도 포함함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품 및 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소오스 등)가 포함된다.The term foodstuffs includes not only typical foods, but also beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. hams). , Sausage cornbeans, etc., breads and noodles (e.g. udon, soba, ramen, spagate, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, candy, dairy products (e.g. butter, cheese), edible vegetable oils , Margarine, vegetable protein, retort foods, frozen foods and various seasonings (eg, miso, soy sauce, sources, etc.).
또한, 본 발명은 본 발명의 찔레나무 추출물을 포함하는 항산화 활성을 가지는 화장품 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장품 조성물은 본 발명의 찔레나무 추출물을 그대로 사용하거나 또는 필요에 따라 희석하여 사용할 수 있다. 상기 찔레나무 추출물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로숀제 및 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition having an antioxidant activity comprising the brier extract of the present invention. The cosmetic composition of the present invention may be used as it is, or diluted as needed. The brier extract may be prepared in liquid or solid form using bases, adjuvants and additives commonly used in the cosmetic field. Cosmetics in liquid or solid form may include, but are not limited to, for example, cosmetics, creams, lotions, baths and the like.
화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 물, 알콜, 프로필렌 글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸 알콜 및 유동 파라핀 등을 포함 할 수 있다.Bases, adjuvants and additives conventionally used in the cosmetic field are not particularly limited and may include, for example, water, alcohols, propylene glycol, stearic acid, glycerol, cetyl alcohol and liquid paraffin.
본 발명에 따른 화장품 조성물은 피부의 산화에 의한 손상, 예를 들면, 반점(갈색반), 주근깨, 피부균열, 자외선 손상(햇볕에 탐) 등을 예방하는데 매우 유용하며, 화장품 자체의 산화를 방지함으로써 화장품의 품질을 유지하는데도 매우 유용하게 사용될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention is very useful for preventing damage caused by oxidation of the skin, for example, spots (brown spots), freckles, skin cracks, ultraviolet damage (sunburn), etc., and prevents oxidation of the cosmetics themselves. This can be very useful for maintaining the quality of cosmetics.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<실시예 1><Example 1>
찔레나무 뿌리의 아세톤 추출물 제조Preparation of Acetone Extract from Brier Root
찔레나무 뿌리는 서울 경동시장 한약상에서 구입하였다. 상기 찔레나무 뿌리 3000g(생체중)에 아세톤 15L를 첨가하여 상온에서 24시간 동안 추출하였다. 이를 2회 반복한 후 농축 건조시켜 아세톤 추출물 92g을 수득하였다.Brier roots were purchased at the Kyungdong Market Herbal Medicine in Seoul. Add 3000L of acetone to 3000g of brier root (live weight) at room temperature Extraction for 24 hours. This was repeated twice and concentrated to dryness to give 92 g of acetone extract.
<실시예 2><Example 2>
찔레나무 뿌리의 에탄올 추출물 제조Ethanol Extract of Brier Root
찔레나무 뿌리 3000g(생체중)에 70% 에탄올 15L를 첨가하고 상온에서 24시간 동안 추출하였다. 이를 2회 반복한 다음 농축 건조시켜 수용성 에탄올 추출물 146.4g을 수득하였다. 15 g of 70% ethanol was added to 3000 g of brier roots (live weight) and extracted at room temperature for 24 hours. This was repeated twice and concentrated to dryness to obtain 146.4 g of an aqueous ethanol extract.
<실시예 3><Example 3>
찔레나무 뿌리의 에틸아세테이트 분획, 부탄올 분획 및 물 분획 제조Preparation of Ethyl Acetate, Butanol and Water Fractions from Brier Roots
상기 실시예 2에서 수득한 수용성 에탄올 추출물에 증류수 1000㎖를 첨가하고 에틸아세테이트 1000㎖를 첨가하여 물과 에틸아세테이트 층으로 2회 분획하였다. 상기에서 수득한 물층에 다시 부탄올 600㎖를 첨가하고 물층과 부탄올 층으로 2회 분획하였다. 각각의 분획을 감압농축하여 에틸아세테이트 분획 76.9g, 부탄올 분획 12.5g 및 물 분획 53.2g을 수득하였다.1000 ml of distilled water was added to the aqueous ethanol extract obtained in Example 2, and 1000 ml of ethyl acetate was added, and the mixture was partitioned twice into water and ethyl acetate layers. 600 mL of butanol was added to the water layer obtained above, and the resultant was partitioned twice into a water layer and a butanol layer. Each fraction was concentrated under reduced pressure to give 76.9 g of ethyl acetate fraction, 12.5 g of butanol fraction and 53.2 g of water fraction.
<실시예 4><Example 4>
찔레나무 뿌리의 아세톤 추출물의 크로마토그래피Chromatography of Acetone Extract of Brier Root
상기 실시예 1에서 수득한 찔레나무 뿌리 아세톤 추출물을 실리카겔 크로마토그래피 및 ODS 크로마토그래피를 순차적으로 시행함으로써 항산화 활성을 나타내는 물질을 분리·정제하였다. 실리카겔(70-230mesh, Merck사)을 클로로포름과 메탄올 용매에 현탁시켜 유리 컬럼(10×15cm)에 충진한 다음 상기 실시예 1에서 수득한 찔레나무 뿌리 아세톤 추출물을 로딩하여 용출하였다. 이때, 전개 용매로는 클로로포름: 메탄올 용매계를 메탄올 비율을 단계적으로 높여가면서 사용하였다. 클로로포름 : 메탄올의 비율을 3:1로 용매량을 6000㎖로 한 다음 메탄올의 비율을 높여서 클로로포름 : 메탄올의 비율을 2:1로, 용매량을 2100㎖로 조절한 후 메탄올만을 2000㎖ 사용하였다. 용출 용매의 유속은 200㎖/시간으로 하였으며, 분획 싸이즈는 50㎖/플라스크의 조건으로 분획하였다. 크로마토그래피 결과, 용출된 분획 170개를 수득하여 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography; 이하 TLC라 함)를 실시하여 10% 황산으로 분무 후 가열하여 물질의 분포를 확인한 다음 유사한 물질이 포함된 분획을 모아 12개의 큰 분획으로 나누웠다. TLC는 고정상으로 TLC 플레이트(silica gel F245, MERCK사)를 사용하고 이동상으로는 클로로포름과 물(2:1)의 혼합용매를 사용하였다. 이들 12개 분획의 항산화 활성을 자유 라디칼을 이용한 항산화활성 측정법(한국식품영양학회, 식품영양실험핸드북, 651, 2000)에 의해 측정하였다. 그 결과, 항산화 활성을 가장 크게 나타내는 분획이 6번째 분획임을 알 수 있었고 수득된 양은 6.16g 이였다. 상기 활성 분획을 다시 한번 상기와 동일한 방법으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 항산화 활성을 나타내는 활성분획 3.11g을 수득하였다. 이를 다시 ODS 겔(40-63㎛, Merck사)이 충진된 유리 컬럼(4.5×12cm)을 이용하여 메탄올 : 증류수의 혼합용매(메탄올 : 증류수 = 1 : 2, 1800㎖)로 용출시킴으로써 최종 활성물질 217mg을 분리 정제하였다.The brier root acetone extract obtained in Example 1 was subjected to silica gel chromatography and ODS chromatography in order to isolate and purify the substance showing antioxidant activity. Silica gel (70-230mesh, Merck) was suspended in a chloroform and methanol solvent, filled in a glass column (10 × 15 cm), and then eluted by loading the Brier root acetone extract obtained in Example 1 above. At this time, as the developing solvent, a chloroform: methanol solvent system was used while increasing the methanol ratio step by step. The ratio of chloroform: methanol was 3: 1 and the solvent amount was 6000ml. Then, the ratio of methanol was increased to adjust the ratio of chloroform: methanol to 2: 1 and the amount of solvent to 2100ml. Only 2000ml of methanol was used. The flow rate of the elution solvent was 200 ml / hour, and the fractionation size was Fractionation was carried out at 50 ml / flask. As a result of chromatography, 170 eluted fractions were obtained, and thin layer chromatography (hereinafter referred to as TLC) was performed. After spraying with 10% sulfuric acid to confirm the distribution of the material, the fractions containing similar substances were collected and divided into 12 large fractions. TLC used a TLC plate (silica gel F 245 , MERCK Co., Ltd.) as a stationary phase and a mixed solvent of chloroform and water (2: 1) as a mobile phase. The antioxidant activity of these 12 fractions was measured by the antioxidant activity measurement method using the free radicals (Korea Food and Nutrition Society, Food and Nutrition Experiment Handbook, 651, 2000). As a result, it was found that the fraction which exhibited the largest antioxidant activity was the sixth fraction and the amount obtained was 6.16 g. The active fraction was once again subjected to silica gel column chromatography in the same manner as above to obtain 3.11 g of an active fraction showing antioxidant activity. This was again eluted with a mixed solvent of methanol: distilled water (methanol: distilled water = 1: 2, 1800 ml) using a glass column (4.5 × 12 cm) filled with an ODS gel (40-63 μm, Merck). 217 mg was isolated and purified.
<실시예 5>Example 5
찔레나무 뿌리 추출물 중의 활성성분의 화학적 구조 결정Determination of Chemical Structure of Active Ingredients in the Extracts of Brier Root
찔레나무 뿌리 추출물 중에서 항산화 활성을 나타내는 활성 성분의 화학적 구조를 수소 및 탄소 핵자기 공명 스펙트럼으로 조사하였으며, 이의 이화학적 성질을 조사하였다.The chemical structure of the active ingredient exhibiting antioxidant activity in the extract of Brier root was investigated by hydrogen and carbon nuclear magnetic resonance spectra, and its physicochemical properties were investigated.
그 결과, 항산화 활성을 나타내는 활성 성분은 하기 화학식으로 표시되는 카테킨-(4α→8)-카테킨의 구조를 가지는 프로시아니딘 B3임을 알 수 있었다. 이의 이화학적 성질은 다음과 같으며, 수소 및 탄소 핵자기 공명스펙트럼은 도 1a 및 도 1b에 나타낸 바와 같다.As a result, it was found that the active ingredient exhibiting antioxidant activity was procyanidin B3 having a structure of catechin- (4α → 8) -catechin represented by the following formula. Its physicochemical properties are as follows, hydrogen and carbon nuclear magnetic resonance spectra are as shown in Figures 1a and 1b.
1) 화합물의 명칭 : 카테킨-(4α→8)-카테킨(catechin-(4α→8)-catechin)1) Name of the compound: catechin- (4α → 8) -catechin (catechin- (4α → 8) -catechin)
2) 물질의 성상 : 엷은 노란색 분말2) Appearance of substance: Pale yellow powder
3) 분자량 : 5783) Molecular Weight: 578
4) 화학구조식 4) Chemical structure
<실시예 6><Example 6>
유기용매로 추출한 찔레나무 뿌리 추출물 및 크로마토그래피 분획의 박층크로마토그래피 Thin layer chromatography of brier root extract and chromatographic fraction extracted with organic solvent
상기 실시예 1, 2, 3 내지 실시예 4에서 수득한 각각의 찔레나무 추출물, 용매 분획물 및 크로마토그래피 분획을 박층크로마토그래피(Thin layer chromatography; 이하 TLC라 함)를 실시하여 프로시아니딘 B3가 가장 많이 추출되는 분획을 조사하였다. 고정상으로는 TLC 플래이트(silica gel F245, MERCK사)를 사용하고 이동상으로는 클로로포름과 물 (2:1)의 혼합용매를 사용하여 각각의 추출물 및 분획을 전개시키고 발색시약으로 10% 황산 용액으로 분무하고 가열하여 발색시키는 방법을 사용하거나 또는 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)용액을 분무시켜 보라색이 탈색되는 부분을 항산화 활성 물질이 존재하는 부위로 확인하는 방법을 사용하였다.Each of the brier extracts, solvent fractions and chromatography fractions obtained in Examples 1, 2, 3 to 4 were subjected to thin layer chromatography (hereinafter referred to as TLC) to extract the most procyanidin B3. Fractions were investigated. In stationary phase Using TLC plate (silica gel F 245 , MERCK Co., Ltd.) and using mobile solvent as a mixed solvent of chloroform and water (2: 1), each extract and fraction were developed, sprayed with a 10% sulfuric acid solution with a coloring reagent, and heated. Areas where antioxidants are present using purple coloration or sprayed with 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) Confirmation method was used.
실험 결과, 10% 황산으로 발색시킨 경우 아세톤 추출물, 에탄올 추출물 및 이의 에틸아세테이트 분획에서 프로시아니딘 B3를 확인하였다. 또한, 전개된 밴드에서 발색의 진하기 정도로부터 프로시아니딘 B3의 존재량을 추정하였다. 그 결과, 아세톤 추출물과 에틸아세테이트 분획에 프로시아니딘 B3가 비교적 많이 존재하고 있음을 확인하였다(도 2a). DPPH 용액을 분무시켜 보라색으로 탈색된 부분을 확인한 경우에도 황산으로 발색시킨 결과와 동일하게 아세톤 추출물, 에탄올 추출물 및 이의 에틸아세테이트 분획에서 프로시아니딘 B3를 확인 할 수 있었다(도 2b). As a result, when procured with 10% sulfuric acid, procyanidin B3 was identified in the acetone extract, the ethanol extract, and the ethyl acetate fraction thereof. In addition, the abundance of procyanidin B3 was estimated from the intensity of color development in the developed band. As a result, it was confirmed that procyanidin B3 is relatively present in the acetone extract and the ethyl acetate fraction (FIG. 2A). When the DPPH solution was sprayed to confirm purple discoloration, proceanidine B3 was identified in the acetone extract, the ethanol extract, and the ethyl acetate fraction thereof in the same manner as the color development with sulfuric acid (FIG. 2B).
또한, 실시예 4에서 크로마토그래피로 분리한 12개 분획을 TLC한 결과, 6번째 분획에 프로시아니딘 B3가 많이 존재하고 있음을 확인 할 수 있었다(도 2c). 이는 실시예 4에서 자유 라디칼을 이용한 황산화 활성 측정법에 의해 상기 12개 분획의 항산화 활성을 측정한 결과와 동일하게 나타난 것이다.In addition, as a result of TLC of the 12 fractions separated by chromatography in Example 4, it was confirmed that a lot of procyanidin B3 was present in the 6th fraction (FIG. 2C). This is the same as the result of measuring the antioxidant activity of the 12 fractions by the sulfated activity measurement method using free radicals in Example 4.
<실시예 7><Example 7>
찔레나무 뿌리 추출물의 항산화 활성 측정Antioxidant Activity of Black Root Extract
상기 실시예 1에서 수득한 찔레나무 뿌리 추출물과 실시예 4에서 수득한 최종 활성물질인 프로시아니딘 B3의 항산화 활성을 합성 항산화제인 BHA와 천연 항산화제인 α-토코페롤의 항산화 활성과 비교하여 측정하였다.The antioxidant activity of the brier root extract obtained in Example 1 and the final active material obtained in Example 4, procyanidin B3, was measured by comparing the antioxidant activities of BHA, a synthetic antioxidant, and α-tocopherol, a natural antioxidant.
항산화 활성은 자유 라디칼인 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl, DPPH)을 사용한 항산화활성측정법(한국식품영양과학회, 식품영양실험핸드북, 651p, 2000; Blois, M. S., Nature, 4617: 1198, 1958)으로 조사하였다. 실시예 1에서 수득한 찔레나무 뿌리 추출물, 실시예 4에서 수득한 최종 활성물질, BHA 및 토코페롤을 각각 2.0, 1.0, 0.5, 0.25, 0.125, 0.063mg/㎖ 함유한 에탄올 용액 0.2㎖를 시험관에 넣고 DPPH(0.4mM) 용액 0.8㎖와 에탄올 3㎖를 첨가하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 활성은 RC50값으로 나타냈다. RC50은 각각의 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도 값을 50% 감소시키는데 필요한 농도(μg/㎖)를 나타낸다.Antioxidant activity was measured using the free radical 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) (Korea Food and Nutrition Science, Food and Nutrition Experiment Handbook , 651p, 2000; Blois, MS, Nature , 4617: 1198, 1958). 0.2 ml of an ethanol solution containing 2.0, 1.0, 0.5, 0.25, 0.125, 0.063 mg / ml of brier root extract obtained in Example 1, the final active material obtained in Example 4, BHA and tocopherol, respectively, was placed in a test tube. 0.8 ml of DPPH (0.4 mM) solution and 3 ml of ethanol were added thereto to react at room temperature for 30 minutes, and then the absorbance was measured at 517 nm. Antioxidant activity is represented by RC 50 value. RC 50 represents the concentration (μg / mL) required to reduce the absorbance value of 50% of the control without adding each sample.
실험 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 찔레나무 뿌리 추출물의 항산화 활성은 BHA와 α-토코페롤에 비해 비교적 높게 나타났다. 또한, 찔레나무 뿌리 추출물로부터 분리된 프로시아니딘 B3의 항산화 활성은 BHA와 α-토코페롤에 비해 각각 2.7배, 3.8배 강하게 나타났다.As a result, as shown in Table 1, the antioxidant activity of the brier root extract was relatively higher than that of BHA and α-tocopherol. In addition, the antioxidative activity of procyanidin B3 isolated from the root extract of the larvae was 2.7 times and 3.8 times stronger than that of BHA and α-tocopherol, respectively.
본 발명에 따른 찔레나무 추출물 및 이를 포함하는 조성물은 활성산소에 의해 유발되는 질병의 치료 또는 예방, 식품의 품질 유지 및 피부의 산화에 의한 손상을 방지하는데 매우 유용하게 사용될 수 있다.Brier extract according to the present invention and a composition comprising the same can be very useful for the treatment or prevention of diseases caused by free radicals, maintaining the quality of food and preventing damage due to oxidation of the skin.
도 1a는 찔레나무 뿌리 추출물 중에서 항산화 활성을 나타내는 활성 성분의 수소 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸 것이다.Figure 1a shows a hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum of the active ingredient showing antioxidant activity in the extract of the root of the brier.
도 1b는 찔레나무 뿌리 추출물 중에서 항산화 활성을 나타내는 활성 성분의 탄소 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸 것이다.Figure 1b shows the carbon nuclear magnetic resonance spectrum of the active ingredient showing antioxidant activity in the extract of the Brier root.
도 2a는 본 발명에 따른 찔레나무 추출물을 박막 크로마토그래피한 후 10% 황산으로 발색시킨 결과를 나타낸 것이다(1: 아세톤 추출물, 2: 수용성 에탄올 추출물, 3: 에틸아세테이트 분획, 4: 부탄올 분획, 5: 물 분획, 6: 프로시아니딘 B3, 화살표는 프로시아니딘 B3가 확인된 부분이다).Figure 2a shows the result of the thin film chromatography of the brier extract according to the present invention and color development with 10% sulfuric acid (1: acetone extract, 2: water-soluble ethanol extract, 3: ethyl acetate fraction, 4: butanol fraction, 5 : Water fraction, 6: procyanidin B3, arrow indicates where procyanidin B3 is identified).
도 2b는 본 발명에 따른 찔레나무 추출물을 박막 크로마토그래피한 후 1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) 용액을 분무시킨 결과를 나타낸 것이다(1: 아세톤 추출물, 2: 수용성 에탄올 추출물, 3: 에틸아세테이트 분획, 4: 부탄올 분획, 5: 물 분획, 6: 프로시아니딘 B3, 화살표는 프로시아니딘 B3가 확인된 부분이다).Figure 2b shows the result of spraying the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) solution after thin film chromatography of the brier extract according to the present invention (1: acetone extract, 2: water soluble ethanol extract, 3: ethyl acetate fraction, 4: butanol fraction, 5: water fraction, 6: procyanidin B3, arrow is the part where procyanidin B3 is identified).
도 2c는 본 발명에 따른 찔레나무 뿌리 아세톤 추출물을 크로마토그래피하여 수득한 분획에 대한 박막크로마토그래피 결과를 나타낸 것이다(화살표는 프로시아니딘 B3가 확인된 부분이다).Figure 2c shows the thin layer chromatography results for the fraction obtained by chromatography of the brier root acetone extract according to the present invention (arrow is the part where procyanidin B3 is confirmed).
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