KR20050024348A - 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드 - Google Patents

저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드 Download PDF

Info

Publication number
KR20050024348A
KR20050024348A KR10-2004-7020636A KR20047020636A KR20050024348A KR 20050024348 A KR20050024348 A KR 20050024348A KR 20047020636 A KR20047020636 A KR 20047020636A KR 20050024348 A KR20050024348 A KR 20050024348A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lmw
sulfate
excess
mixture
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
KR10-2004-7020636A
Other languages
English (en)
Inventor
파수쿠아 안나 오레스테
지오르지오 조페티
Original Assignee
글리코레스 2000 에세.에레.엘레
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 글리코레스 2000 에세.에레.엘레 filed Critical 글리코레스 2000 에세.에레.엘레
Priority to KR10-2004-7020636A priority Critical patent/KR20050024348A/ko
Publication of KR20050024348A publication Critical patent/KR20050024348A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

황산화도가 3.2~4이고 평균분자량이 약 3,000~ 약 6.000이고, 대응하는 K5-N,O-과잉황산염의 해중합반응 또는 LMW-K5-N-황산염으로부터 출발하여 그것의 3차 아민 또는 4차 암모늄 염의 O-과잉황산화 및 이와 같이 얻어진 K5-아민-O-과잉황산염의 연이은 N-재황산화에 의해 얻을 수 있는 LMW-K5-N,O-과잉황산염이 기재되어 있다. 더우기, 항혈관형성 및 항바이러스성, 특히 항-HIV-1 활성을 갖는 LMW-K5-N,O-과항산염을 함유하는 약제학적 조성물이 기재된다. 중간체 LMW-K5-N-황산염 역시 기재된다.

Description

저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드{LOW MOLECULAR WEIGHT OVERSULFATED POLYSACCHARIDE}
본 발명은 K5 폴리사카라이드로부터 유도된 신규한 N,O-과잉황산화 저분자량 폴리사카라이드, 그것의 제조방법, 상기 방법에서 신규의 중요한 중간체 및 상기 과잉황산화 저분자량 폴리사카라이드를 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 더욱 특별하기는, 본 발명은 황산화도가 3.2~4이고 평균 분자량이 약 3,000~ 약 6,000인 N-탈아세틸화 및 N-황산화된 K2에 관한 것이다.
헤파린, 헤파란 술페이트, 데르마탄 술페이트, 콘드로이틴 술페이트 및 히알루론산과 같은 글리코사미노글리칸은 다양한 동물 기관으로부터 산업적으로 추출된 바이오폴리머이다.
특히, 돼지의 내장 점막으로부터 또는 소과 동물의 허파로부터의 추출에 의해 주로 얻어지는 헤파린은 기본적으로 우론산(글루쿠론산 또는 이두론산) 및 α-1→4 또는 β-1→4 결합에 의해 연결된 아미노 당(글루코사민)으로 구성되는 사슬 혼합물을 구성하는 대략 3,000 내지 대략 30,000 D의 분자량 분포를 가진 다중분산(polydispersed)된다. 헤파린에서, 유론 유니트는 2 위치에서 O-술페이트화될 수 있고, 글루코사민 유니트는 존재하는 글루코사민 유니트의 대략 0.5%에서 N-아세틸레이트화되거나 또는 N-술페이트화되거나, 6-O-술페이트화되고 3-O-술페이트화된다.
포유동물에서 헤파린의 특성 및 천연의 생합성은 Lindahl et al., 1986 in Lane, D. and Lindahl, U.(Editor) "Heparin. Chemical and Biological Properties; Clinical Applications", Edward Arnold, London, Pages 159-190, Lindahl, U. Feingold D.S. and Roden L, 1986 TIBS, 11, 221-225 및 Conrad H.E. "Heparin Binding Proteins", Chapter 2: Structure of Heparinoids. Academic Press, 1998에서 개시되어 있다.
주요 항응고성 및 항혈전성 활성 이외에, 헤파린은 또한 항지방혈증, 항증식성, 항바이러스성, 항종양성 및 항전이 활성을 나타내지만, 이와 같은 징후에 대한 약제로서 그의 사용은 출혈을 야기할 수 있는 항응고성 활성으로 인한 부작용에 의해 방해된다.
W.F.Vann et al(1981)에 의해 Eur.J. Biochem 116, 359-364에 기재된 Escherichia Coli 군주로부터 단리된 캡슐화 폴리사카라이드(이하 "K5"로 간단히 언급함)는, 디사카라이드 유니트 D-글루쿠로닐-N-아세틸클루코사민은 α1→4 결합에 의해 연결되는 반면, D-글루크론산과 β1→4 결합에 의해 연결된 아세틸글루코사민에 의해 형성된 반복성 디사카라이드 단위에 의해 형성된 사슬의 혼합물로 이루어져 있고, 그러므로 헤파린과 헤파란 황산염의 N-아세틸헤파로산 생합성 전구체와 동일한 반복 서열(A)를 나타낸다:
헤파린 전구체 N-아세틸헤파론산과 K5 폴리사카라이드와의 유일한 차이는, 즉, K5와 그것의 유도체의 생리적 활성에 대한 비가역성은, 예를 들면 하기의 EP 4898647 및 EP 544592에 설명된 바와 같이, 폴리머의 몇몇 사슬의 비 환원 말단에 서 위치(45)에 준재하는 이중 결합이다.
이들 최초의 출판 후, 다른 논문 및 특허 출원서는 분자량 범위가 몇천에서 수천 달톤인 E.coli K5 폴리사카라이드의 제조를 기재한다. 예를 들면, EP 333243, IT 1230785, EP 489647, EP 544592, WO 92/17507, WO 01/02597 및 M.Manzoni et al(1996), Biotechnology Letters, 18(4) 383-386이 인용되었다.
문헌 EP 489647 및 EP 544592는 항응집성 및 항혈전성 활성을 갖는 저분자량 및 고분자량 N,O 황산염 헤파로산을 기재하고, IT 1230785, WO 92/17507, WO 96/14425, WO 97/43317, WO 98/42754, WO 01/72848 및 US 2002/0062019는 항혈전성 활성을 갖는 C5 위치에 이두론성 유니트에 에피머화된 글루쿠론 유니트의 특정 수를 갖는 N-디아세틸화-K5-N-황산염을 기재하고 있으며, WO 98/09636은 항전이 활성을 갖는 N-디아세틸화-K5-N-황산염을 기재한다.
문헌 US 2000/0062019는 황산화도가 2.3~ 2.9이고 분자량이 2,000~30,000이거나 또는 4,000~8,000 또는 18,000~30,000이며, 응고성 조절에 대해 활성인 에피N,O-황산화-K5 유도체의 제조방법을 기재한다. 상기 방법은 (s-a)K5 폴리사카라이드의 N-탈아세틸화 및 생성된 K5-아민의 N-황산화, (s-b)N-황산염-K5의 에피머화, (s-c)에피K5-N-황산염의 O-황산화, (s-d)부분적 O-탈황산화, (s-e) 선택적인 6-O-황산화, (s-f) 이와같이 얻어진 생성물의 N-황산화를 포함하고, (s-b)~(s-f) 단계의 끝에서 얻어진 화합물이 무엇이든 간에 임의로 해중합반응을 겪는다. 상기 문헌은 상기 (s-a)~(s-f) 단계 후에 (s-f) 단계의 마지막에 아질산 해중합반응에 의해 얻어진, 분자량이 7,400 이고 황산화도가 2.3~2.9인 N-황산화-에피K5를 기재한다.
동일한 문헌은 분자량이 약 5,000인 K5 분획을 기재하며, 이것은 또한 (s-a)~(s-f)단계를 겪는다.
IT 특허출원 제 MI2001A/00397(WO 02/068477)은 본 발명에서 참조로서 병합되며, 친유성 물질이 없는 K5로부터, 또는 (a) N-탈아세틸화/N-황산화, (b)O-과잉황산화, 및 (c)N-재황산화에 의한, 분자량이 약 5,000인 그의 분획 중 하나로부터 출발하여 얻어진, 황산화도가 3.2 보다 큰 K5-N,O-과잉황산화-유도체를 기재한다. 이 문헌은 K5-N,O-과항산화염에 의해 얻어진 평균 분자량 2,000~5,000인 LMW-K5-N,O-과잉황산염 또는 (a)~(c)단계에 의해 상기 K5의 분획으로부터 얻어진, 평균 분자량이 약 6,500인 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 기재한다.
상기 문헌 중 어느 것도 임의로 40%~60% 에피머화된 LMW-K5-N-황산염을 기재하지 않으며, 여기서 NH2 또는 N-아세틸기는 부분적으로 결여되어 있다.
더우기, D.Leali et al.은 J.Biol.Chem 2001(October 12), 276(41), 37900~37908 (Leali 2001)로 출판된, 논문 "Fibroblast Growth Factor 2 Antagonist activity and Angiostatic Capacity of Sulfated Ecsherichia coli K5 Polysaccharide Derivatives"은 평균 분자량이 15,000이고 황산화도가 3.84인 K5-N,O-과잉황산염을 기재하며, 이것은 배양 12일 내에 새로운 혈관의 형성을 70% 억제하는 것으로 표현되는 양호한 항혈관형성을 나타낸다.
용어의 통일성 및 내용을 더욱 이해할 수 있도록, 본 설명서에서 의미 및 통상의 표현은 단수 또는 복수형으로 사용될 것이다. 특히,
-"K5" 또는 "폴리사카라이드 K5"는 발효에 의해 얻어진 Escherichia coli로부터 캡슐화된 폴리사카라이드를 의미하며, 다시말하면, 문헌에 기재된 방법에 따라 제조되거나 또는 정제되는, 특히 Vann 1981, Manzoni M et al., Journal of Bioactivite and Compatible Polymers, 1996, 11, 301-311("Manzoni 1996"), WO 01/72848 또는 예를 들면 US 2002/0062019 A1의 실시예 12에 기재된 방법에 따라 제조되는 임의로 상기와 같이 비-환원 말단에 이중결합을 함유하는, 반복적인 디사카라이드 유니트A로 이루어진 사슬의 혼합물이다: 여기에 설명된 방법이 어느 N-아세틸헤파로산에 적용될 수 있다는 것은 당업자에게는 명백하다;
-"K5 아민"은 적어도 95% N-탈아세틸화된 K5를 의미하지만, 그러나 일반적으로 아세틸기는 현 NMR 장치에 의해 검출되지 않는다;
-"K5-N-황산염"은 하기와 같이 적어도 95% N-탈아세틸화 및 N-황산화된 K5를 의미하지만, 일반적으로 아세틸기는 현 NMR 장치로 검출되지 않는다;
-"K5-아민-O-과잉황산염"은 황산화도가 적어도 2.2인 O-황산화-K5-아민을 의미한다;
-"K5-N,O-과잉황산염"은 황산화도가 적어도 3.2인 N,O-황산화-K5-아민을 의미한다.
또한, 상기 정의된 용어 및 통상의 표현은 발효 후 단리된 K5 폴리사카라이드를 언급하며, 일반적으로 분자량은 약 1,500 ~ 약 50,000이고 평균 분자량은 12,000~25,000, 유리하기는 15,000~25,000이다;
-분자량의 특정한 분포와 달리, 상기 정의된 용어 및 통상의 표현은 머리글자 "LMW"(저분자량)으로 표시될 때, 평균 분자량이 최대 12,000인 저분자량 생성물을 의미한다;
-분자량에 언급되는 "약"은 나트륨의 중량을 포함하여, 점도계로 측정된 분자량 ±디사카라이드 유니트의 이론 중량을 의미하고, K5-N-황산염의 경우는 461이고, 황산화도가 3.87인 K5-N,O-과잉황산염의 경우는 765이다;
-상기 정의된 용어 및 통상의 표현은, "-유도체'라고 표현될 때, 천연 K5 및 저분자량의 K2로부터 유도된 유도체를 의미하고, 이들이 K5 또는 그것의 유도체의 분획화 또는 해중합에 의해 얻어지는 것과는 관련이 없다;
- 특별히 언급되지 않는 한, "황산화도"는 SO3 -/COO- 비를 의미하며, 이것은 디사카라이드 유니트 당 황산염기의 수로서 나타낼 수 있고, Casu B. et al in Carbohydrate Research, 1975, 39, 168-176(Casu 1975)에 기재된 방법에 따라 측정된다;
- 특별한 다른 언급이 없는 한, 분자량은 Johnson et al. Carb. Res. n.51(1976) p.119-127에 따라 점도계로 측정되며, 샘플의 분자량은 표준으로 HPLC로 측정하였다.
-"우세한 종"은 LMW-K5-N-황산염, K5-아민-O-과잉황산염 또는 LMW-K5-N,O-과잉황산염으로 이루어진 혼합물에서, 가장 대표적인 종을 의미하며, HPLC에 의해 측정되는 분자량 곡선의 피크에 의해 측정된다;
-"O-과잉황산화 조건"은 예를 들면, B. Casu et al in Carbohydrate Rearch, 1994, 263, 271-284(Casu 1994)에 기재된 방법 C에 따라 실시된 O-황산화를 의미한다;
-용어 "알킬"은 선형 또는 분지된 알킬을 의미하고, "테트라부틸암모늄"은 테트라(n-부틸)암모늄기를 의미한다.
신규한 LMW-K5-N,P-과잉황산염의 제조를 위한 유용한 출발물질을 이루는 신규한 LMW-K5-N-황산염 유도체를 얻기 위해 K5-N-황산염을 해중합하는 것이 가능하다는 것이 발견되었다. 유리하기는, 매우 분자량이 작은, 특히 약 2,000~ 약 4,000인 신규한 LMW-K5-N-황산염, 더욱 바람직하기는 우세한 종이 데카사카라이드 또는 도데카사카라이드 또는 테트라데카사카라이드인 혼합물에 의해 형성된 LMW-K5-N-황산염을 얻는 것이 가능하다. 이들 신규의 LMW-N-황산염은 항바이러스성 및/또는 항 혈관형성 활성을 갖는 LMW-K5-N,O-과잉황산염의 제조 및 항응고 활성을 피하기 위한 유용한 중간체이다.
더욱 특별히는, 평균 분자량이 약 3,000~ 약 6,000인 LMW-K5-N,O-과잉황산염, 특히 우세한 종이 데카-, 도데카- 또는 테트라테카사카라이드이고, 황산화도가 3.2~4인 혼합물을 이루는 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 Leali 2001에 의해 기재된 K5-N,O-과잉황산염보다 더 높은 항혈관형성 활성을 갖는다는 것이 발견되었다.
더욱, 상기 LMW-K5-N-황산염으로부터 출발하여, 30~60분 동안 pH를 약 7로 유지함에 의해 반응 혼합물을 유지시키고, 그리고 나서 생성된 염을 O-과잉황산화 조건에서 O-황산화제로 처리함에 의해, 상기 LMW-K5-N-황산염의 3차 아민 또는 4차 암모늄염을 제조함에 의해 높은 황산화도를 갖는 신규한 LMW-O-황산화-K5-아민을 얻는 것이 가능하다는 것이 발견되었다. 상기 LMW-K5-아민-O-과잉황산염의 N-황산화에 의해, 신규의 LMW-K5-N,O-과잉황산염이 생성된다.
그러므로, 본 발명의 목적은 평균 분자량이 약 3,000 ~ 약 6,000이고 황산화도가 3.2~4, 바람직하기는 3.5~4, 더욱 바람직하기는 3.7~3.9인 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 제공하는 것이다.
본 발명의 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염들 중에서, 특히 관심있는 것은 평균분자량이 3,750~4,250, 4,750~5,250 또는 5,750~6,250인 것이다.
바람직한 화합물은 사슬의 혼합물에 의해 형성되고, 여기서 우세한 종은 하기식Ⅰ인 LMW-K5-N,O-과잉황산염으로 ,
여기서, q는 4,5,6,7 또는 8이고, R, R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -기를 나타내며, 황산화도는 3.2~4, 유리하기는 3.5~4, 바람직하기는 3.5~3.9이며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다.
본 명세서에서, 용어 "화학적으로 허용가능한"은 나트륨, 암모늄, 테트라(C1-C4)알킬암모늄과 같은 화학 합성 또는 생성물의 정화에 유용한 양이온을 말하며, 반면 "약제학적으로 허용가능한"은 설명이 필요없다.
유리한 양이온은 알칼리금속, 알칼리토금속, 암모늄, 테트라(C1-C4) 알킬암모늄, 알루미늄 및 아연으로부터 유도된 것이다.
본 발명의 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 Leali 2001에 기재된 타입의 K5-N,O-과잉황산염의 해중합반응에 의해 제조되고 그리고 그곳에 기재된 방법으로 제조될 수 있다.
상기 해중합반응은 헤파린의 해중합을 위한 공지의 반응에 따라, 예를 들면, EP 37319, WO 82/03627에 기재된 방법, 또는 EP 544592에 기재된 N,O-황산화-K5의 해중합을 위한 방법에 따라 실시된다.
해중합반응을 적당히 조절함에 의해, 특히 다른 양의 아질산나트륨을 사용함에 의해, 원하는 분자량을 갖는 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 얻을 수 있다.
바람직한 구현예에 따르면, 예를 들면, 이하의 제조예 Ⅳ에 기재된 바와 같이 얻어진 K5-N,O-과잉황산염 1g으로부터 출발하여, 출발물질을 탈이온수 100~200㎖에 용해시키고 4℃로 자동온도조절을 한다. 그리고 나서 약 3,000~ 약 6,000의 원하는 평균 분자량을 얻기 위한 양의 아질산나트륨을 첨가한다. 따라서, BioSil 250 칼럼이 장착된 HPLC로 측정된 평균 분자량이 20,000인 K5-N,O-과잉황산염으로 출발하여 그리고 공지의 분자량을 갖는 헤파린 표준물을 사용하여, 0.2%로 수용액 중에 용해된 아질산나트륨 160~230mg이 첨가되어야 한다.
K5-N,O-과잉황산염 및 아질산나트륨을 함유하는, 4℃로 유지된 용액에 4℃로 냉각시킨 0.1N HCl을 첨가하여 pH를 2로 한다. 반응물을 20~40분 동안 반응을 위해 남겨두고, 그리고 나서 0.1N NaOH로 중화시킨다. 생성물을 실온이 되도록 하고 브롬화수소나트륨(물 50~100㎖에 250~500mg을 용해)과 같은 환원제로 처리하고 4~8 시간동안 반응되도록 남겨둔다. 과량의 브롬화수소 나트륨은 0.1N HCl을 사용하여 pH를 5~5.5로 하여 측정하고 추가 2~4 시간동안 반응을 위해 남겨둔다. 마지막에, 용액을 0.1N NaOH로 중화시키고 생성물을 감압하에서 증발시켜 생성물을 농축시킨 후 아세톤 또는 에탄올로 침전시켜 회수한다.
K5-N,O-과잉황산염의 아질산 해중합반응으로부터 LMW-K5-N,O-과잉황산염의 기원 및 이후 예를 들면 브롬화수소 나트륨의 가능한 반응은, 상기 사슬의 혼합물에서 대부분의 사슬의 환원 발단에서, 구조식(a°)를 갖는 황산화 2,5-무수만니톨 유니트의 존재를 의미하며
여기서 X'는 포밀 또는 히드록시메틸을 나타내고 R"는 수소 또는 SO3 -를 나타내다.
특히, 바람직한 생성물은 K5-N,O-과잉황산염의 아질산 해중합화반응 및 예를 들면 우세한 종이 하기식Ⅰ°의 화합물인 사슬의 혼합물로 이루어진 브롬화수소 나트륨에 의한 임의의 연이은 환원에 의해 얻을 수 있는 LMW-K5-N,O-과잉황산염으로,
여기서 m은 4, 5 또는 6이고, 황산화도가 3.2~4, 유리하기는 3.5~4, 바람직하기는 3.5~3.9를 위해, R, R' 또는 R"는 수소 또는 SO3 -이고, X는 포밀 또는 히드록시메틸이며 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다. 각 혼합물의 평균 분자량은 3,750~4,250, 4,750~5,250, 5,750~6,250인 것이 바람직하다.
이들 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 포괄적인 항응고 활성에 대한 호의적인 비율을 갖는 높은 항혈관형성 활성을 가지며 해모머릭(hamorragic) 부작용의 위험이 극히 감소된 투여량에서 혈관형성-의존 병리학의 처리를 위한 약제학적 조성물의 제조에 사용될 수 있다.
LMW-K5-N,O-과잉황산염으로 처리될 수 있는 혈관형성 의존 병리학은 예를 들면, 인간에서 발견될 수 있는 것들 중에서, 당뇨성 망막증, 이식된 각막의 네오혈관신생, 네오맥관 녹내장, 트라코마, 수정체 뒤 섬유 디스플라시아(displasia), 건선, 화농성 녹내장, 동맥경화성 플라그의 진행, 혈관종 및 안지피브로마(angifibroma), 동맥-정맥 기형, 관절염, 및 고형 종양의 조합성 치료법에서 사용될 수 있다.
더욱 특별히는, 본 발명의 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 Ribatti D. et al., J. Vasc.Res. 1997, 34, 455-463(Ribatti 1997)에 따른 치킨 배아 chroallantioic 막(CAM) 상의 혈관형성 억제 인 비보 시험에서 활성이었다. 이 시험에 따르면, 겔 형태의 해면 조직(Upjohn)이 전개 8일에 치킨 배아의 CAM에 적용디었고, 적용 후 즉시 LMW-K5-N,O-과잉황산염 50㎍을 함유하는, 또는 참조 화합물로서, Leali 2001에 기재된, 분자량이 15,000이고 황산화도가 3.84인 K5-N,O-과잉황산염을 함유하는 생리적 살린용액 3 ㎕를 적용하였다. 혈관형성 점수는 다른 전개일 및 화합물이 활성인 배아(에그)의 수에서 해면 주변의 관찰가능한 거시적인 혈관의 수를 세어 얻었다.
LMW-K5-N,O-과잉황산염의 둘러싸인 해면 주변에서 성장하는 혈관의 수는 K5-N,O-과잉황산염의 둘러싸인 해면 주변에서 형성되는 혈관의 수와 동일하지만, LMW-K5-N,O-과항산염이 활성인 배아의 수가 더 많다는 것이 관찰되었다.
평균 분자량이 약 3,000~약 6,000인 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 문헌에 기재되지 않은 방법에 의해서 제조될 수도 있고, 그것은 일반적으로 평균 분자량이 약 3,000~ 약12,000인 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염의 제조에도 적용될 수 있다. 상기 신규한 방법 및 상기 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 본 발명의 추가의 면을 나타낸다.
그러므로, 본 발명은 또한, 황산화도가 3.2~4, 바람직하기는 3.5~3.9인 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산화염의 제조방법을 제공하며, 상기 방법은
(a)LMW-K5-N-황산염을, 산성 형태로, 3차 아민 또는 4차 수산화암모늄으로 처리하고, 반응 혼합물을 30 ~ 60분동안 유지시키고, 그것에 의해 용액의 pH를 7로 유지하고, 그리고 상기 염을 상기 유기 염기로 단리시키고;
(b)이와 같이 얻어진 상기 LMW-K5-N-황산염의 3차 아민 또는 4차 암모늄염을 O-과잉황산화 조건하에서 O-황산화반응물로 처리하고;
(c)이와 같이 얻어진 생성물을 N-황산화제로 처리하고 얻어진 LMW-K5-N,O-황산화물을 단리시키는 것을 포함한다. 보통, 최종 생성물은 나트륨염으로 단리되고, 이것은 임의로 다른 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 변환된다.
부분적으로 완전한 N-탈아세틸화, 이후의 N-황산화 및 최종의 아질산 해중합화 및 LMW-K5-N,O- 황산화의 환원에 의해 K5로부터 얻어진 LMW-K5-N-황산염은, 상기와 같이, 본 발명의 방법에서 출발물질로 사용된다. 상기 환원은, LMW-K5-N-황산염이 이후에 반응되고, 이때 2,5-무수만노스 라디칼의 포밀기에 대한 효과가 알려져 있지 않기 때문에 필수적이다. 또한, 이 경우에, 상기 설명과 같이 해중합반응을 조절함으로써, 폴리사카라이드 사슬 내부의 글루코사민의 음이온성 탄소의 시그널과 2,5-무수만니톨의 C-2에 기여할 수 있는 시그널을 적분하여 13C-NMR 스펙트럼으로부터 산출하여, 평균 분자량 범위가 약 1,500 ~ 약 10,000, 바람직하기는 1,500 ~ 7,500인 LMW-K5-N-황산염을 얻을 수 있다.
평균 분자량이 약 1,500~ 약 7,500인 LMW-K5-N-황산염 및 그들의 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 중간체로서 유용한 신규의 생산물이며 약제학적으로도 활성이다. 상기 LMW-K5-N-황산염의 분자량 분포는 약 1,000~ 약 10,000일 수 있다. 예를 들면, K5-N-황산염 1g으로 출발하여 진행하는 일반적인 방법에 따르면, 출발 생성물을 탈이온수 100~200㎖에 용해시키고 4℃로 온도를 조절한다. 그리고 나서, 원하는 평균 분자량 약 2,000 ~ 4,000을 얻기 위한 양의 아질산나트륨을 첨가한다. 따라서, BioSil 250 Biorad 칼럼이 장착된 HPLC로 측정하고 분자량을 아는 헤파린을 표준으로 하여 측정한 분자량 20,000의 K5-N-황산염으로부터 출발하여, 0.1% 수용액에 용해된 아질산나트륨은 330~480mg이 첨가될 것이다. 4℃에서 유지된 K5-N-황산염과 아질산나트륨을 함유하는 용액에 4℃로 냉각된 0.1N HCl을 첨가하여 pH를 2로 하였다. 반응물을 20~40분동안 반응하도록 놔두고, 그리고 나서0.1N NaOH로 중화시켰다. 생성물을 실온으로 가온시키고 브롬화수소나트륨(물 50~100㎖에 250~500mg 용해)과 같은 환원제로 처리하고 4~8 시간동안 반응하도록 놔두었다. 과량의 브롬화수소나트륨을 0.1N HCl로 pH 5~5.5로 하여 측정하고 추가로 2~4시간 반응하도록 놔두었다. 마지막에 용액을 0.1N NaOH로 중화시키고 생성물을 감압 증발에 의해 생성물을 농축시킨 후 아세톤 또는 에탄올로 침전시켜 회수하였다.
유사하기는, K5-N-황산염 1g으로부터 출발하여, 약 4,000~ 약 7,000, 특별히는 적어도 6,000(6,000~7,000)의 분자량을 갖는 LMW-K5-N-황산염을 얻기 위한 아질산나트륨의 양을 측정할 수 있다.
K5-N-황산염은 문헌에 잘 나와 있으며, 상기 인용된 문헌에서 당 분야의 상태에 대해 기재되어 있다. 상기 인용된 출발물질은 N-탈아세틸화반응 및 이후의 이와 같이 얻어진 K5-아민의 N-황산화에 의해 일정하게 얻어진다. 그러나, 실질적으로 아세틸기 또는 NH2가 없는 K2-N-황산염의 제조는, 제조된 K5가 순수한 경우, 특히 친유성 물질을 함유하지 않는 경우에 용이하다는 것이 알려져 있다. 더우기 친유성 물질이 없는 K5로부터 제조된 K5-N-황산염은, 특허출원 IT MI2001A00397 (WO 02/068477)에 기재된 바와 같이, 과항산화되기 쉽다는 것이 발견되었다. 그리고 나서, 해중합반응이 이하의 제조예Ⅰ에 기재된 바와 같이, 순수한 K5로부터 제조된 K5-N-황산염으로부터 출발하여 실시되는 것이 바람직하다. 13C-NMR 스펙트럼에서 아세틸기 또는 NH2의 흔적을 나타내지 않는 상기 K5-N-황산염이 이하의 제조예 Ⅱ에 기재되어 있다.
본 발명의 방법의 유리한 출발물질은 K5의 아질산 해중합반응 및 연이은 브롬화수소 나트륨에 의한 환원반응에 의해 얻어진, 예를 들면 사슬의 적어도 90%가 하기식 Ⅱ을 갖는 사슬 혼합물로 이루어진 신규한 LMW-K5-N-황산염으로
여기서, n은 2~20의 정수이고 대응하는 양이온은 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다.
더욱 유리하기는, 출발물질은 우세한 종이 하기식 Ⅱ'인 사슬의 혼합물로 이루어진 신규한 LMW-K5-N-황산염으로
여기서 q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다. 본 발명을 유리하게 하는, 이들 LMW-K5-N-황산염은 상기와 같이, 아질산 해중합반응 및 예를 들면 브롬화수소나트륨에 의한 환원에 의해 K5-N-황산염으로부터 얻는다. 이들의 평균 분자량은 약 2,000~ 약 4,000이다.
아질산 해중합반응 단계 및 예를 들면 브롬화수소나트륨에 의한 환원에 의한 LMW-K5-N-황산염의 기원은 상기 사슬 혼합물에서 사슬 대부분의 환원 말단에 하기 구조식(a')의 2,5-무수만니톨 유니트의 존재를 의미한다:
따라서, 사슬 대부분의 환원 말단은 실제적으로 하기 구조식(b)로 나타난다:
구조식(a')의 존재는 LMW-K5-N-황산염 및 그들의 유도체의 특성에 영향을 미치지 않는다. 왜냐하면, 가능한 황산화에는 오직 O-황산화 유도체의 황산화도에 상당한 영향을 미치지 않는 하나 이상의 황산염기의 가능한 도입이 포함되기 때문이다. 바람직한 LMW-K5-N-황산염은 실질적으로 아세틸기가 없다.
특히 유리한 본 발명에 따른 LMW-K5-N-황산염은, 우세한 종이 하기식 Ⅱ'인 사슬 혼합물에 의해 형성되고;
여기서, m은 4, 5 또는 6을 나타내며 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다.
본 발명의 다른 관점에 따르면, 본 발명은 신규한 LMW-K5-N-황산염 및 그들의 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 제조방법에 관한 것으로, 상기 방법은 K5-N-황산염을 조절된 아질산 해중합반응 및 임의로 환원시키고 이와 같이 생성된 생성물을 단리하는 것을 포함한다. 상기 생성물은 대부분 그들의 나트륨 염의 형태이고, 이것은 다른 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다.
이들을 이루는 사슬 대부분의 환원 발단에서, 상기 LMW-K5-N-황산염은 하기 구조식(a)를 갖는 2,5-무수만노 유니트를 갖고
여기서, X는 포밀 또는 히드록시메틸기를 나타내고, 바람직하기는 이들은 사슬의 적어도 90%가 식 Ⅱ인 사슬의 혼합물 또는 우세한 종이 식 Ⅱ' 또는 Ⅱ"인 사슬의 혼합물에 의해 형성된다. 이들 신규한 LMW-K5-N-황산염은 약제학적 조성물의 활성 성분으로서 사용될 수 있다.
상기 구조식 (a)에서, X가 히드록시메틸기를 나타낸다면, 신규한 LMW-K5-N-황산염은 본 발명의 LMW-K5-N,O-과잉황산염의 제조방법의 출발물질이다.
유리하기는 LMW-K5-N-황산염은 약 1,000~ 약 10,000의 분자량 분포를 갖는다.
본 발명의 방법의 LMW-K5-N-황산염 출발물질은, 상기와 같이 단계(a)에 따라 제조된 3차 아민 또는 4차 암모늄염, 바람직하기는 테트라부틸암모늄 염이 이미 이용가능하지 않은 한, 나트륨염의 형태로 존재한다.
본 발명의 방법의 또 다른 유리한 구현예에 따르면, 단계(a)는 출발물질 LMW-K5-N-황산염의 나트륨염 용액을 산성 이온교환수지, 예를 들면 IR-120 H+를 통해 통과시키고, 수지의 폐기물을 또한 포함하는 용출물을 수집하고, 3차 아민 또는 4차 수산화암모늄, 바람직하기는 테트라부틸암모늄 히드록사이드로 용출물을 중화기켜 형성된다. 용액을 1시간 동안 방치하고 동일한 염기를 첨가하여 pH를 7로 유지시키고 이와같이 얻어진 염을 냉동건조에 의해 단리한다.
단계 (b)에서, O-과잉황산화는 극성 어프로틱(aprotic) 용매중에 최대 24시간동안 20~70℃에서 과량의 O-황산화제를 사용하여 실시된다. 유리하기는, 단계 (a)에서 얻어진 LMW-K5-N-황산염의 3차 아민 또는 4차 암모늄염은 디메틸포름아미드에 용해되고 40~60℃의 온도에서 10~20 시간동안 각각의 유리 히드록시기에 대해 O-황산화제 2~10몰로 처리된다. O-황산화제로서, 부가 피리딘 SO3가 유리 히드록시기 당 2.5~5몰, 바람직하기는 2.5~4 몰의 양으로 사용되는 것이 바람직하고 반응은 50~60℃, 바람직하기는 55℃에서 밤새도록 실시된다. 반응의 마지막에 얻어진 생성물은 물 0.1~1 부피의 첨가 및 바람직하기는 수산화나트륨으로 중화에 의해 단리되고, 아세톤 중의 염화나트륨의 포화용액으로 침전되고 한외여과에 의해 임의로 여과된다.
이와 같이 얻어진 생성물은 바람직하기는 황산화도가 2.3~3인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염의 나트륨염이다. 이와 같이 얻어진 나트륨염은 다른 염으로 전환될 수 있다. 이와 같은 생산물의 평균 분자량은 약 3,500~ 약 11,000일 수 있다.
단계(c)에서, LMW-K5-아민-O-과잉황산염은 N-황산화하고, 그것의 수용액을 탄산나트륨과 예를 들면, (C1-C4)트리알킬아민SO3 또는 피리딘SO3 와 같은 N-황산화제로 처리하고, 혼합물을 30~50℃에서 8~24시간동안 유지하고 그리고 예를 들면 투석여과(diafiltration)로 단리시키는 것으로 실시된다.
단계 (a)와 (b)로 제한된, 본 발명의 방법에 따라 얻을 수 있는 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 및 그들의 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 본 발명의 추가의 면에 기여하는 새로운 생성물이다. 놀랍게도, LMW-K5-아민-O-과잉황산염은 유용한 중간체일 뿐만 아니라 약리생물학적 활성을 갖는다.
그러므로, 본 발명은 또한 황산화도가 2.3~3인 신규한 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 및 그들의 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 유리하기는, 그들의 평균 분자량은 약 3,500~ 약 10,000이고, 더욱 바람직하기는 약 3,500 ~ 약 5,200이다.
바람직하기는 이들은 실질적으로 N-아세틸기가 없다.
사슬의 적어도 90%가 상기 식Ⅱ의 사슬 혼합물로 이루어진 LMW-K5-N-황산염이 출발물질로 사용된다면, 단계 (b)의 마지막에서, 사슬의 적어도 90%가 하기식 Ⅲ인 사슬의 혼합물로 이루어지고, 황산화도가 2.2~3이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인, 신규한 LMW-K5-아민-O-과잉황산염이 얻어지고:
여기서, n은 2~20의 정수이고, R,R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -기를 나타낸다.
우세한 종이 하기식 Ⅱ'인 사슬의 혼합물로 이루어진 유리한 LMW-K5-N-황산염이 출발물질로 사용된다면, 단계(b)의 마지막에서, 우세한 종이 하기식 Ⅲ'인 사슬의 혼합물로 이루어지고, 황산화도가 2.3~3이고, 대응하는 양이온이 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염이 얻어지고,
여기서, q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, R, R' 및 R"는 상기 정의와 같다.
이들 LMW-K5-아민-O-과잉황산염은 그들의 N-황산화 유도체의 제조시 중간체로서 유용한 신규한 생성물이지만, 이들은 그 자체로 자유 라디칼에 대하여 흥미있는 약물학적 특성을 갖는다.
LMW-K5-N-황산염으로부터 아질산 해중합반응 및 이후의 예를들면 브롬화수소나트륨으로의 환원에 의해 얻어지는 신규한 LMW-K5-아민-O-과잉황산염의 기원은 구조식 (a")의 2,5-무수만니톨 황산화 유니트의 존재를 포함하고
여기서 R"는 상기 사슬 혼합물중의 사슬 말단 대부분의 환원 말단에서, 수소 또는 SO3 -를 나타낸다.
그러므로, 상기 사슬 혼합물에서 사슬 대부분의 환원 말단은 구조식(b')로 나타낸다:
신규한 상기 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 중에서, 우세한 종이 하기식(Ⅲ")인 혼합물로 이루어진 것으로, 황산화도가 2.2~3이고, m은 4,5 또는 6이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이 바람직하다:
여기서 R,R' R"는 수소 또는 SO3 -이고, X"는 OH 또는 OSO3 -이다.
본 발명에 따르면, K5-N-황산염을 출발물질로 하여 LMW-K5-N,O-황산염 및 그들의 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 다음의 방법으로 제조하는 것이 가능하며, 상기 방법은
(ⅰ)K5-N-황산염을 아질산 해중합반응 시키고, 예를들면 브롬화수소나트륨으로 환원하고;
(ⅱ)LMW-K5-N-황산염을, 산성 형태에서, 3차 아민 또는 4차 수산화암모늄으로 처리하고, 반응 혼합물을 30~60분 동안 유지시키고, 그것에 의해 용액의 pH가 7을 유지하도록 하고, 대응하는 3차 아민 또는 4차 암모늄 염을 단리하고;
(ⅲ)상기 LMW-K5-N-황산염의 상기 3차 아민 또는 4차 암모늄염을 O-과잉황산 조건하에서 O-황산화제로 처리하고;
(ⅳ)이와같이 얻어진 생성물을 N-황산화제로 처리하고 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 단리하는 것을 포함한다.
본 발명의 방법의 마지막에 얻어진 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 일반적으로 나트륨염으로 존재한다. 상기 나트륨염은 다른 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다. 예를 들면, 칼슘이온에 의한 전환은 한외여과막을 사용하여 실시될 수 있다. 특히 유리한 염은 알칼리금속, 알칼리 토금속, 암모늄, 테트라(C1-C4)알킬암모늄, 알루미늄, 및 아연의 염이다. 나트륨, 칼슘 및 테트라부틸암모늄이 바람직한 염이다.
본 발명의 방법에 따라 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 사슬의 적어도 90%가 구조식(Ⅰ')인 사슬 혼합물로 이루어지고
여기서 n은 2~20의 정수이고, 황산화도 3.2~4, 바람직하기는 3.5~4, 더욱 바람직하기는 3.5~3.9를 위해, R,R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -기를 나타내고, 상기 사슬 대부분의 환원 말단은 구조식(a")를 가지며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다.
본 발명의 방법에 따라 얻어진 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염 중에서, 우세한 종이 식Ⅰ인 사슬들의 혼합물로 이루어지고 상기 사슬의 대부분의 환원말단은 구조식(a")인 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 방법에 따라 얻어진 것들 중에서 바람직한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 우세한 종이 식 Ⅰ"의 화합물인 사슬 혼합물로 이루어지고,
여기서, R, R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -를 나타내고, X"는 OH 또는 OSO3 -이고,황산화도 3.2~4, 바람직하기는 3.5~4, 더욱 바람직하기는 3.5~3.9를 위해, m은 4, 5 또는 6이고 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것이다.
본 발명의 신규한 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 이들이 항바이러스성, 특히 항 HIV-1 활성 및 뛰어난 항혈관형성 활성을 갖기 때문에 치료법에서 유용한 활성 성분으로서 중요하다. 특히, 흥미로운 것은 분자량이 3,750~4,250(m=4), 4,750~5,250 (m=5) 또는 5,750~6.250(m=6)이고 황산화도 3.5~3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염이다.
상기의 모든 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 그들의 항바이러스 및 항혈관형성 활성으로 인해 상기 병리학의 치료를 위한 중요한 약제를 구성한다. 치료적 용도를 위해, 본 발명의 활성 성분 및 그들의 염은 통상의 방법에 따라 투여에 알맞는 형태, 예를 들면, 살균용액, 국소 투여형 및 일반적으로, 오늘날까지 글루코사민글리칸-형 유도체에 대해 제안되었던 모든 형태로 제제화될 수 있다. 또한, 치료적 투여량은 공지의 천연 화합물에 대해 이미 연구된 것과 유사하게 선택될 수 있다.
활성 성분의 투여는 경구적으로, 피부에 바르거나 또는 비경구적으로, 특히 피하, 근육내 또는 정맥, 또는 국소적 경로를 통해 실시될 수 있다.
인간에게, 비경구적 투여의 경우, 매일의 투여량은 0.5~500mg/Kg/die, 유리하기는 5~250 mg/kg/die, 바람직하기는 10~150 mg/kg/die인 반면, 국소적 경로의 경우의 투여량은 1~1,000 mg/kg/die, 유리하기는 10~500 mg/kg/die, 바람직하기는 20~100 mg/kg/die이다.
그러므로, 본 발명의 또 다른 면에 따르면, 본 발명은 활성성분으로서 우세한 종이 식Ⅰ, Ⅰ°, Ⅰ"의 화합물인 사슬의 혼합물 또는 상기 사슬의 적어도 90%가 식Ⅰ'인 사슬의 혼합물로 이루어지고, 황산화도 3.2~4, 유리하기는 3.5~4, 바람직하기는 3.5~3.9인 경우 약물학적으로 효과적인 양의 LMW-K5-N,O-과잉황산염 또는 약제학적으로 허용가능한 염을, 약제학적 담체와 혼합하여 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 LMW-K5-N,O-과잉황산염 및 그들의 염은 위에서 대부분 설명되었다. 유리하기는 약제학적으로 허용가능한 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 및 아연 염이다.
경구, 피하, 근육내 또는 정맥, 또는 국소적 투여를 위한 본 발명의 약제학적 조성물에서, 활성 성분은 통상의 부형제 또는 약제학적 담체와의 혼합물로서, 바람직하기는 투여량 단위로 투여된다. 투여량은 환자의 연령, 체중 및 건강 상태와 감염의 심각성 및 투여 경로에 따라 변화될 수 있다. 이 투여량은 1~1,000mg, 바람직하기는 10~750mg, 더욱 바람직하기는 250~500mg의 투여량 단위의 1일 1~3회, 근육내, 피하, 경구, 경피, 트란스점막 또는 국소적 경로에 의한 투여를 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 여러가지 투여 경로에 알맞는 약제학적 담체와 제제화된다. 제제는 크림, 포마드, 연고, 겔, 질내 배지, 좌약, 국소적 투여를 위한 용액 또는 현탁액의 형태이다.
특히 본 발명은 활성성분으로서, 우세한 종이 식Ⅰ, Ⅰ°, Ⅰ"의 화합물인 사슬의 혼합물 또는 상기 사슬의 적어도 90%가 식Ⅰ'인 사슬의 혼합물로 이루어지고, 황산화도가 3.2~4, 유리하기는 3.5~4, 바람직하기는 3.5~3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염 중 하나의 약제학적으로 효과적인 양을 약제학적 매질 또는 담체와 혼합된 형태로 포함하는, 혈관형성 의존 병리의 치료 및 HIV 감염의 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
마지막으로, 본 발명은 그의 활성성분들 중 하나로서, 상기 방법의 단계 (a) 및 (b)에 따라 얻을 수 있는 신규한 LMW-K5-아민-O-과잉황산염, 특히 황산화도가 2.2~3이고, 바람직하기는 평균 분자량이 약 3,400~ 약 11,000, 더욱 바람직하기는 약 3,500~ 약 5,200이고, 사슬의 적어도 90%가 식 Ⅲ이거나, 또는 우세한 종이 화합물 Ⅲ' 또는 Ⅲ"인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염 중 하나를 약제학적 담체와 혼합된 생태로 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 바람직하기는 상기 황산화도가 2.2~3인 LMW-O-과잉황산화-K5-아민은 실질적으로 N-아실기가 없다.
다음의 실시예는 본 발명의 설명하기 위한 것으로 본 발명이 이것으로 제한되는 것은 아니다.
제조예 Ⅰ
US 2002/0067019의 실시예 12의 문단 [0251] 및 [0252]에 기재된 바에 따라 얻어진, 친유성 물질에 의한 시그널이 1.5ppm 이하의 영역에 존재하는 1H-NMR 스펙트럼(도 3)을 제공하는 K5 1g을 염화나트륨 포화수용액 100㎖에 용해시키고, 4℃로 온도를 맞추었다. 얻어진 용액에, 냉각된 이소프로판올 3 부피를 첨가하였다. 상기 용액의 염 농도를 포화 염화나트륨의 산출된 양을 첨가하여 3M로 만들고, 냉각된 용액을 냉각된 온도(약 4℃)로 밤새도록 유지하였다. 형성된 침전물을 10,000rpm에서 20분동안 원심단리하여 단리시키고 생성물의 순도를 밤새도록 투여하고 1.5ppm 이하 영역의 시그널이 없는 것을 확실히 하기 위해 1H-NMR 분석에 의해 조절하였다. 필요에 따라, 4M NaCl을 함유하는 물에 용해시키고 이소프로판올로 침전하는 과정을 반복하였다. 침전물을 물에 용해시키고 염이 사라질 때까지 10,000D 컷오프로 Miniplate membrane Milipore 상에서 한외여과시켰다. 순도가 적어도 99%이고 1.5ppm 이하의 영역에서 친유성 불순물의 흔적이 검출되지 않는 1H-NMR 스펙트럼을 제공하는 K5를 얻었다.
제조예 Ⅱ
K5-N-황산염의 제조
(ⅰ) N-탈아세틸화
제조예 1의 기재에 따라 제조된 순수한 K5 폴리사카라이드 1g을 2N 수산화나트륨 100㎖에 용해시키고 이와 같이 제조된 용액을 24 시간동안 60℃에서 유지시켰다. 용액을 실온이 되도록 하고 그리고 나서 6N 염산으로 pH를 중성으로 하였다.
(ⅱ) N-황산화
탈아세틸화되고, 4℃로 유지된 K5를 함유하는 용액에 탄산나트륨 1.6g, 그리고 순차적으로 피리딘.설퍼 트리옥사이드 1.6g을 4시간 동안 첨가하였다. 반응 마지막에, 24시간 후, 용액이 실온이 되도록 하고 염산 5% 용액으로 pH를 6.5~7로 조절하였다. 이와같이 얻어진 K5-N-황산염을 1,000D의 나선형막을 사용하여 투석여과에 의해 염으로부터 정화시켰다. 과정은 투과의 전도도가 1,000 μS 이하, 바람직하기는 100 μS 이하일 때 끝난다. 내부투석은 동일한 농도 투석 시스템을 사용하여 폴리사카라이드 농도가 10%일 때까지 감소시켰다. 농축된 용액을 냉동건조시켰다. K5-N-황산염의 13C-NMR 스펙트럼은 N-아세틸 또는 NH2-기의 어떠한 잔류물도 나타내지 않았다.
제조예 Ⅲ
LMW-K5-N-황산염
제조예 Ⅱ에서 얻어진 생성물을 질산에 의한 열화법 및 형성된 알데히드의 환원으로 해중합시켰다. K5-N-황산염 1g을 증류수 200㎖에 용해시키고, 여기에 증류수 240㎖에 용해된 아질산나트륨 480mg을 첨가하였다. 그리고나서 용액을 4℃로 냉각시키고 0.1N HCl을 사용하여 pH를 2로 맞추고 30분 동안 유지시켰다. 반응 마지막에 0.1N NaOH를 사용하여 pH를 7로 맞추고 실온으로 하였다. 그리고 나서 용액에 NaBH4 450mg을 첨가하고 4 시간동안 반응하도록 놔두었다. 과량의 NaBH4를 HCl을 사용하여 pH를 5~6으로 하여 제거하였다. 0.1M NaOH로 중화된 생성물을 4℃에서 아세톤 3부피로 침전시키고, 유리 깔대기로 여과하고 진공 오븐에서 40℃에서 건조시켜 회수하였다. 이와같이 하여 평균 분자량이 약 2,000인 LMW-K5-N-황산염 900mg을 얻었다.
제조예 Ⅳ
K5-N,O-과잉황산염
제조예 Ⅱ의 기재에 따라 얻어진 K5-N-황산염 1g을 탈이온수 100㎖에 용해시키고 이 용액을 냉각조에서 10℃로 냉각시키고 나서 양이온 교환수지 IR 120 H+ 또는 등가물(50~200㎖)을 통해 통과시켰다. 칼럼과 용출물 저장소 모두를 10℃로 유지시켰다. 샘플을 함유하는 용액의 계대 후, 수지를 투과물의 pH가 6 이상일 때까지 탈이온수로 세척하였다(탈이온수 약 3 부피). 산성용액을 테트라부틸암모늄 히드록사이드(15% 수용액)로 중화시키고, 그리고 나서 최소 부피로 줄이고 건조시켰다. 테트라부틸암모늄염을 DMF 40 ㎖에 용해시키고 고체 형태로 부가물 피리딘.SO3 3.5g을 첨가하였다. 용액을 50 ℃에서 24시간 유지하였다. 반응 마지막에, 용액을 실온으로 냉각시키고 침전이 완료될 때까지 아세톤 중의 염화나트륨 포화용액 3부피를 첨가하였다. 침전물을 여과하여 용매로부터 단리시키고 최소량의 탈이온수(예를 들면 100㎖)로 용매화시키고 염화나트륨을 첨가하여 0.2M 용액을 얻었다. 용액의 pH를 2N 수산화나트륨으로 pH 7.5~8로 하고 침전이 완전해질 때까지 아세톤 2 부피를 첨가하였다. 침전물을 여과하여 용매로부터 단리하였다. 얻어진 고형물을 탈이온수 100㎖로 용매화하고 1,000D 컷 오프의 나선형 막을 사용하여 상기 잔류염으로부터 정제하였다.
O-황산화 생성물을 함유하는 용액을 제조예 Ⅱ의 단계(ⅱ)에 이미 기재된 바와 같이 N-황산화를 위해 처리하였다. 생성물은 Casu et al. 에 따른 전도계로 측정하여, 황산염 대 카르복시의 비가 3.87였고, 평균 분자량은 분자 배제 HPLC로 측정하여 20,000 이었다.
실시예 1
제조예 Ⅳ에서 얻어진 K5-N,O-과잉황산염 1g을 탈이온수 200 ㎖에 용해 시키고, 4℃로 온도를 조절하였다. 그리고 나서, 0.2% 농도에서 용액중에 용해된 아질산나트륨 230mg을 첨가하였다. 4℃로 유지시킨 K5-N,O-과잉황산염과 아질산나트륨을 함유하는 용액에 4℃로 냉각된 0.1N HCl을 첨가하여 pH를 2로 하였다. 용액을 30분 동안 천천히 교반하면서 반응하도록 하고, 0.1N NaOH로 중화하였다. 이와 같이 얻어진, 우세한 종이 식 Ⅰ°이고, 여기서 m은 4이고, X'는 포밀인 사슬 혼합물로 이루어진, LMW-K5-N,O-과잉황산염을 함유하는 용액을 실온으로 하고 물 50㎖에 용해된 브롬화 나트륨 250mg으로 처리하고 반응을 위해 4시간 동안 놔두었다. 과량의 브롬화수소 나트륨을 0.1N HCl을 사용하여 pH를 약 5로하여 제거하고 추가 2시간동안 그대로 두었다. 마지막에 용액을 0.1N NaOH로 중화시키고 생성물을 감압하에 증발시켜 생성물을 농축한 후 아세톤으로 침전하여 회수하였다. 이와 같이 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 K5-N,O-과화산염 출발물질의 황산화도와 유사한 황산화도, 점도계로 측정된 약 4,250의 평균분자량 및 우세한 종이 식Ⅰ'의 데카사카라이드이고 여기서 m은 4이고, X'는 CH2OH인 사슬의 혼합물로 이루어지는 특성을 나타내었다.
실시예 2
제조예 Ⅳ에 기재된 바에 따라 얻어진 K5-N,O-과잉황산염 1g을 아질산나트륨 200mg을 이용하여 실시예 1에 기재된 바와 같이 처리하였다. 얻어진 생성물은 K5-N,O-과잉황산염 출발물질과 유사한 황산화도, 점도계로 측정하여 약 5,000의 평균 분자량, 및 우세한 종이 식 Ⅰ'의 도데카사카라이드이고 여기서 m은 5이고 X'는 CH2OH인 사슬의 혼합물로 이루어진 특성을 나타낸다.
실시예 3
제조예 Ⅳ에 기재된 바에 따라 얻어진 K5-N,O-과잉황산염 1g을 아질산나트륨 160mg을 이용하여 실시예 1의 기재와 같이 처리하였다. 이와 같이 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염은 K5-N,O-과잉황산염 출발물질과 유사한 황산화도, 점도계로 측정하여 약 6,000의 평균분자량 및 우세한 종이 식 Ⅰ'의 테트라데카사카라이드이고 여기서 m은 6이고 X'는 CH2OH인 사슬의 혼합물로 이루어진 특성을 나타낸다.
실시예 4
(a) LMW-K5-N-황산염의 테트라부틸암모늄염
물 50 ㎖중의 제조예 Ⅲ의 기재에 따라 얻어진 LMW-K5-N-황산염 500mg의 용액을 4 ℃로 온도를 맞추고, 물로 4℃로 미리 조절된 IR 120 H+ 이온교환수지를 통과시켰다. 약 pH 2에서 용액 125mg으로 이루어진, 얻어진 용출물을 테트라부틸암모늄 히드록사이드 15% 용액으로 중화시키고 1시간 동안 실온에 놔두고 마지막으로 냉동건조하였다. LMW-K5-N-황산염의 테트라부틸암모늄염 1g을 얻었다.
(b)LMW-K5-아민-O-과잉황산염
디메틸포름아미드 20 ㎖ 중에 이와 같이 얻어진 염 1g을 함유하는 용액을 55 ℃에 유지하고 피리딘.SO3 부가물 1.7g을 함유하는 디메틸포름아미드 20 ㎖로 처리하였다. 반응은 55℃에서 밤새도록 실시되었고 그리고나서 물 40 ㎖를 혼합물에 첨가하였다. 1N NaOH로 중화시킨 후, 생성물을 아세톤 중의 NaCl 포화용액 3㎖로 침전시키고 4℃에서 밤새도록 유지하였다. 침전물을 G4 유리 깔대기로 여과하고 1,000D 컷오프를 갖는 TFF Milipore 시스템으로 한외여과하고 감압하에 건조시켰다. 이와같이 하여, 우세한 종이 식 Ⅲ'의 데카사카라이드이고 여기서 m은 4인 사슬의 혼합물로 이루어지고 황산화도는 약 2.9인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 683.2mg을 얻었다.
(c)LMW-K5-N,O-과잉황산염
물 30㎖ 중에 단계 (b)에서 얻어진 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 500mg의 용액에 탄산나트륨 800mg을 첨가하고, 그리고 나서 피리딘.SO3 부가물 800mg을 얻어진 용액에 4시간 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 55℃로 유지시키고, 0.1N HCl을 첨가하여 pH를 7로 하여 반응을 멈추었다. 1,000D 막에서 한외여과 후, 아세톤 중의 NaCl 포화용액 3 부피를 첨가하고 침전물을 5,000 rpm에서 5분동안 원심단리하여 회수하였다. 이와같이 하여, 점도계로 측정하여 평균 분자량이 약 4,100이고, 우세한 종이 식Ⅰ"의 데카사카라이드이고 여기서 m은 4인 사슬의 혼합물로 이루어지고 황산화도는 약 3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염 502mg을 얻었다.
실시예 5
제조예 Ⅲ의 기재에 따라 얻어진 LMW-K5-N-황산염 1g을 실시예 4의 기재된 바와 같은 단계 (a) 및 (b)로 처리하였다. LMW-K5-아민-O-과잉황산염을 아세톤 중의 NaCl 포화용액 3 부피로 침전시키고, 얻어진 침전물을 물에 용해시키고, 1,000D 컷오프 막에서 한외여과하고 냉동 건조하여 회수하였다. 이와 같이 얻어진 생성물은 점도계로 측정하여 평균분자량이 약 3,600이고 우세한 종이 식 Ⅲ"이고, 여기서 m이 4인 데카사카라이드인 사슬의 혼합물로 이루어진 LMW-K5-아민-O-과항산염이다.

Claims (55)

  1. 평균 분자량이 약 3,000 ~ 약 6,000이고 황산화도가 3.2~4인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  2. 제 1항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅰ인 사슬들의 혼합물로 이루어지고,
    여기서 q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, 황산화도 3.2~4를 위해, R,R' 및 R" 는 수소 또는 SO3 -기이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 평균 분자량이 3,750~4,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 평균 분자량이 4,750~5,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  5. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 평균 분자량이 5,750~6,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  6. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅰ°의 화합물인 사슬들의 혼합물로 이루어지고,
    여기서, 황산화도 3.2~4를 위해, R,R' 및 R" 는 수소 또는 SO3 -기이고, X'는 포밀 또는 히드록시메틸기이고, m은 4, 5 또는 6을 나타내며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  7. 제 6항 있어서, 평균 분자량이 3,750~4,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  8. 제 6항에 있어서, 평균 분자량이 4,750~5,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  9. 제 6항에 있어서, 평균 분자량이 5,750~6,250인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  10. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 황산화도가 3.5~4인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  11. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 황산화도가 3.5~3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  12. 황산화도가 3.2~4인 LMW-K5-N,O-과잉황산염 유도체의 제조방법으로,
    (a)K5-N-황산염의 아질산 해중합반응 및 이후의 환원반응에 의해 얻어진 LMW-K5-N-황산염을, 산성 형태로, 3차 또는 4차 수산화암모늄으로 처리하고, 용액의 pH를 약 7에서 유지하여 반응 혼합물을 30~60분 동안 유지시키고, 그것의 염을 상기 유기 염기로 단리시키고;
    (b) 상기 폴리사카라이드의 3차 또는 4차 암모늄염을 O-과잉황산화 조건하에서 O-황산화제로 처리하고;
    (c) 이와 같이 얻어진 생성물을 N-황산화제로 처리하고, 이와같이 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 단리하는 것을 포함하는 제조방법.
  13. 제 12항에 있어서,
    (ⅰ)K5-N-황산염을 아질산 해중합시킨 후, 예를 들면 브롬화수소 나트륨으로 환원시키고;
    (ⅱ)LMW-K5-N-황산염을, 산성 형태로, 3차 아민 또는 4차 수산화암모늄으로 처리하고, 반응 혼합물을 30~ 60분 동안 유지시키고, 그것에 의해 용액의 pH를 7로 유지하고, 대응하는 3차 또는 4차 암모늄 염을 단리하고;
    (ⅲ)상기 LMW-K5-N-황산염의 3차 아민 또는 4차 암모늄염을 O-과잉황산화 조건 하에서 O-황산화제로 처리하고;
    (ⅳ)이와같이 얻어진 생성물을 N-황산화제로 처리하고, 얻어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 단리하는 것을 포함하는 방법.
  14. 제 12항에 있어서, 상기 환원반응이 브롬화수소 나트륨으로 실시되는 방법.
  15. 제 12항에 있어서, 사슬의 90% 이상이 하기식 Ⅱ인 사슬들의 혼합물로 이루어지고,
    여기서, n은 2~20의 정수이고, 상기 사슬 혼합물 중의 사슬 대부분의 환원 말단에 하기 구조식(a')의 2,5-무수만니톨 단위를 함유하고, 그리고
    대응하는 양이온은 화학적으로 및 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N-황산염이 출발물질로서 사용되는 방법:
  16. 제 12항 내지 제 14항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 K5-N-황산염 출발물질은 친유성 물질이 없는 방법.
  17. 제 12항 및 제 14항 내지 제 16항중 어느 하나의 항에 있어서, LMW-K5-N-황산염 출발물질이 그것의 나트륨염의 형태로 사용되는 방법.
  18. 제 12항 및 제 14항 내지 제16항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 K5-N-황산염 출발물질은, 우세한 종이 하기식 Ⅱ'의 화합물인 사슬들의 혼합물로 이루어지고,
    여기서 q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, 상기 사슬 혼합물중의 사슬 대부분의 환원 말단에서 구조식(a')의 2,5-무수만니톨 단위를 함유하고, 그리고
    대응하는 양이온은 화학적으로 및 약제학적으로 허용가능한 것인 방법.
  19. 제 12항 및 제 14항 내지 제 18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 K5-N-황산염 출발물질은, 우세한 종이 하기식 Ⅱ'인 사슬들의 혼합물로 이루어지고,
    여기서 m은 4, 5 또는 6이며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 방법.
  20. 제 12항 내지 제 19항 중 어느 하나의 항에 있어서, LMW-K5-N,O-과잉황산염은 그의 나트륨염 형태로 얻어지고, 임의로 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 다른 염으로 전환되는 방법.
  21. 제 12항 내지 제 20항 중 어느 하나의 항의 단계(a) 및 (b)에 의해 얻을 수 있는 LMW-K5-아민-O-과잉황산염, 또는 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 그것의 염.
  22. 황산화도가 2.2~3인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염 또는 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 그것의 염.
  23. 제 21항 또는 제 22항에 있어서, 평균 분자량이 약 3,500~ 약 11,000인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염, 또는 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 그것의 염.
  24. 제 21항 내지 제 23항 중 어느 하나의 항에 있어서, 황산화도가 2.2~3이고 분자량이 3,500~5,200인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염.
  25. 제 21항 내지 제 24항 중 어느 하나의 항에 있어서, 실질적으로 N-아세틸기가 없는 LMW-K5-아민-O-과잉황산염.
  26. 제 20항 내지 제 24항 중 어느 하나의 항에 있어서, 사슬의 90% 이상이 하기식 Ⅲ의 구조를 갖는 사슬 혼합물로 이루어지고,
    여기서, 황산화도 2.2~3를 위해, R, R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -이고, n은 2~20의 정수이고, 상기 사슬의 혼합물 중에서 사슬의 대부분의 환원 말단에서 구조식 (a")의 황산화된 2,5-무수만니톨 유니트를 함유하며,
    대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염.
  27. 제 26항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅲ'의 화합물인 혼합물로 이루어지고
    여기서, q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염.
  28. 제 27항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅲ"의 화합물인 혼합물로 이루어지고
    여기서, 황산화도 2.2~3를 위해, R, R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -이고, X"는 OH 또는 OSO3 -이고, m은 4, 5 또는 6이며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-아민-O-과잉황산염.
  29. 제 12항 내지 제 20항 중 어느 하나의 항의 방법에 따라 얻을 수 있는 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  30. 사슬의 90% 이상이 구조식 I'을 갖는 사슬 혼합물로 이루어진 LMW-K5-N,O-과잉황산염으로,
    여기서 n은 2~20의 정수이고 R, R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -기 이고, 여기서 상기 사슬의 대부분의 환원 말단은 구조식(a")를 가지고
    여기서, 황산화도 3.2~4를 위해, R"는 수소 또는 SO3 -기 이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 및 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  31. 제 30항에 있어서, 우세한 종이 하기식 I의 화합물인 사슬의 혼합물로 이루어지고,
    여기서 q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  32. 제 31항에 있어서, 우세한 종이 하기식 I"의 화합물인 혼합물로 이루어지고,
    여기서, m은 4, 5, 6이고, 황산화도 3.2~4를 위해, R,R' 및 R"는 수소 또는 SO3 -이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  33. 제 29항 내지 제 32항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 양이온이 알칼리 금속, 알칼리-토금속, 암모늄, 테트라(C1-C4)알킬암모늄, 알루미늄 및 아연의 이온인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  34. 제 33항에 있어서, 상기 양이온이 나트륨, 칼슘 또는 테트라부틸암모늄 이온인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  35. 제 29항 내지 제 34항 중 어느 하나의 항에 있어서, 황산화도가 3.5~3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  36. 제 29항 내지 제 34항 중 어느 하나의 항에 있어서, 황산화도가 3.5~3.9인 LMW-K5-N,O-과잉황산염.
  37. LMW-K5-N-황산염 및 그것의 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 제조방법으로, K5-N-황산염을 조절된 아질산 해중합반응을 시키고 임의로 환원시키고 이와같이 얻어진 생성물을 단리시키는 것을 포함하는 방법.
  38. 제 37항에 있어서, 상기 K5-N-황산염이, 임의로 다른 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환되는 나트륨염으로 단리되는 방법.
  39. 제 38항에 있어서, 상기 다른 염은 알칼리 금속, 알칼리-토금속, 암모늄, 테트라(C1-C4)알킬암모늄, 암모늄 및 아연의 염인 방법.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 다른 염은 나트륨, 칼슘 또는 테트라부틸암모늄의 염인 방법.
  41. 제 37항 내지 제 40항 중 어느 하나의 항에 따른 방법으로 얻을 수 있는 LMW-K5-N-황산염.
  42. 제 37항 내지 제 40항 중 어느 하나의 항에 따른 방법으로 얻고, 사슬 혼합물 중에서 사슬 대부분의 환원 말단에, 구조식(a')의 2,5-무수만니톨 유니트를 함유하는 LMW-K5-N-황산염:
  43. LMW-K5-N-황산염, 또는 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 그것의 염.
  44. 제 43항에 있어서, 사슬의 90% 이상이 평균 분자량이 약 1,500~ 약 7,500인 사슬의 혼합물로 이루어지는 LMW-K5-N-황산염.
  45. 제 44항에 있어서, 분자량 분포가 약 1,000 ~ 약 10,000인 LMW-K5-N-황산염.
  46. 제 41항 내지 제 45항 중 어느 하나의 항에 있어서, 0 내지 5%이하의 아세틸기를 함유하는 LMW-K5-N-황산염.
  47. 제 41항 내지 제 46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 평균 분자량이 약 2,000 ~ 약 4,000인 LMW-K5-N-황산염.
  48. 제 41항 내지 제 46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 평균 분자량이 약 4,000 ~ 약 7,500인 LMW-K5-N-황산염.
  49. 제 41항 내지 제 46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 사슬의 90% 이상이 하기식 Ⅱ인 사슬의 혼합물로 이루어지고,
    여기서 n은 2 ~ 20의 정수이며, 하기 구조식 단위를 함유하고,
    여기서, X는 상기 사슬의 대부분에서 포밀 또는 히드록시메틸이고, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N-황산염.
  50. 제 41항 내지 제 46항중 어느 하나의 항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅱ'의 화합물인 사슬의 혼합물로 이루어지고,
    여기서, q는 4, 5, 6, 7 또는 8이고, 하기 구조식의 단위를 함유하며,
    여기서, X는 상기 사슬의 대부분에서, 포밀 또는 히드록시메틸을 나타내며, 대응하는 양이온은 화학적 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N-황산염.
  51. 제 41항 내지 제 46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 우세한 종이 하기식 Ⅱ"의 화합물인 사슬의 혼합물로 이루어지고,
    여기서, X는 포밀 또는 히드록시메틸을 나타내고, m은 4, 5 또는 6이며, 대응하는 양이온은 화학적으로 또는 약제학적으로 허용가능한 것인 LMW-K5-N-황산염.
  52. 제 49항 내지 제 51항 중 어느 하나의 항에 있어서, 구조식(a)에서, X는 히드록시메틸인 LMW-K5-N-황산염.
  53. 제 41항 내지 제 52항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염 또는 양이온이 알킬리 금속, 알칼리-토금속, 암모늄, 테트라(C1-C4)알킬암모늄, 알루미늄 및 아연의 염 또는 양이온인 LMW-K5-N-황산염.
  54. 제 41항 내지 제 52항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 염 또는 양이온이 나트륨, 칼슘 또는 테트라부틸암모늄의 염 또는 양이온인 LMW-K5-N-황산염.
  55. 활성성분으로, 제 1항 내지 제 11항 또는 제 28항 내지 제 35항 중 어느 하나의 항에 따른 LMW-K5-N,O-과잉황산염을 약제학적 담체와 혼합된 상태로 포함하는 약제학적 조성물.
KR10-2004-7020636A 2002-06-18 2003-06-17 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드 KR20050024348A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2004-7020636A KR20050024348A (ko) 2002-06-18 2003-06-17 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ITMI2002A001345 2002-06-18
ITMI2002A001346 2002-06-18
ITMI2002A001854 2002-08-27
KR10-2004-7020636A KR20050024348A (ko) 2002-06-18 2003-06-17 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20050024348A true KR20050024348A (ko) 2005-03-10

Family

ID=41784678

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2004-7020636A KR20050024348A (ko) 2002-06-18 2003-06-17 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20050024348A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8193166B2 (en) Epimerized derivatives of K5 polysaccharide with a very high degree of sulfation
EP1366082B1 (en) Highly sulfated derivatives of k5 polysaccharide and their preparation
US8513407B2 (en) Process for the preparation of N-acyl-(epi)K5-amine-O-sulfate-derivatives and products thus obtained
AU2002236118A1 (en) Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation
KR20050024348A (ko) 저분자량 과잉황산화 폴리사카라이드
US9346893B2 (en) Process for the preparation of highly O-sulfated, epimerized derivatives of K5 polysacchride and intermediates therein
RU2333222C2 (ru) Эпимеризованные производные полисахарида к5 с высокой степенью сульфатирования
ZA200410358B (en) Low molecular weight oversulfated polysaccharide.
KR20050024339A (ko) 엔-아실-(에피)케이5-아민-오-황산염-유도체 생산방법 및그 생성물
KR20050024349A (ko) 매우 높은 황산화도를 가진 케이5 폴리사카라이드의에피머화된 유도체

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Withdrawal due to no request for examination