KR20050010914A - 항균제 및 항균성 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 조릿대엑기스를 함유하는 항파상풍균제, 조릿대엑기스 및 유기산을 함유하는 항곰팡이제, 조릿대엑기스를 함유하는 항바이러스제, 조릿대탄닌을 함유하는 항균제, 및 조릿대엑기스 및 유기산을 함유하는 항균성조성물에 관한 것이다.
Description
조릿대엑기스는 예부터 항균성을 갖는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 창상감염증의 원인균이 되는 세균인 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(Escherichia coli) 에 대한 항균효과 및 위궤양 원인균인 필로리균(Helicobacter pylori)에 대한 항균효과가 보고되어 있다.
그러나 창상감염증의 중요한 원인균으로서 파상풍, 가스괴저, 각종 화농성 감염증의 원인인 유아포 및 무아포 혐기성균인, 이들 혐기성균에 대한 항균작용에 대한 검토가 이제까지 없었다.
항균력을 갖는 물질을 평가할 때, 이들 물질이 인체의 병원균에 대해서 가지는 작용과 함께, 피부, 점막에 상존하는 유용 또는 기회세균에 대한 작용을 알아두는 것은 매우 중요하다.
Lactobacillus spp.는 구강내, 소화관내, 질(膣)내 상존세균으로 알려져있다. 상존세균의 생체에 대한 작용에는 이면성이 있는 것은 알려진 바이다. Lactobacillus spp.도 혈액을 포함한 임상재료로부터 분리되는 것이 있어, 병원적 의의도 절대 과소평가해서는 아니지만, 그 분리빈도가 매우 적은 비율이므로, 각각의 해부학적 부위에서 유용성이 높은 세균종으로 간주되고 있다. 인체에 대한 유용성이 높은 균군으로 평가되고 있는 Lactobacillus spp.에 대하여 조릿대엑기스가 어느 정도의 항균작용을 가지는가 하는 점은 매우 흥미로운 점이나 이제까지 그에 대한 상세한 검토성적은 없다.
피부의 피지선(皮脂腺)내에 상존하는 Propionibacterium acnes는 혐기성 무아포 혐기성균으로, 中症~重症의 Aene vulgaris(여드름)에 있어서, Stapyhlococcus aureus, Staphylococus epidermidis 등과 함께 Acne vulgaris의 증악인자로서 알려져 있다. 현재, Acne vulgaris의 치료에는 지금까지 항균약 (I리스로마이신, 테트라사이클린, nadifloxacin)크림, 로션이 사용되었으나, 이들을 장기적으로 사용하면, Staphylococus spp. 및 P. acnes의 내성화가 임상상 문제가 되어, 세계적으로 그 대책에 대하여 논의가 진행되고 있는 상황이다. 조릿대엑기스의 P. acnes에 대한 검토성적은 알려진 바가 없다.
Prevotella bivia 및 Pigmented Prevotella spp.는 건강한 여성의 질내에서 검출한계이하 균수만 존재하지만, Mycoplasma genitalium(hommnis), Gardnerella vaginalis, Peptostreptococcus anaerobius를 중심으로 하는 혐기성 그람양성구균,Porphyromonas spp. 등과 함께, 질내유산균의 감소, 질내 pH의 저하 및 밀크성 악취 (아민취)가 있는 대하(帶下)를 특징으로 하는 세균성질증(BV)의 상태에서 이상(異常)증가하는 세균성질증(BV) 관련 미생물의 범주 들어가는 편성혐기성그람음성간균으로 자궁내, 골반내감염증의 원인균으로도 매우 중요한 세균이다.
조릿대엑기스의 항균작용은 알려져 있으나, 지금까지 이들 BV관련 세균군균종에 대한 항균작용의 검토는 전혀 없었다.
이와 같이, 조릿대엑기스가 모든 세균에 대하여 유효한 항균활성을 가지는가에 대해서는 알려져 있지 않으며, 세균에 대해서 항균활성을 갖는 천연추출물이 칸디다 등의 곰팡이에 대해서 항균활성을 갖는가에 대해서도 일반적으로 알려져 있지 않다.
한편, 파상풍은 파상풍균이 창상부위에 감염하여, 그곳에서 생성된 신경독소가 주로 근육의 경련, 경직, 건반사항진(腱反射亢進)을 일으키는 치명률이 높은 독소성질환이다. 파상풍균은 흙, 인체, 동물의 변에서 검출되는 혐기성간균으로, 파상풍의 예방치료에는 톡소이드에 의한 자동면역, 항독소혈청에 의한 수동면역이 유효하다고 하며, 조릿대엑기스가 파상풍균에 대하여 항균활성을 갖는 것은 알려져있지 않다.
또한, 바이러스는 자기증식불능으로 동식물 및 미생물에 기생증식하는 극미소한 병원체이며, 동물바이러스, 식물바이러스, 미생물 바이러스로 나뉜다. 바이러스성 질환의 예방치료용 각종 항바이러스제가 개발되어 있으나, 부작용이 없는 유효한 항바이러스활성을 갖는 약제가 요구된다.
또한, 각종 식물에 함유되어 있는 탄닌이 항균작용을 갖는 사실도 알려져 있다. 예를 들어 조릿대이외의 식물유래 탄닌이 MRSA(메티실린 내성황색포도상구균)에 대한 항균작용을 갖는 사실도 알려져있으나, 부작용이 크기 때문에 항균제로서 사용할 수 없는 문제가 있다.
본 발명은 조릿대엑기스를 함유하는 항균제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 조릿대엑기스를 함유하는 항파상풍균제, 항곰팡이제, 항바이러스제 및 항균성 조성물에 관한 것이다.
발명의 개시
따라서 본 발명의 목적은, 항균제를 제공하는 것으로, 더욱 구체적으로는 항파상풍균제, 항곰팡이제 및 항바이러스제를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 항균성 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 조릿대엑기스를 함유하는 이하의 항균제, 항균성조성물을 제공한다.
1. 조릿대엑기스를 함유하는 항파상풍균제
2. 조릿대엑기스를 함유하는 항곰팡이제
3. 유기산을 함유하는 상기 2기재 항곰팡이제
4. 곰팡이가 칸디다인 상기 3기재 항곰팡이제
5. 조릿대엑기스를 함유하는 항바이러스제
6. 조릿대 탄닌을 함유하는 항균제
7. 황색포도상구균, 프로피오니박테리움, 대장균에 대한 항균활성을 가지는 상기 6기재 항균제
8. MRSA에 대한 항균활성을 가지는 상기 6기재의 항균제
9. 프로피오니박테리움아크네스에 대한 항균활성을 가지는 상기 6기재의 항균제
10. 조릿대탄닌을 함유하는 여드름치료제
11. 조릿대엑기스 및 유기산을 함유하는 항균성조성물
12. 잉크, 도료, 식품첨가물, 음료, 조미료, 애완동물용 푸드, 플라스틱성형품, 또는 접착제인 상기 11기재의 항균성조성물
13. 조릿대엑기스를 함유하는 가스괴저균에 대한 항균제
14. 가스괴저균이 크로스트리듐속균인 상기 13기재의 항균제
15. 조릿대엑기스를 함유하는 무아포 혐기성그람양성구균에 대한 항균제
16. 무아포혐기성그람양성구균이 피네골디아(Finegoldia), 마이크로모나스(Micromonas), 펩토스트렙토코커스(Peptostreptococcus), 아토포비움(Atopobium), 또는 게멜라(Gemella)인 상기 15기재의 항균제
17. 조릿대엑기스를 함유하는 무아포혐기성그람음성간균에 대한 항균제.
18. 무아포혐기성그람음성간균이 프리보텔라(Prevotella), 포르피로모나스(Porphyromonas), 빌로필라(Bilophila), 데술포비브리오(Desulfovivrio) 또는 푸소박테리움(Fusobacterium)인 상기 17기재의 항균제
19. 조릿대엑기스를 함유하는 질염 및 세균성질증관련미생물에 대한 항균제
20. 유기산을 함유하는 상기 13~19 기재의 항균제.
21. 조릿대엑기스를 함유하는 조미료
22. 조릿대엑기스를 함유하는 식염인 상기 21기재의 조미료
23. 유기산을 함유하는 상기 21 또는 22기재의 조미료
24. 조릿대엑기스를 함유하는 농약
25. 유기산을 함유하는 상기 24기재의 농약
26. 조릿대엑기스를 함유하는 농약용 살균제
27. 유기산을 함유하는 상기 26기재의 농약용살균제
28. 조릿대엑기스를 함유하는 방부제
29. 유기산을 함유하는 상기 28기재의 방부제
이하. 본 명세서에서 항파상풍균제, 항곰팡이제, 항바이러스제, 여드름치료제등을 총징하여 단순히 「항균제」로 기재할 때도 있다.
또한 본 명세서에는 「항균제」라 하면, 인체이외에 사용되는 항균제, 방부제도 포함하는 것으로 한다.
발명을 실시하는 최적의 상태
본 발명은 유효성분으로서 조릿대엑기스를 함유하는 항균제이다. 본 발명의 항균제는 조릿대엑기스를 고형분으로 1 ∼ 50 중량%, 바람직하게는 2 ∼ 25 중량%, 더욱 바람직하게는 4 ∼ 15중량% 함유한다. 조릿대엑기스의 고형분농도가 1 중량% 미만으로는 목적하는 항균성을 충분히 발현할 수 없으며, 50중량%을 초과하면 자극이 너무 강해져 바람직하지 못하다.
종래, 조릿대엑기스는 통상 0.5 ~ 10 중량%의 고형분을 함유하는 엑기스로 제조되어, 각종 용도로 이용되어 왔다. 통상은 본 고형분 농도를 최종제품에 대하여 1 ∼ 10 중량% 정도 첨가하여 사용하고 있기 때문에, 최종제품중의 조릿대엑기스의 고형분 농도는 통상 0.05 ∼ 0.8 중량% 정도이며, 가장 고농도일 경우에도 1 중량% 미만정도였다. 이는 조릿대엑기스가 비교적 고가이며, 이정도의 저농도에서도 어느 정도의 소염효과 및 항균효과가 발현되고, 유효성분의 첨가량을 10 중량% 이상으로 하는 것도 상식적이지 않다는 점 등을 들 수 있다. 그러나 이러한 저농도로는 항균효과가 충분하지 않은 경우가 많았다.
본 발명자들은 조릿대엑기스를 고형분농도로 1 ∼ 10중량%, 바람직하게는 2 ∼ 8 중량%, 더욱 바람직하게는 3 ∼ 7 중량% 함유시키므로써, 종래 저농도로 경우에는 거의 확인되지 않았던 아토피등에 대한 개선효과, 가려움방지 효과가 현저하게 발현되고, 또한 창상치료효과도 현저하게 향상되는 것을 발견하였다(WO 02/07745).
본 발명자는 조릿대엑기스의 각종균류에 대한 항균효과를 더욱 고찰하여, 조릿대엑기스를 고형분으로 1 ∼ 50 중량%, 바람직하게는 2 ∼ 25 중량%, 더욱 바람직하게는 4 ∼ 15 중량% 함유하는 것이 녹농균, 황색포도상구균, 대장균 등 이외의 균, 즉 파상풍균등의 혐기성균, 프로피오니박테리움아크네스를 함유하는 프로피오니박테리움, 칸디다등의 곰팡이류, 또는 헤르페스바이러스, 인플루엔자바이러스, 코로나바이러스 등의 바이러스 등에도 현저한 항균효과를 가지는 사실, 조릿대엑기스에 사과산등의 유기산을 함유시키므로써, 항균성이 현저하게 향상되는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 조릿대엑기스 자체는 예부터 알려져왔음에두 불구하고, 이를 고농도로 사용하려고 하는 시도가 이제까지 없었던 이유는 정확하지는 않지만, 종래의 농도보다 고농도(10배 이상)로 하므로써 파상풍균 등의 혐기성균, 칸디다등의 곰팡이류, 또는 바이러스등에도 현저한 항균효과를 갖는 사실은 매우 놀라울만하다.
본 발명은 피부연부조직 감염증에도 유효하다. 피부, 뼈, 연부조직이 외상, 허혈, 수술로 손상을 받으면, 혐기성균감염증에 적합한 환경이 된다. 피부연부조직 감염증은 분변 및 상기도(上氣道)분비물로 오염되기 쉬운 장소에서 일어난다. 예를 들면 장관수술과 관계된 상처부위, 욕창, 사람에 의한 물린상처(創傷)와 관련한 창상이 있다. 혐기성균은 가스가 발생하는 봉와직염(crepitant cellulitis), 상승적 봉와직염(symergistic cellulitis), 괴저(gangrene)및 괴사성근막염의 증례에서 분리된다. 더욱이, 혐기성균은 피부의 농양(膿,瘍), 직장농양(直腸膿瘍), 액하간선감염증(화농성간선염)에서 분리된다. 혐기성균은 당뇨병환자의 족궤양(足潰瘍)에서 빈번하게 분리된다.
피부연부조직감염증은 통상복수균감염증이다. 평균 증례당 4.8균종이 분리되며, 혐기성균과 호기성균의 비율은 3:2가 된다. 분리빈도가 높은 세균종은 Bacteroides spp., Peptostreptoccus spp., Enterococcus spp., Clostridium spp., Proteus spp. 이다. 혐기성균이 이들 감염증에 관계하면, 발열빈도가 높아지고 환부에 악취가 생겨, 조직내 가스 또는 발에 궤양이 생기게 된다.
혐기성균과 통성균의 상승작용에 따라 발생하는 괴저(Meleney의 괴저)는 강렬한 통증, 발적, 종창(腫脹)에 이어서 발생하는 경결(induration)을 특징으로 한다. 홍반이 괴사대를 중심으로 발생한다. 괴사와 홍반이 외측으로 확대함에 따라 육아성(肉芽性) 궤양이 중심부에 형성되어 간다. 증상은 동통(疼痛)만으로, 발열은 전형적인 증상은 아니다. 이러한 감염증은 주로 S. aureus와 Peptostreptococus spp.와의 결합에 의해 일어난다. 호발(好發)부위는 복부의 수술창, 하지의 궤양의 주변부이다. 치료방법으로는 괴사조직의 외과적 제거와 항균화학치료가 있다.
괴사성근막염이라고 하는 급속하게 퍼지는 근막의 파괴적 질병은 A군 연쇄구균에 의한 것이 많으며, Peptostreptococcus 및 Bacteroides와 같은 혐기성균에 의해 발생하는 경우도 있다. 조직내 가스를 생기는 경우도 있다. 이와 같이 근육괴사도 혐기성균과 통성균의 혼합감염증과 관계가 있다. Fournier괴저는 회음부, 복벽전부를 침범하는, 복수의 혐기성균이 심부(深部)의 근막면 deep external facial planes을 따라 퍼지며, 광범위한 피부결손을 초래하는 봉와직염이다.
본 발명은 조릿대엑기스를 함유하는 피부연부조직 감염증에 대한 치료 및/또는 예방제를 제공하는 것이다.
본 발명은 또한, 조릿대엑기스를 함유하는 프로피오니박테리움 아크네스를 함유하는 프로피오니박테리움에 대한 항균제를 제공한다.
본 발명자는 조릿대엑기스의 유효성분에 대하여 더욱 검토한 결과, 조릿대엑기스중에 비교적 다량으로 함유되어 있는 탄닌이 우수한 항균작용을 갖는 사실을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 종래, 탄닌이 항균작용을 갖는 사실은 보고되어 있으나, 이들 탄닌은 모두 부작용이 커서 실용화된 것은 알려져있지 않다. 조릿대엑기스 자체는 예부터 경구섭취하여 인체에 대한 부작용을 갖지 않는 것이 알려져 있다. 이러한 조릿대엑기스중에 탄닌이 비교적 다량으로 함유되어, 우수한 항균작용을 갖는 사실은 전혀 예상하지 못한 것이다.
본 발명의 항균제의 유효성분인 조릿대엑기스의 원료로서 사용하는 조릿대는 특별히 한정하지 않지만, 조릿대(sasa)속에 속하는 모든 조릿대를 포함한다. 예를 들어, 금대조릿대 (sasa senanensis, 쿠마이조릿대), 얼룩조릿대(sasa veitchii, 쿠마조릿대), 섬조릿대(Sasa kurilensis, 치시마조릿대), 오쿠야마조릿대(Sasa cernua), 에조미야마조릿대, 치마끼조릿대(Sasa palmate), 야히꼬조릿대, 오바조릿대, 미야마조릿대, 센다이조릿대, 유까와조릿대, 아보이조릿대(Sasa samaniana Nakai), 오누까조릿대 등이 있으며, 이들 중 시판중인 제품으로 금대조릿대, 얼룩조릿대(중국조릿대, 히다조릿대) 등을 예로 들 수 있다.
더욱 구체적으로는, 북해도 테시오산(天鹽山)에서 7 ~ 10월에 채취되는 금대조릿대, 얼룩조릿대의 물추출물 등이 바람직하다.
본 발명에 사용하는 조릿대 엑기스는, 조릿대 생엽 또는 건조엽, 바람직하게는 건조엽을 100 ~ 180 ℃의 물로 상압 또는 가압추출하여 얻어진 것이 바람직하다.
추출방법에 대해서는 특별히 한정하지 않으며, 예를 들어, 일본특허 제3212278 (일본특개평11-196818)에 기재되어 있는 방법을 사용할 수 있다. 더욱 구체적으로는 가압열수추출기로 100 ~ 180 ℃, 5 ∼ 30 분간 처리하여 엑기스를 추출하고, 수분분리기로 함수고형분 (함수율 40 ~ 70%)으로 분리하고, 포화수증기 가열처리기로 함수고형분을 100 ∼ 200 ℃에서 5 ~ 60분 처리한 후, 재차 가압열수추출기에서 100 ∼ 180 ℃로 5 ∼ 30분간 처리하여 엑기스를 추출시키고, 제1차, 제2차 엑기스를 합쳐 사용한다. 또한, 조릿대 건조잎을 예를 들면, 60 ∼ 100 ℃의 물로 30분 ∼ 12시간 정도 추출하여 얻어진 엑기스도 사용할 수 있다.
조릿대엑기스를 고형분으로 50 중량% 함유하는 시판품으로는, 일본 ㈜크로로란도모시리 (クロロランドモシリ) 社 제품[AHSS], 주식회사 봉황당의 [TWEBS]가 있다.
이렇게 얻어진 조릿대엑기스는 유황성분을 함유하고 있고, 그 함유량은 유황으로 환산하여, 조릿대엑기스의 고형분 1g 당 약 4 ~ 10mg, 통상은 약 6 ∼ 9 mg이다. 유황성분 중 주성분은 함황(含硫)아미노산으로 생각된다.
본 발명의 항균제는 조릿대 엑기스 유래 유황성분을 유황으로 환산하여 100g 당, 바람직하게는 4 ∼ 500 mg, 더욱 바람직하게는 8 ∼ 250 mg, 가장 바람직하게는 16 ∼ 150 mg 함유한다.
또한 조릿대엑기스는 탄닌을 함유하고 있으며, 그 함유량은 조릿대엑기스의 고형분에 대해 5 ∼ 15 중량% 정도이다.
본 발명의 항균제는, 조릿대탄닌을 고형분 농도로 바람직하게는 0.05 ∼ 7.5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 ∼ 6 중량% 함유하는 것이 바람직하다.
본 발명의 항균제는, 조릿대엑기스만을 유효성분으로 하는 것도 좋으나, 여기에 적당량의 유기산을 병용하는 것도, 그 항균효과를 더욱 향상시킬 수 있다. 이러한 유기산으로서는, 사과산, 구연산, 유산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 초산, 안식향산, 페닐초산, 사리틸산, 페놀류등이 있다.
유기산의 사용량은 본 발명의 항균제 중, 바람직하게는 0.01 ∼ 5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02 ∼ 3 중량%, 가장 바람직하게는 0.05 ∼ 1.5 중량% 이다.
본 발명의 항균제는 조릿대엑기스만으로도 좋으며, 이를 다른 성분, 담체와 혼합하여도 좋다.
본 발명은 조릿대엑기스 또는 조릿대엑기스와 유기산의 혼합물을 함유하는 식염, 설탕, 장유, 미소, 소스, 마요네즈, 술, 미림, 드리싱등의 조미료등을 제공하는 것이다. 예를 들어, 조릿대엑기스 또는 조릿대엑기스와 유기산의 혼합물을 식염에 첨가하면 식염에 의해 어류, 육류 등의 보존기간이 현격하게 연장되는 효과가 있다. 식염에 대한 조릿대엑기스의 첨가량은 고형분으로 바람직하게는 1 ∼ 10 중량%, 더욱 바람직하게는 2 ∼ 8 중량%, 가장 바람직하게는 3 ∼ 6 중량%이다.
본 발명의 항균제의 제형은 액체상, 고체상, 기체상 모두 좋다. 본 발명의 항균제는 경구, 비경구 투여등 어떤 투여형태로 투여하여도 좋다. 경구투여형태로서는 정제, 환제, 분제, 액제, 츄잉껌, 캔디, 초콜렛, 빵, 쿠키, 메밀국수, 우동, 각종 드링크제등의 식품형태가, 비경구투여형태로서는 주사제, 국소투여제(크림, 연고등), 좌약 등을 들수 있다. 국소투여제의 제형의 예로서는, 본 발명의 항균제를 천연섬유 또는 합성섬유제의 거즈 등의 담체에 함침시킨 것, 립스틱 등의 화장품에 함유시킨 것 등이 있다.
본 발명의 항균제는 사람은 물론, 사람이외 포유류, 조류, 어류, 파충류 등에도 항균제로서 유효하다. 따라서, 본 발명의 항균제는 이들 동물용 항균제 (예를들어 애완동물용 의약, 애완동물용 푸드등)로서도 사용할 수 있다. 더욱이 본발명의 항균제는 동물이외에 각종식물에 대한 항균제로서도 유용하며, 또한 방부제로서도 유용하다.
본 발명의 각종 제형의 항균제의 제조에는 소정량의 상기 조릿대엑기스 외에, 통상 의약조성물, 화장품, 피부용조성물 등에 사용되는 유성성분등의 기재성분, 보습제, 방부제등을 사용할 수 있다.
항균제에 사용하는 물은, 수돗물, 천연수, 정제수 등, 특별히 한정하지 않지만, 일반적으로 이온교환수 등의 고순도의 물이 바람직하다.
유성성분으로는, 스콸렌(squalane), 우지, 돈지, 마유(馬油), 라놀린, 밀납 등의 동물성유, 올리브유, 그레이프씨드(grape seed)유, 팜유, 호호버유, 배아유(胚芽油) (예를 들어, 쌀배아유) 등의 식물성유, 유동파라핀, 고급지방산에스테르(예를 들어, 옥틸팔미테이트, 이소프로필팔미테이트, 옥틸도데실미리스테이트), 실리콘유 등의 합성유, 반합성유가 있다.
유성성분은, 피부의 보호, 에몰리언트(emollient)성 부여효과(피부표면을 얇은 막으로 덮어, 건조를 막는 동시에 유연성, 탄력성을 부여하는 효과), 산뜻함 등의 요구성능에 따라 적절하게 배합하여 사용한다. 스콸렌, 올리브유 및 옥틸도데실미리스테이트의 조합은 바람직한 일례이다.
항균제의 경도, 유동성을 조절하기 위해 스테아린산, 스테아릴알콜, 베헤닌산, 세타놀, 바세린 등의 고체유가 사용되며, 스테아린산과 세타놀의 배합이 바람직하다.
본 발명의 항균제를 크림조성물로 제조하기 위해서는, 조릿대엑기스, 물, 유성성분을 크림상으로 하기 위해, 크림화제를 사용한다. 크림화제는 특별히 한정하지는 않으나, 모노스테아린산글리세린과 자기유화형 모노스테아린산글리세린(모노스테아린산글리세린에 유화제를 첨가한 것)을 배합하여 사용하는 것이 일반적이다.
본 발명의 항균제에는 필요에 따라 안정화제, 보습제, 창상치료제, 방부제, 계면활성제등을 함유시킬수 있다.
안정화제로서는, 카르복실비닐폴리머와 수산화칼륨의 배합, 디스테아린산폴리에틸렌글리콜등이 있다. 특히 세스키스테아린산폴리에틸렌글리콜 (디스테아린산폴리에틸렌글리콜과 모노스테아린산폴리에틸렌글리콜의 1: 1 혼합물) (폴리에틸렌글리콜의 분자량은 1000 ∼ 20000)은 안정성이 높고, 물과 기름으로 분리되는 일없이, 크림조성물로서 피부에 도포할 때 경도를 효과적으로 조절할 수 있어 바람직하다.
보습제로서는, 히알론산나트륨, 콜라겐, 알로에엑기스 (특히 목립(木立)알로에(Aloe arborescens)유래 알로에엑기스(2)가 바람직하다), 요소, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 트레하로스, 솔비톨, 아미노산, 피로리돈카르본산나트륨 등이 있다.
창상치료제로서는, 알란토인(allantoin), 글리틸리틴산디칼륨, 감초엑기스, 쑥엑기스 등이 있다.
방부제로는, 조릿대엑기스 자체에 항균작용이 있기 때문에 보조적으로 사용한다. 예를 들어 안식향산나트륨, 파라히드록시안식향산저급알킬에스테르(예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필 또는 부틸에스테르등의 파라벤이라고 칭하는 것), 프로피온산나트륨, 혼합지방산에스테르(카프린산글리세릴, 라우린산폴리글리세릴-2, 라우린산폴리글리세릴-10의 혼합물), 페녹시에탄올, 감광소(感光素)201호(황색색소), 1,2-페탄디올 등이 있으며, 파라벤, 혼합지방산에스테르, 1, 2-판탄디올이 바람직하다.
계면활성제로는, 예를 들어, N-아실-L-글루타민산나트륨, 폴리옥시에틸렌솔비탄모노스테아레이트 등이 있다.
필요에 따라, 향(香)성분, 예를 들어, 오렌지오일, 레몬오일, 등피유, 향료 등을 함유시켜도 좋다.
이상의 각 성분에 물, 필요에 따라 유기산을 첨가하여 전체 100 중량%로 한다.
본 발명의 항균제를 크림조성물로 제조하는 경우의 각 성분의 바람직한 배합량 (중량%)을 하기 표1에 나타냈다. 수분 이외 각 성분의 배합량은 수분을 제외한 중량%이다.
[표 1]
성분 | 바람직한 범위 | 보다 바람직한 범위 | 가장 바람직한 범위 |
조릿대엑기스 | 1 ~ 50 | 2 ~ 25 | 4 ~ 15 |
액체상 유성성분 | 6 ~ 30 | 2 ~ 20 | 5 ~ 15 |
고체상 유성성분 | 2 ~ 35 | 3 ~ 25 | 5 ~ 15 |
크림화제 | 1 ~ 6 | 1.5 ~ 4 | 1.6 ~ 3 |
안정화제 | 0 ~ 2 | 0 ~ 1.5 | 0 ~ 1 |
보습제 | 0 ~ 10 | 0.05 ~ 5 | 0.1 ~ 5 |
창상치료제 | 0 ~ 2 | 0.05 ~ 1 | 0.1 ~ 0.5 |
향기성분 | 0 ~ 5 | 0 ~ 3 | 0 ~ 1 |
유기산 | 0.01 ~ 5 | 0.1 ~ 3 | 0.5 ~ 1.5 |
물 | 나머지 | 나머지 | 나머지 |
이상의 각 성분을 교반날개와 바람직하게는 유화기를 구비한 가열혼합가마에 투입하고, 70 ∼ 90 ℃에서 1 ∼ 2시간 교반혼합하여, 본 발명의 항균제를 얻었다.
본 발명의 항균제는, 크림조성물 이외, 연고, 액상, 젤상, 겔상, 에어졸, 기타 형태로 사용할수 있으며, 크림조성물의 형태가 간편하며 효과도 좋다. 또한, 샴푸, 보디비누, 세안폼 등의 반고체 또는 액체 형태도 좋다.
본 발명의 항균제는, 환부를 청결하게 한 후, 적당량, 예를 들어, 크림조성물로 적용할 경우, 피부 100 ㎠당 0.1 ∼ 1 g 정도를, 1일 1 ∼ 5회, 통상적으로는 1 ∼ 3회 정도 도포하면 좋다. 도포량, 도포회수는 증상 및 상처의 정도에 따라 적절하게 증감시키면 된다.
본 발명의 항균제는 경구섭취하는 경우, 조릿대엑기스 고형분으로 체중 1Kg당 0.01 ∼ 0.1 g 정도를 1일 1 ∼ 5회, 통상은 1 ∼ 3회 정도 섭취하는 것이 적당하다. 섭취량, 섭취회수는 증상에 따라 적절하게 증감하면된다.
본 발명의 항균제는 주사제등으로 비경구섭취할 경우, 조릿대엑기스 고형분으로 체중 1Kg당 0.01 ∼ 0.1 g정도를 1일 1 ∼ 5회, 통상은 1 ∼ 3회 정도 섭취하는 것이 적당하다. 섭취량, 섭취회수는 증상에 따라 적절하게 증감하면된다.
본 발명의 항균제는 콘돔 등에 도포해둠으로써, 성병 및 HIV감염 등을 예방할 수 있다.
본 발명의 항균제의 유효성분인 조릿대엑기스는 조릿대(笹)속 추출물이며, 1.25 중량% 수용액은 사람의 태아신장(腎臟)유래의 293세포에 대해서 독성을 나타내지 않았다.
본 발명의 항균제는 조릿대엑기스를 고형분으로 1 ∼ 50 중량% 함유하고 있으며, 파상풍균, 가스괴저를 일으키는 크로스트리듐속 가스괴저균군, 칸디다균, 백선균(白癬菌), 털곰팡이, 쿠모노스곰팡이, 아스페루기루스속균, 크립토코카스속균, 콕시디오이데스속균, 히토플라즈마속균, MRSA등의 항생물질내성균, 프로피오니박테리움아크네스를 포함하는 프로피오니박테리움속균, 헤르페스바이러스, 인플루엔자바이러스, 코로나바이러스등의 바이러스등에 대하여 현저한 항균효과를 나타낸다.
본 발명의 항균제의 바람직한 실시형태는 이하와 같다.
1. 조릿대엑기스(고형분으로 1 ∼ 50 중량%), 물, 유성성분 및 크림화제를 함유하는 항균제
2. 유성성분으로, 동물성유, 식물성유, 합성유, 반합성유로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 1항 기재의 항균제
3. 유성성분은, 스콸렌, 우지, 돈지, 마유(馬油), 라놀린, 밀납, 올리브유, 그레이프씨드유, 팜유, 호호버유, 배아유, 유동파라핀, 옥틸팔미테이트, 이소프로필 팔미테이트, 옥틸도데실미리스테이트, 실리콘유, 스테아린산, 스테아릴알콜, 베헤닌산, 세타놀 및 바세린으로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 1항 기재의 항균제
4. 크림화제가 모노스테아린산글리세린과 자기유화형 모노스테아린산글리세린과의 배합인 상기 1 ∼ 3항 기재의 항균제
5. 또한 유기산, 안정화제, 보습제, 창상치료제, 방부제 및 계면활성제로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 성분을 함유하는 상기 1 ∼ 4항 기재의 항균제
6. 안정화제가, 카르복실비닐폴리머와 수산화칼륨의 배합 및 디스테아린산폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 5항 기재의 항균제
7. 보습제가 히알론산나트륨, 콜라겐, 알로에엑기스, 요소, 1, 3-부틸렌글리콜, 글리세린, 트레하로스, 솔비톨, 아미노산 및 피로리돈카르본산나트륨으로 구성된 군에서 적어도 1종 선택된 상기 5항 기재의 항균제
8. 창상치료제는 알란토인, 글리틸리틴산디칼륨, 감초엑기스, 쑥엑기스로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 5항 기재 항균제
9. 방부제는 안식향산나트륨, 파라히드록시안식향산저급알킬에스테르, 프로피온산나트륨, 혼합지방산에스테르, 페녹시에탄올, 1,2-펜탄디올 및 황색색소로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 5항 기재의 항균제
10. 오렌지오일, 레몬오일, 등피 및 향료로 이루어진 군에서 적어도 선택된 1종의 성분을 함유하는 상기 5항 기재의 항균제
11.조릿대엑기스, 물, 유성성분, 크림화제, 안정화제, 보습제, 창상치료제, 방부제 및 계면활성제를 함유하는 항균제에 있어서, 유성성분이 스콸렌, 우지, 돈지, 마유(馬油), 라놀린, 밀납, 올리브유, 그레이프씨드유, 팜유, 호호버유, 배아유, 유동파라핀, 옥틸팔미테이트, 이소프로필 팔미테이트, 옥틸도데실미리스테이트, 실리콘유, 스테아린산, 스테아릴알콜, 베헤닌산, 세타놀 및 바세린으로 구성된 군에서 적어도 1종이며, 크림화제는 모노스테아린산글리세린과 자기유화형 모노스테아린산글리세린과의 배합이며, 안정화제는 카르복시비닐폴리머와 수산화칼륨의 배합 및 디스테아린산폴리에틸렌글리콜로 이루어진 군에서 적어도 선택된 1종이며, 보습제가 히알론산나트륨, 콜라겐, 알로에엑기스, 요소, 1, 3-부틸렌글리콜, 글리세린, 트레하로스, 솔비톨, 아미노산 및 피로리돈카르본산나트륨으로 구성된 군에서 적어도선택된 1종이며, 창상치료제는 알란토인, 글리틸리틴산디칼륨, 감초엑기스, 쑥엑기스로 이루어진 군에서 적어도 선택된 1종이며, 방부제는 안식향산나트륨, 파라히드록시안식향산저급알킬에스테르, 프로피온산나트륨, 혼합지방산에스테르, 페녹시탈 및 황색색소로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1종이며, 계면활성제가 N-아실-L-글루타민산나트륨인 상기 1항 기재 항균제
12. 또한 오렌지오일, 레몬오일, 등피유 및 향료로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 성분을 함유하는 상기 11항 기재의 항균제
13. 조릿대엑기스, 물, 스콸렌, 올리브유, 모노스테아린산글리세린, 자기유화형 모노스테아린산글리세린, 카르복실비닐폴리머, 수산화칼륨, 요소, 1, 3-부틸렌글리콜, 알란토인, 파라히드록시안식향산저급알킬에스테르, 스테아린산, N-아실-L-글루타민산나트륨, 레몬오일을 함유하는 상기 1항 기재의 항균제
14. 조릿대엑기스, 물, 스콸렌, 올리브유, 옥틸도데실미리스테이트, 세타놀, 모노스테아린산글리세린, 자기유화형 모노스테아린산글리세린, 카르복실비닐폴리머, 수산화칼륨, 요소, 1, 3-부틸렌글리콜, 알란토인, 혼합지방산에스테르, 스테아린산, N-아실-L-글루타민산나트륨, 오렌지오일을 함유하는 상기 1항 기재의 항균제
15. 세스키스테아린산폴리에틸렌글리콜을 함유하는 1 ∼ 14항 기재의 항균제
16. 유기산이, 사과산, 구연산, 유산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 초산, 안식향산, 페닐초산, 사리틸산, 페놀류로 이루어진 군에서 적어도 1종 선택된 상기 1 ∼ 15항 기재 항균제
본 발명은 또한, 조릿대엑기스 및 유기산을 함유하는 항균성 조성물을 제공한다. 본 발명의 항균성 조성물로서 바람직한 형태는 잉크, 도료, 식품첨가물, 음료, 애완동물용푸드, 플라스틱성형품 및 접착제를 들수 있다.
이들 항균성조성물의 소재로서, 식품첨가물, 향료(청량음료수, 과일쥬스, 야채쥬스, 주류(일본술, 맥주, 발포주, 위스키, 소주, 워커, 와인, 브랜디 등)) 등의 수성소재를 사용하는 경우, 이들 소재에 조릿대엑기스 및 유기산을 첨가, 혼합하면 된다. 첨가시기는 소재의 제조전, 제조중, 제조후 어떤 단계에서도 상관없다. 조릿대엑기스 및 유기산을 첨가한 후, 70 ∼ 90 ℃에서 1 ∼ 2시간 교반혼합처리하므로써, 항균성을 더욱 향상시킬 수 있다. 식품첨가물, 음료등의 항균성 조성물 중의 조릿대엑기스의 함유량은, 바람직하게는 0.1 ∼ 20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.25 ∼ 7 중량%이다.
또한 이들 항균성조성물의 소재로서, 잉크, 도료, 플라스틱성형품, 접착제등을 사용하는 경우, 이들 소재가 친수성인 경우에는 상술한바와 같이 소재에 조릿대엑기스 및 유기산을 첨가, 혼합하면된다. 첨가시기는 소재의 제조전, 제조중, 제조후 어떤 단계에도 상관없다. 한편, 이들 소재가 소수성(친유성)인 경우에는 조릿대엑기스 및 유기산이 혼화되기 어려운 경우가 많다. 이때, 조릿대엑기스 또는 조릿대엑기스와 유기산의 혼합물을 계면활성제(유화제) 또는 친수성 유기용제 (예를들어, 메틸알콜, 에틸알콜등의 알콜, 아세톤등의 케톤, 초산에틸 등의 에스테르, 피리딘, 디메틸포름아미드 등)을 병용하여 소재와의 혼화성을 개선하거나, 조릿대엑기스 또는 조릿대엑기스와 유기산의 혼합물을 미리 친유성 재료를 사용하여 마이크로캅셀화 해두는 등의 수단을 강구하여, 소재와의 혼화성을 개성하는 것이 바람직하다. 조릿대엑기스 및 유기산을 첨가한 후에는, 70 ∼ 90 ℃에서 1 ∼ 2시간 교반혼합처리하므로써, 항균성을 더욱 향상시킬 수 있다.
소재로서, 잉크, 도료, 플라스틱성형품, 접착제등을 사용한 본 발명의 항균성 조성물중의 조릿대엑기스의 함유량은 바람직하게는 1 ∼ 20 중량%, 더욱 바람직하게는 3 ∼ 7 중량%이며, 유기산의 함유량은 바람직하게는 0.1 ∼ 10 중량%, 더욱바람직하게는 3 ∼ 7 중량%이다.
특히 바람직한 유기산은 사과산, 숙실산 등이다.
본 발명의 항균성조성물은 본 발명의 항균제를 함유하지 않는 것과 비교하여 현저한 항균성을 나타내며, 잉크 및 도료는 항균성건축자재로서, 일반가정은 물론, 원내감염의 위험이 있는 병원 및 공공건축물 자재로서 매우 유용하다.
다음에는, 참고예, 실시예, 시험예로 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
참고예 1: 조릿대엑기스 제조
북해도 테시오산(天鹽山)에서 9월에 채집한 조릿대의 건조엽을 가압열수추출탱크에 넣어 125 ℃에서 10 분 처리하고, 냉각수로 열수를 80 ℃정도까지 냉각하고, 엑기스와 함수고형분을 스크류프레스로 분리하고, 함수율을 약 50 중량%로 하였다. 약 50 중량% 함수고형분을 오토크레이브에 넣어 180 ℃에서 10분, 포화수중기로 가압열처리를 실시하였다. 처리한 함수고형분을 재차 가압열수추출탱크에 넣어 110 ℃에서 5 분간 처리하고 엑기스를 추출시켰다. 제1차, 제2차 추출엑기스를 혼합하여, 규조토 여과하고, 고형분 50 중량%가 될 때까지 감압농축하고, 110 ~ 130 ℃의 유동살균처리하여 조릿대엑기스를 얻었다.
조릿대엑기스 중의 유황함유량은 3850 ㎍/㎖ (7.7 ㎎/고형분 1g)이었다.
참고예 2
조릿대엑기스 (Bambuseae Sasa) (㈜鳳凰堂 제조)의 성분을 분석한 결과 하기의 결과를 얻었다.
물 59.5 중량%
단백질 8.6 중량%
지질 0.6 중량%
미네랄 9.0 중량%
탄수화물 19.8 중량%
탄닌 2.5 중량%
실시예 1 ∼ 4
하기 표 2와 같이 혼합하고, 교반날개와 유화기를 구비한 가열혼합가마에 투입하고, 80 ℃에서 2시간 교반혼합하고, 본 발명의 항균제를 얻었다. 고형분농도 8 중량%의 조릿대엑기스 (참고예 1에서 제조한 고형분 50 중량%의 조릿대 엑기스를물로 희석한 것)의 첨가량은 실시예 1 ~ 4 에서 각각 12.5, 25, 37.5 및 75 중량% (따라서 조릿대 고형분의 함유량은 1, 2, 3 및 6 중량%, 유황함유량은 항균제 100 g 중 7.7 ㎎, 15.4 ㎎, 23.1 ㎎ 및 46.2 ㎎이다)
[표 2]
성 분 | 중량% |
스콸렌 | 5.0 |
올리브유 | 6.0 |
레몬오일 | 1.0 |
스테아린산 | 4.0 |
모노스테아린산글리세린 | 0.8 |
카르복실비닐폴리머(카보포르940) | 0.2 |
모노스테아린산글리세린(자기유화형) | 1.0 |
N-아실-L-글루타민산나트륨 | 0.2 |
1.3-부틸렌글리콜 | 1.0 |
요소 | 10.0 |
알란토인 | 0.1 |
파라옥시안식향산메틸 | 0.1 |
파라옥시안식향산프로필 | 0.1 |
조릿대엑기스(고형분8중량%) | 소정량 |
수산화칼륨 | 0.02 |
이온교환수(전체 100중량%가 되도록 조정) |
비교예 1
실시예1에서, 고형분농도 8 중량%의 조릿대엑기스 (참고예1에서 제조한 고형분 50 중량%의 조릿대 엑기스를 물로 희석한 것)의 첨가량을 6.2 중량% (따라서 조릿대 고형분의 함유량은 0.5 중량%, 유황함유량은 항균제 100 g 중 3.8 ㎎이다)으로 하고, 다른 것은 동일하게 하여, 비교예 1의 항균제를 얻었다.
실시예 5
하기 표 3와 같이 혼합하여, 실시예 1 ~ 4와 동일하게 처리하고, 본 발명의 항균제를 얻었다.
[표 3]
성 분 | 중량% |
스콸렌 | 1.0 |
올리브유 | 4.0 |
오렌지오일 | 1.0 |
밀리스틴산옥틸드데씰 | 6.0 |
스테아린산 | 4.0 |
세타놀 | 2.0 |
디스테아린산폴리에틸렌글리콜 | 0.5 |
모노스테아린산글리세린 | 1.0 |
카르복실비닐폴리머(카보포르940) | 0.2 |
모노스테아린산글리세린(자기유화형) | 1.4 |
N-아실-L-글루타민산나트륨 | 0.2 |
1.3-부틸렌글리콜 | 1.0 |
요소 | 3.0 |
알란토인 | 0.1 |
혼합지방산에스테르(니코가드 DL) | 0.5 |
조릿대엑기스(고형분8중량%) | 75.0 |
수산화칼륨 | 0.05 |
이온교환수(전체 100중량%가 되도록 조정) | 0.05 |
항균제 100 g 중 유황함유량은 46.2㎎이다.
실시예 6
하기 표 4와 같이 혼합하고, 교반날개와 유화기를 구비한 가열혼합가마에 투입하여 80 ℃에서 2시간 교반혼합하고, 본 발명의 항균제를 얻었다.
[표 4]
성분 | 중량% |
유동파라핀 | 10.0 |
스콸렌 | 1.0 |
올리브유 | 1.0 |
오렌지오일 | 1.0 |
옥틸도데실미리스테이트 | 6.0 |
1,2- 펜탄디올 | 0.5 |
페녹시에탄올 | 0.5 |
세타놀 | 1.5 |
스테아린산 | 4.0 |
모노스테아린산글리세린 | 2.0 |
모노스테아린산글리세린(자기유화형) | 2.5 |
디스테아린산폴리에틸렌글리콜 | 0.5 |
카르복실비닐폴리머 | 0.3 |
N-아실-L-글루타민산나트륨 | 0.2 |
1,3-부틸렌글리콜 | 1.0 |
에탄올 | 3.0 |
트리메틸글리신 | 0.5 |
히알론산나트륨 | 1.0 |
조릿대엑기스(고형분50중량%) | 12.0 |
정제수 | 51.5 |
크림의 pH는 6.00이다.
실시예 7
하기 표 5와 같이 혼합하고, 교반날개와 유화기를 구비한 가열혼합가마에 투입하고, 80 ℃에서 2시간 교반혼합하고, 본 발명의 항균제크림을 얻었다.
[표 5]
성분 | 중량% |
올리브유 | 3.0 |
스콸렌 | 1.0 |
유동파라핀 | 3.0 |
세탄올 | 1.3 |
모노스테아린산글리세린 | 2.0 |
모노스테아린산글리세린(자기유화형) | 5.0 |
폴리옥시에틴렌(20) 스테아릴에테르 | 1.0 |
폴리옥시에틴렌(20) 세틸에테르 | 1.0 |
모노스테아린산폴리옥시에틸렌(140) | 1.0 |
벤토나이트 | 0.5 |
산탄검 | 0.2 |
글루코노-δ-락톤 | 4.0 |
d 1-사과산 | 1.0 |
트리에탄올아민 | 3.3 |
1,2-펜탄디올 | 0.5 |
페녹시에탄올 | 0.5 |
1,3-부틸렌글리콜 | 2.0 |
조릿대엑기스(고형분50중량%) | 12.0 |
정제수 | 57.7 |
이 크림의 pH는 4.68이다.
실시예 8 ∼ 10
실시예 7에 d1-사과산을 첨가하지 않고, 조릿대엑기스 (고형분함유량 50 중량%)의 양을 16 중량%, 20 중량% 및 30 중량%로 하고, 정제수의 양을 조정하고, 다른 것은 동일하게 하여, 조릿대엑기스 고형분 함유량이 8 중량%, 10 중량% 및 15 중량%의 본 발명의 항균제크림을 얻었다.
실시예 11 ∼ 13
실시에 7에서 조릿대 엑기스 (고형분함유량 50 중량%)의 양을 16 중량%, 20 중량% 및 30 중량%로 하고, 정제수의 양을 조정하고, 다른 것은 동일하게 하여, 조릿대엑기스 고형분 함유량이 8 중량%, 10 중량% 및 15 중량%의 본 발명의 항균제크림을 얻었다.
시험예 1 (파상풍균에 대한 항균활성)
파상풍균(Clostridium tetani)의 26주를 사용하였다. 이들 균주는 일본토양에서 분리한 것이다. 대조군으로 대장균(Escherichia coli) ATCC25922와 포도상구균(Staphylococcus aureus) ATCC25923도 사용하였다. 참고예1에서 제조한 조릿대엑기스(조릿대엑기스 고형분 함유량 50중량%)를 멸균증류수로 희석하여 조릿대엑기스수용액을 얻었다.
각각의 농도의 조릿대엑기스수용액에 대하여 한천평판희석법에 따라 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78, 0.39, 0.19, 0.10중량%가 되도록 변법GAM한천평판(일수제약)을 만들었다. 조릿대엑기스 수용액과 2배한천배지를 1:1로 혼합하고, 소정의 농도의 조릿대엑기스 함유 한천배지를 만들었다. 파상풍균의 도주방지를 위해 한천농도는 3%로 보정하였다. 한천을 3%로 조정한 변법 GAM한천배지에서 24시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락(集落)을 백금이(白金耳)로 취하여 Anaerobe broth(Difco)에 부유시켜, Mc Farland No. 1의 탁도(濁度)로 조정하였다. 그 1㎕(접종량: 105cfu)를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다. 대조균주는 혈액한천배지상의 집락을 사용하여 Anacrobe broth(Difco)중에 Mc Farland No. 0.5의 탁도로 조정하고, 그11㎕(접종량: 105cfu)를 화선도말법에 의해 접종하였다. 또한 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 18시간 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
이러한 방법에 따라 측정한 조릿대엑기스의 대장균 ATCC25922와 포도상구균ATCC25923에 대한 최소발육저지농도는 모두 3.13중량%였다.
파상풍균 26주의 최소발육저지농도는 0.78 중량% ~ 0.19 중량%에 분포하였다. 결과를 표 6에 나타냈다. 파상풍균사용균주의 80% 또는 50%의 주(株)의 발육을 저지하는 조릿대엑기스농도(MIC80% 및 MIC50%)는 각각 0.78% 및 0.39%였다.
[표 6]
최소발육저지농도(%) | 균주수 |
12.5 | 0 |
6.25 | 0 |
3.15 | 0 |
1.56 | 0 |
0.78 | 11 |
0.39 | 14 |
0.19 | 1 |
0.10 | 0 |
합계 | 26 |
파상풍은 토양중에 존재하는 파상풍균의 아포가 토양과 함께 상처부위에 침입하여 발증하는 질환이다. 발증에는 아포가 국소에 발아하고, 증식하고, 독소(테타노스파스민)을 발생시키는 것이 필요불가결하다. 오염된 창상부위는 아포의 발아에 혐기적 환경이 되기 쉽기 때문에 파상품의 발증을 예방하기 위한 기본은 데브리도만이라고 불리는 침입한 이물질 및 괴사조직의 제거 등의 적절한 외과적 조치가 이루어져, 창상부위가 혐기성 환경이 되는 것을 저지하고, 파상풍균의 증식을방지하는 것이다.
표 6에 기재한 바와 같이, 조릿대엑기스는 파상풍균 26주 모두 0.78% 저농도에서 안전하게 증식을 억제하였다. 조릿대엑기스의 항균활성은 대장균, 포도상구균에 대한 항균활성의 4배 이상인 것이 확인되었다.
균의 발육이 조릿대엑기스를 함유하지 않는 배지에서의 발육과 차이가 없는 농도(0.19%)에서 얻은 파상풍균의 단염색 현미경관찰에서 균체의 필라멘트화와 균체가 부풀어 용균한 형상이 관찰되었다. 또한 균의 발육이 조릿대엑기스를 함유하지 않는 배지에서의 발육보다 현저하게 억제된 농도(0.38%)에서는 발색성이 나쁜 균체가 확인되었으며, 또한 아포를 갖는 균체를 용이하게 확인할 수 있었다. 포도상구균에서 간격형성이 저해되어있는 것을 시사하는 소견이 전자현미경에서 이미 관찰되었다. 최소발육저지농도이하의 농도에서 관찰된 필라멘트화는 분열시의 毛句로 기혈성이 저해된 경우에 보여지는 소견인 것이 항생물질의 연구에서 알려져 있다.
파상풍과 유사 발증기전을 갖는 외상과 관련하는 질환인 가스괴저를 일으키는 몇가지 혐기성균, 즉 Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium bifermentans 등의 가스괴저균군에 대한 조릿대엑기스의 항균활성 및 화농성감염증을 일으키는 무아포혐기성균에 대한 항균활성도 기대된다.
시험예 2(칸디다균에 대한 항균활성)
실시예 8 ∼ 13에서 제조된 조릿대엑기스 및 조릿대엑기스, 사과산을 함유하는 크림조성물의 칸디다균(Candida albicans임상분리주)에 대한 항균활성을 살펴보았다.
사용배지
· NB배지: 육엑기스 0.2%를 첨가한 보통 부용 (영연화학)
· 1/50NB배지: NB배지를 인산완충액으로 50배 희석하고 pH7.2 ± 0.2로 조정한 것
· SCDLP부용(영연화학)
· SA배지: 표준한천배지 (일수제약)
균액조정
시험 실시 1일전 순배양한 신선 배양균을 1/50NB 배지에 Mc Farland(맷팔랜드) 0.5, 약 108개/㎖로 현탁하고, 1/50NB 배지에서 균액을 100배(약106개/㎖)로 희석한다.
크림조성물을 60 ℃에서 10분간 가열하고 크림조성물을 융해한다. 융해한 크림조성물 1㎖를 아크릴판(50㎜×50㎜)상에 적하하고, 10분간 실온에서 방치하고 굳힌다. 균액 0.5㎖를 크림조성물 도포면에 적하하고, 그 위에 아크릴판 (45㎜×45㎜)를 밀착시킨다. 이를 고온도하에서 36 ℃ 24시간 배양한다.
멸균샬레에 10㎖의 SCDLP부용을 넣고, 24시간 배양후 아크릴판을 이동하고, 아크릴판을 부용으로 씻어 흘러보낸다. 100 ㎕를 취하여 SA배지상에 적하하고, 균일하게 넓게 펴바르고, 48시간 배양 후, 균수를 측정하고, 아크릴판 1장당 균수로 환산한다. 결과를 표 7에 나타낸다.
[표 7]
시험No. | 크림 | 조릿대엑기스 | 사과산 | 접종직후 | 24시간후 |
1 | - | - | - | 1.7×104 | 9.6×106 |
2 | 대조 | - | - | 8.5×105 | |
3 | 실시예8 | 8% | - | 2.3×105 | |
4 | 실시예9 | 10% | - | 1.8×105 | |
5 | 실시예10 | 15% | - | - | |
6 | 실시예11 | 8% | 1% | 2.4×105 | |
7 | 실시예12 | 10% | 1% | 1.0×103 | |
8 | 실시예13 | 15% | 1% | 2.0×102 |
대조: 실시예7에서 d1-사과산과 조릿대엑기스를 첨가하지 않은 것.
조릿대엑기스를 함유하나 사과산을 함유하지 않는 크림조성물 (시험No. 3~5)는 칸디다균에 대하여 항균활성을 거의 나타내지 않는 데 비해, 조릿대엑기스 및 사과산을 함유하는 크림조성물 (시험No. 6~8)은 특히 조릿대 농도 10중량% 이상에서 높은 항균활성을 나타냈다.
시험예 3(헤르페스바이러스에 대한 치료효과)
실시예 7에서 제조한 크림조성물(조릿대엑기스 고형분 함유량 6중량%)를 헤르페스바이러스감염환자(60세, 여)의 환부(口角)에 1일 2회 적정량 도포한 결과, 2일만에 증상이 현저하게 완화하여, 3일만에 완치하였다.
시험예 4(여드름환자의 병소유래균주의 분석)
여드름환자의 병소로부터 하기 황색포도상구균 44주(株)와 프로피오니박테리움아크네스속균 26주를 분리하였다.
[표 8]
Staphylococcus epidermidis | 34 |
Staphylococcus homminis | 1 |
Staphylococcus capitis | 1 |
Staphylococcus haemolyticus | 2 |
Staphylococcus aureus | 2 |
Staphylococcus cohnii | 1 |
Others | 3 |
Propionibacterium acnes | 26 |
상기 44주의 황색포도상구균의 항생물질 감수성은 이하와 같다.
(㎍/㎖)
[표 9]
항생물질 | MIC Range | MIC 50 | MIC 90 |
OFLX | 0.19~>100 | 0.39 | 0.78 |
NDFX | 0.025~25 | 0.05 | 0.78 |
TC | 0.19~>100 | 0.39 | 25 |
MINO | 0.10~50 | 0.10 | 0.10 |
CLDM | 0.025~>100 | 0.10 | >100 |
상기 26주의 프로피오니박테리움아크네스속균의 항생물질감수성은 이하와 같다 (㎍/㎖)
[표 10]
항생물질 | MIC Range | MIC 50 | MIC 90 |
OFLX | 0.39~0.78 | 0.39 | 0.39 |
NDFX | 0.10~0.39 | 0.19 | 0.19 |
TC | 0.19~1.56 | 0.19 | 0.19 |
MINO | 0.05~0.39 | 0.05 | 0.39 |
CLDM | 0.025~0.78 | 0.10 | 0.19 |
시험예 5 (참고예 2의 조릿대엑기스의 항균성)
참고예 2의 조릿대엑기스(조릿대탄닌)과 시판 탄닌(Lot. 02060618, Extrasynthese, Geney, France)의 항균성 (MIC (㎎/㎖): 최소생육저지농도)를 한천배지상, 2배희석법에 따라 측정하여, 결과를 이하에 나타냈다.
[표 11]
균 | 조릿대엑기스 MIC(㎎/㎖) | 탄닌: MIC(㎎/㎖) |
S. aureus ATCC25923 | 0.8~1.6(0.05~0.1) | 0.02~0.04 |
P. acnes PA-1 | 6.4(0.4) | 0.08 |
E.coli ATCC25922 | 1.6~3.2(0.1~0.2) | >0.63 |
()내 수치는 조릿대탄닌의 MIC수치
시험예 6 (참고예2의 조릿대엑기스의 항균성)
시험예 4의 여드름환자의 병소유래균주의 포도상구균속 세균 44주(혼합물)과 프로피오니박테리움아크네스균 26주(혼합물)을 이용하여 참고예 2의 조릿대엑기스(조릿대탄닌)과 시판탄닌(Lot. 02060618, Extrasynthese, Geney, France)의 항균성(MIC (㎎/㎖): 최소생육저지농도)를 한천배지상, 2배희석법에 따라 측정하여, 결과를 이하에 표시하였다. 포도상구균속의 균은 MH한천(Mueller Hinton Agar(BBL))배지, pH 7.0, 공기중, 37 ℃ 24시간동안, 프로피오니박테리움아크네스균은 GAM배지, pH 7.0, 혐기중, 35 ℃ 48시간동안, 배양하였다. 또한, 시판탄닌의 MIC80은 포도상구균속군에 대하여 0.04 ㎎/㎖이며, 프로피오니박테리움아크네스균에 대하여 0.08 ㎎/㎖이었다.
[표 12]
균 | 조릿대엑기스 | 시판탄닌 | ||
MIC Range | MIC50 | MIC80 | MIC80 | |
포도상구균군(44주) | 0.1~1.6 | 0.4 | 0.8 | 0.04 |
프로피오니박테리움아크네스균(26주) | 3.2~6.4 | 6.4 | 6.4 | 0.08 |
실시예 14
수성잉크 100 질량부에 참고예 1에서 제조한 조릿대엑기스 6 질량부 및 d1-사과산 10질량부를 첨가하고, 80 ℃에서 2시간 혼합 가열처리하고, 항균성잉크를 얻었다.
실시예 15
수성도료 100 질량부에 참고예 1에서 제조한 조릿대엑기스 6 질량부 및 d1-사과산 10 질량부를 첨가하고, 80 ℃에서 2시간 혼합 가열처리하고, 항균성 도료를 얻었다.
실시예 16
일본술 100 질량부에 참고예 1에서 제조한 조릿대엑기스 3 질량부 및 d1-사과산 0.25 질량부를 첨가하고, 80 ℃에서 3시간 혼합 가열처리하고, 항균성 일본술을 얻었다.
실시예 17
수성접착제 100 질량부에 참고예 1에서 제조한 조릿대엑기스 6 질량부 및 d1-사과산 10 질량부를 첨가하고, 80 ℃에서 2시간 혼합 가열처리하고, 항균성 접착제를 얻었다.
시험예 7 (가스괴저균군 Clostridium perfringens 10주에 대한 항균작용)
사용균주 : C. perfringens ATCC13124 1주와 임상분리 C. perfringens 9주(GAI-92099, GAI-92100, GAI-92101, GAI-92102, GAI-92103, GAI-92104, GAI-92105, GAI-92106, GAI-92107), 합계10주를 사용하였다. 이들의 임상분리주는 감염환자유래 임상재료에서 분리되어, 기후(岐阜)대학의학부 부속혐기성균실험시설(이하 「당시설」로 칭한다)에 보관되어 있던 균주이다. 또한, 항균력평가 정도(精度)관리용균주로서 E. coli ATC25922를 사용하였다.
조릿대엑기스 용액의 고형분농도는 50%로, 수용성 단백·아미노산, 미네랄, 탄닌, 당질, 수용성다당체, 카르본산, 총크로로필, 규산, 비타민, 지질, 정유, 수분으로 구성된다. 원액 pH는 약 5.0이다. 용액의 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 준하여 최소발육저지농도를 %로 측정하였다. 최종농도가 25%에서 0.2%가 되도록 조릿대엑기스의 2배희석수용액의 계열을 만들었다. 조릿대엑기스 희석액과 변법GAM한천배지(2배)를 1:1로 혼합하여, 최종적으로 12.5 ∼0.1%ml 농도의 조릿대엑기스 함유 변법GAM한천배지를 제조하였다. 변법GAM한천배지에서 24시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균 면봉으로 긁어모아, Anaerobe broth(Difco)에 부유시켜, Mc Farland No 1의 탁도의 균액을 조정하였다. 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법(畵線塗抹法)에 의해 접종하였다. 대조균주 E.coli에 대해서는 TSA한천배지(Difco)상의 집락을 이용하여, Anaerobe broth중에 Mc Farland No. 0.5의 탁도로 조정하고, 그 10 ㎕(접종량: 105cfu)를 화선도말법에 의해 접종하였다. 또한, 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 18시간 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다. 본 방법에 따라 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATC25922에 대한 최소발육저지농도는 3.13%였다.
결과
C. perfingens 10주의 발육을 저지하는데 필요한 조릿대엑기스 최소농도(MIC)는 3.13 ∼ 6.25%에 분포하였다. C. perfringens사용균주의 80%, 또는 50%의 주의 발육을 저지하는 조릿대엑기스 농도는 6.25%였다.
[표 13]
조릿대엑기스 Clostridium perfrigens 10주에 대한 항균작용
최소발육저지조릿대엑기스농도(%) | 균주수 |
12.56.253.131.560.780.390.190.10 | 08200000 |
합계 | 10 |
고찰
가스괴저는 토양중에 존재하는 가스괴저균주인 1군의 Clostridium spp.의 아포가 토양과 함께 상처부위에 침입하여 발증하는 질환이다. C. perfringens, Clostridium septicum, Clostridium bifermentans등이 원인균으로 알려져있으며, 가스괴저의 증례의 80%는 C. perfringens에 의한 것이다. 가스괴저는 구급외과에서 적절한 치료에 의해 충분히 예방할 수 있는 질환이나, 외과적 처치가 늦어지는 상황이 되는 경우, 또는, 외과적 조치가 충분히 적절하게 이루어지지 않는 경우에는, 상처가 난 후 6시간 이후에 발증, 급격한 경과를 거쳐, 치사적으로 되는 것이 알려져있다. 또한, 생명을 구하기 위해서는 사지 등 환부를 절단할 수 밖에 없는 경우가 있어, 의료상 경시할 수 없는 질환의 하나이다.
금회 시험관내에서 검토한 실험성적에 따르면, 조릿대엑기스의 C. perfringens에 대한 항균작용은, 시험예1에서 검토한 C. tetani에 대한 작용에는 못미치나, C. perfringens 10주의 증식을 3.13% 이상 ∼ 6.25% 이하의 농도에서 완전히 억제하는 것이 밝혀졌다. 따라서, 이정도의 농도의 조릿대엑기스를 함침시킨 환부보호포등은 C. perfringens의 최소발육저지농도를 상회하고 있으며, 상처후 외과의의 적절한 치료를 받기까지의 응급조치로서 인체에 사용한 경우, 상처부위에서의 C. perfringens의 발아 및 발아후 증식을 억제하는 효과가 있는 것으로 말할 수 있다.
시험예 8 (Clostridium perfringens이외 가스 괴저균군에 대한 항균작용)
사용균주: 감영증환자유래 임상재료로부터 분리된, 또는 당시설에서 보존하고 있는 참고균주를 사용하였다. 또한, 항균력평가의 정도관리용 균주로서, E.coli ATC25922, S.aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 같다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 준하여 최소발육저지농도를 %로 측정하였다. 최종농도가 8%에서 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유하는 변법GAM한천배지를 제조하였다. 배지 pH를 7.0으로 조정하였다. 변법GAM한천배지에서 24시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어모아, Anaerobe broth(Difco)에 부유시켜, Mc Farland No 1의 탁도의 균액을 조정하였다. 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 대조균주 E. coli S. aureus에 대해서는 TSA한천배지 (Difco)상의 집락을 이용하여, Anaerobe broth중에 Mc Farland No. 0.5의 탁도로 조정하고, 그 10 ㎕(접종량: 105cfu)를 화선도말법에 의해 접종하였다. 또한 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35℃ 18시간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)으로 판정하였다. 결과를 표 14에 나타냈다.
[표 14]
조릿대엑기스의 가스괴저균군 Clostridium spp. 에 대한 항균작용
% | C. bi-fermentans | C. sordellii | C. novyiType A | C. sporogenes | C. septicum | 합계 |
8 | ||||||
7 | 1 | 2 | 3 | |||
6 | 1 | 1 | ||||
5 | 2 | 1 | 3 | |||
4 | 4 | 4 | ||||
3 | 2 | 6 | 8 | |||
2 | 1 | 1 | ||||
1 | 3 | 4 | 1 | 8 | ||
0.5 | 1 | 1 | ||||
0.25 | ||||||
0.125 | ||||||
합계 | 3 | 3 | 4 | 7 | 12 | 29 |
고찰
조릿대엑기스는 C. novyi와 C. sporogenes의 발육을 3%의 농도에서, C. septicum의 발육을 3~5%의 농도에서, 또한, C. bifermentans, C. sordellii의 발육을 5~7%의 농도에서 억제하는 것이 확인되었다. 즉, 가스괴저에 관계하는 Clostridium spp.에 대한 조릿대엑기스의 항균작용은 균종에 의해 차이가 있으나, 7%의 농도이면 사용한 전체균주의 증식을 억제할 수 있다는 것이 밝혀졌다. 상처부위에 본 엑기스를 가스괴저의 예방을 의도하여 사용할 경우에는 pH7의 조건하에서 7%의 농도로 설정하는 것이 바람직하다.
시험예 9 (Propionibacterium acnes 16주에 대한 항균작용)
사용균주: P. acnes ATCC11827과 P. acnes임상분리주 15주(GAI-10341, GAI-10342, GAI-10343, GAI-10344, GAI-10345, GAI-10346, GAI-10347, GAI-10348, GAI-10349, GAI-10350, GAI-10351, GAI-10352, GAI-10353, GAI-10354, GAI-10355), 합계 16주를 사용하였다. 이들 임상분리주는 피부과 감염증 환자로부터 분리하여, 당시설에 보존되어 있던 균주이다. 시험액은 시험예 7와 같다. 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 12. 5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 제작하였다. 조릿대엑기스액과 2배한천배지를 1:1로 혼합하고,소정의 농도의 조릿대엑기스 함유한 한천배지를 제조하였다. pH의 조정은 실시하지 않았다.
부르셀라HK반유동배지(극동제약)에서 48시간배양하여 얻은 피험균주의 농후발육부위로부터 취한 1백금이를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 본 실험조건하에서는 1백금이에 108/㎖의 세균수를 포함한다. 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 2일간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
결과.
P. acnes 16주의 발육을 완전히 저지하는데 필요한 조릿대엑기스의 최소농도 (MIC)는 6.25%였다(표 15). 조릿대엑기스는 P. acnes의 16주 중 12주에 대하여 3.13%에서 조릿대엑기스 불함유 대조배지와 비교하여 현저하게 발육을 억제시켰으나, 완전한 저지에는 6.25%가 필요하였다.
[표 15]
조릿대엑기스의 Propionibacterium acnes 16균주에 대한 항균작용
최소발육저지 조릿대엑기스 농도(%) | 균주수 |
12.56.253.131.560.78 | 016000 |
합계 | 16 |
고찰
Acne vulgaris에 관여하는 S. aureus의 저지에 필요한 조릿대엑기스의 농도는 3.13%이였으나, 시험예의 검토로, P. acnes의 전체균주를 완전하게 저지하는데필요한 조릿대엑기스 농도는 3.13% 이상에서 6.25% 이하의 범위의 농도였다. P. acnes는 S. aureus와 함께 중요한 Acne vulgaris의 증악인자이므로, Acne vulgaris치료를 목적으로 하는 경우에는, P. acnes의 발육을 완전하게 저지할 수 있는 6.25%정도가 적당한 것으로 생각된다.
조릿대엑기스의 이러한 항균작용의 기작에 대해서는 현시점에서는 불명확하나, 그 유래가 식물인 조릿대엑기스는 이제까지 방선균유래 및 진균유래의 각종 항균약과는 다른 작용기작을 가지고 있을 가능성이 있으며, 내성발현의 관점에서도 매우 흥미롭다.
시험예 10 (여드름유래 Propionibacterium acnes 26주에 대한 항균작용)
사용균주 : P. acnes임상분리주, 합계26주를 사용하였다. 이들 임상분리주는 여드름환자로부터 분리되어 당시설에 보존되어 있던 균주이다. 시험액은 시험예7과 동일하며, 농도는 50%의 산성(pH5.0전후) 용액이다. 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험 : 항균약의 항균력측정법에 사용된 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법 GAM한천평판(일수제약)을 제작하였다. pH는 7.0부근으로 조정하였다. GAM한천배지에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 Anaerobe Broth로 현탁하고, 소정의 균수를 포함하는 균액을 조정하였다. 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 2일간 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다.
결과와 고찰
동시에 이루어진 실험성적은 아니지만, 각종 항균약에 대한 감수성의 분포를 참고로 나타냈다. 금회실험은 pH무조정으로 실시한 전회 실험과 달리, 종말점의 판정이 곤란하였다.
[표 16]
P. acnes (26주)의 조릿대엑기스 및 각종항균약에 대한 감수성
Drug | MIC50(㎍/㎖) | MIC80(㎍/㎖) | MIC Range(㎍/㎖) |
Nadifloxacin | 0.19 | 0.19 | 0.39~0.10 |
Ofloxacin | 0.39 | 0.39 | 0.78~0.39 |
Minocycline | 0.05 | 0.10 | 0.39~0.05 |
Tetracycline | 0.19 | 0.19 | 1.56~0.19 |
Clindamycin | 0.10 | 0.19 | 0.78~0.025 |
Extract | MIC50(㎍/㎖) | MIC80(㎍/㎖) | MIC Range(%) |
조릿대엑기스 | 6% | 6% | 8~3% |
시험예 11(조릿대엑기스의 Lactobacillus spp. 에 대한 항균작용)
사용균주: 표17에 나타낸 시설에서 보존중인 참고균주를 사용하였다. 이들 균주는 ATCC, JCM에서 구입하고, 당시설에서 보존하고 있던 균주이다. 또한 대조로서, 세균성 질증인 여성의 질내, 산부인과 영역감염증으로부터 비교적 고빈도로 분비되는 대표적 균종 중에서 Prevotella bivia ATCC29303, Porphyromonas asaccharolytica ATCC25260, Bacteroides fragilis N-1, N-2를 선택하였다. 또한 Escherichia coli ATC25922과 Staphylococcus aureus ATCC25923도, 동일한 목적과 감수성 측정의 정도관리용 균주로서 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 동일하다.
또한 조릿대엑기스 원액을 멸균증류수로 희석하고, 잠시 방치하면, 녹갈색의침전물이 생기는 경우가 있으나, 배지와의 혼합시 잘 교반혼합하여 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도(MIC)를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4,3, 2, 1, 0.5%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 제작하였다. 10%~6%까지의 고농도영역에 대해서는 각각 20%~12%의 조릿대엑기스액과 2배한천배지를 1:1로 혼합하여 제작하고(최종pH5.3~5.5), 5%~0.5%까지의 저농도 영역에 대해서는, 50%~5%의 조릿대엑기스액과 1배한천배지를 1:9로 혼합하여 (최종pH5.5~6.0), 조릿대엑기스 함유한천배지를 제조하였다.
또한, 금회 항균력의 검토는 산성(pH 5.3~6.0)조건하에 추가하여, 보다 약산성~환경하에서도 실시하였다. 조릿대엑기스 첨가후의 pH를 2N의 NaOH수로 pH 6.5~7.0로 조정한 배지를 제조하였다.
접종균액의 조정:
Brucella HK혈액한천배지에서 48시간배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어모아, Anaerobe broth MIC(Difco)에 부유시켜, Mc Farland No 1의 탁도로 조정하였다. 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를 조릿대엑기스 함유평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다. 대조균주에 대해서도 TSA한천배지상의 집락을 이용하여, Abaerobe broth MIC중에 Mc Farland #1의 탁도로 조정하고, 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를 화선도말법에 따라 접종하였다. 금회, E. coli ATC25922와 S. aureusATCC25923에 대해서는 Mc Farland #1/2, 1/2의 10배 희석액, 1/2의 100배 희석액에 대해서도 동시에 MIC를 측정하고, 접종균량이 MIC에 미치는 영향을 검토하였다.
또한, 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 18시간 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)으로 판정하였다.
결과
pH무조정 산성(pH 5.3~6.0)의 실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스이 최소발육저지농도는 표 17에 나타냈다. Lactobacillus casei ss. casei, Lactobacillus. brevis ss. brevis, Lactobacillus acidophilus, lactobacillus salivarius 의 4균종 4주에 대해서는 7~8%, 그 4균종 4주를 제외한 5균종 5주에 대해서는 10%이상이였다. 또한 동시에 측정한 P. bivia ATCC29303, P. asaccharolytica ATCC25260에 대한 최소발육저지농도는 모두 0.5%이며, 본 방법에 의해 측정한 조릿대엑기스의 정도관리용 균주 2주, E. coli ATC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 최소발육저지농도는 모두 4%였다.
pH조정(pH 6.8~7.1)의 실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 최소발육저지농도도 표 1에 나타냈다.
L. brevis ss. brevis, L. acidophilus의 2균종2주에 대하여 7%, 그 2균종2주를 제외한 7균종 7주에 대해서, >=9%였다. P. bivia에서는 1%, P. asaccharolytica에서는 0.5%였다. 또한 E. coli ATCC25922 및 S. aureus ATCC25923의 MIC는 6%였다.
또한 pH조정하(pH6.4~7.0)에서의 MIC를 구함에 앞서, 접종균량이 MIC에 미치는 영향을 E. coli ATC25922와 S. aureus ATCC25923을 사용하여 검토하였다. 그 결과, S. aureus는 Mc Farland #1~1/2(>108/㎖)의 탁도의 균액의 1백금이량을 사용한 경우, MIC는 6%, Mc Farland #1/2의 10배(107㎖), 100배희석액(106/㎖)의 그것을 사용한 경우에는 MIC는 3%로 읽혀졌다. E. coli는 접종균량의 변화에 따라, subMIC의 영역에서의 균의 발육정도가 단계적으로 악화하기는 했지만, 읽혀진 MIC수치는 변동없이, 모두 6%로 읽혀졌다.
고찰
조릿대엑기스가 6.25%~3.13%이하의 농도에서, 몇가지 병원성세균의 발육을 저지하는 것이 밝혀졌다. 조릿대엑기스의 이들 병원성세균에 대한 항균력 외에 비병원성세균에 대한 항균에 대한 결과를 살펴보는 것도 매우 중요하게 생각되어, 시험예를 실시하였다.
생체방어의 관점에서 Lactobacillus spp.의 대부분은 사람의 점막에서 매우 중요한 역할을 수행하는 것이 알려져 있다. 본 발명자들은 미리 29명의 건강한 임산부의 질에서 Lactobacillus spp. 91주를 분리하고, 이들을 상세하게 동정한 결과, Lactobacillus crispatus가 48주(52.7%)로 가장 많고, Lactobacillus gasseri가 19주(20.8%)로 그 뒤를, 그리고 Lactobacillus vaginalis, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, L. salivarius등이 분리되는 사실을 발견하였다. 그중에서도, L. crispatus는 100%가 과산화수소를 생성하고, 그 생성량도많은 Lactobacillus spp.의 대표적 균종이며, 100%는 아니지만, 과산화수소 생성주가 존재하는 것이 보고되어 있는, L. gasseri 및 L. vaginalis의 2종과 함께, 여성의 질 및 자궁점막내의 감염방어에 있어 특히 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다. 금회 검토에서 조릿대엑기스이 과산화수소생성 Lactobacillus spp.인 L. crispatus와 L. gasseri에 대한 항균작용은, MIC가 10%이상으로, 동시에 실시한 E. coli, S. aureus등의 대표적 병원성 통성균에 대한 MIC 4%와 P. bivia, P. asaccharolytica, B. fragilis등의 대표적인 화농성혐기성균에 대한 MIC 0.5~4%와 비교하여, 매우 약한 것으로 확인되었다.
또한, 조릿대엑기스용액은 질내환경의 pH에 가까운 pH를 나타내고, 알칼리성보다 중성, 중성보다 산성조건하에서 보다 강한 항균작용을 발휘하는 것이 알려져있다. E. coli 및 S. aureus참고균주에 대한 항균력이2관(管)정도 저하하는 pH를 거의 중성부근으로 시프트시킨 약산성의 실험조건에서도 Lactobacillus spp.의 MIC는 크게 변화하지 않았다.
더욱이, 본 발명자들은 임산부 및 신생아의 장관(腸管)에서 L. gasseri, L. fermentum, L. paracasei, L. plantarum, L. salivarius, L. crispatus등이 비교적 고비율로 분리되는 것도 발견했으며, 이들 Lactobacillus spp. 중에서 질에서의 분리율이 높은 L. crispatus 와 L. gasseri이외의 Lactobacillus spp.에 대해서도 MIC는 7%이상으로 높은 수치를 나타냈다.
조릿대엑기스는 질내유용균 및 소화관내 유용균인 Lactobacillus spp. 에 대하여 그 항균력이, 보다 병원성이 강한 것으로 평가되고 있는 세균종에 대한 항균력보다, 본래 약하다는 사실을 시사하고 있다. 이런한 것은, 동시에 산부인과 질, 소화관에서 조릿대엑기스를 사용하도록 한 경우, 매우 본 물질에 있어서 우수한 특징이 될 가능성이 시사되었다.
[표 17]
조릿대엑기스의 Lactobacillus spp. group에 대한 항균효과
세균명 | 최소발육저지 조릿대엑기스 농도(%) | |
pH 미조정 | pH 조정 | |
LactobacillusL. crispatus GAI97504L. gasseri GAI97505L. casei ss. casei JCM1134L. brevis ss brevis JCM1059L. acidophilus JCM1132L. salivarius ss. salvarius JCM1231L. reuteri JCM1112L. plantarum JCM1149L. fermentum JCM1173PrevotellaP. bivia ATCC25903PoprphyromonasP. asaccharolytica ATCC25260BacteroidesB. fragilis NB. fragilis N-10Escherichia coli ATCC25922Staphylococcus aureus ATCC25923 | >10>107778>10>10>10<=0.5<=0.54NT44 | >=9>=9>=977>=9>=9>=9>=91<=0.5NT566 |
* 접종균량: Mc Farland #1의 1백금이량
시험예 12 (Escherichia coli, Methicillin resistant Staphylococcus aureus 및 Pseudomonas aeruginosa에 대한 항균작용)
본 발명자들은 조릿대엑기스가 각종화농성 감염증의 원인균으로 매우 중요한 Escherichia coli, 각종 항균약에 다제내성을 나타내는 Methicillin resistant Staphylococcus aureus(MRSA), MRSA와 마찬가지로 많은 항균약에 대하여 내성경향이 강한 Pseudomonas aeruginosa 등에 대하여 항균작용을 나타내는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 지금까지 조릿대엑기스의 혐기성균에 대한 항균작용을 혐기성균에 대하여 권장되고 있는 변법GAM한천배지를 감수성측정배지로 하는 한천평판희석법에 따라 측정해왔다.
본 시험예에서는 환자로부터 분리한 E. coli, S. aureus, P. aeruginosa의 통성균과 호기성균 각각 10주 이상을 사용하여, 조릿대엑기스의 이들 균종에 대한 항균작용을 통성균에서 권장되고 있는 Mueller Hinton Agar을 측정배지로 하는 한천평판희석법에 따라 검토하였다.
재료와 방법
사용균주: 시절에 보존중인 임상분리주인 E. coli 14주, Methicillin resistant S. aureus 14주 및 P. aeruginosa 13주를 사용하였다. 또한, E. coli ATC25922과 S. aureus ATCC25923을 감수성 측정의 정도관리용 균주로서 사용하였다. 시험액은 시험예 7와 같다. 용액의 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험:
항균약의 통성균에 대한 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도(MIC)을 측정하였다. 가능한, 일본화학요법학회표준법에 준한다. 최종농도가 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.063, 0.032%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 Muellar Hinton한천평판(Difco)를 만들었다. 7%~6%의 고농도영역에서 대해서는 각각 14%~12%의 조릿대엑기스액과 2배 농도의 Mueller Hinton한천배지를 1:1로 혼합하여 제조하고, 5%~0.032%까지의 저농도 영역에 대해서는 50% ~ 0.32%의 조릿대엑기스액과 1배농도의 Mueller Hinton한천배지를 1:9로 혼합하여 조릿대엑기스 함유 한천배지를 제조하였다. 2N NaOH수로 배지 pH6.5~7.3으로 조정하였다.
또한, Mueller Hinton한천배지 대신, 변법GAM한천배지 [일수제약]을 사용하여 조릿대엑기스함유 한천배지를 제조하고, 동일 접종균을 이용하여, E. coli와 MRSA를 접종하고, 하룻밤 혐기성 배양을 실시하고, MIC를 구하였다. 또한 이경우도 pH는 2NNaOH를 이용하여 6.7~7.3으로 조정하였다.
접종균액의 조정과 판정:
TSA한천배지에서 24~48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어서 취하여, Mueller Hinton broth(Difco)중에 부유시켜, Mc Farland No1의 탁도의 균액을 조정하였다. 그 10㎕을 Meuller Hinton broth 1㎖에 부유시켜, 그 5㎕을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다.
35 ℃ 20시간 호기환경하에서 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 혐기배양한 평판에 대해서는 하룻밤 배양후의 판정한 후, 대기환경하에서 하룻밤 방치하고 재증식의 유무를 판정하였다.
결과
pH조정(pH 6.5~7.3)의 실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli에 대한 최소발육저지농도(MIC)는 2~3%에 분포하고, MIC50%는 2%였다. 또한 MRSA에 대한 MIC는 0.25~0.5%에 분포하고, MIC50%는 0.5%였다. 또한, P. aeruginosa에 대한 MIC는 전체균주 1%였다.
또한 정도관리용 균주인 E. coli ATCC25922에 대한 Mueller Hinton배지에서의 중성환경, 호기성배양이라고 하는 금회 실험조건하에서의 MIC는 2%, S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 0.5%이었다.
변법GAM한천배지를 이용하여, 혐기성환경하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli임상분리주 14주에 대한 MIC50%는 8%로, S. aureus임상분리주 14주에 대한 MIC50%는 3%이었다. 정도관리용 균주에 대한 변법GAM한천배지에서의 중성환경, 혐기성환경에서의 MIC는 E. coli ATCC25922에 대하여 8%, S. aureus ATCC25923에 대하여 3%였다.
고찰
본 시험예에서, 일본화학요법학회 MIC측정표준법에 가능한한 가깝게한 조릿대엑기스의 MIC측정결과로부터, 조릿대엑기스는 MRSA 및 P. aeruginosa에 대하여, 거의 중성환경에서 모두 1%이하의 MIC를 나타내어, 매우 강한 항균작용이 있다는 사실을 확인하였다.
어떤 약물의 세균에 대한 MIC는 측정에 사용하는 배지의 성분 및 pH, 혈액등 첨가물의 유무, 접종균량, 배양환경등의 각종 실험조건에서 변동하는 것은 잘 알려져있다. 본 발명자들은 영양학적으로 복잡한 성분을 필요로 하고, 유리산소가 존재하지 않는 혐기성환경에서만 발육하는 혐기성균이다. Clostridium tetani, Clostridium perfringens, Propionibacterium acnes, Bacteroides fragilis등을 대상으로 조릿대엑기스의 MIC를 검토했다. 이들 측정시 정도관리용 균주로서 E.coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923을 사용하였으나, 조릿대엑기스의 이들 정도관리용 균주에 대한 혐기성환경하에서의 MIC와 통성균에 대하여 본래 사용된 측정환경에서의 MIC를 동시에 비교한 적은 없었다. 금회 이러한 점을 검토하고, 그 차이를 명확히 하였다. 변법GAM한천배지를 감수성 측정배지의 기초배지로 하여, 혐기성 환경에서 측정한 조릿대엑기스의 MIC는 E. coli ATCC25922에 대하여 7%이상이 되어, Mueller Hinton 배지에서 호기성배양한 경우의 2%와 비교하여 내성측으로의 큰 시프트가 관찰되었다. 또한, S. aureus ATCC25923에 대해서도 혐기성환경에서 측정한 조릿대엑기스의 MIC는 3%가 되어, Mueller Hinton배지에서 호기성 배양한 경우의 0.5%와 비교할 때, 내성측으로의 큰 시프트가 발견되었다. MRSA14주에 대한 조릿대엑기스의 혐기성균과 동일한 측정환경에서의 MIC90%는 3%였다. 혐기성배양에서의 S. aureus의 증식은 발육이 억제된 노적(露適)상의 집락이 되어, 엔드포인트의 판정이 곤란한 경우가 있었다. 한번 판정한 평판을 하룻밤 호기환경에 방치하고, 노적상의 집락이 재증식하는가를 확인하는 조작을 실시한 결과, 발육약성으로 판정한 포인트에서 하룻밤 배양하여도 재증식이 확인되지 않은 예를 3예 경험하였다. 이러한 사실로부터 조릿대엑기스의 혐기성배양에서의 항균력의 측정의 경우에 S. aureus ATCC 25923을 정도관리용으 하여 노적상 집락이 보여진 경우에는 재증식능의 유무를 확인해두는 등, MIC의 결정의 방법에 대해서도 재고가 필요하다고 생각된다. 이상의 사실로부터 혐기성균과 동일한 조건에서 측정한 통성균의 MIC는 6~8배 내성측으로 시프트하는 것이 밝혀졌다. 그 원인이 Muller Hinton agar와 변법GAM한천의 배지성분이 달라서 생기는 것인자, 항균약인 아미노배당체에서 보여지는 혐기배양과 호기배양의 차이에 의한 것인가하는 점은 흥미로운 점이나, Mueller Hinton ager을 사용한 호기배양과 혐기배양의 MIC을 비교검토한 결과, E. coli ATCC25922에서는 Mueller Hinton agar을 이용한 혐기배양에서의 MIC는, 호기배양에서의 MIC와 동일하였으나, S. aureus ATCC25923에서는 E. coli ATCC25922와 동일 실험조건임에도 불구하고, 혐기배양에서의 MIC가 호기배양에서의 MIC보다 4배 높은 등, 균종에 따라 다른 현상을 확인하였다. 이런 현상에는, 각종 요소가 복합하여 관계하고 있는 것으로 생각된다.
[표 18]
조릿대엑기스의 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus에 대한 MIC분포
MIC(%) | E. coli | P. aeruginosa | S. aureus (MRSA) |
호기성* 혐기성* | 호기성 혐기성 | 호기성 혐기성 | |
8 | 14* | (14) | |
7 | |||
6 | |||
5 | |||
4 | 5* | ||
3 | 10 | 7 | |
2 | 4* | 2 | |
1 | 13* | ||
0.5 | 8* | ||
0.25 | 6 | ||
0.125 | |||
합계 | 14 | 13 | 14 14 |
MIC rangeMIC 50% | 3~2% 8%2% 8% | 1% ND1% ND | 0.5~0.25% 4~2%0.5% 3% |
* 호기성: Mueller Hinton Agar, 호기성배양
혐기성: 변법GAM한천배지, 혐기성배양
P. aeruginosa의 혐기성배양은 미실시
참고:
[표 19]
Mueller Hinton Agar을 감수성측정용배지로서 일본화학요법확회기준법에 준하여 측정한 조릿대엑기스의 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus 참고균주 3주에 대한 MIC비교
Organism ATCC No | 접종균량 | MIC(%) | MIC(%) |
호기성pH7.0 pH5.0 | 혐기성pH7.0 | ||
Escherichia coli ATCC 25822 | High | NT | 2 |
Low | 2* | 2 | |
Psudomonas aeruginosa ATCC | High | NT | (1) |
Low | NT | (1) | |
Staphylococcus aureus ATCC25923 | High | NT | 2 |
Low | 0.5** | 2 |
High : Mc Farland No. 1의 10㎕,
Low: Mc Farland No. 1의 100배 희석액의 10㎕,
(1): 혐기배양에서는 측정불가능하였으나, 호기성배양을 계속하여 판정하면 1%가 된다,
NT; 시험미실시
[표 20]
배지 pH가 MIC에 미치는 영향
균명 | pH5.0 | pH7.0 | |
E. coli | high | <=5 | 8 |
low | <=5 | 8 | |
S. aureus | high | <=5 | 8 |
low | <=5 | 5 | |
P. aeruginosa | high | <=5 | <=5 |
low | <=5 | <=5 |
[표 21]
변법GAM 한천배지, 혐기성배양, 24시간배양
조릿대엑기스E.coli | 조릿대엑기스S. aureus | 일본하루마S. aureus | 일본하루마E.coli | |||||
Low | High | Low | High | Low | High | Low | High | |
4 | - | - | - | - | - | + | + | |
3 | - | + | - | - | - | + | + | |
2 | +W | + | - | - | - | + | + | |
1 | + | + | - | - | + | + | + | |
0.5 | + | + | - | + | + | + | + | |
0.25 | + | + | + | + | + | + | + | |
0 | + | + | + | + | ||||
3 | 4 | 0.5 | 1 | ND | 2 | >4 | >4 |
변법GAM한천배지, 호기성배양, 24시간배양
시험예 13 (세균성질증관련미생물에 대한 항균작용)
1. Prevotella bivia 및 pigmented prevotella spp. 주에 대하여
BV관련세균으로 분류되는 세균중에, 먼저 P. bivia 및 Pigmented prevotella spp. 에 대한 조릿대엑기스의 항균작용을 검토하였다.
사용균주: P. bivia의 합계 14주와 Pigmented Prevotella spp. (Prevotella intermedia, Prevotella melaninogenica) 9주를 사용하였다. P. bivia는 1990년대 전반에 여성질내에서 분리된, Pigmented Prevotella spp. 는, 2002년 각종임상재료에서 분리되어, 당시설에 보존되어 있던 균주이다. MIC 정도관리용 균주로서 Escherichia coli ATCC25922와 Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7와 동일하다. 농도는 50(w/v)%의 산성(pH5.0전후)의 용액이다. 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125%가 되도록조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 제작하였다. 조릿대엑기스액가 한천배지를 1:9로 혼합하여 소정의 농도의 조릿대엑기스 함유 한천배지를 제조하였다. 또한 2N NaOH수용액을 사용하여 배지 pH의 조정(pH7.0~7.3)을 실시하였다.
Brucella HK혈액한천배지(극동제약)에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, Anaerobe Broth MIC(Difco) 중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 10배희석후 1백금이(10㎕)을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다. 본 실험조건하에서는 1백금이에 약 104의 세균을 함유한다. 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃에서 2일간 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
또한 본실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 둘다 >5%였다.
결과
조릿대엑기스는 0.5%에서 P. bivia의 발육을, 1%에서 pigmented Prevotella spp. 의 발육을 완전하게 저지하였다. 조릿대엑기스의 P. bivia 14주에 대한 MIC50% 및 Pigmented Prevotella spp.에 대한 MIC50%는 모두 0.5%였다.
[표 22]
조릿대엑기스의 Prevotella bivia 14주 및 pigmented Prevotella spp. 9주에 대한 항균작용
최소발육저지조릿대엑기스농도(%) | P. bivia | Pigmented Prevotella spp |
43210.50.250.125 | 00001400 | 27 |
합계 | 14 | 9 |
고찰
건강한 여성의 질은 혐기성균과 호기성균의 보고이다. 여성의 산도(産道)의 정상세균총에는 질내 청결도를 유지하는데 중요한 역할을 하는 Lactobacillus spp. 가 가장 우세하게 존재하고 있다. 그러나, 한편으로는 기회병원체로서 알려져 있는 Peptostreptococus anaerobius등의 혐기성 그람 양성구균 및 Prevotella spp. (Prevotella melaninogenica, Prevotella intermedia 등), Bacteroides spp. 등의 혐기성 그람음성간균도 저균량으로 존재하고, 세균성 질증인 상황에서 이상 증식하여, Bacterial Vaginosis(세균성질증)관련 미생물로 칭하고 있다. 세균성질증은 밀크형 악취가 있는 대하(帶下)가 생기는 질환으로, STD에 대한 역감염성, 조산, 전기파수(前期破水)등 주산기(周産期)에 보여지는 각종 이상증상과의 관계, 골반내 염증성 질환 PID으로의 전개면에서 논의가 되고 있다.
P. bivia및 pigmented Prevotella spp. 는 세균성 질증관련 미생물 중에도 중증도(重症度) 또는 난치성과 관련한 극도로 중요한 세균종인 것이 알려져 있다.
금회 검토로부터 조릿대엑기스는 이들 P. bivia 및 pigmented Prevotella spp. 에 대하여 매우 양호한 항균작용을 나타내는 것을 확인하였다.
[표 23]
산부인과영역감염증의 원인이 되는 병원체일람(질환명, 학명, 통속명)
질환 | 학명 | 통속명 | 비고 |
임질 | Neisseria | 임균 | 세균 |
임균성경관염 | gonorrhoea | ||
자궁경부크라미디아증(자궁경관염) | Chlamydia | 크라미데디아 | 세균 |
trachomatis | 토라코마티스 | ||
칸디다증 | Candida albicans | 칸디다 | 진균 |
외음염 | 아르비칸스 | ||
질염 | |||
질트리코모나스증 | Trichomonas | 질트리코모나스 | 원충 |
질염 | vaginalis | ||
뇨도염 | |||
세균성질증(BV) | BV관련미생물 | 세균 | |
Mycoplasma | 성기마이코플라즈마 | ||
genitalium | |||
Gardnerella | 가드네렐라 | ||
vaginalis | |||
Prevotella | 프레보테라 | ||
bivia* | 비비아 | ||
Pigmented Prevotella spp. * | 흑색색소생성프레보테라 | ||
Porphyromonas spp.* | 포르피로모나스 | ||
Mobiluncus spp. * | 모비룬카스 | ||
Peptostreptococcus spp.* | 펩토스트렙토코카스 | ||
외음부헤르페스 | Herpes simplex virus(HSV) | 단순헤르페스바이러스 | 바이러스 |
매독 | Treponema pallidum | 매독트레포네마 | 세균 |
* 혐기성균
시험예 14(세균성질증관련미생물에 대한 항균작용)
2. Gardnerella vaginalis주에 대하여
Gardnerella vaginalis는 건강한 여성의 질에서도 검출되지만, 그 균수는 적다. G. vaginalis는 Mycoplasma homminis, Peptostreptococcus anaerobius, Pigmented Prevotella spp., Non-pigmented Prevotella spp., Porphyromonas spp.. 등과 함께, 세균성질증의 상태에서 이상증식하는 소위 BV관련미생물의 범주에 들어가는 세균의 하나이다. 산도감염증의 원인균으로서도 매우 중요하다. 이 실험에서는 G. vaginalis에 대하여 검토하였다.
재료와 방법
사용균주: G. vaginalis 합계11주를 사용하였다. 이들은 NCTC 또는 ATCC에서 구입한 균주2주와 임상분리주9주로 구성된다. 임상분리주는 1990년대전반에 본 발명자가 여성질내에서 분리하고, 당시설에서 보존하고 있던 균주이다. 또한, MIC 정도관리용 균주로서 Escherichia coli ATCC25922과 Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 동일하다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용된 한천평판희석법에 따라 최소발육저지농도를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 8,7,6,5,4,3,2,1,0.5,0.25, 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 Brucella HK혈액한천배지 (극동제약)을 제작하였다. 조릿대엑기스액과 Brucella HK혈액한천배지를 1:1 또는 1:9의 비율로 혼합하여 소정의 농도의 조릿대엑기스 함유 한천배지를 제조하였다. 또한, 2N NaOH수용액을 사용하여 배지 pH의 조정 (pH 7.0~7.3)을 실시하였다.
Brucella HK혈액한천배지(극동제약)에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여 Anaerobe Broth MIC(Difco) 중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고 그 1백금이(10 ㎕)을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다. 대조배지에서의 발육이 도말부위전체에 똑같게 보이도록 설정하였다.
혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃에서 2일간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
또한, 본 실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 각각 >8%, 8%였다.
결과
조릿대엑기스의 G. vaginalis11주에 대한 MIC의 범위는 6%에서 4%에 분포하고, MIC50%는 6%였다.
[표 24]
조릿대엑기스의 Gardnerella vaginalis11주에 대한 항균작용
최소발육저지 조릿대엑기스농도(%) | 균주수 |
876543210.50.250.125 | 00731000000 |
합계 | 11 |
고찰
금회 검토에서 조릿대엑기스는 세균성질증관련미생물의 하나로서 중요한 통성혐기성균의 G. vaginalis에 대해서는 6%의 농도에서 완전히 발육을 저지하는 사실이 확인되었다. BV관련 미생물의 혐기성균인 Non-pigmented Prevotella인 P. bivia 및 pigmented Prevotella인 Prevotella melaninogenica보다 항균력이 약하다는 사실을 밝혔다. 본엑기스는 8%의 농도에서도 Lactobacillus spp.의 대부분의 균주의 발육을 저지하지 않는 것이 알려져 있으며, 생체에서의 사용시 농도의 설정에 중요한 실험성적이 얻어진 것으로 생각된다.
또한 일련의 검토에서 실험조건에 따라 참고균주인 E. coli 및 S. aureus 의 MIC에 변동이 있는 사실이 확인되었다. MIC는 사용하는 감수성측정용 배지의 종류, 접종균량, 배양조건등의 인자에 따라 영향을 받으나, 금회는 처음으로 감수성측정배지로서 Brucella HK혈액한천배지를 사용하였다. 본배지에서의 MIC는 변법GAM배지에서의 MIC보다 산성측으로 시프트하는 인상이었다.
시험예 15 (세균성질증관련미생물에 대한 항균작용)
3. Finegoldia, Micromonas, Peptostreptococus에 대하여
혐기성구균인 Finegoldia magna, Micromonas micros, Peptostreptococcus spp. 는 Prevotella bivia, Pigmented Prevotella spp., Porphyromonas spp., Mycoplasma genitalium(hommnis), Gardnerella vaginalis등과 함께 질내 유산균의 감소, 질내 pH의 저하, 및 밀크형 악취 (아민취)가 있는 대하를 특징으로 하는 세균성질증(BV)의 상태에서 이상 증가하는 세균성질증관련 미생물과 같은 종류이다. 이 시험예에서는 세균성질증관련세균으로 분류되는 세균의 하나인 혐기성구균에 대한 조릿대엑기스의 항균작용을 검토하였다.
재료와 방법
사용균주: Peptostreptococcus anaerobius(5주), Peptostreptococcus asacccharolyticus(3주), Finegoldia magna(7주), Micromonas micros(6주) 합계 21주를 사용하였다. MIC 정도관리용 균주로서 Escherichia coli ATCC25922와Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 같다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 따라 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 5,4,3,2,1,0.5, 0.25, 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 만들었다. 조릿대엑기스액과 한천배지를 1:9로 혼합하고, 소정의 농도의 조릿대엑기스 를 함유한 한천배지를 제조하였다. 또한 2N NaOH수용액을 사용하여 배지 pH의 조정(pH 7.0 ~ 7.3)을 실시했다.
Brucella HK혈액한천배지(극동제약)에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, Anaerobe Broth MIC(Difco)중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 그 1백금이(10 ㎕)을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 따라 접종하였다. 본 실험 조건하에서는 1백금이에는 약 106의 세균이 포함하여 있다.
혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃에서 24시간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)으로 판정하였다.
또한, 본실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 모두 >=5%이었다.
결과
조릿대엑기스는 3%의 농도에서 M. micros, F. magna, P. anaerobius, P. asaccharolyticus의 혐기성구균군 21주의 발육을 완전히 저지하였다. 조릿대엑기스의 혐기성 구균에 대한 MIC50%는 0.5%였다.
[표 25]
조릿대엑기스의 혐기성 구균군에 대한 항균작용
최소발육저지농도(%) | F. magna | M. micros | P. anaerobius | P. asaccharolyticus | 합계 |
543210.50.250.125 | 00002500 | 00023010 | 00001400 | 00000300 | 26121 |
합계 | 7 | 6 | 5 | 3 | 21 |
고찰
세균성질증은 밀크형 악취가 있는 대하가 발생하는 질환이며, 성감염증(STD)에 대한 역감염성, 조산, 전기파수 등 주산기에 보여지는 각종 이상증상과의 관계, 골반내염증성질환(PID)으로의 전개면에서 논의가 되고 있다. 세균성질증에서는 건강시 질내의 청결도를 유지하는데 중요한 역할을 하는 Lactobacillus spp. 가 현저하게 감소하고, Prevotella spp. (p. melaninogenica, P. intermedia 등), Bacteroides spp. 등의 혐기성 그람음성간균 및 P. anaerobius 등의 혐기성그람양성구균, 그리고 G. vaginalis 및 Mycoplasma등의 미생물이 이상증식하는 것을 알수 있다. 이들 세균군은 세균성질증관련미생물로 칭해진다.
앞서, 조릿대엑기스가 세균성질증관련미생물인 Prevotella spp. (P. bivia, P. melaninogenica, P. intermedia등)의 발육을 2%의 낮은 농도에서, Bacteroides fragilis group 및 G. vaginalis의 발육을 6%의 농도에서 저지하는 것을 기술하였다. 금회 검토에서는 조릿대엑기스는 혐기성구균군에 대해서도 2%의 농도에서 전체균주의 발육을 저지하는 것이 밝혀졌다.
시험예 16(세균성질증관련미생물에 대한 항균작용)
Mobiluncus spp. 에 대하여
혐기성그람양성간균인 Mobiluncus spp.는 혐기성무아포그람양성혐기성간균으로, Prevotella bivia, Pigmented Prevotella spp., Porphyromonas spp. Mycoplasma genitalium (hommnis), Gardnerella vaginalis 등과 함께, 질내유산균의 감소, 질내 pH의 저하 및 밀크형 악취(아민취)인 대하를 특징으로 하는 세균성질증의 상태에서 이상 증가하는 세균성질증 관련 미생물의 일종이다. 이 시험예에서는 Mobiluncus spp. 에 대한 조릿대엑기스의 항균작용을 검토하였다.
재료와 방법
사용균주: Mobiluncus spp. 12주를 사용하였다. 이중에서는, M. curtisii subsp. curtisii ATCC35242, M. curtisii subsp. holmessii ATCC25241, M. mullielis ATCC35240, ATCC35243을 포함한다. 또한, MIC 정도관리용 균주로서, Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 동일하다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 따라 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 Brucella HK혈액한천평판을 제작하였다. 혈액은 동결융해에 의해 용혈시킨 양탈섬혈(羊脫纖血)(白生材)를 사용하고, 배지에 5%의 비율로 첨가하였다. 조릿대엑기스액과 한천배지를 1:1로 혼합하고, 소정의 농도의 조릿대엑기스를 함유한 한천배지를 제조하였다. 2N NaOH수용액을 사용하여, 배지 pH의 조정 (pH 7.0±0.3)을 실시하였다.
Brucella HK혈액한천배지(극동제약)에서 72시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, Anaerobe Broth MIC(Difco)중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 그 1백금이(1㎕)을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법으로 접종하였다. 본 실험 조건하에서 1백금이에는 약 106세균을 포함한다.
혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃에서 2일간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 관찰된 경우 (+)으로 판정하였다.
또한, pH 7.0의 본 실험 조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 8%이었다(대조배지에서의 발육과 비교하여, 발육이 현저하게 저지되는 농도를 관찰하면 4%이었다)
결과
표 26에 시험성적을 나타냈다. 조릿대엑기스는 4%에서 Mobiluncus spp.의 발육을 완전히 저지하였다. 조릿대엑기스의 Mobiluncus spp.에 대한 MIC 50%는 4%였다.
고찰
세균성질증은 밀크형 악취가 있는 대하를 생기는 질환으로, STD에 대한 역감염성, 조산, 전기파수 등 주산기에 보여지는 각종 이상증상과의 관계, 골반내염증성질환(PID)으로의 전개면에서 논의가 되고 있다. 세균성질증에서는 건강할 때에는 질내의 청결도를 유지하는데 중요한 역할을 하는 Lactobacillus spp.가 현저하게 감소하고, Provotella spp. (P. melaninogenica, P. intermedia등), Bacteroides spp. 등의 혐기성그람음성간균 및 혐기성그람양성간균인 Mobiluncus spp., P. anaerobius 등의 혐기성그람양성구균, G. vaginalis 및 Mycoplasma등의 미생물이 이상 증식하는 것을 알 수 있다. 이들 세균군을 세균성질증 관련 미생물로 칭하고 있다. 세균성질증 관련 미생물중, Mobiluncus spp.는 BV score가 높은 수치를 얻는 상태에서 검출율이 높게되는 균종이 본 발명자들의 연구에서도 확인되어있다.
앞서, 조릿대엑기스가 세균성질증관련미생물인 Prevotella spp. (P. bivia, P. melaninogenica, P. intermedia등)의 발육을 2%라고 하는 낮은 농도에서, Bacteroides fragilis group 및 G. vaginalis의 발육을 6% 농도에서, 혐기성구균군에 대해서도 전체균주를 2%로 발육을 저지하는 것을 기술하였다. 본 시험예에서는 Mobiluncus spp.에 대하여 검토하였다. 그 결과, 조릿대엑기스는 4%의 농도에서 이들 발육을 저지하는 것이 밝혀졌다.
[표 26]
조릿대엑기스 Mobiluncus spp. 에 대한 항균작용
조릿대엑기스최소발육저지농도(%) | 균주수 |
8 | |
7 | |
6 | |
5 | |
4 | 6 |
3 | 2 |
2 | 4 |
1 | |
0.5 | |
0.25 | |
0.125 | |
0 | |
합계 | 12 |
시험예 17 (조릿대엑기스의 Bacteroides Fragilis 주에 대한 항균작용)
Bacteroides fragilis는 인분 중에서 분리된 무아포 혐기성 그람음성간균으로, 욕창 및 강문주위농양 등을 포함하는 각종 피부 및 피하연부조직 감염증에서 황색포도상구균(MRSA), 다약제 내성 녹농균과 함께 임상상 매우 중요한 균종이다. 이 시험예에서는 조릿대엑기스의 B. fragilis에 대한 항균작용을 검토하였다.
사용균주: B. fragilis 합계 12균주를 사용하였다. 이들 임상분리는 2002년 1월부터 7월까지 각종화농성감염증환자로부터 분리되어, 당시설에 보존되어 있던 것이다. MIC 정도관리용 균주로서, Escherichia coli ATCC25922과 Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 같다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 만들었다. 10~6%까지는 조릿대엑기스액과 2배한천배지를 1:1로혼합하고, 5~1%까지는 조릿대엑기스액과 한천배지를 1:9로 혼합하여, 소정의 농도의 조릿대엑기스를 함유한 한천배지를 제조하였다. 또한, 2N NaOH수용액을 사용하여, 배지 pH의 조정(pH 6.6~7.1)을 실시하였다.
Brucella HK혈액한천배지(극동제약)에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, Anaerobe Broth MIC(Difco) 중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 그 1백금이(10㎕)을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 본 실험조건하에서는 1백금이에는 106cfu/㎖의 세균수를 포함한다.
혐기웍스테이션(군제산업)중에 35 ℃에서 1, 2일간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
또한, 본실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 MIC는 모두 6%이었다.
결과: 조릿대엑기스의 B. fragilis 12주에 대한 MIC는 4~6%에 분포하였다. MIC90%는 5%이었다.
[표 27]
조릿대엑기스의 Bacteroides fragilis group 12주에 대한 항균작용
최소발육저지조릿대엑기스농도(%) | 균주수 |
10987654321 | 00001101000 |
합계 | 12 |
고찰
Bacteroides fragilis group(특히, B, fragilis)는 혐기성무아포그람음성혐기성간균으로, 사람의 하부소화관점막에 상존하고 있다. 본 균군은 점막이 파단시, 통상무균의 조직 및 장기에 침입하여, 감염증을 야기한다. 각종 화농성 감염증, 특히 횡격막에서 하부의 화농성 감염증으로부터, 가장 고빈도로 분리되는 혐기성균이다 본 균은, 감염부위에서 대장균등의 통성간균, 포도상구균, 장구균(腸球菌), Streptococcus milleri group등의 통성, 미호기성구균, Bacteroides이외의 무아포혐기성균혐기성균등과 함께 존재한다. 즉, 복수균 감염증의 구성균으로서 중요하다. 또한, B. fragilis는 다른 일부 통성균과 함께, 많은 항균약에 대하여 자연내성이며, 본균종에 항균력이 있는 항균약은, 클린다마이신, 세파마이신, 카르바페넴 등으로 비교적 한정된다. 그러나 이들 소수의 항균약에 대해서도 획득내성화경향이 있어 문제가 있다. 따라서, B. fragilis가 관여하는 감염증의 치료에는 보다 광역의 항균약이, 또는 복수종의 항균약이 장기간에 걸쳐 사용되는 경향이 있다. 그러나, 이런 사용방법에 따라서는 본균종은 물론, 본균종이외의 세균종의 항균약내성화를 증장(增長)할 가능성이 있어, 감염증치료상 매우 위험한 균종이라고 말할 수 있다.
금회 검토에서 조릿대엑기스에는 화농성 복수균감염증의 원인균으로서, S. aureus, P. aeruginosa, E.coli와 함께 중요한 무아포혐기성균혐기성균의 대표적인 균군인 B. fragilis group의 세균종에 대해서도, 혐기성조건하에서의 S. aureus 및E. coli참고 균주에 대한 작용과 적어도 동일한 정도의 항균작용이 있다는 것이 밝혀졌다.
시험예 18(골반내감염증)
건강한 여성의 질은 혐기성균과 호기성균의 보고의 하나이다. 여성의 산도의 정상세균총에는 혐기성균이 호기성균의 10배이상 많이 존재하고 있다. 혐기성그람양성구균과 Bacteroides spp. (현재분류에는 Prevotella spp. 와 Bacteroides spp.)이다. 혐기성균은 STD병원체가 관계하지 않는 산도감염증의 대부분의 환자로부터 분리된다. 주요한 혐기성병원체는 Bacteroides fragilis, Prevotella bivia, Prevotella disiens, Prevotella melaninogenica, 혐기성구균, 그리고 Clostridium spp. 이다. 혐기성균은 난관난소농창, 패혈증성 유산, 골반내농창, 자궁내막염, 수술후 창부감염증, 특히 제왕절개 수술창부감염증, 등과 관계하고 있다. 이들 감염증은 혐기성균과 장내세균과의 세균과의 복수균감염증인 경우가 많으나, 장내 세균과의 세균 및 그 외 통성균이 분리되지 않는 혐기성균으로만 인한 감염증은 복강내감염증의 경우보다도 많이 보여진다. 또한, 자궁에서 악취가 있는 농즙(膿汁), 혈액의 배출이 있는 것, 자궁의 하복부전체 또는 골반내 국소적 압통, 지속적인 발열, 오한이 특징이다. 골반정맥의 화농성혈전성정맥염이 합병하는 것도 있으며, 반복성 패혈증성폐전색의 에피소드를 일으키는 원인이 된다.
혐기성균은 세균성질증(Bacterial Vaginosis)의 원인과 관련하는 인자로 알려져있다. 원인이 아직 확실하게 밝혀지지 않은 증후군은 악취가 있는 분비물과질내 Gardnerella vaginalis, Prevotella spp., Mobiluncus spp., Peptostreptococcus spp., 그리고 mycoplasmas 등의 세균의 이상한 증가를 특징으로 한다. 혐기성균은 골반내염증성질환(PID)의 병인(病因)에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 생각되며, 몇 명의 전문가는 세균성질증과 PID로의 전개와의 관계를 시사해왔다. Actinomyces spp.가 원인이 되는 골반내 감염증은 자궁내 피임도구의 사용과 관계가 있는 감염증이다.
시험예 19(조릿대엑기스의 Bifidobacterium spp. 에 대한 항균작용)
항균력을 갖는 물질을 평가할때에는 인간의 병원균에 대한 작용과 함께 피부, 점막에 상존하는 유용성과 기회세균에 대한 작용을 알아두는 것이 매우 중요하다.
Bifidobacterium spp. 는 Lactobacillus spp. 와 마찬가지로, 소화관내, 질실내의 상존세균으로, 호흡기병원성이 있는 것이 알려져있는 Bifidobacterium dentium을 제외하고, 병원적 의의가 지적된 균종이 없는 유용균으로 알려져 있는 세균이다. 여기서, Bifidobacterium spp. 에 대하여 조릿대엑기스가 어느 정도의 항균작용을 가지는가, Bifidobacterium spp.의 참고균주를 이용하여 검토하였다.
재료와 방법
사용균주 : 표28에 나타낸 시설에 보존중인 참고균주를 사용하였다. 이들 균주는 ATCC, JCM에서 구입하고, 당시설에 보존되어 있던 균주이다. 또한, 참조로서, 산부인과 영역감염증 및 소화기 감염증으로부터 가장 고빈도로 분리되는 혐기성균 균종중, Prevotella bivia ATCC29303, Porphyromonas asaccharolytica ATCC25260, Bacteroides fragilis N-1을 선택하였다. 또한, Escherichia coli ATC25922와 Staphylococcus aureus ATCC25923도 동일 목적과 감수성측정의 정도관리용 균주로서 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 같다. 용액의 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험:
항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도(MIC)를 측정하였다. 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 9,8,7,6,5,4,3,2,1,0.5%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM한천평판(일수제약)을 만들었다. 10%~6%까지의 고농도영역에 대해서는 각각 20%~12%의 조릿대엑기스액과 2배한천배지를 1:1로 혼합하여 제조하고 (최종pH 5.3~5.5), 5%~0.5%까지의 저농도의 영역에 대해서는 50%~5%의 조릿대엑기스액과 1배한천배지를 1:9로 혼합하여 (최종 pH 5.5~6.0), 조릿대엑기스 함유 한천배지를 제조하였다.
접종균액의 조정:
Brucella HK혈액한천배지에서 48시간배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어모아, Anaerobe broth(Difco)중에 부유시켜, Mc Farland No 1의 탁도로 조정하였다. 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를 조릿대엑기스 함유평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 대조균주에 대해서도, TSA한천배지상의 집락을 이용하고, Anaerobe broth중에 Mc Farland #1의 탁도로 조정하고, 그 10 ㎕(접종량: 106cfu)를화선도말법에 따라 접종하였다. 또한, 혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃ 18시간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우 (+)로 판정하였다.
결과
pH무조정 산성(pH 5.3~6.0)의 실험조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 최소발육저지농도는 표 28에 나타냈다. Bifidobacterium spp.의 5균종 5주에 대해서도 MIC가 4%였던 B. bifidum 1주를 제외하고, 최소발육저지농도가 모두 7% 이상이였다. 또한 동시에 측정한 P. bivia ATCC29303, P. asaccharolytica ATCC25260에 대한 최소발육저지농도는 모두 0.5%로, 본방법에 의해 측정한 AHSS의 정도관리용균주2주, E. coli ATC25922와 S. aureus ATCC25923에 대한 최소발육저지농도 모두 4%였다.
고찰
조릿대엑기스가 6.25% 이하(대부분은 4%정도)의 농도에서, 몇가지 병원성세균의 발육을 저지하는 것이 명확해졌다. 조릿대엑기스의 이러한 병원성세균에 대한 항균력외에 비병원성세균에 대한 항균력에 대한 정보도 매우 중요하게 생각되어, 금회 검토를 실시하였다.
Lactobacillus spp. 및 Bifidobacterium spp의 대부분은 생체방어 관점에서 인체의 점막에서 매우 중요한 역할을 하고 있다. 본 발명자들은 이미 조릿대엑기스의 과산화수소 생성 Lactobacillus spp. 인 L. crispatus와 L. gasseri에 대한 항균작용은 MIC가 10% 이상으로, 동시에 실시한 E. coli, S. aureus 등의 대표적인병원성통성균에 대한 MIC4% 및 P. bivia, P. asaccharolytica, B. fragilis 등의 대표적 화농성혐기성균에 대한 MIC 0.5~4%에 비해 매우 약하다는 것을 보고하였다.
금회, 조릿대엑기스는 소화관에 상존하는 Bifidobacterium spp.의 5균종 5주에 대해서도 Lactobacillus spp. 에 대한 경우와 마찬가지로 약한 항균력만 나타내는 것이 확인되었다.
조릿대엑기스는 질내 유용균 및 소화관내유용균에 대해서 항균력이 기회병원세균보다 상대적으로 약하다는 것을 강하게 시사하고 있다.
[표 28]
조릿대엑기스의 Bifidobacterium spp. group에 대한 항균작용
세균명 | 최소발육저지농도(%)pH미조정 |
BifidobacteriumB. adolescentis ATCC15703B. bifidum JCM1255B. breve ATCC15700B. longum ATCC15707B. pseudolongum ATCC25526PoprphyromonasP. asaccharolytica ATCC25260BacteroidesB. fragilisEscherichia coli ATCC25922Staphylococcus aureus ATCC25923 | 94778<=0.5444 |
* 접종균량: Mc Farland #1의 탁도의 균액의 1백금이량을 1㎝ 화선도말
시험예 20(Candida albicans 및 Candida glabrata에 대한 항진균작용)
이 시험예에서는 아구창 및 여성의 질염, 외음염의 원인이 되는 Candida albicans 및 Candida glabrata에 대한 항진균작용을 검토하였다.
사용균주: Candida albicans 및 Candida glabrata 합계 13주를 사용하였다. 이들은, 2002년에 각종임상재료에서 분리하여, 당시설에서 보존시킨 균주이다. MIC 정도관리용 균주로서, Escherichia coli ATCC25922, Staphylococcus aureus ATCC25923 및 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853을 사용하였다.
시험액은 시험예 7과 같다. 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 따라 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 8,7,6,5,4,3,2,1%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 MH한천평판(Difco)를 사용하였다. 조릿대엑기스액과 한천배지를 1:9로 혼합하여, 소정농도의 조릿대엑기스 함유 한천배지를 제조하였다. 또한, 2N NaOH수용액 또는 10% 염화수소수용액을 사용하여, 배지 pH를 조정(pH 7.0 전후와 pH 5.0 전후 2종류)하였다.
마이코셀한천배지(BD)에서 48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, MH broth (Difco)중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 그 1백금이(10㎕)를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 본 실험 조건하에서는 1백금이에는 약 106의 세균을 함유한다.
35 ℃에서 24시간 배양 후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 발육이 확인된 경우(+)로 판정하였다.
또한, 본 실험 조건하에서 측정한 조릿대엑기스의 E. coli ATCC25922와 S. aureus ATCC25923 및 P. aeruginosa ATCC27853에 대한 1일 후 MIC는 pH 7에서, 각각, 2, <=1, 2이며, pH 5에서는 모두 <=1이었다. 또한 3일 실온 후에서의 MIC는 pH 7에서 각각, 3, <=1, 3이며, pH 5에서는 2, <=1, <=1이었다.
표에 pH 5와 pH 7의 환경에서 1일후, 3일후에 판정한 조릿대엑기스의 Candida spp. 에 대한 MIC의 분포를 나타냈다. pH 5에서 24시간 판정에서 조릿대엑기스 5%의 농도에서 C. albicans 8주와 C. glabrata 4주의 모든 발육을 저지하였다. 3일 후의 판정에서는 8%의 농도에서 전체균주 발육이 저지되었다.
pH 7에서 24시간판정에서 조릿대엑기스 5%의 농도에서 C. albicans전주의 발육저지를 나타냈다. C. glabrata에 대한 MIC는 판정불가능하였다. 3일 후의 판정에서는C. glabrata을 포함하여 전체균주의 발육저지에는 8% 이상이 필요하였다.
고찰
여성의 질염에는 원충에 의한 트리코모나스질염, 진균에 의한 Candida성 질염 및 세균에 의한 세균성질증(=비특이성질염)이 알려져 있다. 질염을 일으키는 Candida spp.는 외음염의 윈인도 된다. Candida성 질염은 다른 질염과 달리 치즈상의 대하가 특징으로 매우 가려움증이 강한 질환이다. 치료에는 항진균약이 투여된다.
금회 검토에서 조릿대엑기스는 효모상진균에 대하여 발육저지효과가 있다는 사실이 확인되었다. 산성하에서 1일 후에 측정한 MIC는 5% ~ 3%에 분포하였다. 또한, pH 조정 후 중성하에서 측정한 MIC는 5% ~ 4%에 분포하였다. 그러나 3일간 실온방치 후에 재차 MIC를 판정한 결과, 조릿대엑기스의 Candida spp. 에 대한 pH 5.0에서의 MIC는 8%의 1주를 제외하고 12주가 5~3%의 범위에서 7~4%의 범위로 내성측에서 시프트하고, pH 7.0에서의 MIC는 13주 전체균주가 5~4%의 범위부터 8%이상으로 시프트하였다. 이러한 사실로부터 1일후에 결정한 MIC 또는 그 이상의 농도에서의 조릿대엑기스진균에 대한 작용이 정균적(靜菌的)이다라는 것을 나타내고 있으며, 살균에는 보다 고농도가 필요하다는 것을 시사한다. 또한, C. glabrata는 중성환경에서 37 ℃에서 1일배양후에는 충분한 발육이 확인되지 않았으나, 그후 3일실온에서 방치하였을 때, 충분한 발육이 확인되어, MIC의 판정이 가능하게 되었다. 산성으로 조정한 Mueller Hinton배지에서는 37 ℃ 1일동안에서도 충분한 발육이 관찰되며, MIC의 판정이 가능하였다.
Mueller Hinton배지를 감수성 측정용 배지로서 사용한 본실험에서는, 조릿대엑기스의 Candida spp.에 대한 MIC는 7~4%의 농도에 있으며, 항진균작용을 나타내는 것이 밝혀졌다. 그 MIC는 중성환경에서 산성환경보다 1관(管)정도 낮은 수치를 나타냈다. 더욱이, 중성조건에서 1일후에 발육을 저지하는 한 꽤 높은 농도에서도 그 후의 실온방치에 의해 Candida spp.의 발육이 관찰되며, 그 작용은 정균적이다라는 것이 알려졌다. 산성조건하에서도 1일후에 발육을 저지하고 있던 농도에서 그후 Candida spp.의 발육이 관찰되었으나, 그 정도는 중성환경에서 관찰된 것 보다 경도(輕度)였다. 즉, 본 엑기스는 산성조건하에서 Candida spp. 에 대하여 중성환경하보다 강한 살균작용을 나타내는 것이 밝혀졌다. 조릿대엑기스를 임상응용하는 경우의 농도 설정에는 본 엑기스의 독성에 관한 정보에 이러한 점도 추가적으로 충분히 고려하여, 사용농도와 사용회수를 설정할 필요가 있다고 생각되었다.
이상의 사실로부터 항균작용에 더하여, 항진균작용을 갖는 조릿대엑기스는 Candida 질염 및 외음염 및 그 외 Candida spp.가 관여하는 병태의 치료약으로서 충분히 사용할 수 있다는 사실이 강하게 시사되었다.
또한, 본엑기스가 Prevotella spp., Gardnerella vaginalis등 세균성질증에 관계하는 세균에 강한 또는 중등도(中等度)의 항균작용을 나타내는 것, 그 외 세균학적인 특성이 있는 사실을 본 발명자들이 확인하고 있는 점에서, 세균성질증의 치료약으로서의 유용성이 높은 것으로 생각되지만, 이 경우, 항진균 작용을 함께 갖는 본 엑기스는, 현재 세균성질증에 사용되는 클로팜페니콜과 같이 항진균작용을 전혀 나타내지 않는 항균약의 사용후에 발생하는 것이 보고되어 있는 Candida sppl에 의한 부작용인 균교대현상 또는 교대증의 발생을 방지할 수 있는 특성을 가지고 있다는 사실이 용이하게 예상된다.
[표 29]
조릿대엑기스의 Candida albicans 및 Candida glaburata에 대한 항진균작용
감수성 측정용 배지의 pH 및 판정일수의 영향
최소발육저지농도(%) | Candida albicans주 | Candida glabrata주 | ||||||
pH 5* | pH 7 | pH 5 | pH 7 | |||||
1일** | 3일 | 1일 | 3일 | 1일 | 3일 | 1일 | 3일 | |
>=87654321ND(측정불능) | 143 | 1421 | 35 | 8 | 41 | 41 | 5※ | 5 |
합계 | 8 | 8 | 8 | 8 | 5 | 5 | 5 | 5 |
* 배지 pH
** 판정일수
*** 측정 안됨
※ 엑기스불함유배지(pH 7.0)에서의 발육이 나쁘기 때문에 판정보류
시험예 21 (Acne vulgaris환자병소유래 Staphylococcus spp. 에 대한 항균작용)
조릿대엑기스는 여드름 (Acne vulgaris)의 병인의 하나로서 중요한 Propionibacterium acnes를 6.25%의 농도에서 완전하게 발육을 억제한다. 또한 조릿대엑기스는 화농성구균으로서 중요한 Staphylococcus aureus(MRSA)에 대해서도, 1% 이하의 농도에서 완전하게 발육을 억제하는 것이 확인되었다. 본 발명자들은 여드름환자의 병소에서 분리한 여드름의 증악인자로서 중요한 Staphylococcus epidermidis 13주와 Staphylococcus cohnii 1주의 Staphylococcus spp. 합계 14주를 사용하여 조릿대엑기스의 항균작용을 한천평판희석법에 의해 검토하였다.
재료와 방법
사용균주: Staphylococcus epidermidis 13주와 Staphylococcus cohnii1주 합계14주를 사용하였다. 또한, Escherichia coli ATCC25922, S. aureus ATCC25923을 감수성측정의 정도관리용 균주로서 사용하였다. 표 30에 사용한 균주의 균종과 항균약감수성 패턴을 나타냈다.
[표 30]
여드름병소유래 Staphylococus spp.의 항균약내성패턴
균주번호 | 균종 | 감수성패턴(TC, CLDM, OFLX) |
N-4 | S. epidermidis | TCR, |
N-5 | S. epidermidis | |
N-6 | S. epidermidis | CLDMR |
N-7 | S. epidermidis | |
N-8 | S. epidermidis | |
N-15 | S. epidermidis | TCR |
N-26 | S. epidermidis | |
N-39 | S. epidermidis | |
N-34 | S. epidermidis | OFLXR |
N-37 | S. epidermidis | TCR,CLDMR |
N-38 | S. epidermidis | |
N-46 | S. epidermidis | |
N-48 | S. cohnii | TCR,CLDMR |
N-68 | S. epidermidis |
시험액은 시험예 7과 같다. 용액의 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험:
항균약의 통성균에 대한 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도(MIC)를 측정하였다. 가능한, 일본화학요법학회표준법에 준한다. 최종농도가 5,4,3,2,1,0.5, 0.25, 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 Muellar Hinton 한천평판(Difco)를 만들었다. 50%~1.25%의 조릿대엑기스액과 1배농도의 Muellar Hinton 한천배지를 1:9로 혼합하여, 조릿대엑기스를 함유한 한천배지를 제조하였다. 2N NaOH수로 배지 pH 6.1~7.1로 조정하였다. S. aureus ATCC 25922 및 E. coli ATCC25922에 대한 MIC는 2%이었다.
접종균액의 조정과 판정:
TSA 한천배지에서 24~48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어모아, Mueller Hinton broth(Difco)중에 부유시켜, Mc Farland No 1의 탁도의 균액을 조정하였다. 그 10㎕을 Mueller Hinton broth 1㎖에 부유시켜, 그 10 ㎕을조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 35 ℃ 20시간 호기환경하에서 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다.
결과
Staphylococcus epidermidis 13주와 Staphylococcus cohnii 1주의 Staphylococcus spp. 함계 14주를 사용하여, 조릿대엑기스의 항균작용을 한천평판희석법에 의해 검토하였다. 그 결과, 조릿대엑기스는 1%의 농도에서 이들 발육을 완전히 억제하였다. 14주에 대하여, 항균약3약제 (tetracycline, clindamycin, ofloxaxin)에 대한 감수성이 검토되어 있으며, 테트라사이크린1제내성의 균주가 2주, 크린다마이신1제내성주가 1주, 테트라사이크린과 크린다마이신의 2제내성의 균주가 2주, 오프록사신1제내성주가 1주 함유되어 있으나, 이들 내성균을 조릿대엑기스는 모두 1% 이하에서 발육을 저지하였다.
[표 31]
조릿대엑기스의 Staphylococcus spp.14주에 대한 항균작용
발육저지농도(%) | 균주수 | ||
항균약감수성주 | 항균약내성주 | 합계 | |
5 | |||
4 | |||
3 | |||
2 | 3 | 3 | |
1 | 4 | 4 | 8 |
0.5 | 1 | 2 | 3 |
0.25 | |||
0.125 | |||
합계 | 8 | 6 | 14 |
고찰
본 발명자들은 여드름 환자로부터 분리된, 여드름의 증악인자로서 중요한 Staphylococcus epidermidis 13주와 Staphylococcus cohnii 1주의 Staphylococcusspp. 합계 14주의 조릿대엑기스에 대한 감수성을 한천평판희석법에 의해 검토하였다. 그 결과, 조릿대엑기스는 2%의 농도에서 이들 발육을 완전히 억제하였다.
항균약3약제 (테트라사이크린, 크린다마이신, 오프록사신)에 대한 감수성이 시험된 이들 14주에는 테트라사이크린1제내성의 균주가 2주, 크린다마이신1제내성주가 1주, 테트라사이크린과 크린다마이신의 2제내성의 균주가 2주, 오프록사신1제 내성주가 1주 함유되어 있으나, 조릿대엑기스는 이들 내성균을 균일하게 2%이하의 농도에서 발육을 저지하였다.
이상의 사실은 조릿대엑기스가 P. acnes 의 발육을 억제할 수 있는 6.25%의 농도이면, 증악인자 Staphylococcus spp. 에 대해서도 충분한 효과가 있으며, 여드름의 치료약으로서 매우 유용하다는 것을 시사한다.
시험예 22 (Acne vulgaris 환자병소유래 Staphylococcus spp. 에 대한 항균작용)
이 시험예에서는 여드름환자 병소에서 분리된 Staphylococcus epidermidis spp. 합계 44주를 사용하여, 조릿대엑기스의 항균작용을 한천평판희석법에 의해 검토하였다.
사용균주: Staphylococcus 합계 44주를 이용하였다. 또한 Escherichia coli ATCC25922, S. aureus ATCC25923을 감수성측정 정도관리용 균주로서 사용하였다. 시험액은 시험예7와 같다. 용액의 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험:
항균약의 통성균에 대한 항균력측정법에 사용되는 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도(MIC)를 측정하였다. 가능한, 일본화학요법학회표준법에 준하였다. 최종농도가 5,4, 3,2, 1, 0.5, 0.125%가 되도록 조릿대엑기스를 함유시킨 Muellar Hinton한천평판(Difco)를 만들었다. 2N NaOH수에서 배지 pH 6.1~7.1로 조정하였다. S. aureus ATCC 25922및 E. coli ATCC25922에 대한 MIC는 2%였다.
접종균액의 조정과 판정:
TSA한천배지에서 24~48시간 배양하여 얻은 피험균주의 집락을 멸균면봉으로 긁어모아, Mueller Hinton broth (Difco)중에 부유시켜, Mc Farland No 1 의 탁도의 균액을 조정하였다. 그 10 ㎕를 Mueller Hinton broth 1㎖에 부유시켜, 그 10㎕을 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 35 ℃ 20시간 호기환경하에서 배양후, 발육의 유무를 육안으로 관찰하였다.
결과를 표 32에 나타냈다.
[표 32]
Staphylococcus spp. (44주)의 조릿대엑기스 및 각종 항균약에 대한 감수성
Drug | MIC50(㎍/㎖) | MIC80(㎍/㎖) | MIC Range(㎍/㎖) |
Nadifloxacin | 0.05 | 0.78 | 25~0.025 |
Ofloxaxin | 0.39 | 0.78 | >100~0.19 |
Minocycline | 0.10 | 0.10 | 50~0.10 |
Tetracycline | 0.39 | 25 | >100~0.19 |
Clindamycin | 0.10 | >100 | >100~0.025 |
Extract | MIC50(㎍/㎖) | MIC80(㎍/㎖) | MIC Range(㎍/㎖) |
조릿대엑기스 | 0.5% | 1% | 2~0.125% |
1) Staphylococcus epidermidis 34, S. capitis 2, S. aureus 2, S. cohnii 1, S. hominis 1, S. haemolyticus 1, Staphylococcus sp.3
시험예 23 (질염 및 세균성질증관련미생물에 대한 항균작용)
시험액은 시험예 7와 같다. 50(w.v)%의 녹갈색으로, 방향을 가지며 약간 점성이 있는 산성의 액체이다.
항균력의 시험법: 혐기성균의 항균약의 항균력측정법에 따라, 변법GAM한천배지 또는 Brucella HK한천배지를 측정용 기초배지로 하여, 최소발육저지농도(MIC)를 %로 구하였다.
공시균주: Candida spp. 와 Prevotella bivia (14주), Pigmened Prevotella spp. (9주), Finegoldia, Micromonas, Peptostreptococcus의 혐기성 구균군(21주), Mobiluncus spp. (12주), Gardnerella vaginalis (11주)를 이용하였다.
성적과 정리
BV관련미생물의 통성혐기성균과 혐기성균 및 Candida spp.에 대한 조릿대엑기스의 항균력의 정도가 밝혀졌다. Candida spp. 를 3~5%에서, G. vaginalis의 발육을 6%의 농도에서, Mobiluncus spp. 를 4%의 농도에서, 혐기성구균군을 3%농도에서, Prevotella spp.를 1%의 농도에서 억제하였다.
시험예 24 (조릿대엑기스의 편성혐기성균에 대한 항균스펙톨)
혐기성균참고균주를 사용한 pH6.0과 pH7.0에서의 검토
이시험예에서는 조릿대엑기스의 항균스펙톨을 밝히는 목적으로, 일부의 까다로운 미호기성균, 통성균(Streptococcus, Lactobacillus, Actinomyces, Sutterella)를 함유하는 교실보존 편성혐기성균의 다수균주를 사용하여, 조릿대엑기스의 항균작용을 중성(pH 7.0)과 약산성(pH 6.0)부근에서 검토하였다.
사용균주: 당시설에서 보존되어 있던 참고균주를 사용하였다 [표33~36]. MIC 정도관리용 균주로서, Escherichia coli ATCC25922 와 Staphylococcus aureus ATCC25923도 사용하였다. 시험액은 시험예 7과 같다. 희석에는 멸균증류수를 사용하였다.
항균시험: 항균약의 항균력측정법에 사용된 한천평판희석법에 의해 최소발육저지농도를 측정하였다. 최종농도가 6.4, 3.2, 1.6, 0.8, 0.4, 0.2, 0.1%조릿대엑기스를 함유시킨 변법GAM 한천평판(일수제약)을 만들었다. 또한, 2N 수산화나트륨수용액과 10% 염산수를 사용하여, 배지 pH의 조정을 실시하고, 그 목표를 pH6.0과 pH7.0으로 하였다.
Brucella HK혈액한천배지 (극동제약)에서 48시간배양하여 얻은 피험균주의 집락을 사용하여, Anaerobe Broth MIC(Difco)중에 McFarland#1의 탁도의 균액을 조정하고, 10배 희석 후, 그 1백금이를 조릿대엑기스 함유 평판계열에 화선도말법에 의해 접종하였다. 본 실험 조건하에서는 1백금이에는 약 104의 세균을 함유한다.
혐기워크스테이션(군제산업)에서 35 ℃에서 2일간 배양 후 (Clostridium 에서는 1일배양 후), 생육의 유무를 육안으로 관찰하였다. 생육이 확인된 경우 (+)으로 판정하였다. 결과를 표 33~36에 나타냈다.
[표 33]
1) 혐기성구균(Peptostreptococcus, Staphylococcus, Finegoldia, Micromonas, Atopobium, Gemella)과 미호기성균(Streptococcus) 및 혐기성그람양성간균(Actinomyces, Eubacterium, Propionibacterium, Bifidobacterium)에 대한 항균력
세균명 | pH 7.2+/-0.2 | pH 5.8+/-0.2 |
Peptostreptococcus anaerobius ATCC27337 | 0.4 | ND |
Peptostreptococcus asaccharolyticus WAL3218 | 0.4 | ND |
Peptostreptococcus indolicus GAI0915 | 1.6 | ND |
Peptostreptococcus prevotii ATCC9321 | 3.2 | ND |
Micromonas micros VPI-5464-1 | 1.6 | ND |
Finegoldia magna ATCC29328 | 1.6 | ND |
Staphylococcus saccharolyticus ATCC14953 | 0.8 | ND |
Streptococcus intermedius ATCC27823 | >6.5 | 3.2 |
Streptococus constellatus ATCC27735 | >6.5 | 3.2 |
Atopobium parvulum VPI0546 | 1.6 | ND |
Gemella morbillorum ATCC27824 | 3.2 | 1.6 |
Propionibacterium acnes ATCC11828 | 6.5 | 6.5 |
Propionibacterium granulosum ATCC25564 | 6.5 | 6.5 |
Eggerthella lenta ATCC25559 | >6.5 | 6.5 |
Actinomyces odontolyticus GAI-91002 | >6.5 | 6.5 |
Bifidobacterium adolescentis ATCC15703 | >6.5 | 1.6 |
Bifidobacterium bifidum JCM1255 | 6.5 | ND |
Bifidobacterium breve ATCC15700 | 6.5 | 6.5 |
Bifidobacterium longum ATCC15707 | >6.5 | 6.5 |
Bifidobacterium pseudolongum ATCC25526 | >6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis ATCC25285 | 6.5 | 3.2 |
Bacteroides thetaiotaomicron ATCC29741 | 6.5 | 6.5 |
Escherichia coli ATCC25922 | >6.5 | 6.5 |
Staphylococcus aureus ATCC25923 | 6.5 | 1.6 |
접종균량: 108㎖ 배양시간: 48시간판정
비고: Peptostreptococcus anaerobius ATCC27337, Peptostreptococcus asacchrolyticus WAL3218, Peptostreptococccus indolicus GAI0915, Peptostreptococcus prevotii ATCC9321, Micromonas micros VPI-5464-1, Finegoldia magna ATCC29328, Staphylococcus saccharolyticus ATCC14953, Atopobium parvulum VPI0546, Bifidobacterium bifidum JCM1255는 pH 6.0에서 발육없음
[표 34]
유산간균(Lactobacillus )및 혐기성그람음성간균(Bacteroides)에 대한 항균작용
세균명 | pH 7.1 +/-0.3 | pH 5.8+/-0.3 |
Lactobacillus acidophilus JCM1132 | >6.5 | >6.5 |
Lactobacillus brevis ss. brevis JCM1059 | >6.5 | >6.5 |
Lactobacillus casei ss. casei JCM1134 | >6.5 | >6.5 |
Lactobacillus plantarum JCM1173 | >6.5 | >6.5 |
Lactobacillus reuteri JCM1149 | >6.5 | >6.5 |
Lactobacillus salivarius ss. salivarius JCM1112 | >6.5 | >6.5 |
Bacteroides fragilis GAI5562 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis ATCC 25285 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis NCTC10581 | 6.5 | 3.2 |
Bacteroides fragilis GAI-0558 페니실린내성 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis GAI-7955 페니실린내성 | 6.5 | 3.2 |
Bacteroides fragilis GAI-10150 페니실린내성 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis GAI30079 카르바페넴내성 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides fragilis GAI30144 카르바페넴내성 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides vulgatus ATCC8482 | 6.5 | 3.2 |
Bacteroides distasonis ATCC8503 | 6.5 | 3.2 |
Bacteroides ovatus ATCC8483 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides thetaiotaomicron ATCC29741 | 3.2 | 6.5 |
Bacteroides uniformis ATCC8482 | 3.2 | 3.2 |
접종균량: 107/㎖ 배양시간: 35℃ 48시간 판정
[표 35]
혐기성그람음성간균(Bacteroides, Prevotella, Porphyromonsa, Fusobacterium, Bilophila, Desulfovibrio), 미호기성균(Campylobacter, sutterella, Capnocytophaga) 및 혐기성그람음성구균(Veillonella)에 대한 항균작용
세균명 | pH7.0+/-0.2 | pH60+/-0.2 |
Bacteroides eggerthii ATCC27754 | 1.6 | 3.2 |
Bacteroides ureolyticus NCTC10941 | 0.8 | 0.8 |
Campylobacter gracilis JCM8538 | 3.2 | 3.2 |
Sutterella wadsworthensis ATCC51579 | 6.5 | 6.5 |
Prevotella bivia ATCC29303 | 0.4 | 0.8 |
Prevotella buccae ATCC33574 | 0.8 | 1.6 |
Prevotella corporis GAI91000 | 0.4 | 0.8 |
Prevotella heparinolytica ATCC35895 | 0.4 | ND |
Prevotella intermedia ATCC25611 | 0.8 | 1.6 |
Prevotella melaninogenica GAI5490 | 3.2 | 3.2 |
Prevotella oralis ATCC33269 | 1.6 | 3.2 |
Prevotella oris ATCC33573 | 0.4 | 0.8 |
Porphyromonas asaccharolytica ATCC25260 | 0.2 | ND |
Porphyromonas gingivalis ATCC33277 | 0.4 | ND |
Fusobacterium nucleatum ATCC25586 | 1.6 | 1.6 |
Fusobacterium varium ATCC8501 | 1.6 | 3.2 |
Fusobacterium necrophorum ATCC25286 | 0.8 | 0.8 |
Bilophila wadsworthia WAL7959 | 0.2 | ND |
Desulfovibrio piger DAM749 | 0.4 | ND |
Veillonella parvula ATCC10790 | 0.8 | 1.6 |
Veillonella dispar ATCC 17748 | 0.8 | 1.6 |
Capnocytophaga ochracea GAI-5586 | 1.6 | 0.4 |
Bacteroides fragilis ATCC25285 | 6.5 | 6.5 |
Bacteroides thetaiotaomicron ATCC29741 | 3.2 | 6.5 |
접종균량: 107/㎖ 배양시간: 35 ℃ 48시간 판정
비고:
Prevotella heparinolytica ATCC35895, Porphyromonas asaccharolytica ATCC25260, Porphyromonas gingivalis ATCC33277, Bilophila wadsworthia WAL7959, Desulfovibrio piger DSM749는 pH 6.0의 엑기스 불포함 대조배지에서 발육하지 않았다.
[표 36]
유아포혐기성균(Clostridium) 에 대한 항균력
세균명 | pH7.0+/-0.3 | pH6.0+/-0.3 |
Clostridium difficile GAI10029 | 1.6 | 0.4 |
Clostridium sordellii ATCC9714* | 6.5 | 1.6 |
Clostridium septicum ATCC12464* | 3.2 | 1.6 |
Clostridium perfringens ATCC13124* | 3.2 | 1.6 |
Clostridium ramosum ATCC25582 | 1.6 | 0.8 |
Clostridium clostridiiforme NCTC11224 | 0.8 | 0.8 |
Bacteroides fragilis ATCC25285 | 3.2(24Hr) | 3.2(24Hr) |
Bacteroides thetaiotaomicron ATCC29741 | 3.2(24hHr) | 3.2(24Hr) |
* Clostridium septicum, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens는 가스 괴저균군에 속한다.
접종균량: 107/㎖ 배양시간: 35 ℃ 24시간 판정
정리
조릿대엑기스의 혐기성균군에 대한 항균스펙톨의 개요가 밝혀졌다. 조릿대엑기스에 대한 MIC가 3% 이하 경우에 강한 항균력, 4%~6%의 경우, 중등도(中等度)의 항균력, 그리고 7% 이상의 경우에 약한 항균력을 나타낸다고 가정한 경우에는 이하와 같이 기술할 수 있다.
조릿대엑기스는 무아포혐기성그람양성구균(Finegoldia, Micromonas, Peptostreptococcus, Atopobium, Gemella)에 강한 항균력을 나타냈다. 그러나 미호기성균의 anginosus group에는 약한 항균력밖에 나타내지 못했다.
무아포그람양성혐기성균에는 Propionibacterium 에는 중등도의 Actinomyces, Bifidobacteru, Lactobacillus에는 약한 항균력을 나타냈다. 무아포혐기성그람음성간균에는 Prevotella, Porphyromonas, Bilophila, Desulfovivrio, Fusobacterium 에는 강한 항균작용을, Bacteroides, Sutterella에는 중등도의 항균작용을 나타냈다. 혐기성그람음성구균(Veillonella)에는 강한 항균작용을 나타냈다.Clostridium 에는 중동도의 항균작용을 나타낸 C. sordellii를 제외한 모든 균주에 강한 항균작용을 나타냈다.
본 발명의 항균제는, 파상풍균, 칸디다균(예를들어, Candida albicans, Candida glabrata), 프로피오니박테리움아크네스속균, 가스괴저균, 각종내성균(예를들어, Methicillin resistant Staphylococcus aureus), 질염및 세균성질증관련미생물 (예를들어, Finegoldia, Micromonas, Peptostreptococus) 등에는 강한 항균작용을, Actinomyces, Bifidobacterum, Lactobacillus등에는 약한 항균작용을 나타내고, 헤르페스바이러스 등의 바이러스에 대한 항바이러스작용을 나타내고, 항균성잉크, 항균성도료, 항균성일본주, 항균성접착제, 항균성음료, 항균성식품, 항균성조미료, 동식물용항균제, 방부제, 농업용살균제, 농약등으로서 유용하다. 특히, 조릿대엑기스에 유기산(예를들어 사과산)을 함유하는 본 발명의 항균제의 항균작용은 특히 현저하다.
Claims (29)
- 조릿대엑기스를 함유하는 항파상풍균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 항곰팡이제.
- 유기산을 함유하는 청구항 2 기재의 항곰팡이제.
- 곰팡이가 칸디다인 청구항 3 기재의 항곰팡이제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 항바이러스제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 항균제.
- 황색포도상구균, 프로피오니박테리움, 대장균에 대한 항균활성을 가지는 청구항 6 기재의 항균제.
- MRSA에 대한 항균활성을 가지는 청구항 6 기재의 항균제.
- 프로피오니박테리움악크네스에 대한 항균활성을 가지는 청구항 6 기재의 항균제.
- 조릿대탄닌을 함유하는 여드름치료제.
- 조릿대엑기스 및 유기산을 함유하는 항균성 조성물.
- 잉크, 도료, 식품첨가물, 음료, 조미료, 애완동물용푸드, 플라스틱성형품, 또는 접착제인 청구항 11 기재의 항균성 조성물.
- 조릿대엑기스를 함유하는 가스괴저균에 대한 항균제.
- 가스괴저균이 크로스트리듐속균인 청구항 13 기재의 항균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 무아포혐기성그람양성구균에 대한 항균제.
- 무아포혐기성그람양성구균이 피네골디아(Finegoldia), 마이크로모나스(Micromonas), 펩토스트렙토코커스(Peptostreptococcus), 아토포비움(Atopobium), 또는 게멜라(Gemella)인 청구항 15 기재의 항균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 무아포혐기성그람음성간균에 대한 항균제.
- 무아포혐기성그람음성간균이 프리보텔라(Prevotella), 포르피로모나스(Porphyromonas), 빌로필라(Bilophila), 데술포비브리오(Desulfovivrio) 또는 푸소박테리움(Fusobacterium)인 청구항 17 기재의 항균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 질염 및 세균성 질증관련미생물에 대한 항균제.
- 유기산을 함유하는 청구항 13 ∼ 19 중 어느 한 항의 항균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 조미료.
- 조릿대엑기스를 함유하는 식염인 청구항 21의 조미료.
- 유기산을 함유하는 청구항 21 또는 22항의 조미료.
- 조릿대엑기스을 함유하는 농약.
- 유기산을 함유하는 청구항 14의 농약.
- 조릿대엑기스을 함유하는 농약용 살균제.
- 유기산을 함유하는 청구항 26의 농업용살균제.
- 조릿대엑기스를 함유하는 방부제.
- 유기산을 함유하는 청구항 28의 방부제.
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