KR20040094462A - 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 다음 화학식 1로 표시되는 신규 화합물과, 이의 제조방법, 그리고 이의 약제로서의 용도를 그 특징으로 한다.
상기 화학식 1에서, R1, R2, 및 R3은 각각 발명의 상세한 설명에서 정의한 바와 같다.

Description

피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체{Pyridinyl[1,2,4]triazole derivatives}
본 발명은 전환성장인자(TGF)-β신호 경로의 억제제, 특히 제I형 또는 액티빈 유사-키나제(ALK)-5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화(phosphorylation) 억제제인 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체, 이의 제조 방법, 그리고 의약 특히 이 경로에 의해 매개되는 질환의 치료 및 예방제로서의 이의 용도에 관한 것이다.
TGF-β1은 단일막 세린/트레오닌 키나제 수용체류를 통해 신호하는 TGF-β, 액티빈, 인히빈, 골형성 단백질 및 뮬레리안(Mullerian) 억제 물질을 비롯해 시토킨류에 속하는 원형질류(prototypic member)이다. 이들 수용체는 두 가지 종류, 즉 제I형 또는 액티빈 유사 키나제(ALK) 수용체 및 제Ⅱ형 수용체로 분류할 수 있다. ALK 수용체는 (a) 세린/트레오닌 풍부 세포내 꼬리(tail)가 없고, (b) 제I형 수용체들 사이에서 매우 상동성인 세린/트레오닌 키나제 도메인을 가지며, (c) 글리신 및 세린 잔기가 풍부한 영역으로 구성된 GS 도메인이라 불리는 통상의 서열 모티프를 공유하고 있다는 점에서 제Ⅱ형 수용체와 구별된다. GS 도메인은 세포내 키나제 도메인의 아미노 말단 끝(amino-terminal end)에 위치하고 제Ⅱ형 수용체에 의한 활성화에 있어 중요하다. 연구 결과, TGF-β신호에 있어 ALK 및 제Ⅱ형 수용체가 필요하다는 것이 밝혀졌다. 구체적으로, 제Ⅱ형 수용체는 TGF-β의 존재 하에서 TGF-β, ALK5를 위한 제I형 수용체의 GS 도메인을 인산화한다. 상기 ALK5는 2개의 카르복시 말단 세린에서 세포질 단백질 samd2 및 smad3를 인산화한다. 많은 종에 있어서 일반적으로 제Ⅱ형 수용체는 세포 증식을 조절하고 제I형 수용체는 매트릭스 생성을 조절하는 것으로 여겨진다. 따라서, 제I형 수용체를 억제하고 이에 따라 매트릭스 생성을 억제하나 제Ⅱ형 수용체 매개 증식을 억제하지 않는 화합물이 바람직하다.
TGF-β1 축의 활성 및 세포외 매트릭스의 팽창은 만성 신장 질환 및 혈관 질환의 전개 및 발전에 있어 초기의 그리고 지속적인 병인이다[Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19):1286-92]. 나아가, TGF-β1은 TGF-β1 수용체 ALK5에 의한 smad3 인산화의 활성을 통해 피브로넥틴 및 플라스미노겐 활성자 억제제-1, 피부 퇴적(sclerotic deposit) 성분의 형성에 있어 어떤 역할을 수행한다[Zhang Y., Feng X.H., Derynck R., Nature, Aug. 27, 1998; 394(6696): 909-13; Usui T., Takase M., Kaji Y., Suzuki K., Ishida K., Tsuru T., Miyata K., Kawabata M., Yamashita H., Invest. Ophthalmol. Vis . Sci., Oct. 1998; 39(11): 1981-9].
신장 및 심혈관계에서 점진적인 섬유화는 질환 및 사망의 주원인이고 보건 비용의 원인이다. TGF-β1은 많은 신장 섬유증에 관여한다[Border W.A., NobleN.A., N. Engl. J. Med., Nov 10, 1994; 331(19):1286-92]. TGF-β1은 급성 및 만성 신염에서 증가한다[Yoshioka K., Takemura T., Murakami K., Okada M., Hino S., Miyamoto H., Maki S., Lab. Invest., Feb. 1993; 68(2): 154-63, diabetic nephropathy, Yamamoto T., Nakamura T., Noble N.A., Ruoslahti E., Border W.A., (1993) PNAS 90:1814-1818, allograft rejection, HIV nephropathy and angiotensin-induced nephropathy, Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19): 1286-92]. 이들 질환에서, TGF-β1의 수준은 세포외 매트릭스의 생성과 일치한다. 3개의 증거는 TGF-β1과 매트릭스 생성간의 인과관계가 존재함을 암시한다. 첫째, 통상의 사구체, 신간 세포 및 비신장 세포를 유발시켜 세포외 메트릭스 단백질을 생성하고 외인성 TGF-β1의 시험관내 프로테아제 활성을 억제할 수 있다. 둘째, TGF-β1에 대한 항체를 중화시켜 신장염에 걸린 래트에서 세포외 매트릭스의 축적을 예방할 수 있다. 셋째, TGF-β1 형질전환 마우스 또는 TGF-β1 유전자의 정상적인 래트 신장으로의 생체내 트란스펙션은 사구체경화증의 빠른 전개를 초래한다[Kopp J.B., Factor V.M., Mozes M., Nagy P., Sanderson N., Bottinger E.P., Klotman P.E., Thorgeirsson S.S., Lab Invest, June 1996; 74(6): 991-1003]. 따라서, TGF-β1 활성의 억제는 만성 신장 질환에서 치료적으로 개입한다.
TGF-β1 및 그의 수용체는 손상된 혈관에서 증가하고 풍선혈관 성형술 후의 신내막 형성에서 나타난다[Saltis J., Agrotis A., Bobik A., Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., Mar. 1996; 23(3): 193-200]. 또한, TGF-β1은평활근(SMC) 이동의 강력한 생체내 촉진제이고 동맥벽에서 SMC의 이동은 죽상경화증 및 재협착의 병인에서 한 원인이다. 더욱이, 전체 콜레스테롤에 대한 내피 세포 산물의 다변량 자료분석에서, TGF-β수용체 ALK5는 전체 콜레스테롤과 상관관계가 있다(p＜0.001) [Blann A.D., Wang J.M., Wilson P.B., Kumar S., Atherosclerosis, Feb. 1996; 120(1-2): 221-6]. 나아가, 인간의 죽상경화 상처로부터 유래된 SMC는 증가된 ALK5/TGF-β제Ⅱ형 수용체 비를 갖는다. TGF-β1은 섬유증식성 혈관 상처에서 과발현되기 때문에, 수용체-변형 세포는 세포외 매트릭스 성분을 과생산하면서 천천히 그러나 조절되지 않는 방식으로 성장할 것이다[McCaffrey T.A., Consigli S., Du B., Falcone D.J., Sanborn T.A., Spokojny A.M., Bush H.L., Jr., J Clin Invest, Dec. 1995; 96(6): 2667-75]. TGF-β1은 활성 매트릭스 합성이 일어나는 죽상경화성 상처에서 비포말 대식세포에 면역국소화(immunolocalization)되었고, 이는 비포말 대식세포가 TGF-β의존성 기전에 의한 죽상경화성 리모델링에서 매트릭스 유전자 발현의 조절에 관여한다는 것을 암시한다. 따라서, ALK5에 대한 TGF-β1의 작용 억제는 또한 죽상경화증 및 재협착에서 필요하다.
TGF-β는 또한 상처 치료에서 필요하다. TGF-β1에 대한 항체를 억제하는 것은 많은 모델에서 사용되어 왔고, 그 결과 TGF-β1 신호의 억제가 치유 과정 중 과도한 흉터 생성을 억제함으로써 부상 후 기능을 회복하는데 유익한 것으로 나타났다. 예를 들어, TGF-β1 및 TGF-β2에 대한 항체를 억제한 결과, 상처 형성을 감소시켰고, 래트에서 피부 피브로넥틴 및 콜라겐 침착을 감소시켰을 뿐 만아니라 단핵세포 및 대식세포의 수를 줄임으로써 네오더미스(neodermis)의 시토아커텍쳐(cytoarchitecture)를 증가시켰다[Shah M., J. Cell. Sci., 1995, 108, 985-1002]. 더욱이, TGF-β항체는 토끼에서 각막 손상의 치유를 개선시키고[Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747], 래트에서 위궤양의 상처 치유를 촉진시킨다[Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175]. 이들 데이타는 TGF-β의 활성 억제는 많은 조직에서 유익함을 강력히 암시하고 있고, TGF-β의 만성 상승을 갖는 임의의 질환은 smad2 및 smad3 신호 경로를 억제함으로써 호전될 수 있음을 암시하고 있다.
TGF-β는 또한 복막성 유착에 관여한다[Saed G.M., et al, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7(6), 504-510]. 따라서, ALK5의 억제는 외과 수술 이후 복막 및 피하 섬유성 유착을 예방하는데 유익할 것이다.
TGF-β1 항체는 신생혈관생성 억제 기전을 통해 누드 마우스에서 이식된 신장 종양 성장을 예방하는 것으로 여겨진다[Ananth S, et al, Journal Of The American Society Of Nephrology Abstracts, 9:433A(발췌)]. 종양 그 자체는 TGF-β에 비반응성이지만, 주위 조직은 반응성이고 TGF-β분비 종양의 신생혈관생성에 의해 종양 성장을 도와준다. 따라서, TGF-β경로의 길항작용은 전이 성장을 방지하고 암의 고통을 줄여줄 것이다.
ALK5의 억제제로서 WO 00/61576 A1은 트리아릴이미다졸 화합물을, WO 01/62756 A1은 피리디닐이미다졸 화합물을, WO 02/055077 A1은 이미다졸일 시클릭 아세탈 유도체를, WO 02/40467 A1은 2-피리딜이 치환된 벤즈이미다졸 화합물을, WO02/40476 A1은 피리딜이 치환된 트리아졸 화합물을 개시하고 있다. 또한 문헌[Callahan J.F., Burgess J.L., Fornwald J.A., Gaster L.M.,Harling J.D., Harrington F.P., Heer J., Kwon C., Lehr R., Mathur A., Olson B.A., Weinstock J., Laping N.J., J Med Chem, 2002;45(5):999-1001]은 ALK5의 억제제로서 디히드로피롤로이미다졸 화합물과 트리아릴이미다졸 화합물을 개시하고 있다.
본 발명에서는 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체가 ALK5의 강력하고 선택적인 비펩티드 억제제로서의 활성을 나타내므로, ALK5 키나제 기전에 의해 매개되는 각종 질환, 예를 들어 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 상처 치유, 관절염, 골다공증, 신질환(kidney disease), 울혈성 심부전, 궤양, 안질환, 각막 손상, 당뇨병성 신장장애, 손상된 신경 기능, 알쯔하이머병, 영양상태 이상, 죽상경화증, 복막 및 피하 유착, 폐 섬유증 및 간섬유증(단, 이들에 국한되는 것은 아님)과 같이 섬유형성이 주원인인 임의의 질환 및 재협착의 치료 및 예방에 있어 유용하다는 것을 밝힘으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체와 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는데 그 목적이 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체의 제조방법을 제공하는데 다른 목적이 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체와 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 유효성분으로 함유되어 있어 ALK5 키나제 기전에 의해 매개되는 각종 질환의 치료 및 예방제로 유효한 약제를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,4]트리아졸 유도체와 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 그 특징으로 한다.
[화학식 1]
상기 화학식 1에서,
R1은 나프틸, 안트라세닐, 또는 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬, C1-6할로알킬, O-(CH2)n-Ph, S-(CH2)n-Ph, 시아노, 페닐 및 CO2R(식 중, R은 수소 또는 C1-6알킬이고 n은 0 내지 3임)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 치환된 임의의 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜이고, R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 페닐, C1-6할로알킬, 할로, NH2, NH-C1-6알킬 또는 NH(CH2)o-Ph(식 중, o은 0 내지 3임)를 나타내고, R3는 CO2H, CONR4R5, CN, NO2, C1-6알킬티오, -SO2-C1-6알킬, C1-6알콕시, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH, CH2NH2또는 -CO2-C1-6알킬을 나타내고, R4및 R5는 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬을 나타낸다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R1은 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오 및 페닐로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 임의 치환된 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜, 특히 페닐이다. 예를 들어, R1은 벤조[1,3]디옥솔릴, 2,3-디히드로벤조[1,4]디옥시닐, 벤졸사졸릴, 벤조티아졸릴, 퀴녹살리닐, 벤조[1,2,5]옥사디아졸릴, 벤조[1,2,5]티아디아졸릴, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딜, [1,2,3]트리아졸로[1,5-a]피리딜, 디히드로벤조푸라닐, 벤조[1,4]옥사지닐-3-온 또는 벤족사졸릴-2-온이다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R2는 수소 또는 메틸이고, 특히 바람직하기로는 R2는 피리딜 고리의 질소에 대해 오르토에 위치하는 것이다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R3는 CO2H, CONH2,CN, NO2, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH 또는 CH2NH2이다.
또한, 본 발명의 특정 화합물의 예는 다음의 실시예에 기재한 바와 같다.
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수도 있는 바, 예를 들면 염산염, 황산염, 인산염, 이인산염, 브롬화수소염 및 질산염과 같은 무기산과의 염, 또는 말레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 타르트레이트, 숙시네이트, 시트레이트, 아세테이트, 락테이트, 메탄술포네이트,p-톨루엔술포네이트, 팔미테이트, 살리실레이트 및 스테아레이트와 같은 유기산과의 염을 포함한다.
본 발명의 화합물의 일부는 수성 및 유기 용매와 같은 용매로부터 결정화되거나 또는 재결정화될 수 있다. 그러한 경우, 용매화물이 형성될 수 있다. 동결건조와 같은 방법으로 제조 가능한 다양한 양의 물 함유 화합물 이외에 수화물을 비롯한 화학양론적 용매화물도 본 발명의 범위에 속한다.
상기 화학식 1로 표시되는 어떤 화합물은 광학 이성질체, 예를 들어 부분입체 이성질체 및 모든 비의 이성질체 혼합물(예, 라세미체)의 형태로 존재할 수 있다. 상이한 이성질체 형태는 통상의 방법에 의해 분리되거나 또는 분해될 수 있거나, 또는 임의의 소정 이성질체는 통상의 합성법에 의해 또는 입체특이적 또는 비대칭적 합성에 의해 수득할 수 있다.
본 발명에서의 'C1-6알킬' 및 'C1-7알킬'이란 용어는 그 자체로 또는 더 큰기(예, C1-6알콕시)의 일부로서 간에 관계없이 메틸, 에틸,n-프로필, 이소프로필,n-부틸,sec-부틸, 이소부틸 및t-부틸을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 1 내지 6개 및 1 내지 7개의 탄소원자의 직쇄 또는 분지쇄 라디칼을 의미한다.
C1-6할로알킬기는 1종 이상의 할로 원자, 특히 CF3에서 언급될 수 있는 C1-6할로알킬을 함유할 수 있다.
'할로' 또는 '할로겐'이란 용어는 서로 교환 가능하게 사용되는 용어로서 원소인 염소, 불소, 요오드 및 브롬으로부터 유도된 라디칼을 의미한다.
'C3-7시클로알킬'이란 용어는 본 발명에서 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 3 내지 7개의 탄소원자를 갖는 시클릭 라디칼을 의미한다.
'아릴'이란 용어는 본 발명에서 5 내지 14원의 치환되거나 비치환된 방향족 고리(들), 또는 페닐 및 나프틸을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 바이 또는 트리-시클릭계를 포함할 수 있는 고리 시스템을 의미한다.
'ALK5 억제제'란 용어는 본 발명에서 억제적 smad(예, smad6 및 smad7)이외의 화합물로서 ALK5를 바람직하게는 p38 또는 제Ⅱ형 수용체에 대해 선택적으로 억제하는 화합물을 의미한다.
'ALK5 매개 질환'이란 용어는 본 발명에서 ALK5에 의해 매개(또는, 조절)되는 임의의 질환, 예를 들어 TGF-β1신호 경로에서 smad2/3의 인산화의 억제에 의해 조절되는 질환을 말한다.
본 발명에서 '궤양'이란 용어는 당뇨병성 궤양, 만성 궤양, 위장 궤양 및 십이지장 궤양을 들 수 있으나, 이들에만 국한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 포함하는 바, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 공지되거나 시판중인 출발물질로부터 당 업계에 인식된 통상의 절차에 의해 제조 가능하다. 출발물질이 상업적으로 이용가능하지 않다면, 그의 합성이 본 발명에서 기술되거나 또는 당 업계에 공지된 방법에 의해 제조 가능하다.
구체적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 다음 반응식 1에 따라 제조할 수 있다.
상기 반응식 1에서 R1, R2, 및 R3은 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
상기 반응식 1에서 반응 중간물질로 생성되는 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 문헌[EP 0388528, EP 0055418, WO 94/02475, WO 01/72737, USP 5,968,967, Synthesis, pp 483-486, 1983]을 참조하여 제조하였다. 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 중간에 분리하지 않고, 바로 상기 화학식 3으로 표시되는 화합물과디클로로메탄, THF, 톨루엔 또는 크실렌 등의 용매에서 반응시켜 본 발명이 목적하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다. 이때, 염기로는 트리에틸아민, 피리딘 등을, 촉매로는 DMAP 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 중, R3가 CONH2인 상기 화학식 5로 표시되는 화합물의 경우는 다음 반응식 2에 나타낸 바와 같이 R3가 CN인 상기 화학식 4로 표시되는 화합물을 28% H2O2와 6N NaOH를 에탄올 용매 중에서 반응시켜 얻을 수 있다.
상기 반응식 2에서, R1및 R2는 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
상기 화학식 2로 표시되는 화합물의 제조방법 및 상기 화학식 2로 표시되는 화합물을 출발물질로 사용하여 본 발명이 목적하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 상세한 설명은 다음의 실시예를 통하여 상세히 설명하기로 한다.
한편, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 유효성분으로 함유되어 있어 포유동물에서 ALK5에 의해 매개되는 질환의 치료 및 예방에 유효한 약제를 포함한다.
본 발명은 ALK5에 의해 매개되는 질환을 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 ALK5 매개 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
ALK5 매개 질환에는 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 상처 치유, 관절염, 골다공증, 신질환(kidney disease), 울혈성 심부전, 궤양, 안질환, 각막 손상, 당뇨병성 신장장애, 손상된 신경 기능, 알쯔하이머병, 영양상태 이상, 죽상경화증, 복막 및 피하 유착, 폐 섬유증 및 간섬유증(단, 이들에 국한되는 것은 아님)과 같이 섬유형성이 주원인인 임의의 질환 및 재협착을 들 수 있다. 본 발명에서의 '치료'라는 용어는 예방적 또는 치료적 요법을 의미한다.
나아가, 본 발명은 TGF-β신호 경로의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제를 필요로 하는 포유동물에게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 TGF-β신호 경로의 억제 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은 포유동물에게서 TGF-β신호 경로를 억제하기 위한 약제를 제조함에 있어 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
나아가, 본 발명은 매트릭스 형성의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제를 필요로 하는포유동물에게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 매트릭스 형성을 억제하는 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은 포유동물에게서 매트릭스 형성을 억제하기 위한 약제를 제조함에 있어 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 화학식 1로 표시되는 화합물을 표준 약학 담체 또는 희석제와 당업계에 알려진 통상의 절차에 따라 배합하여 제조된 통상의 투여 형태로 투여할 수 있다. 이들 절차에는 원하는 제형에 적합하게 성분을 혼합하고, 과립화하고, 압축하거나 용해시키는 것을 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 임의의 투여 경로에 맞게 제제될 수 있고 인간을 비롯한 포유동물에 경구, 국소 또는 비경구 투여하기에 적합한 형태를 포함한다.
본 발명의 조성물은 임의의 투여 경로를 위해 제제될 수 있다. 본 발명의 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 로젠지, 크림 또는 액상 제제(예, 경구 또는 살균성 비경구 용액 또는 현탁액)의 형태일 수 있다.
본 발명의 국소 제제는 예컨대, 연고, 크림 또는 로션, 안연고 및 점안액 또는 이용액, 함침된 드레싱 및 에어로졸로 제공될 수 있고, 방부제, 약투과를 돕는 용매 및 연고 및 크림 중의 에몰리엔트와 같은 통상의 적합한 첨가제를 함유할 수 있다.
본 발명의 제제는 또한 크림 또는 오인트먼트 기재 및 로션용 에탄올 또는 올레일 알코올과 같은 상용성인 통상의 담체를 함유할 수 있다. 그러한 담체는 제제의 약 1% 내지 약 98%로 존재할 수 있다. 더욱 바람직하기로는 이들은 제제 중에 약 80% 이하로 존재할 것이다.
경구 투여용 정제 및 캡슐은 단위 투여 제공 형태로 존재할 수 있고, 결합제(예, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트 또는 폴리비닐피롤리돈)와 같은 통상의 부형제, 락토오스, 당, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신과 같은 충전제, 스테아르산 마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카와 같은 타정용 윤활제, 감자 전분과 같은 붕해제 또는 소듐 라우릴 술페이트와 같은 허용 가능한 습윤제를 함유할 수 있다. 정제는 통상의 약제 업계에 알려진 방법에 따라 코팅할 수 있다. 경구용 액상 제제는 예컨대 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르의 형태일 수 있거나, 또는 사용전 물 또는 다른 적합한 비이클과 재구성하기 위해 건조한 산물로 제공될 수 있다. 그러한 액상 제제는 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 글로코오스 시럽, 젤라틴, 히드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 또는 수소화 식용 지방과 같은 현탁화제, 렉시틴, 소르비탄 모노올레에이트 또는 아카시아와 같은 에멀젼제, 아몬드 오일, 유성 에스테르(예, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 에틸 알코올)와 같은 비수성 비이클(식용 오일을 함유할 수 있음), 메틸 또는 프로필p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산과 같은 방부제 및 원한다면 통상의 풍미제 또는 착색제와 같은 첨가제를 함유할 수 있다.
좌약은 통상의 좌약 기재, 예컨대 코코아-버터 또는 기타 글리세라이드를 함유할 것이다.
비경구 투여의 경우, 유체 단위 투여 형태는 화합물 및 살균성 비이클(물이 바람직함)을 이용해 제조한다. 화합물은 사용된 비이클 및 농도에 따라 비이클 중에 현탁화되거나 용해될 수 있다. 용액을 제조함에 있어, 본 발명의 화합물은 주입용 물에 용해시킬 수 있고, 필터는 적합한 바이알 또는 앰플로 충전시키고 밀봉시키기 전에 살균시킬 수 있다. 또한, 국소 마취제, 방부제 및 완충제와 같은 물질을 비이클 중에 용해시킬 수 있다. 본 발명의 조성물은 안정성을 증가시키기 위하여 바이알로 충전한 후에 냉동시킬 수 있고 물은 진공 하에서 제거할 수 있다. 이어서, 동결 건조된 분말을 바이알에 밀봉하고, 수반되는 주입용 물의 바이알을 사용전 액체를 재구성하기 위해 공급한다. 비경구 현탁액은 본 발명의 화합물이 용해되는 대신에 비이클 중에 현탁되고 살균이 여과를 수반할 수 없다는 점을 제외하고는 실질적으로 동일한 방식으로 제조된다. 본 발명의 화합물은 살균성 비이클에 현탁시키기 전에 에틸렌 옥사이드에 노출시킴으로써 살균 가능하다. 또한, 계면활성제 또는 습윤제를 본 발명의 조성물에 포함시켜 화합물의 균일한 분포를 촉진시킬 수도 있다.
본 발명의 조성물은 투여 방법에 따라 활성 물질을 0.1 중량% 이상, 바람직하게는 10 내지 60 중량% 함유하는 것이다. 조성물이 투여 단위를 포함하는 경우, 각각의 단위는 활성 성분을 바람직하게는 50 내지 500 mg 함유하는 것이다. 성인을 치료하는데 사용되는 투여량은 투여 경로 및 빈도에 따라 다르지만 바람직하게는 100 내지 3,000 mg/일, 예컨대 1,500 mg/일이다. 그러한 투여량은 1.5 내지 50 mg/kg/일에 해당한다. 투여량은 적합하게는 5 내지 20 mg/kg/일이다.
당 업계의 숙련자들은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 개개 투여량의 최적 양 및 간격이 치료하고자 하는 증상, 투여 형태, 경로 및 부위의 특성 및 정도에 의해 결정될 것이고, 그러한 최적 양 및 간격은 통상의 기술로 결정될 것이라는 점을 인식할 것이다. 또한, 당업자들은 치료의 최적 과정, 즉 소정의 날에 대한 화학식 1로 표시되는 화합물의 일일당 투여 회수는 치료 결정 시험의 통상적인 과정을 사용해 확인할 수 있음을 알 것이다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 상기한 투여 범위로 투여될 때, 어떠한 독성도 나타나지 않는다.
본 명세서에 인용된 특허 및 특허출원을 비롯한(이들 문헌에 국한되는 것은 아님) 모든 간행물은 마치 각각의 문헌이 참고문헌으로서 구체적이고 개별적으로 삽입된 것처럼 참고문헌으로서 인용한다.
이상에서 설명한 바와 같은 본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 아래 실시예들은 단지 예시적인 것으로 해석되어야 하며 어떠한 식으로든 본 발명의 범위를 제한하도록 사용되어서는 안될 것이다. 이들 실시예에서, 질량 스펙트럼은 전자분무(ES)이온화기술에 의한 Micromass Platform(M@ldi사 제품)을 사용해 수행하였다. 그리고 핵자기 공명 스펙트럼은 Varian Technology사에 의한 Unity INOVA 400MHz FT-NMR을 사용하여 구조를 분석하였다.
실시예 1: 4-(5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-피리딘-2-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일)벤조니트릴(A1)
4-시아노벤즈이미드산 메틸 에스테르(556 mg, 3.43 mmol, 1.34 당량)를 무수 디클로로메탄(100 mL)에 녹인 후, 상온에서 피페로닐일 클로라이드(552 mg, 3.00 mmol, 1.20 당량), 트리에틸아민(0.475 mL, 3.43 mmol, 1.34 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(50 mg, 0.41 mmol, 0.16 당량)를 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 6시간 동안 교반하였다. 이후 히드라지노피리딘(273 mg, 2.50 mmol, 1.00 당량)을 가하고 상온에서 6시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(10 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 에테르와 디클로로메탄을 1대 15의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A1을 얻었다 (330 mg, 34.6%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.99(s, 2H), 6.79(d, 1H), 7.03(d, 1H), 7.06(dd, 1H), 7.39(q, 1H), 7.58(d, 1H), 7.73(d, 2H), 7.88(td, 1H), 8.33(d, 2H), 8.52(dd, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 101.84,108.68, 109.59, 119.05, 119.79, 124.10, 124.43, 127.36, 132.66, 139.18, 149.39; MSm/z368(MH+)
실시예 2: 4-(5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-피리딘-2-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일)벤즈아미드(A2)
A1(198 mg, 0.54 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.120 mL, 1.89 mmol, 3.5 당량)와 6N NaOH(0.023 mL, 0.135 mmol, 0.25 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×30 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대19의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A2를 얻었다 (164 mg, 78.8%).1H NMR(400MHz, CD3OD) δ 6.04(s, 2H), 6.85(d, 1H), 7.04(s, 1H), 7.07(dd, 1H), 7.54(q, 1H), 7.73(d, 1H), 8.03(d, 2H), 8.07(q, 1H), 8.27(d, 2H), 8.52(d, 1H),NH not observed;13C NMR(400MHz, CD3OD) δ 100.99, 107.27, 108.14, 119.23, 120.54, 122.86, 123.82, 125.46, 127.12, 132.55, 133.86, 138.67, 146.97, 147.97, 148.71, 149.82, 154.75, 159.75, 161.88, 162.18, 162.47, 168.94
실시예 3: 4-[5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1 H -[1,2,4] 트리아졸-3-일)벤조니트릴(A3)
4-시아노벤즈이미드산 메틸 에스테르(486 mg, 3.00 mmol, 1.00 당량)를 무수 디클로로메탄(90 mL)에 녹인 후, 상온에서 피페로닐일 클로라이드(556 mg, 3.00 mmol, 1.00 당량), 트리에틸아민(0.475 mL, 3.43 mmol, 1.14 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(36 mg, 0.30 mmol, 0.10 당량)를 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 6시간 동안 교반하였다. 이후 (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(369 mg, 3.00 mmol, 1.00 당량)을 가하고 상온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(10 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 에테르와 디클로로메탄을 1대 20의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써표제 화합물 A3을 얻었다 (293 mg, 25.7%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.54(s, 3H), 5.99(s, 2H), 6.77(dd, 1H), 7.05(s, 1H), 7.07(dd, 1H), 7,26(t, 2H), 7.73(m, 3H), 8.32(d, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.40, 101.79, 108.51, 109.69, 113.00, 116.99, 119.06, 121.82, 124.15, 124.39, 127.39, 132.62, 135.15, 139.20, 147.85, 149.54, 150.23, 159.25, 160.36; MSm/z382(MH+)
실시예 4: 4-[5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1 H -[1,2,4] 트리아졸-3-일)벤즈아미드(A4)
A3(190 mg, 0.50 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.120 mL, 1.89 mmol, 3.78 당량)와 6N NaOH(0.023 mL, 0.135 mmol, 0.27 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×30 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대19의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A4를 얻었다 (153 mg, 76.6%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.53(s, 3H), 5.85(br s, 1H), 5.98(s, 2H), 6.14(br s, 1H), 6.77(d, 1H), 7.07(m, 2H), 7.23(d, 1H), 7.27(d, 1H), 7.71(t, 1H), 7.88(d, 2H), 8.29(d, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.39, 101.74, 108.48, 109.74, 117.00, 122.02, 124.01, 124.15, 127.11, 127.88, 134.05, 134.32, 139.15, 147.79, 149.41, 150.32, 155.64, 159.15, 161.04, 169.23; MSm/z400(MH+)
실시예 5: 4-(1-피리딘-2-일-5-퀴녹살린-6-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일)벤조니트릴 (A5)
4-시아노벤즈이미드산 메틸에스테르(518 mg, 3.23 mmol, 1.13 당량)를 무수 디클로로메탄(25 mL)에 녹인 후, 상온에서 퀴녹살린일 클로라이드(621 mg, 3.22 mmol, 1.13 당량), 트리에틸아민(0.500 mL, 3.61 mmol, 1.26 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(36 mg, 0.30 mmol, 0.11 당량)을 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 14시간 동안 교반하였다. 이후 히드라지노피리딘(311 mg, 2.85 mmol, 1.00당량)을 가하고 상온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(2×10 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 에테르와 디클로로메탄을 1대 2의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A5를 얻었다 (295 mg, 27.6%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.41(m, 1H), 7.79(dd, 2H), 7.83(d, 1H), 7.96(td, 1H), 8.04(dd, 1H), 8.16(d, 1H) 8.35(d, 1H), 8.40(m, 3H), 8.90(dd, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 113.33, 118.91, 118.96, 124.60, 127.41, 129.86, 130.29, 130.64, 130.84, 132.76, 134.77, 139.46, 142.61, 143.68, 146.04, 146.28, 149.01, 150.72, 154.90, 160.84; MSm/z376(MH+)
실시예 6: 4-(1-피리딘-2-일-5-퀴녹살린-6-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일)벤즈아미드 (A6)
A5(129 mg, 0.34 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.100 mL, 1.58 mmol, 4.65 당량)와 6N NaOH(0.020 mL, 0.117 mmol, 0.34 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×35 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A6을 얻었다 (93 mg, 69.5%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.71(br s, 1H), 6.11(br s, 1H), 7.36(m, 1H), 7.81(d, 1H), 7.92(m, 3H), 8.02(dd, 1H), 8.12(d, 1H), 8.34(m, 4H), 8.86(dd, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 118.93, 124.46, 127.16, 128.04, 129.82, 130.54, 130.78, 130.81, 134.00, 134.32, 146.00, 146.21, 148.97, 161.55, 168.97; MSm/z394(MH+)
실시예 7: 4-[1-(6-메틸피리딘-2-일)-5-퀴녹살린-6-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤조니트릴(A7)
4-시아노벤즈이미드산 메틸 에스테르(332 mg, 2.07 mmol, 1.28 당량)를 무수 디클로로메탄(25 mL)에 녹인 후, 상온에서 퀴녹살린일 클로라이드(396 mg, 2.06 mmol, 1.27 당량), 트리에틸아민(0.305 mL, 2.20 mmol, 1.36 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(20 mg, 0.16 mmol, 0.10 당량)을 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 14시간 동안 교반하였다. 이후 (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(200 mg, 1.62 mmol, 1.00 당량)을 가하고 상온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(50 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(2×25 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 에테르와 디클로로메탄을 1대 3의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A7을 얻었다 (145 mg, 23.0%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.38(s, 3H), 7.25(d, 1H), 7.54(d, 1H), 7.78(m, 3H), 8.05(dd, 1H), 8.13(d, 1H), 8.38(m, 3H), 8.90(dd, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.09, 113.21, 115.81, 118.97, 124.20, 127.41, 129.52, 130.37, 130.84, 130.87, 132.70, 134.85,139.47, 142.52, 143.61, 146.00, 146.23, 149.92, 154.79, 158.87, 160.67; MSm/z390(MH+)
실시예 8: 4-[1-(6-메틸피리딘-2-일)-5-퀴녹살린-6-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤즈아미드(A8)
A7(131 mg, 0.34 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.100 mL, 1.58 mmol, 4.65 당량)와 6N NaOH(0.020 mL, 0.117 mmol, 0.34 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×35 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A8을 얻었다 (88 mg, 63.5%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.31(s, 3H), 5.71(br s, 1H), 6.13(br s, 1H), 7.17(d,1H), 7.49(d, 1H), 7.72(d, 1H), 7.88(d, 2H), 8.00(dd, 1H), 8.07(d, 1H), 8.31(m, 3H), 8.25(dd, 2H);13C NMR(400MHz, DMSO-d 6 ) δ 23.21, 115.42, 123.58, 125.72, 127.78, 128.56, 129.67, 129.79, 130.01, 132.43, 134.96, 139.30, 141.52, 142.59, 145.88, 146.08, 149.22, 153.71, 157.49, 160.29, 167.62; MSm/z408(MH+)
실시예 9: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-피리딘-2-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤조니트릴(A9)
4-시아노벤즈이미드산 메틸 에스테르(642 mg, 4.00 mmol, 1.00 당량)를 무수 디클로로메탄(25 mL)에 녹인 후, 상온에서p-아니솔일 클로라이드(689 mg, 4.00 mmol, 1.00 당량), 트리에틸아민(0.610 mL, 4.40 mmol, 1.10 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(49 mg, 0.40 mmol, 0.10 당량)를 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 14시간 동안 교반하였다. 이후 히드라지노피리딘(443 mg, 4.00 mmol, 1.00 당량)을 가하고 상온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(30 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(2×25 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트와 헥산, 디클로로메탄을 1대 2대 1의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A9를 얻었다 (377 mg, 25.0%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 3.84(s, 3H), 6.87(td, 2H), 7.35(m, 1H), 7.48(td, 2H), 7.53(d, 1H), 7.72(dd, 2H), 8.85(td, 1H), 8.32(dd, 2H), 8.51(dd, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 55.58, 113.01, 114.16, 116.29, 119.06, 119.79, 120.42, 124.33, 127.17, 127.38, 130.86, 132.63, 135.15, 139.09, 149.37, 151.12, 156.15, 160.49, 161.40; MSm/z354(MH+)
실시예 10: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-피리딘-2-일-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤즈아미드(A10)
A9(91 mg, 0.25 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(10 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.073 mL, 1.15 mmol, 4.60 당량)와 6N NaOH(0.015 mL, 0.088 mmol, 0.35 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×20 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A10을 얻었다 (78 mg, 81.0%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 3.84(s, 3H), 5.71(br s, 1H), 6.16(br s, 1H), 6.90(td, 2H), 7.39(m, 1H), 7.53(td, 2H), 7.58(d, 1H), 7.88(td, 1H), 7.91(d, 2H), 8.34(td, 1H), 8.53(m, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 55.58, 114.13, 119.80, 120.66, 124.17, 127.10, 127.90, 130.88, 134.07, 134.34, 139.04, 149.32, 151.23, 155.94, 161.19, 161.30. 169.10
실시예 11: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤조니트릴 (A11)
4-시아노벤즈이미드산 메틸 에스테르(160 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)를 무수 디클로로메탄(15 mL)에 녹인 후, 상온에서p-아니소일 클로라이드(172 mg, 1.00mmol, 1.00 당량), 트리에틸아민(0.154 mL, 1.11 mmol, 1.11 당량), 그리고 촉매량의 DMAP(12 mg, 0.10 mmol, 0.10 당량)을 가하였다. 반응 온도를 30 ℃로 올리고 14시간 동안 교반하였다. 이후 (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(123 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)을 가하고 상온에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물에 물(30 mL)을 가하고 유기층을 분리하였다. 수용액층은 디클로로메탄(2×10 mL)으로 추출하였다. 혼합된 유기용매를 포화 소금물로 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트와 헥산, 디클로로메탄을 1대 2대 1의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A11을 얻었다 (117 mg, 31.8%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.51(s, 3H), 3.80(s, 3H), 6.85(td, 2H), 7.23(m, 2H), 7.49(td, 2H), 7.70(m, 3H), 8.32(td, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.37, 55.57, 112.93, 113.99, 116.96, 119.08, 120.49, 124.04, 127.41, 130.92, 132.59, 135.28, 139.14, 150.38, 156.11, 159.20, 160.40, 161.35; MSm/z368 (MH+)
실시예 12: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1 H -[1,2,4]트리아졸-3-일]벤즈아미드(A12)
A11(160 mg, 0.45 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(10 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.131 mL, 2.07 mmol, 4.60 당량)와 6N NaOH(0.027 mL, 0.158 mmol, 0.35 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×30 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대 9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A12를 얻었다 (141 mg, 84.4%).1H NMR(400MHz, CD3OD) δ 2.49(s, 3H), 3.78(s, 3H), 4.32(br d, 2H), 6.85(d, 2H), 7.23(dd, 2H), 7.42(d, 2H), 7.23(t, 1H), 7.90(d, 2H), 8.20(d, 2H);13C NMR(400MHz, CD3OD) δ 24.18, 55.75, 114.43, 117.65, 120.16, 124.80, 127.23, 128.47, 131.15, 134.08, 134.74, 139.89, 150.31, 156.43, 159.61, 161.34, 161.87, 170.95
한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 다음은 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
제제 1 : 정제의 생산(직접 가압)
활성성분 5.0 ㎎
락토스 14.1 ㎎
Crospovidone USNF 0.8 ㎎
마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎
총무게 20 ㎎/정제
활성성분을 체로 친 후 부형제와 함께 섞었다. 이 혼합물을 가압하여 정제로 만들었다.
다른 방법으로, 활성성분과 락토스를 물에 녹여 동결건조시켰다. 건조 혼합물을 부형제와 함께 섞은 후 가압하여 정제로 만들었다.
제제 2 : 정제의 생산(습식 조립)
활성성분 5.0 ㎎
폴리솔베이트 80 0.3 ㎎
락토스 16.0 ㎎
녹말 4.0 ㎎
콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7 ㎎
마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎
총무게 30 ㎎/정제
활성성분을 체로 친 후 락토스, 녹말과 섞었다. 폴리솔베이트 80을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음 분말을 미립화하였다. 건조 후에, 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드, 마그네슘 스테아레이트와 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 만들었다.
제제 3 : 분말과 캡슐 약제의 생산
활성성분 5.0 ㎎
락토스 14.8 ㎎
폴리비닐 피롤리돈 10.0 ㎎
마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎
총무게 30 ㎎/캡슐
활성성분을 체로 친 다음 부형제와 함께 섞었다. 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 단단한 No. 5 젤라틴 캡슐에 채웠다.
[생물학적 데이타]
본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 아래 시험을 사용해 평가하였다.
ALK5 키나제의 SMAD3 인산화를 측정하는 방법 .
ALK5 키나제 도메인은 206번째 아미노산부터 498번째 아미노산까지 293개의 아미노산으로 구성된 부분을 베큘로바이러스(baculovirus) 발현 시스템에서 his표지자를 붙여서 발현시켰다. 발현된 도메인은 니켈-NTA 컬럼을 사용하여 정제하였다. 기질 단백질인 SMAD3 단백질은 전체크기에 해당하는 625개의 아미노산으로 구성된 부분을 베큘로바이러스(baculovirus) 발현 시스템에서 his 표지자를 붙여서 발현시킨 후, 니켈-NTA 컬럼을 사용하여 정제하였다. 정제한 ALK5 키나제 도메인을 반응 완충용액[20 mM Tris-HCl(pH 7.5), 20 mM MgCl2, 50 μM 기질 단백질(SMAD3), 40 μM ATP, 1 μCi(γ-32P ATP) 100 ㎕ 에 더한 다음 30 ℃에서 10분간 반응시킨 후 얼음에 방치하여 반응을 정지시켰다. 전체 반응물에서 50 ㎕를 덜어내어 phosphocellulose disk sheet로 옮기고 난 뒤, 1% 인산으로 1번 세척하고, 증류수로 2번 더 세척한 다음 sheet를 씬틸레이션 바이알(scintillation vial)로 옮겼다. 바이알(Vial)에 씬틸레이션 칵테일(scintillation cocktail) 4 mL를 더해서 충분히 혼합한 후에 씬틸레이션 카운터(scintillation counter)를 이용하여 방사능을 측정하였다.
Western blot을 이용하여 매트릭스 표지자 및 기질의 인산화 억제를 조사 .
신장 상피암 세포주인 A498 세포를 DMEM 배지에서 90% 이상 융합하도록 배양한 다음, 배양배지를 제거하고 우태아혈청이 첨가되지 않은 배양배지로 24시간 동안 배양한 후, 4시간 동안 화합물로 처리한 다음, TGF-beta를 10 ng/mL 의 농도로 8시간 처리하였다. 세포를 모은 다음, 세포용해완충용액 [Tris-HCl 50 mM(pH 7.4), NP40 1%, Na-deoxycholate 0.25%, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, Aprotinin, leupeptin, pepstatin 1 ㎍/mL each, Na3VO41 mM, NaF 1 mM] 을 처리하여 전체 추출물을 얻었다. 이중 25 ㎕의 세포전체 추출물에 5X 로딩 완충용액을 6 ㎕ 첨가하여 잘 섞은 후, 8% 아크릴아마이드 겔에서 전기영동하였다. SDS-PAGE 후 나일론 막으로 옮기고, 항 피브로넥틴 항체를 이용하여 western blot을 수행하였다. 반응은 다음과 같다. 나일론 막을 5% 탈지우유 및 0.1% 트윈(tween)이 포함된 인산염 완충용액에 담근 후 4 ℃에서 밤새 반응시키고 나서 0.1% 트윈(tween)이 포함된 인산염 완충용액으로 3번 세척하였다. 세척된 나일론 막에 1차 항체로 1시간 상온에서 반응시키고 난 뒤 인산염 완충용액으로 3번 세척하고, 2차 항체로 1시간 상온에서 반응시킨다. 반응 후 0.1% 트윈이 포함된 완충용액으로 4번 세척 후 ECL 탐지 키트(Amersham)를 이용하여 화합물에 의한 억제정도를 가시화하였다.
본 발명의 화합물은 일반적으로 0.0001 내지 10 μM 값의 ALK5 수용체 조절 활성을 보여준다.
경구독성 시험
본 발명에 따른 몇몇 화합물에 대해서는 래트를 대상으로 급성독성 시험을 수행하였다. 그 결과 경구 투여량 10 mg/kg 까지는 목적에 반하는 심각한 독성의 증상이 없으며, 경구 투여량 100 mg/kg 까지는 사망이 전혀 없었다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 매트릭스 형성의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제 활성이 우수하므로, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매트릭스 형성의 억제가 요구되는 질환의 치료 및 예방에 유효하다.

Claims (8)

  1. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 :
    [화학식 1]
    상기 화학식 1에서,
    R1은 나프틸, 안트라세닐, 또는 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬, C1-6할로알킬, O-(CH2)n-Ph, S-(CH2)n-Ph, 시아노, 페닐 및 CO2R(식 중, R은 수소 또는 C1-6알킬이고 n은 0 내지 3임)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 치환된 임의의 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜이고;
    R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 페닐, C1-6할로알킬, 할로, NH2, NH-C1-6알킬 또는 NH(CH2)o-Ph(식 중, o은 0 내지 3임)를 나타내고;
    R3는 CO2H, CONR4R5, CN, NO2, C1-6알킬티오, -SO2-C1-6알킬, C1-6알콕시, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH, CH2NH2또는 -CO2-C1-6알킬을 나타내고, R4및 R5는독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이다.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 R1은 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오 및 페닐로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 임의 치환된 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜이고; 상기 R2는 수소 또는 메틸이고, 상기 메틸 치환체는 피리딜 고리의 질소에 대해 오르토에 위치하고; 상기 R3는 CO2H, CONH2, CN, NO2, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH 또는 CH2NH2인 것임을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 R1은 벤조[1,3]디옥솔릴, 2,3-디히드로벤조[1,4]디옥시닐, 벤졸사졸릴, 벤조티아졸릴, 퀴녹살리닐, 벤조[1,2,5]옥사디아졸릴, 벤조[1,2,5]티아디아졸릴, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딜, [1,2,3]트리아졸로[1,5-a]피리딜, 디히드로벤조푸라닐, 벤조[1,4]옥사지닐-3-온 또는 벤족사졸릴-2-온인 것임을 특징으로 하는 화합물.
  4. 다음 화학식 2로 표시되는 화합물과 다음 화학식 3으로 표시되는 히드라지노피리딘 화합물을 반응시켜 제조하는 것을 특징으로 하는 다음 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
    상기에서 R1, R2, 및 R3은 각각 상기 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
  5. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염과, 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물 :
    [화학식 1]
    상기 화학식 1에서, R1, R2및 R3은 각각 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 조성물이 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 상처 치유, 관절염, 골다공증, 신질환(kidney disease), 울혈성 심부전, 궤양, 안질환, 각막 손상, 당뇨병성 신장장애, 손상된 신경 기능, 알쯔하이머병, 영양상태 이상, 죽상경화증, 복막 및 피하 유착, 섬유형성이 주원인인 임의의 질환 및 재협착으로부터 선택된 질환의 치료 및 예방을 목적으로 사용되는 것임을 특징으로 하는 약학 조성물.
  7. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 TGF-β신호 경로를 억제하는 방법 :
    [화학식 1]
    상기 화학식 1에서, R1, R2및 R3은 각각 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
  8. 다음 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 포유동물에서의 매트릭스 형성을 억제하는 방법 :
    [화학식 1]
    상기 화학식 1에서, R1, R2및 R3은 각각 청구항 1에서 정의한 바와 같다.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR100808551B1 (ko) * 2006-12-01 2008-03-03 한국생명공학연구원 트리아졸 유도체를 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물

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KR100808551B1 (ko) * 2006-12-01 2008-03-03 한국생명공학연구원 트리아졸 유도체를 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물

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