KR20040003043A - 키메라 플라비바이러스 벡터 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 벡터의 엔벨로프 단백질 내에 삽입된 이종 펩타이드를 포함하는 키메라 플라비바이러스 및 이러한 벡터들을 이용하는 방법을 제공한다.
Description
플라비바이러스는 소형의, 피복 양성-가닥 (enveloped positive-strand) RNA 바이러스이다. 플라비바이러스 단백질은 다기능단백질(polyprotein)을 생산하는 단일의 긴 개방 해독 틀(open reading frame)의 해독(translation)에 의하여 생산되는데, 다기능단백질은 해독 이후에 성숙한 바이러스 단백질을 생성하기 위해 숙주와 바이러스의 단백질 분해효소의 조합(combination)에 의한 복잡한 일련의 해독후 단백질 가수분해 절단(post-translational proteolytic cleavages)을 거친다 (Amberg 등, J. Virol. 73:8083-8094, 1999; Rice, "Flaviviridae", InVirology,Fields(ed.), Raven-Lippincott, New York, 1995, Volume I, p.937). 바이러스의 구조 단백질은 다기능단백질에서 C-prM-E의 순서로 배열되어 있는데, "C"는 캡시드(capsid)를, "prM"은 바이러스 엔벨로프-결합 M 단백질의 전구체를, "E"는 엔벨로프 단백질(envelope protein)을 의미한다. 이러한 구조 단백질은 다기능단백질의 N 말단 영역에 존재하는 반면에, 비구조 단백질(non-structural proteins; NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B 및 NS5)은 다기능단백질의 C 말단 영역에 존재한다.
황열 바이러스 백신 균주(YF 17D)의 C 및 비구조 단백질 및 약독화된 일본뇌염 바이러스(SA 14-14-2) 균주의 prM 및 E 단백질을 포함하는 키메라 플라비바이러스가 제작되었다. ChimeriVaxTM-JE로 명명된 이 키메라는 면역화되지 않은 대조군과 비교할 때, 면역화된 레서스 원숭이(rhesus monkeys)에서 일본 뇌염(JE)에 대한 중화 항체(neutralizing antibodies)의 생산을 유도할 뿐만 아니라 JE 시험감염 이후에 이들 원숭이들을 임상적으로 나타나는 뇌염 증상으로부터 보호하는 것으로 입증되었다. ChimeriVaxTM-JE는 사람 백신으로서의 임상전 안전성 요건들을 충족하는 것으로 확인되었다 (Monath 등, J. Virol. 74(4):1742-1751, 2000).
YF 17D의 C 및 비구조 단백질과 뎅기(Dengue)-2 균주의 prM 및 E 단백질을 포함하는 유사한 키메라도 만들어졌다. ChimeriVax-D2로 명명된 이 키메라는 면역화되지 않은 대조군과 비교할 때, 레서스 원숭이에서 뎅기-2 바이러스에 대한 중화항체를 유도할 뿐만 아니라, 이들 원숭이들을 뎅기-2의 시험감염 이후에 나타나는 바이러스 혈증으로부터 보호하는 것으로 확인되었다. ChimeriVax-D2 또한 안전하고 유전적으로 안정한 것으로 나타났다 (Guirakhoo 등, J. Virol. 74(12):5477-5485, 2000).
본 발명은 키메라 플라비바이러스 벡터 및 이 벡터들을 이용하는 방법에 관한 것이다.
도 1은 JE 엔벨로프를 코드화하는 유전자를 이용하여 수행된 전이인자 돌연변이유발 방법의 개략도이다.
도 2는 JE 엔벨로프를 코드화하는 유전자의 Tn5 삽입 돌연변이체의 PCR분석 결과를 도시한 것이다. JE 엔벨로프 내에 전이인자를 포함하는 안정한 클론들은 레인 1, 2, 8 및 10에; pUC19 벡터 내에 전이인자를 포함하는 클론들은 레인 3 및 4에; JE 엔벨로프 내에 전이인자를 포함하는 불안정한 클론들은 레인 5-7 및 9에; 1 킬로베이스 마커는 레인 11에 나타내었다.
도 3은 선택 돌연변이 플라스미드(select mutant plasmids)의 PCR 맵핑(mapping) 결과를 도시한 것이다. 이 분석 결과는 JE 엔벨로프로 내로의 삽입의 무작위성을 입증해 준다. 레인 1-13은 13개의 클론들의 PCR 산물을 나타내고, 레인 14는 1 킬로베이스 마커를 포함한다.
도 4는 베로 세포(Vero cells)의 트랜스펙션을 위해 선택된 5개의 돌연변이체 클론의 아미노산 서열을 도시한 것이다. JE 엔벨로프 서열은 진한 글자체로 나타내었고, 전좌가 일어날 삽입 서열은 밑줄로 표시하였다. 각 라인의 첫번째 대시(dash)의 왼쪽 및 두번째 대시의 왼쪽에 각각 존재하는 세 개 아미노산의 반복되는 세트인 나머지 서열들은, 전이인자 돌연변이유발 과정의 인공물이다.
도 5는 JE의 엔벨로프 당단백질의 개략도인데, 단백질의 정해진 입체형태 에피토프(defined conformational epitope)에 대한 삽입 부위를 보여주는 것이다. 화살표는 베로 세포(Vero cells)의 트랜스펙션을 위해 선택된 5개의 독립적인 JE 엔벨로프 돌연변이체의 대략적인 삽입부위를 가리킨다. 괄호 안의 숫자는 19 아미노산 삽입체에 선행하는 JE 엔벨로프 아미노산을 나타낸다.
도 6은 5개의 유일 클론(2개는 중복해서)으로부터 만들어진 RNA에 의해 트랜스펙션된 베로 세포로부터 추출한 RNA로부터 합성된 cDNA의 RT-PCR 분석 결과를 도시한 것이다. 57개의 염기쌍 링커(linker)를 포함하는 1.9 킬로베이스의 삽입체는 각 클론으로부터 증폭되었고, 자손 바이러스의 생산을 확인해 준다. 레인 1에서 1 킬로베이스 마커가 분획화된다. 레인 2-8은 각각 클론Ⅰ-10-2, 클론 Ⅰ-10-3, 클론 Ⅱ-4-3, 클론 Ⅱ-4-6, 클론 Ⅰ-1, 클론 Ⅲ-6 및 클론 Ⅳ-8-1에 해당한다.
도 7은 P2 내지 P6에서(각각, 레인 2-6 및 레인 8-12)에서의 클론Ⅰ-10 cDNA의 PCR 분석 결과를 도시한 것이다. 왼쪽 패널 상의 분획된 시료는 JE 엔벨로프 특이적 프라이머를 사용하여 수득한 것이고, 오른쪽 패널 상의 분획된 시료는 전이인자-특이적 프라이머를 이용하여 수득한 것이다. 1 킬로베이스 마커는 레인 1에 분획되어 있고, 100 염기쌍 마커는 레인 7에 분획되어 있다.
도 8은 P2 내지 P6에서의 감염성 클론Ⅰ-10의 RT-PCR 산물의 뉴클레오타이드 서열을 트랜스펙션 이전의 플라스미드Ⅰ-10 서열과 나란히 정렬하여 나타낸 것이다. 화살표는 이황화 결합(disulfide bond)을 형성할 가능성이 있고, 엔벨로프 단백질 상에서 펩타이드를 안정화시킬 가능성이 있으며 삽입체를 분자 표면 상에 있게하는 삽입체 내에 존재하는 두 개의 시스테인 잔기를 가리킨다.
도 9는 JE 엔벨로프 당단백질의 3차원 구조의 개략도로, 아미노산 287 위치에 있는 허용가능한 부위(permissive site)가 중심(Ⅰ) 도메인과 이합체화 도메인(Ⅱ) 사이에 존재하고, 표면 노출된 것처럼 보인다는 것을 도시한 것이다.
도 10은 Ⅰ-10 감염성 클론의 생장 특성을 도시한 그래프이다. 삼각형으로 표시된 라인은 전이인자 돌연변이체Ⅰ-10의 역가(titer)에 해당하고, 사각형으로 표시된 라인은 YE/JE 모(parent) 바이러스의 역가에 해당한다.
도 11은 전이인자 돌연변이체Ⅰ-10의 중화 분석(neutralization analysis) 결과를 나타낸 그래프이다. 다이아몬드로 표시된 라인은 항-JE 혈청과 함께 인큐베이션된 시료의 역가에 해당하고, 사각형으로 표시된 라인은 정상 혈청과 함께 인큐베이션된 시료에 해당하며, 점섬은 평균치를 나타낸다.
도 12는 YE/JE 대조군의 중화 분석 결과를 나타낸 그래프이다. 다이이몬드로 표시된 라인은 항-JE 혈청과 함께 인큐베이션된 시료의 역가에 해당하고, 사각형으로 표시된 라인은 정상 혈청과 함께 인큐베이션된 시료에 해당하며, 점섬은 평균치를 보여주는 것이다.
[발명의 상세한 설명]
본 발명은 키메라 플라비바이러스 또는 유전적으로 약독화된 플라비바이러스 (예컨대, YF 17D) 내의 이종 펩타이드가 도입될 수 있는 엔벨로프 단백질의 부위를 확인하는 방법, 그러한 펩타이드를 포함하는 엔벨로프 단백질을 갖는 키메라 플라비바이러스 벡터 및 이러한 펩타이드들을, 예를 들어, 펩타이드가 유도된 병원체에 대한 면역반응을 유도하기 위해 벡터 투여에 의해 전달하는 방법을 제공한다. 이하에서 이러한 벡터, 펩타이드, 및 방법에 대해 상세하게 설명한다.
키메라 플라비바이러스 벡터
본 발명에서 사용할 수 있는 키메라 바이러스는 구조 단백질(또는 단백질들)이 제 2 바이러스의 대응하는 구조 단백질(또는 단백질들)로 대체된 제 1 플라비바이러스(즉, 백본 플라비바이러스)로 구성된다. 예를 들어, 키메라는 prM 및 E 단백질이 제 2 바이러스의 prM 및 E 단백질로 대체된 제 1 플라비바이러스로 구성될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 키메라 바이러스는 어떠한 바이러스 조합에 의해서도만들어질 수 있다. 본 발명에서 사용되는 특정 플라비바이러스의 예로는, 제 1 또는 제 2 바이러스로서, 일본 뇌염, 뎅기열(항원형 1-4), 황열병, 머레이 벨리 뇌염(Murray valley encephalitis), 세인트 루이스 뇌염(St. Louis encephalitis), 웨스트 나일(West Nile), 쿤진(Kunjin), 로시오 뇌염(Rocio encephalitis) 및 일헤우스(Ilheus)와 같은 모기-매개 플라비바이러스; 중부 유럽 뇌염(Central European encephalitis), 시베리아 뇌염, 러시아 봄-여름 뇌염(Russian Spring-Summer encephalitis), 키아사누 포레스트 질병(Kyasanur Forest Disease), 옴스크 출혈열(Omsk Hemorrhagic Fever), 도약병(Louping ill), 포와산(Powassan), 네기쉬(Negishi), 엡세타로프(Absettarov), 한살로바(Hansalova), 아포이(Apoi) 및 하이프르 바이러스(Hypr virus)와 같은 진드기-매개 바이러스; 헤파시바이러스 속(예를 들어, C형 간염 바이러스)을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 키메라 바이러스를 만드는 상세한 내용은 예를 들어 미국 특허 출원 제 09/007,664호, 동09/121,587호 및 동09/452,638호; 국제출원 PCT/US98/03894 및 PCT/US00/32821; 및 챔버스(Chambers)등, J.Virol. 73: 3095-3101, 1999에 제공되어 있으며, 각각은 그 전문이 본원에 참고문헌(reference)으로 포함된다.
본 발명에 사용될 수 있는 타입의 키메라 바이러스의 구체적인 예는 황열병 사람 백신 균주인 YF 17D로서, prM 및 E 단백질이 일본 뇌염 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 세인트 루이스(St. Louis) 바이러스, 머레이 벨리(Murray valley) 뇌염 바이러스, 뎅기열 바이러스, 또는 위에서 나열된 것들중 임의의 하나와 같은 기타의 임의의 다른 플라비바이러스의 prM 및 E 단백질로 대체된 것이다. 예를 들어, 미국 버지니아주의 매나세스(Manassas)에 있는 ATCC(American Type Culture Collection)에 부다페스트 조약에 따라 1998년 1월 6일자로 기탁된 이하의 키메라 플라비바이러스가 본 발명에 사용될 수 있다: 키메라 황열병 17D/일본 뇌염 SA14-14-2 바이러스(YF/JE A1.3; ATCC 수탁번호 ATCC VR-2594) 및 키메라 황열병 17D/뎅기 타입 2 바이러스(YF/DEN-2; ATCC 수탁번호 ATCC VR-2593)가 해당된다.
키메라 플라비바이러스 엔벨로프 단백질에서 허용가능 부위(permissive site)의 확인 방법
키메라 플라비바이러스 엔벨로프 단백질 내의 이종 서열의 삽입을 허용하는 부위는 다음과 같이 확인될 수 있다. 펩타이드를 코드화하는 핵산 서열을 분자생물학의 표준 방법을 이용하여 엔벨로프 유전자 내에 삽입한다. 바람직하게 그러한 핵산 서열은 삽입 돌연변이체 도서관(insertion mutants library)의 생성을 용이하게 하기 위해서 무작위로 삽입된다. 그렇지 않으면, 핵산 서열을 엔벨로프 유전자의 특정 위치에 삽입하고 그 효능을 평가할 수도 있다. 예를 들어, 특정 부위가 제 1 이종 서열의 삽입을 허용하는 것으로 확인된 경우에 후자의 접근 방식이 바람직할 수 있고, 그 특정 부위가, 예컨대, 길이 또는 예상 2차 구조가 제 1 이종 서열과 상이한 제 2 이종 서열의 삽입도 허용하는지 확인하기 위한 경우에 바람직하다.
핵산 서열의 무작위적인 삽입은 예를 들어, 전이인자 돌연변이유발 접근방법을 이용하여 달성될 수 있다. 예를 들어 Tn5 전좌 시스템(transposition system)이 사용될 수 있다 (Goryshin et al., J. Biol. Chem. 273:7367, 1998). 구체적인 예로, 에피센터 테크놀로지(Epicentre Technologies; Madison, WI, U.S.A)에서 제작한 EZ::TN 삽입 시스템이 이용될 수 있다. 이 시스템의 상세한 사용법은 이하에서 더 설명할 것이다. 요컨대, 클로닝된 플라비바이러스 엔벨로프 유전자는 펩타이드를 코드화하는 서열을 포함하고 있는 전이인자에 의해 돌연변이유발된다. 플라비바이러스 엔벨로프 유전자 내에 무작위적으로 삽입된 전이인자를 포함하는 돌연변이체의 도서관(library)이 만들어지고, 바람직한 경우, 삽입 부위가 매핑되고/되거나 서열결정된다. 이어서 돌연변이 엔벨로프 유전자를 포함하는 전장 지놈 RNA가 만들어지고, 이것은 돌연변이 바이러스를 만드는데 사용되며, 이어서 만들어진 바이러스들은 전이인자의 삽입 허용여부에 대하여 확인된다. 바이러스들은 예를 들어, 감염성의 판단(determination of infectivity), 유전자의 안정성(genomic stability), 생장 특성(growth properties) 및 중화(neutralization)의 측정에 의해 전이인자 삽입 허용여부에 관하여 확인될 수 있다. 이러한 전이인자 돌연변이유발 시스템의 사용에 관한 세부사항은 이하에서 키메라 플라비바이러스인 ChimeriVaxTM-JE와 관련하여 설명한다(도 1 또한 참조). 그러나 본 방법은 본원에 기술된 어떠한 키메라에 대해서도 사용될 수 있다.
이종 펩타이드들 (Foreign Peptides)
본 발명의 벡터는 질병 예방 또는 치료에 가치 있는 임의의 펩타이드 또는 단백질의 전달에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 벡터들은 키메라 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질 내에 삽입된 임의의 단백질계 항원에 대한 면역반응(예방 또는 치료)을 유도하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는 그러한 항원은 키메라의 제 2 플라비바이러스로부터 유래된 것은 아니다. 본원에 기술된 바와 같이, 키메라 플라비바이러스의 엔벨로프 유전자 내의 삽입 허용 부위에 항원을 코드화하는 핵산 서열을 삽입하기만 하면 된다. 후술하는 바와 같이 해서 허용 부위로 확인된 키메라의 엔벨로프 유전자 내에 항원을 코드화하는 핵산 분자를 삽입하기 위해 분자생물학의 표준 방법들이 사용될 수 있다.
본 발명의 벡터들은 각각 단일의 에피토프를 포함할 수 있다. 대안으로 다수의 에피토프들이 단일의 부위에 삽입되거나(즉, 폴리토프(polytope)로서, 다른 에피토프들이 아미노산들의 폴리글리신 스트렛치(stretch)와 같은 유동성 링커(flexible linker)에 의해 분리될 수 있다), 다른 부위들에 삽입되거나 또는 이들의 임의의 조합 방식으로 삽입될 수 있다. 다른 에피토프들은 단일한 종의 병원체로부터 유래된 것이거나 또는 다른 종 및/또는 속으로부터 유래된 것일 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 항원들은, 예를 들어, 바이러스, 박테리아 및 기생충과 같은 감염체로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 표 2에 나열된 병원체로부터 유래된 항원들이 사용될 수 있다. 그러한 항원의 구체적인 예는 표 3에 열거된 바이러스들을 포함한다. 또한 본 발명의 벡터에 삽입될 수 있는 에피토프의 구체적 예는 표 4에 나타내었다. 표 4를 통해서 파악되는 바와 같이, 본 발명의 벡터에서 사용될 수 있는 에피토프들은 B 세포 에피토프(즉, 중화 에피토프; neutralizing epitopes) 또는 T 세포 에피토프(즉, T 헬퍼 및 세포독성 T 세포-특이적 에피토프)일 수 있다.
본 발명의 벡터들은 병원체-유래 항원뿐만 아니라 다른 항원들을 전달하는데도 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 벡터들은 암에 대한 면역치료 방법에 이용하기 위한 종양-관련 항원을 전달하는데 사용될 수 있다. 암(및 대응되는 종양 관련 항원)의 예로는 다음과 같은 것들을 들 수 있다: 흑색종(NY-ESO-1 단백질(구체적으로 아미노산 157-165에 위치한 CLT 에피토프), CAMEL, MART 1, gp100, 티로신 연관 단백질 TRP1 및 2, 및 MUC1)); 샘암종(ErbB2 단백질); 직장결장암(17-1A, 791Tgp72 및 암종태아성 항원(carcinoembryonic antigen); 전립선암(PSA1 및 PSA3) 등이 그러한 항원으로 사용될 수 있다. 열충격 단백질(heat shock protein)(hsp 110) 또한 그러한 항원으로 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에서, 알러지-유도성 항원의 에피토프(들)를 코드화하고 그에 대한 면역반응이 이용될 수 있는 외인성 단백질(exogenous protein)이 사용될 수도 있다. 또한, 본 발명의 벡터들은 항원과 같은 펩타이드들을, 벡터가 투여될 대상의 특정 세포(예를 들어, 그 리간드에 대한 수용체를 포함하는 세포들)들로 전달하도록 벡터를 표적화하는데 사용되는 리간드(ligand)를 포함한다.
본 발명의 벡터 내에 삽입되는 펩타이드 또는 단백질의 크기는 예를 들어 5-500 아미노산, 10-100, 20-55, 25-45 또는 35-40 아미노산 길이의 범위를 갖는다.임의의 특정된 바람직한 펩타이드의 사용 가능성 여부는 본원에 기술된 방법들을 사용하여 쉽게 결정할 수 있다.
이종 펩타이드를 전달하기 위한 키메라 플라비바이러스 벡터의 용도
본 발명의 벡터들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 쉽게 결정될 수 있는 양 및 방법을 이용하여 투여된다. 벡터들은 예를 들어, 황열병 17D 백신에서와 동일한 방법으로 제형화되고 투여될 수 있는데, 예를 들어, 감염된 계 배아 조직(chicken embryo tissue)의 정제된 현탁액 또는 키메라 황열병 바이러스에 의해 감염된 세포 배양물로부터 수득된 유체(fluid)로서 투여되거나 제형화될 수 있다. 따라서 본 발명의 벡터는 0.1 내지 1.0ml의 도스 부피내에서 100 내지 1,000,000의 감염 단위(예를 들어, 용균반 형성 단위 또는 조직 배양 감염 도스)를 포함하는 살균된 수용액으로 제형화될 수 있고, 예를 들어 근육내, 피하, 또는 피부내 경로를 통해 투여될 수 있다. 또한, 플라비바이러스는 구강 경로와 같은 점막 조직을 통해 인간 숙주에 감염시킬 수도 있기 때문에(Gresikova 등의 "진드기 뇌염",In Arboviruses, Ecology and Epidemiology, Monath (ed.), CRC출판, Boca Raton, Florida, 1998년, Vol. Ⅳ, 177-203), 벡터들도 점막 경로를 통해 투여될 수 있다.
면역화 방법에서 사용되는 경우에, 벡터들은 1차적인 예방 약제로서 특정 병원체에 의해 감염될 위험에 처해 있는 성인 또는 어린이들에게 투여될 수 있다. 벡터들은 그로부터 펩타이드 항원이 유래된 병원체에 대한 면역반응을 촉진함으로써 감염된 환자들을 치료하기 위한 2차적인 약제로서 사용될 수도 있다.
백신으로 응용되는 경우에, 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련된 사람에게 알려진 아쥬반트(adjuvant)들이 사용될 수 있다. 키메라 벡터의 면역원성을 고양시키는데 사용될 수 있는 아쥬반트들은 예를 들어, 리포좀 제재(liposomal formulations), 무라밀디펩타이드(muralmil peptides), 모노포스포릴 리피드 A 또는 폴리포스파진들과 같은 합성 아쥬반트(예를 들어 QS21)를 포함한다. 이러한 아쥬반트들은 전형적으로 불활성화 백신에 대한 면역반응을 상승시키기 위해 사용되지만, 생백신(live vaccine)으로도 사용될 수 있다. 키메라 벡터가 점막 경로, 예를 들어 구강을 통해 전달되는 경우에이. 콜라이(E.coli)(LT)의 열-변성 독소 또는 LT의 돌연변이 유도체들이 아쥬반트로 사용될 수 있다. 또한, 아쥬반트 활성을 갖는 싸이토카인을 코드화하는 유전자가 아쥬반트로 사용될 수 있다. 따라서 GM-CSF, IL-2, IL-12, IL-13 또는 IL-5와 같은 싸이토카인을 코드화하는 유전자가 이종 항원 유전자와 함께 삽입되어 향상된 면역 반응을 일으키는 백신을 생산하거나 면역성을 세포성, 체액성 또는 점막성 반응으로 보다 특이적으로 유도할 수 있다.
백신으로의 응용 이외에, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자들에게 자명한 바와 같이, 본 발명의 벡터들은 치료효과가 있는 유전자 산물을 환자의 세포에 투입하는 유전자 치료방법 및 암치료에 사용될 수 있다. 이러한 방법에서, 치료효과가 있는 유전자 산물을 코드화하는 유전자가 벡터의 허용가능한 부위에 삽입된다.
[발명의 요약]
본 발명은 키메라 플라비바이러스 또는 유전적으로 약독화된 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질 내의 이종 펩타이드(foreign peptides)의 삽입을 허용하는 부위를 확인하는 방법을 제공한다. 이러한 방법들은 (1) 플라비바이러스 엔벨로프 단백질을 코드화하는 유전자 내에 이종 펩타이드를 코드화하는 유전자를 도입하는 단계; (2) 상기 유전자에 의해 코드화된, 이종 펩타이드를 포함하는 엔벨로프 단백질을 포함하는 플라비바이러스 벡터를 생산하는 단계; 및 (3) 상기 단계 (2)에서 생산된 플라비라이러스 벡터가 상기 삽입을 허용하는지 판단하는 단계를 포함한다.
플라비바이러스 벡터는 키메라 플라비바이러스 벡터일 수 있는데, 예를 들어, 제 1 플라비바이러스의 C 및 비구조 단백질과 제 2 플라비바이러스의 prM 및 E 단백질을 포함하는 키메라 플라비바이러스 벡터일 수 있다. 제 1 및 제 2 플라비바이러스는 일본 뇌염, 뎅기(항원형 1, 2, 3 또는 4), 황열병(예를 들어, YF 17D), 머레이 벨리(Murray valley) 뇌염, 세인트 루이스(St. Louis) 뇌염, 웨스트 나일(West Nile), 쿤진(Kunjin), 로시오(Rocio) 뇌염, 일헤우스(Ilheus), 진드기 매개 뇌염, 중부 유럽(Central European) 뇌염, 시베리아 뇌염, 러시아 봄-여름 뇌염(Russian Spring-Summer encephalitis), 키아사누 포레스트 질병(Kyasanur Forest Disease), 옴스크 출혈열(Omsk Hemorrhagic Fever), 도약병(Louping ill), 포와산(Powassan), 네기쉬(Negishi), 엡세타로프(Absettarov), 한살로바(Hansalova), 아포이(Apoi) 및 하이프르 바이러스(Hypr virus)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 벡터 내로 삽입된 이종 펩타이드는, 예를 들어, 바이러스, 박테리아, 또는 기생충성 병원체의 항원들로부터 유래된 에피토프(epitope)를 포함하거나 종양-관련 항원(tumor-associated antigen)으로부터 유래된 에피토프를 포함할 수 있다. 이러한 펩타이드의 예 및 그 밖의 것들은 후술한다.
핵산 분자들은 본 발명의 방법에 따라, 플라비바이러스의 엔벨로프 유전자 내에 삽입될 수 있는데, 예를 들어, 전이인자 돌연변이유발(transposon mutagenesis)에 의해 무작위로 도입될 수 있다. 또한, 본 발명 방법의 단계 (2)에서 생성된 플라비바이러스 벡터가 삽입을 허용하는지 여부를 판단하는 것은 예를 들어, (a) 플라비바이러스 벡터의 감염성(infectivity), (b) 벡터의 수회의 계대배양시의 이종 단백질의 서열의 안정성, (c) 플라비바이러스 벡터의 생장 특성 및/또는 (d) 플라비바이러스 벡터가 제 1 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질에 대한 항체에 의해 중화될 수 있는지를 분석하여 행할 수 있다. 본 발명의 방법은 플라비바이러스 벡터들의 분석결과와 그 벡터가 유래된 플라비바이러스의 유사한 분석결과를 비교하는 과정을 추가로 포함한다.
본 발명은 또한 이종 펩타이드를 포함하고 있는 엔벨로프 단백질을 갖고 있는 플라비바이러스 벡터를 포함한다. 플라비바이러스 벡터들은 제 1 플라비바이러스의 prM 및 E 단백질과 제 2 플라비바이러스의 C 및 비구조 단백질을 포함하는 키메라 플라비바이러스일 수 있다. 제 1 및 제 2 플라비바이러스는 일본 뇌염, 뎅기열(항원형 1, 2, 3 또는 4), 황열병(예를 들어, YF 17D), 머레이 벨리 뇌염(Murray valley encephalitis), 세인트 루이스 뇌염(St. Louis encephalitis), 웨스트 나일(West Nile), 쿤진(Kunjin), 로시오(Rocio) 뇌염, 일헤우스 (Ilheus),진드기 매개 뇌염, 중부 유럽 뇌염(Central European encephalitis), 시베리아 뇌염, 러시아 봄-여름 뇌염(Russian Spring-Summer encephalitis), 키아사누 포레스트 질병(Kyasanur Forest Disease), 옴스크 출혈열(Omsk Hemorrhagic Fever), 도약병(Louping ill), 포와산(Powassan), 네기쉬(Negishi), 엡세타로프(Absettarov), 한살로바(Hansalova), 아포이(Apoi) 및 하이프르 바이러스(Hypr virus)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 대안으로, 플라비바이러스 벡터는 황열병 바이러스 YF 17D와 같이 유전적으로 약독화된 플라비바이러스일 수 있다.
벡터 내에 삽입된 이종 펩타이드들은 바이러스, 박테리아 또는 기생충성 병원체의 항원으로부터 유래된 에피토프를 포함할 수 있다. 대안으로, 이종 펩타이드는 종양-관련 항원으로부터 유래된 에피토프를 포함할 수도 있다.
또한 본 발명에 포함되는 것은 상기한 플라비바이러스 및 제약학상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학상 허용가능한 조성물 및 이 조성물을 환자에게 투여함으로써 펩타이드를 환자에게 전달하는 방법이다. 예를 들어, 이러한 방법은 펩타이드가 항원인 경우에, 그 항원이 유래된 병원체 또는 종양에 대한 면역반응을 유발하여 수행될 수 있다. 또한 본 발명은 이러한 조성물들의 펩타이드의 전달을 위한 용도 뿐만 아니라 펩타이드의 전달을 위한 약물의 제조에서의 이러한 조성물의 용도를 포함한다.
본 발명은 또한 상기 플라비바이러스의 지놈(genomes) 또는 이들의 상보체 (complement)를 포함하는 핵산 분자들을 포함한다.
본 발명은 몇 가지 이점을 제공한다. 예를 들어, 본 발명에서 사용될 수있는 키메라 플라비바이러스는 충분히 약독화되어 안전하면서도, 여전히 키메라의 엔벨로프 단백질이 유래된 플라비바이러스, 특히 키메라 내에 삽입된 에피토프에 대한 방어 면역을 유도할 수 있다. 본 발명에 사용되는 벡터가 키메라이기 때문에 환원유전(reversion)의 가능성을 제거할 수 있다는 점에서 더욱 안전하다. 본 발명에서 사용되는 벡터의 추가적인 장점은 플라비바이러스가 세포의 세포질 내에서 복제하여, 바이러스의 복제 전략이 바이러스 지놈이 숙주 세포 내로 삽입되는 과정을 포함하지 않는 것인데, 이는 중요한 안정성 정도를 제공한다. 또한, 후술하는 바와 같이, 본 발명의 단일의 벡터는 단일의 항원으로부터의 다수의 에피토프 또는 하나 이상의 항원으로부터 유래된 에피토프들을 전달하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 특징 및 이점들은 이하의 상세한 설명, 도면 및 청구범위로부터 자명해질 것이다.
이하의 실시예는 ChimeriVaxTM-JE에서의 삽입 허용 부위를 확인하는 과정을 보여준다. 본 실시예에 기술된 방법은 상술한 바와 같은 다른 키메라 플라비바이러스에도 사용될 수 있다.
황열병 17D(YF 17D)의 살아있는 약독화된 백신 균주는 지난 60여년간 인간에게 사용되어 왔고, 우수한 안정성 기록을 갖고 있으며, 단일 도스의 투여후 오래 지속되는 면역성을 제공한다. 상술한 바와 같이 ChimeriVaxTM-JE는 YF 17D의 구조 단백질(PrME)을 코드화하는 유전자가 유전적으로 약독화된 일본 뇌염 바이러스(JE) SA14-14-2의 대응하는 유전자로 대체된, 살아있는 약독화된 재조합 백신 균주이다. 이 키메라의 세포내 복제를 담당하는 캡시드(capsid) 및 모든 비구조(NS) 유전자는 YF 17D 백신 균주로부터 유래된다. 상기한 바와 같이, ChimeriVaxTM-JE의 감염성 분자 클론에 관하여는 이미 기술하였다. 후술하는 실험에서 ChimeriVaxTM-JE의 생물학적으로 관련있는 펩타이드에 대한 전달 비히클(delivery vehicle)로서의 적합성에 대해 평가하였다.
EZ::TN In-Frame Linker Insertion Kitⓒ(Epicentre)는 다양한 응용에서 클로닝된 DNA에 의해 코드화되는 단백질의 프레임 내에 19개의 아미노산 펩타이드를 무작위로 삽입하는 빠르고 효과적인 방법이다. 이러한 접근방법을 이용하여, 본발명자들은 이종 펩타이드의 삽입을 허용하는 ChimeriVaxTM-JE의 엔벨로프 유전자내의 부위(sites)를 확인하기로 선택하였다. 이하에서 보다 상세히 설명하겠지만, EZ::TN에 의한 이. 콜라이(E.coli) 내의 JE 엔벨로프 단백질을 코드화하는 유전자에 대한 무작위 돌연변이유발에 의해 19개의 아미노산 펩타이드를 코드화하는 57개의 염기쌍 단편을 포함하는 안정한 삽입 돌연변이체의 뱅크(bank)를 수득하였다. DNA 서열분석, 제한효소 처리에 의한 맵핑(mapping) 및 PCR 분석을 통해 전이인자의 정확한 위치 및 삽입의 무작위성을 확인하였다. 돌연변이된 JE 엔벨로프 유전자를 ChimeriVaxTM-JE 감염 클론으로 되돌려보내는 유전자 조작에 의해 본 발명자들은 세포 배양물 내에서의 감염을 연구하였고, 이종 항원에 대한 전달 비히클로서의 재조합 플라비바이러스의 용도와 관련한 가치있는 정보를 수득하였다. 본 발명자들은 베로 세포에 대해 감염성인 돌연변이 클론의 패널을 확인하였고 그들의 생물학적 특성을 규명하였다. 구체적으로, 본 발명자들은 안정한 감염성 클론의 생장 특성을 세포 배양물내의 모(parent) ChimeriVaxTM-JE와 비교하였고, JE-특이적 다클론 항체들에 대하여 용균반 감소 중화 시험(plaque reduction neutralization test: PRNT)에서의 중화 능력을 비교하였다. 본 발명자들은 이종 DNA의 삽입을 허용하는 JE 엔벨로프내의 부위를 확인하였고, 이 부위들은 생물학적으로 관련된 에피토프들의 전달을 위해 이용될 수 있다는 것을 확인하였다. 이하에서 더욱 상세하게 설명한다.
JE 엔벨로프를 코드화하는 유전자의 pUC19 내로의 클로닝
YF/JE 바이러스 RNA를 트리졸 시약(Trizol reagent; Gibco BRL)을 이용하여 감염된 베로 세포로부터 추출하였다. FNOR 안티센스 프라이머를 이용한 cDNA 합성에 이어(하기 참조), JE SA14-14-2 엔벨로프를 코드화하는 유전자를 TN1.F/TN2.R 프라이머를 이용한 XL-PCR에 의해 증폭하여, 각 올리고뉴클레오타이드 5'말단에 삽입된 KpnⅠ및 PstⅠ인식 서열을 이용하여 pUC19(New England Biologicals, NEB, U.S.A.) 내에 종래의 방법에 의해 방향을 정하여 클로닝함으로써, pJEeⅠ을 제조하였다. PCR은 GeneAmp PCR 시스템 2400(Perkin Elmer)을 이용하여 수행하였다.
전이인자 돌연변이유발 및 삽입 부위의 맵핑(mapping)
삽입 돌연변이유발은 pJEe1에 대해 EZ::TN In-Frame Linker Insertion Kitⓒ(Epicentre Technologies, U.S.A.)를 이용하여 제조사의 지시에 따라 수행하였다. EZ::TN<NotⅠ/Kan-3> 전이인자는 NotⅠ절단 부위 인접 카나마이신 내성 유전자를 포함한다. 후술하는 바와 같이, NotⅠ 절단 부위에 인접한 카나마이신 내성 유전자의 제거 및 재연결(re-ligation)에 의해 모든 세개의 리딩 프레임에서 읽혀질 수 있는 19개 코돈 삽입체를 만들었다.
삽입 돌연변이체는 카나마이신(50㎍/ml)이 첨가된 LB 아가 배지 상에서의 선택(selection)을 통해 E. coli에서 확인되었다. 전좌에 이어서, 선택된 카나마이신-내성 클론에서의 TN1.F/TN2.R를 이용한 PCR은 40%의 클론이 JE 엔벨로프 내에안정하게 전이인자를 보유한다는 것을 보여주었다(도 2). 삽입 부위는 Tn5-특이적 프라이머인 TN1.F 및 NotⅠ/KAN-3 RP-2를 이용한 PCR(Pwo DNA 폴리머라제, Boehringer Mannheim/Roche)를 통하여 지도화하였는데, 그 결과 JE 엔벨로프에 무작위적으로 삽입된 Tn5 전이인자를 확인할 수 있었다. 유일 클론들(unique clones)이 전장 돌연변이 지놈 RNA (full length mutant genomic RNA)의 생성 및 서열결정을 위해 선택되었다.
서열결정
베로 세포의 트랜스펙션을 위해 선택된 5개의 돌연변이 클론의 아미노산 서열은 도 4에 나타내었다. JE 바이러스의 엔벨로프 단백질상에서의 정해진 입체형태 에피토프에 대한 삽입체의 위치를 도 5에 나타내었다. 삽입 부위는 DNA 서열결정에 의해 결정되었고, 삽입체는 JE 엔벨로프의 예상되는 3차 구조와 비교하여 위치가 결정되었다 (Kolaskar et al., Virology 261:31-42, 1999). 5개의 삽입 부위 중 4개는 표면 노출된 것으로 보인다. 서열결정은 CEQTM2000 DNA 분석 시스템(Beckman Coulter) 및 CEQ 2000 Dye Terminator Cycle Sequencing Kit을 이용하여 수행하였다. 데이타는 SEQUENCHERTM, 버젼 4.0.5에 의해 분석하였다(Gene Codes Coporation).
Tn 5 삽입체를 갖고 있는 감염성 클론의 구성
항생물질 내성 마커를 안정한 이. 콜라이(E.coli) 클론으로부터 제거하고 나서, 이들을 재연결하여, 전이인자에 인접하는 9개 염기쌍의 표적 부위 서열 듀플리케이션(target site sequence duplication)을 포함하는 57 염기쌍 길이의 인-프레임 삽입체를 수득하였다. 재연결된 JE 엔벨로프를 포함하는 시료 클론들(n=5)을 NheⅠ/NarⅠ(NEB, U.S.A.)에 의해 절단하였고, 그 결과 전장 YF/JE 지놈을 생성하기 위해 앞서 기술했던 2개의 플라스미드 시스템 내로 클로닝하기에 적합하게 되었다.
전사 및 트랜스펙션
JE 엔벨로프를 코드화하는 유전자 내에 이종 DNA를 갖고 있는 선형화된 전장지놈 DNA의 전사는 AmpliScribeTMSP6 고수율 전사 키트(High Yield Transcription Kit)(EPICENTRE Technologies)를 이용하여 SP6 프로모터로부터 행하였다. 베로 세포가 접종된 6개 웰 플레이트를 LIPOPECTIN 시약(Life Technologies)의 존재 하에서 시험관내 전사된 지놈 RNA에 의해 트랜스펙션하였고, 5% FBS(Hyclone), NEAA (Life Technologies) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(Sigma Chemicals)이 보충된 MEM 배지(Life Technologies)에서 유지하였다. 세포 상층액(supernants; 500ml)은 P6를 통해 매 6일마다 새로운 세포로 계대배양하였고, 단층(monolayer)에 대해 세포변성 효과(cytopathic effect:CPE)를 모니터하였다. 바이러스 RNA는 각 계대배양시 세포 단층 및 상층액으로부터 추출되었다.
도 6에 도시된 바와 같이, 모든 돌연변이 클론들은 P2에서 베로 세포에 대해 감염성이었다. 구체적으로, 세포 단층의 RNA 추출물로부터 합성된 cDNA에 대한 TN1.F/TN2.R 프라이머를 이용한 RT-PCR에 의해 57개 염기쌍의 링커를 갖고 있는 1.9 킬로베이스 삽입체를 증폭하였고, 자손 바이러스의 생산을 확인할 수 있었다. P2 내지 P6의 계대배양으로부터 얻은 클론Ⅰ-10에 대한 PCR 분석을 통해서 이러한 클론이 P6 내내 안정하여 아미노산 287의 삽입부위가 이종 DNA의 삽입에 대해 허용성 있는 것을 확인할 수 있다. PCR은 JE 엔벨로프 유전자 특이적 프라이머(TN1.F/TN2.R) 및 전이인자 특이적 프라이머(TN1.F/TMOS.R)를 이용하여 행하였다 (도 7).
P2 내지 P6에서의 RT-PCR 산물의 DNA 서열을 결정하였는데, 이는 도 8에 도시된 바와 같이, 각 계대배양에서의 서열은 오리지날 클론의 서열 Ⅰ-10과 동일하였다. 흥미롭게도, Ⅰ-10 전이인자 삽입체는 이황화결합을 형성할 가능성이 있는 두 개의 시스테인 잔기를 포함하고, 이는 엔벨로프 단백질 상의 이종 펩타이드를 안정화하며 이종 펩타이드가 분자 표면상에 존재하도록 한다. 도 9는 JE 바이러스 엔벨로프 당단백질의 3차원 구조를 도시한 것으로, 위치 287 (position 287)이 중심(Ⅰ) 도메인(central Ⅰ domain)과 이합체형(Ⅱ) 도메인(dimerization Ⅱ domain) 사이에 위치하고 표면 노출된 것처럼 보인다는 것을 확인할 수 있다.
전이인자 돌연변이체 Ⅰ-10의 생물학적 특성을 규명하고 ChimeraVaxTM-JE의그것과 비교하였다. 먼저 클론 Ⅰ-10의 성장 특성을 결정하였다. 도 10에 도시된 바와 같이, 돌연변이 감염성 클론 Ⅰ-10은 ChimeraVaxTM-JE 페어런트와 비교하여 유사한 성장 동력학(growth kinetics)을 나타내었으나, YF/JE에 대한 le7 PFU/ml인 경우에 비해, 8e5 PFU/ml에 달하는 정도로 약간 낮은 역가로 성장한다. 또한, 돌연변이 감염성 클론 I-10은, YF/JE 페어런트와 유사하게, 베로 세포에서 세포변성 효과를 유발하는 것으로 확인되었다.
이어서 용균반 감소 중화(PRNT) 분석을 행하였다. 항JE-다클론성 항혈청의 제조는 클론 Ⅰ-10과 ChimeraVaxTM-JE를 같은 정도(1:64,000)로 중화하고 바이러스 엔벨로프의 본래 구조에 부적절한 영향을 주지 않고도 이종 DNA를 JE 키메라의 엔벨로프에 삽입할 수 있음을 증명해 주었다 (도 11 및 도 12). 이러한 실험들은 ChimeraVaxTM-JE내의 JE 엔벨로프의 아미노산 위치 287이 이종 DNA의 삽입을 허용하고 있음을 보여준다. 본 발명자들은 또한 아미노산 위치 59, 231, 340 및 436이 이종 서열의 삽입을 허용한다는 증거를 제공한다.
Claims (18)
- (i) 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질을 코드화하는 유전자에 이종 펩타이드(foreign peptides)를 코드화하는 유전자를 도입하는 단계;(ii) 유전자에 의해 코드화되는 엔벨로프 단백질을 포함하는 플라비바이러스 벡터를 생산하는 단계; 및(iii) 상기 단계 (ii)에서 생산된 플라비라이러스 벡터가 상기 삽입을 허용하는지 확인하는 단계를 포함하는 키메라 플라비바이러스 또는 유전적으로 약독화된 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질 내의 이종 펩타이드(foreign peptides)의 삽입을 허용하는 부위를 확인하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 플라비바이러스 벡터가 제 1 플라비바이러스의 캡시드 및 비구조 단백질과 제 2 플라비바이러스의 prM(premembrane) 및 엔벨로프 단백질을 포함하는 키메라 플라비바이러스 벡터인 방법.
- 제 2항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2의 플라비바이러스는 일본 뇌염, 뎅기 1, 뎅기 2, 뎅기 3, 뎅기 4, 황열병, 머레이 벨리(Murray valley) 뇌염, 세인트 루이스(St. Louis) 뇌염, 웨스트 나일(West Nile), 쿤진(Kunjin), 로시오(Rocio) 뇌염, 일헤우스, 진드기 매개 뇌염, 중부 유럽(Central European) 뇌염, 시베리아 뇌염, 러시아 봄-여름 뇌염(Russian Spring-Summer encephalitis), 키아사누 포레스트 질병(Kyasanur Forest Disease), 옴스크 출혈열(Omsk Hemorrhagic Fever), 도약병(Louping ill), 포와산(Powassan), 네기쉬(Negishi), 엡세타로프(Absettarov), 한살로바(Hansalova), 아포이(Apoi) 및 하이프르 바이러스(Hypr virus)로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 제 1 플라비바이러스와 제 2 플라비바이러스는 서로 다른 플라비바이러스인 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 이종 펩타이드는 바이러스, 박테리아, 또는 기생충성 병원체의 항원으로부터 유래된 에피토프(epitope) 또는 종양-관련 항원(tumor-associated antigen)으로부터 유래된 에피토프를 포함하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 핵산 분자가 전이인자 돌연변이유발 (transposon mutagenesis)에 의해 상기 엔벨로프 유전자 내로 무작위로 삽입되는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 단계 (ii)에서 생성된 플라비바이러스 벡터가 삽입을 허용하는지 여부를 판단하는 단계는 (a) 플라비바이러스 벡터의 감염성(infectivity), (b) 벡터의 수회의 계대배양시의 이종 단백질의 서열의 안정성, (c) 플라비바이러스 벡터의 생장 특성 및/또는 (d) 플라비바이러스 벡터가 제 1 플라비바이러스의 엔벨로프 단백질에 대한 항체에 의해 중화될 수 있는지를 분석하여 수행되는 방법.
- 제 6항에 있어서, 상기 방법이 플라비바이러스 벡터들의 분석결과와 그 벡터가 유래된 플라비바이러스의 유사한 분석결과를 비교하는 과정을 추가로 포함하는 방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 유전적으로 약독화된 플라비바이러스가 황열병 바이러스 YF 17D인 방법.
- 이종 펩타이들을 포함하는 엔벨로프 단백질을 포함하는 플라비바이러스 벡터.
- 제 9항에 있어서, 상기 벡터가 제 1 플라비바이러스의 prM(premembrane) 및 E 단백질 및 제 2 플라비바이러스의 C 및 비구조 단백질을 포함하는 키메라 플라비바이러스인 플라비바이러스 벡터.
- 제 10항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 플라비바이러스는 일본 뇌염, 뎅기 1, 뎅기 2, 뎅기 3, 뎅기 4, 황열병, 머레이 벨리(Murray valley) 뇌염, 세인트 루이스(St. Louis) 뇌염, 웨스트 나일(West Nile), 쿤진(Kunjin), 로시오(Rocio) 뇌염, 일헤우스 뇌염, 진드기 매개 뇌염, 중부 유럽(Central European) 뇌염, 시베리아 뇌염, 러시아 봄-여름 뇌염(Russian Spring-Summer encephalitis), 키아사누 포레스트 질병(Kyasanur Forest Disease), 옴스크 출혈열(Omsk Hemorrhagic Fever), 도약병(Louping ill), 포와산(Powassan), 네기쉬(Negishi), 엡세타로프(Absettarov), 한살로바(Hansalova), 아포이(Apoi) 및 하이프르 바이러스(Hypr virus)로 구성된 군으로부터 선택되는 플라비바이러스 벡터.
- 제 9항에 있어서, 상기 이종 펩타이드는 바이러스, 박테리아, 또는 기생충성 병원체의 항원으로부터 유래된 에피토프(epitope) 또는 종양-관련 항원(tumor-associated antigen)으로부터 유래된 에피토프를 포함하는 플라비바이러스 벡터.
- 제 9항에 있어서, 상기 벡터가 유전적으로 약독화된 플라비바이러스를 포함하는 플라비바이러스 벡터.
- 제 13항에 있어서, 상기 유전적으로 약독화된 플라비바이러스가 황열병 바이러스 YF 17D인 플라비바이러스 벡터.
- 제 9항의 플라비바이러스 벡터 및 제약학상 허용가능상 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학 조성물.
- 제 15항의 조성물의 펩타이드를 환자에 전달하기 위한 용도.
- 제 16항에 있어서, 상기 펩타이드가 항원이고 상기 조성물이 그로부터 상기 항원이 유래된 병원체 또는 종양에 대한 면역반응을 유도하기 위해 투여되는 제 16항의 조성물의 용도.
- 제 1항의 플라비바이러스의 지놈 또는 그의 상보체(complement)를 포함하는 핵산 분자.
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| BRPI0714721A2 (pt) * | 2006-07-14 | 2013-04-24 | Sanofi Pasteur Biologics Co | construÇço de vacinas de vÍrus recombinante por inserÇço direta mediada por transpàson de determinantes imunolàgicos estranhos em proteÍnas de vÍrus vetorial |
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| EP2143440A1 (fr) | 2008-07-09 | 2010-01-13 | Sanofi Pasteur | Agent stabilisant et composition vaccinale comprenant un ou plusieurs flavivirus vivants atténués |
| EP2408477A4 (en) * | 2009-03-16 | 2013-03-27 | Sanofi Pasteur Biologics Llc | REPLICATION DEFECTS FLAVIVIRUS VACCINE VACCINATORS AGAINST RESPIRATORY SYNZYTIAL VIRUS |
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| US20150265694A1 (en) * | 2011-10-25 | 2015-09-24 | Florida Gulf Coast University Board Of Trustees | Vaccines and methods for creating a vaccine for inducing immunity to all dengue virus serotypes |
| EP3932422A1 (en) | 2012-07-24 | 2022-01-05 | Sanofi Pasteur | Vaccine compositions for the prevention of dengue virus infection |
| CA2878599A1 (en) | 2012-07-24 | 2014-01-30 | Jiansheng Yao | Vaccine compositions for prevention against dengue virus infection |
| BR112015012515B1 (pt) | 2012-11-30 | 2023-04-11 | Sanofi Pasteur | Uso de antígenos, construções de ácido nucleico ou vetores virais capazes de expressar uma partícula do tipo vírus (vlp) da dengue e de uma vacina contra sarampo, uma vacina contra caxumba e uma vacina contra rubéola |
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|---|---|---|---|---|
| US6184024B1 (en) * | 1988-07-14 | 2001-02-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Chimeric and/or growth-restricted flaviviruses |
| ATE443143T1 (de) | 1991-09-19 | 2009-10-15 | Us Health | Chimäre und/oder wachstumgehemmte flaviviren |
| US6136561A (en) | 1995-05-24 | 2000-10-24 | Hawaii Biotechnology Group, Inc. | Methods of preparing carboxy-terminally truncated recombinant flavivirus envelope glycoproteins employing drosophila melanogaster expression systems |
| US6962708B1 (en) | 1997-02-28 | 2005-11-08 | Acambis, Inc. | Chimeric flavivirus vaccines |
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| BRPI9701774B8 (pt) | 1997-04-11 | 2015-09-29 | Fundação Oswaldo Cruz Fiocruz | cdna mutante e infeccioso do vírus da febre amarela, constructo de dna, vírus recombinante de febre amarela e vacina para humanos contra infecções de febre amarela. |
| US6416763B1 (en) | 1998-08-28 | 2002-07-09 | Hawaii Biotechnology Group, Inc. | Recombinant nonstructural protein subunit vaccine against flaviviral infection |
| US6416783B1 (en) * | 1999-08-20 | 2002-07-09 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Aspartic and malic acid inhibition of ss-glucuronidase |
| AU1813901A (en) | 1999-12-01 | 2001-06-12 | Oravax, Inc | Chimeric flavivirus vaccines |
| GB2372991B (en) * | 2001-03-09 | 2004-11-17 | Fiocruz Fundacao Oswaldo Cruz | Flavivirus expression vector |
| CA2448971C (en) * | 2001-06-01 | 2013-11-26 | Acambis, Inc. | Chimeric flavivirus vectors |
| US6682883B1 (en) | 2001-07-19 | 2004-01-27 | Acambis, Inc. | Diagnosis of flavivirus infection |
| DE60219658T2 (de) | 2001-10-19 | 2008-01-03 | Acambis, Inc., Cambridge | Verfahren zur prävention und behandlung von infektionen mit dem flavivirus bei tieren |
| US20050002968A1 (en) | 2002-01-15 | 2005-01-06 | Monath Thomas P. | Flavivirus vaccines |
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| BRPI0316346B1 (pt) | 2002-11-15 | 2016-05-31 | Acambis Inc | molécula de ácido nucleico, flavivírus quimérico, uso do referido flavivírus e método de fabricação de vacina de flavivírus quimérico contra vírus do nilo ocidental |
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| WO2005040390A1 (fr) | 2003-07-21 | 2005-05-06 | Shanghai Tengen Biomedical Co., Ltd. | Vaccin recombine utilisant le virus de la fievre jaune comme vecteur |
| WO2005049815A1 (en) | 2003-11-21 | 2005-06-02 | K.U.Leuven Research & Development | Flavivirus replication |
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| BRPI0609949A2 (pt) | 2005-04-24 | 2010-05-11 | Acambis Inc | flavivìrus recombinante, seu uso na preparação de vacina, composição farmacêutica compreendendo o mesmo, molécula de ácido nucléico e método para atenuar candidato a vacina de flavivìrus |
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