KR20030005719A - A cosmetic composition containing an extract of viscum album - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 겨우살이로부터 추출한 유효 활성성분을 함유하는 피부 화장료에 관한 것이다.The present invention relates to a skin cosmetic containing an active ingredient extracted from mistletoe.
최근 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 각종 한방 원료를 소정의 방법으로 추출하고, 그 추출물의 기능을 확인하여 각종 기능성 화장품을 개발하는 사례도 늘고 있다.Recently, many cosmetic products using natural products have been developed to reduce skin irritation. Various herbal raw materials are extracted by a predetermined method, and the function of the extracts is being increased to develop various functional cosmetics.
예를 들면 녹두는 피부를 청결하게 하는 기능이 알려져 있고, 그 외 인삼추출물, 상황버섯 추출물 등에 대해서도 그 특유의 노화방지 또는 미백 등의 효과가 밝혀져 각종 화장품에 응용되고 있다.For example, mung beans have a known function to clean the skin, and other ginseng extracts, mushroom extracts, etc., have been found to have unique anti-aging or whitening effects and are applied to various cosmetic products.
이러한 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 높아지고 있다.These natural ingredients have less side effects on the skin, and as the consumer's response to cosmetics using natural materials has recently increased, the development value of cosmetics as a raw material for cosmetics is further increased.
이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 다른 한방재료들에 있어서 화장품으로의 응용가능성을 연구한 결과, 겨우살이의 추출물이 미백효과 등과 같은 화장품으로서의 효능이 기대 이상으로 우수함을 발견하게 되었다.Accordingly, the present inventors have studied the applicability to cosmetics in other herbal ingredients that have not been known so far, it has been found that the extract of mistletoe is more excellent than expected as a cosmetic such as a whitening effect.
겨우살이(Viscum album var.)는 중국, 대만, 일본 및 우리나라의 전국 각지역의 산 해발 50~1100m 지역 뽕나무, 참나무류, 팽나무, 물오리나무, 밤나무 및 자작나무 등에 기생(寄生)하는 기생식물이다. 상록성기생관목(常綠性寄生灌木)이며 둥지 모양으로 둥글게 자라고 지름 1m 정도에 달하는 것도 있으며 가지는 우상(又狀)으로 갈라지고 둥글며 황록색이고 털이 없으며 마디 사이가 3~6cm이다. 잎은 대생(對生)하고 피침형이며 길이 3~6cm, 너비 6~12cm로 둔두(鈍頭)ㆍ원저(圓底)이고 밑으로 갈수록 점점 좁아지며 엽병(葉柄)이 없고 짙은 녹색이며 두껍고 윤채(潤彩)가 없다. 1~3월에 꽃이 피고 꽃은 황색이며 자웅2가화(雌雄二家花)이고 정생(頂生)하며 화경(花梗)이 없고 소포(小苞)는 술잔 모양이고 화피(花被)는 종(鐘)같으며 4개로 갈라지고 암술머리는 대가 없다. 12~이듬해 1월에 열매가 성숙되며 핵과(核果)는 둥글고 연한 황색으로 익으며 지름 6mm 정도이고 끝에 화피열편(花被裂片)과 암술머리가 남아 있다. 열매가 붉은색으로 익는 것을 붉은겨우살이(for. rubroaurantiacum OHWI)라고 한다. 관상용ㆍ약용으로 쓰이며 한방과 민간에서 잎ㆍ줄기를 진정ㆍ통경(通經)ㆍ요통ㆍ고혈압ㆍ최토ㆍ산후(産後)ㆍ동상(凍傷)ㆍ동맥경화(動脈硬化) 등에 식물체(植物體)를 약재로 쓴다.Mistletoe (Viscum album var.) Is a parasitic plant that is parasitic to mulberry, oak, oak, teal, chestnut, and birch in 50 ~ 1100m above sea level in China, Taiwan, Japan and Korea. Evergreen parasitic shrub (常綠 性 목 生 灌木), nest-shaped, round, some 1m in diameter. Branches are divided into idols, round, yellow-green, hairless, and 3-6cm between nodes. Leaves are macrophage, lanceolate, 3 ~ 6cm long, 6 ~ 12cm wide, obtuse and original, narrowed gradually toward the bottom, no leaf disease, dark green, thick, glossy There is no. Flowers bloom in January-March, flowers are yellow, male and female, wild flowers, no life, no parcels, small parcels, and small flowers. (鐘) like, divided into four, pistil has no stage. Fruits mature in January to December of the following year. Nucleus fruits are round and pale yellow, ripen to about 6mm in diameter, with stalk fragments and pistils remaining at the end. The ripening fruit is called red mistletoe (for. Rubroaurantiacum OHWI). It is used for ornamental and medicinal purposes, and it is used for medicinal plants such as soothing leaves, stems, back pain, low blood pressure, hypertension, postpartum, frostbite, arteriosclerosis, etc. Write it as medicine.
겨우살이의 학명은 Viscum album var. coloratum(KOM.) OHWI.이고, 성분으로는 lectin, inositol, viscine, urson, viscotoxin, -amylin, lupeol 등이 함유되어 있으며, 체내 섭취에 따른 인체 안전성이 이미 확인되어 있다(김태정, 한국의 자원식물 I, 서울대학교출판부, 1996, 육창수, 한국약용식물도감, 아카데미서적, 1993).Mistletoe's scientific name is Viscum album var. coloratum (KOM.) OHWI., which contains lectin, inositol, viscine, urson, viscotoxin, -amylin, lupeol, and has been confirmed to be safe for human consumption. I, Seoul National University Press, 1996, Chang-Sook Yuk, Korea Plant Book, Academy Books, 1993).
이러한 겨우살이 추출물에 관해서는 식품 및 제약에서 적용이 다음과 같이 보고되고 있다. 겨우살이 추출물을 첨가하여 발효시킨 유산균 발효물 및 그 제조 방법(공개특허 97-064384), 한국산 겨우살이로부터 분리된 렉틴 성분을 함유하는 면역 증강용 의약 조성물(공개특허 99-034024), 겨우살이 추출물을 함유하는 고지혈증 치료제로서 약학 조성물(공개특허 99-080547), 경구 투여 면역 증강제로서 겨우살이 추출물의 적용(공개특허 00-048654) 등이 개시되어 있다. 그러나 미백 효과, 자극완화효과 등 피부 개선에 우수한 기능을 하는 화장료에 대한 연구 보고는 전무하다.As for this mistletoe extract, application in food and pharmaceuticals has been reported as follows. Lactobacillus fermented product fermented with the addition of mistletoe extract and its manufacturing method (Patent No. 97-064384), Immunity-enhancing pharmaceutical composition containing the lectin component isolated from Korean mistletoe (Patent No. 99-034024), Contains mistletoe Pharmaceutical compositions as a treatment for hyperlipidemia (Patent No. 99-080547), the application of mistletoe extract as an orally administered immune enhancer (Patent No. 00-048654) and the like are disclosed. However, there are no research reports on cosmetics that have excellent functions for skin improvement such as whitening effect and stimulating effect.
이에 본 발명자들은 여러 가지 한방 원료 중 겨우살이를 선택하여 이것의 화장품 원료로서의 효능을 확인하고 그 사용방법을 개발함으로써 다양한 화장품의 원료의 선택범위를 높이고, 또한 이 원료를 사용하여 좀더 자극이 없으면서도 소정의 기능성 효과를 나타내는 화장품을 제조할 수 있는 방법을 제공하고자 한다.Accordingly, the present inventors select mistletoe from various herbal ingredients to confirm its efficacy as a cosmetic raw material and develop a method of using the same, thereby increasing the selection range of various cosmetic raw materials, and using this raw material without being further stimulated. It is intended to provide a method for producing a cosmetic exhibiting a functional effect of.
또한, 겨우살이의 추출물 제조시 특정 추출용매 선택시 목적 효능이 더욱 크게 나타난 점으로부터 화장품 원료로서의 이들 물질을 이용하여 화장료를 제조하는 방법 및 그 화장료를 제공하고자 한다.In addition, from the point of view that the target efficacy was more selected when selecting a specific extraction solvent in the preparation of the extract of mistletoe, and to provide a method for producing a cosmetic using these materials as a cosmetic raw material and the cosmetic.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 겨우살이 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening containing the mistletoe extract as the main active ingredient.
또한, 본 발명은 겨우살이 추출용매로서 정제수, 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized by using at least one solvent selected from purified water, lower alcohol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane as the mistletoe extract solvent.
또한, 본 발명은 추출용매로서 에탄올 40∼95% 용액을 이용하여 추출하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the extraction using the ethanol 40-95% solution as the extraction solvent.
뿐만 아니라, 본 발명은 냉침 또는 가열방법으로 추출을 수행하는 것을 특징으로 한다.In addition, the present invention is characterized in that the extraction is carried out by a cooling or heating method.
나아가, 본 발명은 추출 후 여과, 농축 또는 동결건조를 더 수행하는 것을 특징으로 한다.Furthermore, the present invention is characterized by further performing filtration, concentration or lyophilization after extraction.
또한, 본 발명의 화장료는 겨우살이 추출물을 0.01∼30중량% 함유함을 특징으로 한다.In addition, the cosmetic of the present invention is characterized in that it contains 0.01 to 30% by weight of mistletoe extract.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중 하나인 것을 특징으로 한다.In addition, the cosmetic composition of the present invention is characterized in that one of the formulation of a lotion, gel, water-soluble liquid, oil-in-water (O / W) type and water-in-oil (W / O) type.
상기 화장료 조성물은 피부 미백용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is used for skin whitening.
상기 화장료 조성물은 피부 자극완화용으로 사용되는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that it is used for skin irritation relief.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these Examples are only illustrative description of the present invention and the scope of the present invention is not limited to these Examples.
[실시예 1]겨우살이 추출물 제조 Example 1 Mistletoe Extract Preparation
세절하여 음건한 겨우살이를 10∼200메쉬 크기로 분쇄하여 뜨거운(hot) 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.01 내지 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 겨우살이 추출물을 제조하였다.Shred the dried mistletoe into 10 ~ 200 mesh size, refluxed three times with a hot 95% (V / V) ethanol solution for 5 hours, cooled and filtered with Whatman # 5 filter paper. It was. The filtered extract was concentrated under reduced pressure and lyophilized at 50 캜 or lower. Mistletoe extract was prepared using one or more solvents selected from purified water, ethanol, butylene glycol, and propylene glycol so as to contain 0.01 to 30.0% by weight of the vacuum concentrate and the lyophilisate.
[실시예 2]멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 이용한 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해 실험 Example 2 Melanin synthesis inhibition experiment of melanocytes using melanocyte stimulating hormone (MSH)
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)를 이용하여 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해정도로 미백효과를 평가한 것이다.This Example is to evaluate the whitening effect to the degree of inhibition of melanin synthesis of melanocytes using melanocyte stimulating hormone (MSH) to confirm the whitening effect of the mistletoe extract obtained in Example 1.
본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 사람에서 유래한 세포주이며 정상적인 조건에서는 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하지 않다가 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)을 처리하면 멜라닌을 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 α-MSH와 겨우살이 추출물을 처리하여 멜라닌 흑색색소의 합성 정도를 비교, 평가하였다. 본 실시예에 사용된 A375SM 멜라노싸이트는 KCLB(Korea Cell Line Bank, 기탁번호:80004)로부터 분양받아 사용하였다.The A375SM melanocytes used in this example are human-derived cell lines, which do not secrete melanin under normal conditions, but melanocyte stimulating hormone (MSH). Α-MSH and mistletoe extracts were treated in the artificial culture of these cells to compare and evaluate the degree of synthesis of melanin black pigment. The A375SM melanocytes used in this example were used from KCLB (Korea Cell Line Bank, Accession No.:80004).
멜라노싸이트 자극 호르몬은 멜라노싸이트의 세포막 수용체와 결합하여 세포내로 멜라닌 합성 신호를 전달하는 싸이토카인으로 α-타입과 β-타입으로 나누어지는데, β-타입은 동물개체간 특이성이 높아 사람과 마우스 등 동물 개체간 교차반응이 일어나지 않고, α-타입은 모든 동물개체간 동일한 구조를 가지고 있어 실험실내 미백효과 평가를 위하여 폭넓게 사용되고 있다.Melanosite stimulating hormone is a cytokine that binds to the membrane receptor of melanocytes and transmits melanin synthesis signal into cells. The melanocyte stimulating hormone is divided into α- and β-types. Liver cross-reaction does not occur, and α-type has the same structure among all animal subjects and is widely used for the evaluation of whitening effect in the laboratory.
α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The melanin synthesis inhibitory effect of A375SM melanocytes using α-MSH was measured as follows.
A375SM 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 α-MSH(Sigma사) 200nM과 겨우살이 추출물을 독성을 유발하지 않는 농도로 동시에 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 48시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액{homogenization buffer(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF)} 1㎖을 첨가하여 5분간 와류(vortexing)하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액(cell lysate)에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader,ELx800, 미국)로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정하여 합성된 멜라닌을 정량한 다음 시료의 멜라닌 합성 저해율(%)을 측정하였다.A375SM melanocytes were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well and attached to cells, followed by incubation with α-MSH (Sigma) 200nM and mistletoe extract at the same time to induce no toxicity. . After 48 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, the cell number was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Intracellular melanin quantification was performed by slightly modifying the method of Rotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). After washing the cell pellet with PBS once, 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. It was. Melanin was extracted by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell lysate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then melanin at 405 nm with a microplate reader (ELx800, USA). The absorbance of the melanin was measured to quantify the synthesized melanin synthesis rate (%) of the sample was measured.
A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 합성 저해율(%)은 다음 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라노싸이트의 세포막에 결합하는 α-MSH를 저해하여 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Melanin synthesis inhibition rate (%) of the A375SM melanocytes was calculated by the following equation (1), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by inhibiting α-MSH binding to the cell membrane of melanocytes.
A : α-MSH만 첨가한 웰의 멜라닌 양A: the amount of melanin in the well containing only α-MSH
B : 시료와 α-MSH를 동시에 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Melanin amount in the wells to which the sample and α-MSH were simultaneously added
α-MSH를 이용한 A375SM 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 겨우살이 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 1).As a result of testing the melanin production inhibitory effect of A375SM melanocytes using α-MSH, the IC 50 value of the mistletoe extract was 0.01%, which was superior to the conventional whitening agents such as kojic acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and lettuce extract. (Table 1).
이와 같은 결과로 볼 때 본 발명의 겨우살이 추출물의 경우 기존의 미백제가 단순히 티로시나제만을 저해하는 것과는 달리 멜라노싸이트 자극 호르몬인 α-MSH가 멜라노싸이트에 결합하는 것을 저해하여 멜라닌 합성을 저해하는 것임을 알 수 있다.These results suggest that the mistletoe extract of the present invention inhibits melanin synthesis by inhibiting the binding of melanocyte stimulating hormone α-MSH to melanocytes, unlike the conventional whitening agent merely inhibiting tyrosinase alone. .
[실시예 3]머쉬룸 티로시나제를 이용한 티로시나제 억제효과 측정 실험 EXAMPLE 3 Experimental Measurement of Tyrosinase Inhibitory Effect Using Mushroom Tyrosinase
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example is to determine the whitening effect by looking at the degree of inhibition of the function of the enzyme tyrosinase (tyrosinase) to confirm the whitening effect of the mistletoe extract obtained in Example 1.
티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S.H., J. Biochem., 24:161-168, 1966)을 응용해 미백 효과를 판정하였다.Tyrosinase is an enzyme that accelerates the oxidation of tyrosine in vivo and helps melanin production. In this example, the method of inhibiting the function of this enzyme to inhibit the oxidation of tyrosine to form a black polymer called melanin (Pomerantz SH, J. Biochem., 24: 161-168, 1966) is applied. The sun whitening effect was determined.
상백피 추출물, 겨우살이 추출물, 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물을 시료로 사용하여 티로시나제 활성 억제효과를 조사하였다.The inhibitory effect of tyrosinase activity was investigated using lettuce extract, mistletoe extract, kojic acid, arbutin and oil-soluble licorice extract as samples.
각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50mM 인산완충액(pH6.5) 150㎕, 1.5mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/㎖, Sigma社 ) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨후 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 2에 의하여 계산하였으며, IC50값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.The inhibitory activity against tyrosinase of each sample was determined by placing 15 μl of the sample into a 96 well plate, adding 150 μl of 50 mM phosphate buffer (pH6.5), 25 μl of 1.5 mM L-tyrosine solution, and then using mushroom tyrosinase (1,500 units / ml, Sigma) 10 μl was added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes, and then the absorbance was measured at 490 nm using a microplate reader (ELx800, USA) to measure the inhibition rate against tyrosinase. Inhibition rate (%) for tyrosinase was calculated by the following equation (2), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits the tyrosinase enzyme activity by 50%.
A : 시료를 넣은 웰의 반응전 흡광도A: Absorbance before reaction of the well containing the sample
B : 시료를 넣은 웰의 반응후 흡광도B: Absorbance after reaction of the well containing the sample
C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응전 흡광도C: Absorbance before reaction of the well without sample
D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응후 흡광도D: Absorbance after reaction of well without sample
티로시나제 활성 억제 효과를 시험한 결과 겨우살이 추출물의 IC50값은 0.025%로 나타나 티로시나제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 2).As a result of testing the inhibitory effect of tyrosinase activity, the IC 50 value of the mistletoe extract was 0.025%, which was superior to the conventional whitening agents known as kojic acid, arbutin, and lettuce extract (Table 2).
[실시예 4]방선균을 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험 [Example 4] Melanin production inhibitory effect measurement experiment using actinomycetes
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 방선균에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example is to determine the whitening effect by looking at the degree of inhibition of melanin production against actinomycetes in order to confirm the whitening effect of the mistletoe extract obtained in Example 1.
방선균(Streptomyces bikiniensis NRRL B1049)은 생명과학연구원(KCTC)으로부터 분양(기탁번호:9172)받아 사용하였다.Actinomycetes (Streptomyces bikiniensis NRRL B1049) were used by the Korea Science Institute (KCTC).
방선균을 파파비자스(papavizas) VDYA 한천 슬랜트 배지(V-8 juice 200㎖, 포도당 2g, 효모 추출물 2g, CaCO31g, 한천 20g, 증류수 800㎖, pH7.2)에서 2주간 28℃로 배양시켜 포자를 생성시킨 후 멸균수로 포자 현탁액을 만들었다. 0.2%의 효모 추출물을 첨가한 ISP No.7 평판배지에 포자 현탁액을 0.2㎖씩 도포한 후 배지표면에 시료(30㎍/㎖)를 200㎕씩 적신 페이퍼 디스크(paper disc)를 올리고 28℃에서 배양하였다. 48시간 배양한 후 생성된 멜라닌 생성 저해환의 크기를 대표적 멜라닌 생성 저해물질로 알려진 4-하이드록시아니졸을 대조군으로 하여 측정하여 멜라닌 생성 저해여부를 관찰하였다(이충환, 산업미생물학회지, 21:139-143, 1993).Actinomycetes were incubated at 28 ° C. for 2 weeks in papavizas VDYA agar slant medium (V-8 juice 200 ml, glucose 2 g, yeast extract 2 g, CaCO 3 1 g, agar 20 g, distilled water 800 ml, pH7.2) for 2 weeks. Spores were produced to produce spores with sterile water. 0.2 ml of spore suspension was applied to ISP No. 7 flat medium containing 0.2% yeast extract, and a paper disc moistened with 200 µl of sample (30 µg / ml) was placed on the surface of the medium. Incubated. After 48 hours of incubation, the size of the melanogenesis inhibitory ring produced was measured using 4-hydroxyanisol, which is known as a typical melanogenesis inhibitor, as a control group and the inhibition of melanogenesis was observed (Lee Chung-hwan, Journal of the Industrial Microbiology, 21: 139- 143, 1993).
겨우살이 추출물의 방선균에 대한 멜라닌 생성 저해환은 29㎜로 대조군인 4-하이드록시아니졸이나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴보다 우수한 멜라닌 생성 저해효과를 나타내었다(표 3).The inhibitory effect of melanin production on the actinomycetes of the mistletoe extract was 29 mm, which showed a superior melanin production inhibitory effect than 4-hydroxyanisol, which is a control group, or the existing whitening agents koji acid and arbutin (Table 3).
[실시예 5]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험 Example 5 Measurement of melanin production inhibitory effect using B16F1 melanocytes
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.This Example is to determine the whitening effect by looking at the degree of melanin production inhibition on B16F1 melanocytes in order to confirm the effect of the mistletoe extract obtained in Example 1.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocytes used in this example are cell lines derived from mice and cells that secrete a black pigment called melanin. Samples were treated during the artificial culture of these cells to evaluate the degree of melanin black pigment reduction. The B16F1 melanocytes used in this example were used after being sold from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No .: 6323).
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows.
B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.B16F1 melanocytes were dispensed in 6-well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well, cells were attached, and the samples were incubated for 72 hours by treating the samples at a concentration that does not cause toxicity. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, and the cells were counted and centrifuged to recover the cells.
세포내 멜라닌 정량은 Lotan(Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 완충액(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm,10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10%DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 다음 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Intracellular melanin quantification was performed by slightly modifying the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). The cell pellet was washed once with PBS, and then 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added to vortex for 5 minutes to disrupt the cells. Melt the extracted melanin by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 minutes), and then measured the absorbance of melanin at 405 nm with a microplate reader, and then quantified the melanin. Melanin production inhibition rate (%) was measured. Melanin inhibition rate (%) of B16F1 melanocytes was calculated by the following equation (3), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by 50%.
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Melanin amount in wells without sample
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Melanin amount in the wells to which the sample was added
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 겨우살이 추출물의 IC50값은 0.01%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 4).As a result of testing the melanin production inhibitory effect of B16F1 melanocytes, the IC 50 value of the mistletoe extract was 0.01%, which was superior to the conventional whitening agents, koji acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and extract of lettuce extract (Table 4).
[실시예 6]B16F1 멜라노싸이트를 이용한 세포내 티로시나제 효소 합성 억제효과 측정 실험 Example 6 Inhibitory Effect of In Vitro Tyrosinase Enzyme Synthesis Using B16F1 Melanosite
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트내 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 세포내 티로시나제효소합성량을 측정하여 판단한 것이다.In this example, in order to confirm the whitening effect of the mistletoe extract obtained in Example 1, the degree of inhibition of tyrosinase enzyme synthesis in B16F1 melanocytes was determined by measuring the amount of intracellular tyrosinase enzyme synthesis.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 티로시나제라는 효소를 합성하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하고 세포에서 티로시나제를 분리하여 효소 합성량을 측정하므로서 티로시나제 효소 합성 억제 정도를 비교 평가하였다.The B16F1 melanocytes used in this example are cell lines derived from mice and cells that synthesize an enzyme called tyrosinase. The degree of inhibition of tyrosinase enzyme synthesis was compared by evaluating the amount of enzyme synthesis by treating the sample during the artificial culture of the cells and by separating the tyrosinase from the cells.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocytes used in this example were used after being sold from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No .: 6323).
B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.The tyrosinase enzyme synthesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows.
B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼(50mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF) 1㎖을 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하고, 원심분리(3,000rpm,10분)하여 상등액을 회수하였다. 50mM 소듐 포스페이트 버퍼(pH6.5)에 1.5mM L-티로신, 0.06mM L-DOPA, 세포 상등액을 각각 넣고, 37℃에서 30분간 배양한 후 마이크로플레이트 판독기로 490㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나제 효소 합성 억제효과를 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제율(%)은 다음 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC50값은티로시나제 효소 합성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.B16F1 melanocytes were dispensed in 6 well plates at a concentration of 2 × 10 6 per well, cells were attached, and the samples were incubated for 72 hours by treating the samples at a concentration that does not cause toxicity. After 72 hours of incubation, the cells were detached with trypsin-EDTA, and the cells were counted and centrifuged to recover the cells. Wash the cell pellet once with PBS, add 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF), vortex for 5 minutes, disrupt the cells, and centrifuge (3,000 rpm). 10 minutes) to recover the supernatant. Put 1.5mM L-tyrosine, 0.06mM L-DOPA, and cell supernatant into 50mM sodium phosphate buffer (pH6.5), incubate for 30 minutes at 37 ° C, and measure the absorbance at 490nm with a microplate reader to synthesize tyrosinase enzyme. Inhibitory effect was measured. The inhibition rate of tyrosinase enzyme synthesis (%) of B16F1 melanocytes was calculated by the following equation (4), the IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits tyrosinase enzyme synthesis by 50%.
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 티로시나제 효소 합성량A: Synthesis amount of tyrosinase enzyme in wells without sample
B : 시료를 첨가한 웰의 티로시나제 효소 합성량B: Tyrosinase enzyme synthesis amount of wells to which sample was added
B16F1 멜라노싸이트의 티로시나제 효소 합성 억제 효과를 시험한 결과, 겨우살이 추출물의 IC50값은 0.015%로 나타나 기존의 미백제인 코지산, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 매우 우수한 효과를 나타내었다(표 5). 이와 같은 결과를 볼 때 본 발명의 겨우살이 추출물의 경우는 기존의 미백제가 단순히 티로시나제 효소의 활성만을 저해하는 것과는 달리 티로시나제 효소의 합성을 저해하여 미백효과를 나타내는 것을 알 수 있다.As a result of testing the inhibitory effect of tyrosinase enzyme synthesis of B16F1 melanocytes, the IC 50 value of the mistletoe extract was 0.015%, which was much better than the existing whitening agents, kojic acid, arbutin, oil-soluble licorice extract, and lettuce extract. 5). In view of these results, in the case of mistletoe extract of the present invention, unlike the conventional whitening agent merely inhibits the activity of tyrosinase enzyme, it can be seen that the whitening effect by inhibiting the synthesis of tyrosinase enzyme.
[실시예 7]염증유발관련 효소 활성 억제효과 측정 실험 Example 7 Inflammation-Induced Enzyme Activity Inhibitory Effect Measurement Experiment
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 항염증효과를 확인하기 위해 염증유발관련 효소인 히아루로니디아제의 효소 활성을 측정하여 판단한 것이다.This example is to determine the anti-inflammatory effect of the mistletoe extract obtained in Example 1 by determining the enzyme activity of the hyaluroniadiaze enzyme, an inflammation-associated enzyme.
히아루로니디아제(Hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 기능을 가지고 있다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammation, 4:437-438, 1984)을 응용해 항염증효과를 판정하였다.Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid and has the function of causing inflammation. In this example, the anti-inflammatory effect was determined by applying a method (Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammation, 4: 437-438, 1984) to inhibit the activity of this enzyme to measure the anti-inflammatory effect.
컴프리, 시소, 삼백초, 유용성 감초 추출물, 겨우살이 추출물을 시료로 사용하여 히아루로니디아제 활성 억제효과를 조사하였다.The inhibitory effect of hyaluroniadiasis activity was investigated using comfrey, seesaw, triticale, oil-soluble licorice extract and mistletoe extract as samples.
각 시료들의 히아루로니디아제 대한 저해활성은 다음과 같이 행하였다.Inhibitory activity of hyaluronidiases of each sample was performed as follows.
시료 100㎕와 히아루로니디아제 용액(type IV-S, Sigma사, 400U/㎖) 50㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨후, 효소활성화용액(Compound 48/80 CaCl2·2H2O, Sigma사, 0.1㎎/㎖)을 100㎕ 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시킨다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4㎎/㎖)을 250㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100㎕를 넣어 반응을 종결시킨다. 포타슘보레이트 용액을 100㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 p-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시켜 발색시킨다. 585㎚에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제에 대한 저해율을 측정하였다.100 μl of sample and 50 μl of hyaluronidiase solution (type IV-S, Sigma, 400U / mL) were added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes, followed by enzyme activation solution (Compound 48/80 CaCl 2 · 2H 2 O, 100 μl of Sigma Co., Ltd., 0.1 mg / ml) was added and reacted again at 37 ° C. for 20 minutes. 250 μl of hyaluronic acid solution (0.4 mg / ml) was added thereto, followed by reaction at 37 ° C. for 40 minutes, and 100 μl of 0.4N NaOH was added to terminate the reaction. 100 μl of potassium borate solution was added thereto, reacted at 95 ° C. for 3 minutes, cooled, and 3 ml of p-dimethylaminobenzaldehyde solution was added thereto. Absorbance was measured at 585 nm to determine the inhibition rate for hyaluronidiases.
히아루로니디아제에 대한 저해율(%)은 다음 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC50값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Inhibition rate (%) for the hyaluronia diase was calculated by the following equation (5), IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits the hyaluronia diase enzyme activity by 50%.
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성A: Enzyme activity of wells without sample
B : 시료를 첨가한 웰의 효소활성B: Enzyme Activity of Well Added Samples
히아루로니디아제 효소 활성 억제 효과를 시험한 결과 겨우살이 추출물의 IC50값은 0.05%로 나타나 히아루로니디아제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 항염증제인 유용성 감초 추출물, 컴프리 추출물, 삼백초 추출물, 시소 추출물 등에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 6).As a result of testing the inhibitory effect of hyaluronidase enzyme activity, the IC 50 value of the mistletoe extract was 0.05%, which is an effective anti-inflammatory licorice extract, comfrey extract, tritical herb extract, and seesaw extract, which are known to be excellent in inhibiting hyaluronimide. It showed a superior effect (Table 6).
[실시예 8]세포배양기술을 이용한 자극완화 효과 평가 Example 8 Evaluation of Stimulation Relaxation Effect Using Cell Culture Technology
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물의 자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 배양 기술을 이용하여 피부자극을 유발하는 물질인 소듐라우릴썰페이트(Sodium Lauryl Sulfate:SLS)에 의한 세포 사멸을 저해시키는 정도로 자극완화 효과를 평가한 것이다.In this example, the cell death by Sodium Lauryl Sulfate (SLS), a substance that causes skin irritation using cell culture technology, was evaluated in order to evaluate the irritating effect of the mistletoe extract obtained in Example 1 The degree of stimulation alleviation was evaluated to the extent of inhibition.
SLS는 화장품 기재의 피부 자극 평가의 기준이 되는 물질로 세포막에 결합되어 세포대사억제와 세포막을 파괴하여 피부 자극을 유발시키는 물질이다.SLS is a substance that is used as a criterion for evaluating skin irritation based on cosmetics and is bound to cell membranes to inhibit cell metabolism and destroy cell membranes to cause skin irritation.
본 실시예는 사람 섬유아세포에 SLS와 겨우살이 추출물을 동시에 첨가하였을 때 SLS에 의한 세포 사멸을 감소시키는 효과를 평가한 것이다.This example evaluates the effect of reducing cell death by SLS when SLS and mistletoe extract were added to human fibroblasts at the same time.
본 실시예에 사용된 Hs68 섬유아세포는 사람의 피부 진피세포로 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호:1635)에서 분양받아 사용하였다.Hs68 fibroblasts used in this example were used as human dermal dermal cells from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No.:1635).
세포배양기술을 이용한 자극완화 평가 실험은 다음과 같이 행하였다.Stimulation relaxation evaluation experiment using the cell culture technology was carried out as follows.
사람 유래의 섬유아세포를 96 웰 플레이트에 각 웰당 1×105농도로 분주하고, 24시간 동안 배양한 후 0.01% SLS 단독, 0.01% SLS와 겨우살이 추출물(0.01%)을 동시에 처리하고 24시간 동안 추가배양하였다. 배양후 MTT(Sigma사)시약을 첨가하고 4시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고 1N NaOH/이소프로판올용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 마이크로플레이트 판독기로 565㎚에서 흡광도를 측정하여 겨우살이 추출물 및 백렴 추출물이 SLS에 의한 세포사멸을 저해하는 효과를 측정하였다.Human-derived fibroblasts were dispensed in 96 well plates at a concentration of 1 × 10 5 per well, incubated for 24 hours, treated with 0.01% SLS alone, 0.01% SLS and mistletoe extract (0.01%) simultaneously and added for 24 hours. Incubated. After incubation, MTT (Sigma) reagent was added and incubated for 4 hours, the culture medium was removed, 1N NaOH / isopropanol solution was added and stirred for 20 minutes, and the absorbance at 565 nm was measured using a microplate reader. The effect of the extract on inhibiting apoptosis by SLS was measured.
시험결과 겨우살이 추출물은 SLS에 의해서 유발되는 세포 사멸을 억제시키므로써 화장료 기재와 함께 처방하였을 때 화장료 기재로 인하여 일어날 수 있는 피부 자극을 감소시키는 자극완화 물질임이 밝혀졌다(표 7).Test results have shown that mistletoe extract is an irritant that reduces skin irritation that can occur due to cosmetic substrates by inhibiting cell death induced by SLS (Table 7).
[실시예 9 내지 11 및 비교예 1][Examples 9 to 11 and Comparative Example 1]
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.This Example prepared the cosmetics containing the mistletoe extract obtained in Example 1 to evaluate the skin whitening effect in a comparative experiment with Comparative Example 1.
비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 9 내지 11, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 9 내지 11에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 색차계로 얼굴색을 비교하여 가장 어두운 색을 5, 중간색을 3, 가장 환한 색을 1로 정하고 그 중간정도를 어림잡아 평가하였다. 표 9는 실시예 11에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색을 비교예 1로 만든 크림을 사용한 실험자의 안면 피부색과 비교한 것이다.The cosmetics used in the comparative experiments are in the form of a cream, the composition of which is shown in Table 8. First, the phase b) recorded in Table 8 is heated and stored at 70 ° C. To this, a) phase is added, and after pre-emulsification, it is emulsified uniformly with a homomixer, and then cooled slowly to prepare a cream (Examples 9 to 11 and Comparative Example 1). 20 experimenters (20-35 year old female) applied the creams prepared in Examples 9 to 11 on the right side of the face and the creams prepared in Comparative Example 1 on the left side of the face twice a day for 2 consecutive months. It was. After completion of the experiment, the skins of the application areas on the left and right sides of the face were compared by using an image analyzer and a color difference meter, and the darkest color was set to 5, the middle color to 3, and the brightest color to 1. Table 9 compares the facial skin color of the experimenter using the cream prepared in Example 11 with the facial skin color of the experimenter using the cream made in Comparative Example 1.
표 9에 나타난 바와같이 겨우살이 추출물과 백렴 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.As shown in Table 9, it can be seen that the whitening effect is excellent in the facial skin of the experimenter who applied the cream containing mistletoe extract and baekryeom extract.
주) 단위:중량 %Note) Unit: Weight%
[실시예 12]Example 12
본 실시예는 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물을 함유한 화장료의 자극완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가한 것이다.This Example is to evaluate the irritating effect of the cosmetic containing the mistletoe extract obtained in Example 1 by human patch experiment.
본 평가는 실시예 8에서 얻어진 결과를 인체에 직접 적용하여 얻어진 평가의 결과이다. 일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS와 실시예 9 내지 11에서 제조된 제품을 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첨포하여 자극 유발 지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.This evaluation is a result of evaluation obtained by directly applying the result obtained in Example 8 to the human body. SLS alleviates the effects of stimulation induction for 24 hours, 48 hours, 72 hours by using SLS that causes irritation in general cosmetic prescriptions (cream, lotion, skin, essence) and the products prepared in Examples 9-11. Is evaluated.
20-50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박부위에 FINN CHAMBER (FINLAND)를 이용하여 각각의 제품을 0.2㎎씩 첩포하고, 24시간 후 급성자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.FINN CHAMBER (FINLAND) was used to coat 0.2 mg of each product on the upper arm of 50 healthy men and women aged 20-50 years, and the acute stimulation index was evaluated after 24 hours. After evaluation, the same amount of product was applied to the same site again, and the delayed stimulation index after 48 and 72 hours was evaluated.
시험 결과 겨우살이 추출물을 함유하는 제품을 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발적을 일으키지 않았다.The test resulted in no skin redness after 24 hours, 48 hours, 72 hours of patching the product containing mistletoe extract.
이 평가의 결과는 겨우살이 추출물이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있는 유의한 효과가 있음을 나타낸다.The results of this evaluation indicate that mistletoe extracts have a significant effect on reducing skin irritation by substrates (surfactants, fragrances, alcohols) that cause irritation when used in cosmetics.
이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 앞에서와 같이 미백효과, 자극완화효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.Other examples are shown below. That is, as described above, the skin whitening effect, the irritation-releasing effect, etc. showed an excellent effect on skin improvement.
[실시예 13]실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물을 함유한 화장수의 제조 Example 13 Preparation of Lotion Containing Mistletoe Extract Obtained in Example 1
95%에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합, 용해하였다. 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.To 8 g of 95% ethanol, 0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of fragrance, 0.1 g of paraoxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of pigment are dissolved and mixed. It was. 0.05 g of the mistletoe extract obtained in Example 1 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water, and the mixed solution was added and stirred to obtain a lotion having a skin improvement effect.
[실시예 14]실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물을 함유한 유액의 제조 Example 14 Preparation of Latex Containing Mistletoe Extract Obtained in Example 1
세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of petrolatum, 0.2 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoesteralide, 1 g of polyoxyethylene (20 mole added) monooleate and 0.1 g of fragrance were mixed and dissolved at 70 ° C. 0.5 g of the mistletoe extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol 1500, 0.2 g of triethanolamine, and 76.2 g of purified water were heated to 75 ° C to dissolve it. Both mixtures were emulsified and cooled to obtain an emulsion having an oil-in-water (O / W) type skin improvement effect.
[실시예 15]실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물을 함유한 미용액의 제조 Example 15 Preparation of Beauty Solution Containing Mistletoe Extract Obtained in Example 1
95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 겨우살이 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of kitulose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium licorice, 0.1 g of paraoxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of the mistletoe extract obtained in Example 1 and an appropriate amount of pigment were mixed to obtain a cosmetic solution having a skin improvement effect.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 겨우살이 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌의 생성을 막아주는 멜라노싸이트 자극 호르몬(MSH)의 세포막 결합저해효과, 티로시나제 활성억제효과, 티로시나제 합성억제효과, 멜라닌 합성억제효과 등의 미백효과와 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 감소시키는 피부세포사멸 억제효과, 염증유발관련효소 활성 억제효과 등의 피부자극 완화효과에 우수한 효과를 나타내었다. 따라서, 이러한 겨우살이 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩 등의 화장료 조성물은 피부 미백효과 및 자극완화효과가 있음을 알 수 있다.As described above, the mistletoe extract according to the present invention, the inhibition of cell membrane binding of melanocyte stimulating hormone (MSH), tyrosinase activity inhibitory effect, which prevents the production of melanin, a substance causing blemishes, freckles and skin pigmentation, It showed excellent effects on skin irritation, such as whitening effect such as tyrosinase synthesis inhibitor, melanin synthesis inhibitory effect, skin cell death suppression effect that reduces skin irritation caused by cosmetic substrate, and inhibitory activity of inflammation-associated enzyme. . Therefore, it can be seen that the cosmetic composition such as a lotion, cream, milky lotion, and pack containing the mistletoe extract has a skin whitening effect and a stimulating effect.
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Cited By (4)
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|---|---|---|---|---|
| KR101634670B1 (en) | 2015-07-27 | 2016-06-30 | 강원대학교산학협력단 | Cosmetic composition comprising fermented extract of mistletoe for anti-inflammation or anti-allergy |
| KR20180077117A (en) | 2018-06-25 | 2018-07-06 | 강원대학교산학협력단 | Cosmetic composition for anti-oxidation or whitening comprising solvent fraction of mistletoe extract and active material isolated therefrom |
| KR20180077118A (en) | 2018-06-25 | 2018-07-06 | 강원대학교산학협력단 | Cosmetic composition for anti-oxidation or whitening comprising solvent fraction of mistletoe extract and active material isolated therefrom |
| KR20210001935A (en) | 2019-06-28 | 2021-01-06 | 강원대학교산학협력단 | Anti-allergy composition comprising mistletoe extract or fraction |
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2001
- 2001-07-10 KR KR1020010041139A patent/KR20030005719A/en not_active Application Discontinuation
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