KR20020011967A - Cloning of cDNA of MAGE's 5,8,9 and 11 and their uses in diagnosis of cancer - Google Patents

Abstract

본 발명은 유전자 발현 수준을 증대시키고자 개발된 방법에 따라 분리 및 동정된 cDNA 분자에 관한 것이다.The present invention relates to cDNA molecules isolated and identified according to methods developed to increase gene expression levels.

본 발명은 또한 상기 cDNA 분자를 기본으로 하는 단백질 및 펩티드 뿐아니라, 상기 물질을 다양한 진단 및 치료 용도로 사용하는 것에 관한 것이다.The invention also relates to the use of such substances for various diagnostic and therapeutic uses, as well as proteins and peptides based on the cDNA molecules.

Description

ＭＡＧＥ 5, 8, 9 및 11의 ｃＤＮＡ 클로닝 및 이를 이용한 암 진단 방법{Cloning of cDNA of MAGE's 5,8,9 and 11 and their uses in diagnosis of cancer}Cloning of cDNA of MAGE's 5,8,9 and 11 and their uses in diagnosis of cancer}

문헌 "Van der Bruggen, et al., Science 254: 1643-1647 (1991)"에 의해, 인체 백혈구 항원("HLAs")과 복합체를 형성하여 자가유래 세포용해성(autologous cytolytic) T 세포에 의한 반응을 유발시키는 종양 거부 항원계의 존재가 밝혀졌다[상기 문헌 외에도, Boon et al.의 미국 특허 제5,342,774호 참조; 상기 문헌은 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]. 이들 문헌들에는 또한, 프로세싱 과정을 거쳐 상기한 종양 거부 항원이 되는 단백질을 암호화하는 유전자에 대한 분리 기술이 개시되어 있다. 지속적인 연구 결과, 밀접한 관련이 있는 12종의 유전자들을 발견하게 되었다. 이들 유전자들은 X 염색체의 q28 영역내에 위치하는 것으로밝혀졌다. 처음에는 이들 유전자들을 MAGE-1 내지 MAGE-12로 명명하였으나, 또다른 유전자들의 연이은 발견으로, 지금은 이들을 MAGE-A1 내지 MAGE-A12로 지칭하고 있다. X 염색체의 p21 영역내에는 MAGE-B 유전자 클러스터로 지칭되는 4종의 또다른 관련 유전자들이 위치한다. 또한 MAGE-C1 및 MAGE-C2로 명명된 또다른 MAGE계 분자들이 q26 영역에 위치하고 있다.According to Van der Bruggen, et al., Science 254: 1643-1647 (1991), it forms complexes with human leukocyte antigens (“HLAs”) to respond to autologous cytolytic T cells. The presence of a triggering tumor rejection antigen system has been discovered (in addition to the above references, see US Pat. No. 5,342,774 to Boon et al .; Which is incorporated herein by reference. These documents also disclose a separation technique for genes encoding proteins that become the tumor rejection antigens described above through processing. Ongoing research led to the discovery of 12 closely related genes. These genes were found to be located in the q28 region of the X chromosome. Initially these genes were named MAGE-1 through MAGE-12, but subsequent discoveries of other genes now refer to them as MAGE-A1 through MAGE-A12. Within the p21 region of the X chromosome are four other related genes called MAGE-B gene clusters. Another MAGE-based molecule, also named MAGE-C1 and MAGE-C2, is located in the q26 region.

여러 가지 이유로, MAGE 유전자 발현에 대한 분석이 요구되어 왔고, 또한 현재 요구되고 있다. 각종 종양 샘플, 종양 세포주 및 정상 조직내에서 역 전사-중합효소 연쇄 반응("RT-PCR")에 의해 이루어지는 MAGE-A의 발현 패턴에 대한 분석은 해당 분야에서 어려운 작업으로 여겨져 왔다. 필수적으로, 전사 및 발현 수준이 RT-PCR을 통해 반-정량적으로 확립되어야 한다. 이는 아가로즈 겔상에서 밴드의 강도를 평가하고, 이를 기준 또는 대조용 물질의 표준 희석액과 비교하는 과정을 필요로 한다. 연구 결과, 유전자 MAGE-A1, A2, A3, A4, A6 및 A12는 많은 종양에서 높은 수준으로 전사되는 것으로 밝혀졌다. 유전자 MAGE-A8이 1종의 종양에서 높은 수준으로 발현되는데 반해, MAGE-A5, A9, A10 및 A11은 양성 종양들에서 다소 약하게 전사되는 것으로 나타났다. MAGE-A 유전자는 정소 및 태반(몇몇 경우에서)을 제외한 정상 조직에서는 발현되지 않는 것으로 밝혀졌다[참조: Brasseur, et al., Int. J. Cancer 52: 839-841 (1992); Brasseur, et al., Int. J. Canc 63: 375-380 (1995); De Plaen, et al., Immunogenetics 40: 360-369 (1994); van der Bruggen, et al.,supra, and Weynants, et al., Int. J. Canc 56: 826-829 (1994)]. 정소내 MAGE-A 유전자의 발현은 정자형성기의 초기 단계에 있는 생식선 세포로 제한된다[참조: Takahashi et al., Canc. Res. 55: 3478-3482 (1995)]. 정소에서는 MAGE-A7을 제외한 모든 MAGE-A 유전자가 발현된다. MAGE-A4, A8, A9, A10 및 A11은 태반에서도 전사되는 것으로 밝혀졌다.For a variety of reasons, assays for MAGE gene expression have been required and are currently required. Analysis of expression patterns of MAGE-A by reverse transcription-polymerase chain reaction ("RT-PCR") in various tumor samples, tumor cell lines and normal tissues has been considered a difficult task in the art. Essentially, transcriptional and expression levels must be established semi-quantitatively via RT-PCR. This requires evaluating the intensity of the band on the agarose gel and comparing it with a standard dilution of the reference or control material. Studies have shown that the genes MAGE-A1, A2, A3, A4, A6 and A12 are transcribed at high levels in many tumors. While gene MAGE-A8 is expressed at high levels in one tumor, MAGE-A5, A9, A10 and A11 have been shown to be somewhat weakly transcribed in benign tumors. The MAGE-A gene was found not to be expressed in normal tissues except testes and placenta (in some cases). Brasseur, et al., Int. J. Cancer 52: 839-841 (1992); Brasseur, et al., Int. J. Canc 63: 375-380 (1995); De Plaen, et al., Immunogenetics 40: 360-369 (1994); van der Bruggen, et al., supra , and Weynants, et al., Int. J. Canc 56: 826-829 (1994). Expression of the MAGE-A gene in the testis is limited to germline cells in the early stages of spermatogenesis. Takahashi et al., Canc. Res. 55: 3478-3482 (1995). In testis, all MAGE-A genes are expressed except for MAGE-A7. MAGE-A4, A8, A9, A10 and A11 have also been found to be transcribed in the placenta.

CTL이 TRA 및 HLA의 복합체를 인지하기 위해서는, 특정 수준에 이르는 관련 MAGE-A 유전자의 발현이 요구되는 것으로 보인다. 문헌 "DePlaen, et al., Methods 12: 125-142 (1997); Lethe, et al., Melanoma Res 7: Suppl 2: S83-8 (1997)"에 따르면, 흑색종에서 HLA-A1에 의해 제시된 MAGE-A1 펩티드를 인지하기 위해서는 MAGE-A1의 발현 수준이 참고 세포주 MZ2-MEL내 수준의 10%를 초과해야 하는 것으로 밝혀졌다. MAGE-A2, A3, A4, A6 및 A12의 발현 수준은 반-정량적 RT-PCR을 통했을 때 MAGE-A1과 유사한 것으로 나타났는데, 이는 이들 유전자가 CTL 인지를 위해 제시되는 형태인 TRA로 프로세싱될 수 있음을 암시한다. MAGE-A1 및 A3으로부터 유래된 몇몇 펩티드는 HLA에 의해 제시된 후, 혼합 임파구-종양 세포 배양액으로부터 유래된 자가유래 CTL에 의해 인지되는 것으로 실제 밝혀졌다.In order for CTLs to recognize complexes of TRA and HLA, expression of related MAGE-A genes up to a certain level appears to be required. According to DePlaen, et al., Methods 12: 125-142 (1997); Lethe, et al., Melanoma Res 7: Suppl 2: S83-8 (1997), presented by HLA-A1 in melanoma In order to recognize the MAGE-A1 peptide it was found that the expression level of MAGE-A1 should exceed 10% of the level in the reference cell line MZ2-MEL. Expression levels of MAGE-A2, A3, A4, A6 and A12 were found to be similar to MAGE-A1 via semi-quantitative RT-PCR, which would be processed into TRA, a form in which these genes are presented for CTL recognition. Imply that it can. Several peptides derived from MAGE-A1 and A3 have been shown to be recognized by autologous CTLs derived from mixed lymphocyte-tumor cell cultures after being presented by HLA.

최근 들어, MAGE-A1에 대해 반응성인 모노클로날 항체가 흑색종에서 발현된 다른 단백질과 교차 반응하는 것으로 보고되었다[참조: 미국 특허 출원 일련번호 제 08/724,774 호(1996년 10월 3일) 및 Carrel, et al., Int. J. Canc 67: 417-422 (1996); 두 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]. 이후, 상기 교차-반응성 단백질은 MAGE-A10에 의해 암호화되는 것으로 밝혀졌다. MZ2-MEL내에서, 이 단백질의 양은 MAGE-A1 단백질과 마찬가지로 풍부한 것으로 나타났다. RT-PCR에 의해 측정했을 때 MAGE-A10의 발현 수준이 MZ2-MEL에서 아주 낮게 나타났기 때문에, 상기한 결과는 매우 놀라운 것이었다. 상기한 바는 RT-PCR에서 MAGE-A10을 증폭하는데 사용된 프라이머가 그리 효율적이지 않음을 의미한다.Recently, monoclonal antibodies reactive against MAGE-A1 have been reported to cross react with other proteins expressed in melanoma. See US Patent Application Serial No. 08 / 724,774 (3 October 1996). And Carrel, et al., Int. J. Canc 67: 417-422 (1996); Both documents are incorporated herein by reference]. The cross-reactive protein was then found to be encoded by MAGE-A10. Within MZ2-MEL, the amount of this protein was found to be as rich as the MAGE-A1 protein. The results were surprising because the expression levels of MAGE-A10 were very low in MZ2-MEL as measured by RT-PCR. This means that the primers used to amplify MAGE-A10 in RT-PCR are not very efficient.

본 발명은 1999년 3월 2일에 출원된 미국특허출원 제09/260,978호의 일부계속출원으로서, MAGE계에 속하는 핵산 분자, 이들의 용도 및 이들의 발현을 검출 및 측정하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 이들 핵산 분자의 단편, 전체 핵산 분자 및 단편 모두에 의해 암호화된 단백질, MHC 또는 HLA 분자와 복합체를 형성하는 이들의 펩티드, 융합 단백질, 폴리토프(polytopes) 등에 관한 것이다.The present invention is a partial application of US patent application Ser. No. 09 / 260,978, filed March 2, 1999, and relates to nucleic acid molecules belonging to the MAGE system, their use, and methods for detecting and measuring their expression. The invention also relates to peptides, fusion proteins, polytopes, and the like, which form complexes with proteins, MHC or HLA molecules encoded by both fragments, whole nucleic acid molecules and fragments of these nucleic acid molecules.

도 1은 MAGE-A5, A8, A9 및 A11(서열 17, 18, 19 및 20)을 포함한 MAGE 유전자의 엑손/인트론(exon/intron) 구조를 나타낸 것이다.1 shows the exon / intron structure of the MAGE gene, including MAGE-A5, A8, A9 and A11 (SEQ ID NOs: 17, 18, 19 and 20).

따라서, 본 발명자들은 프라이머로 인한 오류가 없는 유전자의 발현 빈도 평가 방법을 개발하게 되었다. 본 발명의 특징중 하나는 이러한 방법을 통해 본 발명에 따른 핵산 분자를 분리해내는 것이다.Therefore, the present inventors have developed a method for evaluating the expression frequency of genes without errors due to primers. One of the features of the present invention is to isolate the nucleic acid molecule according to the present invention through this method.

실시예 1Example 1

본 실시예에서는 프라이머의 선택이 RT-PCR을 통한 발현 빈도 측정시 얻어지는 수치에 영향을 미치는지의 여부를 결정하기 위한 실험을 실시하였다. MAGE-A10의 발현 빈도는 세포주 MZ2-MEL과 다음 2쌍의 프라이머중 하나를 사용하여 측정하였다. 그 첫번째 쌍은 문헌 "De Plaen, et al., Immunogenetics 40: 360-369 (1994)"에 개시된 것이다:In this example, an experiment was conducted to determine whether the selection of the primer affects the value obtained when measuring the expression frequency through RT-PCR. The expression frequency of MAGE-A10 was measured using cell line MZ2-MEL and one of the following two pairs of primers. The first pair is disclosed in De Plaen, et al., Immunogenetics 40: 360-369 (1994):

CACAGAGCAG CACTGAAGGA G (서열 1) 및CACAGAGCAG CACTGAAGGA G (SEQ ID NO: 1) and

CTGGGTAAAG ACTCACTGTC TGG (서열 2), 또는CTGGGTAAAG ACTCACTGTC TGG (SEQ ID NO: 2), or

AGCAGCCAAA AGGAGGAGAG TC (서열 3) 및AGCAGCCAAA AGGAGGAGAG TC (SEQ ID NO: 3) and

TGACCTCCTC AGGGGTGCAG TA (서열 4).TGACCTCCTC AGGGGTGCAG TA (SEQ ID NO: 4).

서열 번호 3 및 4는 MAGE-A10의 최종 엑손에 상보적인 서열에 해당한다.SEQ ID NOs: 3 and 4 correspond to sequences complementary to the final exons of MAGE-A10.

MAGE-A1의 발현 빈도는 세포주 LB11-OC1 및 다음 2쌍의 프라이머를 사용하여 측정하였다:The expression frequency of MAGE-A1 was determined using the cell line LB11-OC1 and the following two pairs of primers:

CGGCCGAAGG AACCTGACCC AG (서열 5) 및CGGCCGAAGG AACCTGACCC AG (SEQ ID NO: 5) and

GCTGGAACCC TCACTGGGTT GCC (서열 6), 또는GCTGGAACCC TCACTGGGTT GCC (SEQ ID NO: 6), or

TCAGGGGACA GGCCAACCC (서열 7) 및TCAGGGGACA GGCCAACCC (SEQ ID NO: 7) and

CTTGCACTGA CCTTGATCAC ATA (서열 8).CTTGCACTGA CCTTGATCAC ATA (SEQ ID NO: 8).

본 실험에서는, 세포로부터 전(total) RNA를 추출하였다. 이후, 상기 웨이난츠 등(Weynants, et al.,)의 문헌에 따라, 2㎍의 샘플을 역 전사에 사용하였다. 이후, 전 cDNA의 1/10을 사용하고, 2.5㎕의 10 x PCR 완충액, 2.5㎕의 10mM dNTP, 10pmoles의 프라이머 및 0.5 유니트의 중합효소와 함께, 총 25㎕의 용적이 되도록 물을 보충하여 PCR을 수행하였다. 각 혼합물을 94℃에서 5분 동안 가열한 후, 30회 증폭과정을 수행하였다. 서열 1-4, 7 & 8의 경우, 1회 증폭 과정을 94℃에서 1분, 65℃에서 2분 및 72℃에서 3분 수행하였다. 서열 5 & 6의 경우에는 94℃에서 1분 및 72℃에서 3분으로 1회 증폭 과정을 수행하고, 최종 사슬 연장은 72℃에서 5분간 수행하여 전체 증폭 과정을 종결하였다. 5㎕의 샘플을 사용하여 각각에 대해 1% 아가로즈 겔상에서 전개시키고, 표준 에티듐 브로마이드 염색 관찰을 통해 분석을 실시하였다.In this experiment, total RNA was extracted from the cells. Thereafter, according to Weynants et al., 2 μg of the sample was used for reverse transcription. PCR was then performed using 1/10 of the cDNA and supplemented with water to a total volume of 25 μl with 2.5 μl 10 × PCR buffer, 2.5 μl 10 mM dNTP, 10 pmoles primer and 0.5 unit of polymerase. Was performed. Each mixture was heated at 94 ° C. for 5 minutes and then amplified 30 times. For SEQ ID NOS: 1-4, 7 & 8, one time amplification was carried out for 1 minute at 94 ° C, 2 minutes at 65 ° C and 3 minutes at 72 ° C. In the case of SEQ ID NO: 5 & 6, the amplification process was performed once at 1 minute at 94 ° C and 3 minutes at 72 ° C, and the final chain extension was performed at 72 ° C for 5 minutes to terminate the whole amplification process. 5 μl of samples were used for each run on a 1% agarose gel and analyzed via standard ethidium bromide staining observation.

서열 1 & 2를 사용한 경우에 있어서는, MAGE-A10의 발현 수준이 낮게 나타난 반면, 서열 3 & 4의 경우는 MAGE-A1과 동등한 발현 수준을 나타냈다. 이 결과는동등한 발현 수준을 나타낸 상기 캐럴 등(Carrel, et al.,)의 웨스턴 블롯팅 작업 결과와도 일치한다.In the case of using SEQ ID NOS: 1 & 2, the expression level of MAGE-A10 was low, whereas in the case of SEQ ID NOs: 3 & 4, the expression level was the same as that of MAGE-A1. This result is consistent with the results of Western blotting work of Carrel et al., Which showed equivalent expression levels.

서열 3 & 4가 MAGE-A10의 최종 엑손 영역에 대응하는 경우, 오염 게놈 DNA도 증폭되었을 가능성이 있다. 이 가능성에 대해 시험하기 위해, 역 전사 단계를 생략하고 증폭을 실시하였다. 그러나, 증폭이 관찰되지 않았으며, 이를 통해 오염의 가능성이 없음을 확인할 수 있었다. 프라이머로서 서열 3 & 4를 사용하여 많은 PCR 산물에 대해 서열결정을 수행한 결과, 모두 MAGE-A10에 해당하는 것으로 나타났다.If SEQ ID NOs: 3 & 4 correspond to the final exon region of MAGE-A10, it is likely that contaminating genomic DNA has also been amplified. To test for this possibility, the reverse transcription step was omitted and amplification was performed. However, no amplification was observed, confirming that there is no possibility of contamination. Sequencing of many PCR products using SEQ ID NOs: 3 & 4 as primers revealed that they all correspond to MAGE-A10.

MAGE-A1에 대한 프라이머를 사용하여 얻은 결과와 비교해 볼 때, 서열 5 & 6에 비해 서열 7 & 8의 발현 수준이 높게 나타나는 결과가 제시되었다.Compared with the results obtained using the primers for MAGE-A1, the results showed higher expression levels of SEQ ID NOs: 7 & 8 compared to SEQ ID NOs: 5 & 6.

종전에 MAGE-A5, A9 및 A11의 경우는 매우 낮은 발현 수준이 관찰되었다. 따라서, 프라이머의 교체가 상기한 결과를 나타내는 요인임을 추측할 수 있었다.Previously very low expression levels were observed for MAGE-A5, A9 and A11. Therefore, it could be inferred that the replacement of the primer is a factor indicating the above result.

실시예 2Example 2

상기 실시예에서 얻은 결과로부터, 유전자, 예를 들면 MAGE 유전자의 발현 빈도를 결정하기 위한 보다 우수한 방법의 필요성을 확인할 수 있었다. 따라서 본 실시예에서는 이를 위해 개발된 방법에 대해 설명하고자 한다.From the results obtained in the above examples, it was confirmed that there is a need for a better method for determining the frequency of expression of genes, such as the MAGE gene. Therefore, the present embodiment will be described for the method developed for this.

표준 절차[참조: De Plaen, et al., Methods 12: 125-142 (1997); 본 명세서 참고문헌으로 인용됨]에 따라, MAGE-A 양성 샘플로부터 cDNA 라이브러리를 제작하고, 이를 대장균내에서 재조합 플라스미드로 유지하였다.Standard procedures [De Plaen, et al., Methods 12: 125-142 (1997); CDNA libraries were constructed from MAGE-A positive samples and maintained as recombinant plasmids in E. coli.

구체적으로 설명하면, 샘플을 구아니딘 티오시아네이트중에서 균질화시켜 용균물을 형성한 후, 이를 CsCl 쿠션 상단에 로딩하였다. 이후, 2개의 연속올리고(dT) 셀룰로즈 컬럼을 통해 전 RNA를 프로세싱하여 폴리(A)+ RNA를 분리하였다. 분리된 폴리(A)+ RNA를 NotI 제한 부위를 포함하는 올리고(dT) 프라이머를 사용하여 cDNA로 전환시켰다. 수득된 cDNA를 BstXI 어댑터에 연결시키고, NotI로 분해한 후, 발현 벡터 pcDNAI/Amp의 BstXI 및 NotI 부위내로 삽입하였다. 수득된 재조합 플라스미드를 표준 전기영동 기술을 이용하여 대장균 DH5∝내로 도입한 후, 앰피실린(25㎍/㎖)으로 선별하였다.Specifically, the sample was homogenized in guanidine thiocyanate to form a lysate which was then loaded onto the CsCl cushion. The whole RNA was then processed through two serial oligo (dT) cellulose columns to separate the poly (A) + RNA. The isolated poly (A) + RNA was converted to cDNA using oligo (dT) primers containing the NotI restriction site. The cDNA obtained was linked to the BstXI adapter, digested with NotI, and inserted into the BstXI and NotI sites of the expression vector pcDNAI / Amp. The resulting recombinant plasmid was introduced into E. coli DH5VIII using standard electrophoresis technique and then selected with ampicillin (25 μg / ml).

모든 라이브러리들을 앰피실린이 보강된 LB 배지중에 희석시켜 ㎕당 3-6개의 클론을 수득하였다. 이후, 9.6㎖의 희석액을 각각 취해 96 마이크로웰 플레이트(마이크로웰당 100㎕)에 시딩하였다. 모든 라이브러리를 2 또는 3개의 플레이트에 시딩하여 플레이트 전반에 걸쳐 확산된 약 100,000개의 독립적인 클론들을 수득하였다. 플레이트를 37℃에서 밤새 배양한 후, 모든 마이크로웰로부터 10㎕씩 모아, 모든 플레이트에서 20종의 상이한 푸울(즉, 라인별로 8종의 푸울 및 컬럼별로 12종의 푸울)을 수득하였다. 플레이트와 푸울을 증배(duplicate)시키고, 동결된 마스터(-70℃, 20% 글리세롤 함유 LB 배지)와 증배물을 PCR 분석을 위해 4℃에서 유지시켰다.All libraries were diluted in ampicillin supplemented LB medium to yield 3-6 clones per μl. Dilutions of 9.6 ml were then each taken and seeded in 96 microwell plates (100 μl per microwell). All libraries were seeded on two or three plates to yield about 100,000 independent clones spread across the plates. Plates were incubated overnight at 37 ° C., then 10 μl from all microwells to yield 20 different pools (ie 8 pools per line and 12 pools per column) in all plates. Plates and pools were duplicated and frozen masters (-70 ° C., LB medium containing 20% glycerol) and multiplications were kept at 4 ° C. for PCR analysis.

생 균주 및 동결 균주 모두에 대해 PCR 분석을 실시하는데, 라인별 및 컬럼별로 모은 푸울에 대해 1차 분석을 수행하였다. 양성 라인과 양성 컬럼의 교차점에서 양성 마이크로웰이 발견되었다. 증폭 분석 수행을 위해, 3㎕의 생 균주에 2.5㎕의 10 x PCR 완충액, 2.5㎕의 10mM dNTP, 10 pmoles의 각 프라이머 및 0.5 유니트의 중합효소와 함께, 총 25㎕의 용적이 되도록 물을 보충하였다.PCR analysis was performed on both live and frozen strains, with primary analysis performed on pools collected line by line and column by column. Positive microwells were found at the intersection of the positive line and the positive column. To perform the amplification assay, 3 μl live strain was supplemented with 2.5 μl 10 × PCR buffer, 2.5 μl 10 mM dNTP, 10 pmoles of each primer and 0.5 unit of polymerase to a total volume of 25 μl. It was.

대부분의 경우에 있어, 플레이트내 양성 웰의 수는 20% 미만으로 나타났다. 유해물의 분포에 따라, 양성 클론의 비율이 20% 미만인 경우 웰내 단일 클론을 가질 가능성은 90% 이상이 된다. 웰의 10% 미만이 양성이 되는 시점까지 제한 희석을 실시하면, 예상 정확도가 95%에 이르게 된다.In most cases, the number of positive wells in the plate was found to be less than 20%. Depending on the distribution of pests, if the proportion of positive clones is less than 20%, the probability of having a single clone in the well is 90% or more. Limit dilution up to the point where less than 10% of the wells are positive leads to 95% expected accuracy.

실험 결과, 양성의 수치는 20% 미만이었다. 각 웰내 독립적인 클론의 수를 감안하여, 라이브러리내 상이한 MAGE-A cDNA의 풍요도(abundance)를 계산할 수 있었다.As a result, the positive value was less than 20%. Given the number of independent clones in each well, the abundance of different MAGE-A cDNAs in the library could be calculated.

총 12종의 MAGE-A 유전자에 대해 7개의 cDNA 라이브러리(5종의 종양 세포주, 1종의 정소 라이브러리, 1종의 태반 라이브러리)를 대상으로 실험을 반복하였다. 그 결과가 하기 표 1에 제시되어 있다. 표 1은 종양 세포주, 정소 및 태반에서의 MAGE-A 유전자의 발현 수준을 나타낸 것이다.Experiments were repeated on seven cDNA libraries (five tumor cell lines, one testis library, and one placenta library) for a total of 12 MAGE-A genes. The results are shown in Table 1 below. Table 1 shows the expression levels of the MAGE-A gene in tumor cell lines, testes and placenta.

주) 종양 세포주명 또는 조직명 방향으로 첫번째 줄은 유해물 분포에 따라, PCR 분석 결과 양성으로 결정된 마이크로웰의 수(괄호안의 수치)로부터 계산된 라이브러리내에 클로닝된 MAGE-A cDNA의 풍요도를 나타낸 것이다. 하나의 마이크로웰에는 350 내지 860개의 상이한 클론이 포함되어 있다. 두번째 줄은 클로닝되지 않은 cDNA에 대해 실시한 PCR 분석 결과를 나타낸 것이다. 아가로즈 겔중에서 PCR 산물을 분리함으로써 얻어진 밴드의 강도에 따라 발현 수준을 평가하여 ++++, +++, ++, + 또는 +/- 로 표시하였다. 산물 부재는 -로 표시되어 있다. 첫번째 평가 결과는 종래의 프라이머(De Plaen et al., 1994)를 사용하여 얻었으며, 유전자 MAGE-A1, 9 및 10에 대해 괄호안에 제시된 두번째 평가 결과는 최근 개발된 프라이머쌍을 사용하여 얻은 것이다.NOTE 1 The first line in the direction of tumor cell name or tissue name shows the abundance of MAGE-A cDNA cloned into the library calculated from the number of microwells (values in parentheses) determined positive by PCR analysis, depending on the pest distribution. . One microwell contains 350 to 860 different clones. The second line shows the results of PCR analysis performed on the uncloned cDNA. Expression levels were evaluated according to the intensity of the band obtained by separating PCR products in agarose gels and expressed as ++++, +++, ++, + or +/-. Product members are marked with-. The first evaluation result was obtained using a conventional primer (De Plaen et al., 1994), and the second evaluation results in parentheses for genes MAGE-A1, 9 and 10 were obtained using recently developed primer pairs.

상기 표 1에 제시된 바와 같이, 결과들을 RT-PCR에서 얻은 결과들과 비교하였다. MAGE-A1, A9 및 A10에 대해서는 상이한 프라이머쌍을 사용하여 이중으로 평가하고, 아가로즈 겔상의 밴드 강도를 기준으로 발현 수준을 추산하였다.As shown in Table 1 above, the results were compared with those obtained in RT-PCR. MAGE-A1, A9 and A10 were assessed in duplicate using different primer pairs and the expression levels were estimated based on the band intensity on the agarose gel.

제한 희석 분석 결과, MAGE-A10의 발현 수준은 서열 3 및 4를 사용하여 얻은 수치에 버금가고, 서열 1 및 2를 사용하여 얻은 수치에 비해서는 높게 나타났다. 이와 같은 수치 상승은 상기 캐럴 등의 문헌 및 1996년 10월 3일자 미국 특허 출원 일련번호 제 08/724,774 호(두 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 보고된 웨스턴 블롯팅 작업의 결과와 일치한다. 빈도 또한 여러 라인에서 MAGE-A1의 빈도 수치와 필적하게 나타났다. 다른 라인에서는 수준이 감소되었지만, A1, A2 또는 A12의 경우에 대해서는 여전히 필적할만한 수준을 나타냈다.As a result of the restriction dilution analysis, the expression level of MAGE-A10 was higher than that obtained using SEQ ID NOs: 3 and 4, and higher than that obtained using SEQ ID NOs: 1 and 2. This increase in value is consistent with the results of the Western blotting work reported in Carol et al. And U.S. Patent Application Serial No. 08 / 724,774, filed October 3, 1996, both of which are incorporated herein by reference. Matches. Frequency was also comparable to that of MAGE-A1 in several lines. In other lines the levels were reduced, but still comparable to the case of A1, A2 or A12.

A1, A2, A3, A4, A6 및 A12에 대한 빈도 계산치는 RT-PCR에 의해 얻어진 결과와 본질적으로 일치하였다. 하나의 라이브러리에서는, 서열 7 및 8을 사용하여 얻은 결과와는 일치하였으나, 서열 5 및 6을 사용하여 얻은 결과와는 일치하지 않는 결과(분석 124,000당 1개의 클론)가 나타났는데, 이는 서열 5 및 6이 전사물 측정에 더욱 효율적인 반면, 서열 7 및 8은 발현 수준 측정에 유리함을 암시한다.Frequency calculations for A1, A2, A3, A4, A6 and A12 were essentially consistent with the results obtained by RT-PCR. In one library, the results were consistent with the results obtained using SEQ ID NOs: 7 and 8, but inconsistent with the results obtained using SEQ ID NOs: 5 and 6 (one clone per analysis 124,000). While 6 is more efficient for measuring transcripts, SEQ ID NOS: 7 and 8 suggest that it is advantageous for measuring expression levels.

실시예 3Example 3

상기 실험 결과중 후속 연구를 진행시키게 한 양태는 MAGE-A8의 발현에 대한 것이었다. 항상 미약한 발현이 관찰되었으나, 세포주 TT-THYR에서는 예외적으로 반-정량적 PCR 분석시 높은 수준의 발현을 나타냈다.One aspect that led further studies of the experimental results was for expression of MAGE-A8. Although weak expression was always observed, the cell line TT-THYR showed exceptionally high levels of expression in semi-quantitative PCR analysis.

TT-THYR 라이브러리내 삽입체의 평균 크기는 0.9kb에 불과하며, MAGE-A8 mRNA의 최종 450 뉴클레오티드 분절을 증폭하도록 프라이머를 고안하였다. MAGE-A1, A2, A4 및 A8에 대해서도 유사한 프라이머를 다음과 같이 고안하였다:The average size of the inserts in the TT-THYR library is only 0.9 kb, and the primers were designed to amplify the final 450 nucleotide segment of MAGE-A8 mRNA. Similar primers were designed for MAGE-A1, A2, A4 and A8 as follows:

서열 9 GAAGAGAGCGGTCAGTGTTC-3 (센스)SEQ ID NO: 9 GAAGAGAGCGGTCAGTGTTC-3 (sense)

서열 10 AATCCAGGTATGCATATATCTTTA (안티-센스)SEQ ID NO: 10 AATCCAGGTATGCATATATCTTTA (anti-sense)

서열 11 GCCTCTTTGAAGAGAGCAGTC (센스)SEQ ID NO: 11 GCCTCTTTGAAGAGAGCAGTC (sense)

서열 12 CAAAGAAGCAAAAACATACACATA (안티-센스)SEQ ID NO: 12 CAAAGAAGCAAAAACATACACATA (anti-sense)

서열 13 CACTCTGTTTGAAGAAAATAGTC (센스)SEQ ID NO: 13 CACTCTGTTTGAAGAAAATAGTC (sense)

서열 14 AGTATCTTTTAATTTATCTCACCTA (안티-센스)SEQ ID NO: 14 AGTATCTTTTAATTTATCTCACCTA (anti-sense)

서열 15 AGCATGTTGGGTGTGAGGGA (센스)SEQ ID NO: 15 AGCATGTTGGGTGTGAGGGA (sense)

서열 16 AGGGTACACTAAGAGGTACAG (안티-센스)SEQ ID NO: 16 AGGGTACACTAAGAGGTACAG (anti-sense)

(서열 9 및 10은 A1을, 서열 11 및 12는 A2를, 서열 13 및 14는 A4를 그리고 서열 15 및 16은 A8을 증폭시키는데 사용)(SEQ ID NOS: 9 and 10 are used to amplify A1, SEQ ID NOs: 11 and 12 for A2, SEQ ID NOs: 13 and 14 for A4, and SEQ ID NOs: 15 and 16 for A8)

전술한 바와 같이, 상기 프라이머를 사용하여 RT-PCR을 수행하였다. 완결 시점에서, MAGE-A8의 발현 빈도는 훨씬 높게 즉, MAGE-A2와 같은 수준으로 나타났다.As described above, RT-PCR was performed using the primers. At the time of completion, the expression frequency of MAGE-A8 was much higher, ie at the same level as MAGE-A2.

정소에 대한 분석 결과에서는, MAGE-A4의 발현 수준이 MAGE-A1에 비해 높은 것으로 밝혀졌으며, A2, A3, A8, A9 및 A11의 수준은 낮게 나타나고, A6, A10 또는 A12에 대한 cDNA는 발견되지 않았다. 이러한 결과는 MAGE-A1 및 MAGE-A10에 대해 상기 캐럴 등의 문헌에 제시된 결과와 일치한다.Analysis of testes revealed that the expression level of MAGE-A4 was higher than that of MAGE-A1, the levels of A2, A3, A8, A9 and A11 were low, and no cDNA for A6, A10 or A12 was found. Did. These results are consistent with the results presented in Carol et al., Supra for MAGE-A1 and MAGE-A10.

태반에 대해서는, MAGE-A10이 최고의 발현 수준을 나타낸 반면, A1-A7, A9 및 A12는 분석된 230,000개의 클론중에서 전혀 발견되지 았았다.For placenta, MAGE-A10 showed the highest expression level, while A1-A7, A9 and A12 were not found at all among the 230,000 clones analyzed.

실시예 4Example 4

MAGE-A 유전자에 대한 문헌은 많으나, 이들중 몇몇에 대한 cDNA는 MAGE-A1을 기초로 한 구조에 관한 추론이 있을 뿐, 별도로 분리된 바가 전혀 없었다.There are many literatures on the MAGE-A gene, but some of these cDNAs have only been inferred about the structure based on MAGE-A1 and have not been isolated.

상기 실시예 2에 기술된 방법에 의해, MAGE-A5, A8, A9, A10 및 A11에 대한 cDNA를 분리할 수 있었다. MAGE-A10에 대한 cDNA만이 1996년 10월 3일자 미국 특허 출원 일련번호 제 08/724,774 호(본 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 개시되어 있을 뿐, 다른 것들은 공지된 바가 없었다. A5, A8, A9 및 A11에 대한 cDNA가 서열 17-20으로 각각 제시되어 있다. 또한, cDNA의 서열에 대한 정보로부터, 도 1에 제시된 바와 같이, 유전자의 엑손/인트론 구조를 완성할 수 있었다.By the method described in Example 2 above, cDNAs for MAGE-A5, A8, A9, A10 and A11 could be isolated. Only the cDNA for MAGE-A10 is disclosed in U.S. Patent Application Serial No. 08 / 724,774, filed Oct. 3, 1996, the others of which are unknown. The cDNAs for A5, A8, A9 and A11 are shown in SEQ ID NOs: 17-20, respectively. In addition, from the information on the sequence of the cDNA, as shown in Figure 1, it was possible to complete the exon / intron structure of the gene.

MAGE-A5 cDNA의 서열결정으로, 이것이 MAGE-A10의 첫번째 2개의 엑손, 미지의 엑손 서열 후, MAGE-A5의 2개의 엑손으로 이루어진다는 흥미로운 사실을 발견할 수 있었다.The sequencing of the MAGE-A5 cDNA revealed an interesting fact that it consists of the first two exons of MAGE-A10, after the unknown exon sequence, followed by two exons of MAGE-A5.

상기 실시예들은 본 발명을 설명하는 것으로, 본 명세서에 제시된 핵산 분자 외에, 관심있는 특정 유전자의 발현 빈도를 측정하는 방법을 포함한다. 이 방법은 샘플로부터 cDNA를 제조한 후, 이 cDNA를 세포내로 형질전환 또는 형질감염시켜 형질전환체/형질감염체의 라이브러리를 생성하는 것으로 이루어진다. 이들 세포는 이후, 대략 동일한 크기를 갖는 다수의 샘플로 나눈 후, cDNA의 존재(함량 대비)에 대해 각 샘플을 분석한다. 양성 샘플의 수는 시험된 샘플 총수의 20% 이하이어야 하며, 시험된 샘플 수의 10% 이하가 더욱 바람직하다. 양성체의 수가 소정 수치 이상이면, 라이브러리를 희석하고, 샘플을 나누어 재차 분석을 반복 실시한다. 양성 수치가 소정의 수치 이하일 때, 각 MAGE cDNA의 빈도를 측정한다.The above examples illustrate the invention and in addition to the nucleic acid molecules set forth herein, include methods for measuring the frequency of expression of particular genes of interest. The method consists of preparing a cDNA from a sample and then transforming or transfecting the cDNA into cells to generate a library of transformants / transfectants. These cells are then divided into multiple samples of approximately the same size and then analyzed each sample for the presence (relative to content) of cDNA. The number of positive samples should be 20% or less of the total number of samples tested, more preferably 10% or less of the number of samples tested. If the number of positives is greater than or equal to the predetermined value, the library is diluted, the sample is divided, and the analysis is repeated again. When the positive value is below the predetermined value, the frequency of each MAGE cDNA is measured.

상기 방법은 샘플을 상이한 비율로 모을 수 있도록 소정의 어레이(array)내에 분배하여 실시하는 것이 바람직하다. 샘플을 상기한 방법으로 배열하면, 2개의 샘플 푸울이 교차하는 위치를 결정함으로써, 관심의 cDNA를 포함하는 샘플을 결정할 수 있다. 수직선과 수평선으로 배열된 직사각형의 샘플 어레이를 예를 들어 생각하면, 수평선을 "A", "B", "C" 등의 문자로 표시하고, 수직선을 "1", "2", "3" 등의 숫자로 표시하여, 푸울 "A", "B", "2", "3" 등을 생성할 수 있다. 각 수직선과 수평선이 교차하는 지점을 "A1", "B2", "C3", "D4" 등과 같은 부호로 표시한다. 푸울 "B"와 푸울 "7"이 양성이면, "B7" 지점의 샘플은 양성이라는 결론에 도달할수 있다. 이와 같은 방법에 의하면, 관심 샘플을 포함하는 웰을 동정할 수 있다.The method is preferably carried out by dispensing in a predetermined array so that samples can be collected at different rates. By arranging the samples in the manner described above, it is possible to determine the sample containing the cDNA of interest by determining where the two sample pools intersect. For example, consider a rectangular sample array arranged with vertical lines and horizontal lines, and the horizontal lines are represented by the letters "A", "B", "C", and the vertical lines are represented by "1", "2", and "3". It is possible to generate a pool "A", "B", "2", "3", etc. by displaying the number etc .. The points at which the vertical lines and the horizontal lines intersect are denoted by symbols such as "A1", "B2", "C3", and "D4". If pool "B" and pool "7" are positive, one can conclude that the sample at point "B7" is positive. According to this method, wells containing a sample of interest can be identified.

발현 측정 외에도, 상기 방법에 의하면 관심의 cDNA 분자, 특히 저 빈도로 존재하는 분자에 대한 동정이 가능하다. 본 명세서에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 실시로 다양한 MAGE 유전자에 대한 cDNA를 분리할 수 있었다. 이러한 cDNA는 종전에는 분리된 적이 없는 것들로, 본 발명은 또한 서열 18, 19 또는 20에 의해 암호화된 단백질의 아미노산 서열을 갖는 단백질을 암호화하는 cDNA 분자와 같이, MAGE-A8, MAGE-A9 및 MAGE-A11 단백질을 암호화하는 분리된 cDNA 분자를 특징으로 한다.In addition to measuring expression, the method allows for the identification of cDNA molecules of interest, especially those that are present at low frequency. As described herein, the cDNA for various MAGE genes could be isolated by the practice of the present invention. Such cDNAs have never been isolated, and the present invention also relates to MAGE-A8, MAGE-A9 and MAGE, such as cDNA molecules encoding proteins having the amino acid sequence of the protein encoded by SEQ ID NO: 18, 19 or 20. Characterized by an isolated cDNA molecule encoding the A11 protein.

또한, 본 발명은 서열 17에 개시된 바와 같은 신규 분리된 핵산 분자 또는 기타 유사 분자들 즉, 특정 뉴클레오티드 서열을 사이에 두고, MAGE-A5의 2개의 엑손과 MAGE-A10의 2개의 엑손을 포함하는 분자 뿐아니라, MAGE-A5 부분과 MAGE-A10 부분 모두에 혼성화되는 부분을 포함하는 핵산 분자에 관한 것이다. 이들 핵산 분자 즉, 본 명세서에 제시된 모든 핵산 분자들을 사용하여, 프로모터에 작동가능하게 연결된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제작할 수 있다. 이들 벡터 및 분리된 핵산 분자 자체는 세포를 형질전환 또는 형질감염시키는데 사용하여 재조합 세포를 제조할 수 있다.In addition, the present invention provides a novel isolated nucleic acid molecule or other similar molecules as disclosed in SEQ ID NO: 17, ie, a molecule comprising two exons of MAGE-A5 and two exons of MAGE-A10 with a specific nucleotide sequence in between. In addition, the present invention relates to a nucleic acid molecule comprising a moiety that hybridizes to both a MAGE-A5 moiety and a MAGE-A10 moiety. These nucleic acid molecules, ie all the nucleic acid molecules set forth herein, can be used to construct expression vectors comprising nucleic acid molecules operably linked to a promoter. These vectors and the isolated nucleic acid molecules themselves can be used to transform or transfect cells to produce recombinant cells.

이들 핵산 분자는 또한 진단용 및 치료용 모두에 사용할 수 있다. 진단 분야에 있어서는, 중합효소 연쇄 반응과 같은 표준 방법에 따라, 올리고머 프로브를 사용하여 세포 함유 샘플, 세포 용해물 등과 같은 샘플을 본 발명의 핵산 분자의 발현 여부에 대해 검사할 수 있다. 또한, 상기 핵산 분자에 의해 암호화된 단백질의존재 여부에 대한 측정을 통해 상기 샘플을 분석하는 것도 가능하다.These nucleic acid molecules can also be used for both diagnostic and therapeutic purposes. In the diagnostic field, according to standard methods such as polymerase chain reaction, oligomer probes can be used to test for the expression of nucleic acid molecules of the present invention, such as cell containing samples, cell lysates and the like. It is also possible to analyze the sample by measuring the presence of a protein encoded by the nucleic acid molecule.

본 발명은 또한, 상기 신규 동정 및 분리된 분자를 기초로 하는 방법들에 관한 것이다. 예를 들면, 관심의 MAGE 핵산 분자에 특이적으로 혼성화하는 1종 이상의 올리고뉴클레오티드를 샘플과 접촉시킴으로써 MAGE 유전자의 발현을 측정할 수 있다. 예를 들면, MAGE-A1의 측정에는 서열 9 및 서열 10을 사용할 수 있으며, 서열 11 및/또는 12를 사용하면 MAGE-A2를 측정할 수 있다. 예시한 바와 같이, PCR에 국한하지 않고, 어떠한 형태의 혼성화-의거 분석 방법도 사용가능하다. 항체 분석 같은 표준 방법이나 단백질 측정을 위한 기타 시스템에 의해 MAGE 단백질에 대한 분석을 실시할 수도 있다.The invention also relates to methods based on these novel identified and isolated molecules. For example, expression of the MAGE gene can be measured by contacting a sample with one or more oligonucleotides that specifically hybridize to the MAGE nucleic acid molecule of interest. For example, SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 10 can be used to measure MAGE-A1, and MAGE-A2 can be measured using SEQ ID NO: 11 and / or 12. As illustrated, not limited to PCR, any form of hybridization-based assay method may be used. Analysis of MAGE proteins can also be performed by standard methods such as antibody analysis or by other systems for protein determination.

본 발명은 또한, 본 발명에 따른 MAGE 단백질의 아미노산 서열상에서 상호 연결된 약 8 내지 약 25개의 아미노산으로 이루어진 펩티드에 관한 것이다. 상기 펩티드는 HLA-A1, A2, A3, A24, B7, B8, B35, B44, B52 및 CW6 같은 HLA 분자를 포함하여, MHC I군 또는 II군 분자와 같은 MHC 분자에 대한 특이적 결합체이다. 관련 서열들은 예를 들면 문헌 "Parker, et al., J. Immunol 152: 163 (1994), D'Amaro et al., Hum. Immunol. 43: 13-18 (1995), Drijfhout, et al., Hum. Immunol. 43: 1-12 또는 Sturniolo, et al., Nat. Biotechnol 17(6): 555-61 (1999); 상기 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨" 또는 NIH 월드와이드 웹 사이트 URL http://bimas.dcrt.hih.gov. 및 http://www.unituebingen.de/uni/kxc(이들 모두 본 명세서에 참고로 인용됨) 같은 웹 사이트에 제시된 방법을 이용하여 결정하였다. 하기 제시된 목록들은 관련 MAGE 아미노산 서열과 함께 몇몇의 이러한 펩티드를 나타낸 것이다. 완성된 아미노산 서열은 서열 21-24에 제시되어 있는데, 서열 21은 MAGE-A5, 서열 22는 MAGE-A8, 서열 23은 MAGE-A9 및 서열 24는 MAGE-A11에 대한 것이다:The invention also relates to a peptide consisting of about 8 to about 25 amino acids interconnected on the amino acid sequence of the MAGE protein according to the invention. The peptide is a specific binding to an MHC molecule, such as an MHC Group I or Group II molecule, including HLA molecules such as HLA-A1, A2, A3, A24, B7, B8, B35, B44, B52 and CW6. Related sequences are described, for example, in Parker, et al., J. Immunol 152: 163 (1994), D'Amaro et al., Hum. Immunol. 43: 13-18 (1995), Drijfhout, et al., Hum. Immunol. 43: 1-12 or Sturniolo, et al., Nat. Biotechnol 17 (6): 555-61 (1999); all of which are incorporated herein by reference "or NIH Worldwide website URL http://bimas.dcrt.hih.gov. And http://www.unituebingen.de/uni/kxc (all of which are incorporated herein by reference). The listings presented below represent some such peptides with associated MAGE amino acid sequences. The complete amino acid sequence is shown in SEQ ID NOs: 21-24, where SEQ ID NO: 21 is MAGE-A5, SEQ ID NO: 22 is MAGE-A8, SEQ ID NO: 23 is MAGE-A9 and SEQ ID NO: 24 is to MAGE-A11:

MAGE A5: HLA-A1 결합체MAGE A5: HLA-A1 Conjugate

98-107 SPDPESVFR98-107 SPDPESVFR

69-78 SAIPTAIDF69-78 SAIPTAIDF

32-41 TTEEQEAVS32-41 TTEEQEAVS

116-125 LIHFLLLKY116-125 LIHFLLLKY

113-122 VADLIHFLL113-122 VADLIHFLL

115-124 DLIHFLLLK115-124 DLIHFLLLK

2-11 SLEQKSQHC2-11 SLEQKSQHC

77-86 FTLWRQSIK77-86 FTLWRQSIK

73-82 TAIDFTLWR73-82 TAIDFTLWR

74-83 AIDFTLWRQ74-83 AIDFTLWRQ

15-24 GLDTQEEAL15-24 GLDTQEEAL

MAGE A5: HLA-A2 결합체MAGE A5: HLA-A2 conjugate

112-123 KVADLIHFL112-123 KVADLIHFL

108-117 ALSKKVADL108-117 ALSKKVADL

24-33 GLVGVQAAT24-33 GLVGVQAAT

70-79 AIPTAIDFT70-79 AIPTAIDFT

38-47 AVSSSSPLV38-47 AVSSSSPLV

22-31 ALGLVGVQA22-31 ALGLVGVQA

15-24 GLDTQEEAL15-24 GLDTQEEAL

45-54 LVPGTLGEV45-54 LVPGTLGEV

31-40 ATTEEQEAV31-40 ATTEEQEAV

71-80 IPTAIDFTL71-80 IPTAIDFTL

113-122 VADLIHFLL113-122 VADLIHFLL

25-34 LVGVQAATT25-34 LVGVQAATT

78-87 TLWRQSIKG78-87 TLWRQSIKG

48-57 GTLGEVPAA48-57 GTLGEVPAA

18-27 TQEEALGLV18-27 TQEEALGLV

MAGE A5: HLA-A3 결합체MAGE A5: HLA-A3 conjugate

115-124 DLIHFLLLK115-124 DLIHFLLLK

103-112 SVFRAALSK103-112 SVFRAALSK

108-116 ALSKKVADL108-116 ALSKKVADL

15-23 GLDTQEEAL15-23 GLDTQEEAL

77-85 FTLWRQSIK77-85 FTLWRQSIK

116-124 LIHFLLLKY116-124 LIHFLLLKY

24-32 GLVGVQAAT24-32 GLVGVQAAT

73-81 TAIDFTLWR73-81 TAIDFTLWR

22-30 ALGLVGVQA22-30 ALGLVGVQA

MAGE A5: HLA-A24 결합체MAGE A5: HLA-A24 conjugate

112-120 KVADLIHFL112-120 KVADLIHFL

42-50 SSPLVPGTL42-50 SSPLVPGTL

17-25 DTQEEALGL17-25 DTQEEALGL

37-45 EAVSSSSPL37-45 EAVSSSSPL

76-84 DFTLWRQSI76-84 DFTLWRQSI

113-121 VADLIHFLL113-121 VADLIHFLL

71-79 IPTAIDFTL71-79 IPTAIDFTL

15-23 GLDTQEEAL15-23 GLDTQEEAL

108-116 ALSKKVADL108-116 ALSKKVADL

69-77 SAIPTAIDF69-77 SAIPTAIDF

97-105 TSPDPESVF97-105 TSPDPESVF

63-71 KSPQGASAI63-71 KSPQGASAI

109-117 LSKKVADLI109-117 LSKKVADLI

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

114-122 ADLIHFLLL114-122 ADLIHFLLL

111-119 KKVADLIHF111-119 KKVADLIHF

MAGE A5: HLA-B7 결합체MAGE A5: HLA-B7 conjugate

71-79 IPTAIDFTL71-79 IPTAIDFTL

112-123 KVADLIHFL112-123 KVADLIHFL

108-116 ALSKKVADL108-116 ALSKKVADL

37-45 EAVSSSSPL37-45 EAVSSSSPL

17-25 DTQEEALGL17-25 DTQEEALGL

42-50 SSPLVPGTL42-50 SSPLVPGTL

113-121 VADLIHFLL113-121 VADLIHFLL

38-47 AVSSSSPLV38-47 AVSSSSPLV

60-68 GPLKSPQGA60-68 GPLKSPQGA

54-62 PAAGSPGPL54-62 PAAGSPGPL

114-122 ADLIHFLLL114-122 ADLIHFLLL

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

15-23 GLDTQEEAL15-23 GLDTQEEAL

45-53 LVPGTLGEV45-53 LVPGTLGEV

30-38 AATTEEQEA30-38 AATTEEQEA

31-39 ATTEEQEAV31-39 ATTEEQEAV

100-108 DPESVFRAA100-108 DPESVFRAA

8-16 QHCKPEEGL8-16 QHCKPEEGL

25-33 LVGVQAATT25-33 LVGVQAATT

109-117 LSKKVADLI109-117 LSKKVADLI

MAGE A5: HLA-B8 결합체MAGE A5: HLA-B8 conjugate

108-117 ALSKKVADL108-117 ALSKKVADL

37-46 EAVSSSSPL37-46 EAVSSSSPL

109-118 LSKKVADLI109-118 LSKKVADLI

71-80 IPTAIDFTL71-80 IPTAIDFTL

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

42-50 SSPLVPGTL42-50 SSPLVPGTL

102-110 ESVFRAALS102-110 ESVFRAALS

MAGE A5: HLA-B35 결합체MAGE A5: HLA-B35 Conjugate

71-79 IPTAIDFTL71-79 IPTAIDFTL

97-105 TSPDPESVF97-105 TSPDPESVF

109-118 LSKKVADLI109-118 LSKKVADLI

42-50 SSPLVPGTL42-50 SSPLVPGTL

63-71 KSPQGASAI63-71 KSPQGASAI

112-120 KVADLIHFL112-120 KVADLIHFL

37-46 EAVSSSSPL37-46 EAVSSSSPL

69-77 SAIPTAIDF69-77 SAIPTAIDF

17-25 DTQEEALGL17-25 DTQEEALGL

60-68 GPLKSPQGA60-68 GPLKSPQGA

116-124 LIHFLLLKY116-124 LIHFLLLKY

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

108-116 ALSKKVADL108-116 ALSKKVADL

113-121 VADLIHFLL113-121 VADLIHFLL

100-107 DPESVFRAA100-107 DPESVFRAA

31-39 ATTEEQEAV31-39 ATTEEQEAV

106-114 RAALSKKVA106-114 RAALSKKVA

41-49 SSSPLVPGT41-49 SSSPLVPGT

102-110 ESVFRAALS102-110 ESVFRAALS

30-38 AATTEEQEA30-38 AATTEEQEA

MAGE A5: HLA-B44 결합체MAGE A5: HLA-B44 Conjugate

69-77 SAIPTAIDF69-77 SAIPTAIDF

34-42 EEQEAVSSS34-42 EEQEAVSSS

20-28 EEALGLVGV20-28 EEALGLVGV

33-41 TEEQEAVSS33-41 TEEQEAVSS

90-98 QEEEGPSTS90-98 QEEEGPSTS

51-59 GEVPAAGSP51-59 GEVPAAGSP

114-122 ADLIHFLLL114-122 ADLIHFLLL

41-49 SSSPLVPGT41-49 SSSPLVPGT

92-100 EEGPSTSPD92-100 EEGPSTSPD

97-105 TSPDPESVF97-105 TSPDPESVF

48-56 GTLGEVPAA48-56 GTLGEVPAA

91-99 EEEGPSTSP91-99 EEEGPSTSP

36-44 QEAVSSSSP36-44 QEAVSSSSP

116-124 LIHFLLLKY116-124 LIHFLLLKY

56-64 AGSPGPLKS56-64 AGSPGPLKS

23-31 LGLVGVQAA23-31 LGLVGVQAA

13-23 EEGLDTQEE13-23 EEGLDTQEE

75-83 IDFTLWRQS75-83 IDFTLWRQS

100-108 DPESVFRAA100-108 DPESVFRAA

17-25 DTQEEALGL17-25 DTQEEALGL

MAGE A5: HLA-B52 결합체MAGE A5: HLA-B52 Conjugate

18-26 TQEEALGLV18-26 TQEEALGLV

97-105 TSPDPESVF97-105 TSPDPESVF

45-53 LVPGTLGEV45-53 LVPGTLGEV

109-117 LSKKVADLI109-117 LSKKVADLI

71-79 IPTAIDFTL71-79 IPTAIDFTL

63-71 KSPQGASAI63-71 KSPQGASAI

23-31 LGLVGVQAA23-31 LGLVGVQAA

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

20-28 EEALGLVGV20-28 EEALGLVGV

69-77 SAIPTAIDF69-77 SAIPTAIDF

46-54 VPGTLGEVP46-54 VPGTLGEVP

14-22 EGLDTQEEA14-22 EGLDTQEEA

106-114 RAALSKKVA106-114 RAALSKKVA

113-121 VADLIHFLL113-121 VADLIHFLL

31-39 ATTEEQEAV31-39 ATTEEQEAV

60-68 GPLKSPQGA60-68 GPLKSPQGA

76-84 DFTLWRQSI76-84 DFTLWRQSI

96-104 STSPDPESV96-104 STSPDPESV

89-107 NQEEEGPST89-107 NQEEEGPST

112-120 KVADLIHFL112-120 KVADLIHFL

MAGE A5: HLA-CW6 결합체MAGE A5: HLA-CW6 conjugate

112-120 KVADLIHFL112-120 KVADLIHFL

108-116 ALSKKVADL108-116 ALSKKVADL

71-79 IPTAIDFTL71-79 IPTAIDFTL

113-121 VADLIHFLL113-121 VADLIHFLL

116-124 LIHFLLLKY116-124 LIHFLLLKY

105-113 FRAALSKKV105-113 FRAALSKKV

67-75 GASAIPTAI67-75 GASAIPTAI

18-26 TQEEALGLV18-26 TQEEALGLV

37-45 EAVSSSSPL37-45 EAVSSSSPL

114-122 ADLIHFLLL114-122 ADLIHFLLL

45-53 LVPGTLGEV45-53 LVPGTLGEV

42-50 SSPLVPGTL42-50 SSPLVPGTL

15-23 GLDTQEEAL15-23 GLDTQEEAL

8-16 QHCKPEEGL8-16 QHCKPEEGL

20-28 EEALGLVGV20-28 EEALGLVGV

17-25 DTQEEALGL17-25 DTQEEALGL

41-49 SSSPLVPGT41-49 SSSPLVPGT

63-71 KSPQGASAI63-71 KSPQGASAI

76-84 DFTLWRQSI76-84 DFTLWRQSI

109-117 LSKKVADLI109-117 LSKKVADLI

MAGE A11: HLA-A1 결합체MAGE A11: HLA-A1 Conjugate

376-384 GTDPACYEF376-384 GTDPACYEF

281-290 EVDPTSHSY281-290 EVDPTSHSY

211-220 LIDPESFSQ211-220 LIDPESFSQ

71-80 NLEDRSPRR71-80 NLEDRSPRR

142-150 QAEEQEAAF142-150 QAEEQEAAF

352-360 FGEPKRLLT352-360 FGEPKRLLT

MAGE A11: HLA-A2 결합체MAGE A11: HLA-A2 conjugate

313-321 GLLIIVLGV313-321 GLLIIVLGV

350-358 FLFGEPKRL350-358 FLFGEPKRL

221-229 ILHDKIIDL221-229 ILHDKIIDL

89-97 VLWGPITQI89-97 VLWGPITQI

333-341 VMWEVLSIM333-341 VMWEVLSIM

384-392 FLWGPRAHA384-392 FLWGPRAHA

271-279 MQLLFGIDV271-279 MQLLFGIDV

225-233 KIIDLVHLL225-233 KIIDLVHLL

398-406 KVLEYIANA398-406 KVLEYIANA

337-345 VLSIMGVYA337-345 VLSIMGVYA

289-297 YVLVTSLNL289-297 YVLVTSLNL

316-324 IIVLGVIFM316-324 IIVLGVIFM

335-353 WEVLSIMGV335-353 WEVLSIMGV

MAGE A11: HLA-A3 결합체MAGE A11: HLA-A3 conjugate

272-280 QLLFGIDVK272-280 QLLFGIDVK

228-236 DLVHLLLRK228-236 DLVHLLLRK

89-97 VLWGPITQI89-97 VLWGPITQI

359-367 LTQNWVQEK359-367 LTQNWVQEK

313-321 GLLIIVLGV313-321 GLLIIVLGV

MAGE A11: HLA-A24 결합체MAGE A11: HLA-A24 Conjugate

343-351 VYAGREHFL343-351 VYAGREHFL

255-263 NYEDYFPEI255-263 NYEDYFPEI

351-359 LFGEPKRLL351-359 LFGEPKRLL

225-234 KIIDLVHLL225-234 KIIDLVHLL

288-296 SYVLVTSLN288-296 SYVLVTSLN

236-244 KYRVKGLIT236-244 KYRVKGLIT

82-90 RITGGEQVL82-90 RITGGEQVL

311-319 KSGLLIIVL311-319 KSGLLIIVL

413-421 SYPSLYEDA413-421 SYPSLYEDA

MAGE A11: HLA-B7 결합체MAGE A11: HLA-B7 conjugate

98-106 FPTVRPADL98-106 FPTVRPADL

414-422 YPSLYEDAL414-422 YPSLYEDAL

283-291 DPTSHSYVL283-291 DPTSHSYVL

64-73 QVFREQANL64-73 QVFREQANL

76-84 SPRRTQRIT76-84 SPRRTQRIT

289-297 YVLVTSLNL289-297 YVLVTSLNL

127-135 QAQEEDLGL127-135 QAQEEDLGL

307-315 QSMPKSGLL307-315 QSMPKSGLL

266-279 EASVCMQLL266-279 EASVCMQLL

147-155 EAAFFSSTL147-155 EAAFFSSTL

MAGE A11: HLA-B8 결합체MAGE A11: HLA-B8 Conjugate

98-106 FPTVRPADL98-106 FPTVRPADL

221-229 ILHDKIIDL221-229 ILHDKIIDL

241-250 GLITKAEML241-250 GLITKAEML

234-242 LRKYRVKGL234-242 LRKYRVKGL

2-10 ETQFRRGGL2-10 ETQFRRGGL

309-317 MPKSGLLII309-317 MPKSGLLII

307-315 QSMPKSGLL307-315 QSMPKSGLL

MAGE A11: HLA-B5 결합체MAGE A11: HLA-B5 Conjugate

374-382 VPGTDPACY374-382 VPGTDPACY

410-418 DPTSYPSLY410-418 DPTSYPSLY

102-110 RPADLTRVI102-110 RPADLTRVI

394-402 TSKMKVLEY394-402 TSKMKVLEY

309-317 MPKSGLLII309-317 MPKSGLLII

283-291 DPTSHSYVL283-291 DPTSHSYVL

181-190 SPTAMDAIF181-190 SPTAMDAIF

414-422 YPSLYEDAL414-422 YPSLYEDAL

98-106 FPTVRPADL98-106 FPTVRPADL

389-497 RAHAETSKM389-497 RAHAETSKM

48-56 APYGPQLQW48-56 APYGPQLQW

311-319 KSGLLIIVL311-319 KSGLLIIVL

378-386 DPACYEFLW378-386 DPACYEFLW

MAGE A11: HLA-B44 결합체MAGE A11: HLA-B44 Conjugate

143-151 AEEQEAAFF143-151 AEEQEAAFF

58-66 QDLPRVQVF58-66 QDLPRVQVF

256-269 YEDYFPEIF256-269 YEDYFPEIF

392-400 AETSKMKVL392-400 AETSKMKVL

166-174 AESPSPPQS166-174 AESPSPPQS

144-152 EEQEAAFFS144-152 EEQEAAFFS

394-402 TSKMKVLEY394-402 TSKMKVLEY

280-288 KEVDPTSHS280-288 KEVDPTSHS

265-273 REASVCMQL265-273 REASVCMQL

406-414 ANGRDPTSY406-414 ANGRDPTSY

410-418 DPTSYPSLY410-418 DPTSYPSLY

335-343 WEVLSIMGV335-343 WEVLSIMGV

146-154 QEAAFFSST146-154 QEAAFFSST

331-339 EEVMWEVLS331-339 EEVMWEVLS

MAGE A11: HLA-B52 결합체MAGE A11: HLA-B52 Conjugate

309-318 MPKSGLLII309-318 MPKSGLLII

102-110 RPADLTRVI102-110 RPADLTRVI

314-322 LLIIVLGVI314-322 LLIIVLGVI

333-341 VMWEVLSIM333-341 VMWEVLSIM

271-279 MQLLFGIDV271-279 MQLLFGIDV

218-226 SQDILHDKI218-226 SQDILHDKI

181-189 SPTAMDAIF181-189 SPTAMDAIF

315-323 LIIVLGVIF315-323 LIIVLGVIF

29-37 FGLQVSTMF29-37 FGLQVSTMF

219-227 QDILHDKII219-227 QDILHDKII

57-65 SQDLPRVQV57-65 SQDLPRVQV

90-98 LWGPITQIF90-98 LWGPITQIF

245-254 KAEMLGSVI245-254 KAEMLGSVI

329-338 IPEEVMWEV329-338 IPEEVMWEV

256-264 YEDYFPEIF256-264 YEDYFPEIF

58-66 QDLPRVQVF58-66 QDLPRVQVF

128-136 AQEEDLGLV128-136 AQEEDLGLV

283-291 DPTSHSYVL283-291 DPTSHSYVL

87-95 EQVLWGPIT87-95 EQVLWGPIT

325-334 EGNCIPEEV325-334 EGNCIPEEV

MAGE A11: HLA-CW6 결합체MAGE A11: HLA-CW6 conjugate

225-233 KIIDLVHLL225-233 KIIDLVHLL

311-319 KSGLLIIVL311-319 KSGLLIIVL

287-295 HSYVLVTSL287-295 HSYVLVTSL

221-229 ILHDKIIDL221-229 ILHDKIIDL

147-155 EAAFFSSTL147-155 EAAFFSSTL

229-237 LVHLLLRKY229-237 LVHLLLRKY

269-277 VCMQLLFGI269-277 VCMQLLFGI

244-252 TKAEMLGSV244-252 TKAEMLGSV

313-321 GLLIIVLGV313-321 GLLIIVLGV

222-230 LHDKIIDLV222-230 LHDKIIDLV

184-192 AMDAIFGSL184-192 AMDAIFGSL

MAGE A9: HLA-A1 결합체MAGE A9: HLA-A1 Conjugate

94-103 SVDPAQLEF94-103 SVDPAQLEF

167-176 EVDPAGHSY167-176 EVDPAGHSY

262-271 GSDPAHYEF262-271 GSDPAHYEF

134-143 MLESVIKNY134-143 MLESVIKNY

153-162 ASEFMQVIF153-162 ASEFMQVIF

189-198 LGDGHSMPK189-198 LGDGHSMPK

238-247 YGEPRKLLT238-247 YGEPRKLLT

112-121 VAELVHFLL112-121 VAELVHFLL

246-255 TQDWVQENY246-255 TQDWVQENY

280-289 TSYEKVINY280-289 TSYEKVINY

249-258 WVQENYLEY249-258 WVQENYLEY

MAGE A9: HLA-A2 결합체MAGE A9: HLA-A2 conjugate

199-208 ALLIIVLGV199-208 ALLIIVLGV

223-232 ALSVMGVYV223-232 ALSVMGVYV

102-111 FMFQEALKL102-111 FMFQEALKL

307-316 VLGEEQEGV307-316 VLGEEQEGV

270-279 FLWGSKAHA270-279 FLWGSKAHA

175-184 YILVTALGL175-184 YILVTALGL

157-166 MQVIFGTDV157-166 MQVIFGTDV

140-149 KNYKRYFPV140-149 KNYKRYFPV

219-228 VIWEALSVM219-228 VIWEALSVM

290-299 VMLNAREPI290-299 VMLNAREPI

284-293 KVINYLVML284-293 KVINYLVML

221-230 WEALSVMGV221-230 WEALSVMGV

24-33 GLMGAQEPT24-33 GLMGAQEPT

187-196 SMLGDGHSM187-196 SMLGDGHSM

MAGE A9: HLA-A3 결합체MAGE A9: HLA-A3 conjugate

235-244 HMFYGEPRK235-244 HMFYGEPRK

114-123 ELVHFLLHK114-123 ELVHFLLHK

203-212 IVLGVILTK203-212 IVLGVILTK

225-234 SVMGVYVGK225-234 SVMGVYVGK

102-111 FMFQEALKL102-111 FMFQEALKL

134-143 MLESVIKNY134-143 MLESVIKNY

158-167 QVIFGTDVK158-167 QVIFGTDVK

118-127 FLLHKYRVK118-127 FLLHKYRVK

199-208 ALLIIVLGV199-208 ALLIIVLGV

107-116 ALKLKVAEL107-116 ALKLKVAEL

270-279 FLWGSKAHA270-279 FLWGSKAHA

148-157 VIFGKASEF148-157 VIFGKASEF

MAGE A9: HLA-A24 결합체MAGE A9: HLA-A24 conjugate

281-290 SYEKVINYL281-290 SYEKVINYL

237-246 FYGEPRKLL237-246 FYGEPRKLL

229-238 VYVGKEHMF229-238 VYVGKEHMF

71-80 VYYTLWSQF71-80 VYYTLWSQF

141-150 NYKRYFPVI141-150 NYKRYFPVI

236-245 MFYGEPRKL236-245 MFYGEPRKL

284-293 KVINYLVML284-293 KVINYLVML

MAGE A9: HLA-B7 결합체MAGE A9: HLA-B7 conjugate

169-178 DPAGHSYIL169-178 DPAGHSYIL

300-309 YPSLYEEVL300-309 YPSLYEEVL

127-136 EPVTKAEML127-136 EPVTKAEML

284-293 KVINYLVML284-293 KVINYLVML

111-120 KVAELVHFL111-120 KVAELVHFL

197-206 KAALLIIVL197-206 KAALLIIVL

17-26 EAQGEDLGL17-26 EAQGEDLGL

107-116 ALKLKVAEL107-116 ALKLKVAEL

193-202 HSMPKAALL193-202 HSMPKAALL

195-204 MPKAALLII195-204 MPKAALLII

228-237 GVYVGKEHM228-237 GVYVGKEHM

181-190 LGLSCDSML181-190 LGLSCDSML

201-210 LIIVLGVIL201-210 LIIVLGVIL

173-182 HSYILVTAL173-182 HSYILVTAL

175-184 YILVTALGL175-184 YILVTALGL

92-101 SSSVDPAQL92-101 SSSVDPAQL

67-76 SSISVYYTL67-76 SSISVYYTL

102-111 FMFQEALKL102-111 FMFQEALKL

112-121 VAELVHFLL112-121 VAELVHFLL

180-189 ALGLSCDSM180-189 ALGLSCDSM

MAGE A9: HLA-B8 결합체MAGE A9: HLA-B8 Conjugate

107-116 ALKLKVAEL107-116 ALKLKVAEL

127-136 EPVTKAEML127-136 EPVTKAEML

195-204 MPKAALLII195-204 MPKAALLII

193-202 HSMPKAALL193-202 HSMPKAALL

169-178 DPAGHSYIL169-178 DPAGHSYIL

300-309 YPSLYEEVL300-309 YPSLYEEVL

MAGE A9: HLA-B52 결합체MAGE A9: HLA-B52 Conjugate

195-204 MPKAALLII195-204 MPKAALLII

200-209 LLIIVLGVI200-209 LLIIVLGVI

219-228 VIWEALSVM219-228 VIWEALSVM

157-166 MQVIFGTDV157-166 MQVIFGTDV

104-113 FQEALKLKV104-113 FQEALKLKV

131-140 KAEMLESVI131-140 KAEMLESVI

152-161 KASEFMQVI152-161 KASEFMQVI

96-105 DPAQLEFMF96-105 DPAQLEFMF

201-210 LIIVLGVIL201-210 LIIVLGVIL

300-309 YPSLYEEVL300-309 YPSLYEEVL

212-221 DNCAPEEVI212-221 DNCAPEEVI

169-178 DPAGHSYIL169-178 DPAGHSYIL

278-287 AETSYEKVI278-287 AETSYEKVI

141-150 NYKRYFPVI141-150 NYKRYFPVI

MAGE A9: HLA-CW6 결합체MAGE A9: HLA-CW6 conjugate

197-206 KAALLIIVL197-206 KAALLIIVL

111-120 KVAELVHFL111-120 KVAELVHFL

173-182 HSYILVTAL173-182 HSYILVTAL

107-116 ALKLKVAEL107-116 ALKLKVAEL

199-208 ALLIIVLGV199-208 ALLIIVLGV

100-109 LEFMFQEAL100-109 LEFMFQEAL

130-139 TKAEMLESV130-139 TKAEMLESV

115-124 LVHFLLHKY115-124 LVHFLLHKY

201-210 LIIVLGVIL201-210 LIIVLGVIL

MAGE A9: HLA-B44 결합체MAGE A9: HLA-B44 Conjugate

105-113 QEALKLKVA105-113 QEALKLKVA

221-229 WEALSVMGV221-229 WEALSVMGV

47-55 EEVSAAGSS47-55 EEVSAAGSS

296-304 EPICYPSLY296-304 EPICYPSLY

280-288 TSYEKVINY280-288 TSYEKVINY

217-225 EEVIWEALS217-225 EEVIWEALS

255-263 LEYRQVPGS255-263 LEYRQVPGS

278-286 AETSYEKVI278-286 AETSYEKVI

166-174 KEVDPAGHS166-174 KEVDPAGHS

33-41 GEEEETTSS33-41 GEEEETTSS

96-104 DPAQLEFMF96-104 DPAQLEFMF

222-230 EALSVMGVY222-230 EALSVMGVY

MAGE A9: HLA-B35 결합체MAGE A9: HLA-B35 Conjugate

260-269 VPGSDPAHY260-269 VPGSDPAHY

296-305 EPICYPSLY296-305 EPICYPSLY

195-204 MPKAALLII195-204 MPKAALLII

300-309 YPSLYEEVL300-309 YPSLYEEVL

127-136 EPVTKAEML127-136 EPVTKAEML

96-105 DPAQLEFMF96-105 DPAQLEFMF

169-178 DPAGHSYIL169-178 DPAGHSYIL

280-289 TSYEKVINY280-289 TSYEKVINY

65-74 ASSSISVYY65-74 ASSSISVYY

264-273 DPAHYEFLW264-273 DPAHYEFLW

92-101 SSSVDPAQL92-101 SSSVDPAQL

18-27 AQGEDLGLM18-27 AQGEDLGLM

222-231 EALSVMGVY222-231 EALSVMGVY

64-73 GASSSISVY64-73 GASSSISVY

197-206 KAALLIIVL197-206 KAALLIIVL

MAGE A8: HLA-A1 결합체MAGE A8: HLA-A1 Conjugate

171-180 EVDPAGHSY171-180 EVDPAGHSY

266-275 GSDPVRYEF266-275 GSDPVRYEF

138-147 MLESVIKNY138-147 MLESVIKNY

157-166 ASECMQVIF157-166 ASECMQVIF

250-259 TQEWVQENY250-259 TQEWVQENY

98-107 SPDPAHLES98-107 SPDPAHLES

116-125 VAELVRFLL116-125 VAELVRFLL

253-262 WVQENYLEY253-262 WVQENYLEY

193-202 LGDDQSTPK193-202 LGDDQSTPK

181-190 LVTCLGLSY181-190 LVTCLGLSY

MAGE A8: HLA-B52 결합체MAGE A8: HLA-B52 Conjugate

199-208 TPKTGLLII199-208 TPKTGLLII

223-232 AIWEALSVM223-232 AIWEALSVM

161-170 MQVIFGIDV161-170 MQVIFGIDV

286-295 YVKVLEHVV286-295 YVKVLEHVV

204-213 LLIIVLGMI204-213 LLIIVLGMI

135-144 KAEMLESVI135-144 KAEMLESVI

262-271 RQAPGSDPV262-271 RQAPGSDPV

205-214 LIIVLGMIL205-214 LIIVLGMIL

156-165 KASECMQVI156-165 KASECMQVI

173-182 DPAGHSYIL173-182 DPAGHSYIL

MAGE A8: HLA-A3 결합체MAGE A8: HLA-A3 conjugate

280-289 ALAETSYVK280-289 ALAETSYVK

118-127 ELVRFLLRK118-127 ELVRFLLRK

122-131 FLLRKYQIK122-131 FLLRKYQIK

1-10 MLLGQKSQR1-10 MLLGQKSQR

203-212 GLLIIVLGM203-212 GLLIIVLGM

210-219 GMILMEGSR210-219 GMILMEGSR

162-171 QVIFGIDVK162-171 QVIFGIDVK

138-147 MLESVIKNY138-147 MLESVIKNY

2-11 LLGQKSQRY2-11 LLGQKSQRY

111-120 ALDEKVAEL111-120 ALDEKVAEL

274-283 FLWGPRALA274-283 FLWGPRALA

29-38 QIPTAEEQK29-38 QIPTAEEQK

24-33 GLMDVQIPT24-33 GLMDVQIPT

253-262 WVQENYLEY253-262 WVQENYLEY

MAGE A8: HLA-B7 결합체MAGE A8: HLA-B7 conjugate

299-308 RVRISYPSL299-308 RVRISYPSL

304-313 YPSLHEEAL304-313 YPSLHEEAL

173-182 DPAGHSYIL173-182 DPAGHSYIL

22-31 APGLMDVQI22-31 APGLMDVQI

64-73 SPEGASSSL64-73 SPEGASSSL

240-249 SVYWKLRKL240-249 SVYWKLRKL

115-124 KVAELVRFL115-124 KVAELVRFL

37-46 KAASSSSTL37-46 KAASSSSTL

17-26 QAQGEAPGL17-26 QAQGEAPGL

199-208 TPKTGLLII199-208 TPKTGLLII

216-225 GSRAPEEAI216-225 GSRAPEEAI

196-205 DQSTPKTGL196-205 DQSTPKTGL

116-125 VAELVRFLL116-125 VAELVRFLL

MAGE A8: HLA-B8 결합체MAGE A8: HLA-B8 Conjugate

197-206 QSTPKTGLL197-206 QSTPKTGLL

199-208 TPKTGLLII199-208 TPKTGLLII

240-249 SVYWKLRKL240-249 SVYWKLRKL

297-306 NARVRISYP297-306 NARVRISYP

111-120 ALDEKVAEL111-120 ALDEKVAEL

299-308 RVRISYPSL299-308 RVRISYPSL

MAGE A8: HLA-A2 결합체MAGE A8: HLA-A2 conjugate

288-297 KVLEHVVRV288-297 KVLEHVVRV

274-283 FLWGPRALA274-283 FLWGPRALA

24-33 GLMDVQIPT24-33 GLMDVQIPT

111-120 ALDEKVAEL111-120 ALDEKVAEL

115-124 KVAELVRFL115-124 KVAELVRFL

45-54 LIMGTLEEV45-54 LIMGTLEEV

179-188 YILVTCLGL179-188 YILVTCLGL

161-170 MQVIFGIDV161-170 MQVIFGIDV

203-212 GLLIIVLGM203-212 GLLIIVLGM

191-200 GLLGDDQST191-200 GLLGDDQST

223-232 AIWEALSVM223-232 AIWEALSVM

71-80 SLTVTDSTL71-80 SLTVTDSTL

279-288 RALAETSYV279-288 RALAETSYV

251-260 QEWVQENYL251-260 QEWVQENYL

184-193 CLGLSYDGL184-193 CLGLSYDGL

MAGE A8: HLA-A24 결합체MAGE A8: HLA-A24 conjugate

241-250 VYWKLRKLL241-250 VYWKLRKLL

145-154 NYKNHFPDI145-154 NYKNHFPDI

273-282 EFLWGPRAL273-282 EFLWGPRAL

121-130 RFLLRKYQI121-130 RFLLRKYQI

126-135 KYQIKEPVT126-135 KYQIKEPVT

115-124 KVAELVRFL115-124 KVAELVRFL

285-294 SYVKVLEHV285-294 SYVKVLEHV

303-312 SYPSLHEEA303-312 SYPSLHEEA

201-210 KTGLLIIVL201-210 KTGLLIIVL

116-125 VAELVRFLL116-125 VAELVRFLL

299-308 RVRISYPSL299-308 RVRISYPSL

37-46 KAASSSSTL37-46 KAASSSSTL

205-214 LIIVLGMIL205-214 LIIVLGMIL

17-26 QAQGEAPGL17-26 QAQGEAPGL

64-73 SPEGASSSL64-73 SPEGASSSL

131-140 EPVTKAEML131-140 EPVTKAEML

179-188 YILVTCLGL179-188 YILVTCLGL

185-194 LGLSYDGLL185-194 LGLSYDGLL

42-51 SSTLIMGTL42-51 SSTLIMGTL

111-120 ALDEKVAEL111-120 ALDEKVAEL

MAGE A8: HLA-CW6 결합체MAGE A8: HLA-CW6 conjugate

115-124 KVAELVRFL115-124 KVAELVRFL

201-210 KTGLLIIVL201-210 KTGLLIIVL

177-186 HSYILVTCL177-186 HSYILVTCL

240-249 SVYWKLRKL240-249 SVYWKLRKL

111-120 ALDEKVAEL111-120 ALDEKVAEL

241-250 VYWKLRKLL241-250 VYWKLRKLL

119-128 LVRFLLRKY119-128 LVRFLLRKY

205-214 LIIVLGMIL205-214 LIIVLGMIL

104-113 LESLFREAL104-113 LESLFREAL

42-51 SSTLIMGTL42-51 SSTLIMGTL

134-143 TKAEMLESV134-143 TKAEMLESV

MAGE A8: HLA-B35 결합체MAGE A8: HLA-B35 Conjugate

264-273 APGSDPVRY264-273 APGSDPVRY

199-208 TPKTGLLII199-208 TPKTGLLII

304-313 YPSLHEEAL304-313 YPSLHEEAL

131-140 EPVTKAEML131-140 EPVTKAEML

173-182 DPAGHSYIL173-182 DPAGHSYIL

100-109 DPAHLESLF100-109 DPAHLESLF

39-48 ASSSSTLIM39-48 ASSSSTLIM

268-277 DPVRYEFLW268-277 DPVRYEFLW

MAGE A8: HLA-B44 결합체MAGE A8: HLA-B44 Conjugate

282-291 AETSYVKVL282-291 AETSYVKVL

20-29 GEAPGLMDV20-29 GEAPGLMDV

225-234 WEALSVMGL225-234 WEALSVMGL

33-42 AEEQKAASS33-42 AEEQKAASS

234-243 YDGREHSVY234-243 YDGREHSVY

109-118 REALDEKVA109-118 REALDEKVA

221-230 EEAIWEALS221-230 EEAIWEALS

170-179 KEVDPAGHS170-179 KEVDPAGHS

34-43 EEQKAASSS34-43 EEQKAASSS

296-305 VNARVRISY296-305 VNARVRISY

226-235 EALSVMGLY226-235 EALSVMGLY

237-246 REHSVYWKL237-246 REHSVYWKL

본 발명은 또한 상기 분자들을 주성분으로 하는 조성물, 예를 들면 본 발명에 따른 MAGE 단백질, 및 사이토킨, 인터류킨(예, IL-2, IL-4, IL-12 등) 또는 GM-CSF 같은 약학적으로 허용되는 보조제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 마찬가지로, 전술한 1종 이상의 펩티드 및 보조제, HLA 또는 MHC 분자와 펩티드의 복합체 및 보조제를 포함하는 조성물 또한 본 발명의 일부분이다.The present invention also provides compositions comprising the above molecules as a main component, such as the MAGE protein according to the present invention, and pharmaceuticals such as cytokines, interleukins (eg, IL-2, IL-4, IL-12, etc.) or GM-CSF. It relates to a composition comprising an acceptable adjuvant. Likewise, compositions comprising one or more of the foregoing peptides and adjuvants, complexes and adjuvants of HLA or MHC molecules and peptides are also part of the present invention.

상기 복합체들은 그 자체로서 또는 수상돌기(dendritic) 세포 같은 항원 제시 세포상에 결합하여, 비-증식성이 되도록 함으로써 치료 효과를 거둘 수 있다.The complexes may have a therapeutic effect either by themselves or by binding to antigen presenting cells, such as dendritic cells, to be non-proliferative.

당해 기술 분야의 기술자들은 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 핵산 분자들을 리포좀(liposome) 조성물 같은 적합한 조성물의 형태로 사용할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 본 발명은 또한 상기 펩티드 및 이것의 MHC 결합 파트너 즉, HLA 분자의 복합체에 특이적인 분리된 세포용해성 T 세포주에 관한 것이다.Those skilled in the art will appreciate that nucleic acid molecules encoding peptides or proteins can be used in the form of suitable compositions, such as liposome compositions. The present invention also relates to an isolated cytolytic T cell line specific for the complex of said peptide and its MHC binding partner, ie HLA molecule.

HLA 분자에 결합할 수 있는 상기 펩티드의 능력을 이용하여, 펩티드가 샘플내 세포에 결합하는지의 여부를 측정함으로써 HLA-A^*0201 양성 세포 같은 특정 HLA 분자에 대해 양성인 세포의 존재를 결정하기 위한 제제로서 펩티드를 유용하게 사용할 수 있다. 이러한 "리간드/수용체" 유형의 반응은 당해 기술분야에 잘 알려져 있으며, 이를 측정하기 위한 다양한 방법이 이용될 수 있다.Agents for determining the presence of cells that are positive for a particular HLA molecule, such as HLA-A ^* 0201 positive cells, by measuring whether the peptide binds to cells in a sample, using the peptide's ability to bind HLA molecules. As the peptide can be usefully used. Such "ligand / receptor" type reactions are well known in the art and various methods for measuring them may be used.

본 발명의 또다른 양태는 세포 형질감염을 통해 변형된 데카펩티드의 직접 합성에 필요한 정보를 운반하는 소위 "미니-유전자"에 관한 것이다. 미니 유전자는 1종 이상의 항원성 펩티드를 암호화하여, 플라스미드를 이용한 형질감염 또는 백시니아(vaccinia)나 아데노바이러스내로의 클로닝을 통해 숙주 세포 게놈으로 형질전이되도록 고안될 수 있다[참조예: Zajac, et al.,Int. J. Cancer71: 496 (1997); 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]. 재조합 백시니아 바이러스 벡터 같은 상기 재조합 벡터는 융합 단백질을 생산하도록 구성할 수 있다. 예를 들면, 융합 단백질의 일부분을 목적하는 종양 거부 항원 전구체 또는 종양 거부 항원으로 하고, 별도의 단백질 또는 펩티드 분절이 포함될 수 있도록 융합 단백질을 구성할 수 있다. 융합 단백질에 부가될 수 있는 별도의 단백질 또는 펩티드 분절의 예로는 리포터 단백질 또는 펩티드 즉, 그린 형광 단백질 같이, 발현이 일어났음을 나타내기 위해 관측가능한 시그날을 주는 단백질 또는 펩티드를 들 수 있다. 추가 리포터 단백질로는 β-갈락토시다제, 루시페라제, dhfr 및 "eGFP" 같은 단백질 또는 문헌 "Cheng, etal., Nature Biotechnology 14: 606 (1996); 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨"에 기술된 바와 같은 향상된 그린 형광 단백질 등이 있으나, 이들로만 제한되지는 않는다. 당해 기술분야의 기술자들이 이용할 수 있는 다양한 리포터 단백질을 다른 방법으로 사용할 수도 있다. 예컨대, "GFP" 및 "eGFP"의 경우, 감염 세포에 사용하여 이를 가시화함으로써, 유동 세포계산법(flow cytometry)을 이용한 감염 세포의 탐지 및 분리를 용이하게 할 수도 있다. 다른 리포터 단백질의 경우는 웨스턴 블롯팅, 면역침전 등의 방법 이용시 유용하다. 이러한 기술은 당해 기술분야에서 통용되는 표준 기술로서, 본 명세서에서는 반복 설명하지 않도록 하겠다. 융합 펩티드로부터 종양 거부 항원 전구체 또는 종양 거부 항원을 절단하는데 도움을 주는 단백질 또는 펩티드 분절 또한 포함될 수 있다. 융합 단백질에는 전술한 1종 이상의 종양 거부 항원과 함께, 관련 MHC 분자로 종양 거부 항원 또는 항원들의 전달을 촉진시키는 단백질 또는 펩티드도 또한 포함될 수 있다. 이러한 단백질 및 펩티드 또한 당해 기술분야에 잘 알려져 있어, 본 명세서에서는 별도로 설명하지 않도록 하겠다.Another aspect of the invention relates to a so-called "mini-gene" which carries the information necessary for the direct synthesis of modified decapeptides via cell transfection. Mini genes can be designed to encode one or more antigenic peptides so that they can be transfected into the host cell genome through transfection with a plasmid or by cloning into vaccinia or adenoviruses (see, for example, Zajac, et. al., Int. J. Cancer 71: 496 (1997); Incorporated herein by reference]. Such recombinant vectors, such as recombinant vaccinia virus vectors, can be constructed to produce fusion proteins. For example, a portion of the fusion protein may be a desired tumor rejection antigen precursor or tumor rejection antigen, and the fusion protein may be constructed so that separate proteins or peptide segments can be included. Examples of separate protein or peptide segments that may be added to the fusion protein include proteins or peptides that give an observable signal to indicate that expression has occurred, such as reporter proteins or peptides, ie green fluorescent proteins. Additional reporter proteins include proteins such as β-galactosidase, luciferase, dhfr and "eGFP" or in "Cheng, etal., Nature Biotechnology 14: 606 (1996); incorporated herein by reference". Enhanced green fluorescent proteins as described, and the like, but are not limited to these. Various reporter proteins available to those skilled in the art may be used in other ways. For example, "GFP" and "eGFP" may be used in infected cells to visualize them, thereby facilitating detection and isolation of infected cells using flow cytometry. Other reporter proteins are useful when using methods such as western blotting, immunoprecipitation and the like. This technique is a standard technique commonly used in the art, and will not be repeated herein. Protein or peptide segments that also help cleave the tumor reject antigen precursor or tumor reject antigen from the fusion peptide may also be included. Fusion proteins may also include proteins or peptides that facilitate the delivery of tumor rejection antigens or antigens to related MHC molecules, along with one or more tumor rejection antigens described above. Such proteins and peptides are also well known in the art and will not be described separately herein.

본 발명은 또한, 상기 재조합 벡터로 형질감염된 재조합 세포에 관한 것이다. 이러한 세포로는 예컨대 어떠한 유형의 진핵 세포도 가능하며, 인체 세포가 특히 바람직하다. 이러한 세포는 이후, 종양 거부 항원 전구체 또는 종양 거부 항원을 생산하는데 사용할 수 있다. 이는 또한, 생체외에서 사용시 특정 MHC 분자와 종양 거부 항원의 복합체에 특이적인 세포용해성 T 세포를 생산할 수도 있다. 이러한 작업은 형질감염된 세포를 혈액 샘플과 같은 T 세포원에 접촉시켜, 융합 단백질의발현 및 TRA(즉, 종양 거부 항원)의 프로세싱 결과 생성된 MHC 분자와 TRA의 복합체에 특이적인 샘플내 특정 세포의 증식을 유발시킴으로써 간단히 수행될 수 있다. 이러한 세포는 비-증식성이 된 경우, 백신 재료로 사용될 수도 있는데, 이것은 이후 표면상에 관련 복합체를 제시하여 본 명세서에 제시된 바와 같이 생체내에서 동일한 유형의 T 세포 반응을 유발시키게 된다. 마찬가지로, 벡터 또한 그 자체로서 백신 재료로 사용하여 세포 표면상에 MHC 분자와 펩티드의 복합체에 대한 T 세포 반응을 요하는 환자에게 투여할 수 있다. 물론, 생체외에서 생산된 T 세포 또한 환자 치료시 사용할 수 있다.The invention also relates to recombinant cells transfected with the recombinant vector. Such cells may, for example, be any type of eukaryotic cells, with human cells being particularly preferred. Such cells can then be used to produce tumor rejection antigen precursors or tumor rejection antigens. It may also produce cytolytic T cells specific for the complex of certain MHC molecules and tumor rejection antigens when used in vitro. This operation involves contacting the transfected cells with a T cell source, such as a blood sample, to determine the specific cell in the sample specific for the complex of the MHC molecule and TRA resulting from expression of the fusion protein and processing of the TRA (ie, tumor rejection antigen). It can be done simply by inducing proliferation. Such cells can also be used as vaccine material if they become non-proliferative, which then presents the relevant complex on the surface, causing the same type of T cell response in vivo as presented herein. Likewise, the vector can also be used as a vaccine material per se to administer to patients in need of a T cell response to a complex of MHC molecules and peptides on the cell surface. Of course, ex vivo produced T cells can also be used to treat patients.

상기 펩티드는 다른 종양 거부 항원으로부터 유래된 펩티드와 결합하여 '폴리토프(polytope)'를 형성할 수도 있다. 이러한 펩티드의 예가 미국 특허 출원 일련번호 제 08/672,351 호, 제 08/718,964 호(현 미국 특허 제__호), 제 08/487,135 호(현 미국 특허 제__호), 제 08/530,569 호 및 제 08/880,963 호(상기 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 제시되어 있다.The peptide may also be combined with a peptide derived from another tumor rejection antigen to form a 'polytope'. Examples of such peptides are U.S. Patent Application Serial Nos. 08 / 672,351, 08 / 718,964 (current U.S. Patent No.), 08 / 487,135 (current U.S. Patent No.), 08 / 530,569 And 08 / 880,963, all of which are incorporated herein by reference.

사용가능한 또다른 펩티드들이 미국 특허 제 5,405,940 호; 제 5,487,974 호; 제 5,519,117 호; 제 5,530,096 호; 제 5,554,506 호; 제 5,554,724 호; 5,559,995 호; 제 5,585,461 호; 제 5,589,334 호; 제 5,648,226 호; 및 제 5,683,886 호; PCT 국제 공개 제 92/20356 호; 제 94/14459 호; 제 96/10577 호; 제 96/21673 호; 제 97/10837 호; 제 97/26535 호; 및 제 97/31017 호 뿐아니라, 계류중인 미국 출원 일련번호 제 08/713,354 호(상기 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 개시되어 있다.Still other peptides that can be used are described in US Pat. No. 5,405,940; 5,487,974; 5,487,974; 5,519,117; No. 5,530,096; 5,554,506; 5,554,506; 5,554,724; 5,554,724; 5,559,995; 5,585,461; 5,589,334; 5,589,334; 5,648,226; 5,648,226; And 5,683,886; PCT International Publication No. 92/20356; 94/14459; 96/10577; 96/21673; 97/10837; 97/26535; And 97/31017, as well as pending US application Ser. No. 08 / 713,354, all of which are incorporated herein by reference.

폴리토프는 2종 이상의 잠재적 면역원성 또는 면역 자극성 펩티드의 그룹으로, 다양한 방법으로 함께 결합시켜 해당 유형의 분자가 면역 반응을 자극 및/또는 유발시킬 것인지의 여부를 결정할 수 있다.Polytopes are a group of two or more potential immunogenic or immunostimulatory peptides that can be bound together in a variety of ways to determine whether molecules of that type will stimulate and / or elicit an immune response.

이들 펩티드는 서로 직접적으로 또는 플랭킹 서열을 사용하여 결합할 수 있다[관련 에피토프성 서열의 직접 결합과 관련하여서는 문헌 "Thompson et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA92(13): 5845-5849 (1995)" 참조]. 백신으로서 폴리토프를 사용하는 것에 대해서는 잘 알려져 있다[참조예: Gilbert et al.,Nat. Biotechnol. 15(12): 1280-1284 (1997); Thomson et al.,supra; Thomson et al.,J. Immunol.157(2): 822-826 (1996); Tam et al.,J. Exp. Med.171(1): 299-306 (1990); 상기 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]. 상기 탐의 문헌은 특히 폴리토프가 마우스 모델에서 항체 및 보호성 면역을 산출하는데 유용함을 제시하고 있다. 또한, 상기 문헌은 폴리토프가 분해시에, MHC가 될 수 있거나 또는 이것에 의해 제시되는 펩티드를 산출함을 밝히고 있다. 탐은 CTL을 통해 폴리토프 '스트링(strings)'로부터 프로세싱된 개별적 에피토프의 인지를 보여줌으로써 이를 입증하고 있다. 이러한 접근은 예컨대, 폴리토프에서 결합하여 인지를 유발할 수 있는 에피토프의 수를 결정하는데, 그리고 상이한 에피토프 조합의 효력을 결정하기 위해 이용될 수 있다. 상이한 조합이라 함은 특정 서브세트(subsets)의 종양 거부 항원을 발현하는 환자에 맞게 '주문-제작'된 것을 의미한다. 이들 폴리토프는 폴리펩티드 구조체로서 또는 핵산 전달 시스템을 이용하여 도입될 수 있다. 당해 기술분야에는 전술한 바와 같은 개개의 에피토프 또는 폴리토프를 암호화하는 DNA를 도입하기 위한 많은 다른 방법들이 있다[참조예: Allsopp et al.,Eur. J. Immunol.26(8); 1951-1959 (1996); 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]. 아데노바이러스, 폭스-바이러스(pox-virus), Ty-바이러스형 입자, 플라스미드, 박테리아 등이 사용가능하다. 상기 시스템을 마우스 모델에서 시험함으로써 제시된 인체내 상황에 가장 적합한 시스템을 결정할 수 있다. 또한 인체에 임상 시험할 수도 있다.These peptides can be bound to each other directly or using flanking sequences. [0044] With regard to the direct binding of related epitope sequences, see “Thompson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 (13): 5845 -5849 (1995) ". The use of polytopes as vaccines is well known. See, eg, Gilbert et al., Nat. Biotechnol . 15 (12): 1280-1284 (1997); Thomson et al., Supra ; Thomson et al., J. Immunol. 157 (2): 822-826 (1996); Tam et al., J. Exp. Med. 171 (1): 299-306 (1990); All of which are incorporated herein by reference]. The Tom's literature suggests that polytopes are particularly useful for producing antibodies and protective immunity in mouse models. The document also reveals that, upon degradation, the polytope can yield MHC or thereby present a peptide. Tom demonstrates this by showing the recognition of individual epitopes processed from polytope 'strings' via CTL. This approach can be used, for example, to determine the number of epitopes that can bind to and induce cognition in polytopes, and to determine the potency of different epitope combinations. By different combinations is meant 'custom-made' for patients expressing certain subsets of tumor rejection antigens. These polytopes can be introduced as polypeptide constructs or using nucleic acid delivery systems. There are many other methods in the art for introducing DNA encoding individual epitopes or polytopes as described above. See, eg, Allsopp et al., Eur. J. Immunol. 26 (8); 1951-1959 (1996); Incorporated herein by reference]. Adenoviruses, pox-viruses, Ty-virus type particles, plasmids, bacteria and the like can be used. By testing the system in a mouse model, one can determine the system best suited for the presented human body situation. It can also be clinically tested in humans.

본 발명의 특징은 또한, 상기 펩티드를 사용하여 샘플내에서 세포용해성 T 세포의 존재를 결정하는 것에 관한 것이다. 샘플내 CTL이 펩티드/MHC 복합체와 반응하게 된다는 사실은 상기에서 밝힌 바 있다. 따라서, CTL이 샘플내에 존재함을 알고 있다면, 특정 HLA 분자에 대해 양성인 세포는 HLA-A2 양성 세포와 같은 양성 세포에 본 발명의 펩티드를 첨가하여 "용해"시킨 후, 예를 들면 방사능 크로뮴 방출, TNF 생성 등의 방법을 통해 T 세포 활성을 측정할 수 있다. 마찬가지로, 본 발명의 펩티드중 1종을 HLA 양성 세포와 함께 샘플에 첨가하고,⁵¹Cr 방출, TNF 존재 검출 등을 통해 HLA 양성 세포의 용해를 측정함으로써, 샘플내에 특이적 종양 침투 임파구("TILs")가 존재하는지의 여부를 결정할 수도 있다. 또한 CTL은 ELISPOT 분석[참조예: Schmittel et al., (1997).J. Immunol. Methods210: 167-174 및 Lalvani et al., (1997).J. Exp. Med.126: 859] 또는 MHC I군/펩티드의 형광발생 테트라머 복합체의 FACS 분석[참조: Dunbar et al., (1998),Current Biology8: 413-416, Romero, et al.,J. Exp. Med.188: 1641-1650 (1998); 상기 문헌 모두 본 명세서에 참고문헌으로 인용됨]에 의해 검출할 수도 있다.Features of the invention also relate to determining the presence of cytolytic T cells in a sample using the peptide. The fact that CTL in the sample will react with the peptide / MHC complex has been described above. Thus, if one knows that CTL is present in a sample, cells that are positive for a particular HLA molecule are "dissolved" by adding the peptides of the invention to positive cells, such as HLA-A2 positive cells, followed by, for example, radiochromium release, T cell activity can be measured by methods such as TNF production. Similarly, one of the peptides of the present invention is added to a sample along with HLA positive cells, and the specific tumor infiltrating lymphocytes ("TILs") in the sample are measured by measuring lysis of HLA positive cells through ⁵¹ Cr release, detection of the presence of TNF, and the like. May be determined whether or not) is present. CTLs can also be analyzed by ELISPOT analysis (see, for example, Schmittel et al., (1997). J. Immunol. Methods 210: 167-174 and Lalvani et al., (1997). J. Exp. Med. 126: 859] or FACS analysis of fluorogenic tetramer complexes of MHC I group / peptide [Dunbar et al., (1998), Current Biology 8: 413-416, Romero, et al., J. Exp. Med. 188: 1641-1650 (1998); All of which are also incorporated herein by reference.

물론, 상기 펩티드를 CTL 생성 유발에 사용할 수도 있다. 전술한 바와 같이, CTL 전구체는 적합한 복합체 대면시, CTL로 전환될 수 있다. 그 자체로서 상기한 "대면(confrontation)"을 유발시킴으로써, CTL을 생성할 수도 있다. 이러한 것은 생체내에서 뿐아니라 생체외에서도 상기 CTL을 산출하는데 유용하다.Of course, the peptide can also be used to induce CTL production. As mentioned above, CTL precursors can be converted to CTL upon facing the appropriate complex. By itself triggering such "confrontation", CTLs may be generated. This is useful for calculating the CTL in vivo as well as in vitro.

본 발명의 다른 양태들은 당해 기술분야의 기술자라면 잘 알 수 있을 것이므로, 본 명세서에서는 특별히 한정하지 않기로 한다.Other aspects of the present invention will be well understood by those skilled in the art, and are not particularly limited herein.

본 명세서에서 사용된 용어 및 표현은 제한을 하기 위한 것이 아니라 설명을 위한 것으로, 상기한 용어와 표현이 본 명세서에 제시 및 개시된 특징에 해당하는 부분 또는 그 일부분을 배제하는 의도로 사용되어서는 안되며, 본 발명의 다양한 변형 또한 본 발명의 범주내에 속함을 명시하고자 한다.The terms and expressions used herein are for the purpose of description and not of limitation, and the above terms and expressions are not to be used with the intention of excluding or eliminating portions corresponding to the features presented and disclosed herein. Various modifications of the invention are also intended to be within the scope of the invention.

본 발명은 상술한 바와 같이 다양한 진단 및 치료의 용도에 사용될 수 있다.The present invention can be used for various diagnostic and therapeutic uses as described above.

Claims (17)

서열 18, 서열 19 및 서열 20에 제시된 뉴클레오티드 서열로 이루어진 핵산 분자에 의해 암호화된 단백질을 암호화하는 분리된, 상보성 DNA 분자.An isolated, complementary DNA molecule encoding a protein encoded by a nucleic acid molecule consisting of the nucleotide sequences set forth in SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, and SEQ ID NO: 20. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 18에 의해 암호화된 단백질을 암호화하는 분리된, 상보성 DNA 분자.An isolated, complementary DNA molecule encoding a protein encoded by SEQ ID NO: 18. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 19에 의해 암호화된 단백질을 암호화하는 분리된, 상보성 DNA 분자.An isolated, complementary DNA molecule encoding a protein encoded by SEQ ID NO: 19. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 20에 의해 암호화된 단백질을 암호화하는 분리된 핵산 분자.An isolated nucleic acid molecule encoding a protein encoded by SEQ ID NO: 20. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 18의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 분리된, 상보성 DNA 분자.An isolated, complementary DNA molecule consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 18. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 19의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 분리된, 상보성 DNA 분자.An isolated, complementary DNA molecule consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 19. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 서열 20의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 분리된 핵산 분자.An isolated nucleic acid molecule consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 20. 프로모터에 작동가능하게 연결된, 제 1 항의 상보성 DNA 분자를 포함하는 발현 벡터.An expression vector comprising the complementary DNA molecule of claim 1 operably linked to a promoter. 제 1 항의 분리된 상보성 DNA 분자를 포함하는 재조합 세포.A recombinant cell comprising the isolated complementary DNA molecule of claim 1. 제 8 항의 발현 벡터를 포함하는 재조합 세포.Recombinant cell comprising the expression vector of claim 8. (i) 엄격한 조건(stringent condition)하에서, MAGE-A10을 암호화하는 분리된 핵산 분자에 혼성화하는 제 1 뉴클레오티드 서열,(i) a first nucleotide sequence that hybridizes to an isolated nucleic acid molecule encoding MAGE-A10 under stringent conditions, (ii) 엄격한 조건하에서, MAGE-A5를 암호화하는 분리된 핵산 분자에 혼성화하는 제 2 뉴클레오티드 서열 및(ii) under stringent conditions, a second nucleotide sequence that hybridizes to an isolated nucleic acid molecule encoding MAGE-A5 and (iii) 상기 (i)과 (ii) 사이에 게재된 제 3 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.(iii) an isolated nucleic acid molecule comprising a third nucleotide sequence disclosed between (i) and (ii) above. 제 11 항에 있어서,The method of claim 11, 서열 17에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.An isolated nucleic acid molecule comprising the nucleotide sequence set forth in SEQ ID NO: 17. 프로모터에 작동가능하게 연결된, 제 11 항의 분리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.An expression vector comprising the isolated nucleic acid molecule of claim 11 operably linked to a promoter. 제 11 항의 분리된 상보성 핵산 분자를 포함하는 재조합 세포.A recombinant cell comprising the isolated complementary nucleic acid molecule of claim 11. 제 12 항의 분리된 핵산 분자를 포함하는 재조합 세포.A recombinant cell comprising the isolated nucleic acid molecule of claim 12. 샘플내에서, 서열 17, 18, 19 또는 20의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자의 존재를 측정하고, 상기 핵산 분자의 존재를 통해 샘플내 발암 여부를 결정하는 것을 포함하는, 샘플내 암 선별 방법.In a sample, measuring the presence of a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 17, 18, 19, or 20, and determining whether to cause cancer in the sample through the presence of the nucleic acid molecule. 제 16 항에 있어서,The method of claim 16, 중합효소 연쇄 반응을 통해 상기 핵산 분자의 존재를 측정하는 것을 포함하는 방법.Measuring the presence of said nucleic acid molecule via a polymerase chain reaction.